RS65365B1 - Derivati fenil-3,4-dihidroizohinolin-2(1h)-il-etan-1-ona kao pozitivni alosterni modulatori dopamin d1 receptora - Google Patents

Description

Opis

[0001] Pronalazak obezbeđuje određena jedinjenja povezana sa fenil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il-etan-1-onom, njihove farmaceutske kompozicije i jedinjenja za upotrebu u postupcima tretmana dopaminergičnih poremećaja CNS, uključujući Parkinsonovu bolest, Alzheimer-ovu bolest, šizofreniju i poremećaj pažnje sa hiperaktivnošću (ADHD).

[0002] Mnogi trenutno korišćeni lekovi deluju direktno ili indirektno preko dopamin receptora. Ovo uključuje agoniste dopamina i prekursor dopamina L-DOPA za Parkinsonovu bolest, lekove koji oslobađaju dopamin za poremećaj deficita pažnje i narkolepsiju i inhibitore ponovnog preuzimanja dopamina za depresiju. D1 receptor ima važnu ulogu u motornoj aktivnosti i nagrađivanju i specijalnu ulogu u održavanju viših kognitivnih funkcija za radnu memoriju, pažnju i izvršne funkcije (Amsten AF, Cereb. Cortex (2013) 123, 2269-2281). Pokušaji da se razviju D1 agonisti za kliničku upotrebu do sada nisu bili uspešni, što daje podsticaj traženju alternativnih pristupa za povećanje aktivnosti D1 receptora.

[0003] Jedan ovakav pristup je da se identifikuje alosterni potencijator, takođe poznat kao pozitivni alosterni modulator ili PAM, dopamin D1 receptora. (Svensson K, i saradnici, J. Pharmacol. Exp. Ther. (2017) 360:117-128). Alosterni modulatori su sredstva koja ili potenciraju (pozitivni alosterni modulator, ili PAM), ili inhibiraju (negativni alosterni modulator, ili NAM) efekat prirodnog liganda vezivanjem na mestu koje je različito od mesta ortosternog vezivanja na receptoru (alosterno mesto vezivanja). Povećanje afiniteta dopamina za D1 receptor, D1 potencijator može da pojača odgovor za endogeni dopamin, povećavajući D1 ton kada i gde se dopamin oslobađa. Ovaj način aktivnosti je u suprotnosti sa D1 agonistom, koji će da aktivira sve D1 receptore za koje ima pristup sve dok je prisutan. U životinjskim modelima kognitivne i lokomotorne aktivnosti, D1 agonisti pokazuju odnos doza-odgovor u obliku zvona, što je verovatno zbog prekomerne stimulacije pri većim dozama. Neki D1 agonisti takođe pokazuju brzi razvoj tolerancije zbog konstantne aktivnosti D1 receptora. Nasuprot tome, zato što bi D1 potencijator zavisio od endogenog tonusa i bio podvrgnut normalnoj povratnoj kontroli, može da ima mnogo nižu sklonost ka preteranoj stimulaciji. S obzirom na učešće dopamina i signalizacije D1 receptora u funkcijama centralnog nervnog sistema, D1 potencijator koji može da poveća aktivnost D1 receptora može da obezbedi alternativno i/ili poboljšano sredstvo za tretman određenih bolesti povezanih sa dopaminom.

[0004] Parkinsonova bolest je hronični, progresivni, neurodegenerativni poremećaj koji se karakteriše gubitkom dopaminergičnih neurona u mozgu. Parkinsonova bolest se manifestuje sa tremorom pri mirovanju pored drugih motornih simptoma (na primer bradikinezija i posturalna nestabilnost) i ne-motornih simptoma (na primer kognitivni poremećaj, poremećaj sna i depresija). Savremene terapije za tretman Parkinsonove bolesti uključuju primenu neselektivnih dopamin prekursora kao što je levodopa i agonista dopamin receptora. Direktno delovanje terapija agonistom dopamin receptora može takođe da bude povezano sa poremećajima kontrole impulsa, psihozama i pogoršanjem pažnje, zbog njihovog većeg afiniteta za D2 receptore. Šizofrenija je iscrpljujuća bolest sa složenim patološkim mehanizmima. Komponenta šizofrenije je poremećaj pažnje koji može da bude u vezi sa nedostatkom aktivnosti D1 receptora ili niskom regulacijom D1 receptora. Postoji hipoteza da aktivacija D1, selektivno preko modulacije D2, može da bude efikasna u tretmanu kognitivnog poremećaja povezanog sa šizofrenijom. Alzheimer-ova bolest je hronični, progresivni, neurodegenerativni poremećaj koji se karakteriše gubitkom neurona i sinapsi u cerebralnoj kori i određenim subkortikalnim regionima. Progresija bolesti uključuje poremećaj pažnje za koji postoji hipoteza da je bar delimično zbog smanjene aktivnosti D1 receptora; tako da aktivacija D1 može da obezbedi terapeutsku korist u tretmanu poremećaja pažnje povezanog sa Alzheimer-ovom bolešću. ADHD je neurorazvojni poremećaj koji se karakteriše otežanim održavanjem pažnje, povećanom aktivnošću, ili teškoćom u kontroli ponašanja koje odgovara godinama osobe. Pretpostavlja se da aktivacija D1 može da obezbedi terapeutsku korist u tretmanu ADHD. Prema tome, ostaje značajna nezadovoljena potreba za bezbednim i efikasnim tretmanom kognitivnih ili drugih neuroloških poremećaja povezanih sa šizofrenijom, Parkinsonovom bolešću, Alchajmer-ovom bolešću i/ili ADHD, kao što su alternativni i/ili poboljšani pozitivni alosterni modulatori dopamin D1 receptora (D1 PAM).

[0005] WO 2014/193781 navodi određena 3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il jedinjenja kao D1 PAMs za tretman kognitivnog poremećaja povezanog sa Parkinsonovom bolešću, Alzheimerovom bolešću, šizofrenijom, depresijom ili ADHD.

[0006] Ovaj pronalazak obezbeđuje određena nova jedinjenja koja su selektivni PAMs dopamin 1 receptora (D1) i pokazuju kombinovane prednosti farmakoloških karakteristika, kao što je potenciranje signalizacije humanog D1 receptora kao odgovor na dopamin, visoka oralna in vivo dostupnost i in vivo efikasnost u lokomotornoj aktivaciji životinja koje su naviknute na životnu sredinu. Zbog toga se veruje da će jedinjenja iz ovog pronalaska da budu korisna u tretmanu Parkinsnove bolesti, Alzheimerove bolesti, šizofrenije i/ili ADHD.

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da obebzede alternativni tretman za ove poremećaje. Pronalazak je definisan u pridodatom setu patentnih zahteva.

[0007] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I:

pri čemu:

R<1>je

ili

R<2>je -F ili -Cl;

R<3>je -F ili -Cl; i

R<4>je -H ili -F;

pod uslovom da kada je R<1>

tada je R<4>= -F.

[0008] Jedinjenja formule I su posebno korisna u jedinjenjima za upotrebu u tretmanu postupcima iz pronalaska, ali neke konfiguracije imaju prednost. Naredni odeljci opisuju takve konfiguracije koje imaju prednost. Mada ovaj pronalazak predstavljen formulom I obuhvata sve pojedinačne enantiomere i diastereomere, kao i smeše enantiomera i/ili diastereomera tih jedinjenja, uključujući racemate, prednost imaju jedinjenja sa apsolutnom konfiguracijom kako je niže navedeno. Razumljivo je da su ove preference primenljive na jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja i na nova jedinjenja iz pronalaska.

[0009] Posebno ostvarenje formule I je jedinjenje formule Ia:

pri čemu:

R<1>je

ili

R<2>je -F ili -Cl;

R<3>je -F ili -Cl; i

R<4>je -H ili -F;

pod uslovom da kada je R<1>

tada je R<4>= -F.

[0010] Posebno ostvarenje formule I je jedinjenje formule Ib:

koje u obliku slobodne baze može takođe da se označi kao 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1Hizohinolin-2-il]etanon.

[0011] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule I, Ia i/ili Ib i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent.

[0012] Naredna posebna ostvarenja su jedinjenja formule I ili Ia.

[0013] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0014] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0015] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0016] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0017] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0018] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

8

[0019] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0020] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0021] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

9

[0022] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je

[0023] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje jednog od konkretnih ostvarenja sa liste koja je prethodno data, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent. Na primer, za jedinjenja čija su ostvarenja ovde opisana razmatrani su i ko-kristali.

[0024] Jedinjenja iz ovog pronalaska su selektivni PAMs dopamin 1 (D1) receptora sa minimalnim delovanjem na dopamin 2 (D2) receptor. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu dalje da obezbede terapeutsku korist uz izbegavanje rizika od interakcija lek-lek. Kao takva, veruje se da bi jedinjenja iz ovog pronalaska bila korisna za tretman stanja u kojima smanjena aktivnost D1 igra ulogu a aktivacija D2 je nepoželjna, kao što su Parkinsonova bolest i šizofrenija, uključujući ublažavanje nekih povezanih simptoma kao što su simptomi motorike i kognitivni poremećaj povezan sa Parkinsonovom bolešću i kognitivni poremećaj i negativni simptomi povezani sa šizofrenijom, kao što su, na primer, kognitivni poremećaj ili demencija. Takođe se veruje da jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da budu korisna u poboljšanju simptoma motorike kod Parkinsonove bolesti kao monoterapija ili u kombinaciji sa drugim terapijama. Takođe se veruje da jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da budu korisna u lečenju određenih simptoma Alzheimer-ove bolesti kao što je kognitivni poremećaj, kao na primer blagi kognitivni poremećaj. Dalje, veruje se da bi jedinjenja iz ovog pronalaska bila korisna u lečenju određenih simptoma ADHD. Takođe se veruje da bi jedinjenja iz ovog pronalaska bila korisna u lečenju dopaminergičnih poremećaja CNS koji uključuju Parkinsonovu bolest, Alzheimer-ovu bolest, demenciju Lawy-evih tela (LBD), vaskularnu demenciju, šizofreniju, ADHD, depresiju, autizam, hronični mišićno skeletni bol, fibromialgiju, poremećaj kognitivnog oštećenja, poremećaj sna, pojačanu pospanost u toku dana, narkolepsiju, poremećaj radnog rasporeda, traumatično oštećenje mozga, hroničnu traumatičnu encefalopatiju, gojaznost i regulaciju apetita, poremećaj raspoloženja, letargiju, apatiju i poremećaje zavisnosti.

[0025] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, za upotrebu u postupku terapije. Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule Ia, za upotrebu u postupku terapije. Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule Ib, za upotrebu u postupku terapije.

[0026] U narednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata. Osim toga, ovaj aspekt pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u postupku lečenja Parkinsonove bolesti, kao na primer, kognitivnog poremećaja povezanog sa Parkinsonovom bolešću, koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata. U narednom ostvarenju ovog aspekta pronalaska, data je farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku ublažavanja poremećaja motorike povezanog sa Parkinsonovom bolešću, koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.

[0027] U narednom ostvarenju ovog aspekta pronalaska, data je farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku lečenja Alzheimer-ove bolesti, na primer, ublažavanjem kognitivnog poremećaja povezanog sa Alzheimer-ovom bolešću, koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.

[0028] Naredno ostvarenje ovog aspekta pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u postupku lečenja šizofrenije, kao na primer ublažavanja kognitivnog poremećaja povezanog sa šizofrenijom, koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.

[0029] Naredno ostvarenje ovog pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u postupku lečenja ADHD, koja uključuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.

[0030] U jednom ostvarenju ovog aspekta, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, za upotrebu u postupku lečenja Parkinsonove bolesti. U jednom određenom ostvarenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib za upotrebu u postupku tretmana kognitivnog poremećaja povezanog sa Parkinsonovom bolešću. U narednom određenom ostvarenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, za upotrebu u postupku ublažavanja poremećaja motorike povezanog sa Parkinsonovom bolešću..

[0031] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, za upotrebu u postupku tretmana šizofrenije, kao na primer u tretmanu kognitivnog poremećaja povezanog sa šizofrenijom.

[0032] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib za upotrebu u postupku tretmana ADHD.

[0033] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, Ia ili Ib, za upotrebu u postupku tretmana Alzheimer-ove bolesti, na primer u tretmanu kognitivnog poremećaja povezanog sa Alzheimer-ovom bolešću.

[0034] Dok je jedinjenje koje se koristi u postupcima moguće primeniti direktno bez ikakve formulacije, jedinjenje se obično primenjuje u obliku farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedinjenje formule I, Ia ili Ib, kao aktivni sastojak, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač i/ili ekscipijent. Ove kompozicije mogu da se primene direktno različitim putevima uključujući oralno, sublingvalno, nazalno, subkutano, intravenski i intramuskularno. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. Videti, na primer, Remington: Science and Practice of Pharmacy (University of Sciences in Philadelphia, ed., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005).

[0035] Kompozicije se preferirano formulišu u jediničnom doznom obliku, gde svaka doza sadrži od približno 0.5 do približno 800 mg aktivnog sastojka. Naziv "jedinični dozni oblik" se odnosi na fizički odvojene jedinice pogodne kao pojedinačne doze za humane subjekte i druge sisare, gde svaka jedinica sadrži prethodno odmerenu količinu aktivnog materijala izračunatu da dovede do željenog terapeutskog efekta, zajedno sa najmanje jednim pogodnim farmaceutski prihvatljivim nosačem, razblaživačem i/ili ekscipijentom. Razumljivo je da će lekar da odredi količinu jedinjenja koja se trenutno primenjuje u svetlu relevantnih okolnosti, uključujući stanje koje se tretira, izabrani način primene, određeno jedinjenje koje se primenjuje, starost, težinu i odgovor pojedinačnog pacijenta i ozbiljnost simptoma kod pacijenta. Predviđeno je da se jedinjenje iz pronalaska, kao na primer u farmaceutskoj kompoziciji iz pronalaska, koristi za lečenje Alzheimer-ove bolesti, Parkinsonove bolesti i/ili šizofrenije, kao na primer u tretmanu blagog kognitivnog poremećaja povezanog sa ovim bolestima trajnom terapijom.

[0036] Jedinjenje iz ovog pronalaska može da se koristi u kombinaciji sa drugim lekovima koji se koriste u tretmanu ili poboljšanju dopaminergičnih poremećaja CNS. Ovaj drugi lek(ovi) može da se primeni načinom i u količini kako se uobičajeno koriste, istovremeno ili odvojeno od jedinjenja iz ovog pronalaska. Na primer, drugi aktivni efikasni sastojci u tretmanu Parkinsonove bolesti koji mogu da se kombinuju sa jedinjenjem iz ovog pronalaska uključuju, ali bez ograničenja na: (a) prekursore dopamina kao što su levodopa; melevodopa, i etilevodopa; i (b) agoniste dopamina, uključujući pramipeksol, ropinirol, apomorfin, rotigotin, bromokriptin, kabergolin, i pergolid, (c) inhibitore oksidaze monoamina, uključujući selegilin i rasagilin, (d) inhibitore COMT uključujući tolkapon i entakapon, (e) inhibitore acetil holin esteraze, uključujući rivastigmin i donepezil, (f) anti-depresante, uključujući sertralin, citalopram, mirtazapin i trazodon. Dalje, na primer, drugi aktivni sastojci efikasni u tretmanu Alzheimer-ove bolesti koji mogu da se kombinuju sa jedinjenjem iz ovog pronalaska uključuju ali bez ograničenja na: inhibitore acetilholinsteraze uključujući rivastigmin i donepezil, antagonist NMDA uključujući memantin, neke antipsihotične lekove uključujući risperidon, kvetijapin, aripiprazol, olanzapin i pimavanserin, i antidepresante uključujući sertralin, citalopram, mirtazapin i trazodon.

[0037] Kako se ovde koristi, naziv "pacijent" se odnosi na sisara, na primer čoveka, kome je potreban tretman poremećaja ili bolesti. Čovek je preferirani pacijent. Kako se ovde koristi, pacijenti koji treba da se tretiraju sa jedinjenjima iz ovog pronalaska boluju od dopaminergičnog poremećaja CNS, i kao takvi dele etiopatološke aspekte za koje se zna da poremećaj signalizacije dopamina doprinosi ovim bolestima. Kako se ovde koristi dopaminergični poremećaji CNS uključuju Parkinsonovu bolest, Alzheimer-ovu bolest, demenciju Lewy-evih tela (LBD), vaskularnu demenciju, šizofreniju, ADHD, depresiju, autizam, hronični mišićnoskeletni bol, fibromialgiju, poremećaj kognitivnog oštećenja, poremećaj sna, povećanu pospanost u toku dana, narkolepsiju, poremećaj radnog rasporeda, traumatično oštećenje mozga, hroničnu traumatičnu encefalopatiju, gojaznost i regulaciju apetita, poremećaje raspoloženja, letargiju, apatiju i poremećaje zavisnosti. Identifikacija pacijenata sa ovim dopaminergičnim poremećajima CNS može da se postigne utvrđenim postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom.

[0038] Jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj, ili po redu kombinaciji sa prekursorom dopamina u tretmanu dopaminergičnog poremećaja kod pacijenta. Na primer, jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa prekursorom dopamina u tretmanu Parkinsonove bolesti kod pacijenta.

[0039] Jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa prekursorom dopamina u tretmanu Alzheimer-ove bolestisti kod pacijenta.

[0040] Jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa agonistom dopamina u tretmanu dopaminergičnog poremećaja kod pacijenta. Na primer, jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa agonistom dopamina u tretmanu Parkinsonove bolesti kod pacijenta.

[0041] Jedinjenje formule I, Ia, ili Ib može da se koristi u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa agonistom dopamina u tretmanu Alzheimer-ove bolesti kod pacijenta.

[0042] U ostvrenjima ovog pronalaska pacijent je čovek kod koga je dijagnostikovano da ima medicinski rizik, stanje ili poremećaj, kao što je dopaminergični poremećaj CNS, uz tretman sa ovde opisanim režimom doziranja. U onim slučajevima kada su poremećaji koji se mogu lečiti otkrivenim postupcima poznati prema utvrđenim i prihvaćenim klasifikacijama, kao što su AD, PD, LBD, njihove klasifikacije mogu da se nađu u različitoj, dobro poznatoj, medicinskoj literaturi. Na primer, trenutno, 5-to izdanje Diagnostic and Statistical Manual of Mental Dizorders (DSM-5), daje dijagnostički alat za identifikaciju mnogih od ovde opisanih poremećaja. Takođe, International Classification of Diseases, Tenth Revision (ICD-10), daje klasifikacije za brojne ovde opisane poremećaje. Stručnjak sa iskustvom će da prepozna da postoje alternativne nomenklature, nozologije i sistemi klasifikacije za ovde opisane poremećaje, uključujući način kako je opisano u DSM-5 i ICD-10, i da terminologija i sistemi klasifikacija napreduju sa napretkom medicinske nauke. Kognitivni poremećaj kod sujekata sa Parkinsonovom bolešću se uobičajeno označava kao neurokognitivni poremećaj.

Dijagnostički kriterijum u DSM-5 (5-to izdanje Diagnostic and Statistical Manual of Mental Dizorders) daje dokaze značajnog kognitivnog pada od prethodnog nivoa performansi (zabrinutost pojedinca ili izveštača dokumentovana neuropsihološkim testiranjem), a kognitivni deficiti mogu ili ne moraju da ometaju nezavisnost u svakodnevnim aktivnostima. To se kvalifikuje kao teški ili blagi neurokognitivni poremećaj. "Gubitak težine", kako se ovde koristi, se odnosi na smanjenje telesne težine i/ili na trajno regulisanje težine pri čemu tretman doprinosi održavanju telesne težine u okviru željenog opsega.

[0043] Kako se ovde koriste, nazivi "tretman", "lečenje", ili "ublažavanje" treba da se odnose na sve procese kojima može da se uspori, prekine, zaustavi, kontroliše i stopira progresija postojećeg poremećaja i/ili smanje njegovi simptomi, ali ne mora neophodno da dovede do potpune eliminacije svih simptoma.

[0044] Kako se ovde koristi, naziv "efektivna količina" jedinjenja formule I, Ia ili Ib se odnosi na količinu, to jest na dozu, koja je efikasna u pojačavanju dopaminom posredovanog odgovora kod pacijenta. Preferirana "efektivna količina" može da se odredi kao količina koja može da podstakne mere upozorenja kod pacijenta u poređenju sa pacijentom kada se ne leči. U određivanju efektivne količine ili doze jedinjenja formule I, I1 ili Ib, razmatraju se broji faktori, uključujući ali bez ograničenja na, jedinjenje koje se primenjuje i njegova određena formulacija; veličina, starost i opšte zdravstveno stanje pacijenta; stepen zahvaćenosti ili težine poremećaja; odgovor pojedinačnog pacijenta; način primene; i druge relevantne okolnosti.

[0045] Skraćenice koje su ovde korišćene su definisane na sledeći način:

Bn" se odnosi na benzil.

"CAS#" se odnosi na registarski broj hemijskih abstrakta.

"krotil" se odnosi na but-2-en-1-il.

"CNS" se odnosi na centralni nervni sistem.

"1D-NOESY" se odnosi na jednodimenzionalnu NMR spektroskopiju sa nuklearnim Overhauser efektom.

"DCM" se odnosi na dihlormetan ili metilen hlorid.

"DIPEA" se odnosi na N, N-diizopropiletilamin.

"dmso-d6" se odnosi na potpuno deuterisani dimetilsulfoksid.

"ee" se odnosi na enantiomerni višak.

"ESMS" se odnosi na elektrosprej masenu spektrometriju.

"EtOAc" se odnosi na etil acetat.

"h" se odnosi na sat ili sate.

"HATU" se odnosi na 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat ili N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N-metilmetanaminijum heksafluorofosfat N-oksid.

"HPLC" se odnosi na visoko efikasnu tečnu hromatografiju.

"LAH" se odnosi na litijum aluminijum hidrid.

"MeOH" se odnosi na metanol ili metil alkohol.

"min" se odnosi na minut ili minute.

"NMR" se odnosi na spektroskopiju nuklearne magnetne rezonance.

"PG" se odnosi na zaštitnu grupu.

"Ph" se odnosi na fenil.

"OAc" se odnosi na acetat.

"rac-" se odnosi na racematno ili racemat.

"RT" se odnosi na sobnu temperaturu ili temperaturu sredine.

"SFC" se odnosi na superkritičnu tečnu hromatografiju.

"TBDMS" se odnosi na terc-butildimetilsilil.

"TBDPS" se odnosi na terc-butildifenilsilil.

"THF" se odnosi na tetrahidrofuran.

"tR" se odnosi na vreme zadržavanja.

"m/m" se odnosi na težinu mase ili težinu kao jedinicu mase.

"mt%" se odnosi na težinski procenat.

"Z" se odnosi na benziloksikarbonil, -C(O)OCH2Ph, kao zaštitnu grupu

Opšta hemija

[0046] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade opštim postupcima poznatim i prihvatljivim u tehnici ili ovde opisanim procesima. Pogodni uslovi reakcija za faze u ovim šemama su dobro poznati u tehnici a odgovarajuće supstitucije rastvarača i ko-reagenasa su u okviru stanja tehnike. Isto tako, stručnjak sa iskustvom će razumeti da međuproizvodi sinteze mogu da se izoluju i/ili prečiste različitim dobro poznatim tehnikama ukoliko je potrebno ili poželjno, a često je moguće da se različiti međuproizvodi koriste direktno u narednim fazama sinteze uz malo ili bez prečišćavanja. Osim toga, stručnjak sa iskustvom će prihvatiti da u nekim okolnostima redosled uvođenja radikala nije kritičan.

Šema 1

[0047] Šema 1 opisuje izradu jedinjenja 8. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će prepoznati da odgovarajuće disupstituisani fenilalanin 1 (na primer, X = Br, Cl, I; R<4>= H, F), rastvoren u polarnom aprotičnom rastvaraču može da bude esterifikovan sa odgovarajućom jakom kiselinom da se dobije esterifikovana so 2. Nakon toga se acilacijom ispiranjem soli sa vodenim rastvorom baze dobija slobodna baza, rastvaranjem u aprotičnom rastvaraču i dodavanjem odgovarajućeg kiselog hlorida može da dobije 3. Ciklizacija 2-supstituisanog N-acilovanog fenilalanin metil estra 3 tretmanom sa paraformaldehidom u odgovarajućoj jakoj kiselini i mešanjem da se dobije tetrahidroizohinolin 4 je dobro poznato u tehnici.

Demetilacija i dekarboksilacija može da se postigne tretmanom sa vodenim rastvorom kiseline i mešanjem pod refluksom da se dobije 5 kao odgovarajuća so amina. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će prepoznati da N-zaštićeni tetrahidroizohinolin 6 može d se formira rastvaranjem soli amina 5 u odgovarajućem polarnom aprotičnom rastvaraču, dodavanjem baze i pogodnog anhidrida ili alkil hloroformata da se dobije tercbutil karbamat 6. Nakon toga može da se izvede redukcija u derivat metanola 7 korišćenjem niza redukcionih sredstava, kao što su hidrid metala, borhidridna so ili diboran u polarnom aprotičnom rastvaraču. O-zaštićeni tetrahidroizohinolin 8 može da se dobije prvo tretiranjem N-zaštićenog tetrahidroizohinolina 7 sa odgovarajućom jakom kiselinom i koncentrovanjem pod vakuumom. Nakon toga, so amina može da se rastvori u odgovarajućem aprotičnom rastvaraču, tretira sa bazom i odgovarajućom zaštitnom grupom (PG) (na primer, PG = OSi, OBn, OMOM, itd.) da se dobije 8. Na primer, zaštita primarnog alkohola sa kiselo stabilnom silil grupom kao što su TBDMS ili TBDPS, je dobro poznata u tehnici.

Šema 2

[0048] Šema 2 ilustruje alternativni način izrade potrebnog supstituisanog međuproizvoda 3 (na primer, X = Br, Cl, I; R<4>= F). Stručnjak sa iskustvom u tehnici će da prepozna da Horner-Wadsworth-Emmons kondenzacija između odgovarajuće disupstituisanog benzaldehida 13 (R<4>= F) i N-zaaštićenog amino-2-dimetoksifosforil acetata 14 može da se koristi za izradu en-karbamata 15 (na primer, PG = Z). Nakon toga se asimetičnom redukcijom pod H2sa asimetričnim pomoćnim, na primer, sa Rh(I) tranzicionim metalnim katalizatorom, što je dobro opisano u tehnici, dobija N-zaštićeni 16. Uklanjanje N-zaštitnih grupa može da se izvrši pod različitim uslovima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici, da se dobije 3. Naknadne transformacije na jedinjenju 3 mogu da se izvrše kao u Šemi 1 da se dobije jedinjenje 8 (na primer, X = Br, Cl, I; R<4>= F).

Šema 3

[0049] Šema 3 opisuje sintezu jedinjenja tipa I’. Formiranje imina od tetrahidroizohinolina 8 može da se izvrši pod različitim oksidativnim uslovima koje prepoznaje stručnjak sa iskustvom, specifičnom halogenacijom sekundarnog amina i nakon toga eliminacijom sa odgovarajućom jakom bazom da se dobije dihidroizohinolin 9. Stereoselektivna Grignard reakcija može da se koristi za tretiranje imina 9 sa pogodnim alkilmagnezijum halidom da se dobije trans tetrahidroizohinolin 10. Relativna konfiguracija tetrahidroizohinolin 10 može da se odredi odgovarajućim eksperimentom NMR spektroskopije, posebno 1D-NOESY. Nakon toga, N-acilacija može da se izvede tehnikama udvajanja amida koje su dobro poznate u tehnici, na primer, benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfatom u prisustvu blage nenukleofilne baze, da se izradi jedinjenje 11. Formiranje ugljenik-ugljenik veze koristeći odgovarajuće supstituisano jedinjenje 11 (na primer, X = Br, Cl, I, itd.) može da se izvrši pod katalizom tranzicije metala, koristeći na primer, Pd, Pt, Ni, ili Cu, sa odgovarajućim boratnim estrom ili trifluoroboranuidnom solju, kako je dobro poznato u tehnici. Alternativno, može da se postigne udvajanje pod uslovima Heck- ili Sonogashira-tipa sa odgovarajuće supstituisanim alkenom ili alkinom, tim redom, kao što je dobro poznato u tehnici. Na primer, može da se izvrši unakrsno udvajanje 11 posredstvom paladijuma sa odgovarajuće supstituisanim ciklopropil trifluoroboranuidom da se dobiju supstituisana ciklopropil jedinjenja tipa 12. Pored toga, može da se izvrši unakrsno udvajanje 11 posredstvom paladijuma sa odgovarajuće supstituisanim alkenom da se dobiju alkil supstituisana jedinjenja tipa 12. Stručnjak sa iskustvom će da prepozna da deprotekcija zaštićenog alkohola 12, gde je PG = OSi, OBn, OMOM itd., može da se izvrši pod različitim uslovima. Na primer, silil zaštitna grupa može da se ukloni sa tetrabutilamonijum fluoridom, da se dobiju asimetrična jedinjenja tip I’.

[0050] U narednim ilustrativnim izradama i primerima, rastvarači su generalno uklonjeni p od sniženim pritiskom (evaporisani). U nekim procedurama, navedeni prinosi predstavljaju sirove prinose za produkte koji su izolovani evaporacijom ili filtracijom i korišćeni direktno bez naknadnog prečišćavanja. Relativna stereohemija koja se odnosi na radni okvir opisanog tetrahidroizohinolina je identifikovana odgovarajućom NMR spektroskopijom, posebno 1D-NOESY. U slučaju konfiguracije koja se odnosi na supstituisane ciklopropil grupe u supstitucijama bočnog lanca, relativna konfiguracija je opisana bez određivanja apsolutne stereohemije. U slučajevima drugih dodatnih asimetričnih centara u supstitucijama bočnog lanca, nije određena apsolutna konfiguracija. U oba od ovih slučajeva, diastereomerni parovi su označeni kao "Izomer 1" ili "Izomer 2" kada su razdvojeni tehnikama asimetrične hromatografije.

Izrada 1

Metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorid

[0051]

[0052] 2-Bromo-D-fenilalanin (22.4 g, 91.8 mmol) se rastvori u MeOH (459 mL). Na sobnoj temperaturi se doda acetil hlorid (65.3 mL, 917.7 mmol) i dobijena reaktivna smeša se meša 36 h. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (27.2 g, >99% prinos). ESMS (m/z) 258/260 [M-Cl,<79>Br/<81>Br].

Izrada 2

Metil 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninat

[0054] Metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorid (27.2 g, 92.3 mmol) se rastvori u dvofaznoj smeši DCM (923 mL) i vode (185 mL). Na RT se dodaju NaHCO3(31 g, 369.4 mmol) i metil hlorformat (7.9 mL, 101.6 mmol) i dobijena smeša se meša 2.5 h. Smeša se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa DCM. Organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 10-75% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (29.1 g, >99% prinos). ESMS (m/z): 316/318 [M+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 3

Dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilat

[0055]

[0056] Smeša metil 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninata (29.1g 92.1 mmol) i paraformaldehida (9.13 g, 101.3 mmol) se meša 7 h na RT u glacijalnoj sirćetnoj kiselini (115 mL, 2 mol) koja sadrži koncentrovanu H2SO4(38.4 mL, 719.9 mmol). Reaktivna smeša se podeli između vode i EtOAc, slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc.

Kombinovani organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-40% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (27.6 g, 91% prinos). ESMS (m/z): 328/330 [M+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 4

Metil (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilat hidrohlorid

[0057]

[0058] Dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilat (27.6 g, 84mmol) se rastvori u 5 N rastvoru HCl (330.6 mL, 1.7 mol) i dobijena smeša se zagreva pod refluksom tri dana. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa dietil etrom i suši pod vakuumom na 40 °C u toku noći da se dobije hidrohlorid (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (1:1) (20.8 g, 71.1 mmol). U smešu hidrohlorida (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (1:1) (20.8 g, 71.1 mmol) u MeOH (474 mL) se na 0 °C doda acetil hlorid (50.6 mL, 711.0 mmol). Smeša se zagreje na RT i meša 36 h. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (21.9 g, 85% prinos). ESMS (m/z): 270/272 [M-Cl,<79>Br/<81>Br].

Izrada 5

2-terc-Butil-3-metil-(3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilat

[0059]

[0060] Metil (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilat hidrohlorid (21.0 g, 68.5 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (685 mL). Na RT se dodaju zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(685 mL, 17.5 mol) i di-terc-butildikarbonat (29.9 g, 137.0 mmol) i dvofazna smeša se meša 90 min na RT. Smeša se ekstrahuje sa EtOAc i organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 5-50% gradijentom EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (19.5 g, 77% prinos). MS (m/z): 270/272 [M-<t>Boc+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 6

terc-Butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilat

[0061]

[0062] 2 M rastvor litijum borohidrida (99.4 mL, 198.8 mmol) u THF i MeOH (10.1 mL, 248.5 mmol) se dodaju u rastvor 2-terc-butil-3-metil-(3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata (18.4 g, 49.7 mmol) u THF (497 mL) i dobijena smeša se meša 40 min na RT. Reakcija se neutrališe sa vodom i ekstrahuje sa EtOAc. Organski ekstrakti se razdvoje, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom.

Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-80% EtOAc u heksanima. Rastvarač ispari iz traženih hromatografskih frakcija i dobijeni ostatak se suši pod visokim vakuumom u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (19.1 g, >99% prinos). ESMS (m/z): 286/288 [M<t>Bu+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 7

[(3R)-5-Bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silan

[0063]

[0064] Trifluorosirćetna kiselina (75.5 mL, 998.3 mmol) se na sobnoj temperaturi doda u rastvor terc-butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata (15.5 g, 45.3 mmol) u DCM (226 mL). Reaktivna smeša se meša 30 min na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se suši pod vakuumom da se dobije [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanol 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina kao vlažna čvrsta supstanca. [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanol 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina se rastvori u DCM (753 mL). Dodaju se 1H-imidazol (51.3 g, 753 mmol), N,N-dimetil-4-piridinamin (460 mg, 3.77 mmol) i t-butildimetilhlorsilan (13.6 g, 90.4 mmol) i dobijena smeša se meša na RT u toku noći. Doda se zasićeni rastvor NH4Cl i smeša se ekstrahuje sa DCM. DCM sloj se izdvoji, suši preko Na2SO4i filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se kombinuje sa skoro potpuno istom reakcijom izvedenom sa terc-butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilatom (6.6 g, 19.4 mmol). Kombinovani sirovi produkt se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 5-40% gradijentom EtOAc u heksanima, da se nakon uparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (14.3 g, 89% prinos). ESMS (m/z): 356/358 [M+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 8

[(3R)-5-Bromo-3,4-dihidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silan

[0065]

[0066] [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silan (4.2 g, 11.8 mmol) se rastvori u dietili etru (118 mL) i doda se N-hlorsukcinimid (2.36 g, 17.7 mmol). Dobijena smeša se meša 30 min na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom.

Dobijeni ostatak se rastvori u 5% rastvoru KOH u MeOH (42.0 mL, 30.3 mmol) i meša 30 min na RT. Smeša se sipa u vodu i ekstrahuje sa DCM. DCM ekstrakti se suše preko Na2SO4,filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-100% EtOAc u heksanima, da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.40 g, 82% prinos). ESMS (m/z): 354/356 [M+H,<79>Br/<81>Br].

[0067] Alternativno, N-hlorsukcinimid (106.7 g, 790 mmol) se u toku 30 min na RT dodaje u rastvor [(3R)-5-bromo-3,4-dihidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silana (220 g, 520 mmol) u THF (3.85 L) u odgovarajućoj posudi uz mešanje. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom a ostatak se u toku 30 min na RT rastvori u 5% m/m KOH u metanolu (2.2 L, 1.7 mola) uz mešanje. Smeša se doda u vodu (3 L) i ekstrahuje tri puta sa DCM (3 x 1 L). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog MgSO4i filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (210 g, >99% prinos). ESMS (m/z): 354/356 [M+H,<79>Br/<81>Br].

Izrada 9

[(1S,3R)-5-Bromo-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetilsilan

[0068]

[0069] [(3R)-5-bromo-3,4-dihidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silan (3.4 g, 9.6 mmol) se rastvori u dietili etru (160 mL) i ohladi na -78 °C u kupatilu suvi led – aceton. U kapima se doda 3M rastvor metilmagnezijum hlorida u THF (26.9 mL, 80.6 mmol). Smeša polako zagreva na RT i meša u toku noći. Reaktivna smeša se polako neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl. Dobijena smeša se ekstrahuje sa DCM, suši preko NaSO4i filtrira a filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se kombinuje sa materijalom iz u suštini iste reakcije izvršene sa 1.7 mmol [(3R)-5-bromo-3,4-dihidroizohinolin-3-il]metoksiterc-butil-dimetil-silana. Kombinovani ostaci se prečiste fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-65% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (3.78 g, >99% prinos). ESMS (m/z): 370/372 [M+H,<79>Br/<81>Br].

[0070] Relativna konfiguracija jedinjenja [(1S,3R)-5-bromo-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silana se odredi pomoću NMR spektroskopije koristeći 1D-NOESY. Selektivnom ekscitacijom metil grupe na 1.30 ppm dobija se porast NOE za Ha na 3.11 ppm. Ovo poboljšanje NOE je samo u skladu sa konfiguracijom u kojoj su metil i Ha na istoj strani prstena (trans izomer) zato što su u cis izomeru protoni metil grupe previše udaljeni od Ha da bi pokazali NOE. Kako je poznato da je apsolutna hemija na položaju 3 = R, tada se zaključuje da je apsolutna hemija na položaju 1 = S.

Izrada 10

1-[(1S,3R)-5-bromo-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon

[0071]

[0072] 2,6-Dihlorfenilsirćetna kiselina (3.7 g, 18 mmol) se kombinuje sa [(1S,3R)-5-bromo-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silanom (5 g, 13.5 mmol), HATU (7.7 g, 20 mmol) i DIPEA (7.1 mL, 41 mmol) u DCM (70 mL). Smeša se meša u struji azota 2 h na RT. Reaktivni rastvor se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-25% EtOAc u heksanima da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (6.2g, 81% prinos). ESMS (m/z): 558 (M+1).

Izrada 11

trans-Etil-2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilat

[0073]

[0074] 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon (500 mg, 0.9 mmol) se u mikrotalasnoj boci kombinuje sa kalijum [trans-2-etoksikarbonilciklopropil]-trifluoro-boratom (300 mg, 1.3 mmol; videti PCT/FR2013/053057), KH2PO4(370 mg, 2.7 mmol) i 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan kompleksom (115 mg, 0.1 mmol,) u 1,4-dioksanu (8 mL, 93.2 mmol) i vodi (2 mL). Boca se zatvori, prečisti sa azotom i zrači mikrotalasnima 2 h na 120 °C. Reaktivni rastvor se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-25% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša transizomera (245mg, 46% prinos). ESMS (m/z): 590 (M+1).

Izrada 12

1-[(1S,3R)-3-[[terc-Butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[trans-2-(2-hidroksi-2-metilpropil)ciklopropil]-1-metil-3,4-di- hidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon

[0075]

[0076] trans-Etil 2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-1-metil-3,4-di- hidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilat (240 mg, 0.4 mmol) se meša u THF (4 ml) i ohladi na 0 °C. U kapima se pomoću šprica na 0 °C u toku 5 min dodaje 3 M rastvor metilmagnezijum hlorida u THF (1.75 mL, 5.25 mmol). Dobijena smeša se meša 1 h u struji azota, neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc.

Organski sloj se izdvoji, suši preko Na2SO4, filtrira i dobijeni filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša transizomera okok ciklopropil supstituenta, pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. ESMS (m/z): 576 (M+1).

Izrada 13

cis-Etil 2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilat

[0077]

[0078] Koristeći u suštini postupak opisan u Izradi 2, 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon (500 mg, 0.9 mmol) se kombinuje sa kalijum [cis-2-etoksikarbonilciklopropil]-trifluoroboratom (WZ5-E16784-076-B, 300 mg, 1.3 mmol; videti PCT/FR2013/053057) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša cis izomera (280mg, 53% prinos). ESMS (m/z): 590 (M+1).

Izrada 14

1-[(1S,3R)-3-[[terc-Butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metilpropil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon Izomer 1 i 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metilpropil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon Izomer 2

[0080] Koristeći u suštini postupak opisan u Izradi 3, smeša cis-etil 2-[(1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilata (280 mg, 0.5 mmol) i 3M rastvor metilmagnezijum bromida u THF (2 mL, 6 mmol), uz naknadno prečišćavanje fleš hromatografijom na silika gelu, koristeći gradijent 0-25% EtOAc u heksanima, nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija, dobijaju se naslovljena jedinjenja kao razdvojeni cis izomeri, 1-[(1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metil-propil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon Izomer 1 (110mg, 38% prinos) i 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metilpropil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon Izomer 2 (65mg, 23% prinos). ESMS (m/z) za svaki: 576 (M+1).

Izrada 15

4-[(1S,3R)-3-[[terc-Butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2-hlor-6-fluorofenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]butan-2-on

[0081]

[0082] 1-[(1S,3R)-5-Bromo-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon (2 g, 3.7 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (169 mg, 0.2 mmol) i di-terc-butil-(1-fenilindol-2-il)fosfan (187 mg, 0.55 mmol) se suspenduju u DMF (12.3 mL). Dodaju se N,N-dicikloheksilmetilamin (0.9 mL, 4 mmol) i but-3-en-2-ol (0.45 mL, 5.2 mmol) i smeša se degasira propuštanjem mehurića azota u toku 10 min. Reaktivna posuda se zatvori i zagreva 1.5 h na 100 °C, uz mešanje. Reaktivna smeša se ohladi na RT i razblaži sa EtOAc. Organski sloj se izdvoji, ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, sa gradijentom 5-30% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela pena (1.5 g, 75% prinos). ESMS (m/z): 532 (M+1).

Izrada 16

1-((1S,3R)-3-(((terc-Butildimetilsilil)oksi)metil)-5-((R)-4,4-difluoro-3-metil-3-((trimetilsilil)oksi)butil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hlor-6-fluorofenil)etan-1-on i 1-((1S,3R)-3-(((terc-Butildimetilsilil)oksi)metil)-5-((S)-4,4-difluoro-3-metil-3-((trimetilsilil)oksi)butil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2- hlor-6-fluorofenil)etan-1-on

[0083]

[0084] 4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(2-hlor-6-fluorofenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]butan-2-on (580 mg, 1.1 mmol) i 18-kruna-6 (29 mg, 0.1 mmol) se rastvore u 1,2-dimetoksietanu (5.5 mL). Doda se (difluorometil)trimetilsilan (0.30 mL, 2 mmol), a nakon toga CsF (17 mg, 0.1 mmol). Smeša se zagreje na 60 °C i meša u toku noći. Dodaju se nove količine (difluorometil)trimetilsilana (0.30 mL, 2 mmol), 18-kruna-6 (29 mg, 0.1 mmol,) i CsF (17 mg, 0.1 mmol) i reaktivna smeša se meša 4 h na 60 °C. Smeša se ohladi na RT, razblaži sa EtOAc i izdvojeni organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, sa gradijentom 0-10% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao bela pena (493 mg, 68% prinos). ESMS (m/z): 656 (M+1).

Izrada 17

Metil (Z)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)akrilat

[0085]

[0086] Metil 2-(benziloksikarbonilamino)-2-dimetoksifosforil-acetat (25.5 g, 76.9 mmol) se rastvori u DCM (250 mL) i rastvor ohladi na 0 °C. Doda se 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (12 mL, 79.9 mmol) i smeša se meša 30 min na 0 °C. Polako se u toku 20 min na 0 °C dodaje rastvor 2-bromo-3-fluoro-benzaldehida (13.0 g, 64 mmol) u DCM (250 mL). Smeša se meša 2 h na 0 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje i po redu ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (200 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (200 mL). Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca rekristališe iz vrućeg EtOAc i sakupi se filtriranjem, da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (25 g, 80% prinos). ESMS (m/z): 407 (M+1).

Izrada 18

Metil (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)propanoat BMD-E17046-003

[0087]

[0088] Unutar komore sa rukavicama se u autoklav bocu koja sadrži metil (Z)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)akrilat (26 g, 63.8 mmol) doda MeOH (300 mL). Doda se [((R)-terc-butilmetilfosfino)(di-terc-butilfosfino)amin](1,5-ciklooktadien)rodijum(I) tetrafluoroborat (430 mg, 0.8 mmol) i autoklav boca se zatvori i ukloni iz komore. Smeša se ispere sa H2gasom u toku 15 sekundi i podvrgne pritisku H2od 100 psi. Dobijena smeša se meša 15 h na RT. Autoklav boca se otvori i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca, pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja (26.3 g, 98% prinos). ESMS (m/z): 410 (M+1).

[0089] Za dobijanje analitički čistog uzorka, deo sirovog produkta (66 mg) se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 15% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije produkt kao bela čvrsta supstanca. Asimetrična HPLC analiza (CHIRALCEL<®>OJ-H kolona, 0.2% izopropanol/MeOH, 1 mL/min): glavni enantiomer tR: 2.981 min, sporedni enantiomer tR: 3.557 min. Izmereno >99% ee.

Izrada 19

Metil (R)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)-2-((metoksikarbonil)amino)propanoat

[0090]

[0091] Metil (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)propanoat (21.25 g, 51.8 mmol) se rastvori u DCM (110 mL) i doda se 33% rastvor HBr u sirćetnoj kiselini (28.1 mL, 155 mmol). Dobijena smeša se meša 1h na RT. Dodaju se voda (100 mL) i DCM (100 mL) i dobijena smeša se energično meša 15 min. Organski sloj se izdvoji i odbaci. DCM (200 mL) i Na2CO3(35.1 g, 331.5 mmol) se dodaju u vodeni sloj. U smešu se doda metil hlorformat (5.2 mL) i dobijena smeša se meša na RT u toku noći. Smeša se ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije nalovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (13.6 g, 78% prinos). ESMS (m/z): 333 (M+1).

Izrada 20

Hidrohlorid (R)-5-bromo-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline

[0092]

[0093] Metil (R)-3-(2-bromo-3-fluorofenil)-2-((metoksikarbonil)amino)propanoat (17 g, 50.9 mmol) i paraformaldehid (6.9 g, 76.4 mmol) se suspenduju u sirćetnoj kiselini (128 mL). Rastvor se ohladi na 0 °C i doda se koncentrovana H2SO4(43 mL). Dobijena smeša se zagreje na 35 °C i meša u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na RT i sipa u vodu (200 mL).

Dobijena suspenzija se ekstrahuje sa EtOAc i kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u koncentrovanoj HCl (231 mL) i dobijena smeša se zagreva na 120 °C u toku noći u boci ogruglog dna opremljenoj sa povratnim kondenzatorom. Reaktivna smeša se ohladi na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom na 50 °C. Dobijeni ostatak se suši na 40 °C pod vakuumom u toku 18 h da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojna čvrsta supstanca (15 g, 94% prinos). ESMS (m/z): 273 (M+1).

Izrada 21

(R)-(5-bromo-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metanol

[0094]

[0095] Hidrohlorid (R)-5-bromo-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (9.95 g, 32.0 mmol) se suspenduje u THF (80 mL) i smeša ohladi na 0 °C. Polako se dodaje 1M rastvor bor-tetrahidrofuran kompleksa (96 mL, 96 mmol). Smeša se zagreje na 60 °C i meša u toku noći. Reaktivna smeša ohladi na 0 °C i dodaju se MeOH (20 mL) i zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (40 mL) i smeša meša 10 min na RT. Doda se 5N vodeni rastvor HCl (60 mL) i dobijena smeša se zagreva 4 h na 45 °C. Smeša se ohladi na 0 °C i doda se 21 mt% koncentrovanog vodenog rastvora NH4OH. Smeša se zagreje na RT. Dobijena smeša se ekstrahuje sa 3:1 smešom CHCl3:izopropanol. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bež čvrsta supstanca (9.5 g, 86% prinos). ESMS (m/z): 259 (M+1).

Izrada 22

(R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin

[0096]

[0097] (R)-(5-Bromo-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metanol (12.6 g, 48.3 mmol) se rastvori u smeši DCM (185 mL) i DMF (146 mL). Dodaju se imidazol (16.4 g, 241.5 mmol) i 4,4-dimetilaminopiridin (118 mg, 1 mmol), a nakon toga se doda tercbutilhlordifenilsilan (13.8 mL, 53.1 mmol). Dobijena smeša se meša 1h na RT. Doda se MeOH (100 mL) i smeša se meša još 1 h. Doda se zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (200 mL) i smeša se ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa gradijentom 2-50% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao ulje (10.5 g, 45% prinos). ESMS (m/z): 498 (M+1).

Izrada 23

(R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-3,4-dihidroizohinolin

[0098]

[0099] (R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (10.9 g, 21.9 mmol) se rastvori u THF (200 mL) i doda se N-hlorsukcinimid (4.4 g, 32.9 mmol). Dobijena smeša se meša 40 min na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u 0.75M rastvoru KOH u MeOH (100 mL) i meša 30 min na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (50 mL) i ekstrahuje sa DCM.

Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-50% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (9.63 g, 88% prinos). ESMS (m/z): 496 (M+1).

Izrada 24

(1S,3R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin

[0101] (R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-3,4-dihidroizohinolin (7.5 g, 15 mmol) se u atmosferi azota rastvori u terc-butil metil etru (190 mL) i rastvor se ohladi na -15 °C. U kapima se uz mešanje dodaje 3M rastvor metil-magnezijum hlorida u THF (20 mL, 60 mmol) i reaktivna smeša se zagreje na RT i meša narednih 2h. Smeša se ohladi na 0 °C i dodaju se MeOH (4 mL) i zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (4 mL) tim redom. Dobijena smeša se ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 2-5% terc-butil metil etrom u DCM, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje (1.7 g, 23% prinos). ESMS (m/z): 512 (M+1).

Izrada 25

1-[(1S,3R)-5-Bromo-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon

[0102]

[0103] (1S,3R)-5-Bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (5.2 g, 10.1 mmol) se rastvori u DMF (101 mL). Dodaju se 2-(2-Hlor-6-fluoro-fenil)sirćetna kiselina (2.5 g, 13.2 mmol), 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat (5 g, 13.2 mmol) i DIPEA (8.8 mL, 50.6 mmol) tim redom i dobijena smeša se meša na RT u toku noći. Doda se voda (200 mL) i smeša se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-25% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela pena (6.3 g, 91% prinos). ESMS (m/z): 682 (M+1).

Izrada 26

1-[(1S,3R)-3-[[terc-Butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-(3-hidroksi-3-metil-but-1-inil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluorofenil)etanon

[0104]

[0105] 1-[(1S,3R)-5-Bromo-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon (5.8 g, 8.5 mmol), tri-tercbutilfosfin(hlor)(krotil)paladijum(II) (675 mg, 1.7 mmol) i bakar 2-tiofenkarboksilat (258 mg, 1.35 mmol) se dodaju u bocu okruglog dna zapremine 500 mL. Boca se isprazni i napuni sa azotom. Dodaju se DMF (60 mL), DIPEA (6 mL, 42.5 mmol) i 2-metilbut-3-yn-2-ol (4.1 mL, 42.2 mmol). Reaktivna smeša se zagreje na 40 °C i meša u toku noći. Smeša se ohladi na RT, razblaži sa EtOAc i faze se razdvoje. Organski sloj se po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 20-40% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela pena (5.4 g, 93% prinos). ESMS (m/z): 686 (M+1).

Izrada 27

1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon

[0106]

[0107] Par šejker se prečisti sa azotom i doda se 5 mt% sulfidirana platina na ugljeniku (2.5 g). Posuda se ponovo prečisti sa azotom. Doda se EtOAc (50 mL). Doda se rastvor 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-(3-hidroksi-3-metil-but-1-inil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanona (5.4 g, 7.9 mmol) u EtOAc (50 mL). Reaktivna posuda se prečisti sa H2gasom i podvrgne pritisku H2od 60 psi. Reaktivna smeša se mućka 3 h na RT. Doda se nova količina 5 mt% sulfidirane platine na ugljeniku (1.21 g) suspendovane u EtOAc (30 mL) i posuda podvrgne pritisku H2od 60 psi. Reaktivna posuda se mućka dodatnih 8 h. Posuda se oslobodi pritiska i prečisti sa azotom. Dobijena suspenzija is filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% EtOAc u heksanima (gradijent 0-100%), da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela pena (5.33 g, 7.72 mmol). MS (m/z): 690.4 (M+1).

Izrada 28

trans-Etil 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2-hlor-6-fluorofenil)acetil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)ciklopropan-1-karboksilat

[0108]

[0109] 1-[(1S,3R)-5-Bromo-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon (665 mg, 1 mmol), racematni kalijum [(trans-2-etoksikarbonilciklopropil]-trifluoroborat (CAS# 1612792-88-7; videti PCT/FR2013/053057; December 12, 2013) (257 mg, 1.2 mmol), di(1-adamantil)-nbutilfosfonijum jodid (50 mg, 0.1 mmol), [(di(1-adamantil)-butilfosfin)-2- amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat (75 mg, 0.1 mmol) i Cs2CO3(631 mg, 1.9 mmol) se suspenduju u smeši toluena (10 mL) i vode (1 mL). Smeša se degasira 5 min sa azotom i bočica se zatvori i zagreva na 100 °C uz mešanje u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na RT i razblaži sa EtOAc. Dobijena smeša se po redu ispere sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl i slojevi se razdvoje.

Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% etil tercbutil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca (448 mg, 61% prinos). ESMS (m/z): 716 (M+1).

Izrada 29

1-[(1R,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[(trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)etanon

[0110]

[0111] Smeša trans-etil 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2-hlor-6-fluorofenil)acetil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)ciklopropan-1-karboksilata Izomer 1 i trans-etil 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2-hlor-6-fluorofenil)acetil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)ciklopropan-1-karboksilata Izomer 2 (440 mg, 0.6 mmol) se rastvori u THF (4 mL) i ohladi na 0 °C. Polako se u toku 10 min dodaje 1M rastvor metilmagnezijum bromida u THF (1.4 mL, 1.4 mmol) i dobijena reaktivna smeša se zagreje na RT i meša u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na 0 °C i doda se nova količina 1M rastvora metilmagnezijum bromida u THF (1.4 mL, 1.4 mmol). Reaktivna smeša se zagreje na RT i meša 8 h. Smeša se neutrališe sa MeOH (130 mL) i meša na RT u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i dobijeni rastvor se po redu ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Slojevi se razdvoje i organska faza se suši preko MgSO4i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% metil terc-butil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca (245 mg, 42% prinos). ESMS (m/z): 702 (M+1).

Izrada 30

1-[(1S,3R)-5-bromo-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6- dihlorfenil)etanon

[0112]

[0113] (1S,3R)-5-bromo-3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (500 mg, 1 mmol), 2-(2,6-dihlorfenil)sirćetna kiselina (260 mg, 1.3 mmol) i 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat (482 mg, 1.3 mmol) se suspenduju u DMF (10 mL). Doda se DIPEA (0.85 mL, 4.9 mL) i smeša se meša 72 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Slojevi se razdvoje i organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 5-15% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela pena (680 mg, 0.97 mmol). ESMS (m/z): 698 (M+1).

Izrada 31

trans Etil 2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-di- hidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilat

[0114]

[0115] 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]- 2-(2,6-dihlorfenil)etanon (604 mg, 0.9 mmol), racematni kalijum [(trans-2-etoksikarbonilciklopropil]-trifluoroborat (CAS# 1612792-88-7; videti PCT/FR2013/053057; December 12, 2013) (228 mg, 1 mmol), di(1-adamantanil)-n-butilfosfonijum jodid (44 mg, 0.1 mmol), [(di(1-adamantil)-butilfosfin)-2- amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat (66 mg, 0.1 mmol) i Cs2CO3(565 mg, 1.7 mmol) se suspenduju u smeši toluena (10 mL) i vode (1 mL). Dobijena smeša se poprska sa azotom u toku 5 min, reakcija se zatvori i smeša se zagreva na 100 °C uz mešanje u toku noći.

Reaktivna smeša se ohladi na RT, razblaži sa EtOAc i po redu ispere sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Slojevi se razdvoje i organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% metil terc-butil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobiju naslovljena jedinjenja kao smeša trans diastereomera kao žuta čvrsta supstanca (417 mg, 64% prinos). ESMS (m/z): 732 (M+1).

Izrada 32

1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanon

[0116]

[0117] Smeša trans etil 2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilata Izomer 1 i trans etil 2-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2-[2-(2,6-dihlorfenil)acetil]-6-fluoro-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-il]ciklopropankarboksilata Izomer 2 (405 mg, 0.6 mmol) se rastvori u THF (3 mL) i smeša ohladi na 0 °C. Polako se u toku 10 min dodaje 1M rastvor metilmagnezijum bromida u THF (2.8 mL, 2.8 mmol) i reaktivna smeša se zagreje na RT i meša u toku noći. Reaktivna smeša ohladi na 0 °C i neutrališe sa MeOH (220 mL). Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Slojevi se razdvoje i organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% metil terc-butil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobiju naslovljena jedinjenja kao smeša trans diastereomera kao žuta čvrsta supstanca (336 mg, 55% prinos). ESMS (m/z): 718 (M+1).

Primeri 1 i 2

2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 i 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2

[0118]

[0119] 1M Rastvor tetrabutilamonijum formata u THF (0.8 mL) se doda u rastvor 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[(trans-2-(2-hidroksi-2-metil-propil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanona (170 mg, 0.3 mmol) u THF (2.5 mL) i dobijena smeša se meša 30 min. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-65% EtOAc u heksanima i dalje prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-50% EtOAc u DCM, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje, 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2 (20mg, 14% prinos). Smeša frakcija nakon dodatne fleš hromatografije se dalje prečisti reverzno faznom hromatografijom na 18C silika gelu, sa gradijentom 5-95% vode (koja sadrži amonijum bikarbonat u acetonitrilu) da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje, 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 (26mg, 18% prinos). ESMS (m/z) za svaki: 462 (M+1).<1>H NMR (400 MHz, dmso-d6) Izomer 1: δ 0.66-1.01 (m, 4H), 1.08-1.27 (m, 6H), 1.40-1.89 (m, 1H), 2.00-2.08 (m, 1H), 2.66-3.04 (m, 2H), 3.20-3.32 (m, 2H), 3.63-3.75 (m, 1H), 4.09-4.31(m, 3H), 4.38-4.50 (m, 1H), 4.98-5.25 (m, 2H), 6.88-7.16 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.48 (d, 2H).<1>H NMR (400 MHz, dmso-d6) Izomer 2: δ 0.66-1.01 (m, 4H), 1.06-1.31 (m, 5H), 1.40-1.89 (m, 2H), 1.99-2.05 (m, 1H), 2.67-3.00 (m, 2H), 3.24-3.32 (m, 2H), 3.66-3.77 (m, 1H), 4.09-4.01(m, 3H), 4.40-4.49 (m, 1H), 4.98-5.25 (m, 2H), 6.92-7.15 (m, 3H), 7.34 (t, 1H), 7.48 (d, 2H).

Primeri 3 i 4

2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[cis-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil- 3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 i 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)- 5-[cis-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2

[0120]

[0121] Koristeći u suštini postupak opisan u Primerima 1 i 2, koristeći 1-[(1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metil-propil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6- dihlorfenil)etanon Izomer 1 (100mg, 173 mmol) dobija se naslovljeno jedinjenje 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[cis-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 (61 mg, 76% prinos). ESMS (m/z): 462 (M+1).<1>H NMR (400 MHz, dmso-d6) Izomer 1: δ 0.55 (s, 1H), 0.65 (s, 2H), 0.94-1.00 (m, 2H), 1.07-1.22 (m, 7H), 1.40-1.49 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 1H), 2.60-3.15 (m, 2H), 3.20-3.29 (m, 1H), 3.53-3.65 (m, 1H), 4.09-4.34 (m, 2H), 4.37-4.48 (m, 1H), 4.98-5.34 (m, 2H), 7.00-7.22 (m, 3H), 7.30-7.37 (m, 1H), 7.45-7.51 (m, 2H).

[0122] Koristeći u suštini postupak opisan u Primerima 1 i 2, koristeći 1-[(1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[cis-2-(2-hidroksi-2-metil-propil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6- dihlorfenil)etanon Izomer 2 (60 mg, 104mmol), dobija se naslovljeno jedinjenje 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-[cis-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2, (42 mg, 87% prinos). ESMS za svaki (m/z): 462 (M+1).<1>H NMR (400 MHz, dmso-d6) Izomer 1: δ 0.81 (s, 3H), 0.83-0.94 (m, 4H), 1.14-1.26 (m, 5H), 1.28-1.37 (m, 1H), 1.50 (d, 1H), 2.09-2.18 (m, 1H), 2.66-3.05 (m, 2H), 3.27-3.32 (m, 1H), 3.56-3.67 (m, 1H), 4.08-4.32 (m, 2H), 4.39-4.48 (m, 1H), 4.96-5.26 (m, 2H), 7.00-7.16 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.48 (d, 2H).

Primeri 5 i 6

2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-5-[4,4-difluoro-3-hidroksi-3-metil-butil]-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 i 2-(2,6-Dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-5-[4,4-difluoro-3-hidroksi-3-metil-butil]-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2

[0123]

[0124] Smeša 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-5-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroksi-3-metil-butil]-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanona i 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-5-[(3S)-4,4-difluoro-3-hidroksi-3-metil-butil]-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanona (493 mg, 0.75 mmol) se rastvori u THF (12 mL). Doda se 1M rastvor tetrabutilamonijum fluorida u THF (3 mL, 3 mmol) i dobijena smeša se meša 1 h na RT. Smeša se razblaži sa EtOAc i ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organski sloj se izdvoji, suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, koristeći gradijent 0-75% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao bela pena (342 mg, 97% prinos). ESMS (m/z): 470 (M+1).

[0125] Dva diastereomera se dalje prečiste i razdvoje asimetričnom SFC (CHIRALCEL<®>OD-H kolona, 21 x 250 mm), uz eluiranje sa smešom metanol: CO2(15:85) uz brzinu protoka od 80 mL/min i temperaturu od 40 °C, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobiju Izomer 1 (156 mg, 46% prinos) i Izomer 2 (141 mg, 41% prinos).

Izomer 1: ESMS (m/z): 470 (M+H). Analitička SFC tR: 1.618 min (CHIRALCEL<®>OD-H kolona, 4 x 150 mm, 15% metanol/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

Izomer 2: ESMS (m/z): 470 (M+H). Analitička SFC tR: 2.213 min (CHIRALCEL<®>OD-H kolona, 4 x 150 mm, 15% metanol/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

Primer 7

2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4- dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon

[0126]

[0127] 1-((1S,3R)-3-(((terc-Butildifenilsilil)oksi)metil)-6-fluoro-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hlor-6-fluorofenil)etan-1-on (5.3 g, 7.7 mmol) se rastvori u THF (129 mL) i doda se 1M rastvor tetrabutilamonijum fluorida u THF (23 mL, 23 mmol). Smeša se meša 1 h na RT. Smeša se razblaži sa EtOAc, ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl i slojevi se razdvoje. Organski ekstrakt se suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 50-100% EtOAc u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (2.75 g, 79% prinos). ESMS (m/z): 452 (M+1).

Primeri 8 i 9

2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1R,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklo-ropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 i 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1R,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2

[0128]

[0129] Smeša 1-[(1R,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluorofenil)etanona Izomer 1 i 1-[(1R,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hlor-6-fluorofenil)etanona Izomer 2 (1.1g, 1.5 mmol) se rastvori u THF (10 mL) i smeša ohladi na 0 °C. U kapima se dodaje 1M rastvor tetrabutil amonijum fluorida u THF (3 mL, 3 mmol) i reaktivna smeša se meša uz zagrevanje na RT u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Dobijeni slojevi se razdvoje i organski sloj se suši preko MgSO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% metil terc-butil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao ulje boje ćilibara (490 mg, 69% prinos. ESMS (m/z): 464 (M+1).

[0130] Dva diastereomera se dalje prečiste i razdvoje asimetričnom SFC (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 21 x 250 mm, 20% izopropanol/CO2, 80 mL/min, 40 °C) da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobiju 2-(2-hlor-6-fluorofenil)-1-[(1R,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 (136 mg, 28% prinos; Analitička HPLC tR: 2.769 min) i 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1R,3R)- 6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2 (121 mg, 25% prinos; Analitička HPLC tR: 3.368 min) kao bela čvrsta supstanca.

[0131] Izomer 1: ESMS (m/z): 464 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.94-1.17 (m, 2H), 1.17-1.25 (m, 3H), 1.25-1.44 (m, 4H), 1.60 (s, 3H), 1.80-1.90 (m, 1H), 2.07-2.37 (m, 1H), 2.91-3.23 (m, 3H), 3.47-3.57 (m, 1H), 3.92 (t, J = 16.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 4.42-4.66 (m, 1H), 5.04 (q, J = 7.0 Hz, 0.5 H), 5.21 (q, J = 7.0 Hz, 0.5 H).6.83-7.09 (m, 3H), 7.19-7.26 (m, 2H). Analitička SCF tR2.769 min (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 4 x 150 mm, 20% izopropanol/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

[0132] Izomer 2: ESMS (m/z): 464 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.71-0.81 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.33-1.44 (m, 4H), 1.48-1.59 (m, 1H), 1.59-1.69 (m, 2H), 1.69-1.81 (m, 1H), 2.87-3.08 (m, 1H), 3.08-3.31 (m, 1H), 3.47-3.57 (m, 1H), 3.70-3.95 (m, 1H), 3.97-4.11 (m, 2H), 4.43-4.60 (m, 1H), 5.01-5.26 (m, 1H), 6.84-7.08 (m, 3H), 7.20-7.26 (m, 2H). Analitička SFC tR3.368 min (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 4 x 150 mm, 20% izopropanol/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

Primeri 10 i 11

2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 i 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2- il]etanon, Izomer 2

[0133]

[0134] Smeša 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanona Izomer 1 i 1-[(1S,3R)- 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-6-fluoro-5-[trans-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2,6-dihlorfenil)etanona Izomer 2 (333 mg, 0.5 mmol) se rastvori u THF (4.6 mL) i smeša ohladi na 0 °C. U kapima se dodaje 1M rastvor tetrabutilamonijum fluorida u THF (0.50 mL, 0.50 mmol) i dobijena reaktivna smeša se zagreje na RT uz mešanje u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Slojevi se razdvoje i organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 0-100% metil terc-butil etar u heksanima, da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobije smeša naslovljenih jedinjenja kao ulje boje ćilibara (211 mg, 72% prinos). ESMS (m/z): 480 (M+1).

[0135] Dva diastereomera se dalje prečiste i razdvoje asimetričnom SFC (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 21 x 250 mm, 20% IPA/CO2, 80 mL/min, 40 °C) da se nakon isparavanja rastvarača traženih hromatografskih frakcija dobiju naslovljena jedinjenja 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-[trans-(1-hidroksi-1-metiletil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 1 (41 mg, 21% prinos; Analitička HPLC tR: 3.095 min) i 2-(2,6-dihlorfenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro- 3-(hidroksimetil)-5-[trans-(1-hidroksi-1-metil-etil)ciklopropil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, Izomer 2 (47 mg, 24% prinos; Analitička HPLC tR: 3.793 min) kao bela čvrsta supstanca.

[0136] Izomer 1: ESMS (m/z): 480 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.92-1.07 (m, 2H), 1.20-1.27 (m, 5H), 1.60-1.66 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 1.80-1.90 (m, 1H).2.93-3.23 (m, 2H), 3.47-3.60 (m, 1H), 3.81-4.00 (m, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.44-4.70 (m, 1H), 5.06 (q, J = 6.7 Hz, 0.5 H), 5.23 (q, J = 6.7 Hz, 0.5 H), 6.84-7.04 (m, 2H), 7.16-7.23 (m, 1H), 7.36 (d, J = 8.1 Hz, 2H).

Analitička SFC tR3.095 min (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 4.63150 mm, 20% IPA/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

[0137] Izomer 2: ESMS (m/z): 480 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.70-0.83 (m, 1H), 1.09-1.18 (m, 1H), 1.23 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 1.32 (s, 3H), 1.35-1.46 (m, 4H), 1.64 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 1.69-1.82 (m, 1H), 2.90-3.10 (m, 1H), 3.16-3.37 (m, 1H), 3.50-3.61 (m, 1H), 3.70-4.00 (m, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.48-4.63 (m, 1H), 5.09 (q, J = 6.7 Hz, 0.6H), 5.24 (q, J = 6.7 Hz, 0.4H).6.85-7.05 (m, 2H), 7.15-7.23 (m, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H). Analitička SFC tR3.793 min (PHENOMENEX<®>LUX<®>Celuloza-2 kolona, 4.6 x 150 mm, 20% IPA/CO2, 5 mL/min, 225 nm).

PAM ispitivanje humanog D1 receptora

[0138] PAM aktivnost jedinjenja iz ovog pronalaska može u osnovi da se meri na način opisan u Svensson i saradnici, An Allosteric Potentiator of Dopamin D1 Receptor Increases Locomotor Activity in Human D1 Knock-in Mices without Casusing Stereotypy or Tachyphylaxis. J. Pharmacol. Exp. Ther. (2017) 360:117-128.

[0139] Još preciznije, HEK293 ćelije koje stabilno ekspresuju humani D1 receptor (pristupni broj NM 000794) su generisane transdukcijom gena koristeći pBABE-bleo retrovirusni vektor i izabrane sa Zeocin™ (InvivoGen). Pri približno 80% ispunjenosti, ćelije se sakupe koristeći TrypLE™ Express (Gibco), suspenduju u FBS plus 8% DMSO i čuvaju u tečnom azotu. Na dan ispitivanja, ćelije se otope i resuspenduju u STIM puferu (Hank-ov balansirani rastvor soli obogaćen sa 0.1% BSA, 20 mM HEPES, 500 mM IBMX i 100 mM askorbinske kiseline).

[0140] Test jedinjenje se serijski razblaži (1:2) sa DMSO u pločama za analizu (ProxiPlate-384 Plus, PerkinElmer) koristeći akustičnu dispenziju (Labcyte) da se dobije 20 koncentracija za krive potpunog odgovora. Test jedinjenje (80 nL) se doda u 5 mL STIM pufera koji sadrži 2000 ćelija i 5 mL rastvora 2X koncentracije dopamina u STIM puferu koji će da generiše EC20nivo odgovora (24 nM u osnovnom rastvoru, ili 12 nM finalno) i finalna koncentracija DMSO u udubljenju od 0.8%. Ploče se inkubiraju na sobnoj temperaturi za ukupno vreme reakcije od 60 minuta.

[0141] Produkcija cAMP se kvantifikuje koristeći HTRF® detekciju (Cisbio) u skladu sa uputstvima proizvođača. Generalno, pufer za lizu koji sadrži anti-cAMP kriptat (5 mL) i D2-konjugat (iz HTRF® kita)(5mL) se doda u udubljenja, ploče se inkubiraju dodatnih 60-90 minuta i vremenski razrešena fluorescencija je detektovana pomoću EnVision™ čitača ploča (PerkinElmer). Rezultat fluorescencije je konvertovan u koncentracije cAMP koristeći cAMP standardnu krivu i analizom koristeći 4-parametarske ne-linearne logaritamske jednačine (Genedata Screener, verzija 13.0.5-standard). Za režim potencijatora krivih koncentracijaodgovor, rezultati su izraženi kao procenat razlike između odgovora za EC20koncentraciju samog dopamina (normalizovan na 0%) i maksimuma odgovora na dopamin (definisano odgovorom na 5 mM dopamina, finalna koncentracija, normalizovano kao 100%). Apsolutne EC50vrednosti su izračunate na bazi maksimalnog i minimalnog odgovora kontrolnog agonista (dopamin). % potencijacije (% vrha) je određen od postavljenog vrha krive koncentracija-odgovor. Apsolutna EC50i % vrha za neka jedinjenja iz Primera su pokazani u niže datoj Tabeli 1:

Tabela 1:

nastavla se

[0142] Apsolutne EC50vrednosti dobijene za prethodna jedinjenja iz Primera u Tabeli 1 ilustruju potenciju signalizacije humanog D1 receptora u odgovoru na dopamin i ilustruju aktivnost jedinjenja iz Patentnog zahteva 1 kao pozitivnih alosternih modulatora humanog dopamin D1 receptora. Primeri jedinjenja 1-6 i 8-11 iz ovog pronalaska predstavljaju asimetrična jedinjenja, i kako je ovde opisano u Primerima, izrađena su i testirana kao pojedinačni stereoizomeri. Videti Primere 1-6, 8-11 i prethodno datu Tabelu 1. Kombinovani rezultati za pojedinačne stereoizomere (Aps EC50u rasponu od 5.6 nM do 86.7 nM za primere 1-6, 8-11) pokazuju da svaki pojedinačni stereoizomer predstavlja ostvarenje D1 pozitivnog alosternog modulatora iz ovog pronalaska. Karakterizacija i određivanje apsolutne stereohemije pojedinačnih stereoizomera iz ovde datih Primera je u okviru stanja tehnike za prosečnog stručnjaka a postupci za ovakva određivanja su dobro poznati u literaturi medicinske hemije (videti, na primer, Chiral Analysis (Second Edition) Advances in Spectroscopy, Chromatography i Emerging Methods, 2018). Na primer, apsolutne konfiguracije se uobičajeno određuju pomoću NMR na bazi upotrebe CDAs: diastereomerni derivati koji uključuju kovalentno vezivanje između asimetričnih pomoćnih i enantiomernih supstrata usvajaju poželjnu konformaciju koja se može predvideti na osnovu diferencijalne zaštite uzrokovane aromatičnim prstenom ugrađenim u asimetrični diskriminirajući reagens.

Generisanje humanog D1 receptora Knock-in miševa

[0143] Transgenični miševi kod kojih je mišji dopamin 1 (D1) receptor zamenjen sa njegovim humanim pandanom mogu da se generišu standardnim tehnikama (videti generalno Svensson i saradnici, J. Pharmacol. Exp. Ther. (2017) 360:117-128). Na primer, genomični fragmenti miša su subklonirani iz biblioteke RP23 bakterijskog veštačkog hromozoma i reklonirani u PGK-neo ciljani vektor. Otvoreni okvir čitanja miša je zamenjen sa otvorenim okvirom čitanja humanog D1 receptora u exonu 2. Marker neo selekcije ushodno od eksona 2 je okružen frt mestima za kasnije uklanjanje. Okruživanje eksona 2 sa mestima loxP selekcije dozvoljava opciju generisanja D1 knock-out miševa ukrštanjem sa miševima koji ekspresuju cre nukleaza gen.

[0144] C57BL/6 N linija embrionalnih matičnih ćelija B6-3 uzgaja se na mitotički inaktiviranom hranljivom sloju mišjih embrionalnih fibroblasta u visokoglukoznom DMEM-u sa 20% FBS i 2x10<6>jedinica/l inhibitornog faktora leukemije. Deset miliona embrionih matičnih ćelija plus 30 mikrograma linearizovanog vektora DNK se podvrgava elektroporaciji i dalje podvrgne G418 selekciji (200 mg/ml). Klonovi se izoluju i analiziraju Saudern blotom.

[0145] Klon koji sadrži očekivanu veličinu umetka se ubacuje u blastocite i dobijeni miševi se genotipuju pomoću PCR. Muška himera se ukrsti sa ženskom koja sadrži flp gen nukleaze da se eliminiše selektivni marker. Progeni koji sadrže humani D1 receptor bez selektivnog markera se identifikuju pomoću PCR. Muški heterozigot se sparuje sa ženskim C57BL/6 miševa. Muški i ženski progeni koji sadrže humani D1 receptor su spareni a homozitogoti su identifikovani pomoću PCR. Utvrđeno je da je ponašanje i reprodukcija homozigota normalna i kolonija se održava u homozigotnom stanju za naredne generacije.

Bazalna (naviknuta) lokomotorna aktivnost

[0146] In vivo efikasnost datih jedinjenja može da se pokaže delovanjem preko D1 receptora koristeći lokomotornu aktivnost miševa. Lokomotorna aktivnost se meri korišćenjem automatizovanog sistema za praćenje kretanja miševa. Praćenje navika lokomotorne aktivnost se vrši u providnim plastičnim kavezima oblika kutije za cipele dimenzija 45 x 25 x 20 cm, sa 1 cm sloja drvene piljevine kao upijajuće podloge i pokrivene plastičnim poklopcem sa filterom za ventilaciju. Kavezi se postave u pravougaoni okvir koji sadrži mrežu od 12 snopova fotoćelija u konfiguraciji 8 x 4 (Kinder Scientific, Povai, CA) koji je pozicioniran 2,5 centimetra od poda kaveza za detekciju pokreta tela (ambulacija) i beleži se kompjuterom.

[0147] Mužjaci knock-in miševa sa humanim D1 receptorom se stave u komore i ostave 60 minuta da se priviknu na komore. U toku perioda privikavanja, miševi očekivano tokom vremena pokazuju smanjenje kretanja. Nakon primene jedinjenja iz pronalaska, nađeno je da se kretanje životinje povećava u zavisnosti od doze.

[0148] Miševi su po slučajnom uzorku podeljeni u grupe za tretman. U studiji odgovora na dozu, svaki miš se pojedinačno stavi u jedan od boksova za lokomotornu aktivnost u toku 60 minuta perioda privikavanja. Miševima se nakon toga oralno dozira test jedinjenje u 20% hidroksipropil-betaciklodekstrin vehikulumu i koristi se zapremina od 10 mL/kg doze. Nakon doziranja, miševi se vrate u LMA kutije a ukupan broj ambulacija se beleži u intervalu od po 10 minuta za svakog miša u periodu merenja od 60 minuta. Statistička analiza se izvodi koristeći jednosmerne ANOVA a nakon toga post-hok analizama koristeći Dunnett-ov komparativni test.

[0149] Jedinjenje iz Primera 7 je ispitivano u osnovi kako je prethodno opisano i nađeno je da povećava bazalno kretanje na način zavistan od doze (Tabela 2 niže data).

Tabela 2:

[0150] Rezultati bazalne lokomotorne aktivnosti za Primer 7 pokazanim u Tabeli 2 ilustruju da su jedinjenja iz pronalaska a posebno Primer 7, efikasni u lokomotornoj aktivnosti životinja koje su prilagođene na okolinu. Veruje se da je ova aktivnost rezultat centralne aktivacije D1 receptora preko alosterne potencijacije (videti, na primer, Svensson i saradnici, J. Pharmacol. Exp. Ther. (2017) 360:117-128). Rezultati dati u Tabeli 2 za Primer 7 ilustruju farmakološke prednosti in vivo efikasnosti jedinjenja iz pronalaska za potencijaciju endogenih odgovora posredstvom dopamina. Rezultat dat u Tabeli 2 za Primer 7 dalje ilustruje farmakološke prednosti oralne bioraspoloživosti Primera 7 i jedinjenja formule I.

Vrednosti u plazmi i mozgu:

[0151] Primer 7, 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, je oralno doziran mužjacima miševa od 3 mg/kg do 60 mg/kg nakon uzimanja hrane a koncentracija u plazmi i mozgu je određena 1h nakon doze. Nevezana frakcija jedinjenja je određena in vitro kako je prethodno opisano (Zamek-Gliszczynski MJ, i saradnici, Validation of 96-well equilibrium dialysis with non-radiolabeled drug for definitive measurement of protein binding i application to clinical development of highly-bound drugs., J. Pharm. Sci. (2011) 100: 24982507). Odnos (Kpuu) koncentracije nevezane frakcije u mozgu (Cu, mozak) prema koncentraciji nevezane frakcije u plazmi (Cu, plazma) je određen kako je prethodno opisano (Raub TJ, i saradnici, Brain Exposure of Two Selective Dual CDK4 i CDK6 Inhibitori and Antitumor Activity of CDK4 and CDK6 Inhibition in Combination with Temozolomide in an Intracranial Glioblastoma Xenograft. Drug Metab. Dispos. (2015) 43:1360-71). Rezultati predstavljeni u niže datoj Tabeli 3 za Primer 7 su prosečne vrednosti od 3 životinje za svaku dozu. "Con." se odnosi na koncentraciju

Tabela 3:

Doza Vreme Plazma Mozak fu. plazma fu.mozak Cu. plazma Cu. mozak Kpuu h kon. nM kon. nM nM nM

3 1 353 18 0.0141 0.0249 4.97 0.448 0.126 6 1 682 45.1 0.0141 0.0249 9.62 1.12 0.143 10 1 1210 84.9 0.0141 0.0249 17.1 2.11 0.122 30 1 4980 557 0.0141 0.0249 70.1 13.9 0.194 60 1 9080 1290 0.0141 0.0249 128 32.1 0.248

[0152] Jedinjenja iz pronalaska, na primer Primer 7, 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon, pokazuju prednosti kombinacije farmakoloških karakteristika, kao što je potencijacija signalizacije humanog D1 receptora u odgovoru na dopamin, visoku oralnu in vivo dostupnost, dostupnost u centralnom nervnom sistemu i in vivo efikasnost u lokomotornoj aktivaciji životinja koje su naviknute na životnu sredinu. Na primer, Primer 7 pokazuje potencijaciju signalizacije humanog D1 receptora u odgovoru na dopamin (10.2 x 1.40 nM (n=15)) i značajnu in vivo efikasnost kada je oralno primenjen u količini od 10, 30 i 60 mg/kg PO, u lokomotornoj aktivaciji humanog D1 receptora knock-in miševa koji su naviknuti na životnu sredinu, što ilustruje povoljnu oralnu bioraspoloživost ovog jedinjenja. Dalje, Primer 7 se generalno dobro podnosi kada je primenjen in vivo na normalnim pacovima u širokom opsegu doza i pokazuje prednosti manje toksičnosti u ovom in vivo eksperimentu. Prema tome, Primer 7 pokazuje prednosti kombinacije poželjnih farmakoloških karakteristika podržavajući mogućnost upotrebe kao oralno primenljivog terapeutskog sredstva za podizanje potencijala dopamin D1 receptora i za tretman Parkinsonove bolesti, šizofrenije, ADHD i/ili Alzheimer-ove bolesti.

Određivanje frakcije jedinjenja očišćene putem metabolizma CYP3A4 (fmCYP3A4)

[0153] Frakcija ukupnog klirensa leka oksidativnim metabolizmom preko citohroma P450 (CYP) je važna indikacija za potencijalni uzrok neželjenih efekata do kojih dolazi posredstvom interakcije lek-lek. (Videti generalno Ogu, Chris C. i Maxa, Jan L., Drug interactions due to cytochrome P450, BUMC Proceedings 2000; 13:421-423.) Što je veća frakcija ukupnog klirensa za dati lek koji ide putem oksidacije CYP, posebno ekskluzivno putem pojedinačnog CYP, kao na primer CYP3A4, to je veći potencijal da lek može da bude podložniji neželjenim posledicama interakcija lek-lek kada se koristi u terapiji. Za određivanje fmCYP3A4 (frakcija metabolizma preko CYP3A4), prvo je određena frakcija oksidacije posredstvom P450 (fmCYP) u humanim hepatocitima, nakon toga je određen relativni doprinos oksidacije posredstvom CYP3A4 (fmCYP3A4_RCP) u odnosu na P450s koristeći ispitivanje fenotipizacije rekombinantnog CYP (RCP). fmCYP3A4 se izračunava po sledećoj jednačini:

fmCYP3A4= fmCYPx fmCYP3A4RCP

Određivanje frakcije oksidativnog metaboizma posredstvom citohroma P450 (CYP) (fmCYP) u humanim hepatocitima

[0154] Relativni doprinos P450s u ukupnom metabolizmu jedinjenja je određen ispitivanjem klirensa leka koristeći humane hepatocite u prisustvu i bez prisustva pan P450 inhibitora 1-aminobenzotriazola (ABT). Unutrašnji klirens je određen u kriokonzervisanim humanim hepatocitima u osnovi kako je opisano od strane McGinnity DF, i saradnika (2004) (Evaluation of fresh i cryopreserved hepatocytes as in vitro drug metabolism tools for prediction of metabolic clearance. Drug Metab Dispos 32:1247-1253). Generalno, ispituje se inkubacija koja sadrži 0.3 mM test jedinjenje i 10<6>ćelija/mL hepatocita, sa ili bez 0.5 h preinkubacije sa ABT (1 mM). Gubitak osnovnog jedinjenja se meri pomoću LC/MS nakon 15, 30, 60 i 90 min. inkubacije. Unutrašnji klirens (mL/min/10<6>ćelija) se izračunava koristeći niže datu jednačinu za oba x ABT. Frakcija metabolizma sa CYP je procenat inhibicije sa ABT.

CLint= -kdepx zapremina inkubacije/10<6>ćelija

gde kdep, konstanta iscrpljivanja supstrata (min<-1>), je pad određen linearnom regresijom iz log transformisanog % preostalog na y-osi u odnosu na vreme na x-osi (min<-1>).

Određivanje frakcije metabolizma posredovanog CYP3A4 koristeći ispitivanje fenotipizacije rekombinantnog CYP (fmCYP3A4 RCP)

[0155] Relativna frakcija metabolizma jedinjenja postignutog datim CYP, kao što je na primer, CYP3A4, ukupnog P450 metabolizma jedinjenja može da se odredi na sledći način: Grupa od 9 humanih rekombinantnih CYPs (rCYPs) dobijenih kao Supersomes (BD Gentest, Woburn, MA), koja uključuje rCYPs 1A2, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2J2, 3A4 i 3A5, je procenjena na metabolizam jedinjenja (videti generalno Cannady EA, i saradnici (2015) Evacetrapib: in vitro and clinical disposition, metabolism, excretion and assessment of drug interaction potential with strong CYP3A and CYP2C8 inhibitors. Pharmacol Res Perspect 3:e00179). Inkubacije i izračunavanja su izvršena u potpunosti kako je opisano u Wickremsinhe ER, i saradnici (2014), Dispozicija i metabolizam LI2603618, Chk-1 inhibitora nakon intravenske primene kod pacijenata sa uznapredovalim i/ili metastaznim solidnim tumorima. Ksenobiotica 44:827-841, izuzev što se inkubacije vrše u toku 2 h, s obzirom na nisku stopu obrta test jedinjenja. Unutrašnji klirens (CLint) urCYPs se skalira na mikrozom humane jetre (HLM-skaliran CLint) u skladu sa niže datom jednačinom:

HLM-skalirano CLint= -kdepx (zapremina inkubacije/pmol rCYP) x RAF

u kojoj je kdepkonstanta brzine iscrpljivanja supstrata (min<-1>), pmol rCYP je lot-specifična količina rCYP u inkubaciji a relativni faktor inkubacije (RAF) je odgovarajući relativni faktor aktivacije (pmol/mg) za rCYPs/HLMs par.

Konstanta brzine je određena lokalno eksperimentom, pad je određen linearnom regresijom iz log transformisanog % preostalog na y-osi u odnosu na vreme na x-osi (min<-1>). pmol rCYP i RAF su dodatni sadržaji za superzome.

[0156] Frakcija metabolizma posredstvom CYP3A4 (fmCYP3A4_RCP) je određena deljenjem HLM-skaliranog CLintza CYP3A4 sa zbirom HLM-skaliranog CLintza svaki ispitivani P450 subtip (Cannady i saradnici, 2015.).

Profil metabolita hepatocita

[0157] Utvrđuje se metabolički profil hepatocita da bi se potvrdilo formiranje metabolita preko P450 posredovanih oksidativnih i Faza II enzima (na primer, UDP-glukuronoziltransferaze i sulfotransferaze) posredovano neoksidativnim putevima.

Određivanje je izvršeno u humanim hepatocitima u potpunosti kako je opisano u Zhou X, i saradnici (2016), Difference in Pharmacokinetics i Hepatic Metabolism of Antidiabetic Drugs in Zucker Diabetic Fatty i Sprague-Dawley Rats. Drug Metab Dispos 44:1184-1192).

Ukratko, inkubacije su izvršene u inkubatoru sa CO2na 37 °C u pločama sa 24 udubljenja koja sadrže 250.000 ćelija/udubljenje. U medijum se doda ostnovni rastvor test jedinjenja da se dobije finalna koncentracija inkubacije od 2 mM. Inkubacija u kojoj se nalaze medijum i ćelije se nakon 4 h neutrališe sa jednakom zapreminom acetonitria. Uzmu se uzorci i analiziraju pomoću LC/MS u potpunosti kako je predstavljeno u Zhou i saradnici 2016.

Izračunavanje frakcije jedinjenja očišćenog preko CYP3A4 mebatolizma (fmCYP3A4)

[0158] Izlučivanje test jedinjenja preko bubrega i žuči je testirano u žučnoj kesi kaniliranih pasa u potpunosti u skladu sa Burkey JL, i saradnici (2002) Disposition of LY333531, selective protein kinase C beta inhibitor, in Fischer 344 rat i beagle dog. Xenobiotica 32:1045-1052. Jedinjenje iz Primera 7 je testirano u potpunosti kako je opisano i nađeno je da je njegovo izlučivanje preko bubrega i žuči zanemarljivo. Frakcija jedinjenja očišćenog kroz CYP3A4 metabolizam je izračunata pomoću niže date jednačine:

fmCYP3A4= fmCYPx fm3A4_RCP

gde je fmCYPfrakcija jedinjenja metabolizovanog preko CYP izmereno ispitivanjem u hepatocitu CLintx ABT

fm3A4_RCPje frakcija jedinjenja metabolizovanog preko CYP3A4 ispitivanjem fenotipizacije rekombinantnog CYP

Određivanje frakcije koja izbegava metabolizam prvog prolaza u crevima (FG)

[0159] Procena frakcije koja se metaboliše u crevima može se odrediti korišćenjem sledeće jednačine nađene kod Iang J, i saradnici (2007) Prediction of intestinal first-pass drug metabolism. Curr Drug Metab 8:676-684:

FG= Qgut/(Qgut+ fugutx Clint CYP3A, gut)

Qgut= Qvillix Clperm/ (Qvilli+ Clperm)

Clperm= Pappx oblast površine tankog creva

Clint,CYP3A, gut= Clint,CYP3A, jetra/fumicx mikrozomalni protein u crevima (mg) x 0.4 lokalno izračunavanje)

[0160] Gde je Qgut naziv hibridnog protoka koji zavisi od protoka vilozne krvi i permeabilnosti jedinjenje

fugutje frakcija leka nevezanog u enterocitu

Qvillije protok vilozne krvi

Clpermje naziv klirensa koji definiše permeabilnost kroz enterocit

Pappje pasivna permeabilnost merena lokalno u MDCKII ćelijskoj liniji

fumicje frakcija leka nevezanog u mikrozomima humane jetre

[0161] Parametri humanog tankog creva su uzeti iz Yang i saradnici, 2007 i Gertz M, i saradnici (2010) Prediction of human intestinal first-pass metabolism of 25 CYP3A substrates from in vitro clearance i permeability data. Drug Metab Dispos 38:1147-1158.

Mehanički statički model za procenu DPI žrtve inhibicijom CIP3A4

[0162] Potencijalna promena u AUC leka izložeog magnitudi test jedinjenja u prisustvu itrakonazola može da se odredi primenom mehaničkog statičkog modela u potpunosti kako je opisano u Han B, i saradnici (2013) Prediction of CYP3A Mediated Drug-Drug Interactions: Estimation of Gut Wall i Hepatic Contributions. ASCPT Annual Meeting, Indianapolis, IN: AUCPO,inh/AUCPO= [1/ (A x fm (1-fm))] x [1/ (X x (1-FG) FG]

A = 1/ (1 [I]h/Ki)

X = 1/(1+[I]gut/Ki)

Gde je fm frakcija metabolizovana hepatičnim CYP3A4

FGje frakcija koja izbegava metabolizam u enterocitima tankog creva

Ki je konstanta disocijacije intrakonazola iz enzima

[I]hje koncentracija intrakonazola u jetri

[I]gutje koncentracija intrakonazola u crevima

[0163] Parametri intrakonazola kao CYP3A4 inhibitora (A= 0.10 i X= 0.10) su iz Olkkola KT, i saradnici (1994) Midazolam should be avoided in patients receiving systemic antimycotics ketoconazole or itraconazole. Clin Pharmacol Ther 55:481-485.

[0164] Jedinjenje iz Primera 7, koje predstavlja jedinjenje iz pronalaska, je testirano u potpunosti kako je prethodno opisano i nađeno je da je primarno metabolizovano neoksidativnim procesima u hepatocitima nasuprot oksidativnom metabolizimu sa P450 (frakcije metabolizovane sa CYPs su 32.3%). Jedinjenje nije ispitano u RCP analizi, ali u najgorem slučaju scenario od 100% metabolizma sa CYP3A4 je pretpostavljen za predviđanje AUC odnosa u prisustvu intrakonazola. Predviđeni AUC odnos je manji od 2. Prema tome, veruje se da jedinjenja iz pronalaska predstavljaju minimalni rizik žrtve interakcije lek-lek preko bilo kod CYP, uključujući CYP3A4 (videti Tabelu 4.).

Tabela 4. fmCYP3A4, FGi predviđeni odnos AUC za jedinjenja iz Primera 7

Jedinjenje Primer 7

fmCYP0.322

fm3A4_RCP1

fmCYP3A40.322

Clint, CYP3A, jetraml/min/mg 25.5

fumic0.392

Papp10<-6>37.9

FG0.78

Predviđeni odnos AUC

(sa inrakonazolom) 1.76

Claims (13)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:

   naznačeno time što: R<1>je

   ili R<2>je -F ili -Cl; R<3>je -F ili -Cl; i R<4>je -H ili -F; pod uslovom da kada je R<1>

   tada je R<4>= -F.
2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 formule:

   naznačeno time što R<1>je

   ili R<2>je -F ili -Cl; R<3>je -F ili -Cl; i R<4>je -H ili -F; pod uslovom da kada je R<1>

   tada je R<4>= -F.
3. 3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to:
4. 4. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3 i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent.
5. 5. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 4, naznačena time što uključuje:

   i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent
6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u postupku terapije.
7. 7. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u postupku za tretman dopaminergičnih CNS poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od Parkinsonove bolesti, Alzheimer-ove bolesti, demencije Lewy-jevih tela (LBD), vaskularne demencije, šizofrenije, ADHD, depresije, autizma, hroničnog mišićnokoštanog bola, fibromialgije, kognitivnog poremećaja pažnje, poremećaja sna, povećane dnevne pospanosti, narkolepsije, poremećaja smenskog rada, traumatičnog oštećenja mozga, hronične traumatične encefalopatije, gojaznosti i regulacije apetita, poremećaja raspoloženja, letargije, apatije i poremećaja zavisnosti.
8. 8. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u postupku tretmana Parkinsonove bolesti.
9. 9. Jedinjenje za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što je jedinjenje 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6-fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon.
10. 10. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u postupku tretmana Alzheimer-ove bolesti.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačeno time što je jedinjenje 2-(2-hlor-6-fluoro-fenil)-1-[(1S,3R)-6- fluoro-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanon.
12. 12. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u kombinaciji sa prekursorom dopamina izabranog iz grupe koja se sastoji od levodope, melevodope i etilevodope, u postupku tretmana Parkinsonove bolesti.
13. 13. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je za upotrebu u kombinaciji sa agonistom dopamina izabranog iz grupe koja se sastoji od pramipeksola, ropinirola, apomorfina, rotigotina, bromokriptina, kabergolina i pergolida, u postupku tretmana Parkinsonove bolesti. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu s 6v9ojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd