RS66480B1 - Jedinjenja koja sadrže ligand proteina za aktivaciju fibroblasta i njihova upotreba - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na hemijsko jedinjenje; inhibitor proteina za aktivaciju fibroblasta (FAP); kompoziciju koja sadrži jedinjenje i inhibitor, respektivno; jedinjenje, inhibitor i kompoziciju, respektivno, za upotrebu u postupku za dijagnozu bolesti; jedinjenje, inhibitor i kompozicija, respektivno, za upotrebu u postupku za lečenje bolesti; jedinjenje, inhibitor i kompoziciju, respektivno, za upotrebu u postupku dijagnoze i lečenja bolesti koja se takođe naziva "tera(g)noza" ili "tera(g)nostika"; jedinjenje, inhibitor i kompoziciju, respektivno, za upotrebu u postupku za isporuku efektora u tkivo koje eksprimira FAP; postupak za dijagnozu bolesti korišćenjem jedinjenja, inhibitora i kompozicije, respektivno; postupak za lečenje bolesti upotrebom jedinjenja, inhibitora i kompozicije, respektivno; postupak za dijagnozu i lečenje bolesti koja se takođe naziva "tera(g)noza" ili "tera(g)nostika, koristeći jedinjenje, inhibitor i kompoziciju, respektivno; metod za isporuku efektora na tkivo koje eksprimira FAP koristeći jedinjenje, inhibitor i kompoziciju, respektivno.

STANJE TEHNIKE

[0002] Uprkos sve većoj dostupnosti terapijskih opcija, rak je i dalje drugi vodeći uzrok smrti u svetu. Terapijske strategije se uglavnom fokusiraju na ciljanje samih malignih ćelija raka, ignorišući sveprisutno mikrookruženje tumora (TME) koje ograničava pristup terapeutskim agensima ćelija raka (Valkenburg, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2018, 15: 36(Valkenburg, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2018, 15: 366). TME je deo tumorske mase i sastoji se ne samo od heterogene populacije ćelija raka, već i od raznih rezidentnih i infiltrirajućih ćelija domaćina, sekretovanih faktora i proteina ekstracelularnog matriksa ( (Quail, et al., Nat Med, 2013, 19: 1423). Dominantni tip ćelije koji se nalazi u TME je fibroblast povezan sa rakom (CAF) (Kalluri, Nat Rev Cancer, 2016, 16: 582). Mnogi različiti tipovi ćelija su opisani kao izvor i poreklo za CAF, kao što su npr. fibroblasti, mezenhimalne matične ćelije, ćelije glatkih mišića, ćelije epitelnog porekla ili endotelne ćelije (Madar, et al., Trends Mol Med, 2013, 19: 447). CAF ispoljavaju karakteristike slične mezenhima i često su dominantni tip ćelije u masi solidnog tumora. CAF su privukli sve veću pažnju kao element u progresiji tumora i homeostazi (Gascard, et al., Genes Dev, 2016, 30: 1002; LeBleu, et al., Dis Model Mech, 2018, 11).

[0003] Poslednjih godina, protein aktivacije fibroblasta (FAP) je postao poznat kao marker CAF (Shiga, et al., Cancers (Basel), 2015, 7: 2443; Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343; Jacob, et al., Curr Mol Med, 2012, 12: 1220). Zbog sveprisutnosti CAF i stroma unutar tumora, FAP je otkriven kao pogodan marker za radiofarmaceutsku dijagnostiku i kao pogodna meta za radiofarmaceutsku terapiju (Siveke, J Nucl Med, 2018, 59: 1412).

[0004] Protein za aktivaciju fibroblasta α (FAP) je transmembranska serinska proteaza tipa II i član porodice S9 prolil oligopeptidaza (Park, et al., J Biol Chem, 1999, 274: 36505). Najbliži član porodice DPP4 deli 53% homologije sa FAP. Kao i drugi DPP enzimi (DPP4, DPP7, DPP8, DPP9), FAP ima aktivnost post-prolin egzopeptidaze. Pored toga, FAP poseduje aktivnost endopeptidaze, sličnu prolil oligopeptidazi/endopeptidazi (POP/PREP). FAP gen je visoko očuvan kod različitih vrsta.

Ekstracelularni domen humanog FAP deli 90% identičnost aminokiselinske sekvence sa FAP miša i pacova. FAP miša ima 97% identičnost sekvence sa FAP pacova.

[0005] Strukturno, FAP je transmembranski protein od 760 aminokiselina koji se sastoji od kratkog N-terminalnog citoplazmatičnog repa (6 aminokiselina), jednog transmembranskog domena (20 aminokiselina) i ekstracelularnog domena od 734 aminokiseline (Aertgeerts, et al., J Biol Chem, 2005, 280: 19441). Ovaj ekstracelularni domen se sastoji od β -propelera sa osam lopatica i domena α /β hidrolaze. Katalitička trijada se sastoji od Ser624, Asp702 i His734 i nalazi se na interfejsu β -propelera i domena hidrolaze. Aktivno mesto je dostupno kroz centralni otvor domena β -propelera ili kroz usku šupljinu između β -propelera i domena hidrolaze. FAP monomeri nisu aktivni, ali formiraju aktivne homodimere kao i heterodimere sa DPP4 (Ghersi, et al., Cancer Res, 2006, 66: 4652). Takođe je opisan i rastvoran homodimerni FAP (Keane, et al., FEBS Open Bio, 2013, 4: 43; Lee, et al., Blood, 2006, 107: 1397).

[0006] FAP poseduje dvostruku aktivnost enzima (Hamson, et al., Proteomics Clin Appl, 2014, 8: 454). Njegova aktivnost dipeptidil peptidaze omogućava cepanje dve aminokiseline na N-kraju nakon ostatka prolina. FAP supstrati koji se brzo cepaju putem njegove dipeptidil peptidazne aktivnosti su neuropeptid Y, peptid YY, supstanca P i natriuretski peptid β -tipa. Pokazalo se da se kolagen I i III, FGF21 i α2-antiplazmin cepaju endopeptidaznom aktivnošću FAP. Dok FAP nije u stanju da otcepi nativni kolagen, pre-digestija drugim proteazama, kao što su matriks metaloproteinaze, olakšava dalje otcepljenje kolagena sa FAP. Obrada kolagena može uticati na migracione kapacitete ćelija raka. Pored povećanja invazivnosti ćelija raka kroz remodelovanje ekstracelularnog matriksa, predloženo je nekoliko drugih uloga u promociji tumora posredovanih FAP-om, uključujući proliferaciju i povećanje angiogeneze. Dalje, stromalna ekspresija FAP je povezana sa ibegavanjem imunološkog nadzora kod različitih karcinoma, što sugeriše ulogu u antitumorskom imunitetu (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343).

[0007] FAP je prolazno eksprimiran tokom normalnog razvoja, ali samo retko u zdravim tkivima odraslih. Kod transgenih miševa, pokazano je da se FAP eksprimira masnim tkivom, skeletnim mišićima, kožom, kostima i pankreasom (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343; Roberts, et al., J Exp Med, 2013, 210: 1137). Međutim, FAP knokaut miša ima zdrav fenotip, što ukazuje na suvišnu ulogu u normalnim uslovima (Niedermeyer, et al., Mol Cell Biol, 2000, 20: 1089). Na mestima aktivnog remodelovanja tkiva, uključujući zarastanje rana, fibrozu, artritis, aterosklerozu i rak, FAP postaje visoko regulisan u stromalnim ćelijama highly upregulated in stromal cells (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343).

[0008] Ekspresija FAP u tumorskoj stromi 90% epitelnih karcinoma prvi put je prijavljena 1990. godine uz upotrebu monoklonalnog antitela, F19 (Garin-Chesa, et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1990, 87: 7235; Rettig, et al., Cancer Res, 1993, 53: 3327). Stromalne ćelije koje eksprimiraju FAP su dalje okarakterisane kao fibroblasti povezani sa rakom (CAF) i periciti povezani sa rakom (Cremasco, et al., Cancer Immunol Res, 2018, 6: 1472). Ekspresija FAP na malignim epitelnim ćelijama je takođe prijavljena, ali njen značaj ostaje da se definiše (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343). Sledeća tabela 1, preuzeta od Busek et al. (Busek, et al., Front Biosci (Landmark Ed), 2018, 23: 1933), sumira ekspresiju FAP u različitim malignitetima koji ukazuju na tip tumora i ćelijsku ekspresiju.

Tabela 1: Eksprimovanje FAP u ljudskim malignostima (iz Busek i al.)

[0009] Ekspresija FAP-a u CAF je prikazana za skoro sve karcinome i sarkome (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343; Busek, et al., Front Biosci (Landmark Ed), 2018, 23: 1933). Dalje, CAF su prisutni kod hematoloških maligniteta (Raffaghello, et al., Oncotarget, 2015, 6: 2589). Upotreba FAP kao terapeutske mete stoga nije ograničena na određene tumorske entitete.

[0010] Opisano je da broj CAF koji eksprimiraju FAP je u korelraciji sa lošom prognozom. U širokom spektru indikacija humanog tumora, ekspresija FAP je opisana kao korelacija sa višim stepenom tumora i lošijim ukupnim preživljavanjem (Pure, et al., Oncogene, 2018, 37: 4343).

[0011] Kao što je gore opisano, naznačeno je da FAP kao i ćelije koje eksprimiraju FAP prisutne u tumorskom mikrookruženju značajno utiču na progresiju tumora (Hanahan, et al., Cancer Cell, 2012, 21: 309). Pored toga, zbog svoje relativno selektivne ekspresije u tumorima, FAP se smatra pogodnom metom za terapeutske i dijagnostičke agense kao što je opisano u nastavku (Siveke, J Nucl Med, 2018, 59: 1412; Christiansen, et al., Neoplasia, 2013, 15 : 348 Zi, et al., Mol Med Rep, 2015, 11; 3203).

[0012] Ubrzo nakon svog otkrića, FAP je korišćen kao terapeutska meta kod raka/karcinoma. Do danas su istraživane različite strategije, uključujući npr. inhibiciju enzimske aktivnosti FAP, ablaciju FAP-pozitivnih ćelija ili ciljanu isporuku citotoksičnih jedinjenja.

[0013] U 2007. godini, inhibitor FAP i DPP4, Talabostat (Val-boro-Pro, PT-100), koje je razvio Point Therapeutics (na primer kako je opisano u patentu SAD br. 6,890,904, WO9916864). Pennisi et al. (Pennisi, et al., Br J Haematol, 2009, 145: 775) primetili su smanjeni rast tumora u životinjskom modelu sa multiplim mijelomom, kao i na modelima raka singenih miševa. Dalje, nekoliko drugih derivata prolil boronske kiseline je razvijeno i prijavljeno kao navodni selektivni inhibitori za FAP. Ovi derivati pokazuju nestabilnost u vodenim sredinama na fiziološkom pH (Coutts, et al., J Med Chem, 1996, 39: 2087) i nespecifičnu reaktivnost sa drugim enzimima.

[0014] WO 2008/116054 je otkrio derivate heksapeptida u kojima jedinjenja sadrže C-terminalnu funkcionalnu grupu bis-amino ili borne kiseline.

[0015] US 2017/0066800 otkriva pseudopeptidne inhibitore, kao što je M83, efikasni protiv FAP. Ovi inhibitori su procenjeni kod ksenografta raka pluća i debelog creva kod imunodeficijentnih miševa. Uočena je supresija rasta tumora (Jackson, et al., Neoplasia, 2015, 17: 43). Ovi pseudopeptidi inhibiraju aktivnost i prolil oligopeptidaze (POP/PREP) i FAP, čime se isključuje njihova upotreba kao specifičnih terapeutskih inhibitora FAP.

[0016] US 2008/280856 je otkrio nanomolarni inhibitor na bazi borne kiseline. Inhibitor pokazuje bispecifičnu inhibiciju FAP i PREP, čime se isključuje njihova upotreba kao specifičnih terapeutskih inhibitora FAP.

[0017] FAP inhibitori bazirani na cikličnim peptidima su otkriveni, npr., u WO 2016/146174 i WO 2006/042282. WO 2016/146174 je otkrio peptide za dijagnozu i lečenje tumora koji eksprimiraju FAP koji pokazuju specifičnost za FAP, pri čemu bliski homolog DPP4 nisu prepoznali navedeni peptidi. WO 2006/042282 je otkrio polipeptide za lečenje melanoma. Kod golih/nude miševa prikazana je inhibicija rasta melanoma i metastaza melanoma.

[0018] WO 99/75151 i WO 01/68708 su otkrili humanizovano FAP monoklonsko antitelo, F19, (Sibrotuzumab). Dalje, anti-FAP antitelo F19 i njegove humanizovane verzije su otkrivene u WO 99/57151 i WO 01/68708. Razvojni pristupi uključivali su npr. stvaranje visoko afinitetnih, unakrsno reaktivnih za vrste, FAP-specifičnih scFvs konvertovanih u bivalentni derivat (Brocks, et al., Mol Med, 2001, 7: 461). U kliničkim ispitivanjima faze I i II, sibrotuzumab je pokazao specifično obogaćivanje tumora, dok nije pokazao merljivu terapijsku aktivnost kod pacijenata sa metastatskim kolorektalnim karcinomom, sa samo 2 od 17 pacijenata koji imaju stabilnu bolest (Hofheinz, et al., Onkologie, 2003, 26: 44). Nije pokazano da ovo F19 antitelo blokira bilo koju ćelijsku ili proteaznu funkciju FAP, što bi moglo da objasni nedostatak terapijskih efekata (Hofheinz, et al., Onkologie, 2003, 26: 44; Scott, et al., Clin Cancer Res, 2003, 9: 1639).

[0019] US 2018/022822 otkriva nove molekule koji se specifično vezuju za humani FAP i njegove epitope, kao humana antitela i himerne antigen receptore (CAR) korisne u lečenju bolesti i stanja izazvanih sa FAP. Tretman miševa koji nose ortotopske singene MC38 kolorektalne tumore anti-FAP antitelom smanjio je prečnik tumora i broj metastaza. WO 2012/020006 je otkrio antitela dovbijena glikoinženjeringom koja nose modifikovane oligosaharide u Fc regionu. Potom su razvijena bispecifična antitela specifična za FAP i DR5 u skladu sa WO 2014/161845. Ova antitela pokreću apoptozu tumorskih ćelija in vitro i in vivo pretkliničke modele tumora sa FAP-pozitivnom stromom (Brunker, et al., Mol Cancer Ther, 2016, 15: 946). Konjugati leka antitela i imunotoksini koji ciljaju FAP opisani su u WO 2015/118030. In vitro toksičnost kao i in vivo inhibicija rasta tumora je prikazana nakon primene antihu/moFAP hu36:citolizin ADC kandidata. Nije jasno da li su ova antitela bila sposobna da inhibiraju aktivnost FAP.

[0020] Inhibitori FAP malih molekula na bazi (4-hinolinoil)glicil-2-cijanopirolidina koji pokazuju nisku nanomolarnu inhibitornu moć i visoku selektivnost protiv srodnih DPP i PREP opisali su Jansen et al. (Jansen, et al., J Med Chem, 2014, 57: 3053; Jansen, et al., ACS Med Chem Lett, 2013, 4: 491) i otkrivenu u WO 2013/107820. Međutim, jedinjenja su strukturno nepovezana sa jedinjenjima iz ovog pronalaska i uključuju bojnu glavu koja vodi do kovalentnog vezivanja za FAP.

[0021] Poslednjih godina razvijeno je nekoliko radiofarmaceutskih pristupa usmerenih na FAP koji su ovde opisani kao primeri.

[0022] WO 2010/036814 otkriva male molekule FAP-inhibitore za upotrebu kao terapeutski agensi kroz inhibiciju aktivnosti enzima FAP-a ili kao radiofarmaceutike kroz vezivanje za FAP.

[0023] WO 2019/083990 otkriva imidžing i radioterapeutske agense zasnovane na malim molekulskim FAP-inhibitorima koje su opisali Jansen et al. (Jansen, et al., J Med Chem, 2014, 57: 3053; Jansen, et al., ACS Med Chem Lett, 2013, 4: 491). Dalje, nekoliko autora je opisalo selektivno uzimanje imidžing i radioterapeutskih agenasa kod tumora pacijenata sa rakom (Lindner, et al., J Nucl Med, 2018, 59: 1415; Loktev, et al., J Nucl Med, 2018, 59: 1423; Giesel, et al., J Nucl Med, 2019, 60: 386; Loktev, et al., J Nucl Med, 2019, 8. mart (epub pre štampanja, Giesel, et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2019, 46: 1754; Kratochwil, et al., J Nucl Med, 2019, 60: 801) bayirano na inhibitoru FAP koje su opisali Jansen et al. (Jansen, et al., J Med Chem, 2014, 57: 3053; Jansen, et al., ACS Med Chem Lett, 2013, 4: 491).

[0024] Kliničke procene oble<131>I -obeleženog, humanizovanog oblika F19 antitela (sibrotuzumab) otkrile su selektivnu apsorpciju tumora, ali ne i normalnih tkiva kod pacijenata sa kolorektalnim karcinomom ili karcinomom ne-malih ćelija pluća (Scott, et al., Clin Cancer Res, 2003, 9: 1639). Ovo može biti zbog dugog vremena cirkulacije antitela što ih čini neprikladnim za dijagnostički, terapeutski ili terapeutski pristup koji uključuje radionuklide.

[0025] WO 2011/040972 je otkrio antitela visokog afiniteta koja prepoznaju i humani i mišji FAP antigen kao moćne radioimunokonjugate. ESC11 lgG1 indukuje donju modulaciju i internalizaciju površinskog FAP (Fischer, et al., Clin Cancer Res, 2012, 18: 6208). WO 2017/211809 je otkrio komplekse torijum-227 koji ciljaju tkivo pri čemu ciljani deo ima specifičnost za FAP. Međutim, dugo vreme cirkulacije antitela čini ih neprikladnim za dijagnostički, terapeutski ili terapeutski pristup koji uključuje radionuklide.

[0026] FAP je takođe opisan kao uključen u druge bolesti osim onkoloških indikacija, čiji su primeri dati u nastavku.

[0027] Sinoviociti slični fibroblastu u zglobovima pacijenata sa reumatoidnim artritisom pokazuju značajno povećanu ekspresiju FAP (Bauer, et al., Arthritis Res Ther, 2006, 8: R171; Milner, et al., Arthritis Res Ther, 2006, 8 : R23). Kod reumatoidnog artritisa, stromalne ćelije igraju važnu ulogu u organizovanju strukture sinovijalnog tkiva zglobova tako što proizvode komponente ekstracelularnog matriksa, regrutuju infiltrirajuće imune ćelije i luče inflamatorne medijatore. Postoje značajni dokazi koji podržavaju ulogu ovih ćelija u pokretanju perzistentnosti upale i oštećenja zglobova (Bartok, et al., Immunol Rev, 2010, 233: 233; Turner, et al., Curr Opin Rheumatol, 2015, 27: 175) . Kod reumatoidnog artritisa FAP ima patološku ulogu u prometu hrskavice, barem promocijom gubitka proteoglikana i kasnije degradacije hrskavice (Bauer, et al., Arthritis Res Ther, 2006, 8: R171; Valdele, et al., Arthritis Res Ther, 2015. , 17: 12). Stoga, može poslužiti kao marker za stratifikaciju pacijenata, za procenu i praćenje uspeha lečenja, ili kao terapijski cilj (Bauer, et al., Arthritis Res Ther, 2006, 8: R171). Kod miševa, odgovor na tretman je demonstriran korišćenjem SPECT/CT snimanja<99m>Tc -obeleženog anti-FAP antitela (van der Geest, et al., Rheumatology (Oxford), 2018, 57: 737; Laverman, et al., J Nucl Med, 2015, 56: 778; van der Geest, et al., J Nucl Med, 2017, 58: 151).

[0028] Pored toga, FAP je prepoznat ne samo kao marker aktiviranih fibroblasta u odgovoru na povredu (Tillmanns, et al., Int J Cardiol, 2013, 168: 3926) već i kao važan akter u procesu zarastanja rana ( Ramirez-Montagut, et al., Oncogene, 2004, 23: 5435). Jing et al. je pokazao vremenski zavisan tok promene ekspresije FAP na ranama nakon opekotina kod pacova ((Jing, et al., Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2013, 33: 615). Inhibicija aktivnosti FAP u reaktivnim fibroblastima rana u keloidnim ožiljcima, uobičajenim benignim fibroproliferativnim retikularnim dermalnim lezijama, može ponuditi terapijsku opciju za sprečavanje naprdovanja bolesti (Dienus, et al., Arch Dermatol Res, 2010, 302: 725).

[0029] Kod fibroznih bolesti primećena je pojačana ekspresija FAP, npr. kod idiopatske plućne fibroze, Kronove bolesti i fibroze jetre. U ek vivo modelu za Crohnovu bolest, uočena je hronična inflamatorna bolest creva koju karakteriše prekomerno, neuravnoteženo taloženje ekstracelularnog matriksa (ECM), povećana ekspresija FAP. Inhibicija FAP je rekonstituisala homeostazu ekstracelularnog matriksa homeostasis (Truffi, et al., Inflamm Bowel Dis, 2018, 24: 332). Slična zapažanja dali su Egger et al. (Egger, et al., Eur J Pharmacol, 2017, 809: 64) na modelu mišje plućne fibroze. Inhibicija FAP dovodi do smanjene fibrozne patologije. FAP je takođe eksprimiranu regionu remodelovanja tkiva kod hronično oštećene jetre (Wang, et al., Front Biosci, 2008, 13: 3168), a ekspresija FAP putem zvezdastih ćelija jetre je u koleraciji sa histološkom težinom bolesti jetre(Gorrell, et al., Adv Exp Med Biol, 2003, 524: 235). Stoga je FAP takođe obećavajuća meta u lečenju fibroze jetre ((Lay, et al., Front Biosci (Landmark Ed), 2019, 24: 1).

1

[0030] FAP se eksprimira u arteriosklerotskim lezijama i pojačava u aktiviranim ćelijama glatkih mišića krvnih sudova (Monslow, et al., Circulation, 2013, 128: A17597). Monslow et al. su pokazali da ciljana inhibicija FAP u arteriosklerotskim lezijama može smanjiti ukupni teret lezija, inhibirati inflamatorno kretanje ćelija i povećati stabilnost lezije kroz svoju sposobnost da promeni arhitekturu lezije favorizujući lezije bogate matriksom u odnosu na inflamaciju. Što je još važnije, većina arteriosklerotičnih patologija ima zajedničku patogenu karakteristiku: ruptura aterosklerotskog plaka koja izaziva arteriosklerotske (Davies, et al., Br Heart J, 1985, 53: 363; Falk, Am J Cardiol, 1989, 63: 114e). Ruptura fibrozne kapice u uznapredovalim aterosklerotskim plakovima je kritičan pokretač akutnih koronarnih sindroma koji mogu dovesti do infarkta miokarda i iznenadne srčane smrti. Jedan od ključnih događaja u promovisanju nestabilnosti plaka je degradacija fibrozne kapice, koja izlaže jezgro trombogenog plaka krvotoku, uzrokujući na taj način trombozu i naknadnu okluziju krvnih sudova (Farb, et al., Circulation, 1996, 93: 1354; Virmani, et al., J Am Coll Cardiol, 2006, 47: C13). Brokopp i dr. pokazali su da FAP doprinosi razgradnji kolagena tipa I u fibroznim kapicama (Brokopp, et al., Eur Heart J, 2011, 32: 2713). Razvijen je radioaktivno obeležen tragač i prikazana je njegova primenljivost za snimanje ateroskleroze (Meletta, et al., Molecules, 2015, 20: 2081).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0031] Problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koje je pogodno kao dijagnostički agens i/ili farmaceutski agens, posebno ako je konjugovan sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom. Sledeći problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koje je pogodno kao dijagnostički agens i/ili farmaceutski agens, posebno ako je konjugovan sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom, pri čemu je jedinjenje snažan inhibitor FAP aktivnosti. ; poželjno je pIC50 jedinjenja jednak ili veći od 6,0. Sledeći problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koje je pogodno kao dijagnostički agens i/ili farmaceutski agens, posebno ako je konjugovan sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom, u dijagnozi i/ili terapiji bolesti. gde obolele ćelije i/ili obolela tkiva eksprimiraju FAP. Naredni problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koje je pogodno za isporuku dijagnostički i/ili terapeutski efikasnog agensa u bolesnu ćeliju i/ili obolelo tkivo, a tačnije obolelu ćeliju koja eksprimira FAP i/ili ili obolelo tkivo, poželjno obolelo tkivo sadrži ili sadrži fibroblaste povezane sa rakom. Takođe, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje metode za dijagnozu bolesti, metoda za lečenje i/ili prevenciju bolesti i metoda za kombinovanu dijagnozu i lečenje bolesti; poželjno takva bolest je bolest koja uključuje ćelije i/ili tkiva koje eksprimiraju FAP, tačnije bolesnu ćeliju i/ili obolelo tkivo koje eksprimiraju FAP, poželjno obolelo tkivo sadrži ili sadrži fibroblaste povezane sa rakom. Sledeći problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje metode za identifikaciju subjekta, pri čemu je verovatno da će subjekat reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti, metoda za izbor subjekta iz grupa subjekata, pri čemu je verovatno da će subjekt reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti. Takođe, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje ima karakteristike kao što su gore navedene. Štaviše, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je obezbeđivanje kompleta koji je pogodan za upotrebu u bilo kojoj od gore navedenih metoda.

[0032] Postoji potreba za jedinjenjima koja su pogodna kao dijagnostički agens i/ili farmaceutski agens, posebno ako su konjugovani sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom. Dalje, postoji potreba za jedinjenjima koja su pogodna kao dijagnostički agens i/ili farmaceutski agens, posebno ako su konjugovani sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom, pri čemu je jedinjenje snažan inhibitor FAP aktivnosti; poželjno je pIC50 jedinjenja jednak ili veći od 6,0. Dalje, postoji potreba za jedinjenjima pogodnim kao dijagnostički agensi i/ili farmaceutski agensi, posebno ako su konjugovani sa dijagnostički i/ili terapeutski aktivnim efektorom, u dijagnozi i/ili terapiji bolesti gde su obolele ćelije i/ili obolela tkiva ekspresni FAP. Dalje, postoji potreba za jedinjenjem koje je pogodno za isporuku dijagnostički i/ili terapeutski efikasnog agensa u bolesnu ćeliju i/ili obolelo tkivo, odnosno, a tačnije obolelu ćeliju i/ili obolelo tkivo koja eksprimira FAP, poželjno obolelo tkivo sadrži ili sadrži fibroblaste povezane sa rakom. Takođe, postoji potreba za metodom za dijagnozu bolesti, metodom za lečenje i/ili prevenciju bolesti i metodom za kombinovanu dijagnozu i lečenje bolesti; poželjno takva bolest je bolest koja uključuje ćelije i/ili tkiva koje eksprimiraju FAP, tačnije bolesnu ćeliju i/ili obolelo tkivo koje eksprimiraju FAP, poželjno obolelo tkivo sadrži ili sadrži fibroblaste povezane sa rakom. Dalje, postoji potreba za metodom za identifikaciju subjekta, gde je verovatno da će subjekt reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti, metodom za izbor subjekta iz grupe subjekata, gde subjekat će verovatno reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti. Dalje, postoji potreba za farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje koje ima karakteristike kao što su gore navedene. Štaviše, postoji potreba za kompletom koji je pogodan za upotrebu u bilo kojoj od gore navedenih metoda. Ovaj pronalazak zadovoljava ove potrebe.

[0033] Ovi i drugi problemi su rešeni predmetom priloženih zahteva.

[0034] Ovi i drugi problemi su takođe rešeni sledećim realizacijama. Pronalazak je izložen u priloženom setu zahteva.

[0035] Realizacija 1. Jedinjenje izabrano iz grupe koju čine jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3554) sledeće formule

i jedinjenja Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3407) sledeće formule

[0036] Realizacija 2. Jedinjenje iz realizacije 1, pri čemu jedinjenje je Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET)) formule

[0037] Realizacija 3. Jedinjenje iz realizacije 1, pri čemu jedinjenje je Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3407) sledeće formule

[0038] Realizacija 4. Jedinjenje prema jednoj od realizacija 1 do 3, pri čemu bilo koji S atom koji može da bude oksidovan, poželjno S atomo tioetarskih grupa, je prisutan kao -S-, -S(O)- ili - S(O2)- ili kao njihova smeša.

[0039] Erealizacija 5. Jedinjenje prema jednoj od realizacija 1 do 4, pri čemu jedinjenje je sposobno da se veže za protein za aktivaciju fibroblasta (FAP).

[0040] Realizacija 6. Jedinjenje prema jednoj od realizacija 1 do 5, pri čemu jedinjenje sadrži terapeutski aktivan nuklid.

[0041] Realizacija 7. Jedinjenje iz realizacije 6, pri čem je jedinjenje odabrano iz grupe koju čine jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(InDOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3590) sledeće formule

1

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(LuDOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3591) sledeće formule

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(GaDOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3592) sledeće formule

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(EuDOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3661) sledeće formule

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(LuDOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3624) sledeće formule

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(GaDOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3949) sledeće formule

1

[0042] Realizacija 10. Jedinjenje iz bilo koje od realizacija 6 i 7, gde terapeutski aktivan nuklid je

terapeutski aktivan radionuklid.

[0043] Realizacija 11. Jedinjenje iz realizacije 10, gde terapeutski aktivan radionuklid je izabran iz grupe koju čine<47>Sc,<67>Cu,<89>Sr,<90>Y,<153>Sm,<149>Tb,<161>Th,<177>Lu,<186>Re,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<223>Ra,<225>Ac,<226>Th,<227>Th,<131>I,<211>At, poželjno<47>Sc,<67>Cu,<90>Y,<177>Lu,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<225>Ac,<227>Th,<131>I,<211>At i još bolje<90>Y,<177>Lu,<225>Ac,<227>Th,<131>I i<211>At.

[0044] Realizacija 12. Jedinjenje iz bilo koje od realizacija 1 do 7, 10 do 11, gde jedinjenje interaguje sa proteinom za aktivaciju fibroblasta (FAP), poželjno sa humanim FAP koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 1 ili njegov homolog, pri čemu aminokiselinska sekvenca homologa ima identitet od najmanje 85% sa sekvencom amino kiselina SEQ ID NO: 1.

[0045] Realizacija 13. Jedinjenje iz realiazcije 12, gde je jedinjenje inhibitor proteina aktivacije fibroblasta (FAP).

[0046] U jednom aspektu, jedinjenje pronalaska, kako je navedeno u priloženom setu zahteva, je za upotrebu u postupku za dijagnozu bolesti. U nekim realizacijama, pomenuti postupak za dijagnozu je

1

metoda snimanja/imidžing. U nekim realizacijama, pomenuta metoda snimanja je izabrana iz grupe koju čine scintigrafija, kompjuterizovana tomografija sa jednim fotonom (SPECT) i pozitronska emisiona tomografija (PET).

[0047] Realizacija 33. Jedinjenje iz bilo koje od realizacija 1 do 7, 10 do 13, za upotrebu u postupku za lečenje bolesti.

[0048] Realizacija 34. Jedinjenje za upotrebu iz realizacije 33, pri čemu bolest je bolest koja uključuje protein aktivacije fibroblasta (FAP), poželjno pojačano eksprimirane proteina aktivacije fibroblasta (FAP).

[0049] Realizacija 35. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od realizacija 33 do 34, gde bolest uključuje ćelije koje pokazuju povećano eksprimiranje proteina aktivacije fibroblasta (FAP), poželjno obolelo tkivo koje sadrži ćelije koje pokazuju povećano esprimiranje proteina aktivacije fibroblasta (FAP), poželjnije bolest koja uključuje fibroblaste povezane sa tumorom.

[0050] Realizacija 36. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od realizacija 33 do 35, pri čemu bolest je neoplazma, poželjno karcinom ili tumor.

[0051] Realizacija 37. Jedinjenje za upotrebu realizaciji 36, pri čemu su neoplazma, karcinom i tumor svaki pojedinačno izabrani iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora, epitelnog tumora, raka bešike, raka dojke, raka grlića materice, kolorektalnog karcinoma , holangiokarcinom, rak endometrijuma, rak jednjaka, rak želuca, gastrointestinalnog stromalnog tumora, raka glave i ak vrata, raka jetre, raka pluća, melanoma, mezotelioma, neuroendokrinih tumora i karcinoma, rak jajnika, raka pankreasa, raka prostate, karcinoma bubrežnih ćelija, karcinoma pljuvačnih žlezda, sarkoma, karcinoma skvamoznih ćelija i raka štitne žlezde.

[0052] Realizacija 38. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 37, pri čemu su neoplazma, rak/karcinom i tumor svaki pojedinačno izabrani iz grupe koju čine rak dojke, kolorektalni kancer, holangiokarcinom, rak glave i vrata, rak pluća, mezoteliom, neuroendokrini tumori i karcinomi, rak jajnika, rak pankreasa, rak prostate, sarkom i karcinom skvamoznih ćelija.

[0053] Realizacija 39. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj realizaciji 33 do 35, pri čemu bolest je izabrana iz grupa koje obuhvataju inflamatornu bolest, kardiovaskularnu bolest, autoimunu bolest i fibrotičnu bolest.

[0054] Realizacija 40. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 39, gde bolest je inflamatorna bolest.

[0055] Realizacija 41. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 40, gde bolest je ateroskleroza, artritis ili reumatoidni artritis.

[0056] Realizacija 42. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 39, gde bolest ke kardiovaskularna bolest.

[0057] Realizacija 43. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 42, gde bolest je kardiovaskularna bolest koja uključuje aterosklerotične plakove.

[0058] Realizacija 44. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 43, gde bolest je aterosklerotična patologija uzrokovana rupturom plakova, akutnim koronarnim sindromom, infarktom miokarda, trombozom ili okluzijom krvnih sudova.

[0059] Realizacija 45. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 39, gde bolest je fibrotska bolest.

1

[0060] Realizacija 46. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 45, pri čemu je bolest odabrana iz grupe koja obuhvata idiopatsku plućnu fibrozu, Kronovu bolest i fibrozu jetre.

[0061] Realizacija 47. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj realizaciji 33 do 38, pri čemu jedinjenje sadrži terapeutski aktivan nuklid, poželjno terapeutski aktivan radionuklid.

[0062] Realizacija 48. Jedinjenje za upotrebu prema realizaciji 47, gde je terapeutski aktivan nuklid izabran iz grupe koju čine<47>Sc,<6 7>Cu,<89>Sr,<90>Y,<153>Sm,<149>Tb,<161>Tb,<177>Lu,<186>Re,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<223>Ra,<225>Ac,<226>Th,<227>Th,<131>I,<211>At, poželjno<47>Sc,<67>Cu,<90>Y,<177>Lu,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<225>Ac,<227>Th,<131>I,<211>At i još bolje<90>Y,<177>Lu,<225>Ac,<227>Th,<131>I and<211>At.

[0063] Realizacija 49. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj realizaciji 33 do 48, gde postupak obuhvata administraciju terapeutski efikasne količine jedinjenja subjektu, poželjno sisaru, pri čemu je sisar izabran iz grupe koja obuhvata čoveka, radne životinje, kućne ljubimce i stoku, poželjnije je subjekt izabran iz grupe koju čine čovek, pas, mačka, konj, i krava, a najpoželjnije je da subjekt je čovek.

[0064] Realizacija 99. Postupak za lečenje bolesti kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja prema bilo kojoj od realizacija 1 do 7, 10 do 13. Realizacija 100. Postupak iz realizacije 99, gde jedinjenje sadrži terapeutski aktivan agens/sredstvo, pri čemu poželjno agens je radionuklid.

[0065] Realizacija 101. Postupak prema bilo kojoj od realizacija 99 do 100, pri čemu bolest je bolest koja uključuje protein za aktivaciju fibroblasta (FAP), poželjno pojačanu ekspresiju proteina aktivacije fibroblasta (FAP).

[0066] Realizacija 102. Postupak prema bilo kojoj od realizacija 99 do 101, gde bolest uključuje ćelije koje pokazuju povećanu ekspresiju proteina aktivacije fibroblasta (FAP), poželjno obolelo tkivo koje sadrži ćelije koje pokazuju povećanu ekspresiju proteina aktivacije fibroblasta (FAP), još bolje bolest koja uključuje fibroblaste povezane sa tumorom.

[0067] Realizacija 103. Postupak prema bilo kojoj od realizacija 99 do 102, pri čemu je bolest izabrana iz grupa koje sadrže neoplazme, poželjno karcinome ili tumore, i inflamatorne bolesti, kardiovaskularne bolesti, autoimune bolesti i fibrotične bolesti.

[0068] Realizacija 104. Komplet koji sadrži jedinjenje u skladu sa bilo kojom od realizacija 1 do 7, 10 do 13, jedan ili više opcionih ekscipijenasa i opciono jedan ili više uređaja, pri čemu je uređaj (uređaji) se biraj iz grupe koju čine uređaj za obeležavanje, uređaj za prečišćavanje, uređaj za rukovanje, uređaj za radiozaštitu, analitički uređaj ili uređaj za administraciju.

[0069] Detaljnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u prvom aspektu pomoću jedinjenja izabranog iz grupe koju čine

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3554) sledeće formule

1

jedinjenje Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3407) sledeće formule

[0070] Tačnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u drugom aspektu pomoću jedinjenja prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu varijantu, za upotrebu u postupku za dijagnozu bolesti.

[0071] Tačnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u trećem aspektu pomoću jedinjenja prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu varijantu, za upotrebu u postupku za lečenje bolesti.

[0072] Detaljnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u četvrtom aspektu pomoću jedinjenja prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu realizaciju, za upotrebu u postupku za identifikaciju subjekta, pri čemu je verovatno da će subjekt reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti, pri čemu postupak za identifikaciju subjekta obuhvata sprovođenje metode dijagnoze korišćenjem jedinjenja prema prvom aspektu uključujući bilo koju njegovu varijantu.

[0073] Preciznije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u petom aspektu jedinjenjem prema prvom aspektu, uključujući bilo koje njegovu realizaciju, za upotrebu u metodi za izbor subjekta iz grupe subjekata, gde subjekat će verovatno reagovati ili verovatno neće reagovati na lečenje bolesti, pri čemu postupak za izbor subjekta iz grupe subjekata obuhvata sprovođenje metode dijagnoze korišćenjem jedinjenja prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu varijantu.

[0074] Tačnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u šestom aspektu jedinjenjem prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu realizaciju, za upotrebu u metodi za stratifikaciju grupe subjekata na subjekte koji će verovatno da reaguju na lečenje bolesti, i na subjekte za koje nije verovatno da će reagovati na lečenje bolesti, pri čemu postupak za stratifikaciju grupe subjekata

1

obuhvata sprovođenje metode dijagnoze korišćenjem jedinjenja prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu varijantu.

[0075] Detaljnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u sedmom aspektu pomoću kompozicije, poželjno farmaceutske kompozicije, gde kompozicija sadrži jedinjenje prema prvom aspektu uključujući bilo koju njegovu varijantu i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0076] Tačnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u osmom aspektu metodom za dijagnozu bolesti kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu dijagnostički efikasne količine jedinjenja prema prvom aspekt, uključujući bilo koju njegovu realizaciju.

[0077] Detaljnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u devetom aspektu metodom za lečenje bolesti kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja prema prvom aspekt uključujući bilo koju njegovu realizaciju.

[0078] Tačnije, problem koji leži u osnovi ovog pronalaska je rešen u desetom aspektu pomoću kompleta koji sadrži jedinjenje prema prvom aspektu, uključujući bilo koju njegovu realizaciju, jedan ili više opcionih ekscipijenasa i opciono jedan ili više uređaja, pri čemu se uređaj(uređaji) bira(biraju) iz grupe koja sadrži uređaj za obeležavanje, uređaj za prečišćavanje, uređaj za rukovanje, uređaj za radiozaštitu, analitički uređaj ili uređaj za administraciju.

[0079] Stručnjak u ovoj oblasti će priznati da jedinjenje pronalaska je bilo koje jedinjenje koje je ovde otkriveno, uključujući, ali ne ograničavajući se na bilo koje jedinjenje opisano u bilo kojoj od prethodnih realizacija i bilo kojoj od narednih realizacija.

[0080] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da postupak pronalaska je bilo koji postupak/metod koji je ovde otkriven, uključujući, ali ne ograničavajući se na bilo koji postupak opisan u bilo kojoj od prethodnih realizacija i bilo kojoj od narednih realizacija.

[0081] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da kompozicija pronalaska je bilo koja kompozicija koja je ovde otkrivena, uključujući, ali ne ograničavajući se na bilo koju kompoziciju opisanu u bilo kojoj od prethodnih realizacija i bilo kojoj od narednih realizacija.

[0082] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da komplet pronalaska je bilo koji komplet koji je ovde otkriven, uključujući, ali ne ograničavajući se na bilo koji komplet opisan u bilo kojoj od prethodnih realizacija i bilo kojoj od narednih realizacija.

[0083] Ovaj pronalazak je zasnovan na iznenađujućem otkriću sadašnjih pronalazača da jedinjenje pronalaska i tačnije njegov ciklični peptid obezbeđuje visoko specifično vezivanje jedinjenja koje sadrži takav ciklični peptid, za protein aktivacije fibroblasta (FAP), pošto do sada nisu opisani FAP-specifični inhibitori na bazi cikličnih peptida sa nanomolarnim afinitetom.

[0084] Konačno, ovi pronalazači su otkrili da su jedinjenja pronalaska iznenađujuće stabilna u krvnoj plazmi, i da su iznenađujuće korisna kao agensi za snimanje/imidžing i efikasna u smanjenju tumora.

[0085] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, helator je jedinjenje koje je sposobno da formira helat, pri čemu je helat jedinjenje, poželjno ciklično jedinjenje gde metal ili grupa koji ima elektronsku razmak ili usamljeni par elektrona učestvuje u formiranju prstena. Poželjnije, helator je ova vrsta jedinjenja gde jedan ligand zauzima više od jednog koordinacionog mesta na centralnom atomu.

[0086] U jednoj realizaciji i kako je poželjno ovde korišćeno, dijagnostički aktivno jedinjenje je jedinjenje koje je pogodno za ili korisno u dijagnozi bolesti.

2

[0087] U jednoj realizaciji i kako je poželjno ovde korišćeno, dijagnostički agens ili dijagnostički aktivan agens je jedinjenje koje je pogodno za ili korisno u dijagnozi bolesti.

[0088] U jednoj realizaciji i kako je poželjno ovde korišćeno, terapeutski aktivno jedinjenje je jedinjenje koje je pogodno za ili korisno u lečenju bolesti.

[0089] U jednoj realizaciji i kako se poželjno ovde koristi, terapeutski agens ili terapeutski aktivan agens je jedinjenje koje je pogodno za ili korisno u lečenju bolesti.

[0090] U jednoj realizaciji i kao što je poželjno ovde korišćeno, teragnostički aktivno jedinjenje je jedinjenje koje je pogodno ili korisno i za dijagnostiku i za terapiju bolesti.

[0091] U jednoj realizaciji i kako je poželjno ovde korišćeno, teragnostičko sredstvo ili teragnostički aktivno sredstvo je jedinjenje koje je pogodno ili korisno i za dijagnostiku i za terapiju bolesti.

[0092] U jednoj realizaciji i kako se poželjno ovde koristi, theragonstics je metod za kombinovanu dijagnozu i terapiju bolesti; poželjno, kombinovana dijagnostički i terapeutski aktivna jedinjenja koja se koriste u teragnostici su radioaktivno obeležena.

[0093] U jednoj realizaciji i kako je poželjno ovde korišćeno, lečenje bolesti je lečenje i/ili prevencija bolesti.

[0094] U jednoj realizaciji i kao što je poželjno ovde korišćeno, bolest koja uključuje FAP je bolest u kojoj ćelije uključuju, ali nisu ograničene na fibroblaste koji eksprimiraju, poželjno na pojačan način, FAP i tkivo koje ili eksprimira FAP ili koje sadrži ili sadrži ćelije kao što su fibroblasti, poželjno eksprimuju FAP na pojačan način, odnosno, ili su uzrok bolesti i/ili simptomi bolesti, ili su deo patologija koja je u osnovi bolesti. Poželjna ćelija koja eksprimira FAP je fibroblast povezan sa rakom (CAP). U jednoj realizaciji bolesti, poželjno kada se koristi u vezi sa lečenjem, ltretiranjm i/ili terapijom bolesti, uticaj na ćelije, tkivo i patologiju, respektivno, rezultira izlečenjem, lečenjem ili poboljšanjem bolesti i/ili simptoma bolesti. U jednom aspektu bolesti, poželjno kada se koristi u vezi sa dijagnozom i/ili dijagnostikom bolesti, obeležavanje ćelija koje eksprimiraju FAP i/ili tkiva koje eksprimiraju FAP omogućava diskriminaciju ili razlikovanje navedenih ćelija i/ili navedenog tkiva od zdravih ćelija ili ćelija koje ne eksprimiraju FAP i/ili zdravog tkiva ili tkiva koje ne eksprimira FAP. Poželjnije je da takva diskriminacija ili razlikovanje čini osnovu za pomenutu dijagnozu i dijagnostikovanje, respektivno. U jednom aspektu, obeležavanje označava interakciju detektabilne oznake bilo direktno ili indirektno sa ćelijama koje eksprimiraju FAP i/ili sa tkivom ili tkivom koje eksprimiraju FAP koji sadrže takve ćelije koje eksprimiraju FAP; poželjnije, takva interakcija uključuje ili se zasniva na interakciji oznake ili jedinjenja koje nosi takvu oznaku sa FAP.

[0095] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, ciljna ćelija je ćelija koja eksprimira FAP i koja je ili uzrok bolesti i/ili simptoma bolesti, ili je deo patologije koja leži u osnovi bolesti.

[0096] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, ne-ciljana ćelija je ćelija koja ili ne eksprimira FAP i/ili nije uzrok bolesti i/ili simptoma bolesti, ili je deo patologije koja je u osnovi bolesti.

[0097] U jednom aspektu i kako je poželjno ovde korišćeno, neoplazma je abnormalni novi rast ćelija. Ćelije u neoplazmi rastu brže od normalnih ćelija i nastaviće da rastu ako se ne leče. Neoplazma može biti benigna ili maligna.

[0098] U jednom aspektu i kako se ovde poželjno koristi, tumor je masovna lezija koja može biti benigna ili maligna.

[0099] U jednom aspektu i kako je poželjno ovde korišćeno, karcinom je maligna neoplazma.

[0100] Aminokiselinske sekvence ovde datih peptida su prikazane u tipičnom formatu peptidne sekvence, kao što bi razumeo prosečan stručnjak. Na primer, troslovni kôd konvencionalne aminokiseline, ili kod za nekonvencionalnu aminokiselinu ili skraćenice za dodatne gradivne blokove, ukazuje na prisustvo amino kiseline ili gradivnog bloka na određenoj poziciji unutar peptidne sekvence. Kôd za svaku aminokiselinu ili gradivni blok je povezan sa kôdom za sledeću i/ili prethodnu aminokiselinu ili gradivni blok u nizu crticom koja (obično predstavlja amidnu vezu).

[0101] Kada amino kiselina sadrži više od jedne amino i/ili karboksi grupe, sve orijentacije ove amino kiseline su u principu moguće, ali u α-amino kiselini je poželjno korišćenje α-amino i α -karboksi grupe i inače preferirane orijentacije su eksplicitno naznačene.

[0102] Za aminokiseline, u njihovim skraćenicama, prvo slovo označava stereohemiju C- α -atoma ako je primenjivo. Na primer, veliko prvo slovo označava da je L-oblik aminokiseline prisutan u peptidnoj sekvenci, dok prvo malo slovo označava da je D-oblik odgovarajuće amino kiseline prisutan u peptidnoj sekvenci.

[0103] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, aromatična L-a-amino kiselina je bilo koja vrsta L-a-amino kiselina koja sadrži aril grupu.

[0104] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, heteroaromatična L- α -amino kiselina je bilo koja vrsta L- α -amino kiseline koja sadrži heteroaril grupu.

[0105] Osim ako nije drugačije naznačeno, aminokiselinske sekvence su ovde predstavljene u pravcu od N- do C-kraja/terminusa.

[0106] Jedinjenja pronalaska tipično sadrže sekvence aminokiselina kao što je ovde dato. Konvencionalne aminokiseline, koje se takođe nazivaju prirodne aminokiseline, identifikuju se prema njihovim standardnim skraćenicama od tri slova i skraćenicama od jednog slova, kao što je navedeno u tabeli 2.

Tabela 2. Konvencionalne aminokiseline i njihove skraćenice

[0107] Nekonvencionalne amino kiseline, koje se takođe pominju kao ne-prirodne amino kiseline, su bilo koja vrsta neoligomernog jedinjenja koje sadrži amino grupu i karboksilnu grupu i nije konvencionalna amino kiselina.

[0108] Primeri nekonvencionalnih aminokiselina i drugih gradivnih blokova koji se koriste za konstrukciju jedinjenja pronalaska identifikovani su prema njihovoj skraćenici ili nazivu koji se nalazi u tabeli 3. Strukture nekih graivnih blokova su prikazane sa reagensom datim kao primer za uvođenje gradivnog bloka u peptid (npr. kao karboksilna kiselina) ili su ovi gradivni blokovi prikazani kao ostatak koji je potpuno vezan za drugu strukturu kao što je peptid ili amino kiselina. Strukture aminokiselina su prikazane kao eksplicitne aminokiseline a ne kao ostaci aminokiselina kako su predstavljene nakon implementacije u peptidnu sekvencu. Neki veći hemijski ostaci koje se sastoje od više od jedne grupe su takođe prikazani radi jasnoće.

2

Tabela 3: Skraćenica, naziv i struktura neprirodnih aminokiselina i drugih gradivnih blokova i hemijskih ostataka

2

2

[0109] U skladu sa predmetnom prijavom, DOTA označava 1,4,7,10-tetrazaciklododekan-1,4,7,10-tetraacetatnu kiselinu.

[0110] Stručnjaci će dalje prepoznati da prisustvo helacionog agensa u jedinjenju pronalaska uključuje, ako nije drugačije navedeno, mogućnost da je helacioni agens kompleksiran sa bilo kojim partnerom metalnog kompleksa, tj. koji se u principu može kompleksirati helacionog agensa. Eksplicitno pomenuti helacioni agens jedinjenja pronalaska ili opšti termin helacioni agens (helator) u vezi sa jedinjenjem pronalaska odnosi se ili na nekompleksirani helacioni agens kao takav ili na helacioni agens za koji je vezan bilo koji partner metalnog kompleksa, pri čemu je partner metalnog kompleksa bilo kog radioaktivnog ili neradioaktivnog partnera u kompleksu metala. Poželjno, metalni kompleks helatora, tj. helacioni agens za koji je vezan partner metalnog kompleksa, je stabilan metalni kompleks helatora.

[0111] Neradioaktivni metalni kompleksi helacionog agensa imaju nekoliko primena, npr. za procenu osobina poput stabilnosti ili aktivnosti koje je inače teško odrediti. Jedan aspekt je da hladne varijante radioaktivnih verzija partnera metalnog kompleksa (npr. neradioaktivni kompleksi galijuma, lutecijuma ili indijuma kao što je opisano u primerima) mogu delovati kao surogati radioaktivnih jedinjenja. Dalje, to su vredni alati za identifikaciju metabolita in vitro ili in vivo, kao i za procenu toksičnih svojstava

2

jedinjenja pronalaska. Dodatno, kompleksi metala helatora mogu se koristiti u testovima vezivanja koji koriste fluorescentna svojstva nekih metalnih kompleksa sa različitim ligandima (npr. soli evropijuma).

[0112] Stručnjak će prepoznati da je radioaktivni nuklid koji je ili koji treba da bude vezan za jedinjenje pronalaska, izabran uzimajući u obzir bolest koja se leči i/ili bolest koju treba lečiti. dijagnostikovan, odnosno, i/ili posebnosti pacijenta i grupe pacijenata, respektivno, koje treba lečiti, odnosno dijagnostikovati, respektivno.

[0113] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, radioaktivni nuklid se takođe naziva radionuklid. Radioaktivni raspad je proces kojim atomsko jezgro nestabilnog atoma gubi energiju emitujući jonizujuće čestice (jonizujuće zračenje). Postoje različite vrste radioaktivnog raspada. Raspad, ili gubitak energije, nastaje kada se atom sa jednim tipom jezgra, koji se zove matični radionuklid, transformiše u atom sa jezgrom u drugom stanju ili u drugo jezgro koje sadrži različit broj protona i neutrona. Bilo koji od ovih proizvoda se naziva ćerka nuklid. U nekim raspadima matični i ćerka su različiti hemijski elementi, tako da proces raspadanja rezultira nuklearnom transmutacijom (stvaranje atoma novog elementa). Na primer, radioaktivni raspad može biti alfa raspad, beta raspad i gama raspad. Alfa raspad nastaje kada jezgro izbaci alfa česticu (jezgro helijuma). Ovo je najčešći proces emitovanja nukleona, ali u ređim tipovima raspada, jezgra mogu izbaciti protone, ili specifična jezgra drugih elemenata (u procesu koji se naziva raspad klastera). Beta raspad se dešava kada jezgro emituje elektron (β --raspad) ili pozitron (B<+>-raspad) i vrstu neutrina, u procesu koji menja proton u neutron ili obrnuto. Nasuprot tome, postoje procesi radioaktivnog raspada koji ne dovode do transmutacije. Energija pobuđenog jezgra može se emitovati kao gama zrak u gama raspadu, ili koristiti za izbacivanje orbitalnog elektrona interakcijom sa pobuđenim jezgrom u procesu koji se naziva unutrašnja konverzija, ili se koristiti za apsorpciju unutrašnjeg atomskog elektrona iz elektronske ljuske pri čemu promena nuklearnog protona u neutron izaziva emisiju elektronskog neutrina u procesu koji se naziva hvatanje elektrona (EC), ili se može emitovati bez promene broja protona i neutrona u procesu koji se naziva izomerna tranzicija (IT). Drugi oblik radioaktivnog raspada, spontana fisija (SF), nalazi se samo u veoma teškim hemijskim elementima što dovodi do spontanog raspada na manja jezgra i nekoliko izolovanih nuklearnih čestica.

[0114] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid se može koristiti za obeležavanje jedinjenja pronalaska.

[0115] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid je pogodan za stvaranje kompleksa sa helirajućim agensom, što dovodi do radionuklidnog helatnog kompleksa.

[0116] U daljem izvođenju jedan ili više atoma jedinjenja pronalaska su neprirodnog izotopskog sastava, poželjno su ti atomi radionuklidi; poželjnije radionuklidi ugljenika, kiseonika, azota, sumpora, fosfora i halogena: Ovi radioaktivni atomi su tipično deo aminokiselina, u nekim slučajevima aminokiseline koje sadrže halogen, i/ili gradivni blokovi i u nekim slučajevima halogenovani gradivni blokovi svakog jedinjenja pronalaska.

[0117] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid ima poluživot koji omogućava dijagnostičku i/ili terapeutsku medicinsku upotrebu. Konkretno, poluživot je između 1 min i 100 dana.

[0118] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid ima energiju raspada koja omogućava dijagnostičku i/ili terapeutsku medicinsku upotrebu. Konkretno, za izotope koji emituju γ zračenje, energija raspada je između 0,004 i 10 MeV, poželjno između 0,05 i 4 MeV, za dijagnostičku upotrebu. Za izotope koji emituju pozitron, energija raspada je između 0,6 i 13,2 MeV, poželjno između 1 i 6 MeV, za dijagnostičku upotrebu. Za izotope koji emituju čestice, energija raspada je između 0,039 i 10 MeV, poželjno između 0,4 i 6,5 MeV, za terapeutsku upotrebu.

2

[0119] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid se industrijski proizvodi za medicinsku upotrebu. Konkretno, radionuklid je dostupan u GMP kvalitetu.

[0120] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, ćerka nuklid (ćerke nuklidi) nakon radioaktivnog raspada radionuklida je kompatibilna sa dijagnostičkom i/ili terapeutskom medicinskom upotrebom. Štaviše, ćerke nuklidi su ili stabilni ili se dalje raspadaju na način koji ne ometa ili čak podržava dijagnostičku i/ili terapijsku medicinsku upotrebu. Reprezentativni radionuklidi koji se mogu koristiti u vezi sa ovim pronalaskom sumirani su u tabeli 4.

2

ela Tab 4: leTab

- -SiSg-RaR Ha

Hs

M M ReRg-N N N N

[0121] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid se koristi za dijagnozu. Poželjno, radioaktivni izotop je izabran iz grupe koju čine, ali nije ograničen na,<43>Sc,<44>Sc,<51>Mn,<52>Mn,<64>Cu,<67>Ga,<68>Ga,<86>Y,<89>Zr,<94m>Tc,<99m>Tc,<111>In,<152>Tb,<155>Tb,<177>Lu,<201>Tl,<203>Pb,<18>F,<76>Br,<77>Br,<123>I,<124>I,<125>I. Još poželjnije, radionuklid je izabran iz grupe koja sadrži<43>Sc,<44>Sc,<64>Cu,<67>Ga,<68>Ga,<86>Y,<89>Zr,<99m>Tc,<111>In,<152>Tb,<155>Tb,<203>Pb,<18>F,<76>Br,<77>Br,<123>I,<124>I,<125>I. Još poželjnije, radionuklid se bira iz grupe koja sadrži<64>Cu,<68>Ga,<89>Zr,<99m>Tc,<111>In,<18>F,<123>I, i<124>I.. Međutim, takođe će biti priznato od strane stručnjaka u ovoj oblasti da upotreba pomenutog radionuklida nije ograničena na dijagnostičke svrhe, već obuhvata njihovu upotrebu u terapiji i teragnostici kada su konjugovani sa jedinjenjem pronalaska.

[0122] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, radionuklid se koristi za terapiju. Poželjno, radioaktivni izotop je izabran iz grupe koju čine<47>Sc,<67>Cu,<89>Sr,<90>Y,<111>In,<153>Sm,<149>Tb,<161>Tb,<177>Lu,<186>Re,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<223>Ra,<225>Ac,<226>Th,<227>Th,<131>I,<211>At. Još poželjnije, radioaktivni izotop je izabran iz grupe koju čine<47>Sc,<67>Cu,<90>Y,<177>Lu,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<225>Ac,<227>Th,<131>I,<211>At. Još poželjnije, radionuklid se bira iz grupe koja sadrži<90>Y,<177>Lu,<225>Ac,<227>Th,<131>I i<211>At. Međutim, stručnjak će takođe prepoznati da upotreba pomenutog radionuklida nije ograničena na terapeutske svrhe, već obuhvata njihovu upotrebu u dijagnostici i teragnostici kada su konjugovani sa jedinjenjem pronalaska.

[0123] U jednom aspektu jedinjenje pronalaska je prisutno kao farmaceutski prihvatljiva so.

[0124] "Farmaceutski prihvatljiva so" jedinjenja iz ovog pronalaska je poželjno kisela so ili bazna so za koju se u struci generalno smatra da je pogodna za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi ili životinja bez prekomerne toksičnosti ili kancerogenost, i poželjno bez iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija. Takve soli obuhvataju soli mineralnih i organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini, kao i alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline. Jedinjenja pronalaska su sposobna da formiraju unutrašnje soli koje su takođe farmaceutski prihvatljive soli.

[0125] Pogodne farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, soli kiselina kao što su hlorovodonična, fosforna, bromovodonična, jabučna, glikolna, fumarna, sumporna, sulfaminska, sulfanilna, mravlja, toluensulfonska, metansulfonska, benzosulfonska, etandisulfonska, 2-hidroksietilsulfonska, azotna, benzoeva, 2-acetoksibenzoeva, limunska, vinska, mlečna, stearinska, salicilna, glutaminska, askorbinska, pamoična, sukcinska, fumarna, maleinska, propionska, hidroksimaleinska, jodovodonična, fenilacetatna, alkanska, kao što su acetatna kiselina HOOC-(CH2)n-COOH gde n je bilo koji ceo broj od 0 do 4, tj.0, 1, 2, 3 ili 4, i slično. Slično, farmaceutski prihvatljivi katjoni uključuju, ali nisu ograničeni na natrijum, kalijum, kalcijum, aluminijum, litijum i amonijum. Prosečan stručnjak u oblsti tehnike prepoznaće dalje farmaceutski prihvatljive soli za jedinjenja koja su ovde data. Generalno, farmaceutski prihvatljiva kisela ili bazna so se može sintetisati od matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak bilo kojim konvencionalnim hemijskim postupkom. Ukratko, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva. Generalno, poželjna je upotreba nevodenih medija, kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril.

[0126] "Farmaceutski prihvatljiv solvat" jedinjenja pronalaska je poželjno solvat jedinjenja pronalaska formiran asocijacijom jednog ili više molekula rastvarača na jedan ili više molekula jedinjenja pronalaska. Poželjno, rastvarač je onaj za koji se u struci generalno smatra da je pogodan za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi ili životinja bez prekomerne toksičnosti ili kancerogenosti, i poželjno bez iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija. Takav rastvarač uključuje organski rastvarač kao što su alkoholi, etri, estri i amini.

11

[0127] "Hidrat" jedinjenja pronalaska se formira povezivanjem jednog ili više molekula vode na jedan ili više molekula jedinjenja pronalaska. Takav hidrat uključuje, ali nije ograničen na, hemihidrat, monohidrat, dihidrat, trihidrat i tetrahidrat. Nezavisno od sastava hidrata, svi hidrati se generalno smatraju farmaceutski prihvatljivim.

[0128] Jedinjenje pronalaska ima visok afinitet vezivanja za FAP i visoku inhibitornu aktivnost na FAP. Zbog ovog visokog afiniteta vezivanja, jedinjenje pronalaska je efikasno kao, korisno i/ili pogodno kao agens za ciljanje i, ako je konjugovano sa drugim ostatkom, kao ciljni deo. Kako se ovde poželjno koristi, agens za ciljanje je agens koji je u interakciji sa ciljnim molekulom koji je u ovom slučaju pomenuti FAP. U smislu ćelija i tkiva koje su na taj način ciljane jedinjenjem pronalaska, svaka ćelija i tkivo, respektivno, koji eksprimiraju navedeni FAP su ili mogu biti ciljani.

[0129] U jednom aspektu, jedinjenje stupa u interakciju sa proteinom za aktivaciju fibroblasta (FAP), poželjno sa humanim FAP koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 1 ili njen homolog, pri čemu aminokiselinska sekvenca homologa ima identitet FAP koji je najmanje 85% aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 1. U poželjnim rešenjima, identitet je 90%, poželjno 95%, 96%, 97%, 98% ili 99%.

[0130] Identitet između dva molekula nukleinske kiseline može se odrediti kao što je poznato stručnjaku. Tačnije, algoritam za poređenje sekvenci se može koristiti za izračunavanje procenta homologije sekvence za test sekvencu(e) u odnosu na referentnu sekvencu, na osnovu naznačenih parametara programa. Test sekvenca je poželjno sekvenca ili protein ili polipeptid za koji se kaže da je identičan ili da se testira da li je identičan, i ako jeste, u kojoj meri, na drugi protein ili polipeptid, pri čemu se tako različiti protein ili polipepetid takođe nazivaju kao referentna sekvenca i poželjno je protein ili polipeptid divljeg tipa, poželjnije ljudski FAP SEQK ID NO: 1.

[0131] Optimalno poravnanje sekvenci za poređenje može se izvesti, na primer, algoritmom lokalne homologije Smith & Waterman (Smith, et al., Advances in Applied Mathematics, 1981, 2: 482), pomoćupomoću algoritma za poravnanje homologije Needleman & Wunsch (Needleman, et al., J Mol Biol, 1970, 48: 443),metodompretrage sličnosti Pearson & Lipman (Pearson, et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1988, 85: 2444), kompjuterizovanim implementacijama ovih algoritama ((GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), ili vizuelnom inspekcijom.

[0132] Jedan primer algoritma koji je pogodan za određivanje procenta identiteta sekvence je algoritam koji se koristi u osnovnom alatu za pretragu lokalnog poravnanja (u daljem tekstu "BLAST"), videti, npr. Altschul et al., 1990 (Altschul, et al., J Mol Biol, 1990, 215: 403) i Altschul et al., 1997 (Altschul, et al., Nucleic Acids Res, 1997, 25: 3389). Softver za obavljanje BLAST analiza je javno dostupan preko Nacionalnog centra za biotehnološke informacije (u daljem tekstu „NCBI“). Podrazumevani parametri koji se koriste za određivanje identiteta sekvence korišćenjem softvera dostupnog od NCBI, npr. BLASTN (za nukleotidne sekvence) i BLASTP (za sekvence aminokiselina) opisani su u McGinnis et al. (McGinnis, et al., Nucleic Acids Res, 2004, 32: W20).

[0133] U okviru ovog pronalaska je jedinjenje pronalaska korišćeno ili je za upotrebu u postupku za lečenje bolesti kako je ovde otkriveno. Takav postupak, poželjno, obuhvata korak davanja subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska. Takav metod uključuje, ali nije ograničen na, kurativni ili pomoćni tretman raka. Koristi se kao palijativni tretman kada izlečenje nije moguće, a cilj je lokalna kontrola bolesti ili ublažavanje simptoma ili kao terapijski tretman gde terapija ima koristi za preživljavanje i može biti lekovita.

[0134] Metoda za lečenje bolesti kako je ovde otkrivena uključuje lečenje bolesti opisane ovde, uključujući tumore i rak/karcinome, i može se koristiti ili kao primarna terapija ili kao druga, treća,

11

četvrta ili poslednja linija terapije. Takođe je u okviru ovog pronalaska kombinovanje jedinjenja pronalaska sa daljim terapijskim pristupima. Stručnjaku je dobro poznato da će precizna namera lečenja, uključujući kurativno, pomoćno, neoadjuvantno, terapeutsko ili palijativno lečenje, zavisiti od tipa tumora, lokacije i stadijuma, kao i od opšteg zdravlja pacijenta..

[0135] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, bolest je izabrana iz grupe koja se sastoji od neoplazme koa nije drugačije određena (NOS), neoplazme benigne, neoplazme nesigurne da li benigne ili maligne, neoplazme maligne, neoplazme metastatske, neoplazme maligne neizvesne da li primarne ili metastatske, tumorske ćelije benigne, tumorske ćelije nesigurne da li su benigne ili maligne, tumorske ćelije maligne, maligni tumor male ćelije tip, maligni tumor tip gigantske ćelije, maligni tumor fuziformni ćelijski tip, epitelne neoplazme NOS, epitelni tumor benigni, karcinom in situ NOS, karcinomi NOS, metastatski karcinomi NOS, karcinomatoza, epiteliom benigni, maligni epiteliom, karcinom velikih ćelijaNOS, karcinom nediferencirani tipa NOS , anaplastični karcinom tip NOS, pleomorfni karcinom, karcinom džinovskih i vretenastih ćelija, karcinom džinovskih ćelija, karcinom vretenastih ćelija, pseudosarkomatozni karcinom, karcinom poligonalnih ćelija, karcinom sferoidnih ćelija, tumorlet, karcinom malih ćelija NOS, karcinom malih ćelija, sitnoćelijski karcinom, karcinom fuziformnog tipa ćelija, papilarne i skvamozne neoplazme, papiloma NOS, papilarni karcinom in situ, papilarni karcinom NOS, verukozni papilom, verukozni karcinom NOS, papilom skvamoznih ćelija, papilarni karcinom skvamoznih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom invertovanog papiloma papilomatoza NOS, karcinom skvamozinih čelija in situ NOS, karcinom skvamoznih ćelija NOS, karcinom skvamoznih ćelija metastatski nos, karcinom skvamoznih ćelija, keratinizirajući tip NOS, karcinom skvamoznih ćelija metastatski NOS, Karivnom skvamoznih ćelija, keratinizirajući tip NOS, karcinom skvamoznih ćelija velikih ćelija nekeratinizirajući tip, karcinom skvamoznih ćelija malih ćelija nekeratinizirajuči tip, karcinom tip skvamoznih vretenastih ćelija , karcinom adenoidnih skvamoznih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija in situ sa upitnom stromalnom invazijom, mikroinvazivni karcinom skvamoznih ćelija, Kuejratova eritroplazija, Bovnova bolest, limfoepitelijalni karcinom, neoplazme bazalnih ćelija, tumor bazalnih ćelija, karcinom bazalnih ćelija NOS, mulicentrični karcinom bazalnih ćelija, karcinom bazalnih ćelija karcinom morfea tip, karcinom bazalnih ćelija fibroepitelnog tipa, bazoskvamozni karcinom, metatipični karcinom, intraepidermalni epiteliom Jadasona, trihoepiteliom, trihofolikulom, triholemoma, pilomatriksorna, papilom i karcinomi tranzicionih ćelija, papilomi transicionih ćelija NOS, urotelni papilom, tranzicioni ćelijski karcinom in situ, karcinom prelaznih ćelija NOS, šnajderov papilom, papilom prelaznih ćelija, obrnuti tip, šnajderov karcinom, karcinom prelaznih ćelija vretenastoćelijski tip, bazaloidni karcinom, kloakogeni karcinomi papiloma i prelazni karcinomi, adenokarcinomi, adenom NOS, bronhijalni adenom NOS, adenokarcinom in situ, adenokarcinom NOS; adenokarcinom metastatski nos, scirozni adenokarcinom, linitis plastica, adenokarcinom površinskog širenja, adenokarcinom intestinalni tip, adenokarcinomski tip, adenosalni karcinom, difuzni karcinom ćelijski adenom, karcinom ćelija ostrvaca, insulinoma NOS, insulinom maligni, glukagonoma NOS, glukagonoma maligni, gastrinoma NOS, maligni gastrinom, mešoviti adenokarcinom ćelija ostrvaca i egzokrini, adenom žučnih kanala, holangiokarcinom, holangiokarcinom, žučni kanal, cistadenom žučnog kanala, cistadenom žučnog kanala, hepatocelularni karcinom NOS, benigni hepatoholangiom, kombinovani hepatocelularni karcinom i holangiokarcinom, trabekularni adenom, trabekularni adenokarcinom, embrionalni adenom, ekkrini dermalni cilindrom, adenoidni cistični karcinom NOS, krinomat pobrusni karcinom, krinomat adenokarcinom u adenomatoznom polipu, tubularni adenom NOS, tubularni adenokarcinom, adenomatozna polipoza koli, adenokarcinom u adenomatoznoj polipozi koli, višestruki adenomatozni polipi, solidni karcinom maligni NOS, karcinoidni tumor neargentafinski NOS, karcinoidni tumor neargentafinski maligni, mukokarcinoidni tumor maligni, kompozitni karcinoid, plućna adenomatoza, bronhiolo-alveolarni adenokarcinom, alveolarni adenom, alveolarni adenokarcinom, papilarni adenom NOS, papilarni adenom NOS, papilarni adenom NOS,

12

papilarni adenonom NOS, papilarni adenom vilozni adenom, vilozni adenokarcinom, tubulovilozni adenom, hromofobni adenom, hromofobni karcinom, acidofilni adenom, acidofilni karcinom, mešani acidofilno-bazofilni adenom, mešani acidofilno-bazofilni karcinom, oksifilnobazofilni adenom, oksifilni karcinom adenom, bazofilni karcinom, adenom bistrih ćelija, adenokarcinom bistrih ćelija, ćelijski adenokarcinom NOS, lipoadenom, folikularni adenom, folikularni adenokarcinom NOS, folikularni adenokarcinom dobro diferenciran tip, folikularni adenokarcinom trabekularni tip, mikrofolikularni adenom, makrofolikularni adenom, papilarni i folikularni adenokarcinom, multipli adenomski karcinom, nonencaps jukstaglomerularni tumor, adenoma kortikalne nadbubrežne žlezde NOS, karcinom kore nadbubrežne žlezde, kompaktni ćelijski adenom korteksa nadbubrežne žlezde, jako pigmentirana varijanta adenoma kore nadbubrežne žlezde, adenom kortikalne nadbubrežne žlezde bistroćelijski tip, adenom kortikalne nadbubrežne žlezde glomeruloza ćelijski tip, adenoma kore nadbubrežne žlezde, karcinom kore nadbubrežne žlezde, kompaktni ćelijski adenom kortikalne žlezde, varijanta jako pigmentisane varijante adenoma kore nadbubrežne žlezde, bistri ćelijski adenom kore nadbubrežne žlezde, ćelijski adenom kore nadbubrežne žlezde, ćelijski tip glomeruloze, adenoma kortikalne nadbubrežne žlezde mešoviti adenooidni endometrijski tip, adenooidni endometrijski tip , granični malignitet, endometrioidni karcinom, endometrioidni adenofibrom nos, endometrioidni adenofibrom granični malignitet, maligni endometrioidni adenofibrom, neoplazme adneksa i dodatka kože, adenom dodatka kože, karcinom dodatka kože, adenom znojnih žlezda, tumor znojne žlezde, tumor znojne žlezde, apenoma znojnice apokrini adenokarcinom, ekkrini akrospirom, ekkrini spiradenom, hidrocistoma, papilarni hidradenom, papilarni siringadenom, siringoma NOS, kloakogeni karcinom, papilarni karcinom tranzicionih ćelija, adenomi i adenokarcinomi, adenom NOS., bronhijalni adenom NOS., adenokarcinom in situ, adenokarcinom NOS, metastatski adenokarcinom NOS, scirozni adenokarcinom adenokarcinoma, linitis plastica, superficialno širenje adenokarcinoma , adenokarcinom intestinalni tip, karcinom difuzni tip, monomorfni adenom, adenom bazalnih ćelija, adenom ćelija ostrvaca, tumor ćelija „ostrvaca“, insulinoma NOS, insulinom maligni, glukagonom NOS, glukagonom maligni, gastrinoma NOS, maligni gastrinom, mešoviti adenokarcinom ćelija ostvaca i egzokrini adenom, adenom žučnih kanala, holangiokarcinom, cistadenom žučnih kanala, cistadenokarcinom žučnih kanala, adenom ćelija jetre, hepatocelularni karcinom NOS, benigni hepatoholangiom, kombinovani hepatocelularni karcinom i holangiokarcinom, tubularni adenom NOS, tubularni adenokarcinom, adenomatozna polipoza coli, adenokarcinom u adenomatoznoj polipozi coli, višestruki adenomatozni polipi, čvrsti karcinomi NOS, karcinom simpleks, karcinoidni tumor NOS, karcinoidni tumor maligni, karcinoidni tumor argentafinski NOS, karcinoidni tumor argentafinski maligni, karcinoidni tumor neargentafinski nos, karcinoidni tumor neargentafinski maligni, mukokarcinoidni tumor maligni, kompozitni karcinoid, plućna adenomatoza, bronhioloalveolarni adenokarcinom, alveolarni adenokarcinom, alveolarni adenokarcinom nos, papilarni adenokarcinom NOS, vilozni adenom NOS, adenokarcinom u viloznom adenomu, vilozni adenokarcinom, tubulovilozni adenom, hromofobni adenom, hromofobni karcinom, acidofilni adenom, acidofilni karcinom, mešani acidofilni adenom karcinom, oksifilni adenom, oksifilni adenokarcinom, bazofilni adenom, bazofilni karcinom, adenofibrom bistrih ćelija, adenom bistrih ćelija, adenokarcinom bistrih ćelija, adenoma mešovitih ćelija, adenokarcinom mešovitih ćelija, lipoadenom, folikularni adenom, folikularni adenokarcinom NOS, folikularni adenokarcinom, nekapsulirani sklerozirajući karcinom, višestruki endokrini adenomi, jukstaglomerularni tumor, adenoma kore nadbubrežne žlezde NOS, karcinom kore nadbubrežne žlezde, adenom kore nadbubrežne žlijezde, kompaktni ćelijski adenom, adenom kore nadbubrežne žlezde, jako pigmentirani kortikalni adenoma adrenma, jasna adeno pigmentna kortikalna varijanta, adrenma tip ćelija glomeruloze, mešoviti ćelijski adenom nadbubrežne žlezde, endometrioidni adenom NOS, endometrioidni adenom, granični malignitet, endometrioidni karcinom, endometrioidni adenofibroma nos, endometrioidni adenofibrom granični malignitet, endometrioidni adenofibroma granični malignitet, endometrioidni adenofibroma, maligni apendiks kože, apendiks kože ne i apendeks kože karcinom dodatka, adenom znojne žlezde, tumor znojnih žlezda NOS, adenokarcinom znojne žlezde, apokrini adenom, apokrini adenokarcinom, ekrini akrospirom, ekrini spiradenom, hidrocistoma, papilarni hidradenom, papilarni siringadenom, siringoma NOS, lojni adenom, lojni adenokarcinom, ceruminozni adenom, ceruminozni adenokocipidermi mukoepidermoidni tumor, mukoepidermoidni karcinom cistične, mucinozne i serozne neoplazme, cistadenomi NOS, cistadenokarcinomi nos, serozni cistadenomi nos, serozni cistadenom granični malignitet, serozni cistadenokarcinom granični malignitet, serozni cistadenokarcinom nos, papilarni cistadenomi granični papilarni tumori, papilarni nosni papilarni tumori papilarni cistadenokarcinom nos, papilarni serozni cistadenom nos, papilarni serozni cistadenom granični malignitet, papilarni serozni cistadenokarcinom, serozni površinski papiloma NOS, serozni površinski papilom granični malignitet, serozni površinski papiloma granični malignitet, serozna površinska papiloma nosmastadeno, mucin karcinom granični malignitet, mucinozni cistadenokarcinom NOS, papilarni mucinozni cistadenom NOS, papilarni mucinozni cistadenom granični malignitet, papilarni mucinozni cistadenokarcinom, mucinozni adenom, mucinozni adenokarcinom, pseudomiksoma peritonei, adenokarcinom koji proizvodi mucin, karcinom ćelija pečatnog prstena, metastatski karcinom kola i medijumularni lobni prsten neoplazme, intraduktalni karcinom neinfiltrirajući nos, infiltrirajući karcinom kanala, komedokarcinom, neinfiltrirajući komedokarcinom nos, juvenilni karcinom dojke, intraduktalni papilom, neinfiltrirajući intraduktalni papilarni adenokarcinom, intracistična intracistična papiloma karcinom, intraduktalna papilomatoza nos, papilomatoza subareolnog kanala, medularni karcinom br, medularni karcinom sa amiloidnom stromom, medularni karcinom sa limfoidnom stromom, lobularni karcinom in situ, lobularni karcinom NOS, infiltrirajuća bolest karcinoma karcinoma, bolest karcinoma ćelije u karcinomu karcinom dojke, Pagetova bolest i infiltrirajući kanali karcinoma dojke, ekstramamarna Pagetova bolest, neoplazme acinarnih ćelija, adenom acinarnih ćelija, tumor acinarnih ćelija, karcinom acinarnih ćelija, složene epitelne neoplazme, adenoskvamozni karcinom, adenolimfom, adenokarcinom sa skvamoznom metaplazijom, adenokarcinom sa hrskavičastom i koštanom metaplazijom, adenokarcinom sa metaplazijom vretenastih ćelija, adenokarcinom sa apokrinom metaplazijom, benigni timom, maligni timom, specijalizovane neoplazme gonada, tumor polne vrpce, karcinom stromalnog nosa nos, tumor granuloza ćelija NOS; maligni tumor granuloza ćelija, tumor granuloza ćelija-teka ćelija, benigni androblastom, nos androblastoma, maligni androblastom, tumor Sertoli-leidig ćelija, ginandroblastom, tubularni androblastom NOS, sertoli ćelijski karcinom i liproblast skladište, tubularni karcinom benigni tumor Lejdigovih ćelija, tumor lejdigovih ćelija, maligni tumor lejdigovih ćelija, tumor hilarnih ćelija, tumor lipidnih ćelija jajnika, tumor ostataka nadbubrežne žlezde, tumori paraganglioma i glomusa, paragangliomi nos, maligni paragangliomi, simpatički paragangliom, parasimpatički paragangliom, tumor glomus jugulare, tumor tela aorte, tumor karotidnog tela, ekstra-nadbubrežni paragangliom br. melanomi, pigmentni nevus NOS, maligni melanom NOS, nodularni melanom, nevus balon ćelija, melanom balon ćelija, halo nevus, fibrozna papula nosa, neuronevus, magnocelularni nevus, nepigmentisani nevus, amelanomski melanom, maligni melanom melanoma, maligni nevus melanoma, junk prekancerozna melanoza br, maligni melanom u prekanceroznoj melanozi, hačinsonova melanotična pega, maligni melanom u hačinsonovoj melanoznoj pegi, melanom površinskog širenja, intradermalni nevus, složeni nevus, džinovski melanotični pigmentni nevus, maligni nevus melanotičnog pigmenta u malignom nevusu ćelijski nevus, melanom epitelioidnih ćelija, melanom vretenastih ćelija, melanom vretenastih ćelija tip a, melanom vretenastih ćelija tip b, melanom epitelioidnih i vretenastih ćelija, plavi nevus NOS, plavi nevus maligni, ćelijski plavi nevus, tumori mekih tkiva i sarkomi tumor mekog tkiva benigni, sarkom nos, sarkomatoza nos, sarkom vretenastih ćelija, sarkom gigantskih ćelija, sarkom malih ćelija, sarkom epitelioidnih ćelija, fibromatozne neoplazme, fibrom NOS, fibrosarkom NOS, fibromiksoma, fibromiksosarkom, periostalni fibrom, periostalni fibrosarkom, fascijalni fibroma, fascijalni fibrosarkom, infantilni fibrosarkom, elastofibroma, agresivna fibromatoza, abdominalna fibromatoza, dezmoplastični fibrom, fibrozni histiocitom NOS, atipični fibrozni histiocitom, maligni fibrozni histiocitom, fibroksantom NOS, atipični fibroksantom, fibroksantomski protufibroma, maligni fibroksantom dermatofibrosarkom NOS, miksomatozne neoplazme, miksom NOS, miksosarkom, lipomatozne neoplazme, lipoma NOS, liposarkom NOS, fibrolipom, liposarkom dobro diferenciranog tipa, fibromiksolipom, miksoidni liposarkom, liposarkom okruglih ćelija, pleomorfni liposarkom, liposarkom mešovitog tipa, liposarkom mešovitog tipa, intramuskularna lipoćelijska lipoćelija, intramuskularna lipoćelijska ćelija angiomioliposarkom, angiolipoma NOS, infiltriranje angiolipoma, mijelolipom, hibernom, lipoblastomatoza, miomatozne neoplazme, lejomioma NOS, intravaskularna lejomiomatoza, leiomiosarkom NOS, epitelioidni leiomiom, epiteliosarkom leiooma, epiteliosarkom leiooma bizarni lejomiom, angiomiom, angiomiosarkom, miom, miosarkom, nos rabdomioma, rabdomiosarkom NOS, pleomorfni rabdomiosarkom, rabdomiosarkom mešovitog tipa, fetalni rabdomiom, rabdomioma kod odraslih, rabdomioma za odrasle, rabdomiosarkom alveolarni rabdomiosarkom, složene mešane i stromalne neoplazme, stromalni sarkom endometrijuma, endolimfatička stromalna mioza, adenomiom, pleomorfni adenom, mešani tumor, maligni nos, mulerov mešani tumor, mezodermalni mešani tumor, mezodermalni mešoviti tumor, nefroblastični nefroblastom nefroblastom, nefroblastom nefroblastom nefroblastom, hepatoblastom, karcinosarkom nos, karcinosarkom embrionalni tip, mioepiteliom, mezenhimom benigni, mezenhimom nos, maligni mezenhimom, embrionalni sarkom, fibroepitelne neoplazme, brenerov tumor NOS, brenerov maligni tumor, granični tumor brenera, granični tumor fibroadenom NOS, intrakanalikularni fibroadenom NOS, perikanalikularni fibroadenom, adenofibroma nos, serozni adenofibrom, mucinozni adenofibrom, ćelijski intrakanalikularni fibroadenom, cistosarkom filodes nos, cistosarkom filodes maligni, juvenilni fibroadenom, sinovijalne neoplazme, benigni sinoviom, sinovijalni sarkom nos, sinovijalni sarkom, sinovijalni sarkom, sinovijalni sarkom, sinovijalna vretenasta ćelija sarkom bifazičnog tipa, bistra ćelijski sarkom tetiva i aponeuroza, mezotelijalne neoplazme, mezoteliom benigni, mezoteliom maligni, fibrozni mezoteliom benigni, fibrozni mezoteliom maligni, epitelioidni mezoteliom benigni, epiteliom maligni mezoteliom mezobenigni tip mezoteliom dvofaznog tipa maligni, adenomatoidni tumor br., neoplazme polnih ćelija, disgerminom, seminoma NOS, seminom anaplastični tip, spermatocitni seminom, germinom, embrionalni karcinom nos, tumor endodermalnog sinusa, poliembrioma nosa, gonadoteraben blastom teratom maligni nos, teratokarcinom, maligni teratom nediferencirani tip, maligni teratom srednji tip, dermoidna cista, dermoidna cista sa malignom transformacijom, struma jajnika NOS, struma jajnika maligna, strumalni karcinoid, trofoblastne neoplazme, hidatidiformni mladež, invazivni hidatidiformni mladež, horiokarcinom, horiokarcinom u kombinaciji sa teratomom, maligni teratom trofoblastični, mezonefromi, mezonefrom benigni, mezonefromni tumor, mezonefroma maligni, endosalpingiom, tumori krvnih sudova, hemangiom NOS, hemangiosarkom, kavernozni hemangiom, venski hemangiom, racemozni hemangiom, sarkom Kupferovih ćelija, hemangioendoteliom benigni, hemangioendoteliom nos, maligni hemangioendoteliom, kapilarni hemangion, intramuskularni hemangiom, Kapošijev sarkom, angiokeratom, verukozni keratotični hemangiom, benigni hemangiopericitom, benigni hemangiopericitom, maligni hemangiopericitom, angiofibrom NOS, hemangioblastom nosni tumor, limfni sarkom nosni sud kapilarni limfangiom, kavernozni limfangiom, cistični limfangiom, limfangiomiom, limfangiomiomatoza, hemolimfangiom, osteomi i osteosarkomi, osteomi nos, osteosarkom nos, hondroblastični osteosarkom, fibroblastična bolest osteosarkoma, osteosarkom, fibroblastična bolest kostiju, jukstakortikalni osteosarkom, osteoidni osteom NOS, osteoblastom, hondromatske neoplazme, osteohondroma, osteohondromatoza nos, hondroma nos, hondromatoza nos, hondrosarkom nos, jukstakortikalna hondroma, jukstakortikalna hondroma, jukstakortikalna noshondroblastom, maligna hondrosarkom mezenhimalni hondrosarkom, hondromiksoidni fibrom, tumori gigantskih ćelija, tumor gigantskih ćelija kostiju NOS, maligni tumor

12

gigantskih ćelija kostiju, tumor gigantskih ćelija mekih delova NOS, maligni tumor gigantskih ćelija mekih delova, razni tumori kostiju, juingov sarkom, adamantinom dugih kostiju, okoštavajući fibrom, odontogeni tumori, benigni odontogeni tumor, benigni tumor odontoge, odontogeni tumor maligni tumor, dentinom, cementom benigni cementoblastom, cementirajući fibrom, gigantiformni cementom, nos odontoma, složeni odontom, složeni odontom, ameloblastični fibro-odontom, ameloblastični odontosarkom, adenomatoidni odontogeni tumor, kalcificirajući odontogeni odontogeni tumor, nosmeloblastna maligna cista, a odontoameloblastom, skvamozni odontogeni tumor, odontogeni miksom, odontogeni fibroma NOS, ameloblastični fibroma, ameloblastični fibrosarkom, kalcificirajući epitelni odontogeni tumor, razni tumori, kraniofaringiom, pinealom, pineocitom, pineoblastom, melanotični neuroektodermalni tumor, hordom, gliomi, maligni gliom, gliomatoza cerebri, mešani gliom, subependimalni gliom, subependimalni astrocitom džinovskih ćelija, maligni pleksus horoida, papiloma pleksusa, papiloma ependimoma NOS, ependimoma anaplastični tip, papilarni ependimoma, miksopapilarni ependimoma, astrocitom NOS, astrocitom, anaplastični tip, protoplazmatski astrocitom, gemistocitni astrocitom, fibrilarni astrocitoma, pilocitoma nostoma, pilocitoma polarni spongioblastom, astroblastom, glioblastom NOS, glioblastom džinovskih ćelija, glioblastom sa sarkomatoznom komponentom, primitivni polarni spongioblastom, oligodendrogliom NOS, oligodendrogliom, anaplastični tip, oligodendroblastom, nosuloblastom, medulomoblastom, meduloblastom cerebelarni sarkom NOS, monstrocelularni sarkom, neuroepiteliomatozne neoplazme, ganglioneuroma, ganglioneuroblastom, ganglioneuromatoza, neuroblastom nos, meduloepiteliom NOS, teratoidni meduloepiteliom, neuroepitelioma nosog, spongiona, ganglioneuroblastom, ganglioneuromatoza tumor, retinoblastoma NOS, diferencirani tip retinoblastoma, nediferencirani tip retinoblastoma, olfaktorni neurogeni tumor, estesioneurocitoma, estesioneuroblastoma, estesioneuroepiteliom, meningiomi, meningiom NOS, meningiomatosis NOS meningiom maligni, meningoteliomatozni meningiom, fibrozni meningiom, psamomatozni meningiom, angiomatozni hemanbioblastični meningiom, hemangiopericitični meningiom, prelazni meningiom, papilarni meningiom, meningealna sarkomatoza, tumor nervnog omotača, neurofibroma nos, neurofibromatoza NOS, neurofibrosarkom, melanotični neurofibrom, pleksiformni neurofibrom, neurilemoma nos, neurinomatoza, tumor neurilemoma, maligni tumor neurilemoma, alveolarni deo malignih ćelija, sarkom, tumor granularnih ćelija, maligni tumor granularnih ćelija, sarkom alveolarnog mekog dela, limfomi NOS ili difuzni, limfomatozni tumor benigni, maligni limfom NOS, limfom uvijeni ćelijski tip NOS, limfosarkom NOS, maligni limfom limfoplazmacitoidni tip, maligni limfom imunoblastični tip,limfom mešoviti limfocitno-histiocitni NOS, maligni limfom centroblastičnocentrocitni difuzni, maligni limfom folikularni centar ćelija NOS, maligni limfom limfocitni dobro diferencirani NOS, maligni limfom limfocitni NOS, maligni limfocitni NOS, maligna srednja diferencijacija limfom folikularni centar ćelijski cepani NOS, maligni limfom limfocitni slabo diferencirani NOS, prolimfocitni limfosarkom, maligni limfom centroblastični tip NOS, maligni limfom folikularni centar neotcepljenih ćelija NOS, retikulosarkom pletikulosarkom, retikulosarkom retikulosarkom, ćelijski tip, nodularni retikulosarkom, Hodžkinova bolest, Hodžkinova bolest NOS, Hodžkinova bolest limfocitna prevlast, Hodžkinova bolest mešovita celularnost, Hodžkinova bolest limfocitna deplecija nos, Hodžkinova bolest, limfocitna bolest, dipl. retikularni tip deplecije, Hodžkinova bolest nodularna skleroza nos, Hodžkinova bolest nodularna skleroza ćelijske faze, Hodžkinov paragranulom, Hodžkinov granulom, Hodžkinov sarkom, limfomi nodularni ili folikularni, maligni limfomi nodularni nodularni nodularni, hodgkinov paragranulom, Hodžkinov granulom, Hodžkinov sarkom, limfomi nodularni ili folikularni, maligni limfomi maligni nodularni nodularni nodularni miks, hodžkinov miks nodularni, maligni limfom centroblastično-centrocitni folikularni, maligni limfom limfocitni dobro diferencirani nodularni,nodularni limfocitni maligni limfom intermedijarne-diferencijacije, maligni limfom limfocitni slabo diferencirani nodularni, maligni limfom centroblastični tip folikularni, maligni limfom folikularni centar ćelija nerazcepljeni folikul, gljivična mikoza, gljivična mikoza, Sezarijeva bolest, raznorazni mikrogligalni retikuloendo histiocitoza, histiocitna medularna retikuloza, Leter-Sive-ova bolest, mijelom plazma ćelija, benigni tumor plazma ćelija, nos plazmacitoma, maligni tumor plazma ćelija, tumori mastocita, nos mastocitoma, sarkom mastocita, maligna mastocitoza, Burkitov tumor, Burkitov tumor, leukemije, leukemije, leukemije nosa, leukemija nosa, leukemija nosa subakutna leukemija nos, hronična leukemija nos, aleukemična leukemija nos, složena leukemija, složena leukemija, limfoidna leukemija, nos limfoidne leukemije, akutna limfoidna leukemija, subakutna limfoidna leukemija, limfoidna leukemija NOS, akutna limfoidna leukemija, subakutna limfoidna leukemija, hronična limfoidna leukemija, hronična limfoidna leukemija, aleukemična limfoidna leukemija, prolimfocitna leukemija, leukemija plazma ćelija, leukemija plazma ćelija, eritroleukemija, eritroleukemija, akutna eritremija, hronična leukemija, leukemija plazma ćelija, eritroleukemija leukemija ćelija limfosarkoma, mijeloične leukemije, mijeloične leukemije nos, akutne mijeloične leukemije, subakutne mijeloične leukemije, hronične mijeloične leukemije, aleukemične mijeloične leukemije, neutrofilne leukemije, akutne leukemije, akutna promijelocitna leukemija, bazofilna leukemija, bazofilne leukemije, bazofilne leukemije, eozinofilne leukemije, eozinofilne leukemije, monocitne leukemije, monocitne leukemije nos, akutne monocitne leukemije, subakutne monocitne leukemije, hronične monocitne leukemije, a monocitne leuke razne leukemije, leukemija mastocita, megakariocitna leukemija, megakariocitna mijeloza, mijeloidni sarkom, leukemija dlakavih ćelija, razni mijeloproliferativni i limfoproliferativni poremećaji, vera policitemija, akutna bolest, hronična bolest mieloskleroza sa mijeloidnom metaplazijom, idiopatska trombocitemija, hronična limfoproliferativna bolest.

[0136] U jednoj realizaciji ovog pronalaska, bolest je izabrana iz grupe koju čine tumori pankreasa, adenokarcinom pankreasa, tumori glave pankreasa, tela pankreasa, repa pankreasa, kanala pankreasa, Langerhansovih ostrvaca , vrat pankreasa, tumor prostate, adenokarcinom prostate, prostata žlezda, neuroendokrini tumori, rak dojke, tumor centralnog dela dojke, gornji unutrašnji kvadrant dojke, donji unutrašnji kvadrant dojke, gornji spoljašnji kvadrant dojke, donji spoljašnji kvadrant dojke, aksilarni rep dojke, preklapajuća lezija dojke, juvenilni karcinom dojke, tumori paratiroidne žlezde, mijelom, pluća kancer, karcinom malih ćelija pluća, karcinom ne-malih ćelija pluća, tumor glavnog bronha, gornjeg režnja pluća, srednjeg režnja pluća, donjeg režnja pluća, kolorektalni karcinom, tumor uzlaznog kolona, hepatične fleksure debelog creva, poprečnog debelog creva, slezene fleksure debelog creva, silaznog kolona, sigmoidnog kolona, preklapajuće lezije debelog creva, tankog creva, tumori jetre, adenom ćelija jetre, hepatocelularni karcinom, hepatoholangiom, kombinovani hepatocelularni karcinom i holangiokarcinom, hepatoblastom, karcinom jajnika, sarkom, osteosarkom, fibrosarkom, tumori gastrointestinalne strome, gastrointestinalni trakt, karcinom želuca, karcinom štitaste žlezde, medularni karcinom štitaste žlezde, štitna žlezda, karcinom bubrežnih ćelija, karcinom bubrežne karlice, tumori trostruke karlice, tumori trostruke karlice bešika, bešike kupole, bešike sa bočnim zidom, bešike zadnjeg zida, otvora uretera, urahusa, preklapajuća lezija bešike, karcinom bazalnih ćelija, neoplazme bazalnih ćelija, tumor bazalnih ćelija, karcinom bazalnih ćelija, karcinom bazalnih ćelija, multicentrični bazalnom ćelija karcinom, adenom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, oralni karcinom skvamoznih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija larinksa, karcinom grlića materice, tumori egzocerviksa, preklapajuća lezija grlića materice, grlića materice, isthmus uteri, tumori jajnika, tumori jajnika, tumori cerviksa , tumori torakalnog jednjaka, abdominalni jednjak, gornja trećina jednjaka, srednja trećina jednjaka, donja trećina jednjaka, preklapajuća lezija jednjaka, karcinom endometrijuma, rak glave i vrata, limfom, maligni mezoteli mezoteli, maligni mezoteli mezoteli mezoteliom, fibrozni mezoteliom, epitelioidni mezoteliom, epitelioidni mezoteliom, karcinom dvanaestopalačnog creva, neuroendokrini tumori, neuroendokrini tumori pluća, neuroendokrini tumori pankreasa, neuroendokrini tumori prednjeg creva, neuroendokrini tumori nervnog creva, neuroendokrini tumori neurona gastroenteropankreasni neuroendokrini tumori, neuroendokrini

12

karcinomi, neuroendokrini tumori dojke, neuroendokrini tumori jajnika, kancer testisa, karcinom timusa, tumori želuca, fundusa želuca, telesni želudac, antrum želuca, pilorus, mala zakrivljenost stoma, veća zakrivljenost želucam preklapajuća lezija želuca, paragangliomi, gangliomi, melanomi, maligni melanom, nodularni melanom, amelanotični melanom, melanom površinskog širenja, melanom epitelioidnih ćelija, melanom vretenastih ćelija, melanom mešovitih epitelioidnih i vretenastih ćelija.

[0137] U još jednom izvođenju, gore pomenute indikacije se mogu javiti u organima i tkivima izabranim iz grupe koju čine spoljašnje gornje usne, spoljašnje donje usne, spoljašnje usne, sluzokože gornje usne, sluznice donje usne, sluzokože usne, usne u obliku komisure, preklapajuća lezija usne, osnove jezika, NOS leđne površine jezika, ivica jezika, ventralna površina br. jezika, prednje 2/3 NOS jezika, lingvalni krajnik, preklapajuća lezija jezika, NOS jezika, gornja desni, donja desni, NOS dna usta, tvrdo nepce, br. mekog nepca, uvula, preklapajuća lezija nepce, br. nepca, sluznica obraza, predvorje usta, retromolarno područje, preklapajuća lezija drugih i nespecificiranih delova usta, NOS usta, parotidna žlezda, submaksilarna žlezda, sublingvalna žlezda, preklapajuća lezija velikih pljuvačnih žlezda, NOS velike pljuvačne žlezde, fossa, krajnik stub, preklapajuća lezija od krajnik, NOS krajnika, valekula, prednja površina epiglotisa, bočni zid orofarinksa, zadnji zid orofarinksa, grančija rascep, preklapajuća lezija orofarinksa, orofarinks NOS, gornji zid nazofarinksa, zadnji zid nazofarinksa, bočni zid nazofarinksa, prednji zid nazofarinksa, preklapajuća lezija nazofarinksa, nazofarinks NOS, piriformni sinus, postkrikoidni region, hipofaringealni aspekt ariepiglotičnog nabora, hipofarinks zadnjeg zida, preklapajuća lezija hipofarinksa, hipofarinksa, NOS ždrelo, cervikalni jednjak, torakalni jednjak, abdominalni jednjak, gornja trećina jednjaka, srednja trećina jednjaka, donja trećina jednjaka, preklapajuća lezija jednjaka, esophaguspifund NOS, cardia NOS, ezofagus manja zakrivljenost br. želuca, veća zakrivljenost NOS želuca, preklapajuća lezija želuca, NOS želuca, duodenum, jejunum, ileum, Mekelov divertikulum, preklapajuća lezija tankog creva, nosa tankog creva, slepog creva, slepo crevo, uzlaznog kolona, jetrenog creva , poprečno kolon, slezena fleksura debelog creva, descendentno debelo crevo, sigmoidni kolon, preklapajuća lezija debelog creva, NOS debelog creva, rektosigmoidni spoj, NOS rektuma, NOS anusa, analni kanal, kloakogena zona, preklapajuća lezija rektuma anusa i analnog kanala, jetra, intrahepatični žučni kanal, žučna kesa, ekstrahepatični žučni kanal, Vaterova ampula, preklapajuća lezija bilijarnog trakta, br. bilijarnog trakta, glava pankreasa, telo pankreasa, rep pankreasa, kanal pankreasa, Langerhansova ostrvca, vrat pankreasa, preklapajuća lezija pankreasa, pankreas NOS, crevni trakta NOS, preklapajuća lezija digestivnog sistema, gastrointestinalni trakt NOS, nosna šupljina, srednje uho, maksilarni sinus, etmoidni sinus, frontalni sinus, sfenoidni sinus, preklapajuća lezija aksesornih sinusa, akcesorni sinus NOS, glotis, supraglotis, subglotis, hrskavica larinksa, preklapajuća lezija larinksa, larinks NOS, traheja, glavni bronhiji, gornji režanj pluća, srednji režanj pluća, donji režanj pluća, preklapajuća lezija pluća, pluća NOS, timus, srce, prednji medijastinuma, posterior medijastinum, medijastinum NOS, pleura NOS, preklapajuća lezija srca medijastinum i pleura, gornji disajni putevi NOS, preklapajuća lezija respiratornog sistema i intratorakalnih organa, disajni putev NOS, zglobovi dugih kostiju gornjih ekstremiteta, zglobovi kratkih kostiju gornjih ekstremiteta, zglobovi dugih kostiju donjih ekstremiteta, zglobovi kratkih kostiju donjih ekstremiteta, preklapajuća lezija kosti zglobovi i zglobne hrskavice udova, kosti udova, lobanja i kost lica, donja vilica, kičmeni stub, rebra grudna kost, karlična kost, preklapajuća lezija zglobova kostiju i zglobne hrskavice, NOS kosti, krv, koštana srž, slezina, NOS retikuloendotelnog sistema, hematopoietični sistem NOS, lice NOS, koža glave, vrat, trup kože, gornji deo kože, kožni ud donji deo, vrat perifernog nerva, ramena ruka perifernog nerva, periferni nerv NOS, grudni koš perifernog nerva, abdomen perifernog nerva, karlica perifernog nerva, trup perifernog nerava, preklapajuća lezija perifernih nerava i autonomnog nervnog sistema, autonomni nervni peritoneum, retroperitoneum , peritoneum NOS, preklapajuća lezija retroperitoneuma i peritoneuma, glava vezivnog tkiva, ruka

12

vezivnog tkiva, noga vezivnog tkiva, grudni koš vezivnog tkiva, stomak vezivnog tkiva, karlica vezivnog tkiva, NOS trupa vezivnog tkiva, preklapajuća lezija vezivnog potkožnog i drugih mekih tkiva, vezivno tkivo NOS, bradavica, centralni deo dojke, gornji unutrašnji kvadrant dojke, donji unutrašnji kvadrant dojke, gornji spoljašnji kvadrant dojke, donji spoljašnji kvadrant dojke, aksilarni rep dojke, preklapajuća lezija dojke, dojka NOS, labium majus, labium minus, klitoris, preklapajuća lezija vulve, vulva NOS, vagina NOS, endocerviks egzocerviks, preklapajuća lezija grlića materice, grlić materice, isthmus uteri, endometrijum, miometrijum, fundus uteri, preklapajuća lezija tela materice, korpus materice NOS. , ženski genitalni trakt NOS, prepucij, glavić penis, telesni penis, preklapajuća lezija penisa, penis NOS, prostata, nespušteni testis, spušteni testis, testis NOS, epididimis, semenska vrpca, skrotum NOS, tunica vaginalis, preklapajuća lezija muških genitalnih organa, muški genitalni organi NOS, bubrežna karlica, ureter, trigonska bešika, kupolasta bešika, bočna zidna bešika, zadnji zid bešike, otvor uretera, urahus, preklapajuća lezija bešike, mokraćna bešika NOS, uretra, parauretralna žlezda, preklapajuća lezija urinarnih organa, NOS orbita, preklapajuća lezija oka i adneksa, oko NOS, moždane ovojnice mozga, moždane ovojnice kičme, NOS moždane ovojnice, veliki mozak, frontalni režanj, temporalni režanj, parijetalni režanj, okcipitalni režanj, NOS olfaktorni nerv, optički nerv, akustični nerv, kranijalni neravi NOS, preklapajuća lezija mozga i centralnog nervnog sistema, NOS nervnog sistema, štitna žlezda, korteks nadbubrežne žlezde, srž nadbubrežne žlezde, telo NOS, preklapanje lezije endokrinih žlezda i srodnih strukture, NOS endokrinih žlezda, NOS glave ili vrata, NOS grudnog koša, NOS abdomena, NOS karlice, NOS gornjih udova, NOS donjih udova, druga nedefinisana mesta, preklapajuća lezija loše definisanih mesta, limfni čvor lice, vrat glave, intratorakalni limfni čvor , intraabdominalni limfni čvorovi, pazušna ruka limfnog čvora, limfni čvor ingvinalni region nogu, limfni čvor karlice, limfni čvorovi više regiona, NOS limfnih čvorova, nepoznato primarno mesto,

[0138] Subjekti koji se leče sa jedinjenjima koja su trenutno otkrivena i za koje se traži zaštita mogu se lečiti u kombinaciji sa drugom nehirurškom antiproliferativnom (npr., antikancerogenom) terapijom lekovima. U jednom aspektu, jedinjenja se mogu admoinistrirati u kombinaciji sa jedinjenjem protiv raka kao što je citostatičko jedinjenje. Citostatsko jedinjenje je jedinjenje (npr. mali molekul, nukleinska kiselina ili protein) koje potiskuje ćelijski rast i/ili proliferaciju. U nekim realizacijama, citostatsko jedinjenje je usmereno ka malignim ćelijama tumora. U narednim realizacijama, citostatsko jedinjenje je ono koje inhibira rast i/ili proliferaciju vaskularnih glatkih mišićnih ćelija ili fibroblasta.

[0139] Pogodni antiproliferativni lekovi ili citostatička jedinjenja koja se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima koja su sada otkrivena i za koja se traži su lekovi protiv raka. Brojni lekovi protiv raka koji se mogu koristiti su dobro poznati i uključuju, ali nisu ograničeni na: Acivicin; Aclarubicin; Acodazol Hidrohlorid; Acronin; Adozelesin; Aldesleukin; Altretamine; Ambomicin; ametantron acetat; Aminoglutethimide; Amsacrine; Anastrozole; Anthramicin; Asparaginase; Asperlin; azacitidin; Azetepa; Azotomicin; Batimastat; Benzodepa; Bicalutamide; Bisantrene Hidrohlorid; Bisnafide Dimesilat; Bizelesin; Bleomicin Sulfate; Brekuinar Sodium; Bropirimin; Busulfan; Caktinomicin; Kalusteron; Karacemid; Karbetimer; Karboplatin; Karmustin; Karubicin hidrohlorid; Carzelesin; Cedefingol; Hlorambucil; Cirolemicin; Cisplatin; Kladribin; Crisnatol Mezilat; Ciklofosfamid; Citarabin; Dacarbazin; Daktinomicin; Daunorubicin Hidrohlorid; Decitabin; Dekormaplatin; Dezaguanin; Dezaguanin mezilat; Diazikuon; Docetaksel; Doksorubicin; Doksorubicin hidrohlorid; Drolokifen; Drolokifen Citrat; Dromostanolon propionat; Duazomicin; Edatreksat; Eflomitin hidrohlorid; Elsamitrucin; Enloplatin; Enpromate; Epipropidin; Epirubicin Hidrochloride; Erbulozol; Esorubicin hidrohlorid; Estramustine; estramustin fosfat natrijum; Etanidazole; Etopozid; Etoposide Phosphate; Etoprin; Fadrozol Hidrohlorid; Fazarabin; Fenretinid; Flokuridin; FLudarabin fosfat; Fluorouracil; Fluorocitabin; Foskuidon; Fostriecin Natrijum; Gemcitabin; Gemcitabin hidrohlorid; Hidroksiurea; Idarubicin hidrohlorid; Ifosfamid; Ilmofosine; Interferon Alfa-2a; Interferon Alfa-2b; Interferon Alfa-nl; Interferon Alfa-n3; Interferon Beta-I a; Interferon Gama-I b; Iproplatin; Irinotecan Hidrohlorid; Lanreotid Acetat;

12

Letrozol; leuprolid acetat; Liarozol Hidrohlorid; Lometreksol natrijum; Lomustine; Losoksantrone Hidrohlorid; Masoprokol; Maitanzin; Mehloretamin hidrohlorid; Megestrol acetat; Melengestrol Acetat; Melfalan; Menogaril; Merkaptopurin; Metotreksat; Metotreksat natrijum; Metoprin; Meturedepa; Mitindomid; Mitokarcin; Mitokromin; Mitogilin; Mitomalcin; Mitomicin; Mitosper; Mitotane; Mitoksantron hidrohlorid; Mmikofenolna kiselina; Niraparib; Nocodazol; Nogalamicin; Olaparib; Ormaplatin; Oksisuran; Paklitaksel; Pegaspargaz; Peliomicin; Pentamustin; Peplomicin sulfat; Perfosfamid; Pipobroman; Piposulfan; Piroksantrone Hidrohlorid; Plicamicin; Plomestan; Porfimernatrijum; Porfiromicin; Prednimustin; Prokarbazin hidrohlorid; Puromicin; puromicin hidrohlorid; Pirazofurin; Riboprin; Rogletimid; Rucaparib; Safingol; Safingol hidrohlorid; Semustine; Simtrazen; Sparfosat natrijum; Sparsomicin; Spirogermanijum hidrohlorid; Spiromustin; Spiroplatin; Streptonigrin; Streptozocin; Sulofenur; Talazoparib; Talisomicin; Taksol; Taksoter; Tekogalan natrijum; Tegafur; Teloksantron hidrohlorid; Temoporfin; Tenipozid; Teroksiron; Testolaktone; TIamiprin; Tioguanin; Tiotepa; Tiazofurin; Tirapazamin; Topotekan Hidrohlorid; Toremifen citrat; Trestolon Acetat; Triciribin fosfat; Trimetreksat; Trimetreksat glukuronat; Tubulozol hidrohlorid; Uracil Mustard; Uredepa; Vapreotide; Velaparib; Verteporfin; Vinblastin Sulfat; Vinkristin sulfat; Vindezin; Vindezin Sulfate; Vinepidin sulfat; Vinglicinate Sulfat; Vinleurozin Sulfat; Vinorelbin Tartrat; Vinrozidin Sulfat; Vinzolidin Sulfat; Vorozol; Zeniplatin; Zinostatin; i Zorubicin hidrohlorid.

[0140] Drugi lekovi protiv raka uključuju, ali nisu ograničeni na: 20-epi-1,25 dihidroksivitamin D3; 5-etiniluracil; abirateron; acilfulven; adecipenol; adozelesin; ALL-TK antagonisti; ambamustin; amidoks; amifostin; aminolevulinska kiselina; amrubicin; anagrelid; andrografolid; inhibitori angiogeneze; antagonist D; antagonist G; antarelik; anti-dorsalizirajući morfogenetski protein-1; antiestrogen; antineoplaston; antisens oligonukleotidi; afidikolin glicinat; modulatori gena apoptoze; regulatori apoptoze; apurinska kiselina; ara-CDP-DL-PTBA; arginin deaminaza; asulacrine; atamestan; atrimustin; aksinastatin 1; aksinastatin 2; aksinastatin 3; azasetron; azatoksin; azatirozin; derivati bakatina III; balanol; batimastat; BCR/ABL antagonisti; benzohlorini; benzoilstaurosporin; derivati beta laktama; beta-aletin; betaklamicin B; betulinska kiselina; bFGF inhibitor; bisaziridinilspermin; bisnafide; bistraten A; breflate; budotitan; butionin sulfoksimin; kalcipotriol; kalfostin C; derivati kamptotecina; kanarinske boginje IL-2; kapecitabin; karboksamid-amino-triazol; karboksiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibitor dobijen iz hrskavice; inhibitori kazein kinaze (ICOS); castanospermine; cecropin B; cetrorelik; hlorini; hlorokinoksalin sulfonamid; cicaprost; cis-porfirin; analozi klomifena; klotrimazol; kolimicin A; kolimicin B; kombretastatin A4; analog kombretastatina; konagenin; krambescidin 816; crisnatol; criptophicin 8; derivati kriptoficina A; curacin A; ciklopentantrakinoni; cikloplatam; cipemicin; citarabin okfosfat; citolitički faktor; citostatin; dakliksimab; dehidrodidemnin B; deslorelin; deksifosfamid; deksrazoksan; dekverapamil; didemnin B; didok; dietilnorspermine; dihidro-5-azacitidin; dihidrotaksol, 9-; dioksamicin; difenil spiromustin; dokozanol; dolasetron; dokifluridine; dronabinol; duokarmicin SA; ebselen; ekomustin; edelfosin; edrecolomab; eflomitin; elemene; emitefur; epirubicin; epristerid; analog estramustina; agonisti estrogena; antagonisti estrogena; etanidazol; etopozid fosfat; ekemestane; filgrastim; finasterid; flavopiridol; flezelastin; fluasteron; fludarabin; fluorodaunorunicin hidrohlorid; forfenimek; formestane; fotemustin; gadolinijum teksafirin; galijum nitrat; galocitabin; ganirelik; inhibitori želatinaze; inhibitori glutationa; hepsulfam; heregulin; heksametilen bisacetamid; hipericin; ibandronska kiselina; idoksifen; idramantone; ilmofosine; ilomastat; imidazoakridones; imikvimod; imunostimulantni peptidi; inhibitor receptora faktora rasta-I sličnog insulinu; agonisti interferona; interferoni; interleukini; iobenguane; jododoksorubicin; ipomeanol, 4-; irinotekan; iroplatt; irsogladin; izobengazol; izohomohalikondrin B; itasetron; jasplakinolid; kahalalide F; lamelarin-N triacetat; lanreotid; leinamicin; lenograstim; lentinan sulfat; leptolstatin; faktor inhibicije leukemije; leukocitni alfa interferon; leuprolid+ estrogen+ progesteron; leuprorelin; levamisole; liarozol; linearni analog poliamina; lipofilni disaharidni peptid;

12

lipofilna jedinjenja platine; lissoclinamide 7; lobaplatin; lombricin; lometreksol; lonidamine; losoksantron; lovastatin; loksoribin; lurtotecan; lutecijum teksafirin; lizofilin; litički peptidi; maitansin; mannostatin A; marimastat; masoprokol; maspin; inhibitori matrilizina; inhibitori matriks metaloproteinaze; merbarone; meterelin; metioninaza; metoklopramid; MIF inhibitor; mifepriston; miltefosin; mirimostim; neusklađena dvolančana RNK; mitoguazon; mitolaktol; analozi mitomicina; mitonafid; mitotoksin faktor rasta fibroblasta-saporin; mofaroten; molgramostim; monoklonsko antitelo, humani horionski gonadotropin; monofosforil lipid A+ćelijski zid miobakterije sk; mopidamol; inhibitor gena za višestruku rezistenciju na lekove; terapija zasnovana na višestrukom supresoru tumora 1; jedinjenje senfa protiv raka; mikaperoksid B; ekstrakt mikobakterijskog ćelijskog zida; miriaporone; N-acetildinalin; N-supstituisani benzamidi; nafarelin; nagrestip; nalokson+pentazocin; napavin; nafterpin; nartograstim; nedaplatin; nemorubicin; neridronska kiselina; neutralna endopeptidaza; nilutamid; nisamicin; modulatori azotnog oksida; nitroksid antioksidans; nitrulin; O6-benzilgvanin; oktreotid; okicenone; oligonukleotidi; onapristone; ondansetron; ondansetron; oracin; oralni induktor citokina; osateron; oksaliplatin; oksaunomicin; analozi paklitaksela; derivati paklitaksela; palauamin; palmitoilrizoksin; pamidronska kiselina; panaksitriol; panomifen; parabaktin; pazelliptine; pegaspargaza; peldesin; pentosan polisulfat natrijum; pentostatin; pentrozol; perflubron; perfosfamid; perilil alkohol; fenazinomicin; fenilacetat; inhibitori fosfataze; picibanil; pilokarpin hidrohlorid; pirarubicin; piritreksim; placetin A; placetin B; inhibitor aktivatora plazminogena; kompleks platine; jedinjenja platine; platina-triamin kompleks; porfimer natrijum; porfiromicin; propil bis-akridon; prostaglandin J2; inhibitori proteazoma; imunomodulator na bazi proteina A; inhibitor protein kinaze C; inhibitori protein kinaze C, mikroalge; inhibitori protein tirozin fosfataze; inhibitori purin nukleozid fosforilaze; purpurini; pirazoloakridin; piridoksilovani hemoglobin polioksietilen konjugat; raf antagonisti; raltitreked; ramosetron; inhibitori ras farnezil protein transferaze; ras inhibitori; ras-GAP inhibitor; reteliptin demetilovan; renijum Re 186 etidronat; rizoksin; ribozimi; RII retinamid; rohitukine; romurtide; rokuinimek; rubiginone Bl; ruboksil; saintopin; SarCNU; sarkofitol A; sargramostim; Sdi 1 mimetika; inhibitor 1 izveden iz starenja; oligonukleotidi smisla; inhibitori transdukcije signala; modulatori za transdukciju signala; jednolančani protein koji vezuje antigen; sizofuran; sobuzoksan; natrijum borokaptat; natrijum fenilacetat; solverol; protein koji vezuje somatomedin; sonermin; sparfosična kiselina; spikamicin D; spiromustin; splenopentin; spongistatin 1; skvalamin; inhibitor matičnih ćelija; inhibitori deobe matičnih ćelija; stipiamid; inhibitori stromelizina; sulfinozin; superaktivni vazoaktivni intestinalni peptidni antagonist; suradista; suramin; svainsonine; sintetički glikozaminoglikani; tallimustin tamoksifen metiodid; tauromustin; tazaroten; tekogalan natrijum; tegafur; telurapirilijum; inhibitori telomeraze; temozolomid; tetrahlorodekaoksid; tetrazomin; taliblastin; talidomid; tiokoralin; trombopoetin; trombopoetin mimetik; timalfasin; agonist receptora timopoetina; timotrinan; hormon koji stimuliše štitastu žlezdu; kalaj etil etiopurpurin; titanocen dihlorid; topsentin; toremifen; totipotentni faktor matičnih ćelija; inhibitori translacije; tretinoin; triacetiluridin; triciribin; tropisetron; turosterid; inhibitori tirozin kinaze; tirpostini; UBC inhibitori; ubenimeks; faktor inhibitora rasta koji potiče od urogenitalnog sinusa; antagonisti receptora urokinaze; variolin B; vektorski sistem, genska terapija eritrocita; velaresol; veramin; verdins; vinorelbin; vinksaltine; vitaksin; zanoterone; zilaskorb; i zinostatin stimalamer.

[0141] Trenutno otkrivena jedinjenja i jedinjenja za koja se traži takođe mogu da se koriste u kombinaciji sa bilo kojim od sledećih tretmana:

Terapija u kombinaciji sa inhibitorima poli(ADP-riboza) polimeraza (PARP), klase hemoterapeutskih agenasa usmerenih na ciljanje karcinoma sa defektnom popravkom oštećenja (Yuan, et al., Expert Opin Ther Pat, 2017, 27: 363).. Takvi PARP inhibitori uključuju, ali nisu ograničeni na olaparib, rupakarib, velaparib, niraparib, talazoparib, pamiparib, iniparib, E7449 i A-966492.

12

[0142] Terapija u kombinaciji sa inhibitorima signalnih puteva i mehanizama koji dovode do popravke jednostrukih i dvolančanih prekida DNK kao npr. signalizacija nuklearnog faktora-kappaB (Pilie, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2019, 16: 81; Zhang, et al., Chin JCancer, 2012, 31: 359). Takvi inhibitori uključuju, ali nisu ograničeni na, inhibitore ATM i ATR kinaze, kinaze kontrolne tačke 1 i 2, DNK zavisnu protein kinazu i WEE1 kinazu (Pilie, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2019, 16: 81).

[0143] Terapija u kombinaciji sa imunomodulatorom (Khalil, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2016, 13: 394), vakcinom protiv raka (Hollingsworth, et al., NPJ Vaccines, 2019, 4: 7), imunim inhibitorom kontrolne tačke (npr. PD-1, PD-Ll, CTLA-4-inhibitor) (Wei, et al., Cancer Discov, 2018, 8: 1069), inhibitor ciklin-D-kinaze 4/6 (Goel, et al., Trends Cell Biol, 2018, 25: 911), antitelo koje je sposobno da se veže za tumorsku ćeliju i/ili metastaze i može da izazove ćelijska citotoksičnost zavisna od antitela (ADCC) (Kellner, et al., Transfus Med Hemother, 2017, 44: 327), angažovanjeT ćelija ili NK ćelija (npr. bispecifična antitela) (Yu, et al., J Cancer Res Clin Oncol, 2019, 145: 941), ćelijska terapija korišćenjem proširene autologne ili alogene imune ćelije (npr. ćelije himernog antigen receptora T (CAR-T)) (Khalil, et al., Nat Rev Clin Oncol, 2016, 13: 394). Inhibitori imunološke kontrolne tačke indukuju, ali nisu ograničeni na nivolumab, ipilimumab, pembrolizuinab, atezolizumab, avelumab, durvalumab i cemiplimab.

[0144] Prema ovom pronalasku, jedinjenja se mogu administrirati pre, istovremeno sa ili posle drugih jedinjenja protiv raka. Raspored primene može uključivati davanje različitih agenasa na naizmeničan način. U drugim realizacijama, jedinjenja mogu biti isporučena pre i tokom, ili tokom i posle, ili pre i posle tretmana drugim terapijama. U nekim slučajevima, jedinjenje se administrira više od 24 sata pre primene drugog anti-proliferativnog tretmana. U drugim realizacijama, subjektu se može administrirati više od jedne antiproliferativne terapije. Na primer, subjekt može da primi jedinjenja pronalaska, u kombinaciji sa operacijom i najmanje jednim drugim anti-proliferativnim jedinjenjem. Alternativno, jedinjenje se može administrirati u kombinaciji sa jednim i više lekova protiv raka.

[0145] U jednom aspektu, jedinjenja iz ovog pronalaska se koriste za detekciju ćelija i tkiva koja prekomerno eksprimiraju FAP, pri čemu se takva detekcija postiže konjugacijom detektabilne oznake sa jedinjenjima pronalaska, poželjno detektabilnim radionuklidom. U poželjnom izvođenju, detektovane ćelije i tkiva su bolesne ćelije i tkiva i/ili su ili uzrok bolesti i/ili simptomi bolesti, ili su deo patologije koja leži u osnovi bolesti. U daljem poželjnom izvođenju, obolele ćelije i tkiva izazivaju i/ili su deo onkološke indikacije (npr. neoplazme, tumori i karcinomi) ili ne-onkološke indikacije (npr. inflamatorne bolesti, kardiovaskularne bolesti, autoimune bolesti i fibrozne bolesti).

[0146] U drugom aspektu, jedinjenja iz ovog pronalaska se koriste za lečenje ćelija i tkiva koja prekomerno eksprimiraju FAP. U poželjnom izvođenju, tretirane ćelije i tkiva su bolesne ćelije i tkiva i/ili su ili uzrok bolesti i/ili simptomi bolesti, ili su deo patologije koja leži u osnovi bolesti. U daljem poželjnom izvođenju, obolele ćelije i tkiva izazivaju i/ili su deo onkološke indikacije (npr. neoplazme, tumori i kanceri) i terapeutska aktivnost se postiže konjugacijom terapeutski aktivnog efektora sa jedinjenjima iz ovog pronalaska, poželjno terapeutski aktivan radionuklid. U daljem poželjnom izvođenju, obolele ćelije i tkiva izazivaju i/ili su deo neonkološke indikacije (npr. inflamatorne bolesti, kardiovaskularne bolesti, autoimune bolesti i fibrozne bolesti), a terapeutska aktivnost se postiže inhibicijom enzimske aktivnosti FAP-a.

[0147] U daljem izvođenju, posebno ako je bolest neonkološka bolest ili ne-onkološka indikacija (npr. inflamatorna bolest, kardiovaskularna bolest, autoimuna bolest i fibrozna bolest), jedinjenja iz ovog pronalaska se daju u terapeutski efektivni iznosi; poželjno jedinjenje iz ovog pronalaska ne sadrži terapeutski aktivan nuklid. Efikasna količina je doza jedinjenja dovoljna da obezbedi terapeutski ili medicinski poželjan rezultat ili efekat kod subjekta kome se jedinjenje primenjuje. Efektivna količina će

1

varirati u zavisnosti od određenog stanja koje se leči, starosti i fizičkog stanja subjekta koji se leči, težine stanja, trajanja lečenja, prirode istovremene ili kombinovane terapije (ako postoji), specifičnosti način primene i slični faktori u okviru znanja i stručnosti zdravstvenog radnika. Na primer, u vezi sa metodama usmerenim na lečenje subjekata koji imaju stanje koje karakteriše abnormalna proliferacija ćelija, efikasna količina za inhibiciju proliferacije bi bila količina dovoljna da smanji ili potpuno zaustavi abnormalnu proliferaciju ćelija tako da uspori ili zaustavi razvoj ili napredovanje ćelijske mase kao što je, na primer, tumor. Kako se koristi u realizacijama, "inhibicija" obuhvata sve prethodno.

[0148] U drugim realizacijama, terapeutski efikasna količina će biti količina neophodna za produženje mirovanja mikrometastaza ili za stabilizaciju bilo kojih rezidualnih primarnih tumorskih ćelija nakon hirurške intervencije ili terapije lekovima.

[0149] Generalno, kada se koristi nekonjugovano jedinjenje bez terapeutski aktivnog radionuklida, terapeutski efikasna količina će varirati u zavisnosti od starosti, stanja i pôla subjekta, kao i prirode i stepena bolesti kod subjekta, a sve to može određuje neko od uobičajenih veština u ovoj oblasti. Dozu može prilagoditi individualni lekar ili veterinar, posebno u slučaju bilo kakve komplikacije. Terapijski efikasna količina je tipično, ali nije ograničena na, količina u opsegu od 0,1 µg/kg do oko 2000 mg/kg, ili od 1,0 µg/kg do oko 1000 mg/kg, ili od oko 0,1 mg/kg do oko 500 mg/kg, ili od oko 1,0 mg/kg do oko 100 mg/kg, u jednoj ili više doza dnevno, za jedan ili više dana. Akpo ptorebi, efikasna dnevna doza aktivnog jedinjenja se može primeniti kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više pod-doza, na primer, odvojeno u odgovarajućim intervalima tokom dana, opciono, u jediničnim doznim oblicima. U nekim realizacijama, jedinjenja se primenjuju više od 7 dana, više od 10 dana, više od 14 dana i više od 20 dana. U drugim izvođenjima, jedinjenje se primenjuje tokom perioda od nedelja ili meseci. U još nekim izvođenjima, jedinjenje se isporučuje naizmeničnim danima. Na primer, agens se isporučuje svaka dva dana, ili svaka tri dana, ili svaka četiri dana, ili svakih pet dana, ili svakih šest dana, ili svake nedelje, ili svakog meseca.

[0150] U poželjnoj varijanti, jedinjenje ovog pronalaska je za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji bolesti, pri čemu je takav tretman radionuklidna terapija.

[0151] Poželjno, radionuklidna terapija koristi ili se zasniva na različitim oblicima zračenja koje emituje radionuklid. Takvo zračenje može, na primer, biti bilo koje od zračenja fotona, zračenja elektrona uključujući ali ne ograničavajući se na β -čestice i Augerove-elektrone, zračenje protona, zračenje neutrona, zračenje pozitrona, zračenje α -čestica ili jonski snop. U zavisnosti od vrste čestice ili zračenja koje emituje navedeni radionuklid, radionuklidna terapija se može, na primer, razlikovati kao terapija fotonskim radionuklidima, terapija elektronskim radionuklidima, terapija protonskim radionuklidom, terapija neutronskim radionuklidom, terapija pozitronskim radionuklidom, terapija a-česticama ili radionuklidnom terapijom terapija snopom radionuklida. Svi ovi oblici radionuklidne terapije su obuhvaćeni ovim pronalaskom, a svi ovi oblici radionuklidne terapije mogu se realizovati pomoću jedinjenja pronalaska, poželjno pod uslovom da je radionuklid vezan za jedinjenje pronalaska, poželjnije kao efektor, obezbeđuje ovu vrstu zračenja.

[0152] Radionuklidna terapija poželjno deluje tako što oštećuje DNK ćelija. Oštećenje izaziva foton, elektron, proton, neutron, pozitron, α -čestica ili jonski snop koji direktno ili indirektno jonizuju atome koji čine lanac DNK. Indirektna jonizacija se dešava kao rezultat jonizacije vode, formirajući slobodne radikale, posebno hidroksilne radikale, koji zatim oštećuju DNK.

[0153] U najčešćim oblicima radionuklidne terapije, najveći deo efekta zračenja je preko slobodnih radikala. Pošto ćelije imaju mehanizme za popravku oštećenja DNK, razbijanje DNK na oba lanca se pokazuje kao najznačajnija tehnika u modifikaciji karakteristika ćelije. Pošto su ćelije raka generalno

1 1

nediferencirane i slične matičnim ćelijama, one se više razmnožavaju i imaju smanjenu sposobnost da poprave subletalna oštećenja u poređenju sa većinom zdravih diferenciranih ćelija. Oštećenje DNK nasleđuje se deobom ćelija, akumulirajući oštećenje ćelija raka, uzrokujući da one umiru ili se sporije razmnožavaju.

[0154] Kiseonik je snažan radiosenzibilizator, povećavajući efikasnost date doze zračenja formiranjem slobodnih radikala koji oštećuju DNK. Zbog toga se može primeniti upotreba rezervoara kiseonika pod visokim pritiskom, zamene za krv koje nose povećan kiseonik, radiosenzibilizatora hipoksičnih ćelija kao što su mizonidazol i metronidazol, i hipoksičnih citotoksina, kao što je tirapazamin.

[0155] Drugi faktori koji se uzimaju u obzir pri odabiru radioaktivne doze uključuju da li pacijent prima hemoterapiju, da li se radioterapija primenjuje pre ili posle operacije, i stepen uspešnosti operacije.

[0156] Ukupna radioaktivna doza može da se frakcioniše, tj. da se rasporedi tokom vremena u jednom ili više tretmana iz nekoliko važnih razloga. Frakcionisanje omogućava normalnim ćelijama vreme da se oporave, dok su tumorske ćelije generalno manje efikasne u popravljanju između frakcija. Frakcionisanje takođe omogućava tumorskim ćelijama koje su bile u relativno radio-rezistentnoj fazi ćelijskog ciklusa tokom jednog tretmana da pređu u osetljivu fazu ciklusa pre nego što se da sledeća frakcija. Slično, tumorske ćelije koje su bile hronično ili akutno hipoksične i, prema tome, radiorezistentnije, mogu reoksigenirati između frakcija, poboljšavajući ubijanje tumorskih ćelija.

[0157] Opšte je poznato da različiti kanceri različito reaguju na terapiju zračenjem. Reakcija raka na zračenje je opisana njegovom radiosenzitivnošću. Visoko radiosenzitivne ćelije raka brzo se ubijaju umerenim dozama zračenja. To uključuje leukemije, većinu limfoma i tumore germinativnih ćelija.

[0158] Važno je razlikovati radiosenzitivnost određenog tumora, koja je u izvesnoj meri laboratorijska mera, od "izlečivosti" karcinoma interno isporučenom radioaktivnom dozom u stvarnoj kliničkoj praksi. Na primer, leukemije se generalno ne leče radioterapijom, jer se šire kroz telo. Limfom može biti radikalno izlečiv ako je lokalizovan na jednom delu tela. Slično tome, mnogi uobičajeni tumori sa umerenom radioaktivnošću mogu se lečiti kurativnim dozama radioaktivnosti ako su u ranoj fazi. Ovo se, na primer, odnosi na nemelanomski karcinom kože, rak glave i vrata, rak nemalih ćelija pluća, rak grlića materice, rak analnog tkiva, rak prostate.

[0159] Odgovor tumora na radioterapiju je takođe povezan sa njegovom veličinom. Iz složenih razloga, veoma veliki tumori slabije reaguju na zračenje od manjih tumora ili mikroskopske bolesti. Za prevazilaženje ovog efekta koriste se različite strategije. Najčešća tehnika je hirurška intervencija pre radioterapije. Ovo se najčešće primećuje u lečenju raka dojke širokom lokalnom ekscizijom ili mastektomijom praćenom adjuvantnom radioterapijom. Druga metoda je smanjenje tumora neoadjuvantnom hemoterapijom pre radikalne radionuklidne terapije. Treća tehnika je da se poveća radiosenzitivnost raka davanjem određenih lekova tokom kursa radioterapije. Primeri radiosenzibilnih lekova uključuju, ali nisu ograničeni na, cisplatin, nimorazol i cetuksimab.

[0160] Introoperativna radioterapija je posebna vrsta radioterapije koja se primenjuje odmah nakon hirurškog uklanjanja kancera. Ova metoda je primenjena kod karcinoma dojke (TARGeted Introperative radioTherapy), tumora mozga i raka rektuma.

[0161] Radionuklidna terapija je sama po sebi bezbolna. Mnogi palijativni tretmani sa malim dozama izazivaju minimalne ili nikakve neželjene efekte. Lečenje većim dozama može izazvati različite neželjene efekte tokom lečenja (akutni neželjeni efekti), u mesecima ili godinama nakon lečenja (dugotrajni neželjeni efekti) ili nakon ponovnog lečenja (kumulativni neželjeni efekti). Priroda, težina i dugotrajnost

1 2

neželjenih efekata zavise od organa koji primaju zračenje, samog lečenja (vrsta radionuklida, doza, frakcionisanje, istovremena hemoterapija) i pacijenta.

[0162] U okviru sadašnjih pronalazaka, postupak za lečenje bolesti prema pronalasku može da realizuje svaku od gore navedenih strategija koje su kao takve poznate u tehnici, i koje utoliko predstavljaju dalje realizacije pronalaska.

[0163] Takođe je u okviru ovog pronalaska da se jedinjenje pronalaska koristi u postupku za dijagnozu bolesti kako je ovde otkriveno. Takav postupak, poželjno, obuhvata korak davanja subjektu kome je to potrebno dijagnostički efikasne količine jedinjenja pronalaska.

[0164] U skladu sa ovim pronalaskom, metoda snimanja /imidžing je izabrana iz grupe koju čine scintigrafija, jednofotonska kompjuterizovana tomografija (SPECT) i pozitronska emisiona tomografija (PET).

[0165] Scintigrafija je oblik dijagnostičkog testa ili metoda koji se koristi u nuklearnoj medicini, pri čemu se radiofarmaceutici internalizuju ćelijama, tkivima i/ili organima, poželjno internalizovani in vivo, a zračenje koje emituju navedeni internalizovani radiofarmaceutici se hvata spoljnim detektorima (gama kamere). ) za formiranje i prikaz dvodimenzionalnih slika. Za razliku od njih, SPECT i PET formiraju i prikazuju trodimenzionalne slike. Zbog toga su SPECT i PET klasifikovani kao posebne tehnike za scintigrafiju, iako takođe koriste gama kamere za detekciju unutrašnjeg zračenja. Scintigrafija je za razliku od dijagnostičkog rendgenskog zraka gde se spoljašnje zračenje propušta kroz telo da bi se formirala slika.

[0166] Skeniranje jednofotonske emisione tomografije (SPECT) je vrsta tehnike nuklearnog snimanja koja koristi gama zrake. Oni su veoma slični konvencionalnim planarnim slikama nuklearne medicine pomoću gama kamere. Pre SPECT skeniranja, pacijentu se ubrizgava radioaktivno obeležena hemikalija koja emituje gama zrake koje može da detektuje skener. Kompjuter prikuplja informacije sa gama kamere i prevodi ih u dvodimenzionalne poprečne preseke. Ovi poprečni preseci se mogu ponovo sabrati da bi se formirala trodimenzionalna slika organa ili tkiva. SPECT uključuje detekciju gama zraka koje emituje pojedinačno i uzastopno radionuklid koji obezbeđuje radioaktivno obeležena hemikalija. Za dobijanje SPECT slika, gama kamera se rotira oko pacijenta. Projekcije se dobijaju na definisanim tačkama tokom rotacije, obično na svakih 3 - 6 stepeni. U većini slučajeva koristi se puna rotacija od 360 stepeni da bi se dobila optimalna rekonstrukcija. Vreme potrebno za dobijanje svake projekcije je takođe promenljivo, ali je tipično 15-20 sekundi. Ovo daje ukupno vreme skeniranja od 15 - 20 minuta. Gama kamere sa više glava su brže. Pošto je SPECT akvizicija veoma slična snimanju planarnom gama kamerom, mogu se koristiti isti radiofarmaceutici.

[0167] Pozitronska emitujuća tomografija (PET) je neinvazivna, dijagnostička tehnika snimanja za merenje biohemijskog statusa ili metaboličke aktivnosti ćelija u ljudskom telu. PET je jedinstven jer proizvodi slike osnovne biohemije ili funkcija tela. Tradicionalne dijagnostičke tehnike, kao što su rendgenski snimci, CT skeniranje ili MRI, proizvode slike anatomije ili strukture tela. Pretpostavka ovih tehnika je da se mogu videti sve promene u strukturi ili anatomiji povezane sa bolešću. Biohemijski procesi su takođe promenjeni bolešću i mogu se javiti pre bilo kakvih grubih promena u anatomiji. PET je tehnika snimanja koja može da vizuelizuje neke od ovih ranih biohemijskih promena. PET skeneri se oslanjaju na zračenje koje emituje pacijent da bi kreirali slike. Svakom pacijentu se daje mala količina radioaktivnog leka koji ili veoma liči na prirodnu supstancu koju telo koristi ili se specifično vezuje za receptor ili molekularnu strukturu. Kako radioizotop prolazi kroz raspad emisije pozitrona (takođe poznat kao pozitivni beta raspad), on emituje pozitron, antičesticni pandan elektrona. Nakon putovanja do nekoliko milimetara, pozitron nailazi na elektron i anihilira, stvarajući par anihilacionih (gama)

1

fotona koji se kreću u suprotnim smerovima. One se detektuju kada stignu do scintilacionog materijala u uređaju za skeniranje, stvarajući nalet svetlosti, koji se detektuje pomoću fotomultiplikatora ili silicijumskih lavinskih fotodioda. Tehnika zavisi od istovremenog ili koincidentnog otkrivanja para fotona. Fotoni koji ne stignu u parovima, odnosno u roku od nekoliko nanosekundi, zanemaruju se. Sve podudarnosti se prosleđuju jedinici za obradu slike gde se konačni podaci o slici proizvode pomoću procedura za rekonstrukciju slike.

[0168] SPECT/CT i PET/CT je kombinacija SPECT i PET sa kompjuterizovanom tomografijom (CT). Ključne prednosti kombinovanja ovih modaliteta su poboljšanje poverenja i tačnosti čitaoca. Sa tradicionalnim PET i SPECT, ograničen broj fotona emitovanih iz oblasti abnormalnosti proizvodi pozadinu veoma niskog nivoa koja otežava anatomsku lokalizaciju tog područja. Dodavanje CT pomaže u određivanju lokacije abnormalnog područja iz anatomske perspektive i kategorizaciji verovatnoće da ovo predstavlja bolest.

[0169] U okviru sadašnjih pronalazaka, metoda za dijagnozu bolesti prema pronalasku može da realizuje svaku od gore navedenih strategija koje su kao takve poznate u tehnici, i koje utoliko predstavljaju dalje realizacije pronalaska.

[0170] Jedinjenja ovog pronalaska su korisna za stratifikaciju pacijenata, tj. za stvaranje podskupova unutar populacije pacijenata koji pružaju detaljnije informacije o tome kako će pacijent reagovati na dati lek. Stratifikacija može biti kritična komponenta za transformaciju kliničkog ispitivanja iz negativnog ili neutralnog ishoda u onaj sa pozitivnim ishodom identifikacijom podgrupe populacije koja će najverovatnije reagovati na novu terapiju.

[0171] Stratifikacija uključuje identifikaciju grupe pacijenata sa zajedničkim "biološkim" karakteristikama kako bi se izabralo optimalno upravljanje za pacijente i postigao najbolji mogući ishod u smislu procene rizika, prevencije rizika i postizanja optimalnog ishoda lečenja

[0172] Jedinjenje ovog pronalaska može se koristiti za procenu ili otkrivanje, specifične bolesti što je ranije moguće (što je dijagnostička upotreba), rizika od razvoja bolesti (što je upotreba osetljivosti/rizika), evolucije bolesti uključujući indolentnu naspram agresivnu (što je prognostička upotreba) i može se koristiti za predviđanje odgovora i toksičnosti na dati tretman (što je prediktivna upotreba).

[0173] Takođe je u okviru ovog pronalaska da se jedinjenje pronalaska koristi u teragnostičkoj metodi. Koncept teragnostike je kombinovanje terapeutskog agensa sa odgovarajućim dijagnostičkim testom koji može povećati kliničku upotrebu terapijskog leka. Koncept theragnostike postaje sve privlačniji i široko se smatra ključem za poboljšanje efikasnosti lečenja lekovima tako što pomaže lekarima da identifikuju pacijente koji bi mogli da profitiraju od date terapije i na taj način izbegavaju nepotrebne tretmane.

[0174] Koncept teragnostike je da kombinuje terapeutsko sredstvo sa dijagnostičkim testom koji omogućava lekarima da identifikuju one pacijente koji će imati najviše koristi od date terapije. U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, jedinjenje iz ovog pronalaska se koristi za dijagnozu pacijenta, tj. identifikaciju i lokalizaciju primarne tumorske mase, kao i potencijalnih lokalnih i udaljenih metastaza. Dalje, zapremina tumora se može odrediti, posebno korišćenjem trodimenzionalnih dijagnostičkih modaliteta kao što su SPECT ili PET. Samo oni pacijenti koji imaju FAP-pozitivne tumorske mase i koji bi stoga mogli da profitiraju od date terapije biraju se za određenu terapiju i stoga se izbegavaju nepotrebni tretmani. Poželjno, takva terapija je FAP-Diljana terapija korišćenjem jedinjenja iz ovog pronalaska. U jednom posebnom izvođenju, primenjuje se hemijski identična dijagnostika ciljana na tumor, poželjno dijagnostika snimanja za scintigrafiju, PET ili SPECT i radioterapeutike. Takva

1 4

jedinjenja se razlikuju samo po radionuklidu i stoga obično imaju veoma sličan, ako ne i identičan farmakokinetički profil. Ovo se može realizovati korišćenjem helatora i dijagnostičkog ili terapeutskog radiometala. Alternativno, ovo se može realizovati korišćenjem prekursora za radio-obeležavanje i radio-obeležavanje bilo dijagnostičkim ili terapijskim radionuklidom. U jednom aspektu dijagnostička slika se koristi prvenstveno pomoću kvantifikacije zračenja dijagnostičkog radionuklida i naknadne dozimetrije koja je poznata stručnjacima i predviđanja koncentracija leka u tumoru u poređenju sa ranjivim organima sporednog dejstva. Tako se postiže zaista individualizovana terapija doziranja leka za pacijenta.

[0175] U jednom aspektu i kako se poželjno ovde koristi, teragnostička metoda se realizuje sa samo jednim teragnostički aktivnim jedinjenjem kao što je jedinjenje iz ovog pronalaska obeleženo radionuklidom koji emituje dijagnostički detektovano zračenje (npr. pozitroni ili gama zraci), kao i terapeutski efektivno zračenje (npr. elektroni ili alfa čestice).

[0176] Pronalazak takođe razmatra metodu intraoperativne identifikacije/otkrivanja obolelih tkiva koja eksprimiraju FAP kod subjekta. Takav postupak koristi jedinjenje pronalaska, pri čemu takvo jedinjenje pronalaska poželjno sadrži kao Efektor dijagnostički aktivni agens.

[0177] Prema daljoj realizaciji pronalaska, jedinjenje pronalaska, posebno ako je u kompleksu sa radionuklidom, može se koristiti kao dodatak ili pomoćno sredstvo za bilo koji drugi tretman tumora, uključujući operaciju kao primarni metod lečenja većine izolovanih čvrstih materija. kanceri, radioterapija koja uključuje upotrebu jonizujućeg zračenja u pokušaju da se izleče ili poboljšaju simptomi raka koristeći zatvorene unutrašnje izvore u obliku brahiterapije ili eksterne izvori, hemoterapija kao što su agensi za alkilovanje, antimetaboliti, antraciklini, biljni alkaloidi, inhibitori topoizomeraze i drugi antitumorski agensi, hormonski tretmani koji moduliraju ponašanje tumorskih ćelija bez direktnog napada na te ćelije, ciljani agensi koji direktno ciljaju molekularnu abnormalnost kod određenih vrsta raka, uključujući monoklonska antitela i inhibitori tirozin kinaze, inhibitori angiogeneze, imunoterapija, vakcinacija protiv raka, palijativno zbrinjavanje uključujući akcije za smanjenje fizičkog, emocionalnog, duhovnog i psiho-socijalnog stresa kako bi se poboljšao kvalitet života pacijenata i alternativni tretmani, uključujući raznoliku grupu zdravstvenih sistema, praksi i proizvoda koji nisu deo konvencionalne medicine.

[0178] U jednoj realizaciji metoda pronalaska, subjekt je pacijent. U sledećoj realizaciji, pacijent je subjekt za koga je dijagnostikovano da pati ili za koga se sumnja da pati ili koji je u opasnosti da pati od bolesti ili da razvije bolest, pri čemu je bolest bolest kako je ovde opisana i poželjno bolest koja uključuje FAP.

[0179] Doze koje se koriste u primeni metoda za lečenje i dijagnozu, respektivno, gde se koristi radionuklid i konkretnije vezan za ili deo jedinjenja pronalaska će varirati u zavisnosti od npr. na određeno stanje koje treba lečiti, na primer poznatu radiosenzitivnost tipa tumora, zapreminu tumora i željenu terapiju. Generalno, doza se izračunava na osnovu distribucije radioaktivnosti na svaki organ i na osnovu uočenog ciljanog unosa. Kompleks koji emituje γ-zračenje može da se administrira jednom ili nekoliko puta za dijagnostičko snimanje. Kod životinja, naznačeni raspon doze može biti od 0,1 µg /kg do 5 mg/kg jedinjenja pronalaska u kompleksu, npr. sa 1 do 200 MBq od<111>In ili<89>Zr. β -emitujući kompleks jedinjenja pronalaska može da se administrira u nekoliko vremenskih tačaka, npr. u periodu od 1 do 3 nedelje ili duže. Kod životinja, naznačeni raspon doza može biti od 0,1 µg /kg do 5 mg/kg jedinjenja pronalaska u kompleksu, npr. sa 1 do 200 MBq<90>Y ili<177>Lu. Kod većih sisara, na primer ljudi, naznačeni raspon doze je od 0,1 do 100 ug/kg jedinjenja pronalaska u kompleksu sa npr. 10 do 400 MBq<111>In ili<89>Zr Kod većih sisara, na primer ljudi, naznačeni opseg doze je od 0,1 do 100 µg /kg jedinjenja pronalaska u kompleksu sa npr.10 do 5000 MBq<90>Y ili<177>Lu

1

[0180] U daljem aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na kompoziciju i posebno na farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži jedinjenje pronalaska.

[0181] Farmaceutska kompozicija ovog pronalaska sadrži najmanje jedno jedinjenje pronalaska i, opciono, jednu ili više supstanci nosača, ekscipijenata i/ili adjuvansa. Farmaceutska kompozicija može dodatno da sadrži, na primer, jedan ili više od vode, pufera kao što je, na primer, fiziološki rastvor sa neutralnim puferom ili fosfatnim puferom, etanol, mineralno ulje, biljno ulje, dimetilsulfoksid, ugljene hidrate kao što su, na primer, glukoza, manoza, saharoza ili dekstrani, manitol, proteini, adjuvansi, polipeptidi ili aminokiseline kao što su glicin, antioksidansi, helatni agensi kao što su EDTA ili glutation i/ili konzervansi. Dalje, jedan ili više drugih aktivnih sastojaka mogu, ali ne moraju, biti sastavni deo farmaceutske kompozicije pronalaska.

[0182] Farmaceutska kompozicija pronalaska može biti formulisana za bilo koji odgovarajući način administracije, uključujući, na primer, lokalnu, kao što je, na primer, transdermalna ili okularna, oralna, bukalna, nazalna, vaginalna, rektalna ili parenteralna administracija. Termin parenteralno kako se ovde koristi uključuje subkutanu, intradermalnu, intravaskularnu, kao što je, na primer, intravenska, intramuskularna, intratekalna i intraperitonealna injekcija, kao i bilo koju sličnu tehniku injekcije ili infuzije. Poželjan način administracije je intravenska primena.

[0183] U jednom aspektu pronalaska, jedinjenje pronalaska koje sadrži radionuklid se administrira bilo kojim konvencionalnim putem, posebno intravenozno, npr. u obliku injekcionih rastvora ili suspenzija. Jedinjenje pronalaska se takođe može primenjivati u prednosti infuzijom, npr. infuzijom od 30 do 60 min.

[0184] U zavisnosti od mesta tumora, jedinjenje pronalaska se može administrirati što je bliže moguće mestu tumora, npr. pomoću katetera. Takva administracija se može sprovesti direktno u tumorsko tkivo ili u okolno tkivo ili u aferentne krvne sudove. Jedinjenje pronalaska se takođe može administriratii više puta u dozama, poželjno u podeljenim dozama.

[0185] U skladu sa poželjnom realizacijom pronalaska, farmaceutska kompozicija pronalaska sadrži stabilizator, npr. hvatač slobodnih radikala, koji inhibira autoradiolizu jedinjenja pronalaska. Pogodni stabilizatori uključuju, na primer, serumski albumin, askorbinsku kiselinu, retinol, gentizinsku kiselinu ili njihov derivat, ili rastvor za infuziju aminokiselina kao što je, na primer, koji se koristi za parenteralno hranjenje proteinima, poželjno bez elektrolita i glukoze, na primer komercijalno dostupan amino infuzija kiseline kao što je Proteinsteril® KE Nephro. Prednost se daje askorbinskoj i gentizinskoj kiselini.

[0186] Farmaceutska kompozicija pronalaska može da sadrži dodatne aditive, npr. sredstvo za podešavanje pH između 7,2 i 7,4, npr. natrijum ili amonijum acetat ili Na2HPO4. Poželjno, stabilizator se dodaje u neradioaktivno jedinjenje pronalaska i uvođenje radionuklida, na primer kompleksiranje sa radionuklidom, se izvodi u prisustvu stabilizatora, bilo na sobnoj temperaturi ili, poželjno, na temperaturi od od 40 do 120°C. Kompleksiranje se može pogodno izvesti u uslovima bez vazduha, npr. pod N2ili Ar. Dodatni stabilizator se može dodati kompoziciji nakon kompleksiranja.

[0187] Izlučivanje jedinjenja pronalaska, posebno ako je Efektor radionuklid, u suštini se odvija kroz bubrege. Dalja zaštita bubrega od akumulacije radioaktivnosti može se postići davanjem lizina ili arginina ili rastvora amino kiseline koji ima visok sadržaj lizina i/ili arginina, npr. komercijalno dostupan rastvor amino kiselina kao što je Synthamin -14 ili -10, pre injekcije ili zajedno sa jedinjenjem pronalaska, posebno ako je Efektor radionuklid. Zaštita bubrega se takođe može postići primenom plazma ekspandera kao što je npr. gelofuzin, bilo umesto ili kao dodatak infuziji aminokiselina. Zaštita bubrega se takođe može postići davanjem diuretika koji omogućavaju forsiranu diurezu koja povećava brzinu mokrenja. Takvi diuretici uključuju diuretike petlje visokog plafona, tiazide, inhibitore

1

karboanhidraze, diuretike koji štede kalijum, diuretike koji štede kalcijum, osmotske diuretike i diuretike niskog plafona. Farmaceutska kompozicija pronalaska može da sadrži, osim jedinjenja pronalaska, najmanje jedno od ovih daljih jedinjenja namenjenih ili pogodnih za zaštitu bubrega, poželjno zaštitu bubrega subjekta kome se administrira jedinjenje pronalaska.

[0188] Prosečan stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da je jedinjenje pronalaska ovde otkriveno namenjeno za upotrebu u različitim metodama. Prosečan stručnjak u ovoj oblasti će dalje propoznati da se kompozicija pronalaska i farmaceutska kompozicija pronalaska mogu podjednako koristiti u navedenim različitim metodama. Prosečan stručnjak u ovoj oblasti takođe će prepoznati da su kompozicija pronalaska i farmaceutska kompozicija ovde otkrivena za upotrebu u različitim metodama. Prosečan stručnjak u ovoj oblasti će podjednako prepoznati da se jedinjenje pronalaska može podjednako koristiti u navedenim različitim metodama.

[0189] Prosečan stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da kompozicija pronalaska i farmaceutska kompozicija pronalaska sadrže jedno ili više dodatnih jedinjenja pored jedinjenja pronalaska. U meri u kojoj je jedno ili više dodatnih jedinjenja ovde otkriveno kao deo kompozicije pronalaska i/ili farmaceutske kompozicije pronalaska, podrazumevaće se da se takvo jedno ili više dodatnih jedinjenja može administrirati odvojeno od jedinjenja pronalaska subjektu koji je izložen ili predmetu postupka prema pronalasku. Takva primena jednog ili više daljih jedinjenja može se izvesti pre, istovremeno sa ili posle admministracije jedinjenja pronalaska. Prosečan stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da se u postupku prema pronalasku, osim jedinjenja pronalaska, jedno ili više dodatnih jedinjenja može administrirati subjektu. Takva administracija jednog ili više daljih jedinjenja može se izvesti pre, istovremeno sa ili posle administracije jedinjenja pronalaska. U meri u kojoj je jedno ili više dodatnih jedinjenja ovde otkriveno tako da se administriraju kao deo metode pronalaska, podrazumevaće se da su takva jedno ili više dodatnih jedinjenja deo kompozicije pronalaska i/ili farmaceutskog leka. kompozicija pronalaska. U okviru ovog pronalaska jedinjenje pronalaska i jedno ili više dodatnih jedinjenja mogu biti sadržani u istoj ili različitoj formulaciji. Takođe je u okviru ovog pronalaska da jedinjenje pronalaska i jedno ili više dodatnih jedinjenja nisu sadržani u istoj formulaciji, već se nalaze u istom pakovanju koje sadrži prvu formulaciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i drugu formulaciju koji sadrže jedno ili više dodatnih jedinjenja, pri čemu tip formulacije može biti isti ili može biti različit.

[0190] U okviru ovog pronalaska je više od jednog tipa jedinjenja pronalaska sadržano u kompoziciji pronalaska i/ili farmaceutskoj kompoziciji pronalaska. Takođe je u okviru ovog pronalaska da se više od jednog tipa jedinjenja pronalaska koristi, poželjno administrirano, u postupku pronalaska.

[0191] Biće prepoznato da se kompozicija pronalaska i farmaceutska kompozicija pronalaska mogu proizvesti na uobičajeni način.

[0192] Radiofarmaceutski preparati imaju opadajući sadržaj radioaktivnosti sa vremenom, kao posledicu radioaktivnog raspada. Fizički poluživot radionuklida je često kratak za radiofarmaceutsku dijagnostiku. U ovim slučajevima, konačna priprema se mora obaviti neposredno pre administracije pacijentu. Ovo je posebno slučaj za radiofarmaceutike koji emituju pozitron za tomografiju (PET radiofarmaceutika). Često dovodi do upotrebe poluproizvoda kao što su generatori radionuklida, radioaktivni prekursori i kompleti.

[0193] Poželjno, komplet pronalaska sadrži osim jednog ili više od jednog jedinjenja pronalaska, obično najmanje jedno od sledećeg: uputstva za upotrebu, finalnu pripremu i/ili kontrolu kvaliteta, jedan ili više opcionih ekscipijenata , jedan ili više opcionih reagenasa za postupak obeležavanja, opciono jedan ili više radionuklida sa ili bez zaštićenih kontejnera, i opciono jedan ili više uređaja, pri čemu uređaj(i)

1

je/su izabrani iz grupe koja sadrži uređaj za obeležavanje, uređaj za prečišćavanje, analitički uređaj, uređaj za rukovanje, uređaj za radiozaštitu ili uređaj za administraciju.

[0194] Spremnici sa košuljicom poznati kao "svinje" za opšte rukovanje i transport radiofarmaceutskih kontejnera dolaze u različitim konfiguracijama za držanje radiofarmaceutskih spremnika kao što su boce, bočice, špricevi, itd. Jedan oblik često uključuje poklopac koji se može ukloniti koji omogućava pristup radiofarmaceutskom kontejneru. Kada je poklopac spremnika na svom mestu, izloženost zračenju je prihvatljiva.

[0195] Uređaj za obeležavanje se bira iz grupe otvorenih reaktora, zatvorenih reaktora, mikrofluidnih sistema, nanoreaktora, kertridža, posuda pod pritiskom, bočica, reaktora sa regulacijom temperature, reaktora za mešanje ili mućkanje i njihovih kombinacija.

[0196] Uređaj za prečišćavanje je poželjno izabran iz grupe kolona ili uređaja za hromatografsku izmjenu jona, kolona ili uređaja za hromatografiju bez veličine, kolona ili uređaja za afinitetnu hromatografiju, kolone ili uređaja za gasnu ili tečnu hromatografiju, kolone ili uređaje za ekstrakciju čvrste faze, uređaja za filtraciju, bočica ili uređaja za centrifugiranje.

[0197] Poželjno je da se analitički uređaj bira iz grupe testova ili test uređaja za određivanje vrste, radiohemijske čistoće, radionuklidne čistoće, sadržaja radioaktivnosti i specifične radioaktivnosti radioaktivno obeleženog jedinjenja.

[0198] Poželjno je da se uređaj za rukovanje bira iz grupe koju čine uređaji za mešanje, razblaživanje, doziranje, obeležavanje, ubrizgavanje i administriranje radiofarmaceutika subjektu.

[0199] Uređaj za radiozaštitu se koristi u cilju zaštite lekara i drugog osoblja od zračenja kada se koriste terapeutski ili dijagnostički radionuklidi. Uređaj za radiozaštitu je poželjno izabran iz grupe koju čine uređaji sa zaštitnim barijerama od materijala koji apsorbuju zračenje izabranih iz grupe koju čine aluminijum, plastika, drvo, olovo, gvožđe, olovno staklo, voda, guma, plastika, tkanina, uređaji koji obezbeđuju adekvatnu udaljenosti od izvora zračenja, uređaji koji smanjuju vreme izlaganja radionuklidu, uređaji koji ograničavaju udisanje, gutanje ili druge načine ulaska u radioaktivnog materijala u telo i uređaja koji obezbeđuju kombinaciju ovih mera.

[0200] Uređaj za administraciju je poželjno izabran iz grupe špriceva, zaštićenih špriceva, igala, pumpi i uređaja za infuziju. Štitnici šprica su obično šuplje cilindrične strukture koje prihvataju cilindrično telo šprica i napravljene su od olova ili volframa sa prozorom od olovnog stakla koji omogućava rukovaocu da vidi klip šprica i zapreminu tečnosti unutar šprica.

[0201] Ovaj pronalazak je sada dalje ilustrovan pozivanjem na sledeće slike i primere iz kojih se mogu uzeti dalje karakteristike, realizacije i prednosti, pri čemu

Slika 1 prikazuje radiohromatogram<177>Lu-3BP-3407 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran neposredno nakon sinteze;

Slika 2 prikazuje radiohromatogram<177>Lu-3BP-3407 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran šest dana nakon sinteze;

Slika 3 prikazuje radiohromatogram<177>Lu-3BP-3554 in u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran neposredno nakon sinteze;

Slika 4 prikazuje radiohromatogram<177>Lu-3BP-3554 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran šest dana nakon sinteze;

1

Slika 5 pokazuje procenat ubrizgane doze po gramu tkiva (%ID/g) u bubrezima, jetri, krvotoku i HEK-FAP tumoru, kao što je određeno SPECT-imagingom<111>In-3BP-34071h, 3h, 6h i 24h nakon injekcije na modelu miša;

Slika 6 prikazuje %ID/g unosa u bubreg, jetru, krvotok i HEK-FAP tumor kao što je određeno SPECT-imagingom<111>In-3BP-35541h, 3h, 6h i 24h nakon injekcije na modelu miša;

Slika 7 prikazuje SPECT-slike<111>In-3BP-35541 h, 3 h, 6 h, 24 h i 48 h nakon injekcije miševima sa HEK-FAP tumorima;

Slika 8 prikazuje aminokiselinske sekvence humanog proteina koji aktivira fibroblaste (FAP), humane dipeptidil peptidaze 4 (DDP4) i humane prolil endopeptidaze (PREP);

Slika 9 A pokazuje rast tumora tokom vremena kod miševa sa HEK-FAP tumorima tretiranim vehikulumom, hladnim jedinjenjem<nat>Lu-3BP-3554, 30 MBq (niska doza)<177>Lu-3BP-3554 i 60 MBq (visoka doza)<177>Lu-3BP-3554;

Slika 9 B prikazuje promene u procentima telesne težine tokom vremena kod miševa sa HEK-FAP tumorima tretiranim vehikulumom, hladnim jedinjenjem natLu-<nat>Lu-3BP-3554, 30 MBq<177>Lu-3BP-3554, i 60 MBq<177>Lu-3BP-3554;

Slika 10 A prikazuje reprezentativne SPECT/CT slike tokom vremena biodistribucije 60 MBq<177>Lu-3BP-3554 kod miševa sa HEK-FAP tumorima;

Slika 10 B prikazuje reprezentativne SPECT/CT slike tokom vremena biodistribucije 30 MBq<177>Lu-3BP-3554 kod miševa sa HEK-FAP tumorima;

Slika 11 A prikazuje reprezentativne SPECT/CT slike četiri različita PDKS modela sarkoma 3 h nakon administracije<111>In-3BP-3554;

Slika 11 B prikazuje %ID/g unosa<111>In-3BP-3554 u četiri različita PDKS modela sarkoma, 3 sata nakon injekcije;

Slika 12 A pokazuje rast tumora tokom vremena kod miševa sa sarkomom Sarc4809 PDX tumora tretiranih vehikulumom, hladnim jedinjenjem<nat>Lu-3BP-3554, 30 MBq<177>Lu-3BP-3554, ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554; i

Slika 12 B prikazuje promene telesne težine tokom vremena kod miševa sa tumorima sarkoma Sarc4809 PDX tretiranih vehikulumom, hladnim jedinjenjem natLu-<nat>Lu-3BP-3554, 30 MBq<177>Lu-3BP-3554, ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554.

[0202] Primeri koji slede su uključeni da obezbede smernice za prosečne stručnjake u ovoj oblasti za praktikovanje reprezentativnih izvođenja predmeta zaštite koji je ovde otkriven. U svetlu sadašnjeg otkrića i opšteg nivoa veštine prosečnog stručnjaka, stručnjaci mogu da prepoznaju da su sledeći primeri namenjeni samo kao primeri i da se brojne promene, modifikacije i izmene mogu primeniti bez odstupanja od obima zaštite predmetnog pronalaska. Opisi sinteza i specifični primeri koji slede su namenjeni samo u svrhu ilustracije i ne treba da se tumače kao ograničavajući na bilo koji način pravljenje jedinjenja iz ovog otkrića drugim metodama.

PRIMERI

[0203] Skraćenice koje se koriste u trenutnoj prijavi, a posebno u primerima koji su dati u daljem tekstu, su sledeće:

1

4PL označava uklapanje logističke krive sa četiri parametra

Å označava angstrom

ACN označava acetonitril

Ahx označava 6-aminoheksansku kiselinu

AMC označava 7-amino-4-metilkumarin

amu označava jedinica atomske mase

aq. označava vodeni

AUCinfoznačava površinu ispod krive ekstrapoliranu na beskonačnost

BSA označava goveđi serum albumin

C0označava početnu koncentraciju jedinjenja

CAF označava fibroblaste povezane sa rakom/karcinomom

CL označava klirens

CM označava ChemMatrix<™>

CT označava kompjuterska tomografija

Cy5 označava cijanin-5

DAD označava foto-doidni detektor

DCM označava dihlorometan

Dde označava N-(1-(4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheksiliden)etil)

DEG označava di etilen glikol dimetakrilat

DIC označava N,N'-diizopropilkarbodiimid

DICOM označava digitalni imidžing i komunikacije u medicini

DIPEA označava diizopropiletilamin

DMF označava N,N-dimetilformamid

DMSO označava dimetil sulfoksid

DOTA označava 1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7,10-tetraacetatnu kiselinu

DOTA(tBu)3-OH označava tri-terc-butil-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1,4,7,10-tetraacetat DPP označava dipeptidil peptidazu

EC označava hvatanje elektrona (electron capture)

EC50označava pola maksimalne ekscitatorne koncentracije

ECACC označava Evropska kolekcija provjerenih ćelijskih kultura (European Collection of Authenticated Cell Cultures)

14

EDC označava 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid

EMEM označava Eagle's Minimum Essential Medium (Eagl-ov minimalni esencijalni medijum) eq ili eq. označava ekvivalent

ESI označava elektrosprej jonizaciju

Et2O označava dietil etar

EtOAc označava etilacetat

FACS označava fFluorescentno aktivirano sortiranje ćelija (fluorescence-activated cell sorting) FAP označava protein za aktivaciju fibroblasta

Fb označava pozadinski fluorescentni intenzitet

FBS označava fetalni goveđi serum

FGF21 označava faktor 21 rasta fibroblasta

FITC označava 5(6)-fluorescein izotiocijanat

Fmoc označava 9-fluorenilmetoksikarbonil

FRET označava energetski prenos rezonancije fluorescencije

Ft označava intenzitet fluorescencije

Gab označava gama-amino buternu kiselinu

GABA označava gama-amino buternu kiselinu

h označava sat( časove)

HATU označava O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HBST označava SPR radni pufer

HEK-FAP označava ćelije ljudskog embriona bubrega 293 koje eksprimiraju humani FAP HEPES označava 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu

HFIP označava heksafluor-2-izopanol

HOAc označava acetatnu kiselinu

HOAt označava 1-hidroksi-7-azabenzotriazol

HPLC označava tečnu hromatografiju visokih performansi

HPLC/MS označava tečnu hromatografiju visokih performansi /masenu spektrometriju IC50označava polovinu maksimalne inhibitorne koncentracije

ID/g označava ubrizganu dozu po gramu

IS označava izomerni prelaz

iTLC-SG označava instant tankoslojnu hromatografiju na-silika-gelu

K2EDTA označava dikalijum etilendiamintetraacetatnu kiselinu

KDoznačava konstantu disocijacije

kDa označava 1000 Daltona

Kioznačava konstantu inhibicije

koffoznačava konstantu brzine disocijacije

konoznačava konstantu brzine asocijacije

LC/TOF-MS označava tečna hromatografija/vreme-preleta/masena spektrometrija

LC-MS označava tečnu hromatografiju visokih performansi kuplovanu sa masenom spektrometrijom LDH označava laktat dehidrogenazu

Leu označava leucin

LiOH označava litijum hidroksid

M označava molarnu koncentraciju ili mol po litru

m/z označava masu podeljenu sa naelektrisanjem

max. označava maksimum

MeOH označava metanol

MeV označava mega elektron volt

min označava minut(e)

MMP označava matriks metaloproteinazu

MRM označava praćenje višestrukih reakcija

MTBE se odnosi na Metil-terc-butiletar

Mtt se odnosi na Metiltritil

MTV se odnosi na srednji volumen/zapreminu tumora

MW se odnosi na molekulsku težinu

n.d. znači nije utvrđeno

Na2SO4znači natrijum sulfat

NaCl znači natrijum hlorid

NaHCO3znači natrijum hidrogenkarbonat

NCA znači nekompartmanska analiza (non-compartmental analysis)

NHS znači N-hidroksisukcinimid

NMP znači 1-metil-2-pirolidon

NOS znači da nije drugačije naznačeno

Oic znači L-oktahidroindol-2-karboksilna kiselina

p.a. znači: u analitičke svrhe (stepen kvaliteta)

p.i. znači posle injekcije

Pbf znači 2,2,4,6,7-pentametil-2,3-dihidrobenzofuran-5-sulfonil

PBS znači fiziološki rastvor puferovan fosfatom

PDX znači ksenograft koji je izveden od pacijenta

PET znači pozitronska emisiona tomografija

pIC50 označava negativan log vrednosti IC50 kada se pretvori u molaru vrednost POP znači prolil oligopeptidaza

ppm označava milionite delove

PREP znači prolil endopeptidaza

prep. znači preparativni

PS znači polistiren

Q-TOF znači kvadrupolno vreme preleta

Ref znači referenca

RFU označava relativnu fluorescentnu jedinicu

RLB znači test vezivanja radioliganda

RMCE označava razmenu kaseta posredovanu rekombinazom

RP znači reversnu fazu

Rt znači retenciono vreme

RT znači sobna temperatura

RU znači rezonantne jedinice

SAR znači odnos strukture aktivnosti

sat. znači zasićen

SCID znači teška kombinovana imunodeficijencija

SCK označava kinetiku jednog ciklusa

sec ili s znači drugi

SF znači spontana fisija

SPECT znači jednofotonska kompjuterizovana tomografija

SPPS znači sinteza peptida u čvrstoj fazi

t1/2znači terminalni poluživot

14

tBu znači terc. butil

TFA znači trifluoroacetat ili trifluoroacetatna kiselina

TG znači TentaGel

TGI znači inhibiciju rasta tumora

THF znači tetrahidrofuran

TIPS znači triizopropilsilan

TLC označava tankoslojnu hromatografiju

TME znači tumorsko mikrookruženje

tRznači retenciono vreme

UHPLC označava tečnu hromatografiju ultravisokih performansi

UV znači ultraljubičast

VSSoznačava zapreminu distribucije u stabilnom stanju

VZoznačava zapreminu distribucije u terminalnoj fazi

Primer 1: Materijal i metode

[0204] Materijali i metode kao i opšte metode su dalje ilustrovane sledećim primerima.

Rastvarači:

[0205] Rastvarači su korišćeni u specificiranom kvalitetu bez daljeg prečišćavanja. Acetonitril (Super Gradient, HPLC, VWR - za analitičke svrhe; PrepSolv, Merck - za preparativne svrhe); dihlorometan (sinteza, Roth); etil acetat (klasa za sintezu, Roth); N,N-dimetilformamid (klasa za sintezu peptida, Biosolve); 1-metil-2-pirolidon (peptidna klasa, IRIS BioTech) 1,4-dioksan (reinst, Roth); metanol (str., Merck).

[0206] Voda: Milli-Q Plus, Millipore demineralizovana.

Hemikalije:

[0207] Hemikalije su sintetizovane prema ili analogno procedurama iz literature ili su kupljene od Sigma-Aldrich-Merck (Deisenhofen, Nemačka), Bachem (Bubendorf, Švajcarska), VWR (Darmstadt, Nemačka), Novabiochem (Merck Group, Darmstadt, Nemačka ), Acros Organics (distributivna kompanija Fisher Scientific GmbH, Schverte, Nemačka), Iris Biotech (Marktredvitz, Nemačka), Amatek Chemical (Jiangsu, Kina), Roth (Karlsruhe, Deutschland), Molecular Devices (Čikago, SAD), Biochrom (Berlin, Nemačka), Peptech (Cambridge, MA, SAD), Synthetech (Albani , OR, SAD), Pharmacore (High Point, NC, SAD), PCAS Biomatrix Inc (Saint-Jean-sur-Richelieu, Kvebek, Kanada), Alfa Aesar (Karlsrue, Nemačka), Tianjin Nankai Hecheng S&T Co., Ltd (Tianjin, Kina), CheMatech (Dijon, Francuska) i Anaspec (San Jose, CA, SAD) ili drugih kompanija i koriste se u zadatom kvalitetu bez daljeg prečišćavanja.

Ćelije:

[0208] HT29 (ECACC Cat. No. 91072201) i WI-38 (ECACC Cat. No.90020107) su kupljene od ECACC i HEK293 ćelije koje eksprimiraju FAP (K12884) čoveka je proizveo InSCREENeX GmbH (Braunschveig) koristeći rekombinaza-posredovanu razmeni kaseta (RMCE). RMCE proceduru opisali su Nehlsen et al. (Nehlsen, et al., BMC Biotechnol, 2009, 9:100).

HPLC/MS analize

[0209] HPLC/MS analize su izvedene injekcijom 5 µl rastvora uzorka, koristeći gradijent u 2 koraka za sve hromatograme (5-65% B za 12 minuta, nakon čega sledi 65-90% za 0,5 min, A : 0,1% TFA u vodi i B: 0,1% TFA u ACN). RP kolone su Agilent (Tip Poroshell 120, 2,7 µm, EC-C18, 50 × 3,00 mm, protok 0,8 ml, HPLC na sobnoj temperaturi); Maseni spektrometar: Agilent 6230 LC/TOF-MS, ESI jonizacija. MassHunter Qualitative Analysis B.07.00 SP2 je korišćen kao softver. UV detekcija je urađena na λ = 230 nm. Vremena zadržavanja (Rt) su prikazana u decimalnom sistemu (npr. 1,9 min = 1 min 54 s) i odnose se na detekciju u UV spektrometru. Za procenu posmatranih masa jedinjenja korišćena je karakteristika „Pronađi jedinjenja po formuli“ (`Find Compounds by Formula'). Konkretno, pojedinačne vrednosti 'neutralne mase jedinjenja (u Daltonima)' i odgovarajući obrazac distribucije izotopa korišćeni su da bi se potvrdio identitet jedinjenja. Tačnost masenog spektrometra bila je pribl. ± 5 ppm.

Preparativna HPLC:

[0210] Preparativna HPLC separacija je obavljena sa kolonama obrnute faze (Kinetex 5µ XB-C18100 Å, 150 × 30 mm od Phenomenex ili RLRP-S 8µ, 100 Å, 150 × 25 mm) kao stacionarne faze. Kao mobilna faza korišćeni su 0,1% TFA u vodi (A) i 0,1% TFA u ACN (B) koji su mešani u linearnim binarnim gradijentima. Gradijent se opisuje kao: „10 do 40% B za 30 min“, što znači da je linearni gradijent od 10% B (i odgovarajuće 90% A) do 40% B (i odgovarajuće 60% A) izveden u roku od 30 minuta. Brzine protoka su bile u opsegu od 30 do 50 ml/min. Tipičan gradijent za prečišćavanje jedinjenja pronalaska je počeo na 5-25% B i završio se posle 30 minuta na 35-50% B, a razlika između procenta B na kraju i početku bila je najmanje 10%. Uobičajeni gradijent je bio "15 do 40% B za 30 min".

Opšte procedure za automatsku/poluautomatsku sintezu na čvrstoj fazi:

[0211] Automatizovana čvrsta faza peptida i poliamida je izvedena na Tetras Peptide Synthesizer (Advanced ChemTech) u skali od 50 µmol i 100 µmol. Ručni koraci su izvedeni u plastičnim špricevima opremljenim fritama (materijal PE, Roland Vetter Laborbedarf OHG, Ammerbuch, Nemačka). Količina reagensa u opisanim protokolima odgovara skali od 100 µmol, osim ako nije drugačije navedeno.

[0212] Sinteza u čvrstoj fazi je izvedena na polistirenu (povezanom sa 1,4-divinilbenzenom (PS) ili di (etilen glikol) dimetakrilatom (DEG)), ChemMatrix (CM) ili TentaGel (TG) smolom. Linkeri smole su tritil, vang i rink amid.

Punjenje smolom:

[0213] U slučaju tritil linkera, pričvršćivanje prvog gradivnog bloka (punjenje smolom) je izvedeno na sledeći način. Smola (polistiren (PS) tritil hlorid, početno punjenje: 1,8 mmol/g) je ostavljena da nabubri u DCM (5 ml) tokom 30 minuta i zatim isprana sa DCM (3 ml, 1 minut). Zatim je smola tretirana smešom odgovarajućeg gradivnog bloka (0,5 mmol, 5 ekv.) i DIPEA (350 ul, 3,5 mmol, 35 ekv.) u DCM (4 ml) tokom 1 sata. Nakon toga, smola je isprana metanolom (5 ml, 5 minuta) i DMF (3 ml, 2x 1 minut).

[0214] U slučaju Wang linkera korišćeni su prethodno napunjene smolom (polistiren (PS) i TentaGel (TG)).

[0215] U slučaju prstenastog amidnog linkera, vezivanje prvog ostatka smole (CM, DEG) je izvedeno istim postupkom kao za sklop lanca kao što je opisano u nastavku.

Alok/alil-deprotekcija:

14

[0216] Nakon bubrenja u DMF-u, smola je isprana sa DMF i DCM. DCM je deoksigenisan propuštanjem struje azota kroz rastvarač uz mešanje. Za ispiranje smole korišćen je rastvarač bez kiseonika. Zatim je smoli dodato 2 ml 2 M rastvora barbiturne kiseline u DCM bez kiseonika i 1 ml 25 µM rastvora tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) u DCM bez kiseonika. Smola je mešana 1 sat, a zatim isprana sa DCM, MeOH, DMF, 5% DIPEA u DMF, 5% ditiokarbamatom u DMF, DMF i DCM (svaki korak ispiranja je ponovljen 3 puta sa 3 ml, 1 minut).

Fmoc-deprotekcija:

[0217] Nakon bubrenja u DMF, smola je isprana sa DMF-om i zatim tretirana sa piperidin/DMF (1:4, 3 ml, 2 i 20 minuta) i zatim isprana sa DMF (3 ml, 5x 1 minut).

Dde-deprotekcija:

[0218] Nakon bubrenja u DMF, smola je isprana sa DMF i zatim tretirana sa hidrazin-hidratom/DMF (2/98, 3 ml 2x 10 minuta) i zatim isprana sa DMF (3 ml, 5x 1 minut).

Mtt-deprotekcija:

[0219] Nakon bubrenja u DCM, smola je isprana sa DCM i zatim tretirana sa HFIP/DCM (7/3, 4 - 6 ml, 4 sata) i zatim isprana sa DCM (3 ml, 3x 1 minut), DMF ( 3 ml, 3x 1ml) i DIPEA (0,9 M u DMF, 3 ml, 1 minut).

Rastvori reagenasa:

[0220] Graivni blokovi (0,3 M u DMF ili NMP), DIPEA (0,9 M u DMF), HATU (0,4 M u DMF), anhidrid acetatne kiseline (0,75 M u DMF)

Kuplovanje: Kuplovanje gradivnih blokova/aminokiselina (sklop lanca):

[0221] Osim ako nije drugačije navedeno, kuplovanje gradivnih blokova je izvedeno na sledeći način: Nakon naknadnog dodavanja rastvora odgovarajućeg gradivnog bloka (1,7 ml, 5 ekv.), rastvora DIPEA (1,15 ml, 10 ekv.) i rastvora HATU (1,25 ml , 5 ekv.) smola je mućkana 45 min. Po potrebi, smola je isprana sa DMF (3 ml, 1 minut) i korak kuplovanja je ponovljen.

Terminalna acetilacija:

[0222] Nakon dodavanja rastvora DIPEA (1,75 ml, 16 ekv.) i rastvora anhidrida sirćetne kiseline (1,75 ml, 13 ekv.), smola je mućkana 10 minuta. Zatim je smola isprana sa DMF (3 ml, 6k 1 minuta).

Metoda A cepanja : Cepanje zaštićenih fragmenata od smole koja je izuzetno osjetljiva na kiseline:

[0223] Nakon završetka sastavljanja sekvence, smola je konačno isprana sa DCM (3 ml, 4x 1 minut) i zatim osušena u vakuumu. Zatim je smola tretirana sa HFIP/DCM (7/1, 4 ml, 4 sata) i sakupljeni rastvor je uparen do suva. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC ili upotrebljen bez daljeg prečišćavanja.

Metoda B cepanja: Cepanje nezaštićenih fragmenata (potpuno cepanje smole):

[0224] Nakon završetka sastavljanja sekvence, smola je konačno isprana sa DCM (3 ml, 4x 1 minut), osušena u vakuumu preko noći i tretirana sa TFA, EDT, vodom i TIPS (94/2,5/2,5/ 1) 2 h (osim ako nije drugačije navedeno). Zatim je rastvor za cepanje sipan u ohlađenu smešu MTBE i cikloheksana (1/1, 10-struki višak u poređenju sa zapreminom rastvora za cepanje), centrifugiran na 4 °C tokom 5 minuta i talog je sakupljen i osušen u vakuumu. Ostatak je liofilizovan iz vode/acetonitril pre prečišćavanja ili dalje modifikacije.

14

Metoda C cepanja: Cepanje zaštitnih grupa peptida u rastvoru

[0225] Zaštićeno/delimično zaštićeno jedinjenje je rastvoreno u TFA, vodi i TIPS (95/2,5/2,5) tokom 2 h (osim ako nije drugačije navedeno). Zatim je rastvor za cepanje sipan u ohlađenu smešu MTBE i cikloheksana (1/1, 10-struki višak u poređenju sa zapreminom rastvora za cepanje), centrifugiran na 4 °C tokom 5 minuta i talog je sakupljen i osušen u vakuumu. Ostatak je liofilizovan iz vode/acetonitril pre prečišćavanja ili dalje modifikacije.

[0226] Relevantnije metode sinteze Fmoc-peptida na čvrstoj fazi su detaljno opisane u Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis" Editors W. Chan, P. White, Oxford University Press, USA, 2000. Jedinjenja su imenovana korišćenjem MestreNova verzije 12 Mnova IUPAC Name plugin (Mestrelab Research, S.L.), or AutoNom version 2.2 (Beilstein Informationssysteme Copyright<©>1988-1998, Beilstein Institut fćr Literatur der Organischen Chemie licensed to Beilstein Chemiedaten and Software GmbH, gdje je prikladno.

Priprema jedinjenja:

[0227] Specifične realizacije za pripremu jedinjenja pronalaska su date u sledećim primerima. Osim ako nije drugačije naznačeno, svi polazni materijali i reagensi su standardne komercijalne klase i koriste se bez daljeg prečišćavanja ili se od takvih materijala lako pripremaju rutinskim metodama. Stručnjaci u oblasti organske sinteze će prepoznati u svetlu trenutnog otkrića da polazni materijali i uslovi reakcije mogu da variraju uključujući dodatne korake koji se koriste za proizvodnju jedinjenja obuhvaćenih ovim pronalaskom.

[0228] Jedan opšti put sinteze za jedinjenja pronalaska obuhvata

1. Sintezu peptida u čvrstoj fazi (SPPS) linearnog peptidnog prekursora sa dva tiolna ostatka.

2. Ciklizaciju ovog linearnog peptidnog prekursora specifičnu za tiolno mesto sa

a. derivatom bis(brom-metil)benzenaili

b. derivatom tris(brom-metil)benzena.

3. U slučaju ciklizacija sa derivatom tris(brom-metil)benzena, intermedijer nastao u reakciji ciklizacije dalje je reagovao sa linkerom koji je omogućio vezivanje helirajućeg agnesa.

Primer 2: Sinteza Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3554)

[0229] Sinteza naslovnog jedinjenja je obavljena ili inicijalno sintezom linearnog peptidnog prekursora na čvrstoj fazi i naknadnim ciklizacijama faze rastvora (Primer 2a, bilo u nevodenom rastvoru (Metoda A) ili u vodenom rastvoru (Metoda B)) ) ili alternativno izvođenjem svih koraka na čvrstoj fazi uključujući ciklizaciju čvrste faze (Primer 2b).

Primer 2a: Sinteza pomoću dve alternativne metode ciklizacije u rastvoru

[0230] Fmoc-Cys(Trt)-OH je nanet na tritil smolu kao što je opisano u 'General procedures for Automated/Semi-automated Solid-Phase Synthesis' u skali od 50 µmol. Na ovoj smoli (Hex-Cys-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys-OH) peptida je sastavljena prema 'General procedures for Automated/Semiautomated Solid-Phase Synthesis'. Posle izvođenja koraka 'Metoda B cepanja ', sirovi peptid je liofilizovan i ciklizovan pomoću dve alternativne metode u rastvoru.

Metoda A ciklizacije:

14

[0231] Sirovi peptid (baziran na 50 µmol smole) rastvoren je u 10 ml 1:1 smeše etanola i acetonitrila. Ovoj smeši je prvo dodato 35 µl DIPEA, a zatim 23,7 mg 1,3,5-tris(brom-metil)benzena (66,6 µmol, 1,3 ekv. u odnosu na početno punjenje smolom). Rastvor je mešan 1 sat, a zatim je dodato 42,8 mg cisteamina (555 umol, 11 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole). Posle 1 sata rastvarači su uklonjeni in vacuo i dodato je 25 ml 1:1 smeše acetonitrila i vode (koja sadrži 50 µl TFA). Rastvarači su uklonjeni liofilizacijom. Ostatak je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 45% B za 30 min - Kinetek) da bi se dobilo 17,8 mg (16,4 µmol) intermedijera Hex-[Cys(tMeBn(H-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (32.8%).

Metoda B ciklizacije:

[0232] Sirovi peptid (bazorano na 50 µmol punjenja smolom) rastvoren je u 60 ml 1:1 smeše rastvora amonijum bikarbonata (50 mM, pH = 8,5) i acetonitrila. Ovoj smeši je dodat rastvor 26,8 mg 1,3,5-tris(bromometil)benzena (75 µmol, 1,5 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole) u 0,5 ml acetonitrila. Rastvor je mešan 1 sat, a zatim je dodato 38,6 mg cisteamina (500 umol, 10 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole). Posle 2 sata je dodato 50 ul TFA i rastvarač je uklonjen liofilizacijom. Ostatak je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 45% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 19,47 mg (18 µmol) intermedijera Hex-[Cys(tMeBn(H-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (35.9%).

[0233] Obe metode ciklizacije imaju sličan učinak i postižu uporedive prinose i slične čistoće.

[0234] U rastvor intermedijera Hex-[Cys(tMeBn(H-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (u ovom primeru dobijenog metodom B ciklizacije B) u 300 µl DMSO, dodato je 5 µl DIPEA da bi se pH vrednost podesila na približno 7,5 - 8. Zatim je dodato 20,5 mg DOTA-NHS (27 umol, 1.5 ek u poređenju sa peptidnim intermedijerom) u 200 ul DMSO. Tokom LC/TOF-MS praćennja reakcije, 5 µl DIPEA je dodato 3 puta da bi se pH vrednost ponovo podesila na početnu vrednost. Nakon završetka reakcije, rastvor je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 45% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 20,44 mg čistog naslovnog jedinjenja (27,8% ukupnog prinosa). HPLC: Rt= 5,9 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1469,640 (izračunato 1469,639). C67H99N13O18S3(MW = 1470.780).

Primer 2b: Sinteza uključujući metodu ciklizacije na čvrstoj fazi

[0235] Za sintezu naslovnog jedinjenja vezanog za smolu, Fmoc-Cys(Trt)-WANG Tentagel smola je korišćena kao početni materijal. Na ovom poslednjem sekvenca (Hex-Cys(Trt)-Pro-Pro-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Cys-OH) peptida je sastavljena u skladu sa 'General procedures for Automated/Semiautomated Solid-Phase Synthesis' reda veličine 1 mmol. Nakon završetka sastavljanja sekvence, smola je isprana sa DCM (3x 1 min). Zatim su tritil zaštitne grupe selektivno uklonjene sa smole tretmanom sa rastvorom TFA, TIPS i DCM (5/5/90, 5x 5 min). Smola je isprana sa DCM, DMF, 0,9 M DIPEA u DMF, DMF, DCM (3/3/2/3/3) i osušena u vakuumu. Sledeća ciklizacija je izvedena u porcijama od 200 µmol. U tu svrhu, smola je nabubrena u DMF i zatim tretirana rastvorom 1,3,5-tris(brom-metil)benzena (86 mg, 240 µmol, 1,2 eq.), DIPEA (235 µL, 1 mmol, 5 ekv.) u 2 mL DMF na 50 °C tokom 90 minuta. Rastvor je uklonjen, smola je isprana sa DMF i zatim smoli dodat rastvor cisteamina (154,3 mg, 2 mmol, 10 ekv.). Smola je mešana još 90 minuta na 50 °C. Nakon ispiranja smole sa DMF i DCM (3/3) osušena je peptidna smola ((Hex-[Cys(tMeBn(H-AET))-Pro-Pro-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Cys]-O-WANG-Tentagel) . Ovim postupkom može se desiti da sa tritil grupe u glutaminu bude delimično ili potpuno bude uklonjena zaštita. U svakom slučaju, ovo ne ometa opcionu derivatizaciju slobodne amino grupe AET.

[0236] Za konačnu derivatizaciju sa DOTA, peptidna smola korišćen je (Hex-[Cys(tMeBn(H-AET))-Pro-Pro-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Cys]-O-WANG-Tentagel) reda veličine od 50 µmol. Prema 'General procedures for Automated/Semi-automated Solid-Phase Synthesis' kuplovan je DOTA(tBu)3-OH. Nakon sušenja, smola je podvrgnuta 'metodi B cepanja '. Sirovi peptid je liofilizovan i zatim prečišćen

14

preparativnom HPLC (15 do 45% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 11,0 mg (7,5 umol) čistog jedinjenja iz naslova (15%). HPLC: Rt = 5,9 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1469,640 (izračunato 1469,639). C67H99N13O18S3(MW = 1470.780).

Primer 3: Sinteza Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2 (3BP-3407)

a) Sinteza intermedijera Hex-[Cys(tMeBn(H-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2pomoću dve različite metode ciklizacije

[0237] Sekvenca (Hex-Cys-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys-Asp-NH2) peptida je sastavljena prema 'General procedures for Automated/Semi-automated Solid-Phase Synthesis' u 50 µmol skale na Rink amidnoj smoli. Posle izvođenja koraka 'Metode B cepanja ', sirovi peptid je liofilizovan i ciklizovan pomoću dve alternativne metode.

Metoda A ciklizacije:

[0238] Sirovi peptid (zasnovano na 50 µmola smole) rastvoren je u 10 ml 1:1 smeše etanola i acetonitrila. Ovoj smeši je prvo dodato 30 µl DIPEA, a zatim 26,8 mg 1,3,5-tris(bromometil)benzena (75 µmol, 1,5 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole). Posle mešanja rastvora tokom 45 minuta, dodat je rastvor od 43 mg piperazina (500 µmol, 10 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole) u 200 µl 1:1 smeše etanol/acetonitril. Posle 1 sata rastvarači su uklonjeni in vacuo, dodato je 25 ml 1:1 smeše acetonitrila i vode (koja sadrži 50 ul TFA) i rastvarači su uklonjeni liofilizacijom. Ostatak je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 40% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 15,3 mg (12,7 µmol) peptidnog intermedijera Hex-Cys(tMeBn(H-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(25.3%).

Metoda B ciklizacije:

[0239] Sirovi peptid (na osnovu 50 µmol punjenja smolom) rastvoren je u 60 ml 1:1 smeše rastvora amonijum bikarbonata (50 mM, pH = 8,5) i acetonitrila. Ovoj smeši je dodato 26,8 mg 1,3,5-tris(brommetil)benzena (75 µmol, 1,5 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole). Rastvor je mešan 1 sat i dodato je 43 mg piperazina (500 umol, 10 ekv. u poređenju sa početnim punjenjem smole). Posle 6 sati je dodato 100 ul TFA i rastvarač je uklonjen liofilizacijom. Ostatak je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 40% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 17,2 mg (14,2 µmol) peptidnog intermedijera Hex-Cys(tMeBn(H-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(28.4%).

[0240] Obe metode ciklizacije imaju sličan učinak i postižu uporedive prinose i slične čistoće.

b) Završni koraci sinteze Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(3BP-3407): DOTA-kuplovanje i prečišćavanje

[0241] Rastvoru intermedijera (dobijenog metodom ciklizacije B) u 200 µl DMSO 2,5 µl DIPEA je dodato da se pH vrednost podesi na približno 7,5 - 8. Zatim 16,3 mg DOTA-NHS (21,4 µmol, 1,5 ekv. na peptidni intermedijer) u 100 µl DMSO je dodat. Tokom reakcije praćene LC/TOF-MS 2,5 µl DIPEA je dodato 5 puta da bi se pH vrednost ponovo podesila na početnu vrednost. Nakon završetka reakcije rastvor je podvrgnut HPLC prečišćavanju (15 do 40% B za 30 min - Kinetex) da bi se dobilo 19,1 mg (12,0 umol) čistog jedinjenja iz naslova (85%). HPLC: Rt = 5,70 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1592,737 (izračunato 1592,737). C73H108N16O20S2(MW = 1593.866).

Primer 4: Priprema DOTA-prelaznih metalnih kompleksa jedinjenja pronalaska

A. Opšti postupak za pripremu peptida koji sadrži DOTA-prelazne metalne komplekse iz odgovarajućih peptida koji sadrže nekompleksirani DOT A

[0242] 0,1 mM rastvor peptida koji se sastoji od nekompleksirane DOTA u

14

• 0,4 M natrijum acetatu, pH = 5 (pufer A) (u slučaju Cu(II), Zn(II), In(III), Lu(III) ili Ga(III) kompleksa) ili • 0,1 M amonijum acetatu, pH = 8 (pufer B) (u slučaju kompleksa Eu(III)) je razblažen rastvorom 0,1 mM rastvora odgovarajuće soli metala u vodi pri čemu je molarni odnos peptida prema metalu podešen na 1 : 3. Rastvor je mešan

• na 50 °C tokom 20 minuta (koji se ovde takođe naziva Uslov A) (u slučaju kompleksa In(III), Lu(III),Ga(III), Zn(II) ili Cu(II)) ili

• na sobnoj temperaturi preko noći (koji se ovde takođe naziva Uslov B) (u slučaju Eu(III) kompleksa).

[0243] Rastvor je zatim primenjen za

• HPLC prečišćavanje (koji se ovde takođe naziva prečišćavanje A) ili

• ekstrakciju na čvrstoj fazi (u ovom tekstu se takođe naziva prečišćavanje B).

U slučaju ekstrakcije na čvrstoj fazi, 250 mg Varian Bondesil-ENV stavljeno je u polistirenski špric od 15 ml, prethodno ispran metanolom (1 × 5 ml) i vodom (2 × 5 ml). Zatim je reakcioni rastvor nanet na kolonu. Nakon toga je izvršeno eluiranje vodom (2 × 5 ml - da bi se uklonio višak soli), 5 ml 50% ACN u vodi kao prva frakcija i svaka od sledećih frakcija je eluirana sa 5 ml 50% ACN u vodi koja sadrži 0,1% TFA .

[0244] U oba slučaja (HPLC prečišćavanje ili ekstrakcija na čvrstoj fazi) frakcije koje sadrže čisti proizvod su objedinjene i osušene zamrzavanjem.

B. Indijum Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(3BP-3590) kompleks [0245] Kompleks je pripremljen počevši od 25 mg peptida 3BP-3407 (15,7 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom InCl3× 4 H2O koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja je korišćeno 'Prečišćavanje A' (15 do 40% B za 30 min - RLRP-S) do prinosa 18,24 mg čistog naslovnog jedinjenja (68,1% prinos). HPLC: Rt= 5,6 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1702,622 (izračunato 1702,617). C73H105InN16O20S2(MW = 1705.663).

C. Galijum Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(3BP-3592) kompleks [0246] Kompleks je pripremljen počevši od 25 mg peptida 3BP-3407 (15,7 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom Ga(NO3)3× H2O koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja 'Prečišćavanje A ' je upotrebljen (15 do 40% B za 30 min - RLRP-S) da bi se dobio 16,78 mg čistog jedinjenja iz naslova (69,3% prinos). HPLC: Rt= 5.7 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1658,664 (izračunato 1658,639). C73H105GaN16O20S2(MW = 1660.568).

D. Lutecijum- Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(3BP-3591)kompleks [0247] Kompleks je pripremljen polazeći od 25 mg peptida 3BP-3407 (15,7 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom LuCl3koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja primenjeno je 'Prečišćavanje A' (15 do 40% B za 30 min - RLRP-S) da bi se dobilo 16,66 mg čisto jedinjenje iz naslova (60,1% prinos). HPLC: Rt = 5,6 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1764,654 (izračunato 1764,654). C73H105LuN16O20S2(MW = 1765.812).

E. Europijum- Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-PP))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-Asp-NH2(3BP-3661)kompleks [0248] Kompleks je pripremljen polazeći od 9,5 mg peptida (6 µmol) 3BP-3407 rastvorenog u puferu B, razblaženog rastvorom EuCl3× 6 H2O koji je tretiran sa uslovima B. U koraku prečišćavanja je korišćeno 'Prečišćavanje B' da bi se dobilo 8,24 mg čistog jedinjenja iz naslova (79,3% prinos). HPLC: Rt

1

= 5,7 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1740,636 (izračunato 1740,633). C73H105EuN16O20S2(MW = 1742.809).

F. Indijum- Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3623)kompleks [0249] Kompleks je pripremljen počevši od 6 mg peptida 3BP-3554 (4,1 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom InCl3 × 4 H2O koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja korišćeno je 'Prečišćavanje B' da bi se dobilo 5,26 mg čistog jedinjenja iz naslova (81% prinos). HPLC: Rt = 5,8 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1579,524 (izračunato 1579,520). C67H96InN13O18S3(MW = 1582.574).

G. Lutecijum- Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3624)kompleks [0250] Kompleks je pripremljen počevši od 6 mg peptida 3BP-3554 (4,1 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom LuCl3koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja korišćeno je 'Prečišćavanje B' da bi se dobilo 5,5 mg čistog naslovnog jedinjenja (82% prinos). HPLC: Rt= 5,9 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1641,560 (izračunato 1641,557). C67H96LuN13O18S3(MW = 1642.723).

H. Galijum Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3949) kompleks [0251] Kompleks je pripremljen počevši od 7,9 mg peptida 3BP-3554 (5,4 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom Ga(NO3)3× H2O koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja 'Prečišćavanje B ' je korišćen da bi se dobilo 4,2 mg čistog jedinjenja iz naslova (51% prinos). HPLC: Rt= 6,6 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1535,543 (izračunato 1535,541). C67H96GaN13O18S3(MW = 1537.479).

I. Europijum- Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-3662) kompleks [0252] Kompleks je pripremljen počevši od 3,4 mg peptida 3BP-3554 (2,3 µmol) rastvorenog u puferu B, razblaženog rastvorom EuCl3× 6 H2O koji je tretiran sa uslovima B. U koraku prečišćavanja korišćeno je 'Prečišćavanje B' da bi se dobilo 3,1 mg čistog jedinjenja iz naslova (83% prinos). HPLC: Rt= 5,9 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1617,541 (izračunato 1617,536 C67H96EuN13O18S3(MW = 1619.721).

J. Bakar(II)-kompleks Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-4293)

[0253] Kompleks je pripremljen počevši od 18 mg peptida 3BP-3554 (12,2 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom Cu(OAc)2koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja 'Prečišćavanje B' je bilo korišćeno da se dobije 16,5 mg čistog naslovnog jedinjenja (88% prinos). HPLC: Rt= 6,5 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1530,553 (izračunato 1530,553). C67H97CuN13O18S3(MW = 1532.310).

K. Cink-kompleks Hex-[Cys(tMeBn(DOTA-AET))-Pro-Pro-Thr-Gln-Phe-Cys]-OH (3BP-4343)

[0254] Kompleks je pripremljen počevši od 20 mg peptida 3BP-3554 (13,6 µmol) rastvorenog u puferu A, razblaženog rastvorom ZnCl2koji je tretiran sa uslovima A. U koraku prečišćavanja korišćeno je 'Prečišćavanje B' da bi se dobilo 16,1 mg čistog jedinjenja iz naslova (77% prinos). HPLC: Rt= 6,4 min. LC/TOF-MS: tačna masa 1531,553 (izračunato 1531,553). C67H97N13O18S3Zn (MW = 1534.160).

Primer 5: Test stabilnosti plazme

[0255] Da bi se odredila stabilnost odabranih jedinjenja pronalaska u humanoj/ljudskoj i mišjoj plazmi, sproveden je test stabilnosti plazme. Takav test stabilnosti plazme meri degradaciju jedinjenja ovog pronalaska u krvnoj plazmi. Ovo je važna karakteristika jedinjenja jer jedinjenja, sa izuzetkom prolekova, koji se brzo razgrađuju u plazmi, generalno pokazuju slabu in vivo efikasnost. Rezultati pokazuju da su ta jedinjenja veoma stabilna u ljudskoj i mišjoj plazmi. Stabilnost je dovoljna za dijagnostičku, terapijsku i terapeutsku upotrebu ovih jedinjenja prema ovom pronalasku.

1 1

[0256] Uzorci stabilnosti plazme su pripremljeni dodavanjem alikvota od 50 µl plazme (svi K2EDTA) sa 1 µl 0,5 mM osnovnog rastvora jedinjenja u DMSO. Nakon vorteksiranja, uzorci su inkubirani u Thermomixer-u na 37°C tokom 0, 4 i 24 sata. Nakon inkubacije, uzorci su čuvani na ledu do daljeg tretmana. Svi uzorci su pripremljeni u duplikatima.

[0257] Pogodan interni standard je dodat svakom uzorku (1 µl 0,5 mM osnovnog rastvora u DMSO). Precipitacija proteina je izvedena korišćenjem dve različite metode u zavisnosti od uslova jedinjenja kao što je navedeno u tabeli 5.

A) Dodato je 250 µl acetonitrila koji sadrži 1% trifluoracetatne kiseline. Posle inkubacije na sobnoj temperaturi tokom 30 min, talog je odvojen centrifugiranjem i 150 ul supernatanta je razblaženo sa 150 ul 1% vodenog rastvora metanske kiseline.

B) Dodato je 150 µl agensa za taloženje cink sulfatom koji sadrži 78% 0,1 M cink sulfata i 22% acetonitrila. Posle inkubacije na sobnoj temperaturi tokom 30 min, talog je odvojen centrifugiranjem. U 100 µl supernatanta je dodato 10 µl 1% metanske kiseline, nakon čega je usledila dalja inkubacija na 60°C tokom 10 minuta da bi se završilo formiranje cinkovog helata, ako jedinjenje sadrži slobodni DOTA ostatak.

[0258] Određivanje analita u čistim rastvorima uzoraka izvedeno je na Agilent 1290 UHPLC sistemu kuplovanom sa Agilent 6530 Q-TOF masenim spektrometrom. Hromatografsko razdvajanje je izvedeno na Phenomenex BioZen XB-C18 HPLC koloni (50 × 2 mm, veličina čestica 1,7 µm) sa gradijentom eluiranja korišćenjem smeše 0,1% mravlja kiselina u vodi kao eluent A i acetonitrila kao eluent B (2% B do 41% za 7 min, 800 µl/min, 40°C). Masena spektrometrijska detekcija je izvedena u ESI modu pozitivnih jona skeniranjem opsega mase od m/z 50 do 3000 sa brzinom uzorkovanja od 2 / sec.

[0259] Iz sirovih podataka masene spektrometrije, jonske struje za dvostruko ili trostruko naelektrisani monoizotopski signal su ekstrahovane i za jedinjenje i za interni standard.

[0260] Kvantifikacija je izvedena eksternom kalibracijom matrice sa internim standardom korišćenjem integrisanih signala analita.

[0261] Dodatno, povrat je određen dodavanjem uzorka čiste plazme koji je sadržao samo unutrašnji standard nakon tretmana sa određenom količinom jedinjenja.

[0262] Prenos je procenjen analizom slepog uzorka (20% acetonitrila) nakon najvišeg uzorka kalibracije.

[0263] Rezultati ovog testa obavljenog na nekim od jedinjenja prema predmetnom pronalasku dati su u sledećoj tabeli 5. Rezultat je naveden kao "% intaktnogjedinjenja preostalog posle 24 h" i znači da od količine materijala na na početku eksperimenta navedeni procenat se detektuje kao nepromenjen materijal na kraju eksperimenta LC-MS kvantifikacijom. Pošto su sva jedinjenja više od 50% intaktna nakon najmanje 24 h, smatraju se dovoljno stabilnima za dijagnostičku i terapeutsku primenu.

1 2

Tabela 5: Rezultati testa stabilnosti plazme

Primer 6: FACS test vezivanja

[0264] Da bi se odredilo vezivanje jedinjenja prema ovom pronalasku za ćelije koje eksprimiraju FAP, uspostavljen je kompetitivni FACS test vezivanja.

[0265] Humani WI-38 fibroblasti (ECACC) koji eksprimiraju FAP kultivisani su u EMEM uključujući 15% fetalnog goveđeg seruma, 2mM L-glutamina i 1% neesencijalnih aminokiselina. Ćelije su odvojene sa Accutase (Biolegend, #BLD-423201) i isprane u FACS puferu (PBS uključujući 1% FBS). Ćelije su razblažene u FACS puferu do konačne koncentracije od 100.000 ćelija po ml i 200 µl ćelijske suspenzije je prebačeno na nevezujuću ploču sa 96 ležišta u obliku slova U (Greiner). Ćelije su isprane u ledeno hladnom FACS puferu i inkubirane sa 3 nM Cy5-obeleženog jedinjenja H-Met-[Cys(3MeBn)-Pro-Pro-Thr-Glu-Phe-Cys]-Asp-His-Phe-Arg-Asp-Ttds-Lys(Cy5SO3)-NH2) u prisustvu rastuće koncentracije peptida na 4°C za 1 sat. Ćelije su dva puta isprane sa FACS puferom i resuspendovane u 200 µl FACS pufera. Ćelije su analizirane u Attune NxT protočnom citometru. Medijan intenziteta fluorescencije (Cy5 kanal) je izračunat pomoću Attune NxT softvera i nacrtan u odnosu na koncentracije peptida. Podešavanje četiri parametarske logističke (4PL) krive i pIC50 proračuni su izvedeni korišćenjem ActivityBase softvera. Rezultati ovog eseja, kao i rezultati testa aktivnosti FAP proteaze, kao što je predmet Primera 7, za svako jedinjenje prema ovom pronalasku su predstavljeni u Tabeli 6 (prikazani u Primeru 7). pIC50 kategorija A označava pIC50 vrednosti >8,0, kategorija B za pIC50 vrednosti između 7,1 i 8,0, kategorija C za pIC50 vrednosti između 6,1 i 7,0 i kategorija D za pIC50 vrednosti ≤ 6,0.

Primer 7: Test aktivnosti FAP proteaze

[0266] Da bi se odredila inhibitorna aktivnost peptida iz primera 6, uspostavljen je test aktivnosti FAP proteaze nazoran na FRET.

[0267] Rekombinantni humani FAP (R&D sistemi, # 3715-SE) je razblažen u puferu za ispitivanje (50 mM Tris, 1 M NaCl, 1 mg/mL BSA, pH 7,5) do koncentracije od 3,6 nM.25 µl rastvora FAP je pomešano sa 25 µl test jedinjenja u trostrukom serijskom razblaženju i inkubirano 5 minuta u beloj ploči ProxiPlate (Perkin Elmer) sa 96 ležišta. Kao specifičan FAP supstrat korišćen je FRET-peptid HiLyteFluor<™>488 -VS(D-)P SQG K(QXL<®>520) - NH2 (Bainbridge, et al., Sci Rep, 2017, 7: 12524). Dodato je 25 µL rastvora supstrata od 30 µM, razblaženog u puferu za ispitivanje. Svi rastvori su ekvilibrisani na 37°C pre

1

upotrebe. Cepanje supstrata i povećanje fluorescencije (ekscitacija na 485 nm i emisija na 538 nm) mereni su u kinetičkom režimu tokom 5 minuta na 37°C u SPECTRAmak M5 čitaču ploča. RFU/sec je izračunat pomoću softvera SoftMax Pro i nacrtan u odnosu na koncentraciju peptida. Podešavanje četiri parametarske logističke (4PL) krive i pIC50 proračuni su izvedeni korišćenjem ActivityBase softvera. Rezultati ovog testa za svako jedinjenje prema ovom pronalasku dati su u tabeli 6 (Primer 6). pIC50 kategorija A označava pIC50 vrednosti >8,0, kategorija B za pIC50 vrednosti između 7,1 i 8,0, kategorija C za pIC50 vrednosti između 6,1 i 7,0 i kategorija D za pIC50 vrednosti ≤ 6,0.

[0268] Kao što je vidljivo iz tabele 6, jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju iznenađujuće superiorne rezultate i u FACS testu vezivanja iu testu aktivnosti FAP proteaze.

Tabela 6: Jedinjenja ID sekvenca, tačno izračunata masa tačna masa pronađeno vreme zadržavanja u minutima kao što je određeno sa HPLC i pfC50 kategorija FACS vezujući FAP test aktivnosti

1 4

Primer 8: Test površinske plazmonske rezonance

[0269] Studije površinske plazmonske rezonance su izvedene korišćenjem Biacore<™>T200 SPR sistema. Ukratko, polarizovana svetlost se usmerava ka površini senzora sa zlatnom oznakom i detektuje se reflektovana svetlost minimalnog intenziteta. Ugao reflektovane svetlosti se menja kako se molekuli vezuju i disosuju. Površina senzora obeležena zlatom je napunjena FAP antitelima koja nose FAP ciljne proteine, pri čemu se vezivanje antitela ne dešava na mestu vezivanja supstrata FAP. Ispitivana jedinjenja se dovode u kontakt sa nanetom površinom, a profil interakcije u realnom vremenu sa FAP ligandom je zabeležen u senzorgramu. U realnom vremenu se meri asocijacija i disocijacija interakcije vezivanja, što omogućava izračunavanje konstanti brzine asocijacije i disocijacije i odgovarajućih konstanti afiniteta. Važno je da se pozadinski odgovor generiše zbog razlike u indeksima prelamanja pufera za rad i uzorka, kao i zbog nespecifičnog vezivanja test jedinjenja za površinu protočne ćelije. Ova pozadina se meri i oduzima puštanjem uzorka na kontrolnu protočnu ćeliju obloženu antitelom za hvatanje iste gustine u odsustvu imobilizovanog FAP. Dalje, vrši se korekcija baznog odstupanja podataka vezivanja, što je uzrokovano sporom disocijacijom uhvaćenog FAP od imobilizovanog antitela. Ovaj drift se meri ubrizgavanjem pufera u toku kroz protočnu ćeliju sa antitelom i FAP imobilisanim na površinu senzora.

[0270] Biacore™ CM5 senzorski čipovi su korišćeni. Humano anti-FAP antitelo (MAB3715, R&D sistemi) je razblaženo u 10 mM acetatnom puferu, pH 4,5, do konačne koncentracije od 50 µg/mL. Alikvot od 150 µL je prebačen u plastične bočice i stavljen u stalak za uzorke Biacore™ T200 instrumenta. Rastvori reagenasa kompleta za kuplovanje amina su prebačeni u plastične bočice i stavljeni u stalak za uzorke: 90 µL 0,4 M 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimida (EDC) i 90 µL 0,1 M N-hidroksisukcinimida (NHS) . Alikvot od 130 µL 1 M etanolamin-HCl, pH 8,5, prebačen je u plastične bočice i stavljen u stalak za uzorke. Biacore™ tečni sistem je postavljen na sledeći način: Odvojene boce koje sadrže destilovanu vodu (1 L), pufer za analizu (500 mL), kao i prazna boca za otpad su stavljene na tacnu za pufer. Korišćen je unapred instaliran program za imobilizaciju, sa nivoom imobilizacije od 7000 RU. Imobilizacija je izvršena na 25°C. Izvedena je procedura imobilizacije anti-FAP antitela, kako je opisano u tabeli 7.

1

Tabela 7 Protokol imobilizacije za anti-FAP antitela koja se koriste na CM5 senzorskom čipu

[0271] Humani rekombinantni FAP je razblažen u puferu za analizu do konačne koncentracije od 20 µg /mL. Alikvot od 100 µL humanog FAP-radnog rastvora je prebačen u plastične bočice i stavljen u stalak za uzorke. Pripremljen je 0,5 mM osnovni rastvor jedinjenja rastvaranjem svakog jedinjenja u DMSO. Za svako test jedinjenje, osnovni rastvori jedinjenja su razblaženi u puferu za analizu (HBST) na 500 nM i dalje razblaženi sa HBST-DMSO puferom (0,1% DMSO). SPR analize vezivanja za binarne komplekse izvedene su u SCK režimu na 25°C. Tabela 8 opisuje protokol za hvatanje i procenu kinetike vezivanja. Posle tri merenja SCK, procenjeno je pomeranje osnovne linije ubrizgavanjem pufera kroz protočnu ćeliju, sa antitelom i FAP imobilisanim na površinu senzora.

Tabela 8: Protokol za procenu kinetike vezivanja.

1

[0272] Za svako test jedinjenje, SPR neobrađeni podaci u obliku rezonantnih jedinica (RU) su ucrtani kao senzorgrami korišćenjem kontrolnog softvera Biacore™ T200. Signal sa neispisanog senzorgrama je oduzet od signala senzorgrama ispitivanog jedinjenja (korigovan neispisan). Korigovan neispisan senzorgram jekorigovan za pomeranje osnovne linije oduzimanjem senzorgrama SCK serije bez ispitanog jedinjenja (samo pufer za analizu). Brzina asocijacije (kon), brzina disocijacije (koff), konstanta disocijacije (KD), i t1/2su izračunati iz Blank-normalizovanih SPR podataka korišćenjem 1:1 Langmuirovog modela vezivanja iz Biacore™ T200 softvera za procenu. Neobrađeni podaci i rezultati fitovanja su importovani kao tekstualne datoteke u IDBS. Vrednost pKD(negativni dekadni logaritam konstante disocijacije) je izračunata u IDBS ekcel templatu.

[0273] Rezultati ovog testa za izbor jedinjenja prema ovom pronalasku su predstavljeni u tabeli 9. Kategorija A označava pKDvrednosti >8,0, kategorija B za pKDvrednosti između 7,1 i 8,0, kategorija C za pKDvrednosti između 6,1 i 7.0.

Tabela 9: ID jedinjenja, sekvenca i kategorija pkD Biacore testa

1

Primer 9: Test aktivnosti PREP i DPP4 proteaze

[0274] Da bi se testirala selektivnost peptida koji se vezuju za FAP i prema PREP i prema DPP4, izvedeni su testovi aktivnosti proteaze kao analozi testu aktivnosti FAP koji je opisan gore sa sledećim izuzecima.

[0275] PREP aktivnost je merena sa rekombinantnim humanim PREP (R&D sistemi, #4308-SE). Kao supstrat je korišćeno 50 µM Z-GP-AMC (Bachem, # 4002518). Test aktivnosti DPP4 je izveden u puferu za ispitivanje DPP (25 mM Tris, pH 8,0). Rekombinantni humani DPP4 je kupljen od R&D sistema (#9168-SE).20 µM GP-AMC (Santa Cruz Biotechnology, #115035-46-6) je korišćen kao supstrat.

[0276] Fluorescencija AMC (ekscitacija na 380 nm i emisija na 460 nm) posle cepanja je merena u kinetičkom režimu tokom 5 minuta na 37°C na SPECTRAmax M5 čitaču ploča. RFU/sec je izračunat pomoću softvera SoftMax Pro i plotovan u odnosu na koncentraciju peptida. Podešavanje četiri parametarske logističke (4PL) krive i pIC50 proračuni su izvedeni korišćenjem ActivityBase softvera. Rezultati ovog testa za neka od jedinjenja prema ovom pronalasku dati su u sledećoj tabeli 10.

Tabela 10: Rezultati (pIC50 vrednosti) testova aktivnosti PREP i DPP4

1

Primer 10: Skrining specifičnosti

[0277] Pregled specifičnosti je izvršen kako bi se rano identifikovale značajne off-target interakcije jedinjenja sadašnjeg izuma. Specifičnost je testirana korišćenjem standardne baterije testova ("SafetiScreen44™ Panel") koja se sastoji od 44 odabrana cilja i jedinjenja koja se za njih vezuju (nazivaju se "referentna jedinjenja", Ref. Jedinjenja), koju su preporučili Bowes et al. (Bowes, et al., Nat Rev Drug Discov, 2012, 11: 909). Referentna jedinjenja su služila kao pozitivne kontrole za odgovarajuće testove, stoga se očekuje da će se inhibicija otkriti kod ovih referentnih jedinjenja. Međutim, nije se očekivalo da će jedinjenja pronalaska pokazati inhibiciju u ovim testovima. Ove testove vezivanja i inhibicije enzima izvršio je Eurofins Cerep SA (Celle l'Evescault, Francuska).

[0278] 3BP-3407 i 3BP-3554 su testirani prikoncinetracijama od 10 uM. Vezivanje jedinjenja je izračunato kao % inhibicije vezivanja radioaktivno obeleženog liganda specifičnog za svaku metu („% inhibicije specifičnog vezivanja“ (3BP-3407) ili (3BP-3554), respektivno. Efekat inhibicije enzima jedinjenja je izračunat kao % inhibicije kontrolne aktivnosti enzima.

[0279] Smatra se da rezultati koji pokazuju inhibiciju ili stimulaciju veću od 50% predstavljaju značajne efekte testiranih jedinjenja. Takvi efekti nisu primećeni ni na jednom od ispitivanih receptora koji su navedeni u sledećoj tabeli 11. Rezultati ovog testa su sumirani u sledećoj tabeli 11.

1

[0280] Pored toga, BPS Biosciences je izvršio ispitivanje specifičnosti za proteaze da bi dalje odredio specifičnost jedinjenja pronalaska (Turk, Nat Rev Drug Discov, 2006, 5: 785; Overall, et al., Nat Rev Cancer, 2006, 6: 227; Anderson, et al., Handb Exp Pharmacol, 2009, 189: 85).

[0281] 3BP-3407 i 3BP-3554 su testirani na 1 µM i 10 µM u duplikatima. U odsustvu jedinjenja, jačina fluorescencije (Ft) u svakom skupu podataka je definisan kao 100% aktivnost. U odsustvu enzima, pozadinski fluorescentni intenzitet (Fb) u svakom skupu podataka je definisan kao 0% aktivnosti. Procenat aktivnosti u prisustvu svakog jedinjenja je izračunat prema sledećoj jednačini: %aktivnost = (F-Fb)/(Ft-Fb), gde je F = jačina fluorescencije u prisustvu jedinjenja. Procenat inhibicije je izračunat prema sledećoj formuli: % inhibicije = 100% - % aktivnosti. Smatra se da rezultati koji pokazuju inhibiciju veću od 50% predstavljaju značajne efekte testiranog jedinjenja. Rezultati ovog testa dati su u sledećoj tabeli 12.

1

1elaTab

Primer 11: obeležavanje odabranih jedinjenja sa<111>In- i<177>Lu-

[0282] Da bi služilo kao dijagnostički, terapeutski ili teragonisti;ki aktivni agens, jedinjenje treba da bude obeleženo radioaktivnim izotopom. Procedura obeležavanja treba da bude odgovarajuća da bi se obezbedio visok radiohemijski prinos i čistoća radioaktivno obeleženog jedinjenja pronalaska. Ovaj primer pokazuje da su jedinjenja iz ovog pronalaska pogodna za radioobeležavanje i da mogu biti obeležena sa visokim radiohemijskim prinosom i čistoćom.

[0283] 30-100 MBq of<111>InCl3(u 0,02 M HCl) je pomešano sa 1 nmol jedinjenja (200 µM osnovni rastvor u 0,1 M HEPES pH 7) na 30 MBq i puferom (1 M natrijum acetat 1 M puferom pH 5 ili 1 M pufer natrijum acetat/askorbinska kiselina pH 5 koji sadrži 25 mg/ml metionina) pri konačnoj koncentraciji pufera od 0,1 - 0,2 M. Smeša je zagrevana na 80 °C tokom 20-30 min. Nakon hlađenja, dodani su DTPA i TWEEN-20 u konačnoj koncentraciji od 0,2 mM i 0,1%, respektivno.

[0284] 0.2 - 2.0 GBq<177>LuCl3(u 0,04 M HCl) je pomešano sa 1 nmol jedinjenja (200 µM osnovni rastvor u 0,1 M HEPES pH 7) na 45 MBq i puferom (1 M pufer natrijum-acetat / askorbinska kiselina sadrži pH525 mg/ml metionina) at konačna koncentracija pufera od ~0,4 M. Smeša je zagrevana na 90 °C tokom 20 min.

[0285] Efikasnost obeležavanja je analizirana tankoslojnom hromatografijom (TLC) i HPLC. Za TLC analizu, 1-2 µl razblaženog rastvora za obeležavanje je naneto na traku iTLC-SG hromatografskog papira (Agilent, 7,6 × 2,3 mm) i razvijeno u rastvoru citrat-dekstroze (Sigma). iTLC traka je zatim isečena na 3 dela i prateća radioaktivnost je merena gama-brojačem. Radioaktivnost merena na frontu rastvarača predstavlja slobodni radionuklid i koloide, dok radioaktivnost na početku predstavlja radioaktivno obeleženo jedinjenje. Za HPLC, 5 µl razblaženog rastvora za obeležavanje je analizirano sa Poroshell SB-C182,7 µm (Agilent). Eluent A: MeCN, eluent B: H2O, 0,1 % TFA, gradijent od 5% B do 70% B u roku od 15 min, brzina protoka 0,5 ml/min; detektor: NaI (Raytest), DAD 230 nm. Pik eluiran sa mrtvom zapreminom predstavlja slobodni radionuklid, a vrh eluiran sa vremenom zadržavanja specifičnim za peptide kao što je određeno sa neobeleženim uzorkom predstavlja radioaktivno obeleženo jedinjenje.

[0286] Prinos inkorporacije radionuklida iznosio je ≥ 95% i radiohemijska čistoća je ≥ 90% na kraju sinteze. Primeri radiohemijske čistoće za jedinjenja obeležena sa<111>In prikazani su u tabeli 13. Jedinjenja obeležena sa<177>Lu - u formulacijama pogodnim za ljudsku upotrebu održavala su radiohemijsku čistoću od ≥ 90% do 6 dana nakon sinteze (Tabela 14). Radiohromatogrami za odabrana jedinjenja su prikazani na sl.1 do 4, pri čemu je na slici 1 prikazan radiohromatogram<177>Lu-3BP-3407 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/ml askorbata i 5 mg/ml L-metionina analiziran odmah po završetku sinteze, slika 2 prikazuje radiohromatogram od<177>Lu-3BP-3407 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analizirano šest dana nakon završetka sinteze, Slika 3 prikazuje radiohromatogram<177>Lu-3BP-3554 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metiona analiziran odmah po završetku sinteze, a slika 4 prikazuje a radiohromatogram<177>Lu-3BP-3554 u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran šest dana nakon završetka sinteze.

1 4

Tabela 13: Radiohemijska čistoća prema HPLC jedinjenja obeleženih sa<111>In.

Tabela 14: Radiohemijska čistoća određena pomoću HPLC jedinjenja obeleženih sa<177>Lu u puferu za formulaciju koji sadrži 100 mg/mL askorbata i 5 mg/mL L-metionina analiziran 0 i 6 dana nakon završetka sinteze

Primer 12: Ispitivanja inidžinga i biodistribucije

[0287] Radioaktivno obeležena jedinjenja se mogu detektovati metodama snimanja kao što su SPECT i PET. Dalje, podaci dobijeni takvim tehnikama mogu se potvrditi direktnim merenjem radioaktivnosti sadržane u pojedinačnim organima pripremljenim od životinje kojoj je ubrizgano radioaktivno obeleženo jedinjenje pronalaska. Tako se može odrediti i analizirati biodistribucija (merenje radioaktivnosti u pojedinačnim organima) radioaktivno obeleženog jedinjenja. Ovaj primer pokazuje da jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju biodistribuciju prikladnu za dijagnostičko snimanje i terapeutski tretman tumora.

[0288] Svi eksperimenti na životinjama su sprovedeni u skladu sa nemačkim zakonima o zaštiti životinja. Mužjaci SCID bež (stari 6- do 8-nedelja, Charles River, Sulzfeld, Nemačka) inokulisani su sa 5 × 10<6>HEK-FAP (293 ćelije embrionalnog ljudskog bubrega genetski modifikovane da eksprimiraju visoke nivoe FAP) ćelija u jedno rame. Kada su tumori dostigli veličinu > 150 mm<3>, miševi su primili ~30 MBq jedinjenja pronalaska obeleženih sa<111>In (razblaženih do 100 µL sa PBS) administrirani intravenozno preko repne vene. Slike su dobijene na NanoSPECT/CT sistemu (Mediso Medical Imaging Systems, Budimpešta, Mađarska) korišćenjem primera sledećih parametara akvizicije i rekonstrukcije (Tabela 15).

1

Tabela 15: Parametri akvizicije i rekonstrukcije NanoSPECT/CT imidžinga

[0289] Podaci o slici su sačuvani kao DICOM datoteke i analizirani korišćenjem VivoQuant<™>softvera (Invicro, Boston, SAD). Rezultati su izraženi kao procenat ubrizgane doze po gramu tkiva (%ID/g). Za studije biodistribucije, životinje su žrtvovane dislokacijom grlića materice 24h ili 48h nakon injekcije, a zatim secirane. Sakupljeni su i izmereni različiti organi i tkiva, a radioaktivnost je određena γ -brojanjem. Dve životinje su korišćene po vremenskoj tački. Rezultati su izraženi kao procenat ubrizgane doze po gramu tkiva (%ID/g).

[0290] Rezultati studija snimanja i biodistribucije za odabrana jedinjenja prikazani su na Sl.5-7.

Primer 13: Studija efikasnosti - HEK-FAP

1

[0291] Radioaktivno obeležena jedinjenja se mogu koristiti za terapeutsku i dijagnostičku primenu kod različitih bolesti, posebno raka. Ovaj primer pokazuje da jedinjenja iz ovog pronalaska imaju antitumorsko delovanje pogodno za terapeutski tretman tumora.

[0292] Svi eksperimenti na životinjama su sprovedeni u skladu sa nemačkim zakonima o zaštiti životinja. Ženke švajcarskih golih miševa (stare od 7 do 8 nedelja, Charles River Laboratories, Francuska) su inokulisane sa 5 × 10<6>HEK-FAP ćelija u jedno rame, a tretmani su administrirani kada su tumori dostigli srednju zapreminu tumora od 160 ± 44 mm<3>Miševi su podeljeni u 4 različite grupe od 10 životinja/grupi: Grupa 1 - kontrola nosač, Grupa 2 - hladno jedinjenje<nat>Lu-3BP-3554, Grupa 3 - 30 MBq<177>Lu-3BP-3554 (niska doza) i Grupa 4 - 4 - 60 MBq<177>Lu-FAP-3554 (visoka doza). Tretmani su administrirani 0. dana intravenskom injekcijom u repnu venu u dozi od 4 mL/kg (100 µL/mišu). Zapremina tumora i telesna težina mereni su dana 0 (tj. prvog dana primene radioaktivno obeleženog tragač), a zatim tri puta nedeljno do završetka studije.

[0293] Distribucija tragača kod miševa kojima je ubrizgan<177>Lu-obeležen 3BP-3554 određena je SPECT imidžingom kod tri miša po doznoj grupi. Nakon toga, nakon SPECT, urađeno je CT skeniranje za anatomske informacije. Snimanje je obavljeno 3 h, 24 h, 48 h i 120 h nakon injekcije pomoću NanoSPECT/CT sistema (Mediso Medical Imaging Systems, Budimpešta, Mađarska) korišćenjem primera sledećih parametara akvizicije i rekonstrukcije (Tabela 16).

Tabela 16: Parametri akvizicije i rekonstrukcije NanoSPECT/CT imidžinga

1

[0294] Podaci o imidžingu su sačuvani kao DICOM datoteke i analizirani korišćenjem VivoQuant<™>softvera (Invicro, Boston, SAD). Rezultati su izraženi kao procenat ubrizgane doze po gramu tkiva (%ID/g).

[0295] Tumori kod miševa tretiranih nosačem i hladnim jedinjenjem<nat>Lu-3BP-3554 dostigli su srednju zapreminu tumora (MTV) od 1338 ± 670 mm<3>i 1392 ± 420 mm<3>14. dana, respektivno (Slika 9 A). Statistički značajna (P < 0.01) antitumorska aktivnost je primećena kod miševa obe tretirane grupe. Inhibicija rasta tumora (TGI) 14. dana iznosila je 111% i 113% kod miševa tretiranih jednom dozom od 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554, respektivno, u odnosu na grupu koja je tretirana nosačem. MTV kod svih miševa tretiranih sa<177>Lu-3BP-3554 smanjen je na ≤70 mm<3>14. dana. Tumori su praćeni radi ponovnog rasta i 42. dana (što predstavlja kraj studije), tri od deset i devet od deset miševa su tretirani sa 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554, respektivno, bez tumora (< 10 mm<3>), što ukazuje na potencijalni odgovor na dozu u ovom modelu. Tokom studije nije primećen gubitak telesne težine vezan za lečenje (Slika 9 B). Nakon smanjenja telesne težine od 3-5% uočenog u svim grupama drugog dana, telesna težina životinja se vremenom povećavala.

[0296] SPECT/CT snimanje 3 životinje iz obe grupe tretmana obeležene sa<177>Lu pokazalo je visok kontrast tumor-pozadina tokom svih ispitivanih vremenskih tačaka (3-120 h posle injekcije (p.i.)). Uočeno je visoko zadržavanje tumora do 120 h. Organ sa najvećim neciljanim unosom bio je bubreg, sa odnosom tumor-bubreg od 8,6±0,6 i 8,0±1,6 na 3 h p.i. kod miševa tretiranih sa 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554, respektivno. Ovi odnosi su se povećavali tokom vremena, dostižući najveću vrednost u 120 h sa 40±7,9 i 32±7,4 odnosa tumor-bubreg kod miševa tretiranih sa 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554, respektivno. Primer panela SPECT/CT imidža za miša 5 koji je životinja sa visokom dozom prikazan je na Slici 10 A, a za miša 1 koji je životinja sa malom dozom je prikazan na Slici 10 B.

Primer 14: Studija imidžinga – PDX modeli sarkoma

[0297] Prijavljeno je da tumori sarkoma eksprimiraju FAP, a slikanje četiri različita modela tumora ksenotransplantata (PDX) dobijenih od sarkoma je izvedeno da bi se procenilo resorpciju 3BP-3554. Sarc4183, Sarc4605, Sarc4809 i Sarc12616 PDX modeli su izvedeni od pacijenata sa rabdomiosarkomom, osteosarkomom, nediferenciranim sarkomom i nediferenciranim pleiomorfnim sarkomom, respektivno (Experimental Pharmacology & Oncology Berlin-Buch, Nemačka). Fragmenti tumora su transplantirani subkutano u levi bok 8-nedeljnih NMRI nu/nu miševa (Janvier Labs, Francuska). Svi eksperimenti na životinjama sprovedeni su u skladu sa nemačkim zakonima o zaštiti životinja. 47 dana (Sarc4183, Sarc4809) ili 46 dana (Sarc4605, Sarc12616) nakon transplantacije, snimljeno je 2-3 miša po modelu 3 sata nakon jedne intravenske injekcije od 30 MBq<111>In-3BP-3554. Imidžing je izveden kao što je opisano u Primeru 12.

1

[0298] Rezultati imidžinga sa<111>In-3BP-3554 pokazali su visoku resorpciju tumora 3 h p.i. i visok kontrast tumor-pozadina. Reprezentativni SPECT/CT imidži su prikazani na slici 11 A. Kvantifikacija uzimanja tumora za dva (Sarc4605, Sarc12616) ili tri (Sarc4183, Sarc4809) miševa sa PDX, respektivno, otkrila je %ID/g vrednosti od 4,9 ± 1,87 (Sarc ± 1,87). ), 5,2 ± 0,8 (Sarc4605), 4,4 ± 0,7 (Sarc4809) i 6,1 ± 0,6 (Sard 2616) kao što je prikazano na slici 11 B. Ovi rezultati pokazuju resorpciju<111>In-3BP-3554 u sva 4 modela sarkoma. Odnos tumora i bubrega bio je 4,7±1,2 (Sarc4183), 3,2±0,4 (Sarc4605), 4,1±0,7 (Sarc4809) i 4,3±1,2 (Sarc12616).

Primer 15: Studija efikasnosti - Sarcoma Sarc4809 PDX model

[0299] Efikasnost<177>Lu-3BP-3554 je ispitivana u humanom sarkoma PDX modelu tumora Sarc4809. Ovaj model nediferenciranog sarkoma pokazuje resorpciju<111>In-3BP-3554 (Primer 14) i takođe je pokazano da eksprimira FAP imunohistohemijom.

[0300] Svi eksperimenti na životinjama su sprovedeni u skladu sa nemačkim zakonima o zaštiti životinja. Sarc4809 fragmenti tumora su transplantirani subkutano na levom boku 8-nedeljnih NMRI nu/nu miševa (Janvier Labs, Francuska). Tretman je započet 23 dana nakon transplantacije sa prosečnom zapreminom tumora od 187.08 ± 123.8 mm<3>. Miševi su podeljeni u četiri grupe od 10 životinja/grupi: Grupa 1 - kontrola nosač, Grupa 2 - hladno jedinjenje<nat>Lu-FAP-3554, Grupa 3 - 30 MBq<177>Lu-3BP-3554, Grupa 4 - 60 MBq<177>Lu-FAP-3554. Tretmani su davani 0. dana intravenskom injekcijom u repnu venu u dozi od 4 mL/kg (100 µL/mišu). Zapremina tumora i telesna težina određivani su na dan 0 (tj. prvi dan primene radioaktivno obeleženog tragača), a zatim tri puta nedeljno do završetka studije.

[0301] Svi tumori su kontinuirano rasli tokom perioda praćenja studije do 42. dana. Tumori kod miševa tretiranih nosačem i<nat>Lu-3BP-3554 (kontrolne grupe) dostigli su MTV od 894 ± 610 mm<3>i 1225 ± 775 mm<3>31. dana (poslednji dan kada je najmanje 50% miševa po grupi još uvek bilo živo), respektivno. Tumori kod miševa tretiranih jednom dozom od 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554 dostigli su MTV od 635 ± 462 i 723 ± 391 mm<3>31. dana, respektivno (Slika 12A). Statistički značajna (P < 0,05) antitumorska aktivnost je primećena kod miševa obe tretirane grupe. Inhibicija rasta tumora (TGI) 31. dana iznosila je 61% i 73% kod miševa tretiranih jednom dozom od 30 ili 60 MBq<177>Lu-3BP-3554, respektivno, u odnosu na grupu koja je tretirana nosačem. Tokom studije nije primećen gubitak telesne težine vezan za lečenje (BWL). U svim grupama telesna težina se povećala tokom praćenja studije (Slika 12B)

Primer 16: Farmakokinetičke studije

[0302] Farmakokinetičko ponašanje odabranih jedinjenja je procenjeno kod miševa i pacova. Ova karakterizacija farmakokinetičkog ponašanja jedinjenja omogućava nove uvide u distribuciju i eliminaciju jedinjenja i izračunavanje izloženosti.

[0303] Različite količine jedinjenja su stabilno formulisane u PBS. Formulacije su primenjene intravenozno sa dozom od 4 nmol/kg, 40 nmol/kg i 400 nmol/kg kod miševa i 2 nmol/kg, 20 nmol/kg i 200 nmol/kg (3BP-3554) ili 40 nmol/kg i 400 mol/kg (3BP-3623) kod pacova. Pod pretpostavkom da je alometrijski faktor translacije 12,3 od čoveka do miša, i 6,2 od čoveka do pacova (Nair AB, Jacob S. Journal of Basic and Clinical Pharmacy, 2016, 7(2): 27-31), primenjene doze predstavljaju opseg doze od 0,325 nmol/kg do 32,5 nmol/kg za čoveka.

[0304] Uzorci krvi su sakupljeni nakon različitog vremena (5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h) iz repne vene (pacovi) ili retrobulbarne (miševi).

[0305] Nakon odvajanja krvnih zrnaca iz krvne plazme centrifugiranjem, jedinjenja su kvantifikovana u pripremljenim uzorcima plazme koji su podvrgnuti postupku precipitacije proteina. Dodato je 150 µl

1

agensa za taloženje cink sulfata koji sadrži 78% 0,1 M cink sulfata i 22% acetonitrila. Posle inkubacije na sobnoj temperaturi tokom 30 min, talog je odvojen centrifugiranjem. U 100 µl supernatanta je dodato 10 µl 1% metanske kiseline, nakon čega je usledila dalja inkubacija na 60°C tokom 10 minuta da bi se završilo formiranje helata cinka, ako jedinjenje sadrži slobodni DOT A ostatak.

[0306] Određivanje analita u čistim rastvorima uzoraka izvedeno je na Agilent 1290 UHPLC sistemu spojenom na Agilent 6470 trostruki kvadrupolni maseni spektrometar. Hromatografsko razdvajanje je izvedeno na Phenomenex BioZen Peptide XB-C18 HPLC koloni (50 × 2 mm, veličina čestica 1,7 µm) na 40°C sa gradijentom eluiranja korišćenjem smeše 0,1% metanske kiseline u vodi kao eluenta A i acetonitrila kao eluent B (izokratski na 5% B tokom 1 min, a zatim a linearni gradijent do 43% B za 4 min, 500 µl/min).

[0307] Masena spektrometrijska detekcija je izvedena u ESI modu pozitivnih jona praćenjem višestrukih reakcija (MRM).

Tabela 17: Maseni spektrometrijski parametri detekcije

[0308] Kvantifikacija ispitivanih jedinica je obavljena korišćenjem Quantitative Analysis softvera iz paketa Agilent MassHunter softvera. Urađena je kvadratna regresija sa težinskim faktorom 1/x.

[0309] Nivo u plazmi je podvrgnut ne-kompartmentalnoj analizi (NCA) sa sledećim rezultatima: početna koncentracija jedinjenja (C0), zapremina distribucije u stabilnom stanju (Vss), zapremina distribucije u terminalnoj fazi (Vz),, terminalni poluživot (t1/2), klirens (CL) i površina ispod krive ekstrapolirana na beskonačnost (AUCinf). Sažetak NCA parametara 3BP-3554 predstavljen je u tabeli 18 za 3BP-3554 u plazmi miša i u tabeli 19 za 3BP-3554 u plazmi pacova, i NCA parametara 3BP-3623 u tabeli 20 za 3BP-362 u plazmi miša i u tabeli 21 za 3BP-3623 u plazmi pacova.

Tabela 18: Sažetak NCA parametara 3BP-3554 u plazmi miša

1

Tabela 19: Sažetak NCA parametara 3BP-3554 u plazmi pacova

Tabela 20: Sažetak NCA parametara 3BP-3623 u plazmi miša

Tabela 21: Sažetak NCA parametara 3BP-3623 u plazmi pacova

1 1

[0310] Rezultati ukazuju na distribuciju pretežno u krvi i intersticijalnim tečnostima i klirens tipičan za peptide sa terminalnim poluživotom između 23 min i 59 min kod miševa i između 45 min i 71 min kod pacova. Ekspozicija kako je opisana AUC je skoro linearnoj koleraciji sa ubrizganom dozom i klirens je konstantan za sve primenjene doze u određenom životinjskom modelu. Ova zapažanja sugerišu da nema značajne nelinearnosti farmakokinetičkog ponašanja koje treba uzeti u obzir za izračunavanje prve doze kod ljudi.

1 2

Claims (26)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje odabrano iz gupe koju čine:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat;

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što jedinjenje je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, opciono gde slovat je hidrat.
3. 3. Jedinjenje iz zahteva 2, naznačeno time, što jedinjenje je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Jedinjenje iz zahteva 3, naznačeno time, što jedinjenje je:
5. 5. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što jedinjenje je:
6. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, opciono gde solvat je hidrat. 6. Jedinjenje iz zahteva 5, naznačeno time, što jedinjenje je: 1 4
7. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 7. Jedinjenje iz zahteva 6, naznačen time, što jedinjenje je:
8. 8. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od zahteva 1-7, naznačeno time, što jedinjenje sadrži terapeutski aktivan nuklid.
9. 9. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema zahtevu 8, naznačeno time, što terapeutski aktivan nuklid je terapeutski aktivan radionuklid.
10. 10. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema zahtevu 9, naznačeno time, što terapeutski aktivan radionuklid je izotop koji emituje čestice za terapeutsku upotrebu i ima energiju raspada između 0,039 i 10 MeV, poželjno između 0,4 i 6,5 MeV.
11. 11. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema zahtevu 9 ili zahtevu 10, naznačeno time, što čemu terapeutski aktivan radionuklid je izabran iz grupe koju čine<47>Sc,<67>Cu,<89>Sr,<90>Y,<153>Sm,<149>Tb,<161>Tb,<177>Lu,<186>Re,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<223>Ra,<225>Ac,<226>Th,<227>Th,<131>I, i<211>At,poželjno<47>Sc,<67>Cu,<90>Y,<177>Lu,<188>Re,<212>Pb,<213>Bi,<225>Ac,<227>Th,<131>I, i<211>At,, a još bolje<90>Y,<177>Lu,<225>Ac,<227>Th,<131>I, i<211>At. 1
12. 12. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od zahteva 9-11, naznačeno time, što terapeutski aktivan radionuklid je terapeutski aktivan radiometal.
13. 13. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema zahtevu 9, naznačeno time, što terapeutski aktivan radionuklid je<177>Lu.
14. 14. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od zahteva 8-13, naznačeno time, što terapeutski aktivni nuklid je kompleksiran sa 1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7,10-tetraacetatnom kiselinom. (DOTA) helirajućim agensom.
15. 15. Kompleks radionuklida helata koji sadrži: jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat kao što je definisano u bilo kom od zahteva 1-7; i radionuklid, pri čemu je radionuklid kompleksiran sa 1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7,10-tetraacetatnom kiselinom (DOTA) helirajućim agensom.
16. 16. Kompleks radionuklida helata prema zahtevu 15, naznačen time što radionuklid je terapeutski aktivan radionuklid kao što je definisano u bilo kom od zahteva 9-13.
17. 17. Radionuklid helatni kompleks prema zahtevu 16, izabran iz grupe koju čine:

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, 1

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat,

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat,

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat,

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, 1

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, i

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
18. 18. Radionuklid helatni kompleks prema zahtevu 17, izabran iz grupe koju čine

    1

    i 1
19. 19. Kompozicija, poželjno farmaceutska kompozicija, gde kompozicija sadrži: jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat prema bilo kom od zahteva 1-14 ili radionuklid helatni kompleks prema bilo kom od zahteva 15-18; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
20. 20. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od zahteva 8-14, ili radionuklid helatni kompleks prema bilo kom od zahteva 15-18, za upotrebu kao lek.
21. 21. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od zahteva 8-14, ili radionuklid helatni kompleks prema bilo kom od zahteva 15-18, za upotrebu u lečenju bolesti, pri čemu je bolest neoplazma, poželjno rak ili tumor.
22. 22. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ili radionuklid helatni kompleks za upotrebu prema zahtevu 21, pri čemu bolest je (a) neoplazma, poželjno rak ili tumor, i (b) uključuje ćelije koje pokazuju povećanu ekspresiju proteina za aktivaciju fibroblasta (FAP), poželjno gde bolest uključuje obolelo tkivo koje sadrži ćelije koje pokazuju povećanu ekspresiju FAP, poželjnije gde bolest uključuje fibroblaste povezane sa tumorom.
23. 23. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ili radionuklid helatni kompleks za upotrebu prema zahtevu 21 ili 22, naznačeno time što je bolest izabrana od čvrstog tumora, epitelnog tumora, raka bešike, raka dojke, raka grlića materice, kolorektalnog karcinoma, holangiokarcinoma. , raka endometrijuma, raka jednjaka, raka želuca, gastrointestinalnog stromalnog tumora, raka glave i vrata, rak jetre, rak pluća, melanoma, mezotelioma, neuroendokrinih tumora i karcinoma, raka jajnika, raka pankreasa, raka prostate, karcinoma bubrežnih ćelija, karcinoma pljuvačnih žlezdi, sarkoma, karcinoma skvamoznih ćelija ili raka štitne žlezde.
24. 24. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ili radionuklid helatni kompleks za upotrebu prmea zahtevima 21 ili 22, gde je bolest izabrana od raka dojke, kolorektalnog raka, holangiokarcinoma, raka glave i vrata, rak pluća, mezotelioma, neuroendokrinih tumora i karcinoma, raka jajnika, raka pankreasa, raka prostate, sarkoma i karcinoma skvamoznih ćelija. 1
25. 25. Komplet koji sadrži jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat prema bilo kom od zahteva 1-14, ili radionuklid helatnog kompleksa prema bilo kom od zahteva 15-18, jedan ili više opcionih ekscipijenata i opciono jedan ili više uređaja, pri čemu uređaji su uređaji za označavanje, uređaj za prečišćavanje, uređaj za rukovanje, uređaj za radiozaštitu, analitički uređaj ili uređaj za administraciju.
26. 26. Kombinacija koja sadrži: (i) jedinjenje ili njegovua farmaceutski prihvatljivu so ili solvat prema bilo kom od zahteva 1-14, ili kompleks radionuklida helata prema bilo kom od zahteva 15-18; i (ii) jedinjenje protiv raka. 1 1