RS64449B1 - Postupci i kompozicije za imunsku zaštitu protiv ekstra-intestinalne patogene e. coli - Google Patents

Postupci i kompozicije za imunsku zaštitu protiv ekstra-intestinalne patogene e. coli

Info

Publication number
RS64449B1
RS64449B1 RS20230664A RSP20230664A RS64449B1 RS 64449 B1 RS64449 B1 RS 64449B1 RS 20230664 A RS20230664 A RS 20230664A RS P20230664 A RSP20230664 A RS P20230664A RS 64449 B1 RS64449 B1 RS 64449B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
coli
antigen
polysaccharide
subject
epa
Prior art date
Application number
RS20230664A
Other languages
English (en)
Inventor
Jan Theunis Poolman
Bert Jacquemyn
Darren Robert Abbanat
Patricia Ibarra Yon
Peter Wilhelmus Maria Hermans
Michael Thomas Kowarik
Michael Lukas Wetter
Stefan Jochen Kemmler
Micha Andres Hauptle
Veronica Gambillara
Manuela Mally
Original Assignee
Glaxosmithkline Biologicals Sa
Janssen Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glaxosmithkline Biologicals Sa, Janssen Pharmaceuticals Inc filed Critical Glaxosmithkline Biologicals Sa
Publication of RS64449B1 publication Critical patent/RS64449B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0258—Escherichia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kompozicije i kompozicije za upotrebu u postupcima za pokretanje imunskog odgovora protiv ekstra-intestinalne patogene Escherichia coli (ExPEC) čime bi se obezbedila imunska zaštita protiv bolesti koje su povezane sa ExPEC. Posebno, izvođenja iz ovog pronalaska se odnose na multivalentne vakcine koje sadrže konjugate polisaharida antigena O25B, O1A, O2, i O6A E. coli u kojima je svaki kovalentno vezan za protein nosač egzotoksina A detoksifikovanog Pseudomonas aeruginosa i upotrebe vakcina da bi se obezbedila efikasna imunska zaštita protiv infekcije ExPEC.
STANJE TEHNIKE PRONALASKA
[0002] Ekstra-intestinalne patogene E. coli (ExPEC) su normalno bezopasni stanovnici humanog creva. Međutim, sojevi ExPEC mogu sadržati faktore virulencije za kolonizaciju i mesta infekcije izvan gastrointestinalnog trakta čime se uzrokuju različite i ozbiljne invazivne bolesti, što dovodi do značajnog morbiditeta, mortaliteta, i troškova na godišnjem nivou (videti, npr., Johnson et al., J Lab Clin Med.2002;139(3):155-162; Kohler et al., Int J MedMicrobiol.2011;301(8):642-647; Foxman, Am J Med.2002;113 Suppl 1A:5S-13S; i Russo et al., Microbes Infect.2003;5(5):449-456). Sojevi ExPEC su najčešći uzročnik infekcije urinarnog trakta (UTI – eng. urinal tract infections). Takođe doprinose infekcijama na mestu hiruške intervencije i neonatalnom meningitisu (Johnson et al., 2002; i Russo et al., 2003), povezani su sa abdominalnim i pelvičnim infekcijama i nosokomijalnoj pneumoniji, i povremeno su uključeni u drugim ekstra-intestinalnim infekcijama kao što je osteomijelitis, celulitis, i infekcije rana. Svako od ovih primarnih mesta infekcije može rezultovati u bakteremiji ExPEC (Russo et al., 2003).
[0003] Rezistencija bakterija na antibiotike je glavna briga u borbi protiv bakterijske infekcije, i sojevi E. coli koji su rezistentni na više lekova (MDR) postaju sve više prevalentni (videti, npr., Schito et al., 2009, Int. J. Antimicrob. Agents 34(5):407-413; i Pitout et al., 2012, Expert Rev. Anti. Infect. Ther.
10(10): 1165-1176). Pojavljivanje i brza globalna diseminacija ExPEC sekvence tipa 131 se smatra glavnim pokretačem povećane rezistencije na lek, uključujući rezistenciju na više lekova (Johnson et al., Antimicrob Agents Chemother.2010; 54(1):546-550; Rogers et al., J Antimicrob Chemother.2011; 66(1):1-14). Ovaj klon je pronađen kod 12.5% do 30% od svih kliničkih izolata ExPEC, uglavnom je serotipa O25B:H4, i pokazuje visok nivo otpornosti na fluorohinolone, što je često praćeno rezistencijom na trimetoprim/sulfametoksazol (Rogers et al, 2011, i Banerjee et al., Antimicrob Agents Chemother.2014; 58(9):4997-5004).
[0004] Serotip O-antigena je zasnovan na hemijskoj strukturi O polisaharidnog antigena, dela spoljašnje membrane lipopolisaharida (LPS) kod Gram-negativnih bakterija. Prijavljeno je više od 180 O-antigena 180 E. coli (Stenutz et al., FEMS Microbial Rev.2006; 30: 382-403). Infekcija ExPEC se može izazvati bilo kojim serotipom. Iako postoji prekomerna zastupljenost određenih serotipova infekcije ExPEC, površinski polisaharidi iz izolata ExPEC pored toga ispoljavaju značajnu raznolikost antigena, koji čini razvoj vakcina ExPEC zasnovanih na površinkim polisaharidima ekstremno izazovnim (Russo et al., Vaccine.2007; 25: 3859-3870). Takođe, određeni O-antigeni mogu biti slabo imunogeni. Osim toga, na osnovu studija koje su zasnovane na Pneumococcal konjugatnih vakcina, kada broj serotipova može uzrokovati bolest, kompozicija vakcine, kao što je odabir serotipova za uključivanje u vakcinu i nivoi doziranja uključenih serotipova, mogu biti kritični, s obzirom da upotreba vakcine proiv određenih serotipova može potencijalno povećati zarazu i bolest od serotipova koji nisu uključeni u vakcinu, ili čak serotipa koji je uključen u vakcinu ali je slabo efikasan u imunizovanju protiv serotipa (Lipsitch, Emerging Infectious Diseases; 1999, 5:336-345). U idealnom slučaju, vakcina treba da maksimizira svoje korisne efekte u prevenciji bolesti koja je uzrokovana serotipovima koji su uključeni u vakcinu, dok se minimizuje rizik od dodatne bolesti povećane zaraze serotipovima koji nisu deo vakcine.
[0005] Prema tome, u oblasti tehnike postoji potreba za vakcinama protiv ExPEC. Posebno, postoji potreba za ExPEC vakcinom koja je zasnovana na polisaharidima na površini koji se mogu koristiti da bi se obezbedila efikasna imunska zaštita protiv O25B serotipa ExPEC i drugih serotipova koji preovlađuju kod ExPEC.
[0006] Takođe se dodatno pominju i sledeći dokumenti:
• Cross et al(1994) Journal of Infectious Diseases 170(4): 834-840 koji se odnosi na bezbednost i imunogenost polivalentne vakcine Escherichia coli kod humanih volontera; • Cryz et al (1995) Vaccine 13(5): 449-453 koji se odnosi na sintezu i karaktrizaciju polivantne vakcine konjugata O-polisaharida-toksina A Escherichia coli;
• Feldman et al (2005) PNAS USA 102(8): 3016-3021 koji se odnosi na modifikovanu N-vezanu proteinsku glikozilaciju sa različitim strukturama lipopolisaharida O antigena kod Escherichia coli; i
• WO 2014/037585 koji se odnosi na biokonjugate koji sadrže modifikovane antigene i njihove upotrebe.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0007] Iznenađujuće je otkriveno da je antigen O25B E. coli izgleda manje imunogen u odnosu na druge O-antigene E. coli (npe., O1A, O2, i O6A) kada se ispituju kao konjugati O-antigena svaki kovalentno vezani za detoksifikovani egzotoksin A protein nosač P. aeruginosa (EPA), i da vakcinacija sa kompozicijom koja sadrži EPA konjugate antigena O25B E. coli i EPA konjugate jednog ili više dodatnih O-antigena E. coli u odgovarajućoj dozi i odnosu obezbeđuje poboljšani imunski odgovor protiv O25B serotipa ExPEC i jedan ili više dodatnih O-serotipova ExPEC. Prema tome, ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži prvu koncentraciju polisaharida antigena O25B E. coli, i drugu koncentraciju svakog od polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida antigena O2 E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli, gde je odnos prve koncentracije u odnosu na drugu koncentraciju 2:1, svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno kovalentno vezani za detoksifikovani egzotoksin A protein nosač Pseudomonas aeruginosa (EPA), i prva koncentracija je 10 do 36 µg/ml.
[0008] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje multivalentnu imunsku kompoziciju koja sadrži polisaharid antigena O25B E. coli na prvoj dozi od 5 do 18 µg, i polisaharid antigena O1A E. coli, polisaharid antigena O2 E. coli i polisaharid antigena O6A E. coli svaki na dozi koja je nezavisno 50% od prve doze, pri čemu svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno u vezi sa detoksifikovanim egzotoksinom A proteina nosača Pseudomonas aeruginosa (EPA).
[0009] U jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje multivalentnu imunsku kompoziciju koja sadrži polisaharid anti ena O25B E. coli sa formulom strukture O25B’:
polisahar
polisahari
i polisaharid antigena O6A E. coli koji ima strukturu formule O6A’:
gde je n nezavisno ceo broj od 5 do 25, i
svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno kovalentno vezani za proteinski nosač aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:1; i koncentracije polisaharida antigena O25B, O1A, O2, O6A E. coli u kompozicijama su redom 16:8:8:8 µg/ml, ili 32:16:16:16 µg/ml.
[0010] U jednom poželjnom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku pokretanja imunskog odgovora na ekstra-intestinalnu patogenu E. coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu kompozicije iz ovog pronalaska.
[0011] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku pokretanja imunskog odgovora na ekstra-intestinalnu patogenu E.coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu prve efikasne količine polisaharida antigena O25B E. coli, i druge efikasne količine svakog od polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida antigena O2 E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli, pri čemu je odnos prve efikasne količine u odnosu na drugu efikasnu količinu 2:1, svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno kovalentno vezani za detoksifikovani egzotoksin A Pseudomonas aeruginosa (EPA) proteinski nosač, i prva efikasna količina je 5 do 18 µg po davanju. U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje polisaharid antigena O25B E.coli za upotrebu u postupku pokretanja imunskog odgovora na ekstra-intestinalnu patogenu E.coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu polisaharid antigena O25B E. coli koji ima strukturu formule O25B’:
polisahar
polisahari
i polisaharid antigena O6A E. coli koji ima strukturu formule O6A’:
pri čemu je n nezavisno ceo broj od 5 do 25,
svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno kovalentni vezani za proteinski nosač aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, i polisaharidi antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su davani na 8:4:4:4 µg, ili 16:8:8:8 µg po primeni.
[0012] U skladu sa poželjnim izvođenjem, imunski odgovor koji je pokrenut kompozicijom iz ovog pronalaska sprečava invanzivnu ExPEC bolest koja je uzrokovana serotipovima O1A, O2, O6A i O25B ExPEC u humanom subjektu kome je potrebno. Bolesti koje su povezane sa ExPEC ili ExPEC bolesti uključuju, ali nisu ograničene na, infekciju urinarnog trakta, infekciju na hirurškom mestu, bakteremiju, abdominalnu ili infekciju pelvisa, pneumoniju, nosokomijalnu pneumoniju, osteomijelitis, celulitis, pijelonefritis, infekciju rane, meningitis, neonatalni meningitis, peritonitis, holangitis, infekcije mekih tkiva, piomiozitis, septički artritis, i sepsa. Poželjno, humani subjekt je humani subjekt koji se nalazi u riziku, koji ima ili je u riziku da dobije invanzivnu bolest ExPEC, kao što je starije humano biće, hospitalizovani pacijent, humano dete, imunokompromitovano humano biće, trudna žena, ljudi sa dijabetesom ili povredama rana, ljudi koji u nedavno imali ili im je zakazana operacija, itd.
[0013] U skladu sa izvođenjem iz pronalaska, svaki od O-antigena je kovalentno vezan za EPA proteinski nosač na ostatku Asn sekvence glikozilacije koja sadrži Asp (Glu)-X-Asn-Z-Ser (Thr) (SEQ ID NO: 3), pri čemu su X i Z nezavisno odabrani iz bilo koje prirodne aminokiseline izuzev Pro. U poželjnom izvođenju, EPA proteinski nosač sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1. U drugom izvođenju, O-antigen je kovalentno vezan za EPA proteinski nosač u masenom odnosu polisaharida-premaproteinu od 1:7 do 1:2, poželjno, 1:5 do 1:2. Na primer, u konjugatu O-antigena/EPA prema izvođenju iz pronalaska, masa O-antigena može biti 15% do 50%, ili 20% do 40%, mase EPA.
[0014] Drugi aspekt pronalaska se odnosi na postupak dobijanja kompozicije u skladu sa izvođenjem iz pronalaska, postupak obuhvata kombinovanje polisaharida antigena O25B E. coli, polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida anigena O2 E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli da bi se na taj način dobila kompozicija. Postupak obuhvata kombinovanje O25B, O1A, O2 i O6A antigena E. coli, od kojih je svaki kovalentno vezan za EPA proteinski nosač, u jednoj kompoziciji.
[0015] Takođe je prikazana upotreba kompozicije kao što je ovde prikazano za pravljenje vakcine ili leka za pokretanje imunskog odgovora na ExPEC ili za prevenciju ili lečenje bolesti koja je povezana sa ExPEC kod subjekta kome je potrebno.
KRATAK OPIS NACRTA
[0016] Gore navedeni pregled, kao i sledeći detaljni opis pronalaska, bolje će razumeti kada se čita zajedno sa priloženim nacrtima. Treba razumeti da pronalazak nije ograničen određenim izvođenjima koja su prikazana u nacrtima.
[0017] U nacrtima:
Slika 1 je primer kojim je predstavljena platforma za proizvodnju glikokonjugata vakcine: citoplazma (označeno sivom bojom) ćelije domaćina sadrži svaki od konstrukata DNK koji je potreban za rekombinantnu proizvodnju konjugata O-antigena/EPA u periplazmi (označeno belom bojom) ćelije domaćina;
Slika 2 je detaljan šematski prikaz procesa glikozilacije proteina;
Slike 3A-3C prikazuju indekse opsonizacije (OIs) dobijene od seruma koji su poreklom iz prethodno imunizovanih pacova (prazni krugovi) u poređenju sa 42 dana nakon imunizacije (popunjeni kvadrati) sa jednom prajming dozom i dve doze pojačanja naznačenih doza monovalentne vakcine; Slika 3A: O2-EPA imunizacija; Slika 3B: O6A-EPA imunizacija; i Slika 3C: O25B-EPA imunizacija; Slika 4 prikazuje ELISA titre dobijene sa serumima iz humanih subjekata koji su vakcinisani sa placebo ili tetravalentnom vakcinom koja sadrži antigene O1A, O2, O6A i O25B E. coli na 4 µg polisaharida po serotipu; značajno povećanje u ELISA titrima između davanja injekcije posle-(30 dana nakon injekcije) i pre injekcije (dan 1) je uočen samo kod vakcinisanih grupa (* predstavlja statističku značajnost, pri čemu višestuka * predstavlja povećani stepen značajnosti; ns, nema značajne razlike); i Slike 5A-5D prikazuju OIs koji su dobijeni sa serumima koji su izvedeni iz humanih subjekata koji su vakcinisani sa tetravalentnom vakcinom koja sadrži antigene E. coli O1A, O2, O6A i O25B na 4 µg polisaharida po serotipu; imunski odgovor kao što je označen sa OI protiv placeba i komponente tetravalentne vakcine; Slika 5A: O1A-EPA; Slika 5B: O2EPA; Slika 5C: O6A-EPA; i Slika 5D: O25B-EPA; pre davanja injekcije (Dan 1) i posle davanja injekcije (30 dana posle injekcije), gde je značajno povećanje u OI između davanja injekcije posle i davanja injekcije pre (označeno sa *, višestruke * predstavljaju povećani stepen značajnosti) koji je uočen samo u vakcinisanim grupama; ns, nema značajne razlike.
DETALJNI OPIS PRONALASKA
[0018] Razmatranje dokumenata, akata, materijala, uređaja, sprava ili slično koje je uključeno u ovoj specifikaciji je za svrhu obezbeđivanja konteksta pronalaska. Takvo razmatranje nije priznanje da bilo koja ili svaka od ovih materija čini deo prethodnog stanja tehnike u odnosu na bilo koje prikazane ili pronalaske koji se štite.
[0019] Osim ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji su se ovde koriste imaju isto značenje koje će obično razumenti osoba koja je uobičajno verzirana u oblast tehnike kojoj ovaj pronalazak pripada. Sa druge strane, određeni termini koji su ovde citirani imaju značenja kao što su prikazana u specifikaciji. Mora se primetiti da kao što je korišćeno ovde i u priloženim patentnim zahtevima, oblici u jednini, uključuju reference pozivanja na množinu osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje drugačije.
[0020] Kao što je ovde korišćeno, termini "O polisaharid," "O-antigen", "O antigen", "O-antigenski polisaharid," "O-polisaharidni antigen" i skraćenica "OPS", se svaki odnosi na O antigen Gramnegativnih bakterija, koji je komponenta lipopolisaharida (LPS) i specifičan je za svaki serotip ili sero(sub)tip Gram-negativnih bakterija. O antigen obično sadrži jedinice koje se ponavljaju (RUs) od dva do sedam ostataka šećera. Kao što je ovde korišćeno, RU je postavljen kao jedinica biološkog ponavljanja (BRU). BRU opisuje RU O-antigena kada se in vivo sintetiše.
[0021] Kao što je ovde korišćeno, termini "konjugat" i "glikokonjugat" se svaki odnose na proizvod konjugovanja koji sadrži O antigen E. coli kovalentno vezan za proteinski nosač. Konjugat može biti biokonjugat, koji je proizvod konjugovanja koji je pripremljen u ćeliji domaćina, u kome mašinerija ćelije domaćina proizvodi O antigen i proteinski nosač i povezuje O antigen sa proteinskim nosačem, npr., N-vezama. Konjugat se takođe može dobiti upotrebom drugih sredstava, na primer, hemijskim spajanjem proteina i antigena šećera.
[0022] Kao što je ovde korišćen, termin "efikasna količina" u kontekstu davanja subjektu antigena O se odnosi na količinu O antigena koja je dovoljna da se indukuje željeni imunski efekat ili imunski odgovor kod subjekta. U određenim izvođenjima, "efikasna količina" se odnosi na količinu antigena O koja je dovoljna da se proizvede imunitet kod subjekta da bi se postigao jedan ili više od sledećih efekata kod subjekta: (i) sprečio razvoj ili početak infekcije ExPEC, poželjno invazivne ExPEC bolesti, ili simptoma koji su sa njima povezani; (ii) sprečilo vraćanje ExPEC infekcije, poželjno invazivne ExPEC bolesti, ili simptoma koji su sa njom povezani; (iii) sprečila, smanjila ili ublažila ozbiljnost ExPEC infekcije, poželjno invazivne ExPEC bolesti, ili simptoma koji je sa njom povezan;
(iv) smanjilo trajanje ExPEC infekcije, poželjno invazivne ExPEC bolesti, ili simptoma koji je sa njom povezan;
(v) sprečilo napredovanje ExPEC infekcije, poželjno invazivn ExPEC bolesti, ili simptoma koji je sa njom povezan; (vi) uzrokuje regresiju infekcije ExPEC ili simptoma koji je sa njom povezan; (vii) sprečava ili smanjuje prestanak rada organa koji je povezan sa ExPEC infekcijom; (viii) smanjuje šansu ili učestalost hospitalizacije subjekta koji ima ExPEC infekciju; (ix) smanjuje dužinu hospitalizacije subjekta koji ima ExPEC infekciju; (x) povećava preživljavanje subjekta sa ExPEC infekcijom, poželjno invazivne ExPEC bolesti; (xi) eliminiše ExPEC infekciju, poželjno invazivnu ExPEC bolest; (xii) inhibira ili smanjuje ExPEC replikaciju; i/ili (xiii) pojačava ili poboljšava profilaktičke ili terapeutske efekat(e) druge terapije.
[0023] "Efikasna količina" se može razlikovati u zavisnosti od različitih faktora, kao što je fizičko stanje subjekta, starosno doba, masa, zdravlje, itd.; način davanja, kao što je oralno ili parentalno; kompozicije koja se daje, kao što je ciljni O antigen, ili drugi O antigeni koji se daju zajedno, adjuvans, itd.; i određena bolest za koju je poželjan imunitet. Kada je O antigen kovalentno vezan sa proteinskim nosačem, efikasna količina za O antigen je izračunata samo na osnovu ostatka polisaharida antigena O u konjugatu.
[0024] Kao što je ovde korišćen, termin "u kombinaciji," u kontekstu davanja dva ili više O antigena ili kompozicija subjektu, ne ograničava redosled u kome su O antigeni ili kompozicije davane subjektu. Na primer, prva kompozicija se može davati pre (npr., 5 minuta, 15 minuta, 30 minuta, 45 minuta, 1 sata, 2 sata, 4 sata, 6 sati, 12 sati, 16 sati, 24 sata, 48 sati, 72 sata, 96 sati, 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelja, 5 nedelja, 6 nedelja, 8 nedelja, ili 12 nedelja pre), istovremeno sa, ili nakon (npr., 5 minuta, 15 minuta, 30 minuta, 45 minuta, 1 sata, 2 sata, 4 sata, 6 sati, 12 sati, 16 sati, 24 sata, 48 sati, 72 sata, 96 sati, 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelja, 5 nedelja, 6 nedelja, 8 nedelja, ili 12 nedelja nakon) davanja druge kompozicije subjektu.
[0025] Kao što je ovde korišćen, "subjekt" označava bilo koju životinju, poželjno sisara, najpoželjnije humano biće, koje će biti ili je vakcinisano kompozicijiom u skladu sa izvođenjem iz ovog pronalaska. Termin "sisar" kao što je ovde korišćen, obuhvata bilo kojeg sisara. Primeri sisara uključuju, ali nisu ograničeni na, krave, konje, ovce, svinje, mačke, pse, miševe, pacove, zečeve, zamorce, majmune, humana bića, itd., najpoželjnije čoveka. U nekim izvođenjima, subjekt je humano odojče. U drugom izvođenju, subjekt je humano dete. U drugom izvođenju, subjekt je humani adult. U specifičnom izvođenju, subjekt je humani adult koji se nalazi u riziku. U drugom izvođenju, subjekt je stariji čovek. U drugom izvođenju, subjekt je humano odojče, uključujući preveremeno rođeno humano odojče i humano odojče koje je rođeno u terminu. U drugom izvođenju, subjekt je humano dete. Termini "subjekt" i "pacijent" mogu se ovde koristiti naizmenično.
[0026] Kao što je ovde korišćen, termin "prevremeno rođeno humano odojče" se odnosi na humano odojče rođeno manje od 37 nedelje gestacijske starosti.
[0027] Kao što je ovde korišćen, termin "humano odojče" se odnosi na novorođeno humano biće starosti 1 godine.
[0028] Kao što je ovde korišćen, termin "humani mališan" se odnosi na humano biće koje je starosti 1 do 3 godine.
[0029] Kao što je ovde korišćen, termin "humano dete" se odnosi na humano biće koje je starosti 1 godine do 18 godina.
[0030] Kao što je ovde korišćen, termin "humani adult" se odnosi na humano biće koje ima 18 godina ili je starije.
[0031] Kao što je ovde korišćen, termin "humani adult koji je u riziku" se odnosi na humano biće koje ima 18 godina ili je starije i koje je podložnije infekciji ExPEC u odnosu na prosečnu populaciju humanog adulta. Primeri "humanog adulta koji se nalazi u riziku" uključuju, ali nisu ograničeni na, starija humana bića, imunokompromitivana humana bića, trudne žene, ljude koji imaju dijabetes ili povrede rana, ljude koji su nedavno imali ili im je planirana operacija, itd.
[0032] Kao što je ovde korišćen, termin "starije humano biće" se odnosi na humano biće koje je starosti 55, poželjno 60, poželjnije 65, godina ili starije.
[0033] Kao što je ovde korišćen, "invazivna ExPEC bolest" je definisana kao izolacija i identifikacija ExPEC iz normalno sterilnih mesta u telu kod subjekta koji predstavlja akutnu bolest u skladu sa bakterijskom infekcijom.
[0034] Kao što je ovde korišćen, "imunološki odgovor" ili "imunski odgovor" na antigen ili kompoziciju se odnosi na razvijanje u subjektu humoralnog i/ili ćelijskog imunskog odgovora na antigen ili antigen koji je pristutan u kompoziciji.
[0035] U pronalasku je iznenađujuće otkriveno da O25B antigen E. coli konjugovan na EPA proteinski nosač izgleda manje imunogen u odnosu na druge E. coli O-antigene (npr., O1A, O2, i O6A) konjugovane za EPA proteinski nosač. Ovo otkriće dovodi do daljeg ispitivanja u doziranju O25B antigena E. coli i doznim odnosima različitih O antigena E. coli u multivalentnoj vakcini, stoga razvoju multivalentnih vakcina i postupcima imunizacije zasnovanim na O antigenima E. coli za poboljšane imunske odgovore protiv O25B serotipa i drugih serotipova ExPEC.
Epidemiologija
[0036] Studije o raspodeli serotipova E. coli koji dovode do bolesti ExPEC ukazuju na da 10 predominantnih O serotipa bi moglo da pokrije procenjeno 60-80% infekcija ExPEC, pretpostavljajući pokrivenost subporcija sojeva koji se ne mogu tipizirati. Videti, ispod npr., Tablele 1A-1C . U obe UTI i bakteremijskim ciljnim populacijama, serotipovi O1, O2, O6, i O25 su identifikovani kao četiri najzastupljenija serotipa E. coli, među kojima, serotip O25 je najzastupljniji serotip E. coli u bakteremiji. Takođe je pronađeno da je, za serotip O antigena koji je sastavljen od različitih, ali stukturalno i antigenski srodnih subtipova, jedan subtip može biti zastupljeniji među kliničkim izolatima u odnosu na druge. Na primer, određeno je da su antigeni O1A, O6A i O25B učestaliji subtipovi među analiziranim skorašnjim kliničkim sojevima ili izolatima za serotipove 01, 06 i O25, tim redom. Videti povezano izlaganje na epidemiološkim studijama u međunarodnoj prijavi patenta br. PCT/EP2015/053739, objavljenoj pod WO 2015/124769).
Tabela 1A: Distribucija najčešćih serotipova E. coli povezanih sa UTI iz kolekcije od 1841 uzorka urina prikupljenih u Švajcarskoj 2012. Prikazana je distribucija serotipova uzoraka iz relevantne subpopulacije od 671 subjekta i distribucija iz svih** uzoraka.
Tabela 1B: Prevalencija najčešćih serotipova povezanih sa UTI iz odabrane literature u rasponu od 1987-2011 i iz retrospektivno analiziranih američkih podataka od 2000-2011 (ECRC).
(nastavak)
1
Tabela 1C: Distribucija najčešćih O-serotipova E. coli povezanih sa bakteremijom iz kolekcije od 860 izolata krvi prikupljenih u SAD i EU u periodu 2011-2013. Navedena je relativna distribucija O-serotipa uzoraka.
[0037] Novi O25 aglutinirajući klon nedavno se pojavio u E. coli izolovanoj iz bolničkih okruženja, a on je nazvan O25B. Za O-serotip O25, primenom analize podtipova pomoću PCR-a, otkriveno je da je velika većina zapravo podtip O25B (u studiji od 24 testirana klinička izolata sa O25 pozitivnim fenotipom aglutinacije, 20 je dodeljeno podtipu O25B, dok je preostali 4 su dodeljena podtipu O25A, a u populaciji bakterijemije koja je tada proučavana, 56 od 57 proučavanih izolata O25 serotipa bilo je određeno kao O25B). Potvrđeno je da autologni antiserumi bolje prepoznaju autologni antigen od neautolognog antigena, pa stoga uključivanje O25B antigena u vakcinu može pružiti bolju zaštitu od preovlađujućih kliničkih sojeva O25B grupe O25 nego što bi učinilo uključivanje O25A antigena (videti, npr., međunarodnu patentnu prijavu br. PCT/EP2015/053739, objavljenu kao WO 2015/124769). Rezultati su pokazali da O25B vakcina može dovesti do seruma koji unakrsno reaguju sa antigenom O25A, čime se takođe obezbeđuje imuni odgovor protiv serotipa O25A (Id.). Kompozicije u skladu sa izvođenjima pronalaska sadrže E. coli O25B antigen konjugovan sa EPA nosačem proteina i druge E. coli O-antigene konjugovane sa EPA proteinom nosačem.
Kompozicije koje sadrže konjugate antigena O E. coli
[0038] U jednom opštem aspektu, pronalazak se odnosi na multivalentnu vakcinu koja sadrži serotipove O-antigena koji se nalaze pretežno među kliničkim izolatima E. coli, koji se mogu koristiti za obezbeđivanje aktivne imunizacije za prevenciju bolesti izazvanih ExPEC-om koji ima serotipove O-antigena sadržane u vakcina. Konkretno, ovaj pronalazak obezbeđuje multivalentnu imunološku kompoziciju koja sadrži polisaharid antigena O25B E. coli u prvoj dozi od 5 do 18 µg, i polisaharid antigena O1A E. coli, polisaharid antigena O2 E. coli i polisaharid antigena O6A E. coli svaki u dozi koja je nezavisno 50% prve doze, pri čemu je svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli nezavisno kovalentno vezan za detoksikovani egzotoksin A proteina nosača Pseudomonas aeruginosa (EPA).
[0039] Poželjno, najmanje jedan dodatni O antigen E. coli koji se koristi u kompozicijama pronalaska preovlađuje među kliničkim izolatima E. coli. Primeri takvih dodatnih O antigena uključuju, ali nisu ograničeni na, O1, O2, O4, O6, O7, O8, 015, 016, 018, 021, O73, O75 i 0153 antigene E. coli. U zavisnosti od potrebe, kompozicija može uključivati više od jednog dodatnog E. coli O antigena, kao što su dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam ili devet dodatnih O antigena E. coli, kako bi se obezbedila imunska zaštita protiv višestrukih serotipova E.coli pored serotipa E. coli O25B. U poželjnom slučaju, dodatni E. coli O-antigen se bira iz grupe koju čine E. coli O1, O2 i O6 antigeni. Poželjnije, dodatni E. coli O-antigen se bira iz grupe koju čine E. coli O1A, O2 i O6A antigeni.
[0040] U jednom izvođenju, kompozicija pronalaska sadrži prvu koncentraciju polisaharida antigena E. coli O25B, i drugu koncentraciju svakog od polisaharida antigena E. coli O1A, polisaharida antigena E. coli O2 i polisaharida E. coli O6A antigena, pri čemu je odnos prve koncentracije prema drugoj koncentraciji 2:1, svaki od polisaharida antigena E. coli O25B, O1A, O2 i O6A je nezavisno kovalentno vezan za detoksikovani egzotoksin A protein nosač Pseudomonas aeruginosa (EPA), a prva koncentracija je 10 do 36 µg/ml. U poželjnom izvođenju, svaki od antigena E. coli O1A, O2 i O6A je nezavisno prisutan u koncentraciji od najmanje 5 µg/ml, poželjnije, u koncentraciji od najmanje 8 µg/ml.
[0041] Kompozicija u skladu sa slučajem t izlaganja sadrži E. coli O25B antigen u koncentraciji koja je ista ili veća od koncentracije bilo kog od dodatnih O antigena u kompoziciji. Na primer, kompozicija može imati O25B antigen E. coli u prvoj koncentraciji od, npr., 10, 16, 24, 32 ili 36 µg/ml, i jedan ili više dodatnih O-antigena E. coli svaki u koncentraciji koja je, na primer.10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% prve koncentracije. Kada kompozicija sadrži više od jednog dodatnog O antigena, svi dodatni O antigeni mogu imati istu koncentraciju koja iznosi 10 do 100% koncentracije O25B antigena E. coli u kompoziciji. Alternativno, dodatni O antigeni takođe mogu imati različite koncentracije, od kojih je svaka nezavisno 10-100% koncentracije O25B antigena E. coli. Poželjno, kompozicija sadrži 32 µg/ml O25B antigena E. coli i nezavisno 16 do 32 µg/ml svakog od jednog ili više dodatnih O antigena, pri čemu svaki od O25B antigena E. coli i dodatnih O-antigena E. coli je nezavisno kovalentno vezan za EPA protein nosač. U drugom poželjnom izvođenju, kompozicija sadrži 16 µg/ml O25B antigena E. coli, i nezavisno 8 µg/ml do 16 µg/ml svakog od jednog ili više dodatnih O antigena, pri čemu svaki od O25B antigena E. coli i dodatni O-antigeni E. coli su nezavisno kovalentno vezani za protein nosač EPA.
[0042] U jednom poželjnom izvođenju, pronalazak se odnosi na kompoziciju koja sadrži O25B antigen E. coli u prvoj koncentraciji od 10 do 36 µg/ml, i drugu koncentraciju svakog od O1A antigena E. coli, O2 antigena E. coli i antigena O6A E. coli, pri čemu je svaki od antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli nezavisno kovalentno vezan za protein nosač EPA, a odnos prve koncentracije prema drugoj koncentraciji je 2:1.
[0043] Poželjno, kompozicija sadrži antigene O25B, O1A, O2 i O6A E. coli u masenom odnosu 2:1:1:1, a kompozicija sadrži 32 µg/ml antigena O25B E. coli, pri čemu svaki od O-antigena je kovalentno vezan za EPA protein nosač. U drugom poželjnom izvođenju, kompozicija sadrži antigene O25B, O1A, O2 i O6A E. coli u masenom odnosu 2:1:1:1, a kompozicija sadrži 16 µg/ml antigena O25B E. coli, pri čemu svaki od O-antigena je kovalentno vezan za EPA protein nosač. Još poželjnije, svaki od antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli je nezavisno kovalentno vezan za protein nosač EPA koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 1, i svaki od O-antigena i konjugata EPA proteina nosača je napravljen u ćeliji, odnosno biokonjugat. Najpoželjnije, antigeni O25B, O1A, O2 i O6A E. coli sadrže, redom, strukture formule O25B’, formule O1A’, formule O2’ i formule O6A’ opisane dole.
[0044] Kompozicije opisane ovde su korisne u lečenju i prevenciji infekcije subjekata (npr. humanih subjekata) sa ExPEC. U određenim izvođenjima, pored toga što sadrže O-antigene E. coli kovalentno vezane za protein nosač EPA, ovde opisane kompozicije sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač. Kako se ovde koristi, izraz "farmaceutski prihvatljiv" označava odobrenje od strane regulatorne agencije savezne ili vlade države ili je naveden u Farmakopeji SAD ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a posebno kod ljudi. Termin "nosač", kako se ovde koristi u kontekstu farmaceutski prihvatljivog nosača, odnosi se na razblaživač, adjuvans, ekscipijens ili nosač sa kojim se primenjuje farmaceutska kompozicija. Slani rastvori i vodeni rastvori dekstroze i glicerola takođe se mogu koristiti kao tečni nosači, posebno za rastvore za injekcije. Pogodni ekscipijenti su skrob, glukoza, laktoza, saharoza, želatin, slad, pirinač, brašno, kreda, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, i kao. Primeri odgovarajućih farmaceutskih nosača su opisani u "Remington's Pharmaceutical Sciences" E.W. Martina.
[0045] U specifičnom izvođenju, ovde je obezbeđena kompozicija koja sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač, i dodatne O antigene E. coli, svaki kovalentno vezan za EPA protein nosač.
[0046] Ovde je takođe prikazana kompozicija koja sadrži (i) biokonjugat koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, i (ii) biokonjugat koji sadrži antigen O1A E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač.
[0047] Ovde je takođe prikazana kompozicija koja sadrži (i) biokonjugat koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, i (ii) biokonjugat koji sadrži antigen O2 E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač.
[0048] Ovde je takođe prikazana kompozicija koja sadrži (i) biokonjugat koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, i (ii) biokonjugat koji sadrži antigen O6A E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač.
[0049] Ovde je takođe prikazana kompozicija koja sadrži biokonjugat O25B E. coli koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, i dva ili više biokonjugata izabranih iz grupe koju čine: (i) biokonjugat O1A E. coli koji sadrži antigen O1A E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; (ii) biokonjugat O2 E. coli koji sadrži antigen O2 E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; i (iii) biokonjugat O6A E. coli koji sadrži antigen O6A E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA.
[0050] Ovde je takođe prikazana kompozicija koja sadrži: (i) biokonjugat O25B E. coli koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; (ii) biokonjugat O1A E. coli koji sadrži antigen O1A E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; (iii) biokonjugat O2 E. coli koji sadrži antigen O2 E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; i (iv) biokonjugat O6A E. coli koji sadrži antigen O6A E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, pri čemu su (i), (ii), (iii) i (iv) formulisani u jednoj formulaciji.
[0051] Ovde je takođe otkrivena kompozicija koja sadrži: (i) biokonjugat O25B E. coli koji sadrži antigen O25B E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; (ii) biokonjugat O1A E. coli koji sadrži antigen O1A E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; (iii) biokonjugat O2 E. coli koji sadrži antigen O2 E. coli kovalentno vezan za EPA protein nosač; i (iv) biokonjugat O6A E. coli koji sadrži antigen O6A E. coli kovalentno vezan za protein nosač EPA, pri čemu su (i), (ii), (iii) i (iv) formulisani u pojedinačnim kompozicijama koje se daju u kombinaciji.
[0052] U određenim izvođenjima, gore navedne kompozicije opciono sadrže EPA protein nosač kovalentno vezan za O-antigen E. coli koji nije O1A, O2, O6A i O25B E. coli. Drugi O antigeni E. coli uključuju, ali nisu ograničeni na, dodatne O antigene navedene u Tabelama 1A-1C iznad.
[0053] Kompozicije koje su ovde obezbeđene mogu se koristiti za izazivanje imunog odgovora kod domaćina kome se kompozicija daje, tj. imunogene su. Prema tome, ovde opisane kompozicije mogu da se koriste kao vakcine protiv ExPEC infekcije i mogu da sadrže bilo koje dodatne komponente pogodne za upotrebu u vakcini. Ovde opisane kompozicije su multivalentne formulacije, npr., najmanje tetravalentne formulacije koje sadrže biokonjugate O-antigena O25B, O1A, O6A i O2 E. coli serotipа/podserotipа.
1
[0054] U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije dodatno sadrže konzervans, kao što je derivat žive timerosal. U specifičnom izvođenju, ovde opisane farmaceutske kompozicije sadrže 0,001% do 0,01% timerosala. U drugim izvođenjima, ovde opisane farmaceutske kompozicije ne sadrže konzervans.
[0055] U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije (npr. imunogene kompozicije) sadrže, ili se primenjuju u kombinaciji sa, pomoćnim sredstvom. Adjuvans za primenu u kombinaciji sa ovde opisanom kompozicijom može se primeniti pre, istovremeno sa ili posle primene pomenute kompozicije. U nekim izvođenjima, termin "adjuvans" se odnosi na jedinjenje koje kada se daje zajedno sa ili kao deo ovde opisane kompozicije povećava, pojačava i/ili pojačava imuni odgovor na biokonjugat, ali kada se adjuvansno jedinjenje daje samo ne stvara imuni odgovor na biokonjugat. U nekim izvođenjima, adjuvans generiše imuni odgovor na poli biokonjugat peptid i ne izaziva alergiju ili drugu neželjenu reakciju. Adjuvansi mogu poboljšati imuni odgovor pomoću nekoliko mehanizama uključujući, na primer, regrutovanje limfocita, stimulaciju B i/ili T ćelija i stimulaciju makrofaga. U određenim poželjnim izvođenjima, ovde opisane kompozicije ne sadrže pomoćno sredstvo osim biokonjugata, i/ili se ne daju u kombinaciji sa pomoćnim sredstvom pored biokonjugata (u slučaju da bi biokonjugati sadržali neka intrinzična svojstva adjuvansa, bili bi zanemareni i nijedan ekstrinzični adjuvans ne bi bio dodat u ovim izvođenjima).
[0056] Specifični primeri adjvanasa uključuju, ali nisu ograničeni na, soli aluminijuma (alum) (kao što j aluminijum hidroksid, aluminijum fosfat, i aluminijum sulfat), 3 De-O-acilovani monofosforil lipid A (MPL) (videti patent GB2220211 Ujedinjenog kraljevstva), MF59 (Novartis), AS03 (GlaxoSmithKline), AS04 (GlaxoSmithKline), polisorbat 80 (Tween 80; ICL Americas, Inc.), jedinjenja imidazopiridina (videti međunarodnu prijavu br. PCT/US2007/064857, koja je objavljena kao međunarodna objava br. WO2007/109812), jedinjenja imidazohinoksalina (videti međunarodnu prijavu br. PCT/US2007/064858, koja je objavljena kao međunarodna objava br. WO2007/109813) i saponini, kao što su QS21 (videti Kensil et al., in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995); U.S. Pat. No. 5,057,540). U nekim izvođenjima, adjuvans je Frojndov adjuvans (kompletan ili nekompletan). Drugi adjuvansi su emulzije ulja u vodi (kao što je skvalen ili ulje kikirikija), opciono u kombinaciji sa imunskim stimulansima, kao što su monofosforil lipid A (videti Stoute et al., 1997, N. Engl. J. Med.336, 86-91). Drugi adjuvans je CpG (Bioworld Today, Nov.15, 1998).
[0057] U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su formulisane da budu pogodne za namenjeni način primene subjektu. Na primer, kompozicije koje ovde opisuju mogu biti formulisane da budu pogodne za subkutanoznu, parenteralnu, oralnu, intradermalnu, transdermalnu, kolorektalnu, intraperitonealnu, i rektalnu primenu. U specifičnom izvođenju, farmaceutska kompozicija može biti formulisana za intravenoznu, oralnu, intraperitonealnu, intranazalnu, intratrahealnu, subkutanoznu, intramuskularnu, topikalnu, intradermalnu, transdermalnu ili pulmonarnu primenu. U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su primenjene intramuskularnom injekcijom.
[0058] U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije dodatno sadrže jedan ili više pufera, npr., Tris-puferovani slani rastvor, fosfatni pufer, i saharoza fosfat glutamat pufer.
[0059] U određenim izvođenjima, ovde opisane kompozicije dodatno sadrže jednu ili više soli, npr., Tris-hidrohlorid, natrijum hlorid, kalcijum hlorid, kalijum hlorid, natrijum fosfat, mononatrijum glutamat, i soli aluminijuma (npr., aluminijum hidroksid, aluminijum fosfat, alum (kalijum aluminijum sulfat), ili mešavina takvih aluminijumovih soli). U jednom izvođenju, kompozicija iz pronalaska sadrži ovde opisane biokonjugata u Tris-puferovanom slanom rastvoru (TBS) pH 7.4 (npr. koji sadrži Tris, NaCl i KCl, npr. na 25 mM, 137 mM i 2.7 mM, tim redom).
[0060] Ovde opisane kompozicije mogu biti uključene u kontejner, pakovanje, ili dispenser zajedno sa uputstvima za primenu.
[0061] Ovde opisane kompozicije se mogu skladištiti pre upotrebe, npr., kompozicije se mogu čuvati zamrznute (npr., na oko -20°C ili na oko -70°C); skladištene u rashlađenim uslovima (npr., na oko 4°C); ili skladištene na sobnoj temperaturi.
Postupci/Upotrebe
[0062] U drugom opštem aspektu, pronalazak obezbeđuje O25B antigen polisaharida E. coli za upotrebu u postupku pokretanja imunskog odgovora na ekstra-intestinalnu patogenu E. coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu prve efikasne količine O25B antigena polisaharida E. coli, i druge efikasne količine svakog od O1A antigena polisaharida E. coli, O2 antigena polisaharida E. coli i O6A antigena polisaharida E. coli, gde je odnos prve efikasne količine prema drugoj efikasnoj količini 2: 1, svaki od E. coli O25B, O1A, O2 i O6A antigena polisaharida su nezavisno kovalentno vezani za detoksifikovani egzotoksin A protein nosač Pseudomonas aeruginosa (EPA) nosač protein, i prva efikasna količina je 5 do 18 µg po davanju.. Poželjno, imunski odgovor je efikasan da bi se sprečila ili lečila bolest koja je povezana sa ExPEC kod subjekta kome je potrebna.
[0063] Poželjno, bar jedan dodatni O antigen E. coli O korišćen je u postupcima u upotrebama koje su ovde izložene preovlađuju među kliničkim izolatima E. coli. Primeri takvih dodatnih O antigena uključuju, ali nisu ograničeni na, antigene O1, O2, O4, O6, O7, O8, 015, 016, 018, 021, O73, O75 i 0153 E. coli. U zavisnosti od potrebe, više od jednog dodatnog antigena O E. coli, kao što su dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam ili devet dodatnih antigena O E. coli, mogu se davati da bi se obezbedila imunska zaštita protiv višestrukih serotipova E. coli pored serotipa O25B E. coli.
[0064] Poželjno, kompozicija iz ovog pronalaska je za upotrebu u postupku koji indukuje imunski odgovor kod subjekta kome je potrebno protiv ExPEC serotipova O25B, i jednog ili više dodatnih E. coli O-antigena koji su odabrani iz grupe koja se sastoji iz E. coli O1A, O2 i O6A antigena. Kompozicija iz ovog pronalaska može biti za upotrebu u postupku koji obuhvata davanje subjektu kome je potrebno E. coli O25B antigena u prvoj efikasnoj količini od 5 do 18 µg po davanju, i E. coli O1A, O2 i O6A antigena svaki na efikasnoj količini koja je 50% prve efikasne količine, pri čemu je svaki od E. coli O25B antigena i dodatnih O-antigena E. coli nezavisno kovalentno vezan za EPA protein nosač. U poželjnom izvođenju, svaki od E. coli O1A, O2 i O6A antigena je nezavisno davan u efikasnoj količini od najmanje 3 µg po davanju, poželjnije, na efikasnoj količini od najmanje 4 µg po davanju.
postupak prema izlaganju, primenjena efikasna količinaa E. coli O25B antigena je ista ili veća od primenjene efikasne količine bilo kojih od dodatnih O antigena. Na primer, E. coli O25B antigen može se davati u prvoj efikasnoj količini od 4 do 24 µg po davanju, i bar jedan dodatni E. coli O-antigen može se davati u drugoj efikasnoj količini koja je, npr., 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% prve efikasne količine. Kada više od jednog dodatnog O antigena su davani kombinovao, svaki od dodatnih O antigena može se davati u istoj efikasnoj količini koja je 10-100% od prve efikasne količine za O25B antigen E. coli. Dodatni O antigeni mogu se takođe davati u različitim efikasnim količinama od kojih je svaka nezavisno 10-100% od prve efikasne količine za E. coli O25B antigen. Poželjno, O25B antigen E. coli je davan u prvoj efikasnoj količini od 5 µg do 18 µg, i najmanje jedan dodatni O antigen je davan u drugoj efikasnoj količini koja je nezavisno 50% do 100% od prve efikasne količine.
[0065] U jednom izvođenju obezbeđena je kompozicija prema pronalasku za upotrebu u postupku indukovanja imunskog odgovora na ExPEC kod subjekta kome je potrebno koji obuhvata davanje subjektu O25B antigena E. coli u prvoj efikasnoj količini, npr., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16
1
µg po davanju, i E. coli O1A, O2 i O6A antigeni svaki na efikasnoj količni koja je nezavisno, 50% prve efikasne količine, pri čemu je svaki od E. coli O25B antigena i dodatnih O-antigena E. coli je nezavisno kovalentno vezan za EPA protein nosač.
[0066] U jedom poželjnom izvođenju, obezbeđena je kompozicija za upotrebu u postupku indukovanja imunskog odgovora na ExPEC kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu O25B antigena E. coli u prvoj efikasnoj količini od 5 do 18 µg po davanju, i druga efikasna količina svakog od O1A antigena E. coli, O2 antigena E. coli i O6A antigena E. coli, pri čemu svaki od O25B, O1A, O2 i O6A antigena E. coli su nezavisno kovalentno vezani za EPA protein nosač, i odnos prve efikasne količine prema drugoj efikasnoj količini je 2:1. Poželjno, E. coli O25B, O1A, O2 i O6A antigeni su davani subjektu u odnosu doza od 2:1:1:1, i O25B antigen E. coli je davan na 5 µg, 8 µg ili 16 µg po davanju. Takođe poželjno, O25B, O1A, O2 i O6A antigeni E. coli su davani subjektu u jednoj kompoziciji.
[0067] Ovde su prikazani postupci i upotrebe kompozicija za indukovanje imunskog odgovora na ExPEC kod subjekta kome je potrebno, obuhvata davanje subjektu O25B antigena E. coli kovalentno vezanog na EPA protein nosač, i bar jednog dodatnog O antigena E. coli kovalentno vezanog na EPA proteinski nosač. U specifičnom slučaju, ovde opisane kompozicije su korišćene za vakcinisanje humanog subjekta da bi se indukovao zaštitni imunitet protiv ExPEC infekcije humanog subjekta.
[0068] Ovde su dalje prikazani postupci za indukciju proizvodnje opsonofagocitnih antitela protiv ExPEC kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu O25B antigena E. coli kovalentno vezanog za EPA proteinski nosač, i bar jedan dodatni O antigen E. coli kovalentno vezan za EPA proteinski nosač.
[0069] U jednom izvođenju, pomenuti subjekt ima ExPEC infekciju u vremenu davanja. U drugom izvođenju, pomenuti subjekt nema ExPEC infekciju u vremenu davanja. Primeri infekcija koje su izazvane ExPEC uključuju, ali nisu ograničene na, infekciju mokraćnog trakta, infekcija na mestu operacije, bakteremija, abdominalna ili karlična infekcija, pneumonija, nozokomijalna pneumonija, osteomijelitis, celulitis, infekcija rane, meningitis, neonatalni meningitis, peritonitis, holangitis, infekcije mekog tkiva, piomiozitis, septični artritis, i sepsa. Poželjno, infekcija koja je izazvana sa ExPEC je invazivana ExPEC bolest koja je uzrokovana serotipovima ExPEC čiji su antigeni uključeni u kompozicijama prema izvođenjima iz pronalaska.
[0070] Kompozicije iz pronalaska mogu biti za upotrebu u postupcima pokretanja imunskog odgovora kod ovde opisanog subjekta koji rezultuje u vakcinaciji subjekta protiv infekcije sojevima ExPEC čiji su O-antigeni prisutni u kompoziciji(ama). Kada je korišćen podtip O-antigena, pronalazak može takođe indukovati imunski odgovor na drugi podtip O-antigena koji ima sličnu antigenost.
[0071] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana serotipom O25 E. coli. U specifičnom izvođenju, pomenuti O25 serotip je O25B. U drugom specifičnom izvođenju, pomenuti O25 serotip je O25A.
[0072] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana serotipom O25 E. coli, npr. O25B serotipom, i O1 serotipom, O1A serotipom.
[0073] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana serotipom O25, npr. O25B serotipom, i O2 serotipom E. coli.
1
[0074] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana serotipom O25, npr. O25B serotipom, i O6 serotipom, O6A serotipom E. coli.
[0075] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana serotipom E. coli O25 (npr. O25B i/ili O25A), i sa dva ili više sledećih serotipa E. coli: O1 (npr., O1A, O1B, i/ili O1C), O2, i/ili O6 (npr., O6A i/ili O6GlcNAc).
[0076] U specifičnom izvođenju, imunski odgovor koji je indukovan ovde opisanim postupkom ili kompozicijom je efikasan da bi se sprečila i/ili lečila infekcija koja je izazvana bilo kojim od sledećih serotipa E. coli: O25 (npr., O25B i/ili O25A), O1 (npr., O1A, O1B, i/ili O1C), O2, i O6 (npr., O6A i/ili O6GlcNAc).
[0077] U specifičnom izvođenju, indukovani imunski odgovor je efikasan kako bi se sprečila i/ili lečila infekcija E. coli serotipa O25B, serotipa E. coli osim O1, O2, O6, ili O25, uključujući, ali bez ograničenja na, dodatne serotipove O koji su navedeni u Tabelama 1A-1C.
[0078] Da bi se subjekt imunizovao protiv ExPEC infekcije, subjektu se može primeniti jedna kompozicija koja se ovde opisuje, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži O25B antigen E. coli, i jedan, dva, tri, četiri, ili više dodatnih ovde opisanih O antigena E. coli, svaki je kovalentno vezan za EPA nosače proteina. Alternativno, da bi se tretirao subjekt koji ima ExPEC infekciju ili subjekt imunizovao protiv ExPEC infekcije, subjektu se mogu primeniti ovde opisane višestruke kompozicije u kombinaciji. Na primer, subjektu se može primeniti kompozicija koja sadrži O25B antigen E. coli konjugovan sa EPA nosačem proteina, u kombinaciji sa davanjem dva, tri, četiri, ili više kompozicija koje obuhvataju konjugate dodatnih O antigena u skladu sa izvođenjima iz pronalaska.
[0079] U određenim izvođenjima, imunski odgovor koji je izazvan kod subjekta nakon davanja ovde opisane kompozicije je efikasan da bi se sprečio ili smanjio simptom koji se dobija od infekcije ExPEC, poželjno bar 30%, poželjnije bar 40%, kao što je bar 50%, subjekata kojima je davana kompozicija. Simptomi infekcije ExPEC mogu se razlikovati u zavisnosti od prirode infekcije i mogu obuhvatiti, ali nisu ograničeni na: disuriju, povećanu učestalost ili hitnost mokrenja, piuriju, hematuriju, bol u leđima, bol u karlici, bol prilikom mokrenja, groznicu, drhtavicu, i/ili mučninu (npr., kod subjekata koji imaju infekciju mokraćnog trakta izazvanu sa ExPEC); visoku temperaturu, glavobolju, ukočen vrat, mučninu, povraćanje, napade, pospanost, i/ili osetljivost na svetlost (npr., kod subjekata koji imaju meningitis koji je izazvan sa ExPEC); groznicu, povećan broj otkucaja srca, povećanu brzinu disanja, smanjeno izlučivanje urina, smanjen broj trombocita, abdominalni bol, poteškoće u disanju, i/ili abnormalnu srčanu funkciju (npr., kod subjekata koji imaju sepsu koja je izazvana ExPEC).
[0080] U određenim izvođenjima, imunski odgovor koji je izazvan kod subjekta nakon primene ovde opisane kompozicije je efikasan za smanjenje verovatnoće hospitalizacije subjekta koji pati od ExPEC infekcije. U nekim izvođenjima, imunski odgovor koji je indukovan kod subjekta nakon davanja ovde opisane kompozicije je efikasan da bi se smanjilo trajanje hospitalizacije subjekta koji pati od ExPEC infekcije.
O-antigeni E. coli
[0081] Izvođenja iz pronalaska se odnose na kompozicije i kompozicije za upotrebu u postupcima koji se odnose na O25B antigen E. coli i jedan ili više dodatnih O antigena E. coli. Poželjno, dodatni O antigen preovlađuje među kliničkim izolatima E. coli. Primeri antigena E. coli koji se mogu koristiti u pronalasku uključuju, ali nisu ograničeni na, O25B, O1A, O2, i O6A antigene E. coli.
1
[0082] Kao što se ovde koristi "E. coli O25B antigen" se odnosi na O antigen koji je specifičan za O25B serotip E. coli. U jednom izvođenju, O25B antigen E. coli sadrži strukturu formule O25B:
poželjno, O25B antigen E. coli sadrži strukturu formule O25B’:
pri čemu n u formuli O25B ili formuli O25B’ je ceo broj od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju iz pronalaska, n u formuli O25B ili formuli O25B’ je ceo broj od 10-20.
[0083] Poželjno, populacija O25B antigena E. coli ima strukturu formule O25B, poželjnije formule O25B’, je korišćena u kompozicijama i postupcima prema izvođenjima iz pronalaska, pri čemu n od najmanje 80% od O25B antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju iz pronalaska, n od najmanje 80% O25B antigena E. coli u populaciji je ceo broj of 10-20.
[0084] Kao što se ovde koristi, "E. coli O1 antigen" se odnosi na O antigen koji je specifičan za O1 serotip E. coli. U jednom izvođenju, O1 antigen E. coli je O1A antigen E. coli O1A.
poželjno, O1A antigen E. coli obuhvata strukturu formule O1A’:
1
pri čemu n u formuli O1A ili formuli O1A’ je ceo broj od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, do 15 do 20. U jednom izvođenju, n u formuli O1A ili formuli O1A’ je ceo broj od 7-15.
[0086] Poželjno, populacija O1A antigena E. coli ima strukturu formule O1A, poželjnije formule O1A’, je korišćena u kompozicijama i postupcima prema izvođenjima iz pronalaska, gde je n od najmanje 80% O1A E. coli u populaciji je od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju, n od najmanje 80% O1A antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 5-15.
poželjno, O2 antigen E. coli sadrži strukturu formule O2’:
pri čemu n u formuli O2 ili formuli O2’ je ceo broj 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju, n u formuli O2 ili formuli O2’ je ceo broj od 8-16.
[0088] Poželjno, populacija O2 antigena E. coli koji imaju strukturu formule O2, poželjnije formule O2’, je korišćena u kompozicijama i postupcima u skladu sa izvođenjima iz pronalaska, pri čemu je n od najmanje 80% O2 antigena E. coli u populaciji je od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju, n od najmanje 80% O2 antigena E. coli u populacije ceo broj od 5-20.
[0089] Kao što je ovde korišćen, "E. coli O6 antigen" se odnosi na O antigen koji je specifičan za O6 serotip E. coli. U jednom izvođenju, O6 antigen E. coli je E. coli O6A.
[0090] Kao što je ovde korišćen, "E. coli O6A antigen," takođe je označen sa "E. coli O6K2 antigen" ili "E. coli O6Glc antigen," odnosi se na O antigen koji je specifičan za O6A serotip E. coli. U jednom izvođenju, E. coli O6A antigen sadrži strukturu formule O6A:
1
poželjno, E. coli O6A antigen sadrži strukturu formule O6A’:
gde je β 1, 2 veza takođe nazvana β2 veza, n u formuli O6A ili formuli O6A’ je ceo broj od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15,1 do10, 1 do 5,10 do 30, 15 do 30,20 do 30,25 do 30, 5 do 25,10 do 25, 15 do 25,20 do 25,10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju, n u formuli O6A ili fomruli O6A’ je ceo broj od 8-18.
[0091] Poželjno, populacija O6A antitgena E. coli koji imaju strukturu formule O6A, poželjnije formule O6A’, je korišćena u kompozicijama i postupcima u skladu sa izvođenjima iz pronalaska, pri čemu je n najmanje 80% O6A antigena E. coli u populaciji je od 1 do 30, 1 do 20, 1 do 15, 1 do 10, 1 do 5, 10 do 30, 15 do 30, 20 do 30, 25 do 30, 5 do 25, 10 do 25, 15 do 25, 20 do 25, 10 do 20, ili 15 do 20. U jednom izvođenju, n od najmanje 80% O6A antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 5-20.
[0092] U poželjnom izvođenju, kompozicija iz pronalaska sadrži E. coli O25B antigene koji imaju strukturu formule O25B’, pri čemu je n od najmanje 80% O25B antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 10-20; E. coli O1A antigeni koji imaju strukturu formule O1A’, pri čemu je n od najmanje 80% O1A antigena E. coli O1A u populaciji je ceo broj od 5-15; E. coli O2 antigeni koji imaju strukturu formule O2’, pri čemu je n od najmanje 80% O2 antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 5-20; i E. coli O6A antigeni koji imaju strukturu formule O6A’, pri čemu je n od najmanje 80% O6A antigena E. coli u populaciji je ceo broj od 5-20, gde je svaki od O-antigena kovalentno vezan sa proteinom nosačem EPA koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1.
[0093] O antigen E. coli koji je koristan u pronalasku može se proizvesti postupcima poznatim u oblasti tehnike u pogledu ovog izlaganja. Na primer, mogu se proizvesti iz ćelije, poželjno rekombinantne ćelije koja je optimizovana za biosintezu O antigena. Videti, npr., relevantno izlaganje o nukleinskim kiselinama, proteina, ćelijama domaćina, proizvodnim postupcima, itd., za biosintezu O antigena E. coli u WO 2006/119987, WO 2009/104074, međunarodnoj patentnoj prijavi br. PCT/EP2015/053739 (objavljena kao WO 2015/124769), Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61.
EPA nosač proteina
[0094] Prema izvođenjima iz pronalaska, svaki O antigen E. coli je kovalentno vezan sa EPA proteinom nosača (videti, npr., Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61). U literaturi su opisane različite detoksifikovane varijante EPA i mogu se koristiti kao proteini nosači EPA u ovde opisanim konjugatima.
[0095] U određenim izvođenjima, EPA proteini nosači koji su korišćeni u ovde opisanim konjugatima su EPA modifikovani na takav način da je protein manje toksičan i/ili je podložniji glikozilaciji. Na primer, detoksifikacija se može postići mutiranjem i delecijom ostataka koji su esencijalni za katalizu, kao što su L552V i ΔE553, u skladu sa Lukac et al., Infect Immun, 56: 3095-3098, 1988 i Ho et al., Hum
2
Vaccin, 2:89-98, 2006. U specifičnom izvođenju, proteini nosači koji su korišćeni u dobijanju ovde opisanih konjugata su EPA modifikovani tako da broj mesta glikozilacije u proteinima nosača je optimizovan na način koji omogućava da se primenjuju niže koncentracije proteina, npr., u imunogenoj kompoziciji, u njegovom obliku biokonjugata.
[0096] U određenim izvođenjima, EPA proteini nosači su modifikovani za EPA da uključe 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ili više mesta glikozilacije koja bi normalno bila povezana sa proteinom nosačem (npr., u odnosu na broj mesta glikozilacije povezanih sa proteinom nosačem u njegovom nativnom/prirodnom, npr., "divljem tipu" stanju). U specifičnim izvođenjima, uvođenje mesta glikozilacije se postiže insercijom konsenzusnih sekvenci glikozilacije (npr., Asn-X-Ser(Thr), gde X može da bude bilo koja aminokiselina izuzev Pro (SEQ ID NO: 2); ili poželjno Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr), gde su X i Z nezavisno odabrani od bilo koje prirodne aminokiseline izuzev Pro (SEQ ID NO:3) (videte WO 2006/119987)) na bilo kom mestu u primarnoj strukturi EPA proteina. U jednom posebnom izvođenju, EPA protein nosač sadrži 4 konsenzusne sekvence glikozilacije Asp/Glu-X-Asn-Z-Ser/Thr (SEQ ID NO: 3), i ima aminokiselinsku sekvencu kao što je obezbeđena u SEQ ID NO: 1.
[0097] U određenim izvođenjima, EPA protein nosač se može proizvesti zajedno sa signalnom sekvencom (kao što je signalni peptid za E. coli DsbA, porin A spoljašnje membrane E. coli (OmpA), maltoza vezujući protein E. coli (MalE), itd.) koji cilja protein nosač u periplazmatski prostor ćelije domaćina koja eksprimira protein nosač. EPA protein nosač takođe se može modifikovato sa "tag-om," tj., aminokiselinskom sekvencom koja omogućava izolovanje i/ili identifikaciju proteina nosača.
[0098] EPA protein nosač koji je koristan u pronalasku može se u pogledu ovog pronalaska proizvesti u korišćenjem postupaka koji su poznati u oblasti tehnike. Videti, npr., relevantno izlaganje u npr., Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61, i u WO 2006/119987, WO 2009/104074, i međunarodnoj patentnoj prijavi br. PCT/ EP2015/053739 (objavljena pod br. WO 2015/124769). Konjugati
[0099] U određenim izvođenjima, ćelija domaćin može poizvesti O antigen E. coli i EPA protein nosač, i kovalentno vezati O antigen sa EPA proteinom nosačem da se obrazuje biokonjugat koji je koristan u pronalasku. Videti, npr., relevantno izlaganje u npr., Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61, i u WO 2006/119987, WO 2009/104074, i međunarodnoj patentnoj prijavi br. PCT / EP2015/053739 (objavljena pod br. WO 2015/124769).
[0100] Alternativno, glikokonjugati se mogu dobiti hemijskom sintezom, tj., pripremiti izvan ćelije domaćina (in vitro). Na primer, ovde opisani O-antigeni E. coli, npr., O25B antigen, mogu se konjugovati sa proteinima nosačima upotrebom postupaka koji su poznati stručnjacima iz oblasti tehnike, uključujuči korišćenjem aktivacionih reakcionih grupa u polisaharidu/ oligosaharidu kao i proteinu nosaču. Videti, npr., Pawlowski et al., 2000, Vaccine 18:1873-1885; i Robbins et al., 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106:7974-7978. Takvi pristupi obuhvataju ekstrakciju antigenih polisaharida/ oligosaharida iz ćelija domaćina, prečišćavanje polisaharida/oligosaharida, hemijsku aktivaciju polisaharida/oligosaharida, i konjugovanje polisaharida/ oligosaharida sa proteinom nosačem.
[0101] Biokonjugati imaju svojstva prednosti u odnosu na glikokonjugate koji su dobijeni in vitro, npr., bioknjugati zahtevaju manje hemikalija u proizvodnju i konzistentniji su i homogeniji u pogledu konačnog proizvoda koji se dobija. Prema tome, biokonjugati su poželjni u odnosu na hemijski proizvedene glikokonjugate.
[0102] U specifičnom izvođenju, EPA protein nosač je N-vezan za O-antigen E. coli koji je koristan u pronalasku. Na primer, O antigen E. coli O je spojen sa Asn ostatku u sekvenci glikozilacije proteina nosača, kao što je AsnX-Ser(Thr), pri čemu X može biti bilo koja aminokiselina izuzev Pro (SEQ ID NO: 2), poželjno Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr), gde su X i Z nezavisno odabrani od bilo koje prirodne aminokiseline izuzev Pro (SEQ ID NO: 3).
[0103] Ovde opisani konjugati mogu biti prečišćeni bilo kojim postupkom poznatim u oblasti tehnike za prečišćavanje proteina, na primer, hromatografijom (npr., jonska razmena, anjonska razmena, afinitet, i hromatografija na koloni za određivanje veličine), centrifugoranjem, diferencijalnom rastvorljivošću, ili bilo kojom drugom standardnom tehnikom za prečišćavanje proteina. Videti, npr., Saraswat et al., 2013, Biomed. Res. Int. ID#312709 (p.1-18); videte takođe postupke koji se opisuju u WO 2009/104074. Stvarni uslovi koji se koriste za prečišćavanje određenog konjugata će zavisiti od, delom, strategije sinteze (npr., sintetička proizvodnja u odnosu na rekombinantnu proizvodnju) i faktora kao što je neto naelektrisanje, hidrofobnost, i/ili hidrofilnost biokonjugata, i biće očigledno stručnjacima iz oblasti tehnike.
Kombinovane terapije
[0104] U određenim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je davana subjektu u kombinaciji sa jednom ili više drugih terapija (npr., antibakterijskim ili imunomodulatornim terapijama). Jedna ili više drugih terapija mogu biti od koristi u lečenju ili prevenciji ExPEC infekcije ili mogu ublažiti simptom ili stanje povezano sa ExPEC infekcijom. U nekim izvođenjima, jedna ili više drugih terapija su za oslobađanje od bola ili su lekovi protiv groznice. U određenim izvođenjima, terapije su davane u razmaku manjem od 5 minuta do razmaka manjem od 1 nedelje. Bilo koja antibakterijska sredstva koja su poznata stručnjaku iz oblasti tehnike (npr. antibiotici) mogu se koristiti u kombinaciji sa ovde opisanom kompozicijom.
Populacija pacijenata
[0105] U određenim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku u kome se daje (ili primenjuje) naivnom subjektu, tj., subjektu koji nema infekciju ExPEC ili prethodno nije imao infekciju ExPEC. U jednom izvođenju, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku gde se daje (ili primenjuje) naivnom subjektu koji se nalazi u riziku razvijanja ExPEC infekcije.
[0106] U određenim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku u kome se daje (ili primenjuje) subjektu koji je imao ili kome je pretodno dijagnostikovana ExPEC infekcija. U nekim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku gde se daje (ili primenjuje) subjektu inficiranom sa ExPEC pre ispoljavanja simptoma ili pre nego što simptomi postanu ozbiljni (npr., pre nego što pacijentu bude potrebna hospitalizacija).
[0107] U određenim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku u kome se daje (ili primenjuje) subjektu kome je dijagnostikovana infekcija uropatogenom E. coli (UPEC). U nekim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku u kome se daje (ili primenjuje) subjektu koji pati od infekcija urinarnog trakta koje se ponavljaju. U nekim izvođenjima, ovde opisana kompozicija (ili postupak) se daje (ili primenjuje) subjektu koji pati od infekcija urinarnog trakta koje se ponavljaju, ali je zdrav u trenutku lečenja. U nekim izvođenjima, ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku gde se daje (ili primenjuje) subjektu koji ima ili se nalazi u riziku od razvijanja bakteremije ili sepse.
[0108] U nekim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je životinja. U određenim izvođenjima, životinja je pas. U određenim izvođenjima, životinja je mačka. U određenim izvođenjima, životinja je konj. U određenim izvođenjima, životinja je krava. U određenim izvođenjima, životinja je sisar, npr., konj, svinja, zec, miš, ili primat. U poželjnom izvođenju, subjekt je čovek.
[0109] U određenim izvođenjima, ovde opisani subjekt kome se daje (ili primenjuje) je humani subjekt, poželjno, humani subjekt koji se nalazi u riziku da razvije invazivnu ExPEC bolest. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je humani adult stariji od 50 godina. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je humani adult stariji od 55, stariji od 60 ili stariji od 65 godina.
[0110] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je humano dete. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) kompozija koja se ovde opisuje je humano dete. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) kompozicija koja se ovde opisuje je humano odojče, uključujući prevremeno rođeno humano odojče. U nekim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je humani mališan. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija nije dete manje od 6 meseci starosti.
[0111] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je individua koja je trudna. U određenim izvođenjima, kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je žena koja se porodila 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8 nedelja ranije.
[0112] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) kompozicija (ovde je opisana individua u povećanom riziku od ExPEC, npr., imunokompromitovana ili imunodeficijentna individua, individual kojoj je zakazana operacija ili je nedavno imala operaciju, individua koja ima povredu, pacijent na odeljenju intenzivne nege (ICU) ili pacijent odeljenja za kritičnu negu (CCU), itd. u određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) kompozicija (ili) koja se ovde opisuje je individua koja se nalazi u bliskom kontaktu sa individuom koja ima ili se nalazi u povećanom riziku da razvije ExPEC infekciju.
[0113] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je zdravstveni radnik. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je imunokompromitovan (npr., pati od HIV infekcije) ili je imunosuprimiran.
[0114] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija ima dijabetes. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija ima multiple sklerozu.
[0115] U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija ima stanje kojim se zahteva upotreba katetera, kao što je urinarni kateter. U određenim izvođenjima, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija ima povredu kičmene moždine.
[0116] U određenim izvođenjima, subjekt je muškarac koji će proći ili je nedavno prošao kroz biopsiju prostate.
[0117] U poželjnom izvođenju, subjekt kome se daje (ili primenjuje) ovde opisana kompozicija je humani odrasli čovek koji se nalazi u riziku i kome je potrebna imunizacija za prevenciju invazivne bolesti ExPEC uzrokovane sa serotipovima O1A, O2, O6A i O25B ExPEC. Primeri humanih bića koja se nalaze u riziku uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji se ovde opisuju supra. Drugi primeri humanih bića koja se nalaze u riziku, npr., pojedince sa transrektalnom ultrasonografijom sa biopsijom prostate iglom (TRUS-PNB) ili rekurentnom urosepsom, štićenicima ustanova za dugotrajnu negu (LTCF), život
2
uz pomoć dogotrajne nege (LTAC), pacijenti pre operacije (uključujući ali bez ograničenja na, pacijente kojima je zakazana genito-urinarna/abdominalna operacija); pacijenti pre dijalize, pre dijaliza, itd. Doza i učestalost davanja
[0118] Primena konjugata O-antigena i EPA proteina nosača i/ili njihove kompozicije može se sprovesti pomoću različitih načina koji su poznati kliničarima, na primer subkutanoznom, parenteralnom, intravenoznom, intramuskularnom, lokalnom, oralnom, intradermalnom, transdermalnom, intranazalnom, itd. U jednom izvođenju, davanje je putem intramuskularne injekcije.
[0119] Prema izvođenjima iz pronalaska, nivo doze antigena O25B E. coli kovalentno treba biti ne manje, poželjno više, od doznih nivoa drugih antigena O E. coli korišćenih u kompoziciji ili postupku kompozicije pronalaska je za upotrebu u, pri čemu svaki od O antigena E. coli O je kovalentno vezan za EPA protein nosač. Precizna doza koja će se koristiti u formulaciji i postupak zavisiće od načina primene, i ozbiljnosti infekcije, i odluka se donosi na osnovu procene lekara i pojedinačnim okolnostima kod subjekta.
[0120] U određenim izvođenjima iz pronalaska, primer doza antigena O25B E. coli je u opsegu od 5 do 18 mg antigena O25B po davanju, i primer doza za svake dodatne antigene O E. coli koji će se koristiti u kombinaciji sa E. coli u opsegu 10% do 100% doze antigena O25B E. coli, pri čemu svaki od antigena O E. coli je kovalentno vezan za EPA protein nosač. U određenim izvođenjima, primer doza za O25B glikokonjugat E. coli je, npr., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 24 mg antigena O25B po davanju, i primer doze za drugi O glikokonjugat E. coli može se koristiti u kombinaciji sa O25B glikokonjugatom E. coli je, npr., 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% doze O25B glikokonjugata E. coli, pri čemu je doza izračunata količinom antgena O u O glikokonjugatima po davanju.
[0121] U određenim izvođenjima iz pronalaska, kompozicija iz ovog pronalaska je za upotrebu u postupku u kome se subjektu kome je potrebno daje 0.5 ml kompozicije prema predmetnom pronalasku.
[0122] U određenim izvođenjima, primer doze za davanje subjektu humanom subjektu odgovar 0.5 ml kompoziciji koja sadrži prvu koncentraciju od 8-48 µg/mL, npr., oko 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 ili 48 µg/mL, antigena O25B E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač, i koncentracije od 10% do 100% prve koncentracije jednog ili više dodatnih antigena O E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač.
[0123] U određenim izvođenjima, primer doze za davanje humanom subjektu odgovara 0.5 ml kompozicije koja sadrži koncentraciju od oko 16 µg/mL O25B antigena E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač, oko 8 µg/mL antigena O1A E. coli O1A antigen kovalentno vezan za EPA protein nosač, oko 8 µg/mL antigena O2 E. coli O2 kovalentno vezanog za EPA protein nosač, i oko 8 µg/mL antigena O6A kovalentno vezanog za EPA protein nosač.
[0124] U određenim izvođenjima, primer doze po davanju humanom subjektu odgovara 0.5 ml kompozicije koja sadrži koncentraciju od oko 32 µg/mL antigena O25B E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač, oko 16 µg/mL antigena O1A E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač, oko 16 µg/mL antigena O2 E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač, i oko 16 µg/mL antigena O6A E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač.
[0125] U određenim izvođenjima, konjugati O-antigena E. coli, poželjno biokonjugati, koji su ovde opisani ili kompozicije koje su ovde opisane je za upotrebu u postupku gde se daju subjektu jednom kao pojedinačna doza. U određenim izvođenjima, konjugati O-antigena E. coli, poželjno biokonjugati, koji se ovde opisuju ili ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku gde se daje subjektu kao pojedinačna doza zatim sledi druga doza 3 do 6 nedelja kasnije. U skladu sa ovim izvođenjima, buster inokulacije mogu se primeniti subjektu u intervalima 6 do 24 meseci nakon druge inokulacije. U određenim izvođenjima, buster inokulacije mogu koristiti različit O-antigen E. coli, biokonjugat, ili kompoziciju. U nekim izvođenjima, davanje istog konjugata O-antigena E. coli, ili kompozicije se može ponoviti i davanja mogu biti razdvojena najmanje 1 dan, 2 dana, 3 dana, 5 dana, 7 dana, 10 dana, 15 dana, 30 dana, 45 dana, 2 meseca, 75 dana, 3 meseca, ili bar 6 meseci. U određenim izvođenjima, ovde opisani konjugat O-antigena E. coli ili kompozicija koja se ovde opisuje je za upotrebu u postupku gde se daje subjektu kao jedna doza jednom godišnje. U određenim izvođenjima, ovde opisani konjugat O-antigena E. coli ili ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku gde se daje subjektu kao jedna doza jednom u toku n godina, n je na primer oko 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 ili 20 godina.
[0126] U određenim izvođenjima, ovde opisani konjugat O-antigena E. coli ili ovde opisana kompozicija je za upotrebu u postupku pri čemu se daje subjektu u 2, 3, 4, 5 ili više doza u razmaku od 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili 6 nedelja. U nekim izvođenjima, 2, 3, 4, 5 ili više doza ovde opisanog konjugata O-antigena E. coli ili ovde opisane kompozicije je davano subjektu u razmaku od 2, 3, 4, 5 ili 6 nedelja. U određenim izvođenjima, konjugati O-antigena E. coli, ili kompozicija koja se daje je ista svaki put. U određenim izvođenjima, konjugat O-antigena E. coli, ili kompozicija koja se daje je različita svaki put.
Testovi
[0127] Sposobnost ovde opisanih konjugata/kompozicija da se generiše imuni odgovor kod subjekta može se proceniti korišćenjem bilo kog pristupa koji je poznat stručnjacima iz oblasti tehnike u pogledu ovog izlaganja.
Test za procenu sposobnosti biokonjugata da indukuju imuni odgovor
[0128] U nekim izvođenjima, sposobnost biokonjugata da razvija imuni odgovor kod subjekta može se proceniti imunizovanjem subjekta (npr., miša) ili seta subjekata sa biokonjugatom i imunizovanjem dodatnog subjekta (npr., miša) ili seta subjekta sa kontrolom (npr., placebo). Subjekti ili set subjekata može se naknadno izazvati sa ExPEC i sposobnost ExPEC da uzrokuju bolest (npr., UTI) kod subjekata ili seta subjekata se može odrediti. Stručnjaci iz oblasti tehnike će prepoznati da ukolko je subjekt ili set subjektata imunizovan kontrolom pati(e) od bolesti nakon izazivanja sa ExPEC ali subjekt ili set subjekata koji su imunizovani biokonjugatom(ima) ili njihovom ovde opisanom kompozicijom pate manje od ili uopšte ne pate od bolesti, nakon toga biokonjugat je sposoban za generisanje imunog odgovora kod subjekta. Sposobnost biokonjugat(a) ili njihove ovde opisane kompozicije da indukuje antiserum koji unakrsno reaguje sa O-antigenom iz ExPEC može se ispitati sa, npr., imunskim testom, kao što je ELISA.
In Vitro baktericidni testovi
[0129] Sposobnost ovde opisanih konjugata/kompozicija za dobijanje imunog odgovora kod subjekta može se proceniti upotrebom serumskog baktericidnog testa (SBA) ili opsonofagocitoznog testa ubijanja (OPK), koji predstavlja uspostavljeni i prihvaćeni postupak koji je korišćen da bi se dobilo odobrenje za vakcine koje su zasnovane na glikokonjugatima. Takvi testovi su dobro poznati u oblasti tehnike i, ukratko, sadrže korake dobijanja i izolovanja antitela protiv mete od interesa (npr., O-antigena, npr., O25B, E. coli) davanjem subjektu (npr., mišu) jedinjenja koje izaziva takva antitela. Nakon toga, baktericidni kapacitet antitela se može proceniti, npr., kultivisanjem dotičnih bakterija (npr., E. coli relevantnog serotipa) u prisustvu pomenutih antitela i komplementa i u zavisnosti od testa
2
-neutrofilnih ćelija i ispitivanjem sposobnosti antitela da ubiju i/ili neutralizuju bakterije, npr., upotrebom standardnih mikrobioloških postupaka.
KITOVI
[0130] Ovde je takođe prikazano pakovanje ili kit koje sadrži jedan ili više kontejnera koji su napunjeni sa jednim ili više sastojaka ovde opisanih kompozicija, kao što je jedan ili više O antigena E. coli i/ili konjugata O antigena E. coli kovalentno vezanog za EPA protein nosač. Opcino povezano sa takvim kontejnerom(ima) može biti obaveštenje ili informacije koje su u obliku koji je prepisan sa regulatornom vladinom agencijom kojom se kontroliše manufaktura, upotreba ili prodaja farmaceutika ili bioloških proizvoda, gde obaveštenje odražava odobrenje agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za humanu primenu. Kitovi se mogu korisiti u gore navedenom lečenju i imunizaciji subjekata.
[0131] Sledeći primeri pronalaska su namenjeni da dalje ilustruju prirodu pronalaska. Treba razumeti da primeri koji slede ne ograničavaju pronalazak i da se obim pronalaska određuje patentnim zahtevima.
PRIMERI
Biokonjugati O-Antigena
[0132] O1A-EPA, O2-EPA, O6A-EPA i O25B-EPA biokonjugati koji sadrže, tim redom, E. coli O1A, O2, O6A i O25B kovalentno vezane za mesta glikozilacije na EPA proteina nosača mogu se proizvesti, prečistiti, i karakterisati kao što je opisano u, npr., Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61, i u WO 2006/119987, WO 2009/104074, i međunarodnoj patentnoj prijavi br. PCT/ EP2015/053739 (objavljenoj WO 2015/124769). Biokonjugati su sintetisani ukorišćenjem rekombinantnih ćelija E. coli, koje eksprimiraju enzime koji sintetišu polisaharide različitih O-serotipova u prisustvu oligosahariltransferaze PglB, i proteina nosača (EPA). U ovom pristupu, glikokonjugatna vakcina se može eksprimirati u periplazmi E. coli, ekstrahovati i prečistiti kroz biohemijski proces koji je ilustrovan na slici 1 i slici 2. Tabela 2 označava sojeve domaćina koji su korišćeni za proizvodnju konjugata u skladu sa izvođenjem iz pronalaska.
Tabela 2: Soevi domaćina za roizvodnu rekliničkih toksikoloških studia i kliničkih seria
[0133] Na primer, za proizvodnju O25B-EPA, konstruisan je soj sa genomski integrisanim O25B klasterom: W3110 ΔwaaL ΔgtrABS ΔrfbO16::rfb(upec138), koji je transformisan plazmidima pGVXN1076 (koji eksprimira EPA sa aminokiselinskom sekvencom SEQ NO:1) i pGVXN970 (koji je eksprimirao oligosaharil transferazu PelB) (WO/2009/104074). Ovaj soj je konstruisan počev od soja W3110 metodom po Datsenko i Wanner (2000, Proc Natl Acad Sci USA 97: 6640-6645) i tehnikom homologne rekombinacije za mesto usmerenu integraciju velikih inserta u bakterijske hromozome (videti WO 200109). Klaster rfb povezan sa antigenom O25B kloniran je iz soja E. coli upec138, koji je pozitivan na O25B. Rekombinantne ćelije domaćini su proizvele biokonjugate O25B/EPA u periplazmi. Dobijeni biokonjugati O25B su karakterisani upotrebom standardnih testova oslobađanja i
2
karakterizacije. Biokonjugati su prečišćeni korišćenjem dva uzastopna koraka anjonske izmene i hromatografije isključivanja po veličini, čime se dobijaju preparati biokonjugata O25B čistoće od 98,1%.
[0134] Slično, konstruisani su sojevi domaćina za rekombinantnu proizvodnju O1A-EPA, O2-EPA i O6A-EPA (Tabela 2). Ovi sojevi uključuju klastere rfb klastere povezane sa O1A, O2 i O6A kloniranim iz E. coli soja upec032, upec116 i CCUG11309, redom. Biokonjugati O1A-EPA, O2-EPA i O6A-EPA su proizvedeni iz ovih rekombinantnih ćelija domaćina i prečišćeni korišćenjem metoda poznatih u tehnici s obzirom na ovo izlaganje.
[0135] SDS PAGE kvantifikacija je korišćena za analizu čistoće. Odnosi šećera i proteina su izračunati na osnovu kvantifikacije šećera pomoću antronskog testa (videti Laurentin i Edwards, 2003, Anal Biochem 315, 143-145) i BCA testa za koncentraciju proteina. Analitička ekskluziona hromatografija po veličini pokazala je monomerno stanje čestica u skladu sa očekivanim hidrodinamičkim poluprečnikom EPA sa vezanim glikanskim lancima.
[0136] Biokonjugati i ne-glikozilovani EPA referentni standard analizirani su hromatografijom isključivanja veličine rasejanjem svetlosti iz više uglova (SEC-MALS), kako bi se kvantifikovao stepen mono- i di-glikozilacije pojedinačnih biokonjugata, i da bi se odredila molekulska masa (MW) proteinskog nosača i O-PS vezanog za njega. Uzorci su razdvojeni na TSKgel-G3000 SWxl koloni u fosfatnom puferu (pH 7,0; 50 mM NaCl, 150 mM natrijum fosfata) i praćeni UV (214 i 280 nm), indeksom prelamanja (RI) i svetlosnim rasejanjem više uglova (MALS).
Kompozicije vakcina
[0137] Ovaj primer ilustruje kompozicije vakcina koje su korisne za pronalazak.
Tabela 3-1: Kompozicije vakcina
Sastojak Količina (µg/mL)
Aktivna supstanca ExPEC4V Kompozicija 3
Polisaharid O-antigena
E. coli O1A 8 8
E. coli O2 8 8
E. coli O6A 8 8
E. coli O25B 8 16
Protein nosač
EPA 109 Očekivano: 126
(nastavak)
Ekscipijensi
TBS pufer, koji sadrži pH 7.4
Tris 25 mM
NaCl 137 mM
KCl 2.7 mM
2
Tabela 3-2: Kompozicije vakcina
Sastojak Količina (µg/mL)
Aktivna supstanca ExPEC4V Kompozicija 3
Polisaharid O-antigena
E. coli O1A 32 16
E. coli O2 32 16
E. coli O6A 32 16
E. coli O25B 32 32
Protein nosač
EPA Očekivano: 436 Očekivano: 251
Ekscipijensi
TBS pufer, koji sadrži pH 7.4
Tris 25 mM
NaCl 137 mM
KCl 2.7 mM
[0138] Svaka od gore prikazanih tečnih kompozicija vakcine je spakovana u bočicu koja je spremna za injekciju. Prozvode vakcine je potrebno skladištiti na 2°C do 8°C.
[0139] Aktivne supstance u kompoziciji vakcine su glikozilovani proteini (biokonjugati koji se sastoje iz EPA proteina nosača kovalentno vezanog za polisaharid O antigena E. coli) i doza je izračunata na samo osnovu sadržaja ostataka polisaharida (O antigena).
[0140] Doza EPA proteina nosača zavisi od odnosa polisaharida prema proteinu. Procenjeni odnos polisaharida prema proteinu je bio između 15% i 50% u zavisnosti od serotipova O-antigenа, tj., masa polisaharida u konjugatu je oko 15% do 50% mase EPA proteina nosača u konjugatu. Za svaki serotip u ExPEC4V, određivana je količina polisaharida prema proteinu, npr., količina polisaharida (O-antigen) je izmerena antronim testom (videti Laurentin and Edwards, 2003, Anal Biochem 315, 143-145) i test bicinhoninske kiseline (BCA) je korišćen za merenje koncentracije proteina. Za svaki serotip u proizvodima 1-3, vrednost EPA koja je obezbeđena u Tabelama 3-1 i 3-2 je očekivana vrednost koja je zasnovana na analitičkim rezultatima ExPEC4V.
[0141] Stabilnost kompozicija tetravalentne vakcine (biokonjugati O25B, O1A, O2 i O6) je ispitivana tokom perioda od 3 meseca. Studije su uključivale ubrzane i stresne uslove skladištenja da bi se identifikovali putevi degradacije. Ove studije pokazuju da su aktivne supstance i kompozicije tetravalentne vakcine stabilne najmanje tri meseca, i da su prema tome, kompozicije vakcine pogodne u pogledu stabilnosti.
Studija toksičnosti ponovljenih doza kod pacova
[0142] Studija toksičnosti dobre laboratorijske prakse (GLP) sa periodom oporavka od 14-dana sprovedena je kod Sprague-Dawley pacova da bi se ispitala toksičnost i lokalna tolerancija kompozicije vakcine koja sledi nakon 2 intramuskularne (i.m.) injekcije (u kvadriceps femoris mišića) u Danima 1 i 14. Reverzibilnost, postojanost, i odloženo pojavljivanje bilo kojih promena je procenjeno nakon 14-dnevnog perioda oporavka (tj., u danu 28). Dizajn Faze 1- koji omogućava studiju toksičnosti ponovljene doze kod pacova prikazan je u Tabeli 4.
2
Tabela 4: Prikaz studije toksičnosti ponovljenih doza kod pacova
e
EPA = EgzoProtein A/Pseudomonas aeruginosa ekzotoksin A, detoksifikovani oblik korišćen kao protein nosač;
F = ženski,
M = muški
Napomena: Dan 1 = početak tretmana
<a>Grupi nosača je dat pufer za formulaciju (kontrola nosača)
<b>Životinje su primile 2 injekcije od 0.25 mL po doziranju (leva i desna zadnja noga). Životinje su dozirane u 2 navata: danu 1 i danu 14
<c>Glavne životinje su eutanazirane u danu 17
<d>Životnje za oporavak su eutanazirane u danu 28, tj 14 dana posle drugog tretmana
[0143] U ovoj studiji je testirana doza od 4 µg po polisahardu O-antigena (PS) ExPEC4V (ukupna doza PS od 16 µg). Ova doza je ekvivalentna maksimalnoj dozi koja je procenjena u kliničkoj studiji Faze 1 opisanoj u nastavku. Stoga je puna doza za ljude kao što je korišćena u fazi 1 primenjena u toksikološkoj studiji GLP pacova. Studija je sprovedena sa nekliničkom serijom koja je bila reprezentativna za seriju korišćenu u kliničkoj studiji faze 1.
[0144] Tokom studije nisu primećeni smrtni ishodi, niti klinički znaci u vezi sa tretmanom (uključujući telesnu temperaturu) ili oftalmološka zapažanja. Osim toga, nije bilo toksikološki relevantnih, štetnih efekata na telesnu težinu, povećanje telesne mase, potrošnju hrane ili hematologiju, kliničku hemiju, koagulaciju i parametre analize urina. Nije bilo makroskopskih nalaza u vezi sa ispitivanim ili razlika u težini organa na kraju tretmana (14 dan) i periodu oporavka (28 dan).
[0145] Nisu primećeni neželjeni mikroskopski nalazi u vezi sa ispitivanjem. Minimalni do blagi mikroskopski nalazi koji nisu štetni (intersticijsko zapaljenje, degeneracija/nekroza miovlakana i mešani inflamatorni ćelijski infiltrati) su zabeleženi na mestima injekcije u mišiću quadriceps femoris na kraju perioda lečenja i u grupi koja je nosila i tretirana. Stoga se smatralo da ovi nalazi nisu povezani sa primenom ispitivanog proizvoda, već kao rezultat postupka doziranja (tj. i.m. injekcije). Na kraju perioda oporavka, mišići na mestu injekcije 1 dana su se oporavili, dok su na mestu injekcije 14 dana, u mišiću primećena rezidualna minimalna mešana ćelijska upala/infiltrati, što ukazuje na nastavak oporavka i kod nosača i kod tretiranih životinja. Sve u svemu, vakcina se dobro podnosila i nisu zabeleženi nikakvi neželjeni efekti vezani za tretman.
[0146] Imunogenost vakcine je potvrđena, izazivajući veće titre serumskog imunoglobulina G (IgG) prema 4 O-antigena u vakcinisanoj grupi u poređenju sa nosačima koji su primali samo pufer formulacije.
2
Studija toksičnosti ponovljenih doza kod zečeva
[0147] GLP studija toksičnosti ponovljenih doza sa periodom oporavka od 3 nedelje je sprovedena na zečevima NZV (TOX11163, nacrt izveštaja) da bi se procenila toksičnost i lokalna tolerancija ExPEC4V nakon 3 i.m. injekcije (0, 14 i 28 dan) date u razmaku od 2 nedelje. Reverzibilnost, postojanost i odloženo pojavljivanje bilo kakvih promena procenjeni su 49 dana, nakon 3-nedeljnog perioda bez tretmana nakon 3 injekcije 28 dana. Dizajn studije toksičnosti ponovljene doze na zečevima koja omogućava fazu 2 nalazi se u tabeli 5.
Tabela 5: Dizajn studije toksičnosti ponovljenih doza kod zeca
Broj životinja Grupa oncen rac a u rzgana an
nivo<a>(mg/mL) po ADM<d>
doziranja Terminalni<e>Oporavljeni<e>(mg/dozi) zir n
ADM: mesto davanja; F = žensko; M = muško
Napomena: Dan 0 = početak tretmana; Grupa 1 je primila fiziološki rastvor (kontrolna grupa)<a>Ukupni polisaharid O-antigena (odnos 1:1:1:1 za O1A, O2, O6A i O25B serotipove, redom)<b>8 µg polisaharida po serotipu 109 mg ukupnog EPA proteina nosača
<c>16 µg polisaharida po serotipu 218 mg ukupnog EPA proteina nosača
<d>ADM1: levo - donji deo m. biceps femoris; ADM2: desno - donji deo m. biceps femoris;
ADM3: levo - gornji deo m. biceps femoris; ADM4: desno - gornji deo m. biceps femoris;
ADM5: levo - m. kvadriceps femoris; ADM6: desno - m. kvadriceps femoris
<e>Terminalne životinje su eutanazirane 30 dana, a životinje za oporavak 49 dana
[0148] U ovoj studiji je testirana maksimalna doza od 16 µg po O-antigenu PS ExPEC4V (ukupna doza PS od 64 µg, zajedno sa 218 µg EPA proteina nosača). Ova doza je 4 puta veća od maksimalne doze koja je prethodno testirana u studiji toksičnosti GLP faze 1 na pacovima i ekvivalentna je maksimalnoj dozi PS (i EPA) koja je procenjena u kliničkoj studiji faze 2 opisanoj u nastavku. Stoga je puna (maksimalna) doza za ljude koja se koristila u fazi 2 primenjena u ovoj toksikološkoj studiji GLP-a na zečevima.
[0149] Studija je sprovedena sa ExPEC4V (koji sadrži 32 µg/mL ukupnog PS) koji je korišćen u kliničkoj studiji Faze 1 opisanoj u nastavku. Ova serija se smatra reprezentativnom za kompoziciju vakcine koja se koristi u kliničkoj studiji faze 2 opisanoj u nastavku (koja sadrži 128 µg/mL ukupnog PS), pošto se iste supstance lekova koriste za obe kompozicije vakcine.
[0150] Tokom studije nisu primećeni smrtni ishodi. Nije bilo uticaja na telesnu temperaturu, telesnu težinu, povećanje telesne mase, unos hrane, oftalmologiju, procenu kože (bodovanje po Draize-u), kliničku hemiju i C-reaktivni protein.
[0151] Žene koje su primale 64 µg ExPEC4V pokazale su nenepoželjne, minimalno snižene nivoe hemoglobina na kraju tretmana i perioda oporavka, sa minimalnim smanjenjem ukupnog broja eritrocita i hematokrita na kraju perioda oporavka. Fibrinogen je minimalno povećan 1 nedelju nakon prve injekcije i na kraju perioda lečenja kod ženki, ali više nisu primećene promene na kraju faze bez tretmana (oporavak).
[0152] Ubrzo nakon doziranja, primećena je tamna promena boje potkožnog tkiva kod nekih životinja u grupama doziranim sa ExPEC4V, što je koreliralo sa fokusima/oblastima promene boje koje su primećene na mestima ubrizganim 28 dana u svim grupama (uključujući kontrolnu grupu) na obdukciji (nekropsiji). (30 dan). Na kraju perioda oporavka nisu zabeležene nikakve abnormalnosti. Histopatološki višestruki fokusi mešovitih inflamatornih ćelijskih infiltrata (minimalnih do blagih) primećeni su uglavnom na mestima injekcije 28 dana kod životinja kojima je dozirano ExPEC4V. Na kraju perioda oporavka (49 dan) samo 1 ženka u grupi sa visokim dozama pokazala je mešane inflamatorne ćelijske infiltrate na mestima injekcije 28 dana, što ukazuje oporavak (koji je u toku).
[0153] Unutar drenirajućih medijalnih ilijakalnih limfnih čvorova, proizvodnja (u germinalnim centrima) i sekvestracija limfoblastičnih ćelija primećena je u parakorteksu i/ili medularnim vrpcama zečeva doziranim ExPEC4V na kraju perioda lečenja, što je rezultiralo povećanom sveukupnom celularnošću. Osim toga, limfni čvorovi su bili veći kod oba pola, što je u korelaciji sa povećanom težinom ženki. Ovi nalazi nisu primećeni na kraju perioda oporavka. Povećan broj germinativnih centara zabeležen je u slezini lečenih mužjaka i ženki na kraju tretmana i perioda oporavka, a praćen je povećanjem mase slezine kod oba pola na kraju perioda lečenja.
[0154] Ovi nalazi se smatraju neštetnim i povezani su sa imunološkim odgovorom na primenu vakcine.
[0155] Imunogenost vakcine je potvrđena jer su nivoi IgG u serumu protiv sva 4 serotipa O-antigena kao i EPA su bili povišeni kod muškaraca i žena.
[0156] Sveukupno, vakcinacija zečeva (3 i.m. injekcije, u razmaku od 2 nedelje) sa dozama ExPEC4V koje sadrže do 64 µg ukupnog PS bila je bezbedna i dobro se podnosila. Smatra se da svi uočeni efekti povezani sa lečenjem odražavaju normalan, ne-neželjeni odgovor koji je izazvan primenom vakcine.
Funkcionalnost odgovora antitela inkovana vakcinama u pacovima
[0157] Da bi se procenila funkcionalna aktivnost vakcinom izazvanih odgovora antitela biokonjugata O25B, O1A, O2 i O6A, serumi pacova vakcinisanih monovalentnim ili tetravalentnim vakcinama koji sadrže O25B, O1A, O2 i O6A EPA biokonjugate, svaki pojedinačno ili u kombinaciji, su analizirani korišćenjem testova opsonofagocitnog ubijanja (OPK), koji mere in vitro fagocitozu zavisnu od komplementa i antitela i ubijanje bakterija, npr., E. coli. OPK test meri sposobnost seruma da olakša
1
opsonofagocitozu i ubijanje različitih serotipova E. coli. U pločama sa 96 bunarčića, definisana razblaženja uzorka seruma su inkubirana, u svakom bunarčiću, sa bakterijama iz jednog od četiri serotipa E. coli specifičnih za vakcinu, definisanom količinom HL60 ćelija i komplementom bebe zeca. Posle inkubacije, deo smeše je uočen na tripton sojinom agaru (TSA) i izbrojan je broj bakterijskih kolonija. Sposobnost antitela da vežu bakterijske ćelije i aktiviraju taloženje komplementa i posreduju u preuzimanju i ubijanju bakterija od strane HL60 ćelija izražena je kao opsonični titar. Opsonični titar ili indeks opsonizacije (OI) odgovara razblaženju seruma koji ubija 50% bakterijskih ćelija. Prikazani su opsonični indeksi za pre- i postimune serume. Značajnim se smatra povećanje najmanje 4 puta OI od pre do postimunizacije.
[0158] E. coli je pre-opsonizovana razblaženjima seruma vakcinisanih pacova, inkubirana sa komplementom i fagocitima (diferenciranim HL60 ćelijama), i određene su jedinice za obrazovanje kolonija (CFU). Nakon toga, izračunati su maksimalni % ubijanja i indeksi opsonizacije (OI: ubijanje razblaženje seruma 50% E. coli). E. coli odabrane za ispitivanje OPK bili su OC 24453 (serotip O2), OC 24781 (serotip O6A) i OC 24176 (serotip O25B).
[0159] Kao što je predstavljeno rezultatima koji su prikazani na slikama 3A-3C, monovalente vakcine koje sadrže O2-EPA, O6A-EPA i O25B-EPA indukuju snažne odgovore antitela u pacovima, i takvi odgovori antitela su funkcionalni u ubijanju E. coli iz ovih serotipova.
[0160] Tabela 6 prikazuje ukupne titre OI za O-antigene O2, O6A i O25B iz pacova imunizovanih sa tetravalentnom vakcinom sa ili 0.4 ili 4 µg po O-antigenu. Titri su određivani u dva odvojena eksperimenta. Doza od 0.4 µg indukovala je značajne OI u svim životinjama za O2 i O6A serotipove. Za O25B, 3/8 životinja pokazalo je značajno smanjenje u OI nakon imunizacije dozom od 0.4 µg. U poređenju sa dozom 0.4 µg dose, doza od 4 µg je indukovala niže povećanje OI za O2 kod svih životinja.
3/8 životinja je pokazalo povećanje OI kada su serumi iz grupe sa dozom od 4 µg testirani na O25B E. coli.
[0161] Podaci potvrđuju da je tetravalentna vakcina sposobna da izazove O-antigen-specifična opsonizujuća antitela protiv O2, O6A i O25B kod životinja, koja pokazuje da ovde opisane kompozicije vakcine izazivaju odgovore antitela protiv serotipova E. coli iz kojih su O-antigeni uključeni u vakcinu, i da su takvi odgovori antitela funkcionalni u ubijanju E. coli iz ovih serotipova.
2
Efekti kod ljudi -faza I Studije
[0162] ExPEC4V je testiran u studiji faze 1 kod ljudi, koja je uključivala ukupno 194 subjekata. Ova studija faze 1 je randomizovana, placebom-kontrolisana, multicentrična studija. Studija je sprovedena na jedan slep način pošto su istraživač i osoblje znali grupu ispitanika za randomizaciju dok se od subjekata zahtevalo da u svakom trenutku budu slepi za svoju grupu za randomizaciju.
[0163] Cilj ove prve studije na ljudima bio je da se proceni bezbednost, imunogenost i efikasnost kandidata vakcine kod zdravih žena starosti ≥18 do ≤70 godina sa istorijom rekurentne infekcije urinarnog trakta (rUTI). Primarni cilj studije bio je poređenje traženih i neželjenih neželjenih događaja (AE) i ozbiljnih neželjenih događaja (SAE) između ispitanika koji su primili ExPEC4V i subjekata koji su primali placebo. Glavni sekundarni ciljevi uključivali su parametre imunogenosti, broj simptomatskih epizoda UTI uzrokovanih serotipovima vakcine E. coli, i stopu pojavljivanja i kliničkih simptoma E. coli specifičnih za serotip E. coli.
[0164] Ispitanici koji ispunjavaju uslove morali su da imaju najmanje 3 nezavisne epizode UTI u poslednjih 12 meseci ili najmanje 2 nezavisne epizode UTI u prethodnih 6 meseci; najmanje 1 od nezavisnih epizoda UTI morala je biti posledica infekcije E. coli potvrđene kulturom. Ukupno 194 subjekta je upisano i randomizovano na jedan i.m. doza od 0,5 mL ExPEC4V ili placebo (videti tabelu 7). Uključivanje je obavljeno postepeno radi procene bezbednosnih podataka 14. dana pre nego što se pređe na sledeću fazu:
1. Prvih 8 ispitanika je randomizirano (3:1) na dozu od 1 µg svakog PS, ili placebo
2. Sledećih 8 subjekata je randomizirano (3:1) na dozu od 4 µg svakog PS, ili placebo
3. Preostalih 178 ispitanika je randomizirano (1:1) na dozu od 4 µg svakog PS, ili placebo.
Tabela 7: demografske i osnovne karakterike ispitanika uključenih u fazu 1 studije
Ukupno
N = 6 N = 93
Starosna
dob N
(godine) Srednja vrednost (SD)
Medijana (opseg)
Rasa
N
Bela
Drugo
Težina (kg)
N
Srednja vrednost (SD)
Medijana (opseg)
Indeks telesne mase (kg/m<2>)
N
Srednja vrednost (SD)
Medijana (opseg)
Menopauzalni status
N
Premenopauzalni
Potencial ostaana u dru om
*doze ExPEC4V sadrže polisaharide O-antigena 4ExPEC serotipa O1A, O2, O6A, i O25B
4
[0165] Prilikom prve posete, ispitani su kvalifikovani ispitanici koji su dali informisani pristanak i potvrđena je usklađenost sa kriterijumima za uključivanje/isključivanje. Izvađena je krv i sakupljen urin. Prilikom posete 2 (1. dan), svaki subjekt je primio jednu intramuskularnu injekciju od 0,5 ml rastvora (ExPEC4V ili placebo) u deltoidni mišić. Smanjena doza kandidata vakcine sadržala je 1 µg svakog polisaharida (ukupno 4 µg polisaharida). Ciljna doza kandidata vakcine sadržala je 4 µg svakog polisaharida (ukupno 16 µg polisaharida).
[0166] Bezbednost je procenjena na osnovu traženih lokalnih (bol, eritem i otok na mestu injekcije) i sistemskih (groznica, tj. telesna temperatura ≥38°C) AE prikupljenih u dnevniku od 1 dana postvakcinacije do 7 dana i na AE i SAE prikupljeno do 270 dana (kraj studijske posete). Imunogenost je procenjena kvalifikovanim enzimskim imunosorbentnim testovima (ELISA) i testovima opsonofagocitnog ubijanja (OPK) korišćenjem seruma iz uzoraka krvi uzetih prevakcinacijom 1 dana i postvakcinacijom 30 i 270 dana.
[0167] Deskriptivna statistika (n, srednja vrednost, standardna devijacija, medijana i opsezi za kontinuirane varijable, učestalosti i procenti za kategoričke varijable) daju se prema grupi tretmana i/ili poseti, gde je primenljivo. Svi podaci su navedeni prema subjektu, grupi tretmana i, gde je primenljivo, poseti. Svi subjekti iz Grupe B koji su primali placebo su kombinovani da bi se formirala grupa za placebo tretman.
Bezbednost
[0168] Do danas, ništa od sledećeg nije identifikovano u fazi 1 studije (koja je još uvek u toku): neželjene reakcije na lekove, značajne abnormalnosti kliničke laboratorije, kardiovaskularni, plućni, centralni nervni sistem, bubrezi ili drugi značajni neželjeni efekti, predoziranje. Pojava neželjenih događaja i teških neželjenih događaja bila je uporediva između placebo i vakcinisanih grupa.
Imunogenost -Ukupan titar antitela
[0169] Da bi se procenila imunogenost komponenti vakcine, serumi žena koje su učestvovale u kliničkoj studiji su dobijene i analizirane pomoću ELISA da bi se kvantifikovao IgG protiv četiri različita O-antigena uključena u tetravalentnu vakcinu (E. coli O1, E. coli O2, E coli O6 i E. coli O25B). Ukupan dan 1 (prevakcinacija) i 30 dan titri serumskih IgG antitela su procenjeni kvalifikovanom ELISA testom optimizovanom za svaki izolat serotipa korišćenjem prečišćenog serotip-specifičnog O-antigena kao primarnog antigena analize. Ukupni titri IgG antitela po serotipu su izračunati korišćenjem 4-parametarske logističke krive da bi se odredile vrednosti polovine maksimalne efektivne koncentracije (EC50) po uzorku.
1 ug polisaharida po seroptipu ExPEC4V (N = 6)
[0170] Šest subjekata je primilo ExPEC4V dozu od 1 µg PS po serotipu (4 µg ukupnog PS). Analiza serotip-specifičnih imunoloških odgovora ovih subjekata do 30 dana pokazala je da je procenat ispitanika sa ≥2 puta povećanjem ukupnih antitela po serotipu bio 50% (serotip O1A), 83% (serotip O2), 50% (serotip O6A), i 67% (serotip O25B). Procenat subjekata sa ≥4 puta povećanjem titra antitela bio je manji, odnosno 17% (serotip O6A), 33% (serotip 1A), 33% (serotip 2) i 50% (serotip O25B).
[0171] Analiza odgovora 1 µg PS po grupi sa dozom serotipa dala je povećanje slične veličine za 4 serotipa. Za serotipove O1A, O2, O6A i O25B, upoređujući dan 30 sa 1 danom, srednje povećanje titra antitela iznosilo je 2,5, 3,7, 2,2 i 4,1, respektivno. Pojedinačno povećanje broja ispitanika kretalo se od 1 do 6 za serotipove O1A i O2, od 1 do 7 za serotip O6A i od 1 do 11 za serotip O25B. Vrednosti geometrijskog srednjeg titra (GMT) 30. dana bile su 4,053, 13,768, 1,236 i 227 za odgovarajuća 4 serotipa (Tabela 8), što predstavlja povećanje od približno 2,2 - 3,5 puta u odnosu na 1 dan GMT vrednosti.
Tabela 8: GMT i intervali pouzdanosti od 95% u ukupnim titarima antitela utvrđenim ELISA od 1 dana (prevakcinacija) do 30 dana – studija faze 1
(nastavak)
[0172] U poređenju sa dozom koja sadrži 1 µg PS po serotipu (4 µg ukupnog PS), primena ExPEC4V doze od 4 µg PS po serotipu (16 µg ukupnog PS) dala je snažniji imuni odgovor. Analiza ovih subjekata do 30 dana pokazala je da je procenat ispitanika sa ≥2 puta povećanjem ukupnih antitela po serotipu bio 81% (serotip O1A), 92% (serotip O2), 80% (serotip O6A) i 82% (serotip O25B). Procenat subjekata sa ≥4 puta povećanjem titra antitela kretao se od 57% (serotipovi O1A i O6A) do 80% (serotip O2), što je niže od proporcije sa 2 puta povećanjem, ali značajno više od uočenog sa dozom koja sadrži 1 µg PS po serotipu. Videti takođe sliku 4, uočen je snažan imuni odgovor na svaki od O1A, O2, O6A i O25B i da je primećeno značajno povećanje titara ELISA između post (30 dana nakon injekcije) i pre injekcije (dan 1). samo u vakcinisanim grupama (V_dan 30 v.s. V_dan 1), ali ne i u placebo grupama (P_dan 30 v.s. P_dan 1).
[0173] Analiza odgovora grupe sa 4 µg PS po serotipskoj grupi dala je srednjestruka povećanja koja su bila veća od onih u grupi sa dozom od 1 µg PS po grupi serotipa. Za serotipove O1A, O2, O6A i O25B, upoređujući dan 30 sa 1 danom, EC50 srednji broj puta je bio 4,6, 9,4, 4,9 i 5,9, respektivno. Magnituda i varijabilnost u povećanju puta bili su veći kod ove dozne grupe, u rasponu od 1 do 96 za serotip O1A, od 1 do 165 za serotip O2, od 0 do 61 za serotip O6A i od 1 do 579 za serotip O25B. GMT vrednosti 30. dana bile su 9.460, 27.973, 4.475 i 2.164 za odgovarajuća 4 serotipa (Tabela 8), što predstavlja povećanje od približno 4,9 do 9,8 puta u odnosu na GMT vrednosti prvog dana.
Zaključak
[0174] Ovi privremeni rezultati pokazuju imuni odgovor specifičan za vakcinu kod zdravih subjekata kojima je davana doza 1 µg PS po serotipu ExPEC4V, i uporedivo veće povećanje u imunom odgovoru sa većom dozom 4 µg PS po serotipu ExPEC4V, tokom perioda posmatranja od 30 dana. Nedostatak relevantne promene u titrima antitela kod 95 subjekata u placebo grupi tokom ovog perioda ukazuje da odgovor antitela kod ExPEC4V recipijenata je posredovan vakcinom, i nije posledica izloženosti ExPEC bakterijama iz okoline.
[0175] Ovi podaci ukazuju na ukupno povećanje u titrima antitela povezano sa većom dozom 4 µg PS po serotipu u poređenju sa dozom 1 µg PS po serotipu. Iako ovi rezultati ukazuju na veću raznolikost u vezi sa titrima grupe sa većom dozom u poređenju sa grupom sa nižom dozom, mali broj subjekata u dozi 1 µg po subjektu ograničava tumačenje bilo kojih uočenih razlika. Takođe su uočene razlike unutar svake dozne grupe u relativnim titrima IgG po serotipu, pri čemu je titar antitela na antigen O25B bio najniži (Tabela 8).
Funkcionalni odgovor antitela
[0176] OPK testovi su korišćeni za procenu funkcionalnih odgovora antitela žena koje su učestvovale u kliničkoj studiji. Serumi su prikupljeni iz učesnika studije. E. coli je prethodno opsonizovana sa razblaženjima seruma iz vakcinisanih žena, inkubiranih sa komplementom i fagocitima (diferencirane HL60 ćelije), i određene su preostale jedinice koje formiraju kolonije (CFUs). Nakon toga, izraćunati su maksimalni procenat ubijanja i indeksi opsonizacije (OI: razblaženje seruma ubijanje od 50% E. coli). E. coli odabrani za OPK testiranje su OC 24452 (serotip O1A), OC 24453 (serotip O2), OC 24454 (serotip O6A), i OC 24176 (serotip O25B).
[0177] Serumi su ispitivani dana 1 i dana 30 za funkcionalna antitela (mereno kao indeks opsonizacije [OI], ili koncentracija u serumu koja daje 50% smanjenje u jedinicama koje formiraju kolonije E. coli) sa OPK testom, optimizovanim korišćenjem odabranog serotipa O1A, O2, O6A, ili O25B ExPEC sojeva, sa humanim komplementom i HL60 fagocitnim ćelijama. Funkcionalni titri antitela za serotip O25B su uključeni u privremenu analizu na osnovu preliminarnih procena tačnosti i reproduktivnosti titra. Za sve serotipe, funkcionalni titri antitela su određivani iz merenja opsonofagocitno posredovanog ubijanja E. coli upotrebom NICE programa, razvijenog od strane Nacionalni instutut za standard i tehnologiju, SAD, i Opsititer3 programa, koji je razvio i licencirao Univerzitet u Alabami. Za privremenu analizu, titri OPK su određivani za 194 subjekta, uključujući 95 subjekata koji su primili placebo, 6 subjekata je primilo ExPEC4V 1 µg PS (po serotipu) vakcinu i 93 subjekata su primili ExPEC4V 4 µg PS (po serotipu) vakcine.
Placebo recipijenti (N = 95)
[0178] Kao što je primećeno ELISA testiranjem, placebo recipijenti (95 subjekata) su pokazali slične OPK odgovore za serume dana 1 i dana 30 u odnosu na ExPEC4V serotipove, sa malom ili bez uočene promene većine odgovarajućih vrednosti OPK titra po subjektu. Ovi rezultati ukazuju na stabilan funkcionalni titrar antitela za većinu ili sve subjekte tokom ovog vremenskog perioda.
1 µg polisaharida po serotipu ExPEC4V (N = 6)
[0179] Šest subjekta je primilo dozu 1 µg PS ExPEC4V po serotipu (4 µg ukupno PS). Analiza imunih odgovora koji su specifični za serotip kod ovih subjekata do Dana 30 pokazala je da je udeo subjekata sa ≥2-strukim povećanjem ukupnih antitela po serotipu bio 33% (serotip O1A), 67% (serotip O2), i 0% (serotipovi O6A i O25B). Za serotipe O1A i O2, udeo subjekata sa ≥4-strukim povećanjem u titrima antitela smanjio se do 17% i 50%, tim redom.
[0180] Za serotipove O1A, O2, O6A, i O25B u poređenju sa Danom 30 do Dana 1, srednja vrednost stope povećanja u titrima antitela bile su 1.0, 4.8, 0.9, i 1.0, tim redom. Stepen povećanja kod pojedinačnih subjekata bio je u opsegu od 0.6 do 8.1 za serotip O1, od 0.3 do 9.5 za O2, od 0.8 do 1.3 za serotip O6A, i od 0.5 do 1.5 za serotip O25B. Geometrijskse srednje vrednosti titra (GMT) u danu 30 bile su 429, 1834, 1,136, i 51 za respektivna 4 serotipa, predstavljajući približno 1.0 -2.8 struko povećanje vrednosti GMT u danu.
4 µg polisaharida po serotipu ExPEC4V (N = 93)
[0181] Primena doze 4 µg PS ExPEC4V po serotipu (16 µg ukupno PS) dala je funkcionalni imuni odgovor za sve serotipove ExPEC 4V. Analiza ovih subjekata do dana 30 pokazala je udeo subjekata sa ≥2-strukim povećanjem u vrednostima OI po serotipu od 63% (serotip O1A), 90% (serotip O2), 33% (serotip O6A), i 55% (serotip O25B). Udeo subjekata sa ≥4-strukim povećanjem u vrednostima OI bila je u opsegu od 20% (serotip O6A) do 82% (serotip O2); kao što je očekivano, ovi udeli su bili konzistentno niži u odnosu na one koji se uočavaju za ≥2-struko povećanje.
[0182] Za O1A, O2, O6A, i O25B serotipove u poređenju sa danom 30 do dana 1, povećanja titra OPK medijana OI bila su 3.5, 14.7, 1.4, i 2.5, tim redom. Stepen promene kod subjekta povećava se sa doznom grupom koja je u opsegu od 0.5 do >292 za serotipove O1A i O2, od 0.3 do 26.4 za serotip O6A, i od 0.1 do 272.8 za serotip O25B. Kao što je prikazano na slikama 5A-5D, uočen je robustni funkcionalni imuno odgovor na svaki od O1A, O2, O6A, i O25B, i značajno povećanje u OI između post i pre-injektiranja samo u vakcinisanim grupama, ali ne u grupama koje su primile placebo.
[0183] GMT vrednosti u danu 30 bile su 950.5, 4,132, 1,542, i 414.7 za odgovarajuća 4 serotipa (Tabela 9), predstavljajući približno 2-do 14-struko povećanje GMT vrednosti u danu 1. Ovi podaci ukazuju da je sveukupno povećanje u titrima funkcionalnih antitela u danu 30 povezano sa dozom od 4 µg PS po serotipu, u toku svih ExPEC 4V serotipova.
Tabela 9: GMT i 95% intervali pouzdanosti u OPK-određenim titrima funkcionalnih antitela iz dana 1
(Prevakcinacija) dana 30 -faza 1 studije
(nastavak)
Zaključak
[0184] Ovi privremeni rezultati pokazuju funkcionalni imuni odgovor specifičan za vakcinu kod zdravih subjekata kojima je davana doza 4 µg PS po serotipu ExPEC4V, tokom perioda posmatranja od 30 dana. Nedostatak značajne promene u titrima antitela kod 95 subjektata u placebo grupi tokom ovog perioda (Slike 5A-5D i Tabela 9) je u skladu sa ELISA rezultatima i podržava zaključak da je odgovor antitela na vakcinaciju ispoljen kroz 4 ExPEC serotipa.
[0185] U međuvremenu dobijeni rezultati imunogenosti iz faze 1 studije pokazuju da su oba ukupni (ELISA) i funkcionalni (OPK) titri antitela imunog odgovora specifičnog za vakcinu kod zdravih subjekata primili dozu od 1 µg PS po serotipu ExPEC4V, i upotredivo veće povećanje u imunom odgovoru doze veće od 4 µg PS po serotipu ExPEC4V, tokom perioda posmatranja od 30-dana. Poređenje sa stepenom povećanja specifičnim za serotip koje se uočava za testiranje ELISA, OPK test je pokazao slične nivoe odgovora za serotipove O1A i O2 za oba testa, ali u određenoj meri niže nivoe % odgovora subjekta OPK sa serotipovima O6A i O25B. Selektivno smanjenje u OPK odgovoru nekih subjekata za serotipove O6A i O25B je u procesu ispitivanja.
[0186] Primetno, vrednost GMT u OPK-određenom titru funkcionalnog antitela za antigen O25B je niži od onog za druge antigene (O1A, O2 i O6A). OPK test je prihvaćen kao bolji surogatni test za imunsku zaštitu koji je indukovan PS konjugatnom vakcinom protiv Streptococcus pneumoniae (Prevenar<®>), s obzirom da ELISA može da ne pravi razliku između nezaštitnih antitela nisokog aviditeta od zaštitnih antitela sa visokim aviditetom (Kim et al., Clin Diagn Lab Immunol.200310(4):616-21)
Efekti kod ljudi -faza II studije
[0187] Na osnovu privremenih rezultata iz faze I studije, sprovešće se faza II studije. Ova randomizovana, dvostruko-slepa, placebom-kontrolisana multicentrična studija je planirana da bi se procenila bezbednost, podnošljivost, i imunogenost 5 različitih doza kod ljudi i žena koji su stabilnog zdravlja, raslojenih prema starosti: ≥18 do <50 godina starosti (N=275) i ≥50 godina starosti (N=560).
[0188] Dve kompozicije vakcina, tj., Producti 1 &2 obezbeđeni su u tabeli 3-2, koji imaju dve različite koncentracije polisahardia korišćenjem istih aktivnih supstanci kao one koje se koriste u ExPEC4V će se koristiti u fazi II studije. Specifičnije, kompozicija 1 formulacije sadrži 32, 32, 32, 32 µg/ml po O-antigenu polisaharida (PS) E. coli serotipova O1A, O2, O6A i O25B, tim redom, bez adjuvana. Kompozicija 2 formulacije sadrži 16, 16, 16, 32 µg/ml po O-antigenu PS E. coli serotipova O1A, O2, O6A i O25B, tim redom, bez adjuvansa.
[0189] Različite doze i odnosi aktivnih supstanci će biti ispitivani u fazi II studije. Specifičnije, subjekti koji su uključeni će biti randomizovani i podeljeni u šest celina: (i-v) pet različitih doza kandidata vakcina i (vi) placeba. Svaki subjekt će primiti pojedinačnu i.m. dozu Kompozicije 1, Kompozicije 2 ili placeba. Ciljna doza za E. coli O-antigene O1A: O2: O6A: O25B po injekciji kompozicije 1 ili 2 je: 4:4:4:4 mg (tj., ista kao najveća doza koja je korišćena gore u fazi I studije), 4:4:4:8, 8:8:8:8, 8:8:8:16 i 16:16:16:16 µg. Cilj studije je ispitivanje bezbednosti, imunogenosti, i efikasnosti 5 različitih doza vakcine tetravalentnog biokonjugata E. coli.
Sekvence
[0190]
4
REFERENCE
[0191]
(1) Johnson et al., JLab ClinMed.2002;139(3):155-162
(2) Kohler et al., Int J Med Microbiol.2011;301(8):642-647
(3) Foxman, Am J Med.2002; 113 Suppl 1A:5S-13S;
(4) Russo et al., Microbes Infect.2003;5(5):449-456
(5) Schito et al., 2009, Int. J. Antimicrob. Agents 34(5):407-413
(6) Pitout et al., 2012, ExpertRev. Anti. Infect. Ther.10(10):1165-1176
(7) Johnson et al., Antimicrob Agents Chemother.2010; 54(1):546-550
(8) Rogers et al., JAntimicrob Chemother.2011; 66(1):1-14
(9) Banerjee et al., Antimicrob Agents Chemother.2014; 58(9):4997-5004
(10) Stenutz et al., FEMS Microbial Rev.2006; 30: 382-403
(11) Russo et al., Vaccine.2007; 25: 3859-3870
(12) Lipsitch, Emerging Infectious Diseases; 1999, 5:336-345
(13) WO 2006/119987
(14) WO 2009/104074
(15) International Patent Application No. PCT/EP2015/053739 (published as WO 2015/124769) (16) Ihssen et al., 2010, Microbial Cell Factories 9, 61
(17) Lukac et al., Infect Immun, 56: 3095-3098, 1988
(18) Ho et al., Hum Vaccin, 2:89-98, 2006
(19) Pawlowski et al., 2000, Vaccine 18:1873-1885
(20) Robbins et al., 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106:7974-7978
(21) Saraswat et al., 2013, Biomed. Res. Int. ID#312709 (p.1-18)
(22) WO/2009/104074
(23) Datsenko and Wanner (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97: 6640-6645
(24) WO 2014/057109
(25) Laurentin and Edwards, 2003, Anal Biochem 315, 143-145
(26) Kim et al., Clin Diagn Lab Immunol.200310(4): 616-21

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Kompozicija koja sadrži prvu koncentraciju polisaharida antigena O25B E. coli, i drugu koncentraciju svakog od polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida antigena O2 antigena E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli, gde je odnos prve koncentracije prema drugoj koncentraciji 2: 1, svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli su nezavisno kovalentno vezani za protein nosač detoksifikovanog egzotoksina A Pseudomonas aeruginosa (EPA), i prva koncentracija je 10 do 36 µg/ml.
  2. 2. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, koja sadrži polisaharide antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli u masenom odnosu 2:1:1:1, gde je prva koncentracija 10, 16, 24, 32 ili 36 µg/ml.
  3. 3. Kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 ili 2, koja sadrži 16 µg/ml polisaharida antigena O25B.
  4. 4. Kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 ili 2, koja sadrži 32 µg/ml polisaharida antigena O25B.
  5. 5. Multivalentna imunska kompozicija koja sadrži polisaharid antigena O25B E. coli u prvoj dozi od 5 do 18 µg, i polisaharid antigena O1A E. coli, polisaharid antigena O2 E. coli i polisaharid antigena O6A E. coli svaki u dozi koja je nezavisno 50% od prve doze, gde su svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli nezavisno kovalentno vezani za protein nosač detoksifikovanog egzotoksina A Pseudomonas aeruginosa (EPA).
  6. 6. Multivalentna imunska kompozicija koja sadrži polisaharid antigena O25B E. coli koji ima strukturu formule O25B’:
    polisaharid antigena O1A E. coli koji ima strukturu formule O1A’:
    polisaharid antigena O2 E. coli koji ima strukturu formule O2’:
    polisah
    pri čemu je n nezavisno ceo broj od 5 do 25, a svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli je nezavisno kovalentno vezan za protein nosač aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:1; i koncentracije polisaharida antigena O25B, O1A, O2, O6A E. coli u kompozicijama su redom 16:8:8:8 µg/ml, ili 32:16:16:16 µg/ml.
  7. 7. Kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6 za upotrebu u postupku pokretanja imunog odgovora na ekstra-intestinalnu patogenu E. coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu pomenute kompozicije.
  8. 8. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku pokretanja imunog odgovora na ekstraintestinalnu patogenu E. coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, koji obuhvata davanje subjektu prve efektivne količine polisaharida antigena O25B E. coli, i druge efektivne količine svakog od polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida antigena O2 E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli, pri čemu je odnos prve efektivne količine prema drugoj efektivnoj količini 2 : 1, svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli je nezavisno kovalentno vezan za protein nosač detoksikovanog egzotoksina A Pseudomonas aeruginosa (EPA), a prva efektivna količina je 5 do 18 µg po davanju.
  9. 9. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku prema patentnom zahtevu 8, gde se polisaharidi antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli primenjuju u odnosu doziranja od 2:1:1:1, pri čemu je prva efektivna količina je 6, 8, 10, 12, 14, 16 ili 18 µg po davanju.
  10. 10. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku prema bilo kojem od patentnih zahteva 7 do 9, pri čemu se 8 µg polisaharida antigena O25B_E. coli primenjuje po davanju.
  11. 11. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku prema bilo kojem od patentnih zahteva 7 do 9, pri čemu se 16 µg polisaharida antigena O25B E. coli primenjuje po davanju.
  12. 12. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku prema bilo kojem od patentnih zahteva 7 do 11, pri čemu se polisaharidi antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli primenjuju zajedno u jednoj kompoziciji.
  13. 13. Polisaharid antigena O25B E. coli za upotrebu u postupku pokretanja imunog odgovora na ekstraintestinalni patogeni E.coli (ExPEC) kod subjekta kome je potrebno, postupak koji se sastoji od davanja subjektu polisaharida antigena O25B E. coli koji ima strukturu formule O25B': 4
    polisahar
    polisahari
    i polisa
    pri čemu je n nezavisno ceo broj od 5 do 25, svaki od polisaharida antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli je nezavisno kovalentno vezan za protein nosač aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, i polisaharidi antigena O25B, O1A, O2 i O6A E. coli se primenjuju u 8:4:4:4 µg, ili 16:8:8:8 µg po davanju.
  14. 14. Polisaharid anitigena O25B E. coli za upotrebu u postupku prema bilo kojem od patentnih zahteva 7 do 13, pri čemu imuni odgovor ograničava ozbiljnost ili sprečava invazivnu ExPEC bolest uzrokovanu ExPEC serotipovima O1A, O2 i O6A i O25B kod humanih subjekata koji su u riziku, na primer kada odrasli humani subjekt ima ili je u riziku od invazivne ExPEC bolesti izabrane iz grupe koju čine infekcija urinarnog trakta, infekcija hirurškog mesta, infekcija abdomena ili karlice, pneumonija, bolnička pneumonija, osteomijelitis, celulitis, sepsa, bakteremija, infekcija rane, pijelonefritis, meningitis, neonatalni meningitis, peritonitis, holangitis, infekcije mekog tkiva, piomiozitis i septički artritis.
  15. 15. Postupak dobijanja kompozicije prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 6, koji obuhvata kombinovanje polisaharida antigena O25B E. coli, polisaharida antigena O1A E. coli, polisaharida antigena O2 E. coli i polisaharida antigena O6A E. coli da se dobije kompozicija.
RS20230664A 2015-08-24 2016-08-24 Postupci i kompozicije za imunsku zaštitu protiv ekstra-intestinalne patogene e. coli RS64449B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562209091P 2015-08-24 2015-08-24
US201562210655P 2015-08-27 2015-08-27
PCT/US2016/048278 WO2017035181A1 (en) 2015-08-24 2016-08-24 Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic e. coli
EP16760616.9A EP3341016B9 (en) 2015-08-24 2016-08-24 Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic e. coli

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64449B1 true RS64449B1 (sr) 2023-09-29

Family

ID=56855827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230664A RS64449B1 (sr) 2015-08-24 2016-08-24 Postupci i kompozicije za imunsku zaštitu protiv ekstra-intestinalne patogene e. coli

Country Status (18)

Country Link
US (3) US10583185B2 (sr)
EP (2) EP4245320A3 (sr)
JP (1) JP6872532B2 (sr)
KR (1) KR102735147B1 (sr)
CN (1) CN108430500B (sr)
AU (1) AU2016312422B2 (sr)
BR (1) BR112018003469A2 (sr)
EA (1) EA037500B1 (sr)
ES (1) ES2951408T3 (sr)
HR (1) HRP20230947T1 (sr)
HU (1) HUE063961T2 (sr)
IL (1) IL257608B (sr)
MX (1) MX2018002340A (sr)
PL (1) PL3341016T3 (sr)
RS (1) RS64449B1 (sr)
SM (1) SMT202300220T1 (sr)
TW (1) TWI715617B (sr)
WO (1) WO2017035181A1 (sr)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20110072A1 (es) * 2005-06-27 2011-02-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica
PL2945651T3 (pl) 2013-01-17 2018-08-31 Arsanis Biosciences Gmbh Przeciwciało swoiste wobec E.coli MDR
WO2015124769A1 (en) 2014-02-24 2015-08-27 Glycovaxyn Ag Novel polysaccharide and uses thereof
TWI715617B (zh) 2015-08-24 2021-01-11 比利時商葛蘭素史密斯克藍生物品公司 對抗腸道外病原性大腸桿菌之免疫保護之方法及組合物
AR109621A1 (es) 2016-10-24 2018-12-26 Janssen Pharmaceuticals Inc Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec
WO2019175147A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Vaccines against intra-abdominal infections
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
CA3134216A1 (en) 2019-03-18 2020-09-24 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Bioconjugates of e. coli o-antigen polysaccharides, methods of production thereof, and methods of use thereof
IL286467B2 (en) 2019-03-18 2026-02-01 Janssen Pharmaceuticals Inc Methods for producing bioconjugates of polysaccharides E. coli o-antigen, preparations thereof and methods for using them
EP4461744A3 (en) 2020-01-16 2025-01-08 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Fimh mutant, compositions therewith and use thereof
BR112022014555A2 (pt) * 2020-02-23 2022-09-20 Pfizer Composições de escherichia coli e métodos das mesmas.
EP4143564B1 (en) 2020-04-28 2024-06-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Method for identification and quantification of polysaccharides in complex glycoconjugate compositions
WO2021259743A2 (en) 2020-06-25 2021-12-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine
AU2021342797B2 (en) * 2020-09-17 2024-02-08 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Multivalent vaccine compositions and uses thereof
US12138302B2 (en) 2020-10-27 2024-11-12 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
JP7495578B2 (ja) 2020-11-30 2024-06-04 ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド キャピラリーベースのイムノアッセイシステムを使用する複合糖質の分析方法
US12357681B2 (en) 2020-12-23 2025-07-15 Pfizer Inc. E. coli FimH mutants and uses thereof
KR20250007029A (ko) 2021-01-12 2025-01-13 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 FimH 돌연변이체, 이를 포함하는 조성물 및 이의 용도
US20220236283A1 (en) * 2021-01-28 2022-07-28 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Method for identification and quantification of polysaccharides in complex glycoconjugate compositions
US12491237B2 (en) 2021-02-16 2025-12-09 Duke University Vaccine compositions and methods for the treatment and prevention of urinary tract infections
IL307247A (en) 2021-04-01 2023-11-01 Janssen Pharmaceuticals Inc Production of E. Coli O18 bioconjugates
US20240376506A1 (en) 2021-04-08 2024-11-14 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Process for bioconjugate production
AR131046A1 (es) * 2022-11-15 2025-02-12 Janssen Pharmaceuticals Inc Composiciones de vacunas multivalentes y sus usos
EP4478050A1 (en) 2023-06-12 2024-12-18 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Method for quantifying bound acetate in glycoconjugates
WO2025172892A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified proteins and methods
CN118286407B (zh) * 2024-04-08 2025-04-01 江西省农业科学院畜牧兽医研究所 一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及其制备方法

Family Cites Families (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3700612A (en) 1971-06-23 1972-10-24 Tenneco Chem Aqueous surface-coating compositions containing hydroxyalkyl ethers of galactomannan gums as thickeners
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8422653D0 (en) 1984-09-07 1984-10-10 Technology Licence Co Ltd Monoclonal antibodies
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5370872A (en) 1991-08-12 1994-12-06 Swiss Serum And Vaccine Institute Berne Escherichia coliO-polysaccharide-protein conjugate vaccine
AUPM399594A0 (en) 1994-02-21 1994-03-17 Csl Limited Antigenic preparation for treatment or prevention of helicobacter infection
US6858211B1 (en) 1998-07-20 2005-02-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccines against Escherichia coli O157 infection
WO2001078787A2 (en) 2000-04-18 2001-10-25 Endobiologics, Incorporated Lipopolysaccharide-conjugate vaccine for sepsis treatment
RU2189253C1 (ru) 2001-04-09 2002-09-20 Государственный научный центр прикладной микробиологии Диагностикум для идентификации escherichia coli o157 : h7 и способ его получения
US7117096B2 (en) 2001-04-17 2006-10-03 Abmaxis, Inc. Structure-based selection and affinity maturation of antibody library
AU2003217912A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 Xencor Antibody optimization
IL163806A0 (en) 2002-03-07 2005-12-18 Eidgenoess Tech Hochschule System and method for the production of recombinant glycosylated proteins in a prokaryotic host
AU2003901008A0 (en) 2003-03-04 2003-03-20 Anadis Ltd Composition for the treatment and prevention of bacterial infections
AU2005229434B2 (en) 2004-03-30 2010-09-30 Nsgene A/S Therapeutic use of a growth factor, NsG33
US7759070B2 (en) * 2004-05-14 2010-07-20 National Research Council Of Canada Conserved inner core lipopolysaccharide epitopes as multi-species vaccine candidates
ES2353814T3 (es) 2005-05-11 2011-03-07 Eth Zuerich Proteinas n-glicosiladas recombinantes de celulas procariotas.
US8063063B2 (en) 2006-03-23 2011-11-22 Novartis Ag Immunopotentiating compounds
ES2536426T3 (es) 2006-03-23 2015-05-25 Novartis Ag Compuestos de imidazoquinoxalina como inmunomoduladores
JP4791866B2 (ja) 2006-03-24 2011-10-12 国立大学法人秋田大学 下痢原性大腸菌感染症の判別に用いられる固相等
EP3124497B1 (en) 2007-09-14 2020-04-15 Adimab, LLC Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CA2711503A1 (en) 2008-01-08 2009-07-16 Biogenerix Ag Glycoconjugation of polypeptides using oligosaccharyltransferases
CN101983070B (zh) * 2008-02-20 2016-03-30 格林考瓦因有限公司 由来源于原核细胞的重组n-糖基化蛋白制备生物共轭物
CA2760096C (en) 2009-04-27 2018-10-30 Immuron Limited Anti-lps enriched immunoglobulin preparation for use in treatment and/or prophylaxis of a pathologic disorder.
NO2501406T3 (sr) 2009-11-19 2018-05-19
KR102318383B1 (ko) 2010-07-16 2021-10-27 아디맵 엘엘씨 항체 라이브러리
CA2819366A1 (en) 2010-12-10 2012-06-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel formulations which mitigate agitation-induced aggregation of immunogenic compositions
US20140336366A1 (en) 2011-09-06 2014-11-13 Glycovaxyn Ag Bioconjugate vaccines made in prokaryotic cells
US9932598B2 (en) 2012-08-02 2018-04-03 The Regents Of The University Of California Metabolic engineering of microbial organisms
BR112015004817A2 (pt) * 2012-09-10 2017-07-04 Glycovaxyn Ag bioconjugados compreendendo antígenos modificados e seus usos
ES2905107T3 (es) 2012-10-12 2022-04-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de modificación de células hospedadoras
ES2750525T3 (es) 2012-12-27 2020-03-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos y composiciones relacionados con CRM197
PL2945651T3 (pl) 2013-01-17 2018-08-31 Arsanis Biosciences Gmbh Przeciwciało swoiste wobec E.coli MDR
MX371513B (es) 2013-10-11 2020-01-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Metodos de modificacion de celulas huespedes.
WO2015117711A1 (en) 2014-02-06 2015-08-13 Arsanis Biosciences Gmbh E. coli specific antibody sequences
WO2015124769A1 (en) 2014-02-24 2015-08-27 Glycovaxyn Ag Novel polysaccharide and uses thereof
CN107614679B (zh) 2014-12-30 2026-04-07 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于蛋白糖基化的组合物和方法
TWI715617B (zh) 2015-08-24 2021-01-11 比利時商葛蘭素史密斯克藍生物品公司 對抗腸道外病原性大腸桿菌之免疫保護之方法及組合物
AR109621A1 (es) 2016-10-24 2018-12-26 Janssen Pharmaceuticals Inc Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec
GB201711635D0 (en) 2017-07-19 2017-08-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
CA3134216A1 (en) 2019-03-18 2020-09-24 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Bioconjugates of e. coli o-antigen polysaccharides, methods of production thereof, and methods of use thereof
IL286467B2 (en) 2019-03-18 2026-02-01 Janssen Pharmaceuticals Inc Methods for producing bioconjugates of polysaccharides E. coli o-antigen, preparations thereof and methods for using them
FR3098334B1 (fr) 2019-07-05 2021-07-23 Airbus Operations Sas Procédé et système de surveillance d’un état de conscience d’un opérateur dans un poste de pilotage d’un aéronef

Also Published As

Publication number Publication date
JP2018525423A (ja) 2018-09-06
KR102735147B1 (ko) 2024-11-26
PL3341016T3 (pl) 2023-11-13
EP4245320A3 (en) 2023-11-22
ES2951408T3 (es) 2023-10-20
IL257608A (en) 2018-04-30
EP3341016C0 (en) 2023-06-07
WO2017035181A1 (en) 2017-03-02
US10583185B2 (en) 2020-03-10
EP3341016B9 (en) 2023-09-27
CN108430500B (zh) 2021-12-24
IL257608B (en) 2021-12-01
HUE063961T2 (hu) 2024-02-28
MX2018002340A (es) 2018-09-17
SMT202300220T1 (it) 2023-09-06
EP3341016B1 (en) 2023-06-07
US20230062987A1 (en) 2023-03-02
NZ739963A (en) 2024-02-23
CA2995873A1 (en) 2017-03-02
TWI715617B (zh) 2021-01-11
EP4245320A2 (en) 2023-09-20
AU2016312422A1 (en) 2018-03-29
JP6872532B2 (ja) 2021-05-19
US11484582B2 (en) 2022-11-01
US12076385B2 (en) 2024-09-03
HRP20230947T1 (hr) 2023-11-24
US20210046171A1 (en) 2021-02-18
CN108430500A (zh) 2018-08-21
EP3341016A1 (en) 2018-07-04
AU2016312422B2 (en) 2019-09-26
KR20180054629A (ko) 2018-05-24
TW201714620A (zh) 2017-05-01
EA201890400A1 (ru) 2018-09-28
BR112018003469A2 (pt) 2018-09-25
EA037500B1 (ru) 2021-04-05
US20180243393A1 (en) 2018-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12076385B2 (en) Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic E. coli
Cohen et al. Safety and immunogenicity of a synthetic carbohydrate conjugate vaccine against Shigella flexneri 2a in healthy adult volunteers: a phase 1, dose-escalating, single-blind, randomised, placebo-controlled study
TWI815860B (zh) 多價肺炎球菌多醣-蛋白質共軛物組成物
TWI826420B (zh) 多價肺炎球菌多醣-蛋白質共軛物組成物
US20090098157A1 (en) Helicobacter Pylori Vaccination
TW201136603A (en) 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
EA006602B1 (ru) Применение стафилококковых и энтерококковых вакцин для защиты иммунокомпромиссного субъекта от бактериальных инфекций
JP2015505309A (ja) 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質のアジュバントされた組み合わせ
Stein et al. Are antibodies to the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis group B and Escherichia coli K1 associated with immunopathology?
US20180271969A1 (en) Streptococcus suis polysaccharide-protein conjugate composition
JP2019532035A (ja) 淋菌に対するワクチン
JP2015519305A (ja) ヒストフィルス・ソムニの外膜タンパク質とその方法
Kaplonek et al. A semisynthetic glycoconjugate provides expanded cross-serotype protection against Streptococcus pneumoniae
CN105999254A (zh) 含2型和12f血清型的15价肺炎球菌结合物组合疫苗
CA2995873C (en) Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic e. coli
HK40101369A (en) Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic e. coli
CN121548427A (zh) 免疫原性组合物
JP2013510188A (ja) 黄色ブドウ球菌に由来する菌血症関連抗原
Suarez Next-Generation Whole-Cell Pneumococcal Vaccine
Anderson et al. Protection against Pneumococcal
Lucero et al. Pneumococcal conjugate vaccines for preventing vaccine-type invasive pneumococcal disease and pneumonia with...