RS65384B1 - Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe - Google Patents

Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe

Info

Publication number
RS65384B1
RS65384B1 RS20240417A RSP20240417A RS65384B1 RS 65384 B1 RS65384 B1 RS 65384B1 RS 20240417 A RS20240417 A RS 20240417A RS P20240417 A RSP20240417 A RS P20240417A RS 65384 B1 RS65384 B1 RS 65384B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
cells
ser
gly
cell
leu
Prior art date
Application number
RS20240417A
Other languages
English (en)
Inventor
David Dilillo
Frank Delfino
Kevin Bray
Thomas Craig Meagher
Jessica Kirshner
Olga Sineshchekova
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
Publication of RS65384B1 publication Critical patent/RS65384B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001129—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4214—Receptors for cytokines
    • A61K40/4215—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/10—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the structure of the chimeric antigen receptor [CAR]
    • A61K2239/11—Antigen recognition domain
    • A61K2239/13—Antibody-based
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/99—Coculture with; Conditioned medium produced by genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na himerne antigenske receptore (CARs), i modifikovane ćelije koje sadrže takve CARs, koji su specifični za antigen sazrevanja B-ćelija (BCMA), i postupke za njegovu upotrebu.
STANJE TEHNIKE
[0002] Antigen sazrevanja B-ćelija (BCMA), takođe poznat pod imenom TNFRSF17, ili CD269, je tip III transmembranskog proteina kome nedostaje signalni peptid i koji sadrži ekstracelularni domen bogat cisteinom. BCMA, zajedno sa blisko povezanim proteinima, promoviše preživljavanje B ćelija u različitim stadijumima razvoja. BCMA se eksprimira isključivo u liniji B ćelija, naročito u interfolikularnom regionu germinalnog centra kao i na plasmablastima i diferenciranim plazma ćelijama. BCMA se indukuje selektivno u toku diferencijacije plazma ćelija, i potreban je za optimalno preživljavanje dugoživećih plazma ćelija u kostnoj srži. U multiplom mijelomu, BCMA je široko eksprimiran na malignim plazma ćelijama u povišenim nivoima, i ekspresija BCMA je povišena sa napredovanjem od normalnih ćelija ka aktivnom multiplom mijelomu. BCMA je takođe eksprimiran u drugim malignitetima B ćelija, uključujući Waldenström-ovu makroglobulinemiju, Burkitov limfom, I difuzni B krupnoćelijski limfom. Tai et al., Immunotherapy, 7(11):1187-1199, 2015.
[0003] Adoptivna imunoterapija, koja obuhvata transfer autolognih antigen-specifičnih T ćelija dobijenih ex vivo, je obećavajuća strategija za lečenje virusnih infekcija i kancera. T ćelije koje su korišćene za adoptivnu imunoterapiju mogu se dobiti ili ekspanzijom antigen-specifičnih T ćelija ili preusmeravanjem T ćelija pomoću genskog inženjeringa.
[0004] Nove specifičnosti u T ćelijama su uspešno generisane upotrebom genskog transfera transgenih receptora T ćelija ili himernih antigenskih receptora (CARs) (Jena, Dotti et al.2010). CARs su sintetički receptori koji se sastoje iz ciljajućeg ostatka koji je povezan sa jednim ili više signalnih domena u jednom spojenom molekulu. Generalno, ostatak za vezivanje CAR sastoji se iz domena za vezivanje antigena jednolančanog antitela (scFv), koji sadrži varijabilne fragmente teškog i lakog lanca monoklonskog antitela spojene sa fleksibilnim linkerom. Signalni domeni za CARs prve generacije su izvedeni iz citoplazmatskog regiona CD3zeta ili gama lanaca receptora Fc. Pokazano je da CARs prve generacije uspešno preusmeruju citotoksičnost T ćelija. Međutim, ne uspevaju da obezbede produženu ekspanziju i anti-tumorsku aktivnost in vivo. Signalni domeni iz kostimulatornih molekula, kao i transmembranski i zglobni regioni su se dodaju da bi se dobili CAR-i druge i treće generacije, što dovodi do u određenoj meri uspešnih terapeutskih ispitivanja kod ljudi. Na primer, CAR preusmerene T ćelije koje su specifične za B ćelijski antigen diferencijacije CD19 ispoljile su dramatičnu efikasnost u lečenju maligniteta B ćelija, dok su TCR-preusmerene T ćelije pokazale benefite kod pacijenata koji pate od solidnih kancera. Stauss et al. opisuje strategije modifikovanja terapeutskih CARs i TCRs, za upotrebu u lečenju kancera, na primer, da se pojača antigen-specifična efektorska funkcija i ograniči toksičnost modifikovanih T ćelija (Current Opinion in Pharmacology 2015, 24:113-118).
[0005] Smith et al., Mol Ther. 26(6):1447-1456, 2018 prikazuje humani varijabilni fragment jednog lanca poreklom iz BCMA-ciljanog CAR T ćelijskog vektora. Harrington et al., Blood 130(S1):1813, 2017 prikazuje JCARH125, potpuno humani anti-BCMA CAR za upotrebu u lečenju multiplog mijeloma. WO 2019/149249 opisuje himerni antigenski receptor (CAR) koji se vezuje specifično za BCMA protein koji sadrži strukturalni domen za vezivanje BCMA, transmembranski domen, kostimulatorni domen, i intracelularni domen za signalizaciju.
[0006] Modifikovane ćelije koje eksprimiraju himerne antigenske receptore koji ciljaju BCMA bile bi od koristi u terapeutskim uslovima u kojima je specifično ciljanje i ubijanje ćelija koje eksprimiraju BCMA posredovano T ćelijama je poželjno.
KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0007] Ovaj pronalazak obezbeđuje himerni antigenski receptor specifičan za antigen sazrevanja B-ćelije (BCMA) kao što je definisano u patentnim zahtevima, nukleinske kiseline koje kodiraju CARs, vektore koji sadrže nukleinske kiseline i ćelije koje sadrže nukleinske kiseline ili vektore. Pronalazak takođe obezbeđuje modifikovane ćelije koje sadrže CARs i postupke za dobijanje modifikovanih ćelija. Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže genetički modifikovane T ćelije koje sadrže CARs, ili sadrže modifikovane ćelije. Pronalazak takođe obezbeđuje modifikovane ćelije za upotrebu u lečenju kancera koji eksprimira BCMA.
SUŠTINA TEHNIČKIH UČENJA
[0008] Pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Bilo koji aspekti, izvođenja i primeri iz predmetnog prikaza koji nisu obuhvaćeni obimom priloženih patetnih zahteva ne čine deo pronalaska i dati su samo u informativne svrhe.
[0009] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje himerni antigenski receptor specifičan za antigen sazrevanja B-ćelije (BCMA) koji se sastoji iz, od N-kraja prema C-kraju: (a) ekstracelularni domen za vezivanje liganda koji sadrži anti-BCMA antigen-vezujući domen; (b) zglob; (c) transmembranski domen; i (d) citoplazmatski domen koji sadrži kostimulatorni domen i domen za signalizaciju. U pronalasku, ekstracelularni domen za vezivanje liganda sadrži anti-BCMA domen varijabilnog fragmenta jednog lanca (scFv) koji sadrži varijabilni region lakog lanca (LCVR) i varijabilni region teškog lanca (HCVR). anti-BCMA scFv domen sadrži linker između LCVR i HCVR. U nekim slučajevima, himerni receptor antigena dalje sadrži linker između ekstracelularnog domena za vezivanje liganda (npr., domen scFv) i zglob. U nekim slučajevima, linker sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 93-96. U nekim izvođenjima, linker je (G4S)nlinker, pri čemu n je 1-10.
[0010] U pronalasku zglob i transmembranski domen su iz CD8. U nekim slučajevima, zglob, transmembranski domen, ili oba, su iz CD8α polipeptida. U pronalasku, kostimulatorni domen sadrži 4-1BB kostimulatorni domen. U pronalasku, signalni domen se sastoji iz CD3zeta domena za signalizaciju. U nekim izvođenjima, zglob sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97. U nekim izvođenjima, transmembranski domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 98. U nekim izvođenjima, 4-1BB kostimulatorni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 99. U nekim izvođenjima, CD3zeta domen za signalizaciju sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100.
[0011] U nekim aspektima iz prikaza, LCVR sadrži regione za određivanje komplementarnosti (CDRs) LCVR koji sadrže aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja sadrži SEQ ID NOs: 10, 26, 42, 58 i 74. U nekim aspektima iz prikaza, LCVR sadrži LCDR1- LCDR2-LCDR3 domene koji se sastoje iz aminokiselinskih sekvenci, redom, SEQ ID NOs: 12-14-16, 28-30-32, 44-46-48, 60-62-64, ili 76-78-80. U nekim aspektima iz prikaza, HCVR sadrži CDRs HCVR koji se sastoji iz aminokiselinske sekvence koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 2, 18, 34, 50 i 66. U nekim aspektima iz prikaza, HCVR sadrži HCDR1-HCDR2-HCDR3 domene koji se sastoje iz aminokiselinskih sekvenci, redom, SEQ ID NOs: 4-6-8, 20-22-24, 36-38-40, 52-54-56, ili 68-70-72. U pronalasku, LCVR sadrži LCDR1- LCDR2-LCDR3 domene koji su prikazani u SEQ ID NOs: 60-62-64 redom i HCVR sadrži HCDR1-HCDR2-HCDR3 domene koji su prikazani u SEQ ID NOs: 52-54-56 redom.
[0012] U nekim slučajevima, LCVR sadrži aminokiselinske sekvence odabrane iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 10, 26, 42, 58 i 74, ili aminokiselinske sekvence koja je 95%-99% identična u sekvenci sa aminokiselinskom sekvencom koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 10, 26, 42, 58 i 74; i HCVR sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 2, 18, 34, 50 i 66, ili aminokiselinske sekvence koja je 95%-99% identična u sekvenci sa aminokiselinskom sekvencom koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 2, 18, 34, 50 i 66. U nekim slučajevima, LCVR sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 10, 26, 42, 58 i 74, i HCVR sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 2, 18, 34, 50 i 66.
[0013] U nekim slučajevima, domen scFv sadrži aminokiselinski par sekvenci LCVR/HCVR koji se sastoji iz aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NOs: 10/2, 26/18, 42/34, 58/50, ili 74/66. U pronalasku, domen scFv može sadržati aminokiselinski par sekvenci LCVR/HCVR SEQ ID NOs: 58/50. U nekim slučajevima, LCVR i HCVR su spojeni linkerom, opciono (G4S)nlinkerom u kome je n=1-3.
[0014] U nekim aspektima iz prikaza, himerni receptor antigena sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, ili SEQ ID NO: 90. U nekim aspektima iz prikaza, himerni antigenski receptor sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82. U nekim aspektima iz prikaza, himerni antigenski receptor sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 84. U nekim aspektima iz prikaza, himerni antigenski receptor sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 86. U pronalasku, himerni antigenski receptor može sadržati aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 88. U nekim aspektima prikaza, himerni antigenski receptor sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 90.
[0015] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje izolovani vektor nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor iz pronalaska. U nekim aspektima iz prikaza, molekul nukleinske kiseline sadrži nukleotidnu sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NO: 81, 83, 85, 87 i 89. U pronalasku, molekul nukleinske kiseline može sadržati sekvencu nukleotida SEQ ID NO: 87.
[0016] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje vektor koji sadrži molekul nukleinske kiseline iz pronalaska. U nekim slučajevima, vektor je DNK vektor, RNK vektor, plazmid, lentivirusni vektor, adenovirusni vektor, ili retrovirusni vektor. U nekim izvođenjima, vektor je lentivirusni vektor.
[0017] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje ćeliju koja sadrži molekul nukleinske kiseline, ili vektor koji je razmotren u pronalasku. U nekim slučajevima, ćelija je humana T ćelija.
[0018] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje modifikovanu ćeliju koja sadrži himerni antigenski receptor iz pronalaska. U nekim slučajevima, modifikovana ćelija je imuna ćelija. U nekim slučajevima, imuna ćelija je imuna efektorska ćelija. U nekim slučajevima, imuna efektorska ćelija je T limfocit. U nekim izvođenjima, T limfocit je inflamatorni T limfocit, citotoksični T limfocit, regulatorni T limfocit, ili pomoćnički T limfocit. U nekim izvođenjima, modifikovana ćelija je CD8+ citotoksični T limfocit.
[0019] U nekim slučajevima, modifikovane ćelije iz ovog pronalaska su za upotrebu u lečenju kancera koji eksprimira BCMA. U nekim slučajevima, kancer koji eksprimira BCMA je multipli mijelom.
[0020] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje modifikovanu humanu T ćeliju koja sadrži himerni receptor antigena iz pronalaska
[0021] U nekim izvođenjima, domen scFv se sastoji iz aminokiselinskog para sekvenci LCVR/HCVR koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NOs:58/50 U nekim slučajevima, zglob sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97. U nekim slučajevima, transmembranski domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 98. U nekim slučajevima, 4-1BB kostimulatorni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 99. U nekim slučajevima, CD3zeta domen za signalizaciju sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100.
[0022] U nekim aspektima iz prikaza, modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 82. U nekim aspektima iz prikaza, modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 84. U nekim aspektima iz prikaza, modifikovana humana T ćelija obuhvata himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvene SEQ ID NO: 86. U nekim izvođnjima, modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvece SEQ ID NO: 88. U nekim aspektima iz prikaza, modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 90.
[0023] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži genetički modifikovanu humanu T ćeliju i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu genetički modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor iz pronalaska. U nekim slučajevima, farmaceutska kompozicija je za upotrebu u lečenju kancera koji eksprimira BCMA. U nekim izvođenjima, kancer koji eksprimira BCMA je multipli mijelom.
[0024] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje modifikovanu ćeliju kao što je definisano u patentnim zahtevima. U nekim slučajevima, farmaceutska kompozicija je za upotrebu u lečenju kancera koji eksprimira BCMA. U nekim izvođenjima, kancer koji eksprimira BCMA je multipli mijelom.
[0025] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu himernog antigenskog receptora, molekula nukleinske kiseline, vektora, ćelije, ili modifikovane ćelije kao što je razmotreno gore u tekstu ili ovde u dobijanju leka za lečenje kancera koji eksprimira BCMA. U nekim slučajevima, kancer koji eksprimira BCMA je multipli mijelom. U različitim izvođenjima, himerni receptori antigena, molekuli nukleinskih kiselina, vektori, ćelije, ili modifikovane ćelije iz pronalaska su predviđene za upotrebu u bilo kom od postupaka koji su razmatrani gore u tekstu ili ovde. Na primer, u nekim izvođenjima, CARs ili modifikovane ćelije koje su ovde razmatrani za upotrebu u medicini ili za upotrebu u lečenju kancera kao što je razmatrano gore u tekstu ili ovde.
[0026] U drugom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak za pojačanje akivnosti T limfocita kod subjekta koji obuhvata, uvođenje u subjekta T limfocita koji se sastoji iz himerni antigenski receptor kao što je razmotreno ovde ili iznad u tekstu.
[0027] U drugom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje subjekta koji boluje od kancera koji obuhvata, uvođenje u subjekta terapijski efikasne količine T limfocita koji sadrži himerni antigenski receptor kao što je ovde ili gore razmatrano.
[0028] U drugom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak za stimulisanje imunskog odgovora posredovanog T ćelijama na populaciju ili tkivo ciljne ćelije kod subjekta koji obuhvata, davanje subjektu efikasne količine ćelija genetički modifikovanih da eksprimiraju himerni antigenski receptor kao što je ovde ili gore razmatrano.
[0029] U drugom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak kojim se obezbeđuje imunitet protiv tumora imunitet kod subjekta, postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine ćelije genetički modifikovane da eksprimira himerni antigenski receptor kao što je gore razmatrano.
[0030] U nekim izvođenjima postupaka, subjekt je čovek. U nekim slučajevima, subjekt boluje od multiplog mijeloma, akutne limfoblastne leukemije B linija, B-ćelije hronične limfocitne leukemije, B-ćelijski ne-Hodžkinov limfom, leukemije i limfoma, akutne limfoblastne leukemije, Hodžkinovog limfoma, ili akutne limfoblastne leukemije u detinjstvu. U nekim izvođenjima, subjekt boluje od multiplog mijeloma.
[0031] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak modifikovanja ćelijske populacije da se eksprimira himerni antigenski receptor, pri čemu postupak obuhvata: (a) obezbeđivanje populacije imunih ćelija; (b) uvođenje u imune ćelije molekula nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor iz pronalaska; (c) kultivaciju imunskih ćelija pod uslovima za ekspresiju molekula nukleinske kiseline; i (d) izolovanje imunskih ćelija koje eksprimiraju himerni antigenski receptor na površini ćelije. U nekim slučajima, postupak dalje sadrži dobijanje populacije imunskih ćelija iz subjekta pre uvođenja molekula nukleinske kiseline.
[0032] U drugom aspektu, prikazani pronalazak se odnosi na himerni antigenski receptor iz pronalaska za upotrebu u postupku lečenja kancera koji eksprimira BCMA kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata: (a) modifikovanje populacije ćelija prema gore razmatranom postupku; i (b) ponovnog uvođenja populacije imunih ćelija koje eksprimiraju himerne antigenske receptore u subjektu. U nekim izvođenjima, kancer koji eksprimira BCMA je multipli mijelom.
[0033] Ostali aspekti će postati očigledni iz pregleda detaljnog opisa koji sledi.
KRATAK OPIS NACRTA
[0034] Slika 1 ilustruje primer konstrukta nukleotida za eksprimiranje konstrukta himernog antigenskog receptora (CAR). Primer konstrukta nukleotida sadrži anti-BCMA VL-linker-VH scFv, zglob i transmembranski domen humanog CD8, 4-1BB kostimulatorni domen, CD3zeta signalni domen, i IRES:eGFP sekvencu za praćenje ćelija transdukovanih sa CAR.
DETALJAN OPIS
[0035] Ponovo, pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Svi aspekti, izvođenja i primeri ovog prikaza koji ne ulaze u obim priloženih patentnih zahteva ne čine deo pronalaska i samo su dati za informativne svrhe.
[0036] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada. Kako se ovde koristi, termin "oko", kada se koristi u odnosu na određenu navedenu numeričku vrednost, znači da vrednost može da varira od navedene vrednosti za najviše 1%. Na primer, kako se ovde koristi, izraz "oko 100" uključuje 99 i 101 i sve vrednosti između (npr.99.1, 99.2, 99.3, 99.4, itd.).
[0037] Iako se bilo koji postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, sada su opisani poželjni postupci i materijali.
Definicije
[0038] Izraz "BCMA," kao što se ovde koristi, se odnosi na angen sazrevanja B-ćelija. BCMA (takođe poznat kao TNFRSF17 i CD269) je protein ćelijske površine izražen na malignim plazma ćelijama, i igra centralnu ulogu u regulaciji sazrevanja B ćelija i diferencijaciji u plazma ćelije koje proizvode imunoglobuline. Kao što se ovde koristi, "BCMA" se odnosi na humani BCMA osim ukoliko nije naznačeno da je iz nehumanih vrsta (npr., "mišji BCMA," "majmunski BCMA," itd.). Humani BCMA protein ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 101.
[0039] Kao što se ovde koristi, "antitelo koje se vezuje za BCMA" ili "anti-BCMA antitelo" obuhvata antitela i njihove fragmente koji vezuju antigen koji specifično prepoznaju BCMA.
[0040] Termini "domen koji vezuje ligand" i "domen koji vezuje antigen" su ovde korišćeni istovremeno, i odnose se na deo himernog antigenskog receptora ili odgovarajuće antitelo koje se veže specifično za prethodno definisani antigen (npr., BCMA). Reference na "odgovarajuće antitelo" se odnose na antitelo iz kojeg su izvedeni CDRs ili varijabilni regioni (HCVR i LCVR) koji su korišćeni u himernog antigenskom receptoru. Na primer, konstrukti himernog antigenskog receptora koji se razmatraju u primeru 2 obuhvataju scFvs sa varijabilnim regionima koji su izvedeni iz specifičnih anti-BCMA antitela. Ova anti-BCMA antitela su "odgovarajuća antitela" u odnosu na odgovarajuće himerne receptore antigena.
[0041] Termin "antitelo", kao što je ovde korišćen, označava bilo koji antigen vezujući molekul ili molekulski kompleks koji sadrži bar jedan region za određivanje komplementarnosti (CDR) koji se specifično veže za ili interaguje sa određenim antigenom (npr., BCMA). Termin "antitelo" uključuje molekule imunoglobulina koji sadrže četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama, kao i njihove multimere (npr., IgM). Termin "antitelo" takođe uključuje molekule imunoglobulina koji se sastoje iz četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama. Svaki težak lanac sadrži varijabilni region teškog lanca (ovde skraćeno HCVR ili VH) i konstantni region teškog lanca. Konstantni region teškog lanca sadrži tri domena, CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac sadrži varijabilni region lakog lanca (ovde skraćeno LCVR ili VL) I konstantni region lakog lanca. Konstantni region lakog lanca sadri jedan domen (CL1). Regioni VHi VLse dalje mogu podeliti u regione hipervarijabilnosti, koji se zovu regioni za određivanje komplementarnosti (CDRs), ispresecani među regionima koji su najviše konzervirani, koji su poznati kao regioni okvira (FR). Svaki VHi VLse sastoji iz tri CDRs i četiri FRs, koji su uređeni od amino-kraja prema karboksi-kraju u sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. U različitim izvođenjima iz pronalaska, FRs anti-BCMA antitela (ili njegove porcije za vezivanje antigena) mogu biti identični sa humanim germinativnim sekvencama, ili se mogu modifikovanti prirodno ili veštački. Aminokiselinska konsenzusna sekvenca se može definisati na osnovu paralelne analize dva ili više CDRs.
[0042] Termin "antitelo", kao što se ovde koristi, takođe obuhvata antigen-vezujuće fragmente punih molekula antitela. Termini "antigen-vezujući deo" antitela, "antigen-vezujući fragment" antitela, i slično, kao što je ovde korišćeno, uključuje bilo koji se pojavljuje u prirodi, može enzimski dobiti, sintetički, ili genetički modifikovani polipeptid ili glikoprotein koji se specifično vezuje za antigen da se obrazuje kompleks. Antigen-vezujući fragmenti antitela se mogu dobiti, npr., iz punih molekula antitela upotrebom bilo kojih pogodnih standardnih postupaka kao što su proteolitička digestija ili postupci rekombinantnog genetičkog inženjeringa koji obuhvata manipulaciju i ekspresiju DNK koja kodira varijabilne i opciono konstantne domene antitela. Takva DNK je poznata i/ili je jednostavno dostupna iz, npr., komercijalnih izvora, biblioteka DNK (uključujući, npr., biblioteke fag-antitelo), ili se mogu sintetisati. DNK se može sekvencirati i hemijski manipulisati ili upotrebom molekularno bioloških postupaka, na primer, da bi se uredili jedan ili više varijabilnih i/ili konstantnih domena u odgovarajućoj konfiguraciji, ili da bi se uveli kodoni, kreirali cisteinski ostaci, modifikovale, dodale ili obrisale aminokiseline, itd.
[0043] Neograničavajući primeri antigen vezujućih fragmenata obuhvataju: (i) Fab fragmente; (ii) F(ab’)2 fragmente; (iii) Fd fragmente; (iv) Fv fragmente; (v) jednolančane Fv (scFv) molekule; (vi) dAt fragmente; i (vii) minimalne jedinice prepoznavanja koje se sastoje iz aminokiselinskih ostataka koji imitiraju hipervarijabilni region antitela (npr., izolovani region za određivanje komplementarnosti (CDR) kao što je CDR3 peptid), ili ograničeni FR3-CDR3-FR4 peptid. Drugi modifikovani molekuli, kao što su antitela specifična za domen, antitela sa jednim domenom, antitela sa obrisanim domenom, himerna antitela, antitela sa prenetim CDR-om, diatela, triatela, tetratela, minitela, nanotela (npr. monovalentna nanotela, bivalentna nanotela, etc.), mali imunomodularni imunofarmaceutici (SMIPs), i varijabilni IgNAR domeni ajkule, su takođe obuhvaćeni izrazom "antigen-vezujući fragment," kao što se ovde koristi.
[0044] Antigen vezujući fragment antitela će obično sadržati najmanje jedan varijabilni domen. Varijabilni domen može imati bilo koju veličinu ili aminokiselinski sastav i generalno će sadržati najmanje jedan CDR koji je susedni ili je u okviru sa sekvenci regiona okvira. U antigen vezujućim fragmentima koji imaju VHdomen povezan sa VLdomenom, VHi VLdomeni mogu se nalaziti jedan prema drugom u bilo kojem pogodnom uređenju. Na primer, varijabilni region može biti dimerni i sadržati VH-VH, VH-VLili VL-VLdimere. Alternativno, antigen vezujući fragment antitela može sadržati monomerni VHili VLdomen.
[0045] U određenim slučajevima, antigen vezujući fragment antitela može sadržati bar jedan varijabilni domen kovalentno povezanim sa bar jednim konstantnim domenom. Neograničavajući, primeri konfiguracija varijabilnih i konstantnih domena koji se mogu pronaći u antigen vezujućem fragmentu antitela iz prikazanog pronalaska uključuju: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; i (xiv) VL-CL. U bilo kojoj konfiguraciji varijabilnih i konstantnih domena, uključujući bilo koju od gore navedenih primera konfiguracija, varijabilni i konstantni domeni mogu biti ili direktno spojeni jedan sa drugim ili mogu biti spojeni u celini ili delom zgloba ili regionom linkera. Region zgloba se može sastojati iz najmanje 2 (npr., 5, 10, 15, 20, 40, 60 ili više) aminokiselina koje rezultuju fleksibilnoj ili polu-fleksibilnoj vezi između susednih varijabilnih i/ili konstantnih domena u jednom polipeptidnom molekulu. Osim toga, antigen vezujući fragment antitela iz prikazanog pronalaska može sadržati homo-dimer ili hetero-dimer (ili drugi multimer) bilo kojih gore navedenih konfiguracija od varijabilnih i konstantnih domena u nekovalentnom povezivanju jedan sa drugim i/ili sa jednim ili više monomernim VHili VLdomenom (npr., disulfidnom vezom(ama)).
[0046] U određenim izvođenjima, anti-BCMA antitela su humana antitela. Termin "humano antitelo", kao što se ovde koristi, je namenjen da obuhvati antitela koja imaju varijabilne i konstantne regione koji su dobijeni iz humanih germinativnih imunoglobulinskih sekvenci. Humana antitela mogu uključiti aminokiselinske ostatke koji su kodirani humanim germinativnim imunoglobulinskim sekvencama (npr., mutacije uvedene slučajnom ili mutagenezom specifičnom za mesto in vitro ili somatskom mutacijom in vivo), na primer u CDRs i naročito CDR3. Međutim, termin "humano antitelo", kao što se ovde koristi, nije namenjeno da obuhvati antitela kod kojih su sekvence CDR dobijene iz germinativnih drugih sisarskih vrsta, kao što je miš, koje su presađene na sekvence humanog regiona okvira.
[0047] Antitela mogu, u nekim izvođenjima, biti rekombinantna humana antitela. Termin "rekombinantno humano antitelo", kao što se ovde koristi, je namenjen da obuhvati sva humana antitela koja su pripremljena, eksprimirana, kreirana ili izolovana rekombinantnim sredstvima, kao što su antitela koja su eksprimirana korišćenjem rekombinantnog ekspresionog vektora koji je transfektovan u ćeliju domaćina (ovde u nastavku opisano), antitela koja su izolovana iz rekombinantne, kombinatorne biblioteke humanih antitela (ovde u nastavku opisano), antitela koja su izolovana iz životinje (npr., miša) koji je transgeni za gene koji kodiraju humani imunoglobulin (videti npr., Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res.20:6287-6295) ili antitela koja su pripremljena, eksprimirana, kreirana ili izolovana bilo kojim drugim sredstvima koja obuhvataju spajanje genskih sekvenci humanog imunoglobulina sa drugim sekvencama DNK. Takva rekombinantna humana antitela imaju varijabilne i konstantne regione koji su dobijeni iz humanih germinativnih imunoglobulinskih sekvenci. U određenim izvođenjima, međutim, takva rekombinantna humana antitela su podvrgnuta mutagenezi in vitro (ili, kada je korišćena životinja transgena za sekvence humanog Ig, in vivo somatska mutageneza) i stoga aminokiselinske sekvence regiona VHi VLrekombinantnih antitela su sekvence koje, dok su dobijene od i srodne humanim germinativnim VHi VLsekvencama, ne moraju u prirodi postojati sa repertoarom humanih germinativih antitela in vivo.
[0048] Humana antitela mogu postojati u dva oblika koja su povezana sa zglobnom heterogenošću. U jednom obliku, molekul imunoglobulina sadrži stabilan četvorolančani konstrukt od približno 150-160 kDa u kome su dimeri držani zajedno interlančanom disulfidnom vezom teškog lanca. U drugom obliku, dimeri nisu povezani preko interlanačanih disulfidnih veza i obrazovan je molekul od oko 75-80 kDa koji se sastoji iz kovalentno spojenog lakog i teškog lanca (pola-antitela). Ove oblike je izuzetno teško razdvojiti, čak i nakon afinitetnog prečišćavanja.
[0049] Učestalost pojavljivanja drugog oblika kod različitih intaktnih izotipova IgG je usled, ali bez ograničenja na, strukturalne razlike koje su povezane sa zglobnim regionom izotipa antitela. Supstitucija pojedinačne aminokiseline u zglobnom regionu u zglobu humanog IgG4 može značajno smanjiti drugog oblika (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) do nivoa koji se obično uočavaju korišćenjem zgloba humanog IgG1. Ovaj pronalazak obuhvata antitela koja imaju jednu ili više mutacija u zglobu, CH2 ili CH3 regionu koji može biti poželjan, na primer, u proizvodnji, da bi se unapredio prinos željenog oblika antitela.
[0050] Antitela mogu biti izolovana antitela. "Izolovano antitelo," kao što se ovde koristi, označava antitelo koje je identifikovano i razdvojeno i/ili oporavljeno iz bar jedne komponente u njegovom prirodnom okruženju. Na primer, antitelo koje je razdvojeno ili je uklonjeno iz bar jedne komponente organizma, ili iz tkiva ili ćelije u kojoj antitelo prirodno postoji ili je proizvedeno u prirodi, je "izolovano antitelo" za svrhe predmetnog pronalaska. Izolovano antitelo takođe uključuje antitelo in situ unutar rekombinantne ćelije. Izolovana antitela su antitela koja su podvrgnuta bar jednom koraku prečišćavanja ili izolovanja. Prema određenim izvođenjima, izolovano anitelo može biti suštinski oslobođeno od drugog ćelijskog materijala i/ili hemikalija.
[0051] Ovde prikazana anti-BCMA antitela mogu sadržati jednu ili više aminokiselinskih supstitucija, insercija i/ili delecija u regionu okvira i/ili regionima CDR varijabilnih domena teškog i lakog lanca u poređenju sa germinativnim sekvencama iz kojih su antitela dobijena. Takve mutacije se mogu lako utvrditi upoređivanjem ovde prikazanih aminokiselinskih sekvenci sa germinativnim sekvencama dostupnim od, na primer, javnih baza podataka sekvenci antitela. Prikazani pronalazak uključuje antitela, i njihove fragmente za vezivanje antigena, koji su dobijeni iz bilo koje od ovde prikazanih aminokiselinskih sekvenci, pri čemu su jedna ili više aminokiselina unutar jednog ili više regiona okvira i/ili regiona CDR mutirane u odgovarajući ostatak(ke) germinativne sekvence iz koje je dobijeno antitelo, ili u odgovarajući ostatak(ke) druge humane germinativne sekvence, ili u konzervativnu aminokiselinsku supstituciju odgovarajućih germinativnih ostatak(a) (takve promene u sekvenci su ovde zajedno pomenute kao "germinativne mutacije"). Osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike, počev od ovde prikazanih sekvenci varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, može jednostavno proizvesti brojna antitela i fragmente koji vežu antigen koji sadrže jednu ili više individualnih germinativnih mutacija ili njihovih kombinacija. U određenim slučajima, svi ostaci regiona okvira i/ili CDR ostaci unutar VHi/ili VLdomena su mutirani nazad u ostatke koji su mutirani nazad u originalnu germinativnu sekvencu iz koje je antitelo dobijeno. U drugim slučajevima, samo određeni ostaci su mutirani nazad u originalnu germinativnu sekvencu, npr., samo mutirani ostaci koji su pronađeni u okviru prvih 8 aminokiselina FR1 ili u okviru poslednjih 8 aminokiselina FR4, ili samo mutirani ostaci koji su pronađeni u CDR1, CDR2 ili CDR3. U drugim slučajevima, jedan ili više regiona okvira i/ili CDR ostatak(ci) su mutirani u odgovarajući ostatak(tke) različite germinativne sekvence (tj., germinativna sekvenca koja je različita od germinativne sekvence iz koje je antitelo orgiinalno dobijeno). Dаlje, antitela iz prikazanog pronalaska mogu sadržati bilo koju kombinaciju dve ili više germinativnih mutacija unutar regiona okivira i/ili CDR regiona, npr., pri čemu su određeni individualni ostaci mutirani u odgovarajući ostatak određene germinativne sekvence dok su određeni drugi ostaci koji se razlikuju od originalne germinativne sekvence održavani ili mutirani u odgovarajući ostatak različite germinativne sekvence. Jednom dobijena, antitela i fragmenti koji vežu antigen mogu sadržati jednu ili više germinativnih mutacija mogu se jednostavno ispitati za jednu ili više željenih osobina kao što su, poboljšanje specifičnosti vezivanja, povećani afinitet vezivanja, poboljšana ili pojačana antagonistička ili agonistička biološka svojstva (kao što može biti slučaj), smanjene imunogenosti, itd. Antitela i fragmenti koji vezuju antigen koji su dobijeni na ovaj opšti način su obuhvaćeni predmentim pronalaskom.
[0052] Anti-BCMA antitela mogu sadržati varijante bilo koje od ovde prikazanih HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskih sekvenci sa jednom ili više konzervativnih supstitucija. Na primer, anti-BCMA antitela mogu imati HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinske sekvence sa, npr., 10 ili manje, 8 ili manje, 6 ili manje, 4 ili manje, itd. konzervativnih aminokiselinskih supstitucija u odnosu na bilo koju od predstavljenih HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskih sekvenci.
[0053] Termin "epitop" se odnosi na determinantnu antigena koja interaguje sa specifičnim mestom vezivanja antigena u varijabilnom regionu molekula antitela poznatog kao paratop. Jedan antigen može imati više od jednog epitopa. Prema tome, različita antitela se mogu vezati za različite oblasti na antigenu i mogu imati različite biološke efekte. Epitopi mogu biti ili konformacioni ili linearni. Konformacioni epitop se proizvodi od prostorno postavljenih aminokiselina iz različitih segmenata linearnog polipeptidnog lanca. Linearni epitop je onaj koji poizvode susedni aminokiselinski ostaci u polipeptidnom lancu. U određenim okolnostima, epitope može uključiti ostatke saharida, fosforil grupa, ili sulfonil grupa na antigenu.
[0054] Termin "suštinski identitet" ili "u suštini identičan," kada se odnosi na nukleinsku kiselinu ili njen fragment, ukazuje da, kada se optimalno poravna sa odgovarajućim nukleotidnim insercijama ili delecijama sa drugom nukleinskom kiselinom (ili njenim komplementarnim lancem), postoji identitet nukleotidne sekvence u najmanje oko 95%, i poželjnije najmanje oko 96%, 97%, 98% ili 99% nukleotidnih baza, mereno bilo kojim dobro poznatim algoritmom za procenu identičnosti sekvence, kao što su FASTA, BLAST ili Gap, kao što je razmatrano ispod. Molekul nukleinske kiseline koji je suštinski identičan sa referentnim molekulom nukleinske kiseline može, u određenim slučajevima, kodirati polipeptid koji ima istu ili suštinski sličnu aminokiselinsku sekvencu kao polipeptid koji je kodiran referentnim molekulom nukleinske kiseline.
[0055] Kao što se primenjuje na polipeptida, termin "suštinska sličnost" ili "u suštini sličan" označava da su dve polipeptidne sekvence, kada se optimalno poravnaju, kao što je pomoću programa GAP ili BESTFIT upotrebom podrazumevanih “gap weights”, dele najmanje 95% identitet u sekvenci, još poželjnije bar 98% ili 99% identitet u sekvenci. Poželjno, pozicije ostataka koji nisu identični se razlikuju u konzervativnim aminokiselinskim supstitucijama. "Konzervativna aminokiselinska supstitucija" je ona u kojoj je aminokiselinski ostatak supstituisan sa drugim aminokiselinskim ostatkom koji ima bočni lanac (R grupu) sa sličnim hemijskim osobinama (npr., naelektrisanje ili hidrofobnost). Generalno, konzervativna aminokiselinska supstitucija neće suštinski izmeniti funkcionalne osobine proteina. U slučajevima u kojima se dve ili više aminokiselinskih sekvenci razlikuju jedna od druge konzervativnim supstitucijama, procenat identiteta u sekvenci ili stepen sličnosti se može podesiti nagore da se ispravi konzervativna priroda supstitucije. Stručnjacima u oblasti tehnike su dobro poznata sredstva za ovo podešavanje. Vidi, npr., Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Primeri aminokiselinskih grupa koje imaju bočne lance sa sličnim hemijskim osobinama obuhvataju (1) alifatični bočni lanca: glicin, alanin, valin, leucin i izoleucin; (2) alifatični-hidroksil bočni lanci: serin i treonin; (3) bočni lanci koji sadrže amid: asparagin i glutamin; (4) aromatični bočni lanci: fenilalanin, tirozin, i triptofan; (5) bazni bočni lanci: lizin, arginin, i histidin; (6) kiseli bočni lanci: aspartat i glutamat, i (7) bočni lanci koji sadrže sumpor su cistein i metionin. Poželjne supstitucione grupe aminokiselina su: valin-leucinizoleucin, fenilalanin-tirozin, lizin-arginin, alanin-valin, glutamat-aspartat, i asparagin-glutamin. Alternativno, konzervativna zamena je bilo koja promena koja ima pozitivnu vrednost u matrici logverovatnoće PAM250 prikazanoj u Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445."Umereno konzervativna" zamena je bilo koja promena koja ima nenegativnu vrednost u matrici log-verovatnoće PAM250.
[0056] Sličnost u sekvenci za polipeptide, koja je takođe označena identitet sekvence, je obično merena upotrebom softvera za analizu sekvenci. Softver za analizu proteina poklapa slične sekvence upotrebom mera sličnosti koje su dodeljene različitim supstitucijama, delecijama i drugim modifikacijama, uključujući konzervativne aminokiselinske supstitucije. Na primer, GCG softver sadrži programe kao što su Gap i Bestfit koji se mogu koristiti sa podrazumevanim parametrima da se odredi homologija u sekvenci ili identitet u sekvenci između blisko povezanih polipeptida, kao što su homologni polipeptidi iz različitih vrsta organizama ili između divljeg tipa proteina i njegovog muteina. Videti, npr., GCG Verziju 6.1. Polipeptidne sekvence se takođe mogu uporediti korišćenjem FASTA korišćenjem podrazumevanih ili preporučenih parametara, program GCG Verzija 6.1. FASTA (npr., FASTA2 i FASTA3) obezbeđuje poravnanja i procenat identiteta u sekvenci u regionima sa najboljim poklapanjem između ispitivane i sekvenci koje se pretražuju (Pearson (2000) supra). Drugi poželjni algoritam kada se uporedi sekvenca iz prikaza sa bazom podataka koja sadrži veliki broj sekvenci iz različitih organizama je kompjuterski program BLAST, naročito BLASTP ili TBLASTN, korišćenjem podrazumevanih parametara. Videti, npr., Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol.215:403-410 i Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res.25:3389-402.
[0057] Kao što je ovde korišćeno, termini "nukleinska kiselina" ili "polinukleotidi" se odnosi na nukleotide i/ili polinukleotide, kao što je dezoksiribonukleinska kiselina (DNK) ili ribonukleinska kiselina (RNK), oligonukleotidi, fragmenti dobijeni lančanom reakcijom polimeraze (PCR), i fragmenti koji su generisani bilo kojim od spajanja, cepanja, dejstvom endonukleaze, i dejstvom egzonukleaze. Molekuli nukleinske kiseline mogu se sastojati iz monomera koji su nukleotidi koji se nalaze u prirodi (kao što su DNK i RNK), ili analozi nukleotida koji se nalaze u prirodi (npr., enantiomerni oblici nukleotida koji se nalaze u prirodi), ili kombinacija oba navedena. Modifikovani nukleotidi mogu imati izmene u ostacima šećera i/ili u ostacima baze pirimidina ili purina. Modifikacije šećera obuhvataju, na primer, zamenu jedne ili više hidroksil grupa sa halogenima, alkil groupama, aminima, i azido grupama, ili šećeri mogu biti funkcionalizovani kao etri ili estri. Osim toga, ukupni ostatak šećera može biti zamenjen sa sterično i elektronski sličnim strukturama, kao što su aza-šećeri i analozi karbocikličnih šećera. Primeri modifikacija u ostaci baze obuhvataju alkilovane purine i pirimidine, acilovane purine ili pirimidine, ili druge dobro poznate heterociklične supstituente. Monomeri nukleinskih kiselina mogu biti spojeni fosfodiestarskim vezama ili analozima takvih veza. Nukleinske kiseline mogu biti ili jednolančane ili dvolančane.
[0058] Termin "himerni antigenski receptor" (CAR) se odnosi na molekule koji kombinuju vezujući domen protiv komponente koja se nalazi na ciljnoj ćeliji, za specifičnosti zasnovane na antitelu za željeni antigen (npr., tumorski antigen, kao što je BCMA) sa intracelularnim domenom koji aktivira T ćelijski receptor za dobijanje himernog proteina koji pokazuje specifičnu anti-ciljnu ćelijsku imunološku aktivnost. Generalno, CARs se sastoje od ekstracelularnog jednolančanog domena za vezivanje antitela (scFv) spojenog sa intracelularnim signalnim domenom zeta lanca kompleksa receptora antigena T ćelija, i imaju sposobnost, kada se eksprimiraju u T ćelijama, da preusmeri prepoznavanje antigena na osnovu specifičnosti monoklonskog antitela.
[0059] Termin "vektor," kao što je ovde korišćen, uključuje, ali nije ograničen na, virusni vektor, plazmid, vektor RNK ili linearni ili cirkularni molekul DNK ili RNK koji se može sastojati iz hromozomskih, nehromozomskih, polusintetičkih ili sintetičkih nukleinskih kiselina. U nekim slučajevima, vektori su oni koji su sposobni za autonomnu replikaciju (epizomalni vektor) i/ili ekspresiju nukleinskih kiselina u koje su povezani (ekspresioni vektori). Stručnjacima iz oblasti tehnike su poznati veliki brojevi pogodnih vektora i komercijalno su dostupni. Virusni vektori uključuju retrovirus, adenovirus, parvovirus (npr., adenopovezane viruse), koronavirus, negative strand RNK viruse sa negativnim lancem kao što je ortomiksovirus (npr., virus influence), rabovirus (npr., besnilo i virus vezikularnog stomatitisa), paramiksovirus (npr. boginje i Sendai), RNK virusi pozitivnog lanca kao što su pikornavirus i alfavirus, i DNK virusi sa dvostrukim lancem uključujući adenovirus, herpesvirus (npr., Herpes Simpleks virus tipovi 1 i 2, Epštajn-Bar virus, citomegalovirus), i virus malih boginja (npr., vakcinija, boginje živine i virus boginja kanarinaca). Drugi virusi uključuju Norwalk virus, togavirus, flavivirus, reovirusi, papovavirus, hepadnavirus, i hepatitis virus, na primer. Primeri retrovirusa obuhvataju: ptičiji leukosis-sarkoma, sisarski C-tip, B-tip virusi, D tip virus, HTLV-BLV grupa, i lentivirus.
[0060] "Kostimulatorni domen" ili "kostimulatorni molekul" se odnosi na srodnog vezujućeg partnera na T-ćeliji koji se specifično vezuje za kostimulatnorni ligand, čime posreduje kostimulatorni odgovor ćelije, kao što je, ali ne ograničavajući se na proliferaciju. Kostimulatorni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, molekul MHC klase I, BTLA i receptor Tol liganda. Primeri kostimulatornih molekula uključuju CD27, CD28, CD8, 4-1BB (CD137) (SEQ ID NO: 99), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antigen-1 povezan sa funkcijom limfocita (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7- H3 i ligand koji se specifično vezuje za CD83 i slično. Kostimulatoni molekul je molekul na površini ćelije koji je drugačiji od receptora antigena ili njihovih liganada koji je neophodan za efikasan imuni odgovor.
[0061] "Kostimulatorni ligand" se odnosi na molekul na antigen prezentujućoj ćeliji koja specifično vezuje srodni kostimulatorni molekul na T-ćeliji, čime se obezbeđuje signal koji, pored primarnog signala obezbeđenog, na primer, vezivanjem kompleksa TCR/CD3 sa molekulom MHC napunjenim sa peptidnom, posreduje u T ćelijskom odgovoru, uključujući, ali bez ograničenja na, aktivaciju proliferacije, diferencijaciju i slično. Kostimulatorni ligand može uključiti ali nije ograničen na CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, inducibilni kostimulatorni ligand (ICOS- L), međućelijski adhezioni molekul (ICAM), CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, limfotoksin beta receptor, 3/TR6, ILT3, ILT4, agonist ili antitelo koje vezuje receptor Tol liganda i ligand koji se specifično vezuje sa B7-H3.
[0062] "Kostimulatorni signal" se odnosi na signal, koji u kombinaciji sa primarnim signalom, kao što je spajanje TCR/CD3, dovodi do proliferacije T ćelija i/ili pojačane ili smanjene regulacije ključnih molekula.
[0063] Termin "ekstracelularni domen za vezivanje liganda," kao što se ovde koristi, se odnosi na oligoili polipeptid koji je sposoban da veže ligand, npr., molekul na površini ćelije. Na primer, ekstracelularni domen koji se vezuje za ligand se može biti izabran da prepozna ligand koji deluje kao površinski marker ćelije na ciljnim ćelijama povezanim sa određenim bolesnim stanjem (npr., kancerom). Primeri markera ćelijske površine koji mogu delovati kao ligandi uključuju one povezane sa virusnim, bakterijskim i parazitskim infekcijama, autoimunim bolestima i ćelijama kancera.
[0064] Termin "subjekt" ili "pacijent" kao što se ovde koristi obuhvata sve članove životinjskog carstva uključujući ne-humane primate i humana bića. U jednom izvođenju, pacijenti su humana bića koja imaju kancer (npr., multipli mijelom).
[0065] "Domen za transdukciju signala" ili "signalni domen" CAR, kao što se ovde koristi, odgovoran je za intracelularnu signalizaciju nakon vezivanja ekstracelularnog domena vezivanja liganda za metu što dovodi do aktivacije imune ćelije i imunološkog odgovora. Drugim rečima, domen za transdukciju signala odgovoran je za aktivaciju najmanje jedne od normalnih efektorskih funkcija imune ćelije u kojoj je CAR eksprimiran. Na primer, efektorska funkcija T ćelije može biti citolitička aktivnost ili pomoćna aktivnost uključujući lučenje citokina. Dakle, termin "domen za transdukciju signala" odnosi se na deo proteina koji transdukuje signal efektorske funkcije i usmerava ćeliju da obavlja specijalizovanu funkciju. Primeri domena za transdukciju signala za upotrebu u CAR mogu biti citoplazmatske sekvence T ćelijskog receptora i ko-receptora koji deluju zajedno da iniciraju transdukciju signala nakon angažovanja receptora antigena, kao i bilo koji derivat ili varijanta ovih sekvenci i bilo koji sintetički sekvence koja ima istu funkcionalnu sposobnost. U nekim slučajevima, signalni domeni obuhvataju dve različite klase citoplazmatskih signalnih sekvenci, one koje iniciraju primarnu aktivaciju zavisnu od antigena, i one koje deluju na antigen nezavisan način da bi obezbedile sekundarni ili ko-stimulatorni signal. Primarne citoplazmatske signalne sekvence mogu da sadrže signalne motive koji su poznati kao aktivacioni motivi ITAM-a zasnovani na imunoreceptoru na tirozinu. ITAM su dobro definisani signalni motivi koji se nalaze u intracitoplazmatskom repu različitih receptora koji služe kao mesta vezivanja za tirozin kinaze klase syk/zap70. Primeri ITAM-a uključuju one izvedene iz TCRzeta, FcRgama, FcRbeta, FcRepsilon, CD3gama, CD3delta, CD3epsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b i CD66d. U nekim izvođenjima, domen za transdukciju signala CAR može da sadrži CD3zeta domen signalizacije (SEQ ID NO: 100).
Himerni antigenski receptori (CARs)
[0066] Himerni antigenski receptori (CAR) preusmeravaju specifičnost T ćelija ka antigenima koje prepoznaju antitela koja se eksprimiraju na površini ćelija (npr., ćelije raka), dok T ćelijski receptori (TCR) proširuju opseg ciljeva da bi uključili intracelularne antigene (npr., tumorski antigeni).
[0067] Jedan aspekt predmetnog pronalaska uključuje himerni antigenski receptor (CAR) koji je specifičan za antigen sazrevanja B-ćelija (BCMA) eksprimiran na površini malignih plazma ćelija. U pronalasku, CAR obuhvata ekstracelularni ciljno-specifičan vezujući domen, transmembranski domen, intracelularni signalni domen (izveden iz CD3zeta) i jedan ili više kostimulatornih signalnih domena izvedenih iz kostimulatornog molekula (4-1BB). U jednom aspektu, CAR uključuje zglob ili regiona spejsera između ekstracelularnog vezujućeg domena i transmembranskog domena, kao što je zglob CD8alfa.
[0068] Domen za vezivanje ili ekstracelularni domen CAR obezbeđuje CAR-u sposobnost da se veže za ciljni antigen od interesa. Prema izlaganju, domen za vezivanje (npr., domen za vezivanje liganda ili domen za vezivanje antigena) može biti bilo koji protein, polipeptid, oligopeptid, ili peptid koji poseduje sposobnost da specifično prepozna i veže biološki molekul (npr., receptor ćelijske površine ili tumorski protein, ili njegova komponenta). Domen za vezivanje uključuje bilo koji prirodni, sintetički, polu-sintetički, ili rekombinantno proizveden vezujući partner za biološki molekul od interesa. Na primer, i kao što je ovde dalje opisano, domen za vezivanje mogu biti varijabilni regioni lakog lanca i teškog lanca antitela, ili varijabilni regioni lakog i teškog lanca mogu biti zajedno spojeni u jedan lanac i u bilo kojoj orijentaciji (npr., VL-VH ili VH-VL). Poznato je mnoštvo testova za identifikovanje domena za vezivanje iz predmetnog pronalaska koji se specifično vežu za određenu metu, uključujući Western blot, ELISA, protočna citometrija, ili analiza površinske plazmonske rezonance (npr., upotrebom analize BIACORE). Meta može biti antigen od kliničkog interesa protiv koga bi bilo poželjno izazvati efektorski imunski odgovor koji rezultuje ubijanjem tumora. U pronalasku, ciljni antigen vezujućeg domena himernog antigenskog receptora je BCMA protein na površini ćelija tumora, naročito, ćelija tumora linije B ćelija, kao što su ćelije multiplog mijeloma.
[0069] Ilustrativni domeni koji se vezuju za ligand obuhvataju proteine za vezivanje antigena, kao što su fragmenti antitela koji vezuju antigen, kao što su scFv, scTCR, ekstracelularni domeni receptora, ligandi za molekule/receptore ćelijske površine, ili njihovi domeni za vezivanje receptora, i proteini koji vezuju tumor. U određenim slučajevima, domeni koji se vezuju za antigen uključeni u CAR ovog prikaza mogu biti varijabilni region (Fv), CDR, Fab, scFv, VH, VL, varijanta antitela domena (dAt), antitelo kamelide (VHH), varijanta domena fibronektina 3, varijanta ponovka ankirina i drugi vezujući domen specifičan za antigen izveden iz drugih proteinskih skela. U pronalasku, domen vezivanja je scFv.
[0070] U jednom aspektu prikaza, vezujući domen CAR je anti-BCMA jednolančano antitelo (scFv), i može biti mišje, humano ili humanizovano scFv. Jednolančana antitela se mogu klonirati iz gena V regiona hibriodoma specifičnog za željenu metu. Opisan je postupak koji se može koristiti za kloniranje varijabilnog regiona teškog lanca (VH) i varijabilnog regiona lakog lanca (VL), na primer, u Orlandi et al., PNAS, 1989; 86: 3833-3837. Prema tome, u određenim aspektima prikaza, vezujući domen sadrži vezujući domen koji potiče od antitela ali može biti vezujući domen koji nije izveden iz antitela. Vezujući domen koji je izveden iz antitela može biti fragment antitela ili genetički modifikovani proizvod jednog ili više fragmenata antitela, čiji je fragment uključen u vezivanje sa antigenom.
[0071] U određenim izvođenjima, CAR iz prikazanog prolaska mogu da sadrže linker između različitih domena, koji je dodat za odgovarajući razmak i odgovarajuću konformaciju molekula. Na primer, u jednom izvođenju, može postojati linker između vezujućeg domena VH ili VL koji mogu imati dužinu 1-10 aminokiselina. U ostalim izvođenjima, linker između bilo kojih domena himernog antigenskog receptora može imati dužinu između 1-20 ili 20 aminokiselina. U tom pogledu, linker može imati dužinu 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 aminokiselina. U daljim izvođenjima, linker može imati dužinu 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ili 30 aminokiselina. Opsezi uključujući ovde opisane brojeve su ovde takođe uključeni, npr., linker dužine 10-30 aminokiselina.
[0072] U određenim izvođenjima, linkeri pogodni za upotrebu u ovde opisanom CAR su fleksibilni linkeri. Pogodni linkeri se mogu brzo odabrati i mogu biti bilo koje od pogodnih različitih dužina, kao što je od 1 aminokiseline (npr., Gly) do 20 aminokiselina, od 2 aminokiselina do 15 aminokiselina, od 3 aminokiselina do 12 aminokiselina, uključujući 4 aminokiseline do 10 aminokiselina, 5 aminokiselina do 9 aminokiselina, 6 aminokiselina do 8 aminokiselina, ili 7 aminokiselina do 8 aminokiselina, i može biti 1, 2, 3, 4, 5, 6, ili 7 aminokiselina.
[0073] Primeri fleksibilnih linkera obuhvataju polimere glicina (G)n, polimere glicina-serina, gde je n broj od najmanje jednog, polimera glicina-alanina, polimera alanin-serina, i drugi fleksibilni linkeri koji su poznati u oblasti tehnike. Polimeri glicina i glicin-serina su relativno nestrukturirani, i prema tome može biti u stanju da služi kao neutralna veza (eng. tether) između domena spojenih proteina kao što su ovde opisani CAR. Glicin ima pristup znatno većem phi-psi prostoru nego čak alanin, i mnogo je manje ograničen od ostataka sa dužim bočnim lancima (videti Scheraga, Rev. Computational Chem.
11173-142 (1992)). Stručnjak koji je uobičajeno verziran u stanje tehnike će prepoznati da dizajn CAR može uključiti linkere koji su potpuno ili delimično fleksibilni, tako da linker može uključiti fleksibilni linker kao i jedan ili više delova koji daju manje fleksibilnu strukturu da se obezbedi željena CAR struktura. Specifični linkeri obuhvataju (G4S)nlinkere, gde n=1-3, kao što je prikazano u SEQ ID NOs: 95-97, kao i linker predstavljen u SEQ ID NO: 96.
[0074] Domen za vezivanje CAR može pratiti "spejser," ili, "zglob," koji se odnosi na region koji pomera domen vezivanja antigena od površine efektorske ćelije kako bi se omogućio pravilan kontakt ćelija/ćelija, vezivanje antigena i aktivacija (Patel et al., Gene Therapy, 1999; 6: 412-419). Region zgloba u CAR je generalno između transmembranskog (TM) i domena za vezivanje. U određenim slučajevima, region zgloba je region zgloba imunoglobulina i može biti region zgloba divljeg tipa imunoglobulina ili izmenjeni region zgloba divljeg tipa imunoglobulina. Drugi primeri regiona zgloba korišćeni u ovde opisanim CARs uključuju region zgloba koji je izveden iz ekstracelularnih regiona tipa 1 membranskih proteina kao što su CD8alfa, CD4, CD28 i CD7, koji mogu biti zglobni regioni divljeg tipa iz ovih molekula ili mogu biti izmenjeni. U jednom izvođenju, region zgloba sadrži zglob CD8alfa (SEQ ID NO: 97).
[0075] "Transmembranski" region ili domen je deo CAR koji usidruje ekstracelularni vezujući deo za plazma membranu imunske efektorske ćelije, i olakšava vezivanje domena vezivanja za ciljni antigen. Transmembranski domen može biti CD3zeta transmembranski domen, međutim drugi transmembranski domeni koji se mogu koristiti sadrže one koji su dobijeni iz CD8alfa, CD4, CD28, CD45, CD9, CD16, CD22, CD33, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, i CD154. Na primer, transmembranski domen je transmembranski domen CD137. U nekim izvođenjima, transmembranski domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 98. U određenim slučajevima, transmembranski domen je sintetički u kom slučaju bi pretežno sadržao hidrofobne ostatke kao što su leucin i valin.
[0076] "Intracelularni signalni domen" ili "signalni domen" se odnosi na deo proteina himernog anigenskog receptora koji učestvuje u prenošenju poruke o efikasnom vezivanju CAR za ciljni antigen u unutrašnjos imunske efektorske ćelije da izazove funkciju efektorske ćelije, npr., aktivaciju, proizvodnju citokina, proliferaciju i citotoksičnu aktivnost, uključujući oslobađanje citotoksičnih faktora u ciljnu ćeliju vezanu za CAR, ili druge odgovore ćelija izazvane vezivanjem antigena za ekstracelularni domen CAR. Termin "efektorska funkcija" se odnosi na specijalizovanu ćelijsku funkciju. Efektorska funkcija T ćelije, na primer, može biti citolitička aktivnost ili pomoć ili aktivnost koja uključuje lučenje citokina. Prema tome, termini "intracelularni signalni domen" ili "signalni domen," koji se ovde koriste naizmenično, se odnose na deo proteina koji transdukuje signal efektorske funkcije i koji usmerava ćeliju da obavlja specijalizovanu funkciju. Dok se obično može koristiti ceo intracelularni signalni domen, u mnogim slučajima nije neophodno korisiti ceo domen. U meri u kojoj se koristi skraćeni deo intracelularnog signalnog domena, takav skraćeni deo može se koristiti umesto celog domena sve dok transdukuje signal efektorske funkcije. Termin intracelularni signalni domen treba da uključi bilo koji skraćeni deo intracelularnog signalnog domena koji je dovoljan za transdukciju signala efektorske funkcije. Intracelularni signalni domen je takođe poznat kao, "domen transdukcije signala," i obično se izvodi iz delova humanih CD3 ili FcRy lanaca.
[0077] Poznato je da signali generisani samo preko T ćelijskog receptora nisu dovoljni za potpunu aktivaciju T ćelije i da je takođe potreban sekundaran, ili kostimulatorni signal. Prema tome, može se reći da je aktivacija T ćelija posredovana sa dve različite klase of citoplazmatskih signalnih sekvenci: onih koje iniciraju zavisnu od antigena primarnu aktivaciju kroz T ćelijski receptor (primarne citoplazmatske signalne sekvence) i one koje deluju na antigen nezavisan način da se obezbedi sekundarni ili kostimulatorni signal (sekundarne citoplazmatske signalne sekvence). Citoplazmatske signalne sekvence koje deluju na kostimulatorni način mogu sadržati signalne motive koji su poznati pod imenom imunoreceptorski tirozinski aktivacioni motiv ili ITAM.
[0078] Primeri ITAM koje sadrže primarne citoplazmatske signalne sekvence koje imaju naročitu upotrebu u prikazu uključuju one izvedene iz TCRzeta, FcRgama, FcRbeta, CD3gama, CD3delta, CD3epsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b i CD66d. U pronalasku, intracelularni signalni domen anti-BCMA CAR-a iz pronalaska su izvedeni iz CD3zeta. U nekim izvođenjima, signalni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100.
[0079] Kao što je ovde korišćeno, termin, "kostimulatorni domen za signalizaciju," ili "kostimulatorni domen", se odnosi na deo CAR koji sadrži intracelularni domen kostimulatornog molekula. Kostimulatorni molekuli su molekuli na površini ćelije koji nisu receptori za antigen ili Fc receptori koji obezbeđuju drugi signal koji je neophodan za efikasnu aktivaciju i funkciju T limfocita nakon vezivanja za antigen. Primeri takvih kostimulatornih molekula sadrže CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134), CD30, CD40, PD-1, ICOS (CD278), LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKD2C, B7-H2 i ligand koji se specifično vezuje za CD83. Prema tome, dok prikazani pronalazak obezbeđuje primere kostimulatornih domena izvedenih iz CD3zeta i 4-1BB, drugi kostimulatorni domeni se razmatraju za upotrebu sa ovde opisanim CAR-ovima. Uključivanje jednog ili više kostimulatornih signalnih domena može pojačati efikasnost i ekspanziju T ćelija koje eksprimiraju CAR receptore. Domeni intracelularne signalizacije i kostimulatorne signalizacije mogu biti povezani bilo kojim redosledom u tandemu sa karboksilnim krajem transmembranskog domena. U nekim izvođenjima, kostimulatorni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 99.
[0080] Iako se pokazalo da CAR-ovi zasnovani na scFv-u modifikovani da sadrže signalni domen iz CD3 ili FcRgama daju snažan signal za aktivaciju T ćelija i funkciju efektora, oni nisu dovoljni da izazovu signale koji promovišu preživljavanje i ekpanziju T ćelija u odsustvu pratećeg kostimulatornog signala. Drugi CAR koji sadrže vezujući domen, zglob, transmembranski i signalni domen izveden iz CD3zeta ili FcRgama zajedno sa jednim ili više kostimulatornih signalnih domena (npr., intracelularni kostimulatorni domeni izvedeni iz CD28, CD137, CD134 i CD278) mogu efikasnije da usmere antitumorsku aktivnost kao i povećano lučenje citokina, litičku aktivnost, preživljavanje i proliferaciju in vitro T ćelijama koje eksprimiraju CAR, i kod životinjskih modela i pacijenata sa rakom (Milone et al., Molecular Therapy, 2009; 17: 1453-1464; Zhong et al., Molecular Therapy, 2010; 18: 413-420; Carpenito et al., PNAS, 2009; 106:3360-3365).
[0081] U različitim aspektima, BCMA CAR-ovi otkrivanja sadrže (a) anti-BCMA scFv kao vezujući domen (npr. scFv koji ima vezujuće regione (npr. CDR ili varijabilne domene) iz bilo kog ili više BCMA antitela identifikovanih u tabeli 1) (b) zglobni region izveden iz humanog CD8alfa, (c) humani CD8alfa transmembranski domen, i (d) intracelularni signalni domen CD3 zeta lanca CD3 zeta lanca (CD3), i opciono jedan ili više kostimulatornih signalnih domena, npr. 4-1BB. Na primer, različiti domeni proteina su raspoređeni od amino do karboksilnog kraja sledećim redosledom: vezujući domen, zglobni region i transmembranski domen. Intracelularni signalni domen i opcioni ko-stimulatorni signalni domeni su vezani za transmembranski karboksi kraj u bilo kom redosledu u tandemu da bi formirali jednolančani himerni polipeptid. Na primer, konstrukt nukleinske kiseline koji kodira BCMA CAR je himerni molekul nukleinske kiseline koji sadrži molekul nukleinske kiseline koji sadrži različite kodirajuće sekvence, na primer, (5' do 3') kodirajuće sekvence humanog anti-BCMA scFv, čoveka CD8alfa zglob, humani CD8alfa transmembranski domen i CD3zeta intracelularni signalni domen. U drugom slučaju, konstrukt nukleinske kiseline koji kodira BCMA CAR je himerni molekul nukleinske kiseline koji sadrži molekul nukleinske kiseline koji sadrži različite kodirajuće sekvence, na primer, (5' do 3') kodirajuće sekvence humanog anti-BCMA scFv, humani CD8alfa zglob, humani CD8alfa transmembranski domen, 4-1BB kostimulatorni domen i CD3zeta kostimulatorni domen.
[0082] U određenim izvođenjima, polinukleotid koji kodira CAR pronalaska se insertuje u vektor. Vektor je nosač u koji polinukleotid koji kodira protein može biti kovalentno insertovan da bi se došlo do ekspresije tog proteina i/ili kloniranja polinukleotida. Takvi vektori se takođe mogu nazvati "ekspresioni vektori". Izolovani polinukleotid može da se ubaci u vektor korišćenjem bilo koje pogodne metode poznate u tehnici, na primer, bez ograničenja, vektor može da se digestira korišćenjem odgovarajućih restrikcionih enzima, a zatim može biti povezan sa izolovanim polinukleotidom koji ima odgovarajuće restrikcione krajeve. Ekspresioni vektori imaju sposobnost da ugrade i eksprimiraju heterologne ili modifikovane sekvence nukleinske kiseline koje kodiraju najmanje deo genskog proizvoda koji može da se transkribuje u ćeliji. U većini slučajeva, molekuli RNK se zatim prevode u protein. Ekspresioni vektori mogu da sadrže različite kontrolne sekvence, koje se odnose na sekvence nukleinske kiseline neophodne za transkripciju i eventualno translaciju operativno povezane kodirajuće sekvence u određenom organizmu domaćina. Pored kontrolnih sekvenci koje upravljaju transkripcijom i translacijom, vektori i ekspresioni vektori mogu sadržati sekvence nukleinskih kiselina koje služe i drugim funkcijama i o kojima se govori infra. Ekspresioni vektor može da sadrži dodatne elemente, na primer, ekspresioni vektor može imati dva sistema replikacije, što mu omogućava da se održi u dva organizma, na primer u humanim ćelijama za ekspresiju i u prokariotskom domaćinu za kloniranje i amplifikaciju.
[0083] Ekspresioni vektor može imati 5’ ushodne i 3’ nishodne regulatorne elemente kao što su sekvence promotora kao što su CMV, PGK i EF1alfa. promotori, prepoznavanje ribozoma i TATA box za vezivanje, i 3’ UTR AAUAAA sekvenca za terminaciju transkripcije za efikasnu transkripciju gena i translaciju u njegovog odgovarajućoj ćeliji domaćinu. Drugi pogodni promotori obuhvataju konstitutivni promotor virusa 40 kod majmuna (SV40) rani promotor, virus tumora mlečne žlezde kod miša (MMTV), HIV LTR promotor, MoMuLV promotor, promotor virusa leukemije ptica, EBV trenutni rani promotor, i rous sarkoma virusni promotor. Promotori humanog gena se takođe mogu koristiti, uključujući, ali ne ograničavajući se na promotor aktina, promotor miozina, promotor hemoglobina i promotor kreatin kinaze. U određenim izvođenjima inducibilni promotori su takođe razmatrani kao deo vektora koji eksprimiraju himerni antigenski receptor. Ovo obezbeđuje molekularni prekidač sposoban da uključi ekspresiju polinukleotidne sekvence od interesa ili isključi ekspresiju. Primeri inducibilnih promotora uključuju, ali nisu ograničeni na metalotioninski promotor, glukokortikoidni promotor, progesteronski promotor, ili tetraciklični promotor.
[0084] Ekspresioni vektor može imati dodatnu sekvencu kao što je 6x-histidin, c-Myc, i FLAG tagove koji su inkorporisani u eksprimirane CARs. Prema tome, ekspresioni vektor može biti modifikovan da sadrži 5’ i 3’ netranslantirane regulatorne sekvence koje nekada mogu funkcionisati kao sekvence pojačivača, regione promotora i/ili sekvence terminatora koje mogu da olakšaju ili poboljšaju efikasnu transkripciju nukleinske kiselin(e)a od interesa koje su nošene na ekspresionom vektoru. Ekspresioni vektor može takođe da bude modifikovan za replikaciju i/ili funkcionalnost ekspresije (npr., transkripcija i translacija) u određenom ćelijskom tipu, ćelijskoj lokaciji, ili tipu tkiva. Ekspresioni vektori mogu obuhvatiti selektabilni marker za održavanje vektora u domaćinu ili ćeliji recipijentu.
[0085] U različitim izvođenjima, vektori su plazmidi, sekvence sa autonomnom replikacijom, i transponzabilni elementi. Dodatni primeri vektora uključuju, bez ograničenja, plazmide, fagemide, kozmide, veštačke hromozome kao što su kvaščev veštački hromozom (YAC), bakterijski veštački hromozom (BAC), ili P1-izvedeni veštački hromozom (PAC), bakteriofagi kao što su lambda fag ili M13 fag, i životinjski virusi. Primeri kategorija životinjskih virusa koji su korisni kao vektori obuhvataju, bez ograničenja, retrovirus (uključujući lentivirus), adenovirus, adeno-povezani virus, herpesvirus (npr., herpes simpleks virus), virus malih boginja, bakulovirus, papilomavirus, i papovavirus (npr., SV40). Primeri ekspresionih vektora su Lenti-X<TM>Bicistronic ekspresioni sistem (Neo) vektora (Clontrch), pClneo vektori (Promega) za ekspresiju u sisarskim ćelijama; pLenti4/V5-DEST.TM., pLenti6/V5-DEST.TM., i pLenti6.2N5-GW/lacZ (Invitrogen) za transfer gena posredovan lentivirusom i ekspresiji u sisarskim ćelijama. Ovde prikazane kodirajuće sekvence CARs se mogu spojiti u takve ekspresione vektore za ekspresiju himernog proteina u sisarskim ćelijama.
[0086] U određenim izvođnjima, nukleinske kiseline koje kodiraju CAR iz predmetnog pronalaska su obezbeđene u virusnom vektoru. Virusni vektor može biti poreklom iz retrovirusa, lentivirusa, ili penastog virusa. Kao što je ovde korišćen, termin, "virusni vektor," odnosi se na konstrukt vektora nukleinske kiseline koji uključuje bar jedan element virusnog porekla i ima kapacitet za pakovanje u česticu virusnog vektora. Virusni vektor može da sadrži kodirajuću sekvencu za različite ovde opisane himerne proteine umesto neesencijalnih virusnih gena. Vektor i/ili čestica se mogu koristiti za svrhu prenošenja DNK, RNK ili drugih nukleinskih kiselina u ćelije bilo in vitro ili in vivo. U oblasti tehnike su poznati brojni virusni vektori.
[0087] U određenim izvođenjima, virusni vektor koji sadrži kodirajuću sekvencu za ovde opisani CAR je retrovirusni vektor ili lentivirusni vektor. Termin "retrovirusni vektor" se odnosi na vektor koji sadrži strukturalne i funkcionalne genske elemente koji su primarno dobijeni iz retrovirusa. Termin "lentivirusni vektor" se odnosi na vektor koji sadrži strukturalne i funkcionalne genske elemente izvan LTRs koji su primarno dobijeni iz lentivirusa.
[0088] Ovde navedeni retrovirusni vektori za upotrebu mogu da se dobiju iz kojeg poznatog retrovirusa (npr., tip c retrovirusa, kao što je Moloney mišji sarkoma virus (MoMSV), Harvey mišji sarkoma virus (HaMuSV), mišji sisarski tumorski virus (MuMTV), virus leukemije majmuna gibona (GaLV), mačji virus leukemije (FLV), spumavirus, Friend, mišji virus matičnih ćelija (MSCV) i Rous Sarkoma Virus (RSV)). Retrovirusi" iz pronalaska takođe obuhvataju viruse leukemije humane T ćelije, HTLV-1 i HTLV-2, i lentivirusen familije retrovirusa, kao što su virusi humane imunodeficijencije, HIV-1, HIV-2, virus imunodeficijencije majmuna (SIV), virus mačije imunodeficijencije (FIV), virus imunodeficijencije konja (EIV), i druge klase retrovirusa.
[0089] Ovde navedeni lentivirusni vektor se odnosi na vektor koji se dobija od lentivirusa, grupe (ili roda) retrovirusa koji izazivaju sporo razvijanje bolesti. Virusi koji su sadržani u ovoj grupi obuhvataju HIV (virus humane imunodeficijencije; uključujući HIV tip 1, i HIV tip 2); visna-maedi; virus kozjeg artritisa-encefalitisa; virus infektivne anemije konja; virus mačje imunodeficijencije (FIV); virus goveđe imunodeficijencije (BIV); i virus imunodeficijencije majmuna (SIV). Priprema rekombinantnog lentivirusa može se postići upotrebom postupaka prema Dull et al. i Zufferey et al. (Dull et al., J. Virol., 1998; 72: 8463-8471 i Zufferey et al., J. Virol.1998; 72:9873-9880).
[0090] Retrovirusni vektori (tj., i lentivirusni i ne-lentivirusni) za upotrebu u prikazanom pronalasku mogu se obrazovati upotrebom standardnih postupaka za kloniranje kombinovanjem željenih sekvenci DNK u ovde opisanom redosledu i orijentaciji (Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F. M. et al. (eds.) Greene Publishing Associates, (1989), Sections 9.10-9.14 i drugim standardnim laboratorijskim priručnicima; Eglitis, et al. (1985) Science 230:1395-1398; Danos i Mulligan (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6460-6464; Wilson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:3014-3018; Armentano et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6141-6145; Huber et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8039-8043; Ferry et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8377-8381; Chowdhury et al. (1991) Science 254:1802-1805; van Beusechem et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-7644; Kay et al. (1992) Human Gene Therapy 3:641-647; Dai et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895; Hwu et al. (1993) J. Immunol 150:4104-4115; U.S. Pat. No.4,868,116; U.S. Pat. No. 4,980,286; PCT Prijava WO 89/07136; PCT Prijava WO 89/02468; PCT Prijava WO 89/05345; i PCT Prijava WO 92/07573).
[0091] Pogodni izvori za dobijanje retrovirusnih (tj., i lentivirusnih i ne-lentivirusnih) sekvenci za upotrebu u obrazovanju vektora obuhvataju, na primer, genomsku RNK i cDNK dostupne iz komercijalno dostupnih izvora, uključujući Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Md. Sekvence se takođe mogu hemijski sintetizovati.
[0092] Za ekspresiju BCMA CAR, vektor može biti u uveden u ćeliju da se omogući ekspresija polipeptida unutar ćelije domaćina. Ekspresioni vektori mogu sadržati različite elemente za kontrolu ekspresije, uključujući bez ograničenja, sekvence promotora, sekvence za inicijaciju transkripcije, sekvence pojačivača, markere za selekciju, i signalne sekvence. Ovi elementi se mogu odabrati kao odgovarajući od strane stručnjaka iz oblasti tehnike, kao što je gore opisano. Na primer, sekvence promotora mogu biti odabrane tako da promovišu transkripciju polinukleotida u vektoru. Pogodne sekvence promotora obuhvataju, bez ograničenja, T7 promotor, T3 promotor, SP6 promotor, betaaktin promotor, EF1a promotor, CMV promotor, i SV40 promotor. Sekvence pojačivača mogu biti odabrane da pojačavaju transkripciju polinukleotida. Markeri za selekciju mogu biti odabrani da omoguće odabir ćelija domaćina u koje je insertovan vektor iz onih koji nisu, na primer, marker za selekciju mogu biti geni koji potvrđuju otpornost na antibiotike. Signalne sekvence mogu biti odabrane da omoguće transport eksprimiranog polipeptida izvan ćelije domaćina.
[0093] Za kloniranje polipeptida, vektor se može uvesti u ćeliju domaćina (izolovana ćelija domaćina) da se omogući umnožavanje samog vektora i time umnože kopije nukleotida koje su u njemu sadržane. Vektori za kloniranje mogu da sadrže komponente sekvence koja generalno obuhvata, bez ograničenja, početak replikacije, sekvence promotora, sekvence inicijacije transkripcije, sekvence pojačivača, i markere za selekciju. Ovi elementi se mogu odabrati kao odgovarajući od strane stručnjaka koji je uobičajeno verziran u stanje tehnike. Na primer, početak replikacije može se odabrati da promoviše autonomnu replikaciju vektora u ćeliji domaćina.
[0094] U određenim izvođenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje izolovanu ćeliju domaćina koja sadrži vektor iz pronalaska. Ćelije domaćina koje sadrže vektor mogu biti korisne u ekpresiji ili kloniranju polinukleotida sadržanog u vektoru. Pogodne ćelije domaćina mogu uključiti, bez ograničenja, prokariotske ćelije, ćelije gljiva, kvaščeve ćelije, ili ćelije viših eukariota kao što su ćelije sisara. Pogodne prokariotske ćelije za ovu svrhu uključuju, bez ograničenja, eubakterije, kao što su Gram-negativni ili Gram-pozitivni organizmi, na primer, Enterobactehaceae kao što su Escherichia, npr., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, npr., Salmonella typhimurium, Serratia, npr., Serratia marcescans, i Shigella, kao i Bacilli kao što su B. subtilis i B. licheniformis, Pseudomonas kao što su P. aeruginosa, i Streptomyces.
[0095] CARs iz prikazanog pronalaska su uvedeni u ćeliju domaćina upotrebom postupaka transfekcije i/ili transdukcije u oblasti tehnike. Kao što je ovde korišćeno, termini, "transfekcija," i, "transdukcija," odnose se na postupke kojima je sekvenca egzogene nukleinske kiseline uvedena u ćeliju domaćina. Nukleinska kiselina može biti integrisana u DNK ćelije domaćina ili se može održavati ekstrahromozomalno. Nukleinska kiselina se može održavati privremeno ili može biti stabilno uvedena. Transfekcija se može postići različitim postupcima koji su poznati u oblasti tehnike uključujući ali bez ograničenja na koprecipitaciju kalcijum fosfata-DNK, transfekcija posredovana DEAE-dekstranom, transfekcija posredovana polibrenom, elektroporacija, mikroinjekcija, fuzija lipozoma, lipofekcija, fuzija protoplasta, retrovirusna infekcija i biolistika. Transdukcija se odnosi na isporuku gen(a) korišćenjem virusnog ili retrovirusnog vektora putem virusne infekcije, a ne transfekcijom. U određenim izvođenjima, retrovirusni vektori se transdukuju pakovanjem vektora u virione pre kontakta sa ćelijom. Na primer, nukleinska kiselina koja kodira BCMA CAR koji nosi retrovirusni vektor može biti transdukovana u ćeliju putem infekcije i integracije provirusa.
[0096] Kao što je ovde korišćen, termin "genetički izmenjen" ili "genetički modifikovan" se odnosi na dodavanje ekstra genetičkog materijala u obliku DNK ili RNK u ukupni genetički materijal u ćeliji. Termini, "genetički modifikovane ćelije," "modifikovane ćelije," i, "preusmerene ćelije," se koriste naizmenično.
[0097] Posebno, CAR iz prikazanog pronalaska je uveden i eksprimiran u imunskim efektorskim ćelijama tako da se njihova specifičnost preusmeri na ciljni antigen od interesa, npr., malignu plazma ćeliju npr. multiplog mijeloma.
[0098] Prikazani pronalazak obezbeđuje postupke dobijanja imunskih efektorskih ćelija koje eksprimiraju CAR iz pronalaska. U jednom izvođenju, postupak transfekcije ili transdukovanja imunskih efektorskih ćelija koje su izolovane iz subjekta, tako da subjekt ima ćeliju tumora koja eksprimira BCMA, tako da imunske efektorske ćelije eksprimiraju jedan ili više CAR iz pronalaska. U određenim izvođenjima, imunske efektorske ćelije su izolovane iz pojedinca i genski modifikovane bez dalje in vitro manipulacije. Takve ćelije se nakon toga mogu direktno ponovo davati pojedincu. U ostalim izvođenjima, imunske efektorske ćelije se prvo aktiviraju i stimulišu da in vitro proliferišu pre nego što su genski modifikovane da eksprimiraju CAR. U tom pogledu, imunske efektorske ćelije se mogu kultivisati pre ili nakon što budu genski modifikovane (tj., transdukovane ili transfektovane da eksprimiraju CAR iz pronalaska).
[0099] Pre in vitro manipulacije ili ovde opisane genetičke modifikacije imunskih efektorskih ćelija, izvor ćelija se može dobiti iz subjekta. Naročito, imunske efektorske ćelije za upotrebu sa ovde opisanim CARs sadrže T ćelije. T ćelije se mogu dobiti iz brojnih izvora, uključujući mononuklearne ćelije periferne krvi, kostna srž, tkivo limfnih čvorova, krv iz pupčane vrpce, timusnog tkiva, tkiva sa mesta infekcije, ascita, pleuralnog izliva, tkiva slezine, i tumora. U određenim izvođenjima, T ćelije se mogu dobiti iz jedinice krvi sakupljene iz subjekta korišćenjem bilo kojeg broja postupaka koji su poznati u oblasti tehnike, kao što je FICOLL razdvajanje. U jednom izvođenju, ćelije iz krvi cirkulacije pojedinca se dobijaju aferezom. Proizvod afereze obično sadrži limfocite, uključujući T ćelije, monocite, granulocite, B ćelije, druga bela krvna zrnca za jedrom, crvena krvna zrnca, i pločice. U jednom izvođenju, ćelije sakupljene aferezom mogu se isprati da se ukloni frakcija plazme i ćelije postave u odgovarajućem puferu ili medijumu za sledeću obradu. U jednom izvođenju iz pronalaska, ćelije su isprane sa PBS. U alternativnom izvođenju, ispranom rastvoru nedostaje kalcijum, i može nedostajati magnezijum ili mogu nedostajati mnogi, ukoliko ne svi, divalentni katjoni. Kao što će biti jasno osobi koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike, korak ispiranja se može postići pomoću postupaka koji su poznati stručnjaku iz oblasti tehnike, kao što je korišćenjem poluautomatske protočne centrifuge. Nakon ispiranja, ćelije se mogu resuspendovati u različitim biokompatibilnim puferima ili drugim slanim rastvorima sa ili bez pufera. U određenim izvođenjima, neželjene komponente uzorka afareze se mogu ukloniti u ćelijskom direktno resuspendovanom medijumu za kulturu.
[0100] U određenim izvođenjima, T ćelije su izolovane iz mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMCs) liziranjem crvenih krvnih zrnaca i iscrpljivanjem monocita, na primer, centrifugiranjem kroz PERCOLLTM gradijent. Specifična podpopulacija T ćelija, kao što su CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+, i CD45RO+ T ćelije, mogu se dalje izolovati korišćenjem postupaka pozitivne ili negativne selekcije. Na primer, obogaćenej populacije T ćelija negativnom selekcijom se može postići kombinacijom antitela usmerenih na površinske markere jedinstvene za negativno selektovane ćelije. Jedan postupak upotrebe ovde je sortiranje ćelija i/ili selekcija pomoću negativne magnetne imunoadherencije ili protočne citometrije koja koristi koktel monoklonskih antitela usmerenih na markere ćelijske površine koji se nalaze na ćelijama koje su negativno selektovane. Na primer, za bogaćenje CD4+ ćelijama negativnom selekcijom, koktel monoklonskih antitela obično obuhvata antitela na CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, i CD8. Protočna citometrija i ćelijsko sortiranje se takođe mogu koristiti za izolovane populacija ćelija od interesa za upotrebu u prikazanom pronalasku.
[0101] PBMC se mogu direktno koristiti za gensku modifikaciju sa CAR-ovima korišćenjem postupaka kao što je ovde opisano. U određenim izvođenjima, nakon izolacije PBMC, T limfociti su dalje izolovani i u određenim izvođenjima, i citotoksični i pomoćnički T limfociti mogu se sortirati u naivne, memorijske i efektorske subpopulacije T ćelija bilo pre ili posle genske modifikacije i/ili ekspanzije. CD8+ ćelije se mogu dobiti korišćenjem standardnih postupaka. U nekim izvođenjima, CD8+ ćelije se dalje sortiraju u naivne, centralne memorijske i efektorske ćelije identifikacijom antigena ćelijske površine koji su povezani sa svakim od tih tipova CD8+ ćelija. U izvođenjima, memorijske T ćelije su prisutne i u CD62L+ i u CD62L-podskupovima CD8+ limfocita periferne krvi. PBMC se sortiraju u CD62L-CD8+ i CD62L+CD8+ frakcije nakon bojenja anti-CD8 i anti-CD62L antitelima. U nekim izvođenjima, ekspresija fenotipskih markera centralne memorije TCM uključuje CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 i CD127 i negativna je na granzim B. U nekim izvođenjima, T ćelije centralne memorije su CD45RO+, CD62L+, CD8+ T ćelije. U nekim izvođenjima, efektorske T ćelije su negativne na CD62L, CCR7, CD28 i CD127, a pozitivne na granzim B i perforin. U nekim izvođenjima, naivni CD8+ T limfociti se karakterišu ekspresijom fenotipskih markera naivnih T ćelija uključujući CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD 127 i CD45RA.
[0102] U nekim slučajevima, CD4+ T ćelije se dalje sortiraju u subpopulacije. Na primer, CD4+ T pomoćne ćelije se mogu sortirati u naivne, centralne memorijske i efektorske ćelije identifikacijom ćelijskih populacija koje imaju antigene na površini ćelije. CD4+ limfociti se mogu dobiti standardnim postupcima. U nekim izvođenjima, naivni CD4+ T limfociti su CD45RO-, CD45RA+, CD62L+CD4+ T ćelije. U nekim izvođenjima, CD4+ ćelije centralne memorije su CD62L pozitivne i CD45RO pozitivne. U nekim izvođenjima, efektorske CD4+ ćelije su CD62L i CD45RO negativne.
[0103] Imunske efektorske ćelije, kao što su T ćelije, mogu biti genski modifikovane nakon izolacije korišćenjem poznatih postupaka, ili se imunskee efektorske ćelije mogu aktivirati i proširiti (ili diferencirati u slučaju progenitora) in vitro pre nego što budu genski modifikovane. U drugom izvođenju, imunske efektorske ćelije, kao što su T ćelije, su genski modifikovane pomoću himernih antigenskih receptora opisanih ovde (npr., transdukovane virusnim vektorom koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira CAR), zatim se aktiviraju i ekspandiraju in vitro. Postupci za aktiviranje i ekspanziju T ćelija su poznati u tehnici i opisani su, na primer, u U.S. Pat. br.6,905,874; U.S. Pat. br.6,867,041; U.S. Pat. br. 6,797,514; WO2012079000. Generalno, takvi postupci uključuju dovođenje u kontakt PBMC ili izolovanih T ćelija sa stimulativnim agensom i kostimulatornim agensom, kao što su anti-CD3 i anti-CD28 antitela, generalno vezana za česticu ili drugu površinu, u medijumu kulture sa odgovarajućim citokinima, kao što je IL-2. Anti-CD3 i anti-CD28 antitela vezana za istu česticu služe kao "surogat" antigen prezentujuća ćelija (APC). U drugim izvođenjima, T ćelije mogu biti aktivirane i stimulisane da proliferiraju sa ćelijama za hranjenje (eng. feeder cells) i odgovarajućim antitelima i citokinima korišćenjem postupaka kao što su oni opisani u U.S. Pat. br. 6,040,177; U.S. Pat. br.
5,827,642; i WO2012129514.
[0104] Pronalazak obezbeđuje populaciju modifikovanih imunih efektorskih ćelija za lečenje pacijenata koji imaju malignitet izazvan tumorom koji eksprimira BCMA, npr., multipli mijelom, modifikovane imune efektorske ćelije sadrže BCMA CAR pronalaska.
[0105] Imunske efektorske ćelije koje eksprimiraju CAR, pripremljene kako je ovde opisano, mogu se koristiti u postupcima i kompozicijama za adaptivnu imunoterapiju u skladu sa poznatim tehnikama, ili njihovim varijacijama koje će biti očigledne stručnjacima u ovoj oblasti na osnovu ovog otkrića. Videti, npr., US patentna prijava objava br.2003/0170238 od Gruenberg et al; vidi takođe U.S. Pat. br.
4,690,915 po Rosenbergu.
[0106] U nekim izvođenjima, ćelije se formulišu tako što se prvo sakupe iz njihovog medijuma za kulturu, zatim se ćelije operu i koncentrišu u medijumu i sistemu kontejnera koji su pogodni za davanje („farmaceutski prihvatljivog“ nosača) u količini koja je efektivna za tretman. Pogodan medijum za infuziju može biti bilo koja izotonična formulacija medijuma, obično normalni fiziološki rastvor, Normosol R (Abbott) ili Plasma-Lyte A (Baxter), ali se takođe može koristiti 5% dekstroze u vodi ili Ringerov laktat. Infuzioni medijum se može dopuniti humanim serumskim albuminom.
[0107] Količina ćelija koja je efikasna za lečenje je najmanje 2 ćelije (na primer, najmanje 1 CD8+ T ćelija centralne memorije i najmanje 1 CD4+ pomoćna T ćelija podskup) ili je uobičajeno veća od 10<2>ćelije, i do 10<6>do uključujući 10<8>ili 10<9>ćelija i može biti više od 10<10>ćelija. Broj ćelija zavisiće od krajnje upotrebe za koju je kompozicija namenjena, kao i od vrste ćelija koje su u njoj uključene.
[0108] Ćelije mogu biti autologne ili heterologne za pacijenta koji je podvrgnut terapiji. Po želji, tretman može takođe uključiti davanje mitogena (npr. PHA) ili limfokina, citokina i/ili hemokina (npr., IFN-γ, IL-2, IL- 12, TNF-α, IL-18, i TNF-β, GM-CSF, IL-4, IL-13, Flt3-L, RANTES, MIP1α, itd.) kako je ovde opisano da bi se poboljšala indukcija imunog odgovora.
[0109] Populacije imunih efektorskih ćelija ovog pronalaska koje eksprimiraju CAR mogu se davati ili same, ili kao farmaceutska kompozicija u kombinaciji sa razblaživačima i/ili sa drugim komponentama kao što su IL-2 ili drugi citokini ili ćelijske populacije. Ukratko, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu sadržati populaciju imunih efektorskih ćelija koje eksprimiraju CAR, kao što su T ćelije, prema pronalasku, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski ili fiziološki prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata. Takve kompozicije mogu sadržati pufere kao što su neutralni puferovani slani rastvor, fiziološki rastvor puferovan fosfatom i slično; ugljeni hidrati kao što su glukoza, manoza, saharoza ili dekstrani, manitol; proteini; polipeptide ili aminokiseline kao što je glicin; antioksidansi; helatni agensi kao što su EDTA ili glutation; adjuvanske (npr. aluminijum hidroksid); i konzervanse. Kompozicije ovog pronalaska su poželjno formulisane za intravensku primenu.
[0110] Antitumorski imunski odgovor izazvan kod subjekta davanjem T ćelija koje eksprimiraju CAR koje su ovde opisane korišćenjem ovde opisanih postupaka, ili drugih postupaka poznatih u struci, može uključivati ćelijske imune odgovore posredovane citotoksičnim T ćelijama koje su sposobne da ubiju inficirane ćelije, regulatorne T ćelije i odgovori pomoćničkih T ćelija. Humoralni imunski odgovori, posredovani prvenstveno pomoćničkim T ćelijama sposobnim da aktiviraju B ćelije i na taj način dovode do proizvodnje antitela, takođe mogu biti indukovani. Različite tehnike se mogu koristiti za analizu tipa imunih odgovora indukovanih kompozicijama ovog pronalaska, koje su dobro opisane u tehnici; npr., Current Protocols in Immunology, Edited by: John E. Coligan, Ada M. Kruisbeek, David H. Margulies, Ethan M. Shevach, Warren Strober (2001) John Wiley & Sons, NY, N.Y.
[0111] Prema tome, ovaj pronalazak obezbeđuje imune efektorske ćelije pronalaska koje eksprimiraju CAR za upotrebu u postupcima lečenja pojedinca sa dijagnozom ili sumnjom da ima, ili u riziku od razvoja hematopoetskog maligniteta koji se delimično karakteriše abnormalnom akumulacijom plazma ćelija koje proizvode imunoglobulin u koštanoj srži, kao što je multipli mijelom, koji obuhvata davanje pojedincu terapeutski efikasne količine imunoloških efektorskih ćelija koje eksprimiraju CAR.
[0112] U jednom aspektu, pronalazak se odnosi na himerni antigenski receptor prema pronalasku za upotrebu u postupku lečenja subjekta sa dijagnozom karcinoma koji eksprimira BCMA, koji obuhvata uklanjanje imunih efektorskih ćelija od subjekta sa dijagnozom kancera koji eksprimira BCMA, gensko modifikovanje pomenutih imunskih efektorskih ćelija vektorom koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira himerni antigenski receptor ovog pronalaska, čime se proizvodi populacija modifikovanih imunskih efektorskih ćelija, i davanje populacije modifikovanih imunih efektorskih ćelija istom subjektu. U jednom aspektu, imunske efektorske ćelije sadrže T ćelije.
[0113] Postupci za davanje ovde opisanih ćelijskih kompozicija uključuju bilo koji postupak koji je efikasan da dovede do ponovnog uvođenja ex vivo genski modifikovanih imunih efektorskih ćelija koje ili direktno eksprimiraju CAR pronalaska kod subjekta ili ponovnim uvođenjem genski modifikovanih progenitora imunskih efektorskih ćelija koje se prilikom uvođenja u subjekta diferenciraju u zrele imune efektorske ćelije koje eksprimiraju CAR. Jedan postupak obuhvata transdukciju T ćelija periferne krvi ex vivo sa konstruktom nukleinske kiseline u skladu sa pronalaskom i vraćanje transdukovanih ćelija subjektu.
Svojstva vezivanja himernih antigenskih receptora i odgovarajućih antitela
[0114] Kako se ovde koristi, termin "vezivanje" u kontekstu vezivanja receptora himernog antigena ili odgovarajućeg antitela za bilo koji, npr., unapred određeni antigen, kao što je protein ćelijske površine ili njegov fragment, obično se odnosi na interakcija ili asocijacija između najmanje dva entiteta ili molekulske strukture, kao što je interakcija domen koji vezuje antigen: antigen.
[0115] Na primer, afinitet vezivanja tipično odgovara vrednosti KDod oko 10<-7>M ili manje, kao što je oko 10<-8>M ili manje, kao što je oko 10<-9>M ili manje kada se određuje, na primer, tehnologijom površinske plazmonske rezonance (SPR) u instrumentu BIAcore 3000 koji koristi antigen kao ligand i antitelo ili himerni receptor antigena kao analit (ili antiligand). Strategije vezivanja zasnovane na ćelijama, kao što su testovi vezivanja fluorescentno aktiviranog sortiranja ćelija (FACS), takođe se rutinski koriste, FACS podaci dobro koreliraju sa drugim metodama kao što su kompetitivno vezivanje radioliganda i SPR (Benedict, CA, J Immunol Methods. 1997, 201(2):223-31; Geuijen, CA, et al. J Immunol Methods.2005, 302(1-2):68-77).
[0116] Shodno tome, himerni antigenski receptor ili odgovarajuće antitelo se vezuje za unapred određeni antigen ili molekul na površini ćelije (receptor) koji ima afinitet koji odgovara vrednosti KDkoja je najmanje deset puta niža od njegovog afiniteta za vezivanje za nespecifični antigen (npr. BSA, kazein). U skladu sa ovim otkrićem, afinitet himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela sa KDvrednosti koja je jednaka ili manja od deset puta niža od nespecifičnog antigena može se smatrati vezivanjem koje se ne može detektovati.
[0117] Termin "KD" (M) se odnosi na konstantu ravnoteže disocijacije određene interakcije domena koji se vezuje za antigen, ili konstantu ravnoteže disocijacije odgovarajućeg antitela na antigen. Postoji inverzna veza između KDi afiniteta vezivanja, pa što je manja vrednost KD, veći je, odnosno jači, afinitet. Dakle, termini "veći afinitet" ili "jači afinitet" odnose se na veću sposobnost formiranja interakcije i stoga na manju KDvrednost, i obrnuto, termini "niži afinitet" ili "slabiji afinitet" odnose se na nižu sposobnost formiranja interakcija i samim tim veća KD vrednost. U nekim okolnostima, veći afinitet vezivanja (ili KD) određenog molekula (npr. himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela) za njegov interaktivni partner molekul (npr. antigen X) u poređenju sa afinitetom vezivanja molekula (npr. receptor antigena ili odgovarajuće antitelo) na drugi interaktivni partner molekul (npr. antigen Y) može se izraziti kao odnos vezivanja određen deljenjem veće vrednosti KD(niži ili slabiji afinitet) sa manjim KD(većim ili jačim afinitetom), na primer, izraženo kao 5 ili 10 puta veći afinitet vezivanja, u zavisnosti od slučaja.
[0118] Termin "kd" (sec -1 ili 1/s) se odnosi na konstantu brzine disocijacije određenog domena koji vezuje antigen: interakciju antigena, ili konstantu brzine disocijacije himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela. Navedena vrednost se takođe naziva koffvrednost.
[0119] Termin "ka" (M-1 k sec-1 ili 1/M) se odnosi na konstantu brzine asocijacije određenog domena koji vezuje antigen: interakciju antigena, ili konstantu brzine asocijacije himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela.
[0120] Termin "KA" (M-1 ili 1/M) se odnosi na konstantu ravnoteže vezivanja interakcije određenog domena za vezivanje antigena: antigen ili konstanta ravnoteže vezivanja himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela. Konstanta ravnoteže vezivanja se dobija deljenjem kasa kd.
[0121] Termin "EC50" ili "ECso" se odnosi na polovinu maksimalne efikasne koncentracije, koji obuhvata koncentraciju himernog antigenskog receptora koji izaziva odgovor na napola između osnovnog nivoa i maksimuma nakon određenog vremena izlaganja. EC50u suštini predstavlja koncentraciju receptora himernog antigena gde se primećuje 50% njegovog maksimalnog efekta. U određenim slučajevima, vrednost ECso jednaka je koncentraciji himernog antigenskog receptora ili odgovarajućeg antitela koje daje polu-maksimalno vezivanje za ćelije koje eksprimiraju antigen (npr. antigen povezan sa tumorom, kao što je BCMA), kao što je određeno npr. FACS test vezivanja. Dakle, smanjeno ili slabije vezivanje se primećuje sa povećanom EC50, ili polovinom maksimalne efektivne vrednosti koncentracije.
[0122] Na primer, smanjeno vezivanje se može definisati povećanom EC50himernog antigenskog receptora ili odgovarajuće koncentracije antitela koja omogućava vezivanje za polovinu maksimalne količine ciljnih ćelija.
Varijante sekvenci himernih antigenskih receptora
[0123] Himerni receptori antigena ili predmetni prikaz mogu sadržati jednu ili više aminokiselinskih supstitucija, insercija i/ili delecija u okvirima i/ili CDR regionima varijabilnih domena teškog i lakog lanca u poređenju sa odgovarajućim sekvencama germinativne linije iz kojih su izvedeni pojedinačni domeni za vezivanje antigena odgovarajućih antitela. Takve mutacije se mogu lako utvrditi upoređivanjem sekvenci aminokiselina koje su ovde otkrivene sa sekvencama germinativne linije koje su dostupne iz, na primer, javnih baza podataka sekvenci antitela. Himerni antigenski receptori ovog otkrića mogu sadržati domene koji se vezuju za antigen koji su izvedeni iz bilo kog primera sekvenci aminokiselina CDR ili varijabilnog regiona koji su ovde otkriveni, pri čemu su jedna ili više aminokiselina unutar jednog ili više okvira i/ili CDR regiona mutirane na odgovarajući ostatak(e) sekvence germinativne linije iz koje je izvedeno odgovarajuće antitelo, ili na odgovarajući ostatak(e) druge sekvence humane germinativne linije, ili na konzervativnu aminokiselinsku supstituciju odgovarajućeg(ih) ostatka(a) germinativne linije (tako promene sekvence se ovde zajednički nazivaju "mutacije germinativne linije"). Osoba sa uobičajenim iskustvom u ovoj oblasti tehnike, počevši od ovde otkrivenih sekvenci varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, može lako proizvesti brojna antitela koja sadrže jednu ili više pojedinačnih mutacija germinativne linije ili njihove kombinacije. U određenim slučajevima, svi ostaci okvira i/ili CDR unutar VHi/ili VLdomena su mutirani nazad na ostatke pronađene u originalnoj sekvenci germinativne linije iz koje je izvorno izveden domen koji vezuje antigen. U drugim slučajevima, samo određeni ostaci su mutirani nazad u originalnu sekvencu germinativne linije, na primer, samo mutirani ostaci koji se nalaze u prvih 8 aminokiselina FR1 ili u poslednjih 8 aminokiselina FR4, ili samo mutirani ostaci koji se nalaze u CDR1, CDR2 ili CDR3. U drugim slučajevima, jedan ili više ostataka okvira i/ili CDR su mutirani u odgovarajući ostatak(e) različite sekvence germinativne linije (tj. sekvencu germinativne linije koja se razlikuje od sekvence germinativne linije iz koje je antigen- vezujući domen je prvobitno izveden). Osim toga, domeni koji se vezuju za antigen mogu sadržati bilo koju kombinaciju dve ili više mutacija germinativne linije unutar okvira i/ili CDR regiona, na primer, gde su određeni pojedinačni ostaci mutirani u odgovarajući ostatak određene sekvence germinativne linije, dok su neki drugi ostaci koji razlikuju od originalne sekvence germinativne linije se održavaju ili su mutirane u odgovarajući ostatak druge sekvence germinativne linije.
Biološke karakteristike himernih antigenskih receptora i odgovarajućih antitela
[0124] Prikazani pronalazak obuhvata himerne antigenske receptore sa domenima za vezivanje antigena dobijenim iz antitela koja vezuju humani BCMA sa visokim afinitetom (npr., nanomolarne ili sub-nanomolarne vrednosti KD).
[0125] Prema određenim aspektima, prikazani pronalazak obuhvata himerne antigenske receptore sa domenima za vezivanje antigena koji su dobijeni iz odgovarajućih antitela koja vežu humani BCMA (npr., na 25°C) sa KDmanjom od oko 5 nM kao što je mereno površinskom plazmonskom rezonancom. U određenim slučajevima, odgovarajuća antitela vezuju BCMA sa KDmanjom od oko 20 nM, manjom od oko 10 nM, manjom od oko 8 nM, manjom od oko 7 nM, manjom od oko 6 nM, manjom od oko 5 nM, manjom od oko 4 nM, manjom od oko 3 nM, manjom od oko 2 nM, manjom od oko 1 nM, manjom od oko 800 pM, manjom od oko 700 pM, manjom od oko 500 pM, manjom od oko 400 pM, manjom od oko 300 pM, manjom od oko 200 pM, manjom od oko 100 pM, manjom od oko 50 pM, ili manjom od oko 25 pM kao što je mereno površinskom plazmonskom rezonancom.
[0126] Prikazani pronalazak takođe obuhvata himerne antigenske receptore sa domenima za vezivanje antigena koji su dobijeni iz odgovarajućih antitela koja vežu BCMA sa poluživotom disocijacije (t<1>/2) većim od oko 10 minuta ili većim od oko 125 minuta kao što je mereno površinskom plazmonskom rezonancom na 25°C. U određenim slučajevima, odgovarajuća antititela vežu BCMA sa t<1>/2većim od oko 3 minuta, većim od oko 4 minuta, većim od oko 10 minuta, većim od oko 20 minuta, većim od oko 30 minuta, većim od oko 40 minuta, većim od oko 50 minuta, većim od oko 60 minuta, većim od oko 70 minuta, većim od oko 80 minuta, većim od oko 90 minuta, većim od oko 100 minuta, većim od oko 110 minuta, ili većim od oko 120 minuta, kao što je mereno površinskom plazmonskom rezonancom na 25°C.
[0127] Prikazani pronalazak takođe obuhvata himerne antigenske receptore sa domenima za vezivanje antigena koji su dobijeni iz odgovarajućih antitela koja se specifično vežu za humane ćelijske linije koje eksprimiraju endogeni BCMA (npr., NCI-H929, MOLP-8 ili OMP-2), kao što je određeno FACS testom za vezivanje.
[0128] Prikazani pronalazak takođe obuhvata modifikovane ćelije koje eksprimiraju BCMA-specifične himerne antigenske receptore koji (i) su aktivirani ćelijama koje eksprimiraju BCMA, i/ili (ii) ispoljavaju inhibiciju tumorskog rasta kod imunski kompromitovanih miševa koji nose ksenografte humanog multiplog mijeloma.
Dobijanje antigen vezujućih domena
[0129] Ovde prikazani antigen vezujući domeni himernih antigenskih receptora, koji su specifični za određene antigene (npr., BCMA), se mogu dobiti bilo kojom tehnologijom za generisanje antitela koja je poznata u oblasti tehnike. U određenim slučajevima, jedna ili više pojedinačnih komponenti (npr., teški i laki lanci) ovde prikazanih odgovarajućih antitela su dobijeni iz himernih, humanizovanih ili potpuno humanih antitela. Postupci za dobijanje takvih antitela su dobro poznati u oblasti tehnike. Na primer, jedan ili više od teških i/ili lakih lanaca se mogu dobiti korišćenjem tehnologije TM VELOCIMMUNETM . Korišćenjem tehnologije VELOCIMMUNE (ili bilo koje druge tehnologije za generisanje humanog antitela), visokoafinitetna himerna antitela na određeni antigen (npr., BCMA) su inicijalno izolovana da imaju humani varijabilni region i mišji konstantni region. Antitela su karakterisana i odabrana za željene karakteristike, uključujući afinitet, selektivnost, epitop, itd. Kao što je ovde razmatrano, ovi humani varijabilni regioni (ili CDR) mogu zatim da se ugrade u antigen vezujuće domene himernih antigenskih receptora.
Polinukleotidi i vektori
[0130] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na polinukleotide i vektore koji kodiraju himerne antigenske receptore iz pronalaska.
[0131] U različitim izvođenjima, polinukleotid može sadržati ekspresionu kasetu ili ekspresioni vektor (npr., plazmid za uvođenje u bakterijsku ćeliju domaćina, ili virusni vektor kao što je vektor bakulovirusa za transfekciju ćelije domaćina insekta, ili plazmidni ili virusni vektor kao što je lentivirus za transfekciju sisarske ćelije domaćina).
[0132] U različitim aspektima prikaza, polinukleotidi i/ili vektori sadrže molekul nukleinske kiseline koji sadrži sekvencu nukleotida SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 87 ili SEQ ID NO: 89. U različitim aspektima iz prikaza, polinukleotidi i/ili vektori sadrže sekvencu nukleotida koji kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, ili SEQ ID NO: 90. U različitim aspektima iz prikaza, polinukleotidi i/ili vektori sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 ili SEQ ID NO: 100. Postupci za modifikovanje imunskih ćelija koje ekspirmiraju himerne antigenske receptore [0133] Prikazani pronalazak obuhvata postupke dobijanja imunskih ćelija za imunoterapiju koji sadrže uvođenje, ex vivo, u takve imunske ćelije polinukleotide ili vektore koji kodiraju jedan od BCMA-specifičnih himernih antigenskih receptora iz pronalaska.
[0134] Prikazani pronalazak takođe obuhvata imunske ćelije koje sadrže polinukleotid ili lentivirusni vektor koji kodira jedan od BCMA-specifičnih himernih antigenskih receptora iz pronalaska. U nekim izvođenjima, ovde imunske ćelije su korišćene za imunoterapiju (npr., lečenje kancera).
[0135] Prikazani pronalazak takođe obuhvata postupke genetičkog modifikovanja imunskih ćelija kako bi postale podobnije za alogenu transplantaciju. Prema prvom aspektu, imunska ćelija se može napraviti da bude alogena, na primer, inaktivacijom bar jednog gena koji eksprimira jednu ili više komponenti T-ćelijskog receptora (TCR) kao što je opisano u WO 2013/176915, koji se može kombinovati sa inaktivacijom gena koji kodira ili reguliše ekspresiju HLA ili β2m proteina. Shodno tome rizik od sindroma graft protiv domaćina i odbacivanja grafta je značajno smanjen. Prema daljem aspektu iz pronalaska, imunskim ćelijama se dalje može manipulisati da postanu aktivnije ili da im se ograniči iscrpljivanje, inaktivacijom gena koji kodiraju protein koji deluju ako "imunske tačke provere" koji deluju kao regulatori aktivacije T-ćelija, kao što su PD1 ili CTLA-4.
Modifikovane imunske ćelije
[0136] Imunske ćelije koje sadrže himerni antigenski receptor iz pronalaska (ili modifikovane imune ćelije) su drugi cilj prikazanog pronalaska. U nekim slučajevima, imunska ćelija je imuna efektorska ćelija. U nekim slučajevima, imunska ćelija je T ćelija. U nekim slučajevima, imuna ćelija je T limfocit odabran od inflamatornog T limfocita, citotoksičnog T limfocita, regulatornog T limfocita, ili pomoćničkog T limfocita. U nekim slučajevima, imuna ćelija je CD8+ citotoksični T limfocit.
[0137] U nekim slučajevima, modifikovana imuna ćelija je humana T ćelija koja sadrži himerni antigenski receptor koji sadrži, od N-kraja ka C-kraju: (a) ekstraćelijski domen za vezivanje liganda koji sadrži domen anti-BCMA jednolančanog varijabilnog fragmenta (scFv) koji sadrži varijabilni region lakog lanca (LCVR) i varijabilni region teškog lanca (HCVR); (b) zglob; (c) transmembranski domen; i (d) citoplazmatski domen koji sadrži kostimulatorni domen i domen za signalizaciju.
[0138] U nekim slučajevima, scFv domen modifikovane humane T ćelije sadrži par aminokiselinskih sekvenci LCVR/HCVR koji sadrži aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 10/2, 26/18, 42/34, 58/50, ili 74/66. U nekim slučajevima, zglob sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97. U nekim slučajevima, transmembranski domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 98. U nekim slučajevima, kostimulatorni domen je 4-1BB kostimulatorni domen. U nekim slučajevima, 4-1BB kostimulatorni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 99. U nekim slučajevima, domen za signalizaciju je CD3zeta domen za signalizaciju. U nekim slučajevima, CD3zeta domen za signalizaciju sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100.
[0139] U raznim slučajevima, modifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor koji se sastoji iz aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, ili SEQ ID NO: 90.
Bioekvivalenti
[0140] Prikazani pronalazak sadrži himerne antigenske receptore i modifikovane ćelije koje eksprimiraju himerne antigenske receptore, koji imaju aminokiselinske sekvence koje se razlikuju od onih u ovde prikazanim primerima molekula ali koji zadržavaju sposobnost da se vežu za BCMA, aktiviraju imune ćelije koje eksprimiraju himerne antigenske receptore u pristustvu ćelija koje eksprimiraju BCMA, ili suprimiraju rast ili proliferaciju tumorskih ćelija koje eksprimiraju BCMA. Takvi varijantni molekuli mogu sadržati jednu ili više adicija, delecija, ili supstitucija aminokiselina u poređenju sa roditeljskom sekvencom, ali ispoljavaju biološku aktivnost koja je u suštini ekvivalentna onoj kod opisanih molekula za vezivanje bispecifičnih antigena.
[0141] Na primer, dve modifikovane imunske ćelije koje eksprimiraju himerni antigenski receptor iz predmentnog prikaza su bioekvivalenti ukoliko ne postoje klinički značajne razlike u njihovoj bezbednosti, čistoći, i potenciji.
[0142] Na primer, dve modifikovane imunske ćelije su bioekvivalente ukoliko se pacijent može prebaciti jednom ili više puta između referentnog proizvoda i biološkog proizvoda bez očekivanog povećanja rizika od neželjenih efekata, uključujući klinički značajnu promenu u imunogenosti, ili umanjenu efikasnost, u poređenju sa kontinuiranom terapijom bez prebacivanja.
[0143] Na primer, dve modifikovane imunske ćelije su bioekvivalenti ukoliko obe imaju zajednički mehanizam ili mehanizme delovanja za stanje ili upotrebu u stanju, u obimu u kome su ti mehanizmi poznati.
[0144] Bioekvivalencija se može dokazati pomoću in vivo i in vitro postupaka. Merenja bioekvivalencije obuhvataju, npr., (a) in vivo test na ljudima ili drugim sisarima, u kome se koncentracija modifikovane ćelije meri u krvi, plazmi, serumu ili drugoj biološkoj tečnosti kao funkcija vremena; (b) in vitro test koji je u korelaciji sa podacima o bioraspoloživosti in vivo kod ljudi i koji razumno predviđa; (c) in vivo test na ljudima ili drugim sisarima u kome se odgovarajući akutni farmakološki efekat modifikovane ćelije (ili njenog cilja) meri kao funkcija vremena; i (d) u dobro kontrolisanom kliničkom ispitivanju koje utvrđuje bezbednost, efikasnost ili biodostupnost ili bioekvivalenciju modifikovane ćelije.
[0145] Ovde prikazane bioekvivalentne varijante primera modifikovanih ćelija mogu se dobiti, na primer, pravljenjem različitih supstitucija ostataka ili sekvenci ili brisanjem terminalnih ili unutrašnjih ostataka ili sekvenci koje nisu potrebne za biološku aktivnost.
Selektivnost prema vrsti i unakrsna reaktivnost vrsta
[0146] Prema određenim aspektima, obezbeđeni su domeni koji vezuju antigen koji se vezuju za humani BCMA, ali ne za BCMA iz drugih vrsta. Ovo izlaganje takođe obuhvata domene koji vezuju antigen koji se vezuju za BCMA i sa BCMA iz jednog ili više ne-humanih vrsta.
[0147] Prema određenim aspektima, obezbeđeni su domeni koji se vezuju za antigen koji se vezuju za humani BCMA i mogu da se vezuju ili ne vezuju, u zavisnosti od slučaja, za jednog ili više BCMA od miša, pacova, zamorca, hrčka, gerbila, svinje, mačke, psa, zeca, koze, ovde, krave, konja, kamile, cinomolgusa, marmozeta, rezusa ili šimpanze.
Aktivacija i ekspanzija modifikovanih imunih ćelija
[0148] Bilo da pre ili posle genske modifikacije modifikovanih ćelija (npr., T ćelija), čak i ako se genski modifikovane imunske ćelije ovog pronalaska aktiviraju i proliferišu nezavisno od mehanizama za vezivanje antigena, imunske ćelije, naročito T-ćelije iz predmetnog pronalaska se mogu dalje aktivirati i proširiti generalno upotrebom postupaka kao što je opisano, na primer, u U.S. Pat. Nos.6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; i U.S. objavi patentne prijave Br.
20060121005. T ćelije se mogu proširiti in vitro ili in vivo.
[0149] Generalno, T ćelije iz pronalaska su proširene dovođenjem u kontakt sa agensom koji stimuliše CD3 TCR kompleks i kostimulatorni molekul na površini T ćelija da se dobije signal aktivacije za T-ćelije. Na primer, hemijska sredstva kao što su kalcijuomova jonofora A23187, forbol 12-miristat 13-acetat (PMA), ili mitogeni lektini poput fitohemaglutinina (PHA) koji se mogu koristiti za dobijanje signala za aktivaciju za T-ćelije.
[0150] Kao neograničavajući primeri, populacije T ćelija mogu biti stimulisane in vitro kao što je dovođenjem u kontakt sa anti-CD3 antitelom, ili njegovim fragmentom koji vezuje antigena, ili anti-CD2 antitelom imobilizovanim na površini, ili dovođenjem u kontakt sa aktivatorom protein kinaze C (npr., briostatin) u kombinaciji sa jonoforom kalcijuma. Za kostimulaciju pomoćnog molekula na površini T ćelija, korišćen je ligand koji vezuje pomoćnički molekul. Na primer, populacija T ćelija može biti dovedena u kontakt sa anti-CD3 antitelom i anti-CD28 antitelom, pod uslovima koji su odgovarajući za stimulaciju proliferacije T ćelija. Uslovi koji su odgovarajući za kulturu T ćelija obuhvataju odgovarajući medijum (npr., Minimalni esencijalni medijum ili RPMI medijum 1640 ili, X-vivo 5, (Lonza)) koji mogu sadržati faktore koji su neophodni za proliferaciju i vijabilnost, uključujući serum (npr., fetalni goveđi ili humani serum), interleukin-2 (IL-2), insulin, IFN-g, 1L-4, 1L-7, GM-CSF, IL-10, IL-2, 1L-15, TGFp, i TNF-α ili bilo koja druga pomoćna sredstva za rast ćelija koji su poznati stručnjaku iz oblasti tehnike. Druga pomoćna sredstva za rast ćelija obuhvataju, ali nisu ograničeni na, površinski aktivno sredstvo, plazmanat, i redukujuće agense kao što su N-acetil-cistein i 2-merkaptoetanol. Medijum može obuhvatiti RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 1, i X-Vivo 20, Optimizator, sa dodatim aminokiselinama, natrijum piruvatom, i vitaminima, ili bez seruma ili dopunjeni sa odgovarajućom količinom seruma (ili plazme) ili definisanim skupom hormona, i/ili količinom citokin(a) koji su dovoljni za rast i ekspanziju T ćelija. Antibiotici, npr., penicilin i streptomucin, su uključeni samo u eksperimentalnim kulturama, a ne u kulturama ćelija koje su namenjene za unos u subjektu. Ciljane ćelije su održavane pod uslovima koji su neophodni za podržavanje rasta, na primer, odgovarajućoj temperaturi (npr., 37°C) i atmosferi (npr., vazduhu plus 5% O2). T ćelije koje su bile izložene različitim vremenima stimulacije mogu ispoljiti različite karakteristike.
[0151] U drugom određenom izvođenju, pomenute ćelije mogu biti proširene zajedničkom kultivacijom sa tkivima ili ćelijama. Pomenute ćelije mogu takođe biti proširene in vivo, na primer u krvi subjekta nakon primene pomenutih ćelija u subjektu.
Terapijske primere
[0152] Ovaj pronalazak obuhvata kompozicije koje obuhvataju modifikovanu ćeliju (npr., T ćelija) koja eksprimira himerni antigenski receptor iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim slučajevima, modifikovane ćelije čine lek, naročito za imunoterapiju. U nekim slučajevima, modifikovane ćelije su korišćene za lečenje kancera (npr., multipli mijelom). U nekim slučajevima, modifikovane ćelije su korišćene u dobijanju leka za imunoterapiju i/ili lečenje kancera (npr., kancer koji eksprimira BCMA).
[0153] Ovaj pronalazak obuhvata postupke koji obuhvataju primenu subjektu kome je potrebno terapeutske kompozicije koja se sastoji iz modifikovane ćelije (npr., T ćelije) koja eksprimira himerni antigenski receptor iz pronalaska. Terapeutska kompozicija može sadržati ćeliju koja eksprimira bilo koji himerni angen receptor kao što je ovde prikazano i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili nosač. Kao što je ovde korišćeno, izraz "subjekt kome je potrebno"označava humanu ili nehumanu životinju životinju koja ispoljava jedan ili više simptoma ili indikacija kancera (npr., subjekt koji eksprimira tumor ili pati od bilo kojih ovde pomenutih kancera), ili koji bi inače imao koristi od inhibicije ili smanjenja u aktivnosti BCMA ili iscrpljivanju ćelija BCMA+ (npr., ćelije multiplog mijeloma).
[0154] Modifikovane ćelije iz predmetnog pronalaska su korisne, između ostalog, za lečenje bilo koje bolesti ili poremećaja u kome bi stimulacija, aktivacija i/ili ciljanje imunskog odgovora bilo od koristi. Naročito, modifikovane ćelije iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za lečenje, prevenciju i/ili ublažavanje bilo koje bolesti ili poremećaja koji je povezan sa ili je posredovan ekspresijom BCMA ili aktivnosti ili proliferacijom BCMA+ ćelija. Ćelije koje eksprimiraju BCMA koji mogu biti inhibirane ili ubijene korišćenjem modifikovanih ćelija iz pronalaska obuhvataju, na primer, ćelije multiplog mijeloma.
[0155] Modifikovane ćelije iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za lečenje bolesti ili poremećaja koji su povezani sa ekspresijom BCMA uključujući, npr., kancer koji obuhvata multipli mijelom ili druge kancere B-ćelija ili plazma ćelija, kao što je Waldenströmova makroglobulinemija, Burkitov limfom, i difuzni krupnoćelijski B limfom. U nekim izvođenjima, bolest ili poremećaj koji eksprimira BCMA je Kastlemanova bolest, limfoplazmacitični limfom, folikularni limfom, limfom mantle ćelija, limfom marginalne zone, Hodžkinovog limfoma, ne-Hodžkinovog limfoma, ili hronične limfocite leukemije. U skladu sa određenim izvođenjima iz predmetnog pronalaska, modifikovane ćelije su korisne za lečenje pacijenta koji je oboleo od multiplog mijeloma. U skladu sa drugim srodnim izvođenjuma aspekata pronalaska, obezbeđeni su postupci koji obuhvataju davanje modifikovane ćelije kao što je ovde prikazano pacijentu koji boluje od multiplog mijeloma. Analitički/diagnostički postupci koji su poznati u oblasti tehnike, kao što je skeniranje tumora, itd., može se koristiti da se utvrdi da li pacijent nosi multipli mijelom ili još jedan kancer B ćelijske linije.
[0156] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupke za lečenje rezidualnog kancera kod subjekta. Kao što je ovde korišćeno, termin "rezidualni kancer" označava postojanje ili postojanost jedne ili više ćelija kancera kod subjekta nakon tretmana terapijom protiv kancera.
[0157] Prema određenim aspektima, predmetnim pronalazak se odnosi na postupke za lečenje bolesti ili poremećaja koji je povezan sa ekspresijom BCMA (npr., multipli mijelom) koji obuhvata davanje populacije modifikovanih ćelija iz pronalaska subjektu nakon što je utvrđeno da subjekt boluje od multiplog mijeloma. Na primer, ovaj pronalazak obuhvata postupke za lečenje multiplog mijeloma koji obuhvata davanje modifikovanih imunih ćelija pacijentu 1 dana, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje ili 4 nedelje, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 1 godine, ili više nakon što je subjekt primio drugu imunoterapiju ili hemoterapiju.
[0158] Tretmani o kojima se ovde govori mogu biti poboljšani, kurativni ili profilaktički. Tretmani mogu biti ili deo autologne imunoterapije ili deo alogene imunoterapije. Pod autolognim, podrazumeva se da ćelije, ćelijska linija ili populacija ćelija koje se koriste za lečenje pacijenata potiču od pacijenta ili od donora kompatibilnog humanog leukocitnog antigena (HLA). Pod alogenim se podrazumeva da ćelije, ćelijska linija ili populacija ćelija koje se koriste za lečenje pacijenata ne potiču od pacijenta već od donora.
[0159] Ovde se opisuju ćelije koje se mogu koristiti sa prikazanim postupcima. Tretmani se mogu koristiti za lečenje pacijenata kojima je dijagnostikovano stanje pre-malignog ili malignog kancera koje je karakterisano sa ćelijama koje eksprimiraju BCMA, posebno izobiljem ćelija koje eksprimiraju BCMA. Takvi uslovi se mogu naći u kancerima, kao što je multipli mijelom.
[0160] Tipovi kancera koji se mogu tretirati modifikovanim ćelijama iz pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na multipli mijelom, Waldenström-ovu makroglobulinemiju, Burkitov limfom, i difuzni krupnićelijski B limfom, kao i druge kancere B ćelija ili plazma ćelija. U nekim izvođenjima, modifikovane ćelije se mogu koristiti za lečenje bolesti ili poremećaja koji eksprimira BCMA, kao što je Kastlemanova bolest, limfoplazmacitičnog limfoma, folikularnog limfoma, limfoma mantle ćelija, limfoma marginalne zone, Hodžkinovog limfoma, Ne-Hodžkinovog limfoma, ili hronične limfocitne leukemije.
[0161] Kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za lečenje subjekta koji je okarakterisan da ima ćelije ili tkiva koja eksprimuju BCMA, ili se sumnja da ima ćelije ili tkiva koja eksprimuju BCMA. Na primer, subjekti koji imaju korist iz lečenja u skladu sa pronalaskom obuhvata subjekte sa multiplim mijelomom.
[0162] Primena ćelija ili populacije ćelija prema predmetnom pronalasku može se izvesti na bilo koji pogodan način, uključujući inhalaciju aerosola, injekciju, ingestiju, transfuziju, implantaciju ili transplantaciju. Kompozicije koje su ovde opisane mogu se davati pacijentu subkutano, intradermalno, intratumoralno, intranodalno, intramedularno, intramuskularno, intravenskom ili intralimfatičnom injekcijom, ili intraperitonealno. U jednom izvođenju, ćelijske kompozicije ovog pronalaska se poželjno daju intravenskom injekcijom.
4
[0163] Primena ćelija i populacija ćelija može se sastojati iz primene 10 -10<9>ćelija po kg telesne mase, poželjno 10<5>do 10<6>ćelija/kg telesne mase uključujući sve celobrojne vrednosti broja ćelija unutar tih opsega. Ćelije ili brojevi ćelija mogu se primeniti u jednoj ili više doza. U nekim izvođenjima, efikasna količina ćelija se daje u pojedinačnoj dozi. U nekim izvođenjima, efikasna količina ćelija se daje u više od jedne doze tokom vremenskog perioda. Vreme davanja je unutar procene ordinirajućeg lekara i zavisi od kliničkog stanja pacijenta. Ćelije ili populacije ćelija se mogu dobiti iz bilo kojeg izvora, kao što je banka krvi ili od donora. Dok se individualne potrebe razlikuju, određivanje opsega efikasnih količina određenog ćelijskog tipa za određenu bolest ili stanje su obuhvaćeni stanjem tehnike. Efikasna količina označava količinu koja obezbeđuje terapeutski ili profilaktički benefit. Primenjena doza će zavisiti od starosnog doba, zdravlja i težine recipijenta, vrste istovremenog lečenja, ukoliko je prisutno, učestalosti tretmana i prirodu željenog efekta.
[0164] U jednom izvođenju, efektivna količina ćelija ili kompozicija koje sadrže ove ćelije je pimenjivana parentalno. Ova primena može biti intravenoznim davanjem. U nekim slučajevima, primena može biti sprovedena direktno injekcijom u tumor.
[0165] U određenim izvođenjima iz predmetnog pronalaska, ćelije su davane pacijentu istovremeno sa (npr., pre, istovremeno ili nakon) bilo kojeg broja relevantnih modaliteta lečenja, uključujući ali bez ograničenja na lečenje agensima kao što je antivirusna terapija, cidofovir i interleukin-2, Citarabin (takođe poznat kao i ARA-C) ili tretman natalizumabom za pacijente koji boluju od MS ili tretman efaliztimabom za pacijente koji boluju od psorijaze ili drugih tretmana za PML pacijente. U daljim izvođenjima, T ćelije iz pronalaska mogu se koristiti u kombinaciji sa hemoterapijom, zračenjem, imunosupresivnim agensima, kao što su ciklosporin, azatioprin, metotreksat, mikofenolat, i FK506, antitelima, ili drugim imunoablativnim agensima kao što su CAMPATH, anti-CD3 antitela ili drugim terapijama antitelima, citoksin, fludaribin, ciklosporin, FK506, rapamicin, mikofenolna kiselina, steroidima, FR901228, citokinima, i ozračivanje.
[0166] U daljem izvođenju, kompozicije ćelija iz ovog pronalaska se primenjuju pacijentu zajedno sa (npr., pre, istovremeno ili nakon) transplantacije kostne srži, ablativna terapija T ćelija upotrebom ili hemoterapeutskih agenasa kao što su, fludarabin, terapija eksternim zračenjem (XRT), ciklofosfamid, ili antitelima kao što su OKT3 ili CAMPATH, U drugom izvođenju, kompozicije ćelija iz prikazanih pronalazaka su primenjeni nakon ablativne terapije B-ćelija kao što su agensi koji reaguju sa CD20, npr., Rituksan. Na primer, u jednom izvođenju, subjekti mogu biti podvrgnuti standardnim tretmanom sa visokom dozom hemoterapije nakon čega sledi transplantacija matičnih ćelija periferne krvi. U određenim izvođenjima, nakon transplantacije, subjekti primaju infuziju proširenih imunskih ćelija iz prikazanog pronalaska. U dodatnom izvođenju, proširene ćelije su primenjene pre ili posle operacije. U određenim izvođenjima, bilo koji način (npr., operacija, hemoterapija, ili terapija zračenjem) može da se iskoristi za smanjenje opterećenja tumorom pre primene proširenih imunskih ćelija iz pronalaska. U jednom izvođenju, smanjenje opterećenja tumorom pre primene modifikovanih ćelija iz pronalaska može smanjiti potencijal za, ili sprečiti, sindrom oslobađanja citokina ili citokinska oluja, neželjeni efekat koji može biti povezan sa CAR T ćelijskom terapijom.
Kombinovane terapije
[0167] Ovaj pronalazak se odnosi na postupke koji obuhvataju primenu modifikovanih ćelija ili populacije ćelija koji sadrži bilo koji od himernih receptora antigena iz pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutskih agenasa. Primeri dodatnih terapeutskih agenasa koji se mogu kombinovati sa ili primeniti u kombinaciji sa ćelijama ili populacijom ćelija iz predmetnog pronalaska uključuju, npr., anti-tumorski agens (npr. hemoterapeutske agense uključujući melfalan, vinkristin (Oncovin), ciklofosfamid (Cytoxan), etoposid (VP-16), doksorubicin (Adryamicin), lipozomalni doksorubicin (Doxil), obendamustin (Treanda), ili bilo koji drugi za koje je poznato da su efikasni u lečenju tumora plazma ćelija kod subjekta.). U nekim izvođenjima, drugi terapeutski agens sadrži steroide. U nekim izvođenjima, drugi terapeutski agens sadrži ciljane terapije uključujući talidomid, lenalidomid, i bortezomib, koji su odobrene terapije za lečenje novodijagnostikovanih pacijenata. Lenalidomid, pomalidomid, bortezomib, karfilzomib, panobinostat, iksazomib, elotuzumab, i daratumumab su primeri drugog terapeutskog agensa koji su efikasni za lečenje rekurentnog mijeloma. U određenim izvođenjima drugi terapeutski agens je režim koji sadrži terapiju zračenjem ili transplantacije matičnih ćelija. U određenim izvođenjima, drugi terapeutski agens može biti imunomodulatorni agens. U određenim izvođenjima, drugi terapeutski agens može biti inhibitor proteazoma, uključujući bortezomib (Velcade), karfilzomib (Kyprolis), iksazomib (Ninlaro). U određenim izvođenjima drugi terapeutski agens može biti inhibitor histonske deacetilaze kao što je panobinostat (Farydak). U određenim izvođenjima, drugi terapetuski agens može biti monoklonsko antitelo, konjugat antitela sa lekom, bispecifično antitelo konjugovano sa anti-tumorskim agensom, inhibitorom kontrolne tačke, ili njihove kombinacije. Drugi agensi koji se mogu korisno primeniti u kombinaciji sa molekulima pronalaska koji vezuju antigen uključuju inhibitore citokina, uključujući male molekule inhibitore inhibitore citokina i antitela koja se vezuju za citokine kao što su IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, ili za njihove odgovarajuće receptore. Farmaceutske kompozicije iz prikazanog pronalaska (npr., farmaceutske kompozicije koje sadrže modifikovane ćelije ili ovde prikazane populacije ćelija) mogu se takođe primeniti kao deo terapeutskog režima koji sadrže jednu ili više terapeutskih kombinacija koje su odabrane od monoklonskog antitela osim onih koji su ovde opisani, koji mogu ovde interagovati sa različitim antigenom na površini plazma ćelije, bispecifičnog antitela, koji ima jedan krak koji se vezuje za antigen na površini tumorske ćelije i drugi krak se vezuje za antigen na T ćeliji, konjugata antitela sa lekom, bispecifičnog antitela konjugovanog sa anti-tumorskim agensom, inhibitorom kontrolne tačke, na primer, onaj koji cilja, PD-1 ili CTLA-4, ili njihove kombinacije. U određenim izvođenjima, inhibitori kontrolne tačke mogu biti odabrani od inhibitora PD-1, kao što je pembrolizumab (Keytruda), nivolumab (Opdivo), ili cemiplimab (REGN2810). U određenim izvođenjima, inhibitori kontrolne tačke mogu biti izabrani iz inhibitora PD-L1, kao što su atezolizumab (Tecentriq), avelumab (Bavencio), ili Durvalumab (Imfinzi)). U određenim izvođenjima, inhibitori kontrolne tačke mogu biti odabrani od inhibitora CTLA-4, kao što je ipilimumab (Yervoy).
[0168] Ovaj pronalazak takođe obuhvata terapeutske kombinacije koje obuhvataju bilo koju od modifikovanih ćelija ili ovde pomenutih populacija ćelija i inhibitora jednog ili više VEGF, Ang2, DLL4, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, EGFRvlll, cMet, IGF1R, B-raf, PDGFR-α, PDGFR-β, FOLH1 (PSMA), PRLR, STEAP1, STEAP2, TMPRSS2, MSLN, CA9, uroplakina, ili bilo koji od prethodno pomenutih citokina, gde je inhibitor aptamer, antisensni molekul, ribozim, siRNK, peptitelo, nanotelo ili fragment antitela (npr., Fab fragment; F(ab’)2fragment; Fd fragment; Fv fragment; scFv; dAt fragment; ili drugi modifikovani molekuli, kao što su diatela, triatela, tetratela, minitela i minimalne jedinice prepoznavanja). U nekim izvođenjima, modifikovane ćelije ili populacija ćelija iz pronalaska može se takođe primeniti kao deo režima tretmana koji takođe obuhvata tretman zračenjem i/ili konvencionalnom hemoterapijom.
[0169] Dodatna terapeutski aktivna komponenta(e) mogu se primeniti neposredno pre, istovremeno sa, ili ubrzo nakon primene modifikovanih ćelija iz ovog pronalaska; (za svrhe ovog prikaza, takvi režimi primene podrazumevaju primenu modifikovanih ćelija "u kombinaciji sa" dodatnom terapeutski aktivnom komponentom).
[0170] Ovaj pronalazak obuhvata farmaceutske kompozicije u kojima je modifikovana ćelija ili populacija ćelija iz predmetnog pronalaska istovremeno formulisana sa jednom ili više dodatnih terapeutski aktivnih komponen(ata)ti kao što je ovde na drugom mestu opisano.
Režimi primene
[0171] Prema određenim izvođenjima iz predmetnog pronalaska, višestruke doze modifikovanih ćelija se mogu primeniti subjektu u toku definisanog vremenskog perioda. Postupci prema ovom aspektu pronalaska sadrže sekvencijalnu primenu subjektu višestrukih doza ćelija. Kao što se ovde koristi, "sekvencijalna primena" znači da svaka doza koja se primenjuje subjektu u različitoj vremenskoj tački, npr., u različitim danima koji su razdvojeni unapred određenim intervalom (npr., satima, danima, nedeljama ili mesecima). Ovaj pronalazak obuhvata postupke koji sadrže sekvencijalnu primenu pacijentu pojedinačne početne doze, koju prati jedna ili više sekundarnih doza, i po potrebi koju prati jedna ili više tercijernih doza.
[0172] Termini "početna doza," "sekundarne doze," i "tercijerne doze," se odnosi na vremensku sekvencu primene modifikovanih ćelija iz pronalaska. Prema tome, "početna doza" je doza koja se primenjuje na početku režima tretmana (takođe označena sa "osnovna doza"); "sekundarne doze" su doze koje se primenjuju nakon početne doze; i "tercijerne doze" su doze koje su primenjene nakon sekundarnih doza. Početna, sekundarna, i tercijerne doze mogu svaka sadržati istu količinu modifikovanih ćelija, ali se generalno mogu razlikovati jedna od druge u smislu učestalosti primene. U određenim izvođenjima, međutim, količina modifikovanih ćelija sadržanih u početnim, sekundarnim i/ili tercijernim dozama se razlikuje jedna od druge (npr., prilagođena naviše ili najniže po potrebi) tokom trajanja tretmana. U određenim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3, 4, ili 5) doza se daju na početku režima tretmana kao "doze punjenja" nakon čega slede sledeće doze koje se ređe primenjuju (npr., "doze za održavanje").
[0173] U jednom primeru izvođenja iz predmetnog pronalaska, svaka sekundarna i/ili tercijerna doza je primenjivana 1 do 26 (npr., 1, 1<1>/2, 2, 2<1>/2, 3, 3<1>/2, 4, 4<1>/2, 5, 5<1>/2, 6, 6<1>/2, 7, 7<1>/2, 8, 8<1>/2, 9, 9<1>/2, 10, 10<1>/2, 11, 11<1>/2, 12, 12<1>/2, 13, 13<1>/2, 14, 14<1>/2, 15, 15<1>/2, 16, 16<1>/2, 17, 17<1>/2, 18, 18<1>/2, 19, 19<1>/2, 20, 20<1>/2, 21, 21<1>/2, 22, 22<1>/2, 23, 23<1>/2, 24, 24<1>/2, 25, 25<1>/2, 26, 26<1>/2, ili više) nedelja neposredno nakon prethodne doze. Fraza "neposredno nakon prethodne doze," kao što se ovde koristi, znači, u nizu višestrukih primena, doza koja je primenjivana pacijentu pre primene sledeće doze u nizu bez interventnih doza.
[0174] Postupci prema ovom aspektu iz pronalaska mogu da obuhvate primenu pacijentu bilo kog broja sekundarnih i/ili tercijernih doza. Na primer, u određenim izvođenjima, pacijentu se daje samo jedna sekundarna doza. U drugim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) sekundarnih doza se daju pacijentu. Slično, u određenim izvođenjima, samo jedna tercijerna doza se daje pacijentu. U drugim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) tercijernih doza se daju pacijentu.
[0175] U izvođenjima koja obuhvataju višestruke sekundarne doze, svaka sekundarna doza se može primeniti istom učestalošću kao druge sekundarne doze. Na primer, svaka sekundarna doza se može primeniti pacijentu 1 do 2 nedelje neposredno nakon prethodne doze. Slično, u izvođenjima koja obuhvataju višestruke tercijerne doze, svaka tercijerna doza se može primeniti u istoj učestalosti kao i druge tercijerne doze. Na primer, svaka tercijerna doza se može primeniti pacijentu 2 do 4 nedelje neposredno nakon prethodne doze. Alternativno, učestalost na kojoj se sekundarne i/ili tercijerne doze daju pacijentu može da varira tokom režima lečenja. Učestalost primene može takođe da se prilagodi tokom lečenja od strane lekara u zavisnosti od potreba pojedinačnog pacijenta nakon kliničkog pregleda.
PRIMERI
[0176] Sledeći primeri su ilustrativni ali ne ograničavaju obim patentnih zahteva.
Primer 1: Dobijanje Anti-BCMA antitela
[0177] Anti-BCMA antitela su dobijena imunizacijom genetički modifikovanog miša sa humanim BCMA antigenom (npr., hBCMA, SEQ ID NO: 101), ili imunizovanjem modifikovanog miša koji sadrži DNK koja kodira varijabilne regione teškog i kapa lakog lanca humanog imunoglobulina sa humanim BCMA antigenom.
[0178] Nakon imunizacije, splenociti su sakupljeni iz svakog miša i ili (1) spojeni sa ćelijama mijeloma miša da bi se sačuvala njihova vijabilnost i obrazovale ćelije hibridoma i testirane za specifičnost na BCMA, ili (2) sortirani sa B-ćelijama (kao što je opisano u US 2007/0280945A1) korišćenjem fragmenta humanog BCMA kao agenta za sortiranje koji vezuje i identifikuje reaktivna antitela (antigen-pozitivne B ćelije).
[0179] Himerna antitela na BCMA su prvobitno izolovana sa humanim varijabilnim regionom i mišjim konstantnim regionom. Antitela su karakterisana i selektovana za željene karakteristike, uključujući afinitet, selektivnost, itd. Po potrebi, mišji konstantni regioni su zamenjeni sa željenim humanim konstantnim regionom, na primer divljim tipom ili modifikovanim konstantnim domenom IgG1 ili IgG4, da bi se generisalo puno humano anti-BCMA antitelo. Dok odabrani konstantni region može da varira u zavisnosti od specifične upotrebe, karakteristike visokoafinitetnog vezivanja antigena i ciljne specifičnosti se nalaze u varijabilnom regionu.
[0180] Sekvence aminokiselina i nukleinskih kiselina varijabilnog regiona teškog i lakog lanca anti-BCMA antitela: Tabela 1 prikazuje identifikatore sekvenci aminokiselina varijabilnih regiona i CDR-a teških i lakih lanaca izabranih anti-BCMA antitela iz prikaza. Odgovarajući identifikatori sekvence nukleinskih kiselina su prikazani u Tabeli 2.
Tabela 1. Identifikatori aminokiselinske sekvence
Tabela 2. Identifikatori sekvence nukleinske kiseline
(nastavak)
Primer 2: Dobijanje BCMA-Specifičnih himernih antigenskih receptora
[0181] Šest anti-BCMA antitela (mAt16711, mAt16716, mAt16732, mAt16747, i mAt21581) je reformatirano u VL-VH jednolančane varijabilne fragmente (ScFv) i postavljeno u konstrukt himernog antigenskog receptora (CAR) koji koristi zglob i transmembranski domen CD8α, 4-1BB kostimulišući domen, i stimulišući domen CD3ζ. BCMA specifični CARs su klonirani u lenti-virusni ekspresioni vektor (Lenti-X<TM>Bicistronic Ekspersioni Sistem (Neo), Clontech Kat# 632181) i lentivirusne čestice su generisane upotrenom Lenti-X Packaging Single-Shot (VSV-G) sistema (Clontech Kat # 631276) u skladu sa protokolima proizvođača. Jurkat ćelije modifikovane da eksprimiraju reporter NFAT-luciferaza (Jurkat/NFATLuc cl. 3C7) su zatim transdukovane sa različitim konstruktima CAR upotrebom RetroNectin<®>Precoated Dishes (Clontech, Cat# T110a) u skladu sa protokolima proizvođača. Posle selekcije od najmanje 2 nedelje u 500 µg/ml G418 (Gibco, Kat # 11811-098), dobijene su sledeće CAR-T ćelijske linije; Jurkat/NFATLuc cl. 3C7/BCMA 16716 VL-VH CART, Jurkat/NFATLuc cl. 3C7/BCMA 16711 VL-VH CART, Jurkat/NFATLuc cl.3C7/BCMA 16732 VL- VH CART, Jurkat/NFATLuc cl.3C7/BCMA 16747 VL-VH CART, Jurkat/NFATLuc cl. 3C7/BCMA 21581 VL-VH CART. Sekvence nukleotida CAR konstrukata korišćenih u dobijanju ovih linija CAR-T ćelija, kao što je ilustrovano na Slici 1, su prikazani u SEQ ID NOs: 81 (mAt16711 VUVH), 83 (mAt16716 VUVH), 85 (mAt16732 VUVH), 87 (mAt16747 VUVH), i 89 (mAt21581 VUVH). Ovih šest CAR-T ćelijskih linija je korišćeno da bi se procenila ekspresija na ćelijskoj površini i aktivacija BCMA CAR-T ćelija, kao što je razmotreno u Primeru 3.
[0182] Himerni antigenski receptori koji sadrže anti-BCMA VL-VH scFv, huCD8 transmembranski domen, 4-1BB kostimulišući domen, i CD3ζ domen za signalizаciju su konstruisani upotrebom sekvenci nukleotida VL i VH dva anti-BCMA antitela, mAt21581 i mAt16747 (koje odgovaraju SEQ ID NOs: 89 i 87 tim redom). Kao nevezujuća kontrola, slični CAR je konstruisan korišćenjem sekvence nukleotida irelevantnog scFv (CAR konstrukt SEQ ID NO: 91). Ovakvi CARs su klonirani u pLVX lentivirusni vektor sa EF1a promotorom i IRES:eGFP sekvencom (za praćenje ćelija transdukovanih sa CAR) i i proizveden je VSV-pseudotipizovani lentivirus.
[0183] CD3+ T ćelije su izolovane iz mononuklearnih ćelija humane periferne krvi (PBMCs), koje su stimulisane sa CD3/CD28 mikrozrncima plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2, i transdukovane sa lentivirusom pri MOI=5. Transdukovane ćelije su ekspandirane tokom 3 nedelja sa CD3/CD28 mikrozrncima plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2 pre nego što su krioprezervirani do upotrebe tokom in vivo eksperimenta. Ove tri linije ćelija CAR-T su korišćene da bi se procenila efikasnost u smanjenju tumorskog opterećenja in vivo, kao što je razmatrano u Primerima 4 i 5.
Primera 3: Ekspresija BCMA CAR konstrukata na površini ćelije u Jurkat ćelijama i aktivacija BCMA CAR-T ćelija
[0184] Relativnoj ekspresiji BCMA CAR konstrukata na ćelijskoj površini u Jurkat/NFATLuc ćelijama je pristupljeno protočnom citometrijom. Za bojenje, ćelije su postavljene u pufer za bojenje (PBS, bez kalcijuma i magnezijuma (Irving 9240) 2% FBS (ATCC 30-2020) pri gustini od 200,000 ćelija u bunariću u ploči sa V-dnom sa 96 bunarića i bojeni su u trajanju od 30 minuta na 4°C sa 10 ug/ml ekstraćelijskog domena BCMA spojenog sa hlgG1-Fc (BCMA ecto-hFc) ili irelevantnim proteinom spojenim sa hlgG1-Fc (Fc kontrola izotipa). Nakon inkubacije sa BCMA-hFc ili Fc kontrolom izotipa, ćelije su jednom isprane u puferu za bojenje, i obojene Alexa-Flour 647 konjugovanim sekundarnim antitelom (Jackson ImmunoResearch, Cat # 109-606-170) na 10 µg/ml tokom 30 minuta na 4°C. Ćelije su nakon toga isprane i fiksirane upotrebom 50% rastvora BD Cytofix (BD, Cat # 554655) razblaženog u puferu za bojenje. Uzorci su pušteni na Intellicyt iQue protočni citometar i analizirani sa FlowJo 10.2 da bi se izračuna srednji intenzitet fluorescencije (MFI). Odnos šuma prema signalu (S:N) je određen uzimanjem odnosa MFI BCMA-hFc ili Fc kontrole izotipa MFI prema MFI samo sekundarnog antitela.
[0185] Aktivnost CAR-T linija je procenjena u biotestu CAR-T/APC (antigen prezentujuća ćelija). Da bi se sproveo biotest, 50,000 CAR-T ćelija je dodato u bele ploče Thermo-Nunc sa 96 bunarića (Thermo Scientific, Kat# 136101) u 50 ul medijuma za testiranje (RPMI medijum sa 10% FBS i 1 % P/S/G) nakon čega se dodaje 3-struko serijsko razblaženje APC-a (500,000 ćelija na 685 ćelija) u 50 ul medijuma za ispitivanje. Korišćene su sledeće APC-e: RAJI, Daudi, RPMI8226 (endogena ekspresija BCMA), i HEK293 (BCMA negativni). Mešavina ćelija je inkubirana na 37°C, 5% C02, vlažnom inkubatoru tokom 5 h. Aktivnost NFAT-Luciferaze je izmerena korišćenjem Promega One-Glo (Cat# E6130) i Perkin Elmer Envision čitača ploča. Relativne jedinice luciferaze (RLU) su generisane i prikazane na GraphPad Prism korišćenjem logističke jednačine iz četiri parametra preko krive odgovora od 8-tačaka. Uslov od nule APC za svaku krivu doza-odgovor je takođe uključen u analizu kao nastavak trostrukog serijskog razblaženja i predstavljen je kao najniža doza. Aktivnost CAR-T je određena uzimanjem odnosa najvećeg RLU na krivi prema najnižem i predstavljen je kao signal:šum (S:N) u Tabeli 4.
[0186] Tabela 3 pokazuje da su 16747 i 21581 CAR-T-e imale sličnu ekspresiju na površini ćelije sa S:N u opsegu od 209-273, 16716 CAR-T eksprimiranim 44-puta iznad pozadinske, dok 16732 i 16711 CAR ekspresija je bila mnogo niža sa S:N od 13 i 4, tim redom.
[0187] Tabela 4 pokazuje da je svih šest linija BCMA CAR-T ćelija aktivirano sa RAJI, Daudi i RPMI8226 ćelijama. Nijedna linija CAR-T ćelija nije aktivirana sa HEK293. 16747 BCMA CAR je imao najjaču aktivaciju u CAR-T/APC biotestu dok je CAR 16711 imao najslabiju aktivnost bez obzira na BCMA koji eksprimira APC. Na kraju, primećena je korelacija između ekspresije CAR (Tabela 3) i aktivnosti CAR (Tabela 4).
Tabela 3: Vezivanje rastvorljivog FC-BCMA na BCMA CAR-T ćelijskim linijama
Tabela 4: Aktivacija BCMA CAR-T u CAR-T/APC Biotestu
Primer 4: BCMA-Ciljane CAR-T ćelije smanjuju rast tumora koji eksprimiraju BCMA (OPM-2) In Vivo u modelu ksenogenog tumora
[0188] Da bi se odredila in vivo efikasnost BCMA-ciljane T ćelije himernog antigenskog receptora (CAR), studija ksenogenog tumora je sprovedena u miševima upotrebom OPM-2 ćelija humanog multiplog mijeloma, koji eksprimira visoke nivoe BCMA.
[0189] Implantacija i merenja ksenogenih tumora: U danu 0, imunodeficijentnim NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) miševima je intravenozno primenjeno 2x106 BCMA<+>OPM-2 tumorskim ćelijama multiplog mijeloma koje su modifikovane da takođe eksprimiraju luciferazu svica (OPM-2-6
luciferazne ćelije). U danu 21, miševima je intravenozno ubrizgano 2x10 T ćelija koje eksprimiraju ili kontrolni CAR ili anti-BCMA CAR (kao što je određeno učestalošću ćelija koje eksprimiraju GFP, što je 6 marker za one ćelije koje su transdukovane sa CAR). Miševima (n=5 po grupi) je primenjeno 2x10 irelevantnih scFc CAR T (kontrolni scFv CAR), 2x10<6>anti-BCMA CAR T koji kodira 21581 scFv CAR, ili 2x10<6>anti-BCMA CAR T koji kodira 16747 scFv. Tumorski rast je procenjen tokom dana 61 merenjem tumorske bioluminiscencije (BLI) u anesteziranim životinjama. Kao pozitivna kontrola, grupa miševa (n=5) je primila samo OPM-2-luciferazne ćelije, ali ne T ćelije. Da bi se izmerili pozadinski nivoi BLI, grupa miševa (n=5) je netretirana i nisu primili tumore ili T ćelije.
[0190] Merenje rasta ksenogenog tumora: BLI snimanje je korišćeno za merenje opterećenja tumorom. Miševima je IP ubrizgano 150 mg/kg supstrata luciferaze D-luciferina suspendovanog u PBS. Pet minuta nakon ove injekcije, BLI snimanje miševa je sprovedeno u anesteziji izofluranom upotrebom sistema Xenogen IVIS. Snimanje slike je obavljeno sa vidnim poljem u D, visina subjekta od 1.5 cm, i srednjim nivoom grupisanja (eng. binning) sa automatskim vremenom ekspozicije koje određuje softver Living Image. BLI signali su ekstrahovani upotrebom softvera Living Image: regioni od interesa su nacrtani oko svake tumorske mase i intenziteti fotona su zabeleženi kao p/s/cm2/sr.
[0191] Dok su BCMA<+>OPM-2-luciferaza tumori progresivno rasli u miševima koji su primili irelevantne scFv CAR T ćelije, CAR T cells koje kodiraju 21581 scFV CAR smanjenje tumorskim opterećenjem do pozadinskih nivoa u većini životinja i CAR T ćelije kodiraju 16747 scFv CAR smanjuju tumorsko opterećenje do pozadinskih nivoa u svim životinjama. Rezultati su prikazani ispod u Tabeli 5a.
Tabela 5a: Srednja vrednost veličine tumora (u odnosu na radijansu) u različitim vremenskim tačkama
nastavak
nastavak
[0192] Dalji eksperiment je sproveden kao što je dole razmatrano, osim toga što je miševima ubrizgano 2x10<6>T ćelija koje eksprimiraju ili kontrolni CAR ili anti-BCMA CAR u danu 22 (radije od dana 21), i rast tumora je procenjen sve do dana 56 (radije od dana 61).
[0193] Dok su BCMA<+>OPM-2-luciferaza tumori rasli progresivno kod miševa koji su primili irelevantne scFv CAR T ćelije, CAR T ćelije koje kodiraju 21581 i 16747 scFV CARs su smanjile opterećenje tumorom do pozadinskih nivoa kod svih životinja. Rezultati su prikazani ispod u Tabeli 5b.
Tabela 5b: Srednja vrednost veličine tumora (u odnosu na radijansu) u različitim vremenskim tačkama
nastavak
Primer 5: CAR-T ćelije koje ciljaju BCMA smanjuju tumore koji eksprimiraju BCMA (MOLP-8) In Vivo u modelu ksenogenog tumora
[0194] Da bi se odredila in vivo efikasnost BCMA-ciljanog himernog antigenskog receptora (CAR) T ćelija, ispitivanje ksenogenog tumora je sprovedeno kod miševa korišćenjem MOLP-8 ćelija humanog multiplog mijeloma, koje eksprimiraju niske nivoe BCMA..
[0195] Implantacija i merenja ksenogenih tumora: U danu 0, immunodeficijentim NOD.Cgscid tm1Wjl
Prkdc II2rg /SzJ (NSG) miševima su intravenozno ubrizgane 2x10<6>BCMA<+>MOLP-8 ćelije tumora humanog multiplog mijeloma koje su modifikovane da takođe eksprimiraju luciferazu svica (MOLP-8-luciferazne ćelije). U danu 12, miševima su intravenozno ubrizgane 2x10<6>T ćelije koje eksprimiraju ili kontrolu CAR ili anti-BCMA CAR (kao što je određeno učestalošću ćelija koje eksprimiraju GFP, koji je marker onih ćelija koje su transdukovane sa CAR). Miševima (n=5 po grupi) je ubrizgano 2x106 irelevantnih scFv CAR T (kontrola scFv CAR), 2x10<6>anti-BCMA CAR T koje kodiraju 21581 scFv CAR, ili 2x10<6>anti-BCMA CAR T koje kodiraju 16747 scFv. Tumorski rast je procenjen u eksperimentu merenjem tumorske bioluminiscencije (BLI) kod anesteziranih životinja. Kao pozitivnoj kontroli, grupi miševa (n=5) su davane samo MOLP-8-luciferazne ćelije, ali ne T ćelije. Da bi se izmerili nivoi pozadinskog BLI, grupa miševa (n=5) je netretirana i nije primila tumore ili T ćelije.
[0196] Merenje rasta ksenogenog tumora: BLI snimanje je korišćeno za merenje opterećenja tumorom. Miševima je IP ubrizgano 150 mg/kg supstrata luciferaze D-luciferina suspendovanog u PBS-u. Pet minuta nakon ovog ubrizgavanja, BLI snimanje miševa je sprovedeno pod anestezijom koja sadrži izofluran korišćenjem Xenogen IVIS sistema. Razvijanje slike je sprovedeno sa vidnim poljem kod D, predmetnoj visini od 1.5 cm, i srednjim nivoom grupisanja (eng. binning) sa automatskim vremenom izlaganja određenim od Living Image softvera. BLI signali su ekstrahovani korišćenjem Living Image softvera: regioni od interesa su zaokruženi oko svake tumorske mase i fotonski intenziteti su zabeleženi kao p/s/cm2/sr.
[0197] Dok su BCMA<+>MOLP-8-luciferazni tumori progresivno rasli u miševima koji su primili irelevantne scFv CAR T ćelije, CAR T ćelije koje kodiraju 21581 scFV CAR i 16747 scFv CAR smanjili su opterećenja tumorom do pozadinskih nivoa u svim životinjama. Rezultati su prikazani ispod u Tabeli.
Tabela 6: Srednja vrednost veličine tumora (u odnosu na radijansu) u različitim vremenskim tačkama
Primer 6: CAR-T ćelije specifične za BMA posreduju u citolizi ćelija koje eksprimiraju BCMA [0198] CD3+ T ćelije su izolovane iz mononuklearnih ćelija humane periferne krvi (PBMCs), stimulisane sa CD3/CD28 mikroperlama plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2, I transdukovane sa lentivirusom na MOI=5, kao što je gore razmatrano u Primeru 2. Transdukovane ćelije su proširene tokom 3 nedelje sa CD3/CD28 mikroperlama plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2 pre postavke citolitičkog testa.
[0199] Da bi se odredio citolitički kapacitet (CAR) T ćelija sa himernim antigenskim receptorom koji cilja BCMA, citolitički test je sproveden korišćenjem proširenih CAR-T ćelija i različite ciljne ćelijske linije tumora koje eksprimiraju varijabilne nivoe BCMA. U danu 21 proširenja, proširene CAR-T ćelije su ko kultivisane u triplikatu u različitim odnosima sa kalceinom obeleženim BCMA+ ciljnim ćelijskim 6
linijama. Svaka ciljna ćelijska linija je sakupljena i suspendovana u gustini od 2x10 /mL pre dodavanja kalcein-AM boje u koncentraciji od 8 uM tokom 35 minuta na 37°C. Nakon obeležavanja kalceinom, ciljne ćelije su isprane dva puta da bi se uklonio kalcein u višku. Nakon toga, T ćelije i ciljne ćelije su zajedno kultivisane u ploči sa 96 bunarića sa okruglim dnom u različitim odnosima i kultivisane su na 37°C okom 2.5 h kada je sakupljen supernatant kulture. Za negativnu kontrolu, ciljne ćelije su zajedno gajene sa T ćelijama koje su dobijene upotrebom sličnog CAR koji je dizajniran da sadrži scFv koji ne prepoznaje BCMA. Kao dodatna CAR negativna kontrola, korišćene su netransdukovane i proširene T ćelije iz istog normalnog zdravog donora. Kao kontrola za antigen specifično CAR-T ćelijama posredovano ubijanje, korišćena je K562 ciljna ćelijska linija hronične mijelogene leukemije jer je ova ćelijska linija negativna za ekspresiju BCMA. Da bi se odredilo da li se kalcein spontano oslobađa iz H-929 i MOLP-8 ciljnih ćelijskih linija, svaka ćelijska linija je kultivisana u odsustvu CAR-T ćelija. Da bi se odredilo maksimalno moguće oslobađanje kalceina, ciljne ćelijske linije su kultivisane i lizirane upotrebom Optmizer medijuma koji je dopunjen da sadrži 1% Trito<nTM>X-114 deterdžent. U supernatantu, relativni nivoi kalceina su mereni korišćenjem Viktor X4 čitača ploča i procenat citotoksičnosti je izračunat kao ((Signal kalceina – Spontano oslobađanje kalceina) / (Maksimum oslobađanja kalceina – Spontano oslobađanje kalceina))*100.
[0200] Kao što je ispod prikazano u Tabelama 7A-7C, kulture koje se sastoje iz BCMA-ciljanih CAR+ T ćelija dobijene su korišćenjem 21581 i 16747 scFv koji indukuje robustnu citolizu H-929 ciljnih ćelija i MOLP-8 ciljnih ćelija. Relativno u odnosu na H-929 ćelije, uočen je niži nivo citotoksičnosti protiv MOLP8 ćelija. Ovaj rezultat je objašnjen H-929 koji eksprimiraju više nivoe BCMA antigena od MOLP-8 ćelija. Za svaku BCMA-ciljanu CAR-T ćelijsku kulturu, najveći stepen citotoksičnosti protiv H-929 ćelija, i BCMA-ciljne CAR-T ćelije modifikovane sa 16747 scFv dalo je najveći stepen citotoksičnosti protiv obe ciljne ćelijske linije. I netransdukovane i proširene (MOI 0) T ćelije, i relevantne CAR-T ćelije (17363), kada su zajedno kultivisane sa ciljnim ćelijama na najvećem odnosu 50 T ćelije prema jednoj ćeliji, nije uspeo da pokrene bilo koju citolizu MOLP-8 i H-929 ciljnih ćelija. Ovaj rezultat ilustruje da se citoliza uočava samo kada CAR struktura sadrži scFv koji prepoznaje BCMA (npr., od mAt21581 i mAt16747). Dodatno, BCMA-ciljne CAR-T ćelije pokazale su zanemarljivu citotoksičnost protiv K562 ćelija kojima nedostaje eskpresija BCMA što ukazuje da je ekspresija BCMA potrebna da bi se posmatrala citoliza.
Tabela 7A: BCMA-Usmerena citoliza CAR-T ćelia
Tabela 7B: BCMA-Usmerena citoliza CAR-T ćelija
Tabela 7C: BCMA-Usmerena CAR-T Cell Cytolysis
Primer 7: Ex Vivo Citotoksičnost BCMA-ciljanih CAR-T ćelija u kostnoj srži dobijenoj iz multiplog mijeloma pacijenta
[0201] CD3+ T ćelije su izolovane iz mononuklearnih ćelija humane periferne krvi (PBMCs), stimulisane sa CD3/CD28 mikroperlama plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2, i transdukovane su na MOI=5, kao što je gore razmatrano u Primeru 2. Transdukovane ćelije su proširene 3 nedelje sa CD3/CD28 mikroperlama plus 100 U/ml rekombinantnim humanim IL-2 pre postavljanja testa citotoksičnosti.
[0202] Pri sakupljanju, proširene CAR-T ćelije su isprane i resuspendovane u kompletnom medijumu (RPMI dopunjenom sa 10% FBS, 100 U/mL penicilinom, 100 mg/mL streptomicinom, i 292 mg/mL L-glutaminom). Kostna srž iz pacijenata koji boluju od multiplog mijeloma je otopljena i resuspendovana u kompletnom medijumu. HS-5 stromalne ćelije su zasejane na ploče sa 96 bunarčića sa ravnim dnom u 10000 ćelija po bunarčiću i inkubirane su preko noći. T ćelije i kostna srž koja je dobijena iz pacijenta su dodate u bunarčiće sa stromalnim u različitim E:T odnosima (2 struke titracije počev od E:T=10:1) i kultivisane na 37°C tokom 12 h. Kao CAR negativna kontrola, korišćene su netransdukovane i proširene T ćelije iz istog normalnog zdravog donora.
[0203] Posle 12 h, preživljavanje blasta multiplog mijeloma je određeno korišćenjem protočne citometrije. Ćelije su obojene koktelom antitela konjugovanih sa fluoroforom (anti-CD4, anti-CD8, anti-CD16, anti-CD45, anti-CD90, anti-CD138, i anti-SlamF7) u BD Horizon Brilliant puferu za bojenje u toku 30 minuta na 4°C. Ćelije su jednom isprane u PBS-u i obojene sa LIVE/DEAD bojom za fiksiranje mrtvih ćelija tokom 20-30 minuta na 4°C zatim slede dva ispiranja u PBS-u i resuspendovanje u hladnom Miltenyi AutoMacs puferu. CountBright čestice su dodate u uzorke da bi se odredila količina apsolutnog broja ćelija po bunariću. Uzorci su analizirani na BD FortessaX20 protočnom citometru. Preživeli blasti multiplog mijeloma su ograničeni na žive pojedinačne CD4-/CD8-/SlamF7+/CD138+. Procenat preživljavanja je izračunat kao aposolutni broj živih blasta multiplog mijeloma u tretiranom uzorku normalizovanom na žive ćelije multiplog mijeloma u netretiranoj kontroli.
[0204] Kulture koje sadrže CAR+ T ćelije koje ciljaju BCMA generisane su korišćenjem mAt21581 VH/VL indukovalo je robustnu ciljno specifičnu citolizu blasta multiplog mijeloma iz 2 novodijagnozirana i 1 pacijenta u relapsu. U E:T odnosu 10:187-94% blasta multiplog mijeloma je liziranu. Netransdukovane i lizirane (MOI 0) T ćelije su lizirale 34-0% blasta mijeloma ćelija. Ovaj rezultat pokazuje aktivnost CAR+ T ćelija koje ciljaju BCMA da potentno liziraju blaste multiplog mijeloma dobijene iz pacijenta na ciljno specifičan način. Rezultati su prikazani ispod u tabeli 8.
Table 8: % preživljavanja blasta multiplog mijeloma u BCMA-usmerenoj CAR-T ćelijskog citolizi
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> Chimeric Antigen Receptors with BCMA
Specificity and Uses Thereof
<130> 10455WO01
<160> 101
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 1
caggtgcagc tggtggagtc ggggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggca ttcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattacatg atggaagtag taactactat 180 gcagagtccg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca attccaagaa cacactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctctat attactgtac gaaaaggtat 300 tcagaagcag ctggcccaaa ttggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366
<210> 2
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu His Asp Gly Ser Ser Asn Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
Thr Lys Arg Tyr Ser Glu Ala Ala Gly Pro Asn Trp Phe 46 Asp Pro Trp 100 105 110
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 3
ggattcacct tcagtaccta tggc 24
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly
1 5
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 5
atattacatg atggaagtag taac 24
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 6
Ile Leu His Asp Gly Ser Ser Asn
1 5
<210> 7
<211> 45 47 <212> DNA
<223> synthetic
<400> 7
acgaaaaggt attcagaagc agctggccca aattggttcg acccc 45
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 8
Thr Lys Arg Tyr Ser Glu Ala Ala Gly Pro Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 9
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 9
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtcg gggaattagc agctggttag cctggtatca gcagaagcca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatccatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg ctacttacta ttgtcaacag gctatcagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 48
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 11
cggggaatta gcagctgg 18 <210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 12
Arg Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 13
gctgcatcc 9 <210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 14
Ala Ala Ser
1
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 15
caacaggcta tcagtttccc attcact 27
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 16
Gln Gln Ala Ile Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 17
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 17
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgtca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attattggta gtggtggtag cacatattac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaagagcc 300 ggggataact ggaactggtt cgacccctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30 50
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Arg Ala Gly Asp Asn Trp Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 19
ggattcacct ttagcagcta tgtc 24
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 20
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val
1 5
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 21
attattggta gtggtggtag caca 24
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 51
<223> synthetic
<210> 23
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 23
gcgaaaagag ccggggataa ctggaactgg ttcgacccc 39
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 24
Ala Lys Arg Ala Gly Asp Asn Trp Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 25
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 25
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctttaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcggaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tggggcggat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaaaagtg tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
52
<400> 26
Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys Ser Val Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 27
cagggtatta gcagctgg 18
<210> 28
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 28
Gln Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 29
gctgcatcc 9
<210> 30
<211> 3
<212> PRT 53 <213> Artificial Sequence
Ala Ala Ser
1
<210> 31
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 31
caacaggcta aaagtgtccc attcact 27
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 32
Gln Gln Ala Lys Ser Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 33
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 33
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt atcagttgga atagtggtaa catgggatat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgttc 240 ctgcaaatgc acagtttgag agctgaggac acggcctttt attactgtgc aaaagtccgt 300 ctaactgcct ttgacttttg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 34
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
54
<220>
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Asn Met Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80
Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Val Arg Leu Thr Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 35
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 36
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 37
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 37 55 atcagttgga atagtggtaa catg 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 38
Ile Ser Trp Asn Ser Gly Asn Met
1 5
<210> 39
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 39
gcaaaagtcc gtctaactgc ctttgacttt 30
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 40
Ala Lys Val Arg Leu Thr Ala Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 41
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 41
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc ggacaagtca gagcattggc aactatttaa attggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct catctatact gcatccagtt tgcagaatgg agtcccatca 180 aggttcactg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaggattttg taatttacta ctgtcaacag agtttcagta ccccgtatac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321
56
<210> 42
<223> synthetic
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 43
cagagcattg gcaactat 18
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 44
Gln Ser Ile Gly Asn Tyr
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 57 <223> synthetic
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 46
Thr Ala Ser
1
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 47
caacagagtt tcagtacccc gtatact 27
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 48
Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 49
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 49
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tcagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagttcta gtggtagttc cataaagtac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgcc 5a8agaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gagagaggga 300 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ile Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Asn Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 51
ggattcacct tcagtgacta ctac 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 53 59
<211> 24
<223> synthetic
<400> 53
attagttcta gtggtagttc cata 24 <210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 54
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ile
1 5
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 55
gcgagagagg gagggaacta cggtatggac gtc 33 <210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 56
Ala Arg Glu Gly Gly Asn Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 57
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
60
<400> 57
aggttcagcg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcccac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Trp 20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 59
cagggtatta acaactgg 18
<210> 60
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 60
Gln Gly Ile Asn Asn Trp
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 61
gctgcaacc 9 <210> 62
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 62
Ala Ala Thr
1
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 63
caacaggcta acagtttccc tcccact 27 <210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 64
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 65
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
62
<220>
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt aacttttgga tgacctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac atgaaccaag atggaagtga gaaatactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagag ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcgg 300 gaatattgta ttagtaccag ctgctatgat gactttgact actggggcca gggaaccctg 360 gtcaccgtct cctca 375
<210> 66
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Met Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Glu Tyr Cys Ile Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Asp Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 67
ggattcacct ttagtaactt ttgg 24
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
63
<220>
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Trp
1 5
<210> 69
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 69
atgaaccaag atggaagtga gaaa 24
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 70
Met Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys
1 5
<210> 71
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 71
gcgagagatc gggaatattg tattagtacc agctgctatg atgactttga ctac 54
<210> 72
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 72
Ala Arg Asp Arg Glu Tyr Cys Ile Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Asp Phe 1 5 10 15
Asp Tyr 64
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 73
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcatagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 74
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 75
cagagcatta gcagctat 18
65
<210> 76
<223> synthetic
<400> 76
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 77
gctgcatcc 9
<210> 78
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 78
Ala Ala Ser
1
<210> 79
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 79
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30 <210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic 66 <211> 1404
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16711 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16711_VK_v2(human).(G4S)3 Linker.16711 VH.hCD8a hinge/TM.hCD137 (4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 81
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtcg gggaattagc agctggttag cctggtatca gcagaagcca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatccatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg ctacttacta ttgtcaacag gctatcagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa aggcggcggt ggatctggag gcggtggaag cggtggcggg 360 ggaagtcagg tgcagctggt ggagtcgggg ggaggcgtgg tccagcctgg gaggtccctg 420 agactctcct gtgcagcctc tggattcacc ttcagtacct atggcattca ctgggtccgc 480 caggctccag gcaaggggct ggagtgggtg gcagttatat tacatgatgg aagtagtaac 540 tactatgcag agtccgtgaa gggccgattc atcatctcca gagacaattc caagaacaca 600 ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagct gaggacacgg ctctatatta ctgtacgaaa 660 aggtattcag aagcagctgg cccaaattgg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 720 accgtctcct caactaccac tcctgctccc cgccccccaa cacctgctcc aactattgca 780 tcccaaccac tctccctcag acccgaagct tgtcgccccg ccgccggagg tgctgttcac 840 actagaggac tcgattttgc ttgcgacatt tatatctggg ccccacttgc aggtacttgc 900 ggagtattgc tgctctcact tgttattact ctttattgca aacggggcag aaagaaactc 960 ctgtatatat tcaaacaacc atttatgaga ccagtacaaa ctactcaaga ggaagatggc 1020 tgtagctgcc gatttccaga agaagaagaa ggaggatgtg aactgagagt gaagttcagc 1080 aggagcgcag acgcccccgc gtacaagcag ggccagaacc agctctataa cgagctcaat 1140 ctaggacgaa gagaggagta cgatgttttg gacaagagac gtggccggga ccctgagatg 1200 gggggaaagc cgagaaggaa gaaccctcag gaaggcctgt acaatgaact gcagaaagat 1260 aagatggcgg aggcctacag tgagattggg atgaaaggcg agcgccggag gggcaagggg 1320 cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca gccaccaagg acacctacga cgcccttcac 1380 atgcaggccc tgccccctcg ctaa 1404
<210> 82
<211> 467
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16711 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16711_VK_v2(human).(G4S)3 Linker.16711 VH.hCD8a hinge/TM.hCD137 (4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 82 67
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
His Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ile Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Ile His Trp Val Arg 145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Leu His Asp 165 170 175
Gly Ser Ser Asn Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Thr Lys Arg Tyr Ser Glu 210 215 220
Ala Ala Gly Pro Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 245 250 255
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg 260 265 270
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys 275 280 285
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 290 295 300
Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 305 310 315 320
Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 325 330 335
Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 340 345 350
Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 355 360 365
Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 370 375 380
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 385 390 395 400
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 405 410 415
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 420 425 430
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Ty 6r8 Gln Gly Leu 435 440 445
<210> 83
<211> 1398
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16716 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16716_VK(human).(G4S)3
Linker.16716_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
(4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 83
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctttaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcggaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tggggcggat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaaaagtg tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa aggcggcggt ggatctggag gcggtggaag cggtggcggg 360 ggaagtgagg tgcagctggt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg 420 agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttagcagct atgtcatgag ttgggtccgc 480 caggctccag ggaagggact ggagtgggtc tcagctatta ttggtagtgg tggtagcaca 540 tattacgcag actccgtgaa gggccggttc accatctcca gagacaattc caagaacacg 600 ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgaaa 660 agagccgggg ataactggaa ctggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 720 tcctcaacta ccactcctgc tccccgcccc ccaacacctg ctccaactat tgcatcccaa 780 ccactctccc tcagacccga agcttgtcgc cccgccgccg gaggtgctgt tcacactaga 840 ggactcgatt ttgcttgcga catttatatc tgggccccac ttgcaggtac ttgcggagta 900 ttgctgctct cacttgttat tactctttat tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat 960 atattcaaac aaccatttat gagaccagta caaactactc aagaggaaga tggctgtagc 1020 tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc 1080 gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 1140 cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag agacgtggcc gggaccctga gatgggggga 1200 aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 1260 gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 1320 ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 1380 gccctgcccc ctcgctaa 1398
<210> 84
<211> 465
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16716 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16716_VK(human).(G4S)3
Linker.16716_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
(4-1BB).hCD3 zeta) 69
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys Ser Val Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met Ser Trp Val Arg 145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ile Gly Ser 165 170 175
Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Arg Ala Gly Asp 210 215 220
Asn Trp Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 225 230 235 240
Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile 275 280 285
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 290 295 300
Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 305 310 315 320
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 325 330 335
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 340 345 350
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln 355 360 365
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 370 375 380
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 385 390 395 400
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 405 410 415
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 7 L0ys Gly Glu 420 425 430
Arg
465
<210> 85
<211> 1389
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16732 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16732_VK_v2(human).(G4S)3
Linker.16732_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
(4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 85
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc ggacaagtca gagcattggc aactatttaa attggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct catctatact gcatccagtt tgcagaatgg agtcccatca 180 aggttcactg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaggattttg taatttacta ctgtcaacag agtttcagta ccccgtatac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa aggcggcggt ggatctggag gcggtggaag cggtggcggg 360 ggaagtgaag tgcagctggt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg caggtccctg 420 agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttgatgatt atgccatgca ctgggtccgg 480 caagctccag ggaagggcct ggagtgggtc tcaggtatca gttggaatag tggtaacatg 540 ggatatgcgg actctgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaactcc 600 ctgttcctgc aaatgcacag tttgagagct gaggacacgg ccttttatta ctgtgcaaaa 660 gtccgtctaa ctgcctttga cttttggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcaact 720 accactcctg ctccccgccc cccaacacct gctccaacta ttgcatccca accactctcc 780 ctcagacccg aagcttgtcg ccccgccgcc ggaggtgctg ttcacactag aggactcgat 840 tttgcttgcg acatttatat ctgggcccca cttgcaggta cttgcggagt attgctgctc 900 tcacttgtta ttactcttta ttgcaaacgg ggcagaaaga aactcctgta tatattcaaa 960 caaccattta tgagaccagt acaaactact caagaggaag atggctgtag ctgccgattt 1020 ccagaagaag aagaaggagg atgtgaactg agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc 1080 cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc tataacgagc tcaatctagg acgaagagag 1140 gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga 1200 aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc 1260 tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc cggaggggca aggggcacga tggcctttac 1320 cagggtctca gtacagccac caaggacacc tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc 1380 cctcgctaa 1389
<210> 86
<211> 462
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16732 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16732_VK_v2(human).(G4S)3 71 Linker.16732_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg 145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Asn Met Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe Leu Gln Met His Ser Leu 195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Arg Leu Thr 210 215 220
Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr 225 230 235 240
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser 245 250 255
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 260 265 270
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp 275 280 285
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 290 295 300
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 305 310 315 320
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 325 330 335
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 340 345 350
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 355 360 365
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 370 375 380
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 385 390 395 400 72
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
435 440 445
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
450 455 460
<210> 87
<211> 1392
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16747 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16747_VK(human).(G4S)3
Linker.16747_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
(4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 87
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattaac aactggttag tctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcaaccagct tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcccac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa aggcggcggt ggatctggag gcggtggaag cggtggcggg 360 ggaagtcagg tgcagctggt ggagtctggg ggaggcttgg tcaagcctgg agggtccctg 420 agactctcct gtgcagcctc tggattcacc ttcagtgact actacatcag ctggatccgc 480 caggctccag ggaaggggct ggagtgggtt tcatacatta gttctagtgg tagttccata 540 aagtacgcag actctgtgaa gggccgattc accatctcca gggacaacgc caagaactca 600 ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgaga 660 gagggaggga actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 720 actaccactc ctgctccccg ccccccaaca cctgctccaa ctattgcatc ccaaccactc 780 tccctcagac ccgaagcttg tcgccccgcc gccggaggtg ctgttcacac tagaggactc 840 gattttgctt gcgacattta tatctgggcc ccacttgcag gtacttgcgg agtattgctg 900 ctctcacttg ttattactct ttattgcaaa cggggcagaa agaaactcct gtatatattc 960 aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact actcaagagg aagatggctg tagctgccga 1020 tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac 1080 gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag ctctataacg agctcaatct aggacgaaga 1140 gaggagtacg atgttttgga caagagacgt ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg 1200 agaaggaaga accctcagga aggcctgtac aatgaactgc agaaagataa gatggcggag 1260 gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt 1320 taccagggtc tcagtacagc caccaaggac acctacgacg cccttcacat gcaggccctg 1380 ccccctcgct aa 1392
<210> 88
<211> 463
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 16747 (VL-VH) ScFv CAR-T
(16747_VK(human).(G4S)3 73 Linker.16747_VH(human).hCD8a hinge/TM.hCD137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Trp 20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Ile Ser Trp Ile Arg 145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser 165 170 175
Gly Ser Ser Ile Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Gly Asn 210 215 220
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 240
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 245 250 255
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 260 265 270
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile 275 280 285
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val 290 295 300
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 305 310 315 320
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 325 330 335
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 340 345 350
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln 355 360 365
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 370 375 380
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 385 390 395 400
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Le 7u4 Gln Lys Asp 405 410 415
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
450 455 460
<210> 89
<211> 1431
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 21581 (VL-VH) ScFv CAR-T
(21581 VK(human).(G4S)3 Linker.21581
VH(human).G4S Linker_v2.hCD8a hinge/TM.hCD137
(4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 89
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcatagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaaggcggc ggtggatctg gaggcggtgg aagcggtggc 360 gggggaagtg aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tggtccagcc tggggggtcc 420 ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc acctttagta acttttggat gacctgggtc 480 cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtggccaaca tgaaccaaga tggaagtgag 540 aaatactatg tggactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagagacaa cgccaagagc 600 tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggctgtgta ttactgtgcg 660 agagatcggg aatattgtat tagtaccagc tgctatgatg actttgacta ctggggccag 720 ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggaggc ggaggcagca ctaccactcc tgctccccgc 780 cccccaacac ctgctccaac tattgcatcc caaccactct ccctcagacc cgaagcttgt 840 cgccccgccg ccggaggtgc tgttcacact agaggactcg attttgcttg cgacatttat 900 atctgggccc cacttgcagg tacttgcgga gtattgctgc tctcacttgt tattactctt 960 tattgcaaac ggggcagaaa gaaactcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca 1020 gtacaaacta ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga 1080 ggatgtgaac tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc 1140 cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 1200 aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 1260 ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 1320 aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 1380 accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta a 1431
<210> 90
<211> 476
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA 21581 (VL-VH) ScFv CAR-T
(21581 VK(human).(G4S)3 Linker.21581
VH(human).G4S Linker_v2.hCD8a hinge/TM.hC 7D5137
(4-1BB).hCD3 zeta)
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly 100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val 115 120 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 130 135 140
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Trp Met Thr Trp Val 145 150 155 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Met Asn Gln 165 170 175
Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu 210 215 220
Tyr Cys Ile Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Thr Thr 245 250 255
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro 260 265 270
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val 275 280 285
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 290 295 300
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 305 310 315 320
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 325 330 335
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 340 345 350
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 355 360 365
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu 370 375 380
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 385 390 395 400
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 405 410 415 76
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
450 455 460
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470 475
<210> 91
<211> 1437
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HLA-A2/HPV16E7(11-19) 17363 ScFv (VL-VH) CAR-T
(Irrelevant Control)
(17363_ULC-VK(1)(human).G4Sx3_4.17363_VH(human).
G4S_V2.hCD8a hinge/TM.hCD137 (4-1BB).hCD3 zeta)
<400> 91
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca acagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gtttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaactc tctgcaacct 240 gaagattttg caacttactc ctgtcaacag acttacagta cccctccgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaaggtgga ggcggtagtg gcggaggcgg aagtggtgga 360 ggaggctcag aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacaacc tggggggtcc 420 ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc acctttagca gttatgccat gacctgggtc 480 cgccaggctc cagggatggg actggagtgg gtctcagtta ttagtggtag tggtagtgaa 540 acatactacg cagactccgt gaagggccgg ttcaccatct ccagagacaa ttccaaaaac 600 acactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaagaca cggccgtata ttactgtgtg 660 aaagattctt cgtataggag ctcgtcgagg gcctactact actacggaat ggacgtctgg 720 ggcctaggga ccacggtcac cgtctcctca ggaggtggtg gaagtactac cactcctgct 780 ccccgccccc caacacctgc tccaactatt gcatcccaac cactctccct cagacccgaa 840 gcttgtcgcc ccgccgccgg aggtgctgtt cacactagag gactcgattt tgcttgcgac 900 atttatatct gggccccact tgcaggtact tgcggagtat tgctgctctc acttgttatt 960 actctttatt gcaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgctaa 1437
<210> 92
<211> 478
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 77
<223> HLA-A2/HPV16E7(11-19) 17363 ScFv (VL-VH) CAR-T
_ . . - .
<400> 92
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Ala Val Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly 100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu 115 120 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 130 135 140
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Thr Trp Val 145 150 155 160
Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Leu Glu Trp Val Ser Val Ile Ser Gly 165 170 175
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Lys Asp Ser Ser 210 215 220
Tyr Arg Ser Ser Ser Arg Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 225 230 235 240
Gly Leu Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr 245 250 255
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser 260 265 270
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 275 280 285
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp 290 295 300
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 305 310 315 320
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu G 7l8u Tyr Asp Val 385 390 395 400
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 93
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 94
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 95
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 95
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15
<210> 96
<211> 18
<212> PRT 79 <213> Artificial Sequence
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15
Lys Gly
<210> 97
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hinge
<400> 97
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 98
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TM domain
<400> 98
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 99
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-1BB
<400> 99
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 80
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe <211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> cd3-Zeta
<400> 100
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110
<210> 101
<211> 184
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> human BCMA (TNFRSF17) Protein NP_001183.2
<400> 101
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu C 81ys Thr Cys 115 120 125
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu 165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Himerni antigenski receptor specifičan za antigen sazrevanja B-ćelije (BCMA) koji sadrži, od N-kraja do C-kraja:
(a) ekstracelularni domen koji veže ligand koji sadrži anti-BCMA antigen-vezujući domen; (b) zglob iz CD8;
(c) transmembranski domen iz CD8; i
(d) citoplazmatski domen koji sadrži kostimulatorni domen iz 4-1BB i signalni domen iz CD3zeta; gde je ekstracelulani domen koji veže ligand anti-BCMA domen varijabilnog fragmenta jednog lanca (scFv) koji sadrži varijabilni region lakog lanca (LCVR) i varijabilni region teškog lanca (HCVR) spojene linkerom, gde LCVR sadrži LCDR1-LCDR2-LCDR3 domene prikazane u SEQ ID NOs: 60-62-64, tim redom, i HCVR sadrži HCDR1-HCDR2-HCDR3 domene prikazane u SEQ ID NOs: 52-54-56, tim redom.
2. Himerni antigenski receptor prema patentnom zahtevu 1, gde linker sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana iz grupe koja se sastoji iz SEQ ID NOs: 93-96.
3. Himerni antigenski receptor prema patentnom zahtevu 1 ili 2, gde LCVR sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 58 i HCVR sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 50.
4. Himerni antigenski receptor prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, gde:
(a) zglob sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97;
(b) transmembranski domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 98;
(c) kostimulatorni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 99; ili
(d) signalni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100.
5. Himerni antigenski receptor prema patentnom zahtevu 1, gde himerni antigenski receptor sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 88.
6. Izolovani molekul nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, opciono gde molekul nukleinske kiseline sadrži nukleotidnu sekvencu SEQ ID NO: 87.
7. Vektor koji sadrži molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 6, opciono gde je vektor DNK, RNK vektor, plazmid, lentivirusni vektor, adenovirusni vektor, ili retrovirusni vektor.
8. Ćelija koja sadrži molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 6 ili vektor prema patentnom zahtevu 7, opciono gde je ćelija humana T ćelija.
9. Modifikovana ćelija koja sadrži himerni antigenski receptor prema bilo kom od zahteva 1-5.
10. Modifikovana ćelija prema patentnom zahtevu 9, gde:
(a) modifikovana ćelija je imuna ćelija;
(b) modifikovana ćelija je imuna ćelija i imuna ćelija je imuna efektorska ćelija;
(c) modifikovana ćelija je T limfocit; ili
(d) modifikovana ćelija je T limfocit i T limfocit je inflamatorni T limfocit, citotoksični T limfocit, regulatorni T limfocit, ili pomoćnički T limfocit, opciono CD8+ citotoksični T limfocit.
11. Populacija modifikovanih ćelija, koja se može dobiti
(a) obezbeđivanjem populacije imunih ćelija, koja je dobijena iz subjekta;
(b) uvođenjem u imune ćelije molekul nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5;
(c) kultivisanjem imunih ćelija pod uslovima za ekspresiju molekula nukleinskih kiselina; i (d) izolovanjem imunih ćelija koje eksprimiraju himerni antigenski receptor na površini ćelije.
12. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedan od:
(a) genski-modifikovanu humanu T ćeliju i farmaceutski prihvatljivi nosač, gde genskimodifikovana humana T ćelija sadrži himerni antigenski receptor prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5; ili
(b) modifikovanu ćeliju prema patentnom zahtevu 9 i farmaceutski prihvatljivi nosač; ili (c) modifikovanu ćeliju prema patentnom zahtevu 10 i farmaceutski prihvatljivi nosač.
13. Modifikovana ćelija prema patentnom zahtevu 10, ili populacija modifikovanih ćelija prema patentnom zahtevu 11, za upotrebu u lečenju kancera koji eksprimira BCMA kod subjekta, poželjno humanog subjekta, obezbeđivanjem imuniteta protiv tumora kod subjekta, gde su ćelije davane u terapeutski efikasnoj količini za (a) pojačanje aktivnosti T limfocita kod subjekta, ili (b) stimulisanje imunog odgovora posredovanog T-ćelijama na ciljnu ćelijsku populaciju ili tkivo subjektu koji prima.
14. Modifikovane ćelije ili populacija modifikovanih ćelija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, gde je kancer multipli mijelom, B linijska akutna limfoblastna leukemija, B-ćelijska hronična limfocitna leukemija, B-ćelijski ne-Hočkinov limfom, leukemija i limfom, akutna limfoblastna leukemija, Hodžkinov limfom, ili akutna limfoblastna leukemija u detinjstvu.
15. Postupak za modifikovanje populacije ćelija da eksprimiraju himerni antigenski receptor, koji sadrži:
(a) obezbeđivanje populacije modifikovanih ćelija, koje su po potrebi dobijene iz subjekta; (b) uvođenje u imune ćelije molekula nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5;
(c) kultivisanje imunih ćelija u uslovima koji omogućavaju ekspresiju molekula nukleinske kiseline; i
(d) izolovanje imunih ćelija koje eksprimiraju himerni antigenski receptor na površini ćelija.
RS20240417A 2018-07-19 2019-07-18 Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe RS65384B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862700615P 2018-07-19 2018-07-19
EP19749097.2A EP3823665B1 (en) 2018-07-19 2019-07-18 Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof
PCT/US2019/042452 WO2020018825A1 (en) 2018-07-19 2019-07-18 Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65384B1 true RS65384B1 (sr) 2024-04-30

Family

ID=67515170

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20251074A RS67345B1 (sr) 2018-07-19 2019-07-18 Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe
RS20240417A RS65384B1 (sr) 2018-07-19 2019-07-18 Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20251074A RS67345B1 (sr) 2018-07-19 2019-07-18 Himerni antigenski receptori specifični za bcma i njihove upotrebe

Country Status (31)

Country Link
US (2) US12150959B2 (sr)
EP (2) EP4324851B1 (sr)
JP (2) JP7404335B2 (sr)
KR (1) KR102901020B1 (sr)
CN (2) CN112437671B (sr)
AU (2) AU2019308290B2 (sr)
BR (1) BR112021000919A2 (sr)
CA (1) CA3106612A1 (sr)
CL (2) CL2021000142A1 (sr)
CO (1) CO2021000334A2 (sr)
DK (2) DK4324851T3 (sr)
EA (1) EA202190315A1 (sr)
ES (2) ES2973946T3 (sr)
FI (2) FI3823665T3 (sr)
HR (2) HRP20240494T1 (sr)
HU (2) HUE066474T2 (sr)
IL (1) IL279979A (sr)
LT (2) LT4324851T (sr)
MA (2) MA65527B1 (sr)
MD (2) MD3823665T2 (sr)
MX (3) MX2021000532A (sr)
MY (1) MY207197A (sr)
PH (1) PH12021550036A1 (sr)
PL (2) PL4324851T3 (sr)
PT (2) PT3823665T (sr)
RS (2) RS67345B1 (sr)
SG (1) SG11202100221VA (sr)
SI (2) SI4324851T1 (sr)
SM (2) SMT202500371T1 (sr)
WO (1) WO2020018825A1 (sr)
ZA (1) ZA202100107B (sr)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7241161B2 (ja) 2018-08-01 2023-03-16 イミュニティーバイオ、インコーポレイテッド 細胞免疫療法の安定した遺伝子改変のための、ホーミング受容体又はサイトカインとキメラ抗原受容体とを含むクアドリシストロニックシステム
PL3856775T3 (pl) 2018-09-27 2025-06-09 Autolus Limited Chimeryczny receptor antygenowy
CN114364801B (zh) 2019-05-30 2024-04-19 莱蒂恩技术公司 用于用抗bcma免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
MX2022006714A (es) * 2019-12-06 2022-08-08 Regeneron Pharma Métodos de tratamiento del mieloma múltiple con anticuerpos anti-bcma x anti-cd3 bisespecíficos.
US11230699B2 (en) 2020-01-28 2022-01-25 Immunitybio, Inc. Chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells targeting EGFR super-family receptors
US20230346937A1 (en) * 2020-02-13 2023-11-02 Beijing Immunochina Pharmaceuticals Co., Ltd. Optimization of chimeric antigen receptor
US20230346734A1 (en) * 2020-04-14 2023-11-02 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Combination therapy of atra or other retinoids with immunotherapeutic agents binding to bcma
KR102316091B1 (ko) * 2020-06-17 2021-10-25 국립암센터 Bcma를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도
CN112812186B (zh) * 2021-02-08 2022-07-29 华道(上海)生物医药有限公司 一种抗b细胞成熟抗原的纳米抗体及其应用
CN113109572A (zh) * 2021-04-01 2021-07-13 苏州才博医学科技有限公司 一种检测自体cart细胞体液性免疫原性的方法
EP4323387A4 (en) * 2021-04-13 2025-04-02 Wugen, Inc. ENHANCED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND THEIR USES
WO2023284875A1 (zh) * 2021-07-16 2023-01-19 克莱格医学有限公司 嵌合抗原受体
CN115466331B (zh) * 2021-11-18 2023-05-30 合源生物科技(天津)有限公司 靶向bcma的嵌合抗原受体及其应用
EP4428156A4 (en) * 2021-12-03 2026-03-04 Shandong Simcere Biopharmaceutical Co., Ltd. ANTI-BCMA NANOBODY AND USE THEREOF
CN113980907B (zh) * 2021-12-24 2022-03-15 山东兴瑞生物科技有限公司 一种抗flt3嵌合抗原受体修饰的t细胞及其在制备治疗aml药物中的应用
IL314843A (en) * 2022-02-09 2024-10-01 Hadasit Med Res Service Anti-bcma car to target immune-related disorders, compositions and method thereof
CN118843693A (zh) * 2022-04-03 2024-10-25 上海先博生物科技有限公司 靶向bcma的嵌合抗原受体及其应用
CN117143248A (zh) * 2022-05-24 2023-12-01 合源康华医药科技(北京)有限公司 靶向bcma-cd19的双特异性嵌合抗原受体及其应用
WO2025072257A1 (en) * 2023-09-25 2025-04-03 Kelonia Therapeutics, Inc. Compositions for treating cancer
US12440564B2 (en) 2023-09-25 2025-10-14 Kelonia Therapeutics, Inc. Compositions for treating cancer
US20250101122A1 (en) 2023-09-25 2025-03-27 Kelonia Therapeutics, Inc. Antigen binding polypeptides
TW202540428A (zh) 2024-01-26 2025-10-16 美商雷傑納榮製藥公司 使用漿細胞耗乏劑及／或ｂ細胞耗乏劑遏制宿主抗ａａｖ抗體反應且實現ａａｖ轉導及重複給藥的方法及組成物
US20250242018A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination immunosuppression for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration
WO2025171383A2 (en) 2024-02-09 2025-08-14 Dispatch Biotherapeutics, Inc. Engineered cancer antigens and related methods and uses
WO2025171388A1 (en) 2024-02-09 2025-08-14 Dispatch Biotherapeutics, Inc. Engineered cancer antigens with modified domains and related methods and uses
US20250276092A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for re-dosing aav using anti-cd40 antagonistic antibody to suppress host anti-aav antibody response
CN118344480A (zh) * 2024-03-19 2024-07-16 浙江康佰裕生物科技有限公司 靶向bcma的单域抗体、嵌合抗原受体及其应用
WO2026006767A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Dispatch Biotherapeutics, Inc. Tethered il-9/il-9r and related engineered cells and methods

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
DE3681787D1 (de) 1985-07-05 1991-11-07 Whitehead Biomedical Inst Expression von fremdem genetischem material in epithelzellen.
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
JP3015383B2 (ja) 1987-09-11 2000-03-06 ホワイトヘツド・インスチチユート・フオー・バイオメデイカル・リサーチ 形質導入した線維芽およびそれらの使用
DE3851153T2 (de) 1987-12-11 1995-01-05 Hughes Howard Med Inst Genetische modifizierung von endothelialen zellen.
DE68927996T2 (de) 1988-02-05 1997-12-04 Hughes Howard Med Inst Modifizierte hepatozyten und deren anwendung
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
ATE163046T1 (de) 1990-10-31 1998-02-15 Somatix Therapy Corp Genetische veränderung von endothelzellen
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR20090016772A (ko) 1999-08-17 2009-02-17 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 Ｂａｆｆ 수용체(ｂｃｍａ), 면역조절제
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
AU4328801A (en) 2000-02-24 2001-09-03 Xcyte Therapies Inc Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
DE10206325A1 (de) 2002-02-14 2003-09-04 Medinnova Ges Med Innovationen Ummantelter Mikroorganismus
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
AR047392A1 (es) 2002-10-22 2006-01-18 Wyeth Corp Neutralizacion de anticuerpos contra gdf 8 y su uso para tales fines
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
TW200732350A (en) 2005-10-21 2007-09-01 Amgen Inc Methods for generating monovalent IgG
RS52176B (sr) 2006-06-02 2012-08-31 Regeneron Pharmaceuticals Inc. Antitela visokog afiniteta prema humanom il-6 receptoru
AU2010224160A1 (en) 2009-03-10 2011-09-22 Biogen Idec Ma Inc. Anti-BCMA antibodies
TWI667257B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的ＦｃＲｎ親和力之抗體
EP2640750A1 (en) 2010-11-16 2013-09-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
PT3434767T (pt) 2010-11-30 2026-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapêutico indutor de citotoxicidade
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
RU2688185C2 (ru) 2011-03-23 2019-05-21 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер Способ и композиции для клеточной иммунотерапии
SG194176A1 (en) 2011-05-27 2013-12-30 Glaxo Group Ltd Bcma (cd269/tnfrsf17) -binding proteins
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
SG10201806573TA (en) 2012-05-25 2018-09-27 Cellectis Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EP2914628A1 (en) 2012-11-01 2015-09-09 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin An antibody that binds cd269 (bcma) suitable for use in the treatment of plasma cell diseases such as multiple myeloma and autoimmune diseases
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
US9243058B2 (en) 2012-12-07 2016-01-26 Amgen, Inc. BCMA antigen binding proteins
ES2667420T3 (es) 2013-02-05 2018-05-10 Engmab Sàrl Anticuerpos biespecíficos contra cd3epsilon y bcma
EP2762497A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
AR095374A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Amgen Res Munich Gmbh Moléculas de unión para bcma y cd3
US20180112384A1 (en) 2013-12-30 2018-04-26 Craig Rothleitner Drainage treatment system
KR102526945B1 (ko) 2014-04-30 2023-04-27 막스-델부뤽-센트럼 퓌어 몰레쿨라레 메디친 인 데어 헬름홀츠-게마인샤프트 Ｃｄ269에 대한 인간화 항체
MX2017001079A (es) * 2014-07-24 2017-09-12 Bluebird Bio Inc Receptores de antígeno quiméricos de antígeno de maduración de células b (bcma).
EP2982692A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
BR112017010513A2 (pt) 2014-11-20 2018-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag ?cadeias leves comuns e métodos de uso?
EP3029068A1 (en) 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
CA2969877A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use
EP4310097A3 (en) 2014-12-05 2024-04-03 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof
SMT201900596T1 (it) * 2014-12-12 2019-11-13 Bluebird Bio Inc Recettori chimerici di antigene per bcma
JP6921001B2 (ja) 2015-04-13 2021-08-18 ファイザー・インク Ｂ細胞成熟抗原を標的にするキメラ抗原受容体
PL3988117T3 (pl) 2015-04-13 2025-03-10 Pfizer Inc. Przeciwciała terapeutyczne i ich zastosowania
AU2016263198C1 (en) 2015-05-15 2023-10-05 The General Hospital Corporation Antagonistic anti-tumor necrosis factor receptor superfamily antibodies
JOP20160154B1 (ar) 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
TWI811023B (zh) 2015-08-17 2023-08-01 美商健生生物科技公司 抗bcma抗體，結合bcma及cd3之雙特異性抗原結合分子及其用途
TWI784917B (zh) 2015-09-23 2022-11-21 美商再生元醫藥公司 最優化抗ｃｄ３雙特異性抗體及其用途
AU2016353067B2 (en) 2015-11-13 2023-10-05 Sanford Research Anti-BCMA polypeptides and proteins
EP4015537A1 (en) 2015-12-01 2022-06-22 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
TWI797073B (zh) 2016-01-25 2023-04-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 包含雙特異性抗體建構物之醫藥組合物
IL313507A (en) 2016-02-03 2024-08-01 Amgen Res Munich Gmbh Constructs of bispecific antibodies to BCMA and CD3 that bind to T cells, preparations containing the same and uses thereof
US20190194338A1 (en) 2016-02-17 2019-06-27 Seattle Genetics, Inc. Bcma antibodies and use of same to treat cancer and immunological disorders
WO2017173349A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Kite Pharma, Inc. Bcma binding molecules and methods of use thereof
SG10202012157QA (en) 2016-06-07 2021-01-28 Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma
EP3481410A2 (en) 2016-07-08 2019-05-15 Paul C. Tumeh Compositions and treatment methods for cancer immunotherapy
HRP20240767T1 (hr) 2016-09-14 2024-09-13 Teneoone, Inc. Cd3 vezujuća antitijela
HRP20221202T1 (hr) 2016-09-23 2022-12-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-muc16 (mucin 16) antitijela
WO2018075359A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Boger Henry William Wireless power transfer for process control
US11124577B2 (en) 2016-11-02 2021-09-21 Engmab Sàrl Bispecific antibody against BCMA and CD3 and an immunological drug for combined use in treating multiple myeloma
WO2018099539A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Horst Lindhofer Combination of t-cell redirecting multifunctional antibodies with immune checkpoint modulators and uses thereof
BR112019012354A2 (pt) 2016-12-21 2019-11-26 Teneobio, Inc. anticorpos apenas de cadeia pesada anti-bcma
WO2018133877A1 (zh) 2017-01-23 2018-07-26 科济生物医药（上海）有限公司 靶向bcma的抗体及其应用
JP7231549B2 (ja) 2017-02-06 2023-03-01 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 抗体媒介性受容体シグナル伝達を増強するための組成物及び方法
CN110461335A (zh) 2017-02-17 2019-11-15 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于治疗bcma相关癌症和自身免疫性失调的联合疗法
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
AU2018261951B2 (en) 2017-05-05 2025-05-22 Amgen Inc. Pharmaceutical composition comprising bispecific antibody constructs for improved storage and administration
CN110891971B (zh) 2017-06-20 2024-01-12 特尼奥生物股份有限公司 仅有重链的抗bcma抗体
JP7150820B2 (ja) 2017-08-01 2022-10-11 メディミューン，エルエルシー Ｂｃｍａモノクローナル抗体薬剤コンジュゲート
KR102403046B1 (ko) 2017-09-29 2022-05-30 재단법인 목암생명과학연구소 Bcma에 높은 친화도를 가지는 항-bcma 항체 및 이를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물
JP7084990B2 (ja) 2017-10-13 2022-06-15 ハープーン セラピューティクス，インク． 三重特異性タンパク質と使用方法
AU2019214163B2 (en) * 2018-02-01 2021-06-24 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Chimeric antigen receptor (CAR) binding to BCMA, and uses thereof
MX420253B (es) 2018-05-24 2025-02-10 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-cd3 y usos de estos.
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途
MA55372A (fr) 2019-03-21 2022-01-26 Regeneron Pharma Combinaison d'inhibiteurs de la voie il-4/il-13 et d'ablation de plasmocytes pour traiter une allergie

Also Published As

Publication number Publication date
PT3823665T (pt) 2024-02-26
PL3823665T3 (pl) 2024-06-03
DK3823665T3 (da) 2024-03-04
US20240325445A1 (en) 2024-10-03
DK4324851T3 (da) 2025-10-06
HUE073567T2 (hu) 2026-01-28
HRP20240494T1 (hr) 2024-07-05
KR102901020B1 (ko) 2025-12-19
JP7404335B2 (ja) 2023-12-25
LT3823665T (lt) 2024-02-26
KR20210035832A (ko) 2021-04-01
MX2025004599A (es) 2025-05-02
JP2024028944A (ja) 2024-03-05
HRP20251331T1 (hr) 2025-12-05
CN112437671B (zh) 2025-02-25
DK3823665T5 (da) 2024-08-19
CN112437671A (zh) 2021-03-02
US20200023010A1 (en) 2020-01-23
US12150959B2 (en) 2024-11-26
SI4324851T1 (sl) 2025-12-31
EP4324851A2 (en) 2024-02-21
EP3823665B1 (en) 2024-01-24
CO2021000334A2 (es) 2021-01-29
WO2020018825A1 (en) 2020-01-23
CL2022003796A1 (es) 2023-07-07
MD3823665T2 (ro) 2024-05-31
MX2025004598A (es) 2025-05-02
CL2021000142A1 (es) 2021-07-02
CN119954969A (zh) 2025-05-09
SMT202400102T1 (it) 2024-05-14
FI3823665T3 (fi) 2024-03-01
RS67345B1 (sr) 2025-11-28
EA202190315A1 (ru) 2021-04-16
BR112021000919A2 (pt) 2021-04-27
PL4324851T3 (pl) 2026-01-26
LT4324851T (lt) 2025-10-10
AU2026200174A1 (en) 2026-01-29
JP7601998B2 (ja) 2024-12-17
MA65527B1 (fr) 2024-05-31
EP4324851B1 (en) 2025-08-27
JP2021531004A (ja) 2021-11-18
HUE066474T2 (hu) 2024-08-28
AU2019308290A1 (en) 2021-02-18
MD4324851T2 (ro) 2025-12-31
EP3823665A1 (en) 2021-05-26
SG11202100221VA (en) 2021-02-25
ZA202100107B (en) 2024-07-31
PH12021550036A1 (en) 2021-09-20
AU2019308290B2 (en) 2025-10-16
FI4324851T3 (fi) 2025-10-08
MA69412B1 (fr) 2025-12-31
PT4324851T (pt) 2025-09-23
SMT202500371T1 (it) 2025-11-10
IL279979A (en) 2021-03-01
ES3042810T3 (en) 2025-11-24
SI3823665T1 (sl) 2024-03-29
ES2973946T3 (es) 2024-06-25
CA3106612A1 (en) 2020-01-23
EP4324851A3 (en) 2024-05-15
MX2021000532A (es) 2021-04-12
MY207197A (en) 2025-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240325445A1 (en) Chimeric Antigen Receptors with BCMA Specificity and Uses Thereof
CN114174345B (zh) 具有mage-a4特异性的嵌合抗原受体和其用途
US20240226163A1 (en) Chimeric Antigen Receptors with MAGE-A4 Specificity and Uses Thereof
HK40107592B (en) Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof
HK40107592A (en) Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof
CN117425491A (zh) 具有mage-a4特异性的嵌合抗原受体及其用途
HK40052063B (en) Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof
HK40052063A (en) Chimeric antigen receptors with bcma specificity and uses thereof
EA045217B1 (ru) Химерные антигенные рецепторы со специфичностью к bcma и их применение
EA049634B1 (ru) Химерные антигенные рецепторы со специфичностью к bcma и их применение