RS65248B1 - Derivati 6,7-dihidro-5h-pirido[2,3-c]piridazina i slična jedinjenja kao inhibitori bcl-xl proteina i pro-apoptotička sredstva za lečenje kancera - Google Patents
Derivati 6,7-dihidro-5h-pirido[2,3-c]piridazina i slična jedinjenja kao inhibitori bcl-xl proteina i pro-apoptotička sredstva za lečenje kanceraInfo
- Publication number
- RS65248B1 RS65248B1 RS20240257A RSP20240257A RS65248B1 RS 65248 B1 RS65248 B1 RS 65248B1 RS 20240257 A RS20240257 A RS 20240257A RS P20240257 A RSP20240257 A RS P20240257A RS 65248 B1 RS65248 B1 RS 65248B1
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- methyl
- amino
- pyridazin
- benzothiazol
- mmol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
- C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
- A61K31/428—Thiazoles condensed with carbocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
- A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
- C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D471/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
Opis
OBLAST TEHNIKE
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na derivate 6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il, na farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i njihovu upotrebu kao pro-apoptotičkih sredstava. Jedinjenja iz ovog pronalaska inhibiraju aktivnost Bcl-xL proteina i mogu biti od interesa za lečenje kancera, imunih i autoimunih bolesti.
STANJE TEHNIKE
[0002] Apoptoza (programirana ćelijska smrt) je evolucijski očuvan put neophodan za homeostazu tkiva, razvoj i uklanjanje oštećenih ćelija. Deregulacija apoptoze doprinosi ljudskim bolestima, uključujući malignitete, neurodegenerativne poremećaje, bolesti imunog sistema i autoimune bolesti (Hanahan and Weinberg, Cell.2011 Mar 4;144(5):646-74; Marsden and Strasser, Annu Rev Immunol.
2003;21:71-105; Vaux and Flavell, Curr Opin Immunol.2000 Dec;12(6):719-24). Izbegavanje apoptoze je prepoznato kao obeležje kancera, koje učestvuje u razvoju kao i u neprekidnoj ekspanziji tumora i otpornosti na tretmane protiv kancera (Hanahan and Weinberg, Cell.2000 Jan 7;100(1):57-70).
[0003] Porodica Bcl-2 proteina obuhvata ključne regulatore opstanka ćelija koji mogu da potisnu (npr., Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1) ili da promovišu (npr., Bad, Bax) apoptozu (Gross et al., Genes Dev. 1999 Aug 1;13(15):1899-911, Youle and Strasser, Nat. Rev. Mol. Cell Biol.2008 Jan;9(1):47-59).
[0004] Suočeni sa stresnim stimulansima, da li će ćelija preživeti ili će se podvrgnuti apoptozi zavisi od stepena uparivanja između članova porodice Bcl-2 koji promovišu ćelijsku smrt sa članovima porodice koji promovišu opstanak ćelija. Najvećim delom, ove interakcije uključuju pripajanje Bcl-2 homoloških 3 (BH3) domena proapoptotičkih članova porodice u žljeb na površini članova koji promovišu opstanak. Prisustvo Bcl-2 homoloških (BH) domena definiše članstvo u porodici Bcl-2, koja se podeli u tri glavne grupe u zavisnosti od konkretnih BH domena prisutnih u proteinu. Članovi koji promovišu opstanak kao što su Bcl-2, Bcl-xL, i Mcl-1 sadrže BH domene 1-4, dok Bax i Bak, proapoptotički efektori permeabilizacije spoljne membrane mitohondrija dok traje apoptoza, sadrže BH domene 1-3 (Youle and Strasser, Nat. Rev. Mol. Cell Biol.2008 Jan;9(1):47-59).
[0005] Prekomerna ekspresija članova koji promovišu opstanak porodice Bcl-2 je obeležje kancera i pokazalo se da ovi proteini igraju važnu ulogu u razvoju tumora, održavanju i otpornosti na terapiju protiv kancera (Czabotar et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol.2014 Jan;15(1):49-63). Bcl-xL (takođe nazvan BCL2L1, od BCL2-like 1) se često pojačava kod kancera (Beroukhim et al., Nature 2010 Feb 18;463(7283):899-905) i pokazalo se da je njegova ekspresija u obrnutoj korelaciji sa osetljivošću na više od 120 terapeutskih molekula protiv kancera u reprezentativnoj listi ćelijskih linija kancera (NCI-60) (Amundson et al., Cancer Res.2000 Nov 1;60(21):6101-10).
[0006] Pored toga, nekoliko studija koje su koristile modele transgenih nokaut miševa i transgenu prekomernu ekspresiju članova porodice Bcl-2 istakle su značaj ovih proteina u bolestima imunog sistema i autoimunih bolesti (za pregled, videti Merino et al., Apoptosis 2009 Apr;14(4):570-83. doi: 10.1007/s10495-008-0308-4.PMID: 19172396). Transgena prekomerna ekspresija Bcl-xL u odeljku T-ćelija dovela je do otpornosti na apoptozu indukovanu glukokortikoidom, g-zračenjem i CD3 umrežavanjem, što sugeriše da transgena prekomerna ekspresija Bcl-xL može smanjiti apoptozu u T-ćelijama u stanju mirovanja i aktiviranim T-ćelijama (Droin et al., Biochim Biophys Acta 2004 Mar 1;1644(2-3):179-88. doi: 10.1016/j.bbamcr.2003.10.011.PMID: 14996502). U uzorcima pacijenata, posmatrana je postojana ili visoka ekspresija antiapoptotičkih proteina porodice Bcl-2 (Pope et al., Nat Rev Immunol. 2002 Jul;2(7):527-35. doi: 10.1038/nri846.PMID: 12094227). Posebno, T-ćelije izolovane iz zglobova pacijenata sa reumatoidnim artritisom su pokazale povećanu ekspresiju Bcl-xL i bile su otporne na spontanu apoptozu (Salmon et al., J Clin Invest. 1997 Feb 1;99(3):439-46. doi: 10.1172/JCI119178.PMID: 9022077). Upotreba BH3 mimetika je takođe pokazala korist u pretkliničkim modelima bolesti imunog sistema i autoimunih bolesti. Tretman sa ABT-737 (Bcl-2, Bcl-xL, i Bcl-w inhibitor) je doveo do snažne inhibicije proliferacije limfocita in vitro. Važno je da su miševi tretirani sa ABT-737 na životinjskim modelima artritisa i lupusa pokazali značajno smanjenje težine bolesti (Bardwell et al., J Clin Invest.1997 Feb 1;99(3):439-46. doi: 10.1172/JCI119178.PMID: 9022077). Pored toga, pokazalo se da ABT-737 sprečava aktivaciju alogenihT-ćelija, proliferaciju, i citotoksičnost in vitro i inhibiranje odgovora alogenih T-i B-ćelija nakon transplantacije kože sa visokom selektivnošću za limfoidne ćelije (Cippa et al., .Transpl Int. 2011 Jul;24(7):722-32. doi: 10.1111/j.1432-2277.2011.01272.x. Epub 2011 May 25.PMID: 21615547).
[0007] Gore navedeni dobijeni podaci motivisali su otkrivanje i razvoj nove klase lekova pod nazivom BH3 mimetici. Ovi molekuli su u stanju da poremete interakciju između proapoptotičkih i antiapoptotičkih članova porodice Bcl-2 i moćni su induktori apoptoze. Ova nova klasa lekova uključuje inhibitore Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w i Mcl-1. Prvi opisani mimetici BH3 su ABT-737 i ABT-263, ciljajući na Bcl-2, Bcl-xL i Bcl-w (Park et al., J. Med. Chem.2008 Nov 13;51(21):6902-15; Roberts et al., J. Clin. Oncol.
2012 Feb 10;30(5):488-96). Nakon toga, takođe su otkriveni selektivni inhibitori Bcl-2 (ABT-199 i S55746 -Souers et al., Nat Med. 2013 Feb;19(2):202-8; Casara et al., On-cotarget 2018 Apr 13;9(28):20075-20088), Bcl-xL (A-1155463 i A-1331852 -Tao et al., ACS Med Chem Lett. 2014 Aug 26;5(10):1088-93; Leverson et al., Sci Transl Med.2015 Mar 18;7(279):279ra40) i Mcl-1 (A-1210477, S63845, S64315, AMG-176 i AZD-5991 -Leverson et al., Cell Death Dis.2015 Jan 15;6:e1590.; Kotschy et al., Nature 2016, 538, 477-482; Maragno et al., AACR 2019, Poster #4482; Kotschy et al., WO 2015/097123; Caenepeel et al., Cancer Discov.2018 Dec;8(12):1582-1597; Tron et al., Nat. Commun.
2018 Dec 17;9(1):5341). Selektivni Bcl-2 inhibitor ABT-199 je sada odobren za lečenje pacijenata sa CLL i AML u kombinovanoj terapiji, dok su ostali inhibitori u pretkliničkom ili kliničkom razvoju. U pretkliničkim modelima, ABT-263 je pokazao aktivnost kod nekoliko hematoloških maligniteta i čvrstih tumora (Shoemaker et al., Clin. Cancer Res. 2008 Jun 1;14(11):3268-77; Ackler et al., Cancer Chemother. Pharmacol.2010 Oct;66(5):869-80; Chen et al., Mol. Cancer Ther.2011 Dec;10(12):2340-9). U kliničkim studijama, ABT-263 je pokazao objektivnu antitumorsku aktivnost kod limfoidnih maligniteta (Wilson et al., Lancet Oncol.2010 Dec;11(12):1149-59; Roberts et al., J. Clin. Oncol.2012 Feb 10;30(5):488-96) i njegova aktivnost se istražuje u kombinaciji sa nekoliko terapija kod čvrstih tumora. Selektivni inhibitori Bcl-xL, A-1155463 ili A-1331852, pokazali su in vivo aktivnost u pretkliničkim modelima T-ALL (T-ćelijska Akutna Limfoblastna Leukemija) i različitim tipovima čvrstih tumora (Tao et al., ACSMed. Chem. Lett.2014 Aug 26;5(10):1088-93; Leverson et al., Sci. Transl. Med.
2015 Mar 18;7(279):279ra40). Pored toga, WO 2017/214233, WO 2013/055897 i WO 2010/080503 otkrivaju derivate 6-[8-(1,3-benzotiazol-2-il-karbamoil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-3-piridin-2-karboksilne kiseline kao inhibitore Bcl-xL proteina za upotrebu kao apoprotička sredstva u lečenju kancera. Selektivni inhibitori Mcl-1 su pokazali obećavajuću in vivo aktivnost kod nekoliko tipova maligniteta hematoloških ćelija u pretkliničkim modelima i tri od njih, S64315, AMG176 i AZD5991, se trenutno istražuju u kliničkim ispitivanjima (Yang et al., Eur. J. Med. Chem. 2019 May 8;177:63-75). Prema tome, BH3 mimetici predstavljaju veoma atraktivan pristup za razvoj nove terapije u onkologiji i u oblasti imunih i autoimunih bolesti. Posebno, postoji potreba za malim molekulima koji selektivno inhibiraju Bcl-xL protein. Ovaj pronalazak ispunjava ovu potrebu.
SUŠTINA PRONALASKA
[0008] Ovaj pronalazak obezbeđuje moćne selektivne inhibitoree Bcl-xL formule (I) kako je definisano u nastavku. Mi smo pokazali da su ova jedinjenja sposobna da indukuju apoptozu ćelija kancera in vivo, izazivajući regresiju tumora kod miševa. Na osnovu njihovih pro-apoptotičkih svojstava, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti od interesa za lečenje patologija uključujući deregulaciju kod apoptoze, kao što su, na primer, kancer, autoimune bolesti i bolesti imunog sistema. Pored toga, ova jedinjenja se dobro podnose kod miševa, bez klinički značajnog gubitka telesne mase nakon tretmana efikasnim dozama, što ukazuje na moguću terapijsku marginu za upotrebu ovih malih molekula koji ciljaju BclxLu lečenju kancera. U skladu sa prethodno opisanom ulogom Bcl-xL u regulaciji životnog veka trombocita (Zhang et al., Cell Death Differ. 2007 May; 14(5):943-51; Mason et al., Cell. 2007 Mar 23;128(6):1173-86), mi smo primetili smanjenja broja trombocita u cirkulaciji nakon tretiranja miševa ovim inhibitorima, sa oporavkom nakon prekida tretiranja. Uzimajući u obzir ovaj efekat u preživljavanju trombocita, inhibitori Bcl-xL iz ovog pronalaska se mogu takođe koristiti za lečenje bolesti ili stanja koje karakteriše višak ili deregulacija aktivnosti trombocita, kao što su, na primer, protrombotska stanja.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0009] U prvom izvođenju (E1), ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I):
pri čemu:
● Het deo predstavlja spojeni aromatični ili nearomatični prsten sastavljen od 5 do 7 članova u prstenu, koji može sadržati, pored azota, još jedan heteroatom ili grupu izabranu između kiseonika, sumpora i C=O,
● A4i A5nezavisno jedan od drugog predstavljaju atom ugljenika ili azota, poželjno A4i A5predstavljaju svaki atom azota,
● Z1predstavlja vezu, -N(R)-, ili -O-, gde R predstavlja vodonik ili linearni ili razgranat C1-C6alkil, ● R1se bira iz grupe koju čine: vodonik; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa hidroksilom ili C1-C6alkoksi grupa; C3-C6cikloalkil; trifluorometil; linearni ili razgranati C1-C6alkilen-heterocikloalkil pri čemu je heterocikloalkil grupa opciono supstituisana sa linearnom ili razgranatom C1-C6alkil grupom;
● R2predstavlja vodonik ili metil;
● R3se bira iz grupe koju čine: vodonik; linearni ili razgranati C1-C4alkil; -X1-NRaRb; -X1-N<+>RaRbRc;
-X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3i :
Rai Rbnezavisno jedan od drugog predstavljaju grupu koju čine: vodonik; heterocikloalkil; -SO2-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa linearnim ili razgranatim C1-C6alkilom; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve hidroksilne grupe; C1-C6alkilen-SOzOH; C1-C6alkilen-SOzO-; C1-C6alkilen-COOH; C1-C6alkilen-PO(OH)2; C1-C6alkilen-NRdRe; C1-C6alkilen-N<+>RdReRf; C1-C6alkilen-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa C1-C6alkoksi grupom; grupa:
ili Rai Rbformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B1;
ili Ra, Rbi RCformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil,
Rc, Rd, Re, Rf, nezavisno jedan od drugog predstavljaju vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil grupu, ili Rdi Reformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B2, ili Rd, Rei Rf formiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil,
Het1predstavlja grupu izabranu od:
Het2predstavlja grupu izabranu od:
A1je -NH-, -N(C1-C3alkil), O, S ili Se,
A2je N, CH ili C(R5),
G se bira iz grupe koju čine: -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, halogen, -NO2, i -CN, u kojima:
-RG1i RG2pri svakom pojavljivanju su svaki nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, C1-C6alkil opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C6cikloalkil, fenil i -(CH2)1-4-fenil;
-RG3se bira iz grupe koju čine C1-C6alkil opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C6cikloalkil, fenil i -(CH2)1-4-fenil; ili
RG1i RG2, zajedno sa atomom za koji je svaki vezan su sastavljeni da formiraju C3-C8heterocikloalkil ; ili alternativno, G se bira iz grupe koju čine:
pri čemu se RG4bira između C1-C6alkila opciono supstituisanog sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenila, C2-C6alkinila i C3-C6cikloalkila,
R4predstavlja atom vodonika, fluora, hlora ili broma, metil, hidroksil ili metoksi goupa, R5predstavlja grupu izabranu od: C1-C6alkila opciono supstituisanog sa 1 do 3 atoma halogena; C2-C6alkenila; C2-C6alkinila; halogena ili -CN,
R6predstavlja grupu izabranu od:
vodonika;
-C2-C6alkenila;
-X2-O-R7;
-X2-NSO2-R7;
-C=C(R9)-Y1-O-R7;
C3-C6cikloalkil;
C3-C6heterocikloalkil opciono supstituisan sa hidroksil grupom;
C3-C6cikloalkilen-Y2-R7;
C3-Ceheterocikloalkilen-Y2-R7grupa,
heteroarilen-R7grupa opciono supstituisana sa linearnom ili razgranatom C1-C6alkil grupom, R7predstavlja grupu izabranu od: linearne ili razgranate C1-C6alkil grupe; (C3-C6)cikloalkilen-R8; ili:
R9predstavlja grupu izabranu od linearnog ili razgranatog C1-C6alkil, trifluorometil, hidroksil, vodonika, C1-C6alkoksi,
R10predstavlja grupu izabranu od vodonika, fluora, hlora, broma, -CF3i metil,
R11predstavlja grupu izabranu od vodonika, halogena, C1-C3alkilen-R8, -O-C1-C3alkilen-R8, -CO-NRhRii -CH=CH-C1-C4alkilen-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8cikloalkilen-CH2-R8, C3-C8heterocikloalkilen-CH2-R8,
R12i R13, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju atom vodonika ili metil grupu,
R14i R15, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju vodonik ili metil grupu, ili R14i R15formiraju sa atomom ugljenika koji ih nosi cikloheksil,
Rhi Ri, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil grupu,
X1predstavlja linearnu ili razgranatu C1-C4alkilen grupu opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe izabrane od trifluorometil, hidroksil, halogena, C1-C6alkoksi,
X2predstavlja linearnu ili razgranatu C1-C6alkilen grupu opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe izabrane od trifluorometil, hidroksil, halogena, C1-C6alkoksi,
X’2predstavlja linearni ili razgranat C1-C6alkilen,
R’ai R’bnezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu izabranu između: vodonika; heterocikloalkil; -SO2-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa linearnim ili razgranatim C1-C6alkilom; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve hidroksil ili C1-C6alkoksi grupe; C1-C6alkilen-SO2OH; C1-C6alkilen-SO2O-; C1-C6alkilen-COOH; C1-C6alkilen-PO(OH)2; C1-C6alkilen-NR’aR’e; C1-C6alkilen-N<+>R’dR’eR’f; C1-C6alkilen-O-C1-C6alkilen-OH; C1-C6alkilen-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa hidroksil ili C1-C6alkoksi grupom; grupa:
ili R’ai R’bformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B3,
ili R’a, R’bi R’Cformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil,
R’c, R’d, R’e, R’f, nezavisno jedan od drugog, predstavlja vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil grupu,
ili R’di R’eformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B4,
ili R’d, R’ei R’f formiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil,
• Yi predstavlja linearni ili razgranat C1-C4alkilen,
• Y2predstavlja vezu, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-,-C2H5-, -CO-, -COO-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-,
• m=0, 1 ili 2,
• p=1, 2,3 ili 4,
• B1, B2, B3i B4, nezavisno jedan od drugog, predstavlja C3-C8heterocikloalkil grupu, koja grupa može: (i) biti mono-ili biciklična grupa, pri čemu biciklična grupa uključuje spojeni, premošćeni ili spiro prstenski sistem, (ii) može sadržati, pored atoma azota, jedan ili dva heteroatoma izabrana od kiseonika, sumpora i azota, (iii) biti supstituisana sa jednom ili dve grupe izabrane od: fluora, broma, hlora, linearnog ili razgranatog C1-C6alkila, hidroksila, -NH2, okso ili piperidinil,
takođe se podrazumeva da:
-"aril" označava fenil, naftil, bifenil ili indenil grupu,
-"heteroaril" označava bilo koju mono ili bicikličnu grupu sastavljenu od 5 do 10 članova u prstenu, koji imaju najmanje jedan aromatični deo i koji sadrži od 1 do 4 hetero atoma izabrana od kiseonika, sumpora i azota (uključujući kvaternarni azot),
-"cikloalkil" označava bilo koju mono ili bicikličnu nearomatičnu karbocikličnu grupu koja sadrži od 3 do 10 članova prstena, koji mogu uključivati spojene, premošćene ili spiro prstenaste sisteme,
-"heterocikloalkil" označava bilo koju mono ili bicikličnu nearomatičnu karbocikličnu grupu, sastavljenu od 3 do 10 članova prstena, i koji sadrži jedan do 3 heteroatoma odabrana između kiseonika, sumpora, SO, SO2i azota, podrazumeva se da biciklična grupa može biti spojena ili spiro tipa,
-heteroarilen, cikloalkilen, heterocikloalkilen označava dvovalentni heteroaril, cikloalkil i heterocikloalkil,
njegove enantiomere i dijastereoizomere, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
[0010] Među farmaceutski prihvatljivim kiselinama može se pomenuti, bez ikakvog ograničenja, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosfonska kiselina, sirćetna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, mlečna kiselina, pirogrožđana kiselina, malonska kiselina, ćilibarna kiselina, glutarna kiselina, fumarna kiselina, vinska kiselina, maleinska kiselina, limunska kiselina, askorbinska kiselina, oksalna kiselina, metansulfonska kiselina i kamforna kiselina.
[0011] Među farmaceutski prihvatljivim bazama može se pomenuti, bez ikakvog ograničenja, natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, trietilamin i terc-butilamin.
[0012] Ovde su opisana dalje nabrojana izvođenja (E) pronalaska. Prepoznaće se da karakteristike navedene u svakom izvođenju mogu biti kombinovane sa drugim navedenim karakteristikama da bi se obezbedila dalja izvođenja ovog pronalaska.
[0013] E2. Jedinjenje prema E1, koje je jedinjenje formule (IA):
[0014] E3. Jedinjenje prema E1 ili E2 pri čemu Z1predstavlja -NH-ili -O-.
[0015] E4. Jedinjenje prema bilo kom E1 do E3 pri čemu R3predstavlja -X1-NRaRb, poželjno grupu -C2H5-NH-CH3.
0016 E5. Jedinene rema E1 ili E2 koe e izabrano od:
[0017] E6. Jedinjenje prema E5, koje je jedinjenje formule (IB):
[0018] E7. Jedinjenje prema E6 pri čemu Z1predstavlja vezu i R3predstavlja atom vodonika.
[0019] E8. Jedinjenje prema E1, koje je jedinjenje formule (IC):
Pri čemu A3predstavljan atom kiseonika ili sumpora.
[0020] E9. Jedinjenje prema bilo kom od E1 do E8 pri čemu R1predstavlja atom vodonika, metil ili ciklopropil grupu, poželjno metil.
[0021] E10. Jedinjenje prema bilo kom od E1 do E9 pri čemu Het1predstavlja:
[0022] E11. Jedinjenje prema bilo kom od E1 do E10 pri čemu Het2predstavlja:
[0023] E12. Jedinjenje prema bilo kom od E1 do E10 pri čemu Het2predstavlja:
[0024] E13. Jedinjenje prema E11 pri čemu R6predstavlja -X2-O-R7grupu pri čemu X2je propilen grupa.
[0025] E14. Jedinjenje prema E13 pri čemu R7predstavlja sledeću grupu:
[0026] E15. Jedinjenje prema E13 pri čemu R7predstavlja sledeću grupu:
[0027] E16. Jedinjenje prema E13 pri čemu R7predstavlja sledeću grupu:
[0028] E17. Jedinjenje prema bilo kom od E14 do E16 pri čemu R8predstavlja NR’aR’b.
[0029] E18. Jedinjenje prema bilo kom od E14 do E16 pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: dimetilamino, dietilamino, diizopropilamino, diizobutilamino, metilamino, etilamino, etil(metil)amino, 4-metil-piperazin-1-il, piperazin-1-il, pirolidin-1-il, azetidin-1-il, 1-piperidil, 4-morfolinil, 4,4-difluoropiperidin-1-il, 3,3-difluoropiperidin-1-il, 3-hidroksi-1-piperidil, (1S,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il, 4-(1-piperidil)-1-piperidil, 3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il, (1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il, 2-(dimetilamino)etilamino, 3-piperazin-1-il, (3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il, (but-3-in-1-il)amino, (but-3-in-1-il)(metil)amino, (3-azidopropil)amino, (3-azidopropil)(metil)amino (3-aminopropil)amino, (pent-4-in-1-il)amino, metil(pent-4-in-1-il)amino, (prop-2-in-1-il)amino, (heks-5-in-1-il)amino, 3-[(heks-5-in-1-il)(metil)amino, (4-azidobutil)amino, (4-azidobutil)(metil)amino, [2-(2-hidroksietoksi)etil](metil)amino,
i:
[0030] E19. Jedinjenje prema bilo kom od E14 do E16 pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: bis[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino, amino, [(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino, [(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino, acetil(metil)amino, 3-hidroksipropilamino.
[0031] E20. Jedinjenje prema E13 pri čemu R7predstavlja:
pri čemu R11je izabran između 3-(dimetilamino)propil, 3-(metilamino)propil, aminometil, 2-(dimetilamino)etil, 4-(dimetilamino)butil, 2-(metilamino)etil, 4-(metilamino)butil, 3-(azetidin-1-il)propil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propil, 3-pirolidin-1-ilpropil, 3-morfolinopropil, 3-(1-piperidil)propil, 3-[(1R,5S)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il i 3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)propil.
[0032] E21. Jedinjenje prema E13 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od:
[0033] E22. Jedinjenje prema E12 pri čemu R6predstavlja:
[0034] E23. Jedinjenje prema E22 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od:
pri čemu R8predstavlja -O-X’2-NR’aR’bili -X’2-NR’aR’b.
[0035] E24. Jedinjenje prema E22 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od :
pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: vodonika, 2-(metilamino)etoksi, 2-(dimetilamino)etoksi, 2-[(2-sulfoetil)amino]etoksi, 2-[metil(2-sulfoetil)amino]etoksi, 4-metilpiperazin-1-il i:
[0036] E25. Jedinjenje prema E22 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od :
pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: 2-pirolidin-1-iletoksi, 2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi, 2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]etoksi, 2-(4-hidroksibutilamino)etoksi, 2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi, 2-[bis(2-hidroksietil)amino]etoksi, 2-[[2-hidroksi-1-(hidroksimetil)etil]amino]etoksi, 2-[2-(2-hidroksietoksi)etilamino]etoksi, 2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi, 2-(3-hidroksipropilamino)etoksi, 2-[bis(4-hidroksibutil)amino]etoksi, 2-morfolinoetoksi, 2-(1-piperidil)etoksi, 2-piperazin-1-iletoksi, 2-(azepan-1-il)etoksi, 2-(4-izopropilpiperazin-1-il)etoksi, 2-[(4-hidroksifenil)metilamino]etoksi, 2-[2-hidroksietil(metil)amino]etoksi, 2-[3-metoksipropil(metil)amino]etoksi, 2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi, 3-pirolidin-1-ilpropil, 3-(dimetilamino)propil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propil, 3-morfolinopropil, 3-(3-hidroksipropilamino)propil, 3-(4-hidroksibutilamino)propil, 3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]propil, 3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]propil, 3-[4-hidroksibutil(metil)amino]propil, 3-[3-hidroksipropil(metil)amino]propil, 3-[3-[bis(3-hidroksipropil)amino]propil, 3-piperazin-1-ilpropil.
[0037] E26. Jedinjenje prema bilo kom od E1, E2 i E6 pri čemu R3predstavlja -X1-PO(OH)2, -X1-SO2(OH), -X1-NRaRb; -X1-N<+>RaRbRc, pri čemu Raili Rb, ili oba od njih, predstavljaju grupu odabranu između C1-C6alkilen-SO2OH, C1-C6alkilen-SO2O<->i C1-C6alkilen-PO(OH)2.
[0038] E27. Jedinjenje prema bilo kom od E1, E2 i E6 pri čemu R8predstavlja -NR’aR’b; -N<+>R’aR’bR’c; -NH-X’2-N<+>R’aR’bR’c, pri čemu R’ai R’b, ili oba od njih, predstavljaju grupu odabranu između C1-C6alkilen-SO2OH i C1-C6alkilen-PO(OH)2.
[0039] E28. Jedinjenje prema E1 odabrano u sledećoj grupi:
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-5-(3-{4-[3-(Azetidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(4,4-difluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(3,3-difluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-piperazin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dietilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(diizopropilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[2-(dimetilamino)etilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-[2-(metilamino)etoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(prop-2-inilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetiladamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-(3-{4-[3-(etilamino)-3-metilbut-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina,
-3-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina,
njegovi enantiomeri i dijastereoizomeri, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
[0040] E29. Jedinjenje prema E1 odabrano u sledećoj grupi:
- 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetiladamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, - 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino}etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino}etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-hidroksietil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, - 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(1-piperidil)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, - 3-[1-[[3-[2-(azepan-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina, - 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-izopropil-piperazin-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[3-metoksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-(2-hidroksietoksi)etilamino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[2-hidroksi-1-(hidroksimetil)etil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(2-hidroksietil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(4-hidroksibutil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-{1-[(3,5-dimetil-7-{2-[(2-sulfoetil)amino]etoksi}adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}piridin-2-karboksilna kiselina,
- 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[(4-hidroksifenil)metilamino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina,
- 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
- 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
- 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksipropilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina,
njegovi enantiomeri i dijastereoizomeri, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
[0041] E30. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) prema E6, koji je karakterisan u tome što se kao polazni materijal koristi jedinjenje formule (II):
koje jedinjenje formule (II) je podvrgnuto ugrađivanju odlazeće grupe (poželjno korišćenjem jodiranja) da bi se dobilo jedinjenje formule (III):
pri čemu L.G predstavlja odlazeću grupu (poželjno atom halogena, poželjnije jod), koje jedinjenje formule (III) je dalje podvrgnuto reakciji kuplovanja, u vodenom ili organskom medijumu (poželjno acetonu), u prisustvu baze (poželjno cezijum karbonata), sa jedinjenjem formule (IV):
pri čemu G1 predstavlja C1-C6alkil grupu ili (4-metoksifenil)metil grupu i
predstavlja zaštitnu grupu (poželjno terc-butoksikarbonil grupu), da bi se dobilo jedinjenje formule (V):
sa koje amino grupe jedinjenja formule (V) je skinuta zaštita (poželjno korišćenjem 1,1,1,3,3,3-heksafluoroizopropanola) da bi se dobilo jedinjenje formule (VI):
koje jedinjenje formule (VI) je podvrgnuto Suzuki reakciji kuplovanja, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu fosfin paladijum kompleksa (poželjno Pd(AtaPhos)2Cl2), baze (poželjno Cs2CO3) i jedinjenja formule (VII):
pri čemu R7je kao što je definisano u formuli (I),
da bi se dobilo jedinjenje formule (VIII):
koje jedinjenje formule (VIII) se dalje podvrgava intramolekulskoj Buchwald-ovoj reakciji kuplovanja, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu fosfin paladijum kompleksa (poželjno Pd(AtaPhos)2Cl2) i najmanje jedne baze (poželjno Cs2CO3i DIPEA) da bi se dobilo jedinjenje formule (IX):
koje jedinjenje formule (IX) se podvrgava Buchwald-ovoj reakciji, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu paladijumskog katalizatora (poželjno Pd2(dba)3), baze (poželjno DIPEA), fosfina (poželjno Xantphos) i jedinjenja formule (X):
pri čemu R4i m su definisani kao što je u formuli (I),
da bi se dobilo jedinjenje formule (XI):
estarska funkcija čije jedinjenje (XI) je hidrolizovano (korišćenjem poželjno LiOH3H2O ili TFA) da bi se dobilo jedinjenje formule (I),
koje jedinjenje formule (I) može biti prečišćeno u skladu sa konvencionalnom tehnikom razdvajanja, koje može biti konvertovano u njegove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom i koje je opciono odvojeno u svoje izomere u skladu sa konvencionalnom tehnikom razdvajanja, podrazumeva se da, u bilo koje vreme koje se smatra odgovarajućim u toku gore opisanog postupka, hidroksi, amino, karboksilne i fosfono grupe reagenasa ili intermedijera sinteze mogu biti zaštićene a zatim uklonjena zaštita prema zahtevima sinteze.
[0042] E31. Postupak prema E30 pri čemu grupa R7je izabrana od:
pri čemu R8, R12i R13su kao što je definisano u formuli (I).
[0043] E32. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) prema E6, koji je karakterisan u što se kao polazni materijal koristi jedinjenje formule (II):
koje jedinjenje formule (II) je podvrgnuto Mitsunobu reakciji u prisustvu trifenilfosfina u toluenu, odgovarajućeg reagensa za kuplovanje (poželjno di-terc-butilazodikarboksilat) i jedinjenja formule (XII-a) ili (XII-b):
pri čemu A1, A2i R6su kao što je definisano u formuli (I), G1 predstavlja C1-C6alkil grupu ili (4-metoksifenil)metil grupu i
predstavlja zaštitnu grupu (poželjno terc-butoksikarbonil grupa), da bi se dobilo jedinjenje formule (XIII-a) ili (XIII-b):
koja amino grupa jedinjenja formule (XIII-a) ili (XIII-b) je dalje uklonjena zaštita da bi se dobilo jedinjenje formule (XIV-a) ili (XIV-b):
(i) koje jedinjenje formule (XIV-a) je dalje podvrgnuto reakciji intramolekulskog kuplovanja, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu baze (poželjno Cs2CO3) da bi se dobilo jedinjenje formule (XV-a), ili
(ii) koje jedinjenje formule (XIV-b) je dalje podvrgnuto reakciji intramolekulskog Buchwald-ovog kuplovanja, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu fosfin paladijum kompleksa (poželjno Pd(AtaPhos)2Cl2) i najmanje jedne baze (poželjno Cs2CO3i DIPEA) da bi se dobilo jedinjenje formule (XV-b),
koje jedinjenje formule (XV-a) ili (XV-b) se podvrgava Buchwald-ovoj reakciji, u vodenom ili organskom medijumu, u prisustvu paladijumskog katalizatora (poželjno Pd2(dba)3), baze (poželjno DIPEA), fosfina (poželjno Xantphos) i jedinjenja formule (X):
da bi se dobilo jedinjenje formule (XVI-a) ili (XVI-b):
estarska funkcija od jedinjenja formule (XVI-a) ili (XVI-b) je hidrolizovana (korišćenjem poželjno LiOH3H2O ili sa TFA) da bi se dobilo jedinjenje formule (I), koje jedinjenje formule (I) može biti prečišćeno u skladu sa konvencionalnom tehnikom razdvajanja, koje može biti konvertovano u njegove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom i koji je opciono odvojen u njegove izomere u skladu sa konvencionalnom tehnikom razdvajanja, podrazumeva se da, u bilo koje vreme koje se smatra odgovarajućim u toku gore opisanog postupka, hidroksi, amino, karboksilne i fosfono grupe reagenasa ili intermedijera sinteze mogu biti zaštićene a zatim uklonjena zaštita prema zahtevima sinteze.
[0044] E33. Sinteza intermedijera prema E30 ili E31 odabranog u sledećoj grupi:
pri čemu R7je kao što je definisano u formuli (I) i G1 predstavlja C1-C6alkil grupu, poželjno metil grupu, ili (4-metoksifenil)metil grupu.
[0045] E34. Sinteza intermedijera prema E32 odabranog u sledećoj grupi:
pri čemu R6je kao što je definisano u formuli (I) i G1 predstavlja C1-C6alkil grupu, poželjno metil grupu, ili (4-metoksifenil)metil grupu.
[0046] E35. Jedinjenje prema E1 pri čemu R4predstavlja atom vodonika, fluora, hlora ili broma, metil ili metoksi grupu.
[0047] E36. Jedinjenje prema E1 pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: vodonika; linearni ili razgranati C1-C6alkil, -NR’aR’b; -NR’a-CO-OR’c; -N<+>R’aR’bR’c; -O-R’c; - NH-X’2-N+R’aR’bR’c; -O-X’2-NR’aR’b, -NR’c-X’2-N3i :
[0048] E37. Jedinjenje prema E1 pri čemu R’ai R’bnezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu između: vodonika; heterocikloalkil; -SO2-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa linearnim ili razgranatim C1-C6alkilom; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve hidroksilne grupe; C1-C6alkilen-SOzOH; C1-C6alkilen-SO2O-; C1-C6alkilen-COOH; C1-C6alkilen-PO(OH)2; C1-C6alkilen-NR’dR’e; C1-C6alkilen-N<+>R’dR’eR’f; C1-C6alkilen-O-C1-C6alkilen-OH; C1-C6alkilenfenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa C1-C6alkoksi grupom; grupa:
ili R’ai R’bformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B3,
ili R’a, R’bi R’Cformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil.
[0049] E38. Jedinjenje prema bilo kom od E1 do E27 pri čemu je m=1.
[0050] Farmakološka studija jedinjenja iz pronalaska je pokazala da ona imaju pro-apoptotička svojstva. Sposobnost da reaktiviraju apoptotički proces u ćelijama je od velikog terapeutskog interesa u lečenju kancera i imunih i autoimunih bolesti. Naročito, jedinjenja prema pronalasku će biti korisna u lečenju hemo- ili radio- rezistentnih kancera.
[0051] U drugom izvođenju, jedinjenja prema pronalasku mogu da se koriste za lečenje bolesti ili stanja karakterisanih viškom ili deregulisanom aktivacijom trombocita, posebno protrombotskih stanja.
[0052] Kako se ovde koristi, izraz "tretirati", "lečiti" ili "lečenje" bilo koje bolesti ili poremećaja odnosi se u jednom izvođenju, za ublažavanje bolesti ili poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili smanjenje razvoja bolesti ili barem jednog od njenih kliničkih simptoma). U drugom izvođenju "tretirati", "lečiti" ili "lečenje" se odnosi na ublažavanje ili poboljšanje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući one koje pacijent možda ne može da uoči. U još, jednom izvođenju "tretirati", "lečiti" ili "lečenje" se odnosi na modulaciju bolesti ili poremećaja, bilo fizički, (npr., stabilizacija uočljivog simptoma), fiziološki, (npr., stabilizacija fizičkog parametra), ili oboje.
[0053] Među predviđenim lečenjima kancera može se pomenuti, bez ikakvog ograničenja, lečenje hematoloških maligniteta i čvrstih tumora. Hematološki maligniteti uključuju mijelom, posebno multipli mijelom, limfom, posebno Non-Hočkinov limfom (NHL) i posebno difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL), i leukemija, posebno hronična limfocitna leukemija (CLL), akutna limfoblastna leukemija T-ćelija (T-ALL), akutna limfoblastna leukemija B-ćelija (B-ALL) i akutna mijelogena leukemija (AML). Čvrsti tumori uključuju kancer bešike, mozga, dojke, materice, jednjaka i jetre, kolorektalni kancer, kancer bubrega, melanom, rak jajnika, kancer prostate, kancer pankreasa i rak pluća, posebno nemikrocelularni rak pluća i karcinom malih ćelija pluća.
[0054] Konkretno, T-ALL je rezultat leukemijske transformacije prekursora ćelija timusa i njihovog zaustavljanja na specifičnim fazama diferencijacije. Uprkos nedavnim i obimnim uvidima u molekularne i ćelijske mehanizme odgovorne za početak i progresiju T-ALL, ovo znanje nije prevedeno u efikasne ciljane terapije. Trenutna klinička lečenja uključuju hemoterapiju povezanu ili ne sa transplantacijom hematopoetskih matičnih ćelija sa stopama preživljavanja ostaju oko 50 i 70% kod odraslih i pedijatrijskih slučajeva, respektivno. I kod pedijatrijskih i kod odraslih slučajeva, recidivi pokazuju veoma lošu prognozu, pojačavajući potrebu za otkrivanjem novih terapijskih opcija (Passaro et al., Immunol. Rev.2016 May;271(1):156-72). Pokazalo se da dvostruki Bcl-2/Bcl-xL inhibitori, kao što su ABT-263 i ABT-737, imaju obećavajuću aktivnost kod modela ksenotransplantata izvedenih od T-ALL pacijenata (Van Delft et al. Cancer Cell 2006;10:389-99; Suryani et al., Clin. Cancer Res.
2014,20:4520-31). Druge studije su izvestile o diferencijalnim zahtevima za Bcl-xL ili Bcl-2 za preživljavanje zrelih naspram nezrelih (ETP podgrupa) T-ALL (Chonghaile et al., Cancer Discov.
2014;4:1074-87). Prethodno opisani selektivni Bcl-xL inhibitor A-1331852 takođe je pokazao in vitro i in vivo aktivnost u modelu ksenotransplantata zrele T-ALL ćelijske linije Molt-4 (Leverson et al., Sci. Transl. Med.2015 Mar 18;7(279):279ra40). U posebnom izvođenju, inhibicija rasta tumora je takođe primećena u modelu ksenotransplantata MOLT-4 nakon tretmana sa Bcl-xL inhibitorima iz pronalaska. Ovi podaci podržavaju upotrebu ovih jedinjenja u lečenju T-ALL.
[0055] Među predviđenim lečenjima autoimunih bolesti mogu se navesti, bez ikakvog ograničenja, lečenje reumatoidnog artritisa (RA) i sistemskog eritematoznog lupusa (SLE).
[0056] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I), kao aktivni sastojak, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih inertnih punilaca. Konkretno, ove farmaceutske kompozicije su zanimljive za upotrebu kao proapoptotička i/ili anti-proliferativna sredstva, naročito, u lečenju kancera i bolesti autoimunog i imunog sistema.
[0057] Pogodni inertni punioci prema pronalasku uključuju razblaživače, maziva, veziva, sredstva za dezintegraciju, stabilizatore, konzervanse, apsorbense, boje, zaslađivače i arome.
Kao neograničavajući primer se može pomenuti:
[0058]
● kao razblaživači: laktoza, dekstroza, saharoza, manitol, sorbitol, celuloza, glicerol,
● kao maziva: silicijum dioksid, talk, stearinska kiselina i njene magnezijumove i kalcijumove soli, polietilen glikol,
● kao veziva: magnezijum aluminijum silikat, skrob, želatin, tragakant, metilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza i polivinilpirolidon,
● kao sredstva za dezintegraciju: agar, alginska kiselina i njena natrijumova so, šumeće smeše.
[0059] Među farmaceutskim kompozicijama prema pronalasku mogu se posebno pomenuti one koje su pogodne za oralnu, parenteralnu, nazalnu, per-ili trans-kutanu, rektalnu, perlingvalnu, okularnu ili respiratornu primenu, posebno tablete, dražeje, sublingvalne tablete, kapsule, glosete, kapsule, pastile, preparati za injekcije ili za piće, aerosoli, kapi za oči ili nos, supozitorije, kreme, masti, dermalni gelovi.
[0060] Stvarni nivoi doze aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu se varirati tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna za postizanje željenog terapeutskog odgovora za određenog pacijenta, kompoziciju, i način primene, a da nije toksična za pacijenta. Odabrani nivo doze će zavisiti od niza faktora uključujući aktivnost određenog jedinjenja iz ovog pronalaska koje se koristi, načina primene, vremena primene, brzine izlučivanja ili metabolizma određenog jedinjenja koje se koristi, brzine i obima apsorpcije, trajanja lečenja, drugih lekova, jedinjenja i/ili materijala koji se koriste u kombinaciji sa određenim jedinjenjem koje se koristi, starosti, pola, mase, stanja, opšteg zdravlja i prethodne medicinske istorije pacijenta koji se leči, i sličnih faktora dobro poznatih u oblasti medicine.
[0061] Pogodna dnevna doza jedinjenja iz pronalaska će zavisiti od prethodno opisanih faktora i može biti u rasponu od 0,01 mg do 2,5 g na dan u jednom ili više davanja.
[0062] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se takođe odnosi na kombinaciju jedinjenja formule (I) sa sredstvom protiv kancera koje je odabrano od genotoksičnih sredstava, mitotičkih otrova, antimetabolita, inhibitora proteazoma, inhibitora kinaze i antitela, i takođe na farmaceutske kompozicije koje sadrže tu vrstu kombinacije i njihovu upotrebu u proizvodnji lekova za upotrebu u lečenju kancera.
[0063] U drugom aspektu, jedinjenja prema pronalasku se mogu koristiti u kombinaciji sa radioterapijom u lečenju kancera.
[0064] Alternativno, jedinjenja prema pronalasku mogu biti vezana za monoklonska antitela. Konjugati antitela i lekova (eng. Antibody Drug Conjugates - ADCs) predstavljaju novu klasu terapeutika koja nastaje hemijskim povezivanjem citotoksičnog leka sa sa monoklonskim antitelom preko linkera. Monoklonsko antitelo iz ADC selektivno se vezuje za ciljani antigen ćelije (npr. ćelija kancera) i oslobađa lek u ćeliju. ADC-ovi imaju terapeutski potencijal jer kombinuju specifičnost antitela i citotoksični potencijal leka. Bez obzira na to, razvoj ADC-ova kao terapeutskih sredstava je do sada ispunjen ograničenim uspehom zbog niza faktora kao što su nepovoljni profili toksičnosti, niska efikasnost i loši farmakološki parametri. Shodno tome, još uvek postoji potreba za novim ADC-ovima koji prevazilaze ove probleme i mogu selektivno isporučivati Bcl-xL ciljanim ćelijama kancera.
[0065] U drugom aspektu, jedinjenja prema pronalasku mogu biti povezana sa fragmentima monoklonskih antitela ili povezana sa proteinima skelama (eng. scaffold proteins) koji mogu biti povezani ili ne sa monoklonskim antitelima. Fragmenti antitela se moraju razumeti kao fragmenti tipa Fv, scFv, Fab, F(ab’)2, F(ab’), scFv-Fc ili dijatela (eng. diabodies), koja uopšteno imaju istu specifičnost vezivanja kao antitelo od kojeg potiču. Prema ovom pronalsku, fragmenti antitela iz pronalaska mogu se dobiti polazeći od antitela postupcima kao što je varenje enzimima, kao što su pepsin ili papain, i/ili bcepanjem disulfidnih mostova hemijskom redukcijom. Na drugi način, fragmenti antitela obuhvaćeni ovim pronalskom mogu se dobiti tehnikama genetske rekombinacije takođe dobro poznatim stručnjacima iz ove oblasti, ili sintezom peptida pomoću, na primer, instrumenata za automatsku sintezu peptida kao što su oni koji se isporučuju od strane kompanije Applied Biosistems, itd.
[0066] Proteini skele koji mogu biti povezani ili ne sa monoklonskim antitelima podrazumevaju protein koji sadrži ili ne imunoglobulinski prevoj i to daje kapacitet vezivanja sličan monoklonskom antitelu. Stručnjak iz ove oblasti zna kako da izabere protein skelu. Tačnije, poznato je da, da bi bila izabrana, takva skela treba da ima nekoliko karakteristika kao što su u nastavku (Skerra, J. Mol. Recogn.2000, 13, 167-187): filogenetski dobra zaštita, snažna arhitektura sa dobro poznatom trodimenzionalnom molekularnom organizacijom (kao što je, na primer, kristalografija ili NMR), mala veličina, bez ili samo nizak stepen post-translacionih modifikacija, lak za proizvodnju, ekspresiju i prečišćavanje. Takav protein skela može biti, ali bez ograničenja, struktura izabrana iz grupe koju čine fibronektin i prvenstveno deseti domen fibronektina tipa III (FNfn10), lipokalin, antikalin (Skerra, J. Biotechnol.
2001, 74, 257-75), derivat proteina Z iz domena B stafilokoknog proteina A, tioredoksin A ili bilo koji protein sa ponovljenim domenom kao što je "ankirin ponavljanje" (Kohl et al. PNAS 2003, 100, 1700-1705), "armadiljo ponavljanje", "ponavljanje bogato leucinom" ili "tetratrikopeptid ponavljanje". Mogli bi se pomenuti derivate scaffold iz toksina (kao što su, na primer, toksini škorpija, insekata, biljaka ili mekušaca) ili inhibitori proteina neuronske azot oksid sintaze (PIN).
[0067] Sledeći primeri ilustruju pronalazak, ali ga ni na koji način ne ograničavaju. Svi intermedijeri za dobijanje primera su ili komercijalno dostupni ili ih može dobiti stručnjak iz ove oblasti, koristeći konvencionalne hemijske reakcije opisane u literaturi.
OPŠTI POSTUPAK
[0068] Svi reagensi dobijeni iz komercijalnih izvora su korišćeni bez daljeg prečišćavanja. Anhidrovani rastvarači su bili dobijani iz komercijalnih izvora i koristili su se bez daljeg sušenja.
Hromatografija na koloni
[0069] Automatska fleš hromatografija na koloni se izvodi na ISCO CombiFlash<®>Rf 200 ili CombiFlash<®>Rf+ Lumen<™>korišćenjem RediSep<®>Rf Normalna faza silicijum dioksid fleš kolona (35-70µm, 60 Å), RediSep Rf Gold<®>Normalna faza silicijum dioksid visoko efikasna kolona (20-40µm, 60 Å), RediSep<®>Rf reverzna faza C18 kolona (40-63 µm, 60 Å), ili RediSep Rf Gold<®>reverzna faza C18 visoko efikasna kolona (20-40 µm, 100 Å).
TLC
[0070] Tankoslojna hromatografija se izvodi sa pločama 5 x 10 cm koje su obložene sa Merck Type 60 F254silikagelom.
Mikrotalasne reakcije
[0071] Mikrotalasno zagrevanje je izvedeno sa CEM Discover<®>SP, ili sa mikrotalasnim reaktorom Anton Paar Monowave.
NMR
[0072] 1H-NMR merenja su obavljena na Bruker Avance III 500 MHz spektrometru, Bruker Avance III 400 MHz spektrometru, ili Bruker DPX-400 spektrometru korišćenjem DMSO-d6ili CDCl3kao rastvarač.
1H NMR podaci su u obliku delta vrednosti, datih u delu na milion (ppm), koristeći rezidualni pik rastvarača (2.50 ppm za DMSO-d6i 7.26 ppm za CDCl3) kao interni standard. Obrasci razdvajanja su označeni kao: s (singlet), d (oublet), t (triplet), q (kvartet), quint (kvintet), sept (septet), m (multiplet), br s (široki singlet), dd (dublet dubleta), td (triplet dubleta), dt (dublet tripleta), ddd (dublet dublet dubleta).
Analitički LC-MS
[0073] Određena jedinjenja ovog pronalaska su bila okarakterisana visoko efikasnom tečnom hromatografijom-masenom spektroskopijom (HPLC-MS) na Agilent HP1200 sa Agilent 6140 kvadrupolom LC/MS, radeći u režimu pozitivnih ili nergativnih jona elektrosprej jonizacije. Opseg skeniranja molekulske mase je od 100 do 1350. Paralelna UV detektcija je urađena na 210 nm i 254 nm. Uzorci su davani kao 1 mM rastvor u ACN, ili u THF/H2O (1:1) 5 µL petljom za ubrizgavanje. LCMS analize su vršene na dva instrumenta, od kojih je jedan radio sa baznim, a drug isa kiselim eluentima.
[0074] Bazni LCMS: Gemini-NX, 3 µm, C18, 50 mm x 3.00 mm i.d. kolona na 23 °C, pri brzini protoka od 1 mL min-1 korišćenjem 5 mM amonijum bikarbonata (Rastvarač A) i acetonitrila (Rastvarač B) sa gradijentom polazeći od 100% rastvarača A i završavajući na 100% rastvarača B tokom različitog/određenog vremenskog perioda.
[0075] Kiselinski LCMS: KINATEX XB-C18-100A, 2.6 µm, 50 mm*2.1 mm kolona na 40 °C, pri brzini protoka od 1 mL min-1 korišćenjem 0,02% v/v vodene mravlje kiseline (Rastvarač A) i 0,02% v/v mravlje kiseline u acetonitrilu (Rastvarač B) sa gradijentom polazeći od 100% rastvarača A i završavajući na 100% rastvarača B tokom različitog/određenog vremenskog perioda. ;[0076] Određena druga jedinjenja iz ovog pronalaska su okarakterisana HPLC-MS prema specifičnim imenovanim metodama kao što sledi. Za sve ove metode UV detekcija je bila detektorom diodnog niza na 230, 254, i 270 nm. Zapremina ubrizgavanja uzorka je bila 1 µL. Gradijentno eluiranje je izvođeno definisanjem brzina protoka i procenata smeša sledećih mobilnih faza, korišćenjem rastvarača posebno pripremljenih za HPLC: ;Rastvarač A: 10 mM vodeni amonijum formijat 0,04% (v/v) mravlja kiselina ;Rastvarač B: Acetonitril 5,3% (v/v) rastvarač A 0,04% (v/v) mravlja kiselina. ;[0077] Vremena zadržavanja (RT) za ove imenovane metode su prikazana u minutima. Jonizacija se snima u pozitivnom režimu, negativnom režimu, ili pozitivno-negativnom prebacujućem režimu. Slede konkretni detalji za pojedinačne metode. ;LCMS-V-B metode ;;[0078] Korišćenje instrumenta Agilent 1200 SL serije povezanog sa Agilent MSD 6140 pojedinačnim kvadrupolom sa multimodnim izvorom ESI-APCI (Metode LCMS-V-B 1 i LCMS-V-B2) ili korišćenje instrumenta Agilent 1290 Infinity II serije priključenog na Agilent TOF 6230 sa ESI izvorom mlaznog toka (Metoda LCMS-V-B1); kolona: Thermo Accucore 2.6 µm, C18, 50 mm x 2,1 mm at 55 °C. Detalji gradijenta za metode LCMS-V-B1 i LCMS-V-B2: ;;; ;;;
LCMS-V-C metoda ;;[0079] Korišćenje instrumenta Agilent 1200 SL serije povezanog sa Agilent MSD 6140 pojedinačnim kvadrupolom sa multimodnim izvorom ESI-APCI; kolona: Agilent Zorbax Eclipse plus 3.5 µm, C18(2), 30 mm x 2.1 mm na 35 °C. Detalji gradijenta za metodLCMS-V-C: ;;; ;;;
Preparativna HPLC ;;[0080] Određena jedinjenja ovog pronalaska su prečišćena visoko efikasnom tečnom hromatografijom (HPLC) na Armen Spot tečnoj hromatografiji ili sistemu Teledyne EZ sa Gemini-NX<®>10 µM C18, 250 mm x 50 mm i.d. kolona koja radi pri brzini protoka od 118 mL min-1 sa detekcijom niza UV dioda (210 -400 nm) koristeći 25 mM vodeni rastvor NH4HCO3i MeCN ili 0,1% TFA u vodi i MeCN kao eluente. ;;[0081] Određena druga jedinjenja ovog pronalaska su prečišćena pomoću HPLC prema specifičnim imenovanim metodama kao što sledi: ;;HPLC-V-A metode ;[0082] One su izvedene na Waters FractionLynx MS sistemu za autoprečišćavanje, sa Gemini<®>5 µm C18(2), 100 mm x 20 mm i.d. kolonom od Phenomenex, koja radi pri brzini protoka od 20 cm<3>min<-1>sa detecijom niza UV dioda (210-400 nm) i masom usmerenim prikupljanjem. Maseni spektrometar je bio Waters Micromass ZQ2000 spektrometar, koji radi u režimima pozitivnih ili nergativnih jona elektrosprej jonizacije, sa opsegom skeniranja molekulske mase od 150 do 1000. ;Metoda HPLC-V-A1 (pH 4): ;[0083] Rastvarač A: 10 mM vodeni amonijum acetat 0,08% (v/v) mravlja kiselina; Rastvarač B: acetonitril 5% (v/v) Rastvarač A 0,08% (v/v) mravlja kiselina ;Metoda HPLC-V-A2 (pH 9): ;[0084] Rastvarač A: 10 mM vodeni amonijum acetat 0,08% (v/v) konc. amonijak; Rastvarač B: acetonitril 5% (v/v) Rastvarač A 0,08% (v/v) konc. amonijak ;HPLC-V-B metode ;[0085] Izvedene na AccQPrep HP125 (Teledyne ISCO) sistemu, sa Gemini<®>NX 5 µm C18(2), 150 mm x 21.2 mm i.d. kolonom od Phenomenex, koja radi pri brzini protoka od 20 cm<3>min<-1>sa UV (214 i 254 nm) i ELS detekcijom. ;Metoda HPLC-V-B1 (pH 4): ;[0086] Rastvarač A: voda 0,08% (v/v) mravlja kiselina; rastvarač B: acetonitril 0,08% (v/v) mravlja kiselina. ;Metoda HPLC-V-B2 (pH 9): ;[0087] Rastvarač A: voda 0,08% (v/v) konc. amonijak; rastvarač B: acetonitril 0,08% (v/v) konc. amonijak. ;Metoda HPLC-V-B3 (neutralna): ;[0088] Rastvarač A: voda; Rastvarač B: acetonitril. ;Analitička GC-MS ;[0089] Kombinovana gasna hromatografija i masena spektrometrija niske rezolucije (GC-MS) su izvedene na Agilent 6850 gasnom hromatografu i Agilent 5975C masenom spektrometru koji koriste 15 m x 0,25 mm kolonu sa 0,25 µm HP-5MS oblogom i helijum kao noseći gas. Izvor jona: EI+, 70 eV, 230°C, kvadrupol: 150°C, interfejs: 300°C. ;MS visoke rezolucije ;[0090] Maseni spektri visoke rezolucije su dobijeni na masenom spektrometru Agilent 6230 vreme leta (eng. time-of-flight), koji je opremljen sa Jet Stream elektrosprej jonskim izvorom u režimu pozitivnih jona. Ubrizgavanja od 0,5µl su usmerena na maseni spektrometar pri brzini protoka od 1,5 ml/min (5mM amonijum formijata u vodi i gradijentnom program acetonitrila), korišćenjem Agilent 1290 Infinity HPLC sistema. Parametri mlaznog protoka: protok gasa za sušenje (N2) i temperatura: 8,0 l/min i 325 °C, respektivno; pritisak gasa u raspršivaču (N2): 30 psi; kapilarni napon: 3000 V; protok gasa za oblaganje i temperatura: 325 °C i 10,0 l/min; TOFMS parametri: napon fragmentora: 100 V; potencijal skimera: 60 V; OCT 1 RF Vpp:750 V. Maseni spektri punog skeniranja su dobijeni u m/z opsegu 105-1700 pri brzini sakupljanja od 995.6 ms/spektar i obrađeni pomoću softvera Agilent MassHunter B.04.00. ;;Hemijsko imenovanje ;;[0091] Imena prema IUPAC-u su generisana korišćenjem ChemAxon- ove funkcionalnosti ‘Structure to Name’ (s2n) u sklopu MarvinSketch ili JChem for Excel (JChem verzije 16.6.13 -18.22.3), ili sa obezbeđenom funkcionalnošću hemijskog imenovanja od Biovia<®>Draw 4.2. ;;Skraćenice ;;[0092] ;;Ahx monomer 6-heksanske kiseline ;AgOTf srebro trifluorometansulfonat ;<t>BuOH terc-butanol ;cc. koncentrovan ;CiOH cikloheksanol ;dba (1E,4E)-1,5-difenilpenta-1,4-dien-3-on, dibenzilidenaceton ;DCM dihlorometan ;DIPA N-izopropilpropan-2-amin, diizopropilamin ;DIPEA N-etil-N-izopropil-propan-2-amin, ;diizopropiletilamin ;DMAP 4-dimetilaminopiridin ;ee. enantiomerni višak ;ekv. ekvivalent ;EtOAc etil acetat ;HF3Pir vodonik fluorid piridin ;hs homo sapiens ;LDA litijum diizopropilamid ;MeCN acetonitril ;MeOH metanol ;NMP N-metil-2-pirolidon ;Pd(AtaPhos)2Cl2bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfin)dihloropaladijum(II) ;st sobna temperatura ;RT vreme zadržavanja (u minutima) ;on preko noći ;TBAF tetrabutilamonijum fluorid ;TBAOH tetrabutilamonijum hidroksid ;TBDPS-Cl terc-butil-hloro-difenil-silan ;TB SCl terc-butil-hloro-dimetil-silan ;TEA N,N-dietiletanamin ;TFA 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina ;pTSA 4-metilbenzensulfonska kiselina ;THF tetrahidrofuran ;TMP-MgCl rastvor kompleksa 2,2,6,6-tetrametilpiperidinilmagnezijum ;hlorid litijum hlorida ;DIAD diizopropilazodikarboksilat ;Xantphos 4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten ;BrettPhos 2-(Dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2’,4’,6’-triizopropil-1,1’-bifenil ;JosiPhos (2R)-1-[(1R)-1-(Dicikloheksilfosfino)etil]-2-(difenilfosfino)ferocen ;JosiPhos Pd G3 {(R)-1-[(Sp)-2-(Dicikloheksilfosfino)ferocenil]etildi-tercbutilfosfin}[2-(2’-amino-1,1’- bifenil)]paladijum(II) metansulfonat Xantphos Pd G3 [(4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten)-2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat ;BINAP 2,2’-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil ;rac-BINAP Pd G3 [(2,2’-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil)-2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II) ;metansulfonat ;Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2;[1,1’Bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpal ;adijum(II) ;;Pd2(dba)3Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) ;;Imenovani opšti postupci ;;[0093] U nastavku su tipični eksperimentalni postupci koji se pominju po imenima u narednim dobijanjima. ;;Sonogashira opšti postupak ;;[0094] Smeša od 1 ekv. aril halogenida, 2 ekv. acetilena, 0,05 ekv. Pd(PPh3)2Cl2, 0,05 ekv. CuJ, i DIPA (1 mL/mmol) u THF (5 mL/mmol) se drži na 60°C. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;;Uklanjanje zaštite sa HFIP opštim postupkom ;;[0095] Supstrat u HFIP (10 mL/mmol) se drži na 100-120°C u boci pod pritiskom. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;;Opšti postupak uklanjanja zaštite i hidrolize ;;[0096] Smeša od 1 ekv. supstrata i 100 ekv. HFxPir u MeCN (15 mL/mmol) se meša na 60°C. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, ostatak se suspenduje u smeši 1:1 THF -voda (30 mL/mmol), dodaje se 150 ekv. LiOH x H2O, i smeša se meša na st. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom; sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (koji sadrži 1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak alkilacije ;[0097] Smeša od 1 ekv. fenol/karbamat, 1-2 ekv. alkil jodid/bromid, i 2-3 ekv. CS2CO3u acetonu (5 mL/mmol) se meša na st za fenole i na 55 °C za karbamate. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;Opšti postupak alkilacije sa tozilatom ;[0098] Bočica osušena u sušnici je opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, i napunjena je sa 1 ekv. tozilata i 5 ekv. kao odgovarajući amin su suspendovani u MeCN (5 mL/mmol). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 50°C i mešana na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Reakciona smeša se razblaži sa DCM, zatim se ubrizga u kolonu od silikagela prethodno kondicioniranu sa DCM. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak alkilacije fenola zaštićenih sililom ;[0099] Smeša od 1 ekv. fenola zaštićenog sililom, 1 ekv. alkil jodida, i 1.15 ekv. TBAF (1 M u THF) u THF (2 mL/mmol) se meša na st. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;Buchwald-ov opšti postupak I ;[0100] Smeša od 1 ekv. hloro-supstrata, 2 ekv.1,3-benzotiazol-2-amina, 0.1 ekv. Pd2(dba)3, 0.2 ekv. Xantphosa, i 3 ekv. DIPEA u CiOH (5 mL/mmol) se drži na 140°C. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, reakciona smeša se razblaži sa DCM (10 mL/mmol), ubrizga se u prethodno kondicioniranu kolonu od silikagela i prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;Buchwald-ov opšti postupak II ;[0101] Smeša od hloro jedinjenja, 2 ekv.1,3-benzotiazol-2-amina, 10 mol% JosiPhos Pd (G3) i 3 ekv. DIPE suspendovanog u 1,4-dioksanu (5 mL/mmol) se mesa na refluksu dok se ne primeti dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom na koloni od 120 g silikagela koristeći heptan-EtOAc ili DCM-MeOH (1.2% NH3) kao eluente. ;Mitsunobu-ov opšti postupak ;[0102] U smešu od 1 ekv. alifatičnog alkohola, 1 ekv. karbamat/fenol, i 1 ekv. trifenilfosfin u toluenu (5 mL/mmol) se dodaje 1 ekv. di-terc-butil azodikarboksilata. Smeša se meša na 50°C za karbamat i na st za fenol. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;Finkelstein-ov opšti postupak ;[0103] Smeša od 1 ekv. alkil hlorida i 2 ekv. NaJ u acetonu (5 mL/mmol) se drži na refluksu. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, sirovi intermedijer se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan / EtOAc kao eluente. ;Opšti postupak formiranja kvaternarne soli ;[0104] Bočica osušena u sušnici je opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, i napunjena je sa 1 ekv. tozilata i 20 ekv. kao odgovarajući amin su suspendovani u CiOH (5 mL/mmol). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 140°C i mešana na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Reakciona smeša se razblaži sa DCM zatim se ubrizga u kolonu od silikagela prethodno kondicioniranu sa DCM. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak uklanjanje zaštite sa kvaternarne soli ;[0105] U THF (5 mL/mmol) rastvor odgovarajuće kvaternarne soli se dodaje 3 ekv. TBAF, i onda se to meša na st dok se ne primeti dalja konverzija. Reakciona smeša se uparava do suva pod sniženim pritiskom. U suspenziju od 1 ekv. desalilated kvaternarne soli u suvom MeCN (15 mL/mmol), dodaje se 100 ekv. HF x Pir, a zatim se meša na 60°C. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom, ostatak se suspenduje u 1:1 smeši THF -voda (30 mL/mmol), dodaje se 150 ekv. LiOH 3H2O, i smeša se meša na st. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (koji sadrži 1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak dobijanja propargilnog amina ;[0106] Bočica osušena u sušnici je opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, napuni se sa 2 ekv. PPh3 i 2 ekv. imidazola zatim se dodaje DCM (5 mL/mmol). U dobijenu smešu se dodaje 2 ekv. joda u porcijama, zatim se meša tokom 15 min na st. U dobijenu smešu 1 ekv. odgovarajućeg alkohola se dodaje rastvoren u DCM i meša na st dok se ne primeti dalja konverzija. Na nastalo jedinjenje joda se dodaje 20 ekv. odgovarajućeg amina i zatim se meša tokom 30 min na st, dok se ne primeti potpuna konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) eluente. ;Opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom ;;[0107] Bočica od 24 ml je opremljena šipkom za mešanje, i napunjena sa 1 ekv.2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-(4-etinil-2-fluoro-fenoksi) propil]tiazol-4-karboksilne kiseline, 20 ekv. paraformaldehid/aceton i 20 ekv. odgovarajućeg amina se mešaju u suvom etanolu (5 ml/mmol) u prisustvu 20 mol% srebro tozilata na 80°C dok se ne primeti dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak hidrolize ;[0108] Odgovarajući metil estar se suspenduje u smeši 1:1 THF -voda (5 mL/mmol) i dodaje se 10 ekv. LiOH x H2O, i smeša se meša na 50°C. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom; sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (koji sadrži 1,2% NH3) kao eluente. ;Opšti postupak supstitucije amina i hidrolize ;[0109] ;U proizvod iz bilo kog od dobijanja 12, 13 i 14 u smeši 1:1 acetonitrila i N-metil-2-pirolidona (10 ml/mmol), se dodaje odgovarajući amin (3-10 ekv), i reakciona smeša se meša na 50 °C tokom 2-24 h. Nakon prečišćavanja supstitucionog proizvoda pomoću hromatografije na koloni (silikagel, koristeći DCM i MeOH kao eluente), proizvod se rastvara u THF (10 ml/mmol), i vodi (2 ml/mmol) i dodaje se LiOHxH2O (3-5 ekv). Zatim, reakciona smeša se meša na 20-40 °C tokom 1-4 h. Hidrolizovan proizvod se prečišćava preparativnom HPLC (koristeći acetonitril i 5mM vodeni zastvor NH4HCO3kao eluente) da bi se dobio željeni proizvod. ;Dobijanja ;[0110] Sledeći eksperimentalni detalji opisuju dobijanje sintetičkih intermedijera. ;Dobijanje 1a: Metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil] tiazol-4-karboksilat ;Korak A: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-jodo-tiazol-4-karboksilat ;[0111] 50,00 g metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)tiazol-4-karboksilata (193.55 mmol, 1 ekviv) se suspenduje u 600 mL suvog MeCN. Dodaje se 52,25 g N jodo sukcinimida (232.30 mmol, ) i dobijena smeša se meša preko noći na sobnoj temperaturi. ;[0112] Reakciona smeša se razblaži sa zasićenim rastvorom soli, zatim se ekstrahuje sa EtOAc. Spojeni organski slojevi se ekstrahuju sa 1 M Na2S2O3, zatim ponovo sa rastvorom soli. Zatim se suši preko Na2SO4, procedi i filtrat se koncetruje pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan kao eluent da se dobije 60 g željenog proizvoda (156 mmol, 80% prinos). ;[0113]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.03/11.06 (br s), 3.78 (s, 3H), 1.47 (s, 9H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 153.8, 82.5, 77.7, 52.3, 28.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C10H14IN2O4S: 384.9713; nađeno 384.9708. ;Korak B: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-(3-hidroksiprop-1-inil)tiazol-4-karboksilat ;;[0114] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 500 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 9,6 g proizvoda iz koraka A (25 mmol, 1 ekviv), 2,80 g prop-2-in-1-ola (2,91 mL, 50 mmol, 2 ekviv) i 36,10 g DIPA (50 mL, 356.8 mmol, 14.27 ekviv) zatim se dodaje 125 mL suvog THF i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi, dodaje se 549 mg Pd(PPh3)2Cl2(1.25 mmol, 0.05 ekviv) i 238 mg CuJ (1.25 mmol, 0.05 ekviv). Dobijena smeša se zatim zagreva do 60°C i meša na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 7,30 g željenog proizvoda (23 mmol, 93% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ;[0115]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C13H17N2O5S: 313.0852, nađeno 313.0866. ;Korak C: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-(3-hidroksipropil)tiazol-4-karboksilat ;[0116] Boca pod pritiskom od 1 L osušena u sušnici opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE je napunjena sa 44,75 g proizvoda iz koraka B (143.3 mmol, 1 ekviv), 7.62 Pd/C ( 7.17 mmol, 0.05 ekviv) u 340 mL etanola, a zatim se stavlja pod atmosferu azota koristeći sistem hidrogenacije. Nakon toga, napuni se sa 4 bara H2gasa i meša na st preko noći. Uočena je potpuna konverzija, ali je formiran samo olefinski proizvod. Nakon ceđenja od katalizatora kroz sloj Celita, ceo postupak se ponavlja sa 5 mol% novih katalizatora. Dobijene smeše se mešaju preko noći da bi se dobila puna konverzija. Celit se dodaje u reakcione smeše a isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom na koloni koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 31,9 g željenog proizvoda (101 mmol, 70,4% prinos) kao svetlo žuti kristali [0117]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.61 (br s, 1H), 4.54 (t, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.43 (m, 2H), 3.09 (t, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.46 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 143.1, 135.4, 60.3, 51.9, 34.5, 28.3, 23.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C13H21N2O5S: 317.1165, nađeno 317.1164 (M+H). ;Korak D: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat ;;[0118] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, je napunjen sa 3,40 g 2-fluoro-4-jodo-fenola (14 mmol, 1 ekviv), 5,00 g proizvoda iz koraka C (16 mmol, 1.1 ekviv) i 4,10 g PPh3(16 mmol, 1.1 ekviv) rastvorenog u 71 mL suvog toluena. Nakon 5 min mešanja u atmosferi azota, dodaje se 3,10 mL DIAD (3,20 g, 16 mmol, 1.1 ekviv) u jednoj porciji dok se reakciona smeša zagreva. Zatim se reakciona smeša zagreva do 50°C i meša na toj temperaturi tokom 30 min, kada je reakcija dostigla potpunu konverziju. ;[0119] Reakciona smeša se direktno ubrizga u prethodno kondicioniranu kolonu od silikagela, a zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente. Sirov proizvod kristalizuje iz MeOH da se dobije 4,64 g željenog proizvoda (9.24 mmol, 66% prinos). ;[0120]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.64 (br s, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.22 (t, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.46 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 134, 124.9, 117.6, 68.2, 51.9, 30.5, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C19H23N2O5FSI: 537.0350; nađeno 537.0348. ;Dobijanje 1b: Metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil) amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat ;;[0121] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 500 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 13,41 g dobijanja 1a (25 mmol, 1 ekviv), 8,46 g terc-butil N-metil-N-prop-2-inil-carbamata (50 mmol, 2 ekviv) i 50 mL DIPA (36,10 g, 50 mL, 356.8 mmol, 14.27 ekviv), zatim se dodaje 125 mL suvog THF i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi, dodaje se 549 mg Pd(PPh3)2Cl2(1.25 mmol, 0.05 ekviv) i 238 mg CuJ (1.25 mmol, 0.05 ekviv). Dobijena smeša se zatim zagreva do 60°C i meša na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 10,5 g željenog proizvoda (18.2 mmol, 72.7% prinos). ;;[0122]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.65 (br s, 1H), 7.31 (br d, 1H), 7.21 (br d, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.1 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.23 (t, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.46/1.41 (s, 18H);<13>C NMR (125 MHz, DMSOd6) δ ppm 129.1, 119.2, 115.4, 68.1, 51.9, 38.6, 33.8, 30.5, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C28H37FN3O7S: 578.2330; nađeno 578.2331. ;Dobijanje 1c: Metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluorofenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat ;;[0123] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 5,36 g dobijanja 1a (10 mmol, 1 ekviv), 1,66 g N,N-dimetilprop-2-in-1-amina (20 mmol, 2 ekviv) i 20 mL DIPA (142.7 mmol, 14.27 ekviv), zatim se dodaje 50 mL suvog THF i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi dodaje se 220 mg Pd(PPh3)2Cl2(0.5 mmol, 0.05 ekviv) i 95 CuJ (0.5 mmol, 0.05 ekviv). Dobijena smeša se zatim zagreva do 60°C i meša na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 4,5 g željenog proizvoda (7.8 mmol, 78% prinos). ;[0124]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.66 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.07 (m, 2H), 1.45 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 147.3, 129, 119.2, 115.4, 84.3, 68, 51.9, 48.1, 44.2, 30.6, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H31FN3O5S: 492.1962; nađeno 492.1956 (M+H). ;Dobijanje 1d: Metil 2-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-5-(3-jodopropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0125] U rastvor proizvoda iz dobijanja 1a, korak C (5 g, 15.8 mmol, 1 ekv) u dietil etru (175 mL) i acetonitrila (35 mL) se dodaje imidazol (1,57 mL, 23.71 mmol, 1.5 ekv) a zatim trifenilfosfin (3,73 g, 14.22 mmol, 1.5 ekv) i jod (6,02 g, 23.71 mmol, 1.5 ekv). Smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata (150 mL) i 10% vodenog natrijum tiosulfata (250 mL), i organska faza se uzastopno ispire vodom (200 mL) i rastvorom soli (150 mL), osušena (magnezijum sulfate) i koncentrovana u vakuumu. Ostatak se rastvara u dietil etru i ostavlja da odleži na temperature frižidera preko noći. Nastali kristali su uklonjeni ceđenjem i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Prečišćavanjem automatizovanom fleš hromatografijom (Combiflash Rf, silicijum dioksid 80g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod (5,77 g, 13.53 mmol, 85%) kao bela čvrsta supstanca. ;LC/MS (C13H19IN2O4S) 427 [M+H]<+>; RT 0.88 (LCMS-V-B2) ;;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.29 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.20 -3.12 (m, 2H), 2.09 (dq, J = 8.7, 6.8 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H). ;Dobijanje 2a: 3-(3,6-Dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propan-1-ol ;KorakA: [(pent-4-in-1-iloksi)metil]benzen ;[0126] U balon osušen u sušnici se dodaje 4-pentin-1-ol (11,1 mL, 119 mmol, 1 ekv) u THF (100 mL) i i rastvor se ohladi na 0 °C. Natrijum hidrid (60% disperzija; 7,13 g, 178 mmol, 1.5 ekv) se dodaje u porcijama i smeša je ostavljena da se meša 30 min na 0 °C pre nego što se u kapima dodaje benzil bromid (15,6 mL, 131 mmol, 1.1 ekv). Smeša je ostavljena da se zagreje do temperature okoline i meša se tokom 16 h, zatim ohladi na 0 °C, gasi sa zasićenim vodenim amonijum hloridom (30 mL) i razblaži sa vodom (30 mL). Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 150 mL), i spojeni organski ekstrakti se uzastopno ispiru sa razblaženim vodenim amonijum hidroksidom amonijum hidroksidom (150 mL) i rastvorom soli (100 mL), osuše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 330 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta tečnost (19,5 g, 112 mmol, 94%). ;LC/MS (C12H14O) 175 [M+H]<+>; RT 1.28 (LCMS-V-B1) ;;<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.37 -7.32 (m, 4H), 7.31 -7.27 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.58 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.32 (td, J = 7.1, 2.6 Hz, 2H), 1.95 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 1.83 (tt, J = 7.1, 6.2 Hz, 2H). ;Korak B: [(heks-4-in-1-iloksi)metillbenzen ;[0127] U balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (19,5 g, 112 mmol, 1 ekv) i tetrahidrofuran (200 mL) i rastvor se ohladi na -78 °C. Dodaje se u kapima n-butillitijum (66,9 mL, 135 mmol, 1.2 ekv) tokom 30 min i reakcija se meša tokom 1 h, zatim se dodaje jodometan (10,5 mL, 168 mmol, 1.5 ekv) u kapima i smeša se ostavlja da se zagreje na 0 °C tokom 1 h. Reakcija se gasi dodavanjem zasićenog vodenog amonijum hlorida (40 mL), razblaži sa vodom (40 mL), ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 100 mL), i spojeni organski ekstrakti se uzastopno ispiru sa 2M vodenog natrijum tiosulfata (200 mL) i rastvorom soli (200 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 330 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta tečnost (19,2 g, 0.1 mol, 91%). ;LC/MS (C13H16O) 189 [M+H]<+>; RT 1.34 (LCMS-V-B1)<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 -7.23 (m, 5H), 4.46 (s, 2H), 3.48 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.23 -2.14 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.70 -1.65 (m, 2H). ;Korak C: 4-[3-(benziloksi)propil]-3,6-dihloro-5-metilpiridazin ;[0128] Rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (5 g, 33.1 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz koraka B (7,48 g, 39.8 mmol, 1.2 ekv) u tetrahidrofuranu (30 mL) se zagreva na 160 °C tokom 19 h u zatvorenom balonu. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline zatim koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžasto ulje (7,32 g, 23.5 mmol, 71%). ;LC/MS (C15H16Cl2N2O) 311 [M+H]<+>; RT 1.35 (LCMS-V-B1) ;;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.45 -7.18 (m, 5H), 4.48 (s, 2H), 3.53 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.96 -2.83 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.88 -1.69 (m, 2H). ;Korak D: 3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propan-1-ol ;[0129] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka C (7,32 g, 23.5 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (100 mL) se dodaje rastvor bor trihlorida (1 M u dihlormetanu; 58,8 mL, 58.8 mmol, 2.5 ekv) u kapima i smeša se ostavi da se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se gasi dodavanjem metanola i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je podeljen između dihlormetana (100 mL) i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata (150 mL), i organska faza se ispire rastvorom soli (150 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (4,19 g, 19 mmol, 81%). ;LC/MS (C8H10Cl2N2O) 221 [M+H]<+>; RT 0.84 (LCMS-V-B1) ;;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.67 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.49 (td, J = 6.0, 5.1 Hz, 2H), 2.91 -2.80 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.72 -1.59 (m, 2H). ;Dobijanje 2b: 2-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propan-1-ol (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 koraka A) ;Korak A: etil 3-(3, 6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)-2-hidroksi-propanoat ;[0130] U 3,6-dihloro-4,5-dimetil-piridazin (26,5 g, 150 mmol) u suvom THF (375 mL) se dodaje u kapima TMP-MgCl x LiCl (165 mL, 165 mmol, 1.1 ekv.) na -78°C, zatim se dobijena smeša meša tokom 2 h na 0 °C. Stvorena Mg so se prebacuje u rastvor etil 2-oksoacetata (45,9 g, 225 mmol, 1.5 ekv.) u suvom THF (375 mL) na 0 °C, zatim se meša tokom 30 min na 0 °C. Nakon gašenja reakcije sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcije sa EtOAc, spojeni organski slojevi se suše, cede, koncentruju, i prečišćavaju fleš hromatografijom na silikagelu koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 11 g (26,3%) željenog jedinjenja. ;[0131]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.85 (d, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.12 (q, 2H), 3.19 (d, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.17 (t, 3H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 172.8, 157.6, 157.2, 141.4, 139.3, 68.8, 61.2, 35.2, 17.3, 14.4. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C10H13Cl2N2O3: 279.0303, nađeno 279.0301. ;[0132] Enantiomeri željenog proizvoda se razdvajaju na AS-V hiralnoj koloni (100*500 mm, 20 µm) korišćenjem 10:90 EtOH-heptana kao eluenta da se dobije enantiomer 1 (prvi eluiran) od 99,6% ee i enantiomer 2 (poslednji eluiran) od 99,1% ee.
Korak B: etil 2-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propanoat [0133] U enantiomer 2 iz koraka A (4500 mg, 16 mmol, imidazol (2200 mg, 2.0 ekv.) u THF (81 mL) se dodaje u kapima TBDPS-Cl (8900 mg, 2.0 ekv.), zatim se meša na st tokom 18 h. Proizvod se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da bi se dobio željeni proizvod (6200 mg, 74%).
[0134]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.52-7.27 (m, 10H), 4.46 (dd, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.35 (dd, 1H), 3.19 (dd, 1H), 2.34 (s, 3H), 0.93 (t, 3H), 0.87 (s, 9H).
Korak C: 2-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propan-1-ol
[0135] U enantiomerno čist proizvod iz koraka B (3600 mg, 6.95 mmol) u MeOH (35 mL) se dodaje u porcijama NaBH4(2.63 g, 10 ekv.) na 0 °C tokom perioda od 5 min i meša na toj temperaturi tokom 30 min. Nakon gašenja reakcije dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl, ekstrahuje se dva puta sa EtOAc. Spojeni organski slojevi se suše, cede, koncentruju, i prečišćavaju fleš hromatografijom na silikagelu koristeći heptan i EtOAc kao eluente da bi se dobio željeni proizvod (1,6 g, 48%).
[0136]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.57-7.3 (m, 10H), 4.9 (brs, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.38/3.32 (dd+dd, 2H), 3.13/3.11 (dd+dd, 2H), 2.3 (s, 3H), 0.8 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) ppm 72.7, 65.5, 35.5, 26.9, 17.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H29Cl2N2O2Si: 475.1369, nađeno 475.1362.
Dobijanje 2c: 2-(3,6-Dihloro-5-metil-piridazin-4-il)etanol
Korak A: 3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propan-1,2-diol
[0137] U 700 mg (2.5 mmol) proizvoda iz dobijanja 2b, korak A u 3 mL metanola se dodaje 285 mg (3 ekv.) NaBH4na 0 °C i smeša se meša na 0 °C tokom 0,5 h. Nakon gašenja reakcije sa zasićenim rastvorom NH4Cl, sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silikagelu koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 500 mg (84%) željenog jedinjenja.
[0138]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.90 (bd, 1H), 4.83 (bs, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.47 (dd, 1H), 3.38 (m, 1H), 3.00 (dd, 1H), 2.87 (dd, 1H), 2.45 (s, 3H).
Korak B: 2-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)acetaldehid
[0139] U rastvor 237 mg proizvoda iz koraka A (1 mmol.) u 5 mL aceton/H2O (4:1) se ohladi na 0 °C, zatim se dodaje 427 mg natrijum perjodata (2 mmol, 2 ekv.) u porcijama. Nakon 2 h mešanja na st, smeša se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluente da se dobije 200 mg željenog proizvoda (97%).
[0140]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.71 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 2.35 (s, 3H).
Korak C: 2-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)etanol
[0141] U rastvor 200 mg proizvoda iz koraka B (0.97 mmol) u 3 mL metanola se dodaje u malim porcijama 110 mg (2.92 mmol, 3 ekv.) natrijum borhidrid na 0 °C. Nakon 15 min mešanja, reakciona smeša se razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc. Spojeni organski slojevi se suše, cede, koncentruju, i prečišćavaju fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluente da se dobije 180 mg (89%) željenog proizvoda.
[0142]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.9 (t, 1H), 3.65 (m, 2H), 3 (t, 2H), 2.45 (s, 3H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 157.5, 157.2, 140.9, 140.7, 59.1, 34, 17.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C7H9Cl2N2O: 207.0086, nađeno 207.0083.
Dobijanje 2e: 3-(3,6-Dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propanal
[0143] U balon osušen u sušnici se dodaje dimetil sulfoksid (3,08 mL, 43.4 mmol, 2.4 ekv) i dihlormetan (100 mL) i rastvor se ohladi na -78 °C. Oksalil hlorid (2M u dihlormetanu; 13,6 mL, 27.1 mmol, 1.5 ekv) se dodaje u kapima i reakcija se ostavlja da se meša tokom 1 h. Rastvor proizvoda iz dobijanja 2a (4 g, 18.1 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (20 mL) se zatim dodaje u kapima i smeša je ostavljena da se meša 1 h. Dodaje se trietilamin (15,1 mL, 109 mmol, 6 ekv) i reakcija se ostavlja da se zagreje na 0 °C tokom 1 h. Reakcija se gasi sa vodom (50 mL), zatim podeli između zasićenog natrijum bikarbonata (50 mL) i dihlormetana (200 mL), vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (200 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (100 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (2,27 g, 10.4 mmol, 57%).
LC/MS (C8H8Cl2N2O) 219 [M+H]<+>; RT 0.87 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.71 (s, 1H), 3.03 (dd, J = 8.7, 7.0 Hz, 2H), 2.86 -2.69 (m, 2H), 2.44 (s, 3H).
Dobijanje 3a: Metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c] piridazin-8-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil] tiazol-4-karboksilat
Korak A: metil 2-{[(terc-butoksi)karbonil][3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0144] Korišćenjem Mitsunobu-ovog opšteg postupka polazeći od 4,85 g dobijanja 1a (9.04 mmol, 1 ekviv) kao odgovarajućeg karbamata i 2 g dobijanja 2a (9.04 mmol, 1 ekviv) kao odgovarajućeg alkohola, dobija se 4,6 g željenog proizvoda (69% prinos).
[0145]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 7.08 (m, 2H), 6.96 (t, 1H), 4.05 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.4 (s, 3H), 2.06 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.48 (s, 9H);
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.7, 157.6, 156.7, 156.5/153.2, 152.2, 147, 142.1, 139.8, 134, 124.9, 117.6, 84, 82.4, 68.1, 52.1, 46.1, 30.4, 28.1, 27.5, 25.8, 23.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C27H31Cl2FIN4O5S: 739.0415, nađeno 739.0395.
Korak B: metil 2-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
[0146] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite sa HFIPA polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg karbamata, dobija se 3,70 g željenog proizvoda (97% prinos).
[0147]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.71 (t, 1 H), 7.59 (dd, 1 H), 7.44 (dm, 1 H), 6.96 (t, 1 H), 4.03 (t, 2 H), 3.7 (s, 3 H), 3.29 (m, 2 H), 3.11 (t, 2 H), 2.84 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 2 (m, 2 H), 1.76 (m, 2 H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.6, 163, 152.3, 147.1, 134.1, 124.8, 117.6, 82.4, 68.1, 51.9, 44, 30.7, 28, 26.9, 23.3, 16.4; HRMSESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H23Cl2FIN4O3S: 638.9891, nađeno 638.9888.
Korak C: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
[0148] Suspenzija od 3 g proizvoda iz koraka B (4.69 mmol, 1 ekv) i 1,81 g cezijum karbonata (9.3853 mmol, 2 ekv.) se mešaju na 80°C tokom 3 h u 25 mL suvog 1,4-dioksana da bi se postigla potpuna konverzija. Reakciona smeša se direktno uparava na Celit, a zatim prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM-MeOH kao eluente da se dobije 2,67 g naslovnog jedinjenja (94% prinos).
[0149]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.57 (dd, 1H), 7.43 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 4.23 (t, 2 H), 4.08 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.22 (t, 2 H), 2.86 (t, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 2.08 (m, 2 H), 2.03 (m, 2 H);
[0150]<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 152.2, 151.6, 151.2, 147, 142.5, 136, 134.8, 134, 128.9, 124.9, 117.6, 82.3, 68.4, 51.9, 46.3, 30.7, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H22ClFIN4O3S: 603.0124, nađeno 603.0108.
Dobijanje 3b: Metil 5-(3-hidroksipropil)-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat Korak A: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksiprop-1-inil] tiazol-4-karboksilat
[0151] ] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 1 L, osušen u sušnici, opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, je napunjen sa 20 g dobijanja 1a, korak A (52.05 mmol, 1.0 ekv.), 17.73 g terc-butil-dimetil-prop-2-inoksi-silana (21 mL, 104.1 mmol, 2.0 ekv.) rastvara se u 250 mL suvog THF/25 mL DIPA a zatim se stavlja u atmosferu azota kroz dovod gasa. Zatim se ovaj rastvor napuni sa 572 mg Pd(PPh3)2Cl2(1.30 mmol, 0.025 ekv.) i 247 mg CuJ (1.30 mmol, 0.025 ekv.). Reakciona smeša se zatim zagreva do refluksa i meša na toj temperaturi sve dok nije primećena dalja konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava u dva dela fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 18,00 g željenog proizvoda (81% prinos).
[0152]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.13 (br., 1H), 4.62 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.13 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 161.2, 52.4, 52.4, 28.3, 26.2, -4.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C19H31N2O5SSi: 427.1717, nađeno 427.1711.
Korak B: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]tiazol-4-karboksilat
[0153] 13 g proizvoda iz koraka A (30.42 mmol, 1.0 ekv.) se rastvara u 150 mL EtOH i napuni sa 3,23 g Pd/C (3.04 mmol, 0.1 ekv.). Autoklav od 250 mL, osušen u sušnici, opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, je napunjen rastvorom, a zatim stavljen u atmosferu azota koristeći sistem hidrogenizacije. Nakon toga je popunjen sa 10 bara H2gasa. Nakon 2 sata mešanja na st, reakcija je dostigla potpunu konverziju. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom, heptan i EtOAc kao eluenti da se dobije 9,95 g željenog proizvoda (78% prinos).
[0154]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.62 (br., 1H), 3.76 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 3.12 (t, 2H), 1.78 (quint., 2H), 1.46 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.03 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 62, 51.9, 34.3, 28.3, 26.3, 23.3, -4.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C19H35N2O5SSi: 431.2030, nađeno 431.2025.
Korak C: metil 2-[terc-butoksikarbonil-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propil]amino]-5-[3-[tercbutil(dimetil)silil]oksipropil]tiazol-4-karboksilat
[0155] Korišćenjem Mitsunobu-ovog opšteg postupka polazeći od 9,91 g proizvoda iz koraka B (23.0 mmol, 1 ekv.) kao odgovarajućeg karbamata i 5,1 g dobijanja 2a (23.0 mmol, 1 ekviv) kao odgovarajućeg alkohola, dobija se 13,02 g željenog proizvoda (89% prinos).
[0156]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.09 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.61 (t, 2H), 3.12 (t, 2H), 2.82 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.88 (qn, 2H), 1.79 (qn, 2H), 1.39 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0.02 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 157.7, 156.3, 156.1, 152.8, 144.5, 142.1, 139.9, 135.3, 79.4, 62.1, 52.1, 46.1, 34.1, 28.6, 27.5, 26.3, 25.9, 23.2, 18.4, 16.4, -4.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C27H43Cl2N4O5SSi: 633.2095, nađeno 633.2091.
Korak D: metil 5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]tiazol-4-karboksilat
[0157] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite sa HFIPA polazeći od proizvoda iz koraka C kao odgovarajućeg karbamata, dobija se 10,4 g željenog proizvoda (95% prinos).
[0158]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.69 (t, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.60 (t, 2H), 3.30 (q, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.78 (qn, 2H), 1.71 (qn, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.3, 163.1, 157.7, 156.9, 142.5, 140.0, 137.6, 136.5, 62.0, 51.7, 44.1, 34.4, 28.0, 26.9, 26.3, 23.4, 18.5, 16.5, -4.9; HRMSESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H35Cl2N4O3SSi: 533.1570, nađeno 533.1566.
Korak E: metil 5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0159] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, je napunjen sa 10,4 g proizvoda iz koraka D (19.57 mmol, 1.0 ekv.), 12.75 g Cs2CO3(39.13 mmol, 2.0 ekv.) i 100 mL suvog 1,4-dioksana. Reakciona smeša se zatim zagreva do refluks temperature i meša na toj temperaturi tokom 8 h. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 6,40 g željenog proizvoda (66% prinos).
[0160]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.26 (t, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.14 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.04 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.3, 151.8, 151.3, 143.4, 136.1, 134.6, 129.0, 62.1, 52.0, 46.3, 34.4, 26.3, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7, -4.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H34ClN4O3SSi: 497.1804, nađeno 497.1796.
Korak F: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil] tiazol-4-karboksilat
[0161] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 6,43 g proizvoda iz koraka E (12.94 mmol, 1.0 ekv.), 3,88 g 1,3-benzotiazol-2-amina (25.87 mmol, 2.0 ekviv) i 6,75 mL DIPEA (38.81 mmol, 3.0 ekv.) zatim se dodaje 65 mL CiOH. A zatim se sistem ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi dodaje se 1,18 g Pd2(dba)3(1.29 mmol, 0.1 ekv.) i 1,49 g Xantphosa (2.587 mmol, 0.2 ekv.). Dobijena smeša se zatim zagreva do 140°C i meša na toj temperaturi tokom 1 sata da bi se postigla potpuna konverzija. Reakciona smeša se razblaži sa DCM, i direktno se ubrizga u prethodno kondicioniranu kolonu od silikagela, i zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 6,85 g željenog proizvoda (87% prinos).
[0162]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.82 (br., 1H), 7.52 (br., 1H), 7.37 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.07 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.2, 155.6, 148.8, 148.6, 142.3, 134.5, 127.6, 126.5, 122.5, 122, 62.0, 51.9, 46.3, 34.4, 26.4, 23.9, 22.9, 20.3, 12.8, -4.8; HRMS-ESI (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C29H39N6O3S2Si: 611.2288, nađeno 611.2284.
Korak G: metil 5-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsilil etoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il] tiazol-4-karboksilat
[0163] 5,00 g proizvoda iz koraka F (8.18 mmol, 1.0 ekv.) se rastvara u 50 mL suvog DCM i dodaje se 50 mg DMAP (0.41 mmol, 0.05 ekv.) i 2,85 mL DIPEA (16.37 mmol, 2.0 ekv.) na 0°C. TZatim se dodaje 2,24 mL 2-(hlorometoksi)etiltrimetil-silana (12.69 mmol, 1.5 ekv.) tokom vremenskog perioda od 5 minuta na 0°C, i dobijena smeša se stavlja u frižider tokom noći, dok se ne uoči potpuna konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 3,85 g željenog proizvoda (63% prinos).
[0164]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.6-7.15 (m, 4H), 5.83 (s, 2H), 4.42 (t, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.74 (t, 2H), 3.73 (t, 2H), 3.24 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.97 (m, 2H), 0.96 (t, 2H), 0.95 (s, 9H), 0.1 (s, 6H), -0.07 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.6, 157.7, 156.4, 154.7, 148.5, 143.7, 137.6, 134.1, 132.6, 126.1, 125.6, 73.2, 66.9, 62.5, 51.9, 46, 34.3, 26.1, 24.2, 23.4, 20.6, 18.0, 12.9, -1.4, -5.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H53N6O4S2Si2: 741.3102, nađeno 741.3098.
Korak H: metil 5-(3-hidroksipropil)-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0165] 3,85 g proizvoda iz koraka G (5.19 mmol, 1.0 ekv.) i 362 mg kamfor sulfonske kiseline (1.56 mmol, 0.3 ekv.) se rastvara u 40 mL DCM/MeOH (2:1). Reakciona smeša se zatim zagreva do 50°C i meša na toj temperaturi preko noći. Reakcija je dostigla potpunu konverziju. Reakciona smeša se hladi do sobne temperature i gasi dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCOs, a zatim zatim se ekstrahuje sa EtOAC dva puta. Celit se dodaje u spojene organske slojeve i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 2,50 g naslovnog jedinjenja (76% prinos).
[0166]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.83 (dm, 1H), 7.44 (dm, 1H), 7.42 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.57 (brs, 1H), 4.26 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.72 (m, 2H), 3.48 (t, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.81 (m, 2H), 0.91 (m, 2H), -0.11 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 127.1, 123.3, 123.2, 111.9, 72.9, 66.7, 60.6, 51.9, 46.4, 35.0, 23.8, 23.2, 20.4, 17.8, 13, -1.0;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C29H39N6O4S2Si: 627.2237, nađeno 627.2236.
Dobijanje 3c: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-(4-etinil-2-fluoro-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
Korak A: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[2-fluoro-4-(2-trimetilsililetinil)fenoksi] propil]tiazol-4-karboksilat
[0167] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 5 g dobijanja 3a (8.29 mmol, 1 ekv.), 2,34 mL etinil(trimetil)silana (16.58 mmol, 2 ekv.) i 10 mL DIPEA, zatim se dodaje 40 mL suvog THF i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi dodaje se 182 mg Pd(PPh3)2Cl2(0.41 mmol, 0.05 ekv.) i79 mg (0.41 mmol, 0.05 ekv.). Dobijena smeša se zatim zagreva do 60°C i meša na toj temperaturi tokom 2 sata da bi se postigla potpuna konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluent da se dobije 4,26 g željenog proizvoda (89% prinos).
[0168]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.31 (dd, 1H), 7.23 (dn, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.1 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.21 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.0, 155.3, 151.7, 151.3, 136.1, 129.4, 129.0, 119.4, 115.3, 104.6, 93.7, 68.2, 51.9, 46.3, 30.7, 24.1, 23.0, 19.7, 15.7, 0.4; HRMS-ESI (m/z): [M]+ izračunato za C27H30ClFN4O3SSi: 572.1481, nađeno 572.1480.
Korak B: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(2-trimetilsililetinil) fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0169] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 100 mL osušen u sušnici, sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE se napuni sa 4,25 g proizvoda iz koraka A (7.4 mmol, 1.0 ekv.), 2,23 g 1,3-benzotiazol-2-amina (14.8 mmol, 2.0 ekv.) i 3,87 mL DIPEA (2,87 mg, 22.2 mmol, 3.0 ekv.) zatim se dodaje 40 mL cikloheksanola i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi dodaje se 679 mg Pd2(dba)3(0.74 mmol, 0.10 ekv.) i 858 mg Xantphosa (1.48 mmol, 0.20 ekv.). Dobijena smeša se zatim zagreva do 140°C i meša na toj temperaturi tokom 30 min da bi se postigla potpuna konverzija. Reakciona smeša se razblaži sa DCM i direktno se ubrizga u prethodno kondicioniranu kolonu od silikagela, a zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente. Čiste frakcije se spajaju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 3,90 g željenog proizvoda (77% prinos).
[0170]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.27/10.91 (brs, 1H), 8.1-7.1 (brm, 4H), 7.34 (dd, 1H), 7.24 (dm, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.28 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 0.19 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H36FN6O3S2Si: 687.2038, nađeno 687.2020.
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-(4-etinil-2-fluoro-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0171] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 10 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 343 mg proizvoda iz koraka B (0.5 mmol, 1.0 ekv.) rastvara se u 2,5 mL THF/H2O (4:1). Zatim se dodaje 105 mg LiOH x H2O (2.50 mmol, 5.0 ekv.) i dobijena smeša se zagreva do 60°C i meša tokom 4 h na ovoj temp. Reakcija je dostigla potpunu konverziju. Celit gel se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 200 mg naslovnog jedinjenja (66% prinos).
[0172]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (br., 1H), 7.37 (t, 1H), 7.36 (dd, 1H), 7.25 (dm, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 4.11 (s, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.04 (m, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.2, 151.5, 147.9, 129.4, 126.5, 122.5, 122.3, 119.5, 115.5, 114.5, 82.9, 80.5, 68.5, 46.2, 31.0, 23.9, 23.1, 20.3, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C30H26FN6O3S2: 601.1486, nađeno 601.1498.
Dobijanje 3d: Metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido [2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-hidroksiprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksiprop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0173] Korišćenjem Sonogashira opšteg postupka polazeći od 4,00 g iz dobijanja 3a (6.63 mmol, 1.0 ekv.) i 2,26 g terc-butil-dimetil-prop-2-inoksi-silana (13.27 mmol, 2 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 2,80 g željenog proizvoda (65% prinos).
[0174]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.27 (dd, 1H), 7.19 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.3 (s, 3H), 2.1 (quint., 2H), 2.03 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.12 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.0, 128.9, 119.1, 115.5, 68.3, 52.1, 51.9, 46.3, 30.7, 26.2, 24.2, 23.0, 19.7, 15.7, -4.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C31H39ClFN4O4SSi: 645.2128, nađeno 645.2120.
Korak B: metil2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksiprop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0175] Korišćenjem Buchwald-ovog opšteg postupka II polazeći od 2,8 g proizvoda iz koraka A (4.34 mmol, 1.0 ekv.) i 1,30 g 1,3-benzotiazol-2-amina (8.67 mmol, 2.0 ekv.), dobijeno je 2,1 g željenog proizvoda (64% prinos).
[0176]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.25/10.91 (brs 1H), 7.88 (br, 1H), 7.51 (br, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.1 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.2, 155.7, 151.6, 148.5, 147.6, 141.5, 128.9, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.9, 115.5, 114.8, 88.2, 84, 68.4, 52.1, 51.9, 46.4, 31, 26.2, 24, 23.1, 20.4, 12.9, -4.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C38H44FN6O4S2Si: 759.2613, nađeno 759.2609.
Korak C: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-hidroksiprop-1-inil)fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilat
[0177] Balon sa jednim grlom i okruglim dnom od 100 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 2,10 g proizvoda iz koraka B (2.76 mmol, 1.0 ekv.) rastvara se u 15 mL THF. Zatim se dodaje 3,32 mL TBAF (3.32 mmol, 1.2 ekv., 1 M u THF) u kapima putem šprica tokom perioda od 2 minuta, i meša na toj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša se gas isa zasićenim NH4Cl, zatim direktno uparava na Celit i prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluente da se dobije 1,6 g željenog proizvoda (90% prinos).
[0178]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.14 (brs, 1H), 7.83 (brd, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.24 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.18 (dm, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.08 (t, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.27 (d, 2H), 4.17 (t, 2H), 3.8 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.15 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z):
[M+H]+ izračunato za C32H30FN6O4S2: 645.1748, nađeno 645.1738.
Dobijanje 3e: Metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-hidroksipropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
Korak A: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksiprop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0179] Korišćenjem Sonogashira opšteg postupka polazeći od 4,00 g iz dobijanja 1a (7.45 mmol, 1.0 ekv.) i 2,54 g terc-butil-dimetil-prop-2-inoksi-silana (14.90 mmol, 2.0 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 1,70 g željenog proizvoda (39% prinos).
[0180]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.64 (s, 1H), 7.27 (dd, 1H), 7.19 (dm, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.1 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.23 (t, 2H), 2.07 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.12 (s, 6H);
<13>C NMR (125 MHz, DMSOd6) δ ppm 88.2, 83.8.
Korak B: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-fluorofenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0181] Autoklav od 50 mL, osušen u sušnici, opremljen je sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE. Napuni se sa 1,70 g proizvoda iz koraka A (2.9 mmol, 1.0 ekv.), 310 mg Pd/C (0.29 mmol, 0.10 ekv.) i 15 mL etanola, a zatim inertizuje korišćenjem vakuuma i azota, konačno napunjen vodoničnim gasom pod pritiskom od 10 bara. Zatim se smeša meša na st temperaturi tokom 3 sata da bi se postigla potpuna konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 1,2 g željenog proizvoda (70% prinos).
[0182]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.64 (br., 1H), 7.02 (t, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 4.02 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.54 (t, 2H), 2.04 (quint., 2H), 1.70 (quint., 2H), 1.45 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 156.2/153.5, 152.0, 144.7, 141.9, 135.8, 135.5, 124.6, 116.2, 115.5, 68.1, 62.0, 51.9, 34.3, 30.8, 30.8, 28.3, 26.2, 23.2, -4.9. Korak C: metil 2-[terc-butoksikarbonil-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propil]amino]-5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0183] Korišćenjem Mitsunobu-ovog opšteg postupka polazeći od 1,16 g proizvoda iz koraka B (2.0 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg karbamata i 484 mg dobijanja 2a (2.2 mmol, 1.1 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola, dobija se 1.2 g željenog proizvoda (77% prinos).
[0184]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.02 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.08 (t, 2H), 4.02 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.81 (t, 2H), 2.53 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.05 (quint., 2H), 1.87 (m, 2H), 1.70 (quint., 2H), 1.48 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0.00 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.7, 156.4/153, 152.0, 144.7, 143.6, 142/139.8, 141.9, 135.5, 124.6, 116.2, 115.4, 68.1, 62.0, 52.0, 46.1, 34.2, 30.8, 30.7, 28.0, 27.5, 26.2, 25.8, 23.2, 16.4, -4.9;
Korak D: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]tiazol-4-karboksilat
[0185] Korišćenjem opšteg postupka za uklanjanje zaštite sa HFIPA polazeći od 1,2 g proizvoda iz koraka C kao odgovarajućeg karbamata, dobija se 790 mg željenog proizvoda (75% prinos).
Korak E: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0186] Boca pod pritiskom od 25 mL osušean u sušnici, opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE je napunjena sa 1,2 g proizvoda iz koraka D (1.75 mmol, 1.0 ekviv) i 680 mg cezijum karbonata (3.50 mmol, 2.0 ekviv) suspendedovanih u 10 mL 1,4-dioksana. Reakciona smeša se zatim zagreje do 80°C i meša na toj temperaturi tokom 3 h, kada je reakcija dostigla potpunu konverziju. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom DCM i MeOH (koji sadrži 1,2% NH3) kao eluente da se dobije 1,0 g željenog proizvoda (88% prinos).
Korak F: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0187] Korišćenjem Buchwald-ovog opšteg postupka II polazeći od 630 mg proizvoda iz koraka E (0.97 mmol, 1.0 ekv.) i 291 mg 1,3-benzotiazol-2-amina (1.94 mmol, 2.0 ekv.), dobija se 600 mg željenog proizvoda (81%).
Korak G: metil2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-hidroksipropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0188] Balon sa okruglim dnom od 250 mL, osušen u sušnici, je opremljen sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE. Napuni se sa 600 mg proizvoda iz koraka F (0.78 mmol, 1.0 ekv.) rastvara se u 10 mL THF, a zatim se dodaje 936 uL TBAF (0.963 mmol, 1.2 ekv.) u kapima. Nakon 1 sata mešanja uočena je potpuna konverzija. Zatim se reakciona smeša gasi sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 450 mg željenog proizvoda (89% prinos).
[0189]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.87 (br, 1H), 7.49 (br, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.06 (m, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.44 (br, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.36 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.52 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.1 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.65 (qn, 2H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 163.2, 155.6, 152.0, 148.5, 144.7, 141.7, 135.9, 134.8, 127.6, 126.5, 124.7, 122.5, 122.3, 116.3, 116.0, 115.6, 68.6, 60.4, 52.0, 46.4, 34.6, 31.2, 31.0, 23.9, 23.2, 20.4, 12.9.
Dobijanje 3f: Etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido [2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
Korak A: etil 2-[(heks-4-in-1-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0190] U rastvor etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilata (1,17 g, 4.97 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (16 mL) se dodaje heks-4-in-1-amin (725 mg, 7.46 mmol, 1.5 ekv) i trietilamin (1,04 mL, 7.46 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na 150 °C tokom 4 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (741 mg, 2.94 mmol, 59%).
[0191] LC/MS (C12H16N2O2S) 253 [M+H]<+>; RT 2.32 (LCMS-V-C)
Korak B: etil 2-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0192] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (443 mg, 2.94 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (15 mL) se dodaje proizvod iz koraka A (741 mg, 2.94 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 110 °C preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu a ostatak se trituriše sa metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrstu supstanca (607 mg, 1.79 mmol, 61%).
LC/MS (C14H15ClN4O2S) 339 [M+H]<+>; RT 2.41 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (s, 1H), 4.38 -4.25 (m, 4H), 2.92 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.142.01(m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0193] U mikrotalasnu bočicu, osušenu u sušnici, se dodaje proizvod iz koraka B (607 mg, 1.79 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (404 mg, 2.69 mmol, 1.5 ekv) ), Xantphos (207 mg, 0.36 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (1,17 g, 3.58 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (36 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (164 mg, 0.18 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 4 sata pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, zatim ispere rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (329 mg, 0.73 mmol, 41%).
LC/MS (C21H20N6O2S2) 453 [M+H]<+>; RT 2.73 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (br s s, 2H), 7.65 (br s, 1H), 7.43 -7.31 (m, 1H), 7.28 -7.15 (m, 1H), 4.35 -4.25 (m, 4H), 2.96 -2.85 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.15 -2.00 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Dobijanje 3g: Etil 5-(3-hidroksipropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden] amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
Korak A: etil 2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzo-tiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0194] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3f (11,7 g, 25.8 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (700 mL) se dodaje N,N-diizopropiletilamin (13,5 mL, 77.4 mmol, 3 ekv). Nakon 5 min smeša se hladi na 0 °C i dodaju se 4-(dimetilamino)piridin (630 mg, 5.16 mmol, 0.2 ekv) i 2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid (1,.6 mL, 77.4 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 330 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (9,61 g, 16.5 mmol, 64%).
LC/MS (C27H34N6O3SiS2) 583 [M+H]<+>; RT 2.90 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.49 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.19 (m, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.38 -4.23 (m, 4H), 3.77 -3.67 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.13 -2.01 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 5-bromo-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0195] U rastvor proizvoda iz koraka A (9,61 g, 16.5 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (400 mL) se dodaje N-bromosukcinimid (3,52 g, 19.8 mmol, 1.2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (9,66 g, 14.6 mmol, 89%).
LC/MS (C27H33BrN6O3SiS2) 663 [M+H]<+>; RT 3.13 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.59 -7.38 (m, 2H), 7.24 (ddd, J= 8.3, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 -4.23 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.132.00 (m, 2H), 1.32 (t, 3H), 0.95 -0.81 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak C: etil 5-[(1E)-3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]prop-1-en-1-il]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0196] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (9,66 g, 14.6 mmol, 1 ekv), pinakolni estar (E)-3-(terc-butildimetilsililoksi)propen-1-il-borne kiseline (5,74 mL, 17.5 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (6,05 g, 43.8 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)- ferocen]dihloropaladijum(II) (1,19 g, 1.46 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (360 mL) i voda (120 mL), i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organski sloj se ispere vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (6,46 g, 8.58 mmol, 59%).
LC/MS (C36H52N6O4Si2S2) 753 [M+H]<+>; RT 1.62 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (dd, J = 7.6, 1.0 Hz, 1H), 7.51 -7.38 (m, 3H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.8 Hz, 1H), 6.28 (dt, J = 16.0, 4.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (dd, J = 4.4, 2.1 Hz, 2H), 4.35 -4.25 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.09 -1.99 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.92 -0.83 (m, 2H), 0.11 ( (s, 6H), -0.11 (s, 9H).
Korak D: etil 5-[3-[(terc-butildimetilsilil)oksilpropil]-2-(4-metil-3-[[(2Z)-3-[2-(trimetilsilil)etoksi]-metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0197] U rastvor proizvoda iz koraka C (6,46 g, 8.58 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (300 mL) se dodaje platina (IV) oksid (390 mg, 1.72 mmol, 0.2 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni, stavi u atmosferu vodonika, i mućka tokom 3 dana na temperaturi okoline. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon guma (6,72 g, 8.9 mmol, >100%).
LC/MS (C36H54N6O4Si2S2) 755 [M+H]<+>; RT 1.67 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.76 (d, 1H), 7.48 -7.35 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.2, 6.5, 1.9 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.33 -4.22 (m, 4H), 3.76 -3.62 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.10 -1.98 (m, 3H), 1.91 -1.79 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 -0.85 (m, 11H), 0.06 (s, 6H), -0.12 (s, 9H).
Korak E: etil 5-(3-hidroksipropil)-2-(4-metil-3-[[(2Z)-3-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0198] U rastvor proizvoda iz koraka D (6,72 g, 8.9 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (400 mL) se dodaje hlorovodonična kiselina (4M u dioksanu; 67 mL, 267 mmol, 30 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se hladi na 0 °C i neutrališe sa 1N vodenim natrijum hidroksidom (300 mL), zatim podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (3,87 g, 6.04 mmol, 68%).
LC/MS (C30H40N6O4SiS2) 641 [M+H]<+>; RT 2.80 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.48 -7.37 (m, 2H), 7.23 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.33 -4.22 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.6, 7.3 Hz, 2H), 3.48 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.17 -3.08 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.11 -1.99 (m, 2H), 1.87 -1.75 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Dobijanje 4a: 4-[1-[(Dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluorofenol
Korak A: triciklo[1.1.1.0<1>,<3>]pentan
[0199] Trogrli balon od 1 L opremljen sa šipkom za mešanje je spojen sa adapterom za destilaciju (eng. stillhead) koja je pričvršćena za kondenzator i balon za skupljanje od 250 mL sa Schlenk-ovom slavinom, levak za kapanje od 250 mL, i termometar [svo stakleno posuđe je sastavljeno vruće, zatim spojeno na Schlenk-ovu liniju i ostavljeno da se ohladi pod strujom azota]. Rastvor 1,1-dibromo-2,2-bis(hlormetil)ciklopropan (59,4 g, 200 mmol, 1 ekv) u dietil etru (200 mL) se hladi na -45 °C i dodaje se fenillitijum (1.9 M u n-butil etru; 211 mL, 400 mmol, 2 ekv) tokom 25 min pomoću levka za kapanje. Nakon završenog dodavanja smeša se ostavlja da se zagreje na 0 °C i meša tokom 2 h. Nakon ovog vremena prijemni balon je ohlađen na -78 °C, i veza sa razvodnom cevi se brzo zatvara i zamenjuje priključkom za vakuum pumpu (sa ulazom izjednačenog prtitiska povezanim na razvodnu cev azota). Pre uključivanja pumpe, levak za kapanje i termometar su bili zamenjeni prethodno podmazanim staklenim zapušačima. Pumpa je dovedena na pritisak od 200 mbara a zatim je priključak otvoren. Tokom 3 minuta pritisak je postepeno snižen na 120 mbara a zatim se reakcioni sud ostavlja da se zagreje na temperaturi okoline. Pritisak se zatim oprezno snižava na 45 mbara i ovaj pritisak se održava tokom 45 minuta. Nakon ovog vremena, vakuum se oslobađa sa azotom i nastali bistar i bezbojan destilat se čuva na -20 °C. Koncentracija željenog proizvoda se određuje da bude 0.45 M pomoću<1>H NMR.
[0200]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 2.04 (s, 6H).
Korak B: bromo(3-fluoro-4-metoksifenil)magnezijum
[0201] U trogrli balon od 50 mL opremljen sa šipkom za mešanje i ckondenzatorom, dodaje se magnezijum (681 mg, 28 mmol, 1.4 ekv) i aparat se snažno zagreva (~ 500 °C) toplotnim pištoljem tokom 5 min uz snažno mešanje, a zatim se ostavi da se ohladi na temperature okoline pod azotom. Dodaje se dietil etar (5 mL) a zatim 1,2-dibromoetan (172 µL, 2 mmol, 0.1 ekv). Smeša se zagreva do refluksa 4-5 puta tokom 5 min a zatim se ostavi da stoji 10 min nakon kojeg vremena je primećen blagi refluks. Smeša se dovodi do stalnog refluksa uz ručno zagrevanje, a zatim se polako pokreće mešanje. U ovom trenutku se dodaje rastvor 4-bromo-2-fluoroanizola (4,1 g, 20 mmol, 1 ekv) u dietil etru (10 mL) takvom brzinom da se održava stabilan refluks a brzina mešanja se povećava (300 oum). Dodavanje se završava posle 15 min. Smeša se ostavi da se meša na temperaturi okoline tokom 0,5 h nakon kojeg vremena je nastao bistar dvofazni sistem. Donji tamni sloj boje slame (10,15 mL) se prebacuje u suv Schlenk-ov balon putem šprica kroz 0,2 um PTFE filter. Koncentracija rastvora je izračunata da bude 1.38 M titracijom prema rastvoru joda u suvom tetrahidrofuranu. Rastvor proizvoda se koristi direktno u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
Korak C: etil 3-(3-fluoro-4-metoksifenil)biciklo[1.1.1]pentan-1-karboksilat
[0202] U posudu pod pritiskom od 50 mL ACE, osušenu u sušnici, koja je opremljena sa šipkom za mešanje, dodaje se proizvod iz koraka B (1.38M u dietil etru; 4,83 mL, 6.67 mmol, 1 ekv) a zatim proizvod iz koraka A (0.45M u dietil etru, 14,8 mL, 6.67 mmol, 1 ekv) i posuda se zatvara teflonskim poklopcem opremljenim sa prednjim O-prstenom, i postavlja u prethodno zagrejan blok grejača iza štita od eksplozije na 105 °C tokom 3 h. Smeša se ostavlja da se ohladi na temperaturi okoline tokom 20 min, a zatim u ledenoj vodi tokom 10 min. Teflonski zavrtanj na vrhu se zamenjuje sa podzaptivkom pričvršćenom za azotnu liniju, i reakcija se hladi na -78 °C. Etil hloroformijat (5,1 mL, 53.3 mmol, 4 ekv) se dodaje i smeša se ostavlja da se zagreje na temperaturi okoline tokom 1.5 h. Reakcija se podeli između zasićenog vodenog amonijum hlorida i dietil etra, i vodena faza se ekstrahuje sa etrom. Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojna tečnost koja je bila mešavina željenog proizvoda i nusproizvoda. Ovaj materijal se dalje prečišćava automatskom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Torrent, 200 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% dihlormetana u heptanu i daje željeni proizvod (640 mg, 3.78 mmol, 56%).
[0203]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.09 (t, 1 H), 7.09 (dd, 1 H), 6.98 (dm, 1 H), 4.08 (q, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 2.22 (s, 6 H), 1.2 (t, 3 H).13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 169.8, 151.8, 146.6, 133.0, 122.8, 114.2, 114.2, 60.6, 56.5, 53.2, 41.0, 36.9, 14.6.
[0204] HRMS-EI (m/z): M+ izračunato za C15 H17 F O3: 264.1162, nađeno 264.1156.
Korak D: 1-(3-fluoro-4-metoksi-fenil)biciklo[1.1.1]pentan-3-karboksilna kiselina
[0205] 200 mg proizvoda iz koraka C (0.76 mmol, 1 ekv.) i 159 mg of LiOH3H2O (3.78 mmol, 5 ekv.) se meša u 1,4-dioksanu (2 mL/mmol) i vodi (2 mL/mmol) zatim meša na st tokom 1 h dok se ne uoči potpuna konverzija. Reakciona smeša se napravi baznom sa rastvorom 1:1 HCl, zatim se talog procedi i ispere vodom zatim suši u vakuumu tokom noći.170 mg (95%) željenog proizvoda je izolovano kao bela čvrsta supstanca.
[0206]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.41 (s, 1H), 7.09 (m, 1H), 7.09 (m, 1H), 6.97 (dm, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.18 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 171.7, 151.8, 146.6, 133.3, 122.7, 114.2, 114.1, 56.5, 53.1, 40.8, 37.0; GC-MS-EI (m/z): [M]<+>izračunato za C13H13FO3: 236.0849, nađeno 236.0840.
Korak E: 1-(3-fluoro-4-metoksi-fenil)-N,N-dimetil-biciklo[1.1.1]pentan-3-karboksamid
[0207] 164 mg proizvoda iz koraka D (1.04 mmol, 1 ekv.) i 278 mg N,N-dietiletanamina (1.39 mmol, 2 ekv.) se mesa u EtOAc (3 mL/mmol) zatim se dodaje 663 mg 2,4,6-tripropil-1,3,5,2λ^{5},4λ^{5},6λ^{5}-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (50w% u EtOAc, 1.04 mmol, 1.5 ekv.) u jednoj porciji, zatim meša na st tokom 40 min. Nakon reakcionog vremena dodaje se 0,52 mL N-metilmetanamina (2 M u MeOH, 1.04 mmol, 1.5 ekv.) i meša na st dok se ne uoči potpuna konverzija (60 min). Reakciona smeša se razblaži sa DCM zatim ispere sa cc. NaHCOs, zatim se organska faza ispere sa cc. NaCl, osuši iznad MgSO4, procedi, koncentruje, osuši u vakuumu da se dobije 187 mg (kvant.) željenog proizvoda kao čvrsta supstanca boje breskve.
[0208]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.14 (m, 2H), 6.86 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 2.26 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 168.9, 158.6, 132.5, 127.6, 114.1, 55.5, 54.2, 42.0, 39.0, 37.4, 35.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C15H19FNO2: 264.1394, nađeno 264.1389.
Korak F: 1-[3-(3-fluoro-4-metoksi-fenil)-1-biciklo[1.1.1]pentanil]-N,N-dimetil-metanamin [0209] 182 mg proizvoda iz koraka E (0.69 mmol, 1 ekv.) se rastvara u THF (5 mL/mmol) zatim se dodaje 1,38 mL LiAlH4(1 M u THF, 1.38 mmol, 2 ekv.) u atmosferi azota na temperaturi okoline, zatim meša dok se ne postigne potpuna konverzija (ca.1 h). Smeša se ohladi na 0°C zatim gasi sa cc. NH4Cl. Nakon gašenja se dodaje ~5 mL vode i ~10 mL EtOAc i dobro promućka. Dodaje se 2 M HCl i (kiselinska) vodena faza se odvaja, zatim se organska faza ekstrahuje sa daljih 2 M HCl. Spojene vodene faze se alkalizuju sa 2 M NaOH i ekstrahuju sa DCM. Spojene organske faze se isperu sa rastvorom soli, osuše iznad MgSO4i koncentruju, osuše u vakuumu.119 mg (69%) željenog proizvoda se dobija kao viskozno ulje.
[0210]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.07 (t, 1H), 7.01 (dd, 1H), 6.93 (dm, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.35 (s, 2H), 2.16 (s, 6H), 1.90 (s, 6H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 151.8, 146.2, 134.5, 122.5, 114.1, 114.0, 60.7, 56.5, 52.9, 46.6, 41.7, 38.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C15H21FNO: 250.1602, nađeno 250.1596.
Korak G: 4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenol
[0211] 113 mg proizvoda iz koraka F (0.45 mmol, 1 ekv.) se rastvara u DCM (5 mL/mmol) zatim se dodaje 1,36 mL BBr3(1 M u DCM, 1.36 mmol, 3 ekv.) u atmosferi azota na 0°C zatim se meša tokom 15 min na 0°C i na st dok se ne postigne puna konverzija (ca.45 min). Zatim se dodaje DCM sipanjem u rastvor NaHCOs, mesa tokom nekoliko minuta zatim se neutralize sa cc. NH4Cl. Odvoji se i ispere rastvorom soli, osuši preko MgSO4i koncentruje, suši u vakuumu. Dobija se 47 mg (kvant.) sirovog željenog proizvoda kao viskozno ulje.
[0212]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.95 (t, 1H), 6.90 (dd, 1H), 6.85 (dm, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.17 (s, 6H), 2.24 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ ppm 122.4, 117.4, 113.4, 59.5, 54.8, 46.0, 43.8, 34.8;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C14H19FNO: 236.1445, 236.1445.
Dobijanje 4b: 4-[3-(Dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenol
[0213] Korišćenjem Sonogashira opšteg postupka polazeći od 10,00 g 2-fluoro-4-jodo-fenola (42.0 mmol, 1 ekv.) kao odgovarajućeg fenola i 5,24 g N,N-dimetilprop-2-in-1-amina (63 mmol, 1.5 ekv.) kao alkina, dobija se 7,30 g (90%) željenog proizvoda.
[0214]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.20 (dd, 1H), 7.07 (dm, 1H), 6.91 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 2.21 (m, 3H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 150.9, 146.2, 128.9, 119.5, 118.4, 113.6, 84.5, 84.2, 48.2, 44.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C11H13FNO: 194.0976, nađeno 194.0981.
Dobijanje 4c: terc-Butil N-[3-(3-fluoro-4-hidroksi-fenil)prop-2-inil]-N-metilkarbamat
[0215] Korišćenjem Sonogashira opšteg postupka polazeći od 10,00 g 2-fluoro-4-jodo-fenola (42.0 mmol, 1 ekv.) kao odgovarajućeg fenola i 10,67 g terc-butil N-metil-N-prop-2-inil-karbamata (63.1 mmol, 1.5 ekv.) kao alkina, dobija se 10,8 g (92%) željenog proizvoda.
[0216]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.32 (s, 1 H), 7.22 (brd, 1H), 7.08 (dm, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 150.8, 146.4, 129.0, 119.6, 118.4, 113.2, 84.4, 82.7, 38.5, 33.8, 28.5; HRMS-ESI (m/z): [M-C4H8+H]<+>izračunato za C11H11FNO3: 224.0717, nađeno 224.0720.
Dobijanje 4d: 4-[3-(Dimetilamino)propil]-2-fluorofenol
[0217] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4b (1,5 g, 7.76 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (54 mL) i etanola (18 mL) pod azotom se dodaje platina (IV) oksid hidrat (353 mg, 1.55 mmol, 0.2 ekv). Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni, podvrgne atmosferi vodonika, i mućka na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% 1N metanolni amonijak u dihlormetanu dalo je željeni proizvod (652 mg, 3.31 mmol, 42%) kao beličastu čvrstu supstancu.
LC/MS (C11H16FNO) 198 [M+H]<+>; RT 0.44 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 6.96 (dd, J = 12.5, 1.9 Hz, 1H), 6.88 -6.76 (m, 2H), 2.47 (dd, J = 8.5, 6.8 Hz, 2H), 2.20 -2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 6H), 1.69 -1.57 (m, 2H).
Dobijanje 4e: 4-[2-(Dimetilamino)etoksi]fenol
Korak A: 4-(metoksimetoksi)fenol
[0218] U rastvor hidrohinona (0,76 mL, 9.08 mmol, 1 ekv) u acetonu (30 mL) se dodaje kalijum karbonat (2,51 g, 18.2 mmol, 2 ekv) i hlormetil metil etar (0,69 mL, 9.08 mmol, 1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao braon ulje (601 mg, 3.9 mmol, 43%).
[0219]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 6.91 -6.80 (m, 2H), 6.72 -6.62 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 3.36 (s, 3H).
Korak B: {2-[4-(metoksimetoksi)fenoksi]etil}dimetilamin
[0220] U rastvor proizvoda iz koraka A (400 mg, 2.59 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (20 mL) se dodaje N,N-dimetil etanol amin (526 mL, 5.19 mmol, 2 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (1,19 g, 5.19 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (1,36 g, 5.19 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 3 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, podeli se između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon ulje (383 mg, 1.7 mmol, 66%).
LC/MS (C12H19NO3) 226 [M+H]<+>; RT 0.88 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.99 -6.90 (m, 2H), 6.94 -6.82 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.98 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.59 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.20 (s, 6H).
Korak C: 4-[2-(dimetilamino)etoksi]fenol
[0221] Rastvor proizvoda iz koraka B (383 mg, 1.7 mmol, 1 ekv) u hlorovodoničnoj kiselini (4M u 1,4-dioksanu; 5 mL, 20 mmol, 11.7 ekv) se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (10 g), ispere sa metanolom, i eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom, i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (249 mg, 1.37 mmol, 812%).
LC/MS (C10H15NO2) 182 [M+H]<+>; RT 0.24 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 (s, 1H), 6.79 -6.70 (m, 2H), 6.70 -6.62 (m, 2H), 3.92 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.20 (s, 6H).
Dobijanje 4f: 4-[2-(Pirolidin-1-il)etoksi]fenol
Korak A: 1-{2-[4-(metoksimetoksi)fenoksi]eti}pirolidin
[0222] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4e, korak A (525 mg, 3.41 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (20 mL) dodaje se 1-(2-hidroksietil)pirolidin (0,8 mL, 6.81 mmol, 2 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (1,57 g, 6.81 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (1,79 g, 6.81 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu i podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon ulje (556 mg, 2.21 mmol, 65%).
LC/MS (C14H21NO3) 252 [M+H]<+>; RT 1.09 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.98 -6.91 (m, 2H), 6.91 -6.82 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.00 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 2.75 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.50 -2.42 (m, 4H), 1.74 -1.61 (m, 4H).
Korak B: 4-[2-(pirolidin-1-il)etoksi]fenol
[0223] Rastvor proizvoda iz koraka A (556 mg, 2.21 mmol, 1 ekv) u hlorovodoničnoj kiselini (4M u 1,4-dioksanu; 7 mL, 28 mmol, 12.7 ekv) se meša na temperaturi okoline tokom 30 min. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (10 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (453 mg, 2.19 mmol, 99%).
LC/MS (C12H17NO2) 208 [M+H]<+>; RT 0.28 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 (s, 1H), 6.79 -6.70 (m, 2H), 6.70 -6.62 (m, 2H), 3.94 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.17 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 2.73 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.49 (dt, J = 4.1, 1.4 Hz, 2H), 1.74 -1.60 (m, 4H).
Dobijanje 4g:4-[2-(Dimetilamino)etil]-2-fluorofenol
Korak A: 2-fluoro-1-metoksi-4-[(E)-2-nitroetenil]benzen
[0224] U rastvor 3-fluoro-4-metoksibenzaldehida (400 mg, 2.6 mmol, 1 ekv) i nitrometana (339 mL, 6.23 mmol, 2.4 ekv) u metanolu (50 mL ohlađenom na 0 °C, dodaje se 1M vodeni natrijum hidroksid (20 mL, 20 mmol, 7.71 ekv) u kapima i nastala smeša se meša na 0 °C tokom 1 h. Smeša se dodaje u porcijama u 8M vodenu hlorovodoničnu kiselinu (12 mL, 96 mmol, 37 ekv), ohladi na 0 °C, i nastala suspenzija se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 30 min. Talog se sakupi ceđenjem, ispere vodom i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (393 mg, 1.99 mmol, 76%) kao žuta čvrsta supstanca.
[0225]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 13.5, 1.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 12.6, 2.1 Hz, 1H), 7.70 (dt, J = 8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H).
Korak B: 2-(3-fluoro-4-metoksifenil)etan-1-amin
[0226] U rastvor proizvoda iz koraka A (393 mg, 1.99 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (12 mL) se dodaje litijum aluminijum hidrid (1M u tetrahidrofuranu; 5,98 mL, 5.98 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 40 °C preko noći. Reakcija se gasi sa vodom (1.2 mL) i koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u 2N vodenoj hlorovodoničnoj kiselini (20 mL) i ispire sa etil acetatom (x2). Vinska kiselina (2,1 g) se dodaje u vodenu fazu i pH se podešava na pH 11 sa koncentrovanim amonijum hidroksidom. Smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (x3) i spojeni organski ekstrakti se razdvajaju (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (252 mg, 1.49 mmol, 75%).
LC/MS (C9H12FNO) 170 [M+H]<+>; RT 0.14 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.16 -7.03 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.38 -3.30 (m, 2H), 2.79 -2.69 (m, 2H), 2.62 -2.54 (m, 2H).
Korak C: [2-(3-fluoro-4-metoksifenil)etil]dimetilamin
[0227] U rastvor proizvoda iz koraka B (252 mg, 1.49 mmol, 1 ekv) u metanolu (5 mL) se dodaje formaldehid (13.4M u vodi; 123 mL, 4.47 mmol, 3 ekv) a zatim natrijum triacetoksiborohidrid (947 mg, 4.47 mmol, 3 ekv) i glacijalna sirćetna kiselina (0,05 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (92 mg, 0.47 mmol, 31%).
LC/MS (C11H16FNO) 198 [M+H]<+>; RT 0.82 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.16 -6.94 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.64 (dd, J = 8.5, 6.7 Hz, 2H), 2.41 (dd, J = 8.5, 6.7 Hz, 2H), 2.16 (s, 6H).
Korak D: 4-[2-(dimetilamino)etil]-2-fluorofenol
[0228] U rastvor proizvoda iz koraka C (92 mg, 0.47 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (3.5 mL), ohlađenom na 0 °C, dodaje se bor tribromid (1M u dihlormetanu, 1,4 mL, 1.4 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se hladi na 0 °C i gasi sa metanolom, zatim koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom, i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon ulje (41 mg, 0.22 mmol, 48%).
LC/MS (C10H14FNO) 184 [M+H]<+>; RT 0.36 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 7.03 -6.95 (m, 1H), 6.88 -6.78 (m, 2H), 2.59 (dd, J = 8.7, 6.7 Hz, 2H), 2.38 (dd, J = 8.6, 6.7 Hz, 2H), 2.15 (s, 6H).
Dobijanje 4h: 3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluoro-1-metil-1H-indol-6-ol
Korak A: 6-(benziloksi)-5-fluoro-1H-indol-2-karboksilna kiselina
[0229] U mešani rastvor metil estra 6-benziloksi-5-fluoro-1H-indol-2-karboksilne kiseline (2,5 g, 8.35 mmol, 1 ekv) u smeši tetrahidrofurana (25 mL) i metanola (25 mL) dodaje se rastvor natrijum hidroksida (4 g, 100 mmol, 12 ekv) u vodi (30 mL) i smeša se meša tokom 2.5 h. Reakcija se hladi u ledenoj vodi i zakišeljava se laganim dodavanjem mešajući 2N vodene hlorovodonične kiseline (60 mL) što dovodi do taloženja. Dodaje se voda (80 mL i smeša se meša tokom 45 min, zatim se čvrste materije sakupe ceđenjem, isperu vodom i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (2,25 g, 7.89 mmol, 94%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0230] LC/MS (C16H12FNO3) 284 [M-H]-; RT 1.16 (LCMS-V-B1)<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.85 (s, 1H), 11.71 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.54 -7.39 (m, 5H), 7.39 -7.32 (m, 1H), 7.10 (dd, J = 7.4, 0.8 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 2.2, 0.8 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H).
Korak B: 6-(benziloksi)-5-fluoro-1H-indol
[0231] Smeša proizvoda iz koraka A (1,25 g, 4.38 mmol, 1 ekv) i difenil etra (60 mL) se zagreva na 290 °C (spoljno) tokom 45 min. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline zatim razblaži sa heptanom (180 mL) i stavlja na heksanom navlaženu prethodno upakovanu kolonu silicijum dioksida (80 g) pod vakuumom. Prečišćavanjem automatizovanom fleš hromatografijom (CombiFlash Rf, Silicijum dioksid 80g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u heksanu dalo je željeni proizvod (372 mg, 1.54 mmol, 35%) kao bež čvrstu supstancu.
LC/MS (C15H12FNO) 242 [M+H]<+>; RT 1.26 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.00 (s, 1H), 7.52 -7.45 (m, 2H), 7.49 -7.37 (m, 2H), 7.41 -7.30 (m, 2H), 7.25 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 7.3, 0.8 Hz, 1H), 6.34 (ddd, J = 3.0, 2.0, 0.8 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H).
Korak C: 6-(benziloksi)-5-fluoro-1-metil-1H-indol
[0232] U mešani rastvor proizvoda iz koraka B (365 mg, 1.51 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (10 mL), ohlađen u ledeno vodeno kupatilo, dodaje se natrijum hidrid (60% disperzija; 72,6 mg, 3.03 mmol, 2 ekv) i smeša se meša tokom 15 min. dodaje se jodometan (0,11 mL, 1.82 mmol, 1.2 ekv), zatim se smeša ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 1 h. Reakcija se ohladi u ledu, zatim se gasi dodavanjem u kapima zasićenog vodenog amonijum hlorida, i polako sipa u ledenu vodu uz mešanje (40 mL) što dovodi do taloženja. Dalje se dodaje led (20 mL) a nakon 30 min mešanja, čvrste supstance su sakupljene ceđenjem, isprane uzastopno ledeno hladnom vodom (2 x 30 mL) i heksanom (2 x 10 mL) i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (259 mg, 1.01 mmol, 67%) kao bež čvrsta supstanca.
LC/MS (C16H14FNO) 256 [M+H]<+>; RT 1.36 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.55 -7.48 (m, 2H), 7.47 -7.38 (m, 2H), 7.40 -7.29 (m, 3H), 7.25 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 6.33 (dd, J = 3.1, 0.8 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 3.76 (s, 3H).
Korak D: {[6-(benziloksi)-5-fluoro-1-metil-1H-indol-3-il]metil}dimetilamin
[0233] U mešanu smešu 1,4-dioksana (5 mL) i glacijalne sirćetne kiseline (5 mL) se dodaje vodeni formaldehid (37 mas%; 1.18 mL, 14.54 mmol, 14.6 ekv) a zatim vodeni dimetilamin (40 mas%; 1.42 mL, 12.6 mmol, 12.6 ekv). Ovaj rastvor (1,6 mL) se dodaje u mešani rastvor proizvoda iz koraka C (255 mg, 1 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (1 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 4 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se dodaje 2N vodeni natrijum hidroksid (4 mL) i nastala gusta suspenzija se razblaži sa vodom (10 mL), mesa i hladi u ledenoj void tokom 15 min, zatim cedi, ispere vodom (x3) i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (290 mg, 0.93 mmol, 93%) kao kremasta čvrsta supstanca.
LC/MS (C19H21FN2O) 268 [M+H-NHMe2]<+>; RT 0.99 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.55 -7.47 (m, 2H), 7.47 -7.38 (m, 2H), 7.40 -7.31 (m, 2H), 7.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.20 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.44 (s, 2H), 2.12 (s, 6H).
Korak E: 3-[(dimetilamino)metil]-5-fluoro-1-metil-1H-indol-6-ol
[0234] Balon se napuni sa 10% Pd/C (50 mg, 0.05 ekv), zatim isprazni i ispere azotom (x 2). Dodaje se rastvor proizvoda iz koraka D (285 mg, 0.91 mmol, 1 ekv) u etanolu (20 mL) i balon se isprazni i ispere azotom (x 3), zatim isprazni i ispere sa vodonikom (x 3), zatim podvrgne atmosferi vodonika i mućka tokom 4 h na temperaturi okoline. Reakcija se cedi kroz HM-N kertridž, eluira sa etanolom, i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C1850g Gold RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 10 -100% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod (69,8 mg, 0.27 mmol, 29%) kao beličastu čvrstu supstancu (hidrohloridna so).
LC/MS (C12H15FN2O) 178 [M+H-NHMe2]<+>; RT 0.36 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.08 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 7.60 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.96 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.66 (s, 6H), 1.23 (d, J = 6.5 Hz, 1H). Dobijanje 4i: 4-[4-(Dimetilamino)butil]-2-fluorofenol
Korak A: [3-(1,3-diokso-2,3-dihidro-1H-isoindol-2-il)propil]trifenilfosfanijum bromid
[0235] N-(3-bromopropil)ftalamid (2,75 g, 10.26 mmol, 1 ekv) i trifenilfosfin (2,69 g, 10.3 mmol, 1 ekv) se mešaju u toluenu (25 mL) i zagrevaju na refluksu preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i švrste supstance se sakupe ceđenjem i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (2,55 g, 4.81 mmol, 47%).
[0236]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 -7.85 (m, 7H), 7.82 -7.71 (m, 12H), 3.80 -3.64 (m, 4H), 1.99 -1.90 (m, 2H).
Korak B: 2-[(3E)-4-(3-fluoro-4-metoksifenil)but-3-en-1-il]-2,3-dihidro-1H-isoindol-1,3-dion [0237] U rastvor proizvoda iz koraka A (2,55 g, 4.81 mmol, 1 ekv) u toluenu (25 mL) se dodaje 3-Fluoro-4-metoksibenzaldehid (741 mg, 4.81 mmol, 1 ekv), a zatim 18-kruna-6 (108 mL, 0.48 mmol, 0.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (1,48 g, 4.55 mmol, 95%).
LC/MS (C19H16FNO3) 302 [OTHER]; RT 2.25 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 -7.79 (m, 4H), 7.13 -6.98 (m, 3H), 6.43 -6.33 (m, 1H), 5.61 (dt, J = 11.7, 7.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 2.64 (qd, J = 7.2, 1.8 Hz, 2H).
Korak C: (3E)-4-(3-fluoro-4-metoksifenil)but-3-en-1-amin
[0238] U rastvor proizvoda iz koraka B (1,48 g, 4.55 mmol, 1 ekv) u etanolu (60 mL) se dodaje metilamin (2M u metanolu; 24 mL, 665 mmol, 146 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje se u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom. Sirova čvrsta supstanca se rastvara u etil acetatu i ekstrahuje sa 1N vodenom hlorovodoničnom kiselinom (3 x100 mL). Spojeni vodeni ekstrakti se alkalizuju sa 4M vodenim kalijum hidroksidom, ekstrahuju sa etil acetatom (x2), i spojeni organski ekstrakti se suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao roze guma (395 mg, 2.02 mmol, 45%).
LC/MS (C11H14FNO) 196 [M+H]<+>; RT 1.25 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.24 -7.04 (m, 4H), 6.44 -6.30 (m, 1H), 5.63 (dt, J = 11.6, 7.2 Hz, 1H), 2.65 (t, 2H), 2.37 (qd, J = 7.1, 2.0 Hz, 2H).
Korak D: 4-(3-fluoro-4-metoksifenil)butan-1-amin
[0239] U rastvor proizvoda iz koraka C (395 mg, 2.02 mmol, 1 ekv) u metanolu (10 mL) se dodaje platina (IV) oksid (45,9 mg, 0.2 mmol, 0.1 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), isprazni, zatim stavi u atmosferu vodonika i mućka na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se cedi kroz celit, eluira sa metanolom i koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao guma boje breskve (219 mg, 1.11 mmol, 55%).
LC/MS (C11H16FNO) 198 [M+H]<+>; RT 1.18 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.10 -7.01 (m, 2H), 6.99 -6.90 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.57 -2.44 (m, 2H), 1.611.42 (m, 4H), 1.39 -1.26 (m, 2H).
Korak E: [4-(3-fluoro-4-metoksifenil)butil]dimetilamin
[0240] U rastvor proizvoda iz koraka D (219 mg, 1.11 mmol, 1 ekv) u metanolu (5 mL) se dodaje vodeni formaldehid (37 mas%; 91,8 µL, 13.4 M, 3.33 mmol, 3 ekv), natrijum triacetoksiborohidrid (706 mg, 3.33 mmol, 3 ekv) i glacijalna sirćetna kiselina (6,36 µL, 0.11 mmol, 0.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (163 mg, 0.72 mmol, 65%).
LC/MS (C13H20FNO) 226 [M+H]<+>; RT 1.30 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.10 -7.00 (m, 2H), 6.98 -6.90 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.56 -2.47 (m, 2H), 2.23 -2.15 (m, 2H), 2.09 (s, 6H), 1.59 -1.47 (m, 2H), 1.43 -1.31 (m, 2H).
Korak F: 4-[4-(dimetilamino)butil]-2-fluorofenol
[0241] U rastvor proizvoda iz koraka E (163 mg, 0.72 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL), ohlađenom na 0 °C, dodaje se bor tribromid (1M u dihlormetanu; 2.17 mL, 2.17 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se hladi na 0 °C, gasi sa metanolom i koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (110 mg, 0.52 mmol, 72%).
LC/MS (C12H18FNO) 212 [M+H]<+>; RT 0.96 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 6.94 (dd, J = 12.5, 2.0 Hz, 1H), 6.88 -6.75 (m, 2H), 2.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.21 -2.13 (m, 2H), 2.08 (s, 6H), 1.56 -1.44 (m, 2H), 1.42 -1.30 (m, 2H).
Dobijanje 4i: terc-butil N-[2-(3-fluoro-4-hidroksifenil)etil]-N-metilkarbamat
Korak A: etil N-[2-(3-fluoro-4-metoksifenil)etil]karbamat
[0242] U rastvor 2-(3-fluoro-4-metoksifenil)etan-1-amina (263 mg, 1.55 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (10 mL) se dodaje trietilamin (315 mg, 3.11 mmol, 2 ekv) i smeša se ohladi na 0 °Pre nego što se doda etil hloroformijat (149 µL, 1.55 mmol, 1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -1% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao beli vosak (245 mg, 1.02 mmol, 65%).
LC/MS (C12H16FNO3) 242 [M+H]<+>; RT 1.81 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.13 (t, 1H), 7.11 -7.01 (m, 2H), 6.98 -6.92 (m, 1H), 3.96 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.16 (td, J = 7.3, 5.8 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: [2-(3-fluoro-4-metoksifenil]etil](metil)amin
[0243] Rastvor proizvoda iz koraka A (245 mg, 1.02 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (3 mL) se ohladi na 0 °C. Dodaje se litijum aluminijum hidrid (1M u tetrahidrofuranu, 2.54 mL, 2.54 mmol, 2.5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se hladi na 0 °C i dodaje se voda (96 µL), zatim 15% vodeni natrijum hidroksid (96 µL), zatim vodar (288 µL). Dalje se dodaje tetrahidrofuran da bi se olakšalo mešanje i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 30 min. Dodaje se magnezijum sulfat, zatim etil acetat, smeša se meša tokom 15 min, zatim cedi kroz celit i eluira etil acetatom. Rastvarači se uklanjaju u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu je dalo željeni proizvod kao bistro ulje (89 mg, 0.49 mmol, 48%).
LC/MS (C10H14FNO) 184 [M+H]<+>; RT 0.75 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.15 -7.01 (m, 2H), 6.96 (ddd, J = 8.3, 2.0, 1.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.69 -2.57 (m, 4H), 2.27 (s, 3H).
Korak C: 2-fluoro-4-[2-(metilamino)etil]fenol
[0244] U rastvor proizvoda iz koraka B (89 mg, 0.49 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (4 mL), ohlađen na 0 °C, se dodaje bor tribromid (1M u dihlormetanu, 1,46 mL, 1.46 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 4 h. Reakcija se hladi na 0 °C i gasi sa metanolom, zatim koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.75N metanolnim amonijakom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon guma (62 mg, 0.37 mmol, 75%).
LC/MS (C9H12FNO) 170 [M+H]<+>; RT 0.24 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.02 -6.93 (m, 1H), 6.88 -6.76 (m, 2H), 2.67 -2.53 (m, 4H), 2.27 (s, 3H).
Korak D: terc-butil N-[2-(3-fluoro-4-hidroksifenil)etil]-N-metilkarbamat
[0245] U rastvor proizvoda iz koraka C (62 mg, 0.37 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se dodaje trietilamin (153 mL, 1.1 mmol, 3 ekv) i 4-(dimetilamino)piridin (4,48 mg, 0.04 mmol, 0.1 ekv), a zatim di-terc-butil dikarbonat (0,09 mL, 0.44 mmol, 1.2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -85% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (48 mg, 0.18 mmol, 49%).
LC/MS (C14H20FNO3) 170 [M-Boc+H]<+>; RT 2.54 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.60 (s, 1H), 6.95 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 6.89 -6.72 (m, 2H), 3.34 -3.27 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.64 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.28 (s, 9H).
Dobijanje 4k: terc-Butil N-[4-(3-fluoro-4-hidroksifenil)butil]-N-metilkarbamat
Korak A: etil N-[(3E)-4-(3-fluoro-4-metoksifenil)but-3-en-1-il]karbamat
[0246] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4i, korak C (397 mg, 2.03 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (20 mL) se dodaje trietilamin (0,57 mL, 4.07 mmol, 2 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C. Dodaje se etil hloroformijat (194 µL, 2.03 mmol, 1 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (310 mg, 1.16 mmol, 57%).
LC/MS (C14H18FNO3) 268 [M+H]<+>; RT 2.06 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.24 -7.05 (m, 3H), 6.42 -6.33 (m, 1H), 5.57 (dt, J = 11.7, 7.2 Hz, 1H), 4.00 (dq, J = 26.6, 7.1 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.08 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 2.42 (qd, J = 7.1, 1.9 Hz, 2H), 1.16 (t, 3H).
Korak B: etil N-[4-(3-fluoro-4-metoksifenil)butil]karbamat
[0247] U rastvor proizvoda iz koraka A (310 mg, 1.16 mmol, 1 ekv) u metanolu (12 mL) se dodaje platina (IV) oksid (26,3 mg, 0.12 mmol, 0.1 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), isprazni, postavi u atmosferu vodonika i mućka na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se cedi kroz celit, eluira sa metanolom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao bistro ulje (275 mg, 1.02 mmol, 88%).
LC/MS (C14H20FNO3) 270 [M+H]<+>; RT 2.07 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.12 -7.00 (m, 3H), 6.99 -6.91 (m, 1H), 3.96 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.97 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 2.52 -2.45 (m, 2H), 1.51 (p, J = 7.8, 7.4 Hz, 2H), 1.37 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: [4-(3-fluoro-4-metoksifenil)butil](metil)amin
[0248] U rastvor proizvoda iz koraka B (417 mg, 1.55 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (5 mL), ohlađenom na 0 °C, dodaje se litijum aluminijum hidrid (1M u tetrahidrofuranu; 3,87 mL, 3.87 mmol, 2.5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se hladi na 0 °C, dodaje se voda (150 µL), a zatim 15% vodeni natrijum hidroksid (150 µL) i voda (450 µL). Smeša se razblaži sa tetrahidrofuranom i meša tokom 30 min. Dodaju se magnezijum sulfat i etil acetat, i smeša se cedi kroz celit i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (222 mg, 1.05 mmol, 68%).
LC/MS (C12H18FNO) 212 [M+H]<+>; RT 1.28 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.09 -6.99 (m, 2H), 6.94 (dd, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.51 -2.48 (m, 2H), 2.44 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.61 -1.47 (m, 2H), 1.47 -1.31 (m, 2H).
Korak D: 2-fluoro-4-[4-(metilamino)butil]fenol
[0249] U rastvor proizvoda iz koraka C (222 mg, 1.05 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (10 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje bor tribromid (1M u dihlormetanu, 3,15 mL, 3.15 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Reakcija se hladi na 0 °C, gasi sa metanolom i koncentruje u vakuumu. Ostatak se rastvara u metanolu, napuni se u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 1.4N metanolnim amonijakom i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao braon guma (63 mg, 0.32 mmol, 30%).
LC/MS (C11H16FNO) 198 [M+H]<+>; RT 1.01 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.00 -6.91 (m, 1H), 6.88 -6.75 (m, 2H), 2.49 -2.40 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 1.58 -1.45 (m, 2H), 1.43 -1.33 (m, 2H).
Korak E: terc-butil N-[4-(3-fluoro-4-hidroksifenil)butil]-N-metilkarbamat
[0250] U rastvor proizvoda iz koraka D (63 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se dodaje trietilamin (133 µL, 0.96 mmol, 3 ekv) i 4-(dimetilamino)piridin (3,9 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C i dodaje se di-terc-butil dikarbonat (66 µL, 0.29 mmol, 0.9 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podei između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -35% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod (33 mg, 0.11 mmol, 35%).
LC/MS (C16H24FNO3) 198 [M-Boc+H]<+>; RT 2.18 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 6.95 (dd, J = 12.4, 2.0 Hz, 1H), 6.88 -6.74 (m, 2H), 3.21 -3.11 (m, 2H), 2.74 (s, 3H), 2.49 -2.41 (m, 2H), 1.53 -1.40 (m, 4H), 1.37 (s, 9H).
Dobijanje 5a: 1-(1-Adamantilmetil)-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol Korak A: 1-(1-adamantilmetil)-4-jodo-pirazol
[0251] Smeša od 35,9 g 1-adamantilmetanola (216 mmol), 73,48 g of trifenilfosfina (280 mmol, 1.3 ekv.), 54,25 g 4-jodo-1H-pirazola (280 mmol, 1.3 ekv.) i 64,4 g terc-butil N-(tercbutoksikarboniliminometilen)karbamata (266 mmol.1.3 ekv.) u 1078 mL THF se meša na st tokom 48 h. Nakon dodavanja dodatnih 10,94 g of 4-jodo-1H-pirazola (56 mmol, 0.26 ekv.), 12,81 g terc-butil N-(terc-butoksikarboniliminometilen)karbamata (53 mmol, 0.26 ekv.) i 14,69 g of trifenilfosfina (56 mmol, 0.26 ekv.), reakcija se meša na st tokom 24 h zatim koncentruje, prečišćava putem fleš hromatografije na koloni koristeći DCM kao eluent, triturisanje u hladnoj MeOH, i ceđenje da se dobije 53,6 g (73%) željenog proizvoda ka obeli prah.
Korak B: 1-(1-adamantilmetil)-4-jodo-5-metil-pirazol
[0252] U 9,8 mL diizopropilamina (69.5 mmol, 1.1 ekv.) u 180 mL THF se dodaje u kapima 33,4 mL 2.5 M rastvor butil litijuma (84 mmol, 1.3 ekv.) na -78 °C i smeša se meša na -78 °C tokom 0,5 h, tretira sa 22,0 g proizvoda iz koraka A (64.28 mmol, 1 ekv.) u 90 mL THF, meša na -78 °C tokom 1 h, tretira sa 4,67 mL metiljodida (73.3 mmol, 1.14 ekv.), i meša na -78 °C tokom 18 h. Nakon gašenja sa cc. NH4Cl, reakcija se ekstrahuje sa EtOAc i spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, koncentruju, triturišu u MeOH, i ocede da se dobije 21 g (92%) željenog proizvoda.
Korak C: 1-(1-adamantilmetil)-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol [0253] U 21 g proizvoda iz koraka B (58.95 mmol, 1 ekv.) u 300 mL THF se dodaje 28,3 mL 2.5 M rastvora butillitijuma (70.8 mmol, 1.2 ekv) na -78 °C i smeša se meša na -78 °C tokom 0,5 h, tretira sa 16,4 g 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (88.1 mmol, 1.5 ekv.) (dodavanje u porcijama tokom 40 min), i čuvanje na -78 °C tokom 24 h. Nakon gašenja sa cc. NH4Cl na st, reakcija se ekstrahuje sa EtOAc i spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, koncentruju, triturišu u MeOH, i ocede da se dobije 19,7 g (94%) željenog proizvoda kao beličasti kristali.
[0254]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.45 (s, 1H), 3.69 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.91 (m, 1H), 1.64/1.54 (m, 6H), 1.50 (m, 6H), 1.24 (s, 12H);<13>C NMR (500 MHz, , DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.1, 104.6, 59.7, 40.6, 36.8, 35.4, 28.1, 25.1, 12.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C21H34BN2O2: 357.2713, nađeno 357.2704.
Dobijanje 5b: 1-{[1-(3-Metoksipropil)ciklooktil]metil}-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol
Korak A: metil 1-(3-metoksipropil)ciklooktankarboksilat
[0255] U 4,74 g (1.14 ekv.) diizopropilamina u 90 mL tetrahidrofurana se dodaje 18,8 mL (1.14 ekv.) 2.5 M rastvor butil litijuma na -78 °C i nakon 0,5 h na -78 °C, 7,0 g (41.1 mmol) metil ciklooktankarboksilata u 40 mL tetrahidrofurana se dodaje tokom 1 h. Nakon 1 h na -78 °C, dodaje se 7,2 g (1.14 ekv.) 1-bromo-3-metoksi-propana i smeša se meša tokom 18 h. Nakon gašenja reakcije sa dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl, smeša se ekstrahuje sa EtOAc i organske faze se suše preko MgSO4i koncentruju da se dobije 8,0 g (80%) željenog proizvoda.
[0256]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.66 (s, 3H), 3.33 (t, 2H), 3.31 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.64-1.38 (m, 16H).
Korak B: [1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metanol
[0257] U 9,0 g (37.13 mmol) proizvoda iz koraka A u 93 mL dietil etra se dodaje 1,76 g (1.25 ekv.) litijum aluminijum hidrida u porcijama na 0 °C. Nakon mešanja na st tokom 2 h, reakcija se gasi dodavanjem ledene vode i EtOAc i dodaje se 10% rastvor NaOH. Smeša se ekstrahuje sa EtOAc, suši, i koncentruje da se dobije 7,4 g (93%) željenog proizvoda.
[0258]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.37 (t, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.30 (s, 2H), 1.61-1.23 (m, 18H). Korak C: 4-jodo-1-[[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil]-1H-pirazol
[0259] U 1,39 g (6.5 mmol) proizvoda iz koraka B i 1,64 g (1.3 ekv.) 4-jodo-1H-pirazola u 33 mL tetrahidrofurana se dodaje 2,22 g (1.3 ekv.) trifenilfosfina i 1,95 g (1.3 ekv.) di-terc-butil azodikarboksilata i smeša se meša na st tokom 67 h. U smešu se dodaje 278 mg 4-jodo-1H-pirazola, 444 mg of trifenil-fosfina, i 390 mg di-terc-butil azodikarboksilata i meša se na st tokom 24 h. Nakon dodavanja reagenasa i mešanja na st tokom 24 h se ponavlja (115 h ukupnog mešanja), smeša se koncentruje i prečišćava putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 1,24 g (49%) željenog proizvoda.
[0260]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.47 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.37 (t, 2H), 3.36 (s, 3H), 1.68-1.18 (m, 18H).
Korak D: 4-jodo-1-[[1-(3-metoksipropil)ciklookti]metil]-5-metil-1H-pirazol
[0261] U 1,2 g (3.07 mmol) proizvoda iz koraka C u 5 mL tetrahidrofurana se dodaje 3,7 mL (1.2 ekv.) 1 M rastvor LDA na -78 °C. Nakon 0,6 h na -78 °C, dodaje se 0,5 mL (1.14 ekv.) metil jodida u kapima u smešu i to se ostavlja da se ugreje na st tokom 20 h. Reakcija se gasi sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc. Spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 0,79 g (64%) željenog proizvoda.
[0262]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.43 (s, 1H), 3.85 (s, 2H), 3.38 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.69-1.24 (m, 18H).
Korak E: 1-[[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil]-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol
[0263] U rastvor 0,81 g (2 mmol) proizvoda iz koraka D u 15 mL tetrahidrofurana se dodaje 0,96 mL (1.2 ekv.) 2.5 M rastvor butil litijuma u kapima na -78 °C. Nakon 0,5 h, dodaje se 0,5 mL (1.2 ekv.) 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana tokom 20 min i smeša se drži na -78 °C tokom 6 h a na st tokom 6 h. Nakon gašenja reakcije sa zasićenim rastvorom NH4Cl I ekstrahovanja sa EtOAc, spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, i prečišćavaju putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 0,33 g (34%) željenog proizvoda.
[0264]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.46 (s, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 3.21 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.66-1.1 (m, 14H), 1.57 (m, 2H), 1.24 (s, 12H), 1.24 (m, 2H).<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 147.3, 144.5, 104.5, 73.2, 58.2, 54.4, 40.5, 33.2, 25.1, 23.6, 11.8. IR: 2922, 1556, 1246, 1144, 1055.
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C23H42N2O3B: 405.3289, nađeno 405.3329.
Dobijanje 5c: 1-{[1-(3-Metoksipropil)cikloheksil]metil}-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol
Korak A: metil 1-(3-metoksipropil)cikloheksankarboksilat
[0265] U 6,84g (1.09 ekv.) diizopropilamina u 130 mL tetrahidrofurana se dodaje 27 mL (1.09 ekv.) 2.5 M rastvor butil litijuma na -78 °C i nakon 0,5 h na -78 °C, dodaje se 8,8 g metil cikloheksankarboksilata u 50 mL tetrahidrofurana tokom 1 h. Nakon 1 h na -78 °C, dodaje se 10,7 g (1.13 ekv.) 1-bromo-3-metoksi-propana i smeša se meša tokom 18 h. Nakon gašenja reakcije sa dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl, smeša se ekstrahuje sa EtOAc i organske faze se suše preko MgSO4i koncentruju da se dobije 12 g (92%) željenog proizvoda.
[0266]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.67 (s, 3H), 3.35 (d, 1H), 3.32 (d, 1H), 3.31 (s, 3H), 2.11-2.03 (m, 2H), 1.60-1.16 (m, 12H).
Korak B: [1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metanol
[0267] U 12 g (56.41 mmol) proizvoda iz koraka A u 140 mL dietil etra se dodaje 2,68 g (1.25 ekv.) litijum aluminijum hidrida u porcijama na 0 °C. Nakon mešanja na st tokom 2 h, reakcija se gasi dodavanjem ledene vode i EtOAc i dodaje se 10% rastvor NaOH. Smeša se ekstrahuje sa EtOAc, suši, i koncentruju da se dobije 9,37 g (89%) željenog proizvoda.
[0268]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.41 (s, 2H), 3.38 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 1.56-1.27 (m, 14H). Korak C: 4-jodo-1-[[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil]pirazol
[0269] U 1,21g (6.5 mmol) proizvoda iz koraka B i 2,58 g (2.05 ekv.) 4-jodo-1H-pirazola u 33 mL tetrahidrofurana se dodaje 3,5 g (2.05 ekv.) trifenilfosfina i 3,07 g (2.05 ekv.) di-terc-butil azodikarboksilata i smeša se meša na st tokom 2 h. U smešu se dodaje 140 mg 4-jodo-1H-pirazola, 230 mg trifenilfosfina, i 200 mg di-terc-butil azodikarboksilata i meša se st tokom 24 h. Nakon dodavanja reagenasa i mešanja na st tokom 24 h, ponavlja se dva puta (96 h ukupnog mešanja), smeša se koncentruje i prečišćava putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 1,4 g (59.5%) željenog proizvoda.
[0270]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.47 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.36 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 1.62-1.21 (m, 14H).
Korak D: 4-jodo-1-[[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil]-5-metil-pirazol
[0271] U 3,7 g (10.21 mmol) proizvoda iz koraka C u 15 mL tetrahidrofurana se dodaje 12,3 mL (1.2 ekv.) 1 M rastvor LDA u tetrahidrofuranu na -78 °C. Nakon 0,6 h na -78 °C,dodaje se 0,73 mL (1.14 ekv.) metil jodida u kapima u smešu i to se ostavlja da se ugreje na st tokom 20 h. Reakcija se gasi sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc. Spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 2,85 g (74%) željenog proizvoda.
[0272]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.44 (s, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.38 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.58-1.13 (m, 14H).
Korak E: 1-[[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil]-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol
[0273] U rastvor 5,0 g (13.3 mmol) proizvoda iz koraka D u 71 mL tetrahidrofurana se dodaje 6,38 mL (1.2 ekv.) 2.5 M rastvor butil litijuma u kapima na -78 °C. Nakon 0,5 h, dodaje se 4,1 mL (1.5 ekv.) 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana tokom 40 min i smeša se drži na -78 °C tokom 6 h a na st tokom 6 h. Nakon gašenja reakcije sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahovanja sa EtOAc, spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, i prečišćavaju putem fleš hromatografije na koloni (silikagel) koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 2,3 g (46%) željenog proizvoda.
[0274]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.47 (s, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 1.54-1.07 (m, 10H), 1.46 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.24 (s, 12H).<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 147.3, 144.4, 104.6, 73.1, 58.2, 55.7, 37.9, 30.6, 25.1, 23.1, 12.0. IR: 2927, 1556, 1257, 1144, 1053.
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C21H38N2O3B: 376.2897, nađeno 376.3019.
Dobijanje 6a: Etil 5-bromo-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-1[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzo-tiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat Korak A: etil 2-[(pent-3-in-1-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0275] U rastvor etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilata (538 mg, 2.28 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (10 mL) se dodaje pent-3-in-1-amin hidrohlorid (300 mg, 2.51 mmol, 1.1 ekv) i trietilamin (0,7 mL, 5.02 mmol, 2.2 ekv) i smeša se zagreva na 150 °C tokom 3 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (221 mg, 0.93 mmol, 41%).
LC/MS (C11H14N2O2S) 239 [M+H]<+>; RT 2.22 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.93 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.38 -3.28 (m, 2H), 2.44 -2.33 (m, 2H), 1.75 (t, J = 2.5 Hz, 3H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0276] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (140 mg, 0.93 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu se dodaje proizvod iz koraka A (221 mg, 0.93 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu a ostatak se trituriše sa dihlormetanom, cedi, i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (148 mg, 0.46 mmol, 49%).
LC/MS (C13H13ClN4O2S) 325 [M+H]<+>; RT 2.32 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 4.41 (dd, J = 8.8, 7.7 Hz, 2H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.34 -3.24 (m, 2H), 2.29 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0277] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (148 mg, 0.46 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (103 mg, 0.68 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (52,7 mg, 0.09 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (297 mg, 0.91 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (20 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (41,7 mg, 0.05 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (103 mg, 0.23 mmol, 52%).
LC/MS (C20H18N6O2S2) 439 [M+H]<+>; RT 2.67 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.94 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.95 (br s, 1H), 7.66 (br s, 1H), 7.44 -7.33 (m, 1H), 7.28 -7.15 (m, 1H), 4.42 -4.34 (m, 2H), 4.30 (q, 2H), 3.32 -3.28 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.1, 2.4 Hz, 3H).
Korak D: etil 2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0278] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka C (103 mg, 0.23 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (15 mL) i dimetilformamida (5 mL) se dodaje N,N-diizopropiletilamin (81,8 mL, 0.47 mmol, 2 ekv). Nakon 5 min, dodaju se 4-dimetilaminopiridin (5,74 mg, 0.05 mmol, 0.2 ekv) i [2-(hlorometoksi)etil]trimetilsilan (103 mL, 0.59 mmol, 2.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (98 mg, 0.17 mmol, 73%).
LC/MS (C26H32N6O3SiS2) nema jonizacije; RT 3.08 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (s, 1H), 7.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60 -7.51 (m, 2H), 7.39 -7.30 (m, 1H), 5.96 (s, 2H), 4.48 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.87 -3.78 (m, 2H), 3.48 -3.36 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.07 -0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
Korak E: etil 5-bromo-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0279] U rastvor proizvoda iz koraka D (98 mg, 0.17 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (15 mL) se dodaje N-bromosukcinimid (39,9 mg, 0.22 mmol, 1.3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (98 mg, 0.15 mmol, 88%).
LC/MS (C26H31BrN6O3SiS2) nema jonizacije; RT 3.22 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.81 (dd, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.50 -7.39 (m, 2H), 7.28 -7.21 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.40 -4.24 (m, 4H), 3.68 -3.58 (m, 2H), 3.27 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.02 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.12 (s, 9H).
Dobijanje 7: terc-butil-difenil-[2-[[3,5-dimetil-7-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]silan
Korak A: 3-bromo-5,7-dimetiladamantan-1-karboksilna kiselina
[0280] Nakon mešanja gvožđa (6,7 g, 120 mmol) u bromu (30,7 mL, 600 mmol, 5 ekv) na 0 °C tokom 1 h, dodaje se 3,5-dimetiladamantan-1-karboksilne kiseline (25 g, 1 ekv) i reakciona smeša se meša na st tokom 2 dana. Nakon dodavanja EtOAc, reakciona smeša se pažljivo tretira sa zasićenim rastvorom natrijum-tiosulfata na 0 °C i meša tokom 15 min. Nakon ceđenja kroz sloj celita i ispiranja sa EtOAc, organske faze se razdvajaju, isperu sa zasićenim rastvorom natrijum-tiosulfata i rastvorom soli, suše, koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (34,28 g, 74.6%), koji se koristi bez daljeg prečišćavanja.
[0281]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.33 (br., 1H), 2.21 (s, 2H), 1.96/1.91 (d+d, 4H), 1.50/1.43 (d+d, 4H), 1.21/1.14 (dm+dm, 2H), 0.86 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 176.8, 66.8, 54.0, 48.7, 48.5, 45.7, 43.3, 35.5, 29.4; HRMS-ESI (m/z): [M-H]- izračunato za C13H18BrO2: 285.0496; nađeno 285.0498.
Korak B: 3-bromo-5,7-dimetil-1-adamantil-metanol
[0282] U proizvod iz koraka A (34,3 g, 119 mmol) u THF (77.6 mL) se polako dodaje 1 M rastvor BH3-THF u THF (358 mL, 3 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 18 h. Nakon dodavanja metanola i mešanja tokom 30 min, prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (16,19 g, 49.6%).
[0283]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4.51 (t, 1H), 3.05 (d, 2H), 1.91 (s, 2H), 1.91 (s, 4H), 1.19/1.09 (d+d, 2H), 1.19/1.05 (d+d, 4H), 0.85 (s, 6H)<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 70.4, 68.9, 54.9, 49.8, 49.3, 43.8, 41.4, 35.7, 29.7; HRMS-ESI (m/z): [M-Br]- izračunato za C13H21O: 193.1598 nađeno: 193.1589.
Korak C: 1-[3-bromo-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]pirazol
[0284] U proizvod iz koraka B (16,19 g, 59.26 mmol) i 1H pirazol (4,841 g, 1.2 ekv) u toluenu (178 mL) se dodaje cijanometilentributilfosforan (18,64 mL, 1.2 ekv) u jednoj porciji i reakciona smeša se meša na 90 °C tokom 2 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (17,88 g, 93%).
[0285]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.90 (s, 2H), 1.92-1.02 (m, 12H), 0.83 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 131.8, 105.2, 67.7, 61.4, 54.4/48.8/44.6, 50.4, 35.7, 29.6; HRMS-ESI (m/z): [M]+ izračunato za C16H23BrN2:322.1045 nađeno: 322.1014.
Korak D: 5-metil-1-[[-3-bromo-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]pirazol
[0286] U rastvor proizvoda iz koraka C (17,88 g, 55.3 mmol) u THF (277 mL) se dodaje butillitijum (2.5 M u THF, 66 mL, 3 ekv) na -78 °C, zatim nakon 1 h, se dodaje jodometan (17,2 mL, 5 ekv). Nakon 10 min, reakciona smeša se gasi sa zasićenim rastvorom NH4Cl, ekstrahuje sa EtOAc i spojeni organski slojevi se suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (18,7 g, 100%), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0287]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 3.79 (s, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.01 (s, 2H), 1.89/1.85 (d+d, 4H), 1.23/1.15 (d+d, 4H), 1.16/1.05 (d+d, 2H), 0.83 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 67.8, 57.8, 54.4, 50.6, 48.8, 44.8, 41.5, 35.7, 29.6, 11.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C17H26BrN2: 337.1279 nađeno: 337.1289.
Korak E: 2-[[-3.5-dimetil-7-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]oksi]etanol
[0288] Smeša od proizvoda iz koraka D (18,7 g, 55.3 mmol), etilen glikola (123 mL, 40 ekv), i DIPEA (48,2 mL, 5 ekv) se meša na 120 °C tokom 6 h. Nakon što se reakciona smeša razblaži sa vodom i ekstrahuje sa EtOAc, spojeni organski slojevi se suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (18,5 g, 105%), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0289]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.29 (d, 1H), 5.99 (d, 1H), 4.45 (t, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.39 (q, 2H), 3.32 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.34 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.13/1.07 (d+d, 4H), 1.04/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.0, 62.1, 61.5, 58.5, 50.1, 47.0, 46.1, 43.3, 39.7, 33.5, 30.2, 11.9;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C19H31N2O2: 319.2386 nađeno: 319.2387.
Korak F: terc-butil-difenil-[2-[[-3,5-dimetil-7-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]oksi]-etoksi]silan
[0290] U smešu od proizvoda iz koraka E (17,6 g, 55.3 mmol) i imidazola (5,65 g, 1.5 ekv) u DCM (150 ml) se dodaje terc-butil-hloro-difenil-silan (18,6 g, 1.2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (27,0 g, 87.8%).
[0291]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.72-7.34 (m, 10H), 7.29 (d, 1H), 5.99 (br., 1H), 3.78 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.33 (s, 2H), 1.26/1.18 (d+d, 4H), 1.12/1.06 (d+d, 4H), 1.03/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.2, 64.4, 61.7, 58.5, 50.0, 46.9, 46.0, 43.4, 39.6, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H49N2O2Si : 557.3563 nađeno: 557.3564.
Korak G: terc-butil-difenil-[2-[[3-[(4-jodo-5-metil-pirazol-1-il)metil]-5,7-dimetil-1-adamantil]oksi]etoksi]silan
[0292] U rastvor proizvoda iz koraka F (27,0 g, 48.56 mmol) u DMF (243 mL) se dodaje N-jodosukcinimid (13,6 g, 1.25 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Nakon razblaženja sa vodom, smeša se ekstrahuje sa DCM. Spojeni organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom natrijumtiosulfata i rastvorom soli, suše, i koncentruju da se dobije željeni proizvod (30,1g, 90%).
[0293]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.68-7.37 (m, 10H), 7.45 (s, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.30 (s, 2H), 1.26/1.17 (d+d, 4H), 1.12/1.05 (d+d, 4H), 1.00/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 142.5, 140.8, 133.7, 64.4, 61.7, 60.3, 59.9, 49.9, 46.8, 45.9, 43.2, 39.7, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 12.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H48IN2O2Si: 683.2530 nađeno: 683.2533.
Korak H: terc-butil-difenil-[2-[[3,5-dimetil-7-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]silan
[0294] U proizvod iz koraka G (17,5 g, 25.6 mmol) u THF (128 mL) se dodaje hloro(izopropil)magnezijum-LiCl (1.3 M u THF, 24 mL, 1.2 ekv) na 0 °C, meša tokom 40 min, tretira sa 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanom (15,7 mL, 3 ekv), i reakciona smeša se meša tokom 10 min. Posle razblaživanja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se koncentruju i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (15,2g, 86.9%).
[0295]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.65 (dm, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (tm, 2H), 7.40 (tm, 4H), 3.80 (s, 2H), 3.66 (t, 2 H), 3.44 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.35-0.94 (m, 12H), 1.24 (s, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.83 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.3, 135.6, 130.2, 128.2, 104.7, 83.0, 74.2, 64.4, 61.7, 58.4, 30.1, 27.1, 25.2, 19.3, 12.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C41H60BN2O4Si: 683.4415 nađeno: 683.4423.
Dobijanje 8: terc-butil-[3-[3,5-dimetil-7-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]propoksi]-difenil-silan
Korak A: 1-[[3-alil-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol
[0296] U proizvod iz koraka D iz dobijanja 7 (15,66 g, 46.43 mmol) i AgOTf (597 mg, 0.05 ekv) u THF (232 mL) se dodaje 2 M rastvora alil-Mg-Cl u THF (46,4 mL, 2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 0,5 h. Nakon gašenja sa zasićenim rastvorom NH4Cl I ekstrahovanja sa EtOAc, spojene organske faze se koncentruju i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (11,32 g, 81.7%).
[0297]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.27 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 5.76 (m, 1H), 5.01/4.96 (dm+dm, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.83 (d, 2H), 1.15-0.93 (m, 12H), 0.78 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.7, 135.0, 117.7, 105.0, 59.0, 47.8, 44.2, 35.0, 31.8, 30.6, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C20H31N2: 299.2487 nađeno: 299.2485.
Korak B: 3-[3,5-dimetil-7-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]propan-1-ol
[0298] U proizvod iz koraka A (10,2 g, 34.17 mmol), u THF (85 mL) se dodaje 1 M rastvor BH3-THF u THF (85,4 mL, 2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Nakon tretmana sa 10 M rastvorom NaOH (24 mL, 7 ekv) i 33 % rastvorom vodonik peroksida (73 mL, 25 ekv) na 0 °C, reakcija se meša na st tokom 1 h. Zatim, gasi se sa vodenim rastvorom HCl, ekstrahuje sa EtOAc, i prečišćava hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (9,75 g, 90%).
[0299]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 4.33 (t, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.22 (brs, 3H), 1.32 (m, 2H), 1.12-0.92 (m, 12H), 1.06 (m, 2H), 0.78 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.7, 105.0, 62.1, 59.1, 39.7, 30.7, 26.5, 11.9, HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C20H33N2O: 317.2593 nađeno: 317.2590
Korak C: terc-butil-[3-[3,5-dimetil-7-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]propoksi]-difenil-silan
[0300] U proizvod iz koraka B (9,75 g, 30.8 mmol) i imidazola (3,1 g, 1.5 ekv) u DCM (92 ml) se dodaje terc-butil-hloro-difenil-silan (9,45 mL, 1.2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (12,5 g, 73%).
[0301]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63-7.39 (m, 10H), 7.27 (d, 1H), 5.98 (d, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.1-0.92 (br., 12H), 1.09 (m, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.77 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.7, 105.0, 64.8, 59.1, 39.3, 38.0, 34.2, 31.8, 30.6, 27.2, 26.1, 19.2, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H51N2OSi: 555.3771 nađeno: 555.3770.
Korak D: terc-butil-[3-[3-[(4-jodo-5-metil-pirazol-1-il)metil]-5,7-dimetil-1-adamantil] propoksi]-difenil-silan
[0302] U proizvod iz koraka C (12,5 g, 22.54 mmol) u DMF (112 mL) se dodaje N-jodosukcinimid (6,34 g, 1.25 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Nakon gašenja sa zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata i ekstrakcijom sa DCM, spojene organske faze se isperu sa zasićenim natrijum tiosulfatom i rastvorom soli, suše, i uparavaju da se dobije željeni proizvod (16,3 g, 105%). LC/MS (C36H50IN2OSi) 681 [M+H]<+>.
Korak E: terc-butil-[3-[3,5-dimetil-7-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]propoksi]-difenil-silan
[0303] U proizvod iz koraka D (16,25 g, 23.9 mmol) u THF (119 mL) se dodaje hloro(izopropil)magnezijum-LiCl (1.3 M u THF, 22 mL, 1.2 ekv.) na 0 °C, smeša se meša tokom 40 min, tretira sa 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (14,6 mL, 3 ekv), i meša tokom 10 min. Posle razblaživanja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se koncentruju i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (11,4 g, 70%).
[0304]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.59 (d, 4H), 7.46 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.43 (t, 4H), 3.74 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.41 (qn, 2H), 1.24 (s, 12H), 1.09 (m, 2H), 1.08 (s, 4H), 1.05 (s, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.98 (s, 2H), 0.94 (s, 4H), 0.78 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.2, 135.5, 133.8, 130.3, 128.3, 104.6, 83.0, 64.7, 64.7, 59.0, 50.6, 48.2, 46.5, 44.1, 39.2, 37.9, 31.8, 30.7, 27.2, 26.1, 25.2, 19.2, 12.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H62BN2O3Si: 681.4623 nađeno: 681.4631.
Dobijanje 9: terc-butil-[2-[[3-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]-difenil-silan
Korak A: (3-bromo-1-adamantil)metanol
[0305] U 3-bromoadamantan-1-karboksilnu kiselinu (10,0 g, 38.6 mmol) u THF (25 mL) se polako dodaje 1 M rastvor BH3-THF u THF (115 mL, 3 ekv) i smeša se meša tokom 48 h. Nakon dodavanja metanola i mešanja tokom 30 min, prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (8,37 g, 88%).
[0306]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4.50 (t, 1H), 3.02 (d, 2H), 2.28/2.21 (dm+dm, 4H), 2.11 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.66/1.56 (dm+dm, 2H), 1.48/1.39 (dm+dm, 4H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 70.9, 69.3, 51.3, 49.0, 40.6, 37.3, 35.1, 32.3.
Korak B: 1-[(3-bromo-1-adamantil)metil]pirazol
[0307] U proizvod iz koraka A (8,37 g, 34.1 mmol), dodaje se 1H-pirazol (2,79 g, 1.2 ekv) u toluenu (100 mL) (cijanometilen)tributilfosforan (10,7 mL, 1.2 ekv) i reakciona smeša se meša na 90 °C tokom 2 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (8,50 g, 84%).
[0308]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (dd, 1H), 7.43 (dd, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.87 (s, 2H), 2.24/2.13 (m+m, 4H), 2.1 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.63/1.50 (m+m, 2H), 1.47/1.43 (m+m, 4H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 138.9, 131.7, 105.1, 68.0, 61.8, 51.8, 48.5, 39.8, 38.3, 34.6, 32.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C14H20BrN2: 295.0810 nađeno: 295.0804.
Korak C: 1-[(3-bromo-1-adamantil)metil]-5-metil-pirazol
[0309] U proizvod iz koraka B (1,70 g, 5.76 mmol) u THF (30 mL) se dodaje butillitijum (2.5 M u THF, 12 mL, 5 ekv) na -78 °C. Nakon 1 h, dodaje se jodometan (7,2 mL, 5 ekv) u smešu. Nakon 10 min, reakciona smeša se gasi sa zasićenim rastvorom NH4Cl, ekstrahuje sa EtOAc i spojeni organski slojevi se suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (2,0 g, 112%), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0310]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.01 (d, 1H), 3.76 (s, 2H), 2.25/2.15 (d+d, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.16 (s, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.63/1.52 (d+d, 2H), 1.52/1.49 (d+d, 4H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 68.2, 58.3, 52.1, 48.5, 40.5, 38.4, 34.5, 32.2, 11.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C15H22BrN2: 309.0966 nađeno: 309.0962.
Korak D: 2-[[3-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]oksi]etanol
[0311] Smeša od proizvoda iz koraka C (2,00 g, 6.47 mmol), etilen glikola (14,4 mL, 40 ekv), i DIPEA (5,6 mL, 5 ekv) se meša na 120 °C tokom 6 h. Nakon razblaživanja sa vodom i ekstrahovanja sa EtOAc, spojene organske faze se prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (1,62 g, 86,6%).
[0312]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.99 (m, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.23 (brs, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.61/1.52 (m+m, 4H), 1.47/1.43 (m+m, 2H), 1.45 (s, 2H), 1.44-1.35 (m, 4H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.8, 105.1, 61.8, 61.5, 59.0, 44.6, 40.8, 39.6, 35.7, 30.0, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C17H27N2O2: 291.2073 nađeno: 291.2069.
Korak E: terc-butil-[2-[[3-[(5-metilpirazol-1-il)metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]-difenil-silan [0313] U proizvod iz koraka D (6,52 g, 22.5 mmol) i imidazola (2,29 g, 1.5 ekv) u DCM (67 ml) se dodaje terc-butil-hloro-difenil-silan (6,9 mL, 1.2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) dalo je željeni proizvod (11,0 g, 92,7%). LC/MS (C33H45N2O2Si) 529 [M+H]<+>.
Korak F: terc-butil-[2-[[3-[(4-jodo-5-metil-pirazol-1-il)metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]-difenil-silan
[0314] U proizvod iz koraka E (11,0 g, 20.8 mmol) u DMF (105 mL) se dodaje N-jodosukcinimid (5,85 g, 1.25 ekv.) i reakciona smeša se meša tokom 3 h. Nakon što se reakciona smeša razblaži sa vodom i ekstrahuje sa DCM, spojene organske faze se isperu sa zasićenim natrijum tiosulfatom i rastvorom soli, suše, i uparavaju da se dobije željeni proizvod (11,0 g, 81%).
[0315]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.70-7.36 (m, 10H), 7.44 (s, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.66-1.32 (m, 12H), 0.98 (s, 9H)<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 142.4, 140.9, 64.4, 61.4, 60.4, 60.3, 30.0, 27.1, 12.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C33H44IN2O2Si: 655.2217 nađeno: 655.2217.
Korak G: terc-butil-[2-[[3-[[5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-il]metil]-1-adamantil]oksi]etoksi]-difenil-silan
[0316] U proizvod iz koraka F (11,0 g, 16.8 mmol) u THF (84 mL) se dodaje hloro(izopropil)magnezijum-LiCl (1.3 M u THF, 17 mL, 1.2 ekv) na 0 °C, i reakciona smeša se meša tokom 40 min, tretira sa 2-izopropoksi-4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioksaborolanom (10,3 mL, 3 ekv), i meša tokom 10 min. Posle razblaživanja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se koncentruju i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i MTBE kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (9,0 g, 82%).
[0317]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.66 (d, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.40 (t, 4H), 3.77 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.11 (br, 2H), 1.60/1.48 (d+d, 4H), 1.44 (d, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.40 (d, 4H), 1.23 (s, 12H), 0.97 (s, 9H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.2, 133.8, 130.2, 128.3, 125.7, 104.6, 83.0, 72.5, 64.4, 61.4, 58.9, 44.6, 40.7, 39.6, 38.7, 35.6, 30.0, 27.1, 25.2, 19.3, 12.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C39H56BN2O4Si: 655.4102 nađeno: 655.4108.
Dobijanje 10: metil 3-bromo-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-l)propilamino]piridin-2-karboksilat
Korak A: metil 6-[bis(terc-butoksikarbonil)amino]-3-bromo-piridin-2-karboksilat
[0318] U metil 6-amino-3-bromo-piridin-2-karboksilat (25,0 g, 108.2 mmol) i DMAP (1,3 g, 0.1 ekv) u DCM (541 mL) se dodaje Boc2O (59,0 g, 2.5 ekv) na 0 °C i reakciona smeša se meša tokom 2,5 h. Nakon dodavanja zasićenog rastvora NaHCOs i ekstrakcijom sa DCM, spojene organske faze se suše i koncentruju da se dobije željeni proizvod (45,0 g, 72,3%).
[0319] LC/MS (C17H23BrN2O6Na) 453 [M+Na]<+>.
Korak B: metil 3-bromo-6-(terc-butoksikarbonilamino)piridin-2-karboksilat
[0320] U proizvod iz koraka A (42,7 g, 74.34 mmol) u DCM (370 mL) se dodaje TFA (17,1 mL, 3 ekv) na 0 °C i reakciona smeša se meša tokom 18 h. Nakon ispiranja sa zasićenim rastvorom NaHCOs i rastvorom soli, spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (28,3 g, 115,2%).
[0321]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 10.29 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.6, 153.1, 151.8/148.3, 143.5, 116.3, 109.2, 53.2, 28.4.
LC/MS (C12H15BrN2O4Na) 353 [M+Na]<+>.
Korak C: metil 3-bromo-6-[terc-butoksikarbonil-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propil]amino]piridin-2-karboksilat
[0322] U proizvod iz koraka B (10,0 g, 30.1967 mmol) u acetonu (150 mL), dodaju se Cs2CO3(29,5 g, 3 ekv) i 3,6-dihloro-4-(3-jodopropil)-5-metil-piridazin (9,9 g, 1 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 18 h. Nakon razblaživanja sa vodom i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (17,5 g, 108%).
[0323]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.13 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 3.91 (t, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.79 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.82 (m, 2H), 1.46 (s, 9H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.3, 157.6, 156.6, 153.2, 152.9, 147.2, 143.1, 142.2, 139.7, 122.6, 111.8, 82.2, 53.3, 46.4, 28.1, 27.7, 26.5, 16.3;
HRMS-ESI (m/z): [M+Na]<+>izračunato za C20H23BrCl2N4NaO4: 555.0177 nađeno: 555.0172.
Korak D: metil 3-bromo-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-l)propilamino]piridin-2-karboksilat [0324] Proizvod iz koraka C (17,5 g, 32.7 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoroizopropanolu (330 mL) se meša na 110 °C tokom 18 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (9,9 g, 70%).
[0325]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 6.57 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.30 (m, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.74 (m, 2H)<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.5, 141.5, 112.6, 52.9, 40.9, 28.0, 27.0, 16.4.
Dobijanje 11: (4-metoksifenil)metil 3-bromo-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]-piridin-2-karboksilat
Korak A: 3-bromo-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]piridin-2-karboksilna kiselina [0326] Smeša od proizvoda iz dobijanja 10 (35,39 g, 81.52 mmol) i LiOH3H2O (13,68 g, 4 ekv) u 1,4-dioksanu (408 mL) i voda (82 mL) se meša na 60 °C tokom 1 h. Nakon gašenja sa 1 M rastvora HCl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju fleš hromatografijom (silikagel, koristeći DCM i MeOH kao eluente) da bi se dobio željeni proizvod (27,74 g, 81%).
[0327] LC/MS (C14H14BrCl2N4O2) 421 [M+H]<+>.
Korak B: (4-metoksifenil)metil 3-bromo-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]piridin-2-karboksilat
[0328] U proizvod iz koraka A (27,7 g, 65.9 mmol), (4-metoksifenil)metanol (16.4 mL, 2 ekv), i PPh3(34,6 g, 2 ekv) u toluenu (660 mL) i THF (20 ml) se dodaje u kapima diizopropil azodikarboksilat (26 mL, 2 ekv) i reakciona smeša se meša na 50 °C tokom 1 h. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, koristeći heptan i EtOAc kao eluente) dalo je željeni proizvod (23,65 g, 66,4%).
[0329]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.62 (d, 1H), 7.37 (dn, 2H), 7.21 (t, 1H), 6.91 (dm, 2H), 6.56 (d, 1H), 5.25 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.30 (q, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.73 (m, 2H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 165.9, 159.7, 157.6, 157.5, 156.8, 148.0, 142.7, 141.5, 139.7, 130.6, 127.8, 114.3, 112.6, 101.6, 67.0, 55.6, 40.9, 28.0, 27.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C22H22BrCl2N4O3: 539.0252, nađeno: 539.0246.
Dobijanje 12: metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
Korak A: metil 6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]-3-[5-metil-1-[[3-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat [0330] Smeša od proizvoda iz dobijanja 10 (15,0 g, 34.55 mmol), proizvoda iz dobijanja 7 (30,7 g, 1.3 ekv), Cs2CO3(33,8 g, 3.0 ekv), i Pd(AtaPhos)2Cl2(1,53 g, 0.1 ekv) u 1,4-dioksanu (207 mL) i H2O (34,5 mL) se meša na 80 °C tokom 1,5 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (18,5 g, 58%).
[0331]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.98 (t, 1H), 6.63 (d, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.35 (s, 2H), 1.27/1.2 (m+m, 4H), 1.15/1.09 (m+m, 4H), 1.05/0.97 (m+m, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C50H63Cl2N6O4Si: 909.4057 nađeno: 909.4053.
Korak B: metil 6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-3-[5-metil-1-[[[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat [0332] Smeša od proizvoda iz koraka A (18,5 g, 20.3 mmol), Cs2CO3(13,2 g, 2 ekv), DIPEA (7,1 mL, 2 ekv), i Pd(Ataphos)2Cl2(900 mg, 0.1 ekv) u 1,4-dioksanu (102 mL) se meša na 110 °C tokom 18 h. Nakon ceđenja i koncentrovanja, ostatak se uzima sa DCM, ispere vodom, i prečišćava hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (12,6 g, 71%).
[0333]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.66 (dm, 4H), 7.47-7.36 (m, 6H), 7.38 (s, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.99 (br., 2H), 1.38 (s, 2H), 1.32-0.96 (br., 10H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 120.5, 64.4, 61.7, 58.9, 52.3, 46.0, 43.4, 30.2, 27.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C50H62ClN6O4Si: 873.4290 nađeno: 873.4291.
Korak C: metil 6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0334] U proizvod iz koraka B (8,46 g, 9.68 mmol) u THF (95 mL) se dodaje 1 M rastvor TBAF u THF (10,6 mL, 1.1 ekv) na 0 °C i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Nakon gašenja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i MeOH kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (5,38g, 88%).
[0335]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.86 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.42-0.95 (m, 12H), 0.87 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H44ClN6O4: 635.3113 nađeno: 635.3112.
Korak D: metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0336] Korišćenjem Buchwald-ovog opšteg postupka I na 130 °C tokom 1 h, polazeći od 3,7 g proizvoda iz koraka C (5.78 mmol) i 1,74 g 1,3-benzotiazol-2-amina (2 ekv), dobija se 3,1 g željenog proizvoda (72% prinos).
[0337]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.82 (br., 1H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (brt., 2H), 3.35 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.42-0.96 (m, 12H), 0.87 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 126.4, 122.4, 122.1, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.6, 45.4, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C41H49N8O4S: 749.3597 nađeno: 749.3595.
Korak E: metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0338] U proizvod iz koraka D (3,85 g, 5.14 mmol) i trietilamina (2,15 mL, 3 ekv) u DCM (50 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (2,51 g, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (3,2 g, 69%).
[0339]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.81 (br., 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.32-0.93 (m, 12H), 0.84 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 126.4, 122.4, 122.1, 119, 71.5, 58.8, 58.4, 52.6, 45.4, 30.1, 24.3, 21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C48H55N8O6S2: 903.3686 nađeno: 903.3685.
Dobijanje 13: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[3-(p-tolilsulfoniloksi)propil]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
Korak A: (4-metoksifenil)metil 3-[1-[[3-[3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]piridin-2-karboksilat
[0340] Smeša od proizvoda iz dobijanja 11 (3,67 g, 6.79 mmol), proizvoda iz dobijanja 8 (5,09 g, 1.1 ekv), Pd(AtaPhos)2Cl2(301 mg, 0.1 ekv), i Cs2CO3(6,64 g, 3 ekv) u 1,4-dioksanu (41 mL) i H2O (6,8 mL) se meša na 80 °C tokom 18 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (4,43 g, 64%).
[0341]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.62-7.38 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.63 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.58 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.43 (m, 2H), 1.18-0.85 (m, 12H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C58H71Cl2N6O4Si: 1013.4683 nađeno: 1013.4683;
Korak B: (4-metoksifenil)metil 3-[1-[[3-[3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)piridin-2-karboksilat
[0342] Smeša od proizvoda iz koraka A (4,43 g, 4.37 mmol), Cs2CO3(2,84 g, 2 ekv), DIPEA (1,5 mL, 2 ekv) i Pd(Ataphos)2Cl2(193 mg, 0.1 ekv) u 1,4-dioksanu (22 mL) se meša na 110 °C tokom 18 h. Nakon gašenja sa vodom i ekstrahovanja sa EtOAc, spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (2,83 g, 66%).
[0343]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.59 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 7.38 (s, 1H), 7.14 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.59 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.43 (qn, 2H), 1.12 (s, 4H), 1.10 (s, 2H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.95 (s, 2H), 0.94/0.91 (d+d, 4H), 0.78 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.9, 159.6, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.5, 137.3, 136.0, 135.5, 133.8, 130.3, 130.1, 129.1, 128.3, 127.6, 123.1, 120.5, 115.5, 114.3, 66.8, 64.8, 64.8, 59.6, 55.6, 50.5, 48.1, 46.4, 46.0, 44.2, 39.3, 38.1, 31.7, 30.6, 27.2, 26.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C58H70ClN6O4Si: 977.4916 nađeno: 977.4915.
Korak C: (4-metoksifenil)metil 6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-3-[1-[[3-(3-hidroksipropil)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat [0344] U proizvod iz koraka B (2,83 g, 2.89 mmol) u THF (95 mL) se dodaje 1 M rastvor TBAF u THF (3,2 mL, 1.1 ekv) na 0 °C i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Nakon gašenja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrakcije sa EtOAc, spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, koncentruju, i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i MeOH kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (2,21 g, 103%).
[0345]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.17 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.32 (q, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.13 (s, 2H), 1.13 (s, 4H), 1.06 (t, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.97 (s, 2H), 0.78 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.9, 159.7, 156.4, 153.6, 150.8, 147.7, 140.2, 137.5, 137.3, 136.0, 130.2, 129.1, 127.6, 123.1, 120.4, 115.5, 114.3, 66.8, 66.8, 62.1, 59.7, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 46.0, 44.3, 39.7, 38.1, 31.8, 30.6, 26.5, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C42H52ClN6O4: 739.3739 nađeno: 739.3739.
Korak D: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-(3-hidroksipropil)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0346] Smeša od proizvoda iz koraka C (1,71 g, 2.31 mmol), 1,3-benzotiazol-2-amina (695 mg, 2 ekv), Pd2dba3(212 mg, 0.1 ekv), Xantphos (268 mg, 0.2 ekv), i DIPEA (1,2 mL, 3 ekv) u cikloheksanolu (14 mL) se meša na 130 °C tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan, DCM i MeCN kao eluenti) dalo je željeni proizvod (1,25g, 63%).
[0347]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.08/10.87 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.18 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.33 (q, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.14 (s, 4H), 1.14 (s, 2H), 1.07 (t, 2H), 1.00/0.95 (d+d, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.79 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.2, 126.4, 122.4, 122.0, 119.0, 114.3, 66.7, 62.1, 59.6, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 45.4, 44.3, 39.7, 30.6, 26.5, 24.3, 21.7, 12.6, 11.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C49H57N8O4S: 853.4223 nađeno: 853.4229.
Korak E: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[3-(p-tolilsulfoniloksi)propil]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0348] U proizvod iz koraka D (1,25 g, 1.47 mmol) i trietilamina (0,61 mL, 3 ekv) u DCM (15 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (717 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je 800 mg (54%) željenog proizvoda.
[0349]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.88 (brs, 1H), 7.77 (m, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (brs, 1H), 7.17 (brs, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.98 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.17-0.8 (m, 12H), 0.98 (m, 2H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z):
[M+H]+ izračunato za C56H63N8O6S2: 1007.4312 nađeno: 1007.4318.
Dobijanje 14: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
Korak A: (4-metoksifenil)metil 3-[1-[[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]piridin-2-karboksilat [0350] Smeša od proizvoda iz dobijanja 11 (3,67 g, 6.79 mmol), proizvoda iz dobijanja 9 (4,89 g, 1.1 ekv), Pd(AtaPhos)2Cl2(301 mg, 0.1 ekv), i Cs2CO3(6,64 g, 3 ekv) u 1,4-dioksanu (41 mL) i H2O (6,8 mL) se meša na 80 °C tokom 12 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (3,0 g, 45%).
[0351]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.12 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.62 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.65-1.33 (m, 12H), 0.97 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C55H65C12N6O5Si: 987.4163 nađeno: 987.4158. Korak B: (4-metoksifenil)metil 3-[1-[[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)piridin-2-karboksilat
[0352] Smeša od proizvoda iz koraka A (3,00 g, 3.00 mmol), Cs2CO3(1,95 g, 2 ekv), DIPEA (1,0 mL, 2 ekv), i Pd(Ataphos)2Cl2(212 mg, 0.1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se meša na 110 °C tokom 18 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i MeOH kao eluenti) dalo je željeni proizvod (1,74 g, 60%).
[0353]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.68-7.37 (m, 10H), 7.36 (s, 1H), 7.16 (m, 2H), 6.87 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.46 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.65-1.37 (m, 12H), 0.97 (s, 9H);
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C55H64ClN6O5Si: 951.4396 nađeno: 951.4397.
Korak C: (4-metoksifenil)metil 6-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0354] U proizvod iz koraka B (1,73 g, 1.82 mmol) u THF (20 mL) se dodaje 1 M rastvor TBAF u THF (2,0 mL, 1.1 ekv) na 0 °C i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i MeOH kao eluenti) dalo je željeni proizvod (1,06 g, 82%).
[0355]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.19 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.47 (t, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.67-1.36 (m, 12H); HRMS-ESI (m/z):
[M+H]+ izračunato za C39H46ClN6O5: 713.3218 nađeno: 713.3217.
Korak D: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0356] Smeša od proizvoda iz koraka C (1,00 g, 1.40 mmol), 1,3-benzotiazol-2-amina (421 mg, 2 ekv), Pd2dba3(128 mg, 0.1 ekv), Xantphos (162 mg, 0.2 ekv), i DIPEA (0,72 mL, 3 ekv) u cikloheksanolu (10 mL) se meša na 130 °C tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, heptan, zatim DCM i MeOH kao eluenti) dalo je željeni proizvod (600 mg, 53%).
[0357]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.18/10.84 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.83 (br, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (br, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.35 (brt, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.17 (brt, 1H), 6.91 (d, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.47 (brt, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.41 (brq, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.62/1.53 (d+d, 4H), 1.53 (s, 2H), 1.49/1.44 (d+d, 2H), 1.44 (s, 4H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 66.7, 61.9, 61.5, 59.5, 55.6, 45.4, 44.7, 40.8, 39.5, 35.6, 30.1, 24.3, 21.7, 12.6, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C46H51N8O5S: 827.3703 nađeno: 827.3709.
Korak E: (4-metoksifenil)metil 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[0358] U proizvod iz koraka D (600 mg,0.726 mmol) i N,N-dietiletanamina (0,31 mL, 3 ekv) u dihlormetanu (7 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (357 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 18 h. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, koristeći DCM i MeOH kao eluente) dalo je 354 mg (50%) željenog proizvoda.
[0359]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.22/10.85 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.52 (br, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.89 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (t, 2 H), 4.00 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.55-1.36 (m, 12H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.5, 130.3, 128.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 71.4, 66.8, 59.4, 58.2, 55.6, 45.4, 30.0, 24.2, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C53H57N8O7S2: 981.3792 nađeno: 981.3795.
Dobijanje 15: etil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
Korak A: 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0360] Smeša od proizvoda iz dobijanja 3a (35,39 g, 81.52 mmol) i LiOH3H2O (4 ekv) u 1,4-dioksanu (408 mL) i voda (82 mL) se meša na 60 °C tokom 1 h. Nakon gašenja sa 1 M rastvora HCl i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju fleš hromatografijom (silikagel, koristeći DCM i MeOH kao eluente) da bi se dobio željeni proizvod (27,7 g, 81%).
[0361]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.43 (brd., 1H), 6.96 (t, 1H), 4.18 (t, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.97 (m, 2H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.4, 154.8, 152.1, 151.8, 151.1, 147.1, 143.9, 135.7, 134.0, 133.8, 129.0, 124.9, 117.6, 82.3, 68.8, 46.3, 31.0, 24.0, 22.5, 19.8, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C21H20ClFIN4O3S: 588.9973 nađeno: 588.9969.
Korak B: etil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
[0362] U smešu od proizvoda iz koraka A (27,7 g, 65.9 mmol), etanola (2 ekv) i PPh3(2 ekv) u toluenu (660 mL) i THF (20 ml) se dodaje u kapima diizopropil azodikarboksilat (2 ekv) i reakcija se meša na 50 °C 1 h. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, koristeći heptan i EtOAc kao eluente) dalo je željeni proizvod (23,65 g, 66,4%).
[0363]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.59 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.29 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.24 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.28 (t, 3H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 162.6, 155.4, 152.2, 151.7, 151.3, 147.0, 134.0, 124.9, 117.6, 82.4, 68.3, 60.7, 46.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7, 14.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C23H24ClFIN4O3S: 617.0286, nađeno: 617.0282.
Primer 1: 2-16-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-1,2,3,4-tetrahidrohinolin-1-il1-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0364]
Korak A: etil 2-(6-bromo-1,2,3,4-tetrahidrohinolin-1-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0365] U rastvor benzoil izotiocijanata (380 µL, 2.83 mmol, 1.2 ekv) u acetonu (10 mL) se dodaje 6-bromo-1,2,3,4-tetrahidrohinolina (500 mg, 2.36 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Smeša se sipa u ledenu vodu i talog se procedi, ispere vodom i suši da se dobije bledo žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se dodaje u 1N vodeni natrijum hidroksid (10 mL) i suspenzija se zagreva na 80 °C tokom 30 min, hladi na temperaturu okoline i sipa u hladnu 1N vodenu hlorovodoničnu kiselinu. PH se podešava na pH 8 sa zasićenim vodenim natrijum karbonatom i čvrste supstance se sakupe ceđenjem i isperu vodom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Suspenzija čvrste supstance i etil bromopiruvata (296 µL, 2.36 mmol, 1 ekv) u etanolu (10 mL) se zagreva na refluksu tokom 2 h. Smeša se ostavi da se ohladi na temperature okoline, zatim podeli između etil acetata i vode. Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL) a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (232 mg, 0.63 mmol, 27%).
LC/MS (C15H15BrN2O2S) 367 [M+H]<+>; RT 1.42 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (d, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.53 -7.48 (m, 1H), 7.44 -7.38 (m, 1H), 4.27 (q, 2H), 3.83 (t, 2H), 2.83 -2.73 (m, 2H), 2.00 -1.90 (m, 2H), 1.29 (t, 3H).
Korak B: etil 2-{6-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1,2,3,4-tetrahidrohinolin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0366] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (93,8 mg, 0.26 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazola (46,0 mg, 0.31 mmol, 1.2 ekv), cezijum karbonat (166 mg, 0.51 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (4 mL), i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda BrettPhos (13,7 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (23,4 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv), i zagreva na 120 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (85,1 mg, 0.19 mmol, 76%).
LC/MS (C22H20N4O2S2) 437 [M+H]<+>; RT 1.40 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (d, 1H), 7.83 -7.78 (m, 1H), 7.69 -7.65 (m, 1H), 7.63 -7.57 (m, 2H), 7.36 -7.29 (m, 1H), 7.18 -7.13 (m, 1H), 7.03 -6.98 (m, 1H), 4.28 (q, J = 7.08 Hz, 2H), 3.92 -3.84 (m, 2H), 2.80 (t, J = 6.30 Hz, 2H), 2.00 -1.89 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.09 Hz, 2H).
Korak C: 2-{6-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1,2,3,4-tetrahidrohinolin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0367] U rastvor proizvoda iz koraka B (85,1 mg, 0.19 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (2 mL) i metanola (1 mL), se dodaje a 1N vodeni natrijum hidroksid (0,39 mL, 0.39 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 3 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -6% metanol u dihlormetanu dalo je materijal koji se dalje prečišćava preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (1,2 mg, 1,5%).
[0368] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C20H17N4O2S2: 409.0793, nađeno 409.0830
Primer 2: 2-{5-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0369]
Korak A: metil 2-(5-bromo-1H-indol-1-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0370] U ohlađen rastvor 5-bromoindola (150 mg, 0.77 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (2 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 36,7 mg, 1.53 mmol, 2 ekv) u porcijama i smeša se meša na 0 °C tokom 30 min, pre nego što se doda metil 2-hloro-4-tiazolkarboksilat (272 mg, 1.53 mmol, 2 ekv), zatim se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (3 x 30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (72,8 mg, 0.22 mmol, 28%).
LC/MS (C13H9BrN2O2S) 339 [M+H]<+>; RT 1.35 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.41 -8.38 (m, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.02 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 3.5, 0.8 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H). Korak B: metil 2-[5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0371] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (72,8 mg, 0.22 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (38,9 mg, 0.26 mmol, 1.2 ekv), cezijum karbonat (141 mg, 0.43 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (2 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda BrettPhos (11,6 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (19,8 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv), zatim zagreva na 120 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca (10,5 mg, 0.03 mmol, 12%).
LC/MS (C20H14N4O2S2) 407 [M+H]<+>; RT 1.35 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.847.78 (m, 1H), 7.67 -7.57 (m, 2H), 7.39 -7.30 (m, 2H), 7.20 -7.12 (m, 1H), 6.92 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
Korak C: 2-{5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0372] U rastvor proizvoda iz koraka B (10,5 mg, 0 mol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (2 mL) i metanola (1 mL) se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,05 mL, 0.05 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) dalo je željeni proizvod kao kremastu čvrstu supstancu (3,5 mg, 0.01 mmol, 35%).
[0373] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C19H13N4O2S2: 393.0480, nađeno 393.0503
Primer 3: 2-{5-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-2,3-dihidro-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0374]
Korak A: etil 2-(5-bromo-2,3-dihidro-1H-indol-1-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0375] U rastvor benzoil izotiocijanata (0,33 mL, 2.42 mmol, 1.2 ekv) u acetonu (10 mL) se dodaje 5-bromoindolin (400 mg, 2.02 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se sipa u ledenu vodu i talog se procedi, ispere vodom i suši da se dobije bledo žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se dodaje u 1N vodeni natrijum hidroksid (10 mL) i suspenzija se zagreva na 80 °C tokom 30 min, ostavi da se ohladi do temperature okoline i sipa u hladnu 1N vodenu hlorovodoničnu kiselinu. PH se podešava na pH 8 sa zasićenim vodenim natrijum karbonatom, i čvrste supstance se sakupe ceđenjem i isperu vodom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Suspenzija čvrste supstance i etil bromopiruvata (253 mL, 2.02 mmol, 1 ekv) u etanolu (10 mL) se zagreva na refluksu tokom 2 h zatim ostavi da se ohladi do temperature okoline. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (377 mg, 1.07 mmol, 53%).
LC/MS (C14H13BrN2O2S) 353 [M+H]<+>; RT 1.39 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.57 -7.53 (m, 1H), 7.47 -7.44 (m, 1H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.34 -3.26 (m, 2H), 1.31 (t, 3H).
Korak B: etil 2-{5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-2,3-dihidro-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0376] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (100 mg, 0.28 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (51,0 mg, 0.34 mmol, 1.2 ekv), cezijum karbonat (129 mg, 0.4 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (2 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda BrettPhos (10,6 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (18,2 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv), zatim zagreva na 120 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao braon guma (29,8 mg, 0.07 mmol, 36%).
LC/MS (C21H18N4O2S2) 423 [M+H]<+>; RT 1.38 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (d, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83 -7.78 (m, 1H), 7.61 -7.57 (m, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.33 -7.28 (m, 1H), 7.18 -7.10 (m, 1H), 7.00 (td, J = 1.24, 7.55 Hz, 1H), 4.31 (q, J = 7.12 Hz, 2H), 4.13 -4.06 (m, 2H), 3.43 -3.34 (m, 2H), 1.33 (t, J = 7.12 Hz, 3H).
Korak C: 2-[5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-2,3-dihidro-1H-indol-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0377] U rastvor proizvoda iz koraka B (29,8 mg, 0.07 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (2 mL) i metanola (1 mL), se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,14 mL, 0.14 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% metanol u dihlormetanu dalo je materijal koji se dalje prečišćava preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (3,7 mg, 0.01 mmol, 13%).
[0378] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C19H15N4O2S2: 395.0636, nađeno 395.0659
Primer 4: 2-{7-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoksazin-4-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0379]
Korak A: etil 2-(7-bromo-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoksazin-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0380] U rastvor benzoil izotiocijanata (301 µL, 2.24 mmol, 1.2 ekv) u acetonu (10 mL) se dodaje 7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin (400 mg, 1.87 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se sipa u ledenu vodu i talog se procedi, ispere vodom i suši da se dobije bledo žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se dodaje u 1N natrijum hidroksid (10 mL) i suspenzija se zagreva na 80 °C tokom 30 min, hladi na temperaturu okoline i sipa u hladnu 1N vodenu hlorovodoničnu kiselinu. PH se podešava na pH 8 sa zasićenim vodenim natrijum karbonatom, čvrste supstance se sakupe ceđenjem i isperu vodom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Suspenzija čvrste supstance i etil bromopiruvata (235 µL, 1.87 mmol, 1 ekv) u etanolu (10 mL) se zagreva na refluksu tokom 2 h zatim ostavi da se ohladi do temperature okoline. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu 0 -20% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (264 mg, 0.71 mmol, 38%).
LC/MS (C14H13BrN2O3S) 369 [M+H]<+>; RT 1.36 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (d, J = 8.76 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.26 -7.11 (m, 2H), 4.37 -4.21 (m, 4H), 4.07 -3.99 (m, 2H), 1.29 (t, 3H).
Korak B: etil 2-{7-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoksazin-4-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0381] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (173 mg, 0.47 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (105 mg, 0.7 mmol, 1.5 ekv), kalijum terc-butoksid (105 mg, 0.94 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (5 mL), i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda BrettPhos (37,7 mg, 0.07 mmol, 0.15 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (42,9 mg, 0.05 mmol, 0.1 ekv), zatim zagreva na 140 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bledo žutu čvrstu supstancu (91,4 mg, 0.21 mmol, 45%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0382] LC/MS (C21H18N4O3S2) 439 [M+H]<+>; RT 1.35 (LCMS-V-B1)
Korak C: 2-{7-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoksazin-4-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0383] U rastvor proizvoda iz koraka B (91,4 mg, 0.21 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (3 mL) i metanola (1 mL), se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,42 mL, 0.42 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A1) dalo je željeni proizvod kao kremastu čvrstu supstancu (1,5 mg, 2%).
LC/MS (C19H14N4O3S2) 411 [M+H]<+>; RT 1.18 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.69 -7.59 (m, 3H), 7.33 (td, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.16 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 4.5 Hz, 2H).
HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C19H15N4O3S2: 411.0586, nađeno 411.0610 Primer 5: 6-{5-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-1H-indol-1-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0384]
Korak A: 6-(5-jodo-1H-indol-1-il)piridin-2-karboksilna kiselina
[0385] U mešani rastvor 5-jodoindola (170 mg, 0.7 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) / dimetilformamid (1 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 20,1 mg, 0.84 mmol, 1.2 ekv) u porcijama tokom 20 minuta, zatim se smeša meša tokom 30 min pre nego što se doda etil 6-hloropikolinat (143 mg, 0.77 mmol, 1.1 ekv) i meša na 70 °C preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (3 x 30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (38,3 mg, 0.11 mmol, 15%).
LC/MS (C14H9IN2O2) 365 [M+H]<+>; RT 1.22 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.47 (s, 1H), 8.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.20 -8.17 (m, 1H), 8.16 -8.13 (m, 1H), 8.08 -8.02 (m, 2H), 7.93 (dd, J = 7.5, 0.8 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 1.8 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 3.6, 0.7 Hz, 1H).
Korak B: 6-{5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-indol-1-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0386] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (38,3 mg, 0.11 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (19 mg, 0.13 mmol, 1.2 ekv), natrijum terc-butoksid (20,2 mg, 0.21 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (2 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda BrettPhos (5,65 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (9,63 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv), zatim zagreva na 140 °C tokom 4 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (0,8 mg, 2%).
[0387] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C21H15N4O2S: 387.0916, nađeno 387.0943
Primer 6: 2-{5-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-1H-pirolo[2,3-b]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0388]
Korak A: etil 2-{5-bromo-1H-pirolo[2,3-b]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0389] U rastvor 5-bromo-1H-pirolo[2,3-b]piridina (250 mg, 1.27 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) i dimetilformamida (2 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 36,5 mg, 1.52 mmol, 1.2 ekv) u porcijama tokom 20 min i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 30 min pre nego što se doda etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilat (449 mg, 1.9 mmol, 1.5 ekv). Smeša se zagreva na refluksu tokom 2 h zatim ostavi da se ohladi do temperature okoline i nastali talog se sakupi ceđenjem i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (300 mg, 0.85 mmol, 67%).
LC/MS (C13H10BrN3O2S) 352 [M+H]<+>; RT 1.41 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.33 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.34 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-[5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]1H-pirolo[2,3-b]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0390] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (200 mg, 0.57 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (128 mg, 0.85 mmol, 1.5 ekv), cezijum karbonat (370 mg, 1.14 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (3 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (52 mg, 0.06 mmol, 0.1 ekv) i Xantphos (64,8 mg, 0.12 mmol, 0.2 ekv) zatim zagreva na 120 °C tokom 6 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je sirovi željeni proizvod kao žutu gumu koji se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0391] LC/MS (C20H15N5O2S2) 422 [M+H]<+>; RT 1.37 (LCMS-V-B1)
Korak C: 2-{5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-pirolo[2,3-b]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0392] U rastvor proizvoda iz koraka B (61,2 mg, 0.15 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (3 mL) i metanola (1 mL), se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,29 mL, 0.29 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu a ostatak suspenduje u vodi i zakišeljava do pH 6 sa 1N vodenom hlorovodoničnom kiselinom. Smeša se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C18 5,5g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (2,5 mg, 0.01 mmol, 4%).
[0393] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C18H12N5O2S2: 394.0432, nađeno 394.0459
Primer 7: 2-{5-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-1H-pirolo[2,3-c]piridin-1-il]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0394]
Korak A: etil 2-{5-hloro-1H-pirolo[2,3-c]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0395] U rastvor 5-hloro-1H-pirolo[2,3-c]piridina (300 mg, 1.97 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) i dimetilformamida (2 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 56,6 mg, 2.36 mmol, 1.2 ekv) u porcijama tokom 20 min i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 30 min, pre nego što se doda etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilat (696 mg, 2.95 mmol, 1.5 ekv) i zagreva na refluksu tokom 2 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i nastali talog se sakupi ceđenjem i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bledo braon čvrsta supstanca (518 mg, 1.68 mmol, 86%).
LC/MS (C13H10ClN3O2S) 308 [M+H]<+>; RT 1.19 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.48 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.33 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 3.5, 0.8 Hz, 1H), 4.37 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-[5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-pirolo[2,3-c]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0396] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (300 mg, 0.97 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (220 mg, 1.46 mmol, 1.5 ekv), cezijum karbonat (635 mg, 1.95 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (7 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (89,3 mg, 0.1 mmol, 0.1 ekv) i Xantphos (113 mg, 0.19 mmol, 0.2 ekv) zatim zagreva na 130 °C tokom 8 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (17,3 mg, 0.04 mmol, 4%).
LC/MS (C20H15N5O2S2) 422 [M+H]<+>; RT 1.34 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.52 (s, 1H), 9.53 (t, J = 0.9 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.22 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54 -7.49 (m, 1H), 7.40 -7.27 (m, 1H), 7.21 -7.14 (m, 1H), 6.94 (dd, J = 3.5, 0.7 Hz, 1H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3H). Korak C: 2-{5-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-1H-pirolo[2,3-c]piridin-1-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0397] U rastvor proizvoda iz koraka B (17,3 mg, 0.04 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (3 mL) i metanola (1 mL), se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,08 mL, 0.08 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu a ostatak se suspenduje u vodi i zakišeljava do pH 7 sa 1N vodenom hlorovodoničnom kiselinom. Čvrste supstance se sakupe ceđenjem, isperu sa metanolom, zatim dietil etrom, i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (9,1 mg, 0.02 mmol, 56%).
[0398] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C18H12N5O2S2: 394.0432, nađeno 394.0452 Primer 8: 2-13-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}1-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0399]
Korak A: etil 2-{3-hloro-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0400] U rastvor 3-hloro-7H-pirolo[2,3-c]piridazina (285 mg, 1.86 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) i dimetilformamida (2 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 53,4 mg, 2.23 mmol, 1.2 ekv) u porcijama tokom 20 min, zatim se smeša meša na temperaturi okoline tokom 30 min, pre nego što se doda etil 2-hlorotiazol-4-karboksilat (533 mg, 2.78 mmol, 1.5 ekv) i zagreva na refluksu tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 40 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao čvrstu supstancu boje breskve (388 mg, 1.26 mmol, 68%).
LC/MS (C12H9ClN4O2S) 309 [M+H]<+>; RT 1.14 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 6.97 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0401] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (388 mg, 1.26 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (283 mg, 1.89 mmol, 1.5 ekv), cezijum karbonat (819 mg, 2.51 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (10 mL) i smeša se prska azotom (10 min) pre nego što se doda tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (115 mg, 0.13 mmol, 0.1 ekv) i Xantphos (145 mg, 0.25 mmol, 0.2 ekv), zatim zagreva na 130 °C tokom 6 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (30 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (112 mg, 0.27 mmol, 21%).
LC/MS (C19H14N6O2S2) 423 [M+H]<+>; RT 1.29 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.84 (s, 1H), 8.58 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71 -7.63 (m, 1H), 7.40 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.24 (td, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0402] U rastvor proizvoda iz koraka B (112 mg, 0.27 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (5 mL) i metanola (1.5 mL) se dodaje 1N vodeni natrijum hidroksid (0,53 mL, 0.53 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, ostatak se suspenduje u vodi, i čvrste supstance se sakupe ceđenjem. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C185,5g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca (4,9 mg, 0.01 mmol, 5%).
[0403] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C17H11N6O2S2: 395.0385, nađeno 395.0406
Primer 9: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-[3-(2-fluorofenoksi)-propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0404]
Korak A: etil 5-bromo-2-acetamido-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0405] U rastvor etil 2-amino-5-bromotiazol-4-karboksilata (4 g, 15.9 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (70 mL) se dodaje anhidrid sirćetne kiseline (1,65 mL, 17.5 mmol, 1.1 ekv) i 4-dimetilaminopiridin (2,24 g, 18.3 mmol, 1.15 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, zatim ispere vodom zatim rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Nastala čvrsta supstanca se trituriše sa dietil etrom, cedi, i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (4,15 g, 14.15 mmol, 89%).
LC/MS (C8H9BrN2O3S) 294 [M+H]<+>; RT 0.82 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.80 (s, 1H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-acetamido-5-(3-hidroksiprop-1-in-1-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0406] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (813 mg, 0.7 mmol, 0.05 ekv) se dodaje u rastvor proizvoda iz koraka A (4,13 g, 14.1 mmol, 1 ekv), propargil alkohol (1,64 mL, 28.2 mmol, 2 ekv), trietilamin (5,87 mL, 42.2 mmol, 3 ekv) i bakar (I) jodid (0,27 g, 1.41 mmol, 0.1 ekv) u dimetilformamidu (60 mL) u atmosferi azota, i smeša se zagreva na 100 °C tokom 3 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao kremastu čvrstu supstancu (3 g, 11.2 mmol, 79%).
LC/MS (C11H12N2O4S) 269 [M+H]<+>; RT 0.63 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.80 (s, 1H), 5.45 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-acetamido-5-(3-hidroksipropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0407] Etil acetat (30 mL) i metanol (30 mL) se dodaju u balon koji sadrži proizvod iz koraka B (3 g, 11.2 mmol, 1 ekv) i platinu (IV) oksid hidrat (508 mg, 2.23 mmol, 0.2 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni i postavi u atmosferu vodonika i mućka na temperaturi okoline tokom 24 h. Reakcija se cedi kroz celit (10 g), eluira sa metanolom, a rastvarač se uklanja u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (1,89 g, 6.94 mmol, 62%).
LC/MS (C11H16N2O4S) 273 [M+H]<+>; RT 0.61 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.38 (s, 1H), 4.54 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.44 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 3.20 -3.08 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.82 -1.68 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: etil 2-amino-5-(3-hidroksipropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0408] U rastvor proizvoda iz koraka C (500 mg, 1.84 mmol, 1 ekv) u etanolu (15 mL) se dodaje hlorovodonična kiselina (4M u 1,4-dioksanu; 4,59 mL, 4 M, 18.4 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na 60 °C preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline a zatim koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (422 mg, 1.83 mmol, 100%).
LC/MS (C9H14N2O3S) 231 [M+H]<+>; RT 0.50 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (br s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.05 -2.96 (m, 2H), 1.76 -1.64 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak E: etil 2-bromo-5-(3-hidroksipropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0409] terc-Butil nitrat (0,26 mL, 2.2 mmol, 1.2 ekv) se dodaje u kapima u mešani rastvor bakar (II) bromida (491 mg, 2.2 mmol, 1.2 ekv) u acetonitrilu (6 mL) i smeša se zagreva do 60 °C zatim se polako dodaje suspenzija proizvoda iz koraka D (422 mg, 1.83 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (8 mL). Smeša se održava na 60 °C tokom 2 h zatim ostavi da se ohladi do temperature okoline i gasi dodavanjem 2N vodenog natrijum hidroksida, zatim ekstrahuje sa etil acetatom. Organski ekstrakt se ispere vodom, rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (271 mg, 0.92 mmol, 50%).
LC/MS (C9H12BrNO3S) 296 [M+H]<+>; RT 0.76 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.59 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.44 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.24 -3.15 (m, 2H), 1.81-1.69 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak F: etil 2-bromo-5-[3-(2-fluorofenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0410] Rastvor proizvoda iz koraka E (271 mg, 0.92 mmol, 1 ekv), 2-fluorofenol (0,12 mL, 1.38 mmol, 1.5 ekv) i trifenilfosfin (362 mg, 1.38 mmol, 1.5 ekv) u tetrahidrofuranu (10 mL) se ohladi u ledenom kupatilu zatim se polako dodaje diizopropil azodikarboksilat (0,27 mL, 1.38 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na 0 °C tokom 30 min zatim na temperaturi okoline tokom 3 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžasto ulje (302 mg, 0.78 mmol, 85%).
LC/MS (C15H15BrFNO3S) 390 [M+H]<+>; RT 1.23 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.26 -7.07 (m, 3H), 7.01 -6.88 (m, 1H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.09 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.39 -3.29 (m, 2H), 2.16 -2.03 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak G: etil 2-{3-hloro-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-[3-(2-fluorofenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0411] U mešani rastvor 3-hloro-7H-pirolo[2,3-c]piridazina (179 mg, 1.17 mmol, 1.5 ekv) u 1,4-dioksanu (10 mL) i dimetilformamida (3 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 22,4 mg, 0.93 mmol, 1.2 ekv) u porcijama tokom 20 minuta i smeša se meša tokom 30 min pre dodavanja proizvoda iz koraka F (302 mg, 0.78 mmol, 1 ekv) i meša na temperaturi okoline tokom 2 h i na refluksu preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca (122 mg, 0.27 mmol, 34%).
LC/MS (C21H18ClFN4O3S) 461 [M+H]<+>; RT 1.41 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.26 -7.07 (m, 3H), 6.99 -6.87 (m, 2H), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.48 -3.37 (m, 2H), 2.28 -2.14 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak H: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-[3-(2-fluorofenoksi)-propil]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0412] U mikrotalasnu bočicu se dodaje proizvod iz koraka G (122 mg, 0.27 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (59,7 mg, 0.4 mmol, 1.5 ekv), cezijum karbonat (173 mg, 0.53 mmol, 2 ekv), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (24,3 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv), Xantphos (15.3 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i 1,4-dioksan (7,5 mL), i smeša se zagreva na 120 °C tokom 6 h pod mikrotalasnim zračenjem. Smeša se podeli između etil acetata i vode, i vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 40 mL), ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (42,8 mg, 0.07 mmol, 28%).
LC/MS (C28H23FN6O3S2) 575 [M+H]<+>; RT 1.47 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.80 (br s, 1H), 8.53 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.69 -7.63 (m, 1H), 7.40 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.26 -7.16 (m, 3H), 7.15 -7.11 (m, 1H), 6.98 -6.91 (m, 2H), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.48 -3.39 (m, 2H), 2.28 -2.17 (m, 2H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak I: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-[3-(2-fluorofenoksi)-propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0413] U rastvor proizvoda iz koraka H (42,8 mg, 0.07 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje 1.25M vodeni litijum hidroksid (0,12 mL, 0.15 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 2 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (2,3 mg, 6%).
[0414] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C26H20FN6O3S2: 547.1022, nađeno 547.1010.
Primer 10: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0415]
Korak A: terc-butil 3-hloro-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-karboksilat
[0416] U rastvor N-(but-3-in-1-il)-6-hloro-1,2,4,5-tetrazin-3-amina (381 mg, 2.08 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (15 mL) se dodaju di-terc-butil dikarbonat (1,36 g, 6.23 mmol, 3 ekv) i 4-dimetilaminopiridin (12,7 mg, 0.1 mmol, 0.05 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao crvenu čvrstu supstancu (89 mg, 0.35 mmol, 17%).
LC/MS (C11H14ClN3O2) 256 [M+H]<+>; RT 2.06 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 8.9, 7.9 Hz, 2H), 3.10 (ddd, J = 9.4, 7.8, 1.6 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H).
Korak B: 3-hloro-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin
[0417] U rastvor proizvoda iz koraka A (89 mg, 0.35 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (3 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (1,5 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu zatim se napuni u metanolom navlažen SCX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, zatim eluira sa 1.4N metanolnim amonijakom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (51 mg, 0.33 mmol, 94%).
LC/MS (C6H6ClN3) 156 [M+H]<+>; RT 0.37 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.27 (br s, 1H), 7.24 -7.20 (m, 1H), 3.55 (td, J = 8.2, 1.1 Hz, 2H), 3.06 (ddd, J = 9.7, 7.8, 1.7 Hz, 1H).
Korak C: etil 2-[3-hloro-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0418] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (51 mg, 0.33 mmol, 1 ekv), etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilat (92,9 mg, 0.39 mmol, 1.2 ekv), trans-N,N’-dimetilcikloheksan-1,2-diamin (10,3 mL, 0.07 mmol, 0.2 ekv), bakar(I) jodid (6,24 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i trobazni kalijum fosfat (139 mg, 0.66 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (3 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim zagreva na 150 °C tokom 1 sata pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, cedi kroz celit, zatim ispere rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -3% metanola u dihlormetanu dalo je sirovi željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (19 mg, 0.06 mmol, 19%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0419] LC/MS (C12H11ClN4O2S) 311 [M+H]<+>; RT 2.24 (LCMS-V-C)
Korak D: etil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0420] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka C (19 mg, 0.06 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (13,8 mg, 0.09 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (7,08 mg, 0.01 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (39,8 mg, 0.12 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (3 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (5,6 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (9 mg, 0.02 mmol, 35%).
LC/MS (C19H16N6O2S2) 425 [M+H]<+>; RT 2.53 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 -7.89 (m, 1H), 7.69 -7.58 (m, 2H), 7.41 -7.35 (m, 1H), 7.33 -7.29 (m, 1H), 7.25 -7.15 (m, 1H), 4.40 -4.26 (m, 4H), 1.33 (t, 3H).
Korak E: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0421] U rastvor proizvoda iz koraka D (9 mg, 0.02 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (3,56 mg, 0.08 mmol, 4 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 6 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u metanolu i napuni u metanolom ispran PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 10:1 dihlormetan / mravlja kiselina, i koncentruje u vakuumu. Sirov materijal se trituriše sa dihlormetanom, cedi, i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (2,42 mg, 0.01 mmol, 29%), kao so mravlje kiseline.
[0422] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C17H13N6O2S2: 397.0541, nađeno 397.0529.
Primer 11: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0423]
Korak A: 3-hloro-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin
[0424] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (600 mg, 3.97 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (16 mL) se dodaju pent-3-in-1-amin hidrohlorid (475 mg, 3.97 mmol, 1 ekv) i trietilamin (553 µL, 3.97 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na 110 °C u zatvorenoj epruveti tokom 8 sati. Reakcija se razblaži sa metanolom, cedi kroz sloj celita, a filtrat se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom, i spojeni organski ekstrakti se suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (96 mg, 0.57 mmol, 14%).
LC/MS (C7H8ClN3) 170 [M+H]<+>; RT 0.54 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.12 (s, 1H), 3.56 (td, J = 8.4, 1.2 Hz, 2H), 3.04 (ddd, J = 9.2, 7.9, 1.3 Hz, 2H), 2.13 (d, J = 1.3 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0425] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (96 mg, 0.57 mmol, 1 ekv), etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilat (187 mg, 0.79 mmol, 1.4 ekv), trans-N,N’-dimetilcikloheksan-1,2-diamin (17,9 mL, 0.11 mmol, 0.2 ekv), bakar (I) jodid (10,8 mg, 0.06 mmol, 0.1 ekv), trobazni kalijum fosfat (240 mg, 1.13 mmol, 2 ekv), i 1,4-dioksan (8 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (18 mg, 0.06 mmol, 10%).
LC/MS (C13H13ClN4O2S) 325 [M+H]<+>; RT 2.32 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 4.41 (dd, J = 8.8, 7.6 Hz, 2H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.34 -3.27 (m, 2H), 2.29 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0426] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (27 mg, 0.08 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (18,7 mg, 0.12 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (9,62 mg, 0.02 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (54,2 mg, 0.17 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (4 mL), i posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (7,61 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, zatim ispere rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (15 mg, 0.03 mmol, 41%).
LC/MS (C20H18N6O2S2) 439 [M+H]<+>; RT 2.67 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 4.31 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.32 -3.21 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0427] U rastvor proizvoda iz koraka C (15 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (5,74 mg, 0.14 mmol, 4 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 3 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, napuni u metanolom ispran PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (9,03 mg, 0.02 mmol, 64%).
[0428] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C18H15N6O2S2: 411.0698, nađeno 411.0701.
Primer 12: 2-13-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0429]
Korak A: pent-4-in-1-il metansulfonat
[0430] U rastvor 4-pentin-1-ola (3,32 mL, 35.7 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (60 mL) se dodaje trietilamin (6,45 mL, 46.4 mmol, 1.3 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C pre nego što se u kapima doda metansulfonil hlorid (3,31 mL, 42.8 mmol, 1.2 ekv) i meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, a organska faza se ispire uzastopno sa zasićenim natrijum bikarbonatom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao ćilibarno ulje (5,8 g, 35.8 mmol, 100%).
[0431]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.26 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H), 2.88 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 2.29 (td, J = 7.1, 2.7 Hz, 2H), 1.91 -1.80 (m, 2H).
Korak B: 5-azidopent-1-in
[0432] U rastvor proizvoda iz koraka A (5,8 g, 35.8 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (30 mL) se dodaje natrijum azid (5,81 g, 89.4 mmol, 2.5 ekv) i smeša se zagreva na 70 °C tokom 3 h. Reakcija se razblaži sa vodom, vodena faza se ekstrahuje sa dietil etrom (x3), i spojeni organski se suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (5,65 g, 51.8 mmol, >100%).
[0433]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.42 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.85 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 2.25 (td, J = 7.0, 2.7 Hz, 2H), 1.75 -1.64 (m, 2H).
Korak C: pent-4-in-1-amin
[0434] Rastvor proizvoda iz koraka B (3,9 g, 35.7 mmol, 1 ekv) u dietil etru (40 mL) se ohladi na 0 °C, dodaje se trifenilfosfin (14,1 g, 53.6 mmol, 1.5 ekv) i reakcija meša na 0 °C tokom 6 h. Reakcija se gasi dodavanjem vode (5 mL) i meša na temperaturi okoline preko noći. Smeša se sipa u 4N vodenu hlorovodoničnu kiselinu (300 mL) i ekstrahuje sa dietil etrom (x3). Vodena faza se alkalizuje sa dodavanjem u porcijama natrijum hidroksida i dalje ekstrahuje sa dietil etrom (x2). Spojeni organski ekstrakti se suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (1,51 g, 18.16 mmol, 51%).
[0435]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.73 (t, 1H), 2.58 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.19 (td, J = 7.2, 2.7 Hz, 2H), 1.55 -1.44 (m, 2H).
Korak D: etil 2-[(pent-4-in-1-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0436] U rastvor etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilata (750 mg, 3.18 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (15 mL) se dodaju proizvod iz koraka C (396 mg, 4.77 mmol, 1.5 ekv) i trietilamin (0,66 mL, 4.77 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na 150 °C tokom 10 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (MgSO4) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu čvrstu supstancu (263 mg, 1.1 mmol, 35%).
LC/MS (C11H14N2O2S) 239 [M+H]<+>; RT 2.20 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.28 (td, J = 6.9, 5.4 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 2.25 (td, J = 7.1, 2.7 Hz, 2H), 1.73 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak E: etil 2-{3-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0437] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (103 mg, 0.68 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (12 mL) se dodaje proizvod iz koraka D (163 mg, 0.68 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na 90 °C preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (141 mg, 0.43 mmol, 64%).
LC/MS (C13H13ClN4O2S) 325 [M+H]<+>; RT 2.42 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.08 (s, 1H), 7.77 -7.71 (m, 1H), 4.40 -4.33 (m, 2H), 4.30 (q, 2H), 2.94 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.11 -2.00 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak F: etil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0438] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka E (141 mg, 0.43 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (97,8 mg, 0.65 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (50,2 mg, 0.09 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (283 mg, 0.87 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (15 mL) i posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (39,8 mg, 0.04 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (29 mg, 0.07 mmol, 15%).
LC/MS (C20H18N6O2S2) 439 [M+H]<+>; RT 2.64 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.66 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42 (dt, J = 15.0, 7.2 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.41 -4.24 (m, 4H), 2.96 (t, 2H), 2.12 -2.02 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak G: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0439] U rastvor proizvoda iz koraka F (29 mg, 0.07 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (13,9 mg, 0.33 mmol, 5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, zatim napuni u metanolom ispran PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina, i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše dihlormetanom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (9,86 mg, 0.02 mmol, 36%), kao so mravlje kiseline.
[0440] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C18H15N6O2S2: 411.0698, nađeno 411.0722
Primer 13: 5-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0441]
Korak A: etil 5-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0442] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a (98 mg, 0.15 mmol, 1 ekv), proizvod iz dobijanja 5a (64,7 mg, 0.18 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (62,7 mg, 0.45 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (11,1 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (3 mL) i voda (1 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organski sloj se ispere vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (57 mg, 0.07 mmol, 47%).
[0443]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.78 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.76 -3.67 (m, 2H), 3.45 -3.36 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.02 -1.90 (m, 3H), 1.73 -1.52 (m, 12H), 1.16 (t, 3H), 0.96 -0.87 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 5-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0444] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka A (57 mg, 0.07 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (6 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,6 mL) i nakon 10 min smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (17 mg, 0.03 mmol, 36%).
LC/MS (C35H38N8O2S2) 667 [M+H]<+>; RT 1.55 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 -7.44 (m, 2H), 7.42 -7.31 (m, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.18 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.34 -3.24 (m, 2H), 2.34 (d, J = 3.4 Hz, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.02 -1.93 (m, 3H), 1.74 -1.51 (m, 12H), 1.18 (t, 3H).
Korak C: 5-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0445] U rastvor proizvoda iz koraka B (17 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (10,7 mg, 0.25 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, napuni u metanolom ispran PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina, i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dietil etrom i acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (2,4 mg, 3.7 mmol, 15%).
[0446] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H35N8O2S2: 639.2324, nađeno 639.2310
Primer 14: 2-13-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1-{[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0447]
Korak A: etil 5-(1-{[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-2-(4-metil-3-{[(2Z)3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0448] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a (34 mg, 0.05 mmol, 1 ekv), proizvod iz dobijanja 5b (25,5 mg, 0.06 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (21,8 mg, 0.16 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (3,84 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (3 mL) i voda (1 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organski sloj se ispere vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (29 mg, 0.03 mmol, 65%).
LC/MS (C43H60N8O4SiS2) 845 [M+H]<+>; RT 1.79 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (d,1 H), 7.58 (s, 1H), 7.49 -7.38 (m, 2H), 7.27 -7.19 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.77 -3.66 (m, 2H), 3.45 -3.34 (m, 2H), 3.31 -3.26 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.74 -1.48 (m, 8H), 1.47 -1.20 (m, 8H), 1.18 (t, 3H), 0.96 -0.87 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1{[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0449] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka A (29 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,9 mL) i nakon 10 min smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (13 mg, 0.02 mmol, 54%).
LC/MS (C37H46N8O3S2) 715 [M+H]<+>; RT 1.59 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 (s, 1H), 7.59 (br s s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.34 -3.26 (m, 6H), 3.25 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.73 -1.49 (m, 8H), 1.48 -1.21 (m, 8H), 1.18 (t, 3H).
Korak C: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1-{[1-(3-metoksipropil)ciklooktil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0450] U rastvor proizvoda iz koraka B (13 mg, 0.02 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (11,5 mg, 0.27 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h.
Reakcija se koncentruje u vakuumu, a ostatak se trituriše sa vodom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (5,64 mg, 0.01 mmol, 45%), kao litijumova so.
[0451] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C35H43N8O3S2: 687.2900, nađeno 687.2932
Primer 15: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0452]
Korak A: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0453] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3f (24 mg, 0.05 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (33,4 mg, 0.8 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 7 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u metanolu, napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (13,5 mg, 0.03 mmol, 60%), kao so mravlje kiseline.
[0454] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C19H17N6O2S2: 425.0854, nađeno 425.0845.
Primer 16: 2-13-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-6-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0455]
Korak A: etil 2-[(pent-4-in-2-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0456] U rastvor etil 2-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilata (1,87 g, 7.93 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (18 mL) se dodaju pent-4-in-2-amin (989 mg, 11.9 mmol, 1.5 ekv) i trietilamin (1,66 mL, 11.9 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na 170 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu.
Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (555 mg, 2.33 mmol, 29%).
LC/MS (C11H14N2O2S) 239 [M+H]<+>; RT 2.21 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 4.27 (q, 2H), 3.91 -3.79 (m, 1H), 2.89 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 2.51 -2.45 (m, 1H), 2.44 -2.41 (m, 1H), 1.30 -1.21 (m, 6H). Korak B: etil 2-{3-hloro-6-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0457] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (352 mg, 2.33 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (15 mL) se dodaje proizvod iz koraka A (555 mg, 2.33 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu a prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao crvenu čvrstu supstancu (124 mg, 0.38 mmol, 16%).
LC/MS (C13H13ClN4O2S) 325 [M+H]<+>; RT 2.39 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.71 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.11 -4.97 (m, 1H), 4.31 (q, J = 7.1, 1.4 Hz, 2H), 3.65 -3.53 (m, 1H), 3.00 -2.88 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.31 (t, 3H).
Korak C: etil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0458] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (124 mg, 0.38 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (86 mg, 0.57 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (44,2 mg, 0.08 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (249 mg, 0.76 mmol, 2 ekv), 1,4-dioksan (4 mL) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (35 mg, 0.04 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, zatim ispere rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (37 mg, 0.08 mmol, 22%).
LC/MS (C20H18N6O2S2) 439 [M+H]<+>; RT 2.62 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 -7.37 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.23 (td, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 5.07 -4.95 (m, 1H), 4.31 (q, 2H), 3.65 -3.52 (m, 1H), 3.03 -2.93 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0459] U rastvor proizvoda iz koraka C (37 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (8 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (53,1 mg, 1.27 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 7 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, zatim napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (10 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (24,8 mg, 0.06 mmol, 72%), kao so mravlje kiseline.
[0460] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C18H15N6O2S2: 411.0698, nađeno 411.0695.
Primer 17: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1-{[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0461]
Korak A: etil 5-(1-{[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0462] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a (37 mg, 0.06 mmol, 1 ekv), proizvod iz dobijanja 5c (25,8 mg, 0.07 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (23,7 mg, 0.17 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II) (4,18 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (3 mL) i voda (1 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrstu supstancu (22 mg, 0.03 mmol, 47%).
LC/MS (C41H56N8O4SiS2) 818 [M+H]<+>; RT 3.45 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 -7.74 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.76 -3.66 (m, 2H), 3.44 -3.36 (m, 2H), 3.343.25 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.60 -1.27 (m, 14H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.98 -0.85 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1-{[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0463] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka A (22 mg, 0 mol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (1,5 mL) i nakon 10 min smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (10 mg, 0.01 mmol, 54%).
LC/MS (C35H42N8O3S2) 688 [M+H]<+>; RT 3.02 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 -7.79 (m, 1H), 7.59 (br s s, 2H), 7.38 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.25 -7.13 (m, 1H), 4.38 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.34 -3.27 (m, 4H), 3.25 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.60 -1.45 (m, 6H), 1.44 -1.29 (m, 6H), 1.28 -1.22 (m, 2H), 1.18 (t, 3H).
Korak C: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(1-{[1-(3-metoksipropil)cikloheksil]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0464] U rastvor proizvoda iz koraka B (10 mg, 0.01 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (12,2 mg, 0.29 mmol, 20 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, trituriše sa vodom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (5,71 mg, 0.01 mmol, 60%).
[0465] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H39N8O3S2: 659.2587, nađeno 659.2577.
Primer 18: 2-{4-Metil-3-[(1,3-tiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0466]
Korak A: etil 2-[4-metil-3-[(1,3-tiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0467] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a, korak B (100 mg, 0.31 mmol, 1 ekv), 2-aminotiazol (46,3 mg, 0.46 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (35,6 mg, 0.06 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (201 mg, 0.62 mmol, 2 ekv), 1,4-dioksan (4 mL) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (28,2 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (23 mg, 0.06 mmol, 19%).
LC/MS (C16H16N6O2S2) 389 [M+H]<+>; RT 2.29 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.57 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.44 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.40 -4.32 (m, 2H), 4.29 (q, 2H), 3.30 -3.22 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.32 (t, 3H).
Korak B: 2-{4-metil-3-[(1,3-tiazol-2-il)amino]-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0468] U rastvor proizvoda iz koraka A (23 mg, 0.06 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (37,3 mg, 0.89 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h.
Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom i metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (8,84 mg, 0.02 mmol, 41%).
[0469] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C14H13N6O2S2: 361.0541, nađeno 361.0531.
Primer 19: 2-13-[(4,5-Dimetil-1,3-tiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0470]
Korak A: etil 2-{3-[(4,5-dimetil-1,3-tiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0471] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a, korak B (100 mg, 0.31 mmol, 1 ekv), 4,5-dimetil-1,3-tiazol-2-amin (59,2 mg, 0.46 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (35,6 mg, 0.06 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (201 mg, 0.62 mmol, 2 ekv), 1,4-dioksan (3 mL) zatim tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (28,2 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, zatim ispere rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (64 mg, 0.15 mmol, 50%).
LC/MS (C18H20N6O2S2) 417 [M+H]<+>; RT 2.42 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (s, 1H), 4.39 -4.21 (m, 4H), 3.25 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: 2-{3-[(4,5-dimetil-1,3-tiazol2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-cjpiridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0472] U rastvor proizvoda iz koraka A (64 mg, 0.15 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (96,7 mg, 2.3 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, zatim napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (10 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (17,9 mg, 0.05 mmol, 30%).
[0473] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C16H17N6O2S2: 389.0854, nađeno 389.0847.
Primer 20: 6-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilna kiselina
Korak A: terc-butil 6-[(pent-3-in-1-il)amino]piridin-2-karboksilat
[0475] U rastvor terc-butil 6-fluoropiridin-2-karboksilata (219 mg, 1.11 mmol, 1 ekv) u dimetilacetamidu (5 mL) se dodaju pent-3-in-1-amin hidrohlorid (133 mg, 1.11 mmol, 1 ekv) i N,N-diizopropiletilamin (0,39 mL, 2.22 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 120 °C preko noći u zatvorenoj epruveti. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (48 mg, 0.18 mmol, 17%).
LC/MS (C15H20N2O2) 261 [M+H]<+>; RT 2.42 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.49 (dd, J = 8.4, 7.2 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 7.3, 0.8 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.66 (dd, J = 8.5, 0.8 Hz, 1H), 3.45 -3.29 (m, 2H), 2.44 -2.35 (m, 2H), 1.75 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.53 (s, 9H).
Korak B: terc-butil 6-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilat [0476] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (27,8 mg, 0.18 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (3 mL) se dodaje proizvod iz koraka A (48 mg, 0.18 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na 110 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se koncentruje u vakuumu a prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao roze čvrstu supstancu (12 mg, 0.03 mmol, 19%).
LC/MS (C17H19ClN4O2) 347 [M+H]<+>; RT 2.67 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (dd, J = 8.6, 0.8 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 8.6, 7.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 7.4, 0.8 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 8.9, 7.8 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.57 (s, 9H).
Korak C: terc-butil 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilat
[0477] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (26 mg, 0.07 mmol, 1 ekv), 2-aminotiazol (16,9 mg, 0.11 mmol, 1.5 ekv), Xantphos (8,68 mg, 0.01 mmol, 0.2 ekv), cezijum karbonat (48,9 mg, 0.15 mmol, 2 ekv), 1,4-dioksan (4 mL) zatim tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (6,87 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, cedi kroz celit, ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (7 mg, 0.02 mmol, 20%).
LC/MS (C24H24N6O2S) 461 [M+H]<+>; RT 2.69 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.01 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.68 -7.57 (m, 2H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.28 -7.14 (m, 1H), 4.32 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.58 (s, 8H).
Korak D: 6-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0478] U rastvor proizvoda iz koraka C (7 mg, 0.02 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (9,57 mg, 0.23 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 6 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u metanolu, napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (5 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom i metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (2,0 mg, 32%).
[0479] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C20H17N6O2S: 405.1134, nađeno 405.1122.
Primer 21: 6-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0480]
Korak A: etil 6-{[3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino]piridin-2-karboksilat
[0481] U rastvor proizvoda iz dobijanja 2e (500 mg, 2.28 mmol, 1 ekv) i etil 6-aminopikolinata (455 mg, 2.74 mmol, 1.2 ekv) u metanolu (18 mL) i sirćetne kiseline (6 mL) se dodaje natrijum triacetoksiborohidrid (968 mg, 4.56 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakcija se gasi dodavanjem 1N vodenog natrijum hidroksida (50 mL), ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), i spojeni organski ekstrakti se uzastopno ispiru sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (400 mg, 1.08 mmol, 47%).
LC/MS (C16H18Cl2N4O2) 369 [M+H]<+>; RT 1.19 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.52 (dd, J = 8.4, 7.2 Hz, 1H), 7.18 (dd, 1H), 6.99 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.69 (dd, J = 8.5, 0.8 Hz, 1H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.42 -3.35 (m, 2H), 2.92 -2.82 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.87 -1.74 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: metil 6-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilat [0482] U rastvor proizvoda iz koraka A (170 mg, 0.46 mmol, 1 ekv) u alfa,alfa,alfa-trifluorotoluenu (4 mL) se dodaje cezijum karbonat (300 mg, 0.92 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 160 °C tokom 5 dana. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (74 mg, 0.23 mmol, 50%).
LC/MS (C15H15ClN4O2) 319 [M+H]<+>; RT 1.10 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 -7.84 (m, 2H), 7.75 (dd, J = 7.1, 1.2 Hz, 1H), 4.05 -3.96 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.92 -2.81 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.05 -1.92 (m, 2H).
Korak C: metil 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilat
[0483] U rastvor proizvoda iz koraka B (74 mg, 0.23 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazola, (52.3 mg, 0.35 mmol, 1.5 ekv) i N,N-diizopropiletilamina (0,12 mL, 0.7 mmol, 3 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaje Xantphos (13,4 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (10,6 mg, 0.01 mmol, 0.05 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 150 °C tokom 20 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, zatim podeli između etil acetata (20 mL) i rastvora soli (25 mL), i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (20 mg, 0.05 mmol, 20%).
LC/MS (C22H20N6O2S) 433 [M+H]<+>; RT 1.15 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (dd, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.68 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.11 -3.99 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.86 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.05 -1.94 (m, 2H).
Korak D: 6-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0484] U rastvor proizvoda iz koraka C (15 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (2,91 mg, 0.07 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C18 4.3g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (10 mg, 0.02 mmol, 69%).
[0485] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C21H19N6O2S: 419.1290, nađeno 419.1287.
Primer 22: 2-13-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(3-14-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0486]
Korak A: etil 5-[(1E)-3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]prop-1-en-1-il]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0487] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz dobijanja 6a (3 g, 4.63 mmol, 1 ekv), pinakolni estar (E)-3-(terc-butildimetilsililoksi)propen-1-il-borne kiseline (1,82 mL, 5.56 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (1,92 g, 13.9 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (339 mg, 0.46 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (150 mL) i voda (50 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1.5 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline zatim podeli između etil acetata i vode, i organska faza ispire sa rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (1,86 g, 2.52 mmol, 54%).
LC/MS (C35H50N6O4Si2S2) 739 [M+H]<+>; RT 3.69 (Shortneg2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 -7.38 (m, 3H), 7.30 -7.20 (m, 1H), 6.30 (dt, J = 15.9, 4.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.41 -4.26 (m, 4H), 3.77 -3.67 (m, 2H), 3.45 -3.20 (m, 4H), 2.32 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.92 -0.86 (m, 2H), 0.11 (s, 6H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 5-{3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0488] U rastvor proizvoda iz koraka A (900 mg, 1.22 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (600 mL) se dodaje katalitička količina platina (IV) oksida u atmosferi azota. Smeša se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni i ponovo napuni vodonikom i mućka tokom 3 dana na temperaturi okoline pod atmosferom vodonika. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i uparava pod sniženim pritiskom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (950 mg, 1.28 mmol, >100%%).
LC/MS (C35H52N6O4Si2S2) 741 [M+H]<+>; RT 1.88 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 -7.39 (m, 2H), 7.28 -7.18 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 -4.22 (m, 4H), 3.77 -3.62 (m, 4H), 3.31 -3.14 (m, 4H), 2.32 (s, 3H), 1.93 -1.80 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.80 (m, 11H), 0.06 (s, 6H), -0.11 (s, 9H).
Korak C: etil 5-(3-hidroksipropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-ilidenlandnol-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0489] U rastvor proizvoda iz koraka B (950 mg, 1.28 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (150 mL) se dodaje hlorovodonična kiselina (4M u dioksanu; 50 mL, 200 mmol, 156 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (577 mg, 0.92 mmol, 72%).
LC/MS (C29H38N6O4SiS2) 627 [M+H]<+>; RT 2.68 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.49 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.19 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.57 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.37 -4.22 (m, 4H), 3.76 -3.67 (m, 2H), 3.53 -3.44 (m, 2H), 3.30 -3.13 (m, 4H), 2.32 (s, 3H), 1.86 -1.77 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak D: etil 5-(3-hloropropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0490] Proizvod iz koraka C (577 mg, 0.92 mmol, 1 ekv) se rastvara u tionil hloridu (30 mL) i meša na temperaturi okoline tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (341 mg, 0.53 mmol, 57%).
LC/MS (C29H37ClN6O3SiS2) 645 [M+H]<+>; RT 2.91 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (d, 1H), 7.50 -7.39 (m, 2H), 7.29 -7.18 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.38 -4.22 (m, 4H), 3.78 -3.67 (m, 4H), 3.30 -3.21 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.20 -2.06 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 0.97 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak E: etil 5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(tri-metilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0491] U zatvoren balon, osušen u sušnici, se dodaje proizvod iz dobijanja 4b (133 mg, 0.69 mmol, 1.3 ekv) u dimetilformamidu (70 mL). Natrijum hidrid (60% disperzija; 52,8 mg, 1.32 mmol, 2.5 ekv) se dodaje u rastvor i smeša meša tokom 2 min. Rastvor proizvoda iz koraka D (341 mg, 0.53 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (30 mL) se dodaje i smeša se prska azotom (10 min) i zagreva na 100 °C tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (203 mg, 0.25 mmol, 48%).
LC/MS (C40H48FN7O4SiS2) 802 [M+H]<+>; RT 2.59 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (d, 1H), 7.47 -7.38 (m, 2H), 7.31 (dd, 1H), 7.27 -7.11 (m, 3H), 5.84 (s, 2H), 4.36 -4.20 (m, 4H), 4.13 (t, 2H), 3.75 -3.66 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.31 -3.19 (m, 4H), 2.30 (s, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.18 -2.09 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.95 -0.84 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak F: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0492] U rastvor proizvoda iz koraka E (203 mg, 0.25 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (10 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (5,0 mL, 65.8 mmol, 260 ekv) i smeša se meša na st tokom 6 h. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohladi na 0 °C i neutralize dodavanjem 2M vodenog natrijum hidroksida. Organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -5% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (114 mg, 0.17 mmol, 67%).
LC/MS (C34H34FN7O3S2) 672 [M+H]<+>; RT 2.04 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.36 (br s, 1H), 7.89 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.58 -7.47 (m, 1H), 7.43 -7.28 (m, 2H), 7.26 -7.12 (m, 3H), 4.33 (t, 2H), 4.27 (q, 2H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.34 -3.22 (m, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.16 (t, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak G: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0493] U rastvor proizvoda iz koraka F (114 mg, 0.17 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (71,2 mg, 1.7 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 7 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, a ostatak se trituriše sa vodom i acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (64,7 mg, 0.1 mmol, 59%), kao litijumova so.
[0494] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H31FN7O3S2: 644.1914, nađeno 644.1908.
Primer 23: 3-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0495]
Korak A: terc-butil N-(pent-3-in-1-il)karbamat
[0496] U rastvor pent-3-in-1-amin hidrohlorida (5 g, 41.8 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (130 mL) i vodi (130 mL) se dodaje natrijum bikarbonat (10,5 g, 125 mmol, 3 ekv), zatim di-terc-butil dikarbonat (9,12 g, 41.8 mmol, 1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, uzastopno ispere zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (8,2 g, 44.8 mmol, >100%).
[0497]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.89 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 2.99 (td, J = 7.3, 5.9 Hz, 2H), 2.25 -2.15 (m, 2H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.38 (s, 9H).
Korak B: etil 3-bromo-6-{[(terc-butoksi)karbonil](pent-3-in-1-il)amino}piridin-2-karboksilat
[0498] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka A (8,2 g, 44.8 mmol, 1 ekv), etil 3,6-dibromopikolinat (13,8 g, 44.8 mmol, 1 ekv), Xantphos (2,59 g, 4.47 mmol, 0.1 ekv), cezijum karbonat (29,2 g, 89.5 mmol, 2 ekv) i 1,4-dioksan (180 mL). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (2,05 g, 2.24 mmol, 0.05 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 130 °C tokom 1 h. Reakcija se razblaži sa etil acetatom i cedi kroz celit, zatim uzastopno ispere vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 330 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (9,95 g, 24.2 mmol, 54%).
LC/MS (C18H23BrN2O4) 357 [M-<t>Bu]<+>; RT 2.59 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.38 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.96 -3.87 (m, 2H), 2.49 -2.38 (m, 2H), 1.66 (t, J = 2.5 Hz, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 3-bromo-6-[(pent-3-in-1-il)amino]piridin-2-karboksilat
[0499] U rastvor proizvoda iz koraka B (9,95 g, 24.2 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (120 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (19,9 mL, 260 mmol, 10.8 ekv) i smeša se meša na okolini preko noći. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohladi na 0 °C i neutrališe dodavanjem 4M vodenog natrijum hidroksida. Organska faza se suši (separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (6,68 g, 21.5 mmol, 89%).
LC/MS (C13H15BrN2O2) 313 [M+H]<+>; RT 2.12 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.29 (td, J = 7.1, 5.7 Hz, 2H), 2.41 -2.29 (m, 2H), 1.74 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: etil 3-bromo-6-{3-hloro-4-metil-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilat [0500] U rastvor proizvoda iz koraka C (6,68 g, 21.5 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (220 mL) se dodaje 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazin (6,48 g, 42.9 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenom balonu na 120 °C tokom 72 h. Reakcija se razblaži sa metanolom, cedi kroz separator faza i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao crvenu čvrstu supstancu (1,49 g, 3.77 mmol, 18%).
LC/MS (C15H12BrClN4O2) 397 [M+H]<+>; RT 2.36 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.63 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.64 (s, 3H), 1.37 (t, 3H).
Korak E: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-hloro-4-metil-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilat
[0501] U rastvor proizvoda iz koraka D (1,49 g, 3.77 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (5 mL) i vode (15 mL) se dodaje proizvod iz dobijanja 5a (1,48 g, 4.14 mmol, 1.1 ekv) i kalijum karbonat (1,56 g, 11.3 mmol, 3 ekv). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(308 mg, 0.38 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 90 °C preko noći u zatvorenom balonu. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (1,08 g, 1.98 mmol, 53%).
LC/MS (C30H33ClN6O2) 545 [M+H]<+>; RT 2.72 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.10 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 -1.89 (m, 3H), 1.73 -1.50 (m, 12H), 1.16 (t, 3H).
Korak F: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilat
[0502] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka E (1,08 mg, 1.98 mmol, 1 ekv), 2-aminotiazol (594 mg, 3.96 mmol, 2 ekv), N,N-diizopropiletilamin (1,03 mL, 5.93 mmol, 3 ekv) i 1,4-dioksan (80 mL). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje JosiPhos (183 mg, 0.2 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 2 dana. Reakcija se razblaži sa etil acetatom, uzastopno ispere vodom i rastvorom soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu čvrstu supstancu (510 mg, 0.77 mmol, 39%).
LC/MS (C37H38N8O2S) 659 [M+H]<+>; RT 2.9 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.13 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.41 -7.32 (m, 1H), 7.27 -7.11 (m, 1H), 6.99 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 -1.89 (m, 3H), 1.76 -1.52 (m, 12H), 1.16 (t, 3H).
Korak G: 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0503] U rastvor proizvoda iz koraka F (400 mg, 0.61 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (255 mg, 6.07 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, a ostatak se trituriše u vodi, procedi i suši pod vakuumom. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -14% metanol u dihlormetanu daje bledo žutu čvrstu supstancu koja se trituriše sa metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (154 mg, 0.24 mmol, 40%).
[0504] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C35H35N8O2S: 631.2604, nađeno 631.2600.
Primer 24: 3-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0505]
Korak A: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-aminopiridin-2-karboksilat [0506] Dvofazni rastvor etil 6-amino-3-bromopikolinata (5,14 g, 21 mmol, 1 ekv), proizvod iz dobijanja 5a (7,47 g, 21 mmol, 1 ekv) i kalijum karbonat (8,7 g, 62.9 mmol, 3 ekv) u tetrahidrofuranu (100 mL) i voda (20 mL) se snažno meša uz prskanje azota (10 min). Dodaje se Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(2,57 g, 3.15 mmol, 0.15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 16 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i cedi kroz celit. Filtrat se razblaži sa etil acetatom (200 mL), ispere vodom (100 mL), i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -90% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao kremasta čvrsta supstanca (5,28 g, 13.4 mmol, 64%).
LC/MS (C23H30N4O2) 395 [M+H]<+>; RT 1.32 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7032 (d, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.24 (s, 2H), 4.05 (q, 2H), 3.72 (s, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.98 -1.88 (m, 3H), 1.71 -1.47 (m, 12H), 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{[3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}piridin-2-karboksilat
[0507] U rastvor proizvoda iz dobijanja 2e (1,92 g, 8.76 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz koraka A (3,8 g, 9.64 mmol, 1.1 ekv) u metanolu (40 mL) se dodaje sirćetna kiselina (15 mL) i natrijum cijanoborohidrid (2,75 g, 43.8 mmol, 5 ekv) u porcijama i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline zatim sipa u 1N vodeni natrijum hidroksid (50 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL). Organska faza se uzastopno ispere zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (100 mL) i rastvorom soli (100 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (3,99 g, 6.68 mmol, 76%).
LC/MS (C31H38Cl2N6O2) 597 [M+H]<+>; RT 1.53 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.34 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.95 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.06 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.41 -3.31 (m, 2H), 2.92 -2.83 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 -1.89 (m, 3H), 1.86 -1.74 (m, 2H), 1.71 -1.48 (m, 12H), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilat
[0508] U rastvor proizvoda iz koraka B (3,99 g, 6.68 mmol, 1 ekv) u alfa,alfa,alfa-trifluorotoluenu (150 mL) se dodaje cezijum karbonat (4,35 g, 13.4 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 160 °C tokom 3 dana. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu.
Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (0,95 g, 1.69 mmol, 25%).
LC/MS (C31H37ClN6O2) 561 [M+H]<+>; RT 1.55 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.15 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.01 -3.92 (m, 2H), 3.77 (s, 2H), 2.88 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.04 -1.88 (m, 5H), 1.73 -1.50 (m, 12H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilat
[0509] U rastvor proizvoda iz koraka C (946 mg, 1.69 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazola, (380 mg, 2.53 mmol, 1.5 ekv) i N,N-diizopropiletilamina (0,88 mL, 5.06 mmol, 3 ekv) u 1,4-dioksanu (30 mL) se dodaje Xantphos (97,6 mg, 0.17 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (77,2 mg, 0.08 mmol, 0.05 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenom balonu na 160 °C tokom 60 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i razblaži se sa etil acetatom (20 mL), ispire sa rastvorom soli (25 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -75% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu čvrstu supstancu (606 mg, 0.9 mmol, 53%).
LC/MS (C38H42N8O2S) 675 [M+H]<+>; RT 1.61 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (br s, 1H), 7.40 -7.31 (m, 2H), 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.05 -3.97 (m, 2H), 3.77 (s, 2H), 2.86 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.04 -1.89 (m, 5H), 1.72 -1.50 (m, 12H), 1.13 (t, 3H).
Korak E: 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0510] U rastvor proizvoda iz koraka D (600 mg, 0.89 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (10 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (74,6 mg, 1.78 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Ostatak se stavlja u vodu, zakišeljava do pH 4 i čvrste supstance se sakupe ceđenjem, isperu vodom i suše. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (93 mg, 0.14 mmol, 16%).
[0511] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C36H39N8O2S: 647.2917, nađeno 647.2913.
Primer 25: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0512]
Korak A: etil 2-{[(terc-butoksi)karbonil](hept-5-in-1-il)amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0513] U etil 2-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat (1,62 g, 5.94 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (50 mL) se dodaje hept-5-in-1-ol (1 g, 8.92 mmol, 1.5 ekv) i trifenilfosfin (2,34 g, 8.92 mmol, 1.5 ekv), a zatim se dodaje u kapima dietil azodikarboksilat (1,62 mL, 8.92 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (1,92 g, 5.24 mmol, 88%).
LC/MS (C18H26N2O4S) 367 [M+H]<+>; RT 2.53 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.07 (s, 1H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.11 -4.00 (m, 2H), 2.22 -2.13 (m, 2H), 1.79 -1.68 (m, 5H), 1.55 (s, 9H), 1.48 -1.34 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 2H). Korak B: etil 2-[(hept-5-in-1-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0514] U rastvor proizvoda iz koraka A (1,97 g, 5.38 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (50 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (4,94 mL, 64.5 mmol, 12 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se hladi na 0 °C i razblažuje sa dihlormetanom, alkalizuje sa 2N vodenim natrijum hidroksidom, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (1,46 g, 5.48 mmol, >100%).
LC/MS (C13H18N2O2S) 267 [M+H]<+>; RT 1.91 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.81 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 4.21 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.21 (td, J = 6.9, 5.3 Hz, 2H), 2.19 -2.07 (m, 2H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.67 -1.55 (m, 2H), 1.54 -1.41 (m, 2H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0515] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (827 mg, 5.48 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (20 mL) se dodaje proizvod iz koraka B (1,46 g, 5.48 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na 120 °C u zatvorenom balonu tokom 48 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu. I prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao roze čvrstu supstancu (0,92 g, 2.61 mmol, 48%).
LC/MS (C15H17ClN4O2S) 353 [M+H]<+>; RT 2.00 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (s, 1H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 3H), 4.22 -4.13 (m, 2H), 2.95 -2.88 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.02 -1.89 (m, 2H), 1.84 -1.75 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H). Korak D: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)andno]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0516] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka C (920 mg, 2.61 mmol, 1 ekv), 2-aminotiazol (470 mg, 3.13 mmol, 1.2 ekv), Xantphos (151 mg, 0.26 mmol, 0.1 ekv), N,N-diizopropiletilamin (1,36 mL, 7.82 mmol, 3 ekv) i 1,4-dioksan (15 mL). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje tris(dibenzilidenaceton)di-paladijum(0) (119 mg, 0.13 mmol, 0.05 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 8 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (0,81 g, 1.74 mmol, 67%).
LC/MS (C22H22N6O2S2) 467 [M+H]<+>; RT 2.20 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (br s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.49 (br s, 1H), 7.44 -7.34 (m, 1H), 7.27 -7.16 (m, 1H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.14 -4.01 (s, 2H), 2.90 -2.78 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.96 -1.83 (m, 2H), 1.82 -1.70 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak E: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0517] U rastvor proizvoda iz koraka D (30 mg, 0.06 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (27 mg, 0.64 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 6 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim se rastvara u MeOH, napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (5 g),ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa dihlormetanom i metanolom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (22,4 mg, 0.05 mmol, 79%).
[0518] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C20H19N6O2S2: 439.1011, nađeno 439.1003.
Primer 26: 3-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}benzojeva kiselina
[0519]
Korak A: etil 3-{[3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}benzoat
[0520] U rastvor proizvoda iz dobijanja 2e (100 mg, 0.46 mmol, 1 ekv) i etil 3-aminobenzoata (79,2 mg, 0.48 mmol, 1.05 ekv) u metanolu (6 mL) se dodaju sirćetna kiselina (2 mL) i natrijum cijanoborohidrid (57,4 mg, 0.91 mmol, 2 ekv) u porcijama i smeša se meša preko noći. Reakcija se gasi dodavanjem 1N vodenog natrijum hidroksida i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (88 mg, 0.24 mmol, 52%).
LC/MS (C17H19Cl2N3O2) 332 [M-HCl+H]<+>; RT 1.34 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.40 (dt, J = 7.6, 1.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 2.6, 1.5 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.78 (ddd, J = 8.1, 2.6, 1.0 Hz, 1H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.32 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.98 -2.86 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.96 -1.83 (m, 2H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 3-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}benzoat
[0521] U rastvor proizvoda iz koraka A (88 mg, 0.24 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (3 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,1 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se neutralizuje dodavanjem 1N vodenog natrijum hidroksida i smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (2 x 20 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (48 mg, 0.14 mmol, 61%).
LC/MS (C17H18ClN3O2) 332 [M+H]<+>; RT 1.27 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.80 (dt, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H), 7.66 -7.60 (m, 1H), 7.56 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.76 -3.70 (m, 2H), 2.87 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.09 -1.97 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 3-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}benzoat
[0522] U rastvor proizvoda iz koraka B (80 mg, 0.24 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazola, (43,5 mg, 0.29 mmol, 1.2 ekv), N,N-diizopropiletilamina (0,13 mL, 0.72 mmol, 3 ekv) i 1,4-dioksana (5 mL) se dodaju Xantphos (14 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (11 mg, 0.01 mmol, 0.05 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 160 °C tokom 24 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, zatim podeli između etil acetata (20 mL) i rastvora soli (25 mL) i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C18 4,3g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je sirovi željeni proizvod kao žuto staklo (18 mg, 0.04 mmol, 17%) koje se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0523] LC/MS (C24H23N5O2S) 446 [M+H]<+>; RT 1.31 (LCMS-V-B1)
Korak D: 3-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}benzojeva kiselina
[0524] U rastvor proizvoda iz koraka C (18 mg, 0.04 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (3,39 mg, 0.08 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Ostatak se stavlja u vodu, zakišeljava sa 1N vodenom hlorovodoničnom kiselinom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A1) dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (10,6 mg, 0.03 mmol, 63%).
[0525] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C22H20N5O2S: 418.1338, nađeno 418.1334.
Primer 27: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0526]
[0527] Korišćenje opšteg postupka dobijanja propargilnog amina polazeći od dobijanja 3d i dimetilamina kao odgovarajućeg amina. Zatim opšti postupak hidrolize polazeći od odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0528] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H35FN7O3S2: 672.2221, nađeno 672.2205.
Primer 28: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0529]
Korak A: etil 2-[[(terc-butoksi)karbonil](4-jodobut-3-in-1-il)amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0530] U etil 2-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat (3,16 g, 11.6 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (150 mL) se dodaje 4-jodobut-3-in-1-ol (3,41 g, 17.4 mmol, 1.5 ekv) i trifenilfosfin (4,56 g, 17.4 mmol, 1.5 ekv), a zatim se dodaje u kapima dietil azodikarboksilat (2,74 mL, 17.4 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (3,75 g, 8.33 mmol, 72%).
LC/MS (C15H19IN2O4S) 451 [M+H]<+>; RT 2.45 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.56 (s, 9H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak B: etil 2-[(4-jodobut-3-in-1-il)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0531] U rastvor proizvoda iz koraka A (3,75 g, 8.33 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (50 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (15,3 mL, 200 mmol, 24 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se hladi na 0 °C, razblaži sa dihlormetanom, alkalizuje sa 2N vodenim natrijum hidroksidom, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (2,74 g, 7.82 mmol, 94%).
LC/MS (C10H11IN2O2S) 351 [M+H]<+>; RT 1.84 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.98 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.40 -3.30 (m, 2H), 2.61 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-hloro-4-jodo-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0532] U rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (1,18 g, 7.82 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (80 mL) se dodaje proizvod iz koraka B (2,74 g, 7.82 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline a talog se sakupi ceđenjem, ispere tetrahidrofuranom i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (1,06 g, 2.43 mmol, 31%).
LC/MS (C12H10ClIN4O2S) 437 [M+H]<+>; RT 1.99 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (s, 1H), 4.45 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.31 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.46 -3.33 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: etil 2-{3-hloro-4-ciklopropil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0533] U zatvorenu cev se dodaje proizvod iz koraka C (120 mg, 0.27 mmol, 1 ekv), kalijum ciklopropiltrifluoroborat (102 mg, 0.69 mmol, 2.5 ekv), kalijum karbonat (114 mg, 0.82 mmol, 3 ekv), tetrahidrofuran (16 mL) i voda (4 mL). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(44.9 mg, 0.05 mmol, 0.2 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 40 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentrujw u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -90% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (40 mg, 0.11 mmol, 42%).
LC/MS (C15H15ClN4O2S) 351 [M+H]<+>; RT 2.00 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.43 -4.23 (m, 4H), 3.42 -3.29 (m, 2H), 2.03 -1.94 (m, 1H), 1.30 (t, 3H), 1.14 -1.04 (m, 2H), 0.98 -0.84 (m, 2H).
Korak E: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0534] U mikrotalasnu bočicu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka D (40 mg, 0.11 mmol, 1 ekv), 2-aminotiazol (25,7 mg, 0.17 mmol, 1.5 ekv), N,N-diizopropiletilamin (59,6 µL, 0.34 mmol, 3 ekv) i 1,4-dioksan (3 mL). Posuda se isprazni i ispere azotom zatim se dodaje JosiPhos (10,5 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 150 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (18 mg, 0.04 mmol, 34%).
LC/MS (C22H20N6O2S2) 464 [M+H]<+>; RT 2.31 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.58 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.02 -7.89 (m, 1H), 7.76 -7.62 (m, 1H), 7.47 -7.32 (m, 1H), 7.30 -7.13 (m, 1H), 4.42 -4.25 (m, 4H), 3.46 -3.37 (m, 2H), 2.20 -2.01 (m, 1H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.21 -1.06 (m, 2H), 0.93 -0.74 (m, 2H).
Korak F: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H-pirolo[2,3-c]piridazin-7-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0535] U rastvor proizvoda iz koraka E (18 mg, 0.04 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (6 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (16,3 mg, 0.39 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 8 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, rastvara se u metanolu, zatim napuni u PE-AX kertridž sa metanolom (10 g), ispere sa metanolom, eluira sa 9:1 dihlormetan / mravlja kiselina i koncentruje u vakuumu. Ostatak se uzastopno trituriše sa dihlormetanom i vodom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao bež čvrsta supstanca (2,44 mg, 0.01 mmol, 14.43%), kao so mravlje kiseline.
[0536] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C20H17N6O2S2: 437.0854, nađeno 437.0853.
Primer 29: 3-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0537]
Korak A: [(heks-5-in-1-iloksi)metil]benzen
[0538] U mešani rastvor 5-heksin-1-ola (5,36 g, 54.6 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (35 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 3,28 g, 81.9 mmol, 1.5 ekv) u porcijama i smeša se ostavlja da se meša 30 min. Benzil bromid (6,49 mL, 54.6 mmol, 1 ekv) se dodaje u kapima i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 90 h. Reakcija se hladi na 0 °C i gasi dodavanjem zasićenog vodenog amonijum hlorida (30 mL) zatim razblaži sa vodom (30 mL). Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 150 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (100 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (10,2 g, 54.2 mmol, 99%).
LC/MS (C13H16O) 189 [M+H]<+>; RT 2.21 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.40 -7.24 (m, 5H), 4.45 (s, 2H), 3.44 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 2.17 (td, J = 7.0, 2.6 Hz, 2H), 1.70 -1.57 (m, 2H), 1.56 -1.37 (m, 2H).
Korak B: [(hept-5-in-1-iloksi)metil]benzen
[0539] Rastvor proizvoda iz koraka A (10,2 g, 54.2 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (90 mL) se ohladi na -78 °C i dodaje se n-butillitijum (2.5M u heksanima; 26 mL, 65 mmol, 1.2 ekv) u kapima preko 30 min. Nakon mešanja tokom 1 h, jodometan (4.05 mL, 65 mmol, 1.2 ekv) se dodaje u kapima i smeša se ostavlja da se zagreje na 0 °C preko 1 h. Reakcija se gasi sa vodenim zasićenim amonijum hloridom (40 mL), razblaži sa vodom (40 mL), i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 100 mL). Spojeni organski ekstrakti se uzastopno isperu sa 2N vodenog natrijum tiosulfata (200 mL) i rastvorom soli (200 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -6% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (10,4 g, 51.3 mmol, 95%).
LC/MS (C14H18O) 203 [M+H]<+>; RT 2.37 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.40 -7.24 (m, 5H), 4.45 (s, 2H), 3.43 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.17 -2.08 (m, 2H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.67 -1.55 (m, 2H), 1.54 -1.41 (m, 2H).
Korak C: 4-[4-(benziloksi)butil]-3,6-dihloro-5-metilpiridazin
[0540] Rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (3,23 g, 21.4 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz koraka B (5,2 g, 25.7 mmol, 1.2 ekv) u toluenu (40 mL) se zagreva na 130 °C preko noći u zatvorenom balonu. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje se u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao crveno ulje (3,27 g, 10.1 mmol, 47%).
LC/MS (C16H18Cl2N2O) 325 [M+H]<+>; RT 2.32 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.40 -7.24 (m, 5H), 4.46 (s, 2H), 3.49 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.87 -2.78 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.74 -1.62 (m, 2H), 1.61 -1.51 (m, 2H).
Korak D: 4-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)butan-1-ol
[0541] U rastvor proizvoda iz koraka C (3,27 g, 10.1 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (50 mL), ohlađenom u ledeno vodeno kupatilo, se dodaje u kapima bor trihlorid (1M u dihlormetanu; 50,3 mL, 50.3 mmol, 5 ekv) i smeša je ostavljena da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 1 h. Reakcija se hladi na 0 °C, gasi dodavanjem metanola i koncentruje u vakuumu. Ostatak je podeljen između dihlormetana (100 mL) i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata (150 mL), i organska faza se ispire rastvorom soli (150 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (2,21 g, 9.4 mmol, 94%).
LC/MS (C9H12Cl2N2O) 235 [M+H]<+>; RT 1.36 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.44 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 6.0, 5.0 Hz, 2H), 2.87 -2.76 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.62 -1.48 (m, 4H).
Korak E: 4-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)butanal
[0542] Bolon, osušen u sušnici, se napuni sa dimetil sulfoksidom (1,6 mL, 22.6 mmol, 2.4 ekv) i dihlormetanom (60 mL) i smeša se ohladi na -78 °C. Dodaje se oksalil hlorid (2M u dihlormetanu; 7,05 mL, 14.1 mmol, 1.5 ekv) u kapima i smeša se meša tokom 1 h. Dodaje se rastvor proizvoda iz koraka D (2,21 g, 9.4 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (20 mL) u kapima i smeša se meša tokom 1 h. Dodaje se trietilamin (7,84 mL, 56.4 mmol, 6 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje na 0 °C preko 1 h. Reakcija se gasi sa vodom (50 mL), razblaži sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (50 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (2 x 200 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli (100 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (6,58 g, 6.78 mmol, 72%).
LC/MS (C9H10Cl2N2O) 233 [M+H]<+>; RT 1.51 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.70 (t, J = 1.1 Hz, 1H), 2.86 -2.76 (m, 2H), 2.63 (td, J = 7.0, 1.1 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.81 -1.68 (m, 2H).
Korak F: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{[4-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin -4-il)butil]amino}piridin-2-karboksilat
[0543] U rastvor proizvoda iz koraka E (1,04 g, 4.45 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz primera 24,korak A (1,93 g, 4.89 mmol, 1.1 ekv) u metanolu (30 mL) i sirćetne kiseline (10 mL) se dodaje natrijum cijanoborhidrid (559 mg, 8.89 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se gasi sa 1N vodenim natrijum hidroksidom (50 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL). Spojeni organski ekstrakti se uzastopno isperu zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao belu gumu (1,71 g, 2.8 mmol, 63%).
LC/MS (C32H40Cl2N6O2) 611 [M+H]<+>; RT 2.65 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.81 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.05 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.32 -3.23 (m, 2H), 2.90 -2.81 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.74 -1.48 (m, 16H), 1.07 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak G: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}piridin-2-karboksilat
[0544] U rastvor proizvoda iz koraka F (646 mg, 1.06 mmol, 1 ekv) u alfa,alfa,alfa-trifluorotoluenu (6 mL) se dodaje cezijum karbonat (1,03 g, 3.17 mmol, 3 ekv) i Xantphos Pd G3 (50,1 mg, 0.05 mmol, 0.05 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (119 mg, 0.21 mmol, 20%).
LC/MS (C32H39ClN6O2) 575 [M+H]<+>; RT 2.66 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.47 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.80 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.22 -4.16 (m, 2H), 4.12 (q, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.89 -2.81 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.00 -1.89 (m, 3H), 1.80 -1.49 (m, 16H), 1.10 (t, 3H).
Korak H: etil 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}piridin-2-karboksilat
[0545] U rastvor proizvoda iz koraka G (119 mg, 0.21 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazola, (62,2 mg, 0.41 mmol, 2 ekv) i N,N-diizopropiletilamina (108 µL, 0.62 mmol, 3 ekv) u 1,4-dioksanu (8 mL) se dodaje JosiPhos (19,2 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenoj cevi na 150 °C tokom 72 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, zatim razblaži sa etil acetatom (20 mL), ispire sa rastvorom soli (25 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je sirovi željeni proizvod kao žutu gumu (49 mg, 0.07 mmol, 34%) koji se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0546] LC/MS (C39H44N8O2S) 690 [M+H]<+>; RT 2.81 (LCMS-V-C)
Korak I: 3-{1-[(adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0547] U rastvor proizvoda iz koraka H (49 mg, 0.07 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (44,8 mg, 1.07 mmol, 15 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1 h. Reakcija se hladi na temperature okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C18 4,3g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (6,24 mg, 0.01 mmol, 13%).
[0548] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C37H41N8O2S: 661.3073, nađeno 661.3097
Primer 30: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0549]
Korak A: terc-butil[(5-ciklopropilpent-4-in-1-il)oksi]dimetilsilan
[0550] U rastvor ciklopropilacetilena (8 mL, 94.5 mmol, 1.1 ekv) u tetrahidrofuranu (200 mL), ohlađen na -78 °C, se dodaje n-butillitijum (2.0M u heksanima; 47,3 mL, 94.5 mmol, 1.1 ekv) i smeša se meša na na ovoj temperature tokom 2,5 h. Dodaje se 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinon (12 mL, 98.8 mmol, 1.15 ekv) a nakon 15 min se dodaje (3-bromopropoksi)-terc-butildimetilsilan (15 mL, 85.9 mmol, 1 ekv) u kapima i smeša je ostavljena da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog amonijum hlorida, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 330 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -6% etil acetata u izo-heptanu dalo je sirovi željeni proizvod kao bistro ulje (8,62 g, 36.2 mmol, 42%) koji se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak B: 5-ciklopropilpent-4-in-1-ol
[0551] U rastvor proizvoda iz koraka A (8,62 g, 36.2 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (150 mL) se dodaje tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu; 39,8 mL, 39.8 mmol, 1.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (2,14 g, 17.2 mmol, 48%).
[0552]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.43 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.46 -3.38 (m, 2H), 2.12 (td, J = 7.1, 2.0 Hz, 2H), 1.58 -1.47 (m, 2H), 1.29 -1.16 (m, 1H), 0.74 -0.65 (m, 2H), 0.54 -0.46 (m, 2H).
Korak C: etil 2-{[(terc-butoksi)karbonil](5-ciklopropilpent-4-in-1-il)amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0553] U rastvor etil 2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilata (3,13 g, 11.5 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz koraka B (2,14 g, 17.2 mmol, 1.5 ekv) u tetrahidrofuranu (80 mL) se dodaje trifenilfosfin na bazi polimera (4,52 g, 17.23 mmol, 1.5 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C i dodaje se u kapima dietil azodikarboksilat (2,73 mL, 17.2 mmol, 1.5 ekv) zatim se smeša ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, razdvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu čvrstu supstancu (3,86 g, 10.2 mmol, 89%).
LC/MS (C19H26N2O4S) 379 [M+H]<+>; RT 2.60 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.07 (s, 1H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.11 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.21 -2.13 (m, 2H), 1.84 -1.75 (m, 2H), 1.58 (s, 9H), 1.55 (s, 4H), 1.29 (t, 3H), 1.23 -1.14 (m, 1H), 0.73 -0.61 (m, 2H), 0.56 -0.45 (m, 2H).
Korak D: etil 2-{3-hloro-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0554] U rastvor proizvoda iz koraka C (3,86 g, 10.2 mmol, 1 ekv) u toluenu (120 mL) se dodaje 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (1,54 g, 10.2 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva u zatvorenom balonu na 130 °C tokom 24 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod (677 mg, 1.86 mmol, 18%).
LC/MS (C16H17ClN4O2S) 365 [M+H]<+>; RT 2.18 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, TFA added / DMSO-d6) δ 8.04 (s, 1H), 4.36 -4.22 (m, 4H), 3.07 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.11 -2.00 (m, 2H), 1.92 -1.81 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.20 -1.06 (m, 2H), 0.76 -0.67 (m, 2H).
Korak E: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0555] U zatvorenu epruvetu osušenu u sušnici se dodaje proizvod iz koraka D (627 mg, 1.72 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (387 mg, 2.58 mmol, 1.5 ekv), N,N-diizopropiletilamine (0,9 mL, 5.16 mmol, 3 ekv) i 1,4-dioksan (22 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim se dodaje JosiPhos Pd G3 (162 mg, 0.17 mmol, 0.1 ekv) i smeša se zagreva na 150 °C tokom 20 h. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (261 mg, 0.55 mmol, 32%).
LC/MS (C23H22N6O2S2) 479 [M+H]<+>; RT 2.44 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, TFA added / DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H), 8.07 -7.92 (m, 2H), 7.75 -7.60 (m, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.30 -7.16 (m, 1H), 4.38 -4.22 (m, 4H), 3.08 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.15 -2.01 (m, 2H), 1.98 -1.85 (m, 1H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.27 -1.12 (m, 2H), 0.74 -0.53 (m, 2H).
Korak F: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)({[2-(trimetilsilil)etoksi]metil})amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0556] U rastvor proizvoda iz koraka E (1,47 g, 3.07 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (240 mL) se dodaje N,N-diizopropiletilamin (1,61 mL, 9.21 mmol, 3 ekv) i nakon 5 min se smeša hladi na 0 °C i dodaju se 4-(dimetilamino)piridin (75,1 mg, 0.61 mmol, 0.2 ekv) i 2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid (1,62 mL, 9.21 mmol, 3 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između dihlormetana i rastvora soli, razdvoji (PTFE separator faza) i organska faza se koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (1,36 g, 2.23 mmol, 73%).
LC/MS (C29H36N6O3SiS2) 609 [M+H]<+>; RT 2.96 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.48 -7.37 (m, 2H), 7.22 (ddd, J = 8.3, 7.0, 1.5 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.36 -4.21 (m, 4H), 3.76 -3.66 (m, 2H), 3.06 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.13 -2.02 (m, 2H), 1.95 -1.84 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.23 -1.15 (m, 2H), 1.13 -1.05 (m, 2H), 0.93 -0.84 (m, 2H), -0.10 (s, 9H).
Korak G: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)({[2-(trimetilsilil)etoksi]metil})amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-bromo-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0557] U rastvor proizvoda iz koraka F (1,36 g, 2.23 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (40 mL) se dodaje N-bromosukcinimid (596 mg, 3.35 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (1,43 g, 2.08 mmol, 93%).
LC/MS (C29H35BrN6O3SiS2) 689 [M+H]<+>; RT 3.17 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 -7.81 (m, 1H), 7.50 -7.39 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.32 (q, 2H), 4.29 -4.21 (m, 2H), 3.75 -3.66 (m, 2H), 2.13 -2.01 (m, 2H), 1.98 -1.86 (m, 1H), 1.32 (t, 3H), 1.28 -1.16 (m, 2H), 1.15 -1.05 (m, 2H), 0.94 -0.83 (m, 2H), -0.10 (s, 9H). Korak H: etil 5-[(1E)-3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]prop-1-en-1-il]-2-(4-ciklopropil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0558] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka G (1,43 g, 2.08 mmol, 1 ekv), pinakolni estar (E)-3-(terc-butildimetilsililoksi)propen-1-il-borne kiseline (0,82 mL, 2.5 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (862 mg, 6.24 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (170 mg, 0.21 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (60 mL) i voda (20 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1.5 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (1,05 g, 1.35 mmol, 65%).
LC/MS (C38H54N6O4Si2S2) 779 [M+H]<+>; RT 1.66 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (d, 1H), 7.51 -7.37 (m, 3H), 7.27 -7.18 (m, 1H), 6.27 (dt, J = 16.0, 4.3 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.40 -4.34 (m, 2H), 4.34 -4.23 (m, 4H), 3.75 -3.66 (m, 2H), 3.06 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.13 -2.01 (m, 2H), 1.96 -1.84 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.22 -1.14 (m, 2H), 1.13 -1.04 (m, 2H), 0.93 (s, 9H), 0.890.82 (m, 2H), 0.11 (s, 6H), -0.10 (s, 9H).
Korak I: etil 5-{3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]propil}-2-(4-ciklopropil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0559] U rastvor proizvoda iz koraka H (1,05 g, 1.35 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (60 mL) se dodaje platina (IV) oksid (91,8 mg, 0.4 mmol, 0.3 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni, stavi u atmosferu vodonika, i mućka na temperaturi okoline tokom 2 dana. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistru gumu (913 mg, 1.17 mmol, 87%).
LC/MS (C38H56N6O4Si2S2) 781 [M+H]<+>; RT 1.71 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.74 (d, 1H), 7.49 -7.36 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.34 -4.21 (m, 4H), 3.75 -3.62 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.05 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.12 -2.00 (m, 2H), 1.96 -1.78 (m, 3H), 1.31 (t, 3H), 1.21 -1.16 (m, 2H), 1.13 -1.05 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.87 -0.81 (m, 2H), 0.06 (s, 6H), -0.10 (m, 9H).
Korak J: etil 2-(4-ciklopropil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-(3-hidroksipropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0560] U rastvor proizvoda iz koraka I (819 mg, 1.05 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (18 mL) se dodaje tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu; 1,15 mL, 1.15 mmol, 1.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetate u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (650 mg, 0.97 mmol, 93%).
LC/MS (C32H42N6O4SiS2) 667 [M+H]<+>; RT 2.85 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.81 (dd, J = 7.5, 1.0 Hz, 1H), 7.48 -7.36 (m, 2H), 7.27 -7.17 (m, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.34 -4.21 (m, 4H), 4.12 (q, J = 7.1 Hz, 3H), 3.75 -3.66 (m, 2H), 3.48 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.17 -3.08 (m, 2H), 3.05 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 1.96 -1.84 (m, 1H), 1.83 -1.74 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.20 -1.15 (m, 2H), 1.13 -1.04 (m, 2H), 0.93 -0.85 (m, 2H), -0.10 (s, 9H).
Korak K: etil 5-(3-hloropropil)-2-(4-ciklopropil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0561] Proizvod iz koraka J (291 mg, 0.44 mmol, 1 ekv) se rastvara u tionil hloridu (10 mL) i meša na temperaturi okoline tokom 8 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu gumu (147 mg, 0.21 mmol, 49%).
LC/MS (C32H41ClN6O3SiS2) 685 [M+H]<+>; RT 3.15 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (dd, J = 7.4, 1.0 Hz, 1H), 7.48 -7.36 (m, 2H), 7.27 -7.18 (m, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.34 -4.21 (m, 4H), 3.78 -3.64 (m, 4H), 3.27 -3.18 (m, 2H), 3.05 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.16 -1.96 (m, 4H), 1.98 -1.81 (m, 1H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.22 -1.14 (m, 2H), 1.13 -1.01 (m, 2H), 0.95 -0.82 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak L: etil 2-(4-ciklopropil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-ili-den]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0562] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4b (53,9 mg, 0.28 mmol, 1.3 ekv) u dimetilformamidu (30 mL) se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 21.5 mg, 0.54 mmol, 2.5 ekv) i smeša meša tokom 2 min. dodaje se rastvor proizvoda iz koraka K (147 mg, 0.21 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (10 mL) i smeša se zagreva na 100 °C tokom 1,5 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -5% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (145 mg, 0.17 mmol, 80%).
LC/MS (C43H52FN7O4SiS2) 842 [M+H]<+>; RT 2.76 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.48 -7.36 (m, 2H), 7.34 -7.27 (m, 1H), 7.26 -7.12 (m, 3H), 5.81 (s, 2H), 4.30 -4.20 (m, 4H), 4.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.75 -3.66 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.27 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.05 (t, 2H), 2.19 (s, 6H), 2.17 -2.09 (m, 2H), 2.08 -1.99 (m, 2H), 1.94 -1.83 (m, 1H), 1.29 (t, 3H), 1.21 -1.14 (m, 2H), 1.13 -1.05 (m, 2H), 0.94 -0.82 (m, 2H), -010 (s, 9H).
Korak M: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0563] U rastvor proizvoda iz koraka L (175 mg, 0.21 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (6 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (6 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 7,5 h. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohladi na 0 °C i neutrališe sa 2N vodenim natrijum hidroksidom. Organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (16 mg, 0.02 mmol, 11%).
LC/MS (C37H38FN7O3S2) 712 [M+H]<+>; RT 2.18 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 -7.34 (m, 1H), 7.30 (dd, J = 11.9, 2.0 Hz, 1H), 7.26 -7.10 (m, 3H), 4.30 -4.20 (m, 4H), 4.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.36 (s, 2H), 3.30 -3.23 (m, 2H), 3.10 -3.00 (m, 2H), 2.19 (s, 6H), 2.16 -2.09 (m, 2H), 2.08 -1.99 (m, 2H), 1.95 -1.86 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.25 -1.21 (m, 2H), 1.21 -1.13 (m, 2H).
Korak N: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-ciklopropil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0564] U rastvor proizvoda iz koraka M (16 mg, 0.02 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (9,43 mg, 0.22 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, a ostatak se trituriše u vodi zatim dietil etru, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (10,4 mg, 0.02 mmol, 68%), kao litijumova so.
[0565] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C35H35FN7O3S2: 684.2227, nađeno 684.2223.
Primer 31: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0566]
Korak A: etil 2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0567] U rastvor iz primera 25 (4,97 g, 10.7 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (180 mL) se dodaje N,N-diizopropiletilamin (5,57 mL, 32 mmol, 3 ekv). Nakon 5 min se smeša ohladi na 0 °C i dodaju se 4-(dimetilamino)piridin (260 mg, 2.13 mmol, 0.2 ekv) i 2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid (5,61 mL, 32 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (5,21 g, 8.73 mmol, 82%).
LC/MS (C28H36N6O3SiS2) 597 [M+H]<+>; RT 2.87 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.52 -7.39 (m, 2H), 7.25 (td, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 -4.01 (m, 2H), 3.72 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), 2.89 -2.81 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.95 -1.83 (m, 2H), 1.82 -1.69 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 5-bromo-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0568] U rastvor proizvoda iz koraka A (5,21 g, 8.73 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (100 mL) se dodaje N-bromosukcinimid (1,71 g, 9.6 mmol, 1.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i 10% vodenog natrijum tiosulfata, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (5,23 g, 7.74 mmol, 89%).
LC/MS (C28H35BrN6O3SiS2) 677 [M+H]<+>; RT 3.08 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.52 -7.38 (m, 2H), 7.31 -7.20 (m, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 6.8, 4.6 Hz, 2H), 3.78 -3.66 (m, 2H), 2.95 -2.85 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.01 -1.88 (m, 2H), 1.86 -1.72 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.87 (m, 2H), -0.10 (s, 9H).
Korak C: etil 5-[(1E)-3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]prop-1-en-1-il]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0569] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka B (5,23 g, 7.74 mmol, 1 ekv), pinakolni estar (E)-3-(terc-butildimetilsililoksi)propen-1-il-borne kiseline (3,04 mL, 9.29 mmol, 1.2 ekv), kalijum karbonat (3,21 g, 23.2 mmol, 3 ekv), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (632 mg, 0.77 mmol, 0.1 ekv), tetrahidrofuran (150 mL) i voda (50 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 120 °C tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžasto ulje (5,17 g, 6.74 mmol, 87%).
LC/MS (C37H54N6O4Si2S2) 767 [M+H]<+>; RT 1.60 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.53 -7.35 (m, 3H), 7.26 (ddd, J = 8.3, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 6.01 (dt, J = 15.9, 4.3 Hz, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.36 -4.235 (m, 4H), 4.12 -3.99 (m, 2H), 3.78 -3.67 (m, 2H), 2.89 -2.78 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.95 -1.82 (m, 2H), 1.81 -1.68 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.97 -0.84 (m, 11H), 0.07 (s, 6H), -0.12 (s, 9H).
Korak D: etil 5-{3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi-]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0570] U rastvor proizvoda iz koraka C (5,17 g, 6.74 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (120 mL) se dodaje platina (IV) oksid (459 mg, 2.02 mmol, 0.3 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni, postavi u atmosferu vodonika i mućka na temperaturi okoline tokom 2 dana. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžasto ulje (4,46 g, 5.8 mmol, 86%).
LC/MS (C37H56N6O4Si2S2) 769 [M+H]<+>; RT 1.62 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.53 -7.40 (m, 2H), 7.31 -7.21 (m, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.10 -3.97 (m, 2H), 3.77 -3.66 (m, 2H), 3.61 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.60 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.11 -2.99 (m, 2H), 2.88 -2.76 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.96 -1.81 (m, 2H), 1.81 -1.67 (m, 4H), 1.29 (t, 3H), 0.91 -0.81 (m, 11H), 0.01 (s, 6H), -0.11 (s, 9H).
Korak E: etil 5-(3-hidroksipropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0571] U rastvor proizvoda iz koraka D (4,46 g, 5.8 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (150 mL) se dodaje tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu, 8,7 mL, 8.7 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na st tokom 1,5 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bež gumu (2,63 g, 4.02 mmol, 69%).
LC/MS (C31H42N6O4SiS2) 655 [M+H]<+>; RT 2.77 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.52 -7.39 (m, 2H), 7.25 (ddd, J = 8.3, 7.1, 1.3 Hz, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.50 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.07 -3.98 (m, 2H), 3.72 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 3.42 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.04 (dd, J = 8.9, 6.4 Hz, 2H), 2.90 -2.77 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.95 -1.82 (m, 2H), 1.81 -1.65 (m, 4H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak F: etil 5-(3-hloropropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0572] Proizvod iz koraka E (1,35 g, 2.06 mmol, 1 ekv) se rastvara u tionil hloridu (20 mL) imeša na temperaturi okoline tokom 5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu, zatim podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (989 mg, 1.47 mmol, 71%).
LC/MS (C31H41ClN6O3SiS2) 673 [M+H]<+>; RT 3.02 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.52 -7.39 (m, 2H), 7.30 -7.21 (m, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.11 -3.98 (m, 2H), 3.72 (t, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.19 -3.09 (m, 2H), 2.88 -2.80 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.07 -1.96 (m, 2H), 1.94 -1.83 (m, 2H), 1.82 -1.69 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak G: etil 5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4b]azepin-9-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0573] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4b (369 mg, 1.91 mmol, 1.3 ekv) u dimetilformamidu (150 mL) se dodaje natrijum hidrid (147 mg, 3.67 mmol, 2.5 ekv) i smeša meša tokom 2 min. Dodaje se rastvor proizvoda iz koraka F (989 mg, 1.47 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (50 mL) i smeša se zagreva na 100 °C tokom 1.5 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -5% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (728 mg, 0.88 mmol, 60%).
LC/MS (C42H52FN7O4SiS2) 830 [M+H]<+>; RT 2.61 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.52 -7.39 (m, 2H), 7.31 -7.22 (m, 2H), 7.21 -7.15 (m, 1H), 7.12 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.10 (t, 2H), 4.08 -3.99 (m, 2H), 3.77 -3.68 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.18 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.86 -2.77 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.11 -1.98 (m, 2H), 1.94 -1.83 (m, 2H), 1.82 -1.69 (m, 2H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak H: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat [0574] U rastvor proizvoda iz koraka G (728 mg, 0.88 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (18 mL) se dodaju etilenediamin (176 µL, 2.63 mmol, 3 ekv) i tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu; 2,64 mL, 2.63 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 60 °C tokom 24 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (224 mg, 0.32 mmol, 37%).
LC/MS (C36H38FN7O3S2) 700 [M+H]<+>; RT 2.05 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (br s, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 12.0, 2.0 Hz, 1H), 7.23 -7.16 (m, 2H), 7.12 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.09 (t, 2H), 4.05 -3.97 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.17 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.86 -2.77 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.11 -1.96 (m, 2H), 1.92 -1.82 (m, 2H), 1.80 -1.69 (m, 2H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak I: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H,9H-piridazino[3,4-b]azepin-9-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0575] U rastvor proizvoda iz koraka H (224 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (134 mg, 3.2 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu, a ostatak se trituriše sa vodom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (202 mg, 0.3 mmol, 94%), kao litijumova so.
[0576] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C34H35FN7O3S2: 672.2227, nađeno 672.225.
Primer 32: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0577]
Korak A: etil 5-{3-[4-(3-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}prop-1-in-1-il)-2-fluorofenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat U rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (500 mg, 0.78 mmol, 1 ekv) u toluenu (15 mL) se dodaje proizvod iz dobijanja 4c (327 mg, 1.17 mmol, 1.5 ekv), a zatim trifenilfosfin (307 mg, 1.17 mmol, 1.5 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (230 µL, 1.17 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao beličastu penu (715 mg, 0.79 mmol, >100%).
LC/MS (C45H56FN7O6SiS2) 902 [M+H]<+>; RT 1.46 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.48 -7.37 (m, 2H), 7.33 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 7.28 -7.13 (m, 3H), 5.84 (s, 2H), 4.32 -4.17 (m, 6H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 2.93 -2.75 (m, 5H), 2.36 (s, 3H), 2.19 -2.10 (m, 2H), 2.10 -1.98 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.28 (t, 3H), 0.96 -0.89 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0578] U rastvor proizvoda iz koraka A (1,67 g, 1.85 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (17 mL) se dodaje fluorovodonik-piridin (3,22 mL, 37 mmol, 20 ekv) i smeša se zagreva na 60 °C tokom 2 h. Reakcija se podeli između 3:1 dihlormetan / izopropanol i 2N vodenog natrijum hidroksida, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (1,02 g, 1.52 mmol, 82%).
LC/MS (C34H34FN7O3S2) 672 [M+H]<+>; RT 2.06 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.2 Hz, 1H), 7.32 -7.25 (m, 1H), 7.23 -7.12 (m, 3H), 4.32 -4.21 (m, 4H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.323.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.20 -2.10 (m, 2H), 2.09 -1.97 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,BH-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0579] U rastvor proizvoda iz koraka B (1,02 g, 1.52 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (50 mL) litijum hidroksid monohidrat (637 mg, 15.2 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na 110 °C preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% 0.7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (657 mg, 1.02 mmol, 67%).
[0580] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H31FN7O3S2: 644.1914, nađeno 644.1930.
Primer 33: 2-[(6R)-3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-6-hidroksi-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0581]
Korak A: (4S)-3-[2-(benziloksi)acetil]-4-(propan-2-il)-1,3-oksazolidin-2-on
[0582] U rastvor (S)-4-izopropil-2-oksazolidinona (10 g, 77.4 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (200 mL) se polako dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 3,72 g, 92.9 mmol, 1.2 ekv) na 0 °C. Nakon 1 h, dodaje se u kapima benziloksiacetil hlorid (12,8 mL, 81.3 mmol, 1.05 ekv) i smeša se meša tokom 1 h. Reakcija se gasi dodavanjem u kapima zasićenog vodenog amonijum hlorida (20 mL) na 0 °C, i ekstrahuje sa etil acetatom (250 mL). Organski ekstrakt se ispere uzastopno sa vodom (250 mL) i rastvorom soli (2 x 250 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Čvrste supstance se suspenduju u heptanu (250 mL) i snažno mešaju tokom 1 h, zatim cede, isperu sa heptanom (2 x 100 mL) i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod ka obeli prah (19,9 g, 71.7 mmol, 93%).
LC/MS (C15H19NO4) 278 [M+H]<+>; RT 1.19 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.42 -7.35 (m, 4H), 7.34 -7.28 (m, 1H), 4.64 (d, 2H), 4.57 (d, J = 0.8 Hz, 2H), 4.42 -4.29 (m, 3H), 2.26 -2.15 (m, 1H), 0.85 (dd, J = 20.8, 6.9 Hz, 6H).
Korak B: (4S)-3-[(2R)-2-(benziloksi)heks-4-inoil]-4-(propan-2-il)-1,3-oksazolidin-2-on
[0583] U rastvor proizvoda iz koraka A (8,7 g, 31.4 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (350 mL), ohlađen na -78 °C, se dodaje natrijum bis(trimetilsilil)amid (1M u tetrahidrofuranu; 47,1 mL, 47.1 mmol, 1.5 ekv) u kapima i smeša se meša tokom 1 h na ovoj temperaturi. Dodaje se u kapima rastvor 1-jodobut-2-ina (16,9 g, 94.1 mmol, 3 ekv) u tetrahidrofuranu (30 mL) i smeša se ostavlja da se zagreje na -40 °C i meša tokom 3 h. Reakcija se gasi zasićenim vodenim amonijum hloridom (200 mL), podeli između etil acetata i vode, i organska faza se uzastopno ispire vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (4.17 g, 12.7 mmol, 40%).
LC/MS (C19H23NO4) 330 [M+H]<+>; RT 1.31 (LCMS-V-B1PsNeg)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 -7.34 (m, 4H), 7.34 -7.27 (m, 1H), 5.13 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.55 -4.40 (m, 2H), 4.39 -4.26 (m, 2H), 2.68 -2.56 (m, 2H), 2.20 -2.07 (m, 1H), 1.71 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 0.84 (dd, 6H).
Korak C: (2R)-2-(benziloksi)heks-4-in-1-ol
[0584] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka B (4,17 g, 12.7 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (45 mL) se dodaje rastvor natrijum borohidrida (623 mg, 16.5 mmol, 1.3 ekv) u vodi (12 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Reakcija se gasi sa zasićenim vodenim amonijum hloridom (100 mL) i podeli između etil acetata i vode. Organska faza se uzastopno ispire vodom i rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (2,01 g, 9.84 mmol, 78%).
[0585]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 -7.31 (m, 4H), 7.31 -7.23 (m, 1H), 4.70 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 3.57 -3.40 (m, 3H), 2.46 -2.27 (m, 2H), 1.75 (t, J = 2.6 Hz, 3H).
Korak D: {[(2R)-2-(benziloksi)heks-4-in-1-il]oksi}(terc-butil)difenilsilan
[0586] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka C (2,01 g, 9.84 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (50 mL) se dodaju u kapima imidazol (1,34 g, 19.7 mmol, 2 ekv) i terc-butil(hloro)difenilsilan (5,12 mL, 19.7 mmol, 2 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 4 h. Reakcija se gasi sa 2M vodenim amonijum hloridom i podeli između dihlormetana i voda. Organska faza se uzastopno ispire vodom i rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (3,66 g, 8.27 mmol, 84%).
LC/MS (C29H34O2Si) weak ionisation; RT 1.73 (LCMS-V-B1P0sNeg)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.68 -7.61 (m, 4H), 7.51 -7.38 (m, 6H), 7.37 -7.32 (m, 4H), 7.32 -7.25 (m, 1H), 4.65 -4.52 (m, 2H), 3.83 -3.68 (m, 2H), 3.67 -3.56 (m, 1H), 2.49 -2.41 (m, 2H), 1.71 (t, J = 2.5 Hz, 3H), 1.00 (s, 9H).
Korak E: 4-[(2R)-2-(benziloksi)-3-[(terc-butildifenilsilil)oksi]propil]-3,6-dihloro-5-metilpiridazin [0587] Rastvor 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (4,99 g, 33.1 mmol, 4 ekv) i proizvod iz koraka D (3,66 g, 8.27 mmol, 1 ekv) u toluenu (50 mL) se zagreva u zatvorenom balonu na 150 °C preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izo-heptanu daje željeni proizvod kao svetlo narandžasto ulje (3,76 g, 6.65 mmol, 80%).
LC/MS (C31H34Cl2N2O2Si) 566 [M+H]<+>; RT 1.72 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.72 -7.62 (m, 4H), 7.56 -7.40 (m, 6H), 7.27 -7.11 (m, 3H), 6.93 -6.84 (m, 2H), 4.44 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.91 -3.78 (m, 2H), 3.76 -3.66 (m, 1H), 3.15 (dd, J = 13.8, 10.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 13.8, 3.6 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.04 (s, 9H).
Korak F: (2R)-2-(benziloksi)-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propan-1-ol
[0588] U rastvor proizvoda iz koraka E (3,76 g, 6.65 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (25 mL) se dodaje tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu; 7,31 mL, 7.31 mmol, 1.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se razblaži sa etil acetatom (100 mL), uzastopno ispere vodom (150 mL), zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (150 mL) i rastvorom soli (2 x 100 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu čvrstu supstancu (1,68 g, 5.14 mmol, 77%).
LC/MS (C15H16Cl2N2O2) 327 [M+H]<+>; RT 1.06 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.25 -7.12 (m, 3H), 7.01 -6.93 (m, 2H), 4.99 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.69 -3.51 (m, 3H), 3.08 -2.91 (m, 2H), 2.29 (s, 3H).
Korak G: etil 2-{[(2R)-2-(benziloksi)-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0589] U rastvor proizvoda iz koraka F (1,68 g, 5.14 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (55 mL) se dodaju trifenilfosfin (2,7 g, 10.3 mmol, 2 ekv) i etil 2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-1,3-tiazol-4-karboksilat (1,68 g, 6.16 mmol, 1.2 ekv), a zatim diizopropil azodikarboksilat (2,02 mL, 10.3 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 2 h. Reakcija se podeli između etil acetata i vode i organska faza se uzastopno ispire vodom i rastvorom soli (2 x 50 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Materijal se rastvara u dihlormetanu (30 mL) i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (7,87 mL, 103 mmol, 20 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se razblaži i neutrališe sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, slojevi se razdvajaju i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 100 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli (150 mL), suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -80% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (1,94 g, 4.02 mmol, 78%).
LC/MS (C21H22Cl2N4O3S) 482 [M+H]<+>; RT 1.28 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.24 -7.06 (m, 3H), 7.01 -6.93 (m, 2H), 4.54 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.31 -4.15 (m, 3H), 3.97 -3.86 (m, 1H), 3.70 -3.59 (m, 1H), 3.52 -3.41 (m, 1H), 3.06 (dd, J = 13.9, 10.2 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 13.9, 3.2 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak H: etil 2-[(6R)-6-(benziloksi)-3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0590] U rastvor proizvoda iz koraka G (2,09 g, 4.34 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (130 mL) se dodaje kalijum karbonat (1,2 g, 8.68 mmol, 2 ekv) i bakar (I) jodid (827 mg, 4.34 mmol, 1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 10 h. Reakcija se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 60 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli (2 x 50 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C18130g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao bledo braon čvrstu supstancu (0,7 g, 1.58 mmol, 36%).
LC/MS (C21H21ClN4O3S) 446 [M+H]<+>; RT 1.36 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.05 (s, 1H), 7.32 -7.17 (m, 5H), 4.99 -4.86 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 4.39 -4.23 (m, 3H), 4.07 (dd, J = 13.6, 2.1 Hz, 1H), 3.29 -3.02 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak I: etil 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-(benziloksi)-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0591] U zatvoren balon osušen u sušnici se dodaje proizvod iz koraka H (700 mg, 1.57 mmol, 1 ekv), 2-aminobenzotiazol (473 mg, 3.15 mmol, 2 ekv), N,N-diizopropiletilamin (0,82 mL, 4.72 mmol, 3 ekv), JosiPhos Pd G3 (291 mg, 0.31 mmol, 0.2 ekv) i 1,4-dioksan (17.5 mL) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 100 °C tokom 3 dana. Reakcija se podeli između zasićenog vodenog natrijum bikarbonata i etil acetata, vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 80 mL), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli (70 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (548 mg, 0.98 mmol, 62%).
LC/MS (C28H26N6O3S2) 559 [M+H]<+>; RT 1.03 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (br s, 1H), 7.38 (td, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.33 -7.16 (m, 6H), 4.96 -4.85 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.38 -4.25 (m, 3H), 4.15 -4.05 (m, 1H), 3.25 -3.14 (m, 1H), 3.13 -3.02 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H). Korak J: etil 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-hidroksi-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0592] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka I (548 mg, 0.98 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (30 mL) se dodaje u kapima bor trihlorid (1M u dihlormetanu; 4,9 mL, 4.9 mmol, 5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 2 h. Reakcija se hladi na 0-5 °C i gasi sa metanolom (5 mL). Dalje se dodaje metanol (5 mL) i smeša se zagreva na refluksu tokom 1,5 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C1843g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi daje željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu(328 mg, 0.7 mmol, 71%).
LC/MS (C21H20N6O3S2) 469 [M+H]<+>; RT 0.71 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.89 (br s, 1H), 7.51 (br s, 1H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 12.8, 4.8 Hz, 1H), 4.41 -4.34 (m, 1H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.19 (dd, J = 12.9, 2.5 Hz, 1H), 3.08 -2.88 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak K: 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-hidroksi-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0593] U rastvor proizvoda iz koraka J (60 mg, 0.13 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (10 mL) se dodaje rastvor litijum hidroksid monohidrata (10,8 mg, 0.26 mmol, 2 ekv) u vodi (2 mL) i smeša se zagreva na refluksu tokom 2 h. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C1813g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi daje žutu čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca se rastvara u metanolu, zatim se napuni u metanolom navlažen PE-AX kertridž (10 g), ispere uzastopno sa metanolom i dihlormetanom, eluira sa 10% mravlje kiseline u dihlormetanu, i koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (11,4 mg, 0.03 mmol, 20%), kao so mravlje kiseline.
[0594] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C19H17N6O3S2: 441.0804, nađeno 441.0827.
Primer 34: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)propil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0595]
Korak A: etil 5-{3-[4-(3-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}propil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0596] U rastvor iz primera 32, korak A (447 mg, 0.5 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (11 mL) se dodaje platina (IV) oksid (22,5 mg, 0.1 mmol, 0.2 ekv) u atmosferi azota. Posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3) zatim isprazni, postavi pod atmosferu vodonika i mućka na temperaturi okoline tokom 24 h. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od izo-heptana do 50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (424 mg, 0.47 mmol, 94%).
LC/MS (C45H60FN7O6SiS2) 906 [M+H]<+>; RT 1.45 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.20 (m, 1H), 7.12 -7.02 (m, 2H), 6.98 -6.91 (m, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.33 -4.20 (m, 4H), 4.08 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.77 -3.67 (m, 2H), 3.27 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.18 -3.04 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.45 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.17 -1.99 (m, 4H), 1.78 -1.62 (m, 2H), 1.29 (t, 3H), 1.24 (s, 9H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)propil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0597] U rastvor proizvoda iz koraka A (424 mg, 0.47 mmol, 1 ekv) u acetonitrilu (6 mL) se dodaje fluorovodonik-piridin (0,81 mL, 9.36 mmol, 20 ekv) i smeša se zagreva na 60 °C tokom 3 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i 2N vodenog natrijum hidroksida, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (147 mg, 0.22 mmol, 47%).
LC/MS (C34H38FN7O3S2) 676 [M+H]<+>; RT 2.06 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.53 -7.45 (m, 1H), 7.41 -7.32 (m, 1H), 7.18 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.12 -7.01 (m, 2H), 6.97 -6.89 (m, 1H), 4.34 -4.19 (m, 4H), 4.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.32 -3.21 (m, 4H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.41 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.17 -1.99 (m, 4H), 1.69 -1.57 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-(metilamino)propil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0598] U rastvor proizvoda iz koraka B (147 mg, 0.22 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (15 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (91,3 mg, 2.18 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (83,8 mg, 0.13 mmol, 60%).
[0599] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H35FN7O3S2: 648.2227, nađeno 648.2246.
Primer 35: 5-{3-[4-(Aminometil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0600]
Korak A: etil 5-[3-(4-cijano-2-fluorofenoksi)propil]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{2-[2-(trimetilsilil)etoksi]-etil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0601] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (200 mg, 0.31 mmol, 1 ekv) u toluenu (6 mL) se dodaje 3-fluoro-4-hidroksibenzonitril (64,2 mg, 0.47 mmol, 1.5 ekv), a zatim trifenilfosfin (123 mg, 0.47 mmol, 1.5 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (92,2 µL, 0.47 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -50% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (207 mg, 0.27 mmol, 87%).
LC/MS (C37H42FN7O4SiS2) 760 [M+H]<+>; RT 3.00 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 -7.78 (m, 2H), 7.70 -7.63 (m, 1H), 7.49 -7.38 (m, 2H), 7.36 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.28 -7.19 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.33 -4.18 (m, 6H), 3.77 -3.68 (m, 2H), 3.32 -3.23 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.22 -2.11 (m, 2H), 2.10 -1.99 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 5-{3-[4-(aminometil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{2-[2-(trimetilsilil)-etoksi]etil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0602] Rastvor proizvoda iz koraka A (336 mg, 0.44 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (60 mL) se hidrogenizuje korišćenjem H-Cube<®>Pro (ThalesNano) (110 °C, 85 bar). Smeša se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (282 mg, 0.37 mmol, 84%).
LC/MS (C37H46FN7O4SiS2) 764 [M+H]<+>; RT 1.31 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 -7.78 (m, 1H), 7.48 -7.37 (m, 2H), 7.28 -7.13 (m, 2H), 7.12 -7.00 (m, 2H), 5.84 (s, 2H), 5.87 (s, 2H), 4.33 -4.20 (m, 4H), 4.09 (td, J = 6.2, 1.9 Hz, 2H), 3.78 -3.66 (m, 2H), 3.31 -3.21 (m, 4H), 2.86 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.19 -1.97 (m, 4H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 -0.84 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak C: etil 5-{3-[4-(aminometil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0603] U rastvor proizvoda iz koraka B (94 mg, 0.12 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (5 mL) se dodaje tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu, 0,74 mL, 0.74 mmol, 6 ekv) i etilendiamin (49,3 µL, 0.74 mmol, 6 ekv) i smeša se zagreva na 100 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (29 mg, 0.05 mmol, 37%).
LC/MS (C31H32FN7O3S2) 634 [M+H]<+>; RT 1.96 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.38 -7.30 (m, 1H), 7.26 -7.00 (m, 4H), 4.32 -4.21 (m, 4H), 4.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.32 -3.21 (m, 4H), 2.87 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.17 -1.98 (m, 4H), 1.29 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
Korak D: 5-{3-[4-(aminometil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0604] U rastvor proizvoda iz koraka C (29 mg, 0.05 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (19,2 mg, 0.46 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (3,0 mg, 4.89 mmol, 28%).
[0605] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C29H29FN7O3S2: 606.1757, nađeno 606.1782.
Primer 36: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0606]
Korak A: etil 5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0607] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (1 g, 1.56 mmol, 1 ekv) u toluenu (30 mL) se dodaje proizvod iz dobijanja 4b (452 mg, 2.34 mmol, 1.5 ekv), a zatim trifenilfosfin (614 mg, 2.34 mmol, 1.5 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (461 mL, 2.34 mmol, 1.5 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao braon gumu (1,16 g, 1.42 mmol, 91%).
LC/MS (C41H50FN7O4SiS2) 816 [M+H]<+>; RT 2.70 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 -7.77 (m, 1H), 7.47 -7.37 (m, 2H), 7.31 (dd, J = 12.0, 1.9 Hz, 1H), 7.27 -7.12 (m, 3H), 5.83 (s, 2H), 4.32 -4.20 (m, 4H), 4.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.76 -3.67 (m, 2H), 3.37 (s, 2H), 3.31 -3.21 (m, 2H), 2.86 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.17 -2.09 (m, 2H), 2.07 -2.00 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0608] U rastvor proizvoda iz koraka A (262 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (10 mL) se dodaju etilendiamin (21,4 µL, 0.32 mmol, 1 ekv) i tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu, 0,96 mL, 0.96 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 70 °C preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -6% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (114 mg, 0.17 mmol, 52%).
LC/MS (C35H36FN7O3S2) 686 [M+H]<+>; RT 2.08 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.43 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 -7.35 (m, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.26 -7.12 (m, 3H), 4.32 -4.22 (m, 4H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.28 (dd, J = 8.6, 6.7 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.20 -2.10 (m, 2H), 2.07 -2.02 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0609] U rastvor proizvoda iz koraka B (119 mg, 0.17 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (40 mL) se dodaje platina (IV) oksid (7,88 mg, 0.03 mmol, 0.2 ekv) u atmosferi azota i posuda se isprazni i ponovo napuni azotom (x3), zatim isprazni, postavi pod atmosferu vodonika, i mućka na temperaturi okoline tokom 3 dana. Reakcija se cedi kroz celit, eluira etil acetatom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (55 mg, 0.08 mmol, 46%).
LC/MS (C35H40FN7O3S2) 690 [M+H]<+>; RT 2.10 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.44 (br s, 1H), 7.88 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.20 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.12 -7.02 (m, 2H), 6.97 -6.89 (m, 1H), 4.32 -4.21 (m, 4H), 4.09 (t, 2H), 3.33 -3.22 (m, 4H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.19 -2.11 (m, 4H), 2.09 (s, 6H), 2.07 -2.01 (m, 2H), 1.63 (p, J = 7.4 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak D: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,BH-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0610] U rastvor proizvoda iz koraka C (55 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (33,5 mg, 0.8 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu 0 -20% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa acetonitrilom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (32,8 mg, 0.05 mmol, 62%).
[0611] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H37FN7O3S2: 662.2383, nađeno 662.2402.
Primer 37: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-5,6-dihidropirolo[2,3-c]piridazin-7-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0612]
Korak A: metil 2-[terc-butoksikarbonil-[2-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)etil]amino]-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
[0613] Korišćenjem Mitsunobu-ovog opšteg postupka polazeći od 5,18 g iz dobijanja 1a (Korak D) (9.6 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg karbamata i 2,0 g iz dobijanja 2c (9.6 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola, dobija se 5,6 g željenog proizvoda (80% prinos).
Korak B: metil 2-[2-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)etilamino]-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)-propil]tiazol-4-karboksilat
[0614] Korišćenjem uklanjanje zaštite sa HFIP opštim postupkom polazeći od 5,65 g proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg karbamata, dobija se 2,9 g željenog proizvoda (60%).
[0615]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.76 (t, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 4.02 (t, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.48 (m, 2H), 3.13 (t, 2H), 3.1 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.99 (m, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 134.2, 125, 117.7, 82.4, 67.9, 51.8, 41.6, 30.4, 30.4, 23.2, 16.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C21H21Cl2FIN4O3S: 624.9734, nađeno 624.9740.
Korak C: metil 2-(3-hloro-4-metil-5,6-dihidropirolo[2,3-c]piridazin-7-il)-5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]tiazol-4-karboksilat
[0616] Suspenzija od 3,0 g proizvoda iz koraka B (4.79 mmol, 1 ekv.) i 1,85 g cezijum karbonata (9.59 mmol, 2 ekv.) se mešaju na 80°C tokom 3 h u 25 mL suvog 1,4-dioksana, dok se ne primeti potpuna konverzija. Reakciona smeša se direktno uparava na celit, a zatim prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM-MeOH kao eluente da se dobije 2,64 g željenog proizvoda (93% prinos).
[0617]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.6 (dd, 1H), 7.46 (dm, 1H), 6.99 (t, 1H), 4.35 (t, 2H), 4.1 (t, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.3 (m, 2H), 3.3 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.12 (m, 2H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 134.2, 125.0, 117.7, 68.1, 52.2, 49.8, 30.7, 24.6, 23.5, 16.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C21H20ClFIN4O3S: 588.9967, nađeno 588.9959.
Korak D: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-5,6-dihidropirolo[2,3-c]piridazin-7-il)tiazol-4-karboksilat
[0618] Jednogrli balon sa okruglim dnom od 100 mL, osušen u sušnici, je opremljen magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE i montiran na refluks kondenzator. Napuni se sa 2,6 g proizvoda iz koraka C (4.48 mmol, 1 ekv.), 1,51 g terc-butil N-metil-N-prop-2-inil-karbamata (8.96 mmol, 2 ekv.) i 4 mL DIPEA, zatim se dodaje 16 mL suvog THF i sistem se ispere sa argonom. Nakon 5 minuta mešanja u inertnoj atmosferi dodaju se 42 mg mg Pd(PPh3)2Cl2(0.224 mmol, 0.05 ekv.) i 79 mg (0.224 mmol, 0.05 ekv.). Dobijena smeša se zatim zagreva do 60°C i meša na toj temperaturi tokom 2 sata da bi se postigla potpuna konverzija. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluente da se dobije 1,88 g željenog proizvoda (67% prinos).
Korak E: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-5,6-dihidropirolo[2,3-c]piridazin-7-il]-5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino] prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0619] Bočica od 4 mL osušena u sušnici opremljena magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE se napuni sa 80 mg proizvoda iz koraka D (0.127 mmol, 1.0 ekv.), 28 mg 1,3-benzotiazol-2-amina (0.19 mmol, 1.5 ekv.) i 113 uL DIPEA (0.635 mmol, 5 ekviv) suspendoviano u 0,5 mL suvog 1,4-dioksana. Nastala smeša se ispere azotom, a zatim se dodaju 11 mg Pd2(dba)3(0.012 mmol, 0.1 ekv.) i 14 mg Xantphosa (0.024 mmol, 0.2 ekv.). Reakciona smeša se zatim zagreje do 120°C i meša na toj temperaturi tokom 2 h, kada je reakcija dostigla potpunu konverziju. Reakciona smeša se direktno uparava na celit, a zatim prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan-EtOAc kao eluente da se dobije 65 mg željenog proizvoda (68% prinos).
Korak F: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-5,6-dihidropirolo[2,3-c]piridazin-7-il]-5-[3-[2-fluor--4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0620] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize, polazeći od proizvoda iz koraka E kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0621] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C31H29FN7O3S2: 630.1752, nađeno 630.1755.
Primer 38: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-6-hidroksi-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0622]
Korak A: metil 2-[terc-butoksikarbonil-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino]-5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluorofenoksilpropil]tiazol-4-karboksilat (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0623] Korišćenjem Mitsunobu-ovog opšteg postupka polazeći od 1,91 g dobijanja 1b (3.4 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg karbamata i 1,6 g dobijanja 2b (3.4 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola, dobija se 2,2 g željenog proizvoda (63% prinos).
[0624]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.54-7.26 (m, 10H), 7.29 (m, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.08 (t, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.34/3.84 (m, 2H), 4.06 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 2.96/2.89 (m, 2H), 2.86 (bs, 3H), 2.06 (m, 2H), 2.03 (bs, 3H), 1.4 (s, 18H), 1.22 (m, 2H), 0.81 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.0, 119.2, 115.4, 68.8, 67.9, 52.0, 51.1, 36.1, 33.9, 30.4, 28.0, 26.9, 22.9, 22.7, 19.1, 16.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C52H63Cl2FN5O8SSi: 1034.3522, nađeno 1034.3519.
Korak B: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[[2-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propil]amino]tiazol-4-karboksilat (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0625] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite sa HFIPA polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg karbamata, dobija se 1,6 g željenog proizvoda (81% prinos).
[0626]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.76 (t, 1H), 7.56-7.26 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.23 (br., 2H), 4.06 (t, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.38/3.25 (m+m, 2H), 3.11 (t, 2H), 3.05 (m, 2H), 2.86 (br., 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (quint., 2H), 1.41 (s, 9H), 0.85 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.9, 157.4, 157.3, 154.9, 151.5, 140.6, 139.8, 129.1, 119.3, 115.3, 69.9, 67.9, 51.7, 50.1, 38.5, 36.2, 33.8, 30.5, 28.5, 27.1, 23.2, 17.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C47H55Cl2FN5O6SSi: 934.2997, nađeno 934.2994.
Korak C: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[6-[terc-butil(difenil)silil]oksi-3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0627] Bočica od 40 mL, osušena u sušnici, opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE je napunjena sa 1,50 g proizvoda iz koraka B (1.6 mmol, 1.0 ekviv), rastvara se u 8 mL 1,4-dioksana, zatim se dodaju 620 mg cezijum karbonata (3.2 mmol, 2.0 ekviv) i 560 uL DIPEA (410 mg, 3.2 mmol, 2.0 ekviv), i zatim postavi u inertnu atmosferu. Nakon dodavanja 110 mg Pd(AtaPhos)2Cl2(0.16 mmol, 0.10 ekv.) reakciona smeša se zatim zagreva do 80°C i meša na toj temperaturi tokom 30 min, kada je reakcija dostigla potpunu konverziju. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 550 mg željenog proizvoda (38% prinos).
[0628]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.47 (dm, 4H), 7.47/7.43 (tm+tm, 2H), 7.38/7.33 (tm+tm, 4H), 7.3 (dm, 1H), 7.18 (m, 1H), 7.11 (t, 1H), 4.72/3.86 (m+m, 2H), 4.63 (m, 1H), 4.22 (s, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.27 (m, 2H), 2.95/2.87 (m+m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.8 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.0, 156.0, 151.9, 151.6, 151.5, 151.4, 147.5, 142.2, 137.0, 135.6/135.5, 135.0, 133.2/133.1, 130.6/130.5, 129.1, 128.4/128.3, 126.8, 119.4, 115.4, 114.8, 85.3, 82.5, 79.8, 68.3, 63.1, 52.0, 51.8, 38.5, 33.8, 32.6, 30.7, 28.5, 26.8, 23.1, 19.1, 15.5; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C47H54ClFN5O6SSi: 898.3231, nađeno 898.3238.
Korak D: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-6-[terc-butil(difenil)silil]oksi-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluorofenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0629] Bočica od 40 mL, osušena u sušnici, opremljena sa magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE je napunjena sa 179 mg proizvoda iz koraka C (0.2 mmol, 1.0 ekv.), 60 mg 1,3-benzotiazol-2-amina (0.4 mmol, 2.0 ekv.) i 104 uL DIPEA (0.6 mmol, 3 ekviv) rastvara se u 1 mL suvog DMF. Nastala smeša se ispere azotom, a zatim se dodaju 18 mg Pd2(dba)3(0.02 mmol, 0.1 ekv.) i 23 mg Xantphos (0.04 mmol, 0.2 ekv.). Reakciona smeša se zatim zagreva do 140°C i meša na toj temperaturi tokom 30 min, kada je reakcija dostigla potpunu konverziju. Reakciona smeša se direktno ubrizga se u prethodno kondicioniranu kolonu od silikagela, i zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći heptan i EtOAc kao eluente da se dobije 50 mg željenog proizvoda (24% prinos).
Korak E: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-6-hidroksi-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina (enantiomerno čist, iz enantiomera 2 iz dobijanja 2b, korak A)
[0630] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka D kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0631] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C32H31FN7O4S2: 660.1857, nađeno 660.1847.
Primer 39: 2-[(6R)-3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-{[2-(metilamino)etil]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0632]
Korak A: terc-butil (4R)-4-(2-hidroksietil)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[0633] U rastvor terc-butil N-[(2R)-1,4-dihidroksibutan-2-il]karbamata (10,5 g, 51.2 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (110 mL) se dodaje 2,2-dimetoksipropan (12,5 mL, 102 mmol, 2 ekv) i p-toluensulfonska kiselina monohidrat (0,51 mL, 5.12 mmol, 0.1 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se gasi sa 0.2N vodenim natrijum hidroksidom (50 mL) i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (5,13 g, 20.9 mmol, 41%).
[0634]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.49 -4.40 (m, 1H), 3.92 -3.82 (m, 2H), 3.79 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.48 -3.39 (m, 2H), 1.87 -1.69 (m, 1H), 1.66 -1.50 (m, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.42 (s, 12H).
Korak B: terc-butil (4R)-2,2-dimetil-4-(2-oksoetil)-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[0635] Rastvor proizvoda iz koraka A (5,13 g, 20.9 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (100 mL) se ohladi na 0 °C. Dodaje se Des Martinov perjodinan (9,31 g, 22 mmol, 1.05 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 2,5 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 220 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (3,23 g, 13.3 mmol, 64%).
[0636]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.65 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 4.22 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.09 -3.98 (m, 1H), 3.71 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 2.76 -2.61 (m, 2H), 1.48 (s, 3H), 1.40 (d, J = 8.1 Hz, 12H).
Korak C: terc-butil (4R)-4-(3,3-dibromoprop-2-en-1-il)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat [0637] U rastvor tetrabromometana (4,04 mL, 39.8 mmol, 3 ekv) u dihlormetanu (65 mL) se dodaje rastvor trifenilfosfin (20,9 g, 79.7 mmol, 6 ekv) u dihlormetanu (100 mL) i smeša se meša tokom 10 min. U rastvor proizvoda iz koraka B (3,23 g, 13.3 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (60 mL) se dodaje trietilamin (16,6 mL, 120 mmol, 9 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C. Prvi rastvor se dodaje u porcijama, a nastala smeša se meša na 0 °C tokom 2 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Ostatak se trituriše sa ohlađenim dietil etrom, čvrste supstance se sakupe ceđenjem i ispiru sa dietil etrom. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (1,77 g, 4.43 mmol, 33%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.08 -3.87 (m, 2H), 3.83 -3.70 (m, 2H), 2.45 -2.28 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.41 (d, 12H).
Korak D: terc-butil (4R)-4-(but-2-in-1-il)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[0638] U rastvor proizvoda iz koraka C (1,77 g, 4.43 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (40 mL), ohlađenom na -78 °C, se dodaje n-butillitijum (2.5M u heksanima; 5,32 mL, 13.3 mmol, 3 ekv) i smeša se meša na ovoj temperaturi tokom 1 h. Dodaje se jodometan (1,38 mL, 22.2 mmol, 5 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog amonijum hlorida, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (1,04 g, 4.11 mmol, 93%).
[0639]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.02 -3.92 (m, 1H), 3.90 -3.75 (m, 2H), 2.46 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.37 -2.20 (m, 1H), 1.75 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.41 (dd, J = 8.2, 3.8 Hz, 12H).
Korak E: terc-butil N-[(2R)-1-hidroksiheks-4-in-2-il]karbamat
[0640] U rastvor proizvoda iz koraka D (1,04 g, 4.11 mmol, 1 ekv) u metanolu (30 mL) se dodaje ptoluensulfonska kiselina monohidrat (0,08 mL, 0.82 mmol, 0.2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Comb-iFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -60% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (724 mg, 3.39 mmol, 83%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.54 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.67 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.53 -3.40 (m, 1H), 3.39 -3.26 (m, 2H), 2.38 -2.09 (m, 2H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.39 (s, 9H).
Korak F: terc-butil N-[(2R)-1-[(terc-butildifenilsilil)oksi]heks-4-in-2-il]karbamat
[0641] U rastvor proizvoda iz koraka E (724 mg, 3.39 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (30 mL) se dodaje imidazol (0,45 mL, 6.79 mmol, 2 ekv) i smeša se ohladi na 0 °C zatim se dodaje tercbutil(hloro)difenilsilan (0,93 mL, 3.56 mmol, 1.05 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog amonijum hlorida, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (1,67 g, 3.7 mmol, 109%).
LC/MS (C27H37NO3Si) 352 [M-Boc]<+>; RT 1.28 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.73 -7.59 (m, 4H), 7.52 -7.35 (m, 6H), 3.67 -3.57 (m, 2H), 2.46 -2.14 (m, 2H), 1.70 (t, J = 2.5 Hz, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.37 -1.29 (m, 1H), 1.00 (s, 9H).
Korak G: {[(2R)-2-aminoheks-4-in-1-il]oksi}(terc-butil)difenilsilan
[0642] U rastvor proizvoda iz koraka F (1,67 g, 3.7 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (35 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (8,07 mL, 105 mmol, 28.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i 1N vodenog natrijum hidroksida (120 mL), i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (997 mg, 2.84 mmol, 77%).
[0643]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.68 -7.61 (m, 4H), 7.53 -7.40 (m, 6H), 3.54 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.92 -2.81 (m, 1H), 2.38 -2.14 (m, 2H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 1.62 -1.44 (m, 2H), 1.01 (s, 9H).
Korak H: benzil N-(2-{[(2R)-1-[(terc-butildifenilsilil)oksi]heks-4-in-2-il]amino}etil)-N-metilkarbamat [0644] U rastvor proizvoda iz koraka G (997 mg, 2.84 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (24 mL) se dodaje rastvor benzil N-metil-N-(2-oksoetil)karbamata (647 mg, 3.12 mmol, 1.1 ekv) u tetrahidrofuranu (11.9 mL) i smeša se ohladi na 0 °C. Dodaje se natrijum triacetoksiborohidrid (1,8 g, 8.51 mmol, 3 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 4 h. Reakcija se podeli između etil acetata i 1N vodenog natrijum hidroksida, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (1,46 g, 2.69 mmol, 95%).
LC/MS (C33H42N2O3Si) 543 [M+H]<+>; RT 2.34 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (d, J = 6.7 Hz, 4H), 7.52 -7.39 (m, 6H), 7.37 -7.24 (m, 5H), 5.03 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.64 -3.52 (m, 2H), 3.28 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.86 (d, J = 14.2 Hz, 3H), 2.74 -2.60 (m, 2H), 2.35 -2.23 (m, 2H), 1.68 (t, 3H), 1.63 -1.50 (m, 1H), 0.99 (s, 9H).
Korak I: benzil N-(2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)-N-[(2R)-1-[(tercbutildifenilsilil)oksi]heks-4-in-2-il]karbamat
[0645] U rastvor proizvoda iz koraka H (1,46 g, 2.69 mmol, 1 ekv) u etil acetatu (30 mL) se dodaje rastvor natrijum bikarbonat (497 mg, 5.92 mmol, 2.2 ekv) u vodi (8.5 mL) i smeša se ohladi na 0 °C zatim se dodaje benzil hloroformijat (0,46 mL, 3.23 mmol, 1.2 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bistro ulje (1,75 g, 2.59 mmol, 96%).
LC/MS (C41H48N2O5Si) 677 [M+H]<+>; RT 1.32 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.67 -7.50 (m, 4H), 7.49 -7.22 (m, 16H), 5.16 -4.90 (m, 4H), 4.19 -4.07 (m, 1H), 3.79 -3.51 (m, 2H), 3.44 -3.34 (m, 2H), 3.28 -3.15 (m, 2H), 2.92 -2.71 (m, 3H), 2.45 -2.17 (m, 2H), 1.64 (s, 3H), 0.95 (d, J = 4.4 Hz, 9H).
Korak J: benzil N-(2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino]etil)-N-[(2R)-1-[(terc-butildifenilsilil)oksi]-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propan-2-il]karbamat
[0646] U rastvor proizvoda iz koraka I (1,75 g, 2.59 mmol, 1 ekv) u toluenu (35 mL) se dodaje 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (1,56 g, 10.3 mmol, 4 ekv) i smeša se zagreva na 150 °C u zatvorenom balonu tokom 3 dana. Reakcija se koncentruje u vakuumu a prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -40% etil acetata u izo-heptanu dalo je sirovi željeni proizvod kao crvenu gumu (1,2 g, 1.5 mmol, 58%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0647] LC/MS (C43H48N4O5SiCl2) 799 [M+H]<+>; RT 1.32 (LCMS-V-B2)
Korak K: benzil N-(2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)-N-[(2R)-1-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)-3-hidroksipropan-2-il]karbamat
[0648] U rastvor proizvoda iz koraka J (1,2 g, 1.5 mmol, 1 ekv) u metanolu (55 mL) se dodaje acetil hlorid (0,54 mL, 7.5 mmol, 5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 dana. Reakcija se koncentruje u vakuumu zatim podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanol u dihlormetanu dalo je sirovi željeni proizvod kao narandžastu gumu (846 mg, 1.51 mmol, 100%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0649] LC/MS (C27H30Cl2N4O5) 561 [M+H]<+>; RT 0.80 (LCMS-V-B2)
Korak L: metil 2-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0650] U rastvor proizvoda iz dobijanja 4d (652 mg, 3.31 mmol, 1.2 ekv) u dimetilformamidu (15 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje natrijum hidrid (60% disperzija; 264 mg, 6.61 mmol, 2.4 ekv) i smeša se meša tokom 30 min. Rastvor proizvoda iz dobijanja 1d (1,17 g, 2.75 mmol, 1 ekv) u dimetilformamidu (15 mL) se dodaje i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -16% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bistru gumu (431 mg, 0.87 mmol, 32%).
LC/MS (C24H34FN3O5S) 496 [M+H]<+>; RT 1.81 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.64 (br s, 1H), 7.13 -7.00 (m, 2H), 6.97 -6.89 (m, 1H), 4.04 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.28 -3.15 (m, 2H), 2.58 -2.50 (m, 2H), 2.18 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.12 (s, 6H), 2.12 -2.00 (m, 2H), 1.71 -1.59 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
Korak M: metil 2-{[(2R)-2-{[(benziloksi)karbonil](2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)amino}-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil][(terc-butoksi)karbonil]amino}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0651] U rastvor proizvoda iz koraka K (422 mg, 0.75 mmol, 1 ekv) u toluenu (25 mL) se dodaje proizvod iz koraka L (431 mg, 0.87 mmol, 1.16 ekv), a zatim trifenilfosfin (394 mg, 1.5 mmol, 2 ekv) i di-tercbutil azodikarboksilat (346 mg, 1.5 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, srazdvaja (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu gumu (517 mg, 0.5 mmol, 66%).
LC/MS (C51H62Cl2FN7O9S) 1040 [M+H]<+>; RT 2.48 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (s, 27H), 7.24 (s, 2H), 7.11 -6.95 (m, 8H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 3H), 5.76 (s, 3H), 5.22 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 4.97 (s, 4H), 4.78 (s, 1H), 4.50 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.00 (s, 7H), 3.69 (s, 6H), 2.94 (s, 3H), 2.82 (s, 3H), 2.76 (s, 1H), 2.37 (s, 1H), 2.30 (s, 1H), 2.20 (s, 7H), 2.13 (s, 17H), 2.09 (s, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.96 (s, 5H), 1.64 (d, J = 8.1 Hz, 8H), 1.50 (s, 5H), 1.43 (d, J = 10.5 Hz, 6H).
Korak N: metil 2-{[(2R)-2-{[(benziloksi)karbonil](2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)amino}-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0652] U rastvor proizvoda iz koraka M (517 mg, 0.5 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (10 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (4 mL, 52.2 mmol, 105 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom i ohladi na 0 °C i gasi sa 1N vodenim natrijum hidroksidom (60 mL), i organska faza se ispire rastvorom soli, razdvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% 1N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu gumu (461 mg, 0.49 mmol, 99%).
LC/MS (C46H54Cl2FN7O7S) 939 [M+H]<+>; RT 2.16 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (s, 1H), 7.48 -7.18 (m, 10H), 7.11 -6.88 (m, 3H), 5.12 -4.82 (m, 4H), 4.063.90 (m, 2H), 3.76 -3.58 (m, 4H), 3.53 -3.36 (m, 2H), 3.29 -3.21 (m, 2H), 3.17 -3.03 (m, 4H), 3.01 -2.81 (m, 3H), 2.79 -2.69 (m, 2H), 2.36 -2.24 (m, 4H), 2.18 (t, 2H), 2.11 (s, 6H), 2.00 -1.93 (m, 3H), 1.64 (p, J = 7.3 Hz, 2H).
Korak O: metil 2-[(6R)-6-{[(benziloksi)karbonil](2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)amino}-3-chlor-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0653] U rastvor proizvoda iz koraka N (461 mg, 0.49 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (10 mL) se dodaje cezijum karbonat (320 mg, 0.98 mmol, 2 ekv) i N,N-diizopropiletilamin (171 µL, 0.98 mmol, 2 ekv). Smeša se prska azotom (10 min) zatim se dodaje bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfin)dihloropaladijum(II) (34,8 mg, 0.05 mmol, 0.1 ekv) i smeša se zagreva na 80 °C tokom 3 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -12% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu gumu (285 mg, 0.32 mmol, 64%).
LC/MS (C46H53ClFN7O7S) 902 [M+H]<+>; RT 2.32 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.52 -7.21 (m, 9H), 7.15 -7.00 (m, 4H), 5.21 -4.91 (m, 4H), 4.84 -4.63 (m, 1H), 4.39 -4.22 (m, 1H), 4.07 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.05 -3.91 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.56 -3.43 (m, 2H), 3.41 -3.36 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 3.30 -3.23 (m, 2H), 3.01 -2.75 (m, 4H), 2.28 (s, 2H), 2.18 (d, J = 6.9 Hz, 4H), 2.11 (s, 6H), 1.64 (p, J = 7.4 Hz, 2H).
Korak P: metil 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-{[(benziloksi)karbonil](2-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}etil)amino}-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0654] U rastvor proizvoda iz koraka O (117 mg, 0.13 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (5 mL) se dodaju 2-aminobenzotiazol (39 mg, 0.26 mmol, 2 ekv), N,N-diizopropiletilamin (67,9 µL, 0.39 mmol, 3 ekv) i JosiPhos Pd G3 (24 mg, 0.03 mmol, 0.2 ekv) i smeša se prska azotom (10 min) zatim zagreva na 140 °C tokom 3 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C1813g RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je sirovi željeni proizvod kao žutu gumu (23 mg, 0.02 mmol, 17%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0655] LC/MS (C53H58FN9O7S2) 1017 [M+H]<+>; RT 2.43 (LCMS-V-C)
Korak Q: 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-{[2-(metilamino)etil]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0656] U rastvor proizvoda iz koraka P (23 mg,0.02 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (0.5 mL) se dodaje koncentrovana hlorovodonična kiselina (1,5 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 dana. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željena čvrsta supstanca kao žuta čvrsta supstanca (9,5 mg, 0.01 mmol, 57%).
[0657] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C36H45FN9O3S2: 734.3071, nađeno 734.3096.
Primer 40: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-ill-5-(3-14-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-(trifluorometil)fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0658]
Korak A: etil 5-{3-[4-bromo-2-(trifluorometil)fenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0659] Diizopropil azodikarboksilat (0,09 ml, 0.47 mmol, 1.5 ekv) se dodaje u kapima u rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (200 mg, 0.31 mmol, 1 ekv), 4-bromo-2-(trifluorometil)fenol (100 mg, 0.41 mmol, 1.33 ekv) i trifenilfosfin (123 mg, 0.47 mmol, 1.5 ekv) u toluenu (10 mL). Smeša se meša na temperaturi okoline tokom 18 h zatim koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (265 mg, 0.26 mmol, 84%).
LC/MS (C37H42BrF3N6O4SiS2) 863 [M+H]<+>; RT 1.91 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71 -7.64 (m, 1H), 7.62 -7.52 (m, 2H), 7.39 -7.34 (m, 2H), 7.24 -7.17 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.50 -4.30 (m, 4H), 4.12 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.82 -3.68 (m, 2H), 3.39 -3.30 (m, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.33 -2.22 (m, 2H), 2.18 -2.07 (m, 2H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.01 -0.90 (m, 2H), -0.08 (s, 9H).
Korak B: etil 5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-(trifluorometil)fenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0660] U rastvor proizvoda iz koraka A (265 mg, 0.26 mmol, 1 ekv) u 2-metiltetrahidrofuranu (10 mL) se dodaje bakar(I) jodid (9,93 mg, 0.05 mmol, 0.2 ekv) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (30,1 mg, 0.03 mmol, 0.1 ekv) i dimetil(prop-2-in-1-il)amin (0,1 ml, 0.93 mmol, 3.5 ekv). Dodaje se N,N-diizopropiletilamin (0,14 ml, 0.78 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 75 °C tokom 96 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao tamno žutu gumu (170 mg, 0.2 mmol, 75%).
LC/MS (C42H50F3N7O4SiS2) 866 [M+H]<+>; RT 1.57 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.66 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.59 (dt, J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7.54 -7.50 (m, 1H), 7.40 -7.31 (m, 2H), 7.23 -7.17 (m, 1H), 6.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.49 -4.32 (m, 4H), 4.18 -4.12 (m, 2H), 3.80 -3.66 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.35 (dd, J = 8.5, 6.6 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.34 (s, 6H), 2.31 -2.25 (m, 2H), 2.17 -2.08 (m, 2H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.99 -0.90 (m, 2H), -0.07 (s, 9H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)andnol-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-(trifluorometil)fenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0661] U rastvor proizvoda iz koraka B (160 mg, 0.18 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (4.5 mL) na 0 °C se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,5 ml, 6.47 mmol, 35 ekv) i smeša se meša tokom 36 h. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom (50 mL) i uzastopno ispire sa 1M vodenim amonijakom (20 mL), vodom (20 mL) i rastvorom soli (20 mL), suši magnezijum sulfatom i koncentruje u vakuumu. U suspenziju sirovog materijala u smeši vode (1,5 mL) i tetrahidrofurana (1,5 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (23,3 mg, 0.55 mmol, 3 ekv) i smeša se meša tokom 72 h na temperaturi okoline. Dodaje se voda (5 mL) i suspenzija se neutrališe sirćetnom kiselinom. Čvrste supstance se sakupe ceđenjem, isperu vodom (10 mL) i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (75 mg, 0.11 mmol, 57%).
[0662] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C34H33F3N7O3S2: 708.2038, nađeno 708.2058 Primer 41: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0663]
Korak A: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0664] Bočica od 24 mL, osušena u sušnici, je opremljena magnetnom šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, i napunjena je sa 250 mg 1-metilpiperazina (2.5 mmol, 5.0 ekv.), rastvara se u 2,5 mL suvog THF Zatim se dodaje u kapima 133 mg 3-bromobut-1-ina (1.0 mmol, 2.0 ekviv) putem šprica tokom perioda od 5 minuta, i meša na toj temperaturi tokom 30 min. U dobijenu smešu se dodaju 301 mg iz dobijanja 3a (0.50 mmol, 1.0 ekv.), 18,15 mg Pd(PPh3)2Cl2(0.025 mmol, 0.05 ekv.) i 4,76 CuJ (0.025 mmol, 0.05 ekv.), zatim se zagreva do 60°C i meša tokom 2h na toj temperaturi. Reakcija je dostigla potpunu konverziju. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 300 mg (95% prinos) željenog proizvoda.
Korak B: metil 2-ilamino)-4-metil-6,7dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0665] Korišćenjem Buchwald-ovog opšteg postupka II polazeći od 300 mg proizvoda iz koraka A (0.47 mmol, 1.0 ekv.) i 140 mg 1,3-benzotiazol-2-amina (0.94 mmol, 2.0 ekv.), dobija se 150 mg (42%) mg željenog proizvoda.
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0666] Koristeći Opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.26 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (q, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.62-2.21 (brm, 8H), 2.14 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.33 (s, 3H), 1.25 (d, 3H);
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.3, 155.4, 151.5, 151.4, 148.6, 147.2, 145.1, 140.2, 136.3, 130.2, 129.0, 129.0, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.4, 115.5, 115.4, 88.4, 84.1, 68.5, 51.7, 46.3, 46.1, 31, 23.9, 23.0, 20.3, 19.6, 12.9;
HRMS-ESI (m/z) [M+H]<+>izračunato za C37H40FN8O3S2: 727.2649, nađeno 727.2630 Primer 42: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0667]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0668] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 258 mg iz dobijanja 3d (0.40 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i pirolidina (20 eq, 670 mg), dobija se 120 mg željenog proizvoda (43%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0669] Koristeći Opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0670]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.52 (t, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.69 (t, 4H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 151.5, 151.4, 148.6, 147.3, 145.1, 140.1, 136.7, 130.2, 129.0, 129.0, 127.5, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.5, 115.5, 115.4, 85.9, 83.3, 68.6, 52.3, 46.3, 43.3, 31.1, 23.8, 23.8, 23.0, 20.4, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H35FN7O3S2: 684.2221, nađeno 684.2209.
Primer 43: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilbut-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0671]
Korak A: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilbut-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0672] Bočica od 24 ml je opremljena šipkom za mešanje obloženom sa PTFE, i napunjena sa 177 mg pirolidina (2.500 mmol, 5.0 ekv.) rastvara se u 2,5 mL suvog THF Zatim se dodaje 133 mg 3-brombut-1-ini (1.0 mmol, 2.0 ekviv) u kapima putem šprica tokom perioda od 5 minuta, i meša na toj temperaturi tokom 30 min. U dobijenu smešu se dodaju 301 mg iz dobijanja 3a (0.50 mmol, 1.0 ekv.), 18,15 mg Pd(PPh3)2Cl2(0.025 mmol, 0.05 ekv.) i 4.76 CuJ (0.025 mmol, 0.05 ekv.), zatim se to zagreva do 60°C i meša tokom 2h na toj temperaturi. Reakcija je dostigla potpunu konverziju. Celit se dodaje u reakcionu smešu i isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom. Zatim se prečišćava fleš hromatografijom koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente da se dobije 220 mg (73% prinos) željenog proizvoda.
[0673]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.41 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.18 (t, 1H), 4.51 (br., 1H), 4.26 (m, 2H), 4.13 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.5-2.97 (br., 4H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (quint., 2H), 2.04 (m, 2H), 1.89 (br., 4H), 1.51 (brd., 3H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 129.4, 119.6, 115.4, 68.3, 52.4/50.2, 52.0, 51.7, 46.3, 30.7, 24.2, 23.6, 23.0, 19.7, 19.3, 15.7.
Korak B: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilbut-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0674] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak II polazeći od 220 mg proizvoda iz koraka A (0.47 mmol, 1.0 ekv.) i 100 mg 1,3-benzotiazol-2-amina (0.668 mmol, 2.0 ekv.), dobijeno je 150 mg (63% prinos) mg željenog proizvoda.
Korak C: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilbut-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0675] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0676] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H37FN7O3S2: 698.2377, nađeno 698.2368.
Primer 44: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0677]
Korak A: etil 5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etoksilfenoksilpropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0678] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (100 mg, 0.16 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz dobijanja 4e (56,6 mg, 0.31 mmol, 2 ekv) u tetrahidrofuranu (5 mL) se dodaje trifenilfosfin (81,9 mg, 0.31 mmol, 2 ekv) i di-terc-butil azodikarboksilat (71,9 mg, 0.31 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 8 h. Reakcija se podeli između etil acetata i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -11% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon guma (35 mg, 0.04 mmol, 28%).
LC/MS (C40H53N7O5SiS2) 804 [M+H]<+>; RT 2.72 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.20 (m, 1H), 6.92 -6.83 (m, 4H), 5.85 (s, 2H), 4.33 -4.22 (m, 4H), 4.03 -3.89 (m, 4H), 3.76 -3.66 (m, 2H), 3.30 -3.19 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.54 (dt, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.16 (s, 6H), 2.14 -2.00 (m, 4H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0679] U rastvor proizvoda iz koraka A (35 mg, 0.04 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (2.7 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,3 mL, 3.92 mmol, 90 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohlađenom na 0 °C i neutrališe sa vodenim amonijakom, zatim se organske faze razdvajaju (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (21 mg, 0.03 mmol, 72%).
LC/MS (C34H39N7O4S2) 674 [M+H]<+>; RT 2.12 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.48 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.1, 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.24 -7.15 (m, 1H), 6.93 -6.82 (m, 4H), 5.77 (s, 1H), 4.33 -4.23 (m, 4H), 4.02 -3.90 (m, 4H), 3.31 -3.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.58 -2.51 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.17 (s, 6H), 2.13 -2.01 (m, 4H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)andnol-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0680] U rastvor proizvoda iz koraka B (21 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (13,1 mg, 0.31 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 15 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (14,6 mg, 0.02 mmol, 73%).
[0681] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H36N7O4S2: 646.2270, nađeno 646.2292
Primer 45: 5-(3-{4-[3-(Azetidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0682]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-(azetidin-1-il)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0683] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 258 mg iz dobijanja 3d (0.40 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i azetidina (456,8 mg, 20 ekv.), dobija se 36 mg željenog proizvoda (36%).
Korak B: 5-(3-{4-[3-(azetidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0684] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0685] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H33FN7O3S2: 670.2064, nađeno 670.2065.
Primer 46: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0686]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0687] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i piperidina (264,2 mg, 20 ekv.), dobija se 55 mg željenog proizvoda (50%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0688] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0689] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H37FN7O3S2: 698.2377, nađeno 698.2373.
Primer 47: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinoprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0690]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinoprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0691] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i morfolina (270,3 mg, 20 ekv.), dobija se 191 mg željenog proizvoda (86%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinoprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0692] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0693] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H35FN7O4S2: 700.2170, nađeno 700.2163.
Primer 48: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina
[0694]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0695] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i 1-metilpiperazina (310,7 mg, 20 ekv.), dobija se 150 mg željenog proizvoda (79%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)prop-1-iniljfenoksijpropil] tiazol-4-karboksilna kiselina [0696] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0697] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H38FN8O3S2: 713.2486, nađeno 713.2474.
Primer 49: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(4,4-difluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0698]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(4,4-difluoro-1-piperidil)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0699] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i 4,4-difluoropiperidina (20 ekv.), dobija se 120 mg željenog proizvoda (72%).
Korak B: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(4,4-di-fluoropiperidin-1-il)prop-1-in-]-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0700] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0701] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H35F3N7O3S2: 734.2189, nađeno 734.2185.
Primer 50: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(3,3-difluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(3,3-difluoro-1-piperidil)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0703] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i 3,3-difluoropiperidin, hlorovodonik (1:1) (488,9 mg, 20 ekv.), dobija se 30 mg željenog proizvoda (26%).
Korak B: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-[4-[3-(3,3-di-fluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0704] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0705] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H35F3N7O3S2: 734.2189, nađeno 734.2186.
Primer 51: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-hloro-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]fenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0706]
Korak A: metil 5-[3-(2-hloro-4-jodofenoksi)propil]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]-metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0707] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (225 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u toluenu (10 mL) se dodaje 2-hloro-4-jodofenol (100 mg, 0.39 mmol, 1.22 ekv), a zatim trifenilfosfin (127 mg, 0.48 mmol, 1.5 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (0,1 ml, 0.48 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 3 h. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (235 mg, 0.23 mmol, 72%).
LC/MS (C35H40ClIN6O4SiS2) 863 [M+H]<+>; RT 1.48 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.59 (dt, J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.39 -7.35 (m, 2H), 7.24 -7.17 (m, 1H), 6.67 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.47 -4.35 (m, 2H), 4.13 -4.06 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.80 -3.70 (m, 2H), 3.43 -3.34 (m, 2H), 2.87 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.34 -2.22 (m, 2H), 2.19 -2.06 (m, 2H), 1.02 -0.91 (m, 2H), -0.07 (s, 9H).
Korak B: metil 5-(3-{2-hloro-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il}fenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0708] Dimetil(prop-2-in-1-il)amin (0,1 ml, 0.93 mmol, 4.0 ekv) se dodaje u rastvor proizvoda iz koraka A (235 mg, 0.23 mmol, 1 ekv), dodaju se bakar(I) jodid (8,81 mg, 0.05 mmol, 0.2 ekv) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (26,7 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) u 2-metiltetrahidrofuranu (10 mL), zatim N,N-diizopropiletilamin (0,15 ml, 0.69 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 75 °C tokom 18 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao braon gumu (75 mg, 0.09 mmol, 40%).
LC/MS (C40H48ClN7O4SiS2) 818 [M+H]<+>; RT 1.56 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.70 -7.63 (m, 1H), 7.59 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.48 -7.44 (m, 1H), 7.40 -7.35 (m, 2H), 7.23 -7.16 (m, 1H), 6.84 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.46 -4.36 (m, 2H), 4.18 -4.05 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.79 -3.69 (m, 2H), 3.49 -3.34 (m, 4H), 2.87 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.35 (s, 6H), 2.32 -2.25 (m, 2H), 2.18 -2.08 (m, 2H), 1.01 -0.93 (m, 2H), -0.07 (s, 9H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-hloro-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0709] U rastvor proizvoda iz koraka B (75 mg, 0.09 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (1,8 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,2 ml, 2.75 mmol, 30 ekv) i smeša se meša tokom 36 h. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom (20 mL), uzastopno ispere sa 1M vodenim amonijakom (10 mL), vodom (10 mL) i rastvorom soli (10 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Sirov materijal se suspenduje u smeši vode (1,5 mL) i metanola (0,5 mL), dodaje se litijum hidroksid monohidrat (11,5 mg, 0.27 mmol, 3 ekv), i suspenzija se zagreva na 80 °C tokom 18 h. Reakcija se neutrališe sirćetnom kiselinom i čvrste supstance se sakupe ceđenjem i isperu vodom (20 mL). Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) dalo je željeni proizvod kao bledo žutu čvrstu supstancu (7 mg, 0.01 mmol, 11%).
[0710] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H33ClN7O3S2: 674.1775, nađeno 674.1796.
Primer 52: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(pirolidin-1-il)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
Korak A: etil 2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-(3-{4-[2-(pirolidin-1il)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0712] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3g (150 mg, 0.23 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz dobijanja 4f (97 mg, 0.47 mmol, 2 ekv) u toluenu (6 mL) se dodaje trifenilfosfin (123 mg, 0.47 mmol, 2 ekv) i di-tercbutil azodikarboksilat (108 mg, 0.47 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i rastvora soli, i organska faza se suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -12% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (165 mg, 0.2 mmol, 85%).
LC/MS (C42H55N7O5SiS2) 831 [M+H]<+>; RT 2.75 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.48 -7.39 (m, 2H), 7.28 -7.20 (m, 1H), 6.92 -6.82 (m, 4H), 5.84 (s, 2H), 4.34 -4.21 (m, 4H), 4.02 -3.91 (m, 4H), 3.76 -3.66 (m, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.71 (t, 1H), 2.48 -2.42 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.13 -2.00 (m, 4H), 1.71 -1.60 (m, 4H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: etil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-[4-[2-(pirolidin-1-il)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0713] U rastvor proizvoda iz koraka A (165 mg, 0.2 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (8,1 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,91 mL, 11.9 mmol, 60 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohlađenom na 0 °C, neutralize sa vodenim amonijakom i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -14% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (84 mg, 0.12 mmol, 60%).
LC/MS (C36H41N7O4S2) 700 [M+H]<+>; RT 2.14 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.48 (br s, 1H), 7.89 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42 -7.34 (m, 1H), 7.20 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 6.94 -6.83 (m, 4H), 4.34 -4.21 (m, 4H), 3.98 (t, J = 6.2 Hz, 4H), 3.32 -3.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.85 -2.74 (m, 2H), 2.65 -2.53 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.16 -1.99 (m, 4H), 1.70 (s, 4H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-[4-[2-(pirolidin-1-il)etoksi]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0714] U rastvor proizvoda iz koraka B (84 mg, 0.12 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (4 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (50,4 mg, 1.2 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (52,9 mg, 0.08 mmol, 66%).
LC/MS (C34H37N7O4S2) 672 [M+H]<+>; RT 1.93 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.20 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 6.94 -6.81 (m, 4H), 4.28 (dd, J = 7.3, 4.3 Hz, 2H), 4.05 -3.91 (m, 4H), 3.35 -3.17 (m, 6H), 2.89 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.18 -1.96 (m, 4H), 1.73 -1.62 (m, 4H).
HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C34H38N7O4S2: 672.2427, nađeno 672.2449 Primer 53: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0715]
Korak A: metil 5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etil]-2-fluorofenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0716] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (95 mg, 0.15 mmol, 1 ekv) i proizvoda iz dobijanja 4g (41 mg, 0.22 mmol, 1.48 ekv) u toluenu (5 mL) se dodaje di-terc-butil azodikarboksilat (69,8 mg, 0.3 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (79,5 mg, 0.3 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 20 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -5% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (83 mg, 0.1 mmol, 69%).
LC/MS (C39H50FN7O4SiS2) 792 [M+H]<+>; RT 2.69 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.3, 1.1 Hz, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.20 (m, 1H), 7.14 -7.02 (m, 2H), 6.98 -6.92 (m, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.26 (dd, J = 7.2, 4.4 Hz, 2H), 4.08 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.75 -3.67 (m, 2H), 3.31 -3.23 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.65 2.56 (m, 2H), 2.46 -2.37 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.12 (s, 6H), 2.11 -2.07 (m, 2H), 2.07 -2.00 (m, 2H), 0.96 -0.88 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0717] U rastvor proizvoda iz koraka A (83 mg, 0.1 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se dodaje trifluorosirćetna kiselina (1 mL, 12.99 mmol, 124 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ohlađenom na 0 °C, neutralize sa vodenim amonijakom, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (50 mg, 0.08 mmol, 72%).
LC/MS (C33H36FN7O3S2) 662 [M+H]<+>; RT 2.04 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.48 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 -7.34 (m, 1H), 7.19 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.13 -7.02 (m, 2H), 6.98 -6.92 (m, 1H), 4.30 -4.21 (m, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.32 -3.24 (m, 2H), 2.87 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.62 (dd, J = 8.6, 6.6 Hz, 2H), 2.46 -2.38 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.14 (s, 6H), 2.13 -2.09 (m, 2H), 2.08 -2.01 (m, 2H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[2-(dimetilamino)etil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0718] U rastvor proizvoda iz koraka B (50 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (31,7 mg, 0.76 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na 70 °C preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (24,68 mg, 0.04 mmol, 50%).
LC/MS (C32H34FN7O3S2) 648 [M+H]<+>; RT 1.87 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.1, 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.20 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.14 -7.02 (m, 2H), 6.95 (dt, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 4.32 -4.25 (m, 2H), 4.09 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.31 -3.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.44 (dd, J = 8.5, 6.6 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.17 (s, 6H), 2.15-2.08 (m, 2H), 2.08 -2.00 (m, 2H)
HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H35FN7O3S2: 648.2227, nađeno 648.2269.
Primer 54: 3-[2-[3-[4-[3-[2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-4-karboksi-tiazol-5-il]propoksi]-3-fluoro-fenil]prop-2-inilamino]etil-dimetilammonio]propan-1-sulfonat
[0719]
Korak A: 3-[2-[terc-butoksikarbonil-[3-[4-[3-[2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-4metoksikarbonil-tiazol-5-il]propoksi]-3-fluoro-fenil]prop-2-inil]amino]etil-dimetilammonio]propan-1-sulfonat
[0720] Smeša od 384 mg primera 76 (Korak A)(0.55 mmol, 1 ekv.) i 1944 mg oksatiolan 2,2-dioksida (15.92 mmol, 30 ekv.) u acetonitrilu (4 mL/mmol) i DMF (1 mL/mmol) se meša na st. Nakon dostizanja odgovarajuće konverzije, isparljive supstance se uklanjaju pod sniženim pritiskom i prečišćavaju putem fleš hromatografije na koloni (SiO2, EtOAc : 0.6 M NH3u MeOH) da se dobije 94 mg (29%) željenog proizvoda.
[0721] LC-MS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H49ClFN6O8S2: 823.3, nađeno 823.2.
Korak B: 3-[2-[3-[4-[3-[2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-4-metoksikarbonil-tiazol-5-il]propoksi]-3-fluoro-fenil]prop-2-inil-terc-butoksikarbonil-amino]etil-dimetil-ammonio]propan-1-sulfonate
[0722] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak II polazeći od proizvoda iz koraka A i 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se željeni proizvod.
[0723]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.20 (t, 1H), 7.18 (t, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.69 (t, 2H), 3.46 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 3.28 (t, 2H), 3.07 (s, 6H), 2.88 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 2.02 (qn, 2H), 1.44 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.2, 126.5, 122.6, 122.4, 119.3, 116.9, 115.5, 85.4, 82.5, 68.4, 63.3, 60.1, 52.0, 50.8, 48.0, 46.4, 40.8, 37.9, 31.0, 28.4, 23.9, 23.2, 20.4, 19.5, 13.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H54FN8O8S3: 937.3205, nađeno 937.3209.
Korak C: 3-[2-[3-[4-[3-[2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-4-karboksi-tiazol-5-il]propoksi]-3-fluoro-fenil]prop-2-inilamino]etil-dimetilammonio]propan-1-sulfonat
[0724] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize praćeno ponovnim prečišćavanjem putem preparativne hromatografije sa reverznom fazom (C18, 25 mM NH4HCO3u vodi : MeCN) polazeći od proizvoda iz koraka B, dobija se željeni proizvod.
[0725] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H44FN8O6S3: 823.2524, nađeno 823.2523.
Primer 55: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksi-1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0726]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksi-1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0727] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i piperidin-3-ola (313,8 mg, 20 ekv.), dobija se 70 mg željenog proizvoda (62%).
Korak B: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksi-1-piperidil)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0728] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0729] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H37FN7O4S2: 714.2327, nađeno 714.2323.
Primer 56: 5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-3-Azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0730]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-[(1R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0731] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i (1R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksana (20 ekv.), dobija se 150 mg željenog proizvoda (81%).
Korak B: 5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-3-Azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0732] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0733] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H35FN7O3S2: 696.2221, nađeno 696.2227.
Primer 57: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-[4-(1-piperidil)-1-piperidil]prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina [0734]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-[4-(1-piperidil)-1-piperidil]prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0735] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i 1-(4-piperidil)piperidin, hlorovodonik (1:2) (748,3 mg, 20 ekv.), dobija se 100 mg željenog proizvoda (81%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-[4-(1-piperidil)-1-piperidil]prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina [0736] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0737] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C41H46FN8O3S2: 781.3112, nađeno 781.3112.
Primer 58: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)prop-1-inil] fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0738]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0739] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i 2,8-diazaspiro[4.5]dekan-3-ona (478,4 mg, 20 ekv.), dobija se 125 mg željenog proizvoda (82%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)prop-1-inil] fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0740] Koristeći Opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0741] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C39H40FN8O4S2: 767.2592, nađeno 767.2588.
Primer 59: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-bromo-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0742]
Korak A: metil 5-[3-(2-bromo-4-jodofenoksi)propil]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0743] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (350 mg, 0.5 mmol, 1 ekv) i 2-bromo-4-jodofenola (200 mg, 0.67 mmol, 1.33 ekv) u toluenu (10 mL) se dodaju trifenilfosfin (198 mg, 0.75 mmol, 1.5 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (0,15 ml, 0.75 mmol, 1.5 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 18 h. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (555 mg, 0.49 mmol, 97%).
LC/MS (C35H40BrIN6O4SiS2) 907 [M+H]<+>; RT 1.50 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.59 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.39 -7.34 (m, 2H), 7.24 -7.16 (m, 1H), 6.65 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.47 -4.36 (m, 2H), 4.17 -4.05 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.80 -3.69 (m, 2H), 3.39 (dd, J = 8.4, 6.6 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.34 -2.23 (m, 2H), 2.18 -2.07 (m, 2H), 1.00 -0.92 (m, 2H), -0.07 (s, 9H).
Korak B: metil 5-(3-{2-bromo-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-iljfenoksilpropil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0744] U rastvor proizvoda iz koraka A (550 mg, 0.52 mmol, 1 ekv), bakar (I) jodida (18,5 mg, 0.1 mmol, 0.2 ekv) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (56 mg, 0.05 mmol, 0.1 ekv) u 2-metiltetrahidrofuranu (10 mL) se dodaje dimetil(prop-2-in-1-il)amin (0,3 mL, 2.79 mmol, 5.75 ekv) a zatim N,N-diizopropiletilamin (0,3 ml, 1.45 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 75 °C tokom 3 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni (20 g silicijum dioksid) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao tamno narandžastu gumu (220 mg, 0.25 mmol, 53%).
LC/MS (C40H48BrN7O4SiS2) 862 [M+H]<+>; RT 1.54 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.60 (dt, J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7.38 -7.37 (m, 2H), 7.34 -7.30 (m, 1H), 7.23 -7.16 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.48 -4.35 (m, 2H), 4.16 -4.07 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.78 -3.69 (m, 2H), 3.50 -3.35 (m, 4H), 2.87 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (s, 6H), 2.33 -2.26 (m, 2H), 2.18 -2.07 (m, 2H), 1.01 -0.88 (m, 2H), -0.07 (s, 9H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)andnol-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-bromo-4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0745] U rastvor proizvoda iz koraka B (210 mg, 0.24 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (4,5 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (0,5 ml, 6.08 mmol, 25 ekv) i smeša se meša tokom 24 h na temperaturi okoline. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom (40 mL), uzastopno ispere sa 1M vodenim amonijakom (20 mL), vodom (2 x 20 mL) i rastvorom soli (20 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. U rastvor sirovog proizvoda u metanolu (1 mL) se dodaje voda (2 mL) i litijum hidroksid monohidrat (30,6 mg, 0.73 mmol, 3 ekv) i suspenzija se zagreva na 75 °C tokom 72 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, zatim neutrališe sa sirćetnom kiselinom i čvrste supstance se sakupe ceđenjem i isperu vodom (2 x 10 mL). Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-A2) dalo je željeni proizvod kao zelenu čvrstu supstancu (15 mg, 0.02 mmol, 9%).
LC/MS (C33H32BrN7O3S2) 718 [M+H]<+>; RT 1.18 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 -7.33 (m, 2H), 7.20 (td, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.26 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.34 -3.25 (m, 2H), 2.86 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.54 (s, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.17 (s, 6H), 2.16 -2.09 (m, 2H), 2.08 -1.95 (m, 2H).
Primer 60: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0746]
Korak A: metil 5-[3-(2-fluoro-4-jodofenoksi)propil]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0747] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (200 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) i 2-fluoro-4-jodofenola (152 mg, 0.64 mmol, 2 ekv) u toluenu (6 mL) se dodaje trifenilfosfin (167 mg, 0.64 mmol, 2 ekv) i diizopropil azodikarboksilat (147 mg, 0.64 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na 50 °C tokom 17 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se odvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (161 mg, 0.19 mmol, 60%).
LC/MS (C35H40FIN6O4SiS2) 847 [M+H]<+>; RT 3.33 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 10.8, 2.1 Hz, 1H), 7.49 -7.39 (m, 3H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.6, 1.9 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.26 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.11 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.76 -3.67 (m, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.18 -2.09 (m, 2H), 2.08 -2.01 (m, 2H), 0.95 -0.86 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak B: metil 5-{3-[2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0748] 1-Metilpiperazin (14.5 µL, 0.13 mmol, 1.5 ekv) se dodaje u rastvor proizvoda iz koraka A (74 mg, 0.09 mmol, 1 ekv), bakar(I) jodid (1,66 mg, 0.01 mmol, 0.1 ekv), trobazni kalijum fosfat (37,1 mg, 0.17 mmol, 2 ekv) i [(2,6-dimetilfenil)karbamoil]mravlja kiselina (3,38 mg, 0.02 mmol, 0.2 ekv) u DMSO (2 mL) i smeša se zagreva na 120 °C tokom 2 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline, podeli između etil acetata i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao braon gumu (30 mg, 0.04 mmol, 42%).
LC/MS (C40H51FN8O4SiS2) 819 [M+H]<+>; RT 2.71 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 7.03 (t, 1H), 6.84 (dd, 1H), 6.67 -6.61 (m, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.26 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.02 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.76 -3.66 (m, 2H), 3.26 (t, 2H), 3.04 -2.95 (m, 4H), 2.92 -2.82 (m, 2H), 2.42 -2.32 (m, 7H), 2.18 (s, 3H), 2.12 -1.99 (m, 4H), 0.95 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak C: metil 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0749] U rastvor proizvoda iz koraka B (116 mg, 0.14 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (7.5 mL), ohlađenom na 0 °C, se dodaje trifluorosirćetna kiselina (1,52 mL, 19.8 mmol, 140 ekv) i smeša se meša tokom 24 h na temperaturi okoline. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom (40 mL), ispere sa vodenim amonijakom, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (72 mg, 0.1 mmol, 74%).
LC/MS (C34H37FN8O3S2) 689 [M+H]<+>; RT 2.01 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.46 (br s, 1H), 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 -7.44 (m, 1H), 7.38 (ddd, J = 8.3, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.24 -7.16 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 9.9, 9.0 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 14.6, 2.8 Hz, 1H), 6.69 -6.61 (m, 1H), 4.27 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.08 -3.99 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.31 -3.23 (m, 2H), 3.05 -2.96 (m, 4H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.42 -2.36 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.13 -2.00 (m, 4H).
Korak D: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0750] U rastvor proizvoda iz koraka C (72 mg, 0.1 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (43,9 mg, 1.05 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 3 h. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -15% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil etrom, procedi i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (35 mg, 0.05 mmol, 50%).
[0751] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H36FN8O3S2: 675.2336, nađeno 675.2364 Primer 61: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-[3-({3-[(dimetilamino)metil]-5-fluoro-1-metil-1H-indol-6-il}oksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0752]
Korak A: metil 5-[3-({3-[(dimetilamino)metil]-5-fluoro-1-metil-1H-indol-6-il}oksi)propil]-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0753] Proizvod iz dobijanja 3b (120 mg, 0.19 mmol, 1 ekv) se stavlja u u toluen (15 mL) i dodaje se proizvod iz dobijanja 4h (67 mg, 0.26 mmol, 1.35 ekv), a zatim trifenilfosfin (100 mg, 0.38 mmol, 2 ekv) i di-terc-butil azodikarboksilat (88,2 mg, 0.38 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao bež čvrstu supstancu (18 mg, 0.02 mmol, 11%).
LC/MS (C41H51FN8O4SiS2) 831 [M+H]<+>; RT 2.73 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.81 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.47 -7.43 (m, 2H), 7.40 -7.33 (m, 1H), 7.28 -7.21 (m, 1H), 7.15 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.28 (t, 2H), 4.16 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.76 -3.71 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.48 -3.41 (m, 4H), 3.88 (t, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.08 -2.00 (m, 2H), 1.46 (s, 6H), 1.350.95 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-[3-({3-[(dimetilamino)metil]-5-fluoro-1-metil-1H-indol-6-il}oksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0754] Rastvor proizvoda iz koraka A (18 mg, 0.02 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (1 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (1 mL, 13 mmol, 600 ekv) i smeša se meša tokom 4 h na temperaturi okoline. Dodaje se dihlormetan (10 mL) i rastvor se ohladi na 0 °C, ispere sa vodenim amonijakom, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Ostatak se suspenduje u 1,4-dioksanu (2 mL), dodaje se litijum hidroksid monohidrat (9,1 mg, 0.22 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na 70 °C preko noći. Prečišćavanje preparativnom HPLC (HPLC-V-B1) dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (4,5 mg, 0.01 mmol, 30%), kao so mravlje kiseline.
[0755] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C34H36FN8O3S2: 687.2336, nađeno 687.2362 Primer 62: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0756]
Korak A: metil 5-(3-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2-fluorofenoksi}propil)-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0757] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (120 mg, 0.19 mmol, 1 ekv) u toluenu (5 mL) se dodaju proizvod iz dobijanja 4i (107 mg, 0.51 mmol, 2.65 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (88 mg, 0.38 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (100 mg, 0.38 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 20 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (133 mg, 0.16 mmol, 85%).
LC/MS (C14H54FN7O4SiS2) 821 [M+H]<+>; RT 2.74 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 -7.78 (m, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.27 -7.20 (m, 1H), 7.11 -7.01 (m, 2H), 6.95 -6.89 (m, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.26 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.07 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.71 (dd, 2H), 3.28 (dd, J = 15.9, 8.4 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.21 -2.08 (m, 4H), 2.08 -2.01 (m, 8H), 1.55 -1.42 (m, 2H), 1.41 -1.27 (m, 2H), 0.95 -0.87 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0758] Rastvor proizvoda iz koraka A (133 mg, 0.16 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (6 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (1,24 mL, 16.2 mmol, 100 ekv) i smeša se meša tokom 24 h na temperaturi okoline. Dodaje se dihlormetan (40 mL) i rastvor se ispere sa zasićenim vodenim amonijum hloridom, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -14% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (81 mg, 0.12 mmol, 72%).
LC/MS (C35H40FN7O3S2) 690 [M+H]<+>; RT 2.14 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.19 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.09 -7.01 (m, 2H), 6.94 -6.87 (m, 1H), 4.25 (dd, J = 7.3, 4.5 Hz, 2H), 4.07 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.27 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.48 -2.43 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.18 -2.07 (m, 4H), 2.08 -1.98 (m, 8H), 1.55 -1.41 (m, 2H), 1.40 -1.26 (m, 2H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0759] U rastvor proizvoda iz koraka B (81 mg, 0.12 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (49,3 mg, 1.17 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na 70 °C preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (48,3 mg, 0.07 mmol, 61%).
[0760] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C34H39FN7O3S2: 676.2540, nađeno 676.2569 Primer 63: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0761]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilat
[0762] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 100 mg iz dobijanja 3d (0.155 mmol, 1ekv.) kao odgovarajućeg propargilnog alkohola i (1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksana(20 ekv.), dobija se 61 mg željenog proizvoda (52%).
Korak B: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0763] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0764] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H33F3N7O3S2: 732.2033, nađeno 732.2023.
Primer 64: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[2-(metilamino)etil]fenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0765]
Korak A: metil 5-{3-[4-(2-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}etil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0766] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (80 mg, 0.13 mmol, 1 ekv) u toluenu (5 mL) se dodaju proizvod iz dobijanja 4j (48 mg, 0.18 mmol, 1.4 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (58,8 mg, 0.26 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (67 mg, 0.26 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, razdvoji (separator faza) i organska faza se koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu gumu (77 mg, 0.09 mmol, 69%).
LC/MS (C43H56FN7O6SiS2) 878 [M+H]<+>; RT 3.28 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 7.13 -7.01 (m, 2H), 6.96 -6.86 (m, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.75 -3.67 (m, 2H), 3.31 -3.22 (m, 4H), 2.88 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.69 -2.61 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.17 -2.06 (m, 2H), 2.05 -2.00 (m, 2H), 1.24 (s, 9H), 0.95 -0.86 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[2-(metilamino)etil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0767] Rastvor proizvoda iz koraka A (77 mg, 0.09 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (4 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (0,81 mL, 10.5 mmol, 120 ekv) i smeša se meša tokom 24 h na temperaturi okoline. Reakcija se razblaži sa dihlormetanom, ispere sa vodenim amonijakom, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g Redi-Sep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -18% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (39 mg, 0.06 mmol, 69%).
LC/MS (C32H34FN7O3S2) 648 [M+H]<+>; RT 2.02 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 -7.84 (m, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 -7.33 (m, 1H), 7.19 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.12 -7.03 (m, 2H), 6.94 (dd, J = 8.8, 1.9 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 7.1, 4.5 Hz, 2H), 4.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.31 -3.21 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.68 -2.57 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.17 -2.01 (m, 4H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)andnol-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[2-(metilamino)etil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0768] U rastvor proizvoda iz koraka B (39 mg, 0.06 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (25,3 mg, 0.6 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 4 h.
Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je čvrstu supstancu koja se suspenduje u etil acetatu (2 mL) i dodaje se hlorovodonična kiselina (4M u 1,4-dioksanu; 68.9 µL, 0.28 mmol, 4.58 ekv). Smeša se meša tokom 10 min pre sakupljanja čvrste supstance ceđenjem i suši pod vakuumom dajući željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (17,2 mg, 0.03 mmol, 45%), kao so hlorovodonične kiseline.
[0769] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C31H33FN7O3S2: 634.2070, nađeno 634.2093.
Primer 65: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-[2-(metilamino)etoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0770]
Korak A: 4-metilmorfolin-3-on
[0771] Rastvor 2-(metilamino)etanola (5,32 mL, 66.6 mmol, 1 ekv) u etanolu (100 mL) i 35% vodenog natrijum hidroksida (6,25 mL) se ohladi na 15-20 °C i uzastopno se dodaju hloroacetil hlorid (13,3 mL, 166 mmol, 2.5 ekv) i 35% vodeni natrijum hidroksid (22 mL uz snažno mešanje tokom 1 h. Smeša se meša tokom 20 min, zatim neutrališe sa vodenom hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 100 mL). Spojeni organski ekstrakti se isperu vodom, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (4,4 g, 38.2 mmol, 58%).
[0772]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.00 (s, 2H), 3.84 -3.78 (m, 2H), 3.36 -3.29 (m, 2H), 2.86 (s, 3H).
Korak B: 2-(but-2-in-1-il)-4-metilmorfolin-3-on
[0773] U rastvor diizopropilamina (6,45 mL, 45.9 mmol, 1.2 ekv) u tetrahidrofuranu (130 mL), ohlađenom na -78 °C, se dodaje u kapima n-butillitijum (2.06M u heksanima; 20,4 mL, 42 mmol, 1.1 ekv). Nakon 1 minut dodaje se u kapima rastvor proizvoda iz koraka A (4,4 g, 38.2 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (30 mL). Nakon 15 minuta, dodaje se u kapima rastvor 1-bromo-2-butina (4,02 mL, 45.9 mmol, 1.2 ekv) u tetrahidrofuranu (15 mL) i smeša se meša na -78 °C tokom 1 h zatim se ostavi da se ugreje do temperature okoline. Dodaje se zasićeni vodeni amonijum hlorid i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (x3), i spojeni organski ekstrakti se suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao žuto ulje (5,15 g, 30.8 mmol, 81%).
[0774]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.09 (dd, J = 7.6, 3.5 Hz, 1H), 4.01 -3.94 (m, 1H), 3.76 (ddd, J = 11.9, 10.0, 3.6 Hz, 1H), 3.52 -3.41 (m, 1H), 3.26 -3.18 (m, 1H), 2.86 (s, 3H), 2.67 -2.58 (m, 1H), 2.57 -2.44 (m, 1H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H).
Korak C: 2-[2-(metilamino)etoksi]heks-4-jonska kiselina
[0775] U rastvor proizvoda iz koraka B (3,25 g, 19.4 mmol, 1 ekv) u metanolu (110 mL) se dodaje 1M vodeni litijum hidroksid (60,3 mL, 60.3 mmol, 3.1 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se koncentruje u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao narandžasta guma (5,15 g, 27.8 mmol, 100%) koja se koristi direktno u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
Korak D: 2-[2-({[(9H-fluoren-9-il)metoksi]karbonil}(metil)amino)etoksi]heks-4-jonska kiselina [0776] U rastvor proizvoda iz koraka C (5,15 g, 27.8 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (45 mL) i vode (160 mL) se dodaje kalijum karbonat (15,4 g, 111 mmol, 4 ekv) na 0 °C, a zatim 9H-fluoren-9-il-metil hloroformijat (7,19 g, 27.8 mmol, 1 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša tokom 2 h. Reakcija se podeli između vode i etil acetata, i vodena faza se zakišeljava sa vodenom hlorovodoničnom kiselinom na pH 2-3 i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 300 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao tamno žutu gumu (7,06 g, 17.3 mmol, 62%).
LC/MS (C24H25NO5) 408 [M+H]<+>; RT 0.74 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 2H), 7.42 (td, J = 7.4, 3.0 Hz, 2H), 7.34 (td, J = 7.4, 1.3 Hz, 2H), 4.43 -4.22 (m, 3H), 3.50 -3.42 (m, 1H), 3.39 -3.28 (m, 1H), 3.26 -3.15 (m, 3H), 2.90 -2.82 (m, 3H), 2.51 -2.44 (m, 2H), 1.71 (dt, J= 13.8, 2.5 Hz, 3H).
Korak E: (9H-fluoren-9il)metil N-{2-[(1-hidroksiheks-4-in-2-il)oksi]etil}-N-metilkarbamat
[0777] Rastvor proizvoda iz koraka D (7,06 g, 17.33 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (120 mL) se ohladi na -10 °C, zatim se u kapima dodaju trietilamin (2,65 mL, 19.1 mmol, 1.1 ekv) i izobutil hloroformijat (2,7 mL, 20.8 mmol, 1.2 ekv) u THF (40 mL). Talog se uklanja ceđenjem i rastvor se ohladi na -10 °C. Natrijum borohidrid (2,62 g, 69.3 mmol, 4 ekv) u vodi (40 mL) se dodaje u kapima i smeša se meša tokom 1 h na -10 °C. PH rastvora se podešava na pH 5 koristeći 1N vodenu hlorovodoničnu kiselinu, a zatim se podešava na pH 10 koristeći zasićeni vodeni natrijum bikarbonat. Slojevi se razdvajaju i organska faza se uzastopno ispire vodom (100 mL) i rastvorom soli (50 mL), suši (magnezijum sulfat) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 80 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izoheptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu gumu (4,64 g, 11.8 mmol, 68%).
LC/MS (C24H27NO4) 394 [M+H]<+>; RT 0.77 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.65 (dt, J = 7.4, 0.9 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35 (td, J = 7.4, 1.2 Hz, 2H), 4.68 -4.60 (m, 1H), 4.39 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.60 -3.51 (m, 1H), 3.46 -3.36 (m, 2H), 3.34 -3.28 (m, 2H), 3.19 (dd, J = 16.6, 5.5 Hz, 2H), 2.84 (d, J = 10.8 Hz, 3H), 2.38 -2.15 (m, 2H), 1.71 (t, J = 2.5 Hz, 3H).
Korak F: (9H fluoren-9il)metil N-[2-({1-[(terc-butildifenilsilil)oksi]heks-4-in-2-il}oksi)etil]-N-metilkarbamat
[0778] U ohlađen rastvor proizvoda iz koraka E (4,64 g, 11.8 mmol, 1 ekv) i imidazola (1,56 mL, 23.6 mmol, 2 ekv) u dihlormetanu (200 mL) se dodaje u kapima terc-butil(hloro)difenilsilan (6,13 mL, 23.6 mmol, 2 ekv) i smeša se ostavlja da se zagreje do temperature okoline i meša preko noći. Reakcija se gasi sa 2M vodenim amonijum hloridom i smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 200 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu gumu (5,86 g, 9.27 mmol, 79%).
LC/MS (C40H45NO4Si) 632 [M+H]<+>; RT 1.38 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (dd, J = 20.0, 7.5 Hz, 2H), 7.67 -7.56 (m, 6H), 7.53 -7.39 (m, 7H), 7.39 -7.22 (m, 3H), 4.38 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.24 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.73 -3.61 (m, 1H), 3.60 -3.44 (m, 2H), 3.34 -3.29 (m, 2H), 3.29 -3.18 (m, 1H), 3.16 -3.06 (m, 1H), 2.81 (d, J = 14.1 Hz, 3H), 2.43 -2.26 (m, 2H), 1.69 (t, J = 2.4 Hz, 3H), 0.98 (s, 9H).
Korak G: (9H-fluoren-9il)metil N-[2-({1-[(terc-butildifenilsilil)oksil-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propan-2-il}oksi)etil]-N-metilkarbamat
[0779] Rastvor proizvoda iz koraka F (5,86 g, 9.27 mmol, 1 ekv) i 3,6-dihloro-1,2,4,5-tetrazina (5,6 g, 37.1 mmol, 4 ekv) u toluenu (130 mL) se zagreva na 150 °C preko noći u zatvorenom balonu. Reakcija se koncentruje u vakuumu a prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 120 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -30% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao roze penu (2,99 g, 3.97 mmol, 43%).
LC/MS (C42H45Cl2N3O4Si) 754 [M+H]<+>; RT 1.37 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.68 -7.59 (m, 5H), 7.57 -7.50 (m, 1H), 7.47 -7.41 (m, 6H), 7.45 -7.37 (m, 1H), 7.36 -7.28 (m, 2H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.27 -4.11 (m, 2H), 3.81 -3.60 (m, 3H), 3.55 -3.45 (m 1H), 3.20 -2.98 (m, 4H), 2.89 -2.77 (m, 1H), 2.58 (d, J = 23.0 Hz, 3H), 2.39 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 1.01 (s, 9H).
Korak H: 4-{3-[(terc-butildifenilsilil)oksi]-2-[2-(metilamino)etoksi]propil}-3,6-dihloro-5-metilpiridazin
[0780] Rastvor proizvoda iz koraka G (2,79 g, 3.7 mmol, 1 ekv) i dietilamina (0,77 mL, 7.39 mmol, 2 ekv) u acetonitrilu (60 mL) se meša na temperaturi okoline preko noći. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 70 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli (100 mL), suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -16% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao narandžastu/ roze gumu (1,9 g, 3.57 mmol, 96%).
LC/MS (C27H35Cl2N3O2Si) 532 [M+H]<+>; RT 0.84 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 -7.62 (m, 4H), 7.54 -7.41 (m, 6H), 3.83 -3.60 (m, 3H), 3.42 -3.36 (m, 1H), 3.16 -2.97 (m, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.39 -2.23 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
Korak I: terc-butil N-[2-({1-[(terc-butildifenilsilil)oksi]-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propan-2-il}oksi)etil]-N-metilkarbamat
[0781] U rastvor proizvoda iz koraka H (1,9 g, 3.57 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (100 mL) se dodaje di-terc-butil dikarbonat (1,53 mL, 7.14 mmol, 2 ekv) a zatim trietilamin (1,99 mL, 14.3 mmol, 4 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 4 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i vodena faza se zakišeljava do pH 4 i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 80 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 40 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bezbojnu gumu (1,83 g, 2.9 mmol, 81%).
LC/MS (C32H43Cl2N3O4Si) 532 [M-Boc+H]<+>; RT 1.33 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 -7.62 (m, 4H), 7.54 -7.41 (m, 6H), 3.76 (qd, J = 10.7, 4.7 Hz, 2H), 3.66 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.44 (q, J = 7.9, 6.3 Hz, 1H), 3.20 -3.10 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 14.0, 4.1 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 1.31 (d, J = 22.6 Hz, 9H), 1.02 (s, 9H).
Korak J: terc-butil N-(2-{[1-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)-3-hidroksipropan-2-il]oksi}etil)-N-metilkarbamat
[0782] Rastvor proizvoda iz koraka I (1,83 g, 2.9 mmol, 1 ekv) u tetrahidrofuranu (75 mL) se ohladi na 0 °pre nego što se doda tetrabutilamonijum fluorid (1M u tetrahidrofuranu; 2,9 mL, 2.9 mmol, 1 ekv) i meša na 0 °C tokom 30 min, zatim na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (x2). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 24 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bledo narandžastu gumu (0,73 g, 1.86 mmol, 64%).
[0783]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.93 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.62 -3.44 (m, 4H), 3.23 (dt, J = 9.6, 6.0 Hz, 1H), 3.11 (d, J = 23.9 Hz, 2H), 3.02 (dd, J = 6.5, 2.0 Hz, 2H), 2.60 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.35 (d, J = 13.0 Hz, 9H).
Korak K: metil 2-{[(terc-butoksi)karbonil][2-(2-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}etoksi)-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0784] U rastvor proizvoda iz koraka J (125 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u toluenu (20 mL) se dodaju proizvod iz dobijanja 1c (171 mg, 0.35 mmol, 1.1 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (146 mg, 0.63 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (166 mg, 0.63 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na 50 °C tokom 1 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (x2), a spojeni organski ekstrakti se ispiru sa rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -100% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bledo žutu gumu (282 mg, 0.32 mmol, 102%).
LC/MS (C40H53Cl2FN6O8S) 867 [M+H]<+>; RT 0.97 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.30 (dd, 1H), 7.23 -7.17 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.29 (dd, J = 13.9, 5.7 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 -3.87 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.61 -3.48 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.25 (dt, J = 7.1, 3.9 Hz, 3H), 3.16 -2.99 (m, 2H), 2.97 -2.89 (m, 1H), 2.58 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.10 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.31 (d, J = 39.6 Hz, 9H).
Korak L: metil 2-{[2-(2-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}etoksi)-3-(3,6-dihloro-5-metilpiridazin-4-il)propil]amino}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0785] Rastvor proizvoda iz koraka K (275 mg, 0.32 mmol, 1 ekv) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoro-2-propanolu (2,5 mL, 23.7 mmol, 74.7 ekv) se zagreva na 100 °C tokom 60 min pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se koncentruje u vakuumu i prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (154 mg, 0.2 mmol, 63%).
LC/MS (C35H45Cl2FN6O6S) 767 [M+H]<+>; RT 0.70 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (br s, 1H), 7.30 (dd, J = 11.9, 2.0 Hz, 1H), 7.24 -7.17 (m, 1H), 7.12 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.82 (dt, J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.60 -3.49 (m, 1H), 3.46 -3.39 (m, 4H), 3.33 (s, 2H), 3.29 -3.18 (m, 1H), 3.14 (t, 2H), 3.10 -3.02 (m, 2H), 2.98 (dd, J = 13.9, 3.8 Hz, 1H), 2.64 -2.53 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.07 -1.95 (m, 2H), 1.32 (d, J = 30.8 Hz, 9H).
Korak M: metil 2-[6-(2-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}etoksi)-3-hloro-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0786] U rastvor proizvoda iz koraka L (154 mg, 0.2 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (14 mL) se dodaju cezijum karbonat (131 mg, 0.4 mmol, 2 ekv), N,N-diizopropiletilamin (0,07 mL, 0.4 mmol, 2 ekv) i bis(diterc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfin) dihloropaladijum(II) (14,2 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i smeša se zagreva na 80 °C tokom 45 min. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (x2). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (magnezijum sulfat) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 12 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -8% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao kremastu čvrstu supstancu (136 mg, 0.19 mmol, 93%).
LC/MS (C35H44ClFN6O6S) 731 [M+H]<+>; RT 0.75 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (dt, J = 12.0, 1.9 Hz, 1H), 7.25 -7.19 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.86 (dd, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.13 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.93 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.30 -3.23 (m, 2H), 3.21 -3.09 (m, 2H), 3.08 -3.00 (m, 1H), 2.58 -2.52 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.12 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 1.27 (d, J = 28.5 Hz, 9H).
Korak N: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-(2-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}etoksi)-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0787] U rastvor proizvoda iz koraka M (136 mg, 0.19 mmol, 1 ekv) u cikloheksanolu (4,5 mL) se dodaju 2-aminobenzotiazol (55,7 mg, 0.37 mmol, 2 ekv) i N,N-diizopropiletilamin (0,1 mL, 0.56 mmol, 3 ekv) i smeša se prska azotom (10 min). Dodaju se Xantphos (21,5 mg, 0.04 mmol, 0.2 ekv) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (17 mg, 0.02 mmol, 0.1 ekv) i smeša se zagreva na 140 °C tokom 1 h pod mikrotalasnim zračenjem. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 40 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom sa reverznom fazom (CombiFlash Rf, C1815.5g Gold RediSep kolona) eluiranjem u gradijentu od 5 -95% acetonitrila u vodi dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (70,8 mg, 0.08 mmol, 45%).
LC/MS (C42H49FN8O6S2) 845 [M+H]<+>; RT 0.86 (LCMS-V-B2)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.52 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 -7.12 (m, 3H), 4.80 (dd, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.44 -3.37 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.28 (d, 1H), 3.24 -3.14 (m, 2H), 3.12 -2.97 (m, 2H), 2.58 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.27 (d, 9H).
Korak O: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-[2-(metilamino)etoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0788] U rastvor proizvoda iz koraka N (70,8 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se polako dodaje trifluorosirćetna kiselina (1 mL) i smeša se meša na temperaturi okoline tokom 1 h. Reakcija se podeli između dihlormetana i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 30 mL). Spojeni organski ekstrakti se ispiru rastvorom soli, suše (PTFE separator faza) i koncentruju u vakuumu da se dobije željeni proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca (59,8 mg, 0.08 mmol, 96%).
LC/MS (C37H41FN8O4S2) 745 [M+H]<+>; RT 1.07 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 -7.12 (m, 3H), 4.79 -4.69 (m, 1H), 4.26 -4.19 (m, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 13.5, 2.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.60 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.32 -3.27 (m, 2H), 3.15 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 3.08 -2.99 (m, 1H), 2.70 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.17 -2.08 (m, 2H).
Korak P: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-[2-(metilamino)etoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0789] U rastvor proizvoda iz koraka O (59,8 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje 1M vodeni litijum hidroksid (0,24 mL, 0.24 mmol, 3 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C tokom 2 h. Čvrsta supstanca se sakupi ceđenjem i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca (43 mg, 0.06 mmol, 73%), kao litijumova so.
[0790] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C36H40FN8O4S2: 731.2598, nađeno 731.2623.
Primer 66: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(6-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-7-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0791]
Korak A: metil 5-[3-[(6-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-7-il)oksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil)-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0792] U rastvor 6-fluoro-2-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-7-ola (52 mg, 0.29 mmol, 1.8 ekv) i proizvoda iz dobijanja 3b (100 mg, 0.16 mmol, 1 ekv) u toluenu (5 mL) se dodaju trifenilfosfin (83,7 mg, 0.32 mmol, 2 ekv) i di-terc-butil azodikarboksilat (73,5 mg, 0.32 mmol, 2 ekv) i smeša se meša na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (61 mg, 0.08 mmol, 48%).
LC/MS (C39H48FN7O4SiS2) 790 [M+H]<+>; RT 2.68 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.48 -7.37 (m, 2H), 7.28 -7.19 (m, 1H), 6.94 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.76 -3.68 (m, 2H), 3.42 -3.34 (m, 4H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.69 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.17 -1.99 (m, 4H), 0.95 -0.87 (m, 2H), -011 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(6-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-7-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0793] Rastvor proizvoda iz koraka A (67 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (4 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (1,95 mL, 25.4 mmol, 300 ekv) i smeša se meša tokom 6 h na temperaturi okoline. Dodaje se dihlormetan (10 mL) i rastvor se ohladi na 0 °C, ispere sa vodenim amonijakom, i organska faza se odvoji (separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -10% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (39 mg, 0.06 mmol, 70%).
LC/MS (C33H34FN7O3S2) 660 [M+H]<+>; RT 2.01 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (s, 1H), 7.51 (br s, 1H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.27 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.43 -3.36 (m, 4H), 3.29 (t, 2H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.73 -2.66 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.17 -2.10 (m, 2H), 2.09 -2.00 (m, 2H).
Korak C: 2-[3-[(1,3-benzotiazol-2-il)aminol-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(6-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-7-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0794] U rastvor proizvoda iz koraka B (39 mg, 0.06 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (2 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (24,8 mg, 0.59 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao beličastu čvrstu supstancu (19,4 mg, 0.03 mmol, 51%)
[0795] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H33FN7O3S2: 646.2070, nađeno 646.2094 Primer 67: 5-[3-[4-[3-(Azetidin-1-il)propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0796]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-(azetidin-1-il)propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0797] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i azetidina (88,00 mg, 20 ekv.), dobija se 35 mg željenog proizvoda (75%).
Korak B: 5-[3-[4-[3-(azetidin-1-il)propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0798] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0799] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H36FN7O3S2: 674.2377, nađeno 674.2386.
Primer 68: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0800]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-il-amino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0801] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i 1-metilpiperazina (154,4 mg, 20 ekv.), dobija se 46 mg željenog proizvoda (73%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0802] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0803] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H42FN8O3S2: 717.2799, nađeno 717.2808.
Primer 69: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilpropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0804]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilpropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0805] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i pirolidina (109,6 mg, 20 ekv.), dobija se 53 mg željenog proizvoda (98%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilpropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0806] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0807] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H39FN7O3S2: 688.2534, nađeno 688.2533.
Primer 70: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinopropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0808]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinopropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0809] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i morfolina (134,3 mg, 20 ekv.), dobija se 46 mg željenog proizvoda (83%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-morfolinopropil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0810] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0811] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H39FN7O4S2: 704.2483, nađeno 704.2471.
Primer 71: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0812]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0813] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i piperidina (131,2 mg, 20 ekv.), dobija se 43 mg željenog proizvoda (83%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(1-piperidil)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0814] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0815] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H41FN7O3S2: 702.2690, nađeno 702.2703.
Primer 72: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1R,5S)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0816]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0817] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i (1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksana (1.54 mmol, 20 ekv.), dobija se 24 mg željenog proizvoda (41%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1R,5S)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]propil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0818] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0819] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H37F3N7O3S2: 736.2345, nađeno 736.2340.
Primer 73: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)propil]fenoksi] propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0820]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)propil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0821] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina polazeći od 50 mg iz dobijanja 3e (0.077 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg alkohola i 2,8-diazaspiro[4.5]dekan-3-ona (237,7 mg, 20 ekv.), dobija se 35 mg željenog proizvoda (58%).
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)propil]fenoksi] propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0822] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0823] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C39H44FN8O4S2: 771.2905, nađeno 771.2922.
Primer 74: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(7-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0824]
Korak A: metil 5-{3-[(7-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)oksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil)-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0825] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (120 mg, 0.19 mmol, 1 ekv) u toluenu (5 mL) se dodaju 7-fluoro-2-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-6-ol (69,4 mg, 0.38 mmol, 2 ekv), trifenilfosfin (100 mg, 0.38 mmol, 2 ekv) i di-terc-butil azodikarboksilat (88,2 mg, 0.38 mmol, 2 ekv). Smeša se meša na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, i organska faza se ispire rastvorom soli, suši (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (Combi-Flash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -14% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (111 mg, 0.14 mmol, 73%).
LC/MS (C39H48FN7O4SiS2) 790 [M+H]<+>; RT 2.64 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.28 -7.20 (m, 1H), 6.94 -6.84 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.06 (q, J = 7.4, 6.8 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.76 -3.68 (m, 2H), 3.34 -3.22 (m, 4H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.73 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.17 -1.99 (m, 4H), 0.97 -0.86 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(7-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilat [0826] Rastvor proizvoda iz koraka A (111 mg, 0.14 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (5 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (1,02 mL, 13.4 mmol, 95 ekv) i smeša se meša na temperaturi okoline preko noći. Dodaje se ihlormetan (10 mL) i rastvor se ohladi na 0 °C, ispere sa vodenim amonijakom, i organska faza se odvoji (separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -7% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu gumu (79 mg, 0.12 mmol, 85%).
LC/MS (C33H34FN7O3S2) 660 [M+H]<+>; RT 2.01 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (br s, 1H), 7.42 -7.33 (m, 1H), 7.20 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.95 -6.85 (m, 2H), 4.27 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.08 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.34 -3.22 (m, 6H), 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.74 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.17 -2.03 (m, 4H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[(7-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)oksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0827] U rastvor proizvoda iz koraka B (79 mg, 0.12 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (50,2 mg, 1.2 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu tokom 4,5 h. Reakcija se ostavi da se ohladi na temperaturu okoline i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se trituriše sa dietil eetrom, cedi, ispere sa dietil etrom i suši pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (44,4 mg, 0.07 mmol, 57%).
[0828] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C32H33FN7O3S2: 646.2070, nađeno 646.2103 Primer 75: 2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[4-(metilamino)butil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0829]
Korak A: metil 5-{3-[4-(4-{[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino}butil)-2-fluorofenoksi]propil}-2-(4-metil-3-{[(2Z)-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidro-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino}-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0830] U rastvor proizvoda iz dobijanja 3b (50 mg, 0.08 mmol, 1 ekv) u toluenu (5 mL), dodaju se proizvod iz dobijanja 4k (32,7 mg, 0.11 mmol, 1.38 ekv), di-terc-butil azodikarboksilat (36,7 mg, 0.16 mmol, 2 ekv) i trifenilfosfin (41,8 mg, 0.16 mmol, 2 ekv) i smeša se zagreva na 50 °C preko noći. Reakcija se podeli između dihlormetana i vode, razdvoji (PTFE separator faza) i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -70% etil acetata u izo-heptanu dalo je željeni proizvod kao bistru gumu (45 mg, 0.05 mmol, 62%).
LC/MS (C45H60FN7O6SiS2) 906 [M+H]<+>; RT 3.51 (LCMS-V-C)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.48 -7.38 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.8 Hz, 1H), 7.11 -7.01 (m, 2H), 6.91 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.07 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.76 -3.68 (m, 2H), 3.32 -23 (m, 4H), 3.16 -3.05 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.17 -2.01 (m, 4H), 1.51 -1.39 (m, 4H), 1.34 (d, J = 16.8 Hz, 9H), 0.95 -0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
Korak B: metil 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[4-(metilamino)butil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilat
[0831] Rastvor proizvoda iz koraka A (45 mg, 0.05 mmol, 1 ekv) u dihlormetanu (3 mL) se ohladi na 0 °C i dodaje se trifluorosirćetna kiselina (0,61 mL, 7.95 mmol, 160 ekv) i smeša se meša tokom 24 h na temperaturi okoline. Dodaje se dihlormetan (40 mL) i rastvor se ispere sa vodenim amonijakom i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -20% metanola u dihlormetanu dalo je željeni proizvod kao žutu čvrstu supstancu (22 mg, 0.03 mmol, 66%).
LC/MS (C34H38FN7O3S2) 676 [M+H]<+>; RT 1.12 (LCMS-V-B1)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.11 -7.02 (m, 2H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 6.9, 4.3 Hz, 2H), 4.09 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.32 -3.24 (m, 4H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.42 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.19 -2.09 (m, 2H), 2.08 -1.99 (m, 2H), 1.60 -1.47 (m, 2H), 1.41 -1.30 (m, 2H).
Korak C: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[4-(metilamino)butil]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0832] U rastvor proizvoda iz koraka B (22 mg, 0.03 mmol, 1 ekv) u 1,4-dioksanu (3 mL) se dodaje litijum hidroksid monohidrat (13,7 mg, 0.33 mmol, 10 ekv) i smeša se zagreva na refluksu preko noći. Prečišćavanje automatizovanom fleš hromatografijom na koloni (CombiFlash Rf, 4 g RediSep<™>silicijum dioksidna patrona) eluiranjem u gradijentu od 0 -25% 7N metanolnog amonijaka u dihlormetanu daje čvrstu supstancu koja se suspenduje u etil acetatu (1,5 mL) i dodaje se hlorovodonična kiselina (4M u 1,4-dioksanu; 54,5 µL, 0.22 mmol, 6.7 ekv). Smeša se meša tokom 10 min, zatim se čvrste materije sakupe ceđenjem i suše pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (11,4 mg, 0.02 mmol, 53%), kao so hlorovodonične kiseline.
[0833] HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ izračunato za C33H37FN7O3S2: 662.2383, nađeno 662.2414 Primer 76: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[2-(dimetilamino)etilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0834]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil-[2-(dimetilamino)etil]amino]prop-1-inil]-2-fluorofenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0835] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 1,00 g iz dobijanja 3a (1.66 mmol, 1 ekv.) i 413 mg terc-butil N-[2-(dimetilamino)etil]-N-prop-2-inil-karbamata (1.83 mmol, 1.1 ekv.) kao odgovarajućeg alkina, željeni proizvod je izolovan kao žuta čvrsta supstanca.
[0836]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.30 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.15 (t, 1H), 4.27 (brt, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.47 (brt, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.82 (brs, 2H), 2.45 (brs, 6H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.43 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 151.8, 151.4, 151.4, 147.5, 142.4, 136.2, 135, 129.1, 129.1, 119.2, 115.5, 114.8, 82.3, 80.3, 68.3, 56.3, 52.0, 46.4, 46.4, 44.6, 43.1, 30.7, 28.5, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H43ClFN6O5S: 701.2683, nađeno 701.2678.
Korak B: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil-[2-(dimetilamino)etil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-tiazol-4-karboksilat
[0837] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak II polazeći od proizvoda iz koraka A i 1,3-benzotiazol-2-amin, dobija se željeni proizvod.
[0838] LC-MS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H48FN8O5S2: 815.3, nađeno 815.4.
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[2-(dimetilamino)etilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0839] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize praćenog ponovnim prečišćavanjem putem preparativne hromatografije sa reverznom fazom (C18, 25 mM NH4HCO3u vodi : MeCN) polazeći od proizvoda iz koraka B, dobija se željeni proizvod.
[0840] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H38FN8O3S2: 701.2487, nađeno 701.2483.
Primer 77: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0841]
Korak A: metil 5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat [0842] Koristeći Mitsunobu-ov opšti postupak polazeći od 2,00 g iz dobijanja 3b (3.19 mmol, 1 ekv.) i 835 mg of 2-fluoro-4-jodo-fenola (3.51 mmol, 1.1 ekv.) kao odgovarajućeg fenola, dobija se 2,31 g (85% prinos) željenog proizvoda.
[0843]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (dm, 1H), 7.6 (dd, 1H), 7.45 (dm, 1H), 7.43 (dm, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7 (t, 1H), 5.83 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.1 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.9 (m, 2H), -0.11 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C35H41FIN6O4S2Si: 847.1423, nađeno 847.1396.
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-(2-fluoro-4-jodo-fenoksi)propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0844] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg karbamata, dobija se željeni proizvod.
[0845] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C28H25FIN6O3S2: 703.0452, nađeno 703.0427.
Primer 78: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[5-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0846]
Korak A: metil 5-[3-(2-fluoro-5-jodo-fenoksi)propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat [0847] Koristeći Mitsunobu-ov opšti postupak polazeći od 390 mg iz dobijanja 3b (0.622 mmol, 1 ekv.) i 177 mg 2-fluoro-5-jodo-fenola (0.746 mmol, 1.2 ekv.) kao odgovarajućeg fenola, dobija se 416 mg (79% prinos) željenog proizvoda.
[0848]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (dm, 1H), 7.46 (dd, 1H), 7.43 (dm, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.05 (dd, 1H), 5.83 (s, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 0.91 (m, 2H), -0.11 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C28H25FIN6O3S2: 847.1423, nađeno 847.1416.
Korak B: metil 5-[3-[5-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-tri-metilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0849] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 310 mg proizvoda iz koraka A (0.366 mmol, 1.0 ekv.) i 91 mg N,N-dimetilprop-2-in-1-amina (1.10 mmol, 3 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 251 mg (85% prinos) željenog proizvoda.
[0850]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (dm, 1H), 7.43 (dm, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.03 (m, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.28 (s, 6H), 2.12 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.9 (m, 2H), -0.11 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H49FN7O4S2Si: 802.3035, nađeno 802.3028.
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[5-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0851] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B kao odgovarajućeg karbamata, dobija se željeni proizvod.
[0852] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C33H33FN7O3S2: 658.2064, nađeno 658.2045.
Primer 79: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-piperazin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
Korak A: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(4-terc-butoksikarbonilpiperazin-1-il)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0854] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehid kao aldehid i terc-butil piperazin-1-karboksilat kao odgovarajući sekundarni amin, dobija se željeni proizvod.
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-piperazin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0855] Smeša od proizvoda iz koraka A (207 mg, 0.25 mmol) i HFxPir (2.5 mmol, 10 ekv.) u acetonitrilu (4,3 mL) se meša na 60 °C tokom 2,5 h. Proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na koloni od 24 g silikagela koristeći DCM i MeOH (NH3) kao eluente da se dobije 143 mg (79%) željenog proizvoda.
[0856] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H36FN8O3S2: 699.2330, nađeno 699.2322.
Primer 80: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0857]
Korak A: metil 5-[3-(4-jodofenoksi)propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0858] Koristeći Mitsunobu-ov opšti postupak polazeći od 313 mg iz dobijanja 3b (0.50 mmol, 1.0 ekv.) i 110 mg 4-jodo-fenoal (0.50 mmol, 1.0 ekv.) kao odgovarajućeg fenola, dobija se 328 mg (63% prinos) željenog proizvoda.
[0859]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.43 (d, 1H), 7.42 (t, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.81 (d, 2H), 5.83 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.02 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.1 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 0.9 (t, 2H), -0.11 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 138.5, 127.1, 123.3, 123.1, 117.8, 111.8, 73, 67.3, 66.7, 52.0, 46.4, 31.1, 23.8, 23.2, 20.4, 17.8, 13.0, -0.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H42IN6O4S2Si: 829.1517, nađeno 829.1517.
Korak B: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]fenoksi]propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0860] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 3304 mg proizvoda iz koraka A (0.294 mmol, 1.0 ekv.) i 100 mg terc-butil N-metil-N-prop-2-inil-karbamata (0.588 mmol, 2 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 172 mg (67% prinos) željenog proizvoda.
[0861]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.42 (t, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.24 (t, 1H), 6.96 (d, 2H), 5.84 (s, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.2 (brs, 2H), 4.06 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.84 (brs, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.11 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.91 (t, 2H), -0.11 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSOd6) δ ppm 133.5, 127.1, 123.3, 123.1, 115.3, 111.8, 72.9, 67.3, 66.7, 52.0, 46.3, 38.6, 33.7, 31.0, 28.5, 23.8, 23.2, 20.3, 17.8, 13.0, -0.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N7O6S2Si: 870.3497, nađeno 870.349.
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0862] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B kao odgovarajućeg karbamata, dobija se željeni proizvod.
[0863] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H32N7O3S2: 626.2002, nađeno 626.2004.
Primer 81: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-metil-3-pirolidin-1-il-but-1-inil)fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina [0864]
[0865] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, acetona kao ketona i pirolidina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0866] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H39FN7O3S2: 712.2534, nađeno 712.2522.
Primer 82: 5-[3-[4-[3-(Dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0867]
Korak A: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0868] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 500 mg iz dobijanja 3a (0.80 mmol, 1.0 ekv.) i 100 mg N,N-dimetilprop-2-in-1-amina (1.2 mmol, 1.5 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 254 mg (50% prinos) željenog proizvoda.
[0869] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C27H30ClFN5O3S: 558.1736, nađeno 558.1729.
Korak B: metil 5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-[(7-fhioro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat [0870] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak II polazeći od 254 mg proizvoda iz koraka A (0.45 mmol, 1.0 ekv.) i 153 mg 7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-amina (0.91 mmol, 2.0 ekv.), dobija se 161 mg (51% prinos) željenog proizvoda.
[0871]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.59 (brs, 1H), 7.41 (dd, 1H), 7.4 (t, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.15 (t, 1H), 7.08 (t, 1H), 4.26 (t, 2H), 4.13 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.49 (s, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.27 (s, 6H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.2, 157.0, 155.7, 151.6, 150.4, 149.1, 148.8, 147.5, 141.6, 134.9, 129.0, 128.3, 128.0, 127.9, 119.3, 117.2, 115.5, 115.0, 113.6, 108.4, 84.8, 84.3, 68.3, 51.8, 48.0, 46.4, 43.9, 30.8, 23.9, 22.9, 20.2, 12.8;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H34F2N7O3S2: 690.2127, nađeno 690.2110.
Korak C: 5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0872] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[0873] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C32H31FN7O3S2: 676.1970, nađeno 676.1958.
Primer 83: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)-3-metil-but-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0874]
[0875] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, acetona kao ketona i dimetil amina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0876] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O3S2: 686.2377, nađeno 686.2361.
Primer 84: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[2-[1-(dimetilamino)cikloheksil]etinil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0877]
[0878] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, cikloheksanona kao ketona i dimetil amina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0879] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H41FN7O3S2: 726.2690, nađeno 726.2676.
Primer 85: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dietilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi] propil] tiazol-4-karboksilna kiselina
[0880]
[0881] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehida kao aldehida i dietil amina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0882] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O3S2: 686.2377, nađeno 686.2386.
Primer 86: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(diizopropilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0883]
[0884] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehida kao aldehida i diizopropil amina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0885] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H41FN7O3S2: 714.2690, nađeno 714.2681.
Primer 87: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(diizobutilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0886]
[0887] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehida kao aldehida i N-izobutil-2-metil-propan-1-amina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0888] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C39H45FN7O3S2: 742.3003, nađeno 742.3001.
Primer 88: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[etil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0889]
[0890] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehida kao aldehida i N-metiletanamina kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se željeni proizvod.
[0891] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H35FN7O3S2: 672.2221, nađeno 672.2206.
Primer 89: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0892]
Korak A: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(3R,5S)-4-terc-butoksikarbonil-3,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0893] Koristeći opšti postupak dobijanja propargilnog amina katalizovanog srebrom polazeći od dobijanja 3c, paraformaldehida kao aldehida i terc-butil (2R,6S)-2,6-dimetilpiperazin-1-karboksilata kao odgovarajućeg sekundarnog amina, dobija se 215 mg (62% prinos) željenog proizvoda.
[0894]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (dm, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.32 (dd, 1H), 7.2 (dm, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.98 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.62/2.25 (dd+dd, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.4 (s, 9H), 1.19 (d, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H48FN8O5S2: 827.3167, nađeno 827.3186.
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0895] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize (bez LiOH x H2O hidrolize) polazeći od proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg karbamata, dobija se željeni proizvod.
[0896] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H40FN8O3S2: 727.2643, nađeno 727.2641.
Primer 90: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0897]
Korak A: metil 5-[3-[4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0898] Koristeći Mitsunobu-ov opšti postupak polazeći od dobijanja 4a i dobijanja 3b kao odgovarajućeg alkohola, sirov željeni proizvod se izoluje i prenosi u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0899] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H55FN7O4S2Si: 844.3505, nađeno 844.3485.
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0900] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize praćenog ponovnim prečišćavanjem putem preparativne hromatografije sa reverznom fazom (C18, 25 mM NH4HCO3u vodi : MeCN) polazeći od proizvoda iz koraka A, dobija se željeni proizvod.
[0901] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H39FN7O3S2: 700.2534, nađeno 700.2515.
Primer 91: 2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [0902]
Korak A: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0903] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od dobijanja 3a i N,2-dimetilbut-3-in-2-amina, dobija se 417 mg željenog proizvoda.
[0904]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.23 (dd, 1 H), 7.16 (dd, 1 H), 7.12 (t, 1 H), 4.26 (t, 2 H), 4.11 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.25 (t, 2 H), 2.89 (t, 2 H), 2.37 (s, 3 H), 2.32 (s, 3 H), 2.1 (m, 2 H), 2.04 (m, 2 H), 1.34 (s, 6 H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 151.3, 136.2, 129.1, 128.9, 119.1, 115.4, 93.7, 81.5, 68.2, 52, 51, 46.4, 30.7, 30.4, 29, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C28H32ClFN5O3S: 572.1898; nađeno: 572.1888.
Korak B: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0905] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak II polazeći od proizvoda iz koraka A i 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 77 mg željenog proizvoda.
[0906] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O3S2: 686.2383; nađeno 686.2380
Korak C: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0907] Koristeći opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B, dobija se 22 mg željenog proizvoda.
[0908] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H35FN7O3S2: 672.2227; nađeno: 672.2224.
Primer 92: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino)etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina
[0909]
[0910] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se jedinjenje sa dihidroksi zaštićenim aminom. Hidroliza sa 10% rastvorom HCl (st, 1 h) i prečišćavanje preparativnom HPLC (koristeći acetonitril i 5mM vodeni rastvor NH4HCO3kao eluente) dalo je željeni proizvod.
[0911] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H55N9O5: 822.4125, nađeno: 822.4120.
Primer 93: 6-13-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino}etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina
[0912]
[0913] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-[(4R)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se jedinjenje sa dihidroksi zaštićenim aminom. Hidroliza sa 10% rastvorom HCl (st, 1 h) i prečišćavanje preparativnom HPLC (koristeći acetonitril i 5mM vodeni rastvor NH4HCO3kao eluente) dalo je željeni proizvod.
[0914] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H56N9O5S: 822.4125, nađeno: 822.4124.
Primer 94: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0915]
[0916] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i metilamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[0917] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C41H50N9O3S: 748.3757, nađeno: 748.3746.
Primer 95: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetiladamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0918]
[0919] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i dimetilamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[0920] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C42H52N9O3S: 762.3914, nađeno: 762.3912.
Primer 96: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-{1-[(3,5-dimetil-7-{2-[(2-sulfoetil)amino]etoksi}adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0921]
[0922] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i taurina kao odgovarajućeg amina, i K2CO3(10 ekv) kao baze za vreme trajanja koraka supstitucije, dobija se željeni proizvod.
[0923] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C42H52N9O6S2: 842.3482, nađeno: 842.3487.
Primer 97: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-{1-[(3,5-dimetil-7-{2-[metil(2-sulfoetil)amino]etoksi}adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}piridin-2-karboksilna kiselina
[0924]
Primer 98: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[4-(3-{[(but-3-in-1-il)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0925]
Primer 99: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0926]
Primer 100: 6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3,5-dimetil-7-(4-metilpiperazin-1-il)adamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina
[0927]
Primer 101: 5-{3-[4-(3-{[(3-azidopropil)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]-propil}-2-13-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0928]
Primer 102: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-(3-{4-[3-(etilamino)-3-metilbut-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0929]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-(terc-butoksikarbonilamino)-3-metil-but-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0930] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 1,00 g proizvoda iz dobijanja 3a (1.66 mmol) i 330 mg (1.1 ekv) terc-butil N-(1,1-dimetilprop-2-inil)karbamata kao odgovarajućeg alkina, dobija se 742 mg (68%) željenog proizvoda.
[0931]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.17 (dd, 1H), 7.12 (t, 1H), 7.11 (dd, 1H), 7.07 (brs, 1H), 4.26 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.25 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.1 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.50 (s, 6H), 1.40 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 151.7, 151.5, 151.3, 147.1, 142.5, 136.2, 134.9, 129.1, 128.7, 118.9, 115.7, 115.4, 94.2, 79.3, 78.7, 68.2, 52.0, 47.1, 46.4, 30.7, 29.8, 28.7, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H38ClFN5O5S : 658.2266, nađeno: 658.2245
Korak B: metil 5-[3-[4-(3-amino-3-metil-but-1-inil)-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0932] Smeša od proizvoda iz koraka A (740 mg, 1.12 mmol) i HFxPir (3 ekv) u acetonitrilu (5 mL/mmol) se meša na 50 °C tokom 1 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći EtOAc i MeOH (NH3) kao eluente) daje 560 mg (89%) željenog proizvoda.
[0933]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.18 (dd, 1H), 7.11 (m, 1H), 7.11 (m, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.10 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.35 (s, 6H);
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 128.6, 118.9, 115.3, 98.1, 78.4, 68.2, 52.0, 46.3, 46.3, 32.3, 30.7, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C27H30ClFN5O3S: 558.1742, nađeno: 558.1730.
Korak C: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[4-[3-(etilamino)-3-metil-but-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0934] Smeša od proizvoda iz koraka B (550 mg, 0.98 mmol), N-etil-N-izopropil-propan-2-amina (0,52 mL, 3 ekv) i jodoetana (0,12 mL, 1.5 ekv) u N,N-dimetilformamidu (5 mL/mmol) se meša na st tokom 3 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, sirovi intermedijer se prečišćava hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći EtOAc i MeOH (NH3) kao eluente) da se dobije 570 mg (99%) željenog proizvoda.
[0935]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.07 (brm, 2H), 7.41 (dd, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.20 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 3.17 (m, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.12 (qn, 2H), 2.05 (qn, 2H), 1.64 (s, 6H), 1.26 (t, 3H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 151.7, 151.4, 151.3, 148.2, 142.4, 136.3, 135.0, 129.4, 129.1, 119.5, 115.5, 113.2, 86.8, 85.3, 68.3, 53.8, 52.0, 46.4, 38.2, 30.7, 26.5, 24.2, 23.1, 19.8, 15.7, 12.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C29H34ClFN5O3S: 586.2055, nađeno: 586.2048.
Korak D: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(etilamino)-3-metil-but-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0936] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 570 mg proizvoda iz koraka C (0.98 mmol) i 292 mg (2 ekv) 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 420 mg (61%) željenog proizvoda.
[0937]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.98 (m, 2H), 7.88 (brs, 1H), 7.53 (brs, 1H), 7.42 (dd, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.29 (dm, 1H), 7.22 (t, 1H), 7.20 (m, 1H), 4.26 (t, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.29 (t, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.15 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.60 (s, 6H), 1.23 (t, 3H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H39FN7O3S2: 700.2540, nađeno: 700.2532.
Korak E: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(etilamino)-3-metil-but-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0938] U proizvod iz koraka D (420 mg, 0.60 mmol) u 2:1 smeši 1,4-dioksana i vode (7,5 mL/mmol) se dodaje 50 mg (2 ekv) LiOH x H2O, i smeša se meša na st tokom 3 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, prečišćavanje preparativnom hromatografijom sa reverznom fazom (C18, 0.1% TFA u vodi: MeCN) daje 33 mg (8%) željenog jedinjenja.
[0939] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O3S2: 686.2383, nađeno: 686.2378.
Primer 103: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-(3-{2-fluoro-4-[3-metil-3-(piperazin-1-il)but-1-in-1-il]fenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0940]
Primer 104: 5-[3-(4-{3-[(3-azidopropil)amino]prop-1-in-1-il}-2-fluorofenoksi)propil]-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0941]
Primer 105: 5-[3-(4-{3-[(3-aminopropil)amino]prop-1-in-1-il}-2-fluorofenoksi)propil]-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0942]
Primer 106: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-[3-(2-fluoro-4-{3-[(pent-4-in-1-il)amino]prop-1-in-1-il}fenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0943]
Primer 107: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(3-{[2-(2-hidroksietoksi)etil](metil)amino} prop-1-in-1-il)fenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0944]
Primer 108: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-[3-(2-fluoro-4-{3-metil-3-[(pent-4-in-1-il)amino]but-1-in-1-il}fenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0945]
Primer 109: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(3-{[(prop-2-in-1-il)amino]metillbiciklo[1.1.1]pentan-1-il)fenoksi]propill-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0946]
Primer 110: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-[3-(2-fluoro-4-{3-[(heks-5-in-1-il)amino]prop-1-in-1-il}fenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina [0947]
Primer 111: 5-[3-(4-{3-[(4-azidobutil)amino]prop-1-in-1-il}-2-fluorofenoksi)propil]-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0948]
Primer 112: 5-[3-(4-{3-[(4-azidobutil)(metil)amino]prop-1-in-1-il}-2-fluorofenoksi)propil]-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0949]
Primer 113: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-[3-(2-fluoro-4-{3-[(heks-5-in-1-il)(metil)amino]prop-1-in-1-il}fenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0950]
Primer 114: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-[3-(2-fluoro-4-{3-[metil(pent-4-in-1-il)amino]prop-1-in-1-il}fenoksi)propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0951]
Primer 115: 5-[3-(4-{3-[(3-azidopropil)(metil)amino]prop-1-in-1-il}-2-fluorofenoksi)propil]-2-13-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0952]
Primer 116: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(3-{[metil(pent-4-in-1-il)amino]metillbiciklo[1.1.1]pentan-1-il)fenoksi]propill-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0953]
Primer 117: 5-{3-[4-(3-{[(4-azidobutil)(metil)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]-propil}-2-13-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0954]
Primer 118: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[4-(3-{[(but-3-in-1-il)(metil)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0955]
Primer 119: 5-{3-[4-(3-{[(3-azidopropil)(metil)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]propil}-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0956]
Primer 120: 5-{3-[4-(3-1[(4-azidobutil)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-2-fluorofenoksi]-propil}-2-13-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0957]
Primer 121: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-{3-[2-fluoro-4-(3-{[(pent-4-in-1-il)amino]metil}biciklo[1.1.1]pentan-1-il)fenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0958]
Primer 122: 2-[(6R)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-(2-hidroksietil)-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil]-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0959]
Primer 123: 2-[(6S)-3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6-(2-hidroksietil)-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il]-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksilpropil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0960]
Primer 124: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(prop-2-inilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0961]
Korak A: metil 5-[3-[2-fluoro-4-[3-(prop-2-inilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]-2-[4-metil-3-[(Z)-[3-(2-tri-metilsililetoksimetil)-1,3-benzotiazol-2-iliden]amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0962] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od proizvod iz dobijanja 77, korak A (2,30 g, 2.71 mmol, 1.0 ekv.) i 1,26 g N-prop-2-inilprop-2-in-1-amina (13.58 mmol, 5 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 793 mg (36%) željenog proizvoda.
[0963] LC/MS (C41H47FN7O4S2Si) 812 [M+H]<+>.
Korak B: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(prop-2-inilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0964] Korišćenjem opšteg postupka uklanjanja zaštite i hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka A (900 mg, 1.10 mmol), dobija se 222 mg (30%) željenog proizvoda.
[0965]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.48 (br., 1H), 7.37 (t, 1H), 7.28 (dd, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.18 (t, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (br., 2H), 4.14 (t, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.39 (d, 2H), 3.27 (t, 2H), 3.09 (t, 1H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.03 (m, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 128.9, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 115.5, 87.8, 82.8, 82.2, 74.5, 68.5, 46.3, 37.2, 36.6, 31.0, 23.9, 23.1, 20.3, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H31FN7O3S2: 668.1914, nađeno: 668.1907.
Primer 125: 2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H,-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-{3-[4-(3-{bis[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino}prop-1-in-1-il)-2-fluorofenoksi]propil}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina
[0966]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-(terc-butoksikarbonilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0967] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 3,00 g iz dobijanja 3a (5.0 mmol) i 1,55 g tercbutil N-prop-2-inilkarbamata (2 ekv.) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 2,79 g željenog proizvoda (89%).
[0968]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.34 (brt, 1H), 7.26 (dd, 1H), 7.17 (dm, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.95 (brd, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.39 (s, 9H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.9, 119.1, 115.4, 68.2, 51.9, 46.3, 30.7, 30.5, 28.7, 24.1, 23.0, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C30H34ClFN5O5S: 630.1953, nađeno 630.1945.
Korak B: metil 5-[3-[4-(3-aminoprop-1-inil)-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[0969] Smeša od proizvoda iz koraka A (2,19 g, 3.47 mmol), piridin i fluorovodonik (1:1) (3,44 g, 10.0 ekv) u MeCN (17,3 mL) se meša na 60 °C tokom 1,5 h. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, DCM i MeOH (1.2% NH3) kao eluenti) dalo je željeni proizvod (1,81 g, 98.5%).
[0970]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.26 (dd, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 5.36 (NH3+, br., 3H), 4.25 (m, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.61 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 2.04 (m, 2H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 163.1, 155.3, 151.7, 151.5, 151.3, 147.4, 142.5, 136.1, 136.1, 134.9, 128.9, 119.1, 115.5, 115.2, 89.2, 81.9, 68.2, 51.9, 46.3, 31.1, 30.7, 24.2, 23.0, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C25H26ClFN5O3S: 530.1429, nađeno 530.1410.
Korak C: (4S)-4-(2-jodoetil)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan
[0971] U smešu od PPh3(11,84 g, 2.2 ekv), imidazola (3,07 g, 2.2 ekv) i 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanola (2,92 mL, 20.52 mmol) u dihlormetanu (103 mL), dodaje se jod (11,46 g, 2.2 ekv) u porcijama na 0 °C, zatim meša na st tokom 18 h. Zatim, reakcija se gasi sa 100 mL rastvora Na2S2O3i faze se razdvajaju, organska faza se ispire sa rastvorom soli, suši, i prečišćava fleš hromatografijom (silikagel, heptan i heptan-MTBE kao eluenti) da se dobije željeno jedinjenje (2,90 g, 55%).
[0972]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 4.06 (m, 1H), 4.01/3.45 (dd+dd, 2H), 3.28/3.21 (dd+dd, 2H), 2.00/1.97 (m+m, 2H), 1.31 (s, 3H), 1.26 (s, 3H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 108.7, 75.8, 68.3, 37.9, 27.3, 26.0, 3.5; GC-MS (El, M+): 255.79.
Korak D: metil 5-[3-[4-[3-[bis[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil]amino]prop-1-inil]-2-fluorofenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat [0973] Smeša od proizvoda iz koraka B (500 mg, 0.94 mmol), proizvoda iz koraka C (483,2 mg, 2.0 ekv) i N-etil-N-izopropil-propan-2-amina (1,0 mL, 6 ekv) u N,N-dimetilformamidu (4,7 mL) se meša na st tokom 6 h. Dodaje se 10 mL 2 M rastvor dimetilamina i reakciona smeša se dalje meša tokom 1 h. Smeša se razblaži sa vodom I zasićenim rastvorom NaHCOs i ekstrahuje sa EtOAc. Spojene organske faze se ispiru sa rastvorom soli, suše, koncentruju i prečišćavaju preparativnom HPLC (MeCN, NH4HCO3) da se dobije željeno jedinjenje (100 mg, 13%).
[0974]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.28 (dd, 1H), 7.18 (dm, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 4.07 (m, 2H), 3.99/3.46 (dd+dd, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.51 (m, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.32 (t, 2H), 2.11 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.64 (m, 4H), 1.30 (s, 6H), 1.24 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z):
[M+H]+ izračunato za C39H50ClFN5O7S: 786.3104, nađeno 786.3111.
Korak E: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[bis[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil]amino]prop-1-inil]-2-fluorofenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[0975] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 100 mg proizvoda iz koraka D (0.127 mmol) i prečišćavanje preparativnom HPLC (MeCN, NH4HCO3), dobija se 90 mg željenog proizvoda (78%).
[0976]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (brs, 1H), 7.60 (brs, 1H), 7.37 (brm, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.20 (brm, 1H), 7.19 (dm, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.45/3.98 (dd+dd, 4H), 4.26 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 4.05 (dd, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.5 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.63 (m, 4H), 1.3 (s, 6H), 1.24 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C46H55FN7O7S2: 900.3588, nađeno 900.3591.
Korak F: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[bis[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0977] Smeša od proizvoda iz koraka E (90 mg, 0.1 mmol) i LiOH x H2O (95 mg, 22.6 ekv) u 1,4-dioksanu (1 mL) i vodi (1 mL) se meša na st tokom 1 h, i na 50 °C tokom 2 h. Nakon tretmana sa hlorovodonikom (8 mmol) i mešanja na st tokom 4 h, dodaju se zasićeni rastvor NaHCO3i 1:1 smeša vode i rastvora soli, a željeni proizvod se procedi (33 mg, 40%).
[0978] HRMS-ESI (m/z) [M+H]<+>izračunato za C39H45FN7O7S2: 806.2806, nađeno 806.2803.
Primer 126: metil 5-[3-[4-(3-aminoprop-1-inil)-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0979]
Korak A: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(terc-butoksikarbonilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat [0980] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 4,60 g dobijanja 125, korak A i 2,20 g (2 ekv) 2-aminobenzotiazola praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni (silikagel koristeći heptan, EtOAc, i MeOH (1,2% NH3) kao eluente), dobija se 4,02 g (74%) željenog proizvoda.
[0981]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (br., 1H), 7.61 (br., 1H), 7.37 (brt., 1H), 7.27 (dd, 1H), 7.19 (br., 1H), 7.19 (dd, 1H), 7.15 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.94 (d, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.39 (s, 9H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 163.2, 155.7, 129.0, 126.4, 122.5, 122.2, 119.2, 115.5, 68.4, 51.9, 46.3, 31.0, 30.5, 28.7, 23.9, 23.1,20.3, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+izračunato za C37H39FN7O5S2: 744.2438, nađeno: 744.2425.
Korak B: metil 5-[3-[4-(3-aminoprop-1-inil)-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat
[0982] Smeša od proizvoda iz koraka A (4,00 g, 5.38 mmol), piridin i fluorovodonik (1:1) (5,33 g, 10 ekv) u MeCN (27 mL) se meša na 60 C tokom 16 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i MeOH (NH3) kao eluenti) daju željeno jedinjenje.
[0983] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C32H31FN7O3S2: 644.1914, nađeno: 644.1913.
Primer 127: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil] metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0984]
[0985] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[0986] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H54N9O3S: 788,4070, nađeno: 788.4068.
Primer 128: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0987]
[0988] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 1-metilpiperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[0989] HRMS-ESI (m/z): [M+2H]2+ izračunato za C45H48N10O3S: 409.2207, nađeno: 409.2208.
Primer 129: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0990]
[0991] Smeša od proizvoda iz dobijanja 3c (400 mg, 0.67 mmol), paraformaldehida (400 mg, 20 ekv), (2S)-4-aminobutan-1,2-diola, hlorovodonika (1:1) (754,3 mg, 8 ekv), trietilamina (2,3 mL, 25 ekv), CuJ (127 mg, 1 ekv) i molekulskih sita (0,5 g) u etanolu (3,3 mL) se čuva u Anton-Paar mikrotalasnom reaktoru na 120 °C tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći heptan, EtOAc i MeOH/NH3 (0.6N) kao eluente) i RF HPLC (Gemini, koristeći vodu sa 0,1% TFA i acetonitril kao eluente) daje 15,3 mg (3%) željenog proizvoda.
[0992] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O5S2: 718.2282, nađeno: 718.2266.
Primer 130: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0993]
[0994] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-[(4R)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]-N-metil-etanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se jedinjenje sa dihidroksi zaštićenim aminom. Hidroliza sa 10% rastvorom HCl (st, 1 h) i prečišćavanje preparativnom HPLC (koristeći acetonitril i 5mM vodeni rastvor NH4HCO3kao eluente) dalo je željeni proizvod.
[0995] HRMS-ESI (m/z): [M+2H]<2+>izračunato za C45H59N9O5S: 418.7180, nađeno: 418.7167.
Primer 131: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[0996]
[0997] Smeša od proizvoda iz dobijanja 3c (200 mg, 0.33 mmol), paraformaldehida (200 mg, 20 ekv), (2R)-4-aminobutan-1,2-diola, hlorovodonika (1:1) (471 mg, 10 ekv), trietilamina (1,2 mL, 25 ekv), CuJ (64 mg, 1 ekv) i molekulskih sita (0.25 g) u etanolu (1,6 mL) se čuva u Anton-Paar mikrotalasnom reaktoru na 120 °C tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći heptan, EtOAc i MeOH/NH3 (0.6N) kao eluente) i RF HPLC (Gemini, koristeći vodu sa 0,1% TFA i acetonitril kao eluente) daje 43 mg (18%) željenog proizvoda.
[0998] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H37FN7O5S2: 718.2282, nađeno: 718.2281.
Primer 132: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[0999]
[1000] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 4-aminobutan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1001] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H56N9O4S: 806.4176, nađeno: 806.4174.
Primer 133: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1002]
[1003] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i (2,2-dimetil-1,3-dioksan-5-il)metanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se jedinjenje sa dihidroksi zaštićenim aminom. Hidroliza sa 10% rastvorom HCl (st, 1 h) i prečišćavanje preparativnom HPLC (koristeći acetonitril i 5mM vodeni rastvor NH4HCO3kao eluente) dalo je željeni proizvod.
[1004] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H56N9O5S: 822,4125, nađeno: 822.4099.
Primer 134: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(2-hidroksietil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1005]
[1006] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-(2-hidroksietilamino)etanola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1007] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H56N9O5S: 822,4125, nađeno: 822.4123.
Primer 135: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[2-hidroksi-1-(hidroksimetil)etil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1008]
[1009] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-aminopropan-1,3-diola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1010] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C43H54N9O5S: 808.3969, nađeno: 808.3965.
Primer 136: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-(2-hidroksietoksi)etilamino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1011]
[1012] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-(2-aminoetoksi)etanola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1013] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H56N9O5S: 822.4125, nađeno: 822.4116.
Primer 137: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1014]
[1015] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 3-(3-hidroksipropilamino)propan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1016] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C46H60N9O5S: 850.4438, nađeno: 850.4436.
Primer 138: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1017]
[1018] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 3-aminopropan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1019] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C43H54N9O4S: 792.4019, nađeno: 792.4012.
Primer 139: 5-[3-[4-[3-[acetil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1020]
Korak A: metil 5-[3-[4-[3-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[1021] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 4,00 g iz dobijanja 3a (6.63 mmol) i 2,24 g terc-butil N-metil-N-prop-2-inil-karbamata (13.3 mmol, 2 ekv) kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 2,40 g (55%) željenog proizvoda.
[1022]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.30 (dd, 1H), 7.20 (dm, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.24 (m, 2H), 4.23 (brs, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.41 (s, 9H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 129.1, 119.3, 115.4, 85.2, 82.4, 68.2, 51.9, 46.3, 38.6, 33.8, 30.7, 28.5, 24.1, 23.0, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C31H36ClFN5O5S: 644.2110, nađeno: 644.2094.
Korak B: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(metilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[1023] U 322 mg proizvoda iz koraka A (0.5 mmol) u 2,5 mL acetonitrila se dodaje 0,9 mL fluorovodonik u piridinu (20 ekv). Reakciona smeša se meša na 60 °C dok se ne primeti dalja konverzija. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3)) daje 258 mg (95%) željenog proizvoda.
[1024]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.25 (dd, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (qn, 2H), 2.03 (qn, 2H), 1.99 (brs, 1H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 151.7, 151.6, 151.3, 147.2, 142.5, 136.2, 134.9, 129.0, 128.8, 119.1, 115.7, 115.4, 88.7, 82.1, 68.3, 52.0, 46.4, 40.5, 35.4, 30.8, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C26H28ClFN5O3S: 544.1585, nađeno: 544.1570.
Korak C: metil 5-[3-[4-[3-[acetil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[1025] Na 220 mg proizvoda iz koraka B (0.41 mmol) i 0,085 mL TEA (1.5 ekv) u 2 mL dihlormetana se dodaje 0,031 mL acetil hlorida (1.1 ekv). Reakciona smeša se meša dok se ne primeti dalja konverzija. Prečišćavanje fleš hromatografijom (silikagel, koristeći DCM i MeOH (1,2% NH3) kao eluente) donosi 174 mg (73%) željenog proizvoda.
[1026]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.34/7.31 (dd/dd, 1H), 7.23/7.20 (brd/brd., 1H), 7.14/7.13 (t/t, 1H), 4.38/4.34 (s/s, 2H), 4.25 (m, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.25 (t, 2H), 3.05/2.88 (s/s, 3H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 2.09/2.02 (s/s, 3H), 2.03 (m, 2H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 170.2/170.1, 163.0, 155.4, 151.3, 142.4, 134.9, 129.2/129.1, 119.4/119.3, 115.4, 85.3/84.7, 82.9/81.9, 68.2, 51.9, 46.3, 40.6/36.3, 35.4/33.1, 30.7, 24.1, 23.0, 21.9/21.8, 19.7, 15.7. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C28H30ClFN5O3S: 586.1691, nađeno: 586.1690.
Korak D: metil 5-[3-[4-[3-[acetil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilat [1027] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 170 mg (0.29 mmol) proizvoda iz koraka C i 87 mg (2 ekv) 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 220 mg (98%) željenog proizvoda.
[1028] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C35H35FN7O4S2: 700.2176, nađeno: 700.2180.
Korak E: 5-[3-[4-[3-[acetil(metil)amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1029] Koristeći Opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka D kao odgovarajućeg metil estra, dobija se željeni proizvod.
[1030] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H33FN7O4S2: 686.2023, nađeno: 686.2019.
Primer 140: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(4-hidroksibutil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1031]
[1032] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 4-(4-hidroksibutilamino)butan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1033] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C48H64N9O5S: 878.4751, nađeno: 878.4752.
Primer 141: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1034]
Korak A: 4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenol
[1035] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 10,0 g 4-jodofenola (45.45 mmol) i 4,91 g (1.3 ekv) N,N-dimetilprop-2-in-1-amina, dobija se 3,29 g (41%) željenog proizvoda.
[1036]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.83 (brs, 1H), 7.25 (d, 2H), 6.74 (d,2H), 3.44 (s, 2H), 2.26 (s, 6H); LC/MS (C11H14NO) 176[M+H]<+>.
Korak B: metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)-5-[3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tiazol-4-karboksilat
[1037] U proizvod iz dobijanja 1a, korak C (77,0 g, 243.7 mmol), imidazola (33,14 g, 2 ekv) i DMAP (1,49 g, 0.05 ekv) u DMF (973 mL), dodaje se u kapima terc-butil(hloro)difenilsilan (93,5 mL, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša na st tokom 16 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći heptan i EtOAc kao eluente) donosi 13,56 g (99%) željenog proizvoda.
[1038]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.63 (s, 1H), 7.60 (d, 4H), 7.45 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 1.87 (qn, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.99 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 156.0, 142.6, 135.6, 135.5, 133.5, 130.3, 128.3, 81.8, 62.9, 51.9, 34.0, 28.3, 27.1, 23.2, 19.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C29H39N2O5SSi: 555.2349, nađeno: 555.2336.
Korak C: metil 2-[terc-butoksikarbonil-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propil]amino]-5-[3-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tiazol-4-karboksilat
[1039] Koristeći opšti postupak alkilacije polazeći od 34,95 g (63 mmol) proizvoda iz koraka B i 25,0 g (1.2 ekv) 3,6-dihloro-4-(3-jodopropil)-5-metil-piridazina kao odgovarajućeg jedinjenja joda, dobija se 51,0 g (kvantitativni prinos) željenog proizvoda.
[1040]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.63-7.37 (m, 10H), 4.09 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 0.97 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 62.9, 52.0,46.1, 33.9, 28.1,27.5, 27.1, 25.9,23.8, 16.4; HRMS-ESI (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C37H47C12N4O5SSi:757.2413, nađeno: 757.2395.
Korak D: metil 5-[3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-2-[3-(3,6-dihloro-5-metil-piridazin-4-il)propilamino]tiazol-4-karboksilat
[1041] Koristeći opšti postupak uklanjanja zaštite sa HFIPA polazeći od 51,70 g proizvoda iz koraka C (68 mmol), dobija se 36,32 g (81%) željenog proizvoda.
[1042]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.71 (t, 1H), 7.63-7.37 (m, 10H), 3.69 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 0.98 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 62.9, 51.7, 44.1, 34.2, 28.0, 27.1, 27.0, 23.4, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H39Cl2N4O3SSi: 657.1889, nađeno: 657.1875.
Korak E: metil 5-[3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[1043] Smeša od 36,0 g (54.7 mmol) proizvoda iz koraka D i 35,7 g (2 ekv) Cs2CO3u 1,4-dioksanu (383 mL) se meša na 90 °C tokom 18 h. Nakon razblaživanja sa vodom, istaloženo čvrsto jedinjenje se iscedi, ispere sa dietiletrom, i suši da se dobije 34,0 g (99%) željenog proizvoda.
[1044]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.61 (d, 4H), 7.43 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 4.26 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (qn, 2H), 1.90 (qn, 2H), 1.00 (s, 9H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.3, 151.8, 151.4, 143.2, 136.2, 135.5, 134.7, 133.6, 130.3, 129.0, 128.3, 63.1, 51.9, 46.3, 34.1, 27.1, 24.2, 23.1, 19.8, 19.2, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H38ClN4O3SSi: 621.2122, nađeno: 621.2097.
Korak F: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-(3-hidroksipropil)-tiazol-4-karboksilat
[1045] Smeša od 23,36 g (37.6 mmol) proizvoda iz koraka E i 45 mL (1.2 ekv.) 1 M TBAF rastvora u THF (5 mL/mmol) se meša na st tokom 2 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, koristeći EtOAc i MeOH/NH3kao eluenti) donosi 12,88 g (89%) željenog proizvoda.
[1046]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.54 (br., 1H), 4.25 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.45 (t, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.77 (m, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.2, 151.2, 143.8, 136.1, 134.5, 129.0, 60.5, 52.0, 46.3, 34.6, 24.2, 23.2, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C16H20ClN4O3S: 383.0945, nađeno: 383.0937.
Korak G: metil 2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[1047] Koristeći Mitsunobu-ov opšti postupak polazeći od 0,65 g (1.2 ekv) proizvoda iz koraka F i 250 mg (1.43 mmol) 4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenola u THF (9 mL/mmol), dobija se 0,28 g (37%) željenog proizvoda.
[1048]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.34 (d, 2H), 6.91 (d, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.03 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.40 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.08 (qn, 2H), 2.03 (qn, 2H);<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 158.9, 155.3, 151.7, 151.3, 142.7, 136.2, 134.9, 133.3, 129.0, 115.2, 115.0, 85.2, 84.1, 67.1, 52.0, 48.3, 46.3, 44.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C27H31ClN5O3S: 540.1836, nađeno: 540.1834.
Korak H: metil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[1049] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 0,27 g proizvoda iz koraka G (0.5 mmol), dobija se 0,29 g (89%) željenog proizvoda.
[1050]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.83 (dm, 1H), 7.50 (dm, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.18 (m, 1H), 6.94 (m, 2H), 4.28 (m, 2H), 4.09 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 3.29 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.13 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H36N7O3S2: 654.2321, nađeno: 654.2322.
Korak I: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6, 7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1051] U proizvod iz koraka H (280 mg, 0.43 mmol) u 1:1 smeši THF i vode (10 mL/mmol) se dodaje 90 mg (5 ekv) LiOHxH2O, i reakciona smeša se meša na 50 °C tokom 18 h. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci, prečišćavanje preparativnom hromatografijom sa reverznom fazom (C18, 0,1% TFA u vodi i MeCN kao eluenti) donosi 132 mg (48%) željenog jedinjenja.
[1052] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C33H34N7O3S2: 640.2165, nađeno: 640.2160.
Primer 142: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1053]
[1054] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i morfolina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1055] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H54N9O4S: 804.4019, nađeno: 804.4012.
Primer 143: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(1-piperidil)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1056]
[1057] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i piperidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1058] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C45H56N9O3S: 802.4227, nađeno: 802.4223.
Primer 144: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1059]
[1060] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i piperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1061] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H55N10O3S: 803.4179, nađeno: 803.4177.
Primer 145: 3-[1-[[3-[2-(azepan-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido [2,3-c] piridazin-8-il] piridin-2-karboksilna kiselina
[1062]
[1063] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i azepana kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1064] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C46H58N9O3S: 816.4383, nađeno: 816.4379.
Primer 146: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c] piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-izopropilpiperazin-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1065]
[1066] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 1-izopropilpiperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1067] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C47H61N10O3S: 845.4649, nađeno: 845.4646.
Primer 147: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksipropilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [1068]
Korak A: 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-N-prop-2-inil-propan-1-amin
[1069] Smeša od 0,70 mL (3.0 mmol) 3-bromopropoksi-terc-butil-dimetil-silana, 1,9 mL (10 ekv) propargilnog amina i 1,6 mL (3 ekv) DIPEA u acetonitrilu (15 mL) se meša na 50 °C dok se ne primeti dalja konverzija. Reakciona smeša se koncentruje, razblaži sa DCM, i ekstrahuje sa zasićenim NaHCO3i rastvorom soli. Spojeni organski slojevi se suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod u kvantitativnom prinosu.
[1070]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 3.62 (t, 2H), 3.27 (d, 2H), 3.02 (t, 1H), 2.59 (t, 2H), 2.19 (brs, 1H), 1.57 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 73.9, 61.5, 45.2, 37.9, 32.7, 26.3, -4.8; HRMS (EI) (m/z): [M-CH3]+ izračunato za C11H22NOSi: 212.1471, nađeno: 212.1467.
Korak B: etil 5-[3-[4-[3-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]-propil]-2-(3-hloro-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)tiazol-4-karboksilat
[1071] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 1,0 g (1.64 mmol) proizvoda iz dobijanja 15 i 737 mg (2 ekv.) proizvoda iz koraka A kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 1,16 g (96%) željenog proizvoda.
[1072]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 45.2 (t, 2H), 7.24 (dd, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (t, 2H), 3.6 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmsod6) δ ppm 128.8, 119.1, 115.4, 68.3, 61.3, 60.7, 46.3, 45.2,38.4, 32.4, 30.8, 26.3, 24.2,23.1, 19.7, 15.7,14.6, -4.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+izračunato za C35H48ClFN5O4SSi: 716.2869, nađeno: 716.2868.
Korak C: etil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[1073] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 1,16 g (1.57 mmol) proizvoda iz koraka B i 730 mg (2 ekv) 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 598 mg (45%) željenog proizvoda.
[1074]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (td, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 7.17 (m, 1H), 4.26 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.63 (t, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.69 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.9, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.3, 115.5, 68.4, 61.3, 60.6, 46.3, 45.2, 38.4, 32.4, 31.1, 26.3, 23.9, 23.2, 20.3, 14.6, 12.9, -4.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C42H53FN7O4S2Si: 830.3354, nađeno: 830.3347.
Korak D: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksipropilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina [1075] Smeša od 590 mg (0.71 mmol) proizvoda iz koraka C i 298 mg LiOHxH2O (10 ekv) u 7 mL THF / voda (1:1) se meša na 60 °C dok se ne primeti dalja konverzija. Reakciona smeša se tretira sa 0,71 mL (12 ekv) koncentrovanog hlorovodonika na 0°C (pH = 2-3) i meša dok se ne primeti dalja konverzija. Nakon što se reakciona smeša koncentruje da se ukloni THF i liofilizacije, čvrsta supstanca se rastvara u 6N rastvoru NH3u MeOH i prečišćava hromatografijom sa reverznom fazom (koristeći 25 mM NH4HCO3i MeCN kao eluente) da se dobije 100 mg (21%) željenog proizvoda.
[1076] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C34H35FN7O4S2: 688.2176, nađeno: 688.2179.
Primer 148: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1077]
Korak A: 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil 4-metilbenzensulfonat
[1078] U 1,0 g (6.8 mmol) 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanola i 3,8 mL (4 ekv) trietilamina u 34 mL DCM se dodaje 4,5 g (2 ekv) p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonata na 0 °C. Reakciona smeša se meša dok se ne primeti dalja konverzija, koncentruje i tretira sa diizopropil etrom. Zatim, istaložena hlorovodonična so se iscedi i matična tečnost se koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom (silikagel, koristeći heptan i EtOAc kao eluenti) da se dobije 1,6 g (81%) željenog proizvoda.
[1079]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.79 (dm, 2H), 7.49 (dm, 2H), 4.08 (m, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.91/3.44 (dd+dd, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.83/1.77 (m+m, 2H), 1.24/1.20 (s+s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 132.7, 132.7, 130.7, 128.1, 108.6, 72.3, 68.7, 68.4, 32.9, 27.2/25.9, 21.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C14H21O5S: 301.1110, nađeno: 301.1107.
Korak B: N-[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil]prop-2-in-1-amin
[1080] Smeša od proizvoda iz koraka A (7,6 g, 25.3 mmol), prop-2-in-1-amina (16 mL, 10 ekv) i DIPEA (13,22 mL, 3 ekv) u 127 mL MeCN se meša na 50 °C tokom 16 h. Nakon koncentrovanja, dodaje se u DCM i ekstrahuje se sa cc. rastvorom NaHCOs i rastvorom soli, spojeni organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 5,0 g (107%) željenog proizvoda, koji se koristi bez ikakvog daljeg prečišćavanja.
[1081]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 4.07 (m, 1H), 3.98/3.43 (dd+t, 2H), 3.28 (m, 2H), 3.05 (t, 1H), 2.62/2.55 (m+m, 2H), 2.23 (brs, 1H), 1.63/1.59 (m+m, 2H), 1.30 (s, 3H), 1.25 (s, 3H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 108.2, 83.4, 74.6, 74.1, 69.2, 45.1, 37.8, 33.6, 27.3, 26.2; HRMS (EI) (m/z): [M]+ izračunato za C10H17NO2: 183.1259, nađeno: 183.1260.
Korak C: N-[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil]-N-metil-prop-2-in-1-amin
[1082] U proizvod iz koraka B (500 mg, 2.73 mmol) u N,N-dimetilformamidu (14 mL) se dodaje u porcijama natrijum hidrid (120 mg, 1.1 ekv) na 0°C. Nakon mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, Smeša se tretira jodometanom (0,17 mL, 1 ekv) i meša na st tokom 18 h. Nakon gašenja sa zasićenim rastvorom NH4Cl i vode, smeša se ekstrahuje sa Et2O. Spojene organske faze se suše i koncentruju da bi se dobio željeni proizvod (362 mg, 67%). GC/MS (C11H19NO2) 197 [M<+>].
Korak D: etil 2-(3-hloro-4-metil-6, 7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il)-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil-metil-amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilat
[1083] Koristeći Sonogashira opšti postupak polazeći od 0,548 g (0.89 mmol) proizvoda iz dobijanja 15 i 350 mg (2 ekv) proizvoda iz koraka C kao odgovarajućeg acetilena, dobija se 510 mg (82%) željenog proizvoda. LC/MS (C34H42ClFN5O5S) 686 [M+H]<+>.
Korak E: etil 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etil-metil-amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-tiazol-4-karboksilat
[1084] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I polazeći od 510 mg (0.52 mmol) proizvoda iz koraka D i 234 mg (3 ekv) 1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 200 mg (48%) željenog proizvoda.
[1085]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.88 (dm, 1H), 7.49 (brd, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.3 (dd, 1H), 7.20 (dm, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.26 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.98/3.45 (dd+dd, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.28 (m, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.45/2.39 (m+m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.29 (t, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.24 (s, 3H); HRMS (ESI) (m/z):
[M+H]+ izračunato za C41H47FN7O5S2: 800.3064, nađeno: 800.3064.
Korak F: 2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1086] Smeša od 200 mg (0.25 mmol) proizvoda iz koraka E i 53 mg LiOHxH2O (5 ekv) u 5 mL THF / voda (1:1) se meša na 60 °C tokom 18 h. Reakciona smeša se tretira sa 0,125 mL (6 ekv) koncentrovanog hlorovodonika na 0 °C (pH = 2-3) i meša na st, zatim na 60 °C tokom 0,5 h. Nakon što se reakciona smeša koncentruje da se ukloni THF i liofilizacije, čvrsta supstanca se rastvara u 6 N rastvoru NH3u MeOH i prečišćava hromatografijom sa reverznom fazom (koristeći 5 mM NH4HCO3i MeCN kao eluente) da se dobije 47 mg (25%) željenog proizvoda.
[1087] HRMS (ESI) (m/z): [M+H]+ izračunato za C36H39FN7O5S2: 732.2438, nađeno: 732.2441.
Primer 149: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[(4-hidroksifenil)metilamino] etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1088]
[1089] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 4-(aminometil)fenola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1090] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C47H54N9O4S: 840.4019, nađeno: 840.4016.
Primer 150: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c] piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-hidroksietil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1091]
[1092] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 2-(metilamino)etanola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1093] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C43H54N9O4S: 792.4019, nađeno: 792.4019.
Primer 151: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[3-metoksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1094]
[1095] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 3-metoksi-N-metil-propan-1-amina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1096] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C45H58N9O4S: 820.4332, nađeno: 820.4328.
Primer 152: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-hidroksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido [2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1097]
Korak A: 5-[terc-butil(dimetil)silifloksi-1,3-benzotiazol-2-amin
[1098] U smešu 2-amino-1,3-benzotiazol-5-ola (750 mg, 4.51 mmol), DMAP (110 mg, 0.2 ekv), i imidazola (399 mg, 1.3 ekv) u DMF (23 mL) dodaje se terc-butil(hloro)difenilsilan (816 mg, 1.2 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 18 h. Nakon gašenja sa vodom i ekstrakcijom sa EtOAc, spojene organske faze se suše, koncentruju, i prečišćavaju hromatografijom na koloni (silikagel, heptan i EtOAc kao eluenti) da bi se dobio željeni proizvod (1,07 g, 84.5%).
[1099]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.46 (d, 1H), 7.44 (s, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 0.95 (s, 9H), 0.17 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 168.1, 154.5, 154.1, 124.0, 121.5, 114.0, 109.6, 26.1, 18.4, -4.0;<15>N NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 237, 79.
Korak B: metil 6-[3-[[5-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-1,3-benzotiazol-2-il]amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[1100] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I na 130 °C tokom 1 h, polazeći od 1,0 g (1,57 mmol) proizvoda iz dobijanja 12, korak C i 883 mg (2 ekv) proizvoda iz koraka A, dobija se 1,1 g (80%) željenog proizvoda.
[1101]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.65 (br, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.95 (br, 1H), 6.71 (brd, 1H), 4.45 (t, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (q, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.32/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1.00 (d+d, 4H), 0.97 (s, 9H), 0.87 (s, 6H), 0.21 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.9, 137.5, 122.3, 119.1, 115.3, 62.1, 61.5, 58.9, 52.6, 50.1, 47.0, 46.1, 45.4, 43.3, 30.2, 26.1, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9, -4.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C47H63N8O5SSi: 879.4411, nađeno: 879.4412.
Korak C: metil 6-[3-[[5-[terc-butil(dimetil)silifloksi-1,3-benzotiazol-2-il]amidon-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[1102] U proizvod iz koraka B (1,1 g, 1.26 mmol) i trietilamina (0,53 mL, 3 ekv) u DCM (13 mL) dodaje se p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (618 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 2 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (590 mg, 45%).
[1103]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.90-6.40 (brs, 3H), 7.70 (d, 10H), 7.70 (m, 2H), 7.46 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 4.07 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (m, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.33-0.91 (m, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.84 (s, 6H), 0.21 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C54H69N8O7S2Si: 1033.4500, nađeno: 1033.4504.
Korak D: metil 6-[3-[[5-[terc-butil(dimetil)sili]oksi-1,3-benzotiazol-2-il]amino-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[1104] U proizvod iz koraka C (180 mg, 0.17 mmol) u MeCN (1,7 mL) i NMP (1,0 mL) dodaje se pirolidin (0,10 mL, 7 ekv) i reakciona smeša se meša na 60 °C tokom 18 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i 0.6 M NH3u MeOH kao eluenti) dalo je željeni proizvod (144 mg, 89%).
[1105]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.24 (brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.92 (br, 1H), 6.70 (dd, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.43 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.41 (t, 4H), 2.31 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.63 (t, 4H), 1.38 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.19/1.12 (d+d, 4H), 1.08/0.99 (d+d, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.86 (s, 6H), 0.21 (s, 6H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 122.6, 119.0, 115.3, 59.5, 58.9, 56.6, 54.5, 52.6, 50.1, 47.0, 46.0, 46.0, 43.3, 30.2, 26.0, 24.2, 23.6, 21.7, 12.6, 10.9, -4.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C51H70N9O4SSi: 932.5041, nađeno: 932.5014.
Korak E: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-hidroksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1106] U proizvod iz koraka D (70 mg, 0.075 mmol) u THF (1.2 mL) i vodu (0,30 mL), dodaje se LiOH3H2O (25,2 mg, 8 ekv) i reakciona smeša se meša na 60 °C tokom 1,5 h. Prečišćavanje preparativnom HPLC sa reverznom fazom (C18, 5 mM NH4HCO3(vodeni) i IPA kao eluenti) dalo je željeni proizvod (45 mg, 74%).
[1107] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H54N9O4S: 804,4019, nađeno: 804.4019.
Primer 153: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino] etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1108]
[1109] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 12 i 4-(metilamino)butan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1110] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C45H58N9O4S: 820.4332, nađeno: 820.4339.
Primer 154: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(dimetilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina [1111]
[1112] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i dimetilamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1113] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H48N9O3S: 734.3601, nađeno: 734.3589.
Primer 155: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina [1114]
[1115] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1116] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H50N9O3S: 760.3757, nađeno: 760.3730.
Primer 156: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1117]
[1118] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 1-metilpiperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1119] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H53N10O3S: 789.4017, nađeno: 789.4023.
Primer 157: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1120]
[1121] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i morfolina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1122] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H50N9O4S: 776.3706, nađeno: 776.3697.
Primer 158: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1123]
[1124] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 3-aminopropan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1125] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H50N9O4S: 764.3706, nađeno: 764.3700.
Primer 159: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1126]
[1127] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 4-aminobutan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1128] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O4S: 778.3863, nađeno: 778.3859.
Primer 160: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1129]
[1130] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1131] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O5S: 794.3812, nađeno: 794.3807.
Primer 161: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1132]
[1133] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 2-(aminometil)propan-1,3-diola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1134] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O5S: 794.3812, nađeno: 794.3808.
Primer 162: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1136] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 4-(metilamino)butan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1137] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H54N9O4S: 792.4019, nađeno: 792.4020.
Primer 163: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[3-hidroksipropil(metil)amino]etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1138]
[1139] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 3-(metilamino)propan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1140] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O4S: 778.3863, nađeno: 778.3858.
Primer 164: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1141]
[1142] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i 3-(3-hidroksipropilamino)propan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1143] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N9O5S: 822.4125, nađeno: 822.4121.
Primer 165: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[5-metil-1-[[3-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina [1144]
[1145] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 14 i piperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1146] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N9O5S: 775.3866, nađeno: 775.3859.
Primer 166: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(3-pirolidin-1-ilpropil)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1147]
[1148] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1149] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C45H56N9O2S: 786.4278, nađeno: 786.4273.
Primer 167: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-(dimetilamino)propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1150]
[1151] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i dimetilamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1152] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H54N9O2S: 760.4115, nađeno: 760.4121.
Primer 168: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1153]
[1154] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 1-metilpiperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1155] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C46H59N10O2S: 815.4543, nađeno: 815.4534.
Primer 169: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(3-morfolinopropil)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1156]
[1157] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i morfolina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1158] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C45H56N9O3S: 802.4227, nađeno: 802.4221.
Primer 170: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-(3-hidroksipropilamino)propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1159]
[1160] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 3-aminopropan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1161] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N9O3S: 790.4227, nađeno: 790.4220.
Primer 171: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-(4-hidroksibutilamino)propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1162]
[1163] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 4-(amino)butan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1164] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C45H58N9O3S: 804.4383, nađeno: 804.4377.
Primer 172: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1165]
[1166] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 2-[(4,S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]etanamina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1167] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O5S: 820.4332, nađeno: 820.4328.
Primer 173: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1168]
[1169] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 2-(aminometil)propan-1,3-diola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1170] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O5S: 820.4332, nađeno: 820.4329.
Primer 174: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-[4-hidroksibutil(metil)amino]propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1171]
[1172] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 4-(metilamino)butan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1173] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H54N9O4S: 818.4540, nađeno: 818.4536.
Primer 175: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-[3-hidroksipropil(metil)amino]propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1174]
[1175] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 3-(metilamino)propan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1176] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H52N9O4S: 804.4383, nađeno: 804.4380.
Primer 176: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[3-[bis(3-hidroksipropil)amino]propil]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1177]
[1178] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i 3-(3-hidroksipropilamino)propan-1-ola kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1179] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N9O5S: 848.4645, nađeno: 848.4645.
Primer 177: 6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(3-piperazin-1-ilpropil)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1180]
[1181] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od dobijanja 13 i piperazina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1182] HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C44H56N9O5S: 801.4387, nađeno: 801.4370.
Primer 178: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il] piridin-2-karboksilna kiselina
[1183]
Korak A: metil 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilat
[1184] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I na 130 °C tokom 2 h, polazeći od 130 mg (0.2 mmol) proizvoda iz dobijanja 12, korak C i 52 mg (1.5 ekv) 7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 139 mg (88%) željenog proizvoda.
[1185]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.45-7.35 (m, 1H), 7.45-7.35 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.05 (m, 1H), 4.46 (br., 1H), 4 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.41 (q, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.07/1.00 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 157.1, 140.0, 137.5, 127.7, 119.3, 108.3, 62.1, 61.5, 59.0, 52.7, 50.1, 47.0, 46.0, 45.5, 43.3, 30.2, 24.3, 21.6, 12.5, 10.9;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H48FN8O4S: 767.3482, nađeno: 767.3503.
Korak B: metil 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilat
[1186] U proizvod iz koraka A (130 mg, 0.17 mmol) i trietilamina (0,071 mL, 3 ekv) u DCM (2 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (83 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (54 mg, 34%).
[1187]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.71 (d, 1H), 7.63-7.26 (br., 1H), 7.46 (d, 2H), 7.40 (br., 1H), 7.39 (s, 1H), 7.05 (br., 1H), 4.06 (m, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (m, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.28 (s, 2H), 1.20-1.06 (m, 4H), 1.20-1.06 (m, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.6, 128.1, 127.6, 119.3, 108.3, 71.5, 58.9, 58.4, 52.6, 49.9, 46.6, 45.9, 45.5, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 12.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H48FN8O4S: 921.3592, nađeno: 921.3567.
Korak C: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1188] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1189] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C44H53FN9O3S: 806.3976, nađeno: 806.3974.
Primer 179: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1190]
Korak A: metil 3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilat
[1191] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I na 130 °C tokom 1,5 h, polazeći od 140 mg (0.22 mmol) proizvoda iz dobijanja 12, korak C i 54,3 mg (1.5 ekv) 5-metil-1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 126 mg (75%) željenog proizvoda.
[1192]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.08/10.89 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (br, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.46 (brs, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1.02 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmsod6) δ ppm 139.8, 137.5, 123.6, 121.6, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.7,50.1, 47.0,46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3,21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H51N8O4S: 763.3760, nađeno: 763.3754.
Korak B: metil 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilat
[1193] U proizvod iz koraka A (119 mg, 0.16 mmol) i trietilamina (0,066 mL, 3 ekv) u DCM (2 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (76 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (93 mg, 65%).
[1194]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.7 (d, 1H), 7.69 (br, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.42 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4 (t, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.49 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.1 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 123.6, 119.0, 71.5, 58.8, 58.4, 52.7, 49.9, 46.6, 45.9, 45.4, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C49H57N8O6S2: 917.3842, nađeno: 917.3840.
Korak C: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1195] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1196] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C45H56N9O3S: 802.4227, nađeno: 802.4220.
Primer 180: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1197]
Korak A: metil 3-[1-[[3-(2-hidroksietoksi)-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilat
[1198] Koristeći Buchwald-ov opšti postupak I na 130 °C tokom 2,5 h, polazeći od 140 mg (0.22 mmol) proizvoda iz dobijanja 12, korak C i 60 mg (1.5 ekv) 5-metil-1,3-benzotiazol-2-amina, dobija se 129 mg (75%) željenog proizvoda.
[1199]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.02 (br., 1H), 6.80 (dd, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H);<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 122.6, 119.0, 110.5, 62.1, 61.5, 58.9, 55.8, 52.6, 50.1, 47.0, 46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9;
HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H51N8O5S: 779.3703, nađeno: 779.3687.
Korak B: metil 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(p-tolilsulfoniloksi)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilat
[1200] U proizvod iz koraka A (122 mg, 0.16 mmol) i trietilamina (0,066 mL, 3 ekv) u DCM (2 mL) se dodaje p-tolilsulfonil 4-metilbenzensulfonat (77 mg, 1.5 ekv) i reakciona smeša se meša tokom 1 h. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (silikagel, DCM i EtOAc kao eluenti) dalo je željeni proizvod (79 mg, 54%).
[1201]<1>H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.72 (d, 1H), 7.67 (brd, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.02 (br, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.10 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H);
<13>C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.6, 128.1, 119.0, 110.6, 71.5, 58.8, 58.4, 55.9, 52.6, 49.9, 46.6, 45.9, 45.8, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 12.7, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]<+>izračunato za C49H57N8O7S2: 933.3792, nađeno: 933.3794.
Korak C: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1202] Koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od proizvoda iz koraka B i pirolidina kao odgovarajućeg amina, dobija se željeni proizvod.
[1203] HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ izračunato za C45H57N9O4S: 818.4176, nađeno: 818.4172.
Jedinjenja iz sledećih primera 181-219 su sintetizovana koristeći supstituciju amina i opšti postupak hidrolize polazeći od jednog od dobijanja 12, 13, 14 ili analoga derivata benzotiazola i odgovarajućeg amina.
Primer 181: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1204]
Primer 182: 3-[1-[[3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1205]
Primer 183: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
Primer 184: 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1207]
Primer 185: 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1208]
Primer 186: 3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1209]
Primer 187: 3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1210]
Primer 188: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1211]
Primer 189: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1212]
Primer 190: 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[3-hidroksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1213]
Primer 191: 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
Primer 192: 6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1215]
Primer 193: 3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil] metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(7-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1216]
Primer 194: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il] piridin-2-karboksilna kiselina
[1217]
Primer 195: 3-[1-[[3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1218]
Primer 196: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1219]
Primer 197: 3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1220]
Primer 198: 3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1221]
Primer 199: 3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1222]
Primer 200: 3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1223]
Primer 201: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1224]
Primer 202: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1225]
Primer 203: 3-[1-[[3-[2-[3-hidroksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1226]
Primer 204: 3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1227]
Primer 205: 3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]-metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1228]
Primer 206: 3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1229]
Primer 207: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1230]
Primer 208: 3-[1-[[3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1231]
Primer 209: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1232]
Primer 210: 3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1233]
Primer 211: 3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil] metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1234]
Primer 212: 3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5Hpirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1235]
Primer 213: 3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1236]
Primer 214: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido [2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1237]
Primer 215: 3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido [2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1238]
Primer 216: 3-[1-[[3-[2-[3-hidroksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1239]
Primer 217: 3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1240]
Primer 218: 3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1241]
Primer 219: 3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]-6-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina
[1242]
Primer 220: 5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[4-metil-3-[(5-metil-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il] tiazol-4-karboksilna kiselina [1243]
Primer 221: 5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-2-[3-[(5-metoksi-1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]tiazol-4-karboksilna kiselina
[1244]
FARMAKOLOŠKA STUDIJA
PRIMER A: Podaci o testu fluorescentne polarizacije
[1245] Fluorescentna polarizacija meri rotaciju fluorescentne vrste u rastvoru, što je veći molekul, emisija fluorescencije je polarizovanija.
[1246] Sonda zasnovana na fluorescentnoj PUMA (UniProtKB<®>primarni pristupni broj Q9BXH1 -SEQ ID:01) Fluorescein-betaAla-Ahx-AREIGAQLRRMADDLNAQY-OH iz Biopeptida se vezuje za GST(1-218)-(FACTOR_XA)-hsBCLXL(2-209) ima sekvencu aminokiselina (SEQ ID: 02):
[MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPY YIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDF ETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCL DAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSDLIEGRGIPE FEFSQSNRELVVDFLSYKLSQKGYSWSQFSDVEENRTEAPEGTESEMETPSAINGNPS WHLADSPAVNGATGHSSSLDAREVIPMAAVKQALREAGDEFELRYRRAFSDLTSQL HITPGTAYQSFEQVVNELFRDGVNWGRIVAFFSFGGALCVESVDKEMQVLVSRIAAW MATYLNDHLEPWIQENG-GWDTFVELYGNNAAAESRKGQER] (GST UniProtKB<®>primarni pristupni broj P08515 i BCLXL UniProtKB<®>primarni pristupni broj Q07817-1),
što dovodi do povećanja anizotropije. Ako se doda jedinjenje koje se vezuje za isto mesto kao i sonda, time se oslobađajući, anizotropija se smanjuje usled povećane količine slobodne sonde.
[1247] Serijsko razblaživanje od 11 tačaka svakog jedinjenja je pripremljeno u DMSO, krajnji puferski uslovi su 10 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonska kiselina [HEPES], 150 mM NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,4 i 5% DMSO. Krajnja koncentracija proteina u testu je 20 nM sa fluorescentnom sondom prisutnom na 10 nM. Eksperimenti su inkubirani tokom 2 sata na 23°C pre nego što je izmerena polarizacija fluorescencije na čitaču ploča Biotek SynergyNeo (ekscitacija 485nm, emisija 525nm, paralelno i vertikalno očitavanje). Krive doza odgovor su ucrtane softverom XL-Fit koristeći 4-parametarski logistički model (Sigmoidalni model doza odgovor) i određen je (IC50) za inhibitorne koncentracije koje daju za 50% povećanje intenziteta fluorescencije. Vrednosti KIsu određene iz vrednosti IC50prema Cer et al, Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer izdanje): W441-W445.
[1248] Rezultati su sumirani u Tabeli 1. Oni pokazuju da jedinjenja prema pronalasku inhibiraju interakciju između Bcl-xL proteina i fluorescentnog peptida koji je ovde opisan.
Tabela 1
PRIMER B: Podaci o testu za gašenje
[1249] Test gašenja fluorescencije meri promenu u intenzitetu fluorescencije C-terminalno obeleženog Cy5 BCL-xL proteina, His-His-(EK)-hsBCLXL(2-197)[N197C] (UniProtKB<®>primarni pristupni broj Q07817-1) koji ima sekvencu aminokiselina (SEQ ID:03):
[MHHHHHHHHGATGSTAGSGTAGSTGASGASTGGTGATHHHHHHHHDDDDKSPMG SQSNRELVVDFLSYKLSQKGYSWSQFSDVEENRTEAPEGTESEMETPSAINGNPSWH LADSPAVNGATGHSSSLDAREVIPMAAVKQALREAGDEFELRYRRAFSDLTSQLHITP GTAYQSFEQVVNELFRDGVNWGRIVAFFSFGGALCVESVDKEMQVLVSRIAAWMAT YLNDHLEPWIQENGGWDT-FVELYG] koji je vezan u C-terminalnom regionu za aminokiselinu X koja odgovara cisteinu obeleženom na sumporu sa Sulfo-Cijninom5 iz Lumiprobe GmbH kataloški broj 13380,
Nakon vezivanja C-terminalno obeleženog peptida dobijenog iz PUMA (UniProtKB<®>primarni pristupni broj Q9BXH1) koji ima sekvencu aminokiselina (SEQ ID:04): [QWAREIGAQLRRMADDLNAQY] koja je povezana u C-terminalnom regionu za aminokiselinu X’ gde je X’ cistein obeležen na sumporu sa TQSWS iz AAT Bioquest kataloški broj 2079.
[1250] Dodavanje jedinjenja koje se kompetitivno vezuje za isto mesto kao i peptid dovešće do povećanja u intenzitetu fluorescencije proteina zbog pomeranja gasitelja fluorescencije.
[1251] Serijsko razblaživanje od 11-tačaka za svako jedinjenje je pripremljeno u DMSO, krajnji puferski uslovi su 10 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonska kiselina [HEPES], 150 mM NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,4 i 5% DMSO. Krajnja koncentracija proteina u testu je1 nM sa peptidom prisutnim na 400 nM. Eksperimenti su inkubirani tokom 2 sata na 23°C pre nego što je meren intenzitet fluorescencije na čitaču ploča Biotek SynergyNeo (ekscitacija 620nm, emisija 680nm). Krive doza odgovor su ucrtane pomoću softvera XL-Fit koristeći 4-parametarski logistički model (Sigmoidalni model doza odgovor) i određen je (IC50) za inhibitorne koncentracije koje daju za 50% povećanje intenziteta fluorescencije. Vrednosti KIsu određene iz vrednosti IC50prema Cer et al, Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer izdanje): W441-W445.
[1252] Rezultati su sumirani u Tabeli 2.
Tabela 2
[1253] Rezultati iz Tabela 1 i 2 pokazuju da većina jedinjenja prema pronalasku su snažni inhibitori BclxL proteina.
PRIMER C: Efekat inhibitora Bcl-xL u vitalnosti ćelija MOLT-4 ili H146 koristeći MTT test
[1254] MTT kolorimetrijski test se zasniva na mitohondrijskoj redukciji tetrazolijumove soli živim ćelijama. Broj vitalnih ćelija je proporcionalan proizvodnji soli formazana, koje se mogu očitati spektrofotometrijski na 540 nm.
[1255] Ćelije MOLT-4 i H146 su kupljene od ATCC i kultivisane u RPMI 1640 sa dodatkom10% toplotom inaktivisanog fetalnog goveđeg seruma, penicilina (100 IU/ml), streptomicina (100 µg/ml) i L-glutamina (2 mM). Ćelije su bile kultivisane na 37°C u vlažnoj atmosferi koja sadrži 5% CO2.. Ćelije su zasejane u ploče sa 96 mikrobunarčića (150µL po bunarčiću) i izložene jedinjenjima tokom 48h (3,16 puta serijsjki razblažene; 9 koncentracija svaka, tri primerka). Na kraju vremena inkubacije, dodaje se 15µL rastvora MTT (5mg/mlpo bunarčiću i ćelije se inkubiraju tokom narednih 4h. Zatim, dodaje se 100µL 10% natrijum dodecil sulfata (SDS)/HCl 10mM po bunarčiću i ploča se inkubira preko noći, pre merenja optičke gustine na 540 nm. IC50s su izračunate koristeći standardno prilagođavanje krive sa četiri parametra. IC50se definiše kao koncentracija jedinjenja pri kojoj se MTT signal smanjuje na 50% od onog izmerenog za kontrolu. Rezultati predstavljaju srednju vrednost od najmanje 2 nezavisna eksperimenta i prikazani su u Tabeli 3 ispod.
Tabela 3
[1256] Ovi podaci pokazuju da je većina ovih jedinjenja aktivna u ćelijama i da može izazvati smanjenje vitalnosti ćelijskih linija H146 i Molt-4 u zavisnosti od doze.
PRIMER D: Studija farmakodinamike i regresije tumora
[1257] Terapeutski i farmakokinetički efekti in vivo malih molekula koji ciljaju Bcl-xL su određeni u modelu MOLT-4 Akutne limfoblastne leukemije T-ćelija (T-ALL) nakon intravenskog (IV) ili oralnog (PO) davanja.
Materijali i metode
[1258] MOLT-4 ćelije (ATCC No. CRL-1582) su kultivisane u RPMI sa dodatkom 10% FBS. Ćelije su resuspendovane u 50% matrigelu (BD Biosciences) i 0,1 mL koji sadrži 5310<6>ćelija je subkutano inokulisan u desni bok ženke NOD SCID miševa (Charles River). Za studije efikasnosti, kada su tumori dostigli odgovarajuću zapreminu, miševi su nasumično izabirani (7 životinja po grupi) koristeći softver Easy stat. Kontrolni nosač (HPBCD/HCl) ili primer 24 (2,5, 5 ili 7,5 mg/kg) je ubrizgano IV (dva puta nedeljno tokom 3 nedelje -Q3D6). Telesna masa miševa je praćena tri puta nedeljno, a veličina tumora je merena pomoću elektronskog šublera. Zapremina tumora je procenjena merenjem minimalnog i maksimalnog prečnika tumora koristeći formulu: (minimalni prečnik)<2>(maksimalni prečnik)/2. Poslednjeg dana sa najmanje polovine kontrolnih životinja još uvek prisutnih u studiji (dan 31), izračunata je inhibicija rasta tumora korišćenjem formule:
[1259] Odgovor je procenjen na sledeći način: CR (potpuni odgovor) ako je veličina tumora ≤25mm<3>za najmanje tri uzastopna merenja, PR (delimični odgovor) ako je veličina tumora između 25mm<3>i polovine početne veličine za najmanje tri uzastopna merenja. Miševi su žrtvovani pri prvom merenju za koje je zapremina tumora premašila 2000 mm<3>ili pri prvim znacima pogoršavanja zdravlja životinja.
[1260] Za farmakološke studije, kada su tumori dostigli odgovarajuću zapreminu, miševi su nasumično odabirani (3 životinje po grupi) koristeći softver Easy stat. Primer 24 (7,5 mg/kg) je IV doziran (jednom dnevno -QD) u HPBCD/HCl ili PO (jednom dnevno -QD) u PEG300/EtOH/Phosal (30/10/60). Uzorci tumora su sakupljeni 6 h nakon doziranja i lizirani (10 mM HEPES pH 7,4, 142,5 mM KCl, 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 1% NP40, kokteli inhibitora proteaze i fosfstaze -Calbiochem). Očišćeni lizati su pripremljeni za imunodetekciju otcepljenih PARP i kaspaze 3 korišćenjem MSD ploča za apoptozu kompleta lizata celih ćelija (MSD) u pločama sa 96 bunarčića prema uputstvima proizvođača, i analizirani su na QuickPlex SQ 120. Uzorci kompletne krvi su analizirani na hematološkom analizatoru Coulter Ac•T diff (Beckman Coulter).
[1261] Svi eksperimenti su sprovedeni u skladu sa francuskim propisima koji su na snazi nakon odobrenja od strane Etičkog komiteta Istraživačkog instituta Servier (IdRS). NOD SCID miševi su održavani u skladu sa institucionalnim smernicama.
Rezultati
[1262] Efikasnost primera 24 na MOLT-4 ksenotransplantatima je ilustrovana na slici 1. Tretman je započet 12 dana nakon inokulacija tumorskih ćelija (prosečna veličina: 235 mm<3>). Nosač (HPBCD/HCl) ili primer 24 (2,5, 5 i 7,5 mg/kg) su IV dozirani, svaki 3 dana za ukupno 6 davanja.
[1263] Na dan 31 nakon početka tretmana, inhibicija rasta tumora (%TGI) izazvana primerom 24 je bila 77,1% pri 2,5 mg/kg, 78,7% pri 5 mg/kg i 94,7% pri 7,5 mg/kg (p<0.05), kao što je prikazano na slici 1 i tabeli 4. Delimična regresija (PR) je ostvarena u 28,6%, 71,4% i 100% slučajeva, respektivno. Potpuna regresija (CR) je primećena u 14,3% životinja tretiranih najvećom dozom.
[1264] Nije primećen klinički značajan gubitak telesne mase usled lečenja (slika 2).
Tabela 4: Inhibicija rasta tumora MOLT-4 nakon tretmana sa primerom 24 (2,5, 5 i 7,5 mg/kg, davano IV 3D6.
[1265] Efekat primera 24 na indukciju apoptoze u MOLT-4 tumorskim ćelijama i broj cirkulišućih trombocita je ilustrovan u tabeli 5. Tretman je započet 18 dana nakon inokulacije tumorskih ćelija (average size: 461 mm<3>). Primer 24 (7,5 mg/kg) je doziran jednom PO ili IV, a uzorci su sakupljeni 6h kasnije. Jedinjenje je pokazalo indukciju markera apoptoze, naime otcepljen PARP (24,1 -38,6-puta u odnosu na netretirane kontrolne) i otcepljenu kaspazu 3 (7,2 -18,9-puta u odnosu na netretirane kontrolne) cepanja, nezavisno od načina davanja. Pored toga, s obzirom na dobro opisanu ulogu BclxL u regulaciji životnog veka trombocita, takođe je izazvalo značajno smanjenje broja trombocita (na 1% kontrolne vrednosti).
Tabela 5: Aktivacija otcepljenog PARP i otcepljene kaspaze 3 u tumorskim ćelijama i gubitak trombocita u MOLT-4-transplantiranim ženkama NOD SCID miševa 6h nakon tretmana (PO ili IV) sa rimerom 24 ri 75 m /k .
[1266] U zaključku, ovde pokazujemo da je mali molekul koji cilja Bcl-xL opisan u primeru 24 aktivan in vivo nakon intravenskog ili oralnog davanja. Primetili smo regresiju tumora, indukciju apoptoze u tumorskim ćelijama i jako smanjenje cirkulirajućih trombocita, iu skladu sa prethodno opisanom ulogom Bcl-xL u kontroli apoptoze i regulaciji životnog veka trombocita (Youle and Strasser, Nat. Rev. Mol. Cell Biol.2008 Jan;9(1):47-59; Zhang et al., Cell Death Differ.2007 May;14(5):943-51; Mason et al., Cell 2007 Mar 23;128(6):1173-86). Pored toga, nije primećen klinički relevantan gubitak telesne mase nakon tretmana efikasnim dozama, a gubitak trombocita je oporavljen nakon prekida tretmana (podaci nisu prikazani). U celini, ovi podaci ukazuju da postoji moguća terapijska margina za upotrebu ovih malih molekula koji ciljaju Bcl-xL u lečenju raka.
PRIMER E: In vivo farmakodinamički profil jedinjenja formule (I)
[1267] Farmakokinetički profil jedinjenja formule (I) je procenjen kod glodara (miš, pacov) nakon PO i/ili IV načina davanja. Formulacija se bira na osnovu fizičko-hemijskih osobina testiranog leka kao i načina davanja. Pojedinačna doza leka (<5mg/kg) pripremljena u prilagođenoj formulaciji se daje IV (bolus ili 10-minutna infuzija) ili PO (gavaža) ruta do životinja (3 životinje/ruta). Uzorci krvi iz svake životinje (do 6 uzoraka/životinja) se sakupljaju tokom 24 h nakon doziranja i koncentracije ispitivanog jedinjenja u plazmi se određuju nakon ekstrakcije praćene tečnom hromatografijom u kombinaciji sa detekcijom uzastopnom masenom spektrometrijom (LC/MS-MS).
[1268] U nekim slučajevima, korišćen je sledeći eksperimentalni protokol da se odredi farmakokinetički profil jedinjenja prema pronalasku kod Vistar pacova:
Lek se priprema u formulaciji koja se sastoji od smeše polietilen glikola 300/anhidrovanog etanola/NaCl 0,9% (40/10/50 v/v/v). Formulacija se daje IV putem mužjaku Vistar pacova (3 životinje) u dozi od 0,75mg/kg (10min inf, 5mL/kg). Uzorci krvi se uzimaju u sledećim vremenskim tačkama od svake životinje: kraj infuzije (10min), 0,5h, 1h, 3h, 6h i 24h nakon ddoziranja. Koncentracije ispitivanog jedinjenja u plazmi se određuju nakon ekstrakcije praćene tečnom hromatografijom u kombinaciji sa detekcijom uzastopnom masenom spektrometrijom (LC/MS-MS).
[1269] Donja granica kvantifikacije je 2,5ng/mL.
[1270] Rezultati omogućavaju rangiranje jedinjenja prema pronalasku na osnovu njihove izloženosti plazmi, konstanti stope eliminacije, uklanjanja i zapremine distribucije kako bi se procenio terapijski opseg jedinjenja kod životinjskog modela.
<120> 6,7-dihydro-5H-pyrido[2,3-c]pyridazin-8-yl derivatives, pharmaceutical compositions containing them and their uses as pro-apoptotic agents
<130> XLPAT3a
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Ala Arg Glu Ile Gly Ala Gln Leu Arg Arg Met Ala Asp Asp Leu Asn 1 5 10 15
Ala Gln Tyr
<210> 2
<211> 440
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly Leu Val Gln Pro 1 5 10 15
Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Glu Glu His Leu 20 25 30
Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys Lys Phe Glu Leu 35 40 45
Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp Gly Asp Val Lys 50 55 60
Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala Asp Lys His Asn 65 70 75 80 277
Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg Ile Ala Tyr Ser 100 105 110
Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser Lys Leu Pro Glu 115 120 125
Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys Thr Tyr Leu Asn 130 135 140
Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr Asp Ala Leu Asp 145 150 155 160
Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala Phe Pro Lys Leu 165 170 175
Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln Ile Asp Lys Tyr 180 185 190
Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln Gly Trp Gln Ala 195 200 205
Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys Ser Asp Leu Ile Glu Gly 210 215 220
Arg Gly Ile Pro Glu Phe Glu Phe Ser Gln Ser Asn Arg Glu Leu Val 225 230 235 240
Val Asp Phe Leu Ser Tyr Lys Leu Ser Gln Lys Gly Tyr Ser Trp Ser 245 250 255
Gln Phe Ser Asp Val Glu Glu Asn Arg Thr Glu Ala Pro Glu Gly Thr 260 265 270
Glu Ser Glu Met Glu Thr Pro Ser Ala Ile Asn Gly Asn Pro Ser Trp 275 280 285
His Leu Ala Asp Ser Pro Ala Val Asn Gly Ala Thr Gly 27 H8is Ser Ser 290 295 300
Leu Arg Glu Ala Gly Asp Glu Phe Glu Leu Arg Tyr Arg Arg Ala Phe 325 330 335
Ser Asp Leu Thr Ser Gln Leu His Ile Thr Pro Gly Thr Ala Tyr Gln 340 345 350
Ser Phe Glu Gln Val Val Asn Glu Leu Phe Arg Asp Gly Val Asn Trp 355 360 365
Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Ser Phe Gly Gly Ala Leu Cys Val Glu 370 375 380
Ser Val Asp Lys Glu Met Gln Val Leu Val Ser Arg Ile Ala Ala Trp 385 390 395 400
Met Ala Thr Tyr Leu Asn Asp His Leu Glu Pro Trp Ile Gln Glu Asn 405 410 415
Gly Gly Trp Asp Thr Phe Val Glu Leu Tyr Gly Asn Asn Ala Ala Ala 420 425 430
Glu Ser Arg Lys Gly Gln Glu Arg
435 440
<210> 3
<211> 249
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met His His His His His His His His Gly Ala Thr Gly Ser Thr Ala 1 5 10 15
Gly Ser Gly Thr Ala Gly Ser Thr Gly Ala Ser Gly Ala Ser Thr Gly 20 25 30
Gly Thr Gly Ala Thr His His His His His His His His A 27s9p Asp Asp 35 40 45
Phe Leu Ser Tyr Lys Leu Ser Gln Lys Gly Tyr Ser Trp Ser Gln Phe 65 70 75 80
Ser Asp Val Glu Glu Asn Arg Thr Glu Ala Pro Glu Gly Thr Glu Ser 85 90 95
Glu Met Glu Thr Pro Ser Ala Ile Asn Gly Asn Pro Ser Trp His Leu 100 105 110
Ala Asp Ser Pro Ala Val Asn Gly Ala Thr Gly His Ser Ser Ser Leu 115 120 125
Asp Ala Arg Glu Val Ile Pro Met Ala Ala Val Lys Gln Ala Leu Arg 130 135 140
Glu Ala Gly Asp Glu Phe Glu Leu Arg Tyr Arg Arg Ala Phe Ser Asp 145 150 155 160
Leu Thr Ser Gln Leu His Ile Thr Pro Gly Thr Ala Tyr Gln Ser Phe 165 170 175
Glu Gln Val Val Asn Glu Leu Phe Arg Asp Gly Val Asn Trp Gly Arg 180 185 190
Ile Val Ala Phe Phe Ser Phe Gly Gly Ala Leu Cys Val Glu Ser Val 195 200 205
Asp Lys Glu Met Gln Val Leu Val Ser Arg Ile Ala Ala Trp Met Ala 210 215 220
Thr Tyr Leu Asn Asp His Leu Glu Pro Trp Ile Gln Glu Asn Gly Gly 225 230 235 240
Trp Asp Thr Phe Val Glu Leu Tyr Gly
245
280
<210> 4
Gln Trp Ala Arg Glu Ile Gly Ala Gln Leu Arg Arg Met Ala Asp Asp 1 5 10 15
Leu Asn Ala Gln Tyr
20
Claims (38)
- Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (IA) :pri čemu: ● n=0, 1 ili 2, ● ------predstavlja jednostruku ili dvostruku vezu. ● A4i A5nezavisno jedan od drugog predstavljaju atom ugljenika ili azota, ● Z1predstavlja vezu, -N(R)-, ili -O-, pri čemu R predstavlja vodonik ili linearni ili razgranat C1-C6alkil, ● R1predstavlja grupu izabranu od: vodonika; linearnog ili razgranatog C1-C6alkila opciono supstituisan sa hidroksil ili C1-C6alkoksi grupom; C3-C6cikloalkil; trifluorometil; linearni ili razgranati C1-C6alkilen-heterocikloalkil pri čemu heterocikloalkil grupa je opciono supstituisana sa linearnom ili razgranatom C1-C6alkil grupom; ● R2predstavlja vodonik ili metil; ● R3predstavlja grupu izabranu od: vodonika; linearnog ili razgranatog C1-C4alkila; -X1-NRaRb; -X1-N<+>RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3i :● Rai Rbnezavisno jedan od drugog predstavljaju grupu izabranu od: vodonika; heterocikloalkila; -SO2-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa linearnim ili razgranatim C1-C6alkilom; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve hidroksilne grupe; C1-C6alkilen-SO2OH; C1-C6alkilen-SO2O; C1-C6alkilen-COOH; C1-C6alkilen-PO(OH)2; C1-C6alkilen-NRdRe; C1-C6alkilen-N<+>RdReRf; C1-C6alkilenfenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa a C1-C6alkoksi grupom; grupa:ili Rai Rbformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B1; ili Ra, Rbi RCformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil, ● Rc, Rd, Re, Rf, nezavisno jedan od drugog predstavljaju vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil grupu, ili Rdi Reformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B2, ili Rd, Rei Rfformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-Csheterocikloalkil, Het1predstavlja grupu izabranu od:Het2predstavlja grupu izabranu od:A1je -NH-, -N(C1-C3alkil), O, S ili Se, A2je N, CH ili C(R5), G se bira iz grupe koju čine: -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, halogen, -NO2, i -CN, u kome: -RG1i RG2pri svakom pojavljivanju su svaki nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, C1-C6alkil opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C6cikloalkil, fenil i -(CH2)1-4-fenil; -RG3se bira iz grupe koju čine C1-C6alkil opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C6cikloalkil, fenil i -(CH2)1-4-fenil; ili RG1i RG2, zajedno sa atomom za koji je svaki vezan su sastavljeni da formiraju C3-C8heterocikloalkil ; ili alternativno, G se bira iz grupe koju čine:pri čemu RG4je izabran od C1-C6alkila opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil i C3-C6cikloalkil, R4predstavlja atom vodonika, fluora, hlora ili broma, metil, hidroksil ili metoksi grupu, R5predstavlja grupu izabranu od: C1-C6alkila opciono supstituisan sa 1 do 3 atoma halogena; C2-C6alkenil; C2-C6alkinil; halogen ili -CN, R6predstavlja grupu izabranu od: vodonika; -C2-C6alkenil; -X2-O-R7;-X2-NSO2-R7; -C=C(R9)-Y1-O-R7; C3-C6cikloalkil; C3-C6heterocikloalkil opciono supstituisan sa hidroksil grupom; C3-C6cikloalkilen-Y2-R7; C3-C6heterocikloalkilen-Y2-R7grupe, heteroarilen-R7grupe opciono supstituisane sa linearnom ili razgranatom C1-C6alkil grupom, R7predstavlja grupu izabranu od: linearne ili razgranate C1-C6alkil grupe; (C3-C6)cikloalkilen-R8; ili:● R9predstavlja grupu izabranu od linearnog ili razgranatog C1-C6alkila, trifluorometil, hidroksil, halogena, C1-C6alkoksi, ● R10predstavlja grupu izabranu od vodonika, fluora, chlora, broma, -CF3i metil, ● R11predstavlja grupu izabranu od vodonika, halogena, C1-C3alkilen-R8, -O-C1-C3alkilen-R8, -CO-NRhRii -CH=CH-C1-C4alkilen-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8cikloalkilen-CH2-R8, C3-C8heterocikloalkilen-CH2-R8, ● R12i R13, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju atom vodonika ili metil grupu, ● R14i R15, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju vodonik ili metil grupu, ili R14i R15obrazuju sa atomom ugljenika koji ih nosi cikloheksil, ● Rhi Ri, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil goupu, ● X1predstavlja linearnu ili razgranatu C1-C4alkilen grupu opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe izabrane od trifluorometil, hidroksil, halogen, C1-C6alkoksi, ● X2predstavlja linearnu ili razgranatu C1-C6alkilen grupu opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe izabrane od trifluorometil, hidroksil, halogen, C1-C6alkoksi, ● X’2predstavlja linearni ili razgranat C1-C6alkilen, R’ai R’bnezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu izabranu od: vodonika; heterocikloalkil; -SO2-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa linearnim ili razgranatim C1-C6alkilom; linearni ili razgranati C1-C6alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve hidroksil ili C1-C6alkoksi grupe; C1-C6alkilen-SO2OH; C1-C6alkilen-SO2O-; C1-C6alkilen-COOH; C1-C6alkilen-PO(OH)2; C1-C6alkilen-NR’dR’e; C1-C6alkilen-N<+>R’dR’eR’f; C1-C6alkilen-O-C1-C6alkilen-OH; C1-C6alkilen-fenil pri čemu fenil može biti supstituisan sa hidroksil ili C1-C6alkoksi grupom; grupa:ili R’ai R’bformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B3, ili R’a, R’bi R’Cformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil, ● R’c, R’d, R’e, R’f, nezavisno jedan od drugog, predstavlja vodonik ili linearnu ili razgranatu C1-C6alkil grupu, ili R’di R’eformiraju sa atomom azota koji ih nosi ciklični B4, ili R’d, R’ei R’fformiraju sa atomom azota koji ih nosi premošćen C3-C8heterocikloalkil, ● Y1predstavlja linearni ili razgranat C1-C4alkilen, ● Y2predstavlja vezu, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-,-C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-, ● m=0, 1 ili 2, ● p=1, 2,3 ili 4, ● B1, B2, B3i B4, nezavisno jedan od drugog, predstavlja C3-C8heterocikloalkil grupu, koja grupa može: (i) biti mono-ili bi-ciklična grupa, pri čemu biciklična grupa uključuje spojeni, premošćen ili spiro prstenasti sistem, (ii) može sadržati, pored atoma azota, jedan ili dva heteroatoma izabrana od kiseonika, sumpora i azota, (iii) biti supstituisana sa jednom ili dve grupe izabrane od: fluora, broma, hlora, linearnog ili razgranatog C1-C6alkila, hidroksil, -NH2, okso ili piperidinil, njegovi enantiomeri i dijastereoizomeri, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
- 2. Jedinjenje prema zahtevu 1 pri čemu A4i A5predstavljaju svaki atom azota.
- 3. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2 pri čemu Z1predstavlja -NH-ili -O-.
- 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3 pri čemu R3predstavlja -X1-NRaRb, poželjno grupu -C2H5-NH-CH3.
- 5. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je izabrano od:
- 6. Jedinjenje prema zahtevu 5, koje je jedinjenje formule (IB):
- 7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6 pri čemu R1predstavlja atom vodonika, metil ili ciklopropil grupu, poželjno metil.
- 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7 pri čemu Het1predstavlja:
- 9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 pri čemu Het2predstavlja:
- 10. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 pri čemu Het2predstavlja:
- 11. Jedinjenje prema zahtevu 9 pri čemu R6predstavlja -X2-O-R7grupu pri čemu X2je propilen grupa.
- 12. Jedinjenje prema zahtevu 11 pri čemu R7predstavlja sledeću grupu:
- 13. Jedinjenje prema zahtevu 11 pri čemu R7predstavlja sledeću grupu:
- 14. Jedinjenje prema zahtevu 12 ili 13 pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: dimetilamino, dietilamino, diizopropilamino, diizobutilamino, metilamino, etilamino, etil(metil)amino, 4-metil-piperazin-1-il, piperazin-1-il, pirolidin-1-il, azetidin-1-il, 1-piperidil, 4-morfolinil, 4,4-difluoropiperidin-1-il, 3,3difluoropiperidin-1-il, 3-hidroksi-1-piperidil, (1S,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il, 4-(1-piperidil)-1-piperidil, 3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il, (1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il, 2-(dimetilamino)etilamino, 3-piperazin-1-il, (3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il, (but-3-in-1-il)amino, (but-3-in-1-il)(metil)amino, (3-azidopropil)amino, (3-azidopropil)(metil)amino (3-aminopropil)amino, (pent-4-in-1-il)amino, metil(pent-4-in-1-il)amino, (prop-2-in-1-il)amino, (heks-5-in-1-il)amino, 3-[(heks-5-in-1-il)(metil)amino, (4-azidobutil)amino, (4-azidobutil)(metil)amino, [2-(2-hidroksietoksi)etil](metil)amino, i:
- 15. Jedinjenje prema zahtevu 12 ili 13 pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: bis[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino, amino, [(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino, [(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino, acetil(metil)amino, 3-hidroksipropilamino.
- 16. Jedinjenje prema zahtevu 11 pri čemu R7predstavlja:pri čemu R11je izabrano od 3-(dimetilamino)propil, 3-(metilamino)propil, aminometil, 2-(dimetilamino)etil, 4-(dimetilamino)butil, 2-(metilamino)etil, 4-(metilamino)butil, 3-(azetidin-1-il)propil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propil, 3-pirolidin-1-ilpropil, 3-morfolinopropil, 3-(1-piperidil)propil, 3-[(1R,5S)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il i 3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)propil.
- 17. Jedinjenje prema zahtevu 11 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od:
- 18. Jedinjenje prema zahtevu 10 pri čemu R6predstavlja:
- 19. Jedinjenje prema zahtevu 18 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od :pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: vodonika, 2-(metilamino)etoksi, 2-(dimetilamino)etoksi, 2-[(2-sulfoetil)amino]etoksi, 2-[metil(2-sulfoetil)amino]etoksi, 4-metilpiperazin-1-il i:
- 20. Jedinjenje prema zahtevu 18 pri čemu R7predstavlja grupu izabranu od :pri čemu R8predstavlja grupu izabranu od: 2-pirolidin-1-iletoksi, 2-(4-metilpiperazin-1 -il)etoksi, 2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]etoksi, 2-(4-hidroksibutilamino)etoksi, 2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi, 2-[bis(2-hidroksietil)amino]etoksi, 2-[[2-hidroksi-1-(hidroksimetil)etil]amino]etoksi, 2-[2-(2-hidroksietoksi)etilamino]etoksi, 2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi, 2-(3-hidroksipropilamino)etoksi, 2-[bis(4-hidroksibutil)amino]etoksi, 2-morfolinoetoksi, 2-(1-piperidil)etoksi, 2-piperazin-1-iletoksi, 2-(azepan-1-il)etoksi, 2-(4-izopropilpiperazin-1-il)etoksi, 2-[(4-hidroksifenil)metilamino]etoksi, 2-[2-hidroksietil(metil)amino]etoksi, 2-[3-metoksipropil(metil)amino]etoksi, 2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi, 3-pirolidin-1-ilpropil, 3-(dimetilamino)propil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propil, 3-morfolinopropil, 3-(3-hidroksipropilamino)propil, 3-(4-hidroksibutilamino)propil, 3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]propil, 3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]propil, 3-[4-hidroksibutil(metil)amino]propil, 3-[3-hidroksipropil(metil)amino]propil, 3-[3-[bis(3-hidroksipropil)amino]propil, 3-piperazin-1-ilpropil.
- 21. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1, 2 i 6 pri čemu R3predstavlja -X1-PO(OH)2, -X1-SO2(OH), -X1-NRaRb; -X1-N<+>RaRbRc, pri čemu Raili Rb, ili oba od njih, predstavljaju grupu izabranu od C1-C6alkilen-SO2OH, C1-C6alkilen-SO2O-i C1-C6alkilen-PO(OH)2.
- 22. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1, 2 i 6 pri čemu R8predstavlja -NR’aR’b; -N<+>R’aR’bR’c; -NH-X’2-N<+>R’aR’bR’c, pri čemu R’ai R’b, ili oba od njih, predstavljaju grupu izabranu od C1-C6alkilen-SO2OH i C1-C6alkilen-PO(OH)2.
- 23. Jedinjenje prema zahtevu 1 odabrano u sledećoj grupi: -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilainino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il} -5-(3-{2-fluoro-4-[3 -(metilamino)prop-1 -in-1 -il]fenoksi} propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)propil]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-pirolidin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -5-(3-{4-[3-(Azetidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(4,4-difluoropiperidin-1-il)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H pirido[2,3-c]piridazin-8-i 1} -5 - (3 -{4-[3 -(3,3 -difluoropiperidin-1 -il)prop-1 -in-1 -il] -2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)prop-1-inil] fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(1S,5R)-6,6-difluoro-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-(3-piperazin-1-ilprop-1-inil)fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dietilamino)prop-1-inil] -2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(diizopropilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[2-(dimetilamino)etilamino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-Benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6-[2-(metilamino)etoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}-5-(3-{4-[3-(dimetilamino)prop-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi}propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[1-[(dimetilamino)metil]-3-biciklo[1.1.1]pentanil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-metil-3-(metilamino)but-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(prop-2-inilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetiladamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -2-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-5-(3-{4-[3-(etilamino)-3 -metilbut-1-in-1-il]-2-fluorofenoksi} propil)-1,3-tiazol-4-karboksilna kiselina, -3-{1-[(Adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il}-6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il}piridin-2-karboksilna kiselina, njegovi enantiomeri i dijastereoizomeri, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
- 24. Jedinjenje prema zahtevu 1 odabrano u sledećoj grupi: -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,7-dimetiladamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-pirolidin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(3-hidroksipropilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-hidroksibutilamino)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino}etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-(1-{[3-(2-{[(3R)-3,4-dihidroksibutil]amino}etoksi)-5,7-dimetiladamantan-1-il]metil}-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-hidroksietil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[4-hidroksibutil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[(3R)-3,4-dihidroksibutil]-metil-amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-piperazin-1-iletoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-[1-({3,5-dimetil-7-[2-(metilamino)etoksi]adamantan-1-il}metil)-5-metil-1H-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-[2-(1-piperidil)etoksi]-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -3-[1-[[3-[2-(azepan-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]-6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-(4-izopropilpiperazin-1-il)etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3,5-dimetil-7-(2-morfolinoetoksi)-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[3-metoksipropil(metil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[2-(2-hidroksietoksi)etilamino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[2-hidroksi-1-(hidroksimetil)etil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[[3-hidroksi-2-(hidroksimetil)propil]amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metilpirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(2-hidroksietil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(3-hidroksipropil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[bis(4-hidroksibutil)amino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -6-{3-[(1,3-benzotiazol-2-il)amino]-4-metil-6,7-dihidropirido[2,3-c]piridazin-8(5H)-il}-3-{1-[(3,5-dimetil-7-{2-[(2-sulfoetil)amino]etoksi}adamantan-1-il)metil]-5-metil-1H-pirazol-4-il} piridin-2-karboksilna kiselina, -6-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-3-[1-[[3-[2-[(4-hidroksifenil)metilamino]etoksi]-5,7-dimetil-1-adamantil]metil]-5-metil-pirazol-4-il]piridin-2-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-Benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-(dimetilamino)prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-dihidroksibutil]amino]prop-1-inil]-2-fluoro-fenoksi]propil]tiazol-4-karboksilna kiselina, -2-[3-(1,3-benzotiazol-2-ilamino)-4-metil-6,7-dihidro-5H-pirido[2,3-c]piridazin-8-il]-5-[3-[2-fluoro-4-[3-(3-hidroksipropilamino)prop-1-inil]fenoksi]propil] tiazol-4-karboksilna kiselina, njegovi enantiomeri i dijastereoizomeri, i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom.
- 25. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 24, ili njenu adicionu so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih inertnih punilaca.
- 26. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 25 za upotrebu kao pro-apoptotičko sredstvo.
- 27. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 25 za upotrebu u lečenju kancera, autoimune bolesti ili bolesti imunog sistema.
- 28. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 27 pri čemu kancer je hematološki malignitet ili čvrsti tumor.
- 29. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 28 pri čemu hematološki malignitet je mijelom, posebno multipli mijelom, limfom, posebno Non-Hočkinov limfom (NHL), ili leukemija, posebno hronična limfocitna leukemija (CLL), akutna limfoblastna leukemija T-ćelija (T-ALL), akutna limfoblastna leukemija B-ćelija (B-ALL) i akutna mijelogena leukemija (AML).
- 30. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 28 pri čemu čvrsti tumor je izabran od kancera bešike, mozga, dojke, materice, jednjaka i jetre, kolorektalnog kancera, kancera bubrega, melanoma, raka jajnika, kancera prostate, kancera pankreasa i raka pluća.
- 31. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 24, ili njegova adiciona so sa farmaceutski prihvatljivom kiselinom ili bazom, za upotrebu u lečenju kancera izabranog od: mijeloma, posebno multipli mijelom, limfoma, posebno Non-Hočkinov limfom (NHL), ili leukemije, posebno hronična limfocitna leukemija (CLL), akutna limfoblastna leukemija T-ćelija (T-ALL), akutna limfoblastna leukemija B-ćelija (B-ALL) i akutna mijelogena leukemija (AML), kancera bešike, mozga, dojke, materice, jednjaka i jetre, kolorektalnog kancera, kancera bubrega, melanoma, raka jajnika, kancera prostate, kancera pankreasa i raka pluća, posebno nemikrocelularni rak pluća i karcinom malih ćelija pluća.
- 32. Kombinacija jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 24, sa anti-kancernim sredstvom izabranim od genotoksičnih sredstava, mitotičkih otrova, antimetabolita, inhibitora proteazoma, inhibitora kinaze i antitela.
- 33. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kombinaciju prema zahtevu 32 u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih inertnih punilaca.
- 34. Kombinacija prema zahtevu 32 za upotrebu u lečenju kancera.
- 35. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 24, za upotrebu u lečenju kancera koje zahteva radioterapiju.
- 36. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 25 za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja naznačena prekomernom ili deregulisanom aktivnošću trombocita, posebno protrombotskim stanjima.
- 37. Intermedijer sinteze izabran u sledećoj grupi:pri čemu R7je kao što je definisano u zahtevu 1 i G1 predstavlja C1-C6alkil grupu, poželjno metil grupu, ili (4-metoksifenil)metil grupu.
- 38. Intermedijer sinteze izabran u sledećoj grupi:pri čemu A1, A2 i R6su kao što je definisano u zahtevu 1 i G1 predstavlja C1-C6alkil grupu, poželjno metil grupu, ili (4-metoksifenil)metil grupu.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP19188749 | 2019-07-29 | ||
| EP20751092.6A EP4003989B1 (en) | 2019-07-29 | 2020-07-28 | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer |
| PCT/EP2020/071181 WO2021018858A1 (en) | 2019-07-29 | 2020-07-28 | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RS65248B1 true RS65248B1 (sr) | 2024-03-29 |
Family
ID=67514283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20240257A RS65248B1 (sr) | 2019-07-29 | 2020-07-28 | Derivati 6,7-dihidro-5h-pirido[2,3-c]piridazina i slična jedinjenja kao inhibitori bcl-xl proteina i pro-apoptotička sredstva za lečenje kancera |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US12570648B2 (sr) |
| EP (1) | EP4003989B1 (sr) |
| JP (1) | JP7805283B2 (sr) |
| KR (1) | KR20220041132A (sr) |
| CN (1) | CN114450284B (sr) |
| AR (1) | AR119494A1 (sr) |
| AU (1) | AU2020319652A1 (sr) |
| BR (1) | BR112022001373A2 (sr) |
| CL (1) | CL2022000102A1 (sr) |
| CO (1) | CO2022000612A2 (sr) |
| CR (1) | CR20220016A (sr) |
| DK (1) | DK4003989T3 (sr) |
| DO (1) | DOP2022000019A (sr) |
| ES (1) | ES2975087T3 (sr) |
| FI (1) | FI4003989T3 (sr) |
| GE (2) | GEP20237581B (sr) |
| HR (1) | HRP20240392T1 (sr) |
| HU (1) | HUE065742T2 (sr) |
| IL (1) | IL289933B2 (sr) |
| JO (1) | JOP20220010A1 (sr) |
| LT (1) | LT4003989T (sr) |
| MA (1) | MA56649B1 (sr) |
| MD (1) | MD4003989T2 (sr) |
| MX (1) | MX2022001191A (sr) |
| MY (1) | MY207131A (sr) |
| PE (1) | PE20220705A1 (sr) |
| PH (1) | PH12022550119A1 (sr) |
| PL (1) | PL4003989T3 (sr) |
| PT (1) | PT4003989T (sr) |
| PY (1) | PY2039847A (sr) |
| RS (1) | RS65248B1 (sr) |
| SA (1) | SA522431522B1 (sr) |
| SI (1) | SI4003989T1 (sr) |
| TW (1) | TWI751629B (sr) |
| UA (1) | UA130017C2 (sr) |
| UY (1) | UY38810A (sr) |
| WO (1) | WO2021018858A1 (sr) |
| ZA (1) | ZA202200828B (sr) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2764243C2 (ru) | 2017-09-22 | 2022-01-14 | ДЖУБИЛАНТ ЭПИПЭД ЭлЭлСи | Гетероциклические соединения в качестве ингибиторов PAD |
| AU2018352142B2 (en) | 2017-10-18 | 2022-08-25 | Jubilant Epipad LLC | Imidazo-pyridine compounds as PAD inhibitors |
| US11629135B2 (en) | 2017-11-06 | 2023-04-18 | Jubilant Prodell Llc | Pyrimidine derivatives as inhibitors of PD1/PD-L1 activation |
| PT3704120T (pt) | 2017-11-24 | 2024-07-03 | Jubilant Episcribe Llc | Compostos heterocíclicos como inibidores de prmt5 |
| MX2020009517A (es) | 2018-03-13 | 2021-01-20 | Jubilant Prodel LLC | Compuestos biciclicos como inhibidores de la interaccion/activacio n de pdl/pd-l1. |
| AU2021386367A1 (en) * | 2020-11-24 | 2023-06-22 | Les Laboratoires Servier | Bcl-xl inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
| JP2024505562A (ja) * | 2021-02-02 | 2024-02-06 | レス ラボラトイレス セルビエル | 選択的ｂｃｌ－ｘｌ ｐｒｏｔａｃ化合物及び使用の方法 |
| CN114181039A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-03-15 | 凯美克(上海)医药科技有限公司 | 一种4,4-二苯基-3-丁烯-1-醇的合成方法 |
| CN119562832A (zh) | 2022-05-20 | 2025-03-04 | 诺华股份有限公司 | Met bcl-xl抑制剂抗体-药物缀合物及其使用方法 |
| AU2023271885A1 (en) | 2022-05-20 | 2024-12-12 | Les Laboratoires Servier | Epha2 bcl-xl inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
| US20250387504A1 (en) | 2022-05-20 | 2025-12-25 | Novartis Ag | Antibody-drug conjugates of antineoplastic compounds and methods of use thereof |
| EP4667468A1 (en) | 2023-02-14 | 2025-12-24 | Shenzhen Zhongge Biological Technology Co., Ltd. | Compound for inhibiting nlrp3, preparation method, and use |
| PY24103486A (es) | 2023-11-22 | 2025-06-06 | Servier Lab | Conjugados de anticuerpo anti-cd74-fármaco y métodos de uso de los mismos |
| AR134424A1 (es) | 2023-11-22 | 2026-01-14 | Novartis Ag | Conjugados de anticuerpo anti-cd7-fármaco y métodos de uso de los mismos |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW200730527A (en) * | 2005-12-02 | 2007-08-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | Fused heterocyclic compound |
| WO2010080503A1 (en) * | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Genentech, Inc. | Heterocyclic compounds and methods of use |
| US8889675B2 (en) * | 2011-10-14 | 2014-11-18 | Abbvie Inc. | Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases |
| TWI571466B (zh) * | 2011-10-14 | 2017-02-21 | 艾伯維有限公司 | 用於治療癌症及免疫與自體免疫疾病之細胞凋亡誘發劑 |
| TW201414737A (zh) * | 2012-07-13 | 2014-04-16 | 必治妥美雅史谷比公司 | 作爲激酶抑制劑之咪唑并三□甲腈 |
| FR3015483B1 (fr) | 2013-12-23 | 2016-01-01 | Servier Lab | Nouveaux derives de thienopyrimidine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| CN113209306A (zh) | 2014-12-09 | 2021-08-06 | 艾伯维公司 | 具有细胞渗透性的bcl-xl抑制剂的抗体药物缀合物 |
| CN107207553A (zh) | 2014-12-09 | 2017-09-26 | 艾伯维公司 | Bcl‑xl抑制性化合物和包括其的抗体药物缀合物 |
| CN111620861A (zh) | 2014-12-09 | 2020-09-04 | 艾伯维公司 | 具有低细胞渗透性的bcl-xl抑制性化合物以及包括它的抗体药物缀合物 |
| TW201734002A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-10-01 | 拜耳作物科學股份有限公司 | 作為殺蟲劑之經取代的丙二醯胺類 |
| BR112018075639A2 (pt) * | 2016-06-08 | 2019-04-09 | Abbvie Inc. | conjugados de anticorpo fármaco anti-egfr |
| CN109422754A (zh) * | 2017-08-24 | 2019-03-05 | 上海迪诺医药科技有限公司 | 吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物、其药物组合物及应用 |
-
2020
- 2020-07-27 AR ARP200102096A patent/AR119494A1/es unknown
- 2020-07-28 WO PCT/EP2020/071181 patent/WO2021018858A1/en not_active Ceased
- 2020-07-28 HR HRP20240392TT patent/HRP20240392T1/hr unknown
- 2020-07-28 GE GEAP202015865A patent/GEP20237581B/en unknown
- 2020-07-28 TW TW109125467A patent/TWI751629B/zh active
- 2020-07-28 MY MYPI2022000310A patent/MY207131A/en unknown
- 2020-07-28 US US17/630,673 patent/US12570648B2/en active Active
- 2020-07-28 RS RS20240257A patent/RS65248B1/sr unknown
- 2020-07-28 AU AU2020319652A patent/AU2020319652A1/en active Pending
- 2020-07-28 UA UAA202200297A patent/UA130017C2/uk unknown
- 2020-07-28 PH PH1/2022/550119A patent/PH12022550119A1/en unknown
- 2020-07-28 FI FIEP20751092.6T patent/FI4003989T3/fi active
- 2020-07-28 IL IL289933A patent/IL289933B2/en unknown
- 2020-07-28 BR BR112022001373A patent/BR112022001373A2/pt unknown
- 2020-07-28 CN CN202080068082.7A patent/CN114450284B/zh active Active
- 2020-07-28 PL PL20751092.6T patent/PL4003989T3/pl unknown
- 2020-07-28 HU HUE20751092A patent/HUE065742T2/hu unknown
- 2020-07-28 MD MDE20220595T patent/MD4003989T2/ro unknown
- 2020-07-28 PE PE2022000174A patent/PE20220705A1/es unknown
- 2020-07-28 PY PY202002039847A patent/PY2039847A/es unknown
- 2020-07-28 UY UY0001038810A patent/UY38810A/es active IP Right Grant
- 2020-07-28 DK DK20751092.6T patent/DK4003989T3/da active
- 2020-07-28 PT PT207510926T patent/PT4003989T/pt unknown
- 2020-07-28 KR KR1020227005751A patent/KR20220041132A/ko active Pending
- 2020-07-28 ES ES20751092T patent/ES2975087T3/es active Active
- 2020-07-28 LT LTEPPCT/EP2020/071181T patent/LT4003989T/lt unknown
- 2020-07-28 JO JOP/2022/0010A patent/JOP20220010A1/ar unknown
- 2020-07-28 GE GEAP202315865A patent/GEAP202315865A/en unknown
- 2020-07-28 MA MA56649A patent/MA56649B1/fr unknown
- 2020-07-28 CR CR20220016A patent/CR20220016A/es unknown
- 2020-07-28 MX MX2022001191A patent/MX2022001191A/es unknown
- 2020-07-28 EP EP20751092.6A patent/EP4003989B1/en active Active
- 2020-07-28 SI SI202030373T patent/SI4003989T1/sl unknown
- 2020-07-28 JP JP2022505554A patent/JP7805283B2/ja active Active
-
2022
- 2022-01-13 CL CL2022000102A patent/CL2022000102A1/es unknown
- 2022-01-18 ZA ZA2022/00828A patent/ZA202200828B/en unknown
- 2022-01-25 CO CONC2022/0000612A patent/CO2022000612A2/es unknown
- 2022-01-27 DO DO2022000019A patent/DOP2022000019A/es unknown
- 2022-01-27 SA SA522431522A patent/SA522431522B1/ar unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RS65248B1 (sr) | Derivati 6,7-dihidro-5h-pirido[2,3-c]piridazina i slična jedinjenja kao inhibitori bcl-xl proteina i pro-apoptotička sredstva za lečenje kancera | |
| KR102030609B1 (ko) | Ｐｉ３ｋ 억제제로서 헤테로시클릴아민 | |
| KR102298150B1 (ko) | PI3Kδ 관련 장애의 치료를 위한 피라졸로피리미딘 유도체의 용도 | |
| TWI900486B (zh) | 3,6-二胺基-嗒-3基衍生物、含其之醫藥組成物及其作為促進細胞凋亡劑之用途 | |
| RU2832191C2 (ru) | 6,7-дигидро-5h-пиридо[2,3-c]пиридазиновые производные и родственные соединения в качестве ингибиторов белков bclxl и проапоптотических средств для лечения злокачественных новообразований | |
| CA3148506C (en) | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer | |
| EA052683B1 (ru) | 6,7-ДИГИДРО-5H-ПИРИДО[2,3-c]ПИРИДАЗИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ И РОДСТВЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ БЕЛКОВ BCL-XL И ПРОАПОПТОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ | |
| RU2830186C2 (ru) | 3,6-диаминопиридазин-3-ильные производные, содержащие их фармацевтические композиции и их применение в качестве проапоптотических средств | |
| HK40074798A (en) | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer | |
| HK40074798B (en) | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer | |
| OA20573A (en) | 6,7-dihydro-5H-pyrido[2,3-c] pyridazine derivatives and related compounds as Bcl-xL protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer. | |
| OA20487A (en) | 3,6-diamino-pyridazin-3-yl derivatives, pharmaceutical compositions containing them and their uses as pro-apoptotic agents. | |
| EA046336B1 (ru) | 3,6-диаминопиридазин-3-ильные производные, содержащие их фармацевтические композиции и их применение в качестве проапоптотических средств | |
| HK40074219A (en) | 6,7-dihydro-5h-pyrido[2,3-c]pyridazine derivatives and related compounds as bcl-xl protein inhibitors and pro-apoptotic agents for treating cancer | |
| HK40068269A (en) | 3,6-diamino-pyridazin-3-yl derivatives, pharmaceutical compositions containing them and their uses as pro-apoptotic agents |