RS63712B1 - Jedinjenja c-manozida korisna za tretman infekcija urinarnog trakta - Google Patents

Description

Opis

POLJE PRONALASKA

[0001] Ovde su otkrivena nova jedinjenja i kompozicije C-manozida i njihova primena kao farmaceutskih preparata za tretman bolesti kod ljudi. Takođe su dati postupci inhibicije aktivnosti FimH kod ljudi za tretman bolesti kao što je infekcija urinarnog trakta.

POREKLO PRONALASKA

[0002] Infekcija urinarnog trakta (UTI) je jedna od najčešćih infektivnih bolesti kod žena. Morbiditet i uticaj na ekonomiju su enormni, sa preko 2.5 milijarde dolara godišnjih troškova za tretman. Osim toga, povraćaj infekcija je značajan problem uprkos značajnoj antibiotskoj terapiji u slučaju prve pojave infekcije. Kod žena kod kojih se prvi put javlja epizoda akutne UTI postoji 25-44% verovatnoće za razvoj druge i 3% verovatnoće da dođe do treće epozode u okviru šest meseci od prve UTI. Osim toga, rezistencija na antibiotike najčešće prepisivane za lečenje ili prevenciju UTI se rapidno širi kod uropatogena, što stvara potrebu za novim načinom lečenja koji štedi antibiotike i omogućava terapiju.

[0003] Više od 85% UTI su izazvane uropatogenom Escherichia coli (UPEC).

Gramnegativne bakterije kao što je UPEC su izazivači velikog broja različitih akutnih i hroničnih infektivnih bolesti. Mnoge od ovih infekcija započinju kritičkom interakcijom između liganda domaćina (često polisaharidni ostaci) i bakterijskog adhezina (često ekspresovanih na distalnom vrhu polimernih vlakana pilusa sklopljenih šperon-ušer putem). Kod životinjskih modela UTI je otkriveno da je manoza-vezujući FimH adhezin tip 1 pila kritičan za naseljavanje i širenje UPEC u epitelu mokraćne bešike kao i drugih uropatogenih članova familije enterobakterija, kao što su Klebsiella, Enterobacter i Citrobacter vrste.

[0004] Tip 1 pili su smešteni u spoljašnjoj membrani bakterija i u najvećem delu su sastavljeni od ponavaljajućih subjedinica FimA proteina koje formiraju spiralno namotan cilinder koji se sastoji od debele šipke pila. Distalni FimH adhezin protein je vezan za šipku pila fleksibilnim vrhom fibrila koji je sastavljen od jedne kopije svakog od FimF i FimG. Adhezin vrh FimH proteina je protein od dva domena sastavljen od pila domena (FimHP), koji im omogućava da se inkorporiraju u pilus, i lecitin domena (FimHL) koji sadrži sačuvani manoza-vezujući džep. Struktura kristala FimH vezanog za manozu dobijena X-zracima pokazuje da je manoza vezana za negativno naelektrisani džep na FimH. Mesto vezivanja manoze je visoko očuvano jer je konstantan u 300 fimH gena sekvenciranih iz kliničkih UPEC sojeva. Veruje se da je interakcija FimH sa manoziliranim proteinima domaćina posrednik u naseljavanju UPEC i drugih enterobakterija u donji urinarni trakt u toku UTI.

[0005] Kako bi se razjasnili molekularni detalji UPEC patogeneza, sačinjeno je nekoliko modela infekcije na miševima koji su rekapitulacija mnogih kliničkih manifestacija često viđenih kod ljudi. Ovi modeli uključuju akutne UPEC infekcije, hronične i/ili ponavljajuće infekcije i UTI povezane sa aplikacijom katetera. U svim od ovih modela, pokazano je da adhezin FimH igra integralu ulogu u patogenezi, što ga ističe kao odličan terapeutski cilj. Veruje se da se fundamentalna interakcija između FimH i domaćina dešava sa vezivanjem glikana koji imaju visok sadržaj manoze, kao što su uroplakini i drugi proteini ekspresovani na površini epitelnih ćelija bešike, koji oblažu luminalnu površinu bešike. Ovo početno vezivanje omogućava naseljavanje bakterija u epitel bešike i širenje bakterija u epitelinim ćelijama bešike. Jednom naseljena, pojedinačna bakterija koja dospe u citoplazmu ćelije domaćina može brzo da se umnoži i napreduje da formira intracelularnu bakterijsku zajednicu (IBC) nalik biofilmu. Kada ove zajednice dostignu zrelost, sposobne su da se šire i izađu iz ćelije, da filamentiranjem izbegnu fagocitozu neutrofila. Ove filamentozne bakterije mogu nakon toga da nastave da inficiraju susedne ćelije ponovnim pokretanjem IBC formacije i patogenog ciklusa. Važno je da su u urinu žena koje pate od akutnog UTI-a primećeni dokazi IBC i bakterijskih filamenata, što potvrđuje validnost modela miševa u rekapitulaciji bolesti ljudi.

[0006] Nasuprot sa UTI, koji je primarno posredovan bakterijskim patogenom, bolest manifestovana kod pacijenata koji pate od idiopatske inflamatornbe bolesti creva (IBD), kao što je Kronova bolest (CD) i ulcerativni kolitis (UC), je rezultat složenog međusobnog odnosa između genetički osetljivog domaćina, disfunkcionalnog imunog sistema i mikrobne komponente. Ispitivanje biopsiranog tkiva kod pacijenata koji pate od CD i UC je istaklo povećanje broja E. coli povezane sa mukozom creva. Analize ovih bakterija su dovele do otkrića posebnog patogena poznatog kao adherentna i invazivna E. coli (AIEC), iako je deo ovih sojeva genomski sličan sa UPEC. Identifikacija AIEC i njihova predpostavljena uloga u CD i UC je dovela do nekoliko naknadnih studija nekoliko nezavisnih grupa koje su ispitivale crevnu floru kod pacijenata sa IBD. Ovi radovi su dali značajne dokaze za prekomerni rast AIEC-a kod pacijenata sa ilealnim CDm, uz manje ubedljive podatke za druge podtipove IBD, uključujući UC, CD kolona i CD ileokolona. Analiza ilealnih enterocita izolovanih od pacijenata sa CD pokazala je nenormalnu ekspresiju receptora karcinoembrione antigenpovezane molekule 6 ćelijske adhezije (CEACAM6) domaćina koji je visoko manoziliran i pokazano je da omogućava vezivanje AIEC za ove ćelije preko tip 1 pili. Zanimljivo, adherenca i širenje AIEC u intestinalnim epitelijalnim ćelijama dovodi do povećanja ekspresije CEACAM6 receptora, što sugeriše da su AIEC sposobni da dovedu do njihovog sopstvenog naseljavanja ileuma kod pacijenata sa CD. Upotreba transgeničnih miševa u kojima je ekspresovan klaster gena humane CEA familije, uključujući CEACAM6, za rezultat ima povećano naseljavanje AIEC, koji potvrđuju mnoge od kliničkih simptoma CD, uključujući teški kolitis, gubitak težine i u ovom modelu smanjenje preživljavanja. Osim toga, ovi simptomi mogu da budu potpuno izostavljeni primenom anti-CEACAM6 antitela ili genetskim brisanjem FimH u bakterijskom soju, pokazujući direktnu vezu između prepoznavanja CECAM6 od strane FimH i progresije bolesti. Prema tome, terapije koje ciljaju FimH među AIEC bi mogle da imaju veliku korist u olakšanju simptoma kod pacijenata sa CD.

[0007] WO 2017/156508 se odnosi na jedinjenja derivate manozida korisna kao inhibitori FimH i na postupke za tretman ili prevenciju infekcije urinarnog trakta.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0008] Okvir pronalaska je definisan patentnim zahtevima. Sve reference u opisu za postupke tretmana se odnose na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente iz ovog pronalaska za upotrebu u postupku tretmana ljudskog (ili životinjskog) organizma terapijom (ili za dijagnoze).

[0009] Otkrivena su nova jedinjenja i farmaceutske kompozicije, za koje je nađeno da inhibiraju FimH, zajedno sa postupcima sinteze i upotrebe jedinjenja, uključujući postupke za tretman FimH posredovanih bolesti kod pacijenta primenom jedinjenja.

[0010] Još preciznije, u jednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

u kome

R1je CH3, CF3, ili Cl;

R2je F, Cl, OR’, ili H;

R3, R4i R5su nezavisno H, F, Cl, Br, C3-6cikloalkil, OR’, -N(C1-6alkil)2, C2-6alkenil, C2-6alkinil ili C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa do sedam atoma fluora, do jednom hidroksi, do jednom -N(C1-6alkil)2i do jednom -OC1-6alkil grupom;

pod uslovom da svi R3, R4i R5nisu istovremeno vodonik.

R6je H ili F;

R’ je nezavisno H ili C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa do sedam atoma fluora;

[0011] U jednom ostvarenju, R1je CH3ili CF3.

[0012] U jednom ostvarenju, R1je CH3.

[0013] U jednom ostvarenju, R2je H.

[0014] U jednom ostvarenju, R3je F ili CF3.

[0015] U jednom ostvarenju, R4je CH3, Cl, Br, vinil, CF3, F, ili H.

[0016] U jednom ostvarenju, R4je H.

[0017] U jednom ostvarenju, R5je F ili H.

[0018] U jednom ostvarenju, R5je F.

[0019] U jednom ostvarenju, R6je H.

[0020] U jednom ostvarenju, R1je CH3ili CF3; R2je H; R3je F; R4je CH3, Cl, Br, vinil, CF3, F, ili H; R5je F ili H; i R6je H.

[0021] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0022] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-hlor-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0023] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-brom-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0024] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-4’-vinil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0025] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-Fluoro-3-metil-4’-(trifluorometil)-[1,1’-bi-fenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0026] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-Fluoro-3-metil-5’-(trifluorometil)-[1,1’-bi-fenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0027] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-hidroksi(3’,4’,5’-trifluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0028] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0029] U jednom ostvarenju, jedinjenje je (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol.

[0030] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kao medikamenta.

[0031] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.

[0032] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u tretmanu infekcije urinarnog trakta (UTI).

[0033] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u poboljšanju bolesti ili stanja inhibicijom funkcije ili aktivnosti FimH.

[0034] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu ili prevenciji UTI.

[0035] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za prevenciju ili tretman bolesti ili stanja koja mogu da se poboljšaju inhibicijom funkcije ili aktivnosti FimH.

[0036] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za prevenciju ili tretman UTI.

[0037] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0038] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za tretman bolesti u kojima je posrednik FimH koji uključuje primenu terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na ljudima kojima je to potrebno.

[0039] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za lečenje bakterijske infekcije, Kronove bolesti (CD), ili inflamatorne bolesti creva (IBD) sa jedinjenjem formule I ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.

[0040] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za tretman infekcije urinarnog trakta (UTI) koji uključuje primenu terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno.

[0041] U jednom ostvarenju, navedena bakterijska infekcija je infekcija urinarnog trakta (UTI).

[0042] U jednom ostvarenju, navedena infekcija urinarnog trakta je ponavljajuća.

[0043] U jednom ostvarenju, navedena infekcija urinarnog trakta je hronična.

[0044] U jednom ostvarenju, navedena bakterijska infekcija je bakterijska infekcija rezistentna na antibiotik.

[0045] U jednom ostvarenju, navedena bolest je Kronova bolest.

[0046] U jednom ostvarenju, navedena bolest je inflamatorna bolest creva.

[0047] U jednom ostvarenju, navedena farmaceutska kompozicija je formulisana za oralnu (PO) primenu.

[0048] U jednom ostvarenju, navedena kompozicija je izabrana od tableta i kapsula.

[0049] U jednom ostvarenju, navedena farmaceutska kompozicija je formulsana za topičnu primenu.

[0050] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za lečenje bolesti u kojima je posrednik FimH a koji uključuje fazu primene:

a. terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i

b. drugog terapeutskog sredstva.

[0051] U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na kombinaciju jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i drugog terapeutskog sredstva.

DETALJAN OPIS

Definicije

[0052] Naziv "C1-6alkil," kako se ovde koristi, sam ili u kombinaciji, se odnosi na alkil radikal ravnog lanca ili račvastog lanca koji sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika. U primere C1-6alkil radikala spadaju metil (Me), etil (Et), n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sec-butil, terc-butil, pentil, izo-amil, heksil, i slično.

[0053] Naziv "C3-6cikloalkil," kako se ovde koristi, sam ili u kombinaciji, se odnosi na zasićenu monocikličnu alkil grupu pri čemu svaki ciklični ostatak sadrži od 3 do 6 atoma ugljenika kao članove prstena. Primeri su ciklopropil (cPr), ciklopentil (cPe), ciklobutil (cBu) i cikloheksil (cHex).

[0054] Naziv "C2-6alkenil", kako se ovde koristi, se odnosi na ravne ili račvaste ugljovodonične lance koji sadrže 2 do 6 atoma ugljenika i najmanje jednu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu. Primeri uključuju etenil (ili etenilen) i propenil (ili propenilen).

[0055] Naziv "C2-6alkinil", kako se ovde koristi, se odnosi na ravne ili račvaste ugljovodonične lance koji sadrže 2 do 6 atoma ugljenika i najmanje jednu ugljenik-ugljenik trostruku vezu. Primeri uključuju etinil (ili etinilen) i propinil (ili propinilen).

[0056] Naziv "opciono supstituisan" označava da navedena grupa može da bude supstituisana ili nesupstituisana sa grupama koje slede. Na primer, "C1-6alkil grupa (opciono supstituisana sa do sedam atoma fluora, do jednom hidroksi, do jednom -N(C1-6alkil)2i do jednom -OC1-

6alkil) grupe" uključuje grupe kao što su -CF3, -CF2CF3, -CH2NMe, -CH2OMe,

-CHF2, -CHOHMe, itd.

[0057] U jedinjenju formule I mogu da egzistiraju asimetrični centri. Treba da bude jasno da ovaj pronalazak pokriva jedinjenja apsolutne konfiguracije kako je pokazano u formuli I. Zbog svoje potencijalne upotrebe u medicini, soli jedinjenja formule I su preferirano farmaceutski prihvatljive soli. Reference za soli su farmaceutski prihvatljive soli.

Farmaceutski prihvatljiv se odnosi na ona jedinjenja (uključujući soli), materijale, kompozicije i dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez pojačane toksičnosti, iritacije ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno sa razumnim odnosom korist/rizik. Odgovarajuće farmaceutski prihvatljive soli uključuju one koje su opisali Berge, Bighley and Monkhouse J.Pharm.Sci (1977) 66, pp 1-19, ili one navedene u P H Stahl and C G Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Second Edition Stahl/Wermuth: Wiley-VCH/VHCA, 2011 (see http://www.wiley.com/WileyCDA/WileyTitle/productCd-3906390519.html).

[0058] Kada je jedinjenje iz pronalaska baza (sadrži bazni ostatak), oblik poželjne soli može da se izradi bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u tehnici, uključujući tretman slobodne baze sa neorganskom kiselinom kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina, i slično, ili sa organskom kiselinom, kao što su sirćetna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, maleinska kiselina, sukcinska kiselina, mandelinska kiselina, fumarna kiselina, malonska kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, glikolna kiselina, salicilna kiselina, piranosidilna kiselina, kao što su glukuronska kiselina ili galakturonska kiselina, sa alfa-hidroksi kiselinom, kao što su limunska kiselina ili vinska kiselina, sa amino kiselinom, kao što su asparaginska kiselina ili glutaminska kiselina, sa aromatičnom kiselinom, kao što su benzoeva kiselina ili cinaminska kiselina, sa sulfonskom kiselinom, kao što su p-toluensulfonska kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina ili slično. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju sulfate, pirosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, fosfate, hloride, bromide, jodide, acetat, propionate, dekanoate, kaprilate, akrilate, formate, izobutirate, kaproate, heptanoate, propiolate, oksalate, malonate sukcinate, suberate, sebakate, fumarate, maleate, butine-1,4-dioate, heksin-1,6-dioate, benzoate, hlorbenzoate, metilbenzoate, dinitrobenzoate, hidroksibenzoate, metoksibenzoate, ftalate, fenilacetate, fenilpropionate, fenilbutrate, citrate, laktate, ghidroksibutirate, glikolate, tartarate, mandelate i sulfonate, kao što su ksilensulfonati, metansulfonati, propansulfonati, naftalen-1-sulfonati i naftalen-2-sulfonati.

[0059] Ukoliko je bazno jedinjenje iz pronalaska izolovano kao so, odgovarajući oblik slobodne baze tog jedinjenja može da se izradi bilo kojim odgovarajućim postupkom poznatim u tehnici, uključujući tretman soli sa neorganskom ili organskom bazom, pogodno je neorganskom ili organskom bazom koja ima veću pKa nego oblik slobodne baze jedinjenja.

[0060] Kada je jedinjenje iz pronalaska kiselina (sadrži kiseli ostatak), željena so može da se izradi bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u tehnici, uključujući tretman slobodne kiseline sa neorganskom ili organskom bazom, kao što je amin (primarni, sekundarni ili tercijerni), hidroksid alkalnog metala ili zemno alkalnog metala, ili slično. Ilustrativni primeri pogodnih soli uključuju organske soli dobijene od amino kiselina kao što su glicin i arginin, amonijak, primarnih, sekundarnih i tercijernih amina i cikličnih amina, kao što su etilen diamin, dicikloheksilamin, etanolamin, piperidin, morfolin i piperazin, kao i neorganske soli dobijene od natrijuma, kalcijuma, kalijuma, magnezijuma, mangana, gvožđa, bakra, cinka, aluminijuma i litijuma.

[0061] Neka od jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da formiraju soli sa jednim ili više ekvivalenata kiseline (ukoliko jedinjenje sadrži bazni ostatak) ili baze (ukoliko jedinjenje sadrži kiseli ostatak). Ovaj pronalazak u svom okviru uključuje sve moguće stehiometrijske i nestehiometrijske oblike soli.

[0062] Zbog toga što jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da sadrže i kisele i bazne ostatke, farmaceutski prihvatljive soli mogu da se izrade tretiranjem ovih jedinjenja sa alkalnim reagensom ili kiselim reagensom, tim redom. U skladu sa tim, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje konverziju jedne farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja iz ovog pronalaska, na primer, hidrohloridne soli, u drugu farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja iz ovog pronalaska, na primer, natrijumovu so ili dinatrijumovu so.

[0063] Zbog toga što su jedinjenja iz ovog pronalaska namenjena za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama lako je razumeti da je svako od njih preferirano obezbeđeno u skoro potpuno čistom obliku, na primer najmanje 60% čistoće, još poželjnije najmanje 75% čistoće i preferirano najmanje 85%, posebno najmanje 98% čistoće (% su težinski na bazi težine). Onečišćeni preparati jedinjenja mogu da se koriste za izradu mnogo čistijih oblika koji se koriste u farmaceutskim kompozicijama.

[0064] Naziv "kombinacija" označava primenu dva ili više terapeutskih sredstava za lečenje terapeutskog stanja ili poremećaja opisanih u ovom otkriću. Ovakva primena obuhvata koprimenu ovih terapeutskih sredstava na suštinski istovremeni način, kao što je u pojedinačnoj kapsuli u kojoj se nalazi fiksni odnos aktivnih sastojaka ili kao u više odvojenih kapsula za

1

svaki aktivni sastojak. Pored toga, ovakva primena takođe obuhvata upotrebu svakog tipa terapeutskog sredstva na odvojeni način. U oba slučaja, režim tretmana će da obezbedi korisne efekte kombinacije leka u lečenju stanja ili poremećaja koji su ovde opisani.

[0065] "FimH inhibitor" ili "FimH antagonist", se ovde koristi da označi jedinjenje koje ispoljava HAI (test inhibicije hemaglutinacije) titar ili EC>90 u vezi sa funkcija/aktivnost FimH od ne više od približno 100 µM, po pravilu ne više od približno 50 µM, kako je mereno FimH testom hemaglutinacije (HA) kako je ovde generalno opisano. "HAI titer ili EC>90" je ona koncentracija FimH inhibitora/antagonista koja smanjuje bakterijsku aglutinaciju crvenih krvnih ćelija zamoraca za više od 90%. Za neka jedinjenja koja su ovde otkrivena je utvrđeno da ispoljavaju inhibiciju ovih FimH funkcija/aktivnosti. U nekim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 10 µM; u drugim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 1 µM; u čak još nekim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 250 nM; u još daljim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 100 nM; u još daljim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 50 nM; u još daljim ostvarenjima, jedinjenja će da ispolje EC>90 u odnosu na FimH sa ne više od približno 10 nM, kako je mereno ovde opisanim FimH testom.

[0066] Izraz "terapeutski efektivan" treba da odredi količinu aktivnih sastojaka korišćenih u tretmanu bolesti ili poremećaja ili koja utiče na klinički ishod. Kako se ovde koristi, "lečenje" u vezi sa stanjem označava: (1) poboljšanje ili prevenciju stanja ili jedne ili više bioloških manifestacija stanja, (2) da utiče na (a) jednu ili više pozicija u biološkoj kaskadi koja dovodi do ili je odgovorna za stanje ili (b) jednu ili više bioloških manifestacija stanja, (3) ublažavanje jednog ili više simptoma ili efekata povezanih sa stanjem, ili (4) usporavanje progresije stanja ili jedne ili više bioloških manifestacija stanja.

[0067] Kako se ovde koristi, referenca za "prevenciju" kod pacijenta treba da uključi profilaksu. Prevencija bolesti može da uključi potpunu zaštitu od bolesti, na primer, kao u slučaju prevencije od infekcije sa patogenom, ili može da uključi prevenciju od progresije bolesti. Na primer, prevencija bolesti ne može da znači potpuno isključenje bilo kog efekta u vezi sa bolestima na bilo kom nivou, već umesto toga može da znači prevenciju simptoma bolesti do klinički značajnog ili detektabilnog nivoa. Prevencija bolesti može takođe da znači prevenciju progesije bolesti do kasnijeg stanja bolesti.

[0068] Naziv "pacijent" je generalno sinonim sa nazivom "subjekt" i obuhvata sve sisare uključujući ljude. Primeri pacijenata uključuju ljude, domaće životinje kao što su krave, koze, ovce, svinje i zečevi i kućne ljubimce kao što su psi, mačke, zečevi i konji. Preferirano, pacijenti su ljudi.

[0069] Mada je moguće da se jedinjenja iz ovog pronalaska primene u obliku osnovne hemikalije, takođe je moguće da budu prisutna kao farmaceutska formulacija (ili alternativno označena kao farmaceutska kompozicija). U skladu sa tim, ovde su date farmaceutske formulacije koje uključuju jedno ili više od ovde otkrivenih jedinjenja ili jednu ili više njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, estara, prolekova, amida ili solvata, zajedno sa jednim ili više njihovih farmaceutski prihvatljivih nosača i opciono jednim ili više drugih terapeutskih sastojaka. Nosač(i) mora da bude "terapeutski prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa drugim sastojcima formulacije i da nije štetan za primaoca. Odgovarajuća formulacija zavisi od izabranog načina primene. Bilo koja od dobro poznatih tehnika, nosača i podloga može da se koristi kao pogodna i kao prihvaćena u tehnici. Ovde otkrivene farmaceutske kompozicije mogu da se proizvedu na bilo koji način poznat u tehnici, na primer, primenom uobičajenih procesa mešanja, rastvaranja, granulacije, izrade dražeja, levigacije, emulgovanja, enkapsuliranja, vezivanja ili kompresije.

[0070] Formulacije uključuju one koje su pogodne za oralnu, parenteralnu (uključujući subkutanu, intradermalnu, intramuskularnu, intravensku, intraartikularnu i intramedularnu), intraperitonealnu, transmukoznu, transdermalnu, rektalnu, inhalacionu, intranazalnu i topičnu (uključujući dermalnu, bukalnu, sublingvalnu i intraokularnu) primenu mada najpogodniji način primene može da zavisi, na primer, od stanja i poremećaja kod primaoca. Formulacije mogu uobičajeno da budu prisutne u jediničnom doznom obliku i mogu da se izrade bilo kojim od postupaka dobro poznatih u farmaceutskoj tehnici. Uobičajeno, ovi postupci uključuju fazu dovođenja u kontakt jedinjenja iz pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, estra, amida, proleka ili solvata ("aktivni sastojak") sa nosačem koji se sastoji od jednog ili više pratećih sastojaka. Generalno, formulacije su izrađene ujednačenim i bliskim dovođenjem u vezu aktivnog sastojka sa tečnim nosačima ili fino usitnjenim čvrstim nosačima ili sa oba od njih, ukoliko je potrebno, i oblikovanjem produkta u željenu formulaciju.

[0071] Kako se ovde koristi "jedinjenje(a) iz pronalaska" označava jedinjenje formule I u bilo kom obliku, to jest, u bilo kom obliku soli ili ne-soli (na primer, u obliku slobodne kiseline ili baze, ili kao njihova farmaceutski prihvatljiva so) i u bilo kom njihovom fizičkom obliku (na primer, uključujući nečvrste oblike (na primer, tečne ili polu-čvrste oblike) i čvrste oblike (na primer, amorfne ili kristalne oblike, posebne polimorfne oblike, solvate, uključujući hidrate (na primer, mono-, di- i hemi hidrate)) i smeše različitih oblika.

[0072] Formulacije ovde otkrivenih jedinjenja pogodne za oralnu primenu mogu da budu prisutne kao odvojene jedinice kao što su kapsule, kahete ili tablete koja svaka sadrži prethodno odmerenu količinu aktivnog sastojka; kao prašak ili granule; kao rastvor ili suspenzija u vodenoj tečnosti ili nevodenoj tečnosti; ili kao tečna emulzija ulje-u-vodi ili tečna emulzija voda-u-ulju. Aktivni sastojak može takođe da bude prisutan kao bolus, elektuar ili pasta.

[0073] Farmaceutski preparati koji mogu da se koriste za oralnu primenu uključuju tablete, tvrde kapsule izrađene od želatina, kao i meke, zatvorene kapsule izrađene od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. Tablete mogu da se izrade kompresijom ili modeliranjem, opciono sa jednim ili više pratećih sastojaka. Komprimovane tablete mogu da se izrade kompresijom aktivnog sastojka u protočnom obliku kao što su prašak ili granule, obično kao smeša vezivnih sredstava, inertnih razblaživača ili lubrikansa, površinski aktivnih ili disperzionih sredstava, u odgovarajućoj mašini. Modelirane tablete mogu da se izrade modeliranjem smeše praškastog jedinjenja ovlaženog sa inertnim tečnim razblaživačem, u odgovarajućoj mašini. Tablete mogu opciono da budu obložene ili urezane i mogu da budu formulisane tako da se obezbedi sporo ili kontrolisano oslobađanje prisutnog aktivnog sastojka. Sve formulacije za oralnu primenu bi trebalo da budu u doznim oblicima pogodnim za takvu primenu. Tvrde kapsule mogu da sadrže aktivne sastojke izmešane sa puniocima kao što su laktoza, vezivna sredstva kao što su skrobovi i/ili lubrikansi kao što su talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatori. U mekim kapsulama, aktivna jedinjenja mogu da budu rastvorena ili suspendovana u pogodnim tečnostima, kao što su masna ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikoli. Pored toga, mogu da se dodaju stabilizatori. Jezgra dražea su obezbeđena sa pogodnim omotačima. U ovu svrhu, mogu da se koriste koncentrovani rastvori šećera koji opciono mogu da sadrže arapsku gumu, talk, polivinil pirolidon, karbopol gel, polietilen glikol i/ili titanijum dioksid, rastvore laka i odgovarajuće organske rastvarače ili smeše rastvarača. U tablete ili omotače dražea mogu da se dodaju boje ili pigmenti zbog identifikacije ili zbog karakterizacije različitih kombinacija doza aktivnog jedinjenja.

[0074] Jedinjenja mogu da budu formulisana za parenteralnu primenu injekcijom, na primer, bolus injekcijom ili kontinuiranom infuzijom. Formulacije za injekcije mogu da budu prisutne u jediničom doznom obliku, na primer, u ampulama ili u višedoznim kontejnerima, uz dodatak konzervansa. Kompozicije u ovakvim oblicima mogu da budu kao suspenzije,

1

rastvori ili emulzije u uljanim ili vodenim vehikulumima i mogu da sadrže sredstva za izradu formulacije kao što su sredstva za suspendovanje, stabilizaciju i/ili disperziju. Formulacije mogu da budu prisutne u jednodoznim ili višedoznim kontejnerima, na primer, zatvorenim ampulama i bočicama i mogu da se čuvaju u praškastom obliku ili u zamrznutom (liofiliziranom) stanju koji zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer, rastvora soli ili sterilne apirogene vode, neposredno pre upotrebe. Rastvori za injekcije i suspenzije za ex-temporalnu upotrebu mogu da se izrade od sterilnih praškova, granula i tableta na način kako je prethodno opisano.

[0075] Formulacije za parenteralnu primenu uključuju vodene i ne-vodene (uljane) sterilne injekcione rastvore aktivnih jedinjenja koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostatike i rastvorke koji čine formulaciju izonotničnom sa krvlju primaoca kome je namenjena; i vodene i ne-vodene sterilne suspenzije koje mogu da uključe sredstva za suspendovanje i sredstva za zgušnjavanje. U pogodne lipofilne rastvarače ili vehikulume spadaju masna ulja kao što su susamovo ulje, ili sintetički estri masnih kiselina, kao što je etil oleat ili trigliceridi ili lipozomi. Vodene injekcione suspenzije mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskozitet suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Opciono, suspenzija može takođe da sadrži pogodne stabilizatore ili sredstva koja povećavaju rastvorljivost jedinjenja čime se omogućava izrada visoko koncentrovanih rastvora.

[0076] Pored prethodno opisanih formulacija, jedinjenja mogu takođe da budu formulisana kao depo preparati. Ovakve dugo delujuće formulacije mogu da se primene implantacijom (na primer subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. Prema tome, na primer, jedinjenja mogu da budu formulisana sa pogodnim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primer kao emulzije u prihavatljivom ulju) ili smolama jonskih izmenjivača ili kao slabo rastvorljivi derivati, na primer kao slabo rastvorljiva so.

[0077] Za bukalnu ili sublingvalnu primenu, kompozicije mogu da budu u obliku tableta, lozengi, pastila ili gela formulisanih na uobičajeni načina. Ovakve kompozicije mogu da uključe aktivni sastojak u ukusnoj podlozi kao što su saharoza i akacija ili tragakanta.

Jedinjenja mogu takođe da budu formulisana kao kompozicije za rektalnu primenu, kao što su supozitorije ili retencione klizme, na primer, koje sadrže uobičajene podloge za supozitorije kao što su kakao buter, polietilen glikol ili drugi gliceridi.

[0078] Neka ovde otkrivena jedinjenja mogu da se primene topično, to jest ne-sistemskom primenom. Ovo obuhvata aplikaciju ovde otkrivenog jedinjenja spolja na epiderm ili usnu šupljinu i unošenjem ovakvog jedinjenja u rektum, pluća, vaginalnu šupljinu, uho, oko i nos, tako da jedinjenje ne ulazi značajno u krvotok. Nasuprot tome, sistemska primena se odnosi na oralnu, intravensku, intraperitonealnu i intramuskularnu primenu.

[0079] Formulacije pogodne za topičnu primenu uključuju tečne ili polu-tečne preparate pogodne za penetraciju kroz kožu na mestu inflamacije, kao što su geli, linimenti, losioni, kreme, masti ili paste i kapi pogodne za primenu u oko, uho ili nos. Aktivni sastojak za topičnu primenu može da uključi, na primer, od 0.001% do 10% m/m (težinski) formulacije. U nekim ostvarenjima, aktivni sastojak može da uključi i više10% m/m. U drugim ostvarenjima, može da uključi manje od 5% m/m. U nekim ostavarenjima, aktivni sastojak može da uključi od 2% m/m do 5% m/m. U drugim ostvarenjima, može da uključi od 0.1% do 1% m/m formulacije.

[0080] Za primenu inhalacijom, jedinjenja mogu uobičajeno da se oslobode iz insuflatora, nebulizera pod pritiskom ili drugim uobičajenim načinima oslobađanja aerosol sprejom.

Uređaji pod pritiskom mogu da sadrže odgovarajući propelant kao što su dihlorodifluorometan, trihlorofluorometan, dihlorotetrafluoroetan, ugljen dioksid ili drugi odgovarajući gas. U slučaju aerosola pod pritiskom, dozna jedinica može da se odredi stavljanjem ventila za oslobađanje određene količine. Alternativno, za primenu inhalacijom ili insuflacijom, jedinjenja u skladu sa pronalaskom mogu da budu u obliku kompozicije suvog praška, na primer praškaste smeše jedinjenja i pogodne praškaste baze kao što su laktoza ili skrob. Praškasta kompozicija može da bude prisutna u jediničnom doznom obliku, na primer, u kapsulama, kartridžima, želatinskim ili blister pakovanjima iz kojih prašak može da se primeni uz pomoć inhalatora ili insuflatora.

[0081] Preferirane jedinične dozne formulacije su one koje sadrže efektivnu dozu, kako je ovde niže navedeno, ili njen odgovarajući deo aktivnog sastojka.

[0082] Treba razumeti da, pored sastojaka koji su ovde posebno navedeni, prethodno opisane formulacije mogu da sadrže druga sredstva uobičajena u tehnici imajući u vodu tip formulacije po pitanju, na primer, da li formulacija pogodna za oralnu primenu može da uključi sredstva za korigovanje ukusa.

[0083] Jedinjenja mogu da se primene oralno ili preko injekcije u dozi od 0.1 do 500 mg/kg dnevno. Opseg doze za odraslog čoveka je generalno od 5 mg do 2 g/dan. Tablete ili drugi oblici za oralnu primenu dati u odvojenim jedinicama mogu uobičajeno da sadrže količinu jednog ili više jedinjenja koja je efikasna u toj dozi ili kao više od iste, na primer, jedinice koje sadrže 5 mg do 500 mg, obično oko 10 mg do 200 mg. U jednom ostvarenju, jedinjenje

1

iz ovog pronalaska se primenjuje približno u količini od 150 mg qd (jedanput dnevno) ili bid (dva puta dnevno).

[0084] Količina aktivnog sastojka koja može da bude u kombinaciji sa materijalima nosača za produkciju pojedinačnog doznog oblika će da varira u zavisnosti od domaćina koji se tretira i od određenog načina primene.

[0085] Jedinjenja mogu da se primene na različite načine, na primer, oralno, topično ili injekcijom. Preciznu količinu jedinjenja koja će da se primeni na pacijentu će da odredi ordinirajući lekar. Određena vrednost doze za bilo kog određenog pacijenta će da zavisi od različitih faktora, uključujući aktivnost određenog primenjenog jedinjenja, godine starosti, telesnu težine, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme primene, način primene, brzinu izlučivanja, kombinacije leka, određeni poremećaj koji se tretira i ozbiljnost indikacije ili stanja koje se tretira. Takođe, način primene može da varira u zavisnosti od stanja i njegove ozbiljnosti.

[0086] U nekim slučajevima, može da bude odgovarajuće da se primeni najmanje jedno od ovde opisanih jedinjenja (ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, estar ili prolek) u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvom. Samo kao primer, ukoliko se kod pacijenta nakon prijema jednog od ovde datih jedinjenja kao neželjeni efekat javi hipertenzija, tada može da bude potrebno da se primeni antihipertenzivno sredstvo u kombinaciji sa osnovnim terapeutskim sredstvom. Ili, samo kao primer, terapeutska efikasnost jednog od ovde opisanih jedinjenja može da bude pojačana primenom adjuvansa (to jest, sam adjuvans može da ima samo minimalnu terapeutsku korist, ali u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvom ukupna terapeutska korist za pacijenta je povećana). Ili, samo kao primer, korist koja se javlja kod pacijenta može da bude povećana primenom jednog od ovde opisanih jedinjenja sa drugim terapeutskim sredstvom (koji takođe uključuje terapeutski režim) koje takođe ima terapeutsku korist. Samo kao primer, u tretmanu infekcije urinarnog trakta koji uključuje primenu jednog od ovde opisanih jedinjenja, povećana terapeutska korist može da se dobije takođe uvođenjem drugog terapeutskog sredstva za infekciju urinarnog trakta kod pacijenta. U bilo kom slučaju, nezavisno od bolesti, poremećaja ili stanja koje se tretira, ukupna korist za pacijenta može jednostavno da se postigne dodavanjem dva terapeutska sredstva ili pacijent može da oseti sinergističku korist.

[0087] U bilo kom slučaju, više terapeutskih sredstava (od kojih je najmanje jedno ovde otkriveno jedinjenje) može da se primeni bilo kojim redosledom ili čak istovremeno. Ukoliko se primenjuju istovremeno, više terapeutskih sredstava može da bude u obliku jediničnog,

1

nepodeljenog oblika, ili u više oblika (samo kao primer, ili kao jedna pilula ili kao dve odvojene pilule). Jedno od terapeutskih sredstava može da se da u višestrukim dozama, ili oba mogu da se daju u višestrukim dozama. Ukoliko nije istovremeno, vreme između više doza može da bude u rasponu od nekoliko minuta do četiri nedelje.

[0088] Prema tome, u narednom aspektu, neka ostvarenja obezbeđuju postupke za lečenje FimH posredovanih poremećaja kod ljudi ili životinjskog subjekta kojima je potreban takav tretman koji uključuje primenu na navedenom subjektu količine ovde otkrivenog jedinjenja efikasne da smanji ili spreči navedeni poremećaj kod subjekta, u kombinaciji sa najmanje jednim dodatim sredstvom za tretman navedenog poremećaja koje je poznato u tehnici. U vezi sa tim, neka ostvarenja obezbeđuju terapeutske kompozicije koje uključuju najmanje jedno ovde otkriveno jedinjenje u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih sredstava za tretman FimH-posredovanih poremećaja.

[0089] Posebne bolesti koje mogu da se tretiraju jedinjenjima, kompozicijama i postupcima koji su ovde otkriveni uključuju bakterijske infekcije, Kronovu bolest i sindrom nadraženih creva (IBS). U nekim ostvarenjima, bakterijska infekcija je infekcija urinarnog trakta.

[0090] Pored koristi u tretmanu ljudi, neka jedinjenja i formulacije koji su ovde otkriveni mogu takođe da budu korisna za veterinarski tretman domaćih životinja, egzotičnih životinja i životinja na farmama, uključujući sisare i slično. Poželjnije životinje su konji, psi i mačke.

Opšte šeme sinteza primera

[0091] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade po sintetičkim posutpcima ili njihovim očiglednim varijantama opisanim u WO2017/156508. Međutim, bez ograničavanja ovog pronalaska na bilo koji način, niže dati opisi takođe obezbeđuju postupke reakcija koji mogu da se primene za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0092] Koriste se četiri opšte šeme (A - D) za sintezu jedinjenja opisanih u niže datim Primerima. Svaka od njih koristi Suzuki udvajanja između supstituisanog manozida sa aril bromidom (ili boronatom) i aril boronat estrom (ili aril halidom). Manozidi su zaštićeni sa acetil ili benzil grupama. Acetil grupe se uklanjanju sa NaOMe, benzil grupe se uklanjaju sa BCl3ili hidrogenolizom sa Pd/C.

1

Šema A:

Šema B:

Šema C:

Šema D:

[0093] Opšta procedura za reakcije Suzuki udvajanja: u rastvor manozida (1.0 equiv.) u smeši dioksan/voda (V/V =5/1) se dodaju aril boratna kiselina (ili boronat) ili aril halid (~1.1 equiv.), cezijum karbonat (~3 equiv.) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (~0.05 equiv.) na rt. Dobijena smeša se degasira tri puta. Boca se nakon toga prenese u uljano kupatilo prethodno zagrejano na 80 °C i ostavi da se meša određeno vreme (obično 30 min do 2 h). Reaktivna smeša se nakon toga ohladi na rt i rastvarači se upare pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak se nakon toga prečisti hromatografijom na silika gelu. Produkt se nakon toga deprotektuje ili po protokolu A ili B.

1

[0094] Protokol deprotekcije A: ukoliko nije drugačije navedeno, acetatne zaštitne grupe se uklanjaju rastvaranjem delimično prečišćenog manozida iz Suzuki reakcije u MeOH i hlađenjem na 0 °C. [1M] U kapima se dodaje natrijum metoksid u MeOH sve dok se ne postigne pH od 9-10. Nakon 5 min, ledeno kupatilo se ukloni i reaktivna smeša se meša određeno vreme. Nakon završetka, reakcija se neutrališe sa vodom ili 1N HCl i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti Prep-HPLC pod različitim uslovima.

[0095] Protokol deprotekcije B: ukoliko nije drugačije navedeno, benzil etri se deprotektuju dodavanjem BCl3(8.0 equiv, 1M u DCM) u rastvor delimično prečišćenog manozida iz Suzuki reakcije u DCM (10 mL) na -78 °C. Reakcija se meša navedeno vreme na -78 °C. Nakon završetka, reakcija se neutrališe sa MeOH (1 mL) na -78 °C. Nakon toga se reakcija zagreje na rt i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije debenzilisano jedinjenje. Acetil grupa se nakon toga ukloni postupkom koji je opisan u protokolu A.

[0096] Blok sinteza za izradu C-manozida:

1

[0097] Međuproizvodi korišćeni u izradi jedinjenja iz Primera su izrađeni korišćenjem prethodno datih opštih faza koje su mnogo preciznije niže opisane.

Metil 2,3,4,6-tetra-O-benzil-α-D-manopiranozid

2

[0098] U izmešani rastvor komercijalno raspoloživog metil α-D-manopiranozida (30.0 g, 0.15 mol) u bezvodnom DMF (1000 mL) ohlađenom u ledenom kupatilu, se u porcijama doda NaH (37.1 g, 0.93 mol, 60% u mineralnom ulju). Nakon dodavanja, reaktivna smeša se meša na ovoj temperaturi sve dok ne prestane izdvajanje gasa (obično za 30 min), a nakon toga se 2h zagreva na rt. U reaktivnu smešu se doda benzil bromid (158.7 g, 0.92 mol). Nakon dodavanja, reaktivna smeša se meša 48 sati na ovoj temperaturi, kada TLC analize pokazuju da je reakcija završena. Reaktivna smeša se uz mešanje pažljivo sipa u vodu sa ledom (2500 mL) i dobijena smeša se ekstrahuje sa DCM (2500 mL x 3). Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata i upari na rotacionom uparivaču da se dobije uljani ostatak koji se prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (0~20%), da se dobije čisto jedinjenje (71.0 g, 83% prinos) kao bezbojno ulje.

[0099] Formula: C35H38O6tačna masa; 554.27, molekulska težina: 554.67.

[0100] Analitički podaci: ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C35H38O6Na<+>) 577.27, nađeno 577.0.

(2R,3R,4R,5R,6R)-2-Alil-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran

[0101] U izmešani rastvor metil 2,3,4,6-tetra-O-benzil-α-D-manopiranozida (78.0 g, 0.14 mol) u bezvodnom ACN (300 mL) ohlađenom u ledenom kupatilu se u kapima dodaju alitrimetilsilan (33.0 g, 0.29 mol) i trimetilsilil trifluorometansulfonat (16.0 g, 0.07 mol). Nakon dodavanja, reaktivna smeša se meša na rt u toku noći. Po završetku, reaktivna smeša se pažljivo sipa u vodu sa ledom (200 mL) uz mešanje i dobijena smeša se ekstrahuje sa EtOAc (300 mL x 3). Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom (200 mL), suši preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrira. Filtrat se upari na rotacionom uparivaču da se dobije uljani ostatak, koji se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (1~6%) da se dobije čist željeni produkt (68.0 g, 86% prinos) kao žuto ulje.

[0102] Formula: C37H40O5tačna masa; 564.29, molekulska težina: 564.71.

[0103] Analitički podaci: ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C37H40O5Na<+>) 587.29, nađeno 587.30.

(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-Tris(benziloksi)-2-((benziloksi)metil)-6-(prop-1-en-1-il)tetrahidro-2H-piran

[0104] Pd(PhCN)2Cl2(7.0 g, 0.018 mmol) se doda u rastvor (2R,3R,4R,5R,6R)-2-alil-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-pirana

[0105] (68.0 g, 0.12 mol) u suvom toluenu (350 mL) u atmosferi azota. Dobijena smeša se zagreva na 90 °C u toku noći u atmosferi N2. Po završetku, reakcija se ohladi na rt i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom EtOAc u petrol etru da se dobije željeni produkt (48.0 g, 71% prinos, smeša cis i trans izomera) kao žuto ulje. Formula: C37H40O5tačna masa; 564.29, molekulska težina: 564.71.

[0106] Analitički podaci: MS (ESI+) izračunato za (C37H40O5Na<+>) [M+Na]<+>587.29, nađeno 587.30.

1-((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-Tris(benziloksi)-6-(benziloksimetil)-tetrahidro-2H-piran-2-il)propan-1,2-diol

[0107] OsO4(5 g, u 70 mL t-BuOH) se na rt doda u rastvor (2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-2-((benzyloksi)metil)-6-(prop-1-en-1-il)tetrahidro-2H-pirana (48 g, 0.085 mol) i 4-metilmorfolin N-oksida (39.8 g, 0.34 mol) u sistemu smeše THF/dioksan (100 mL/100 mL). Dobijena smeša se meša u toku noći na rt. Reaktivna smeša se sipa u zasićeni vodeni rastvor Na2S2O3(300 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (300 mL x 3), suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod vakuumom da se dobije ostatak koji se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u DCM (10~20%) da se dobije željeni produkt (34.0 g, 67% prinos, smeša izomera) kao bela čvrsta supstanca.

[0108] Formula: C37H42O7tačna masa; 598.29, molekulska težina: 598.73.

[0109] Analitički podaci:<1>H-NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.42 - 7.12 (m, 20H), 4.66 -4.36 (m, 7H), 4.08 - 3.93 (m, 3H), 3.92-3.85(m, 2 H), 3.83 - 3.68 (m, 2H), 3.64 - 3.58 (m, 2H), 3.52-3.44 (m, 1 H), 1.25 - 1.17 (m, 3H). MS (ESI+) izračunato za (C37H42O7Na<+>) [M+Na]<+>621.29, nađeno 621.30.

(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-Tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-karbaldehid

[0110] U rastvor 1-((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-benziloksimetil)-tetrahidro-2H-piran-2-il)propan-1,2-diola (13.0 g, 21.7 mmol) u smeši THF/dioksan (120 mL/120 mL), se doda NaIO4(13.0 g, 60.75 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 h u atmosferi N2na rt. Po završetku, reakcija se neutrališe sa ledenom vodom (100 mL) i ekstrahuje sa DCM (250 mL x 3). Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom (100 mL), suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije željeni produkt (12.9 g, sirovi) koji se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.

[0111] Formula: C35H36O6tačna masa; 552.25, molekulska težina: 552.66.

[0112] Analitički podaci: ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C35H36O6Na<+>) 575.24, nađeno 575.20.

2

(R/S)-(4-brom-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol

[0113] Standardni postupak: u bocu zapremine 150 mL sa Et2O se na -78 °C u atmosferi N2doda 4-bromo-1-jod-2-metilbenzen (22.6 g, 76.1 mmol) u anhidrovanom Et2O (10 mL).

Nakon toga se u kapima na -78 °C doda n-BuLi u heksanima (2.5 M, 26 mL, 65 mmol) i meša još jedan sat. Nakon toga se pomoću kanile u toku 5 minuta dodaje sveže izrađen sirovi (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-karbaldehid (12.0 g, 21.7 mmol) rastvoren u Et2O (90 mL). Smeša se meša 30 min na -78 °C i nakon toga polako zagreje na 0 °C u periodu od 1.5 h. Reaktivna smeša se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc (250 mL x 3). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (100 mL), suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom a ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM/EtOAc/petrol etar da se dobije (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol (4.0 g, 25% prinos iz dve faze) kao svetlo žuto ulje i (S)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol (8.0 g, 51% prinos iz dve faze) kao svetlo žuto ulje. (R) izomer:

Formula: C42H43BrO6tačna masa: 722.22 molekulska težina: 723.69

[0114] Analitički podaci za 1R:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.41-7.28 (m, 21H), 7.18-7.13 (m, 2H), 5.08 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.64-4.56 (m, 3H), 4.49 (s, 2H), 4.40 (s, 2H), 4.28 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 4.10 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.99-3.94 (m, 1H), 3.89 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 3.83-3.70 (m, 2H), 3.49 (br. s., 1H), 2.29 (s, 3H). ESI-MS [M+Na<+>] izračunato za (C42H43BrO6Na) nađeno: 745.5 (100%), 747.5 (97.3%) (S) izomer:

Formula: C42H43BrO6tačna masa: 722.22 molekulska težina: 723.69

[0115] Analitički podaci za 1S:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.16 (m, 23H), 5.06 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.73 - 4.67 (m, 1H), 4.62 - 4.44 (m, 7H), 4.11 - 4.03 (m, 2H), 3.85 - 3.76 (m, 3H), 3.73 - 3.67 (m, 2H), 3.19 (br. s., 1H), 2.18 (s, 3H).

ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za C42H43BrO6Na<+>745.21, nađeno 745.5 (100%), 747.5

(97.3%).

(4-brom-2-metilfenil)((2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanon

[0116] U izmešani rastvor (S)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanola (2.9 g, 0.004 mol) u bezvodnom DCM (200 mL), se na 0 °C doda bezvodni piridin (0.79 g, 0.01mol) u atmosferi N2. U porcijama se dodaje Dess-Martin perjodinan (3.4 g, 0.008 mol) i reaktivna smeša se čuva 1 sat na 0 °C i nakon toga se ostavi da se zagreje na 15 °C u toku još 1.5 sat. Reaktivna boca se ohladi u ledenom kupatilu i doda se 1:1 smeša 10% rastvora Na2S2O3(30 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(30 mL) i reakcija se meša 5 min na rt. Slojevi se nakon toga razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (20 mL x 3). Organske frakcije se kombinuju i isperu sa rastvorom NaHCO3, nakon toga razdvoje, suše preko Na2SO4i koncentruju pod vakuumom bez zagrevanja i prečiste hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (12%) da se dobije keton (2.03 g, 70%) kao žuto ulje (2.03 g, 70%, sirovi).

[0117] Formula: C42H41BrO6tačna masa; 720.21, molekulska težina: 721.68.

(R)-(4-brom-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol

[0118] U izmešani rastvor (4-bromo-2-metilfenil)((2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanona

[0119] (2.03 g, 2.8 mmol) u bezvodnom THF (200 mL) se u atmosferi N2na -40 °C doda LTBA (8.2 mL, 8.2 mmol, 1M rastvor u THF). Smeša se zagreje na 0 °C i meša još 1 h. Kada TLC analiza pokaže da je reakcija završena, reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc (400 mL).

2

Doda se zasićeni vodeni rastvor kalijum natrijum tartarata (200 mL) i smeša se energično meša 1 h na rt. Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2x100mL), a kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom DCM/EtOAc/petrol etar da se dobije željeni izomer 1R (1.62 g, 80% prinos) kao žuto ulje.

[0120] Analitički podaci – kako je prethodno zabeleženo.

(R)-(4-brom-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro- 2H-piran-2-il)metil acetat

[0121] Dimetilaminopiridin (21 mg, 0.17 mmol) i (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol (2.45 g, 3.4 mmol) se rastvore u bezvodnom piridinu (10 mL) u atmosferi N2. U kapima se u toku 5 min dodaje acetatni anhidrid (518 mg, 5.08 mmol). Nakon 1 h mešanja na rt, reaktivna smeša se ohladi na 0 °C i neutrališe sa MeOH (2 mL) i rastvarači se upare pod vakuumom. Ostatak se ponovo rastvori u DCM (30 mL) i po redu ispere sa vodom (30 mL), 1 N aq. HCl (30 mL x 2) i vodom (30 mL) a nakon toga suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (0~20%) da se dobije željeni produkt 3 (2.5 g, 96% prinos) kao žuto ulje.

[0122] Formula: C44H45BrO7tačna masa; 764.23, molekulska težina: 765.73.

[0123] Analitički podaci:<1>H-NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.32 - 7.24 (m, 14H), 7.23 -7.14 (m, 8H), 7.02 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.30 (m, 7H), 4.25 (dd, J= 6.9 Hz, 3.7 Hz, 1H), 3.99 - 3.82 (m, 2H), 3.78 - 3.52 (m, 4H), 2.31 (s, 3H), 1.85 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C44H45BrO7Na<+>) 787.22, nađeno 787 &789

2

(2R,3R,4S,5R,6R)-2-((R)-Acetoksi(4-bromo-2-metilfenil)metil)-6-(acetoksimetil)tetrahidro-2H-piran- 3,4,5-triil triacetat

[0124] (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat

[0125] (340 mg, 0.44 mmol) se rastvori u bezvodnom DCM (15 mL) u atmosferi N2i reaktivna smeša se ohladi na -78 °C. U kapima se doda bor trihlorid (3.56 mL, 1M u DCM, 3.56 mmol) i reaktivna smeša se meša 30 min. Po završetku, reakcija se neutrališe dodavanjem MeOH (2 mL). Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom a ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (MeOH/DCM) da se dobije debenzilisani međuproizvod. Ovaj međuproizvod (~150 mg) se ponovo rastvori u bezvodnom piridinu (3 mL) u atmosferi N2i reakcija se ohladi na 0 °C. Doda se dimetilaminopiridin (2.5 mg, 0.02 mmol), a nakon toga acetatni anhidrid (230 mg, 2.3 mmol) i reaktivna smeša se meša 5 min na 0 °C a zatim ostavi da temperatura dostigne r.t. Nakon 1 h, reakcija se ponovo ohladi na 0 °C i neutrališe sa MeOH (2 mL). Rastvarači se uklone pod vakuumom a ostatak se nakon toga ponovo rastvori u DCM (25 mL) i po redu ispere sa vodom (10 mL), 1 N aq. HCl (10 mL x 2) i vodom (10 mL). Organski sloj se izdvoji, suši preko Na2SO4i filtrira.

[0126] Filtrat se koncentruje pod vakuumom a ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru da se dobije željeni produkt (200 mg, 79% iz dve faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0127] Formula: C24H29BrNaO11tačna masa; 572.09, molekulska težina: 573.38.

[0128] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 7.36-7.32 (m, 2H), 7.24 - 7.21 (m, 1H), 6.19 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 5.54 (t, J= 3.3 Hz, 1H), 5.37 (dd, J1 = 9.0 Hz, J2= 3.6 Hz, 1H), 5.18 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 2H), 4.02 - 3.91 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.08 (s, 6H), 2.03 (s, 3H), 1.97 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C24H29BrNaO11Na<+>), 595.08, nađeno 595.2 (100%), 597.3 (97.3%).

2

[0129] (2R,3R,4S,5R,6R)-2-((R)-Acetoksi(2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metil)-6-(acetoksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat U atmosferi vodonika, smeša (2R,3R,4S,5R,6R)-2-(acetoksimetil)-6-(4-bromo-2-metilbenzoil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (500 mg, 0.87 mmol), bis(pinakolato) dibora (243.5 mg, 0.96 mmol), kalijum acetata (256.1 mg, 2.61 mmol) i (1.1’-bis(difenilfosfino) ferocen)dihlorpaladijum(II) dihlormetan kompleksa (Pd(dppf)Cl2.DCM) (71mg, 0.09 mmol) u dioksanu (10 mL) se zagreva na 90 °C uz mešanje u toku 3 h. Po završetku, reakcija se ohladi na rt i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (0~25%) da se dobije željeni produkt (480 mg, 89% prinos) kao svetlo žuto ulje (čistoća 90%).

[0130] Formula: C30H41BO13tačna masa; 620.26, molekulska težina: 620.46.

[0131] Analitički podaci:<1>H-NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.66-7.56 (m, 1H), 7.38-7.28 (m, 1H), 7.22-7.19(m, 1H), 6.21 (dd, J = 26.3 Hz, 6.8 Hz, 1H), 5.58-5.52 (m, 1H), 5.41-5.33 (m, 1H), 5.20-5.11 (m, 1H), 4.25-4.19 (m, 2H), 4.00 - 3.91 (m, 2H), 2.42 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 9H), 1.94 (d, J= 2.8 Hz, 3H), 1.32-1.19 (m, 12H).

[0132] ESI-MS [M+H]<+>izračunato za (C30H41BO13H) 621.26, nađeno 621.0

(R)-(2-Metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-(benziloksimetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat

[0133] U atmosferi azota, smeša (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-

2

tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetata (1.2 g, 1.57 mmol), bis(pinakolato) dibora (438 mg, 1.72 mmol), kalijum acetata (462 mg, 4.71 mmol) i (1.1’-bis(difenilfosfino)ferocen)dihlorpaladijum(II)dihlormetan kompleksa (Pd(dppf)Cl2.DCM) (131 mg, 0.16 mmol) u dioksanu (10 mL) se meša 16 h na 90 °C. Po završetku, reakcija se ohladi na rt, a nakon toga se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (0~20%) da se dobije željeni boronat (920 mg, 72% prinos) kao žuto ulje.

[0134] Formula: C50H57BO9tačna masa; 812.14, molekulska težina: 812.79.

[0135] Analitički podaci:<1>H-NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.66-7.56 (m, 1H), 7.38-7.28 (m, 1H), 7.22-7.19 (m, 1H), 6.21 (dd, J = 26.3 Hz, 6.8 Hz, 1H), 5.58-5.52 (m, 1H), 5.41-5.33 (m, 1H), 5.20-5.11 (m, 1H), 4.25-4.19 (m, 2H), 4.00 - 3.91 (m, 2H), 2.42 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 9H), 1.94 (d, J= 2.8 Hz, 3H), 1.32-1.19 (m, 12H).

[0136] ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C50H57BO9NH4<+>) 830.41, nađeno 830.5.

(R)-(4-brom-2-trifluorometilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat & (S)-(4-bromo-2-trifluorometilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat

[0137] Po postupku koji je ranije opisan za (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol, 4-bromo-1-jod-2-(trifluorometil)benzen (6.24 g, 18 mmol) se tretira sa n-BuLi i reaguje sa (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-karbaldehidom (3.3 g, 6.0 mmol). Prečisti se combiflash hromatografijom (faza A: petrol etar; faza B:

DCM/EtOAc/petrol etar (20/1/2), brzina protoka: 80 mL/min; gradijent 30%B - 70% B za 60 min. (R)-alkohol se eluira za 30 min i (S)-alkohol se eluira za 50 min) da se dobije (R)-alkohol (1.2 g, pretpostavljeno, 26% iz dve faze) kao svetlo žuto ulje i (S)-alkohol (1.2 g, pretpostavljeno, 26% iz dve faze) kao svetlo žuto ulje. Po postupku acetilacije prethodno

2

opisane za (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)- 6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat, (S)-alkohol (1.1 g) se zaštiti da se dobije (S)-acetat (1.1 g, 95%) a (R)-alkohol (1.1 g) se zaštiti da se dobije (R)-acetat (1.2 g, 99%).

[0138] Formula: C44H42BrF3O7tačna masa: 818.21 molekulska težina: 819.7.

[0139] Analitički podaci za (R)-izomer:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.77 - 7.66 (m, 2H), 7.33 - 7.17 (m, 20H), 6.20 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.49 (m, 4H), 4.43 - 4.37 (m, 1H), 4.33 - 4.25 (m, 3H), 4.03 - 4.00 (m, 1H), 3.89 - 3.86 (m, 1H), 3.77 - 3.72 (m, 2H), 3.61 - 3.45 (m, 2H), 1.92 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C44H42BrF3O7Na<+>) 841.20, nađeno 841.40, 843.40.

[0140] Analitički podaci za (S)-izomer:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.36 - 7.20 (m, 20H), 6.28 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.60 - 4.56 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 4.39 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.22 - 4.18 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 3H), 3.85 -3.82 (m, 1H), 3.69 - 3.66 (m, 1H), 3.58 - 3.52 (m, 1H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 1.96 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C44H42BrF3O7Na<+>) [M+Na]<+>841.20, nađeno 841.0.

PRIMER 1

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0141]

[0142] Po Šemi D, (R)-(2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.25 mmol) i 5-bromo-1,3-difluoro-2-metilbenzen (56 mg, 0.27 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (1 h na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 60 min na -78 °C) i nakon toga deprotektuju po protokolu A (1h na rt) nakon toga prečiste Prep-HPLC sa uslovima: XBridge Prep C18 OBD kolona 19x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 20 mL/min; gradijent: 27% B do 50% B za 7 min; 254 nm; Rt: 6.23 min da se dobije naslovljeno jedinjenje (30 mg, 30% prinos iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0143] Formula: C21H24F2O6. Tačna masa: 410.15, molekulska težina: 410.41.

[0144] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 7.62 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.51 -4

7.41 (m, 2H), 7.22-7.19 (m, 2H), 5.24 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 6.8 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.07-4.03 (m, 1H), 3.80 - 3.62 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 2.23 (s, 3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C21H24F2O6NH4<+>) 428.19, nađeno 428.20.

PRIMER 2

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-hlor-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0145]

[0146] Po Šemi D, (R)-(2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.25 mmol) i 5-bromo-2-hlor-1,3-difluorobenzen (67 mg, 0.29 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (40 min na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 40 min na -78 °C) i nakon toga deprotektuju po protokolu A (40 min na 0 °C). Prečišćavanjem ostatka Prep-HPLC sa uslovima: XBridge Prep OBD C18 kolona 30 x 150 mm 5 um; mobilna faza A: dioksan (10 mmol/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 60 mL/min; gradijent: 5% B do 65% B za 1 min; 254 nm; Rt: 6.17 min dobija se naslovljeno jedinjenje (41.0 mg, 39% prinos iz tri faze) kao bela

1

čvrsta supstanca.

[0147] Formula: C20H21ClF2O6tačna masa: 430.10 molekulska težina: 430.83

[0148] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ<1>H NMR (300 MHz, Metanold4) δ 7.64 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.54 - 7.38 (m, 4H), 5.25 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.23 (t, J =2.8 Hz 1H), 4.10 (dd, J = 6.7, 2.6 Hz, 1H), 4.05-4.02 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 4H), 2.51 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C20H21ClF2O6Na<+>), 453.09, nađeno 453.10.

PRIMER 3

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-brom-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0149]

[0150] 4-brom-3,5-difluorofenil trifluorometansulfonat

U rastvor 4-bromo-3,5-difluorofenola (300 mg, 1.44 mmol) u THF (5 mL) se na 25 °C dodaju NaOtBu (276 mg, 2.9 mmol) i PhN(SO2CF3)2(569 mg, 1.6 mmol). Dobijena smeša se meša 3 h na 25 °C. Reakcija se neutrališe sa vodom (10 mL), ekstrahuje sa EtOAc (20 mL x 3) i suši preko Na2SO4. Rastvarač se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (0~10%) da se dobije 4-bromo-3,5-difluorofenil trifluorometansulfonat (120 mg, 25% prinos) kao bezbojno ulje.

[0151] Formula: C7H2BrF5O3S tačna masa; 339.88, molekulska težina: 341.05.

[0152] MS (ESI+) [M+H]<+>izračunato za (C7H2BrF5O3SH-) 340.89, nema MS signala.

2

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-brom-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0153] Po Šemi D, (R)-(2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.25 mmol) i 4-bromo- 3,5-difluorofenil trifluorometansulfonat (100 mg, 0.29 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (2 h na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 60 min na -78 °C) i nakon toga deprotektuju po protokolu A (1h na rt). Prečišćavanjem ostatka Prep-HPLC sa uslovima: kolona: XBridge Shield RP 18 OBD kolona 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 60 mL/min; gradijent: 5% B do 60% B za 7 min; 254 nm; Rt: 6.50 min dobija se naslovljeno jedinjenje (24 mg, 20% prinos iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0154] Formula: C20H21BrF2O6. Tačna masa: 474.05. molekulska težina: 475.28.

[0155] Analitički podaci:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7.65 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.55 -7.48 (m, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 5.25 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.23 (t, J =2.9 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 6.7 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.06-4.03 (m, 1H), 3.76 - 3.60 (m,4H), 2.52 (s,3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C20H21BrF2O6NH4<+>) 492.08, nađeno 492.05.

PRIMER 4

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-4’-vinil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0156]

[0157] 5-brom-1,3-difluoro-2-vinilbenzen

U rastvor metiltrifenilfosfonijum bromida (6.92 g, 19.4 mmol) u THF (20 mL) se na 0 °C u atmosferi N2doda NaHMDS (17.8 mL, 1M u THF). Dobijeni rastvor se meša 30 min na 0 °C. Nakon toga se u ovaj rastvor na 0 °C doda 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehid (3.0 g 13.6 mmol). Dobijeni rastvor se meša 3 h na 0 °C. Reakcija se neutrališe sa vodom (20 mL), ekstrahuje sa EtOAc (20 mL x 3), nakon toga suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa petrol etrom da se dobije naslovljeni produkt (1.5 g, 50%) kao žuto ulje. Formula: C8H5BrF2tačna masa; 217.95, molekulska težina: 219.03.

[0158] MS (ESI+) [M+H]<+>izračunato za (C8H5BrF2H<+>) 220.04, nema mass signala.

[0159] 2-(3,5-Difluoro-4-vinilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan

Smeša 5-bromo-1,3-difluoro-2-vinilbenzena (500 mg, 2.3 mmol), bis(pinakolato) dibora (640 mg, 2.5 mmol), (1.1’-bis(difenilfosfino)ferocen)dihlorpaladijum(II) dihlormetan kompleksa (187 mg, 0.23 mmol) i KOAc (674 mg, 6.9 mmol) u dioksanu (5 mL) se meša 12 h na 80 °C u atmosferi N2. Po završetku, reakcija se ohladi na 25 °C. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (5 mL) a nakon toga ekstrahuje sa EtOAc (10 mL x 3), suši preko Na2SO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa petrol etrom da se dobije naslovljeni produkt (270 mg, 44%) kao žuto

4

ulje.

[0160] Formula: C14H17BF2O2tačna masa; 266.13, molekulska težina: 266.09.

[0161] MS (ESI+) [M+H]<+>izračunato za (C14H17BF2O2H<+>) 267.14, nema mass signala.

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-4’-vinil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0162] Po Šemi B, (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.26 mmol) i 2-(3,5-difluoro-4-vinilfenil)-4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (80 mg, 0.3 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (40 min na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1 M u DCM, 40 min na -78 °C) i nakon toga deprotektuju po protokolu A (40 min na 23°C). Prečišćavanjem ostatka Prep-HPLC sa uslovima: kolona: XBridge Shield RP18 OBD kolona 30<*>150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda (0.1% mravlja kiselina), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 60 mL/min; gradijent: 5% B do 50% B za 10 min; 254 nm; Rt: 9.77 min) se dobije naslovljeno jedinjenje (30 mg, 27% prinos iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0163] Formula: C22H24F2O6, tačna masa: 422.15, molekulska težina: 422.42.

[0164] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 7.62 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.55 -7.42 (m, 2H), 7.27-7.25 (m, 2H), 6.82-6.72 (m, 1H), 6.04 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 5.60 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 5.23 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.23 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 4.09 (dd, J= 2.6 Hz, 9.4 Hz, 1H), 4.05-4.00 (m, 1H), 3.73-3.66 (m, 4H), 2.50 (s, 3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C22H24F2O6NH4<+>) 440.16, nađeno 440.20.

PRIMER 5

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-Fluoro-3-metil-4’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0165]

[0166] Po Šemi B, (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (220 mg, 0.29 mmol) i komercijalno raspoloživa (3-fluoro-4-(trifluorometil) fenil)borna kiselina (72 mg, 0.35 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (45 min na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 45 min na -78 °C) i deprotektuju po protokolu A (1 h na 0 °C). Prečišćavanjem ostatka prep-HPLC sa uslovima: XBridge Prep OBD C18 kolona 19x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 20 mL/min; gradijent: 25% B do 55% B za 7 min; 254/220 nm; Rt: 6.17 min dobija se željeni produkt (49.0 mg, 38% iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0167] Formula: C21H22F4O6tačna masa: 446.14, molekulska težina: 446.39.

[0168] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 7.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.66 -7.51 (m, 5H), 5.26 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 3.0 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 6.7 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.07 - 4.03 (m, 1H), 3.72 - 3.67 (m, 4H), 2.53 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C22H24F2O6Na<+>) 469.13, nađeno 469.25.

PRIMER 6

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-Fluoro-3-metil-5’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0170] Po Šemi B, (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.26 mmol) i komercijalno raspoloživa (3-fluoro-5-(trifluorometil)fenil)borna kiselina (108 mg, 0.52 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (1.0 h na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 1 h na -78 °C) i nakon toga deprotektuju po protokolu A (1 h na 25 °C). Prečišćavanjem ostatka Prep-HPLC dobija se željeni produkt (40.0 mg, 34% iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0171] Formula: C21H22F4O6tačna masa: 446.14, molekulska težina: 446.39.

[0172] Analitički podaci:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7.75 (s, 1H), 7.70 - 7.67 (m, 2H), 7.55 (dd, J =8.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 3.0 Hz, 1H), 4.11 (dd, J=6.8 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.06 (dd, J= 8.0 Hz, 3.5 Hz, 1H), 3.74 - 3.64 (m, 4H), 2.53 (s, 3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C21H22F4O6NH4<+>) 464.17, nađeno 464.05.

PRIMER 7

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-hidroksi(3’,4’,5’-trifluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0173]

[0174] Po Šemi B, (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.26 mmol) i komercijalno raspoloživa (3,4,5-trifluorofenil)borna kiselina (91 mg, 0.52 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (1 h na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 1 h na -78 °C) a nakon toga deprotektuju po protokolu A (1 h na 25 °C).

Prečišćavanjem ostatka prep-HPLC dobija se željeni produkt (25.0 mg, 23% iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0175] Formula: C20H21F3O6tačna masa: 414.13, molekulska težina: 414.37.

[0176] Analitički podaci:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.0 Hz, 2.1 Hz, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 3H), 5.25 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 3.0 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 6.8 Hz, 2.6 Hz, 1H), 4.07-4.04 (m, 1H), 3.77 - 3.58 (m, 4H), 2.51 (s, 3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C20H21F3O6NH4<+>) 432.16, nađeno 432.15.

PRIMER 8

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0177]

[0178] Po Šemi B, (R)-(4-bromo-2-trifluorometilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metil acetat (200 mg, 0.24 mmol) i komercijalno raspoloživa (3,5-difluorofenil)borna kiselina (50 mg, 0.32 mmol) reaguju po standardnom postupku Suzuki udvajanja (1 h na 80 °C), nakon toga deprotektuju po protokolu B (BCl3, 1M u DCM, 30 min na -78 °C) a nakon toga deprotektuju po protokolu A (1 h na 25 °C). Prečišćavanjem ostatka Prep-HPLC (sa uslovima: kolona: Xbridge Shield RPC18 OBD kolona, 19x150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 20 mL/min; gradijent: 25% B do 50% B za 7 min; 254 nm; Rt: 5.98 min) dobija se željeni produkt (60 mg, 56% iz tri faze) kao bela čvrsta supstanca.

[0179] Formula: C20H19F5O6tačna masa: 450.11, molekulska težina: 450.36.

[0180] Analitički podaci:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.02 - 74.90 (m, 3H), 7.39 -7.27 (m, 2H), 7.05 - 7.00 (m, 1H), 5.38 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 4.32 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 4.19 (dd, J= 6.8 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 8.8 Hz, 3.4 Hz, 1H), 3.75 (t, J= 8.5 Hz, 1H), 3.70 - 3.58 (m, 3H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C20H19F5O6NH4<+>) 468.14, nađeno 468.20.

PRIMER 9

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0181]

[0182] (R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol

U bocu okruglog dna sa tri grla zapremine 10-L prečišćenu i održavanu u inertnoj atmosferi azota, se sipaju (R)-(4-bromo-2-metilfenil)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)- 6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol (230 g, 317 mmol, 1 equiv), smeša dioksan: H2O (4:1) (2.3 L), (3,5-difluorofenil)borna kiselina (55.2 g, 349 mmol, 1.1 equiv), Cs2CO3(310.6 g, 953 mmol, 3.0 equiv) i Pd(PPh3)4(18.4 g, 15.9 mmol, 0.05 equiv). Dobijeni rastvor se meša 1 h na 80 °C u uljanom kupatilu. Čvrste supstance se izdvoje filtriranjem. Filtrat se ekstrahuje sa 3x4 L etil acetata. Dobijena smeša se ispere sa 2x4 L zasićenog rastvora NaCl. Smeša se suši preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruje. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa EtOAc u petrol etru (3%) da se dobije 197 g (82 %) željenog produkta kao svetlo žuto ulje.

[0183] Formula: C48H46F2O6tačna masa: 756.33, molekulska težina: 756.87

[0184] Analitički podaci:<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.30 (dddd, J = 20.6, 8.1, 6.4, 3.9 Hz, 21H), 7.16 (dd, J = 6.6, 2.9 Hz, 2H), 7.11 - 7.00 (m, 2H), 6.81 (tt, J = 8.9, 2.4 Hz, 1H), 6.40 - 6.26 (m, 1H), 5.19 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 4.42 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 4.37 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.25 -4.01 (m, 5H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 3.69 (dd, J = 10.6, 4.2 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H). ESI-MS [M+Na]<+>izračunato za (C48H46F2O6Na<+>) 779.33, nađeno 779.33.

(2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-Difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triol

[0185] Izradi se rastvor (R)-(3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benziloksi)-6-((benziloksi)metil)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanola (1.00 g, 1.32 mmol) u metanolu (20 mL, 20 volumes) zajedničkim zagrevanjem do blizu refluksa. Smeša se prenese u Hastelloy reaktor pod visokim pritiskom, ohladi na RT i doda se JM Type 10T755 (10% m/m Pd) paladijum na aktivnom uglju (100 mg, 10 mt%) u jednoj porciji. Ova suspenzija se hidrogenizuje pod pritiskom H2od 60 psig u toku 5.75 h na 45 °C. Suspenzija se filtrira kroz celite ploču koja se ispere sa dodatnom količinom MeOH i filtrat se koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao siva čvrsta supstanca (525 mg, 1.32

4

mmol, ~100% sirovi prinos).

[0186] Formula: C20H22F2O6tačna masa: 396.14, molekulska težina: 396.38

[0187] Analitički podaci:<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 2.39 (s, 3H), 3.55-3.60 (m, 4H), 3.92-3.96 (m, 1H), 3.99 (dd, J = 6.6, 2.4 Hz, 1H), 4.13 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.80 (tt, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 7.10-7.14 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.37 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.1 Hz, 1H). ESI-MS [M+NH4]<+>izračunato za (C20H22F2O6NH4<+>) 414.17, nađeno 414.15.

[0188] Naredni primeri (jedinjenja u Tabeli 1) su izrađeni koristeći postupke koji su ovde opisani, pri čemu navedeni Primeri imaju Formulu I.

Tabela 1

n l

n l

4 (nastavlja se)

n l

4 (nastavlja se)

4 n l

4 n l

4 (nastavlja se)

4 n l

(nastavlja se)

Biološki protokoli korišćeni za procenu jedinjenja iz pronalaska

[0189] Aktivnosti prethodno navedenih jedinjenja iz Primera 1-108 kao FimH antagonista/inhibitora su dobijene sledećom analizom(ama) a rezultati su dati u Tabeli 2. Nedostajući rezultati znače da te aktivnosti još nisu testirane.

1

ANALIZA INHIBICIJE HEMAGLUTINACIJE (HAI)

[0190] Analiza inhibicije hemaglutinacije (HAI) je izvedena sa UTI89 bakterijom i ćelijama crvenih krvnih zrnaca zamoraca, kako je prethodno opisano (S. J. Hultgren, W. R. Schwan, A. J. Schaeffer, J. L. Duncan Infect. Immun.1986, 54, 613-620 i Jarvis, C.; Han, Z.; Kalas, V.; Klein, R.; Pinkner, J. S.; Ford, B.; Binkley, J.; Cusumano, C. K.; Cusumano, Z.; Mydock-McGrane, L.; Hultgren, S. J.; Janetka, J. W., ChemMedChem 2016, 11, 367-373). Rezultati su navedeni u Tabeli 2. Vrednosti koje nisu navedene znači da testiranje nije izvršeno.

Opšte analize za dobijanje AUC za oralne h<*>µm, %F i Ue% PO vrednosti

1.1. Životinje

[0191] Mužjaci Wistar Han pacova su nabaveljeni od Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd (Beijing, China). Životinje su bile starosti približno 6-8 nedelja uz telesnu težinu od 200-300 g na dan doziranja. Životinje su smeštene u sredinu sa ciklusom 12 sati svetlost/12 sati mrak i uz slobodan pristup hrani i vodi. Sve životinje su hranjene pre doziranja. Studije su odobrene od strane Pharmaron Institutional Animal Care i Use Committee (IACUC).

1.2. Koncept studije

[0192] Mužjaci Wistar Han pacova (n=3 po doznoj grupi) su dodeljeni u grupu 1 kako je pokazano u niže datoj tabeli. Test uzorak je primenjen kao intravenska infuzija u toku 1 sat (1 mg/kg) u količini od 5 mL/kg/h. Nakon 48h, životinje su primile jednu oralnu dozu (5 mg/kg, slobodan oblik) u dozi zapremine od 10 mL/kg, tim redom. Uzorci krvi su uzimani u različitim vremenskim tačkama nakon IV infuzije i PO primene. Uzorci urina su uzimani u različitim vremenskim tačkama nakon IV infuzije i PO primene.

2

1.3. Priprema formulacije

[0193] Izrada doze za primenu IV infuzije (1 mg/kg):

test uzorak se rastvori u DMSO uz intenzivno mešanje i sonifikaciju da se dobije osnovni rastvor. Alikvot osnovnog rastvora se meša sa 10% HP-β-CD u fiziološkom rastvoru uz mešanje, da se dobije rastvor sa koncentracijom od 0.2 mg/mL test uzorka.

[0194] Izrada doze za PO primenu (5 mg/kg):

test uzorak se doda u 1% metil celulozu uz mešanje i sonikaciju da se dobije homogena suspenzija uz koncentraciju test uzorka od 0.5 mg/mL.

1.4. Uzimanje uzorka

Uzorci krvi

[0195] Kod primene IV infuzije (1 mg/kg), uzorci krvi su uzimani od svake životinje za 0, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.08, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 3, 5, 8, 12, 24 sata nakon doze.

[0196] Za PO primenu (5 mg/kg), uzorci krvi su uzimani od svake životinje za 0, 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24 sata nakon doze.

[0197] Uzorci krvi (50 µL) su uzimani iz jugularne vene svake životinje. Ovi uzorci krvi su preneti u kivete koje sadrže K2EDTA. Cela krv se izmeša sa istom zapreminom vode i invertuje više puta. Uzorci krvi se čuvaju na -75±15°C do analize.

Uzorci urina:

[0198] Za primenu IV infuzijom (1 mg/kg), uzorci urina su od svake životinje uzeti za 0-4, 4-8, 8-12, 12-24 sata nakon doze.

[0199] Za PO primenu(5 mg/kg), uzorci urina su uzeti od svake životinje za 0-4, 4-8, 8-12, 12-24 sata nakon doze.

[0200] Uzorci urina su kontinuirano sakupljani u kontejnere koji se nalaze na suvom ledu, u niže navedenim intervalima i čuvani na -80°C pre analize.

.5. Izrada standardnih rastvora za LC-MS/MS analize

[0201] 10 mg/mL osnovnog rastvora test uzorka se razblaži sa DMSO da se dobije 1 mg/mL standardnog osnovnog rastvora (slobodni oblik).

[0202] Kalibracioni standardni radni rastvori su izrađeni u koncentracijama od 5, 10, 20, 50, 100, 500, 1000, 5000 i 10000 ng/mL serijskim razblaženjem standardnog osnovnog rastvora u 50% rastvoru acetonitrila u vodi. Radni rastvori za kontrolu kvaliteta u koncentracijama od 10, 500 i 8000 ng/mL su izrađeni serijskim razblaženjem standardnog osnovnog rastvora u 50% rastvoru acetonitrila u vodi. Ovi QC uzorci su izrađeni na dan analiza na isti način kao kalibracioni standardi.

1.6. Tretman uzoraka

[0203] 5 µL svakog standardnog radnog rastvora za kalibraciju (5, 10, 20, 50, 100, 500, 1000, 5000 i 10000 ng/mL) se doda u 50 µL blank krvi Wistar Han pacova (Blank krv:voda=1:1) ili urina da se postignu standardi kalibracije od 0.5-1000 ng/mL (0.5, 1, 2, 5, 10, 50, 100, 500, 1000 ng/mL) u ukupnoj zapremini od 55 µL. Uzorci kontrole kvaliteta (QC) za 1 ng/mL (nisko), 50 ng/mL (srednje), 800 ng/mL (visoko) za krv ili urin su nezavisno izrađeni za one koji se koriste za kalibracione krive. Ovi QC uzorci su izrađeni na dan analiza na isti način kao standardi kalibracije.

[0204] 55 µL standarda, 55 µL QC uzorka ili 55 µL nepoznatog uzorka (50 µL krvi ili urina sa 5 µL 50% acetonitrila) se izmeša sa 200 µL acetonitrila koji sadrži IS (deksametazon) za precipitaciju proteina. Nakon toga se uzorci energično mešaju 30 sec. Nakon 30 min centrifugiranja na 4°C, pri 4700 opm, 5 µL supernatanta se injektuje u LC-MS/MS sistem za kvantitativnu analizu.

1.7. Farmakokinetičke analize

[0205] Koncentracije test uzorka u krvi i urinu za svaku životinju nakon IV infuzije od 1 mg/kg i PO od 5 mg/kg se koriste za izračunavanje farmakokinetičkih parametara primenom nekompartmentalnih analiza (Phoenix TM WinNon-lin® 7.0). Linearni trapezoidalni algoritam je korišćen za izračunavanje AUC.

4

AUC oral h<⁎>uM: Profil oblasti ispod koncentracija u krvi - vreme (jedinice: h<*>µM) nakon oralne primene

%F: Oralna bioraspoloživost (%) dobijena iz odnosa doza-normalizovana AUC nakon PO i IV primene

Ue% PO: Procenat oralne doze izlučene nepromenjene u urinu

Tabela 2

(nastavla se)

n l

(nastavla se)

Legenda za Tabelu 2

HAI nM

<50 "++++"

50-200 "+++"

201-1000 "++"

>1000 "+"

[0206] Iz prethodno datog opisa, stručnjak sa iskustvom u tehnici može lako da utvrdi bitne karakteristike ovog pronalaska, može da izvrši različite promene i modifikacije u pronalasku i da ga prilagodi različitoj upotrebi i uslovima.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,

   naznačena time što R1je CH3, CF3, ili Cl; R2je F, Cl, OR’, ili H; R3, R4i R5su nezavisno H, F, Cl, Br, C3-6cikloalkil, OR’, -N(C1-6alkil)2, C2-6alkenil, C2-6alkinil ili C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa do sedam atoma fluora, do jednom hidroksi, do jednom -N(C1-6alkil)2i do jednom -OC1-6alkil grupom; pod uslovom da svi R3, R4i R5nisu istovremeno vodonik. R5je H ili F; R’ je nezavisno H ili C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa do sedam atoma fluora.
2. 2. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno timešto je R1CH3ili CF3grupa.
3. 3. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačeno time što je R1= CH3grupa.
4. 4. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R1je CH3ili CF3; R2je H; R3je F; R4je CH3, Cl, Br, vinil, CF3, F, ili H; R5je F ili H; i R6je H.
5. 5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 4, naznačeno time što je izabrano od: (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-difluoro-3,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-hlor-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(4’-bromo-3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-difluoro-3-metil-4’-vinil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-fluoro-3-metil-4’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’-fluoro-3-metil-5’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3 S,4S,5S,6R)-2-((R)-hidroksi(3’,4’,5’-trifluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-difluoro-3-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola; i (2R,3S,4S,5S,6R)-2-((R)-(3’,5’-difluoro-3-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)(hidroksi)metil)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triola.
6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što je to 1
7. 7. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6 za upotrebu kao medikament.
8. 8. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time što je za upotrebu u prevenciji ili tretmanu bolesti ili stanja poboljšanih inhibicijom funkcije ili aktivnosti FimH.
9. 9. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time što je za upotrebu u prevenciji ili tretmanu bakterijske infekcije, Kronove bolesti (CD) i inflamatorne bolesti creva (IBD).
10. 10. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time što je za upotrebu u prevenciji ili tretmanu infekcije urinarnog trakta (UTI).
11. 11. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačeno time što je infekcija urinarnog trakta ponavljajuća ili hronična.
12. 12. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačeno time što je navedena bakterijska infekcija bakterijska infekcija rezistentna na antibiotik.
13. 13. Farmaceutska kompozicija naznačena time što uključuje jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. 2
14. 14. Farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, naznačena time što je formulisana za oralnu (PO) primenu, posebno pri čemu je navedena kompozicija tableta ili kapsula.
15. 15. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6; i drugo terapeutsko sredstvo. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5