RS65620B1

RS65620B1 - Triazolopiridinil jedinjenja kao inhibitori kinaze

Info

Publication number: RS65620B1
Application number: RS20240656A
Authority: RS
Inventors: Guanglin Luo; Jie Chen; Carolyn Diane Dzierba; David B Frennesson; Junqing Guo; Amy C Hart; Xirui Hu; Michael E Mertzman; Matthew Reiser Patton; Jianliang Shi; Steven H Spergel; Brian Lee Venables; Yong-Jin Wu; Zili Xiao; Michael G Yang
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2020-10-19
Filing date: 2021-10-18
Publication date: 2024-07-31
Also published as: EP4229056A1; TW202233614A; WO2022086828A1; AU2021364302A9; PL4229056T3; JP7730897B2; SI4229056T1; AU2021364302A1; EP4229056B1; US20240425505A1; HRP20240739T1; EP4364737A3; US12110290B2; ES2987662T3; PE20240219A1; KR20230092960A; CO2023004926A2; US20240109888A1; JP2023546166A; HUE067776T2

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja koja inhibiraju protein kinaze koje interaguju sa receptorima i postupke za pravljenje i upotrebu istih. Konkretno, predmetni pronalazak se odnosi na triazolopiridinil jedinjenja kao inhibitore protein kinaze 1 (RIPK1) koja interaguje sa receptorima.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Apoptoza i nekroza predstavljaju dva različita mehanizma ćelijske smrti. Apoptoza je visoko regulisan proces koji uključuje kaspaza familiju cisteinskih proteaza, a karakteriše ga ćelijsko skupljanje, kondenzacija hromatina i degradacija DNK. Nasuprot tome, nekroza je povezana sa oticanjem ćelija i organela i rupturom plazma membrane sa posledičnim oslobađanjem unutarćelijskog sadržaja i sekundarnom inflamacijom (Kroemer i sar., (2009) Cell Death Differ 16:3-11). Nekroza se smatra pasivnim, neregulisanim oblikom ćelijske smrti; međutim, nedavni dokazi pokazuju da neke nekroze mogu biti izazvane regulisanim putevima transdukcije signala kao što su oni posredovani protein kinazama (RIPK) koje interaguju sa receptorima, posebno u uslovima gde su kaspaze inhibirane ili ne mogu da se aktiviraju efikasno (Golstein P & Kroemer G (2007) Trends Biochem. Sci.32:37-43; Festjens i sar. (2006) Biochim. Biophys. Acta 1757:1371-1387). Poznato je da stimulacija Fas i TNFR familije receptora domena smrti (DR) posreduje u apoptozi u većini tipova ćelija kroz aktivaciju ekstrinzičnog puta kaspaze. Pored toga, u određenim ćelijama sa nedostatkom kaspaze-8 ili tretiranim pan-kaspaza inhibitorom Z-VAD, stimulacija receptora domena smrti (DR) uzrokuje programiranu nekrotičnu ćelijsku smrt zavisnu od protein kinaze 1 (RIPK1) koja interaguje sa receptorima umesto apoptoze (Holler i sar. (2000) Nat. Immunol. 1:489-495; Degterev i sar. (2008) Nat. Chem. Biol.4:313-321). Ovaj novi mehanizam ćelijske smrti naziva se "programirana nekroza" ili "nekroptoza" (Degterev i sar., (2005) Nat Chem Biol 1:112-119).

[0003] Nekroptoza može biti izazvana brojnim mehanizmima uključujući aktivaciju TNF receptora, angažovanje toličnih receptora, genotoksični stres i virusnu infekciju. Nizvodno od različitih stimulusa, signalni put koji dovodi do nekroptoze zavisi od aktivnosti RIPK1 i RIPK3 kinaze. (He i sar., (2009) Cell 137:1100-1111; Cho i sar., (2009) Cell 137:1112-1123; Zhang i sar., (2009) Science 325:332-336).

[0004] Disregulacija signalnog puta nekroptoze je u vezi sa inflamatornim oboljenjima kao što su nekroza makrofaga u razvoju ateroskleroze, virusom izazvana inflamacija, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora i ozleda jetre izazvana etanolom, neurodegeneracija kao što je odvajanje mrežnjače, ishemija, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), Gošeova bolest i AAV (vaskulitis koji je u vezi sa ANCA) (Trichonas i sar., (2010) Proc. Natl. Acad. Sci.107, 21695-21700; Lin i sar., (2013) Cell Rep. 3, 200-210; Cho i sar., (2009) Cell, 137, 1112-1123; Duprez i sar., (2011) Immunity 35, 908-918; Roychowdhury i sar., Hepatology 57, 1773-1783; Vandenabeele i sar., (2010) Nature 10, 700-714; Vandenabeele i sar., (2010) Sci. Signalling 3, 1-8; Zhang i sar., (2010) Cellular & Mol. Immunology 7, 243-249; Moriwaki i sar., (2013) Genes Dev.27, 1640-1649; Ito i sar., (2016) Science 353, 603-608; Vitner i sar., (2014) Nature Med. 20, 204-208) (Schreiber i sar., (2017) Proc. Natl. Acad. Sci. 114, E9618-E9625). WO2018/148626 A1 i WO2019/089442 A1 stavljaju na uvid javnosti heterobiciklična jedinjenja koja su inhibitori kazein kinaze RIPK1 i koja su korisna za tretman različitih inflamatornih bolesti kao što su i.a. inflamatorna bolest creva, ulcerozni kolitis ili Kronova bolest.

[0005] Snažan, selektivan, sitnomolekulski inhibitor aktivnosti RIPK 1 bi blokirao RIPK1 zavisnu proinflamatornu signalizaciju i time obezbedio terapijsku korist kod inflamatornih bolesti koje karakteriše povećana i/ili disregulisana aktivnost RIPK1 kinaze.

SUŠTINA PRONALASKA

[0006] Sve reference na postupke lečenja ili primenu jedinjenja kao lekova ili za lečenje u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente predmetnog pronalaska za primenu u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom.

[0007] Predmetni pronalazak obezbeđuje nova triazolopiridinil jedinjenja uključujući njihove stereoizomere, tautomere, izotope, farmaceutski prihvatljive soli, soli ili solvate istog, koja su korisna kao inhibitori RIPK1. Takođe su stavljena na uvid javnosti, ali nisu deo pronalaska, jedinjenja koja su korisna kao prolekovi inhibitora RIPK1.

[0008] Dalje su stavljeni na uvid javnosti procesi i intermedijeri za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0009] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili stereoizomere, tautomere, izotope, farmaceutski prihvatljive soli, soli ili solvate istog.

[0010] Jedinjenja pronalaska mogu da se koriste u lečenju i/ili profilaksi stanja koja su u vezi sa aberantnom aktivnošću RIPK1.

[0011] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska se mogu koristiti u terapiji.

[0012] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se koriste za proizvodnju medikamenta za lečenje i/ili profilaksu stanja koje je u vezi sa aberantnom aktivnošću RIPK1.

[0013] U drugom aspektu, predmezni pronalazak je usmeren na postupak lečenja bolesti posredovanih barem delimično RIPK1 uključujući inflamatorne bolesti, ishemiju, neurodegeneraciju i Gošeovu bolest, koji postupak sadrži administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje, jedinjenja predmetnog pronalaska kao što je gore opisano.

[0014] Jedinjenja pronalaska se mogu koristiti sama, u kombinaciji sa drugim jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, ili u kombinaciji sa jednim ili više, poželjno jednim do dva druga sredstva.

[0015] Ove i druge karakteristike pronalaska će biti prikazane u proširenom obliku kako se stavljanje na uvid nastavlja.

DETALJAN OPIS TEHNIČKIH REŠENJA PRONALASKA

[0016] Pronalazak je definisan priloženim patentnim zahtevima. Opis se odnosi na dalji predmet koji nije deo pronalaska već samo za referencu, kao što su jedinjenja formula (I), (II), (Ia)-(Id) i (Ii)-(Ir), farmaceutske kompozicije koje sadrže iste i njihove primene.

[0017] Stavljena su na uvid javnosti, ali nisu deo pronalaska, inter alia, jedinjenja Formule (I) ili njihovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

pri čemu

R<1>je H, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C1-3haloalkil, C1-3haloalkoksi, C1-3deuteroalkil, C1-

3deuteroalkoksi, halo, ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo, ili C1-3alkil ili C1-3deuteroalkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-3alkil ili C1-3haloalkil; alternativno, R<5a>i R<5b>se spajaju da formiraju ciklopropil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F, C1-3alkil, ili C(O)-4-fluorofenil; alternativno, R<6a>i R<6b>su =O, ili se spajaju da formiraju ciklopropil ili oksetanil; svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, OP(O)(OR)2, OC(O)NH2, NH2, F, C1-

3alkil, C1-3alkoksi, OCD3, ili C1-3haloalkil;

alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da formiraju ciklopropil ili oksetanil;

R je H ili C1-3alkil;

R<8>je H, F, Cl, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C1-3deuteroalkil, ili C1-3deuteroalkoksi;

R<9>je H ili CH3;

prsten Z je fenil, šestočlani heteroaril prsten koji ima 1-2 atoma azota, cikloheksil, ciklopentil, ili ciklobutil;

Y je F, Cl, C1-3alkil, C1-3alkoksi, CN, C1-3haloalkil, C1-3haloalkoksi, C1-3deuteroalkil, C1-3deuteroalkoksi, C(O)OCH3, ili C=CH;

n je 0, 1, 2, ili 3.

[0018] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

pri čemu

R<1>je H, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C1-3haloalkil, C1-3deuteroalkil, halo ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo, ili C1-3alkil ili C1-3deuteroalkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-3alkil ili C1-3haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F ili C1-3alkil;

alternativno, R<6a>i R<6b>su =O, ili se spajaju da bi formirali ciklopropil ili oksetanil; svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, OP(O)(OR)2, F, C1-3alkil ili C1-3haloalkil;

alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da bi formirali ciklopropil ili oksetanil;

R je H ili C1-3alkil;

prsten Z je fenil, 6 - člani heteroaril prsten koji ima 1-2 atoma azota, cikloheksil ili ciklopentil;

Y je F, Cl, C1-3alkil, C1-3alkoksi, CN ili C1-3haloalkil;

n je 0, 1, 2 ili 3.

[0019] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu R<1>je H, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C1-3haloalkil, C1-3deuteroalkil, halo ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo, ili C1-3alkil ili C1-3deuteroalkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-3alkil ili C1-3haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F ili C1-3alkil;

svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F, C1-3alkil ili C1-3haloalkil; alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da bi formirali ciklopropil ili oksetanil; prsten Z je fenil, 6 - člani heteroaril prsten koji ima 1-2 atoma azota, cikloheksil ili ciklopentil;

Y je F, Cl, C1-3alkil, C1-3alkoksi, CN ili C1-3haloalkil;

n je 0, 1 ili 2.

[0020] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu R<1>je H, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C1-3haloalkil, C1-3deuteroalkil, C1-3deuteroalkoksi, halo ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo, ili C1-3alkil ili C1-3deuteroalkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-3alkil ili C1-3haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F ili C1-3alkil;

Y je F, Cl, C1-3alkil, C1-3alkoksi, CN ili C1-3haloalkil;

n je 0, 1 ili 2.

[0021] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

R<1>je H, C1-2alkil, C1-2alkoksi, CD3, halo ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo ili C1-2alkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-2alkil ili C1-2haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, F ili C1-2alkil;

svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F, C1-2alkil ili C1-2haloalkil; alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da formiraju ciklopropil:

Y je F, Cl, C1-2alkil, C1-2alkoksi, CN ili C1-2haloalkil;

n je 0, 1 ili 2.

[0022] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

R<1>je H, C1-2alkil, C1-2alkoksi, CD3, halo ili ciklopropil;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo ili C1-2alkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-2alkil ili C1-2haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, F ili C1-2alkil;

svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F, C1-2alkil, C1-2deuteroalkil ili C1-2haloalkil;

alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da formiraju ciklopropil:

Y je F, Cl, C1-2alkil, C1-2alkoksi, CN ili C1-2haloalkil;

n je 0, 1 ili 2.

[0023] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je fenil, piridinil, pirimidinil, pirazinil ili piridazinil.

[0024] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je cikloheksil ili ciklopentil.

[0025] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

R<1>je C1-2alkil, C1-2deuteroalkil, C1-2haloalkil ili halo;

R<2>je H, ili halo;

R<3>je H, halo ili C1-2alkil;

R<4>je H ili F;

svako od R<5a>i R<5b>je, nezavisno, H, deuterijum, C1-2alkil ili C1-3haloalkil;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H, deuterijum, F ili C1-3alkil;

svako od R<7a>i R<7b>je, nezavisno, H, deuterijum, OH, F, C1-4alkil ili C1-3haloalkil; alternativno, R<7a>i R<7b>su =O, ili se spajaju da bi formirali ciklopropil

Y je F, Cl, C1-2alkil, CN ili C1-2haloalkil;

n je 0, 1 ili 2.

[0026] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

R<1>je Cl ili CH3;

R<2>je H, ili F;

R<3>je H, ili F;

R<4>je H;

svako od R<5a>i R<5b>je H;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H ili F;

jedno od R<7a>i R<7b>je H, a drugo je OH;

Y je F ili Cl;

n je 0, 1 ili 2.

[0027] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

R<1>je Cl ili CH3;

R<2>je H, ili F;

R<3>je H, ili F;

R<4>je H;

svako od R<5a>i R<5b>je H;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H ili F;

jedno od R<7a>i R<7b>je H, CH3ili CD3; i, drugo je OH;

Y je F ili Cl;

n je 0, 1 ili 2.

[0028] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

svako od R<5a>i R<5b>je H;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H ili F;

jedno od R<7a>i R<7b>je H, a drugo je OH.

[0029] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

svako od R<5a>i R<5b>je H;

svako od R<6a>i R<6b>je, nezavisno, H ili F;

jedno od R<7a>i R<7b>je H, CH3ili CD3; a drugo je OH.

[0030] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

jedno od R<7a>i R<7b>je H, a drugo je OP(O)(OR)2; i

R je H ili C1-3alkil.

[0031] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je

X je CH, N, ili C-Y.

[0032] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je piridinil.

[0033] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je fenil.

[0034] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I) ili (II), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

Prsten Z je fenil, piridinil, pirimidinil, pirazinil, ili piridazinil.

[0035] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Ia)

[0036] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Ib)

[0037] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Ic)

[0038] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Id)

[0039] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu R<8>je H; i

R<9>je H.

[0040] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje Formule (Ie), (If) ili (Ig), ili njegove stereoizomere, tautomere, izotope, soli, farmaceutski prihvatljive soli,

[0041] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu

[0042] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (In)

[0043] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Io)

[0044] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Ip)

[0045] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Iq)

[0046] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (Ir)

[0047] Stavljeno na uvid javnosti, ali samo deo pronalaska za formule (Ie)-(Ig), je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), ( Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

pri čemu Prsten Z je

i

Y je Cl ili F.

[0048] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

R<5a>i R<5b>su H ili deuterijum;

R<6a>je F, i R<6b>je H ili F;

R<7a>je OH, i R<7b>je H, CH3, ili CD3.

[0049] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

R<5a>i R<5b>su H ili deuterijum;

R<6a>je F, i R<6b>F;

R<7a>je OH, i R<7b>je H, ili CH3.

[0050] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

R<5a>i R<5b>su H;

R<6a>je F, i R<6b>je H;

R<7a>je OH, i R<7b>je H, CH3, ili CD3.

[0051] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

R<5a>i R<5b>su H;

R<6a>je F, i R<6b>je H;

R<7a>je OH, i R<7b>je H, CH3, ili CD3.

[0052] Stavljeno na uvid javnosti, ali samo deo pronalaska za formule (Ie)-(Ig), je jedinjenje Formule (I), ili stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq) ili (Ir) i pri čemu

R<1>je CH3, CD3, CF3, ili Cl;

R<2>je F;

R<3>je H;

R<4>je H.

[0053] Stavljeno na uvid javnosti, ali samo deo pronalaska za formule (Ie)-(Ig), je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq), ili (Ir) i pri čemu

R<6a>i R<6b>su F;

R<1>je CH3, CD3, CF3, ili Cl;

R<2>je F;

R<3>je H;

R<4>je H; i

Y je Cl ili F.

[0054] Stavljeno na uvid javnosti, ali nije deo pronalaska, je jedinjenje Formule (I), ili njegovi stereoizomeri, tautomeri, izotopi, soli, farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi, pri čemu je jedinjenje formule (I), (II), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ii), (Ij), (Ik), (Il), (Im), (In), (Io) (Ip), (Iq), ili (Ir) i pri čemu

R<6a>je H i R<6b>je F;

R<1>je CH3, CD3, CF3, ili Cl;

R<2>je F;

R<3>je H;

R<4>je H; i

Y je Cl ili F.

[0055] Drugo tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje Formule (I), ili njegove stereoizomere, tautomere, izotope, soli, farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu je jedinjenje izabrano iz primera 29-31, 108, 109, 123 i 315.

[0056] Predmetni pronalazak je takođe usmeren na farmaceutske kompozicije korisne u lečenju bolesti koje su u vezi sa modulacijom kinaze, uključujući modulaciju protein kinaza koje interaguju sa receptorima, kao što je RIPK1, koje sadrže jedinjenja formule (Ie), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljive nosače ili razblaživače.

[0057] Pronalazak se dalje odnosi na postupke lečenja bolesti koje su u vezi sa modulacijom kinaze, uključujući modulaciju protein kinaza koje interaguju sa receptorima, kao što je RIPK1, koji obuhvataju administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja prema formuli (Ie).

[0058] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i intermedijere za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska ili njihovih stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljivih soli.

[0059] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za lečenje proliferativnih bolesti, alergijskih bolesti, autoimunih bolesti i inflamatornih bolesti i fibroznih bolesti, koji obuhvata administriranje domaćinu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine najmanje jednog od jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegovih stereoizomera, tautomera, farmaceutska prihvatljive soli.

[0060] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za lečenje bolesti, koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie),

[0061] pri čemu je bolest inflamatorna bolest creva, Kronova bolest ili ulcerozni kolitis, porijaza, sistemski eritemski lupus (SLE), reumatoidni artritis, multipla skleroza (MS), odbacivanje transplantata, nealkoholni steatohepatitis (NASH) ili reperfuzija usled ishemije.

[0062] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja stanja koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), pri čemu je stanje izabrano od sistemskog eritemskog lupusa (SLE), multiple skleroze (MS), odbacivanja transplantata, akutne mijelogene leukemije, hronične mijelogene leukemije, metastatskog melanoma, Kapošijevog sarkoma, multiplog mijeloma, solidnih tumora, okularne neovaskularizacije i infantilnih hemangioma, B ćelijskog limfoma, sistemskog eritemskog lupusa (SLE), psorijaznog artritisa, višestrukih vaskulitisa, idiopatske trombocitopenične purpure (ITP), mijastenije gravis, alergijskog rinitisa, multiple skleroze (MS), odbacivanja transplantata, dijabetesa tipa I, membranoznog nefritisa, autoimune hemolitičke anemije, autoimunog tireoiditisa, hladne i tople aglutininske bolesti, Evanovog sindroma, hemolitičko-uremijskog sindroma/trombotičke trombocitopenične purpure (HUS/TTP), sarkoidoze, Sjogrenovog sindroma, periferne neuropatije, pemphigus vulgarisa i astme, nealkoholnog steatohepatitisa (NASH), ili reperfuzije usled ishemije.

[0063] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja stanja koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), pri čemu se stanje bira od nekroze makrofaga u razvoju ateroskleroze, virusom izazvane inflamacije, sindroma sistemskog inflamatornog odgovora i ozlede jetre izazvane etanolom, neurodegeneracije kao što je odvajanje mrežnjače, degeneracija mrežnjače, vlažna i suva degeneracija makule koja je u vezi sa starenjem (AMD), ishemije, amiotrofične lateralne skleroze (ALS) i Gošeove bolesti.

[0064] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja stanja koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), pri čemu je stanje izabrano od inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, Kronove bolesti, psorijaze, reumatoidnog artritisa (RA), srčane insuficijencije i nealkoholnog steatohepatitisa (NASH).

[0065] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja stanja koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), pri čemu se stanje bira od inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa i psorijaze. U drugom tehničkom rešenju, stanje se bira između inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti i ulceroznog kolitisa.

[0066] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja stanja koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), pri čemu je stanje izabrano od nealkoholnog steatohepatitisa (NASH) i reperfuzije usled ishemije.

[0067] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za tretiranje reumatoidnog artritisa, koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie).

[0068] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja bolesti, koji obuhvata administriranje pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (Ie), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa drugim terapijskim sredstvom.

[0069] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njihove stereoizomere, tautomere, izotope, soli, farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u terapiji.

[0070] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja formule (Ie) se biraju između predstavljenih primera ili kombinacija predstavljenih primera ili drugih tehničkih rešenja ovde.

[0071] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njihovih stereoizomera, tautomera, izotopa, soli, farmaceutski prihvatljivih soli, za proizvodnju leka za lečenje kancera, alergijskih bolesti, autoimunih bolesti ili inflamatornih bolesti.

[0072] Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije poželjnih aspekata i/ili tehničkih rešenja pronalaska koji su ovde navedeni. Podrazumeva se da se bilo koje i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu uzeti u konjunkciji sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima da bi se opisala dodatna tehnička rešenja. Takođe treba razumeti da je svaki pojedinačni element tehničkog rešenja njegovo sopstveno nezavisno tehničko rešenje. Štaviše, bilo koji element tehničkog rešenja treba da se kombinuje sa bilo kojim ili svim drugim elementima iz bilo kojeg tehničkog rešenja da bi se opisalo dodatno tehničko rešenje, koje je deo pronalaska sve dok je obuhvaćeno priloženim patentnim zahtevima.

[0073] Slede definicije termina koji se koriste u ovoj specifikaciji i priloženim patentnim zahtevima. Početna definicija koja je ovde obezbeđena za grupu ili termin se primenjuje na tu grupu ili termin u celoj specifikaciji i patentnim zahtevima, pojedinačno ili kao deo druge grupe, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0074] Osim ako nije drugačije navedeno ovde, reference u jednini mogu takođe uključivati množinu. Na primer, u engleskom jeziku "a" i "an" se mogu odnositi na jednu, ili jedno ili više.

[0075] Kada se bilo koja varijabla (npr. R<3>) pojavljuje više puta u bilo kom konstituentu ili formuli za jedinjenje, njena definicija pri svakom pojavljivanju je nezavisna od njene definicije pri svakom drugom pojavljivanju. Tako, na primer, ako se pokaže da je grupa supstituisana sa 0-2 R<3>, tada navedena grupa može opciono biti supstituisana sa do dve R<3>grupe i R<3>se pri svakom pojavljivanju bira nezavisno od definicije R<3>. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0076] Osim ako nije drugačije naznačeno, pretpostavlja se da bilo koji ugljenik ili heteroatom sa nezadovoljenim valencama ima atome vodonika dovoljno da popuni valence.

[0077] Kada se pokaže da veza za supstituent prelazi vezu koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može biti vezan za bilo koji atom u prstenu. Kada je supstituent naveden bez navođenja atoma preko kojeg je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti vezan preko bilo kog atoma u takvom supstituentu. Kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0078] U slučajevima kada postoje atomi azota (npr. amini) na jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, oni se mogu konvertovati u N-okside tretmanom sa oksidacionim sredstvom (npr. MCPBA i/ili vodonik peroksidima) da bi se dobila druga jedinjenja predmetnog pronalaska. Dakle, smatra se da svi prikazani i traženi atomi azota pokrivaju i prikazani azot i njegov N-oksid (N→O) derivat.

[0079] U skladu sa konvencijom koja se koristi u oblasti,

se koristi u strukturnim formulama ovde da opiše vezu koja je tačka vezivanja ostatka ili supstituenta za jezgro ili osnovnu strukturu.

[0080] Crtica "-" koja nije između dva slova ili simbola se koristi za označavanje tačke vezivanja za supstituent. Na primer, -CONH2je vezan preko atoma ugljenika.

[0081] Termin "opciono supstituisan" u odnosu na određeni deo jedinjenja Formule (I), (npr., opciono supstituisana heteroaril grupa) odnosi se na deo koji ima 0, 1, 2 ili više supstituenata. Na primer, "opciono supstituisani alkil" obuhvata i "alkil" i "supstituisani alkil" kao što je definisano u nastavku. Stručnjaci u oblasti će razumeti, u odnosu na bilo koju grupu koja sadrži jedan ili više supstituenata, da takve grupe nisu namenjene da uvode bilo kakve supstitucije ili supstitucijske obrasce koji su sterički nepraktični, sintetički neizvodljivi i/ili inherentno nestabilni.

[0082] Kako se ovde koristi, termin "alkil" ili "alkilen" namenjen je da uključuje i razgranate i ravnolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju određeni broj atoma ugljenika. Na primer, "C1-10alkil" (ili alkilen) namenjen je da uključuje C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9i C10alkil grupe. Dodatno, na primer, "C1-C6alkil" označava alkil sa 1 do 6 atoma ugljenika. Alkil grupe mogu biti nesupstituisane ili supstituisane tako da jedan ili više njenih vodonika budu zamenjeni drugom hemijskom grupom. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (Me), etil (Et), propil (npr., n-propil i izopropil), butil (npr., n-butil, izobutil, t-butil), pentil (npr., n-pentil, izopentil, neopentil) i slično.

[0083] Kada se termin "alkil" koristi zajedno sa drugom grupom, kao što je "arilalkil", ova konjunkcija definiše sa više specifičnosti najmanje jedan od supstituenata koje će supstituisani alkil sadržati. Na primer, "arilalkil" se odnosi na supstituisanu alkil grupu kako je gore definisano gde je najmanje jedan od supstituenata aril, kao što je benzil. Dakle, termin aril(C0-4)alkil uključuje supstituisani niži alkil koji ima najmanje jedan aril supstituent i takođe uključuje aril direktno vezan za drugu grupu, tj. aril(C0)alkil. Termin "heteroarilalkil" se odnosi na supstituisanu alkil grupu kako je gore definisano gde je najmanje jedan od supstituenata heteroaril.

[0084] „Alkenil“ ili „alkenilen“ je namenjen da uključuje ugljovodonične lance bilo ravne ili razgranate konfiguracije i imaju jednu ili više dvostrukih ugljenik-ugljenik veza koje se mogu pojaviti u bilo kojoj stabilnoj tački duž lanca. Na primer, "C2-6alkenil" (ili alkenilen), je namenjen da uključuje C2, C3, C4, C5, i C6alkenil grupe. Primeri alkenila uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil, 1-propenil, 2-propenil, 2-butenil, 3-butenil, 2-pentenil, 3, pentenil, 4-pentenil, 2-heksenil, 3-heksenil, 4-heksenil, 5-heksenil, 2-metil-2-propenil, 4-metil-3-pentenil, i slično.

[0085] "Alkinil" ili "alkinilen" je namenjen da uključuje ugljovodonične lance bilo ravne ili razgranate konfiguracije i imaju jednu ili više trostrukih ugljenik-ugljenik veza koje se mogu pojaviti u bilo kojoj stabilnoj tački duž lanca. Na primer, "C2-6alkinil" (ili alkinilen), je namenjen da uključuje C2, C3, C4, C5, i C6alkinil grupe; kao što su etinil, propinil, butinil, pentinil, heksinil i slično.

[0086] Kada se upućuje na supstituisanu alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen ili alkinilen grupu, ove grupe su supstituisane sa jednim do tri supstituenta kao što je gore definisano za supstituisane alkil grupe.

[0087] Termin "alkoksi" se odnosi na atom kiseonika supstituisan alkilom ili supstituisanim alkilom, kao što je ovde definisano. Na primer, izraz "alkoksi" uključuje grupu -O-C1-6alkil kao što su metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, n-butoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, pentoksi, 2-pentiloksi, izopentoksi, neopentoksi, heksoksi, 2-heksoksi, 3-heksoksi, 3-metilpentoksi, i slično. "Niži alkoksi" se odnosi na alkoksi grupe koje imaju jedan do četiri ugljenika.

[0088] Trebalo bi razumeti da će selekcije za sve grupe, uključujući na primer, alkoksi, tioalkil i aminoalkil, vršiti stručnjak u oblasti da bi se obezbedila stabilna jedinjenja.

[0089] Termin "supstituisan", kako se ovde koristi, znači da je bilo koji jedan ili više vodonika na naznačenom atomu ili grupi zamenjen izborom iz naznačene grupe, pod uslovom da normalna valentnost naznačenog atoma nije prekoračena. Kada je supstituent okso, ili keto, (tj. =O), tada se 2 vodonika na atomu zamenjuju. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim delovima. Osim ako nije drugačije naznačeno, supstituenti su imenovani u strukturi jezgra. Na primer, treba razumeti da kada je (cikloalkil)alkil naveden kao mogući supstituent, tačka vezivanja ovog supstituenta za strukturu jezgra je u alkil delu. Dvostruke veze u prstenu, kako se ovde koriste, su dvostruke veze koje se formiraju između dva susedna atoma u prstenu (npr. C=C, C=N ili N=N).

[0090] Kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultiraju stabilnim jedinjenjima ili korisnim sintetičkim intermedijerima. Stabilno jedinjenje ili stabilna struktura podrazumeva jedinjenje koje je dovoljno robusno da izdrži izolaciju iz reakcione smeše do korisnog stepena čistoće, i naknadnu formulaciju u efikasno terapijsko sredstvo. Poželjno je da sada navedena jedinjenja ne sadrže N-halo, S(O)2H ili S(O)H grupu.

[0091] Pojam "karbociklil" ili "karbociklični" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni, ili delimično nezasićeni, monociklični ili biciklični prsten u kome su svi atomi svih prstenova ugljenici. Dakle, termin uključuje cikloalkil i aril prstenove. Monociklični karbocikli imaju 3 do 6 atoma u prstenu, još tipičnije 5 ili 6 atoma u prstenu. Biciklični karbocikli imaju 7 do 12 atoma u prstenu, npr. raspoređenih kao biciklo [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6] sistem, ili 9 ili 10 atoma u prstenu raspoređenih kao biciklo [5,6] ili [6,6] sistem. Primeri takvih karbocikla uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklobutenil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptenil, cikloheptil, cikloheptenil, adamantil, ciklooktil, ciklooktenil, ciklooktadienil, [3.3.0]biciklooktan, [4.3.0]biciklononan, [4.4.0]biciklodekan, [2.2.2]biciklooktan, fluorenil, fenil, naftil, indanil, adamantil, antracenil, i tetrahidronaftil (tetralin). Kao što je gore prikazano, premošćeni prstenovi su takođe uključeni u definiciju karbocikla (npr., [2.2.2]biciklooktan). Karbocikli, mogu da uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i fenil. Kada se koristi termin "karbocikl", on je namenjen da uključuje "aril". Premošćeni prsten nastaje kada jedan ili više atoma ugljenika poveže dva nesusedna atoma ugljenika. Poželjni mostovi su jedan ili dva atoma ugljenika. Primećeno je da most uvek pretvara monociklični prsten u biciklični prsten. Kada je prsten premošćen, supstituenti navedeni za prsten mogu takođe biti prisutni na mostu.

[0092] Pojam "aril" se odnosi na monociklične ili biciklične aromatične ugljovodonične grupe koje imaju 6 do 12 atoma ugljenika u prstenskom delu, kao što su fenil i naftil grupe, od kojih svaka može biti supstituisana. Poželjna aril grupa je opciono-supstituisani fenil.

[0093] Pojam "cikloalkil" se odnosi na ciklizovane alkil grupe, uključujući mono-, bi- ili policiklične sisteme prstena. Predviđeno je da C3-7cikloalkil uključuje C3, C4, C5, C6i C7cikloalkil grupe. Primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, norbornil i slično, koji opciono mogu biti supstituisani na bilo kom raspoloživom atomu prstena (prestenova).

[0094] Pojmovi "heterocikloalkil", "heterociklo", "heterocikl", "heterociklični" ili "heterociklil" mogu se koristiti naizmenično i odnose se na supstituisane i nesupstituisane aromatične ili nearomatične 3- do 7-člane monociklične grupe, 7- do 11-člane biciklične grupe i 10- do 15-člane triciklične grupe, u kojima najmanje jedan od prstenova ima najmanje jedan heteroatom (O, S ili N), pri čemu navedeni prsten koji u sebi ima heteroatom poželjno ima 1, 2 ili 3 odabrana heteroatoma od O, S i N. Svaki prsten takve grupe koji u sebi ima heteroatom može u sebi imati jedan ili dva atoma kiseonika ili sumpora i/ili od jednog do četiri atoma azota pod uslovom da je ukupan broj heteroatoma u svakom prstenu četiri ili manje, i dalje pod uslovom da prsten ima u sebi najmanje jedan atom ugljenika. Atomi azota i sumpora mogu opciono biti oksidovani, a atomi azota mogu opciono biti kvaternizovani. Spojeni prstenovi koji kompletiraju bicikličnu i tricikličnu grupu mogu da u sebi imaju samo atome ugljenika i mogu biti zasićeni, delimično zasićeni ili nezasićeni. Heterociklo grupa može biti vezana za bilo koji raspoloživi atom azota ili ugljenika. Termin "heterocikl" uključuje "heteroaril" grupe. Kako valenca dozvoljava, ako je navedeni dalji prsten cikloalkil ili heterociklo, on je dodatno opciono supstituisan sa =O (okso).

[0095] Monociklične heterociklil grupe uzete kao primer uključuju azetidinil, pirolidinil, oksetanil, imidazolinil, oksazolidinil, izoksazolinil, tiazolidinil, izotiazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidil, piperazinil, 2-oksopiperazinil, 2-oksopiperidil, 2-oksopirolodinil, 2-oksoazepinil, azepinil, 1-piridonil, 4-piperidonil, tetrahidropiranil, morfolinil, tiamorfolinil, tiamorfolinil sulfoksid, tiamorfolinil sulfon, 1,3-dioksolan i tetrahidro-1,1-dioksotienil i slično, uključujući grupe uzete kao primer navedene pod „heteroaril“. Biciklične heterociklo grupe uzete kao primer uključuju hinuklidinil.

[0096] Termin "heteroaril" se odnosi na supstituisane i nesupstituisane aromatične 5- ili 6-člane monociklične grupe, 9- ili 10-člane biciklične grupe i 11- do 14-člane triciklične grupe koje imaju najmanje jedan heteroatom (O, S ili N ) u najmanje jednom od prstenova, pomenuti prsten koji u sebi ima heteroatom poželjno ima 1, 2 ili 3 heteroatoma izabrana između O, S i N. Svaki prsten heteroaril grupe koji ima u sebi heteroatom može u sebi imati jedan ili dva atoma kiseonika ili sumpora i/ili od jednog do četiri atoma azota pod uslovom da je ukupan broj heteroatoma u svakom prstenu četiri ili manji i da svaki prsten u sebi ima najmanje jedan atom ugljenika. Spojeni prstenovi koji kompletiraju bicikličnu i tricikličnu grupu mogu da u sebi imaju samo atome ugljenika i mogu biti zasićeni, delimično zasićeni ili nezasićeni. Atomi azota i sumpora mogu opciono biti oksidovani, a atomi azota mogu opciono biti kvaternizovani. Heteroaril grupe koje su biciklične ili triciklične moraju uključivati najmanje jedan potpuno aromatični prsten, ali drugi spojeni prsten ili prstenovi mogu biti aromatični ili nearomatični. Heteroaril grupa može biti vezana na bilo koji raspoloživi atom azota ili ugljenika u bilo kom prstenu. Kako valenca dozvoljava, ako je navedeni dalji prsten cikloalkil ili heterociklo, on je dodatno opciono supstituisan sa =O (okso).

[0097] Monociklične heteroaril grupe uzete kao primer uključuju pirol, pirazolil, pirazolinil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, tiadiazolil, izotiazolil, furanil, tienil, oksadiazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, triazinil i slično.

[0098] Biciklične heteroaril grupe uzete kao primer uključuju indolil, benzotiazolil, benzodioksolil, benzoksazolil, benzotienil, hinolinil, tetrahidroizohinolinil, izohinolinil, benzimidazolil, benzopiranil, indolizinil, benzofuranil, hromonil, kumarinil, benzopiranil, cinolinil, hinoksalinil, indazolil, pirolopiridil, furopiridil, dihidroizoindolil, tetrahidrohinolinil, i slično.

[0099] Triciklične heteroaril grupe uzete kao primer uključuju karbazolil, benzindolil, fenantrolinil, akridinil, fenantridinil, ksantenil i slično.

[0100] Osim ako nije drugačije naznačeno, kada se upućuje na posebno-imenovani aril (npr. fenil), cikloalkil (npr. cikloheksil), heterociklo (npr. pirolidinil, piperidinil i morfolinil) ili heteroaril (npr. tetrazolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, tiazolil i furil) referenca je namenjena da uključuje prstenove koji imaju 0 do 3, poželjno 0-2, supstituenta, prema potrebi.

[0101] Izraz "halo" ili "halogen" se odnosi na hloro, bromo, fluoro i jodo.

[0102] Termin "haloalkil" označava supstituisani alkil koji ima jedan ili više halo supstituenata. Na primer, "haloalkil" uključuje mono, bi i trifluorometil.

[0103] Termin "haloalkil" označava supstituisani alkil koji ima jedan ili više halo supstituenata. Na primer, "haloalkil" uključuje mono, bi i trifluorometil.

[0104] Termin "haloalkoksi" označava alkoksi grupu koja ima jedan ili više halo supstituenata. Na primer, "haloalkoksi" uključuje OCF3.

[0105] Termin "deuteroalkil" označava supstituisani alkil koji ima jedan ili više atoma deuterijuma. Na primer, termin "deuteroalkil" uključuje mono, bi i trideuterometil.

[0106] Termin "heteroatomi" uključuje kiseonik, sumpor i azot.

[0107] Kada se izraz "nezasićen" ovde koristi za označavanje prstena ili grupe, prsten ili grupa mogu biti potpuno nezasićeni ili delimično nezasićeni.

[0108] Stručnjak u oblasti će razumeti da, kada se ovde koristi oznaka "CO2", namenjeno je da se odnosi na grupu.

[0109] U celoj specifikaciji, njihove grupe i supstituente može izabrati stručnjak u oblasti da obezbedi stabilne delove i jedinjenja i jedinjenja korisna kao farmaceutski prihvatljiva jedinjenja i/ili intermedijerna jedinjenja korisna u pravljenju farmaceutski prihvatljivih jedinjenja.

[0110] Jedinjenja formule (Ie) mogu postojati u slobodnom obliku (bez jonizacije) ili mogu formirati soli koje su takođe u okviru predmetnog pronalaska. Osim ako nije drugačije naznačeno, podrazumeva se da referenca na inventivno jedinjenje uključuje referencu na slobodni oblik i soli istog. Izraz "so(li)" označava kisele i/ili bazne soli formirane sa neorganskim i/ili organskim kiselinama i bazama. Pored toga, izraz "so(li)" može uključivati cviter jone (unutrašnje soli), npr. kada jedinjenje formule (Ie) ima u sebi i bazni deo, kao što je amin ili piridinski ili imidazolni prsten, i kiseli deo, kao što je karbonska kiselina. Poželjne su farmaceutski prihvatljive (tj., netoksične, fiziološki prihvatljive) soli, kao što su, na primer, prihvatljive soli metala i amina u kojima katjon ne doprinosi značajno toksičnosti ili biološkoj aktivnosti soli. Međutim, druge soli mogu biti korisne, npr., u koracima izolacije ili prečišćavanja koje se mogu koristiti tokom pripreme, pa su stoga razmatrane u okviru pronalaska. Soli jedinjenja formule (I) mogu se formirati, na primer, reakcijom jedinjenja formule (I) sa količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kome se so taloži ili u vodenom medijumu nakon čega sledi liofilizacija.

[0111] Adicione soli kiselina uzete kao primer uključuju acetate (kao što su oni formirani sa sirćetnom kiselinom ili trihalosirćetnom kiselinom, na primer, trifluorosirćetnom kiselinom), adipati, alginati, askorbati, aspartati, benzoati, benzensulfonati, bisulfati, borati, butirati, citrati, kamforati, kamforsulfonati, ciklopentanpropionati, diglukonati, dodecil sulfati, etansulfonati, fumarati, glukoheptanoati, glicerofosfati, hemisulfati, heptanoati, heksanoati, hidrohloridi (formirani sa hlorovodoničnom kiselinom), hidrobromidi (formirani sa bromovodonikom), hidrojodidi, 2-hidroksietansulfonati, laktati, maleati (formirani sa maleinskom kiselinom), metansulfonati (formirani sa metansulfonskom kiselinom), 2-naftalensulfonati, nikotinati, nitrati, oksalati, pektinati, persulfati, 3-fenilpropionati, fosfati, pikrati, pivalati, propionati, salicilati, sukcinati, sulfati (kao što su oni formirani sa sumpornom kiselinom), sulfonati (kao što su oni ovde pomenuti), tartrati, tiocijanati, toluensulfonati kao što su tozilati, undekanoati, i slično.

[0112] Bazne soli uzete kao primer uključuju soli amonijuma, soli alkalnih metala kao što su natrijumove, litijumove i kalijumove soli; soli zemnoalkalnih metala kao što su soli kalcijuma i magnezijuma; soli barijuma, cinka i aluminijuma; soli sa organskim bazama (na primer, organski amini) kao što su trialkilamini kao što su trietilamin, prokain, dibenzilamin, N-benzil-βfenetilamin, 1-efenamin, N,N'-dibenziletilen-diamin, dehidroabietilamin, N-etilpiperidin, benzilamin, dicikloheksilamin ili slični farmaceutski prihvatljivi amini i soli sa aminokiselinama kao što su arginin, lizin i slično. Osnovne grupe koje u sebi imaju azot mogu biti kvaternizovane sredstvima kao što su niži alkil halidi (npr., metil, etil, propil i butil hloridi, bromidi i jodidi), dialkil sulfati (npr., dimetil, dietil, dibutil i diamil sulfati), dugi lančani halidi (npr., decil, lauril, miristil i stearil hloridi, bromidi i jodidi), aralkil halidi (npr., benzil i fenetil bromidi) i drugi. U jednom tehničkom rešenju, soli uključuju monohidrohloridne, hidrogensulfatne, metansulfonatne, fosfatne ili nitratne soli.

[0113] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom korist/rizik odnosu.

[0114] Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnose na derivate jedinjenja stavljenih na uvid javnosti gde je matično jedinjenje modifikovano stvaranjem njegovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, soli mineralnih ili organskih kiselina baznih grupa kao što su amini; i alkalne ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijumove soli matičnog jedinjenja formirane, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju one izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, sukcinska, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, pamoična, maleinska, hidroksimaleinska, fenilacetatna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna i izetionska, i slično.

[0115] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu se sintetizovati iz osnovnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva; generalno, poželjni su nevodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril. Liste pogodnih soli nalaze se u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izdanje, Mack Publishing Company, Iston, PA, 1990.

[0116] Svi stereoizomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su razmatrani, bilo u smeši ili u čistom ili suštinski čistom obliku. Stereoizomeri mogu uključivati jedinjenja koja su optički izomeri zbog posedovanja jednog ili više hiralnih atoma, kao i jedinjenja koja su optički izomeri zbog ograničene rotacije oko jedne ili više veza (atropizomeri). Definicija jedinjenja prema pronalasku obuhvata sve moguće stereoizomere i njihove smeše. Veoma posebno obuhvata racemske oblike i izolovane optičke izomere koji imaju specificiranu aktivnost. Racemski oblici mogu da se razdvoje fizičkim postupcima, kao što je, na primer, frakciona kristalizacija, separacija ili kristalizacija dijastereoizomernih derivata ili separacija hiralnom kolonskom hromatografijom. Pojedinačni optički izomeri se mogu dobiti iz racemata konvencionalnim postupcima, kao što je, na primer, formiranje soli sa optički aktivnom kiselinom, nakon čega sledi kristalizacija.

[0117] Predviđeno je da predmetni pronalazak uključuje sve izotope atoma koji se javljaju u ovim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Kao primer, alkil supstituent je namenjen da pokrije alkil grupe koje imaju vodonik, deuterijum i/ili neku njihovu kombinaciju. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski obeležena jedinjenja pronalaska se generalno mogu pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima u oblasti ili procesima analognim onima koji su ovde opisani, korišćenjem odgovarajućeg izotopski obeleženog reagensa umesto neobeleženog reagensa koji se inače koristi.

[0118] Prolekovi i solvati inventivnih jedinjenja su stavljeni na uvid javnosti, ali nisu deo pronalaska. Termin "prolek" označava jedinjenje koje, nakon administriranja subjektu, prolazi kroz hemijsku konverziju putem metaboličkih ili hemijskih procesa da bi se dobilo jedinjenje formule (I), i/ili njegova so i/ili solvat. Svako jedinjenje koje će biti konvertovano in vivo da bi se obezbedilo bioaktivno sredstvo (tj. jedinjenje za formulu (I)) je prolek.

[0119] Na primer, jedinjenja koja sadrže karboksi grupu mogu da formiraju fiziološki hidrolizabilne estre koji služe kao prolekovi tako što se hidrolizuju u telu da bi se dobila jedinjenja formule (I) per se. Takvi prolekovi se poželjno daju oralno, pošto se hidroliza u mnogim slučajevima dešava uglavnom pod uticajem digestivnih enzima. Parenteralna primena se može koristiti kada je estar per se aktivan, ili u onim slučajevima kada se hidroliza javlja u krvi. Primeri fiziološki hidrolizujućih estara jedinjenja formule (I) uključuju C1-6alkilbenzil, 4-metoksibenzil, indanil, ftalil, metoksimetil, C1-6alkanoiloksi-C1-6alkil, npr. acetoksimetil, pivaloiloksimetil ili propioniloksimetil, C1-6alkoksikarboniloksi-C1-6alkil, npr. metoksikarbonil-oksimetil ili etoksikarboniloksimetil, gliciloksimetil, fenilgliciloksimetil, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)-metil i druge dobro poznate estre koji se mogu fiziološki hidrolizovati koji se koriste, na primer, u oblastima penicilina i cefalosporina. Takvi estri mogu biti pripremljeni konvencionalnim tehnikama poznatim u tehnici.

[0120] Različiti oblici prolekova su dobro poznati u tehnici. Za primere takvih derivata prolekova, pogledajte:

a) Design of Prodrugs, uredio H. Bundgaard (Elsevier, 1985) i Methods in Enzymology, Tom. 112, str.309-396, uredili K. Widder, i sar. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, uredili Krosgaard-Larsen i H. Bundgaard, Poglavlje 5, "Design and Application of Prodrugs," napisao H. Bundgaard, str.

113-191 (1991); i

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, Tom 8, str.1-38 (1992).

[0121] Jedinjenja formule (Ie) i njihove soli mogu postojati u svom tautomernom obliku, u kome su atomi vodonika transponovani u druge delove molekula i hemijske veze između atoma molekula su posledično preuređene. Trebalo bi razumeti da su svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu da postoje, uključeni u pronalasku.

[0122] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu imati jedan ili više asimetričnih centara. Osim ako nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i dijastereoizomerni) i racemski oblici jedinjenja iz predmetnog pronalaska su uključeni u predmetnom pronalasku. Mnogi geometrijski izomeri olefina, C=N dvostruke veze i slično mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima, a svi takvi stabilni izomeri su razmatrani u predmetnom pronalasku. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska su opisani i mogu biti izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici. Ova jedinjenja mogu biti izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. U oblasti je dobro poznato kako se pripremaju optički aktivni oblici, kao što je razdvajanje racemskih oblika ili sintezom iz optički aktivnih početnih materijala. Namenjeni su svi hiralni, (enantiomerni i dijastereoizomerni) i racemski oblici i svi geometrijski izomerni oblici strukture, osim ako je specifična stereohemija ili oblik izomera posebno naznačen. Svi geometrijski izomeri, tautomeri, atropizomeri, hidrati, solvati, polimorfi i izotopski obeleženi oblici jedinjenja koja se ovde pominju, i njihove smeše, su razmatrani u okviru predmetnog pronalaska. Postupci solvatacije su opšte poznati u tehnici.

[0123] Za neke primere predmetnog pronalaska, apsolutna stereohemija enantiomera i/ili dijastereoizomera nije specifično identifikovana. Međutim, racemske smeše i svi enantiomeri i dijastereoizomeri su uključeni u predmetnom pronalasku. Čak i tamo gde su specifični enantiomeri i/ili dijastereoizomeri izolovani, ali apsolutna stereohemija nije posebno određena i nacrtana, stručnjak u ovoj oblasti može lako da identifikuje i nacrta strukture pojedinačnih stereoizomera ili dijastereoizomera. Na primer, Referentni Primeri 202, 203, 204 i 205 su predstavljeni strukturom:

4 dijastereoizomera su:

koji stručnjak u oblasti može da identifikuje, čak i ako struktura svakog od primera nije posebno opisana.

[0124] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" označavaju jedinjenje koje je dovoljno robusno da izdrži izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše i formulaciju u efikasno terapijsko sredstvo. Predmetni pronalazak je namenjen da obuhvati stabilna jedinjenja.

KORISNOST

[0125] Jedinjenja pronalaska moduliraju aktivnost kinaze, uključujući modulaciju RIPK1. Shodno tome, jedinjenja formule (Ie) su korisna u tretiranju stanja koja su u vezi sa modulacijom aktivnosti kinaze, a posebno selektivnom inhibicijom aktivnosti RIPK1. U sledećem tehničkom rešenju, jedinjenja formule (Ie) imaju prednost selektivnosti za aktivnost RIPK1, poželjno od najmanje 10 puta, ili alternativno, 20 puta, do preko 1,000 puta selektivnije u odnosu na druge kinaze.

[0126] Kako se ovde koriste, termini "tretiranje" ili "lečenje" obuhvataju lečenje bolesnog stanja kod sisara, posebno kod čoveka, i uključuju: (a) sprečavanje ili odlaganje pojave bolesnog stanja kod sisara, posebno, kada je takav sisar predisponiran za bolesno stanje, ali mu još nije dijagnostikovano da ga ima; (b) inhibiranje bolesnog stanja, tj., zaustavljanje njegovog razvoja; i/ili (c) postizanje potpunog ili delimičnog smanjenja simptoma ili bolesnog stanja, i/ili ublažavanje, poboljšavanje, smanjenje ili lečenje bolesti ili poremećaja i/ili njegovih simptoma.

[0127] S obzirom na njihovu aktivnost kao inhibitora RIPK1, jedinjenja Formule (Ie) su korisna u tretiranju stanja koja su u vezi sa RIPK1 uključujući, ali ne ograničavajući se na, inflamatorne bolesti kao što su Kronova bolest i ulcerozni kolitis, inflamatorna bolest creva, astma, kalem protiv domaćina bolest, hronična opstruktivna bolest pluća; autoimune bolesti kao što su Gravesova bolest, reumatoidni artritis, sistemski eritemski lupus, psorijaza; destruktivni poremećaji kostiju kao što su bolest resorpcije kostiju, osteoartritis, osteoporoza, poremećaj kostiju povezan sa multiplim mijelomom; proliferativni poremećaji kao što je akutna mijelogena leukemija, hronična mijelogena leukemija; angiogeni poremećaji kao što su angiogeni poremećaji uključujući solidne tumore, očne neovaskularizacije i infantilne hemangiome; zarazne bolesti kao što su sepsa, septički šok i Šigeloza; neurodegenerativne bolesti kao što su Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, ALS, cerebralne ishemije ili neurodegenerativne bolesti uzrokovane traumatskim povredama, onkološke i virusne bolesti kao što su metastatski melanom, Kapošijev sarkom, multipli mijelom, i HIV infekcija i CMV retinitis, AIDS; fibrotična stanja kao što je nealkoholni steatohepatitis (NASH); i srčana stanja kao što je reperfuzije usled ishemije; redom.

[0128] Tačnije, specifična stanja ili bolesti koje se mogu lečiti inventivnim jedinjenjima uključuju, bez ograničenja, pankreatitis (akutni ili hronični), astmu, alergije, respiratorni distres sindrom kod odraslih, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, glomerulonefritis, reumatoidni artritis, sistemski eritemski lupus, sklerodermu, hronični tiroiditis, Grejvsovu bolest, autoimuni gastritis, dijabetes, autoimunu hemolitičku anemiju, autoimunu neutropeniju, trombocitopeniju, atopijski dermatitis, hronični aktivni hepatitis, mijasteniju gravis, ALS, multiplu sklerozu, inflamatornu bolest creva, ulcerozni kolitis, Kronovu bolest, psorijazu, graft protiv domaćina bolest, inflamatornu reakciju izazvanu endotoksinom, tuberkulozu, aterosklerozu, degeneraciju mišića, kaheksiju, psorijatični artritis, Reiterov sindrom, giht, traumatski artritis, artritis izazvan rubeolom, akutni sinovitis, bolest β-ćelija pankreasa; bolesti koje karakteriše masivna infiltracija neutrofila; reumatoidni spondilitis, gihtni artritis i druga artritisna stanja, cerebralnu malariju, hroničnu inflamatornu bolest pluća, silikozu, plućnu sarkoidozu, bolest resorpcije kostiju, odbacivanje alografta, groznicu i mijalgiju usled infekcije, kaheksiju koja je posledica infekcije, formiranje meloida, formiranje ožiljnog tkiva, ulcerozni kolitis, pirezu, grip, osteoporozu, osteoartritis, akutnu mijelogenu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, metastatski melanom, Kapošijev sarkom, multipli mijelom, sepsu, septički šok i Šigelozu; Alchajmerovu bolest, Parkinsonovu bolest, cerebralne ishemije ili neurodegenerativne bolesti uzrokovane traumatskom povredom; angiogene poremećaje uključujući solidne tumore, očnu neovaskularizaciju i infantilne hemangiome; virusne bolesti uključujući akutnu infekciju hepatitisom (uključujući hepatitis A, hepatitis B i hepatitis C), HIV infekciju i CMV retinitis, AIDS, ARC ili malignitet, i herpes; moždani udar, ishemiju miokarda, ishemiju kod srčanog udara, hipoziju organa, vaskularnu hiperplaziju, srčanu i bubrežnu reperfuzionu ozledu, trombozu, hipertrofiju srca, trombinom indukovanu agregaciju trombocita, endotoksemiju i/ili sindrom toksičnog šoka, sindrom endoperoksidaze sindaze-2, i pemfigus vulgaris. U drugom aspektu, postupci lečenja su oni u kojima se stanje bira između inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti i ulceroznog kolitisa, odbacivanja alografta, reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankilozirajućeg spondilitisa, psorijatičnog artritisa i pemfigus vulgaris, i nealkoholnog steatohepatitisa (NASH) i reperfuzije usled ishemije. U daljem aspektu, postupci lečenja su oni u kojima se stanje bira između multiple skleroze, amiotrofične lateralne skleroze i Alchajmerove bolesti.

[0129] Alternativno poželjni postupci lečenja su oni u kojima je stanje izabrano od reperfuzije povrede usled ishemije, uključujući cerebralnu reperfuzija povredu usled ishemije koja nastaje iz moždanog udara i srčanu reperfuzija povredu usled ishemije koja proističe iz infarkta miokarda.

[0130] Kada se ovde koriste termini „stanje u vezi sa RIPK1“ ili „bolest ili poremećaj u vezi sa RIPK1“, svaki od njih ima za cilj da obuhvati sva stanja koja su gore identifikovana kao da se dugo ponavljaju, kao i svako drugo stanje na koje utiče RIPK1 aktivnost kinaze.

[0131] Predmetni pronalazak stoga obezbeđuje postupke za lečenje takvih stanja, koji obuhvataju administriranje subjektu kome je to potrebno terapijski efikasne količine najmanje jednog jedinjenja Formule (Ie) ili njegove soli. "Terapijski efikasna količina" treba da uključuje količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja je efikasna kada se daje sama ili u kombinaciji da inhibira RIPK1.

[0132] Postupci lečenja stanja koja su u vezi sa RIPK1 kinazom mogu da sadrže primenu jedinjenja Formule (Ie) samog ili u kombinaciji jedno sa drugim i/ili drugih pogodnih terapijskih sredstava korisnih u lečenju takvih stanja. Shodno tome, "terapijski efikasna količina" takođe treba da uključuje količinu kombinacije jedinjenja za koju se tvrdi da je efikasna da inhibira RIPK1 i/ili tretira bolesti koje su u vezi sa RIPK1.

[0133] Takva druga terapijska sredstva uzeta kao primer uključuju kortikosteroide, rolipram, kalfostin, citokin-supresivne antiinflamatorne lekove (CSAID), interleukin-10, glukokortikoide, salicilate, azot oksid i druge imunosupresive; inhibitore nuklearne translokacije, kao što je deoksispergualin (DSG); nesteroidne antiinflamatorne lekove (NSAID) kao što su ibuprofen, celekoksib i rofekoksib; steroide kao što su prednizon ili deksametazon; antiinflamatorna antitela kao što su vedolizumab i ustekinumab, antiinflamatorne inhibitore kinaze kao što su TYK2 inhibitori, antivirusna sredstva kao što je abakavir; antiproliferativna sredstva kao što su metotreksat, leflunomid, FK506 (takrolimus, Prograf); citotoksične lekove kao što su azatiprin i ciklofosfamid; TNF-α inhibitore kao što su tenidap, anti-TNF antitela ili rastvorljivi TNF receptor, rapamicin (sirolimus ili Rapamune) ili derivate istog, i agoniste FGF21.

[0134] Gorenavedena druga terapijska sredstva, kada se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, mogu se koristiti, na primer, u onim količinama koje su naznačene u Referentnom priručniku za lekare (Physicians’ Desk Reference - PDR) ili kako drugačije odredi obučeno lice u oblasti. U postupcima iz predmetnog pronalaska, takvo drugo terapijsko sredstvo (sredstva) se može primeniti pre, istovremeno sa ili posle primene inventivnih jedinjenja. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije sposobne za lečenje stanja koja su u vezi sa RIPK1 kinazom, uključujući stanja posredovana IL-1, IL-6, IL-8, IFNy i TNF-α, kao što je gore opisano.

[0135] Inventivne kompozicije mogu sadržati druga terapijska sredstva kao što je gore opisano i mogu se formulisati, na primer, upotrebom konvencionalnih čvrstih ili tečnih vehikuluma ili razblaživača, kao i farmaceutskih aditiva tipa koji odgovara načinu željene primene (npr. ekscipijensi, vezivna sredstva, konzervansi, stabilizatori, arome, itd.) prema tehnikama kao što su one koje su dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije.

[0136] Shodno tome, predmetni pronalazak dalje uključuje kompozicije koje sadrže jedno ili više jedinjenja formule (Ie) i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0137] "Farmaceutski prihvatljiv nosač" se odnosi na medijume opšte prihvaćene u oblasti za isporuku biološki aktivnih sredstava životinjama, posebno sisarima. Farmaceutski prihvatljivi nosači su formulisani u skladu sa brojnim faktorima koji su u okviru delokruga onih koji su uobičajenih veština u oblasti. Ovo uključuje bez ograničenja tip i prirodu aktivnog sredstva koje se formuliše; subjekt kome treba da se primeni kompozicija koja u sebi ima sredstvo; nameravani način primene kompozicije; i ciljanu terapijsku indikaciju. Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju i vodene i nevodene tečne medijume, kao i razne čvrste i polučvrste dozne oblike. Takvi nosači mogu uključivati niz različitih sastojaka i aditiva pored aktivnog sredstva, pri čemu su takvi dodatni sastojci uključeni u formulaciju iz raznih razloga, npr. stabilizacija aktivnog sredstva, vezivna sredstva, itd., dobro poznati onima koji su uobičajenih veština u oblasti. Opisi odgovarajućih farmaceutski prihvatljivih nosača i faktora uključenih u njihov izbor nalaze se u različitim lako dostupnim izvorima kao što je, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. izdanje, 1985.

[0138] Jedinjenja Formule (I) se mogu administrirati na bilo koji način pogodan za stanje koje se leči, što može zavisiti od potrebe za lečenjem specifičnim za mesto ili količine leka koji treba da se isporuči. Lokalna primena je generalno poželjna za bolesti koje su u vezi sa kožom, a sistematsko lečenje za kancerogena ili prekancerozna stanja, iako se razmatraju i drugi načini isporuke. Na primer, jedinjenja se mogu administrirati oralno, kao što je u obliku tableta, kapsula, granula, praha ili tečnih formulacija uključujući sirupe; lokalno, kao što je u obliku rastvora, suspenzija, gela ili masti; sublingvalno; bukalno; parenteralno, kao što su subkutane, intravenske, intramuskularne ili intrasternalne injekcije ili tehnike infuzije (npr. kao sterilni injektabilni vod. ili nevod. rastvori ili suspenzije); nazalno, kao što je sprej za inhalaciju; lokalno, kao što je u obliku kreme ili masti; rektalno kao što je u obliku supozitorija; ili lipozomalno. Mogu se davati formulacije jedinične doze koje sadrže netoksične, farmaceutski prihvatljive vehikulume ili razblaživače. Jedinjenja se mogu davati u obliku pogodnom za trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje. Trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje može se postići sa odgovarajućim farmaceutskim kompozicijama ili, posebno u slučaju produženog oslobađanja, sa uređajima kao što su potkožni implantati ili osmotske pumpe.

[0139] Kompozicije za lokalnu primenu uzete kao primer uključuju lokalni nosač kao što je PLASTIBASE<®>(mineralno ulje gelirano polietilenom).

[0140] Kompozicije za oralnu primenu uzete kao primer uključuju suspenzije koje mogu da sadrže, na primer, mikrokristalnu celulozu za prenošenje mase, algininsku kiselinu ili natrijum alginat kao sredstvo za suspenziju, metilcelulozu kao pojačivač viskoznosti i zaslađivače ili arome kao što su oni poznati u tehnici; i tablete sa trenutnim oslobađanjem koje mogu sadržati, na primer, mikrokristalnu celulozu, dikalcijum fosfat, skrob, magnezijum stearat i/ili laktozu i/ili druge ekscipijense, vezivna sredstva, ekstendere, dezintegrante, razblaživače i maziva kao što su oni poznati u tehnici. Inventivna jedinjenja se takođe mogu isporučiti oralno sublingvalnom i/ili bukalnom primenom, na primer, sa oblikovanim, kompresovanim ili tabletama sušenim zamrzavanjem. Kompozicije uzete kao primer mogu da uključuju brzo rastvorljive razblaživače kao što su manitol, laktoza, saharoza i/ili ciklodekstrini. U takve formulacije takođe mogu biti uključeni ekscipijensi visoke molekulske mase kao što su celuloze (A VICEL<®>) ili polietilen glikoli (PEG); ekscipijens koji pomaže adheziju sluzokože kao što je hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metil celuloza (HPMC), natrijum karboksimetil celuloza (SCMC) i/ili kopolimer anhidrida maleinske kiseline (npr. GANTREZ<®>); i sredstva za kontrolu oslobađanja kao što je poliakrilni kopolimer (npr. CARBOPOL 934<®>). Maziva, glidandi, arome, sredstva za bojenje i stabilizatori se takođe mogu dodati radi lakše proizvodnje i upotrebe.

[0141] Kompozicije za nazalni aerosol ili inhalaciju uzete kao primer uključuju rastvore koji mogu da sadrže, na primer, benzil alkohol ili druge pogodne konzervanse, promotere apsorpcije za poboljšanje apsorpcije i/ili biodostupnost, i/ili druga sredstva za rastvaranje ili raspršivanje kao što su ona poznata u tehnici.

[0142] Kompozicije za parenteralnu primenu uzete kao primer uključuju rastvore ili suspenzije za injekcije koje mogu sadržati, na primer, pogodne netoksične, parenteralno prihvatljive razblaživače ili rastvarače, kao što su manitol, 1,3-butandiol, voda, Ringerov rastvor, izotonični rastvor natrijum hlorida, ili druga pogodna sredstva za raspršivanje ili vlaženje i suspendovanje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride, i masne kiseline, uključujući oleinsku kiselinu.

[0143] Kompozicije za rektalnu primenu uzete kao primer uključuju supozitorije koje mogu sadržati, na primer, pogodne neiritirajuće ekscipijense, kao što su kakao puter, sintetički gliceridni estri ili polietilen glikoli, koji su čvrsti na uobičajenim temperaturama, ali se pretvaraju u tečnost i/ili rastvaraju u rektalnoj šupljini da bi oslobodili lek.

[0144] Terapijski efikasnu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska može odrediti neko od uobičajenih veština u oblasti i uključuje količine doze uzete kao primer za sisara od oko 0.05 do 1000 mg/kg; 1-1000 mg/kg; 1-50 mg/kg; 5-250 mg/kg; 250-1000 mg/kg telesne težine aktivnog jedinjenja dnevno, koje se može primeniti u jednoj dozi ili u obliku pojedinačnih podeljenih doza, kao što je od 1 do 4 puta dnevno. Podrazumeva se da nivo specifične doze i učestalost doziranja za bilo kog određenog subjekta mogu da variraju i da će zavisiti od različitih faktora, uključujući aktivnost specifičnog upotrebljenog jedinjenja, metaboličku stabilnost i dužinu delovanja tog jedinjenja, vrstu, starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i ishranu subjekta, način i vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova i težinu određenog stanja. Poželjni subjekti za lečenje uključuju životinje, najpoželjnije vrste sisara kao što su ljudi, i domaće životinje kao što su psi, mačke, konji i slično. Stoga, kada se ovde koristi pojam "pacijent", ovaj pojam treba da uključuje sve subjekte, najpoželjnije vrste sisara, na koje utiče posredovanje nivoa enzima RIPK1.

[0145] Nekroptoza je regulisani put ćelijske smrti koji je indukovan i inflamatornim faktorima (TNFalpha) kao i virusnim okidačima kao što su TLR agonisti. Proces indukcije nekroptoze se dešava nakon aktivacije i fosforilacije RIPK1 da bi se formirao kompleks sa RIPK3 (koji se naziva nekrozom). Protein nalik domenu mešovite kinaze (MI,KL) regrutuje se u RIPK3 i nizvodna je meta RIPK3 kinaze, što dovodi do fosforilacije MLKL na Thr357 i Ser358. Fosforilirani MLKL (pMLKL) dovodi do oligomerizacije MLKL, translokacije na plazma membranu i naknadnog formiranja pora što dovodi do oštećenja integriteta membrane (Moriwaki, K., i F.K. Chan.2013. RIP3: a molecular switch for necrosis and inflammation. Genes Dev.27: 1640-1649). Prema tome, razumevanje potentnosti jedinjenja RIPK1 zasnovano na direktnom vezivanju RIPK1, kao i funkcionalno očitavanje aktivnosti nekroptoze (pMI,KL) je važno za procenu aktivnosti i potencije inhibitora RIPK1.

Test visokog sadržaja MLKL fosforilacije

[0146] Ćelije humanog kolorektalnog adenokarcinoma HT29-L23 su održavane u medijumu RPMI 1640 koji sadrži 10% toplotno inaktivirani FBS, 1% Penicilin-Streptomicin i 10 mM HEPES. Ćelije su zasejane u količini od 2000 ćelija/bunariću u mikropločama sa 384 bunarića tretiranih kulturom tkiva (Greiner # 781090-3B) i inkubirane na 37 °C (5% CO2/95% O2) tokom 2 dana. Na dan analize, ćelije su tretirane test jedinjenjima u konačnim koncentracijama od 6.25 do 0.106 µM tokom 30 minuta na 37 °C (5% CO2/95% O2). Nekroptopza je izazvana mešavinom humanog TNFα (35 ng/mL) (Peprotech #300-01A), SMAC mimetika (iz US 2015/0322111 A1) (700 nM) i Z-VAD (140 nM) (BD pharmingen #51 -6936). Nakon 6 h inkubacije na 37 °C (5% CO2/95% O2), ćelije su fiksirane sa 4% formaldehida (ACROS 11969-0010) tokom 15 minuta na st, zatim permeabilizovane sa fosfatnim puferovanim fiziološkim rastvorom (PBS) koji u sebi ima 0.2% Triton-X-100 tokom 10 min. MLKL fosforilacija je detektovana korišćenjem anti-MI,KL (fosfo S358) antitela (Abcam #ab187091) (1:1000 razblaženje u Blokirajućem puferu [PBS sa dodatkom 0.1% BSA]) sa inkubacijom PN na 4 °C. Nakon tri pranja u PBS-u, kozja anti-zečja Alexa-488 (razblaženje 1:1000) (Life Technologies, A11008) i Hoechst 33342 (Life Technologies, H3570) (razblaženje 1:2000) u blokirajućem puferu su dodavana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Nakon još tri ciklusa ispiranja u PBS-u, mikroploče su zapečaćene, a ćelijske slike su dobijene u Cellomics ArrayScan VTI uređaju za snimanje visokog sadržaja opremljenom kamerom X1. Fluorescentne slike su snimljene korišćenjem 10x objektiva i 386-23 BGRFRN_BGRFRN i 485-20 BGRFRN BGRFRN seta filtera, za jezgra i MLKL fosforilaciju, respektivno. Skupovi slika su analizirani korišćenjem softvera Compartmental Analysis Bioapplication (Cellomics). Nivo fosforilacije MLKL je kvantifikovan kao MEAN_CircRingAvgIntenRatio. Maksimalni inhibitorni odgovor je definisan aktivnošću izazvanom pomoću Nec1s (CAS #: 852391-15-2, 6.25 µM). Vrednost IC50 je definisana kao koncentracija jedinjenja koja proizvodi 50% maksimalne inhibicije. Podaci su podešeni korišćenjem 4-parametarske logističke jednačine za izračunavanje vrednosti IC50 i Ymax.

RIPK1 HTRF Test vezivanja

[0147] Pripremljen je rastvor koji sadrži 0.2 nM Anti GST-Tb (Cisbio, 61GSTTLB), 90.6 nM probe i 1 nM His-GST-TVMV-hRIPK1(1-324) u FRET puferu (20 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0.015% Brij-35, 4mM DTT, 0.05 mg/mL BSA). Koristeći Formulatrix Tempest, rastvor antitelo/enzim/proba za detekciju (2 mL) je raspoređen u bunarčiće 1536 ploče (Crna niskovezujuća 1536 ploča od polistirena (Corning, 3724)) koja sadrži 10 nL jedinjenja od interesa u odgovarajućoj koncentraciji u DMSO. Ploča je inkubirana na st tokom 1 h. FRET je meren korišćenjem EnVision čitača ploča (Ekscitacija: 340 nM, Emisija: 520 nM/495 nM). Ukupni signal (0% inhibicije) je izračunat iz bunarčića koji sadrže samo 10 nL DMSO. Prazan signal (100% inhibicija) je izračunat iz bunarčića koji sadrže 10 nL od 15 nM staurosporina i internih kontrola.

Kloniranje i eksprimiranje bakulovirusa RIPK1 konstrukta

[0148] Kodirajući region humanog RIPK1(1-324) flankiran NdeI mestom na 5' kraju i stop kodonom TGA i XhoI mestom na 3' kraju je kodonski optimizovan i genski sintetisan u GenScript USA Inc. (Piscataway, NJ) i subkloniran u modifikovani pFastBac1 vektor (Invitrogen, Carlsbad, CA) sa N-terminalnom His-GST-TVMV oznakom, da generiše His-GST-TVMV-hRIPK1(1-324)-pFB. Vernost sintetičkog fragmenta je potvrđena sekvenciranjem.

[0149] Bakulovirus je generisan za konstrukt korišćenjem Bac-to-Bac ekspresionog sistema bakulovirusa (Invitrogen) prema protokolu proizvođača. Ukratko, rekombinantni bakmid je izolovan iz transformisanih ćelija kompetentnih DH10Bac E.coli (Invitrogen) i korišćen za transfekciju Spodoptera frugiperda (Sf9) ćelija insekata (Invitrogen). Bakulovirus je sakupljen 72 sata nakon transfekcije i pripremljena je zaliha virusa inficiranjem svežih Sf9 ćelija pri 1/1000 (v/v) odnosu tokom 66 sati.

[0150] Za proizvodnju proteina velikih razmera, ćelije Sf9 (Expression System, Davis, CA) uzgajane u ESF921 insekt medijumu (Expression System) pri 2 × 106 ćelija/ml su inficirane virusnim štokom pri 1/100 (v/v) odnosu tokom 66 sati. Proizvodnja je obavljena ili na skali od 10 L u kesi ze ćelije - cellbag od 22 L (GE Healthcare Bioscience, Pittsburgh, PA) ili na skali od 20 L u kesi ze ćelije od 50 L koristeći WAVE-Bioreactor System 20/50 (GE Healthcare Bioscience). Inficirane ćelije su sakupljene centrifugiranjem na 2000 opm tokom 20 minuta na 4 °C u SORVALL<®>RC12BP centrifugi. Ćelijski peleti su čuvani na -70 °C pre nego što je protein prečišćen.

Prečišćavanje His-GST-TVMV-hRIPK1(1-324)

[0151] Ćelijska pasta koja sadrži RIPK1 je resuspendovana u 50 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM imidazola, 5% glicerola, 5 mM MgSO4, 1 mM TCEP, 25 U/ml Benzonaza i potpune proteaza inhibitorne tablete (1/50 ml, Roche Diagnostics, Indianapolis, IN).Ćelije su lizirane azotnom kavitacijom korišćenjem posude bez mešanja pod pritiskom @ 525 PSI (Parr Instrument Company, Moline, IL).Suspenzija je izbistrena centrifugiranjem na 136,000 × g tokom 40 minuta, na 4 °C. Lizat je dekantovan od peleta i propušten kroz NiNTA Superflow kertridž od 5 ml (Qiagen, Valensija, CA) korišćenjem AKTA Pure (GE Healthcare). Kolona je eluirana linearnim gradijentom od 10 CV u 50 mM Tris 7.5, 150 mM NaCl, 500 mM imidazola, 5% glicerola, 1 mM TCEP. Pik frakcije su sakupljene i direktno nanete na GSTrap 4B kolonu od 5 ml (GE Healthcare). Kolona je isprana sa 50 mM Tris 7.0, 150 mM NaCl, 5% glicerola, 1 mM DTT i eluirana u 10 CV linearnom gradijentu u 50 mM Tris 8.0, 150 mM NaCl, 20 mM redukovanog glutationa, 5% glicerola, 1 mM DTT. Frakcije identifikovane pomoću SDS-PAGE da sadrže RIPK1 su objedinjene i koncentrisane korišćenjem 30 kDa MWCO spin koncentratora (Amicon Ultra-15, Millipore, Billerica, MA) i nanete na HiLoad 26/600 Superdex 200 kolonu (GE Healthcare) ekvilibrisanu u 25mM Tris 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM TCEP, 5% glicerola. RIPK1 protein je eluiran kao dimer sa SEC kolone.

[0152] Prinos je bio ~8 mg/L sa čistoćom >95% kao što je određeno Coomassie stain SDS-PAGE gel analizom. LCMS analiza proteina je pokazala da je protein izgubio N-terminalni metionin, da je imao jedno fosforilisano mesto i da je delimično acetiliran. Protein je podeljen na alikvote i čuvan na -80 °C.

Test vezivanja PI3Kδ HTRF

[0153] Pripremljen je rastvor koji sadrži 0.2 nM Anti GST-Tb (Cisbio, 61GSTTLB), 40 nM probe i 1 nM GST-označen PIK3Cδ u kompleksu sa PIK3R1 (Invitrogen #PV5273) u FRET puferu (20 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0.015% Brij-35, 4 mM DTT, 0.05 mg/mL BSA). Koristeći Formulatrix Tempest, antitelo/enzim/proba rastvor za detekciju (2 mL) je raspoređen u u bunarčiće 1536 ploče (Crna niskovezujuća 1536 ploča od polistirena (Corning, 3724)) koja u sebi ima 10 nL jedinjenja od interesa u odgovarajućoj koncentraciji u DMSO. Ploča je inkubirana na st tokom 1 h. FRET je meren korišćenjem EnVision čitača ploča (Ekscitacija: 340 nM, Emisija: 520 nM/495 nM). Ukupni signal (0% inhibicije) je izračunat iz bunarčića koji sadrže samo 10 nL DMSO. Prazan signal (100% inhibicije) izračunat iz bunarčića koji sadrže 10 nL 15 nM staurosporina i interne kontrole.

[0154] Poželjna jedinjenja imaju nisku ili nikakvu aktivnost protiv PI3K, poželjno jedinjenja imaju PIK3 aktivnost od 1 µM ili veću.

[0155] Koristeći ove testove, određene su IC50vrednosti sledećih jedinjenja. Videti Tabelu A. Samo jedinjenja iz primera 29-31, 108, 109, 123 i 315 su predmet pronalaska. Ostali primeri su samo za referencu.

Tabela A

Pri

Postupak pripreme

[0156]

[0157] Jedinjenja Formule (I) i intermedijeri koji se koriste u pripremi jedinjenja Formule (I) mogu se dobiti korišćenjem procedura prikazanih u sledećim primerima i srodnim procedurama. Postupci i uslovi korišćeni u ovim primerima, i stvarna jedinjenja pripremljena u ovim primerima, nisu namenjeni da budu ograničavajući, već da pokažu kako se jedinjenja Formule (I) mogu pripremiti. Početni materijali i reagensi korišćeni u ovim primerima, kada nisu pripremljeni procedurom koja je ovde opisana, generalno su ili komercijalno dostupni, ili su navedeni u hemijskoj literaturi, ili se mogu pripremiti korišćenjem procedura opisanih u hemijskoj literaturi.

[0158] Skraćenice koje se ovde koriste su definisane na sledeći način: "1 x" za jedanput , "2 x" za dvaput, "3 x" za triput, "° C" za stepene Celzijusa, "ekv" za ekvivalent ili ekvivalente, "g" za gram ili grame, "mg" za miligram ili miligrame, "L" za litar ili litre, "mL" za mililitar ili mililitre, "µL" za mikrolitar ili mikrolitre, "N" za normalan, "M" za molarni, "mmol" za milimol ili milimole, "min" za minut ili minute, "h" za sat ili sate, "ST" za sobnu temperaturu, "PN" za preko noći, "atm" za atmosferu, "psi" za funte po kvadratnom inču , "conc." za koncentrovan, "zas" ili "zasićen" za zasićen, "CV" za zapremine kolone, "MW" za molekulsku masu, "mp" za tačku topljenja, "ee" za enantiomerni višak, "MS" ili "Mass Spec" za masenu spektrometriju, "m/z" za masu po jedinici naelektrisanja, "ESI" za elektrosprej jonizacionu masenu spektroskopiju, "HR" za visoku rezoluciju, „HRMS“ za masenu spektrometriju visoke rezolucije, „APCI“ za hemijsku jonizaciju pod atmosferskim pritiskom, „LCMS“ ili „LC/MS“ za masenu spektrometriju sa tečnom hromatografijom, „HPLC“ za tečnu hromatografiju pri visokom pritisku, „RP HPLC“ za HPLC reverzne faze , "prep" za preparativnu, "SFC" za superkritičnu fluidnu hromatografiju, "TLC" ili "tlc" za tankoslojnu hromatografiju, "Rf" za faktor zadržavanja, "UV" za ultraljubičasto, "NMR" za spektroskopiju nuklearne magnetne rezonance, "nOe" za spektroskopiju sa nuklearnim Overhauser efektom, "1H" za proton, "δ" za delta, "s" za singlet, "d" za dublet, "t" za triplet, "q" za kvartet, "m" za multiplet, "br" za široko, "MHz" za megaherce, i "α", "β", "R", "S", "E" i "Z" su stereohemijske oznake poznate stručnjaku u oblasti.

Me metil

Et etil

Pr propil

i-Pr izopropil

Bu butil

n-BuLi n-butillitijum

i-Bu izobutil

t-Bu terc-butil

Ph fenil

Bn benzil

BISPIN bis(pinakolato)diboron

Boc terc-butiloksikarbonil

ACN acetonitril

AcOH ili HOAc sirćetna kiselina

BOP benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum

heksafluorofosfat

CBz karbobenziloksi

DAST dietilaminosumpor trifluorid

DCE 1,2 dihloroetan

DCM dihlorometan

DIEA/DIPEA/Hünig-ova baza diizopropiletilamin

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DME 1,2-dimetoksietan

DMF dimetil formamid

DMSO dimetil sulfoksid

EDC/EDCI N-(3- dimtilaminopropil)-N'- etilkarbodiimid

Et3N ili TEA trietilamin

EtOAc etil acetat

Et2O dietil etar

EtOH etanol

HCl hlorovodonična kiselina

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

Heks heksan

HOBt ili HOBT 1- hidroksibenzotriazol

IBX 2- jodoksibenzoeva kiselina

i-PrOH ili IPA izopropanol

KHMDS kalijum bis(trimetilsilil)amid

KOAc kalijum acetat

LAH litijum aluminijum hidrid

LDA litijum diizopropilamid

LG odlazeća grupa

LHMDS litijum bis(trimetilsilil)amid

m-CPBA meta-hloroperoksibenzoeva kiselina

MeCN ili CAN acetonitril

MeOH metanol

MeI jodometan

MgSO4magnezijum sulfat

NBS N- bromosukcinimid

NCS N- hlorosukcinimid

NH4OAc amonijum acetat

OTf triflat ili trifluorometansulfonat

Pd2(dba)3tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0)

Pd(OAc)2paladijum(II) acetat

Pd/C paladijum na ugljeniku

PdCl2(dtbpf) [1,1'-Bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II)

Pd(dppf)Cl2[1,1'-bis(difenilfosfino)- ferocen]dihloropaladijum(II)

PG zaštitna grupa

PTFE politetrafluoroetilen ili Teflon

SiO2silika oksid ili silika gel

S-Phos ili SPhos dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfin

TBAI tetra-n-butilamonijum jodid

TEA trietil amin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF Tetrahidrofuran

TMS-Cl trimetilsilil hlorid

X-Phos ili XPhos 2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenil

XPhos Pd G2 XPhos predkatalizator 2. generacije, hloro(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)

[0159] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se sintetisati mnogim postupcima dostupnim stručnjacima u oblasti organske hemije (Maffrand, J.P. i sar., Heterocycles, 16(1):35-7 (1981)). Opšte sintetičke sheme za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska su opisane u nastavku. Ove sheme su ilustrativne i nisu namenjene da ograniče moguće tehnike koje stručnjak u oblasti može da koristi za pripremu jedinjenja koja su ovde stavljena na uvid javnosti. Numerisanje R grupa unutar sheme je u ilustrativne svrhe i nije namenjeno da ograniči patentne zahteve. Stručnjacima u oblasti će biti očigledni različiti postupci za pripremu jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Dodatno, različiti koraci u sintezi se mogu izvoditi u alternativnom nizu da bi se dobilo željeno jedinjenje ili jedinjenja.

[0160] Primeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska dobijenih postupcima opisanim u opštim shemama dati su u odeljku međuproizvoda i primerima koji su navedeni u daljem tekstu. Primeri jedinjenja se obično pripremaju kao racemske smeše. Priprema homohiralnih primera može se izvesti tehnikama koje su poznate stručnjaku. Na primer, homohiralna jedinjenja mogu biti pripremljena separacijom racemskih proizvoda preparativnom HPLC hiralne faze. Alternativno, primeri jedinjenja mogu se pripremiti postupcima za koje je poznato da daju enantiomerno obogaćene proizvode. Ovo uključuje, ali nije ograničeno na, inkorporaciju hiralnih pomoćnih funkcionalnosti u racemske intermedijere koji služe za kontrolu dijastereoselektivnosti transformacija, obezbeđujući enantio-obogaćene proizvode nakon cepanja hiralne pomoćne supstance.

[0161] Sledeće sheme su ilustrativne za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska. R grupe u shemama ne moraju nužno da koreliraju sa R grupama negde drugde u specifikaciji, i nije predviđeno da ograničavaju tehnička rešenja pronalaska.

[0162] Shema 1 ilustruje pristup sintezi jedinjenja predstavljenih sa 4. Funkcionalizacija polaznog materijala 1 se može postići kroz Suzuki reakciju kuplovanja (Miiaura, N. i Suzuki, A. Chemical Reviews, 95:2457-2483, 1995) da bi se obezbedila jedinjenja tipa koji je predstavljen sa 2.

Hidroliza estra u 2 daje karboksilnu kiselinu ili karboksilatnu so koja se može funkcionalizovati amidacijom (Tetrahedron, 61:10827-10852, 2005) da bi se dobila jedinjenja kao što je 4.

Odgovarajuća funkcionalizacija intermedijera korišćenih u predmetnom pronalasku da bi se pripremila jedinjenja poput 4 može se postići kroz Suzuki reakciju ili jednostavne reakcije poznate stručnjacima u oblasti.

[0163] Shema 2 ilustruje alternativni postupak za dolazak do intermedijera kao što je 2. U ovom scenariju, halobenzen kao što je 5 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat. Dodavanje 1 i vodene baze omogućava da dođe do drugog kuplovanja. Važno je da se ovaj postupak za dolazak do 2 može pokrenuti unazad. Konkretno, 1 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat, a zatim da se podvrgne kuplovanju sa halidom 5 da bi se proizveli intermedijeri predstavljeni sa 2.

[0164] Shema 3 opisuje alternativnu pripremu jedinjenja okarakterisanih sa 4. Karboksilna kiselina 6 može da se podvrgne hemiji amidacije pod različitim uslovima poznatim stručnjacima u oblasti da bi se dobili intermedijeri kao što je 7. Intermedijeri kao što je 7 mogu da se podvrgnu in situ konverziji u boronat, nakon čega sledi kuplovanje sa 1 da bi se dobila jedinjenja slična 4.

Alternativno, jedinjenje 1 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat, nakon čega sledi kuplovanje sa 7 da bi se dobila jedinjenja kao što je 4.

[0165] Shema 4 opisuje još jednu alternativnu pripremu za jedinjenja slična 4. Boronatni estri kao što je 8 mogu biti hidrolizovani do njihovih kiselinskih parnjaka. Karboksilne kiseline mogu da se podvrgnu amidaciji pod različitim uslovima poznatim stručnjacima u oblasti da bi se dobila jedinjenja kao što je 10. Suzuki kuplovanje sa 1 proizvodi jedinjenja slična 4.

[0166] Shema 5 ilustruje još jedan pristup za obezbeđivanje jedinjenja kao što je 3. U ovom primeru, funkcionalizacija N-Boc zaštićenog početnog materijala 11 može se postići kroz Suzuki reakciju kuplovanja da bi se obezbedila jedinjenja kao što je 12 direktno ili mešavina jedinjenja tipa predstavljenog sa 12 i 13. Intermedijeri kao što su 12 i 13, bilo odvojeni ili kao smeša, mogu se konvertovati u 3 hidrolizom estra nakon čega sledi naknadni tretman sa TFA. Alternativno, intermedijeri kao što su 12 i 13 mogu se prvo tretirati sa TFA, nakon čega sledi hidroliza estra, da bi se dobila jedinjenja predstavljena sa 3.

[0167] Shema 6 prikazuje alternativni postupak za dolazak so intermedijera kao što su 12 i 13. U ovom scenariju, jod ili bromobenzen kao što je 5 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat. Dodavanje 11 i vodene baze omogućava da dođe do drugog kuplovanja. Važno je da se ovaj postupak za dolazak do ili samo 12 ili mešavine 12 i 13 može pokrenuti i obrnuto. Konkretno, 11 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat, a zatim da se podvrgne kuplovanju sa halidom 5 da bi se proizveli intermedijeri predstavljeni sa 12 i 13.

[0168] Shema 7 opisuje alternativnu pripremu jedinjenja okarakterisanih sa 4. Intermedijeri kao što je 7 mogu se podvrgnuti in situ konverziji u boronat, nakon čega sledi kuplovanje sa 11 da bi se obezbedila mešavina jedinjenja tipa predstavljenog sa 14 i 15. Alternativno, 11 može da se podvrgne in situ konverziji u boronat, nakon čega sledi kuplovanje sa 7 da bi se dobili materijali kao što su 14 i 15. Intermedijeri kao što su 14 i 15 mogu se tretirati sa TFA da bi se dobila jedinjenja slična 4.

[0169] Shema 8 opisuje još jednu pripremu jedinjenja okarakterisanih sa 4. Jedinjenja kao što je 11 mogu da se podvrgnu in situ konverziji u boronat, nakon čega sledi Suzuki kuplovanje sa halidom 6 karboksilne kiseline da bi se obezbedilo ili 16 ili mešavina jedinjenja tipa predstavljenog sa 16 i 17. Amidi kao što su 16 i 17 mogu se tretirati sa TFA ili odvojeno ili kao mešavina da bi se dobila jedinjenja slična 4.

[0170] Shema 9 obezbeđuje alternativna sredstva za pripremu jedinjenja predstavljenih sa 3.

Jedinjenja tipa 1 se mogu konvertovati u njihov odgovarajući boronat estar in situ. Naknadno Suzuki kuplovanje sa halidom 6 karboksilne kiseline obezbeđuje intermedijere kao što je 3.

[0171] Shema 10 ilustruje alternativni pristup za obezbeđivanje jedinjenja kao što je 4. U ovom primeru, jedinjenja kao što je 11 mogu da se konvertuju u boronat kroz Suzuki reakciju kuplovanja da bi se obezbedila jedinjenja kao što je 18. Kuplovanje kiselina kao što je 6 sa aminima može dati amide kao što je 19 koristeći standardna sredstva za kuplovanje kao što su BOP ili HATU. Intermedijeri kao što su 18 i 19 mogu se kuplovati kroz Suzuki reakciju kuplovanja da bi se obezbedila jedinjenja kao što je 16. Tretman kiselinom kao što je TFA ili HCl može da obezbedi jedinjenja kao što je 4.

[0172] Prečišćavanje međuproizvoda i finalnih proizvoda je izvedeno bilo hromatografijom sa normalnim ili obrnutim fazama. Hromatografija sa normalnim fazama je izvedena korišćenjem prethodno upakovanih kertridža od silicijum dioksida eluiranjem bilo sa gradijentom heksana i etil acetata ili dihlorometanom i metanolom osim ako nije drugačije naznačeno. Preparativna HPLC ili LCMS sa obrnutim fazama je tipično izvedena korišćenjem C18 kolona eluiranjem sa gradijentima rastvarača A (90% vode, 10% metanola, 0.1% TFA) i rastvarača B (10% vode, 90% metanola, 0.1% TFA, UV 220 nm), ili sa gradijentima rastvarača A (95% vode, 5% acetonitrila, 0.1% TFA) i rastvarača B (5% vode, 95% acetonitrila, 0.1% TFA, UV 220 nm), ili sa gradijentima rastvarača A (98% vode, 2% acetonitrila, 0.05% TFA) i rastvarača B (98% acetonitrila, 2% vode, 0.05% TFA, UV 254 nm), ili sa gradijentima rastvarača A (95% vode, 5% acetonitrila sa 10 mM amonijum acetata) i rastvarača B (95% acetonitrila, 5% vode sa 10 mM amonijum acetata).

[0173] U većini primera, dve analitičke LCMS injekcije su korišćene za određivanje konačne čistoće.

[0174] Postupak A: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 min, zatim zadržavanje 0.75 min na 100% B; Protok: 1.11 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

[0175] Postupak B: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 min, zatim zadržavanje 0.75 min na 100% B; Protok: 1.11 mL/min; Detekcija: UV na 220nm.

[0176] U manjem broju primera analitičke HPLC injekcije su korišćene za određivanje konačne čistoće.

[0177] Postupak A: Kolona: Sunfire C18, 3.0 x 150 mm, 3.5 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100% B tokom 10 min; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 i 254 nm

[0178] Postupak B: Kolona: Xbridge Phenyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100% B tokom 10 min; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 i 254 nm

[0179] Postupak C: Kolona: XBridge C18, 3.0 x 150 mm, 3.5 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum bikarbonata; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum bikarbonata; Gradijent: 0-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 i 254 nm

[0180] Postupak D: Kolona: XBridge Phenyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µM čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum bikarbonata; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum bikarbonata; Gradijent: 0-100% B tokom 15 minuta; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 i 254 nm..

[0181] Većina tokova masenih spektara je bila: LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ BEH C18, 2.11 x 50 mm, 1,7 µm; Mobilna faza A: 2:98 voda:acetonitril sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 98:2 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100% B tokom 2 minuta; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

[0182] Protonske NMR su se odvijale uz potiskivanje vode osim ako nije drugačije naznačeno.

[0183] Samo jedinjenja iz primera 29-31, 108, 109, 123 i 315 su predmet pronalaska. Ostali primeri su samo za referencu.

Primer 1: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid

[0184]

[0185] 1A: metil 5-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoat: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodat je štapić za mešanje, [1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (66.0 mg, 0.102 mmol), N,N-bis-Boc-2-amino-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (1.41 g, 3.40 mmol) i metil 4-fluoro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (1.00 g, 3.40 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, nakon čega su dodati 1,4-dioksan (17 mL) i trikalijum fosfat (2M u H2O) (5.10 mL, 10.2 mmol). Dobijena smeša je degasirana propuštanjem N2kroz nju tokom 5 min, zatim je smeša mešana na 80 °C tokom 16 h. Sirova smeša je prečišćena fleš kolonskom hromatografijom (silika, elucioni gradijent EtOAc u Heks 0% do 25% do 50%) da bi se dobio metil 5-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoat (0.810 g, 2.02 mmol, 60 % prinos) kao glavni proizvod, i metil 5-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoat (0.520 g, 1.04 mmol, 31% prinos) kao sporedni proizvod. 5-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.63 - 8.55 (m, 1H), 8.15 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.20 - 7.14 (m, 1H), 7.11 (d, J=11.4 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 1.56 (d, J=0.8 Hz, 9H).

MS ESI m/z 501.1 (M+H)<+>

[0186] 1B: 5-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodati su štapić za mešanje i metil 5-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoat (1.06 g, 2.64 mmol), a zatim su dodati THF (11 mL), MeOH (2.2 mL) i natrijum hidroksid, 1M vodeni (7.92 mL, 7.92 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i 1 N vod HCl (100 mL). Smeša je promućkana i faze su razdvojene. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (100 mL), osušen sa anhidrovanim MgSO4i filtriran kroz celit. Sirova 5-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina (1.00 g, 2.59 mmol) tako dobijena je direktno upotrebljena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 387.0 (M+H)<+>

[0187] 1C: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina: U bocu sa okruglim dnom od 250 mL dodati su štapić za mešanje i 5-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina (1.00 g, 2.59 mmol), a zatim su dodati DCM (6.47 mL) i TFA (6.47 mL). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 3 dana. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobila 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina, TFA (850 mg, 2.12 mmol, 82 % prinos) koji je direktno podvrgnut sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 287.3 (M+H)<+>

[0188] 1: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid: U reakcionu bočicu od 8 mL dodat je štapić za mešanje, BOP (24.9 mg, 0.0560 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol, HCl (12.5 mg, 0.0560 mmol) i 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina, TFA (15 mg 0.037 mmol). Bočica je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, zatim su dodati DMF (375 µL) i DIPEA (65 µL, 0.375 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 16% B, 16-56% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid (7.3 mg, 0.016 mmol, 43 % prinos).

[0189]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 8.37 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 2H), 7.37 (s, 4H), 7.26 (br d, J=11.9 Hz, 1H), 7.09 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.05 (br s, 2H), 5.53 - 5.42 (m, 1H), 4.70 - 4.60 (m, 1H), 3.30 (q, J=6.7 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.89 - 1.80 (m, 2H). MS ESI m/z 453.9 (M+H)<+>

Primer 2: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid

[0190]

[0191] 2A: 3-okso-3-(4-(trifluorometil)fenil)propannitril: U rastvor metil 4-(trifluorometil)benzoata (1.00 g, 4.80 mmol) u suvom toluenu (4.8 mL) pod azotom, NaH (0.384 g, 9.60 mmol) pažljivo je dodat. Ukapavanjem je dodat anhidrovani acetonitril (1.25 mL, 24.0 mmol) i dobijena smeša je zagrevana na 80 °C PN pod azotom. Dobijena suspenzija je razblažena heksanima, a čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana heksanom. Čvrsti prah je zatim rastvoren u vodi (50 mL) i dodat je 1N vodeni HCl (približno 20 mL) uz mešanje dok se ne formira talog. Dodavanje 1N HCl je prekinuto kada je postignut pH = 0-1. Dobijeni talog je izolovan filtracijom i ostavljen da se osuši na vazduhu, a zatim pod visokim vakuumom da bi se dobio 3-okso-3-(4-(trifluorometil)fenil)propannitril (0.892 g, 4.18 mmol, 62% čistoće određeno NMR, 54 % prinosa). Proizvod je korišćen kakav jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0192]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.05 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.81 (d, J=8.1 Hz, 2H), 4.11 (s, 2H).

[0193] 2B: 3-3-amino-1-(4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ol: U bočicu od 20 mL dodati su štapić za mešanje i 3-okso-3-(4-(trifluorometil)fenil)propannitril (0.300 g, 1.41 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, nakon čega je dodat THF (7 mL). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i polako je dodat kompleks boran dimetil sulfida (1.4 mL, 5M u THF, 7.04 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC sa reverznom fazom (Rastvarač A: 10 % acetonitril, 90 % H2O, 0.1 % TFA; Rastvarač B: 90 % acetonitril, 10 % H2O, 0.1 % TFA; Kolona: Waters Atlantis 30 x 100 mm S5; Gradijent : 10-70 % B) da bi se dobio 3-amino-1-(4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ol (0.150 g, 0.684 mmol, 49 % prinos).

[0194] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.73 (br d, J=7.8 Hz, 2H), 7.57 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 4.81 (dd, J=3.8, 2.9 Hz, 1H), 2.88 (br d, J=4.4 Hz, 2H), 2,02 - 1.70 (m, 2H).

MS ESI m/z 220.05 (M+H)+

[0195] 2: Jedinjenje iz nalsova je pripremljeno na sličan način kao završni korak opisan za primer 1, zamenom 3-amino-1-(4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ola za (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol, HCl, da bi se dobio racemski 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid (11.5 mg, 0.0240 mmol, 32 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.58 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.41 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.61 -7.50 (m, 4H), 7.25 (d, J=12.0 Hz, 1H), 7.11 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.74 (dd, J=7.7, 4.9 Hz, 1H), 3.37 - 3.27 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.87 (dt, J=14.6, 7.5 Hz, 2H).

MS ESI m/z 488.0 (M+H)<+>

Primer 3: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid enantiomer 1

[0196]

[0197] Racemski 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid je razdvojen na dva pojedinačna stereoizomera korišćenjem SFC hiralne hromatografije pod sledećim uslovima: Kolona: Hiralni OD 30 x 250 mm. 5 mikrona; Mobilna faza: 65% CO2/ 35% IPA w/0.1% DEA; Uslovi protoka: 100 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 1.5 mL 9.8 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani pik su koncentrovane da bi se dobio 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid enantiomer 1 (2.9 mg, 0.0060 mmol, 8 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (d, J=6.7 Hz, 1H), 8.40 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 7.70 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 7.63 - 7.57 (m, 4H), 7.29 (br d, J=11.9 Hz, 1H), 7.12 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.80 - 4.75 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.95 - 1.83 (m, 2H).

MS ESI m/z 488.3 (M+H)<+>

Primer 4: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid enantiomer 2

[0198]

[0199] Jedinjenje iz naslova 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-N-(3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)propil)-2-metilbenzamid enantiomer 2 (2.7 mg, 0.0060 mmol, 8 % prinos) dobijen je kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 3.

[0200]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.40 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 7.71 (br d, J=8.2 Hz, 2H), 7.63 - 7.57 (m, 4H), 7.29 (br d, J=11.9 Hz, 1H), 7.12 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.80 - 4.75 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.96 - 1.82 (m, 2H).

MS ESI m/z 488.3 (M+H)<+>

Tabela 1: Jedinjenja u Tabeli 1 su pripremljena na sličan način kao u primerima 2, 3 i 4.

Primer 11: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid

[0201]

[0202] 11A: etil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat i etil 3-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodat je štapić za mešanje, [1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (0.125 g, 0.192 mmol), etil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat (1.00 g, 3.83 mmol) i N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (2.12 g, 4.60 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, a zatim su dodati 1,4-dioksan (19.2 mL) i trikalijum fosfat, 2M vodeni (5.8 mL, 11.5 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 3 h. Sirova smeša je prečišćena fleš hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, gradijent eluiranja EtOAc u Heks 0% do 50%) da bi se dobio etil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (1.75 g, 3.40 mmol, 89 % prinos) i etil 3-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (0.136 g, 0.328 mmol, 9 % prinos).

[0203] etil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.56 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.83 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.45 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.28 - 7.23 (m, 1H), 7.16 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.45 (q, J=7.3 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.48 (s, 18H), 1.41 (t, J=7.3 Hz, 3H).

[0204] etil 3-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.56 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.44 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.14 (dd, J=7.6, 2.3 Hz, 2H), 4.45 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.56 (s, 9H), 1.41 (t, J=7.2 Hz, 3H). MS ESI m/z 415.2 (M+H)<+>

[0205] 11B: etil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodati su mešač i etil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (1.75 g, 3.40 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, a zatim je dodat DCM (8.5 mL) i TFA (8.5 mL). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h. Smeša je koncentrovana in vacuo i sirovina je direktno upotrebljena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 315.1 (M+H)<+>

[0206] 11C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodati su štapić za mešanje, etil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (1.07 g, 3.23 mmol) i litijum hidroksid monohidrat (0.679 g, 16.2 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, zatim su dodati THF (35 mL) i H2O (5.8 mL). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 3 dana. Smeša je koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je razblažen 1N vodenom HCl (100 mL), ispran dietil etrom (50 mL), a vodena faza je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline, HCl (2.00 g, 3.10 mmol, 96 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.0 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H).

MS ESI m/z 286.8 (M+H)<+>

[0207] 11: U bočicu od 8 mL dodat je mešač, 4,4,4-trifluoro-3-fenilbutan-1-amin (81.0 mg, 0.397 mmol) i 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline, HCl (171 mg, 0.265 mmol). Bočica je evakuisana i napunjena azotom, a zatim je dodat BOP (141 mg, 0.318 mmol), N,N-diizopropiletilamin (0.230 ml, 1.33 mmol) i DMF (2.7 mL). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 24% B, 24-64% B tokom 23 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da bi se dobio racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6- metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid (122 mg, 0.259 mmol, 98 % prinos).

[0208]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (t, J=5.3 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.47 - 7.38 (m, 5H), 7.23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 3.72 (td, J=10.1, 3.2 Hz, 1H), 3.28 - 3.14 (m, 1H), 3.13 - 3.03 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.27 -2.09 (m, 2H).

MS ESI m/z 472.3 (M+H)<+>

Primer 12: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid enantiomer 1

[0209]

[0210] Racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid je razdvojen na dva pojedinačna stereoizomera korišćenjem SFC hiralne hromatografije pod sledećim uslovima: Kolona: Chiral OJ 30 x 250 mm. 5 mikrona; Mobilna faza: 85% CO2/ 15% IPA w/0.1%DEA; Uslovi protoka: 100 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Frakcije koje sadrže prvi eluirani pik su koncentrovane da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid enantiomer 1 (39.7 mg, 0.0840 mmol, 32 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (t, J=5.5 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.47 - 7.38 (m, 5H), 7.23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H), 3.24 - 3.15 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.27 - 2.09 (m, 2H)

MS ESI m/z 472.1 (M+H)<+>

Primer 13: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid enantiomer 2

[0212] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(4,4,4-trifluoro-3-fenilbutil)benzamid enantiomer 2 (39.9 mg, 0.085 mmol, 32 % prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primeru 12.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (t, J=5.5 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.47 - 7.38 (m, 5H), 7.23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H), 3.24 - 3.15 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.27 - 2.09 (m, 2H).

MS ESI m/z 472.1 (M+H)<+>

Primer 14: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0213]

[0214] 14A: 3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1,3,3-d3-1-ol: U bocu sa okruglim dnom od 50 mL dodati su štapić za mešanje i 3-(4-hlorofenil)-3-oksopropannitril (0.500 g, 2.78 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, a zatim je dodat THF (9.3 mL). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i polako je dodat litijum aluminijum deuterid, 98% izotopske čistoće (0.351 g, 8.35 mmol) u THF (4.6 mL). Smeša je mešana na ST tokom 3 h, a zatim kvenčovana dodavanjem 1N vodenog NaOH. Proizvod je ekstrahovan dietil etrom i ispran slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran kroz celit i koncentrovan in vacuo. Sirovi materijal je korišćen kakav jeste u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 189.2 (M+H)<+>

[0215] 14: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao završni korak opisan za primer 11, supstitucijom 3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1,3,3-d3-1-ola za 4,4,4- trifluoro-3-fenilbutan-1-amin u poslednjem koraku da bi se dobio racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2-fluoro-6-metilbenzamid (46.1 mg, 0.101 mmol, 38 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 - 8.58 (m, 2H), 7.58 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 4H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 1.80 (s, 2H).

MS ESI m/z 457.0 (M+H)<+>

Primer 15: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-metilbutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0216]

[0217] 15A: 3-(4-hlorofenil)-3-metilbutanska kiselina: U reakcionu bočicu od 8 mL su dodati mešač i metil 4-(4-hlorofenil)-4-metilpentanoat (0.290 g, 1.21 mmol). Bočica je evakuisana i ponovo napunjena azotom, a zatim je dodat litijum hidroksid monohidrat (0.152 g, 3.61 mmol), THF (4.5 mL) i H2O (1.5 mL). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h. Sirova smeša je koncentrovana in vacuo, razblažena sa EtOAc (50 mL) i 1N vodenom HCl (50 mL). Vodena faza je isprana sa EtOAc (50 mL x 2), a kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom, osušena preko anhidrovanog MgSO4i filtrirana. Smeša je koncentrovana in vacuo i korišćena kakva jeste u sledećem koraku (pretpostavljen je 100% prinos).

MS ESI m/z 224.95 (M-H)-[0218] 15B: U reakcionu bočicu od 20 mL dodati su mešač i 4-(4-hlorofenil)-4-metilpentanska kiselina (272 mg, 1.20 mmol). Bočica je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, zatim je dodat toluen (4 mL), trietilamin (669 µl, 4.80 mmol) i difenil fosforil azid (516 µl, 2.40 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h, zatim razblažena sa EtOAc (30 mL). Organska faza je isprana 1N vodenom HCl i slanim rastvorom, osušena preko anhidrovanog MgSO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je rastvoren u terc-butanolu (574 µl, 60.0 mmol), nakon čega je usledilo dodavanje kalaj(II) hlorida (11.4 mg, 0.0600 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 2 dana. Smeša je koncentrovana in vacuo i ponovo rastvorena u smeši TFA (3 mL) i DCM (6 mL). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 16 h. Proizvod je prečišćen preparativnom HPLC sa reverznom fazom (Rastvarač A: 10% acetonitrila, 90% H2O, 0.1% TFA; Rastvarač B: 90% acetonitrila, 10% H2O, 0.1% TFA; Kolona: Waters Atlantis OBD 30 x 100 mm S5 Gradijent: 10-70 % B) da bi se dobio 3-(4-hlorofenil)-3-metilbutan-1-amin, TFA (69.0 mg, 0.221 mmol, 18.5 % prinos).

MS ESI m/z 197.85 (M+H)<+>

[0219] 15: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao završni korak opisan za primer 11, supstitucijom 3-(4-hlorofenil)-3-metilbutan-1-amina, TFA za 4,4,4-trifluoro-3-fenilbutan-1-amin u poslednjem koraku da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-metilbutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (8.1 mg, 0.0174 mmol, 39 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.50 (t, J=5.5 Hz, 1H), 7.56 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.34 (m, 5H), 7.19 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 2.99 (dt, J=11.0.5.5 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.88 - 1.81 (m, 2H), 1.31 (s, 6H). MS ESI m/z 466.0 (M+H)<+>

Primer 16: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etil)-6-metilbenzamid

[0220]

[0221] 16A: 2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etan-1-amin: U reakcionu bočicu od 20 mL dodati su mešač i 2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)acetonitril (0.250 g, 1.43 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, zatim je dodat THF (7.1 mL). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i polako je dodat kompleks boran dimetil sulfida (0.86 mL, 5M u THF, 4.28 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h. Sirova smeša je prečišćena preparativnom HPLC sa reverznom fazom (Rastvarač A: 10% acetonitril, 90% H2O, 0.1% TFA; rastvarač B: 90% acetonitril, 10% H2O, 0.1% TFA; Kolona: Waters Atlantis OBD 30 x 100 mm S5; Gradijent 10-100 % B) da bi se dobio 2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etan-1-amin, TFA (135 mg, 0.460 mmol, 32.3 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 - 7.26 (m, 2H), 7.14 (br t, J=8.4 Hz, 2H), 2.76 -2.61 (m, 2H), 1.90 - 1.70 (m, 2H), 0.92 - 0.64 (m, 4H).

MS ESI m/z 180.1 (M+H)<+>

[0222] 16: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao završni korak opisan za primer 11, supstitucijom 2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etan-1-amina, TFA za 4,4,4-trifluoro-3-fenilbutan-1-amin u poslednjem koraku da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etil)-6-metilbenzamid (22.3 mg, 0.0498 mmol, 64 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=6.6 Hz, 1H), 8.55 (t, J=5.5 Hz, 1H), 7.57 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.20 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.13 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.02 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 3.21 - 3.14 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.82 - 1.73 (m, 2H), 0.77 (br d, J=12.1 Hz, 4H).

MS ESI m/z 448.0 (M+H)<+>

Primer 17: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0224] 17A: 3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutannitril: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodat je štapić za mešanje. Boca je dva puta osušena u vakuumu, zatim je dodat THF (32.3 mL). Boca je ohlađena na -20 °C i dodat je rastvor n-BuLi (7.8 mL, 2.5 M, 19.4 mmol). Ukapavanjem je dodat rastvor acetonitrila (1.0 mL, 19.4 mmol) u THF (8.1 mL) tokom 10 min. Dobijena smeša je mešana na -20 °C tokom 1 h, i 1-(4-hlorofenil)etan-1-on (2.52 mL, 19.4 mmol) u THF (8.1 mL) je dodavan u kapima tokom 10 minuta. Smeša je dalje mešana na -20 °C tokom 15 min i ostavljena da se zagreje do ST tokom 15 min. Reakcija je kvenčovana dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl. Većina polaznog materijala je ostala neizreagovana kao što pokazuje TLC. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL), isprana sa H2O (200 mL) i slanim rastvorom (200 mL), osušena sa anhidrovanim MgSO4i filtrirana kroz celit. Sirova smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena fleš hromatografijom na koloni (EtOAc u heksanu, gradijent 0 % do 40 %, 40 % zadržavanje, 40 g silike) da bi se dobio 3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutannitril (492 mg, 2.51 mmol, 13.0 % prinos).

[0225]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.45 - 7.40 (m, 2H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 2.85 - 2.74 (m, 2H), 1.74 (s, 3H).

[0226] 17B: 4-amino-2-(4-hlorofenil)butan-2-ol, TFA: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL dodati su štapić za mešanje i 3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutannitril (0.492 g, 2.51 mmol). Boca je ispražnjena i ponovo napunjena azotom, zatim je dodat THF (12.6 mL). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i polako je dodat rastvor boran dimetil sulfida (1.5 mL, 5 M u THF, 7.54 mmol). Dobijena smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC sa reverznom fazom (Rastvarač A: 10% acetonitril, 90% H2O, 0.1% TFA; Rastvarač B: 90% acetonitril, 10% H2O, 0.1% TFA; Kolona: Waters Atlantis OBD 30 x 100 mm S5; Gradijent: 10-60 % B) da bi se dobio 4-amino-2-(4-hlorofenil)butan-2-ol, TFA (0.251 g, 0.800 mmol, 32 % prinos). Smeša je korišćena kakva jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 199.8 (M+H)<+>.

[0227] 17: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao završni korak opisan za primer 11, supstitucijom 4-amino-2-(4-hlorofenil)butan-2-ola, TFA za 4,4,4-trifluoro-3-fenilbutan-1-amin u poslednjem koraku da bi se dobio racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (0.9 mg, 0.0019 mmol, 7 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J=6.6 Hz, 1H), 8.45 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 7.56 (br t, J=7.9 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.38 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.19 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.23 (s, 1H), 3.40 - 3.25 (m, 1H), 2.95 (td, J=11.6, 5.9 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.01 - 1.88 (m, 2H), 1.46 (s, 3H).

MS ESI m/z 468.3 (M+H)<+>

Primer 18: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0228]

[0229] 18A: etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat: Smeša gvožđa (168 mg, 3.00 mmol), 1-(4-fluorofenil)etan-1-ona (138 mg, 1.00 mmol), etil 2-bromo-2,2-difluoroacetata (609 mg, 3.00 mmol), i joda (50.8 mg, 0.200 mmol) u THF (2 mL) je pročišćena azotom i mešana na 70 °C tokom 20 h. Reakcija je kvenčovana zasićenim vodenim NH4Cl (20 mL). Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL), isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela eluiranjem sa 0-60% EtOAc u Heks. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat (166 mg, 0.633 mmol, 63 % prinos) kao ulje.

[0230]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.51 (dd, J=8.5, 5.5 Hz, 2H), 7.06 (t, J=8.7 Hz, 2H), 4.19 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.74 (t, J=1.5 Hz, 3H), 1.17 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0231] 18B: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid: U rastvor etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoata (166 mg, 0.633 mmol) u MeOH (3 mL) na 0 °C dodat je amonijak (7N u MeOH) (0.36 mL, 2.53 mmol). Smeša je mešana na ST tokom 5 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid koji je korišćen kakav jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 231.85 (M-H)-[0232] 18C: 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol, HCl so: U rastvor 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (148 mg 0.635 mmol) u THF (3 mL) je dodat kompleks boran-metil sulfida (2M u THF) (1.6 mL, 3.17 mmol). Smeša je mešana na 70 °C tokom 24 h. Reakcija je kvenčovana ukapavanjem metanola (1 mL). Smeša je mešana na ST tokom 30 min i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je zatim tretiran sa 1 N vodenom HCl (2 mL) na 65 °C tokom 1 h, zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa Et2O i rastvarač je dekantovan. Ostatak je osušen pod vakuumom da bi se dobila sirova 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol, HCl so (104 mg, 0.407 mmol, 64 % prinos) kao čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.57 (br dd, J=8.5, 5.6 Hz, 2H), 7.26 - 7.18 (m, 2H), 3.08 - 2.93 (m, 1H), 1.63 (s, 3H).

MS ESI m/z 220.0 (M+H)<+>

[0233] 18: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao što je završni korak opisan za primer 11, supstitucijom 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ola, HCl za 4,4,4-trifluoro-3-fenilbutan-1-amin u poslednjem koraku da bi se dobio racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (21.0 mg, 0.043 mmol, 58 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (br t, J=6.3 Hz, 1H), 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.62 -7.55 (m, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 7.09 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 4.03 - 3.86 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.63 (s, 3H).

MS ESI m/z 488.2 (M+H)<+>

Primer 19: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-[4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il]-2-fluoro-6-metilbenzamid racemat 1

[0234]

[0235] 19A: 4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-on (Ref. Euro. J. Med. Chem. 2009, 44, 1278-1287): U rastvor 4-hlorobenzaldehida (1.13 g, 8.00 mmol) u acetonu (200 mL) dodat je D-prolin (0.184 g, 1.60 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST preko noći tokom 18 h. Dodati su DMSO (10 mL) i voda (2 mL) i smeša je mešana još 24 h. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo, a ostatak je podeljen između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (gradijent 100 % Heks do 50 % EtOAc u Heks) da bi se dobio 4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-on (1.18 g, 5.92 mmol, 74 % prinos) kao bezbojno ulje. Prema referenci iz literature, željeni proizvod treba da bude S-konfiguracija na OH poziciji sa ~76 % ee.

[0236]<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.29 (m, 4H), 5.15 (dd, J= 8.5, 3.8 Hz, 1H), 3.39 (s, 1H), 2.95 - 2.75 (m, 2H), 2.22 (s, 3H).

[0237] 19B: 3-amino-1-(4-hlorofenil)butan-1-ol: U rastvor 4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-ona (596 mg, 3.00 mmol) u MeOH (10 mL) dodati su amonijum acetat (1.85 g, 24.0 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (377 mg, 6.00 mmol). Dobijena smeša je mešana na STPN tokom 18 h. LCMS je pokazao da su se formirala dva odvojena pika sa m/z u skladu sa željenim proizvodom. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo, a ostatak je podeljen između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi 3-amino-1-(4-hlorofenil)butan-1-ol (0.60 g, 3.0 mmol, 100 % sirovi prinos) kao tamno ulje koje je korišćeno kakvo jeste u narednim koracima. MS ESI m/z 200.1 (M+H)<+>

[0238] 19: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (29.2 mg, 0.100 mmol), BOP (66.3 mg, 0.150 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)butan-1-ola (24.0 mg, 0.120 mmol) i Hunigove baze (0.070 mL, 0.40 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na ST tokom 5 h. LCMS je pokazao da su formirana dva odvojena pika, oba sa m/z u skladu sa željenim proizvodom. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 19% B, 19-59% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže prvi eluirajući pik sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom su kombinovane i sušene centrifugalnim uparavanjem da bi se dobila racemska smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-[4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il]-2-fluoro-6-metilbenzamid racemat 1 (11.3 mg, 24.0 µmol, 24 % prinos) kao prva eluirana smeša iz preparativne HPLC separacije. Relativna i apsolutna stereohemija nisu određene.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.39 (s, 4H), 7.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.37 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.63 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.04 - 3.89 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.93 (dt, J = 14.5, 7.4 Hz, 1H), 1.63 (dt, J = 13.5, 6.6 Hz, 1H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -121.94.

MS ESI m/z 468.2 (M+H)<+>

Primer 20: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-[4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il]-2-fluoro-6-metilbenzamid racemat 2

[0239]

[0240] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-[4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il]-2-fluoro-6-metilbenzamid racemat 2 (3.5 mg, 6.8 umol, 7 % prinos) je dobijeno kao drugi pik eluiranja sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom iz preparativnog HPLC prečišćavanja opisanog za primer 19.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.41 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.70 - 4.61 (m, 1H), 4.24 (s, 1H), 2.36 (s, 3H), 1.80 - 1.60 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -122.00.

MS ESI m/z 468.2 (M+H)<+>

Primer 21: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 1

[0241]

[0242] 21A: 4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-on (Ref. Sinha, S. C.; Duttan, S.; Sun, J. Tetrahedron Lett.2000, 41, 8243-8246): U boci osušenoj u pećnici sa okruglim dnom od 500 mL su kombinovani dibutilbor triflat rastvor 1M u CH2Cl2(20.0 mL, 20.0 mmol) i Hunigova baza (4.2 mL, 24.0 mmol) u CH2Cl2(100 mL) pri 0 °C.1-fluoropropan-2-on (1.52 g, 20.0 mmol) je dodat ukapavanjem i boja je promenjena u blago ružičastu. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, polako je dodat 4-hlorobenzaldehid (1.41 g, 10.0 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do ST i mešana je PN tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa Et2O i polako kvenčovana vodom i viškom H2O2(4 mL svaki). Faze su razdvojene i organska je koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel koloni (gradijent 100% Heks do 80% EtOAc u Heks). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio 4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-on (720 mg, 3.32 mmol, 33 % prinos) kao bezbojno ulje.

[0243]<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.40 - 7.32 (m, 4H), 5.24 (dt, J = 9.3, 2.9 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.82 - 4.80 (m, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 2H);<19>F NMR (470 MHz, Chloroform-d) δ -227.74.

[0244] 21B: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-4-fluorobutan-1-ol: U rastvor 4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-ona (720 mg, 3.32 mmol) u MeOH (10 mL) je dodat amonijum acetat (1.54 g, 19.9 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (313 mg, 4.99 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 72 h. LCMS je pokazao dva odvojena pika proizvoda, oba sa m/z u skladu sa željenim proizvodom. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo i ostatak je podeljen između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi 3-amino-1-(4-hlorofenil)-4-fluorobutan-1-ol (0.800 g, 3.32 mmol, 100% sirovog prinosa) kao ulje svetlo žute boje koje je korišćeno kakvo jeste u narednim koracima.

MS ESI m/z 218.1 (M+H)<+>

[0245] 21C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6- metilbenzoata (292 mg, 1.00 mmol), BOP (663 mg, 1.50 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-4-fluorobutan-1-ola (435 mg, 2.00 mmol) i Hunigove baze (0.70 mL 4.00 mmol) u DMF (4 mL) je mešana na ST tokom 18 h. LCMS je pokazao da su se formirala dva odvojena pika sa m/z u skladu sa željenim proizvodom. Smeša je razblažena sa EtOAc i vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel koloni (120 g silike, gradijent 100% DCM do 10% MeOH u DCM) da bi se dobile dve odvojene enantiomerne smeše 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamida: prvi eluiran, manje polarni materijal je bio sporedni izolat 21C-1 (132 mg, 0.272 mmol, 27 % prinos) i izolovan je kao smeđa uljasta polučvrsta materija. Drugi eluirani, polarniji materijal bio je glavni izolat 21C-2 (164 mg, 0.338 mmol, 34 % prinos) i izolovan je kao prljavo bela čvrsta supstanca. Oba izolata su mešavine enantiomera i dalje su podvrgnuti hiralnoj separaciji.

21C-1: MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

21C-2: MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

[0246] 21: Izolat 21C-2 (164 mg, 0.338 mmol) je podvrgnut hiralnoj separaciji uz sledeće uslove: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4,6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Hromatografski uslovi preparativne SFC: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 21 x 250 mm.5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 900 µL 164.2 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(-4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 1 (21.7 mg, 0.043 mmol, >95 % ee, 13 % prinos). Relativna i apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.40 (q, J = 8.5 Hz, 4H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.52 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.69 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.52 (dd, J = 9.8, 4.8 Hz, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 1H), 4.09 (d, J = 21.3 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.00 - 1.88 (m, 1H), 1.84 (dt, J = 13.5, 6.5 Hz, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -121.63 (nedostaje jedan F).

MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

Primer 22: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 2

[0247]

[0248] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan -2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 2 (29.6 mg, 0.060 mmol, >95% ee, 18% prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 21.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.63 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.40 (q, J = 8.4 Hz, 4H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.50 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.69 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.57 -4.48 (m, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 1H), 4.17 - 4.02 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.84 (dt, J = 13.7, 6.6 Hz, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -121.60.

MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

Primer 23: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 3

[0249]

[0250] Izolat 21C-1 (132 mg, 0.272 mmol) je podvrgnut hiralnoj separaciji uz sledeće uslove: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4,6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 65% CO2/35% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 21 x 250 mm. 5 mikrona; Mobilna faza: 65% CO2/35% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 600 µL 130.2 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 3 (10.1 mg, 0.020 mmol, >95 % ee 8% prinos). Relativna i apsolutna stereohemija nije određena.

[0251]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.45 - 7.33 (m, 4H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.62 - 4.32 (m, 3H), 2.37 (s, 3H), 1.92 (s, 1H), 1.76 (d, J = 8.6 Hz, 2H); 19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -121.69.

MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

Primer 24: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 4

[0252]

[0253] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 4 (9.7 mg, 0.020 mmol, >95 % ee, 8% prinos): dobijen je kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 23.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 4H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.61 - 4.35 (m, 3H), 2.37 (s, 3H), 1.91 (s, 1H), 1.76 (d, J = 8.4 Hz, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -121.69.

MS ESI m/z 486.3 (M+H)<+>

Primer 25: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizomer 1

[0254]

[0255] 25A: 1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-on (Ref. Sinha, S. C.; Duttan, S.; Sun, J. Tetrahedron Lett.2000, 41, 8243-8246): U boci, osušenoj u pećnici, sa okruglim dnom od 500 mL su kombinovani rastvor dibutilbor triflata, 1M u CH2Cl2(20.0 mL, 20.0 mmol) i Hunigova baza (4.18 mL, 23.94 mmol) u CH2Cl2(100 mL bezbojnog rastvora).1-fluoropropan-2-on (1.52 g, 20.0 mmol) je dodat ukapavanjem i boja je promenjena u blago ružičastu. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, polako je dodat 4-fluorobenzaldehid (1.40 mL, 13. mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do ST i mešana je PN tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa Et2O i polako kvenčovana vodom i H2O2(po 4 mL). Faze su razdvojene i organski sloj je koncentrovan do ostatka. Sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel koloni (gradijent 100% Heks do 80% EtOAc u Heks). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio 1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-on (730 mg, 3.65 mmol, 27 % prinos) kao bezbojno ulje.

[0256]<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.12 - 6.98 (m, 2H), 5.21 (dd, J = 9.3, 3.2 Hz, 1H), 4.95 - 4.72 (m, 2H), 3.00 (ddd, J = 17.4, 9.3, 2.4 Hz, 1H), 2.86 (ddd, J = 17.4, 3.3, 2.6 Hz, 1H).

[0257] 25B: 3-amino-1-(4-fluorofenil)-4-fluorobutan-1-ol: U rastvor 1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-ona (730 mg, 3.65 mmol) u MeOH (10 mL) je dodat amonijum acetat (1.69 g, 21.9 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (344 mg, 5.47 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 72 h. LCMS je pokazao dva odvojena pika proizvoda, oba sa m/z u skladu sa željenim proizvodom. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo i ostatak je podeljen između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod kao svetlosmeđe ulje. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel koloni (gradijent 100% DCM do 10% MeOH u DCM) da bi se dobila dva odvojena manje polarna nepoželjna materijala i polarniji (silika gel TLC Rf ~ 0.2, eluiran sa 10% MeOH u DCM) željeni 3-amino-1-(4-fluorofenil)-4-fluorobutan-1-ol (220 mg, 1.10 mmol, 30% prinos) kao svetlosmeđe ulje.

[0258]<1>H NMR (499 MHz, CD3OD) δ 7.52 - 7.38 (m, 2H), 7.09 (td, J = 8.8, 6.6 Hz, 2H), 4.98 (dd, J = 10.0, 3.6 Hz, 1H), 4.81 - 4.51 (m, 2H), 3.95 - 3.55 (m, 1H), 2.10 - 1.86 (m, 2H);<19>F NMR (470 MHz, Metanol-d4) δ -116.77, -230.27, -231.70.<1>H NMR je pokazao dijastereoizomerni odnos od približno 3:1.

[0259] 25C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (120 mg, 0.409 mmol), BOP (271 mg, 0.614 mmol), 3-amino-4-fluoro-1-(4-fluorofenil)butan-1-ola (82.3 mg, 0.409 mmol) i Hunigove baze (0.214 mL, 1.23 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na ST tokom 16 h. LCMS je pokazao da su se formirala dva odvojena pika, oba sa m/z u skladu sa željenim proizvodom, u približnom odnosu 3:1. Smeša je razblažena vodom i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Silika TLC (eluiranje 10% MeOH u DCM) pokazala je dve bliske, ali odvojive tačke. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (24 g silike, gradijent 100% DCM do 8% MeOH u DCM) da bi se dobile dve odvojene enantiomerne smeše 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamida. Prvi eluirani, manje polarni sporedni izolat 25C-01 (21.7 mg, 0.046 mmol, 11 % prinos) dobijen je kao prljavo beli prah. Drugi eluirani, polarniji glavni izolat 25C-02 (66.2 mg, 0.141 mmol, 35 % prinos) je takođe dobijen kao prljavo beli prah. Oba izolata su mešavine enantiomera i dalje su podvrgnuta hiralnoj separaciji.

25C-01: MS ESI m/z 470.3 (M+H)<+>

25C-02: MS ESI m/z 470.4 (M+H)<+>

[0260] 25: Izolat 25C-02 (66.2 mg, 0.141 mmol) je podvrgnut hiralnoj separaciji uz sledeće uslove: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4,6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 21 x 250 mm.

5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 1800 µL 66.2 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-fluorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 1 (17.9 mg, 0.037 mmol, >95 % ee, 26% prinos): Relativna i apsolutna stereohemija nisu određene.

[0261]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.63 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 2H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 10.0, 7.8 Hz, 2H), 7.07 (dt, J = 6.8, 1.7 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.45 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.70 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.58 - 4.47 (m, 1H), 4.43 (qd, J = 9.3, 4.9 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 21.3 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.94 (dt, J = 14.8, 7.6 Hz, 1H), 1.84 (dt, J = 13.4, 6.5 Hz, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -73.42, -115.94, -121.61.

MS ESI m/z 470.4 (M+H)<+>

Primer 26: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizomer 2

[0262]

[0263] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizomer 2 (17.6 mg, 0.037 mmol, 26% prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 25.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.5, 5.6 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.52 (s, 1H), 4.68 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.51 (qd, J = 9.4, 4.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.08 (d, J = 21.9 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.93 (dt, J = 14.8, 7.5 Hz, 1H), 1.83 (dt, J = 13.4, 6.6 Hz, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -73.42, -115.94, -121.61.

MS ESI m/z 470.4 (M+H)<+>

Primer 27: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizomer 3

[0264]

[0265] Izolat 25C-01 (21.7 mg, 0.046 mmol) je podvrgnut hiralnoj separaciji uz sledeće uslove: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4,6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 65% CO2/35% MeOH w/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 21 x 250 mm. 5 mikrona; Mobilna faza: 65% CO2/35% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 720 µL 21.6 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-fluorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid dijastereoizomer 3 (2.8 mg, 5.96 umol, >95 % ee 13 % prinos). Relativna i apsolutna stereohemija nisu određene.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.54 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.62 - 4.33 (m, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.76 (t, J = 6.7 Hz, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -73.60, -116.23, -121.81.

MS ESI m/z 470.4 (M+H)<+>

Primer 28: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizomer 4

[0266]

[0267] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid dijastereoizmer 4 (3.1 mg, 6.6 µmol, 13% prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 27.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 7.11 - 7.05 (m, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.75 - 4.66 (m, 1H), 4.61 - 4.33 (m, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.76 (t, J = 6.6 Hz, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ - 73.62, -116.20, -121.84.

MS ESI m/z 470.4 (M+H)<+>

Primer 29: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0268]

[0269] 29A: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol (Ref. Org. Lett. 2010, 12, 4648-4651): U rastvor 3-(4-hlorofenil)-3-oksopropannitrila (1.08 g, 6.00 mmol) u THF (20 mL) je polako dodat NaH (317 mg, 13.19 mmol) i smeša je mešana tokom 2 h. Dodat je Selektfluor (4.67 g, 13.2 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 20 h. Polako je dodat LAH, 1M u THF (18.0 mL, 18.0 mmol) i reakciona smeša je mešana pod azotom 20 h. Dodat je zasićeni vodeni Na2SO4i reakcija je pažljivo kvenčovana ukapavanjem vode. Dobijena suspenzija je razblažena sa EtOAc, mešana i filtrirana, a filtrat je ispran smešom EtOAc i MeOH. Kombinovani organski rastvor je koncentrovan do svetlsmeđe pene (2.55 g, 5.74 mmol, 96 % prinos sa ~50 % čistoće). Materijal je korišćen kakav jeste u sledećem koraku. MS ESI m/z 222.2 (M+H)<+>

[0270] 29: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (29.2 mg, 0.100 mmol), BOP (66.3 mg, 0.150 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2difluoropropan-1-ola (33.2 mg, 0.150 mmol) i Hunigove baze (0.07 mL, 0.400 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na ST tokom 3 h. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana, a sirovi filtrat je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 18% B, 18-58% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (10.9 mg, 0.021 mmol, 21% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 5H), 7.23 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.95 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 2H), 2.56 (s, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.63 (d, J = 245.0 Hz), -116.66 (d, J = 245.1 Hz), -121.34.

MS ESI m/z 490.3 (M+H)<+>

Primer 30: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid enantiomer 1

[0271]

[0272] 30A: 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol: U rastvor 3-(4-fluorofenil)-3-oksopropannitrila (1.34 g, 8.21 mmol) u THF (25 mL) je polako dodat NaH (0.434 g, 18.1 mmol) i smeša je mešana na ST tokom 1.5 h. Dodat je Selektfluor (6.40 g, 18.1 mmol). Dobijena smeša je mešana na ST tokom 20 h. Polako je dodat LAH, 1.0M u THF (24.6 mL, 24.6 mmol) i reakciona smeša je mešana pod azotom tokom 20 h. Dodat je zasićeni vodeni Na2SO4i reakcija je pažljivo kvenčovana ukapavanjem vode. Dobijena suspenzija je razblažena sa EtOAc, mešana i filtrirana, a filtrat je ispran smešom EtOAc i MeOH. Kombinovani organski rastvor je koncentrovan da bi se dobio 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol kao bezbojno ulje (1.47 g, 7.14 mmol, 87%). Materijal je korišćen kakav jeste u sledećem koraku. MS ESI m/z 206.1 (M+H)<+>

[0273] 30: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (63.0 mg, 0.22 mmol), BOP (146 mg, 0.330 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (90.0 mg, 0.440 mmol) i Hunigove baze (0.15 mL, 0.880 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na ST tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH, filtrirana i prečišćena pomoću preparativne LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 12% B, 12-52% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Izolat je zatim podvrgnut hiralnoj SFC separaciji uz sledeće uslove. Uslovi analitičke hromatografije (pre preparativne separacije SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4,6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 75% CO2/25% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 30 x 250 mm.5 mikrona; Mobilna faza: 75% CO2/25% MeOH w/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 2500 µL 22.5 mg rastvoreno u 6 mL MeOH/MeCN. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (2,2 -difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid enantiomer 1 (8.6 mg, 0.018 mmol, >95 % ee, 8% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (s, 1H), 8.58 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 7.22 (q, J = 9.4, 6.8 Hz, 3H), 7.07 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.91 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H) (nedostatak CH2i delimično potisnuti NH2signali zbog potiskivanja vode);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.75 (d, J = 245.4 Hz), -114.23, -116.83 (d, J = 244.4 Hz), - 121.57. MS ESI m/z 474.4 (M+H)<+>

Primer 31: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid enantiomer 2

[0274]

[0275] Jedinjenje iz naslova (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid enantiomer 2 (8.5 mg, 0.018 mmol, 8% prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 30.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 7.23 (dt, J = 12.1, 5.6 Hz, 3H), 7.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.93 (dd, J = 16.1, 6.6 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H) (nedostatak CH2 zbog potiskivanja rastvarača);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.75 (d, J = 245.4 Hz), -114.23, -116.83 (d, J = 244.4 Hz), -121.57.

MS ESI m/z 474.4 (M+H)<+>

Tabela 2: Jedinjenja u tabeli 2 su pripremljena na sličan način kao primeri 11, 12 i 13.

Primer 63: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(3-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-metilbenzamid enantiomer 1

[0276]

[0277] 63A: 3-(3-fluorofenil)-3-oksopropannitril: Natrijum hidrid 60% disperzija u mineralnom ulju (0.520 g, 13.0 mmol) pažljivo je dodata u rastvor metil 3-fluorobenzoata (1.00 g, 6.50 mmol) u suvom toluenu (6 mL) na ST pod azotom. Smeša je zatim zagrejana do 80 °C i tretirana anhidrovanim acetonitrilom (1.6 mL, 30.9 mmol) putem ukapavanja. Posle zagrevanja PN, smeša je ostavljena da se ohladi na ST i razblažena je heksanima. Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana čistim heksanima. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi (30 mL) i dobijeni rastvor je polako tretiran sa 1N vodenom HCl uz mešanje dok se ne pojavi talog i pH = 4-5 nije postignut. Precipitat je izolovan filtracijom i ostavljen da se osuši na vazduhu. Filtrat je zatim stavljen pod visok vakuum na nekoliko sati da bi se dobio 3-(3-fluorofenil)-3-oksopropannitril (776 mg, 4.76 mmol, 73 % prinos) kao blago prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.73 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.66 (dt, J=9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.55 (td, J=8.0, 5.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J=8.2 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), nema potiskivanja vode.

[0278] 63B: 3-amino-1-(3-fluorofenil)propan-1-ol, TFA so: Pod slojem azota, rastvor 3-(3-fluorofenil)-3-oksopropannitrila (300 mg, 1.839 mmol) u anhidrovanom THF (9.19 mL) je oprezno tretiransa boran dimetil sulfidnim kompleksom, 5M u dietil etru (1.8 mL, 9.19 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 70 °C tokom 16 h. Metanol (5 mL) je dodat u smešu ukapavanjem, i rastvor je mešan 30 min na ST. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Sirova smeša je rastvorena u MeOH i prečišćena preparativnom HPLC sa reverznom fazom (Waters Sunfire C18, 50 x 250 mm, 10 mikrona, Rastvarač A = 90% H2O, 10% acetonitril, 0.1% TFA; Rastvarač B = 90% acetonitril, 10 % H2O, 0.1% TFA 100 mL/min, gradijent 0-100%B tokom 15 min, zadržavanje 100%B tokom 4 min); Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane in vacuo, zatim je ostatak stavljen pod visok vakuum preko noći da bi se obezbedio 3-amino-1-(3-fluorofenil)propan-1-ol, TFA so (224 mg, 1.32 mmol, 43% prinos) kao bistro, bezbojno ulje MS ESI m/z 169.9 (M+H)<+>

[0279] 63: U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, HCl (25 mg, 0.077 mmol) i 3-amino-1-(3-fluorofenil)propan-1-ol, TFA soli (28.5 mg, 0.101 mmol) u DMF (1 mL) je dodat BOP (44.5 mg, 0.101 mmol), a zatim DIPEA (0.068 mL, 0.387 mmol). Smeša je mešana na ST tokom 2 h, zatim je smeša filtrirana i prečišćena pomoću preparativne LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µum čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 13% B, 13-53% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Frakcije koje sadrže racemski proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem do ostatka. Ostatak je dalje prečišćen da bi se odvojili pojedinačni enantiomeri korišćenjem SFC-hiralne hromatografije pod sledećim uslovima: Kolona: Chiral OD 30 x 250 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza: 65% CO2/35% IPA sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 100 mL/min; Detalji o injekciji: 1 mL injekcije ostatka rastvorenog u 3 mL MeOH. Tako je dobijen 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(3-fluorofenil)-3-hidroksipropil )-6-metilbenzamid enantiomer 1 (5.3 mg, 0.0121 mmol, 14.9 % prinos) kao prvi eluirajući izomer iz opisanog preparativnog SFC prečišćavanja.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 - 8.58 (m, 2H), 7.61 (br t, J=8.1 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 7.14 - 6.99 (m, 2H), 6.09 (s, 2H), 5.46 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.75 - 4.65 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.86 (q, J=6.7 Hz, 2H), nema potiskivanja vode. Dva protona su verovatno bila zaklonjena pikom vode.

MS ESI m/z 438.3 (M+H)<+>

Primer 64: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(3-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-metilbenzamid enantiomer 2

[0280]

[0281] Jedinjenje iz naslova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(3-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-metilbenzamid enantiomer 2 (5.4 mg, 0.0123 mmol, 15.9 % prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 63.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (br d, J=6.9 Hz, 2H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.43 - 7.34 (m, 1H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 7.10 - 7.01 (m, 2H), 6.07 (s, 2H), 5.47 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.74 - 4.65 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.85 (q, J=6.5 Hz, 2H).

MS ESI m/z 438.3 (M+H)<+>

Tabela 3: Jedinjenja u Tabeli 3 su pripremljena na sličan način kao u primerima 63 i 64. Različiti alkil benzoati su korišćeni umesto metil 3-fluorobenzoata u prvom koraku.

Primer 90: (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid

[0282]

[0283] 90A: N,N-bis-Boc-2-amino-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin: U suspenziju 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (8.00 g, 37.6 mmol) u DCM (80 mL) i MeCN (80 mL) su dodati (Boc)2O (21.8 mL, 94.0 mmol) i DMAP (1.84 g, 15.0 mmol). Dobijena reakciona smeša je mešana na ST tokom 1.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do 1/3 zapremine i razblažena sa H2O (50 mL). Dalje uklanjanje organskih rastvarača pod sniženim pritiskom rezultiralo je suspenzijom čvrste supstance u vodi. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana vodom (3 x 25 mL) i osušena pod vakuumom da bi se dobio N.N-bis-Boc-2-amino-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (15.5 g, 37.5 mmol, 100 % prinos) kao čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=7.3, 2.0 Hz, 1H), 1.48 (s, 18H).

MS m/z 412.9 (M+H)<+>

[0284] 90B: metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat: Smeša N,N-bis-Boc-2-amino-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (500 mg, 1.21 mmol), (4-hloro-3-(metoksikarbonil)fenil)borne kiseline (259 mg, 1.21 mmol), PdCl2(dtbpf) (39.4 mg, 0.060 mmol) i K3PO4(2M aq.) (1.82 mL, 3.63 mmol) u 1,4-mL dioksanu je pročišćena sa N2. Smeša je zatim mešana na 100 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL) i filtrirana. Filtrat je ispran slanim rastvorom (50 mL), osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela eluiranjem sa 0-50% a zatim sa 50% EtOAc u Heks. Frakcije koje sadrže dva očekivana proizvoda su sakupljene odvojeno i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat (262 mg, 0.521 mmol, 43 % prinos) i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat (173 mg, 0.429 mmol, 36 % prinos).

[0285] Metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.89 - 7.86 (m, 1H), 7.72 (dd, J=8.3, 2.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=7.2, 1.9 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 1.49 (s, 18H).

MS ESI m/z 503.3 (M+H)<+>

[0286] Metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=8.3, 2.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=7.1, 2.0 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 1.57 (s, 9H).

MS ESI m/z 403.2 (M+H)<+>

[0287] 90C: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat, TFA: U smešu metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoata (262 mg, 0.521 mmol) i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoata (173 mg, 0.429 mmol) u DCM (93 mL) je dodat TFA (1.20 mL, 15.6 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na ST PN. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoat, TFA so kao čvrsta supstanca, koja je u sledećem koraku korišćena kakva jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 303.1 (M+H)<+>

[0288] 90D: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoeve kiseline, litijumova so: U rastvor sirovog metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoata, dodat je rastvor TFA (288 mg, 0.951 mmol) u THF (4 mL) i MeOH (2 mL). LiOHHzO (140 mg, 3.33 mmol) u H2O (2 mL). Dobijena suspenzija je mešana na ST tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i osušena pod vakuumom da bi se dobila sirova 5-(2-amino

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoeve kiseline, litijumova so kao čvrsta supstanca, koja je korišćena kakva jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 289.1 (M+H)<+>

[0289] 90: Suspenzija sirove 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hlorobenzoeve kiseline, litijumove soli (20 mg, 0.068 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (15 mg, 0.068 mmol), BOP (36 mg, 0.081 mmol) i DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na ST PN. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 14% B, 14-54% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da bi se dobio (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (24.5 mg, 0.053 mmol, 79 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.53 (t, J=5.3 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.72 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.39 (s, 4H), 7.25 (dd, J=6.9, 1.8 Hz, 1H), 4.68 (br t, J=6.2 Hz, 1H), 1.84 (q, J=7.3 Hz, 2H).

MS ESI m/z 455.9 (M+H)<+>

Tabela 5: Jedinjenja u Tabeli 5 su pripremljena na sličan način kao primer 90.

Primer 94: (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid

[0290]

[0291] 94A: N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin: Smeša N,N-bis-Boc-2-amino-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (10.0 g, 24.2 mmol), bis(pinakolato)dibora (7.37 g, 29.0 mmol), kalijum acetata (7.12 g, 72.6 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (0.988 g, 1.21 mmol) u 1.4-dioksanu (100 mL) je prečišćena sa N2. Smeša je mešana na 100 °C tokom 1 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa EtOAc (400 mL) i filtriran. Filtrat je ispran sa H2O (100 mL), a zatim slanim rastvorom (100 mL), osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je triturisan sa etar / Heks (10 mL/90 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana heksanima (2 x 10 mL) i osušena pod vakuumom da bi se dobio N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (10.93 g, 23.7 mmol, 98 % prinos) kao čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.51 (dd, J=6.8, 1.0 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.37 (dd, J=6.8, 1.1 Hz, 1H), 1.45 (s, 18H), 1.38 (s, 12H).

MS ESI m/z 379.4 (M+H)<+>kao borna kiselina

[0292] 94B: metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat: Smeša N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (279 mg, 0.607 mmol), metil 5-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoata (150 mg, 0.61 mmol), PdCl2(dtbpf) (19.8 mg, 0.030 mmol) i K3PO4(2M v) (0.91 mL, 1.82 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) je pročišćena sa N2. Smeša je mešana na 100 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i filtrirana. Filtrat je ispran slanim rastvorom (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela eluiranjem sa 0-50% a zatim sa 50% EtOAc u Heks. Frakcije koje sadrže očekivane proizvode su sakupljene odvojeno i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat (183 mg, 0.366 mmol, 60.2 % prinos) i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a] piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat (73.0 mg, 0.182 mmol, 30 % prinos).

[0293] Metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.60 (dd, J=7.2, 0.7 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.88 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.50 (dd, J=10.1, 1.6 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=7.2, 1.9 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.57 (d, J=1.9 Hz, 3H), 1.49 (s, 18H).

MS ESI m/z 501.4 (M+H)<+>

[0294] Metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.77 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=10.1, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (dd, J=7.1, 1.8 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.57 (d, J=1.9 Hz, 3H), 1.57 (s, 9H).

MS ESI m/z 401.3 (M+H)<+>

[0295] 94C: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat, TFA: U smešu metil 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoata (183 mg, 0.366 mmol) i metil 5-(N-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoata (73.0 mg, 0.182 mmol) u DCM (2 mL) dodat je TFA (0.85 mL, 11.0 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na ST tokom 2.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat, TFA kao čvrsta supstanca koja je korišćena kakva jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 301.2 (M+H)<+>

[0296] 94D: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline, litijumova so: U rastvor sirovog metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat, TFA (165 mg, 0.549 mmol) u THF (3 mL) i MeOH (1.5 mL) dodat je rastvor LiOH•H2O (81 mg, 1.92 mmol) u H2O (1.5 mL). Dobijena suspenzija je mešana na 50 °C tokom 1 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i osušena pod vakuumom da bi se dobila sirova 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline, litijumova so kao čvrsta supstanca, koja je korišćena kakva jeste u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 287.1 (M+H)<+>

[0297] 94: Suspenzija sirove 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline, litijumove soli (20 mg, 0.068 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (15.2 mg, 0.068 mmol), BOP (36 mg, 0.082 mmol) i DIPEA (0.060 mL, 0.341 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na ST tokom 1 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 16% B, 16-56% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim uparavanjem da bi se dobio (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid (10.2 mg, 0.022 mmol, 33 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.46 (br t, J=5.2 Hz, 1H), 7.76 -7.71 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.38 (s, 4H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.70 - 4.63 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.85 (q, J=6.8 Hz, 2H).

MS ESI m/z 454.0 (M+H)<+>

Tabela 6: Jedinjenja u Tabeli 6 su pripremljena na sličan način kao primer 94.

Primer 97: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid enantiomer 1

[0298]

[0299] 97A: 4-fluoro-5-jodo-2-metilbenzoeva kiselina: U smešu 4-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline (5.00 g, 32.4 mmol) u AcOH (40 mL) dodat je I2(9.06 g, 35.7 mmol), natrijum perjodat (3.47 g, 16.2 mmol) i sumporna kiselina (0.259 mL, 4.87 mmol). Smeša je mešana na 110-120 °C tokom 6 h. Dodat je I2(4.00 g, 15.8 mmol) i smeša je mešana na 120 °C tokom 4 h. LCMS je pokazala da se čini da dodatni I2ne utiče na napredak reakcije. Mešavina je sipana u vlažni led uz mešanje. Dodavan je vodeni rastvor Na2S2O3dok boja nije postala svetlo žuta. Dobijena čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i zatim rastvorena u EtOAc. Organska faza je isprana vodenim rastvorom Na2S2O3, a zatim vodom, zatim koncentrovana in vacuo. Ostatak je kristalizovan iz IPA/vode (približno 10:1) uz hlađenje. Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom da bi se dobilo 2.2 g čvrste supstance koja je bila značajno kontaminirana sa neizreagovanim početnim materijalom 4-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline kao što je primećeno pomoću LCMS. Ova čvrsta materija je ostavljena po strani. Matične tečnosti iz rekristalizacije su koncentrovane in vacuo da bi se dobila nečista 4-fluoro-5-jodo-2-metilbenzoeva kiselina (3.50 g, 12.5 mmol, 39% prinos, ~50% čistoće). Sirovi materijal je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja ili karakterizacije.

[0300] 97B: 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina: u bočici od 5 ml pod pritiskom, smeša N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (250 mg, 0.543 mmol), 4-fluoro-5-jodo-2-metilbenzoeve kiseline (319 mg, 1.14 mmol) (približno 50% čistoće), PdCl2(dtbpf) (17.7 mg, 0.0270 mmol) i K3PO4, vodenog 2M (1.09 mL, 2.17 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je degasirana propuštanjem azota kroz smešu. Bočica pod pritiskom je zatvorena i smeša je mešana na 80 °C tokom 1 h, a zatim ohlađena do ST. LCMS smeše je pokazala željeni bis-Boc proizvod (M H = 486.2), ali je mono-Boc proizvod (M H = 387.2) bio glavni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Prljavo beli talog je izolovan filtracijom i ispran vodom i EtOAc. LCMS ovog sivog čvrstog izolata je pokazala m/z koji je bio u skladu sa mono-Boc proizvodom (98.5 mg, 0.255 mmol, 47 % prinos). Ovaj materijal je ostavljen po strani kao Izolat 1. Organski filtrat je koncentrovan in vacuo i obeležen kao izolat 2; LCMS Izolata 2 pokazala je m/z u skladu sa željenim proizvodom 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina (97 mg, 0.20 mmol, 37 % prinos), blago kontaminirana gore pomenutim mono-Boc proizvodom. Izolat 2 je korišćen kakav jeste u sledećem koraku.

MS ESI m/z 387.2, 486.2 (M+H)<+>

[0301] 97C: 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4)-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid: smeša 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a] piridin-7-il)-4-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline (0.097 g, 0.20 mmol), BOP (0.133 g, 0.300 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (0.082 g, 0.40 mmol) i Hunigove baze (0.140 mL, 0.800 mmol) u DMF (1 mL) mešana je na ST tokom 24 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom, promućkana i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su dva puta isprani vodom, zatim slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se obezbedio 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid (135 mg, 0.20 mmol, 100 % sirovi prinos) kao svetlosmeđe ulje. Ovaj materijal je direktno prenet na sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 674.5 (M+H)<+>

[0302] 97: U rastvor 5-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamida (135 mg, 0.200 mmol) u CH2Cl2(1 mL) je dodat TFA (0.60 mL, 7.8 mmol). Smeša je mešana na ST tokom 2 h. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo. Ostatak je rastvoren u MeOH i prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 12% B, 12-52% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 0 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura Kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Izolovani racemat je dalje podvrgnut SFC hiralnoj separaciji uz sledeće uslove: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Chiral IC, 4.6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji o injekciji: 1500 µL 10.6 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i sušene da bi se dobio 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid enantiomer 1 (2.2 mg, 4.43 umol, >95 % ee, 2% prinos). Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.57 (m, 2H), 7.52 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.04 - 4.88 (m, 1H), 3.98 - 3.75 (m, 2H), 2.42 (s, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ - 110.25 (d, J = 245.5 Hz), -114.46, -115.49 - -116.84 (m).

MS ESI m/z 474.4 (M+H)<+>

Primer 98: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid enantiomer 2

[0303]

[0304] Jedinjenje iz naslova 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-4-fluoro-2-metilbenzamid enantiomer 2 (3.4 mg, 7.0 µmol, 4 % prinos) je dobijen kao drugi eluirajući izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja opisanog za primer 97.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.63 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.65 -7.57 (m, 2H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.31 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 4.95 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.97 - 3.75 (m, 2H), 2.41 (s, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.25 (d, J = 245.5 Hz), -114.46, -115.49 - -116.84 (m).

MS ESI m/z 474.4 (M+H)<+>

Primer 99: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamid

[0305]

[0306] 99A: 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoeva kiselina: 3,4-Difluoro-2-metilbenzoeva kiselina (1.72 g, 9.99 mmol) je rastvorena u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (7.0 mL, 131 mmol). Smeša je ohlađena u kupatilu sa ledenom vodom i 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoin (1.43 g, 5.00 mmol) je dodat polako u smešu. Smeša je mešana na 0-10 °C tokom 30 min, što je rezultovalo čvrstim talogom. Led je dodat u smešu. Prljavo bela čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana vodom, zatim ostavljena da se osuši na vazduhu preko noći da da sirovu materiju 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoevu kiselinu (3.0 g, 11.9 mmol, 120 % prinos). Materijal je korišćen kakav jeste u sledećem koraku.

MS ESI m/z 251.1 (M+H)<+>

[0307] 99B: metil 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoat: U rastvor sirove materije 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (3.0 g, 11.9 mmol) u DMF (15 mL) je dodat kalijum karbonat (2.76 g, 20.0 mmol) zatim jodometan (1.6 mL, 25.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. 50 mL EtOAc je dodato i smeša je oprana vodom, zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni (40 g silika, gradijent 100 % Heks do 5 % EtOAc u heks). Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da daju metil 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoat (560 mg, 2.11 mmol, 18% prinos).

[0308]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.06 - 7.85 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.53 (d, J=2.9 Hz, 3H).

[0309] 99C: metil 3,4-difluoro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat: U smešu metil 5-bromo-3,4-difluoro-2-metilbenzoata (0.530 g, 2.00 mmol) u dioksanu (10 mL) je dodat 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.609 g, 2.40 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (0.114 g, 0.140 mmol) i kalijum acetat (0.491 g, 5.00 mmol). Smeša je produvana N2gasom zatim mešana na 115 °C tokom 4 h. U sirovu rxn smešu koja sadrži metil 3,4-difluoro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (624 mg, 2.00 mmol) je dodat 1,4-dioksan (11 mL) (1 mL), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (426 mg, 2.00 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (65.3 mg, 0.080 mmol) i 2M vodeni rastvor K3PO4(2.50 mL, 5.00 mmol). Nakon što je smeša produvana N2gasom tokom 5 min, smeša je mešana na 115 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Čvrsti talog je izolovan filtracijom i opran vodom i EtOAc da da sirov metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoat (390 mg) kao izolat 1 koji je ostavljen po strani. Slojevi filtrata su odvojeni, i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen silika gel fleš kolonskom hromatografijom (Gradijent 100 % DCM do 10 % MeOH u DCM) da da dodatni metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoat (110 mg) kao tamnu čvrstu supstancu, označenu kao izolat 2. Izolati 1 i 2 su kombinovani da obezbede željeni metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoat (500 mg total, 1.57 mmol, 79 % prinos).

MS ESI m/z 319.1 (M+H)<+>

[0310] 99D: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeva kiselina: U smešu metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoata (500 mg, 1.57 mmol) u THF (4 mL) je dodat 2M vodeni rastvor LiOH (3.20 mL, 6.40 mmol), i MeOH (4 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakciona smeša je filtrirana i filtrirana čvrsta supstanca je isprana vodom i EtOAc da da tamnu čvrstu supstancu (143 mg) označenu kao izolat 1, koji je ostavljen sa strane. Filtrat je neutralizovan sa 1N HCl (4 mL) što je izazvalo taloženje. Dobijena siva čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana vodom i EtOAc da obezbedi Izolat 2 (267 mg). Faze filtrata su odvojene, i organaski sloj je osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da da izolat 3 (36 mg) kao žutomrka čvrsta supstanca. Izolati 1, 2 i 3 su kombinovani da obezbede ukupnu sirovu materiju 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoevu kiselinu (446 mg, 1.46 mmol, 93 % prinos) koja je korišćena kao takva u sledećem koraku.

MS ESI m/z 304.9 (M+H)<+>

[0311] 99: Smeša 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (30 mg, 0.099 mmol), BOP (65.4 mg, 0.148 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorid (26.3 mg, 0.118 mmol) i Hunigove baze (0.086 mL, 0.49 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa MeOH, a sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatomom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatomom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 17% B, 17-57% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamid (8.7 mg, 0.018 mmol, 19 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-t/6) δ 8.65 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.47 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.42 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.38 (s, 4H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.43 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.66 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.43 - 3.26 (m, 2H), 2.35 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 1.86 (q, J = 7.0 Hz, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -140.05, - 141.17.

MS ESI m/z 472.4 (M+H)<+>

Primer 100: Racemat 1 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0312]

[0313] Smeša 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (30.4 mg, 0.100 mmol), BOP (66.3 mg, 0.150 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)butan-1-ola (19B, 23.9 mg, 0.120 mmol) i Hunigove baze (0.070 mL, 0.40 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana, i sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 17% B, 17-55% B tokom 28 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže prvi eluirani pik sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio racemat 15-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (5.4 mg, 10.9 µmol, 11 % prinos). Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.38 (d, J = 1.6 Hz, 5H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.37 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.64 (q, J = 5.9 Hz, 1H), 4.02 (dt, J = 16.2, 8.0 Hz, 1H), 2.36 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 1.96 (dq, J = 15.5, 7.8 Hz, 1H), 1.68 (dt, J = 13.0, 6.4 Hz, 1H), 1.18 (d, J = 6.6 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -140.19 (d, J = 21.8 Hz), -141.36 (d, J = 21.8 Hz).

MS ESI m/z 486.2 (M+H)<+>

Primer 101: Racemat 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0314]

[0315] Naslovno jedinjenje racemat 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (3.9 mg, 7.6 µmol, 8 % prinos) je dobijeno kao drugi eluirani pik sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom iz preparativnog HPLC prečišćavanja opisanog za primer 100.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.37 (d, J = 1.5 Hz, 4H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 4.70 - 4.61 (m, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 1H), 2.37 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 1.86 - 1.78 (m, 1H), 1.76 - 1.68 (m, 1H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -140.09 (d, J = 21.0 Hz), -141.35 (d, J = 21.1 Hz).

MS ESI m/z 486.2 (M+H)<+>

Primer 102: Racemat 1 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0316]

[0317] Smeša 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (30.4 mg, 0.100 mmol), BOP (66.3 mg, 0.150 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-4-fluorobutan-1-ola (21B, 43.5 mg, 0.200 mmol) i Hunigove baze (0.070 mL, 0.400 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana, i sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 12% B, 12-52% B tokom 23 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže prvi eluirani pik sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom su kombinovane i osušen centrifugalnim uparavanjem da obezbede racemat 1 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (1.1 mg, 2.2 µmol, 2 % prinos). Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 - 7.31 (m, 5H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 4.72 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 47.4, 4.9 Hz, 2H), 4.19 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.36 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 1.98 (dt, J = 14.7, 7.5 Hz, 1H), 1.89 (dt, J = 13.5, 6.0 Hz, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -73.45, -140.02, -140.92.

MS ESI m/z 504.3 (M+H)<+>

Primer 103: Racemat 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0318]

[0319] Naslovno jedinjenje racemata 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(4-(4-hlorofenil)-1-fluoro-4-hidroksibutan-2-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (1.4 mg, 2.73 µmol, 3% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani pik sa LCMS m/z signalom u skladu sa željenim proizvodom iz prečišćavanja preparativnom HPLC opisanog za primer 102.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.38 (d, J = 2.3 Hz, 4H), 7.33 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 4.72 (dt, J = 8.1, 4.6 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.43 (d, J =4.8 Hz, 1H), 4.28 - 4.11 (m, 1H), 2.36 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 1.97 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 1H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -73.44, -140.07, -140.99.

MS ESI m/z 504.3 (M+H)<+>

Primer 104: Enantiomer 1 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0320]

[0321] Smeša 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (45.6 mg, 0.150 mmol), BOP (100 mg, 0.225 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ola (29A, 49.9 mg, 0.225 mmol) i Hunigove baze (0.105 mL, 0.600 mmol) u DMF (0.8 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana, i sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µmčestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 19% B, 19-59% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem. Racemat je zatim podvrgnut hiralnoj SFC separaciji sa sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: hiralna IC, 4.6 x 150 mm, 5 mikronaa; Mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: hiralna IC, 21 × 250 mm. 5 mikronaa; Mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji ubrizgavanja: 1500 µL 7.4 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da daju enantiomer 15-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (1.4 mg, 2.8 µmol, >95 % ee, 2% prinos). Apsolutna stereohemija nije određena.

[0322]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.55 - 7.43 (m, 4H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.02 - 4.91 (m, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 2H), 2.35 (s, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -109.98 (d, J = 246.9 Hz), -115.93 (d, J = 246.2 Hz), -139.87 (d, J = 22.3 Hz), -140.66 (d, J = 20.8 Hz). MS ESI m/z 508.2 (M+H)<+>

Primer 105: Enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0323]

[0324] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (1.7 mg, 3.1 µmol, 2 % prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer prečišćavanjem hiralnom SFC opisanog za primer 104.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.03 - 4.92 (m, 1H), 3.86 (td, J = 16.3, 13.5, 8.9 Hz, 2H), 2.35 (d, J = 2.2 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -109.98 (d, J= 246.9 Hz), -115.93 (d, J = 246.2 Hz), -139.87 (d, J = 22.3 Hz), -140.66 (d, J = 20.8 Hz).

MS ESI m/z 508.2 (M+H)<+>

Primer 106: Enantiomer 1 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0325]

[0326] Smeša 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3,4-difluoro-2-metilbenzoeve kiseline (45.6 mg, 0.150 mmol), BOP (100 mg, 0.225 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (30A, 61.6 mg, 0.300 mmol) i Hunigove baze (0.105 mL, 0.600 mmol) u DMF (0.8 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana, i sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 15% B, 15-55% B tokom 25 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem. Racemat je zatim podvrgnut SFC hiralnoj separaciji sa sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: hiralna IC, 4.6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: hiralna IC, 21 x 250 mm.5 mikrona; Mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji ubrizgavanja: 3000 µL 39.2 mg rastvoren u 6 mL MeOH/MeCN. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da daju enantiomer 15-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (10 mg, 0.020 mmol, >95 % ee, 13% prinos). Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 3.92 -3.79 (m, 2H), 2.34 (d, J = 2.4 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ - 110.21 (d, J = 245.7 Hz), -114.42, -116.11 (d, J = 245.6 Hz), -139.86 (d, J = 21.3 Hz), - 140.68 (d, J = 21.1 Hz).

MS ESI m/z 492.2 (M+H)<+>

Primer 107: Enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida

[0327]

[0328] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3,4-difluoro-2-metilbenzamida (12 mg, 0.024 mmol, 16 % prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 106.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 8.5, 5.6 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 4.99 - 4.90 (m, 1H), 3.91 -3.79 (m, 2H), 2.34 (d, J = 2.1 Hz, 3H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ - 110.21 (d, J = 245.7 Hz), -114.42, -116.11 (d, J = 245.6 Hz), -139.86 (d, J = 21.3 Hz), - 140.68 (d, J = 21.1 Hz).

MS ESI m/z 492.2 (M+H)<+>

Primer 108: Enantiomer 1 (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0329]

[0330] Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline (67.5 mg, 0.220 mmol), BOP (146 mg, 0.330 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (30A, 90 mg, 0.44 mmol) i Hunigove baze (0.154 mL, 0.880 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Sirova materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 12% B, 12-52% B tokom 25 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da obezbede racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid. Racemat je zatim podvrgnut SFC hiralnoj separaciji sa sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativne SFC separacije): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; Kolona: Hiralna IC, 4.6 x 150 mm, 5 mikrona; Mobilna faza: 75% CO2/ 25% MeOH s/0.1%DEA; Uslovi protoka: 2 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Hiralna IC, 30 x 250 mm.5 mikrona; Mobilna faza: 75% CO2/ 25% MeOH s/0.1%DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji ubrizgavanja: 3000 µL 21.2 mg rastvorenog u 6 mL MeOH/MeCN. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da daju (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (8.3 mg, 0.016 mmol, >95 % ee, 7 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-t/6) δ 9.16 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.76 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 4H), 7.24 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.02 - 4.86 (m, 1H), 3.98 - 3.77 (m, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.76 (d, J = 245.4 Hz), -114.36, -116.81 (d, J = 245.0 Hz), -117.27.

MS ESI m/z 494.3 (M+H)<+>

Primer 109: Enantiomer 2 (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0331]

[0332] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (7.7 mg, 0.015 mmol, 7 % prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 108.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 4H), 7.23 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 4.95 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.01 - 3.76 (m, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -110.76 (d, J = 245.4 Hz), -114.36, -116.81 (d, J = 245.0 Hz), -117.27.

MS ESI m/z 494.3 (M+H)<+>

Primer 110: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid

[0333]

[0334] 110A: Etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat: U staklenu posudi pod pritiskom od 40 mL su kombinovani 3,4-dihlorobenzaldehid (1.00 g, 5.71 mmol), THF (15 mL) i cink (0.478 g, 7.31 mmol). Smeša je zagrejana na 85 °C tokom 30 min a zatim je dodat etil bromodifluoroacetat (1.28 mL, 9.75 mmol) u delovima tokom 10 min. Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C preko noći. Nakon hlađenja na ST, reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je zakiseljen dodavanjem 1N vodenog rastvora HCl u kapima uz mešanje. Zakiseljen filtrat je razblažen sa EtOAc (30 mL). Organaski sloj je opran sa koncentrovanim rastvorom soli (20 mL), osušen sa amorfnim Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do narandžastog ulja. Ostatak je podvrgnut fleš kolonskoj hromatografiji korišćenjem kolone sa 24 g silike eluiranjem sa 0-40% EtOAc u Heks gradijentu. Čiste frakcije su koncentrovane da daju etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat (1.30 g, 4.40 mmol, 76% prinos) kao prljavo bele čvrste supstance.

[0335]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.21-5.14 (m, 1H), 4.45-4.32 (m, 2H), 2.80 (d, J=5.1 Hz, 1H), 1.43-1.21 (m, 3H).

110B: terc-butil(3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat:

U rastvor etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoata (1.20 g, 4.01 mmol) u MeOH (6 mL) je dodat amonijak (7M in MeOH, 6.0 mL, 42 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Rastvarač je uparen da se dobije sirov 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid.

[0336] U bočicu sa okruglim dnom od 50 mL je dodat 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (600 mg, 2.22 mmol) i THF (6 mL). Kompleksni rastvor boran dimetil sulfida (2.0 M u THF, 4.4 mL, 8.89 mmol) je dodat u delovima na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Reakcija je mešana na 60 °C tokom 2 h. Smeša je zatim ohlađena na sobnu temperaturu i gašena postepenim dodavanjem u kapima metanola (5 mL). Smeša je mešana tokom 30 min i rastvarač je uklonjen u vakuumu da da bistro bezbojno gusto ulje. Uljani ostatak je rastvoren u 1M vodenom rastvoru HCl (10 mL) i zagrevan na 60 °C tokom 1 h. Zamagljena smeša je poslata bistr do kraja sata. Smeša je koncentrovana u vakuumu da da sirov 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2difluoropropan-1-ol kao belu čvrstu supstancu. Sirov 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol je zatim pomešan sa THF (10 ml) i trietilaminom (0.97 ml, 6.7 mmol). Diterc-butildikarbonat (0.61 mL, 2.7 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da da gusto ulje. Ostatak je podvrgnut fleš kolonskoj hromatografiji korišćenjem kolona sa 24 g silike eluiranjem sa 0-20% EtOAc u Heks gradijentu. Čiste frakcije su koncentrovane da daju terc-butil (3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat (600 mg, 1.68 mmol, 76 % prinos) kao belu čvrstu supstancu.

[0337] 110: terc-Butil (3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat (34.8 mg, 0.098 mmol) je rastvoren u DCM (1 mL) i TFA (0.2 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je uparen da da sirovu TFA so 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ola. Ostatak je pomešan sa 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoevom kiselinom (30 mg, 0.098 mmol), DIPEA (0.068 mL, 0.39 mmol) i DMF (1 mL). BOP (47.6 mg, 0.108 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 27% B, 27-67% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio racemski 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid (44.7 mg, 0.0820 mmol, 84 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.16 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.65 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.76 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.69 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.57-7.49 (m, 2H), 7.45 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.07-4.88 (m, 1H), 4.00-3.80 (m, 2H).

MS ESI m/z 544.2 (M+H)<+>

Tabela 7: Jedinjenja u tabeli 7 su pripremljena na sličan način primeru kao u primer 110. U slučajevima nedefinisane stereohemije, jedinjenja su izolovana kao racemske ili dijastereomerne smeše osim ako nije drugačije naznačeno.

Primer 119: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-N-[2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil]-6-etil-2-fluorobenzamid

[0338]

[0339] 119A: Metil3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: Bočica od 40 mL opremljena magnetnim štapićem za mešanje napunjena je sa metil 3-bromo-6-etil-2-fluorobenzoatom (0.800 g, 3.06 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolanom) (1.01 g, 3.98 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2aduktom (0.125 g, 0.153 mmol), 1,4-dioksanom (15.3 mL), i kalijum acetatom (0.601 g, 6.13 mmol). Bočica je sklonjena i ponovo napunjena azotom 3 puta, zatim opremljena sa kondenzatorom i zagrejana na 110 °C pod atmosferom azota tokom 4 h. U smešu je dodat 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (0.653 g, 3.06 mmol) i 2.0M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (2.0 mL, 6.13 mmol). Bočica je sklonjena i ponovo napunjena azotom 3 puta i zagrejana na 90 °C tokom 1 h. Smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i adsorbovana je na silika gel. Sirov, suvo nanet materijal je prečišćen fleš kolonskom hromatografijom na silicijum dioksidu (40 g silika, gradijent eluiranja 50 do 100% EtOAc u heksanima). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane da daju čvrstu supstancu koja je triturisana sa EtOAc (15mL) i izolovana filtracijom da da metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat (0.600 g, 1.91 mmol, 62 % prinos).

<1>H NMR (499 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.73 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.04 (dt, J=7.0, 1.7 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.68 (q, J=7.6 Hz, 2H), 1.19 (t, J=7.5 Hz, 3H)

MS ESI m/z 315.1 (M+H)<+>

[0340] 119B: Litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: U bočicu od 8 mL je dodat štapić za mešanje, metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat (0.200 g, 0.636 mmol), THF (2 mL), MeOH (2 mL) i 1M vodeni rastvor NaOH (0.127 mL, 1.27 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da obezbedi čvrst ostatak koji je direktno korišćen u sledećem koraku, pretpostavljeni prinos 100%.

MS ESI m/z 301.3 (M+H)<+>

[0341] 119: Naslovno jedinjenje pripremljeno sličnom procedurom onoj opisanoj za poslednji korak pripremanja primera 110, gde terc-butil (2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)karbamat je korišćen umesto terc-butil (3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamaat, i gde je litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat korišćen umesto 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline da obezbedi željeni proizvod 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (10.7 mg, 0.022 mmol, 33 % prinos).

<1>H NMR (499 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.81 (td, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 (t, J=6.9 Hz, 1H), 7.63 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.27 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.06 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J=5.8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.07 - 4.91 (m, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.46 (br s, 1H), 2.64 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.19 (t, J=7.6 Hz, 3H).

MS ESI m/z 489.1 (M+H)<+>

Primer 120: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0342]

[0343] Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (30 mg, 0.061 mmol), dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina [S-Phos] (6.23 mg, 0.0150 mmol), paladijum acetata (2.73 mg, 0.0120 mmol) i 6-metil-2-vinil-1,3,6,2-dioksazaborokan-4,8-diona (22.2 mg, 0.121 mmol) u 1,4-dioksanu (1 mL) je produvana azotom tokom 1 min. 2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (0.17 mL, 0.334 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrejana na 115 °C tokom 1.5 h. Smeša je filtrirana kroz sloj celita i oprana sa EtOAc (2 x). Filtrat je koncentrovan u vakuumu i ostatak je rastvoren u MeOH (3 mL).25 mg o10% Pd na C (mokar) je dodato, i smeša je sklonjena i ponovo napunjenja H2iz balona. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da da sirov proizvod. Materijal je rastvoren u DMF (2 mL) i prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 18% B, 18-58% B tokom 21 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem. Materijal je dalje odvojen u dva pojedinačna enantiomera pomoću SFC hiralne hromatografije kao što sledi: Instrument: Waters 100 Prep SFC, Kolona: hiralna OJ, 30 x 250 mm.5 mikrona, Mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH s/0.1%DEA, Uslovi protoka: 100 mL/min, Talasna dužina detektora: 220 nm, Detalji ubrizgavanja: 1000 µL 11.3 mg rastvorena u 3 mL MeOH da bi se povratio prvi eluirani pik kao željeni homohiralni proizvod, 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (2.80 mg, 5.74 µmol, 9% prinos), sa hiralnom čistoćom >95%. Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (br t, J=6.3 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 7.05 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.94 (br d, J=15.0 Hz, 1H), 4.00 - 3.80 (m, 2H), 2.64 (q, J=7.4 Hz, 2H), 2.58 - 2.54 (m, 1H), 1.19 (t, J=7.5 Hz, 3H).

MS ESI m/z 488.1 (M+H)<+>

Tabela 8: Jedinjenja u tabeli 8 su pripremljena na sličan način kao praimer 120. U slučajevima nedefinisane stereohemije, jedinjenja su izolovana kao racemske ili dijastereomerne smeše osim ako nije drugačije naznačeno.

Primer 124: Enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamida

[0344]

[0345] 124A: 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid: U smešu 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoeve kiseline (20 mg, 0.080 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (16.5 mg, 0.0800 mmol) i BOP (39.1 mg, 0.0880 mmol) u DMF (5 mL) je dodata Hunigova baza (0.0280 mL, 0.161 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO (2 x 20mL) i koncentrovanim rastvorom soli (20 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirov proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 436.1 (M+H)<+>

[0346] 124: Smeša 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (25.0 mg, 0.117 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (35.8 mg, 0.141 mmol), kalijum acetata (34.6 mg, 0.352 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (4.79 mg, 5.87 µmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je produvana sa N2i mešana na 110 °C tokom 3 h. U smešu je dodat 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid (46.1 mg, 0.106 mmol), 1,1'-bis(diterc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (3.82 mg, 5.87 µmol), i 2.0 M vodeni rastvor trikalijum fosfata (0.18 mL, 0.352 mmol). Smeša je mešana na 110 °C tokom 1.5 h. EtOAc (10 mL) i Et2O (10 mL) je dodata. Organse materije su oprane sa 1N NaOH (2 x 10 mL). Kombinovani vodeni sloj je zakiseljen sa koncentrovanom HCl do pH = 4-5 da se istaloži proizvod. Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom, oprana vodom i osušena da da sirov proizvod koji je rastvoren u DMF i prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 8% B, 8-48% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem. Materijal je dalje prečišćen pomoću SCP korišćenjem SFC hiralne hromatografije. Waters 100 Prep SFC, Kolona: hiralna OJ, 30 x 250 mm.5 mikrona, Mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH s/0.1%DEA, Uslovi protoka: 100 mL/min, Talasna dužina detektora: 220 nm, Detalji ubrizgavanja: 1000 µL 39.9 mg rastvoreno u 30 mL MeOH / ACN da se ponovo dobije prvi eluirani pik kao želejni homohiralni proizvod, enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamida (7.4 mg, 0.015 mmol, 13 % prinos), sa hiralnom čistoćom >95%). Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 - 8.75 (m, 1H), 8.58 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.56 - 7.37 (m, 3H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 7.10 - 6.95 (m, 2H), 6.04 (s, 2H), 5.05 -4.77 (m, 1H), 4.04 - 3.50 (m, 5H).

MS ESI m/z 488.1 (M+H)<+>

Primer 125: Enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamida

[0347]

[0348] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamida (5.9 mg, 0.012 mmol, 10 % prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 124. Apsolutna stereohemija nije određena.

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 - 8.79 (m, 1H), 8.66 - 8.44 (m, 1H), 7.69 (kvin, J=8.7 Hz, 1H), 7.52 - 7.38 (m, 3H), 7.29 - 7.16 (m, 2H), 7.12 - 6.97 (m, 2H), 6.14 - 5.94 (m, 2H), 4.92 (br dd, J=16.7, 6.8 Hz, 1H), 3.97 - 3.63 (m, 5H).

MS ESI m/z 490.2 (M+H)<+>

Primer 126: 3-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0350] 126A: 3-bromo-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid: U smešu 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline (150 mg, 0.592 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (121 mg, 0.592 mmol), BOP (288 mg, 0.651 mmol) u DMF (5 mL) dodata je Hunigova baza (0.207 mL, 1.18 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs (2 x 20 mL) i koncentrovanim rastvorom soli (20 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni (12g silika, gradijent EtOAc u Heks = 0-10 %, vreme gradijenta = 12 min, sa brzinom protoka od 25 mL/min) da da 3-bromo-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (240 mg, 0.545 mmol, 92 % prinos).

<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.62 (dd, J=8.7, 7.3 Hz, 1H), 7.53 - 7.45 (m, 2H), 7.20 (dd, J=8.6, 1.4 Hz, 1H), 7.15 - 7.08 (m, 2H), 6.36 - 6.26 (m, 1H), 5.04 - 4.92 (m, 1H), 4.55 - 4.39 (m, 1H), 4.02 (br dd, J=15.1, 10.4 Hz, 1H), 3.67 - 3.54 (m, 1H).

MS ESI m/z 442.2 (M+H)<+>

[0351] 126B: 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid: Smeša 3-bromo-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (88 mg, 0.20 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (60.9 mg, 0.240 mmol), kalijum acetata (58.9 mg, 0.600 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (16.3 mg, 0.0200 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je produvana sa N2i mešana na 110 °C tokom 3 h. U gore navedenu smešu je dodat 3-fluoro-4-jodopiridin-2-amin (57.1 mg, 0.240 mmol), [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]paladijum(II) dihlorid (13.0 mg, 0.0200 mmol) i 2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (300 µl, 0.600 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem N2kroz smešu tokom 2 min, zatim je smeša mešana na 110 °C tokom 1.5 h. Reakciona smeša je raspoređena između EtOAc (20 mL) i H2O (10 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni (12g silika gel, gradijent EtOAc/Heks = 0-100%) da da 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (78.0 mg, 0.165 mmol, 83 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.18 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.64 -7.42 (m, 4H), 7.28 - 7.19 (m, 2H), 7.17 - 7.00 (m, 1H), 6.65 (t, J=4.9 Hz, 1H), 4.93 (br dd, J=16.2, 6.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.76 (m, 2H).

MS ESI m/z 472.3 (M+H)<+>

[0352] 126C: 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid: smeša 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (74.0 mg, 0.157 mmol), dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina [S-Phos] (12.9 mg, 0.0310 mmol), paladijum acetata (3.52 mg, 0.0160 mmol) i 6-metil-2-vinil-1,3,6,2-dioksazaborocan-4,8-diona (57.4 mg, 0.314 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je produvana sa azotom tokom 1 min. 2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (0.43 mL, 0.863 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrejana na 115 °C tokom 1.5 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtriran kroz sloj celita koji je opran sa EtOAc (20 mL). Filtrat i isprane supstance su koncentrovane u vakuumu i ostatak je rastvoren u MeOH (3 mL).10% Pd na C (mokar, 25 mg) je dodat, a smeša je sklonjena i ponovo napunjena pomoću posudua sa H2. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da da sirov 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (68.0 mg, 0.146 mmol, 93 % prinos) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (t, J=6.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.53 -7.33 (m, 3H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 6.54 (t, J=4.8 Hz, 1H), 6.41 (br d, J=5.5 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.97 - 4.84 (m, 1H), 3.95 - 3.76 (m, 2H), 2.63 (q, J=7.6 Hz, 2H), 1.18 (t, J=7.5 Hz, 3H).

MS ESI m/z 466.5 (M+H)<+>

[0353] 126: U bočica za reakciju od 8 mL je dodat štapić za mešanje i 3-(2-amino-3-fluoropiridin-4-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (40 mg, 0.086 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, nakon čega je dodat 1,4-dioksan (1 mL), DCM (1 mL) i etoksilkarbonil izotiocijanat (0.015 mL, 0.129 mmol) u kapima na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim na 45 °C tokom 2 h. Smeša je koncentrovan u vakuumu a ostatak koji sadrži željeni intermedijer (MS ESI m/z 597.5 (M+H<+>)) je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni (4 g silika, gradijent MeOH u DCM = 0-6 %, vreme gradijenta =10 min pri brzini 15 mL/min). U bočicu od 8 mL, tako dobijen prečišćeni intermedijer tiouree (51.3 mg, 0.0860 mmol) je kombinovan sa hidroksilamin hidrohloridom (29.9 mg, 0.430 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat etanol (1 mL) i Hunigova baza (0.0450 mL, 0.258 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min a zatim na 80 °C preko noći. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i oprana vodom. Material je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 8% B, 8-48% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio željeni racemski proizvod (30 mg, 0.059 mmol, 69 % prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 - 9.13 (m, 1H), 8.94 - 8.48 (m, 1H), 7.92 - 7.12 (m, 6H), 6.83 - 6.30 (m, 2H), 5.38 - 4.90 (m, 1H), 4.39 - 3.86 (m, 1H), 3.67 -3.20 (m, 2H), 3.01 - 2.75 (m, 3H), 1.68 - 1.07 (m, 3H).

MS ESI m/z 506.4 (M+H)<+>

Primer 127: 3-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0354]

[0355] Primer 127 je pripremljen na sličan način kao primer 124 gde je 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoeva kiselina zamenjena sa 5-bromo-2,4-dihlorobenzoevom kiselinom u prvom koraku, i prečišćavanjem sa hiralnom SFC nije izveden na željenom proizvodu racemata u završnom koraku. Tako, racemski 3-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid je dobijen (5.6 mg, 0.011 mmol, 24 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.56 - 7.42 (m, 4H), 7.21 (t, J=7.3 Hz, 2H), 6.97 (dd, J=6.9, 1.7 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.00 - 4.89 (m, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.88 - 3.67 (m, 2H).

MS ESI m/z 510.1 (M+H)<+>

Primer 128: Enantiomerna smeša 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0356]

[0357] 128A: etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanoat: u suspenziju cinka (5.58 g, 85.0 mmol) u THF (85 mL) je dodat rastvor etil 2-bromo-2-fluoroacetata (6.0 mL, 51.2 mmol) i 4-hlorobenzaldehida (6.00 g, 42.7 mmol) u THF (15 mL) u kapima sa levkom za ukapavanje tokom 15 min. Reakciona smeša je zagrejana uz refluks tokom 30 min. Nakon filtracije, 1N vodeni rastvor HCl i etar su dodati. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom tri puta. Kombinovani organaski slojevi su oprani sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Smeša je filtrirana, a filtrat je uparen u vakuumu da da sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom eluiranjem sa 0-15% etil acetata/heksana da da etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanoat (6.50 g, 26.4 mmol, 62 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.40 - 7.25 (m, 4H), 5.20 - 5.08 (m, 1H), 5.08 - 4.94 (m, 1H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 2.19 (s, 1H), 1.25 (dt, J=11.8, 7.2 Hz, 3H).

[0358] 128B: 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanamid: U rastvor etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanoata (1.37 g, 5.55 mmol) u MeOH (13.9 mL) na sobnoj temperaturi je dodat 7M amonijak u metanolu (4.0 mL, 27.8 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Rastvarači su uklonjeni da daju 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3hidroksipropanamid (1.21 g, 5.56 mmol, 100 % prinos) kao belu čvrstu supstancu. Ovaj materijal je korišćen direktno tokom sledećeg koraka. MS ESI/APCI m/z 216.1 [M-H]-[0359] 128C: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ol: U rastvor 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanamida (158 mg, 0.726 mmol) u THF (1.45 mL) na sobnoj temperaturi je dodat boran-dimetilsulfidni kompleks, 2M u THF (1.09 mL, 2.178 mmol), i reakciona smeša je zagrejana uz refluks tokom 2 h. Metanol je dodat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Ostatak je azeotropiran sa metanolom (5 x) da se ukloni borna kiselina, da da 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ol (149 mg, 0.732 mmol, 101 % prinos) kao bezbojno ulje. Ovaj materijal je direktno korišćen tokom sledećeg koraka.

MS ESI/APCI m/z 203.8 [M+H]<+>

[0360] 128D-1: Enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida: smeša 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline (20 mg, 0.079 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ola (17.7 mg, 0.0870 mmol), BOP (41.9 mg, 0.0950 mmol) i diizopropiletilamin (21 µl, 0.118 mmol) u DCM (158 µL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu a ostatak je prečišćen preparativnom TLC na silika gelu (0.50 mm debljina, elucija 30% etil acetat u heksanima) da obezbede dve odvojene smeše enantiomera. Enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (11 mg, 0.025 mmol, 32 % prinos) je izolovana kao manje polarni materijal koji se brže eluira na preparativnoj TLC na siliki.

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.59 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.43 - 7.34 (m, 4H), 7.19 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.38 (br s, 1H), 4.84 (t, J=7.3 Hz, 1H), 4.69 - 4.53 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 1H), 3.95 (br s, 1H), 3.70 (dddd, J=17.7, 14.9, 5.6, 3.2 Hz, 1H).

MS ESI/APCI m/z 437.8 [M+H]<+>

[0361] 128D-2: Enantiomerna smeša 2 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida: Enantiomerna smeša 2 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (11 mg, 0.025 mmol, 32 % prinos) je izolovana kao manje polarni materijal koji se sporije eluira na preparativnoj TLC na siliki od separacije preparativnom TLC opisanom za intermedijer 128D-1.

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.54 (dd, J=8.6, 7.3 Hz, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.13 (dd, J=8.6, 1.4 Hz, 1H), 6.28 (br s, 1H), 4.88 (dd, J=18.1, 5.0 Hz, 1H), 4.81 (dt, J=7.0, 4.7 Hz, 1H), 3.96 -3.50 (m, 2H).

MS ESI/APCI m/z 437.8 [M+H]<+>

[0362] 128: U bočici od 1 drama opremljenoj štapićem za mešanje su kombinovani enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (23 mg, 0.052 mmol), N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (28.9 mg, 0.063 mmol), kalijum fosfat trobazni (79.0 µL, 0.157 mmol), i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (2.0 mg, 2.5 umol) u 1,4-dioksanu (250 µL) da daju braon suspenziju. Reakciona smeša je degazirana sklanjanjem i ponovnim punjenjem azotom 3 x. Bočica je zapečaćena i zagrejana na 60 °C tokom 2 h. Rastvor hlorovodonika (4M u 1,4-dioksanu, 196 µL, 0.79 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod blagom strujom azota, rastvorena u DMF i filtrirana kroz 0.45 µm PTFE frit. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 10% B, 10-50% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim isparavanjem da daju enantiomerna smeša 1, 2 TFA 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (3.5 mg, 0.0049 mmol, 8 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (s, 1H), 8.61 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.71 (br t, J=8.1 Hz, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 2H), 7.43 (s, 3H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.05 (br s, 2H), 4.79 (br s, 1H), 4.72 - 4.55 (m, 1H).

MS ESI/APCI m/z 491.9 [M+H]<+>

Primer 129: Enantiomerna smeša 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0363]

[0364] U bočicu od 1 drama opremljenoj sa štapićem za mešanje su kombinovani enantiomerna smeša 2 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (22 mg, 0.050 mmol), N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (27.7 mg, 0.060 mmol), kalijum fosfat trobazni (75.0 µL, 0.150 mmol) i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (2.0 mg, 2.5 µmol) u 1,4-dioksanu (250 µL) da daju braon suspenzija. Reakciona smeša je degazirana sklanjanjem i ponovnim punjenjem azotom 3 x. Bočica je zapečaćena i zagrejana na 60 °C tokom 2 h. Rastvor hlorovodonika (4M u 1,4-dioksanu, 188 µL, 0.75 mmol) je dodat, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod blagom strujom azota, rastvorena u DMF, i filtrirana kroz 0.45 µm PTFE frit. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 9% B, 9-49% B tokom 20 min, zatim a 0-mine hold at 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da daju enantiomernu smešu 2, 2 TFA 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (6.8 mg, 0.0094 mmol, 19 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 7.42 (s, 4H), 7.04 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.75 - 4.57 (m, 1H), 3.61 (br s, 2H).

MS ESI/APCI m/z 491.9 [M+H]<+>

Primer 130: enantiomerna smeša 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0365]

[0366] 130A: Smeša etil 2-hloro-2-fluoroacetata (5.1 mL, 44.3 mmol), 4-fluorobenzaldehida (4.3 mL, 40.3 mmol) i cinka (3.69 g, 56.4 mmol) u DMF (101 mL) je zagrejana na 80 °C u uljanom kupatilu tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita, i 1 N HCl je dodat. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom 3 x. Kombinovani organski slojevi su oprani sa koncentrovanim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u vakuumu do ostatka. Ostatak je prečišćen silika gel fleš kolonskom hromatografijom (gradijent eluiranja 0-15% etil acetat u heksanima) da da etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanoat (2.00 g, 8.69 mmol, 22 % prinos).

[0367]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.34 (m, 2H), 7.11 - 7.03 (m, 2H), 5.18 - 5.08 (m, 1H), 5.08 - 4.92 (m, 1H), 4.30 - 4.16 (m, 2H), 2.87 - 2.65 (m, 1H), 1.61 - 1.57 (m, 1H), 1.29 - 1.19 (m, 3H).

[0368] 130B: 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: U rastvor etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanoata (850 mg, 3.69 mmol) u metanolu (9.2 mL) na sobnoj temperaturi je dodat amonijak, 7M rastvor u metanolu (2.6 mL, 18.5 mmol), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu da daju 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (750 mg, 3.73 mmol, 101 % prinos) kao belu čvrsta supstancu. Smeša 1:1 dva dijastereomera je dobijena. Ovaj materijal je korišćen direktno tokom sledećeg koraka.

MS ESI/APCI m/z 200.1 [M-H]-[0369] 130C: 3-amino-1-(4-fluorofenil)-2-fluoropropan-1-ol: U rastvor 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (160 mg, 0.795 mmol) (1.6 mL) je dodat boran-dimetilsulfidni kompleks, 2M u THF (1.2 mL, 2.386 mmol), i rekciona smeša je zagrejana uz refluks tokom 2 h. Nakon hlađenja, metanol je dodat, a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Metanol je uklonjen u vakuumu, a ostatak je azeotropiran sa metanolom (3 x) da se ukloni borna kiselina, da da 3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (150 mg, 0.801 mmol, 101 % prinos) kao bezbojno ulje. Ovaj materijal je korišćen direktno za sledeći korak.

MS ESI/APCI m/z 187.9 [M+H]<+>

[0370] 130D-1: Enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida: Rastvor 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline (190 mg, 0.748 mmol), 3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (140 mg, 0.748 mmol), diizopropiletil amina (196 µl, 1.12 mmol) i (benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata) (397 mg, 0.897 mmol) u dihlorometanu (2.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom TLC na silika gelu (0.50 mm debljina, eluiranje 30% etil acetate u heksanima) da obezbedi dve odvojene smeše enantiomera. Enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamida (63.0 mg, 0.149 mmol, 20 % prinos) je izolovana kao manje polarni materijal koji se brže eluira na preparativnoj TLC na siliki.

[0371]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.60 (dd, J=8.6, 7.3 Hz, 1H), 7.44 (dd, J=8.7, 5.4 Hz, 2H), 7.19 (dd, J=8.6, 1.4 Hz, 1H), 7.10 (t, J=8.3 Hz, 2H), 6.36 - 6.27 (m, 1H), 4.89 - 4.82 (m, 1H), 4.71 - 4.55 (m, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 1H), 3.88 - 3.81 (m, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H). MS ESI/APCI m/z 419.9 [M-H]-[0372] 130D-2: Enantiomerna smeša 2 3(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida: enantiomerna smeša 2 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (67.0 mg, 0.159 mmol, 21 % prinos) je izolovana kao polarniji materijal koji se brže eluirta na preparativnoj TLC na siliki od separacije preparativnom TLC opisane za intermedijer 130D-1.

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.56 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.43 (t, J=6.7 Hz, 2H), 7.19 - 7.02 (m, 3H), 6.28 (br s, 1H), 4.90 (dd, J=17.5, 5.3 Hz, 1H), 4.86 - 4.69 (m, 1H), 3.94 - 3.49 (m, 2H).

MS ESI/APCI m/z 419.8 [M-H]-[0373] 130: U bočicu od 1 drama opremljenoj sa štapićem za mešanje su kombinovani enantiomerna smeša 1 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (23 mg, 0.054 mmol), N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (30.1 mg, 0.065 mmol), 2M vodenog rastvora kalijum fosfata trobaznog (82.1 µL, 0.163 mmol), i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) kompleksa sa dihlorometanom (2.2 mg, 2.7 µmol) u 1,4-dioksanu (270 µL) da da braon suspenziju. Dobijena smeša je degazirana sklanjanjem i ponovnim punjenjem azotom (3 x). Bočica je zapečaćena i zagrejana na 60 °C tokom 2 h. Rastvor hlorovodonika (4M u 1,4-dioksanu, 204 µL, 0.82 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod blagom strujom azota. Ostatak je rastvoren u DMF i filtriran kroz 0.45 um PTFE frit. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 9% B, 9-49% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da daju enantiomernu smešu 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamida (8.4 mg, 0.018 mmol, 32% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.05 - 8.99 (m, 1H), 8.61 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (br t, J=8.2 Hz, 1H), 7.54 - 7.42 (m, 4H), 7.18 (t, J=8.3 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.87 - 4.71 (m, 1H), 4.71 - 4.51 (m, 1H).

MS ESI/APCI m/z 475.9 [M+H]<+>

Primer 131: Enantiomerna smeša 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida

[0374]

[0375] U bočicu od 1 drama opremljenoj sa štapićem za mešanje su kombinovani enantiomerna smeša 2 3-bromo-6-hloro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (23 mg, 0.054 mmol), N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (30.1 mg, 0.065 mmol), 2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfat (82.1 µL, 0.163 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) kompleks sa dihlorometanom (2.2 mg, 2.7 µmol) u 1,4-dioksanu (270 µL) da da braon suspenziju. Dobijena smeša je degazirana sklanjanjem i ponovnim punjenjem azotom (3 x). Bočica je zapečaćena i zagrejana na 60 °C tokom 2 h. Rastvor hlorovodonika (4M u 1,4-dioksanu, 204 µL, 0.82 mmol) je dodat i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod blagom strujom azota, rastvorena u DMF i filtrirana kroz 0.45 um PTFE frit.

Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 5% B, 5-45% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da daju enantiomernu smešu 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid, 2 TFA (4.8 mg, 0.0068 mmol, 11% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br s, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.57 - 7.39 (m, 4H), 7.25 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.22 - 7.13 (m, 3H), 7.12 - 7.00 (m, 2H), 4.84 - 4.76 (m, 1H), 4.74 - 4.57 (m, 1H).

MS ESI/APCI m/z 475.9 [M+H]<+>

Primer 132: (S)-3-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0376]

[0377] 132A: (S)-3-bromo-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: u reakcionu bočicu od 8 mL je dodat štapić za mešanje i BOP (197 mg, 0.446 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat DMF (3.43 mL), N,N-diizopropiletilamin (239 µl, 1.37 mmol), 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (80.0 mg, 0.343 mmol) i (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol, HCl (91.0 mg, 0.412 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 d. Reakciona smeša je razblažena sa vodenim rastvorom LiCl (30 mL, 10% m/m), i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL x 2). Kombinovana organska faza je oprana sa H2O (50 mL x 2) i koncentrovanim rastvorom soli (50 mL), osušena sa amorfnim MgSO4i filtrirana kroz celit. Sirov materijal je koncentrovan u vakuumu.12 g silika gel ketridž je prethodno navlažen sa 4% Et3N u heksanom (50 mL). Sirov materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni (gradijent EtOAc u Heks 0% do 50%, zatim 50% zadržavanje, 12 g prethodno tretirana silika), dajući (S)-3-bromo-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (120 mg, 0.299 mmol, 87 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.46 (dd, J=8.0, 7.3 Hz, 1H), 7.32 (m, 4H), 6.92 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.32 (br s, 1H), 4.84 (dt, J=9.3, 3.5 Hz, 1H), 3.95 - 3.87 (m, 1H), 3.43 (dq, J=14.1, 5.2 Hz, 1H), 3.10 (d, J=3.5 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.03 - 1.87 (m, 2H).

MS ESI m/z 382.00 i 384.00 (M-OH)<+>

[0378] 132B: 8-fluoro-7-jodo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin: U reakcionu bočicu od 20 mL je dodat štapić za mešanje i 3-fluoro-4-iodopiridin-2-amin (1.00 g, 4.20 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat 1,4-dioksan (10.5 mL), DCM (10.5 mL) i etoksikarbonil izotiocijanat (0.74 ml, 6.30 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 d. Smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirova materija je prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (Gradijent EtOAc u Heks, 0% do 100%; 12 g silika), dajući tioureaa intermedijer (1.50 g, 4.06 mmol).

[0379] U bocu sa okruglim dnom od 250 mL je dodat štapić za mešanje, tioureaa intermedijer (1.50 g, 4.06 mmol) i hidroksiamin hidrohlorid (1.41 g, 20.3 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat etanol (27 mL) i DIPEA (2.1 mL, 12.2 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min i zatim na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, razblažena sa 10 mL of DMSO, filtrirana, i filtrat je prečišćen HPLC kolonskom hromatografijom sa reverznom fazom (Rastvarač A: 10% acetonitril, 90% H2O, 0.1% NH4OAc; Rastvarač B: 90% acetonitril, 10% H2O, 0.1% NH4OAc; Gradijent 0 % do 50 % B, zatim zadržavanje 100% B) da da 8-fluoro-7-jodo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (0.500 g, 1.80 mmol, 44 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.25 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=6.9, 5.5 Hz, 1H), 6.26 (s, 2H).

MS ESI m/z 278.85 (M+H)<+>

[0380] 132C: (2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borna kiselina: u reakcionu bočicu od 20 mL je dodat štapić za mešanje, 8-fluoro-7-iodo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (0.100 g, 0.360 mmol), [1,1' bis(difenilfosfino)ferocen]dihloro-paladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (0.030 g, 0.036 mmol), bis(pinakolato)diboron (0.240 g, 0.936 mmol) i kalijum acetat (0.212 g, 2.16 mmol). Bočica je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat 1,4-dioksan (3.6 mL). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 4 d. Smeša je razblažena sa 1,4-dioksanom (da da ukupna zapremina 7.2 mL) i direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0381] 132: U reakcionu bočicu od 8 mL je dodat štapić za mešanje, (S)-3-bromo-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (26.4 mg, 0.0660 mmol), PdCl2(dtbpf) (3.91 mg, 6.00 µmol), i (2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borna kiselina (1/6 alikvota od sirove smeše, 1.2 mL, 0.060 mmol pretpostavljeno) u 1,4-dioksanu, zatim je dodat kalijum fosfat (150 µL, 2M u H2O, 0.300 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem N2kroz rastvor tokom 5 min, zatim je smeša mešana na 80 °C tokom 3 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu, razblažena sa 2 mL DMSO i filtrirana. Sirov filtrat je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 12% B, 12-52% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (7.0 mg, 0.015 mmol, 25 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 8.53 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.48 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 4H), 7.25 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.88 (t, J=6.7 Hz, 1H), 6.36 - 6.18 (m, 2H), 5.39 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.72 - 4.58 (m, 1H), 3.40 - 3.31 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.81 (q, J=6.9 Hz, 2H).

MS ESI m/z 471.93 (M+H)<+>

Tabela 9: Jedinjenja u tabeli 9 su pripremljena na sličan način kao u primeru 132.

Tabela 10: Jedinjenja u tabeli 10 su pripremljena na sličan način kao u primeru 132.3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol je zamenjen za (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol, HCl u prvom koraku niza (formiranje intermedijera 132A). Dodatno, primeri 135 i 136 su odvojeni iz racemata pomoću hiralne SFC hromatografije (Waters 100 Prep SFC, Kolona: hiralna OJ, 30 x 250 mm. 5 mikrona, Mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH s/0.1%DEA, Uslovi protoka: 100 mL/min, Talasna dužina detektora: 220 nm). Takođe, primeri 137 i 138 su odvojeni od racemata hiralnom SFC hromatografijom (Waters 100 Prep SFC, Kolona: Hiralna IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona, Mobilna faza: 65% CO2/ 35% MeOH s/0.1%DEA, Uslovi protoka: 60 mL/min, Talasna dužina detektora: 220 nm).

Primer 139: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-N-[(3S)-3-(4-cijanofenil)-3-hidroksipropil]-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0382]

[0383] U reakcionu bočicu od 8mL je dodat štapić za mešanje, (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (22.7 mg, 0.050 mmol), kalijum ferocijanid trihidrat (10.6 mg, 0.0250 mmol), predkatalizator 2. generacije XPhos (3.93 mg, 5.00 µmol) i XPhos (2.38 mg, 5.00 µmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom tri puta, zatim je dodat degaziran 1,4-dioksan (0.3 mL) i degazirani vodeni rastvor kalijum acetata (0.30 mL, 0.1M in H2O, 0.030 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (10 mL) i iPrOH (5 mL), oprana sa H2O (10 mL) i koncentrovanim rastvorom soli (10 mL), osušena sa amorfnim MgSO4i filtrirana kroz celit. Sirova smeša je koncentrovana u vakuumu, ponovo rastvorena u 2 mL DMF i filtrirana. Sirov filtrat je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatomom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 6% B, 6-46% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-cijanofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (11.8 mg, 0.0265 mmol, 51% prinos).

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (br t, J=5.1 Hz, 1H), 8.56 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J=7.7 Hz, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 7.21 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.06 (br d, J=6.6 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.83 - 5.71 (m, 1H), 4.78 - 4.67 (m, 1H), 3.41 - 3.25 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.91 - 1.74 (m, 2H).

MS ESI m/z 445.3 (M+H)<+>

Tabela 11: Jedinjenja u tabeli 11 su pripremljena na sličan način kao u primeru 139 od odgovarajućeg aril hlorida.

Primer 142: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-N-[(3S)-3-(4-etinilfenil)-3-hidroksipropil]-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0384]

[0385] U bočicu od 8mL je dodat štapić za mešanje, (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (22 mg, 0.048 mmol), cezijum karbonat (39.5 mg, 0.121 mmol), XPhos (6.93 mg, 0.0150 mmol), i Pd katalizator 2. generacije Xphos (7.63 mg, 9.69 µmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat acetonitril (969 µl) i trimetilsililacetilen (68.0 µL, 0.485 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min a zatim na 90 °C tokom 3 h. LCMS je pokazala di-silirani alkinski proizvod kao glavnu komponentu. Smeša je koncentrovana i prečišćena preparativnom TLC (eluiranje 5% MeOH u EtOAc). Proizvod nije bio stabilan na siliki i razložio se na dve komponente. Sirov materijal je ponovno dobijen i prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 9% B, 9-49% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-etinilfenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (0.70 mg, 0.0016 mmol, 3.3 % prinos).

MS ESI m/z 444.0 (M+H)<+>

Primer 143: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-N-[3-(4-hlorofenil)-3-oksopropil]-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0386]

[0387] U reakcionu bočicu od 8mL je dodat štapić za mešanje i sumpor trioksid piridinski kompleks (75.0 mg, 0.474 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat DMSO (1.4 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. U odvojenu reakcionu bočicu od 8 mL je dodat štapić za mešanje, (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (43 mg, 0.095 mmol), trietilamin (0.13 mL, 0.947 mmol), i DMSO (0.6 mL), zatim je dodat pripremljen rastvor SO3-piridina u DMSO polako putem šprica. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 h. Reakcija je gašena dodavanjem iPrOH. Smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL), oprana sa H2O (50 mL) i koncentrovanim rastvorom soli (50 mL), osušena sa amorfnim MgSO4i filtrirana kroz celit. Sirova materija je koncentrovana u vakuumu i prečišćena preparativnom TLC (5 % MeOH u DCM) da da 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-oksopropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (13.7 mg, 0.0300 mmol, 32 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (s, 1H), 8.60 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.03 - 7.95 (m, 2H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.19 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.01 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.62 - 4.56 (m, 4H), 2.27 (s, 3H).

MS ESI m/z 452.0 (M+H)<+>

Primer 144: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid

[0388]

[0389] 144A: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoat: Smeša 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (256 mg, 1.20 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (366 mg, 1.44 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (49.0 mg, 0.0600 mmol) i kalijum acetata (294 mg, 3.00 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je mešana na 110-115 °C tokom 2 h. U smešu je dodat metil 4-hloro-5-jodo-2-metilbenzoat (298 mg, 0.960 mmol) zatim PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (49.0 mg, 0.0600 mmol) i 2.0 M trikalijum fosfat/voda (1.50 mL, 3.00 mmol). Smeša je refluksovana tokom 2 h. Voda je dodata, i čvrsta supstanca je sakupljena da da metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoat (300 mg, 0.947 mmol, 79 % prinos).

MS ESI m/z 317.2 (M+H)<+>

[0390] 144B: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoata (300 mg, 0.947 mmol) u THF (5 mL) je dodat rastvor litijum hidroksid hidrat (50 mg, 1.2 mmol) u vodi (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da sirovu litijumovu so 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoeve kiseline (242 mg, 0.947 mmol, 100 % prinos). Materijal je korišćen kakav jeste u sledećem koraku.

MS ESI m/z 303.2 (M+H)<+>

[0391] 144: U smešu sirovog litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-2-metilbenzoata (30.3 mg, 0.100 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat BOP (53.1 mg, 0.120 mmol) zatim DIPEA (0.035 mL, 0.200 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 min, (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorid (26.7 mg, 0.120 mmol) je dodat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. DMF/MeOH je dodat i čvrste supstance su odfiltrirane i odbačene. Sirov filtrat je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 30 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 14% B, 14-54% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 45 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da da (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid (18.8 mg, 0.040 mmol, 40 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.39 (br t, J=5.0 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.37 (s, 4H), 7.02 (dd, J=6.7, 1.5 Hz, 1H), 4.64 (br t, J=6.3 Hz, 1H), 3.33 - 3.26 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.83 (q, J=6.7 Hz, 2H).

MS ESI m/z 470.2 (M+H)<+>

Primer 145: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-metilbenzamid

[0392]

[0393] 145A: 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoeva kiselina i 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoeva kiselina: 2-hloro-6-metilbenzoeve kiseline (0.341 g, 2.0 mmol) je rastvoren u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (2 mL). Smeša je rashlađena u kupatilu led/koncentrovan rastvor soli i 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoin (0.286 g, 1.00 mmol) je polako dodat. Nakon što je smeša mešana na 0 °C tokom 30 min, led je dodat u smešu, a dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organaski sloj je opran vodom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, zatim koncentrovan da da sirovu smešu 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoeva kiselina i 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoeva kiselina. Materijal je korišćen kakav jeste u sledećem koraku.

[0394] 145B: metil 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoat i metil 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoat: U rastvor sirove smeše 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoeve kiseline i 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoeve kiseline (499 mg, 2.00 mmol) u DMF (6 mL) je dodat kalijum karbonat (553 mg, 4.00 mmol) zatim MeI (0.38 mL, 6.00 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. EtOAc (50 mL) je dodat i organska faza je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli i vodom, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika koloni (24 g silika, gradijent heksani-10%EtOAc) da da neodvojivi odnos 4:1 smeše metil 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoata (360 mg, 1.37 mmol, 68 % prinos) i metil 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoata (90 mg, 0.342 mmol, 17 % prinos), prema<1>H NMR analizi.

[0395] Metil 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoat:<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.54 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.38 (s, 3H).

[0396] Metil 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoat:<1>H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 7.56 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.01 (d, J=8.2 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.30 (s, 3H). MS ESI m/z 265.1 (M+H)<+>

[0397] 145C: metil 2-hloro-6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat i metil 6-hloro-2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat: U rastvor metil 3-bromo-2-hloro-6-metilbenzoata (360 mg, 1.37 mmol) i metil 3-bromo-6-hloro-2-metilbenzoata (90 mg, 0.342 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je dodat 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (520 mg, 2.05 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (112 mg, 0.137 mmol) i kalijum acetat (402 mg, 4.10 mmol). Smeša je isprana azotom zatim mešana na 110-115 °C tokom 3 h dok LCMS nije pokazala da je početni materijal utrošen, i željeni boronatni proizvodi formirani. Reakciona smeša je korišćena takva kakva jeste u sledećem kortaku. MS ESI m/z 311.3 (M+H)<+>

[0398] 145D: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-6-metilbenzoat i metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-metilbenzoat: U dobijenu smešu metil 2-hloro-6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (424 mg, 1.366 mmol) i metil 6-hloro-2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (106 mg, 0.342 mmol) je dodat 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (364 mg, 1.71 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (44.6 mg, 0.055 mmol) i 2M vodeni rastvor K3PO4(2.1 mL, 4.10 mmol). Nakon ispiranja azotom tokom 5 min, smeša je mešana na 115 °C tokom 1 h. Dodata je voda (50 mL), i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika koloni (24 g silika, gradijent DCM-10%MeOH u DCM) da bi se dobila neodvojiva smeša metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-metilbenzoata (350 mg, 1.11 mmol, 81 % prinos) i metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-6-metilbenzoata (80 mg, 0.253 mmol, 18 % prinos).

MS ESI m/z 317.2 (M+H)<+>

[0399] 145E: litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-6-metilbenzoat i litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-metilbenzoat: U smešu metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-metilbenzoata (350 mg, 1.11 mmol) i metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-6-metilbenzoata (88 mg, 0.276 mmol) u THF (4 mL) je dodat rastvor LiOH (66.2 mg, 2.76 mmol) u vodi (1 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, na 60 °C tokom 3 d, zatim na 85 °C tokom 1 d. Reakciona smeša je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom da da sirovu smešu dva litijum karboksilata. Sirov ostatak je korišćen takav kakav jeste u sledećem koraku.

MS ESI m/z 303.2 (M+H)<+>

[0400] 145: U smešu litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-metilbenzoata (30.3 mg, 0.1 mmol) i litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-6-metilbenzoata (7.57 mg, 0.025 mmol) u DMF (1 mL) je dodat BOP (88 mg, 0.200 mmol) zatim DIPEA (0.070 mL, 0.400 mmol). Nakon mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorid (44.4 mg, 0.200 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je rastvorena u DMF i filtrirana. Filtrat koji sadrži sirov proizvod je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 18% B, 18-48% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem. Materijal je dalje prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 10% B, 10-50% B tokom 25 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da daju željeni (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-metilbenzamid (2.3 mg, 4.9 µmol, 5 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J=6.7 Hz, 1H), 8.59 (t, J=5.5 Hz, 1H), 7.44 -7.34 (m, 7H), 6.94 (dd, J=6.9, 1.7 Hz, 1H), 4.68 (t, J=6.4 Hz, 1H), 3.36 - 3.26 (m, 1H), 3.39 - 3.25 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.83 (q, J=6.6 Hz, 2H).

MS ESI m/z 470.0 (M+H)<+>

Primer 146: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-dimetilbenzamid

[0401]

[0402] 146A: (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borna kiselina: U staklenoj posudi srednjeg pritiska koja se može zatvoriti, u smešu 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (250 mg, 1.17 mmol), bis(pinakolato)diborona (447 mg, 1.76 mmol) i kalijum acetata (346 mg, 3.52 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (48 mg, 0.059 mmol).

Smeša je zagrejana na 100 °C tokom 45 min, i sirova smeša je korišćena direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja, pretpostavlja se 100% prinos.

MS ESI m/z 178.9 (M+H)<+>

[0403] 146B: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoat: U staklenoj posudi srednjeg pritiska koja se može zatvoriti, u sirovu smešu opisanu u 146A dodat je metil 5-jodo-2,4-dimetilbenzoat (250 mg, 0.862 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (28 mg, 0.043 mmol). Smeša je degazirana i tretirana 2M vodenim rastvorom K3PO4(1.3 mL, 2.59 mmol). Posuda je zatvorena i zagrejana na 100 °C tokom 15 min. Sirova reakciona supstanca je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću silika gel fleš hromatografije na koloni (eluiranje sa etil acetatom u heksanima) da da metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoat (222 mg, 0.712 mmol, 95 % prinos).

MS ESI m/z 297.1 (M+H)<+>

[0404] 146C: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoata (222 mg, 0.749 mmol) u THF (8 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (39.3 mg, 0.936 mmol) u vodi (1.5 mL). Dobijena smeša je mešana na 55 °C tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da da sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoat (217 mg, 0.692 mmol, 92 % prinos) koji je korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku.

[0405] 146: U smešu sirovog litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-dimetilbenzoata (13 mg, 0.046 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.040 mL, 0.23 mmol) u DMF (1.0 mL) je dodat BOP (31 mg, 0.069 mmol) i reakcija je mešana na 44 °C tokom 72 h. Smeša je razblažena sa metanolom (2 mL), filtrirana i prečišćena preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10mM amonijum acetatomom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 17% B, 17-57% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-dimetilbenzamid (11.1 mg, 0.0250 mmol, 54 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.26 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 7.37 (s, 4H), 7.32 (s, 1H), 7.22 (d, J = 19.6 Hz, 2H), 6.89 (dd, J = 6.9, 1.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.41 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.71 - 4.57 (m, 1H), 3.53 - 3.45 (m, 1H), 3.35 - 3.23 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.88 - 1.77 (m, 2H).

MS ESI m/z 450.28 (M+H)<+>

Primer 147: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid

[0406]

[0407] 147A: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metoksibenzoeva kiselina: U staklenoj posudi srednjeg pritiska koja se može zatvoriti, smeša (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borne kiseline (180 mg, 1.01 mmol) i 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoeve kiseline (233 mg, 0.936 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) je tretirana 1,1'-bis(diterc-butilfosfino)ferocen paladijum dihloridom (31 mg, 0.047 mmol). Smeša je degazirana i tretirana 2M vodenim rastvorom K3PO4(1.40 mL, 2.81 mmol). Posuda je zatim zatvorena i zagrejana na 100 °C tokom 18 h. Dodatna 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoeva kiselina (250 mg, 1.00 mmol), 2M vodeni rastvor K3PO4(2.0 mL, 4.0 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (50 mg, 0.080 mmol) su dodati i dobijena smeša je zagrejana na 100 °C tokom 3 h. Smeša je razblažena sa vodenim fosfatnim puferom (2 mL), ekstrahovana sa etil acetatom, a vodeni sloj je zakiseljen sa 6N HCl što je izazvalo taloženje čvrste supstance. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da da 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metoksibenzoevu kiselinu (202 mg, 0.601 mmol, 64 % prinos).

MS ESI m/z 302.99 (M+H)<+>

[0408] 147: U smešu 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metoksibenzoeve kiseline (22 mg, 0.073 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.064 mL, 0.36 mmol) u DMF (1.0 mL) je dodat BOP (48.3 mg, 0.109 mmol) i dobijena smeša je mešana na 44 °C tokom 18 h. Reakcija je razblažena sa metanolom (2 mL), filtrirana i prečišćena preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 11% B, 11-51% B tokom 24 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid (14.9 mg, 0.032 mmol, 43 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.53 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.66 (br t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 4H), 7.09 - 7.00 (m, 2H), 6.05 (s, 2H), 4.66 (br d, J= 4.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 3.33 - 3.16 (m, 2H), 1.79 (q, J = 6.7 Hz, 2H).

MS ESI m/z 469.98 (M+H)<+>

Primer 148: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid

[0409]

[0410] Naslovno jedinjenje pripremljeno na sličan način kao 147, menjajući (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol sa (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-olom u poslednjem koraku da se dobije (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metoksibenzamid (15.1 mg, 0.031 mmol, 43 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 - 8.52 (m, 2H), 7.65 (t, J=9.0 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 4H), 7.09 - 7.01 (m, 2H), 6.04 (s, 2H), 4.66 (br d, J=3.3 Hz, 1H), 3.98 (br s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.38 - 3.21 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 2H).

MS ESI m/z 469.98 (M+H)<+>

Primer 149: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid

[0411]

[0412] 149A: metil 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat: U smešu metil 5-bromo-2-metilbenzoata (2.00 g, 8.73 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) je dodat 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (2.66 g, 10.5 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (0.356 g, 0.437 mmol) i kalijum acetat (2.57 g, 26.2 mmol). Smeša je produvana azotnim gasom tokom nekoliko minuta, zatim mešana na 110 °C tokom 1 h. Smeša je korišćena takva kakva jeste u sledeće koraku i prepostavljen je 100 % prinos.

MS ESI m/z 277.1 (M+H)<+>

[0413] 149B: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat: U sirovu smešu koja sadrži metil 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (2.41 g, 8.69 mmol) je dodat 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (1.85 g, 8.69 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (0.284 g, 0.348 mmol) i 2M vodeni rastvor K3PO4(10.9 mL, 21.8 mmol). Reakcija je degazirana i zagrejana na 110 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa vodom (50 mL) i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 150 mL). Kombinovane organske supstance su osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirane i koncentrovane do ostatka. Željeni proizvod je kristalisan iz smeše heksana i etil acetata da se dobije metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat (2.30 g, 8.15 mmol, 94 % prinos).

MS ESI m/z 283.1 (M+H)<+>

[0414] 149C: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoata (261 mg, 0.925 mmol) u THF (5 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (48.5 mg, 1.16 mmol) u vodi (1.5 mL). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat (245 mg) koji je korišćen kao takav u sledećem koraku.

MS ESI m/z 269.11 (M+H)<+>

[0415] 149: U smešu litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoata (20 mg, 0.075 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola, HCl (21 mg, 0.093 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.078 mL, 0.45 mmol) u DMF (1 mL) je dodat BOP (49.5 mg, 0.112 mmol) i reakcija je mešana na 44 °C tokom 18 h. Smeša je razblažena sa metanolom (2 mL), filtrirana i prečišćena preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 15% B, 15-55% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid (9.8 mg, 0.022 mmol, 30 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.39 (t, J=5.4 Hz, 1H), 7.76 (dd, J=7.9, 1.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J=9.5 Hz, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 5H), 7.24 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 5.43 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.71 - 4.65 (m, 1H), 3.46 - 3.29 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.86 (q, J=6.8 Hz, 2H).

MS ESI m/z 436.08 (M+H)<+>

Primer 150: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-etilbenzamid

[0416]

[0417] 150A: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoat: U staklenoj posudi srednjeg pritiska koja se može zatvoriti, u smešu (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borne kiseline (142 mg, 0.800 mmol) i metil 5-bromo-2-etilbenzoata (180 mg, 0.740 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je dodat 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (24 mg, 0.037 mmol) i dobijena smeša je degazirana. Smeša je tretirana 2M vodenim rastvorom K3PO4(1.1 mL, 2.2 mmol), i posuda je zatvorena i zagrejana na 100 °C tokom 30 min. Sirova smeša je adsorbovana suvim nanošenjem na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni sa silika gelom (eluent metanol u dihlorometanu) da se dobije metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoat (205 mg, 0.692 mmol, 93 % prinos).

MS ESI m/z 297.0 (M+H)<+>

[0418] 150B: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoata (205 mg, 0.692 mmol) u THF (5 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (36.3 mg, 0.865 mmol) u vodi (1 mL). Smeša je mešana na 60 °C tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoat (189 mg) koji je korišćen kao takav u sledećem koraku.

MS ESI m/z 283.09 (M+H)<+>

[0419] 150: U smešu sirovog litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etilbenzoata (17 mg, 0.060 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.053 mL, 0.30 mmol) u DMF (1.0 mL) je dodat BOP (40 mg, 0.090 mmol) i smeša je mešana na 44 °C tokom 3 d. Smeša je razblažena sa metanolom (2 mL) i filtrirana, i sirov filtrat je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 16% B, 16-56% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-etilbenzamid (12.7 mg, 0.028 mmol, 46 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.40 (t, J=5.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.68 (d, J=4.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 5H), 7.24 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.41 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.76 - 4.59 (m, 1H), 2.77 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.86 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.18 (t, J=7.5 Hz, 3H).

MS ESI m/z 450.09 (M+H)<+>

Primer 151: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0420]

[0421] 151A: metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat: U rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (307 mg, 1.32 mmol) u DMF (6 mL) je dodat kalijum karbonat (455 mg, 3.29 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Jodometan (0.12 mL, 1.98 mmol) je dodat i dobijena smeša je mešana preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. EtOAc sloj je opran sa 10% vodenim LiCl (2x) zatim koncentrovanim rastvorom soli (1x), osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat (277 mg, 1.11 mmol, 84 % prinos) kao žuto ulje koje postalo čvrsta supstanca vremenom pod visokim vakuumom.

[0422] 151B: N,N-bis-Boc-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borna kiselina: Smeša bis-Boc-7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (500 mg, 1.210 mmol), bis(pinakolato)diborona (384 mg, 1.51 mmol), kalijum acetata (356 mg, 3.63 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (49 mg, 0.060 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 45 min. Sirova reakciona smeša je korišćena direktno u sledećem koraku: pretpostavljen 100 % prinos. MS ESI m/z 379.2 (M+H)<+>

[0423] 151C: metil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: U sirovu reakcionu smešu opisanu u 151B koja sadrži N,N-bis-Boc-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)bornu kiselinu je dodat metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat (275 mg, 1.11 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (36 mg, 0.056 mmol). Smeša je degazirana barbotiranjem azota tokom 5 min. 2 M vodeni rastvor K3PO4(1.7 mL, 3.34 mmol) je brzo dodat i dobijena smeša je zagrejana na 100 °C sa mešanjem tokom 15 min. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena suvim nanošenjem pomoću fleš hromatografije na koloni sa silikom (gradijent eluiranja 0-100% EtOAc u heks) da se dobije metil 3-(N,Nbis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (475 mg, 0.949 mmol, 85 % prinos) kao kristalna bež čvrsta supstanca.

MS ESI m/z 501.3 (M+H)<+>

[0424] 151D: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: Rastvor metil 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (475 mg, 0.949 mmol) u TFA (5 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana da se dobije metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (285 mg, 0.902 mmol, 95 % prinos) kao žutomrka čvrsta supstanca. MS ESI m/z 301.1 (M+H)<+>

[0425] 151E: litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: U rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (175 mg, 0.583 mmol) u THF (8 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (30.6 mg, 0.728 mmol) u vodi (1.5 mL). Dobijena smeša je mešana na 60 °C ON a zatim koncentrovana da se dobije sirov litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (163 mg, 0.512 mmol, 88 % prinos) kao čvrsta supstanca koja je korišćena kao takva u sledećem koraku.

MS ESI m/z 287.2 (M+H)<+>

[0426] 151: Smeša sirovog litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (15 mg, 0.052 mmol) i BOP (35 mg, 0.079 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i Hunigove baze (0.046 mL, 0.26 mmol) u DMF (1.0 mL) je mešana na 42 °C tokom 3 h. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 10% B, 10-50% B tokom 20 min, zatim a 4-min hold at 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (14.1 mg, 0.031 mmol, 59.3 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (br t, J=4.5 Hz, 1H), 8.59 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 7.57 (br t, J=8.0 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 4H), 7.22 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.66 (br t, J=6.2 Hz, 1H), 3.39 - 3.24 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.81 (q, J=7.0 Hz, 2H).

MS ESI m/z 454.0 (M+H)<+>

Primer 152: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0427]

[0428] 152A: 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: Smeša 2.0 M LDA u THF/heptan/etilbenzen (34.9 mL, 69.8 mmol) i THF (127 ml) je ohlađena na -78<0>C. U ohlađenu smešu je dodat 4-bromo-3-fluorotoluen (8.03 mL, 63.5 mmol) u kapima uz mešanje. Kada je dodavanje završeno, smeša je ostavljena da se meša na -78 °C tokom 20 min. Čvrst ugljen dioksid u prahu (5.59 g, 127 mmol) je zatim dodat odjednom. Žuta smeša je brzo postala crvena i ponovo brzo izbledela u svetložutu boju. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 20 min. Reakcija je gašena dodavanjem vode i ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Smeša je razblažena dodavanjem vode i ekstrahovana sa EtOAc (2x). Bazni vodeni sloj je doveden do pH 1 dodavanjem 1 N vodenog rastvora HCl. Dobijena suspenzija je filtrirana i čvrsta supstanca osušena pod avkuumom da da 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoevu kiselinu (3.44 g, 14.8 mmol, 23 % prinos).

[0429]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.72 - 7.61 (m, 1H), 7.11 (d, J=8.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H).

[0430] 152B: (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borna kiselina: mešana smeša kalijum acetata (691 mg, 7.04 mmol), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (500 mg, 2.35 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (96.0 mg, 0.117 mmol) i bis(pinakolato)diborona (894 mg, 3.52 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 1 h. Smeša je korišćena direktno u sledećem koraku takva kakva jeste.100 % prinos je pretpostavljen.

MS ESI m/z 179.0 (M+H)<+>

[0431] 152C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: U mešanu sirovu smešu opisanu u 152B koja sadrži (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)bornu kiselinu je dodata 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (750 mg, 3.22 mmol) i 1,1'bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (120 mg, 0.183 mmol). Smeša je degazirana barbotiranjem azota tokom 5 min. 2 M vodeni rastvor K3PO4(5.22 mL, 10.4 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša je zagrejana na 100 °C tokom 3 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, zatim razlažena sa 1 N vodenim rastvorom NaOH (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (1x). Vodeni sloj je zakiseljen sa 6 N HCl pri čemu se proizvod istaloži iz rastvora. Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i osušena da da 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoevu kiselinu (515 mg, 1.62 mmol, 75 % prinos) kao žutomrku čvrstu supstancu.

MS ESI m/z 287.1 (M+H)<+>

[0432] 152: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (20 mg, 0.070 mmol), BOP (46.3 mg, 0.105 mmol), (A)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola, HCl (19.4 mg, 0.087 mmol) i Hunigove baze (0.073 mL, 0.42 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na 44 °C tokom 3 d. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 15% B, 15-55% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (10.6 mg, 0.023 mmol, 33 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (br d, J=6.7 Hz, 2H), 7.58 (br t, J=7.9 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 4H), 7.29 - 7.19 (m, 1H), 7.18 - 7.08 (m, 1H), 7.10 - 6.96 (m, 1H), 4.66 (br t, J=6.4 Hz, 1H), 3.39 - 3.25 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.82 (q, J=7.1 Hz, 2H).

MS ESI m/z 454.3 (M+H)<+>

Tabela 12: Jedinjenja u tabeli 12 su pripremljena na sličan način kao u primeru 152, gde je 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina korišćena umesto 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline u trećem korku.

Primer 155: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0433]

[0434] 155A: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat: Mešana smeša kalijum acetata (380 mg, 3.87 mmol), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2amina (275 mg, 1.29 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (53 mg, 0.065 mmol), i bis(pinakolato)diborona (492 mg, 1.94 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 1 h. U dobijenu smešu je dodat metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat (300 mg, 1.12 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum (II) dihlorid (37 mg, 0.056 mmol). Da bi se reakcija degazila, azot je propuštan kroz smešu 5 min.2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (1.68 mL, 3.36 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (24 g silika, gradijent eluiranja 0-100% etil acetat u heks zatim 0-10% metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat (335 mg, 0.992 mmol, 88 % prinos) kao bež čvrstu supstancu.

MS ESI m/z 321.2 (M+H)<+>

[0435] 155B: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-vinilbenzoat: Smeša metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoata (350 mg, 1.09 mmol), dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (49.3 mg, 0.120 mmol), paladijum (II) acetata (12.3 mg, 0.055 mmol) i 6-metil-2-vinil-1,3,6,2-dioksazaborokan-4,8-diona (399 mg, 2.18 mmol) u 1,4-dioksanu (6.5 mL) je produvana sa azotom tokom 1 min. 2 M vodeni rastvor trobazog kalijum fosfata (3.00 mL, 6.00 mmol) je dodat, i reakciona smeša je zagrejana na 100 °C tokom 1 h. Žuta reakciona smeša je postala narandžasta u okviru 40 min na 100 °C. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (24 g silika, gradijent eluiranja 0-100 % etil acetat u heks zatim 0-10 % metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da se dobije metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-vinilbenzoat (217 mg, 0.695 mmol, 64 % prinos).

MS ESI m/z 313.2 (M+H)<+>

[0436] 155C: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: U rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-vinilbenzoata (217 mg, 0.695 mmol) u etanolu (6.5 mL) je dodat 10 % paladijum na ugljeniku (73.9 mg, 0.069 mmol). Reakciona smeša je degazirana smeštanjem posude pod vakuum tokom 5 min a zatim rponovo napunjena vodonikovim gasom. Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da čvrst metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat (220 mg, 0.630 mmol, 91 % prinos). Proizvod je koriščen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 315.2 (M+H)<+>

[0437] 155D: litijum-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: U rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoata (220 mg, 0.700 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (36.7 mg, 0.875 mmol) u 1 mL vode. Reakciona smeša je mešana na 65 °C ON. Smeša je koncentrovana do čvrste supstance da se dobije sirov litijum-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat. Ovaj materijal je korišćen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 301.2 (M+H)<+>

[0438] 155: Smeša sirovog litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoata (15 mg, 0.050 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (33 mg, 0.075 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i diizopropiletil amina (0.044 mL, 0.25 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL) je mešana na 40 °C tokom 3 d. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 17% B, 17-57% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušenee centrifugalnim uparavanjem da daju (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (11.8 mg, 0.025 mmol, 51 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (t, J=5.7 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.62 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 4H), 7.26 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.05 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.44 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 3.38 - 3.26 (m, 1H), 2.64 (q, J=7.5 Hz, 2H), 1.81 (q, J=7.0 Hz, 2H), 1.20 (t, J=7.6 Hz, 3H). Neki protonski signali su maskirani potiskivanjem vode.

MS ESI m/z 468.1 (M+H)<+>

Primer 156: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0439]

[0440] Smeša sirovog litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoata (22 mg, 0.073 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (48.6 mg, 0.110 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (20 mg, 0.092 mmol) i diizopropiletil amina (0.077 mL, 0.440 mmol) u in dimetilformamidu (1.0 mL) je mešana na 44 °C tokom 3 d. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 15% B, 15-52% B tokom 25 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid (10.6 mg, 0.023 mmol, 31 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 - 8.60 (m, 2H), 7.62 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 4H), 7.26 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.40 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.73 - 4.60 (m, 1H), 2.65 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.92 - 1.77 (m, 1H), 1.82 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 1.21 (t, J=7.6 Hz, 3H).

MS ESI m/z 468.3 (M+H)<+>

Primer 157: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-etil-4-fluorobenzamid

[0441]

[0442] 157A: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-4-fluorobenzoat: mešana smeša kalijum acetata (380 mg, 3.87 mmol), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (275 mg, 1.29 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (53 mg, 0.065 mmol) i bis(pinakolato)diborona (492 mg, 1.94 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 1 h. U dobijenu smešu je dodat metil 5-bromo-2-hloro-4-fluorobenzoat (300 mg, 1.12 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum (II) dihlorid (37 mg, 0.056 mmol). U degaziranu reakciju, barbotiran je azot kroz smešu tokom 5 min.

2 M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (1.7 mL, 3.36 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (24 g silika, gradijent eluiranja 0-100 % etil acetate u heks zatim 0-10 % metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-4-fluorobenzoat (293 mg, 0.868 mmol, 77 % prinos) kao bež čvrstu supstancu.

MS ESI m/z 321.2 (M+H)<+>

[0443] 157B: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-vinilbenzoat: smeša metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-hloro-4-fluorobenzoata (293 mg, 0.914 mmol), dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (41.3 mg, 0.100 mmol), paladijum (II) acetata (10 mg, 0.046 mmol) i 6-metil-2-vinil-1,3,6,2-dioksazaborokan-4,8-diona (334 mg, 1.83 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je produvana sa azotom tokom 1 min. 2 M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (2.51 mL, 5.02 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 1 h. Žuta reakciona smeša je postala narandžasta u okviru 40 min na 100 °C. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (24 g silika, gradijent eluiranja 0-100 % etil acetate u heks zatim 0-10 % metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da se dobije metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-vinilbenzoat (111 mg, 0.355 mmol, 39 % prinos).

MS ESI m/z 313.1(M+H)<+>

[0444] 157C: metil5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-4-fluoro-2-vinilbenzoata (111 mg, 0.355 mmol) u etanolu (6.5 mL) je dodat 10 % paladijum na ugljeniku (38 mg, 0.036 mmol). Dobijena smeša je degazirana vakuumom tokom 5 min, zatim je posuda ponovo napunjena vodonikovim gasom i mešana tokom 3 d na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da čvrst metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoat (79 mg, 0.25 mmol, 71 % prinos). Proizvod je korišćen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 315.2 (M+H)<+>

[0445] 157D: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoata (79 mg, 0.25 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (13.2 mg, 0.314 mmol) u 1 mL vode. Dobijena smeša je mešana na 60 °C preko noći. Smeša je koncentrovana u vakuumu do čvrste supstance da se dobije sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoat (75 mg, 0.25 mmol, 99 % prinos). Materijal je korišćen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 301.1 (M+H)<+>

[0446] 157: Smeša sirovog litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-etil-4-fluorobenzoata (13 mg, 0.043 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (29 mg, 0.065 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol) i diizopropiletil amina (0.038 mL, 0.22 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL) je mešana na 40 °C tokom 3 d. Sirova smeša je prečišćena preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 20% B, 20-60% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-etil-4-fluorobenzamid (8.1 mg, 0.017 mmol, 39 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 (d, J=6.9 Hz, 1H), 8.41 (t, J=5.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.55 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.38 (s, 4H), 7.30 (d, J=12.1 Hz, 1H), 7.10 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.43 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.71 - 4.61 (m, 1H), 3.36 - 3.25 (m, 1H), 2.78 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.84 (q, J=6.8 Hz, 2H), 1.18 (t, J=7.5 Hz, 3H).

MS ESI m/z 468.1 (M+H)<+>

Primer 158: (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid

[0447]

[0448] 158A: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat: Mešana smeša kalijum acetata (691 mg, 7.04 mmol), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (500 mg, 2.35 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (96 mg, 0.12 mmol) i bis(pinakolato)diborona (894 mg, 3.52 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 1 h. U dobijenu smešu je dodat metil 5-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoat (600 mg, 2.43 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum (II) dihlorid (79 mg, 0.12 mmol). U degaziranu reakciju, azot je barbotiran kroz smešu tokom 5 min.

2 M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (3.64 mL, 7.29 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša zagrevana na 100 °C tokom 30 min. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (40 g silika, gradijent eluiranja 0-100 % etil acetate u heks zatim 0-10 % metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat (677 mg, 2.21 mmol, 91 % prinos).

MS ESI m/z 301.1 (M+H)<+>

[0449] 158B: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat: U rastvor metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoata (677 mg, 2.21 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (114 mg, 2.71 mmol) u 1.5 mL vode. Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 3 d. Dodatnih 5 mg litijum hidroksid monohidrata u 0.5 ml vode je dodato i reakcija je mešana na 60 °C tokom 6 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoat (599 mg, 1.99 mmol, 88 % prinos) kao bež čvrsta supstanca. Materijal je korišćen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

[0450] 158: Smeša litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoata (22 mg, 0.077 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (51 mg, 0.115 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (21.3 mg, 0.096 mmol) i diizopropiletil amina (0.081 mL, 0.461 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL) je mešana na 44 °C preko noći. Sirova smeša je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 15% B, 15-55% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju (S)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid (8.1 mg, 0.018 mmol, 23 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J=7.3 Hz, 1H), 8.47 (br t, J=5.2 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.74 (d, J=11.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.40 (s, 4H), 7.28 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.43 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 3.33 (br s, 1H), 2.31 - 2.26 (m, 3H), 1.92 - 1.83 (m, 2H).

MS ESI m/z 454.0 (M+H)<+>

Primer 159: (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid

[0451]

[0452] 159A: etil 5-bromo-2-metilbenzoat: rastvor 5-bromo-2-metilbenzoeve kiseline (1.50 g, 6.98 mmol) u etanolu (20 mL) i sumpornoj kiselini (0.558 mL, 10.5 mmol) je zagrejan uz refluks i mešan preko noći. Etanol je uklonjen pod sniženim pritiskom i preostala smeša je neutralizovana pažljivim dodavanjem 10% vodenog natrijum bikarbonaat. Sirov ostatak je ekstrahovan dvaput sa100 mL etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su oprani sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da se dobije etil 5-bromo-2-metilbenzoat (1.45 g, 5.67 mmol, 81 % prinos) kao ulje.

[0453] 159B: metil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat: mešana smeša kalijum acetata (346 mg, 3.52 mmol), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (250 mg, 1.17 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (48 mg, 0.059 mmol) i bis(pinakolato)diborona (447 mg, 1.76 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 45 min. U dobijenu smešu je dodat etil 5-bromo-2-metilbenzoat (310 mg, 1.275 mmol) i 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum (II) dihlorid (42 mg, 0.064 mmol). U degaziranu reakciju, azot je barbotiran kroz smeša tokom 5 min. 2 M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (1.9 mL, 3.83 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 30 min. Sirova reakciona smeša je koncentrovana na celitu i prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (24 g silika, gradijent eluiranja 0-100 % etil acetate u heks zatim 0-10 % metanol u dihlorometanu). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju etil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat (261 mg, 0.872 mmol, 68 % prinos) kao bež čvrstu supstancu.

MS ESI m/z 297.3 (M+H)<+>

[0454] 159C: litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat: u rastvor etil 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoata (261 mg, 0.872 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (48.5 mg, 1.16 mmol) u 1.5 mL vode. Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije sirov litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoat (245 mg, 0.822 mmol, 89 % prinos) kao svetolo braon čvrsta supstanca. Materijal je korišćen takav kakav jeste bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 269.1 (M+H)<+>

[0455] 159: Smeša sirovog litijum 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-metilbenzoata (20 mg, 0.075 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (49.5 mg, 0.112 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (21 mg, 0.093 mmol) i diizopropiletil amina (0.078 mL, 0.48 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL) je mešana na 44 °C tokom 3 d. Sirova smeša je prečišćena preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 10% B, 10-50% B tokom 20 min, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju (R)-5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-metilbenzamid (17.4 mg, 0.038 mmol, 51 % prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.39 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 7.78 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 7H), 4.68 (t, J=6.6 Hz, 1H), 3.33 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.87 (q, J=6.8 Hz, 2H).

MS ESI m/z 436.1 (M+H)<+>

Primer 160: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-fluoropropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0456]

[0457] Pod atmosferom azota, smeša od 0 °C (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (25 mg, 0.055 mmol) u DCM (1 mL) je tretirana rastvorom deokso-fluora (0.015 mL, 0.083 mmol) u DCM (1 mL) pomoću špric pumpe tokom 30 min. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h a zatim ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Smeša je gašena dodavanjem nekoliko kapi metanola. Dobijena sirova smeša je koncentrovana u vakuumu, zatim ponovo rastvorena u metanolu. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 23% B, 23-63% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima.

Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-fluoropropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (5.2 mg, 0.011 mmol, 21 % prinos).

1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (t, J=5.5 Hz, 1H), 8.56 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.54 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 3H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 7.18 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.98 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 5.71 - 5.53 (m, 1H), 3.46 - 3.20 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.19 - 1.92 (m, 2H).

MS ESI m/z 456.0 (M+H)<+>.

Primer 161: Racemat 3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamido)-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propil dihidrogen fosfata

[0458]

[0459] U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (47 mg, 0.099 mmol) i di-terc-butil diizopropilfosforamidita (0.066 ml, 0.208 mmol) u DMF (1 ml) at 0 C je dodat 1H-tetrazol (14.60 mg, 0.208 mmol) i reakciona smeša je mešana od 0 C do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (30 ml) i vode (25 ml). Organaski sloj je opran sa 10%LiCl rastvorom (2 x 20 ml) i koncentrovanim rastvorom soli (20 ml). Nakon sušenja preko anhidrovanog natrijum sulfata, organaski sloj je koncentrovan a ostatak hromatografisan na silika gel ketridžu od 4 gm, eluiranjem sa gradijentom 0-9%MeOH/CH2Cl2. Proizvod koji sadrži frakcije koncentrovan da se dobije 55 mg smeše 3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamido)-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propil di-terc-butil fosfata i di-terc-butil (7-(3-((3-((di-terc-butoksifosforil)oksi)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)karbamoil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)fosforamidat kao bela čvrsta supstanca. Smeša je rastvorena u 1 ml TFA i je ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu a ostatak je rastvoren u DMF i prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 0% B, 0-46% B tokom 23 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio 3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamido)-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propil dihydrogen fosfat, racemat (12.7 mg, 0.023 mmol, 35 % prinos).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.27 - 8.88 (m, 1H), 8.60 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.46 (m, 3H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 7.03 (dt, J=7.0, 1.6 Hz, 1H), 6.07 (br s, 2H), 5.63 - 5.27 (m, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.30 (s, 3H) fosfat protons missing.

MS ESI m/z 554.3 (M+H)<+>

Intermedijer 1: (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol

[0460]

[0461] Intermedijer 1A: etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanoat: smeša Zn (95.9 g, 1.47 mol) u THF (840 mL) je tretirana u kapima sa rastvorom 4-fluorobenzaldehida (140 g, 1.13 mol) u THF (100 mL). Nakon dodavanja, dobijena smeša je zagrejana na 65 °C uz mešanje, i zatim je dodat etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (275 g, 1.35 mol) u kapima u zagrejanu smešu. Dobijena smeša je mešana na 65 °C tokom 1 h Smeša je ohlađena a zatim gašena dodavanjem zasićenog vodenog NaHSO4(1 L). Ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (300 mL x 2), organaski sloj je opran sa koncentrovanim rastvorom soli (300 mL), osušen sa amorfnim Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da da ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, gradijent eluiranja petrol etar/etil acetat = 50/1 to 3/1) da da etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanoat (195 g, 786 mmol, 70% prinos) kao bezbojno ulje.

[0462]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.46 (m, 2H), 7.07 - 7.12 (m, 2H), 5.17 (dd, J = 15.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.74 (s, 1H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz 3H).

[0463] Intermedijer 1B: (S)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: U rastvor etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanoata (180 g, 725 mmol) u MeOH (1.2 L) je dodat NH3/MeOH rastvor (7 M, 414 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 1 h. TLC na siliki (petrol etar : etil acetat = 5:1, Rf-sm = 0.46, Rf-proizvod = 0.00) je pokazala da je početni materijal potrošen u potpunosti. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, a ostatak (100 g) je odvojen hiralom SFC (kolona: DaLedl Chiralpak AS (250mm x 50mm, 10 um čestice); mobilna faza A: CO2; mobilna faza B: 0.1% amonijum hidroksid u MeOH; izokratsko eluiranje 15 B%, vreme izvođenja: 11 min). (S)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (32 g, 146 mmol, 20% prinos) je bio prvi izomer koji je eluiran iz SFC hromatografije i dobijen je kao svetlo žuta čvrsta supstanca nakon koncentracije u vakuumu. Apsolutna stereohemija ovog materijala određena je eksperimentima sa rendgenskom kristalografijom.

[0464]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.42 - 7.48 (m, 2H), 7.17 -7.24 (m, 2H), 6.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.06 - 5.14 (m, 1H).

[0465] Intermedijer 1: U rastvor (S)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (45 g, 205 mmol) u THF (280 mL) je u kapima dodat 10M BH3-Me2S u THF (71.9 mL, 719 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim zagrejana na 65 °C i mešana tokom 1 h. TLC na siliki (petrol etar : etil acetat = 0:1, Rf-sm = 0.71, Rf-proizvoda = 0.00) je pokazala da je početni materijal potrošen u potpunosti. Dobijena smeša je gašena dodavanjem MeOH (100 mL) na 0 °C. Rezultat je mešan tokom 0.5 h i zatim koncentrovan u vakuumu. U dobijenu belu čvrstu supstancu je dodat 1 L 1N vodenog HCl. Dobijena suspenzija je zatim mešana na 65 - 70 °C tokom 30 min tokom kojeg vremena je nastao bezbojan rastvor. Vodeni kiseli rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu i zatim ispran u levku za odvajanje sa EtOAc (200 mL, 100 mL) a slojevi su odvojeni. U levku za odvajanje, vodeni kiseli sloj je načinjen baznim sa 1N vodenim rastvorom NaOH dok nije postignt pH=8. Vodena faza je zatim ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovana organska faza je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli (100 mL), osušena sa amorfnim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (33 g, 158 mmol, 77% prinos, 98% čistoća) kao belu čvrstu supstancu.

[0466]<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.45 - 7.48 (m, 2H), 7.05 - 7.11 (m, 2H), 4.91 (dd, J = 15.2 Hz, 7.6 Hz, 1H), 3.04 - 3.10 (m, 1H), 2.91 - 3.01 (m, 1H).

Intermedijer 2: (R)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol

[0467]

[0468] Intermedijer 2A: (R)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamie: Naslovno jedinjenje dobijeno kao drugi izomer koji je eluiran iz separacije preparativnom hiralnom SFC koja je opisana za pripremanje intermedijera 1B. (R)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (44 g, 201 mmol, 28% prinos) je tako dobijen kao bela čvrsta supstanca.

[0469] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.42 - 7.48 (m, 2H), 7.17 -7.24 (m, 2H), 6.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.06 - 5.14 (m, 1H).

[0470] Intermedijer 2: U rastvor (R)-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (32 g, 146 mmol) u THF (210 mL) je dodat u kapima 10M BH3-Me2S u THF (51.1 mL, 511 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim zagrejan na 65 °C i mešan tokom 1 h. TLC na siliki (petrol etar : etil acetat = 0:1, Rf-sm = 0.71, Rf-proizvod= 0.00) je pokazala da je početni materijal potrošen u potpunosti. Dobijena smeša je gašena dodavanjem MeOH (100 mL) na 0 °C. Rezultat je mešan tokom 0.5 h a zatim koncentrovan u vakuumu. U dobijenu belu čvrstu supstancu je dodat 1 L 1N vodenog HCl. Dobijena suspenzija je zatim mešana na 65 - 70 °C tokom 30 min za koje vreme je nastao bezbojni rastvor. Vodeni kiseli rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu i zatim opran u levku za odvajanje sa EtOAc (200 mL, 100 mL) i slojevi su odvojeni. U levku za odvajanje, vodeni kiseli sloj je načinjen baznim sa 1N vodenim rastvorom NaOH dok nije postignuta pH=8. Vodena faza je zatim ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovana organska faza je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli (100 mL), osušena sa amorfnim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da da (R)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (22 g, 106 mmol, 72% prinos, 99% čistoća) kao belu čvrstu supstancu.

[0471]<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.45 - 7.49 (m, 2H), 7.06 - 7.11 (m, 2H), 4.91 (dd, J = 15.2 Hz, 7.6 Hz, 1H), 2.99 - 3.10 (m, 1H), 2.90 - 2.97 (m, 1H).

Intermedijer 3: 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina

[0473] U rastvor 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (5.94 mL, 34.9 mmol) u THF (50 mL) na -10 °C je dodat n-butillitijum (21.82 mL, 34.9 mmol) u kapima i smeša je mešana na istoj temperaturi tokom 1.5 h. Temperatura je smanjena na -78 °C i 1-bromo-2-fluoro-4-metilbenzen (3.69 mL, 29.1 mmol) je dodat u kapima i smeša je mešana tokom 30 min. Osušeni samleveni ugljen dioksid (2.56 g, 58.2 mmol) je zatim dodat odjednom i smeša je mešana tokom 20 min. LCMS je pokazao dobru konverziju početnog materijala u pik sa željenom masom. Reakciona smeša je gašena sa 1.5N HCl (50 mL) na -78 °C da se postigne pH ~ 1 i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Organski sloj je izdvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 30 mL). Kombinovani organaski sloj je opran vodom (50 mL), koncentrovanim rastvorom soli (50 mL), osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan. Sirov ostatak je rastvoren u MeOH (25 mL), zagrejan na ~40 °C i voda 75 (mL) je dodavana polako tokom kojeg vremena se istaloži čvrsta supstanca. Smeša je mešana tokom 20 min i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, oprana vodom (30 mL) i osušena da da 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoevu kiselinu (6.1 g, 25.8 mmol, 89% prinos) kao prljavo belu čvrstu supstancu.

[0474]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.80 (br s, 1H), 7.57 (dd, J=8.0, 7.2 Hz, 1H), 7.11 (d, J=8.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H).

Intermedijer 4: terc-butil (7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)(tercbutoksikarbonil)karbamat

[0475]

[0476] U posudu sa jednim grlom i okruglim dnom od 2L je dodat 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (46 g, 216 mmol) i DCM (700 mL) na sobnoj temperaturi da da belu kašu. U posudu je dodat TEA (105 mL, 756 mmol) i DMAP (2.64 g, 21.59 mmol). Smeša je mešana tokom 10 min, zatim je polako dodat Boc-anhidrid (150 mL, 648 mmol) tokom 30 min. Tokom dodavanja primećena je brza egzoterma reakcija. Bela kaša je zagrevana do refluksa na 40 °C i održavana preko noći. Braon rastvor je koncentrovan do suva pod vakuumom. Žuta polučvrsta materija je prečišćen hromatografijom na silika gelu koristeći kolonu Redisep Silika od 750g i petrol etar/EtOAc kao rastvarač da bi se dobio terc-butil (7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)(terc-butoksikarbonil)karbamat (76.8 g, 180 mmol, 83% prinos).

[0477] 1H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) Shift 8.42 (dd, J=7.3, 0.7 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=2.0, 0.7 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=7.3, 2.0 Hz, 1H), 1.49 (s, 18H). MS ESI m/z 413.0 (M+H)<+>

Intermedijer 5: terc-butil (7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)(tercbutoksicarbonil)karbamat

[0478]

[0479] U posudu sa okruglim dnom sa 3 grla od 3L opremljen magnetnim štapićem za mešanje dodat terc-butil (7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)(tercbutoksikarbonil)karbamat (100 g, 242 mmol) i 1,4-dioksan (968 mL). Kalijum acetat (71.2 g, 726 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (67.6 g, 266 mmol), X-Phos (4.61 g, 9.68 mmol) i X-Phos-Pd-G2 (3.80 g, 4.84 mmol) su dodati pod N2. Reakciona smeša je produvana azotom i zagrejana do 95 °C pod N2. napredak reakcije praćen pomoću HPLC i LC/MS. Nakon šo je LC/MS ukazala na potpuno potrošnju početnog materijala, reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i filtrirana kroz celit. Pogača je oprana sa DCM i filtrat je sakupljen i uparen u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa heksani/etil acetat da da tercbutil (tercbutoksikarbonil)(7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat (87.1 g, 188 mmol, 78 % prinos).

[0480]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.53 (dd, J=6.7, 1.0 Hz, 1H), 8.17 (t, J=1.1 Hz, 1H), 7.38 (dd, J=6.8, 1.2 Hz, 1H), 1.57 (s, 4H), 1.47 (s, 18H), 1.40 (s, 12H).

Primer 162: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0481]

[0482] 162A: metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat: U bocu sa okruglim dnom od 250 mL opremljenoj sa magnetnim štapićem za mešanje su kombinovani 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (10.4 g, 40.8 mmol) i kalijum karbonat (14.1 g, 102 mmol) u anhidrovanom DMF (136 mL). U mešanu suspenziju je dodat jodometan (3.83 mL, 61.3 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (400 mL) i čvrste supstance su odfiltrirane i isprane sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan u vakuumu do ostatka zatim razblažen sa EtOAc (175 mL), i organska materija je oprana vodom (3 x 50 mL) i zatim sa koncentrovanim rastvorom soli (50 mL). Organska materija je osušena preko anhidrovanog MgSO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je smešten pod visoki vakuum tokom 1 h da obezbedi metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat (11.0 g, 40.8 mmol, kvantitativno) kao žuto ulje. Nije izvedeno dalje prečišćavanje.

[0483]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.57 (dd, J=8.6, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).

[0484] 162B: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat: U posudi sa okruglim dnom od 500 mL sa magnetnim štapićem za mešanje i pod slojem azotnog gasa je kombinovan metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat (10.9 g, 40.8 mmol) sa 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolanom) (10.9 g, 42.8 mmol), kalijum acetatom (6.01 g, 61.2 mmol) i 1,1'-bis(difenillfosfino)ferocen paladijum dihlorid - CH2Cl2aduktom (1.67 g, 2.04 mmol). Smeša je suspendovana u 1,4-dioksanu (136 mL). Posuda je zatim opremljena sa kondenzatzorom sa refluksom, i dok se brzo mešala, suspenzija je iterativno evakuisana i zatim pročišćena azotom pet puta da se degazira. Smeša je zatim zagrejana do 85 °C tokom 3 h. Nakon što je smeša ohlađena na sobu temperaturu, 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (8.69 g, 40.8 mmol), trikalijum fosfat (2 M u vodi) (61.2 mL, 122 mmol) i 1,1'-bis(difenillfosfino)ferocen paladijum dihlorid - CH2Cl2adukt (1.67 g, 2.04 mmol) su dodati i dobijena smeša je mešana na 75 °C tokom 14.5 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da se ukloni organski rastvarač, i u ostatak je dodat EtOAc (600 mL) i rezultat je filtriran da da bifazni filtrat (obeležen sa filtrat 1) zajedno sa izolovanim čvrstim supstancama. Čvrste supstance su triturisane nekoliko puta sa EtOAc (600 mL, zatim 2 x 100 mL) i zatim DCM (2 x 100 mL) dok zaostale čvrste supstance više nisu sadržale željeni proizvod kao što je dokazano pomoću LCMS. Zaostala čvrste supstanca je odbačena. Organske triturisane supstance su kombinovane i ostavljene sa strane. Faze filtrata 1 su odvojene, a odvojena organska faza je kombinovana sa organskim triturisanim supstancama. Vodena faza filtrata 1 je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Ovi EtOAc ekstrakti su kombinovani sa drugim organskim gfazama. Kombinovane organske supstance su razblažene do ukupne zapremino od 1500 mL sa EtOAc a zatim oprane koncentrovanim rastvorom soli (250 mL, zatim 2 x 100 mL), osušene preko anhidrovanog MgSO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu. Sirov ostatak je suspendovan kao čvrsta supstanca sa zagrevanjem u DCM (150 mL), i u mešanu suspenziju su dodati heksani (100 mL). 100 mL organskog sloja je uklonjeno iz suspenzije pažljivo pomoću rotacionog uparavanja i rezultat je ohlađen u ledenom kupatilu i filtriran da da braon prah koji je ispran sa dietil etrom i ostavljen da se osuši na vazduhu da se dobije klica 1 metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoata (5.86 g, 18.3 mmol, 45% prinos). Filtrat iz izolacije klice 1 je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (silika ketridž od 330 g, gradijent eluiranja 0-100% heksani:EtOAc zatim eluiranje sa 30:1 DCM:MeOH) da obezbede klicu 2 metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoata (1.14 g, 3.50 mmol, 9% prinos) kao prljavo beli prah.

[0485] Klice 1 i 2 su kombinovane i prenete u sledeći korak takve kakve jesu.

MS ESI m/z 320.8 (M+H)<+>

[0486] 162C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina: Rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoata (7.00 g, 21.8 mmol) i 1M vodenog rastvora natrijum hidroksida (32.7 mL, 32.7 mmol) u MeOH (100 mL) je zagrejana na 85 °C tokom 3.5 h. Tamno braon reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, zatim je dodato 100 mL vode. Dobijena suspenzija je filtrirana da bi se uklonila mala količina braon praškaste čvrste supstance koja je odbačena. Braon bistri filtrat je brzo mešan i zakišeljen laganim dodavanjem koncentrovane 12M HCl (približno 2.7 mL) sve dok pH merenjem nije izmereno oko 2 do 3. Tokom dodavanja kiseline nastao je obilan talog. Smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i čvrsta supstanca je sakupljena usisnom filtracijom (Bihnerov levak i filter papir), isprana hladnom dejonizovanom vodom, i ostavljena da se suši na vazduhu preko noći, a zatim stavljena pod visok vakuum nekoliko sati da bi se dobila 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (6.39 g, 20.8 mmol, 95% prinos) kao braon prah.

[0487]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.76 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.54 (d, J=10.5 Hz, 2H), 7.05 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H).

[0488] 162D: etil 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat: U posudu sa okruglim dno i 2 grla od 100 mL opremljen sa magnetnim štapićem za mešanje i kondenzatorom sa refluksom, mešana suspenzija praškastog cinka (0.785 g, 12.0 mmol) u THF (20.0 mL) je zagrejana u uljanom kupatilu na 70 °C. U vruću mešanu suspenziju cinka je dodat etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (1.54 mL, 12.0 mmol) tokom 2 min. Primećeno je blago penjenje. Nakon 1 min, 4-hloro-2-fluorobenzaldehid (1.59 g, 10 mmol) je dodat odjednom i smeša je zagrejana na 70 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je ostavljena da dođe do sobne temperature i reakcija je gašena dodavanjem 10% vodenog NaHCO3što je izazvalo pojavu oblinog taloga. Smeša je neutralizovan polakim dodavanjem koncentrovane HCl uz mešanje. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da se uklone neki organski slojevi, zatim je ostatak prenet u smešu EtOAc (100 mL) i vode (50 mL), smeša je promućkana, i faze su izdvojene. Organska materija je oprana iterativno vodom dok pH ispiranja nije bila približno = 5. Organska materija je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli (25 mL), osušena preko anhidrovanog MgSO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu do ostatka. Sirov ostatak je napunjen u minimalnoj količini DCM na silika ketridž od 120 g koji je prethodno uravnotežen sa heksanima. Gradijent eluiranja 100% heksana do 40% EtOAc u heksanima preko 10 zapremina kolone. Napomena: Ovaj materijal je imao veoma slabu UV apsorbanciju i frakcije koje potrebno proveriti pomoću TLC vizualizovane Hanesijanovom bojom i zagrevanjem. Frakcije sličnog proizvoda su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio etil 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat (2.22 g, 7.85 mmol, 79% prinos) kao žuto ulje.

[0489]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.54 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1H), 7.14 (dd, J=9.9, 2.0 Hz, 1H), 5.56 - 5.48 (m, 1H), 4.40 - 4.34 (m, 2H), 3.12 - 3.00 (m, 1H), 1.36 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0490] 162E: 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid: U scintilacionu bočicu od 20 mL koja sadrži etil 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat (2.22 g, 7.85 mmol) je dodat metanol (10 mL), zatim je dodat amonijačni rastvor, 7N u metanolu (4.49 mL, 31.4 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu i sirov 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (1.99 g, 7.85 mmol, 100% prinos) tako dobijen je direktno prenet u sledeći korak takav kakav jeste. MS ESI m/z 252.05 (M-H)-[0491] 162F: 3-amino-1-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid: Pod atmosferom azota, u bocu sa okruglim dnom od 100 mL opremljena štapićem za mešanje i kondenzatorom sa refluksom je dodat sirov 3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (1.99 g, 7.85 mmol) i THF (26.2 mL). Rastvor boran dimetil sulfidnog kompleksa, 2M u THF (15.7 mL, 31.4 mmol) je dodat uz mešanje, izazivajući snažno penušanje. Dobijena smeša je mešana na 72 °C tokom 24 h. Smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i zatim je tretirana u kapima kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom sa metanolom sa metanolom veoma sporo da izazove trenutnu efervescenciju i značajnu egzotermu. MeOH je dodat sve dok ne prestane sve penušanje, zatim je dodato još 4 mL MeOH i mešavina je mešana dodatnih 30 min i zatim je stajala na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je rastvoren u 1M vodenom rastvoru HCl (75 mL). Dobijena blago flokulantna smeša je zagrevana na 65 °C tokom 1 sata uz mešanje. Bistri bezbojni rastvor je filtriran da bi se uklonile sve čestice. Smeša je koncentrovana u vakuumu do skoro belog čvrstog penastog ostatka i ostatak je stavljen pod visok vakuum nekoliko dana da bi se obezbedio 3-amino-1-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid (1.81 g, 6.61 mmol, 84% prinos) kao HCL so bele penaste čvrste supstance..

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (br s, 2H), 7.60 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=9.8, 1.5 Hz, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 1H), 6.88 (br s, 1H), 5.29 (br d, J=18.5 Hz, 1H), 3.64 - 3.41 (m, 2H).

MS ESI m/z 239.75 (M+H)<+>

[0492] 162: U bočicu od 1 drama sa PTFE zatvaračem su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (60.0 mg, 0.196 mmol) sa 3-amino-1-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-olom, HCl (81.0 mg, 0.293 mmol) i BOP (95.0 mg, 0.215 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.171 mL, 0.978 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirova smeša je filtrirana i prečišćena preparativnom HPLC sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 mm x 200 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 min na 20% B, 20-60% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 0 min na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže racemski proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem do ostatka. Ostatak je dalje prečišćen da se izdvoje pojedinačni enantiomeri korišćenjem SFC-hiralne hromatografije sa sledećim uslovima: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Hiralna IC, 21 × 250 mm, 5µm čestice; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 0.5 mL 80.7 mg ostatka rastvorenog u 6 mL DMSO. Stoga, dobijen je enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (23.2 mg, 0.0431 mmol, 22% prinos) kao prvi eluirani izomer iz opisanog prečišćavanja preparativnom SFC.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.22 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.61 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.34 (m, 2H), 7.06 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 6.67 (br d, J=5.5 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.29 - 5.16 (m, 1H), 4.10 - 3.80 (m, 2H).

MS ESI m/z 528.0 (M+H)<+>

Primer 163: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0493]

[0494] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (20.5 mg, 0.0380 mmol, 19% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 162.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.22 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.42 (d, J=10.3 Hz, 1H), 7.36 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.06 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.22 (br d, J=18.6 Hz, 1H), 4.06 - 3.85 (m, 2H). Jedan proton nedostaje, verovatno zbog pika vode. MS ESI m/z 528.3 (M+H)<+>

Tabela 13: Jedinjenja iz tabele 13 su pripremljana na sličan način kao u primerima 162 i 163. Različiti supstituisani benzaldehidi su korišćeni umesto 4-hloro-2-fluorobenzaldehida u četvrtom koraku.

Primer 194: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid

[0495]

[0496] 194A: etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat-4,4,4-d3: U reakcionu bočicu od 40 mL je dodat štapić za mešanje, 1-(4-fluorofenil)etan-1-on-2,2,2-d3 (0.6 g, 4.25 mmol), gvožđe (0.712 g, 12.75 mmol), jod (0.216 g, 0.850 mmol), THF (8.50 mL) zatim je dodat etil 2-bromo-2-fluoroacetat (2.36 g, 12.75 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem N2 kroz rastvor tokom 5 min i zatim mešana na 60 °C tokom 12 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i Celit je dodat. Sirova smeša je koncentrovana u vakuumu, i suvo naneta na silika gel kolonu. Sirova materija je prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (EtOAc u heksanu, 0% do 20%; 20 g ISCO kolona), dajući etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoate-4,4,4-d3 (480 mg, 1.941 mmol, 46% prinos) kao smešu 1:1 dijastereomera.

[0497] 1H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 (ddd, J=7.8, 6.1, 1.6 Hz, 2H), 6.97 (q, J=8.6 Hz, 2H), 5.03 - 4.65 (m, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 2H), 1.04 (dt, J=17.1, 7.1 Hz, 3H).

[0498] 194B: 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid-d3: U reakcionu bočicu od 40 mL je dodat štapić za mešanje, etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat-4,4,4-d3 (480 mg, 1.941 mmol) i MeOH (3883 µL), zatim je dodat amonijak u MeOH (1664 µL, 11.65 mmol). Dobijena smeša je mešana na 40 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 219.4 (M+H)<+>(dva dijastereomera su uočena u LC-MS)

[0499] 194C: 4-amino-3 -fluoro-2-(4 -fluorofenil)butan-1,1,1 -d3 -2-ol: U reakcionu bočicu od 40 mL je dodat štapić za mešanje, 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (423 mg, 1.94 mmol) i THF (9700 µL), zatim je dodat BH3.DMS (2910 µL, 5.82 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 3 h. Reakcija je gašena metanolom i koncentrovana u vakuumu da se dobije sirov 4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-1,1,1-d3-2-ol (245 mg, 1.200 mmol, 62% prinos). Sirova materija je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0500] 194D: 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid: U reakcionu bočicu od 40 mL je dodat štapić za mešanje, 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluorobenzoeva kiselina (0.151 g, 0.560 mmol), 4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-1,1,1-d3-2-ol (0.082 g, 0.4 mmol) i ((1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)oksi)tris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat(V) (0.248 g, 0.560 mmol), zatim je dodat DCM (4.00 mL) i DIPEA (0.279 mL, 1.600 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Sirova materija je prečišćena pomoću fleš hromatografije na koloni (EtOAc u heksanu, 0-50%; 12 g ISCO kolona), dajući 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid (0.11 g, 0.242 mmol, 60% prinos). Sirova materija je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 455.1 (M+H)<+>

[0501] 194E: Bis-Boc 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid: U posudu sa okruglim dnom od 100 mL je dodat štapić za mešanje, 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid (0.11 g, 0.242 mmol), Bis-Boc 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (0.133 g, 0.290 mmol) i [1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (0.020 g, 0.024 mmol). Posuda je sklonjena i ponovo napunjena sa azotom, zatim je dodat 1,4-dioksan (1.208 mL) i trikalijum fosfat (0.362 mL, 0.725 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 16 h. Sirova materija je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni suvim nanošenjem na celit (EtOAc u heksanu, 0% do 100%; 80 g ISCO kolona), dajući Bis-Boc 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metild3)benzamid (168 mg, 0.237 mmol, 98% prinos) kao dijastereomernu smešu.

MS ESI m/z 709.4 (M+H)<+>

[0502] 194F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid: U reakcionu bočicu od 40 mL je dodat štapić za mešanje, Bis-Boc 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid (168 mg, 0.237 mmol) i etanol (2371 µL), zatim je dodata HCl (593 µL, 2.371 mmol). Dobijena smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h. LC-MS je ukazala na završetak reakcije (željeni proizvod MW+1 = 509.15). Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, razblažena sa 1.5 mL DMF, i filtrirana. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS korišćenjemn XBridge C18 kolona eluiranjem sa acetonitril: voda sa amonijum acetatom. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. materijal je dalje prečišćen sa SCP korišćenjem SFC-hiralne hromatografije.

[0503] Prvi izomer eluiranja: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid (7.3 mg, 0.014 mmol, 6% prinos).

[0504] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.86 (br t, J=7.8 Hz, 1H), 7.65 - 7.47 (m, 4H), 7.23 - 6.88 (m, 4H), 6.12 (s, 2H), 4.76 - 4.45 (m, 1H), 3.85 - 3.63 (m, 1H), 3.08 - 2.89 (m, 1H).

MS ESI m/z 509.2 (M+H)<+>

Primer 195: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid

[0505]

[0506] Drugi izomer eluiranja iz primera 194F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid (5.8 mg, 0.011 mmol, 5% prinos).

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.85 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.65 - 7.50 (m, 4H), 7.23 - 6.87 (m, 4H), 6.12 (s, 2H), 4.80 - 4.55 (m, 1H), dva protona maskirana rastvaračem.

MS ESI m/z 509.2 (M+H)<+>

Primer 196: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid

[0507]

[0508] Treći izomer eluziranja iz primera 194F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid (9.5 mg, 0.019 mmol, 8% prinos).

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.85 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.65 - 7.51 (m, 4H), 7.24 - 6.87 (m, 4H), 6.12 (s, 2H), 4.80 - 4.53 (m, 1H), dva protona maskirana rastvaračem.

MS ESI m/z 509.2 (M+H)<+>

Primer 197: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-(difluorometil)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamid

[0509]

[0510] Četvrti izomer eluiranja iz primera 194F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)-6-(metil-d3)benzamid (8.8 mg, 0.017 mmol, 7% prinos).

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.86 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.49 (m, 4H), 7.23 - 6.89 (m, 4H), 6.12 (s, 2H), 4.74 - 4.50 (m, 1H), 3.82 - 3.62 (m, 1H), 3.09 - 2.90 (m, 1H).

MS ESI m/z 509.2 (M+H)<+>

Primer 198: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0511]

[0512] 198A: metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat: u posudi sa okruglim dnom od 250 mL, smeša 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (4.95 g, 21.3 mmol) i kalijum karbonata (5.88 g, 42.5 mmol) u DMF (42.5 mL) je tretirana jodometanom (2.37 ml, 25.5 mmol). Smeša je mešana preko noći, zatim razblažena sa etil acetatom (200 mL) i filtrirana da se uklone čvrste supstance. Filtrat je opran vodom tri puta, zatim sa koncentrovanim rastvorom soli, i zatim osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat (4.99 g, 20.2 mmol, 95% prinos) kao bistro ulje.

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.51 (t, J=7.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.00 -3.94 (m, 3H), 2.38 (s, 3H).

[0513] 198B: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat: U posudi sa okruglim dnom od 250 mL su kombinovani 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (4.78 g, 18.4 mmol), metil 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoat (4.99 g, 20.2 mmol), 2M vodeni rastvor tribaznog kalijum fosfata (27.6 mL, 55.1 mmol), i Pd(dppf)Cl2, DCM adukt (0.750 g, 0.919 mmol) u 1,4-dioksanu (117 mL) da daju braon suspenziju. Reakciona smeša je degazirana sklanjanjem i ponovnim punjenjem azotom 3 puta. Posuda je opremljena kondenzatorom sa refluksom i zagrejana na 80 °C pod atmosferom azota preko noći. Smeša je ostavljena da se ohladi doi sobne temperature i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov ostatak je razblažen u etil acetatu i filtriran kroz sloj celita. Celit je ispran sa etil acetatom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu i prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent 50-100% etil acetat u heksanima zatim gradijent 0-20 % metanol u dihlorometanu). Frakcije proizvoda su sakupljene i koncentrovane da daju metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoat (2.50 g, 8.33 mmol, 45% prinos) kao narandžastu čvrstu supstancu.

MS ESI m/z 300.95 [M+H]+

[0514] 198C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: Smeša metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (0.66 g, 2.2 mmol) i 1M vodenog LiOH (0.223 g, 9.32 mmol) u MeOH (10 mL) i THF (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim zagrejana na 60 stepeni C tokom 7 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se uklone sav organski rastvarač, zatim je u vodeni ostatak dodat vodena 1M HCl (9.32 mL, 9.32 mmol) uz mešanje što je izazvalo taloženje čvrste supstance. Dobijena suspendovana smeša je koncentrovana u vakuumu direktno do čvrstog ostatka i osušena pod visokim vakuumom preko noći da bi se dobila sirova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (0.888 g, 2.20 mmol, pretpostavljena kvantitativna konverzija, približno 57% željenog materijala po masi). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku takav kakav jeste.

MS ESI m/z 286.85 [M+H]+

[0515] 198D: 3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid: U posudu sa okruglim dnom sa dva grla od 100 mL opremljen sa kondenzatorom sa reflukosom i pod atmosferom azota, mešana suspenzija cink praha, -140+325 mesh (0.981 g, 15.0 mmol) u THF (20.0 mL) je zagrejana u uljanom kupatilu na 70 °C. Etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (1.54 mL, 12.0 mmol) je dodat tokom 2 min na 70 °C. U roku od nekoliko trenutaka, sadržaj balona se egzotermisao tako da je kondenzator sa refluksom bio skoro preplavljen parom. Posle 2 min, 3,4-difluorobenzaldehid (1.10 mL, 10.0 mmol) je dodat odjednom i smeša je zagrejana na 70 °C tokom 16 h da se obezbedi blago zamućen žuti rastvor. Smeša je filtrirana da bi se uklonile čvrste materije, čvrste materije su isprane sa malom količinom EtOAc, a filtrat je koncentrovan u vakuumu do ulja. Ostatak je stavljen u EtOAc (75 mL) i organski sloj je ispran sa 1M vodenim rastvorom HCl (30 mL), a zatim sa koncentrovanim rastvorom soli (30 mL), osušen iznad anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan do ulja. Ostatak je zatim rastvoren u MeOH (50 mL) i tretiran amonijakom, 7M u MeOH (5.71 mL, 40.0 mmol) sa mešanjem preko noći. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se obezbedi sirov 3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (2.90 g, 10 mmol, prekomerna mkao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena kao takva u sledećem koraku.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (br s, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.29 - 7.17 (m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 5.14 (br dd, J=17.9, 7.3 Hz, 1H), 4.09 (br s, 1H). MS ESI m/z 236.00 [M-H]-[0516] 198E: 3-amino-1-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid: Pod atmosferom azota, u bocu sa okruglim dnom opremljena sa štapićem za mešanje i kondenzatorom sa refluksom je dodat 3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (2.89 g, 10.0 mmol), THF (50.0 mL) i rastvor boran dimetil sulfidnog kompleksa, 2.0 M u THF (20.0 mL, 40.0 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 2 h. Reakcija je gašena polaganim dodavanjem metanola u kapima kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom (OPREZ: potrebno je sporo dodavanje, otprilike 1-2 mL u minuti u početku, a zatim brže dok se reakcija drži pod kontrolom), što je izazvalo snažnu fervescenciju i zagrevanje smeše do tačke ključanja ili blizu nje. Na ovaj način je dodato ukupno 15 mL MeOH sve dok ne prestane fervescencija. Smeša je refluksovana 15 min u uljanom kupatilu od 80 °C. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da da bistro bezbojno gusto ulje.

Bezbojni gusti ostatak ulja je zatim tretiran sa 1M vodenim rastvorom HCl (20 mL) na 65 stepeni C tokom 1 h uz mešanje. U početku zamućena smeša je postala bistra do kraja sata. Smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc (75 mL), a EtOAc ekstrakt je ponovo ekstrahovan sa 1M HCl (20 mL). Kombinovane vodene faze su koncentrovane u vakuumu da bi se dobila blago beličasta čvrsta supstanca koja je stavljena pod visok vakuum tokom 2 h. Tako je dobijen 3-amino-1-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid (2.54 g, 9.80 mmol, 98% prinos) kao bež čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (br s, 2H), 7.54 - 7.37 (m, 2H), 7.29 (br s, 1H), 5.08 (br dd, J=17.1, 6.0 Hz, 1H), 3.53 - 3.32 (m, 2H).

MS ESI m/z 300.95 [M+H]+

[0517] 198: U bočicu od 1 drama sa PTFE zatvaračem su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (70.0 mg, 0.139 mmol) sa 3-amino-1-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoropropan-1-olom, HCl (85.0 mg, 0.279 mmol) i BOP (80.0 mg, 0.181 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.243 mL, 1.39 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona smeša je zatim filtrirana i prečišćena preparativnom HPLC sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 17% B, 17-57% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže racematni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem do ostatka. Ostatak je dalje prečišćen da se izdvoje pojedinačni enantiomeri korišćenjem SFC-hiralne hromatografije sa sledećim uslovima: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: Hiralna IC, 21 × 250 mm, 5µm čestice; Mobilna faza: 60% CO2/40% MeOH sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 0.5 mL 30.2 mg ostatka rastvorenog u 3 mL MeOH. Tako, dobijen je enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (8.7 mg, 0.0176 mmol, 13% prinos) kao prvi izomer eluiranja iz opisanog prečišćavanja preparativnom SFC.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.96 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.60 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 3H), 7.31 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 5.09 - 4.90 (m, 1H), 3.87 (ddd, J=19.3, 13.2, 6.0 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H).

MS ESI m/z 492.4 (M+H)<+>

Primer 199: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0518]

[0519] Naslovno jedinjenje enantiomer 23-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (8.5 mg, 0.0172 mmol, 12% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC koja je opisana za primer 198.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.96 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 3H), 7.31 (br s, 1H), 7.23 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.04 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 2H), 2.31 (s, 3H).

MS ESI m/z 492.1 (M+H)<+>

Primer 200: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(metil-d3)fenil)propil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid

[0520]

[0521] 200A: etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat: U posudu sa okruglim dnom sa 2 grla od 100 mL koji je opremljen sa magnetnim štapićem za mešanje i kondenzatorom sa refluksom, mešana suspenzija cinka u prahu (0.981 g, 15.0 mmol) u THF (20.0 mL) je zagrejana u uljanom kupatilu od 80 °C. Vruća mešana suspenzija cinka je dodata etil 2-bromo-2,2-difluoroacetatu (1.54 mL, 12.0 mmol) tokom 2 min. Nastala je značajna egzoterma reakcija koja je izazvala snažno ključanje smeše. Nakon 2 min, 4-hlorobenzaldehid (1.18 mL, 10 mmol) je dodat odjednom i smeša je zagrejana na 80 °C preko noći. Reakciona smeša je ostavljena da dođe do sobne temperature i filtrirana da bi se uklonile zaostale čvrste materije. Filtrat je koncentrovan u vakuumu do ulja, a zatim je ostatak stavljen u EtOAc (150 mL) i organska materija je oprana sa 1M vodenim rastvorom HCl (2 x 40 mL) i zatim sa koncentrovanim rastvorom soli (30 mL), osušena preko anhidrovanog MgSO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu do ostatka. Sirov ostatak je nanešen u minimalnoj količini DCM na silika ketridž od 120 g koji je prethodno uravnotežen sa heksanima. Gradijent eluiranja 100% heksani do 50% EtOAc u heksanima preko 7 zapremina kolone. Napomena: Ovaj materijal je imao veoma slabu UV apsorbanciju i frakcije koje potrebno da se provere pomoću TLC. Frakcije sličnog proizvoda su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoat (2.60 g, 7.85 mmol, 98% prinos) kao bledo žuto ulje.

[0522]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 - 7.36 (m, 4H), 5.18 (dd, J=15.2, 7.7 Hz, 1H), 4.34 (q, J=7.2 Hz, 2H), 2.86 (br s, 1H), 1.35 - 1.31 (m, 3H).

[0523] 200B: 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid: Rastvor etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanoata (2.55 g, 9.64 mmol) u metanolu (15 mL) je tretirana sa 7N rastvorom amonijaka u metanolu (13.8 mL, 96 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu do blago žutog praha, i sirov 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamida (2.08 g, 8.84 mmol, 92% prinos) tako dobijen je prenet direktno u sledeći korak takav kakav jeste.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (br s, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 4H), 6.45 (d, J=5.7 Hz, 1H), 5.15 - 5.06 (m, 1H).

MS ESI m/z 233.80, 235.70 (M+H)<+>

[0524] 200C: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid: Pod atmosferom azota, u bočicu sa okruglim dnom od 250 mL opremljena sa štapićem za mešanje i kondenzatorom sa refluksom je dodat sirov 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (2.07 g, 8.79 mmol) i THF (43.9 mL). 2M rastvor boran dimetil sulfidni kompleksa u THF (17.6 mL, 35.2 mmol) je dodat uz mešanje, izazivajući snažnu efervescenciju. Dobijena smeša je mešana na 85 °C tokom 5 h. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i zatim je tretitrana u kapima kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom sa metanooml veoma polako da izazove trenutnu efervescenciju i značajnu egzotermnu reakciju. Ukupno 15 mL MeOH je dodato na ovaj način. Smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (50 mL) i ponovo koncentrovan u vakuumu do ostatka. Ovaj metanolni azeotrope je ponovljen još jednom. Bezbojno gusto ulje tretirano sa 1M vodenom HCl (100 mL), a dobijena blago flokulantna smeša je zagrevana do 65 stepeni C tokom 1 sata uz mešanje. Dobijena bistra smeša je koncentrovana u vakuumu do bele čvrste supstance koja je stavljena pod visoki vakuum tokom 2 h da obezbedi 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol hidrohlorid (2.22 g, 8.59 mmol, 98% prinos) kao belu čvrstu supstancu soli HCl.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (br s, 2H), 7.52 - 7.40 (m, 4H), 6.85 - 6.67 (m, 1H), 5.11 - 5.00 (m, 1H), 3.55 - 3.33 (m, 2H).

MS ESI m/z 221.90 (M+H)<+>

[0525] 200D: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid: U bočicu od 1 drama sa PTFE zatvaračem su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (63.1 mg, 0.245 mmol) sa 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-olom, HCl (81.0 mg, 0.293 mmol) i BOP (95.0 mg, 0.215 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.171 mL, 0.978 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Sirova smeša je filtrirana i prečišćena preparativnom HPLC sa reverznom fazom sa sledećim uslovima: Kolona Waters XBridge C18, 30 mm x 100 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-100% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 3-min pri 100% B; Brzina protoka: 42.5 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa UV signalima. Frakcije koje sadrže racematni proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu. Na taj način, dobijen je racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (80.6 mg, 0.158 mmol, 81% prinos) kao beli prah.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.18 - 9.11 (m, 1H), 8.64 (br s, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 2H), 7.46 (br s, 4H), 7.04 (br s, 1H), 6.48 (br s, 1H), 6.12 (br s, 2H), 4.95 (br d, J=12.9 Hz, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 2H).

MS ESI m/z 509.90, 510.85, 511.85, 512.85, 513.90 (M+H)<+>

[0526] 200E: (metil-d3)borna kiselina: U posudu sa okruglim dnom od 500 mL sa štapićem za mešanje su dodati THF (100 mL) i trimetil borat (10.03 ml, 90 mmol). Dobijena smeša je ohlađena do -78 °C, zatim slow addition of metil-d3-magnesium iodide rastvor, 1.0 M in dietil ether, 99 atom % D (50.0 mL, 50 mmol). Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. Reakcija je zatim gašena dodavanjem 25 mL 1N vod. HCl i zagrejana do sobne temperature. Smeša je razblažena sa dietil etrom, isprana sa koncentrovanim rastvorom soli, i osušena preko anhidrovanog magnezijum sulfata. Sirova smeša je koncentrovana u vakuumu da obezbedi (metil-d3)bornu kiselinu (4.20 g, pretpostavljen kvantitativni prinos, materijal može biti samo 75% maksimalno po masi) kao žuto ulje. Dobijeni materijal je čuvan u frižideru i prenet direktno u sledeći korak takav kakav jeste i što je pre moguće.

[0527] 200: U Chemglass bočicu pod pritiskom od 4 mL je dodat štapić za mešanje, racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (75.0 mg, 0.147 mmol), 1,1'-Bis(di-terc-butilfosfino) ferocen paladijum hlorid (38.3 mg, 0.0590 mmol) i (metil-d3)borna kiselina (123 mg, 1.47 mmol), zatim je dodat dioksan (735 µL) i 2M vodeni rastvor trikalijum fosfata (735 µL, 1.47 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem azota kroz smešu tokom 5 min. Posuda je zatvorena, i smeša je mešana na 115 °C preko noći. Sirova smeša je zatim razblažena sa DMF i filtrirana da da 2 mL uzorka koji je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 16% B, 16-56% B tokom 25 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju racemic 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(metil-d3)fenil)propil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid (43.8 mg, 0.0921 mmol, 62.7% prinos). Izolovani racemat je dalje prečišćen da se izdvoje pojedinačni enantiomeri korišćenjem SFC-hiralne hromatografije sa sledećim uslovima: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: hiralna OJ, 30 x 250 mm, 5µm čestice; Mobilna faza: 70% CO2/30% MeOH sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 100 mL/min; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 3.0 mL 42 mg ostatka rastvorenog u 9 mL MeOH/ACN. Na taj način, dobijen je enantiomer 1 3-(2-amino

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(metil-d3)fenil)propil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamida (11.0 mg, 0.0231 mmol, 16% prinos) kao prvi eluirani iz opisanog prečišćavanja preparativnom SFC.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.34 (br d, J=8.0 Hz, 2H), 7.24 - 7.17 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.28 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.86 (dt, J=14.6, 6.3 Hz, 1H), 3.90 -3.75 (m, 2H).

MS ESI m/z 476.20 (M+H)<+>

Primer 201: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(metil-d3)fenil)propil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid

[0528]

[0529] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(metil-d3)fenil)propil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamida (10.5 mg, 0.0221 mmol, 15% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanom za primer 200.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 (br t, J=6.2 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.34 (br d, J=8.0 Hz, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.6 Hz, 1H), 6.28 (d, J=5.2 Hz, 1H), 6.10 - 6.02 (m, 2H), 4.90 - 4.81 (m, 1H), 3.89 - 3.74 (m, 2H).

MS ESI m/z 476.20 (M+H)<+>

Primer 202: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid

[0530]

[0531] 202A: metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoat: Mešana suspenzija cinka u prahu (1.11 g, 17.0 mmol) u anhidrovanom THF (2.6 mL) je tretirana sa TMS-Cl (0.174 mL, 1.37 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Smeša je zatim zagrejana na 57 °C, nakon čega smeša metil 2-bromo-2-fluoropropanoata (3.15 g, 17.0 mmol) i 4-fluorobenzaldehida (0.912 mL, 8.50 mmol) u THF (1.64 mL) je dodata u kapima pomoću šprica veoma polako da se zagreje suspenzija tokom 10 min. Ubrzo nakon početka dodavanja, došlo do veoma snažnog ključanja smeše. Sa približno 90% dodate smeše, više nije bilo vidljivog metala cinka u bočici. Dodavanje poslednjih 10% dodate smeše nije izazvalo snažno ključanje. Na kraju dodavanja, smeša je izgledala kao blago žuti homogeni rastvor sa malo ili bez vidljivo prisutnog metala cinka u posuduu. Smeša je mešana dodatnih 30 min na 57 °C. Sirova reakciona smeša je polako dodata u mešani zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (50 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 min. Sirova smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (3 x 50 mL), zatim su kombinovani EtOAc ekstrakti isprani koncentrovanim rastvorom soli (30 mL), osušeni preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u vakuumu do ostatka. Dobijeno skoro bezbojno ulje ubačeno u minimalnu količinu DCM na silika ketridž od 120 g koji je prethodno uravnotežen sa heksanima. Eluiranje 100% heksana za 1 zapreminu kolone, zatim gradijent do 30% EtOAc u heksanima preko 10 zapremina kolone, zadržavanje 30% EtOAc u heksanu za 4 zapremine kolone. Proizvod je imao vrlo malo UV hromofora, ali TLC na silika gelu koristeći 2:1 heksani:EtOAc kao eluent, vizuelizovan bojenjem TLC ploče Hanesijanovom bojom i zagrevanjem, pokazao je da je došlo do razumno dobrog razdvajanja dva glavna proizvoda. Izolat 1 je prvi eluiran, rf = 0.45 prema TLC, a izolat 2 je bio drugi koji je eluiran, rf = 0.4 prema TLC. Slične frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobila dva bezbojna ulja. Posle nekoliko sati stajanja na sobnoj temperaturi, izolat 2 se očvrsnuo u belu voštanu čvrstu supstancu.

[0532] Izolat 1 (prvi izolat koji je eluiran iz silika kolone) je racemska smeša (2S,3S)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata i (2R,3R)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata (0.697 g, 3.03 mmol, 36% prinos) izolovana kao bezbojno ulje.

Stehiometrija izolat 1 je određena rentgenskom kristalografijom proizvoda dobijenog u sledećem koraku niza.

[0533] Izolat 1<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.38 (br dd, J=7.6, 5.8 Hz, 2H), 7.10 -7.02 (m, 2H), 5.00 (dd, J=15.0, 4.7 Hz, 1H), 3.76 - 3.71 (m, 3H), 2.84 - 2.79 (m, 1H), 1.64 - 1.56 (m, 3H).

Izolat 1 MS ESI m/z 230.95 (M+H)<+>

[0534] Izolat 2 (drugi izolat koji je eluiran iz silika kolone) je racemska smeša (2S,3R)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata i (2R,3S)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata (0.793 g, 3.44 mmol, 41% prinos) izolovana kao bela voštana čvrsta supstanca. Stehiometrija izolat 2 je određena rentgenskom kristalografijom proizvoda dobijenog u sledećem koraku niza.

[0535] Izolat 2<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 (dd, J=7.9, 5.4 Hz, 2H), 7.15 - 7.02 (m, 2H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.68 (br s, 1H), 1.42 (dd, J=21.7, 1.0 Hz, 3H). Izolat 2 MS ESI m/z 230.90 (M+H)<+>

[0536] 202B: racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida: racemska smeša (2S,3S)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata i (2R,3R)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata (0.662 g, 2.88 mmol) je tretirana 7M rastvorom amonijaka u MeOH (12.3 mL, 86.3 mmol) tokom 3 d. Smeša je koncentrovana da da željeni proizvod (554 mg, 2.57 mmol, 89% prinos) kao blago prljavo beli prah. Rendgenskom kristalografijom je utvrđeno da je ovaj materijal racemska smeša (2S,3S) i (2R,3R) izomera.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.34 (dd, J=8.3, 5.9 Hz, 2H), 7.16 (br d, J=4.8 Hz, 2H), 7.11 (t, J=8.9 Hz, 2H), 5.84 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.87 - 4.79 (m, 1H), 1.49 (d, J=22.1 Hz, 3H).

MS ESI m/z 213.85 (M-H)-[0537] 202C: racemska smeša (1R,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida i (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida: Pod atmosferom azota, u posudu sa okruglim dnom sa dva grla od 100 mL je dodat štapić za mešanje, racemska smeša 1:1 (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida (510 mg, 2.37 mmol), THF (11.8 mL) i 2.0 M rastvor boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (4.74 mL, 9.48 mmol). Dobijena smeša je mešana u uljanom kupatilu podešenom na 85 °C tokom 4.5 h. Reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ... potrebno je sporo dodavanje, otprilike 1-2 mL u minuti u početku, a zatim brže dok se reakcija drži pod kontrolom), što je izazvalo snažnu fervescenciju i zagrevanje smeše do tačke ključanja ili blizu nje. Ukupno 15 mL MeOH je dodato na ovaj način dok efervescencija nije prestala. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da da bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL), i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom. Dobijeni bezbojni gusti uljni ostatak je zatim tretiran sa 1M vodenom HCl (100 mL) na 65 stepeni C tokom 1 h. Inicijalno mutna smeša je postala bistra do kraja sata. Smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da da racemsku smešu (1R,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida i (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida (559 mg, 2.35 mmol, 99% prinos) kao blago žutu lepljivu penu.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.35 (br s, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.20 (br s, 2H), 6.25 (br s, 1H), 4.85 (br s, 1H), 3.26 - 3.03 (m, 2H), 1.20 - 1.10 (m, 3H).

MS ESI m/z 201.90 (M+H)<+>

[0538] 202: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (38 mg, 0.133 mmol) sa racemskom smešom (1R,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorid i (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorid (44.8 mg, 0.166 mmol) i BOP (64.6 mg, 0.146 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.116 mL, 0.664 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je koncentrovana pod strujom azota, zatim je ostatak rastvoren u smeši 1:1 DCM:TFA (1.0 mL) i mešan tokom 1h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana pod strujom azota, zatim ponovo rastvorena u 2 mL DMF i filtrirana. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 15% B, 15-55% B tokom 25 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju racemsku smešu 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida i 3-(2-amino

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (19.3 mg, 0.0411 mmol, 29% prinos). Izolovani racemat je dalje izdvojen u pojedinačne enantiomere korišćenjem SFC-hiralne hromatografije sa sledećim uslovima: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: hiralna OJ, 30 x 250 mm, 5µm čestice; Mobilna faza: 85% CO2/15% MeOH sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 100 mL/min; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 1.0 mL 18.2 mg ostatka rastvorenog u 3 mL MeOH. Tako, dobijen je enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (4.3 mg, 0.0091 mmol. 7% prinos) kao prvi eluirani izomer iz opisanog prečišćavanja preparativom SFC.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (br t, J=5.9 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (t, J=6.5 Hz, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.91 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.76 (br dd, J=10.2, 5.0 Hz, 1H), 3.82 - 3.69 (m, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.16 (d, J=22.0 Hz, 3H).

MS ESI m/z 470.10 (M+H)<+>

Primer 203: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid

[0539]

[0540] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 -(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (4.3 mg, 0.0091 mmol, 7% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 202.

Primer 204: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid

[0542] 204A: racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida: racemska smeša (2S,3S)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata i (2R,3R)-metil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanoata (0.747 g, 3.25 mmol) je tretirana 7M rastvorom amonijaka u MeOH (13.9 mL, 97.3 mmol) tokom 3 d. Smeša je koncentrovana da da željeni proizvod (652 mg, 3.03 mmol, 93% prinos) kao blago beličast prah. Za ovaj materijal je rengenskom kristalogafijom utvrđeno da je racemska smeša (2S,3R) i (2R,3S) izomera.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.46 - 7.37 (m, 3H), 7.20 - 7.14 (m, 2H), 5.77 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.90 - 4.77 (m, 1H), 1.11 (d, J=21.9 Hz, 3H). Jedan proton nedostaje verovatno zbog vode.

MS ESI m/z 213.90 (M-H)-[0543] 204B: racemska smeša (1R,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida i (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida: Pod atmosferom azota, u posudu sa okruglim dnom sa dva grla od 100 mL je dodat štapić za mešanje, racemska smeša 1:1 (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropanamida (589 mg, 2.74 mmol), THF (13.7 mL) i 2.0 M rastvor dimetil sulfidnog kompleksa u THF (5.47 mL, 10.9 mmol). Dobijena smeša je mešana u uljanom kupatilu podešenom na 85 °C tokom 4.5 h. Reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ... potrebno je sporo dodavanje, otprilike 1-2 mL u minuti u početku, a zatim brže dok se reakcija drži pod kontrolom), što je izazvalo snažnu fervescenciju i zagrevanje smeše do tačke ključanja ili blizu nje. Ukupno 15 mL MeOH je dodato na ovaj način dok efervescencija nije prestala. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da da bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL), i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom. Dobijeni bezbojni gusti uljni ostatak je zatim tretiran sa 1M vodenom HCl (100 mL) na 65 stepeni C tokom 1 h. Prvobitno zamućena smešaje postala bistra do kraja sata. Smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da da racemsku smešu (1R,2R)-3-amino2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida i (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida (855 mg, prekomerna masa, kvantitativna, maksimum čistoće 76%.) kao blago žuta voštana mokra polučvrsta supstanca. Ovaj materijal je sirov materija ali je korišćen takav kakav jeste u sledećem koraku.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (br s, 2H), 7.41 (br s, 2H), 7.19 (br s, 2H), 4.72 (br d, J=19.1 Hz, 1H), 4.54 (br s, 9H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 1.30 - 1.21 (m, 3H).

MS ESI m/z 201.95 (M+H)<+>

[0544] 204: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (38 mg, 0.133 mmol) sa racemskom smešom (1R,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida i (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ol hidrohlorida (62.6 mg, 0.166 mmol) i BOP (64.6 mg, 0.146 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.116 mL, 0.664 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je koncentrovan pod strujom azota, zatim je ostatak rastvoren u smeši 1:1 DCM:TFA (1.0 mL) i mešan tokom 1h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana pod strujom azota, zatim ponovo rastvorena u 2 mL of DMF i filtrirana. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 15% B, 15-55% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju racemsku smešu 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida i 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (19.2 mg, 0.0407 mmol, 301% prinos). Izolovani racemat je dalje izdvojen u pojedinačne enantiomere korišćenjem SFC-hiralne hromatografije sa sledećim uslovima: Instrument: Waters 100 Prep SFC; Kolona: hiralna IC, 21 × 250 mm, 5µm čestice; Mobilna faza: 50% CO2/50% MeOH sa 0.1% DEA; Brzina protoka: 60 mL/min; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 1.0 mL 15.1 mg ostatak rastvorenog u 3 mL MeOH. Tako, dobijen je enantiomer 3 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi2-metilpropil)-6-metilbenzamida (4.9 mg, 0.0104 mmol, 8% prinos) kao prvi eluirani izomer iz opisanog prečišćavanja preparativnom SFC.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (br t, J=6.2 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.58 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 3H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.88 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.71 (br dd, J=15.8, 4.8 Hz, 1H), 3.73 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 1.24 (d, J=22.3 Hz, 3H).

MS ESI m/z 470.10 (M+H)<+>

Primer 205: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid

[0545]

[0546] Naslovno jedinjenje enantiomer 4 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (5.1 mg, 0.0109 mmol, 8% prinos) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz prečišćavanja hiralnom SFC opisanog za primer 204.

Primer 206: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(2-fluoro-3-(metil-d3)fenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid

[0547]

[0548] U Chemglass bočicu pod pritiskom od 1 drama je dodat štapić za mešanje, 3-(2-amino

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(3-hloro-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (4.5 mg, 8.52 µmol), 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino) ferocen paladijum hlorid (2.22 mg, 3.41 µmol) i (metil-d3)borna kiselina (7.14 mg, 0.085 mmol), zatim je dodat dioksan (500 µl) i 2M vodeni rastvor trikalijum fosfata (42.6 µL, 0.085 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem azotim gasom tokom 5 min i zatim je posuda zatvorena, i smeša je mešana na 115 °C preko noći. Smeša je zatim razblažena sa 1:1 MeOH:dioksan i filtrirana da da 2 mL uzorka za prečišćavanje. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 13% B, 13-53% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako, izolovan je enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(2-fluoro-3-(metil-d3)fenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamida (0.7 mg, 0.0014 mmol, 16% prinos). MS ESI m/z 494.00 (M+H)<+>

Primer 207: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-2-fluorobenzamid

[0549]

[0550] 207A: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propanamid: Smeša etil 2,2-difluoro-2-jodoacetata (3.00 g, 12.0 mmol) i dendritskog bakra u prahu, <45 mikrona (1.14 g, 18.0 mmol) u DMSO (21 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je zatim tretirana sa 1-(bromometil)-4-fluorobenzenom (0.756 g, 4.00 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova smeša je dodata putem pipeta u 200 mL brzo mešanog EtOAc što je izazvalo pojavu lepljivog, teškog belog taloga. Dobijena žuto-zelena suspenzija je propuštena kroz sloj celita i sloj je ispran etil acetatom. Žuto-zeleni filtrat (ukupno 250 mL) je sipan u levak za odvajanje sa vodom (100 mL), levak je protresen i faze su razdvojene. Organski sloj je ispran kombinacijom vode (100 mL) i koncentrovanog rastvora soli (20 mL), zatim još jednom koncentrovanim rastvorom soli (50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog magnezijuma sulfata, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo žuto ulje. Sirovi žuti ostatak je rastvoren u 4 mL 7M amonijaka u metanolu da se odmah dobije homogeni rastvor tamne plavo-zelene boje. Posle 1 h boja smeše tretirane amonijakom je bila manje plavo-zelena i svetlije plavoplave boje, a smeša je postala pomalo zamućena sa malom količinom čvrstog taloga. Sirova smeša je koncentrovana u vakuumu do ostatka. Ostatak je prenet u smešu EtOAc (75 mL) i vode (30 mL) i faze su razdvojene. Vodena faza je bila blago plave boje, a EtOAc faza je bila žuta. EtOAc faza je ponovo isprana vodom (30 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana u vakuumu do ostatka. TLC na silicijum dioksidu sa 20:1 DCM:MeOH eluentom pokazala je jednu veliku tačku na rf = 0.55 (vizuelizovano Hanesijanovom bojom i zagrevanjem). Koncentrovanjem u vakuumu dobija se blago žuta čvrsta supstanca. Sirova žuta čvrsta supstanca je rastvorena zagrevanjem u minimalnoj količini DCM (20 mL) i rezultat je nanešen na silika ketridž od 120 g koji je prethodno uravnotežen sa DCM. Gradijent eluiranja 100% DCM to 20:1 DCM:MeOH za 10 zapremina kolone. Proizvod je eluiran pred kraj gradijenta. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propanamid (668 mg, 3.29 mmol, 82% prinos) kao blago žuti prah.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (br s, 1H), 7.84 (br s, 1H), 7.30 (dd, J=8.5, 5.7 Hz, 2H), 7.16 (t, J=8.5 Hz, 2H), 3.43 - 3.27 (m, 2H).

MS ESI m/z 201.90 (M-H)-[0551] 207B: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin hidrohlorid: Pod atmosferom azota, u posudu sa okruglim dnom od 50 mL koja je opremljena kondenzatorom sa refluksom je dodat štapić za mešanje, 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propanamid (500 mg, 2.46 mmol), THF (10 mL) i 2.0 M rastvor boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (4.92 mL, 9.84 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C. Nakon 2.5 h, reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ... potrebno je sporo dodavanje, otprilike 1-2 mL u minuti u početku, a zatim brže dok se reakcija drži pod kontrolom) kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom, što je izazvlao snažnu efervescenciju. Ukupno 15 mL MeOH je dodato na ovaj način sve dok se efervescencija značajno ne uspori. Smeša je refluksovana tokom dodatnih 15 min, zatim je rastvarač uklonjen u vakuumu. Dobijeni bezbojni gusti uljni ostatak je zatim tretiran sa 2M vodenim rastvorom HCl (50 mL) na 70 stepeni C tokom 1 h. U početku zamućena smeša je postala bistra do kraja sata. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL, zatim 25 mL). EtOAc ekstrakti su odbačeni. Vodeni sloj je koncentrovan u vakuumu da da blago beličastu čvrstu supstancu koja je stavljena pod visok vakuum preko noći da da 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin hidrohlorid (394.5 mg, 1.75 mmol, 71% prinoskao blago ružičastu čvrstu supstancu.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (br s, 2H), 7.36 (dd, J=8.2, 5.8 Hz, 2H), 7.21 (t, J=8.8 Hz, 2H), 3.50 - 3.36 (m, 4H).

MS ESI m/z 189.90 (M+H)<+>

[0552] 207C: metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat: U posudu sa okruglim dnom od 250 mL su kombinovani 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (10.4 g, 40.8 mmol) i kalijum karbonat (14.1 g, 102 mmol) u anhidrovanom DMF (136 mL). U mešanu suspenziju je dodat jodometan (3.83 mL, 61.3 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (400 mL) i čvrsta supstanca je odfiltrirana i isprana sa EtOAc. Filtrat je potpuno koncentrovan u vakuumu do ostatka, zatim razblažen sa EtOAc (175 mL) i organski sloj je opran vodom (3 x 50 mL) i zatim sa koncentrovanim rastvorom soli (50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog magnezium sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da da metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat (11.0 g, 40.8 mmol, kvantitativno) kao žuto ulje.

[0553]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.57 (dd, J=8.6, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).

[0554] 207D: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat: U posudu sa okruglim dnom od 500 mL pod slojem azotnog gasa su kombinovani metil 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzoat (10.9 g, 40.8 mmol) sa 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (10.9 g, 42.8 mmol), kalijum acetat (6.01 g, 61.2 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (1.67 g, 2.04 mmol). Smeša je suspendovana u 1,4-dioksanu (136 mL) i posuda je zatim opremljena kondenzatorom sa refluksom. Uz brzo mešanje, suspenzija je iterativno evakuisana i zatim pročišćena azotom pet puta da se degazira. Smeša je zatim grejana na 85 °C tokom 3 h. U smešu je zatim dodat 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (8.69 g, 40.8 mmol), trikalijum fosfat (2 M in water) (61.2 ml, 122 mmol) i dodatni 1,1'-bis(difenillfosfino)ferocen paladijum dihlorid - CH2Cl2adukt (1.67 g, 2.04 mmol) i dobijena smeša je produvana azotnim gas tokom 10 min i zatim mešana uz zagrevanje na 75 °C tokom 14.5 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu do ostatka, zatim je ostatak razblažen sa EtOAc (600 mL), i smeša je promućkana da da suspenziju čvrstih supstanci koja je filtrirana. Sakupljene čvrste supstance koje su sadržale željeni proizvod (kao što je određeno sa LCMS) su tretirane uzastopnim trituracijama sa EtOAc (2 x 100 mL) i zatim DCM (2 x 100 mL) dok konačne čvrste supstance (približno 3g) nisu više sadržale željeni proizvod prema LCMS. Organske materija dobijene trituracijom su kombinovane i ostavljene sa strane. Filtrat se sastojao od dve faze koji se izdvojene. Organska faza je kombinovana sa već navedenim kombinovanim organskim materijama dobijenim trituracijom. Vodena faza je zatim razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc dvaput (100 mL svaki). Organski ekstrakti su zatim dodati u kombinovanu organsku materiju. Kombinovane organske faze su razblažene do 1.5 L sa EtOAc, i zasićeni koncentrovani rastvorsoli (250 mL) je dodat i mešavina je promućkana a faze su izdvojene. Organska materija je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli (2 x 100 mL), zatim je organska materija osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana u vakuumu do tamno braon ostatka. Ostatak je suspendovan pažljivim zagrevanjem u DCM (150 mL), i u ovu braon suspenziju su dodati heksani (100 mL) i dobijena smeša je koncentrovana u vakuumu da se ukloni približno 100 mL organskog rastvarača. Dobijena suspenzija je ohlađena i zatim filtrirana da se izoluje braon prah koji je ispran dietil etrom i ostavljen da se osuši na vazduhu. Tako izolovan braon prah (5.86 g) je ostavljen sa strane. Filtrat je koncentrovan u vakuumu do crnog uljnog ostatka. Crni ostatak je razblažen sa DCM (40 mL) i nanet na silika ketridž od 330g prethodno ekvilibrisan sa heksanima. Gradijent eluiranja 0% heksani do 100% EtOAc preko 5 zapremina kolone, zadržavanje 100% EtOAc preko 5 zapremina kolone, zatim gradijent eluiranja 100% DCM do 30:1 DCM:MeOH. Željene frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da daju žuti prah: 1.14 g. Ovaj žuti prah je kombinovan sa 5.86 g prethodno izolovanog braon praha da da željeni metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat (7.00 g, 21.8 mmol, 54% prinos). Ovaj materijal je prenet takav kakav jeste u sledeći eksperiment.

MS ESI m/z 320.80 (M+H)<+>

[0555] 207E: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina: Rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoata (7.00 g, 21.8 mmol) i 1M vodeni rastvor NaOH (32.7 mL, 32.7 mmol) u MeOH (100 mL) je zagrejan na 85 °C tokom 3.5 h. Tamno braon reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, zatim je dodato 100 mL vode. Suspenzija je filtrirana da se ukloni braon čvrsta supstanca za koju je pronađeno da ne sadrži željeni proizvod i odbaćena je. Braon bistar filtrat je mešan brzo na sobnoj temperaturi i zatim zakiseljen sporim dodavanjem koncentrovanog rastvora 12M HCl (približno 2.7 mL) dok nije izmerena pH 2 d 3 sa pH papirom. Tokom dodavanja kiseline nastao je jak talog. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana hladnom dejonizovanom vodom, i ostavljena da se osuši na vazduhu preko noći, a zatim stavljena pod visoki vakuum na nekoliko sati da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (6.39 g, 20.8 mmol, 95% prinos) kao braon prah.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.76 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.54 (d, J=10.5 Hz, 2H), 7.05 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H).

MS ESI m/z 306.80 (M+H)<+>

[0556] 207: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (15.3 mg, 0.0500 mmol) sa 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amiomn, HCl (13.5 mg, 0.0600 mmol) i BOP (25.4 mg, 0.0580 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.0520 mL, 0.300 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova smeša je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 18% B, 18-58% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako, je dobijeno 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-2-fluorobenzamida (12.4 mg, 0.0260 mmol, 52% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.26 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.76 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 2H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.19 (br t, J=8.8 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 3.84 - 3.72 (m, 2H). Dva protona nedostaju usled vode. MS ESI m/z 478.00 (M+H)<+>

Primer 208: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0558] 208A: 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina: mešani rastvor 2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (2.00 g, 13.0 mmol) 18M sumpornoj kiselini (14.0 mL, 262 mmol) je ohlađen u kupatilu sa ledom/acetonom na -10 °C. Termometar je postavljen u smešu da se prati temperatura reakcije. U mešanu smešu je polako tokom 10 min dodata u kapima smeša azotne kiseline (1.08 mL, 15.8 mmol) i sumporne kiseline (1.00 mL, 18.0 mmol). Dodavanje kontrolisano tako da je temperatura smeša održavana između -5 i 0 °C. Smeša je mešana tokom dodatnih 30 min i je zatim prelivena preko leda (100 g). Bela čvrsta supstanca je izolovana iz dobijene suspenzije filtracijom. Čvrsta supstanca je isprana sa ledeno hladnom dejonizovanom vodom i ostavljena da se osiši na vazduhu preko noći. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc (50 mL) i rastvor je opran dejonizovanom vodom (3 x 20 mL) zatim koncentrovanim rastvorom soli (20 mL). Organska materija je osušena preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da se dobije 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina (1.94 g, 9.74 mmol, 75% prinos) kao beli prah.

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.08 - 8.03 (m, 1H), 7.19 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H).

MS ESI m/z 197.70 (M-H)-[0559] 208B: 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoeva kiselina: U rastvor sobne temperature 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (1.93 g, 9.69 mmol) u 18M sumpornoj kiselini (10.0 mL, 188 mmol) je dodat 1,3-dibromo-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (2.91 g, 10.2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota preko noći. Smeša je u brzo mešanu ledeno hladnu dejonizovanu vodu (100 mL), a suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Suspenzija je ohlađena u ledenom kupatilu i filtrirana da bi se izolovao beli prah. Čvrsta supstanca je rastvorena u DMF (5 mL) i naneta na Isco Redisep Gold C18150g ketridž koji je prethodno ekvilibrisan sa 100%A rastvarača. Materijal je prečišćen MPLC sa reverznom fazom (Rastvarač A = 95 % H2O, 5 % acetonitril, 10 mM amonijum acetat; Rastvarač B = 95 % acetonitril, 5 % H2O, 10 mM amonijum acetat; 85 mL/min, Gradijent 0-40 %B preko 8 zapremina kolone, zadržavanje 40 %B preko 5 zapremina kolone). Proizvod je eluiran tokom gradijenta kao veoma široka traka. Čiste frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u mešanoj smeši EtOAc (100 mL) i vode (40 mL) i dodat je 1M vodeni rastvor HCl dok se ne postigne pH = 1. Dobijene dve faze su odvojene, vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 k 50 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa koncentrovanim rastvorom soli (25 mL), osušeni preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da daju 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoevu kiselinu (1.90 g, 6.83 mmol, 71% prinos) kao belu čvrstu supstancu.

[0560]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J=6.4 Hz, 1H), 3.44 - 3.21 (m, 1H), 2.41 (s, 3H).

[0561] 208C: 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina: u rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoeve kiseline (1.90 g, 6.83 mmol) u MeOH (70 mL) na sobnoj temperaturi je dodat amonijum hlorid (3.66 g, 68.3 mmol) zatim dejonizovana voda (35 mL). Smeša je zagrejana na 70 °C i zatim je dodato gvožđe (2.29 g, 41.0 mmol). Nakon zagrevanja tokom 3.5 h, sirova smeša je sipana preko sloja celita i eluirana metanolom. Koncentrovanje eluenta u vakuumu dalo je čvrstu supstancu koja je izgledala da tamni stajanjem izložena vazduhu. Čvrsta supstanca je suspendovana u dejonizovanoj vodi (100 mL) i dobijena suspenzija je filtrirana i izolovana čvrsta supstanca je ostavljena da se osuči na vazduhu preko noći da se dobije 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina (1.61 g, 6.48 mmol, 95% prinos) kao braon prah. Nije izvedeno dodatno prečišćavanje.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.02 - 6.80 (m, 1H), 5.30 - 5.07 (m, 1H), 1.98 (br s, 3H). MS ESI m/z 247.80, 249.80 (M+H)<+>

[0562] 208D: 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: Mešana suspenzija 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline (1.50 g, 6.05 mmol) u AcOH (15 mL) je tretirana 18M sumpornom kiselinom (0.672 mL, 12.09 mmol) što je izazvalo gustu ali suspenziju koja se još može mešati. Suspenzija je tretirana na sobnoj temperaturi u kapima veoma polako, uz mešanje, sa koncentrovanim vodenim rastvorom natrijum nitrata (0.438 g, 6.35 mmol) u 3 mL vode tokom 20 min. Napomena: brzina dodavanja je približno jedna kap svakih 20 secondi, tokom punih 20 min. Bilo koja veća brzina dodavanja bi izazvala termičku razgradnju diazonijumove soli. Suspenzija je tokom vremena postajala sve crvenkaste boje, ali je i dalje ostala suspenzija. Na kraju dodavanja NaNO2, smeša je mešana tokom 15 min na sobnoj temperaturi. Suspenzija je dodat odjednom sa pipetom u mešani rastvor gvožđe sulfat heptahidrata (1.68 g, 6.05 mmol) i fosforne kiseline (1.65 mL, 24.2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (25 mL, 323 mmol). Dobijena smeša je ispuštala mehure tokom dodavanja, a braon, neproziran blago mlečni rastvor je nastao. Sirova smeša je razblažena do 200 mL sa vodom i dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL). Kombinovane organske supstance su ponovo ekstrahovane vodom (100 mL), osušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrovane u vakuumu da daju crveno ulje. Ulje ponovo rastvoreno u EtOAc (175 mL) i dobijeni rastvor je opran vodom (4x75 mL) i koncentrovanim rastvorom soli (25 mL), osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (1.20 g, 5.15 mmol, 85% prinos) kao crveno/braon čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.68 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J=8.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H).

MS ESI m/z 230.70, 232.60 (M-H)-[0563] 208E: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, hidrohlorid: Pod atmosferom azota su kombinovani N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (1.00 g, 2.17 mmol), 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (557 mg, 2.39 mmol), i PdCl2(dtbpf) (70.8 mg, 0.109 mmol) u dioksanu (10 mL) da daju braon rastvor. Rastvor je brzo tretiran 2M vodenim rastvorom kalijum fosfata, (4.34 mL, 8.69 mmol) i dobijena smeša je degazirana barbotiranjem azotnog gasa tokom 10 min uz brzo mešanje. Rastvor je zagrejan na 60 °C tokom 8 h. Smeša je načinjena kiselom polaganim dodavanjem 3M vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (5.79 mL, 17.4 mmol) uz mešanje. Smeša je preneta u levak za odvajanje i razblažena etil acetatom (50 mL). U smeša je dodat čvrst natrijum hlorid kako bi se zasitila vodena faza sa koncentrovanim rastvorom soli. Smeša je promućkana a faze su odvojene.Organska materija je oprana još dvaput sa koncentrovanim rastvorom soli (2 x 10 mL). Organska materija je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana, zatim je smeša je koncentrovana u vakuumu do tamno braon ostatka. Ostatak je rastvoren u minimumu DCM i nanet na silik aketridž od 120g prethodno ekvilibrisan sa DCM. Gradijent eluiranja, 100% DCM (rastvarač A) do 60% rastvarač B (rastvarač B = EtOAc sa 1% sirćetne kiseline) preko 12 zapremina kolone, zadržavanje 60%B preko 3 zapremina kolone. Separacija željenog N,N-bis-Boc i t N-mono-Boc proizvoda je postignuta. N,N-bis-Boc i N-mono-Boc frakcije proizvoda su kombinovane u jednoj posudi i koncentrovane u vakuumu do približno 80 mL. Ostatak je prenet u levak za odvajanje i ispran dejonizovanom vodom (4 x 40 mL) da se ukloni sirćetna kiselina, zatim je organski sloj opran sa koncentrovanim rastvorom soli (30 mL), osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije braon staklasta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u anhidrovanom 1,4-dioksanu (10 mL) i rastvor je tretiran 4M vodonik hloridom u dioksanu (10.9 mL, 43.4 mmol) tokom 48 h. Sirova smeša je zatim koncentrovana pod strujom azota da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, hidrohlorid (0.684 g, kvantitativno, maksimalno 90 % čistoće) kao prljavo beli prah.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.43 - 7.21 (m, 2H), 2.41 (s, 3H).

MS ESI m/z 286.85 (M+H)<+>

[0564] 208: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, HCl (17.9 mg, 0.0500 mmol) sa 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-aminom, HCl (13.5 mg, 0.0600 mmol) i BOP (25.4 mg, 0.0580 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.0520 mL, 0.300 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova smeša je filtrirana i prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 16% B, 16-56% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako, dobijen je 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (14.3 mg, 0.0312 mmol, 63% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.37 (t, J=6.6 Hz, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 7.05 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.28 - 5.89 (m, 2H), 3.84 - 3.73 (m, 2H), 2.33 (s, 3H). Dva protona nedostaju, verovatno su maskirani velikim pikom vode.

MS ESI m/z 458.10 (M+H)<+>

Primer 209: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N ((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid

[0566] 209A: etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat: smeša etil 2-bromo-2-fluoroacetata (20.8 mL, 176 mmol), 1-(4-fluorofenil)etan-1-ona (7.09 mL, 58.6 mmol), gvožđa (9.82 g, 176 mmol), i joda (2.98 g, 11.7 mmol) u THF (117 mL) je zagrejana na 60 °C tokom 12 h. Voda je dodata i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (x3). Kombinovani organski slojevi su oprani sa koncentrovanim rastvorom soli, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani, a filtrat je uparen u vakuumu da da sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom eluiranjem sa 0-20% etil acetat/heksani da se dobije etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat (9.5 g, 39 mmol, 66% prinos) kao žuto ulje. Ovaj materijal je smeša 4 izomera.

[0567]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.56 - 7.44 (m, 4H), 7.14 - 6.98 (m, 4H), 5.08 -4.73 (m, 2H), 4.24 - 3.97 (m, 4H), 3.54 (s, 1H), 3.28 (s, 1H), 1.74 - 1.64 (m, 6H), 1.23 - 1.04 (m, 6H).

[0568] 209B: racemska smeša (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i racemska smeša (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida: Smeša etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoata (4.00 g, 16.4 mmol) i 7M rastvora amonijaka 7M u metanolu (11.7 mL, 82.0 mmol) i MeOH (32.8 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Sirova reakciona smeša je prečišćen preparativnom HPLC sa reverznom fazom na Sunfire C18 koloni (10 µM čestice, 50x300 mm) eluiranjem sa 0-100 % B (rastvarač A: 95% voda/5% acetonitril/10 mM amonijum acetat, rastvarač B: 5% voda/95% acetonitril/10 mM amonijum acetat) tokom 30 min da se dobiju dva odvojena materijala. Pik prvog proizvoda koji je eluirao iz prečišćavanja sa reverznom fazom obezbedio je racemsku smešu (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (0.920 g, 4.28 mmol, 26% prinos) kao belu čvrstu supstancu nakon koncentrovanja u vakuumu. Stereohemija ovog materijala je određena sa rengenskom kristalografijom.

<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ 7.55 (dd, J=7.7, 5.4 Hz, 2H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 5.15 - 5.14 (m, 1H), 4.83 (1H, d, J = 50 Hz)1.68 (d, J=1.7 Hz, 3H).

MS ESI m/z 213.85 (M-H)-[0569] Pik drugog proizvoda koji eluirao iz prečišćavanja sa reverznom fazom obezbedio je racemsku smešu (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (0.520 g, 2.42 mmol, 15% prinos) kao belu čvrstu supstancu. Stereohemija ovog materijala je određena sa rengenskom kristalografijom.

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.47 (br dd, J=7.3, 5.3 Hz, 2H), 7.04 (t, J=8.8 Hz, 2H), 6.22 - 6.02 (m, 1H), 5.52 - 5.27 (m, 1H), 4.95 (1H, d, J = 50 Hz), 4.90 (1H, s), 1.71 (d, J=2.0 Hz, 3H).

MS ESI m/z 213.85 (M-H)-[0570] 209C: Hiralna separacija (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida: racemska smeša (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (ukupno 520 mg, 2.42 mmol) je dovela do pojedinačnih enantiomera hiralnom SFC sa sledećim uslovima: instrument: Waters MGM Prep 150 SFC; Kolona: Chiral IA, 30 x 250 mm, 5 mikrona čestice; Mobilna faza: 88% CO2, 12% MeOH; Brzina protoka: 85 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 1.2 mL 520 mg rastvorenog u 13 mL MeOH-ACN. Prvi pik koji je eluiran sa ovim uslovima obezbedio je (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (190 mg, 0.883 mmol, 37% prinos). Apsolutna stereohemija ovog materijala je određena sa rengenskom kristalografijom.

Drugi pik koji je eluirao separacijom hiralnom SFC dao je (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (198 mg, 0.920 mmol, 38% prinos).

[0571] 209D: (2S,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: Pod atmosferom azota u posudi opremljenoj sa kondenzatorom sa refluksom i magnetnim štapićem za mešanje, rastvor (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (177 mg, 0.822 mmol) u THF (4.1 mL) je tretiran sa 2.0 M rastvorom boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (1.65 mL, 3.29 mmol). Dobijena smeša je mešana na 85 °C preko noći. Dok se još zagrevala, reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ... obavezno dodavanje u kapima) kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom što je izazvalo snažnu efervescenciju i zagrevanje smeše na ili blizu tačke ključanja. Snažna efervescencija je prestala nakon što je približno 0.3 mL dodato. Ukupno je dodato 2 mL MeOH. Mešavina je zagrejana je tokom dodatnih 30 min. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL) i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom i ostatak je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirov (2S,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol (246 mg, >100% prinos) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja direktno u sledećem koraku. Kvantitativni prinos je pretpostavljen sa čistoćom sirovog materijala od približno 67% masenih. MS ESI m/z 201.85 (M+H)<+>

[0572] 209: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (21 mg, 0.068 mmol) sa (2S,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-olom (29 mg, 0.096 mmol) i BOP (33 mg, 0.075 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona materija je filtrirana i prečišćena preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 11% B, 11-51% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da obezbede 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid (23.7 mg, 0.0483 mmol, 71% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (t, J=5.7 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 4H), 7.18 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.03 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.74 (s, 1H), 4.68 - 4.51 (m, 1H), 3.68 (s, 1H), 3.00 - 2.90 (m, 1H), 1.56 (s, 3H). MS ESI m/z 490.00 (M+H)<+>

Primer 210: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid

[0573]

[0574] 210A: (2R,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: Pod atmosferom azota u posudi opremljenoj kondenzatorom sa refluksom i magnetnim štapićem za mešanje, rastvor (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (195 mg, 0.906 mmol) u THF (4.5 mL) je tretiran sa 2.0 M rastvorom boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (1.81 mL, 3.62 mmol). Dobijena smeša je mešana na 85 °C preko noći. Dok se još zagrevala, reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ...dodavanje u kapima neophodno) kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom što je izazvalo snažnu efervescenciju i zagrevanje smeše na ili blizu tačke ključanja. Snažna efervescencija je prestala nakon što je dodato približno 0.3 mL. Ukupno 2 mL MeOH je dodato. Mešavina je zagrevana tokom dodatnih 30 min. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL) i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom i ostatak je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirov (2R,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol (271 mg, >100% prinos) kao prljavo bela polučvrsta supstanca koje korišćena bez daljeg prečišćavanja direktno u sledećem koraku. Kvantitativni prinos je pretpostavljen čistoćom sirovog materija od približno 67% masenih.

MS ESI m/z 201.90 (M+H)<+>

[0575] 210: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (21 mg, 0.068 mmol) sa (2R,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-olom (29 mg, 0.096 mmol) i BOP (33 mg, 0.075 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova materija reakcije filtrirana i prečišćena preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 11% B, 11-51% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da obezbede 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid (25.4 mg, 0.0518 mmol, 76% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (t, J=5.5 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 4H), 7.18 (t, J=8.3 Hz, 2H), 7.03 (br d, J=7.2 Hz, 1H), 6.14 - 6.05 (m, 2H), 5.74 (s, 1H), 4.70 - 4.48 (m, 1H), 3.78 - 3.64 (m, 1H), 3.04 - 2.83 (m, 1H), 1.56 (s, 3H).

MS ESI m/z 490.00 (M+H)<+>

Primer 211: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid

[0576]

[0577] 211A: Hiralna separacija (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida: racemska smeša (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida i (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (ukupno 922 mg, 4.28 mmol) je razdvojena u pojedinačne enantiomere pomoću hiralne SFC sa sledećim uslovima: Instrument: PIC Prep SFC; Kolona: Chiral IA, 21 × 250 mm, 5 mikrona čestice; Mobilna faza: 85% CO2, 15% MeOH; Brzina protoka: 45 mL/min; Talasna dužina detektora: 220 nm; Detalji ubrizgavanja: ubrizgavanje 0.6 mL 922 mg rastvorenog u 10 mL MeOH. Tprvi pik koji je eluiran sa ovim uslovima dao je (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (250 mg, 1.16 mmol, 27% prinos). Apsolutna stereohemija ovog materijala određena je eksperimentima sa rendgenskom kristalografijom.

[0578] Drugi pik koji je eluiran separacijom sa SFC dao je (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (245 mg, 1.14 mmol, 27% prinos).

[0579] 211B: (2R,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: Pod atmosferom azota u posudi opremljenoj kondenzatorom sa refluksom i magnetnim štapićem za mešanje, rastvor (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (319 mg, 1.48 mmol) u THF (7.4 mL) je tretiran sa 2.0 M rastvorom boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (2.97 mL, 5.93 mmol). Dobijena smeša je mešana na 85 °C tokom 4.5 h. Dok je još zagrevana, reakcija je gašena polaganim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ...dodavanje u kapima neophodno) kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom što je izazvalo snažnu efervescenciju i zagrevanje smeše na ili blizu tačke ključanja. Ukupno 15 mL MeOH je dodato. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL) i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom i ostatak je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirov (2R,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol (348 mg, >100% prinos) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja direktno u sledećem koraku. Kvantitativno prinos je pretpostaljen sa čistoćom sirovog materija od približno 85% masenih.

MS ESI m/z 201.95 (M+H)<+>

[0580] 211: U bočicu od 1 drama su kombinovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (21 mg, 0.068 mmol) sa (2R,3S)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-olom (23 mg, 0.096 mmol) i BOP (33 mg, 0.075 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova materija reakcije filtrirana i prečišćena preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 11% B, 11-51% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da obezbede 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid (34.5 mg, 0.0680 mmol, kvantitativno).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (t, J=5.5 Hz, 1H), 8.62 (d, J=6.3 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.3 Hz, 1H), 7.59 - 7.45 (m, 4H), 7.18 (t, J=8.6 Hz, 2H), 7.02 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.75 - 5.57 (m, 1H), 4.72 - 4.56 (m, 1H), 1.55 (s, 3H). Two protons missing due to large water peak.

MS ESI m/z 490.00 (M+H)<+>

Primer 212: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid

[0581]

[0582] 212A: (2S,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: Pod atmosferom azota u posudi opremljenoj kondenzatorom sa refluksom i magnetnim štapićem za mešanje, rastvor (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (403 mg, 1.87 mmol) u THF (9.4 mL) je tretiran sa 2.0 M rastvorom boran dimetil sulfidnog kompleksa u THF (3.75 mL, 7.49 mmol). Dobijena smeša je mešana na 85 °C tokom 4.5 h. Dok je još zagrevana, reakcija je gašena polakim dodavanjem metanola u kapima (OPREZ...dodavanje u kapima neophodno) kroz gornji deo kondenzatora sa refluksom što je izazvalo snažnu efervescenciju i zagrevanje smeše na ili blizu tačke ključanje. Ukupno 15 mL MeOH je dodato. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije bistro bezbojno gusto ulje. Dodato je još metanola (50 mL) i smeša je ponovo koncentrovana u vakuumu. Metanolni azeotrop je ponovljen još jednom i ostatak je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirov (2S,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol (367 mg, 1.82 mmol, 97% prinos) kao gusto svetlo braon ulje koje korišćeno bez daljeg prečišćavanja direktno u sledećem koraku.

MS ESI m/z 201.85 (M+H)<+>

[0583] 212: U bočicu od 1 drama su kombinovani su 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (21 mg, 0.068 mmol) sa (2S,3R)-4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-olom (19.3 mg, 0.0960 mmol) i BOP (33 mg, 0.075 mmol) u DMF (1 mL), zatim je dodat DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova materija reakcije filtrirana i prečišćena preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 11% B, 11-51% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da obezbede 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid (30.1 mg, 0.0614 mmol, 90% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (t, J=5.7 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=7.7, 5.4 Hz, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.18 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.02 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.10 - 6.06 (m, 2H), 5.72 - 5.61 (m, 1H), 4.71 -4.57 (m, 1H), 1.55 (s, 3H). Dva protona nedostaju zbog velikog pika vode.

MS ESI m/z 490.00 (M+H)<+>

Tabela 14: Jedinjenja iz tabele 14 su pripremljena istim postupcima opisanim za pripremanje primera 209, 210, 211 i 212, redom. U svakom slučaju, 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzoeva kiselina je zamenjena umesto 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline u finalnom koraku.

Primer 217: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0584]

[0585] 217A: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluorobenzoeva kiselina: U rastvor (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)borne kiseline (496 mg, 2.79 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) je dodata 3-bromo-2-fluorobenzoeva kiselina (565 mg, 2.58 mmol) i 1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (84.0 mg, 0.129 mmol). Smeša je degazirana barbotiranjem azota kroz smešu tokom 5 min.2M K3PO4(a) (3.87 mL, 7.74 mmol) je brzo dodat i dobijena smeša je zagrejana na 100 °C tokom 5 min. Smeša je ohlađena do sobne temperature, zatim razblažena sa 50 mL 1.5M vodenog rastvora kalijum fosfata i isprana sa EtOAc (1x10 mL). Vodeni sloj je zakiseljen sa 6N vodenim rastvorom HCl nakon čega je proizvod istaložen iz rastvora. Proizvod je sakupljen filtracijom i osušen da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (497 mg, 1.83 mmol, 71% prinos) kao mrkožuta čvrsta supstanca.

[0586] 217: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (22 mg, 0.081 mmol), BOP (53.6 mg, 0.121 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.80 mg, 0.042 mmol), i Hunigove baze (0.071 mL, 0.404 mmol) u DMF (1.0 mL) je mešana na 44 °C preko noći. Smeša je razblažena do 2mL sa metanolom, zatim filtrirana. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 11% B, 11-51% B tokom 20 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (22.1 mg, 0.050 mmol, 62% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.52 - 8.39 (m, 1H), 7.74 (br t, J=7.5 Hz, 1H), 7.62 (br t, J=6.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 5H), 7.08 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.22 - 6.03 (m, 1H), 4.67 (br s, 1H), 3.48 - 3.39 (m, 1H), 3.41 - 3.24 (m, 1H), 1.84 (q, J=6.8 Hz, 2H) [NH2protoni nisu uočeni].

MS ESI m/z 297.3 (M+H)<+>

Primer 218: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0587]

[0588] Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (20 mg, 0.073 mmol), BOP (48.7 mg, 0.110 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola, HCl (20.4 mg, 0.0920 mmol), i Hunigove baze (0.077 mL, 0.44 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na 44 °C preko noći. LCMS je ukazao na završetak reakcije. Smeša je razblažena do 2 mL sa metanolom, zatim filtrirana. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LCMS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje pri 10% B, 10-46% B tokom 28 minuta, zatim 0-minutno zadržavanje pri 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto sa MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i sušene centrifugalnim isparavanjem da bi se dobio (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (17.0 mg, 0.039 mmol, 53% prinos).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.46 (br s, 1H), 7.73 (br t, J=7.1 Hz, 1H), 7.62 (br t, J=6.7 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 5H), 7.08 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.46 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 4.72 - 4.62 (m, 1H), 3.57 - 3.44 (m, 1H), 3.41 - 3.21 (m, 1H), 1.84 (q, J=6.8 Hz, 2H).

MS ESI m/z 440.03 (M+H)<+>

Primer 219: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluorobenzamid

[0590] 219A: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoat: Rastvoru (2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)boronske kiseline (247 mg, 1.39 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) dodati su metil 3-hloro-2,4-difluorobenzoat (265 mg, 1.28 mmol) i 1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (42 mg, 0.064 mmol) i smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min. 2M K3PO4(vod) (1.92 mL, 3.85 mmol) je brzo dodat i reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 5 min. LCMS je pokazao da je reakcija završena. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana na cilitu, zatim prečišćena na koloni od 24 g silicijum dioksida, eluirana sa 0-100% EtOAc u heksanu i zatim sa 0-10% MeOH u DCM da se dobije metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoat (390 mg, 1.15 mmol, 90% prinosa).

MS ESI m/z 305.1 (M+H)<+>

[0591] 219B: Litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoat: U rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoata (390 mg, 1.28 mmol) u THF (10 mL) i nekoliko kapi metanola je dodat rastvor litijum hidroksid monohidrata (64.5 mg, 1.54 mmol) u 0.5 mL vode. Smeša je zagrevana do 55 °C i mešana tokom 3 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do čvrste supstance. Sirovi materijal je u narednim koracima korišćen bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 291.0 (M+H)<+>

[0592] 219: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoata (22 mg, 0.076 mmol), BOP (50.3 mg, 0.114 mmol), (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol), i Hunigove baze (0.066 mL, 0.38 mmol) u DMF (1.0 mL) je mešana na 44 °C preko noći. LCMS je pokazao završenu reakciju. Smeša je razblažena do 2 mL sa metanolom, zatim filtrirana. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje od 0-minuta na 12% B, 12-52% B tokom 20 minuta, zatim 0-minuta zadržavanje na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluorobenzamid (10.1 mg, 0.022 mmol, 29% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.41 (br s, 1H), 7.82 - 7.62 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 4H), 6.98 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 4.67 (br s, 1H), 3.33 (br s, 2H), 1.92 (s, 2H), 1.84 (br d, J=6.7 Hz, 2H).

MS ESI m/z 458.3 (M+H)<+>

Primer 220: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluorobenzamid

[0593]

[0594] Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluorobenzoata (22 mg, 0.076 mmol), BOP (50.3 mg, 0.114 mmol), (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ola (7.8 mg, 0.042 mmol), i Hunigove baze (0.066 mL, 0.38 mmol) u DMF (1.0 mL) je mešana na 44 °C preko noći. LCMS je pokazao završenu reakciju. Smeša je razblažena do 2 mL sa metanolom, zatim filtrirana. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje od 0-minuta na 12% B, 12-52% B preko 23 minuta, zatim 0-minuta zadržavanja na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluorobenzamid (9.3 mg, 0.020 mmol, 27% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.40 (br s, 1H), 7.80 - 7.62 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.42 - 7.32 (m, 4H), 6.98 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 4.66 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 3.43 - 2.85 (m, 2H), 1.89 (s, 2H), 1.83 (br d, J=6.7 Hz, 2H).

MS ESI m/z 458.01 (M+H)<+>

Primer 221: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0595]

[0596] 221A: etil 2,2-difluoro-3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutanoat:

221A Postupak 1: Smeša gvožđa (1.08 g, 19.4 mmol), 1-(4-hlorofenil)etan-1-ona (0.839 mL, 6.47 mmol), etil 2-bromo-2,2-difluoroacetata (2.49 mL, 19.4 mmol), i joda (0.328 g, 1.29 mmol) u THF (13 mL) je pročišćena sa azotom tokom 5 min i snažno mešana na 70 °C tokom 24 h. Dodatno su dodati etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (0.829 mL, 6.47 mmol) i gvožđe (0.361 g, 6.47 mmol). Smeša je pročišćena sa azotom tokom 5 min i snažno mešana na 70 °C tokom 24 h. Reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (50 mL). Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL), isprana sa slanim rastvorom, osušena Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pri sniženom pritisku. Sirovi proizvod je prečišćen kolonskom hromatografijom na kertridžu silika gela eluiran sa 0-50% EtOAc u heksanu. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su koncentrovane pri smanjenom pritisku da bi se dobio etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanoat (1.15 g, 4.13 mmol, 64% prinosa) kao ulje.

[0597]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.47 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.7 Hz, 2H), 4.20 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.18 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0598] 221A Postupak 2: U smešu 1-(4-hlorofenil)etan-1-ona (1.50 g, 9.70 mmol) i praha indijuma (1.67 g, 14.6 mmol) u THF (20 mL) je dodat u kapima etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (2.95 g, 14.6 mmol). Dobijena smeša je snažno mešana na 60 °C tokom 12 h. Reakcija je ugašena sa 1 N vodenim rastvorom HCl (10 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL) i čvrsta supstanca je filtrirana. Slojevi filtrata su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani EtOAc slojevi su isprani sa slanim rastvorom (50 mL), osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pri sniženom pritisku. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni na kertridžu od silika gela eluiran sa 0-30% EtOAc u heksanu. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su koncentrovane pri smanjenom pritisku da bi se dobio etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanoat (2.25 g, 8.07 mmol, 83% prinosa) kao ulje.

[0599]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.47 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.37 - 7.33 (m, 2H), 4.20 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.73 (t, J=1.5 Hz, 3H), 1.18 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0600] 221B: 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanamid: U rastvor etil 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanoata (4.84 g, 17.4 mmol) u MeOH (80 mL) na 0 °C je dodat amonijak (7 M u MeOH) (9.92 mL, 69.5 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pri sniženom pritisku, zatim osušena pod vakuumom preko noći da se dobije sirovi 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanamid (4.4 g, 17.7 mmol, 96% prinosa) kao čvrsta supstanca koja se u sledećem koraku koristi bez prečišćavanja.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.78 (br s, 1H), 7.64 (br s, 1H), 7.51 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.40 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.22 (s, 1H), 1.65 (s, 3H).

MS ESI m/z 247.9 (M-H)-

[0601] 221C: 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ol: U rastvor 3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutanamida (1.03 g, 4.13 mmol) u THF (20 mL) je dodat LAH (2M u THF) (3.09 mL, 6.19 mmol) na -78 °C. Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min, zatim zagrejana do sobne temperature i mešana preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do -78 °C. Dodatno je dodat LAH (2M u THF) (1.03 mL, 2.06 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je razblažena sa etrom (20 mL) i ohlađena do 0 °C. Dodata je voda (0.3 mL), a zatim 15 % vodeni rastvor NaOH (0.3 mL) i voda (0.9 mL). Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 15 min. Dodat je anhidrovani MgSO4i suspenzija je mešana tokom 15 min i zatim je filtrirana da bi se uklonile soli. Filtrat je koncentrovan pri sniženom pritisku da se dobije sirovi 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ol (832 mg, 3.53 mmol, 86% prinosa) kao viskozno ulje koje se u sledećem koraku koristi bez prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.53 - 7.48 (m, 2H), 7.42 - 7.37 (m, 2H), 1.64 (s, 3H). MS ESI m/z 236.0 (M+H)<+>

[0602] 221D: N,N-bis-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina i N-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: Smeša N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (254 mg, 0.552 mmol), 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (117 mg, 0.502 mmol), PdCl2(dtbpf) (16.4 mg, 0.0250 mmol) i K3PO4(2M vod) (0.753 mL, 1.51 mmol) u dioksanu (3 mL) je pročišćena sa N2i mešana na 80 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pri smanjenom pritisku. Ostatak je triturisan sa Et2O (20 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, rastvorena u H2O (20 mL), i zakiseljena do pH ~ 2 primenom 1N vodenog rastvora HCl. Istaložena čvrsta materija je sakupljena filtracijom, isprana sa H2O (2 x 10 mL) i osušena pod vakuumom da se dobije sirova smeša N,N-bis-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline i N-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (218 mg, 0.448 mmol, 89% prinosa), kao čvrsta supstanca koja se u sledećem koraku koristi bez prečišćavanja.

MS ESI m/z 487.1 (M+H)<+>i 386.9 (M+H)<+>

[0603] 221E: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina: U smešu N,N-bis-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline i N-Boc-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (218 mg, 0.448 mmol) u DCM (4 mL) je dodat TFA (1.04 mL, 13.4 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pri smanjenom pritisku da se dobije sirova 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, 2 TFA (213 mg, 0.414 mmol, 92% prinosa) koja se u sledećem koraku koristi bez prečišćavanja.

MS ESI m/z 287.2 (M+H)<+>

[0604] 221F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: Rastvor sirove 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline, 2 TFA (51.4 mg, 0.100 mmol), 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ola (23.6 mg, 0.100 mmol), BOP (66.3 mg, 0.150 mmol), i DIPEA (0.175 mL, 0.999 mmol) u DMF (1 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Dodatno je dodat 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ol (23.6 mg, 0.100 mmol). Reakcija je nastavljena na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je filtrirana, i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 22% B, 22-62% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (17.2 mg, 0.034 mmol, 34% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.61 -7.54 (m, 3H), 7.47 - 7.42 (m, 3H), 7.20 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.04 - 3.84 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 504.2 (M+H)<+>

[0605] 221: Enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamida: Racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid je razdvojen na pojedinačne stereoizomere primenom SFC-hiralne hromatografije pri sledećim uslovima: kolona: Chiral IC 21 x 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 75% CO2/ 25% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 60 mL/min; detektor talasna dužina: 220 nm; detalji ubrizgavanja: 1 mL, 17 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (4.9 mg, 0.010 mmol, 9% prinosa) kao prvi eluirani izomer pri hiralnom SFC razdvajanju. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.56 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.60 -7.52 (m, 3H), 7.46 - 7.40 (m, 3H), 7.19 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.02 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 4.00 - 3.84 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.61 (s, 3H).

MS ESI m/z 504.1 (M+H)<+>

Primer 222: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0606]

[0607] Enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (4.9 mg, 0.010 mmol, 9% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 221. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 8.57 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 3H), 7.47 - 7.41 (m, 3H), 7.19 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.00 - 3.84 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 504.2 (M+H)<+>

Primer 223: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluorobenzamid

[0608]

[0609] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 221, supstitucijom 3-bromo-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline za 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzojevu kiselinu u koraku 221D, da se dobije enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluorobenzamida (5.4 mg, 0.010 mmol, 10% prinosa) kao prvi eluirani izomer pri hiralnom SFC razdvajanju. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (br t, J=6.2 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.70 (t, J=8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.48 (d, J=6.4 Hz, 2H), 7.47 - 7.42 (m, 2H), 7.02 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 3.99 - 3.86 (m, 1H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 524.2 (M+H)<+>

Primer 224: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluorobenzamid

[0610]

[0611] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 222 da se dobije enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-2-fluorobenzamida (5.3 mg, 0.010 mmol, 10% prinosa) kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC razdvajanju. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.61 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.71 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.49 (d, J=6.6 Hz, 2H), 7.47 - 7.42 (m, 2H), 7.02 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 3.99 - 3.86 (m, 1H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 524.1 (M+H)<+>

Primer 225: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamid

[0612]

[0613] 225A: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamid: Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 1, supstitucijom 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ola za (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol, HCl u finalnom koraku, da se dobije 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamid (59 mg, 0.117 mmol, 47% prinosa).

[0614] 225: Racemski 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamid je razdvojen hiralnom SFC hromatografijom pri sledećim uslovima: kolona: Chiral IC 21 x 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 70% CO2/ 30% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji ubrizgavanja: 1 mL, 59 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 15-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamida (19.6 mg, 0.039 mmol, 16% prinosa) kao prvi eluirani izomer pri hiralnom SFC razdvajanju. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.54 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 7.58 (br d, J=8.5 Hz, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.26 (d, J=11.9 Hz, 1H), 7.07 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.06 (s, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.58 - 3.43 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 504.0 (M+H)<+>

Primer 226: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamid

[0615]

[0616] Enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksibutil)-4-fluoro-2-metilbenzamida (21.7 mg, 0.043 mmol, 17% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 225. Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.54 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 7.58 (br d, J=8.9 Hz, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.26 (d, J=11.9 Hz, 1H), 7.07 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.06 (s, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.59 - 3.44 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 1.62 (s, 3H).

MS ESI m/z 504.0 (M+H)<+>

Primer 227: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0617]

[0618] 227A: etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanoat: U suspenziji 1-(4-(trifluorometil)fenil)etan-1-ona (5.5 g, 29.2 mmol) i indijuma u prahu (5.03 g, 43.8 mmol) u THF (60 mL) je dodat etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (5.62 ml, 43.8 mmol) u kapima putem šprica. Suspenzija je snažno mešana na 60 °C tokom 12 h. Smeša se promenila u narandžasto-crvenobraon-sivu za 5-10 min. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, zatim ugašena sa 30 mL 1N HCl i razblažena sa EtOAc (100 mL). Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (100 ml), osušen MgSO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni eluiran sa EtOAc/heksanom. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su koncentrovane pod vakuumom da se dobije etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanoat (5.39 g, 55% prinosa) kao viskozno ulje.

[0619] 1H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.71 - 7.61 (m, 4H), 4.19 (qd, J=7.2, 1.0 Hz, 2H), 1.79 - 1.75 (m, 3H), 1.15 (t, J=7.1 Hz, 3H).

[0620] 227B: 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanamid: U rastvor etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanoata (5.84 g, 18.70 mmol) u MeOH (80 mL) na 0 °C je dodat amonijak (7 M in MeOH) (10.69 mL, 74.8 mmol). Dobijeni narandžasti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 90 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom zatim osušena pod vakuumom preko noći da se dobije sirovi 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanamid (5.23 g, 96 % prinosa) kao čvrsta supstanca koja se u sledećem koraku koristi bez prečišćavanja.

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (br s, 1H), 7.75 - 7.71 (m, 4H), 7.70 (br s, 1H), 6.36 (s, 1H), 1.69 (s, 3H).

MS ESI m/z 281.8 (M+H)-

[0621] 227C: 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-(trifluorometil)fenil)butan-2-ol: U posudu sa okruglim dnom od 500 mL napunjenu azotom dodat je rastvor 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butanamida (5.2 g, 18.36 mmol) u THF (100 mL). Smeša je ohlađena do -78 °C i dodat je LAH (2M u THF) (18.36 ml, 36.7 mmol) u kapima. Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min, zatim na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS je pokazao završenu reakciju, ali reakcija je dopunjena. Reakcija je razblažena sa etrom (100 mL) i ohlađena do 0°C. Voda (1.4 mL) je polako dodata, a zatim 15 % vodeni rastvor natrijum hidroksida (1.4 mL), voda (3 x 4mL), zatim je smeša zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 15 min. Anhidrovani magnezijum sulfat je dodat i smeša je mešana tokom 15 min, zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni na kertridžu ISCO 24 g silika gela eluiran sa 20-100% EtOAc/heksana preko 10 CV sa ELSD. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da se dobije 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-(trifluorometil)fenil)butan-2-ol (1.06 g, 3.94 mmol, 88 % prinosa) kao čvrsta supstanca.

[0622] 1H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.74 (br d, J=7.6 Hz, 2H), 7.66 - 7.62 (m, 2H), 3.12 - 3.02 (m, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 1H), 1.70 - 1.68 (m, 3H).

[0623] 227D: 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: U posudu sa ravnim dnom od 50 ml je dodat rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (400 mg, 1.716 mmol) i 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-(trifluorometil)fenil)butan-2-ola (462 mg, 1.716 mmol) u DCM (15 mL). Ovome je dodat BOP (911 mg, 2.060 mmol) i DIPEA (1.499 mL, 8.58 mmol). Dobijeni žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (40 mL), isprana sa H2O (30 mL) zatim slanim rastvorom (30 mL), osušena Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni ISCO 40 g silika gela eluiran sa 0-50% EtOAc/heksana preko 15 CV. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da se dobije 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (772 mg, 1.59 mmol, 93 % prinosa) kao čvrsta supstanca.

[0624] 1H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.74 (s, 2H), 7.67 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.47 (dd, J=8.2, 7.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.00 (br s, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.65 - 3.53 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.79 (s, 3H).

[0625] 227E: 6-metil-N-(2,2-difluoro-3-(4-trifluorometilfenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-3-(2-(bis-boc-amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)benzamid: U posudu pod pritiskom od 15 mL je dodata smeša N,N-bis-Boc-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (120 mg, 0.261 mmol), 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (126 mg, 0.261 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (12.77 mg, 0.016 mmol) i K3PO4 (2M vod) (0.391 mL, 0.782 mmol) u 1,4-dioksanu (2.5 mL). Smeša je ohlađena u kupatilu sa suvim ledom i acetonom i mešana. Smeša je podvrgnuta vakuumiranju/pročišćavanju sa N2 ciklusima tri puta. Posuda je zatvorena i smeša je mešana na 70 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL), isprana sa H2O (2x30 mL) zatim slanim rastvorom (30 mL), osušena MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni primenom Biotage sistema (ISCO 12 g silika gel kolone; 30-70% (12 CV), EtOAc/heksan). Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da se dobije 6-metil-N-(2,2-difluoro-3-(4-trifluorometilfenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-3-(2-(bis-boc-amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)benzamid (174 mg, 0.236 mmol, 90% prinosa) kao čvrsta supstanca.

[0626] 1H NMR (600 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.57 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (br d, J=8.2 Hz, 2H), 7.67 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.44 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.22 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 7.17 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.11 (br t, J=6.4 Hz, 1H), 4.16 - 4.05 (m, 1H), 3.67 - 3.56 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.49 (s, 18H).

[0627] 227: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: U rastvor 6-metil-N-(2,2-difluoro-3-(4-trifluorometilfenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-3-(2-(bis-boc-amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)benzamida (170 mg, 0.230 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) je dodat HCl (4 M u dioksanu) (0.576 mL, 2.304 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Proizvod je istaložen, reakciona smeša je postala suspenzija. LC/MS je pokazao da je reakcija nekompletna, tako da je reakciona smeša mešana na 70 °C tokom 2 h. LC/MS je pokazao da je reakcija završena. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je rastvoren u DMF i filtriran. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS primenom kolone XBridge C18 eluiran sa acetonitril: vodom sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 63-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(4-(trifluorometil)fenil)butil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (58.3 mg, 0.107 mmol, 47% prinosa) kao čvrsta supstanca.

1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (t, J=6.3 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.82 -7.78 (m, 2H), 7.77 - 7.74 (m, 2H), 7.58 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.20 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.07 - 7.04 (m, 1H), 4.02 - 3.91 (m, 1H), 3.58 - 3.45 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.67 (s, 3H).

MS ESI m/z 538.2 (M+H)<+>

Primer 228: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-fluorobutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0628]

[0629] U reakcionu bočicu od 8 mL dodati su štapić za mešanje i 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (21 mg, 0.045 mmol). Bočica je evakuisana i ponovo napunjena azotom, a zatim je uveden DCM (1.0 mL). Rastvor Deoxo-Fluor (0.017 mL, 0.090 mmol) u DCM (1.0 mL) je lagano dodat u dve porcije u smešu na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i zatim na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu, i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 24% B, 24-64% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 3-(2-amino

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-fluorobutil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (4.3 mg, 0.009 mmol, 13% prinosa).

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 - 8.57 (m, 1H), 7.61 - 7.39 (m, 7H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 7.04 - 6.98 (m, 1H), 6.08 (s, 2H), 3.11 - 3.02 (m, 1H), 2.73 (t, J=7.0 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.74 - 1.61 (m, 3H).

MS ESI m/z 470.0 (M+H)<+>

Primer 229: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil-1,1-d2)-2-fluorobenzamid

[0630]

[0631] 229A: 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-3,3-d2-1-ol: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (0.438 g, 2.00 mmol) i THF (10 mL), nakon čega je dodat u jednoj porciji kao čvrsta supstanca litijum aluminijum deuterid, 98% izotopske čistoće (0.252 g, 6.00 mmol) na -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min i zatim na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa etrom i ohlađena do 0 °C, zatim su polako uzastopno dodavani H2O (0.5 mL), 15 % vodeni rastvor natrijum hidroksida (0.5 mL), i H2O (1.5 mL). Dobijena smeša je zagrejana do sobne temperature i snažno mešana tokom 15 min. Anhidrovani magnezijum sulfat je dodat i smeša je mešana za dodatnih 15 min. Sirovi materijal je filtriran da bi se uklonile soli, dajući sirovi 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-3,3-d2-1-ol (0.346 g, 1.670 mmol, 83% prinosa), koji se u takvom obliku koristi u sledećem koraku.

MS ESI m/z 208.05 (M+H)<+>

[0632] 229: U reakcionu bočicu od 8 mL dodati su štapić za mešanje, BOP (0.097 g, 0.22 mmol), 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (0.080 g, 0.26 mmol), i 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-3,3-d2-1-ol (0.041 g, 0.20 mmol), nakon čega je dodat DMF (2.0 mL) i DIPEA (0.140 mL, 0.800 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 13% B, 13-53% B preko 26 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako izolovani racemski materijal je dalje prečišćen putem hiralnog SFC razdvajanja da se dobiju razdvojeni enantiomeri. Približno 32.8 mg uzorka je određeno u dva pika sakupljena u MeOH sa 0.1% DEA. Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral OJ, 30 x 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 75% CO2/ 25% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji ubrizgavanja: 1500 µL 32.8 mg rastvorena u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil-1,1-d2)-2-fluorobenzamida (7.4 mg, 0.015 mmol, 7% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz preparativne SFC kolone. Nije određena apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.09 (s, 1H), 8.57 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.67 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 4H), 7.16 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.00 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.95 - 4.79 (m, 1H).

MS ESI m/z 496.0 (M+H)<+>

Primer 230: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil-1,1-d2)-2-fluorobenzamid

[0633]

[0634] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil-1,1-d2)-2-fluorobenzamida (7.3 mg, 0.015 mmol, 7% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 229.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.09 (s, 1H), 8.56 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 7.73 - 7.62 (m, 1H), 7.51 - 7.38 (m, 4H), 7.16 (br t, J=8.8 Hz, 2H), 7.00 (br d, J=6.2 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.96 - 4.78 (m, 1H).

MS ESI m/z 496.0 (M+H)<+>

Primer 231: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid

[0635]

[0636] U reakcionu bočicu od 8 mL dodati su štapić za mešanje, BOP (0.097 g, 0.22 mmol), 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-3-fluoro-2-metilbenzoeva kiselina (0.115 g, 0.400 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (0.041 g, 0.20 mmol), nakon čega je dodat DMF (2.0 mL) i DIPEA (0.140 mL, 0.800 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 16% B, 16-56% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 4-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako izolovani racemski materijal je dalje prečišćen hiralnim SFC razdvajanjem da se obezbedi razdvajanje enantiomera. Približno 24.3 mg uzorka je određeno u dva pika sakupljena u MeOH sa 0.1% DEA. Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral OJ, 30 x 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 500 µL 24.3 mg rastvorena u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 15-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamida (5.9 mg, 0.012 mmol, 6% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz preparativne SFC kolone. Nije određena apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 - 8.70 (m, 1H), 8.55 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.77 - 7.64 (m, 2H), 7.54 (d, J=0.6 Hz, 1H), 7.46 (br dd, J=8.2, 5.8 Hz, 2H), 7.21 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.17 (t, J=8.9 Hz, 2H), 6.40 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.96 - 4.84 (m, 1H), 3.95 - 3.70 (m, 2H), 2.22 (s, 3H).

MS ESI m/z 474.1 (M+H)<+>

Primer 232: 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamid

[0637]

[0638] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 5-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-3-fluoro-2-metilbenzamida (6.0 mg, 0.012 mmol, 6% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 231.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.55 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.64 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.46 (br dd, J=8.2, 5.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 6.40 (d, J=5.2 Hz, 1H), 6.00 (s, 2H), 4.97 - 4.82 (m, 1H), 3.95 - 3.71 (m, 2H), 2.22 (s, 3H).

MS ESI m/z 474.0 (M+H)<+>

Primer 233: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0640] 233A: etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropionat: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionat (200 mg, 0.806 mmol) i srebro oksid (280 mg, 1.21 mmol), zatim je dodat metil jodid (76 µL, 1.2 mmol) i DMF (1.6 mL). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O i slanim rastvorom. Sirovi materijal je osušen na celitu i filtriran, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirovi etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropionat koji je direktno korišćen u sledećem koraku daljeg prečišćavanja (pretpostavljeno 100% prinosa).

MS ESI m/z 233.1 (M-Et)-[0641] 233B: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropanamid: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropionat (0.210 g, 0.800 mmol) i MeOH (4.0 mL), zatim je dodat 7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.457 mL, 3.20 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 d. Smeša sirovog materijala je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirovi 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropanamid (0.187 g, 0.800 mmol, kvantitativno) koji se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0642] 233C: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropan-1-amine: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, sirovi 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropanamid (0.187 g, 0.800 mmol), i THF (4.00 mL) zatim je sporo dodavan litijum aluminijum hidrid, 2M u THF (0.800 mL, 1.60 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa etrom i ohlađena do 0°C nakon čega su redom lagano dodavani H2O (0.05 mL), 15 % vodeni rastvor natrijum hidroksida (0.05 mL), i H2O (0.15 mL). Dobijena smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana snažno tokom 15 min. Anhidrovani magnezijum sulfat je dodat i smeša je mešana za dodatnih 15 min. Sirovi materijal je filtriran da se uklone soli, dajući 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropan-1-amin (0.150 g, 0.684 mmol, 86% prinosa), koji se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 220.27 (M+H)<+>

[0643] 233: U reakcionu bočicu od 8 mL dodati su štapić za mešanje, 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, HCl (32.3 mg, 0.100 mmol), 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropan-1-amin (32.9 mg, 0.150 mmol) i BOP (61.9 mg, 0.140 mmol), zatim je dodat DMF (1.0 mL) i DIPEA (105 µL, 0.600 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 20% B, 20-60% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako izolovani racemski materijal je dalje prečišćen putem hiralnog SFC razdvajanja da se dobiju razdvojeni enantiomeri. Uslovi preparativne hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral OJ, 30 x 250 mm.

5 mikrona; mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektovanja: 2000 µL 15.3 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je izolovan enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (5.0 mg, 0.010 mmol, 10% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz hiralne SFC kolone.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.55 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 3H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.99 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.62 (br dd, J=16.8, 5.4 Hz, 1H), 3.99 - 3.72 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.26 (s, 3H). MS ESI m/z 488.1 (M+H)<+>

Primer 234: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0644]

[0645] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-metoksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (5.1 mg, 0.011 mmol, 10% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 233.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.56 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.55 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.34 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 3H), 6.99 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 6.02 (s, 2H), 4.63 (br dd, J=17.2, 5.7 Hz, 1H), 3.99 - 3.72 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.26 (s, 3H). MS ESI m/z 488.3 (M+H)<+>

Primer 235: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-(metoksi-d3)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0646]

[0647] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 233, supstituisanjem CD3I za MeI u prvom koraku. Tako je dobijen enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-(metoksi-d3)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (5.5 mg, 0.011 mmol, 11% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja koje izvedeno u prvom koraku.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=6.3 Hz, 1H), 8.56 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.55 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 3H), 6.99 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 2H), 4.63 (br dd, J=17.1, 5.8 Hz, 1H), 3.99 - 3.73 (m, 2H), 2.27 (s, 3H).

MS ESI m/z 491.4 (M+H)<+>

Primer 236: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-(metoksi-d3)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0648]

[0649] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 233, supstituisanjem CD3I za MeI u prvom koraku. Tako je dobijen enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-(metoksi-d3)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (5.5 mg, 0.011 mmol, 11% prinosa) kao drugi eluirani izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja koje izvedeno u finalnom koraku.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.96 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.55 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.54 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.46 - 7.33 (m, 3H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.01 (s, 2H), 4.61 (br dd, J=16.9, 5.3 Hz, 1H), 3.96 - 3.73 (m, 2H), 2.26 (s, 3H).

MS ESI m/z 491.4 (M+H)<+>

Primer 237: Dijastereomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamida

[0650]

[0651] 237A: 1-(4-fluorofenil)etan-1-on-2,2,2-d3: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, 1-(4-fluorofenil)etan-1-on (2.0 g, 15 mmol), natrijum hidroksid (0.046 g, 1.2 mmol) i D2O (10 mL). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu 5 min i mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Smeša je ekstrahovana sa dietil etrom i organska faza je koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je ponovo podvrgnut istom stanju (NaOH, D2O) za sledećih 24 h. Smeša je zatim ekstrahovana sa dietil etrom, osušena Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Kvantitativni prinos je pretpostavljen.

[0652] 237B: etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat-4,4,4-d3: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, 1-(4-fluorofenil)etan-1-on-2,2,2-d3(0.600 g, 4.25 mmol), gvožđe (0.712 g, 12.8 mmol), jod (0.216 g, 0.850 mmol) i THF (8.50 mL), zatim je dodat etil 2-bromo-2-fluoroacetat (2.36 g, 12.8 mmol). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min i zatim mešana na 60 °C tokom 12 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, i dodat je celit. Smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni putem suvog punjenja na celitu (eluent = EtOAc u heksanu, gradijent 0% do 20%; 20 g silike) da se dobije etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat-4,4,4-d3(480 mg, 1.94 mmol, 46% prinosa) kao smeša dijastereomera.

[0653]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.56 - 7.40 (m, 2H), 7.15 - 6.94 (m, 2H), 5.12 -4.75 (m, 1H), 4.25 - 4.07 (m, 2H), 1.21 - 1.06 (m, 3H).

[0654] 237C: 2-fluoro-3-(metil-d3)-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat-4,4,4-d3(480 mg, 1.94 mmol) i MeOH (3.9 mL), zatim je dodato 7 N amonijaka u MeOH (1.66 mL, 11.7 mmol). Dobijena smeša je mešana na 40 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, i sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja kao smeša dijastereomera.

MS ESI m/z 219.4 (M+H)<+>

[0655] 237D: 4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-1,1,1-d3-2-ol: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (423 mg, 1.94 mmol) i THF (9.7 mL), zatim je dodat BH3-DMS 2.0M u THF (2.9 mL, 5.8 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 3 h. Reakcija je zatim ugašena laganim dodavanjem metanola. Dobijena smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirovi 4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-1,1,1-d3-2-ol (245 mg, 1.20 mmol, 62% prinosa). Sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja kao smeša dijastereomera.

MS ESI m/z 205.4 (M+H)<+>

[0656] 237: U reakcionu bočicu od 8 mL dodati su štapić za mešanje, 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina, HCl (172 mg, 0.3 mmol, 60% čistoće), 4-amino-3-fluoro-2-(4-fluorofenil)butan-1,1,1-d3-2-ol (80 mg, 0.390 mmol) kao sirova smeša dijastereomera, i BOP (186 mg, 0.420 mmol), zatim je dodat DMF (1.5 mL) i DIPEA (314 µL, 1.80 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 14% B, 14-54% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Približno 57 mg tako dobijenog materijala je dalje podvrgnuto hiralnoj SFC hromatografiji (Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral SB, 30 x 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 400 µL injekcija 57 mg rastvoreno u 2 mL MeOH). Sakupljena su tri odvojena pika. Prvi pik koji je eluiran sastojao se od nerazdvojene mešavine dijastereomera 1 i 2, nakon čega je usledilo eluiranje pika 2 (dijastereomer 3) i finalnog pika 3 (dijastereomer 4). Ovako dobijena nerazdvojena mešavina dijastereomera 1 i 2 dalje je razdvojena u pojedinačne izomere putem drugog preparativnog hiralnog SFC razdvajanja (Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IH, 30 x 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 80% CO2/ 20% MeOH; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: izolat 1 iz SFC koraka 1 rastvoren u 2 mL MeOH). Tako je dobijen dijastereomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil-4,4,4-d3)benzamida (9.4 mg, 0.019 mmol, 6% prinosa). kao prvi eluirani dijastereomer iz drugog hiralnog preparativnog SFC razdvajanja kao što je gore opisano.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (br t, J=5.3 Hz, 1H), 8.63 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.5 Hz, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 4H), 7.18 (t, J=8.9 Hz, 2H), 7.03 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.73 (s, 1H), 4.72 - 4.46 (m, 1H), 3.82 - 3.63 (m, 1H), 3.06 - 2.86 (m, 1H). MS ESI m/z 493.1 (M+H)<+>

Tabela 15: Primeri 238, 239, 240 su dobijeni SFC razdvajanjem koje je opisano u finalnom koraku pripreme za Primer 237.

Primer 241: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid

[0657]

[0658] 241A: etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat: U bocu pod pritiskom od 15 mL dodati su štapić za mešanje, 1-(4-fluorofenil)etan-1-on (138 mg, 1.00 mmol), gvožđe (168 mg, 3.00 mmol), jod (50.8 g, 0.200 mmol) i THF (2 mL), zatim je dodat etil 2-bromo-2-fluoroacetat (609 mg, 3.00 mmol). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min i zatim mešana na 60 °C tokom 20 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, i dodat je celit. Smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni putem suvog punjenja na celitu (eluent = EtOAc u heksanu, gradijent 0% do 60%; 24 g silike) da se dobije etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat (166 mg, 63% prinosa) kao ulje.

[0659]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.51 (dd, J=8.5, 5.5 Hz, 2H), 7.06 (t, J=8.7 Hz, 2H), 4.19 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.74 (t, J=1.5 Hz, 3H), 1.17 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0660] 241B: 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid: U balon sa okruglim dnom od 50 mL dodati su štapić za mešanje, etil 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanoat (166 mg, 0.633 mmol) i MeOH (3 mL), zatim je dodato 7 N amonijaka u MeOH (0.362 mL, 2.53 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, i sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Kvantitativni prinos je pretpostavljen.

MS ESI m/z 231.8 (M-H)-[0661] 241C: 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: U bocu pod pritiskom od 15 mL dodati su štapić za mešanje, 2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (148 mg, 0.635 mmol) i THF (3 mL), zatim je dodat 2.0M BH3-DMS u THF (1.59 mL, 3.17 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 24 h. Reakcija je zatim ugašena laganim dodavanjem metanola. Dobijena smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirovi 4-amino-3,3-difluoro-2-(4fluorofenil)butan-2-ol, 2 HCl (104 mg, 56.1 % prinosa). Sirovi materijal je direktno korišćen u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 219.9 (M+H)<+>

[0662] 241D: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzoat: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, metil 3-(2-di-((tercbutoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoat (1.00 g, 1.92 mmol), 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino) ferocen paladijum hlorid (0.250 g, 0.384 mmol) i (metild3)boronska kiselina (0.603 g, 9.60 mmol), zatim je dodat dioksan (9.60 mL) i 2M vodeni rastvor trikalijum fosfata (5.76 mL, 11.5 mmol). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min i smeša je mešana na 130 °C tokom 1 d. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (elucioni gradijent 0% do 8% MeOH u DCM; 12 g silike), dajući metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzoat (447 mg, 1.47 mmol, 77% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.68 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.28 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.98 (m, 1H), 6.05 (s, 2H), 3.91 (s, 3H).

MS ESI m/z 304.3 (M+H)<+>

[0663] 241E: Hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metild3)benzojeve kiseline: U reakcionu bočicu od 100 mL dodati su štapić za mešanje, metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzoat (447 mg, 1.47 mmol) i MeOH (7.4 mL), zatim je dodat natrijum hidroksid, 15% vodeni rastvor (786 mg, 2.95 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu i zatim zakiseljena 1N vodenim rastvorom HCl (2.95 mL, 2.95 mmol). Dobijena smeša je koncentrovana u vakuumu do 1 mL i filtrirana da se dobije braon čvrsti rastvor. Sirovi materijal se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Kvantitativni prinos je pretpostavljen.

MS ESI m/z 290.1 (M+H)<+>

[0664] 241: U reakcionu bočicu od 4 mL dodati su štapić za mešanje, hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzojeve kiseline (50 mg, 0.15 mmol), 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol. 2 HCl so (76 mg, 0.35 mmol) kao sirovi materijal, i BOP (92 mg, 0.21 mmol), zatim je dodat DMF (0.85 mL) i DIPEA (91 µl, 0.52 mmol). Dobijena smeša je mešana na RT tokom 2 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 14% B, 14-54% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Materijal tako dobijen je dalje razdvojen na pojedinačne stereoizomere putem hiralne SFC hromatografije. Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 70% CO2/ 30% MeOH sa 0.1% DEA; uslovi protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 500 µL 38.1 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamida (10.3 mg, 0.021 mmol, 13% prinosa) kao prvi izomer eluiran tokom hiralnog SFC prečišćavanja.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.52 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.59 - 7.46 (m, 3H), 7.41 (s, 1H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.98 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 5.98 (s, 2H), 3.98 - 3.37 (m, 2H), 1.58 (s, 3H).

MS ESI m/z 491.3 (M+H)<+>

Primer 242: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamid

[0665]

[0666] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)-2-fluoro-6-(metil-d3)benzamida (10.4 mg, 0.021 mmol, 11% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 241.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (br t, J=5.9 Hz, 1H), 8.52 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.46 (m, 3H), 7.41 (s, 1H), 7.21 - 7.09 (m, 3H), 6.98 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 5.98 (s, 2H), 3.99 - 3.36 (m, 2H), 1.58 (s, 3H).

MS ESI m/z 491.3 (M+H)<+>

Tabela 16: Primeri 243 i 244 su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 241 i 242, supstutucijom 1-(4-fluorofenil)etan-1-on-2,2,2-d3umesto 1-(4-fluorofenil)etan-1-ona u prvom koraku.

Primer 245: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etil)-2-fluorobenzamid

[0667]

[0668] 245A: etil 2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetat: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, KOH (0.197 g, 3.52 mmol) u H2O (2.64 mL), u dioksan (4.40 mL). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min, zatim je dodat (1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimer (0.087 g, 0.176 mmol), etil 2-(oksetan-3-iliden)acetat (0.50 g, 3.52 mmol) i (4-fluorofenil)boronska kiselina (0.541 g, 3.87 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (EtOAc u heksanu, elucioni gradijent 0-20%; 20 g silike), dajući etil 2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetat (0.705 g, 2.96 mmol, 84% prinosa).

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.22 - 7.12 (m, 2H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 5.00 (d, J=6.1 Hz, 2H), 4.88 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.03 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.13 (s, 2H), 1.15 (td, J=7.1, 0.7 Hz, 3H).

MS ESI m/z 239.3 (M+H)<+>

[0669] 245B: 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetamid: U reakcionu bočicu od 4 mL dodati su štapić za mešanje, KHMDS, 1.0M u THF (2.52 mL, 2.52 mmol) i THF (16.8 mL), zatim je lagano dodat etil 2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetat (0.200 g, 0.839 mmol) na -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 10 min, zatim je zagrevana do -20 °C tokom 20 min, i zatim je dodat N-fluorobenzensulfonimid (0.794 g, 2.52 mmol) u jednoj porciji. Dobijena smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 3 h. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog NH4Cl i ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je osušena anhidrovanim natrijum sulfatom, filtrirana kroz celit, i koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je ponovo ratvoren u MeOH (1.7 mL) u reakcionoj bočici 40 mL, zatim je dodato 7M amonijaka u metanolu (480 µL, 3.36 mmol). Dobijena smeša je mešana na 40 °C preko noći. Smeša je koncentrovana u vakuumu, dajući sirovi 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetamid (142 mg, 0.579 mmol, 69% prinosa). Sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 244.0 (M-H)-[0670] 245C: 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etan-1-amin: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, sirovi 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)acetamid (140 mg, 0.571 mmol), i THF (2.9 mL), zatim je lagano dodat BH3-DMS, 2.0M u THF (856 µL, 1.71 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 3 h. Reakcija je ugašena dodavanjem MeOH i vodenog rastvora HCl (1N) i koncentrovana u vakuumu, dajući sirovi 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etan-1-amin (130 mg, 0.562 mmol, 98% prinosa) pomešan sa nečistoćama. Sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS ESI m/z 232.3 (M+H)<+>

[0671] 245: U reakcionu bočicu od 4 mL dodati su štapić za mešanje, hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (34.3 mg, 0.0600 mmol), 2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etan-1-amin (20.8 mg, 0.090 mmol) i BOP (34.5 mg, 0.078 mmol), zatim je dodat DMF (600 µL) i DIPEA (62.9 µL, 0.360 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pod sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 18% B, 18-58% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tada je izolovan 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-i)etil)-2-fluorobenzamid (4.5 mg, 0.009 mmol, 14% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.21 - 9.12 (m, 1H), 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.74 (br t, J=8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 7.04 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.07 (d, J=6.9 Hz, 2H), 4.90 (br d, J=6.9 Hz, 2H), 3.65 (br d, J=5.8 Hz, 2H).

MS ESI m/z 520.1 (M+H)<+>

Primer 246: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0672]

[0673] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 245, gde je 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina, HCl supstituisan za 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline, HCl u finalnom koraku. Tako je dobijen 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-2-(3-(4-fluorofenil)oksetan-3-il)etil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (7.3 mg, 0.015 mmol, 24 %prinosa).

MS ESI m/z 500.2 (M+H)<+>

Tabela 17: Jedinjenja u Tabeli 17 su pripremljena na sličan način kao Primeri 63 i 64.3-amino-1-ciklopentilpropan-1-ol se koristi umesto TFA soli 3-amino-1-(3-fluorofenil)propan-1-ola u prvom koraku.

Primer 249: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etil)benzamid

[0674]

[0675] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za Primer 285, gde je 2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etan-1-amin supstituisan za (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin u finalnom koraku. Tako je dobijen 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)etil)benzamid (9.5 mg, 0.021 mmol, 57% prinosa).

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (t, J=5.3 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.81 -7.72 (m, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.39 (dd, J=8.3, 5.7 Hz, 2H), 7.31 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.13 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.02 (br d, J=6.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 3.22 - 3.13 (m, 1H), 1.79 (br t, J=7.5 Hz, 2H), 0.82 - 0.71 (m, 4H).

MS ESI m/z 452.3 (M+H)<+>

Primer 250: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2,6-difluorobenzamid

[0676]

[0677] U reakcionu bočicu Chemglass od 8 mL dodati su štapić za mešanje, BOP (40.6 mg, 0.0920 mmol), hlorovodonična so 3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1,3,3-d3-1-ola (20.7 mg, 0.0920 mmol) i hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzojeve kiseline (20 mg, 0.061 mmol). Bočica je evakuisana i bazifikovana sa azotom, zatim je dodat DMF (612 µL) i DIPEA (107 µL, 0.612 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 13% B, 13-48% B preko 25 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako izolovani racemski materijal je dalje prečišćen putem hiralnog SFC razdvajanja da se dobiju razdvojeni enantiomeri. Približno 28.1 mg uzorka je razdvojeno u dva pika sakupljena u IPA sa 0.1% DEA. Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral OD, 30 x 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% IPA tež /0.1% DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 3000 µL 28.1 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2,6-difluorobenzamida (2.1 mg, 0.0045 mmol, 7% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz preparativne SFC kolone. Nije određena apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (s, 1H), 8.59 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 7.80 - 7.68 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 4H), 7.29 (br t, J=8.5 Hz, 1H), 7.03 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 1.78 (s, 2H).

MS ESI m/z 461.3 (M+H)<+>

Primer 251: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2,6-difluorobenzamid

[0678]

[0679] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil-1,1,3-d3)-2,6-difluorobenzamida (2.0 mg, 0.0043 mmol, 7% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 250.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.81 (s, 1H), 8.60 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 7.74 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 4H), 7.29 (br t, J=8.7 Hz, 1H), 7.03 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 1.78 (s, 2H).

MS ESI m/z 461.0 (M+H)<+>

Tabela 18: Primeri 252 i 253 su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 241 i 242, supstituisanjem 4-amino-2-(4-hlorofenil)-3,3-difluorobutan-2-ola umesto 4-amino-3,3-difluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ola u finalnom koraku.

Primer 254: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propil)-2-fluorobenzamid

[0680]

[0681] 254A: etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propionat: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, cink u prahu (0.560 g, 8.57 mmol), THF (5.71 mL) i 6-(trifluorometil)piridin-2-karboksaldehid (0.50 g, 2.86 mmol). Smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 min, zatim je dodat etil bromodifluoroacetat (0.439 mL, 3.43 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 16 h. Smeša je zatim koncentrovana u vakuumu, ponovo rastvorena u EtOAc i isprana sa vodenim 1N HCl. Organska faza je osušena sa MgSO4, filtrirana, i koncentrovana u vakuumu, dajući etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propionat (0.557 g, 1.86 mmol, 65% prinosa). Sirovi materijal je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0682]<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.98 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.80 - 7.63 (m, 2H), 5.34 - 5.21 (m, 1H), 4.71 (dd, J=7.3, 1.6 Hz, 1H), 4.36 (qd, J=7.1, 2.6 Hz, 2H), 1.44 - 1.29 (m, 3H).

[0683] 254B: 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propanamid: U bocu sa okruglim dnom od 50 mL dodati su štapić za mešanje, etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propionat (0.300 g, 1.00 mmol) i MeOH (5.0 mL), zatim je dodato 7N amonijaka u MeOH (0.573 mL, 4.01 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, i sirovi materijal se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Pretpostavljen je kvantitativni prinos.

MS ESI m/z 268.8 (M-H)-[0684] 254C: 3-amino-2,2-difluoro-1-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propan-1-ol: U reakcionu bočicu od 20 mL dodati su štapić za mešanje, 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propanamid (270 mg, 1.00 mmol) i THF (5.0 mL), zatim je dodat rastvor litijum aluminijum hidrida, 2.0 M u THF (1.50 mL, 3.00 mmol) na -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h i zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa etrom i ohlađena do 0 °C, zatim su lagano redom dodati H2O (0.1 mL), 15 % vodeni rastvor natrijum hidroksida (0.1 mL), i H2O (0.3 mL). Dobijena smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana snažno tokom 15 min. Anhidrovani magnezijum sulfat je dodat i smeša je mešana za dodatnih 15 min. Sirovi materijal je filtriran da se uklone soli, dajući sirovi 3-amino-2,2-difluoro-1-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propan-1-ol (204 mg, 0.796 mmol, 80% prinosa), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 256.8 (M+H)<+>

[0685] 254: U reakcionu bočicu od 4 mL dodati su štapić za mešanje, hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (34.3 mg, 0.100 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propan-1-ol (0.031 g, 0.12 mmol) i BOP (0.053 g, 0.120 mmol), zatim je dodat DMF (1.0 mL) i DIPEA (0.070 mL, 0.40 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pod sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 13% B, 13-53% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Ovako dobijeni materijal je dalje razdvojen na pojedinačne stereoizomere putem hiralne SFC hromatografije. Približno 14.5 mg uzorka je razdvojeno i sakupljeno u MeOH sa 0.1% DEA. Hiralna čistoća izolata je određena primenom analitičkih hromatografskih uslova: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% MeOH sa 0.1% DEA; uslovi protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 2000 µL 14.5 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Tako je dobijen enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(6-(trifluorometil)piridin-2-il)propil)-2-fluorobenzamida (4.2 mg, 0.008 mmol, 8% prinosa) kao prvi izomer koji je eluiran pri preparativnom hiralnom SFC razdvajanju.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.22 - 8.10 (m, 1H), 7.90 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.06 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.14 - 4.96 (m, 1H), 4.17 - 3.85 (m, 2H)

MS ESI m/z 545.3 (M+H)<+>

Tabela 19: Jedinjenja u Tabeli 19 su pripremljeni na sličan način kao Primer 254.255 je pripremljen kao drugi eluirani izomer pri preparativnom hiralnom SFC razdvajanju koje je opisano za 254.

Primer 262: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0686]

[0687] 262A: 3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid: Ovo jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao 254B.

[0688] 262B: Hlorovodonična so 3-amino-1-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoropropan-1-ola: U reakcionu bočicu od 40 mL dodati su štapić za mešanje, 3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3hidroksipropanamid (0.521 g, 2.2 mmol), zatim je dodat THF (11.00 ml) i 2.0 M rastvor kompleksa boran dimetil sulfid u THF (3.30 ml, 6.60 mmol) na -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 5 min i zatim je ostavljena da se zagreva do sobne temerature i zatim mešana na 80 °C tokom 3 h. Reakcija je ugašena dodavanjem MeOH (1 mL), i smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je rastvoren u 1N vodenom rastvoru HCl (5 mL) i mešan na 60 °C tokom 1 h. Dobijena smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Pretpostavljen je kvantitativni prinos.

MS ESI m/z 222.8 (M+H)<+>

[0689] 262: U reakcionu bočicu Chemglass od 8 mL dodati su štapić za mešanje, hlorovodonična so 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (34.3 mg, 0.100 mmol), hlorovodonična so 3-amino-1-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoropropan-1-ola (66.8 mg, 0.258 mmol) i BOP (61.9 mg, 0.140 mmol), zatim su dodati DMF (1.0 mL) i DIPEA (69.9 µL, 0.400 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperturi tokom 1 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 10% B, 10-50% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako dobijeni racemski materijal je dalje prečišćen putem hiralnog SFC razdvajanja da se dobiju razdvojeni enantiomeri. Približno 25.7 mg uzorka je podeljeno na dva pika sakupljeno u MeOH sa 0.1% DEA. Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 60% CO2/ 40% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 600 µL 25.7 mg rastvoreno u 3 mL DMSO. Tako je dobijen enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (8.5 mg, 0.017 mmol, 17% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz praparativne SFC kolone. Nije određena apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.55 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.87 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.66 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 3H), 7.01 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.87 (br dd, J=15.5, 6.6 Hz, 1H), 4.02 - 3.64 (m, 2H). MS ESI m/z 511.0 (M+H)<+>

Primer 263: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid

[0690]

[0691] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3-(6-hloropiridin-2-il)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (8.3 mg, 0.016 mmol, 16% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 262.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.55 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.87 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.66 (t, J=8.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 3H), 7.01 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.87 (br dd, J=14.9, 6.4 Hz, 1H), 4.03 - 3.63 (m, 2H). MS ESI m/z 511.2 (M+H)<+>

Primer 264: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid

[0692]

[0693] 264A: etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropionat: U zatvorenu epruvetu od 40 mL dodati su 3,4-dihlorobenzaldehid (1.00 g, 5.71 mmol), THF (15 mL) i cink (0.478 g, 7.31 mmol). Smeša je zagrevana na 85 °C tokom 30 min i zatim je dodat u porcijama etil bromodifluoroacetat (1.28 mL, 9.75 mmol) tokom 10 min. Reakciona smeša je zagrevana na 85 °C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je filtrirana u vakuumu kroz celit jastučić. Filtrat je zakiseljen dodavanjem 1N vodenog rastvora HCl u kapima uz mešanje. Zakiseljeni filtrat je razblažen sa EtOAc (30 mL). Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (20 mL), osušen sa Na2SO4, koncentrovan, i osušen do narandžastog ulja. Ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji primenom 24 g silika kolone elucionog gradijenta sa 0-40% EtOAc u heksanu. Čiste frakcije su koncentrovana da se dobije etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropionat (1.3 g, 4.4 mmol, 76% prinosa) kao beličasta čvrsta supstanca.

[0694]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.21-5.14 (m, 1H), 4.45-4.32 (m, 2H), 2.80 (d, J=5.1 Hz, 1H), 1.43-1.21 (m, 3H).

[0695] 264B: terc-butil(3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat: U rastvor etil 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropionata (1.20 g, 4.01 mmol) u MeOH (6 mL) dodat je amonijak (7M u MeOH, 6 mL, 42 mmol). Dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Rastvarač je uparen da bi se dobio sirovi materijal 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid. U bocu sa okruglim dnom od 50 mL je dodat 3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropanamid (600 mg, 2.22 mmol) i THF (6 mL). Rastvor kompleksa boran dimetil sulfida (2.0 M in THF, 4.44 mL, 8.89 mmol) je dodat u porcijama na sobnoj temperaturi preko 5 min. Reakcija je mešana na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i ugašena sporim dodavanjem u kapima metanola (5 ml). Smeša je mešana tokom 30 min i rastvarač je uklonjen u vakuumu da bi se dobilo bistro bezbojno gusto ulje. Uljani ostatak je rastvoren u 1M vodenom rastvoru HCl (10 mL) i rezultat je zagrevana na 60 °C tokom 1 h. Mutna smeša je postala bistra do kraja sata. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirovi materijal 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol kao bela čvrsta supstanca. Sirovi materijal 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ol je zatim mešan sa THF (10 mL) i trietilaminom (0.97 mL, 6.7 mmol), zatim je dodat di-terc-butildikarbonat (0.61 mL, 2.7 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je zatim uklonjen u vakuumu da se dobije gusto ulje. Ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji primenom 24 g silika kolone elucionog gradijnta sa 0-20% EtOAc u heksanu. Proizvodne frakcije su koncentrovane da se dobije terc-butil (3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat (600 mg, 1.68 mmol, 76% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

MS ESI m/z 300.0 (M-55)<+>

[0696] 264: terc-butil (3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamat (35 mg, 0.098 mmol) je rastvoren u DCM (1 mL) i TFA (0.2 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je uparen da daje sirovu trifluorsirćetnu so 3-amino-1-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoropropan-1-ola. Ostatak je pomešan sa 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojevom kiselinom (30 mg, 0.098 mmol), DIPEA (0.068 mL, 0.391 mmol) i DMF (1 mL). BOP (47.6 mg, 0.108 mmol) je sledeći dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 27% B, 27-67% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije racemski 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid (44.7 mg, 0.082 mmol, 84% prinosa).

MS ESI m/z 544.2 (M+H)<+>

[0697] Racemski 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid je dalje razdvojen u dva pojedinačna stereoizomera putem hiralne SFC hromatografije pri sledećim uslovima: kolona: Chiral OJ 30 x 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 75% CO2/ 25% IPA tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 1.0 mL injekcije od 44.7 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani pik su koncentrovane da se dobije enantiomer 1 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamida (9.1 mg, 0.017 mmol, 17% prinosa).

MS ESI m/z 544.2 (M+H)<+>

Primer 265: 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamid

[0698]

[0699] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-{2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il}-6-hloro-N-[3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil]-2-fluorobenzamida (8.7 mg, 0.016mmol, 16% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 264.

MS ESI m/z 544.2 (M+H)<+>

Primer 266: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamid

[0700]

[0701] 266A: metil 3-bromo-6-etil-2-fluorobenzoat: U boci od 50 mL pomešani su 3-bromo-6-etil-2-fluorobenzoeva kiselina (1.90 g, 7.69 mmol), kalijum karbonat (2.66 g, 19.2 mmol), i DMF (20 mL). U mešanu suspenziju je dodat jodometan (0.721 mL, 11.5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Smeša je zatim razblažena sa EtOAc (150 mL), vodom (100 mL), i slanim rastvorom (25 mL) i dobro promućkana. Organski sloj je sakupljen, osušen anhidrovanim MgSO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu do bezbojnog ulja. Ostatak je podvrgnut fleš hromtografiji primenjujući 24 g silika kolonu elucioni gradijent sa 0-20% EtOAc u heksanu. Prečišćene frakcije su koncentrovana da se dobije metil 3-bromo-6-etil-2-fluorobenzoat (1.8 g, 6.55 mmol, 85% prinosa) kao bezbojno ulje.

[0702]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.54 (dd, J=8.2, 7.0 Hz, 1H), 6.98 - 6.93 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.72 - 2.63 (m, 2H), 1.23 (t, J=7.6 Hz, 3H).

[0703] 266B: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: U bočici pod pritiskom od 40 mL koja je opremljena sa magnetnom mešalicom pomešani su metil 3-bromo-6-etil-2-fluorobenzoat (800 mg, 3.06 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1.01 g, 3.98 mmol), kompleks [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II) sa dihlorometanom (0.125 g, 0.153 mmol), u dioksanu (15.3 mL), i kalijum acetat (0.601 g, 6.13 mmol). Bočica je evakuisana i bazifikovana sa azotom 3 puta, zatim zagrevana do 110 °C pod atmosferom azota. Smeša je zagrevana tokom 4 h. Dobijena smeša je zatim napunjena sa 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-aminom (0.653 g, 3.06 mmol) i 3 M vodenim rastvorom tribaznog kalijum fosfata (2.04 mL, 6.13 mmol). Bočica je evakuisana i bazifikovana sa azotom 3 puta i zatim zagrevana do 90 °C tokom 1 h. Sirova reakciona smeša je podvrgnuta fleš hromatografiji primenom 40 g silika kolone elucionog gradijenta sa 50-100% EtOAc u heksanu. Obogaćene frakcije su koncentrovana da se dobiju sirove čvrste supstance. Sirovi proizvod je triturisan sa etil acetatom (15 mL) da se dobije metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat (0.600 g, 1.91 mmol, 62% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (499 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.73 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.04 (dt, J=7.0, 1.7 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.72 -2.63 (m, 2H), 1.19 (t, J=7.5 Hz, 3H).

MS ESI m/z 315.1 (M+H)+

[0704] 266C: Natrijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat: Bočica od 8 mL opremljena štapićem za mešanje je napunjena sa metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoatom (0.200 g, 0.636 mmol), THF/MeOH (4:1, 4 mL), i natrijum hidroksidom, 10M vodenim rastvorom (0.127 mL, 1.27 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 16 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Sirovi materijal ostatak natrijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoata se takav koristi direktno u sledećim koracima. Pretpostavljen je kvantitativni prinos.

MS ESI m/z 301.3 (M+H)+

[0705] 266D: terc-butil (2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)karbamat: Intermedijer terc-butil (2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)karbamat (150 mg, 0.490 mmol, 6% prinosa u 4 koraka) je dobijen sličnom procedurom što što je opisana za pripremu terc-butil(3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamata (Intermedijer 264B), gde je 5-fluoropikolinaldehid supstituisan umesto 3,4-dihlorobenzaldehida u prvom koraku.

MS ESI m/z 307.3 (M+H)+

[0706] 266: Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao što je opisano za poslednji korak u pripremi Primera 264, gde se natrijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-etil-2-fluorobenzoat koristi umesto 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline, i gde se terc-butil (2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)karbamat koristi umesto terc-butil(3-(3,4-dihlorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil)karbamata. Naslovno jedinjenje enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(5-fluoropiridin-2-il)-3-hidroksipropil)-6-etil-2-fluorobenzamida (1.9 mg, 0.0038 mmol, 6% prinosa) je prvi izomer koji se eluira pri hiralnom SFC prečišćavanju.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.61 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.81 (td, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 (t, J=6.9 Hz, 1H), 7.63 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.27 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.06 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J=5.8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.07 - 4.91 (m, 1H), 4.06 - 3.86 (m, 2H), 3.46 (br s, 1H), 2.64 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.19 (t, J=7.6 Hz, 3H).

MS ESI m/z 489.1 (M+H)+

Tabela 20: Jedinjenja u Tabeli 20 su pripremljeni na sličan način kao Primeri 264 i 265. U slučajevima nedefinisane sterohemije, jedinjenja su izolovana kao racemske ili dijastereomerne smeše osim ako drugačije nije naznačeno.

Primer 273: metil 4-(3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzamido)propil)benzoat

[0707]

[0708] U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (39.7 mg, 0.129 mmol) u DMF (1 mL) su dodati metil 4-(3-aminopropil)benzoat (25.0 mg, 0.129 mmol), BOP (68.7 mg, 0.155 mmol) i Hunigova baza (0.090 mL, 0.517 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc, i rastvarač je koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 15% B, 15-55% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min da se dobije metil 4(3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzamido)propil)benzoat (14 mg, 0.030 mmol, 23% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 (br t, J=5.0 Hz, 1H), 8.58 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.96 -7.79 (m, J=7.9 Hz, 2H), 7.69 (br t, J=8.5 Hz, 1H), 7.59 - 7.44 (m, 2H), 7.43 - 7.29 (m, J=7.9 Hz, 2H), 7.08 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.82 - 3.62 (m, 2H), 3.28 (q, J=6.1 Hz, 2H), 2.73 (br t, J=7.5 Hz, 2H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.39 (s, 1H).

MS ESI m/z 482.11 (M+H)<+>.

Primer 274: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(2,2,4,4-tetrafluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid

[0709]

[0710] 274A: 2,2,4,4-tetrafluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid: U suvi balon od 100 mL u atmosferi azota dodat je cink (122 mg, 1.87 mmol) i anhidrovani THF (5 mL). Dobijena suspenzija je zagrevana do refluksa. U refluksovanu suspenziju dodavan je etil 2-bromo-2,2-difluoroacetat (221 µL, 1.72 mmol) tokom 2-3 min. Nakon 4 min, dodat je 2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)etan-1-on (250 mg, 1.44 mmol) u jednoj porciji i reakcija je zagrevana na refluksu tokom 4 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je sakupljen i koncentrovan u vakuumu do sirovog ulja koje je rastvoreno u MeOH (4 mL) i tretirano sa amonijakom, 7M u MeOH (2.01 mL, 14.1 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije 2,2,4,4-tetrafluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamid (250 mg, 65% prinosa u 2 koraka) koji se tako dalje koristi u sledećem koraku.

MS ESI m/z 270.2 (M+H)<+>.

[0711] 274B: 4-amino-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol: Rastvor 2,2,4,4-tetrafluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutanamida (250 mg, 0.929 mmol) u THF (3 mL) je tretiran sa slanim rastvorom, komplekom dimetil sulfida 2M u THF (1.86 mL, 3.72 mmol) i dobijena smeša je zagrevana do 60 °C i mešana tokom 2 h. Smeša je ostavljena da dođe do sobne temperature i tretirana je sa MeOH (0.5 mL) i mešana tokom 30 min. Rastvarač je uklonjen da se dobije bistro bezbojno gusto ulje. Ulje je ponovo rastvoreno u 1M vodenom rastvoru HCl (0.5 mL) i zagrevano na 60 °C tokom 1h. Smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirovi 4-amino-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol koji se dalje koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja kao sirovi materijal.

MS ESI m/z 255.9 (M+H)<+>.

[0712] 274: U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (20 mg, 0.070 mmol) u DMF (1 mL) su dodati 4-amino-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(4-fluorofenil)butan-2-ol (26.7 mg, 0.105 mmol), BOP (37 mg, 0.084 mmol), Hunigova baza (0.049 mL, 0.28 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc, i organski sloj je koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 17% B, 17-57% B preko 23 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metil-N-(2,2,4,4-tetrafluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksibutil)benzamid (4.5 mg, 0.008 mmol, 13% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.66 - 8.54 (m, J=7.0 Hz, 1H), 7.70 (br dd, J=7.9, 5.8 Hz, 2H), 7.59 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 3H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.10 - 6.94 (m, J=7.0 Hz, 1H), 6.81 - 6.59 (m, 2H), 4.08 - 3.86 (m, 1H), 3.62 (br d, J=2.1 Hz, 1H), 3.57 (br d, J=4.3 Hz, 1H), 3.00 (s, 1H), 2.28 (s, 3H). MS ESI m/z 524.00 (M+H)<+>.

Primer 275: N-(3-amino-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0713]

[0714] 275A: terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U rastvor oksalil hlorida (42.2 µL, 0.482 mmol) u DCM (1.86 mL) na -78 °C je dodat DMSO (65.8 µL, 0.928 mmol), i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 20 min. Rastvor terc-butil (S)-(tercbutoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (250 mg, 0.371 mmol) u DCM (2 mL) je dodat u reakcionu smešu, i dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min. Trietilamin (233 µL, 1.67 mmol) je dodat, i reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 20 min. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom i filtrirani, i filtrat je uparen u vakuumu dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom TLC na silika gelu (0.50 mm thickness) eluiran sa 40% etil acetata/heksana da se dobije terc-butil (tercbutoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat (220 mg, 0.328 mmol, 88% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.61 - 8.55 (m, 1H), 8.27 - 8.20 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.54 -7.44 (m, 1H), 7.26 - 7.13 (m, 4H), 6.36 - 6.27 (m, 1H), 4.33 (td, J=13.9, 6.5 Hz, 2H), 1.51 (s, 18H).

MS ESI m/z 672.10 (M+H)<+>

[0715] 275: U rastvor terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (30 mg, 0.045 mmol) u toluenu (298 µL) na sobnoj temperaturi je dodat LHMDS (214 µL, 0.107 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Kompleks boran-metil sulfid (89.0 µL, 0.179 mmol) je dodat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. MeOH je pažljivo dodat da bi se ugasio višak BH3, i dodat je HCl 4M u dioksanu (156 µL, 0.625 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 65°C tokom 1 h. Reakciona smeša je uparena u vakuumu, i ostatak je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 8% B, 8-48% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min. Ovaj postupak daje naslovno jedinjenje N-(3-amino-2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamid (3.0 mg, 0.0063 mmol, 12% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 - 8.90 (m, 1H), 8.61 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.66 - 7.54 (m, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.26 (br dd, J=18.6, 7.3 Hz, 1H), 4.00 - 3.74 (m, 3H), 2.32 (3H, s).

MS ESI m/z 473.1 (M+H)<+>

Primer 276: (S)-3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamido)-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propilkarbamat

[0716]

[0717] Smeša terc-butil (S)-(terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (50 mg, 0.074 mmol) i hlorosulfinil izocijanata (14.8 µL, 0.148 mmol) u DCM (742 µl) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Isparljive supstance su uklonjene u vakuumu, i dodat je HCl 4M u 1,4-dioksanu (186 µl, 0.742 mmol), i reakciona smeša je zagrevana na 70 °C tokom 3 h. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu, i ostatak je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 8% B, 8-48% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min. Ovim procesom je dobijeno naslovno jedinjenje (S)-3-(3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzamido)-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propilkarbamat (22 mg, 0.042 mmol, 57% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.10 - 8.94 (m, 1H), 8.61 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.60 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 3H), 7.35 - 7.19 (m, 3H), 7.03 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.93 (dd, J=14.3, 10.0 Hz, 1H), 4.00 - 3.79 (m, 2H).

MS ESI m/z 517.0 (M+H)<+>

Primer 277: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluoro-6-metilbenzamid

[0718]

[0719] 277A: 1,3-difluoro-2-jodo-5-metilbenzen: Rastvor 1,3-difluoro-5-metilbenzena (2.64 g, 20.6 mmol) u THF (50 mL) je mešan na -75 °C pod atmosferom azota. 2.5M rastvor BuLi u heksanu (9.50 mL, 23.7 mmol) je dodat polako i smeša je mešana tokom 1 h pre nego što je polako dodat jod (5.49 g, 21.6 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana tokom 3 h. Reakcija je ugašena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije svetlo žutomrka čvrsta supstanca (4.38 g, 17.2 mmol, 84% prinosa).

[0720]<1>H NMR (499 MHz, hloroform-d) δ 6.74 (dt, J = 7.8, 0.9 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H).<19>F NMR (470 MHz, hloroform-d) δ -94.00.

[0721] 277B: 2,4-difluoro-3-jodo-6-metilbenzoeva kiselina: Rastvor diizopropilamina (4.16 mL, 29.2 mmol) u 20 mL THF je mešan na -75 °C pod atmosferom azota.2.5M rastvor BuLi u heksanu (10.3 mL, 25.7 mmol) je dodat polako i smeša je mešana tokom 5 min na sobnoj temperaturi pre nego što je kanulirana u -75 °C rastvor 1,3-difluoro-2-jodo-5-metilbenzena (4.36 g, 17.2 mmol) u THF (20 mL). Nakon mešanja tokom 1 h, dodat je ugljen dioksid (6.04 g, 137 mmol) (usitnjeni suvi led). Reakcija je ostavljena da se zagreva do sobne temperature sa mešanjem. Smeša je ugašena dodavanjem vode i neutralizovana sa 60 mL 1 N vodenog rastvora HCl i zatim razblažena sa EtOAc. Slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan četiri puta sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani i isprani sa slanim rastvorom, osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da se dobije tamno žutomrko ulje (3.59 g, 12.1 mmol, 70% prinosa sirove materije). Materijal se koristi takav u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

[0722] 277C: metil 2,4-difluoro-3-jodo-6-metilbenzoat: U rastvor 2,4-difluoro-3-jodo-6-metilbenzojeve kiseline (3.59 g, 12.1 mmol) u DMF (20 mL) je dodat K2CO3(3.33 g, 24.1 mmol) zatim je dodat MeI (1.13 mL, 18.1 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije žutomrko ulje. Materijal je prečišćen silika fleš hromatografijom, gradijenta 100% heksana do 40% EtOAc u heksanu da se dobije željeni proizvod (2.67 g, 8.6 mmol, 71% prinosa) kao svetložuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (499 MHz, hloroform-d) δ 6.96 (ddd, J = 10.1, 1.7, 0.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.52 (s, 3H).

<19>F NMR (470 MHz, hloroform-d) δ -111.06, -112.18.

MS ESI m/z 313.2 (M+H)<+>

[0723] 277D: metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluoro-6-metilbenzoat: U bocu pod pritiskom od 150 mL, smeša metil 2,4-difluoro-3-jodo-6-metilbenzoata (825 mg, 2.64 mmol), bis(pinakolato)diborona (839 mg, 3.30 mmol), kalijum acetata (778 mg, 7.93 mmol), i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(ii) (97 mg, 0.132 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) (degazirana sa azotom) je mešana na 100 °C. Nakon 1 h, LCMS pokazao je da je reakcija završena. U reakcionu smešu sirovog materijala dodati su dioksan (2 mL), 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (562 mg, 2.64 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (86 mg, 0.106 mmol) i 2 M vodeni rastvor K3PO4(3.30 mL, 6.60 mmol). Nakon što je azot propušten kroz smešu tokom 5 min, smeša je mešana na 100 °C tokom 11 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su razdvojeni. Silika TLC (80% EtOAc/heksan) je pokazala polarnu plavu mrlju (Rf ~0.2) sa malo osipa. Organski sloj je osušen Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen silika fleš hromatogarfijom, elucioni gradijent 100 % heksani do 90% EtOAc u heksanu da se dobije željeni proizvod (310 mg, 0.974 mmol, 37% prinosa) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (499 MHz, hloroform-d) δ 8.38 (dd, J = 6.9, 0.9 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 1.8, 0.9 Hz, 1H), 6.94 (ddd, J = 10.1, 1.6, 0.8 Hz, 1H), 6.71 (ddd, J = 6.9, 1.8, 0.8 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.24 (d, J = 0.7 Hz, 3H).

<19>F NMR (470 MHz, hloroform-d) δ -110.53, -110.65.

MS ESI m/z 319.1 (M+H)<+>

[0724] 277E: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluoro-6-metilbenzoeva kiselina: U rastvor metil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluoro-6-metilbenzoata (310 mg, 0.974 mmol) u THF (4 mL) je dodat 2M vodeni rastvor LiOH (1.95 mL, 3.90 mmol), i MeOH (3 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. 1N vodeni rastvor HCl (4 mL) je dodat i isparljive materije su uklonjene u vakuumu da se dobije žutomrka žuta supstanca (600 mg, 0.974 mmol, 100% pretpostavljeni prinos sirove materije sa 60% čistoće). Materijal se koristi tako bez daljeg prečišćavanja u sledećim koracima.

MS ESI m/z 305.4 (M+H)<+>

[0725] 277: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluoro-6-metilbenzojeve kiseline (40 mg, 0.079 mmol), BOP (52.3 mg, 0.118 mmol) , (S)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (21 mg, 0.095 mmol) i Hunigove baze (0.069 mL, 0.39 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa malom količinom MeOH i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 14% B, 14-54% B preko 20 minuta, zatim 4-minuta zadržavanje na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije naslovno jedinjenje (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluoro-6-metilbenzamid (28.4 mg, 0.060 mmol, 76% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 6.8, 1.0 Hz, 1H), 7.36 (q, J = 8.5 Hz, 4H), 7.30 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 6.9, 1.8 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.28 (hept, J = 6.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.78 (q, J = 6.9 Hz, 2H).

<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -115.16, -115.28.

MS ESI m/z 472.4 (M+H)<+>

Primer 278: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluoro-6-metilbenzamid

[0726]

[0727] Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,4-difluoro-6-metilbenzojeve kiseline (40 mg, 0.079 mmol), BOP (52.3 mg, 0.118 mmol) , (R)-3-amino-1-(4-hlorofenil)propan-1-ol hidrohlorida (21 mg, 0.095 mmol) i Hunigove baze (0.069 mL, 0.39 mmol) u DMF (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperturi preko noći. Smeša je razblažena sa malom količinom MeOH i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 14% B, 14-54% B preko 20 minuta, zatim 4-minuta zadržavanje na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije naslovno jedinjenje (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-3-hidroksipropil)-2,4-difluoro-6-metilbenzamid (21.9 mg, 0.046 mmol, 58% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.42 -7.32 (m, 4H), 7.30 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 4.63 (q, J = 6.1 Hz, 1H), 3.29 (hept, J = 6.1 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.79 (q, J = 7.0 Hz, 2H).

MS ESI m/z 472.4 (M+H)<+>

Primer 279: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-hidroksi-2-metil-3-oksopropil)-6-metilbenzamid

[0729] 279A: 1-(4-fluorofenil)-2-metilprop-2-en-1-ol: U posudu sa okruglim dnom od 250 mL rastvoren je 4-fluorobenzaldehid (1.24 g, 9.99 mmol) u THF (20 mL) da se dobije bezbojni rastvor.

0.5M rastvora prop-1-en-2-il magnezijum bromida u THF (22.0 mL, 11.0 mmol) je dodato u kapima na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i razblažena sa EtOAc. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je osušen i koncentrovan do sirovog proizvoda u obliku svetlo žuto mrkog ulja (2.12 g, 9.99 mmol, 100% pretpostavljeni prinos sirovog proizvoda). Materijal se takav koristi u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

[0730] 279B: (4-fluorofenil)(2-metiloksiran-2-il)metanol: U posudu sa okruglim dnom od 250 mL rastvoren je 1-(4-fluorofenil)-2-metilprop-2-en-1-ol (831 mg, 5.00 mmol) u CH2Cl2(20 mL) da se dobije bezbojni rastvor. m-CPBA (863 mg, 5.00 mmol) je dodat nakon čega natrijum bikarbonat (420 mg, 5.00 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa etrom i vodom. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran tri puta sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i sa slanim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen Na2SO4i koncentrovan u vakuumu da se dobije sirovi proizvod kao svetlo žuto ulje (836 mg, 92% prinosa sirovog matrijala u dva koraka). Materijal se takav koristi u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

[0731] 279C: 3-amino-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropane-1,2-diol: U bočici pod pririskom od 20 mL pomešani su (4-fluorofenil)(2-metiloksiran-2-il)metanol (274 mg, 1.50 mmol) i amonijak, 7M u MeOH (2.00 mL, 14.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je zatim zagrevana na 65 °C tokom 5 h. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu da bi se dobio sirovi željeni proizvod kao blago žuutomrko gusto ulje (200 mg, 1.01 mmol, 67% prinosa). Materijal se takav koristi bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 200.1 (M+H)<+>

[0732] 279D: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(4-fluorofenil)-2,3-dihidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid: Smeša litijum 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoata (58.4 mg, 0.200 mmol) i BOP (133 mg, 0.300 mmol), 3-amino-1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1,2-diola (39.8 mg, 0.200 mmol) i Hunigove baze (0.140 mL, 0.800 mmol) u DMF (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Smeša je razblažena sa vodom i EtOAc. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je osušen Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se dobije sirovi 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(4-fluorofenil)-2,3-dihidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamid (0.062 g, 0.133 mmol, 66% prinosa) koji se koriti direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 468.3 (M+H)<+>

[0733] 279: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(4-fluorofenil)-2,3-dihidroksi-2-metilpropil)-6-metilbenzamida (0.062 g, 0.133 mmol) i IBX (0.067 g, 0.239 mmol) u DMSO (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 22 h. Smeša je razblažena sa malom količinom metanola i filtrirana da se pripremi uzorak za reverzno fazno preparativno HPLC prečišćavanje. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 11% B, 11-51% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Materijal je dalje prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: Kolona: XBridge Fenil, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 16% B, 16-46% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako je dobijen 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(3-(4-fluorofenil)-2-hidroksi-2-metil-3-oksopropil)-6-metilbenzamid (2.0 mg, 0.0043 mmol, 3% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 - 8.57 (m, 2H), 8.27 (dd, J = 8.6, 5.7 Hz, 2H), 7.55 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.45 (s, 3H). MS ESI m/z 466.2 (M+H)<+>

Primer 280: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)-2-fluorobenzamid

[0734]

[0735] 280A: terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(4-hloro-3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluorofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U bočici pod pritiskom od 1 drama, rastvor terc-butil (R)-(terc-butoksikarbonil)(7-(4-hloro-3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluorofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (73.0 mg, 0.105 mmol) i Dess-Martin perjodinana (134 mg, 0.316 mmol) u CH2Cl2(0.8 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je direktno smeštena u 4 g silika gel kertridž i eluirana sa EtOAc. Frakcije željenog proizvoda su kombinovane i koncentrovane do smeđeg ulja (68.6 mg, 94% prinosa) koje se dalje direktno koristi u sledećem koraku.

MS ESI m/z 692.6 (M+H)<+>

[0736] 280: Rastvor terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(4-hloro-3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluorofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (68.6 mg, 0.099 mmol) u CH2Cl2(0.8 mL) je tretiran sa TFA (500 µL, 6.49 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana, ostatak je rastvoren u DMF i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, 5µm particles; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 17% B, 17-57% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)-2-fluorobenzamid (14.3 mg, 0.029 mmol, 29% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (dd, J = 13.5, 9.2 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.76 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 19.5, 9.9 Hz, 3H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 4.29 - 4.13 (m, 2H);<19>F NMR (471 MHz, DMSO-d6) δ -102.47, -103.90, -116.98.

MS ESI m/z 492.4 (M+H)<+>

Primer 281: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0737]

[0738] 281A: 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: U rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (5.23 g, 22.4 mmol) u DMF (30 mL) je dodat HATU (10.5 g, 27.6 mmol), zatim DIPEA (7.53 mL, 43.1 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 10 min, 3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (3.54 g, 17.25 mmol) je dodat u smešu i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. EtOAc je dodat, smeša je isprana sa vodom i organska faza je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu (120 g, elucioni gradijent 100% heksani do 100 % EtOAc) da se dobije 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (6.80 g, 16.2 mmol, 94% prinosa).

MS ESI m/z 422.3 (M+H)<+>

[0739] 281B: tert-butil (7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U bočicu pod pritiskom dodat je štapić za mešanje, N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (307 mg, 0.667 mmol), 3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (233.7 mg, 0.556 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (27 mg, 0.033 mmol), dioksan (2.8 mL) i 2M vodenog rastvora trikalijum fosfata (0.834 mL, 1.67 mmol). Smeša je degazirana propuštanjem struje azota. Bočica je zatvorena i smeša je mešana na 70 °C tokom 4h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa EtOAc i vodom i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen anhidrovani natrijum sulfatom i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen silika fleš hromatografijom (24 g), elucioni gradijent 100% heksana do 50% EtOAc u heksanu da se dobije željeni proizvod (336 mg, 0.498 mmol, 90% prinosa) kao blago žutomrko ulje.

MS ESI m/z 674.4 (M+H)<+>

[0740] 281C: terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U bočicu pod pritiskom od 1 drama rastvor terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (89.0 mg, 0.132 mmol) i Dess-Martin perjodinana (84.0 mg, 0.198 mmol) u CH2Cl2(1 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je stavljena u 4 g silika gel kertridž i eluirana sa EtOAc. Frakcije željenog proizvoda su kombinovane i koncentrovane do žutomrkog ulja (90 mg, 0.132 mmol, 100% prinosa sirove materije) koje se dalje koristi u sledećem koraku.

MS ESI m/z 672.3 (M+H)<+>

[0741] 281: Rastvor terc-butil (terc-butoksikarbonil)(7-(3-((2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (89.0 mg, 0.133 mmol) u CH2Cl2(1.5 mL) je tretiran sa TFA (1.0 mL, 12 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana, ostatak je rastvoren u DMF i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatoa; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 14% B, 14-54% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-oksopropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (11.8 mg, 18 µmοl, 14% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.21 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.60 (dd, J = 7.3, 3.0 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 2H), 7.60 (dd, J = 9.5, 6.5 Hz, 1H), 7.48 (q, J = 9.7 Hz, 3H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 4.19 (td, J = 15.5, 6.1 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H).

MS ESI m/z 472.2 (M+H)<+>

Primer 282: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2,2,3-tifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid

[0742]

[0743] 282A: (R)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-dion: U smešu (R)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (1.30 g, 6.34 mmol) u acetonitrilu (60 mL) je dodat ftalni anhidrid (1.15 g, 7.76 mmol). Smeša je mešana na 85 °C tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je rastvoren u toluenu (70 mL), tretiran sa 4A molekulskim sitima i zagrevan na 115 °C tokom 8.5 h. Reakcija je filtrirana kroz malo jastuče celita i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je prečišćen putem fleš hromatografije na koloni (40 g silike, gradijent 100 % dihlorometan do 100 % EtOAc). Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da se dobije (R)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-dion (1.68 g, 5.01 mmol, 79% prinosa).

[0744]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.00 - 7.91 (m, 2H), 7.88 - 7.78 (m, 2H), 7.47 (dd, J=8.3, 5.4 Hz, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 4.84 (dt, J=18.4, 4.8 Hz, 1H), 4.40 - 4.13 (m, 2H), 3.80 (d, J=5.0 Hz, 1H).

[0745] 282B: (S)-2-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)izoindolin-1,3-dion:

Suspenziji (R)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-diona (1.60 g, 4.77 mmol) u dihlorometanu (12 mL) je dodat DAST (3.2 mL, 24 mmol) i reakcija je zagrevana do 50 °C tokom 2 h. Reakcija je ugašena sa vodom (10 mL) i razblažena sa dihlorometanom (175 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (2 x 10 mL), slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušen anhidrovanim natrijum sulfatom, filtriran i uparen do suva. Ostatak je prečišćen putem fleš hromatografije na koloni (120 g silike, gradijent 100 % dihlorometan do 100 % EtOAc). Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da se dobije (R)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-dion (406 mg, 1.21 mmol, 25% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.00 - 7.91 (m, 2H), 7.88 - 7.78 (m, 2H), 7.47 (dd, J=8.3, 5.4 Hz, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 4.84 (dt, J=18.4, 4.8 Hz, 1H), 4.40 - 4.13 (m, 2H), 3.80 (d, J=5.0 Hz, 1H).

<19>F NMR (471 MHz, HLOROFORM-d) δ -110.69 - -111.96 (m, 1F), -115.31 - - 116.56 (m, 1F), -191.69 (ddd, J=44.5, 10.6, 8.5 Hz, 1F)

[0746] 282C: (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin: Suspenziji (S)-2-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)izoindolin-1,3-diona (406 mg, 1.20 mmol) u etanolu je dodat hidrazin hidrat, 50-60% (1.00 mL, 17.5 mmol) i reakcija je zagrevana na 80 °C tokom 10 min. Reakcija je razblažena sa etanolom (3 mL), dobijeni beli ostatak je filtriran i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je tretiran sa dihlorometanom i dobijeni beli ostatak je filtriran. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da se dobije (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin (229 mg, 1.11 mmol, 92% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 (dd, J=8.0, 5.6 Hz, 2H), 7.13 (t, J=8.6 Hz, 2H), 5.79 - 5.57 (m, 1H), 3.32 - 3.00 (m, 2H), 1.50 - 1.18 (m, 2H).

MS ESI m/z 207.8 (M+H)<+>

[0747] 282: U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (20 mg, 0.065 mmol), (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amina (15 mg, 0.072 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (35 µL, 0.20 mmol) u DMF (1 mL) je dodat BOP (40 mg, 0.090 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 d, je smeša filtrirana i prečišćena preparativnom LCMS pod sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 19% B, 19-59% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije naslovno jedinjenje (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid (22.3 mg, 0.045 mmol, 69% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.75 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.46 (m, 4H), 7.33 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.18 - 5.88 (m, 3H), 4.05 - 3.84 (m, 2H).

MS ESI m/z 496.0, 497.9 (M+H)<+>

Primer 283: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0748]

[0749] 283A: etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propionat: U suvu bocu sa 3 grla sa okruglim dnom od 500 mL pod azotom je dodat cink (2.50 g, 38.2 mmol) i anhidrovani THF (100 mL). Reakcija je isprana sa azotom, stavljena u uljno kupatilo na 75 °C i lagano tretirano sa etil bromodifluoroacetatom (4.42 mL, 34.5 mmol) preko 3-4 min. Reakcija je refluksovana tokom 5 min, zatim tretirana sa 2,4,6-trifluorobenzaldehida (5.00 g, 31.2 mmol) i zagrevana na 75 °C tokom 5.5 h. Reakcija je filtrirana kroz mali jastučić od celita i filtrat je uparavan do suva u vakuumu. Ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu i opran 1 N vodenim rastvorom HCl (2 x 20 mL), slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušen anhidrovani natrijum sulfatom, filtriran i uparavan do suva. Sirovi proizvod je prečišćen putem fleš hromatografije na koloni (80 g silike, gradijent 100 % heksana do 100 % etil acetata) da se dobije etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propionat (4.61 g, 16.2 mmol, 52% prinosa).

[0750]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 6.76 (t, J=8.5 Hz, 2H), 5.52 (ddd, J=19.5, 11.1, 5.1 Hz, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 2H), 3.19 (dt, J=11.0, 4.0 Hz, 1H), 1.40 (t, J=7.2 Hz, 3H).

[0751] 283B: 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propanamid: Rastvoru etil 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propionata (2.60 g, 9.15 mmol) u metanolu (5 mL) je dodat 7M amonijak u metanolu (6.80 mL, 47.6 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 195 min. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 2,2-difluoro-3-hidroksi3-(2,4,6-trifluorofenil)propanamid (2.17 g, 8.51 mmol, 93% prinosa) koji se koristi u sledećem koraku bez prečišćavanja.

MS ESI m/z 253.85 (M-H)-[0752] 283C: 3-amino-2,2-difluoro-1-(2,4,6-trifluorofenil)propan-1-ol: Rastvoru 2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propanamida (1.26 g, 4.94 mmol) u anhidrovanom THF (15 mL) je dodat 2.0 M rastvor kompleksa boran dimetil sulfida u THF (7.50 mL, 15.0 mmol) i reakcija je zagrevana do 80 °C tokom 3 h. Reakcija je ohlađena do 0 °C, ugašena sa metanolom (30 mL), mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min i isparljive supstance su uklonjene u vakuumu. Ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (35 mL) i ponovo uparen do suva da se dobije 3-amino-2,2-difluoro-1-(2,4,6-trifluorofenil)propan-1-ol (1.22 g, 5.0 mmol, kvantitativnog prinosa).

MS ESI m/z 241.85 (M+H)<+>

[0753] 283: U suvu reakcionu bočicu su dodati 3-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (200 mg, 0.518 mmol), 3-amino-2,2-difluoro-1-(2,4,6-trifluorofenil)propan-1-ol (135 mg, 0.560 mmol), anhidrovani CH2Cl2i N,N-diizopropiletilamin (450 µL, 2.58 mmol). Reakcija je kratko isprana sa azotom, zatim tretirana sa BOP (300 mg, 0.678 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Isparljive supstance su uklonjene pod laganom strujom azota i ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (2mL), tretiran sa 4N HCl u dioksanu (4.0 mL, 16 mmol)) i zagrevan na 60 °C tokom 90 min. Reakcija je tretirana sa dodatnim 4N HCl u dioksanu (2.0 mL, 8.0 mmol) i zagrevana na 60 °C tokom 3.5 h. Isparljive supstance su uklonjene u vakuumu i sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent zadržavanje 0-minuta na 12% B, 12-52% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako izolovani racemat je dalje podvrgnut SFC hiralnom razdvajanju pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog SFC razdavajanja): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 x 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 60% CO2/ 40% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 60% CO2/ 40% MeOH tež/0.1% DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 1500 µL injektirano 10.6 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (28.5 mg, 0.0560 mmol, ee >95%, 34% prinosa) kao prvi eluirani izomer. Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 7.05 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 5.35 - 5.17 (m, 1H), 4.09 - 3.88 (m, 2H), 2.30 (s, 3H).

MS ESI m/z 510.3 (M+H)<+>

Primer 284: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0754]

[0755] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-hidroksi-3-(2,4,6-trifluorofenil)propil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (29.2 mg, 0.057 mmol, ee >95%, 35% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 283. Apsolutna stereohemija nije određena.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.59 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 7.58 (br t, J=8.0 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.26 - 7.11 (m, 3H), 7.09 - 6.99 (m, 1H), 5.32 - 5.16 (m, 1H), 4.11 - 3.89 (m, 2H), 2.30 (s, 3H).

MS ESI m/z 510.3 (M+H)<+>

Primer 285: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid

[0756]

[0757] 285A: 3-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzoeva kiselina: Rastvoru N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (1.80 g, 3.91 mmol), 3-bromo-2,6-difluorobenzojeve kiseline (1.11 g, 4.69 mmol), i 2M vodenog rastvora trikalijum fosfata (9.78 mL, 19.5 mmol) u dioksanu (19.5 mL) je dodat [1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (0.127 g, 0.196 mmol). Reakcija je isprana dobro sa azotom i zagrevana na 60 °C tokom 5 h. Smeša sirovog materijala je zakiseljena sa sirćetnom kiselinom (2.24 mL, 39.1 mmol), koncentrovana na cilitu i prečišćena putem fleš hromatografije na koloni (80 g silike, gradijent 100 % dihlorometan do 50 % EtOAc/dihlorometana). Frakcije koje sadrže žist proizvod su kombinovane i koncentrovane da se dobije 3-(2-(di-(tercbutoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzoeva kiselina (1.50 g, 3.06 mmol, 78% prinosa).

MS ESI m/z 491.1 (M+H)<+>

[0758] 285B: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzoeva kiselina: Rastvoru 3-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzojeve kiseline (1.27 g, 2.58 mmol) u dihlorometanu je dodat TFA (6.46 mL, 84.0 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Isparljive supstance su uklonjene u vakuumu da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzoeva kiselina (0.50 g, 1.7 mmol, 67% prinosa) koja se koristi bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 290.8 (M+H)<+>

[0759] 285: U suvu reakcionu bočicu dodati su 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluorobenzoeva kiselina (20 mg, 0.069 mmol), (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin (15 mg, 0.072 mmol), DMF (1.0 mL) i N,N-diizopropiletilamin (35 µL, 0.20 mmol). Reakcija je isprana sa azotom, tretirana sa BOP (40 mg, 0.090 mmol) i ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 3.5 dana. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom. Gradijent: zadržavanje 0-minuta na 17% B, 17-57% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4] triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid (14.8 mg, 0.0310 mmol, 45% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.89 -7.72 (m, 1H), 7.63 - 7.46 (m, 3H), 7.33 (br t, J=8.7 Hz, 3H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.18 - 5.87 (m, 3H), 4.08 - 3.80 (m, 2H).

MS ESI m/z 480.0 (M+H)<+>

Primer 286: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-6-(trifluorometil)benzamid

[0760]

[0761] 286A: 3-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-trifluorometilbenzoeva kiselina: Rastvoru N,N-bis-Boc-2-amino-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (2.00 g, 4.34 mmol), 3-bromo-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzojeve kiseline (1.30 g, 4.53 mmol), i 2.0 M kalijum acetata u vodi (6.62 mL, 13.3 mmol) u dioksanu (40 mL) je dodat sa [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), compleks sa dihlorometanom (350 mg, 0.429 mmol). Reakcija je pročišćena sa argonom i zagrevana na 80 °C tokom 2.5 h. Reakcija je tretirana sa dodatnom 3-bromo-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzojevom kiselinom (200 mg, 0.697 mmol) i dodatnim katalizatorom (50 mg, 0.060 mmol), isprana sa azotom i zagrevana na 80 °C tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom (750 mL) i vodom (50 mL). Vodeni sloj je podešen na pH=4 i oprana sa etil acetatom (1 × 125 mL). Organski slojevi su kombinovani, oprani sa vodom (3 × 30 mL), slanim rastvorom (2 × 15 mL), osušen anhidrovanim Na2SO4, filtriran i uparen do suva. Ostatak sirovog materijala je prečišćen putem fleš hromatografijom na koloni (20 g silike, gradijent 100 % dihlorometana do 35 % 1:1 metanol/dihlorometana) i frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da se dobije 3-(2-(di-(tercbutoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-trifluorometilbenzoeva kiselina (3.53 g, >100% prinosa) koja se koristi bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 541 (M+H)<+>

[0762] 286: U rastvor 3-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-trifluorometilbenzojeve kiseline (25 mg, 0.046 mmol), (S)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amina (14 mg, 0.068 mmol), i N,N-diizopropiletilamina (35 µL, 0.20 mmol) u dihlorometanu (1.0 mL) je dodat BOP (40 mg, 0.090 mmol), i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5.5 h. Isparljive supstance su uklonjene pod blagom strujom azota i sirovi proizvod je rastvoren u metanolu (800 µL), tretiran sa 4.0M rastvorom hlorovodonika u 1 4-dioksanu (1.5 mL, 6.00 mmol) i zagrevan na 60 C tokom 3 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 22% B, 22-62% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-6-(trifluorometil)benzamid (9.2 mg, 0.017 mmol, 36% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.65 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.93 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.83 - 7.70 (m, 1H), 7.63 - 7.48 (m, 3H), 7.33 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.09 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 6.04 - 5.83 (m, 1H), 4.03 - 3.80 (m, 2H)

MS ESI m/z 529.9 (M+H)<+>

Primer 287: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid

[0764] 287A: (S)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-dion: Prateći proceduru koja je opisana u Primeru 282A, osim upotrebe (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (1.30 g, 6.34 mmol) kao polaznog materijala, izolovan je (S)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-dion (1.72 g, 5.00 mmol, 81%).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.99 - 7.89 (m, 2H), 7.82 (dd, J=5.5, 3.0 Hz, 2H), 7.48 (dd, J=8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.12 - 7.01 (m, 2H), 4.84 (dt, J=18.5, 4.6 Hz, 1H), 4.42 - 4.14 (m, 2H), 3.79 (d, J=5.0 Hz, 1H).

MS ESI m/z 333.9 (M-H)-

[0765] 287B: (R)-2-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)izoindolin-1,3-dion: Prateći proceduru koja je opisana u Primeru 282B, osim upotrebe (S)-2-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)izoindolin-1,3-diona (1.72 g, 5.13 mmol) kao polaznog materijala, izolovan je (R)-2-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)izoindolin-1,3-dion (255 mg, 0.756 mmol, 15% prinosa).

[0766]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.98 - 7.86 (m, 2H), 7.84 - 7.73 (m, 2H), 7.49 (dd, J=8.4, 5.4 Hz, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 5.72 - 5.53 (m, 1H), 4.40 - 4.17 (m, 2H).

[0767] 287C: (R)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin: Prateći proceduru koja je opisana u Primeru 282C, osim upotrebe (R)-2-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)izoindolin-1,3-diona (500 mg, 1.48 mmol) kao polaznog materijala, izolovan je (R)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amin (304 mg, 1.47 mmol, 99% prinosa).

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 (dd, J=8.4, 5.4 Hz, 2H), 7.19 - 7.08 (m, 2H), 5.81 - 5.57 (m, 1H), 3.30 - 3.02 (m, 2H).

MS ESI m/z 207.9 (M+H)<+>

[0768] 287: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid: Rastvoru 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6difluorobenzojeve kiseline (15.2 mg, 0.0520 mmol), (R)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amine (11.8 mg, 0.0570 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (40 µL, 0.23 mmol) u DMF (750 µL) je dodat BOP (37 mg, 0.084 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 15% B, 15-55% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2,6-difluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid (12.4 mg, 0.0260 mmol, 49% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.28 (br t, J=5.9 Hz, 1H), 8.63 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.89 -7.68 (m, 1H), 7.63 - 7.46 (m, 3H), 7.33 (br t, J=8.8 Hz, 3H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.16 - 5.89 (m, 3H), 4.08 - 3.80 (m, 2H).

MS ESI m/z 480.0 (M+H)<+>

Primer 288: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid

[0769]

[0770] Rastvoru 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (17 mg, 0.055 mmol), (R)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amina (12.8 mg, 0.0620 mmol), N,N-diizopropiletilamina (40 µL, 0.23 mmol) u DMF (750 µL) je dodat BOP (37 mg, 0.084 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 18% B, 18-58% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)benzamid (17.4 mg, 0.0350 mmol, 63% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.28 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.64 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.76 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.60 - 7.47 (m, 4H), 7.34 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.15 - 5.90 (m, 3H), 4.03 - 3.81 (m, 2H).

MS ESI m/z 495.9, 497.9 (M+H)<+>

Primer 289: (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-6-(trifluorometil)benzamid

[0771]

[0772] Rastvor 3-(2-(di-(terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-trifluorometilbenzojeve kiseline (30 mg, 0.056 mmol), (R)-2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propan-1-amina (12.8 mg, 0.0620 mmol), i N,N-diizopropiletilamina (40 µL, 0.23 mmol) u DMF (750 µL) je dodat BOP (37 mg, 0.084 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Isparljive materije su uklonjene pod blagom strujom azota i ostatak je rastvoren u metanolu (500 µL), tretiran sa 4M HCl u dioksanu (1.5 mL, 6 mmol) i zagrevan na 65 °C tokom 18 h. Ostatak sirovog materijala je prečišćen preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 20% B, 20-60% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Materijal je dalje prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 18% B, 18-58% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (R)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(2,2,3-trifluoro-3-(4-fluorofenil)propil)-6-(trifluorometil)benzamid (10.7 mg, 0.0200 mmol, 36% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.69 (d, J=6.9 Hz, 1H), 8.04 -7.88 (m, 1H), 7.77 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.55 (br dd, J=7.8, 5.7 Hz, 2H), 7.34 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.12 - 5.87 (m, 1H), 4.05 -3.81 (m, 2H).

MS ESI m/z 530.0 (M+H)<+>

Primer 290: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0773]

[0774] 290A: etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetat: Smeša 1-fluoro-4-jodobenzena (7.95 mL, 68.9 mmol), etil 2-bromo-2,2-difluoroacetata (8.84 mL, 68.9 mmol) i bakra (11.4 g, 179 mmol) u DMSO (172 mL) je zagrevana u uljnom kupatilu na 70 °C tokom 12 h. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovana sa etrom (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušene anhidrovanim natrijum sulfatom i filtrirani, i filtrat je uparen u vakuumu da se dobije sirovi etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetat (13.0 g, 59.6 mmol, 86% prinosa). Ovaj proizvod se koristi direktno u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0775]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.66 - 7.61 (m, 3H), 7.22 - 7.11 (m, 2H), 4.33 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.34 - 1.29 (m, 3H).

[0776] 290B: 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ol: Rastvoru etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetata (0.500 g, 2.29 mmol) u metanolu (5.73 mL) na 0 °C je dodat u porcijama natrijum borhidrid (0.130 g, 3.44 mmol), i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min i zatim na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Metanol je uklonjen u vakuumu i dodato je 1N vodenog rastvora HCl. Vodeni sloj je ekstrahovana sa etrom (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom i filtrirani, i filtrat je uparen u vakuumu da se dobije 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ol (0.350 g, 1.99 mmol, 87% prinosa).

[0777]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.59 - 7.51 (m, 2H), 7.16 (t, J=8.5 Hz, 2H), 3.99 (br t, J=13.1 Hz, 2H), 1.95 (br s, 1H).

[0778] 290C: 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetaldehid: U rastvor oksalil hlorida (239 µL, 2.73 mmol) u DCM (9 mL) na -78 °C je dodat DMSO (403 µL, 5.68 mmol), i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 20 min. Rastvor 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ola (400 mg, 2.27 mmol) u DCM (2 mL) je dodat u reakcionu smešu, i dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min. Trietilamin (1.42 mL, 10.2 mmol) je dodat, i reakcija je ostavljena da se zagreva na sobnoj temperaturi i mešana tokom 20 min. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (x3). Tako je dobijen sirovi 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetaldehid (0.35 g, 2.0 mmol, 89% prinosa). Ovaj materijal se koristi odmah u sledećem koraku.

[0779] 290D: 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ol: Smeša 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetaldehida (240 mg, 1.38 mmol), nitrometana (221 µL, 4.14 mmol), i kalijum karbonata (57.1 mg, 0.414 mmol) u THF (4.6 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić od cilita i oprana sa EtOAc. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom TLC na silika gelu (0.50 mm debljine) eluirana sa 30% etil acetat/heksani da se dobije 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ol (60 mg, 0.255 mmol, 74% prinosa) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.56 (dd, J=8.6, 5.1 Hz, 2H), 7.20 (t, J=8.3 Hz, 2H), 4.85 - 4.70 (m, 2H), 4.60 - 4.54 (m, 1H), 2.83 - 2.70 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 234.05 (M+H)<+>

[0780] 290E: 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ol: Smeša 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ola (260 mg, 1.11 mmol) i 10 % paladijuma na ugljeniku (118 mg, 0.111 mmol) u MeOH (3.7 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika (1 ATM, balon) tokom 12 h. Nakon filtracije i uparavanja, sirovi materijal 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ol (230 mg, 1.12 mmol, 100% prinosa) se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

LC/MS ESI/APCI m/z 205.75 (M+H)<+>

[0781] 290F: 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid: U reakcionoj bočici od 20 mL su kombinovani 3-(N,N-bis-Boc-2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (156 mg, 0.322 mmol), 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ol (60 mg, 0.292 mmol), BOP (155 mg, 0.351 mmol), i diizopropiletil amin (153 µL, 0.877 mmol) u DCM (2.9 mL) da se dobije braon rastvor. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša sirovog materijala je prečišćena direktno fleš hromatografijom na silika gelu. Čiste frakcije su koncentrovane pri smanjenom pritisku da se dobije 3-(2-N,N-bis-Boc-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (117 mg, 0.174 mmol, 59% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.59 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.58 (dd, J=8.5, 5.2 Hz, 2H), 7.49 - 7.44 (m, 1H), 7.26 - 7.14 (m, 1H), 6.31 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 4.26 (br dd, J=13.4, 7.9 Hz, 1H), 4.15 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.00 (ddd, J=14.3, 7.0, 3.2 Hz, 1H), 3.57 (ddd, J=13.9, 8.5, 5.3 Hz, 3H), 3.34 (d, J=4.9 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H), 1.53 - 1.50 (m, 20H), 0.86 (br s, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 674.10 (M+H)<+>

[0782] 290: U bočici su kombinovani 3-(2-N,N-bis-Boc-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (117 mg, 0.174 mmol) i 4 M rastvor hlorovodonika u dioksanu (434 µL, 1.74 mmol) u dioksanu (347 µL) da se dobije žutomrki rastvor. Reakcija je mešana na sobnoj temperturi preko noći. Sirovi proizvod je koncentrovan u vakuumu. Izolovani 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (49.1 mg, 0.104 mmol) je podvrgnut hiralnom razdvajanju pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog SFC razdvajanja): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral AD, 4.6 × 100 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% IPA tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatogarfije: Instrument: Waters 100 Prep SFC kolona: Chiral AD, 30 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% IPA tež/0.1% DEA; brzina protoka: 100 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 3000 µL 49.1 mg rastvoreno u 9 mL MeOH/ACN. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (11.1 mg, 0.023 mmol, >95 % ee, 14% prinosa): Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.58 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.62 -7.53 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 7.33 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 7.21 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.12 (br d, J=6.1 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 4.17 - 4.07 (m, 1H), 3.13 - 3.06 (m, 1H), 2.30 (s, 3H).

LC/MS ESI/APCI m/z 474.12 (M+H)<+>

Primer 291: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0783]

[0784] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida (9.9 mg, 0.021 mmol, 12% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 290.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.58 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.62 -7.53 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 7.33 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 7.21 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 4.13 (br s, 1H), 3.66 - 3.50 (m, 1H), 3.19 - 3.04 (m, 1H), 2.30 (s, 3H).

LC/MS ESI/APCI m/z 474.12 (M+H)<+>

Primer 292: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid

[0785]

[0786] 292A: etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetat: Suspenzija etil 2-bromo-2,2-difluoroacetata (7.74 mL, 60.4 mmol), 1-fluoro-4-jodobenzena (13.4 g, 60.4 mmol) i bakra (9.97 g, 157 mmol) u DMSO (151 mL) je zagrevana na 75 °C tokom 12 sati. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovan sa etrom tri puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da vse dobije etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetat (12.0 g, 55.0 mmol, 91% prinosa). Ovaj materijal nije čist ali se koristi u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja.

[0787] 292B: 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ol: Rastvoru etil 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetata (5.67 g, 26.0 mmol) u etru (65.0 mL) na 0 °C je dodat u porcijama litijum aluminijum hidrid (1.48 g, 39.0 mmol), i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Dodat je natrijum sulfat dekahidrat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi dok se formira bela suspenzija. Reakciona smeša je filtrirana da se dobije 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ol (3.00 g, 17.0 mmol, 66% prinosa) kao bezbojno ulje.

[0788]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.61 - 7.50 (m, 2H), 7.20 - 7.10 (m, 2H), 3.99 (td, J=13.2, 6.9 Hz, 2H), 2.07 (br s, 1H).

[0789] 292C: 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetaldehid: Rastvor oksalil hlorida (0.590 mL, 6.74 mmol) u DCM (22.5 mL) na -78 °C je dodat DMSO (0.997 mL, 14.1 mmol), i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 20 min. Rastvor 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)etan-1-ola (0.990 g, 5.62 mmol) u DCM (2 mL) je dodat u reakcionu smešu, i dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min. Trietilamin (3.53 mL, 25.3 mmol) je dodat, i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana tokom 20 min. Dodata je voda i vodeni sloj je ekstrahovana sa DCM tri puta. Ovako dobijeni sirovi proizvod se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0790] 292D: 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ol: Smeša 2,2-difluoro-2-(4-fluorofenil)acetaldehida (0.98 g, 5.63 mmol), nitrometana (0.452 mL, 8.44 mmol) i kalijum karbonata (0.156 g, 1.13 mmol) u THF (18.8 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz jastuče od celita i oprana sa etil acetatom. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom TLC na silika gelu (0.50 mm debljina) eluirana sa 30% etil acetata/heksana da se dobije 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ol (412 mg, 1.75 mmol, 31% prinosa) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.56 (dd, J=8.6, 5.1 Hz, 2H), 7.20 (t, J=8.4 Hz, 2H), 4.88 - 4.77 (m, 1H), 4.72 (dd, J=13.9, 2.2 Hz, 1H), 4.61 - 4.50 (m, 1H), 2.85 (br s, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z: 234.05 (M-H)-

[0791] 292E: 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ol: Smeša 1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)-3-nitropropan-2-ola (412 mg, 1.75 mmol) i 10% paladijuma na ugljeniku (186 mg, 0.175 mmol) u MeOH (5.8 mL) je hidrogenizovan sa balonom vodonika (1 ATM) tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz jastuče cilita da se dobije 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ol (335 mg, 1.63 mmol, 93% prinosa) kao bezbojno ulje. Ovaj materijal se koristi u sledećim koracima bez daljeg prečišćavanja.

LC/MS ESI/APCI m/z 205.80 (M+H)<+>

[0792] 292F: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid: Smeša 3-amino-1,1-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-2-ola (100 mg, 0.487 mmol), 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (149 mg, 0.487 mmol), BOP (237 mg, 0.536 mmol) i diizopropiletil amina (128 µL, 0.731 mmol) u DMF (2.4 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, i sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da se dobije racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (78 mg, 0.158 mmol, 32% prinosa).

[0793] 292: Izolovani racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluorobenzamid (78 mg, 0.158 mmol) je podvrgnut hiralnim razdvajanjem pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog razdvajanja SFC) Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 60% CO2/ 40% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativnne SFC hromatografije: Instrument: Vodas 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 60% CO2/ 40% MeOH tež/0.1%DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 3 00 µL 78 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije enantiomer 13-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(3,3-difluoro-3-(4-fluorofenil)-2-hidroksipropil)-2-fluorobenzamida (21.2 mg, 0.043 mmol, >95 % ee, 27% prinosa): Nije utvrđena relativna i apsolutna stereohemija.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (br t, J=8.1 Hz, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.35 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.11 (br s, 1H), 3.63 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.45 (br s, 1H), 3.11 - 3.00 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 494.05 (M+H)<+>

Primer 293: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-(1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamid

[0794]

[0795] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N (1-fluoro-4-(4-fluorofenil)-4-hidroksibutan-2-il)-6-metilbenzamida (21.7 mg, 0.044 mmol, 27% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 292.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.60 (t, J=6.5 Hz, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.48 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.35 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.10 (br s, 1H), 3.63 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 3.46 (br d, J=15.9 Hz, 1H), 3.11 - 2.99 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 494.28 (M+H)<+>

Primer 294: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(fluorometil)benzamid

[0796]

[0797] 294A: (4-bromo-3-fluorofenil)metanol: Rastvoru 4-bromo-3-fluorobenzaldehida (4.00 g, 19.7 mmol) u metanolu (39.4 mL) na 0 °C je dodat u porcijama natrijum borohidrid (0.745 g, 19.7 mmol), i reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Metanol je uklonjen u vakuumu, dodata je voda, i vodeni sloj je ekstrahovana sa etil acetatom tri puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da se dobije (4-bromo-3-fluorofenil)metanol (3.86 g, 18.8 mmol, 96% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. Materijal se koristi direktno u sledećoj realciji fluorovanja.

[0798]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.54 (dd, J=8.1, 7.2 Hz, 1H), 7.21 - 7.14 (m, 1H), 7.04 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1H), 4.69 (d, J=4.9 Hz, 2H), 1.83 (br d, J=5.0 Hz, 1H).

[0799] 294B: 1-bromo-2-fluoro-4-(fluorometil)benzen: DAST (2.74 mL, 20.7 mmol) je dodat u kapima u (4-bromo-3-fluorofenil)metanol (3.86 g, 18.8 mmol) nat 0 °C, i reakciona smeša je mešana sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu, i dodat je etar. Vodeni sloj je ekstrahovana sa etrom tri puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtart je uparen u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiran sa 0-10% etil acetatom/heksanima da se dobije 1-bromo-2-fluoro-4-(fluorometil)benzen (2.00 g, 9.66 mmol, 51% prinosa) kao bezbojno ulje.

[0800]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.65 - 7.54 (m, 1H), 7.17 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.05 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.45 - 5.30 (m, 2H).

[0801] 294C: 3-bromo-2-fluoro-6-(fluorometil)benzoeva kiselina: U posudu sa okruglim dnom od 100 mL kombinovani su 1-bromo-2-fluoro-4-(fluorometil)benzen (0.5 g, 2.415 mmol) i THF (12.1 mL) da se dobije narandžasti rastvor. Rastvor je ohlađen do -78 °C u kupatilu sa suvim ledom/acetonom. 1-bromo-2-fluoro-4-(fluorometil)benzen (0.500 g, 2.42 mmol) je dodat u kapima. Rastvor se nakon dodavanja promenio od narandžaste do tamno zelene boje. Reakcija je je mešana na -78 °C tokom 20 min i zatim je ugašena sa suvim ledom. Reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature preko noći. Formiran je narandžasti ostatak. Reakcija je razblažena u etru i ekstrahovana 3 puta sa 1M natrijum hidroksidom. Vodeni sloj je zakiseljena sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom i ponovo ekstrahovan u etru 3 puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom i osušeni natrijum sulfatom. Proizvod je koncentrovana pri smanjenom pritisku do prinosa 3-bromo-2-fluoro-6-(fluorometil)benzojeve kiseline (424 mg, 1.69 mmol, 70% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.78 (dd, J=8.3, 6.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5.70 - 5.58 (m, 2H).

LC/MS ESI/APCI m/z 248.65 (M-H)-

[0802] 294D: (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(fluorometil)benzamid: U reakcionu bočicu od 20 mL dodati su (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (103 mg, 0.504 mmol), 3-bromo-2-fluoro-6-(fluorometil)benzoeva kiselina (115 mg, 0.458 mmol), BOP (243 mg, 0.550 mmol), i DIPEA (240 µL, 1.37 mmol) u DCM (2.3 mL) da se dobije bezbojni rastvor. Reakcija je je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša sirovog materijala je prečišćena direktno fleš hromatografijom na silika gelu. Proizvodne frakcije su sakuplene i koncentrovane do prinosa (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(fluorometil)benzamida (158 mg, 0.361 mmol, 79% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.74 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=8.3, 5.7 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.10 (t, J=7.8 Hz, 2H), 6.59 (br s, 1H), 5.69 - 5.45 (m, 2H), 4.92 (dt, J=19.0, 4.3 Hz, 1H), 4.48 - 4.37 (m, 1H), 4.01 (br d, J=4.2 Hz, 1H), 3.69 - 3.59 (m, 1H). LC/MS ESI/APCI m/z 437.85 (M+H)<+>

[0803] 294E: 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin: U bocu sa okruglim dnom od 250 mL su kombinovani 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (5.00 g, 23.5 mmol), kalijum acetat (6.91 g, 70.4 mmol), bis(pinakolato)diboron (8.94 g, 35.2 mmol), i Pd(dppf)Cl2, DCM adukt (0.958 g, 1.173 mmol) u 1,4-dioksanu (117 mL) da se dobije narandžasti rastvor. Reakciona smeša je degazirana evakuacijom i zatrpavanjem sa azotom 3 puta. Reakciona boca je opremljena refluks kondenzatorom i zagrevana do 100 °C tokom 2 sata. Posle 2 sata, LC/MS je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je tako obezbedila sirovi 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (6.10 g, 23.5 mmol, 100% prinosa je pretpostavljeno) koji se koristi kao sirova smeša u narednim reakcijama. LC/MS(ESI/APCI) m/z 178.95 [M+H]+

[0804] 294: Reakciona bočica od 20 mL je napunjena sa 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-aminom (47.6 mg, 0.183 mmol) kao sirovom reakcionom smešom, (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(fluorometil)benzamidom (80.0 mg, 0.183 mmol), 2M vodenim rastvorom trobaznog kalijum fosfata (274 µL, 0.548 mmol), i Pd(dppf)Cl2, DCM aduktom (7.45 mg, 9.13 µmol) da se dobije braon suspenzija. Reakciona smeša je degazirana evakuacijom i zatrpavanjem azotom 3 puta. Reakciona bočica je zatvorena i zagrevana do 100 °C na grejnom bloku 2 h. Reakcija je koncentrovana pod laganom strujom azota i razblažena u etil acetatu. Rastvor etil acetata je filtriran kroz jastučić od celita i koncentrovan pod sniženim pritiskom do prinosa sirovog proizvoda. Proizvod je razblažen u DMF i filtriran kroz 0.45um PTFE frit pre prečišćavanja. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5-µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 11% B, 11-51% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(fluorometil)benzamid (35 mg, 0.071 mmol, 39% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.05 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.78 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 7.07 (br d, J=6.9 Hz, 1H), 6.42 (d, J=5.1 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.57 - 5.42 (m, 2H), 5.00 - 4.88 (m, 1H), 3.88 (br s, 2H).

LC/MS ESI/APCI m/z 492.01 (M+H)<+>

Primer 295: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometil)-2-fluorobenzamid

[0805]

[0806] 295A: 1-bromo-4-(difluorometil)-2-fluorobenzen: DAST (4.93 mL, 37.3 mmol) je dodat u kapima u 4-bromo-3-fluorobenzaldehid (7.57 g, 37.3 mmol), i reakciona smeša je zagrevana na 60 °C tokom 1 h. Ova reakciona smeša je sipana u ledenu vodu, i dodat je etar. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etrom tri puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovani natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtrat je uparen u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiran sa 0-10% etil acetata/heksana da se dobije 1-bromo-4-(difluorometil)-2-fluorobenzen (3.50 g, 15.6 mmol, 42% prinosa) kao bezbojno ulje.

[0807]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.68 (dd, J=8.0, 7.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J=8.2 Hz, 1H), 6.77 - 6.45 (t, J = 50 Hz, 1H).

[0808] 295B: 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluorobenzoeva kiselina: U bocu sa okruglim dnom od 100 mL su kombinovani 2M rastvor litijum diizopropilamida u THF (1.22 mL, 2.44 mmol) i THF (11.1 mL) da se dobije narandžasti rastvor. Rastvor je ohlađen do - 78 °Cu kupatilu suvog leda/acetona. Rastvor 1-bromo-4-(difluorometil)-2-fluorobenzena (0.500 g, 2.22 mmol) u THF je dodat u kapima. Rastvor je nakon dodavanja promenio boju iz narandžaste u tamno zelenu. Reakciona smeša je mešana 20 min na -78 °C. Dodat je suvi led da se ugasi reakcija. Gas je evoluirao dodavanjem suvog leda i rastvor je postao svetlo narandžaste boje. Smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature preko noći. Ostatak je formiran preko noći. Reakciona smeša je razblažena u etru i ekstrahovana sa 1M avodenim rastvorom natrijum hidroksida tri puta. Kombinovani vodeni slojevi su zakiseljeni sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom.

Vodena smeša je ponovo ekstrahovana etrom 3 puta. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom i osušeni natrijum sulfatom. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pri sniženom pritisku da bi se dobila 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluorobenzoeva kiselina (299 mg, 1.11 mmol, 50% prinosa) u obliku ulja.

[0809]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.90 - 7.80 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.25 -6.98 (m, 1H).

[0810] 295C: (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometil)-2-fluorobenzamid: U reakcionoj bočici od 10 mL su kombinovani (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (137 mg, 0.669 mmol), 3-bromo-6-(difluorometil)-2-fluorobenzoeva kiselina (150 mg, 0.558 mmol), BOP (296 mg, 0.669 mmol), i DIPEA (292 µL, 1.67 mmol) u DCM (2.8 mL) da se dobije bezbojni rastvor. Reakcija je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša sirovog materijala je prečišćena direktno fleš hromatografijom na silika gelu do prinosa (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometil)-2-fluorobenzamid (137 mg, 0.300 mmol, 54% prinosa).

LC/MS ESI/APCI m/z 455.90 (M+H)<+>

<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.81 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 3H), 7.21 - 6.96 (m, 3H), 6.52 (br s, 1H), 4.93 (dt, J=18.9, 4.2 Hz, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 1H), 3.86 (d, J=4.4 Hz, 1H), 3.71 - 3.61 (m, 1H).

[0811] 295: Reakciona bočica od 20 mL je napunjena sa 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-aminom (78.8 mg, 0.303 mmol) kao sirovom smešom, (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometil)-2-fluorobenzamidom (138 mg, 0.303 mmol), 2M vodenim rastvorom trobaznog kalijum fosfata (413 µL, 0.826 mmol), i Pd(dppf)Cl2, DCM aduktom (11.2 mg, 0.014 mmol). Reakciona smeša je degazirana evakuacijom i ponovnim punjenjem sa azotom tri puta. Reakcija je zagrevana do 80 °C na bloku za zagrevanje i mešana preko noći. LC/MS je pokzao da je polazni materijal potrošen. Reakcija je ohlađena do sobne temperature. Sirovi proizvod je koncentrovan pod blagom strujom azota i razblažen u etil acetatu. Smeša je filtrirana kroz jastuče celita i oprana sa više etil acetata. Rastvor etil acetata je koncentrovan pri smanjenom pritisku, razblažen u DMF, i filtriran kroz PTFE frit od 0.45um. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 13% B, 13-53% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometil)-2-fluorobenzamid (75.3 mg, 0.148 mmol, 53% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.18 (br s, 1H), 8.63 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 7.86 (br t, J=7.5 Hz, 1H), 7.62 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.51 - 7.42 (m, 2H), 7.20 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 7.12 - 6.85 (m, 2H), 4.91 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 2H), -0.01 (d, J=4.5 Hz, 1H) (one proton peak obscured by voda).

LC/MS ESI/APCI m/z 510.01 (M+H)<+>

Primer 296: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid

[0812]

[0813] 296A: etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionat: Smeša etil 2-hloro-2-fluoroacetata (5.14 mL, 44.3 mmol), 4-fluorobenzaldehida (4.32 mL, 40.3 mmol) i cinka (3.69 g, 56.4 mmol) u DMF (101 mL) je zagrevana na 80 °C primenom uljnog kupatila tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz jastuče celta, i dodato je 1 N vodenog rastvora HCl. Vodeni sloj je ekstrahovana sa etil acetatom tri puta. Kombinovani organski slojevisu isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtrat je uparen u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiran sa 01-15% etil acetata/heksana da se dobije etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionat (2.00 g, 8.69 mmol, 22% prinosa).

[0814]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.13 - 7.05 (m, 2H), 5.19 -5.10 (m, 1H), 5.09 - 4.94 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 2.88 - 2.66 (m, 1H), 1.29 - 1.21 (m, 3H).

[0815] 296B: 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: U rastvor etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionata (850 mg, 3.69 mmol) u metanolu (9.2 mL) na sobnoj temperaturi je dodato 7 M amonijaka u metanolu (2.64 mL, 18.46 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (750 mg, 3.73 mmol, 100% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. Ovaj materijal se koristi bez daljeg prečišćavanja. LC/MS ESI/APCI m/z 200.10 (M-H)-[0816] 296C: 3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol: U rastvor 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (810 mg, 4.03 mmol) u THF (8.05 mL) je dodat 2.0 M kompleks boran-metil sulfida u THF (6.04 mL, 12.08 mmol). Reakciona smeša je zagrevana pod refluksom tokom 2 h. Posle zagrevanja, dodat je metanol, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Metanol je uklonjen u vakuumu, i ostatak je azeotropiran sa metanolom da se ukloni B(OH)3tri puta da se dobije 3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (760 mg, 4.06 mmol, 100% prinosa) kao čvrsta supstanca. Ovaj materijal se koristi direktno u sledećim koracima bez daljeg prečišćavanja.

LC/MS ESI/APCI m/z 187.85 (M+H)<+>

[0817] 296D: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid: U suvu bočicu sa okruglim dnom od 100 mL pod azotom dodati su 3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (250 mg, 1.34 mmol), 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (400 mg, 1.30 mmol), dihlorometan (8 mL) i N,N-diizopropiletilamin (350 µL, 2.00 mmol). Reakcija je kratko isprana azotom, zatim tretirana sa BOP (635 mg, 1.44 mmol), zatim je bočica zatvorena i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Sirovi proizvod je rerastvoren u 4 mL DMF i filtriran kroz PTFE frit od 0.45um. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 8% B, 8-38% B preko 30 minuta, zatim zadržavanje 5-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Prečišćavanje je dalo dve razdvojene enantiomerne smeše 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-(2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamida. Prvi izolat koji je eluiran iz preparativnog razdvajanja reverzne faze je racemat 296D-01 (133.4 mg, 0.28 mmol, 22% prinosa). Drugi izolat koji je eluiran iz preparativnog razdvajanja reverzne faze je racemat 296D-02 (112.1 mg, 0.24 mmol, 18% prinosa).

296D-01: LC/MS ESI/APCI m/z 475.96 (M+H)<+>

296D-02: LC/MS ESI/APCI m/z 475.99 (M+H)<+>

[0818] 296: Izolat 296D-01 (119 mg, 0.25 mmol) je podvrgnut hiralnom SFC razdvajanju pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 50% CO2/ 50% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 50% CO2/ 50% MeOH tež/0.1%DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 600 µL 133.4 mg rastvoreno u 3 mL DMSO. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer, su kombinovane i osušene da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (46.4 mg, 0.098 mmol, >95% ee, 39% prinosa). Tačna (2S,3S) stereohemija ovog materijala je određena analitičkom hiralnom SFC hromatografijom vremena zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal (SRM) je sintetizovan korišćenjem enantiočistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zraka kao što je opisano u odeljcima Intermedijeri 296-SRM-A do 296-SRM-D.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.42 (m, 4H), 7.20 (t, J=9.0 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 5.89 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.86 - 4.77 (m, 1H), 4.64 - 4.58 (m, 1H), 4.73 - 4.56 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 476.16 (M+H)<+>

Pik 1:

Pik 2:

[0819] Intermedijeri 296-SRM-A: Racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida: U rastvor etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionata (priprema kao što je opisano u 296A) (2.00 g, 8.69 mmol) u metanolu (21.7 mL) na sobnoj temperaturi je dodato 7M amonijaka u metanolu (6.21 mL, 43.4 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h Ovaj materijal je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (Kolona = Waters Sunfire Prep C18 OBD, 50 × 250 mm, čestice 10 mikrona, rastvarač A = 95% voda, 5% acetonitril, 10 mM amonijum acetat, rastvarač B = 5% voda, 95% acetonitril, 10 mM amonijum acetat, brzina protoka = 100 mL/min, elucioni gradijent 0 do 30 % B preko 25 minuta) da bi se dobila dva odvojena pika. Prvi vrh koji je eluiran bio je koncentrovan da bi se dobila racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (0.67 g, 3.33 mmol, 38% prinosa) kao beli prah, a drugi vrh koji je eluiran bio je koncentrisan da bi se dobila racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (0.70 g, 3.48 mmol, 40% prinosa) kao beli prah. Stereohemija oba izolata određena je rendgenskom kristalografijom X-zraka.

Pik 1:

Pik 2:

[0820] Intermedijeri 296-SRM-B: (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: Racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (640 mg, 3.18 mmol) je razdvojena u pojedinačne izomere preparativnom hiralnom SFC hromatografijom. Instrument: PIC Prep SFC; kolona: Chiral IG, 30 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 90% CO2/ 10% IPA; uslovi protoka: 85 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 900 µL 639 mg materiala rastvoreno u 20 mL IPA. Tako su dobijeni razdvojeni materijali (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (200 mg, 0.994 mmol, 31% prinosa) kao prvi materijal koji je eluiran putem preparativnog SFC razdvajanja, i (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (240 mg, 1.19 mmol, 38% prinosa) as kao drugi materijal koji je eluiran putem preparativnog SFC razdvajanja. Apsolutna stereohemija oba materijala je određena rendgenskom kristalografijom X-zraka.

[0821] Intermedijer 296-SRM-C: (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol: U rastvor (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (234 mg, 1.163 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) je dodat 2.0 M rastvor kompleksa borane dimetil sulfid u THF (1.75 mL, 3.50 mmol) preko 3-4 min. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min i zatim je zagrevana do 80 °C u uljnom kupatilu tokom 2 h. Metanol (50 mL) je lagano dodavan i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, zatim je ostatak rerastvoren u MeOH (65 mL) i uparen do suva ponovo. Ovaj metanolni azeotrop je ponovljen još jednom. Tako je dobijen (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (344 mg, višak težine, pretpostavljeno 100% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. Materijal je korišćen kakav jeste u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja. LC/MS ESI/APCI m/z 187.85 (M+H)<+>

[0822] 296-SRM-D: U suvoj bočici pod azotom su kombinovane 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (12 mg, 0.039 mmol), (1S,2S)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (8.8 mg, 0.047 mmol), anhidrovana DMF (1.0 mL) i N,N-diizopropiletilamin (35 µL, 0.20 mmol). Reakcija je kratsko isprana azotom, tretirana sa BOP (26 mg, 0.059 mmol), zatvorena i zagrevana tokom tokom 2h. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 7% B, 7-47% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20

[0823] mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (9.0 mg, mmol, 48% prinosa). Ovaj materijal je korišćen kao standardni referentni materijal za određivanje apsolutne stereohemije Primera 296 i Primera 297 putem analitičke hiralne SFC hromatografije..

Primer 297: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid

[0824]

[0825] Naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamida (45.8 mg, 0.096 mmol, 39% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 296. Tačna (2R,3R) sterehemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom retencionim vremenom u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiopčistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zraka, kao što je opisano u odeljku Intermedijeri 296-SRM-A do 296-SRM-D.

[0826]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 4H), 7.20 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.88 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.86 - 4.77 (m, 1H), 4.76 - 4.55 (m, 1H). LC/MS ESI/APCI m/z 476.18 (M+H)<+>

Primer 298: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid

[0827]

[0828] Izolat 296D-02 (112 mg, 0.24 mmol) je podvrgnut hiralnom SFC razdvajanju pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% MeOH tež/0.1% DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Preparativni SFC hromatografski uslovi: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 65% CO2/ 35% MeOH tež/0.1% DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 600 µL 112 mg rastvoreno u 3 mL DMSO. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (42.3 mg, 0.089 mmol, >95% ee, 37% prinosa). Tačna (2R,3S) sterehemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom retencionim vremenom u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih početnih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zracima, kao što je opisano u odeljku Intermedijeri 298-SRM-A do 298-SRM-D.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 4H), 7.19 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 4.72 - 4.54 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 475.90 (M+H)<+>

Pik 1:

Pik 2:

[0829] Intermedijeri 298-SRM-A: Racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida: U rastvor etil 2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropionata (pripremljeno kao što je opisano u 296A) (2.00 g, 8.69 mmol) u metanolu (21.7 mL) na sobnoj temperaturi je dodato 7M amonijaka u metanolu (6.21 mL, 43.4 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Ovaj materijal je prečišćen preparativnom HPLC sa reverznom fazom (Kolona = waters Sunfire Prep C18 OBD, 50 × 250 mm, čestice 10 mikrona, rastvarač A = 95% voda, 5% acetonitril, 10 mM amonijum acetat, rstvarač B = 5% voda, 95% acetonitril, 10 mM amonijum acetat, brzina protoka = 100 mL/min, elucioni gradijent 0 do 30 % B preko 25 minuta) da bi se dobila dva odvojena pika. Prvi pik koji je eluiran je koncentrovan da bi se dobila racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (0.67 g, 3.33 mmol, 38% prinosa) kao beli prah, a drugi pik koji je eluiran bio je koncentrisan da bi se dobila racemska smeša (2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (0.70 g, 3.48 mmol, 40% prinosa) kao beli prah. Stereohemija oba izolata određena je rendgenskom kristalografijom X-zracima.

Pik 1:

Peak 2:

[0830] Intermedijeri 298-SRM-B: (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid: Racemska smeša (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida i (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (559 mg, 2.78 mmol) je razdvojena na pojedinačne izomere preparativnom hiralnom SFC hromatografijom. Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Agilent SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 250 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 90% CO2 / 10% IPA-ACN; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Berger Prep SFC; kolona: Chiral IC, 30 × 250 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 90% CO2 / 10% IPA-ACN; brzina protoka:85 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 1500 mikrolitara injektirano 559 mg racemata rastvoreno u 8 mL IPA-ACN. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (180 mg, 0.895 mmol, 32% prinosa).

[0831] Frakcije koje sadrže drugi eluirani izomer su kombinovane i osušene da se dobije (2R,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamid (230 mg, 1.14 mmol, 41% prinosa). Apsolutna stereohemija ovog drugog materijala za eluiranje je određena rendgenskom kristalografijom X-zracima.

[0832] Intermediajer 298-SRM-C: (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol: U rastvor (2S,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropanamida (100 mg, 0.497 mmol) u anhidrovanom THF (2.0 mL) je dodat kompleks boran-metil sulfid 2.0 M u THF (750 µL, 1.50 mmol). Reakcija je je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min, zatim je zagrevana na 80 °C tokom 125 min. Reakcija je ugašena sa metanolom (2.5 mL) i isparljive materije su uklonjene u vakuumu da daju (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (95 mg, 0.51 mmol, kvantitativnog prinosa) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku.

MS ESI m/z 187.8 (M+H)<+>

[0833] 298-SRM-D: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid: U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (9.0 mg, 0.029 mmol), (1S,2R)-3-amino-2-fluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ola (6.1 mg, 0.033 mmol), i N,N-diizopropiletilamina (26 µL, 0.15 mmol) u DMF (1 mL) je dodat BOP (17 mg, 0.038 mmol). Reakcija je je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, zatim je smeša filtrirana i prečišćena putem riverzne faze preparativnom LCMS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 9% B, 9-49% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2R,3S)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (9.8 mg, 0.020 mmol, 70% prinosa). Ovaj materijal se koristi kao standardni referntni materijal za određivanje apsolutne sterohemije Primera 298 i Primera 299 putem analitičke hiralne SFC hromatografije.

MS ESI m/z 476.0 (M+H)<+>

Primer 299: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid

[0834]

[0835] Naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((2S,3R)-2-fluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)benzamid (39.0 mg, 0.082 mmol, 35% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 298. Tačna (2S,3R) stereohemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom, vreme zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih početnih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zracima, kao što je opisano u odeljku Intermedijeri 298-SRM-A do 298-SRM-D.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (br s, 1H), 8.62 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.72 (br t, J=7.9 Hz, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 4H), 7.19 (br t, J=8.4 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 4.78 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 4.73 - 4.54 (m, 1H), 3.55 (br d, J=6.7 Hz, 1H). LC/MS ESI/APCI m/z 475.95 (M+H)<+>

Primer 300: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2R,3S)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0836]

[0837] 300A: etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropionat: U suspenziju cinka (5.58 g, 85.0 mmol) u THF (85 mL) je dodat u kapima rastvor etil 2-bromo-2-fluoroacetata (6.05 mL, 51.2 mmol) i 4-hlorobenzaldehida (6.00 g, 42.7 mmol) u THF (15 mL) uz levak za dodavanje tokom 15 minuta. Reakciona smešaje zagrevana pod refluksom tokom 30 minuta. Posle filtriranja dodati su 1 N vodeni rastvor HCl i etar. Vodeni sloj je ekstrahovana sa etil acetatom tri puta. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom, i filtrirani. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiran sa 0-15% etil acetata/heksana da se dobije etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropionat (6.50 g, 26.4 mmol, 62% prinosa).

[0838]<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.42 - 7.35 (m, 8H), 5.20 - 5.10 (m, 2H), 5.06 (dd, J=9.7, 4.4 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=9.4, 4.4 Hz, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 4H), 3.04 - 2.90 (m, 1H), 2.77 (br d, J=3.1 Hz, 1H), 1.25 (dt, J=11.8, 7.2 Hz, 6H).

[0839] 300B: 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropanamid: U rastvor etil 3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropionata (2.22 g, 9.00 mmol) u MeOH (18.0 mL) na sobnoj temperaturi je dodato 7 M amonijaka u metanolu (6.43 mL, 45.0 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Ostaci rastvarača su uklonjeni pri smanjenom pritisku. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobile dve enantiomerne smeše. Prvi eluirani izolat iz preparativnog HPLC odvajanja reverzne faze je 300B-01 (0.80 g, 3.68 mmol, 41% prinosa). Drugi eluirani izolat iz preparativnog HPLC odvajanja reverzne faze je 300B-02 (0.75 g, 3.45 mmol, 38% prinosa).

[0840] 300B-01:<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ 7.43 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 5.13 (s, 1H), 5.10 - 5.02 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 215.85 (M-H)-[0841] 300B-02:<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ 7.50 - 7.44 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 5.21 - 5.10 (m, 1H), 5.03 - 4.90 (m, 1H).

LC/MS ESI/APCI m/z 215.80 (M-H)-[0842] 300C: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ol: U rastvor izolata 300B-01 (655 mg, 3.01 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) je dodat 2.0 M rastvor kompleksa boran dimetil sulfid u THF (4.50 mL, 9.00 mmol). Tokom dodavanja došlo je do velike evolucije gasa. Nakon što je dodavanje završeno, reakcija je kratko isprana azotom, a zatim zagrevana u uljnom kupatilu na 80 °C tokom 2.5 sata. Reakciona smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i dodat je metanol (75 mL). Metanol je uklonjen u vakuumu. Reakciona smeša sirovog materijala je azeotropovana sa metanolom tri puta i proizvod je osušen pod visokim vakuumom preko noći do prinosa 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ola (676 mg, 3.32 mmol, kvantitativni prinos) kao belo ulje. LC/MS ESI/APCI m/z 203.80 (M+H)<+>

[0843] 300D: terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U reakcionoj bočici od 20 mL pomešani su 3-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (200 mg, 0.518 mmol), 300C 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ola (116 mg, 0.569 mmol), BOP (275 mg, 0.621 mmol), i DIPEA (271 µL, 1.55 mmol) u DCM (2.6 mL) da se dobije žutomrki rastvor. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Sirovi reakcioni materijal je prečišćen direktno fleš hromatografijom na silika gelu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pri smanjeenom pritisku do prinosa terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamata (98 mg, 0.171 mmol, 33% prinosa). Materijal se takav koristi u sledećem koraku.

[0844] 300E: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid, TFA: U reakcionoj bočici od 2 drama su kombinovani terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat (98 mg, 0.171 mmol) i 4 M rastvor hlorovodonika u dioksanu (214 µL, 0.857 mmol) u dioksanu (343 µL) da se dobije bezbojni rastvor. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je koncentrovana pod blagom strujom azota i rastvorena u DMF. Uzorak je filtriran kroz PTFE frit od 0.45 um. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 9% B, 9-49% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid, TFA (59 mg, 0.10 mmol, 59% prinosa).

LC/MS ESI/APCI m/z 471.97 (M+H)<+>

[0845] 300: Izolat 300E 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamida TFA (59 mg, 0.10 mmol) je podvrgnut hiralnom razdvajanju pri sledećim uslovima: Analitički hromatografski uslovi (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm. 5 mikrona; mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH tež/0.1%DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 500 µL 47.7 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer iz preparativnog SFC odvajanja su kombinovane i osušene da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2R,3S)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (14.8 mg, 0.031 mmol, >95% ee, 31% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (br t, J=5.2 Hz, 1H), 8.59 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.57 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 5H), 7.22 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.79 (br d, J=9.2 Hz, 1H), 4.74 - 4.58 (m, 1H), 2.29 (s, 3H). (Neki protoni su zaklonjeni potiskivanjem vode). Tačna (2R,3S) stereohemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom vremena zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zracima. Standardni referentni materijali su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 296 počevši od odeljka 296-SRM-A.

LC/MS ESI/APCI m/z 472.06 (M+H)<+>

Primer 301: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2S,3R)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0846]

[0847] Naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N((2S,3R)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (14.6 mg, 0.031 mmol, 31% prinosa) je dobijen kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 300. Tačna (2S,3R) stereohemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom vremena zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zracima. Standardni referentni materijali su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 296, počevši od odeljka 296-SRM-A.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.60 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.58 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 5H), 7.22 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.03 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.79 (br dd, J=12.8, 5.2 Hz, 1H), 4.73 - 4.56 (m, 1H), 3.71 - 3.57 (m, 1H), 2.30 (s, 3H).

LC/MS ESI/APCI m/z 472.05 (M+H)<+>

Primer 302: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2S,3S)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0848]

[0849] 302A: 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ol: Rastvoru 300B-02 (797 mg, 3.66 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) je dodat 2.0 M rastvor kompleksa boran dimetil sulfida u THF (5.50 mL, 11.0 mmol). Tokom dodavanja došlo je do velike evolucije gasa. Po završetku dodavanja Reakcija je kratko isprana azotom, a zatim zagrevana u uljnom kupatilu na 80 °C tokom 2.5 h. Reakciona smeša je ohlađena na ledenom kupatilu i dodat je metanol (75 mL). Metanol je uklonjen u vakuumu. Reakciona smeša sirovog materijala je azeotropirana sa metanolom tri puta i proizvod je osušen pod visokim vakuumom preko noći do prinosa 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ola (803 mg, 3.94 mmol, kvantitativni prinos) kao belo ulje.

LC/MS ESI/APCI m/z 203.85 (M+H)<+>

[0850] 302B: terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat: U reakcionoj bočici od 20 mL pomešani su 3-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-6-metilbenzoeva kiselina (200 mg, 0.518 mmol), 3-amino-1-(4-hlorofenil)-2-fluoropropan-1-ol (116 mg, 0.569 mmol), BOP (275 mg, 0.621 mmol), i DIPEA (271 µL, 1.55 mmol) u DCM (2.6 mL) da se dobije žutomrki rastvor. Reakcija je mešana tokom 2 h. Reakciona smeša sirovog materijala je prečišćena direktno fleš hromatografijom na silika gelu da se dobije terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat (123 mg, 0.215 mmol, 42% prinosa).

[0851] 302C: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid TFA: U reakcionoj bočici od 2 drama su kombinovani terc-butil (7-(3-((3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)karbonil)-2-fluoro-4-metilfenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)karbamat (145 mg, 0.253 mmol) i 4 M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (317 µL, 1.27 mmol) u dioksanu (507 µL) da se dobije bezbojni rastvor. Reakcija je je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nastao je beli talog. Reakciona smeša je koncentrovana pod blagom strujom azota. Sirovi materijal je rastvoren u DMF i filtriran kroz PTFE frit od 0.45 um. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 8% B, 8-48% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije etil 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N (3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid TFA (88.9 mg, 0.152 mmol, 29% prinosa).

LC/MS ESI/APCI m/z 472.00 (M+H)<+>

[0852] 302: Izolat 302C 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid TFA (89 mg, 0.152 mmol) je podvrgnut hiralnom razdvajanju pri sledećim uslovima: Uslovi analitičke hromatografije (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; kolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 50% CO2/ 50% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 50% CO2/ 50% MeOH tež/0.1% DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 2000 µL 71.7 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer iz preparativnog SFC odvajanja su kombinovane i osušene da se dobije 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2S,3S)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (6.3 mg, 0.013 mmol, >95% ee, 9% prinosa). Tačna (2S,3S) stereohemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom vremena zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom Xzracima. Standardni referentni materijali su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 296, počevši od odeljka 296-SRM-A.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (t, J=5.9 Hz, 1H), 8.59 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.43 (s, 4H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.76 - 4.59 (m, 1H), 2.29 (s, 3H).

LC/MS ESI/APCI m/z 472.01 (M+H)<+>

Primer 303: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N((2R,3R)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid

[0853]

[0854] Naslovno jedinjenje 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-((2R,3R)-3-(4-hlorofenil)-2-fluoro-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-metilbenzamid (6.1 mg, 0.013 mmol, 9% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano u Primeru 299. Tačna (2R,3R) stereohemija ovog materijala određena je analitičkom hiralnom SFC hromatografijom vremena zadržavanja u poređenju sa standardnim referentnim materijalom. Standardni referentni materijal je sintetizovan korišćenjem enantiočistih polaznih materijala sa apsolutnom stereohemijom koja je potvrđena rendgenskom kristalografijom X-zracima. Standardni referentni materijali su pripremljeni na sličan način kao što je opisano za Primer 296, počevši od odeljka 296-SRM-A.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (t, J=6.1 Hz, 1H), 8.60 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.58 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 5H), 7.22 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.85 - 4.77 (m, 1H), 4.76 - 4.61 (m, 1H), 2.30 (s, 3H).

LC/MS ESI/APCI m/z 472.04 (M+H)<+>

Tabela 21: Jedinjenja u Tabeli 21 su pripremljena na sličan način kao u Primeru 120.

Primer 306: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzamid

[0855]

[0856] 306A: metil 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoate: U smešu 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzojeve kiseline (430 mg, 1.73 mmol) u MeOH (42 mL) dodato je 5 kapi koncentrovane H2SO4. Smeša je mešana na 85 °C preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sa zasićenim NaHCO3(20 mL) i slanim rastvorom (20 mL), osušena Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da se dobije metil 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoat (450 mg, 4.30 mmol, 99% prinosa) koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0857]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.55 (dd, J=8.9, 7.7 Hz, 1H), 6.67 (dd, J=9.0, 1.3 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.88 (s, 3H). MS ESI m/z 263.2 (M+H)<+>.

[0858] 306B: metil 3-bromo-2-fluoro-6-hidroksibenzoat: Metil 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzoat (450 mg, 4.30 mmol) je rastvoren u DCM (6 mL). Aluminijum hlorid (460 mg, 3.45 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je sipana u ledenu vodu (20 mL) i ekstrahovana sa DCM (20 mL x3). Kombinovani organski slojevi su osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da se dobije metil 3-bromo-2-fluoro-6-hidroksibenzoat (430 mg, 4.30 mmol, 100% prinosa) koji se koristi u sleećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0859]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 11.27 (s, 1H), 7.59 (dd, J=9.0, 7.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J=9.1, 1.7 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H).

[0860] 306C: metil 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoate: Smeša metil 3-bromo-2-fluoro-6-hidroksibenzoata (125 mg, 0.502 mmol), acetonitrila (1.0 mL) i 6M vodenog rastvora KOH (1.0 mL) je tretirana sa difluorometil trifluorometanesulfonatom (301 mg, 1.51 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Smeša je razblažena sa H2O (8 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 8 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu do se dobije metil 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoat (150 mg, 0.502 mmol, 100% prinosa) koji se koristi u sleećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0861]<1>H NMR (499 MHz, DMSO-d6) δ 7.98 (dd, J=8.9, 8.1 Hz, 1H), 7.54 - 7.14 (m, 2H), 3.91 (s, 3H).

[0862] 306D: 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoeva kiselina: Smeša metil 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoata (150 mg, 0.502 mmol) u EtOH (2 mL) i vodeni rastvor 10N NaOH (0.200 mL, 2.00 mmol) su mešani na 80°C tokom 30min. Rastvor je zakiseljen sa koncentrovanom HCl i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoeva kiselina (143mg, 0.502 mmol, 100% prinosa) koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0863] 306E: (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzamid: 3-bromo-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzoeva kiselina (143 mg, 0.502 mmol) je rastvorena u DMF (3 mL) i rastvor je tretiran sa BOP (266 mg, 0.602 mmol), Hunigovom bazom (175 µL, 1.00 mmol) i (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-olom (103 mg, 0.502 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Smeša je razblažena sa H2O (8 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 8 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da se dobije (230 mg, 0.487 mmol, 97% prinosa) koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0864] 306: Smeša 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (30 mg, 0.141 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (5.75 mg, 7.04 µmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (42.9 mg, 0.169 mmol) i kalijum acetata (41.5 mg, 0.422 mmol) u dioksanu (2 mL) je pročišćena sa azotom i mešana na 105 °C tokom 2 h. U smešu je dodat (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzamid (66.5 mg, 0.141 mmol), PdCl2(dtbpf) (9.18 mg, 0.014 mmol) i 2M vodenog rastvora kalijum fosfata (211 µL, 0.422 mmol). Dobijena smeša je degazirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 2 min i zatim mešana na 110 °C tokom 1.5 h. Reakciona smeša je filtrirana i zatim je filtrat koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS pod sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 15% B, 15-55% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzamid (13.1 mg, 0.0249 mmol, 18% prinosa)

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.05 (br t, J=5.7 Hz, 1H), 8.62 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 7.78 (br t, J=8.8 Hz, 1H), 7.54 - 7.43 (m, 3H), 7.28 - 7.17 (m, 4H), 7.13 - 6.99 (m, 1H), 6.50 -6.38 (m, 1H), 6.08 (br s, 2H), 4.91 (dt, J=16.6, 5.8 Hz, 1H), 3.94 - 3.71 (m, 2H).

MS ESI m/z 525.9 (M+H)<+>

Primer 307: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)cikopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamid

[0865]

[0866] 307A: 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksilna kiselina: U bočici od 40 mL su kombinovani metil 3-(4-fluorofenil)-3-oksopropionat (1.50 g, 7.65 mmol), K2CO3(2.11 g, 15.3 mmol), metanol (1.24 mL) i DMSO (15 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. 1,2-dibromoetan (5.75 g, 30.6 mmol) je dodat u jednoj porciji. Smeša je zagrevana do 65 °C tokom 30 h. Reakcija je ugašena dodavanjem 12 mL vode. Smeša je ekstrahovana sa DCM (30 mL × 3) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (30 mL × 3), osušena anhidrovanim natrijum sulfatom, filtrirana i filtrat je uparavan pod smanjenim pritiskom. Proizvod je prečišćen na koloni silika gela (40 g silike, gradijent EtOAc/heksana = 0-60%, gradijent vreme = 15min pri brzini protoka = 30 mL/min). Frakcije koje sadrže željeni estarski proizvod su kombinovane i koncentrovane, i ostatak je rastvoren u smeši MeOH (5 mL) i vode (1 mL) i tretirane sa 12N vodenim rastvorom NaOH (1.5 mL, 18 mmol). Dobijena smeša je mešana na 65 °C tokom 5 h. Smeša je zakiseljena sa koncentrovanom HCl i rastvarač je uklonjen da se dobije željena 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksilna kiselina (0.80 g, 50% prinosa). Materija se tako koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 209.2 (M+H)<+>

[0867] 307B: 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksamid: U rastvor 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksilne kiseline (470 mg, 2.26 mmol), amonijum karbonata (868 mg, 9.03 mmol) i DIPEA (0.789 mL, 4.52 mmol) u DMF (6 mL) je dodat BOP (1.20 g, 2.71 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (20 mL) i EtOAc (30 mL), organski sloj je razdvojen i ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(20 mL ×2) i slanim rastvorom (20 mL), osušen anhidrovanim Na2SO4, filtriran i koncentrovan pri sniženim pritiskom da se dobije 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksamid (470 mg, 2.26 mmol, 100% prinosa) koji se koristi u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.07 - 7.94 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 5.80 -5.40 (m, 2H), 1.69 - 1.65 (m, 2H), 1.47 - 1.41 (m, 2H).

MS ESI m/z 208.2 (M+H)<+>

[0868] 307C: (1-(aminometil)ciklopropil)(4-fluorofenil)metanol: U bočicu pod pritiskom od 8 mL napunjenu azotom, rastvor 1-(4-fluorobenzoil)ciklopropan-1-karboksamida (100 mg, 0.483 mmol) u THF (3 mL) je tretiran sa 5M kompleksa boran-metil sulfid u THF (0.483 mL, 2.413 mmol) na sobnoj temperaturi. Uočena je efervescencija. Bočica je zatvorena i smeša je mešana na 80 °C preko noći. Reakcija je ugašena pažljivim dodavanjem metanola (1 mL) u kapima koje je izazvalo snažnu efervescenciju i zagrevanje smeše. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije viskozno ulje. Tako dobijeni sirovi ketonski proizvod (MS ESI m/z = 193.3 (M+H)<+>) je zatim rastvoren u smeši DCM (4 mL) i MeOH (2 mL), i smeši je dodat NaBH4(110 mg, 2.90 mmol) u 3 porcije preko 1 h. Smeša je mešana za sledećih 1 h i zatim tretirana sa 1N vod. HCl (2 mL) i zagrevana do 65 °C tokom 1 h. U početku je primećena blaga efervescencija. Mutna smeša je postala bistra i boja je vremenom postala blago smeđa. Smeša je koncentrovana in vakuumu, a ostatak sirovog materijala je triturisan sa Et2O. Ostatak je osušen pod vakuumom da bi se dobio sirovi (1-(aminometil)cyclopropil)(4-fluorofenil)metanol (70 mg, 0.359 mmol, 74% prinosa) kao čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS ESI m/z 196.3 (M+H)<+>

[0869] 307D: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)benzamid: U rastvor 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluorobenzojeve kiseline (80.0 mg, 0.261 mmol), (1-(aminometil)ciklopropil)(4-fluorofenil)metanola (61.1 mg, 0.313 mmol) i DIPEA (0.137 mL, 0.783 mmol) u DMF (3 mL) je dodat BOP (138 mg, 0.313 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je triturisan u vodi (5 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena i zatim prečišćena na koloni silika gela (12 g silike, gradijent EtOAc/Heksana = 0-100%, vreme gradijenta = 12min, brzina protoka 25 mL/min) da se dobije racemski 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)benzamid (69 mg, 0.143 mmol, 55% prinosa). Proizvod je takav prenet direktno u sledeći korak.

MS ESI m/z 484.5 (M+H)<+>

[0870] 307: Smeša 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)benzamida (35 mg, 0.072 mmol), PdCl2(dtbpf) (4.71 mg, 7.23 µmol) i (metil-d3)boronske kiseline (0.310 mL, 0.217 mmol) u dioksanu (2 mL) je pročišćena sa azotom tokom 1 min.2M vodeni rastvor trobaznog kalijum fosfata (0.199 mL, 0.398 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrevana do 130 °C preko noći. Sirovi materijal je prečišćen direktno preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; gradijent: zadržavanje 0-minuta na 15% B, 15-55% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 0-minuta na 100% B; brzina protoka: 20 mL/min; temperatura kolone: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Tako dobijeni ostatak je dalje prečišćavan preparativnom hiralnom SFC hromatografijom da se dobiju razdvojeni enantiomeri pri sledećim uslovima: Uslovi analitičke hromatografije (pre preparativnog odvajanja SFC): Instrument: Shimadzu Nexera UC SFC; klolona: Chiral IC, 4.6 × 150 mm, 5 mikrona; mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH tež/0.1%DEA; uslovi protoka: 2 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm. Uslovi preparativne SFC hromatografije: Instrument: Waters 100 Prep SFC; kolona: Chiral IC, 21 × 250 mm.5 mikrona; mobilna faza: 55% CO2/ 45% MeOH tež/0.1%DEA; brzina protoka: 60 mL/min; detektor talasne dužine: 220 nm; detalji injektiranja: 1500 µL 7.4 mg rastvoreno u 3 mL MeOH. Frakcije koje sadrže prvi eluirani izomer su kombinovane i osušene da bi se dobilo naslovno jedinjenje enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamida (2.5 mg, 0.0053 mmol, 9% prinosa).

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.45 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (br dd, J=8.1, 6.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.15 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.38 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.57 (dt, J=4.2, 0.8 Hz, 1H), 3.44 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 3.15 (br dd, J=13.7, 6.4 Hz, 1H), 0.65 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 0.48 (s, 3H).

MS ESI m/z 467.1 (M+H)<+>

Primer 308: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamid

[0871]

[0872] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N ((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamida (2.6 mg, 0.0055 mmol, 9% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju koje je opisano za Primer 307.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.45 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 7.57 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (br dd, J=8.1, 6.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.15 (br t, J=8.7 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.39 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.56 (br d, J=4.3 Hz, 1H), 3.45 (br d, J=5.8 Hz, 1H), 3.15 (br dd, J=13.7, 6.1 Hz, 1H), 0.68 - 0.62 (m, 1H), 0.52 - 0.43 (m, 3H).

MS ESI m/z 467.2 (M+H)<+>

Primer 309: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil-d)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamid

[0873]

[0874] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao Primer 307, osim što je NaBD4korišćen za zamenu NaBH4u koraku 307C. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metild)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamida (3.3 mg, 0.0070 mmol, 20% prinosa) kao prvi eluirani izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 (d, J=6.7 Hz, 1H), 8.45 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 7.59 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (dd, J=8.5, 5.8 Hz, 2H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.15 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 7.04 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.11 - 6.03 (m, 2H), 0.66 (br d, J=9.5 Hz, 1H), 0.52 - 0.44 (m, 3H).

MS ESI m/z 468.3 (M+H)<+>

Primer 310: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-2-fluoro-N-((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil-d)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamid

[0875]

[0876] Naslovno jedinjenje enantiomer 23-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-i)-2-fluoro-N ((1-((4-fluorofenil)(hidroksi)metil-d)ciklopropil)metil)-6-(metil-d3)benzamida (3.1 mg, 0.0066 mmol, 19% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer iz hiralnog SFC prečišćavanja za Primer 309.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.45 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 7.58 (br t, J=8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (br dd, J=7.9, 6.1 Hz, 2H), 7.22 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.15 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 7.05 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 0.65 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 0.52 - 0.44 (m, 3H).

MS ESI m/z 468.3 (M+H)<+>

Primer 311: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3-(4-(difluorometil)fenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil-3-d)-2-fluorobenzamid

[0877]

[0878] 311A: (4-(difluorometil)fenil)metan-d2-ol: U zatvorenoj epruveti od 40 mL u atmosferi azota, smeša 4-(difluorometil)benzojeve kiseline (800mg, 4.65 mmol) i natrijum tetrahidroboratd4(292 mg, 6.97 mmol) u THF (12 mL) je tretirana sa rastvorom BF3OEt2(0.383 mL, 3.02 mmol) u THF (5 mL) na sobnoj temperaturi. Smeša je zagrevana do refluksa (65 °C) tokom 1.5 h dok TLC na silicijum dioksidu nije pokazala završetak reakcije. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i ugašena vodom, što je rezultiralo snažnom evolucijom gasa. Reakciona smeša je filtrirana pod vakuumom kroz Celite jastučić. Filtrat je zakiseljen dodavanjem 1N vodenog rastvora HCl u kapima uz mešanje. Zakiseljeni filtrat je razblažen sa 30 mL EtOAc. Rastvor EtOAc je opran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(2 × 20 mL) i slanim rastvorom (20 mL), osušen anhidrovanim Na2SO4, filtriran koncentrovan pri sniženom pritisku da se dobije (4-(difluorometil)fenil)metan-d2-ol (650mg, 4.05 mmol, 87% prinosa) kao blago zelena čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0879]<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.23 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.58 - 7.42 (m, 2H), 6.90 - 6.51 (m, 1H).

[0880] 311B: 4-difluorobenzaldehid-d1: (4-(difluorometil)fenil)metan-d2-ol (650 mg, 4.06 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL) i piridinijum hlorohromat (3.01 g, 13.9 mmol) je dodat na 0 °C. Smeša je mešana tokom 1.5 h od 0 °C do sobne temperature. Smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 (15 mL) i zatim ekstrahovana sa EtOAc (50 mL). Organski slojevi su zatim isprani sa slanim rastvorom (30 mL), osušeni Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pri sniženom pritisku. Smeša je prečišćena hromatografijom na silka gelu (24 g silike, gradijent EtOAc/heksani = 0-50%, vreme gradijenta = 12min, brzina protoka 30 mL/min). Tako je dobijen 4-difluorobenzaldehid-d1(469 mg, 2.61 mmol, 64% prinosa).

<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.06 - 7.92 (m, 2H), 7.72 (d, J=8.0 Hz, 2H), 6.92 - 6.52 (m, 1H).

MS ESI m/z 158.2 (M+H)<+>

[0881] 311: Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao Primer 110, gde 4-difluorobenzaldehid-d1se koristi umesto 3,4-dihlorobenzaldehida u koraku 110A. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3-(4-(difluorometil)fenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil-3-d)-2-fluorobenzamida (28.2 mg, 0.0535 mmol, 33% prinosa) kao prvi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.19 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.63 (d, J=6.7 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.79 - 7.70 (m, 1H), 7.60 (s, 4H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.20 - 6.93 (m, 2H), 6.11 (s, 1H).

MS ESI m/z 527.3 (M+H)<+>.

Primer 312: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3-(4-(difluorometil)fenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil-3-d)-2-fluorobenzamid

[0882]

[0883] Naslovno jedinjenje enantiomer 23-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (3-(4-(difluorometil)fenil)-2,2-difluoro-3-hidroksipropil-3-d)-2-fluorobenzamida (30.8 mg, 0.0584 mmol, 36% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju Primera 311.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 8.68 - 8.60 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.74 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 4H), 7.55 - 7.49 (m, 2H), 7.18 - 6.91 (m, 2H), 6.11 (s, 1H).

MS ESI m/z 527.3 (M+H)<+>.

Primer 313: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipentil)-2-fluorobenzamid

[0884]

[0885] Naslovno jedinjenje je pripremljeno na sličan način kao Primer 110 primenom 1-(4-fluorofenil)propan-1-ona umesto 3,4-dihlorobenzaldehida u koraku 110A. Tako je dobijen enantiomer 1 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipentil)-2-fluorobenzamida (9.1 mg, 0.0174 mmol, 18% prinosa) kao prvi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.63 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.55 (br dd, J=7.9, 6.1 Hz, 2H), 7.52 - 7.42 (m, 2H), 7.22 (t, J=8.9 Hz, 2H), 7.03 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.03 - 3.82 (m, 1H), 2.19 - 1.97 (m, 2H), 0.62 (t, J=7.2 Hz, 3H).

MS ESI m/z 522.0 (M+H)<+>

Primer 314: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N (2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipentil)-2-fluorobenzamid

[0886]

[0887] Naslovno jedinjenje enantiomer 2 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-6-hloro-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipentil)-2-fluorobenzamida (10.2 mg, 0.0195 mmol, 20% prinosa) je dobijeno kao drugi eluirani izomer pri hiralnom SFC prečišćavanju Primer 313.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 - 8.94 (m, 1H), 8.62 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.22 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.03 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.00 - 3.84 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 1H), 2.06 - 1.96 (m, 1H), 0.62 (t, J=7.2 Hz, 3H).

MS ESI m/z 522.1 (M+H)<+>

Primer 315: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid

[0888]

[0889] 315A: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid: U suvu posudu sa okruglim dnom od 100 mL pod N2 su dodati 3-bromo-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzoeva kiselina (1.0 g, 3.48 mmol), (S)-3-amino-2,2-difluoro-1-(4-fluorofenil)propan-1-ol (720 mg, 3.51 mmol), anhidrovani CH2Cl2 (25 mL) i N,N-diizopropiletilamin (3.0 ml, 17.18 mmol). Reakcija je (bezbojni rastvor) je kratko isprana sa N2, tretirana sa BOP BOP (1.90 g, 4.30 mmol), zatvorena i ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i prečišćena hromatografijom na silika gelu eluirana sa EtOAc/ heksanima da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid (1.63 g, 3.45 mmol, 99% prinosa) kao penasta bela čvrsta supstanca.

[0890] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.14 (br s, 1H), 8.02 (br t, J=7.6 Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.48 (br t, J=6.5 Hz, 2H), 7.31 - 7.14 (m, 2H), 6.41 (br s, 1H), 4.91 (br dd, J=16.0, 6.1 Hz, 1H), 3.94 - 3.71 (m, 2H).

[0891] 315: (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid: U suvu reakcionu bočicu pod N2 je dodat (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid (75 mg, 0.158 mmol), (S)-3-bromo-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid (75 mg, 0.158 mmol) i anhidrovani 1,4-dioksan (1.5 mL). Reakcija je dobro isprana argonom, tretirana 2M kalijum acetata u vodi (240 µL, 0.480 mmol), zatim sa dihloro 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum (II) dihlorometanom, 99% (13 mg, 0.016 mmol). Reakcija je dobro isprana argonom, dobro zatvorena i stavljena u uljno kupatilo na 80 °C i mešana 4 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pri smanjenom pritisku. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i organski sloj je opran sa vodom (2 × 5 mL), slanim rastvorom (1 × 5 mL), osušen Na2SO4, filtriran i uparen do suva. Ostatak je prečišćen hromtografijom na silika gelu eluiran sa EtOAc/CH2Cl2 da se dobije bis-Boc (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid.

Materijal (98 mg) je rastvoren u MeOH (1 mL), tretiran sa HCl, 4M u dioksanu (2 mL, 8.00 mmol) i stavljen u peščano kupatilo na 80 °C i mešan tokom 90 min. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen preparativnom LC/MS na koloni XBridge C18 eluirana sa acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da se dobije (S)-3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(2,2-difluoro-3-(4-fluorofenil)-3-hidroksipropil)-2-fluoro-6-(trifluorometil)benzamid (43.1 mg, 0.082 mmol, 52% prinosa u dva koraka).

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) Pomak 9.12 (br t, J=6.1 Hz, 1H), 8.67 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 7.93 (br t, J=7.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.48 (br t, J=6.5 Hz, 2H), 7.22 (t, J=8.8 Hz, 2H), 7.08 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 6.40 (br d, J=5.1 Hz, 1H), 5.05 -4.81 (m, 1H), 3.95 - 3.72 (m, 2H), 3.14 - 2.76 (br s, 2H).

MS ESI m/z 528.0 (M+H)<+>

Primer 316: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-fenilbutil)benzamid

[0892]

[0893] 316A: N-(3-fenilbutil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid: U rastvor pinakol estra 3-karboksifenilboronske kiseline (1.0 g, 4.03 mmol), 3-fenilbutan-1-amina (0.602 g, 4.03 mmol) i DIPEA (0.880 mL, 5.04 mmol) u DMF (15 mL) je dodat BOP (2.228 g, 5.04 mmol). Smeša je zatim mešana na 23 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa 150 mL EtOAc i isprana sa 10% rastvorom LiCl (2 × 50 mL), vodom (50 mL), slanim rastvorom (50 mL), zatim i osušena Na2SO4. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen putem hromatogarfije na koloni silika gela eluiran sa CH2Cl2/EtOAc (10/1) da se dobije N-(3-fenilbutil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid (1.13 g, 2.99 mmol, 74% prinosa).

MS ESI m/z 380.1 (M+H)<+>

[0894] 316: 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-fenilbutil)benzamid: U rastvor N-(3-fenilbutil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (15 mg, 0.040 mmol) u dioksanu (400 µL) dodati su 7-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amin (16.85 mg, 0.079 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 adukt (3.23 mg, 3.95 µmol), i trikalijum fosfat (25.2 mg, 0.119 mmol). Reakciona smeša je zatvorena i degazirana i pričišćena sa N2. Reakcijoni sud je zatim zagrevan do 100 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature zatim prečišćena preparativnom LC/MS pri sledećim uslovima: kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, čestice 5-µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata; gradijent: 15-70% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje 5-minuta na 100% B; protoka: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem da daju 3-(2-amino-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-7-il)-N-(3-fenilbutil)benzamid (10.6 mg, 0.027 mmol, 70% prinosa).

[0895]<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 - 8.55 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.96 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.87 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.59 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.41 - 7.24 (m, 5H), 7.23 -7.15 (m, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 1H), 3.20 - 3.09 (m, 1H), 2.88 - 2.75 (m, 1H), 1.86 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.25 (br d, J=6.8 Hz, 3H), 2 izmenljiva protona nisu primećena.

[0896] WO2018/148626 obelodanila je jedinjenja koja su korisna kao inhibitori protein kinaze 1(RIPK1) koja interaguje na receptore. Tabela 22 prikazuje referentna jedinjenja i njihovu aktivnost u RIPK1 i pMLKL testovima. Aktivnosti u RIPK1 i pMLKL testovima reprazentativnih jedinjenja iz WO2018/148626 su prikazana u Tabeli 23.

[0897] Poželjna jedinjenja imaju poboljšanu aktivnost RIPK1, poboljšanu aktivnost pMLKL, ili kombinaciju poboljšane aktivnosti u oba testa.

[0898] Tabele 22 i 23: Prikazana pMLKL aktivnost referentnih jedinjenja i jedinjenja kojsa su opisana u WO2018/148626

Tabela 22

Tabela 23

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (Ie), ili njegova so
pri čemu R<6a>i R<6b>su F; R<1>je CH3, CD3, CF3, ili Cl; R<2>je F; R<3>je H; R<4>je H; i Y je Cl ili F. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova so, pri čemu jedinjenje formule (Ie) je jedinjenje formule (If) ili formule (Ig)
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, ili njegova so, pri čemu jedinjenje je jedinjenje formule (If)
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, ili njegova so, pri čemu jedinjenje je jedinjenje formule (Ig)
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
ili njegova so. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje je
19. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnim zahtevima 1-18, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
20. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19 za primenu u terapiji.
21. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19, za primenu u postupku za lečenje bolesti koji obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jedinjenja ili kompozicije subjektu kome je to potrebno, pri čemu bolest je izabrana od inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, Kronove bolesti, psorijaze, reumatoidnog artritisa (RA), NASH, i srčane insuficijencije.
22. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19, za primenu u postupku za lečenje bolesti koji obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jedinjenja ili kompozicije subjektu kome je to potrebno, pri čemu bolest je izabrana od multiple skleroze, amiotrofične lateralne skleroze, ili Alchajmerove bolesti.
23. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19, za primenu u postupku za lečenje bolesti koji obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jedinjenja ili kompozicije subjektu kome je to potrebno, pri čemu bolest je izabrana od inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, i Kronove bolesti. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5