RS66516B1 - 3-sulfopropanska kiselina za lečenje neurodegenerativnih poremećaja - Google Patents

Description

Opis

SRODNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava zahteva pravo prvenstva u odnosu na Privremenu SAD prijavu br.62/713,061, podnetu 1. avgusta 2018.

STANJE TEHNIKE

[0002] Alchajmerova bolest (AB) je progresivna degenerativna bolest mozga, prvenstveno povezana sa starenjem. Sve veći troškovi zdravstvene zaštite za društvo u kontekstu AB naglašeni su brojem obolelih pacijenata u različitim geografskim regionima, sa preko 5,7 miliona u SAD (Alzheimer’s Association 2018) i 35 miliona širom sveta (World Alzheimer Report 2016). Kliničku sliku AB karakteriše gubitak pamćenja, kognicije, rezonovanja, rasuđivanja i orijentacije. Kako bolest napreduje, bivaju pogođene i motorne, senzorne i jezičke sposobnosti sve dok ne dođe do celokupnog oštećenja više kognitivnih funkcija. Ovi kognitivni gubici se javljaju postepeno, ali obično dovode do ozbiljnog oštećenja, a na kraju i smrti u rasponu od četiri do dvanaest godina.

[0003] Trenutno, dve klase odobrenih lekova za AB su inhibitori holinesteraze i memantin. Obe klase su simptomatska sredstva koja ciljano deluju na sekundarne deficijencije neurotransmitera uočene u AB. Nijedna klasa, međutim, ne pokazuju efikasnost nakon 6 meseci lečenja u kliničkim ispitivanjima i nema dokaza da te klase ciljano deluju na osnovnu patologiju bolesti. Novija anti-amiloidna antitela (npr., adukanumab) obećavaju kao potencijalna lečenja koja modifikuju bolest kada se upotrebljavaju u ranim stadijumima bolesti. Videti, npr., Lasser et al. Efficacy and Safety of Gantenerumab in Prodromal AD: Results from Scarlet Road-a Global, Multicenter Trial. Alzheimer’s Association International Conference (AAIC) 2015 Abstract ID: 5963. Međutim, pojedine amiloidne imunoterapije povezane su sa doznozavisnim rizikom od abnormalnosti sa edemom koje se uočavaju prilikom medicinskih snimanja amiloidne patologije (ARIA-E – amyloid related imaging abnormalities with edema), pri čemu je povećan rizik prijavljen kod APOE4 nosača. Videti, npr., Salloway et al. Two Phase 3 Trials of Bapineuzumab in Mild-to-Moderate Alzheimer’s Disease. N Engl J Med 2014; 370:322-33; Sevigny et al., The antibody aducanumab reduces Abeta plaques in Alzheimer’s disease. Nature 2016; 537:50-6; i Caselli et al. Longitudinal modeling of age-related memory decline and the APOE epsilon4 effect. N Engl J Med 2009; 361:255-263. Navedeno predstavlja izazov za razvoj, pošto su doze koje dovode do klirensa amiloida i kliničke koristi povezane sa incidencijom ARIA-E od približno 40% za dve najveće doze adukanumaba. Videti Sevigny et al. A dose titration regimen with aducanumab still shows approximately 35% incidence of ARIA-E in APOE carriers. Videti, npr., Viglietta et al., Aducanumab titration dosing regimen: 12-month interim analysis from prime, a randomized double blind, placebo-controlled phase Ib study in patients with prodromal or mild Alzheimer’s disease. J Prev Alzheimers Dis 2016; 3, suppl 1:378. Premda ARIA-E mogu biti asimptomatske ili blago simptomatske kod većine pacijenata, kod pojedinih pacijenata mogu se razviti epileptični napadi ili drugi ozbiljni neželjeni događaji. Rizik od ARIA-E kod AB pacijenata može zahtevati MRI praćenje, što je opterećujuće za stariju populaciju i moglo bi ograničiti korišćenje tih lekova u kliničkoj praksi.

[0004] Rastvorljivi Aβ42 oligomeri male molekulske mase sada su prepoznati kao ključni pokretači patogeneze AB, a povećana koncentracija Aβ42 oligomera je u bliskoj korelaciji sa početkom i progresijom kliničkih simptoma. Videti, npr., Viglietta et al. Soluble Aβ oligomers have been shown to cause synaptic damage, neuronal death, promote tau phosphorylation and drive tau pathology. Videti, npr., Esparza et al., Amyolid beta oligomerization in Alzheimer’s dementia vs. high pathology controls. Ann Neurol 2013; 73(1):104-119; Hashimoto et al. Apolipoprotein E, especially apolipoprotein E4, increases t peptide. J Neurosci.2012; 32:15181-15192; Ono et al., Low-n oligomers as therapeutic targets of Alzheimer’s disease. J. Neurochem.2011;117:19-28; Townsend et al., Effects of secreted oligomers of amyloid beta-protein on hippocampal synaptic plasticity: a potent role for trimers. J. Physiol.; 2006;572:477-92; i Lambert et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous system neurotoxins. PNAS.

1998; 95:6448-53. Kao značajno, pokazalo se da AB pacijenti sa APOE 4/4 imaju veće opterećenje rastvorljivim amiloidnim oligomerima (Usui et al., Site-specific modification of Alzheimer’s peptides by cholesterol oxidation products enhances aggregation energetics and neurotoxicity. PNAS.; 2009; 106:18563-8), što je verovatno odgovorno za raniji početak bolesti u toj populaciji.

[0005] Do danas, kod AB pacijenata pozitivnih na amiloid, kliničku korist pokazala su samo sredstva koja ciljano deluju na Aβ oligomere, kao što su adukanumab i ALZ-801/tramiprozat. Tramiprozat, 3-amino-1-propansulfonska kiselina (3APS) je oralno sredstvo koje sprečava agregaciju amiloida i time smanjuje neurotoksičnost oligomera amiloda beta. Faza 3 kliničkih ispitivanja tramiprozata kod blage do umerene AB pokazala je odličan profil leka, uključujući sposobnost da se uspori smanjenje zapremine hipokampusa u mozgu i poboljša kognicija i funkcija mozga u podskupu analiza. Videti, npr., Gauthier, S. et al. Effect of tramiprosate in patients with mild-to-moderate Alzheimer’s disease: exploratory analyses of the MRI subgroup of the Alphase study. J Nutr Health Aging 13, 550-557 (2009); Saumier, D., Duong, A., Haine, D., Garceau, D. & Sampalis, J. Domain-specific cognitive effects of tramiprosate in patients with mild to moderate Alzheimer’s disease: ADAS-cog subscale results from the Alphase Study. J Nutr Health Aging 13, 808-812 (2009); i Aisen, P. S. et al. Tramiprosate in mild-to-moderate Alzheimer’s disease - a randomized, double-blind, placebo-controlled, multi-centre study (the Alphase Study). Arch Med Sci 7, 102-111 (2011).

[0006] ALZ-801 je u kliničkom razvoju kao oralni inhibitor tipa malog molekula za obrazovanje oligomera amiloida beta (Aβ) i lečenje Alchajmerove bolesti (AB). ALZ-801 je valinski konjugat tramiprozata, sa poboljšanim farmakokinetičkim svojstvima i gastrointestinalnom podnošljivošću. Videti, npr., Hey et al., Clinical Pharmacokinetics and Safety of ALZ-801, a Novel Prodrug of Tramiprosate in Development for the Treatment of Alzheimer’s Disease. Clin Pharmacokinetics 2018; 315-333. Tramiprozat, aktivni deo ALZ-801, inhibira obrazovanje Aβ oligomerā in vitro. Videti, npr., Kocis et al., Elucidating the Abeta42 Anti-Aggregation Mechanism of Action of Tramiprosate in Alzheimer’s Disease: Integrating Molecular Analytical Methods. Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509. Oralni tramiprozat je prethodno procenjivan u dve studije Faze 3, koje su uključivale 2.015 pacijenata sa blagom do umerenom AB, a koji su lečeni sa 100 mg tramiprozata dva puta dnevno, 150 mg tramiprozata dva puta dnevno, ili placebom. Podaci o bezbednosti iz tih kliničkih ispitivanja Faze 3 i proširena studija bezbednosti ukazali su na povoljan profil bezbednosti pri izlaganjima tramiprozatu do 2,5 godine. Videti, npr., Abushakra et al., Clinical effects of tramiprosate in APOE 4/4 homozygous patients with mild Alzheimer’s disease suggest disease modification potential. J Prev Alzheimers Dis 2017; 4:149-56. U analizi podgrupe subjekata sa ε4 alelom apolipoproteina E (APOE4), postojala je pozitivna i klinički značajna korist u odnosu na kogniciju. PCT prijave WO 2017/044840 i WO2015/143447 prikazuju tramiprozat, ALZ-801 i druge aminokiselinske derivate tramiprozata, za lečenje i/ili prevenciju AB kod pacijenata ApoE4 homozigota i heterozigota koji pate od blage do umerene AB.

SUŠTINA PRONALASKA

[0007] Sada je utvrđeno da je metabolit tramiprozata, 3-sulfopropanska kiselina (3-SPA – 3-sulfopropanoic acid), prisutan u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF – cerebrospinal fluid) i plazmi subjekata koji nisu uzimali lek. Videti, npr., SL. 2. Utvrđeno je da ta endogena 3-SPA inhibira agregaciju Aβ42 u male oligomere, sa efikasnošću koja je uporediva sa onom tramiprozata. Videti, npr., SL.5 i SL.6.

[0008] Uz to, identifikovali smo obrnutu korelaciju između ozbiljnosti kognitivnih oštećenja i koncentracije 3-SPA kod subjekata koji imaju blagu do umerenu AB, što stoga ukazuje da nivo 3-SPA opada kako se ozbiljnost kognitivnog oštećenja povećava i da održavanje viših nivoa 3-SPA može imati ulogu u prevenciji ili znatnijem smanjenju kognitivnog pada povezanog sa AB, na primer, izmerenog skorom Kratkog ispitivanja mentalnog statusa („MMSE“ – Mini Mental State Examination) kod subjekta, što je dobro dokumentovan postupak za određivanje ozbiljnosti Alchajmerove bolesti kod subjekta. Videti, npr., Pangman, et al., Applied Nursing Research. 13 (4): 209-213. Utvrdili smo da AB subjekti sa višim MMSE skorom (tj., manjim kognitivnim oštećenjem) imaju više nivoe 3-SPA u CSF u poređenju sa subjektima sa nižim MMSE skorovima. Videti, npr., SL. 7. Ta korelacija nam je omogućila da za subjekte u testiranoj populaciji koji su patili od blage do umerene AB odredimo trend, ili liniju najboljeg uklapanja, između MMSE skora i koncentracije 3-SPA u CSF.

[0009] Na osnovu tih nalaza, postavili smo hipotezu da bi povećanje nivoa 3-SPA u CSF do vrednosti iznad onih koje su pronađene kod AB subjekata sa najmanjim kognitivnim oštećenjem (tj., MMSE = 30) („bazalni nivo/prag“) i održavanje takvih povišenih nivoa trebalo da štiti te subjekte od daljeg kognitivnog pada ili smanji stopu kognitivnog pada u poređenju sa lečenjem placebom. Povećanje nivoa 3-SPA u CSF do vrednosti iznad takvog bazalnog nivoa/praga može se postići davanjem ALZ-801, tramiprozata, ili drugog predleka ili prekursora za tramiprozat (koji svi konačno proizvode 3-SPA), ili egzogenog oblika 3-SPA, uključujući predlek ili prekursor za 3-SPA.

[0010] U jednom aspektu, prema tome, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti (AB) kod subjekata koji imaju koncentraciju 3-SPA ispod izvesnog bazalnog nivoa/praga, npr., ispod vrednosti koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF koja je utvrđena za MMSE od 30 u najboljem uklapanju nasumične populacije subjekata sa Alchajmerovom bolešću sa različitim kognitivnim oštećenjima.

[0011] Ovde je takođe obezbeđena farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju izabranih AB subjekata koje se definiše različitim stepenima ozbiljnosti kognitivnog oštećenja. Na primer, u jednom aspektu, izabrani subjekti za lečenje mogu imati određene MMSE skorove koji ukazuju, na primer, na ozbiljnost AB koja je blaga ili blaga do umerena. U drugim aspektima, subjekti mogu imati određene MMSE skorove i imati jedan ili više ε4 alela gena apolipoproteina E (APOE) (npr., mogu biti homozigoti za APOE4), abnormalnosti u memorijskom testu slobodnog i selektivnog potpomognutog podsećanja (FCSR – Free and Cued Selective Reminding) koji ukazuju na blago kognitivno oštećenje, i određeni stepen kliničke demencije (CDR – clinical dementia rating).

[0012] Ovde je dalje obezbeđena farmaceutska kompozicija za upotrebu u prevenciji demencije ili prevenciji daljeg kognitivnog pada kod subjekata koji imaju koncentraciju 3-SPA ispod određenog bazalnog nivoa/praga, npr., ispod vrednosti koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF koja je utvrđena za MMSE od 30 postupkom najboljeg uklapanja nasumične populacije subjekata koji pate od kognitivnog pada.

SAŽET OPIS SLIKA

[0013]

SL.1 ilustruje metaboličku transformaciju ALZ-801 u 3-sulfopropansku kiselinu (3-SPA).

SL. 2 je grafikon koji prikazuje koncentraciju (ng/ml) 3-SPA koja je prisutna u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) subjekata koji nisu uzimali lek i kojima nije postavljena dijagnoza AB.

SL. 3 opisuje vreme pomeraja dobijeno spektrometrijom-masenom spektrometrijom pokretljivosti jona (IMS-MS) kao funkciju mase/naelektrisanja (m/z) nakon 4 sata inkubacije Aβ42 sa 3-SPA u odnosu 1:1.000 i sa profilom Aβ42 oligomera. Detektovanje Aβ42 dimerā, trimerā i pentamerā pod tim uslovima ukazuje da 4 sata inkubacije in vitro nije bilo dovoljno za potpunu inhibiciju obrazovanja oligomera.

SL. 4 opisuje vreme pomeraja dobijeno spektrometrijom-masenom spektrometrijom pokretljivosti jona (IMS-MS) kao funkciju mase/naelektrisanja (m/z) nakon 24 sata inkubacije, a koje pokazuje profil Aβ42 oligomerā sa 1.000-strukim viškom 3-SPA. Detektovani su samo pentameri.

SL.5 je prikaz eksperimenta molekulske dinamike koji pokazuje polucikličnu konformaciju Aβ42 u prisustvu viška 3-SPA od 1.000:1. Funkcionalni rezultat za 3-SPA je sličan funkcionalnim krajnjim rezultatima, tj. inhibiciji obrazovanja Aβ42 oligomera koja je utvrđena za tramiprozat (Kocis et al., Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509).

SL. 6 ilustruje obrnutu korelaciju između nivoā 3-SPA u humanoj CSF u okviru populacije subjekata koji imaju AB, sa različitim MMSE skorovima (ozbiljnost AB).

SL. 7 predstavlja LC-MS/MS spektre autentičnog 3-SPA referentnog standarda (derivatizovanog sa EDC i TFEA).

SL.8 Panel A predstavlja LC-MS/MS hromatograme za 3-SPA standard.

SL.8 Panel B predstavlja LC-MS/MS hromatograme za humanu CSF iz jednog AB subjekta sa MMSE 20.

SL.9 prikazuje srednje farmakokinetičke krive za jednokratne oralne i iv doze 3-SPA kod mužjaka SD pacova (30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom; n=3). Prikazani podaci su srednja vrednost ± SD.

SL. 10 prikazuje srednji vremenski tok za koncentracije 3-SPA u mozgu, CSF i plazmi nakon jednokratne oralne doze od 30 mg/kg kod mužjaka SD pacova (n=3). Prikazani podaci su srednja vrednost ± SD.

DETALJAN OPIS

[0014] Predmetni pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Bilo koji predmet koji ne spada u obim patentnih zahteva obezbeđen je samo za informaciju. Postupci lečenja ljudskog tela pomoću terapije, na koje se poziva u ovom opisu, nisu deo predmetnog pronalaska kao takvog, već su opisani ovde u odnosu na jedinjenja i farmaceutske kompozicije za upotrebu u navedenim postupcima lečenja ljudskog tela pomoću terapije, prema predmetnom pronalasku. Tramiprozat (homotaurin, 3-amino-1-propansulfonska kiselina (3-APS), ili Alzhemed<TM>) je jedinjenje koje se daje oralno, koje se vezuje za rastvorljivi Aβ i smanjuje agregaciju amiloida i naknadno taloženje. Videti, npr., Gervais et al., Targeting soluble Abeta peptide with Tramiprosate for the treatment of brain amyloidosis. Neurobiol Aging. 2007;28:537-47. In vitro, tramiprozat obezbeđuje neuroprotekciju protiv neurotoksičnosti indukovane Aβ-om u neuronskim i mišjim organotipskim kulturama hipokampusa, i preokreće inhibiciju dugoročne potencijacije (LTP) indukovanu Aβ-om u hipokampusu pacova (Krzywkowski et al., Tramiprosate Prevents Amyloid Betainduced Inhibition of Long-term Potentiation in Rat Hippocampal Slices. 8th International Conference AD/PD; March 14-18, 2007; Salzburg Austria), delom, putem aktivacije receptorā β-aminobuterne kiseline A (GABA-A). Videti, npr., Azzi M, Morissette C, Fallon L. Involvement of both GABA-dependent and -independent pathways in tramiprosate neuroprotective effects against amyloid-beta toxicity. 8th International Conference AD/PD; March 14-18, 2007; Salzburg Austria. Oralni tramiprozat je prethodno procenjivan u dve studije Faze 3, koje su uključivale 2.015 pacijenata sa blagom do umerenom AB, koji su lečeni sa 100 mg tramiprozata dva puta dnevno, 150 mg tramiprozata dva puta dnevno, ili placebom. Podaci o bezbednosti iz tih ispitivanja Faze 3 i studije proširenja bezbednosti sugerišu povoljan profil bezbednosti sa izlaganjima tramiprozatu sve do 2,5 godina. Videti Abushakra et al., Clinical effects of tramiprosate in APOE4/4 homozygous patients with mild Alzheimer’s disease suggest disease modification potential. J Prev Alzheimers Dis 2017; 4:149-56. U analizama podgrupa subjekata sa ε4 alelom apolipoproteina E (APOE4), postojala je pozitivna i klinički zanačajna korist za kogniciju. Videti Abushakra et al., Clinical benefits of tramiprosate in alzheimer’s disease are associated with higher number of APOE4alleles: the "APOE4gene-dose effect". J Prev Alz Dis.2016; 3:219-28. Selkoe DJ, Hardy J. The amyloid hypothesis of Alzheimer’s disease at 25 years. EMBO Mol Med 2016; 8:595-608.

[0015] ALZ-801 je valinski konjugat tramiprozata koji je optimizovan radi poboljšanih farmakokinetičkih svojstava i gastrointestinalne podnošljivosti. Studije hronične toksikologije koje su bile potrebne za napredovanje ALZ-801 do Faze 3 su dovršene, uključujući karakterizaciju nekliničke bazbednosti ALZ-801, i bezbednosni most do obimnih podataka za nekliničku toksikologiju i bezbednost za tramiprozat. Oralni ALZ-801 je dobro podnošen i u 1-mesečnim i 6-mesečnim studijama sa pacovima pokazao je NOAEL od 2.000 mg/kg i 1.500 mg/kg, tim redom. Nalazi iz ADME studija kod životinja i ljudi pokazuju da se ALZ-801 brzo apsorbuje nakon oralnog davanja, i brzo pretvara u tramiprozat, što dovodi do suštinski poboljšane isporuke tramiprozata u mozak. Videti Hey et al., Clinical Pharmacokinetics and Safety of ALZ-801, a Novel Prodrug of Tramiprosate in Development for the Treatment of Alzheimer’s Disease. Clin Pharmacokinetics 2018; 315-333 i Kocis et al., Elucidating the Abeta42 Anti-Aggregation Mechanism of Action of Tramiprosate in Alzheimer’s Disease: Integrating Molecular Analytical Methods. Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509. Izloženosti plazme za tramiprozat u plazmi mogu se porediti kada se ekvimolarne doze ALZ-801 i tramiprozata daju životinjama. I ALZ-801 i tramiprozat imaju konzistentan poluživot eliminacije u plazmi po vrstama posle ponovljenih oralnih doza ALZ-801, što ukazuje na odsustvo potencijala za akumulaciju nakon hroničnog doziranja. Posle pretvaranja ALZ-801 u tramiprozat, tramiprozat se kod ljudi, miševa, pacova, pasa i mini svinja konzistentno metaboliše in vivo u jedan veći metabolit, 3-sulfopropansku kiselinu (3-SPA). Nisu uočene nikakve dalje metaboličke ili CYP interakcije za 3-SPA, i eliminacija tramiprozata, kao i 3-SPA, kod ljudi, kao i kod životinja, odvija se putem bubrega. Šematski prikaz je pokazan na SL.1.

[0016] Sada smo utvrdili prisustvo 3-SPA u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) i plazmi normalnih subjekata koji nisu uzimali lek. Videti, npr., SL.2. Kao što je razmotreno u odeljku sa primerima u nastavku teksta, ti rezultati se proširuju na subjekte sa kognitivnim oštećenjem (npr., MMSE opseg od 15–30). U naknadnim studijama in vitro za procenu efekta 3-SPA na obrazovanje oligomera anti-Aβ42, uočili smo da 3-SPA inhibira obrazovanje oligomera Aβ42 na način koji je se kvalitativno i kvantitativno može porediti sa tramiprozatom. Videti, npr., SL. 3, SL. 4, i Tabelu 3. Ovde su predstavljena i dalje opisana poređenja molekulskih interakcija tramiprozata i 3-SPA sa Aβ42. Videti, npr., SL.5.

[0017] Takođe smo identifikovali obrnutu korelaciju između koncentracije 3-SPA u CSF i ozbiljnosti kognitivnog oštećenja. Na primer, kako se ozbiljnost AB smanjuje (kako je određivano povećanjem MMSE skorova), u CSF se pronalaze veće koncentracije 3-SPA. Videti SL 6. Uzeto zajedno sa našim nalazima da 3-SPA inhibira obrazovanje oligomerā Aβ42 na način koji se kvalitativno i kvantitativno može porediti sa tramiprozatom, taj trend sugeriše da 3-SPA doprinosi zaštitnim efektima protiv AB i/ili smanjuje verovatnoću progresije bolesti.

[0018] Stoga, u slučajevima kada je koncentracija 3-SPA kod subjekta ispod određenog bazalnog nivoa/praga (kao ispod vrednosti koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF koja je određena za MMSE od 30 u najboljem uklapanju nasumične populacije subjekata sa Alchajmerovom bolešću), isporuka ili dopunjavanje većih koncentracija 3-SPA obezbeđuje terapijski pristup za sprečavanje ili svođenje na minimum kognitivnog pada i progresije neurodegenerativne bolesti, npr., AB. Uz to, održavanje većih koncentracija 3-SPA može sprečiti kognitivni pad, npr., sprečiti AB.

[0019] U skladu sa tim, u prvom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji kognitivnog pada ili Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno.

[0020] U drugom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji demencije kod subjekta kome je to potrebno. U trećem izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno.

[0021] Subjekti prema predmetnom pronalasku mogu biti stratifikovani (tj., dalje birani) po svojim MMSE skorovima pre lečenja. U četvrtom izvođenju, na primer, subjekat koji je lečen u ovde opisanim izvođenjima ima MMSE skor veći od 19 (npr., veći od 20, veći od 21, veći od 22, veći od 23, veći od 24, veći od 25, ili veći od 26) pre lečenja. U sledećem aspektu, subjekat koji se leči u ovde opisanim izvođenjima ima MMSE skor od 16 do 30 (npr., MMSE skor od 22 do 30, MMSE skor od 22 do 28, MMSE skor od 16 do 19, MMSE skor od 18 do 26, MMSE skor od 20 do 26, ili MMSE skor od 22 do 26) pre lečenja.

[0022] Pored MMSE skora, subjekat takođe može imati određene genetičke faktore kao što je prisustvo APOE4 alela (npr., homo- ili heterozigot za APOE4) ili imati druge amiloidne markere kao što je prisustvo amiloida u mozgu, ili oba. Ovde opisani subjekti takođe mogu imati najmanje jedan ε4 alel APOE. Na primer, u petom izvođenju, subjekat koji se leči u ovde opisanim izvođenjima jeste APOE4 heterozigot pre lečenja. Alternativno, u šestom izvođenju, subjekat koji se leči u ovde opisanim izvođenjima je APOE4 homozigot pre lečenja. Termini „heterozigot za APOE4“ i „APOE4 heterozigot“ upotrebljavaju se naizmenično i odnose se na subjekte koji imaju jedan APOE4 alel. Termin „homozigot za APOE4“, „APOE4 homozigot“, „homozigot za APOE4/4“ i „APOE4/4 homozigot“ se upotrebljavaju naizmenično i odnose se na subjekte koji imaju dva APOE4 alela. U jednom specifičnijem aspektu šestog izvođenja, subjekat se bira za lečenje ukoliko je on ili ona APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22–28.

[0023] U sedmom izvođenju, subjekat je, npr., subjekat koji ima AB ili demenciju usled traume glave.

[0024] U osmom izvođenju, subjektu u sedmom izvođenju je potrebna prevencija ako je prisutno jedno ili više od sledećih: a) nivo 3-SPA kod subjekta je ispod unapred određenog bazalnog praga; b) subjekat ima najmanje jedan ApoE4 alel; ili c) subjekat ima porodičnu istoriju Alchajmerove bolesti. Alternativno, subjektu u sedmom izvođenju je potrebna prevencija ako je prisutno jedno ili više od sledećeg: a) nivo 3-SPA kod subjekta je ispod unapred određenog bazalnog praga; b) subjekat ima najmanje dva ApoE4 alela; ili c) subjekat ima porodičnu istoriju Alchajmerove bolesti.

[0025] U devetom izvođenju, ovde je obezbeđena kompozicija prema pronalasku za upotrebu u prevenciji demencije kod subjekta koji ima AB ili demenciju usled traume glave.

[0026] U desetom izvođenju, demencija u drugom izvođenju povezana je sa povredom glave (npr., traumom glave). Do povrede glave dolazi kada spoljašnja sila udari u glavu dovoljno snažno da izazove silovito pomeranje mozga unutar lobanje. Ta sila može prouzrokovati protresanje, uvrtanje, podlive (kontuziju), ili naglu promenu u kretanju mozga (potres mozga). Razumeće se da čak i relativno blage povrede glave mogu izazvati produžene ili trajne padove u kogniciji.

[0027] U jedanaestom izvođenju, demencija u drugom izvođenju je povezana sa povredom glave i subjektu u drugom izvođenju je potrebna prevencija ako je nivo 3-SPA kod subjekta ispod unapred određenog bazalnog praga.

[0028] U jednom aspektu, koncentracija 3-SPA prisutna kod subjekta određuje se iz uzorka cerebrospinalne tečnosti. Prema tome, u jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA kod subjekta je bazalna koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) subjekta dobijena pre ispoljavanja simptoma AB i/ili u vreme kada je subjektov MMSE bio 30.

[0029] „Unapred određen bazalni prag“, „unapred određen bazalni nivo“, ili „određeni bazalni nivo“ prema predmetnom pronalasku upotrebljavaju se naizmenično i odnose se na jedno ili više od sledećeg: (1) vrednost koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF utvrđenu za MMSE od 30 u liniji najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj populaciji subjekata sa Alchajmerovom bolešću različitih stepena ozbiljnosti („nasumična AB populacija“); (2) najveću koncentraciju (± 10%) 3-SPA u CSF utvrđenu u nasumičnoj AB populaciji za MMSE ≤ 29; (3) subjektovu sopstvenu koncentraciju (± 5%) 3-SPA u CSF utvrđenu pre ispoljavanja bilo kakvih simptoma AB; (4) prosečnu koncentraciju (± 5%) 3-SPA u CSF utvrđenu u normalnoj (ne-AB) populaciji odgovarajuće starosne dobi; (5) za izvođenja u kojima se subjekti dalje biraju po vrednostima unutar opsega MMSE skorova, na veće od: (a) vrednosti koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF utvrđene za MMSE od 30 postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj AB populaciji; ili (b) najveće koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF utvrđene u nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove koji su jednaki ili iznad najnižeg MMSE skora u opsegu izbora (npr., ako izbor zahteva MMSE skor između 22–28, onda je (b) najveća koncentracija (± 10%) 3-SPA u CSF utvrđena u nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove koji su jednaki ili iznad 22); (6) vrednost koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF za MMSE skor subjekta kao što je utvrđeno postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj populaciji subjekata. Ukoliko nije drugačije naznačeno, vrednost unapred određenog bazalnog praga dobijenog pomoću bilo kog od prethodnih parametara, može se smanjiti ili povećati za do 10% kako bi se u manjem ili većem stepenu uključili subjekti koji će biti lečeni, i da bi se smanjio broj lažno pozitivnih ili lažno negativnih. Nasumična populacija subjekata sa Alchajmerovom bolešću je nasumično izabran uzorak AB pacijenata prema stepenu ozbiljnosti njihove Alchajmerove bolesti (npr., po stepenu kognitivog pada ili prema njihovom MMSE skoru), starosti, težini, opštem zdravstvenom stanju, polu, ishrani i sličnom, a može obuhvatati, npr., najmanje 10, najmanje 15, najmanje 20, najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 500, najmanje 1000 subjekata. U jednom aspektu, međutim, populacija subjekata je prosečne starosti od 85 godina ili manje. U drugom aspektu, populacija subjekata je prosečne starosti od 65–85 godina. U još nekim drugim aspektima, populacija subjekata je prosečne starosti od 58 godina ili više. U pojedinim aspektima, kada kriterijumi izbora dodatno uključuju ApoE4 status, nasumična populacija subjekata sa Alchajmerovom bolešću različitih stepena ozbiljnosti iz kojih treba izvoditi liniju najboljeg uklapanja ili utvrditi najviši nivo koncentracije 3-SPA u CSF ograničena je na one AB subjekte koji imaju isti ApoE4 status kao kriterijum za izbor prema ApoE4 statusu.

[0030] U jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA prema predmetnom pronalasku definisan je kao koncentracija 3-SPA kod subjekta od manje od 25 ng/ml (npr., manje od 20 ng/ml, manje od 15 ng/ml, manje od 12 ng/ml, manje od 10 ng/ml, manje od 8 ng/ml, manje od 6 ng/ml, manje od 5 ng/ml, manje od 4 ng/ml, manje od 3 ng/ml, manje od 2,9 ng/ml, manje od 2,8 ng/ml, manje od 2,7 ng/ml, manje od 2,6 ng/ml, manje od 2,5 ng/ml, manje od 2,4 ng/ml, manje od 2,3 ng/ml, manje od 2,2 ng/ml, manje od 2,1 ng/ml, manje od 2,0 ng/ml). U drugim aspektima, unapred određen bazalni prag 3-SPA definisan je kao koncentracija 3-SPA kod subjekta od između 2,0 ng/ml i 25 ng/mL (npr., između 7 ng/ml i 25 ng/mL, između 8 ng/ml i 25 ng/mL, između 9 ng/ml i 25 ng/mL, između 6 ng/ml i 24 ng/mL, ili između 6 ng/ml i 23 ng/mL).

[0031] U jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA prema predmetnom pronalasku definisan je kao subjekat koji ima MMSE skor od 22–28 ili MMSE skor od 22–26; a koncentracija 3-SPA (npr., u CSF) je manja od 5 ng/mL, manja od 4 ng/ml, manja od 3 ng/ml, manja od 2,9 ng/ml, manja od 2,8 ng/ml, manja od 2,7 ng/ml, manja od 2,6 ng/ml, manja od 2,5 ng/ml, manja od 2,4 ng/ml, manja od 2,3 ng/ml, manja od 2,2 ng/ml, manja od 2,1 ng/ml, ili manja od 2,0 ng/ml. U drugim aspektima, unapred određen bazalni prag 3-SPA prema predmetnom pronalasku definisan je kao subjekat koji ima MMSE skor od 22–28 ili MMSE skor od 22–26 i koncentraciju 3-SPA (npr., u CSF) od 2–4 ng/mL.

[0032] U dvanaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju subjekta koji pati od AB, gde subjekat ima MMSE skor od 30, homozigot je za APOE4 i ima abnormalnosti u rezultatima FCSR testa memorije koji ukazuju na MCI. Za klasifikaciju abnormalnosti u rezultatima FCSR, videti, npr., E. Grober, R.B Lipton, C. Hall et al; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0033] U trinaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koje obuhvata:

a) biranje subjekta koji ima MMSE skor od 22–28; i

b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0034] U četrnaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koje obuhvata:

a) biranje subjekta koji je APOE4 homozigot ili APOE4 heterozigot; i

b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0035] U petnaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koje obuhvata:

a) biranje subjekta koji ima MMSE skor od 22–28 i jeste APOE4 homozigot ili APOE4 heterozigot; i b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0036] U nekim aspektima trinaestog do četrnaestog izvođenja, subjekat se bira ako ima MMSE skor od 22–26. U nekim aspektima trinaestog do četrnaestog izvođenja, subjekat se bira ako je APOE4 homozigot. U nekim aspektima trinaestog do četrnaestog izvođenja, subjekat se bira ako je APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22–28. U nekim aspektima trinaestog do četrnaestog izvođenja, subjekat se bira ako je APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22–26.

[0037] U šesnaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koje obuhvata: a) biranje subjekta koji ima MMSE skor veći od 19 (npr., veći od 20, veći od 21, veći od 22, veći od 23, veći od 24, veći od 25, ili veći od 26) pre lečenja; i davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U sledećem aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koje obuhvata: a) biranje subjekta koji ima MMSE skor od 16 do 30 (npr., MMSE skor od 22 do 30, MMSE skor od 22 do 28, MMSE skor od 16 do 19, MMSE skor od 18 do 26, MMSE skor od 20 do 26, ili MMSE skor od 22 do 26) pre lečenja; i davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0038] U sedamnaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji AB koja obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0039] U osamnaestom izvođenju, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji pada u kogniciji kod subjekta koji je asimptomatski, ali koji je pod rizikom za AB ili kognitivni pad, koja obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno efektivne količine jedinjenja formule

Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Subjekti koji su pod rizikom uključivali bi, npr., prisustvo APOE4/4 (ili i APOE4 i APOE4/4), poodmaklu dob, ili obrazac porodičnog kognitivnog pada, ili kombinaciju dva ili više od prethodno navedenog.

[0040] U pogledu prevencije AB ili prevencije pada u kogniciji kod subjekta koji je asimptomatičan, ali koji je pod rizikom od AB ili kognitivnog pada, postavili smo hipotezu na osnovu podataka prikazanih u nastavku teksta da je 3-SPA uvek aktivan u mozgu i da sprečava ili inhibira obrazovanje toksičnih oligomera. Prema tome, što je niža količina 3-SPA, to je veća podložnost subjekta da razvije kognitivni pad, ili da ga razvije ranije. Davanje jedinjenjā kao što su ona koja su opisana ovde trebalo bi da proizvede više 3-SPA u mozgu. To bi zauzvrat trebalo da uspostavi konzistentnu i/ili pojačanu inhibiciju Aβ oligomera i na taj način dovede do prevencije AB ili pada u kogniciji.

[0041] Termini „subjekat“ ili „pacijent“ se upotrebljavaju naizmenično. U jednom aspektu, subjekat je čovek. U pojedinim aspektima, subjekat je čovek starosti 85 godina ili manje. U drugim aspektima, subjekat je čovek starosti 65–85 godina. U još nekim drugim aspektima, subjekat je čovek starosti 58 godina ili više.

[0042] 3-sulfopropanska kiselina i 3-SPA se upotrebljavaju naizmenično i odnose se na jedinjenje koje ima strukturu

kao i mono-

ili dijonske

oblike soli, gde je X<+>jon suprotnog naelektrisanja, kao što je natrijum.

[0043] Kako se upotrebljava ovde, termini „lečiti“, „koji leči“ ili „lečenje“ označavaju preokretanje, ublažavanje ili inhibiranje progresije neurodegenerativne bolesti kao što je AB, ili jednog ili više od pridruženih simptoma.

[0044] Faktori za određivanje da li subjekat pati od AB uključuju, npr., jedan ili više MMSE skorova subjekta, prisustvo amiloida u mozgu (npr., utvrđeno PET snimanjem), CDR skor subjekta, rezultate FCSR testa memorije koji su u skladu sa blagim kognitivnim oštećenjem, ili identifikovanje moždanih biomarkera za amiloid u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF), kao što su Abeta-40, Abeta-42, tau protein, ili Abeta oligomeri, ili njihove kombinacije. Na primer, subjekat pati od AB ako: 1) subjekat je homozigot za APOE4 i ima kognitivne simptome; 2) subjekat je homozigot za APOE4 i ima subjektivna oštećenja pamćenja, MCI, ili MMSE od 30, a postoji odstupanje i u FCSR testu; 3) subjekat je homozigot za APOE4 i ima rane simptome AB kao što su MCI ili MMSE od 26–30 i globalni CDR skor od 0,5; 4) subjekat je heterozigot za APOE4 i ima MMSE manji od 20; 5) subjekat je heterozigot za APOE4 i ima MMSE od 20 ili više, i subjekat ima amiloid u mozgu, što se utvrđuje pomoću jednog ili više postupaka opisanih ovde (npr., PET snimanjem ili biomarkerima u CSF izabranim od Abeta-40, Abeta-42 i tau proteina, ili za Abeta oligomere); ili 6) subjekat je APOE4 negativan i subjekat ima MMSE skor od 20 ili više, ili MMSE skor manji od 20, i subjekat ima amiloid u mozgu, što se utvrđuje pomoću jednog ili više postupaka opisanih ovde (npr., PET snimanjem ili biomarkerima u CSF izabranim od Abeta-40, Abeta-42 i tau proteina, ili za Abeta oligomere). Za klasifikaciju odstupanja u FCSR testu videti, npr., E. Grober, R.B Lipton, C. Hall et al; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0045] „Efektivna količina“ ili „efektivna doza“ je količina jedinjenja koja je dovoljna za lečenje neurodegenerativne bolesti kao što je AB. Efektivne količine mogu varirati, kao što prepoznaje osoba uobičajene stručnosti u oblasti tehnike, u zavisnosti od npr., ozbiljnosti neurodegenerativne bolesti, načina davanja, pola, starosti i opšteg zdravstvenog stanja pacijenta, upotrebe ekscipijenasa, mogućnosti istovremene upotrebe sa drugim terapijskim tretmanima, kao što je upotreba drugih sredstava, a shodno proceni ordinirajućeg lekara ili drugog medicinskog osoblja. Primeri efektivnih količina jedinjenja korisnih u postupcima koji su opisani ovde obezbeđeni su u nastavku teksta. U nekim aspektima, efektivna količina je količina koja povećava koncentraciju 3-SPA u CSF iznad unapred određenog bazalnog praga. U specifičnijim aspektima, efektivna količina je količina koja povećava koncentraciju 3-SPA u CSF do 1,1 X, 1,2 X, 1,3 X, 1,4 X, 1,5 X, 2 X, 2,5 X, 3 X, 4 X, 5 X, ili više od unapred određenog bazalnog praga.

[0046] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ je so bazne grupe (npr., amino grupe) ili kisele grupe (npr., sulfonske kiseline) jedinjenja opisanih ovde. Ilustrativne soli bazne grupe uključuju, ali nisu ograničene na njih, sulfatne, citratne, acetatne, oksalatne, hloridne, bromidne, jodidne, nitratne, bisulfatne, fosfatne, kisele fosfatne, izonikotinatne, laktatne, salicilatne, kisele citratne, tartratne, oleatne, tanatne, pantotenatne, bitartratne, askorbatne, sukcinatne, maleatne, gentizinatne, fumaratne, glukonatne, glukoronatne, saharatne, formatne, benzoatne, glutamatne, metansulfonatne, etansulfonatne, benzensulfonatne, p-toluensulfonatne, kamforsulfonatne i pamoatne (tj. 1,1 '-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat)) soli. Ilustrativne soli kisele grupe uključuju, ali nisu ograničene na njih, soli litijuma, natrijuma, kalijuma, kalcijuma, magnezijuma, aluminijuma, hroma, gvožđa, bakra, cinka, kadmijuma, amonijuma, guanidinijuma, piridinijuma i organske amonijumske soli.

[0047] „Farmaceutski prihvatljiv“ se odnosi na lekove, medikamente, insertne sastojke itd. koje ovaj termin opisuje, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez nepotrebne toksičnosti, nekompatibilnosti, nestabilnosti, iritacije, alergijskog odgovora i sličnog, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika. U jednom aspektu, farmaceutski prihvatljiv se odnosi na jedinjenje ili kompoziciju koju je odobrila ili može odobriti regulatorna agencija savezne ili državne vlade ili koje je navedeno u Farmakopeji SAD ili drugoj opštepriznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a posebno kod ljudi.

[0048] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosač“ se odnosi na netoksičan nosač, adjuvans ili rastvarač koji ne uništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisan. Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se mogu upotrebljavati u ovde opisanim kompozicijama uključuju, ali nisu ograničeni na njih, jonoizmenjivače, aluminu, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne mešavine zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidna silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilenski blok polimeri, polietilen glikol i mast vune.

[0049] Ovde opisane kompozicije se mogu davati oralno, parenteralno, putem spreja za inhalaciju, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Termin „parenteralno“, kako se upotrebljava ovde, uključuje supkutane, intravenske, intramuskularne, intraartikularne, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intrahepatične, intralezijske i intrakranijalne tehnike ubrizgavanja ili infuzije. Ovde su uključeni tečni dozni oblici, preparati za ubrizgavanje, oblici u vidu čvrstih disperzija i dozni oblici za topikalno ili transdermalno davanje jedinjenja. U jednom aspektu, davanje je oralno.

[0050] Postupci davanja mogu upotrebljavati količinu i put davanja koji je efektivan za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti koja je opisana ovde. Tačna potrebna količina će varirati od subjekta do subjekta, u zavisnosti od vrste, starosti i opšteg stanja subjekta, kao i od težine infekcije, određenog sredstva, načina njegovog davanja i sličnog. Obezbeđena jedinjenja su poželjno formulisana u jediničnom doznom obliku radi lakog davanja i uniformnosti doziranja. Na primer, obezbeđena jedinjenja mogu biti formuisana tako da se pacijentu koji prima ove kompozicije može dati doza jedinjenja između 0,01–100 mg/kg telesne mase/dan. Izraz „jedinični dozni oblikˮ, kako se upotrebljava ovde, odnosi se na fizički diskretnu jedinicu sredstva koja je prikladna za pacijenta koji će biti lečen. Razumeće se, međutim, da će o ukupnoj dnevnoj upotrebi jedinjenjā i kompozicija iz predmetnog prikaza odlučivati ordinirajući lekar u skladu sa Dobrom medicinskom praksom. Specifičan efektivni dozni nivo za svakog posebnog pacijenta ili organizam zavisiće od različitih faktora, uključujući poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja; aktivnost specifičnog jedinjenja koje se koristi; specifičnu kompoziciju koja se koristi; starost, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol i ishranu pacijenta; vreme davanja, put davanja i stopu izlučivanja specifičnog jedinjenja koje se koristi; trajanje lečenja; lekove koji se upotrebljavaju u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se koristi; i slične faktore koji su dobro poznati u medicinskoj oblasti tehnike.

[0051] Takođe bi trebalo razumeti da će specifični režimi doziranja i lečenja za svakog posebnog pacijenta zavisiti od različitih faktora, uključujući starost, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme davanja, stopu izlučivanja, kombinaciju lekova, procenu ordinirajućeg lekara i ozbiljnost određene bolesti koja se leči. Količina obezbeđenog jedinjenja u kompoziciji takođe će zavisiti od određenog jedinjenja u kompoziciji. Primeri režima su obezbeđeni u nastavku teksta.

PRIMERI

1. Postupci

Prikupljanje i obrada uzoraka humane CSF

[0052] Individualni uzorci CSF su dobijeni iz 64 subjekta muškog i ženskog pola sa kognitivnim oštećenjem (MMSE opsega od 15–30) usled raznovrsnih neurodegenerativnih bolesti (opisne karakteristike sumirane su u Tabeli 1). Ti pacijenti su bili upućeni u Centar za kogniciju na Odeljenju za neurologiju Karlovog univerziteta, 2. Medicinskog fakulteta i Univerzitetske bolnice Motol, Prag, Češka Republika. Ta 64 uzorka su dobijena iz pacijenata kod kojih su klinički dijagnostifikovana sledeća stanja: Alchajmerova demencija (AB demiencija; n=14), blago kognitivno oštećenje usled AB (MCI usled AB, n=20), mešana demencija (n=3), bolest Levijevih tela (LBD; n=1), frontotemporalna lobarna degeneracija (FTLD; n=18), blago kognitivno oštećenje druge etiologije (ostali MCI; n=7) i progresivna supranuklearna paraliza (n=3). Vaskularna bolest je razmatrana kada su na MRI bile prisutne konfluentne vaskularne promene (Fazekasova skala 2 i 3). Izvlačeno je po 12 ml CSF, lumbalnom punkcijom u ležećem položaju, a između tela L3-L5 pršljenova, pomoću atraumatske igle. Lumbalna punkcija je rađena između 8 i 11 sati ujutro, odmah nakon uzimanja uzorka seruma. CSF je prebacivana u laboratoriju za CSF, koja se nalazila na istom spratu, gde je vršeno centrifugiranje od 5 minuta na 2000 o/min, na sobnoj temperaturi. Nakon centrifugiranja, CSF je alikvotan pomoću epruveta od 0,5 ml i odmah je uskladišten na -80 °C. Za uzorkovanje i skladištenje CSF su upotrebljavane samo polipropilenske epruvete. Vreme obrade između vađenja CSF, centrifugiranja i zamrzavanja je standardizovano i ukupno nije prelazilo 45 minuta.

[0053] Uzorci su uzimani iz zamrzivača i otpremani na suvom ledu u kompaniju Nextcea Inc (Woburn, MA), a nakon prijema, čuvani su u zamrzivaču koji je bio podešen tako da se održava -80 °C. Prikupljanje i skladištenje CSF su obavljani nakon što su subjekti potpisali informisani pristanak koji je bio u skladu sa etičkim smernicama u Češkoj Republici i sa dobrom kliničkom praksom, kao i u skladu sa široko priznatim konsenzusnim protokolom za standardizaciju prikupljanja i biobankinga CSF (Viola et al., Amyloid β oligomers in Alzheimer’s disease pathogenesis, treatment, and diagnosis. Acta Neuropathol 2015; 129:183-206; i Vanderstichele et al., Standardization of preanalytical aspects of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer’s disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer’s Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65-73). Komercijalni ELISA kompleti (Innogenetics NV, Gent, Belgija) upotrebljeni su za analize biomarkera demencije (Aβ1-42, tau proteina i fosfo-tau), a kao granične vrednosti za isključivanje upotrebljavane su vrednosti izvedene iz validacione studije. Koncentracije 3-SPA u CSF su kvantifikovane i kod 12 pacijenata koji su primali dozu tramiprozata od 150 mg dva puta dnevno, u 78. nedelji Faze 3 Severnoameričkog ispitivanja AB.

Identifikacija i kvantifikacija 3-SPA u humanoj CSF pomoću LC-MS/MS postupka

[0054] Analizu uzoraka CSF uradila je kompanija Nextcea, pomoću LC-MS i LC-MS/MS postupaka. Nextcea je na analizu primila ukupno 64 humana uzorka CSF.

Derivatizacija i LC-MS/MS postupak

[0055] Referentni 3-SPA materijal i uzorci humane CSF su mešani sa N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil) karbodiimidom (EDC) i 2,2,2-trifluoro etilaminom (TFEA). Uzorci su zatim vorteksovani i ostavljeno je da se reakcija odvija na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Reakcione smeše su dalje centrifugirane na 4500 o/min tokom 5 minuta. Supernatant je prebačen u novu ploču za analizu. 3-SPA je identifikovan i okarakterisan pomoću LC-MS i LC-MS/MS. Uzorci su ubrizgavanjem nanošeni na AQUASIL kolonu od 5 µm, 50 x 2,1 mm kompanije Thermo Scientific, pomoću autoinjektora i UPLC pumpe kompanije Shimadzu. Mobilna faza A je bila 0,1% trifluorosirćetna kiselina u vodi (v/v). Mobilna faza B je bila 0,1% mravlja kiselina u 90/10 acetonitrila/vode (v/v). Brzina protoka je iznosila 0,35 mL/min. Ukupno vreme rada po uzorku je iznosilo 4 min. Za detekciju je upotrebljavan API 6500 trostruki kvadrupolni maseni spektrometar. Podaci su dobijani u negativnim LC-MS i LC-MS/MS režimima rada. Reprezentativni hromatogrami za 3-SPA u sirovom nativnom materijalu i humanoj CSF derivatizovanoj sa EDC i TFEA prikazani su na SL.7, SL.8 Panel A i SL.8 Panel B. LC-MS i LC-MS/MS podaci dobijani su pomoću softvera Analyst (AB Sciex, Foster City, CA). LOQ za LC-MS/MS postupak iznosio je 0,1 ng/ml, a dinamički opseg je bio od 0,1 do 1000 ng/ml (r=0,99688 i % CV od 5,8% ± 2,0; podaci u fajlu).3-SPA je identifikovan u humanoj CSF usklađivanjem hromatografskog retencionog vremena i ko-elucije tranzicionih jona u LC-MS/MS sa autentičnim 3-SPA referentnim standardom (sintetisanim od strane kompanije Paraza Pharma, Montreal, Kanada).

Molekulsko modelovanje i simulacije molekulske dinamike za 3-SPA

[0056] Celokupno molekulsko modelovanje je urađeno pomoću Šredingerovog paketa (Schrödinger Suite, 2015-3; Schrödinger, LLC, New York, NY). Simulacije molekulske dinamike su vršene pomoću programa Desmond. Videti Vanderstichele et al. Standardization of preanalytical aspects of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer’s disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer’s Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65-73. Simulacije su rađene na karticama GeForce GTX Titan Black GPU (grafička procesorska jedinica). Za modelovanje svih interakcija upotrebljeno je OPLS 3.0 (Optimizovani potencijal za simulacije tečnosti) polje sile (Hort et al., The liquor tau protein and beta amyloid in Alzheimer’s disease. Cesk Slov Neurol N 2007; 70(1):30-36), a SPC model je upotrebljavan za vode. Kao polazna tačka za simulacije molekulske dinamike upotrebljena je 1IYT Aβ42 NMR struktura iz Proteinske banke podataka (PDB). Ova struktura je prvenstveno tipa alfa zavojnice i reprezentativna je za peptid u apolarnom okruženju. Polje od 20 Angstrema za vodu ili mešavinu rastvarača, za 1% 3-SPA u vodi, opcrtano je oko peptida pomoću alata za podešavanje Šredingerovog sistema. Radi neutralizacije naelektrisanja celokupnog sistema, dodati su i joni. Simulacije su uravnotežene i propuštene pod NPT uslovima (konstantan broj (N), pritisak (P) i temperatura (T) sa periodičnim graničnim uslovima. Za kontrolu temperature i pritiska su upotrebljavani Nos-Huverov (Nos-Hoover) termostat i Martina-Tobajas-Klajnov (Martina-Tobias-Klein) barostat, tim redom. Simulacije su rađene u 3 ponavljanja, pri čemu je trajanje svakog iznosilo 100 nanosekundi, nakon čega su rezultati prikupljeni za analizu. Analiza glavnih komponenata vršena je pomoću programa ProDy (Shivakumar et al., Improving the Prediction of Absolute Solvation Free Energies Using the Next Generation OPLS Force Field. J. Chem. Theory Comput 2012; 8:2553-8), pa su podaci unošeni u grafike pomoću prilagođenih Pajton (Python) skripti.

Masena spektrometrija pokretljivosti jona (IMS MS)

[0057] Uslovi upotrebljavani za masenu spektrometriju, pomoću Synapt G2-S uređaja kompanije Waters, bili su sledeći: pozitivan polaritet režima osetljivosti, kapilara = 2.5 kV, nebulizator = 2 mbar, temperatura izvora = 80 °C, temperatura desolvatacije = 60 °C, podešavanje konusa za uzorak = 35 V, podešavanje pomeraja izvora = 60 V, i opseg mase = 500 do 4000 m/z. Ti uslovi su održavani tokom čitave studije da bi se osigurala konzistentnost podataka i da bi se izbegao uticaj na detekciju oligomerā usled preferencijalnih uslova jonizacije.

[0058] Uzorci su nanošeni u maseni spektrometar direktnom infuzijom, pri brzini protoka od 10 µL/min, pomoću Protea PM-1000 špric pumpe i Hamilton šprica od 1 mL. Snimanje podataka za amiloidni peptid vršeno je pomoću Synapt G2-S kvadrupolnog masenog spektrometra kompanije Waters sa analizatorom na bazi vremena preleta jona (Q-TOF MS) i sa pokretljivošću jona tipa putujućih talasa (Waters Corp., Milford, MA). Podaci su snimani pomoću režima osetljivosti sistema koji omogućava detekciju manje zastupljenih oligomera. Uzorci su nanošeni infuzijom na sobnoj temperaturi. IMS MS studije su urađene u kompaniji Protea, Inc. (Morgantown, WV).

Priprema uzorka

[0059] U 200 mL Optima vode LC/MS stepena čistoće (kat. br. W6-1) kompanije Fisher, rekonstituisan je 1 mg rekombinantnog humanog Aβ42 peptida kompanije BioLegend (čistoća 99%, kat. br.843801) i smeša je snažno vorteksovana tokom 2 minuta da bi se peptid solubilizovao dajući rastvor koncentracije od 5 mg/mL. Uzorci su pre inkubacije razblaženi do finalne koncentracije od 22 pmol/μL. Smeše uzoraka su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 0, 4 i 24 sata. Nakon što je snimanje inkubiranih uzoraka završeno, sirovi podaci su analizirani pomoću MassLynx v2.4 paketa kompanije Waters sa programom DriftScover v2.7 da bi se vizualizovala vremena pomeraja za peptid.

Karakterizacija Aβ42 vrsta

[0060] Karakterizacija Aβ42 vrsta pomoću IMS MS rađena je direktnom infuzijom od 22 pmol/μL u vodi. Peptid je pripreman u vodi da bi se održala konformacija nativnog stanja peptida, a snimanje podataka za pokretljivost jona vršeno je da bi se detektovale i okarakterisale konformacione promene monomera u nativnom stanju, kao i bilo kojih oligomera koji su se mogli obrazovati tokom inkubacije

IMS MS studija vezivanja za 3-SPA

[0061] Snimanje podataka za Aβ42 peptid vršeno je pomoću Synapt G2-S kvadrupolnog masenog spektrometra kompanije Waters sa analizatorom na bazi vremena preleta jona (Q-TOF MS) i sa pokretljivošću jona tipa putujućih talasa (Waters Corp., Milford, MA). Podaci su snimani pomoću režima osetljivosti sistema koji omogućava detekciju manje zastupljenih oligomera. Uzorci su nanošeni infuzijom na sobnoj temperaturi, kao što je prethodno navedeno.

[0062] U 1 mL Optima vode LC/MS stepena čistoće kompanije Fisher (kat br. W6-1) rekonstituisan je 1 mg 3-SPA i smeša je snažno vorteksovana tokom 2 minuta, do njegovog potpunog rastvaranja. Uzorak je zatim razblažen da bi se napravio rastvor od 220 pmol/µL i 22.000 pmol/µL, a da bi se dobio 100-struki i 1.000-struki molarni višak za eksperimente vezivanja sa Aβ42 peptidom.

[0063] U 200 µL Optima vode LC/MS stepena čistoće kompanije Fisher rekonstituisan je 1 mg rekombinantnog humanog Aβ42 peptida i smeša je snažno vorteksovana da bi se peptid solubilizovao do rastvora od 5 mg/mL. Uzorci su pre inkubacije razblaživani do njihove finalne koncentracije. Smeše uzoraka su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 0, 4 i 24 sata, nakon čega je sledila analiza, kao što je prethodno opisano.

Farmakokinetika, oralna apsorpcija i izloženost mozga 3-SPA kod Sprag-Doli (SD) pacova

[0064] Oralna i iv farmakokinetika 3-SPA procenjivana je kod mužjaka Sprag-Doli (Sprague-Dawley) pacova nakon gladovanja, u dozi od 30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom (n=3 po grupama). Životinje su do eksperimenata gajene u standardom objektu, sa vodom i hranom koji su bili obezbeđeni ad libitum.3-SPA je rastvaran u fiziološkom rastvoru, davan je oralno gavažom, a intravenski u vidu bolusne injekcije. Serijski uzorci krvi (svaki od približno 1,0 mL) prikupljeni su iz svake životinje nakon 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 i 24 sata od davanja doze, u epruvete koje su sadržavale K2EDTA, nakon čega je plazma izdvojena centrifugiranjem. Uzorci plazme su čuvani na -80 °C do bioloških analiza.

[0065] Posebnoj grupi životinja je oralno data doza od 30 mg/kg, nakon čega su uzorci mozga, CSF i plazme prikupljeni žrtvovanjem nakon 1, 2, 6 i 24 sata (3 životinje za svaku vremensku tačku) radi biološke analize koncentracije 3-SPA u mozgu i CSF, kao i za procenu penetracije u mozak u odnosu na koncentracije u plazmi. Studija na živim životinjama urađena je u Agilux Laboratories (Worcester, MA), prateći standarde kvaliteta u skladu sa Dobrom laboratorijskom praksom. Biološke analize plazme, CSF i mozga pacova vršene su postupkom LC-MS/MS u Nextcea. Pre obrade mozga pacova za biološku analizu, mozgovi su perfundovani da bi se uklonila zaostala krv. Analize farmakokinetičkih podataka su sprovedene pomoću programa Winnonlin Professional v5.0.1 (Pharsight, Mountain View, CA).

2. Rezultati

Identifikacija i kvantifikacija 3-SPA u CSF kod subjekata koji nisu uzimali lek i AB pacijenata lečenih tramiprozatom

[0066] 3-SPA je identifikovan i kvantifikovan u humanoj CSF pomoću LC-MS/MS. Uzorci su pre analize derivatizovani sa EDC i TFEA. Tranzicioni joni u LC-MS/MS su izabrani za praćenje na osnovu 2-[(2,2,2-trifluoroetil)karbamoil]etan-1-sulfonske kiseline, jonskog spektra proizvoda derivatizovanog 3-SPA referentnog standarda. [M-H]- za 3-SPA je detektovan u humanoj CSF na m/z 234,1 u retencionom vremenu od 1,55 min. Strukturno podudaranje 3-SPA u humanoj CSF sa autentičnim uzorkom kao standardom urađeno je preklapanjem molekulskog pika kiseline, kao i molekulskih pikova derivata 2-[(2,2,2-trifluoroetil)-karbamoil]etan-1-sulfonske kiseline uključujući MS-MS obrazac fragmentacije, praćenjem dva LC-MS/MS tranziciona jona. Tranzicioni joni i retenciono vreme 3-sulfopropanske kiseline u humanoj CSF poklopili su se sa autentičnim referentnim standardom 3-sulfopropanske kiseline. Za kvantifikaciju su izabrani tranzicioni joni molekulskog pika dikiseline (234,1/80,9). LLOQ iz LC-MS/MS testa iznosio je 0,1 ng/mL za 3-SPA. Koncentracije 3-SPA u humanoj CSF obezbeđene su u Tabeli 1. U posebnoj analizi, prisustvo 3-SPA je takođe potvrđeno postupkom LC-MS/MS u uzorcima CSF subjekata koji nisu uzimali lek, pri čemu su ti uzorci dobijeni od Bioreclamation, Westbury, NY (n=27 i n=88, tim redom). Videti SL.2.

Tabela 1 – Koncentracije 3-SPA u humanoj CSF kod pacijenata sa memorijskim deficitima koji nisu uzimali lek

[0067] Nivoi 3-SPA kod pacijenata sa različitim bolestima koje oštećuju kogniciju, uključujući AB, bili su u opsegu od 4,15 do 27,7 nM (0,64–4,27 ng/ml) (Tabela 1). Kada se odnosi na koncentracije Aβ42 monomerā u CSF kod AB pacijenata (0,04 nM do 0,1 nM) (Bakan et al., ProDy: protein dynamics inferred from theory and experiments. Bioinformatics 2011; 27:1575-7; Shaw et al. Cerebrospinal fluid biomarker signature in Alzheimer’s disease neuroimaging initiative subjects. Ann Neurol 2009; 65:403-13; Pannee et al. Reference measurement procedure for CSF Abeta1-42 and the CSF Abeta1-42 /Abeta1-40 ratio - a crossvalidation study against Amyloid PET. J. Neurochem 2016; i Lambert et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous system neurotoxins. PNAS.1998; 95:6448-53), prisutan je višak 3-SPA od približno 40–700 u odnosu na solubilne Aβ42 monomere, što pripada opsegu u kome se, kod pojedinih pacijenata, može javiti delimična aktivnost tipa inhibicije agregacije Aβ anti-oligomera (Tabela 3). Nadalje, retrospektivne analize CSF u okviru podgrupe pacijenata iz Faze 3 ispitivanja tramiprozata takođe su procenjene na prisustvo 3-SPA, primarnog metabolita tramiprozata. Tabela 2 predstavlja deskriptivne sažetke koncentracija 3-SPA u CSF. Koncentracije metabolita su kvantifikovane kod 6 pacijenata za koje su bili dostupni uzorci CSF u 78. sedmici. Srednja koncentracija 3-SPA u CSF bila je 147 nM (opseg = 114,3– 235,8 nM), što predstavlja povećanje od 12,6 puta u odnosu na nivoe uočene kod pacijenata koji nisu uzimali lek.

Tabela 2 – Koncentracije 3-SPA u CSF (ng/mL) 78. sedmice u Fazi 3 Severnoameričkog kliničkog ispitivanja za tramiprozat

Anti-Aβ42 oligomerna aktivnost 3-SPA

[0068] Da bi se ispitala visoka konformaciona fleksibilnost Aβ42 i okarakterisala njegova interakcija sa 3-SPA, upotrebljavali smo masenu spektrometriju pokretljivosti jona (IMS), sa kvadrupolnim masenim spektrometrom sa analizaotorom na bazi vremena preleta (Q-TOF MS) i pokretljivošću jona tipa putujućih talasa. Dobijeni efekat modulacije konformacionog prostora Aβ je sprečavanje obrazovanja oligomera. Utvrdili smo ne samo zavisnost od koncentracije već i vremensku zavisnost tog anti-Aβ42 oligomernog efekta za 3-SPA, kao što je naznačeno na SL.3 i SL.4. Sažetak zavisnosti viška koncentracije 3-SPA u odnosu na Aβ42 predstavljen je u Tabeli 3. Molarni višak 3-SPA od 100 prema 1.000 puta u odnosu na Aβ42 doveo je do različitih profila podvrsta inhibicije obrazovanja Aβ42 oligomera. Aktivnost je takođe upoređena sa zavisnošću za iste viškove tramiprozata. Za 3-SPA je pokazana gotovo potpuna prevencija obrazovanja Aβ42 oligomerā osim pentamerā.

Tabela 3 – Poređenje anti-Aβ42 oligomerne aktivnosti za 3-SPA u odnosu na tramiprozat u višku od 100:1 i 1.000:1 odnosa jedinjenje : protein

[0069] Dok su funkcionalni krajnji rezultati, tj. inhibicija obrazovanja Aβ42 oligomera, isti za tramiprozat i njegov metabolit, 3-SPA, konformacioni pejzaž procesa nije. 3-SPA kao dianjon u fiziološkim uslovima reaguje sa katjonima, na aminokiselinskim bočnim lancima Aβ42 (SL.5). Navedeno su protonovane amino grupe Asp1, Lys16, Lys28, His13,14. U isto vreme, deluju odbojne sile 3-SPA dianjonskih i karboksilatnih grupa Aβ42. Ovo međudejstvo jonskih interakcija doprinosi znatnim konformacionim promenama monomernih vrsta Aβ42.

[0070] I MS podaci o pokretljivosti jona i molekulske dinamike (SL.3, 4, 7, 8 Panel A i 8 Panel B) prikazuju interakciju tipa višestrukog vezivanja liganda za 3-SPA sa Aβ42 monomerima.3-SPA stupa u interakciju sa Aβ42 preko različitih jonskih interakcija u odnosu na tramiprozat. Zanimljivo je i da iako koriste različite obrasce jonskog vezivanja, pod istim uslovima, podaci iz IMS MS i molekulskih dinamika pokazuju kvalitativno isti za anti-Aβ42 oligomerni rezultat za oba jedinjenja. Tramiprozat je pokazao potpunu inhibiciju obrazovanja Aβ42 oligomera nakon 24 sata in vitro, dok je 3-SPA pokazao iste rezultate sa izuzetkom inhibicije obrazovanja pentamerā u istoj vremenskoj skali. Međutim, detaljno ispitivanje vremenskog toka takođe pokazuje vremenski zavisan tok inhibicije oligomera. Nakon 4 sata, 3-SPA inhibira obrazovanje oligomera sa izuzetkom dimerā, trimerā i pentamerā. Nakon kontinuiranog 24-časovnog izlaganja, jedine oligomerne vrste koje nisu inhibirane su pentameri Aβ42. Ti podaci ukazuju da je prvi antioligomerni efekat tramiprozata praćen drugim anti-oligomernim efektom metabolita tramiprozata, 3-SPA.

Farmakokinetika i penetracija oralno davane 3-SPA u mozak kod pacova

[0071] Koncentracija u plazmi jednokratne doze 3-SPA, rastvorene u fiziološkom rastvoru u vidu bistrog rastvora, date oralno i intravenski pacovima u doznom nivou od 30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom, prikazana je na SL.9. Nivoi u mozgu, CSF i odgovarajući nivoi u plazmi nakon jednokratne oralne doze za dozu od 30 mg/kg 3-SPA u 1., 2., 6. i 24. satu prikazani su na SL. 10. Za izračunavanje farmakokinetičkih parametara upotrebljene su srednje vrednosti PK kriva. Dobijeni farmakokinetički parametri, oralna bioraspoloživost i penetracija 3-SPA u mozak kod pacova prikazani su u Tabelama 4–6.

Tabela 4 – Farmakokinetički parametri za oralno datu 3-SPA kod mužjaka SD pacova (n=3)

Tabela 5 – Farmakokinetički parametri za iv datu 3-SPA kod mužjaka SD pacova (n=3)

Tabela 6 – Penetracija u mozak za oralno datu 3-SPA (30 mg/kg) kod mužjaka SD pacova

3. Diskusija

[0072] U okviru naših studija, utvrdili smo prisustvo 3-SPA u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) subjekata koji nisu uzimali lek. Videti, npr., SL. 2. Takođe, kao što je prethodno navedeno (videti, npr., Tabelu 1), identifikovali smo prisustvo 3-SPA u CSF kod 64 pacijenta sa kognitivnim oštećenjima koji nisu uzimali lek. Srednja koncentracija 3-SPA iz studije bila je 11,7 ± 4,3 nM. Takođe smo pokazali da 3-SPA izaziva anti-Aβ42 oligomerni efekat na način koji zavisi kako od vremena, tako i od koncentracije. Videti prethodno izložen pasus „Anti-Aβ42 oligomerna aktivnost 3-SPA“. Dalje smo pokazali da taj 3-SPA pokazuje oralnu bioraspoloživost od 100% i da je penetracija u mozak 25%, što ukazuje na to da se 3-SPA dobro apsorbuje i prelazi krvno-moždanu barijeru. Videti Tabele 4–6. Uzeti zajedno, ti podaci ukazuju da su veće koncentracije u CSF u ljudskom mozgu nakon oralnog davanja ALZ-801 ili tramiprozata rezultat penetracije metabolita 3-SPA u CNS.

[0073] Takođe smo identifikovali obrnutu korelaciju između koncentracije 3-SPA u CSF i ozbiljnosti kognitivnog oštećenja. Na primer, kako je ozbiljnost AB opadala, u CSF su utvrđivane veće koncentracije 3-SPA. Videti SL 6. Nasuprot tome, kako je ozbiljnost AB rasla, u CSF su pronalažene manje koncentracije 3-SPA. Videti SL 6. Ti podaci ukazuju da nivoi 3-SPA u mozgu imaju važnu ulogu u smanjenju verovatnoće ili odlaganju početka progresije bolesti. Održavanje dovoljnih nivoa 3-SPA, ili povećanje nižih nivoa 3-SPA može se, delimično, postići lečenjem sa AZL-801, tramiprozatom, drugim prekursorima tramiprozata (kao što su oni u Formuli I), ili farmaceutskim kompozicijama koje obuhvataju 3-SPA. Kao takvi, ovde opisani terapijski pristupi obezbeđuju nova sredstva za smanjenje neurotoksičnosti oligomera amiloida beta i obezbedili su klinički značajne rezultate za lečenje kognitivnih poremećaja kao što je AB.

[0074] Obim ovog pronalaska treba da bude definisan priloženim patentnim zahtevima, a ne specifičnim izvođenjima koja su predstavljena kao primer.

[0075] Osim ako nije definisano drugačije, svi ovde upotrebljeni tehnički i naučni termini u skladu su sa značenjem koje je opšte poznato osobi uobičajene stručnosti u oblasti tehnike.

Claims (7)

1. Patentni zahtevi 1. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje 3-SPA formule

   ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so: i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji kognitivnog pada ili Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno.
2. 2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, gde je subjektu potrebna prevencija ako: a) koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta je manja od 25 ng/ml; i/ili b) subjekat ima najmanje jedan ApoE4 alel; i/ili c) subjekat ima porodičnu istoriju Alchajmerove bolesti.
3. 3. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 2, gde je subjektu potrebna prevencija ako: a) koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta je manja od 25 ng/ml; i/ili b) subjekat ima najmanje dva ApoE4 alela.
4. 4. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje 3-SPA formule

   ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so: i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u prevenciji demencije kod subjekta kome je to potrebno.
5. 5. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 4, gde je subjektu potrebna prevencija ako: a) koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta je manja od 25 ng/ml; i/ili b) subjekat je imao najmanje jednu traumu glave.
6. 6. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata 3-SPA formule

   ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i farmaceutski prihvatljiv nosač, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta kome je to potrebno.
7. 7. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 6, gde je subjektu potrebno lečenje ako subjekat: a) ima koncentraciju 3-SPA ispod vrednosti koncentracije (± 10%) 3-SPA u CSF koja je određena za MMSE od 30 u najboljem uklapanju nasumične populacije subjekata sa Alchajmerovom bolešću sa različitim kognitivnim oštećenjima; b) jeste APOE4 homozigot ili APOE4 heterozigot; c) ima MMSE skor veći od 19; i/ili d) ima MMSE skor od 16 do 30.