RS64961B1 - Derivati kamptotecina - Google Patents

Derivati kamptotecina

Info

Publication number
RS64961B1
RS64961B1 RS20231182A RSP20231182A RS64961B1 RS 64961 B1 RS64961 B1 RS 64961B1 RS 20231182 A RS20231182 A RS 20231182A RS P20231182 A RSP20231182 A RS P20231182A RS 64961 B1 RS64961 B1 RS 64961B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
ala
gly
val
ch2nhc
phe
Prior art date
Application number
RS20231182A
Other languages
English (en)
Inventor
Ravi Chari
Wayne C Widdison
Wei Li
David P Pleynet
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Publication of RS64961B1 publication Critical patent/RS64961B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Opis
TEHNIČKA OBLAST
Ovde su otkrivena nova jedinjenja i njihovi konjugati. Tačnije, ovo otkriće se odnosi na nove derivate kamptotecina, intermedijere, njihove metabolite i konjugate, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, koji su korisni kao lekovi, posebno kao anti-proliferativna sredstva (sredstva protiv kancera).
OSNOVA
Konjugati sredstva koji se vezuje za ćeliju i leka, uključujući konjugate antitelo-lek (ADC) se pojavljuju kao moćna klasa sredstava sa efikasnošću u nizu abnormalnog rasta ćelija ili proliferativnih bolesti (npr., kancera). Konjugati sredstva koji se vezuje za ćeliju i leka (kao što su ADC) se obično sastoje od tri različita elementa: sredstva koji se vezuje za ćeliju (npr., antitela); linkera; i citotoksične grupe.
Kamptotecin (CPT) je pentaciklični alkaloid izolovan iz kore i stabljike Camptotheca acuminata (Camptotheca, srećno drvo), drvo poreklom iz Kine. Kamptotecin inhibira topoizomerazu I, što dovodi do smrti ćelije. Zbog njegovog citotoksičnog mehanizma i širokog spektra antitumorske aktivnosti, uloženi su značajni napori ka razvoju kliničkih analoga kamptotecina. Međutim, loša rastvorljivost i neaktivnost u fiziološkim uslovima ograničili su klinički razvoj odgovarajućih analoga kamptotecina. Kamptotecin i većina njegovih derivata nisu rastvorljivi u vodenim puferima. Dalje, kamptotecin je u ravnoteži u obliku aktivnog laktona i neaktivnog hidrolizovanog karboksilatnog oblika, čime se ograničava njegova terapeutska efikasnost.
Konjugati antitelo-lek su opisani u EP 3088419 i sadrže antitumorsko jedinjenje predstavljeno [Formulom 1]:
koje je konjugovano sa anti-TROP2 antitelom pomoću tioetarske veze koja se formira na disulfidnoj vezi prisutnoj u zglobnom delu anti-TROP2 antitela preko specifičnog linkera. Takođe je opisana upotreba konjugata kao antitumorskih lekova.
Konjugati su opisani u US 2006/193865 i imaju formulu: TM-[L]-CPT, pri čemu TM je grupa koja ciljno deluje na bolest; CPT je kamptotecin ili njegov analog; i L je sistem linkera tipa X-Y-Z gde je X grupa koja ciljno deluje na bolest, Y je polipeptid koji se može cepati lizozomima i Z je 4-aminobenziloksi deo, koji je povezan sa CPT lekom. Takođe su opisani postupci za dobijanje konjugata i njihova upotreba kao leka.
Glikokonjugati derivata kamptotecina su opisani u DE 19640207, u kome je najmanje jedna komponenta ugljenih hidrata povezana preko odgovarajućih spejsera za A- ili B-prsten derivata kamptotecina. Takođe su opisani postupci za dobijanje jedinjenja i njihova upotreba kao lekova, posebno za upotrebu u vezi sa kancerima.
Postoji potreba za terapeutski efikasnim derivatima kamptotecina koji imaju povećanu rastvorljivost, potenciju, stabilnost laktona i bioraspoloživost.
REZIME
Pronalazak je definisan priloženim patentnim zahtevima. U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
Z-L<1>-D (Formula I)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
-L<1>-Z je (i) -(C1-C4alkilen)-OR<6>, -(C1-C4alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2; ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>;
R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil; i
R<6>je nezavisno -H, metil ili benzil;
uz uslov da -L<1>-Z ne može biti -CH2OH.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-OR<6>, -(C1-C4alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-OR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(CH2)2OH, -(CH2)3OH, -(CH2)4OH, -CH2OMe, -(CH2)2OMe, -(CH2)3OMe, -(CH2)4OMe, -CH2SH, -(CH2)2SH, -(CH2)3SH, -(CH2)4SH, -CH2SMe, -(CH2)2SMe, -(CH2)3SMe, -(CH2)4SMe, -CH2NH2, -(CH2)2NH2, -(CH2)3NH2, ili (CH2)4NH2.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>, - (C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -CH2NHC(=O)CH2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)3OH, -CH2NHC(=O)(CH2)4OH, -CH2NHC(=O)(CH2)5OH, -CH2NHC(=O)CH2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5OMe, -CH2NHC(=O)CH2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)3SH, -CH2NHC(=O)(CH2)4SH, -CH2NHC(=O)(CH2)5SH, -CH2NHC(=O)CH2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5SMe, -CH2SCH2SH, -CH2S(CH2)2SH, -CH2S(CH2)3SH, -CH2S(CH2)4SH, -CH2S(CH2)5SH, -CH2SCH2SMe, -CH2S(CH2)2SMe, -CH2S(CH2)3SMe, -CH2S(CH2)4SMe, ili -CH2S(CH2)5SMe.
Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil.
Svaki R<6>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je benzil.
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je bilo koje od jedinjenja izabrano od sledećih:
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je bilo koje od jedinjenja izabranih iz Tabele 1B. U sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
E-A-Z'-L<1>-D (Formula II)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, gde<*>je mesto kovalentno vezano za A;
svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil; svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil; A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu je A izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koje su:
(i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu:
X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-;
Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil; ili
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je - (C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, -(CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2O-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>.
Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil. Svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je benzil.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -L<1>-Z'-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano sa A.
U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 8 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 4 aminokiseline. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, svaka aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je D aminokiselina.
U nekim primerima izvođenja, A je -(AA<1>)-(AA<2>)a1-<*>, gde<*>je mesto kovalentno vezano za E; AA<1>i AA<2>su svaki nezavisno aminokiselinski ostatak; i a1 je ceo broj od 1-9.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Gly-Gly-Gly-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, - Val-Cit-<*>, -Val-Lys-<*>, -Lys-Val-<*>, -Phe-Lys-<*>,-Lys-Phe-<*>, -Lys-Lys-<*>, -Ala-Lys-<*>, -Lys-Ala-<*>, -Phe-Cit-<*>,-Cit-Phe-<*>, -Leu-Cit-<*>,- Cit-Leu-<*>-Ile-Cit-<*>, -Phe-Ala-<*>,-Ala-Phe-<*>, -Phe-N<9>-tozil-Arg-<*>, -N<9>-tozil-Arg-Phe-<*>, -Phe-N<9>-nitro-Arg-<*>, -N<9>-nitro-Arg-Phe<*>, -Phe-Phe-Lys-<*>, -Lys-Phe-Phe-<*>, -Gly-Phe-Lys-<*>, Lys-Phe-Gly-<*>, -Leu-Ala-Leu-<*>, -Ile-Ala-Leu-<*>, - Leu-Ala-Ile-<*>, -Val-Ala-Val-<*>, -Ala-Leu-Ala-Leu-<*>,-Leu-Ala-Leu-Ala-<*>, -β-Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Gly-Phe-Leu-Gly-<*>,-Gly-Leu-Phe-Gly-<*>, -Val-Arg-<*>, -Arg-Val-<*>, -Arg-Arg-<*>, -Ala-Ala-<*>, -Ala-Met-<*>, -Met-Ala-<*>, -Thr-Thr-<*>, -Thr-Met-<*>, -Met-Thr-<*>, -Leu-Ala-<*>, -Ala-Leu-<*>, -Cit-Val-<*>, -Gln-Val-<*>, -Val-Gln-<*>, -Ser-Val-<*>, -Val-Ser-<*>, -Ser-Ala-<*>, -Ser-Gly-<*>, -Ala-Ser-<*>, -Gly-Ser-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Gln-Leu-<*>, -PheArg-<*>, -Arg-Phe-<*>, -Tyr-Arg-<*>, -Arg-Tyr-<*>, -Phe-Gln-<*>, -Gln-Phe-<*>, -Val-Thr-<*>, -Thr-Val-<*>, -Met-Tyr-<*>, i -Tyr-Met-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Val-D-Lys-<*>, -Val-D-Arg-<*>, -L-Val-Cit-<*>, -L-Val-Lys-<*>, -L-Val-Arg-<*>, -L-Val-D-Cit-<*>, -L-Phe-Phe-Lys-<*>, -L-Val-D-Lys-<*>, -L-Val-D-Arg-<*>, -L-Arg-D-Arg-<*>, -L-Ala-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -Ala-D-Ala-<*>, -Val-D-Cit-<*>, -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, ili -L-Ser-L-Val-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -Ala-Ala-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Ala-Ala-Ala-<*>, -Ala-Ala-Ala-Ala-<*>, -Gly-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Ala-Gly-<*>, -Gly-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Val-Gly-<*>, -Gly-Phe-Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-Phe-Gly-<*.>U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Ala-D-Val-<*>, -L-Val-L-Ala-<*>, -L-Val-D-Ala-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, -L-Gln-D-Leu-<*>, -L-Leu-L-Gln-<*>, -L-Leu-D-Gln-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -Gly-L-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Ala-Gly-<*>, -Gly-D-Ala-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Ala-Gly-<*>, -Gly-L-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-D-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Val-Gly-<*>, -Gly-L-Phe-Gly-Gly-<*>, ili Gly-Gly-L-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-LAla-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, ili -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano sa E.
U nekim primerima izvođenja, A je supstituisan sa jednim ili više poliola, koji je -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>; pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil.
U nekim primerima izvođenja, pri čemu poliol je
pri čemu R<12>je H ili metil.
E je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<3>. U nekim primerima izvođenja, E je
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je bilo koje od jedinjenja izabranih iz Tabele 2. U sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule III, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
CBA-E'-A-Z'-L<1>-D (Formula III)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
-L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, gde je<*>mesto kovalentno vezano za A;
svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil;
svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil;
A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu je A izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koje su:
(i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu:
X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-;
Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil; ili
pri čemu je R<12>je H ili metil; E' je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<6>-<*>; pri čemu je<*>mesto kovalentno vezano sa CBA; X<6>je
pri čemu je<*>mesto kovalentno vezano za CBA; i CBA je sredstvo za vezivanje za ćeliju, pri čemu sredstvo koje se vezuje za ćeliju je antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je - (C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, -(CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5O-CH2-NH-<*>, - CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-
1
<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>.
Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil. Svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je benzil.
U različitim primerima izvođenja koje otkrivaju -L<1>-Z'-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano sa A.
U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 8 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 4 aminokiseline. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, svaka aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je D aminokiselina.
U nekim primerima izvođenja, A je -(AA<1>)-(AA<2>)a1-<*>, pri čemu je<*>tačka vezivanja za E', AA<1>i AA<2>su svaki nezavisno aminokiselinski ostatak; i a1 je ceo broj od 1-9.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je Gly-Gly-Gly-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, - Val-Cit-<*>, -Val-Lys-<*>, -Lys-Val-<*>, -Phe-Lys-<*>,-Lys-Phe-<*>, -Lys-Lys-<*>, -Ala-Lys-<*>, -Lys-Ala-<*>, -Phe-Cit-<*>,-Cit-Phe-<*>, -Leu-Cit-<*>,- Cit-Leu-<*>- Ile -Cit-<*>, -Phe-Ala-<*>,-Ala-Phe-<*>, - Phe-N<9>-tozil-Arg-<*>, -N<9>-tozil-Arg-Phe-<*>, -Phe-N<9>-nitro-Arg-<*>, -N<9>-nitro-Arg-Phe<*>, -Phe-Phe-Lys-<*>, -Lys-Phe-Phe-<*>, -Gly-Phe-Lys-<*>, Lys-Phe-Gly-<*>, -Leu-Ala-Leu-<*>, -Ile-Ala-Leu-<*>, -Leu-Ala-Ile-<*>, -Val-Ala-Val-<*>, -Ala-Leu-Ala-Leu-<*>,-Leu-Ala-Leu-Ala-<*>, -β-Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Gly-Phe-Leu-Gly-<*>,-Gly-Leu-Phe-Gly-<*>, -Val-Arg-<*>, -Arg-Val-<*>, -Arg-Arg-<*>, - Ala-Ala-<*>, -Ala-Met-<*>, -Met-Ala-<*>, -Thr-Thr-<*>, -Thr-Met-<*>, -Met-Thr-<*>, -Leu-Ala-<*>, -Ala-Leu-<*>, -Cit-Val-<*>, -Gln-Val-<*>, -Val-Gln-<*>, -Ser-Val-<*>, -Val-Ser-<*>, -Ser-Ala-<*>, -Ser-Gly-<*>, - Ala-Ser-<*>, -Gly-Ser-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Phe-Arg-<*>, -Arg-Phe-<*>, -Tyr-Arg-<*>, -Arg-Tyr-<*>, -Phe-Gln-<*>, -Gln-Phe-<*>, -Val-Thr-<*>, -Thr-Val-<*>, -Met-Tyr-<*>, i -Tyr-Met-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je Val-D-Lys-<*>, -Val-D-Arg-<*>, -L-Val-Cit-<*>, -L-Val-Lys-<*>, -L-Val-Arg-<*>, -L-Val-D-Cit-<*>, -L-Phe-Phe-Lys-<*>, -L-Val-D-Lys-<*>, -L-Val-D-Arg-<*>, -L-Arg-D-Arg-<*>, -L-Ala-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -Ala-D-Ala-<*>, -Val-D-Cit-<*>, -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, ili -L-Ser-L-Val-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -Ala-Ala-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>-Gln-Leu-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Ala-Ala-Ala-<*>, -Ala-Ala-Ala-Ala-<*>, -Gly-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Ala-Gly-<*>, -Gly-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Val-Gly-<*>, -Gly-Phe-Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Ala-D-Val-<*>, -L-Val-L-Ala-<*>, -L-Val-D-Ala-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, -L-Gln-D-Leu-<*>, -L-Leu-L-Gln-<*>, -L-Leu-D-Gln-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -Gly-L-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Ala-Gly-<*>,-Gly-D-Ala-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Ala-Gly-<*>, -Gly-L-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-D-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Val-Gly-<*>, -Gly-L-Phe-Gly-Gly-<*>, ili Gly-Gly-L-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, - L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, ili -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>.
U različitim primerima izvođenja koje otkrivaju -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano za E'.
U nekim primerima izvođenja, A je supstituisan sa jednim ili više poliola, koji je -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>; pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil.
U nekim primerima izvođenja, poliol je
pri čemu je R<12>je H ili metil.
E' je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<6>-<*>. U nekim primerima izvođenja, E' je
pri čemu je<*>mesto kovalentno vezano za CBA.
U nekim primerima izvođenja, CBA sadrži -SH grupu koja se kovalentno vezuje sa E' da bi obezbedila
U nekim primerima izvođenja, CBA je antitelo i -E'-A-Z'-L<1>- D je struktura lek-linker, prosečan broj konjugovanih struktura lek-linker po antitelu je u opsegu od 2 do 10.
U nekim primerima izvođenja, prosečan broj konjugovanih struktura lek-linker po antitelu je u opsegu od 2 do 10. U nekim primerima izvođenja, prosečan broj struktura lek-linker konjugovanih po antitelu je u opsegu od 6 do 8. U nekim primerima izvođenja, prosečan broj struktura lek-linker konjugovanih po antitelu je 8.
U nekim primerima izvođenja, CBA je antitelo, jednolančano antitelo, fragment antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, monoklonsko antitelo, jednolančano monoklonsko antitelo ili fragment monoklonskog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, himerno antitelo, fragment himernog antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, domen antitelo, fragment domen antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, protelo, nanotelo ili heksatelo.
U nekim primerima izvođenja, CBA se vezuje za ciljne ćelije izabrane od tumorskih ćelija, ćelija inficiranih virusom, ćelija inficiranih mikroorganizmima, ćelija inficiranih parazitima, autoimunih ćelija, aktiviranih ćelija, mijeloidnih ćelija, aktiviranih T-ćelija, B ćelija ili melanocita; ćelija koje eksprimiraju bilo koji ili više od sledećih: 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H3, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, kripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Disadherin, EFNA4, EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR-alfa, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC3, gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, IL7R, Interleukin-4 Receptor (IL4R), KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, MAGE, Mezotelin (MSLN), MET, protein A i B srodan sa MHC klasom I (MICA i MICB), MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, NaPi2b, Nektin-4, NOTCH3, OAcGD2, OX001L, p-kadherin, PD-L1, fosfatidil serin (PS), polimorfni epitelijalni mucin (PEM), prolaktin Receptor (PRLR), PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, STn, TIM-1, TM4SF1, TNF-alfa, TRA, TROP-2, Tumor-vezani glikoprotein 72 (TAG-72), tumor-specifičan epitop mucina-1 (TA-MUC1), CD5, TIM-3, UPK2, ili UPK1b antigen.
U nekim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje za ćeliju je anti-folatni receptor antitelo ili njegov fragment antitela, anti-EGFR antitelo ili njegov fragment antitela, anti-CD33 antitelo ili njegov fragment antitela, anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment antitela, anti-CD19 antitelo
1
ili njegov fragment antitela, anti-Muc1 antitelo ili njegov fragment antitela, ili anti-CD37 antitelo ili njegov fragment antitela.
Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži citotoksično jedinjenje ili konjugat ovog pronalaska koji je ovde opisan, i farmaceutski prihvatljiv nosač. Predstavljena jedinjenja, konjugati ili kompozicije su korisni za inhibiciju abnormalnog rasta ćelija ili lečenje proliferativnog poremećaja (npr. kancera), autoimunog poremećaja, destruktivnog poremećaja kostiju, infektivnih bolesti, virusnih bolesti, fibroznih bolesti, neurodegenerativnih poremećaja, pankreatitisa ili bolesti bubrega kod sisara (npr. čoveka).
Predmetna jedinjenja, konjugati ili kompozicije su korisni za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno. U nekim primerima izvođenja, kancer je limfom ili leukemija. U nekim primerima izvođenja, kancer je akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijelogena leukemija (CML), mijelodisplastični sindrom (MDS), akutna limfoblastna leukemija (ALL), akutna B limfoblastična leukemija ili B-ćelijska akutna limboblastična leukemija (B-ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ćelija (HCL), akutna promijelocitna leukemija (APL), B-ćelijska hronična limfoproliferativna bolest (B-CLPD), atipična hronična limfocitna leukemija, difuzni krupnoćelijski limfom B-ćelija (DLBCL), neoplazma blastičnih plazmacitoidnih dendritskih ćelija (BPDCN), ne-Hodgkin-ovi limfomi (NHL), leukemija Mantle ćelija (MCL), mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkin-ov limfom, sistemska mastocitoza i Burkitt-ov limfom. U nekim primerima izvođenja, kancer je kancer endometrijuma, kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer bešike, kancer želuca, kancer pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer dojke, kancer glave i vrata, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer štitne žlezde, kancer testisa, mijeloidni kancer, melanom i limfoidni kancer. U nekim primerima izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća ili sitnoćelijski kancer pluća.
Ovde je takođe opisana, ali ne prema pronalasku za koji se traži zaštita, upotreba citotoksičnog jedinjenja, konjugata ili kompozicije ovog pronalaska za proizvodnju leka za inhibiciju abnormalnog rasta ćelija ili lečenje proliferativnog poremećaja (npr., kancera), autoimunog poremećaja, destruktivnog poremećaja kostiju, infektivne bolesti, virusne bolesti, fibrotične bolesti, neurodegenerativnog poremećaja, pankreatitisa ili bolesti bubrega kod sisara (npr., čoveka).
Predmetna jedinjenja, konjugati ili kompozicije su korisni za proizvodnju leka za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno. U nekim primerima izvođenja, kancer je limfom ili leukemija. U nekim primerima izvođenja, kancer je akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijelogena leukemija (CML), mijelodisplastični sindrom (MDS), akutna limfoblastna leukemija (ALL), akutna B limfoblastična leukemija ili B-ćelijska akutna limboblastična leukemija (B-ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ćelija (HCL), akutna promijelocitna leukemija (APL), B-ćelijska hronična limfoproliferativna bolest (B-CLPD), atipična hronična limfocitna leukemija, difuzni krupnoćelijski limfom B-ćelija (DLBCL), neoplazma blastičnih plazmacitoidnih dendritskih ćelija (BPDCN), ne-Hodgkin-ovi limfomi (NHL), leukemija Mantle ćelija (MCL), mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkin-ov limfom, sistemska mastocitoza i Burkitt-ov limfom. U nekim primerima izvođenja, kancer je kancer endometrijuma, kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer bešike, kancer želuca, kancer pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer dojke, kancer glave i vrata, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer štitne žlezde, kancer testisa, mijeloidni kancer, melanom i limfoidni kancer. U nekim primerima izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća ili sitnoćelijski kancer pluća.
KRATAK OPIS CRTEŽA
SL. 1 prikazuje prvi deo sinteze gradivnih blokova kamptotecina.
SL. 2 prikazuje drugi deo sinteze gradivnih blokova kamptotecina.
SL. 3 prikazuje prvi deo sinteze bočnih lanaca.
SL. 4 prikazuje drugi deo sinteze bočnih lanaca.
SL. 5 prikazuje prvi deo spajanja gradivnih blokova kamptotecina sa bočnim lancima.
SL. 6 prikazuje drugi deo spajanja gradivnih blokova kamptotecina sa bočnim lancima.
SL. 7 prikazuje treći deo spajanja gradivnih blokova kamptotecina sa bočnim lancima.
SL. 8 prikazuje sintezu dodatnih metabolita kamptotecina.
SL. 9 prikazuje spajanje gradivnih blokova kamptotecina sa bočnim lancima.
1
SL. 10 prikazuje sintezu dodatnih jedinjenja kamptotecina.
SL. 11 prikazuje jedinjenja koja se koriste za poređenje, koja uključuju generičku Ab-999 strukturu ADC koji nosi 999 grupu vezanu preko redukovanih interlančanih disulfida antitela.
SL. 12 prikazuje citotoksičnost jedinjenja 8c koje nosi sulfid i njegovog sulfoksida 34a i sulfona 34b.
SL. 13 prikazuje farmakokinetiku ML66-999 kod miševa. Gornji panel prikazuje grafikon koncentracije (µg/mL) u odnosu na vreme komponente mAb (prosečno) i komponente korisnog opterećenja, u vremenskim tačkama od 2 min, 1 dan i 3 dana nakon primene kod miševa. Donji panel prikazuje grafikon koncentracije (µg/mL) u odnosu na vreme mAb komponente (prosek) i zadržane bioaktivnosti (skupljeni uzorci) ADC u vremenskim tačkama od 2 min, 1 dan i 3 dana nakon primene kod miševa.
SL. 14 prikazuje farmakokinetiku ML66-22a kod miševa. Gornji panel prikazuje grafikon koncentracije (µg/mL) u odnosu na vreme komponente mAb (prosečno) i komponente korisnog opterećenja, u vremenskim tačkama od 2 minuta, 1 i 3 dana nakon primene kod miševa. Donji panel prikazuje grafikon koncentracije (µg/mL) u odnosu na vreme mAb komponente (prosečno) i zadržane bioaktivnosti (skupljeni uzorci) ADC u vremenskim tačkama od 2 min, 1 dan i 3 dana nakon primene kod miševa.
SL. 15 prikazuje in vitro citotoksičnost ADC protiv Ag+ i Ag- ćelija. ADC standard u formulaciji (Standard) ili krvni serum (skup) koji sadrži ADC uzet 2 minuta, 1 dan ili 3 dana nakon primene miševima za ML66-999.
SL. 16 prikazuje in vitro citotoksičnost ADC protiv Ag+ i Ag- ćelija. ADC standard u formulaciji (Standard) ili krvni serum (skup) koji sadrži ADC uzet 2 minuta, 1 dan ili 3 dana nakon primene miševima za ML66-22a.
SL. 17 prikazuje efikasnost ADC u modelu ksenotransplantata HSC-2. Doziranje se zasniva na nosivosti (75 µg/kg i 250 µg/kg su ~ 3 mg/kg i ~10 mg/kg na osnovu antitela).
1
SL. 18 prikazuje efikasnost ADC u modelima FaDu ksenografta. Doziranje se zasniva na nosivosti (75 µg/kg i 250 µg/kg su ~ 3 mg/kg i ~10 mg/kg na osnovu antitela).
SL. 19 prikazuje podnošljivost miša na ML66-999, ML66-22a i ML66-28a ADC.
SL. 20 prikazuje antitumorsku aktivnost ADC u modelu ksenotransplantata miša H1703. Doziranje se zasniva na nosivosti (75 µg/kg i 250 µg/kg su ~ 3 mg/kg i ~10 mg/kg na osnovu antitela).
SL. 21 prikazuje podnošljivost miševa ne-unakrsno reaktivnih ADC pri dozi korisnog opterećenja od 5000 µg/kg (-200 mg/kg na osnovu Ab komponente). AbF= humanizovano antifolatni receptor antitelo.
DETALJAN OPIS
Da bi se pronalazak koji je ovde opisan mogao u potpunosti razumeti, dat je sledeći detaljan opis. Dok će pronalazak biti opisan u vezi sa nabrojanim primerima izvođenja, biće razumljivo da oni nemaju za cilj da ograniče pronalazak na te primere izvođenja. Naprotiv, pronalazak je namenjen da pokrije sve alternative, modifikacije i ekvivalente koji mogu biti uključeni u obim ovog pronalaska kako je definisano patentnim zahtevima. Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati mnoge postupke i materijale slične ili ekvivalentne onima koji su ovde opisani, koji bi se mogli koristiti u izvođenju ovog pronalaska.
Termin "ovde" označava celu prijavu.
Osim ako nisu drugačije definisani ovde, naučni i tehnički termini korišćeni u ovoj prijavi imaće značenja koja su uobičajeno razumljiva stručnjacima iz oblasti tehnike kojoj ovaj pronalazak pripada. Generalno, nomenklatura koja se koristi u vezi sa jedinjenjima, kompozicijama i postupcima opisanim ovde je ona dobro poznata i koja se obično koristi u tehnici.
Trebalo bi razumeti da se bilo koji od primera izvođenja opisanih ovde, uključujući one opisane pod različitim aspektima pronalaska i različitim delovima specifikacije (uključujući primere izvođenja opisane samo u Primerima) može kombinovati sa jednim ili više drugih primera izvođenja pronalaska, osim ako je izričito odbačen ili neprikladan. Kombinacija primera izvođenja nije ograničena na one specifične kombinacije za koje se traži više zavisnih zahteva. Hemijski termini koji se ovde koriste se koriste u skladu sa konvencionalnom upotrebom u
1
struci, kao što je ilustrovano u "The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms", Parker S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco, C.A. (1985).
U celoj ovoj specifikaciji, reč „sadrže“ ili varijacije kao što su „sadrži“ ili „koji sadrži“ podrazumevaće uključivanje navedenog celog broja (ili komponenti) ili grupe celih brojeva (ili komponenti), ali ne i isključivanje bilo kog drugog celog broja (ili komponente) ili grupe celih brojeva (ili komponenti).
U celoj specifikaciji, gde su kompozicije opisane kao da sadrže, uključujući ili sadrže (ili njihove varijacije), specifične komponente, smatra se da se kompozicije takođe mogu sastojati u suštini od, ili se sastojati od navedenih komponenti. Slično, gde su metode ili postupci opisani kao da imaju, uključujući ili sadrže specifične korake postupka, postupci se takođe mogu sastojati u suštini od, ili se sastojati od navedenih koraka obrade. Dalje, treba razumeti da je redosled koraka ili redosled za izvođenje određenih radnji nebitan sve dok kompozicije i postupci opisani ovde ostaju u funkciji. Pored toga, dva ili više koraka ili radnji se mogu sprovesti istovremeno.
Termin „uključujući“ se koristi da znači „uključujući, ali ne ograničavajući se na“. „Uključujući“ i „uključujući, ali ne ograničavajući se na“ se koriste naizmenično.
Kako se ovde koristi, "oko" ili "približno" znači u okviru prihvatljivog opsega greške za određenu vrednost kako je to odredio neko ko je sa uobičajenim iskustvom u ovoj oblasti, što će delimično zavisiti od toga kako se vrednost meri ili određuje, tj. ograničenja mernog sistema. Upotreba termina "a" i "an" i "the" i sličnih referenci u kontekstu opisa elemenata (naročito u kontekstu sledećih patentnih zahteva) treba da se tumači tako da obuhvata i jedninu i množinu, osim ako drugačije naznačeno ovde ili je jasno u suprotnosti sa kontekstom.
Termin "ili" kako se ovde koristi treba shvatiti da znači "i/ili", osim ako kontekst jasno ne ukazuje drugačije.
Navođenje opsega vrednosti ovde je samo namenjeno da služi kao skraćeni postupak za pojedinačno upućivanje na svaku zasebnu vrednost koja spada u opseg, osim ako nije drugačije naznačeno ovde, a svaka zasebna vrednost je uključena u specifikaciju kao da je ovde pojedinačno navedena. Svi postupci opisani ovde mogu da se izvode bilo kojim pogodnim redosledom osim ako je drugačije naznačeno ovde ili je na drugi način jasno u suprotnosti sa kontekstom. Upotreba bilo kog i svih primera, ili primera jezika (npr., "kao što je") koji je ovde dat, ima za cilj samo da bolje osvetli primere izvođenja i ne predstavlja ograničenje obima zahteva, osim ako nije drugačije navedeno. Nijedan jezik u specifikaciji ne treba da se tumači tako da ukazuje na element za koji nije tražena zaštita kao esencijalan
1
Definicije
Termin "alkil" ili "linearni ili razgranati alkil" kako se ovde koristi odnosi se na zasićeni linearni ili razgranati monovalentni ugljovodonični radikal. U poželjnim primerima izvođenja, alkil ravnog ili razgranatog lanca ima trideset ili manje atoma ugljenika. (npr., C1-C30za ravnolančanu alkil grupu i C3-C30za razgranati alkil) i poželjnije dvadeset ili manje atoma ugljenika. Još poželjnije, alkil ravnog ili razgranatog lanca ima deset ili manje atoma ugljenika (tj. C1-C10za ravnolančanu alkil grupu i C3-C10za razgranati alkil). U drugim primerima izvođenja, alkil ravnog ili razgranatog lanca ima šest ili manje atoma ugljenika (tj. C1-C6za ravnolančanu alkil grupu ili C3-C6za razgranati lanac alkil). Primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, 1-propil, 2-propil, 1-butil, 2-metil-1-propil, -CH2CH(CH3)2), 2-butil, 2-metil-2-propil, 1-pentil, 2-pentil 3-pentil, 2-metil-2-butil, 3-metil-2-butil, 3-metil-1-butil, 2 -metil-1-butil, 1-heksil), 2-heksil, 3-heksil, 2-metil-2-pentil, 3-metil-2-pentil, 4-metil-2-pentil, 3-metil-3-pentil, 2-metil-3-pentil, 2,3-dimetil-2-butil, 3,3-dimetil-2-butil, 1-heptil, 1-oktil i slično. Pored toga, termin "alkil" kako se koristi u celoj specifikaciji, primerima i zahtevima treba da uključi i "nesupstituisane alkile" i "supstituisane alkile", od kojih se poslednji odnosi na alkil grupe koje imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika ugljovodoničnog osnovnog lanca. Kako se ovde koristi, (Cx-Cxx)alkil ili Cx-xxalkil označava linearni ili razgranati alkil koji ima x-xx broj atoma ugljenika.
Termin "alkilen" kako se ovde koristi odnosi se na zasićeni linearni ili razgranati dvovalentni ugljovodonični radikal. U poželjnim primerima izvođenja, alkilen ravnog ili razgranatog lanca ima trideset ili manje atoma ugljenika (npr., C1-C30za ravnolančanu alkilen grupu i C3-C30za razgranati alkilen) i poželjnije dvadeset ili manje atoma ugljenika. Još poželjnije, alkilen ravnog ili razgranatog lanca ima deset ili manje atoma ugljenika (tj. C1-C10za ravnolančanu alkilen grupu i C3-C10za razgranati alkilen). U drugim primerima izvođenja, alkilen ravnog ili razgranatog lanca ima šest ili manje atoma ugljenika (tj. C1-C6za ravnolančanu alkilen grupu ili C3-C6za alkilen razgranatog lanca). Kako se ovde koristi, (Cx-Cxx)alkilen ili Cx-xxalkilen označava linearni ili razgranati alkilen koji ima x-xx broj atoma ugljenika.
Termin "alkenil" ili "linearni ili razgranati alkenil" odnosi se na monovalentni ugljovodonični radikal linearnog ili razgranatog lanca od dva do dvadeset atoma ugljenika sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj. dvostrukom vezom ugljenik-ugljenik, pri čemu alkenil radikal uključuje radikale koji imaju "cis" i "trans" orijentaciju, ili alternativno, "E" i "Z" orijentacije. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etilenil ili vinil (-CH=CH2), alil (-CH2CH=CH2), i slično. Poželjno, alkenil ima dva do deset atoma ugljenika. Poželjnije, alkil ima dva do četiri
1
atoma ugljenika.
Termin "alkinil" ili "linearni ili razgranati alkinil" odnosi se na linearni ili razgranati monovalentni ugljovodonični radikal od dva do dvadeset atoma ugljenika sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj. trostrukom vezom ugljenik-ugljenik. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil, propinil, 1-butinil, 2-butinil, 1-pentinil, 2-pentinil, 3-pentinil, heksinil i slično. Poželjno, alkinil ima dva do deset atoma ugljenika. Poželjnije, alkinil ima dva do četiri atoma ugljenika.
Termini "ciklični alkil" i "cikloalkil" mogu se koristiti naizmenično. Kako se ovde koristi, termin se odnosi na radikal zasićenog karbocikličnog prstena. U poželjnim primerima izvođenja, cikloalkili imaju od 3 do 10 atoma ugljenika u strukturi prstena i poželjnije od 5 do 7 atoma ugljenika u strukturi prstena. U nekim primerima izvođenja, dva ciklična prstena mogu imati dva ili više zajednička atoma, na primer, prstenovi su "fuzionisani prstenovi". Pogodni cikloalkili uključuju, ali nisu ograničeni na cikloheptil, cikloheksil, ciklopentil, ciklobutil i ciklopropil. U nekim primerima izvođenja, cikloalkil je monociklična grupa. U nekim primerima izvođenja, cikloalkil je biciklična grupa. U nekim primerima izvođenja, cikloalkil je triciklična grupa.
Termin "cikloalkilalkil" se odnosi na alkil grupu opisanu gore koja je supstituisana sa cikloalkil grupom.
Termin "ciklični alkenil" se odnosi na radikal karbocikličnog prstena koji ima najmanje jednu dvostruku vezu u strukturi prstena.
Termin "ciklični alkinil" se odnosi na radikal karbocikličnog prstena koji ima najmanje jednu trostruku vezu u strukturi prstena.
Termin "aril" ili "aromatični prsten" kako se ovde koristi, uključuje supstituisane ili nesupstituisane aromatične grupe sa jednim prstenom u kojima je svaki atom prstena ugljenik. Poželjno je da je prsten 5- do 7-člani prsten, poželjnije 6-člani prsten. Aril grupe uključuju, ali nisu ograničene na, fenil, fenol, anilin i slično. Termini "aril" takođe obuhvataju "policiklil", "policiklični" i "policiklični" sistem prstenova koji imaju dva ili više prstenova u kojima su dva ili više atoma zajednički za dva susedna prstena, npr., prstenovi su "fuzionisani prstenovi", pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatičan, npr., ostali ciklični prstenovi mogu biti cikloalkil, cikloalkenili, cikloalkinili ili aromatični prstenovi. U nekim poželjnim primerima izvođenja, policiklusi imaju 2-3 prstena. U određenim poželjnim izvođenjima, policiklični sistemi prstenova imaju dva ciklična prstena u kojima su oba prstena aromatična. Svaki od prstenova policiklusa može biti supstituisan ili nesupstituisan. U određenim primerima izvođenja, svaki prsten policiklusa sadrži od 3 do 10 atoma ugljenika u prstenu, poželjno od 5
2
do 7. Na primer, aril grupe uključuju, ali nisu ograničene na, fenil, tolil, antracenil, fluorenil, indenil, azulenil i naftil, kao i benzo-fuzionisane karbociklične grupe kao što je 5,6,7,8-tetrahidronaftil i slično. U nekim primerima izvođenja, aril je aromatična grupa sa jednim prstenom. U nekim primerima izvođenja, aril je aromatična grupa sa dva prstena. U nekim primerima izvođenja, aril je aromatična grupa sa tri prstena.
Termin "heteroalkil" se odnosi na alkil grupu u kojoj je jedan ili više skeletnih atoma alkila izabrano od atoma koji nije ugljenik, npr. O, S, N (npr. -NH, -N(alkil)-), ili njihove kombinacije. Heteroalkil je vezan za ostatak molekula na atomu ugljenika heteroalkila. U jednom aspektu, heteroalkil je C1-C30heteroalkil. C1-C30heteroalkil se odnosi na alkil grupu koja ima 1 do 30 atoma ugljenika i 1 do 15 heteroatoma. Primeri C1-C30heteroalkil grupe uključuju, ali nisu ograničeni na, etre (npr., -CH2-O-CH3, -(CH2)2-O-CH3, -(CH2)3-O-(CH2)2-O-CH3, -(CH2)2-O-(CH2)3CH3, CH2-O-CH2-O-CH3, -CH2-O-(CH2)3-O-CH3), polietilen glikol (PEG) derivate (npr., -[(CH2)2O]10CH2CH3), tioetre (npr., -CH2-S-CH3, -(CH2)2-S-CH3, -(CH2)3-S-(CH2)2CH3, -((CH2)2S)10CH2CH3), -CH2-S-S-CH2, -(CH2)2-S-(CH2)3CH3, CH2-S-CH2-S-CH3, -CH2-S-(CH2)3-S-CH3), amine (npr., -CH2-NH-CH3, -(CH2)2-N(alkil)-CH3, -(CH2)3-NH-(CH2)2CH3, -(CH2)2-N(alkil)-(CH2)3CH3, CH2-NH-CH2-NH-CH3, -CH2-NH-(CH2)3-NH-CH3), ili njihove kombinacije. Ovo otkriće takođe razmatra C1-C30heteroalkil grupe u kojima jedan od 1 do 15 heteroatoma zauzima krajnji položaj alkil grupe, što rezultira, na primer, alkoholom (tj. OH), tiolom (tj. SH) ili aminom (npr. -NH2) u terminalnoj poziciji grupe.
Termin "heteroalkenil" se odnosi na alkenil grupu kako je ovde definisana, u kojoj su jedan ili više atoma ugljenika zamenjeni heteroatomom, npr., O, S, N (npr. -NH, -N(alkil)-). Heteroalkenil je vezan za ostatak molekula na atomu ugljenika heteroalkenila. U jednom aspektu, heteroalkenil je C1-C30heteroalkenil. C1-C30heteroalkenil se odnosi na alkenil grupu koja ima 1 do 30 atoma ugljenika i 1 do 15 heteroatoma, na primer, 1 do 10 heteroatoma ili 1 do 5 heteroatoma. Ovo otkriće takođe razmatra C1-C30heteroalkenil grupe u kojima jedan od 1 do 15 heteroatoma zauzima krajnji položaj alkenil grupe, što rezultira, na primer, alkoholom (tj. OH), tiolom (tj. SH), aminom (npr. -NH2), ili iminom (-C=N) u terminalnoj poziciji grupe. Termin "heteroalkinil" se odnosi na alkenil grupu kako je ovde definisana, u kojoj su jedan ili više atoma ugljenika zamenjeni heteroatomom, npr. O, S, N (npr. -NH, -N(alkil)-). Heteroalkinil je vezan za ostatak molekula na atomu ugljenika heteroalkinila. U jednom aspektu, heteroalkinil je C1-C30heteroalkinil. C1-C30heteroalkenil se odnosi na alkinil grupu koja ima 1 do 30 atoma ugljenika i 1 do 15 heteroatoma, na primer, 1 do 10 heteroatoma ili 1 do 5 heteroatoma. Ovo otkriće takođe razmatra C1-C30heteroalkinil grupe u kojima jedan od 1 do 15 heteroatoma zauzima krajnji položaj alkinil grupe, što rezultira, na primer, alkoholom (tj.
OH), tiolom (tj. SH), aminom (npr. -NH2), ili nitrilom (-C=N) u terminalnoj poziciji ostatka. Termini "heterocikl", "heterociklil" i "heterociklični prsten" kako se ovde koriste, odnose se na supstituisane ili nesupstituisane strukture nearomatičnog prstena od 3- do 18-članih prstenova, poželjno 3- do 10-članih prstenova, poželjnije 3- do 7-članih prstenova, čije strukture prstena uključuju najmanje jedan heteroatom, poželjno jedan do četiri heteroatoma, poželjnije jedan ili dva heteroatoma. U određenim primerima izvođenja, struktura prstena može imati dva ciklična prstena. U nekim primerima izvođenja, dva ciklična prstena mogu imati dva ili više zajedničkih atoma, na primer, prstenovi su "fuzionisani prstenovi". Heterociklil grupe uključuju, na primer, piperidin, piperazin, pirolidin, morfolin, laktone, laktame i slično. Heterociklusi su opisani u Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), naročito odeljci 1, 3, 4, 6, 7 i 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950. do danas), naročito sveske 13, 14, 16, 19 i 28; i J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. Primeri heterocikličnih prstenova uključuju, ali nisu ograničeni na, tetrahidrofuran, dihidrofuran, tetrahidrotien, tetrahidropiran, dihidropiran, tetrahidrotiopiran, tiomorfolin, tioksan, homopiperazin, azetidin, oksetan, tietan, homopiperidin, piperidin, piperazin, pirolidin, morfolin, oksepan, tiepan, oksazepin, diazepin, tiazepin, 2-pirolin, 3-pirolin, indolin, 2H-piran, 4H-piran, dioksan, 1,3-dioksolan, pirazolin, ditian, ditiolan, dihidropiran, dihidrotien, dihidrofuran, pirazolidinilimidazolin, imidazolidin, 3-azabiciklo[3.1.0]heksan, 3-azabiciklo[4.1.0]heptan i azabiciklo[2.2.2]heksan. Spiro grupe su takođe uključene u obim ove definicije. Primeri heterociklične grupe u kojoj su atomi u prstenu supstituisani sa okso (=O) grupama su pirimidinon i 1,1-diokso-tiomorfolin.
Termin "heteroaril" ili "heteroaromatični prsten" kako se ovde koristi, odnosi se na supstituisane ili nesupstituisane aromatične jednostruke prstenaste strukture, poželjno 6- do 18-člane prstenove, poželjno 5- do 7-člane prstenove, poželjnije 5- do 6-člane prstenovi, čije strukture prstena uključuju najmanje jedan heteroatom (npr., O, N ili S), poželjno jedan do četiri ili jedan do tri heteroatoma, poželjnije jedan ili dva heteroatoma. Kada su dva ili više heteroatoma prisutni u heteroaril prstenu, oni mogu biti isti ili različiti. Termin "heteroaril" takođe uključuje "policiklil", "policiklus" i "policiklični" sistem prstenova koji imaju dva ili više cikličnih prstenova u kojima su dva ili više atoma u prstenu zajednička za dva susedna prstena, npr., prstenovi su "fuzionisani prstenovi", pri čemu je najmanje jedan od prstenova heteroaromatičan, npr., ostali ciklični prstenovi mogu biti cikloalkili, cikloalkenili, cikloalkinili, arili, heteroaromatici i/ili heterociklili. U nekim poželjnim primerima izvođenja, policiklični heteroarili imaju 2-3 prstena. U određenim primerima izvođenja, poželjni policiklični heteroarili imaju dva ciklična prstena u kojima su oba prstena aromatična. U određenim primerima izvođenja, svaki prsten policiklusa sadrži od 3 do 10 atoma u prstenu, poželjno od 5 do 7 atoma u prstenu. Na primer, heteroaril grupe uključuju, ali nisu ograničene na pirol, furan, tiofen, imidazol, oksazol, tiazol, pirazol, piridin, pirazin, piridazin, hinolin, pirimidin, indolizin, indol, indazol, benzimidazol, benzotiazol, benzofuran, benzotiofen, cinolin, ftalazin, hinazolin, karbazol, fenoksazin, hinolin, purin i slično. U nekim primerima izvođenja, heteroaril je aromatična grupa sa jednim prstenom. U nekim primerima izvođenja, heteroaril je aromatična grupa sa dva prstena. U nekim primerima izvođenja, heteroaril je aromatična grupa sa tri prstena.
Heterociklične ili heteroaril grupe mogu biti vezane za ugljenik (vezane za ugljenik) ili za azot (vezane za azot) gde je to moguće. Kao primer, a ne kao ograničenje, heterociklusi ili heteroarili vezani ugljenikom vezani su na poziciji 2, 3, 4, 5 ili 6 piridina, poziciji 3, 4, 5 ili 6 piridazina, poziciji 2, 4, 5 ili 6 pirimidina, poziciji 2, 3, 5 ili 6 pirazina, poziciji 2, 3, 4 ili 5 furana, tetrahidrofurana, tiofurana, tiofena, pirola ili tetrahidropirola, poziciji 2, 4 ili 5 oksazola, imidazola ili tiazola, poziciji 3, 4 ili 5 izoksazola, pirazola ili izotiazola, poziciji 2 ili 3 aziridina, poziciji 2, 3 ili 4 azetidina, poziciju 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 hinolina ili poziciji 1, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 izohinolina.
Kao primer, a ne ograničenje, heterociklusi ili heteroarili vezani azotom su vezani na poziciji 1 aziridina, azetidina, pirola, pirolidina, 2-pirolina, 3-pirolina, imidazola, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazola, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indola, indolina, 1H-indazola, poziciji 2 izoindola ili izoindolina, poziciji 4 morfolina i poziciji 9 karbazola ili O-karbolina.
Heteroatomi prisutni u heteroarilu ili heterociklilu uključuju oksidovane oblike kao što su NO, SO i SO2.
U nekim primerima izvođenja, heteroaromatični prsten je 5- do 18-člani prsten.
Termin "halo" ili "halogen" odnosi se na fluor (F), hlor (Cl), brom (Br) ili jod (I). U nekim primerima izvođenja, halogen je fluor. U nekim primerima izvođenja, halogen je hlor. U nekim primerima izvođenja, halogen je brom. U nekim primerima izvođenja, halogen je jod. Kako se ovde koristi, termin "haloalkil" se odnosi na alkil, kako je ovde definisan, koji je supstituisan sa jednom ili više halo grupa kao što su ovde definisane. Haloalkil može biti monohaloalkil, dihaloalkil ili polihaloalkil. Monohaloalkil može imati jedan fluoro, hloro, bromo ili jodo supstituent. Dihaloalkil ili polihaloalkil mogu biti supstituisani sa dva ili više istih halo atoma ili kombinacijom različitih halo grupa. Primeri haloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, dihlorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, heptafluoropropil, difluorohlorometil, dihlorofluorometil, difluoroetil,
2
diflosoropropil, dihloropropiletil i dihloroetil.
Termin "alkoksi" koji se ovde koristi odnosi se na alkil-O-, gde je alkil definisan gore. Primeri alkoksi uključuju, bez ograničenja, metoksi, etoksi, propoksi, 2-propoksi, butoksi, terc-butoksi, pentiloksi, heksiloksi i slično.
Alkil, haloalkil, alkoksi, alkenil, alkinil, ciklični alkil, ciklični alkenil, ciklični alkinil, karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril gore opisani mogu biti izborno supstituisani sa jednim ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6 ili više) supstituenata.
Osim ako nije posebno navedeno kao "nesupstituisano", podrazumeva se da reference na hemijske grupe ovde takođe uključuju supstituisane varijante. Na primer, referenca na "alkil" grupu ili deo implicitno uključuje i supstituisane i nesupstituisane varijante. Primeri supstituenata na hemijskim delovima uključuju, ali nisu ograničeni na, halogen, hidroksil, karbonil (kao što je karboksil, alkoksikarbonil, formil ili acil), tiokarbonil (kao što je tioestar, tioacetat ili tioformat), alkoksil, alkiltio, aciloksi, fosforil, fosfat, fosfonat, amino, amido, amidin, imin, cijano, nitro, azido, sulhidril, alkiltio, sulfat, sulfonat, sulfamoil, sulfonamido, sulfonil, heterociklil, aralkil ili aril ili heteroaril deo.
„Izborni“ ili „izborno“ znači da se naknadno opisana okolnost može, ali i ne mora desiti, tako da prijava uključuje slučajeve u kojima se ta okolnost javlja i slučajeve u kojima se ne javlja. Na primer, izraz "izborno supstituisana" znači da nevodonični supstituent može ili ne mora biti prisutan na datom atomu, i, prema tome, prijava uključuje strukture u kojima je prisutan nevodonični supstituent i strukture u kojima nije prisutan supstituent koji nije vodonik.
Termin "supstituisan" se odnosi na delove koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više atoma ugljenika, azota, kiseonika ili sumpora. Podrazumeva se da "supstitucija" ili "supstituisan sa" uključuje implicitni uslov da je takva supstitucija u skladu sa dozvoljenom valencom supstituisanog atoma i supstituenta, i da supstitucija rezultira stabilnim jedinjenjem, npr., koje spontano ne podleže transformaciji kao što je preuređivanje, ciklizacija, eliminacija, itd. Kako se ovde koristi, termin "supstituisan" podrazumeva sve dozvoljene supstituente organskih jedinjenja. U širokom aspektu, dozvoljeni supstituenti uključuju aciklične i ciklične, razgranate i nerazgranate, karbociklične i heterociklične, aromatične i nearomatične supstituente organskih jedinjenja. Dozvoljeni supstituenti mogu biti jedan ili više istih ili različitih za odgovarajuća organska jedinjenja. Za potrebe pronalaska, heteroatomi kao što je azot mogu imati vodonične supstituente i/ili bilo koje dozvoljene supstituente organskih jedinjenja koja su ovde opisana koja zadovoljavaju valence heteroatoma. Supstituenti mogu uključivati bilo koje supstituente koji su ovde opisani, na primer, halogen, hidroksil, karbonil (kao što je karboksil, alkoksikarbonil, formil ili acil), tiokarbonil (kao što je tioestar, tioacetat ili tioformat), alkoksil, alkiltio, aciloksi, fosforil, fosfat, fosfonat, amino, amido, amidin, imin, cijano, nitro, azido, sulfhidril, alkiltio, sulfat, sulfonat, sulfamoil, sulfonamido, sulfonil, heterociklil, aralkil, ili aromatični ili heteroaromatični deo. Za ilustraciju, monofluoroalkil je alkil supstituisan sa fluoro supstituentom i difluoroalkil je alkil supstituisan sa dva fluoro supstituenta. Treba imati na umu da ako postoji više od jedne supstitucije na supstituentu, svaki nevodonični supstituent može biti identičan ili različit (osim ako nije drugačije navedeno). Ako je ugljenik supstituenta opisan kao izborno supstituisan sa jednim ili više sa spiska supstituenata, jedan ili više vodonika na ugljeniku (u meri u kojoj ih ima) mogu odvojeno i/ili zajedno biti zamenjeni nezavisno izabranim izbornim supstituentom. Ako je azot supstituenta opisan kao izborno supstituisan sa jednim ili više sa spiska supstituenata, jedan ili više vodonika na azotu (u meri u kojoj ih ima) svaki može biti zamenjen nezavisno izabranim izbornim supstituentom. Jedan ilustrativni supstituent može biti prikazan kao -NR'R", pri čemu R' i R" zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da formiraju heterociklični prsten. Heterociklični prsten formiran od R' i R" zajedno sa atomom azota za koji su vezani može biti delimično ili potpuno zasićen. U nekim primerima izvođenja, heterociklični prsten se sastoji od 3 do 7 atoma. U drugim primerima izvođenja, heterociklični prsten je izabran od pirolila, imidazolila, pirazolila, triazolila, tetrazolila, izoksazolila, piridila i tiazolila.
Ova specifikacija koristi termine "supstituent", "radikal" i "grupa" naizmenično.
Ako je grupa supstituenata zajedno opisana kao izborno supstituisana jednim ili više sa spiska supstituenata, grupa može uključivati: (1) supstituente koji se ne mogu supstituisati, (2) supstituente koji se mogu supstituisati koji nisu supstituisani izbornim supstituentima i/ili (3) supstituenti koji se mogu supstituisati koji su supstituisani sa jednim ili više izbornih supstituenata.
Ako je supstituent opisan kao izborno supstituisan sa do određenog broja nevodonikovih supstituenata, taj supstituent može biti ili (1) nesupstituisan; ili (2) supstituisan sa do tog određenog broja nevodonikovih supstituenata ili sa maksimalnim brojem pozicija koje se mogu supstituisati na supstituentu, šta god je manje. Tako, na primer, ako je supstituent opisan kao heteroaril izborno supstituisan sa do 3 nevodonična supstituenta, onda bi svaki heteroaril sa manje od 3 pozicije koje se mogu supstituisati bio izborno supstituisan sa najviše onoliko nevodonikovih supstituenata koliko heteroaril ima pozicija koje se mogu supstituisati. Takvi supstituenti, u neograničavajućim primerima, mogu biti izabrani od linearnog, razgranatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, arila, heteroarila, heterociklila, halogena, guanidinijuma [-NH(C=NH)NH2], -OR<100>, NR<101>R<102>, -NO2, -NR<101>COR<102>, -SR<100>, sulfoksida predstavljenog sa -SOR<101>, sulfona predstavljenog sa -
2
SO2R<101>, sulfonata -SO3M, sulfata -OSO3M, sulfonamida predstavljenog sa - SO2NR<101>R<102>, cijano, azido, -COR<101>, -OCOR<101>, -OCONR<101>R<102>i jedinicom polietilen glikola (-OCH2CH2)nR<101>pri čemu M je H ili katjon (kao što je Na<+>ili K<+>); R<101>, R<102>i R<103>su svaki nezavisno izabrani od H, linearnog, razgranatog ili cikličnog alkila, alkenila ili alkinila koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, polietilen glikol jedinice (-OCH2CH2)n-R<104>pri čemu je n ceo broj od 1 do 24, arila koji ima od 6 do 10 atoma ugljenika, heterocikličnog prstena koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika i heteroarila koji ima 5 do 10 atoma ugljenika; i R<104>je H ili linearni ili razgranati alkil sa 1 do 4 atoma ugljenika, pri čemu alkil, alkenil, alkinil, aril, heteroaril i heterociklil u grupama predstavljenim sa R<100>, R<101>, R<102>, R<103>i R<104>su izborno supstituisani sa jednim ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6 ili više) supstituenata nezavisno izabranih od halogena, -OH, -CN, -NO2i nesupstituisanog linearnog ili razgranatog alkila sa 1 do 4 atoma ugljenika. Poželjno, gore opisani supstituenti za izborno supstituisani alkil, alkenil, alkinil, ciklični alkil, ciklični alkenil, ciklični alkinil, karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril uključuju halogen, -CN, -NR<102>R<103>, -CF3, -OR<101>, aril, heteroaril, heterociklil, -SR<101>, -SOR<101>, -SO2R<101>i -SO3M. Za sulfokside, predstavljene sa -SOR<101>kao što je naznačeno u prethodnom pasusu, oba optička izomera (R i S konfiguracije na atomu sumpora sulfoksidne grupe) su obuhvaćena.
Broj atoma ugljenika u grupi se ovde može navesti prefiksom „Cx-xx“ ili „Cx-Cxx", gde su x i xx celi brojevi. Na primer, "C1-4alkil" ili "C1-C4 alkil" je alkil grupa koja ima od 1 do 4 atoma ugljenika.
Termin "jedinjenje" ili "citotoksično jedinjenje", "citotoksični dimer" i "citotoksično dimerno jedinjenje" se koriste naizmenično. Oni su namenjeni da uključuju jedinjenja čija je struktura ili formula ili bilo koji njihov derivat otkriven u ovom pronalasku. Termin takođe uključuje, stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere, solvate, metabolite, soli (npr., farmaceutski prihvatljive soli) i prolekove, i soli prolekova jedinjenja svih formula otkrivenih u ovom pronalasku. Termin takođe uključuje sve solvate, hidrate i polimorfe bilo kog od prethodno navedenih. Specifično navođenje „stereoizomera“, „geometrijskih izomera“, „tautomera“, „solvata“, „metabolita“, „soli“, „proleka“, „soli proleka“, „konjugata“, „soli konjugata“, „solvata“, "hidrata" ili "polimorfa" u određenim aspektima pronalaska opisanih u ovoj prijavi neće se tumačiti kao nameravano izostavljanje ovih oblika u drugim aspektima pronalaska gde se termin "jedinjenje" koristi bez navođenja ovih drugih oblika.
Termin "konjugat" kako se ovde koristi odnosi se na ovde opisano jedinjenje ili njegov derivat koji je vezan za sredstvo koje se vezuje za ćeliju.
Termin "hiralni" se odnosi na molekule koji imaju svojstvo nepoklapanja partnera u ogledalu, dok se izraz "ahiralni" odnosi na molekule koji se mogu preklopiti na svog partnera u ogledalu.
2
Termin "stereoizomer" se odnosi na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku konstituciju i povezanost, ali različite orijentacije svojih atoma u prostoru koji se ne mogu međusobno konvertovati rotacijom oko pojedinačnih veza.
Termin "dijastereomer" se odnosi na stereoizomer sa dva ili više hiralnih centara i čiji molekuli nisu odraz u ogledu jedan drugog. Dijastereomeri imaju različite fizičke osobine, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralna svojstva i reaktivnosti. Smeše dijastereomera se mogu odvojiti pod analitičkim postupcima visoke rezolucije kao što su kristalizacija, elektroforeza i hromatografija.
Termin "enantiomeri" se odnosi na dva stereoizomera jedinjenja koji su jedan od drugog odraz u ogledalu koji se ne može preklapati.
Stereohemijske definicije i konvencije koje se ovde koriste uglavnom slede S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Jedinjenja pronalaska mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre, i stoga postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Predviđeno je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja pronalaska, uključujući, ali ne ograničavajući se na, dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove smeše, kao što su racemske smeše, čine deo ovog pronalaska. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim oblicima, tj., imaju sposobnost da rotiraju ravan polarizovane svetlosti. U opisu optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L, ili R i S, se koriste za označavanje apsolutne konfiguracije molekula oko njegovog(ih) hiralnog(ih) centra(centara). Prefiksi d i l ili (+) i (-) se koriste za označavanje znaka rotacije ravni polarizovane svetlosti od strane jedinjenja, pri čemu (-) ili 1 znači da je jedinjenje levorotirajuće. Jedinjenje sa prefiksom (+) ili d je desnorotaciono. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što su međusobni odraz u ogledalu. Specifični stereoizomer se takođe može nazvati enantiomerom i smeša takvih izomera se često naziva enantiomerna smeša. Smeša enantiomera 50:50 se naziva racemska smeša ili racemat, koja može da se javi tamo gde nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti u hemijskoj reakciji ili postupku. Termini "racemska smeša" i "racemat" odnose se na ekvimolarnu smešu dve enantiomerne vrste, bez optičke aktivnosti.
Termin "tautomer" ili "tautomerni oblik" odnosi se na strukturne izomere različitih energija koji su međusobno konvertibilni preko niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije putem migracije protona, kao što su keto-enol i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije reorganizacijom nekih vezivnih elektrona.
2
Termin "farmaceutski prihvatljiva so" kako se ovde koristi, odnosi se na farmaceutski prihvatljive organske ili neorganske soli jedinjenja pronalaska. Primeri soli uključuju, ali nisu ograničeni na, sulfat, citrat, acetat, oksalat, hlorid, bromid, jodid, nitrat, bisulfat, fosfat, kiseli fosfat, izonikotinat, laktat, salicilat, kiseli citrat, tartarat, oleat, tanat, pantonatenat, bitartrat, askorbat, sukcinat, maleat, gentizinat, fumarat, glukonat, glukuronat, saharat, format, benzoat, glutamat, metansulfonat "mezilat", etansulfonat, benzensulfonat, p-toluensulfonat, pamoat (tj. 1,1'-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat)) soli, soli alkalnih metala (npr., natrijuma i kalijuma), soli zemnoalkalnih metala (npr., magnezijuma) i amonijumove soli. Farmaceutski prihvatljiva so može uključiti uključivanje drugog molekula kao što je acetat jon, sukcinat jon ili drugi kontra jon. Kontra jon može biti bilo koji organski ili neorganski deo koji stabilizuje naelektrisanje matičnog jedinjenja. Pored toga, farmaceutski prihvatljiva so može imati više od jednog naelektrisanog atoma u svojoj strukturi. Slučajevi gde su višestruki naelektrisani atomi deo farmaceutski prihvatljive soli mogu imati više kontra jona. Dakle, farmaceutski prihvatljiva so može imati jedan ili više naelektrisanih atoma i/ili jedan ili više kontra jona.
Ako je jedinjenje pronalaska baza, željena farmaceutski prihvatljiva so se može pripremiti bilo kojim pogodnim postupkom dostupnim u struci, na primer, tretmanom slobodne baze sa neorganskom kiselinom, kao što je hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, metansulfonska kiselina, fosforna kiselina i slično, ili sa organskom kiselinom, kao što su sirćetna kiselina, maleinska kiselina, ćilibarna kiselina, bademova kiselina, fumarna kiselina, malonska kiselina, pirogrožđana kiselina, oksalna kiselina, glikolna kiselina, salicilna kiselina, piranozidil kiselina, kao što je glukuronska kiselina ili galakturonska kiselina, alfa hidroksi kiselina, kao što je limunska kiselina ili vinska kiselina, aminokiselina, kao što je asparaginska kiselina ili glutaminska kiselina, aromatična kiselina, kao što je benzojeva kiselina ili cimetna kiselina, sulfonska kiselina, kao što je ptoluensulfonska kiselina ili etansulfonska kiselina, ili slično.
Ako je jedinjenje pronalaska kiselina, željena farmaceutski prihvatljiva so se može pripremiti bilo kojim pogodnim postupkom, na primer, tretmanom slobodne kiseline sa neorganskom ili organskom bazom, kao što je amin (primarni, sekundarni ili tercijarni), hidroksid alkalnog metala ili hidroksid zemnoalkalnog metala, ili slično. Ilustrativni primeri pogodnih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, organske soli izvedene iz aminokiselina, kao što su glicin i arginin, amonijak, primarni, sekundarni i tercijarni amini, i ciklični amini, kao što su piperidin, morfolin i piperazin, i neorganske soli dobijene od natrijuma, kalcijuma, kalijuma, magnezijuma, mangana, gvožđa, bakra, cinka, aluminijuma i litijuma.
Kako se ovde koristi, termin "solvat" označava jedinjenje koje dalje uključuje stehiometrijsku
2
ili nestehiometrijsku količinu rastvarača kao što su voda, izopropanol, aceton, etanol, metanol, DMSO, etil acetat, sirćetna kiselina i etanolamin dihlorometan, 2-propanol, ili slično, vezan nekovalentnim intermolekularnim silama. Solvati ili hidrati jedinjenja se lako pripremaju dodavanjem najmanje jednog molarnog ekvivalenta hidroksilnog rastvarača kao što je metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol ili voda jedinjenju da bi se došlo do solvatacije ili hidratacije iminskog dela.
Izraz "farmaceutski prihvatljiv" označava da supstanca ili kompozicija moraju biti kompatibilni hemijski i/ili toksikološki, sa drugim sastojcima koji sadrže formulaciju, i/ili sisarom koji se njime leči.
Termin "odlazeća grupa" odnosi se na grupu naelektrisanog ili nenaelektrisanog dela koji odlazi tokom zamene ili izmeštanja. Takve odlazeće grupe su dobro poznate u tehnici i uključuju, ali nisu ograničene na, halogene, estre, alkoksi, hidroksil, tozilate, triflate, mezilate, nitrile, azide, karbamat, disulfide, tioestre, tioetre i diazonijumova jedinjenja.
Termin "reaktivni estar" se odnosi na estar koji ima odlazeću grupu koja se lako može zameniti i koja može lako da reaguje sa aminskom grupom da bi formirala amidnu vezu. Primeri reaktivnih estara uključuju, ali nisu ograničeni na, N-hidroksisukcinimid estar, N-hidroksi sulfosukcinimid estar, nitrofenil (npr.2 ili 4-nitrofenil) estar, dinitrofenil (npr., 2,4-dinitrofenil) sulfoetilsteril (npr. 4 sulfo-2,3,5,6-tetrafluorofenil) estar ili pentafluorofenil estar.
Termin "reaktivna grupa" odnosi se na grupu koja može da reaguje sa delom koji se nalazi na drugom molekulu, kao što je sredstvo koje se vezuje za ćeliju ili citotoksično jedinjenje, da bi formirala kovalentnu vezu. Reaktivna grupa uključuje, ali nije ograničena na, amin reaktivnu grupu i tiol reaktivnu grupu.
Termin "amin reaktivna grupa" odnosi se na grupu koja može da reaguje sa amino grupom da bi formirala kovalentnu vezu. Primeri amino reaktivnih grupa uključuju, ali nisu ograničene na, reaktivne estarske grupe, acil halogenide, sulfonil halogenid, imidoestar ili reaktivne tioestarske grupe. U određenim primerima izvođenja, amin reaktivna grupa je reaktivna estarska grupa. U jednom primeru izvođenja, amin reaktivna grupa je N-hidroksisukcinimid estar ili N-hidroksi sulfo-sukcinimid estar.
Termin "tiol-reaktivna grupa" odnosi se na grupu koja može da reaguje sa tiol (-SH) grupom da bi formirala kovalentnu vezu. Primeri grupa koje reaguju na tiol uključuju, ali nisu ograničene na, maleimid, haloacetil, aloacetamid, vinil sulfon, vinil sulfonamid ili vinil piridin. U jednom primeru izvođenja, tiol-reaktivna grupa je maleimid.
Termin "bifunkcionalno unakrsno vezujuće sredstvo", "bifunkcionalni linker" ili "unakrsno vezujuća sredstva" odnosi se na sredstva za modifikovanje koja poseduju dve reaktivne grupe;
2
od kojih je jedna sposobna da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju, dok druga reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem da bi povezala dva dela zajedno. Takva bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva su dobro poznata u tehnici (videti, npr. Isalm and Dent in Bioconjugation chapter 5, p218-363, Groves Dictionaries Inc. New York, 1999). Na primer, bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja omogućavaju povezivanje preko tioetarske veze uključuju N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (SMCC) za uvođenje maleimido grupa, ili sa N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoatom (SIAB) za uvođenje jodoacetil grupa. Druga bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja uvode maleimido grupe ili haloacetil grupe na sredstvo koje se vezuje za ćeliju su dobro poznata u tehnici (videti US Patentne prijave 2008/0050310, 20050169933, dostupna iz Pierce Biotechnology Inc. P.O. Box 117, Rockland, IL 61105, USA) i uključuju, ali ne ograničavajući se na, bismaleimidopolietilenglikol (BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(βmaleimidopropiloksi)sukcinimid estar (BMPS), N-sukcinimidil estar γ-maleimidobuterne kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estar ε-maleimidokaproinske kiseline (EMCS), 5-maleimidovalerijansku kiselinu, NHS, HBVS, N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproat), koji je "dugolančani" analog SMCC (LC-SMCC), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (MBS), hidrazid 4-(4-N-maleimidofenil)-buterne kiseline ili HCl so (MPBH), N-sukcinimidil 3-(bromacetamido)propionat (SBAP), N-sukcinimidil jodoacetat (SIA), N-sukcinimidil estar κ-maleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirat (SMPB), sukcinimidil-6-(βmaleimidopropionamido)heksanoat (SMPH), sukcinimidil-(4-vinilsulfonil)benzoat (SVSB), ditiobis-maleimidoetan (DTME), 1,4-bis-maleimidobutan (BMB), 1,4 bismaleimidil-2,3-dihidroksibutan (BMDB), bis-maleimidoheksan (BMH), bismaleimidoetan (BMOE), sulfosukcinimidil 4-(N-maleimido-metil)cikloheksan-1-karboksilat (sulfo-SMCC), sulfosukcinimidil(4-jodo-acetil)aminobenzoat (sulfo-SIAB), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisulfosukcinimid estar (sulfo-MBS), N-(γ-maleimidobutriloksi)sulfosukcinimid estar (sulfo-GMBS), N-(ε-maleimidokaproiloksi)sulfosukcimido estar (sulfo-EMCS), N-(κmaleimidoundekanoiloksi)sulfosukcinimid estar (sulfo-KMUS) i sulfosukcinimidil 4-(pmaleimidofenil)butirat (sulfo-SMPB).
Heterobifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva su bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja imaju dve različite reaktivne grupe. Heterobifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja sadrže kako amin-reaktivnu N-hidroksisukcinimid grupu (NHS grupa) tako i karbonil-reaktivnu hidrazinsku grupu se takođe mogu koristiti za vezivanje citotoksičnih jedinjenja koja su ovde opisana sa sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo). Primeri takvih komercijalno dostupnih heterobifunkcionalnih unakrsno vezujućih sredstava uključuju sukcinimidil 6-hidrazinonikotinamid aceton hidrazon (SANH), sukcinimidil 4-hidrazidotereftalat hidrohlorid (SHTH) i sukcinimidil hidrazinijum nikotinat hidrohlorid (SHNH). Konjugati koji nose vezu koja je osetljiva na kiselinu mogu se takođe pripremiti korišćenjem derivata benzodiazepina koji sadrži hidrazin iz ovog pronalaska. Primeri bifunkcionalnih unakrsno vezujućih sredstava koji se mogu koristiti uključuju sukcinimidil-pformil benzoat (SFB) i sukcinimidil-p-formilfenoksiacetat (SFPA).
Bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja omogućavaju vezivanje sredstva koji se vezuje za ćeliju sa citotoksičnim jedinjenjima preko disulfidnih veza su poznati u tehnici i uključuju N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio)propionat (SPDP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)pentanoat (SPP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)butanoat (SPDB), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)2-sulfo butanoat (sulfo-SPDB) za uvođenje ditiopiridil grupa. Druga bifunkcionalna unakrsno vezujuća sredstva koja se mogu koristiti za uvođenje disulfidnih grupa su poznata u tehnici i otkrivena su u U.S. Patentima 6,913,748, 6,716,821 i US Patentnim objavama 20090274713 i 20100129314. Alternativno, mogu se takođe koristiti unakrsno vezujuća sredstva kao što su 2-iminotiolan, homocistein tiolakton ili anhidrid S-acetilćilibarne kiseline koji uvode tiol grupe.
Termin "linker", "linker deo" ili "vezujuća grupa" kako je ovde definisan odnosi se na deo koji povezuje dve grupe, kao što je sredstvo koje se vezuje za ćeliju i citotoksično jedinjenje, zajedno. Tipično, linker je suštinski inertan pod uslovima za koje su dve grupe koje vezuje vezane. Bifunkcionalno unakrsno vezujuće sredstvo može da sadrži dve reaktivne grupe, po jednu na svakom kraju linker dela, tako da jedna reaktivna grupa može prvo da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem da bi se dobilo jedinjenje koje nosi linker deo i drugu reaktivnu grupu, koja zatim može da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju. Alternativno, jedan kraj bifunkcionalnog unakrsno vezujućeg sredstva može prvo da reaguje sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju da bi se dobilo sredstvo koje se vezuje za ćeliju koji nosi linker deo i drugu reaktivnu grupu, koja zatim može da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem. Linker deo može da sadrži hemijsku vezu koja omogućava oslobađanje citotoksičnog dela na određenom mestu. Pogodne hemijske veze su dobro poznate u tehnici i uključuju disulfidne veze, tioetarske veze, veze osetljive na kiselinu, veze osetljive na svetlost, veze osetljive na peptidazu i veze osetljive na esterazu (videti npr., US Patente 5,208,020; 5,475,092; 6,441,163; 6,716,821; 6,913,748; 7,276,497; 7,276,499; 7,368,565; 7,388,026 i 7,414,073). Poželjne su disulfidne veze, veze osetljive na tioetar i peptidazu. Drugi linkeri koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju linkere koji se ne mogu odcepiti, kao što su oni detaljno opisani u U.S. objavi broj
1
20050169933, ili naelektrisani linkeri ili hidrofilni linkeri i opisani su u US 2009/0274713, US 2010/01293140 i WO 2009/134976.
Termin "samozapaljivi linker" odnosi se na linker koji će omogućiti oslobađanje citotoksičnog jedinjenja kada se aktivira udaljeno mesto. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži paminobenzil jedinicu. U nekim takvim primerima izvođenja, p-aminobenzil alkohol je vezan za jedinicu aminokiseline preko amidne veze i karbamat, metilkarbamat ili karbonat se stvara između benzil alkohola i leka (Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103). U nekim primerima izvođenja, linker sadrži p-aminobenziloksikarbonil (PAB). Drugi primeri samozapaljivih linkera uključuju, ali nisu ograničeni na, aromatična jedinjenja koja su elektronski slična PAB grupi, kao što su derivati 2-aminoimidazol-5-metanola (U.S. Pat. br.
7,375,078; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) i orto- ili paraaminobenzilacetali. U nekim primerima izvođenja mogu se koristiti spejseri koji prolaze kroz ciklizaciju nakon hidrolize amidne veze, kao što su supstituisani i nesupstituisani amidi 4-aminobuterne kiseline (Rodrigues et al (1995) Chemistry Biology 2:223), odgovarajuće supstituisani biciklo[2.2.1] i biciklo[2.2.2] sistemi prstenova (Storm et al (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815) i amidi 2-aminofenilpropionske kiseline (Amsberry, et al (1990) J. Org. Chem.
55:5867). Veza leka sa α-ugljenikom ostatka glicina je još jedan primer samozapaljivog linkera koji može biti koristan u ADC (Kingsbury et al (1984) J. Med. Chem.27:1447)
Termin "aminokiselina" se odnosi na aminokiseline koje se javljaju u prirodi ili aminokiseline koje se ne pojavljuju u prirodi. U nekim primerima izvođenja, aminokiselina je predstavljena sa NH2-C(R<aa'>R<aa>)-C(=O)OH, pri čemu R<aa>i R<aa'>su svaki nezavisno H, izborno supstituisani linearni, razgranati ili ciklični alkil, alkenil ili alkinil sa 1 do 10 atoma ugljenika, aril, heteroaril ili heterociklil ili R<aa>i N-terminalni atom azota mogu zajedno da formiraju heterociklični prsten (npr., kao u prolinu). Termin "aminokiselinski ostatak" odnosi se na odgovarajući ostatak kada se jedan atom vodonika ukloni sa aminskog i/ili karboksi kraja aminokiseline, kao što je -NH-C(R<aa'>R<aa>)-C(=O)-.
Termin "peptid" se odnosi na kratke lance monomera aminokiselina povezanih peptidnim (amidnim) vezama. U nekim primerima izvođenja, peptidi sadrže 2 do 20 aminokiselinskih ostataka. U drugim primerima izvođenja, peptidi sadrže 2 do 10 ili 2 do 8 aminokiselinskih ostataka. U još drugim primerima izvođenja, peptidi sadrže 2 do 5 aminokiselinskih ostataka. Kako se ovde koristi, kada je peptid deo citotoksičnog sredstva ili linkera koji je ovde opisan, predstavljen specifičnom aminokiselinskom sekvencom, peptid se može povezati sa ostatkom citotoksičnog sredstva ili linkera u oba smera.
Termin "katjon" se odnosi na jon sa pozitivnim naelektrisanjem. Katjon može biti
2
monovalentan (npr., Na<+>, K<+>, itd.), dvovalentni (npr., Ca<2+>, Mg<2+>, itd.) ili viševalentan (npr., Al<3+>itd.). Poželjno, katjon je monovalentan.
Termin "antitelo" označava molekul imunoglobulina koji prepoznaje i specifično se vezuje za ciljno mesto, kao što je protein, polipeptid, peptid, ugljeni hidrat, polinukleotid, lipid ili kombinacije prethodno navedenog preko najmanje jednog mesta za prepoznavanje antigena unutar varijabilnog regiona molekula imunoglobulina. Kako se ovde koristi, termin "antitelo" obuhvata intaktna poliklonska antitela, intaktna monoklonska antitela, fragmente antitela (kao što su Fab, Fab', F(ab')2i Fv fragmenti), jednolančani Fv (scFv) mutanti, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela, biparatopska antitela, itd.), multivalentna antitela (npr. trovalentna, četvorovalentna, itd. antitela koja imaju tri, četiri ili više mesta za vezivanje antigena) himerna antitela, humanizovana antitela, humana antitela, fuzione proteine koji sadrže deo antitela za određivanje antigena i bilo koji drugi modifikovani molekul imunoglobulina koji sadrži mesto za prepoznavanje antigena sve dok antitela pokazuju željenu biološku aktivnost. Antitelo može biti bilo koje od pet glavnih klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, ili njihovih podklasa (izotipova) (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl i IgA2), na osnovu identiteta njihovih konstantnih domena teškog lanca koji se nazivaju alfa, delta, epsilon, gama i mu, respektivno. Različite klase imunoglobulina imaju različite i dobro poznate strukture podjedinica i trodimenzionalne konfiguracije. Antitela mogu biti gola ili konjugovana sa drugim molekulima kao što su toksini, radioizotopi, itd. Kako se ovde koristi, "antitelo" takođe uključuje antitelo koje se može aktivirati (npr., protelo). Koje se može aktivirati označava da antitelo koje se može aktivirati, ispoljava prvi nivo vezivanja za ciljno mesto kada je antitelo koje se može aktivirati, u inhibiranom, maskiranom, netaknutom ili neodcepljenom stanju (tj. prva konformacija), i drugi nivo vezivanja za ciljno mesto u neinhibiranom, demaskiranom i/ili odcepljenom stanju (tj. druga konformacija), gde je drugi nivo vezivanja za ciljno mesto veći od prvog nivoa vezivanja.
U nekim primerima izvođenja, antitelo je antitelo koje se ne pojavljuje u prirodi. U nekim primerima izvođenja, antitelo je prečišćeno od prirodnih komponenti. U nekim primerima izvođenja, antitelo se proizvodi rekombinantno. U nekim primerima izvođenja, antitelo je proizvedeno hibridomom.
Termin "fragment antitela" se odnosi na deo intaktnog antitela i odnosi se na varijabilne regione koji određuju antigene intaktnog antitela. Primeri fragmenata antitela uključuju, ali nisu ograničeni na, Fab, Fab', F(ab')2, i Fvfragmente, linearna antitela, jednolančana antitela i multispecifična antitela (npr., bispecifična, biparatopna) formirana od fragmenata antitela. Termin "fragment koji se vezuje za antigen" antitela obuhvata jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost specifičnog vezivanja za antigen. Pokazalo se da antigen-vezujuću funkciju antitela mogu obavljati određeni fragmenti antitela pune dužine. Primeri vezujućih fragmenata obuhvaćenih terminom "fragment koji vezuje antigen" antitela uključuju (bez ograničenja): (i) Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CL, i CH1domena (npr., antitelo digestirano papainom daje tri fragmenta: dva Fab fragmenta koji se vezuju za antigen i jedan Fc fragment koji ne vezuje antigen); (ii) jednolančani Fab (scFab), fragment koji se sastoji od VL, VH, CL, i CH1domena, pri čemu CLi VHdomeni su povezani preko linker peptida; (iii) F(ab')2fragment, bivalentni fragment koji se sastoji od dva Fab fragmenta povezana disulfidnim mostom u predelu zgloba (npr., antitelo koje se digestira pepsinom daje dva fragmenta: dvovalentni antigen koji vezuje F(ab')2fragment, i pFc' fragment koji ne vezuje antigen) i njegovu srodnu F(ab') monovalentnu jedinicu; (iv) Fdfragment koji se sastoji od VHi CH1domena (tj., onaj deo teškog lanca koji je uključen u Fab); (v) Fvfragment koji se sastoji od VLi VHdomena jednog kraka antitela, i srodnog disulfidno vezanog Fv; (vi) fragment dAb (domenskog antitela) ili sdAb (antitela sa jednim domenom) (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989), koji se sastoji od VHdomena; (vii) izolovani region koji određuje komplementarnost (CDR); (viii) varijabilni fragment jednog lanca (scFv), fragment koji se sastoji od VHi VLdomena, povezan preko linker peptida; i (ix) tetravalentno antitelo, koje može uključivati različite formate (strukture), pri čemu antitelo sadrži 4 mesta za vezivanje antigena. Termin "monoklonsko antitelo" odnosi se na homogenu populaciju antitela koja je uključena u visoko specifično prepoznavanje i vezivanje jedne antigene determinante, ili epitopa. Ovo je u suprotnosti sa poliklonskim antitelima koja tipično uključuju različita antitela usmerena protiv različitih antigenskih determinanti. Termin "monoklonsko antitelo" obuhvata i netaknuta i monoklonska antitela pune dužine, kao i fragmente antitela (kao što su Fab, Fab', F(ab')2, Fv), jednolančane (scFv) mutante, fuzione proteine koji sadrže deo antitela i bilo koji drugi modifikovani molekul imunoglobulina koji sadrži mesto za prepoznavanje antigena. Dalje, "monoklonsko antitelo" se odnosi na takva antitela napravljena na bilo koji broj načina uključujući, ali ne ograničavajući se na hibridom, selekciju faga, rekombinantnu ekspresiju i transgene životinje.
Termin "humanizovano antitelo" odnosi se na oblike ne-humanih (npr., mišjih) antitela koja su specifični imunoglobulinski lanci, himerni imunoglobulini ili njihovi fragmenti koji sadrže minimalan broj nehumanih (npr., mišjih) sekvenci. Tipično, humanizovana antitela su humani imunoglobulini u kojima su ostaci iz regiona koji određuje komplementarnost (CDR) zamenjeni ostacima iz CDR nehumane vrste (npr., miš, pacov, zec, hrčak) koji imaju željenu specifičnost, afinitet i sposobnost (Jones et al., Nature 321:522-525, 1986; Riechmann et al., Nature 332:323-
4
327, 1988; Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536, 1988).
U nekim slučajevima, ostaci Fvokvirnog regiona (FR) humanog imunoglobulina su zamenjeni odgovarajućim ostacima u antitelu ne-humane vrste koje ima željenu specifičnost, afinitet i sposobnost. Humanizovano antitelo se može dalje modifikovati supstitucijom dodatnih ostataka bilo u Fvokvirnog regiona i/ili unutar zamenjenih ostataka koji nisu humani da bi se poboljšala i optimizovala specifičnost, afinitet i/ili sposobnost antitela. Uopšteno govoreći, humanizovano antitelo će sadržati uglavnom sve od najmanje jednog, a tipično dva ili tri, varijabilna domena koji sadrže sve ili suštinski sve CDR regione koji odgovaraju ne-humanom imunoglobulinu, dok svi ili suštinski svi FR regioni su oni od konsenzus sekvence humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo takođe može da sadrži bar deo konstantnog regiona ili domena imunoglobulina (Fc), tipično za humani imunoglobulin. Primeri postupaka koji se koriste za stvaranje humanizovanih antitela su opisani u U.S. patentima 5,225,539 i 5,639,641, Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91(3):969-973, 1994; i Roguska et al., Protein Eng.9(10):895-904, 1996. U nekim primerima izvođenja, "humanizovano antitelo" je antitelo ponovo na površini. U nekim primerima izvođenja, "humanizovano antitelo" je CDR-graftovano antitelo. Termin "varijabilni region" antitela odnosi se na varijabilni region lakog lanca antitela ili varijabilni region teškog lanca antitela, bilo sam ili u kombinaciji. Svaki varijabilni region teškog i lakog lanca sastoji se od četiri okvirna regiona (FR) povezana sa tri regiona koja određuju komplementarnost (CDR) takođe poznata kao hipervarijabilni regioni. CDR regioni u svakom lancu se drže zajedno u neposrednoj blizini pomoću FR i, sa CDR regionima iz drugog lanca, doprinose formiranju mesta antitela za vezivanje antigena. Postoje najmanje dve tehnike za određivanje CDR regiona: (1) pristup zasnovan na varijabilnosti sekvenci među vrstama (tj. Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.); i (2) pristup zasnovan na kristalografskim studijama kompleksa antigen-antitelo (Al-lazikani et al., J. Molec. Biol.273:927-948, 1997). Pored toga, kombinacije ova dva pristupa se ponekad koriste u tehnici za određivanje CDR regiona.
Kabat sistem numerisanja se generalno koristi kada se govori o ostatku u varijabilnom domenu (približno ostaci 1-107 lakog lanca i ostaci 1-113 teškog lanca) (npr., Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
Numeracija aminokiselinskih pozicija kao u Kabatu, odnosi se na sistem numerisanja koji se koristi za varijabilne domene teškog lanca ili varijabilne domene lakog lanca za kompilaciju antitela u Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Koristeći ovaj sistem numerisanja, stvarna linearna aminokiselinska sekvenca može da sadrži manje ili dodatne aminokiseline koje odgovaraju skraćenju ili umetanju u FR ili CDR varijabilnog domena. Na primer, varijabilni domen teškog lanca može uključivati jedan umetak aminokiseline (ostatak 52a prema Kabatu) posle ostatka 52 H2 i inseriranih ostataka (npr., ostaci 82a, 82b i 82c, itd. prema Kabatu) posle FR ostatka teškog lanca 82. Kabat numeracija ostataka se može odrediti za dato antitelo poravnavanjem u regionima homologije sekvence antitela sa „standardnom“ sekvencom sa Kabat brojem. Chothia se umesto toga odnosi na lokaciju strukturnih petlji (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917,1987). Kraj Chothia CDR-H1 petlje kada se numeriše korišćenjem Kabat konvencije numerisanja varira između H32 i H34 u zavisnosti od dužine petlje. To je zato što Kabat šema numerisanja postavlja umetke na H35A i H35B - ako nema ni 35A ni 35B, petlja se završava na 32; ako je prisutno samo 35A, petlja se završava na 33; ako su prisutni i 35A i 35B, petlja se završava na 34. AbM hipervarijabilni regioni predstavljaju kompromis između Kabat CDR regiona i Chothia strukturnih petlji, i koristi ih softver za modeliranje AbM antitela kompanije Oxford Molecular.
EU indeks ili EU indeks kao u Kabat ili EU šemi numeracije odnosi se na sistem numerisanja zasnovan na humanom IgG1 Eu antitelu od Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85.
Termin "humano antitelo" označava antitelo proizvedeno od strane čoveka ili antitelo koje ima aminokiselinsku sekvencu koja odgovara antitelu proizvedenom od čoveka, napravljenom upotrebom bilo koje tehnike poznate u tehnici. U određenim primerima izvođenja, humano antitelo nema sekvencu koja nije humana. Ova definicija humanog antitela uključuje intaktna antitela ili antitela pune dužine, ili njihove fragmente koji se vezuju za antigen.
Termin "himerna antitela" odnosi se na antitela u kojima je aminokiselinska sekvenca molekula imunoglobulina poreklom iz dve ili više vrsta. Tipično, varijabilni region i lakih i teških lanaca odgovara varijabilnom regionu antitela dobijenih od jedne vrste sisara (npr., miš, pacov, zec, itd.) sa željenom specifičnošću, afinitetom i sposobnošću, dok su konstantni regioni homologni sekvencama u antitelima poreklom od drugih (obično humanih) da bi se izbegla ili smanjila mogućnost izazivanja imunološkog odgovora kod te vrste (npr., čoveka). U određenim primerima izvođenja, himerno antitelo može uključiti antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji sadrži najmanje jedan humani polipeptid teškog i/ili lakog lanca, kao što je, na primer, antitelo koje sadrži mišji laki lanac i polipeptide humanog teškog lanca.
Termini "epitop" ili "antigenska determinanta" se ovde koriste naizmenično i odnose se na onaj deo antigena koji može da bude prepoznat i specifično vezan za određeno antitelo. Kada je antigen polipeptid, epitopi se mogu formirati i od susednih aminokiselina i od nesusednih aminokiselina suprotstavljenih tercijarnim savijanjem proteina. Epitopi formirani od susednih aminokiselina se tipično zadržavaju nakon denaturacije proteina, dok se epitopi formirani tercijarnim savijanjem obično gube denaturacijom proteina. Epitop tipično uključuje najmanje 3, a češće, najmanje 5 ili 8-10 aminokiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
"Afinitet vezivanja" se generalno odnosi na snagu zbira nekovalentnih interakcija između jednog mesta vezivanja molekula (npr., antitelo) i njegovog partnera za vezivanje (npr., antigena). Osim ako nije drugačije naznačeno, kako se ovde koristi, "afinitet vezivanja" se odnosi na unutrašnji afinitet vezivanja koji odražava interakciju 1:1 između članova para vezivanja (npr., antitelo i antigen). Afinitet molekula X prema njegovom partneru Y se generalno može predstaviti konstantom disocijacije (Kd) ili polumaksimalne efikasne koncentracije (EC50). Afinitet se može meriti uobičajenim postupcima poznatim u tehnici, uključujući one opisane ovde. Antitela niskog afiniteta generalno sporo vezuju antigen i imaju tendenciju da se lako disociraju, dok antitela visokog afiniteta generalno vezuju antigen brže i imaju tendenciju da ostanu vezana duže. U struci su poznati različiti postupci za merenje afiniteta vezivanja, od kojih se svaki može koristiti u svrhe ovog pronalaska. Ovde su opisane specifični ilustrativni primeri izvođenja.
Pod "specifično vezuje", generalno se podrazumeva da se antitelo vezuje za epitop preko svog domena za vezivanje antigena, i da vezivanje podrazumeva izvesnu komplementarnost između domena za vezivanje antigena i epitopa. Prema ovoj definiciji, za antitelo se kaže da se „specifično vezuje“ za epitop kada se veže za taj epitop, preko svog domena za vezivanje antigena lakše nego što bi se vezalo za nasumični, nesrodni epitop. Termin "specifičnost" se ovde koristi da kvalifikuje relativni afinitet kojim se određeno antitelo vezuje za određeni epitop. Na primer, može se smatrati da antitelo "A" ima veću specifičnost za dati epitop nego antitelo "B", ili se može reći da se antitelo "A" vezuje za epitop "C" sa višom specifičnošću nego što ima za srodni epitop "D."
Termin "imunokonjugat", "konjugat" ili "ADC" kako se ovde koristi odnosi se na jedinjenje ili njegov derivat koji je vezan za sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen).
Termin "antitelo konstruisano cisteinom" uključuje antitelo sa najmanje jednim Cys koje normalno nije prisutno u datom ostatku lakog ili teškog lanca antitela. Takav Cys, koji se takođe može nazvati "konstruisanim Cys", može se konstruisati korišćenjem bilo koje konvencionalne molekularne biologije ili tehnologije rekombinantne DNK (npr., zamenom kodirajuće sekvence za ne-Cys ostatak na ciljnom ostatku sa kodirajućom sekvencom za Cys). Na primer, ako je originalni ostatak Ser sa kodirajućom sekvencom 5'-UCU-3', kodirajuća sekvenca može biti mutirana (npr., mutagenezom usmerenom na mesto) u 5'-UGU-3', koji kodira Cys. U određenim primerima izvođenja, Cys konstruisano antitelo pronalaska ima konstruisan Cys u teškom lancu. U određenim primerima izvođenja, konstruisani Cys je u ili blizu CH3 domena teškog lanca. U određenim primerima izvođenja, konstruisani Cys je na ostatku 442 teškog lanca (EU/OU numeracija). Ostatak C442 može biti konjugovan sa citotoksičnim lekom/sredstvom preko slobodne tiol grupe ostatka C442, kao što je reakcija sa tiol-reaktivnim sredstvom citotoksičnog leka (npr., maleimido grupa).
Termini "kancer" i "kancerogen" odnose se ili opisuju fiziološko stanje kod sisara u kojem populaciju ćelija karakteriše neregulisani rast ćelija. "Tumor" i "neoplazma" se odnose na jednu ili više ćelija koje su rezultat prekomernog rasta ili proliferacije ćelija, bilo benignih (nekanceroznih) ili malignih (kancerogenih) uključujući prekancerozne lezije.
Primeri kancera uključuju kancer endometrijuma, kancer pluća (npr. nesitnoćelijski kancer pluća), kolorektalni kancer, kancer bešike, kancer želuca, kancer pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer, kancer glave i vrata, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer štitne žlezde, kancer testisa, mijeloidni kancer, melanom i limfoidni kancer. U određenim primerima izvođenja, kancer je nestinoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer želuca ili kancer pankreasa. U određenim primerima izvođenja, kancer je nesitnoćelijski kancer pluća (skvamozne ćelije, neskvamozne ćelije, adenokarcinom ili krupnoćelijski nediferencirani karcinom), kolorektalni kancer (adenokarcinom, gastrointestinalni karcinoidni tumori, gastrointestinalni stromalni tumori, primarni kolorektalni limfom, leiomiosarkom, ili karcinom skvamoznih ćelija) ili kancer dojke (npr., trostruko negativni rak dojke (TNBC)). U određenim primerima izvođenja, kancer je limfom i leukemija. U određenim primerima izvođenja, primeri karcinoma uključuju AML, CML, ALL (npr., B-ALL), CLL, mijelodisplastični sindrom, osnovnu plazmacitoidnu DC neoplazmu (BPDCN) leukemiju, B-ćelijske limfome uključujući ne-Hodgkin-ove limfome (NHL), prekursorsku B-ćelijsku limfoblastičnu leukemiju/limfom i B-ćelijske neoplazme kao što su B-ćelijska hronična limfocitna leukemija (B-CLL) / mali limfocitni limfom (SLL), B-ćelijsku prolimfocitnu leukemiju, limfoplazmacitni limfom, limfom Mantle ćelija (MCL), folikularni limfom (FL), uključujući FL niskog stepena, srednjeg stepena i visokog stepena, kožni limfom centra folikula, B-ćelijski limfom marginalne zone (tip MALT, nodalni i slezinski tip), leukemija dlakavih ćelija (HCL), difuzni krupnoćelijski limfom B-ćelija (DLBCL), Burkitt-ov limfom, plazmacitom, mijelom plazma ćelija, limfoproliferativni poremećaj nakon transplantacije, Waldenstrom-ovu makroglobulinemiju, anaplastični krupnoćelijski limfom (ALCL) i Hodgkin-ovu leukemiju (HL). U određenim primerima izvođenja, kancer je BPDCN leukemija. U određenim primerima izvođenja, kancer je ALL. U drugim primerima izvođenja, kancer je AML.
Termin "subjekat" se odnosi na bilo koju životinju (npr., sisara), uključujući, ali ne ograničavajući se na ljude, primate koji nisu ljudi, glodare i slično, koji treba da budu primaoci određenog tretmana. Tipično, termini "subjekat", "pacijent" i "individua" se ovde koriste naizmenično u odnosu na čoveka.
Termin "farmaceutska kompozicija" se odnosi na preparat koji je u takvom obliku da dozvoljava da biološka aktivnost aktivnog sastojka bude efikasna, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za subjekta na koga bi se kompozicija primenjivala. Takav kompozicija može biti sterilna.
"Terapeutski efikasna količina" kako se ovde koristi je količina jedinjenja ili kompozicije dovoljna da izvrši specifično navedenu svrhu. Potpuni terapeutski efekat se ne mora nužno javiti primenom jedne doze, i može se javiti tek nakon primene serije doza. Određena "terapeutski efikasna količina" zavisiće, na primer, od starosti, težine i zdravstvenog stanja subjekta, kao i od načina primene i terapeutske ili kombinacije terapeutika odabranih za primenu. „Terapeutski efikasna količina“ se može odrediti empirijski i na rutinski način, u odnosu na navedenu svrhu. Kako se ovde koristi, termin "lečenje", "lečiti" ili "tretman" uključuje poništavanje, smanjenje ili zaustavljanje simptoma, kliničkih znakova ili osnovne patologije stanja na način da se poboljša ili stabilizuje stanje subjekta. Kako se ovde koristi, i kako se dobro razume u tehnici, "lečenje" je pristup za dobijanje korisnih ili željenih rezultata, uključujući kliničke rezultate. Korisni ili željeni rezultati uključuju, ali nisu ograničeni na, prevenciju, ublažavanje, poboljšanje ili usporavanje napredovanja jednog ili više simptoma ili stanja povezanih sa stanjem, smanjenje obima bolesti, stabilizovano stanje bolesti, odlaganje ili usporavanje napredovanja bolesti, poboljšanje ili ublažavanje stanja bolesti i remisija (delimična ili potpuna), bilo da se može detektovati ili se ne može detektovati. „Lečenje“ takođe može značiti produženje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem ako se ne leči.
Jedinjenja
U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
Z-L<1>-D (Formula I)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
-L<1>-Z je (i) -(C1-C4alkilen)-OR<6>, -(C1-C4alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2; ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>;
svaki R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil; i
svaki R<6>je nezavisno -H, metil, ili benzil;
uz uslov da -L<1>-Z ne može biti -CH2OH.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-OR<6>, -(C1-C4alkilen)-SR<6>, ili - (C1-C4alkilen)-N(R<6>)2. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-OR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(CH2)2OH, -(CH2)3OH, -(CH2)4OH, -CH2OMe, -
4
(CH2)2OMe, -(CH2)3OMe, -(CH2)4OMe, -CH2SH, -(CH2)2SH, -(CH2)3SH, -(CH2)4SH, -CH2SMe, -(CH2)2SMe, -(CH2)3SMe, -(CH2)4SMe, -CH2NH2, -(CH2)2NH2, -(CH2)3NH2, -(CH2)4NH2.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>, - (C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z je -CH2NHC(=O)CH2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)3OH, -CH2NHC(=O)(CH2)4OH, -CH2NHC(=O)(CH2)5OH, -CH2NHC(=O)CH2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5OMe, -CH2NHC(=O)CH2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)3SH, -CH2NHC(=O)(CH2)4SH, -CH2NHC(=O)(CH2)5SH, -CH2NHC(=O)CH2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5SMe, -CH2SCH2SH, -CH2S(CH2)2SH, -CH2S(CH2)3SH, -CH2S(CH2)4SH, -CH2S(CH2)5SH, -CH2SCH2SMe, -CH2S(CH2)2SMe, -CH2S(CH2)3SMe, -CH2S(CH2)4SMe, ili -CH2S(CH2)5SMe. Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil.
Svaki R<6>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je benzil.
U sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
E-A-Z'-L<1>-D (Formula II)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>, ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za A;
svaki R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil;
svaki R<8>je nezavisno -H, metil, ili benzil;
A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu A je izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koja je:
(i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu:
X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-;
Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i
R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril, ili benzil; ili
pri čemu R<12>je H ili metil;
E je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<3>; i
X<3>je
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, -(CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>.
Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil. Svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je benzil.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -L<1>-Z'-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano za A.
U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 8 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 4 aminokiseline. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, svaka aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je D aminokiselina.
4
U nekim primerima izvođenja, A je -(AA<1>)-(AA<2>)a1-<*>, gde<*>je mesto kovalentno vezano za E; AA<1>i AA<2>su svaki nezavisno aminokiselinski ostatak; i a1 je ceo broj od 1-9.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Gly-Gly-Gly-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, - Val-Cit-<*>, -Val-Lys-<*>, -Lys-Val-<*>, -Phe-Lys-<*>,-Lys-Phe-<*>, -Lys-Lys-<*>, -Ala-Lys-<*>, -Lys-Ala-<*>, -Phe-Cit-<*>,-Cit-Phe-<*>, -Leu-Cit-<*>,- Cit-Leu-<*>- Ile -Cit-<*>, -Phe-Ala-<*>,-Ala-Phe-<*>, - Phe-N<9>-tozil-Arg-<*>, -N<9>-tozil-Arg-Phe-<*>, -Phe-N<9>-nitro-Arg-<*>, -N<9>-nitro-Arg-Phe<*>, -Phe-Phe-Lys-<*>, -Lys-Phe-Phe-<*>, -Gly-Phe-Lys-<*>, Lys-Phe-Gly-<*>, -Leu-Ala-Leu-<*>, -Ile-Ala-Leu-<*>, -Leu-Ala-Ile-<*>, -Val-Ala-Val-<*>, -Ala-Leu-Ala-Leu-<*>,-Leu-Ala-Leu-Ala-<*>, -β-Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Gly-Phe-Leu-Gly-<*>,-Gly-Leu-Phe-Gly-<*>, -Val-Arg-<*>, -Arg-Val-<*>, -Arg-Arg-<*>, - Ala-Ala-<*>, -Ala-Met-<*>, -Met-Ala-<*>, -Thr-Thr-<*>, -Thr-Met-<*>, -Met-Thr-<*>, -Leu-Ala-<*>, -Ala-Leu-<*>, -Cit-Val-<*>, -Gln-Val-<*>, -Val-Gln-<*>, -Ser-Val-<*>, -Val-Ser-<*>, -Ser-Ala-<*>, -Ser-Gly-<*>, -Ala-Ser-<*>, -Gly-Ser-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Phe-Arg-<*>, -Arg-Phe-<*>, -Tyr-Arg-<*>, -Arg-Tyr-<*>, -Phe-Gln-<*>, -Gln-Phe-<*>, -Val-Thr-<*>, -Thr-Val-<*>, -Met-Tyr-<*>i -Tyr-Met-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Val-D-Lys-<*>, -Val-D-Arg-<*>, -L-Val-Cit-<*>, -L-Val-Lys-<*>, -L-Val-Arg-<*>, -L-Val-D-Cit-<*>, -L-Phe-Phe-Lys-<*>, -L-Val-D-Lys-<*>, -L-Val-D-Arg-<*>, -L-Arg-D-Arg-<*>, -L-Ala-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -Ala-D-Ala-<*>, -Val-D-Cit-<*>, -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, ili -L-Ser-L-Val-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -Ala-Ala-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Ala-Ala-Ala-<*>, -Ala-Ala-Ala-Ala-<*>, -Gly-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Ala-Gly-<*>, -Gly-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Val-Gly-<*>, -Gly-Phe-Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-Phe-Gly-<*>. U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Ala-D-Val-<*>, -L-Val-L-Ala-<*>, -L-Val-D-Ala-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, -L-Gln-D-Leu-<*>, -L-Leu-L-Gln-<*>, -L-Leu-D-Gln-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -Gly-L-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Ala-Gly-<*>, -Gly-D-Ala-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Ala-Gly-<*>, -Gly-L-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-D-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Val-Gly-<*>, -Gly-L-Phe-Gly-Gly-<*>, ili Gly-Gly-L-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-LAla-<*>, - L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, ili -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano sa E.
U nekim primerima izvođenja, A je supstituisan sa jednim ili više poliola, što je -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>; pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, gde Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil.
U nekim primerima izvođenja, pri čemu poliol je
pri čemu R<12>je H ili metil.
U nekim primerima izvođenja, pri čemu poliol je
pri čemu R<12>je H ili metil.
E je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<3>. U nekim primerima izvođenja, E je
U sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule III, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
CBA-E'-A-Z'-L<1>-D (Formula III)
u kome:
D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
R<1>je -F;
R<2>je metil;
-L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>, ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-
4
C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za A;
svaki R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil;
svaki R<8>je nezavisno -H, metil, ili benzil;
A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu A je izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koja je:
(i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu:
X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-;
Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril, ili benzil; ili
pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za CBA; i
CBA je sredstvo za vezivanje ćelije, pri čemu sredstvo za vezivanje ćelije je antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je - (C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>.
4
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, -(CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>. U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -L<1>-Z'-<*>je -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)SO-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>.
Svaki R<5>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<5>je benzil. Svaki R<8>je nezavisno -H, metil ili benzil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je nezavisno -H. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je metil. U nekim primerima izvođenja, svaki R<8>je benzil.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -L<1>-Z'-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano za A.
U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 8 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, A je peptid koji sadrži 2 do 4 aminokiseline. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, svaka aminokiselina u pomenutom peptidu je L aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna aminokiselina u pomenutom peptidu je D aminokiselina.
U nekim primerima izvođenja, A je -(AA<1>)-(AA<2>)a1-<*>, pri čemu<*>je tačka vezivanja za E', AA<1>i AA<2>su svaki nezavisno aminokiselinski ostatak; i a1 je ceo broj od 1-9.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Gly-Gly-Gly-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, - Val-Cit-<*>, -Val-Lys-<*>, -Lys-Val-<*>, -Phe-Lys-<*>,-Lys-Phe-<*>, -Lys-Lys-<*>, -Ala-Lys-<*>, -Lys-Ala-<*>, -Phe-
4
Cit-<*>,-Cit-Phe-<*>, -Leu-Cit-<*>,- Cit-Leu-<*>- Ile -Cit-<*>, -Phe-Ala-<*>,-Ala-Phe-<*>, -Phe-N<9>-tozil-Arg-<*>, -N<9>-tozil-Arg-Phe-<*>, -Phe-N<9>-nitro-Arg-<*>, -N<9>-nitro-Arg-Phe<*>, -Phe-Phe-Lys-<*>, -Lys-Phe-Phe-<*>, -Gly-Phe-Lys-<*>, Lys-Phe-Gly-<*>, -Leu-Ala-Leu-<*>, -Ile-Ala-Leu-<*>, -Leu-Ala-Ile-<*>, -Val-Ala-Val-<*>, -Ala-Leu-Ala-Leu-<*>,-Leu-Ala-Leu-Ala-<*>, -β-Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Gly-Phe-Leu-Gly-<*>,-Gly-Leu-Phe-Gly-<*>, -Val-Arg-<*>, -Arg-Val-<*>, -Arg-Arg-<*>, - Ala-Ala-<*>, -Ala-Met-<*>, -Met-Ala-<*>, -Thr-Thr-<*>, -Thr-Met-<*>, -Met-Thr-<*>, -Leu-Ala-<*>, -Ala-Leu-<*>, -Cit-Val-<*>, -Gln-Val-<*>, -Val-Gln-<*>, -Ser-Val-<*>, -Val-Ser-<*>, -Ser-Ala-<*>, -Ser-Gly-<*>, - Ala-Ser-<*>, -Gly-Ser-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Phe-Arg-<*>, -Arg-Phe-<*>, -Tyr-Arg-<*>, -Arg-Tyr-<*>, -Phe-Gln-<*>, -Gln-Phe-<*>, -Val-Thr-<*>, -Thr-Val-<*>, -Met-Tyr-<*>, i -Tyr-Met-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je -Val-D-Lys-<*>, -Val-D-Arg-<*>, -L-Val-Cit-<*>, -L-Val-Lys-<*>, -L-Val-Arg-<*>, -L-Val-D-Cit-<*>, -L-Phe-Phe-Lys-<*>, -L-Val-D-Lys-<*>, -L-Val-D-Arg-<*>, -L-Arg-D-Arg-<*>, -L-Ala-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -Ala-D-Ala-<*>, -Val-D-Cit-<*>, -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, ili -L-Ser-L-Val-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -Ala-Ala-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>-Gln-Leu-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Ala-Ala-Ala-<*>, -Ala-Ala-Ala-Ala-<*>, -Gly-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Ala-Gly-<*>, -Gly-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Val-Gly-<*>, -Gly-Phe-Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Ala-D-Val-<*>, -L-Val-L-Ala-<*>, -L-Val-D-Ala-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, -L-Gln-D-Leu-<*>, -L-Leu-L-Gln-<*>, -L-Leu-D-Gln-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -Gly-L-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Ala-Gly-<*>,-Gly-D-Ala-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Ala-Gly-<*>, -Gly-L-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-D-Val-Gly-Gly-<*>, Gly-Gly-D-Val-Gly-<*>, -Gly-L-Phe-Gly-Gly-<*>, ili Gly-Gly-L-Phe-Gly-<*>.
U nekim primerima izvođenja, -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, - L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, ili -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>.
U različitim primerima izvođenja koji otkrivaju -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>ovde,<*>je mesto kovalentno vezano za E'.
U nekim primerima izvođenja, A je supstituisan sa jednim ili više poliola, koji je -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>; pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril ili benzil.
U nekim primerima izvođenja, poliol je
4
pri čemu R<12>je H ili metil.
U nekim primerima izvođenja, pri čemu poliol je
pri čemu R<12>je H ili metil.
U nekim primerima izvođenja, E' je -C(=O)-(C1-C10alkilen)-X<6>-<*>. U nekim primerima izvođenja, E' je
pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za CBA.
U nekim primerima izvođenja, CBA sadrži -SH grupu koja se kovalentno vezuje sa E' da bi se obezbedilo
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je jedinjenje formule I i jedno je od sledećih jedinjenja iz tabele ispod:
Tabela 1A.
4
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je jedinjenje formule I i jedinjenje bilo koje od sledećih iz tabele ispod:
Tabela. 1B
1
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je jedinjenje formule II i jedinjenje je bilo koje od sledećih iz tabele ispod:
Tabela. 2
2
4
U nekim primerima izvođenja, gde jedinjenje sadrži sulfoksid, a sulfoksid je ili R ili S konfiguracija.
U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je bilo koje od sledećih:
ili
Sinteza jedinjenja
Ovde opisana jedinjenja se dobijaju opštim sintetičkim putevima opisanim u sledećim šemama. Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 1.
Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 2.
Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 3.
Kao što je ovde opisano, ali nije deo pronalaska za koji se traži zaštita, je priprema jedinjenja prema Šemi 4.
Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 5.
v može biti 1 do 4. U nekim primerima izvođenja, R može biti alkil, aril ili heteroaril. R može biti metil, etil, fenil ili piridil.
Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 6.
v može biti 1 do 4. U nekim primerima izvođenja, v2 može biti 1 do 4. R može biti alkil, aril ili heteroaril. R može biti metil, etil, fenil ili piridil.
Ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme kao što je navedeno u Šemi 7.
n može biti od 1 do 10. n može biti od 1 do 5. v može biti od 1 do 10. v može biti od 1 do 5. Ovde opisana jedinjenja mogu se pripremiti kao što je navedeno u Šemi 8.
v može biti od 1 do 10. v može biti od 1 do 5.
Sredstva za vezivanje ćelija
Sredstva za vezivanje ćelija u imunokonjugatima ovog pronalaska mogu biti bilo koje vrste koja je trenutno poznata, ili koja postaje poznata, i mogu biti antitela (kao što su poliklonska antitela i monoklonska antitela, posebno monoklonska antitela) ili njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen, protela, ili nanotela.
U određenim primerima izvođenja, sredstvop koje se vezuje za ćeliju je antitelo, jednolančano antitelo, fragment antitela koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, monoklonsko antitelo, jednolančano monoklonsko antitelo, fragment monoklonskog antitela (ili „deo koji se vezuje za antigen " ili "fragment koji se vezuje za antigen") koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, himerno antitelo, himerni fragment antitela (ili "deo koji se vezuje za antigen" ili "fragment koji se vezuje za antigen") koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju, i domen antitela (na primer., sdAb), ili fragment antitela domena koji se specifično vezuje za ciljnu ćeliju.
U određenim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje ćelije je humanizovano antitelo, humanizovano jednolančano antitelo ili fragment humanizovanog antitela (ili "deo koji se vezuje za antigen" ili "fragment koji se vezuje za antigen").
U određenim primerima izvođenja, sredstvo koje se vezuje za ćeliju je antitelo sa promenjenom površinom, jednolančano antitelo sa promenjenom površinom ili fragment antitela sa promenjenom površinom (ili "deo koji se vezuje za antigen" ili "fragment koji se vezuje za antigen").
U određenim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje ćelije je antitelo ili njegov deo koji se vezuje za antigen (uključujući derivate antitela), CBA se može vezati za ligand na ciljnoj ćeliji, kao što je ligand na površini ćelije, uključujući receptore na površini ćelije.
U određenim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje ćelija (CBA) se vezuje za ciljne ćelije odabrane od tumorskih ćelija, ćelija inficiranih virusom, ćelija inficiranih mikroorganizmima, ćelija inficiranih parazitima, autoimunih ćelija, aktiviranih ćelija, mijeloidnih ćelija, aktiviranih T-ćelija, B ćelija, ili melanocita. U nekim primerima izvođenja, CBA se vezuje za ćelije koje eksprimiraju bilo koji ili više od 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H3, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Disadherin, EFNA4, EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR-alfa, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC3, gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, IL7R, Interleukin-4 Receptor (IL4R), KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, MAGE, Mezotelin (MSLN), MET, protein A i B povezan sa MHC klasom I lanca (MICA i MICB), MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, NaPi2b, Nektin-4, NOTCH3, OAcGD2, OX001L, p-kadherin, PD-L1, fosfatidilserin (PS), polimorfni epitelijalni mucin (PEM), receptor prolaktina (PRLR), PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2,
1
SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, STn, TIM-1, TM4SF1, TNF-alfa, TRA, TROP-2, glikoprotein 72 povezan sa tumorom (TAG-72), tumor-specifičan epitop mucina-1 (TA-MUC1), CD5, TIM-3, UPK2, ili UPK1b antigen.
U određenim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje ćelija je cistein-konstruisano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuje za ćelije koje eksprimiraju bilo koji ili više od 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H3, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Disadherin, EFNA4, EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR-alfa, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC3, gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, II,7R, Interleukin-4 Receptor (IL4R), KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, MAGE, Mezotelin (MSLN), MET, protein A i B MHC klase I lanca (MICA i MICB), MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, NaPi2b, Nektin-4, NOTCH3, OAcGD2, OX001L, p-kadherin, PD-L1, fosfatidil serin (PS), polimorni epitelijalni mucin (PEM), Prolaktin Receptor (PRLR), PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, STn, TIM-1, TM4SF1, TNF-alfa, TRA, TROP-2, Tumor-vezani glikoprotein 72 (TAG-72), tumor-specifičan epitop mucin-1 (TA-MUC1), CD5, TIM-3, UPK2, ili UPK1b antigen.
U određenim primerima izvođenja, CBA je antitelo izabrano iz grupe koja se sastoji od anti-CD37 antitela (npr., kako je otkriveno u USPN 8,765,917), anti-CD19 antitela (npr., huB4 antitela kako je otkriveno u USPN 9,555,126), i anti-EGFR antitela (npr., huML66 antitela kako je otkriveno u USPNs 9,238,6908,790,649, i 9,125,896).
U određenim primerima izvođenja, CBA je anti-CD 123 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen može da sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost (CDR) CDRL1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu RASQDINSYLS (SEQ ID NO:1), CDRL2 ima aminokiselinsku sekvencu RVNRLVD (SEQ ID NO:2), i, CDRL3 ima aminokiselinsku sekvencu LQYDAFPYT (SEQ ID NO:3); i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)H1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu SSIMH (SEQ ID NO:4), CDRH2 ima aminokiselinsku
2
sekvencu YIKPYNDGTKYNEKFKG (SEQ ID NO:5), i CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu EGGNDYYDTNMY (SEQ ID NO:6).
U određenim primerima izvođenja, anti-CD123 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) koji ima aminokiselinsku sekvencu
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTSSIMHWVRQAPGQGLEWIGYIKPYND GTKYNEKFKGRATLTSDRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGGNDYYDTMDY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7), pri čemu CDRH1, CDRH2 i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i varijabilni region lakog lanca (VL) koji ima aminokiselinsku sekvencu
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINSYLSWFQQKPGKAPKTLIYRVNRLVDG VPSRFSGSGSGNDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDAFPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9), pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-CD123 antitelo ima sekvencu pune dužine teškog lanca
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTSSIMHWVRQAPGQGLEWIGYIKPYND GTKYNEKFKGRATLTSDRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGGNDYYDTMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLCLSPG
(SEQ ID NO:8), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i sekvenca pune dužine lakog lanca
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINSYLSWFQQKPGKAPKTLIYRVNRLVDG VPSRFSGSGSGNDYTL TISSLQPEDF ATYYCLQYDAFPYTFGQGTKVEIKRTV AAPSV FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:10), pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-CD123 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je obezbeđen kao antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati kao što je dalje opisano u nastavku. U nekim drugim primerima izvođenja, anti-CD123 antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se vezuje za CD123 koji se može aktivirati može biti konjugovan sa jedinjenjem Formule I.
U određenim primerima izvođenja, CBA je anti-CD33 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen kao što je opisano u U.S. Pat. br.7,342,110 i 7,557,189.
U određenim primerima izvođenja, anti-CD33 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen može da sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)L1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu KSSQSVFFSSSQKNYLA (SEQ ID NO:11), CDRL2 ima aminokiselinsku sekvencu WASTRES (SEQ ID NO:12), i, CDRL3 ima aminokiselinsku sekvencu HQYLSSRT (SEQ ID NO:13); i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)H1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu SYYIH (SEQ ID NO:14), CDRH2 ima aminokiselinsku sekvencu VIYPGNDDISYNQKFQG (SEQ ID NO:15), i, CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu EVRLRYFDV (SEQ ID NO:16).
U određenim primerima izvođenja, anti-CD33 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) koji ima amino sekvencu
QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGN DDTSYNQKFQGKATETADKSSTTAYMQLSSETSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGO GTTVTVSS (SEQ ID NO:17), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i varijabilni region lakog lanca (VL) koji imaju aminokiselinsku sekvencu
EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSCKSSQSVFFSSSOKNYLAWYQQIPGQSPRLLIYWA STRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYCHQYLSSRTFGOGTKLEIKR (SEQ ID NO:19), pri čemu CDRL1, CDRL2, and CDRL3 su dvostruko podvučeni.
4
U određenim primerima izvođenja, anti-CD33 antitelo ima sekvencu pune dužine teškog lanca
QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGN DDISYNQKFQGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGQ GTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:18), pri čemu CDRH1, CDRH2, and CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i sekvenca pune dužine lakog lanca
EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPRLLIYWA STRESGVPDRFTGSGSGTDFTTTHSSVOPFDEATYYCHQYLSSRTFGQGTKTFIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:20), pri čemu CDRL1, CDRL2, and CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-CD33 antitelo je huMy9-6 antitelo.
U određenim primerima izvođenja, anti-CD33 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je obezbeđen kao antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati kao što je dalje opisano u nastavku. U nekim drugim primerima izvođenja, antitelo koje se može aktivirati na CD33 ili fragment antitela koji se vezuje za CD33 može biti konjugovan sa jedinjenjem Formule I.
U određenom primeru izvođenja, CBA je anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen kao što je opisano u WO2018/119196 i U.S. Privremene prijave br.
62/690052 i 62/691342.
U određenim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je humanizovano anti-ADAM9 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuje za humani ADAM9 i makaki ADAM9.
U određenim primerima izvođenja, humanizovano anti-ADAM9 antitelo ili njegov ADAM9-vezujući fragment je optimizovan da ima najmanje 100 puta povećanje afiniteta vezivanja za makaki ADAM9 i zadržava visok afinitet vezivanja za humani ADAM9 u poređenju sa himernim ili mišjim roditeljskim antitelom.
U određenim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen (npr. humanizovano anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen) sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna regiona koja određuju komplementarnost (CDR) CDRL1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu KASQSVDYSGDSYMN (SEQ ID NO:21), CDRL2 ima aminokiselinsku sekvencu AASDLES (SEQ ID NO:22), i, CDRL3 ima aminokiselinsku sekvencu QQSHEDPFT (SEQ ID NO:23); i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)H1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu SYWMH (SEQ ID NO:24), CDRH2 ima aminokiselinsku sekvencu EIIPIFGHTNYNEKFKS (SEQ ID NO:25), i, CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu GGYYYYPRQGFLDY (SEQ ID NO:26).
U određenim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen (npr., humanizovano anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen) sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) koji imaju amino sekvencu
EVQLVESGGG LVKPGGSLRLSCAASGFTFS SYWMHWVRQA PGKGLEWVGE IIPIFGHTNY NEKEKSRFTI SLDNSKNTLY LQMGSLRAED TAVYYCARGG YYYYPRQGFL DYWGQGTTVT VSS (SEQ ID NO:27), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH;3 su dvostruko podvučeni;
i varijabilni region lakog lanca (VL) koji imaju aminokiselinsku sekvencu
DIVMTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYSGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAAS DLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFATYYCQQSHEDPFTFGQGTKLEI K
(SEQ ID NO:28), pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo ima sekvencu pune dužine teškog lanca
EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS SYWMHWVRQA PGKGLEWVGE IIPIFGHTNY NEKFKSRFTI SLDNSKNTLY LQMGSLRAED TAVYYCARGG YYYYPRQGFL DYWGQGTTVT VSSASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG TQTYICNVNH KPSNTKVDKR VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLYIT REPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLCLS PG (SEQ ID NO:29), pri čemu CDRH1, CDRH2, and CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i sekvenca pune dužine lakog lanca
DIVMTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYSGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAAS DLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQSHEDPFTFGQGTKLEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:30); pri čemu CDRL1, CDRL2, and CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je obezbeđen kao antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati kao što je dalje opisano u nastavku. U nekim drugim primerima izvođenja, anti-ADAM9 antitelo koje se može aktivirati ili fragment anti-ADAM9 antitela koji se može aktivirati može biti konjugovan sa jedinjenjem Formule I.
U određenim primerima izvođenja, CBA je anti-folat receptor antitelo (tj., FOLR1 ili FRα) (npr., kao što je opisano u U.S. Patentu 8,709,432, U.S. Patentu br. 8,557,966, i WO2011106528).
U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen može da sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)L1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO:31), CDRL2 ima aminokiselinku sekvencu RASNLEA (SEQ ID NO:32), i, CDRL3 ima aminokiselinsku sekvencu QQSREYPYT (SEQ ID NO:33); i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)H1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu GYFMN (SEQ ID NO:34) ili GYTFTGYFMN (SEQ ID NO:37), CDRH2 ima aminokiselinsku sekvencu RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO:35) ili RIHPYDGDTF (SEQ ID NO:38), i, CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu YDGSRAMDY (SEQ ID NO:36). U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži a) varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDRL1 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:31, CDRL2 koji imaju amino sekvencu datu u SEQ ID NO: 32, i CDRL3 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:33; i b) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDRH1 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:34, CDRH2 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO: 35, i CDRH3 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:36. U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži a) varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDRL1 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:31, CDRL2 koji imaju amino sekvencu datu u SEQ ID NO: 32, i CDRL3 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:33; i b) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDRH1 ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:37, CDRH2 koji imaju amino sekvencu datu u SEQ ID NO: 38, i CDRH3 koji ima amino sekvencu datu u SEQ ID NO:36.
U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) koji ima amino sekvencu
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYD GDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWG QGTTVTVSS (SEQ ID NO:39), pri čemu CDRH1, CDRH2, and CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i varijabilni region lakog lanca (VL) koji ima aminokiselinsku sekvencu
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHYHQKPGQQPRLLIYRASN LEAGVPDRFSGSGSKTDFTLNISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR
(SEQ ID NO:40), ili DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSAGTSLMHYHQKPGQQPRLLIYRASN LEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR
(SEQ ID NO:41), pri čemu CDRL1, CDRL2, and CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ima sekvencu pune dužine teškog lanca
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYD GDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
(SEQ ID NO:42), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i sekvenca pune dužine lakog lanca
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASN LEAGVPDRFSGSGSKTDFTLNISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:43), or DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASN LEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:44); pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo je huMov19 ili M9346A antitelo.
U određenim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je obezbeđen kao antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati kao što je dalje opisano u nastavku. U nekim drugim primerima izvođenja, anti-FRα antitelo koje se može aktivirati ili fragment anti-FRα antitela koji se može aktivirati može biti konjugovan sa jedinjenjem Formule I.
U određenim primerima izvođenja, CBA je anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen. U određenim primerima izvođenja, anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen može da sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)L1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu RSSRSLLHSDGFTYLY (SEQ ID NO:45), CDRL2 ima aminokiselinsku sekvencu QTSNLAS (SEQ ID NO:46), i, CDRL3 ima aminokiselinsku sekvencu AQNLELPNT (SEQ ID NO:47); i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)H1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu NIIIH (SEQ ID NO:48), CDRH2 ima aminokiselinsku sekvencu WIYPGNVYIQYNEKFKG (SEQ ID NO:49), i, CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu DGPWFAY (SEQ ID NO:50).
U određenim primerima izvođenja, anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen sadrži varijabilni region teškog lanca (VH) koji ima aminokiselinsku sekvencu
OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQRLEYIGWIYPGN VYTQYNEKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPWFAYWGQG TLVTVSS (SEQ ID NO:52), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i varijabilni region lakog lanca (VL) koji ima aminokiselinsku sekvencu
DIVLTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSRSLLHSDGFTYLYWFLQKPGQSPQLLIYQTSN LASGVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNAQNLELPNTFGQGTKLEIK
(SEQ ID NO:51), pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, anti-EpCAM antitelo ima sekvencu pune dužine teškog lanca
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQRLEYIGWIYPGN VYIQYNEKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPWFAYWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLCLSPG (SEQ ID NO:54), pri čemu CDRH1, CDRH2, i CDRH3 su dvostruko podvučeni;
i sekvenca pune dužine lakog lanca
DIVLTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSRSLLHSDGFTYLYWFLQKPGQSPQLLIYQTSN LASGVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPNTFGQGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:53), pri čemu CDRL1, CDRL2, i CDRL3 su dvostruko podvučeni.
U određenim primerima izvođenja, CBA je anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen može da sadrži: a) najmanje jedan varijabilni region lakog lanca (VL) ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna CDR regiona koji određuju komplementarnost (CDR)L1, CDRL2, i CDRL3, respektivno, pri čemu CDRL1 ima aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 78, 45, 79, 80 i 82; CDRL2 ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46; i CDRL3 ima amino kiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 47, 81, 83, 84, 85, 86 i 87, i b) najmanje jedan varijabilni region teškog lanca (VH) ili njegov fragment koji sadrži tri uzastopna regiona koja određuju komplementarnost (CDR) CDRH1, CDRH2, i CDRH3, respektivno, pri čemu, CDRH1 ima aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 48, 57, 58, 60, 61, 62, 68, 69, 70, 77 i 88; CDRH2 ima aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 49, 56, 59, 63 i 64; i CDRH3 ima aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 55, 65, 66, 67, 71, 72, 73, 74, 75 i 76.
U određenim primerima izvođenja, anti-EpCAM antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen je obezbeđen kao antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati kao što je dalje opisano u nastavku. U nekim drugim primerima izvođenja, anti-EpCAM antitelo koje se može aktivirati ili fragment EpCAM antitela koji se vezuje za antigen može biti konjugovan sa jedinjenjem Formule I.
Varijante u CDR-ovima anti-EpCAM antitela ili fragmenta koji se vezuje za antigen su sumirani u tabelama 3-6 u nastavku.
1
� Tabela 4. Humanizovane varijante huEpCAM-23 (sekvenca pune dužine)
Tabela 5. CDR sekvence teškog lanca varijante EpCAM23
4
U određenim primerima izvođenja, ovde opisano antitelo je mišje, nehumano sisarsko, himerično, humanizovano ili ljudsko antitelo. Na primer, humanizovano antitelo može biti CDR-graftovano antitelo ili antitelo ponovo na površini. U određenim primerima izvođenja, antitelo je antitelo pune dužine. U određenim primerima izvođenja, njegov fragment koji se vezuje za antigen je Fab, Fab', F(ab')2, Fd, jednolančani Fab (scFab), jednolančani Fv ili scFv, disulfidno vezan Fv, V-NAR domen, IgNar, intratelo, IgGΔCH2, minitelo, F(ab')3, tetratelo, triatelo, dijatelo, duotelo, jednodomensko antitelo, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, ili scFv-Fc. U određenim primerima izvođenja, sredstvo za vezivanje ćelija je duotelo (videti Labrijn AF, Meesters JI, Priem P, de Jong RN, van den Bremer ET, van Kampen MD, et al. Controlled Fabarm exchange for the generation of stable bispecific IgG1. Nat Protoc 2014;9(10):2450-63), heksatelo (videti de Jong RN, Beurskens FJ, Verploegen S, Strumane K, van Kampen MD, Voorhorst M, et al. A Novel Platform for the Potentiation of Therapeutic Antibodies Based on Antigen-Dependent Formation of IgG Hexamers at the Cell Surface. PLoS Biol 2016;14(1):e1002344); fragment jednolančanog Fab (scFab) (videti Koerber JT, Hornsby MJ, Wells JA. An improved single-chain Fab platform for efficient display and recombinant expression. J Mol Biol 2015;427(2):576-86; Hust M, Jostock T, Menzel C, Voedisch B, Mohr A, Brenneis M, et al. Single chain Fab (scFab) fragment. BMC Biotechnol 2007;7:14), ciljno mesto identifikovano stabilnošću cilja koji reaguje na afinitet leka (DARTS) (videti Pai MY, Lomenick B, Hwang H, Schiestl R, McBride W, Loo JA, et al. Drug affinity responsive target stability (DARTS) for small-molecule target identification. Methods in molecular biology 2015;1263:287-98) i avitelo (uključujući dijatela, triatela i tetratela; videti U.S. objave br.
2008/0152586 i 2012/0171115), molekule za ponovno ciljno delovanje na dualni receptor (DART) (P.A. Moore et al., Blood, 2011; 117(17):4542-4551; Veri MC, et al., Arthritis Rheum, 2010 Mar 30; 62(7):1933-43; Johnson S, et al. J Mol Biol, 2010 Apr 9;399(3):436-49)
CBA koja se mogu aktivirati
U dodatnim primerima izvođenja, obezbeđeni CBA je antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se može aktivirati (zajedno kao AA). U nekim primerima izvođenja, antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela koji se vezuje za antigen i koji se može aktivirati sadrži antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen (npr, antitela ili fragmenti antitela koji se vezuju za antitela koji su ovde opisani) specifično se vezuju za ligand na ciljnoj ćeliji (ili „ciljno mesto“) spojenoj za maskirajuću grupu (MM), tako da spajanje MM smanjuje sposobnost antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta antitela za vezivanje za ciljno mesto. U nekim primerima izvođenja, MM je spojen preko sekvence koja uključuje supstrat za proteazu, na primer, proteazu koja je aktivna u obolelom tkivu i/ili proteazu koja je ko-lokalizovana sa ciljnim mestom na mestu tretmana kod subjekta. Antitela koja se mogu aktivirati su poželjno stabilna u cirkulaciji, aktiviraju se na predviđenim mestima terapije i/ili dijagnoze, ali ne u normalnom, na primer, zdravom tkivu ili drugom tkivu koje nije ciljno za lečenje i/ili dijagnozu, i, kada se aktiviraju, pokazuju vezivanje za ciljno mesto koje je najmanje uporedivo sa odgovarajućim, nemodifikovanim antitelom. U nekim primerima izvođenja, AA su oni opisani u WO 2009/025846, WO 2010/081173, WO 2015/048329, WO 2015/116933 i WO 2016/118629.
U nekim primerima izvođenja, antitelo koje se može aktivirati ili fragment antitela sadrži:
(a) grupu koja se može cepati (CM) vezanu za antitelo ili fragment antitela (zajedno kao "AB"), pri čemu je CM polipeptid koji funkcioniše kao supstrat za proteazu; i (b) maskirnu hrupu (MM) vezanu za antitelo ili fragment antitela, pri čemu MM inhibira vezivanje antitela ili fragmenta antitela za ligand kada je antitelo koje se može aktivirati u neodcepljenom stanju,
pri čemu antitelo koje se može aktivirati u neodcepljenom stanju ima strukturni raspored od N-kraja do C-kraja kao što sledi: (MM)-(CM)-(AB) ili (AB)-(CM)-(MM).
U nekim primerima izvođenja, maskirni deo (ili „maska“) je aminokiselinska sekvenca koja je spregnuta ili na drugi način vezana za antitelo i pozicionirana unutar konstrukta antitela koji se može aktivirati tako da maskirna grupa smanjuje sposobnost antitela da specifično veže ciljno mesto. Pogodne maskirne grupe se identifikuju korišćenjem bilo koje od niza poznatih tehnika. Na primer, peptidne maskirne grupe se identifikuju korišćenjem postupaka opisanih u WO 2009/025846.
Kdod AB modifikovanog sa MM prema ciljnom mestu može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000 000, 5000 000, 10000 000, 50000 000 ili više, ili između 5-10, 10-100, 10-1 000, 10-10000, 10-100000, 10-1 000 000, 10- 10000 000, 100-1 000, 100-10000, 100-100000, 100-1000 000, 100-10000 000, 1 000-10 000, 1000- 100000, 1000-1 000 000, 1000-10000 000, 10000-100 000, 10000-1 000 000, 10 000-10 000 000, 100 000-1 000 000, ili 100000-10 000 000 puta veći od Kdod AB nemodifikovanog sa MM ili roditeljskog AB prema ciljnom mestu. Obrnuto, afinitet vezivanja AB modifikovanog sa MM prema ciljnom mestu može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000 000, 5000 000, 10000000, 50 000 000 ili više, ili između 5-10, 10-100, 10- 1000, 10-10000, 10-100000, 10-1 000 000, 10-10 000 000, 100-1 000, 100-10000, 100-100000, 100-1 000 000, 100-10000 000, 1 000-10 000, 1000-100 000, 1000-1000 000, 1000-10000 000, 10000- 100000, 10000-1000 000, 10 000-10 000 000, 100000-1 000 000, ili 100000-10 000 000 puta niži od afiniteta vezivanja od AB koji nije modifikovan sa MM ili roditeljskog AB prema ciljnom mestu.
Konstanta disocijacije (Kd) od MM prema AB je generalno veća od KdAB prema ciljnom mestu. KdMM prema AB može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000, 10 000, 100 000, 1000 000 ili čak 10000 000 puta veća od Kdod AB prema ciljnom mestu. Suprotno tome, afinitet vezivanja MM prema AB je generalno niži od afiniteta vezivanja AB prema ciljnom mestu. Afinitet vezivanja MM prema AB može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1 000, 2500, 5 000, 10000, 100000, 1 000 000, 10000 000 puta niži od afiniteta vezivanja AB prema ciljnom mestu.
Kada je AB modifikovan sa MM i nalazi se u prisustvu ciljnog mesta, specifično vezivanje AB za njegovo ciljno mesto može biti smanjeno ili inhibirano, u poređenju sa specifičnim vezivanjem AB koji nije modifikovan sa MM ili specifičnim vezivanjem roditeljskog AB za ciljno mesto. U poređenju sa vezivanjem AB koji nije modifikovan sa MM ili vezivanjem roditeljskog AB za ciljno mesto, sposobnost AB da veže ciljno mesto kada je modifikovan sa MM može da se smanji za najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% i čak 100% za najmanje 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84, 96, sati ili 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 dana ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 meseci ili više kada se meri in vivo ili u testu Target Displacement in vitro imunoapsorbujućim testom, kao što je opisano WO 2010/081173.
MM može inhibirati vezivanje AB za ciljno mesto. MM može da veže domen za vezivanje antigena AB i inhibira vezivanje AB za njegovo ciljno mesto. MM može sterički inhibirati vezivanje AB za ciljno mesto. MM može alosterički inhibirati vezivanje AB za svoje ciljno mesto. U ovim primerima izvođenja kada je AB modifikovan ili spojen sa MM i u prisustvu ciljnog mesta, nema vezivanja ili suštinski nema vezivanja AB za ciljno mesto, ili ne više od .001%, .01%, .1%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, ili 50% vezivanja AB za ciljno mesto, u poređenju sa vezivanjem AB koji nije modifikovan sa MM, roditeljskim AB ili AB koji nije povezan sa MM za ciljno mesto, najmanje 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84, 96, sati ili 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 dana ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 meseci ili više kada se meri in vivo ili u testu Target Displacement in vitro imunoapsorbujućim testom, kao što je opisano WO 2010/081173.
Kada je AB spojen ili modifikovan sa MM, MM može 'maskirati' ili smanjiti, ili inhibirati specifično vezivanje AB za njegovo ciljno mesto. Kada je AB spojen ili modifikovan pomoću MM, takvo spajanje ili modifikacija može uticati na strukturnu promenu koja smanjuje ili inhibira sposobnost AB da specifično veže svoje ciljno mesto.
AB spojen ili modifikovan sa MM može biti predstavljen sledećim formulama (po redosledu od amino (N) terminalnog regiona do karboksil (C) terminalnog regiona):
(MM)-(AB)
(AB)-(MM)
(MM)-L-(AB)
(AB)-L-(MM)
1
gde je MM maskirni deo, Ab je antitelo ili fragment antigena koji se vezuje za ciljno mesto i L je linker. U mnogim primerima izvođenja, može biti poželjno ubaciti jedan ili više linkera, npr., fleksibilnih linkera, u kompoziciju tako da se obezbedi fleksibilnost.
U određenim primerima izvođenja, MM nije prirodni vezujući partner Ab. U nekim primerima izvođenja, MM ne sadrži ili ne sadrži suštinski nikakvu homologiju sa bilo kojim prirodnim vezujućim partnerom Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70 %, 75% ili 80% slično bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70 %, 75% ili 80% identično bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 25% identičan bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 50% identičan bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 20% identičan bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab. U nekim primerima izvođenja, MM nije više od 10% identičan bilo kom prirodnom vezujućem partneru Ab.
Antitela koja se mogu aktivirati ovde mogu takođe uključiti deo koji se može cepati (CM). Takve AAs pokazuju aktiviranje/prekidanje vezivanja za cilj AB. AAs generalno uključuju antitelo ili fragment antitela (AB), modifikovan ili spojen sa maskirnim delom (MM) i ostatkom koji se može modifikovati ili cepati (CM). U nekim primerima izvođenja, CM sadrži aminokiselinsku sekvencu koja služi kao supstrat za proteazu od interesa. U drugim primerima izvođenja, CM obezbeđuje cistein-cistein disulfidnu vezu koja se može cepati redukcijom. U još drugim primerima izvođenja CM obezbeđuje fotolitički supstrat koji se može aktivirati fotolizom.
U nekim primerima izvođenja, deo koji se može cepati (ili "supstrat") uključuje aminokiselinsku sekvencu koja je supstrat za proteazu, obično ekstracelularnu proteazu. Pogodni supstrati se identifikuju korišćenjem bilo koje od niza poznatih tehnika. Na primer, peptidni supstrati se identifikuju korišćenjem postupaka opisanih u US Patentima br.
7,666,817 i 8,563,269; i WO 2014/026136. (Takođe videti, Boulware et al., Biotechnol Bioeng.
106(3):339-346 (2010)). Izborno, CM sadrži par cistein-cistein koji je sposoban da formira disulfidnu vezu, koja se može odvojiti dejstvom redukcionog sredstva. CM je postavljen tako da kada se CM cepa sredstvom za cepanje (npr., proteazni supstrat CM se cepa proteazom i/ili se cistein-cistein disulfidna veza poremeti redukcijom izlaganjem redukcionom sredstvu), u prisustvu ciljnog mesta, što rezultira odcepljenim stanjem, Ab vezuje ciljno mesto, a u
2
neodcepljenom stanju, u prisustvu ciljnog mesta, vezivanje Ab za ciljno mesto inhibira MM. Treba napomenuti da se aminokiselinska sekvenca CM može preklapati ili biti uključena u MM, tako da ceo ili deo CM olakšava "maskiranje" Ab kada je antitelo koje se može aktivirati u neodcepljenoj konformaciji.
U nekim primerima izvođenja, CM se može izabrati na osnovu proteaze koja je ko-lokalizovana u tkivu sa željenim ciljnim mestom antitela koje se može aktivirati. Poznato je mnoštvo različitih stanja u kojima je ciljno mesto od interesa ko-lokalizovano sa proteazom, gde je supstrat proteaze poznat u tehnici. Na primer, ciljno tkivo može biti kancerogeno tkivo, posebno kancerogeno tkivo solidnog tumora. U literaturi postoji mnogo izveštaja o povećanim nivoima proteaza koje imaju poznate supstrate u velikom broju kancera, na primer, solidnih tumora. Videti, npr. La Rocca et al, (2004) British J. of Cancer 90(7): 1414-1421.
Primeri supstrata mogu uključivati, ali nisu ograničeni na supstrate koje se cepaju jednim ili više od sledećih enzima: MMP-I, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-14, PLAZMIN, PSA, PSMA, CATEPSIN D, CATEPSIN K, CATEPSIN S, ADAMlO, ADAM12, ADAMTS, kaspaza-1, kaspaza-2, kaspaza-3, kaspaza-4, kaspaza-5, kaspaza-6, kaspaza-7, kaspaza-8, kaspaza-9, kaspaza-10, kaspaza-11, kaspaza-12, kaspaza-13, kaspaza-14, i TACE.
U nekim primerima izvođenja, CM je polipeptid dužine do 15 aminokiselina.
U nekim primerima izvođenja, CM je polipeptid koji uključuje prvi deo koji se može odcepiti (CMl) koji je supstrat za najmanje jednu matričnu metaloproteazu (MMP) i drugi deo koji se može odcepiti (CM2) koji je supstrat za najmanje jednu serinsku proteazu (SP). U nekim primerima izvođenja, svaka od sekvenci CM1 supstrata i CM2 supstratne sekvence CM1-CM2 supstrata je nezavisno polipeptid dužine do 15 aminokiselina.
U nekim primerima izvođenja CM je supstrat za legumain, plazmin, TMPRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, katepsin, kaspazu, humanu neutrofilnu elastazu, beta-sekretazu, uPA ili PSA. KdAb modifikovanog sa MM i CM prema ciljnom mestu može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1,000, 2500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000 000, 5000 000, 10000 000, 50000 000 ili više, ili između 5-10, 10-100, 10-1 000, 10-10000, 10-100000, 10-1 000 000, 10-10000 000, 100-1000, 100-10000, 100-100 000, 100-1000 000, 100-10 000 000, 1 000-10 000, 1000-100 000, 1000-1 000 000, 1000-10000 000, 10000-100 000, 10000-1 000 000, 10000-10 000 000, 100000-1 000 000, ili 100000-10 000 000 puta veći od Kdod Ab koji nije modifikovan sa MM i CM ili roditeljskim Ab prema ciljnom mestu. Suprotno tome, afinitet vezivanja Ab modifikovanog sa MM i CM prema ciljnom mestu može biti najmanje 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000 000, 5000000, 10 000 000, 50000 000 ili više, ili između 5-10, 10-100, 10-1000, 10-10000, 10-100000, 101 000 000, 10-10 000 000, 100-1 000, 100-10000, 100-100 000, 100-1000 000, 100-10 000 000, 1 000-10 000, 1000-100 000, 1000-1 000 000, 1000- 10000 000, 10 000-100 000, 10 000-1 000 000, 10000-10 000 000, 100000-1 000 000, ili 100000- 10000 000 puta manje od afiniteta vezivanja Ab koji nije modifikovan sa MM i CM ili roditeljskim Ab prema ciljnom mestu.
Kada je Ab modifikovan sa MM i CM i nalazi se u prisustvu ciljnog mesta, ali ne i u prisustvu modifikacionog sredstva (na primer enzima, proteaze, redukcionog sredstva, svetlosti), specifično vezivanje Ab za njegovo ciljno mesto može biti smanjeno ili inhibirano, u poređenju sa specifičnim vezivanjem Ab koji nije modifikovan sa MM i CM ili roditeljskim Ab za ciljno mesto. U poređenju sa vezivanjem roditeljskog Ab ili vezivanjem Ab koji nije modifikovan sa MM i CM za svoje ciljno mesto, sposobnost Ab da veže ciljno mesto kada je modifikovan sa MM i CM može da se smanji za najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% pa čak i 100% za najmanje 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84, 96 sati, ili 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 dana ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 meseci ili više kada se meri in vivo ili u testu Target Displacement in vitro imunoapsorbujućim testom, kao što je opisano u WO201008117.
Kako se ovde koristi, termin odcepljeno stanje se odnosi na stanje AA nakon modifikacije CM proteazom i/ili redukcije cistein-cistein disulfida, veze CM, i/ili fotoaktivacije. Termin neodcepljeno stanje, kako se ovde koristi, odnosi se na stanje AA u odsustvu cepanja CM proteazom i/ili u odsustvu redukcije cistein-cistein disulfidne veze CM, i/ili u odsustvu svetlosti. Kao što je gore rečeno, termin AA se ovde koristi da se odnosi na AA kako u svom neodcepljenom (nativnom) stanju, tako i u svom odcepljenom stanju. Obično kvalifikovanom stručnjaku će biti očigledno da u nekim primerima izvođenja odcepljenom AA može nedostajati MM zbog odcepljivanja CM proteazom, što rezultira oslobađanjem najmanje MM (npr. gde MM nije spojen sa AA kovalentnom vezom (npr. disulfidna veza između cisteinskih ostataka). Pod aktiviranjem ili prebacivanjem se podrazumeva da AA pokazuje prvi nivo vezivanja za ciljno mesto kada je u inhibiranom, maskiranom ili neodcepljenom stanju (tj., prva konformacija), i drugi nivo vezivanja za ciljno mesto u neinhibiranom, demaskiranom i/ili odcepljenom stanju (tj., drugi nivo konformacije), gde je drugi nivo ciljnog vezivanja veći od prvog nivoa vezivanja. Uopšteno govoreći, pristup ciljnog mesta prema Ab od AA je veća u prisustvu sredstva za odcepljivanje sposobnog da odcepi CM nego u odsustvu takvog sredstva za odcepljivanje. Dakle, kada je AA u neodcepljenom stanju, Ab je inhibiran od vezivanja za ciljno mesto i može se maskirati od vezivanja za ciljno mesto (tj., prva konformacija je takva da Ab ne može da veže ciljno mesto), a u odcepljenom stanju AB nije inhibiran ili je demaskiran
4
do vezivanja ciljnog mesta.
CM i AB od AA mogu biti odabrani tako da AB predstavlja vezujući deo za ciljno mesto od interesa i CM predstavlja supstrat za proteazu koja je ko-lokalizovana sa ciljnim mestom na mestu tretmana kod subjekta. Alternativno ili kao dodatak, CM je cistein-cistein disulfidna veza koja se može odcepiti kao rezultat redukcije ove disulfidne veze. AAs sadrže najmanje jednu od CM koje se cepa proteazom ili cistein-cistein disulfidnu vezu, a u nekim primerima izvođenja uključuju obe vrste CM. AA mogu alternativno ili dodatno uključiti fotolabilan supstrat, koji se može aktivirati pomoću izvora svetlosti. Ovde otkriveni AA pronalaze posebnu upotrebu gde je, na primer, proteaza sposobna da odcepi mesto u CM je prisutna na relativno višim nivoima u tkivu koje sadrži ciljno mesto na mestu lečenja (na primer, obolelo tkivo; na primer za terapeutski tretman ili dijagnostički tretman) nego u tkivu netretiranih mesta (na primer u zdravom tkivu). Ovde otkriveni AA takođe nalaze posebnu upotrebu gde je, na primer, redukciono sredstvo sposobno da redukuje mesto u CM prisutno na relativno višim nivoima u tkivu koje sadrži ciljno mesto na mestu lečenja ili dijagnostičkog mesta nego u tkivu netretiranih nedijagnostičkih mesta. Ovde otkriveni AA takođe nalaze posebnu upotrebu gde se, na primer, izvor svetlosti, na primer, putem lasera, sposoban da fotolizuje mesto u CM, uvodi u tkivo koje sadrži ciljno mesto na mestu lečenja ili dijagnostike.
U nekim primerima izvođenja AA mogu obezbediti smanjenu toksičnost i/ili neželjene sporedne efekte koji bi inače mogli da nastanu zbog vezivanja Ab na mestima koja nisu tretirana ako Ab nije maskiran ili na drugi način inhibiran da veže svoje ciljno mesto. Gde AA sadrži CM koji se može odcepiti redukcionim sredstvom koje olakšava redukciju disulfidne veze, AB takve AA može se izabrati da iskoristi aktivaciju Ab gde je ciljno mesto od interesa prisutno na željenom mestu tretmana koje karakterišu povišeni nivoi redukcionog sredstva, tako da okruženje ima veći potencijal redukcije nego, na primer, okruženje netretiranog mesta.
Generalno, AA može biti dizajniran izborom Ab od interesa i konstruisanjem ostatka AA tako da, kada je konformaciono ograničen, MM obezbeđuje maskiranje Ab ili smanjenje vezivanja Ab za njegovo ciljno mesto. Kriterijumi za strukturni dizajn koje treba uzeti u obzir da bi se obezbedila ova funkcionalna karakteristika.
AA daju se promenljivi fenotip željenog dinamičkog opsega za vezivanje ciljnog mesta u inhibiranoj nasuprot neinhibiranoj konformaciji. Dinamički opseg se generalno odnosi na odnos (a) maksimalnog detektovanog nivoa parametra pod prvim skupom uslova prema (b) minimalnoj detektovanoj vrednosti tog parametra pod drugim skupom uslova. Na primer, u kontekstu AA, dinamički opseg se odnosi na odnos (a) maksimalnog detektovanog nivoa vezivanja ciljnog proteina za AA u prisustvu proteaze sposobne da cepa CM od AA prema (b) minimalnom detektovanom nivou vezivanja ciljnog proteina za AA u odsustvu proteaze. Dinamički opseg AA može se izračunati kao odnos konstante ravnoteže disocijacije AA sredstva za cepanje (npr. enzima) prema ravnotežnoj konstanti ravnoteže tretmana AA sredstva za cepanje. Što je veći dinamički opseg AA, to je bolji promenljivi fenotip AA. AA koje imaju relativno veće vrednosti dinamičkog opsega (npr. veće od 1) pokazuju poželjnije fenotipove prebacivanja tako da se ciljni protein koji se vezuje od strane AA javlja se u većoj meri (npr. pretežno se javlja) u prisustvu sredstva za cepanje (npr. enzima) sposobnog da cepa CM od AA nego u odsustvu sredstva za cepanje.
AA se mogu obezbediti u različitim strukturnim konfiguracijama. Primeri formule za AA su dati u nastavku. Posebno se smatra da se redosled od N- do C-terminusa AB, MM i CM može obrnuti unutar AA. Takođe je posebno predviđeno da se CM i MM mogu preklapati u sekvenci aminokiselina, na primer, tako da je CM sadržan u MM.
Na primer, AA mogu biti predstavljeni sledećom formulom (po redosledu od amino (N) terminalnog regiona do karboksil (C) terminalnog regiona:
(MM)-(CM)-(AB)
(AB)-(CM)-(MM) gde je MM maskirni deo, CM je deo koji se može cepati, a AB je antitelo ili njegov fragment. Treba napomenuti da iako su MM i CM naznačeni kao različite komponente u gornjoj formuli, u svim ilustrativnim primerima izvođenja (uključujući formule) koji su ovde otkriveni, smatra se da se sekvence aminokiselina MM i CM mogu preklapati, npr. CM je u potpunosti ili delimično sadržan u MM. Pored toga, formule iznad obezbeđuju dodatne aminokiselinske sekvence koje mogu biti postavljene na N-terminus ili C-terminus prema AA elemenatima.
U određenim primerima izvođenja, može biti poželjno ubaciti jedan ili više linkera, npr. fleksibilnih linkera, u AA konstrukt tako da obezbedi fleksibilnost na jednom ili više MM-CM spoja, CM-AB spoja ili oba. Na primer, AB, MM i/ili CM možda ne sadrže dovoljan broj ostataka (npr. Gly, Ser, Asp, Asn, posebno Gly i Ser, posebno Gly) da bi se obezbedila željena fleksibilnost. Kao takav, promenljivi fenotip takvih AA konstrukata mogu imati koristi od uvođenja jedne ili više aminokiselina da bi se obezbedio fleksibilni linker. Pored toga, kao što je opisano u nastavku, gde je AA obezbeđen kao konformaciono ograničen konstrukt, fleksibilni linker se može operativno umetnuti da bi se olakšalo formiranje i održavanje ciklične strukture u neodcepljenom AA.
Na primer, u određenim primerima izvođenja AA sadrži jednu od sledećih formula (gde formula ispod predstavlja aminokiselinsku sekvencu u smeru od N- do C-terminusa ili u smeru od C-do N-terminusa).
(MM)-L1-(CM)-(AB)
(MM)-(CM)-L1-(AB)
(MM)-L1-(CM)-L2-(AB)
CyClo[L1-(MM)-L2-(CM)-L3-(AB)]
pri čemu su MM, CM i AB kao što su gore definisani; pri čemu L1, L2i L3su svaki nezavisno i izborno prisutni ili odsutni, su isti ili različiti fleksibilni linkeri koji uključuju najmanje 1 fleksibilnu aminokiselinu (npr. Gly); i pri čemu je CyClo prisutan, AA je u obliku ciklične strukture zbog prisustva disulfidne veze između para cisteina u AA. Pored toga, formule iznad obezbeđuju dodatne aminokiselinske sekvence koje mogu biti postavljene na N-terminus ili C-terminusu prema AA elemenatima. Treba razumeti da u formuli CyClo[L1-(MM)-L2-(CM)-L3-(AB)], cisteini odgovorni za disulfidnu vezu mogu biti pozicionirani u AA da omogući jedan ili dva repa, čime se generiše laso ili omega struktura kada je AA u disulfidno vezanoj strukturi (i samim tim konformaciono ograničenom stanju). Aminokiselinska sekvenca repa(ova) može da obezbedi dodatne AA karakteristike, kao što je vezivanje za ciljni receptor da bi se olakšala lokalizacija AA, povećanje poluživota u serumu AA, i slično. Ciljne grupe (npr., ligand za receptor ćelije prisutan u ciljnom tkivu) i delovi koji produžavaju poluživot u serumu (npr. polipeptidi koji vezuju serumske proteine, kao što su imunoglobulin (npr. IgG) ili serumski albumin (npr. serumski albumin (HSA)).
Linkeri pogodni za upotrebu u ovde opisanim AA su generalno oni koji obezbeđuju fleksibilnost modifikovanog AB ili AA da bi se olakšala inhibicija vezivanja AB za ciljno mesto. Takvi linkeri se generalno nazivaju fleksibilnim linkerima. Pogodni linkeri mogu biti lako odabrani i mogu biti bilo koje pogodne različite dužine, kao što je od 1 aminokiseline (npr. Gly) do 20 aminokiselina, od 2 aminokiseline do 15 aminokiselina, od 3 aminokiseline do 12 aminokiselina, uključujući 4 aminokiseline do 10 aminokiselina, 5 aminokiselina do 9 aminokiselina, 6 aminokiselina do 8 aminokiselina, ili 7 aminokiselina do 8 aminokiselina, i mogu biti 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 aminokiselina.
Primeri fleksibilnih linkera uključuju glicinske polimere (G)n, glicin-serinski polimeri (uključujući, na primer, (GS)n, (GSGGS)ni (GGGS)n, gde je n ceo broj od najmanje jednog), glicin-alanin polimeri, alanin-serinski polimeri i drugi fleksibilni linkeri poznati u tehnici. Glicin i glicin-serinski polimeri su relativno nestrukturirani i stoga mogu da služe kao neutralna veza između komponenti. Glicin pristupa znatno više fi-psi prostoru nego čak i alanin, i mnogo je manje ograničen od ostataka sa dužim bočnim lancima (videti Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)). Primeri fleksibilnih linkera uključuju, ali nisu ograničeni na Gly-Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly-Ser-Gly, Gly-Ser-Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Ser-Gly, Gly-Ser-Ser-Ser-Gly i slično. Stručnjak sa uobičajenim znanjem će prepoznati da taj dizajn AA može uključiti linkere koji su svi ili delimično fleksibilni, tako da linker može uključivati fleksibilni linker kao i jedan ili više delova koji daju manje fleksibilnu strukturu da bi se obezbedila željena AA struktura.
Pored gore opisanih elemenata, modifikovani AB i AA mogu da sadrže dodatne elemente kao što je, na primer, aminokiselinska sekvenca N- ili C-terminusa od AA. Na primer, AA mogu uključiti ciljni deo da bi se olakšalo dostavljanje u ćeliju ili tkivo od interesa. Pored toga AA mogu biti obezbeđeni u kontekstu proteina skele da bi se olakšao prikaz AA na površini ćelije.
U nekim primerima izvođenja, antitelo koje se može aktivirati takođe uključuje signalni peptid. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je konjugovan sa antitelom koje se može aktivirati, preko spejsera. U nekim primerima izvođenja, spejser je konjugovan sa antitelom koje se može aktivirati, u odsustvu signalnog peptida. U nekim primerima izvođenja, spejser je spojen direktno sa MM antitela koje se može aktivirati. U nekim primerima izvođenja, spejser je spojen direktno za MM antitela koje se može aktivirati, u strukturnom rasporedu od N-terminusa do C-terminusa spejsera -MM-CM-AB.
Pogodni spejseri i tehnologija spejsera su poznati u tehnici i mogu se rutinski koristiti za inkorporiranje spejsera u nekim primerima izvođenja obezbeđenih antitela koja se mogu aktivirati. Videti, na primer, WO 2016/179285 (npr. na stranicama 52-53).
U nekim primerima izvođenja, antitelo koje se može aktivirati je izloženo i cepa se proteazom tako da, u aktiviranom ili odcepljenom stanju, aktivirano antitelo uključuje sekvencu lakog lanca koja uključuje najmanje deo LP2 i/ili CM sekvence nakon što je proteaza odcepila CM. CM se specifično cepa najmanje jednom proteazom brzinom od oko 0.001-1500 × 10<4>M<-1>S<-1>ili najmanje 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 500, 750, 1000, 1250 ili 1500 × 10<4>M<-1>S<-1>. U nekim primerima izvođenja, CM se specifično cepa brzinom od oko 100 000 M<-1>S<-1>. U nekim primerima izvođenja, CM se specifično cepa brzinom od oko l × l0<2>do oko 1 × 10<6>M<-1>S<-1>(tj. od oko 1×10<2>do oko l × l0<6>M-<1>S<-1>). Za specifično cepanje enzimom, uspostavlja se kontakt između enzima i CM. Kada je antitelo koje se može aktivirati, koje sadrži Ab (npr., antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za EpCAM) spojeno sa MM i CM u prisustvu ciljne i dovoljne enzimske aktivnosti, CM može da se odcepi. Dovoljna aktivnost enzima može se odnositi na sposobnost enzima da uspostavi kontakt sa CM i utiče na cepanje. Lako se može zamisliti da enzim može biti u blizini CM, ali ne može da se cepa zbog drugih ćelijskih faktora ili proteinske modifikacije enzima.
Proizvodnja konjugata sredstva koje se vezuje za ćeliju i leka
Da bi se bilo koje od ovde opisanih citotoksičnih jedinjenja ili njihovih derivata povezali sa sredstvom za vezivanje ćelije, citotoksično jedinjenje može da sadrži vezujući deo sa reaktivnom grupom koja je vezana za njega. Ova jedinjenja mogu biti direktno povezana sa sredstvom za vezivanje ćelija. Reprezentativni postupci za vezivanje citotoksičnih jedinjenja koja imaju reaktivnu grupu koja je vezana za njih sa sredstvom za vezivanje ćelije da bi se proizveli konjugati sredstva za vezivanje ćelije-citotoksično sredstvo opisani su u Primerima. Bifunkcionalni unakrsno vezujući reagens može prvo da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem da bi se dobilo jedinjenje koje ima vezujući deo sa jednom reaktivnom grupom koja je vezana za njega (tj. jedinjenje lek-linker), koje zatim može da reaguje sa sredstvom za vezivanje ćelije. Alternativno, jedan kraj bifunkcionalnog unakrsno vezujućeg reagensa može prvo da reaguje sa sredstvom za vezivanje ćelije da bi se obezbedilo sredstvo za vezivanje ćelije koji nosi vezujući deo sa jednom reaktivnom grupom koja je vezana za njega, koja zatim može da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem. Vezujući deo može da sadrži hemijsku vezu koja omogućava oslobađanje citotoksičnog dela na određenom mestu. Pogodne hemijske veze su dobro poznate u tehnici i uključuju disulfidne veze, tioetarske veze, veze osetljive na kiselinu, veze osetljive na svetlost, veze osetljive na peptidazu i veze osetljive na esterazu (videti npr. US Patente 5,208,020; 5,475,092; 6,441,163; 6,716,821; 6,913,748; 7,276,497; 7,276,499; 7,368,565; 7,388,026 i 7,414,073). Poželjne su disulfidne veze, veze osetljive na tioetar i peptidazu. Drugi linkeri koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju linkere koji se ne mogu odcepiti, kao što su oni detaljno opisani u U.S. objavi broj 2005/0169933, ili naelektrisani linkeri ili hidrofilni linkeri i opisani su u US 2009/0274713, US 2010/01293140 i WO 2009/134976.
Rastvor sredstva za vezivanje ćelije (npr., antitela) u vodenom puferu može da se inkubira sa molarnim viškom bifunkcionalnog unakrsno vezujućeg sredstva, kao što je N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)pentanoat (SPP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)butanoat (SPDB), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)2-sulfo butanoat (sulfo-SPDB) za uvođenje ditiopiridil grupa.
Modifikovano sredstvo za vezivanje ćelije (npr., modifikovano antitelo) može zatim da reaguje sa citotoksičnim jedinjenjem koje sadrži tiol koje je ovde opisano, da bi se proizveo konjugat sredstva za vezivanje ćelije-citotoksično sredstvo vezan disulfidom prema ovom pronalasku. Ovde opisano citotoksično jedinjenje koje sadrži tiol može da reaguje sa bifunkcionalnim unakrsno vezujućim sredstvom kao što je N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)pentanoat (SPP), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)butanoat (SPDB), N-sukcinimidil-4-(2-piridilditio)2-sulfo butanoat (sulfo-SPDB) da bi se formiralo citotoksično sredstvo-linker jedinjenje, koje zatim može da reaguje sa sredstvom koje vezuje ćeliju za proizvodnju konjugata sredstva za vezivanje ćelije-citotoksičnog sredstva vezanog disulfidom iz ovog pronalaska. Citotoksično sredstvolinker jedinjenje može se pripremiti in situ bez prečišćavanja pre nego što reaguje sa sredstvom za vezivanje ćelije. Alternativno, citotoksično sredstvo-linker jedinjenje može se prečistiti pre nego što reaguje sa sredstvom za vezivanje ćelije.
Konjugat sredstva za vezivanje za ćelije-citotoksičnog sredstva može se prečistiti korišćenjem bilo kog postupka prečišćavanja poznatog u struci, kao što su one opisane u US Patentu br.
7,811,572 i US objavi br. 2006/0182750. Na primer, konjugat sredstva koji vezuje ćelijucitotoksičnog sredstva može se prečistiti korišćenjem filtracije tangencijalnog protoka, adsorptivne hromatografije, adsorptivne filtracije, selektivne precipitacije, neapsorptivne filtracije ili njihove kombinacije. Poželjno je da se za prečišćavanje konjugata koriste tangencijalna protočna filtracija (TFF, takođe poznata kao filtracija unakrsnim tokom, ultrafiltracija i dijafiltracija) i/ili smole za adsorpcionu hromatografiju.
Broj vezanih citotoksičnih molekula po molekulu antitela može se odrediti spektrofotometrijski merenjem odnosa apsorbance na 280 nm i 330 nm. U nekim primerima izvođenja, u proseku 1-10 citotoksičnih jedinjenja/molekula(a) antitela može biti povezano ovde opisanim postupcima. U nekim primerima izvođenja, prosečan broj vezanih citotoksičnih jedinjenja po molekulu antitela (DAR) je 2-12. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 2-10. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 2-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 2.5-4.0. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 4-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 5-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 6-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 6.5-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.1-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.2-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.3-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.4-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.5-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.6-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.7-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.8-8. U nekim primerima izvođenja, DAR vrednost je 7.9-8. U nekom primeru izvođenja, kompozicija (npr. farmaceutska kompozicija) koja sadrži konjugate pronalaska ima DAR vrednost između 2 i 12, između 2 i 10, tačnije između 6 i 8. U nekim primerima izvođenja, prosečan broj povezanih citotoksičnih jedinjenja po molekulu antitela (DAR) je 7-8, tačnije 8.
U nekim primerima izvođenja, kada je antitelo vezano sa citotoksičnim sredstvom preko cistein tiol grupe, konjugat ima 1 citotoksično jedinjenje po molekulu antitela. U nekim primerima izvođenja, konjugat ima 1 ili 2 citotoksična jedinjenja po molekulu antitela. U nekim primerima izvođenja, konjugat ima 2 citotoksična jedinjenja po molekulu antitela. U nekim primerima izvođenja, prosečan broj povezanih citotoksičnih jedinjenja po molekulu antitela (DAR) je 1.5 do 2.5, tačnije 1.8-2.2. U nekim primerima izvođenja, kompozicija (npr., farmaceutska kompozicija) koja sadrži konjugate pronalaska ima DAR vrednost između 1.0 i 2.5, između 1.5 i 2.5, tačnije između 1.8 i 2.2 ili između 1.9 i 2.1.
Reprezentativni postupci za pripremu konjugata sredstvo koje vezuje ćeliju-lek iz ovog pronalaska su opisani u 8,765,740 i U.S. prijavi broj objave 2012/0238731.
Kompozicije
Predmetni pronalazak obuhvata farmaceutsku kompoziciju koja sadrži bilo koje od jedinjenja opisanih ovde, njihove derivate ili njihove konjugate (i/ili njihove solvate, hidrate i/ili soli) i farmaceutski prihvatljiv nosač.
Farmaceutske kompozicije opisane ovde mogu se primenjivati na bilo koji broj načina za lokalni ili sistemski tretman. Primena može biti topikalna (kao što je na mukoznim membranama uključujući vaginalnu i rektalnu isporuku) kao što su transdermalni flasteri, masti, losioni, kreme, gelovi, kapi, supozitorije, sprejevi, tečnosti i praškovi; plućna (npr., inhalacijom ili insuflacijom praha ili aerosola, uključujući nebulizator; intratrahealno, intranazalno, epidermalno i transdermalno); oralna; ili parenteralna uključujući intravensku, intraarterijsku, subkutanu, intraperitonealnu ili intramuskularnu injekciju ili infuziju; ili intrakranijalna (npr., intratekalna ili intraventrikularna) primena. U nekim posebnim izvođenjima, primena je intravenska. Farmaceutske kompozicije opisane ovde se takođe mogu koristiti in vitro ili u ex vivo.
Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači, razblaživači i ekscipijensi su dobro poznati i mogu ih odrediti prosečni stručnjaci u ovoj oblasti kako to klinička situacija nalaže. Primeri pogodnih nosača, razblaživača i/ili ekscipijenasa uključuju: (1) Dulbecco-ovv fiziološki rastvor puferovan sa fosfatom, pH oko 7.4, koji sadrži ili ne sadrži oko 1 mg/mL do 25 mg/mL humanog
1
serumskog albumina, (2) 0.9% fiziološki rastvor (0.9 % tež./v NaCl), i (3) 5% (tež./v) dekstroze; i takođe može da sadrži antioksidans kao što je triptamin i stabilizator kao što je Tween 20.
Postupci upotrebe
Predmetne kompozicije su korisne za inhibiciju abnormalnog rasta ćelija ili lečenje proliferativnog poremećaja kod sisara (npr., čoveka).
Predmetni pronalazak obuhvata farmaceutsku kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupku lečenja kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine farmaceutske kompozicije. U određenim primerima izvođenja, kancer uključuje hematološki kancer, leukemiju i limfom. U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer limfnog organa ili hematološki malignitet. U nekim primerima izvođenja, kancer je limfom ili leukemija.
Na primer, kancer može biti izabran iz grupe koja se sastoji od: akutne mijeloidne leukemije (AML, uključujući AML sa niskim CD33, P-glikoprotein pozitivnu AML, relapsnu AML ili refraktornu AML), hronične mijelogene leukemije (CML), uključujući blastnu krizu CML i Abelson onkogen povezan sa CML (Bcr-ABL translokacija), mijelodisplastičnog sindroma (MDS), akutne limfoblastične leukemije (ALL), uključujući, ali ne ograničavajući se na, akutnu B limfoblastičnu leukemiju ili B-ćelijsku akutnu limfoblastičnu leukemiju (B-ALL), hroničnr limfocitne leukemije (CLL), uključujući Richter-ov sindrom ili Richter-ovu transformaciju CLL, leukemije dlakavih ćelija (HCL), akutne promijelocitne leukemije (APL), B-ćelijske hronične limfoproliferativne bolesti (B-CLPD), atipične hronične limfocitne leukemije (poželjno sa izraženom ekspresijom CD11c), difuznog krupnoćelijskog limfoma B-ćelija (DLBCL), blastične plazmacitoidne neoplazme dendritske ćelije (BPDCN), ne-Hodgkin-ovih limfoma (NHL), uključujući leukemiju Mantle ćelija (MCL) i mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkin-ov limfom, sistemsku mastocitozu i Burkitt-ov limfom.
U nekim primerima izvođenja, kancer je kancer endometrijuma, kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer bešike, kancer želuca, kancer pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer dojke (npr., trostruko negativni kancer dojke (TNBC)), kancer glave i vrata, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer štitne žlezde, kancer testisa, mijeloidni kancer, melanom i limfoidni kancer. U nekim primerima izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća ili sitnoćelijski kancer pluća. U daljim primerima izvođenja, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti korisna u lečenju nesitnoćelijskog kancera pluća (skvamoznih ćelija, neskvamoznih ćelija, adenokarcinoma ili krupnoćelijskog
2
nediferenciranog karcinoma), kolorektalnog kancera (adenokarcinoma, gastrointestinalnih karcinoidnih tumora, gastrointestinalnih stromalnih tumora, primarnog kolorektalnog limfoma, leiomiosarkoma ili karcinom skvamoznih ćelija) ili kancer dojke (npr., trostruko negativni kancer dojke (TNBC)).
Ovaj pronalazak, ovako uopšteno opisan, biće lakše razumljiv pozivanjem na sledeće primere, koji su dati kao ilustracija i nije predviđeno da ograničavaju ovaj pronalazak. Jedinjenja 2b, 2d, 4b, 4d, 7b, 8b, 8c, 22e, 34a i 34b nisu predmet pronalaska.
PRIMERI
Sledeće skraćenice se koriste za sledeće termine:
DAR Odnos leka i antitela;
DIPEA diizopropiletilamin;
DMF dimetilformamid;
DMSO Dimetil sulfoksid;
DMTMM (4-(4,6-dimetoksi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metil-morfolinijum hlorid;
EDTA Etilendiamintetrasirćetna kiselina;
EPPS 3-[4-(2-hidroksietil)-1-piperazinil]propansulfonska kiselina;
Fmoc 9-Fluoroenilmetoksikarbonil;
HMPA heksametilfosforamid;
i.v. Intravenski;
NMM N-metilmorfolin;
PPTS piridinijum p-toluensulfonat;
SEC Ekskluziona hromatografija prema veličini;
SEM Standardna greška srednje vrednosti;
TCEP hidrohlorid 3,3',3"-fosfinetriiltripropanske kiseline;
TEA trietilamin; i
TFA Trifluorosirćetna kiselina.
Sl. 1 i Sl. 2 prikazuju sintezu gradivnih blokova kamptotecina. Sl. 3, Sl. 4 i Sl. 5 prikazuju sintezu bočnih lanaca. Sl.6 i Sl.7 prikazuju spajanje blokova kamptotecina sa bočnim lancima. Sl. 8 prikazuje sintezu dodatnih metabolita kamptotecina. Sl. 9 prikazuje spajanje blokova kamptotecina sa bočnim lancima. Sl.10 prikazuje sintezu dodatnih jedinjenja kamptotecina.
Sl. 11 prikazuje jedinjenja koja se koriste za poređenje, koja uključuju generičku Ab-999 strukturu ADC koji nosi 999 deo povezan preko redukovanih međulančanih disulfida antitela. Jedinjenja 998 i 999 su pripremljena kako je opisano u US patentu 2016/0297890 A1 i referencama koje se nalaze u njemu.
Primer 1. Sinteza jedinjenja 2a-2e
2a: U posudu koja sadrži anhidrovani 1,2-dihloretan (80 mL) dodat je 1 M bor trihlorid u dihlorometanu (16 mL, 16 mmol), zatim je ohlađen do 0°C u kupatilu sa ledenom vodom. 1a (2.5 g, 20 mmol) je dodat u porcijama, zatim je mešan na 0°C tokom 10 min, zatim je dodat hloroacetonitril (2.7 mL, 23.5 mmol), zatim je dodat aluminijum hlorid (3.5 g, 26 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcioni rastvor je postepeno zagrevan do sobne temperature. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 min, reakciona smeša je zagrevana na refluksu 39 h. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i polako je dodata hladna voda (40 mL), zatim je dodat 5% vodeni rastvor HCl. Posle 30 min, razblažen je dihlorometanom (80 mL). Organski sloj je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću HPLC sa reverznom fazom (200 g C18 kolona, 80 mL/min, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 5 min i zatim do 95% CH3CN tokom 22 min, zatim 95% CH3CN tokom 5 min) da bi se dobilo jedinjenje 2a kao prljavo bela čvrsta supstanca (1.52 g, prinos 38%). MS
2b: AlCl3(1.0 g, 7.7 mmol) i toluen (3.4 mL) su dodati u posudu od 100 mL opremljenu magnetnim mešanjem. Rastvor 1b (1.0 g, 6.4 mmol) u toluenu (3.85 mL) je dodat u posudu u
4
atmosferi azota, a zatim 1 M BCl3u toluenu (3.85 mL, 7.6 mmol). 2-hloroacetonitril (1.7 mL, 26.6 mmol) je dodat u kapima tokom približno 2 minuta i zatim je u posuda postavljena sa refluksnim kondenzatorom i zagrevana u uljanom kupatilu na 114°C tokom 3 h. Kupatilo za zagrevanje je uklonjeno i nakon 4 minuta termometar je stavljen u posudu. Posle hlađenja na 50°C, reakciona smeša je sipana u dejonizovanu vodu (50 mL) i zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 60 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, zatim je rastvarač uklonjen rotacionim isparavanjem pod vakuumom. Ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu etil acetata i zatim prečišćen na koloni od 80 g silicijum dioksida eluiranjem sa 92:8 heksanima:etil acetatom. Frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem pod vakuumom da bi se dobilo 0.69 g željenog proizvoda 2b (46% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. MS (M+ H)+ 233.8;<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.79 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.62 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.54 (s, 4H).
2e: U rastvor jedinjenja 2a (155 mg, 0.77 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (1.5 mL) dodat je benzilamin (0.68 mL, 6.2 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g kolona silikagela, CH2Cl2/MeOH, 0 do 10% MeOH tokom 16 minuta) da bi se dobilo 156 mg 2e (74% prinos). MS (ESI): m/z 273.4 (M H)<+>.
2c: U posudu koja sadrži anhidrovani 1,2-dihloretan (50 mL) dodat je 1 M bor trihlorid u dihlorometanu (9.95 mL, 9.95 mmol), zatim je ohlađena do 0°C u kupatilu sa ledenom vodom. 1a (1.56 g, 12.4 mmol) je dodat u porcijama i zatim je mešan na 0°C tokom 10 minuta, dodat je 5-bromovaleronitril (1.72 mL, 14.9 mmol), zatim je dodat aluminijum hlorid (2.16 g, 16.2 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcioni rastvor je postepeno zagrevan do sobne temperature. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, reakciona smeša je zagrevana na refluksu 39.5 sati. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i polako je dodata hladna voda (25 mL), što je praćeno dodavanjem 5% vodenog rastvora HCl. Posle 30 minuta, razblažen je dihlorometanom (50 mL). Organski sloj je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću HPLC sa reverznom fazom (100 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 5 minuta, zatim do 95% CH3CN tokom 15 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 2c kao prljavo bela čvrsta supstanca (1.42 g, prinos 40%). MS (ESI): m/z 289.2 (M H)<+>.
2d: U osušenu posudu koja je sadržala anhidrovani 1,2-dihloretan (40 mL) dodat je bor trihlorid (4.73 mL, 4.73 mmol, 1 M u CH2Cl2) i ohlađena je do 0°C sa kupatilom sa ledenom vodom. Jedinjenje 1b (0.93 g, 5.92 mmol) je dodato u porcijama i nakon mešanja na 0°C tokom 10 minuta, dodat je 5-bromovaleronitril (0.819 mL, 7.1 mmol), zatim je dodat aluminijum hlorid (1.025 g, 7.69 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcioni rastvor je postepeno zagrevan do sobne temperature. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, reakciona smeša je zagrevana na refluksu 45 sati. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i polako je dodata hladna voda (25 mL), a zatim 5 mL 5% rastvora HCl. Posle 30 minuta, razblažen je dihlorometanom (50 mL). Organski sloj je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću HPLC sa reverznom fazom (100 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim do 95% CH3CN tokom 15 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 2d kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.776 g, prinos 41%). MS (ESI): m/z 321.0 (M H)<+>.
Primer 2. Opšti postupak za jedinjenja 4a - 4d
4b: Jedinjenje 3 (777 mg, 2.95 mmol), 2b (690 mg, 2.95 mmol) i PPTS (37 mg, 0.15 mmol) su suspendovani u posudi od 50 mL opremljenoj refluksnim kondenzatorom koji sadrži anhidrovani toluen (10 mL). Reakcija je zagrevana do refluksa uz magnetno mešanje u atmosferi argona preko noći, a zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Smeša je filtrirana pod vakuumom, a čvrste materije su isprane toluenom (5 mL) da bi se dobilo 1.08 g željenog proizvoda 4b kao braon čvrsta supstanca (prinos 79%). MS (M+H)+ 461, MS (M-H) 459.
4a: Pripremljen opštim postupkom, rastvor jedinjenja 2a (3.15 g, 15.64 mmol) i jedinjenje 3 (3.92 g, 14.89 mmol) u toluenu (200 mL) sa PPTS (187 mg, 0.75 mmol) je refluksovan 40 sati da bi se dobilo 4a (4.74 g) u prinosu od 74%. MS (ESI): m/z 429.2.431.0 (M H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (d, J = 8.3, 1.2 Hz, 1H), 8.10 - 7.90 (m, 1H), 7.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.85 - 5.20 (m, 6H), 2.61 - 2.45 (m, 3H), 1.98
4c: Prateći opšti postupak, rastvor jedinjenja 2c (1.695 g, 5.88 mmol) i jedinjenja 3 (1.548 g, 5.88 mmol) u toluenu (50 mL) sa PPTS (0.074 g, 0.294 mmol) je refluksovan 21.5 sati. Rastvarač je isparen i ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu od 10% metanola u CH2Cl2, zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu (40 g silika kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 10% MeOH tokom 20 min). 4c (2.56 g) sa prinosom od 84% posle hromatografije na silika gelu (40 g kolona silika, CH2Cl2/MeOH, 0 do 10% MeOH tokom 20 minuta). MS (ESI): m/z 515.2 i 517.1 (M H)<+>, 513.1 i 515.1 (M - H)-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39 - 8.17 (m, 1H), 7.89 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.52 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 3.65 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.28 - 3.09 (m, 2H), 2.51 (t, J = 1.8 Hz, 3H), 2.15 - 1.95 (m, 2H), 1.95 - 1.71 (m, 4H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H). HRMS (M H)<+>izrač.515.0981, pronađeno 515.0992.
4d: Prateći opšti postupak, rastvor jedinjenja 2d (776 mg, 2.42 mmol) i jedinjenja 3 (670 mg, 2.54 mmol) u toluenu (20 mL) sa PPTS (30 mg, 0.12 mmol) je refluksovan 24 sata da bi se dobilo 4d (1.02 g) u prinosu od 77% posle hromatografije na silika gelu (40 g kolona silika, CH2Cl2/MeOH, 0 do 10% MeOH tokom 23 minuta). MS (ESI): m/z 547.0 i 548.9 (M H)<+>, 544.8 i 546.8 (M - H)-.
4e: U rastvor 6a (10 mg, 0.024 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat NMM (3 µL, 0.027 mmol) i 6-bromoheksalna kiselina (7.2 mg, 0.037 mmol) i rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (13.5 mg, 0.049 mmol) u dejonizovanoj vodi. Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 10% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobilo 15 mg 4e (prinos 98%). MS (ESI): m/z 586.1 (M H)<+>, 588.0 (M H)<+>.
Primer 3. Sinteza jedinjenja 8a-8e i 8p
8a: Rastvor jedinjenja 4c (860 mg, 1.67 mmol) u HMPA (5 mL) i dejonizovane vode (0.9 mL) je zagrejan na 101°C tokom 18 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i rastvor je napunjen na C18 kertridž i prečišćen HPLC reverznom fazom (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim do 95% CH3CN tokom 15 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobio 8a kao čvrsta supstanca koja je bila kontaminirana nečistoćama. Dalje je prečišćen hromatografijom na silika gelu (CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH) da bi se dobilo 392 mg 8a kao prljavo bela čvrsta supstanca (prinos 51%). MS (ESI): m/z 453.2 (M H)<+>, 451.1 (M - H)-.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.00 (dd, J = 8.2, 1.1 Hz, 1H), 7.52 - 7.33 (m, 2H), 5.53 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 5.18 - 4.96 (m, 2H), 3.66 (q, J = 7.2, 6.7 Hz, 2H), 3.24 - 3.06 (m, 2H), 2.45 (dd, J = 20.1, 2.7 Hz, 3H), 1.94 (tdd, J = 7.1, 6.0, 2.0 Hz, 2H), 1.88 - 1.66 (m, 4H), 1.00 (td, J = 7.4, 2.5 Hz, 3H).<13>C NMR (101 MHz, Metanol-d4) δ 173.32, 163.68, 161.19, 157.56, 151.44, 151.09, 148.68, 148.56, 146.06, 144.46, 128.10, 127.89, 127.22, 125.66, 125.60, 124.26, 118.92, 111.91, 111.69, 97.96, 72.74, 65.28, 60.97, 49.40, 32.15, 30.80, 29.00, 25.96, 14.09, 14.06, 6.75; HRMS (M H)<+>izrač. 453.1826, pronađeno 453.1832.
8b: Pripremljeno od 4d pomoću 8a postupka. Prinos (prinos 48%). MS (ESI): m/z (M+H)+ 485.7.
8c: Jedinjenje 4a (100 mg, 0.23 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF (2 mL) kome je dodat 2-merkaptoetanol (0.2 mL, 2.8 mmol), a zatim TEA (0.13 mL, 0.94 mmol) i magnetno je mešan tokom 20 min. Reakciona mešavina je injektirana na 250 g C18 kolone srednjeg pritiska koja je prethodno ekvilibrisana sa 95:5 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.2% mravlje kiseline: acetonitril. Kolona je eluirana brzinom od 50 mL/min sa 95:5 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.2% mravlje kiseline: acetonitrila tokom 5 minuta, a zatim sa linearnim gradijentom od 5% acetonitrila na 5 minuta do 95% acetonitrila na 35 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 85 mg 8c (78% prinos). MS (ESI): m/z 471.4 (M H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.25 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.87 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.28 (m, 2H), 3.56 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 2.62 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.48 - 2.44 (m, 3H), 1.87 (hept, J = 7.1, Hz, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 172.44, 163.07, 160.58, 156.69, 152.16, 149.97, 148.66, 148.53, 145.48, 140.06, 128.18, 128.16, 127.28, 127.07, 126.61, 126.54, 123.59, 119.09, 112.56, 112.35, 96.77, 72.36, 65.26, 60.83, 49.69, 34.38, 30.31, 28.78, 15.24, 15.20, 7.75. HRMS (M H)<+>471.1390, pronađeno 471.1393.
8d : Pripremljeno slično kao 8c reakcijom 1,3-propanditiola sa 4a (60% prinos). MS (ESI): m/z 501.7 (M H)<+>.
8e: Pripremljeno slično kao 8c reakcijom 1,2-etanditiola sa 4a (47% prinos). MS (ESI): (M H)<+>izrač.487.1, pronađeno 487.3.
8p: Jedinjenje 8e (28 mg, 0.057 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom THF (1 mL) kome je dodata 60% NaH emulzija u mineralnom ulju (5 mg, 2.1 mmol) uz magnetno mešanje. Posle 2 min, dodat je jodometan (20 µL, 0.32 mmol). Posle 20 minuta rastvarač je isparen pod vakuumom i ostatak je stavljen u anhidrovani DMF (1 mL), zatim prečišćen C18 hromatografijom srednjeg pritiska. Kolona 100 g C18, 50 mL/min, 0.2% mravlje kiseline u dejonizovanoj vodi sa 5% acetonitrila od 0 - 5 min, zatim linearni gradijent od 5% - 95% od 5 min - 28 min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 15 mg 8p kao žuta čvrsta supstanca (54% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.40 -8.27 (m, 1H), 7.89 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.57 - 4.39 (m, 2H), 2.84 - 2.69 (m, 3H), 2.44 (m, 1H), 2.07 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.23 (s, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H). HRMS (M H)<+>izrač.501.1318; pronađeno 501.1322.
Primer 4. Sinteza jedinjenja 5a
1
5a: Rastvor 4a (2 g, 4.66 mmol) i natrijum azida (0.455 g, 7.0 mmol) u 25 mL anhidrovanog DMSO je mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h, a zatim je razblažen dejonizovanom vodom (200 mL). Proizvod je istaložen i sakupljen vakuumskom filtracijom, a zatim osušen pod vakuumom da bi se dobilo 2.03 g 5a u (100% prinos). MS (ESI): (M H)<+>izrač.435.1, nađeno 436.2, MS (ESI): (M - H)<->izrač.433.1, pronađeno 434.2.
Primer 5. Sinteza jedinjenja 6a
6a: U rastvor 5a (2.03 g, 4.66 mmol) u anhidrovanom benzenu (60 mL) dodat je trietil fosfit (1.94 g, 11.66 mmol) i rastvor je ispran argonom, a zatim zagrevan na refluksu 4 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodat je 3 M metanolski HCl (30 mL) i zagrevan na refluksu (80°C kupatilo) 38 h. Reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, a zatim je filtrirana pod vakuumom da bi se dobio 6a (1.016 g) kao sivobela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g kolona silicijum dioksida, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 16 minuta) da bi se dobilo dodatno 6a (0.079 g). Dobijeno je 1.09 g kombinovanog 6a (prinos 57%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 (s, 3H), 8.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.59 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.70 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.88 (hept, J = 7.1 Hz, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS (ESI): m/z izrač.410,2, nađeno 410,4 (M H)<+>; 408,1 (M - H)-.
Primer 6. Sinteza jedinjenja 7a
1 1
7a: U rastvor 6a (7.5 mg, 0.018 mmol) u DMF (0.5 mL) dodat je trietilamin (2.6 µL, 0.018 mmol) i glikolna kiselina (1.5 mg, 0.020 mmol). Rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (10.1 mg, 0.037 mmol) u dejonizovanoj vodi (0.1 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona silicijum dioksida, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobio željeni proizvod 7a (8 mg, prinos 93%). MS (ESI): m/z 468.2 (M H)<+>, 466.1 (M -H)-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.79 - 1.98 (m, 3H), 2.55 (s, 0H), 3.84 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 4.85 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 5.44 (s, 3H), 5.51 (s, 2H), 5.58 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.53 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.90 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 1.2, 8.3 Hz, 1H), 8.76 (t, J = 6.0 Hz, 1H).<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 172.95, 172.89, 157.23, 152.85, 150.44, 149.07, 145.85, 140.12, 129.27, 127.97, 124.28, 119.63, 97.23, 72.83, 65.74, 61.91, 54.06, 50.54, 49.58, 44.06, 37.34, 30.72, 15.74, 8.22. HRMS (M H)<+>izrač. 468.1571, pronađeno 468.1593.
Primer 7. Sinteza jedinjenja 6c
6c: Rastvor jedinjenja 2e (129 mg, 0.47 mmol) koji se meša, jedinjenja 3 (125 mg, 0.47 mmol) i PPTS (131 mg, 0.52 mmol) u anhidrovanom toluenu (10 mL) su na kratko stavljeni pod vakuum, a zatim zagrevani na refluksu 20 sati. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i uklonjen, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 16 minuta) da bi se dobilo 196 mg nečistog proizvoda
1 2
u obliku crne čvrste supstance. Dalje je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 20% do 60% CH3CN tokom 15 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobio 6c (31 mg, prinos 13%). MS (ESI): m/z 500.4 (M H)<+>, 498.3 (M - H)-.
Primer 8. Sinteza jedinjenja 7c
7c: U rastvor 6c (8.5 mg, 0.017 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat trietilamin (2.4 µL, 0.017 mmol) i glikolna kiselina (1.9 mg, 0.026 mmol). Rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (9.4 mg, 0.034 mmol) u dejonizovanoj vodi (0.1 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo) i ostatak je prečišćen pomoću poluprep HPLC (C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% do 65% CH3CN tokom 23 minuta) da bi se dobilo 2.5 mg 7c (26% prinos). MS (ESI): m/z 558.5 (M H)<+>, 556.3 (M - H)-.
Primer 9. Sinteza bočnih lanaca
11: N-metil-D-glukamin 9 (3.94 g, 20.19 mmol) i Z-L-Glu-OBn 10 (5 g, 13.46 mmol) su izmereni u posudu od 200 mL u koji je dodat DMF (50 mL) i magnetno mešan. Zatim je dodat DIPEA (2.351 ml, 13.46 mmol), a zatim kao suspenzija DMTMM (5.22 g, 18.85 mmol) u DMF (30 mL) i dejonizovanoj vodi (10 mL). Posle 2 h 1/3 reakcije je stavljena na 450 g C18 kertridž koji je prethodno uravnotežen sa 95:5 dejonizovanom vodom : acetonitrilom. Kolona je eluirana pri 100 mL/min sa 95:5 dejonizovanom vodom:acetonitrilom tokom 5 min, a zatim sa linearnim
1
gradijentom od 5% acetonitrila do 95% acetonitrila tokom 38 min. Hromatografija je ponovljena još dva puta i frakcije koje sadrže čisti željeni proizvod su sakupljene. Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem pod vakuumom. Metanol (100 mL) je dodat i isparen 2 puta da bi se dobilo 5 g željenog proizvoda 11 kao gusto bezbojno ulje (prinos 68%). MS (ESI): MS (M H)<+>izrač.549.2, nađeno 549.3, MS (ESI): (M - H)<->izračunato 547.2, nađeno 547.2.
12: Jedinjenje 11 (5 g, 9.1 mmol) suspendovan je u 95:5 metanolu:dejonizovanoj vodi (100 mL) u PARR tikvici za mućkanje od 250 mL kojoj je dodat 10% Pd-C (0.13 g, 1.222 mmol) i hidrogenizovan na 30 PSI H245 min, dodajući H2periodično da se ponovo uspostavi pritisak. Rastvor je filtriran u vakuumu kroz pomoćni filter od celita. Bistri bezbojni filtrat je koncentrovan rotacionim isparavanjem pod vakuumom, a zatim ostavljen pod vakuumom preko noći da bi se dobilo 2.8 g željenog proizvoda 12 kao bela čvrsta supstanca (94% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.09 - 3.98 (m, 1H), 3.84 (dt, J = 6.1, 3.1 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.75 (ddd, J = 7.5, 4.2, 2.3 Hz, 1H), 3.72 - 3.59 (m, 3H), 3.56 - 3.51 (m, 1H), 3.48 (dd, J = 15.0, 3.6 Hz, 1H), 3.13 (s, 2H), 2.97 (s, 1H), 2.78 - 2.49 (m, 2H), 2.22 - 2.06 (m, 2H). MS (ESI): MS (M - H)<->izrač.323.1, pronađeno 323.4.
14b: Jedinjenje 13b (1.4, 4.5 mmol) je dodato u rastvor magnetno mešanog rastvora 12 (1.4 g, 4.3 mmol) u DMF (10 mL) i DIPEA (1.1 mL, 6.3 mmol). Posle mešanja od 15 minuta, reakcija je ubrizgana u kolonu C18 srednjeg pritiska od 350 g koja je prethodno uravnotežena sa 98:2 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je eluirana brzinom od 100 mL/min sa 2% acetonitrila tokom 5 min, a zatim sa linearnim gradijentom od 2% acetonitrila na 5 min do 60% acetonitrila na 35 min detekcijom na 214 i 306 nm. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 1.3 g željenog proizvoda 14b kao bela čvrsta supstanca (prinos 58%). MS (M H)+ 518.5,<1>H NMR
1 4
(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (dd, J = 15.3, 7.7 Hz, 1H), 6.99 (s, 3H), 4.79 (d, J = 65.9 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 30.0 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 3.75 (p, J = 4.2 Hz, 1H), 3.57 (ddt, J = 11.4, 6.7, 3.6 Hz, 1H), 3.52 - 3.39 (m, 2H), 3.39 - 3.30 (m, 3H), 3.30 - 3.19 (m, 1H), 2.97 (s, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.45 - 2.21 (m, 1H), 2.08 (h, J = 3.4 Hz, 2H), 2.01 - 1.85 (m, 1H), 1.76 (qd, J = 8.5, 3.9 Hz, 1H), 1.59 - 1.39 (m, 3H), 1.30 - 1.08 (m, 2H).
14a: Jedinjenje 13a (1.4, 5.3 mmol) je dodato u magnetno mešani rastvor 12 (1.8 g, 5.5 mmol) u DMF (10 mL) i DIPEA (1.1 mL, mmol). Posle mešanja od 15 minuta, reakcija je ubrizgana u kolonu C18 srednjeg pritiska od 350 g koja je prethodno uravnotežena sa 98:2 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je eluirana brzinom od 100 mL/min sa 2% acetonitrila tokom 5 min, a zatim sa linearnim gradijentom od 2% acetonitrila na 5 min do 60% acetonitrila na 35 min detekcijom na 214 i 306 nm. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 1.4 g 14a kao bela čvrsta supstanca (55% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 (dd, J = 9.2, 7.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 4.24 (qd, J = 8.8, 4.8 Hz, 1H), 3.86 (dt, J = 8.2, 4.0 Hz, 1H), 3.76 - 3.63 (m, 4H), 3.62 - 3.43 (m, 4H), 3.41 - 3.29 (m, 1H), 3.08 (s, 2H), 2.91 (s, 2H), 2.61 (q, J = 1.8 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 10.0, 6.4 Hz, 1H), 2.02 (tdd, J = 12.6, 10.3, 9.1, 5.8 Hz, 1H), 1.93 - 1.76 (m, 1H). MS (ESI): MS (M H)<+>izrač.476.2, pronađeno 476.4.
Fmoc zaštićeni peptidi 15a, 15b, 15c i 15d su pripremljeni sintezom u čvrstoj fazi primenom standardnih postupaka.
Primer 10. Postupak za pretvaranje Fmoc-peptida-Gly-OH u Fmoc-peptid-NHCH2OAc (jedinjenja 16a-16d)
16a: Jedinjenje 15a (2.5 g, 4.9 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom DMF (40 mL) i magnetno
1
mešano u posudi od 100 mL kako su dodavani bakar (II) acetat (0.334 g, 1.84 mmol), sirćetna kiselina (0.64 mL, 11.1 mmol) i olovo tetraacetat (2.5 g, 5.6 mmol). Balon je zagrevan u uljanom kupatilu na 60°C 15 min. Uljano kupatilo je uklonjeno i reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Približno 1⁄2 smeše je prečišćena na C18 koloni srednjeg pritiska od 350 g koja je uravnotežena sa 90:10 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.3% mravlju kiselinu:acetonitril. Kolona je eluirana brzinom od 100 mL/min sa 10% acetonitrila tokom 5 minuta, a zatim sa linearnim gradijentom od 10% acetonitrila od 5 minuta do 95% acetonitrila na 38 minuta. Ovaj postupak je ponovljen za drugu 1⁄2 reakcione smeše i frakcije koje sadrže željeni proizvod 16a su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 1.2 g bele polučvrste supstance (prinos 62%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 16.1, 7.4 Hz, 2H), 7.89 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 2H), 7.72 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H), 7.33 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H), 5.13 - 5.01 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 4H), 4.06 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.32 (s, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.27 - 1.13 (m, 9H). MS (ESI): MS (M Na)<+>izrač.547.2, pronađeno 547.5.
16b je pripremljen od Fmoc-Ala-Ala-Gly-OH 15b u prinosu od 55%. MS (M Na)+ 476.7.
16c je pripremljen od Fmoc-Leu-Gln-Gly-OH 15c u prinosu od 46%. MS (M Na)+ 575.6.
16d je pripremljen od Fmoc-Ala-D-Ala-Ala-Gly-OH 15d u prinosu od 52%. MS (M Na)+ 547.3.
Primer 11. Postupak za reakciju benzil-2-hidroksiacetata sa Fmoc-peptidom-NHCH2OAc (jedinjenja 17a-17d)
17a: Jedinjenje 16a (142 mg, 0.27 mmol) i benzil-2-hidroksiacetat (226 mg, 1.36 mmol) su suspendovani u rastvoru 20% TFA u dihlorometanu (7 mL) i magnetno mešani na sobnoj temperaturi 30 min. Rastvarač je rotaciono isparen pod vakuumom i ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu DMF, a zatim prečišćen na koloni srednjeg pritiska od 200 g C18 koja je prethodno uravnotežena sa 90:10 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je zatim eluirana brzinom od 60 mL/min sa 10% acetonitrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 10% acetonitrila od 5 minuta do 95% acetonitrila na
1
38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 102 mg bele čvrste supstance 17a (59% prinos). MS (ESI): MS (M Na)<+>izrač.
653.3, pronađeno 653.5.
17b je pripremljen od 16b u prinosu od 61%. MS (M Na)+ 582.7.
17c je pripremljen od 16c u prinosu od 52%. MS (M+H)+ 659.5.
17d je pripremljen od 16d u prinosu od 56%. MS (M Na)+ 653.4.
Primer 12. Konverzija Fmoc-peptida-NHCH2OCH2COOBn u H-peptid-NHCH2OCH2COOBn (jedinjenja 18a-18d)
18a: Jedinjenje 17a (100 mg, 0.16 mmol) je rastvoreno u DMF (4 mL) kome je dodat morfolin (0.6 mL, 6.9 mmol) i magnetno je mešano. Posle 1 h, reakciona smeša je prečišćena na koloni srednjeg pritiska od 200 g C18 koja je prethodno uravnotežena sa 95:5 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je zatim eluirana brzinom od 60 mL/min sa 5% acetontrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 5% acetonitrila od 5 minuta do 70% acetonitrila na 38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 50 mg bele čvrste supstance 18a (76 % prinosa). MS (ESI): MS (M H)<+>izrač.409.2, pronađeno 409.6.
18b je pripremljen od 17b u prinosu od 80%. MS (M H)+ 338.3.
18c je pripremljen od 17c u prinosu od 61%. MS (M H)+ 437.6.
18d je pripremljen od 17d u prinosu od 61%. MS (M H)+ 409.6.
Primer 13. Konverzija H-peptida-NHCH2OCH2COOBn u H-peptid-NHCH2OCH2COOH (jedinjenja 19a-19d)
1
19a: U PARR tikvici za mućkanje od 100 ml, H-Ala-Ala-Ala-NHCH2OCH2COOBn 18a (50 mg, 0.12 mmol) je rastvoreno u 5:95 dejonizovanoj vodi: metanolu (50 mL) u koji je dodat 10% paladijum na ugljeniku (0.1 g) i reakcija je hidrogenizovana u PARR mućkalici na 30 PSI H2 tokom 1 h. Rastvor je filtriran pod vakuumom kroz pomoćni filter za celit i rastvarač je uklonjen iz filtrata rotacionim isparavanjem pod vakuumom da bi se dobilo 35 mg željenog proizvoda 19a kao gusto ulje (prinos 91%). MS (ESI): MS (M H)<+>izrač. 319.2, pronađeno 319.3.
19b je pripremljen od 18b u prinosu od 92%. MS (M H)+ 248.3.
19c je pripremljen od 18c u prinosu od 83%. MS (M H)+ 347.4.
19d je pripremljen od 18d u prinosu od 81%. MS (M+H)+ 319.5.
Primer 14. Postupak za pripremu Mal-(CH2)5-CO-PeptidNHCH2OCH2COOH jedinjenja (jedinjenja 20a-20d)
20a: Mal-(CH2)5-COONHS 13b (46 mg, 0.15 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom DMF-u (2 mL) u koji je dodat DIPEA (0.1 mL, 0.31 mmol) i H-Ala-Ala-Ala-NHCH2OCH2COOH 19a (30 mg, 0.093 mmol). Reakcija je magnetno mešana 15 min, zatim prečišćena na 50 g C18 koloni srednjeg pritiska koja je prethodno uravnotežena sa 95:5 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je zatim eluirana brzinom od 40 mL/min sa 5% acetonitrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 5% acetonitrila od 5 minuta do 90% acetonitrila na 38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 30 mg bele čvrste supstance 20a (63 % prinosa). MS (ESI): MS (M - H)<->izrač.510.2, pronađeno 510.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.16 (s, 1H), 8.64 - 8.48 (m, 1H), 7.97 (dd, J = 7.3, 3.2 Hz, 2H), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.00 (s, 2H), 4.3 - 4.7 (m, 4H), 4.21 (dt, J = 10.3, 7.2 Hz, 4H), 3.55 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.37 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.08 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.47 (p, J = 7.2 Hz, 4H), 1.27 - 1.10 (m, 6H).
20b je pripremljen od 19b u prinosu od 83%. MS (M H)+ 441.4.
20c je pripremljen od 19c u prinosu od 83%. MS (M-H)- 655.4.
1
20d: U rastvor jedinjenja 18d (99.7 mg, 0.24 mmol) u metanolu (3 mL) je dodat Pd (10% na ugljeniku, 26 mg, 0.024 mmol) i reakciona posuda je prečišćena vodonikom. Hidrogenizovan je balonom vodonika na sobnoj temperaturi 3 sata i zatim filtriran. Filtrat je uklonjen da bi se dobilo jedinjenje 19d kao bela čvrsta supstanca (78 mg, prinos 100%).41.9 mg (0.13 mmol) je uzeto i rastvoreno u anhidrovanom DMF (0.5 mL) i dodat je N-hidroksisukcinimid estar 6-maleimidoheksanske kiseline 13b (40.6 mg, 0.13 mmol). Dobijeni bezbojni bistri rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 24 sata. Odstranjen je pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (C18 kolona i eluiran sa CH3CN/H2O, 10 do 50% CH3CN za 15 minuta, a zatim 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 20d (30.8 mg, prinos 45%). MS (ESI): m/z 512.4 (M H)<+>, 510.4 (M - H)-.
Primer 15. Sinteza jedinjenja 21a i 21b
21a: Jedinjenje 16a (300 mg, 0.57 mmol) i 6-merkaptoheksanska kiselina (254 mg, 1.7 mmol) suspendovani su u rastvoru 20% TFA u dihlorometanu (10 mL) i magnetno mešani na sobnoj temperaturi 30 min. Rastvarač je rotaciono isparen pod vakuumom i ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu DMF, zatim prečišćen na koloni srednjeg pritiska od 200 g C18 koja je prethodno uravnotežena sa 95:5 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu : acetonitril. Kolona je zatim eluirana brzinom od 60 mL/min sa 10% acetonitrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 5% acetonitrila od 5 minuta do 95% acetonitrila na 38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 202 mg bele čvrste supstance 21a (58 % prinosa). MS (M Na)+ 613.9.
21b pripremljen je slično kao 21a iz 16d i 6-merkaptoheksanska kiselina u prinosu od 60%. MS (M H)+ 613.7.
Primer 16. Sinteza jedinjenja 22a
1
22a: Jedinjenje 6a (20 mg, 0.049 mmol) i DMTMM (18 mg, 0.065 mmol) u 85:15 DMF:dejonizovanoj vodi (0.8 mL) su magnetno mešani kako su uzastopno dodavani 20a (35 mg, 0.068 mmol) i TEA (0.04 mL, 0.28 mmol). Posle 1 h, reakciona smeša je stavljena na kolonu silicijum dioksida srednjeg pritiska od 50 g koja je uravnotežena sa dihlorometanom i pokrenuta sa dihlorometanom pri 30 mL/min korišćenjem linearnog gradijenta od 0% do 100% 20% metanola u dihlorometanu tokom 40 minuta. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem pod vakuumom da bi se dobilo 16 mg braon čvrste supstance 22a (36 % prinosa). MS (M Na)+ 925.6.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.11 - 1.23 (m, 15H), 1.46 (p, J = 7.3 Hz, 5H), 1.79 - 1.95 (m, 2H), 2.07 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.04 - 3.16 (m, 2H), 3.88 (s, 2H), 4.18 (dd, J = 7.1, 11.0 Hz, 2H), 4.50 - 4.65 (m, 2H), 4.86 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 5.44 (s, 2H), 5.49 (s, 2H), 6.53 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.91 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 8.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.65 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 8.73 (t, J = 5.9 Hz, 1H).<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 180.20, 173.96, 172.96, 172.89, 172.56, 172.36, 171.54, 170.03, 163.99, 157.27, 156.21, 152.90, 150.48, 145.85, 139.87, 134.92, 129.28, 128.06, 124.24, 119.65, 97.28, 72.84, 70.18, 67.29, 65.74, 50.53, 48.81, 48.68, 48.60, 46.26, 41.01, 37.44, 35.26, 30.71, 28.24, 26.23, 25.09, 18.33, 18.24, 18.18, 15.77, 15.74, 9.12, 8.21. HRMS (M H)<+>izrač. 903.3688, pronađeno 903.3676.
Primer 17. Sinteza jedinjenja 22c
11
22c: U rastvor 6a (8 mg, 0.02 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat NMM (2.2 µL, 0.02 mmol) i jedinjenje 20d (10 mg, 0.02 mmol). Rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (10.8 mg, 0.04 mmol) u dejonizovanoj vodi (0.1 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo) i ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim do 95% CH3CN tokom 12 minuta zatim na 95% CH3CN tokom 5 minuta). Frakcije proizvoda su kombinovane i liofilizovane da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Dalje je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g silika kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH za 15 minuta) da bi se dobio željeni proizvod 22c (9.8 mg, prinos 55%). MS (ESI): m/z 903.9 (M H)<+>, 901.9 (M - H)-, 947.9 (M HCOOH - H)-.
Primer 18. Sinteza jedinjenja 22b
22b: U rastvor 6c (10.7 mg, 0.022 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat NMM (2.4 µL, 0.022 mmol) i jedinjenje 20a (11 mg, 0.022 mmol). Rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (11.9 mg, 0.043 mmol) u dejonizovanoj vodi (0.1 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo) i ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim do 95% CH3CN tokom 12 minuta zatim na 95% CH3CN tokom 5 minuta) da bi se dobio željeni proizvod 22b (4 mg, prinos 18%). MS (ESI): m/z 1015.9 (M Na)<+>, 991.9 (M - H)-, 1037.9 (M HCOOH - H)-.
Primer 19. Sinteza jedinjenja 22d
22d: Pripremljeno slično kao 22c reakcijom 6c sa 20d (22% prinos). MS (ESI): m/z 1015.8 (M Na)<+>
Primer 20. Sinteza jedinjenja 22e
22e: U rastvor jedinjenja 18c (15.2 mg, 0.035 mmol) u metanolu (2 mL) dodat je Pd (10% na ugljeniku, 3.7 mg, 0.0035 mmol) i reakciona posuda je prečišćena vodonikom. Hidrogenizovan je balonom vodonika na sobnoj temperaturi 3 sata i zatim filtriran. Filtrat je uklonjen da bi se dobilo jedinjenje 19c kao bezbojna pena. Rastvoren je u anhidrovanom DMF (0.3 mL) i 13d (15.9 mg, 0.03 mmol). Dobijeni bezbojni bistri rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 15 sati. Razblažen je sa DMF (0.2 mL) nakon čega je usledilo dodavanje 6a (15.3 mg, 0.037 mmol) i NMM (4.1 µL, 0,037 mmol). Zatim je dodat DMTMM (20.7 mg, 0.075 mmol) u dejonizovanoj vodi (0.1 mL) i reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1.5 sata. Reakciona smeša je uklonjena pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH) da bi se dobio željeni 22e (10 mg, prinos 26%). MS (ESI): m/z 1049.1 (M H)<+>, 1093,2 (M HCOOH - H)-.
Primer 21. Sinteza jedinjenja 23a
23a: U rastvor 6a (32 mg, 0.078 mmol) u DMF (0,8 mL) je dodat NMM (8.6 µL, 0.078 mmol) i Fmoc zaštićeni L-Ala-L-Ala-L-Ala tripeptidni linker 21a (53 mg, 0.078 mmol) nakon čega je usledilo dodavanje DMTMM (43 mg, 0.156 mmol) u dejonizovanu vodu (0.16 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobilo željeno jedinjenje 23a (78 mg, prinos 99%). MS (ESI): m/z 1004.5 (M H)<+>, 1026.6 (M Na)<+>, 1048.4 (M HCOOH - H)-.
Primer 22. Sinteza jedinjenja 24a
24a: U rastvor jedinjenja 23a (78 mg, 0.078 mmol) u anhidrovanom DMF (1 mL) dodat je morfolin (0.24 mL, 2.7 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakcioni rastvor je odstranjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona silicijum dioksida, eluiran sa CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 9 minuta, zatim 20% MeOH tokom 11 minuta) da bi se dobilo željeno jedinjenje 24a (39.6 mg, prinos 65%). MS (ESI): m/z 782.4 (M H)<+>, 780.0 (M - H)-.
Primer 23. Sinteza jedinjenja 25a
25a: U rastvor jedinjenja 24a (20 mg, 0.026 mmol) u anhidrovanom DMF (0.3 mL) dodat je 13b (9.6 mg, 0,031 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakcioni rastvor je razblažen sa DMSO i prečišćen pomoću reverzne faze semi-prep HPLC (C18 kolona, eluiran sa CH3CN/H2O, 25% do 55% CH3CN tokom 23 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 7 minuta). Frakcije koje sadrže 25a su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo 25a kao bela čvrsta supstanca. Dalje je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g silika kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobio željeni 25a (7.7 mg, prinos 30%). MS (ESI): m/z 975.8 (M H)<+>, 997,8 (M Na)<+>, 773.7 (M - H)-, 1019.7 (M HCOOH - H)-.
Primer 24. Sinteza jedinjenja 23b
11
23b: U rastvor 6a (31 mg, 0.076 mmol) u DMF (0.8 mL) je dodat NMM (8.3 µL, 0.076 mml) i 21b (46.4 mg, 0.076 mmol). Rastvor je ohlađen do 0°C sa ledenim kupatilom i dodat je DMTMM (48 mg, 0.16 mmol)) u dejonizovanoj vodi (0.16 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2.5 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona silicijum dioksida, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobilo željeno jedinjenje proizvoda 23b (31 mg, prinos 40%). MS (ESI): m/z 1004.6 (M H)<+>, 1048.7 (M HCOOH -H)-.
Primer 25. Sinteza jedinjenja 24b
24b: U rastvor 23b (31 mg, 0.031 mmol) u anhidrovanom DMF (0.4 mL) dodat je morfolin (95 µL, 1.08 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2.5 sata. Reakcioni rastvor je odstranjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona silicijum dioksida, eluiran sa CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta, zatim 20% MeOH tokom 5 minuta) da bi se dobilo jedinjenje proizvod 24b (18 mg, prinos 75%). MS (ESI): m/z 782.5 (M H)<+>, 780.2 (M - H)-, 826.4 (M HCOOH - H)-.
Primer 26. Sinteza jedinjenja 25b
25b: U rastvor 24b (12.3 mg, 0.016 mmol) u anhidrovanom DMF (0.3 mL) je dodat N-hidroksisukcinimid estar 5-maleimidoheksanske kiseline 13b (7.3 mg, 0.024 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4 g kolona, CH2Cl2/MeOH, 0 do 20% MeOH tokom 15 minuta) da bi se dobilo 3.2 mg 25b i još 6.5 mg nečistog proizvoda. Nečist proizvod je dalje prečišćen pomoću HPLC reverzne faze semi-prep (C18 kolona, eluiran sa CH3CN/H2O, 25% do 55% CH3CN tokom 23 minuta, zatim 95% CH3CN tokom 7 minuta da bi se dobilo 2.8 mg 25b. Ukupno 6 mg 25b je izolovano (39% prinos). MS (ESI): m/z 975.6 (M H)<+>, 997.6 (M Na)<+>, 973.7 (M - H)-, 1019.6 (M HCOOH - H)-.
Primer 27. Sinteza jedinjenja 26a
26a: U rastvor 8a (58 mg, 0.106 mmol) koji se meša i jedinjenja 16a (55.8 mg, 0.106 mmol) u anhidrovanom DMF (1.5 mL) dodat je HCl eterat (2 M rastvor HCl dietil etra, 64 µL, 0.128 mmol). Posle mešanja 22 sata na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo za zagrevanje). Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim na 90% CH3CN tokom 12 minuta, zatim 90% CH3CN tokom 3 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 26a kao bela čvrsta supstanca (47 mg, prinos 48%). MS (ESI): m/z izrač.917.4, nađeno 917.6 (M H)<+>, 961.5 (M HCOOH - H)-. Neodreagovalo 8a je takođe pronađeno (12 mg).
Primer 28. Sinteza jedinjenja 27a
11
27a: U mešani rastvor jedinjenja 26a (57 mg, 0.062 mmol) u anhidrovanom DMF (0.8 mL) dodat je morfolin (27 µL, 0.31 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 sati, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolone i eluiran sa CH3CN/H2O, 20% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim na 90% CH3CN tokom 15 minuta, zatim 90% CH3CN tokom 3 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 27a kao prljavo bela čvrsta supstanca (35.9 mg, prinos 83%). MS (ESI): m/z 695.5 (M H)<+>, 739.3 (M HCOOH - H)-.
Primer 29. Sinteza jedinjenja 28a
28a: U rastvor jedinjenja 27a (18 mg, 0.026 mmol) u anhidrovanom DMF (0.3 mL) je dodat N-hidroksisukcinimid estar 5-maleimidoheksanske kiseline 13b (12 mg, 0.039 mmol) i NMM (3.1 µL, 0.028 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, eluiran sa CH3CN/H2O, 18 minuta rada, 20% CH3CN tokom 3 minuta, zatim 20% do 90% CH3CN za 12 minuta, zatim 90% CH3CN 3 minuta) da bi se dobio proizvod 28a kao bela čvrsta supstanca (11.9 mg, prinos 51%). MS (ESI): m/z 888.5 (M H)<+>, 932.5 (M HCOOH -H)-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.45 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.90 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.78 (dd, J = 15.2, 9.1 Hz, 2H), 7.22 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.45 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.54 - 4.38 (m, 2H), 4.15 - 4.09 (m, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 1H), 3.32 - 3.21 (m, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 2.50 - 2.42 (m, 3H), 1.99 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.79 (h, J = 7.0 Hz, 2H), 1.67 - 1.55 (m, 6H), 1.38 (p, J = 7.4 Hz, 5H), 1.15 - 1.04 (m, 12H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz,
11
3H).<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 174.54, 173.86, 171.34, 171.26, 170.84, 170.79, 170.47, 170.15, 161.42, 158.95, 155.71, 155.16, 150.43, 148.38, 146.97, 146.80, 144.22, 142.23, 129.03, 126.25, 125.69, 125.48, 124.98, 124.50, 122.77, 122.48, 117.29, 111.01, 110.78, 95.09, 70.75, 70.67, 67.55, 65.17, 63.64, 48.03, 46.55, 33.20, 28.68, 27.46, 26.96, 25.04, 24.55, 24.05, 23.06, 22.84, 16.39, 16.14, 13.54, 6.13, 5.98; HRMS (M H)<+>izrač. 888.3943, pronađeno 888.3966.
Primer 30. Sinteza jedinjenja 26b
26b: U rastvor 8a (73 mg, 0.14 mmol) koji se meša i jedinjenja 16b (64 mg, 0.14 mmol) u anhidrovanom DMF (1.2 mL) dodat je HCl eterat (2 M rastvor HCl dietil etra, 0.14 mL, 0.28 mmol). Posle mešanja 6 h na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo za zagrevanje). Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim na 90% CH3CN tokom 12 min, zatim 90% CH3CN tokom 3 min) da bi se dobilo jedinjenje 26b kao prljavo bela čvrsta supstanca (60 mg, prinos 50%). MS (ESI): m/z 846.4 (M H)<+>, 890.3 (M HCOOH - H)-.
Primer 31. Sinteza jedinjenja 26c
26c: U rastvor 8a (36 mg, 0.08 mmol) koji se meša i 16c (40.2 mg, 0.084 mmol) u anhidrovanom DMF (0.6 mL) dodat je HCl eterat (2 M rastvor HCl dietil etra, 72 µL, 0.43 mmol). Posle mešanja 15 h na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (35°C kupatilo za zagrevanje). Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30
11
g C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim do 95% CH3CN tokom 12 min, zatim 95% CH3CN tokom 3 min) da bi se dobilo jedinjenje 26c kao bela čvrsta supstanca (41.9 mg, prinos 60%). MS (ESI): m/z 874.4 (M H)<+>, 918.5 (M HCOOH - H)-. Nereagovano 8a je takođe pronađeno (12 mg).
Primer 32. Sinteza jedinjenja 27b
27b: U mešani rastvor jedinjenja 26b (60 mg, 0.071 mmol) u anhidrovanom DMF (0.4 mL) dodat je morfolin (31 µL, 0.36 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3.5 sata, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (15.5 g C18 kolona i eluiran sa CH3CN/H2O, 10% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim na 90% CH3CN za 9 minuta, zatim 90% CH3CN tokom 3 minuta) da bi se dobilo jedinjenje 27b kao prljavo bela čvrsta supstanca (36.7 mg, prinos 83%). MS (ESI): m/z 624.5 (M H)<+>, 668.3 (M HCOOH - H)-.
Primer 33. Sinteza jedinjenja 27c
27c: U mešani rastvor jedinjenja 26c (41.9 mg, 0.048 mmol) u anhidrovanom DMF (0.4 mL) dodat je morfolin (21 µL, 0.24 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 h, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolone i eluiran sa CH3CN/H2O, 20% CH3CN tokom 3 min, a zatim
11
na 90% CH3CN tokom 12 min, zatim 90% CH3CN tokom 5 min) da bi se dobilo jedinjenje 27c kao bela čvrsta supstanca (25.5 mg, prinos 82%). MS (ESI): m/z 652.5 (M H)<+>, 650.2 (M - H)-.696.2 (M HCOOH - H)-.
Primer 34. Sinteza jedinjenja 28b
28b: U mešani rastvor jedinjenja 27a (18 mg, 0.026 mmol) i 14a (18.5 mg, 0.039 mmol) u anhidrovanom DMF (0.2 mL) je dodat DMTMM (17 mg, 0.052 mmol) i NMM (2.9 µL, 0.026 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 19 h, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom (temperatura kupatila 35°C) i ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, CH3CN/H2O, 20% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim na 90% CH3CN tokom 12 min, zatim 90% CH3CN tokom 3 min). Frakcije koje su sadržale proizvod su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo 28b kao bela čvrsta supstanca (2.3 mg, 7% prinos). MS (ESI): m/z 1152.5 (M H)<+>, 1150.0 (M - H)-, 1196.5 (M HCOOH -H)-.
Primer 35. Sinteza jedinjenja 28c
28c: U rastvor 27b (36.7 mg, 0.059 mmol) koji se meša i 14a (42 mg, 0.088 mmol) u anhidrovanom DMF (0.6 mL) je dodat DMTMM (39 mg, 0.12 mmol) i NMM (3.2 µL, 0.029 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 h, reakcioni rastvor je direktno napunjen na C18 kertridž i prečišćen pomoću HPLC sa reverznom fazom (30 g C18
11
kolona, CH3CN/H2O, 20% CH3CN tokom 3 minuta zatim do 90% CH3CN tokom 12 min, zatim 90% CH3CN tokom 3 min). Frakcije koje su sadržale proizvod su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo 28c kao bela čvrsta supstanca (9.9 mg, prinos 15%). MS (ESI): m/z 1081.5 (M H)<+>, 1079.2 (M - H)-, 1025.5 (M HCOOH - H)-.
Primer 36. Sinteza jedinjenja 28d
28d: U rastvor 27c (10.5 mg, 0.016 mmol) u anhidrovanom DMF (0.2 mL) je dodat N-hidroksisukcinimid estar 5-maleimidoheksanske kiseline 13b (6 mg, 0.019 mmol) i NMM (2.1 µL, 0.019 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 h, reakcioni rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (30 g C18 kolona, eluiran sa CH3CN/H2O, 18 minuta rada, 20% CH3CN tokom 3 minuta, zatim 20% do 90% CH3CN tokom 12 minuta, zatim 90% CH3CN tokom 3 minuta) da bi se dobio proizvod 28d kao bela čvrsta supstanca (8.7 mg, prinos 63%). MS (ESI): m/z 845.4 (M H)<+>, 989.4 (M HCOOH - H)-.
Primer 37. Sinteza jedinjenja 29a
29a: Jedinjenje 16a (30 mg, 0.057 mmol) i 8d (50 mg, 0.1 mmol) su suspendovani u rastvoru 20% TFA u dihlorometanu (10 mL) i magnetno mešani na sobnoj temperaturi 30 min. Rastvarač je rotaciono isparen pod vakuumom i ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu DMF, zatim prečišćen na 100 g C18 kolone srednjeg pritiska koja je prethodno uravnotežena sa 90:10 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu: acetonitril. Kolona je zatim eluirana
12
brzinom od 30 mL/min sa 10% acetontrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 10% acetonitrila od 5 minuta do 95% acetonitrila na 38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 31 mg bele čvrste supstance 29a (56 % prinosa). MS (M Na)+ 987.5.
Primer 38. Sinteza jedinjenja 30a
30a: Jedinjenje 29a (28 mg, 0.029 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF (0.8 mL) i magnetno mešano dok je dodat morfolin (0.2 mL). Posle 1 h reakciona smeša je direktno napunjena na 100 g C18 kertridž 25:75 CH3CN/H2O, stavljena na 50 mL/min 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim sa linearnim gradijentom do 90% CH3CN od 3 - 23 min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 18 mg (83% prinos) 30a kao žuta čvrsta supstanca. MS (M+H)+ 743.5.
Primer 39. Sinteza jedinjenja 32a
32a: Jedinjenje 30a (16 mg, 0.02 mmol) je rastvoren u 84:16 DMF: dejonizovanoj vodi (0.5 mL) u koju su brzo dodati DMTMM (15 mg, 0.054 mmol), TEA (0.02 mL, 0.14 mmol) i 14a (20 mg, 0.042 mmol) i magnetno mešani. Posle 35 min, reakciona smeša je stavljena na kertridž od 100 g silicijum dioksida koji je prethodno ekvilibrisan sa dihlorometanom, a zatim je postavljena na 35 mL/min sa linearnim gradijentom od 0% do 100% tokom 30 minuta 40:60 metanola:dihlorometana. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i rastvarač je isparen pod vakuumom da bi se dobilo 7 mg (29% prinos) 32a kao gusto ulje. MS (M Na)+ 1223.0.
Primer 40. Sinteza jedinjenja 33a
33a: U rastvor 4c (11 mg, 0.021 mmol) u anhidrovanom DMF (0.2 mL) dodat je natrijum tiometoksid (3.6 mg, 0.052 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Reakcioni rastvor je direktno napunjen na 30g C18 kertridž 25:75 CH3CN/H2O, postavljen na 20 mL/min 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim sa linearnim gradijentom do 90% CH3CN od 3-12 min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i isparene pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje 33a kao bela čvrsta supstanca (3.1 mg, prinos 30%). MS (ESI): m/z 483.4 (M H)<+>, 481.3 (M - H)-.
Primer 41. Sinteza jedinjenja 34a i jedinjenja 34b
34a i 34b: Jedinjenje 8c (30 mg, 0.064 mmol) je magnetno mešano u DMF (1 mL) u koji su dodati vanadijum acetilacetonat (3 mg, 0.008 mmol) i rastvor 5 M terc-butil hidroperoksida u dekanu (0.05 mL, 0.25 mmol). Posle 5 minuta rastvor je direktno napunjen na 30 g C18 kertridž 25:75 CH3CN/H2O, stavljen na 20 mL/min 25% CH3CN tokom 3 minuta, a zatim sa linearnim gradijentom do 90% CH3CN od 3-12 min. Frakcije koje sadrže čist 34a su kombinovane odvojeno od frakcija koje sadrže čist 34b i oba su odvojeno zamrznuta i liofilizovana da bi se dobilo 6 mg 34a (19% prinos) i 15 mg 34b (47% prinos), oba kao žute čvrste supstance. 34a MS (M H)+ 487.4, 34b MS (M H)+ 503.6.
Primer 42. Sinteza jedinjenja 35a
35a: U rastvor jedinjenja 4e (17 mg, 0.025 mmol) u anhidrovanom DMF (0.3 mL) dodat je natrijum tiometoksid (7 mg, 0.1 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 sata. Reakcioni rastvor je razblažen sa DMSO i injektiran na polu-prep HPLC za prečišćavanje (C18 kolona, CH3CN/H2O, 25% do 65% CH3CN tokom 23 minuta) da biste dobili željeni proizvod 35a (2.7 mg, prinos 19%). MS (ESI): m/z 554.4 (M H)<+>, 552.5 (M - H)-.
Primer 43. Sinteza jedinjenja 29b
29b: Jedinjenje 16a (30 mg, 0.057 mmol) i 8e (50 mg, 0.1 mmol) su suspendovani u rastvoru 20% TFA u dihlorometanu (10 mL) i magnetno mešani na sobnoj temperaturi 30 min. Rastvarač je rotaciono isparen pod vakuumom i ostatak je stavljen u minimalnu zapreminu DMF, a zatim prečišćen na 100 g C18 kolone srednjeg pritiska koja je prethodno uravnotežena sa 90:10 dejonizovanom vodom koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu: acetonitril. Kolona je zatim eluirana brzinom od 30 mL/min sa 10% acetonitrila tokom 5 minuta, nakon čega je usledio linearni gradijent od 10% acetonitrila od 5 minuta do 95% acetonitrila na 38 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 31 mg bele čvrste supstance 29b (56 % prinosa). MS (ESI): MS (M Na)<+>izrač.973.3, pronađeno 973.7.
Primer 44. Sinteza jedinjenja 30b
12
30b: Jedinjenje 29b (28 mg, 0.029 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF (0.8 mL) i magnetno mešano dok je dodat morfolin (0.2 mL, 2.32 mmol). Posle 1 h reakciona smeša je direktno napunjena na 100 g C18 kertridž 25:75 CH3CN/H2O, stavljena na 50 mL/min 25% CH3CN tokom 3 min, a zatim sa linearnim gradijentom do 90% CH3CN od 3 - 23 min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane, zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 18 mg (83% prinos) 30b kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.87 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 3.7 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.47 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 4.32 - 4.09 (m, 4H), 3.69 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.36 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 2.84 (s, 4H), 2.61 - 2.54 (m, 3H), 2.46 - 2.42 (m, 4H), 1.94 - 1.75 (m, 2H), 1.17 (dd, J = 7.2, 3.4 Hz, 6H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS (ESI): MS (M H)<+>izrač.729.3, pronađeno 729.4.
Primer 45. Sinteza jedinjenja 32b
32b: Jedinjenje 30b (16 mg, 0.02 mmol) je rastvoreno u 84:16 DMF:dejonizovanoj vodi (0.5 mL) u koji su brzo dodati DMTMM (15 mg, 0.054 mmol), TEA (0.02 mL, 0.14 mmol) i 14a (20 mg, 0.042 mmol) i magnetno mešani. Posle 35 min, reakciona smeša je stavljena na kertridž od 100 g silicijum dioksida koji je prethodno ekvilibrisan sa dihlorometanom, a zatim stavljena na 35 mL/min sa linearnim gradijentom tokom 30 min od 0% do 100% 40:60 metanola:dihlorometana. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i rastvarač je isparen pod vakuumom da bi se dobilo 7 mg 32b (29 % prinosa) kao gusto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 - 7.83 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.69 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 2H), 7.28 (t, J = 1.0 Hz, 1H), 6.61 (s, 2H), 5.59-5.53 (m, 1H), 5.40 (dd, J = 3.3, 1.1 Hz, 2H), 5.29-5.26 (m, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.52-4.46 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.35 (dd, J = 3.5, 1.8 Hz, 2H), 4.28-4.22 (m, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 2H), 3.74 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.70 (ddd, J = 11.9, 5.7, 4.8 Hz, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 2H), 3.44 (dd, J = 11.9, 4.9 Hz, 1H), 3.3 (široki s, 8H), 3.20 (dd, J = 4.7, 3.7 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.56 (td, J = 6.4, 1.7 Hz, 2H), 2.31 (s, 3), 2.37 - 2.21 (m, 2H), 2.07 - 1.82 (m, 3H), 1.72 (dq, J = 13.7, 8.1 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 5.5 Hz, 6H), 1.45 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 8.0 Hz, 3H).<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 174.75, 174.58, 172.85, 172.75, 172.45, 171.62, 171.37, 169.30, 163.44, 160.52, 157.18, 149.96, 148.73, 147.39, 147.32, 142.26, 132.98, 131.74, 127.54, 127.38, 127.24. 126.88, 124.90, 124.84, 124.34, 122.88, 118.32, 116.83, 116.67, 97.97, 74.87, 73.80, 72.41, 72.34, 69.44, 65.10, 62.94, 53.02, 50.02, 49.92, 49.62, 48.46, 45.53, 42.38, 40.85, 35.32, 35.13, 34.00, 32.31, 32.24, 30.20, 26.63, 20.49, 17.81, 17.71, 17.61, 7.68. HRMS (M H)<+>izrač.1186.4237, pronađeno 1186.4220.
Primer 46. Opšti postupak za pripremu konjugata
Stvorena su humanizovana IgG1 antitela kao što su anti-epidermalni faktor rasta (ML66), antifolatni receptor α (FRα) i himerno antitelo koje se vezuje za Kunitz sojini tripsin inhibitor (KTI). Konjugacija antitela sa korisnim opterećenjem koje nosi maleimid izvedena je kao što je opisano za pripremu ML66-22a. Dobijeni konjugati će ovde biti označeni kao ciljno opterećenje za vezivanje, na primer ML66 konjugovan sa 22a je ML66-22a
Primer 47. Sinteza ML66-22a
12
ML66-22a: ML66 pri 5 mg/ml je tretiran sa 7.0 ekvivalenata TCEP u 50 mM EPPS pH7.4, 5 mM EDTA na 37°C tokom 1-1.5 sati. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature. Reakcija konjugacije između antitela i korisnog opterećenja izvedena je pri 2 mg/ml dodavanjem 15-20 ekvivalenata od 22a rastvorenih u DMSO u puferu (50 mM EPPS, pH 7.4) koji sadrži 20% DMSO, i vrtenjem na rotatoru cevi 1.5-2.5 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je odmah prečišćena u puferu za formulaciju (10 mM acetat, 9% saharoza, 0.01% Tween-20, pH 5.0) korišćenjem kolona za odsoljavanje NAP (Illustra Sephadex G-25, GE Healthcare). Dobijeni konjugat je imao odnos leka i antitela (DAR) od 7.5, i bio je 99% monomernih mereno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.
Sprovedene su biofizičke procene za konjugat interlančanog visokog DAR, uključujući određivanje koncentracije konjugata, prinosa, DAR (odnos leka i antitela), slobodnog leka, procenta monomera i DAR distribucije. Određeno je da koncentracija konjugata ima konačnu koncentraciju proteina od 4.5 mg/ml (preko UV-Vis korišćenjem koeficijenta ekstinkcije ε280= 205520 M<-1>centimetar<-1>), DAR 7.5 (preko UV-Vis korišćenjem koeficijenata ekstinkcije ε280= 10764 M<-1>centimetar<-1>, ε370= 20982 M<-1>centimetar<-1>za 22a), 99% monomera (preko ekskluzione UPLC prema veličini proteina BEH SEC kolone), <1% slobodnog leka (preko HiSEP HPLC kolone) i uglavnom homogenih 8 lekova povezanih po antitelu (preko Q-ToF masene spektrometrije i butil-NPR HIC hromatografije). Prinos za ovu specifičnu međulančanu konjugaciju ML66-22a bio je 75%.
UPLC protein BEH SEC postupak: Analiza procenta monomera je sprovedena na sistemu Waters Acquity UPLC H-klase opremljenom Acquity UPLC protein BEH SEC kolonom (200 Å, 1.7um, 4.6mm × 150 mm, deo # 186005225). Mobilna faza je bila 400 mM natrijum perhlorida, 50 mM natrijum fosfata, 5% IPA, pH 7.0, brzina protoka 0.30 mL/min, vreme rada 20 min.
HiSep HPLC postupak: Analiza procenta slobodnog leka je izvedena na Agilent HPLC sistemu opremljenom Supelco analitičkom HiSep kolonom (25cm × 4.6mm, 5um, kat# 58919). Mobilna faza se sastojala od 0.1 M amonijuma, pH 7.0 (rastvarač A) i acetonitrila (rastvarač B). Postupak je izveden pri 0.70 mL/min sa rastvaračem A, koristeći linearni gradijent počevši od 25% rastvarača B do 40% rastvarača B od 0 - 25 min.
Primer 48. In vitro test citotoksičnosti
Citotoksične potencije su procenjene na pločama sa 96 bunarčića sa ravnim dnom (Costar) korišćenjem testa vijabilnosti ćelija na bazi tetrazonijum soli rastvorljive u vodi (WST-8)
12
(Dojindo, Molecular Technologies, Inc.) kao što je prethodno opisano (Kovtun IV, et al. Antibody-maytansinoid conjugates designed to bypass multidrug resistance. Cancer Res 2010;70(6):2528-37). Ukratko, ćelije humanog tumora (1000-5000 ćelija/bunariću, u zavisnosti od ćelijske linije), u odgovarajućem medijumu kulture su inkubirane, sa konjugatima u prisustvu ili odsustvu viška odgovarajućih nekonjugovanih antitela, ili sa metabolitima tokom 5 dana, na 37°C, 6% CO2. Vijabilnost ćelija je određena na osnovu apsorbancije WST-8 korigovane pozadinom.
Rezultati ove studije su sumirani u sledećim tabelama. Sl.12 prikazuje citotoksičnost jedinjenja koje sadrži sulfid 8c i njegov sulfoksid 34a i sulfon 34b.
Tabela 7A. In vitro citotoksičnosti (IC50 vrednosti) nekonjugovanih jedinjenja
Tabela 7B. In vitro citotoksičnosti (IC50 vrednosti) nekonjugovanih jedinjenja
12
N-Luc ukazuje na Namalwa ćelije koje su stabilno transfektovane genom Luciferaze
Primer 49. Test ubijanja ćelija posmatrača
Reagensi Cell Titer Glo i One Glo su kupljeni od Promega. Sposobnost ADC da izazovu ubijanje posmatrača određena je jednim od dva testa. Oba testa su izvedena u pločama sa 96 bunarčića sa U-dnom (Costar) da bi se mešane antigen negativne (Ag-) i antigen pozitivne (Ag+) ćelije održale u neposrednoj blizini jedna drugoj.
Namalwa-Luciferaza (N-Luc) Ag-ćelije (1000 ćelija po bunarčiću) u odgovarajućem medijumu za kulturu su inkubirane u bunarčićima ploče sa 96 bunarčića sa U-dnom sa naznačenim brojem MDA-MB-468 Ag+ ćelija i ADC (1.1 nM) tokom 5 dana, na 37°C, 6% CO2. Koncentracija konjugata korišćenog u testu bila je dovoljno visoka da ubije sve Ag+ ćelije, ali nije mogla da ubije Ag- ćelije, osim ako nisu bile prisutne i Ag+ ćelije. Petog dana, vijabilnost ćelija je određena testom Cell Titer Glo prema protokolu proizvođača; signali luminiscencije su očitani pomoću Victor3 čitača ploča. Tabela u nastavku prikazuje in vitro citotoksičnost kao što je dobijeno u prethodnom primeru i ubijanje jedinjenja koja su ovde opisana u slučaju posmatrača.
Tabela 8. In vitro citotoksičnosti i ubijanje ADC od strane posmatrača
12
N-Luc ukazuje na Namalwa ćelije koje su stabilno transfektovane genom luciferaze
Primer 50. Postupak za određivanje in vivo efikasnosti na modelima ksenotransplantata
Ženke CB.17 SCID miševa starosti 6 nedelja su primljene iz Charles River Laboratories. Svi in vivo postupci su sprovedeni u strogom skladu sa NIH Vodičem za negu i upotrebu laboratorijskih životinja. Efikasnost ADC in vivo je procenjena na datim modelima ksenografta tumora. Ženke SCID miševa su inokulisane supkutano u desni bok sa željenim tipom ćelija u 1:1 odnosu medijuma bez seruma. Životinje su zatim nasumično raspoređene u grupe od 6 ili 8 miševa po grupi. Kontrolni miševi su tretirani fiziološkim rastvorom puferovanim fosfatom, vehikulumom. Potrebne koncentracije ADC su napravljene razblaživanjem osnovnih uzoraka vehikulom. Ksenografti su porasli do približno 100 mm<3>, zatim je na miševe primenjen ADC ili vehikulum intravenskom (i.v.) injekcijom u repnu venu (200 µL/mišu). Sva doziranja su bila zasnovana na težini antitela komponente konjugata. Veličine tumora merene su dva puta nedeljno u tri dimenzije pomoću kalipera sa zapreminom tumora izraženom u mm<3>izračunato po formuli V = 1/2 (dužina × širina × visina). Telesna težina je takođe merena dva puta nedeljno. Podaci iz ovih studija su interpretirani korišćenjem standardizovanih postupaka kao što su
12
prethodno opisani (Bissery MC et al. Experimental antitumor activity of taxotere (RP 56976, NSC 628503), analoga taksola. Cancer Res 1991;51(18):4845-52).
Primer 51. Tolerantnost miša na ML66-999, ML66-22a i ML-28a ADC
Tolerantnost ADC je procenjena kod ženki CD-1 miševa vršenjem dnevnih merenja telesne težine i kliničkih posmatranja tokom 2 nedelje nakon injekcije ADC. Pred-doza od 10 mg/kg golog ML66 antitela je intravenozno primenjena na trideset dve 7-nedeljne ženke CD-1 miševa jer se pokazalo da to ublažava akutnu reakciju infuzije izazvanu samim ML66 u dozama većim od 20 mg /kg. Jedan miš je uginuo nakon ove injekcije golog antitela. Dva sata kasnije, tri grupe od po sedam do osam miševa su dobile dozu intravenske bolus injekcije od 1500 µg/kg korisnog opterećenja ML66-999 (58 mg/kg antitela), ML66-22a (59 mg/kg antitela) ili ML66 -28a (69 mg/kg antitela). Maksimalna tolerisana doza (MTD) je definisana kao najveća doza pri kojoj nijedna životinja nije umrla ili nije trebalo da bude eutanazirana zbog gubitka telesne težine >20% ili znakova uznemirenosti ili morbiditeta (pogrbljenost, nedostatak kretanja, nemogućnost da jedu ili piju ili znaci bola/distresa). Na osnovu ovih kriterijuma, sva tri ADC su bila dobro tolerisana pri dozi od 1500 µg/kg korisnog opterećenja. Sl. 19 prikazuje tolerantnost miša na ML66-999, ML66-22a i ML66-28a ADC.
Primer 52. Postupak za određivanje ADC farmakokinetičkih (PK) parametara kod miševa
Tri grupe od jedanaest 7-nedeljnih ženki CD-1 miševa su dozirane sa jednom intravenskom bolus injekcijom od 10 mg/kg golog antitela ili ADC. Terminalni uzorci krvi su sakupljeni od 3 miša na 2 minuta, 3 miša na 24 sata i 5 miševa na 72 sata nakon injekcije za svaki ADC. Krv je obrađena u serum i ADC su prečišćeni korišćenjem afiniteta sa anti-humanim Fc kuglicama. Uzorci su analizirani anti-humanom Fc ELISA da bi se odredila koncentracija komponente antitela (bez obzira na opterećenje). Uzorci su takođe analizirani ekskluzionom hromatografijom (SEC) i masenom spektrometrijom (MS). Delimični gubitak korisnog opterećenja linkera iz uhvaćenog ADC u svim vremenskim tačkama meren je intaktnim MS postupkom. Koncentracija ADC je izračunata na osnovu ukupne koncentracije antitela i odnosa lek-antitelo (DAR).
Sl. 13 i Tabela 9 prikazuju farmakokinetiku ML66-999 kod miševa. Sl.14 i Tabela 10 prikazuju farmakokinetiku ML66-999 kod miševa. Tabela 11 sumira vezivanje ADC ili golih antitela za
1
odgovarajuće ćelijske linije koje eksprimiraju antigen. Sl. 15 i 16 prikazuju in vitro citotoksičnost ML66-999 i ML66-22a protiv Ag+ i Ag- ćelija. Frakciona zadržana bioaktivnost ADC u uzorcima plazme tokom vremena određena je u testovima citotoksičnosti sa Ag+ ili Agćelijama. ADC su zadržali većinu svoje aktivnosti protiv Ag+ ćelija u svakoj od vremenskih tačaka, dok su ostali preko 200 puta manje aktivni protiv Ag- ćelija, što ukazuje na to da su citotoksičnosti uzrokovane netaknutim ADC, uz mali ili nikakav doprinos bilo kakvog oslobođenog tereta.
Tabela 9.
Tabela 10.
Tabela 11. Vezivanje ADC ili golih antitela za odgovarajuće ćelijske linije koje eksprimiraju antigen
1 1
Primer 53. Anti-tumorska aktivnost konjugata leka protiv anti-EGFR antitela kod golih miševa koji nose HSC-2 humani ksenograft karcinoma skvamoznih ćelija i vrata
Procenjena je antitumorska aktivnost 1, 3 i 10 mg/kg ML66-999 i ML66-22a kod ženki golih miševa koji nose ćelije HSC-2, model ksenotransplantata skvamoznog karcinoma glave i vrata čoveka.
Miševi su inokulisani sa 1 × 10<7>HSC-2 ćelija u 0.1 ml 50% Matrigel/50% medijuma bez seruma subkutanom injekcijom u predelu desnog zadnjeg boka. Dobijene su ženke atimičnih Foxn1<nu>miševa (6 nedelja starosti). Po prijemu, životinje su posmatrane 9 dana pre početka studije. Životinje nisu pokazivale znake bolesti ili bolesti po dolasku ili pre tretmana.
Četrdeset osam miševa je randomizirano u 8 grupa (6 miševa po grupi) prema zapremini tumora. Zapremina tumora se kretala od 68.48 do 118.26 (93.42 ± 11.25, srednja vrednost ± SD) mm<3>. Miševi su mereni, randomizovani i dozirani na osnovu zapremine tumora 4. dana
1 2
nakon implantacije (11/12/18). Telesna težina miševa se kretala od 19.46 do 25.77 (22.98 ± 1.50, srednja vrednost ± SD) grama. Miševi u svakoj grupi su identifikovani postupkom udarca. Primena test sredstava i vehikuluma je sprovedena intravenski korišćenjem šprica od 1.0 ml opremljenog iglom veličine 27, 1⁄2 inča. Sredstva za testiranje konjugata antitela su dozirani qdx1 u 1, 3 ili 10 mg/kg, gde 75 µg/kg ili 250 µg/kg na osnovu korisnog opterećenja korelira sa približno 3 ili 10 mg/kg na osnovu koncentracije antitela. Grupe su uključivale: kontrolnu grupu koja je dozirala vehikulum (PBS, 200 µL), kontrolnu grupu kojoj je dozirao neciljani KTI-999 u dozi od 10 mg/kg, ML66-999 doziranu na 1, 3 i 10 mg/kg na bazi koncentracije antitela, i ML66-22a doziranu na 1, 3 i 10 mg/kg na osnovu koncentracije antitela.
Veličina tumora je merena dva puta nedeljno u tri dimenzije pomoću kalipera. Zapremina tumora je izražena u mm<3>koristeći formulu Zapremina = Dužina × Širina × Visina × 1⁄2. Smatralo se da miš ima delimičnu regresiju (PR) kada je zapremina tumora smanjena za 50% ili više, a potpuna regresija tumora (CR) kada se ne može otkriti palpabilni tumor. Zapremina tumora je određena softverom StudyLog.
Inhibicija rasta tumora (%T/C) je odnos srednje zapremine tumora (TV) tretirane grupe (T) i srednjeg TV kontrolne grupe (C) u unapred određeno vreme (npr. vreme kada je srednji TV za kontrolne tumore dostižu maksimalnu zapreminu tumora ~1000mm<3>, što je kada se miševi eutanaziraju). %T/C je izračunat 22. dana nakon inokulacije, kada je srednji TV kontrolne grupe dostigao 1038 mm<3>. Prema NCI standardima, T/C ≤ 42% je minimalni nivo antitumorske aktivnosti i T/C <10% se smatra visokim nivoom antitumorske aktivnosti.
Telesna težina (BW) svih miševa je merena dva puta nedeljno kao grubi indeks toksičnosti leka i određena je pomoću softvera StudyLog. Telesna težina miševa je izražena kao procenat promene telesne težine od telesne težine pre tretmana na sledeći način: % promene BW = [(BWposle / BWpre) - 1] × 100, gde je BWposle težina nakon tretmana, a BWpre je početna telesna težina pre tretmana. Procenat gubitka telesne težine (BWL) je izražen kao srednja promena telesne težine nakon tretmana. Životinje su eutanazirane ako je zapremina tumora postala veća od 1000 mm<3>, tumori su postali nekrotizirani, miševi su izgubili >20% svoje početne telesne težine, ili su miševi postali umirući u bilo kom trenutku tokom studije.
Sl. 17 i tabela 12 prikazuju efikasnost ADC u modelima ksenotransplantata HSC-2. Konjugati ML66-999 i ML66-22a su imali sličnu antitumorsko aktivnost. ML66-KTI doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 70% (neaktivan), bez regresije tumora. Ovo je pokazalo da je aktivnost ML66 konjugata ciljana na EGFR pošto je kontrolni ADC bio neaktivan. ML66-999 doziran u dozi od 1 mg/kg imao je T/C vrednost od 49% (neaktivan), bez regresije tumora. ML66-999 doziran u dozi od 3 mg/kg imao je T/C vrednost od 7% (visoko aktivan), sa 4
1
delimične regresije tumora od 6 miševa i 1 potpunom regresijom. ML66-999 doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 3% (visoko aktivan), sa 6 delimičnih regresija tumora od 6 miševa i 2 potpune regresije. ML66-22a doziran od 1 mg/kg imao je T/C vrednost od 39% (aktivan), sa 1 delimičnom regresijom tumora od 6 miševa i bez potpune regresije. ML66-22a doziran u dozi od 3 mg/kg imao je T/C vrednost od 5% (visoko aktivan), sa 3 delimične regresije tumora od 6 miševa i 1 potpunom regresijom. ML66-22a doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 2% (visoko aktivan), sa 6 delimičnih regresija tumora od 6 miševa i 5 potpunih regresija. Nije primećen značajan gubitak telesne težine ni u jednoj od naznačenih doza za bilo koji od konjugata što ukazuje da su se konjugati dobro tolerisali. Rezultati ove studije sugerišu da su i ML66-999 i ML66-22a konjugati pokazali antitumorsko delovanje zavisno od doze i da su bili efikasni u modelu ksenotransplantata tumora skvamoznih ćelija karcinoma glave i vrata HSC-2.
Tabela 12.
Primer 54. Anti-tumorska aktivnost konjugata kod golih miševa koji nose ksenotransplantate nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC)
Anti-tumorska aktivnost konjugata u ksenotransplantatu golih miševa koji nose ksenografte nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC) određena je na način sličan onom za HSC-2 ćelije kao što je opisano u Primeru 53.
Ženke atimičnih golih miševa (Fokn1<nu>) u dobi od 6 nedelja primljeni su iz Charles River
1 4
Laboratories. Svi in vivo postupci su sprovedeni u strogom skladu sa NIH Vodičem za negu i upotrebu laboratorijskih životinja. Antitumorska aktivnost ADC je procenjena na modelima ksenotransplantata skvamoznog H1703 tumora nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC). Ženke golih miševa su inokulisane supkutano u desni bok sa željenim tipom ćelija u odnosu 1:1 medijum bez seruma:Matrigel (5 × 10<6>ćelije/miš). Zapremine tumora (TV) merene su dva puta nedeljno u tri dimenzije pomoću kalipera sa zapreminama tumora izraženim u mm<3>izračunato po formuli TV = 1/2 (dužina × širina × visina). Ksenografti su porasli do ~100 mm<3>i miševi su nasumično raspoređeni u grupe od 6 miševa po grupi na osnovu njihove TV 16. dana (sa 116.0 /- 18.5 mm<3>[srednja vrednost /- SD] TV) posle inokulacije ćelija. Zalihe ADC su razblažene puferom za razblaživanje konjugata i miševi su dozirani prema individualnim telesnim težinama. Miševi su primili jednu intravensku (IV) bolus injekciju vehikuluma (fosfatnim puferom (PBS) na 200 µL/miš) ili ADC pri 75 µg/kg ili 250 µg/kg na osnovu korisnog opterećenja (približno 3 ili 10 mg/kg na osnovu koncentracije antitela) pri zapremini doze od 5 mL/kg. Inhibicija rasta tumora (T/C) je odnos medijane zapremine tumora (TV) tretirane grupe (T) i medijane TV kontrolne grupe (C) u unapred određeno vreme (npr. vreme kada srednja TV za kontrolne tumore dostiže maksimalnu zapreminu tumora ~1000mm<3>, što je kada se miševi eutanaziraju). Prema NCI standardima, T/C ≤ 42% je minimalni nivo antitumorske aktivnosti, a T/C <10% se smatra visokim nivoom antitumorske aktivnosti. Smatralo se da miš ima delimičnu regresiju (PR) kada je TV smanjen za 50% ili više i potpunu regresiju (CR) kada nije mogao biti otkriven palpabilni tumor. T/C, PR i CR za obe studije efikasnosti su navedeni u tabeli ispod. Telesna težina je takođe merena dva puta nedeljno kao grubi indeks toksičnosti leka.
Sl. 20 i tabela 14 prikazuju efikasnost ADC u modelima ksenotransplantata H1703. Rezultati sugerišu da su i ML66-999 i ML66-22a konjugati pokazali antitumorsko delovanje zavisno od doze i da su bili efikasni u modelu ksenotransplantata tumora H1703.
Tabela 14. Rezultati studije efikasnosti H1703
1
Primer 55. Anti-tumorska aktivnost konjugata leka protiv anti-EGFR antitela kod golih miševa koji nose FaDu humani ksenograft karcinoma skvamoznih ćelija i vrata
Antitumorska aktivnost od 1, 3 i 10 mg/kg ML66-999 i ML66-22a je procenjena kod ženki golih miševa koji nose FaDu ćelije, model ksenotransplantata skvamoznog karcinoma glave i vrata čoveka.
Miševi su inokulisani sa 1 × 10<7>FaDu ćelija u 0.1 ml 50% Matrigel/50% medijuma bez seruma subkutanom injekcijom u predelu desnog zadnjeg boka. Dobijene su ženke atimičnih Foxn1<nu>miševa (6 nedelja starosti). Po prijemu, životinje su posmatrane 7 dana pre početka studije. Životinje nisu pokazivale znake bolesti ili bolesti po dolasku ili pre tretmana.
Šezdeset četiri miša su randomizirana u 8 grupa (8 miševa po grupi) prema zapremini tumora. Zapremina tumora se kretala od 74.07 do 128.73 (104.66 ± 15.70, srednja vrednost ± SD) mm<3>. Miševi su mereni, randomizovani i dozirani na osnovu zapremine tumora 6. dana nakon implantacije (19/11/18). Telesna težina miševa se kretala od 20.48 do 25.77 (23.55 ± 1.25, srednja vrednost ± SD) grama. Miševi u svakoj grupi su identifikovani postupkom udarca. Primena test sredstava i vehikuluma je sprovedena intravenski korišćenjem šprica od 1.0 ml opremljenog iglom veličine 27, 1⁄2 inča. Sredstva za testiranje konjugata antitela su dozirani qdx1 u dozi od 1, 3 ili 10 mg/kg. Grupe su uključivale: kontrolnu grupu kojoj je doziran vehikulum (PBS, 200 µL), kontrolnu grupu kojoj je doziran neciljani KTI-999 u dozi od 10 mg/kg, ML66-999 doziran od 1, 3 i 10 mg/kg, i ML66-22a doziran na 1, 3 i 10 mg/kg.
Veličina tumora je merena dva puta nedeljno u tri dimenzije pomoću kalipera. Zapremina tumora je izražena u mm<3>koristeći formulu Zapremina = Dužina × Širina × Visina × 1⁄2. Smatralo se da miš ima delimičnu regresiju (PR) kada je zapremina tumora smanjena za 50% ili više, a potpuna regresija tumora (CR) kada se ne može otkriti palpabilni tumor. Zapremina tumora je određena softverom StudyLog.
1
Inhibicija rasta tumora (%T/C) je odnos srednje zapremine tumora (TV) tretirane grupe (T) i srednje TV kontrolne grupe (C) u unapred određeno vreme (npr. vreme kada srednje TV za kontrolne tumore dostižu maksimalnu zapreminu tumora ~1000mm<3>, što je kada se miševi eutanaziraju). %T/C je izračunat 21. dana nakon inokulacije, kada je srednja TV kontrolne grupe dostigla 749 mm<3>. Prema NCI standardima, T/C ≤ 42% je minimalni nivo antitumorske aktivnosti, a T/C <10% se smatra visokim nivoom antitumorske aktivnosti.
Telesna težina (BW) svih miševa je merena dva puta nedeljno kao grubi indeks toksičnosti leka i određena je pomoću softvera StudyLog. Telesna težina miševa je izražena kao procenat promene telesne težine od telesne težine pre tretmana na sledeći način: % promene BW = [(BWposle / BWpre) - 1] × 100, gde je BWposle težina nakon tretmana, a BWpre je početna telesna težina pre tretmana. Procenat gubitka telesne težine (BWL) je izražen kao srednja promena telesne težine nakon tretmana. Životinje su eutanazirane ako je zapremina tumora postala veća od 1000 mm<3>, tumori su postali nekrotizirani, miševi su izgubili >20% svoje početne telesne težine, ili su miševi postali umirući u bilo kom trenutku tokom studije.
Sl. 18 i Tabela 13 prikazuju efikasnost ADC u modelima FaDu ksenografta. Konjugati ML66-999 i ML66-22a su imali sličnu antitumorsko aktivnost. ML66-KTI doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 20% (aktivan), sa 2 delimične regresije tumora od 8 miševa i 2 potpune regresije. Ovo je pokazalo da neke od antitumorskih aktivnosti u ovom modelu nisu ciljane. ML66-999 doziran u dozi od 1 mg/kg imao je T/C vrednost od 12% (aktivan), sa 4 delimične regresije tumora od 8 miševa i 2 potpune regresije. ML66-999 doziran u dozi od 3 mg/kg imao je T/C vrednost od 2% (visoko aktivan), sa 8 delimičnih regresija tumora od 8 miševa i 4 potpune regresije. ML66-999 doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 0% (visoko aktivan), sa 8 delimičnih regresija tumora od 8 miševa i 8 potpunih regresija. ML66-22a doziran od 1 mg/kg imao je T/C vrednost od 13% (aktivan), sa 4 delimične regresije tumora od 8 miševa i 3 potpune regresije. ML66-22a doziran od 3 mg/kg imao je T/C vrednost od 0% (visoko aktivan), sa 8 delimičnih regresija tumora od 8 miševa i 8 potpunih regresija. ML66-22a doziran u dozi od 10 mg/kg imao je T/C vrednost od 0% (visoko aktivan), sa 8 delimičnih regresija tumora od 8 miševa i 8 potpunih regresija. Nije primećen značajan gubitak telesne težine ni u jednoj od naznačenih doza za bilo koji od konjugata što ukazuje da su se konjugati dobro tolerisali. Rezultati ove studije sugerišu da su i ML66-999 i ML66-22a konjugati pokazali antitumorsko delovanje zavisno od doze i da su bili efikasni u FaDu modelu ksenografta tumora skvamoznih ćelija karcinoma glave i vrata.
1
Tabela 13.
Primer 56. Tolerantnost AbF-999 i AbF-22a ADC:
Tolerabilnost ne-unakrsno reaktivnih ADC je procenjena kod ženki CD-1 miševa vršenjem dnevnih merenja telesne težine i kliničkih posmatranja tokom 2 nedelje nakon injekcije ADC. Tri grupe od po tri miša su dozirane IV bolus injekcijom od 5000 µg/kg na osnovu korisnog opterećenja od AbF-22a (184 mg/kg na osnovu antitela) ili AbF-999 (198 mg/kg antitela). Maksimalna tolerantna doza (MTD) je definisana kao najveća doza pri kojoj nijedna životinja nije umrla ili nije trebalo da bude eutanazirana zbog gubitka telesne težine >20% ili znakova uznemirenosti ili morbiditeta (pogrbljenost, nedostatak kretanja, nemogućnost da jedu ili piju ili znaci bola/distresa). GraphPad je korišćen za statističku analizu telesne težine u svakoj grupi (dvosmerna ANOVA sa Tukey-evim testom višestrukih poređenja je pokazala da AbF-999 grupa se značajno razlikovala i od vehikuluma i od AbF-22a grupe, p<0.05). Sl. 21 prikazuje ove rezultate.
Iako su određeni primeri izvođenja ilustrovani i opisani, trebalo bi da se razume da se promene i modifikacije u njima mogu izvršiti u skladu sa uobičajenom veštinom u ovoj oblasti tehnike bez odstupanja od tehnologije u njenim širim aspektima kako je definisano u sledećim zahtevima.
Primeri izvođenja, ilustrativno opisani ovde, mogu se prikladno primeniti u odsustvu bilo kog elementa ili elemenata, ograničenja ili ograničenja, koji ovde nisu posebno otkriveni.
Ovo otkriće ne treba da bude ograničeno u smislu posebnih primera izvođenja opisanih u ovoj prijavi. Mnoge modifikacije i varijacije se mogu napraviti bez odstupanja od obima pronalaska koji je definisan priloženim zahtevima. Podrazumeva se da ovo otkriće nije ograničeno na
1
određene postupke, reagense, jedinjenja ili kompozicije, koji naravno mogu da variraju. Takođe treba razumeti da je terminologija korišćena ovde samo u svrhu opisa određenih primera izvođenja, i nije namera da bude ograničavajuća.
Pored toga, tamo gde su karakteristike ili aspekti otkrića opisani u terminima Markush grupa, stručnjaci u ovoj oblasti će prepoznati da je otkriće takođe opisano u terminima bilo kog pojedinačnog člana ili podgrupe članova Markush grupe.
Kao što će razumeti stručnjak u ovoj oblasti, za bilo koje i sve svrhe, posebno u smislu davanja pisanog opisa, svi opsezi koji su ovde otkriveni takođe obuhvataju bilo koji i sve moguće podopsege i kombinacije njihovih podopsega. Bilo koji navedeni opseg može se lako prepoznati kao dovoljno opisuje i omogućava da se isti opseg razbije na najmanje jednake polovine, trećine, četvrtine, petine, desetine, itd. Kao neograničavajući primer, svaki opseg koji se ovde razmatra može se lako raščlaniti u donju trećinu, srednju trećinu i gornju trećinu, itd. Kao što će takođe razumeti stručnjak u ovoj oblasti sve jezike kao što su „do“, „najmanje“, „veći od“, „manje od“ i na primer, uključuju navedeni broj i upućuju na opsege koji se naknadno mogu podeliti na podopsege kao što je gore objašnjeno. Konačno, kao što će razumeti stručnjak u ovoj oblasti, opseg uključuje svakog pojedinačnog člana.
1

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: Z-L<1>-D (Formula I) u kome: D je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    R<1>je -F; R<2>je -metil; -L<1>-Z je (i) -(C1-C4alkilen)-OR<6>, -(C1-C4alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C4alkilen)-N(R<6>)2; ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-OR<6>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-SR<6>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SR<6>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SSR<6>; R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil; i R<6>je nezavisno -H, metil, ili benzil uz uslov da -L<1>-Z ne može biti -CH2OH.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što -L<1>-Z je (i) -(CH2)2OH, -(CH2)3OH, -(CH2)4OH, -CH2OMe, -(CH2)2OMe, -(CH2)3OMe, -(CH2)4OMe, -CH2SH, -(CH2)2SH, -(CH2)3SH, -(CH2)4SH, -CH2SMe, -(CH2)2SMe, -(CH2)3SMe, -(CH2)4SMe, -CH2NH2, -(CH2)2NH2, -(CH2)3NH2, ili -(CH2)4NH2, ili (ii) -CH2NHC(=O)CH2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)2OH, -CH2NHC(=O)(CH2)3OH, -CH2NHC(=O)(CH2)4OH, -CH2NHC(=O)(CH2)5OH, -CH2NHC(=O)CH2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4OMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5OMe, -CH2NHC(=O)CH2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)2SH, -CH2NHC(=O)(CH2)3SH, -CH2NHC(=O)(CH2)4SH, -CH2NHC(=O)(CH2)5SH, -CH2NHC(=O)CH2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)2SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)3SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)4SMe, -CH2NHC(=O)(CH2)5SMe, -CH2SCH2SH, -CH2S(CH2)2SH, -CH2S(CH2)3SH, -CH2S(CH2)4SH, -CH2S(CH2)5SH, -CH2SCH2SMe, -CH2S(CH2)2SMe, -CH2S(CH2)3SMe, -CH2S(CH2)4SMe, ili -CH2S(CH2)5SMe.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje je bilo koje od jedinjenja izabranih od sledećih:
  4. 4. Jedinjenje formule II, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: E-A-Z'-L<1>-D (Formula II) u kome: D je predstavljen sledećom strukturnom formulom:
    R<1>je F; R<2>je metil; L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>, ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za A; svako R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil; svako R<8>je nezavisno -H, metil, ili benzil; A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu A je izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koja je: (i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril, ili benzil; ili
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što -L<1>-Z'-<*>je (i) -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, -(CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-; ili (ii) -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 4-5, naznačeno time što E je
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što jedinjenje je predstavljeno sledećom formulom:
  8. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što jedinjenje je predstavljeno sledećom formulom:
  9. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što jedinjenje je predstavljeno sledećom formulom:
  10. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 10. Jedinjenje formule III, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: CBA-E'-A-Z'-L<1>-D (Formula III) u kome: D je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  11. R<1>je F; R<2>je metil; -L<1>-Z'-<*>je (i) -(C1-C4alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C4alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C4alkilen)-NR<8>-<*>, ili (ii) -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-O-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-NR<5>C(=O)-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-S-CH2-NR<8>-<*>, ili -(C1-C5alkilen)-S-(C1-C5alkilen)-SS-CH2-NR<8>-<*>, pri čemu<*>je mesto kovalentno vezano za A; svaki R<5>je nezavisno -H, metil, ili benzil; svaki R<8>is nezavisno -H, metil, ili benzil; A je peptid koji sadrži 2 do 10 aminokiselina; pri čemu A je izborno supstituisan sa jednom ili više grupa koja je: (i) -(C1-C6alkilen)-X<5>-Y<3>, pri čemu: X<5>je -NR<12>C(=O)- ili -C(=O)NR<12>-; Y<3>je -C1-C10alkil, pri čemu Y<3>je supstituisan sa 0-10 OH grupa; i R<12>je -H, C1-C6alkil, C1-C6fluoroalkil, C3-C6cikloalkil, aril, heteroaril, ili benzil; ili
  12. i CBA je sredstvo koje se vezuje za ćeliju, pri čemu sredstvo koje se vezuje za ćeliju je antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 10, naznačeno time što -L<1>-Z'-<*>je (i) -CH2O-CH2NH-<*>, -(CH2)2O-CH2NH-<*>, -(CH2)3O-CH2NH-<*>, -(CH2)4O-CH2NH-<*>, -CH2S-CH2NH-<*>, -(CH2)2S-CH2NH-<*>, -(CH2)3S-CH2NH-<*>, -(CH2)4S-CH2NH-<*>, -CH2NH-<*>, -(CH2)2NH-<*>, - (CH2)3NH-<*>, ili -(CH2)4NH-, ili (ii) -CH2NHC(=O)CH2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5O-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)CH2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)4S-CH2-NH-<*>, -CH2NHC(=O)(CH2)5S-CH2-NH-<*>, -CH2SCH2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)2S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)3S-CH2-NH-<*>, -CH2S(CH2)4S-CH2-NH-<*>, ili -CH2S(CH2)5S-CH2-NH-<*>. 14 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 10 ili patentnom zahtevu 11, naznačeno time što E' je
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 4-6 i 10-12, naznačeno time što A je -(AA<1>)-(AA<2>)a1-<*>, pri čemu<*>je tačka vezivanja za E ili E', i pri čemu -AA<1>-(AA<2>)a1-<*>je: (i) -Gly-Gly-Gly-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, -Val-Cit-<*>, -Val-Lys-<*>, -Lys-Val-<*>, -Phe-Lys-<*>,-Lys-Phe-<*>, -Lys-Lys-<*>, -Ala-Lys-<*>, -Lys-Ala-<*>, -Phe-Cit-<*>,-Cit-Phe-<*>, - Leu-Cit-<*>,- Cit-Leu-<*>- Ile -Cit-<*>, -Phe-Ala-<*>,-Ala-Phe-<*>, -Phe-N9-tozil-Arg-<*>, -N9-tozil-Arg-Phe-<*>, -Phe-N9-nitro-Arg-<*>, -N9-nitro-Arg-Phe<*>, -Phe-Phe-Lys-<*>, -Lys-Phe-Phe-<*>, -Gly-Phe-Lys-<*>, Lys-Phe-Gly-<*>, -Leu-Ala-Leu-<*>, -Ile-Ala-Leu-<*>, -Leu-Ala-Ile-<*>, -Val-Ala-Val-<*>, -Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Leu-Ala-Leu-Ala-<*>, -β-Ala-Leu-Ala-Leu-<*>, -Gly-Phe-Leu-Gly-<*>,-Gly-Leu-Phe-Gly-<*>, -Val-Arg-<*>, -Arg-Val-<*>, -Arg-Arg-<*>, -Ala-Ala-<*>, -Ala-Met-<*>, -Met-Ala-<*>, -Thr-Thr-<*>, -Thr-Met-<*>, -Met-Thr-<*>, -Leu-Ala-<*>, -Ala-Leu-<*>, -Cit-Val-<*>, -Gln-Val-<*>, -Val-Gln-<*>, -Ser-Val-<*>, -Val-Ser-<*>, -Ser-Ala-<*>, -Ser-Gly-<*>, -Ala-Ser-<*>, -Gly-Ser-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Phe-Arg-<*>, -Arg-Phe-<*>, -Tyr-Arg-<*>, -Arg-Tyr-<*>, -Phe-Gln-<*>, -Gln-Phe-<*>, -Val-Thr-<*>, -Thr-Val-<*>, -Met-Tyr-<*>, ili - Tyr-Met-<*>; (ii) -Val-D-Lys-<*>, -Val-D-Arg-<*>, -L-Val-Cit-<*>, -L-Val-Lys-<*>, -L-Val-Arg-<*>, -L-Val-D-Cit-<*>, -L-Phe-Phe-Lys-<*>, -L-Val-D-Lys-<*>, -L-Val-D-Arg-<*>, -L-Arg-D-Arg-<*>, -L-Ala-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -Ala-D-Ala-<*>, -Val-D-Cit-<*>, -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Val-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, ili -L-Ser-L-Val-<*>; (iii) -Ala-Ala-<*>, -Ala-Val-<*>, -Val-Ala-<*>, -Gln-Leu-<*>, -Leu-Gln-<*>, -Ala-Ala-Ala-<*>, -Ala-Ala-Ala-Ala-<*>, -Gly-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Ala-Gly-<*>, -Gly-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-Val-Gly-<*>, -Gly-Phe-Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-Phe-Gly-<*>; (iv) -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Val-<*>, -L-Ala-D-Val-<*>, -L-Val-L-Ala-<*>, -L-Val-D-Ala-<*>, -L-Gln-L-Leu-<*>, -L-Gln-D-Leu-<*>, -L-Leu-L-Gln-<*>, -L-Leu-D-Gln-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-D-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-D-Ala-<*>, -Gly-L-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Ala-Gly-<*>, -Gly-D-Ala-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-D-Ala-Gly-<*>, -Gly-L-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-D-Val-Gly-Gly-<*>, -Gly-Gly-L-Val-Gly-<*>, -Gly-L-Phe- 14 Gly-Gly-<*>, ili -Gly-Gly-L-Phe-Gly-<*>; ili (v) -L-Ala-L-Ala-<*>, -L-Ala-D-Ala-LAla-<*>, -L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>, ili -L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-<*>.
  14. 14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  15. 15. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 14 za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine farmaceutske kompozicije, izborno, pri čemu: (i) kancer je limfom ili leukemija; (ii) kancer je akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijelogena leukemija (CML), mijelodisplastični sindrom (MDS), akutna limfoblastična leukemija (ALL), akutna B limfoblastična leukemija ili B-ćelijska akutna limfoblastična leukemija (B-ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija dlakavih ćelija (HCL), akutna promijelocitna leukemija (APL), B-ćelijska hronična limfoproliferativna bolest (B-CLPD), atipična hronična limfocitna leukemija, difuzni krupnoćelijski limfom B-ćelija (DLBCL), blastična plazmacitoidna neoplazma dendritskih ćelija (BPDCN), ne-Hodgkin-ovi limfomi (NHL), leukemija Mantle ćelija (MCL), mali limfocitni limfom (SLL), Hodgkin-ov limfom, sistemska mastocitoza i Burkitt-ov limfom; (iii) kancer je kancer endometrijuma, kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer bešike, kancer želudca, kancer pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer dojke, kancer glave i vrata, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer štitne žlezde, kancer testisa, mijeloidni kancer, melanom i limfoidni kancer; ili (iv) kancer je nesitnoćelijski kancer pluća ili sitnoćelijski kancer pluća. 14
RS20231182A 2019-04-26 2020-04-10 Derivati kamptotecina RS64961B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962839440P 2019-04-26 2019-04-26
US201962875169P 2019-07-17 2019-07-17
US202062978159P 2020-02-18 2020-02-18
EP20722197.9A EP3958977B1 (en) 2019-04-26 2020-04-10 Camptothecin derivatives
PCT/US2020/027831 WO2020219287A1 (en) 2019-04-26 2020-04-10 Camptothecin derivatives

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64961B1 true RS64961B1 (sr) 2024-01-31

Family

ID=70465562

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20231182A RS64961B1 (sr) 2019-04-26 2020-04-10 Derivati kamptotecina

Country Status (20)

Country Link
US (2) US11229639B2 (sr)
EP (2) EP4316524A3 (sr)
JP (2) JP7561141B2 (sr)
KR (1) KR20220027828A (sr)
CN (2) CN119119176A (sr)
AU (1) AU2020263231B2 (sr)
DK (1) DK3958977T3 (sr)
ES (1) ES2966473T3 (sr)
FI (1) FI3958977T3 (sr)
HR (1) HRP20231619T1 (sr)
HU (1) HUE065484T2 (sr)
IL (2) IL317911A (sr)
LT (1) LT3958977T (sr)
PL (1) PL3958977T3 (sr)
PT (1) PT3958977T (sr)
RS (1) RS64961B1 (sr)
SG (1) SG11202110922QA (sr)
SI (1) SI3958977T1 (sr)
TW (1) TW202106691A (sr)
WO (1) WO2020219287A1 (sr)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3658172A4 (en) 2017-07-25 2021-05-05 TrueBinding, Inc. TREATING CANCER BY BLOCKING THE INTERACTION OF TIM-3 AND HIS LIGAND
CN113711036B (zh) 2019-01-30 2025-03-18 真和制药有限公司 抗gal3抗体及其用途
HUE065484T2 (hu) * 2019-04-26 2024-05-28 Immunogen Inc Camptothecin-származékok
WO2021151984A1 (en) * 2020-01-31 2021-08-05 Innate Pharma Treatment of cancer
BR112022017064A2 (pt) * 2020-02-25 2022-11-16 Mediboston Inc Derivados da camptotecina e seus conjugados
CN116157151A (zh) 2020-05-26 2023-05-23 真和制药有限公司 通过阻断半乳凝素-3治疗炎性疾病的方法
WO2022140504A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Shanghai Ruotuo Biosciences Co., Ltd. Antibody-drug conjugates, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications
US11564989B2 (en) * 2021-01-15 2023-01-31 R.P. Scherer Technologies, Llc Camptothecine antibody-drug conjugates and methods of use thereof
MX2023008341A (es) * 2021-01-15 2023-10-04 Scherer Technologies Llc R P Enlazadores de ésteres de doble escisión para conjugados anticuerpo-fármaco.
MX2023008716A (es) * 2021-02-05 2023-08-02 Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd Compuesto de camptotecina, metodo de preparacion del mismo y aplicacion del mismo.
CN119504997A (zh) * 2021-02-09 2025-02-25 苏州宜联生物医药有限公司 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
US12521444B2 (en) * 2021-02-25 2026-01-13 Fortvita Biologics Limited Anti-HER2 antibody-drug conjugates and uses thereof
BR112023024433A2 (pt) * 2021-05-27 2024-02-20 Zymeworks Bc Inc Análogos, conjugados e métodos de uso de camptotecina
US12545716B2 (en) 2021-07-19 2026-02-10 Immunome, Inc. Immunoconjugates and methods
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
EP4389752A4 (en) 2021-08-19 2025-08-20 Hainan Simcere Zaiming Pharmaceutical Co Ltd CAMPTOTHECIN DERIVATIVE, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND THEIR USE
CN117881431A (zh) * 2021-08-24 2024-04-12 昆山新蕴达生物科技有限公司 一种由可断裂连接子偶联的抗体偶联药物
WO2023030364A1 (zh) * 2021-09-01 2023-03-09 上海弼领生物技术有限公司 一种喜树碱类化合物、其制备方法和用途
EP4460330A1 (en) * 2022-01-06 2024-11-13 Virtuoso Binco, Inc. Conjugates, compositions and methods of use
WO2023143208A1 (zh) * 2022-01-26 2023-08-03 苏州宜联生物医药有限公司 一种药物连接体偶联物的制备方法
EP4496593A1 (en) 2022-03-23 2025-01-29 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing nectin-4
IL315366A (en) 2022-03-23 2024-11-01 Synaffix Bv Antibody pairs for targeting PTK7-expressing tumors
CN119212731A (zh) 2022-03-23 2024-12-27 新锐生物技术公司 用于靶向表达Trop-2的肿瘤的抗体缀合物
KR20250024741A (ko) 2022-03-23 2025-02-19 시나픽스 비.브이. 암배아성 항원을 발현하는 종양을 표적화하기 위한 항체-컨쥬게이트
IL315393A (en) 2022-03-25 2024-11-01 Zymeworks Bc Inc Antibody preparations for drugs targeting alpha acid receptor and methods of use
WO2023207773A1 (en) * 2022-04-29 2023-11-02 Shanghai Micurx Pharmaceutical Co., Ltd. Ligand-drug conjugate of camptothecin analogs, intermediates, preparation method therefor, pharmaceutical composition and application thereof
EP4523704A1 (en) 2022-05-12 2025-03-19 Hainan Simcere Zaiming Pharmaceutical Co., Ltd. Camptothecin derivative and ligand-drug conjugate
IL317271A (en) * 2022-05-30 2025-01-01 Medilink Therapeutics Suzhou Co Ltd Preparation method for Drug Linker Conjugate and between them
EP4285935A1 (en) * 2022-06-03 2023-12-06 Emergence Therapeutics AG Novel anti-nectin-4 antibody camptothecin derivative conjugates
JP2025524628A (ja) 2022-07-12 2025-07-30 シートムエックス セラピューティクス，インコーポレイテッド Ｅｐｃａｍイムノコンジュゲート及びその使用
CA3261633A1 (en) * 2022-07-14 2025-04-25 Medilink Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. ANTIBODY-DRUG CONJUGATE, PREPARATION METHOD AND USE
EP4309676A1 (en) * 2022-07-22 2024-01-24 Emergence Therapeutics AG Novel anti-nectin-4 antibody camptothecin derivative conjugates
WO2024020734A1 (en) * 2022-07-25 2024-02-01 Immunogen, Inc. Novel processes for preparing camptothecin derivatives
CN117510515A (zh) * 2022-07-28 2024-02-06 明慧医药（杭州）有限公司 适用于抗体-药物偶联物的毒素分子
WO2024050031A2 (en) * 2022-08-31 2024-03-07 Bionecure Therapeutics Inc Novel camptothecin derivatves as antibody-drug conjugates (adc) payloads
WO2024054089A1 (ko) * 2022-09-08 2024-03-14 주식회사 피노바이오 신규 캄토테신 유도체 및 이를 포함하는 운반체-약물 접합체
TWI876557B (zh) * 2022-09-30 2025-03-11 臺北醫學大學 用於前列腺癌診斷和早期發病的單株抗體
AU2023359114A1 (en) 2022-10-09 2025-04-24 LaNova Medicines Limited Compounds, compositions and methods
IL319485A (en) * 2022-10-18 2025-05-01 Zymeworks Bc Inc Antibody compositions for drugs targeting GLYPICAN-3 and methods of use
EP4604949A2 (en) * 2022-10-20 2025-08-27 Solve Therapeutics, Inc. Compositions and uses thereof
WO2024109949A1 (zh) * 2022-11-25 2024-05-30 明慧医药（杭州）有限公司 一种抗肿瘤化合物及其应用
CN116712563A (zh) * 2022-12-29 2023-09-08 杭州爱科瑞思生物医药有限公司 N-卤代烷基取代的喜树碱衍生物的抗体偶联药物
CN116870187A (zh) * 2022-12-29 2023-10-13 杭州爱科瑞思生物医药有限公司 N-氧杂环烷基取代的喜树碱衍生物的抗体偶联药物
CN116712561A (zh) * 2022-12-29 2023-09-08 杭州爱科瑞思生物医药有限公司 含n-亚甲基酰胺连接子的抗体-药物偶联物
CN116253741B (zh) * 2022-12-30 2024-02-02 上海禧耀医药科技有限公司 一种贝洛替康衍生物的合成方法
JP2026506351A (ja) * 2023-02-10 2026-02-24 ピノットバイオ，インコーポレイテッド 抗体－薬物複合体用リンカー
JP2026510566A (ja) 2023-02-23 2026-04-08 フロントライン バイオファーマ （ハンチョウ） カンパニー リミテッド カンプトテシン誘導体及びその複合体、並びにその調製方法および医療用途
KR20250168470A (ko) * 2023-04-07 2025-12-02 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 캄프토테신 유도체의 항체-약물 접합체 및 이의 용도
CN121358743A (zh) * 2023-06-13 2026-01-16 成都倍特药业股份有限公司 用于治疗或预防癌症的喜树碱衍生物及其抗体药物偶联物
WO2025078841A2 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Antikor Biopharma Limited Antibodies, conjugates, and uses thereof
CN120058721A (zh) * 2024-01-08 2025-05-30 杭州爱科瑞思生物医药有限公司 7-氟烷基取代的喜树碱衍生物的制备及其应用
WO2025153001A1 (zh) * 2024-01-17 2025-07-24 北京泰德制药股份有限公司 含有噻唑[5,4-b]吡啶结构的抗体偶联药物及其用途
WO2025184362A1 (en) * 2024-02-28 2025-09-04 Macrogenics Inc. Adam9 antibody-drug conjugates
WO2025199665A1 (en) * 2024-03-23 2025-10-02 Ranok Therapeutics (Hangzhou) Co. Ltd. Methods and compositions for targeted protein degradation
WO2025252894A1 (en) * 2024-06-06 2025-12-11 BioNTech SE Ca19-9 binding molecule
CN119101060B (zh) * 2024-06-13 2025-10-31 天津中医药大学 喜树碱衍生物及其制备方法和应用
WO2026085745A1 (en) * 2024-10-23 2026-04-30 Zai Lab (Shanghai) Co., Ltd. Dosing regimens of antibody-drug conjugate targeting delta-like ligand 3 for treatment of neuroendocrine neoplasms
CN119350434B (zh) * 2024-12-24 2025-04-29 苏州共康医药科技有限公司 一种可切割连接子Ala-Ala-Ala的工艺合成方法

Family Cites Families (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JPH0615547B2 (ja) * 1988-01-20 1994-03-02 株式会社ヤクルト本社 新規なカンプトテシン誘導体
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
ATE136898T1 (de) * 1991-10-29 1996-05-15 Glaxo Wellcome Inc Wasserlösliche camptothecinderivate
US5559235A (en) * 1991-10-29 1996-09-24 Glaxo Wellcome Inc. Water soluble camptothecin derivatives
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US20080152586A1 (en) 1992-09-25 2008-06-26 Avipep Pty Limited High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US6355780B1 (en) 1995-02-22 2002-03-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antibodies to the death domain motifs of regulatory proteins
DE19640207A1 (de) * 1996-09-30 1998-04-02 Bayer Ag Glycokonjugate von modifizierten Camptothecin-Derivaten (A- oder B-Ring-Verknüpfung)
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
ES2276708T3 (es) 1999-11-24 2007-07-01 Immunogen, Inc. Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
US6268375B1 (en) * 1999-12-29 2001-07-31 Research Triangle Institute 10, 11-difluoromethylenedioxycamptothecin compounds with topoisomerase I inhibition
JP5291279B2 (ja) 2000-09-08 2013-09-18 ウニヴェルジテート・チューリッヒ 反復モジュールを含む反復タンパク質の集合体
US6855720B2 (en) * 2001-03-01 2005-02-15 California Pacific Medical Center Nitrogen-based camptothecin derivatives
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US8877901B2 (en) * 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
KR20050032110A (ko) 2002-08-02 2005-04-06 이뮤노젠 아이엔씨 신규의 효능을 갖는 탁산을 포함하는 세포독성제 및 그치료용도
ES2361739T3 (es) 2002-08-16 2011-06-21 Immunogen, Inc. Reticulantes con elevada reactividad y solubilidad y su uso en la preparación de conjugados para el suministro dirigido de fármacos de molécula pequeña.
HUE026914T2 (en) 2002-11-07 2016-08-29 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and a method of treating acute myeloid leukemia
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US7067666B2 (en) * 2003-06-27 2006-06-27 Research Triangle Institute 7-substituted camptothecin and camptothecin analogs and methods for producing the same
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
JP5165387B2 (ja) 2005-02-11 2013-03-21 イムノゲン インコーポレーティッド 安定な薬物複合体を調製するための方法
MX2008000345A (es) 2005-07-08 2008-04-02 Univ Zuerich Visualizacion en fagos usando transcolocacion contraduccional de polipeptidos de fusion.
EP3539572A1 (en) 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
EP2535346B1 (en) 2005-08-31 2017-08-02 The Regents of The University of California Cellular libraries of peptide sequences (CLiPS) and methods of using the same
JP5102772B2 (ja) 2005-11-29 2012-12-19 ザ・ユニバーシティ・オブ・シドニー デミボディ：二量体化活性化治療剤
WO2007098611A1 (en) 2006-03-03 2007-09-07 Queen's University At Kingston Compositions for treatment of cancer
WO2007140371A2 (en) 2006-05-30 2007-12-06 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
WO2007147213A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Structure of the insulin receptor ectodomain
US20090304719A1 (en) 2007-08-22 2009-12-10 Patrick Daugherty Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
CA2700391A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 University Of Zuerich Designed armadillo repeat proteins
RU2487877C2 (ru) 2008-04-30 2013-07-20 Иммьюноджен, Инк. Высокоэффективные конъюгаты и гидрофильные сшивающие агенты (линкеры)
EP2281006B1 (en) 2008-04-30 2017-08-02 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
KR101098335B1 (ko) 2008-07-18 2011-12-26 성균관대학교산학협력단 신코나 기재 이작용성 유기 촉매 및 이를 이용한 메소-고리산무수물의 비대칭 고리 열림 반응을 통한 키랄성헤미에스터의 제조방법
BRPI0919881B1 (pt) 2008-10-31 2021-09-08 Centocor Ortho Biotech Inc Proteína de arcabouço e seu método de geração, biblioteca e seu método de construção, molécula de ácido nucleico, vetor de ácido nucleico, célula hospedeira, composição, dispositivo médico e artigo de fabricação
WO2010081173A2 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Cytomx Therapeutics, Llc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
WO2010093627A2 (en) 2009-02-12 2010-08-19 Centocor Ortho Biotech Inc. Fibronectin type iii domain based scaffold compositions, methods and uses
WO2011075786A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them 2
AR080301A1 (es) 2010-02-24 2012-03-28 Immunogen Inc Anticuerpos e inmunoconjugados del receptor 1 de folato y sus usos
MX338932B (es) 2010-03-12 2016-05-06 Immunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados.
JP5997134B2 (ja) 2010-04-30 2016-09-28 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 安定したフィブロネクチンドメイン組成物、方法及び用途
KR20140008308A (ko) 2010-10-29 2014-01-21 이뮤노젠 아이엔씨 신규한 egfr-결합 분자 및 이의 면역컨쥬게이트
CN103328505B (zh) 2010-10-29 2015-12-02 伊缪诺金公司 非拮抗性egfr结合分子及其免疫偶联物
KR20140010076A (ko) 2011-02-15 2014-01-23 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체
PL2694106T3 (pl) 2011-04-01 2018-06-29 Immunogen, Inc. Sposoby zwiększania skuteczności terapii przeciwnowotworowej opartej na receptorze folr1
EP2524929A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Sanofi Use of anti-CD19 maytansinoid immunoconjugate antibody for the treatment of CD19+ B-cell malignancies syptoms
CN103509030A (zh) * 2012-06-18 2014-01-15 李雨亮 喜树碱类化合物及其制备和用途
US9309510B2 (en) 2012-08-10 2016-04-12 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-resistant systems for polypeptide display and methods of making and using thereof
KR102488220B1 (ko) 2013-09-25 2023-01-12 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 매트릭스 메탈로프로테이나제 기질 및 다른 절단성 모이어티 및 이의 사용 방법
PT3088419T (pt) 2013-12-25 2019-01-11 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de anticorpo anti-trop2-fármaco
KR102466591B1 (ko) 2014-01-31 2022-11-14 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 마트립타제 및 ｕ-플라스미노겐 활성화인자 기질 및 다른 절단성 모이어티 및 이의 사용 방법
MA41374A (fr) 2015-01-20 2017-11-28 Cytomx Therapeutics Inc Substrats clivables par métalloprotéase matricielle et clivables par sérine protéase et procédés d'utilisation de ceux-ci
SG10202110908WA (en) 2015-05-04 2021-11-29 Cytomx Therapeutics Inc Anti-cd166 antibodies, activatable anti-cd166 antibodies, and methods of use thereof
SI3558391T1 (sl) 2016-12-23 2022-06-30 Immunogen, Inc. Imunokonjugati, ciljno usmerjeni na ADAM9, in načini njihove uporabe
BR112020020466A2 (pt) * 2018-04-06 2021-01-12 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de peptídeo de camptotecina
HUE065484T2 (hu) * 2019-04-26 2024-05-28 Immunogen Inc Camptothecin-származékok

Also Published As

Publication number Publication date
IL286846A (en) 2021-10-31
IL286846B1 (en) 2025-02-01
PL3958977T3 (pl) 2024-03-11
PT3958977T (pt) 2023-12-15
ES2966473T3 (es) 2024-04-22
CN113766954B (zh) 2024-09-24
CA3137125A1 (en) 2020-10-29
IL286846B2 (en) 2025-06-01
LT3958977T (lt) 2023-12-27
HUE065484T2 (hu) 2024-05-28
EP4316524A3 (en) 2024-04-24
FI3958977T3 (fi) 2023-12-12
HRP20231619T1 (hr) 2024-04-26
IL317911A (en) 2025-02-01
SG11202110922QA (en) 2021-10-28
US11229639B2 (en) 2022-01-25
AU2020263231B2 (en) 2026-02-19
KR20220027828A (ko) 2022-03-08
EP4316524A2 (en) 2024-02-07
EP3958977B1 (en) 2023-09-13
EP3958977A1 (en) 2022-03-02
SI3958977T1 (sl) 2024-07-31
AU2020263231A1 (en) 2021-11-18
CN119119176A (zh) 2024-12-13
TW202106691A (zh) 2021-02-16
JP2024178310A (ja) 2024-12-24
JP2022529854A (ja) 2022-06-24
US20210077482A1 (en) 2021-03-18
CN113766954A (zh) 2021-12-07
DK3958977T3 (en) 2023-12-11
JP7561141B2 (ja) 2024-10-03
US20220133711A1 (en) 2022-05-05
WO2020219287A1 (en) 2020-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3958977B1 (en) Camptothecin derivatives
JP7645843B2 (ja) 自己犠牲型ペプチドリンカーを有するメイタンシノイド誘導体及びそのコンジュゲート
KR20230039755A (ko) 세포-결합제 및 세포독성 약물을 포함하는 콘주게이트
CA3137125C (en) Camptothecin derivatives
RU2844846C2 (ru) Производные камптотецина
HK40104845A (en) Camptothecin derivatives
HK40069519A (en) Camptothecin derivatives
HK40069519B (en) Camptothecin derivatives
HK1233252A1 (en) Bifunctional cytotoxic agents