RS65308B1 - Biciklična ketonska jedinjenja i postupci za njihovu upotrebu - Google Patents

Biciklična ketonska jedinjenja i postupci za njihovu upotrebu

Info

Publication number
RS65308B1
RS65308B1 RS20240314A RSP20240314A RS65308B1 RS 65308 B1 RS65308 B1 RS 65308B1 RS 20240314 A RS20240314 A RS 20240314A RS P20240314 A RSP20240314 A RS P20240314A RS 65308 B1 RS65308 B1 RS 65308B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
phenyl
dihydro
pyrrolo
fluoro
triazol
Prior art date
Application number
RS20240314A
Other languages
English (en)
Inventor
Snahel Patel
Gregory Hamilton
Guiling Zhao
Huifen Chen
Blake Daniels
Craig Stivala
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of RS65308B1 publication Critical patent/RS65308B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/12—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

OPIS
OBLAST PRONALASKA
Predmetni pronalazak se odnosi na organska jedinjenja korisna za terapiju i/ili profilaksu kod sisara, a posebno na inhibitore RIP1 kinaze korisne za lečenje bolesti i poremećaja povezanih sa upalom, ćelijskom smrću i drugim.
OSNOVE PRONALASKA
Receptorsko-interaktivna protein-1 („RIP1”) kinaza je serin/treonin protein kinaza. RIP1 je regulator ćelijske signalizacije koji je, između ostalog, uključen u posredovanje oblika programirane ćelijske smrti, npr. nekroptoze. Najbolje proučavani oblik nekroptotičke ćelijske smrti inicira TNFα (faktor nekroze tumora), ali nekroptozu mogu izazvati i drugi članovi familije liganda smrti TNFα (Fas i TRAIL/Apo2L), interferoni, signalizacija toličnih receptora (TLR) i virusna infekcija preko DNK senzora DAI (aktivator regulacionog faktora interferona zavisnog od DNK) [1-3]. Vezivanje TNFα za TNFR1 (TNF receptor 1) podstiče trimerizaciju TNFR1 i formiranje intracelularnog kompleksa, Kompleks-I. TRADD (protein domena smrti povezanog sa TNF receptorom) vezuje se za intracelularni domen smrti TNFR1 i regrutuje proteinsku kinazu RIP1 (receptorsko-interaktivni protein-1) kroz domen smrti prisutan u oba proteina [4]. Nakon inicijalnog regrutovanja u TNFR1-asocirani signalni kompleks, RIP1 prelazi u sekundarni citoplazmatski kompleks, Kompleks-II [5-7]. Kompleks-II se formira domenom smrti koji sadrži protein FADD (Fas povezani protein), RIP 1, kaspazu-8 i cFLIP. Ako kaspaza-8 nije u potpunosti aktivirana ili je njena aktivnost blokirana, proteinska kinaza RIP3 se regrutuje u kompleks, formirajući nekrozom, što će dovesti do inicijacije nekroptotičke ćelijske smrti [8-10]. Kada se nekrozom formira, RIP1 i RIP3 se uključuju u niz događaja auto i unakrsne fosforilacije koji su od suštinskog značaja za nekroptotičku ćelijsku smrt. Nekroptoza može biti potpuno blokirana bilo mutacijom koja inaktivira kinazu u bilo kojoj od dve kinaze, ili hemijski putem inhibitora RIP1 kinaze (nekrostatini), ili inhibitorima RIP3 kinaze [11-13]. Fosforilacija RIP3 omogućava vezivanje i fosforilaciju pseudokinaze MLKL (mešovitog porekla nalik kinaznom domenu), ključne komponente nekroptotičke ćelijske smrti [14, 15].
Nekroptoza ima presudan patofiziološki značaj kod infarkta miokarda, moždanog udara, ateroskleroze, ishemijsko-reperfuzione povrede, inflamatornih bolesti creva, degeneracije mrežnjače i niza drugih uobičajenih kliničkih poremećaja [16]. Stoga su selektivni inhibitori aktivnosti RIP 1 kinaze poželjni kao potencijalni tretman bolesti posredovanih ovim putem i povezanih sa upalom i/ili nekroptotičnom ćelijskom smrću.
Inhibitori RIP1 kinaze su prethodno opisani. Prvi objavljeni inhibitor aktivnosti RIP 1 kinaze bio je nekrostatin 1 (Nec-1) [17]. Nakon ovog početnog otkrića usledile su modifikovane verzije Nec-1 sa različitim sposobnostima da blokiraju aktivnost RIP1 kinaze [11, 18]. Nedavno su opisani dodatni inhibitori RIP 1 kinaze koji se strukturno razlikuju od nekrostatinske klase jedinjenja [19, 20, 21].
Gore citirane reference uključuju:
1) Vanden Berghe, T., Linkermann, A., Jouan-Lanhouet, S., Walczak, H. i Vandenabeele, P. (2014) Regulated necrosis: the expanding network of non-apoptotic cell death pathways. Nature reviews. Molecular cell biology. 15, 135-147.
2) Newton, K. (2015) RIPK1 and RIPK3: critical regulators of inflammation and cell death. Trends in cell biology.25, 347-353.
3) de Almagro, M.C. i Vučić, D. (2015) Necroptosis: Pathway diversity and characteristics. Semin Cell Dev Biol.39, 56-62.
4) Chen, Z. J. (2012) Ubiquitination in signaling to and activation of IKK. Immunological reviews. 246, 95-106.
5) O'Donnell, M. A., Legarda-Addison, D., Skountzos, P., Yeh, W. C. i Ting, A. T. (2007) Ubiquitination of RIP1 regulates an NF-kappaB-independent cell-death switch in TNF signaling. Curr Biol.17, 418-424.
6) Feoktistova, M., Geserick, P., Kellert, B., Dimitrova, D. P., Langlais, C., Hupe, M., Cain, K., MacFarlane, M., Hacker, G. i Leverkus, M. (2011) cIAPs block Ripoptosome formation, a RIP1/caspase-8 containing intracellular cell death complex differentially regulated by cFLIP isoforms. Molecular cell.43, 449-463.
7) Bertrand, M. J., Milutinovic, S., Dickson, K. M., Ho, W. C., Boudreault, A., Durkin, J., Gillard, J. W., Jaquith, J. B., Morris, S. J. i Barker, P. A. (2008) cIAP1 and cIAP2 facilitate cancer cell survival by functioning as E3 ligases that promote RIP1 ubiquitination. Mol Cell.30, 689-700.
8) Wang, L., Du, F. i Wang, X. (2008) TNF-alpha induces two distinct caspase-8 activation pathways. Cell.133, 693-703.
9) He, S., Wang, L., Miao, L., Wang, T., Du, F., Zhao, L. i Wang, X. (2009) Receptor interacting protein kinase-3 determines cellular necrotic response to TNF-alpha. Cell. 137, 1100-1111.
10) Cho, Y. S., Challa, S., Moquin, D., Genga, R., Ray, T. D., Guildford, M. i Chan, F. K. (2009) Phosphorylation-driven assembly of the RIP1-RIP3 complex regulates programmed necrosis and virus-induced inflammation. Cell.137, 1112-1123.
11) Degterev, A., Hitomi, J., Germscheid, M., Ch'en, I. L., Korkina, O., Teng, X., Abbott, D., Cuny, G. D., Yuan, C., Wagner, G., Hedrick, S. M., Gerber, S. A., Lugovskoy, A. i Yuan, J. (2008) Identification of RIP 1 kinase as a specific cellular target of necrostatins. Nat Chem Biol.4, 313-321.
12) Newton, K., Dugger, D. L., Wickliffe, K. E., Kapoor, N., de Almagro, M. C., Vucic, D., Komuves, L., Ferrando, R. E., French, D. M., Webster, J., Roose-Girma, M., Warming, S. i Dixit, V. M. (2014) Activity of protein kinase RIPK3 determines whether cells die by necroptosis or apoptosis. Science.343, 1357-1360.
13) Kaiser, W. J., Sridharan, H., Huang, C., Mandal, P., Upton, J. W., Gough, P. J., Sehon, C. A., Marquis, R. W., Bertin, J. i Mocarski, E. S. (2013) Toll-like receptor 3-mediated necrosis via TRIF, RIP3, and MLKL. The Journal of biological chemistry.288, 31268-31279.
14) Zhao, J., Jitkaew, S., Cai, Z., Choksi, S., Li, Q., Luo, J. i Liu, Z. G. (2012) Mixed lineage kinase domain-like is a key receptor interacting protein 3 downstream component of TNF-induced necrosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.109, 5322-5327.
15) Sun, L., Wang, H., Wang, Z., He, S., Chen, S., Liao, D., Wang, L., Yan, J., Liu, W., Lei, X. i Wang, X. (2012) Mixed Lineage Kinase Domain-like Protein Mediates Necrosis Signaling Downstream of RIP3 Kinase. Cell.148, 213-227.
16) Linkermann, A. i Green, D. R. (2014) Necroptosis. The New England journal of medicine. 370, 455-465.
17) Degterev, A., Huang, Z., Boyce, M., Li, Y., Jagtap, P., Mizushima, N., Cuny, G. D., Mitchison, T. J., Moskowitz, M. A. i Yuan, J. (2005) Chemical inhibitor of nonapoptotic cell death with therapeutic potential for ischemic brain injury. Nat Chem Biol.1, 112-119.
18) Takahashi, N., Duprez, L., Grootjans, S., Cauwels, A., Nerinckx, W., DuHadaway, J. B., Goossens, V., Roelandt, R., Van Hauwermeiren, F., Libert, C., Declercq, W., Callewaert, N., Prendergast, G. C., Degterev, A., Yuan, J. i Vandenabeele, P. (2012) Necrostatin-1 analogues: critical issues on the specificity, activity and in vivo use in experimental disease models. Cell Death Dis.3, e437.
19) Harris, P. A., Bandyopadhyay, D., Berger, S. B., Campobasso, N., Capriotti, C. A., Cox, J. A., Dare, L., Finger, J. N., Hoffman, S. J., Kahler, K. M., Lehr, R., Lich, J. D., Nagilla, R., Nolte, R. T., Ouellette, M. T., Pao, C. S., Schaeffer, M. C., Smallwood, A., Sun, H. H., Swift, B. A., Totoritis, R. D., Ward, P., Marquis, R. W., Bertin, J. i Gough, P. J. (2013) Discovery of Small Molecule RIP1 Kinase Inhibitors for the Treatment of Pathologies Associated with Necroptosis. ACS medicinal chemistry letters.4, 1238-1243.
20) Najjar, M., Suebsuwong, C., Ray, S. S., Thapa, R. J., Maki, J. L., Nogusa, S., Shah, S., Saleh, D., Gough, P. J., Bertin, J., Yuan, J., Balachandran, S., Cuny, G. D. i Degterev, A. (2015) Structure Guided Design of Potent and Selective Ponatinib-Based Hybrid Inhibitors for RIPK1. Cell Rep.
21) Međunarodna publikacija patentne prijave br. WO 2014/125444.
22) Međunarodna publikacija patentne prijave br. WO 2017/004500.
SAŽETAK PRONALASKA
Ovde su navedena jedinjenja formule 1:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
R<1>je odabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, fenil, benzil, 4- do 8-člani heterociklil i 5- do 6-člani heteroaril; pri čemu je R<1>vezan za susedni karbonil atomom ugljenika, i pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa jednim ili dva supstituenta izabrana iz grupe koju čine F, Cl, Br, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, hidroksil, hidroksimetil, cijano, cijanometil, cijanoetil, C(O)C1-C6alkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril);
svaki R<N>je nezavisno odabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi i C1-C6haloalkil; ili dva R<N>mogu zajedno sa susednim N da formiraju 4-6-člani prsten; i
prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
pri čemu:
R<2>je odabran iz grupe koju čine C1-C6haloalkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkoksi, C1-C6tioalkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2-(4- do 6-člani heterociklil), CH2CH2- (4- do 6-člani heterociklil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); pri čemu, kada je prisutan prsten fenila, on može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine halogen, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi i cijano; i
R<3a>i R<3b>su odabrani na sledeći način:
(i) jedan od R<3a>i R<3b>je H, a drugi je izabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi;
(ii) svaki od R<3a>i R<3b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN i metil, pod uslovom da R<3a>i R<3b>ne mogu oba biti OH ili CN; ili
(iii) R<3a>i R<3b>zajedno formiraju ciklopropil.
Ovde su takođe navedene farmaceutske kompozicije koje se sastoje od jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenasa. Specifična otelotvorenja uključuju farmaceutske kompozicije pogodne za oralnu primenu.
Ovde su takođe navedene oralne formulacije jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenasa pogodnih za oralnu primenu.
Ovde je takođe navedeno jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju bolesti i poremećaja povezanih sa upalom, ćelijskom smrću i drugim vezanim za RIP1 kinazu, kao što je detaljnije opisano u nastavku.
Ovde je takođe navedeno jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao terapeutski aktivna supstanca.
Ovde je takođe navedeno jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koju čine Parkinsonova bolest, demencija sa Levijevim telima, multipla sistemska atrofija, Parkinson-plus sindrom, tauopatija, Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija, amiotrofična lateralna skleroza, spinalno mišićna atrofija, primarna lateralna skleroza, Hantingtonova bolest, ishemija, moždani udar, intrakranijalno krvarenje, cerebralno krvarenje, mišićna distrofija, progresivna mišićna atrofija, pseudobulbarna paraliza, progresivna bulbarna paraliza, spinalna mišićna atrofija, nasleđena mišićna atrofija, periferna neuropatija, progresivna supranuklearna paraliza, kortikobazalna degeneracija i demijelinizirajuća bolest.
Ovde je takođe navedeno jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili njegova kompozicija prema bilo kojem od ovde navedenih otelotvorenja, za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koju čine Parkinsonova bolest, demencija sa Levijevim telima, multipla sistemska atrofija, Parkinson-plus sindrom, tauopatija, Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija, amiotrofična lateralna skleroza, spinalna mišićna atrofija, primarna lateralna skleroza, Hantingtonova bolest, ishemija, moždani udar, intrakranijalno krvarenje, cerebralno krvarenje, mišićna distrofija, progresivna mišićna atrofija, pseudobulbarna paraliza, progresivna bulbarna paraliza, spinalna mišićna atrofija, nasleđena mišićna atrofija, periferna neuropatija, progresivna supranuklearna paraliza, kortikobazalna degeneracija i demijelinizirajuća bolest.
Ovde je takođe navedeno jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koju čine inflamatorna bolest creva, Kronova bolest, ulcerozni kolitis, glaukom, psorijaza, psorijatični artritis, reumatoidni artritis, spondiloartritis, juvenilni idiopatski artritis i osteoartritis.
DETALJAN OPIS PRONALASKA DEFINICIJE
Kako je ovde predviđeno, sve hemijske formule i generičke hemijske strukture treba tumačiti kako bi se obezbedila odgovarajuća valentnost i hemijski stabilne veze između atoma, što je poznato stručnjacima iz ove oblasti. Po potrebi, supstituenti mogu biti vezani za više od jednog susednog atoma (npr. alkil uključuje metilen gde su prisutne dve veze).
U ovde navedenim hemijskim formulama, „halogen“ ili „halo“ se odnosi na fluor, hlor i brom (tj. F, Cl, Br).
Alkil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na opciono supstituisanu, ravnolančanu ili razgranatu C1-C12alkil grupu. U nekim otelotvorenjima, alkil se odnosi na C1-C6alkil grupu. Primeri alkil grupa uključuju metil, etil, propil, izopropil, n-butil, izobutil, tercbutil, sek-butil, n-pentil, n-heksil, n-heptil i n-oktil. Ovde navedene supstituisane alkil grupe su suptituisane sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koju čine halogen, cijano, trifluormetil, metoksi, etoksi, difluormetoksi, trifluormetoksi, C3-C6cikloalkil, fenil, OH, CO2H, CO2(C1-C4alkil), NH2, NH(C1-C4alkil), N(C1-C4alkil)2, NH(C=O)C1-C4alkil, (C=O)NH(C1-C4alkil), (C=O)N(C1-C4alkil)2, S(C1-C4alkil), SO(C1-C4alkil), SO2(C1-C4alkil), SO2NH(C1-C4alkil), SO2N(C1-C4alkil)2i NHSO2(C1-C4alkil). U nekim otelotvorenjima, supstituisana alkil grupa ima 1 ili 2 supstituenta. U nekim otelotvorenjima, alkil grupa je nesupstituisana.
Cikloalkil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na opciono supstituisanu C3-C12cikloalkil grupu i uključuje kondenzovane, spirociklične i premošćene biciklične grupe, pri čemu su supstituenti izabrani iz grupe koju čine halogen, cijano, trifluormetil, metoksi, etoksi, difluormetoksi, trifluormetoksi, C3-C6cikloalkil, fenil, OH, COzH, CO2(C1-C4alkil), NH2, NH(C1-C4alkil), N(C1-C4alkil)2, NH(C=O)C1-C4alkil, (C=O)NH(C1-C4alkil), (C=O)N(C1-C4alkil)2, S(C1-C4alkil), SO(C1-C4alkil), SO2(C1-C4alkil), SO2NH(C1-C4alkil), SO2N(C1-C4alkil)2i NHSO2(C1-C4alkil). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil se odnosi na C3-C6cikloalkil grupu. U nekim otelotvorenjima, C3-C6cikloalkil grupa je opciono supstituisana sa 1 do tri atoma halogena. U nekim otelotvorenjima, C3-C6cikloalkil grupa je opciono supstituisana sa 1 do tri atoma fluora. Primeri C3-C6cikloalkil grupe uključuje ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Primeri C3-C12cikloalkil grupa dalje uključuju biciklo[3,1,0]heksil, biciklo[2,1,1]heksil, cikloheptil, bicikl[4,1,0]heptil, spiro[4,2]heptil, ciklooktil, spiro[4,3]oktil, spiro[5,2]oktil, biciklo[2,2,1]heptanil, bicikl[2,2,2]oktanil, adamantanil, dekalinil i spiro[5,4]dekanil. Po potrebi, cikloalkil grupe mogu biti kondenzovane sa drugim grupama tako da postoji više od jedne hemijske veze između cikloalkil grupe i drugog sistema prstenova (npr. C prsten formule I). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa je nesupstituisana.
Haloalkil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na ravnolančanu ili razgranatu C1-C12alkil grupu, pri čemu se jedan ili više atoma vodonika zamenjuju halogenom. U nekim otelotvorenjima, haloalkil se odnosi na C1-C6haloalkil grupu. U nekim otelotvorenjima, 1 do 3 atoma vodonika haloalkil grupe se zamenjuju halogenom. U nekim otelotvorenjima, svaki atom vodonika haloalkil grupe zamenjuje se halogenom (npr. trifluormetil). U nekim otelotvorenjima, haloalkil je kao što je ovde definisano, pri čemu je halogen u svakom slučaju fluor. Primeri haloalkil grupe uključuju fluormetil, difluormetil, trifluormetil, trifluoretil i pentafluoretil.
Alkoksi, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na ravnolančanu ili razgranatu C1-C12alkil grupu, pri čemu je prisutan jedan ili više atoma kiseonika, u svakom slučaju između dva atoma ugljenika. U nekim otelotvorenjima, alkoksi se odnosi na C1-C6alkoksi grupu. U nekim otelotvorenjima, ovde navedene C1-C6alkoksi grupe imaju jedan atom kiseonika. Primeri alkoksi grupa uključuju metoksi, etoksi, CH2OCH3, CH2CH2OCH3, CH2OCH2CH3, CH2CH2OCH2CH3, CH2OCH2CH2CH3, CH2CH2CH2OCH3, CH2OCH(CH3)2, CH2OC(CH3)3, CH(CH3)OCH3, CH2CH(CH3)OCH3, CH(CH3)OCH2CH3, CH2OCH2OCH3, CH2CH2OCH2CH2OCH3i CH2OCH2OCH2OCH3.
Cikloalkoksi, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na C4-C10ili C4-C6alkoksi grupu kao što je gore definisano, pri čemu je grupa ciklična i sadrži jedan atom kiseonika. Primeri cikloalkoksi grupa uključuju oksetanil, tetrahidrofuranil i tetrahidropiranil.
Haloalkoksi, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na C1-C6haloalkil grupu kao što je gore definisano, pri čemu su prisutni jedan ili dva atoma kiseonika, u svakom slučaju između dva atoma ugljenika. U nekim otelotvorenjima, ovde navedene C1-C6haloalkoksi grupe imaju jedan atom kiseonika. Primeri haloalkoksi grupa uključuju OCF3, OCHF2i CH2OCF3.
Tioalkil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na C1-C12ili C1-C6alkoksi grupu kao što je gore definisano, pri čemu se atom kiseonika zamenjuje atomom sumpora. U nekim otelotvorenjima, tioalkil grupe mogu uključivati atome sumpora supstituisane sa jednim ili dva atoma kiseonika (tj. alkilsulfoni i alkilsulfoksidi). Primeri tioalkil grupa su one koje su predstavljene u gornjoj definiciji za alkoksi, pri čemu se svaki atom kiseonika zamenjuje atomom sumpora u svakom slučaju.
Tiocikloalkil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na C4-C10ili C4-C6tioalkil grupu kao što je gore definisano, pri čemu je grupa ciklična i sadrži jedan atom sumpora. U nekim otelotvorenjima, atom sumpora tiocikloalkil grupe je zamenjen sa jednim ili dva atoma kiseonika (tj. ciklični sulfon ili sulfoksid). Primeri tiocikloalkil grupa uključuju tietanil, tiolanil, tianil, 1,1-dioksotiolanil i 1,1-dioksotianil.
Heterociklil, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na jedan zasićeni ili delimično nezasićeni 4- do 8-člani prsten koji ima najmanje jedan atom u prstenu koji nije ugljenik, pri čemu je atom odabran iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor; termin takođe uključuje sisteme višestrukih kondenzovanih prstenova koji imaju najmanje jedan takav zasićeni ili delimično nezasićeni prsten, gde sistemi višestrukih kondenzovanih prstenova imaju od 7 do 12 atoma i detaljnije su opisani u nastavku. Dakle, termin uključuje pojedinačne zasićene ili delimično nezasićene prstenove (npr.3-, 4-, 5-, 6-, 7- ili 8-člani prstenovi) od oko 1 do 7 atoma ugljenika i od oko 1 do 4 heteroatoma u prstenu izabrana iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor. Prsten može biti C-razgranat (tj. suptituisan C1-C4alkilom). Prsten može biti suptitusan sa jednom ili više (npr.1, 2 ili 3) okso grupa, a atomi sumpora i azota takođe mogu biti prisutni u svojim oksidovanim oblicima. Primeri heterociklila uključuju, ali nisu ograničeni na azetidinil, tetrahidrofuranil i piperidinil. Prstenovi sistema višestrukih kondenzovanih prstenova mogu se međusobno povezati putem kondenzovanih, spiro i premošćenih veza kada to dozvoljavaju zahtevi valence. Podrazumeva se da pojedinačni prstenovi sistema višestrukih kondenzovanih prstenova mogu biti povezani po bilo kom redosledu u odnosu jedan na drugi. Takođe se podrazumeva da tačka vezivanja sistema višestrukih kondenzovanih prstenova (kao što je gore definisano za heterocikl) može biti na bilo kojoj poziciji sistema višestrukih kondenzovanih prstenova. Takođe se podrazumeva da tačka vezivanja za heterocikl ili heterociklični sistem višestrukih kondenzovanih prstenova može biti na bilo kom pogodnom atomu heterociklil grupe, uključujući atom ugljenika i atom azota. Primeri heterociklila uključuju, ali nisu ograničeni na aziridinil, azetidinil, pirolidinil, piperidinil, homopiperidinil, morfolinil, tiomorfolinil, piperazinil, tetrahidrofuranil, dihidrooksazolil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, 1,2,3,4-tetrahidrohinolil, benzoksazinil, dihidrooksazolil, hromanil, 1,2-dihidropiridinil, 2,3-dihidrobenzofuranil, 1,3-benzodioksolil, 1,4-benzodioksanil, spiro[ciklopropan-1,1'-izoindolinil]-3'-on, izoindolinil-1-on, 2-oksa-6-azaspiro[3,3]heptanil, imidazolidin-2-on N-metilpiperidin, imidazolidin, pirazolidin, butirolaktam, valerolaktam, imidazolidinon, hidantoin, dioksolan, ftalimid, 1,4-dioksan, tiomorfolin, tiomorfolin-S-oksid, tiomorfolin-S,S-oksid, piran, 3-pirolin, tiopiran, piron, tetrhidrotiofen, hinuklidin, tropan, 2-azaspiro[3,3]heptan, (1R,5S)-3-azabiciklo[3,2,1]oktan, (1s,4s)-2-azabiciklo[2,2,2]oktan, (1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2,2,2]oktan i pirolidin-2-on.
U nekim otelotvorenjima, heterociklil je C4-C10heterociklil koji ima 1 do 3 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik i sumpor. U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupa nije ni biciklična ni spirociklična. U nekim otelotvorenjima, heterociklil je C5-C6
1
heterocikl koji ima 1 do 3 heteroatoma, pri čemu su najmanje 2 azot ako su prisutna 3 heteroatoma.
Aril, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na jednostruki aromatični prsten od svih ugljenika ili sistem višestrukih kondenzovanih prstenova od svih ugljenika u kome je najmanje jedan od prstenova aromatičan i u kome aril grupa ima 6 do 20 atoma ugljenika, 6 do 14 atoma ugljenika, 6 do 12 atoma ugljenika ili 6 do 10 atoma ugljenika. Aril sadrži fenil radikal. Aril takođe uključuje sisteme višestrukih kondenzovanih prstenova (npr. sistemi prstenova koji se sastoje od 2, 3 ili 4 prstena) koji imaju oko 9 do 20 atoma ugljenika u kojima je najmanje jedan prsten aromatičan i pri čemu drugi prstenovi mogu biti aromatični ili nearomatični (tj. karbociklični). Takvi sistemi višestrukih kondenzovanih prstenova su opciono supstituisani sa jednom ili više (npr. 1, 2 ili 3) okso grupa na bilo kom karbocikličnom delu sistema višestrukih kondenzovanih prstenova. Prstenovi sistema višestrukih kondenzovanih prstenova mogu se međusobno povezati putem kondenzovanih, spiro i premošćenih veza kada to dozvoljavaju zahtevi valence. Podrazumeva se da tačka vezivanja sistema višestrukih kondenzovanih prstenova, kao što je gore definisano, može biti na bilo kojoj poziciji sistema prstenova, uključujući aromatični ili karbociklični deo prstena. Primeri aril grupa uključuju fenil, indenil, naftil, 1, 2, 3, 4-tetrahidronaftil i antracenil.
Heteroaril, ukoliko nije drugačije definisano, odnosi se na 5- do 6-člani aromatični prsten koji ima najmanje jedan atom u prstenu koji nije ugljenik, pri čemu je atom odabran iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor; „heteroaril” takođe uključuje sisteme višestrukih kondenzovanih prstenova sa 8 do 16 atoma koji imaju najmanje jedan takav aromatični prsten, gde su sistemi višestrukih kondenzovanih prstenova detaljnije opisani u nastavku. Stoga, „heteroaril” uključuje jednostavne aromatične prstenove od oko 1 do 6 atoma ugljenika i oko 1-4 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine kiseonik, azot i sumpor. Atomi sumpora i azota takođe mogu biti prisutni u oksidovanom obliku pod uslovom da je prsten aromatični. Primeri heteroarilnih sistema prstenova uključuju, ali ne ograničavaju se na piridil, pirimidinil, oksazolil ili furil. „Heteroaril” takođe uključuje sisteme višestrukih kondenzovanih prstenova (npr. sistemi prstenova koji se sastoje od 2 ili 3 prstena) pri čemu je heteroaril grupa, kao što je gore definisano, kondenzovana sa jednim ili više prstenova izabranih od heteroarila (da bi se formirao, na primer, naftiridinil kao što je 1,8-naftiridinil), heterocikla (da bi se formirao, na primer, 1, 2, 3, 4-tetrahidronaftiridinil kao što je 1,2,3,4-tetrahidro-1,8-naftiridinil), karbocikla (da bi se formirao, na primer, 5,6,7,8-tetrahidrohinolil) i arila (da bi se formirao, na primer, indazolil) da bi se formirao sistem višestrukih kondenzovanih prstenova. Stoga, heteroaril (jednostavni aromatični prsten ili sistem višestrukih kondenzovanih prstenova) ima 1 do 15 atoma ugljenika i oko 1-6 heteroatoma u heteroaril prstenu. Takvi sistemi višestrukih kondenzovanih prstenova mogu se opciono supstituisati sa jednom ili više (npr. 1, 2, 3 ili 4) okso grupa na karbocikličnim ili heterocikličnim delovima kondenzovanog prstena. Prstenovi sistema višestrukih kondenzovanih prstenova mogu se međusobno povezati putem kondenzovanih, spiro i premošćenih veza kada to dozvoljavaju zahtevi valence. Podrazumeva se da pojedinačni prstenovi sistema višestrukih kondenzovanih prstenova mogu biti povezani po bilo kom redosledu u odnosu jedan na drugi. Takođe se podrazumeva da tačka vezivanja sistema višestrukih kondenzovanih prstenova (kao što je gore definisano za heteroaril) može biti na bilo kojoj poziciji sistema višestrukih kondenzovanih prstenova, uključujući heteroarilni, heterociklični, arilni ili karbociklični deo sistema višestrukih kondenzovanih prstenova. Takođe se podrazumeva da tačka vezivanja za heteroarilni ili heteroarilni sistem višestrukih kondenzovanih prstenova može biti na bilo kom pogodnom atomu heteroarilnog ili heteroarilnog sistema višestrukih kondenzovanih prstenova, uključujući atom ugljenika i heteroatom (npr. azot). Primeri heteroarila uključuju, ali ne ograničavaju se na piridil, pirolil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, pirazolil, tienil, indolil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, furil, oksadiazolil, tiadiazolil, hinolil, izohinolil, benzotiazolil, benzotiazolil, benzoksazolil, indazolil, hinoksalil, hinazolil, 5,6,7,8-tetrahidroizohinolinil benzofuranil, benzimidazolil, tianafenil, pirolo[2,3-b]piridinil, hinazolinil-4(3H)-on, triazolil, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol i 3b,4,4a,5-tetrahidro-1H-ciklopropa[3,4]ciklopenta[1,2-c]pirazol.
Kao što se ovde koristi, termin „hiralni” se odnosi na molekule koji imaju svojstvo nemogućnosti preklapanja sa likom partnera u ogledalu, dok se termin „ahiralni” odnosi na molekule koji mogu da se preklope sa likom partnera u ogledalu.
Kao što se ovde koristi, izraz „stereoizomeri” se odnosi na jedinjenja koja imaju identičan hemijski sastav, ali se razlikuju u pogledu rasporeda atoma ili grupa u prostoru.
Kao što se ovde koristi talasasta linija ”
” koja preseca vezu u hemijskoj strukturi označava tačku vezivanja veze koju talasasta veza preseca u hemijskoj strukturi sa ostatkom molekula.
Kao što se ovde koristi, termin „C-vezan” znači da je grupa koju termin opisuje vezana za ostatak molekula preko atoma ugljenika u prstenu.
Kao što se ovde koristi, termin „N-vezan” znači da je grupa koju termin opisuje vezana za ostatak molekula preko atoma azota u prstenu.
„Dijastereomer“ se odnosi na stereoizomer sa dva ili više centara hiralnosti čiji molekuli uzajamno nisu kao likovi u ogledalu. Dijastereomeri imaju različita fizička svojstva, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralne osobine i reaktivnosti. Smeše dijastereomera se mogu odvojiti analitičkim postupcima visoke rezolucije, kao što su elektroforeza i hromatografija.
„Enantiomeri” se odnose na dva stereoizomera jedinjenja koji nisu međusobno preklopivi kao likovi u ogledalu.
Ovde korišćene stereohemijske definicije i konvencije uopšteno slede S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. i Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre, i zbog toga postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Namera je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja iz ovog pronalaska, uključujući, ali ne ograničavajući se na dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove smeše, poput racemskih smeša, čine deo predmetnog pronalaska. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim oblicima, tj. imaju sposobnost rotacije ravni svetlosti polarizovane u ravni. Kod opisivanja optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L, ili R i S, koriste se za označavanje apsolutne konfiguracije molekula oko njegovog hiralnog centra (ili centara). Prefiksi d i I ili (+) i (-) koriste se da označe znak rotacije u ravni polarizovane svetlosti od strane jedinjenja, pri čemu (-) ili 1 označava da je jedinjenje levorotatorno. Jedinjenje sa prefiksom (+) ili d je dekstrorotatorno. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što su likovi u ogledalu jedan drugog. Specifični stereoizomer se takođe može nazvati enantiomerom, a smeša takvih izomera često se naziva enantiomerna smeša. Smeša enantiomera u odnosu 50:50 se naziva racemska smeša ili racemat, a može se pojaviti tamo gde nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti u hemijskoj reakciji ili procesu. Izrazi „racemska smeša“ i „racemat“ se odnose na ekvimolarnu smešu dve enantiomerne vrste lišene optičke aktivnosti.
Kada se veza u formuli jedinjenja ovde izvuče na nestereohemijski način (npr. ravna), atom na koji je veza vezana uključuje sve stereohemijske mogućnosti. Kada se veza u formuli jedinjenja ovde izvuče na definisan stereohemijski način (npr. podebljana, podebljana trouglasta, isprekidana ili isprekidana trouglasta), treba shvatiti da je atom za koji je stereohemijska veza vezana obogaćen prikazanim apsolutnim stereoizomerom, osim ako nije drugačije naznačeno. U jednom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 51% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 80% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 90% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 95% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 97% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje
1
može biti najmanje 98% prikazanog apsolutnog stereoizomera. U drugom otelotvorenju, jedinjenje može biti najmanje 99% prikazanog apsolutnog stereoizomera.
Kao što se ovde koristi, termin „tautomer” ili „tautomerni oblik” se odnosi na strukturne izomere različitih energija koji mogu da prelaze jedni u druge putem niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati i kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije preko migracije protona, kao što su keto-enolne i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije preko reorganizacije nekih od vezujućih elektrona.
Kao što se ovde koristi, termin „solvat” se odnosi na udruživanje ili kompleks jednog ili više molekula rastvarača i jedinjenja iz ovog pronalaska. Primeri rastvarača koji formiraju solvate uključuju, ali ne se ograničavaju na vodu, izopropanol, etanol, metanol, DMSO, etilacetat, sirćetnu kiselinu i etanolamin. Termin „hidrat” se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača voda. U nekim otelotvorenjima, hidrat ovde navedenog jedinjenja je ketonski hidrat.
Kao što se ovde koristi, termin „zaštitna grupa” se odnosi na supstituent koji se obično koristi za blokiranje ili zaštitu određene funkcionalne grupe na jedinjenju. Na primer, „aminozaštitna grupa” je supstituent vezan za amino grupu koji blokira ili štiti amino funkcionalnost u jedinjenju. Pogodne amino-zaštitne grupe uključuju acetil, trifluoracetil, t-butoksikarbonil (BOC), benziloksikarbonil (CBZ) i 9-fluorenil metilenoksikarbonil (Fmoc). Slično tome, „hidroksi-zaštitna grupa” se odnosi na supstituent hidroksi grupe koji blokira ili štiti hidroksi funkcionalnost. Odgovarajuće zaštitne grupe uključuju acetil i silil. „Karboksi-zaštitna grupa” se odnosi na supstituent karboksi grupe koji blokira ili štiti karboksi funkcionalnost. Uobičajene karboksi-zaštitne grupe uključuju fenilsulfoniletil, cijanoetil, 2-(trimetilsilil)etil, 2-(trimetilsilil)etoksimetil, 2-(p-toluensulfonil)etil, 2-(p-nitrofenilsulfenil)etil, 2-(difenilfosfino)-etil i nitroetil. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihovu upotrebu, pogledajte P.G.M. Wuts i T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4th edition, Wiley-Interscience, New York, 2006.
Kao što se ovde koristi, termin „sisar” uključuje ljude, miševe, pacove, zamorce, majmune, pse, mačke, konje, krave, svinje i ovce.
Kao što se ovde koristi, termin „farmaceutski prihvatljive soli” treba da obuhvati soli aktivnih jedinjenja koja se pripremaju sa relativno netoksičnim kiselinama ili bazama, u zavisnosti od određenih supstituenata koji se nalaze na ovde opisanim jedinjenjima. Kada jedinjenja iz predmetnog pronalaska sadrže relativno kisele funkcionalnosti, bazne adicione soli se mogu dobiti kontaktom neutralnog oblika takvih jedinjenja sa dovoljnom količinom željene baze, bilo čiste ili u odgovarajućem inertnom rastvaraču. Primeri soli dobijenih iz farmaceutski prihvatljivih neorganskih baza uključuju aluminijum, amonijum, kalcijum, bakar, gvožđe, gvožđe, litijum, magnezijum, dvovalentni mangan, četvorovalentni mangan, kalijum, natrijum i cink. Soli dobijene iz farmaceutski prihvatljivih organskih baza uključuju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, uključujući supstituisane amine, ciklične amine i amine koji se nalaze u prirodi, kao što su arginin, betain, kofein, holin, N,N'-dibenzil etilendiamin, dietilamin, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamin, etilendiamin, N-etilmorfolin, N-etilpiperidin, glukamin, glukozamin, histidin, hidrabamin, izopropilamin, lizin, metilglukamin, morfolin, piperazin, piperidin, poliaminske smole, prokain, purini, teobromin, trietilamin, trimetilamin, tripropilamin i trometamin. Kada jedinjenja predmetnog pronalaska sadrže relativno bazne funkcionalnosti, kisele adicione soli se mogu dobiti kontaktom neutralnog oblika takvih jedinjenja sa dovoljnom količinom željene kiseline, bilo čiste ili u odgovarajućem inertnom rastvaraču. Primeri farmaceutski prihvatljivih kiselih adicionih soli uključuju one koje su dobijene iz neorganskih kiselina, kao što su hlorovodonična, bromovodonična, azotna, ugljena, monohidrogenkarbonska, fosforna, monohidrogenfosforna, dihidrogenfosforna, sumporna, monohidrogensumporna, jodovodična ili fosforna kiselina, kao i soli dobijene iz relativno netoksičnih organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, izobuterna, malonska, benzojeva, sukcinska, suberinska, fumarna, mandelinska, ftalna, benzensulfonska, p-tolilsulfonska, limunska, vinska i metansulfonska. Takođe su uključene soli aminokiselina kao što je arginat i soli organskih kiselina kao što su glukuronske ili galaktunorske kiseline (videti, na primer, Berge, S. M., et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Određena specifična jedinjenja iz predmetnog pronalaska sadrže i bazne i kisele funkcionalnosti koje omogućavaju da se jedinjenja pretvore u bazne ili kisele adicione soli.
Neutralni oblici jedinjenja mogu se regenerisati kontaktom soli sa bazom ili kiselinom i izolacijom polaznog jedinjenja na konvencionalan način. Polazni oblik jedinjenja se razlikuje od različitih oblika soli u određenim fizičkim svojstvima, kao što je rastvorljivost u polarnim rastvaračima, inače su soli ekvivalentne polaznom obliku jedinjenja za potrebe predmetnog pronalaska.
Određena jedinjenja iz ovog pronalaska mogu postojati u nesolvatisanim oblicima, kao i solvatisanim oblicima uključujući hidratne oblike. Uopšteno, solvatisani oblici su ekvivalentni nesolvatisanim oblicima i predviđeni su da budu obuhvaćeni opsegom ovog pronalaska. Određena jedinjenja iz ovog pronalaska mogu postojati u višestrukim kristalnim ili amorfnim oblicima. Uopšteno, svi fizički oblici su ekvivalentni za namene koje se razmatraju u ovom pronalasku i namenjene su da budu u opsegu ovog pronalaska.
1
Određena jedinjenja iz predmetnog pronalaska poseduju asimetrične atome ugljenika (optičke centre) ili dvostruke veze; svi racemati, dijastereomeri, geometrijski izomeri, regioizomeri i pojedinačni izomeri (npr. odvojeni enantiomeri) obuhvaćeni su opsegom predmetnog pronalaska.
Termin „kompozicija”, u smislu ovog dokumenta, ima za cilj da obuhvati proizvod koji sadrži specifične sastojke u specifičnim količinama, kao i bilo koji proizvod koji nastaje, direktno ili indirektno, od kombinacije specifičnih sastojaka u specifičnim količinama. Pod „farmaceutski prihvatljivim” podrazumeva se da nosač, diluent ili ekscipijens mora biti kompatibilan sa drugim sastojcima formulacije i da nije štetan za primaoca.
Termini „lečiti” i „lečenje” odnose se na terapeutsko lečenje i/ili na profilaktičko lečenje ili preventivne mere, gde je cilj da se spreči ili uspori (umanji) neželjena fiziološka promena ili poremećaj, kao što je, na primer, razvoj ili širenje kancera. U svrhu ovog pronalaska, korisni ili željeni klinički rezultati uključuju ublažavanje simptoma, smanjenje obima bolesti ili poremećaja, stabilizovano (tj. koje se ne pogoršava) stanje bolesti ili poremećaja, odlaganje ili usporavanje progresije bolesti, poboljšanje ili ublažavanje stanja bolesti ili poremećaja i remisiju (delimičnu ili totalnu), bilo da može ili ne može da se detektuje. „Lečenje” može takođe da znači produžavanje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem bez lečenja. Oni kojima je lečenje neophodno obuhvataju one koji već imaju bolest ili poremećaj, kao i one koji su skloni tome da imaju bolest ili poremećaj ili one kod kojih bolest ili poremećaj treba sprečiti.
Izraz „terapeutski efektivna količina” ili „efektivna količina” označava količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja, kada se primeni na ispitaniku, (i) leči ili sprečava pojavu određene bolesti, stanja ili poremećaja, (ii) ublažava, poboljšava ili eliminiše jedan ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja ili (iii) sprečava ili odlaže pojavu jednog ili više simptoma ovde opisane određene bolesti, stanja ili poremećaja. Za terapiju kancera, efikasnost se može meriti, na primer, procenom vremena do progresije bolesti (TTP) i/ili određivanjem stope odgovora (RR).
Termin „bioraspoloživost” se odnosi na sistemsku dostupnost (tj. nivoe krvi/plazme) date količine leka koji se daje pacijentu. Bioraspoloživost je apsolutni termin koji označava merenje i vremena (brzine) i ukupne količine (obima) leka koji stiže opšti krvotok iz primenjenog doznog oblika.
INHIBITORI RIP1 KINAZE
U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja opšte formule I:
1
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu
R<1>je odabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, fenil, benzil, 4- do 8-člani heterociklil i 5- do 6-člani heteroaril; pri čemu je R<1>vezan za susedni karbonil atomom ugljenika, i pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa jednim ili dva supstituenta izabrana iz grupe koju čine F, Cl, Br, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, hidroksil, hidroksimetil, cijano, cijanometil, cijanoetil, C(O)C1-C6alkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril);
svaki R<N>je nezavisno odabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi i C1-C6haloalkil; ili dva R<N>mogu zajedno sa susednim N da formiraju 4-6-člani prsten; i
prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
1
pri čemu:
R<2>je odabran iz grupe koju čine C1-C6haloalkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkoksi, C1-C6tioalkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2-(4- do 6-člani heterociklil), CH2CH2- (4- do 6-člani heterociklil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); pri čemu, kada je prisutan prsten fenila, on može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine halogen, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi i cijano; i
R<3a>i R<3b>su odabrani na sledeći način:
(i) jedan od R<3a>i R<3b>je H, a drugi je izabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi;
(ii) svaki od R<3a>i R<3b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN i metil, pod uslovom da R<3a>i R<3b>ne mogu oba biti OH ili CN; ili
(iii) R<3a>i R<3b>zajedno formiraju ciklopropil.
U nekim otelotvorenjima, R<1>se bira iz grupe koju čine C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6haloalkil, fenil, benzil, okstetanil, oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il, tienil i pirazolil; pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa: (i) jednim supstituentom izabranim iz grupe koju čine F, Cl, metil, hidroksil, hidroksimetil, cijano i trifluormetil, ili (ii) dva F supstituenta. U nekim prethodnim otelotvorenjima, R<1>je C1-C6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je C1-C4alkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je C3-C5cikloalkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je C3-C4cikloalkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je etil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je CF3CH2. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 2-propil. U nekim
1
otelotvorenjima, R<1>je terc-butil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je (2-hidroksi)-2-propil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je (2-cijano)-2-propil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je C1-C6haloalkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je C1-C4haloalkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je ciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je mono- ili di-fluorciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 1-fluorciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 2-fluorciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 2,2-difluorciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 1-(trifluormetil)ciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 1-metilciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 1-(hidroksimetil)ciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je ciklobutil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je ciklopentil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je fenil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je benzil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je oksetan-3-il. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 3-metiloksetan-3-il. U nekim otelotvorenjima, R<1>je oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 2-piridil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 1-metilpirazol-4-il. U nekim otelotvorenjima, R<1>je 2-tienil.
U nekim otelotvorenjima, svaki R<N>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H i C1-C6alkil. U nekim otelotvorenjima, svaki R<N>je C1-C4alkil. U nekim otelotvorenjima, svaki R<N>je metil.
U nekim otelotvorenjima, prsten A i prsten B zajedno se biraju iz grupe koja se sastoji od:
1
pri čemu:
R<2>je odabran iz grupe koju čine C1-C6haloalkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkoksi, C1-C6tioalkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2-(4- do 6-člani heterociklil), CH2CH2- (4- do 6-člani heterociklil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); pri čemu, kada je prisutan prsten fenila, on može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine halogen, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi i cijano; i
R<4a>i R<4b>su odabrani na sledeći način:
(i) jedan od R<4a>i R<4b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; ili
(ii) svaki od R<4a>i R<4b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl i metil.
U nekim otelotvorenjima, R<2>je odabran iz grupe koju čine fenil, monofluorfenil, difluorfenil, monohlorfenil i dihlorfenil.
U nekim otelotvorenjima formule (I), R<1>je kao što je gore definisano, a prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
pri čemu:
R<3a>i R<3b>su odabrani na sledeći način:
(i) jedan od R<3a>i R<3b>je H, a drugi je izabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi;
2
(ii) svaki od R<3a>i R<3b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN i metil, pod uslovom da R<3a>i R<3b>ne mogu oba biti OH ili CN; ili
(iii) R<3a>i R<3b>zajedno formiraju ciklopropil;
svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; i
m je 1, 2 ili 3.
U nekim otelotvorenjima formule (I), R<1>je kao što je gore definisano, a prsten A i prsten B zajedno su:
pri čemu:
svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C6alkil, C1-C6haloalkil, C1-C6alkoksi i C1-C6haloalkoksi; i
m je 1, 2 ili 3.
U nekim otelotvorenjima formule (I), R<1>je kao što je gore definisano, a prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
pri čemu:
R<4a>i R<4b>su odabrani na sledeći način:
(i) jedan od R<4a>i R<4b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; ili
(ii) svaki od R<4a>i R<4b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl i metil;
svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C6alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; i
m je 1, 2 ili 3.
U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je fenil. U nekim otelotvorenjima, R<2>je mono- ili difluorfenil. U nekim otelotvorenjima, R<2>je mono- ili dihlorfenil. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je piridinil. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je piridinil supstituisan hlorom. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je piridinil supstituisan fluorom. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je pirazolil. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je 1-metil-1H-pirazol-4-il. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<2>je 4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il.
U nekim otelotvorenjima, R<2>je odabran iz grupe koju čine fenil, monofluorfenil, difluorfenil, monohlorfenil i dihlorfenil.
U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>i R<3b>su oba H. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je H i R<3b>je F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je H i R<3b>je Cl. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>i R<3b>su oba F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>i R<3b>su oba Cl. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>i R<3b>su oba metil. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je metil, a R<3b>je F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je metil, a R<3b>je Cl. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je metil, a R<3b>je OH. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je metil, a R<3b>je CN. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>i R<3b>su oba D. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je H, a R<3b>je D. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je D, a R<3b>je F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je D, a R<3b>je Cl. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<3a>je D, a R<3b>je metil.
U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>i R<4b>su oba H. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, jedan od R<4a>je H, a R<4b>je F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, jedan od R<4a>je H, a R<4b>je metil. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, jedan od R<4a>je H, a R<4b>je Cl. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>i R<4b>su oba F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>i R<4b>su oba D. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>je H, a R<4b>je D. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>je D, a R<4b>je F. U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<4a>je D, a R<4b>je Cl.
U nekim od gore navedenih otelotvorenja, R<5>se bira iz grupe koju čine H, F, Cl, CH3, CH2CH3, OCH3, CF3, OCF3, CF2H i OCF2H.
U nekim od gore navedenih otelotvorenja, m je 0. U nekim otelotvorenjima, m je 1. U nekim otelotvorenjima, m je 2.
U drugom otelotvorenju, ovde navedeno jedinjenje je izabrano od jedinjenja iz tabele 1 u nastavku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U drugom otelotvorenju, ovde je navedeno jedinjenje iz tabele 1 koje ima Kimanji od 100 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U drugom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 1 ima Kimanji od 50 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U još jednom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 1 ima Kimanji od 25 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U još jednom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 1 ima Kimanji od 10 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano.
U drugom otelotvorenju, ovde navedeno jedinjenje je izabrano od jedinjenja iz tabele 2 u nastavku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U drugom otelotvorenju, ovde je navedeno jedinjenje iz tabele 2 koje ima Kimanji od 100 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U drugom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 2 ima Kimanji od 50 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U još jednom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 2 ima Kimanji od 25 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano. U još jednom otelotvorenju, jedinjenje iz tabele 2 ima Kimanji od 10 nM na RIP1K biohemijskom testu ili testu na bazi ćelija, uključujući kao što je ovde opisano.
U nekim otelotvorenjima, ovde je naveden jedan stereoizomer jedinjenja iz Tabele 1 ili Tabele 2, okarakterisan pozivanjem na njegovu hiralnu separaciju i izolaciju (npr. kao što je opisano u Primerima hiralne SFC).
U nekim otelotvorenjima, ovde su navedene farmaceutske kompozicije koje se sastoje od jedinjenja formule I, kao što je opisano u bilo kom od gore navedenih rotelotvorenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenasa. Specifična otelotvorenja uključuju farmaceutske kompozicije pogodne za oralnu primenu.
Ovde su takođe navedene oralne formulacije jedinjenja formule I, kao što je opisano u bilo kojoj od gore navedenih otelotvorenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenasa pogodnih za oralnu primenu.
U nekim otelotvorenjima, ovde su navedena jedinjenja formule I, kao što je opisano u bilo kojm od gore navedenih otelotvorenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za lečenje neurodegenerativnih bolesti i poremećaja. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su sinukleopatije, kao što su Parkinsonova bolest, demencija sa Levijevim telima, multipla sistemska atrofija, Parkinson-plus sindromi. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su tauopatije, kao što su Alchajmerova bolest i frontotemporalna demencija. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su demijelinizirajuće bolesti, kao što je multipla skleroza.
U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su druge neurodegenerativne bolesti, kao što su amiotrofična lateralna skleroza, spinalna mišićna atrofija, primarna lateralna skleroza, Hantingtonova bolest, ishemija i moždani udar. Dodatni
2
primeri neurodegenerativnih bolesti koje treba lečiti kako je ovde predviđeno, uključuju intrakranijalno krvarenje, cerebralno krvarenje, mišićnu distrofiju, progresivnu mišićnu atrofiju, pseudobulbarnu paralizu, progresivnu bulbarnu paralizu, spinalnu mišićnu atrofiju, nasleđenu mišićnu atrofiju, periferne neuropatije, progresivnu supranuklearnu paralizu, kortikobazalnu degeneraciju i demijelinizirajuće bolesti.
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Alchajmerova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Parkinsonova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Hantingtonova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je multipla skleroza. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je amiotrofična lateralna skleroza (ALS). U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je spinalna mišićna atrofija (SMA).
U nekim otelotvorenjima, ovde su navedene namene jedinjenja formule I, kao što je opisano u bilo kojm od gore navedenih otelotvorenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za lečenje inflamatornih bolesti i poremećaja. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti odabrani su iz grupe koju čine inflamatorne bolesti creva (uključujući Kronovu bolest i ulcerozni kolitis), psorijaza, odvajanje mrežnjače, retinitis pigmentosa, makularna degeneracija, pankreatitis, atopijski dermatitis, artritis (uključujući reumatoidni artritis, osteoartritis, spondiloartritis, giht, sistemski juvenilni idiopatski artritis (SoJIA), psorijatični artritis), sistemski eritematemski lupus (SLE), Sjogrenov sindrom, sistemska skleroderma, antifosfolipidni sindrom (APS), vaskulitis, oštećenje/bolest jetre (nealkoholni steatohepatitis, alkoholni steatohepatitis, autoimuni hepatitis, autoimune hepatobilijarne bolesti, primarni sklerozni holangitis (PSC), acetaminofenska toksičnost, hepatotoksičnost), oštećenje/povreda bubrega (nefritis, transplantacija bubrega, hirurgija, primena nefrotoksičnih lekova, npr. cisplatin, akutna povreda bubrega (AKI), celijakija, autoimuna idiopatska trombocitopenična purpura, odbacivanje transplantata, ishemijska reperfuziona povreda čvrstih organa, sepsa, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), cerebrovaskularni incident (CVA, moždani udar), infarkt miokarda (MI), ateroskleroza, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), spinalna mišićna atrofija (SMA), alergijske bolesti (uključujući astmu i atopijski dermatitis), multipla skleroza, dijabetes tipa I, Vegenerova granulomatoza, plućna sarkoidoza, Behčetova bolest, interleukin-1 konvertujući enzim (ICE, takođe poznat kao kaspaza-1) udružen sa sindromom groznice, hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP), periodični sindrom povezan sa receptorom faktora nekroze tumora (TRAPS), parodontitis, sindrom deficijencije NEMO (gen esencijalnog modulatora F-kappa-B (poznat i kao IKK gama ili IKKG)), nedostatak HOIL-1 ((poznat i kao RBCKI), nedostatak hem oksidativne IRP2 ubikvitinske ligaze-1), sindrom nedostatka linearnog ubikvitinskog kompleksa lanca (LUBAC), hematološke i maligne bolesti čvrstih organa, bakterijske infekcije i virusne infekcije (kao što su tuberkuloza i influenca) i Lizozomne bolesti skladištenja (posebno, Gošeova bolest i uključujući GM2, gangliozidozu, alfamanozidozu, aspartilglukozaminuriju, bolest skladištenja holesteril estera, hronični nedostatak heksosaminidaze A, cistinozu, Danonovu bolest, Fabrijevu bolest, Farberovu bolest, fukozidozu, galaktosijalidozu, GM1 gangliozidozu, mukolipidozu, infantilnu bolest skladištenja sijalinske kiseline, nedostatak juvenilne heksosaminidaze A, Krabeova bolest, manjak lizosomalne kisele lipaze, metahromatsku leukodistrofiju, mukopolisaharidozne poremećaje, višestruki nedostatak sulfataze, Niman-Pikovu bolest, neuronske ceroidne lipofuscinoze, Pompeovu bolest, piknodizostozu, Sandhofovu bolest, Šindlerovu bolest, bolest skladištenja sijalinske kiseline, Tej-Saksovu i Volmanovu bolest).
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je inflamatorna bolest creva. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Kronova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je ulcerozni kolitis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je glaukom. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je psorijaza. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je reumatoidni artritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je spondiloartritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je juvenilni idiopatski artritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je osteoartritis.
U nekim otelotvorenjima, ovde je navedeno jedinjenje formule I, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja sa terapeutskom efektivnom količinom takvog jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu je bolest ili poremećaj povezan sa upalom i/ili nekroptozom. U nekim otelotvorenjima navedena bolest ili poremećaj su odabrani od ovde navedenih specifičnih bolesti i poremećaja.
U nekim otelotvorenjima, ovde je navedeno jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za inhibiciju aktivnosti RIP1 kinaze kontaktom ćelije sa jedinjenjem formule I ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.
FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I PRIMENA
Ovde su navedene farmaceutske kompozicije ili lekovi koji sadrže jedinjenja iz pronalaska (ili stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere, solvate, metabolite, izotope, farmaceutski prihvatljive soli ili njihove prolekove), i terapeutski inertan nosač, diluent ili ekscipijens, kao i metode korišćenja jedinjenja iz pronalaska za pripremu takvih kompozicija i lekova. U jednom primeru, jedinjenja formule I se mogu formulisati mešanjem na sobnoj
2
temperaturi na odgovarajućem pH, i sa željenim stepenom čistoće, sa fiziološki prihvatljivim nosačima, tj. nosačima koji su netoksični za primaoca u dozama i koncentracijama primenjenim u datom galenskom obliku. pH vrednost formulacije zavisi uglavnom od konkretne upotrebe i koncentracije jedinjenja, ali se poželjno nalazi u opsegu od oko 3 do oko 8. U jednom primeru, jedinjenje formule I je formulisano u acetatnom puferu, na pH 5. U drugom otelotvorenju, jedinjenja formule I su sterilna. Jedinjenje može da se čuva, na primer, kao čvrsta ili amorfna kompozicija, kao liofilizovana formulacija ili kao vodeni rastvor.
Kompozicije se formulišu, doziraju i primenjuju na način koji je u skladu sa dobrom medicinskom praksom. U ovom kontekstu se mogu razmatrati faktori kao što su konkretni poremećaj koji se leči, konkretni sisar koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, postupak primene, raspored primene, i drugi faktori poznati lekarima. U nekim otelotvorenjima, „efektivna količina” jedinjenja koja se primenjuje biće regulisana takvim razmatranjima i predstavlja minimalnu količinu neophodnu za inhibiciju aktivnosti RIP1 kinaze kako bi se obezbedilo terapeutsko dejstvo kod sisara koji se leči. Na primer, takva količina može biti manja od količine koja je toksična za normalne ćelije ili sisara u celini.
U jednom primeru, farmaceutski efektivna količina jedinjenja ovog pronalaska, koja se daje intravenski ili parenteralno po dozama, biće u opsegu od oko 0,1 do 100 mg/kg, alternativno oko 0,1 do 20 mg/kg telesne težine pacijenta dnevno ili alternativno oko 0,3 do 15 mg/kg/dan.
U drugom otelotvorenju, oralni jedinični dozni oblici, kao što su tablete i kapsule, poželjno sadrže od oko 1 do oko 1000 mg (npr. 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 250 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg ili 1000 mg) jedinjenja iz pronalaska. Dnevna doza, u određenim potelotvorenjima, data je kao pojedinačna dnevna doza ili u podeljenim dozama dva do šest puta dnevno ili u obliku sa produženim oslobađanjem. U slučaju odraslog čoveka od 70 kg, ukupna dnevna doza će generalno biti od oko 7 mg do oko 1400 mg. Ovaj režim doziranja se može prilagoditi kako bi se obezbedio optimalan terapijski odgovor. Jedinjenja se mogu primenjivati u režimu od 1 do 4 puta dnevno, poželjno jednom ili dva puta dnevno.
U nekim otelotvorenjima, primenjuje se mala doza jedinjenja pronalaska kako bi se obezbedila terapijska korist uz smanjenje ili sprečavanje neželjenih dejstava.
Jedinjenja iz pronalaska se mogu primeniti na bilo koji pogodan način, uključujući oralnu, topikalnu (uključujući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu, transdermalnu, parenteralnu, supkutanu, intraperitonealnu, intrapulmonarnu, intradermalnu, intratekalnu i
2
epiduralnu i intranazalnu, i, ako se želi lokalni tretman, intralezionu primenu. Parenteralne infuzije uključuju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili supkutanu primenu. U drugm otelotvorenju, jedinjenje formule I se primenjuje oralno. U drugim specifičnim otelotvorenjima, jedinjenje formule I se primenjuje intravenski.
Jedinjenja iz predmetnog pronalaska se mogu davati u svakom pogodnom obliku primene, npr. tablete, praškovi, kapsule, rastvori, disperzije, suspenzije, sirupi, sprejevi, supozitorije, gelovi, emulzije, flasteri itd. Takve kompozicije mogu sadržati komponente koje su uobičajene u farmaceutskim preparatima, npr. razblaživače, nosače, pH modifikatore, zaslađivače, balastne materije, i druge aktivne agense.
Tipična formulacija se priprema mešanjem jedinjenja iz predmetnog pronalaska i nosača ili ekscipijensa. Pogodni nosači i ekscipijensi su dobro poznati stručnjacima iz ove oblasti, i opisani su detaljno, npr. u Ansel, Howard C., et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; i Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Formulacije takođe mogu sadržavati jedan ili više pufera, stabilizatora, surfaktanasa, kvašljivaca, lubrikanasa, emulgatora, sredstava za suspendovanje, konzervanasa, antioksidanasa, sredstava za zamućenje, glidanasa, pomoćnih agenasa za obradu, boja, zaslađivača, mirisa, aroma, diluenata i drugih poznatih aditiva, kako bi se dobio lep izgled leka (tj. jedinjenja predmetnog pronalaska ili od toga farmaceutske kompozicije) ili kako bi se olakšala proizvodnja farmaceutskog proizvoda (tj. leka).
Pogodni nosači, razblaživači i ekscipijensi su dobro poznati stručnjacima, i uključuju supstance kao što su ugljeni hidrati, voskovi, vodorastvorljivi i/ili bubreći polimeri, hidrofilni ili hidrofobni materijali, želatin, ulja, rastvarači i voda. Određeni nosač, diluent ili ekscipijent koji će se koristiti zavisi od načina i svrhe za koju se primenjuje jedinjenje iz ovog pronalaska. Rastvarači se generalno biraju na osnovu rastvarača koje stručnjaci iz ove oblasti prepoznaju kao sigurne (GRAS) za davanje sisarima. Uopšteno, sigurni rastvarači su netoksični vodeni rastvarači, kao što su voda i drugi netoksični rastvarači koji su rastvorljivi ili se mešaju u vodi. Pogodni vodeni rastvarači uključuju vodu, etanol, propilen glikol, polietilen glikole (npr. PEG 400, PEG 300), itd. i njihove smeše. Formulacije mogu takođe sadržati jedan ili više pufera, stabilizatora, surfaktanata, agenasa za vlaženje, lubrikanata, emulgatora, agenasa za suspendovanje, konzervanasa, antioksidanasa, agenasa za zamućivanje, glidanasa, agenasa za preradu, boja, zaslađivača, mirisa, aroma i drugih poznatih aditiva kako bi se dobio lep izgled
2
leka (tj. jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutske kompozicije) ili kako bi se olakšala proizvodnja farmaceutskog proizvoda (tj. leka).
Prihvatljivi razblaživači, nosači, ekscipijensi i stabilizatori su netoksični za primaoca u primenjenim dozama i koncentracijama, i uključuju pufere, kao što je fosfatni, citratni i puferi drugih organskih kiselina; antioksidanse, uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što je oktadecil dimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene, kao što je metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekulske mase (manje od 10 ostataka); proteine, kao što je serumski albumin, želatin ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinil pirolidon; aminokiseline, kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helatne agense, kao što je EDTA; šećere, kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontrajone koji grade soli, kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. kompleksi Zn-protein); i/ili nejonske surfaktante, kao što je TWEEN<™>, PLURONICS<™>ili polietilen glikol (PEG). Aktivni farmaceutski sastojak prema pronalasku (npr. jedinjenje formule I ili njegovo otelotvorenje) takođe može biti zarobljen u mikrokapsule pripremljene, na primer, tehnikama koacervacije ili interfacijalnom polimerizacijom, na primer, hidroksimetilceluloza ili želatin-mikrokapsule i mikrokapsule poli(metilmetacilata) u koloidnim sistemima za davanje lekova (na primer, lipozomi, mikrosfere albumina, mikroemulzije, nanočestice i nanokapsule) ili u makroemulzijama. Takve tehnike su objavljene u Remington: The Science and Practice of Pharmacy: Remington the Science and Practice of Pharmacy (2005) 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philidelphia, PA.
Mogu da se pripreme preparati jedinjenja iz pronalaska sa produženim oslobađanjem (npr. jedinjenje formule I ili njegovo otelotvorenje). Prikladni primeri preparata sa produženim oslobađanjem uključuju polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže jedinjenje formule I ili njegovo otelotvorenje, gde su te matrice u formi oblikovanih proizvoda, npr. filmova ili mikrokapsula. Primeri matrica za produženo otpuštanje uključuju poliestere, hidrogelove (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat), ili poli(vinil-alkohol)), polilaktide (US patent br. 3,773,919), kopolimere L-glutaminske kiseline i gama-etil-L-glutamat (Sidman et al., Biopolymers 22: 547, 1983), nerazgradivi etilen-vinil-acetat (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167, 1981), razgradive kopolimere mlečne kiseline i glikolne kiseline, kao što je LUPRON DEPOT<™>(injekcione mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečne kiseline i glikolne kiseline i leuprolid-acetata) i poli-D-(-)-3-hidroksibuternu kiselinu (EP 133,988A).
2
Kompozicije sa produženim oslobađanjem takođe uključuju lipozomski zarobljena jedinjenja, koja se mogu dobiti metodama poznatim per se (Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
82:3688, 1985; Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77:4030, 1980; U.S. patent br.
4,485,045 i 4,544,545; i EP 102,324A). Uobičajeno, lipozomi su malog (oko 200–800 angstrema) unilamelarnog tipa u kojem je sadržaj lipida veći od oko 30 mol% holesterola, a odabrana razmera je prilagođena optimalnoj terapiji.
U jednom primeru, jedinjenja formule I ili njihovo otelotvorenje mogu se formulisati mešanjem na sobnoj temperaturi na odgovarajućoj pH vrednosti, sa željenim stepenom čistoće, sa fiziološki prihvatljivim nosačima, tj. nosačima koji su netoksični za primaoce u dozama i koncentracijama upotrebljenim u galenskom obliku za primenu. pH vrednost formulacije zavisi uglavnom od konkretne upotrebe i koncentracije jedinjenja, ali se poželjno nalazi u opsegu od oko 3 do oko 8. U jednom primeru, jedinjenje formule I (ili njegovo otelotvorenje) formulisano je u acetatnom puferu, na pH 5. U sledećem otelotvorenju, jedinjenja Formule I ili njihovo otelotvorenje su sterilni. Jedinjenje može da se čuva, na primer, kao čvrsta ili amorfna kompozicija, kao liofilizovana formulacija ili kao vodeni rastvor.
Primer prikladnog doznog oblika za oralnu primenu je tableta koja sadrži oko 1 do oko 500 mg (npr. oko 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 30 mg, 50 mg, 80 mg, 100 mg, 150 mg, 250 mg, 300 mg i 500 mg) jedinjenja iz predmetnog pronalaska sa prikladnom količinom anhidrovane laktoze, natrijum kroskarmeloze, polivinil pirolidona (PVP) K30 i magnezijum stearata. Praškasti sastojci se prvo izmešaju, a zatim mešaju sa rastvorom PVP. Dobijena kompozicija se može osušiti, granulisati, pomešati sa magnezijum stearatom i komprimovati u oblik tablete, pomoću konvencionalne opreme.
Formulacije jedinjenja iz pronalaska (npr. jedinjenje formule I ili njegovo otelotvorenje) mogu biti u obliku sterilnog injekcionog preparata, kao što je sterilna injekciona vodena ili uljana suspenzija. Ova suspenzija se može formulisati prema poznatoj upotrebi u struci, uz upotrebu odgovarajućih agenasa za dispergovanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje koji su gore navedeni. Sterilni injekcioni preparat takođe može biti sterilni injekcioni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, kao što je rastvor u 1,3-butandiolu ili pripremljen kao liofilizovani prah. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna fiksirana ulja se mogu uobičajeno koristiti kao rastvarač ili suspendirajući medijum. U tu svrhu se može koristiti bilo koje blago fiksno ulje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina mogu se takođe koristiti u pripremi injekcija.
2
Količina aktivnog sastojka koji se može kombinovati sa nosećom supstancom radi stvaranja pojedinačnog doznog oblika variraće u zavisnosti od domaćina koji se leči i konkretnog načina primene. Na primer, formulacija sa vremenskim oslobađanjem namenjena oralnoj primeni na ljudima može da sadrži otprilike od 1 do 1000 mg aktivnog materijala pomešanog sa odgovarajućom i pogodnom količinom noseće supstance koji može varirati od oko 5 do oko 95% ukupne kompozicije (masa:masa). Farmaceutska kompozicija se može pripremiti tako da obezbedi lako merljive količine za primenu. Na primer, vodeni rastvor namenjen za intravensku infuziju može da sadrži od oko 3 do 500 µg aktivnog sastojka po mililitru rastvora, tako da može doći do infuzije pogodne zapremine brzinom od oko 30 ml/h.
Formulacije pogodne za parenteralnu primenu uključuju vodene i nevodene sterilne rastvore za injekcije koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostate i rastvore koji formulaciju čine izotoničnom sa krvlju predviđenog primaoca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu da sadrže agense za suspendovanje i zgušnjavanje.
Formulacije se mogu pakovati u kontejnere sa jediničnom dozom ili više doza, na primer, zapečaćene ampule i bočice, i mogu se skladištiti u liofilizovanom stanju koje zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer, vode, za injekciju neposredno pre upotrebe. Nepripremljeni rastvori za injekcije i suspenzije se pripremaju iz sterilnih praškova, granula i tableta prethodno opisane vrste.
Otelotvorenje, prema tome, uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U daljem otelotvorenju se uključuje farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.
Kada se vezujući cilj nalazi u mozgu, određeni primeri otelotvorenja ovog pronalaska obezbeđuju da jedinjenje formule I (ili njegova otelotvorenja) prelaze krvno-moždanu barijeru. U ovim otelotvorenjima, ovde navedena jedinjenja pokazuju dovoljnu penetraciju u mozak za potencijalnu terapiju kod neuroloških bolesti. U nekim otelotvorenjima, penetracija u mozak se procenjuje procenom odnosa slobodnog leka u mozgu/plazmi (Bu/Pu) mereno in vivo farmakokinetičkim studijama na glodarima ili drugim metodama poznatim stručnjacima iz ove oblasti (videti, npr Liu, X. et al., J. Pharmacol. Exp. Therap., 325:349-56, 2008).
Određene neurološke bolesti dovode se u vezu sa povećanjem permeabilnosti krvnomoždane barijere, tako da se jedinjenje formule I (ili njegovo otelotvorenje) može lako uvesti u mozak. Kada krvno-moždana barijera ostane netaknuta, postoji nekoliko poznatih pristupa za transport molekula preko nje, uključujući fizičke metode, metode zasnovane na lipidima i metode bazirane na receptorima i kanalima. Fizičke metode prenošenja jedinjenja formule I (ili njegovo otelotvorenje) preko krvno-moždane barijere uključuju potpuno zaobilaženje krvnomoždane barijere ili stvaranje otvora u krvno-moždanoj barijeri.
Metode zaobilaženja uključuju direktno ubrizgavanje u mozak (videti, npr. Papanastassiou et al., Gene Therapy 9:398-406, 2002), interstitial infusion/convectionenhanced delivery (videti, npr. Bobo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.91: 2076-2080, 1994), i implantaciju uređaja za isporučivanje u mozak (videti, npr. Gill et al., Nature Med.9:589-595, 2003; i Gliadel Wafers<™>, Guildford.
Metode stvaranja otvora u barijeri uključuju ultrazvuk (videti npr. publikaciju U.S. patenta br.2002/0038086), osmotski pritisak (npr. davanjem hipertoničnog manitola (Neuwelt, E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation, Volumes 1 and 2, Plenum Press, N.Y., 1989)), i permeabilizacija pomoću, npr. bradikinina ili permeabilizatora A-7 (videti, npr. U.S. patent br.5,112,596, 5,268,164, 5,506,206, i 5,686,416).
Metode na bazi lipida za transport jedinjenja formule I (ili njegovog otelotvorenja) preko krvno-moždane barijere uključuju inkapsuliranje jedinjenja formule I ili I-I (ili njegovof otelotvorenja) u lipozome koji se spajaju sa fragmentima koji vezuju antitela koja se vezuju za receptore na vaskularnom endotelu krvno-moždane barijere (videti, npr. U.S. patentnu publikaciju br. 2002/0025313), i oblaganje jedinjenja formule I (ili njegovog otelotvorenja) u lipoproteinskim česticama male gustine (videti npr. U.S. patentnu publikaciju br.
2004/0204354) ili apolipoprotein E (videti npr. U.S. patentnu publikaciju br.2004/0131692).
Metode bazirane na receptorima i kanalima za transport jedinjenja formule I (ili njegovog otelotvorenja) preko krvno-moždane barijere uključuju upotrebu glukokortikoidnih blokatora za povećanje propusnosti krvno-moždane barijere (videti, npr. US patentnu publikaciju br.2002/0065259, 2003/0162695 i 2005/0124533); aktiviranje kalijumovih kanala (videti, npr. US patentnu publikaciju br.2005/0089473), inhibirajuće ABC transportere lekova (videti, npr. US patentnu publikaciju br.2003/0073713); oblaganje jedinjenja formule I ili I-I (ili njegovog otelotvorenja) transferinom i modulirajuće aktivnosti jednog ili više receptora transferina (videti, npr. US patentnu publikaciju br. 2003/0129186) i katjonizovanje antitela (videti, npr. US patent br.5,004,697).
Za intracerebralnu upotrebu, u određenim primerima otelotvorenja, jedinjenja se mogu primenjivati kontinualno infuzijom u rezervoare za fluid u CNS, iako bolus injekcija može biti prihvatljiva. Inhibitori se mogu davati u ventrikule mozga ili na drugi način uvesti u CNS ili spinalnu tečnost. Primena se može izvršiti upotrebom unutrašnjeg katetera i sredstava za kontinualnu primenu, kao što je pumpa, ili se može primeniti implantacijom, npr. intracerebralnom implantacijom nosača sa produženim otpuštanjem. Konkretnije, inhibitori se
1
mogu ubrizgavati kroz hronično implantirane kanile ili hronično infuzirati uz pomoć osmotskih minipumpa. Na raspolaganju su potkožne pumpe koje isporučuju proteine kroz male cevi u moždane komore. Visoko sofisticirane pumpe mogu se dopuniti kroz kožu, a njihova brzina isporuke se može postaviti bez hirurške intervencije. Primere pogodnih protokola primene i sistema za isporuku koji uključuju supkutanu pumpu ili kontinuiranu intracerebroventrikularnu infuziju preko potpuno implantiranog sistema za davanje leka predstavljaju oni koji se koriste za primenu dopamina, agonista dopamina i holinergičkih agonista kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću i životinjskih modela za Parkinsonovu bolest, kao što su opisali Harbaugh, J. Neural Transm. Suppl.24:271, 1987; and DeYebenes et al., Mov. Disord.2: 143, 1987.
INDIKACIJE I POSTUPCI ZA LEČENJE
Jedinjenja iz pronalaska inhibiraju aktivnost RIP1 kinaze. Shodno tome, jedinjenja iz pronalaska su korisna za lečenje bolesti i poremećaja posredovanih ovim putem i povezanih sa upalom i/ili nekroptotičnom ćelijskom smrću.
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je neurodegenerativna bolest ili poremećaj. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su sinukleopatije, kao što su Parkinsonova bolest, demencija sa Levijevim telima, multipla sistemska atrofija, Parkinson-plus sindromi. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su tauopatije, kao što su Alchajmerova bolest i frontotemporalna demencija. U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su demijelinizirajuće bolesti, kao što je multipla skleroza.
U nekim otelotvorenjima, bolesti i poremećaji koje treba lečiti su druge neurodegenerativne bolesti, kao što su amiotrofična lateralna skleroza, spinalna mišićna atrofija, primarna lateralna skleroza, Hantingtonova bolest, ishemija i moždani udar. Dodatni primeri neurodegenerativnih bolesti koje treba lečiti kako je ovde predviđeno, uključuju intrakranijalno krvarenje, cerebralno krvarenje, mišićnu distrofiju, progresivnu mišićnu atrofiju, pseudobulbarnu paralizu, progresivnu bulbarnu paralizu, spinalnu mišićnu atrofiju, nasleđenu mišićnu atrofiju, periferne neuropatije, progresivnu supranuklearnu paralizu, kortikobazalnu degeneraciju i demijelinizirajuće bolesti.
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Alchajmerova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Parkinsonova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Hantingtonova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je multipla skleroza. U nekim otelotvorenjima,
2
bolest ili poremećaj koji treba lečiti je amiotrofična lateralna skleroza (ALS). U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je spinalna mišićna atrofija (SMA).
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj je inflamatorna bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči odabrana je iz grupe koju čine inflamatorne bolesti creva (uključujući Kronovu bolest i ulcerozni kolitis), psorijaza, odvajanje mrežnjače, retinitis pigmentosa, makularna degeneracija, pankreatitis, atopijski dermatitis, artritis (uključujući reumatoidni artritis, osteoartritis, spondiloartritis, giht, sistemski juvenilni idiopatski artritis (SoJIA), psorijatični artritis), sistemski eritemski lupus (SLE), Sjogrenov sindrom, sistemska skleroderma, antifosfolipidni sindrom (APS), vaskulitis, oštećenje/bolesti jetre (nealkoholni steatohepatitis, alkoholni steatohepatitis, autoimuni hepatitis, autoimune hepatobilijarne bolesti, primarni sklerozni holangitis (PSC), acetaminofenska toksičnost, hepatotoksičnost), oštećenje/povreda bubrega (nefritis, transplantacija bubrega, hirurgija, primena nefrotoksičnih lekova npr. cisplatina, akutna povreda bubrega (AKI), celijakija, autoimuna idiopatska trombocitopenična purpura, odbacivanje transplantata, ishemijska reperfuziona povreda čvrstih organa, sepsa, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), cerebrovaskularni incident (CVA, moždani udar), infarkt miokarda (MI), ateroskleroza, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), spinalna mišićna atrofija (SMA), alergijske bolesti (uključujući astmu i atopijski dermatitis), multipla skleroza, dijabetes tipa I, Vegenerova granulomatoza, plućna sarkoidoza, Behčetova bolest, interleukin-1 konvertujući enzim (ICE, takođe poznat kao kaspaza-1) udružen sa sindromom groznice, hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP), periodični sindrom povezan sa receptorom faktora nekroze tumora (TRAPS), parodontitis, sindrom deficijencije NEMO (gen esencijalnog modulatora F-kappa-B (poznat i kao IKK gama ili IKKG)), nedostatak HOIL-1 ((poznat i kao RBCKI), nedostatak hem oksidativne IRP2 ubikvitinske ligaze-1), sindrom nedostatka linearnog ubikvitinskog kompleksa lanca (LUBAC), hematološke i maligne bolesti čvrstih organa, bakterijske infekcije i virusne infekcije (kao što su tuberkuloza i influenca) i Lizozomne bolesti skladištenja (posebno, Gošeova bolest i uključujući GM2, gangliozidozu, alfa-manozidozu, aspartilglukozaminuriju, bolest skladištenja holesteril estra, hronični nedostatak heksosaminidaze A, cistinozu, Danonovu bolest, Fabrijevu bolest, Farberovu bolest, fukozidozu, galaktosijalidozu, GM1 gangliozidozu, mukolipidozu, infantilnu bolest skladištenja sijalinske kiseline, nedostatak juvenilne heksosaminidaze A, Krabeova bolest, manjak lizosomalne kisele lipaze, metahromatsku leukodistrofiju, mukopolisaharidozne poremećaje, višestruki nedostatak sulfataze, Niman-Pikovu bolest, neuronske ceroidne lipofuscinoze, Pompeovu bolest, piknodizostozu, Sandhofovu bolest, Šindlerovu bolest, bolest skladištenja sijalinske kiseline, Tej-Saksovu i Volmanovu bolest).
U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je inflamatorna bolest creva. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je Kronova bolest. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je ulcerozni kolitis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je glaukom. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je psorijaza. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je reumatoidni artritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je spondiloartritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji treba lečiti je juvenilni idiopatski artritis. U nekim otelotvorenjima, bolest ili poremećaj koji se leči je osteoartritis.
U nekim otelotvorenjima, ovde je predviđeno lečenje jednog ili više gore navedenih simptoma bolesti ili poremećaja.
Ovde je takođe predviđena upotreba jedinjenja pronalaska u terapiji (nije deo pronalaska). U nekim otelotvorenjima, ovde je predviđena upotreba jedinjenja pronalaska za lečenje ili prevenciju gore navedenih bolesti i poremećaja (nije deo pronalaska). Ovde je takođe predviđena upotreba jedinjenja iz pronalaska u proizvodnji leka za lečenje ili prevenciju gore navedenih bolesti i poremećaja (nije deo pronalaska).
Ovde je takođe predviđena metoda lečenja bolesti ili poremećaja, kao što je gore navedeno, kod sisara kojima je potrebno takvo lečenje, pri čemu metoda obuhvata primenu na navedenom sisaru terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (nije deo pronalaska). U drugom otelotvorenju, sisar je čovek.
Ovde je takođe predviđena metoda lečenja simptoma bolesti ili poremećaja kod sisara kojima je potrebno takvo lečenje, pri čemu su navedena bolest ili poremećaj odabrani iz grupe koju čine iritabilni poremećaji creva (IBD), sindrom iritabilnog creva (IBS), Kronova bolest, ulcerozni kolitis, infarkt miokarda, moždani udar, traumatska povreda mozga, ateroskleroza, ishemijsko-reperfuziona povreda bubrega, jetre i pluća, povreda bubrega izazvana cisplatinom, sepsa, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), pankreatitis, psorijaza, pigmentoza retinitisa, degeneracija mrežnice, hronične bolesti bubrega, akutni respiratorni distres sindrom (ARDS) i hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP), pri čemu metoda obuhvata primenu na navedenom sisaru terapeutske efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (nije deo pronalaska).
Ovde je takođe predviđena metoda lečenja bolesti ili poremećaja kod čoveka kao pacijenta kome je potrebno takvo lečenje, pri čemu su navedena bolest ili poremećaj odabrani od gore navedenih, pri čemu se metoda sastoji od oralne primene terapeutski efektivne količine
4
jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, kao prihvatljive farmaceutske kompozicije za oralnu primenu (nije deo pronalaska).
KOMBINOVANA TERAPIJA
Jedinjenja iz pronalaska mogu se kombinovati sa jednim jedinjenjem ili više drugih jedinjenja iz pronalaska ili sa jednim terapijskim agensom ili više drugih terapijskih agenasa, ili kao bilo koja njihova kombinacija, u lečenju ovde navedenih bolesti i poremećaja. Na primer, jedinjenje iz pronalaska može se primenjivati istovremeno, sekvencijalno ili odvojeno u kombinaciji sa drugim terapijskim agensima za koje se zna da su korisni za lečenje bolesti ili poremećaja izabranih od onih gore navedenih.
U smislu ovog dokumenta, „kombinacija” se odnosi na bilo koju mešavinu ili permutaciju jednog ili više jedinjenja iz pronalaska i jednog ili više drugih jedinjenja iz ovog pronalaska ili jednog ili više dodatnih terapeutskih agenasa. Ukoliko kontekst ne ukazuje drugačije, „kombinacija” može uključivati istovremenu ili sekvencijalnu isporuku jedinjenja iz pronalaska sa jednim agensom ili više terapijskih agenasa. Ukoliko kontekst ne ukazuje drugačije, „kombinacija” može uključivati dozne oblike jedinjenja iz ovog pronalaska sa drugim terapeutskim sredstvom. Ukoliko kontekst ne ukazuje drugačije, „kombinacija” može uključivati puteve davanja jedinjenja iz pronalaska sa drugim terapijskim sredstvom. Ukoliko kontekst ne ukazuje drugačije, „kombinacija” može uključivati formulacije jedinjenja iz ovog pronalaska sa drugim terapijskim sredstvom. Dozni oblici, načini primene i farmaceutske kompozicije uključuju one koji su ovde opisani.
U nekim otelotvorenjima, ovde navedeno jedinjenje se može kombinovati sa drugim terapeutski aktivnim agensom, kao što je navedeno u WO 2016/027253. U takvim otelotvorenjima, jedinjenje koje inhibira RIP1 kinazu u kombinacijama navedenim u WO 2016/027253 zamenjuje se jedinjenjem formule I iz predmetnog pronalaska.
U nekim otelotvorenjima, ovde navedeno jedinjenje se može kombinovati sa inhibitorom DLK za lečenje neurodegenerativnih bolesti i poremećaja, kao što su oni navedeni na drugim mestima u ovom dokumentu, uključujući sledeće: Parkinsonovu bolest, demenciju sa Levijevim telima, multipla sistemsku atrofiju, Parkinson-plus sindrome, Alchajmerovu bolest, frontotemporalnu demenciju, demijelinizacijske bolesti kao što su multipla skleroza, amiotrofična lateralna skleroza, spinalnu mišićnu atrofiju, primarnu lateralnu sklerozu, Hantingtonovu bolest, ishemiju, moždani udar, intrakranijalno krvarenje, cerebralno krvarenje, mišićnu distrofiju, progresivnu mišićnu atrofiju, pseudobulbarnu paralizu, progresivnu bulbarnu paralizu, spinalnu mišićnu atrofiju, nasleđenu mišićnu atrofiju, periferne neuropatije, progresivnu supranuklearnu paralizu i kortikobazalnu degeneraciju. DLK inhibitori su opisani, na primer, u WO 2013/174780, WO 2014/177524, WO 2014/177060, WO 2014/111496, WO 2015/091889 i WO 2016/142310.
PRIMERI
Pronalazak će se u potpunosti bolje shvatiti kroz primere koji slede.
Ovi primeri služe kao smernice iskusnom stručnjaku za pripremu i korišćenje jedinjenja, kompozicija i metoda pronalaska.
Hemijske reakcije u opisanim primerima mogu se lako prilagoditi za pripremu niza drugih jedinjenja pronalaska, a alternativne metode pripreme jedinjenja ovog pronalaska se smatraju obuhvaćenim opsegom ovog pronalaska. Na primer, sinteza neilustrovanih jedinjenja shodno pronalasku može se uspešno izvršiti modifikacijama koje su jasne stručnjacima iz ove oblasti, na primer, odgovarajućom zaštitom interferentnih grupa, korišćenjem drugih pogodnih reagensa poznatih u ovoj oblasti koji nisu ovde opisani, i/ili rutinskim modifikacijama uslova reakcije.
U primerima u nastavku, osim ako nije drugačije naznačeno, sve temperature su navedene u stepenima Celzijusa. Komercijalno dostupni reagensi su nabavljeni od dobavljača kao što su Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI ili Maybridge i korišćeni su bez daljeg prečišćavanja, osim ako nije drugačije naznačeno. Reakcije navedene u nastavku su uopšteno obavljene pod pozitivnim pritiskom azota ili argona ili sa epruvetom za sušenje (osim ako nije drugačije navedeno) u bezvodnim rastvaračima, a reakcione tikvice su obično opremljene gumenim septama za unošenje supstrata i reagenasa putem šprica. Stakleno posuđe je sušeno u sušnici i/ili je sušeno toplotom.<1>H NMR spektri su dobijeni u deuterisanim rastvorima rastvarača CDCl3, d6-DMSO, CH3OD ili d6-aceton (izražavaju se u ppm) korišćenjem trimetilsilana (TMS) ili rezidualnih nedeuterisanih pikova rastvarača kao referentnog standarda. Kada se izražavaju multipliciteti pikova, koriste se sledeće skraćenice: s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet, br (proširen), dd (dublet dubleta), dt (dublet tripleta). Konstante sprege, kada su date, izražavaju se u Hz (Herc).
Sve skraćenice koje se koriste za opisivanje reagenasa, uslova reakcije ili opreme imaju za cilj da budu u skladu sa definicijama navedenim u sledećoj listi skraćenica. Hemijski nazivi diskretnih jedinjenja pronalaska su obično dobijeni korišćenjem funkcije imenovanja strukture ChemDraw programa za imenovanje.
Skraćenice
ACN Acetonitril
Boc terc-butoksikarbonil
DAST Dietilaminosumpor trifluorid
DCE 1,2-dihloretan
DCM Dihlormetan
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO Dimetil sulfoksid
DPPH 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil
HPLC Tečna hromatografija visokih performansi
LCMS Tečna hromatografija sa masenom spektrometrijom
PCC Piridinijum hlorhromat
RP Obrnuta faza
RT ili RTVreme zadržavanja
SEM 2-(trimetilsilil)etoksimetil
SFC Superkritična tečna hromatografija
TFA Trifluorsirćetna kiselina
THF Tetrahidrofuran
SINTETIČKE ŠEME
Pored specifičnih sintetičkih metoda iz primera u nastavku, mogu se pripremiti dodatna jedinjenja iz premetnog pronalaska, na primer, prema sledećim sintetičkim šemama.
Nakon praćenja koraka 1-5 Metode 9 u nastavku, prati se Šema 1 za pripremu gemdifluroro ostataka:
Šema 2 se prati za pripremu dodatne raznolikosti B prstena jedinjenja formule I koristeći različite nukleofile, uključujući izvore halida i cijanida:
Šema 3 se prati za pripremu jedinjenja supstituisanih gem-dimetil B prstenom formule I:
Sledeći intermedijeri korišćeni u primerima u nastavku su pripremljeni u skladu sa procedurama opisanim u WO 2017/004500:
Ako nije navedeno u specifičnoj metodi, bilo koji korišćeni N-metoksi-N-metil-alkil, aril, heteroaril ili heterociklični karboksamid je pripremljen na isti način kao i cis-2-fluor-N-metoksi-N-metil ciklopropankarboksamid u Metodi 5 u nastavku.
Metod 1: Primeri jedinjenja 1 i 2
Primer 1 Primer 2
[(1S,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1R,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,53 mmol) i cis-2-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (157 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (12 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,64 ml, 1,60 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45%/0,225% HCl u vodi). Racemska supstanca je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1S,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,635 min) (4,0 mg, 2,5%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,39 (m, 3H), 7,30–7,28 (m, 2H), 6,20–6,18 (m, 0,5H), 6,06–6,04 (m, 0,5H), 5,65–5,64 (m, 1H), 5,04–5,02 (m, 0,5H), 4,90–4,87 (m, 0,5H), 3,80–3,74 (m, 1H), 3,25–3,21 (m, 1H), 2,88–2,81 (m, 1H), 2,03–1,96 (m, 1H), 1,34– 1,28 (m, 1H). LCMS RT= 1,662 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,662 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
[(1R,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,995 min) (15,9 mg, 10%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,38 (m, 3H), 7,30–7,28 (m, 2H), 6,21–6,18 (m, 0,5H), 6,06–6,05 (m, 0,5H), 5,66–5,65 (m, 1H), 5,05–5,04 (m, 0,5H), 4,90–4,87 (m, 0,5H), 3,82–3,74 (m, 1H), 3,23–3,20 (m, 1H), 2,88–2,82 (m, 1H), 2,02–1,96 (m, 1H), 1,34– 1,30 (m, 1H). LCMS RT= 1,654 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,654 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel OD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B:izopropanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone 35 °C.
Metod 2: Primeri jedinjenja 3 i 4
Primer 3 Primer 4
[(1S,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1R,2R)-2-fluorciklopropil]-[(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) (5R,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,53 mmol) i cis-2-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (156,5 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,64 ml, 1,60 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (30 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [cis-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (35 mg, 22,5%) u vidu čvrste supstance ružičaste boje. Racemska supstanca je odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1S,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 4,787 min) (5,9 mg, 17%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44−7,39 (m, 3H), 7,28−7,27 (m, 2H), 6,13−6,11 (m, 1H), 5,99−5,97 (m, 1H), 5,53−5,49 (m, 1H), 3,69−3,61 (m, 1H), 3,27−3,24 (m, 1H), 3,03−2,96 (m, 1H), 2,23−2,15 (m, 1H), 1,29−1,24 (m, 1H). LC-MS RT= 0,846 min, m/z = 289,9 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,846 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
4
[(1R,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 5,711 min) (11,7 mg, 33%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44−7,37 (m, 3H), 7,28−7,27 (m, 2H), 6,13−6,11 (m, 1H), 5,99−5,97 (m, 1H), 5,53−5,50 (m, 1H), 3,69−3,63 (m, 1H), 3,27−3,23 (m, 1H), 3,03−2,96 (m, 1H), 2,23−2,16 (m, 1H), 1,29−1,24 (m, 1H). LC-MS RT= 0,849 min, m/z = 289,9 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,849 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel OD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:izopropanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 35 °C.
Prečišćavanje hiralnom SFC i analitički uslovi:
U metodama datim u sledećoj tabeli, rastvarač A je ugljen dioksid, a rastvarač B je 0,1% NH4(vod.) u CH3OH.
Metoda SP 5
Primer 5
2-hidroksi-2-metil-1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Proizvoljno dodeljeni 2-hidroksi-2-metil-1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (10,94 mg, prinos 43%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,50−7,33 (m, 2H), 7,29−7,14 (m, 2H), 6,40−6,05 (m, 1H), 5,81−5,63 (m, 1H), 5,23 (s, 1H), 2,98−2,56 (m, 1H), 1,51 (s, 3H), 1,48 (s, 3H). LC-MS RT= 4,029 min, m/z = 290,1 (M+H)<+>.
Metoda SP 6
Primer 6
2-hidroksi-2-metil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Proizvoljno dodeljeni 2-hidroksi-2-metil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (11,1 mg, prinos 43%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47−7,31 (m, 3H), 7,30−7,12 (m, 2H), 6,37−6,01 (m, 1H), 5,82−5,53 (m, 1H),
4
5,23 (s, 1H), 2,85−2,59 (m, 1H), 1,52−1,47 (m, 6H). LC-MS RT= 4,029 min, m/z = 290,1 (M+H)<+>.
Metoda SP 37
Primer 37
2,2-dimetil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Proizvoljno dodeljeni 2,2-dimetil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (2,84 mg, prinos 48%). LC-MS RT= 5,26 min, m/z = 288,1 (M+H)<+>.
Metoda SP 38
Primer 38
2,2-dimetil-1-[rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Proizvoljno dodeljeni 2,2-dimetil-1-[rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (4,2 mg, prinos 77%). LC-MS RT= 5,26 min, m/z = 288,1 (M+H)<+>.
Metoda SP 39
Primer 39
(1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Proizvoljno dodeljeni (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (19,23 mg, prinos 77%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,69 (s, 1H), 8,18 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,48−7,34 (m, 3H), 7,30−7,22 (m, 2H), 6,43−6,09 (m, 1H), 5,88−5,62 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,87−3,58 (m, 1H). LC-MS RT= 3,99 min, m/z = 312,1 (M+H)<+>.
Metoda SP 40
Primer 40
(1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Proizvoljno dodeljeni (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (20,4 mg, prinos 82%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,68 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,48−7,33 (m, 3H), 7,32−7,06 (m, 2H), 6,43−6,08 (m, 1H), 5,92−5,62 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,96−2,57 (m, 1H). LC-MS RT= 3,99 min, m/z = 312,1 (M+H)<+>.
Metod 3
Primer 7
2-fenil-1-[rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]etanon
U rastvor etil [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,363 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) dodat je benzilmagnezijum hlorid (2 M u tetrahidrofuranu, 0,20 ml, 0,400 mmol) na -78 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (1 ml). Smeša je ekstrahovana izopropil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% izopropil acetat u heptanu), dajući 2-fenil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon u vidu čvrste supstance bele boje (80 mg, prinos 69%). LCMS RT= 5,24 min, m/z = 322,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 10 minuta) retenciono vreme 5,24 min, ESI+ nađeno [M+H] = 322,1
Metod 4
4
Primer 8 Primer 9
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) (5R,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,53 mmol) i trans-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (156 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanu, 0,64 ml, 1,60 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (30 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [trans-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (35 mg, 23%) u vidu čvrste supstance ružičaste boje. Racemska supstanca je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,836 min) (14,3 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,39 (m, 3H), 7,28–7,27 (m, 2H), 6,13–5,97 (m, 1H), 5,54–5,51 (m, 1H), 5,02–4,84 (m, 1H), 3,69–3,53 (m, 2H), 3,03–2,97 (m, 1H), 1,70–1,63 (m, 2H). LC-MS RT= 0,866 min, m/z = 289,9 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,866 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,725 min) (11,3 mg, 32%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,39 (m, 3H), 7,28–7,27 (m, 2H), 6,12–5,97 (m, 1H), 5,54–5,50 (m, 1H), 5,03–4,87 (m, 1H), 3,69–3,51 (m, 2H), 3,04–2,97 (m, 1H), 1,70–1,62 (m, 2H). LC-MS RT= 0,865 min, m/z = 289,9 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,865 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
4
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:metanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min.
Metod 5
Primer 10
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2S)-2-fluorciklopropil]metanon
Korak 1: cis-2-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid
Smeša cis-2-fluorciklopropankarboksilne kiseline (500 mg, 4,80 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (610 mg, 6,25 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilena]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (2375 mg, 6,25 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1552 mg, 12,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Smeša je sipana u vodu (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid (420 mg, 59%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,87−4,67 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 2,35−2,33 (m, 1H), 1,94−1,86 (m, 1H), 1,11−1,05 (m, 1H).
Korak 2: (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2S)-2-fluorciklopropil]metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro -5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i cis-2-fluor-N-metoksi -N-metilciklopropankarboksamida
4
(52 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanu, 0,21 ml, 0,53 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2S)-2-fluorciklopropil]metanon (2,0 mg, 4%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44−7,37 (m, 3H), 7,29−7,27 (m, 2H), 6,19−6,18 (m, 0,5H), 6,04−6,03 (m, 0,5H), 5,67−5,61 (m, 1H), 5,08−4,89 (m, 1H), 3,81−3,70 (m, 1H), 3,26−3,16 (m, 1H), 2,91−2,75 (m, 1H), 2,07−1,90 (m, 1H), 1,36−1,29 (m, 1H). LCMS RT= 1,038 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,038 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Metod 6
Primer 11
(2,2-difluorciklopropil)-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: 2,2-difluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid
Smeša 2,2-difluorciklopropankarboksilne kiseline (300 mg, 2,46 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (312 mg, 3,19 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1214 mg, 3,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (794 mg, 6,14 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešana je tokom 12 h na 25 °C. Smeša je sipana u vodu (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 2,2-difluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid (200 mg, 49%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT=
4
0,427 min, m/z = 166,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,427 min, ESI+ nađeno [M+H] = 166,1.
Korak 2:
(2,2-difluorciklopropil)-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil -6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i 2,2-difluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (59 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanu, 0,25 ml, 0,62 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući (2,2-difluorciklopropil)-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (10,6 mg, 19%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44−7,39 (m, 3H), 7,30−7,29 (m, 2H), 6,21−6,05 (m, 1H), 5,69−5,64 (m, 1H), 3,84−3,74 (m, 2H), 2,90−2,82 (m, 1H), 2,32−2,27 (m, 1H), 1,97−1,90 (m, 1H). LCMS RT= 0,875 min, m/z = 307,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,875 min, ESI+ nađeno [M+H] = 307,9.
Metod 7
Primer 12
fenil-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Fenil-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon je pripremljen iz etil [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata i fenilmagnezijuma u skladu sa metodom 3. Sirovi ostatak je
4
prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% izopropil acetat u heptanu), dajući konačni proizvod (17 mg, 30%) u vidu čvrste supstance bele boje. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,20–8,12 (m, 2H), 7,74–7,65 (m, 1H), 7,61–7.52 (m, 2H), 7,48–7,33 (m, 3H), 7,32–7,24 (m, 2H), 6,28 (ddd, J = 56,4, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,78 (ddd, J = 8,5, 6,5, 3,1 Hz, 1H), 3,78 (dddd, J = 25,8, 15,4, 8,5, 7,1 Hz, 1H), 2,74 (dddd, J = 26,7, 15,2, 3,2, 2,0 Hz, 1H). LC-MS RT= 5,04 min, m/z = 308,1 (M+H)<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 10 minuta) retenciono vreme 5,04 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.1
Metod 8
Korak 1: (E)-benzaldehid oksim
U rastvor benzaldehida (45,0 g, 424,1 mmol) u etanolu (100 ml) dodat je natrijum karbonat (112,3 g, 1060,1 mmol) i hidroksilamin hidrohlorid (35,3 g, 508,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (60 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (E)-benzaldehid oksim u vidu bezbojnog ulja (51,0 g, 99%), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2: metil 3-fenil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U rastvor (E)-benzaldehid oksima (20,0 g, 165,1 mmol) u 1,4-dioksanu (500 ml) dodat je metil akrilat (14,2 g, 165,1 mmol), natrijum jodid (24,7 g, 165,1 mmol), 2,6-lutidin (17,6 g, 165,1 mmol) i terc-butil estar hipohlorne kiseline (17,9 g, 165,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 24 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-fenil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat u vidu čvrste supstance žute boje (25,0 g, 74%). LCMS RT= 0,871 min, m/z = 206,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,871 min, ESI+ nađeno
Korak 3: 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-on
Smeša metil 3-fenil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (25,0 g, 121,8 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 2,5 g) u etanolu (800 ml) hidrogenizovana je (50 psi) na 25 °C tokom 2 sata, a zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu čvrste supstance žute boje (18,0 g, 83%), koji se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,270 min, m/z = 177,8 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,270 min, ESI+ nađeno [M+H] =177,8.
Korak 4: cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on i trans-3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on
U rastvor 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (15,0 g, 84,6 mmol) u dihlormetanu (300 ml) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (19,1 g, 126,9 mmol) i imidazol (11,5 g, 169,3 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući
cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu bezbojnog ulja (12,4 g, 51%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,37–7,25 (m, 5H), 4,88–4,53 (m, 1H), 4,54–4,46 (m, 1H), 2,89–2,79 (m, 1H), 1,80–1,71 (m, 1H), 0,93–0,90 (m, 9H), 0,19–0,12 (m, 6H) i trans-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu bezbojnog ulja (9,3 g, 38%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44–7,34 (m, 2H), 7,29–7,24 (m, 3H), 4,87–4,80 (m,
1
1H), 4,44–4,41 (m, 1H), 2,45–2,37 (m, 1H), 2,27–2,22 (m, 1H), 0,93–0,90 (m, 9H), 0,16–0,13
Korak 5: cis-1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on
U rastvor cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (12,4 g, 42,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (400 ml) polako je dodat natrijum hidrid (60%, 2,6 g, 64,1 mmol) na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 20 min, a zatim je dodat O-(difenilfosforil)hidroksilamin (14,9 g, 64,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu žutog ulja (9,5 g, 73%), koje se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,877 min, m/z = 307,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,877 min, ESI+ nađeno [M+H] =307,0.
Korak 6: etil 2-[[cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-fenil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat
U rastvor cis-1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (9,5 g, 31,0 mmol) u etanolu (250 ml) dodat je etil 2-etoksi-2-imino-acetat (6,7 g, 46,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 6 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-[[cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-fenil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat u vidu žutog ulja (10,6 g, 84%), koje se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 2,106 min, m/z = 406,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 2,106 min, ESI+ nađeno [M+H] =406,2.
2
Korak 7: etil cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 2-[[cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-fenil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (10,6 g, 26,1 mmol) u toluenu (200 ml) dodata je p-toluensulfonska kiselina (4,5 g, 26,1 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 120 °C tokom 24 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 80% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-7-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat u vidu čvrste supstance bele boje (6,5 g, 64%), koja se u takvom stanju koristi za sledeći korak.
Korak 8: etil cis-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 2-[[cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-fenil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (3,1 g, 7,6 mmol) i terc-butilamonijum fluorida (1,0 M u THF-u, 7,6 ml, 7,6 mmol) u tetrahidrofuranu (60 ml) zagrevana je na 60 °C tokom 18 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat u vidu čvrste supstance bele boje (1,4 g, 69%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,39–7,32 (m, 5H), 5,73 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,50 (m, 1H), 4,41 (q, J
= 7,1 2,76 (td, J = 4,5 Hz, 13,9 Hz, 1H), 1,35 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Korak 1: trans-etil 7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor cis-etil-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,37 mmol) u dihlormetanu (8 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (176,9 mg, 1,10 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,5), dajući trans-etil-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (30 mg, 30%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40–7,37 (m, 3H), 7,14–7,12 (m, 2H), 6,14 (d, J = 5,2 Hz, 0,5H), 6,00 (d, J = 5,2 Hz, 0,5H), 5,74–5,71 (m, 1H), 4,51–4,45 (m, 2H), 3,42– 3,35 1,42 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Korak 2: trans-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
U rastvor trans-etil-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (30 mg, 0,11 mmol) u tetrahidrofuranu (4 ml) i vodi (1 ml) dodat je litijum hidroksid monohidrat (14 mg, 0,33 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 5 dodavanjem hlorovodonične kiseline (2 N). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu trans-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu u vidu čvrste supstance bele boje (13 mg, 48%), koja se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
1-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) trans-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (15 mg, 0,05 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je etilmagnezijum bromid (3 M u THF-u, 0,03 ml, 0,10 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim
4
pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 34-64% / 0,05% hidrohlorid u vodi), dajući 1-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (7,4 mg, 50%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,38 (m, 3H), 7,30–7,26 (m, 2H), 6,27–6,26 (m, 0,5H), 6,14–6,12 (m, 0,5H), 5,87–5,84 (m, 1H), 3,44–3,41 (m, 1H), 3,12–3,02 (m, 3H), 1,16 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,840 min, m/z = 260,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,840 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,1.
Metod 9
Primer 14
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[1-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
Korak 1: 3,5-dibrom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol
U rastvor 3,5-dibrom-1h-1,2,4-triazola (150,0 g, 661,2 mmol) u tetrahidrofuranu (1500 ml) polako je dodata p-toluensulfonska kiselina (17,1 g, 99,2 mmol), a zatim 3,4-dihidro-2hpiran (166,9 g, 1983,6 mmol) na 0 °C. Nakon dodavanja, reakciona smeša je zagrevana na 70 °C tokom 3 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je sipan u vodu (500 ml) i podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je ispran metanolom (2 × 50 ml), osušen pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol (155 g, 75%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,49–5,46 (m, 1H), 4,12–3,99 (m, 1H), 3,72–3,61 (m, 1H), 2,38–2,26 (m, 1H),
Korak 2: 1-fenilbut-3-en-1-ol
U ohlađeni rastvor (0 °C) benzaldehida (130 g, 1,23 mol) u tetrahidrofuranu (1000 ml) dodat je alilmagnezijum hlorid (2 M u THF-u, 858 ml, 1,72 mol) tokom 30 minuta. Nakon dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana tokom 2 h. Smeša je zatim deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (1000 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 1-fenilbut-3-en-1-ol (140 g, 77%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,37– 7,34 (m, 4H), 7,29–7,26 (m, 1H), 5,83–5,75 (m, 1H), 5,21–5,08 (m, 2H), 4,76–4,69 (m, 1H), 2,55–2,45 (m, 2H), 2,12 (d, J = 2,8 Hz, 1H).
Korak 3: terc-butildimetil((1-fenilbut-3-en-1-il)oksi)silan
U rastvor 1-fenil-3-buten-1-ola (29,0 g, 195,7 mmol) u dihlormetanu (400 ml) uz mešanje je dodat imidazol (27,0 g, 391,6 mmol) i terc-butildimetilhlorsilan (39,0 g, 254,4 mmol). Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (200 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 100% petrol etar), dajući terc-butildimetil-(1-fenilbut-3-enoksi)silan (43,0 g, 84%) u vidu bezbojnog ulja, koje se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 4: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fenilpropanal
U rastvor terc-butil-dimetil-(1-fenilbut-3-enoksi)silana (50,0 g, 190,5 mmol) u tetrahidrofuranu/vodi (600 ml; 1: 1) dodat je osmijum tetraoksid (968 mg, 3,8 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, dodavan je natrijum perjodat (163 g, 762,0 mmol) u malim porcijama tokom 2 sata. Dobijena smeša je mešana još 2 sata na 30 °C i zatim je deaktivirana dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (500 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-fenil-propanal (33,0 g, 65%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,94 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 4,2 Hz, 4H), 7,44-7,39 (m, 1H), 5,37-5,34 (m, 1H), 2,99-2,97 (m, 1H), 2,80-2,75 (m, 1H), 1,01 (s, 9H), 0,19 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
Korak 5:
1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-fenilpropan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (39,0 g, 125,4 mmol) u tetrahidrofuranu (400 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanu, 55,0 ml, 137,5 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min, a zatim je ukapavanjem dodat rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-fenil-propanala (33,0 g, 124,2 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (500 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fenilpropan-1-ol (50,0 g, 80%) u vidu svetložutog ulja.
Korak 6: trans-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol U rastvor 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-fenilpropan-1-ola (50,0 g, 100,7 mmol) u dihlormetanu (150 ml) uz mešanje je polako dodata trifluorsirćetna kiselina (150 ml). Dobijena smeša je zagrevana na 50 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlormetanom (3 × 200 ml).
Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 32% etil acetat u petrol etru), dajući trans-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (5,5 g, 20%) u vidu čvrste supstance žute boje (Druga frakcija (8,5 g, 30%) takođe je dobijena kao smeša trans/cis proizvoda u razmeri 4:3.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,46–7,32 (m, 3H), 7,15 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 5,65 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,50 (br s, 1H), 5,45 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,19–3,11 (m, 1H), 3,01–2,92 (m, 1H). LCMS RT = 0,682 min, m/z = 279,8 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,682 min, ESI+ nađeno [M H] = 279,8.
Korak 7: (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol i (SR,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol
U rastvor trans-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-ola (3,0 g, 10,71 mmol) u dihlormetanu (60 ml) uz mešanje je polako dodat dietilaminosumpor trifluorid (7,8 g, 48,19 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2,5 h, a zatim polako uz mešanje dodata u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (100 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući racemski cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (1,5 g, 49%) u vidu svetložute čvrste supstance i racemski trans-2-brom-7-fluor-5-fenil -6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (650 mg, 21%) u vidu čvrste supstance bele boje.
cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,31-7,24 (m, 3H), 7,17-7,07 (m, 2H), 5,97-5,77 (m, 1H), 5,37-5,27 (m, 1H), 3,52-3,37 (m, 1H), 2,84-2,70 (m, 1H). LCMS RT= 0,632 min, m/z = 281,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,632 min, ESI+ nađeno [M H] = 281,9.
trans-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,58–7,29 (m, 3H), 7,24–7,05 (m, 2H), 6,14–5,93 (m, 1H), 5,70–5,65 (m, 1H), 3,41–3,25 (m, 1H), 3,04–2,87 (m, 1H).
Racemska cis supstanca je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(5R,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol (pik 1, retenciono vreme = 2,963 min) (350 mg, 44%) u vidu čvrste supstance bele boje.
(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 3,174 min) (350 mg, 44%) u vidu čvrste supstance bele boje.
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 min i zadržan 40% tokom 2,5 min, zatim 5% B tokom 2,5 min protok: 2,5 ml/min.
Korak 8: N-metoksi-N-metil-1-(trifluormetil)ciklopropankarboksamid Smeša 1-(trifluormetil)ciklopropankarboksilne kiseline (400 mg, 2,60 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (329 mg, 3,37 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1283 mg, 3,37mmol) i N,N-diizopropiletilamina (838 mg, 6,49 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 25% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metil-1-(trifluormetil)ciklopropankarboksamid (330 mg, 64%) u vidu svetlog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,74 (s, 3H), 3,29 (s, 3H), 1,37–1,17 (m, 4H).
Korak 9:
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[1-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil -6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i N-metoksi-N-metil-1(trifluormetil)ciklopropankarboksamida (70 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (4 ml) dodat je n-butil litijum(2,5 M u heksanima, 0,1 ml, 0,25 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC ((acetonitril 45-75%/0,05% amonijum hidroksid u vodi)), dajući proizvoljno dodeljeni (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[1-(trifluormetil)ciklopropil]metanon (14,1 mg, 23%) u vidu čvrste supstance crvene boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,35 (m, 3H), 7,24–7,22 (m, 2H), 6,15–5,99 (m, 1H), 5,61– 5,60 (m, 1H), 3,77–3,68 (m, 1H), 2,84–2,77 (m, 1H), 2,27–2,17 (m, 2H), 1,60–1,55 (m, 2H). LC-MS RT= 0,933 min, m/z = 339,9 [M+H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 0,933 min, ESI+ nađeno [M+H] = 339,9.
Metod 10
Primer 15
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(3-metiloksetan-3-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N,3-dimetil-oksetan-3-karboksamid
Smeša 3-metiloksetan-3-karboksilne kiseline (300 mg, 2,58 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (328 mg, 3,36 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1277 mg, 3,36 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (835 mg, 6,46 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Smeša je sipana u vodu (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N,3-dimetil-oksetan-3-karboksamid (120 mg, 29,2%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,97 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 4,30 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 1,67 (s, 3H).
Korak 2:
(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(3-metiloksetan-3-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil -6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (40 mg, 0,14 mmol) i N-metoksi-N,3-dimetil-oksetan-3-karboksamida (45 mg, 0,28 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,17 ml, 0,43 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući (rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(3-metiloksetan-3-il)metanon (11,5 mg, 27%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,37 (m, 3H), 7,26–7,23 (m, 2H), 6,17–6,01 (m, 1H), 5,65–5,63 (m, 1H), 5,08–5,03 (m, 2H), 4,52–4,48 (m, 2H), 3,78–3,70 (m, 1H), 2,86–2,76 (m, 1H), 1,75 (s, 3H). LCMS RT= 0,816 min, m/z = 302,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,816 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,0.
Metod 11
Primer 16
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2R)-2-fluorciklopropil]metanon
1
Korak 1: trans-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid Smeša trans-2-fluorciklopropan-1-karboksilne kiseline (100 mg, 0,96 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (122 mg, 1,25 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (475 mg, 1,25 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (310 mg, 2,40 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Smeša je sipana u vodu (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući trans-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid (70 mg, 50%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,89–4,71 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 2,62–2,60 (m, 1H), 1,48–1,35 (m, 2H). LCMS RT= 0,292 min, m/z = 148,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,292 min, ESI+ nađeno [M+H] = 148,1.
Korak 2: (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2R)-2-fluorciklopropil]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (40 mg, 0,14 mmol) i trans-2-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (42 mg, 0,28 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,07 ml, 0,18 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2R)-2-fluorciklopropil]metanon (3,3 mg, 7,6%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42–7,37 (m, 3H), 7,28–7,27 (m, 2H), 6,13–5,97 (m, 1H), 5,54–5,52 (m, 1H), 5,03–4,85 (m, 1H), 3,71–3,51 (m, 2H), 3,04– 2,94 (m, 1H), 1,70–1,62 (m, 2H). LCMS RT= 0,862 min, m/z = 289,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,862 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
2
Metod 12
Primer 17
1-(7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-il)propan-1-on
Korak 1: 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol
U rastvor imidazola (40,0 g, 587,5 mmol), sirćetne kiseline (1,8 ml) i 1,4-dioksana (600 ml) dodat je akrolein (58,8 ml, 881,3 mmol). Dobijena smeša je mešana na 110 °C tokom 24 h i ohlađena na 0 °C. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana petrol etrom (200 ml), dajući sirovi 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol (50,0 g, 69%) u vidu čvrste supstance bele boje. Koristi se u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 2: 3-hlor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol
U rastvor 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ola (10,0 g, 80,6 mmol) u dihlormetanu (300 ml) dodat je N-hlorsukcinimid (10,8 g, 80,6 mmol). Smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% metanol u dihlormetanu), dajući 3-hlor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol (8,0 g, 63%) u vidu čvrste supstance bele boje, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 3: 3-hlor-2-jod-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol
U rastvor 3-hlor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ola (5,6 g, 35,3 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) dodat je N-jodsukcinimid (8,3 g, 37,1 mmol). Smeša je zagrevana na 60 °C tokom 3 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, f100-200 meša, 0 do 10% metanol u dihlormetanu), dajući 3-hlor-2-jod-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ol (5,3 g, 53%) u vidu svetložute čvrste supstance, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 4: 3-hlor-2-jod-SH-pirolo[1,2-a]imidazol-7(6H)-on
U rastvor 3-hlor-2-jod-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-7-ola (5,3 g, 18,6 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je mangan dioksid (8,1 g, 93,2 mmol). Smeša je zagrevana na 40 °C tokom 5 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-hlor-2-jod-5,6-dihidropirolo[1,2-a]imidazol-7-on (3,2 g, 61%) u vidu čvrste supstance smeđe boje, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 5: N-[(Z)-(3-hlor-2-jod-5,6-dihidropirolo[1,2-a]imidazol-7-iliden)amino]-4-metil-benzensulfonamid
Smeša 4-metilbenzensulfonohidrazida (2,1 g, 11,3 mmol) i 3-hlor-2-jod-5,6-dihidropirolo[1,2-a]imidazol-7-ona (3,2 g, 11,3 mmol) u etanolu (70 ml) zagrevana je na 90 °C tokom 7 h i ohlađena na 15 °C. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod sniženim pritiskom, dajući sirovi N-[(Z)-(3-hlor-2-jod-5,6-dihidropirolo[1,2-a]imidazol-7-iliden)amino]-4-metil-benzensulfonamid (2,8 g, 54%) u vidu bledozelene čvrste supstance, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 6: 3-hlor-2-jod-7-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-a]imidazol
Smeša N-[(Z)-(3-hlor-2-jod-5,6-dihidropirolo[1,2-a]imidazol-7-iliden) amino]-4-metil-benzensulfonamida (1,8 g, 3,88 mmol), fenilboronske kiseline (710 mg, 5,82 mmol), kalijum karbonata (1,6 g, 11,65 mmol) u 1,4-dioksanu (40 ml) zagrevana je na 110 °C tokom 18 h u atmosferi N2. Smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 3-hlor-2-jod-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (200 mg, 15%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LCMS RT= 0,879 min, m/z = 334,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,879 min, ESI+ nađeno [M+H] = 334,9.
4
Korak 7: metil 3-hlor-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilat Smeša 3-hlor-2-jod-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola (200 mg, 0,58 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II) dihlorid dihlormetana (24 mg, 0,03 mmol) i trietilamina (0,4 ml, 2,9 mmol) u N,N-dimetilformamidu (24 ml) / metanolu (8 ml) zagrevana je na 90 °C tokom 18 h u atmosferi CO (50 psi). Smeša je filtrirana kroz tanak sloj celita, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući metil 3-hlor-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilat (140 mg, 87%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LCMS RT= 0,676 min, m/z = 277,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,676 min, ESI+ nađeno [M+H] = 277,0
Korak 8: metil 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilat Smeša metil 3-hlor-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilata (120 mg, 0,43 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 103 mg, 0,10 mmol, 50% vlažan) u metanolu (50 ml) hidrogenizovana je (40 psi) na 50 °C tokom 24 sata, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi metil 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a] imidazol-2-karboksilat (100 mg, 95%) u vidu smeđeg ulja, koji se koristi u takvom stanju za sledeći korak.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,85-7,60 (m, 1H), 7,40-7,25 (m, 4H), 4,70-4,55 (m, 1H), 4,40-4,15 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,30- 3,20 (m, 1H), 2,75-2,70 (m, 1H), 1,70-1,60 (m, 1H). LCMS RT= 0,513 min, m/z = 243,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,513 min, ESI+ nađeno [M+H] = 243,1.
Korak 9: 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilna kiselina Smeša metil 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilata (100 mg; 0,41 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (118 mg, 2,89 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml), vodi (1 ml) i metanolu (2 ml) zagrevana je na 25 °C tokom 18 sati. Dodat je natrijum hidroksid (100 mg) i smeša je zagrevana na 40 °C tokom 2 h. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u vodi (5 ml) i podešen na pH = 3 dodavanjem 2 M HCl. Dobijena smeša je liofilizovana do suva, dajući sirovu 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilnu kiselinu (94 mg, 99%) u vidu čvrste supstance bele boje, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 10: N-metoksi-N-metil-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksamid
Smeša 7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksilne kiseline (60 mg, 0,26 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (77 mg, 0,79 mmol), trietilamina (0,11 ml, 0,79 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen] -1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (105 mg, 0,28 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) mešana je na 15 °C tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,5), dajući N-metoksi-N-metil-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksamid (70 mg, 98%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,506 min, m/z = 272,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,506 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,1.
Korak 11: 1-(7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-il)propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-70 °C) N-metoksi-N-metil-7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-karboksamida (50 mg, 0,18 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) dodat je etilmagnezijum bromid (3,0 M u THF-u, 0,61 ml, 1,83 mmol) u atmosferi N2. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (3 ml). Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući 1-(7-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-2-il)propan-1-on (4,6 mg, 9%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,35–7,31 (m, 2H), 7,30–7,21 (m, 3H), 4,42–4,38 (m, 1H), 4,25–4,23 (m, 1H), 4,20–4,11 (m, 1H), 3,12–3,10 (m, 1H), 2,89–2,83 (m, 2H), 2,58–2,50 (m, 1H), 1,14–1,10 (m, 3H). LCMS RT= 0,634 min, m/z = 241,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,634 min, ESI+ nađeno [M+H] = 241,1.
Metod 13
Primer 18
ciklopropil-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: trans-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša trans-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (50 mg, 0,20 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (46 mg, 0,24 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (5 mg, 0,04 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (12 mg, 0,20 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešana je na 20 °C tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,7), dajući trans-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (30 mg, 51%) u vidu čvrste supstance bele boje.
Korak 2: ciklopropil-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) trans-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (15 mg, 0,05 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je ciklopropilmagnezijum bromid (0,5 M u THF-u, 0,2 ml, 0,10 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65% / 0,05% hidrohlorid u vodi), dajući ciklopropil-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (7,6 mg, 50%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44−7,40 (m, 3H), 7,30−7,26 (m, 2H), 6,29−6,26 (m, 0,5H), 6,14−6,12 (m, 0,5H), 5,92−5,87 (m, 1H), 3,44−3,41 (m, 1H), 3,01−3,02 (m, 2H), 1,19−1,16 (m, 2H), 1,12−1,09 (m, 2H). LCMS RT= 0,849 min, m/z = 272,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,849 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,0.
Metod 14
Primer 19
1-(6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on
Korak 1: etil 3-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilat i etil 4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilat
U rastvor prop-2-in-1-ol (30,0 g, 535,14 mmol) u toluenu (300 ml) dodat je etil 2-diazoacetat (67,2 g, 588,66 mmol). Reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 5 h i ohlađena na sobnu temperaturu. Sirovi proizvod je sakupljen filtracijom i ispran 10% etil acetatom u petrol etru (50 ml), dajući smešu etil 4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilata (15,8 g, 17%) i etil 3-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilata (ne može da se razdvoji; 1:3, 63,1 g, 69%) u vidu svetložute čvrste supstance, koja se kao smeša koristi za sledeći korak.
etil 3-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilat (glavni izomer):<1>H NMR (DMSO-d6) 12,60 (1H, s, široki); 6,70 (1H, s); 4,70 (1H, s); 4,35 (2H, q, J= 7,0 Hz); 4,45 (1H, s, široki); 1,25 (3H, t, J= 7,0 Hz).
etil 4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilat (sporedni izomer):<1>H NMR (DMSO-d6) 12,60 (1H, s, široki); 7,65 (1H, s); 4,75 (1H, s); 4,35 (2H, q, J= 7,0 Hz); 4,13 (1H, s, široki); 1,25 (3H, t, J= 7,0 Hz).
Korak 2:etil 3-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-karboksilat i etil 4-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-karboksilat
Smeša etil 3-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilata i etil 4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-5-karboksilata (3:1, 4,0 g, 23,5 mmol), (2-(hlormetoksi)etil)trimetilsilana (11,2 ml, 70,5 mmol) i cezijum karbonata (45,9 g, 141,0 mmol) u acetonu (100 ml) mešana je na 25 °C tokom 3 h, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-pirazol-5-karboksilat i etil 4-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-karboksilat (ne može da se razdvoji, 3,7 g, 52%), koji se koristi kao smeša za sledeći korak. LC-MS RT= 0,855 min, m/z = 322,9 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,855 min, ESI+ nađeno [M+Na] = 322,9.
Korak 3: Etil 3-formil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-karboksilat U rastvor etil 3-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil) -1H-pirazol-5-karboksilata i etil 4-(hidroksimetil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-5-karboksilata (2,0 g, 6,66 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je mangan dioksid (7,0 g, 80,52 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 15 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući etil 5-formil-2-(2-trimetilsilil etoksimetil)pirazol-3-karboksilat (700 mg, 35%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,02 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 5,94 (s, 2H), 4,40 (q, J = 8,0 Hz, 2H), 3,69−3,60 (m, 2H), 1,40 (t, J = 8,0 Hz, 3H),
Korak 4: (E)-etil 3-(3-okso-3-fenilprop-1-en-1-il)-1H-pirazol-5-karboksilat
U rastvor etil 5-formil-2-(2-trimetilsililetoksimetil) pirazol-3-karboksilata (700 mg, 2,35 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je trimetil ((1-fenilvinil)oksi)silan (499 mg, 2,59 mmol) i titanijum tetrahlorid (875 mg, 4,61 mmol). Smeša je mešana na 40 °C tokom 48 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući (E)-etil 3-(3-okso-3-fenilprop-1-en-1-il)-1H-pirazol-5-karboksilat (310 mg, 49%) u vidu čvrste supstance žute boje. LC-MS RT= 0,853 min, m/z = 270,9 (M+H)<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,853 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,9.
Korak 5: etil 3-(3-hidroksi-3-fenilpropil)-1H-pirazol-5-karboksilat
Smeša (E)-etil 3-(3-okso-3-fenilprop-1-en-1-il)-1H-pirazol-5-karboksilata (310 mg, 1,15 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 122 mg) u metanolu (20 ml) hidrogenizovana je (15 psi) na 25 °C tokom 15 sati, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 3-(3-hidroksi-3-fenilpropil)-1H-pirazol-5-karboksilat (314 mg, 99%) u vidu svetložutog ulja. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak 6: etil 3-(3-hlor-3-fenilpropil)-1H-pirazol-5-karboksilat
U rastvor etil 3-(3-hidroksi-3-fenilpropil)-1H-pirazol-5-karboksilata (314 mg, 1,14 mmol) u acetonitrilu (5 ml) dodat je sumpor dihlorid (681 mg, 5,72 mmol). Smeša je zagrevana na 65 °C tokom 15 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 3-(3-hlor-3-fenilpropil)-1H-pirazol-5-karboksilat (335 mg, 100%) u vidu žutog ulja. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 0,861 min, m/z = 314,9 (M+H)<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,861 min, ESI+ nađeno [M+H] = 314,9.
Korak 7: etil 6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilat Smeša etil 3-(3-hlor-3-fenil-propil)-1H-pirazol-5-karboksilata (335 mg, 1,14 mmol) i cezijum karbonata (3,0 g, 9,21 mmol) u acetonitrilu (20 ml) mešana je na 15 °C tokom 15 h, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 25% etil acetat u petrol etru), dajući etil 6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilat (120 mg, 41%) u vidu svetložutog ulja. LC-MS RT= 0,824 min, m/z = 279,0 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,824 min, ESI+ nađeno [M+H] = 279,0.
Korak 8: 6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilna kiselina Smeša etil 6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilata (60 mg, 0,23 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (50 mg, 1,2 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml), metanolu (5 ml) i vodi (2 ml) mešana je na 25 °C tokom 3 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 5 dodatkom hlorovodonične kiseline (2 N). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu 6-fenil-5,6-dihidro-4H-
1
pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilnu kiselinu (30 mg, 56%) u vidu čvrste supstance žute boje, koja se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 9: N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamid
Smeša 6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilne kiseline (30 mg, 0,13 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (17 mg, 0,17 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksida heksafluorfosfata (65 mg, 0,17 mmol), N,N-diizopropiletilamina (42 mg, 0,33 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo [1,2-b]pirazol-2-karboksamid (25 mg, 70%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 0,952 min, m/z = 272,1 (M+H)<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,952 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,1.
Korak 10: 1-(6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamida (24 mg, 0,09 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (3,0 M u THF-u, 0,07 ml, 0,21 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on (13,0 mg, 61%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,39–7,30 (m, 3H), 7,11–7,09 (m, 2H), 6,60 (s, 1H), 5,54–5,50 (m, 1H), 3,11–3,01 (m, 3H), 2,95–2,89 (m, 2H), 2,52–2,48 (m, 1H), 1,11 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LC-MS RT= 1,858 min, m/z = 241,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80%
2
acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,858 min, ESI+ nađeno [M+H] = 214,2.
Metod 15
Primer 20 Primer 21
1-[(4S)-4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on i 1-[(4R)-4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo [5,1-c] [1,4] oksazin-2-il] propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-karboksilata (200 mg, 0,63 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (2 M u THF-u, 0,63 ml, 1,26 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 1-[4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on (120 mg, 70%) u vidu čvrste supstance bele boje. Ova racemska supstanca je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
1-[(4S)-4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on (pik 1, retenciono vreme = 2,979 min) (45,0 mg, 37%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,40–7,34 (m, 2H), 7,16–7,14 (m, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 4,42–4,18 (m, 4H), 2,96–2,92 (m, 2H), 1,10 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LC-MS RT= 1,761 min, m/z = 275,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,761 min, ESI+ nađeno [M+H] = 275,2.
1-[(4R)-4-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on (pik 2, retenciono vreme = 3,234 min) (52 mg, 43%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,40–7,34 (m, 2H), 7,16–7,14 (m, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 4,41–4,15 (m, 4H), 3,00–2,92 (m, 2H), 1,10 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LC-MSRT= 1,755 min, m/z = 275,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,752 min, ESI+ nađeno [M+H] = 275,2.
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B: etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 16
Primer 22
3-(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-3-okso-propannitril
Korak 1: cis-3-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-3-oksopropannitril
U ohlađeni rastvor (-78 °C) acetonitrila (298 mg, 7,27 mmol) u tetrahidrofuranu (15 ml) dodat je kalijum t-butoksid (611,4 mg, 5,45 mmol). Nakon 30 minuta mešanja, ukapavanjem je dodat etil cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (500 mg, 1,82 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana sporim dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-3-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-3-okso-propannitril (150 mg, 31%) u vidu čvrste supstance bele boje, koji se koristi u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 2: 3-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-3-okso-propannitril
U ohlađeni rastvor (0 °C) cis-3-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-3-okso-propannitrila (140 mg, 0,52 mmol) u N,N-dimetilformamidu (6 ml)
4
dodat je cezijum karbonat (422 mg, 1,30 mmol). Nakon 30 minuta mešanja, dodat je jodmetan (2800 mg, 19,7 mmol) i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 4 h. Smeša je zatim ugašena dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hifroksid u vodi), dajući 3-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-3-okso-propannitril (28,0 mg, 17%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44−7,38 (m, 3H), 7,27−7,25 (m, 2H), 6,15−6,13 (m, 0,5H), 6,01−5,99 (m, 0,5H), 5,57−5,56 (m, 1H), 3,74−3,63 (m, 1H), 3,06−2,95 (m, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,78 (s, 3H). LC-MS RT= 1,734 min, m/z = 299,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,734 min, ESI+ nađeno [M+H] = 299,2.
Metod 17
Primer 23 Primer 24
1-[(4S)-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]propan-1-on i 1-[(4R)-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]propan-1-on
Korak 1: N-metoksi-N-metil-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamid
Smeša 4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilne kiseline (93 mg, 0,41 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (80 mg, 0,81 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (163 mg, 0,43 mmol) i trietilamina (124 mg, 1,22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) mešana je na 25 °C tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (10% metanol u dihlormetanu, Rf= 0,7), dajući N-metoksi-N-metil -4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamid (100 mg, 91%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,593 min, m/z = 272,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,593 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,1.
Korak 2:
1-[(4S)-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]propan-1-on i 1-[(4R)-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) N-metoksi-N-metil-4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamida (100 mg, 0,37 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (2,7 M u THF-u, 0,54 ml, 1,47 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on (80 mg, 90%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance koja je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(R)-1-(4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on (pik 1, retenciono vreme = 2,581 min) (25,4 mg, 32%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,32–7,21 (m, 5H), 6,43 (s, 1H), 4,50–4,37 (m, 1H), 4,36–4,33 (m, 1H), 4,24–4,22 (m, 1H), 3,13–3,10 (m, 1H), 2,99–2,95 (m, 2H), 2,57–2,53 (m, 1H), 1,15 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,843 min, m/z = 240,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,843 min, ESI+ nađeno [M+H] = 240,9.
(S)-1-(4-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)propan-1-on (pik 2, retenciono vreme = 2,968 min) (22,7 mg, 28%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,35–7,22 (m, 5H), 6,43 (s, 1H), 4,51–4,38 (m, 1H), 4,37–4,33 (m, 1H), 4,25–4,22 (m, 1H), 3,14–3,12 (m, 1H), 3,02–2,96 (m, 2H), 2,58–2,54 (m, 1H), 1,16 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,838 min, m/z = 241,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,838 min, ESI+ nađeno [M+H] = 241,0.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralpak AD (250 mm*30 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O iPrOH; početak B 15% kraj B 15%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 18
Primer 25
1-(rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksi-2-metil-propan-1-on
U rastvor 1-[cis-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-2-metil-propan-1-ona (50 mg, 0,18 mmol) u dimetil sulfoksidu (4 ml) dodat je 1-brom-2,5-pirolidindion (33 mg, 0,18 mmol). Smeša je zagrevana tokom 15 h na 100 °C u atmosferi vazduha. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi) i dalje putem preparativne TLC (etil acetat, Rf= 0,6), dajući 1-(rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksi-2-metil-propan-1-on (48,6 mg, 91%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,37 (m, 3H), 7,27–7,25 (m, 2H), 6,20–6,03 (m, 1H), 5,66–5,57 (m, 1H), 3,79–3,71 (m, 1H), 2,87–2,77 (m, 1H), 1,60 (s, 3H), 1,56 (s, 3H). LC-MS RT= 0,771 min, m/z = 290,1 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,771 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Metod 19
Primer 26
(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon
Korak 1: cis-1-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-2-metilprop-2-en-1-on
Smeša cis-1-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il)propan-1-ona (120 mg, 0,46 mmol), dibrommetana (1931 mg, 11,11 mmol) i dietilamina (1625 mg, 22,22 mmol) u acetonitrilu (10 ml) zagrevana je na 100 °C tokom 30 min u mikrotalasnim uslovima. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući cis-1-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-metil-prop-2-en-1-on (52 mg, 41%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 1,020 min, m/z = 272,1 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,020 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,1.
Korak 2: (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon
U smešu dietil cinka (123 mg, 1,00 mmol) i nikl hlorida (8 mg, 0,07 mmol) u dihlormetanu (5 ml) dodat je dijod metan (355 mg, 1,33 mmol) na 0 °C. Nakon mešanja tokom 30 minuta, dodat je 1 -(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-metilprop-2-en-1-on (90 mg, 0,33 mmol) i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h. Smeša je deaktivirana dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% HCl u acetonitrilu), dajući (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon (3,0 mg, 3%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,41–7,37 (m, 3H), 7,24–7,23 (m, 2H), 6,15–6,13 (m, 0,5H), 6,01–5,99 (m, 0,5H), 5,60–5,59 (m, 1H), 3,76–3,68 (m, 1H), 2,84–2,74 (m, 1H), 1,82–1,76 (m, 2H), 1,41 (s, 3H), 0,97–0,92 (m, 2H). LC-MS RT= 1,068 min, m/z = 286,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,068 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1.
Metod 20
Primer 27 Primer 28
1-[(4S)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on i 1-[(4R)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c] [1,4]oksazin-2-il]propan-1-on
Korak 1: N-metoksi-N-metil-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4] oksazin-2-karboksamid
Smeša 4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-karboksilne kiseline (156 mg, 0,64 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (125 mg, 1,28 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksida heksafluorfosfata (291,42 mg, 0,77 mmol) i trietilamina (258 mg, 2,55 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešana je na 15 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (10% metanol u dihlormetanu, Rf= 0,7), dajući N-metoksi-N-metil-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-karboksamid (80 mg, 43,6%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2: 1-[(4S)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on i 1-[(4R)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c] [1,4]oksazin-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) N-metoksi-N-metil-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-karboksamida (60 mg, 0,21 mmol) u tetrahidrofuranu (6 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (2,7 M u THF-u, 0,39 ml, 1,04 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi racemski proizvod, koji je dalje odvojen hiralnim SFC-om dajući proizvoljno dodeljeni:
1-[(4S)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on (pik 1, retenciono vreme = 3,254 min) (11,5 mg, 21%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,39–7,37 (m, 5H), 6,21 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 4,42–4,36 (m, 2H), 4,30– 4,28 (m, 1H), 4,21–4,18 (m, 1H), 3,00–2,95 (m, 2H), 1,13 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 1,026 min, m/z = 257,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,026 min, ESI+ nađeno [M+H] = 257,1.
1-[(4R)-4-fenil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-il]propan-1-on (pik 2, retenciono vreme = 4,381 min) (13,6 mg, 25%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,39–7,37 (m, 5H), 6,21 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 4,42–4,36 (m, 2H), 4,31– 4,25 (m, 1H), 4,21–4,19 (m, 1H), 3,00–2,92 (m, 2H), 1,13 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 1,023 min, m/z = 257,1 [M H]<+>LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,023 min, ESI+ nađeno [M+H] = 257,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: OD (250 mm*30 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B: 30%; kraj B: 30%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 21
Primer 29
3,3,3-trifluor-1-(rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il)propan-1-on
Korak 1: 1-cis-7-fluor-5-fenil-2-(1-((trimetilsilil)oksi)vinil)-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol
U rastvor 1-(cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il)etanona (200 mg, 0,82 mmol) u 1,4-dioksanu (6 ml) dodat je trietilamin (165 mg, 1,63 mmol) i trimetilsilil trifluormetansulfonata (254 mg, 1,14 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)viniloksi-trimetil-silan (245 mg, 95%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,17−7,10 (m, 3 H), 6,98−6,96 (m, 2 H), 5,79−5,78 (m, 0,5 H), 5,65−5,64 (m, 0,5 H), 5,21−5,17 (m, 2 H), 4,40 (s, 1 H), 4,49 (s, 1 H), 3,37−3,27 (m, 1 H), 2,66−2,56 (m, 1 H), 0,03 (s, 9 H).
Korak 2: 3,3,3-trifluor-1-(rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)propan-1-on
Smeša 1-trifulormetil-1,2-benziodoksol-3(1H)-ona (418 mg, 1,32 mmol), 1-(cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)viniloksi trimetil-silana (210 mg, 0,66 mmol) i bakar tiocijanata (16 mg, 0,13 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml) mešana je na 15 °C tokom 15 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% HCl u acetonitrilu), dajući 3,3,3-trifluor-1-(rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)propan-1-on (31mg, 15%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,40–7,37 (m, 3H), 7,28–7,26 (m, 2H), 6,19–6,17 (m, 0,5H), 6,05–6,03 (m, 0,5H), 5,65–5,63 (m, 1H), 4,09–4,01 (m, 2H), 3,78–3,29 (m, 1H), 2,89–2,77 (m, 1H). LC-MS RT= 1,072 min, m/z = 314,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,072 min, ESI+ nađeno [M+H] = 314,1.
Metod 22
Primer 30
1-[(SS)-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) etil (S)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (200 mg, 0,78 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (3,0 M u THF-u, 0,58 ml, 1,74 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 1-[(5S)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]propan-1-on (60 mg, 32%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42–7,32 (m, 3H), 7,12–7,10
1
(m, 2H), 5,49 (dd, J = 5,6, 8,4 Hz, 1H), 3,31–3,21 (m, 1H), 3,17–3,01 (m, 4H), 2,72–2,64 (m, 1H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 1,523 min, m/z = 242,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,523 min, ESI+ nađeno [M+H] = 242,2.
Metod 23
Primer 31
1-[(SS)-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il] propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-70 °C) etil 5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (496 mg, 1,8 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (2,7 M u THF-u, 1,33 ml, 3,6 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajućisirovi racemski proizvod, koji je dalje prečišćen putem hiralne SFC i RP-HPLC (acetonitril 25-55%/ 0,05% amonijum hidroksid u vodi) da bi se dobio proizvoljno dodeljeni:
1-[(5S)-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (pik 2, retenciono vreme = 3,038 min) (17 mg, 8%) u vidu čvrstih supstanci bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,35 (m, 1H), 7,20–7,12 (m, 3H), 5,80–5,75 (m, 1H), 3,30–3,28 (m, 1H), 3,15–3,05 (m, 2H), 3,01–2,97 (m, 2H), 2,72–2,66 (m, 1H), 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,977 min, m/z = 260,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,977 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: OJ (250 mm*30 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B: 20%; kraj B: 20%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 24
2
Primer 32
1-[rac-(5R,6S)-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Korak 1: (E)-metil 4-fenilbut-3-enoat
U rastvor (E)-4-fenilbut-3-enoinske kiseline (15,0 g, 92,48 mmol) u metanolu (60 ml) dodata je sumporna kiselina (2,3 g, 23,12 mmol). Smeša je zagrevana na 90 °C tokom 18 h i ohlađena. Smeša je razblažena vodom (20 ml), i ekstrahovana dihlormetanom (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (30 ml), vodenim zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi metil (E)-4-fenilbut-3-enoat (14,8 g, 91%) u vidu svetlog ulja, koje se koristi u takvom stanju za sledeći korak.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,39−7,21 (m, 5H), 6,54−6,45 (m, 1H), 6,35−6,25 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,30−3,25
Korak 2: metil 2-(3-feniloksiran-2-il)acetat
U smešu metil (E)-4-fenilbut-3-enoata (14,8 g, 84,0 mmol) i natrijum bikarbonata (34,4 g, 409,0 mmol) u acetonu (300 ml) ukapavanjem je dodat rastvor trostruke soli kalijum monopersulfata (67,1 g, 109,2 mmol) u vodi (80 ml) na 0 °C. Nakon dodavanja, dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana tokom 4 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući metil 2-(3-feniloksiran-2-il) acetat (15,0 g, 93%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,799 min, m/z = 233,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,799 min, ESI+ nađeno [M+H] = 233,9.
Korak 3: metil (rac-3R,4S)-4-brom-3-hidroksi-4-fenilbutanoat
U rastvor metil 2-(3-feniloksiran-2-il)acetata (15,0 g, 78,0 mmol) u acetonitrilu (400 ml) dodat je litijum bromid (6,8 g, 78,0 mmol) i magnezijum perhlorat (1,7 g, 78,0 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 12 h i razblažena dihlormetanom (100 ml). Dobijena smeša je isprana hlorovodoničnom kiselinom (1N, 100 ml). Odvojeni vodeni sloj je ispran dihlormetanom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi metil (rac-3R,4S)-4-brom-3-hidroksi-4-fenilbutanoat (20,0 g, 94%) u vidu bezbojnog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 0,610 min, m/z = 256,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,610 min, ESI+ nađeno [M+H] = 256,9.
Korak 4: metil (rac-3R,4R)-4-azido-3-hidroksi-4-fenilbutanoat
Smeša metil (rac-3R,4S)-4-brom-3-hidroksi-4-fenilbutanoata (20,0 g, 73,2 mmol) i natrijum azida (14,3 g, 219,7 mmol) u N,N-dimetilformamidu (500 ml) mešana je na 20 °C tokom 16 h. Smeša je razblažena vodom (500 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (150 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi metil (rac-3R,4R)-4-azido-3-hidroksi-4-fenilbutanoat (17,0 g, 99%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 0,978 min, m/z = 208,3 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,978 min, ESI+ nađeno [M+H] = 208,3.
Korak 5: metil (rac-3R,4R)-4-amino-3-hidroksi-4-fenilbutanoat
Smeša metil (rac-3R,4R)-4-azido-3-hidroksi -4-fenilbutanoata (17,0 g, 72,3 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 7,7 g) u etil acetatu (800 ml) hidrogenizovana je (15 psi) na 25 °C tokom 24 h, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod metil (rac-3R,4R)-4-amino-3-hidroksi-4-fenilbutanoat (15,0 g, 99%) u vidu bezbojnog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 0,315 min, m/z = 210,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,315 min, ESI+ nađeno [M+H] = 210,2.
4
Korak 6: cis-4-hidroksi-5-fenilpirolidin-2-on
Rastvor metil (rac-3R,4R)-4-amino-3-hidroksi-4-fenilbutanoata (15,0 g, 71,7 mmol) u metanolu (200 ml) zagrevan je na 50 °C tokom 16 h i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% metanol u dihlormetanu), dajući cis-4-hidroksi-5-fenilpirolidin-2-on (9,6 g, 76%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45–7,26 (m, 5H), 6,39 (br s, 1H), 4,89–4,87 (m, 1H), 4,66–4,48 (m, 1H), 2,80–2,62 (m, 1H), 2,53–2,30 (m, 1H). LC-MS RT= 0,678 min, m/z = 178,2 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,678 min, ESI+ nađeno [M+H] = 178,2.
Korak 7: cis-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-on
U rastvor cis-4-hidroksi-5-fenilpirolidin-2-ona (9,6 g, 54,2 mmol) u dihlormetanu (300 ml) dodat je imidazol (11,1 g, 162,5 mmol) i terc-butildimetilsilil hlorid (16,3 g, 108,4 mmol). Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući cis-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil pirolidin-2-on (10,0 g, 63%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 1,257 min, m/z = 292,3 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,257 min, ESI+ nađeno [M+H] = 292,3.
Korak 8: cis-1-amino-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-on
U rastvor cis-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-ona (10,0 g, 34,3 mmol) u N,N-dimetilformamidu (50 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 2,1 g, 51,5 mmol) na 0 °C. Nakon mešanja na 0 °C tokom 30 minuta, u porcijama je dodat (aminooksi)difenilfosfin oksid (12,0 g, 51,47 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 12 h na sobnoj temperaturi, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-1-amino-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-on (9,0 g, 86%) u vidu čvrste supstance smeđe boje.
Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 1,225 min, m/z = 307,4 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,225 min, ESI+ nađeno [M+H] = 307,4.
Korak 9: etil cis-2-((3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-okso-2-fenilpirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat
Smeša cis-1-amino-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-ona (9,0 g, 29,4 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (21,3 g, 146,8 mmol) u toluenu (500 ml) zagrevana je na 90 °C tokom 18 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil cis-2-((3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-okso-2-fenilpirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat (10,0 g, 84%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS RT= 1,128 min, m/z = 406,4 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,128 min, ESI+ nađeno [M+H] = 406,4.
Korak 10: etil cis-6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil cis-2-((3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-okso-2-fenil pirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetata (10,0 g, 24,7 mmol) i hidrata 4-metilbenzensulfonske kiseline (4,7 g, 24,7 mmol) u toluenu (300 ml) zagrevana je na 120 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (5,5 g, 58%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS RT= 1,345 min, m/z = 388,4 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,345 min, ESI+ nađeno [M+H] = 388,4.
Korak 11: etil cis-6-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U rastvor tetrabutilamonijum fluorida (18,5 g, 70,9 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) dodat je etil cis-6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (5,5 g, 14,2 mmol). Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i razblažena etil acetatom (300 ml). Smeša je isprana vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušena iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-6-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (1,8 g, 46%) u vidu čvrste supstance žute boje. LC-MS RT= 1,036 min, m/z = 274,3 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,036 min, ESI+ nađeno [M+H] = 274,3.
Korak 12: etil trans-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U rastvor etil cis-6-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (1,0 g, 3,66 mmol) u dihlormetanu (50 ml) ukapavanjem je dodat dietilaminosumpor trifluorid (10,0 g, 62,0 mmol) na 25 °C. Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana sporim dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (400 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41–7,24 (m, 3H), 6,92–6,89 (m, 2H), 5,70–5,55 (m, 1H), 5,62–5,48 (m, 1H), 4,49–4,34 (m, 2H), 3,52–3,35 (m, 1H), 3,35–3,15 (m, 1H), 1,40–1,36 (m, 3H). LC-MS RT= 0,958 min, m/z = 276,2 [M H]<+>
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,958 min, ESI+ nađeno [M+H] = 276,2.
Korak 13: 1-[rac-(SR,6S)-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) etil trans-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (30 mg, 0,11 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum hlorid (3,0 M u THF-u, 0,25 ml, 0,75 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući proizvoljno dodeljeni 1-[rac-(5R6S)-6-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (13,6 mg, 45%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,34–7,31 (m, 3H), 6,90–6,87 (m, 2H), 5,63–5,61 (m, 0,5H), 5,59–5,57 (m, 1H), 5,46–5,44 (m, 0,5H), 3,42–3,28 (m, 1H), 3,26–3,21 (m, 1H), 3,03–3,01 (m, 2H), 1,16 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,977 min, m/z = 260,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,977 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,1.
Metod 25
Primer 33
(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(2-piridil)metanon
U rastvor 2-brompiridina (435 mg, 2,76 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je nbutil litijum (2,5 M u heksanima, 1,10 ml, 2,76 mmol) na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je ostavljena da se zagreje na 30 °C i mešana tokom 2 h. Smeša je ohlađena na -78 °C i dodat je cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2karboksamid (200 mg, 0,69 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 6 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(2-piridil)metanon (32,0 mg, 15%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,69–8,65 (m, 1H), 8,00–7,90 (m, 2H), 7,62–7,59 (m, 1H), 7,42–7,30 (m, 3H), 7,25–7,20 (m, 2H), 6,30–6,22 (m, 0,5H), 6,18–6,14 (m, 0,5H), 5,75– 5,55 (m, 1H), 3,77–3,67 (m, 1H), 2,74–2,45 (m, 1H). LCMS: RT= 1,510 min, m/z = 309,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,510 min, ESI+ nađeno [M+H] = 309,1.
Metod 26
Primer 34 Primer 35
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Primer 42
Korak 1: ciklopropil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) etil cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,36 mmol) u tetrahidrofuranu (4 ml) ukapavanjem je dodat ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u THF-u, 1,45 ml, 0,73 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući cis racemski ciklopropil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il)metanon (15 mg, 10%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45−7,35 (m, 3H), 7,27-7,25 (m, 2H), 6,18−6,15 (m, 0,5H), 6,05−6,00 (m, 0,5H), 5,65−5,60 (m, 1H), 3,77−3,65 (m, 1H), 3,05−2,95 (m, 1H), 2,90−2,70 (m, 1H), 1,17−1,13 (m, 2H), 1,10−1,05 (m, 2H). LCMS RT= 1,031 min, m/z = 272,3 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,031 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,3.
Korak 2: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenit-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Racemski ciklopropil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il)metanon (100 mg, 0,37 mmol) odvojen je putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,575 min) (25,5 mg, 24%) u vidu čvrste supstance bele boje.
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,38 (m, 3H), 7,29–7,27 (m, 2H), 6,19 (d, J = 5,6 Hz, 0,5H), 6,05 (d, J = 5,2 Hz, 0,5H), 5,66–5,62 (m, 1H), 3,79–3,71 (m, 1H), 3,05–3,02 (m, 1H), 3,01–2,81 (m, 1H), 1,29–1,09 (m, 4H). LCMS RT= 0,816 min, m/z = 271,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,816 min, ESI+ nađeno [M+H] = 271,9.
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,849 min) (18,5 mg, 17%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,27 (m, 5H), 6,20–6,17 (m, 0,5H), 6,06–6,03 (m, 0,5H), 5,66–5,64 (m, 1H), 3,79–3,71 (m, 1H), 3,05–3,02 (m, 1H), 3,01–2,81 (m, 1H), 1,19– 1,09 (m, 4H). LCMS RT= 0,817 min, m/z = 271,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,817 min, ESI+ nađeno [M+H] = 271,9.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralpak AD (250 mm*30 mm, 10 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O iPrOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 27
Primer 36
ciklopentil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: ciklopentil-(cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanol
Ciklopentil magnezijum bromid (1 M u THF-u, 0,73 ml, 0,73 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodat u ohlađeni rastvor (-78 °C) cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,36 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-ciklopentil(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanol (100 mg, 91%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,611 min, m/z = 302,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,611 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,1.
1
Korak 2: ciklopentil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U rastvor cis-ciklopentil(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanola (100 mg, 0,33 mmol) u dihlormetanu (15 ml) dodat je mangan dioksid (288 mg, 3,32 mmol). Reakciona smeša je mešana na 35 °C tokom 2 h, a zatim filtrirana kroz tanak sloj celita. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (40% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopentil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (18,2 mg, 18%) u vidu čvrste supstance bele boje.
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,40 (m, 3H), 7,28–7,26 (m, 2H), 6,19–6,17 (m, 0,5H), 6,05–6,03 (m, 0,5H), 5,64–5,63 (m, 1H), 3,89–3,68 (m, 2H), 2,88–2,75 (m, 1H), 2,02–1,60 (m, 8H). LCMS RT= 2,070 min, m/z = 300,2 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 2,070 min, ESI+ nađeno [M+H] = 300,2.
Metod 28
Primer 41
(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(2-tienil)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 2-jodtiofena (289 mg, 1,38 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,55 ml, 1,38 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h, zatim je dodat cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksamid (100 mg, 0,34 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml). Smeša je mešana još 2 h na -78 °C, i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 40-70% / 0,05% hlorovodonik u vodi), dajući (rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(2 tienil)metanon (15,6 mg, 14%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,50−8,49 (m, 1H), 7,96−7,94 (m, 1H), 7,49-7,35 (m, 3H), 7,35−7,27 (m, 2H), 7,26−7,20 (m, 1H), 6,24−6,22 (m, 0,5H), 6,10−6,08 (m, 0,5H), 5,74−5,68
2
(m, 1H), 3,86−3,72 (m, 1H), 2,91−2,79 (m, 1H). LCMS RT= 0,891 min, m/z = 314,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,891 min, ESI+ nađeno [M+H] = 314,1.
Metod 29
Primer 42
ciklobutil-[rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađenu smešu (0 °C) magnezijuma (234 mg, 9,65 mmol), joda (12 mg, 0,05 mmol), 1,2-dibrometana (0,1 ml, 0,10 mmol) u tetrahidrofuranu (15 ml) ukapavanjem je dodat bromciklobutan (0,5 ml, 5,85 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na 35 °C oko 1 h. Gore navedeni sveže pripremljeni rastvor ciklobutil magnezijum bromida (1,0 ml, 0,39 mmol) uz mešanje je ukapavanjem dodat u ohlađeni rastvor (-78 °C) cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (28 mg, 0,10 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 42-62% / 0,05% hidrohlorid u vodi), dajući ciklobutil-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (2 mg, 7%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,40−7,30 (m, 3H), 7,25−7,21 (m, 2H), 6,15−6,10 (m, 0,5H), 6,01−5,95 (m, 0,5H), 5,60−5,55 (m, 1H), 4,15−4,07 (m, 1H), 3,74−3,65 (m, 1H), 2,80−2,70 (m, 1H), 2,35−2,20 (m, 3H), 2,20−2,15 (m, 1H), 2,12−2,00 (m, 1H), 1,90−1,85 (m, 1H). LCMS RT= 0,883 min, m/z = 286,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,883 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,0.
Metod 30
Primer 44
1-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) etil cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (30 mg, 0,11 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat terc-butil litijum (1,3 M u pentanu, 0,17 ml, 0,22 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 45-75% / 0,05% hidrohlorid u vodi), dajući 1-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-propan-1-on (12,7 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD30D) δ 7,42–7,36 (m, 3H), 7,36–7,23 (m, 2H), 6,16–6,13 (m, 0,5H), 6,02–5,99 (m, 0,5H), 5,65–5,61 (m, 1H), 3,77–3,68 (m, 1H), 2,85–2,73 (m, 1H), 1,35 (s, 9H). LCMS RT= 0,907 min, m/z = 288,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,907 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,0.
Metod 31
Primer 45
1-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-metil-propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-78 °C) etil cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (200 mg, 0,73 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 ml u THF-u, 1,1 ml, 2,20 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući racemski 1-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il)-2-metil-propan-1-on (6,9 mg, 3,4%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,46–7,36 (m, 3H), 7,28–7,26 (m, 2H), 6,18–6,16 (m, 0,5H), 6,05–6,02 (m 0,5H),
4
5,65–5,61 (m, 1H), 3,78–3,72 (m, 1H), 3,64–3,61 (m, 1H), 2,87–2,76 (m, 1H), 1,19 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LCMS RT= 1,971 min, m/z = 274,2 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,971 min, ESI+ nađeno [M+H] = 274,2.
Metod 32
Primer 49
1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on i 1-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Korak 1: 1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil- 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksamida (30 mg, 0,10 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat etilmagnezijum bromid (3,0 M u THF-u, 0,1 ml, 0,30 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana oko 3 h na 30 °C i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući 1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (6,3 mg, 23%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,38– 7,35 (m, 3H), 7,25–7,23 (m, 2H), 6,15–6,13 (m, 0,5H), 6,01–5,99 (m, 0,5H), 5,59–5,53 (m, 1H), 3,77–3,67 (m, 1H), 3,05–2,99 (m, 2H), 2,84–2,73 (m, 1H), 1,13 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 1,038 min, m/z = 260,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,038 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,2.
Korak 2:
1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on i 1-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Racemski 1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]propan-1-on (220 mg) odvojen je putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (pik 1, retenciono vreme = 2,265 min) (78 mg, 35,; 88%ee) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,32 (m, 3H), 7,27–7,23 (m, 2H), 6,17–6,14 (m, 0,5H), 6,02–6,00 (m, 0,5H), 5,65–5,58 (m, 1H), 3,84–3,64 (m, 1H), 3,06–3,00 (m, 2H), 2,88–2,69 (m, 1H), 1,13 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,822 min, m/z = 260,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,822 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,0.
1-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (pik 2, retenciono vreme = 2,382 min) (80 mg, 35%, 91%ee) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,32 (m, 3H), 7,27–7,23 (m, 2H), 6,17–6,14 (m, 0,5H), 6,02–6,00 (m, 0,5H), 5,65–5,58 (m, 1H), 3,84–3,64 (m, 1H), 3,06–3,00 (m, 2H), 2,88–2,69 (m, 1H), 1,13 (t, J= 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,817 min, m/z = 260,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,817 min, ESI+ nađeno [M+H] = 260,0.
SFC kondicioniranje: Kolona: AS (250 mm*30 mm,5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B 20% kraj B 20%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 33
Primer 48
(1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil- 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (137 mg, 0,47 mmol) i 1-metil-4-jod-1h-pirazola (393 mg, 1,89 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat terc-butil litijum (1,3 M u heksanu, 1,45 ml, 1,89 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 27-57% / 0,05% hidrohlorid u vodi), dajući cis racemski (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (53,4 mg, 36%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,61 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,46–7,34 (m, 3H), 7,32–7,25 (m, 2H), 6,22–6,19 (m, 0,5H), 6,08–6,05 (m, 0,5H), 5,72–5,65 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,85–3,70 (m, 1H), 2,90–2,75 (m, 1H). LCMS RT= 0,791 min, m/z = 311,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,791 min, ESI+ nađeno [M+H] = 311,9.
Metod 34
Primer 50
1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon
Korak 1: (E)-benzaldehid oksim
U rastvor benzaldehida (45,0 g, 424,1 mmol) u etanolu (100 ml) dodat je natrijum karbonat (112,3 g, 1060,1 mmol) i hidroksilamin hidrohlorid (35,3 g, 508,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (60 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (E)-benzaldehid oksim u vidu bezbojnog ulja (51,0 g, 99%), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2: metil 3-fenil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U rastvor (E)-benzaldehid oksima (20,0 g, 165,1 mmol) u 1,4-dioksanu (500 ml) dodat je metil akrilat (14,2 g, 165,1 mmol), natrijum jodid (24,7 g, 165,1 mmol), 2,6-lutidin (17,6 g, 165,1 mmol) i terc-butil estar hipohlorne kiseline (17,9 g, 165,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 24 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-fenil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat u vidu čvrste supstance žute boje (25,0 g, 74%). LCMS RT= 0,871 min, m/z = 206,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,871 min, ESI+ nađeno
Korak 3: 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-on
Smeša metil 3-fenil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (25,0 g, 121,8 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 2,5 g) u etanolu (800 ml) hidrogenizovana je (50 psi) na 25 °C tokom 2 sata, a zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu čvrste supstance žute boje (18,0 g, 83%), koji se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,270 min, m/z = 177,8 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,270 min, ESI+ nađeno [M+H] =177,8.
Korak 4: cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on i trans-3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on
U rastvor 3-hidroksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (15,0 g, 84,6 mmol) u dihlormetanu (300 ml) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (19,1 g, 126,9 mmol) i imidazol (11,5 g, 169,3 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući proizvoljno dodeljeni:
cis-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on (12,4 g; 51%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,37–7,25 (m, 5H), 4,88–4,53 (m, 1H), 4,54–4,46 (m, 1H), 2,89–2,79 (m, 1H), 1,80–1,71 (m, 1H), 0,93–0,90 (m, 9H), 0,19–0,12 (m, 6H) i
trans-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on u vidu bezbojnog ulja (9,3 g, 38%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44–7,34 (m, 2H), 7,29–7,24 (m, 3H), 4,87–4,80 (m, 1H), 4,44–4,41 (m, 1H), 2,45–2,37 (m, 1H), 2,27–2,22 (m, 1H), 0,93–0,90 (m, 9H), 0,16–0,13
Korak 5: trans-1-amino-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenilpirolidin-2-on
U rastvor tans-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (7,0 g, 24,0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 ml) dodat je natrijum hidrid (1,44 g, 36,0 mmol) na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 20 min. Zatim je dodat o-(difenilfosforil)hidroksilamin (8,40 g, 36,03 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući trans-1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-on (7,0 g, 95,1%) u vidu žutog ulja, koje se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,775 min, m/z = 307,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,775 min, ESI+ nađeno [M+H] = 307,0.
Korak 6: trans-etil 2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-okso-5-fenilpirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat
U rastvor trans-1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-pirolidin-2-ona (7,0 g, 22,8 mmol) u etanolu (150 ml) dodat je etil 2-etoksi-2-imino-acetat (6,63 g, 45,7 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod trans-etil 2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-okso-5-fenilpirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat (8,50 g, 92%) u vidu žutog ulja, koji se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 2,154 min, m/z = 406,3 [M H]<+>. LCMS (0 do 60% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 2,143 min, ESI+ nađeno [M+H] = 406,3.
Korak 7: trans-etil 7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 2-[[trans-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-fenil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (8,5 g, 21,0 mmol) u toluenu (100 ml) dodata je p-toluensulfonska kiselina (4,4 g, 25,2 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi trans-etil 7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (7,5 g, 92,3%) u vidu žutog ulja, koji se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,022 min, m/z = 374,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,022 min, ESI+ nađeno [M+H] = 374,2.
Korak 8: trans-etil 7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil trans-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (7,0 g, 18,06 mmol) u tetrahidrofuranu (120 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1 N u THF-u, 18,06 ml, 18,06 mmol). Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 3 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi trans-
1
etil 7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (3,5 g, 57%) u vidu žutog ulja, koji se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,39–7,35 (m, 3H), 7,14–7,12 (m, 2H), 5,73–5,70 (m, 1H), 5,54–5,51 (m, 1H), 4,47– 4,40 (m, 2H), 3,24-3,21 (m, 1H), 3,05-3,00 (m, 1H), 1,41-1,36 (m, 3H).
Korak 9: cis-etil 7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor trans-etil 7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,37 mmol) u dihlormetanu (8 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (176,9 mg, 1,10 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,5), dajući cis-etil-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (54 mg, 54%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44–7,31 (m, 3H), 7,25–7,17 (m, 2H), 6,09 (dd, J = 1,4 Hz, 7,2 Hz, 1H), 5,95 (dd, J = 1,4 Hz, 7,2 Hz, 1H), 5,52–5,47 (m, 1H), 4,53–4,37
Korak 10: cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
U rastvor cis-etil-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (54 mg, 0,20 mmol) u tetrahidrofuranu (4 ml) i vodi (1 ml) dodat je litijum hidroksid monohidrat (25 mg, 0,59 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 5 dodavanjem hlorovodonične kiseline (2 N). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom,
1 1
dajući sirovu cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (45 mg, 93%) u vidu čvrste supstance bele boje, kojase koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon
Korak 11: cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (350 mg, 1,42 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (201 mg, 1,49 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (407 mg, 2,12 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (180 mg, 1,84 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešana je na 20 °C tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,7), dajući cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksamid (225 mg, 54,7%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41–7,35 (m, 3H), 7,26–7,22 (m, 2H), 6,09–6,07 (m, 0,5H), 5,96–5,93 (m, 0,5H), 5,49–5,46 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,66–3.59 (m, 1H), 3,55–3,35 (brs, 3H), 2,99-2,88 (m, 1H). LCMS RT= 0,564 min, m/z = 291,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,564 min, ESI+ nađeno [M+H] = 291,1.
1 2
Korak 12: 1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksamida (30 mg, 0,10 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat metilmagnezijum bromid (3,0 M u THF-u, 0,1 ml, 0,30 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana oko 3 h na 30 °C i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući 1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon (4 mg, 15%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,41–7,35 (m, 3H), 7,26–7,24 (m, 2H), 6,16–6,14 (m, 0,5H), 6,01–6,00 (m, 0,5H), 5,62–5,58 (m, 1H), 3,77–3,68 (m, 1H), 2,85–2,74 (m, 1H), 2,55 (s, 3H). LCMS RT= 0,954 min, m/z = 246,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,954 min, ESI+ nađeno [M+H] = 246,2.
Metod 35
Primer 51 Primer 52
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro -5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,53 mmol) i trans-2-fluor-N-metoksi -N-metilciklopropankarboksamida (157 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,64 ml, 1,60 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h, zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (30 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 37-67%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [trans-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-
1
il]metanon (25 mg, 16%) u vidu čvrste supstance tamnocrvene boje. Ova supstanca je dalje razdvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,130 min) (11,2 mg, 44%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,51−7,33 (m, 3H), 7,30−7,28 (m, 2H), 6,21−6,03 (m, 1H), 5,68−5,64 (m, 1H), 5,02−4,94 (m, 1H), 4,84−4,80 (m, 1H), 3,84−3,70 (m, 1H), 3,47−3,44 (m, 1H), 2,90−2,78 (m, 1H), 1,73−1,62 (m, 1H), 1,60−1,52 (m, 1H). LCMS RT= 1,765 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,765 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,464 min) (10,2 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,51−7,33 (m, 3H), 7,32−7,20 (m, 2H), 6,21−6,04 (m, 1H), 5,70−5,62 (m, 1H), 5,00−4,82 (m, 1H), 3,83−3,70 (m, 1H), 3,47−3,42 (m, 1H), 2,90−2,77 (m, 1H), 1,74−1,63 (m, 1H), 1,60−1,52 (m, 1H). LCMS RT= 1,756 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,756 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel OD-3150 × 4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B: etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min.
Metod 36
Primer 53
(1-fluorciklopropil)(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il) metanon
Korak 1: 1-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid
Smeša 1-fluorciklopropankarboksilne kiseline (150 mg, 1,44 mmol), N,N-diizopropiletilamina (465 mg, 3,60 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (712 mg, 1,87 mmol) i N,O-
1 4
dimetilhidroksilamin hidrohlorida (183 mg, 1,87 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (15 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 1-fluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (140 mg, 66%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,75 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 1,31–1,21 (m, 4H).
Korak 2: (1-fluorciklopropil)(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i 1-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (52 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,21 ml, 0,53 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45% / 0,05% HCl u vodi), dajući sirovi proizvod (20 mg). Sirovi proizvod je dalje prečišćen putem preparativne TLC (30% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući (1-fluorciklopropil)(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (10,2 mg, 19%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41−7,37 (m, 3H), 7,23−7,21 (m, 2H), 6,09−6,07 (m, 0.5H), 5,96−5,93 (m, 0,5H), 5,51−5,50 (m, 1H), 3,67−3,58 (m, 1H), 3,00−2,90 (m, 1H), 1,92−1,88 (m, 2H), 1,62−1,58 (m, 2H). LCMS RT= 1,726 min, m/z = 290,1 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijačna voda tokom 3,0 minuta) retenciono vreme: 1,726 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Metod 37
1
Primer 54
((SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(3-metiloksetan-3-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro- 5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (80 mg, 0,28 mmol) i N-metoksi-N,3-dimetil-oksetan-3-karboksamida (90 mg, 0,57 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,34 ml, 0,85 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-(3-metiloksetan-3-il)metanon (16,3 mg, 19%) u vidu čvrste supstance ružičaste boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,37 (m, 3H), 7,25– 7,23 (m, 2H), 6,17–6,15 (m, 0,5H), 6,03–6,01 (m, 0,5H), 5,65–5,62 (m, 1H), 5,09–5,02 (m, 2H), 4,52–4,26 (m, 2H), 3,78–3,70 (m, 1H), 2,86–2,76 (m, 1H), 1,74 (s, 3H). LCMS RT= 0,675 min, m/z = 302,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,675 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,1.
Metod 38
Primer 55
((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(3-metiloksetan-3-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N,3-dimetiloksetan-3-karboksamid
1
Smeša N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (252 mg, 2,58 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (396 mg, 2,07 mmol), 3-metiloksetan-3-karboksilne kiseline (200 mg, 1,72 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (140 mg, 1,03 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (556 mg, 4,31 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi N-metoksi-N,3-dimetiloksetan-3-karboksamid (270 mg, 98%) u vidu bezbojnog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,96–4,93 (m, 2H), 4,29–4,27 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 1,66 (s, 3H).
Korak 2: ((SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il)(3-metiloksetan-3-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (5R,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg, 0,35 mmol) i N-metoksi-N,3-dimetil-oksetan-3-karboksamida (113 mg, 0,71 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,43 ml, 1,06 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-(3-metiloksetan-3-il)metanon (13,6 mg, 13%) u vidu čvrste supstance ružičaste boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,37 (m, 3H), 7,25– 7,23 (m, 2H), 6,17–6,15 (m, 0,5H), 6,03–6,01 (m, 0,5H), 5,65–5,62 (m, 1H), 5,09–5,02 (m, 2H), 4,52–4,26 (m, 2H), 3,78–3,70 (m, 1H), 2,86–2,76 (m, 1H), 1,74 (s, 3H). LCMS RT= 0,678 min, m/z = 302,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,678 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,1.
Metod 39
1
Primer 56
3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[ triazol-2-il]metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamid Smeša 3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilne kiseline (trans, 300 mg, 2,34 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (297 mg, 3,04 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1157 mg, 3,04 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (756 mg, 5,85 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metil-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamid (180 mg, 45%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,95–3,93 (m, 2H), 3,80–3,78 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 2,17–2,09 (m, 3H).
Korak 2: 3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i N-metoksi-N-metil-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamida (61 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,21 ml, 0,53 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora
1
amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući 3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (2,2 mg, 3,9%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43−7,39 (m, 3H), 7,27−7,26 (m, 2H), 6,12−5,96 (m, 1H), 5,53−5,49 (m, 1H), 4,02−3,99 (m, 2H), 3,82−3,80 (m, 2H), 3,70−3,61 (m, 1H), 3,07−3,05 (m, 1H), 3,02−2,95 (m, 1H), 2,45−2,43 (m, 2H). LCMS RT= 0,821 min, m/z = 313,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,821 min, ESI+ nađeno [M+H] = 313,9.
Metod 40
Primer 57
oksetan-3-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-oksetan-3-karboksamid
Smeša oksetan-3-karboksilne kiseline (300 mg, 2,94 mmol), 1,1'-karbonildiimidazola (524 mg, 3,23 mmol) i N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (286 mg, 2,94 mmol) u dihlormetanu (8 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (60% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući N-metoksi-N-metil-oksetan-3-karboksamid (60 mg, 14%) u vidu bezbojnog ulja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,92-4,89 (m, 2H), 4,80-4,76 (m, 2H), 4,19-4,13 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,21 (s, 3H).
1
Korak 2: oksetan-3-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon
U ohlađeni rastvor (-70 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (38 mg, 0,13 mmol) i N-metoksi-N-metil-oksetan-3-karboksamida (39 mg, 0,27 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,16 ml, 0,40 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -70 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući oksetan-3-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (6,3 mg, 15,5%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,40 (m, 3H), 7,27–7,23 (m, 2H), 6,11–5,95 (m, 1H), 5,50–5,49 (m, 1H), 4,97–4,90 (m, 4H), 4,72–4,68 (m, 1H), 3,68–3,59 (m, 1H), 3,03–2,92 (m, 1H). LCMS RT= 0,782 min, m/z = 287,9 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,782 min, ESI+ nađeno [M+H] = 287,9.
Metod 41
Primer 58
[1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)ciklopropankarboksilna kiselina U rastvor etil 1-(hidroksimetil)ciklopropankarboksilne kiseline (200 mg, 1,72 mmol) u dihlormetanu (5 ml) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (532 mg, 3,53 mmol) i imidazol (240
11
mg, 3,53 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (10 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u acetonitrilu (6 ml)/vodi (6 ml) i dodat je natrijum hidroksid (138 mg, 3,44 mmol). Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 10 h, a zatim podešena na pH = 4 dodavanjem limunske kiseline. Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu 1-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil] ciklopropankarboksilnu kiselinu (400 mg, 100%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2:
1-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-N-metoksi-N-metil ciklopropan karboksamid Smeša 1-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]ciklopropankarboksilne kiseline (400 mg, 1,74 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (423 mg, 4,34 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (499 mg, 2,6 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (235 mg, 1,74 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,23 ml, 6,95 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h. Dobijena smeša je raspodeljena na vodu (30 ml) i dihlormetan (30 ml). Odvojeni organski sloj je osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 1-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (200 mg, 42%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,848 min, ESI+ nađeno [M+H] = 274,1.
Korak 3:
(1-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)ciklopropil)[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) cis-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (60 mg, 0,21 mmol) i 1-[[terc-butil(dimetil)silil] oksimetil]-N-metoksi-Nmetil-ciklopropankarboksamida (116 mg, 0,43 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,26 ml, 0,64 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući [1-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]ciklopropil]-[cis-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (34 mg, 38%) u vidu svetlosmeđeg ulja.
Korak 4: [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Smeša [1-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]ciklopropil]-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (34 mg, 0,08 mmol) i 2,2,2-trifluorsirćetne kiseline (0,50 ml) u dihlormetanu (3 ml) mešana je na 20 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (4,1 mg, 16%) u vidu svetlosmeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43-7,37 (m, 3H), 7,27-7,25 (m, 2H), 6,17-6,15 (m, 0,5H), 6,03-6,01 (m, 0,5H), 5,63-5,61 (m, 1H), 3,96-3,85 (m, 2H), 3,77-3,71 (m, 1H), 2,86-2,75 (m, 1H), 1,71-1,67 (m, 2H), 1,10-1,07 (m, 2H). LCMS RT= 0,648 min, m/z = 302,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,648 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,1.
Metod 42
Primer 59 Primer 60
((1S)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il)metanon i ((1R)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: 2,2-difluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid
Smeša 2,2-difluorciklopropankarboksilne kiseline (1,00 g, 8,19 mmol), N,N-diizopropiletilamina (2646 mg, 20,5 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (4,05 g, 10,6 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (1,04 g, 10,7 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 2,2-difluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (700 mg, 52%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,77 (s, 3 H), 3,26 (s, 3 H), 2,96–2,91 (m, 1 H), 2,16–2,12 (m, 1 H), 1,69–1,65 (m, 1 H).
Korak 2: ((1S)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon i ((1R)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (300 mg, 1,06 mmol) i 2,2-difluor-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (351 mg, 2,13 mmol) u tetrahidrofuranu (15 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 1,28 ml, 3,19 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45% /0,225% HCl u vodi), dajući (2,2-difluorciklopropil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (120 mg, 37%) u vidu čvrste supstance bele boje. Ova supstanca je dalje razdvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
11
((1S)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,069 min) (35,0 mg, 29%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,42–7,38 (m, 3H), 7,31–7,29 (m, 2H), 6,21–6,19 (m, 0,5H), 6,07–6,05 (m, 0,5H), 5,68–5,66 (m, 1H), 3,85–3,76 (m, 2H), 2,86–2,83 (m, 1H), 2,32–2,28 (m, 1H), 1,96–1,93 (m, 1H). LCMS RT= 1,834 min, m/z = 308,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijačna voda tokom 3,0 minuta) retenciono vreme: 1,834 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
((1R)-2,2-difluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,055 min) (35,0 mg, 29%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,41 (m, 3H), 7,30–7,28 (m, 2H), 6,21–6,19 (m, 0,5H), 6,07–6,05 (m, 0,5H), 5,66–5,65 (m, 1H), 3,87–3,74 (m, 2H), 2,89–2,79 (m, 1H), 2,33–2,28 (m, 1H), 1,98–1,97 (m, 1H). LCMS RT= 1,822 min, m/z = 308,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijačna voda tokom 3,0 minuta) retenciono vreme: 1,822 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
SFC uslovi: Kolona Chiralcel OD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B:izopropanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 35 °C.
Metod 43
Primer 61
(1-fluorciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 1-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropan karboksamida (313 mg, 2,13 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (300 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (30 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 1,28 ml, 3,19 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45%/0,05% HCl u vodi), a zatim putem preparativne TLC (30% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući (1-fluorciklopropil)((SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SHpirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon (80 mg, 25%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40−7,37 (m, 3H), 7,23−7,21 (m, 2H), 6,09−6,07 (m, 0.5H), 5,96−5,94 (m, 0,5H), 5,51−5,49 (m, 1H), 3,67−3,58 (m, 1H), 3,00−2,90 (m, 1H), 1,92−1,88 (m, 2H), 1,62−1,60 (m, 2H). LCMS RT= 1,736 min, m/z = 290,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijačna voda tokom 3,0 minuta) retenciono vreme: 1,736 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Metod 44
Primer 62
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2-fluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 2-fluorbenzaldehida (15,0 g, 120,86 mmol) u tetrahidrofuranu (250 ml) dodat je alilmagnezijum bromid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 150,0 ml, 150,0 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana je 2 sata pre nego što je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(2-fluorfenil)but-3-en-1-ol (6,0 g, 24%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,49–7,27 (m, 1H), 7,29–7,12 (m, 2H), 7,05–7,00 (m, 1H), 5,89–5,80 (m, 1H), 5,20–5,13 (m,
Korak 2: terc-butil((1-(2-fluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)dimetilsilan
U rastvor 1-(2-fluorfenil)but-3-en-1-ola (6,0 g, 36,1 mmol) u dihlormetanu (50 ml) dodat je imidazol (4,9 g, 72,2 mmol) i terc-butildimetilhlorsilan (7,1 g, 146,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml). Smeša je
11
ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 100% petrol etar), dajući terc-butil-[1-(2-fluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (8,5 g, 84%) u vidu svetlog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,60−7,36 (m, 1H), 7,34−7,18 (m, 2H), 7,13−7,02 (m, 1H), 5,97−5,85 (m, 1H), 5,21−5,07 (m, 3H), 2,60−2,48 (m, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,15 (s, 3H), 0,00 (
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2-fluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(2-fluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (8,50 g, 30,3 mmol) u vodi (100 ml) i tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je osmijum tetroksid (0,15 g, 0,6 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 25 °C, dodat je natrijum perjodat (25,90 g, 121,2 mmol) u malim porcijama tokom 2 h. Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (100 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-(2-fluorfenil)propanal (5,5 g, 64%) u vidu crnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,84−9,77 (m, 1H), 7,53−7,51 (m, 1H), 7,31−7,24 (m, 1H), 7,21−7,13 (m, 1H), 7,09−6,98 (m, 1H), 5,58−5,55 (m, 1H), 2,85−2,80 (m, 1H), 2,74−2.64 (m, 1H), 0,92−0,85 (m, 9H), 0,09 (s, 3H), -0,09 (s, 3H).
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(2-fluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (6,3 g, 20,1 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 8,6 ml, 21,4 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapavanjem dodat rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2-fluorfenil)propanala (5,5 g, 19,5 mmol) u tetrahidrofuranu (25 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i zatim je
11
deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2-fluorfenil)propan-1-ol (8,0 g, 80%) u vidu žutog ulja. Koristi se u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 5: 2-brom-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol Smeša 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-3-(2-fluorfenil)propan-1-ola (8,0 g, 15,55 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (30,0 ml) u dihlormetanu (3,0 ml) mešana je na 50 °C tokom 5 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlormetanom (2 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (2,0 g, 43%) u vidu svetložute čvrste supstance. LCMS RT= 0,505 min, m/z = 298,1 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,505 min, ESI+ nađeno [M+H] =298,1.
Korak 6: (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
U rastvor 2-brom-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (750 mg, 2,52 mmol) u toluenu (20 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (1,62 g, 10,06 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h, a zatim polako dodata u ledenu vodu (20 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 50 ml). Kombinovani organski
11
slojevi su isprani vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 15% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (250 mg, 33%) u vidu svetložute čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40–7,27 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 7,20– 7,10 (m, 2H), 7,01–6,97 (m, 1H), 6,10–5,89 (m, 1H), 5,84–5,75 (m, 1H), 3,70–3,53 (m, 1H), 2,96–2,75 (m, 1H). LCMS RT= 1,112 min, m/z = 300,0 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,112 min, ESI+ nađeno [M+H] =300,0.
Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6, 7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 3,408 min) (100 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje. (Takođe je prikupljen izomer 5R,7R (pik 1, retenciono vreme = 3,139 min) (100 mg; 40%)).
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 min i zadržan 40% tokom 2,5 min, zatim 5% B tokom 2,5 min protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg, 0,33 mmol) i N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (86 mg, 0,67 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,27 ml, 0,67 mmol) na -78 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon (7,2 mg, 7%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,47-7,41 (m, 1H), 7,25-7,18 (m, 2H), 7,16 -7,13 (m, 1H), 6,22-6,06 (m, 1H), 5,92-5,88 (m, 1H), 3,85-3,78 (m, 1H), 3,08-3,02 (m, 1H), 2,93-2,78 (m, 1H), 1,22-1,17 (m, 2H), 1,15-1,09 (m,
11
2H). LCMS RT= 1,043 min, m/z = 290,2 [M+H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,043 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,2.
Metod 45
Primer 63
(S)-ciklopropil(5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il) metanon
U rastvor etil (5S)-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (100 mg, 0,36 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat ciklopropilmagnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 0,72 ml, 0,36 mmol) u atmosferi azota na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 40-50% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[(5S)-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (50 mg, 51%) u vidu čvrste supstance bele boje (80% ee). Proizvod je dalje prečišćen hiralnom SFC, dajući proizvoljno dodeljeni (S)-ciklopropil(5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (17,5 mg, 34%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44−7,35 (m, 1H), 7,23−7,16 (m, 3H), 5,81−5,77 (m, 1H), 3,37−3,29 (m, 1H), 3,21−3,03 (m, 2H), 2,99−2,93 (m, 1H), 2,77−2,65 (m, 1H), 1,16−1,09 (m, 2H), 1,09−1,00 (m, 2H). LC-MS RT= 0,699 min, m/z = 272,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,699 min, ESI+ nađeno [M+H] = 272,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B: etanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 46
11
Primer 64
(3,3-difluorciklobutil)((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il)metanon
U rastvor 3,3-difluor-N-metoksi-N-metil-cilobutankarboksamida (76 mg, 0,43 mmol) i (5R,7R)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (60 mg, 0,21 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,26 ml, 0,64 mmol) na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (25 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45%/0,225% hlorovodonična kiselina u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni (3,3-difluorciklobutil)-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (11,0 mg, 16%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43–7,38 (m, 3H), 7,29–7,27 (m, 2H), 6,19–6,17 (m, 0,5H), 6,05–6,03 (m, 0,5H), 5,64–5,63 (m, 1H), 3,94–3,93 (m, 1H), 3,79–3,75 (m, 1H), 2,90–2,82 (m, 5H). LCMS RT= 1,904 min, m/z = 322,1 [M+N]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,904 min, ESI+ nađeno [M+H] =322,1.
Metod 47
Primeri 66 i 67
[(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]metanon i [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]metanon
12
Korak 1: 2-brom-5-fenil-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7(6H)-on
U rastvor 2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (2,0 g, 7,14 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je piridinijum hlorhromat (1,7 g, 7,85 mmol). Smeša je mešana na 20 °C tokom 18 h, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-on (1,8 g, 88%) u vidu čvrste supstance bele boje. Koristi se u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 2: (S)-2-brom-7,7-difluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol U ohlađeni rastvor 2-brom-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ona (1,7 g, 6,11 mmol) u dihlormetanu (80 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (7,88 ml, 61,13 mmol) na 0 °C. Nakon mešanja na 25 °C tokom 2 h, smeša je sipana u ledenu vodu (10 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući racemski 2-brom-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (1,5 g, 82%) u vidu čvrste supstance ružičaste boje. LC-MS RT= 0,774 min, m/z = 303,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,774 min, ESI+ nađeno [M+H] = 303,1.
Racemska supstanca (950 mg, 3,17 mmol) dalje je odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(5R)-2-brom-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 1, retenciono vreme = 2,308 min) (410 mg, 43%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance.
(5S)-2-brom-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 2,614 min) (440 mg, 46%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance.
SFC kondicioniranje: Kolona: OJ (250 mm*50 mm,10 um); mobilna faza: A: CO2B: 0,1%NH3H2O EtOH; gradijent: od 20% do 20% B; protok: 180 ml/min; temperatura kolone:40 °C.
Korak 3: [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]metanon i [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]metanon
U smešu (5S)-2-brom-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (200 mg, 0,67 mmol) i trans-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (196 mg, 1,33 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,8 ml, 2,0 mmol) u atmosferi azota na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod, koji je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 45-75%/ 0,05% amonijum hidroksid u vodi) dajući [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[trans-2-fluorciklopropil]metanon (50 mg, 24%) u vidu smeđeg ulja. Racemska supstanca je odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2R)-2-fluor ciklopropil]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,365 min) (15,1 mg, 30%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,49−7,44 (m, 3H), 7,33−7,30 (m, 2H), 5,99−5,92 (m, 1H), 5,02−5,00 (m, 0,5H), 4,86−4,82 (m, 0,5H), 3,89−3,86 (m, 1H), 3,51−3,47 (m, 1H), 3,34−3,33 (m, 0,5H), 3,32−3,22 (m, 0,5H), 1,78−1,70 (m, 1H), 1,63−1,57 (m, 1H). LC-MS RT= 0,822 min, m/z = 308,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,822 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,0.
[(SS)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2S)-2-fluor ciklopropil]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,163 min) (13,6 mg, 27%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,47-7,43 (m, 3H), 7,31-7,29 (m, 2H), 5,98-5,94 (m, 1H), 5,05-4,99 (m, 0,5H), 4,86-4,83 (m, 0,5H), 3,91-3,86 (m, 1H), 3,47-3,45 (m, 1H), 3,34-3,26 (m, 1H), 1,74-1,68 (m, 1H), 1,62-1,56 (m, 1H). LC-MS RT= 0,818 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,818 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: Kolona: AD (250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2B:0,1%NH3H2O EtOH; gradijent: od 20% do 20% B; protok: 50 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 48
Primer 68
ciklopropil-[(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon i ciklopropil-[(5R)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il] metanon
U rastvor 7,7-difluor-N-metoksi-N-metil-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (100 mg, 0,32 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 2,6 ml, 1,3 mmol) na -78 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-(7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (60 mg, 64%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,38–7,31 (m, 3H), 7,16–7,11 (m, 2H), 5,66–5,60 (m, 1H), 3,73–3,61 (m, 1H), 3,23–3,11 (m, 1H), 3,00–2,96 (m, 1H), 1,31–1,19 (m, 2H), 1,11–0,96 (m, 2H).
Ovaj racemat je dalje odvojen hiralnom SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: ciklopropil-[(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 2,971 min) (22,4 mg, 37%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45–7,41 (m, 3H), 7,23–7,21 (m, 2H), 5,73–5,68 (m, 1H), 3,75–3.70 (m, 1H), 3,31– 3,19 (m, 1H), 3,09–3,04 (m, 1H), 1,37–1,32 (m, 2H), 1,14–1,09 (m, 2H). LCMS RT= 1,238 min, m/z = 290,2 [M+H]<+>.
12
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,238 min, ESI<+>nađeno [M+H] =290,2.
ciklopropil-[(5R)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,677 min) (24,7 mg, 41%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45–7,41 (m, 3H), 7,23–7,20 (m, 2H), 5,72–5,68 (m, 1H), 3,81–3.66 (m, 1H), 3,28–3,21 (m, 1H), 3,09–3,05 (m, 1H), 1,37–1,27 (m, 2H), 1,17–1,05 (m, 2H). LCMS RT= 1,239 min, m/z = 290,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,239 min, ESI<+>nađeno [M+H] =290,2.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel OJ (250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2B:etanol (0,1%NH3H2O) gradijent: od 25% do 25% B tokom 5 minuta: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C
Metod 49
Primer 70
(2,2-difluorspiro[2,3]heksan-5-il)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1,1-difluor-N-metoksi-N-metilspiro[2,3]heksan-5-karboksamid Smeša 1-hidroksibenzotriazola (83 mg, 0,62 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (180 mg, 1,85 mmol), 2,2-difluorspiro[2,3]heksan-5-karboksilne kiseline (200 mg, 1,23 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (284 mg, 1,48 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (478 mg, 3,70 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h i razblažena vodom (30 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 2,2-difluor-N-metoksi-N-metilspiro[2,3]heksan-5-karboksamid (130 mg, 51%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,67 (s, 3H), 3,65−3,51 (m, 1H), 3,21 (s, 3H), 2,78−2,68 (m, 1H), 2,57−2,47 (m, 1H),
Korak 2: (2,2-difluorspiro[2,3]heksan-5-il)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) i 2,2-difluor-N-metoksi-N-metil-spiro[2,3]heksan-5-karboksamida (73 mg, 0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u n-heksanu, 0,28 ml, 0,71 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 47-77% / 0,2% mravlja kiselina u vodi), dajući (2,2-difluorspiro[2,3]heksan-5-il)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (10,8 mg, 17%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43−7,38 (m, 3H), 7,28−7,26 (m, 2H), 6,18−6,02 (m, 1H), 5,64−5,62 (m, 1H), 4,24−4,08 (m, 1H), 3,87−3,64 (m, 1H), 2,91−2,74 (m, 1H), 2,68−2,28 (m, 4H), 1,32−1,23 (m, 2H). LCMS RT= 1,281 i 1,298 min, m/z = 348,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,281 i 1,298 min, ESI+ nađeno [M+H] = 348,1
Metod 50
Primer 71
1-[(5S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
Korak 1: etil 4-(2-hlorfenil)-4-oksobutanoat
12
U rastvor 2-hloracetofenona (100,0 g, 646,87 mmol), 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1h)-pirimidinona (156,4 ml, 1293,70 mmol) u tetrahidrofuranu (500 ml) dodat je [bis(trimetilsilil)amino]litijum (1,0 M u tetrahidrofuranu, 711,6 ml, 711,56 mmol) na -60 °C. Smeša je mešana na -60 °C tokom 100 min i brzo je dodat etil bromacetat (143,5 ml, 1293,7 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana je tokom 15 h. Reakcija je ugašena dodavanjem vode (400 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 1000 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 500 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (1500 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući etil 4-(2-hlorfenil)-4-okso-butanoat (50,0 g, 32%) u vidu bezbojnog ulja. Koristi se u takvom stanju za sledeći korak.
Korak 2: terc-butil (2-(2-hlorfenil)-5-oksopirolidin-1-il)karbamat
U rastvor etil 4-(2-hlorfenil)-4-okso-butanoata (10,0 g, 41,55 mmol) u sirćetnoj kiselini (33 ml) i tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je terc-butil hidrazinkarboksilat (11,0 g, 83,10 mmol). Smeša je mešana na 85 °C tokom 12 h i dodat je natrijum cijanoborhidrid (7,8 g, 124,65 mmol). Dobijena smeša je mešana još 12 h na 85 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (100 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 80 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum karbonata (80 ml), hlorovodoničnom kiselinom (2 M, 80 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 20 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući terc-butil N-[2-(2-hlorfenil)-5-okso-pirolidin-1-il]karbamat (5,0 g, 39%) u vidu svetložutog ulja. LCMS RT= 0,840 min, m/z = 255,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,840 min, ESI+ nađeno [M-55] = 255,0.
Korak 3: 1-amino-5-(2-hlorfenil)pirolidin-2-on
12
Rastvor terc-butil N-[2-(2-hlorfenil)-5-okso-pirolidin-1-il]karbamata (5,0 g, 16,09 mmol) u hlorovodoničnoj kiselini (4,0 M u 1,4-dioksanu, 40,2 ml, 160,89 mmol) mešan je na 25 °C tokom 12 h i filtriran. Filter pogača je isprana etil acetatom (20 ml) i rastvorena u vodi (20 ml). Rastvor je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlormetanom (4 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-amino-5-(2-hlorfenil)pirolidin-2-on (3,3 g, 97%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,615 min, m/z = 211,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,615 min, ESI+ nađeno [M+H] = 211,0.
Korak 4: 1-amino-5-(2-hlorfenil)pirolidin-2-on
Smeša 1-amino-5-(2-hlorfenil)pirolidin-2-ona (3,3 g, 15,67 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (4,6 g, 31,33 mmol) u etanolu (50 ml) mešana je na 70 °C tokom 18 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-[[2-(2-hlorfenil)-5-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat (4,8 g, 99%) u vidu smeđeg ulja. LCMS RT= 0,675 min, m/z = 310,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,675 min, ESI+ nađeno [M+H] = 310,0.
Korak 5: (S)-etil 5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 2-[[2-(2-hlorfenil)-5-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (4,8 g, 15,5 mmol) i fosfor oksihlorida (21,4 g, 139,5 mmol) mešana je na 100 °C tokom 3 h i ohlađena na 25 °C. Smeša je pažljivo sipana u vodu (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući etil 5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (3,0 g, 66%) u vidu smeđeg ulja. LCMS RT= 0,741 min, m/z = 292,1 [M H]<+>.
12
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,741 min, ESI+ nađeno [M+H] = 292,1.
Gore navedena racemska supstanca (1,0 g, 3,43 mmol) dalje je odvojena putem SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(S)-etil 5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (pik 2, retenciono vreme = 4,111 min) (400 mg, 40%) i (R)-etil 5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (pik 1, retenciono vreme = 3,762 min) (400 mg, 40%), oba u vidu čvrstih supstanci žute boje.
SFC kondicioniranje: Kolona: AD-3 (250 mm*30 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B 30% kraj B 30%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Korak 6: (S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
Smeša etil (S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (400 mg, 1,37 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (287 mg, 6,86 mmol) u etanolu (2 ml), vodi (2 ml) i tetrahidrofuranu (2 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u ledenoj vodi (2 ml) i podešen na pH = 3 dodavanjem hlorovodonične kiseline (2 M). Čvrsti proizvod je sakupljen filtracijom i ispran acetonitrilom, dajući sirovu (S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksilnu kiselinu (350 mg, 97%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,642 min, m/z = 264,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,642 min, ESI+ nađeno [M+H] = 264,0.
Korak 7: (S)-5-(2-hlorfenil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša 1-hidroksibenzotriazola (215 mg, 1,59 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (194 mg, 1,99 mmol), (S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-
12
b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (350 mg, 1,33 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (305 mg, 1,59 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (515 mg, 3,98 mmol) u dihlormetanu (8 ml) mešana je na 25 °C tokom 12 h. Reakcija je razblažena vodom (15 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 25 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 10 do 35% etil acetat u petrol etru), dajući (S)-5-(2-hlorfenil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamid (300 mg, 74%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,700 min, m/z = 307,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,700 min, ESI+ nađeno [M+H] = 307,0.
Korak 8: 1-[(SS)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
U ohlađeni rastvor (0 °C) (S)-5-(2-hlorfenil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (20 mg, 0,07 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) dodat je etilmagnezijum bromid (1,0 M u heksanu, 0,42 ml, 0,42 mmol). Smeša je mešana na 0-5 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 32-62% / 0,2% mravlja kiselina u vodi), dajući 1-[(5S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on (5,7 mg, 31%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,52–7,50 (m, 1H), 7,38–7,33 (m, 2H), 6,96–6,94 (m, 1H), 5,99–5,96 (m, 1H), 3,40–3,33 (m, 1H), 3,14–3,11 (m, 2H), 3,07–3,03 (m, 2H), 2,68–2,65 (m, 1H), 1,18 (d, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 1,185 min, m/z = 276,1 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,185 min, ESI+ nađeno [M+H] = 276,1
Metod 51
12
Primer 72
[1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(etoksikarbonil)ciklopropankarboksilna kiselina
U smešu dietil 1,1-ciklopropandikarboksilata (10,0 g, 53,7 mmol) u etanolu (70 ml) i vodi (35 ml) dodat je natrijum hidroksid (2,1 g, 53,7 mmol). Reakcija je mešana na 25 °C tokom 16 h i razblažena etil acetatom (60 ml). Organski sloj je odbačen. Vodena faza je podešena na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 80 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom dajući sirovu 1-etoksikarbonil ciklopropankarboksilnu kiselinu (6,6 g, 78%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12,86 (br s, 1H), 4,31−4,17 (m, 2H), 1,87−1,81 (m, 2H),
Korak 2: etil 1-(hidroksimetil)ciklopropankarboksilat
U smešu 1-etoksikarbonil ciklopropankarboksilne kiseline (6,6 g, 41,7 mmol) i trietilamina (6,98 ml, 50,1 mmol) u tetrahidrofuranu (60 ml) ukapavanjem je dodat izobutil hloroformat (8,12 ml, 62,6 mmol) na 0 °C. Nakon dodavanja, reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h i filtrirana. Filtrat je zatim dodat u smešu natrijum borhidrida (1,6 g, 41,7 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) i vodi (10 ml). Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem 10% sirćetne kiseline (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući etil 1-(hidroksimetil)ciklopropankarboksilat (3,8 g, 63%) u vidu bezbojnog ulja.
1
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17–4,08 (m, 2H), 3,62 (s, 2H), 1,29–1,21 (m, 5H), 0,87–0,84 (m, 2H).
Korak 3: etil 1-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)ciklopropankarboksilat
U rastvor etil 1-(hidroksimetil)ciklopropan-1-karboksilata (1,0 g, 6,94 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) uz mešanje je dodat imidazol (1,4 g, 20,81 mmol) i tercbutildifenilhlorsilan (3,8 g, 13,87 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h i sipana u vodu (30 ml). Rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući etil 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropankarboksilat (2,3 g, 87%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,70–7,61 (m, 4H), 7,46–7,35 (m, 6H), 4,15–4,06 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,17–1,11 (m, 2H), 1,04 (s, 9H),
Korak 4: 1-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)ciklopropankarboksilna kiselina Smeša etil 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropankarboksilata (1,0 g, 2,61 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (438 mg, 10,46 mmol) u tetrahidrofuranu (16 ml), metil alkoholu (16 ml) i vodi (8 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Vodeni ostatak je ispran etil acetatom (15 ml) i podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M) na 0 °C. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropan karboksilnu kiselinu (950 mg, 100%) u vidu blago lepljive čvrste supstance bele boje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
1 1
Korak 5: 1-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-N-metoksi-N-metilciklopropankar boksamid
Smeša 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropankarboksilne kiseline (950 mg, 2,68 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (523 mg, 5,36 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1,43 ml, 8,04 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (217 mg, 1,61 mmol) i 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (771 mg, 4,02 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h. Dobijena smeša je sipana u vodu (20 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (15% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (700 mg, 66%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,68–7,63 (m, 4H), 7,42–7,25 (m, 6H), 3,79 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,23 (s, 3H), 1,04–0,99 (m,
Korak 6: (1-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)ciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U smešu (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg, 0,35 mmol) i 1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (282 mg, 0,71 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,43 ml, 1,06 mmol) u atmosferi azota na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru,
1 2
Rf= 0,4), dajući [1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (60 mg, 31%) u vidu svetlosmeđeg ulja.
Korak 7: [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor [1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (60 mg, 0,11 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 0,17 ml, 0,17 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i sipana u vodu (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 25-55% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (7,8 mg, 18%) u vidu svetlosmeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44-7,38 (m, 3H), 7,30-7,26 (m, 2H), 6,19-6,16 (m, 0,5H), 6,05-6,02 (m, 0,5H), 5,65-5,61 (m, 1H), 3,97-3,85 (m, 2H), 3,84-3,68 (m, 1H), 2,87-2,80 (m, 1H), 1,72-1,67 (m, 2H), 1,11-1,08 (m, 2H). LC-MS RT= 0,695 min, m/z = 302,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,695 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,1.
Metod 52
Primer 73
(3,3-diflurociklobutil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il)metanon
1
Korak 1: 3,3-difluor-N-metoksi-N-metilciklobutankarboksamid
Smeša 1-hidroksibenzotriazola (297 mg, 2,20 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (845 mg, 4,41 mmol), 3,3-difluorciklobutankarboksilne kiseline (500 mg, 3,67 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (537 mg, 5,51 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1187 mg, 9,18 mmol) u dihlormetanu (8 ml) mešana je na 25 °C tokom 5 h i razblažena vodom (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 3,3-difluor-N-metoksi-N-metil-cilobutankarboksamid (430 mg, 65%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,67 (s, 3H), 3,33–3,22 (m, 1H), 3,20 (s, 3H),
Korak 2: (3,3-difluorciklobutil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
U rastvor 3,3-difluor-N-metoksi-N-metil-cilobutankarboksamida (76 mg, 0,43 mmol) i (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (60 mg, 0,21 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,26 ml, 0,64 mmol) na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (25 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45%/0,225% hlorovodonična kiselina u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni (3,3-difluorciklobutil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (12,4 mg, 18%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,39 (m, 3H), 7,30–7,28 (m, 2H), 6,20–6,17 (m, 0,5H), 6,06–6,03 (m, 0,5H), 5,66–5,64 (m, 1H), 3,97–3,80 (m, 1H), 3,78–3,74 (m, 1H), 2,91–2,83 (m, 5H). LCMS RT= 1,241 min, m/z =322,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,241 min, ESI+ nađeno [M+H] = 322,2.
Metod 53
1 4
Primer 74
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(2-(piridin-2-il)ciklopropil)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-2-(piridin-2-il)ciklopropankarboksamid
Smeša 1-hidroksibenzotriazola (149 mg, 1,10 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (423 mg, 2,21 mmol), 2-(piridin-2-il)ciklopropankarboksilne kiseline (300 mg, 1,84 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (269 mg, 2,76 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (594 mg, 4,60 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i razblažena vodom (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metil-2-(piridin-2-il)ciklopropankarboksamid (300 mg, 79%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,47−8,43 (m, 1H), 7,57−7,51 (m, 1H), 7,27−7,22 (m, 1H), 7,10−7,02 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 2,76 (s, 1H), 2,61−2,52 (m, 1H), 1,63−1,55 (m, 2H).
Korak 2: ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(2-(piridin-2-il)ciklopropil)metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,53 mmol) i N-metoksi-N-metil-2-(2-piridil)ciklopropankarboksamida (219 mg, 1,06 mmol) u 2-metil tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u n-heksanu, 0,64 ml, 1,6 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana oko 30 minuta na -78 °C i deaktivirana je dodavanjem zasićenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 32-
1
62%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[2-(2-piridil)ciklopropil] metanon (11,0 mg, 6%) u vidu bledoružičaste čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,39−8,37 (m, 1H), 7,69−7,65 (m, 1H), 7,42−7,31 (m, 4H), 7,27−7,17 (m, 3H), 6,18−6,02 (m, 1H), 5,65−5,61 (m, 1H), 3,83−3,67 (m, 1H), 3,56−3,51 (m, 1H), 2,88−2,73 (m, 2H), 1,86−1,79 (m, 2H). LCMS RT= 0,745 min, m/z = 348,9 [M H]+.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 0,745 min, ESI+ nađeno [M+H] =348,9.
Metod 54
Primer 75
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon
U rastvor trans-N-metoksi-N,2-dimetil-ciklopropankarboksamida (137 mg, 0,96 mmol), (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (180 mg, 0,64 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum bromid (3,0 M u tetrahidrofuranu, 0,85 ml, 2,55 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (30% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,2), dajući proizvoljno dodeljeni [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon (trans smeša metilciklopropil smeše) (80 mg, 44%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,42−7,37 (m, 3H), 7,28−7,26 (m, 2H), 6,20−6,16 (m, 0,5H), 6,05−6,02 (m, 0,5H), 5,65−5,63 (m, 1H), 3,78−3,68 (m, 1H), 2,83−2,75 (m, 2H), 1,59−1,52 (m, 1H), 1,45−1,37 (m, 1H), 1,19−1,14 (m, 3H), 1,01−0,91 (m, 1H). LC-MS RT= 0,793 min, m/z = 286,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,793 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1.
Metod 55
1
Primer 76
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2,3] heksan-5-il-metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-spiro[2,3]heksan-5-karboksamid
Smeša spiro[2,3]heksan-5-karboksilne kiseline (150 mg, 1,19 mmol), N,N-diizopropiletilamina (0,5 ml, 2,97 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (96,4 mg, 0,71 mmol) i N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (174 mg, 1,78 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i razblažena vodom (30 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metilspiro[2,3]heksan-5-karboksamid (170 mg, 84%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,66 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 2,60–2,54 (m, 2H), 2,17–2,12 (m, 2H), 0,50–0,40 (m, 4H).
Korak 2: [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro [2,3] heksan-5-il-metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-spiro[2,3]heksan-5-karboksamida (43 mg, 0,25 mmol), (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,21 ml, 0,42 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml). Rastvor je zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC
1
(voda (0,05% amonijum hidroksid V/V)-acetonitril 45-70%), dajući proizvoljno dodeljeni [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2,3]heksan-5-ilmetanon (42 mg, 75%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42−7,37 (m, 3H), 7,27−7,23 (m, 2H), 6,10−5,94 (m, 1H), 5,50−5,47 (m, 1H), 4,32−4,26 (m, 1H), 3,67−3,60 (m, 1H), 3,01−2,70 (m, 1H), 2,65−2,57 (m, 2H), 2,31−2,26 (m, 2H), 0,51−0,47 (m, 2H), 0,43−0,40 (m, 2H). LC-MS RT= 0,904 min, m/z = 312,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,904 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 312,0.
Metod 56
Primer 77
ciklopropil-[(SS)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (-78 °C) (5S)-5-(2-hlorfenil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (100 mg, 0,33 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 4,24 ml, 2,12 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 38-68% / 0,2% mravlja kiselina u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S)-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (23,5 mg, 25%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,51 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,49–7,33 (m, 2H), 6,96 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,00– 5,96 (m, 1H), 3,45–3,36 (m, 1H), 3,15–3,10 (m, 2H), 3,05–2,98 (m, 1H), 2,70–2,60 (m, 1H), 1,20–1,15 (m, 2H), 1,11–1,07 (m, 2H). LCMS RT= 1,187 min, m/z = 288,1 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,187 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,1
Metod 57
1
Primer 78
ciklopropil-[rac-(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo [1,2-b] pirazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]metanon
Korak 1: rac-(4S,6S)-4-fluor-N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamid
Smeša rac-(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksilne kiseline (800 mg, 3,25 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (412 mg, 4,22 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1,34 ml, 8,12 mmol) i 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfata(V) (1,6 g, 4,22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) mešana je na 25 °C tokom 3 h. Smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(4S,6S)-4-fluor-N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamid (800 mg, 85%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT = 0,707 min, m/z = 290,1 [M H]+.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,707 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Korak 2: ciklopropil-[rac-(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (0 °C) rac-(4S,6S)-4-fluor-N-metoksi-N-metil-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-karboksamida (40 mg, 2,77 mmol) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 1,5 ml, 0,75 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani
1
zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[rac-(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]metanon (28,6 mg, 75%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41–7,36 (m, 3H), 7,27–6,90 (m, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,09–5,92 (m, 1H), 5,53–5,49 (m, 1H), 3,58–3,47 (m, 1H), 2,97–2,79 (m, 2H), 1,22– 1,19 (m, 2H), 0,99–0,96 (m, 2H). LCMS RT= 0,870 min, m/z = 270,9 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,870 min, ESI+ nađeno [M H] = 270,9.
Korak 3: ciklopropil-[(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]metanon (G03280299)
Ciklopropil-[rac-(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il] metanon (600 mg, 2,22 mmol, iz druge veće serije) dalje je odvojen putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,306 min) (250 mg, 41,7%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,39–7,37 (m, 3H), 7,23–7,21 (m, 2H), 6,93 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,09–6,07 (m, 0,5H), 5,95–5,93 (m, 0,5H), 5,51–5,49 (m, 1H), 3,54–3,45 (m, 1H), 2,96–2,92 (m, 1H), 2,85–2,82 (m, 1H), 1,23–1,20 (m, 2H) 0,99–0,96 (m, 2H). LCMS RT= 0,883 min, m/z = 271,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,883 min, ESI+ nađeno [M+H] = 271,0.
SFC kondicioniranje: Kolona: OD-H (250 mm*30 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B 30% kraj B 30%; protok (60 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metod 58
14
Primer 79
[1-(fluormetil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(fluormetil)-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid
Smeša 1-(fluormetil)ciklopropankarboksilne kiseline (543 mg, 4,60 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (1057 mg, 5,52 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (372 mg, 2,76 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (897 mg, 9,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (594 mg, 4,60 mmol) u dihlormetanu (15 ml) mešana je na 30 °C tokom 18 h i deaktivirana je dodavanjem vode (10 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(fluormetil)-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (135 mg, 18%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,63–4,47 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 1,30–1,23 (m, 2H), 0,95–0,85 (m, 2H).
Korak 2: [1-(fluormetil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor 1-(fluormetil)-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (80 mg, 0,50 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (70 mg, 0,25 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 0,3 ml, 0,75 mmol) na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući proizvoljno dodeljeni [1-(fluormetil)ciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (15,6 mg, 20%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,43−7,33 (m, 3H), 7,26−7,23 (m, 2H), 6,17−6,12 (m, 0,5H), 6,01−5,98 (m, 0,5H), 5,62−5,60 (m, 1H), 4,83−4,76 (m, 1H), 4,73−4,63 (m, 1H), 3,76−3,65 (m, 1H), 2,85−2,77 (m, 1H), 1,86−1,79 (m, 2H), 1,23−1,16 (m, 2H). LC-MS RT= 1,188 min, m/z = 304,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,188 min, ESI+ nađeno [M+H] = 304,2.
Metod 59
Primer 80
(3,3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: terc-butil(ciklopent-3-en-1-iloksi)dimetilsilan
U rastvor 3-ciklopenten-1-ola (10,0 g, 118,88 mmol) u tetrahidrofuranu (130 ml) dodat je imidazol (16,0 g, 237,76 mmol) i terc-butildimetil hlorsilan (23,0 g, 154,54 mmol). Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 3% etil acetat u petrol etru), dajući terc-butil-ciklopent-3-en-1-iloksidimetil-silan (22,0 g, 93%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,61 (s, 2H),
0,82 (s, 9H), 0,02 (s, 6H).
Korak 2: etil 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)biciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat U rastvor terc-butil-ciklopent-3-en-1-iloksi-dimetil-silana (20,0 g, 100,82 mmol) u dihlormetanu (160 ml) dodat je etil diazoacetat (13,8 g, 120,98 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat (15,0 g, 52%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,49−4,44 (m, 2H), 2,53−2,48 (m, 2H),
0,83 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).
Korak 3: etil 3-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat
U rastvor etil 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilata (15,0 g, 52,73 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (20,7 g, 79,09 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 12 h i razblažena vodom (200 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 3-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat (8,8 g, 98%) u vidu žutog ulja.
Korak 4: etil 3-oksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat
U rastvor Des-Martinov perjodinana (32,9 g, 77,55 mmol) u dihlormetanu (200 ml) dodat je etil 3-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat (8,8 g, 51,70 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h i razblažena vodom (200 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 80 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3-oksobiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat (8,0 g, 92%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,15–4,12 (m, 2H), 2.68–2,62 (m, 2H), 2,30– 2,25
Korak 5: etil 3, 3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat
U rastvor etil 3-oksobiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilata (2,0 g, 11,89 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (19,2 g, 118,91 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 40 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani
14
vodom (40 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3, 3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilat (1,7 g, 75%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,12–4,07 (m, 2H), 2,48–2,38 (m, 2H), 2,29–2,20 (m, 2H), 1,93–1,92 (m, 2H), 1,63– 1,62
Korak 6: 3,3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilna kiselina
U rastvor etil 3,3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilata (500 mg, 2,63 mmol) u tetrahidrofuranu (24 ml) dodat je rastvor litijum hidroksid monohidrata (330 mg, 7,89 mmol) u vodi (7 ml). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Vodeni ostatak je podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M) na 0 °C. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu 3,3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilnu kiselinu (250 mg, 59%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 7: 3,3-difluor-N-metoksi-N-metilbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamid Smeša 1-hidroksibenzotriazola (250 mg, 1,85 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (426 mg, 2,22 mmol), 3,3-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-6-karboksilne kiseline (300 mg, 1,85 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (271 mg, 2,78 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (598 mg, 4,63 mmol) u dihlormetanu (40 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i razblažena vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 3,3-difluor-N-metoksi-N-metil-biciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamid (102 mg, 27%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,522 min, m/z =206,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,522 min, ESI+ nađeno [M+H] = 206,1.
Korak 8: (3,3-difluor-6-biciklo[3.1.0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor 3,3-difluor-N-metoksi-N-metil-biciklo[3.1.0]heksan-6-karboksamida (102 mg, 0,50 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (70 mg, 0,25 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,37 ml, 0,74 mmol) na -78 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (25 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 20-45%/0,225% hlorovodonična kiselina u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni (3,3-difluor-6-biciklo[3.1.0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (11 mg, 13%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44−7,40 (m, 3H), 7,29−7,27 (m, 2H), 6,19−6,16 (m, 0,5H), 6,05−6,02 (m, 0,5H), 5,65−5,64 (m, 1H), 3,79−3,73 (m, 1H), 3,03−3,02 (m, 1H), 2,90−2,80 (m, 1H), 2,54−2,30 (m, 2H), 2,30−2,25 (m, 2H), 2,20−2,18 (m, 2H). LCMS RT= 1,255 min, m/z = 348,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,255 min, ESI+ nađeno [M+H] = 348,2.
Metod 60
Primer 81
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-[2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
Korak 1: (E)-4,4,4-trifluor-N-metoksi-N-metilbut-2-enamid
14
Smeša N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (4,42 g, 45,30 mmol), N,N-diizopropiletilamina (10,2 ml, 56,94 mmol), 4,4,4-trifluorbut-2-enoinske kiseline (5,00 g, 35,70 mmol) i 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (8,21 g, 42,84 mmol) u dihlormetanu (50 ml) mešana je na 0 °C tokom 5 h. Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 50 ml), osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući (E)-4,4,4-trifluor-N-metoksi-N-metil-but-2-enamid (2,50 g, 38%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,522 min, m/z = 184,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,522 min, ESI+ nađeno [M+H] = 184,1.
Korak 2: N-metoksi-N-metil-2-(trifluormetil)ciklopropankarboksamid
U rastvor trimetilsulfoksonijum jodida (6,01 g, 27,30 mmol) u dimetil sulfoksidu (50 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 1,09 g, 27,30 mmol). Smeša je mešana tokom 1 h i dodat je rastvor (E)-4,4,4-trifluor-N-metoksi-N-metil-but-2-enamida (2,50 g, 13,65 mmol) u dimetil sulfoksidu (20 ml). Dobijena smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i razblažena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (100 ml). Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (150 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (35-65% acetonitril/ 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući N-metoksi-N-metil-2-(trifluormetil)ciklopropankarboksamid (700 mg, 26%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 0,722 min, m/z = 197,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,722 min, ESI+ nađeno [M+H] = 197,9.
Korak 3: [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-[2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-2-(trifluormetil)ciklopropankarboksamida (98 mg, 0,50 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg,
14
0,35 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 1,06 ml, 2,13 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3 x 10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0-40% etil acetat u petrol etru), dajući [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[2-(trifluormetil) ciklopropil]metanon (30 mg, 24%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45−7,39 (m, 3H), 7,32−7,29 (m, 2H), 6,22−6,05 (m, 1H), 5,70−5,65 (m, 1H), 3,84−3,71 (m, 1H), 3,41−3,37 (m, 1H), 2,90−2,79 (m, 1H), 2,45−2,40 (m, 1H), 1,53−1,46 (m, 2H). LC-MS RT= 0,904 min, m/z = 339,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,904 min, ESI+ nađeno [M+H] = 339,9.
Metod 61
Primer 82
(6,6-difluor-3-biciklo[3.1.0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 6,6-difluor-N-metoksi-N-metilbiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksamid Smeša 6,6-difluorbiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilne kiseline (150 mg, 0,93 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (355 mg, 1,85 mmol), N,N-diizopropiletilamina (359 mg, 2,78 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (180 mg, 1,85 mmol) i 1-hidroksibenzotriazola (125 mg, 0,93 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h. Smeša je razblažena vodom (15 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je
14
prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0-30% etil acetat u petrol etru), dajući 6,6-difluor-N-metoksi-N-metil-biciklo[3.1.0]heksan-3-karboksamid (100 mg, 53%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,540 i 0,572 min, m/z = 206,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,540 i 0,572 min, ESI+ nađeno [M+H] = 206,0.
Korak 2: (6,6-difluor-3-biciklo[3.1.0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor 6,6-difluor-N-metoksi-N-metil-biciklo[3.1.0]heksan-3-karboksamida (33 mg, 0,16 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (30 mg, 0,11 mmol) u tetrahidrofuranu (6 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,16 ml, 0,32 mmol) u atmosferi azota na -78 °C. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (15 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (40%-70% acetonitril / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni (6,6-difluor-3-biciklo [3.1.0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (3,9 mg, 11%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42−7,39 (m, 3H), 7,26−7,23 (m, 2H), 6,12−5,94 (m, 1H), 5,52−5,48 (m, 1H), 4,19−4,15 (m, 0,5H), 3,88−3,85 (m, 0,5H), 3,68−3,59 (m, 1H), 3,02−2,91 (m, 1H), 2,39−2,30 (m, 4H), 2,08−2,04 (m, 2H). LCMS RT= 0,896 min, m/z = 347,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,896 min, ESI+ nađeno [M+H] = 347,9.
Metod 63
Primer 84
14
ciklopropil-[(5S,7S)-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: cis-2-brom-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol U rastvor 2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1,20 g, 4,28 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 342 mg, 8,57 mmol). Smeša je mešana tokom 20 minuta i ukapan je jodmetan (3,00 g, 21,14 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana tokom 2 h i sipana u ledenu vodu (70 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 80 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 70 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 8 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-brom-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (330 mg, 26%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,748 min, m/z = 294,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,748 min, ESI+ nađeno [M+H] = 294,0.
Korak 2: ciklopropil-[(5S,7S)-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4] triazol-2-il]metanon
U rastvor cis-2-brom-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (220 mg, 0,75 mmol) i N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (193 mg, 1,50 mmol) u tetrahidrofuranu (6 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 2,24 ml, 4,49 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (25 ml). Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil(cis-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il) metanon (180 mg, 85%) u vidu smeđeg ulja.
14
Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: ciklopropil-[(5S,7S)-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 4,247 min) (29,8 mg, 16%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,40–7,31 (m, 5H), 5,56–5,52 (m, 1H), 4,94–4,92 (m, 1H), 3,67–3,59 (m, 4H), 3,02–3,01 (m, 1H), 2,62–2,57 (m, 1H), 1,17–1,15 (m, 2H), 1,10–1,07 (m, 2H). LCMS RT= 0,709 min, m/z = 284,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,709 min, ESI+ nađeno [M+H] = 284,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: Lux Cellulose-2, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: 40% etanola (0,05% DEA) u COz. Protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 64
Primer 85
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(4-fluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 4-fluorbenzaldehida (50,0 g, 402,87 mmol) u tetrahidrofuranu (500 ml) dodat je alil magnezijum hlorid (1,82 M u tetrahidrofuranu, 288,0 ml, 523,73 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana tokom 2 h, pre nego što je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (200 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(4-fluorfenil)but-3-en-1-ol (66,8 g, 99%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,32– 7,28 (m, 2H), 7,04–7,00 (m, 2H), 5,80–5,73 (m, 1H), 5,17–5,12 (m, 2H), 4,70–4,67 (m, 1H), 2,48–2,46 (m, 2H), 2,44–2,31 (m, 1H).
1
Korak 2: terc-butil((1-(4-fluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)dimetilsilan
U rastvor 1-(4-fluorfenil)but-3-en-1-ol (66,8 g, 401,95 mmol) u dihlormetanu (500 ml) dodat je imidazol (54,7 g, 803,9 mmol) i terc-butil hlordimetilsilan (72,7 g, 482,34 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i razblažena vodom (500 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-[1-(4-fluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (111,0 g, 98%) u vidu svetlog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41−7,37 (m, 2H), 7,14−7,10 (m, 2H), 5,92−5,85 (m, 1H), 5,15−5,11 (m, 2H), 4,81−4,79 (m, 1H), 2,58−2,45 (m, 2H), 1,01 (s, 9H), 0,15 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(4-fluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(4-fluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (110,0 g, 392,23 mmol) u vodi (500 ml) i tetrahidrofuranu (500 ml) dodat je osmijum tetraoksid (0,5 g, 1,97 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 25 °C, dodat je natrijum perjodat (335,6 g, 1568,90 mmol) u malim porcijama tokom 2 sata i dobijena smeša je mešana još 2 sata na 25 °C. Smeša je deaktivirana dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (500 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (500 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 2% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(4-fluorfenil)propanal (70,0 g, 63%) u vidu žutog ulja.
<1>HNMR (400 Hz, CDCl3) δ 9,95−9,90 (m, 1H), 7,48−7,44 (m, 2H), 7,19−7,15 (m, 2H), 5,37−5,34 (m, 1H), 3,02−2,95 (m, 1H), 2,79−2,77 (m, 1H), 1,01 (s, 9H), 0,19 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
1 1
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(4-fluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (70,1 g, 225,32 mmol) u tetrahidrofuranu (500 ml) dodat je n-butil litijum (2, 5 M u heksanima, 98,2 ml, 245,37 mmol) kap po kap u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C i ukapan je rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(4-fluorfenil)propanala (63,0 g, 223,06 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (500 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(4-fluorfenil)propan-1-ol (95,0 g, 83%) u vidu žutog ulja.
Korak 5: 2-brom-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-ol Smeša 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil) silil]oksi-3-(4-fluorfenil)propan-1-ola (40,0 g, 77,75 mmol) i 2,2,2-trifluorsirćetne kiseline (150 ml, 1554,9 mmol) mešana je na 55 °C tokom 8 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (300 ml) i podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (150 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (150 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 20 do 33% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (23,5 g, 100%) u vidu čvrste supstance žute boje. LCMS RT= 0,679 min, m/z = 300,0 [M+H]<+>.
1 2
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,679 min, ESI+ nađeno [M+H] = 300,0.
Korak 6: cis-2-brom-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol
U ohlađeni rastvor (0 °C) 2-brom-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-7-ola (6,0 g, 20,13 mmol) u dihlormetanu (50 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (10,7 ml, 80,51 mmol) u dihlormetanu (8 ml). Nakon 30 minuta mešanja, smeša je sipana u ledenu vodu (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-brom-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (2,1 g, 35%) u vidu svetložute čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 400 MHz), δ 7,26−7,23 (m, 2H), 7,12−7,08 (m, 2H), 6,07−5,91 (m, 1 H), 5,45−5,42 (m, 1H), 3,64−3,52 (m,
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4] triazol-2-il]metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (378 mg, 2,94 mmol) i cis-2-brom-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (400 mg, 1,34 mmol) u tetrahidrofuranu (15 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 2,66 ml, 5,34 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 8 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (30% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,25), dajući ciklopropil-[cis-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-
1
pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon (180 mg, 47%) u vidu čvrste supstance bledožute boje. LCMS RT= 0,733 min, m/z = 290,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,733 min, ESI+ nađeno [M+H] = 290,1.
Ova cis smeša je dalje odvojena hiralnom SFC do proizvoljno dodeljenog: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (pik 2, retenciono vreme = 3,981 min) (71 mg, 39%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,36–7,32 (m, 2H), 7,19–7,14 (m, 2H), 6,20–6,04 (m, 1H), 5,65–5,65 (m, 1H), 3,83–3,69 (m, 1H), 3,10–2,97 (m, 1H), 2,89–2,77 (m, 1H), 1,20–1,09 (m, 4H). LCMS RT= 0,833 min, m/z = 289,9 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,833 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,9.
Takođe je prikupljen 5R,7R izomer (pik 1, retenciono vreme = 3,439 min) (65 mg, 36%) u vidu čvrste supstance bele boje.
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 65
Primer 86
2-(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil) ciklopropankarbonitril
Korak 1: 2-brom-1-(rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4] triazol-2-il)etanon
U smešu 1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanona (250 mg, 1,02 mmol) u sirćetnoj kiselini (3 ml) dodat je piridin hidrobromid
1 4
perbromid (370 mg, 1,16 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i razblažena etil acetatom (40 ml).
Rastvor je ispran vodom (2 × 20 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]etanon (185 mg, 56%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,771 min, m/z =326,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,771 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 326,0.
Korak 2: 2-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karbonil)ciklopropankarbonitril
U smešu 2-brom-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanona (120 mg, 0,37 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) i dimetil sulfoksidu (0,5 ml) dodat je 1,4-diazabiciklo[2.2.2.]oktan (53 mg, 0,48 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 20 °C, u smešu je dodat natrijum karbonat (76 mg, 0,72 mmol) i akrilonitril (6,2 ml, 94,23 mmol). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 20 h i razblažena etil acetatom (40 ml). Rastvor je ispran vodom (2 × 20 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (voda (0,05% amonijum hidroksid V/V)-acetonitril 30-60%) do proizvoljno dodeljenog 2-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarbonitrila (3 mg, 3%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,46−7,42 (m, 3H), 7,31−7,27 (m, 2H), 6,15−5,99 (m, 1H), 5,56−5,53 (m, 1H), 3,72−3,67 (m, 2H), 3,07−3,03 (m, 1H), 2,21−2,08 (m, 1H), 1,75−1,70 (m, 1H), 1,68−1,57 (m, 1H). LCMS RT= 0,818 min, m/z =296,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,771 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 296,9.
Metod 66
1
Primer 87
ciklopropil-[(5S,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: (cis)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol i (trans)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol
U smešu 2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1000 mg, 3,57 mmol) i trietilamina (1083 mg, 10,71 mmol) u dihlormetanu (50 ml) dodat je terc-butil dimetilsilil trifluormetansulfonat (1415 mg, 5,35 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 14 h i razblažena vodom (50 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru) dajući:
(trans)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol (870 mg, 62%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41−7,36 (m, 5H), 5,31−5,28 (m, 1H), 5,26−5,23 (m, 1H), 3,47−3,40 (m, 1H), 2,58−2,52 (m, 1H), 0,99 (s, 9H), 0,23 (s, 3H), 0,20 (s, 3H).
(cis)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4] triazol (430 mg, 31%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,49−7,35 (m, 3H), 7,11−7,10 (m, 2H), 5,61−5,58 (m, 1H), 5,33−5,30 (m, 1H), 3,00−2,96 (m, 1H), 2,90−2,83 (m, 1H), 0,93 (s, 9H), 0,23 (s, 3H), 0,19 (s, 3H).
Korak 2: [cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon
1
U rastvor N-metoksi-n-metil-ciklopropankarboksamida (242 mg, 1,88 mmol) i (cis)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4] triazola (370 mg, 0,94 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 1,41 ml, 2,81 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući [cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon (220 mg, 61%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,36–7,34 (m, 5H), 5,39–5,36 (m, 1H), 5,29–5,28 (m, 1H), 3,54–3,48 (m, 1H), 3,08–3,05 (m, 1H).
2,65−2,61 (m, 1H), 1,30−1,28 (m, 2H), 1,07−1,02 (m, 2H), 0,91 (s, 9H), 0,24 (s, 3H), 0,22 (s, 3H).
Korak 3: ciklopropil-[(5S,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4] triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(5R,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor [cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanona (200 mg, 0,52 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 2,09 ml, 2,09 mmol) na 25 °C. Smeša je mešana 14 sati na 25 °C i razblažena dihlormetanom (30 ml). Dobijena smeša je isprana vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 90% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[cis-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (95 mg, 67%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42–7,36 (m, 5H), 5,46–5,40 (m, 2H), 4,79–4,78 (d, 1H), 3,64–3,58 (m, 1H).3,00–2,98 (m, 1H), 2,81−2,76 (m, 1H), 1,31−1,27 (m, 2H), 1,07−1,03 (m, 2H).
Ova cis smeša je dalje odvojena hiralnom SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,345 min) (22,2 mg, 24%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR
1
(400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,36 (m, 5H), 5,44–5,41 (m, 2H), 4,81 (s, 1H), 3,65–3,60 (m, 1H), 2,99–2,96 (m, 1H), 2,82–2,76 (m, 1H), 1,30–1,29 (m, 2H), 1,06–1,03 (m, 2H). LCMS RT= 2,061 min, m/z = 270,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 7,0 minuta) retenciono vreme 2,061 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,2. ciklopropil-[(5R,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,975 min) (32,2 mg, 35%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,34 (m, 5H), 5,44–5,39 (m, 2H), 3,65–3,57 (m, 1H), 3,07–3,00 (m, 1H), 2,79– 2,74 (m, 1H), 1,31–1,28 (m, 2H), 1,07–1,04 (m, 2H). LCMS RT= 0,896 min, m/z = 270,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,896 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,2.
SFC kondicioniranje: Kolona: OD (250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: COz B:0,1%NH3H2O EtOH; gradijent: 40% B. protok: 60 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 67
Primer 88
ciklopropil-[(5S,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: [trans-7-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (47 mg, 0,36 mmol) i [trans-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] oksi-terc-butil-dimetil-silana (100 mg, 0,25 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,3 ml, 0,60 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su
1
osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (30% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,5), dajući [trans-7-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropilmetanon (50 mg, 51%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 1,008 min, m/z = 384,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,008 min, ESI+ nađeno [M+H] = 384,2.
Korak 2: ciklopropil-[(5S,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(5R,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor [trans-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanona (50 mg, 0,13 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 0,52 ml, 0,52 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 14 h i razblažena dihlormetanom (20 ml). Rastvor je ispran vodom (10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (2,5% metanol u dihlormetanu, Rf= 0,5), dajući ciklopropil-[(trans)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (20 mg, 57%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,38 (m, 3H), 7,19–7,17 (m, 2H), 5,76–5,73 (m, 1H), 5,54–5,52 (m, 1H), 3,29–3,25 (m, 1H), 3,03–3,00 (m, 2H), 1,31–1,28 (m, 2H), 1,06–1,03 (m, 2H).
Ova trans smeša (70 mg iz druge serije) dalje je razdvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5S,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,515 min) (10,5 mg, 15%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44−7,38 (m, 3H), 7,20−7,18 (m, 2H), 5,76−5,73 (m, 1H), 5,70−5,62 (m, 1H), 5,52−5,49 (m, 1H), 3,29−3,25 (m, 1H), 3,01−2,96 (m, 2H), 1,32−1,26 (m, 2H), 1,06−1,04 (m, 2H). LCMS RT= 0,906 min, m/z = 270,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,906 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,2.
ciklopropil-[(5R,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,729 min) (17,0 mg, 24%) u vidu čvrste supstance bele
1
boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44–7,38 (m, 3H), 7,20–7,18 (m, 2H), 5,76–5,73 (m, 1H), 5,65 (brs, 1H), 5,51–5,50 (m, 1H), 3,28–3,25 (m, 1H), 3,01–2,96 (m, 2H), 1,32–1,26 (m, 2H), 1,06–1,04 (m, 2H). LCMS RT= 0,905 min, m/z = 270,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,905 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,2.
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B: IPA (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 25 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 68
Primer 89
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon i [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2R)-2-metilciklopropil]metanon
Racemski [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon (trans smeša LHS) (80 mg) dalje je odvojen putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,714 min) (28 mg, 35%; ee: 96,1%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,38 (m, 3H), 7,29–7,26 (m, 2H), 6,19–6,17 (m, 0,5H), 6,05–6,03 (m, 0,5H), 5,67–5,62 (m, 1H), 3,81–3,71 (m, 1H), 2,89–2,75 (m, 2H), 1,62–1,54 (m, 1H), 1,45–1,39 (m, 1H), 1,18 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,99–0,96 (m, 1H). LC-MS RT= 0,756 min, m/z = 286,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,756 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1.
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2R)-2-metilciklopropil]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,901 min) (48 mg, 60%; ee: 86%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,40 (m, 3H), 7,29–7,27 (m, 2H), 6,20–6,16 (m, 0,5H), 6,06–6,02 (m, 0,5H), 5,67–5,61 (m, 1H), 3,79–3,73 (m, 1H), 2,89–2,74 (m, 2H), 1,64–1,60 (m, 1H), 1,44–1,39 (m, 1H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,00–0,95 (m, 1H). LC-MS RT= 0,757 min, m/z = 286,1 [M+H]<+>.
1
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,757 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1
SFC kondicioniranje: Kolona: AD (250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2B:0,1%NH3H2O EtOH; gradijent: od 25% do 25% B; protok: 50 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 69
Primer 90
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorofenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor trans-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (trans smeša) (245 mg, 1,65 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (250 mg, 0,85 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,1 ml, 4,15 mmol, 2 M u tetrahidrofuranu) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je deaktivirana dodavanjem vode (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 20 ml). Organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (33% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,6), dajući [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (trans smeša) (105 mg, 41%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,739 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,739 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
Gore navedena trans smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,773 min) (48,1 mg, 45%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,48–7,42 (m, 1H), 7,25–7,13 (m, 3H), 6,22–6,06 (m, 1H), 5,93–5,89 (m, 1H), 5,01–4,87 (m, 0,5H), 4,85–4,82 (m, 0,5H), 3,88–3,75 (m, 1H), 3,51–3,42 (m, 1H), 2,93–2,81 (m, 1H), 1,75–1,64 (m, 1H), 1,62–1,54 (m, 1H). LC-MS RT= 0,852 min, m/z = 308,0 [M+H]<+>.
1 1
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,852 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 308,0.
SFC kondicioniranje: kolona: Chiralcel OD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 min i zadržan 40% tokom 2,5 min, zatim 5% B tokom 2,5 min protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C
Veća serija trans smeše (215 mg, 0,70 mmol) odvojena je putem hiralne SFC, dajući:
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,445 min) (19,5 mg, 9%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40–7,38 (m, 1H), 7,18–7,15 (m, 2H), 6,98–6,97 (m, 1H), 6,13–6,11 (m, 0,5H), 5,99–5,98 (m, 0,5H), 5,87–5,85 (m, 1H), 5,05– 5,04 (m, 0,5H), 4,89–4,88 (m, 0,5H), 3,73–3,67 (m, 1H), 3,58–3,54 (m, 1H), 3,01–2,95 (m, 1H), 1,72–1,65 (m, 2H). LC-MS RT= 1,763 min, m/z = 308,1 (M+H)<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,763 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 308,1. Napomena: 1R,2S-izomer je bio pik 2 (retenciono vreme = 2,728 min) pod uslovima AD SFC.
SFC kondicioniranje: Kolona: Daicel Chiralpak AD-H(250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,1%NH3H2O metanol) gradijent: od 15% do 15% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Metod 70
Primer 91
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon i [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2R)-2-metilciklopropil]metanon
Racemski [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon (trans smeša LHS) (80 mg) dalje je odvojen putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,714 min) (28 mg, 35%; ee: 96,1%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45−7,38 (m, 3H), 7,29−7,26 (m, 2H),
1 2
6,19−6,17 (m, 0,5H), 6,05−6,03 (m, 0,5H), 5,67−5,62 (m, 1H), 3,81−3,71 (m, 1H), 2,89−2,75 (m, 2H), 1,62−1,54 (m, 1H), 1,45−1,39 (m, 1H), 1,18 (d, J= 6,4 Hz, 3H), 0,99−0,96 (m, 1H). LC-MS RT= 0,756 min, m/z = 286,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,756 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1.
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazo1-2-il]-[(1R,2R)-2-metilciklopropil]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,901 min) (48 mg, 60%, ee: 86%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,44–7,40 (m, 3H), 7,29–7,27 (m, 2H), 6,20–6,16 (m, 0,5H), 6,06–6,02 (m, 0,5H), 5,67–5,61 (m, 1H), 3,79–3,73 (m, 1H), 2,89–2,74 (m, 2H), 1,64–1,60 (m, 1H), 1,44–1,39 (m, 1H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,00–0,95 (m, 1H). LC-MS RT= 0,757 min, m/z = 286,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,757 min, ESI+ nađeno [M+H] = 286,1
SFC kondicioniranje: Kolona: AD (250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2B:0,1%NH3H2O EtOH; gradijent: od 25% do 25% B; protok: 50 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Metod 71
Primer 92
ciklopropil-[(5R,7S)-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: etil 3-etil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U rastvor etil akrilata (89,6 ml;,841,85 mmol), di-terc-butildikarbonata (58,0 ml, 252,55 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (2,1 g, 16,84 mmol) u acetonitrilu (50 ml) dodat je rastvor 1-nitropropana (15,1 ml, 168,37 mmol) na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog rastvora amonijum hlorida (80 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3-etil-
1
4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (25,5 g, 88%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,94–4,86 (m, 1H), 4,24–4,13 (m, 2H), 3,21–3,14 (m, 2H), 2,40–2,29 (m, 2H), 1,30– 1,24
Korak 2: 5-etil-3-hidroksi-pirolidin-2-on
Smeša etil 3-etil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (15,0 g, 87,62 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 6,7 g) u etanolu (300 ml) mešana je u atmosferi vodonika (50 psi) na 40 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 5-etil-3-hidroksi-pirolidin-2-on (11,0 g, 97%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 3: 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-on
U rastvor 5-hidroksi-3-fenil-pirolidin-2-ona (11,0 g, 85,17 mmol) u dihlormetanu (200 ml) dodat je imidazol (11,6 g, 170,33 mmol) i terc-butildimetilhlorsilan (19,2 g, 127,75 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-on (10,0 g, 48%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 4: 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-on
U rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-ona (10,0 g, 41,08 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 2,5 g, 61,62 mmol). Nakon 20 minuta mešanja na 0 °C, u smešu je dodat O-(difenilfosforil) hidroksilamin (14,4 g, 61,62 mmol) i mešana je na 25 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-on (10,0 g, 94%) u vidu žutog ulja. LCMS RT = 1,130 min, m/z = 259,2 [M H]+.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,130 min, ESI+ nađeno [M+H] = 259,2.
1 4
Korak 5: etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat
Smeša 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-pirolidin-2-ona (10,0 g, 38,7 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (14,0 g, 96,74 mmol) u etanolu (250 ml) mešana je na 90 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat (13,0 g, 94%) u vidu žutog ulja. LCMS RT = 1,148 min, m/z = 358,3 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,148 min, ESI+ nađeno [M+H] = 358,3.
Korak 6: etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (13,0 g, 36,36 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (7,5 g, 43,63 mmol) u toluenu (250 ml) mešana je na 120 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (12,0 g, 97%) u vidu žutog ulja. LCMS RT = 0,823 min, m/z = 340,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,823 min, ESI+ nađeno [M+H] = 340,2.
Korak 7: etil trans-5-etil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
1
U rastvor etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-etil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (12,0 g, 35,35 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 35,35 ml, 35,35 mmol). Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (70 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 70 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-5-etil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (2,3 g, 29%) u vidu bledocrvenog ulja (zajedno sa cis izomerom (2,8 g, 35%)).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,32–5,27 (m, 1H), 4,49–4,43 (m, 3H), 3,24–3,17 (m, 1H), 2,41–2,36 (m, 1H), 2,21–2,12 (m, 1H), 1,94–1,84 (m, 1H), 1,36 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Korak 8:
etil cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat U rastvor etil trans-5-etil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (2,3 g, 10,21 mmol) u dihlormetanu (50 ml) ukapavanjem je dodat dietilaminosumpor trifluorid (6,6 g, 40,85 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodatkom zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (800 mg, 34%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,00–5,78 (m, 1H), 4,53–4,37 (m, 3H), 3,35–3,16 (m, 1H), 2,69–2,54 (m, 1H), 2,13–2,05 (m, 1H), 1,98–1,91 (m, 1H), 1,43 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,02 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Korak 9: cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
1
U smešu etil cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (200 mg, 0,88 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml), vodi (2 ml) i metanolu (1 ml) dodat je litijum hidroksid monohidrat (148 mg, 3,52 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen ledenom vodom (20 ml), i podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (150 mg, 86%) u vidu žutog ulja.
Korak 10: cis-5-etil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid, cis smeša
Smeša cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (100 mg, 0,50 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (34 mg, 0,25 mmol), N,N-diizopropiletilamina (0,21 ml, 1,26 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (74 mg, 0,75 mmol) i 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (116 mg, 0,60 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h. Smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući cis-5-etil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (120 mg, 99%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,99−5,79 (m, 1H), 4,40−4,39 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,36−3,16 (m, 1H), 2,67−2,54 (m, 1H), 2,14−2,03 (m, 1H), 1,97−1,90 (m, 1H), 1,07−1,03 (m, 3H) LCMS RT= 0,481 min, m/z = 243,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,481 min, ESI+ nađeno [M+H] = 243,1.
Korak 11: ciklopropil-[(5R,7S)-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
1
U rastvor cis-5-etil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (100 mg, 0,41 mmol) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 2,0 ml, 1,0 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana 1 sat na 0 °C, i reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući ciklopropil-[cis-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (80 mg, 87%) u vidu žutog ulja. Ova cis smeša je dalje odvojena hiralnom SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5R,7S)-5-etil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,928 min) (22,5 mg, 28%) u vidu čvrste supstance narandžaste boje ((5S,7R)-izomer je takođe sakupljen kao pik 2 (retenciono vreme = 4,391 min, 18,8 mg, 22%)).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6,09–5,89 (m, 1H), 4,55–4,45 (m, 1H), 3,43– 3,36 (m, 1H), 3,15–3,06 (m, 1H), 2,67–2,53 (m, 1H), 2,09–1,93 (m, 2H), 1,23–1,18 (m, 2H), 1,17–1,11 (m, 2H), 1,05 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,770 min, m/z = 224,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,770 min, ESI+ nađeno [M+H] = 224,0.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel IC, 100×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:metanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 3,5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 3 ml/min; temperatura kolone:40 °C.
Metod 72
Primer 93
ciklopropil-[(5R,7S)-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: etil 3-propil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U rastvor etil akrilata (10,32 ml, 96,97 mmol), di-terc-butilkarbonata (6,68 ml, 29,09 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (0,24 g, 1,94 mmol) u acetonitrilu (20 ml) dodat je rastvor 1-
1
nitrobutana (2,01 ml, 19,39 mmol) na 25 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog rastvora amonijum hlorida (80 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući etil 3-propil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (3,2 g, 89%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,98–4,93 (m, 1H), 4,27–4,20 (m, 2H), 3,21– 3,18
Korak 2: hidroksi-5-propil-pirolidin-2-on
Smeša etil 3-propil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (8,0 g, 43,19 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 3,3 g) u etanolu (200 ml) mešana je u atmosferi vodonika (50 psi) na 40 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 3-hidroksi-5-propil-pirolidin-2-on (6,1 g, 99%) u vidu svetložutog ulja. LCMS RT= 0,263 min, m/z = 144,3[M H]+.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,263 min, ESI+ nađeno [M+H] = 144,3.
Korak 3: 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-on
U rastvor 3-hidroksi-5-propil-pirolidin-2-on (6,1 g, 42,60 mmol) u dihlormetanu (200 ml) dodat je imidazol (5,8 g, 85,21 mmol) i terc-butildimetilhlorsilan (9,6 g, 63,91 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-on (7,5 g, 68%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 1,474 min, m/z = 258,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,474 min, ESI+ nađeno [M+H] = 258,2.
Korak 4: 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-on
1
U rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-ona (7,0 g, 27,19 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 1,6 g, 40,79 mmol, 60%). Nakon 20 minuta mešanja na 0 °C, u smešu je dodat O-(difenilfosforil) hidroksilamin (9,5 g, 40,79 mmol) i mešana je na 25 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-on (6,8 g, 92%) u vidu žutog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,766 min, m/z = 273,3 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,766 min, ESI+ nađeno [M+H] =273,3.
Korak 5: etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-propil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat
Smeša 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-pirolidin-2-ona (6,6 g, 24,22 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (8,8 g, 60,56 mmol) u etanolu (100 ml) mešana je na 90 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-propil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat (9,0 g, 100%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 1,192 min, m/z = 372,3[M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,192 min, ESI+ nađeno [M+H] = 372,3.
Korak 6: etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-2-okso-5-propil-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (9,0 g, 24,22 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (6,3 g, 36,33 mmol) u toluenu (150 ml) mešana je na 120 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-
1
b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat (8,3 g, 97%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,803 min, m/z = 240,2 [M-TBS]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,803 min, ESI+ nađeno [M-TBS] = 240,2.
Korak 7: etil trans-7-hidroksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (8,30 g, 23,48 mmol) u tetrahidrofuranu (150 ml) dodat je tetrabutil amonijum fluorid u tetrahidrofuranu (11,74 ml, 11,74 mmol). Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 15 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (70 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 70 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 100-200 meša, 0 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-7-hidroksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (1,0 g, 18%) u vidu žutog ulja (zajedno sa istom količinom cis proizvoda):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,33–5,31 (m, 1H), 4,64–4,63 (m, 1H), 4,46–4,40 (m, 2H), 2,87–2,85 (m, 1H), 2,70–2,66 (m, 1H), 2,66–2,06 (m, 1H), 1,63– 1,33 (m, 6H), 0,96–0,92 (m, 3H).
Korak 8: etil cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil trans-7-hidroksi-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (800 mg, 3,34 mmol) u dihlormetanu (30 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (2,2 g, 13,37 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 60% etil acetat
1 1
u petrol etru), dajući etil cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (270 mg, 34%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,99–5,78 (m, 1H), 4,53–4,40 (m, 3H), 3,34–3,15 (m, 1H), 2,70–2,54 (m, 1H), 2,14–2,02 (m, 1H), 1,91–1,78 (m, 1H), 1,63–1,50 (m, 1H), 1,46–1,41 (m, 4H), 0,98 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Korak 9: cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
Smeša etil cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (260 mg, 1,08 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (135 mg, 3,23 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml), vodi (1 ml) i metil alkoholu (0,5 ml) mešana je na 25 °C tokom 4 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen ledenom vodom (20 ml), i podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (225 mg, 98%) u vidu čvrste supstance žute boje.
Korak 10: ciklopropil-[cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Smeša cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (200 mg, 0,94 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (63 mg, 0,47 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (137 mg, 1,41 mmol), N,N-diizopropiletilamina (0,39 ml, 2,35 mmol) i 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (215 mg, 1,13 mmol) mešana je na 25 °C tokom 3 h. Smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-propil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-
1 2
b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (180 mg, 75%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,00–5,76 (m, 1H), 4,51–4,37 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 3,33–3,17 (m, 1H), 2,70–2,53 (m, 1H), 2,11–1,97 (m, 1H), 1,89–1,77 (m, 1H), 1,66–1,53 (m, 1H), 1,51–1,38 (m, 1H), 0,98 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Korak 11: ciklopropil-[(5R,7S)-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor cis-7-fluor-N-metoksi-N-metil-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamida (170 mg, 0,66 mmol) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 3,21 ml, 1,61 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem vodenog zasićenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf = 0,4), dajući ciklopropil-[cis-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (100 mg, 64%) u vidu bezbojnog ulja. Cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5R,7S)-7-fluor-5-propil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,997 min) (40,0 mg; 40%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6,07−5,91 (m, 1H), 4,59−4,53 (m, 1H), 3,42−3,33 (m, 1H), 3,11−3,07 (m, 1H), 2,67−2,52 (m, 1H), 2,02−1,98 (m, 1H), 1,91−1,80 (m, 1H), 1,69−1,57 (m, 1H), 1,52−1,38 (m, 1H), 1,23−1,11 (m, 4H), 1,01 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS RT= 0,972 min, m/z = 238,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,972 min, ESI+ nađeno [M+H] = 238,2.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel IC, 100×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:metanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 3,5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 3 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Napomena: izomer 5S,7R je takođe sakupljen u vidu bezbojnog ulja. (pik 2, retenciono vreme = 4,420 min) (42,0 mg, 42%)
Metod 73
1
Primer 94
ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2,6-difluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 2,6-difluorbenzaldehida (90,0 g, 633,36 mmol) u tetrahidrofuranu (2000 ml) ukapavanjem je dodat alil magnezijum bromid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 760,0 ml, 760,0 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana 2 sata pa je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (2000 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 2000 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (1000 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2,6-difluorfenil)but-3-en-1-ol (116 g, 99%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2: terc-butil((1-(2,6-difluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)dimetilsilan
U rastvor 1-(2,6-difluorfenil)but-3-en-1-ola (116,0 g, 629,82 mmol) u dihlormetanu (2000 ml) dodat je imidazol (85,8 g, 1259,60 mmol) i terc-butil dimetilhlorsilan (113,9 g, 755,78 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 4 h i filtrirana. Filtrat je ispran vodom (2 × 2000 ml), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 × 2000 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-[1-(2,6-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (180,0 g, 96%) u vidu svetložutog ulja.
1 4
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2,6-difluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(2,6-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (180,0 g, 603,14 mmol) u vodi (1000 ml) i tetrahidrofuranu (1000 ml) dodat je osmijum tetraoksid (0,88 g, 3,45 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, dodat je natrijum perjodat (516,0 g, 2412,6 mmol) u malim porcijama tokom 2 h. Dobijena smeša je mešana još 2 h na 25 °C i deaktivirana je dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (300 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 2000 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2000 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (2000 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,6-difluorfenil)propanal (180,0 g, 99%) u vidu žutog ulja.
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(2,6-difluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (190,0 g, 610,99 mmol) u tetrahidrofuranu (2000 ml) polako je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 268,8 ml, 672,09 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapan rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,6-difluorfenil)propanala (177,0 g, 589,17 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (500 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 2000 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,6-difluorfenil)propan-1-ol (160 g, 49%) u vidu žutog ulja.
1
Korak 5: 2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
Smeša 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-(2,6-difluorfenil)propan-1-ola (80,0 g, 150,24 mmol), trifluorsirćetne kiseline (400 ml, 6009,5 mmol) i trifluormetansulfonske kiseline (40 ml, 600,95 mmol) mešana je na 50 °C tokom 12 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlormetanom (2 × 700 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 300 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran metil terc-butil etrom (80 ml), dajući sirovi 2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (40 g, 84%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,694 i 0,711 min, m/z = 317,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,694 i 0,711 min, ESI+ nađeno [M+H] = 317,9.
Korak 6: (5S,7S)-2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol
U ohlađeni rastvor (0 °C) 2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1,5 g, 4,75 mmol) u dihlormetanu (30 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (2,5 ml, 18,98 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (100 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-7-
1
fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (0,25 g, 16%) u vidu svetložute čvrste supstance. LCMS RT= 0,808 min, m/z = 319,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,808 min, ESI+ nađeno [M+H] = 319,9.
Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: (SS,7S)-2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 3,293 min) (115 mg, 46%) u vidu svetložute čvrste supstance.
SFC kondicioniranje: ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min. protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor (5S,7S)-2-brom-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (115 mg, 0,36 mmol) i N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (93 mg, 0,72 mmol) u tetrahidrofuranu (6 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,36 ml, 0,72 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 37-67%/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (32,6 mg, 29%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,54−7,48 (m, 1H), 7,10−7,06 (m, 2H), 6,24−6,21 (m, 0,5H), 6,10−6,07 (m, 0,5H), 5,98−5,94 (m, 1H), 3,89−3,81 (m, 1H), 3,03−2,91 (m, 2H), 1,18−1,16 (m, 2H), 1,11−1,08 (m, 2H). LCMS RT= 0,740 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,740 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
Metod 74
1
Primer 95
1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil] ciklopropankarbonitril
Korak 1: 1-cijano-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid
Smeša 1-cijanociklopropankarboksilne kiseline (500 mg, 4,5 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (365 mg, 2,7 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (1,0 g, 5,4 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (878 mg, 9,0 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,8 ml, 4,5 mmol) u dihlormetanu (40 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 50% do 60% etil acetat u petrol etru), dajući 1-cijano-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid (410 mg, 59%) u vidu žutog ulja.
Korak 2: 1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karbonil] ciklopropankarbonitril
U ohlađenu smešu (0 °C) (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (200 mg, 0,71 mmol) i 1-cijano-N-metoksi-N-metil-ciklopropan karboksamida (164 mg, 1,06 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 1,06 ml, 2,13 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 35-65% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni 1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-
1
pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarbonitril (20 mg, 9,2%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,40 (m, 3H), 7,78–7,27 (m, 2H), 6,15–5,99 (m, 1H), 5,57–5.55 (m, 1H), 3,69–3,61 (m, 1H), 3,06–2,96 (m, 1H), 2,10–2,03 (m, 2H), 1,84–1,81 (m, 2H). LCMS RT= 0,813 min, m/z = 296,9 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,813 min, ESI+ nađeno [M H] = 296,9.
Metod 75
Primer 96
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2.2]pentan-2-il-metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metilspiro[2.2]pentan-1-karboksamid
Smeša spiro[2.2]pentan-2-karboksilne kiseline (0,5 g, 4,46 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (0,65 g, 6,69 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1,70 g, 4,46 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,44 g, 11,15 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 5 h. Reakcija je sipana u vodu (30 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi N-metoksi-N-metil-spiro[2.2]pentan-2-karboksamid (690 mg, 100%) u vidu bezbojnog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
LC-MS RT= 0,638 min, m/z = 156,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,638 min, ESI+ nađeno [M+H] = 156,1
1
Korak 2: [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2.2]pentan-2-il-metanon
U smešu (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg;,0,35 mmol) i N-metoksi-N-metil-spiro[2,2]pentan-2-karboksamida (110 mg, 0,71 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) dodat je izopropil magnezijum bromid (3,0 M u 2-metil tetrahidrofuranu, 0,71 ml, 2,13 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 40-70% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2,2]pentan-2-il-metanon (18,6 mg, 18%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41–7,33 (m, 3H), 7,29–7,23 (m, 2H), 6,09–5,93 (m, 1H), 5,52–5,44 (m, 1H), 3,68–3,60 (m, 1H), 3,40– 3,36 (m, 1H), 3,01–2,89 (m, 1H), 1,88–1,82 (m, 1H), 1,63–1,61 (m, 1H), 1,05–0,97 (m, 2H), 0,95–0,89 (m, 1H), 0,88–0,83 (m, 1H). LC-MS RT= 0,786 min, m/z = 298,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,786 min, ESI+ nađeno [M+H] = 298,1
Metod 76
Primer 97
[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2,3]heksan-2-il-metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metilspiro[2.3]heksan-1-karboksamid
Smeša spiro[2.3]heksan-2-karboksilne kiseline (300 mg, 2,38 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (464 mg, 4,76 mmol), N,N-diizopropiletilamina (922 mg, 7,13 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (949 mg, 2,5 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešana je na 20 °C
1
tokom 2 h. Smeša je sipana u vodu (60 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi N-metoksi-N-metil-spiro[2.3]heksan-2-karboksamid (400 mg, 99%) u vidu svetložutog ulja, koje se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 0,725 min, m/z = 170,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,725 min, ESI+ nađeno [M+H] = 170,2.
Korak 2: [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-spiro [2,3] heksan-2-il-metanon
U rastvor (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg, 0,35 mmol) i N-metoksi-N-metil-spiro[2,3]heksan-2-karboksamida (120 mg, 0,71 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum bromid (3,0 M u 2-metil tetrahidrofuranu, 0,71 ml, 2,13 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 45-75% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-spiro[2,3]heksan-2-il-metanon (21,6 mg, 19%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42–7,38 (m, 3H), 7,29–7,26 (m, 2H), 6,11–5,95 (m, 1H), 5,51–5,48 (m, 1H), 3,69–3,60 (m, 1H), 3,10– 3,03 (m, 1H), 3,02–2,90 (m, 1H), 2,38–2,13 (m, 4H), 2,08–1,99 (m, 1H), 1,98–1,89 (m, 1H), 1,56–1,52 (m, 1H), 1,29–1,24 (m, 1H). LC-MS RT= 0,821 min, m/z = 312,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,821 min, ESI+ nađeno [M+H] = 312,1
Metod 77
1 1
Primer 98
[1-(2-piridil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-1-(2-piridil)ciklopropankarboksamid
Smeša 1-(2-piridil)ciklopropankarboksilne kiseline (200 mg, 1,23 mmol), N,N-diizopropiletilamina (475 mg, 3,68 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (198 mg, 1,47 mmol), 1-(3-dimetiaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (282 mg, 1,47 mmol) i N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (179 mg, 1,84 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 30 °C tokom 18 h i razblažena vodom (30 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 10 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući N-metoksi-N-metil-1-(2-piridil)ciklopropankarboksamid (200 mg, 79%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 0,733 min, m/z = 207 (M+H)<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,733 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 207.
Korak 2: [1-(2-piridil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-1-(2-piridil)ciklopropankarboksamida (55 mg, 0,27 mmol), (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,18 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,4 ml, 0,80 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (voda (0,05% amonijum hidroksid V/V)-acetonitril 35-65%), dajući proizvoljno dodeljeni [1-(2-piridil)ciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (15,4 mg, 24%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ
1 2
8,42–8,40 (m, 1H), 7,50–7.47 (m, 1H), 7,34–7,32 (m, 3H), 7,26–7,10 (m, 1H), 7,06–7,02 (m, 3H), 6,00–5,83 (m, 1H), 5,40–5,35 (m, 1H), 3,60–3,49 (m, 1H), 2,92–2.81 (m, 1H), 2,02–1,90 (m, 1H), 1,83–1,78 (m, 2H), 1,60–1,50 (m, 1H). LCMS RT= 1,678 min, m/z = 349,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,678 min, ESI<+>nađeno [M+H] =349,2.
Metod 78
Primer 99
(1-ciklopropilciklopropil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-ciklopropil-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamid
Smeša 1-ciklopropilciklopropankarboksilne kiseline (500 mg, 3,96 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (321 mg, 2,38 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (773 mg, 7,93 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (912 mg, 4,76 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (512 mg, 3,96 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h i deaktivirana je dodavanjem vode (10 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 50 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući 1-ciklopropil-N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamid (370 mg, 55%) u vidu žutog ulja.
Korak 2: (1-ciklopropilciklopropil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor 1-ciklopropil-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (340 mg, 2,01 mmol), (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (288 mg, 1,02 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0
1
M u tetrahidrofuranu, 3,57 ml, 7,15 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (20% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,6), dajući proizvoljno dodeljeni (1-ciklopropilciklopropil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (100 mg, 31%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40–7,36 (m, 3H), 7,24–7,22 (m, 2H), 6.09–5,91 (m, 1H), 5,52–5,45 (m, 1H), 3,69–3,54 (m, 1H), 2,99–2,86 (m, 1H), 1,88–1,83 (m, 1H), 1,54–1,50 (m, 2H), 0,78–0,76 (m, 2H), 0,43–0,39 (m, 2H), 0,07– 0,03 (m, 2H). LC-MS RT= 0,816 min, m/z = 312,1 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,935 min, ESI+ nađeno [M+H] = 312,2.
Metod 79
Primer 100
ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2-hlorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 2-hlorbenzaldehida (90,0 g, 640,25 mmol) u tetrahidrofuranu (1000 ml) dodat je alil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 448,1 ml, 896,35 mmol) na -78 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 25°C i mešana 1 sat pa je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2-hlorfenil)but-3-en-1-ol (116,0 g, 99%) u vidu žutog ulja.
1 4
Korak 2: terc-butil-[1-(2-hlorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan
U rastvor 1-(2-hlorfenil)but-3-en-1-ola (116,0 g, 634,55 mmol) u dihlormetanu (1,5 l) dodat je imidazol (86,4 g, 1269,1 mmol) i terc-butil dimetilhlorsilan (124,3 g, 824,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (1 l). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 1 l). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (1 l), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-[1-(2-hlorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (188,0 g, 99%) u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,59−7,54 (m, 1H), 7,31−7,23 (m, 2H), 7,20−7,14 (m, 1H), 5,92−5,79 (m, 1H), 5,17−5,12 (m, 1H), 5,07−5,00 (m, 2H), 2,49−2,42
0,89 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,10−0,13 (m, 3H).
Korak 3: 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2-hlorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(2-hlorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (188,0 g, 633,19 mmol) u vodi (1,0 l) i tetrahidrofuranu (1,0 l) dodat je osmijum tetraoksid (0,04% u vodi, 41,55 ml, 6,65 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, dodat je natrijum perjodat (541,7 g, 2532,8 mmol) u malim porcijama tokom 2 sata. Dobijena smeša je mešana još 2 sata na 30 °C i deaktivirana je dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (500 ml). Smeša je mešana 30 minuta i ekstrahovana etil acetatom (3 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (500 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-(2-hlorfenil)propanal (189,0 g, 99%) u vidu obojenog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 9,84−9,81 (m, 1H), 7,63−7,59 (m, 1H), 7,35−7,28 (m, 2H), 7,25−7,19 (m, 1H), 5,66−5,62 (m, 1H), 2,76−2,69 (m, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,09 (s, 3H), −0,10 (s, 3H).
1
Korak 4: 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[tercbutil(dimetil)silil] oksi-3-(2-hlorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (194,6 g, 626,04 mmol) u tetrahidrofuranu (1100 ml) polako je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 278,2 ml, 695,6 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapavanjem dodat rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2-hlorfenil)propanala (189,0 g, 632,4 mmol) u tetrahidrofuranu (400 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (200 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 800 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2-hlorfenil)propan-1-ol (202,0 g, 60%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 2,657 min, m/z = 446,1 [M+H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 2,657 min, ESI+ nađeno [M+H] = 446,1.
Korak 5: 2-brom-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol Smeša 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-3-(2,3,6-trifluorfenil)propan-1-ola (50,0 g, 94,17 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (280,7 ml, 3766,8 mmol) mešana je na 55 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (9,2 g, 31%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400
1
MHz, CD3CI) δ 7,48–7,41 (m, 1H), 7,34–7,27 (m, 2H), 7,10–6,79 (m, 1H), 6,08–5,83 (m, 1H), 5,70–5,53 (m, 1H), 5,41 (br s, 1H), 3,74–3,57 (m, 0,5H), 3,35–3,21 (m, 0,5H), 2,99–2,84 (m, 1H), 2,67–2,52 (m, 0,5H). LC-MS RT= 0,614 min, m/z = 314,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,614 min, ESI+ nađeno [M H] = 314,0.
Korak 6: 2-brom-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol
U ohlađeni rastvor (0 °C) 2-brom-5-(2-hlorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (5,2 g, 16,53 mmol) u dihlormetanu (80 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (8,8 ml, 66,12 mmol) u dihlormetanu (20 ml). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (300 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (3,9 g, 75%) u vidu tamnožutog ulja.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U smešu N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (402 mg, 3,11 mmol), 2-brom-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (500 mg, 1,58 mmol) u tetrahidrofuranu (30 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 5,5 ml, 11,06 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem vode (30 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (20% etil acetat u petrol etru, Rf=
1
0,5), dajući [5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon (250 mg, 52%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 0,685 min, m/z = 306,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,685 min, ESI+ nađeno [M H] = 306,1.
Gore navedena cis/trans smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 2,509 min) (50,6 mg, 12%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45–7,43 (m, 1H), 7,34–7,28 (m, 1H), 7,26–7,24 (m, 1H), 6,76–6,72 (m, 1H), 6,10–6,06 (m, 0,5H), 6,01–5,95 (m, 1H), 5,95–5,93 (m, 0,5H), 3,78–3,62 (m, 1H), 3,12–3,04 (m, 1H), 2,93–2,80 (m, 1H), 1,37–1,32 (m, 2H), 1,14– 1,09 (m, 2H). LC-MS RT= 1,049 min, m/z = 306,1 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,049 min, ESI+ nađeno [M+H] = 306,1.
ciklopropil-[(5R,7R)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 4, retenciono vreme = 3,571 min) (65,6 mg, 15%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,47–7,43 (m, 1H), 7,34–7,26 (m, 1,5H), 7,25–7,22 (m, 0,5H), 6,76–6,72 (m, 1H), 6,10–6,06 (m, 0,5H), 6,01–5,96 (m, 1H), 5,95–5,93 (m, 0,5H), 3,78–3,62 (m, 1H), 3,12–3,04 (m, 1H), 2,93–2,80 (m, 1H), 1,37–1,32 (m, 2H), 1,14– 1,08 (m, 2H). LC-MS RT= 0,776 min, m/z = 306,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,776 min, ESI+ nađeno [M+H] = 306,1.
Beleška: pik 1 i pik 3 su trans izomeri.
SFC metoda: Kolona: Chiralcel OJ-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Metod 80
1
Primer 101
ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2,5-difluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor cis-2,5-difluorbenzaldehida (10,0 g, 70,4 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je alil magnezijum bromid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 49,3 ml, 98,5 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana je 2 sata. Smeša je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2,5-difluorfenil)but-3-en-1-ol (11,0 g, 85%) u vidu žutog ulja.
Korak 2: terc-butil((1-(2,5-difluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)dimetilsilan
U rastvor 1-(2,5-difluorfenil)but-3-en-1-ola (11,0 g, 59,7 mmol) u dihlormetanu (200 ml) dodat je imidazol (8,1 g, 119,5 mmol) i terc-butil dimetilhlorsilan (11,7 g, 77,6 mmol). Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-[1-(2,5-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (17,0 g, 95%) u vidu svetlog ulja.
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2,5-difluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(2,5-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (17,0 g, 57,0 mmol) u tetrahidrofuranu/vodi (100 ml; 1:1) dodat je osmijum tetraoksid (80,0 mg, 0,33 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, dodat je natrijum perjodat (48,7 g, 227,9 mmol) u malim porcijama tokom 2 sata i dobijena smeša je mešana još 2 sata na 30 °C. Smeša je deaktivirana
1
dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (100 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-(2,5-difluorfenil)propanal (10,8 g, 63%) u vidu svetložutog ulja.
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(2,5-difluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (11,4 g, 36,6 mmol) u tetrahidrofuranu (80 ml) polako je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 16,1 ml, 40,3 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapan rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3-difluorfenil)propanala (10,8 g, 36,0 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,5-difluorfenil)propan-1-ol (10,0 g, 52%) u vidu žutog ulja.
Korak 5: 2-brom-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
U rastvor 1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,5-difluorfenil)propan-1-ola (3,96 g, 8,83 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (25 ml, 88,3 mmol) dodata je trifluormetansulfonska kiselina (2,5 ml, 8,83 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 60 °C tokom 2 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlormetanom
1
(3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (silika gel, 100-200 meša, 50 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući sirovi proizvod, koji je ispran metil t-butil etrom (20 ml) dajući 2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (1,1 g, 39%) u vidu čvrste supstance smeđe boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,11–7,03 (m, 1H), 6,98–6,75 (m, 1H), 5,84–5,68 (m, 1H), 5,47–5,30 (m, 2H), 3,64–3,18 (m, 1H), 3,02–2,63 (m, 1H). LCMS RT= 0,727 min, m/z = 318,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,727 min, ESI+ nađeno [M+H] = 318,0.
Korak 6: (5S,7S)-2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
U rastvor 2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (5,0 g, 15,8 mmol) u toluenu (50 ml) ukapavanjem je dodat dietilaminosumpor trifluorid (10,2 g, 63,3 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 16 h, a zatim polako dodavana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (100 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 15% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(5S,7S)-2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (1,3 g, 26%) u vidu čvrste supstance smeđe boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,15–7,05 (m, 2H), 6,72–6,68 (m, 1H), 6,07–5,91 (m, 1H), 5,78–5,74 (m, 1H), 3,68–3,55 (m, 1H), 2,90–2,79 (m, 1H). LCMS RT= 0,821 min, m/z = 317,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,821 min, ESI+ nađeno [M+H] = 317,9.
Ova cis smeša (500 mg, 1,7 mmol) dalje je odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: (5S,7S)-2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 2,600 min) (220 mg, 44%) u vidu čvrste supstance
1 1
smeđe boje. (Zajedno sa izomerom 5R,7R (pik 1, retenciono vreme = 2,295 min) (220 mg, 44%)).
SFC kondicioniranje: Kolona: ChiralPak IC-3 150×4,6 mm I.D., 3 µm. mobilna faza: A: CO2, B:etanol (0,05% DEA). gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min. protok: 2,5 ml/min. temperatura kolone: 40 °C.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U smešu (SS,7S)-2-brom-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (100 mg, 0,31 mmol), N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (81 mg, 0,63 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,31 ml, 0,63 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC, dajući ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,5-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (22,1 mg, 23%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,28−7,17 (m, 2H), 6,93−6,88 (m, 1H), 6,22−6,06 (m, 1H), 5,90−5,86 (m, 1H), 3,88−3,74 (m, 1H), 3,09−3,02 (m, 1H), 2,93−2,82 (m, 1H), 1,21−1,18 (m, 2H), 1,15−1,11 (m, 2H). LCMS RT= 1,007 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,007 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
Metod 81
Primer 102
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
1 2
Korak 1: 1-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 2,3,6-trifluorbenzaldehida (25,0 g, 156,2 mmol) u tetrahidrofuranu (350 ml) dodat je alil magnezijum bromid (2,5 M u heksanu, 93,7 ml, 187,4 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 25°C i mešana 1 sat pa je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-en-1-ol (30 g, 95%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,01−7,17 (m, 1H), 6,79−6,92 (m, 1H), 5,72−5,91 (m, 1H), 5,07−5,26 (m, 3H), 2,74−2,88 (m,
2,44 (s, 1H).
Korak 2: terc-butildimetil((1-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)silan
U rastvor 1-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-en-1-ola (30,0 g, 148,4 mmol) u dihlormetanu (250 ml) dodat je imidazol (20,2 g, 296,8 mmol) i terc-butil dimetilhlorsilan (29,1 g, 192,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i zatim je deaktivirana dodavanjem vode (100 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-dimetil-[1-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-enoksi]silan (46,0 g, 98%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,26 (s, 1H), 7,07–6,95 (m, 1H), 6,97–6,77 (m, 1H), 5.58–5,82 (m, 1H), 4,97–5,11 (m, 3H), 2,84–2,64 (m, 1H), 2,62–2,44 (m, 1H), 0,83–0,86 (m, 9H), 0,03–0,07 (m, 3H), 0,17– 0,13
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2,3,6-trifluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-dimetil-[l-(2,3,6-trifluorfenil)but-3-enoksi]silana (5,0 g, 15,8 mmol) u vodi (30 ml) i tetrahidrofuranu (30 ml) dodat je osmijum tetroksid (0,5 g, 1,97 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, dodat je natrijum perjodat (13,5 g, 63,2 mmol) u malim
1
porcijama tokom 2 sata. Dobijena smeša je mešana još 2 sata na 30 °C i zatim je deaktivirana dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (300 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3,6-trifluorfenil)propanal (5 g, 99%) u vidu žutog ulja.
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(2,3,6-trifluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (26,9 g, 86,4 mmol) u tetrahidrofuranu (300 ml) dodat je n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 38,0 ml, 95,0 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapan rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3,6-trifluorfenil)propanala (27,0 g, 84,8 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4 triazol-5-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2,3,6-trifluorfenil)propan-1-ol (23 g, 49%) u vidu žutog ulja.
Korak 5: 2-brom-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
Smeša 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-3-(2,3,6-trifluorfenil)propan-1-ola (22,9 g, 41,6 mmol) i trifluormetansulfonske kiseline (12,2 ml, 138,4 mmol) u dihlormetanu (200 ml) zagrevana je na 55 °C tokom 4 dana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (100 ml) i podešen na pH = 9 pomoću zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Smeša je ekstrahovana
1 4
dihlormetanom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 2-brom-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (9,2 g, 66%) u vidu čvrste supstance žute boje. LCMS RT= 0,873 i 0,897 min, m/z = 334,0/336,0 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,873 i 0,897 min, ESI+ nađeno [M+H] = 334,0/336,0
Korak 6: rac-(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
U ohlađeni rastvor (0 °C) 2-brom-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (9,2 g, 27,5 mmol) u toluenu (100 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (14,6 ml, 110,2 mmol) u toluenu (4 ml). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h, a zatim polako dodata u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (100 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (1,8 g, 19%) u vidu čvrste supstance svetložute boje.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (0 °C) N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (188 mg, 1,47 mmol) i rac-(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,6trifluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (150 mg, 0,72 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,73 ml, 1,46 mmol). Smeša je mešana 1 sat na
1
0 °C, i reakcija je prekinuta dodavanjem vode (30 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (95 mg, 40%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,25–7,16 (m, 1H), 6,92–6,89 (m, 1H), 6,23–5,96 (m, 1H), 5,91–5,77 (m, 1H), 3,87–3,72 (m, 1H), 3,14–2,97 (m, 2H), 1,37– 1,27 (m, 2H), 1,14–1,03 (m, 2H). LCMS RT= 0,655 min, m/z = 326,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,655 min, ESI+ nađeno [M+H] = 326,1.
Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,856 min) (40 mg, 42%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,24–7,20 (m, 1H), 6,93–6,90 (m, 1H), 6,19–6,03 (m, 1H), 5,86–5,83 (m, 1H), 3,84–3,74 (m, 1H), 3,10–3,04 (m, 2H), 1,34–1,31 (m, 2H), 1,13–1,08 (m, 2H). LCMS RT= 0,864 min, m/z = 325,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,864 min, ESI+ nađeno [M+H] = 325,9.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralcel OJ-3150×4,6 mm I.D., 3 µm. mobilna faza: A: CO2B: etanol (0,05% DEA). gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta. protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Metod 82
Primer 103
ciklopropil-[(5S,7S)-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
1
Korak 1: cis-2-brom-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
U ohlađeni rastvor (0 °C) trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (400 mg, 1,42 mmol) u toluenu (10 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (917 mg, 5,69 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (30 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-brom-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (0,22 g, 55%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,38 (m, 3H), 7,27–7,24 (m, 2H), 5,47–5,42 (m, 1H), 3,63–3,51 (m, 1H), 2,94–2,84 (m, 1H).
Korak 2: ciklopropil-[(5S,7S)-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor cis-2-brom-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4] triazola (210 mg, 0,74 mmol) i N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (192 mg, 1,48 mmol) u tetrahidrofuranu (6 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,74 ml, 1,48 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 44-74%/ 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[cis-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (55 mg, 27%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,646 min, m/z = 273,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,646 min, ESI+ nađeno [M+H] = 273,2.
Gore navedena cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
1
ciklopropil-[(5S,7S)-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 4,354 min) (16,6 mg, 29%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,38 (m, 3H), 7,29–7,27 (m, 2H), 5,67–5,63 (m, 1H), 3,80–3,70 (m, 1H), 3,05–3,02 (m, 1H), 2,88–2,80 (m, 1H), 1,19–1,16 (m, 2H), 1,12– 1,09 (m, 2H). LCMS RT= 0,738 min, m/z = 273,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme: 0,738 min, ESI+ nađeno [M+H] = 273,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: Daicel Chiralpak AD-H (250 mm*30 mm, 5 µm) I.D., 5 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,1%NH3H2O IPA) gradijent: od 30% do 30% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Metod 83
Primer 104
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon i [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor trans-2-fluor-N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (trans smeša) (245 mg, 1,65 mmol) i (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (250 mg, 0,85 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,1 ml, 4,15 mmol, 2 M u tetrahidrofuranu) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je deaktivirana dodavanjem vode (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 20 ml). Organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (33% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,6), dajući [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (trans smeša) (105 mg, 41%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,739 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,739 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
Gore navedena trans smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
1
[(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,773 min) (48,1 mg, 45%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,48–7,42 (m, 1H), 7,25–7,13 (m, 3H), 6,22–6,06 (m, 1H), 5,93–5,89 (m, 1H), 5,01–4,87 (m, 0,5H), 4,85–4,82 (m, 0,5H), 3,88– 3,75 (m, 1H), 3,51–3,42 (m, 1H), 2,93–2,81 (m, 1H), 1,75–1,64 (m, 1H), 1,62–1,54 (m, 1H). LC-MS RT= 0,852 min, m/z = 308,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,852 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 308,0.
Izomer 1S,2R nije izolovan.
SFC kondicioniranje: kolona: Chiralcel OD-3, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 min i zadržan 40% tokom 2,5 min, zatim 5% B tokom 2,5 min protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C
Veća serija trans smeše (215 mg, 0,70 mmol) odvojena je putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
[(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,445 min) (19,5 mg, 9%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40–7,38 (m, 1H), 7,18–7,15 (m, 2H), 6,98–6,97 (m, 1H), 6,13–6,11 (m, 0,5H), 5,99–5,98 (m, 0,5H), 5,87–5,85 (m, 1H), 5,05– 5,04 (m, 0,5H), 4,89–4,88 (m, 0,5H), 3,73–3,67 (m, 1H), 3,58–3,54 (m, 1H), 3,01–2,95 (m, 1H), 1,72–1,65 (m, 2H). LC-MS RT= 1,763 min, m/z = 308,1 (M+H)<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 1,763 min, ESI<+>nađeno [M+H] = 308,1. Napomena: 1R,2S-izomer je bio pik 2 (retenciono vreme = 2,728 min) pod uslovima AD SFC.
SFC kondicioniranje: Kolona: Daicel Chiralpak AD-H(250 mm*30 mm, 5 µm); mobilna faza: A: CO2 B:etanol (0,1%NH3H2O metanol) gradijent: od 15% do 15% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone: 35 °C.
Metod 84
1
Primer 105
rac-(1R,2R)-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarbonitril
Korak 1: trans-2-(etoksikarbonil)ciklopropankarboksilna kiselina
U rastvor dietil trans-ciklopropan-1,2-dikarboksilata (2000 mg, 10,74 mmol) u etanolu (26 ml) dodat je rastvor natrijum hidroksida (429 mg, 10,74 mmol) u vodi (3 ml). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Vodeni ostatak je podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući trans-2-etoksikarbonilciklopropankarboksilnu kiselinu (820 mg, 48%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,430 min, m/z =159,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,430 min, ESI+ nađeno [M+H] = 159,1.
Korak 2: etil trans-2-(metoksi(metil)karbamoil)ciklopropankarboksilat Smeša 1-hidroksibenzotriazola (684 mg, 5,06 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil karbodiimid hidrohlorida (1164 mg, 6,07 mmol), trans-2-etoksikarbonilciklopropan karboksilne kiseline (800 mg, 5,06 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (740 mg, 7,59 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1634 mg, 12,65 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i razblažena vodom (20 ml). Reakciona smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-2-[metoksi(metil)karbamoil]ciklopropankarboksilat (600 mg, 59%) u vidu svetložutog ulja. LCMS RT= 0,525 min, m/z =202,2 [M+H]<+>.
2
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,525 min, ESI+ nađeno [M+H] = 202,2.
Korak 3: etil trans-2-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karbonil)ciklopropankarboksilat
U rastvor etil trans-2-[metoksi(metil)karbamoil]ciklopropankarboksilata (571 mg, 2,84 mmol) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazola (400 mg, 1,42 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 2,84 ml, 5,67 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklo propankarboksilat (350 mg, 72%) u vidu svetložutog ulja. LCMS RT= 0,693 min, m/z = 344,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,693 min, ESI+ nađeno [M+H] = 344,1.
Korak 4: trans-2-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karbonil)ciklopropankarboksilna kiselina
U rastvor etil trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarboksilata (100 mg, 0,29 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je rastvor litijum hidroksida (42 mg, 1,75 mmol) u vodi (2 ml). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Vodeni ostatak je podešen na pH = 3 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (4 M) na 0 °C. Smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom (3 x 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim
2 1
vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarboksilnu kiselinu (90 mg, 98%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,590 min, m/z =316,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,590 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,2.
Korak 5: trans-2-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karbonil)ciklopropankarboksamid
Smeša 1-hidroksibenzotriazola (34 mg, 0,25 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (49 mg, 0,25 mmol), amonijum hlorida (27 mg, 0,51 mmol), N,N-diizopropiletilamina (98 mg, 0,76 mmol) i trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarboksilne kiseline (80 mg, 0,25 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml) mešana je na 25 °C tokom 18 h i razblažena vodom (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u metanolu), dajući trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarboksamid (75 mg, 94%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,555 min, m/z =315,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,555 min, ESI+ nađeno [M+H] = 315,1.
Korak 6: rac-(1R,2R)-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karbonil]ciklopropankarbonitril
U rastvor trans-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karbonil]ciklopropankarboksamida (65 mg, 0,21 mmol) u 1,4-dioksanu (3 ml) dodat je
2 2
trietilamin (62 mg, 0,62 mmol) i anhidrid trifluorsirćetne kiseline (87 mg, 0,41 mmol). Reakcija je mešana na 25 °C tokom 2 h i razblažena vodom (15 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 15-45% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni rac-(1R,2R)-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropankarbonitril (24,0 mg, 38%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,39 (m, 3H), 7,32–7,30 (m, 2H), 6,22–6,20 (m, 0,5H), 6,08–6,06 (m, 0,5H), 5,70–5,67 (m, 1H), 3,81–3,75 (m, 1H), 3,62–3,31 (m, 1H), 2,90–2,75 (m, 1H), 2,28–2,24 (m, 1H), 1,68–1,63 (m, 2H). LCMS RT= 0,957 min, m/z =297,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 0,957 min, ESI+ nađeno [M+H] = 297,2.
Metod 85
Primer 106
ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2,3-difluorfenil)but-3-en-1-ol
U ohlađeni rastvor (0 °C) 2,3-difluorbenzaldehida (10,0 g, 70,4 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je alil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 46,0 ml, 92,0 mmol) tokom 30 minuta. Nakon dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana je 2 sata i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2,3-difluorfenil)but-3-en-1-ol (12,9 g, 99%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,27–7,24 (m, 1H), 7,11–7,06 (m, 2H), 5,87– 5,77 (m, 1H), 5,20–5,08 (m, 3H), 2,62–2,47 (m, 2H).
2
Korak 2: terc-butil((1-(3,4-difluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)dimetilsilan
U rastvor 1-(2,3-difluorfenil)but-3-en-1-ola (12,9 g, 70,6 mmol) u dihlormetanu (20 ml) uz mešanje je dodat imidazol (9,6 g, 141,2 mmol) i terc-butil dimetilhlorsilan (12,8 g, 84,7 mmol). Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (100 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil-[1-(2,3-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silan (21,0 g, 99%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,25−7,22 (m, 1H), 7,08−7,03 (m, 2H), 5,82−5,75 (m, 1H), 5,10−4,99 (m, 3H), 2,49−2,42 (m, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,67 (s, 3H), -0,08 (s, 3H).
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(3,4-difluorfenil)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(2,3-difluorfenil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (21,0 g, 70,4 mmol) u tetrahidrofuranu/vodi (200 ml, 1:1) dodat je osmijum tetraoksid (0,1 g, 0,39 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, u smešu je dodat natrijum perjodat (60,2 g, 281,5 mmol) u malim porcijama tokom 2 sata. Dobijena smeša je mešana još 2 sata na 30 °C i zatim je deaktivirana dodavanjem hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (300 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 3% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3-difluorfenil)propanal (15,0 g, 71%) u vidu žutog ulja.
2 4
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(3,4-difluorfenil)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (15,7 g, 50,4 mmol) u tetrahidrofuranu (150 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanima, 22,0 ml, 54,9 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je ukapan rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3-difluorfenil)propanala (15,0 g, 49,9 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1,5 h i zatim je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 12% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3-difluorfenil)propan-1-ol (12,0 g, 45%) u vidu žutog ulja.
Korak 5: 2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
Rastvor 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-3-(3,4-difluorfenil)propan-1-ola (56,0 g, 105,2 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (150 ml) zagrevan je na 55 °C tokom 16 sati i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen na pH = 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlorometanom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (22,0 g, 66%) u vidu čvrste supstance bele boje.
Korak 6: (5S,7S)-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol i (5R,7R)-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
2
U rastvor 2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (30,0 g, 94,9 mmol) u toluenu (200 ml) uz mešanje je polako dodat dietilaminosumpor trifluorid (45,9 g, 284,7 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 16 h, a zatim je polako uz mešanje dodata u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (200 ml) na 0 °C. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 150 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 15% etil acetat u petrol etru), dajući cis-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol. Ova cis supstanca je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(5S,7S)-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 1, retenciono vreme = 2,828 min) (1,1 g;,3,7%) u vidu čvrste supstance bele boje i (5R,7R)-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 2,935 min) (1,1 g, 3,7%) u vidu čvrste supstance bele boje.
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiral Cel OJ-H 150×4,6 mm I.D., 5 µm; mobilna faza: A: COz B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 minut; protok: 2,5 ml/min. temperatura kolone: 40 °C.
Korak 7: ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor (5S,7S)-2-brom-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazola (150 mg, 0,47 mmol), N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (122 mg, 0,94 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,47 ml, 0,94 mmol) na 0 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 40-70% /0,225% mravlja kiselina u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,3-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (49,1 mg, 34%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,22–7,16
2
(m, 1H), 7,14–7,08 (m, 1H), 6,75–6,72 (m, 1H), 6,13–6,10 (m, 0,5H), 5,99–5,96 (m, 0,5H), 5,88–5,84 (m, 1H), 3,74–3,67 (m, 1H), 3,09–3,04 (m, 1H), 2,99–2,92 (m, 1H), 1,36–1,31 (m, 2H), 1,14–1,09 (m, 2H). LC-MS RT= 0,666 min, m/z = 308,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,666 min, ESI+ nađeno [M+H] = 308,1.
Metod 86
Primer 107
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-en-1-ol
U rastvor 2,3,5-trifluorbenzaldehida (20,0 g, 124,93 mmol) u dihlormetanu (120 ml) i vodi (120 ml) dodat je tetrabutilamonijum jodid (4,6 g, 12,49 mmol) i kalijum alil trifluorborat (40,7 g, 137,42 mmol) na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h i ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-en-1-ol (29,0 g, 100%) u vidu žutog ulja.
Korak 2: terc-butildimetil((1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)silan
U smešu 1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-en-1-ola (20,5 g, 101,4 mmol) i imidazola (13,8 g, 202,7 mmol) u dihlormetanu (120 ml) dodat je terc-butil dimetilhlorsilan (19,9 g, 131,9 mmol). Smeša je mešana na 35 °C tokom 16 h i razblažena dihlormetanom (50 ml). Smeša je isprana vodom (2 x 50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni
2
(silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući terc-butildimetil((1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-en-1-il)oksi)silan (28,0 g, 87%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 3: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(2,3,5-trifluorfenil)propanal
Smeša terc-butil-dimetil-[1-(2,3,5-trifluorfenil)but-3-enoksi]silana (5,0 g, 15,8 mmol) i osmijum tetroksida (5,0 g, 19,7 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) i vodi (20 ml) mešana je na 20 °C tokom 0,5 h, a zatim je dodat natrijum perjodat (13,5 g, 63,2 mmol) u 3 porcije tokom 0,5 h. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 3 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum tiosulfata (30 ml). Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Filtrat je ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 5% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3,5-trifluorfenil)propanal (1,6 g, 32%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,78 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 7,04−7,01 (m, 1H), 6,87−6,83 (m, 1H), 5,56−5,53 (m, 1H), 2,85−2,79 (m, 1H), 2,71−2,66 (m, 1H), 0,89 (s, 1H), 0,11 (s, 1H), -0,05 (s, 1H).
Korak 4: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(2,3,5-trifluorfenil)propan-1-ol
U smešu 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (1,6 g, 5,2 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u heksanu, 2,1 ml, 5,2 mmol) u atmosferi azota na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h i ukapan je rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3,5-trifluorfenil)propanala (1,5 g, 4,71 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml). Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 4 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 15% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-
2
tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(2,3,5-trifluorfenil)propan-1-ol (1,78 g, 69%) u vidu žute gume. LCMS RT= 1,056 min, m/z = 466,0 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,056 min, ESI+ nađeno [M+H] = 466,0.
Korak 5: 2-brom-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
Rastvor 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-3-(2,3,5-trifluorfenil)propan-1-ola (1,8 g, 3,2 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (250 ml, 32,3 mmol) mešan je na 50 °C tokom 1 h, a zatim je dodata trifluormetansulfonska kiselina (1 ml, 3,2 mmol). Dobijena smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (50 ml) i podešen na pH = 8 dodavanjem vodenog rastvora natrijum hidroksida (20%). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (2 x 50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 40 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je ispran metil tbutil etrom (20 ml), dajući 2-brom-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (0,55 g, 51%) u vidu čvrste supstance smeđe boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,01–6,94 (m, 1H), 6,980–6,56 (m, 1H), 5,88–5,60 (m, 2H), 5,47–5,40 (m, 1H), 3,66– 3,22
Korak 6: (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
U smešu 2-brom-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (550 mg, 1,65 mmol) u toluenu (10 ml) ukapavanjem je dodat dietilaminosumpor trifluorid (1,06 g, 6,6 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 16 h i zatim je
2
deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 15 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,5trifluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol (197 mg, 36%) u vidu čvrste supstance smeđe boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,00–6,95 (m, 1H), 6,52–6,48 (m, 1H), 6,08–5,92 (m, 1H), 5,81–5,77 (m, 1H), 3,71–3,57 (m, 1H), 2,90–2,80 (m, 1H).
Ovaj racemat je dalje odvojen putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (pik 2, retenciono vreme = 2,866 min) (80 mg, 41%) u vidu čvrste supstance smeđe boje (zajedno sa izomerom 5R,7R (pik 1, retenciono vreme = 2,345 min) (80 mg, 41%)).
SFC kondicioniranje: Kolona: Chiralpak IC-3150×4,6 mm I.D., 3 µm. mobilna faza: A: CO2, B:izopropanol (0,05% DEA). gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta. protok: 2,5 ml/min. temperatura kolone: 35 °C.
Korak 7: ciklopropil-((5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
U smešu (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (80 mg, 0,24 mmol), N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (62 mg, 0,48 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) ukapavanjem je dodat izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 0,24 ml, 0,48 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (15 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 40-70/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,5-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (11 mg, 14%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,29–7,26 (m, 1H), 6,78–6,75 (m, 1H), 6,23–6,06 (m,
21
1H), 5,96–5,93 (m, 1H), 3,88–3,80 (m, 1H), 3,07–3,04 (m, 1H), 2,96–2,89 (m, 1H), 1,22–1,11 (m, 4H). LCMS RT= 1,029 min, m/z = 326,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,029 min, ESI+ nađeno [M+H] = 326,2.
Metod 87
Primer 109
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: (1E)-2-metilpropanal oksim
U rastvor izobutiraldehida (200,0 g, 2773,5 mmol) u vodi (2,0 l) dodat je hidroksilamin hidrohlorid (231,3 g, 3328,3 mmol) i natrijum karbonat (587,9 g, 5547,1 mmol). Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 4 h i filtrirana. Filtrat je ekstrahovan etil acetatom (3 × 1 l). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 1 l), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1E)-2-metilpropanal oksim (220 g, 91%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2: metil 3-izopropil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U rastvor n-hlorsukcinimida (268,2 g, 2008,7 mmol) u hloroformu (1500 ml) dodat je piridin (9,73 ml, 120,5 mmol) i (1E)-2-metilpropanal oksim (175,0 g, 2008,7 mmol) na 25 °C. Nakon mešanja na 25 °C tokom 0,5 h, ukapavanjem je dodat rastvor metil akrilata (227,2 ml, 2506,9 mmol) i trietilamina (292,4 ml, 2109,2 mmol) u hloroformu (100 ml) tokom 30 minuta na 25 °C. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i razblažena dihlormetanom (1000 ml). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (3 x 500 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-izopropil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (240 g, 70%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,98–4,93 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,21–3,19 (m, 2H), 2,75–2,66 (m, 1H), 1,16 (d, J = 6,8
Korak 3: 3-hidroksi-5-izopropil-pirolidin-2-on
Smeša metil 3-izopropil-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (240,0 g, 1402 mmol) i paladijuma (10% na uglju, 14,9 g) u etanolu (2 l) hidrogenizovana je (50 psi) na 45 °C tokom 16 sati i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-hidroksi-5-izopropil-pirolidin-2-on (70 g, 35%) u vidu čvrste supstance bele boje.
Korak 4: 3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-5-izopropil-pirolidin-2-on
U ohlađenu smešu (0 °C) 3-hidroksi-5-izopropil-pirolidin-2-ona (49,0 g, 342,2 mmol) i imidazola (69,9 g, 1026,7 mmol) u dihlormetanu (1120 ml) dodat je terc-butil dimetilhlorsilan (77,4 g, 513,3 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i sipana u vodu (1000 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-pirolidin-2-on (35,0 g, 40%) u vidu bezbojnog ulja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,63 (s, 1H), 4,32–4,28 (m, 1H), 3,17–3,11 (m, 1H), 2,46–2,40
0,15 (d, J = 10,4 Hz, 6H).
Korak 5: 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-pirolidin-2-on
U ohlađeni rastvor (0 °C) 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-pirolidin-2-ona (5,0 g, 19,42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 ml)dodat je natrijum hidrid (60%, 1,2 g, 29,13 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana 30 minuta na 0 °C, a zatim je dodat o-(difenilfosforil)hidroksilamin (6,8 g, 29,13 mmol). Dobijena smeša je mešana 16 sati na 20 °C i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1-amino-3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-pirolidin-2-on (5,3 g, 100%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 1,178 min, m/z = 273,3 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2 minuta) retenciono vreme 1,178 min, ESI+ nađeno [M H] = 273,3.
Korak 6: etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat
U rastvor 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-pirolidin-2-ona (5,28 g, 19,38 mmol) u etanolu (250 ml) dodat je etil 2-etoksi-2-imino-acetat (8,44 g, 58,14 mmol). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetat (7,10 g, 98%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,948 min, m/z = 372,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,948 min, ESI+ nađeno [M H] = 372,2.
Korak 7: etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 2-[[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (7,1 g, 19,11 mmol) u toluenu (140 ml) dodat je monohidrat ptoluensulfonske kiseline (4,4 g, 22,93 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući etil 7-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (6,6 g, 98%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,952 min, m/z = 354,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,952 min, ESI+ nađeno [M H] = 354,2.
21
Korak 7: etil cis-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-izopropil-6,7-dihidro- 5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (6,6 g, 18,67 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) dodat je tetrabutil amonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 18,67 ml, 18,67 mmol) na 25 °C. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h i koncentrovana. Ostatak je razblažen vodom (100 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 70% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (2,8 g, 62,7%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,34–5,31 (m, 1H), 4,47–4,43 (m, 2H), 4,26–4,24 (m, 1H), 3,14– 3,09 (m, 1H), 2,48–2,42 (m, 2H), 1,43–1,39 (m, 3H), 1,07 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,92 (d, J= 7,2 Hz, 3H).
Korak 8: etil trans-5-izopropil-7-(4-nitrobenzoil)oksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
U smešu etil cis-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (2,0 g, 8,36 mmol), 4-nitrobenzojeve kiseline (2,1 g, 12,54 mmol) i trifenilfosfina (6,6 g, 25,08 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) dodat je diizopropil azodikarboksilat (5,0 ml, 25,08 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 17% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-5-izopropil-7-(4-nitrobenzoil)oksi-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (2,5 g, 77%) u vidu čvrste supstance žute boje.
Korak 9: etil trans-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša kalijum karbonata (1,23 g, 8,88 mmol) i etil trans-5-izopropil-7-(4-nitrobenzoil)oksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (2,3 g, 5,92 mmol) u etanolu (10 ml) / tetrahidrofuranu (5 ml) / vodi (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 1 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil trans-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (1,10 g, 78%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 10: etil cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksilat
U smešu etil trans-7-hidroksi-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (1,0 g, 4,18 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (2,23 ml, 16,72 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (200 ml). Rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 7% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (550 mg, 55%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 11: cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksilna kiselina
21
Smeša etil cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (550 mg, 2,28 mmol) i litijum hidroksid hidrata (191 mg, 4,56 mmol) u metanolu (10 ml) / tetrahidrofuranu (5 ml) / vodi (5 ml) mešana je na 20 °C tokom 1 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (20 ml) i ispran etil acetatom (20 ml). Vodeni ostatak je podešen na pH = 6 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (1 M), a zatim je ekstrahovan etil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksilnu kiselinu (420 mg, 86%) u vidu bezbojnog ulja.
12. korak: cis-7-fluor-5-izopropil-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilne kiseline (420 mg, 1,97 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1,05 ml, 5,91 mmol), 1-(3-dimetilaminopropil) -3-etilkarbodiimid hidrohlorida (453 mg, 2,36 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (160 mg, 1,18 mmol) i N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (384 mg, 3,94 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (2 x 50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 50 do 60%), dajući cis-7-fluor-5-izopropil-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (200 mg, 40%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,692 min, m/z = 257,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,692 min, ESI+ nađeno [M H] = 257,1.
Korak 13: ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b]
[1,2,4] triazol-2-il]metanon
21
U ohlađeni rastvor (0 °C) cis-7-fluor-5-izopropil-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (200 mg, 0,78 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 1,0 ml, 0,50 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 40% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[cis-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon (100 mg, 52%) u vidu čvrste supstance bele boje. Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-izopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon (pik 2, retenciono vreme = 5,136 min) (24 mg, 23%) u vidu čvrste supstance bele boje.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,99–5,83 (m, 1H), 4,39–4,34 (m, 1H), 3,22–3,18 (m, 1H), 3,12– 3,08 (m, 1H), 2,72–2,62 (m, 1H), 2,42–2,38 (m, 1H), 1,34–1,33 (m, 2H), 1,13–1,10 (m, 2H), 1,08 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,94 (d, J= 6,8 Hz, 3H). LCMS RT= 0,822 min, m/z = 238,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,822 min, ESI+ nađeno [M H] = 238,0.
SFC kondicioniranje: Kolona: Lux 3u Cellulose-2 150 x 4,6 mm; mobilna faza: A: CO2B:metanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, zatim 5% B tokom 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temp. kolone 35 °C.
Metod 88
Primer 110
ciklopropil-[(SS,7S)-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: (E)-ciklopropankarbaldehid oksim
U rastvor ciklopropankarboksaldehida (50,0 g, 713,37 mmol) u etanolu (500 ml) dodat je natrijum karbonat (166,3 g, 1569,4 mmol) i hidroksilamin hidrohlorid (59,5 g, 856,04 mmol).
21
Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (1000 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 x 600 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (1000 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (E)-ciklopropankarbaldehid oksim (40 g, 66%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2: metil 3-izopropil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
Smeša piridina (2,85 ml, 35,25 mmol), N-hlorsukcinimida (78,5 g, 587,54 mmol) i (E)-ciklopropankarbaldehid oksima (50 g, 587,54 mmol) u hloroformu (500 ml) mešana je na 25 °C tokom 2 h, zatim je dodat rastvor metil akrilata (66,45 ml, 733,25 mmol) i trietilamina (85,35 ml, 615,75 mmol) u hloroformu (100 ml). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h i deaktivirana je dodavanjem vode (200 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-ciklopropil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (75,0 g, 76%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 3: 5-ciklopropil-3-hidroksi-pirolidin-2-on
Smeša metil 3-ciklopropil-4, 5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (35,0 g, 206,88 mmol) i platina oksida (6,1 g, 26,89 mmol) u etilen glikolu (300 ml) mešana je na 25 °C u atmosferi vodonika (30 psi) tokom 48 sati i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% etil acetat u petrol etru), dajući 5-ciklopropil-3-hidroksi-pirolidin-2-on (15,5 g, 53%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,297 min, m/z = 142,1 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 0,297 min, ESI+ nađeno [M+H] =142,1.
Korak 4: 3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-pirolidin-2-on
21
U ohlađenu smešu (0 °C) 5-ciklopropil-3-hidroksi-pirolidin-2-ona (13,0 g, 92,09 mmol) i imidazola (18,8 g, 276,26 mmol) u dihlormetanu (150 ml) dodat je terc-butil dimetilhlorsilan (20,8 g, 138,13 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h, a zatim isprana vodom (2 × 50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropilpirolidin-2-on (10,2 g, 43%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 5: 1-amino-3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-pirolidin-2-on U ohlađeni rastvor (0 °C) 3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-pirolidin-2-ona (10,2 g, 39,93 mmol) u N,N-dimetilformamidu (150 ml) dodat je natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 2,4 g, 59,9 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min, a zatim je dodat O-(difenilfosforil) hidroksilamin (14,0 g, 59,9 mmol). Dobijena smeša je mešana 16 sati na 10 °C i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1-amino-3-[tercbutil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-pirolidin-2-on (10,5 g, 97%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,810 min, m/z = 271,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,810 min, ESI+ nađeno [M+H] =271,2.
Korak 6: etil 2-[[3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-2-okso-pirolidin-1-il] amino]-2-imino-acetat
Smeša 1-amino-3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-pirolidin-2-ona (10,5 g, 38,83 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (14,1 g, 97,06 mmol) u etanolu (150 ml) mešana je na 90 °C tokom 12 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-[[3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-2-okso-pirolidin-1-il] amino]-2-imino-acetat (10,0 g, 70%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,804 min, m/z = 370,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,804 min, ESI+ nađeno [M+H] =370,2.
21
Korak 7: etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-ciklopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil (2Z)-2-amino-2-[3-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-2-oksopirolidin-1-il] imino-acetata (10,0 g, 27,06 mmol) u toluenu (120 ml) dodata je ptoluensulfonska kiselina (5,6 g, 32,47 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-ciklopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (9,5 g, 99%) u vidu crvenog ulja. LCMS RT= 0,928 min, m/z = 352,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,928 min, ESI+ nađeno [M+H] =352,2.
Korak 8: etil 5-ciklopropil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 7-[terc-butil (dimetil) silil] oksi-5-ciklopropil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (9,5 g, 27,03 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je tetrabutil amonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 27,0 ml, 27,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 12 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% etil acetat u petrol etru), dajući etil 5-ciklopropil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (2,2 g, 34%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,521 min, m/z = 238,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,521 min, ESI+ nađeno [M+H] =238,1.
22
Korak 9: etil cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U ohlađeni rastvor (0 °C) etil 5-ciklopropil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (2,0 g, 8,43 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je dietilaminosumportrifluorid (3,26 ml, 25,29 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 12 h i deaktivirana je dodavanjem vode (5,0 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući etil cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-karboksilat (220 mg, 11%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,701 min, m/z = 240,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,701 min, ESI+ nađeno [M+H] =240,1.
Korak 10: cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
Smeša litijum hidroksid monohidrata (105 mg, 2,51 mmol) i etil cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (200 mg, 0,84 mmol) u etanolu (0,50 ml) / vodi (0,50 ml) / tetrahidrofuranu (0,50 ml) mešana je na 25 °C tokom 2 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Vodeni ostatak je podešen na pH = 7 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (1 M) i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (175 mg, 99%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,452 min, m/z = 212,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,452 min, ESI+ nađeno [M+H] =212,1.
Korak 11: cis-5-ciklopropil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (175 mg, 0,83 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (56 mg, 0,41 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (121 mg, 1,24 mmol), N,N-diizopropiletilamina (0,34 ml, 2,07 mmol) i 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (190,6 mg, 0,99 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešana je na 25 °C tokom 16 h i deaktivirana je dodavanjem vode (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 60% etil acetat u petrol etru), dajući cis-5-ciklopropil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (75 mg, 36%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,604 min, m/z = 255,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,604 min, ESI+ nađeno [M+H] =255,1.
Korak 12: ciklopropil-[(5S,7S)-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (0 °C) cis-5-ciklopropil-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (65 mg, 0,26 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) dodat je ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 1,24 ml, 0,62 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i deaktivirana je dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (3 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (5 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući ciklopropil-[cis-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (50 mg, 83%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,676 min, m/z = 236,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,676 min, ESI+ nađeno [M+H] =236,1.
Ova cis smeša je dalje odvojena putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: ciklopropil-[(5S,7S)-5-ciklopropil-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 2,841 min) (3,1 mg, 6%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6,05–5,89 (m, 1H), 4,02–3,95 (m, 1H), 3,51–3,35 (m, 1H), 3,14– 3,10 (m, 1H), 2,78–2,70 (m, 1H), 1,26–1,12 (m, 5H), 0,79–0,67 (m, 3H), 0,58–0,52 (m, 1H). LCMS RT= 0,677 min, m/z = 236,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,677 min, ESI+ nađeno [M+H] = 236,1.
SFC kondicioniranje: Kolona: DAICEL CHIRALPAK IC (250 mm*30 mm, 5 um); mobilna faza: A: CO2, B: 0,1% NH3H2O IPA početak B 40% kraj B 40% gradijent; vreme: gradijent: od 40% do 40% B tokom 5 minuta i zadržan 40% tokom 2,5 minuta, protok: 60 ml/min; temperatura kolone: 35 °C.
Metod 89
Primer 111
ciklopropil-[(SS,7S)-7-deuterio-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (50 mg, 0,17 mmol) u metanolu (2,0 ml) dodat je nikl (10 mg, 0,17 mmol). Smeša je mešana tokom 2 sata na 20 °C u atmosferi vodonika (15 psi) i zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (voda (0,05% amonijum hidroksid V/V)- acetonitril: 33-63%), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S, 7S)-7-deuterio-5-fenil-6, 7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon (14,8 mg, 33%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41– 7,36 (m, 3H), 7,14–7,11 (m, 2H), 5,52–5,48 (m, 1H), 3,28–3,21 (m, 1H), 3,06–3,00 (m, 2H),
22
2,70–2,65 (m, 1H), 1,30–1,27 (m, 2H), 1,06–1,03 (m, 2H). LCMS RT= 1,551 min, m/z =255,1 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitrila u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 min) retenciono vreme 1,551 min, ESI<+>nađeno [M+H] =255,1.
Metoda 90
Primer 112
ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon, ciklopropil-[(SS,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(SR,7R)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-nitrobutan-2-ol
U smešu nitrometana (52,6 g, 860,9 mmol), heksadecil trimetilamonijum hlorida (27,6 g, 86,1 mmol), natrijum hidroksida (34,4 g, 860,9 mmol) u vodi (2,5 l) dodat je propionaldehid (50,0 g, 860,9 mmol) na 25 °C. Smeša je mešana 4 sata na 25 °C, zatim je dodat natrijum hlorid (700 g) i ekstrahovana je etil acetatom (2 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-nitrobutan-2-ol (80,0 g, 78%) u vidu svetlosmeđeg ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2: terc-butildimetil((1-nitrobutan-2-il)oksi)silan
U rastvor 1-nitrobutan-2-ola (40,0 g, 335,8 mmol) i imidazola (48,0 g, 705,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (300 ml) uz mešanje je dodat terc-butildimetilhlorsilan (53,2 g, 352,6 mmol) u atmosferi azota na 25 °C. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana 15 sati na 25°C. Smeša je zatim razblažena vodom (400 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući terc-butil-dimetil-[1-(nitrometil)propoksi]silan (28,0 g, 36%) u vidu svetlosmeđeg ulja.
Korak 3:
metil 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat U smešu metil akrilata (54,4 ml, 599,9 mmol), di-terc-butilkarbonata (39,3 g, 179,9 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (1,5 g, 12,0 mmol) u acetonitrilu (500 ml) dodat je rastvor tercbutil-dimetil-[1-(nitrometil)propoksi]silana (28,0 g, 119,9 mmol) u acetonitrilu (10 ml). Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 sati, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (17,0 g, 47%) u vidu smeđeg ulja.
Korak 4: 5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)-3-hidroksipirolidin-2-on Smeša etil 3-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (17,0 g, 53,89 mmol) i paladijuma (10% na ugljeniku, 3,0 g) u etanolu (500 ml) mešana je 48 sati na 40 °C u atmosferi vodonika (50 psi) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-3-hidroksi-pirolidin-2-on (12,0 g, 82%) u vidu bele čvrste supstance.
Korak 5: 3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)pirolidin-2-on U rastvor 5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-3-hidroksi-pirolidin-2-ona (8,8 g, 32,2 mmol) u dihlormetanu (440 ml) dodati su tetrabutilamonijum bromid (519 mg, 1,6 mmol), vodeni rastvor natrijum hidroksida (30%, 60 ml) i benzil bromid (8,3 g, 48,3 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana na 40 °C tokom 18 h. Smeša je zatim sipana u vodu (200 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (2 × 100 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i
22
koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 0 do 80% etil acetat u petrol etru), dajući 3-benziloksi-5-[1-[tercbutil(dimetil)silil]oksipropil]pirolidin-2-on (6,8 g, 58%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 6: 1-amino-3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)pirolidin-2-on
U rastvor 3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]pirolidin-2-ona (6,80 g, 18,7 mmol) u N,N-dimetilformamidu (150 ml) dodat je natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 1,12 g, 28,1 mmol) na 0 °C. Nakon mešanja na 25 °C tokom 20 min, u smešu je dodat o-(difenilfosforil) hidroksilamin (6,50 g, 28,1 mmol) i mešana je još 18 sati na 25 °C. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-amino-3-benziloksi-5-[1-[terc-butil (dimetil)silil]oksipropil]pirolidin-2-on (7,10 g, 100%) u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS RT= 0,876 min, m/z = 379,3 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,876 min, ESI+ nađeno [M+H] = 379,3.
Korak 7: etil 2-((3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)-2-oksopirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat
Smeša 1-amino-3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]pirolidin-2-ona (1,87 g, 4,94 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (1,79 g, 12,35 mmol) u etanolu (25 ml) mešana je na 90 °C tokom 33 sata i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-((3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)-2-oksopirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat (2,36 g, 99%) u vidu žutog ulja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS RT= 1,037 i 1,061 min, m/z = 478,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 1,037 i 1,061 min, ESI+ nađeno [M+H] = 478,2.
22
Korak 8: etil 7-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)propil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 2-[[3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-2-oksopirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (2,2 g, 4,61 mmol) u toluenu (50 ml) dodat je monohidrat p-toluensulfonske kiseline (1,1 g, 5,53 mmol). Dobijena smeša je mešana na 120°C 16 h i koncentrovana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući etil 7-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (0,9 g, 43%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,935 min, m/z = 460,3 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,935 min, ESI+ nađeno [M+H] = 460,3.
Korak 9: etil 7-(benziloksi)-5-(1-hidroksipropil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 7-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (800 mg, 1,74 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 5,22 ml, 5,22 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h i razblažena vodom (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 7-benziloksi-5-(1-hidroksipropil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (70 mg, 93%) u vidu smeđeg ulja. Jedinjenje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
22
Korak 10: etil 7-(benziloksi)-5-propionil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
U smešu etil 7-benziloksi-5-(1-hidroksipropil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (600 mg, 1,74 mmol) i natrijum bikarbonata (584 mg, 6,95 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je Des-Martinov perjodinan (1473 mg, 3,47 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana 40 minuta na 0°C, a zatim deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum sulfita (20 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući etil 7-benziloksi-5-propanoil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (590 mg, 99%) u vidu svetlosmeđeg ulja. LC-MS RT= 0,834 min, m/z = 344,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,834 min, ESI+ nađeno [M+H] = 344,1
Korak 11: etil 7-hidroksi-5-propionil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 7-benziloksi-5-propanoil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (450 mg, 1,31 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (20 ml) zagrevana je 3 sata na 120 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u dihlormetanu (30 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (15 ml) i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (60% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući etil 7-hidroksi-5-propanoil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (220 mg, 66%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,43–5,39 (m, 1H), 5,25–5,21 (m, 1H), 4,50–4,43 (m, 2H), 3,05–3,01 (m, 2H), 2,75–2,55 (m, 2H), 1,44–1,40 (m, 3H), 1,13–1,08 (m, 3H). LC-MS RT= 0,530 i 0,564 min, m/z = 254,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitrila u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,530 i 0,564 min, ESI+ nađeno [M+H] = 254,1.
22
Korak 12: etil cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 7-hidroksi-5-propanoil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (220 mg, 0,87 mmol) i dietilaminosumpor trifluorida (140 mg, 0,87 mmol) mešana je 2 sata na 10 °C, a zatim deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (15 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 10 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4 za cis izomer i Rf= 0,6 za trans izomer), dajući etil trans-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (60 mg, 25%) i etil cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (60 mg, 25%), oba u vidu smeđeg ulja.
Korak 13: cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
U rastvor etil cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (55 mg, 0,20 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml), etanolu (2 ml) i vodi (0,5 ml) dodat je litijum hidroksid monohidrat (83 mg, 1,98 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata na 25 °C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (10 ml), i podešen na pH = 3 pomoću hlorovodonične kiseline (3 N). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (40 mg, 81%) u vidu svetloružičaste čvrste supstance.
22
Korak 14: cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (40 mg, 0,16 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (31 mg, 0,32 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (64 mg, 0,17 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,08 ml, 0,48 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) mešana je 2 sata na 20 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (27 mg, 58%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,7,14 min, m/z = 293,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,714 min, ESI+ nađeno [M+H] = 293,1
Korak 15: ciklopropil-[rac-(SS,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor cis-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (27 mg, 0,09 mmol) u tetrahidrofuranu (0,5 ml) dodat je ciklopropilmagnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 0,92 ml, 0,46 mmol) u atmosferi azota. Nakon dodavanja, smeša je mešana 1 sat na 0 °C i deaktivirana dodavanjem metanola (10 ml). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,6), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (cis smeša) (9,9 mg, 35%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5,97–5,80 (m, 1H), 4,90–4,78 (m, 1H), 3,45–3,25 (m, 1H), 3,05–2,95 (m, 1H), 2,95–2,75 (m, 1H), 2,28–2,00 (m, 2H), 1,20–1,11 (m, 2H), 1,07–0,98 (m, 5H). LC-MS RT= 0,766 min, m/z = 274,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,766 min, ESI+ nađeno [M+H] = 274,1.
2
Korak 16: ciklopropil-[(SS,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(SR,7R)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (58 mg) odvojen je putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(SS,7S)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 5,085 min) (8,2 mg, 14%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,02–5,84 (m, 1H), 4,71–4,66 (m, 1H), 3,33–3,23 (m, 1H), 3,19–3,07 (m, 2H), 2,34–2,26 (m, 1H), 2,18–2,01 (m, 1H), 1,35–1,25 (m, 2H), 1,18 (s, 1H), 1,17–1,15 (m, 2H), 1,14–1,11 (m, 2H). LC-MS RT= 0,818 min, m/z = 273,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitrila u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,818 min, ESI+ nađeno [M+H] = 273,9.
ciklopropil-[(5R,7R)-5-(1,1-difluorpropil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,815 min) (13,9 mg, 23%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,04−5,81 (m, 1H), 4,69−4,61 (m, 1H), 3,43−3,23 (m, 1H), 3,20−3,00 (m, 2H), 2,43−2,22 (m, 1H), 2,20−2,00 (m, 1H), 1,35−1,25 (m, 2H), 1,18 (s, 1H), 1,16−1,15 (m, 2H), 1,15−1,12 (m, 2H). LC-MS RT= 0,815 min, m/z = 273,9 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitrila u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,815 min, ESI+ nađeno [M+H] = 273,9.
Metoda 91
Primer 113
ciklopropil-[(SR,7S)-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
2 1
Korak 1: metil 2-ciklopropiloksiran-2-karboksilat
U smešu natrijum metoksida (40,5 g, 749,04 mmol) u metanolu (250 ml) dodat je ciklopropan karboksaldehid (35,0 g, 499,36 mmol) na -10 °C, zatim je ukapavanjem dodat metil hloracetat (81,3 g, 749,04 mmol) tokom 2 sata. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati i deaktivirana dodavanjem sirćetne kiseline. Dobijena smeša je razblažena vodom (300 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi metil 2-ciklopropiloksiran-2-karboksilat u vidu smeđeg ulja. Ulje je destilovano pod sniženim pritiskom, dajući metil 2-ciklopropiloksiran-2-karboksilat (38 g, 53%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 2: (Z)-2-ciklopropilacetaldehid oksim
U rastvor natrijum hidroksida (19,9 g, 498,07 mmol) u vodi (70 ml) dodavan je metil 2-ciklopropiloksiran-2-karboksilat (59,0 g, 415,05 mmol) na 25 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je mešana 1 sat na 25 °C i hidroksilamin sulfat (37,5 g, 228,28 mmol) dodavan je tokom 30 minuta na 25 °C. Smeša je mešana 2 sata na 25°C i razblažena vodom (300 ml). Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (300 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100–200 meša, 50% etil acetat u petrol etru), dajući (Z)-2-ciklopropilacetaldehid oksim (23,5 g, 57%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 0,265 min, m/z = 100,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,265 min, ESI+ nađeno [M+H] = 100,1.
Korak 3: metil 3-(ciklopropilmetil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat Rastvor piridina (0,85 ml, 10,59 mmol), N-hlorsukcinimida (28,3 g, 211,84 mmol) i (Z)-2-ciklopropilacetaldehid oksima (21,0 g, 211,84 mmol) u hloroformu (200 ml) mešan je 2 sata na 25 °C, a zatim je dodat rastvor metil akrilata (23,96 ml, 264,38 mmol) i trietilamina (30,77 ml, 222,01 mmol) u hloroformu (30 ml). Smeša je mešana 16 sati na 25 °C i razblažena
2 2
vodom (300 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 mL, 100 puta). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući metil 3-(ciklopropilmetil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (21,0 g, 54%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,565 min, m/z = 184,1 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,565 min, ESI+ nađeno [M+H] = 184,1.
Korak 4: 5-(ciklopropilmetil)-3-hidroksipirolidin-2-on
Smeša metil 3-(ciklopropilmetil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (18,0 g, 98,25 mmol) u metanolu i paladijumu (10% na ugljeniku, 10,5 g) mešana je 16 sati na 25 °C u atmosferi vodonika (15 psi) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 100% etil acetat u petrol etru), dajući 5-(ciklopropilmetil)-3-hidroksi-pirolidin-2-on (6,2 g, 41%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,272 min, m/z = 165,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,272 min, ESI+ nađeno [M+H] = 165,2.
Korak 5: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-on
U rastvor 5-(ciklopropilmetil)-3-hidroksi-pirolidin-2-ona (5,7 g, 36,73 mmol) i imidazola (5,5 g, 80,80 mmol) u dihlormetanu (50 ml) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (11,1 g, 73,46 mmol). Smeša je mešana 16 sati na 20 °C i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-on (7,7 g, 78%) u vidu čvrste supstance bele boje. LC-MS RT= 0,872 min, m/z = 270,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,872 min, ESI+ nađeno [M+H] = 270,2.
2
Korak 6: 1-amino-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-on
U rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil] oksi-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-ona (7,2 g, 26,72 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) dodat je natrijum hidrid (60%, 1,6 g, 40,08 mmol) na 0 °C. Nakon 30 minuta mešanja na 0 °C, dodat je O-(difenilfosforil)hidroksilamin (9,3 g, 40,08 mmol) i smeša je mešana 16 sati na 10 °C. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-on (7,5 g, 99%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 0,772 min, m/z = 285,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,772 min, ESI+ nađeno [M+H] = 285,2.
Korak 7: (Z)-etil 2-amino-2-((3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(ciklopropilmetil)-2-oksopirolidin-1-il)imino)acetat
Smeša 1-amino-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-ona (7,1 g;, 24,96 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (9,1 g, 62,4 mmol) u etanolu (150 ml) mešana je 12 sati na 90 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (Z)-etil 2-amino-2-((3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(ciklopropilmetil)-2-oksopirolidin-1-il)imino) acetat (9,2 g, 96%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 0,783 min, m/z = 384,3 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,783 min, ESI+ nađeno [M+H] = 384,3.
2 4
Korak 8: etil 5-(ciklopropilmetil)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol -2-karboksilat
Smeša (Z)-etil 2-amino-2-[3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-(ciklopropilmetil)-2-oksopirolidin-1-il]imino-acetata (9,2 g, 23,99 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (5,0 g, 28,78 mmol) u toluenu (100 ml) mešana je 16 sati na 120 °C i razblažena vodom (200 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 5-(ciklopropilmetil)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat (4,9 g, 82%) u vidu crvenog ulja. LC-MS RT= 0,540 min, m/z = 252,2 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,540 min, ESI+ nađeno [M+H] = 252,2.
Korak 9: etil cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 5-(ciklopropilmetil)-7-hidroksi-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (3,0 g, 11,98 mmol) u dihlormetanu (150 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (5,8 g, 35,94 mmol). Smeša je mešana 16 sati na 0 °C, i reakcija je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (200 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x8 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0-30% etil acetat u petrol etru), dajući etil trans-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (650 mg, 21%) i etil cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat (850 mg, 28%), oba u vidu žutog ulja. (TLC: 33% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,35 za cis izomer i Rf= 0,85 za trans izomer).
2
Korak 10: cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
Smeša etil cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (750 mg, 2,96 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (1,2 g, 29,61 mmol) u etanolu (3 ml) i vodi (1 ml) mešana je 16 sati na 20 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (10 ml), i podešen na pH = 3 pomoću hlorovodonične kiseline (3 N). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 mL, 20 puta). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu (660 mg, 99%) u vidu bistrog ulja. LC-MS RT= 0,491 min, m/z = 226,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,491 min, ESI+ nađeno [M+H] = 226,2.
Korak 11: cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (660 mg, 3,11 mmol), N,N-diizopropiletilamina (3,32 ml, 18,65 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (606 mg, 6,22 mmol) i 1-[bis(dimetilamino) metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfata (1536 mg, 4,04 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešana je 3 sata na 25 °C i razblažena vodom (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (670 mg, 80%) u vidu čvrste supstance smeđe boje. LC-MS RT= 0,706 min, m/z = 269,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,706 min, ESI+ nađeno [M+H] = 269,2.
2
Korak 12: ciklopropil-[(5R,7S)-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor cis-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (150 mg, 0,56 mmol) u tetrahidrofuranu (1 ml) dodat je ciklopropilmagnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 3,35 ml, 1,68 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 5 sati na 0 °C i deaktivirana dodavanjem vode (5 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 5 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 30-60%/0,225% mravlja kiselina u vodi) i dalje prečišćen putem hiralne SFC kako bi se dobio proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5R,7S)-5-(ciklopropilmetil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,498 min) (13,6 mg, 9,5%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6,02–6,00 (m, 0,5H), 5,88–5,86 (m, 0,5H), 4,60–4,55 (m, 1H), 3,37–3,23 (m, 1H), 3,05–3,01 (m, 1H), 2,75–2,60 (m, 1H), 2,00–1,95 (m, 1H), 1,68–1,65 (m, 1H), 1,16–1,06 (m, 4H), 0,90–0,77 (m, 1H), 0,49–0,47 (m, 2H), 0,10–0,02 (m, 2H). LC-MS RT= 0,635 min, m/z = 250,2 [M+H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 min) retenciono vreme 0,635 min, ESI+ nađeno [M+H] = 250,2.
U vidu bezbojnog ulja dobijen je i 5S,7R-izomer (pik 1, retenciono vreme = 3,041 min) (13,5 mg, 9%).
SFC uslov: Kolona: ChiralPak AS, 150×4.6mm I.D., 3µm; Mobilna faza: A: COz B: etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 25 ml/min; temperatura kolone: 40 °C.
SFC uslov: Kolona: Lux Cellulose-2, 150×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B: eEtanol (0,05% DEA); gradijent: od 5% do 40% B tokom 5,5 minuta i zadržan 40% tokom 3 minuta, zatim 5% B tokom 1,5 min; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C.
Metoda 92
2
Primer 114
ciklopropil-[(5S)-7,7-dideuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: ciklopropil-[(SS,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(5R,7R)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
ciklopropil-[rac-(5S,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (350 mg, iz druge veće serije) odvojen je putem hiralne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni:
ciklopropil-[(5R,7R)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1: retenciono vreme = 3,132 min, 100 mg, 10%) i ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2: retenciono vreme = 4,124 min, 100 mg, 10%), oba u vidu čvrstih supstanci bele boje.
SFC uslov: Kolona: OJ-H (250 mm * 30 mm, 10 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B 30% kraj B 30%; protok (80 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Korak 2: ciklopropil-[(SS)-7,7-dideuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Rastvor ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (40 mg, 0,14 mmol) i cinka (40 mg, 0,61 mmol) u mravljoj kiselini-D2(2,0 ml, 0,14 mmol) mešan je 48 sati na 20 °C. Smeša je razblažena etil acetatom (20 ml), isprana vodom (2 x 10 ml) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (0,05% amonijum hidroksid V/V-acetonitril 36-66%), dajući
2
proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S)-7,7-dideuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (13,2 mg, 36%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41–7,36 (m, 3H), 7,14–7,11 (m, 2H), 5,52–5,48 (m, 1H), 3,28–3,21 (m, 1H), 3,04–3,00 (m, 1H), 2,70–2,65 (m, 1H), 1,30–1,27 (m, 2H), 1,06–1,03 (m, 2H). LCMS RT= 1,549 min, m/z =256,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitrila u vodi 0,1% amonijum hidroksid tokom 3,0 min) retenciono vreme 1,549 min, ESI<+>nađeno [M+H] =256,2.
Metoda 93
Primer 115
ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(SR,7R)-7-hlor-S-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
Smeša tionil hlorida (441 mg, 3,71 mmol) i ciklopropil-[trans-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (400 mg, 1,49 mmol) mešana je 0,5 sati na 0 °C i deaktivirana dodavanjem vode (100 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 200 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[cis-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (220 mg, 52%) u vidu čvrste supstance žute boje. LC-MS RT = 0,692 min, m/z = 288,1 [M+H] .
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,692 min, [M H] = 288,1.
Ova cis smeša je dalje razdvojena hiralnim SFC-om kako bi se priuštilo proizvoljno dodeljivanje:
ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 1, retenciono vreme = 3,711 min) (72,9 mg, 33%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,39 (m, 2H), 7,33–7,28 (m, 3H), 5,56–5,51 (m, 1H), 5,40–5,35 (m, 1H), 3,95–3,88 (m, 1H), 3,07–2,99 (m, 2H), 1,34–1,31 (m, 2H), 1,11–1,07 (m, 2H). LCMS RT= 1,034 min, m/z = 288,2 [M+H]<+>.
2
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,034 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,2.
ciklopropil-[(5R,7R)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 3,949 min) (84,6 mg, 38%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,43–7,39 (m, 2H), 7,33–7,28 (m, 3H), 5,56–5,51 (m, 1H), 5,40–5,35 (m, 1H), 3,96–3,86 (m, 1H), 3,10–2,99 (m, 2H), 1,35–1,28 (m, 2H), 1,10–1,06 (m, 2H). LCMS RT= 1,033 min, m/z = 288,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,033 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,2.
SFC metoda: kolona: Chiralcel OJ-3, 150×4,6 mm I.D., 3µm; mobilna faza: A: CO2B:etanol (0,05% DEA) gradijent: od 5% do 40% B tokom 5minuta i zadržan 40% 2,5 minuta, zatim 5% B 2,5 minuta; protok: 2,5 ml/min; temperatura kolone: 35 °C
Metoda 94
Primer 117
ciklopropil-[(5S,7R)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: [rac-(5S,7S)-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetil-silan
Smeša rac-(5S,7S)-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (800 mg, 2,86 mmol), imidazola (389 mg, 5,71 mmol) i terc-butildimetilhlorsilana (646 mg, 4,28 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešana je 1,5 h na 15 °C i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući [rac-(5S,7S)-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksiterc-butil-dimetil-silan (900 mg, 80%) u vidu bezbojnog ulja.
24
Korak 2: ciklopropil-[(rac-5S,7S)-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (589 mg, 4,56 mmol) i [rac-(5S,7S)-2-brom-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butildimetilsilana (900 mg, 2,28 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) ukapavanjem je dodat izopropilmagnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 3,42 ml, 6,85 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 1 sat na 0 °C i razblažena etil acetatom (100 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[(rac-5S,7S)-7-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (450 mg, 51%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 1,016 min, m/z = 384,3 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,016 min, ESI+ nađeno [M+H] = 384,3.
Korak 3: ciklopropil-[(SS,7R)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
U rastvor ciklopropil-[(rac-5S,7S)-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanona (450 mg, 1,17 mmol) u dihlormetanu (10 ml) dodat je tionil hlorid (0,43 ml, 5,87 mmol). Smeša je mešana 40 sati na 25 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7R)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (200 mg, 59%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT = 0,803 min, m/z = 288,2 [M H]+ LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,803 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,2.
Ovaj racemat je dalje razdvojen hiralnim SFC-om kako bi se priuštilo proizvoljno dodeljivanje:
ciklopropil-[(5S,7R)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (pik 2, retenciono vreme = 4,690 min) (60 mg, 40%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,45–7,38 (m, 3H), 7,34–7,32 (m, 2H), 5,85 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 5,69–5,67 (m, 1H), 3,40–3,31 (m, 2H), 3,03–3,00 (m, 1H), 1,19–1,16 (m, 2H), 1,11– 1,08 (m, 2H). LCMS RT= 1,028 min, m/z = 288,2 [M H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,028 min, ESI+ nađeno [M+H] = 288,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralcel OJ-H 100×4,6 mm I.D., 3 µm; mobilna faza: A: CO2 B:metanol (0,05% DEA); gradijent: od 30% do 30% B, temperatura: 40 °C.
Metoda 95
Primer 118
ciklopropil-[rac-(SS,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(SS,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: etil 3-hlor-2-vinilpiridin
Smeša 2-brom-3-hlorpiridina (62,5 g, 324,78 mmol), kalijum vinil trifluorborata (47,9 g, 357,25 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijuma(II) (13,2 g, 16,24 mmol) i natrijum bikarbonata (68,2 g, 811,94 mmol) u 1,4-dioksanu (600 ml) i vodi (150 ml) mešana je 24 sata na 100 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen petrol etrom (500 ml) i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 3-hlor-2-vinil-piridin (40,0 g, 88%) u vidu zelenog ulja. LCMS RT= 0,554 min, m/z = 140,1/142,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,554 min, ESI+ nađeno [M+H] = 140,1 i 142,1.
Korak 2: 3-hlorpikolinaldehid
U rastvor 3-hlor-2-vinil-piridina (35,0 g, 250,75 mmol) u vodi (200 ml) i tetrahidrofuranu (200 ml) dodat je osmijum tetroksid (0,89 g, 3,51 mmol). Crni rastvor je mešan 30 minuta na 25 °C, i dodat je natrijum perjodat (214,5 g, 1003 mmol). Dobijena smeša je mešana 2 sata na 25 °C i deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum sulfita (200 ml). Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 100 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući 3-hlorpiridin-2-karbaldehid (18,5 g, 52%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ
Korak 3: 1-(3-hlorpiridin-2-il)but-3-en-1-ol
U rastvor 3-hlorpiridin-2-karboksaldehida (18,5 g, 130,7 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) ukapavanjem je dodat alilmagnezijum bromid (1,0 M u n-heksanu, 162,2 ml, 162,2 mmol) tokom 30 minuta na 0 °C. Nakon dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 20 °C i mešana 2 sata. Smeša je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(3-hlor-2-piridil)but-3-en-1-ol (10,0 g, 42%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,524 min, m/z = 184,1/186,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,524 min, ESI+ nađeno [M+H] = 184,1 i 186,1.
24
Korak 4: 2-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)but-3-en-1-il)-3-hlorpiridin U rastvor 1-(3-hlor-2-piridil)but-3-en-1-ola (10,0 g, 54,46 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je imidazol (7,4 g, 108,91 mmol) i terc-butildimetil hlorsilan (12,3 g, 81,69 mmol). Reakciona smeša je mešana 16 sati na 10 °C i razblažena vodom (50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u npetrol etru), dajući terc-butil-[1-(3-hlor-2-piridil)but-3-enoksi]-dimetilsilan (10 g, 62%) u vidu svetlog ulja.
Korak 5: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-(3-hlorpiridin-2-il)propanal
U rastvor terc-butil-[1-(3-hlor-2-piridil)but-3-enoksi]-dimetil-silana (10,0 g, 33,57 mmol) u vodi (100 ml) i tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je osmijum tetroksid (0,11 g, 0,44 mmol). Nakon 30 minuta mešanja na 15 °C, u smešu je dodat natrijum perjodat (28,7 g, 134,27 mmol) u malim porcijama tokom 30 minuta i mešana je još 2 sata na 25 °C. Smeša je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum sulfita (1,50 l) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (300 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propanal (6,5 g, 65%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,719 min, m/z = 300,1/302,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,719 min, ESI+ nađeno [M+H] = 300,1 i 302,1.
Korak 6: 1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(3-hlorpiridin-2-il)propan-1-ol
U ohlađeni rastvor (-78 °C) 3,5-dibrom-1-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazola (8,1 g, 26,01 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) ukapavanjem je dodat n-butil litijum (2,5 M u nheksenu, 9,97 ml, 24,93 mmol) u atmosferi azota. Smeša je mešana 30 minuta na -78 °C, a zatim je dodat rastvor 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propanala (6,5 g, 21,68 mmol) u tetrahidrofuranu (15 ml). Dobijena smeša je mešana 1,5 h na -78 °C i reakcija je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 50 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propan-1-ol (10,0 g, 87%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,941 min, m/z = 533,2 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,941 min, ESI+ nađeno [M+H] = 533,2.
Korak 7: [1-(3-brom-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-(3-hlorpiridin-2-il)propil] 2,2-dimetilpropanoat
U smešu 4-dimetilaminopiridina (321 mg, 2,63 mmol), 1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propan-1-ola (14,0 g, 26,32 mmol) i trietilamina (7,01 ml, 52,64 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je pivaloil hlorid (4,8 g, 39,48 mmol). Smeša je mešana 2 sata na 20 °C i reakcija je deaktivirana dodavanjem vode (50 ml). Rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (2 × 100 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru), dajući [1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propil] 2,2-dimetilpropanoat (12,5 g, 77%) u vidu bezbojnog ulja.
Korak 8: 1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-(3-hlorpiridin-2-il)-3-hidroksipropil 2,2-dimetilpropanoat
Smeša [1-(5-brom-2-tetrahidropiran-2-il-1,2,4-triazol-3-il)-3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-3-(3-hlor-2-piridil)propil] 2,2-dimetilpropanoata (12,0 g, 19,48 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (4,0 g, 23,37 mmol) u metanolu (100 ml) mešana je 2 sata na 50 °C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC
24
(acetonitril 17–47%/ 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući [1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-(3-hlor-2-piridil)-3-hidroksipropil] 2,2-dimetilpropanoat (6,8 g, 83%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,760 i 0,768 min, m/z = 417,1/419,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,760 i 0,768 min, ESI+ nađeno [M+H] = 417,1 i 419,0.
Korak 9: rac-[(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-il] 2,2-dimetilpropanoat
U smešu [1-(3-brom-1H-1,2,4 triazol-5-il)-3-(3-hlor-2-piridil)-3-hidroksi-propil] 2,2-dimetilpropanoata (6,2 g, 14,84 mmol), trifenilfosfina (4,7 g, 17,81 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) dodat je rastvor diizopropil azodikarboksilata (3,6 g, 17,81 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml). Smeša je mešana 12 sati na 25°C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući rac-[(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-il] 2,2-dimetilpropanoat (2,3 g, 39%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 0,753 i 0,781 min, m/z = 399,0/401,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,753 i 0,781 min, ESI+ nađeno [M+H] = 399,0 i 401,0.
Korak 10: rac-(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-ol
Smeša rac-[(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 2,2-dimetilpropanoata (2,3 g, 5,75 mmol), litijum hidroksid monohidrata (2,4 g, 57,55 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) i vodi (10 ml) mešana je 12 sati na 25 °C, a zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući rac-(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlor-
24
2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (1,7 g, 94%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,639 min, m/z = 315,0/317,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,639 min, ESI+ nađeno [M+H] = 315,0 i 317,0.
Korak 11: rac-(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il 4-nitrobenzoat
U smešu trifenilfosfina (1,25 g, 4,75 mmol), rac-(5S,7S)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1,2 g, 3,80 mmol) i 4-nitrobenzojeve kiseline (790 mg, 4,75 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) ukapavanjem je dodat diizopropil azodikarboksilat (0,77 ml, 4,75 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Rastvor je mešan 12 sati na 0 °C i filtriran, dajući sirovi rac-[(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 4-nitrobenzoat (1,6 g, 91%) u vidu čvrste supstance bele boje.
Korak 12: rac-(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-7-ol
Smeša kalijum karbonata (713 mg, 5,16 mmol) i rac-[(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 4-nitrobenzoata (1,6 g, 3,44 mmol) u metanolu (5 ml) i vodi (5 ml) mešana je 1 sat na 70 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (10 ml) i filtriran. Čvrsti proizvod je ispran acetonitrilom (5 ml), dajući sirovi rac-(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-7-ol (800 mg, 74%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,649 min, m/z = 315,0/317,0 [M H]+.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,649 min, ESI+ nađeno [M+H] = 315,0 i 317,0.
24
Korak 13: rac-(5S,7R)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol
U smešu rac-(5S,7R)-2-brom-5-(3-hlor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-7-ola (350 mg, 1,11 mmol), imidazola (151 mg, 2,22 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je terc-butil dimetilhlorsilan (251 mg, 1,66 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 1 sat na 0 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući rac-(5S,7R)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (450 mg, 94%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,43–8,41 (m, 1H), 7,73 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,25–7,21 (m, 1H), 6,22–6,19 (m, 1H), 5,49–5,46 (m, 1H), 3,12– 3,08 0,95 (s, 9H), 0,24–0,19 (m, 6H).
Korak 14: rac-((5S,7R)-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon
U rastvor rac-(5S,7R)-2-brom-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (450 mg, 1,05 mmol) i N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (270 mg, 2,09 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 2,62 ml, 5,23 mmol) na 0 °C. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana 1 sat na 0 °C i deaktivirana dodavanjem vode (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru), dajući rac-((5S,7R)-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon (125 mg, 28%) u vidu bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,41–8,40 (m, 1H), 7,75–7,73 (m,
24
1H), 7,24–7,22 (m, 1H), 6,28–6,25 (m, 1H), 5,53–5,50 (m, 1H), 3,15–3,12 (m, 1H), 3,10–3,06 (m, 1H), 3,04–3,02 (m, 1H), 1,06–1,04 (m, 2H), 0,96 (s, 9H), 0,91–0,86 (m, 2H), 0,25 (d, J= 6,8 Hz, 6H). LCMS RT= 0,857 min, m/z = 419,1 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,857 min, ESI+ nađeno [M+H] = 419,1.
Korak 15: rac-((5S,7R)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon
Smeša rac-((5S,7R)-7-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanona (120 mg, 0,29 mmol) i hlorovodonične kiseline (4,0 M u metanolu, 3,60 ml, 14,40 mmol) u metanolu (10 ml) mešana je 1 sat na 20 °C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (10 ml) i podešen na pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi rac-((5S,7R)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon (52 mg, 60%) u vidu čvrste supstance žute boje. LCMS RT= 0,567 min, m/z = 305,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,567 min, ESI+ nađeno [M+H] = 305,0.
Korak 16: ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[(SS,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon U smešu rac-((5S,7R)-5-(3-hlorpiridin-2-il)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanona (90 mg, 0,28 mmol) u dihlormetanu (2 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (40 mg, 0,25 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 1 sat, a zatim deaktivirana dodavanjem vode (5 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 5
24
ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (5 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (acetonitril 32-62% / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (G03345456) (15,0 mg, 28,7%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,45 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,97–7,95 (m, 1H), 7,42–7,38 (m, 1H), 6,24–6,03 (m, 2H), 3,83– 3,72 (m, 1H), 3,04–2,89 (m, 2H), 1,18–1,15 (m, 2H), 1,11–1,08 (m, 2H). LCMS RT= 0,780 min, m/z = 306,9 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,780 min, ESI+ nađeno [M+H] = 306,9.
Cis smeša je dalje odvojena pomoću SFC, dajući proizvoljno dodeljeni: ciklopropil-[(SS,7S)-5-(3-hlor-2-piridil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (G03348054) (pik 1, retenciono vreme = 3,920 min) (5,2 mg, 34%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,47 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 7,79–7,76 (m, 1H), 7,29–7,27 (m, 1H), 6,14–6,12 (m, 1H), 6,11–6,10 (m, 0,5H), 5,99–5,98 (m, 0,5H), 3,71–3,64 (m, 1H), 3,13–3,02 (m, 2H), 1,34–1,32 (m, 2H), 1,11–1,08 (m, 2H). LCMS RT= 0,617 min, m/z = 307,0 [M H]<+>.
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,617 min, ESI+ nađeno [M+H] = 307,0.
SFC uslov: Kolona: OJ-H (250 mm*30 mm,5 µm); kondicioniranje: 0,1%NH3H2O EtOH; početak B 35% kraj B 35%; protok (50 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metoda 96
Primer 119
ciklopropil-[rac-(SS,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il]metanon
2
Korak 1: cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol U rastvor 2-brom-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ona (3,0 g, 10,79 mmol) u metanolu (100 ml) dodat je natrijum borodeuterid (1,4 g, 32,36 mmol). Smeša je mešana 1 sat na 20 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (50 ml), vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1,0 M, 2 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (3,0 g, 99%) u vidu čvrste supstance žute boje. LCMS RT= 0,681 min, m/z = 283,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,681 min, ESI+ nađeno [M+H] = 283,0.
Korak 2: [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 4-nitrobenzoat
U smešu 4-nitrobenzojeve kiseline (1,0 g, 6,24 mmol), trifenilfosfina (1,9 g, 7,21 mmol) i cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1,4 g, 4,8 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) ukapavanjem je dodat diizopropil azodikarboksilat (1,5 g, 7,21 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Ova smeša je mešana 1,5 h i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana tetrahidrofuranom (10 ml) i metil terc-butil etrom (10 ml), dajući [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 4-nitrobenzoat (800 mg, 39%) u vidu čvrste supstance bele boje. LCMS RT= 0,904 min, m/z = 432,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,904 min, ESI+ nađeno [M+H] = 432,0.
2 1
Korak 3: trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
Smeša kalijum karbonata (514 mg, 3,72 mmol) i [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il] 4-nitrobenzoata (800 mg, 1,86 mmol) u metanolu (10 ml)/vodi (5 ml) mešana je 16 sati na 25 °C i razblažena vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2 x 20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 35% etil acetat u petrol etru), dajući trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (300 mg, 57%) u vidu čvrste supstance bledožute boje. LCMS RT= 0,689 min, m/z = 281,0 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,689 min, ESI+ nađeno [M+H] = 281,0.
Korak 4: [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetil-silan
U rastvor trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (300 mg, 1,07 mmol) i imidazola (145 mg, 2,13 mmol) u dihlormetanu (20 ml) dodat je tercbutil dimetilhlorsilan (241 mg, 1,6 mmol). Smeša je mešana 18 sati na 25 °C i razblažena vodom (30 ml). Rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru), dajući [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetil-silan (350 mg, 83%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,931 min, m/z = 397,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi
2 2
+ 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,931 min, ESI+ nađeno [M+H] = 397,1.
Korak 5: [trans-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (457 mg, 3,54 mmol) i [trans-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butildimetilsilana (350 mg, 0,89 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu, 1,33 ml, 2,66 mmol) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana 1 sat na 0 °C, i reakcija je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), dajući [trans-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon (200 mg, 59%) u vidu žutog ulja. LCMS RT= 0,935 min, m/z = 385,3 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,935 min, ESI+ nađeno [M+H] = 385,3.
Korak 6: ciklopropil-[rac-(SS, 7S)-7-hlor- 7 -deuterio-S-fenil-S,6-dihidropirolo [1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il]metanon
U smešu [trans-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanona (200 mg, 0,52 mmol) u dihlormetanu (3 ml) dodat je tionil hlorid (0,19 ml, 2,6 mmol) i 2 kapi dimetil formamida. Smeša je mešana 16 sat na 25 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml),
2
osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prvo prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 30% etil acetat u petrol etru), zatim putem RP-HPLC (acetonitril 54-84/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7S)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (35,0 mg, 23%) u vidu čvrste supstance žute boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,46–7,38 (m, 3H), 7,33–7,31 (m, 2H), 5,69–5,65 (m, 1H), 4,02–3,96 (m, 1H), 3,07–2,99 (m, 1H), 2,91–2,86 (m, 1H), 1,21–1,16 (m, 2H), 1,13–1,09 (m, 2H). LCMS RT= 1,033 min, m/z = 289,1 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,033 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,1.
Metoda 97
Primer 120
ciklopropil-[rac-(SS,7R)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il] metanon
Korak 1: [cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetil-silan
U rastvor cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (1,5 g, 5,34 mmol) i imidazola (726 mg, 10,67 mmol) u dihlormetanu (50 ml) dodat je tercbutil dimetilhlorsilan (1,2 g, 8,00 mmol). Smeša je mešana 16 h na 15 °C i razblažena vodom (20 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru) dajući [cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetil-silan (1,8 g; 85%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 1,029 min, m/z = 395,1 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u
2 4
vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,029 min, ESI+ nađeno [M+H] = 395,1.
Korak 2: [cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanon
U rastvor N-metoksi-N-metil-ciklopropankarboksamida (1,2 g; 9,10 mmol) i [cis-2-brom-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-il]oksi-terc-butil-dimetilsilana (1,8 g; 4,55 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) ukapan je izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u tetrahidrofuranu; 6,83 ml; 13,66 mmol) na 0°C. Smeša je mešana 1,5 h na 0°C i deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 20% etil acetat u petrol etru) dajući [cis-7-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]-ciklopropil-metanon (450 mg; 26%) u vidu bezbojnog ulja. LCMS RT= 1,030 min, m/z = 384,2 [M H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,030 min, ESI+ nađeno [M+H] = 384,2.
Korak 3: ciklopropil-[rac-(5S,7R)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-il]metanon
U smešu [cis-7-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanona (450 mg, 1,17 mmol) u dihlormetanu (4 ml) dodat je tionil hlorid (1,47 ml, 20,23 mmol). Smeša je mešana 25 sati na 25 °C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml),
2
osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prvo prečišćen putem hromatografije na silika gelu (gradijent rastvarača: 0-30% etil acetat u petrol etru), zatim putem RP-HPLC (acetonitril 40-70/0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[rac-(5S,7R)-7-hlor-7-deuterio-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4] triazol-2-il]metanon (110 mg, prinos 32,2%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,74–7,69 (m, 3H), 7,63–7,61 (m, 2H), 6,14 (t, J= 6,8 Hz, 1H), 3,73–3,62 (m, 2H), 3,61–3,59 (m, 1H), 1,48–1,45 (m, 2H), 1,40–1,37 (m, 2H). LCMS RT= 1,033 min, m/z = 289,2 [M H]<+>. LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 2,0 minuta) retenciono vreme 1,033 min, ESI+ nađeno [M+H] = 289,2.
Metoda 98
Primer 122
ciklopropil-[rac-(SS,7S)-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-nitropropan-2-ol
U ohlađeni rastvor (0 °C) acetaldehida (45,9 ml, 819,13 mmol) i nitrometana (44,4 ml, 819,13 mmol) u natrijum hidroksidu (32,8 g, 819,13 mmol) u vodi (1000 ml) dodat je heksadecil trimetilamonijum hlorid (26,2 g, 81,91 mmol). Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 16 h i podešena na pH = 7 dodavanjem sirćetne kiseline. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-nitropropan-2-ol (61,0 g, 71%) u vidu svetlosmeđeg ulja.
Korak 2: terc-butil-dimetil-(1-metil-2-nitro-etoksi)silan
U smešu imidazola (83,0 g, 1219 mmol) i 1-nitropropan-2-ola (61,0 g, 580,45 mmol) u dihlormetanu (1,00 l) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (104,9 g;,696,55 mmol) na 0 °C. Smeša
2
je mešana 1na 20 °C tokom 16 h i razblažena vodom (200 ml). Rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (200 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru) dajući terc-butildimetil-(1-metil-2-nitro-etoksi)silan (115,0 g; 90%) u vidu svetložutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,53–4,68 (m, 1H), 4,24–4,53 (m, 2H), 1,25–1,32 (m, 3H),
Korak 3: etil 3-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat
U smešu etil akrilata (242,6 ml, 2279,5 mmol), di-terc-butildikarbonata (157,1 ml, 683,84 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (5,6 g, 45,59 mmol) u acetonitrilu (1 l) dodat je tercbutildimetil-(1-metil-2-nitro-etoksi)silan (100,0 g, 455,89 mmol) na 20 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 16 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 10% etil acetat u petrol etru) dajući etil 3-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (40,0 g; 29%) u vidu smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,89–5,07 (m, 1H), 4,66–4,84 (m, 1H), 4,16– 4,33 (m, 2H), 3,21–3,41 (m, 2H), 1,32–1,37 (m, 3H), 1,26–1,30 (m, 3H), 0,86–0,87 (m, 9H),
Korak 4: 5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-3-hidroksi-pirolidin-2-on Smeša etil 3-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilata (40,0 g, 132,69 mmol) i paladijuma (10% na ugljeniku;,7,06 g) u etanolu (1,0 l) hidrogenizovana je (50 psi) na 40 °C tokom 48 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-3-hidroksi-pirolidin-2-on (37,0 g, 92%) u vidu čvrste supstance bele boje.
2
Korak 5: 3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-on
U rastvor 5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-3-hidroksi-pirolidin-2-ona (31,2 g, 120,27 mmol) u dihlormetanu (500 ml) dodat je tetrabutilamonijum bromid (1,94 g, 6,01 mmol), natrijum hidroksid (30% u vodi, 80,2 g, 601,34 mmol) i benzil bromid (30,9 g, 180,4 mmol). Smeša je mešana na 40 °C tokom 18 h i ohlađena na 25 °C. Odvojeni organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 80% etil acetat u petrol etru) dajući 3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-on (22,0 g; 52%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,957 min, m/z = 350,2 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,957 min, ESI+ nađeno [M+H] = 350,2.
Korak 6: 1-amino-3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-on U rastvor 3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-ona (22,0 g, 62,94 mmol) u N,N-dimetilformamidu (400 ml) dodat je natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 3,78 g, 94,41 mmol) na 0 °C. Nakon 30 minuta mešanja na 20 °C, dodat je t o-(difenilfosforil)hidroksilamin (19,1 g, 81,82 mmol). Smeša je mešana 18 sati na 20 °C i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 1-amino-3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-on (22,9 g, 99%) u vidu smeđeg ulja.
Korak 7: etil 2-((3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2-oksopirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat
Smeša 1-amino-3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil] pirolidin-2-ona (22,0 g, 60,4 mmol) i etil 2-etoksi-2-imino-acetata (20,3 ml, 150,9 mmol) u etanolu (220 ml) mešana je na 90 °C tokom 33 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 2-((3-(benziloksi)-5-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2-oksopirolidin-1-il)amino)-2-iminoacetat (27,9 g, 99%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 0,840 min, m/z = 365,3 [M+15]<+>.
2
LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorosirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,840 min, ESI+ nađeno [M+15] = 365,3.
Korak 8: etil 7-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 2-[[3-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-2-okso-pirolidin-1-il]amino]-2-imino-acetata (27,0 g, 58,2 mmol) u toluenu (500 ml) dodat je monohidrat ptoluensulfonske kiseline (13,3 g, 69,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 130 °C tokom 16 h i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika gel, 100-200 meša, 0 do 50% etil acetat u petrol etru) dajući etil 7-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (11,2 g; 43%) u vidu žutog ulja. LC-MS RT= 1,029 min, m/z = 446,3 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 1,029 min, ESI+ nađeno [M+H] = 446,3.
Korak 9: etil 7-benziloksi-5-(1-hidroksietil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U rastvor etil 7-benziloksi-5-[1-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (5,1 g, 11,44 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u tetrahidrofuranu, 34,33 ml, 34,33 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h i razblažena vodom (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x8 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1 N, 15 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi etil 7-benziloksi-5-(1-hidroksietil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (3,8 g, 100%) u vidu smeđeg ulja.
2
Korak 10: etil 5-acetil-7-benziloksi-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
U ohlađeni rastvor (0 °C) etil 7-benziloksi-5-(1-hidroksietil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (3,8 g, 11,44 mmol) u dihlormetanu (25 ml) dodat je natrijum bikarbonat (3,8 g, 45,75 mmol) i Des-Martinov perjodinan (9,7 g, 22,87 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h i filtrirana. Filtrat je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,5), dajući etil 5-acetil-7-benziloksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat (1,5 g, 40%) u vidu svetlosmeđeg ulja. LC-MS RT= 0,655 min, m/z = 330,2 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,655 min, ESI+ nađeno [M+H] = 330,2.
Korak 11: etil 5-acetil-7-hidroksi-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat
Smeša etil 5-acetil-7-benziloksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (1,5 g, 4,6 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) zagrevana je na 120 °C tokom 3 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (5% metanol i 45% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,2), dajući etil 5-acetil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilat (350 mg, 32%) u vidu svetlosmeđeg ulja. LC-MS RT= 0,278 min, m/z = 240,2 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,278 min, ESI+ nađeno [M+H] = 240,2.
2
Korak 12: etil cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4] triazol-2-karboksilat
Smeša etil 5-acetil-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksilata (350 mg, 1,46 mmol) i dietilaminosumpor trifluorida (5,0 ml, 1,46 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešana je na 10 °C tokom 2 h i deaktivirana dodavanjem ledeno hladnog zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlormetanom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (50% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,4), dajući etil cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (37 mg, 10%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS RT= 0,694 min, m/z = 264,1 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,694 min, ESI+ nađeno [M+H] = 264,1.
Korak 13: cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilna kiselina
Smeša etil cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (27 mg, 0,10 mmol), litijum hidroksid monohidrata (22 mg, 0,51 mmol) u metanolu (0,7 ml) / vodi (0,7 ml) / tetrahidrofuranu (0,7 ml) mešana je na 10 °C tokom 2 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen ledenom vodom (2 ml), i podešen na pH = 4 dodavanjem vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (1 M). Smeša je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom, dajući sirovu cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilnu kiselinu sa solju litijum hlorida (28 mg, 98%).
2 1
Korak 14: cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-karboksamid
Smeša cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilne kiseline (28 mg, 0,12 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (23 mg, 0,24 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfata (48 mg, 0,13 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (62 mg, 0,48 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) mešana je na 20 °C tokom 3 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (70% etil acetat u petrol etru, Rf= 0,3), dajući cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (15 mg, 45%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,05–5,73 (m, 1H), 4,62 (br s, 1H), 3,86–3,82 (m, 3H), 3,54–3,21 (m, 5H), 3,14–2,99 (m, 1H), 1,96–1,75 (m, 3H).
Korak 15: ciklopropil-[rac-(SS,7S)-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon
U ohlađeni rastvor (0 °C) cis-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (10 mg, 0,04 mmol) u tetrahidrofuranu (1 ml) ukapavanjem je dodat ciklopropilmagnezijum bromid (0,5 M u tetrahidrofuranu, 0,5 ml, 0,25 mmol) u atmosferi azota. Nakon mešanja na 0 °C tokom 1 h, smeša je deaktivirana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (0,5 ml) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u dihlormetanu (50 ml), filtriran da bi se uklonile čvrste supstance, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (36-66% acetonitril / 0,05% amonijum hidroksid u vodi), dajući ciklopropil-[rac-(5S,7S)-5-(1,1-difluoretil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon (2,2 mg, 23%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,00–
2 2
5,84 (m, 1H), 4,75–4,55 (m, 1H), 3,38–3,29 (m, 1H), 3,18–2,99 (m, 2H), 1,86 (t, J = 19,2 Hz, 3H), 1,36–1,33 (m, 2H), 1,16–1,12 (m, 2H). LC-MS RT= 0,828 min, m/z = 259,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,03% trifluorsirćetna kiselina tokom 1,5 minuta) retenciono vreme 0,828 min, ESI+ nađeno [M+H] = 259,9.
Metoda 99
Primer 124
2- [(5S,7S)-2-(ciklopropankarbonil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-5-il]benzonitril
Smeša [(5S,7S)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-ciklopropil-metanona (40 mg, 0,13 mmol), kalijum heksacijanoferat(II) trihidrata (28 mg, 0,07 mmol), kalijum acetata (2 mg, 0,02 mmol), t-BuXPhos paladijum(II) bifenil-2-amin mezilata (10 mg, 0,01 mmol) i 2-di-terc-butilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenila (6 mg, 0,01 mmol) u vodi (5 ml) i 1,4-dioksanu (5 ml) mešana je na 100 °C tokom 6 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem RP-HPLC (40-70/0,04% NH3H2O+10 mM NH4HCO3u vodi), dajući 2-[(5S,7S)-2-(ciklopropankarbonil)-7-fluor-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-5-il]benzonitril (6,1 mg, 16%) u vidu čvrste supstance bele boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,79–7,76 (m, 1H), 7,64–7,60 (m, 1H), 7,53–7,50 (m, 1H), 7,01 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,15–6,12 (m, 0,5H), 6,00–5,98 (m, 1,5H), 3,90–3,74 (m, 1H), 3,10–3,06 (m, 1H), 2,99–2,85 (m, 1H), 1,39–1,33 (m, 2H), 1,17–1,09 (m, 2H). LC-MS RT= 0,915 min, m/z = 397,2 [M+H]<+>.
LCMS (10 do 80% acetonitril u vodi 0,03% amonijum bikarbonat tokom 3,0 minuta) retenciono vreme 0,915 min, ESI+ onađeno [M+H] = 397,2.
Metoda 100
Primer 125
(1-etilciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
2
Korak 1: 1-etil-N-metoksi-N-metilciklopropan-1-karboksamid
Pripremljen je od 1-etilciklopropan karboksilne kiseline korišćenjem metode 5. Sirova reakciona smeša je prečišćena fleš hromatografijom na koloni (silika gel, 0-100% izopropil acetat/heptan), dajući 1-etil-N-metoksi-N-metilciklopropan-1-karboksamid (435 mg, prinos 63%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 3,71 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 1,60 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,97 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,59–0,52 (m, 2H). LCMS RT= 0,92 min, m/z = 157,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,92 min, ESI+ nađeno [M+H] = 157,9.
Korak 2: (1-etilciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il)metanon
Pripremljen je od 1-etil-N-metoksi-N-metilciklopropan-1-karboksamida korišćenjem metode 2. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (30-70% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući (1-etilciklopropil)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (134 mg, prinos 72%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,46–7,34 (m, 3H), 7,25–7,19 (m, 2H), 6,20 (ddd, J= 56,5, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,69 (ddd, J= 8,5, 6,6, 3,0 Hz, 1H), 3,72 (dddd, J = 26,1, 15,4, 8,5, 7,1 Hz, 1H), 2,68 (dddd, J = 26,6, 15,3, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 1,73 (qd, J = 7,2, 1,7 Hz, 2H), 1,58 (dq, J = 4,4, 1,7, 1,2 Hz, 2H), 0,93 (q, J = 3,2, 2,6 Hz, 2H), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H). LCMS RT= 5,29 min, m/z = 300,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 5,29 min, ESI+ nađeno [M+H] = 300,1.
Metoda 101
2 4
Primer 126
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-4-karboksamid
Pripremljen je od tetrahidropiran-4-karboksilne kiseline korišćenjem metode 5. Sirova reakciona smeša je prečišćena fleš hromatografijom na koloni (silika gel, 0-100% izopropil acetat/heptan), dajući N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-4-karboksamid (721 mg, kvantitativni prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 4,08–3,95 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,46 (td, J = 11,8, 2,3 Hz, 2H), 3,18 (s, 3H), 2,91 (tt, J = 11,4, 3,8 Hz, 1H), 1,94–1,78 (m, 2H), 1,73– 1,59 (m, 2H). LCMS RT= 0,70 min, m/z = 173,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,70 min, ESI+ nađeno [M+H] = 173,9.
Korak 2: ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H piran-4-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-4-karboksamida korišćenjem metode 2. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% NH4OH u vodi, 10 min), dajući ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon (167 mg, prinos 85%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47–7,35 (m, 3H), 7,28–7,21 (m, 2H), 6,23 (ddd, J= 56,4, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,73 (ddd, J = 8,9, 6,5, 3,0 Hz, 1H), 3,88 (ddt, J= 11,0, 4,6, 2,4 Hz, 2H), 3,74 (dddd, J= 26,1, 15,5, 8,6, 7,2 Hz, 1H), 3,60 (tt, J= 11,5, 3,8 Hz, 1H), 3,42 (tdd, J = 11,4, 3,6, 2,2 Hz, 2H), 2,70 (dddd, J = 26,7, 15,2, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 1,76 (tdt, J = 10,8, 4,5, 2,2 Hz, 2H), 1,58 (dtdd, J = 13,3, 11,7, 8,8, 4,5 Hz, 2H). LCMS RT= 4,22 min, m/z = 316,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,22 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,1.
Metoda 102
2
Primer 127
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H-piran-3-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-3-karboksamid
Pripremljen je od tetrahidropiran-3-karboksilne kiseline korišćenjem metode 5. Sirova reakciona smeša je prečišćena fleš hromatografijom na koloni (silika gel, 0-100% izopropil acetat/heptan), dajući N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-3-karboksamid (697 mg, kvantitativni prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 4,03–3.96 (m, 1H), 3,96–3,89 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,49 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 3,45–3,37 (m, 1H), 3,16 (s, 3H), 3,07–2,94 (m, 1H), 1,94 (dtd, J = 11,1, 3,7, 1,9 Hz, 1H), 1,86–1,61 (m, 3H). LCMS RT= 0,73 min, m/z = 173,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,73 min, ESI+ nađeno [M+H] = 173,9.
Korak 2: ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H-piran-3-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N-metiltetrahidro-2H-piran-3-karboksamida korišćenjem metode 2. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% NH4OH u vodi, 10 min), dajući ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidro-2H-piran-3-il)metanon (169 mg, prinos 86%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49–7,34 (m, 3H), 7,25 (dt, J = 7,8, 1,4 Hz, 2H), 6,23 (dddd, J = 56,4, 7,2, 2,0, 0,9 Hz, 1H), 5,73 (ddd, J = 8,8, 6,4, 3,0 Hz, 1H), 4,01 (tdd, J = 10,5, 3,9, 1,8 Hz, 1H), 3,84– 3,65 (m, 2H), 3,57 (tdd, J = 9,8, 3,8, 1,9 Hz, 1H), 3,45 (ddd, J = 10,9, 9,5, 2,6 Hz, 1H), 3,41– 3,33 (m, 1H), 2,79–2,62 (m, 1H), 2,05–1,89 (m, 1H), 1,78–1,47 (m, 3H). LCMS RT= 4,42 min,
2
m/z = 316,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,42 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,1.
Metoda 103
Primer 128
(5S,7S)-2-(D-prolil)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol
Korak 1: terc-butil (R)-2-(metoksi(metil)karbamoil)pirolidin-1-karboksilat Pripremljen je od N-Boc-D-prolina korišćenjem metode 1 (1,23 g, kvantitativni prinos). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 4,65 (ddd, J = 42,4, 8,5, 3,5 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 25,4 Hz, 3H), 3,57 (dddd, J = 15,0, 10,5, 7,8, 5,0 Hz, 1H), 3,44 (ddt, J = 28,9, 10,3, 6,9 Hz, 1H), 3,19 (s, 3H), 2,27–2,08 (m, 1H), 2,08–1,74 (m, 3H), 1,43 (d, J = 17,9 Hz, 9H). LCMS RT= 1,03 min, m/z = 158,9 [(M-Boc)+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 1,03 minuta, ESI+ nađeno [(M-Boc)+H] = 158,9.
Korak 2: terc-butil (R)-2-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karbonil)pirolidin-1-karboksilat
Pripremljen je od terc-butil (R)-2-(metoksi(metil)karbamoil)pirolidin-1-karboksilata korišćenjem metode 3. Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 1,30 min, m/z = 300,9 [(M-Boc)+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 1,30 minuta, ESI+ nađeno [(M-Boc)+H] = 300,9.
2
Korak 3: (5S,7S)-2-(D-prolil)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
terc-butil (R)-2-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil)pirolidin-1-karboksilat je rastvoren u dihlormetanu (2 ml) i ohlađen na 0 °C. Dodata je trifluorsirćetna kiselina (2 ml) i reakciona smeša je mešana na 0 °C. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena putem SFC (5-60% metanol/ugljen dioksid, kolona piridil amida, 12 minuta), dajući (5S,7S)-2-(D-prolil)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (3,7 mg, prinos 3%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,48–7,29 (m, 3H), 7,23 (ddt, J = 11,8, 6,1, 1,6 Hz, 2H), 6,35–5,99 (m, 1H), 5,82–5,52 (m, 1H), 4,37–3,89 (m, 1H), 3,88–3,45 (m, 1H), 3,12–2,51 (m, 3H), 2,40–0,29 (m, 4H). LCMS RT= 0,88 min, m/z = 300,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,88 min, ESI+ nađeno [M+H] = 300,9.
Metoda 104
Primer 129
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(2-metiltetrahidrofuran-2-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N,2-dimetiltetrahidrofuran-2-karboksamid
Pripremljen je od 2-metiltetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline korišćenjem metode 2 (76 mg, prinos 38%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,82 min, m/z = 174,0 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,82 min, ESI+ nađeno [M+H] = 174,0.
Korak 2: ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(2-metiltetrahidrofuran-2-il)metanon
2
Pripremljen je od N-metoksi-N,2-dimetiltetrahidrofuran-2-karboksamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(2-metiltetrahidrofuran-2-il)metanon (24 mg, prinos 17%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,48–7,35 (m, 3H), 7,28–7,19 (m, 2H), 6,23 (ddt, J = 56,5, 7,2, 2,0 Hz, 1H), 5,72 (ddt, J = 8,9, 6,3, 2,8 Hz, 1H), 3,93–3,82 (m, 1H), 3,82–3,65 (m, 2H), 2,71 (dddd, J = 26,6, 15,2, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 2,52 (m, 1H), 1,99–1,85 (m, 2H), 1,85–1,72 (m, 1H), 1,53 (d, J = 3,6 Hz, 3H). LCMS RT= 4,66 min, m/z = 316,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,66 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,1.
Metoda 105
Primer 130
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidrofuran-3-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metiltetrahidrofuran-3-karboksamid
Pripremljen je od tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline korišćenjem metode 3 (97 mg, prinos 47%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,80 min, m/z = 160,0 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,80 min, ESI+ nađeno [M+H] = 160,0.
Korak 2: ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidrofuran-3-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N-metiltetrahidrofuran-3-karboksamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1%
2
mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući dijastereomernu smešu ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidrofuran-3-il)metanona (49 mg, prinos 37%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49–7,35 (m, 3H), 7,30–7,21 (m, 2H), 6,24 (ddd, J = 56,2, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 9,2, 6,6, 3,1 Hz, 1H), 4,14–4,05 (m, 1H), 3,93 (dt, J = 11,3, 8,4 Hz, 1H), 3,87–3,65 (m, 4H), 2,72 (dddd, J = 26,7, 15,3, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 2,19–2,00 (m, 2H). LCMS RT= 4,33 min, m/z = 302,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,33 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,2.
Metoda 106
Primeri 131 i 132
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)((S)-tetrahidrofuran-3-il)metanon
Dijastereomerna smeša ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidrofuran-3-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 1,241 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((S)-tetrahidrofuran-3-il)metanon (15 mg, prinos 11%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49–7,35 (m, 3H), 7,30–7,21 (m, 2H), 6,24 (ddd, J = 56,2, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 9,2, 6,6, 3,1 Hz, 1H), 4,14–4,05 (m, 1H), 3,93 (dt, J = 11,3, 8,4 Hz, 1H), 3,87–3,65 (m, 4H), 2,72 (dddd, J = 26,7, 15,3, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 2,19–2,00 (m, 2H). LCMS RT= 4,33 min, m/z = 302,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,33 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,2.
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)((R)-tetrahidrofuran-3-il)metanon
Dijastereomerna smeša ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(tetrahidrofuran-3-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono
2
vreme = 1,627 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)((R)-tetrahidrofuran-3-il)metanon (23 mg, prinos 17%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49–7,35 (m, 3H), 7,30–7,21 (m, 2H), 6,24 (ddd, J = 56,2, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 9,2, 6,6, 3,1 Hz, 1H), 4,14–4,05 (m, 1H), 3,93 (dt, J = 11,3, 8,4 Hz, 1H), 3,87–3,65 (m, 4H), 2,72 (dddd, J = 26,7, 15,3, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 2,19–2,00 (m, 2H). LCMS RT= 4,33 min, m/z = 302,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,33 min, ESI+ nađeno [M+H] = 302,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak IA (150 mm*21,2 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 10% kraj B 10%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak IA (150 mm*21,2 mm, 5 µm); Stanje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 10% kraj B 10%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metoda 107
Primer 133
1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-3-metoksi-2,2-dimetilpropan-1-on
Korak 1: N,3-dimetoksi-N,2,2-trimetilpropanamid
Pripremljen je od 3-metoksi-2,2-dimetilpropionske kiseline korišćenjem metode 2 (184 mg, prinos 46%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,93 min, m/z = 176,0 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,93 min, ESI+ nađeno [M+H] = 176,0.
Korak 2: 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-3-metoksi-2,2-dimetilpropan-1-on
Pripremljen je od N,3-dimetoksi-N,2,2-trimetilpropanamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja
2 1
kiselina u vodi, 10 min), dajući 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-3-metoksi-2,2-dimetilpropan-1-on (16 mg, prinos 18%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,48–7,34 (m, 3H), 7,25–7,18 (m, 2H), 6,23 (ddd, J = 56,5, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 8,9, 6,5, 2,9 Hz, 1H), 3,84–3,71 (m, 2H), 3,79–3,66 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 2,71 (dddd, J = 26,6, 15,2, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H). LCMS RT= 5,44 min, m/z = 318,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 5,44 min, ESI+ nađeno [M+H] = 318,2.
Metoda 108
Primer 134
(S)-3,3,3-trifluor-1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksipropan-1-on
Korak 1: (S)-3,3,3-trifluor-2-hidroksi-N-metoksi-N-metilpropanamid Pripremljen je od (S)-3,3,3-trifluor-2-hidroksipropionske kiseline korišćenjem metode 2 (52 mg, prinos 13%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,72 min, m/z = 187,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,72 min, ESI+ nađeno [M+H] = 187,9.
Korak 2: (S)-3,3,3-trifluor-1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksipropan-1-on
Pripremljen je od (S)-3,3,3-trifluor-2-hidroksi-N-metoksi-N-metilpropanamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući proizvoljno dodeljeni (S)-3,3,3-trifluor-1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksipropan-1-on (7,5 mg, prinos 9%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,42 (dddd, J =
2 2
9,2, 7,4, 6,3, 3,3 Hz, 3H), 7,26 (td, J = 8,3, 7,8, 1,6 Hz, 2H), 6,27 (dddd, J = 56,3, 7,3, 3,5, 2,0 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J = 9,0, 6,3, 3,1 Hz, 1H), 5,62 (dd, J = 10,2, 4,0 Hz, 1H), 3,77 (dddd, J = 25,7, 15,5, 8,5, 7,2 Hz, 1H), 2,80–2,65 (m, 1H). LCMS RT= 4,82 min, m/z = 330,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,82 min, ESI+ nađeno [M+H] = 330,1.
Metoda 109
Primer 135
1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)etan-1-on
Korak 1: N-metoksi-N-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)acetamid Pripremljen je od 2-tetrahidropiran-2-ilsirćetne kiseline korišćenjem metode 2 (200 mg, prinos 77%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,84 min, m/z = 188,0 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,84 min, ESI+ nađeno [M+H] = 188,0.
Korak 2: 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)etan-1-on
Pripremljen je od N-metoksi-N-metil-2-(tetrahidro--2H-piran-2-il)acetamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (5-85% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)etan-1-on (2,5 mg, prinos 3%). LCMS RT= 4,94 min, m/z = 330,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,94 min, ESI+ nađeno [M+H] = 330,2.
Metoda 110
2
Primer 136
1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etan-1-on
Korak 1: N-metoksi-N-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamid Pripremljen je od 2-tetrahidropiran-4-ilsirćetne kiseline korišćenjem metode 2 (154 mg, prinos 59%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,78 min, m/z = 188,0 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,78 min, ESI+ nađeno [M+H] = 188,0.
Korak 2: 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etan-1-on
Pripremljen je od N-metoksi-N-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etan-1-on (46 mg, prinos 52%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,46–7,34 (m, 3H), 7,28–7,22 (m, 2H), 6,22 (ddd, J = 56,4, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,71 (ddd, J = 8,5, 6,5, 3,1 Hz, 1H), 3,84–3,63 (m, 3H), 3,28–3,21 (m, 1H), 2,94 (dd, J = 6,8, 2,1 Hz, 2H), 2,71 (dddd, J = 26,7, 15,2, 3,2, 2,0 Hz, 1H), 2,10 (ttt, J = 11,0, 7,1, 3,9 Hz, 1H), 1,55 (ddd, J = 12,9, 4,2, 2,0 Hz, 2H), 1,23 (qd, J = 12,4, 4,4 Hz, 2H), 0,87–0,65 (m, 1H). LCMS RT= 2,51 min, m/z = 330,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 2,51 min, ESI+ nađeno [M+H] = 330,2.
Metoda 111
Primeri 137 i 138
2 4
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)((R)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon i ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((S)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N,3-dimetiltetrahidrofuran-3-karboksamid
Pripremljen je od 3-metiltetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline korišćenjem metode 2 (386 mg, prinos 58%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,89 min, m/z = 173,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,89 min, ESI+ nađeno [M+H] = 173,9.
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)((R)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N,3-dimetiltetrahidrofuran-3-karboksamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući dijastereomernu smešu ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanona (31 mg, prinos 28%). Dijastereomerna smeša ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 0,785 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((R)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon (11 mg; 10%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,46–7,35 (m, 3H), 7,28–7,21 (m, 2H), 6,24 (ddd, J = 56,4, 7,1, 2,0 Hz, 1H), 5,73 (ddd, J = 8,9, 6,4, 3,1 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 3,84–3,66 (m, 3H), 3,64 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 2,71 (dddd, J = 26,6, 15,2, 3,1, 2,0 Hz, 1H), 2,56 (ddd, J = 12,6, 8,2, 6,8 Hz, 1H), 1,85 (ddd, J = 13,0, 7,6, 5,6 Hz, 1H), 1,48 (s, 3H). LCMS RT= 4,68
2
min, m/z = 316,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,68 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak IG (150 mm*21,2 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 20% kraj B 20%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((S)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon
Dijastereomerna smeša ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 0,966 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((S)-3-metiltetrahidrofuran-3-il)metanon (12 mg, prinos 11%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47–7,34 (m, 3H), 7,28–7,21 (m, 2H), 6,24 (ddd, J = 56,3, 7,1, 1,9 Hz, 1H), 5,73 (ddd, J = 8,9, 6,5, 3,1 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 89. Hz, 1H), 3,83–3,64 (m, 3H), 3,67 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 2,71 (dddd, J = 26,6, 15,2, 3,1, 2,0 Hz, 1H), 2,59– 2,52 (m, 1H), 1,82 (ddd, J = 12,6, 7,6, 5,7 Hz, 1H), 1,47 (s, 3H). LCMS RT= 4,68 min, m/z = 316,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,68 min, ESI+ nađeno [M+H] = 316,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak IG (150 mm*21,2 mm, 5 µm); Stanje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metoda 112
Primeri 139, 140 i 141
((1R,2R,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ((1S,2R,4R)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ((1R,2S,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[ ]triazol-2-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksamid
2
Pripremljen je od 7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilne kiseline korišćenjem metode 2 (184 mg, prinos 70%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,76 min, m/z = 185,8 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,76 min, ESI+ nađeno [M+H] = 185,8.
Korak 2: ((1R,2R,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N-metil-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući dijastereomernu smešu (7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-6][1,2,4]triazol-2-il)metanona (41 mg, prinos 31%). Dijastereomerna smeša (7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 0,442min) dajući proizvoljno dodeljen ((1R,2R,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (3 mg, prinos 2%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47–7,35 (m, 3H), 7,29–7,22 (m, 2H), 6,25 (ddd, J = 56,4, 7,2, 2,0 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 9,1, 6,4, 3,1 Hz, 1H), 4,91 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 4,59 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,96– 3,87 (m, 1H), 3,75 (dddd, J = 25,8, 15,5, 8,5, 7,2 Hz, 1H), 2,72 (dddd, J = 26,7, 15,1, 3,1, 2,0 Hz, 1H), 2,00 (dd, J = 11,9, 4,6 Hz, 1H), 1,75 (dddd, J = 12,0, 10,9, 5,3, 2,8 Hz, 1H), 1,66–1,52 (m, 1H), 1,50–1,36 (m, 2H), 1,29–1,17 (m, 1H). LCMS RT= 4,61 min, m/z = 328,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,61 min, ESI+ nađeno [M+H] = 328,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak ID (250 mm*21,2 mm, 5 µm); kondicioniranje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
((1S,2R,4R)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
2
Dijastereomerna smeša (7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 0,523 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((1S,2R,4R)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (3 mg, prinos 2%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,43–7,34 (m, 3H), 7,25–7,19 (m, 2H), 6,03 (ddd, J = 55,8, 7,1, 1,7 Hz, 1H), 5,50 (ddd, J = 8,8, 6,2, 2,8 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 4,70 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,77–3,51 (m, 2H), 2,95 (dddd, J = 25,0, 15,4, 2,8, 1,7 Hz, 1H), 2,32 (dtd, J = 12,2, 5,0, 2,1 Hz, 1H), 1,90–1,63 (m, 5H). LCMS RT= 4,54 min, m/z = 328,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,54 min, ESI+ nađeno [M+H] = 328,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak ID (250 mm*21,2 mm, 5 µm); Stanje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
((1R,2S,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Dijastereomerna smeša (7-oksabiciklo [2.2.1] heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 1,220 min) da bi se dobio proizvoljno dodeljeni ((1R,2S,4S)-7-oksabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (21 mg; prinos 16%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47– 7,35 (m, 3H), 7,31–7,24 (m, 2H), 6,23 (ddd, J = 56,3, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,74 (ddd, J = 8,9, 6,5, 3,1 Hz, 1H), 4,94 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 4,59 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,93–3,83 (m, 1H), 3,75 (dddd, J = 26,1, 15,5, 8,5, 7,2 Hz, 1H), 2,72 (dddd, J = 26,6, 15,2, 3,1, 1,9 Hz, 1H), 1,99 (dd, J = 12,0, 4,6 Hz, 1H), 1,73 (dddd, J = 11,9, 10,8, 5,3, 2,8 Hz, 1H), 1,59 (ddt, J = 12,8, 8,5, 4,8 Hz, 1H), 1,51–1,37 (m, 2H), 1,28–1,17 (m, 1H). LCMS RT= 4,61 min, m/z = 328,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,61 min, ESI+ nađeno [M+H] = 328,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralpak ID (250 mm*21,2 mm, 5 µm); Stanje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (70 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metoda 113
2
Primer 142
1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(trifluormetoksi)etan-1-on
Korak 1: N-metoksi-N-metil-2-(trifluormetoksi)acetamid
Pripremljen je od 2-(trifluormetoksi)sirćetne kiseline korišćenjem metode 2 (129 mg, prinos 20%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,88 min, m/z = 187,8 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,88 min, ESI+ nađeno [M+H] = 187,8.
Korak 2: 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(trifluormetoksi)etan-1-on
Pripremljen je od N-metoksi-N-metil-2-(trifluormetoksi)acetamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući 1-((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-(trifluormetoksi)etan-1-on (2 mg, prinos 2%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,47–7,36 (m, 3H), 7,30–7,24 (m, 2H), 6,26 (ddd, J = 56,2, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,75 (ddd, J = 8,8, 6,5, 3,1 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 3,84–3,63 (m, 1H), 2,74 (dddd, J = 26,8, 15,3, 3,2, 1,9 Hz, 1H). LCMS RT= 5,39 min, m/z = 330,1 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 5,39 min, ESI+ nađeno [M+H] = 330,1.
Metoda 114
2
Primeri 143 i 144
((1R,5R)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ((1S,5S)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: N-metoksi-N-metil-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-karboksamid Pripremljen je od 3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-karboksilne kiseline korišćenjem metode 3 (150 mg, prinos 56%). Proizvod je korišćen bez prečišćavanja. LCMS RT= 0,72 min, m/z = 171,9 [M+H]<+>. LCMS (5 do 100% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 1,6 minuta) retenciono vreme 0,72 min, ESI+ nađeno [M+H] = 171,9.
Korak 2: ((1R,5R)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Pripremljen je od N-metoksi-N-metil-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-karboksamida korišćenjem metode 3. Sirova reakciona smeša je prečišćena putem RP-HPLC (20-60% acetonitril/0,1% mravlja kiselina u vodi, 10 min), dajući dijastereomernu smešu (3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona (30 mg, prinos 27%). Dijastereomerna smeša (3-oksabiciklo [3.1.0] heksan-1-i)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona je prečišćena hiralnom SFC (retenciono vreme = 0,736 min) dajući dodeljeni ((1R,5R)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (28 mg, prinos 25%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,48– 7,33 (m, 3H), 7,24 (dt, J = 7,8, 1,5 Hz, 2H), 6,22 (dddd, J = 56,4, 7,2, 3,5, 1,9 Hz, 1H), 5,76– 5,65 (m, 1H), 4,11–4,04 (m, 1H), 4,00 (dd, J = 8,7, 1,7 Hz, 1H), 3,81–3,64 (m, 3H), 2,83–2,61
2
(m, 2H), 1,84 (td, J = 8,3, 3,9 Hz, 1H), 1,13 (dd, J = 5,7, 4,0 Hz, 1H). LCMS RT= 4,58 min, m/z = 314,1 [M+H]<+>.
LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,58 min, ESI+ nađeno [M+H] = 314,1.
SFC uslov: Kolona: Chiralcel OX (50 mm*4,6 mm, 3 µm); kondicioniranje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (4 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
((1S,5S)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Dijastereomerna smeša (3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona je prečišćena pomoću hiralne SFC (retenciono vreme = 0,914 min) dajući proizvoljno dodeljeni ((1S,5S)-3-oksabiciklo[3.1.0]heksan-1-il)((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (0,5 mg; prinos 0,05%). LCMS RT= 4,58 min, m/z = 314,2 [M+H]<+>. LCMS (2 do 98% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 7 minuta) retenciono vreme 4,58 min, ESI+ nađeno [M+H] = 314,2.
SFC uslov: Kolona: Chiralcel OX (50 mm*4,6 mm, 3 µm); Stanje: 0,1% NH4OH MeOH; početak B 25% kraj B 25%; protok (4 ml/min); temperatura kolone 40 °C.
Metoda 115
Primeri 145 i 146
ciklopropil-(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon i (S)-ciklopropil(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon
Korak 1: 2-brom-5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin Vodonik je barbotiran kroz rastvor 5-fenil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (0,90 g, 4,28 mmol) i platina(IV) oksida (97,2 mg, 0,428 mmol) u sirćetnoj kiselini (43 ml). Nakon 5 minuta, igla je izvađena iz rastvora i reakcija je ostavljena da se meša u atmosferi vodonika tokom 48 sati (~50% konverzije). Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita pomoću
2 1
metanola. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i sirovi ostatak je prosleđen na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
U rastvor bakar(II) bromida (1,72 g, 7,61 mmol) i terc-butil nitrita (0,750 ml, 5,71 mmol) u acetonitrilu (7,6 ml) na 60°C dodat je sirovi 5-fenil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (0,80 g, 3,81 mmol). Reakciona smeša je zatim zagrevana na 75 °C tokom 1 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dodata je 1 M HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 50% izopropil acetat-heptan) dajući 2-brom-5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (0,354 g, 1,27 mmol, prinos 33%). LCMS RT= 1,15 min, m/z = 277,8 [M = H]<+>.
Korak 2: ciklopropil-(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon (S)-ciklopropil(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 0,27 ml, 0,540 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 2-brom-5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (50 mg, 0,180 mmol) i N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (71 mg, 0,54 mmol) u THF-u (1,8 ml) na 0 °C tokom 15 min. Nakon 1 h dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne TLC (100% izopropil acetat), dajući ciklopropil-(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon (20,9 mg, 0,078 mmol, prinos 44%). Sirova supstanca je dalje prečišćena putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni (S)-ciklopropil(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon.
ciklopropil-(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon:
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,41–7,27 (m, 3H), 7,12–7,04 (m, 2H), 5,62 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,12–2,83 (m, 3H), 2,46–2,35 (m, 1H), 2,13–2,01 (m, 1H), 1,93–1,81 (m, 2H), 1,04–0,92 (m, 4H). LCMS RT= 4,37 min, m/z = 268,1 [M H]<+>.
(S)-ciklopropil(5-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)metanon:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,42–7,23 (m, 3H), 7,12–7,04 (m, 2H), 5,62 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,12–2,85 (m, 3H), 2,45–2,35 (m, 1H), 2,13–2,00 (m, 1H), 1,96–1,82 (m, 2H), 1,05–0,93 (m, 4H).LCMS RT= 4,39 min, m/z = 268,1 [M H]<+>.
Informacije o preparativnoj SFC: Kolona: Chiralcel OJ 5 µm, (250 x 21,2 mm), mobilna faza: ugljen-dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), izokratski program elucije: 15% B; protok: 70 ml/min; temperatura kolone: 30 °C; talasna dužina: 220 nm
2 2
Metoda 116
Primeri 147, 148 i 149
ciklopropil((5S,7R)-7-hidroksi-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ciklopropil-[rac-(5S,7R)-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon i ciklopropil-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon
Korak 1: 1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-(o-tolil)propan-1,3-dion
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 26 ml, 26 mmol) dodat je u rastvor 1-(otolil)etanona (1,9 ml, 15 mmol) i metil 3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-karboksilata (2,0 g, 9,7 mmol) u THF-u (32 ml) na -78 °C. Nakon toga, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i izopropil acetatom. Dodat je 5% rastvor limunske kiseline (100 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 80% izopropil acetatheptan), dajući 1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-(o-tolil)propan-1,3-dion (2,03 g, 6,59 mmol, prinos 68%). LCMS RT= 1,28 min, m/z = 307,8 [M H]<+>.
Korak 2: (5S,7R)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol i (5S,7R)-2-brom-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-7-ol i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol Natrijum borhidrid (3,84 g, 97,4 mmol) dodat je u rastvor 1-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-(o-tolil)propan-1,3-diona (2,00 g, 6,49 mmol) u etanolu (130 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida i reakcija je koncentrovana pod
2
sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u izopropil acetatu i vodi. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (6 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,96 min, m/z = 311,8 [M H]<+>. Trifluorsirćetna kiselina (65 ml) dodata je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (65 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u dihlormetanu. Dodati su voda i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (4 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, koncentrovani i sirovi ostatak je predat na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,08 min, m/z = 293,8 [M H]<+>i LCMS RT= 0,98 min, m/z = 293,8 [M H]<+>. Dietilaminosumpor trifluorid (3,60 ml, 26,0 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (65 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, pažljivo je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (4 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 10% do 100% izopropil acetatheptan, zatim 10% metanol-dihlormetan), dajući 2:1 smešu (5S,7R)-2-brom-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola i (5S,7R)-2-brom-7-fluor-5-(o tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (0,470 g) i (5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (0,350 g, 1,18 mmol, prinos 18%).
(5S,7R)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol:
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,30–7,18 (m, 3H), 6,88 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,30 (ddd, J = 56,2, 6,8, 1,6 Hz, 1H), 6,11 (td, J = 6,8, 3,8 Hz, 1H), 3,44–3,27 (m, 1H), 2,92 (ddt, J = 27,9, 15,2, 6,5 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H). LCMS RT= 1,26 min, m/z = 295,8 [M H]<+>.
(5S,7S)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,38–7,09 (m, 3H), 6,78–6,69 (m, 1H), 6,20 (ddd, J = 56,4, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,95–5,80 (m, 1H), 3,69 (dddd, J = 25,4, 15,4, 8,5, 7,2 Hz, 1H), 2,66–2,51 (m, 1H), 2,39 (s, 3H). LCMS RT= 1,25 min, m/z = 295,7 [M H]<+>.
Korak 3: ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ciklopropil((5S,7R)-7-hidroksi-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
2 4
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 2,4 ml, 4,76 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 2:1 smeše (5S,7R)-2-brom-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola i (SS,7R)-2-brom-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (0,470 g) i N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (0,634 g, 4,76 mmol) u THF-u (15,9 ml) na 0 °C tokom 15 min. Nakon 1 h, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne HPLC/SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(o tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (137 mg, 0,480 mmol) i ciklopropil((5S,7R)-7-hidroksi-5-(otolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (33,8 mg, 0,119 mmol).
ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,33–7,14 (m, 3H), 6,89 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,35 (ddd, J = 56,2, 6,8, 1,6 Hz, 1H), 6,19 (td, J = 6,9, 3,2 Hz, 1H), 3,59–3,27 (m, 1H), 3,11– 2,91 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,14–1,01 (m, 4H). LCMS RT= 4,81 min, m/z = 286,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Torus Diol 5 µm, (150 × 30 mm), mobilna faza: Ugljen dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), program isušivanja izokratski: 5% B
protok: 150 ml/min; temperatura kolone: 25 °C; talasna dužina: 220 nm ciklopropil((SS,7R)-7-hidroksi-5-(o tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,30–7,13 (m, 3H), 7,01–6,94 (m, 1H), 6,25 (bs, 1H), 5,75 (dd, J = 8,1, 5,8 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 7,9, 4,6 Hz, 1H), 3,63 –3,52 (m, 1H), 3,03– 2,92 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,31–2,14 (m, 1H), 1,09–0,96 (m, 4H). LCMS RT= 4,08 min, m/z = 284,1 [M H]<+>.
Informacije o preparativnoj HPLC: Kolona: Gemini-NX C18, 5 µm (50 × 30 mm); mobilna faza: 0,1% amonijum hidroksid u vodi (A) / acetonitril (B), gradijent programa elucije: 10% do 60% B protok: 60 ml/min; temperatura kolone: 25 °C, talasna dužina: 254 nm
Korak 4: ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(o-tolil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 1,80 ml, 3,55 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-(o tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola
2
(0,350 g, 1,18 mmol) i N-metoksi-N-metilciklopropankarboksamida (0,472 g, 3,55 mmol) u THF-u (11,8 ml) na 0 °C tokom 15 min. Nakon 1 h, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil((SS,7S)-7-fluor-5-(o tolil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (0,179 g, 0,627 mmol, prinos 53%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,35–7,14 (m, 3H), 6,76–6,66 (m, 1H), 6,26 (ddd, J = 56,3, 7,2, 1,9 Hz, 1H), 5,94 (ddd, J = 8,5, 6,6, 3,2 Hz, 1H), 3,94–3,48 (m, 1H), 3,01 (ddt, J = 7,6, 6,1, 5,2 Hz, 1H), 2,66 (dddd, J = 26,8, 15,1, 3,2, 2,0 Hz, 1H), 2,42 (s, 3H), 1,18–0,99 (m, 4H). LCMS RT= 4,80 min, m/z = 286,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Torus Diol 5 µm, (150 × 30 mm), Mobilna faza: Ugljen dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), program isušivanja izokratski: 5% B
Brzina protoka: 55 ml/min; Temperatura kolone: 25 °C, talasna dužina: 220 nm.
Metoda 117
Primeri 150 i 151
ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: metil 3-(3-fluorpiridin-2-il)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat Trietilamin (9,8 ml, 70 mmol) dodat je u rastvor (2Z)-3-fluor-N-hidroksi-piridin-2-karboksimidoil hlorida (12,0 g, 68,7 mmol) i metil akrilata (6,3 ml, 70 mmol) u dihlormetanu (460 ml) na 0 °C. Reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 4 h. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući metil 3-(3-fluor-2-piridil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (10,6 g, 47,3 mmol, prinos 68%).
2
Za pripremu (2Z)-3-fluor-N-hidroksi-piridin-2-karboksimidoilhlorida videti: WO2006/114706, 2006, A1. LCMS RT= 0,89 min, m/z = 224,8 [M H]<+>.
Korak 2: 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(3-fluorpiridin-2-il)pirolidin-2-on Nikl(II) hlorid heksahidrat (21,6 g, 89,2 mmol) i metil 3-(3-fluor-2-piridil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilat (10,0 g, 44,6 mmol) rastvoreni su u metanolu (372 ml) i ohlađeni na -30 °C u atmosferi azota. U porcijama je dodat natrijum borhidrid (8,79 g, 223 mmol) tokom 10 min. Nakon toga, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 1 h. Dodat je amonijum hidroksid (100 ml) i reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Talog je uklonjen filtracijom. Filtrat je koncentrovan i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
LCMS RT= 0,75 min, m/z = 196,8 [M = H]<+>. 4-dimetilaminopiridin (0,545 g, 4,46 mmol) dodat je u rastvor sirovog supstrata i imidazola (9,11 g, 134 mmol) i terc-butildimetil hlorsilana (13,9 g, 89,2 mmol) u dimetil sulfoksidu (89 ml) na 40 °C. Nakon 24 h, reakcija je razblažena vodom i izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-5-(3-fluor-2-piridil)pirolidin-2-on (9,6 g, 31 mmol, prinos 69%).
<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 1:1 smeša dijastereomera δ 8,41–8,36 (m, 1H), 7,45– 7,35 (m, 1H), 7,31–7,22 (m, 1H), 6,21 (s, 0,5H), 5,87 (s, 0,5H), 5,18–5,10 (m, 0,5H), 4,90 (ddd, J = 9,5, 6,3, 1,3 Hz, 0,5H), 4,59–4,47 (m, 1H), 3,01–2,90 (m, 0,5H), 2,61 (ddd, J = 13,0, 7,5, 3,7 Hz, 0,5H), 2,48 (ddd, J = 13,2, 8,1, 6,5 Hz, 0,5H), 2,21 (dt, J = 12,3, 9,5 Hz, 0,5H), 0,93 (s, 4,5H), 0,91 (s, 4,5H), 0,22–0,13 (m, 6H). LCMS RT= 1,38 min, m/z = 311,0 [M H]<+>.
Korak 3: etil 5-(3-fluorpiridin-2-il)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
2
Natrijum hidrid (60% u ulju, 0,390 g, 9,7 mmol) dodat je u rastvor 3-[tercbutil(dimetil)silil]oksi-5-(3-fluor-2-piridil)pirolidin-2-ona (2,0 g, 6,4 mmol) u N,N-dimetilformamidu (64 ml) na 0 °C. Nakon 30 minuta dodat je O-difenilfosforilhidroksilamin (2,3 g, 9,7 mmol). Smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,34 min, m/z = 326,0 [M H]<+>i LCMS RT= 1,30 min, m/z = 326,0 [M H]<+>. Etil 2-etoksi-2-iminoacetat (2,50 g, 16 mmol) i sirovi ostatak su rastvoreni u etanolu (23 ml) i reakcija je zagrevana na 90 °C tokom 16 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je korišćen za sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,38 min, m/z = 425,0 [M H]<+>i LCMS RT= 1,34 min, m/z = 425,0 [M H]<+>. U rastvor sirovog ostatka u toluenu (25 ml) dodat je monohidrat p-toluensulfonske kiseline (1,5 g, 7,7 mmol). Reakcija je zagrevana na 120 °C tokom 16 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je korišćen za sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,55 min, m/z = 407,0 [M H]<+>i LCMS RT= 1,50 min, m/z = 407,1 [M H]<+>. Tetrabutilamonijum fluorid (1,0 M u THF-u, 6,4 ml, 6,4 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u THF-u (21 ml) i reakcija je zagrevana na 40 °C tokom 1 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid 0% do 10% metanol/ dihlorometan), dajući etil 5-(3-fluor-2-piridil)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (0,800 g, 2,74 mmol, prinos 42%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 1:1 smeša dijastereomera δ 8,41–8,29 (m, 1H), 7,63–7,26 (m, 2H), 6,12 (dd, J = 8,1, 4,4 Hz, 0,5H), 6,07 (d, J = 8,2 Hz, 0,5H), 5,64 (dd, J = 7,6, 4,0 Hz, 0,5H), 5,21 (d, J = 6,5 Hz, 0,5H), 4,51–4,38 (m, 2H), 3,45 (ddd, J = 14,7, 8,3, 6,6 Hz, 0,5H), 3,29 (ddd, J = 13,8, 7,5, 4,3 Hz, 0,5H), 3,10 (ddd, J = 13,8, 8,1, 4,0 Hz, 0,5H), 2,74 (d, J = 14,4 Hz, 0,5H), 1,40 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS RT= 0,89 min, m/z = 292,9
Korak 4: etil 7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-karboksilat
2
Dietilaminosumpor trifluorid (1,53 ml, 10,9 mmol) dodat je u rastvor etil 5-(3-fluor-2-piridil)-7-hidroksi-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (0,800 g, 2,74 mmol) u dihlormetanu (27,4 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 minuta je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (4 x 30 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 10% DCM-metanol), dajući etil 7-fluor-5-(3-fluor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilat (0,800 g, 2,72 mmol, prinos 99%). LCMS RT= 1,01 min, m/z = 294,8 [M H]<+>.
Korak 5: 7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid
Litijum hidroksid monohidrat (1,20 g, 27 mmol) dodat je u rastvor etil 7-fluor-5-(3-fluor-2-piridil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksilata (0,80 g, 2,7 mmol) u THF-u (9,1 ml), vodi (4,5 ml) i metanolu (9,1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, reakcija je neutralisana pomoću 1 M HCl (27 ml). Reakciona smeša je ekstrahovana izopropil acetatom (10 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je podvrgnut sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,83 min, m/z = 266,8 [M H]<+>. Trietilamin (1,5 ml, 11 mmol) dodat je u rastvor 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida (0,790 g, 4,1 mmol), 1-hidroksibenzotriazola (0,370 g, 2,7 mmol), N,O-dimetil hidroksilamin hidrohlorida (0,540 g, 5,4 mmol) i sirovog ostatka u N,N-dimetilformamidu (9,1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (0% do 10% metanol-dihlormetan), dajući 7-fluor-5-(3-fluor-2-piridil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamid (0,224 g, 0,724 mmol, prinos 27%). LCMS RT= 0,85 min, m/z = 309,9 [M H]<+>.
2
Korak 6: ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon i ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Ciklopropil magnezijum bromid (0,5 M u THF-u, 5,7 ml, 2,85 mmol) dodat je u rastvor 7-fluor-5-(3-fluor-2-piridil)-N-metoksi-N-metil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karboksamida (0,220 g, 0,711 mmol) u THF-u (2,4 ml) na -50 °C. Nakon 20 minuta, reakcija je stavljena u kupatilo na sobnoj temperaturi i mešana tokom 3 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (16,59 mg, 0,057 mmol, prinos 8%) i ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon (23,7 mg, 0,082 mmol, prinos 12%).
ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,45 (dt, J = 4,6, 1,5 Hz, 1H), 7,89 (ddd, J = 10,0, 8,4, 1,3 Hz, 1H), 7,57 (dt, J = 8,6, 4,4 Hz, 1H), 6,26 (ddd, J = 56,6, 7,7, 2,7 Hz, 1H), 6,10–5,99 (m, 1H), 3,74 (dddd, J = 19,7, 14,7, 8,5, 7,7 Hz, 1H), 3,16–2,84 (m, 2H), 1,18–0,93 (m, 4H). LCMS RT= 3,64 min, m/z = 291,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Chiralcel OJ 5 µm, (250 x 21,2 mm), Mobilna faza: ugljen-dioksid (A) / metanol (B), izokratski program elucije: 15% MeOH; protok: 70 ml/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 261 nm
ciklopropil((5S,7R)-7-fluor-5-(3-fluorpiridin-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,42 (dt, J = 4,6, 1,5 Hz, 1H), 7,89 (ddd, J= 10,0, 8,5, 1,3 Hz, 1H), 7,56 (dt, J = 8,6, 4,4 Hz, 1H), 6,58–6,32 (m, 2H), 3,55– 3,19 (m, 2H), 2,95 (tt, J = 7,5, 4,9 Hz, 1H), 1,13–0,98 (m, 4H). LCMS RT= 3,82 min, m/z = 291,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Chiralcel OJ 5 µm, (250 × 21,2 mm), mobilna faza: Ugljen-dioksid (A) / metanol (B), Program isušivanja izokratski: 15% MeOH; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 35 °C, talasna dužina: 261 nm.
Metoda 118
2
Primer 152
ciklopropil((SS,7S)-7-fluor-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-6,7-dihidro-SH-pirolo [1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: 1-(5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)propan-1,3-dion
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 9,5 ml, 9,5 mmol) dodat je u rastvor metil 5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-karboksilata (2,0 g, 5,9 mmol) i 1-(1-metilpirazol-4-il)etanona (1,20 g, 9,5 mmol) u THF-u (40 ml) na 0 °C. Nakon toga, reakcija je zagrevana na sobnu temperaturu i mešana tokom 1 h. Reakcija je razblažena vodom i izopropil acetatom. Dodat je 5% rastvor limunske kiseline i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-il]-3-(1-metilpirazol-4-il)propan-1,3-dion (2,40 g, 5,60 mmol, prinos 94%). LCMS RT= 1,57 min, m/z = 427,9 [M H]<+>.
Korak 2: 2-brom-7-fluor-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
Natrijum borhidrid (3,30 g, 84 mmol) dodat je u rastvor 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4 triazol-3-il]-3-(1-metilpirazol-4-il)propan-1,3-diona (2,4 g, 5,6 mmol) u etanolu (110 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, reakcija je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida i isparljive supstance su uklonjene pod
2 1
sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u izopropil acetatu i razblažen vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, a sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,17 min, m/z = 431,9 [M H]<+>. Trifluorsirćetna kiselina (56 ml) i dihlormetan (56 ml) dodati su u sirovi ostatak i reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 16 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u dihlormetanu i dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 0,82 min, m/z = 283,8 [M H]<+>. Dietilaminosumpor trifluorid (3,1 ml, 22 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (56 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 minuta, u reakcionu smešu je dodat natrijum bikarbonat (5,0 g). Reakciona smeša je razblažena vodom i izopropil acetatom. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, a sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (50% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 2-brom-7-fluor-5-(1-metilpirazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (0,379 g, 1,32 mmol, prinos 24%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1:1 smeša dijastereomera δ 7,84 (s, 0,5H), 7,78 (s, 0,5H), 7,52 (d, J = 0,8 Hz, 0,5H), 7,45 (d, J = 0,8 Hz, 0,5H), 6,33–6,03 (m, 1H), 5,88–5,74 (m, 0,5H), 5,63–5,51 (m, 0,5H), 3,83 (s, 1,5H), 3,82 (s, 1,5H), 3,65–3,47 (m, 0,5H), 3,25–3,00 (m, 1H), 2,81–2,64 (m, 0,5H). LCMS RT= 0,92 min, m/z = 285,8 [M H]<+>.
Korak 3: ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 2,0 ml, 3,97 mmol) dodat je u rastvor 2-brom-7-fluor-5-(1-metilpirazol-4-il)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (0,379 g, 1,32 mmol) i N-metoksi-N-metilciklopropan karboksamida (0,529 g, 3,97 mmol) u THF-u (13,2 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 1 h. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su
2 2
osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, a sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon (44,23 mg, 0,161 mmol, prinos 12%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,80 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,21 (ddd, J = 56,4, 7,0, 2,4 Hz, 1H), 5,66 (ddd, J = 8,2, 6,0, 3,6 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,73–3,55 (m, 1H), 2,99 (tt, J = 7,5, 4,9 Hz, 1H), 2,80 (dddd, J = 26,4, 14,9, 3,7, 2,4 Hz, 1H), 1,14–0,95 (m, 4H). LCMS RT= 3,10 min, m/z = 276,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Whelko-015 µm, (150 × 21,2 mm); mobilna faza: ugljen-dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), izokratski program elucije: 35% B
Brzina protoka: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C; talasna dužina: 220 nm Metoda 119
Primer 153
ciklopropil(7-fluor-5-(5-metilizoksazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: 1-(5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metilizoksazol-4-il)propan-1,3-dion
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 7,1 ml, 7,1 mmol) dodat je u rastvor metil 5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-karboksilata (1,5 g, 4,5 mmol) i 1-(5-metilizoksazol-4-il)etanona (0,890 g, 7,1 mmol) u THF-u (30 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 30 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Dodat je 10% vodeni rastvor limunske kiseline da bi se pH vrednost podesila na 2. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (2 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid 0% do 100% izopropil acetatheptan), dajući 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-il]-3-(5-metilizoksazol-
2
4-il)propan-1,3-dion (1,6 g, 3,7 mmol, prinos 84%). LCMS RT= 1,35 min, m/z = 428,9 [M H]<+>.
Korak 2: ciklopropil(7-fluor-5-(5-metilizoksazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Natrijum borhidrid (3,30 g, 84 mmol) dodat je u rastvor 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4 triazol-3-il]-3-(5-metilizoksazol-4-il)propan-1,3-diona (2,4 g, 5,6 mmol) u etanolu (110 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, reakcija je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida.Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom.Sirovi ostatak je rastvoren u izopropil acetatu i razblažen vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,27 min, m/z = 432,9 [M H]<+>. Sumporna kiselina (10 ml) dodata je u sirovi ostatak i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena vodom. Natrijum hidroksid (3 M u vodi) dodavan je dok vodeni sloj nije postao bazan. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. Dietilaminosumpor trifluorid (0,470 ml, 3,37 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (8,4 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 minuta, dodat je natrijum bikarbonat (2,0 g). Reakciona smeša je razblažena vodom i izopropil acetatom. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak (0,110 g, 0,383 mmol) prosleđen je u sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,02 min, m/z = 286,8 [M H]<+>. Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 0,38 ml, 0,766 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka i N-metoksi-N-metilciklopropan karboksamida (0,153 g, 1,15 mmol) u THF-u (3,8 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 20 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući dijasteromernu smešu ciklopropil(7-fluor-
2 4
5-(5-metilizoksazol-4-il)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanona (1,26 mg, 0,0046 mmol). LCMS RT= 3,63 min, m/z = 277,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Chiracel OX 5 µm, (150 × 21,2 mm); mobilna faza: ugljen-dioksid (A) / metanol (B), izokratski program elucije: 20% B; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C, talasna dužina: 220 nm
Metoda 120
Primeri 154 i 155
((5S,7S)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon i ((5S,7R)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon
Korak 1: 1-(5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)-3-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)propan-1,3-dion
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 5,9 ml, 5,9 mmol) dodat je u rastvor metil 5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-karboksilata (2,0 g, 5,9 mmol) i 1-(4-hlor-1-metil-pirazol-3-il)etanona (0,940 g, 5,9 mmol) u THF-u (40 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 30 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Dodat je 10% vodeni rastvor limunske kiseline da bi se pH podesio na 2. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-il]-3-(4-hlor-1-metil-pirazol-3-il)propan-1,3-dion (2,40 g, 5,19 mmol, prinos 87%). LCMS RT= 1,68 min, m/z = 461,9 [M H]<+>.
2
Korak 2: ((5S,7S)-5-(4-hloro-1-metil-1H-pirazol-3-il) -7-fluoro-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon i ((5S,7R)-5-(4-hloro-1-metil-1H-pirazol-3-il) -7-fluoro-6,7-dihidro-5H-pirolo [1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon
Natrijum borhidrid (3,10 g, 78 mmol) dodat je u rastvor 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-il]-3-(4-hlor-1-metil-pirazol-3-il)propan-1,3-diona (2,4 g, 5,2 mmol) u etanolu (100 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, reakcija je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Rastvor je rastvoren u izopropil acetatu i razblažen vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. Sumporna kiselina (10 ml) dodata je u sirovi ostatak i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena vodom. Natrijum hidroksid (3M u vodi) dodavan je dok vodeni sloj nije postao bazan. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani i sirovi ostatak je predat na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
Dietilaminosumpor trifluorid (1,5 ml, 10 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (26 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 minuta, dodat je natrijum bikarbonat (2,0 g). Smeša je razblažena vodom i etil acetatom. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak (0,40 g, 1,25 mmol) prosleđen je u sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 1,2 ml, 2,50 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka i N-metoksi-N-metilciklopropan karboksamida (0,498 g, 3,74 mmol) u THF-u (12,5 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 20 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (4 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ((5S,7S)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-
2
3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon (8,4 mg, 0,027 mmol) i ((SS,7R)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon (38,8 mg, 0,125 mmol).
((5S,7S)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,03 (s, 1H), 6,23 (ddd, J = 56,8, 7,8, 3,3 Hz, 1H), 5,70 (ddd, J = 8,4, 6,5, 5,0 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,72 (ddt, J = 16,3, 14,6, 8,1 Hz, 1H), 3,02–2,82 (m, 2H), 1,14–0,99 (m, 4H). LCMS RT= 3,86 min, m/z = 310,0 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Chiralpak IB-N 5 µm, (150 × 21,2 mm); mobilna faza: Ugljen dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), program isušivanja izokratski: 20% MeOH; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C, talasna dužina: 225 nm
((5S,7R)-5-(4-hlor-1-metil-1H-pirazol-3-il)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)(ciklopropil)metanon.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,03 (s, 1H), 6,58–6,22 (m, 1H), 6,04 (ddd, J = 7,4, 6,1, 3,1 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,46–3,21 (m, 2H), 2,97 (tt, J = 7,6, 4,8 Hz, 1H), 1,14–1,00 (m, 4H). LCMS RT= 4,01 min, m/z = 310,0 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Chiralpak IB-N 5 µm, (150 x 21,2 mm); mobilna faza: Ugljen dioksid (A) / 0,1% amonijum hidroksid u metanolu (B), program isušivanja izokratski: 20% B
Brzina protoka: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C, talasna dužina: 225 nm.
Metoda 121
Primer 156
ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: 1-(5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)-3-(3-metoksifenil)propan-1,3-dion
2
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 14 ml, 14 mmol) dodat je u rastvor metil 5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-karboksilata (3,00 g, 8,9 mmol) i 1-(3-metoksifenil)etanona (2,0 ml, 14 mmol) u THF-u (59 ml) na 0 °C. Nakon 5 minuta, reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana još 30 minuta. Dodata je voda i reakcija je razblažena izopropil acetatom. Dodat je 10% vodeni rastvor limunske kiseline da bi se pH podesio na 2. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid 0% do 100% izopropil acetat-heptan) 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4 triazol-3-il]-3-(3-metoksifenil)propan-1,3-dion (4,10 g, 9,02 mmol, prinos 100% – proizvod je kontaminiran 1-(3-metoksifenil)etenonom). LCMS RT= 1,80 min, m/z = 453,9 [M H]<+>.
Korak 2: 2-brom-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
Natrijum borhidrid (5,30 g, 140 mmol) dodat je u rastvor 1-[5-brom-1-(2-trimetilsililetoksimetil)-1,2,4-triazol-3-il]-3-(3-metoksifenil)propan-1,3-diona (4,1 g, 9,0 mmol) u etanolu (180 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom.Sirovi ostatak je rastvoren u izopropil acetatu i razblažen vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prosleđen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,40 min, m/z = 357,9 [M H]<+>. Sumporna kiselina (10 ml) dodata je u rastvor sirovog ostatka i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena vodom. Natrijum hidroksid (3M u vodi) dodavan je dok vodeni sloj nije postao bazan. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani i sirovi ostatak je predat na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS RT= 1,02 min, m/z = 309,8 [M H]<+>. Dietilaminosumpor trifluorid (2,50 ml, 17,9 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dihlormetanu (89 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 minuta, dodat je natrijum bikarbonat (5,0 g). Reakciona smeša je razblažena vodom i izopropil acetatom. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i vodeni sloj je
2
ekstrahovan izopropil acetatom (4 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 2-brom-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (50 mg, 0,160 mmol, prinos 1,79%).
<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,35–7,26 (m, 1H), 6,90 (ddd, J = 8,3, 2,5, 0,9 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 7,6, 1,6 Hz, 1H), 6,76 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,97 (ddd, J = 56,0, 7,1, 1,8 Hz, 1H), 5,39 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,64–3,46 (m, 1H), 2,96–2,80 (m, 1H). LCMS RT= 1,16 min, m/z = 311,8 [M H]<+>.
Korak 3: ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 0,24 ml, 0,481 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor (SS,7S)-2-brom-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (50 mg, 0,160 mmol) i N-metoksi-N-metilciklopropan karboksamida (64 mg, 0,481 mmol) u THF-u (1,6 ml) na 0 °C tokom 15 min. Nakon toga, reakcija je ostavljena da se meša na ovoj temperaturi tokom 1 h. Dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (2,35 mg, 0,0078 mmol, prinos 5%). LCMS RT= 4,92 min, m/z = 302,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Cellulose-15 µm, (150 × 21,2 mm); mobilna faza: ugljen-dioksid (A) / metanol (B), izokratski program elucije: 15% MeOH; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C; talasna dužina: 220 nm
Metoda 122
Primer 157
2
ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluor-5-(trifluormetil)fenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon
Korak 1: metil 3-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-okso-propanoat
Litijum bis(trimetilsilil)amid (1,0 M u THF-u, 194 ml, 194 mmol) dodat je u rastvor metil 3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-karboksilata (20,0 g, 97,1 mmol) i metil acetata (15,5 ml, 194 mmol) u THF-u (324 ml) na -20 °C. Nakon dodavanja, reakcija je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i meša preko noći. Reakciona pH vrednost reakcije je podešena na pH 1 dodavanjem 10% vodenog rastvora limunske kiseline. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući metil 3-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-oksopropanoat (15,4 g, 62,1 mmol, prinos 64,0%). LCMS RT= 0,91 min, m/z = 247,7 [M H]<+>.
Korak 2: 2-brom-5-(3-fluor-5-(trifluormetil)fenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol
U piperidinijum acetat (0,250 g, 1,6 mmol) dodat je rastvor metil 3-(3-brom-1H-1,2,4-triazol-5-il)-3-okso-propanoata (2,00 g, 8,1 mmol) i 3-fluor-5-(trifluormetil)benzaldehida (1,2 ml, 8,1 mmol) u benzenu (8,1 ml). Reakcija je opremljena Din-Štarkovom aparaturom i refluksnim kondenzatorom i zagrevana je na refluksu tokom 3 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena vodom i izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući metil 2-brom-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-7-hidroksi-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-6-karboksilat (0,60 g, 1,4 mmol, prinos 18%) koji je odmah korišćen u sledećoj reakciji. LCMS RT= 1,28 min, m/z = 421,8 [M H]<+>.
Natrijum hlorid (0,830 g, 14 mmol) dodat je u rastvor sirovog ostatka u dimetil sulfoksidu (4,7 ml) i vodi (0,47 ml). Reakcija je zatim zagrevana na 120 °C tokom 15 min, nakon čega je reakcija stavljena u vodeno kupatilo na sobnoj temperaturi i dodat je natrijum borhidrid (0,270 g, 7,1 mmol). Nakon 10 minuta, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida i reakcija je razblažena vodom i izopropil acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 2-brom-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ol (0,320 g, 0,874 mmol, prinos 61%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 3:1 smeša dijastereomera δ 7,45 (s, 1H), 7,39–7,25 (m, 2H), 5,46–5,35 (m, 2H), 3,63–3,49 (m, 0,75H), 3,18 (ddd, J = 14,3, 7,5, 2,5 Hz, 0,25 H), 2,90 (ddd, J = 14,2, 7,1, 6,1 Hz, 0,25H), 2,66 (ddd, J = 14,5, 3,9, 3,0 Hz, 0,75H). LCMS RT= 1,19 min, m/z = 365,8 [M H]<+>.
Korak 3: 2-brom-7-fluor-5-(3-fluor-5-(trifluormetil)fenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol
Dietilaminosumpor trifluorid (0,230 ml, 1,75 mmol) dodat je u rastvor 2-brom-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-7-ola (0,320 g, 0,874 mmol) u dihlormetanu (17,5 ml) na 40 °C. Nakon 10 minuta, dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Reakciona smeša je razblažena vodom i dihlormetanom. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, 0% do 100% izopropil acetat-heptan), dajući 2-brom-7-fluor-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol (0,250 g, 0,679 mmol, prinos 78%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 3:1 smeša dijastereomera δ 7,42–7,33 (m, 1H), 7,27 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 7,15–7,04 (m, 1H), 6,14–5,88 (m, 1H), 5,72 (td, J = 6,8, 3,6 Hz, 0,75H), 5,60–5,44 (m, 0,25H), 3,70–3,52 (m, 0,25H), 3,41 (dddd, J = 22,4, 15,3, 7,0, 1,3 Hz, 0,75H),
1,35 min, m/z = 367,7 [M H]<+>.
1
Korak 4: ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-fluor-5-(trifluormetil)fenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon
Izopropil magnezijum hlorid (2,0 M u THF-u, 1,0 ml, 2,04 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor N-metoksi-N-metilciklopropan karboksamida (0,271 g, 2,04 mmol) i 2-brom-7-fluor-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazola (0,250 g, 0,679 mmol) u THF-u (6,8 ml) na 0 °C tokom 15 min. Nakon 1 h, dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, koncentrovani, i sirovi ostatak je prečišćen putem preparativne SFC, dajući proizvoljno dodeljeni ciklopropil-[7-fluor-5-[3-fluor-5-(trifluormetil)fenil]-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon (3,47 mg, 0,0097 mmol, prinos 1,4%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (dt, J = 8,8, 2,1 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,47 (dt, J = 9,4, 1,9 Hz, 1H), 6,26 (ddd, J = 56,2, 7,0, 2,1 Hz, 1H), 5,89 (ddd, J = 8,9, 6,2, 3,4 Hz, 1H), 3,86–3,66 (dddd, J = 25,2, 15,4, 8,5, 7,1 Hz, 1H), 3,09–2,93 (m, 1H), 2,83 (dddd, J = 26,1, 15,2, 3,4, 2,2 Hz, 1H), 1,16–0,99 (m, 4H). LCMS RT= 5,51 min, m/z = 358,1 [M H]<+>.
SFC informacije o pripremi: Kolona: Whelko-015 µm, (150 × 21,2 mm), Mobilna faza: Ugljen-dioksid (A) / metanol (B), Program isušivanja izokratski: 20% MeOH; protok: 55 ml/min; Temperatura kolone: 40 °C, talasna dužina: 220 nm
Metoda 123
Primer 158
(1-((1H-pirazol-1-il)metil)ciklopropil)(5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b]
[1,2,4]triazol-2-il)metanon
(1-((1H-pirazol-1-il)metil)ciklopropil)(5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon je pripremljen od (1R,2R)-2-(1-metilpirazol-4-il)ciklopropankarboksilne kiseline prema metodama 2 i 3. Sirovi ostatak je dalje prečišćen putem preparativne HPLC (Gemini-NX C1850x30 mm, 5 µm, 20-60% 0,1% mravlja kiselina u vodi / acetonitril), dajući konačni proizvod (20,2 mg, 32%) u vidu čvrste supstance bele boje.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,57 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,44–7,30 (m, 4H), 7,26–7,18 (m, 2H), 6,16 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 8,3, 5,8 Hz, 1H), 4,63 (q, J = 14,4 Hz, 2H), 3,22– 2,81 (m, 2H), 2,61–2,28 (m, 1H), 1,70–1,53 (m, 2H), 1,35–1,13 (m, 3H). LCMS RT= 4,31 min,
2
m/z = 334,2 (M+H)<+>. LCMS (5 do 95% acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina tokom 10 minuta) retenciono vreme 4,31 min, ESI+ nađeno [M+H] = 334,2
Dodatno kondicioniranje za SFC prečišćavanja i analizu:
SFC 1
Primer 159
ciklopropil((4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo [1,2-b] pirazol-2-il)metanon
Proizvoljno dodeljeni ciklopropil((4S,6S)-4-fluor-6-fenil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-2-il)metanon (7,9 mg, prinos 55%).1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,46–7,28 (m, 3H), 7,28–7,07 (m, 2H), 6,94 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,34–5,96 (m, 1H), 5,88–5,51 (m, 1H), 2,94– 2,75 (m, 1H), 2,76–2,55 (m, 1H), 2,07 (s, 1H), 1,04–0,74 (m, 4H). LC-MS RT= 5,11 min, m/z = 271,1 (M+H)<+>.
SFC 2
Primer 160
[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
Proizvoljno dodeljeni [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1S,2S)-2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon (4,2 mg, prinos 31%).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,59–7,08 (m, 5H), 6,50–6,06 (m, 1H), 5,93–5,55 (m, 1H), 3,76–3,25 (m, 1H), 2,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 1,88–1,15 (m, 2H). LC-MS RT= 5,36 min, m/z = 340,1 (M+H)<+>.
SFC 3
Primer 161
[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1R,2R)-2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon
Proizvoljno dodeljeni [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(1R,2R)-2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon (12,2 mg, prinos 89%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,50–7,13 (m, 5H), 6,51–6,05 (m, 1H), 5,93–5,49 (m, 1H), 3,90–3,54 (m, 1H), 2,84–2,59 (m, 1H), 2,62–2,53 (m, 1H), 2,07 (s, 1H), 1,64–1,26 (m, 2H). LC-MS RT= 5,40 min, m/z = 340,1 (M+H)<+>.
SFC 4
Primer 162
[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(2S)-spiro[22]pentan-2-il]metanon.
Proizvoljno dodeljeni [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(2S)-spiro[2,2]pentan-2-il]metanon (3,2 mg, prinos 39%). LC-MS RT= 4,95 min, m/z = 298,1 (M+H)<+>.
SFC 5
Primer 163
[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(2R)-spiro[22]pentan-2-il]metanon
Proizvoljno dodeljeni [rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[rac-(2R)-spiro[2,2]pentan-2-il]metanon (x mg, prinos x%). LC-MS RT= 4,94 min, m/z = 298,1 (M+H).
4
Testovi inhibicije RIP1 kinaze (biohemijski test)
Jedinjenja iz predmetnog pronalaska su testirana na sposobnost da inhibiraju RIP1K aktivnost, kao što je dole opisano.
Enzimski test: Sposobnost receptorske interakcione proteinske kinaze (RIPK1) da katalizuje hidrolizu adenozin-5'-trifosfata (ATP) prati se pomoću testa Transkreener ADP (adenozin-5'-difosfat) (BellBrook Labs). Prečišćeni domen ljudske RIP1 kinaze (2-375) (50 nM) izveden iz ekspresionoh sistema ćelije insekta inficirane bakulovirusom inkubira se sa testiranim jedinjenjima tokom 2 sata u 50 mM Hepes puferu (pH 7,5) koji sadrži 30 mM MgCl2, 1 mM ditiotreitol, 50 µM ATP, 0,002% Brij-35 i 0,5% dimetil sulfoksida (DMSO). Reakcije su deaktivirane dodavanjem 1X Bell Brooks zaustavnog pufera B (20 mM Hepes (pH 7,5), 40 mM etilendiamin tetrasirćetna kiselina i 0,02% Brij-35) koji dodatno sadrži 12 mM EDTA i 55 ug/ml ADP2 antitela i 4 nM ADP-AlexaFluor<®>633 trejser. Trejser vezan za antitelo je zamenjen putem ADP-a koji je generisan tokom RIP1K reakcije, što uzrokuje smanjenje fluorescentne polarizacije koja se meri laserskom ekscitacijom na 633 nm sa FP čitačem mikroploča M1000. Frakciona aktivnost je prikazana u odnosu na koncentraciju ispitivanog proizvoda. Koristeći softver Genedata Screener (Genedata; Bazel, Švajcarska), podaci su ubačeni u Morisonovu jednačinu konstante prividne inhibiciječvrstog vezivanja (Ki<app>) [Williams, J.W. i Morrison, J. F. (1979) The kinetics of reversible tight-binding inhibition. Methods Enzymol 63: 437-67]. Za izračunavanje frakcione aktivnosti i Ki<app>korišćena je sledeća jednačina:
gde su [E]Ti [I]Tukupne koncentracije aktivnog enzima i ispitivanog proizvoda, datim redosledom.
Primeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska su dati u tabelama 1 i 2 zajedno sa njihovom fizičko-hemijskom karakterizacijom i in vitro podacima o inhibitornoj aktivnosti RIP1 kinaze. „Metoda“ u prvoj koloni svake tabele odnosi se na sintetičke metode koje se koriste za pripremu svakog jedinjenja kao što je prikazano u gornjim primerima. U određenim primerima, za određene stereoizomere dato je retenciono vreme za hiralnu kolonu (min). Ako nije drugačije naglašeno, stereohemija prikazana u svakoj strukturi predstavlja relativnu konfiguraciju jednog stereoizomera, a apsolutna konfiguracija (tj. „R“ i/ili „S“) dodeljuje se proizvoljno. U nekim otelotvorenjima, kada je opisano da metoda uključuje razdvajanje stereoizomera, obezbeđen je jedan stereoizomer jedinjenja iz Tabele 1 ili Tabele 2.
TABELA 1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
2
21
22
Tabela 2
2
24
2
2
2
2
2
1
2
4
4
41
42
4
44
4
4
4
4
4
1
2
4

Claims (4)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (1):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<1>je odabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, fenil, benzil, 4- do 8-člani heterociklil i 5- do 6-člani heteroaril; pri čemu je R<1>vezan za susedni karbonil atomom ugljenika, i pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa jednim ili dva supstituenta izabrana iz grupe koju čine F, Cl, Br, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, hidroksil, hidroksimetil, cijano, cijanometil, cijanoetil, C(O)C1-C6alkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); svaki R<N>je nezavisno odabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi i C1-C6haloalkil; ili dva R<N>zajedno sa susednim N mogu da grade 4-6-člani prsten; i prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
    pri čemu: R<2>je odabran iz grupe koju čine C1-C6haloalkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkoksi, C1-C6tioalkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2-(4- do 6-člani heterociklil), CH2CH2- (4- do 6-člani heterociklil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); pri čemu, kada je prisutan prsten fenila, on može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine halogen, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi i cijano; i R<3a>i R<3b>su odabrani na sledeći način: (i) jedan od R<3a>i R<3b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; (ii) svaki od R<3a>i R<3b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN i metil, pod uslovom da R<3a>i R<3b>ne mogu oba biti OH ili CN; ili (iii) R<3a>i R<3b>zajedno grade ciklopropil.
  2. 2. Jedinjenje formule (I):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<1>je odabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, fenil, benzil, 4- do 8-člani heterociklil i 5- do 6-člani heteroaril; pri čemu je R<1>vezan za susedni karbonil atomom ugljenika, i pri čemu je R<1>opciono supstituisan sa jednim ili dva supstituenta izabrana iz grupe koju čine F, Cl, Br, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkil, C1-C6haloalkoksi, C1-C6alkil-N(R<N>)2, hidroksil, hidroksimetil, cijano, cijanometil, cijanoetil, C(O)C1-C6alkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); svaki R<N>je nezavisno odabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi i C1-C6haloalkil; ili dva R<N>zajedno sa susednim N mogu da grade 4-6-člani prsten; prsten A i prsten B zajedno su odabrani iz grupe koja se sastoji od:
    pri čemu: R<2>je odabran iz grupe koju čine C1-C6haloalkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, C1-C6haloalkoksi, C1-C6tioalkil, fenil, benzil, CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2CH2-(C3-C6cikloalkil), CH2-(4- do 6-člani heterociklil), CH2CH2- (4- do 6-člani heterociklil), 5- do 6-člani heteroaril i CH2-(5- do 6-člani heteroaril); pri čemu, kada je prisutan prsten fenila, on može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine halogen, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi i cijano; i R<4a>i R<4b>su odabrani na sledeći način: (i) jedan od R<4a>i R<4b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; ili (ii) svaki od R<4a>i R<4b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl i metil.
  3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<2>je odabran iz grupe koju čine fenil, monofluorfenil, difluorfenil, monohlorfenil i dihlorfenil.
  4. 4. Jedinjenje iz zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, prsten A i prsten B su zajedno odabrani iz grupe koja se sastoji od:
    pri čemu: R<3a>i R<3b>su odabrani na sledeći način: (i) jedan od R<3a>i R<3b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; (ii) svaki od R<3a>i R<3b>je odabran iz grupe koju čine D, F, Cl, OH, CN i metil, pod uslovom da R<3a>i R<3b>ne mogu oba biti OH ili CN; ili (iii) R<3a>i R<3b>zajedno formiraju ciklopropil; svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; i m je 1, 2 ili 3, 5. Jedinjenje iz zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, prsten A i prsten B su zajedno:
    pri čemu: svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; i m je 1, 2 ili 3, 6. Jedinjenje iz zahteva 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<2>je odabran iz grupe koju čine fenil, monofluorfenil, difluorfenil, monohlorfenil i dihlorfenil. 7. Jedinjenje iz zahteva 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, prsten A i prsten B su zajedno izabrani iz grupe koja se sastoji od:
    pri čemu: R<4a>i R<4b>su odabrani na sledeći način: (i) jedan od R<4a>i R<4b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine F, Cl, OH, CN, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; ili (ii) svaki od R<4a>i R<4b>je odabran iz grupe koju čine F, Cl i metil; svaki R<5>je odabran iz grupe koju čine H, F, Cl, C1-C6alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi i C1-C4haloalkoksi; i m je 1, 2 ili 3, 8. Jedinjenje iz zahteva 1 ili zahteva 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je odabrano iz grupe koju čine:
    ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1S,2S)-2-fluorciklopropil)metanon;
    ((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1R,2R)-2-fluorciklopropil)metanon;
    ((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1S,2S)-2-fluorciklopropil)metanon;
    2-hidroksi-2-metil-1-[rac-(SR,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    -hidroksi-2-metil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    -fenil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon;
    ((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1R,2S)-2-fluorciklopropil)metanon;
    ((5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1S,2R)-2-fluorciklopropil)metanon;
    (7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-[rac-(1S,2S)-2-fluorciklopropil]metanon;
    (2,2-difluorciklopropil)-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon; 1
    2
    ciklopropil-[rac-(5R,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    -(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-3-okso-propannitril;
    -(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-hidroksi-2-metil-propan-1-on;
    (rac-(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon;
    3,3,3-trifluor-1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    4
    2,2-dimetil-1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    2,2-dimetil-1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(2-tienil)metanon;
    ciklopropil-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon;
    ciklobutil-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    -(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2,2-dimetil-propan-1-on;
    1-(7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-2-metil-propan-1-on;
    -[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    1-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on
    (1-metilpirazol-4-il)-[rac-(5R,7R)-7-fluoro-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    -[rac-(5R,7R)-7-fluoro-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]propan-1-on;
    1-[rac-(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]etanon;
    ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1R,2S)-2-fluorciklopropil)metanon;
    ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1S,2R)-2-fluorciklopropil)metanon;
    (1-fluorciklopropil)-(rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il)metanon;
    (3-metiloksetan-3-il)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    (3-metiloksetan-3-il)-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    -oksabiciklo[3.1.0]heksan-6-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    oksetan-3-il-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(1R)-2,2-difluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    ili grupe koju čine:
    [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2R)-2-fluorciklopropil] metanon;
    [(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2S)-2-fluorciklopropil] metanon;
    ciklopropil-[(5S)-7,7-difluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; 1
    [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5R,7R)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    (2,2-difluorspiro[2,3]heksan-5-il)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [1-(hidroksimetil)ciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    (3,3-difluorciklobutil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; 2
    (3,3-difluor-6-biciklo[3. 1,0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[2-(trifluormetil)ciklopropil]metanon;
    (6,6-difluor-3-biciklo[3. 1,0]heksanil)-[(5S,7S)-7-fluoro-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    2-[1-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil ciklopropil] acetonitril; 4
    ciklopropil-[(5S,7S)-7-metoksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(4-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    2-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]-ciklopropan karbonitril;
    ciklopropil-[(5S,7S)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    ciklopropil-[(5S,7R)-7-hidroksi-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(SS,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1S,2S)-2-metilciklopropil]metanon;
    [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(SS,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-SH-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]-[(1R,2R)-2-metilciklopropil]metanon;
    ciklopropil-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2,3,6-trifluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    ciklopropil-[(5S,7S)-7-deuterio-7-fluor-5-fenil-5,6-dihidropirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    [(1S,2R)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon;
    rac-(1R,2R)-2-[(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-karbonil]ciklopropan karbonitril;
    1
    2
    4
    1 9. Jedinjenje iz zahteva 8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je odabrano iz grupe koju čine: ((5S,7S)-7-fluoro-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1R,2R)-2-fluorociklopropil)metanon; fenil-[rac-(5S,7S)-7-fluoro-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon; ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon; [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2-hlorofenil)-7-fluoro-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon; i ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon. 10. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)((1R,2R)-2-fluorciklopropil)metanon. 11. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je fenil-[rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon. 12. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je (rac-(5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)-(1-metilciklopropil)metanon. 13. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon. 2 14. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je [(1R,2S)-2-fluorciklopropil]-[(5S,7S)-7-fluor-5-(2-fluorfenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b] [1,2,4]triazol-2-il]metanon. 15. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2,6-difluorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il] metanon. 16. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ciklopropil-[(5S,7S)-5-(2-hlorfenil)-7-fluor-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon. 17. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ciklopropil-[(5S,7S)-7-hlor-5-fenil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il]metanon. 18. Jedinjenje iz zahteva 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je ciklopropil((5S,7S)-7-fluor-5-(3-metoksifenil)-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-il)metanon. 19. Jedinjenje iz zahteva 1 ili zahteva 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, izabrano je jedinjenje koje ima inhibitornu aktivnost RIP1 kinaze Kimanju od 100 nM. 20. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i terapeutski inertan nosač. 21. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, namenjeni za upotrebu kao terapeutski aktivna supstanca. 22. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, namenjeni za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od Parkinsonove bolesti, demencije sa Levijevim telima, multiple sistemske atrofije, Parkinson-plus sindroma, tauopatije, Alchajmerove bolesti, frontotemporalne demencije, amiotrofične lateralne skleroze, spinalne mišićne atrofije, primarne lateralne skleroze, Hantingtonove bolesti, ishemije, moždanog udara, intrakranijalnog krvarenja, cerebralnog krvarenja, mišićne distrofije, progresivne mišićne atrofije, pseudobulbarne paralize, progresivne bulbarne paralize, spinalne mišićne atrofije, nasleđene mišićne atrofije, periferne neuropatije, progresivne supranuklearne paralize, kortikobazalne degeneracije i demijelinizirajuće bolesti. 23. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, namenjeni za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa, glaukoma, psorijaze, psorijatičnog artritisa, reumatoidnog artritisa, spondiloartritisa, juvenilnog idiopatskog artritisa i osteoartritisa. 24. Jedinjenje za upotrebu iz zahteva 22 ili 23, pri čemu, bolest ili poremećaj su izabrani iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti, multiple skleroze, Parkinsonove bolesti, amiotrofične lateralne skleroze, Hantingtonove bolesti, spinalne mišićne atrofije, inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa, psorijaze, psorijatičnog artritisa, reumatoidnog artritisa, spondiloartritisa i juvenilnog idiopatskog artritisa. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4
RS20240314A 2017-07-14 2018-07-12 Biciklična ketonska jedinjenja i postupci za njihovu upotrebu RS65308B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762532767P 2017-07-14 2017-07-14
EP18740815.8A EP3652178B1 (en) 2017-07-14 2018-07-12 Bicyclic ketone compounds and methods of use thereof
PCT/EP2018/068998 WO2019012063A1 (en) 2017-07-14 2018-07-12 BICYCLIC KETONIC COMPOUNDS AND METHODS OF USE

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65308B1 true RS65308B1 (sr) 2024-04-30

Family

ID=62916677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240314A RS65308B1 (sr) 2017-07-14 2018-07-12 Biciklična ketonska jedinjenja i postupci za njihovu upotrebu

Country Status (30)

Country Link
US (3) US11098058B2 (sr)
EP (2) EP3652178B1 (sr)
JP (2) JP7258843B2 (sr)
KR (2) KR102664604B1 (sr)
CN (2) CN119613408A (sr)
AR (1) AR112274A1 (sr)
AU (3) AU2018300043B2 (sr)
BR (1) BR112020000771A2 (sr)
CA (2) CA3185865A1 (sr)
CL (1) CL2020000101A1 (sr)
CO (1) CO2020000134A2 (sr)
CR (1) CR20200002A (sr)
DK (1) DK3652178T3 (sr)
ES (1) ES2973661T3 (sr)
FI (1) FI3652178T3 (sr)
HR (1) HRP20240354T1 (sr)
HU (1) HUE065793T2 (sr)
IL (2) IL294961A (sr)
LT (1) LT3652178T (sr)
MA (1) MA49560B1 (sr)
PE (1) PE20200793A1 (sr)
PH (1) PH12020500105A1 (sr)
PL (1) PL3652178T3 (sr)
PT (1) PT3652178T (sr)
RS (1) RS65308B1 (sr)
SG (1) SG11202000333UA (sr)
SI (1) SI3652178T1 (sr)
TW (1) TWI805595B (sr)
UA (1) UA125448C2 (sr)
WO (1) WO2019012063A1 (sr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11071721B2 (en) 2016-12-02 2021-07-27 Genentech, Inc. Bicyclic amide compounds and methods of use thereof
CN119613408A (zh) 2017-07-14 2025-03-14 豪夫迈·罗氏有限公司 二环酮化合物及其使用方法
MX2020003451A (es) 2017-10-31 2020-08-03 Hoffmann La Roche Sulfonas y sulfoxidos biciclicos y metodos de uso de los mismos.
CN113302193B (zh) * 2019-01-11 2026-05-29 豪夫迈·罗氏有限公司 双环吡咯并三唑酮化合物及其使用方法
WO2021198981A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Janssen Biopharma, Inc. Antiviral compounds and uses thereof
JP7626347B2 (ja) 2020-04-27 2025-02-04 オートタック インコーポレーテッド Ｕｂｒボックスドメインリガンドとしての化合物
CA3214802A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 Genentech, Inc. Processes for making bicyclic ketone compounds
WO2023039795A1 (zh) * 2021-09-16 2023-03-23 维泰瑞隆（北京）生物科技有限公司 Rip1激酶抑制剂及其用途
WO2023225041A1 (en) 2022-05-19 2023-11-23 Merck Sharp & Dohme Llc Ripk1 inhibitors and methods of use
AU2024312554A1 (en) * 2023-06-19 2025-12-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of a chiral pyrrolo triazole alcohol

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1620508A1 (de) 1965-07-23 1969-09-18 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur Herstellung neuer 4,5,6,7-Tetrahydrothiazolo-[5,4-c]-pyridine
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3948903A (en) 1972-12-15 1976-04-06 Parke, Davis & Company Substituted N-(1,2-dihydro-2-oxonicotinyl)-cephalexins and -cephaloglycins
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
GB8610530D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Fbc Ltd Herbicides
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5112596A (en) 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
AU677216B2 (en) 1992-07-27 1997-04-17 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Targeting of liposomes to the blood-brain barrier
US6080772A (en) 1995-06-07 2000-06-27 Sugen, Inc. Thiazole compounds and methods of modulating signal transduction
EP1007042A4 (en) 1997-06-13 2001-07-04 Sugen Inc NEW HETEROCYCLIC COMPOUNDS FOR MODULATING THE PROTEIN-TYROSIN-ENZYME-RELATED CELLULAR SIGNAL TRANSDUCTION
JP2004502642A (ja) * 2000-02-11 2004-01-29 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー カンナビノイドレセプターモジュレーター、それらの製造方法、および呼吸系および非呼吸系疾患の処置のためのカンナビノイドレセプターモジュレーターの使用
US6514221B2 (en) 2000-07-27 2003-02-04 Brigham And Women's Hospital, Inc. Blood-brain barrier opening
AU2001286930A1 (en) 2000-08-30 2002-03-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
US7034036B2 (en) 2000-10-30 2006-04-25 Pain Therapeutics, Inc. Inhibitors of ABC drug transporters at the blood-brain barrier
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
CA2450073C (en) 2001-07-25 2017-08-29 Biomarin Pharmaceutical Inc. Compositions and methods for modulating blood-brain barrier transport
US20030162695A1 (en) 2002-02-27 2003-08-28 Schatzberg Alan F. Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
PL382706A1 (pl) 2002-08-26 2007-11-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited Związek modulujący receptor wapnia i jego zastosowanie
JP4995423B2 (ja) 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
ATE410161T1 (de) 2003-05-02 2008-10-15 Elan Pharm Inc 4-bromo-5-(2-chloro-benzoylamino)-1h-pyrazol-3- carbonsäureamid-derivate und verwandte verbindungen als bradykinin b1 rezeptor antagonisten zur behandlung von entzündlichen erkrankungen
WO2005025511A2 (en) 2003-09-10 2005-03-24 Cedars-Sinai Medical Center Potassium channel mediated delivery of agents through the blood-brain barrier
JP2008539220A (ja) 2005-04-26 2008-11-13 ファイザー・リミテッド バソプレシンアンタゴニストとしてのトリアゾール誘導体
EP2083009A1 (de) 2008-01-22 2009-07-29 Grünenthal GmbH Substituierte Tethrahydroimidazopyridin-Verbindungen und deren Verwendung in Arzneimitteln
US8299077B2 (en) 2009-03-02 2012-10-30 Roche Palo Alto Llc Inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
CN101824036A (zh) 2009-03-05 2010-09-08 上海恒瑞医药有限公司 四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪衍生物的盐,其制备方法及其在医药上的应用
UY32776A (es) 2009-07-09 2011-02-28 Irm Llc Compuestos de imidazopirazinas sustituidas para el tratamiento de enfermedades parasitarias,composiciones farmacéuticas que los contienen y aplicación.
CA2852964A1 (en) 2011-11-03 2013-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic piperazine compounds
JP6267193B2 (ja) 2012-05-22 2018-01-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 置換ジピリジルアミン類及びそれらの使用
MX2015009270A (es) 2013-01-18 2015-10-30 Hoffmann La Roche Pirazoles sustituidos en posicion 3 y uso de los mismos como inhibidores de la cinasa cremallera de leucinas dual (dlk).
TWI648274B (zh) * 2013-02-15 2019-01-21 英商葛蘭素史克智慧財產發展有限公司 作為激酶抑制劑之雜環醯胺類 （二）
TWI710558B (zh) 2013-05-01 2020-11-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 二雜芳基化合物及其用途
RU2015147601A (ru) 2013-05-01 2017-06-05 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг С-связанные гетероциклоалкилзамещенные пиримидины и их применения
AU2014287471C1 (en) 2013-07-10 2019-11-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Fused piperidine amides as modulators of ion channels
MX2016008110A (es) 2013-12-20 2016-08-19 Hoffmann La Roche Derivados de pirazol como inhibidores de la cinasa de cremallera de leucina dual (dlk) y usos de los mismos.
CR20160418A (es) 2014-03-26 2016-11-07 Hoffmann La Roche Nuevos compuestos biciclicos de 7 eslabones
RU2017109122A (ru) 2014-08-21 2018-09-21 Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед Способы лечения с использованием гетероциклических амидов в качестве ингибиторов киназы
WO2016128908A1 (en) * 2015-02-12 2016-08-18 Advinus Therapeutics Limited Bicyclic compounds, compositions and medicinal applications thereof
JP6701225B2 (ja) 2015-03-09 2020-05-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 三環式ｄｌｋ阻害剤及びその使用
RU2716136C2 (ru) * 2015-07-02 2020-03-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Бициклические лактамы и способы их применения
CN108602809B (zh) 2015-12-04 2022-09-30 戴纳立制药公司 异噁唑烷衍生的受体相互作用蛋白激酶1(ripk 1)的抑制剂
US10961258B2 (en) 2015-12-21 2021-03-30 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Heterocyclic amides as kinase inhibitors
US9815850B2 (en) 2016-02-05 2017-11-14 Denali Therapeutics Inc. Compounds, compositions and methods
US11071721B2 (en) 2016-12-02 2021-07-27 Genentech, Inc. Bicyclic amide compounds and methods of use thereof
US11072607B2 (en) 2016-12-16 2021-07-27 Genentech, Inc. Inhibitors of RIP1 kinase and methods of use thereof
CN110169087B (zh) 2017-01-05 2021-04-20 微软技术许可有限责任公司 重定向音频输出
CN119613408A (zh) 2017-07-14 2025-03-14 豪夫迈·罗氏有限公司 二环酮化合物及其使用方法
WO2019072942A1 (en) 2017-10-11 2019-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag BICYCLIC COMPOUNDS FOR USE AS INHIBITORS OF KINASE RIP1
MX2020003451A (es) 2017-10-31 2020-08-03 Hoffmann La Roche Sulfonas y sulfoxidos biciclicos y metodos de uso de los mismos.

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018300043B2 (en) 2021-04-01
IL271981A (en) 2020-02-27
PL3652178T3 (pl) 2024-05-06
US11098058B2 (en) 2021-08-24
CA3067944A1 (en) 2019-01-17
HRP20240354T1 (hr) 2024-06-07
US20240300974A1 (en) 2024-09-12
WO2019012063A1 (en) 2019-01-17
ES2973661T3 (es) 2024-06-21
PH12020500105A1 (en) 2020-11-09
EP3652178A1 (en) 2020-05-20
MA49560A (fr) 2020-05-20
CR20200002A (es) 2020-02-10
AU2018300043A1 (en) 2020-01-16
EP4397309B1 (en) 2026-06-10
EP4397309A3 (en) 2024-09-04
TW201920149A (zh) 2019-06-01
AU2023203292B2 (en) 2025-01-30
SG11202000333UA (en) 2020-02-27
EP4397309A2 (en) 2024-07-10
CA3185865A1 (en) 2019-01-17
NZ760749A (en) 2024-08-30
HUE065793T2 (hu) 2024-06-28
EP3652178B1 (en) 2024-01-24
EP4397309C0 (en) 2026-06-10
CN110914271A (zh) 2020-03-24
UA125448C2 (uk) 2022-03-09
LT3652178T (lt) 2024-04-10
MA49560B1 (fr) 2024-05-31
IL271981B (en) 2022-09-01
PT3652178T (pt) 2024-03-18
RU2020106375A3 (sr) 2022-03-25
SI3652178T1 (sl) 2024-05-31
AR112274A1 (es) 2019-10-09
TWI805595B (zh) 2023-06-21
IL294961A (en) 2022-09-01
FI3652178T3 (fi) 2024-03-19
US11834461B2 (en) 2023-12-05
JP2020526549A (ja) 2020-08-31
JP2023085449A (ja) 2023-06-20
RU2020106375A (ru) 2021-08-16
CN110914271B (zh) 2024-12-10
JP7258843B2 (ja) 2023-04-17
CO2020000134A2 (es) 2020-01-17
BR112020000771A2 (pt) 2020-07-14
PE20200793A1 (es) 2020-08-10
CL2020000101A1 (es) 2020-07-17
US20210139504A1 (en) 2021-05-13
AU2023203292A1 (en) 2023-06-22
JP7734163B2 (ja) 2025-09-04
AU2021204369A1 (en) 2021-07-29
KR20200030558A (ko) 2020-03-20
DK3652178T3 (da) 2024-03-25
KR20240065201A (ko) 2024-05-14
CN119613408A (zh) 2025-03-14
KR102664604B1 (ko) 2024-05-14
CA3067944C (en) 2023-03-14
US20190100530A1 (en) 2019-04-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3781571B1 (en) N-[4-oxo-2,3-dihydro-pyrido[3,2-b][1,4]oxazepin-3-yl]-5,6-dihydro-4h-pyrrolo[1,2-b]pyrazole-2-carboxamide derivatives and related compounds as rip1 kinase inhibitors for treating e.g. irritable bowel syndrome (ibs)
AU2023203292B2 (en) Bicyclic ketone compounds and methods of use thereof
US11673892B2 (en) Bicyclic compounds for use as RIP1 kinase inhibitors
EP3548484A1 (en) Bicyclic amide compounds and methods of use thereof
KR20150130311A (ko) 야누스 키나제 억제제로서의 n-(2-시아노 헤테로시클릴)피라졸로 피리돈
US20250282788A1 (en) Bicyclic ketone compounds and methods of use thereof
RU2797922C2 (ru) Бициклические кетоны и способы их применения
HK40062362B (en) Bicyclic pyrrolotriazolr ketone compounds and methods of use thereof
HK40062362A (en) Bicyclic pyrrolotriazolr ketone compounds and methods of use thereof