RS63853B1

RS63853B1 - Proizvod za negu usta

Info

Publication number: RS63853B1
Application number: RS20221098A
Authority: RS
Inventors: Lorenzo Emiliano Boiocchi
Original assignee: Curasept A D S S P A
Priority date: 2019-03-01
Filing date: 2020-02-27
Publication date: 2023-01-31
Also published as: GEAP202215745A; AR118218A1; PH12021552109A1; EP3930663A1; SG11202108777SA; US12102701B2; IT201900003009A1; SI3930663T1; PY2013823A; US20220117868A1; DK3930663T3; CA3130899A1; PL3930663T3; AU2020230945A1; PT3930663T; LT3930663T; CL2021002237A1; UA127726C2; TW202100133A; MD3930663T2

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na proizvod za negu usta na bazi hlorheksidina i natrijumove DNK, kao što je na primer sredstvo za ispiranje usta, parodontalni gel ili pasta za zube, koji sprečava obrazovanje plaka na zubima i istovremeno ograničava pojavu i napredovanje iritacija oralnih mukoza čime se podstiče njihov trofizam.

STANJE TEHNIKE

[0002] Već neko vreme su poznati proizvodi za negu usta na bazi hlorheksidina, kao što su sredstva za ispiranje usta, jer ta aktivna supstanca predstavlja snažan antibakterijski agens zahvaljujući svojoj sposobnosti da prođe kroz spoljašnju membranu bakterija i da koaguliše njihove unutrašnje proteine. Takođe, hlorheksidin ispoljava intenzivno dejstvo protiv plaka. Rastvori koji sadrže hlorheksidin u različitim koncentracijama koriste se i za sprečavanje postoperativnih komplikacija. Patentna prijava JP-AH05-58866 opisuje kompozicije pasta za zube koje sadrže polivinilpirolidon/polioksietilenmonostearat, 0,1/0,05% hlorheksidinhidrohlorid i 0,1/0,2% natrijumovu so dezoksiribonukleinske kiseline za redukovanje bakterija sa površine zuba uz obezbeđivanje neantibakterijskog i baktericidnog dejstva za suzbijanje obrazovanja plaka, gingivitisa, parodontitisa i drugih parodontalnih bolesti. Patentna prijava US-A-5,662,889 otkriva upotrebu natrijumove DNK u kompozicijama za negu usta (tj. sredstvu za ispiranje usta ili u pasti za zube) zbog njenog snažnog dejstva protiv parodontoze. Patentna prijava EP-A1-0712936 otkriva upotrebu natrijumove DNK u kompozicijama za negu usta (tj. sredstvu za ispiranje usta ili u pasti za zube) zbog antiinflamatornog, antiseptičkog i antiparodontoznog dejstva. Patentna prijava JP-A-2018/203628 opisuje kompozicije za negu usta koje sadrže kopolimer polivinilpirolidonvinilacetat kao vezivo, vitamin C i pirosulfit kao antioksidans, hlorheksidin kao antiseptički agens, natrijumcitrat kao pH-regulator i DNK to jest dezoksiribonukleinsku kiselinu kao organski polimer.

[0003] Međutim, poznato je da produžena upotreba proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina može izazvati na primer iritaciju oralnih mukoza što, dugoročno gledano, može oštetiti njihov pravilan trofizam.

[0004] Prijavilac je zapravo došao do zaključka da, iako su korisna dejstva hlorheksidina pri lečenju gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa poznata, ostaju bojazni u pogledu njegove upotrebe za ta lečenja, naročito za dugoročna lečenja, koja proizilaze iz svesti o neželjenim reakcijama koje pomenuta aktivna supstanca izaziva na oralnim mukozama.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0005] Prema tome, predmet ovog pronalaska je da obezbedi nov proizvod za negu usta koji obuhvata hlorheksidin, koji je efikasan protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa te ima isceliteljsko i antiinflamatorno dejstvo i koji takođe neutrališe oksidativni stres, kako bi se ograničile pojava i napredovanje iritacija i promena ćelijske građe oralnih mukoza do kojih dovodi upotreba hlorheksidina i time podstakao trofizam samih oralnih mukoza.

[0006] U skladu s ovim pronalaskom, Prijavilac je nenadano došao do zaključka da se te željene karakteristike mogu postići primenom natrijumove DNK u kombinaciji sa hlorheksidinom.

[0007] Zbog toga se ovaj pronalazak odnosi na natrijumovu DNK za upotrebu u postupku za lečenje neželjenih reakcija na hlorheksidin kod pacijenta koji se podvrgava lečenju hlorheksidinom kao što je definisano u patentnom zahtevu 1.

[0008] Zaista je nenadano otkriveno da se spajanjem natrijumove DNK sa hlorheksidinom ne samo neutrališe iritirajuće dejstvo potonjeg na oralne mukoze, ispoljava zaštitno dejstvo na potonje i isceliteljsko dejstvo na moguće rane u usnoj duplji, nego se omogućava i ograničavanje neželjenih reakcija na produženu upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina, koje uključuju promene ćelijske građe, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0009] Zahvaljujući specifičnoj kombinaciji natrijumove DNK i hlorheksidina, proizvod za negu usta ima opseg karakteristika kojima se mogu prevazići ograničenja primene i funkcionalna ograničenja proizvoda za negu usta koji su bazirani samo na hlorheksidinu čime se proširuju mogućnosti primene i otklanjaju neke neželjene reakcije na njihovu produženu upotrebu.

[0010] Proizvod za negu usta može zapravo da spoji efikasno zaštitno dejstvo protiv neželjenih reakcija na hlorheksidin na ćelijskom nivou, čime ograničava pojavu i napredovanje promena ćelijske građe oralnih mukoza, s antibakterijskim dejstvom efikasnim protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa u kombinaciji sa isceljujućim i antiinflamatornim dejstvom koje može da neutrališe oksidativni stres te da ograniči pojavu i napredovanje iritacija oralnih mukoza čime se podstiče njihov trofizam. Te karakteristike čine njegovu upotrebu naročito poželjnom, čak i dugoročno, bez dolaženja do pojave iritirajućeg dejstva hlorheksidina na oralne mukoze i njihovih neželjenih reakcija na njega na ćelijskom nivou.

[0011] Prijavilac je određenije primetio da jedno od ograničenja primene i funkcionalnih ograničenja za upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina leži u pojavi – naročito u slučaju produžene upotrebe – neželjenih reakcija koje, uz iritaciju oralnih mukoza, podrazumevaju i promene na nivou ćelijske građe pomenutih mukoza, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0012] Tako je Prijavilac nenadano otkrio da se spajanjem natrijumove DNK sa hlorheksidinom ne samo neutrališe njegovo iritirajuće dejstvo na oralne mukoze, ispoljava zaštitno dejstvo na njih i isceliteljsko dejstvo na moguće rane usne duplje, nego se omogućava i ograničavanje neželjenih reakcija na produženu upotrebu pomenute aktivne supstance, koje uključuju promene ćelijske građe, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0013] To je Prijaviocu omogućilo da definiše i razvije novi proizvod za negu usta koji obuhvata hlorheksidin, dakle efikasan protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa, koji istovremeno ne može da izazove, ili može ozbiljno da ograniči, neželjene reakcije na produženu upotrebu pomenute aktivne supstance, koje uključuju iritacije pa čak i promene ćelijske građe oralnih mukoza, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0014] U svom poželjnom načinu ostvarivanja, pomenuti proizvod za negu usta odabran je iz grupe koju čine: sredstvo za ispiranje usta, parodontalni gel i pasta za zube.

[0015] U svom poželjnom načinu ostvarivanja, proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata od 0,01mas.% do 0,30mas.% hlorheksidina, od 0,01mas.% do 0,2mas.% natrijumove DNK, od 0,1mas.% do 0,5mas.% najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala, od 0,1mas.% do 1,0mas.% askorbinske kiseline, od 0,05mas.% do 1mas.% najmanje jednog kopolimera polivinilpirolidon-vinilacetat, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0016] Ovaj pronalazak odnosi se na natrijumovu DNK za upotrebu u postupku za lečenje patologije oralne mukoze, pri čemu pomenuta patologija podrazumeva promenu ćelijske građe pomenute oralne mukoze, gde je pomenuta promena ćelijske građe odabrana iz grupe koju čine: vakuolizacija, degeneracija jedra ćelije, ekspanzija intercelularnih prostora.

[0017] Zapravo je nenadano otkriveno da natrijumova DNK ispoljava zaštitno dejstvo na ćelijsku građu oralne mukoze, može da neutrališe pojavu i napredovanje njenih promena, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0018] Time se omogućava terapijska intervencija na ćelijske promene oralne mukoze bilo koje etiologije, na primer ograničavanjem neželjenih reakcija na lečenja aktivnim supstancama koje su naročito agresivne prema ćelijskoj građi oralnih mukoza, kao što je hlorheksidin.

[0019] Uzevši u obzir gorenavedena ograničenja primene i funkcionalna ograničenja za upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina, Prijavilac je došao do zaključka da lečenje neželjenih reakcija hlorheksidina predstavlja inovativni aspekt naročite vrednosti.

[0020] U svom daljem aspektu, ovaj pronalazak se dakle odnosi i na natrijumovu DNK za upotrebu u postupku za lečenje neželjenih reakcija na hlorheksidin kod pacijenta koji se podvrgava lečenju hlorheksidinom, pri čemu pomenute neželjene reakcije podrazumevaju promenu ćelijske građe oralne mukoze pomenutog pacijenta, gde je pomenuta promena ćelijske građe odabrana iz grupe koju čine: vakuolizacija, degeneracija jedra ćelije, ekspanzija intercelularnih prostora.

KRATAK OPIS NACRTA

[0021] U nacrtu:

- Fig.1 prikazuje šematski izgled poprečnog preseka sistema korišćenog za eksperimentisanje u skladu sa Primerom 1, koji nije u srazmeri;

- Fig.2 prikazuje rezultate MTT testa vijabilnosti na ROE ćelijama nakon različitih vremena tretiranja rastvorima A, B, C i D u skladu sa Primerom 1;

- Fig.3 prikazuje rezultate MTT testa vijabilnosti na ROE ćelijama nakon 1 minuta tretiranja 3vol.% rastvorom H2O2i sledećih različitih vremena tretiranja rastvorima A, B, C i D u skladu sa Primerom 1;

- Fig.4 prikazuje 3D reprodukovane rekonstrukcije CLSM posmatranja i projekcija maksimalnog intenziteta ROE uzoraka, nakon 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D, tim redom, u skladu sa Primerom 1;

- Fig.5 prikazuje 3D reprodukovane rekonstrukcije CLSM posmatranja i projekcija maksimalnog intenziteta ROE uzoraka, nakon 1 minuta tretiranja 3vol.% rastvorom H2O2i naknadnih 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D, tim redom, u skladu sa Primerom 1;

- Fig.6 prikazuje delove ROE uzoraka nakon 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D, tim redom, u skladu sa Primerom 1; i

- Fig.7 prikazuje delove ROE uzoraka nakon 1 minuta tretiranja 3vol.% rastvorom H2O2i naknadnih 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D, tim redom, u skladu sa Primerom 1.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0022] Ovaj pronalazak može se predstaviti u jednom njegovom aspektu ili više njih ili jednoj poželjnoj karakteristici ili više njih navedenih u nastavku, pri čemu se po želji mogu međusobno kombinovati u skladu sa zahtevima primene.

[0023] U kontekstu ovog opisa i patentnih zahteva koji slede, treba smatrati da svim brojčanim veličinama koje označavaju količine, parametre, procente i tako dalje u svim prilikama prethodi pojam „približnoˮ, osim ukoliko je drugačije naznačeno. Pored toga, svi opsezi brojčanih veličina uključuju sve moguće kombinacije maksimalnih i minimalnih brojčanih vrednosti i sve moguće međuopsege kao i one navedene u nastavku.

[0024] Unutar obima ovog pronalaska identifikovana je kombinacija dveju supstanci, hlorheksidina i natrijumove DNK, čije kombinovane antibakterijske, isceliteljske i antiinflamatorne te oksidativni stres neutrališuće karakteristike čine njihovu upotrebu kao aktivnih supstanca proizvoda za negu usta naročito efikasnu protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa, koja istovremeno ograničava pojavu i napredovanje iritacija i promena ćelijske građe oralnih mukoza do kojih dovodi upotreba hlorheksidina pa samim tim podstiče trofizam samih oralnih mukoza.

[0025] Ovaj pronalazak se određenije odnosi na proizvod za negu usta koji obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK.

[0026] Kada se u ovom pronalasku koristi izraz:

- „mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje ustaˮ, on označava količinu date komponente prisutne u 100 mililitara (mL) sredstva za ispiranje usta u gramima;

- „hlorheksidinˮ, on označava, osim ukoliko je drugačije naznačeno, jedinjenje 1,1'-heksametilenbis[5-(p-hlorfenil)biguanid], njegovu so ili kompleks;

- „natrijumova DNKˮ, on označava natrijumovu so dezoksiribonukleinske kiseline, koja se na primer može dobiti ekstrahovanjem nativne dezoksiribonukleinske kiseline iz tkiva gonada mužjaka jesetre i naknadnim prečišćavanjem, depolimerizovanjem i neutralizovanjem jonima natrijuma.

[0027] Bez želje za ograničavanjem na posebnu teoriju, veruje se da se spajanjem natrijumove DNK sa hlorheksidinom ne samo neutrališe iritirajuće dejstvo potonjeg na oralne mukoze, ispoljava zaštitno dejstvo na njih i isceliteljsko dejstvo mogućih rana usne duplje, nego se omogućava i ograničavanje neželjenih reakcija na produženu upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina, koje uključuju promene ćelijske građe, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0028] Prijavilac je određenije primetio da jedno od ograničenja primene i funkcionalnih ograničenja za upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina leži u pojavi – naročito u slučaju produžene upotrebe – neželjenih reakcija koje, uz iritaciju oralnih mukoza, podrazumevaju i promene na nivou ćelijske građe pomenutih mukoza, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0029] Tako je Prijavilac nenadano otkrio da se spajanjem natrijumove DNK sa hlorheksidinom ne samo neutrališe njegovo iritirajuće dejstvo na oralne mukoze, ispoljava zaštitno dejstvo na njih i isceliteljsko dejstvo na moguće rane usne duplje, nego se omogućava i ograničavanje neželjenih reakcija na produženu upotrebu pomenute aktivne supstance, koje uključuju promene ćelijske građe, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0030] To je Prijaviocu omogućilo da definiše i razvije novi proizvod za negu usta koji obuhvata hlorheksidin, dakle efikasan protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa, koji istovremeno ne može da izazove, ili može ozbiljno da ograniči, neželjene reakcije na produženu upotrebu pomenute aktivne supstance, koje uključuju iritacije pa čak i promene ćelijske građe oralnih mukoza, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0031] Zahvaljujući specifičnoj kombinaciji natrijumove DNK i hlorheksidina, proizvod za negu usta ima opseg karakteristika kojima se mogu prevazići ograničenja primene i funkcionalna ograničenja proizvoda za negu usta koji su bazirani samo na hlorheksidinu čime se proširuju mogućnosti primene i otklanjanju neke neželjene reakcije njihove produžene upotrebe.

[0032] Proizvod za negu usta zapravo može da spoji efikasno zaštitno dejstvo protiv neželjenih reakcija na hlorheksidin na ćelijskom nivou, čime ograničava pojavu i napredovanje promena ćelijske građe oralnih mukoza, s antibakterijskim dejstvom efikasnim protiv gingivitisa, bakterijskog plaka i parodontitisa u kombinaciji sa isceljujućim i antiinflamatornim dejstvom koje može da neutrališe oksidativni stres te da ograniči pojavu i napredovanje iritacija oralnih mukoza čime se podstiče njihov trofizam. Te karakteristike čine njegovu upotrebu naročito poželjnom, čak i dugoročno, bez dolaženja do pojave iritirajućeg dejstva hlorheksidina na oralne mukoze i njihovih neželjenih reakcija na njega na ćelijskom nivou.

[0033] U svom poželjnom načinu ostvarivanja, pomenuti proizvod za negu usta odabran je iz grupe koju čine: sredstvo za ispiranje usta, parodontalni gel i pasta za zube.

[0034] U svom prvom poželjnom načinu ostvarivanja, proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK.

[0035] Sredstvo za ispiranje usta obuhvata hlorheksidin. Količina hlorheksidina u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,01mas.% do 0,30mas.%, poželjnije od 0,05mas.% do 0,30mas.%, još poželjnije od 0,09mas.% do 0,20mas.%, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0036] Hlorheksidin u sredstvu za ispiranje usta poželjno može biti prisutan i u obliku soli i kompleksa. Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata hlorheksidin u obliku soli ili kompleksa. Kao so hlorheksidina u sredstvu za ispiranje usta može se koristiti na primer hlorheksidindiglukonat ili hlorheksidindiacetat.

[0037] Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata hlorheksidin u obliku hlorheksidinglukonata.

Sredstvo za ispiranje usta obuhvata natrijumovu DNK. Količina natrijumove DNK u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,01mas.% do 0,2mas.%, poželjnije od 0,05mas.% do 0,1mas.%, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0038] Komercijalno je dostupna natrijumova DNK prikladna za potrebe ovog pronalaska, na primer ona koja se na tržištu javlja pod imenom Kalinat aw powder (Kalichem). Pokazalo se da je pomenuta količina natrijumove DNK zapravo optimalna za neutralisanje iritirajućeg dejstva hlorheksidina na oralne mukoze, ispoljavanje zaštitnog dejstva na njih i isceliteljskog dejstva na moguće rane usne duplje čime se podstiče i pravilan trofizam samih oralnih mukoza. Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata najmanje jednu metabisulfitnu so alkalnog ili zemnoalkalnog metala.

[0039] Prisustvo najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala otklanja nedostatak u vidu tamne pigmentacije na zubima, što je neželjena reakcija na hlorheksidin.

[0040] Najmanje jedna metabisulfitna so alkalnog ili zemnoalkalnog metala poželjno je odabrana iz grupe koju čine: natrijum-metabisulfit, kalijum-metabisulfit, kalcijum-metabisulfit. Sredstvo za ispiranje usta poželjnije obuhvata natrijum-metabisulfit.

[0041] Količina najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,1mas.% do 0,5mas.%, poželjnije od 0,15mas.% do 0,3mas.%, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0042] Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata askorbinsku kiselinu.

[0043] Količina askorbinske kiseline u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,1mas.% do 1,0mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0044] Prisustvo askorbinske kiseline otklanja nedostatak u vidu tamne pigmentacije na zubima, što je neželjena reakcija na hlorheksidin.

[0045] Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata askorbinsku kiselinu i najmanje jednu metabisulfitnu so alkalnog ili zemnoalkalnog metala, još poželjnije od 0,1mas.% do 0,5mas.% najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala i od 0,1 mas.% do 1,0mas.% askorbinske kiseline u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0046] Pokazalo se da su pomenute kombinacije komponenata u pomenutim količinama optimalne za otklanjanje neželjene reakcije na hlorheksidin u vidu tamne pigmentacije na zubima. Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata trobazni natrijumcitrat.

[0047] Količina trobaznog natrijumcitrata u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,8mas.% do 2,0mas.%, poželjnije od 0,8mas.% do 1,2mas.%, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta. Prisustvo trobaznog natrijumcitrata u pomenutim količinama poželjno omogućava podešavanje pH vrednosti sredstva za ispiranje usta na optimalne vrednosti za njegovu upotrebu.

[0048] U poželjnom načinu ostvarivanja, sredstvo za ispiranje usta obuhvata askorbinsku kiselinu i trobazni natrijumcitrat. Sredstvo za ispiranje usta poželjnije obuhvata od 0,1mas.% do 1mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu askorbinske kiseline u sredstvu za ispiranje usta i od 0,8mas.% do 2,0mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta sa trobaznim natrijumcitratom.

[0049] Zapravo je nenadano otkriveno da pomenuta kombinacija askorbinske kiseline i trobaznog natrijumcitrata omogućava stabilizovanje formulacije sredstva za ispiranje usta.

[0050] Sredstvo za ispiranje usta poželjno obuhvata najmanje jedan kopolimer polivinilpirolidonvinilacetat. Komercijalno su dostupni kopolimeri polivinilpirolidon-vinilacetat prikladni za potrebe ovog pronalaska, na primer oni koji se na tržištu javljaju pod imenom Luviskol<®>(BASF SE).

[0051] Najmanje jedan kopolimer polivinilpirolidon-vinilacetat poželjno ispoljava dejstvo obrazovanja filma i protiv plaka u sredstvu za ispiranje usta.

[0052] Količina najmanje jednog kopolimera polivinilpirolidon-vinilacetat u sredstvu za ispiranje usta poželjno je u opsegu od 0,05mas.% do 1mas.%, poželjnije od 0,3mas.% do 1mas.%, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0053] U svom poželjnom načinu ostvarivanja, proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata od 0,01mas.% do 0,30mas.% hlorheksidina, od 0,01mas.% do 0,2mas.%, poželjnije od 0,01mas.% do 0,1mas.%, natrijumove DNK, od 0,1mas.% do 0,5mas.% najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala, od 0,1mas.% do 1,0mas.% askorbinske kiseline, od 0,05mas.% do 1mas.%, poželjnije od 0,3mas.% do 1mas.%, najmanje jednog kopolimera polivinilpirolidon-vinilacetat, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.

[0054] Sredstvo za ispiranje usta može da sadrži jedan drugi mogući sastojak poznat u tehnici za rastvore za oralnu negu ili više njih.

[0055] Određenije, sredstvo za ispiranje usta može dalje obuhvatati jedan aditiv ili više njih odabranih iz grupe koju čine: zaslađivači, arome, ovlaživači, konzervansi, emulgatori, pH-regulatori, prehrambena boja.

[0056] Kao zaslađivače, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati ksilitol, natrijumsaharinat, kalijumacesulfam, sukralozu, ekstrakt stevije.

[0057] Kao arome, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati pepermint, mentol, anetol, mentha viridis, cimet, karanfilić, eukaliptol.

[0058] Kao ovlaživače, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati propilenglikol, sorbitol, glicerin.

[0059] Kao konzervanse, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati natrijumbenzoat, metilizotiazolinon.

[0060] Kao rastvarajuće surfaktante, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati: hidrogenovano ricinusovo ulje Peg 40, Poloksamer 407.

[0061] Kao pH-regulatore, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati natrijumcitrat, limunsku kiselinu.

[0062] Kao boje, sredstvo za ispiranje usta može na primer obuhvatati CI 19140, CIU 42090, CI 17200.

[0063] Sredstvo za ispiranje usta prikladno se priprema na poznat način u obliku rastvora ili suspenzije u prikladnoj rastvornoj sredini, poželjno vodi.

[0064] Prema poželjnom načinu ostvarivanja, sredstvo za ispiranje usta obuhvata sledeće komponente:

1. Vodu

2. Ksilitol

3. Propilenglikol

4. Hidrogenovano ricinusovo ulje PEG 40

5. Askorbinsku kiselinu

6. Hlorheksidindiglukonat

7. Kopolimer polivinilpirolidon-vinilacetat

8. Natrijumovu DNK

9. Aromu

10. Poloksamer 407

11. Natrijum-metabisulfit

12. Natrijumcitrat

13. Limunsku kiselinu

14. C.I.42090

15. C.I.17200

[0065] U daljem poželjnom načinu ostvarivanja, proizvod za negu usta predstavlja parodontalni gel koji obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK.

[0066] Prema poželjnom načinu ostvarivanja, parodontalni gel obuhvata sledeće komponente:

1. Vodu

2. Propilenglikol

3. Hidroksietilcelulozu

4. Kopolimer polivinilpirolidon-vinilacetat

5. Hidrogenovano ricinusovo ulje PEG 40

6. Hlorheksidindiglukonat

7. Natrijumacetat

8. Natrijumovu DNK

1

9. Mentol

10. Ulje peperminta

11. Sirćetnu kiselinu

12. Natrijum-metabisulfit

13. Askorbinsku kiselinu

[0067] Parodontalni gel poželjno obuhvata od 0,5mas.% do 1,0mas.% hlorheksidina u odnosu na ukupnu zapreminu parodontalnog gela.

[0068] Parodontalni gel poželjno obuhvata natrijumovu DNK u maksimalnoj količini od 0,3mas.%, poželjnije od 0,01mas.% do 0,3mas.%, u odnosu na ukupnu masu parodontalnog gela.

[0069] U još daljem poželjnom načinu ostvarivanja, proizvod za negu usta predstavlja pastu za zube koja obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK. Prema poželjnom načinu ostvarivanja, pasta za zube obuhvata sledeće komponente:

1. Sorbitol

2. Vodu

3. Silicijumdioksid (Hidratovan silicijumdioksid)

4. Glicerol

5. Ksilitol

6. Kokamidopropilbetain

7. Kopolimer polivinilpirolidon-vinilacetat

8. Hidrogenovano ricinusovo ulje PEG 40

9. Aromu

10. Hlorheksidindiglukonat

11. Karboksimetilcelulozu

12. Askorbinsku kiselinu

13. Natrijum-metabisulfit

14. Natrijumovu DNK

15. Natrijumsaharin

16. Natrijumbenzoat

17. Natrijumcitrat

[0070] Pasta za zube poželjno obuhvata od 0,05mas.% do 0,2mas.% hlorheksidina u odnosu na ukupnu zapreminu paste za zube.

[0071] Poželjno, najmanje jedan neorganski fluorid može opciono biti prisutan u pasti za zube.

[0072] Količina natrijumove DNK u pasti za zube poželjno je u opsegu od 0,01mas.% do 0,05mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu paste za zube.

[0073] U daljem se aspektu ovaj pronalazak odnosi i na upotrebu proizvoda za negu usta kao agensa protiv iritacije oralne mukoze.

[0074] U daljem se aspektu ovaj pronalazak odnosi i na upotrebu proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku kao agensa za isceljenje oralne mukoze. Pomenuta oralna mukoza poželjno obuhvata parodontalno tkivo.

[0075] Zapravo, otkriveno je da, zahvaljujući spajanju natrijumove DNK sa hlorheksidinom, proizvod za negu usta neutrališe iritirajuće dejstvo potonjeg na oralne mukoze, ispoljava zaštitno dejstvo na njima i isceliteljsko dejstvo na moguće rane usne duplje.

[0076] Takođe je otkriveno da spajanje natrijumove DNK sa hlorheksidinom omogućava i ograničavanje neželjenih reakcija na produženu upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina, koje uključuju promene ćelijske građe, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora čime otklanja jedno od ograničenja primene i funkcionalnih ograničenja pomenutih proizvoda.

[0077] Prema tome, ovaj pronalazak se poželjno odnosi na upotrebu proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku u postupku za lečenje najmanje jedne patologije odabrane iz grupe koju čine: gingivitis, bakterijski plak i parodontitis.

[0078] Uz to je nenadano otkriveno da je proizvod za negu usta efikasan i u lečenju periimplantatnog mukozitisa. Stoga se, u svom daljem aspektu, ovaj pronalazak odnosi i na upotrebu proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku u postupku za lečenje periimplantatnog mukozitisa.

[0079] U svom daljem aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu natrijumove DNK za upotrebu u postupku za lečenje patologije oralne mukoze, pri čemu pomenuta patologija podrazumeva promenu ćelijske građe pomenute oralne mukoze, gde je pomenuta promena ćelijske građe odabrana iz grupe koju čine: vakuolizacija, degeneracija jedra ćelije, ekspanzija intercelularnih prostora.

[0080] Zapravo je nenadano otkriveno da natrijumova DNK ispoljava zaštitno dejstvo na ćelijsku građu oralne mukoze, može da neutrališe pojavu i napredovanje njenih promena, uključujući vakuolizaciju, degeneraciju jedra ćelije i ekspanziju intercelularnih prostora.

[0081] Pomenuta oralna mukoza poželjno obuhvata parodontalno tkivo.

[0082] Prijavilac je takođe otkrio da pomenuto zaštitno dejstvo natrijumove DNK omogućava terapijsku intervenciju na ćelijskim promenama oralne mukoze bilo koje etiologije, na primer ograničavanjem neželjenih reakcija na lečenja aktivnim supstancama koje su naročito agresivne prema ćelijskoj građi oralnih mukoza, kao što je na primer hlorheksidin.

[0083] Uzevši u obzir gorenavedena ograničenja primene i funkcionalna ograničenja za upotrebu proizvoda za negu usta na bazi hlorheksidina, Prijavilac je došao do zaključka da lečenje neželjenih reakcija na hlorheksidin predstavlja inovativni aspekt naročite vrednosti.

[0084] U svom daljem aspektu, ovaj pronalazak se dakle odnosi i na natrijumovu DNK za upotrebu u postupku za lečenje neželjenih reakcija hlorheksidina kod pacijenta koji se podvrgava lečenju hlorheksidinom, pri čemu pomenute neželjene reakcije podrazumevaju promenu ćelijske građe oralne mukoze pomenutog pacijenta, gde je pomenuta promena ćelijske građe odabrana iz grupe koju čine: vakuolizacija, degeneracija jedra ćelije, ekspanzija intercelularnih prostora.

[0085] Pomenuta oralna mukoza poželjno obuhvata parodontalno tkivo.

EKSPERIMENTALNI DEO

[0086] Sada će ovaj pronalazak biti opisan pomoću nekih primera koje treba smatrati kao neograničavajuće za potrebe njegove ilustracije.

Primer 1

Materijali i postupci

[0087] Svi reagensi, podloge za uzgajanje ćelija i potrošni materijali koji su korišćeni pribavljeni su od preduzeća Merck (E.Merck AG, Darmštat, Nemačka). Uzorci rekonstituisanog humanog oralnog epitela (u nastavku „ROEˮ) od 0,5 cm<2>(SkinEthic HOE<™>/ Humani oralni epitel) pribavljeni su od preduzeća EPISKIN (EPISKIN, Lion Cedex 7, Francuska). Natrijumova DNK (u nastavku „NaDNKˮ, Kalinat<®>AW) pribavljena je od preduzeća KALICHEM (Kalichem, Breša, Italija).

[0088] Testirani su sledeći rastvori sredstava za ispiranje usta, koji ne sadrže konzervanse:

A. sredstvo za ispiranje usta koje sadrži 0,2mas.% hlorheksidina u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta (pozitivna kontrola);

B. sredstvo za ispiranje usta koje sadrži 0,2mas.% hlorheksidina i 0,01mas.% NaDNK-a u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta (test);

C. sredstvo za ispiranje usta koje sadrži 0,01mas.% NaDNK-a u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta);

D. fiziološki rastvor puferovan fosfatom (PBS, negativna kontrola).

Rekonstituisani humani oralni epitel (ROE)

[0089] Korišćena su 32 ROE uzorka. Ti su ROE uzorci otvoreni pod digestorom u prisustvu sterilne vazdušne struje. Uzorci su postavljeni u transportne pločice sa 24 bazenčića koje sadrže podlogu sa

1

agaroznim nutrijentom. Uzorci su ekstrahovani iz transportnih pločica i agaroza je uklonjena. Potom su uzorci smešteni u pločice sa 6 bazenčića sa hranljivom podlogom (RPMI 1640 podloga, sa dodatkom 20% fetalnog goveđeg seruma, 1% L-glutamina i 1% penicilina / streptomicina). Pre testa, pločice za uzgajanje inkubirane su preko noći na 37 °C u CO2atmosferi na 5% i 100% relativnoj vlažnosti.

Bioreaktor

[0090] Testovi su izvedeni u dvama komercijalno dostupnim kapajućim protočnim bioreaktorima (DFR 110; BioSurface Technologies, Bozeman, MT, SAD) izvedenim tako da se tacne koje sadrže uzorke mogu postaviti na osnovu protočnih ćelija i da ROE uzorci mogu da se urone u okolnu cirkulišuću podlogu. Time se omogućavala upotreba hranljive podloge pri kontinuiranom protoku.

[0091] Sve tacne bioreaktora koje sadrže epruvete i uzorke sterilisane su pre početka eksperimenta pomoću hemikava sa gasnom plazma tehnologijom sa vodonikperoksidom (Sterrad, ASP, Ervajn, CA, SAD). Ograničavanjem maksimalne temperature na 45 °C, izbegnuta su oštećenja koja prouzrokuje toplota čitavog sistema. Nakon sterilizacije, bioreaktori su zatim sklopljeni unutar sterilnog digestora.

Postupci za ispitivanje

[0092] Fig.1 prikazuje šematski izgled poprečnog preseka sistema korišćenog za eksperimentisanje, koji nije u srazmeri i prikazuje primera radi jedan bioreaktor od njih dvaju. Sistem 1 obuhvata peristaltičku pumpu 11, reaktor 10 kapajućeg protočnog tipa i protočne ćelije 14, 15 i 16 koje sadrže uzorke. Reaktor 10 kapajućeg protočnog tipa opremljen je protočnom komorom 21, ulazom 12 i odvodom 13. Protočna komora 21 je konfigurisana tako da sadrži protočnu podlogu 20.

[0093] ROE uzorci su isečeni iz njihovog nosača pomoću sterilnih skalpela i pinceta te postavljeni unutar bioreaktora u osam protočnih ćelija 14, 15 i 16 politetrafluoroetilena (PTFE) od kojih svaka obuhvata četiri otvora, koje su ih fiksirale i izložile njihove površine protočnoj podlozi 20 koja obuhvata hranljivu podlogu (podloga RPMI 1640, sa dodatkom 20% fetalnog goveđeg seruma, 1% L-glutamina i 1% penicilina / streptomicina). Sve tacne su fiksirane za osnovu svake protočne komore 21 dvaju bioreaktora 10 koji rade paralelno i odmah inokulisane novom hranljivom podlogom. Bioreaktori su potom prebačeni u inkubator koji radi na 37 ° C, na 5% CO2i na 100% relativne vlažnosti. Potom je uključena računarski upravljana višekanalska peristaltička pumpa 11 (RP-1, Rainin, Emerivil, CA, SAD), podešena na protok od 9,6 ml/h i korišćena za obezbeđivanje konstantnog protoka protočne podloge 20 koja obuhvata hranljivu podlogu kroz protočne ćelije. Na Fig.1, strelice 17, 18 i 19 šematski prikazuju smer protoka protočne podloge 20. Peristaltička pumpa 11 uvodi protočnu podlogu 20 kroz ulaz 12 reaktora 10 u protočnu komoru 21 dvaju bioreaktora 10, koja se potom odvodi kroz odvod 13.

[0094] Nakon 24 sata, pumpa 11 je zaustavljena i četiri protočne ćelije 14, 15 i 16 su tim redom tretirane rastvorima A, B, C i D sredstava za ispiranje usta, jedan za svaku protočnu ćeliju (10 ml). U svakoj protočnoj ćeliji, dva uzorka su tretirana tokom 5 minuta, a druga dva tokom 30 minuta naginjanjem bioreaktora 10 tokom 25 minuta tako da rastvor u potpunosti prekrije dva niža uzorka, potom vraćanjem u horizontalni položaj tokom preostalih 5 minuta kako bi prekrio sva četiri uzorka. Preostale četiri protočne ćelije 14, 15 i 16 su prvo tretirane 3% rastvorom H2O2tokom 1 minuta kako bi se indukovao visok oksidativni stres i ćelijsko oštećenje, potom su uzorci temeljno isprani sterilnim PBS-om tokom 1 minuta pa su protočne ćelije 14, 15 i 16 tretirane rastvorima sredstava za ispiranje usta koji su testirani kao što je prethodno naznačeno. Ponovo su, u svakoj protočnoj ćeliji, dva uzorka tretirana rastvorima sredstava za ispiranje usta tokom 5 minuta, a druga dva tokom 30 minuta.

[0095] Nakon toga, pumpa 11 je ponovo uključena radi ispiranja rastvora sredstava za ispiranje usta tokom 60 minuta, potom su svi ROE uzorci ekstrahovani iz protočnih ćelija 14, 15 i 16, odmah isečeni na 4 jednaka dela pomoću sterilnih skalpela i pinceta i obrađeni kao što sledi.

Procena uzoraka

[0096] ROE uzorci svakog tretiranja podvrgnuti su MTT testovima vijabilnosti (n = 4), snimanju konfokalnom lasersko-skenirajućom mikroskopijom (CLSM) (n = 2) i histološkoj proceni (n = 2) pomoću optičke mikroskopije i elektronske mikroskopije u transmisionom snimanju (TEM).

MTT test vijabilnosti

[0097] Preživljavanje ćelija procenjeno je MTT testom vijabilnosti. Doziranje je izvedeno na sledeći način: dva početna štok rastvora pripremljena su rastvaranjem 5 mg / ml 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijumbromida (MTT) u sterilnom PBS-u i 0,3 mg / ml N-metilfenazinijum-metilsulfata (PMS) u sterilnom PBS-u. Rastvori su skladišteni na 2 °C u fiolicama otpornim na svetlost do dana eksperimenta kada je izrađen nov merni rastvor (FMS) mešanjem u odnosu 1: 1: 8, MTT štok rastvora, sterilnog PMS-a i PBS štok rastvora, tim redom. Rastvor za lizu (LS) pripremljen je rastvaranjem 10vol.% natrijumdodecilsulfata i 50vol.% dimetilformamida u destilovanoj vodi. ROE uzorci podvrgnuti MTT testu postavljeni su unutar bazenčića sterilne pločice sa ravnom osnovom sa 24 bazenčića. Nakon toga je u svaki bazenčić pipetiran 1 ml FMS-a i pločice su inkubirane na 37 ° C u svetlosnim uslovima tokom 1 sata. Tokom inkubacije, transport elektrona kroz ćelijsku membranu i, u manjoj meri, ćelijski oksidoredukcioni sistemi konvertovali su MTT žutu so u nerastvorljivi ljubičasti formazan. Konverzija je olakšana intermedijarnim akceptorom elektrona (PMS). Potom je FMS koji nije reagovao aspiracijom pažljivo uklonjen iz bazenčića i kristali formazana su rastvoreni dodavanjem 1 ml LS-a u svaki bazenčić,

1

nakon čega je usledila dalja inkubacija u uslovima ambijentalne svetlosti tokom 1 sata. Zatim je ukupno 100 mikrolitara suspenzije uklonjeno iz svakog bazenčića te je spektrofotometrom (Genesys 10-S, Thermo Spectronic, Ročester, NY, SAD) izmerena optička gustina (na 550 nm).

CLSM posmatranja

[0098] CLSM snimanje izvedeno je pomoću Live / Dead bojenja kao što je opisano u Brambilla E, lonescu A, Mazzoni A, Cadenaro M, Gagliani M, Ferraroni M, Tay F, Pashley D, Breschi L. (2014) Hydrophilicity of dentin bonding systems influences in vitro Streptococcus mutans biofilm formation. Dent Mater.30(8): 926-35. Ukratko, ROE uzorci podvrgnuti CLSM posmatranjima obojeni su pomoću LIVE / DEAD<®>kompleta za vijabilnost za mikroskopiju (Invitrogen Ltd., Pejsli, UK). Živo obojena ćelijska fluorescencija posmatrana je pomoću CLSM-a (Eclipse Ti2 inverted CLSM, Nikon, Tokio, Japan). Četiri nasumično izabrana dela sloga snimaka snimljena su za svaki ROE uzorak. Konfokalne slike dobijene su pomoću suvih Plan Apochromat 20x (NA 0,75) sočiva i digitalizovane pomoću Nikonovog vlasničkog softvera, sa rezolucijom od 1024 × 1024 piksela, sa faktorom uvećanja od 1,0. Za svaki deo sloga snimaka dobijene su 3D reprodukovane rekonstrukcije pomoću Drishti 3D softvera, kao što je opisano u Lindhe J, Heyden G, Svanberg G, Löe H, Rindom Schiøtt C. (1970). Effect of local applications of chlorhexidine on the oral mucosa of the hamster. J. Periodont. Res.5(3): 177-182.

Histološka procena

[0099] ROE uzorci podvrgnuti histološkoj analizi fiksirani su preko noći u sveže pripremljenom Karnovskijevom rastvoru (2,0% paraformaldehid, 2,0% glutaraldehid u 0,1 M natrijumkakodilatnog pufera).

[0100] Nakon ispiranja u puferu, uzorci su obojeni 2% OsO4i 2% uranilacetatom. Uzorci su potom dehidrirani u acetonskim rastvorima i inkorporisani u Epon-Aralditnu smolu (Fluka, Italija). Pripremljeni su poprečni preseci od 0,5 mikrona, podvrgnuti toluidin plavom bojenju, svih uzoraka različitih eksperimentalnih grupa i potom posmatrani optičkom mikroskopijom (Pro Plus Imaging softver) na krajnjem uvećanju od 1500x i TEM-om (Zeiss mikroskop EM10).

Rezultati

MTT test

[0101] Preliminarno je proverena normalnost raspodele (Šapiro-Vilkov test) i homoskedastičnost

1

(Levinov test) skupa podataka MTT testa vijabilnosti. Budući da podaci nisu bili normalno raspoređeni čak ni posle logaritamske transformacije, izvedena je neparametarska analiza pomoću Vilkoksonovog testa (p <0,05).

[0102] Na Fig.2 su prikazani rezultati dobijeni na ROE ćelijama nakon različitih vremena tretiranja rastvorima A, B, C i D. Fig.3 prikazuje rezultate MTT testa vijabilnosti na ROE ćelijama nakon 1 minuta tretiranja 3vol.% rastvorom H2O2i sledećih različitih vremena tretiranja rastvorima A, B, C i D.

[0103] Kao što se može videti na Fig.2, nakon 5 minuta tretiranja rastvorima sredstava za ispiranje usta primećen je značajan pad vijabilnosti u uzorcima tretiranim rastvorom C u poređenju sa rastvorom B. Nije identifikovana nikakva značajna promena vijabilnosti rastvora u poređenju sa negativnom kontrolom (rastvor D). Tretiranje ROE uzoraka rastvorima sredstava za ispiranje usta tokom 30 minuta dovelo je do značajnog smanjenja vijabilnosti primenom rastvora C u odnosu na rastvore koji sadrže hlorheksidin. Tretiranje sa 3vol.% H2O2(Fig.3) dovelo je do opšteg pada vijabilnosti. Uzorci tretirani tokom 5 minuta pokazali su značajno veću vijabilnost nakon tretiranja rastvorom A nego rastvorom B, ali se, nakon 30 minuta tretiranja, razlika između tih dvaju rastvora značajno smanjila i bila je značajno veća nego sa rastvorima C i D. Uz to, rastvor C je izazvao značajno veću vijabilnost nego rastvor D što sugeriše značajno i pozitivno dejstvo NaDNK na ćelijsku vijabilnost.

CLSM posmatranja

[0104] Rekonstrukcije konfokalne mikroskopije dobijene nakon 5-minutnog tretiranja rastvorima sredstava za ispiranje usta nisu pokazale nikakve razlike između grupa. Rekonstrukcije uzoraka nakon 30 minuta tretiranja prikazane su na Fig.4 (uzorci nakon 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D) i na Fig. 5 (uzorci nakon 1 minuta tretiranja sa H2O2i naknadnih 30 minuta tretiranja rastvorima A, B, C i D).

[0105] Uzorci tretirani rastvorom A i, u manjoj meri, rastvorom B prikazali su dobru očuvanost ćelijske građe čak i u uzorcima koji su bili izloženi vodonikperoskidu. Uzorci (D) negativne kontrole pokazali su prisustvo mrtvih ćelija na površini i, nakon tretiranja vodonikperoksidom, na površini je bilo moguće identifikovati sloj koji se gotovo u potpunosti sastojao od mrtvih ćelija. Uzorci tretirani samo NaDNK-om (rastvorom C) pokazali su mnogo manju količinu mrtvih ćelija nego u negativnoj kontroli bilo bez tretiranja vodonikperoksidom ili sa njim.

Histološka procena

[0106] Isečci ROE tkiva (0,5 µm) dobijeni nakon 5-minutnog tretiranja rastvorima sredstava za ispiranje usta nisu pokazali razlike između grupa. Isečci uzoraka nakon 30 minuta tretiranja prikazani su na Fig.6 (uzorci tretirani rastvorima A, B, C i D) i na Fig.7 (uzorci nakon 1 minuta tretiranja sa H2O2i naknadnog

1

tretiranja rastvorima A, B, C i D).

[0107] Uzevši u obzir uzorke sa Fig.6, negativna kontrola (D) je pokazala potpuno očuvanje struktura tkiva. Uzorci tretirani rastvorima A i, u manjoj meri, B pokazali su promene ćelijske građe, kao što su vakuolizacija, degenerisano jedro i početno uvećanje intercelularnih prostora, kako u spoljnim tako i u bazalnim slojevima. Te promene mogu biti posledica dejstva hlorheksidina. Zapravo, dodavanje NaDNK sredstvu za ispiranje usta sa hlorheksidinom (rastvor B) pokazalo je manje intenzivne promene ćelijske građe u odnosu na sredstvo za ispiranje usta sa isključivo hlorheksidinom (rastvor A). Uzorci tretirani rastvorom C pokazali su iste promene, ali ograničene na prvi ćelijski sloj. Tretiranje vodonikperoksidom (vidi Fig.7) pokazalo je, kao što je očekivano, velika oštećenja ROE ćelija, kao što je izražena vakuolizacija, degenerisano jedro i proširenje intercelularnih prostora. Te su promene bile uočljivije u uzorcima tretiranim negativnom kontrolom (D) i rastvorom A (samo hlorheksidin). U uzorcima tretiranim rastvorom B, neke ćelije koje ne pokazuju nikakve znake degeneracije mogu se pronaći u unutrašnjim slojevima, gde su te ćelije verovatno zaštićenije od reaktivnih vrsta kiseonika koje stvara vodonikperoksid i gde NaDNK ispoljava dejstvo svođenja ćelijskih oštećenja na minimum. Uzorci tretirani sredstvom C za ispiranje usta (samo NaDNK) pokazali su minimalne znake ćelijske degeneracije.

[0108] Konačno, NaDNK je pokazala jasno zaštitno dejstvo protiv ćelijske degeneracije usled oksidativnog stresa i izlaganja rastvorima sredstava za ispiranje usta koji sadrže samo hlorheksidin.

Primer 2

[0109] Svrha ovog eksperimenta jeste ispitivanje efikasnosti proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku u obliku gela u prisustvu periimplantatnog mukozitisa, tj. u prisustvu krvarenja pri sondiranju oko implantata bez gubitka potporne kosti i patoloških džepova (<3mm).

Izbor pacijenata

[0110] Ispitivanje je sprovedeno u skladu sa kriterijumima Helsinške deklaracije i prema smernicama Dobre kliničke prakse nakon saglasnosti Etičkog odbora za biomedicinska istraživanja u Kjetiju i Peskari. Stoga su, za potrebe procenjivanja kontrolnih karakteristika bakterijskog plaka i zapaljenja, na Katedri za medicinske, oralne i biotehnološke nauke, izabrani pacijenti sa periimplantatnim mukozitisom.

[0111] Pacijenti izabrani za ispitivanje uključeni su u skladu sa smernicama iznetim u Helsinškoj deklaraciji za sprovođenje naučnih ispitivanja i prema sledećim inkluzionim kriterijumima:

• Pacijenti u dobrom zdravstvenom stanju dakle bez: relevantnih sistemskih bolesti, kao što su najpre dijabetes, imunološke bolesti, hematološke bolesti; neoplazmi; ozbiljnih infektivnih

1

bolesti kao što su HIV ili virusni hepatitis sa znacima i/ili simptomima insuficijencije jetre; kognitivnih poteškoća; intelektualnih poteškoća; motornih deficita;

• Stariji od 18 godina;

• Učestvovanje u eksperimentisanju uz poseban pristanak zasnovan na obaveštenosti; Kandidati izabrani zbog prisustva implantata pogođenog mukozitisom, koji je definisan:

• prisustvom krvarenja pri sondiranju bez gubitka potporne kosti oko implantata;

• Odsustvom biljne mobilnosti;

• Prisustvom najmanje 2 mm keratinizovane gingive oko implantata;

• Odsustvom rehabilitacija implantata osim pojedinačnih krunica ili mostova od najviše tri elementa;

• Odsustvom očiglednih znakova preopterećenja ili okluzalne traume.

[0112] Principi za isključivanje su sledeći:

• Bez potpunog edentulizma nakon hirurškog postupka implantacije (ako ne postoje prirodni elementi nakon operacije, nemoguće je utvrditi promenljive plaka, krvarenja);

• Nepušači ili blagi pušači (manje od 10 cigareta dnevno);

• Dobra oralna nega sa niskim nivoima indeksa plaka i krvarenja i odsustvo parodontalnih lezija na drugim dentalnim elementima (FMPS i FMBS ≤ 25%);

• Pacijenti alergični na hlorheksidinglukonat ili druge komponente formulacije sredstva i placeba.

Izbor Primarnog indeksa procene

[0113] Primarni ciljevi: Skor indeksa plaka: zabeleženo je prisustvo/odsustvo plaka na procenjenim površinama.

Izbor Sekundarnog indeksa procene

[0114] Beleženje kliničkih parametara

- Krvarenja pri sondiranju („BOPˮ): zabeleženo je prisustvo/odsustvo krvarenja pri sondiranju. - Gingivalnog indeksa (Loe & Silness 1963): zdravlje parodontalnih tkiva zabeleženo je u skladu sa sledećim kriterijumom:

1

0 = Normalna gingiva;

1 = Blago zapaljenje - blagi edem i promena boje bez krvarenja pri sondiranju;

2 = Umereno zapaljenje - pocrvenela, edematozna tkiva i krvarenje pri sondiranju; 3 = Teško zapaljenje - izraženo crvenilo, edem, ulceracija i sklonost ka krvarenju.

Statistička analiza

[0115] Izvedena je deskriptivna analiza podataka u kojoj su kvantitativne promenljive predstavljene sa srednjom vrednošću i standardnom devijacijom. Za poređenje dveju ispitanih grupa što se tiče kvantitativnih promenljivih korišćen je Studentov T-test. Nivo značajnosti podešen je na 5%. Normalna raspodela je procenjena pomoću Kilmogorov-Smirnofovog testa (p-vrednost> 0,05) i procenjivanjem grafika sa 14-dnevnim zavisnim promenljivama.

Eksperimentalne faze

[0116] Ispitani su sledeći gelovi:

E. gel koji sadrži 0,2mas.% hlorheksidina i 0,01mas.% NaDNK-a;

F. „placeboˮ gel sa istovetnim sastavom kao gel E, ali bez hlorheksidina i NaDNK;

[0117] Veličina uzorka iznosila je 24 pacijenta, sa odnosom uključenja između dveju grupa 1:1 (12 pacijenata po eksperimentalnoj grupi).

[0118] Nakon beleženja kliničkih promenljivih i sesije oralne nege, svaki pacijent je dobio neobeleženu tubu gela, špric i aplikatorsku mlaznicu za primene (3 puta dnevno tokom 14 dana). Pacijenti koji su dobili gel E (koji sadrži 0,2mas.% hlorheksidina i 0,01mas.% NaDNK-a) identifikovani su kao Grupa A, pacijenti koji su dobili gel F („placeboˮ gel) identifikovani su pak kao Grupa B.

[0119] Pregledanje vrednosti koje treba zabeležiti tokom praćenja podešena su kao što sledi:

• Osnovna linija (Vreme 0, „T0ˮ)

• 14 dana nakon operacije (Vreme 1, „T1ˮ)

[0120] U fazi T0, napravljena je parodontalna zabeleška uz prikupljanje Indeksa plaka, Krvarenja pri sondiranju i Gingivalnog indeksa prema kliničkom protokolu.

[0121] Svi pacijenti koji su završili faze T0 i T1 kliničkog ispitivanja. Subjekti su zatim upućeni u to kako da isprave manevre kućne oralne nege i ponovo procenjeni nakon 14 dana. U fazi T1, napravljena je

2

parodontalna zabeleška uz prikupljanje Indeksa plaka, Krvarenja pri sondiranju i Gingivalnog indeksa prema kliničkom protokolu. Tokom perioda ispitivanja nisu zabeležene nikakve neželjene reakcije. Pored toga, nije bilo nikakvih neželjenih dejstava ili kontraindikacija nakon primene gela E ili F.

Rezultati

Primarni indeksi vrednovanja

[0122] U trenutku T0, osnovna linija koja se odnosi na detektovani Indeks plaka iznosila je 2,4 ± 0,4 za Grupu A (gel E) i 2,2 ± 0,5 za Grupu B (gel F) (p> 0,05). Nakon 2 sedmice tretiranja (T1), izmereni Indeks plaka iznosio je 0,5 ± 0,4 za Grupu A (gel E) i 1,7 ± 1,9 za Grupu B (gel F) (p <0,05).

Sekundarni indeksi vrednovanja

[0123] U trenutku T0, osnovna linija koja se odnosi na detektovani BOP iznosila je 57,1% ± 15,2% za Grupu A (gel E) i 55,3% ± 11,7% za Grupu B (gel F) (p> 0,05). Nakon 2 sedmice tretiranja (T1), izmereni BOP iznosio je 14,3% ± 6,6% za Grupu A (gel E) i 45,4% ± 9,8% za Grupu B (gel F) (p <0,05).

[0124] U Tabeli 1 prikazani su podaci koji se odnose na Gingivalni indeks izmeren nakon različitih eksperimentalnih vremena: u Osnovnoj liniji i u T1 nakon dve sedmice tretiranja.

Tabela 1

Zaključci

[0125] Nakon eksperimentalnog vremena T1 javlja se statistički značajna razlika između Grupe A (gel E) i Grupe B (gel F) što se tiče primarnog parametra skora plaka. Benefiti tretiranja su očigledni i što se tiče sekundarnih indeksa Krvarenja pri sondiranju i Gingivalnog indeksa iz kojih proističe statistički značajna razlika procenjenih parametara u korist Grupe A čime se potvrđuje efikasnost proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku u lečenju periimplantatnog mukozitisa.

Primer 3

[0126] Svrha ovog eksperimenta jeste da klinički proceni antimikrobne i kontrolne karakteristike dentalnog plaka proizvoda za negu usta prema ovom pronalasku u obliku sredstva za ispiranje usta na mekom tkivu usne duplje nakon dve sedmice kod pacijenata sa parodontalnom patologijom.

Izbor pacijenata

[0127] Eksperiment je sproveden u skladu sa kriterijumima Helsinške deklaracije i prema smernicama Dobre kliničke prakse nakon saglasnosti Etičkog odbora za biomedicinska istraživanja u Kjetiju i Peskari. Stoga su, za potrebe procenjivanja kontrolnih karakteristika bakterijskog plaka i gingivalnog zapaljenja, na Katedri za medicinske, oralne i biotehnološke nauke, izabrani pacijenti sa parodontalnom bolešću.

[0128] Pacijenti su izabrani prema sledećim inkluzionim kriterijumima:

• Pacijenti sa hroničnim parodontitisom sa sondiranjima > 3 mm na broju većem od 20 elemenata ili jednakom njemu;

• Pacijenti nepušači ili umereni pušači (<10 cigareta dnevno);

[0129] Kriterijumi za isključivanje bili su sledeći:

• Pacijenti sa ortodontskim aparatima;

• Intolerancije ili alergije na sredstva za ispiranje usta;

• Pušenje duvana i konzumiranje alkohola;

• Pacijenti koji se podvrgavaju radioterapiji/ hemoterapiji tokom manje od 5 godina;

• Imunokompromitovani pacijenti;

• Sistemske, bubrežne ili kardiovaskularne bolesti;

• Trudne žene, žene koje doje ili se podvrgavaju antibiotskoj ili antiinflamatornoj terapiji.

Izbor Primarnog indeksa procene

[0130] Procenat površina zahvaćenih plakom (FMPS): biće zabeleženo prisustvo/odsustvo plaka na 4 mesta po zubu i procenat će biti izračunat u odnosu na površine.

Izbor Sekundarnog indeksa procene

[0131] Procenat mesta s krvarenjem pri sondiranju (FMBS): prisustvo/odsustvo krvarenja biće zabeleženo pri sondiranju na 4 mesta po zubu i procenat se računa u odnosu na površine.

[0132] Gingivalni indeks (Loe & Silness 1963): zdravlje parodontalnih tkiva zabeleženo je u skladu sa sledećim kriterijumom:

0 = Normalna gingiva;

1 = Blago zapaljenje - blagi edem i promena boje bez krvarenja pri sondiranju;

2 = Umereno zapaljenje - pocrvenela, edematozna tkiva i krvarenje pri sondiranju;

3 = Teško zapaljenje - izraženo crvenilo, edem, ulceracija i sklonost ka krvarenju.

[0133] Beleženje svih komplikacija, neželjenih reakcija i subjekata koji odustaju od ispitivanja.

Statistička analiza

[0134] Raspodela FMPS, FMBS i GI podataka koji se odnose na eksperimentalne grupe nakon različitih eksperimentalnih vremena kao što su osnovna linija, 1 sedmica i 2 sedmice, procenjena je Kolmogorov-Smirnovovim testom. Značajnost ispitnih podataka procenjena je Studentovim T-testom za p <0,05.

Eksperimentalno tretiranje

[0135] Ispitana su sledeća sredstva za ispiranje usta:

G: sredstvo za ispiranje usta koje sadrži 0,2mas.% hlorheksidina i 0,01mas.% NaDNK-a;

H: „placeboˮ sredstvo za ispiranje usta sa istovetnim sastavom kao gel E, ali bez hlorheksidina i NaDNK.

[0136] Veličina uzorka iznosila je 54 pacijenta, sa odnosom uključenja između dveju grupa 1:1 (27 pacijenata po eksperimentalnoj grupi).

[0137] Pacijenti koji su dobili sredstvo G za ispiranje usta (koje sadrži 0,2mas.% hlorheksidina i 0,01mas.% NaDNK-a) identifikovani su kao Grupa A, pacijenti koji su dobili sredstvo H za ispiranje usta („placeboˮ sredstvo za ispiranje usta) identifikovani su kao Grupa B.

Faze ispitivanja

[0138] Eksperimentalna faza V1. Skrining pregled za procenu prihvatljivosti pacijenta i uključenja u ispitivanje. Potvrda pristanka zasnovanog na obaveštenosti i instrukcije za oralnu negu.

2

[0139] Eksperimentalna faza V2 (osnovna linija). Parodontalna zabeleška sa beleženjem Procenta površina zahvaćenih plakom (FMPS) te Procenta mesta s krvarenjem prilikom sondiranja (FMBS) i Gingivalnog indeksa (GI). Pacijentima će biti dato pakovanje sredstva za ispiranje usta u skladu sa dodeljenom ispitnom grupom (A ili B) i biće izvedeno ispiranje sa 10 ml. Protokol je uključivao ukupno tri ispiranja kod kuće na dnevnom nivou (ujutru i uveče posle obroka) tokom 2 sedmice tretiranja.

[0140] Eksperimentalna faza V3 (1 sedmica) Kontrola sa beleženjem sledećih FMPS, FMBS i GI indeksa.

[0141] Eksperimentalna faza V4 (2 sedmice) Kontrola sa beleženjem FMPS-a, FMBS-a, GI-ja i završna obrada kako bi se uklonile moguće mrlje koje su se obrazovale.

Rezultati

Primarni indeksi vrednovanja

[0142] Nakon vremena V2, utvrđeno je da je osnovna linija koja se odnosi na detektovani FMPS iznosila 52,7 ± 9,2 za Grupu A (sredstvo G za ispiranje usta) i 58,2 ± 6,1 za Grupu B (sredstvo H za ispiranje usta) (p> 0,05). Nakon 1 sedmice tretiranja (V3), utvrđeno je da je izmereni FMPS iznosio 13,3 ± 5,6 za Grupu A i 18,7 ± 4,3 za Grupu B (p <0,05). Najzad, nakon 2 sedmice tretiranja (V4), utvrđeno je da je FMPS iznosio 14,2 ± 4,1 za Grupu A i 20,3 ± 5,2 za Grupu B (p <0,05).

Sekundarni indeksi vrednovanja

[0143] Nakon vremena V2, utvrđeno je da je osnovna linija za detektovani FMBS iznosila 46,7 ± 8,7 za Grupu A i 49,2 ± 6,2 za Grupu B (p> 0,05). Nakon 1 sedmice tretiranja (V3), utvrđeno je da je izmereni FMPS iznosio 12,7 ± 4,2 za Grupu A i 18,5 ± 5,9 za Grupu B (p <0,05). Najzad, nakon 2 sedmice tretiranja (V4), utvrđeno je da je FMBS iznosio 13,1 ± 3,2 za Grupu A i 19,8 ± 4,9 za Grupu B (p <0,05).

[0144] U Tabeli 2 prikazani su podaci koji se odnose na Gingivalni indeks izmeren nakon različitih eksperimentalnih vremena: u Osnovnoj liniji, nakon 1 sedmice i nakon 2 sedmice.

Tabela 2

Claims

Zaključci [0145] Već nakon eksperimentalnog vremena V3 javlja se statistički značajna razlika između Grupe A i Grupe B što se tiče primarnog parametra FMPS. Čiji dokaz je potvrđen nakon dve sedmice tretiranja, pri čemu prosečni nivoi FMPS-a ostaju ispod 20% u Grupi A. Prema tome, benefiti tretiranja su očigledni i što se tiče sekundarnih indeksa FMBS-a i Gingivalnog indeksa koji pokazuju statistički značajnu varijaciju kliničkih parametara u korist Grupe A što predstavlja dokaz koji se može dovesti u vezu sa korisnim efektom kog proizvod za negu usta prema ovom pronalasku indukuje na gingivalna tkiva subjekata koji se podvrgavaju tretiranju. Patentni zahtevi 1. Natrijumova DNK za upotrebu u postupku za lečenje neželjenih reakcija na hlorheksidin kod pacijenta koji se podvrgava lečenju hlorheksidinom, gde takve neželjene reakcije podrazumevaju promenu ćelijske građe oralne mukoze pomenutog pacijenta, pri čemu je pomenuta promena ćelijske građe odabrana iz grupe koju čine: vakuolizacija, degeneracija jedra ćelije, ekspanzija intercelularnih prostora.
2. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu se pomenuto lečenje hlorheksidinom izvodi pomoću proizvoda za negu usta koji obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK.
3. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 2, pri čemu je pomenuti proizvod za negu usta koji obuhvata hlorheksidin i natrijumovu DNK odabran iz grupe koju čine: sredstvo za ispiranje usta, parodontalni gel i pasta za zube.
4. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 3, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta i količina hlorheksidina je u opsegu od 0,01mas.% do 0,30mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta. 2
5. Natrijumova DNK za upotrebu prema 3 ili 4, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta i hlorheksidin je u obliku soli ili kompleksa.
6. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 5, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta i količina natrijumove DNK je u opsegu od 0,01mas.% do 0,2mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.
7. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 6, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata najmanje jednu metabisulfitnu so alkalnog ili zemnoalkalnog metala.
8. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 7, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata askorbinsku kiselinu.
9. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 8, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata najmanje jedan kopolimer polivinilpirolidon-vinilacetat.
10. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 9, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata trobazni natrijumcitrat.
11. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 3 do 10, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja sredstvo za ispiranje usta koje obuhvata od 0,01mas.% do 0,30mas.% hlorheksidina, od 0,01mas.% do 0,2mas.% natrijumove DNK, od 0,1mas.% do 0,5mas.% najmanje jedne metabisulfitne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala, od 0,1mas.% do 1,0mas.% askorbinske kiseline, od 0,05mas.% do 1mas.% najmanje jednog kopolimera polivinilpirolidon-vinilacetat, u odnosu na ukupnu zapreminu sredstva za ispiranje usta.
12. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 3, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja parodontalni gel koji obuhvata od 0,5mas.% do 1,0mas.% hlorheksidina u odnosu na ukupnu zapreminu parodontalnog gela.
13. Natrijumova DNK za upotrebu prema 3 ili 12, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja parodontalni gel koji obuhvata natrijumovu DNK u količini od najviše 0,3mas.% u odnosu na ukupnu masu parodontalnog gela.
14. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 3, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja pastu za zube koja obuhvata od 0,05mas.% do 0,2mas.% hlorheksidina u odnosu na ukupnu zapreminu paste za zube.
15. Natrijumova DNK za upotrebu prema zahtevu 3 ili 14, pri čemu pomenuti proizvod za negu usta predstavlja pastu za zube koja obuhvata natrijumovu DNK u količini od 0,01mas.% do 0,05mas.% u odnosu na ukupnu zapreminu paste za zube.
16. Natrijumova DNK za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 15, pri čemu se pomenuto lečenje hlorheksidinom koristi za lečenje najmanje jedne patologije odabrane iz grupe koju čine: gingivitis, bakterijski plak i parodontitis. 2