RS65558B1 - Piridazinoni i postupci primene istih - Google Patents

Piridazinoni i postupci primene istih

Info

Publication number
RS65558B1
RS65558B1 RS20240594A RSP20240594A RS65558B1 RS 65558 B1 RS65558 B1 RS 65558B1 RS 20240594 A RS20240594 A RS 20240594A RS P20240594 A RSP20240594 A RS P20240594A RS 65558 B1 RS65558 B1 RS 65558B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
equiv
pyrido
chloro
trifluoromethyl
Prior art date
Application number
RS20240594A
Other languages
English (en)
Inventor
Mark W Ledeboer
Matthew H Daniels
Maolin Yu
Jean-Christophe P Harmange
Original Assignee
Gfb Abc Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gfb Abc Llc filed Critical Gfb Abc Llc
Publication of RS65558B1 publication Critical patent/RS65558B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
STANJE TEHNIKE
[0001] Proteinurija je stanje u kojem prekomerna količina proteina iz krvi „curi“ u urin. Proteinurija može napredovati od gubitka od 30 mg proteina u urinu tokom perioda od 24 sata (koji se naziva mikroalbuminurija) do >300 mg/dan (nazvan makroalbuminurija), pre nego što dostigne nivoe od 3.5 grama proteina ili više tokom perioda od 24 sata , ili 25 puta veće od normalne količine. Proteinurija se javlja kada postoji zastoj u glomerulima bubrega, što dovodi do akumulacije tečnosti u telu (edem). Pokazalo se da produženo curenje proteina dovodi do otkazivanja bubrega. Bolest nefrotski sindrom (NS) čini oko 12% preovlađujućih slučajeva bubrežne bolesti u završnoj fazi sa godišnjim troškovima u Sjedinjenim Državama od više od 3 milijarde dolara. Otprilike 5 od svakih 100,000 dece ima dijagnozu NS svake godine i 15 od svakih 100,000 dece danas živi sa njim. Za pacijente koji pozitivno reaguju na lečenje, učestalost relapsa je izuzetno visoka. Devedeset % dece sa nefrotskim sindromom će reagovati na lečenje, međutim, procenjuje se da će 75% imati recidiv. Postoji potreba za efikasnijim postupcima lečenja, ili smanjenja rizika od razvoja, bolesti bubrega, npr., proteinurije.
[0002] Proteini TRP kanala sisara formiraju šest transmembranskih katjon-propustljivih kanala koji se mogu grupisati u šest podfamilija na osnovu homologije sekvence aminokiselina (TRPC, TRPV, TRPM, TRPA, TRPP, i TRPML). Nedavne studije TRP kanala ukazuju da su oni uključeni u brojne fundamentalne funkcije ćelija i da se smatra da igraju važnu ulogu u patofiziologiji mnogih bolesti. Mnogi TRP se eksprimiraju u bubrezima duž različitih delova nefrona i sve veći dokazi sugerišu da su ovi kanali uključeni u nasledne, kao i stečene poremećaje bubrega. TRPC6, TRPM6, i TRPP2 su umešani u naslednu fokalnu segmentalnu glomerulosklerozu (FSGS), hipomagnezemiju sa sekundarnom hipokalcemijom (HSH), i policističnu bolest bubrega (PKD), redom.
[0003] Takođe je prijavljeno da TRPC5 doprinosi mehanizmima koji su u osnovi regulacije urođenih reakcija na strah. (J Neurosci. 5. mart 2014; 34(10): 3653-3667). US20161046624 i US9139573 stavljaju na uvid javnosti antagoniste TRPC5 a Journal of Biological Chemistry, 07. jul 2011; 286; 33436-33446 stavljaja na uvid javnosti antagonist TRPC4/C5 I
[0004] Dakle, postoji potreba za dodatnim inhibitorima TRPC5 ili TRPC4 ili oba.
REZIME
[0005] Ovaj pronalazak se zasniva, barem delimično, na otkriću da aktivnost tranzicijskog potencijalnog receptorskog kanala, podfamilija C, član 5 (TRPC5), ukida aktinska stresna vlakna i smanjuje formiranje fokalne adhezije, stvarajući pokretni, migratorni fenotip podocita.
[0006] Jedan aspekt pronalaska su jedinjenja koja su antagonisti TRPC5 ili TRPC4 ili oba. U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je jedinjenje strukturne formule I:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; pri čemu:
"---" je jednostruka veza ili dvostruka veza
X<1>je CH ili N;
kada "—" je dvostruka veza, X<2>je CH ili N;
kada "—" je jednostruka veza, X<2>je N(CH3),
kada X<1>je CH, X<2>je N ili N(CH3);
Y je -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciklopropan-1,1-diil, ili -CH(CH3)-;
Q je 2-trifluorometil-4-fluorofenil, 2-difluorometil-4-fluorofenil, 2-trifluorometilfenil, 2-metil-4-fluorofenil, 2-hloro-4-fluorofenil, 2-hlorofenil, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-il, 4-trifluorometilpiridin-3-il, 2-trifluorometil-6-fluorofenil, 2-trifluorometil-3-cijanofenil, 2-etil-3-fluorofenil, 2-hloro-3-cijanofenil, 2-trifluorometil-5-fluorofenil, ili 2-difluorometilfenil;
R<3>je vodonik, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, -CH(OH)CH3, -OCH3, ili - NH-(CH2)2OH; i kada "—" je dvostruka veza, R<4>je odsutan;
i kada "—" je jednostruka veza, R<3>i R<4>su uzeti zajedno da formiraju=O; i
svaki od R<5>i R<6>je su nezavisno vodonik ili -CH3,
pod uslovom da ako X<1>je N, X<2>je N, Y je -O- ili -N(CH3)-, i Q je 2-trifluorometilfenil, tada najmanje jedan od R<3>, R<5>, i R<6>nije vodonik.
[0007] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je predstavljeno strukturnom formulom II:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; pri čemu:
R<1>je hloro, -CF3, -CHF2, ili -CH3;
R<2>je vodonik ili fluoro; i
R<3>je vodonik, -NH2, -CH2OH, ili CH(OH)-CH2OH. pod uslovom da ako R<1>je -CF3 i R<2>vodonik, tada R<3>nije vodonik.
[0008] U jednom aspektu, pronalazak karakteriše farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0009] U jednom aspektu, pronalazak se odnosi na jedinjenje ili kompoziciju pronalaska za primenu u postupcima lečenja, ili smanjenja rizika razvoja, bolesti ili stanja dabranih od bolesti bubrega, plućne arterijske hipertenzije, anksioznosti, depresije, kancera, dijabetesne retinopatije, ili bola, koji sadrže administriranje subjektu kome je to potrebno terapijski efikasne količine jedinjenje ili kompozicija. U nekim tehničkim rešenjima, bolest je bolest bubrega, anksioznost, depresija, kancer, ili dijabetesna retinopatija. U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje je bolest bubrega odabrana od fokalne segmentne glomeruloskleroze (FSGS), dijabetesne nefropatije, Alportovog sindroma, hipertenzivne bolesti bubrega, nefrotskog sindroma, nefrotskog sindroma otpornog na steroide, bolesti minimalnih promena, membranozne nefropatije, idiopatske membranske nefropatije, membranoproliferativnog glomerulonefritisa (MPGN), MPGN posredovanog imunim kompleksom, MPGN posredovanog komplementom, lupusnog nefritisa, postinfektivnog glomerulonefritisa, bolesti tanke bazalne membrane, mezangijalnog proliferativnog glomerulonefritisa, amiloidoze (primarne), c1q nefropatije, brzo progresivnog GN, anti-GBM bolesti, C3 glomerulonefritisa, hipertenzivne nefroskleroze, ili IgA nefropatije. U nekim tehničkim rešenjima, bolest bubrega je proteinurična bolest bubrega. U nekim tehničkim rešenjima, bolest bubrega je mikroalbuminurija ili makroalbuminurija. U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je plućna arterijska hipertenzija. U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je bol odabran između neuropatskog bola i visceralnog bola.
[0010] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje je kancer odabran od hemorezistentnog karcinoma dojke, kancera dojke otpornog na adriamicin, hemorezistentnog kolorektalnog kancera, meduloblastoma, i tumorske angiogeneze.
[0011] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je FSGS povezan sa transplantacijom, nefrotski sindrom povezan sa transplantacijom, proteinurija povezana sa transplantacijom, holestatska bolest jetre, policistične bolesti bubrega, autozomno dominantne policistične bolesti bubrega (ADPKD), gojaznost, insulinska rezistencija, dijabetes tipa II, predijabetes, metabolički sindrom, nealkoholna masna bolest jetre (NAFLD), ili nealkoholni steatohepatitis (NASH).
[0012] Postupci su efikasni za različite subjekte uključujući sisare, npr., ljude i druge životinje, kao što su laboratorijske životinje, npr., miševi, pacovi, zečevi, ili majmuni, ili pripitomljene i domaće životinje, npr., mačke, psi, koze, ovce, svinje, krave, ili konji.
[0013] Pronalazak pruža nekoliko prednosti. Profilaktički i terapijski postupci opisani ovde su efikasni u lečenju bolesti bubrega, npr., proteinurije, i imaju minimalne, ako ih ima, neželjene efekte. Dalje, postupci opisani ovde su efikasni za identifikaciju jedinjenja koja leče ili smanjuju rizik od razvoja bolesti bubrega, anksioznosti, depresije, ili kancera.
[0014] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada. Iako se postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu koristiti u praksi ili testiranju predmetnog pronalaska, pogodni postupci i materijali su opisani u nastavku.
[0015] Pored toga, materijali, postupci, i primeri su samo ilustrativni, a ne ograničavajući.
[0016] Ostale karakteristike, ciljevi, i prednosti pronalaska će biti vidljivi iz detaljnog opisa, i iz patentnih zahteva.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0017]
Slika 1 prikazuje izlučivanje albumina kod pacova povređenih usled PAN-a tretiranih jedinjenjem 100 ili mizoribinom.
Slika 2 prikazuje podatke o odnosu proteina kreatinina u urinu kod AT1R transgenih pacova tretiranih jedinjenjem 100 u poređenju sa vehikulom, sa infuzijom AngII.
Slika 3 prikazuje podatke o odnosu proteina keratina u urinu predstavljene na slici 2 izražene kao procenna početne vrednosti.
DETALJAN OPIS
Definicije
[0018] Termin "acil" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu predstavljenu opštom formulom hidrokarbilC(O)-, poželjno alkilC(O)-.
[0019] Termin "acilamino" je poznna u oblasti i odnosi se na amino grupu supstituisanu sa acil grupom i može biti predstavljen, na primer, formulom hidrokarbilC(O)NH-.
[0020] Termin "aciloksi" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu predstavljenu opštom formulom hidrokarbilC(O)O-, poželjno alkilC(O)O-.
[0021] Termin "alkoksi" odnosi se na alkil grupu, poželjno nižu alkil grupu, koja ima kiseonik vezan za nju. Reprezentativne alkoksi grupe uključuju metoksi, trifluorometoksi, etoksi, propoksi, terc-butoksi i i slično.
[0022] Termin "alkoksialkil" odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa alkoksi grupom i može biti predstavljen opštom formulom alkil-O-alkil.
[0023] Termin "alkenil", kako se ovde koristi, odnosi se na alifatičnu grupu koja se sastoji od najmanje jedne dvostruke veze i namera je da uključuje i "nesupstituisane alkenile" i "supstituisane alkenile", od kojih se poslednji odnosi na alkenil segmente koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika alkenil grupe. Takvi supstituenti se mogu pojaviti na jednom ili više ugljenika koji su uključeni ili nisu uključeni u jednu ili više dvostrukih veza. Štaviše, takvi supstituenti uključuju sve one koji se razmatraju za alkil grupe, kao što je diskutovano u nastavku, osim kada je stabilnost zabranjena. Na primer, razmatra se supstitucija alkenil grupa sa jednom ili više alkil, karbociklil, aril, heterociklil, ili heteroaril grupa.
[0024] "Alkil" grupa ili "alkan" je nearomatični ugljovodonik sa ravnim ili razgranatim lancem koji je potpuno zasićen. Tipično, alkil grupa sa ravnim ili razgranatim lancem ima od 1 do oko 20 atoma ugljenika, poželjno od 1 do oko 10 osim ako nije drugačije definisano. Primeri alkil grupa sa ravnim ili razgranatim lancem uključuju metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, sek-butil, terc-butil, pentil, heksil, pentil, i oktil. Ci-Cs alkil grupa sa ravnim ili razgranatim lancem se takođe naziva "niža alkil" grupa.
[0025] Štaviše, termin "alkil" (ili "niži alkil") kako se koristi kroz specifikaciju, primere, i patentne zahteve nameravano je da uključuje i "nesupstituisane alkile" i "supstituisane alkile", od kojih se poslednji odnosi na alkil segmente koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika ugljovodonične osnovne strukture. Takvi supstituenti, ako nije drugačije naznačeno, mogu da uključuju, na primer, halogen (npr., fluoro), hidroksil, karbonil (kao što je karboksil, alkoksikarbonil, formil, ili acil), thiokarbonil (kao što je tioestar, tioacetat, ili tioformat), alkoksi, fosforil, fosfat, fosfonat, fosfinat, amino, amido, amidin, imin, cijano, nitro, azido, sulfhidril, alkiltio, sulfat, sulfonat, sulfamoil, sulfonamido, sulfonil, heterociklil, aralkil, ili aromatični ili heteroaromatični segment. U poželjnim tehničkim rešenjima, supstituenti na supstituisanim alkilima su odabrani od C1-6alkila, C3-6cikloalkila, halogena, karbonila, cijano, ili hidroksil. U još poželjnijim tehničkim rešenjima, supstituenti na supstituisanim alkilima su odabrani od fluoro, karbonil, cijano, ili hidroksil. Stručnjaci će razumeti da segmenti supstituisani na ugljovodoničnom lancu mogu sami biti supstituisani, ako je odgovarajuće. Na primer, supstituenti supstituisanog alkila mogu uključivati supstituisane i nesupstituisane oblike amino, azido, imino, amido, fosforil (uključujući fosfonna i fosfinat), sulfonil (uključujući sulfat, sulfonamido, sulfamoil i sulfonat), i silil grupe, kao i etre, alkiltio, karbonile (uključujući ketone, aldehide, karboksilate, i estre), -CF3, -CN i i slično. Primeri supstituisanih alkila su opisani u nastavku. Cikloalkili mogu biti dalje supstituisani sa alkilima, alkenilima, alkoksi, alkiltio, aminoalkilima, karbonil-supstituisanim alkilima, -CF3, -CN, i i slično.
[0026] Ukoliko nije drugačije naznačeno, "alkilen" sam po sebi ili kao deo drugog substituenta odnosi se na na zasićenu dvovalentnu grupu sa ravnim ili razgranatim lancem koja ima navedeni broj atoma ugljenika i izvedena je uklanjanjem dva atoma vodonika iz odgovarajućeg alkana. Primeri alkilenskih grupa sa ravnim ili razgranatim lancem uključuju -CH2- (metilen), -CH2-CH2- (etilen), -CH2-CH2-CH2-(propilen), -C(CH3)2-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- (pentilen), -CH2-CH(CH3)-CH2-, i -CH2-C(CH3)2-CH2-.
[0027] Termin "Cx-y" kada kada se koristi zajedno sa hemijskim segmentom, kao što je, acil, aciloksi, alkil, alkenil, alkinil, ili alkoksi namenjen je da uključuje grupe koje sadrže od x do y ugljenika u lancu. Na primer, termin "Cx-yalkil" odnosi se na supstituisane ili nesupstituisane zasićene ugljovodonične grupe, uključujući ravnočlane alkil i razgranate alkil grupe koje sadrže od x do y ugljenika u lancu, uključujući haloalkil grupe. Poželjne haloalkil grupe uključuju trifluorometil, difluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, i pentafluoroetil. C0alkil označava vodonik gde je grupa u terminalnom položaju, veza ako je unutrašnja. Termini "C2-yalkenil" i "C2-yalkinil" odnose se na supstituisane ili nesupstituisane nezasićene alifatične grupe analogne po dužini i mogućoj supstituciji alkilima opisanim iznad, ali koje sadrže najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu redom.
[0028] Termin "alkilamino", kako se ovde koristi, odnosi se na amino grupu supstituisanu sa najmanje jednom alkil grupom.
[0029] Termin "alkilthio", kako se ovde koristi, odnosi se na tiol grupu supstituisanu sa alkil grupom i može biti predstavljen opštom formulom alkilS-.
[0030] Termin "alkinil", kako se ovde koristi, odnosi se na alifatičnu grupa koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu i namenjen je da uključuje i "nesupstituisane alkinile" i "supstituisane alkinile", od kojih se poslednji odnosi na alkinil segmente koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika alkinil grupe. Takvi supstituenti se mogu javiti na jednom ili više ugljenika koji su uključeni ili nisu uključeni u jednu ili više trostrukih veza. Štaviše, takvi supstituenti uključuju sve one koji se razmatraju za alkil grupe, kao što je diskutovano gore, osim kada je stabilnost zabranjena. Na primer, razmatra se supstitucija alkinil grupa sa jednom ili više alkil, karbociklil, aril, heterociklil, ili heteroaril grup.
[0031] Termin "amid", kako se ovde koristi, odnosi se na grupu
pri čemu svaki R<A>nezavisno predstavlja vodonik ili hidrokarbil grupu, ili dva R<A>su uzeti zajedno sa N atomom za koji su vezani da čine heterocikl koji ima od 4 do 8 atoma u strukturi prstena.
[0032] Termini "amin" i "amino" su poznati u oblasti i odnose se i na nesupstituisane i supstituisane amine i soli istog, npr., segment koji može biti predstavljen sa
pri čemu svaki R<A>nezavisno predstavlja vodonik ili hidrokarbil grupu, ili dva R<A>su uzeti zajedno sa N atomom za koji su vezani da čine heterocikl koji ima od 4 do 8 atoma u strukturi prstena.
[0033] Termin "aminoalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa amino grupom.
[0034] Termin "aralkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa aril grupom.
[0035] Termin "aril" kako se ovde koristi uključuju supstituisane ili nesupstituisane aromatične grupe sa jednim prstenom u kojima svaki atom prstena je ugljenik. Poželjno prsten je 6- ili 10-očlani prsten, poželjnije 6-očlani prsten. Termin "aril" takođe uključuje policiklične prstenaste sisteme koji imaju dva ili više ciklična prstena u kojima dva ili više ugljenika su zajednička za dva susedna prstena u kojima je najmanje jedan od prstenova aromatičan, npr., drugi ciklični prstenovi mogu biti cikloalkili, cikloalkenili, arili, heteroarili, i/ili heterociklili. Aril grupe uključuju benzen, naftalen, fenantren, fenol, anilin, i slično.
[0036] Termin "karbamat" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu
pri čemu svaki R<A>nezavisno predstavlja vodonik ili hidrokarbil grupu, kao što je alkil grupa, ili oba R<A>uzeta zajedno sa atomom(ima) koji se nalazi u sredini čini heterocikl koji ima od 4 do 8 atoma u strukturi prstena.
[0037] Termini "karbocikl", i "karbociklični", kako se ovde koristi, odnosi se na zasićen ili nezasićen prsten u kome svaki atom prstena je ugljenik. Termin karbocikl uključuje i aromatične karbocikle i nearomatične karbocikle. Nearomatični karbocikli uključuju i cikloalkanske prstenove, u kojima su svi atomi ugljenika zasićeni, i cikloalkenske prstenove, koji sadrže najmanje jednu dvostruku vezu. "Karbocikl" uključuje 5-7 očlane monociklične i 8-12 očlane biciklične prstenove. Svaki prsten bicikličnog karbocikla može biti odabran od zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. Karbocikl uključuje biciklične molekule u kojima jedan, dva ili tri ili više atoma su zajednički između dva prstena. Termin "fuzionisani karbocikl" odnosi se na biciklični karbocikl u kojem svaki od prstenova deli dva susedna atoma sa drugim prstenom. Svaki prsten fuzionisanog karbocikla može biti odabran od zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. U tehničkom rešenju uzetom kao primer, aromatični prsten, npr., fenil, može biti fuzionisan sa zasićenim ili nezasićenim prstenom, npr., cikloheksanom, ciklopentanom, ili cikloheksanom. Bilo koja kombinacija zasićenih, nezasićenih i aromatičnih bicikličnig prstenova, kako valenca dozvoljava, je uključen u definiciju karbociklični. "Karbocikli" uzeti kao primer uključuju ciklopentan, cikloheksan, biciklo[2.2.1]heptan, 1,5-ciklooktadien, 1,2,3,4-tetrahidronafthalen, biciklo[4.2.0]okt-3-en, nafthalen i adamantan. Fuzionisani karbocikli uzeti kao primer uključuju dekalin, naftalen, 1,2,3,4-tetrahidronaftalen, biciklo[4.2.0]oktan, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-inden i biciklo[4.1.0]hept-3-en. "Karbocikli" mogu biti supstituisani na bilo kojem jednom ili više položaja koji mogu da nose atom vodonika.
[0038] "Cikloalkil" grupa je ciklični ugljovodonik koji je potpuno zasićen. "Cikloalkil" uključuje monociklične i biciklične prstenove. Uobičajeno, monociklična cikloalkil grupa ima od 3 do oko 10 atoma ugljenika, uobičajenije od 3 do 8 atoma ugljenika ukoliko nije drugačije definisano. Drugi prsten bicikličnog cikloalkila može biti odabran od zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. Cikloalkil uključuje biciklične molekule u kojima jedan, dva, ili tri ili više atoma su zajednički između dva prstena. Termin "fuzionisan cikloalkil" odnosi se na biciklični cikloalkil u kojem svaki od prstenova deli dva susedna atoma sa drugim prstenom. Drugi prsten fuzionisanog bicikličnog cikloalkila može biti odabran od zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. "Cikloalkenil" grupa je ciklični ugljovodonik koji sadrži jednu ili više dvostrukih veza.
[0039] Termin "karbociklilalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa karbocikl grupom.
[0040] Termin "karbonat" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu -OCO2-R<A>, pri čemu R<A>predstavlja hidrokarbil grupu.
[0041] Termin "karboksi", kako se ovde koristi, odnosi se na grupu predstavljenu formulom -CO2H.
[0042] Termin "estar", kako se ovde koristi, odnosi se na grupu -C(O)OR<A>pri čemu R<A>predstavlja hidrokarbil grupu.
[0043] Termin "etar", kako se ovde koristi, odnosi se na hidrokarbil grupu povezanu pomoću kiseonika za drugu hidrokarbil grupu. Prema tome, etarski substituent hidrokarbil grupe može biti hidrokarbil-O-. Etri mogu biti ili simetrični ili unnesimetrični. Primeri etara uključuju, ali nisu ograničeni na, heterocikl-O-heterocikl i aril-O-heterocikl. Etri uključuju "alkoksialkil" grupe, koje mogu biti predstavljeni opštom formulom alkil-O-alkil.
[0044] Termini "halo" i "halogen" kako se ovde koristi označava halogen i uključuje hloro, fluoro, bromo, i jodo.
[0045] Termini "hetaralkil" i "heteroaralkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa hetaril grupom.
[0046] Termin "heteroalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na zasićen ili nezasićen lanac atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom, pri čemu dva heteroatoma nisu susedna.
[0047] Termini "heteroaril" i "hetaril" uključuju supstituisane ili nesupstituisane aromatične strukture sa jednim prstenom, poželjno 5- do 7-očlane prstenove, poželjnije 5- do 6-očlane prstenove, čije strukture uprstena ključuju najmanje jednom heteroatom, poželjno jedan do četiri heteroatoma, poželjnije jedan ili dva heteroatoma. Termini "heteroaril" i "hetaril" takođe uključuju policiklične sisteme prstenova koji imaju dva ili više cikličnih prstenova u kojima dva ili više ugljenika su zajednička za dva susedna prstena pri čemu je najmanje jedan od prstenova heteroaromatičan, npr., drugi ciklični prstenovi mogu biti cikloalkili, cikloalkenili, arili, heteroarili, i/ili heterociklili. Heteroaril grupe uključuju, na primer, pirol, furan, tiofen, imidazol, oksazol, tiazol, pirazol, piridin, pirazin, piridazin, i pirimidin, i i slično.
[0048] Termin "heteroatom" kako se ovde koristi znači atom bilo kog elementa koji nije ugljenik ili vodonik. Poželjni heteroatomi su azot, kiseonik, i sumpor.
[0049] Termini "heterociklil", "heterocikl", i "heterociklični" odnose se na supstituisane ili nesupstituisane nearomatične structure prstenova, poželjno 3- do 10-očlane prstenove, poželjnije 3- do 7-očlane prstenove, čije structure prstenova uključuju najmanje jedan heteroatom, poželjno jedan do četiri heteroatoma, poželjnije jedan ili dva heteroatoma. Termini "heterociklil" i "heterociklični" takođe uključuju policiklične sisteme prstenova koji imaju dva ili više cikličnih prstenova u kojima dve ili više ugljenika su zajednička za dva susedna prstena pri čemu najmanje jednan od prstenova je heterociklični, npr., drugi ciklični prstenovi mogu biti cikloalkili, cikloalkenili, arili, heteroarili, i/ili heterociklili. Heterociklil grupe uključuju, na primer, piperidin, piperazin, pirolidin, tetrahidropiran, tetrahidrofuran, morfolin, laktone, laktame, i i slično.
[0050] Termin "heterociklilalkil" ili "heterocikloalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa heterocikl grupom.
[0051] Termin "hidrokarbil", kako se ovde koristi, odnosi se na grupu koja je vezana preko atoma ugljenika koji nema =O ili =S substituent, i uobičajeno ima najmanje jednu ugljenikvodonik vezu i primarnu ugljeničnu osnovnu strukturu, ali može po izboru da uključuje heteroatome. Dakle, grupe kao što su metil, etoksietil, 2-piridil, i trifluorometil se smatraju hidrokarbilima za potrebe ove prijave, ali supstituenti kao što je cetil (koji ima =O substituent na vezujućem ugljeniku) i etoksi (koji je povezan pomoću kiseonika, ne ugljenik) ne.
Hidrokarbil grupe uključuju, ali nisu ograničene na aril, heteroaril, karbocikl, heterociklil, alkil, alkenil, alkinil, i kombinacije istih.
[0052] Termin "hidroksialkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa hidroksi grupom.
[0053] Termin "niži" kada kada se koristi zajedno sa hemijskim segmentom, kao što je, acil, aciloksi, alkil, alkenil, alkinil, ili alkoksi znači da uključuje grupe gde ima deset ili manje atoma koji nisu vodonik u substituentu, poželjno šest ili manje. "Niži alkil", na primer, odnosi se na alkil grupu koja sadrži deset ili manje atoma ugljenika, poželjno šest ili manje. U određenim tehničkim rešenjima, acil, aciloksi, alkil, alkenil, alkinil, ili alkoksi supstituenti definisani ovde su redom niži acil, niži aciloksi, niži alkil, niži alkenil, niži alkinil, ili niži alkoksi, bilo da se pojavljuju sami ili u kombinaciji sa drugim supstituentima, kao što su u ponavljanjima hidroksialkil i aralkil (u kom slučaju, na primer, atomi unutar aril grupe se ne računaju kada se broje atomi ugljenika u alkil supstituentu).
[0054] Termini "policiklil", "policikl", i "policiklični" odnosi se na dva ili više prstena (npr., cikloalkili, cikloalkenili, arili, heteroarili, i/ili heterociklili) u kojima dva ili više atoma su zajednička za dva susedna prstena, npr., prstenovi su "fuzionisani prstenovi". Svaki od prstena policikla može biti supstituisan ili nesupstituisan. U određenim tehničkim rešenjima, svaki prsten policikla sadrži od 3 do 10 atoma u prstenu, poželjno od 5 do 7.
[0055] Termin "silil" odnosi se na silicijumski segment sa tri hidrokarbilna dela vezana za njega.
[0056] Termin "supstituisan" odnosi se na segmente koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika osnovne strukture. Razumeće se da "supstitucija" ili "supstituisan sa" uključuje implicitnu odredbu da je takva supstitucija u skladu sa dozvoljenom valencijom supstituisanog atoma i supstituenta, i da je supstitucija rezultira stabilnim jedinjenjem, npr., koje se ne podvrgava spontanoj transformaciji kao što je preuređivanje, ciklizacija, eliminacija, itd. Kako se ovde koristi, smatra se da termin "supstituisan" uključuju sve dozvoljene supstituente organskih jedinjenja. U širem aspektu, dozvoljeni supstituenti uključuju aciklične i ciklične, razgranate i nerazgranate, karbociklične i heterociklične, aromatične i nearomatične supstituente organskih jedinjenja. Dozvoljeni supstituenti mogu biti jedan ili više istih ili različitih za odgovarajuća organska jedinjenja. Za potrebe ovog pronalaska, heteroatomi kao što je azot mogu imati supstituente vodonika i/ili bilo koje dozvoljene supstituente organskih jedinjenja koja su ovde opisana koji zadovoljavaju valence heteroatoma. Supstituenti mogu uključiti bilo koje supstituente opisane ovde, na primer, halogen, hidroksil, karbonil (kao što je karboksil, alkoksikarbonil, formil, ili acil), tiokarbonil (kao što je tioestar, tioacetat, ili tioformat), alkoksi, fosforil, fosfat, fosfonat, fosfinat, amino, amido, amidin, imin, cijano, nitro, azido, sulfhidril, alkiltio, sulfat, sulfonat, sulfamoil, sulfonamido, sulfonil, heterociklil, aralkil, ili aromatični ili heteroaromatični segment. U poželjnim tehničkim rešenjima, supstituenti na supstituisanim alkilima su odabrani od C1-
6alkila, C3-6cikloalkila, halogena, karbonila, cijano, ili hidroksil. U još poželjnijim tehničkim rešenjima, supstituenti na supstituisanim alkilima su odabrani od fluoro, karbonil, cijano, ili hidroksil. Stručnjaci u oblasti će razumeti da supstituenti mogu sami biti supstituisani, ako je prikladno. Osim ako nije posebno navedeno kao "nesupstituisano", podrazumeva se da pozivanje na hemijske segmente ovde uključuju supstituisane varijante. Na primer, pozivanje na "aril" grupu ili segment implicitno uključuje i supstituisane i nesupstituisane varijante.
[0057] Termin "sulfat" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu -OSO3H, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0058] Termin "sulfonamid" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu predstavljenu opštom formulom
pri čemu svaki R<A>nezavisno predstavlja vodonik ili hidrokarbil, kao što je alkil, ili oba R<A>uzeta zajedno sa uključenim atomom(ima) čine heterocikl koji ima 4 do 8 atoma u strukturi prstena.
[0059] Termin "sulfoksid" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu -S(O)-R<A>, pri čemu R<A>predstavlja hidrokarbil.
[0060] Termin "sulfonat" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu SO3H, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0061] Termin "sulfon" je poznna u oblasti i odnosi se na grupu -S(O)2-R<A>, pri čemu R<A>predstavlja hidrokarbil.
[0062] Termin "tioalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa tiol grupom.
[0063] Termin "tioestar", kako se ovde koristi, odnosi se na grupu -C(O)SR<A>ili -SC(O)R<A>pri čemu R<A>predstavlja hidrokarbil.
[0064] Termin "tioetar", kako se ovde koristi, je ekvivalentan etru, pri čemu je kiseonik zamenjen sa sumporom.
[0065] Termin "urea" je poznna u oblasti i može biti predstavljen opštom formulom
pri čemu svaki R<A>nezavisno predstavlja vodonik ili hidrokarbil, kao što je alkil, ili svako pojavljivanje R<A>uzetog zajedno sa drugim i uključenim atomom(ima) čini heterocikl koji ima 4 do 8 atoma u strukturi prstena.
[0066] "Zaštitna grupa" odnosi se na grupu atoma koja, kada su vezani za reaktivnu funkcionalnu grupu u molekulu, maskiraju, smanjuju ili sprečavaju reaktivnost funkcionalne grupe. Uobičajeno, zaštitna grupa se može selektivno ukloniti po želji tokom sinteze. Primeri zaštitnih grupa mogu se naći uGreene i Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3. izd., 1999, John Wiley & Sons, NY i Harrison i sar., Compendium of Synthetic Organic Methods, tomovi 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Reprezentativne azotne zaštitne grupe uključuju, ali nisu ograničene na, formil, acetil, trifluoroacetil, benzil, benziloksikarbonil ("CBZ"), terc-butoksikarbonil ("Boc"), trimetilsilil ("TMS"), 2-trimetilsilil-etansulfonil ("TES"), tritil i supstituisane tritil grupe, aliloksikarbonil, 9-fluorenilmetiloksikarbonil ("FMOC"), nitro-veratriloksikarbonil ("NVOC") i slično. Reprezentativne hidroksil zaštitne grupe uključuju, ali nisu ograničeni na, one u kojima hidroksil grupa je ili acilovana (estarifikovana) ili alkilovana kao što su benzil i tritil etri, kao i alkil etri, tetrahidropiranil etri, trialkilsilil etri (npr., TMS ili TIPS grupe), glikol etri, kao što su derivati etilen glikola i propilen glikola i allil etri.
[0067] Kako se ovde koristi, terapijsko sredstvo koje "sprečava" ili "smanjuje rizik razvoja" bolesti, poremećaja, ili stanja odnosi se na jedinjenje koje, u statističkom uzorku, smanjuje pojavljivanje bolesti, poremećaja, ili stanja u tretiranom uzorku u odnosu na netretirani kontrolni uzorak, ili odlaže početak ili smanjuje ozbiljnost jednog ili više simptoma poremećaja ili stanja u odnosu na netretirani kontrolni uzorak.
[0068] Termin "lečenje" uključuje profilaktičke i/ili terapijske tretmane. Termin "profilaktički ili terapeutski" tretman je poznna u oblasti i uključuje administriranje domaćinu jedne ili više predmetnih kompozicija. Ako se administrira pre kliničke manifestacije neželjenog stanja (npr., bolesti ili drugog neželjenog stanja životinje domaćina) onda je tretman profilaktički (tj., štiti domaćina od razvoja neželjenog stanja), dok ako se administrira nakon ispoljavanja neželjenog stanja, lečenje je terapijsko (tj., ima za cilj da umanji, poboljša ili stabilizuje postojeće neželjeno stanje ili njegove neželjene efekte).
[0069] Izrazi "zajedničko administriranje" i "primenjena zajedno" odnose se na bilo koji oblik administriranja dva ili više različitih terapijskih jedinjenja, tako da je drugo jedinjenje administrirano, dok je prethodno administrirano terapijsko jedinjenje još uvek efikasno u telu (npr., dva jedinjenja su istovremeno efikasni kod pacijenata, što može uključivati sinergističke efekte dva jedinjenja). Na primer, različita terapijska jedinjenja se mogu administrirati bilo u istoj formulaciji ili u posebnoj formulaciji, bilo istovremeno ili uzastopno. U određenim tehničkim rešenjima, različita terapijska jedinjenja mogu se administrirati u toku jednog sata, 12 sati, 24 sata, 36 sati, 48 sati, 72 sata, ili nedelju dana jedno od drugog. Dakle, pojedinac koji prima takav tretman može imati koristi od kombinovanog efekta različitih terapijskih jedinjenja.
[0070] Kako se ovde koristi, "mali molekuli" odnose se na male organske ili neorganske molekule molekulske mase ispod oko 3,000 Daltona. Generalno, mali molekuli korisni za pronalazak imaju molekulsku masu manju od 3,000 Daltona (Da). Mali molekuli mogu biti, npr., od najmanje oko 100 Da do oko 3,000 Da (npr., između oko 100 do oko 3,000 Da, oko 100 do oko 2500 Da, oko 100 do oko 2,000 Da, oko 100 do oko 1,750 Da, oko 100 do oko 1,500 Da, oko 100 do oko 1,250 Da, oko 100 do oko 1,000 Da, oko 100 do oko 750 Da, oko 100 do oko 500 Da, oko 200 do oko 1500, oko 500 do oko 1000, oko 300 do oko 1000 Da, ili oko 100 do oko 250 Da).
[0071] U nekim tehničkim rešenjima, "mali molekul" odnosi se na organsko, neorgansko, ili organometalno jedinjenje koje uobičajeno ima molekulsku masu manju od oko 1000. U nekim tehničkim rešenjima, mali molekul je organsko jedinjenje, sa veličinom reda 1 nm.
[0072] "Efikasna količina" je količina dovoljna da postigne korisne ili željene rezultate. Na primer, terapijska količina je ona koja postiže željeni terapijski efekat. Ova količina može biti ista ili različita od profilaktički efikasne količine, što je količina neophodna za sprečavanje pojave bolesti ili simptoma bolesti. Efikasna količina se može administrirati pri jednoj ili više administriranja, primena ili doza. Terapijski efikasna količina kompozicije zavisi od izabrane kompozicije. Kompozicije se mogu administrirati od jednog ili više puta dnevno do jednog ili više puta nedeljno; uključujući jednom svaki drugi dan. Stručnjak u oblasti će shvatiti da određeni faktori mogu uticati na dozu i vrijeme potrebno za efikasno lečenje subjekta, uključujući, ali ne ograničavajući se na ozbiljnost bolesti ili poremećaja, prethodne tretmane, opšte zdravlje i/ili starost subjekta, i druge prisutne bolesti. Štaviše, lečenje subjekta terapijski efikasnom količinom kompozicija opisanih ovde može uključivati jedan tretman ili seriju tretmana.
Jedinjenja pronalaska
[0073] Jedan aspekt pronalaska obezbeđuje inhibitore malih molekula TRPC5.
[0074] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je jedinjenje strukturne formule I:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; pri čemu:
"---" je jednostruka veza ili dvostruka veza
X<1>je CH ili N;
kada "—" je dvostruka veza, X<2>je CH ili N;
kada "—" je jednostruka veza, X<2>je N(CH3),
kada X<1>je CH, X<2>je N ili N(CH3);
Y je -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciklopropan-1,1-diil, ili -CH(CH3)-;
Q je 2-trifluorometil-4-fluorofenil, 2-difluorometil-4-fluorofenil, 2-trifluorometilfenil, 2-metil-4-fluorofenil, 2-hloro-4-fluorofenil, 2-hlorofenil, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-il, 4-trifluorometilpiridin-3-il, 2-trifluorometil-6-fluorofenil, 2-trifluorometil-3-cijanofenil, 2-etil-3-fluorofenil, 2-hloro-3-cijanofenil, 2-trifluorometil-5-fluorofenil, ili 2-difluorometilfenil;
R<3>je vodonik, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, -CH(OH)CH3, -OCH3, ili - NH-(CH2)2OH; i kada "—" je dvostruka veza, R<4>je odsutan;
i kada "—" je jednostruka veza, R<3>i R<4>su uzeti zajedno da formiraju=O; i
svaki od R<5>i R<6>su nezavisno vodonik ili -CH3,
pod uslovom da ako X<1>je N, X<2>je N, Y je -O- ili -N(CH3)-, i Q je 2-trifluorometilfenil, tada najmanje jedan od R<3>, R<5>, i R<6>nije vodonik.
[0075] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom II:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; pri čemu:
R<1>je hloro, -CF3, -CHF2, ili -CH3;
R<2>je vodonik ili fluoro; i
R<3>je vodonik, -NH2, -CH2OH, ili CH(OH)-CH2OH.
pod uslovom da ako R<1>je -CF3i R<2>vodonik, tada R<3>nije vodonik. I
[0076] U nekim tehničkim rešenjima, kada R<1>je -CHF2, R<2>nije vodonik.
[0077] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je odabrano od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive soli istog:
[0078] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je odabrano od od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive soli istog:
[0079] U nekim tehničkim rešenjima, jedinjenje pronalaska je odabrano od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive soli istog:
[0080] U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenja pronalaska mogu biti racemska. U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenja pronalaska mogu obogaćena jednim enantiomerom. Na primer, jedinjenje pronalaska može imati više od 30% ee, 40% ee, 50% ee, 60% ee, 70% ee, 80% ee, 90% ee, ili čak 95% ili veće ee.
[0081] Jedinjenja pronalaska mogu imati više od jednog stereocentra. Prema tome, jedinjenja pronalaska mogu biti obogaćena jednim ili više dijastereomera. Na primer, jedinjenje pronalaska može imati više od 30% de, 40% de, 50% de, 60% de, 70% de, 80% de, 90% de, ili čak 95% ili veći de. U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenja pronalaska imaju suštinski jednu izomernu konfiguraciju u jednom ili više stereogenih centara, i imaju više izomernih konfiguracija u preostalim stereogenim centrima.
[0082] U određenim tehničkim rešenjima, enantiomerni višak stereocentra je najmanje 40% ee, 50% ee, 60% ee, 70% ee, 80% ee, 90% ee, 92% ee, 94% ee, 95% ee, 96% ee, 98% ee ili veći ee.
[0083] Kako se ovde koristi, pojedinačne veze nacrtane bez stereohemije ne ukazuju na stereohemiju jedinjenja.
[0084] Kako se ovde koristi, veze iznad ravni ili podebljane veze koje nemaju klin ukazuju na relativnu, ali ne i apsolutnu, stereohemijsku konfiguraciju (npr., ne prave razliku između enantiomera datog dijastereomera).
[0085] Kako se ovde koristi, veze iznad ravni ili podebljane veze sa klinom ukazuju na apsolutnu stereohemijsku konfiguraciju.
[0086] U nekim tehničkim rešenjima, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim tehničkim rešenjima, terapijski preparna ili farmaceutska kompozicija jedinjenja pronalaska može biti obogaćen bi se obezbedio pretežno jedan enantiomer jedinjenja. Enantiomerno obogaćena smeša može da sadrži, na primer, najmanje 60 mol procenata jednog enantiomera, ili još poželjnije najmanje 75, 90, 95, ili čak 99 mol procenata. U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenje obogaćeno jednim enantiomerom je u suštini bez drugog enantiomera, pri čemu suštinski slobodno znači da dotična supstanca čini manje od 10%, ili manje od 5%, ili manje od 4%, ili manje od 3% %, ili manje od 2%, ili manje od 1% u poređenju sa količinu drugog enantiomera, npr., u kompoziciji ili smeši jedinjenja. Na primer, ako kompozicija ili smeša jedinjenja sadrži 98 grama prvog enantiomera i 2 grama drugog enantiomera, reklo bi se da sadrži 98 mol procenata prvog enantiomera i samo 2% drugog enantiomera.
[0087] U određenim tehničkim rešenjima, terapijski preparna ili farmaceutska kompozicija može biti obogaćena da obezbede pretežno jedan dijastereomer jedinjenja pronalaska. Dijastereomerno obogaćena smeša može da sadrži, na primer, najmanje 60 mol procenata jednog dijastereomera, ili još poželjnije najmanje 75, 90, 95, ili čak 99 mol procenata.
Postupci lečenja
[0088] Sva pozivanja u opisu na postupke lečenja odnose se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili lekove predmetnog pronalaska za primenu u postupku lečenja ljudskog ili životinjskog tela terapijom.
[0089] Neselektivni kanali propustiljivi za Ca<2+>prolaznog receptorskog potencijala (TRP) deluju kao senzori koji prenose ekstracelularne signale u intracelularno okruženje u različitim ćelijskim procesima, uključujući remodeliranje aktina i migraciju ćelija (Greka i sarad., Nna Neurosci 6, 837-845, 2003; Ramsey i sarad., Annu Rev Physiol 68, 619-647, 2006; Montell, Pflugers Arch 451, 19-28, 2005; Clapham, Nature 426, 517-524, 2003). Dinamičko preuređenje aktinskog citoskeleta se oslanja na prostorno-vremenski regulisan influks Ca<2+>(Zheng i Poo, Annu Rev Cell Dev Biol 23, 375-404, 2007); Brandman i Meyer, Science 322, 390-395, 2008); Collins i Meyer, Dev Cell 16, 160-161, 2009) i male GTPases RhoA i Rac1 služe kao ključni modulatori ovih promena (Etienne-Manneville i Hall, Nature 420, 629-635, 2002); Raftopoulou i Hall, Dev Biol 265, 23-32, 2004). RhoA indukuje stresno vlakno i formiranje fokalne adhezije, dok Rac1 posreduje u formiranju lamelipodije (Etienne-Manneville i Hall, Nature 420, 629-635, 2002). Katjonski kanal prolaznog receptorskog potencijala, podfamilija C, član 5 (TRPC5) deluje zajedno sa TRPC6 da reguliše influks Ca<2+>, remodeliranje aktina, pokretljivost ćelija u podocitima bubrega i fibroblastima. Influks Ca<2+>posredovan sa TRPC5 povećava Rac1 aktivnost, dok influks Ca<2+>poredovan sa TRPC6 pospešuje RhoA aktivnost. Utišavanje gena TRPC6 kanala ukida stresna vlakna i smanjuje fokalne kontakte, stvarajući fenotip pokretnih, migratornih ćelija. Nasuprot tome, utišavanje gena TRPC5 kanala spašava formiranje stresnih vlakana, stvarajući fenotip kontraktilnih ćelija. Ovde opisani rezultati otkrivaju očuvan mehanizam signalizacije u kome TRPC5 i TRPC6 kanali kontrolišu strogo regulisanu ravnotežu dinamike citoskeleta kroz diferencijalno spajanje sa Rac1 i RhoA.
[0090] Ca<2+>-zavisno remodelovanje aktinskog citoskeleta je dinamičan proces koji pokreće migraciju ćelija (Wei i sarad., Nature 457, 901-905, 2009). RhoA i Rac1 deluju kao prekidači odgovorni za preuređenje citoskeleta u migraciji ćelija (Etienne-Manneville i Hall, Nature 420, 629-635, 2002); Raftopoulou i Hall, Dev Biol 265, 23-32, 2004). Aktivacija Rac1 posreduje fenotip pokretnih ćelija, dok aktivnost RhoA promoviše kontraktilni fenotip (EtienneManneville i Hall, Nature 420, 629-635, 2002). Ca<2+>igra centralnu ulogu u regulaciji male GTPaze (Aspenstrom i sarad., Biochem J 377, 327-337, 2004). Prostorno i vremenski ograničeni treperenja Ca<2+>su obogaćena blizu prednje ivice migrirajućih ćelija (Wei i sarad., Nature 457, 901-905, 2009). Ca2+ mikrodomeni su se tako pridružili lokalnim eksplozijama u Rac1 aktivnosti (Gardiner i sarad., Curr Biol 12, 2029-2034, 2002; Machacek i sarad., Nature 461, 99-103, 2009) kao kritični događaji na prednjoj ivici. Do danas, izvori influksa Ca2+ odgovorni za regulaciju GTPaze ostaju uglavnom neuhvatljivi. TRP (tranzientni receptorski potencijal) kanali generišu vremenski i prostorno ograničene Ca<2+>signale povezane sa migracijom ćelija u fibroblastima i konusima rasta neurona 0. Konkretno, TRPC5 kanali su poznati regulatori vođenja konusa rasta neurona 1 i njihova aktivnost u neuronima zavisi od PI3K i Rac1 aktivnosti (Bezzerides i sarad., Nna Cell Biol 6, 709-720, 2004).
[0091] Podociti su ćelije slične neuronima koje potiču iz metanefričnog mezenhima bubrežnog glomerula i neophodni su za formiranje aparata za filtriranje bubrega (Somlo i Mundel, Nna Genet 24, 333-335, 2000; Fukasawa i sarad., J Am Soc Nephrol 20, 1491-1503, 2009). Podociti poseduju izuzetno rafiniran repertoar adaptacija citoskeleta na znakove životne sredine (Somlo i Mundel, Nna Genet 24, 333-335, 2000; Garg i sarad., Mol Cell Biol 27, 8698-8712, 2007; Verma i sarad., J Clin Invest 116, 1346-1359, 2006; Verma i sarad., J Biol Chem 278, 20716-20723, 2003; Barletta i sarad., J Biol Chem 278, 19266-19271, 2003; Holzman i sarad., Kidney Int 56, 1481-1491, 1999; Ahola i sarad., Am J Pathol 155, 907-913, 1999; Tryggvason i Wartiovaara, N Engl J Med 354, 1387-1401, 2006; Schnabel i Farquhar, J Cell Biol 111, 1255-1263, 1990; Kurihara i sarad., Proc Natl Acad Sci USA 89, 7075-7079, 1992). Rane događaje povrede podocita karakteriše disregulacija aktinskog citoskeleta (Paul i sarad., Trends Cell Biol 17, 428-437, 2007; Takeda i sarad., J Clin Invest 108, 289-301, 2001; Asanuma i sarad., Nna Cell Biol 8, 485-491, 2006) i Ca<2+>homeostaza (Hunt i sarad., J Am Soc Nephrol 16, 1593-1602, 2005; Faul i sarad., Nna Med 14, 931-938, 2008). Ove promene su povezane sa pojavom proteinaurije, gubitkom albumina u urinarni prostor, i na kraju otkazivanjem bubrega (Tryggvason i Wartiovaara, N Engl J Med 354, 1387-1401, 2006). Vazoaktivni hormon angiotenzin II indukuje influks Ca<2+>u podocitima, i produženo lečenje dovodi do gubitka stresnih vlakana (Hsu i sarad., J Mol Med 86, 1379-1394, 2008). Iako postoji prepoznata veza između influksa Ca<2+>i reorganizacije citoskeleta, mehanizmi pomoću kojih podocit oseća i transdukuje ekstracelularne znakove koji moduliraju pokretljivost oblika i ćelije ostaju nedostižni. Mutacije kanala TRP Canonical 6 (TRPC6) su povezane sa povredom podocita (Winn i sarad., Science 308, 1801-1804, 2005; Reiser i sarad., Nna Genet 37, 739-744, 2005; Moller i sarad., J Am Soc Nephrol 18, 29-36, 2007; Hsu i sarad., Biochim Biophys Acta 1772, 928-936, 2007), ali malo je poznato oko specifičnih puteva koji regulišu ovaj proces. Štaviše, TRPC6 deli blisku homologiju sa šest drugih članova familije TRPC kanala (Ramsey i sarad., Annu Rev Physiol 68, 619-647, 2006; Clapham, Nature 426, 517-524, 2003). TRPC5 kanali antagonizuju aktivnost kanala TRPC6 da bi kontrolisali strogo regulisanu ravnotežu dinamike citoskeleta kroz diferencijalno spajanje sa različitim malim GTPazama.
Proteinurija
[0092] Proteinurija je patološko stanje u kojem je protein prisutan u urinu. Albuminurija je vrsta proteinurije. Mikroalbuminurija se javlja kada bubrezi ispuštaju male količine albumina u urin. U telu koje pravilno funkcioniše, albumin nije normalno prisutan u urinu jer ga bubrezi zadržavaju u krvotoku. Mikroalbuminurija se dijagnostikuje ili iz 24-časovnog sakupljanja urina (20 do 200 µg/min) ili, češće, iz povišenih koncentracija (30 do 300 mg/l) u najmanje dva navrata. Mikroalbuminurija može biti preteča dijabetesne nefropatije. Nivo albumina iznad ovih vrednosti naziva se makroalbuminurija. Subjekti sa određenim stanjima, npr., dijabetesna nefropatija, mogu napredovati od mikroalbuminurije do makroalbuminurije i dostići nefrotski opseg (>3.5 g/24 sata) kako bolest bubrega dostiže uznapredovalu fazu.
Uzroci proteinaurija
[0093] Proteinurija može biti povezana sa brojnim stanjima, uključujući fokalnu segmentnu glomerulosklerozu, IgA nefropatiju, dijabetesnu nefropatiju, lupus nefritis, membranoproliferativni glomerulonefritis, progresivni (polmesečasti) glomerulonefritis, i membranski glomerulonefritis.
A. Fokalna segmentna glomeruloskleroza (FSGS)
[0094] Fokalna segmentna glomeruloskleroza (FSGS) je bolest koja napada sistem za filtriranje bubrega (glomerule) izazivajući ozbiljne ožiljke. FSGS je jedan od mnogih uzroka bolesti poznna kao nefrotski sindrom, koji se javlja kada protein iz krvi curi u urin (proteinurija).
[0095] Vrlo malo tretmana je dostupno za pacijente sa FSGS. Mnogi pacijenti se leče steroidnim režimima, od kojih većina ima veoma oštre neželjene efekte. Neki pacijenti su pokazali da pozitivno reaguju na imunosupresivne lekove kao i lekove za krvni pritisak koji snižavaju nivo proteina u urinu. Do danas, nema opšteprihvaćenog efikasanog tretmana ili leka i ne postoje lekovi odobreni od strane FDA za lečenje FSGS. Stoga su poželjni efikasniji postupci za smanjenje ili inhibiciju proteinurije.
B. IgA nefropatija
[0096] IgA nefropatija (takođe poznna kao IgA nefritis, IgAN, Bergerova bolest, i sinfaringitični glomerulonefritis) je oblik glomerulonefritisa (zapaljenja glomerula bubrega). IgA nefropatija je najčešći glomerulonefritis u svetu. Primarnu IgA nefropatiju karakteriše taloženje IgA antitela u glomerulu. Postoje i druge bolesti povezane sa glomerularnim depozitima IgA, a najčešća je Henoch-Schönlein purpura (HSP), koju mnogi smatraju sistemskim oblikom IgA nefropatije. Henoch-Schönlein purpura se manifestuje karakterističnim purpurnim kožnim osipom, artritisom, i bolom u stomaku i javlja se češće kod mladih odraslih osoba (16-35 godina). HSP je povezan sa bezazlenijom prognozom od IgA nefropatije. Kod IgA nefropatije postoji spora progresija do hronične bubrežne insuficijencije u 25-30% slučajeva tokom perioda od 20 godina.
C. Dijabetesna nefropatija
[0097] Dijabetesna nefropatija, takođe poznata kao Kimmelstiel-Wilsonov sindrom i interkapilarni glomerulonefritis, je progresivna bolest bubrega uzrokovana angiopatijom kapilara u bubrežnim glomerulima. Karakteriše ga nefrotski sindrom i difuzna glomeruloskleroza. To je zbog dugotrajnog dijabetes melitusa i glavni je uzrok dijalize. Najranija promena koja se može otkriti u toku dijabetesna nefropatije je zadebljanje u glomerulu. U ovoj fazi, bubrezi mogu početi da dozvoljavaju više serumskog albumina nego što je normalno u urinu. Kako dijabetesna nefropatija napreduje, sve veći broj glomerula se uništava nodularnom glomerulosklerozom i povećava se količina albumina izlučenog urinom.
D. Lupus Nephritis
[0098] Lupus nephritis je poremećaj bubrega koji je komplikacija sistemskog eritematoznog lupusa. Lupusni nefritis se javlja kada se antitela i komplement nakupljaju u bubrezima, izazivajući upalu. Često izaziva proteinuriju i može brzo napredovati do otkazivanja bubrega. Otpadni proizvodi azota se nakupljaju u krvotoku. Sistemski eritematozni lupus izaziva različite poremećaje unutrašnjih struktura bubrega, uključujući intersticijski nefritis. Lupusni nefritis pogađa otprilike 3 od 10,000 ljudi.
E. Membranoproliferative Glomerulonephritis I/II/III
[0099] Membranoproliferativni glomerulonefritis je vrsta glomerulonefritisa uzrokovana naslagama u bubrezima glomerularni mezangijum i zadebljanje bazalne membrane, aktiviranje komplementa i oštećenje glomerula. Postoje tri tipa membranoproliferativnog glomerulonefritisa. Tip I je uzrokovan imunološkim kompleksima koji se talože u bubrezima i veruje se da je povezan sa klasičnim putem komplementa. Tip II je sličan tipu I, međutim, veruje se da je povezan sa alternativnim putem komplementa. Tip III je veoma redak i karakteriše ga mešavina subepitelnih naslaga i tipičnih patoloških nalaza bolesti tipa I.
F: Progresivni (krescentni) glomerulonefritis
[0100] Progresivni (krescentni) glomerulonefritis (PG) je sindrom bubrega koji, ako se ne leči, brzo napreduje u akutnu bubrežnu insuficijenciju i smrt u roku od nekoliko meseci. U 50% slučajeva, PG je povezan sa osnovnom bolešću kao što je Goodpastureov sindrom, sistemski eritematozni lupus, ili Wegenerova granulomatoza; ostali slučajevi su idiopatski. Bez obzira na osnovni uzrok, PG uključuje tešku povredu glomerula bubrega, pri čemu mnogi glomeruli sadrže karakteristične ožiljke u obliku polumeseca. Pacijenti sa PG imaju hematuriju, proteinuriju, a povremeno, i hipertenziju i edem. Klinička slika je u skladu sa nefritičnim sindromom, iako stepen proteinurije može povremeno da pređe 3 g/24 sata, što je opseg povezan sa nefrotskim sindromom. Nelečena bolest može napredovati do smanjenja zapremine urina (oligurije), što je povezano sa lošom funkcijom bubrega.
G. Membranski glomerulonefritis
[0101] Membranski glomerulonefritis (MGN) je sporo progresivna bolest bubrega koja pogađa uglavnom pacijente između 30 i 50 godina, obično bele rase. Može se razviti u nefrotski sindrom. MGN je uzrokovan cirkulišućim imunološkim kompleksom. Sadašnja istraživanja pokazuju da se većina imunoloških kompleksa formira vezivanjem antitela na antigene in situ za bazalnu membranu glomerula. Navedeni antigeni mogu biti endogeni za bazalnu membranu, ili deponovani iz sistemske cirkulacije.
Merenje nivoa proteina u urinu
[0102] Nivoi proteina u urinu se mogu meriti korišćenjem postupaka poznatih u oblasti. Do nedavno, precizno merenje proteina zahtevalo je 24-časovno sakupljanje urina. U 24-časovnom sakupljanju, pacijent mokri u posudu, koja se čuva u frižideru između odlazaka u kupatilo. Pacijentu se savetuje da počne da sakuplja urin nakon prvog odlaska u kupatilo ujutru. Svaka kap urina ostatak dana treba da se sakupi u posudu. Sledećeg jutra, pacijent dodaje prvo mokrenje nakon buđenja i sakupljanje je završeno.
[0103] Nedavno, istraživači su otkrili da jedan uzorak urina može pružiti potrebne informacije. U novijoj metodi rada, količina albumina u uzorku urina se poredi sa količinom kreatinina, otpadnog proizvoda normalne razgradnje mišića. Merenje se naziva odnos albumin-kreatinin u urinu (UACR). Uzorak urina koji sadrži više od 30 miligrama albumina za svaki gram kreatinina (30 mg/g) je upozorenje da može postojati problem. Ako laboratorijski test prelazi 30 mg/g, drugi UACR test treba uraditi 1 do 2 nedelje kasnije. Ako drugi test takođe pokazuje visok nivo proteina, osoba ima upornu proteinuriju, znak opadanja funkcije bubrega, i treba da ima dodatne testove za procenu funkcije bubrega.
[0104] Testovi koji mere količinu kreatinina u krvi će takođe pokazati da li bubrezi subjekta efikasno uklanjaju otpad. Previše kreatinina u krvi je znak da osoba ima oštećenje bubrega. Lekar može da koristi merenje kreatinina da proceni koliko efikasno bubrezi filtriraju krv. Ovaj proračun se naziva procenjena brzina glomerularne filtracije, ili eGFR. Hronična bolest bubrega je prisutna kada je eGFR manji od 60 mililitara u minuti (ml/min).
TRPC5
[0105] TRPC je familija katjonskih kanala prolaznih receptorskih potencijala kod životinja. TRPC5 je podtip TRPC familije jonskih kanala prolaznih receptorskih potencijala kod sisara. Tri primera TRPC5 su istaknuta ispod u tabeli 1.
TABELA 1
[0106] Prema tome, u određenim tehničkim rešenjima, pronalazak obezbeđuje postupke za lečenje, ili smanjenje rizika od razvoja, bolesti ili stanja odabranih od bolesti bubrega, plućne arterijske hipertenzije, anksioznosti, depresije, kancera, dijabetesne retinopatije, ili bola, koja sadrži administriranje subjektu kome je to potrebno terapijski efikasne količine jedinjenja pronalaska (npr., jedinjenje strukturne formule I) ili farmaceutske kompozicije koja sadrži navedeno jedinjenje.
[0107] U nekim tehničkim rešenjima, bolest je bolest bubrega, anksioznost, depresija, kancer, ili dijabetesna retinopatija.
[0108] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje je bolest bubrega odabrana od
fokalne segmentne glomeruloskleroze (FSGS), dijabetesne nefropatije, Alportovog sindroma, hipertenzivne bolesti bubrega, nefrotskog sindroma, nefrotskog sindroma otpornog na steroide, bolesti minimalnih promena, membranozne nefropatije, idiopatske membranske nefropatije, membranoproliferativnog glomerulonefritisa (MPGN), MPGN posredovanog imunim kompleksom, MPGN posredovanog komplementom, lupusnog nefritisa, postinfektivnog glomerulonefritisa, bolesti tanke bazalne membrane, mezangijalnog proliferativnog glomerulonefritisa, amiloidoze (primarne), c1q nefropatije, brzo progresivnog GN, anti-GBM bolesti, C3 glomerulonefritisa, hipertenzivne nefroskleroze, ili IgA nefropatije. U nekim tehničkim rešenjima, bolest bubrega je proteinurična bolest bubrega. U nekim tehničkim rešenjima, bolest bubrega je mikroalbuminurija ili makroalbuminurija.
[0109] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je plućna arterijska hipertenzija.
[0110] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je bol odabran od neuropatskog bola i visceralnog bola.
[0111] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje je kancer odabran od hemorezistentnog karcinoma dojke, kancera dojke otpornog na adriamicin, hemorezistentnog kolorektalnog kancera, meduloblastoma, i tumorske angiogeneze.
[0112] Pronalazak takođe obezbeđuje postupke lečenja, ili smanjenja rizika od razvoja, anksioznosti, ili depresije, ili kancera, koja sadrži administriranje subjektu kome je to potrebno terapijski efikasne količine jedinjenja pronalaska (npr., jedinjenje formule I), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži navedeno jedinjenje.
[0113] U nekim tehničkim rešenjima, bolest ili stanje koje se leči je FSGS povezan sa transplantacijom, nefrotski sindrom povezan sa transplantacijom, proteinurija povezana sa transplantacijom, holestatska bolest jetre, policistične bolesti bubrega, autozomno dominantne policistične bolesti bubrega (ADPKD), gojaznost, insulinska rezistencija, dijabetes tipa II, predijabetes, metabolički sindrom, nealkoholna masna bolest jetre (NAFLD), ili nealkoholni steatohepatitis (NASH).
Subjekti koji se leče
[0114] U jednom aspektu pronalaska, subjekt je odabran na osnovu toga što ima, ili je u riziku da razvije, bolest bubrega, plućnu arterijsku hipertenziju, anksioznost, depresiju, kancer, dijabetesnu retinopatiju, ili bol. U drugom aspektu, subjekt je odabran na osnovu toga što ima, ili je u riziku da razvije, bolest bubrega, anksioznost, depresiju, kancer, ili dijabetesnu retinopatija. U drugom aspektu pronalaska, subjekt je odabran na osnovu toga što ima, ili je u riziku da razvije, bol, neuropatski bol i visceralni bol, FSGS povezan sa transplantacijom, nefrotski sindrom povezan sa transplantacijom, proteinuriju povezanu sa transplantacijom, holestatsku bolest jetre, policističnu bolest bubrega, autozomno dominantne policistične bolesti bubrega (ADPKD), gojaznost, insulinsku rezistenciju, dijabetes tipa II, predijabetes, metabolički sindrom, nealkoholnu masnu bolest jetre (NAFLD), ili nealkoholni steatohepatitis (NASH).
[0115] Subjekti koji imaju, ili su u riziku da razviju, proteinuriju uključuju one sa diabetesom, hipertenzijom, ili određeno porodično poreklo. U Sjedinjenim Državama, dijabetes je vodeći uzrok završnog stadijuma bubrežne bolesti (ESRD). U oba tipa dijabetesa tipa 1 i tipa 2, albumin u urinu je jedan od prvih znakova pogoršanja funkcije bubrega. Kako funkcija bubrega opada, količina albumina u urinu se povećava. Još jedan faktor rizika za razvoj proteinurije je hipertenzija. Proteinurija kod osobe sa visokim krvnim pritiskom je pokazatelj opadanja funkcije bubrega. Ako se hipertenzija ne kontroliše, osoba može napredovati do potpunog zatajenja bubrega. Afroamerikanci imaju veću verovatnoću od belaca da imaju visok krvni pritisak i da zbog toga razviju probleme sa bubrezima, čak i kada im je krvni pritisak samo blago povišen. Druge grupe sa rizikom od proteinurije su američki Indijanci, Hispanoamerikanci/ Latinoamerikanci, Amerikanci sa pacifičkih ostrva, starije osobe, i osobe sa prekomernom težinom.
[0116] U jednom aspektu pronalaska, subjekt je odabran na osnovu toga što ima, ili je u riziku da razvije proteinuriju. Subjekt koji ima ima, ili je u riziku da razvije, proteinuriju je onaj koji ima jedan ili više simptoma stanja. Simptomi proteinurije su poznati stručnjacima u oblasti i uključuju, bez ograničenja, velike količine proteina u urinu, što može prouzrokovati da izgleda penasto u toaletu. Gubitak velikih količina proteina može dovesti do edema, gde može doći do otoka u rukama, stopalima, stomaku, ili licu. Ovo su znaci velikog gubitka proteina i ukazuju na to da je bolest bubrega napredovala. Laboratorijsko testiranje je jedini način da se sazna da li je protein u urinu subjekta pre nego što dođe do velikog oštećenja bubrega.
[0117] Postupci su efikasni za različite subjekte uključujući sisare, npr., ljude i druge životinje, kao što su laboratorijske životinje, npr., miševi, pacovi, zečevi, ili majmuni, ili pripitomljene i domaće životinje, npr., mačke, psi, koze, ovce, svinje, krave, ili konje. U nekim tehničkim rešenjima, subjekna je sisar. U nekim tehničkim rešenjima, subjekna je čovek.
PRIMERI
[0118] Pronalazak je dalje opisan u sledećim primerima, koji ne ograničavaju obim zaštite pronalaska opisanog u patentnim zahtevima.
Primer 1. Sinteza jedinjenja 100
[0119]
terc-butil 4- [4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi] -5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0120] U mešani rastvor terc-butil 4-hloro-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilata (400 mg, 1.48 mmol, 1 ekviv.) i 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (400.6 mg, 2.22 mmol, 1.5 ekviv.) u acetonitrilu(10 mL) dodat je DBU (451.5 mg, 2.97 mmol, 2.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na 80°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (3 × 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 2:1) da da terc-butil 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (110 mg, 17.94%) kao braon čvrsta supstanca.
4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0121] U mešani rastvor terc-butil 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (110 mg, 0.27 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL, 13.46 mmol, 50.59 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom do pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (DCM / MeOH 12:1) da da 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H, 7H,SH-pirido[3,4-d]pirimidin (50 mg, 59.98%) kao smeđa čvrsta supstanca.
4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidro-3-on
[0122] U mešani rastvor 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (50 mg, 0.16 mmol, 1 ekviv.) u DIEA (2 mL) dodat je 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (47.5 mg, 0.19 mmol, 1.19 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na 100°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 2:1) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (40 mg, 47.65%) kao smeđa čvrsta supstanca.
4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0123] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (40 mg, 0.08 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL, 13.46 mmol, 177.00 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (40 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A:voda(10MMOL/L NH4HCO3), Mobilna faza B:; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 18% B do 47% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.22 min) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on(8.6 mg, 25.59%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 2. Sinteza jedinjenja 140
Terc-butil 4-bromo-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-karboksilat
[0125] U rastvor 4-bromo-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridina (250 mg, 1.173 mmol, 1 ekviv.) u THF (10 mL, 123.430 mmol, 105.20 ekviv.) dodati su Boc2O (512.13 mg, 2.347 mmol, 2.00 ekviv.) i TEA (474.90 mg, 4.693 mmol, 4 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 5/1) da da terc-butil 4-bromo-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-karboksilat (210 mg, 57.15%) kao svetlo žuto ulje.
Terc-butil 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-karboksilat
[0126] U rastvor terc-butil 4-bromo-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridino-7-karboksilata (210 mg, 0.671 mmol, 1 ekviv.) i 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenola (241.52 mg, 1.341 mmol, 2 ekviv.) u DMSO (10 mL) dodati su Cs2CO3(873.86 mg, 2.682 mmol, 4 ekviv), 2-(dimetilamino)sirćetna kiselina (41.46 mg, 0.402 mmol, 0.6 ekviv.) i CuI (76.62 mg, 0.402 mmol, 0.60 ekviv). Nakon mešanja tokom 4 sata na 120°C pod atmosferom azota, dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC, eluirana sa PE/EA (5/1) da da terc-butil 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-karboksilat (100 mg, 36.17%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin
[0127] U rastvor terc-butil 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-karboksilata (150 mg, 0.364 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL, 157.300 mmol, 432.46 ekviv.) dodat je TFA (414.75 mg, 3.637 mmol, 10 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je korišćen u sledećem koraku.
4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0128] Smeša 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridina (60 mg, 0.192 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (47.86 mg, 0.192 mmol, 1.00 ekviv.) u DIEA (49.67 mg, 0.384 mmol, 2 ekviv.) je mešana tokom 2 sata na 100°C pod N2atmosferom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 1/1) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (100 mg, 99.15%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0129] U rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (100 mg, 0.191 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL, 157.300 mmol, 825.67 ekviv.) dodat je TFA (217.23 mg, 1.905 mmol, 10.00 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 2 sata. Sirov proizvod (150 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30* 150mm,5um ; Mobilna faza Voda (10 mMNH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5,6,7,8-tetrahidro-1,7-nafthiridin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (42.9 mg, 51.09%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 3. Sinteza jedinjenja 120
[0130]
2-Benzil-5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksil-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin
[0131] U mešanu smešu 2-benzil-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridina (250 mg, 0.825 mmol, 1 ekviv.) i 2-(dimetilamino)sirćetne kiseline (170.05 mg, 1.649 mmol, 2.00 ekviv.) u DMSO (5 mL) dodati su 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (89.10 mg, 0.495 mmol, 0.6 ekviv.) i CuI (94.22 mg, 0.495 mmol, 0.6 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Zatim Cs2CO3(1074.59 mg, 3.298 mmol, 4 ekviv.) je dodat na sobnoj temperaturi. Finalna smeša reakcije je ozračena mikrotalasnim zračenjem tokom 1 sata na 120°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Sirov proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza Voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 18% B do 35% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.12 min) da da 2-benzil-5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin (180 mg, 54.25%) kao smeđu čvrstu supstancu.
5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksil-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin
[0132] U mešani rastvor 2-benzil-5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridina (180 mg) uMeOH (10 mL) dodat je Pd/C (20 mg) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 5 sati na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (DCM/MeOH 12: 1) da da 5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin (100mg) kao smeđu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trffluorometil)fenoksil-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin-2-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0133] U mešani rastvor 5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin (100 mg, 0.320 mmol, 1 ekviv.) u DIEA (0.1 mL) dodat je 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (63.81 mg, 0.256 mmol, 0.8 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na 90°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (DCM/MeOH; 12:1) da da 4-hloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin-2-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (130 mg, 77.34%) kao belu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin-2-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0134] U mešani rastvor 4-hloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin-2-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (107 mg, 0.204 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je načinjena baznom na pH 7 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (50 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 30% B do 50% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.55 min) da da 4-hloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1,2,3,4-tetrahidro-2,6-nafthiridin-2-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (60 mg, 66.78%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 4. Sinteza jedinjenja 118
[0135]
Etil 2-(benzilamino)propanoat
[0136] U mešani rastvor benzaldehida (8 g, 75.384 mmol, 1 ekviv.) i TEA (7.63 g, 75.384 mmol, 1 ekviv.) u DCE (100 mL, 1263.149 mmol, 16.76 ekviv.) dodat je TEA (7.63 g, 75.384 mmol, 1 ekviv.) i NaBH(OAc)3(31.95 g, 150.767 mmol, 2 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na st tokom noći. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (2 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1x90 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da etil 2-(benzilamino)propanona (12 g, 76.80%) kao bezbojno ulje.
Metil 4-[benzil(1-etoksi-1-oksopropan-2-il)amino]butanoat
[0137] U mešani rastvor etil 2-(benzilamino)propanoata (8 g, 38.596 mmol, 1 ekviv.) i metil 4-oksobutanoata (4.48 g, 38.596 mmol, 1.00 ekviv.) u DCE (120 mL, 1515.779 mmol, 39.27 ekviv.) dodat je TEA (3.91 g, 38.596 mmol, 1 ekviv.) i NaBH(OAc)3(16.36 g, 77.193 mmol, 2 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na st tokom noći. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (2 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x90 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da metil 4-[benzil(1-etoksi-1-oksopropan-2-il)amino]butanona (10g, 84.29%) kao bezbojno ulje.
Metil 1-benzil-2-metil-3-oksopiperidin-4-karboksilat
[0138] U mešani rastvor metil 4-[benzil(1-etoksi-1-oksopropan-2-il)amino]butanoata (8 g, 26.026 mmol, 1 ekviv.) u toluenu (100 mL) dodat je t-BuOK (5.00 g, 52.051 mmol, 2 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 80°C tokom 2 sata. Željeni proizvod je detektovan pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (5:1 to 2:1) da da metil 1-benzil-2-metil-3-oksopiperidin-4-karboksilat (6.5 g, 95.57%) kao belu čvrstu supstancu.
7-Benzil-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
[0139] U mešani rastvor metil 1-benzil-2-metil-3-oksopiperidin-4-karboksilata (6 g, 22.960 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (80 mL, 1377.083 mmol, 59.98 ekviv.) dodat je t-BuONa (4.41 g, 45.921 mmol, 2 ekviv.) i metanimidamid hidrohlorid (3.70 g, 45.921 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 80°C tokom 2h. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (3:1 to 2:1) da da 7-benzil-8-metil-SH,6Σi,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (5 g, 85.29%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-hidroksi-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0140] U rastvor 7-benzil-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (5 g, 19.583 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (60 mL, 1032.812 mmol, 52.74 ekviv.) dodat je Boc2O (8.55 g, 39.166 mmol, 2 ekviv), CH3COONa (1.81 g, 23.500 mmol, 1.2 ekviv), Pd(OH)2/C (275.01 mg, 1.958 mmol, 0.1 ekviv.) pod atmosferom azota. Smeša je hidrogenizovana na sobnoj temperaturi tokom 2h pod atmosferom azota, filtrirana kroz sloj Celite-a i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da terc-butil 4-hidroksi-8-metil-5H,6H, 7H, 8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4.5 g, 86.61%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-butil 4-hloro-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0141] U mešani rastvor terc-butil 4-hidroksi-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (4.5 g, 16.961 mmol, 1 ekviv.) i PPh3(6.67 g, 25.442 mmol, 1.5 ekviv.) u DCE (60 mL, 0.606 mmol, 0.04 ekviv.) dodat je CCl4(5.22 g, 33.922 mmol, 2 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 70°C for 2 sata. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluirana sa PE/EtOAc (7:1) da da terc-butil 4-hloro-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4 g, 83.11%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0142] U mešani rastvor terc-butil 4-hloro-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (4 g, 14.096 mmol, 1 ekviv.) i 2-hloro-4-fluorofenola (2.07 g, 14.096 mmol, 1 ekviv.) u DMF (50 mL) dodat je K2CO3(3.90 g, 28.193 mmol, 2 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 70 tokom 1h. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (1:1) da da terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4 g, 72.05%) kao belu čvrstu supstancu.
4-(2-Hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0143] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H-6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (4 g, 1 ekviv.) u DCM (20 mL) dodat je TFA (4 mL) u kapima/u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na st tokom 2h. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (2.7 g, 90.51%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0144] U mešani rastvor 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-S-metil-5H,6H, 7H, SH-pirido [3,4-d]pirimidin (1 g, 3.404 mmol, 1 ekviv.) u DIEA (1 mL) dodat je 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (0.85 g, 3.404 mmol, 1 ekviv.) u delovima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 100°C tokom noći. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (1:1 to 1:2) da da 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 58.01%) kao belu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0145] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodat je TFA (2 mL) u kapima na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša je mešana na st tokom 1h. Željeni proizvod se može detektovati pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (600 mg, 71.95%) kao belu čvrstu supstancu.
4-hloro-5- [(8R)-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0146] 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (250 mg, 1 ekviv.) je razdvojen prep hiralnom- HPLC (Kolona: CHIRALPAK IG, 20*250mm, 5 um; Mobilna faza A: Hex:DCM=3 : 1 (0.1%FA)--HPLC, Mobilna faza B: EtOH--HPLC; Protok: 20 mL/min; Gradijent: 15 B do 15 B u 19 min; 220/254 nm; RT1:13.016 ; RT2:16.004) da da 4-hloro-5-[(8R)-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (144 mg, 57.60%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 5. Sinteza jedinjenja 103
[0147]
Terc-Butil 4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0148] U mešani rastvor terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (800 mg, 2.966 mmol, 1 ekviv.) i 2-(difluorometil)fenil acetata (1104.26 mg, 5.932 mmol, 2.00 ekviv.) u DMF (20 mL) dodat je K2CO3(1229.72 mg, 8.898 mmol, 3 ekviv.) u delovima na 80°C pod atmosferom azota. Smeša je mešana tokom 2 sata. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Reakcija je kvenčovana vodom na sobnoj temperaturi. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (3 × 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, MeOH u vodi, 10% do 50% gradijent za 10 min; detektor, UV 254 nm. da da terc-butil 4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (900 mg, 80.41%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
4-[2-(Difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0149] U mešani rastvor terc-butil 4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (900 mg, 2.385 mmol, 1 ekviv.) u DCM dodata je 3,3,3trifluoropropanska kiselina (3 mL, 6.00 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 1.5 sat. Reakcija je praćena sa TLC (PE/EtOAc 10:1). Ostatak je načinjenj baznim na pH 8 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (100 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima da da 4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (329 mg, 49.75%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0150] U mešani rastvor 4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (328 mg, 1.183 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (169.05 mg, 0.679 mmol, 1.00 ekviv.) dodat je DIEA (175.43 mg, 1.357 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na 70°C. Smeša je mešana tokom 2 sata na 70°C. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, MeOH u vodi, 10% do 50% gradijent za 10 min; detektor, UV 254 nm. da da 4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoksi]-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (328 mg, 56.60%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[2-(diftuorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0151] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (328 mg, 0.670 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3 mL) u kapima na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC da da 4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoksi]-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (256.4 mg, 94.38%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
Primer 6. Sinteza jedinjenja 117 i 117a
[0152]
Etil 4-[(1-feniletil)amino]pentanoat
[0153] U mešani rastvor 1-feniletan-1-amina (25 g, 206.300 mmol, 1 ekviv.) i etil 4-oksopentanoata (29.74 g, 206.300 mmol, 1 ekviv.) u DCE (400 mL, 5052.598 mmol, 24.49 ekviv.) dodat je NaBH(OAc)3(65.59 g, 309.449 mmol, 1.5 ekviv.) u delovima na 25°C pod atmosferom azota. Rastvor je mešan na 25°C tokom 2 sata. Reakcija je kvenčovana dodavanjem H2O (400 mL) na 0°C. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaCl (vod.) (3 × 200 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod je korišćen u sledećem koraku.
Etil 4-[(2-etoksi-2-oksoetil)(1-feniletil)aminol pentanoat
[0154] U mešani rastvor etil 4-[(1-feniletil)amino]pentanoata (49 g, 196.508 mmol, 1 ekviv.) i etil 2-oksoacetata (40.12 g, 392.990 mmol, 2.00 ekviv.) u DCE (500 mL, 6315.747 mmol, 32.14 ekviv.) dodat je NaBH(OAc)3(62.47 g, 294.762 mmol, 1.5 ekviv.) u delovima na 25°C pod atmosferom azota. Rastvor je mešana na 25°C tokom 2 sata. Reakcija je kvenčovana dodavanjem H2O (400 mL) na 0°C. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaCl (vod.) (3 × 200 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod etil 4-[(2-etoksi-2-oksoetil)(1-feniletil)amino]pentanona (57 g, 86.47%) je korišćen u sledećem koraku.
Etil 2-metil-5-okso-l-(1-feniletil)piperidin-4-karboksilat
[0155] U rastvor etil 4-[(2-etoksi-2-oksoetil)(1-feniletil)amino]pentanoata (57 g, 169.924 mmol, 1 ekviv.) u toluenu (500 mL, 4699.452 mmol, 27.66 ekviv.) dodat je t-BuOK (47.67 g, 424.810 mmol, 2.5 ekviv.) u delovima na 0°C. Smeša je mešana na 25°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (50/1 to 10/1) da da etil 2-metil-5-okso-1-(1-feniletil)piperidin-4-karboksilat (29 g, 58.98%) kao žuto ulje
7-(1-cikloheailetil)-6-metil-dekahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
[0156] U rastvor etil 2-metil-5-okso-1-(1-feniletil)piperidin-4-karboksilata (10 g, 34.557 mmol, 1 ekviv.) i metanimidamid hidrohlorida (4.17 g, 51.836 mmol, 1.50 ekviv.) u EtOH (100 mL, 1721.353 mmol, 49.81 ekviv.) dodat je EtONa (5.88 g, 86.393 mmol, 2.50 ekviv.) u delovima na 25°C. Smeša je mešana na 90°C tokom 2 sata. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa DCM/MeOH (20/1 to 10/1) da da 7-(1-cikloheksiletil)-6-metil-dekahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (3.4 g, 34.96%) kao žutu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-hidroksi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0157] U rastvor 6-metil-7-(1-feniletil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (3.5 g, 12.994 mmol, 1 ekviv), HCOONH4(4.10 g, 65.022 mmol, 5.00 ekviv.) i Boc2O (8.51 g, 38.983 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (50 mL, 860.677 mmol, 66.23 ekviv.) dodat je Pd(OH)2/C (0.36 g, 2.599 mmol, 0.2 ekviv.) pod atmosferom azota. Smeša je hidrogenizovana na 70°C tokom 2 sata pod atmosferom azota korišćenjem balona sa vodonikom, filtrirana kroz sloj Celite-a i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Da da terc-butil 4-hidroksi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1.8 g, 52.21%) kao žutu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-hloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karbksilat
[0158] U rastvor terc-butil 4-hidroksi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (1.8 g, 6.784 mmol, 1 ekviv.) i PPh3(3.56 g, 13.569 mmol, 2 ekviv.) u DCE (20 mL, 252.630 mmol, 37.24 ekviv.) dodat je CCl4(3.13 g, 20.353 mmol, 3 ekviv.) na 25°C. Smeša je mešana na 70°C tokom 3 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (10/1 to 1/1) da da terc-butil 4-hloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1.1 g, 57.14%) kao žutu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat
[0159] U rastvor terc-butil 4-hloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilata (1.1 g, 3.877 mmol, 1 ekviv.) i 2-hloro-4-fluorofenola (0.85 g, 5.800 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF (15 mL, 193.826 mmol, 50.00 ekviv.) dodat je K2CO3(1.07 g, 7.753 mmol, 2 ekviv.) na 25°C. Smeša je mešana na 70°C tokom 1 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (10/1 to 5/1) da da terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilat (1.2 g, 78.60%) kao žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0160] Smeša 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (800 mg, 2.724 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (678.42 mg, 2.724 mmol, 1.00 ekviv.) u DIEA (704.01 mg, 5.447 mmol, 2 ekviv.) je mešana tokom 16 sati na 100°C pod atmosferom azota. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 1/1) da da 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (530 mg, 38.43%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-hloro-5- [(6R)-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0161] U rastvor 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (530 mg, 1.047 mmol, 1 ekviv.) u DCM (20 mL, 314.601 mmol, 300.57 ekviv.) dodat je TFA (1193.47 mg, 10.467 mmol, 10 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (600 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30*150mm,5um ; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da racemna (200 mg).Ostatak (200 mg) je prečišćen pomoću hiralne-Prep-HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: CHIRALPAK IE, 2*25cm,5um; Mobilna faza A:MTBE (0.1%FA)-HPLC, Mobilna faza B: IPA--HPLC; Protok: 18 mL/min; Gradijent: 20 B do 20 B za 15 min; 220/254 nm. Iako su dva izomera razdvojena ovom tehnikom, apsolutna orjentacija nije određena. Jedinjenje označeno kao 4-hloro-5-[(6S)-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (60.9mg,13.78%) je dobijeno na 9.688 min kao bela čvrsta supstanca. Jedinjenje označeno kao 4-hloro-5-[(6R)-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-6-metil-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (61.5mg,13.92%) je dobijeno na 11.813 min kao bela čvrsta supstanca.
Primer 7. Sinteza jedinjenja 134
[0162]
Terc-butil 2-hloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0163] U mešani rastvor 2-(difluorometil)-4-fluorofenola (5.33 g, 32.879 mmol, 2.00 ekviv.) i terc-butil 2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (5 g, 16.438 mmol, 1 ekviv.) u DMF (30 mL) dodat je NaHCO3 (4.14 g, 49.282 mmol, 3.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na 70°C tokom 0.5 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferni C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: vode (plus 10 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 70% B - 95% B gradijent za 100 min; Detektor: 254 nm. Sakupljene su frakcije koje sadrže željeni proizvod pri 92% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju terc-butil 2-hloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2.100g) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
7-terc-Butil 2-metil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoai]-5H,6H,7H,8Hpirido[3,4-d]pirimidin-2,7-dikarboksilat
[0164] U rastvor terc-butil 2-hloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (400 mg, 0.931 mmol, 1 ekviv.) i TEA (188.34 mg, 1.861 mmol, 2 ekviv.) u MeOH (15 mL, 370.484 mmol, 398.10 ekviv.) dodat je Pd(PPh3)4 (107.54 mg, 0.093 mmol, 0.1 ekviv.) u rezervoaru pod pritiskom. Smeša je pročišćena sa azotom tokom 1 sata a zatim je stavljena pod pritisak do 10 atm sa ugljen monoksidom na 100°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperture i filtrirana da se uklone nerastvorne čvrste supstance. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 10 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 35% B - 65% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 62% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 7-terc-butil 2-metil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,7-dikarboksilata (100 mg, 23.70%) kao bezbojno ulje.
Terc-butil 4- [2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0165] U mešani rastvor 7-terc-butil 2-metil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,7-dikarboksilata (100 mg, 0.221 mmol, 1 ekviv.) u tBuOH (6 mL, 63.139 mmol, 286.29 ekviv.) dodat je NaBH4(16.69 mg, 0.441 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na 70°C tokom 3 sata. U smeša je dodata voda (3 mL). Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 10 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 80% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 74% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju terc-butil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (35 mg, 37.30%) kao bezbojno ulje.
[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]metanol
[0166] U mešani rastvor terc-butil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (35 mg) u DCM (6 mg) dodat je TFA (1 mg) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na st tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 10 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 25% B - 55% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 41% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju [4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]metanol (20 mg) kao bezbojno ulje.
4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0167] U bocu od 25 mL sa ravnim dnom dodati su [4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]metanol (20 mg, 0.061 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (15.31 mg, 0.061 mmol, 1 ekviv.) na sobnoj temperaturi. U smeša je dodat DIEA (15.89 mg, 0.123 mmol, 2 ekviv.) na st. Smeša je mešana na 90°C tokom 2 sata. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 10 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 35% B - 70% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 65% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 4-hloro-5-[4-[2(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (30 mg, 90.71%) kao bezbojno ulje.
4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0168] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-SH,6H,7Σi,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (30 mg) u DCM (5 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na st tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (30 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A:nedefinisana, Mobilna faza B: nedefinisana; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 8 min; 220 nm; rv: 7.22 min) da da 4-hloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoksi]-2-(hidroksimetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (8.7 mg) kao belu čvrstu supstancu.
[0169] Jedinjenja 128, 125, 114 su pripremljena postupcima i shemama opisanim u ovom primeru korišćenjem 2-trifluorometilfenola, 4-fluoro-2-trifluorometilfenola i 4-fluoro-2-hlorofenola redom, umesto 2-(difluorometil)-4-fluorofenola u prvom korku sinteze.
Primer 8. Sinteza jedinjenja 112
[0170]
Terc-butil 2-hloro-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0171] U mešanu smešu terc-butil 2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (800 mg, 2.630 mmol, 1 ekviv.) i 2-hloro-4-fluorofenola (578.16 mg, 3.945 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF (15 mL) dodat je K2CO3(726.99 mg, 5.260 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 0.5 sati na 70°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (2 × 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (30/1 do 10/1) da da terc-butil 2-hloro-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-5H,6H, 7H, 8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1 g, 91.78%) kao žuto ulje.
Terc-Butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil] amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0172] U mešanu smešu terc-butil 2-hloro-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (700 mg, 1.690 mmol, 1 ekviv.) u THF (30 mL) dodat je 1-(4-metoksifenil)metanamin (1159.02 mg, 8.449 mmol, 5.00 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 16 sati na 60°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2 × 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, acetonitril u vodi, 60% do 95% gradijent za 20 min; detektor, UV 220 nm) da da terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (350 mg, 40.22%) kao žuto ulje.
4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-N-[(4-metoksifenil)metil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-amin
[0173] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil]amino]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (350 mg, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Reakciona smeša je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona, 5um,19*150mm; Mobilna faza voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 25 mL/min; Gradijent: 2% B do 32% B za 1 min; 220/254 nm; Rt: 7.08 min) da da 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-N-[(4-metoksifenil)metil]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-amin (260 mg) kao žuto ulje.
4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0174] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-N-[(4-metoksifenil)metil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-amin (260 mg, 0.627 mmol, 1 ekviv), 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (156.11 mg, 0.627 mmol, 1.00 ekviv.) i DIEA (242.99 mg, 1.880 mmol, 3.00 ekviv.) na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 90°C pod atmosferom azota. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, acetonitril u vodi, 50% do 85% gradijent za 25 min; detektor, UV 220 nm) da da 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil]amino]-SH,6H,7Σi,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (350 mg, 89.00%) kao žutu čvrstu supstancu.
5-[2-amino-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-hloro-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0175] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-2-[[(4-metoksifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg) u TFA (8 mL, 107.704 mmol, 328.23 ekviv.). Smeša konačne reakcije je ozračena mikrotalasnim zračenjem tokom 2 sata na 80°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 25% B do 40% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.35 min) da da 5-[2-amino-4-(2-hloro-4-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-hloro-2,3-dihidropiridazin-3-on (52.4 mg) kao žutu čvrstu supstancu.
[0176] Jedinjenja 113, 116, i 102 su pripremljena postupcima i shemom opisanim u ovom primeru korišćenjem 2-hlorofenola, 4-fluoro-2-trifluorometilfenola, 2-trifluorofenola redom, umesto 2-hloro-4-fluorofenola u prvom koraku sinteze.
Primer 9. Sinteza jedinjenja 129 i 130
[0177]
1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d] pirimidin-2-il]etan-1-on
[0178] U smešu terc-butil 2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5h,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (600 mg, 1.340 mmol, 1 ekviv.) i tributil (1-etoksietenil)stanana (967.80 mg, 2.680 mmol, 2.00 ekviv.) u toluenu (10 mL) dodat je Pd(PPh3)4(77.41 mg, 0.067 mmol, 0.05 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 4 sata na 110°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Ovo je rezultovalo terc-butil 2-(1-etoksietenil)-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8Hpirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilatom (700 mg, 108.06%) kao žutim uljem. Sirova dobijena smeša je korišćena u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja.
[0179] U mešani rastvor terc-butil 2-(1-etoksietenil)-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (1 g, 2.068 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL) dodat je TFA (3.33 mL, 29.239 mmol, 21.70 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša/ostatak je načinjenj baznim na pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 43% B - 55% B gradijent za 20 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 50% B i koncentrovan pod sniženim pritiskom da daju 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]etan-1 -on (750 mg, 102.06%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
5-[2-Acetil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0180] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]etan-1-on (750 mg, 2.111 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (525.81 mg, 2.111 mmol, 1.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi. U gore navedenu smešu dodat je DIEA (818.47 mg, 6.333 mmol, 3.00 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 100°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 60% B - 85% B gradijent za 20 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 80% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 5-[2-acetil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (230 mg, 19.18%) kao svetlo žuto ulje.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-(1-hidroksietil)-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0181] U mešani rastvor 5-[2-acetil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (230 mg, 0.405 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (10 mL) dodat je NaBH4(30.64 mg, 0.810 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na 0°C pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 1/1) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-(1-hidroksietil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (120 mg, 51.99%) kao svetlo žuto ulje.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-[(1S)-1-hidroksietil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-[(1R)-1-hidroksietil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0182] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-(1-hidroksietil)-SH,6H,7Σi,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (120 mg, 0.211 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL) dodat je TFA (2.00 mL, 17.541 mmol, 127.89 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Ostatak je načinjen baznim na pH 8 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 80% B gradijent za 25 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 55% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (50 mg) je prečišćen pomoću Chiral-Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: CHIRALPAK IE, 2*25cm,5um; Mobilna faza A:Hex (0.1%FA)--HPLC, Mobilna faza B: EtOH--HPLC; Protok: 16 mL/min; Gradijent: 30 B do 30 B za 33 min; 220/254 nm ; RT1:26.219 ; RT2:29.589). Iako su ova dva izomera razdvojena ovom tehnikom, apsolutna orijentacija nije određena. Jedinjenje označeno sa 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-[(1S)-1-hidroksietil]-5H,6H,7H,8H-pirido
[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (27.1 mg) je dobijeno pri 29.589 min kao prljavo bela čvrsta supstanca. Jedinjenje označeno sa 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-[(1R)-1-hidroksietil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (22.6 mg) je dopbijeno pri 26.219 min kao prljavo bela čvrsta supstanca.
[0183] Jedinjenje 119 je pripremljeno postupcima i shemom opisanim u ovom primeru korišćenjem terc-butil 2-hloro-4-[4-fluoro-2-hlorofenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilata kao početnog materijala.
[0184] Jedinjenja 122 i 123 su pripremljena postupcima i shemom opisanim u ovom primeru korišćenjem terc-butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata kao početnog materijala. Ponovo, apsolutna orijentacija ovih razdvojenih izomera nije određena i označavanje kao (S) ili (R) je proizvoljno.
Primer 10. Sinteza jedinjenja 115
[0185]
terc-Butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0186] U mešani rastvor terc-butil 2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (2 g, 6.58 mmol, 1 ekviv.) i 2-(trifluorometil)fenola (1.6 g, 9.86 mmol, 1.5 ekviv.) u acetonitrilu (20 mL) dodat je DBU (2.0 g, 13.15 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na st tokom 4 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 10: 1) da da terc-butil 2-hloro-4-[2(trifluorometil)fenoksi]-SΣi,6Σi,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (700 mg, 24.77%) kao bezbojno ulje.
terc-butil 2-([2-[(terc-butildimetilsilil)oksi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0187] U rastvor terc-butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.163 mmol, 1 ekviv.) u THF (15 mL) dodat je (2-aminoetoksi)(terc-butil)dimetilsilan (1019.89 mg, 5.816 mmol, 5.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 16 h na 50 °C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 3/1) da da terc-butil 2-([2-[(tertbutildimetilsilil)oksi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (440 mg, 66.51%) kao svetlo žuto ulje.
2-([4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]amino)etan-1-ol
[0188] U mešani rastvor terc-butil 2-([2-[(terc-butildimetilsilil)oksi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (440 mg, 0.774 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodat je TFA (3 mL, 40.389 mmol, 52.20 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, ACN u vodi, 40% do 60% gradijent za 15 min; detektor, UV 254 nm da da 2-([4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]amino)etan-1-ol (220 mg) kao svetlo žuto ulje.
4-hloro-5-[2-[(2-hidroksietil)aminol-4-[2-(trifluorometil)fenoksi1-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0189] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 2-([4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]amino)etan-1-ol (220 mg, 0.621 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (154.66 mg, 0.621 mmol, 1.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi. U smešu navedenu iznad dodat je DIEA (240.74 mg, 1.863 mmol, 3.00 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na 100 stepeni C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: ACN; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 60% B gradijent za 20 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 55% B i koncentrovan pod sniženim pritiskom da daju 4-hloro-5-[2-[(2-hidroksietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (210 mg, 59.66%) kao žutu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-[2-[(2-hidroksietil)aminol-4-[2-(trifluorometil)fenoksil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0190] U mešani rastvor 4-hloro-5-[2-[(2-hidroksietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-SH,6H,7Σi,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg, 0.353 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL) dodat je TFA (2 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je načinjena baznom na pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A:nedefinisana, Mobilna faza B: nedefinisana; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 25% B do 50% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.67 min) da da 4-hloro-5-[2-[(2-hidroksietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (106.3 mg) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 11. Sinteza jedinjenja 138 i 139
[0191]
7-Benzil-2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0192] U mešani rastvor 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenola (1469.32 mg, 8.158 mmol, 1.20 ekviv.) i 7-benzil-2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (2000 mg, 6.799 mmol, 1 ekviv.) u DMF (20 mL) dodat je K2CO3(1879.20 mg, 13.597 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na 70°C tokom 0.5 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: Sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM TFA); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 70% B - 95% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 95% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 7-benzil-2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (2331mg,78.31%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
7-Benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-on
[0193] Rastvor 7-benzil-2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (2 g, 4.568 mmol, 1 ekviv.) u HAc (10 mL, 174.515 mmol, 38.20 ekviv.) i H2O (1 mL, 55.508 mmol, 12.15 ekviv.) je mešan tokom 10 sati na 140°C pod atmosferom N2. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 1/1) da da 7-benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-on (530 mg, 27.67%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-on
[0194] U rastvor 7-benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (530 mg, 1.264 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (10 mL, 246.989 mmol, 195.44 ekviv.) dodat je Pd/C (268.98 mg, 2.528 mmol, 2 ekviv.) pod atmosferom azota. Smeša je hidrogenizovana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod atmosferom azota korišćenjem balona sa vodonikom, filtrirana kroz sloj Celite-a i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2Σi,5Σi,6Σi,7Σi,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-on (430 mg, 103.34%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0195] Smeša 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (430 mg, 1.306 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (357.84 mg, 1.437 mmol, 1.1 ekviv.) u DIEA (337.58 mg, 2.612 mmol, 2.00 ekviv.) je mešana tokom 2 sata na 100°C pod atmosferom N2. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 1/1) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (210 mg, 29.67%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1-metil-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifruorometil)fenoksi]-2-metoksi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0196] U rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (90 mg, 0.166 mmol, 1 ekviv.) i NaHCO3 (27.90 mg, 0.332 mmol, 2 ekviv.) u DMF (10 mL, 129.218 mmol, 778.02 ekviv.) dodat je CH3I (47.15 mg, 0.332 mmol, 2.00 ekviv.) u kapima na 0°C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 25°C tokom 16 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EA 0/1) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1-metil-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (60 mg, 64.99%) i 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-metoksi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (15 mg) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1-metil-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0197] U rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1-metil-2-okso-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (60 mg, 0.108 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL, 157.300 mmol, 1457.41 ekviv.) dodat je TFA (123.07 mg, 1.079 mmol, 10 ekviv.) na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (100 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30*150mm,5um ; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-1-metil-2-okso-1H,2H,SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (29.3 mg, 57.54%) kao belu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-metoksi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0198] U rastvor 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-metoksi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (15 mg, 0.027 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL, 78.650 mmol, 2914.83 ekviv.) dodat je TFA (30.77 mg, 0.270 mmol, 10 ekviv.) na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (20 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30*150mm,5um ; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da 4-hloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-2-metoksi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (7.5 mg, 58.91%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 12. Sinteza jedinjenja 110
[0199]
Terc-Butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0200] U mešani rastvor terc-butil 2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (2 g, 6.58 mmol, 1 ekviv.) i 2-(trifluorometil)fenol (1.6 g, 9.86 mmol, 1.5 ekviv.) u acetonitrilu (20 mL) dodat je DBU (2.0 g, 13.15 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na st tokom 4 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 10: 1) da da terc-butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-SΣi,6Σi,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (700 mg, 24.77%) kao bezbojno ulje.
Terc-Butil 2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0201] U rastvor terc-butil 2-hloro-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (1 g, 2.327 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (20 mL, 493.978 mmol, 212.32 ekviv.) dodat je NaOMe (0.25 g, 0.005 mmol, 2 ekviv.) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C tokom 4 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (10/1 to 1/1) da da terc-butil 2-metoksi-4-[2-(triflurometil)fenoksi]-5H-6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (100 mg, 10.10%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
2-Metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d] pirimidin
[0202] U rastvor terc-butil 2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (100 mg, 0.235 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodat je TFA (268.03 mg, 2.351 mmol, 10 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 4 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (150 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30* 150mm,5um ; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da 2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (80 mg, 104.62%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0203] Rastvor 2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (80 mg, 0.246 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (61.26 mg, 0.246 mmol, 1 ekviv.) u DIEA (63.57 mg, 0.492 mmol, 2.00 ekviv.) je mešan tokom 2 sata na 100°C pod atmosferom azota. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (5/1 to 1/1) da da 4-hloro-5-[2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (120 mg, 90.71%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0204] U rastvor 4-hloro-5-[2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (120 mg, 0.223 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL, 78.650 mmol, 352.56 ekviv.) dodat je TFA (254.36 mg, 2.231 mmol, 10.00 ekviv.) na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (150 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona 30*150mm,5um ; Mobilna faza voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 7 min; 220 nm; Rt: 6.63 min) da da 4-hloro-5-[2-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (24.1 mg, 23.81%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 13. Sinteza jedinjenja 108
[0205]
Terc-Butil 4-(3-bromo-2-hlorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0206] U mešani rastvor terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.854 mmol, 1 ekviv.) i 3-bromo-2-hlorofenola (461.46 mg, 2.224 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF (10 mL) dodat je K2CO3(512.38 mg, 3.707 mmol, 2 ekviv).Dobijena smeša je mešana tokom 1h na 70°C. Smeša je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona:(sferna C18, 20-40 um,330g; Mobilna faza Voda (5mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 20% B do 60% B za 55 min; 254 nm).Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 40% B i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo terc-butil 4-(3-bromo-2-hlorofenoksi)5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilatom (300 mg, 36.72%) kao prljavo belom čvrstom supstancom.
Terc-Butil 4-(2-hloro-3-cijanofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0207] U mešani rastvor terc-butil 4-(3-bromo-2-hlorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (450 mg, 1.021 mmol, 1 ekviv.) i cink dikarbonitrila (143.87 mg, 1.225 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF (5 mL) dodat je Pd(PPh3)4(117.99 mg, 0.102 mmol, 0.1 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 120°C pod atmosferom azota. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20-40 um,180g ; Mobilna faza voda (5mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 10% B do 60% B za 55 min; 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 40% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo terc-butil 4-(2-hloro-3-cijanofenoksi)-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilatom (280 mg, 70.89%) kao svetlo žutom čvrstom supstancom.
2-Hloro-3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloksi]benzonitril
[0208] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-hloro-3-cijanofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (100 mg, 0.259 mmol, 1 ekviv.) u DCM (3 mL) dodat je TFA (1 mL). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi pod atmosferom vazduha. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 7 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Smeša je prečišćena pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20-40 um,180g; Mobilna faza A: voda (5mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 30% B do 60% B za 30 min; 254 nm). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 45% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo 2-hloro-3-[5H,6H, 7H, 8H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-iloksi]benzonitrilom (60 mg, 80.95%) kao svetlo žutim uljem.
2-Hloro-3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido [3,4-d] pi rimidin-4-il] oksi)benzonitril
[0209] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-hloro-3-cijanofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (60 mg, 0.155 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3dihidropiridazin-3-ona (38.63 mg, 0.155 mmol, 1.00 ekviv.) u DIEA (40.09 mg, 0.310 mmol, 2 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom sata na 100°C pod atmosferom vazduha. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) da da 2-hloro-3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi)benzonitril (50 mg, 64.56%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
2-Hloro-3-[[7-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il] oksi] benzonitril
[0210] U mešani rastvor 2-hloro-3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi)benzonitrila (50 mg, 0.100 mmol, 1 ekviv.) u DCM (3 mL) dodat je TFA (1 mL). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 7 sa zasićenim NH4CO3(vod.).Sirov proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A: voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 42% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.58 min) da da 2-hloro-3-[[7-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi]benzonitril (14.5 mg, 34.88%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
Primer 14. Sinteza jedinjenja 111
Terc-Butil 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0212] U mešanu smešu terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (180 mg, 0.667 mmol, 1 ekviv.) i 3-bromo-2-(trifluorometil)fenola (241.25 mg, 1.001 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF (10 mL) dodat je Cs2CO3(434.86 mg, 1.335 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 0.5 sata na 70°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2 × 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, acetonitril u vodi, 40% do 85% gradijent za 30 min; detektor, UV 220 nm) da da terc-butil 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (150 mg, 47.39%) kao žuto ulje.
Terc-Butil 4-[3-cijano-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0213] U mešanu smešu terc-butil 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fenoksi]-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (150 mg, 0.316 mmol, 1 ekviv.) i Zn(CN)2(111.43 mg, 0.949 mmol, 3.00 ekviv.) u DMF (8 mL) dodat je Pd(PPh3)4 (36.55 mg, 0.032 mmol, 0.1 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Smeša konačne reakcije je ozračena mikrotalasnim zračenjem tokom 3 sata na 150°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, acetonitril u vodi, 40% do 95% gradijent za 30 min; detektor, UV 220 nm) da da terc-butil 4-[3-cijano-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (70 mg, 52.65%) kao žuto ulje.
3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloksi]-2-(trifluorometil)benzonitril
[0214] U mešani rastvor terc-butil 4-[3-cijano-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (70 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na rt. The reaction mixture je mešana tokom 2 sata na rt Reakcija je praćena pomoću LCMS.
Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, acetonitril u vodi, 30% to 60% gradijent za 20 min; detektor, UV 220 nm) da da 3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloksi]-2-(trifluorometil)benzonitril (40 mg) kao žuto ulje.
3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d] pi rimidin-4-il] oksi)-2-(trifluorometil)benzonitril
[0215] U bocu od 25 ml sa ravnim dnom dodati su 3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloxy]-2-(trifluorometil)benzonitril (40 mg, 0.125 mmol, 1 ekviv), 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (62.22 mg, 0.250 mmol, 2.00 ekviv.) i DIEA (48.42 mg, 0.375 mmol, 3.00 ekviv.) na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 16 sata na 90°C pod atmosferom azota. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc=5/1) da da 3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi)-2-(trifluorometil)benzonitrile (50 mg, 75.12%) kao žuto ulje.
3-[[7-(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi]-2-(trifluorometil)benzonitril
[0216] U mešani rastvor 3-([7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi)-2-(trifluorometil)benzonitril (50 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 25% B do 45% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.07 min) da da 3-[[7-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oksi]-2-(trifluorometil)benzonitril (10.8 mg) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 15. Sinteza jedinjenjas 126 i 126a
[0217]
N-[(1E)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etiliden]-4-metilbenzen-1-sulfonohidrazid
[0218] U mešani rastvor 1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etan-1-ona (2 g, 9.702 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (40 mL) dodat je 4-metilbenzen-1-sulfonohidrazid (1.81 g, 9.719 mmol, 1.00 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 6 sata na 90°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM AcOH); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 70% B gradijent za 20 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 60% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da N-[(1E)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etiliden]-4-metilbenzen-1-sulfonohidrazid (2.5 g, 68.83%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0219] U mešanu smešu terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (750 mg, 2.781 mmol, 1 ekviv.) i N-[(1E)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etiliden]-4-metilbenzen-1-sulfonohidrazid (2081.80 mg, 5.561 mmol, 2.00 ekviv.) u 1,4-dioksanu (20 mL) dodati su Pd(acetonitril)2Cl2(72.14 mg, 0.278 mmol, 0.10 ekviv), Dppf (307.18 mg, 0.556 mmol, 0.2 ekviv.) i t-BuOLi (489.71 mg, 6.117 mmol, 2.20 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Smeša konačne reakcije je ozračena mikrotalasnim zračenjem tokom 2 sata na 100°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je filtrirana, filter pogača je oprana sa EtOAc (2x50 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM AcOH); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% -5% B, 10 min, 50% B - 90% B gradijent za 30 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 85% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da tercbutil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (800 mg, 67.95%) kao braon ulje.
Terc-Butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0220] U rastvor terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (150 mg) u 30 mL MeOH dodat je Pd/C (10%, 30 mg) pod atmosferom azota u bosu od 100 mL sa ravnim dnom. Smeša je hidrogenizovana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod atmosferom azota korišćenjem balona sa vodonikom, filtrirana kroz sloj celite-a i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilatom (150 mg) kao žutim uljem.
4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,SH-pirido[3,4-d]pirimidin
[0221] U mešani rastvor terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-SΣi,6Σi,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (150 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM AcOH); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 58% B gradijent za 15 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 53% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (100 mg) kao žuto ulje.
4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0222] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (100 mg, 0.307 mmol, 1 ekviv), 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (91.88 mg, 0.369 mmol, 1.20 ekviv.) i DIEA (119.19 mg, 0.922 mmol, 3.00 ekviv.) na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 90°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM AcOH); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% B gradijent za 15 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 53% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (120 mg, 72.57%) kao žuto ulje.
4-Hloro-5-[4-[(1S)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 4-hloro-5-[4-[(1R)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0223] U mešani rastvor 4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 4 sata na rt. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Chiral-Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep Fenil OBD Kolona 19×150mm Sum 13nm; Mobilna faza A: Mobilna faza B:Protok: 60 mL/min; Gradijent: 20% B do 37% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.97 min). Iako su dva izomera razdvojena ovom tehnikom, apsolutna orjentacija nije određena. Jedinjenje označeno kao 4-hloro-5-[4-[(1S)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (11.8 mg) je dobijeno na 1.819 min kao prljavo bela čvrsta supstanca. Jedinjenje označeno kao 4-hloro-5-[4-[(1R)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (13.5 mg) je dobijeno na 2.470 min kao bela čvrsta supstanca.
Primer 16. Sinteza jedinjenja 133
[0224]
terc-Butil 4-[metil[(3R,4R)-4-metilpiperidin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0225] U bocu od 25 ml sa ravnim dnom dodati su (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin-3-amin (2.43 g, 0.011 mmol, 1.50 ekviv.) i terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2 g, 0.007 mmol, 1 ekviv.) na sobnoj temperaturi. U smešu dodat je DIEA (1.92 g, 0.015 mmol, 2.00 ekviv.) na st. Smeša je mešana na 100°C tokom 2 sata. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) da da terc-butil 4-[metil[(3R,4R)-4-metilpiperidin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat 670mg,25.00%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
(3R,4R)-1-Benzil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperidin-3-amin
[0226] U mešani rastvor terc-butil 4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (413 mg, 0.914 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3 mL, 0.026 mmol, 6.00 ekviv.) u kapima na 0°C. Smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Rastvor je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (362mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Shield RP18 OBD Kolona, 5um,19*1 50mm; Mobilna faza A: voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 30% B do 80% B za 25 min; 220 nm; Rt: 21.65 min) da da (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperidin-3-amin (250 mg, 77.77%) kao crveno ulje.
5-(4-[[(3R,4R)-1-Benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0227] U bocu od 25 ml sa ravnim dnom dodati su (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperidin-3-amin (263 mg, 0.748 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (186.38 mg, 0.748 mmol, 1.00 ekviv.) na sobnoj temperaturi. U smešu je dodat DIEA (193.41 mg, 1.261 mmol, 2 ekviv.) na st. Smeša je mešana tokom 2 sata na 100°C. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 95% B gradijent za 30 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 85% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (245mg,58.04%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
5-(4-[[(3R,4R)-1-Benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-hloro-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0228] U mešani rastvor 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-hloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (88 mg, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3 mL, 0.026 mmol, 6.00 ekviv.) u kapima na 0°C. Smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM TFA); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% -5% B, 10 min, 33% B - 95% B gradijent za 30 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 90% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-hloro-2,3-dihidropiridazin-3-on (33.5 mg, 44.74%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
[0229] Jedinjenje 133a je pripremljeno postupcima i shemom opisanim u ovom primeru korišćenjem (3S,4S)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin-3-amina umesto (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin-3-amina.
Primer 17. Sinteza jedinjenja 136
[0230]
Terc-Butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0231] Smeša 4-fluoro-2-(trifluorometil)anilina (6.64 g, 37.074 mmol, 2 ekviv), terc-butil 4-hloro-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (5 g, 18.537 mmol, 1 ekviv), Pd(AcO)2 (0.83 g, 3.707 mmol, 0.2 ekviv), ksantfosa (4.29 g, 7.415 mmol, 0.4 ekviv.) i Cs2CO3 (12.08 g, 37.074 mmol, 2 ekviv.) u1,4-dioksanu (80 mL) je mešana na 110°C tokom 16 sata. Smeša reakcijeje filtrirana i filtrat je koncentrovan da da sirov proizvod koji je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE:EA (20:1 to 1:2) da da terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (5.6 g, 73.26%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-metoksi-2-oksoetil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0232] U mešanu smešu terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (3 g, 7.275 mmol, 1 ekviv.) i metil 2-bromoacetata (2.23 g, 14.578 mmol, 2.00 ekviv.) u DMF (30 mL) dodat je Cs2CO3(4.74 g, 14.548 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 400 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (2x 200 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM TFA); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 55% B - 85% B gradijent za 30 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 79% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-metoksi-2-oksoetil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (500 mg, 14.19%) kao žutu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0233] U mešani rastvor terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-metoksi-2-oxoetil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.032 mmol, 1 ekviv.) u THF (50 mL) dodat je LiAlH4(78.34 mg, 2.064 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na -30°C pod atmosferom azota. Smeša reakcije je mešana tokom 16 sati na rt. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Reakcija je kvenčovana dodavanjem vode (1 mL) na -30°C. Istaložene čvrste supstance su sakupljene filtracijom i oprane sa MeOH (3x30 mL). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC
[0234] (PE/EA = 1/1) da da terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (100 mg, 21.23%) kao žuto ulje.
4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0235] U mešani rastvor terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-SΣi,6Σi,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (150 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 58% B gradijent za15 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 53% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (100 mg) kao žuto ulje.
4-Hloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0236] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 2-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]([5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il])amino]etan-1-ol (40 mg, 0.112 mmol, 1 ekviv), 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (55.92 mg, 0.224 mmol, 2.00 ekviv.) i DIEA (43.53 mg, 0.337 mmol, 3.00 ekviv.) na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 90°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% B gradijent za 15 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 55% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-hloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (50 mg, 78.28%) kao žuto ulje.
4-Hloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0237] U mešani rastvor 4-hloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (50 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL) u kapima na st. Smeša reakcijeje mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A:nedefinisana, Mobilna faza B: nedefinisana; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 30% B do 45% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.6 min) da da 4-hloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroksietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (6.2 mg) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 18. Sinteza jedinjenja 132
[0238]
Terc-Butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0239] U mešani rastvor t-BuONa (226.97 mg, 2.362 mmol, 2.00 ekviv.) u DMSO (20 mL) dodat je Me3SiI (472.57 mg, 2.362 mmol, 2.00 ekviv.) u delovima na 40°C pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 0.5 sata na 40°C pod atmosferom azota. Zatim tercbutil 4-[1 -[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (500 mg, 1.181 mmol, 1 ekviv.) u DMSO (5 mL) je u kapima na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na st pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (2x 100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 55% B - 80% B gradijent za 25 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 73% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (240 mg, 46.46%) kao žuto ulje.
4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0240] U mešani rastvor terc-butil 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (240 mg, 0.549 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) dodat je TFA (1 mL, 13.463 mmol, 24.54 ekviv.) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM AcOH); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 33% B - 45% B gradijent za 20 min; Detektor: 254 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 40% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (150 mg, 81.05%) kao žuto ulje.
4-Hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0241] U bocu od 50 ml sa ravnim dnom dodati su 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin (150 mg, 0.445 mmol, 1 ekviv), 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridazin-3-on (134.00 mg, 0.534 mmol, 1.20 ekviv.) i DIEA (172.42 mg, 1.334 mmol, 3.00 ekviv.) na st pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 90°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do st. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20 - 40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% B gradijent za 15 min; Detektor: 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 54% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 81.78%) kao žuto ulje.
4-Hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0242] U mešani rastvor 4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg) u DCM (10 mL) dodat je TFA (2 mL) u kapima na st. Smeša reakcije je mešana tokom 2 sata na st. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH=8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza A:nedefinisana, Mobilna faza B: nedefinisana; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 30% B to 55% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.232 min) da da 4-hloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciklopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (39.2 mg) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
Primer 19. Sinteza jedinjenja 109
[0243]
Terc-Butil 4-(2-bromo-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0244] U mešani rastvor terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.854 mmol, 1 ekviv.) i 2-bromo-3-fluorofenola (424.87 mg, 2.224 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF (10 mL) dodat je K2CO3(512.38 mg, 3.707 mmol, 2 ekviv).Dobijena smeša je mešana tokom 0.5 sata na 70°C. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakcija je kvenčovana vodom na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (5:1) da da terc-butil 4-(2-bromo-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (500 mg, 63.58%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-Butil 4-(2-etenil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0245] U rastvor terc-butil 4-(2-bromo-3-fluorofenoksi)-SH,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidino-7-karboksilata (500 mg, 1.178 mmol, 1 ekviv.) i pentametil-1,3,2-dioksaborolana (334.72 mg, 2.357 mmol, 2.00 ekviv.) u H2O (2 mL) i 1,4-dioksana (16 mL) dodati su K2CO3(325.75 mg, 2.357 mmol, 2 ekviv.) i Pd(PPh3)4(68.09 mg, 0.059 mmol, 0.05 ekviv). Nakon mešanja tokom tokom noći na 90°C pod atmosferom azota, dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (5:1) da da terc-butil 4-(2-ethenyl-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (250 mg, 57.12%) kao žuto ulje.
Terc-Butil 4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H58H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0246] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-ethenyl-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (250 mg, 0.673 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (10 mL) dodat je Pd/C (100 mg, 0.940 mmol, 1.40 ekviv).Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na ST pod atmosferom azota. Dobijena smeša je filtrirana, filter pogača je oprana sa MeOH (2x10 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo terc-butil 4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilatom (210 mg, 0.08%) kao crnim uljem.
4-(2-Etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin
[0247] U mešani rastvor terc-butil 4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (210 mg, 0.562 mmol, 1 ekviv.) u DCM (3 mL) dodat je TFA (1 mL). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi pod atmosferom vazduha. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 8 sa zasićenim NH4HCO3(vod.).Smeša je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20-40 um,180g ; Mobilna faza A: voda (5mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 25% B do 60% B za 40 min; 254 nm). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 40% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ovo je rezultovalo 4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidinom (120 mg, 78.07%) kao svetlo žutim uljem.
4-Hloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0248] U mešani rastvor 4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (120 mg, 0.439 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (109.37 mg, 0.439 mmol, 1.00 ekviv.) u DIEA (113.49 mg, 0.878 mmol, 2 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 100°C pod atmosferom vazduha. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) da da 4-hloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (100 mg, 46.87%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
4-Hloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0249] U mešani rastvor 4-hloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H, 7H, 8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (100 mg, 0.206 mmol, 1 ekviv.) u DCM (3 mL) dodat je TFA (1 mL). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 7 sa zasićenim NH4HCO3(vod.). Sirov proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30×150mm 5um; Mobilna faza voda (10mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 30% B do 50% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.27 min) da da 4-hloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoksi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-dihidropiridazin-3-on (41.6 mg, 50.31%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 20. Sinteza jedinjenja 127
[0250]
Metil 3-(metilamino)piridin-4-karboksilat
[0251] U mešani rastvor 3-(metilamino)piridin-4-karboksilne kiseline (11 g, 72.296 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (500 mL, 12349.455 mmol, 170.82 ekviv.) dodat je SOCl2(43.01 g, 361.478 mmol, 5 ekviv.) u kapima na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 30 sati na 70°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (50 mL). Smeša je načinjena baznom do pH 8 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1x30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da metil 3-(metilamino)piridine-4-karboksilat (9 g, crude) kao žutu čvrstu supstancu.
Metil 3-(N-metilacetamido)piridin-4-karboksilat
[0252] U mešani rastvor metil 3-(metilamino)piridin-4-karboksilata (9 g, 54.158 mmol, 1 ekviv.) u DCM (100 mL) dodati su piridin (21.42 g, 270.791 mmol, 5 ekviv.) i acetil hlorid (6.38 g, 81.237 mmol, 1.5 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Rastvor je načinjen baznim na pH 8 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: C18 Kolona 330 g; Mobilna faza Voda (10 mM NH4HCO3), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 10% B do 30% B za 25 min; 254/220 nm) da da metil 3-(N-metilacetamido)piridin-4-karboksilat (8 g, 70.94%) kao braon tečnost.
4-Hidroksi-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0253] U mešani rastvor metil 3-(N-metilacetamido)piridin-4-karboksilata (6 g, 28.816 mmol, 1 ekviv.) u suvom 1,4-dioksanu (100 mL) dodat je t-BuOK (6.47 g, 57.632 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na 90°C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa DCM/MeOH (10:1) da da 4-hidroksi-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on (4.5 g, 88.64%) kao narandžastu čvrstu supstancu.
4-Hloro-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0254] U mešani rastvor 4-hidroksi-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-ona (4.5 g, 25.543 mmol, 1 ekviv.) u suvom 1,4-dioksanu (100 mL) dodat je POCl3(3.92 g, 25.543 mmol, 1 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 16 sati na 90°C. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa DCM/MeOH (10:1) da da 4-hloro-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on (2 g, 40.23%) kao crvenu čvrstu supstancu.
4-[[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0255] U mešani rastvor 4-hloro-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-ona (0.8 g, 4.111 mmol, 1 ekviv.) u suvom 1,4-dioksanu (15 mL) dodati su Cs2CO3 (2.68 g, 8.221 mmol, 2 ekviv), 4-fluoro-2-(trifluorometil)anilin (1.47 g, 8.221 mmol, 2.00 ekviv), ksantfos (0.95 g, 1.644 mmol, 0.4 ekviv.) i Pd(AcO)2(0.18 g, 0.822 mmol, 0.2 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Smeša konačne reakcije je ozračena mikrotalasnim zračenjem tokom 4 sata na 110°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (1x100 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: C18 Kolona 330 g; Mobilna faza voda (10 mM AcOH), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 50 mL/min; Gradijent: 20% B do 40% B za 40 min; 254/220 nm) da da 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on (1.1 g, 79.34%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
4-[[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0256] U mešani rastvor 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2-dihidro-1,7-nafthiridin-2-on (1 g, 2.965 mmol, 1 ekviv.) u THF (20 mL) dodat je PtO2(67.33 mg, 0.296 mmol, 0.10 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 16 sata na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je filtrirana, filter pogača je oprana sa EtOAc (3x20 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: C18 Kolona 330 g; Mobilna faza voda (10 mM AcOH), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80mL/min; Gradijent: 5% B do 20% B za 40 min; 254/220 nm) Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 16% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on (750 mg, 74.11%) kao prljavo belu čvrstu supstancu.
7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0257] U mešanu smešu 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexahidro-1,7-nafthiridin-2-ona (750 mg, 2.197 mmol, 1 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1.09 g, 4.395 mmol, 2 ekviv.) dodat je DIPEA (568.00 mg, 4.395 mmol, 2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na 100°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Ostatak je rastvoren u DMF (10 mL). Rastvor je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: C18 kolona 330 g; Mobilna faza voda (10 mM FA), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 30% B do 50% B za 40 min; 254/220 nm). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 44% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju 7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on (1 g, 82.15%) kao žuto ulje.
7-[5-Hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0258] U mešani rastvor 7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-ona (800 mg, 1.444 mmol, 1 ekviv.) u DMF (20 mL) dodati su Cs2CO3(0.94 g, 2.888 mmol, 2 ekviv.) i MeI (614.96 mg, 4.333 mmol, 3 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 16 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je prečišćena pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: C18 kolona 120 g; Mobilna faza voda (10 mM AcOH), Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 40% B do 60% B za 40 min; 254/220 nm). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene pri 49% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da 7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexahidro-1,7-nafthiridin-2-on (80 mg, 9.75%) kao žuto ulje.
7-(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heaahidro-1,7-nafthiridin-2-on
[0259] U mešani rastvor 7-[5-hloro-1-(oksan-2-il)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-ona (80 mg, 0.141 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4.5 mL) dodat je TFA (0.5 mL, 6.732 mmol, 31.07 ekviv.) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je načinjen baznim na pH 8 sa zasićenim NaHCO3 (vod.). Rastvor je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom da da 7-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-heksahidro-1,7-nafthiridin-2-on (40mg,58.69%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 21. Sinteza jedinjenja 135 i 137
[0260]
Terc-butil 2-hloro-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-karboksilat.
[0261] U rastvor terc-butil 2,4-dihloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (5 g, 16.44 mmol) u DMF (50 mL) dodat je 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (4.44 g, 24.66 mmol) i dodat je K2CO3(3.41 g, 24.66 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na 70°C. Nakon hlađenja na sobnoj temperaturi urađeno je filtriranje i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona: sferna C18, 20-40 um, 330 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3; Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 80 mL/min; Gradijent: 5% za 10 min, 35%B do 45%B za 10 min; Detektor: 254 nm/220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene na 44% B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da da tercbutil 2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (6.2 g, 85%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-butil 4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-2-vinyl-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-karboksilat.
[0262] U rastvor terc-butil 2-hloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.12 mmol) u dioksanu (10 mL) dodati su 2-etenil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (344 mg, 2.23 mmol) i H2O (0.5 mL, 27.75 mmol) K2CO3(309 mg, 2.23 mmol) i Pd(PPh3)4(129 mg, 0.11 mmol). Nakon mešanja tokom 2 sata na 95°C pod atmosferom azota, dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC, eluiran sa 17% etil acetatom u petrol etru da da terc-butil 2-etenil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (490 mg, 99%) kao svetlo žutu čvrstu supstancu.
Terc-butil 2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat.
[0263] U rastvor terc-butil 2-etenil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (400 mg, 0.91 mmol) u DCM (20 mL) dodati su 4-hidroksi-4-metilmorfolin-4-ium (323 mg, 2.73 mmol) i K2OSO4.2H2O (34 mg, 0.091 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom dodatnog 1 sata, dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20~40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3; Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% B za 10 min, 45%B to 65%B za 15 min; Detektor: 254 nm i 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene na 64% B i koncentrovan pod sniženim pritiskom da da terc-butil 2-(1,2-dihidroksietil)-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (280 mg, 65%) kao belu čvrstu supstancu.
1-(4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)etan-1,2-diol.
[0264] U mešani rastvor terc-butil 2-(1,2-dihidroksietil)-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (280 mg, 0.59 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u DCM (50 mL) i opran sa zasićenim vodenim NaHCO3(20 mL). Organski sloj je odvojen i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC sa 8% metanolom u dihlorometanu da da 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]etan-1,2-diol (180 mg, 82%) kao smeđa čvrsta supstanca.
4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)piridazin-3(2H)-on.
[0265] U mešani rastvor 2-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloksi]benzaldehid (180 mg, 0.71 mmol) u DIEA (0.5 mL) dodat je 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (176 mg, 0.71 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na 90°C. Nakon hlađenja na temperaturi okoline, dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC, eluiran sa 8% metanolom u dihlorometanu da da 4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)piridazin-3(2H)-on (140 mg, 43%) kao smeđa čvrsta supstanca.
(S)-4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-on i (R)-4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-on
[0266] U rastvor 4-hloro-5-[2-(1,2-dihidroksietil)-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (150 mg, 0.27 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: sferna C18, 20-40 um, 120 g; Mobilna faza A: voda (plus 5 mM NH4HCO3); Mobilna faza B: acetonitril; Protok: 45 mL/min; Gradijent: 5% B za 10 min, 45%B do 65%B za 15 min; Detektor: 254nm i 220 nm. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene na 64%B i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju racemski proizvod (130 mg) koji je razdvojen Prep-hiralnom-HPLC sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge Prep OBD C18 Kolona 30 × 150 mm, 5 um; Mobilna faza A: heksan, Mobilna faza B: EtOH; Protok: 20 mL/min; Gradijent: 35% B za10 min; Detektor: 254/220 nm). Iako su dva izomera razdvojena ovom tehnikom, apsolutna orjentacija nije određena. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju proizvod: jedinjenje označeno kao (S)-4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-on: retenciono vreme (4.97 min) (49.5 mg, 39%) kao bela čvrsta supstanca i jedinjenje označeno kao (R)-4-hloro-5-(2-(1,2-dihidroksietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-on: retenciono vreme (8.05 min) (45.7 mg, 36%) kao bela čvrsta supstanca
Primer 22. Sinteza jedinjenja 131
[0267]
Terc-butil 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0268] U mešanu smešu terc-butil 4-hloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (500 mg, 1.854 mmol, 1 ekviv.) i 4-(trifluorometil)piridin-3-amina (601.03 mg, 3.707 mmol, 2.0 ekviv.) u 1,4-dioksanu (5 mL) dodati su Pd(AcO)2(83.24 mg, 0.371 mmol, 0.2 ekviv.) i Cs2CO3(1207.95 mg, 3.707 mmol, 2.0 ekviv.) i ksantfos (429.04 mg, 0.741 mmol, 0.4 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na 110 stepeni C pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je filtrirana, filter pogača je oprana sa DCM (3 × 2 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona:C18,120 g; Mobilna faza voda/0.05% NH4HCO3, Mobilna faza B:ACN; Protok:45 mL/min ;Gradijent: 45%B do 65%B za 15 min; Detektor, 254nm i 220 nm, željeni proizvodi su sakupljeni na 64%B) da daju terc-butil 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (600mg,81.86%) kao belu čvrstu supstancu.
Terc-butil 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat
[0269] U mešanu smešu terc-butil 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (1.32 g, 3.339 mmol, 1 ekviv.) i Cs2CO3(2.18 g, 6.677 mmol, 2.0 ekviv.) u DMF (10 mL) dodat je CH3I (0.95 g, 6.677 mmol, 2.0 ekviv.) na 0°C pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Sirov proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije sa reverznom fazom sa sledećim uslovima (Kolona:C18,120 g; Mobilna faza voda/0.05% NH4HCO3, Mobilna faza B:ACN; Protok:45 mL/min; Gradijent: 45%B do 65%B za 15 min; Detektor, 254nm i 220 nm, željeni proizvodi su sakupljeni na 64%B) da daju terc-butil 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (400 mg, 29.26%) kao smeđa čvrsta supstanca.
N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorometil)piridin-3-amin
[0270] U mešani rastvor terc-butil 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H, 7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (220 mg, 0.537 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (DCM/MeOH 12:1) da da N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorometil)piridin-3-amin (130 mg, 78.22%) kao smeđu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0271] U mešani rastvor N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorometil)piridin-3-amina (130 mg, 0.420 mmol, 1 ekviv.) u DIEA (0.5 mg) dodat je 4,5-dihloro-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (104.69 mg, 0.420 mmol, 1.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na 90°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (DCM/MeOH 12:1) da da 4-hloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (100 mg, 45.58%) kao smeđu čvrstu supstancu.
4-hloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0272] U mešani rastvor 4-hloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oksan-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (100 mg, 0.192 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je načinjena baznom na pH 8 sa zasićenim NaHCO3(vod.). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod (100 mg) je prečišćen pomoću Prep-HPLC sa sledećim uslovima (Kolona: XBridge Prep Fenil OBD Kolona 19×150mm Sum 13nm; Mobilna faza A: voda, 5mM NH4HCO3, Mobilna faza B:Acetonitril; Protok: 60 mL/min; Gradijent: 35% B do 55% B za 8 min; 220 nm; Rt: 7.13 min) da da 4-hloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on (52 mg, 61.99%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 23. Sinteza intermedijera
A. 2-(Difluorometil)-4-fluorofenil acetat
[0273]
4-Fluoro-2-formilfenil acetat
[0274] U rastvor 5-fluoro-2-hidroksibenzaldehida (10 g, 71.371 mmol, 1 ekviv.) u piridinu (100 mL, 1242.353 mmol, 17.41 ekviv.) dodat je acetil acetat (14.57 g, 0.143 mmol, 2 ekviv.) na 25°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 30 min. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (100/1 to 20/1) da da 4-fluoro-2-formilfenil acetat (12 g, 92.31%) kao svetlo žuto ulje.
2-(Difluorometil)-4-fluorofenil acetat
[0275] U rastvor 4-fluoro-2-formilfenil acetata (12 g, 65.880 mmol, 1 ekviv.) u DCM (200 mL, 3146.009 mmol, 47.75 ekviv.) dodat je DAST (21.24 g, 131.760 mmol, 2 ekviv.) na 0°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 4 sata. Dobijeni rastvor je kvenčovan vodom (100 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (100 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaCl vod. (100 mL × 2) osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (10/1 to 5/1) da da 2-(difluorometil)-4-fluorofenil acetat (10 g, 74.35%) kao svetlo žuto ulje.
B. 2-(Difluorometil)-4-fluorofenol
[0276]
1-Bromo-2-(difluorometil)-4-fluorobenzen
[0277] U mešani rastvor 2-bromo-5-fluorobenzaldehida (10 g, 49.26 mmol, 1 ekviv.) u DCM (60 mL) dodat je DAST (15.9 g, 98.52 mmol, 2 ekviv). Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata na -10°C. Reakcija je kvenčovana vodom na -10°C. Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (4 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani koncentrovanim rastvorom soli (2x 40 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografiji na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EtOAc (6:1) da da 1-bromo-2-(difluorometil)-4-fluorobenzen (8 g, 72.18%) kao svetlo žuto ulje.
2-[2-(Difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan
[0278] U rastvor 1-bromo-2-(difluorometil)-4-fluorobenzena (31 g, 137.773 mmol, 1 ekviv.) i BPD (52.48 g, 206.664 mmol, 1.50 ekviv.) u 1,4-dioksanu (300 mL, 3541.225 mmol, 25.70 ekviv.) dodati su AcOK (27.04 g, 275.546 mmol, 2 ekviv.) i Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2(5.63 g, 6.889 mmol, 0.05 ekviv.) na 25°C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 90°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni sa silika gelom, eluiran sa PE/EA (10/1) da da 2-[2-(difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanom (30 g, 80.03%) kao svetlo žuto ulje. Reakcija je praćena sa TLC. Sirova supstanca je korišćena u sledećem koraku direktno.
2-(Difluorometil)-4-fluorofenol
[0279] U rastvor 2-[2-(difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (50 g, 183.776 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (300 mL, 7409.673 mmol, 40.32 ekviv.) i H2O (100 mL, 5550.837 mmol, 30.20 ekviv.) dodat je H2O2(30%) (50 mL, 2146.131 mmol, 11.68 ekviv.) u kapima na 0°C. Rastvor je mešan na 25°C tokom 3 sata. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa EA (500 mL), Organski slojevi su oprani sa 3 × 200 mL zasićenog NaCl (vod.). Kombinovani organski slojevi su osušeni sa anhidrovanim Na2SO4, koncentrovani pod sniženim pritiskom da daju 2-(difluorometil)-4-fluorofenol (25 g, 83.91 %) kao svetlo žuto ulje.
Primer 24. Analiza aktivnosti TRPC4
[0280] ICLN-1694 ćelije (HEK-TREx hTRPC4) koje eksprimiraju TRPC4 su stvorene kao što sledi u nastavku. Komercijalno dostupne HekTrex-293 ćelije su zasejane pri 0.7×10<6>ćelija/bunariću u ploči sa 1×6-bunarića 24 h pre transfekcije korišćenjem 2 ml medijuma za rast ćelija koji ne sadrži antibiotike (1x DMEM/visoko glukozni (Hyclone #SH30022.02); 10% fetalni goveđi serum (Sigma) 2mM natrijum piruvat, 10 mM HEPES). Kodirajuća sekvenca TRPC4 optimizovana za ljudski kodon je klonirana u pcDNA5/TO (Invitrogen; kat br. V103320) korišćenjem higromicina kao gena rezistencije i plazmida (SEQ ID NO:1) propagiranog korišćenjem T-Rex-293 ćelija (Invitrogen; kat. br. R71007) prema uputstvima proizvođača. 2. dana, 2 µg plazmida DNA plus 6 µl Xtreme-GENE HP reagensa u Optimem-u (200 µl ukupna zapremina) je pripremljeno i inkubirano tokom 15 min na sobnoj temperaturi. Ovaj rastvor plazmida je zatim pažljivo prenet u kapima na svaki bunarić i ploča je pažljivo mešana da se kompleks pomeša sa medijumom tokom približno 30 sekundi. Transfektovane ćelije su inkubirane na 37 °C u inkubatoru sa 10% CO2tokom 24 h. Transfektovane ćelije su prikupljene i prenete u 2 × 150mm posude koje sadrže medijum za rast ćelija bez antibiotika na 37 °C
[0281] Sledećeg dana je započeta selekcija da bi se stvorio stabilan „pool“ dodavanjem medijuma za rast ćelija koji sadrži 150 µg/ml higromicina i 5 µg/ml ćelijama blasticidina i ćelije su ostavljene da rastu. Medijum sa agensom za selekciju je menjan svakih 1-2 dana po potrebi da bi se uklonile mrtve ćelije. Posle 7 dana, koncentracija higromicina je smanjena na 75 µg/ml i rast ćelija je nastavljen.
[0282] Pojedinačni klonovi su odabrani na sledeći način. Stabilni „pool“ je razblažen do 10 ćelija/ml i zasejan (100 µl/bunarić) u ploče sa 24 × 96 bunarića (~1 ćelija/bunarić) i ostavljen da raste tokom 7 dana u medijumu za rast ćelija. Sveži medijum (100 µl) je dodat i ćelije su ostavljene da rastu tokom još 1-2 nedelje i zatim su čuvane zamrznute ili korišćene odmah.
[0283] Jedinjenja su napravljena do, ili isporučena kao, 10 mM matični rastvor generalno koristeći DMSO kao vehikulum. Krive odgovora na dozu u 10 tačaka su generisane korišćenjem akustičnog dispenzera Echo-550. Izvorne ploče sa jedinjenjima su napravljene serijskim razblaživanjem matičnih rastvora jedinjenja da bi se stvorili 10mM, 1mM, i 0.1mM rastvori u DMSO u Echo-sertifikovanim LDV pločama. Echo je zatim serijski dodao u kapima 100% DMSO matične rastvore u izvorne za odgovor na dozu da bi stvorio 4-ostruku shemu razblaživanja. 100% DMSO je dodat u ploče u koje se dodaju kapi za odgovor na dozu da bi se konačna zapremina dovela do 5µl.300n1 od matične ploče za odgovor na dozu je zatim dodato u kapima u test ploče za pre-inkubaciju i stimulaciju. 50µl pre-inkubacionog pufera i 100µl pufera za stimulaciju je zatim dodato u ploče, što je rezultiralo konačnim opsegom koncentracije testa od 30µM do 0.0001 µM sa konačnom koncentracijom DMSO od 0.3%.
[0284] ICLN-1694 ćelije (HEK-TREx hTRPC4) su zasejane u crne mikroploče obložene sa pdl sa 384 bunarića, i održavane u medijumu za rast ćelija obogaćenom sa 1 µg/mL tetraciklina dan pre upotrebe za eksperimenate. Ekspresija TRPC4 je uvedena primenom 1 µg/mL tetraciklina u vreme nanošenja na ploče. Medijum je uklonjen sa ploča i 10µl 4gM Fluo-4 AM (pomešanog sa jednakom zapreminom Pluronic F-127) u EBSS (NaCl (142 mM), KCl (5.4 mM), glukoze (10 mM), CaCl2(1.8 mM), MgC12 (0.8 mM), HEPES (10 mM), pH 7.4) je dodato u ćelije. Ćelije su inkubirane na sobnoj temperaturi, zaštićene od svetlosti, tokom 60-90 minuta. Nakon perioda inkubacije, boja je uklonjena i zamenjena sa 10µl EBSS. Ploče sa ćelijama, za pre-inkubacuiju i stimulaciju su stavljene u FLIPR-II i ispitivanje je započeto. FLIPR je merio osnovnu liniju na 10 sekundi i zatim je dodatno 10µl 2X jedinjenja (ili kontrole). Promene u florescenciji su praćene tokom dodatnih 5 minuta. Nakon pre-inkubacije od 5 minuta, 20µl 2X Englerin A (sa 1X jedinjenjem ili kontrolama) je dodato ploču sa ćelijama. Konačna koncentracija za stimulaciju Engerlin A u testu je bila 100nM. Nakon što je Englerin A dodat, promene u florescenciji su praćene tokom dodatnih 5 minuta.
[0285] Modulacija jedinjenja odgovora TRPC4 na kalcijum je određena na sledeći način. Nakon Englerina A, fluorescencija je praćena u periodu od 5 minuta. Maksimalni relativni odgovor fluorescencije (minus kontrolni odgovor od 1 µM internog kontrolnog jedinjenja za koje je poznato da maksimalno blokira odgovor TRPC4 na kalcijum, "REF INHIB" u formuli ispod) je snimljen i izvezen iz FLIPR-a.
[0286] Efekat jedinjenja je izračunat kao % inhibicije korišćenjem sledeće formule:
pri čemu "RFU" je jedinice za relaativnu florescenciju.
[0287] Rezultati ovih testova su prikazani u tabeli 2, u nastavku, pri čemu "A" označava IC50manji od ili jednak 50 nM; "B" IC50veći od 50 nM i manji od ili jednak 500 nM; "C" IC50veći od 500 nM i manji od 1 µM; "D" IC501 µM ili veći; i "NT" označava da jedinjenje nije testirano.
Primer 25. Test aktivnosti TRPC5
[0288] ICLN-1633 ćelije (HEK-TREx hTRPC5) koje eksprimiraju TRPC5 su stvorene kao što sledi u nastavku. Komercijalno dostupne HekTrex-293 ćelije su zasejane pri 0.7×10<6>ćelija/bunariću u ploči sa 1×6-bunarića 24 h pre transfektovanja korišćenjem 2 mL medijuma za rast ćelija koji ne sadrži antibiotike (1x DMEM/visoko glukozni (Hyclone #SH30022.02); 10% fetalni goveđi serum (Sigma) 2mM natrijum piruvat, 10 mM HEPES). Humana kodirajuća sekvenca TRPC4 (NM_012471 sa tihom T478C mutacijom) je klonirana u pcDNA5/TO (Invitrogen; kat. br. V103320) korišćenjem higromicina kao gena rezistencije i plazmida (SEK ID BR (SEQ ID NO):2) propagiranog sa T-Rex-293 ćelijama (Invitrogen; kat br. R71007) prateći uputstva proizvođača. 2. dana, 2 µg DNK plazmida plus 6 µl Xtreme-GENE HP reagensa u Optimem (200 µl ukupna zapremina) je pripremljeno i inkubirano tokom 15 min na sobnoj temperaturi. Ovaj rastvor plazmida je zatim pažljivo nanet u kapima na svaki bunarić i ploča je pažljivo mešana da se kompleks pomeša sa medijumom tokom približno 30 sekundi. Transfektovane ćelije su inkubirane na 37 °C u inkubatoru sa 10% CO2tokom 24 h. Transfektovane ćelije su prikupljene i prenete u 2 × 150mm posude koje sadrže medijum za rast ćelija bez antibiotika na 37 °C
[0289] Sledećeg dana je započeta selekcija da bi se stvorio stabilan „pool“ dodavanjem medijuma za rast ćelija koji sadrži 150 µg/mL higromicina i 5 µg/mL blasticidina i ćelije su ostavljene da rastu. Medijum sa agensom za selekciju je menjan svakih 1-2 dana po potrebi da bi se uklonile mrtve ćelije. Posle 7 dana, koncentracija higromicina je smanjena na 75 µg/mL i rast ćelija je nastavljen.
[0290] Pojedinačni klonovi su odabrani na sledeći način. Stabilni „pool“ je razblažen do 10 ćelija/ml i zasejan (100 µl/bunarić) u ploče sa 24 × 96 bunarića (~1 ćelija/bunarić) i ostavljen da raste tokom 7 dana u medijumu za rast ćelija. Sveži medijum (100 µl) je dodat i ćelije su ostavljene da rastu tokom još 1-2 nedelje i zatim su čuvane zamrznute ili korišćene odmah.
[0291] Jedinjenja su napravljena do, ili isporučena kao, 10 mM matični rastvor generalno koristeći DMSO kao vehikulum. Krive odgovora na dozu u 10 tačaka su generisane korišćenjem akustičnog dispenzera Echo-550. Izvorne ploče sa jedinjenjima su napravljene serijskim razblaživanjem matičnih rastvora jedinjenja da bi se stvorili 10mM, 1mM, i 0.1mM rastvori u DMSO u Echo-sertifikovanim LDV pločama. Echo je zatim serijski dodao u kapima 100% DMSO matične rastvore u izvorne ploče za odgovor na dozu da bi stvorio 4-ostruku shemu razblaživanja. 100% DMSO je dodat u ploče u koje se dodaju kapi za odgovor na dozu da bi se konačna zapremina dovela do 5µl. 300n1 od matične ploče za odgovor na dozu je zatim dodato u kapima u test ploče za pre-inkubaciju i stimulaciju. 50µl pre-inkubacionog pufera i 100µl pufera za stimulaciju je zatim dodato u ploče, što je rezultiralo konačnim opsegom koncentracije testa od 30µM do 0.0001 µM sa konačnom koncentracijom DMSO od 0.3%.
[0292] Humane ICLN-1633 ćelije koje eksprimiraju su zasejane u crne mikroploče obložene sa PDL sa 384 bunarića, i održavane u TRPC5 medijumu za rast ćelija dan pre upotrebe za eksperimenate. Ekspresija TRPC4 je uvedena primenom 1 µg/mL tetraciklina u vreme nanošenja na ploče. Medijum je uklonjen sa ploča i 10µl 4gM Fluo-4 AM (pomešanog sa jednakom zapreminom Pluronic F-127) u EBSS je dodato u ćelije. Ćelije su inkubirane na sobnoj temperaturi, zaštićene od svetlosti, tokom 60-90 minuta. Nakon perioda inkubacije, boja je uklonjena i zamenjena sa 10µl EBSS. Ploče sa ćelijama, za pre-inkubacuiju i stimulaciju su stavljene u FLIPR-II i ispitivanje je započeto. FLIPR meri osnovnu liniju na 10 sekundi i zatim je dodatno 10µl 2X jedinjenja (ili kontrole). Promene u florescenciji su praćene tokom dodatnih 5 minuta. Nakon pre-inkubacije od 5 minuta, 20µl 2X riluzola A (sa 1X jedinjenjem ili kontrolama) je dodato u ploču sa ćelijama. Konačna koncentracija za stimulaciju riluzola u testu je bila 30µM. Nakon što je riluzol dodat, promene u florescenciji su praćene tokom dodatnih 5 minuta.
[0293] Modulacija jedinjenja odgovora TRPC4 na kalcijum je određena na sledeći način. Nakon Englerina A, fluorescencija je praćena u periodu od 5 minuta. Maksimalni relativni odgovor fluorescencije (minus kontrolni odgovor od 1 µM internog kontrolnog jedinjenja za koje je poznato da maksimalno blokira odgovor TRPC4 na kalcijum, "REF INHIB" u formuli ispod) je snimljen i izvezen iz FLIPR-a.
[0294] Efekat jedinjenja je izračunat kao % inhibicije korišćenjem sledeće formule:
pri čemu "RFU" je jedinice za relaativnu florescenciju.
[0295] Rezultati ovih testova su prikazani u tabeli 2, u nastavku, pri čemu "A" označava IC50manji od ili jednak 50 nM; "B" IC50veći od 50 nM i manji od ili jednak 500 nM; "C" IC50veći od 500 nM i manji od 1 µM; "D" IC501 µM ili veći; i "NT" označava da jedinjenje nije testirano.
Tabela 2. TRPC4 i TRPC5 aktivnosti jedinjenja uzetih kao primer
[0296]<1>H NMR i MS podaci za odabrana jedinjenja su dati u tabeli ispod:
Primer 26. Efekat jedinjenja 100 Primer na glomerularnu povredu izazvanu puromicin aminonukleozidom (PAN) kod pacova
Cilj:
[0297] Cilj ove studije je da proceni dozno-zavisne efekte jedinjenja 100 na povredu glomerula bubrega izazvanu PAN-om kao što je indeksirano albuminurijom.
Postupci:
[0298] Osmdeset (80), mužjaka Sprague-Dawley pacova sa težinom od približno 125-150 g i starosti približno 5-6 nedelja su nabavljeni od Charles River. Hranili su se standardnom dijetetskom hranom (Harlan 8640), smešteni u standardnim uslovima, i dozvoljeno mi je da se aklimatiziraju tokom na najmanje 5 dana pre početka studije.
[0299] Na D-2, pacovi su smešteni u grupe za tretman prilagođene težine i smešteni su, pojedinačno, u metaboličke kaveze tokom bilansa studije.
[0300] Sakupljen je 24-časovni osnovni (dan 0) urin, zatim početno uzimanje krvi putem svesne venske punkcije repa. Pacovima je tada administriran vehikulum ili ispitni artikal.
[0301] Dva (2) sata nakon administriranja vehikuluma ili ispitnog agensa na dan 0, pacovi su primili administriranje (5 ml/kg, s.c.) vehikuluma (sterilini rastvor soli) ili puromicin aminonukleozid (PAN; agens za test provokacije; 75mg/kg) rastvoren u vehikulumu.
[0302] Određene su povremene (4, 7. i 10. dan) 24-časovne zapremine urina i dobijeni su uzorci (4 uzorka/životinja/vremenska tačka; 0.5 ml/uzorak). Pored toga, povremeni (4, 7. i 10. dan) uzorci krvi su sakupljeni putem svesne venske punkcije repa 2 sata ± 1 minut posle AM doze.
[0303] Neposredno nakon poslednjeg uzimanja krvi, pacovi su anestezirani izofluranom, tkiva su sakupljena, a životinje žrtvovane. Dobijeni su krajnje vrednosti težine bubrega i indeksi.
[0304] Uzorci urina su odmah zamrznuti u tečnom N2i čuvani na -80°C do analize.
[0305] Uzorci pune krvi prikupljeni na K3EDTA su obrađeni na odgovarajući način tokom proizvodnje plazme tokom PK merenja.
Rezultati:
[0306] Kao što je prikazano na slici 1, tretman sa jedinjenjem 100 na 30 mg/kg jednom (QD) ili dva puta (BID) dnevno je rezultirao smanjenim izlučivanjem albumina u urinu nakon povrede sa PAN-om. Značajna smanjenja su primećena 7 i 10 dana sa BID doziranjem, i 10 dana sa QD doziranjem jedinjenje 100. Mizoribin, pozitivna kontrola jedinjenje, takođe je bio efikasan u smanjenju albuminurije.
Zaključak:
[0307] Jedinjenje 100 je efikasno u smanjenju albuminurije u PAN modelu glomerularne povrede kod pacova.
Primer 27. Jedinjenje 100 je efikasan u AT1R modelu transgenog pacova FSGS-a
[0308] AT1R model transgenih pacova FSGS-a karakteriše ekspresija humanog AT1R specifičnog za podocite. Pokazalo se da mužjaci imaju znatno lošiju patologiju u poređenju sa ženkama. Efikasnost TRPC5 inhibitora u AT1R modelu je demonstrirana sa alatnim („tool“) jedinjenjem. Videti Zhou i sarad., Science (2017), tom.358 (6368), 1332-1336.
[0309] U predmetnoj studiji, patofiziologija kod AT1R transgenih pacova je ubrzana jednostranom nefrektomijom (UniNX) i infuzijom AngII sa minipumpom. Jedinjenje 100 je dozirano oralno jednom dnevno u dozi od 3 mg/kg ili 10 mg/kg, a odnos proteina kreatinina u urinu je određen na -1, 0, 1, 2 i 3 nedelje lečenja. Slika 2 prikazuje odnos proteina kreatinina u urinu tokom studije za pacove tretirane jedinjenjem 100 ili one tretirane vehikulumom. Početak UniNX, AngII,
i početak jedinjenja 100 se desio u naznačenim vremenskim tačkama. Slika 3 prikazuje iste podatke predstavljene kao % osnovne lvrednosti.
[0310] Rezultati prikazuju da je jedinjenje 100 efikasno u AT1R modelu transgenih pacova FSGS-a.
SEQ ID NO (SEK ID BR): 1 Sekvenca TRPC4 plazmida
[0311] DNK sekvenca TRPC4 plazmida korišćenog u primeru 24 je uključena u nastavku. Podvučene nukleinske kiseline predstavljaju one koje kodiraju humani TRPC4.
SEQ ID NO: 2 Sekvenca TRPC5 plazmida
[0312] DNK sekvenca TRPC5 plazmida korišćenog u primeru 25 je uključena ispod. Podvučene nukleinske kiseline predstavljaju one koje kodiraju humani TRPC5.

Claims (16)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje strukturne formule I:
    ili farmaceutski prihvatljiva so istog; pri čemu: "---" je dvostruka veza ili jednostruka veza; X<1>je N ili CH; kada "---" je dvostruka veza, X<2>je N ili CH; kada "---" je jednostruka veza, X<2>je N(CH3), kada X<1>je CH, X<2>je N ili N(CH3); Y je -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciklopropan-1,1-diil, ili -CH(CH3)-; Q je 2-trifluorometil-4-fluorofenil, 2-difluorometil-4-fluorofenil, 2-trifluorometilfenil, 2-metil-4-fluorofenil, 2-hloro-4-fluorofenil, 2-hlorofenil, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-il, 4-trifluorometilpiridin-3-il, 2-trifluorometil-6-fluorofenil, 2-trifluorometil-3-cijanofenil, 2-etil-3-fluorofenil, 2-hloro-3-cijanofenil, 2-trifluorometil-5-fluorofenil, ili 2-difluorometilfenil; R<3>je vodonik, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, -CH(OH)CH3, -OCH3, ili -NH-(CH2)2OH; i kada "---" je dvostruka veza, R<4>je odsutan; i kada "---" je jednostruka veza, R<3>i R<4>su uzeti zajedno da formiraju=O; i svaki od R<5>i R<6>je nezavisno vodonik ili -CH3, pod uslovom da ako X<1>je N, X<2>je N, Y je -O- ili -N(CH3)-, i Q je 2-trifluorometilfenil, tada najmanje jedan od R<3>, R<5>, i R<6>nije vodonik.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, predstavljeno strukturnom formulom II:
    ili farmaceutski prihvatljiva so istog; pri čemu: R<1>je hloro, -CF3, -CHF2, ili -CH3; R<2>je vodonik ili fluoro; i R<3>je vodonik, -NH2, -CH2OH, ili CH(OH)-CH2OH.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, pri čemu kada R<1>je -CHF2, R<2>nije vodonik.
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, odabrano od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljiva so istog:
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, odabrano od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljiva so istog:
  6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, odabrano od bilo kog od sledećih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljiva so istog:
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je jedinjenje 100:
  8. ili farmaceutski prihvatljiva so istog. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
  9. 9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8; i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, za primenu u postupku lečenja, ili smanjenja rizika od razvoja bolesti ili stanja odabranog od bolesti bubrega, plućne arterijske hipertenzije, anksioznosti, depresije, kancera, dijabetesne retinopatije, ili bola.
  11. 11. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje je bolest bubrega odabrana od fokalne segmentne glomeruloskleroze (FSGS), dijabetesne nefropatije, Alportovog sindroma, hipertenzivne bolesti bubrega, nefrotskog sindroma, nefrotskog sindroma otpornog na steroide, bolesti minimalnih promena, membranozne nefropatije, idiopatske membranske nefropatije, membranoproliferativnog glomerulonefritisa (MPGN), MPGN posredovanog imunim kompleksom, MPGN posredovanog komplementom, lupusnog nefritisa, postinfektivnog glomerulonefritisa, bolesti tanke bazalne membrane, mezangijalnog proliferativnog glomerulonefritisa, amiloidoze (primarne), c1q nefropatije, brzo progresivnog GN, anti-GBM bolesti, C3 glomerulonefritisa, hipertenzivne nefroskleroze, ili IgA nefropatije.
  12. 12. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje je anksioznost.
  13. 13. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje je depresija.
  14. 14. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje koje se leči je bol odabran od neuropatskog bola, i visceralnog bola.
  15. 15. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje je kancer odabran od hemorezistentnog karcinoma dojke, kancera dojke otpornog na adriamicin, hemorezistentnog kolorektalnog kancera, meduloblastoma, i tumorske angiogeneze.
  16. 16. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu bolest ili stanje je FSGS povezan sa transplantacijom, nefrotski sindrom povezan sa transplantacijom, proteinurija povezana sa transplantacijom, holestatska bolest jetre, policistične bolesti bubrega, autozomno dominantne policistične bolesti bubrega (ADPKD), gojaznost, insulinska rezistencija, dijabetes tipa II, predijabetes, metabolički sindrom, nealkoholna masna bolest jetre (NAFLD), ili nealkoholni steatohepatitis (NASH).
RS20240594A 2018-09-18 2019-09-18 Piridazinoni i postupci primene istih RS65558B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862732728P 2018-09-18 2018-09-18
US201862780553P 2018-12-17 2018-12-17
PCT/US2019/051680 WO2020061162A1 (en) 2018-09-18 2019-09-18 Pyridazinones and methods of use thereof
EP19863481.8A EP3852533B8 (en) 2018-09-18 2019-09-18 Pyridazinones and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65558B1 true RS65558B1 (sr) 2024-06-28

Family

ID=69887813

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240594A RS65558B1 (sr) 2018-09-18 2019-09-18 Piridazinoni i postupci primene istih

Country Status (35)

Country Link
US (3) US10654850B2 (sr)
EP (2) EP3852533B8 (sr)
JP (2) JP7474243B2 (sr)
KR (2) KR20250171415A (sr)
CN (1) CN112911935A (sr)
AU (2) AU2019344928B2 (sr)
BR (1) BR112021004926A2 (sr)
CA (1) CA3113236A1 (sr)
CL (1) CL2021000648A1 (sr)
CO (1) CO2021004789A2 (sr)
DK (1) DK3852533T3 (sr)
EC (1) ECSP21026485A (sr)
ES (1) ES2982498T3 (sr)
FI (1) FI3852533T3 (sr)
HR (1) HRP20240707T1 (sr)
HU (1) HUE067188T2 (sr)
IL (1) IL281438B2 (sr)
LT (1) LT3852533T (sr)
MA (1) MA71645A (sr)
MD (1) MD3852533T2 (sr)
MX (1) MX2021003152A (sr)
MY (1) MY208106A (sr)
PE (2) PE20250453A1 (sr)
PH (1) PH12021550443A1 (sr)
PL (1) PL3852533T3 (sr)
PT (1) PT3852533T (sr)
PY (1) PY1977703A (sr)
RS (1) RS65558B1 (sr)
SG (1) SG11202102053VA (sr)
SI (1) SI3852533T1 (sr)
SM (1) SMT202400201T1 (sr)
TW (2) TWI894724B (sr)
UA (1) UA128841C2 (sr)
UY (1) UY38377A (sr)
WO (1) WO2020061162A1 (sr)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12435078B2 (en) 2017-09-18 2025-10-07 Gfb (Abc), Llc Pyridazinones and methods of use thereof
CN112911935A (zh) 2018-09-18 2021-06-04 金翅雀生物公司 哒嗪酮及其使用方法
CN113939295B (zh) * 2019-03-20 2025-05-16 金翅雀生物公司 哒嗪酮及其使用方法
WO2020206623A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Goldfinch Bio, Inc. Crystal forms
CA3136632A1 (en) 2019-04-11 2020-10-15 Goldfinch Bio, Inc. Spray-dried formulation of a pyridazinone trpc5 inhibitor
JP2022551580A (ja) * 2019-10-04 2022-12-12 ゴールドフィンチ バイオ，インク． 巣状分節性糸球体硬化症および糖尿病性腎症のバイオマーカーに基づく処置
AR122450A1 (es) * 2020-05-08 2022-09-14 Lilly Co Eli Compuestos de (trifluorometil)pirimidin-2-amina
WO2022006278A1 (en) * 2020-07-01 2022-01-06 Angion Biomedica Corp. Reducing fibrosis and treating related diseases, disorders, and conditions
EP4174069A4 (en) * 2020-07-03 2024-07-10 Wuhan LL Science and Technology Development Co., Ltd. HETEROCYCLIC COMPOUND AND ASSOCIATED USE
US20240317755A1 (en) * 2021-02-07 2024-09-26 Wuhan Ll Science And Technology Development Co., Ltd. Heterocyclic compound, and intermediate thereof, preparation method therefor and use thereof
EP4400500A4 (en) * 2021-09-10 2025-08-13 Medshine Discovery Inc HALOGEN-SUBSTITUTED PYRIDAZINONE COMPOUND AND ITS APPLICATION
WO2025250920A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Gfb (Abc), Llc Pyridazinone phosphate compounds, pharmaceutical compositions, and medical uses thereof

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA77526C2 (en) 2002-06-07 2006-12-15 Sanofi Aventis Substituted derivatives of 1-piperazineacylpiperidine, a method for the preparation thereof and their use in therapy
CA2553969A1 (en) 2004-01-23 2005-08-04 Amgen Inc. Vanilloid receptor ligands and their use in treatments
JP4705922B2 (ja) 2004-01-29 2011-06-22 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション Ｃｇｒｐ受容体拮抗薬
DE102004044231A1 (de) 2004-09-14 2006-03-16 Henkel Kgaa Mittel zum Färben von keratinhaltigen Fasern
BRPI0517418A (pt) 2004-10-13 2008-10-07 Merck & Co Inc composto, composição farmacêutica, e, métodos para antagonismo de atividade do receptor de cgrp em um mamìfero, para tratar, controlar, melhorar ou reduzir o risco de dor de cabeça, enxaqueca ou cefalgia, e de tratamento ou prevenção de dores de cabeça de enxaqueca, cefalgias, e dores de cabeça
UA95644C2 (ru) 2006-07-25 2011-08-25 Сефалон, Инк. Пиридазиноновые производные, фармацевтическая композиция и способ лечения заболеваний
JP2010521463A (ja) 2007-03-15 2010-06-24 シェーリング コーポレイション グルカンシンターゼの阻害剤として有用なピペラジン置換ビリダジノン誘導体
RU2010121763A (ru) * 2007-10-31 2011-12-10 Ниссан Кемикал Индастриз, Лтд. (Jp) Производные пиридазинона и ингибиторы р2х7 рецептора
US8633233B2 (en) * 2008-08-06 2014-01-21 Hydra Biosciences, Inc. Methods and compositions for treating anxiety
BR112013007499A2 (pt) * 2010-09-01 2016-07-12 Genentech Inc piridazinonas - métodos de criação e usos
JP6215315B2 (ja) * 2012-06-12 2017-10-18 アッヴィ・インコーポレイテッド ピリジノンおよびピリダジノン誘導体
JO3470B1 (ar) 2012-10-08 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme مشتقات 5- فينوكسي-3h-بيريميدين-4-أون واستخدامها كمثبطات ناسخ عكسي ل hiv
JP6667093B2 (ja) 2014-08-11 2020-03-18 ハイドラ・バイオサイエンシーズ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＨｙｄｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， ＬＬＣ ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン誘導体
CN109790143A (zh) 2016-05-10 2019-05-21 C4医药公司 用于靶蛋白降解的胺连接的c3-戊二酰亚胺降解决定子体
US12435078B2 (en) 2017-09-18 2025-10-07 Gfb (Abc), Llc Pyridazinones and methods of use thereof
US10703748B2 (en) 2017-10-31 2020-07-07 Samumed, Llc Diazanaphthalen-3-yl carboxamides and preparation and use thereof
CN112911935A (zh) * 2018-09-18 2021-06-04 金翅雀生物公司 哒嗪酮及其使用方法
CN113939295B (zh) * 2019-03-20 2025-05-16 金翅雀生物公司 哒嗪酮及其使用方法
WO2020206623A1 (en) * 2019-04-10 2020-10-15 Goldfinch Bio, Inc. Crystal forms
CA3136632A1 (en) * 2019-04-11 2020-10-15 Goldfinch Bio, Inc. Spray-dried formulation of a pyridazinone trpc5 inhibitor
JP2022551580A (ja) * 2019-10-04 2022-12-12 ゴールドフィンチ バイオ，インク． 巣状分節性糸球体硬化症および糖尿病性腎症のバイオマーカーに基づく処置

Also Published As

Publication number Publication date
KR20250171415A (ko) 2025-12-08
PT3852533T (pt) 2024-05-31
TWI828758B (zh) 2024-01-11
SI3852533T1 (sl) 2024-10-30
LT3852533T (lt) 2024-06-10
SMT202400201T1 (it) 2024-07-09
UY38377A (es) 2020-04-30
EP3852533B1 (en) 2024-02-28
DK3852533T3 (da) 2024-05-27
AU2019344928A1 (en) 2021-04-29
EP3852533B8 (en) 2024-07-17
PE20250453A1 (es) 2025-02-19
US10654850B2 (en) 2020-05-19
AU2025238155A1 (en) 2025-10-23
PL3852533T3 (pl) 2024-09-16
TW202430524A (zh) 2024-08-01
CN112911935A (zh) 2021-06-04
ECSP21026485A (es) 2021-07-30
JP2022500359A (ja) 2022-01-04
CO2021004789A2 (es) 2021-07-30
TW202035402A (zh) 2020-10-01
ES2982498T3 (es) 2024-10-16
JP7474243B2 (ja) 2024-04-24
IL281438A (en) 2021-04-29
CL2021000648A1 (es) 2021-08-06
EP3852533A4 (en) 2022-06-15
EP4414365A1 (en) 2024-08-14
JP2024099595A (ja) 2024-07-25
HRP20240707T1 (hr) 2024-10-11
HUE067188T2 (hu) 2024-10-28
PH12021550443A1 (en) 2021-12-06
TWI894724B (zh) 2025-08-21
US20200283437A1 (en) 2020-09-10
FI3852533T3 (fi) 2024-05-24
BR112021004926A2 (pt) 2021-06-01
PY1977703A (es) 2020-06-19
IL281438B1 (en) 2023-08-01
EP3852533A1 (en) 2021-07-28
AU2019344928B2 (en) 2025-07-03
CA3113236A1 (en) 2020-03-26
MY208106A (en) 2025-04-15
UA128841C2 (uk) 2024-11-06
US20200102301A1 (en) 2020-04-02
SG11202102053VA (en) 2021-04-29
KR102890905B1 (ko) 2025-11-24
MD3852533T2 (ro) 2024-08-31
US11046690B2 (en) 2021-06-29
MX2021003152A (es) 2021-06-23
WO2020061162A1 (en) 2020-03-26
KR20210069652A (ko) 2021-06-11
IL281438B2 (en) 2023-12-01
PE20211774A1 (es) 2021-09-08
US20220024917A1 (en) 2022-01-27
MA71645A (fr) 2025-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS65558B1 (sr) Piridazinoni i postupci primene istih
CN113939295B (zh) 哒嗪酮及其使用方法
JP7809096B2 (ja) イミダゾジアゼピンジオン及びその使用方法
HK40115225A (en) Pyridazinones and methods of use thereof
HK40056020A (en) Pyridazinones and methods of use thereof
HK40056020B (en) Pyridazinones and methods of use thereof
EA048445B1 (ru) Пиридазиноны и способы их применения