RS67276B1 - Derivati benzizoksazol sulfonamida - Google Patents

Derivati benzizoksazol sulfonamida

Info

Publication number
RS67276B1
RS67276B1 RS20250987A RSP20250987A RS67276B1 RS 67276 B1 RS67276 B1 RS 67276B1 RS 20250987 A RS20250987 A RS 20250987A RS P20250987 A RSP20250987 A RS P20250987A RS 67276 B1 RS67276 B1 RS 67276B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
methyl
compound
methoxy
hydrogen
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
RS20250987A
Other languages
English (en)
Inventor
Ylva Elisabet Bergman Bozikis
Oleg Brodsky
Michelle Ang Camerino
Samantha Elizabeth Greasley
Robert Louis Hoffman
Robert Arnold Kumpf
Pei-Pei Kung
Paul Francis Richardson
Paul Anthony Stupple
Scott Channing Sutton
Original Assignee
Pfizer
Ctxt Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer, Ctxt Pty Ltd filed Critical Pfizer
Publication of RS67276B1 publication Critical patent/RS67276B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/423—Oxazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na nove derivate benzizoksazol sulfonamida, koji deluju kao inhibitori lizin acetil transferaze (KAT) iz MYST porodice i korisni su u lečenju abnormalnog rasta ćelija, kao što je kancer, kod pacijenata. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja i na jedinjenja i kompozicije za upotrebu u lečenju abnormalnog rasta ćelija kod pacijenata.
Osnova pronalaska
[0002] MYST familija je najveća familija KAT i dobila je ime po osnovnim članovima kod kvasca i sisara: MOZ, Ybf2/Sas3, Sas2 i TIP60. (Dekker 2014). MYST proteini posreduju u mnogim biološkim funkcijama, uključujući regulaciju gena, reparaciju DNK, regulaciju ćelijskog ciklusa i razvoj (Avvakumov 2007; Vosss 2009). KAT proteini iz MYST porodice igraju ključnu ulogu u posttranslacionoj modifikaciji histona i stoga imaju dubok uticaj na strukturu hromatina u eukariotskom jezgru. (Avvakumov 2007). Familija trenutno obuhvata pet sisarskih KAT: TIP60 (KAT5; HTATIP; MIM 601409), MOZ (KAT6A; MIM 601408; MYST3), MORF (KAT6b; QKF; MYST4), HBO (KAT7; HBO1; MYST2) i MOF (KAT8; MYST1) (Vosss 2009). Ovih pet članova MYST porodice prisutno je kod ljudi, a poznato je da je neispravnost MYST proteina povezana sa kancerom. (Avvakumov 2007). Najčešće korišćena imena za članove porodice MYST su:
MYST funkcionalni domeni
[0003] MYST proteini funkcionišu u multisubjediničnim proteinskim kompleksima, uključujući adaptere kao što su ING proteini koji posreduju u vezivanju DNK (Avvakumov 2007). Na primer, TIP60 je povezan sa multiproteinskim kompleksom NuA4 (koji obuhvata više od 16 članova) (Zhang 2017). Međutim, bilo je i nekih izveštaja o motivu vezivanja DNK tipa heliks-obrtaj-heliks unutar strukture samog MOZ proteina (Holbert 2007), što ukazuje na sposobnost direktnog vezivanja za DNK.
[0004] Na acetiltransferaznu aktivnost MYST proteina utiče MYST domen (katalitički domen). MYST domen sadrži motiv vezivanja acetil-koenzima A, koji je strukturno konzerviran sa drugim HAT, i neobičan cink prst C2HC-tipa (Voss 2009). Visoko konzervirani MYST domen, uključujući motiv vezivanja acetil-CoA i cink prst, smatra se definišućom karakteristikom ove porodice enzima (Avvakumov 2007).
Uloga MYST proteina
[0005] Acetilacija histonskih ostataka je generalno povezana sa transkripcionom aktivacijom. Međutim, u nekim slučajevima, transkripciona represija je takođe pripisana MYST proteinima (Voss 2009). Poznato je da pojedinačni članovi MYST porodice učestvuju u širokom spektru važnih biohemijskih interakcija:
HBO1 pozitivno reguliše početak replikacije DNK (Avvakumov 2007; Aggarwal 2004; Doyon 2006; Lizuka 2006) putem acetilacije histonskih supstrata, što verovatno dovodi do pristupačnije konformacije hromatina (Avvakumov 2007, Lizuka 2006). Takođe je poznato da HBO1 igra ulogu u patogenezi kancera dojke promovišući obogaćivanje ćelija sličnih matičnim ćelijama kancera (Duong 2013) i destabilizacijom estrogenskog receptora α (ERα) putem ubikvinicijacije, koja se odvija preko histon-acetilirajuće aktivnosti HBO1 (Lizuka 2013). HBO1 je takođe povezan sa akutnom mijeloidnom leukemijom (AML) (Shi 2015).
[0006] TIP60 (KAT5) je najproučavaniji član MYST porodice. TIP60 igra važnu ulogu ne samo u regulaciji transkripcije već i u procesu reparacije oštećenja DNK, posebno u dvolančanim prekidima DNK (DSB) (Gil 2017). TIP60 može acetilovati p53, ATM i c-Myc. TIP60 i MOF specifično acetiluju lizin 120 (K120) p53 nakon oštećenja DNK (Avvakumov 2007). Takođe je implicirano da je TIP60 važan za biologiju regulatornih T-ćelija (Treg). FOXP3 je glavni regulator u razvoju i funkciji Treg ćelija i pokazano je da je acetilacija FOXP3 pomoću TIP60 neophodna za aktivnost FOXP3 (Li 2007, Xiao 2014). Podvlačeći ovo, uslovna delecija TIP60 kod miševa dovodi do fatalne autoimune bolesti slične peruti, oponašajući fenotip koji se vidi kod miševa sa nokautom FOXP3 gena (Xiao 2014). Kod kancera, Treg ćelije mogu olakšati progresiju tumora suzbijanjem adaptivnog imuniteta protiv tumora.
[0007] MOF („mužjaci odsutni na prvom“) je prvobitno identifikovan kao jedna od komponenti kompenzacije doze kod drozofile i klasifikovan je kao član porodice MYST na osnovu funkcionalnih studija i analize sekvenci (Su 2016). Humani ortolog pokazuje značajnu sličnost sa MOF drozofile; sadrži mesto za vezivanje acetil-KoA, hromodomen (koji vezuje histone) i C2HC-tip cink prsta (Su 2016). MOF je ključni enzim za acetiliranje histona H4K16, a kompleksi koji sadrže MOF su uključeni u razne esencijalne ćelijske funkcije sa vezama za kancer (Su 2016). Pored globalnog smanjenja acetilacije histona, smanjenje MOF u ćelijama sisara može dovesti do abnormalne transkripcije gena, posebno uzrokujući abnormalnu ekspresiju određenih gena supresora tumora ili onkogena, što ukazuje na kritičnu ulogu MOF u tumorogenezi (Su 2016). Na primer, pokazalo se da je KAT aktivnost MOF neophodna za održavanje MLL-AF9 leukemije i može biti važna za višestruke AML podtipove (Valerio 2017).
[0008] KAT6B (Querkopf) je prvi put identifikovan u skriningu mutacija gena koji regulišu ravnotežu između proliferacije i diferencijacije tokom embrionalnog razvoja (Thomas 2000). Miševi homozigotni za mutantni alel KAT6B imaju teške defekte u razvoju moždane kore koji su rezultat ozbiljnog smanjenja i proliferacije i diferencijacije, posebno populacije kortikalnih progenitora tokom embrionalnog razvoja. KAT6B je neophodan za održavanje populacije odraslih neuralnih matičnih ćelija i deo je sistema koji reguliše diferencijaciju matičnih ćelija u neurone (Merson 2006). KAT6B je takođe mutiran kod retkih oblika leukemije (Vizmanos 2003).
[0009] Lokus MOZ je dvanaesti najčešće amplifikovani region kod svih vrsta kancera. (Zack 2013). MOZ se nalazi unutar amplikona 8p11-p12, koji se javlja sa učestalošću od oko 10-15% kod različitih karcinoma, posebno dojke i jajnika (Turner-Ivey 2014). MOZ je prvi put identifikovan kao fuzioni partner proteina koji vezuje CREB (CBP) tokom ispitivanja specifične hromozomske translokacije kod akutne mijeloidne leukemije (AML) (Avvakumov 2007; Borrow 1996). MOZ KAT aktivnost je neophodna za podsticanje ekspresije MEIS1 i HOXa9, proteina koji se obično prekomerno eksprimiraju kod nekih limfoma i leukemija. Primećeno je povećano preživljavanje MOZ<+/->heterozigotnih miševa u Eµ-Myc transgenom modelu B-ćelijskog limfoma, gde gubitak jednog MOZ alela dovodi do biološki relevantnog smanjenja nivoa Meis1 i Hoxa9 u pre-B-ćelijama (Sheikh 2015).
[0010] Inhibitori nekih MYST su poznati. Na primer, objavljen je sledeći derivat anakardne kiseline (Ghizzoni 2012) kao inhibitor TIP60 (IC50= 74µM) i MOF (IC50= 47µM):
[0011] Drugi poznati inhibitori uključuju (Zhang 2017):
[0012] Stein et al. „Discovery and structure-activity relationships of sulfonamide ETA-selective antagonists“, J. Med Chem, 1995, vol 38(8), p1344-1354 otkriva odnose strukture i aktivnosti sulfonamida ETAantagonista receptora.
[0013] WO 2018/102419 (Epizyme Inc, objavljen 7. 6. 2018) otkriva jedinjenja koja sadrže sulfonsku grupu kao KAT inhibitore.
[0014] WO 2019/243491 (CTXT PTY LIMITED, objavljen 26. 12. 2019) otkriva jedinjenja koja deluju kao inhibitori lizin acetil transferaze (KAT) iz MYST porodice.
[0015] U svetlu utvrđene uloge KAT uopšte, a posebno MYST, kod bolesti kao što je kancer, postoji potreba za novim inhibitorima ovih proteina.
Rezime pronalaska
[0016] Svako od dole navedenih primera izvođenja koja opisuju pronalazak podrazumeva u svom obimu farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja pronalaska. Shodno tome, fraza „ili njegova farmaceutski prihvatljiva so“ je implicitna u opisu svih jedinjenja opisanih ovde.
[0017] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde
R<1>je vodonik;
R<2>je -(CH2)n-(5-6 člani heteroaril) izborno supstituisan halogenom, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, - OCHF2, ili -OCF3;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil,
gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik;
Prsten A je C6-C10aril ili 9-10-člani heteroaril;
R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, - OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3;
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi;
R<7>je vodonik, brom, hlor, fluor ili metoksi i
n je 1.
[0018] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<1>je vodonik i R<2>je - (CH2)-(5-6 člani heteroaril); R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-(5-člani heteroaril) izborno supstituisan halogenom, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-(5-člani heteroaril); R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-triazolil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan halogenom ili C1-C3alkil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan halogenom; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan sa C1-C3alkil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil supstituisan metilom; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-(6-člani heteroaril); ili R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-piridin, -(CH2)-pirazin, ili -(CH2)-pirimidin.
[0019] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde R<3>je halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3i R<4>je vodonik.
[0020] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik i R<4>je halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil.
[0021] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil; R<3>je fluoro: R<3>je metil; R<3>je vodonik; R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<4>je vodonik; R<4>je C1-C3alkoksi; ili R<4>je metoksi, i bilo koja kombinacija R<3>i R<4>gde je bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik.
[0022] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil i R<4>je vodonik; R<3>je metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je C1-C3alkoksi; ili R<3>je vodonik i R<4>je metoksi.
[0023] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, hinolinil, benzoksazolil, indanil ili tetrahidronaftil.
[0024] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil.
[0025] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<5>je metoksi.
[0026] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je metoksi.
[0027] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je vodonik.
[0028] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<7>je vodonik.
[0029] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, a R<6>je metoksi.
[0030] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
[0031] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0032] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil.
[0033] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A tetrahidronaftil.
[0034] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil ili tetrahidronaftil, R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0035] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil.
[0036] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A benzoksazolil.
[0037] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil ili benzoksazolil, R<5>je metil ili etil, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0038] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (I) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0039] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje formule (Ia)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
R<1>je vodonik;
R<2>je -(CH2)n-(5-6 člani heteroaril) izborno supstituisan halogenom, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil,
gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik;
Prsten A je C6-C10aril ili 9-10-člani heteroaril;
R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3;
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi;
R<7>je vodonik, brom, hlor, fluor ili metoksi; i
n je 1.
[0040] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<1>je vodonik i R<2>je - (CH2)-(5-6 člani heteroaril); R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-(5-člani heteroaril) izborno supstituisan halogenom, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-(5-člani heteroaril); R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-triazolil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan halogenom ili C1-C3alkil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan halogenom; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil izborno supstituisan sa C1-C3alkil; R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil supstituisan metilom; ili R<1>je vodonik i R<2>je -(CH2)-pirazolil.
[0041] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>je halogen, C1-C3alkil, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3i R<4>je vodonik.
[0042] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>je vodonik i R<4>je halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil.
[0043] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil i R<4>je vodonik; R<3>je metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je C1-C3alkoksi; ili R<3>je vodonik i R<4>je metoksi.
[0044] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, hinolinil, benzoksazolil, indanil ili tetrahidronaftil.
[0045] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil.
[0046] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<5>je metoksi.
[0047] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je metoksi.
[0048] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je vodonik.
[0049] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<7>je vodonik.
[0050] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, a R<6>je metoksi.
[0051] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, a R<6>je vodonik.
[0052] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
[0053] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0054] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil.
[0055] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A tetrahidronaftil.
[0056] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil ili tetrahidronaftil, R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0057] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil.
[0058] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A benzoksazolil.
[0059] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil ili benzoksazolil, R<5>je metil ili etil, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0060] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za Formulu (Ia) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0061] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje formule (II)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil;
gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik;
Prsten A je C6-C10aril ili 9-10-člani heteroaril;
R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3;
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; i
R<7>je vodonik, brom, hlor, fluoro ili metoksi.
[0062] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH; R<2a>je odsutan, fluoro ili metil; R<2a>je odsutan; R<2a>je fluoro; ili R<2a>je metil.
[0063] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3.
[0064] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil; R<3>je fluoro; R<3>je metil; R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<4>je vodonik: R<4>je C1-C3alkoksi; ili R<4>je metoksi, i bilo koja kombinacija R<3>i R<4>gde je bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik.
[0065] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil i R<4>je vodonik; R<3>je metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je C1-C3alkoksi; R<3>je vodonik i R<4>je metoksi.
[0066] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, hinolinil, benzoksazolil, indanil ili tetrahidronaftil.
[0067] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil.
[0068] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<5>je metoksi.
[0069] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je metoksi.
[0070] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<6>je vodonik.
[0071] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil i R<7>je vodonik.
[0072] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil, R<5>je metoksi, a R<6>je metoksi.
[0073] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
[0074] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A fenil R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0075] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil.
[0076] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A tetrahidronaftil.
[0077] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A indanil ili tetrahidronaftil, R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0078] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil.
[0079] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A benzoksazolil.
[0080] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je Prsten A hinolinil, R<5>je metil ili etil, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0081] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (II) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0082] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (III)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil;
gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik;
R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3;
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; i
R<7>je vodonik, brom, hlor, fluoro ili metoksi.
[0083] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (III) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH; R<2a>je odsutan, fluoro ili metil; R<2a>je odsutan; R<2a>je fluoro; ili R<2a>je metil.
[0084] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (III) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil; R<3>je fluoro; R<3>je metil; R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<4>je vodonik; R<4>je C1-C3alkoksi; R<4>je metoksi; ili R<3>je fluoro i R<4>je metoksi.
[0085] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (III) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil i R<4>je vodonik; R<3>je metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je C1-C3alkoksi; ili R<3>je vodonik i R<4>je metoksi.
[0086] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (III) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
[0087] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (III) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
[0088] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (III) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0089] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (IV)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3;
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; i
R<7>je vodonik, brom, hlor, fluoro ili metoksi.
[0090] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (IV) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH; R<2a>je odsutan, fluoro ili metil; R<2a>je odsutan; R<2a>je fluoro; ili R<2a>je metil.
[0091] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (IV) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
[0092] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (IV) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>su vodonik.
[0093] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (IV) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0094] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (V)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
X je N ili -C(H)-;
Y je N ili -C(H)-,
pod uslovom da je bar jedan od X i Y -C(H)-;
R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil;
R<5>je vodonik, metil, -CF3, C1-C3alkoksi, -CH2-OCH3, ili -C(O)OCH3i
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi.
[0095] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je X N, a Y je -C(H)-.
[0096] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je X -C(H)- i Y je N.
[0097] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je X -C(H)- i Y je -C(H)-.
[0098] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH; R<2a>je odsutan, fluoro ili metil; R<2a>je odsutan; R<2a>je fluoro; ili R<2a>je metil.
[0099] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<4>je vodonik, fluoro, etil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil; R<4>je C1-C4alkoksi; R<4>je metoksi; ili R<4>je vodonik.
[0100] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi.
[0101] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<6>je metoksi.
[0102] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<6>je vodonik.
[0103] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi i R<6>je metoksi.
[0104] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (V) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi i R<6>je vodonik.
[0105] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (V) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0106] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (VI)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
gde
R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH;
R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil;
R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil,
gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik;
R<5>je vodonik, metil, -CH2-OCH3, -CF3, C1-C3alkoksi, ili -C(O)OCH3i
R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi.
[0107] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH; R<2a>je odsutan, fluoro ili metil; R<2a>je odsutan; R<2a>je fluoro; ili R<2a>je metil.
[0108] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<3>je vodonik, fluoro ili metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik; R<3>je metil i R<4>je vodonik; R<3>je vodonik i R<4>je vodonik, fluoro, etil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil; R<3>je vodonik i R<4>je C1-C4alkoksi; ili R<3>je vodonik i R<4>je metoksi.
[0109] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi.
[0110] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<6>je metoksi.
[0111] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<6>je vodonik.
[0112] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi i R<6>je metoksi.
[0113] Jedan primer izvođenja ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde je R<5>je metoksi i R<6>je vodonik.
[0114] Podrazumeva se da se bilo koji od gore navedenih primera izvođenja za formulu (VI) može kombinovati sa bilo kojim drugim primerom izvođenja (ili više njih) gore navedenim u meri u kojoj nisu nekompatibilna.
[0115] Jedinjenja bilo kog od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, takođe mogu biti obeležena deuterijumom.
[0116] Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje bilo kojeg od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
[0117] Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje bilo kojeg od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač, za lečenje kancera.
[0118] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje bilo kojeg od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta.
[0119] Ovaj pronalazak se odnosi na kombinaciju jedinjenja bilo kojeg od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa antitumorskim sredstvom ili sa radioterapijom, za lečenje kancera.
[0120] Ovaj pronalazak se odnosi na kombinaciju jedinjenja bilo kojeg od primera izvođenja jedinjenja formule (I), formule (Ia), formule (II), formule (III), formule (IV), formule (V) ili formule (VI), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa antitumorskim sredstvom, za lečenje kancera.
[0121] U jednom primeru izvođenja ovog pronalaska, kancer je kancer dojke.
[0122] U jednom primeru izvođenja ovog pronalaska, kancer je kancer dojke, koji je ER-pozitivan kancer dojke.
Kratak opis crteža
[0123] Slika 1 prikazuje PXRD spektar anhidrovanog 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Oblik 1).
Detaljan opis pronalaska
[0124] Predmetni pronalazak se može lakše razumeti pozivanjem na sledeći detaljan opis preferiranih primera izvođenja pronalaska i primera koji su ovde uključeni. Podrazumeva se da je terminologija koja se ovde koristi samo u svrhu opisivanja specifičnih primera izvođenja i nije namenjena da bude ograničavajuća. Dalje podrazumeva se da, osim ako nije ovde posebno definisana, terminologija koja se ovde koristi treba da ima svoje tradicionalno značenje kako je poznato u relevantnoj struci.
[0125] Pronalazak opisan ovde može se na odgovarajući način primeniti u odsustvu bilo kog elementa (elemenata) koji nisu ovde posebno opisani. Tako, na primer, u svakom slučaju ovde bilo koji od izraza „koji obuhvata“, „koji se u suštini sastoji od“ i „koji se sastoji od“ može se zameniti bilo kojim od druga dva izraza.
[0126] Radi lakšeg razumevanja, mnogi hemijski delovi i jedinjenja su predstavljeni korišćenjem dobro poznatih skraćenica, uključujući, ali ne ograničavajući se na, Ac (acetil), AcOH (sirćetna kiselina), AIBN (azobisizobutironitril), n-BuLi (n-butillitijum), CN (cijano), CPME (ciklopentil metil etar), DCM (dihlormetan ili metilen hlorid), aceton-d6(deuterizovani aceton), CDCl3(deuterizovani hloroform), DMSO-d6(deuterizovani dimetilsulfoksid), metanol-d4(deuterizovani metanol), D2O (deuterisana voda), DIAD (diizopropil azodikarboksilat), DMAP (N, N-dimetilpiridin-4-amin), DMF (N,N-dimetilformamid), DMSO (dimetilsulfoksid), dppf (1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen), dppp (1,3-bis(difenilfosfino)propan), Et (etil), etil acetat (EtOAc), EtOH (etanol), LDA (litijum diizopropil amid), Me (metil), MeON (metanol), MeCN (acetonitril), MeOAc (metil acetat), Ms (metansulfonil), MsCl (metansulfonil hlorid), MTBE (metil terc-butil etar), NADPH (nikotinamid adenin dinukleotid fosfat), N/D (nije određeno); NaOMe (natrijum metoksid), NaOtPn (natrijum terc-pentoksid), Pd(OAc)2(paladijum(II) acetat), PdCl2(dppf) ili Pd(dppf)Cl2(1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen dihloropaladijum (II)), Pd(PPh3)4(tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)), petrol etar (petrol etar), Ph (fenil), 2-PrOH (izopropanol, 2-propanil), t-Bu (terc-butil), TBAF(tetra-n-butilamonijum fluorid), TBS (terc-butildimetilsilil), TMG (tetrametilguanidin), TBSCI (terc-butildimetilsilil hlorid), TEA (trietilamin), TFA (trifluorosirćetna kiselina), THF (tetrahidrofuran), TMEDA (tetrametiletilendiamin) i X-Phos (2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenil).
[0127] Pored toga, TLC se odnosi na tankoslojnu hromatografiju, HPLC se odnosi na visokoefikasnu tečnu hromatografiju, LCMS se odnosi na tečnu hromatografiju-masnu spektrometriju i SFC (superkritična fluidna hromatografija).
[0128] Ostale skraćenice: rt ili Rt (vreme zadržavanja), min (minut ili minuti), h (sat ili sati), RT (sobna temperatura), aq. (vodeni), zas. (zasićeni), eq ili eq. (ekvivalent(i)).
[0129] Termin „halogen“, kako se ovde koristi, odnosi se na atom fluora, hlora, broma ili joda ili fluoro (F), hloro (Cl), bromo (Br) ili jodo (I).
[0130] Termin „alkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na zasićene monovalentne ugljovodonične radikale koji sadrže, u određenim ostvarenjima, od jednog do šest, ili od jednog do tri atoma ugljenika, sa pravim ili razgranatim delovima. Termin „C1-C4„alkil“ se odnosi na alkil radikal koji sadrži od jednog do četiri atoma ugljenika, sa pravim ili razgranatim delovima. Termin alkil" u svojoj definiciji uključuje termin "C1-C3alkil“. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil i tercbutil.
[0131] Termin „alkoksi“, kako se ovde koristi, odnosi se na alkil radikal koji je jednostruko vezan za atom kiseonika. Tačka vezivanja alkoksi radikala za molekul je preko atoma kiseonika. Alkoksi radikal može biti predstavljen kao alkil-O-. Termini alkoksi" i "C1-C3„alkoksi“ se odnosi na alkoksi radikal koji sadrži od jednog do četiri atoma ugljenika i od jednog do tri atoma ugljenika, respektivno, sa pravim ili razgranatim delovima. Alkoksi grupe uključuju, ali nisu ograničene na, metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi i slično.
[0132] Termin „aril“, kako se ovde koristi, odnosi se na cikličnu grupu izvedenu iz aromatičnog ugljovodonika. Termin „C6-C10„aril“ sadrži od šest do deset atoma ugljenika. Primeri takvih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, fenil i naftil. Termin „aril“ takođe uključuje kondenzovane policiklične aromatične prstenaste sisteme u kojima je aromatični prsten kondenzovan sa jednim ili više prstenova. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, 1-naftil, 2naftil, 1-antracil i 2-antracil. Takođe, u okviru termina „aril“, kako se ovde koristi, je grupa u kojoj je aromatični prsten kondenzovan sa jednim ili više nearomatičnih prstenova, kao što je u indanil (2,3-dihidro-1H-inden) ili tetrahidronaftil (takođe poznat kao 1, 2, 3, 4-tetrahidronaftil), gde se radikal ili tačka vezivanja nalazi na aromatičnom prstenu.
[0133] Termin „heterociklus“, kako se ovde koristi, odnosi se na grupu izvedenu iz aril grupe, u kojoj je najmanje jedan od atoma ugljenika u prstenu zamenjen heteroatomom izabranim iz kiseonika, azota i sumpora.
[0134] Termin „heteroaril“, kako se ovde koristi, odnosi se na grupu izvedenu iz aromatičnog monocikličnog ili bicikličnog heterocikla, a posebno u odnosu na biciklični heterocikl, na benzo-kondenzovanu heterociklu grupu, u kojoj je aromatični ili nearomatični heterocikl kondenzovan sa fenil grupom. Kako se ovde koristi, termin „5-člani heteroaril“ ima ukupno 5 atoma u svom sistemu prstena, termin „5-6-člani heteroaril“ ima ukupno 5 ili 6 atoma u svom sistemu prstena, a termin „5-9-člani heteroaril“ ima ukupno 5, 6, 7, 8 ili 9 atoma u svom sistemu prstena. Pored toga, svaka od grupa „5-člani heteroaril“, „5-6-člani heteroaril“ i „5-9-člani heteroaril“ ima jedan, dva ili tri heteroatoma nezavisno izabrana iz azota i kiseonika, pod uslovom da sistem prstena ne sadrži dva susedna atoma kiseonika. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, pirazolil i triazolil. Kako se ovde koristi, termin „heteroaril sa 9-10 članova“ ima ukupno 9 ili 10 atoma u svom sistemu prstena i jedan ili dva heteroatoma, svaki nezavisno izabran iz azota i kiseonika, pod uslovom da sistem prstena ne sadrži dva susedna atoma kiseonika.
[0135] Primeri „heteroarila sa 9-10 članova“, prema ovom pronalasku, uključuju, ali nisu ograničeni na,
[0136] Termin „lečenje“, kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, znači preokretanje, ublažavanje, inhibiranje napredovanja ili sprečavanje bolesti, poremećaja ili stanja na koje se taj termin odnosi, ili jednog ili više simptoma takve bolesti, poremećaja ili stanja. Termin „lečenje“, kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, odnosi se na čin lečenja, kao što je „lečenje“ definisano neposredno gore.
[0137] Termin „kombinacija“, kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, označava kombinaciju fiksne doze ili kombinaciju sredstava koja se primenjuje povremeno, istovremeno ili sekvencijalno, prema istim ili različitim načinima primene. Kako se ovde koristi, „efikasna“ količina se odnosi na količinu supstance, sredstva, jedinjenja ili kompozicije koja je dovoljna da rezultuje smanjenjem težine simptoma bolesti, povećanjem učestalosti i trajanja perioda bez simptoma bolesti ili sprečavanjem oštećenja ili invaliditeta usled bolesti -bilo kao jedna doza ili prema režimu višestrukih doza, samostalno ili u kombinaciji sa drugim sredstvima ili supstancama. Stručnjak u ovoj oblasti bi bila u stanju da odredi takve količine na osnovu faktora kao što su veličina pacijenta, težina simptoma pacijenta i izabrana kombinacija, kompozicija ili način primene. Pacijent ili subjekt može biti čovek ili ne-humani sisar kome je potrebno lečenje. U jednom primeru izvođenja, pacijent je čovek.
[0138] Osim ako nije drugačije naznačeno, sve reference ovde na jedinjenja pronalaska uključuju reference na njihove soli, solvate, hidrate i komplekse, i na solvate, hidrate i komplekse njihovih soli, uključujući polimorfe, stereoizomere i izotopski obeležene verzije.
[0139] Ovde opisana primera izvođenja uključuju izotopski obeležena jedinjenja, koja su identična onima navedenim u formulama (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI), osim što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja ovde opisanih primera izvođenja uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora i hlora, kao što su, ali ne ograničavajući se na,<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F, i<36>Cl, respektivno. U jednom primeru izvođenja, izotop ugrađen u jedinjenja formula (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI) je<2>H. Jedinjenja opisana ovde i farmaceutski prihvatljive soli navedenih jedinjenja koja sadrže gore pomenute izotope i/ili druge izotope drugih atoma spadaju u obim ovih primera izvođenja. Određena izotopski obeležena jedinjenja primera izvođenja opisanih ovde, na primer, ona u koja se pretvaraju radioaktivni izotopi kao što su<3>H i<14>C su inkorporirani, korisni su u testovima distribucije lekova i/ili supstrata u tkivu. Tricijumovani, tj.<3>H, i ugljenik-14, tj.<14>C izotopi su posebno poželjni zbog lakoće pripreme i detekcije. Dalje, supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može pružiti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećani in vivo poluživot ili smanjeni zahtevi za doziranje i, stoga, mogu biti poželjniji u nekim okolnostima. Izotopski obeležena jedinjenja ovde opisanih primera izvođenja mogu se generalno pripremiti sprovođenjem postupaka opisanih u šemama i/ili u primerima ispod, zamenom reagensa koji nije izotopski obeležen lako dostupnim izotopski obeleženim reagensom. U jednom primeru izvođenja, jedinjenja formula (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI) su obeležena deuterijumom.
[0140] Neki primeri izvođenja se odnose na farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja opisanih ovde. Jedinjenja opisana ovde koja su bazne prirode sposobna su da formiraju širok spektar soli sa različitim neorganskim i organskim kiselinama. Kiseline koje se mogu koristiti za pripremu farmaceutski prihvatljivih soli sa kiselinama takvih baznih jedinjenja opisanih ovde su one koje formiraju netoksične soli sa kiselinama, npr. soli koje sadrže farmakološki prihvatljive anjone, kao što su hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, nitrat, sulfat, bisulfat, fosfat, kiseli fosfat, izonikotinat, acetat, laktat, salicilat, citrat, kiseli citrat, tartarat, pantotenat, bitartrat, askorbat, sukcinat, maleat, gentizinat, fumarat, glukonat, glukuronat, saharat, formiat, benzoat, glutamat, metansulfonat, etansulfonat, benzensulfonat, p-toluensulfonat i pamoat [tj.1,1'-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat)] soli. Jedinjenja opisana ovde koja uključuju bazni deo, kao što je amino grupa, mogu formirati farmaceutski prihvatljive soli sa različitim aminokiselinama, pored gore pomenutih kiselina.
[0141] Takođe se mogu formirati hemisoli kiselina i baza, na primer, hemisulfatne i hemikalcijumove soli.
[0142] Za pregled odgovarajućih soli, pogledati Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002). Metode za pravljenje farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenja opisanih ovde su poznate stručnjacima u ovoj oblasti.
[0143] Termin „solvat“ se ovde koristi za opisivanje molekularnog kompleksa koji sadrži jedinjenje opisano ovde i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih molekula rastvarača, na primer, etanol.
[0144] Jedinjenja opisana ovde mogu takođe postojati u nerastvorenim i rastvorenim oblicima. Shodno tome, neki primeri izvođenja se odnose na hidrate i solvate jedinjenja opisanih ovde. Kada su rastvarač ili voda čvrsto vezani, kompleks će imati dobro definisanu stehiometriju nezavisno od vlažnosti. Međutim, kada su rastvarač ili voda slabo vezani, kao kod kanalskih solvata i higroskopnih jedinjenja, sadržaj vode/rastvarača će zavisiti od vlažnosti i uslova sušenja. U takvim slučajevima, nestehiometrija će biti norma. Termin „solvat“ se ovde koristi za opisivanje molekularnog kompleksa koji sadrži jedinjenje pronalaska i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih molekula rastvarača, na primer, etanol. Termin „hidrat“ se koristi kada je rastvarač voda. Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa pronalaskom uključuju hidrate i solvate gde rastvarač za kristalizaciju može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.
[0145] Mogu postojati i kompleksi kao što su klatrati, inkluzioni kompleksi lek-domaćin u kojima su, za razliku od gore pomenutih solvata, lek i domaćin prisutni u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Mogu postojati i kompleksi leka koji sadrže dve ili više organskih i/ili neorganskih komponenti koje mogu biti u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Dobijeni kompleksi mogu biti jonizovani, delimično jonizovani ili nejonizovani. Za pregled takvih kompleksa, videti J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 od Haleblian (avgust 1975).
[0146] Opisani su prolekovi jedinjenja koja su ovde data. Stoga, određeni derivati jedinjenja pronalaska koji mogu imati malu ili nikakvu farmakološku aktivnost sami po sebi mogu se, kada se primene na pacijenta, pretvoriti u pronalazna jedinjenja, na primer, hidrolitičkim razlaganjem. Takvi derivati se nazivaju „prolekovi“. Više informacija o upotrebi prolekova može se na’i u 'Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella) i 'Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association)..
[0147] Prolekovi se mogu, na primer, proizvesti zamenom odgovarajućih funkcionalnosti prisutnih u inovativnim jedinjenjima određenim delovima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti kao „pro-deli“, kao što je opisano, na primer, u "Design of Prodrugs" by H Bundgaard (Elsevier, 1985).
[0148] Neki neograničavajući primeri prolekova uključuju:
(i) gde jedinjenje sadrži karboksilnu kiselinsku funkcionalnost (-COOH), njegov estar, na primer, zamena vodonika sa (C1-C8)alkil;
(ii) gde jedinjenje sadrži alkoholnu funkcionalnost (-OH), njegov etar, na primer, zamena vodonika sa (C1-C6)alkanoiloksimetil, ili sa fosfatno-etarskom grupom; i (iii) gde jedinjenje sadrži primarnu ili sekundarnu amino funkcionalnu grupu (-NH2ili -NHR gde je R ≠ H), njegov amid, na primer, zamenom jednog ili oba vodonika sa odgovarajućom metabolički labilnom grupom, kao što je amid, karbamat, urea, fosfonat, sulfonat itd.
[0149] Dalji primeri zamenskih grupa u skladu sa gore navedenim primerima i primeri drugih tipova prolekova mogu se naći u gore navedenim referencama. Konačno, određena inovativna jedinjenja mogu sama delovati kao prolekovi drugih inovativnih jedinjenja.
[0150] Metaboliti jedinjenja formula opisanih ovde, tj. jedinjenja koja nastaju in vivo nakon primene leka takođe mogu postojati.
[0151] Jedinjenja opisana ovde koja sadrže jedan ili više asimetričnih atoma ugljenika mogu postojati kao dva ili više stereoizomera. Tamo gde jedinjenje opisano ovde sadrži alkenil ili alkenilen grupu, mogući su geometrijski cis/trans (ili Z/E) izomeri. Tamo gde su strukturni izomeri međusobno konvertibilni preko niskoenergetske barijere, može doći do tautomerne izomerije („tautomerije“). Ovo može imati oblik protonske tautomerije u jedinjenjima opisanim ovde koja sadrže, na primer, imino, keto ili oksimsku grupu, ili takozvane valentne tautomerije u jedinjenjima koja sadrže aromatični deo. Jedno jedinjenje može pokazivati više od jedne vrste izomerije.
[0152] Jedinjenja ovde opisanih primera izvođenja uključuju sve stereoizomere (npr. cis i trans izomeri) i svi optički izomeri jedinjenja opisanih ovde (npr. R i S enantiomeri), kao i racemske, dijastereomerne i druge smeše takvih izomera. Iako su svi stereoizomeri obuhvaćeni obimom naših zahteva, stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da određeni stereoizomeri mogu biti poželjniji.
[0153] U nekim primerima izvođenja, jedinjenja opisana ovde mogu postojati u nekoliko tautomernih oblika, uključujući enolni i iminski oblik, keto i enaminski oblik i njihove geometrijske izomere i smeše. Svi takvi tautomerni oblici su uključeni u obim ovih primera izvođenja. Tautomeri postoje kao smeše tautomernog skupa u rastvoru. U čvrstom obliku, obično preovladava jedan tautomer. Iako se može opisati jedan tautomer, ova primera izvođenja uključuju sve tautomere ovih jedinjenja.
[0154] Sadašnja primera izvođenja takođe uključuju atropizomere jedinjenja opisanih ovde. Atropizomeri se odnose na jedinjenja koja se mogu razdvojiti na rotaciono ograničene izomere.
[0155] U obim ovih primera izvođenja uključeni su svi stereoizomeri, geometrijski izomeri i tautomerni oblici jedinjenja opisanih ovde, uključujući jedinjenja koja pokazuju više od jedne vrste izomerizma i smeše jednog ili više njih.
[0156] Cis/trans izomeri se mogu razdvojiti konvencionalnim tehnikama koje su dobro poznate stručnjacima u ovoj oblasti, na primer, hromatografijom i frakcionom kristalizacijom.
[0157] Konvencionalne tehnike za pripremu/izolaciju pojedinačnih enantiomera uključuju hiralnu sintezu iz odgovarajućeg optički čistog prekursora ili razdvajanje racemata (ili racemata soli ili derivata) korišćenjem, na primer, hiralne tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) ili SFC.
[0158] Alternativno, racemat (ili racemski prekursor) može reagovati sa odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem, na primer, alkoholom, ili, u slučaju kada jedinjenje opisano ovde sadrži kiseli ili bazni deo, bazom ili kiselinom kao što je 1-feniletilamin ili vinska kiselina. Dobijena dijastereomerna smeša može se razdvojiti hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom, a jedan ili oba dijastereoizomera pretvoriti u odgovarajući čisti enantiomer(e) na načine dobro poznate stručnjaku.
[0159] „Abnormalan rast ćelija“ ili „kancer“, kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, odnosi se na rast ćelija koji je nezavisan od normalnih regulatornih mehanizama (npr. gubitak kontaktne inhibicije). Ovo uključuje abnormalni rast: (1) tumorskih ćelija (tumora) koje se razmnožavaju ekspresijom mutirane tirozin kinaze ili prekomernom ekspresijom receptorske tirozin kinaze; (2) benignih i malignih ćelija drugih proliferativnih bolesti kod kojih dolazi do abnormalne aktivacije tirozin kinaze; (3) bilo kojih tumora koji se razmnožavaju putem receptorskih tirozin kinaza; (4) bilo kojih tumora koji se razmnožavaju putem abnormalne aktivacije serin/treonin kinaze; (5) benignih i malignih ćelija drugih proliferativnih bolesti kod kojih dolazi do abnormalne aktivacije serin/treonin kinaze; (6) bilo kojih tumora koji se razmnožavaju putem abnormalne signalizacije, metaboličkog, epigenetskog i transkripcionog mehanizma; i (7) benignih i malignih ćelija drugih proliferativnih bolesti kod kojih dolazi do abnormalne signalizacije, metaboličkog, epigenetskog i transkripcionog mehanizma.
[0160] Radi lakšeg snalaženja, ovde se mogu koristiti određene dobro poznate skraćenice, uključujući: pozitivan na receptor estrogena (ER+), negativan na receptor 2 humanog epidermalnog faktora rasta (HER2-), nesitnoćelijski karcinom pluća (NSCLC) i kastracionorezistentni karcinom prostate (CRPC).
[0161] Dalji primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju abnormalnog rasta ćelija kod pacijenta. Dodatni primeri izvođenja se odnose na lečenje abnormalnog rasta ćelija kod pacijenta, koje obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, koje je efikasno u lečenju abnormalnog rasta ćelija.
[0162] U drugim primerima izvođenja, abnormalni rast ćelija je kancer.
[0163] U nekim primerima izvođenja, kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kancera pluća, mezotelioma, kancera kostiju, kancera pankreasa, kancera kože, kancera glave ili vrata, kožnog ili intraokularnog melanoma, kancera materice, kancera jajnika, kancera rektuma, kancera analnog regiona, kancera želuca, karcinoma jetre, kancera debelog creva, kancera dojke, kancera materice, karcinoma jajovoda, karcinoma endometrijuma, karcinoma grlića materice, karcinoma vagine, karcinoma vulve, Hodgkin-ove bolesti, kancera jednjaka, kancera tankog creva, kancera endokrinog sistema, kancera štitne žlezde, kancera paratiroidne žlezde, kancera nadbubrežne žlezde, sarkoma mekog tkiva, kancera uretre, kancera penisa, kancera prostate, hematološkog maligniteta, hronične ili akutne leukemije, limfocitnih limfoma, kancera bešike, kancera bubrega ili uretera, karcinoma bubrežnih ćelija, karcinoma bubrežne karlice, neoplazmi centralnog nervnog sistema (CNS), primarnog limfoma CNS, tumora kičme, glioblastoma, glioma moždanog stabla, adenoma hipofize ili kombinacija dva ili više gore navedenih karcinoma.
[0164] Dodatni primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju solidnih tumora kod pacijenta. Neki primeri izvođenja se odnose na lečenje solidnih tumora kod pacijenta, što obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, koje je efikasno u lečenju solidnog tumora.
[0165] U jednom primeru izvođenja, čvrsti tumor je tumor dojke, pluća, debelog creva, mozga, prostate, želuca, pankreasa, jajnika, melanoma, endokrinog sistema, materice, testisa ili bešike.
[0166] U jednom primeru izvođenja, čvrsti tumor je tumor dojke, pluća, prostate, pankreasa ili jajnika.
[0167] U jednom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke.
[0168] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je ER+ kancer dojke.
[0169] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je ER+ HER2- kancer dojke.
[0170] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je lokalno uznapredovali ili metastatski ER+ HER2- kancer dojke.
[0171] U jednom primeru izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća.
[0172] U jednom primeru izvođenja, kancer pluća je lokalno uznapredovali ili metastatski nesitnoćelijski kancer pluća.
[0173] U jednom primeru izvođenja, kancer prostate je kancer prostate otporan na kastraciju.
[0174] U jednom primeru izvođenja, kancer prostate je lokalno uznapredovali ili metastatski kastraciono-rezistentni kancer prostate.
[0175] Dodatni primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju hematoloških tumora kod pacijenta. Neki primeri izvođenja se odnose na lečenje hematoloških tumora kod pacijenta, što obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, koje je efikasno u lečenju hematološkog tumora.
[0176] U jednom primeru izvođenja, hematološki tumor je leukemija, limfom ili multipli mijelom.
[0177] U jednom primeru izvođenja, hematološki tumor je leukemija ili limfom.
[0178] Dodatni primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta, što obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, koje je efikasno u lečenju kancera.
[0179] U jednom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke, pluća, debelog creva, mozga, prostate, želuca, pankreasa, jajnika, melanoma, endokrini kancer, materice, testisa, bešike ili hematološki.
[0180] U jednom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke, pluća, prostate, pankreasa, jajnika ili hematološki.
[0181] U jednom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke, pluća, prostate, pankreasa ili jajnika.
[0182] U jednom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke.
[0183] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je ER+ kancer dojke.
[0184] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je ER+ HER2- kancer dojke.
[0185] U jednom primeru izvođenja, kancer dojke je lokalno uznapredovali ili metastatski ER+ HER2-rak dojke.
[0186] U jednom primeru izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća.
[0187] U jednom primeru izvođenja, kancer pluća je lokalno uznapredovali ili metastatski nesitnoćelijski kancer pluća.
[0188] U jednom primeru izvođenja, kancer prostate je kancer prostate otporan na kastraciju.
[0189] U jednom primeru izvođenja, kancer prostate je lokalno uznapredovali ili metastatski kastraciono-rezistentni kancer prostate.
[0190] U jednom primeru izvođenja, kancer je hematološki.
[0191] U jednom primeru izvođenja, hematološki tumor je leukemija ili limfom.
[0192] Dalji primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta, što obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, koje je efikasno u lečenju kancera, u kombinaciji sa antitumorskim sredstvom izabranim iz grupe koja se sastoji od mitotičkih inhibitora, alkilujućih sredstava, antimetabolita, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, zračenja, inhibitora ćelijskog ciklusa, enzima, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, antitela, citotoksičnih sredstava, antihormona i antiandrogena.
[0193] Više primera izvođenja se odnosi na farmaceutske kompozicije za lečenje kancera kod pacijenta koje sadrže količinu jedinjenja opisanog ovde koja je efikasna u lečenju kancera i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0194] Dodatni primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta, a posebno kod čoveka, što obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili hidrata, koje je efikasno u lečenju kancera. U jednom primeru izvođenja, kancer obuhvata, ali nije ograničen na, kancer pluća, kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kožni ili intraokularni melanom, kancer materice, kancer jajnika, kancer rektuma, kancer analnog regiona, kancer želuca, kancer debelog creva, kancer dojke, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, Hodgkin-ovu bolest, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer štitne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretre, kancer penisa, kancer prostate, hroničnu ili akutnu leukemiju, limfocitne limfome, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežnih ćelija, karcinom bubrežne karlice, neoplazme centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS-a, tumore kičme, gliom moždanog stabla, adenom hipofize ili kombinaciju jednog ili više gore navedenih kancera. Jedan primer izvođenja obuhvata davanje pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde koje je efikasno u lečenju pomenutog solidnog tumora kancera. U jednom preferiranom primeru izvođenja, solidni tumor je kancer dojke, pluća, debelog creva, mozga, prostate, želuca, pankreasa, jajnika, kože (melanom), endokrinog sistema, materice, testisa i bešike.
[0195] U drugom primeru izvođenja, navedeni kancer je benigna proliferativna bolest, uključujući, ali ne ograničavajući se na, psorijazu, benignu hipertrofiju prostate ili restenozu.
[0196] Neki primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta, što obuhvata davanje pomenutom pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili hidrata, koje je efikasno u lečenju kancera u kombinaciji sa antitumorskim sredstvom izabranim iz grupe koja se sastoji od mitotičkih inhibitora, alkilujućih sredstava, antimetabolita, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, inhibitora ćelijskog ciklusa, enzima, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, antitela, citotoksičnih sredstava, antihormona i antiandrogena.
[0197] Dodatni primeri izvođenja se odnose na Farmaceutska kompozicija za lečenje kancera kod pacijenta, a posebno kod čoveka, koji sadrži količinu jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili hidrata, koje je efikasno u lečenju kancera, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednom primeru izvođenja navedenog sastava, kancer obuhvata, ali nije ograničen na, kancer pluća, kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kožni ili intraokularni melanom, kancer materice, kancer jajnika, kancer rektuma, kancer analnog regiona, kancer želuca, kancer debelog creva, kancer dojke, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, Hodgkin-ovu bolest, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer štitne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretre, kancer penisa, kancer prostate, hroničnu ili akutnu leukemiju, limfocitne limfome, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežnih ćelija, karcinom bubrežne karlice, neoplazme centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS-a, tumore kičme, gliom moždanog stabla, adenom hipofize ili kombinaciju jednog ili više gore navedenih kancera. U drugom primeru izvođenja navedenog farmaceutskog sastava, navedeni abnormalni rast ćelija je benigna proliferativna bolest, uključujući, ali ne ograničavajući se na, psorijazu, benignu hipertrofiju prostate ili restenozu.
[0198] Dalji primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta, što obuhvata davanje pomenutom pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili hidrata, koje je efikasno u lečenju kancera u kombinaciji sa drugim antitumorskim sredstvom izabranim iz grupe koja se sastoji od mitotičkih inhibitora, alkilujućih sredstava, antimetabolita, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, inhibitora ćelijskog ciklusa, enzima, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, antitela, citotoksičnih sredstava, antihormona i antiandrogena. Neki primeri izvođenja razmatraju Farmaceutska kompozicija za lečenje abnormalnog rasta ćelija, gde sastav uključuje jedinjenje opisano ovde, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili hidrat, koje je efikasno u lečenju abnormalnog rasta ćelija, i drugo antitumorsko sredstvo izabrano iz grupe koja se sastoji od mitotičkih inhibitora, alkilujućih sredstava, antimetabolite, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, inhibitora ćelijskog ciklusa, enzima, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, antitela, citotoksičnih sredstava, antihormona i antiandrogena.
[0199] Još više primera izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u lečenju poremećaja povezanog sa angiogenezom kod pacijenta, uključujući čoveka, što obuhvata davanje pomenutom pacijentu količine jedinjenja opisanog ovde, kao što je gore definisano, ili farmaceutski prihvatljive soli, solvata, ili njegov hidrat, koji je efikasan u lečenju navedenog poremećaja u kombinaciji sa jednim ili više gore navedenih antitumorskih sredstava. Takvi poremećaji uključuju kancerogene tumore kao što je melanom; očne poremećaje kao što je makularna degeneracija povezana sa starenjem, pretpostavljeni sindrom očne histoplazmoze i neovaskularizacija mrežnjače usled proliferativne dijabetičke retinopatije; reumatoidni artritis; poremećaj gubitka koštane mase kao što su osteoporoza, Paget-ova bolest, humoralna hiperkalcemija maligniteta, hiperkalcemija od tumora metastatskih u kosti i osteoporoza izazvana lečenjem glukokortikoidima; koronarna restenoza; i određene mikrobne infekcije, uključujući one povezane sa mikrobnim patogenima odabranim iz adenovirusa, hantavirusa, Borrelia burgdorferi, Yersinia spp., Bordetella pertussis i streptokoka grupe A.
[0200] Neki primeri izvođenja se odnose na jedinjenja pronalaska za upotrebu u (i na Farmaceutska kompozicija za) lečenje kancera kod pacijenta, koja sadrže količinu jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili hidrata, u kombinaciji sa količinom jedne ili više supstanci izabranih iz anti-angiogeneznih sredstava, inhibitora signalne transdukcije (npr. inhibirajući način komunikacije regulatornih molekula koji upravljaju fundamentalnim procesima rasta, diferencijacije i preživljavanja ćelija unutar ćelije) i antiproliferativnih sredstava, koje su zajedno efikasne u lečenju pomenutog abnormalnog rasta ćelija.
[0201] Sredstva protiv angiogeneze, kao što su inhibitori MMP-2 (matriks-metaloproteinaze 2), inhibitori MMP-9 (matriks-metaloproteinaze 9) i inhibitori COX-II (ciklooksigenaze II), mogu se koristiti zajedno sa jedinjenjem opisanim ovde u metodama i farmaceutskim kompozicijama opisanim ovde.
[0202] Inhibitori tirozin kinaze takođe se mogu kombinovati sa jedinjenjem opisanim ovde.
[0203] Inhibitori VEGF, na primer, sutent i aksitinib, takođe se mogu kombinovati sa jedinjenjem opisanim ovde.
[0204] Inhibitori ErbB2 receptora mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem opisanim ovde. Razna druga jedinjenja, kao što su derivati stirena, takođe su pokazala da poseduju inhibitorna svojstva tirozin kinaze, a neki od inhibitora tirozin kinaze su identifikovani kao inhibitori erbB2 receptora.
[0205] Inhibitori receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0206] Inhibitori PI3K, kao što su inhibitori PI3K alfa ili PI3K beta, mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0207] Sisarska meta rapamicina (mTOR) mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0208] Inhibitori c-Met mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0209] Inhibitori CDK mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0210] Inhibitori MEK mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0211] Inhibitori PARP mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0212] Inhibitori JAK mogu se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0213] Antagonist proteina Programirane smrti 1 (PD-1) može se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0214] Antagonist liganda programirane smrti 1 (PD-L1) može se primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0215] Drugi antiproliferativni agensi koji se mogu koristiti sa jedinjenjima opisanim ovde uključuju inhibitore enzima farnezil protein transferaze i inhibitore receptorske tirozin kinaze PDGFr.
[0216] Jedinjenje opisano ovde može se takođe koristiti sa drugim sredstvima korisnim u lečenju abnormalnog rasta ćelija ili kancera, uključujući, ali ne ograničavajući se na, sredstva sposobna da pojačaju antitumorske imune odgovore, kao što su antitela protiv CTLA4 (citotoksični limfocitni antigen 4), i druga sredstva sposobna da blokiraju CTLA4; i antiproliferativna sredstva kao što su drugi inhibitori farnezil protein transferaze, na primer farnezil protein transferaza.
[0217] Jedinjenje opisano ovde može se primeniti kao jedina terapija ili može uključivati jednu ili više drugih antitumorskih supstanci, na primer onih izabranih iz, na primer, mitotičkih inhibitora, alkilujućih sredstava, antimetabolita, inhibitora faktora rasta, inhibitora ćelijskog ciklusa, interkalirajućih antibiotika, enzima i antihormona.
[0218] Jedinjenja opisana ovde mogu se koristiti sama ili u kombinaciji sa jednim ili više različitih antikancerogenih sredstava ili sredstava za potpornu negu. Na primer, jedinjenja opisana ovde mogu se koristiti sa citotoksičnim sredstvima. Neki primeri izvođenja takođe razmatraju upotrebu jedinjenja opisanih ovde zajedno sa hormonskom terapijom. Dalje, neki primeri izvođenja pružaju jedinjenje opisano ovde samo ili u kombinaciji sa jednim ili više proizvoda za potpornu negu, npr. proizvodom izabranim iz grupe koja se sastoji od Filgrastima (Neupogen), ondansetrona (Zofran), Fragmina, Prokrita, Aloksi, Emenda ili njihovih kombinacija. Takav zajednički tretman može se postići istovremenim, sekvencijalnim ili odvojenim doziranjem pojedinačnih komponenti tretmana.
[0219] Jedinjenja opisana ovde mogu se koristiti sa antitumorskim sredstvima, alkilujućim sredstvima, antimetabolitima, antibioticima, antitumorskim sredstvima biljnog porekla, derivatima kamptotecina, inhibitorima tirozin kinaze, antitelima, interferonima i/ili modifikatorima biološkog odgovora. U tom smislu, sledi neograničavajuća lista primera sekundarnih sredstava koja se mogu koristiti sa jedinjenjima opisanim ovde.
[0220] Neki primeri izvođenja se takođe odnose na Farmaceutska kompozicija koji sadrži jedinjenje formula (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, kao što je gore definisano, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem.
[0221] Dalji primeri izvođenja se odnose na Farmaceutska kompozicija koji obuhvata mešanje jedinjenja formula (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, kao što je gore definisano, sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem.
[0222] Za gore pomenute terapeutske primene, primenjena doza će, naravno, varirati u zavisnosti od korišćenog jedinjenja, načina primene, željenog lečenja i naznačenog poremećaja. Dnevna doza jedinjenja formula (I), (Ia) (II), (III), (IV), (V) ili (VI), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, može biti u opsegu od 1 mg do 1 grama; od 1 mg do 250 mg; od 1 mg do 100 mg; od 1 mg do 50 mg; od 1 mg do 25 mg; i od 1 mg do 10 mg.
[0223] Predmetni primeri izvođenja takođe obuhvataju kompozicije sa produženim oslobađanjem.
[0224] Primena jedinjenja opisanih ovde (u daljem tekstu „aktivno jedinjenje (jedinjenja)“) može se obaviti bilo kojom metodom koja omogućava isporuku jedinjenja do mesta delovanja. Ove metode uključuju oralne puteve, intraduodenalne puteve, parenteralnu injekciju (uključujući intravensku, potkožnu, intramuskularnu, intravaskularnu ili infuziju), lokalnu i rektalnu primenu.
[0225] Aktivno jedinjenje može se primeniti kao jedina terapija ili može uključivati jednu ili više drugih antitumorskih supstanci, na primer onih izabranih iz, na primer, mitotičkih inhibitora, na primer vinblastina; alkilujućih sredstava, na primer cis-platina, karboplatina i ciklofosfamida; antimetabolita, na primer 5-fluorouracila, citozin arabinozida i hidroksiureje, ili, na primer, jednog od poželjnih antimetabolita opisanih u European Patent Application No.
239362 kao što su N-(5-[N-(3,4-dihidro-2-metil-4-oksokinazolin-6-ilmetil)-N-metilamino]-2-tenoil)-L-glutaminska kiselina; inhibitori faktora rasta; inhibitori ćelijskog ciklusa; interkalirajući antibiotici, na primer adriamicin i bleomicin; enzimi, na primer interferon; i antihormoni, na primer antiestrogeni kao što je Nolvadex<®>(tamoksifen) ili, na primer, antiandrogeni kao što je Casodex<®>(4'-cijano-3-(4-fluorofenilsulfonil)-2-hidroksi-2-metil-3'-(trifluorometil)propionanilid). Takav zajednički tretman može se postići istovremenim, sekvencijalnim ili odvojenim doziranjem pojedinačnih komponenti tretmana.
[0226] Farmaceutska kompozicija može, na primer, biti u obliku pogodnom za oralnu primenu kao tableta, kapsula, pilula, prah, formulacije sa produženim oslobađanjem, rastvor, suspenzija, za parenteralnu injekciju kao sterilni rastvor, suspenzija ili emulzija, za lokalnu primenu kao mast ili krema ili za rektalnu primenu kao supozitorija. Farmaceutska kompozicija može biti u jediničnim doznim oblicima pogodnim za jednokratnu primenu preciznih doza. Farmaceutska kompozicija će uključivati konvencionalni farmaceutski nosač ili ekscipijent i jedinjenje opisano ovde kao aktivni sastojak. Pored toga, može uključivati i druga medicinska ili farmaceutska sredstva, nosače, adjuvanse itd.
[0227] Primeri parenteralnih oblika primene uključuju rastvore ili suspenzije aktivnih jedinjenja u sterilnim vodenim rastvorima, na primer, vodenim rastvorima propilen glikola ili dekstroze. Takvi dozni oblici mogu biti odgovarajuće puferovani, ako je potrebno.
[0228] Pogodni farmaceutski nosači uključuju inertne razblaživače ili punioce, vodu i različite organske rastvarače. Farmaceutske kompozicije mogu, po želji, sadržati dodatne sastojke kao što su arome, veziva, ekscipijenti i slično. Stoga, za oralnu primenu, tablete koje sadrže različite ekscipijente, kao što je limunska kiselina, mogu se koristiti zajedno sa različitim dezintegrantima kao što su skrob, alginska kiselina i određeni složeni silikati i sa vezivnim sredstvima kao što su saharoza, želatin i akacija. Pored toga, sredstva za podmazivanje kao što su magnezijum stearat, natrijum lauril sulfat i talk su često korisna za tabletiranje. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu se takođe koristiti u mekim i tvrdim želatinskim kapsulama. Poželjni materijali, zato, uključuju laktozu ili mlečni šećer i polietilen glikole visoke molekulske težine. Kada su vodene suspenzije ili eliksiri željeni za oralnu primenu, aktivno jedinjenje u njima može se kombinovati sa različitim zaslađivačima ili aromama, bojama ili bojama i, po želji, emulgatorima ili suspendovanju, zajedno sa razblaživačima kao što su voda, etanol, propilen glikol, glicerin ili njihove kombinacije.
[0229] Primeri i pripreme dati u nastavku dodatno ilustruju i ilustruju jedinjenja opisana ovde i postupke pripreme takvih jedinjenja. Obim ovde opisanih primera izvođenja nije ni na koji način ograničen sledećim primerima i pripremama. U sledećim primerima, molekuli sa jednim hiralnim centrom, osim ako nije drugačije naznačeno, postoje kao racemska smeša. Molekuli sa dva ili više hiralnih centara, osim ako nije drugačije naznačeno, postoje kao racemska smeša dijastereomera. Pojedinačni enantiomeri/dijastereomeri mogu se dobiti postupcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti.
[0230] U prikazanim primerima, oblici soli su povremeno izolovani kao posledica aditiva mobilne faze tokom HPLC hromatografskog prečišćavanja. U ovim slučajevima, soli kao što su formiat, trifluoroacetat i acetat su izolovane i testirane bez dalje obrade. Treba napomenuti da će osoba sa prosečnim znanjem u ovoj oblasti biti u stanju da ostvari oblik slobodne baze standardnom metodologijom (kao što je korišćenje jonoizmenjivačkih kolona ili izvođenje jednostavnih baznih ekstrakcija korišćenjem blage vodene baze).
[0231] Generalno, jedinjenja opisana ovde mogu se pripremiti postupcima poznatim u hemijskoj struci, posebno u svetlu opisa koji je ovde dat. Određeni postupci za proizvodnju jedinjenja opisanih ovde dati su kao dalje karakteristike primera izvođenja i ilustrovani su u reakcionim šemama datim u nastavku i u eksperimentalnom odeljku.
PRIMERI
[0232] Sledeći primeri i referentni primeri ilustruju ovaj pronalazak.
Opšti eksperimentalni detalji
[0233] Osim ako nije drugačije naznačeno, važe sledeće generalizacije.<1>H NMR spektri su snimljeni na Bruker Ultrashield Plus (400 MHz) ili Bruker AVANCE III (400 MHz). Multiplicitet signala je označen sledećim skraćenicama: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; p, pentet; sept, septet; dd, dublet dubleta; dt, dublet tripleta; tt, triplet tripleta; br, široki; m, multiplet. Sve posmatrane konstante sprezanja, J, su prikazani u hercima (Hz). Zamenljivi protoni se ne primećuju uvek. LCMS podaci su generisani korišćenjem Agilent 6100 serije Single Quad, Agilent 1260 Infinity serije UPLC/MS, Agilent 1200 (LCMS-A), Waters 2695 Alliance, Agilent 6120 Single Quad ili maseno usmerene HPLC-MS. Izotopi hlora su prikazani kao<35>Cl izotopi, broma su prijavljeni kao<79>Br ili<81>Br ili oba<79>Br/<81>Br.
Reprezentativna LCMS metodologija je data u nastavku:
[0234]
Instrument: Agilent serija 6100 jednostruki četvorostruki LC/MS, Agilent serija 1200 HPLC, Pumpa: 1200 serija G1311A kvaternarna pumpa, Automatski uzorkovač: 1200 serija G1329A termostatirani automatski uzorkovač, Detektor: 1200 serija G1314B detektor sa promenljivom talasnom dužinom
LC uslovi: HPLC analiza sa reverznom fazom, kolona: Luna C8 (2) 5 µm 50 × 4,6 mm 100 Å, temperatura kolone: 30 °C, zapremina ubrizgavanja: 5 µL, rastvarač A: voda 0,1 % mravlja kiselina, rastvarač B: MeCN 0,1 % mravlja kiselina, gradijent: 5-100 % rastvarač B tokom 10 min, detekcija: 254 nm ili 214 nm
MS uslovi: Izvor jona: Kvadrupol, Jonski režim: Multimodni ES, Temperatura gasa za sušenje: 300 °C, Temperatura isparivača: 200 °C, Kapilarni napon (V): 2000 (pozitivan), Kapilarni napon (V): 4000 (negativan), Opseg skeniranja: 100-1000, Veličina koraka: 0,1 sek, Vreme akvizicije: 10 min
LCMS metoda A (LCMS-A): LC model: Agilent 1200, Tip pumpe: Binarna pumpa, Tip detektora: DAD, MS model: Agilent G6110A Kvadrupol, LC uslovi: Kolona: Xbridge-C18, 2,5 µm, 2,1×30 mm, Temperatura kolone: 30 °C, Akvizicija talasne dužine: 214 nm, 254 nm, Mobilna faza: A: 0,07% vodeni rastvor HCOOH, B: MeOH; MS uslovi: MS: Izvor jona: ES+ (ili ES-) MS opseg: 50 - 900 m/z, Fragmentor: 60, Protok gasa za sušenje: 10 l/min, Pritisak raspršivača: 35 psi Temperatura gasa za sušenje: 350 °C, Vcap: 3,5 kV
Tabela gradijenata:
Priprema uzorka:
[0235] Uzorak je rastvoren u metanolu, koncentracije oko 0,11 - 1 mg/ml, zatim filtriran kroz špric filter sa 0,22 µm. (Zapremina ubrizgavanja: 1 - 10 µL)
Opšti postupci:
[0236] Osim ako nije drugačije naznačeno, promenljive u Šemama I-VI imaju ista značenja kao što je ovde definisano.
[0237] Kao što je prikazano u Šemi I, jedinjenje tipa I može se tretirati jedinjenjem tipa II u prisustvu efikasne baze (kao što je Cs2CO3) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je MeCN) da bi se dobilo jedinjenje tipa III. Jedinjenje tipa III može se pretvoriti u jedinjenje tipa IV tretmanom sa N-hidroksiacetamidom u prisustvu efikasne baze (kao što je K2CO3ili 1,1,3,3-tetrametilguanidin) u odgovarajućoj smeši rastvarača (kao što je DMF/H2O). Jedinjenje tipa IV može se tretirati jedinjenjem tipa V u prisustvu efikasne baze (kao što je piridin, NaH ili NaOtPn), čisto ili u odgovarajućem rastvaraču (kao što su THF ili DMF), da bi se dobilo jedinjenje Formula (A). U nekim slučajevima, jedinjenja tipa II, III, i IV, ili Formula (A) može da sadrži zaštitne grupe, koje se mogu dodati ili ukloniti dodatnim koracima u sintetičkom nizu koristeći uslove poznate u struci (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981 or Protecting Groups, 10 Georg Thieme Verlag, 1994).
Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<2a>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>i R<8>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
[0238] Kao što je prikazano u Šemi II, jedinjenje tipa VI može se deuterovati tretmanom efikasnom bazom (kao što je Cs2CO3) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je CD3OD) da bi se dobilo jedinjenje tipa VII. Jedinjenje tipa VII može se pretvoriti u jedinjenje tipa VIII tretmanom sa N-hidroksiacetamidom u prisustvu efikasne baze (kao što je 1,1,3,3-tetrametilguanidin) u odgovarajućoj smeši rastvarača (kao što je MeCN/D2O). Jedinjenje tipa VIII može se tretirati jedinjenjem tipa V u prisustvu efikasne baze (kao što je piridin), nerazblažene, da bi se dobilo jedinjenje Formula (B). Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<3>, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
[0239] Kao što je prikazano u Šemi III, jedinjenje tipa IX može se pretvoriti u jedinjenje tipa X tretmanom sa 1-(metansulfonil)-1H-pirazol u prisustvu efikasne baze (kao što je Cs2CO3) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je MeCN). Jedinjenje tipa X može se tretirati jedinjenjem tipa V u prisustvu efikasne baze (kao što je piridin), nerazblažene, da bi se dobilo jedinjenje Formula (C). Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<3>, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
Kao što je prikazano u Šemi IV, jedinjenje tipa XI, sa odgovarajućom odlazećom grupom (kao što je -Br ili -SO2CH3) može se pretvoriti u jedinjenje tipa VI tretmanom sa 1H-pirazol u prisustvu efikasne baze (kao što je Cs2CO3) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je MeCN). Jedinjenje tipa VI može se pretvoriti u jedinjenje tipa X tretmanom sa N-hidroksiacetamid u prisustvu efikasne baze (kao što je 1,1,3,3-tetrametilguanidin) u odgovarajućoj smeši rastvarača (kao što je DMF/H2O). Jedinjenje tipa X može se tretirati jedinjenjem tipa V u prisustvu odgovarajuće baze (kao što je piridin), nerazblažene, da bi se dobilo jedinjenje Formula (C).
Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<3>, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
[0240] Kao što je prikazano u Šemi V, jedinjenje tipa XII može se pretvoriti u jedinjenje tipa XIII tretmanom sa odgovarajuće izborno supstituisanim 1H-pirazol u prisustvu efikasne baze (kao što je Cs2CO3) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je MeCN). Jedinjenje tipa XIII može se pretvoriti u jedinjenje tipa XIV pod uslovima Suzukijevog unakrsnog kuplovanja u prisustvu efikasnog katalizatora (kao što je metansulfonato(tri-t-butilfosfino)(2"amino-1,1-bifenil-2-il)paladijum(II)) u odgovarajućoj smeši rastvarača (kao što je PhMe/H2O). Jedinjenje tipa XIV može se pretvoriti u jedinjenje tipa XV tretmanom sa N-hidroksiacetamid u prisustvu efikasne baze (kao što je 1,1,3,3-tetrametilguanidin) u odgovarajućoj smeši rastvarača (kao što je DMF/H2O). Jedinjenje tipa XV može se tretirati jedinjenjem tipa V u prisustvu odgovarajuće baze (kao što je piridin), nerazblažene, da bi se dobilo jedinjenje Formula (D). Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<2a>, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
[0241] Kao što je prikazano u Šema VI, jedinjenje tipa XVI može se pretvoriti u jedinjenje tipa XVII tretmanom sa (3,5-dimetoksifenil)metanolom pod Micunobu uslovima (PPh3, DIAD) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je 2-Me-THF). Jedinjenje tipa XVII može se pretvoriti u jedinjenje tipa XVIII pod uslovima Suzukijevog unakrsnog kuplovanja u prisustvu efikasne kombinacije katalizatora/liganda (kao što je Pd(OAc)2/X-Phos) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je CPME/H2O). Jedinjenje tipa XVII može se pretvoriti u jedinjenje Formula (C) tretmanom efikasnom kiselinom (kao što je TFA) u odgovarajućem rastvaraču (kao što je DCM). Jedinjenja u svakom koraku mogu se prečistiti standardnim tehnikama, kao što su hromatografija na koloni, kristalizacija ili SFC ili HPLC sa reverznom fazom. Promenljive R<3>, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>su kao što je definisano u ovde navedenim primerima izvođenja, šemama, primerima i zahtevima.
Sinteza intermedijera:
Priprema 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01) prema šemi 1.
Korak 1: Sinteza 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (1b).
[0243] U rastvor 4-bromo-2,6-difluorobenzonitrila (1a) (40,0 g, 183,5 mmol) u THF (210,0 ml) i MeOH (30,0 ml) dodat je NaOMe (11,9 g, 220 mmol) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. TLC analiza (1:4 EtOAc/petrol etar) pokazala je potrošnju početnog materijala. Smeša je prebačena u levak za odvajanje i isprana sa H2O (150 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (300 ml). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (330 g SiO2, 10% EtOAc/petrol etar) da bi se dobio 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitril (1b) (15.7 g, prinos 52%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49 (dd, J=1,5, 8,8 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 3,98 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza metil 4-cijano-3-fluoro-5-metoksibenzoata (1c).
[0244] Rastvor 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (1b) (15.7 g, 68,2 mmol), TEA (20,7 g, 205 mmol), dppp (2,8 g, 6,8 mmol) i Pd(OAc)2(766 mg, 3,4 mmol) u MeOH (150 ml) je mešano na 80 °C u atmosferi CO2tokom 16 sati. TLC analiza (1:4 EtOAc/petrol etar) je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (120 g SiO2, 1:4 EtOAc/petrol etar) da bi se dobio metil 4-cijano-3-fluoro-5-metoksibenzoat (1c) (10,0 g, prinos 70%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,53 - 7,47 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,91 (s, 3H).
Korak 3: Sinteza 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01).
[0245] U rastvor metil 4-cijano-3-fluoro-5-metoksibenzoata (1c) (9,5 g, 45,4 mmol) u THF (50 mL) dodat je LiBH4(2.0 g, 90,8 mmol) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 70 °C tokom 2 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala uz formiranje željene mase proizvoda. Reakcija je ugašena sporim dodavanjem H2O (100 ml). Smeša je prebačena u levak za odvajanje i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 150 ml). Spojeni organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitril (Int-01) (7.9 g, prinos 96%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,05 (s, 1H), 6,98 (d, J=10,0 Hz, IH), 4,58 (d, J=5,7 Hz, 2H), 3,95 (s, 3H).
[0246] Intermedijeri u tabeli ispod su pripremljeni prema postupcima koji se koriste za sintezu 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01). Sledeći intermedijeri su sintetizovani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 1:
Alternativna priprema 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01) prema Šemi 2.
[0247]
Korak 1: Sinteza 2,6-difluoro-4-(hidroksimetil)benzonitrila (2b).
[0248] Rastvor 2,6-difluoro-4-formilbenzonitrila (2a) (21.5 g, 129 mmol) u apsolutnom etanolhidroksidu (400 ml) je ohlađen u kupatilu sa ledenom vodom na ~3 °C (interno). Čvrsti NaBH4(5x1 g peleta, 5,0 g, 130 mmol) je dodato, što je izazvalo blago oslobađanje gasa. Smeša je mešana uz hlađenje u ledeno-vodenom kupatilu tokom 2 sata, a zatim je reakcija ugašena na istoj temperaturi dodavanjem dejonizovane H₂O kap po kap (100 ml tokom 5 min). Vodeni rastvor HCl (2,0 N, 50 ml tokom 30 min) je polako dodat, održavajući temperaturu <10 °C (interno). Rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se uklonio EtOH. Vodeni ostatak je prebačen u levak za odvajanje, ostavljajući za sobom gumastu belu čvrstu supstancu. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (2x), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je triturisan sa heptanom, filtriran i osušen pod vakuumom da bi se dobio 2,6-difluoro-4(hidroksimetil)benzonitril. (2b) (21.3 g, 98%) kao slobodno tekuća bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (d, J=9,3 Hz, 2H), 5,69 (br. s, 1H), 4,60 (br. s, 2H).
Korak 2: Sinteza 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01).
[0249] Rastvor 2,6-difluoro-4-(hidroksimetil)benzonitrila (2b) (21,3 g, 126 mmol) u anhidrovanom MeOH (400 ml) je ohlađeno na -40 °C (unutrašnje) pomoću kupatila sa suvim ledom/acetonitrilom. Rastvor NaOMe (5,0 M u MeOH, 100 ml, 500 mmol) je dodat tokom 10 minuta preko levka za dodavanje u kapima. Nakon završetka dodavanja, kupatilo za hlađenje je uklonjeno. Smeša je ostavljena da se prirodno zagreje do sobne temperature i mešana je dodatnih 8 sati. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C (interno) i HCl (2,0 N, 200 ml) je dodata kap po kap da bi se dobio rastvor sa pH ~5-6. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio MeOH. Vodeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (2x), osušeni preko MgSO4, i filtrirani. Smeša je koncentrovana na ~150 ml na rotacionom uparivaču (temperatura kupatila ~35 °C) i dobijena suspenzija je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu. Čvrste materije su sakupljene filtracijom. Filter kolač je ispran heptanom (2x). Filtrat i heptanska ispiranja su dalje koncentrovani da bi se dobila druga porcija čvrstih materija, koje su sakupljene filtracijom. Spojene čvrste materije su osušene pod vakuumom da bi se dobio 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitril (Int-01) (18.6 g, 82%) kao bledožuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,82 (s, 1H), 6,79 (d, J=9,2 Hz, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,97 (s, 3H).
[0250] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01). Sledeći intermedijer je sintetisan sa nekritičnim izmenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 2:
Priprema 2-fluoro-4-(hidroksimetil)benzonitrila (Int-06) prema Šemi 3.
[0251]
[0252] Rastvor (5,0 g, 33,5 mmol) 2-fluoro-4-formilbenzonitrila (3a) u EtOH (100 ml) je ohlađen na 0 °C. NaBH4(1.3 g, 33 mmol) je dodat i reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Smeša je ugašena dodavanjem H₂O kap po kap (25 mL tokom 5 min). Dodata je razblažena HCl (2 N, 13 mL), održavajući unutrašnju temperaturu <10 °C. Rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se uklonio EtOH. Vodena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane. Ostatak je trituriran sa heptanom i osušen da bi se dobio 2-fluoro-4-(hidroksimetil)benzonitril (Int-06) (4.2 g, prinos 82%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,87 (dd, J=7,9, 6,8 Hz, 1H), 7,42 (dd, J=10,6, 1.3 Hz, 1H), 7,35 (dd, J=8,0, 1,3 Hz, 1H), 5,55 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,60 (d, J=5,7 Hz, 2H).
Priprema 5-bromo-4-(bromometil)-2-fluorobenzonitrila (Int-07) prema Šemi 4.
[0253]
[0254] U rastvor 5-bromo-2-fluoro-4-metilbenzonitrila (4a) (1.01 g, 4,72 mmol) u MeCN (10,0 ml) dodat je 1,3-dibromo-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (701 mg, 2,45 mmol) i AIBN (101 mg, 0,613 mmol). Smeša je mešana na 80 °C preko noći, a zatim koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (80 g SiO2, 0-30% EtOAc/heptan) da bi se obezbedilo (Int-07) (847 mg, prinos 84%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,84 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8,9 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H).
[0255] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu 5-bromo-4-(bromometil)-2-fluorobenzonitrila (Int-07). Sledeći intermedijer je sintetisan sa nekritičnim izmenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 3:
Priprema (4-cijano-2,5-difluorofenil)metil metansulfonata (Int-09) prema Šemi 5.
[0256]
Korak 1: Sinteza 2,5-difluoro-4-(hidroksimetil)benzonitrila (5b)
[0257] Rastvor 2,5-difluoro-4-formilbenzonitrila (5a) (250 mg, 1,5 mmol) u EtOH (5,0 ml) je ohlađeno na 0 °C pomoću ledenog kupatila, a zatim je dodat NaBH4(60 mg, 1,6 mmol). Smeša je mešana 30 minuta na 0 °C. Reakcija je ugašena na istoj temperaturi dodatkom H2O (0,5 mL) i HCl (6,0 N, 0,32 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio 2,5-difluoro-4-(hidroksimetil)benzonitril (5b) (202 mg, prinos 80%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44 (dd, J=5,62, 8,80 Hz, 1H), 7,30 (dd, J=4,89, 8,56 Hz, 1H), 4,85 (s, 2H).
Korak 2: Sinteza (4-cijano-2,5-difluorofenil)metil metansulfonata (Int-09)
[0258] Rastvor 2,5-difluoro-4-(hidroksimetil)benzonitrila (5b) (915 mg, 5,41 mmol) u DCM (25,0 ml) je ohlađen na 0 °C, a zatim su dodati TEA (871 mg, 5,84 mmol) i MsCl (649 g, 5,66 mmol). Posle 2 sata, reakcija je direktno napunjena na SiO2i prečišćena fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-75% EtOAc/heptan) da bi se dobio (4-cijano-2,5-difluorofenil)metil metansulfonat (Int-09) (1.15 g, prinos 86%) kao bistro ulje, koje se stvrdnulo stajanjem.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44 - 7,39 (m, 2H), 5,34 - 5,32 (m, 2H), 3,14 (s, 3H).
[0259] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu (4-cijano-2,5-difluorofenil)metil metansulfonata (Int-09). Sledeći intermedijer je sintetisan sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi neko ko je stručan u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 4:
Priprema 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-5-metilbenzonitrila (Int-11) prema šemi 6.
Korak 1: Sinteza metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoata (6b)
[0261] U rastvor 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrila (6a) (1.0 g, 4,67 mmol) i TEA (1,7 g, 17 mmol) u MeON (30,0 ml) u posudi od nerđajućeg čelika od 100 ml dodat je PdCl2(dppf) (247 mg, 0,327 mmol). Posuda je pod pritiskom CO2do 4 bara i mešana na 55 °C tokom 20 h. Reakcija je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-55% EtOAc/heptan) da bi se dobio metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoat (6b) (716 mg, prinos 79%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,74 (d, J=9,4 Hz, 1H), 7,52 (d, J=6,1 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-5-metilbenzonitrila (Int-11)
[0262] U rastvor metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoata (6b) (710 mg, 3,68 mmol) u THF (18,4 ml) dodat je LiBH4(120 mg, 5,51 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je ugašena sa H2O (3 mL). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim ohlađena u ledenom kupatilu. Smeša je pažljivo ugašena sa HCl (6,0 N, 0,60 mL). THF je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je raspodeljen između EtOAc i 1:1 H2O/zasićeni vodeni rastvor NaHCO3.Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (24 g SiO2, 0-80% EtOAc/heptan) da bi se dobio 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-5-metilbenzonitril (Int-11) (495 mg, prinos 82%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,44 - 7,35 (m, 2H), 4,74 (d, J=5,5 Hz, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,84 (t, J=5,5 Hz, 1H),<19>F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -110,29 (dd, J=5,7, 10,3 Hz).
Priprema (3-amino-5-fluoro-4-metoksi-1,2-benzoksazol-6-il)metanola (Int-12) prema Šemi 7.
[0263]
Korak 1: Sinteza (2,3,5-trifluorofenil)metanola (7b)
[0264] U rastvor 2,3,5-trifluorobenzaldehida (7a) (1.8 g, 11 mmol) u THF (30 ml) dodat je NaBH4(468 mg, 12,4 mmol) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je ugašena sporim dodavanjem H2O (10 mL) i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-50% EtOAc/heptan) da bi se dobio (2,3,5-trifluorofenil)metanol (7b) (740 mg, prinos 41%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,10 - 6,96 (m, 1H), 6,94 - 6,78 (m, 1H), 4,81 (d, J=5,9 Hz, 2H), 1,91 (t, J=6,1 Hz, 1H).
Korak 2: Sinteza terc-butil(dimetil)[(2,3,5-trifluorofenil)metoksi]silana (7c)
[0265] U rastvor (2,3,5-trifluorofenil)metanola (7b) (740 mg, 4,56 mmol) u DCM (20 ml) dodat je DMAP (27,9 mg, 0,228 mmol), TEA (639 mg, 6,85 mmol) i rastvor TBSCI (894 mg, 5,93 mmol) u DCM (5 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. LCMS je pokazao potrošnju početnog materijala. Smeša je koncentrovana do sušenja, a ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-10% EtOAc/petrol etar) da bi se dobilo tercbutil(dimetil)[(2,3,5-trifluorofenil)metoksi]silan (7c) (1.1 g, prinos 87%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,06 - 6,95 (m, 1H), 6,87 - 6,70 (m, 1H), 4,79 (s, 2H), 0,95 (s, 9H), 0,13 (s, 6H).
Korak 3: Sinteza 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2,3,6-trifluorobenzonitrila (7d)
[0266] Rastvor LDA (0,07 M u THF, 20,0 mL, 1,41 mmol) u THF (20 mL) je ohlađen na -70 °C, a zatim je kap po kap tretiran rastvorom terc-butil(dimetil)[(2,3,5-trifluorofenil)metoksi]silana (7c) (300 mg, 1,09) u THF (5 mL) tokom 5 minuta. Smeša je mešana 2 sata na -70 °C, a zatim je kap po kap tretirana rastvorom p-tolilsulfonil cijanida (216 mg, 1,19 mmol) u THF (5 mL) tokom 10 minuta. Smeša je mešana na -70 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena dodatkom zasićenog vodenog rastvora NH4Cl i raspoređen između EtOAc (60 mL) i H2O (60 mL). Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (SiO2, 3:1 - 10:1 EtOAc/petrol etar). Spojene frakcije koje sadrže proizvod su ponovo prečišćene preparativnom HPLC sa Agela DuraShell C18 kolonom (150x25 mm, veličina čestica 5 µm), koja je eluirana sa 70-100% MeCN/H2O (+0,04% NH4OH, 10 mM NH4HCO3) sa brzinom protoka od 25 mL/min da bi se dobio 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2,3,6-trifluorobenzonitril (7 dana) (150 mg, prinos 46%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,10 - 7,02 (m, 1H), 4,69 (s, 2H), 0,81 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).
Korak 4: Sinteza 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,6-difluoro-2-metoksibenzonitril (7e)
[0267] U rastvor 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2,3,6-trifluorobenzonitrila (7 dana) (150 mg, 0,498 mmol) u THF (20 ml) dodat je NaOMe (71,7 mg, 0,398 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena sa H2O i podeljena između EtOAc i H2O. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio sirovi 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,6-difluoro-2-metoksibenzonitril (7e) (150 mg, prinos 96%) kao žuto ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Korak 5: Sinteza (3-amino-5-fluoro-4-metoksi-1,2-benzoksazol-6-il)metanola (Int-12)
[0268] U rastvor sirovog 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,6-difluoro-2-metoksibenzonitrila (7e) (150 mg, 0,479 mmol) i N-hidroksiacetamid (108 mg, 1,33 mmol) u DMF-u (10 ml) i H2O (2 mL) dodat je K2CO3(397 mg, 2,87 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC-om sa Agela DuraShell C18 kolonom (150x25 mm, veličina čestica 5 µm), koja je eluirana sa 5-35% MeCN/H.2O H2O (+0,04% NH4OH, 10 mM NH4HCO3) sa brzinom protoka od 25 mL/min da bi se dobio (3-amino-5-fluoro-4-metoksi-1,2-benzoksazol-6-il)metanol (Int-12) (25 mg, prinos od 24% u dva koraka) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,12 (d, J=4,3 Hz, 1H), 6,03 (s, 2H), 5,47 (t, J=5,8 Hz, 1H), 4,62 (d, J=5,6 Hz, 2H), 4,05 (s, 3H); m/z (ESI+) 213,1 (M+H)<+>.
Priprema 1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-13) prema Šemi 8.
[0269]
[0270] U rastvor 1H-pirazola (8a) (33.0 g, 485 mmol) i TEA (73,6 mg, 727 mmol) u DCM je polako dodat MsCl (73,9 g, 645 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 minuta, a zatim na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. TLC analiza (1:1 EtOAc/petrol etar) je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je razblažena zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (200 mL) i smeša je razdvojena. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (200 mL). Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom (300 mL) i zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3(300 ml), osušeno preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio 1-(metansulfonil)-1H-pirazol (Int-13) (64 g, prinos 90%) kao bledožuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,04 (d, J=2,6 Hz, 1H), 7,86 - 7,79 (m, 1H), 6,46 (dd, J=1,6, 2,7 Hz, 1H), 3,33 (s, 3H).
[0271] Intermedijeri u tabeli ispod su pripremljeni prema postupcima koji se koriste za sintezu 1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-13). Sledeći intermedijeri su sintetizovani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je naznačeno, regioizomerne smeše su izolovane bez daljeg razdvajanja.
Tabela 5:
Priprema 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-(metansulfonil)-1H-pirazol (Int-17) prema Šemi 9.
Korak 1: Sinteza 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazola (9b).
[0273] U rastvor (1H-pirazol-4-il)metanola (9a) (500 mg, 5,1 mmol) u DCM (10,0 ml) dodat je TBSCI (845 mg, 5,6 mmol), TEA (774 mg, 7,7 mmol) i DMAP (31,1 mg, 0,26 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala sa formiranjem željene mase proizvoda. Smeša je razblažena sa DCM (20 ml) i isprana sukcesivno sa H2O (20 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(20 ml) i fiziološkim rastvorom (20 ml). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol (9b) (1.0 g, prinos 92%), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. m/z (ESI+) 212,8 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-17).
[0274] Rastvoru 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol (9b) (1.0 g, 4,7 mmol) u DCM (15,0 ml) dodat je TEA (619 mg, 6,1 mmol). Smeša je ohlađena na 0 °C pomoću kupatila sa ledenom vodom. MsCl (3,8 g, 33,0 mmol) je dodat kap po kap. Smeša je mešana 2 sata na 0 °C i sobnoj temperaturi tokom 16 sati. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala uz formiranje željene mase proizvoda. Smeša je razblažena sa DCM (100 ml) i isprana sukcesivno sa H2O (50 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml) i fiziološkim rastvorom (50 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-(metansulfonil)-1H-pirazol (Int-17) (1.1 g, prinos 80%), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. m/z (ESI+) 291,1 (M+H)<+>.
[0275] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu 4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-17). Sledeći intermedijer je sintetisan sa nekritičnim izmenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je naznačeno, regioizomerne smeše su izolovane bez daljeg razdvajanja.
Tabela 6:
Priprema 2,4,6-trimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-19) prema Šemi 10.
[0276]
[0277] Hlorosumporna kiselina (15,0 ml) je ohlađena na -10 °C i 1,3,5-trimetoksibenzen (10a) (1.4 g, 8,4 mmol) je dodat u jednoj porciji. Smeša je mešana na -10 °C tokom 15 minuta. TLC analiza (1:1 EtOAc/petrol etar) je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je ugašena pažljivim prelivanjem preko ledene vode. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3x100 mL). Spojeni organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani.
[0278] Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, 0-50% EtOAc/petrol etar) da bi se dobio 2,4,6-trimetoksibenzen-1-sulfonil hlorid. (Int-19) (1.8 g, prinos 60%) kao čvrsta supstanca, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,12 (s, 2H), 3,96 (s, 6H), 3,89 (s, 3H).
[0279] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu 2,4,6-trimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-19). Sledeći intermedijer je sintetisan sa nekritičnim izmenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 7:
Priprema 2-metoksi-5-(trifluorometoksi)benzen-1-sulfonil hlorida (Int-21) prema Šemi 11.
[0281] Hlorosumporna kiselina (26,0 ml) je ohlađena na 0 °C i 1-metoksi-4-(trifluorometoksi)benzen (11a) (2.0 g, 10,4 mmol) je dodat u jednoj porciji. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakcija je ugašena pažljivim prelivanjem preko ledene vode. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2x60 ml). Spojeni organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3(50 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio 2-metoksi-5-(trifluorometoksi)benzen-1-sulfonil hlorid (Int-21) (2.6 g, prinos 86%) kao žuto ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,85 (d, J=2,8 Hz, 1H), 7,56 (dd, J=2,4, 9,1 Hz, 1H), 7,16 (d, J=9,2 Hz, 1H), 4,08 (s, 3H).
Priprema 2-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-sulfonil hlorida i 3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonil hlorida (Intermedijer-22) prema Šemi 12.
[0282]
[0283] Smeša CHCl3(10.0 mL) i hlorsumporne kiseline (1,0 mL) je ohlađena na -10 °C i dodat je 6-metoksi-1,2,3,4-tetrahidronaftalen (12a) (1.0 g, 6,1 mmol). Smeša je mešana na -10 °C tokom 15 minuta. TLC analiza (1:1 EtOAc/petrol etar) je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je ugašena pažljivim prelivanjem preko ledene vode. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3x50 mL). Spojeni organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-50% EtOAc/petrol etar) da bi se dobio 2-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-sulfonil hlorid i 3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonil hlorid (Int-22) (~1:1 smeša, 600 mg, prinos 37%) kao bledožuta guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,65 (s, 1H), 7,35 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,92 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 4,01 (s, 6H), 3,23 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,91 - 2,63 (m, 6H), 1,88 - 1,69 (m, 8H).
[0284] Intermedijer u tabeli ispod je pripremljen prema postupcima koji se koriste za sintezu 2-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-sulfonil hlorida i 3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonil hlorida. (Int-22). Sledeći intermedijeri su sintetizovani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi neko ko je stručan u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 8:
Priprema 4-ciklopropil-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-24) prema Šemi 13.
[0285]
[0286] rastvor iz (13a) (1.0 g, 5,61 mmol) (J. Org. Chem. 2008, 7481-7485) i TMEDA (717 mg, 6,17 mmol) u petrolej etru (15,0 ml) je ohlađen u kupatilu sa ledenom vodom, a zatim je kap po kap dodat n-BuLi (2,5 M u heksanima, 2,5 ml, 6,17 mmol) preko levka za dodavanje, održavajući temperaturu <5 °C (interno). Smeša je mešana na 0 °C tokom 20 minuta, a zatim ohlađena na -70 °C pomoću kupatila sa suvim ledom/acetonom. Prethodno ohlađen rastvor (-65 °C) SO2(5.4 g, 84,2 mmol) u Et2O (100 mL) je polako dodat, održavajući temperaturu < -60 °C (interno). Bledožuta reakciona smeša je polako zagrejana na 10 °C. Dobijene čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane suvim Et2O. Filter kolač je suspendovan u heksanu (30 mL) i smeša je ohlađena na 0 °C. U hladnu suspenziju je dodat rastvor SOCl2(757 mg, 5,61 mmol) u heksanu (20 ml) polako, održavajući temperaturu <3 °C (interno). Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 18 sati. Rastvor je filtriran, a filter kolač je ispran hladnim heksanom (20 ml). Čvrste materije su rastvorene u EtOAc (50 ml) i isprane sa H2O (50 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio 4-ciklopropil-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorid (Int-24) (856 mg, prinos 55%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,32 (s, 2H), 3,97 (s, 6H), 1,93 (tt, J=5,0, 8,3 Hz, 1H), 1,18-1,11 (m, 2H), 0,86-0,80 (m, 2H).
Priprema 4-metoksi-6-((4-metil-1H-pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-amina (Int-25) prema Šemi 14.
[0287]
Korak 1: Sinteza 4-(bromometil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (14b).
[0288] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01) (8.0 g, 44,2 mmol) i PPh3(18.7 g, 71,2 mmol) u acetonitrilu (400 ml) dodat je Br2(11.8 g, 73,8 mmol) i smeša je zagrejana na 55 °C tokom 2 sata. Voda i višak Na2SO3su dodati i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Petrol etar/EtOAc = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9,7 g, 91%) kao bela čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku.
Korak 2: Sinteza 2-fluoro-6-metoksi-4-((4-metil-1H-pirazol-1-il)metil)benzonitrila (14c).
[0289] Smeša 4-(bromometil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (14b) (100 mg, 0,41 mmol), 4-metil-1H-pirazola (40 mg, 0,49 mmol) i K2CO3(113 mg, 0,82 mmol) u DMF (5 ml) zagrejana je na 60 °C preko noći. Smeša je razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc i organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Reakcija je uvećana u odgovarajućem obimu korišćenjem 4-(bromometil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (14b) (500 mg, 2,05 mmol) i dve serije su spojene i prečišćene hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 mg, 63%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z 246.0 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-metoksi-6-((4-metil-1H-pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-amina (Int-25)
[0290] U rastvor N-hidroksiacetamida (238 mg, 3,18 mmol) u anhidrovanom DMF (13 ml) na 0 °C dodat je t-BuOK (357 mg, 3,18 mmol) i smeša je mešana 30 minuta. 2-Fluoro-6-metoksi-4-((4-metil-1H-pirazol-1-il)metil)benzonitril (14c) (260 mg, 1,06 mmol) je zatim dodato i smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 55%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z 259,1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,37 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,43 (s, 1H), 5,31 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).
Priprema 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida (Int-26) prema Šemi 15.
[0291]
[0292] U rastvor 1,3-dimetoksibenzena (5,0 g, 36 mmol) i TMEDA (4,6 g, 39,8 mmol) u nheksanu (100 ml) na 0 °C pod N2dodat je n-BuLi (2,5 M rastvor u heksanima, 16,0 mL, 39,8 mmol) kap po kap, dok je unutrašnja temperatura reakcije održavana ispod 5 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 20 minuta, zatim ohlađena na -78 °C i barbotirana sa gasovitim SO2tokom 20 minuta. Smeša je zatim ostavljena da se polako zagreje do 10 °C, a dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran suvim dietil etrom. Čvrsta supstanca je suspendovana u n-heksanu (100 mL), ohlađena na 0 °C i u kapima je dodat rastvor SO2Cl2(4.9 g, 36 mmol) u n-heksanu (20 ml), održavajući internu temperaturu ispod 3 °C. Smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 1 sata, a čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane hladnim n-heksanom. Čvrste materije su zatim razdvojene između dietil etra i vode, slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je dalje ekstrahovan dietil etrom. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,0 g, 47%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,54 (t, J=8,4 Hz, 1H), 6,66 (d, J=8,4 Hz, 2H), 3,97 (s, 6H).
Priprema N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-27) prema postupku AA.
[0293]
[0294] Postupak AA:
[0295] U rastvor amina (0,5 mmol, 1,0 ekv.) u anhidrovanom THF (10 mL) na -78 °C pod N2dodat je LiHMDS (1 M rastvora u THF, 3 ekv.) kap po kap i smeša je mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Zatim je kap po kap dodat rastvor sulfonil hlorida (1,5 ekv.) u anhidrovanom THF (2,0 mL) i smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni ili preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije gore navedenih uslova su navedene u tabeli odmah ispod.
Tabela 9:
Priprema 7-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina (Int-28) prema Šemi 16.
[0296]
Korak 1: Sinteza 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoeve kiseline (16a)
[0297] U rastvor 2-bromo-1-fluoro-4-metilbenzena (10,0 g, 53 mmol) i diizopropilamina (5,9 g, 58 mmol) u anhidrovanom THF-u (200 ml) na -78 °C pod N2dodat je n-BuLi (2,5 M rastvor u heksanima, 25,6 mL, 64,0 mmol) kap po kap i smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h. Dodat je višak čvrstog CO2(suvi led) i mešanje je nastavljeno na -78 °C tokom 3 sata. Smeša je razblažena vodom (500 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (500 ml). Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12,3 g, 100%) kao smeđa čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z 232,8 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoil hlorida (16b)
[0298] U rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoeve kiseline (16a) (12.3 g, 53 mmol) i DMF (4 kapi) u DCM (100 ml) na sobnoj temperaturi pod N2dodat je oksalil hlorid (13,0 g, 106 mmol) kap po kap i smeša je mešana 2 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (14,0 g, 100%) kao smeđa čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak 3: Sinteza 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzamida (16c)
[0299] Rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoil hlorida (16b) (14,0 g, 53 mmol) u DCM (100 ml) je dodat kap po kap u 30% vodeni rastvor amonijum hidroksida (100 ml) i smeša je mešana 2 sata. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 ml), isprana vodom (200 ml × 3), fiziološkim rastvorom, a organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12,0 g, 97%) kao smeđa čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z 231,9 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrila (16d)
[0300] Rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzamida (16c) (10,0 g, 43,0 mmol) i tionil hlorida (15,4 g, 129 mmol) u DMF-u (100 mL) je zagrevan na 100 °C tokom 3 sata. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL) i isprana vodom (400 mL × 5), fiziološkim rastvorom, a organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5,0 g, 54%) kao smeđa čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z 213,9 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 7-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina (Int-28)
[0301] Suspenzija N-hidroksiacetamida (5,27 g, 70,2 mmol) i t-BuOK (7,88 g, 70,2 mmol) u anhidrovanom DMF-u (200 ml) mešana je na 0 °C tokom 1 sata. 3-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitril (16 dana) (5.0 g, 23,4 mmol) je zatim dodat i smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 ml), isprana vodom (600 ml × 4), fiziološkim rastvorom, a organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (petrol etar/EtOAc = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,8 g, 52%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z 226.9 [M+H]<+>.
Priprema N-(7-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-29) prema postupku AB.
[0302]
Postupak AB:
[0303]
[0304] U rastvor amina (0,2 mmol, 1,0 ekv.) u piridinu (2 mL) dodat je sulfonil hlorid (1,5 ekv.) i smeša je zagrejana na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 2 sata. Smeša je podeljena između vode i EtOAc, slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC metodom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije gore navedenih uslova su navedene u tabeli odmah ispod.
Tabela 10:
Postupci formiranja sulfonamida:
Postupak A:
[0306] Rastvoru jedinjenja tipa IV (1.0 ekvivalenta) u piridinu (c = 0,1 M) dodato je jedinjenje tipa V (1,2 ekvivalenta). Smeša je mešana na temperaturi između 80 i 120 °C tokom ~3-16 sati. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu, koncentrovana do sušenja i prečišćena standardnim postupcima poznatim stručnjacima da bi se dobilo jedinjenje Formule (A).
Postupak B:
[0307] Suspenziji NaH (60% disperzija u mineralnom ulju, 3,0 ekvivalenta) u THF (c = 0,15 M) na 0 °C dodat je rastvor jedinjenja tipa IV (1.0 ekvivalent) u 1:1 THF/DMF (c = 0,15 M) ili THF (c = 0,15 M) kap po kap. Rastvor jedinjenja tipa V (1.3 ekvivalent) u 2:1 THF/DMF (c = 0,15 M) ili THF (c = 0,15 M) je dodat na istoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana do sušenja i prečišćena standardnim postupcima poznatim stručnjacima da bi se dobilo jedinjenje Formule (A).
Postupak C:
[0308] Rastvoru jedinjenja tipa IV (1.0 ekvivalent) u THF (c = 0,3 M) dodat je NaOtPn (40% u PhMe, 1,0 ekvivalent) i rastvor jedinjenja tipa V (1.0 ekvivalent) u THF-u (c = 0,3 M). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana do sušenja i prečišćena standardnim postupcima poznatim stručnjacima da bi se dobilo jedinjenje Formule (A).
Postupak D:
[0309] Rastvoru jedinjenja tipa IV (1.0 ekvivalent) i jedinjenja tipa V (1.2 ekvivalent) u ACN (c = 0,2 M) dodat je 0,05 M rastvor DMSO u ACN (1,0 ml/mmol jedinjenja tipa IV, 0.05 ekvivalent DMSO), a zatim 3,5-lutidin (3,0 ekvivalent). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati, koncentrovana do sušenja i prečišćena standardnim postupcima poznatim stručnjacima da bi se dobilo jedinjenje Formule (A).
Priprema primera i referentnih primera
Primer 01: Priprema 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema Šemi A.
[0310]
Korak 1: Sinteza 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (A-1).
[0311] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila (Int-01) (7.0 g, 38,6 mmol) i 1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-13) (6.2 g, 42,5 mmol) u MeCN (150 ml) dodat je Cs2CO3(18.9 g, 58 mmol). Smeša je mešana na 70 °C tokom 2 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan do sušenja. Sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 1:1 EtOAc/petrol etar) da bi se dobio 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (A-1) (7.0 g, prinos 78%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z (ESI+) 231,8 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (A-2).
[0312] U rastvor 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (A-1) (7.0 g, 30,3 mmol) i N-hidroksiacetamida (6,8 g, 90,8 mmol) u DMF-u (200 ml) i H2O (30 mL) dodat je K2CO3(25.1 g, 182 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. TLC analiza (EtOAc) je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio veći deo DMF, a zatim razblažena sa H2O (100 ml). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Filter kolač je ispran sa H2O (3x20 mL) i osušen u vakuumu da bi se dobio 4-metoksi-6-[(1Hpirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (A-2) (6.0 g). Gore navedeni filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (2x30 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (SiO2, EtOAc) da bi se dobila dodatna serija 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (A-2) (0.5 g). Dve serije proizvoda su spojene i osušene pod vakuumom da bi se dobio 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (A-2) (6.5 g, prinos 88%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,88 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J=1,3 Hz, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,31 (t, J=2,0 Hz, 1H), 6,08 - 5,78 (m, 2H), 5,52 - 5,31 (m, 2H), 3,93 - 3,73 (m, 3H). m/z (ESI+) 244,8 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 01) prema postupku formiranja sulfonamida A.
[0313] U rastvor 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (A-2) (1.23 g, 5,032 mmol) u piridinu (2,5 ml) dodat je 5-etil-2-metoksibenzen-1-sulfonil hlorid (1,54 g, 6,54 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 3,5 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala sa formiranjem željene mase proizvoda. Reakcija se stvrdnula nakon hlađenja. Čvrsta supstanca je rastvorena u DCM i AcOH (1,4 ml) sa minimalnom količinom MeOH. Smeša je prečišćena fleš hromatografijom (40 g SiO22, 10-70% MeOAc/heptan). Čiste frakcije koje sadrže jedinjenje iz naslova su sakupljene. Nečiste frakcije su ponovo prečišćene fleš hromatografijom (40 g SiO2, 10-70% MeOAc/heptan). Čiste frakcije su kombinovane sa prethodno izolovanim čistim frakcijama i koncentrovane da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je suspendovana u MeOAc, refluksovana 1 sat i ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom da bi se dobio 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 01) (1.4 g, prinos 63%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,49 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7,46 (dd, J=2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,10 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,30 (t, J=2,0 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 2,59 (k, J=7,5 Hz, 2H), 1,13 (t, J=7,5 Hz, 3H); m/z (ESI+) 443,1 (M+H)<+>.
Primer 02: Priprema 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema Šemi B.
Primer 03: Priprema 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema Šemi B.
[0315]
Korak 1: Sinteza 2-fluoro-6-metoksi-4-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (B-1) i 2-fluoro-6-metoksi-4-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (B-2).
[0316] U smešu (~1:1) 1-(metansulfonil)-3-metil-1H-pirazol i 1-(metansulfonil)-5-metil-1H-pirazol (Int-15) U MeCN (25 mL) je dodat 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitril (Int-01) (1.0 g, 5,5 mmol) i Cs2CO3(2.3 g, 7,2 mmol). Smeša je mešana na 70 °C tokom 1 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala uz formiranje željene mase proizvoda. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, 100% EtOAc) da bi se dobila smeša (~1:1) 2-fluoro-6-metoksi-4-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (B-1) i 2-fluoro-6-metoksi-4-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (B-2) (1.13 g, prinos 84%) kao žuta guma. m/z (ESI+) 245,8 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (B-3) i 4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (B-4).
[0317] U smešu (~1:1) 2-fluoro-6-metoksi-4-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (B-1) i 2-fluoro-6-metoksi-4-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (B-2) (1.13 g, 4,73 mmol) u DMF (20 ml) i H2O (3 ml) dodat je N-hidroksiacetamid (1,07 g, 14,2 mmol) i K2CO3(3.9 g, 28,4 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala uz formiranje željene mase proizvoda. Smeša je koncentrovana do sušenja. Ostatak je rastvoren u EtOAc (30 ml) i ispran sa H2O (30 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, 100% EtOAc) da bi se dobila smeša (~1:1) 4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (B-3) i 4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (B-4) (916 mg, prinos 75%) kao čvrsta supstanca. m/z (ESI+) 258,8 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 02) i 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 03) prema postupku formiranja sulfonamida A.
[0318] U smešu (~1:1) 4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (B-3) i 4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (B-4) (800 mg, 3,1 mmol) u piridinu (10,0 ml) dodat je 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorid (Int-26) (1.1 g, 4,65 mmol). Smeša je mešana na 120 °C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, 1:4 MeOH/EtOAc). Materijal je ponovo prečišćen preparativnom HPLC-om sa YMC Triart kolonom (20x150 mm, veličina čestica 7 µm), koja je eluirana sa 23-63% MeCN/H2O (+0,225% mravlje kiseline) sa brzinom protoka od 25 mL/min. Materijal je ponovo prečišćen preparativnom SFC metodom sa Diacel CHIRALCEL OD-H kolonom (30x250 mm, veličina čestica 5 µm), koja je eluirana sa 45% EtOH/CO2(+0,1 % NH4OH) sa brzinom protoka od 60 mL/min da bi se dobio 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 02) (63 mg, prinos 4%) kao prvi eluirani pik u obliku bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (br. s, 1H), 7,74 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,49 (t, J=8,4 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,77 (d, J=8,3 Hz, 3H), 6,07 (d, J=2,1 Hz, 1H), 5,33 (s, 2H), 3,93 - 3,84 (m, 3H), 3,77 (s, 6H), 2,15 (s, 3H); m/z (ESI+) 458,8 (M+H)<+>2,6Dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 03) (33 mg, prinos 2%) je dobijen kao drugi eluirani pik u obliku bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,64 (br. s, 1H), 7,49 (t, J=8,6 Hz, 1H), 7,40 (d, J=1,7 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,66 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,11 (dd, J=1,8, 0,9 Hz, 1H), 5,41 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,76 (s, 6H), 2,21 (s, 3H); m/z (ESI+) 458,8 (M+H)<+>.
[0319] Primeri i referentni primeri u tabeli ispod su sintetisani prema postupcima koji se koriste za sintezu 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 01), 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 02), i 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 03) i opšte metode formiranja sulfonamida A-D. Sledeći primeri su sintetisani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je potrebno, razdvajanje regioizomernih smeša je sprovedeno standardnim postupcima poznatim u struci, kao što su SFC ili HPLC, i sprovedeno je u bilo kom pogodnom koraku u sintetičkom nizu.
Tabela 11:
Primer 45: Priprema 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema Šemi C (put A).
[0320]
[0321] Suspenziji 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (A-2) (2,5 g, 10 mmol) u piridinu (8,0 ml) dodat je 2-metoksibenzen-1-sulfonil hlorid (3,17 g, 15,4 mmol). Reakcija je mešana na 120 °C tokom 1,5 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa MeOH. Dobijena suspenzija je filtrirana, a filter kolač je ispran sa MeOH (30 ml). Čvrste materije su rastvorene u DCM (50 ml) i dodat je MeOH (30 ml). DCM je uklonjen pod vakuumom, a talog je sakupljen filtracijom. Filter kolač je osušen liofilizacijom da bi se dobio 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 45) (2,5 g, prinos 59%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,18 (s, 1H), 7,87 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,6, 7,9 Hz, 1H), 7,66 - 7,59 (m, 1H), 7,49 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,19 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,09 (t, J=7,7 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,30 (t, J=2,0 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,78 (s, 3H); m/z (ESI+) 415,0 (M+H)<+>.
Primer 45: Alternativna priprema 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema prema Šemi D.
[0322]
[0323] Reaktor od 100 ml opremljen gornjom mešalicom je napunjen 4-metoksi-6-(1H-pirazol-1-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-aminom (A-2) (10.00 g, 40,94 mmol), 2-metoksibenzensulfonil hloridom (10,15 g, 49,13 mmol) i acetonitrilom (100 ml). Dobijena suspenzija je mešana na 25 °C tokom 55 minuta. Pipetom je dodat dimetilsulfoksid (0,36 ml, 4,09 mmol) u jednoj porciji. Špricem je dodat 3,5-lutidin (14,8 ml, 122,82 mmol) kap po kap tokom 15 minuta. Dobijena svetložuta suspenzija je mešana na 25 °C tokom 18 sati da bi se dostigla konverzija >98%, procenjena LCMS metodom. Reakciona smeša je zakiseljena sa 1 M vodenog rastvora HCl (100 ml), a zatim koncentrovana na ~80 ml (rotacioni uparivač, 40 °C, 85 mbar). Suspenzija je tretirana sa dodatnim 1 M vodenim rastvorom HCl (40 ml) da bi se isprali zidovi posude, a zatim je mešana na 20 °C tokom 2,5 sata. Dobijeni talog je sakupljen vakuumskom filtracijom. Filter kolač je ispran vodom (2 x 50 mL), zatim sušen pod vakuumom na 35 °C tokom 48 sati, čime je dobijen sirovi 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 45) (15.2 g, prinos 90%, čistoća 98% prema LCMS) kao čvrsta supstanca. m/z 415.1 (M+H)<+>.
[0324] Da bi se prečistio sirovi proizvod, suspenzija sirove 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 45) (14,00 g, 33,78 mmol) u dihlorometanu (210 ml) je zagrejan u kupatilu na 40 °C dok se nije dobio bistar rastvor (10 minuta). Smeša je filtrirana, a filtrat vraćen u čistu reakcionu posudu, koristeći dodatni dihlorometanom (70 ml) za kvantifikaciju prenosa. Etil acetat (140 ml) je dodat u rastvor tokom 2 minuta, a zatim je smeša mešana 2,5 sata. Nije primećena kristalizacija, pa je rastvor koncentrovan pod smanjenim pritiskom (200 mbar) da bi se uklonio dihlorometanom (zapremina je smanjena za oko 70 ml). Još etil acetata (140 ml) je dodato ostatku, a smeša je mešana na sobnoj temperaturi 21 sat. Dobijena suspenzija je koncentrovana pod smanjenim pritiskom (40 °C, 200 mbar) na oko 280 ml, a zatim mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Čvrste materije su sakupljene filtracijom, a dodatni etil acetat (70 ml) je korišćen za ispiranje reakcione posude i filter kolača. Filter kolač je sušen u vakuumskoj peći na 35 °C tokom 23 sata, čime je dobijen 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 45) (12,0 g, prinos 85%, čistoća 97,9% pomoću UPLC, nijedna nečistoća nije veća od 0,5%) kao čvrsta supstanca. m/z 415.1 (M+H)<+>.
[0325] Radi daljeg prečišćavanja, suspenzija 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 45) (2,0 g, 4,73 mmol) u acetonu (80 ml) je zagrejana do refluksa (temperatura kupatila 55 °C) uz mešanje tokom 2 sata. Dok se smeša još uvek zagrevala, polako je dodat etil acetat (30 ml), tako da je unutrašnja temperatura ostala iznad 45 °C. Dobijena suspenzija je koncentrovana na oko 30 ml pod blagim vakuumom (temperatura kupatila 65 °C), a zatim polako hlađena brzinom od 1 °C/min do 20 °C (~31 minut). Dobijeni talog je sakupljen vakuumskom filtracijom. Filter kolač je sušen pod vakuumom na 50 °C tokom 22 sata, čime je dobijen 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 45) (1,825 g, prinos 93%, čistoća 99,5% pomoću UPLC) kao kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 8,14 (dd, J=1,7, 7,8 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,59 - 7,51 (m, 2H), 7,44 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,14 - 7,06 (m, 1H), 6,95 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,78 (d, J=0,6 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,32 (t, J=2,1 Hz, IH), 5,38 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,91 (s, 3H).
Primer 45b: Priprema 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid, bezvodni (Oblik 1) prema Šemi C-1 (Put B).
[0326]
[0327] 2-metoksibenzen-1-sulfonil hlorid (7,6 g, 37 mmol) je stavljen u tikvicu sa dva grla sa okruglim dnom opremljenu unutrašnjim termometrom. 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (A-2) (8,18 g, 33,5 mmol) je dodat i sadržaj je rastvoren u piridinu (55 ml, 0,6 M) uz blago zagrevanje. Zagrevanje je započeto sa temperaturom uljanog kupatila od 110°C i unutrašnjom temperaturom od 101°C. Nakon 5 sati zagrevanja, reakcija je završena, što je utvrđeno LCMS analizom. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i podeljena između DCM (200 ml), 6 N HCl (100 ml) i ledene vode (100 ml). Proizvod je ekstrahovan u DCM (x3) i kombinovani DCM ekstrakt je ispran sa 1 N HCl (x3) da bi se uklonili tragovi piridina. DCM ekstrakt je osušen preko MgSO4i koncentrovano do tamnog ulja. Ulje je prečišćeno fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 40 - 100% EtOAc u heptanu da bi se dobilo 4,6 g proizvoda, što je potvrđeno NMR-om.4,6 g proizvoda je rekristalizovano prvo rastvaranjem u CH3CN (60 mL) na refluksu dok se većina čvrstih materija nije rastvorila. Ovaj vrući rastvor je filtriran pomoću prethodno zagrejanog/vrelog staklenog levka opremljenog žlebljenim filter papirom. Ovaj korak uklanja sve neorganske ili silika gel nečistoće. Filter papir je ispran malim porcijama CH3CN dodavanjem do ukupne zapremine ispiranja od 10 mL. Filtrat je sakupljen u čašu od 250 mL opremljenu mešalicom. U vrući filtrat je dodat MTBE (45 mL) i započeto je mešanje. Nakon 30 sekundi mešanja, počeo je da se formira beli talog. Mešanje je nastavljeno na 400 rpm dok je blagi mlaz N2gasa prinudno propuštan preko vrha rastvora kako bi se ubrzao proces isparavanja. Prinudno N2isparavanje je nastavljeno 3 sata dok ukupna zapremina nije dostigla 50 ml. Bela čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa MTBE (x2) i heptanom (x2). Beli prah je stavljen u posudu za kristalizaciju prečnika 3 inča, pokriven komadom filter papira i zagrejan u vakuumskoj peći na 70°C tokom 48 sati koristeći spor protok N2u i iz sušare kako bi se olakšao proces sušenja. Nakon sušenja, dobijeno je 3,9 g kristalnog proizvoda, što je potvrđeno NMR. Tačka topljenja = 203-204° C. Analitički izračunato za C19H18N4O5S: C, 55,06; H, 4,38; N, 13,52. Pronađeno: C, 55,09; H, 4,41; N, 13,57.
[0328] Kristalna čvrsta supstanca pripremljena gore kao anhidrovana (Oblik 1) je dalje okarakterisana difrakcijom X-zraka praha (PXRD). Analiza difrakcije X-zraka praha je sprovedena na Bruker A25 D8 Advance difraktometru za X-zrake praha opremljenom teta-2teta goniometrom i Lynxeye detektorom sa veličinom PSD prozora od 3,3°, primarnim Solerovim prorezom podešenim na 2,5° i divergencijskim prorezima podešenim na konstantno osvetljenje od 0,6 mm. Napon i struja rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA, respektivno. Podaci su prikupljeni na talasnoj dužini bakra koristeći korak veličine 0,02 stepena, vreme koraka od 0,3s od 3,0 do 40,0° 2-teta. Uzorak je pripremljen stavljanjem praha u držač šupljine sa niskim pozadinskim sadržajem Si. Uzorak praha je presovan špatulom kako bi se osiguralo da je postignuta odgovarajuća visina uzorka. Podaci su prikupljeni pomoću Bruker DIFFRAC softvera, a analiza je izvršena pomoću DIFFRAC EVA softvera. Prikupljeni PXRD dijagrami su uvezeni u Bruker DIFFRAC EVA softver. Izbor pikova je izvršen korišćenjem softverske „funkcije pretraživanja pikova“, a zatim je pažljivo proveren i korigovan kako bi se osiguralo da su svi položaji pikova tačno dodeljeni. Izabrani su pikovi sa relativnim intenzitetom ≥ 4,0%. Tipična greška od ± 0,2° 2-teta u položajima pikova primenjuje se na ove podatke. Manja greška povezana sa ovim merenjem može nastati zbog različitih faktora, uključujući: (a) pripremu uzorka (npr. visinu uzorka), (b) instrument, (c) kalibraciju, (d) operatera (uključujući greške prisutne pri određivanju lokacija pikova) i (e) prirodu materijala (npr. greške preferirane orijentacije i transparentnosti). Stoga se smatra da pikovi imaju tipičnu pridruženu grešku od ± 0,2° 2-teta. Kada se dva pika na listi smatraju preklapajućim, manje intenzivan pik je uklonjen sa liste. Pikovi koji postoje kao ramena, na susednom piku većeg intenziteta, takođe su uklonjeni sa liste pikova. Iako ramena mogu biti > 0,2° 2-teta od položaja susednog pika, ona se ne smatraju prepoznatljivim od susednog pika.
[0329] Da bi se dobile apsolutne pozicije pikova, praškasti dijagram treba poravnati sa referentnim. To može biti ili simulirani praškasti dijagram iz kristalne strukture istog oblika rastvorenog na sobnoj temperaturi, ili interni standard, npr. silicijum dioksid ili korund. Simulirani praškasti dijagram anhidrovanog 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Oblik 1) je dobijen iz monokristalne strukture. Da bi se pripremio monokristal, 200 mg materijala iz Primera 45b je rastvoreno u CH3CN (3 mL) uz zagrevanje do refluksa. Dodat je MTBE (2 mL) i smeša je ostavljena da stoji u epruveti otvorenoj za vazduh tokom 48 sati, što je rezultovalo sporim isparavanjem rastvarača. Formirali su se veliki kristali, koji su filtrirani i isprani sa MTBE (x2) i heptanom (x2) i osušeni pod vakuumom. Dobijeno je 116 mg (58% oporavka) materijala iz Primera 45b kao kristalna, bela čvrsta supstanca, što je potvrđeno pomoću<1>H NMR. Kristali, vizuelizovani mikroskopijom polarizovane svetlosti, pokazali su veliku veličinu čestica i bili su trikliničnog oblika. Simulirani dijagram praha iz strukture monokristala dobijen je putem proračuna korišćenjem programa Mercury 4.1.0, koji je deo CCDC softverskog paketa.
[0330] PXRD dijagram 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida, anhidrovani oblik 1 (Primer 45a), prikazan je na slici 1. PXRD lista pikova i podaci o relativnom intenzitetu za 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid anhidrovani Oblik 1 (Primer 45a) (2-Teta °) je dat u Tabeli 12 ispod. Karakteristični položaji PXRD pikova su označeni zvezdicom.
Tabela 12: PXRD lista pikova za primer 45 Oblik 1 anhidrovani.
[0331] Otkriven je kristalni oblik 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H[([([-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida, anhidrovani, sa rendgenskim difraktogramom praha koji sadrži pikove na vrednostima 2θ od: 13,4 i 18,1 °2θ ± 0,2 °2θ.
[0332] Otkriven je kristalni oblik 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid anhidrovani, sa difraktogramom X-zraka praha koji sadrži pikove na vrednostima 2θ od: 13,4 i 18,1 °2θ ± 0,2 °2θ, i dalje sadrži najmanje jedan pik izabran od vrednosti 2θ od: 11,4, 14,1 i 17,5 °2θ ± 0,2 °2θ]]
[0333] Otkriven je kristalni oblik 2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid anhidrovani, sa difraktogramom X-zraka praha koji sadrži pikove na vrednostima 2θ od: 13,4 i 18,1 °2θ ± 0,2 °2θ], i dalje sadrži pikove na vrednostima 2θ od: 11,4, 14,1 i 17,5 °2θ ± 0,2 °2θ]]
[0334] Otkriven je kristalni oblik 2-mtoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid anhidrovani, sa difraktogramom X-zraka praha koji sadrži pikove na vrednostima 2θ vrednostima od: 13,4 i 18,1 °2θ ± 0,2 °2θ, i dalje sadrži pikove na vrednostima 2θ od: 11,4, 14,1, i 17,5 °2θ ± 0,2 °2θ.
[0335] Primeri u tabeli ispod su sintetisani prema postupcima koji se koriste za sintezu 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 01), 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 02), i 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 03) i opšti postupak formiranja sulfonamida C u formatu biblioteke visokog protoka. Sledeći primeri su sintetisani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u primerima navedenih postupaka koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 13:
Primer 87: Priprema N-(6-{[4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid prema Šemi E.
[0336]
Korak 1: Sinteza 6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-amina (E-2).
[0337] Rastvoru 4-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (E-1) (pripremljen kao u Primer 01, 500 mg, 1,33 mmol) i N-hidroksiacetamida (300 mg, 3,99 mmol) u DMF (10,0 ml) i H2O (2,0 mL) dodat je K2CO3(1.1 g, 7,99 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio DMF i razblažena sa H2O. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Filter kolač je osušen pod vakuumom. LCMS analiza je pokazala smešu željenog proizvoda i des-TBS nusproizvoda. Sirove čvrste materije su kombinovane paralelnom reakcijom sa 200 mg 4-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila. Spojene čvrste supstance su rastvorene u DCM (10,0 mL). Dodati su TBSCI (178 mg, 1,18 mmol), TEA (149 mg, 1,48 mmol) i DMAP (6,0 mg, 0,49 mol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Smeša je razblažena sa DCM (100 mL) i isprana sukcesivno sa H2O (50 mL), zasićenim NaHCO3(50 ml) i fiziološkim rastvorom (50 ml). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, 60-70% EtOAc/petrol etar) da bi se dobilo 6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-amina (E-2) (280 mg, prinos od 34% u 2 koraka) kao bela čvrsta supstanca. m/z (ESI+) 388,9 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza N-(6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (E-3) prema postupku formiranja sulfonamida B.
[0338] Suspenziji NaH (60% disperzija u mineralnom ulju, 40,1 mg, 1,00 mmol) u THF (2,0 ml) dodat je rastvor 6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-amina (E-2) (130 mg, 0,335 mmol) u THF-u (2,0 ml). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 15 minuta, a zatim je dodat rastvor 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-26) (95.0 mg, 0,402 mmol) u THF-u (2,0 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 17 sati. Suspenzija je filtrirana i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (12 g SiO2, 1:1 EtOAc/petrol etar) da bi se dobilo N-(6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (E3) (80 mg, prinos 41%) kao bledožuta guma. m/z (ESI+) 589,1 (M+H)<+>
Korak 3: Sinteza N-(6-{[4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 87).
[0339] U rastvor N-(6-{[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (E-3) (80,0 mg, 0,16 mmol) u THF-u (2,0 ml) dodat je TBAF (76,3 mg, 0,32 mmol). Reakcioni rastvor je mešan 1 sat. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala sa formiranjem željene mase proizvoda. Reakcija je koncentrovana do sušenja. Ostatak je rastvoren u EtOAc (15 ml) i ispran sa H2O (10 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom sa YMC-Actus Triart C-18 kolonom (30x150 mm, veličina čestica 5 µm), koja je eluirana sa 5-25% MeCN/H2O (0,05% NH4OH) sa brzinom protoka od 35 mL/min da bi se obezbedilo N-(6-{[4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (Primer 87) (4,5 mg, prinos 6%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,73 (br. s, 1H), 7,40 (br. s, 2H), 6,74 (br. s, 4H), 5,35 (br. s, 2H), 4,81 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,34 (d, J=5,4 Hz, 2H), 3,97-3,59 (m, 9H); m/z (ESI+) 475,0 (M+H)<+>.
[0340] Primeri u tabeli ispod su sintetisani prema postupcima koji se koriste za sintezu N-(6-{[4-(hidroksimetil)-1H-pirazol-1-il]metil}-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-2,6dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 87). Sledeći primeri su sintetisani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je potrebno, razdvajanje regioizomernih smeša je sprovedeno standardnim metodama poznatim u struci, kao što su SFC ili HPLC, i sprovedeno je u bilo kom pogodnom koraku u sintetičkom nizu.
Tabela 14:
Primer 90: Priprema 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid prema Šemi F.
[0341]
Korak 1: Sinteza 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]benzonitrila (F-1).
[0342] U rastvor 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (164 mg, 0,703 mmol) (A-1) na CD3OD (4,0 mL) dodat je Cs2CO3(229 mg, 0,703 mmol). Smeša je mešana na 40 °C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (24 g SiO2, 0-40% EtOAc/DCM) da bi se dobio 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]benzonitril (F-1) (81,0 mg, prinos 49%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,61 (d, J=1,71 Hz, 1H), 7,47 (d, J=2,32 Hz, 1H), 6,52 - 6,57 (m, 2H), 6,37 (t, J=2,08 Hz, 1H), 3,88 - 3,91 (m, 3H); m/z (ESI+) 234,2 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (F-2).
[0343] Suspenziji 2-fluoro-6-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]benzonitrila (F-1) (81,0 mg, 0,35 mmol) i N-hidroksiacetamida (78,2 mg, 1,04 mmol) u MeCN (2,7 ml) i D2O (0,3 mL) dodat je 1,1,3,3-tetrametilguanidin (240 mg, 2,08 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 7 sati i na 65 °C još 2 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (24 g SiO2, 60-100% EtOAc/DCM) da bi se dobio 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (F-2) (32 mg, prinos 37%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,85 - 7,89 (m, 1H), 7,49 (d, J=1,83 Hz, 1H), 6,70 (d, J=0,86 Hz, 1H), 6,63 (d, J=0,73 Hz, 1H), 6,30 (t, J=2,08 Hz, 1H), 5,93 (s, 2H), 3,83-3,87 (m, 3H); m/z (ESI+) 247,2 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 90) prema postupku formiranja sulfonamida A.
[0344] Smeša 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (F-2) (25,0 mg, 0,10 mmol) i 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-26) (36.0 mg, 0,152 mmol) u piridinu je mešan na 95 °C tokom 2 sata. Dobijena guma je razblažena sa DCM i tretirana sa AcOH (46 µL, 0,812 mmol). Smeša je prečišćena direktno fleš hromatografijom (24 g SiO2, 70-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 90) (37,0 mg, prinos 82%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,88 (d, J=2,08 Hz, 1H), 7,43 - 7,54 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,73 - 6,80 (m, 3H), 6,30 (t, J=2,08 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,76 (s, 6H); m/z (ESI+) 448,1 (M+H)<+>.
[0345] Primer u tabeli ispod je sintetisan prema postupcima koji su korišćene za sintezu 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)(<2>H2)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 90). Sledeći primeri su sintetizovani sa nekritičnim izmenama ili zamenama u primerima navedenih postupaka koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 15:
Primer 92: Priprema N-{5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid prema Šemi G.
[0346]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (G-1)
[0347] U rastvor 5-bromo-4-(bromometil)-2-fluorobenzonitrila (Int-07) (280 mg, 0,956 mmol) u MeCN (6,4 ml) je dodat 1H-pirazol (71,6 mg, 1,05 mmol) i Cs2CO3(0.374 mg, 1,15 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 sati. Smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 10-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 5-bromo-2-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (G-1) (188 mg, prinos 70%) kao bistro ulje, koje se stajanjem stvrdnulo u bledožutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,83 (d, J=5,7 Hz, 1H), 7,65 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,53 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,52 (d, J=9,3 Hz, 1H), 6,40 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H); m/z (ESI+) 280,0, 282,0 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (G-2)
[0348] U rastvor 5-bromo-2-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (G-1) (185 mg, 0,66 mmol) i N-hidroksiacetamida (149 mg, 1,98 mmol) u MeCN (3,5 ml) i H2O (0,35 mL) dodat je 1,1,3,3-tetrametilguanidin (45,9 mg, 0,399 mmol). Smeša je mešana na 75 °C tokom 4 sata. Reakcija je koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 30-90% EtOAc/heptan) da bi se dobio 5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3amin (G-2) (157 mg, prinos 81%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,18 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J=1,3 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,50 (s, 2H), 6,34 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H); m/z (ESI+) 293,0, 295,0 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza N-{5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 92)
[0349] Rastvor 5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (G-2) (155 mg, 0,529 mmol) i 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-26) (188 mg, 0,793 mmol) - u piridinu (0,31 ml) je zagrejano na 95 °C, kada je reakcija postala homogena. Reakcija je mešana na 95 °C tokom 2 sata, a zatim koncentrovana do sušenja. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini DCM i tretiran sa AcOH (0,10 ml, 1,75 mmol). Smeša je direktno nanesena na SiO2i prečišćena fleš hromatografijom (40 g SiO2, 35-100% MeOAc/heptan) da bi se dobio N-{5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (Primer 92) (221 mg, prinos 84%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,55 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J=1,3 Hz, 1H), 7,47 (t, J=8,4 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,74 (d, J=8,4 Hz, 2H), 6,34 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 3,75 (s, 6H); m/z (ESI+) 493,0, 495,0 (M+H)<+>.
[0350] Primeri u tabeli ispod su sintetisani prema postupcima koji se koriste za sintezu N-{5-bromo-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 92). Sledeći primeri su sintetisani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je potrebno, razdvajanje regioizomernih smeša je sprovedeno standardnim postupcima poznatim u struci, kao što su SFC ili HPLC, i sprovedeno je u bilo kom pogodnom koraku u sintetičkom nizu.
Tabela 16:
Primer 95: Priprema N-{4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida prema Šemi H.
[0351]
Korak 1: Sinteza 2-bromo-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (H-1)
[0352] Suspenzija 2-bromo-4-(bromometil)-6-fluorobenzonitrila (Int-08) (459 mg, 1,57 mmol), 1H-pirazol (159 mg, 2,34 mmol) i Cs2CO3(767 mg) u 2-Me-THF (3,1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5,5 h. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala. Smeša je podeljena između H2O (5 mL) i EtOAc (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (20 mL). Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom (5 mL), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 2-bromo-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (H-1) (295 mg, prinos 66%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,62 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,47 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,92 (d, J=8,9 Hz, 1H), 6,38 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,36 (s, 2H); m/z (ESI+) 280,0, 282,0 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 2-etil-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (H-2)
[0353] Mikrotalasna bočica napunjena sa 2-bromo-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrilom (H-1) (79,3 mg, 0,283 mmol), kalijum etiltrifluoroboratom (60,0 mg, 0,441 mmol), K2CO3(108 mg, 0,778 mmol) i metansulfonato(tri-t-butilfosfino)(2"amino-1,1-bifenil-2-il)paladijum(II) (P(t-Bu)3Pd (7,9 mg, 0,014 mmol) je zapečaćena, evakuisana i ponovo napunjeni N2.PhMe (0,60 mL) i dejonizovana H2O (0,30 mL) su dodati i smeša je mešana na 100 °C tokom 5 sati. LCMS analiza je pokazala formiranje željene mase proizvoda. Smeša je raspodeljena između zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (10 mL) i EtOAc (15 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (15 mL). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom, osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (12 g SiO2, 0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 2-etil-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (H-2) (43,1 mg, prinos 66%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,60 (d, J=1,6 Hz, 1H), 7,46 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,76 (d, J=9,2 Hz, 1H), 6,36 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,36 (s, 2H), 2,85 (q, J=7,6 Hz, 2H), 1,28 (t, J=7,6 Hz, 3H); m/z (APCI+) 230,1 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (H-3)
[0354] U rastvor 2-etil-6-fluoro-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (H-2) (40,6 mg, 0,177 mmol) i N-hidroksiacetamida (43,9 mg, 0,585 mg) u MeCN (1,0 ml) i H2O (0,1 mL) dodat je 1,1,3,3-tetrametilguanidin (120 mg, 1,0 mmol). Smeša je mešana na 75 °C tokom 24 h. Smeša je koncentrovana do sušenja i prečišćena fleš hromatografijom (12 g SiO2, 0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (H-3) (13,2 mg, prinos 31%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,60 (d, J=1,6 Hz, 1H), 7,45 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,34 (t, J=2,0 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 4,35 (br. s, 2H), 2,93 (q, J=7,6 Hz, 2H), 1,34 (t, J=7,6 Hz, 3H); m/z (APCI+) 243,1 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza N-{4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimethoksibenzen-1-sulfonamid (Primer 95)]
[0355] Suspenzija 4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (H-3) (13,2 mg, 0,055 mmol) i 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (Int-26) (21,3 mg, 0,090 mmol) u piridinu (0,15 ml) je mešana na 95 °C tokom 3 sata. LCMS analiza je pokazala potrošnju početnog materijala. Reakcija je koncentrovana do sušenja i prečišćena fleš hromatografijom (4 g SiO2, 0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio N-{4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (Primer 95) (12,0 mg, prinos 50%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10,14 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,57 - 7,50 (m, 1H), 7,49 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,20 (br. s, 1H), 7,06 (br. s, 1H), 6,79 (br. d, J=7,8 Hz, 2H), 6,29 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,46 (s, 2H), 3,77 (br. s, 6H), 3,07 (q, J=7,5 Hz, 2H), 1,21 (t, J=7,5 Hz, 3H); m/z (APCI+) 443,1 (M+H)<+>.
[0356] Primer u tabeli ispod je sintetisan prema postupcima koji su korišćene za sintezu N-{4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 95). Sledeći primer je sintetisan sa nekritičnim promenama ili zamenama u primerima navedenih procedura koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 17:
Primer 97: Priprema 5-ciklopropil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid prema šemi J.
[0357]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (J-2)
[0358] U rastvor 5-bromo-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (J-1) (pripremljen kao u Primer 01, 700 mg, 1,42 mmol), PPh3(930 mg, 3,55 mmol) i (3,5-dimetoksifenil)metanola (358 mg, 2,13 mmol) u 2-Me-THF (30 ml) na 0 °C dodat je u kapima DIAD (574 mg, 2,84 mmol). Rastvor je mešan 16 sati da bi se dobila bledožuta suspenzija. Suspenzija je filtrirana, a filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (40 g SiO2, 1:2 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio 5-bromo-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (J-2) (200 mg, prinos 22%) kao bela čvrsta supstanca.
Korak 2: Sinteza 5-ciklopropil-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (J-3)
[0359] U rastvor 5-bromo-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (J-2) (200 mg, 0,311 mmol) u CPME (10,0 ml) i H2O (1,0 ml) je dodat kalijum ciklopropiltrifluoroborat (138 mg, 0,932 mmol), Pd(OAc)2(14.0 mg, 0,062 mmol), K2CO3(172 mg, 1,24 mmol) i X-Phos (44,4 mg, 0,093 mmol). Smeša je evakuisana i ponovo napunjena sa N2(3x) a zatim mešana na 100 °C u atmosferi N2tokom 16 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc (20 mL) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (20 g SiO2, EtOAc) da bi se dobio 5-ciklopropil-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (J-3) (100 mg, prinos 53%) kao bela čvrsta supstanca. m/z (ESI+) 605,3 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 5-ciklopropil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 97)
[0360] U rastvor 5-ciklopropil-N-[(3,5-dimetoksifenil)metil]-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (J-3) (100 mg, 0,165 mmol) u DCM (2,0 ml) dodata je TFA (2,0 ml). Smeša je mešana 1 sat, a zatim koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (12 g SiO2, 1:10 MeOH/EtOAc). Materijal je ponovo prečišćen preparativnom HPLC sa Phenomenex Gemini-NX kolonom (150x30 mm, veličina čestica 5 µm), koja je eluirana sa 2-42% MeCN/H2O (+0,05% NH34OH) sa brzinom protoka od 30 mL/min da bi se dobio 5-ciklopropil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 97) (50 mg, prinos 67%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,10 (br s, 1H), 7,88 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,51 (dd, J=1,6, 11,0 Hz, 2H), 7,27 (br. d, J=6,8 Hz, 1H), 7,05 (br. d, J=8,9 Hz, 1H), 6,82 (br. s, 1H), 6,72 (br. s, 1H), 6,30 (t, J=1,9 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,83 (s, 2H), 3,90 (br. d, J=8,3 Hz, 1H), 3,73 (s, 2H), 3,76 - 3,67 (m, 1H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,04 - 0,78 (m, 2H), 0,70 - 0,42 (m, 2H). m/z (ESI+) 454,8 (M+H)<+>.
Primer 98: Priprema N-(6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida [ili 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida] prema Šemi K.
[0361]
Korak 1: Alternativna sinteza 4-((1H-pirazol-1-il)metil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (A-1) iz 14b
[0362] Rastvor 1H-pirazola (2,0 g, 29,6 mmol) i NaH (60% w/w disperzija u mineralnom ulju, 1,5 g, 37,1 mmol) u DMF-u (520 ml) je mešan na 0 °C tokom 1 sata. Rastvor 4-(bromometil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (14b) (6,0 g, 24,7 mmol) u DMF-u (80 ml) je zatim dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je ugašena vodom i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Petrol etar/EtOAc = 6/1) da bi se dobio 4-((1H-pirazol-1-il)metil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril (A-1) (2,4 g, 42%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z 232.0 [M+H]<+>.
Korak 2: Alternativna sinteza 6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin (A-2) korišćenjem kalijum terc-butoksida
[0363] U rastvor acetohidroksamske kiseline (3,7 g, 49,5 mmol) u anhidrovanom DMF (150 ml) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (5,6 g, 49,5 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. 4-((1H-Pirazol-1-il)metil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril (A-1) (3,8 g, 16,5 mmol) je zatim dodat i mešanje je nastavljeno na 60 °C tokom 4 sata. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Petrol etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobio 6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin (A-2) (2,1 g, 53%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z 245.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,87 (dd, J=1,6, 0,4 Hz, 1H), 7,50 (dd, J=1,6, 0,4 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,30 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,93 (s, 2H), 5,41 (s, 2H), 3,86 (s, 3H).
Korak 3: Sinteza N-(6-((1H-(pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Primer 98)
[0364] Smeša 6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (A-2) (50 mg, 0,205 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida (Int-26) (73 mg, 0,308 mmol) u piridinu (1 ml) je zagrejana na 120 °C tokom 2 sata pod mikrotalasnim zračenjem (serija 1).
[0365] Smeša 6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (A-2)(500 mg, 2,1 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida (Int-26) (746 mg, 3,2 mmol) u piridinu (5 ml) je zagrejana na 120 °C tokom 2 sata pod mikrotalasnim zračenjem (Serija 2). Ova reakcija je ponovljena još jednom u potpuno istoj skali (Serija 3).
[0366] Smeša 6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin (A-2)(350 mg, 1,4 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida (Int-26) (509 mg, 2,2 mmol) u piridinu (4 ml) je zagrejana na 120 °C tokom 2 sata pod mikrotalasnim zračenjem (serija 4). Četiri reakcione smeše su spojene, razblažene vodom, podešene na pH 5-6 pomoću 2 M vodenog rastvora HCl i ekstrahovane sa EtOAc (300 ml x 3). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Petrol etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobio N-(6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid (Primer 98) (1,07 g, 43%) kao bela čvrsta supstanca. m/z 445.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,50 - 7,46 (m, 2H), 6,83 (s, 1H), 6,76 (m, 3H), 6,30 (s, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,76 (s, 6H).
Primer 98: Alternativna priprema 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida prema Šemi L.
[0367]
Korak 1: Alternativna sinteza 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (A-2) korišćenjem 1,1,3,3-tetrametilguanidina.
[0368] Suspenzija 2-fluoro-6-metoksi-4-(1H-pirazol-1-ilmetil)benzonitrila (A-1) (15,43 g, 66,7 mmol), N-hidroksiacetamida (15,0 g, 200 mmol) i 1,1,3,3-TMG (46,1 g, 400 mmol) u acetonitrilu (270 ml) i dejonizovanoj vodi (30 ml) zagrejana je na 60 °C tokom 7 sati. Acetonitril je uklonjen pod vakuumom, a preostalo gusto ulje je razdvojeno između etil acetata (300 ml) i dejonizovane vode (250 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 x 150 ml). Svi organski slojevi su spojeni i isprani zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Neke čvrste materije su počele da se formiraju u organskom sloju, pa je dodat metanol (~10 ml) i suspenzija je zagrejana dok nije postala homogena. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Dobijena bledožuta čvrsta materija je suspendovana u etil acetatu (125 ml) i kratko zagrejana do refluksa. Suspenzija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, dobijene čvrste materije su sakupljene filtracijom, a filter kolač je ispran heptanom. Filtrat i heptan su koncentrovani do sušenja, preostala čvrsta materija je suspendovana u etil acetatu (15 ml), suspenzija je kratko zagrejana do refluksa, a drugi talog je sakupljen kao i prethodni. Spojeni talozi su osušeni pod vakuumom da bi se dobio 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (A-2) (11,86 g, 48,6 mmol) kao bledožuti prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,87 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J=1,2 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,30 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,93 (s, 2H), 5,41 (s, 2H), 3,86 (s, 3H). LCMS: [M+H]<+>245.
Korak 2: Sinteza 22,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 98)
[0369] Smeša 4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (A-2) (9,5 g, 39 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida (Int-26) (12,1 g, 51,1 mmol) u piridinu (20 ml) je zagrejana na 97 °C interno tokom 1 sata. Nakon hlađenja na 50 °C, rastvor je sipan u posudu koja sadrži usitnjeni led (200 g) i 6N HCl (100 ml). Reakciona posuda je isprana dihlorometanom da bi se kvantifikovao prenos. Dobijena vodena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (4 x 100 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani dejonizovanom vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do žute pene. Metil acetat (50 ml) je dodat u penu i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Čvrste materije su sakupljene vakuumskom filtracijom i isprane heptanom. Nakon sušenja pod vakuumom, dobijen je sirov 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(1H-pirazol-1-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 98)(16,1 g, 95%) kao narandžasto-smeđa čvrsta supstanca. Trituracija sirove čvrste supstance sa metil acetatom još dva puta nije uklonila narandžastu boju, pa je sirovi proizvod triturisan u toplom dihlorometanu, ostavljen da se ohladi na sobnu temperaturu i filtriran da bi se dobila bela čvrsta supstanca kremaste boje. Matični rastvor dihlorometana je dalje prečišćen hromatografijom (kolona od 330 g silicijum dioksida, eluiranje sa 60-100% etil acetata u heptanu) da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Čvrste supstance iz trituracije sa DCM i hromatografije DCM filtrata su spojene, mešane u refluksujućem metil acetatu i ohlađene na sobnu temperaturu tokom 2 sata. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena vakuumskom filtracijom i sušena u vakuumskoj peći na 100 °C preko noći, dajući prečišćeni 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(1H-pirazol-1-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 98) (15,3 g, 89%) kao beličasti prah.
[0370] Tri serije Primer 98 (ukupno 54,3 g), pripremljene kao što je gore opisano, su kombinovane, suspendovane u metil acetatu (250 ml) i zagrevane do refluksa tokom 1 sata. Nakon uklanjanja iz grejnog kupatila, mešanje je nastavljeno još 4 sata dok se smeša nije ohladila do sobne temperature. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran heptanom. Čvrsta supstanca je sušena pod vakuumom na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, a zatim dalje sušena u vakuumskoj peći na 130 °C tokom 16 sati, čime je dobijen 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(1H-pirazol-1-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 98) (53,55 g, 99%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,88 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,45-7,52 (m, 2H), 6,83 (s, 1H), 6,77 (d, J=8,4 Hz, 3H), 6,30 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,76 (s, 6H). LCMS: [M+H]<+>445. Analitički izračunato za C20H20N4O6S: C, 54,05; H, 4,54; N, 12,61; S, 7,21. Pronađeno: C, 53,91; H, 4,58; N, 12,51; S, 7,09.
Primer 99: Priprema N-(6-((1H-pirazol-1-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-3-metilhinolin-8-sulfonamid prema postupku AC.
[0371]
Primer 100: Priprema 2,6-dimetoksi-N-(4-metoksi-6-((4-metil-1H-pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid prema postupku AC.
[0372]
Postupak AC:
[0373]
[0374] U rastvor amina (0,2 mmol, 1,0 ekv.) u piridinu (2 mL) dodat je sulfonil hlorid (1,5 ekv.) i smeša je zagrejana na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 2 sata. Smeša je podeljena između vode i EtOAc, slojevi su razdvojeni, a organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC metodom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije gore navedenih uslova su navedene u Tabeli 18.
Tabela 18:
Referentni primer 101: Priprema 2,6-dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida prema Šemi M.
Rastvoru N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-27) (40 mg, 0,09 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) i vodi (2 ml) dodata je (1-metil-1H-pirazol-4-il)borna kiselina (80 mg, 0,631 mmol), Na2CO3(100 mg, 0,948 mmol) i Pd(PPh3)4(37 mg, 0,032 mmol) i smeša je zagrejana pod refluksom pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena na pH 4-5 sa 1 M vodenim HCl, razblažena sa EtOAc i isprana vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (DCM/MeOH = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (22 mg, 55%) kao bela čvrsta supstanca. m/z 445.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,52 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,50 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,78 (s, 6H).
[0375] Referentni primer 102: Priprema 2,6-dimetoksi-N-(5-metil-7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid prema Šemi N.
U rastvor N-(7-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-29)(50 mg, 0,117 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) i vodi (2 ml) je dodat (1-metil-1H-pirazol-4-il)borna kiselina (22 mg, 0,176 mmol), Na2CO3(50 mg, 0,468 mmol) i Pd(dppf)Cl2(9 mg, 0,012 mmol) i smeša je zagrejana pod refluksom pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena na pH 5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom TLC (petrol. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca. m/z 429.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,24 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,49 - 7,22 (m, 2H), 6,67 (d, J=8,6 Hz, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,69 (s, 6H), 2,39 (s, 3H), 38 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,78 (d, J=8,5 Hz, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,78 (s, 6H).
Primer 103: Priprema 3-hidroksi-2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid prema Šemi O.
Primer 104: Priprema 2-hidroksi-6-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid prema Šemi O.
[0377]
Primer 105: Priprema N-{6-[(4-hidroksi-1H-pirazol-1-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida prema Šemi O.
[0378]
[0379] U Erlenmajerovu posudu od 500 ml dodata je H2O HPLC gradusa (27,2 mL), vodeni rastvor kalijum fosfata (1,0 M, 4,0 mL, pH 7,5), vodeni rastvor MgCl2(165 mM, 0,8 mL), mikrozomi jetre mužjaka pacova indukovani deksametazonom (4,0 mL, 20 mg/mL, Xenotech) i rastvor 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Pripremljen kao u Primeru 98, 5 mM u MeCN, 0,20 mL, 1,0 µmol). Inkubacija je započeta dodatkom sveže pripremljenog vodenog rastvora NADPH (4,0 mL, 13 mM). Erlenmajerova posuda bez poklopca je mućkana u vodenom kupatilu održavanom na 37 °C tokom 1,5 sata. Inkubaciona smeša je ugašena dodatkom MeCN (40 mL), a zatim centrifugiranjem na ~1700 g tokom 5 minuta. Supernatant je delimično uparen u vakuumskoj centrifugi. Preostali rastvor je tretiran sa MeCN (0,5 mL), čistom mravljom kiselinom (0,5 mL) i dejonizovanom H2O do konačne zapremine od ~50 ml. Rastvor je podvrgnut centrifugiranju na ~40.000 g tokom 30 minuta. Supernatant je adsorbovan na Zorbax Polaris C18-A HPLC kolonu (250x4,6 mm, veličina čestica 5 µm) korišćenjem JASCO PU-1580 HPLC pumpe pri brzini protoka od 0,8 ml/min tokom ~60 minuta. HPLC kolona je prebačena na Thermo LTQ Velos maseni spektrometar povezan sa Waters Acquity UHPLC instrumentom koji se sastoji od kvaternarne pumpe, automatskog uzorkovanja i fotodiodnog niza UV/vis detektora. Gradijent MeCN/H2O (+0,1% mravlje kiseline) je primenjen na odvojene proizvode od interesa. Nakon prolaska kroz PDA detektor, eluent je podeljen u odnosu približno 15:1, pri čemu je veći deo išao u sakupljač frakcija, a manji deo u maseni spektrometar. Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, a one koje sadrže pikove od interesa analizirane su UHPLC-UV-HRMS pomoću Thermo Orbitrap Elite masenog spektrometra sa jonskom zamkom visoke rezolucije u liniji sa Thermo Accela UHPLC i diodnim nizom UV/vis detektora sa CTC Analytics Leap autoinjektorom (Thermo-Fisher). Uzorci su ubrizgani (10 µL) na Phenomenex Kinetex C18 UHPLC kolonu (50x2,1 mm, veličina čestica 1,7 µm) održavanu na 45 °C, koja je eluirana gradijentom MeCN/H2O (+0,1% mravlje kiseline) sa brzinom protoka od 0,4 mL/min. Nakon UHPLC-UV-HRMS analize, frakcije su sakupljene, a rastvarač je uklonjen vakuumskim centrifugiranjem. Osušeni uzorci su analizirani NMR spektroskopijom i kvantifikovani eksternom kalibracijom u odnosu na<1>H NMR spektar standardnog rastvora benzoeve kiseline koncentracije 5,0 mM u DMSO-d6korišćenjem funkcije ERETIC2 u okviru Topspin V3.2. N-{6-[(4-hidroksi-1H-pirazol-1-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (Primer 105) (0,028 µmol, prinos 3%) je dobijen kao prvi eluirani pik.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8,45 (s, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,70 (m, 3H), 6,63 (s, 1H), 5,22 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,69 (s, 6H). HRMS (ESI-TOF) izračunato za (C20H21N4O7S)[M+H]<+>m/z = 461,1125, pronađeno 461,1121 (-0,45 ppm). 3-Hidroksi-2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 103) (0,072 µmol, prinos 7%) je dobijen kao drugi eluirani pik.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9,33 (s, 1H), 7,88 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,01 (d, J=9,0 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,76 - 6,68 (m, 2H), 6,31 (t, J=2,3 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,65 (s, 3H). HRMS (ESI-TOF) izračunato za (C20H21N4O7S)[M+H]<+>m/z = 461,1125, pronađeno 461,1123 (-0,25 ppm). 2-Hidroksi-6-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Primer 104) (0,19 µmol, prinos 19%) je dobijen kao treći eluirani vrh.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7,86 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,13 (m, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,53 (m, 2H), 6,40 (d, J=8,1 Hz, 2H), 6,30 (s, 1H), 5,41 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,72 (s, 3H). HRMS (ESI-TOF) izračunato za (C19H19N4O6S) [M+H]<+>431.1020, pronađeno 431,1017 (-0,28 ppm).
Referentni primer 106: Priprema N-{6-[hidroksi(piridin-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamida prema Šemi P.
[0380]
Primer 107: Priprema 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(piridin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid prema Šemi P.
[0381]
Korak 1: Sinteza N-{6-[hidroksi(piridin-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Referentni primer 106):
[0382] Rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-27) (628 mg, 1,42 mmol) u anhidrovanom THF (20 ml) je ohlađen na -78 °C. n-BuLi (1,20 ml 2,5 u heksanima, 3,00 mmol) je dodat kap po kap. Dobijena suspenzija je mešana na -78 °C tokom 1 sat. Zatim je kap po kap dodat rastvor piridin-2-aldehida (187 mg, 1,75 mmol) u anhidrovanom THF (2 ml). Dobijena reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 1 sata.
[0383] Dodata je dodatna količina piridin-2-aldehida (75 mg, 0,71 mmol) u 1 ml anhidrovanog THF. Dobijena reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Reakcija je ugašena sa HOAc (0,5 ml). Ugašena reakciona smeša je podeljena između EtOAc (50 ml) i vode (50 ml). Organska faza je odvojena, isprana fiziološkim rastvorom, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 0 - 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 - 20% 2-PrOH u EtOAc da bi se dobio N-{6-[hidroksi(piridin-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamid (Referentni primer 106) kao čvrsta supstanca (247 mg, 37%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,61 (d, J=4,9 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,82 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,42 -7,33 (m, 3H), 7,10 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,58 (d, J=8,4 Hz, 2H), 5,99 (s, IH), 4,01 (s, 3H), 3,88 (s, 6H). m/z 472.2 [M+H].
Korak 2: Sinteza N-(6-(hloro(piridin-2-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (P-1):
[0384] Rastvoru N-{6-[hidroksi(piridin-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Referentni primer 106) (113 mg, 0,240 mmol) u anhidrovanom DCM (5 ml) dodat je SOCl2(0.20 mL, 2,7 mmol). Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Rastvor je uklonjen, a dobijeni ostatak je raspodeljen između EtOAc (50 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(50 ml).
[0385] Organska faza je odvojena, osušena preko natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio N-(6-(hloro(piridin-2-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid (P-1) (78 mg, prinos 66%) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,57 (br. d, J=4,2 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,75 (dt, J=1,7, 7,8 Hz, 1H), 7,57 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J=8,5 Hz, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,57 (d, J=8,6 Hz, 2H), 6,17 (s, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,87 (s, 6H), nedostaje sulfonamid NH; m/z 490.1 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(piridin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 107):
[0386] Rastvoru N-(6-(hloro(piridin-2-il)metil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (P-1) (75 mg, 0,153 mmol) u HOAc (5 ml) dodat je cinkov prah (69 mg, 1,1 mmol) i rastvor je zagrejan na 60 °C. Posle 3 sata na 60 °C, reakcija je završena. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i pažljivo neutralisana zasićenim NaHCO3. Organski slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (2 x 50 mL) i kombinovani organski ekstrakt je osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan do sušenja i prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 0 - 100% EtOAc u heptanu, a zatim sa 0 - 20% 2-PrOH u EtOAc.
Koncentrovanjem čistih frakcija dobijen je 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(piridin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 107) (38 mg, 55% tokom dva koraka) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,57 (širok s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,37 (t, J=8,5 Hz, 1H), 7,19 (br. d, J=6,6 Hz, 2H), 6,89 (s, 1H), 6,64-6,53 (m, 3H), 4,23 (s, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,87 (s, 6H). m/z 456.3 [M+H].
Referentni primer 108: Priprema N-{6-[(S*)-hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamid prema Šemi Q.
[0387]
Referentni primer 109: Priprema N-{6-[(R*)-hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamid prema Šemi Q.
[0388]
Primer 110: Priprema 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid prema Šemi Q.
[0389]
Korak 1: Sinteza N-(6-bromo-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Q-1)
[0390] Rastvoru N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida (Int-27) (15 g, 34 mmol) u THF (300 ml) i 2,4-dimetoksibenzil alkoholu (8,54 g, 50,8 mmol), PPh3(22.2 g, 84,6 mmol) je dodat kap po kap DIAD (13,7 g, 67,7 mmol) na 0 °C. Reakcioni rastvor je zagrejan do sobne temperature i ostavljen da se meša 16 sati. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (300 ml), isprana vodom (150 ml), fiziološkim rastvorom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ponovo fiziološkim rastvorom. Organska faza je osušena preko natrijum sulfata i filtrirana. Rastvor je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobila smeša koja je prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa 60%-70% EtOAc u petrolej etru da bi se dobio sirovi proizvod sa izvesnom količinom preostalog trifenilfosfin oksida. Sirova čvrsta supstanca je rekristalisana iz MeOH da bi se dobio N-(6bromo-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (P-1) (8,0 g, prinos 40%) kao bela čvrsta supstanca.
Korak 2: Sinteza rac-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-N-{6-[hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Q-2)
[0391] Rastvoru N-(6-bromo-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il)-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Q-1) (500 mg 0,843 mmol) u THF (9,5 ml) dodat je kap po kap n-BuLi (0,506 ml 2,5 M rastvor u heksanima, 1,26 mmol) na -78 °C pod atmosferom argona. Posle 30 minuta na -78 °C, dodat je oksazol-2-karbaldehid (123 mg 1,26 mmol) kao rastvor u THF (0,5 ml). Reakcija je polako ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 16 sati. Reakciona smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa dve porcije EtOAc (2 x 20 mL). Kombinovani ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen preko MgSO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 100% EtOAc da bi se dobio rac-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-N-{6-[hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamid (Q-2) (150 mg, prinos 29%) kao žuta guma.
Korak 3: Sinteza N-{6-[(S*)-hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamid (Referentni Primer 108) i N-{6-[(R*)-hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzensulfonamid (Referentni primer 109)
[0392] Rastvor rac-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-N-{6-[hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Q-2) (150 mg 0,245 mmol) u TFA (5 ml) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Primećen je ružičasti rastvor, a reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prethodno prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa EtOAc / MeOH 10:1 da bi se dobila racemska smeša Referentnih primera 108 i 109 koja je podvrgnuta hiralnom SFC prečišćavanju. Jedinjenja su razdvojena jedno od drugog korišćenjem Chiralpak AS-3 kolone unutrašnjeg prečnika 100×4,6 mm i unutrašnjeg prečnika 3 μm sa mobilnom fazom koja se sastoji od CO2(A) i etanol sa 0,05% DEA (B). Gradijentno eluiranje od 5% do 40% B za 4 min i zadržavanje 40% B tokom 2,5 min, zatim 5% B tokom 1,5 min. Nakon hiralnog SFC odvajanja dobijeno je 20 mg svakog proizvoda. Pik 1 = Referentni primer 108<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,06 (d, J=0,6 Hz, 1H), 7,45 (br. t, J=8,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J=0,6 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,74 (d, J=8,4 Hz, 2H), 6,67 (d, J=5,1 Hz, 1H), 5,93 (d, J=5,3 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,74 (s, 6H), nedostaje pik sulfonamida NH; m/z 462.0 (M+H)<+>Pik 2 = Referentni primer 109<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,06 (d, J=0,6 Hz, 1H), 7,50 (t, J=8,5 Hz, 1H), 7,13 - 7,26 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,78 (d, J=8,4 Hz, 2H), 6,70 (d, J=5,4 Hz, 1H), 5,95 (d, J=5,3 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,78 (s, 6H), nedostaje pik sulfonamida NH; m/z 462.0 (M+H)<+>.
Koraci 4 i 5: Sinteza N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1,3-oksazol-2-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid (Q-3)
[0393] Rastvoru rac-N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-N-{6-[hidroksi(1,3-oksazol-2-il)metil]-4-metoksi-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Q-2) (150 mg 0,245 mmol) u DCM (5 ml) dodat je tionil hlorid (290 mg 2,44 mmol) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan 1 sat dok se nije formirao bledožuti rastvor. Reakcija je završena pomoću TLC i smeša je ugašena vodom (20 ml) i ekstrahovana sa DCM (20 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio sekundarni hlorid (150 mg, žuto ulje) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. U rastvor sekundarnog hlorida (150 mg, 0,238 mmol) u HOAc (5 ml) dodat je cinkov prah (467 mg 7,14 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakcija je završena pomoću TLC i smeša je razblažena sa EtOAc (50 ml) i filtrirana. Filtrat je podešen na pH 7-8 korišćenjem zasićenog vodenog rastvora Na2CO3. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak koji je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1,3-oksazol-2-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamid Q-3) (80 mg) kao žuto ulje.
Korak 6: Sinteza 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamida (Primer 110)
[0394] Rastvor N-[(2,4-dimetoksifenil)metil]-2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(1,3-oksazol-2-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Q-3) (80 mg 0,13 mmol) u TFA (5 ml) je mešan 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana i prethodno prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa EtOAc / MeOH 10:1. Dobijeni sirovi proizvod je dalje prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom, a čiste frakcije su zamrznute i liofilizovane da bi se dobilo 10 mg proizvoda koji je i dalje kontaminiran nečistoćom, što je određeno pomoću<1>H NMR. Ovaj uzorak je dalje prečišćen preparativnom tankoslojnom hromatografijom (TLC) da bi se dobio 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(1,3-oksazol-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 110) (5 mg, prinos 8,4%) kao bela čvrsta supstanca. m/z 446.0 (M+H)<+>;<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 7,87 (s, 1H), 7,43 (t, J=8,5 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,72 (d, J=8,5 Hz, 3H), 4,34-4,11 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,81 (s, 7H).
Primer 111: Priprema 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(pirazin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamida prema Šemi R.
Korak 1: Sinteza 2-fluoro-4-[hidroksi(pirazin-2-il)metil]-6-metoksibenzonitrila (R-2).
[0396] Tikvica sa tri grla i okruglim dnom od 250 ml opremljena je termometrom, mešalicom i dovodom za azot. Tikvica je napunjena 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrilom. (1b) (4.00 g, 17,4 mmol) i 100 ml anhidrovanog THF. Tikvica je zatvorena septumskim čepom, isprana pod atmosferom azota i ohlađena na -20 °C (led/MeOH kupatilo). iPrMgCl-LiCl (17,5 mL 1,3 M, 22,8 mmol) je dodat kap po kap, uz održavanje temperature ispod -15 °C. Dobijena smeša je mešana na -20 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat pirazin-2-karboksaldehid (2,95 g, 1,57 mmol) kao rastvor u 20 mL anhidrovanog THF uz održavanje temperature ispod -10 °C. Dobijena reakcija je mešana na -10 °C tokom 1 sata, a zatim je ugašena sa 4 N HCl (10 mL). Ugašena reakciona smeša je podeljena između EtOAc (200 mL) i vode (200 mL). Organska faza je odvojena, a vodena faza je ponovo ekstrahovana sa EtOAc (1 x 100 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na2SO4, koncentrovano do sušenja i prečišćeno fleš hromatografijom koristeći gradijent od 20 - 100% EtOAc u heptanu da bi se dobio 2-fluoro-4-[hidroksi(pirazin-2-il)metil]-6-metoksibenzonitril (R-2) (2.6 g, prinos 58%) kao guma. m/z 260.0 (M+H)<+>;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,67 (d, J=0,7 Hz, 1H), 8,56 - 8,50 (m, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,87 (d, J=9,2 Hz, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,57 (br. s, 1H), 3,94 (s, 3H).
Koraci 2-4: Sinteza 2-fluoro-6-metoksi-4-[(pirazin-2-il)metil]benzonitrila (R-3).
[0397] U rastvor 2-fluoro-4-[hidroksi(pirazin-2-il)metil]-6-metoksibenzonitrila (R-2) (145 mg, 0,559 mmol) i Et3N (0,120 mL, 0,861 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) na 0 °C dodat je metansulfonil hlorid (0,050 mL, 0,64 mmol). Dobijena smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (30 mL), isprana vodom (1 x 30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(1 x 30 mL). Ekstrakt je osušen preko Na2SO4i koncentrovan do sušenja. Materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Smeša sirovog mezilata (173 mg, 0,513 mmol) i LiBr (137 mg, 1,58 mmol) u anhidrovanom DMF (4 ml) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (50 ml) i vode (50 ml). Organska faza je odvojena, isprana vodom (1 x 50 ml) i fiziološkim rastvorom (1 x 50 ml), osušena preko Na2SO4, i koncentrovana. Prečišćavanje fleš hromatografijom je izvršeno korišćenjem gradijenta od 0-100% EtOAc u heptanu da bi se dobilo 72 mg (44%) sekundarnog bromida. Sekundarni bromid (43 mg, 0,13 mmol) i cinkov prah (90 mg, 1,4 mmol) su mešani na 80 °C u HOAc (2 mL) tokom 8 sati. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena sa EtOAc (50 mL) i pažljivo isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organski sloj je zatim ispran fiziološkim rastvorom (1 x 50 ml) i osušen preko Na2SO4. Nakon koncentrovanja do sušenja, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom 0-100% EtOAc u heptanu da bi se dobilo 10 mg (31%) 2-fluoro-6-metoksi-4-[(pirazin-2-il)metil]benzonitrila. (R-3) (10 mg, prinos 31%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,56 (širok s, 3H), 6,74 - 6,69 (m, 2H), 4,18 (s, 2H), 3,94 (s, 3H); m/z 244.0 (M+H)<+>.
Koraci 5-6: Sinteza 2,6-dimetoksi-N[4-metoksi-6-(pirazin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamida (Primer 111).
[0398] U smešu 2-fluoro-6-metoksi-4-[(pirazin-2-il)metil]benzonitrila (R-3) (178 mg, 0,732 mmol) i N-hidroksiacetamida (165 mg, 2,20 mmol) u CH3CN (5 mL) i vodi (0,5 mL) dodat je 1,1,3,3-tetrametilguanidin (0,55 mL, 4,4 mmol). Dobijena reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Rastvor je uklonjen, a dobijeni ostatak je podeljen između EtOAc i vode. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana drugi put sa EtOAc (50 mL). Kombinovani organski ekstrakt je osušen preko Na2SO4, koncentrovan do sušenja i prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 40 -100% EtOAc u heptanu. Ovo je dalo 82 mg (44%) aminskog intermedijera kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,68 (d, J=1,1 Hz, 1H), 8,60 - 8,55 (m, 1H), 8,51 (d, J=2,6 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,87 (br. s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,88 (s, 3H); m/z 257.1 (M+H)<+>Amin (73 mg, 0,28 mmol) iz gornje reakcije je tretiran 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hloridom.
(Int-26) (100 mg, 0,43 mmol) i piridinom (2 ml). Reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 3 sata. Zatim je dodat dodatni 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorid (Int-26) (50 mg, 0,21 mmol) i zagrevanje na 110 °C je nastavljeno još 1 sat. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i 2N HCl (20 mL). Organska faza je odvojena, osušena preko Na2SO4i prečišćena pomoću fleš hromatografije eluiranjem sa gradijentom od 20 - 100% EtOAc u heptanu, a zatim drugim gradijentom od 0 - 20% 2-PrOH u EtOAc da bi se dobio 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(pirazin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 111) (44 mg, prinos 34%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,50 (s, 1H), 8,68 (d, J=1,0 Hz, 1H), 8,58 - 8,53 (m, 1H), 8,50 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,49 (t, J=8,5 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,77 (d, J=8,6 Hz, 2H), 4,25 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,77 (s, 6H); m/z 456.8 (M+H)<+>.
[0399] Primeri i referentni primeri u tabeli ispod su sintetizovani prema postupcima koji se koriste za sintezu 2,6-dimetoksi-N-[4-metoksi-6-(pirazin-2-ilmetil)-1,2-benzoksazol-3-il]benzensulfonamid (Primer 111). Sledeći primeri su sintetizovani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerene postupke koje bi stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari. Ako je potrebno, razdvajanje regioizomernih smeša je sprovedeno standardnim postupcima poznatim u struci, kao što su SFC ili HPLC, i sprovedeno je u bilo kom pogodnom koraku u sintetičkom nizu.
Tabela 19:
Referentni primer 128: Priprema N-{5-fluoro-4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida prema Šemi S.
[0400]
Korak 1: Sinteza metil 4-(benzilamino)-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-1).
[0401] Rastvor benzilamina (38,0 mL, 347 mmol), metil 2,4,5-trifluoro-3-metoksibenzoata (51,0 g, 232 mmol) i trietilamina (161 mL, 1160 mmol) u DMSO (500 mL) je zagrevan na 100 °C tokom 18 sati. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je sipana u vodu i ekstrahovana etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (eluiranje sa 5/1 petrol. etar/etil acetat) da bi se dobio metil 4(benzilamino)-2,5-difluoro-3-metoksibenzoat (S-1) (41 g, prinos 57%) kao svetložuto ulje. LCMS m/z 308.1 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7,43 - 7,20 (m, 6H), 4,74 (br s, 1H), 4,63 (br s, 2H), 3,97 - 3,80 (m, 6H).
Korak 2: Sinteza metil 4-amino-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-2).
[0402] Rastvor metil 4-(benzilamino)-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-1) (41 g, 133 mmol) u metanolu (500 ml) je tretiran sa Pd/C (7,0 g) i mešan na 50 °C pod pritiskom vodonika (45 psi) tokom 48 sati. Suspenzija je filtrirana kroz sloj celita.<®>, a filtrat je koncentrovan da bi se dobio metil 4-amino-2,5-difluoro-3-metoksibenzoat (S-2) (28.0 g, prinos 96%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS m/z 217.9 [M+H]<+>;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7,27 (dd, J=6,3, 11,6 Hz, 1H), 6,21 (s, 2H), 3,77 (d, J=1,1 Hz, 6H).
Korak 3: Sinteza metil 4-cijano-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-3)
[0403] Suspenzija metil 4-amino-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-2) (28.0 g, 129 mmol) i bakar(I) cijanida (34,6 g, 387 mmol) u CH3CN (1 L) je zagrejana na 65 °C. Izoamil nitrit (22,7 g 193 mmol) je dodat kap po kap i reakcija je mešana na 65 °C tokom 1 sat. Analiza pomoću LCMS je pokazala da je deo početnog materijala ostao i dodat je dodatni izoamil nitrit (15,1 g 129 mmol). Reakcija je zagrejana na 65 °C tokom 18 sati. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je razblažena sa EtOAc (200 mL) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 0 - 50% EtOAc u heptanu da bi se dobio metil 4-cijano-2,5-difluoro-3-metoksibenzoat (S-3) (14.0 g, prinos 47%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7,36 (dd, J=4,8, 8,4 Hz, 1H), 4,21 (d, J=3,1 Hz, 3H), 3,97 (s, 3H).
Korak 4: Sinteza 3,6-difluoro-4-(hidroksimetil)-2-metoksibenzonitrila (S-4)
[0404] U rastvor metil 4-cijano-2,5-difluoro-3-metoksibenzoata (S-3) (14 g (62 mmol) u THF-u (400 ml) dodat je LiBH4(20 g, 92 mmol) polako na 0 °C. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature, a zatim zagrejana na 50 °C tokom 2 sata. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je ugašena sporim dodavanjem H2O (100 mL) i organski slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (2 x 300 mL). Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom i zasićenim rastvorom NaHCO3, sušen preko Na2SO4i filtriran. Nakon uklanjanja rastvarača, dobijen je 3,6-difluoro-4-(hidroksimetil)-2-metoksibenzonitril (S-4) (10 g, 81%) kao žuta čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7,06 (dd, J=4,8, 8,8 Hz, 1H), 4,81 (s, 2H), 4,17 (d, J=3,3 Hz, 3H), 2,48 (br s, 1H).
Korak 5: Sinteza 3,6-difluoro-2-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (S-5)
[0405] U rastvor 3,6-difluoro-4-(hidroksimetil)-2-metoksibenzonitrila (S-4) (10 g, 50 mmol) i 1-(metansulfonil)-1H-pirazola (Int-13) (8.8 g, 60 mmol) u CH3CN (500 mL) dodat je Cs2CO3(24.5 g, 75,3 mmol) i mešano je na 70 °C tokom 2 sata. Analiza pomoću LCMS je pokazala da je početni materijal potrošen. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Nakon što je filtrat koncentrovan, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 20 - 50% EtOAc u petrolej etru da bi se dobio 3,6-difluoro-2-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitril (S-5) (8.4 g, prinos 67%) kao žuta guma. LCMS m/z 250.0 [M+H]<+>;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7,89 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,62 - 7,40 (m, 1H), 6,76 (dd, J=5,0, 9,1 Hz, 1H), 6,33 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,49 (d, J=1,1 Hz, 2H), 4,13 (d, J=3,2 Hz, 3H).
Korak 6: Sinteza 5-fluoro-4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin (S-6)
[0406] U rastvor 3,6-difluoro-2-metoksi-4-[(1H-pirazol-1-il)metil]benzonitrila (S-5) (8.4 g, 34 mmol) i N-hidroksiacetamida (7,6 g, 100 mmol) u CH3CN (400 mL) i vode (80 mL) je polako dodat 1,1,3,3-tetrametilguanidin (23 g, 200 mmol). Smeša je zagrejana na 60 °C tokom 16 sati. Smeša je ohlađena i koncentrovana da bi se uklonio CH3CN. Žuta čvrsta supstanca se istaložila iz rastvora koji je ispran vodom, a zatim smešom 10% EtOAc u petroleju. Dobijena bledožuta čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobio 5-fluoro-4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amin. (S-6) (6.1 g, prinos 69%) kao bledožuta čvrsta supstanca. LCMS m/z 262.9 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7,59 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,43 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,70 (d, J=9,2 Hz, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,35 (t, J=2,1 Hz, 1H), 5,31 (s, 2H), 2,23 (tt, J=5,1, 8,4 Hz, 1H), 1,20-1,14 (m, 2H), 0,81-0,73 (m, 2H).
Korak 7: Sinteza N‑{5-fluoro‑4-metoksi‑6‑[(1H-pirazol‑1-il)metil]‑1,2-benzoksazol‑3-il}‑2,6-dimetoksibenzen‑1-sulfonamida (Referentni primer 128)]
[0407] U rastvor 5-fluoro-4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-amina (S-6) (6.1 g, 23 mmol) u piridinu (100 ml) dodat je 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorid (Int-26) (6.1 g, 26 mmol) i dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 18 sati. Smeša je koncentrovana i prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa 10% MeOH u DCM da bi se dobio sirovi proizvod Referentnog primera 128 (8 g) kao žuta čvrsta supstanca. Suspenzija žute čvrste supstance u CH3CN (100 mL) je refluksovana 10 minuta. Većina čvrstih materija je ostala.
[0408] Stoga, dodatni CH3CN (500 mL) je dodat u koracima od 100 mL dok se čvrsta supstanca potpuno nije rastvorila. Rastvor je ostavljen da se hladi tokom 5 minuta i dodat je MTBE (400 mL) uz energično mešanje. Počele su da se formiraju bele čvrste supstance, smeša je koncentrovana na 1/3 zapremine i rastvor je energično mešan na 20 °C tokom 18 sati. Talog je sakupljen filtracijom, ispran heptanom i osušen pod vakuumom da bi se dobilo 3,2 g (30%) Referentnog primera 128 kao bela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo 4,7 g sirove supstance Referentnog primera 128 kao žuta čvrsta supstanca koja je dalje prečišćena kao što je opisano u nastavku. Dobijenih 4,7 g je ponovo prečišćeno fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 0-20% EtOAc u DCM da bi se dobilo 3 grama bele čvrste supstance koja je rastvorena u CH3CN (10 mL) i MTBE (25 mL). Bezbojni rastvor je mešan dok se nije zamutio i dok se nije istaložila bela čvrsta supstanca. Bela čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa MTBE (3 x 5 mL). Ova serija bele čvrste supstance je spojena sa serijom od 3,2 g i spojena čvrsta supstanca je suspendovana u CH3CN (30 mL) i zatim zagrejano do rastvaranja. MTBE (60 mL) je postepeno dodat i bela čvrsta supstanca se istaložila iz rastvora. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana do ukupne zapremine od 30 mL. Dobijena bela čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa MTBE (3 x 10 mL), sušena u vakuumskoj peći na 60 °C tokom 6 sati da bi se dobio N‑{5-fluoro‑4-metoksi‑6‑[(1H-pirazol‑1-il)metil]‑1,2-benzoksazol‑3-il}‑2,6-dimetoksibenzen‑1-sulfonamid (Referentni primer 128) (5.3 g, prinos 49%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,13 (br. s, 1H), 7,86 (br. s, 1H), 7,59 - 7,43 (m, 2H), 6,90 (br. d, J=3,3 Hz, 1H), 6,78 (br. d, J=8,5 Hz, 2H), 6,31 (br. s, 1H), 5,50 (br. s, 2H), 4,04 (br. s, 3H), 3,76 (s, 6H); m/z 463.0 [M+H]<+>.
[0409] Primeri u tabeli ispod su sintetisani prema postupcima koji se koriste za sintezu N-{5-fluoro-4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Referentni primer 128), N-{4-etil-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}-2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonamida (Primer 95), 5-etil-2-metoksi-N-{4-metoksi-6-[(1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 01), 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(3-metil-1H[(-(pirizol-1-il)metil)-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1sulfonamida (Primer 02), i 2,6-dimetoksi-N-{4-metoksi-6-[(5-metil-1H-pirazol-1-il)metil]-1,2-benzoksazol-3-il}benzen-1-sulfonamida (Primer 03), i opštim postupcima formiranja sulfonamida A-D. Sledeći primeri su sintetisani sa nekritičnim promenama ili supstitucijama u odnosu na primerne postupke koje stručnjak u ovoj oblasti mogao da ostvari.
Tabela 20:
Biološke analize Odeljak 1
Protokol za KAT analizu:
[0410]
A. Priprema jedinjenja
1. Pripremiti osnovne rastvore od 10 mM u 100% DMSO od čvrstog materijala 2. Serijski razblaženi rastvori jedinjenja od 10 mM, 1 mM ili 0,1 mM 3 puta u 100% DMSO za odgovor na dozu u 11 tačaka
B. Priprema reagensa
1. Pripremiti 1x pufer za analizu koji sadrži 10 mM Tris HCL pH 8,0, 2,5 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,005% BSG i 0,02% Tween-20
2. Razblažiti histonski peptid (CPC Scientific) i AcCoA (Sigma) zajedno u puferu za ispitivanje do 2x.
3. Razblažiti KAT enzim u puferu za ispitivanje do 2x.
C. Enzimska reakcija
1. Konačni reakcioni uslovi za svaki KAT test u reakcionoj zapremini testa od 20 μl:
i. KAT525 nM, 1 uM AcCoA, 2 uM H41-21 peptid, reakcija od 30 minuta ii. KAT6A 15 nM, 1 uM AcCoA, 2 uM H31-21 peptid, 45-minutna reakcija iii. KAT6B 25 nM, 1 μM AcCoA, 2 μM H31-21 peptid, reakcija od 60 minuta iv. KAT712,5 nM, 1 uM AcCoA, 2 uM H31-21 peptid, 45-minutna reakcija v. KAT815 nM, 1 uM AcCoA, 2 uM H31-21 peptida, 45-minutna reakcija 2. Dodati 0,5 μl razblaženog jedinjenja na ploču za ispitivanje (ploče od polipropilena sa 384 bunarčića i V-dnom) ili 0,5 μl DMSO za kontrolne bunarčiće.
3. Dodati 10 µl mešavine 2x histonski peptid/2x AcCoA na ploču za ispitivanje.
4. Dodati 10 μl 2x enzima na ploču za ispitivanje.
5. Zaustaviti reakciju nakon naznačenog vremena dodatkom 2 μl 5% mravlje kiseline 6. Svaka reakcija je analizirana korišćenjem samosastavljene monoslojne desorpcionojonizacione masene spektrometrije sa vremenom preleta (Mrksich, Milan (2008) Mass Spectrometry of Self-Assembled Monolayers: A New Tool for Molecular Surface Science ACS Nano 20082 (1), 7-18; SAMDI Tech, Inc. (Chicago, IL)).
7. Površina ispod krive (AUC) za pikove supstrata i proizvoda određena je za KAT5 pri MW 2561 [Supstrat H]<+>i 2603 [Proizvod H]<+>sa tolerancijom od /- 1 Da, respektivno
8. Površina ispod krive (AUC) za pikove supstrata i proizvoda određena je za KAT6A, KAT6B, KAT7 i KAT8 pri MW 2723 [Supstrat H]<+>i 2765 [Proizvod H]<+>sa tolerancijom od /- 1 Da, respektivno.
9. Procenat konverzije u proizvod je izračunat pomoću: AUCProizvod/(AUCSupstrat+ AUCProizvod).
D. Analiza podataka
1. IC50vrednosti su određene uklapanjem % konverzije pri svakoj koncentraciji inhibitora u 4 parametarsku jednačinu za IC50korišćenjem softvera za uklapanje krive kompanije Pfizer.
2. Kivrednosti su određene uklapanjem % konverzije pri svakoj koncentraciji inhibitora u Morrison jednačinu za konkurentske inhibitore čvrstog vezivanja korišćenjem softvera za uklapanje krive kompanije Pfizer.
Materijali
[0411] KAT enzimi su eksprimirani korišćenjem bakulovirusnog sistema za ekspresiju i prečišćeni u Pfizer, La Jolla. Histon H3 (1-21) peptid (ARTKQTARKSTGGKAPRKQLA, SEQ ID NO:3) i histon H4 (1-21) peptid (SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKV, SEQ ID NO:4) su kupljeni od CPC Scientific (Sunnyvale, CA). Acetil koenzim A je kupljen od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Svi ostali biohemijski reagensi su kupljeni od Sigma-Aldrich ili ThermoFisher Scientific (Waltham, MA).
KAT reakcije
[0412] KAT testovi su sprovedeni na sobnoj temperaturi u puferu za test koji sadrži 1 µM AcCoA, 2 µM histonskog peptida, 10 mM Tris HCL pH 8,0, 2,5 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,005% BSG i 0,02% Tween-20. 10 µl mešavine 2x histonskog peptida/AcCoA dodato je na polipropilensku ploču za test sa 384 bunarčića sa V-dnom koja sadrži 0,5 µl serijski razblaženog test jedinjenja u 100% dimetil sulfoksidu (DMSO). Da bi se započela reakcija, 10 µl 2x rastvora enzima dodato je na ploču za test. KAT testovi su završeni nakon 30-60 minuta dodatkom 2 µl 5% mravlje kiseline. Svi testovi su koristili histonski H3 (1-21) peptid osim KAT5 testa koji je koristio histonski H4 (1-21) peptid. Konačna koncentracija enzima za svaki KAT bila je sledeća: KAT5, 25 nM; KAT6A, 15 nM; KAT6B, 25 nM; KAT7, 12,5 nM; KAT815 nM. Svaka reakcija je analizirana korišćenjem samosastavljene monoslojne desorpciono-jonizacione masene spektrometrije sa vremenom preleta (Mrksich, Milan (2008) Mass Spectrometry of Self-Assembled Monolayers: A New Tool for Molecular Surface Science ACS Nano 20082 (1), 7-18; SAMDI Tech, Inc. (Chicago, IL))).
Obrada i analiza podataka
[0413] Površina ispod krive (AUC) za pikove supstrata i proizvoda određena je za KAT5 pri MW 2561 [Supstrat H]<+>i 2603 [Proizvod H]<+>sa tolerancijom od /- 1 Da, respektivno. Površina ispod krive (AUC) za pikove supstrata i proizvoda određena je za KAT6A, KAT6B, KAT7 i KAT8 pri MW 2723 [Supstrat H]<+>i 2765 [Proizvod H]<+>sa tolerancijom od /- 1 Da, respektivno. Procenat konverzije u proizvod je izračunat pomoću: AUCProizvod/(AUCSupstrat+ AUCProizvod). Vrednosti IC50su određene uklapanjem % konverzije pri svakoj koncentraciji inhibitora u 4 parametarsku jednačinu za IC50korišćenjem softvera za uklapanje krive kompanije Pfizer. Vrednosti Kisu određene uklapanjem % konverzije pri svakoj koncentraciji inhibitora u Morrison jednačinu za konkurentske inhibitore čvrstog vezivanja korišćenjem softvera za uklapanje krive kompanije Pfizer.
[0414] KAT6a i KAT6b Ki vrednosti su date u Tabeli 21, a KAT5, KAT7 i KAT8 Ki vrednosti su date u Tabeli 22 ispod.
Tabela 21:
Tabela 22:
Biološke analize Odeljak 2
Priprema proteina
[0415] KAT5
[0416] Molekularna biologija: DNK sekvenca optimizovana za kodone (za ekspresiju u Esherihia coli) koja kodira aminokiselinske ostatke od 2 do 461 (Uniprot Q92993-2) humane KAT5 izoforme sintetisala je kompanija GenScript USA Inc (Piscataway, New Jersey, USA). Ovo je vezano u modifikovani pET43a E. coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira N-terminalnu heksahistidinsku oznaku, nakon čega sledi mesto cepanja proteaze virusa nagrizanja duvana (TEV) i KAT5 sekvenca. Dobijena proteinska sekvenca je navedena u nastavku (SEQ ID NO:5).
[0417] Ekspresija proteina: Da bi se proizveo rekombinantni KAT5 protein, ekspresioni plazmid je transformisan u E. coli soj BL21 DE3 i uzgajan uz mućkanje na 37°C u zapremini od 1 L Terrific bujona (TB) dopunjenog sa 100 µg/mL ampicilina i 50 µM cinka dok se ne postigne OD600 od 0,8. Kulture su prebačene na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodatkom izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do konačne koncentracije od 0,5 mM, a kulture su mućkane preko noći dodatnih 16 sati. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 x g tokom 20 minuta, a ćelijski pelet je čuvan zamrznut na -20°C.
[0418] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je započeto odmrzavanjem ćelijskog peleta (25 g vlažne težine) u liznom puferu (50 mM Hepes pH 7,4, 500 mM NaCl, 5 mM imidazol, 5% [v/v] glicerol, 0,1% [w/v] CHAPS, 2 mM 2-merkaptoetanol, 3 mM MgCl22, 0,5 mg/ml lizozima, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) koristeći odnos od 6 ml pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dalje lizirane sonikacijom pomoću Misonix Liquid Processor (6 x 30 sekundi impulsa, amplituda 60 [70 vati]), a zatim centrifugirane na 48.000 x g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je pomešan sa 20 ml Q-Sepharose FF smole (GE Healthcare) prethodno uravnotežene sa Q puferom (20 mM Hepes pH 7,4, 1 M NaCl). Nevezana frakcija iz Q-Sepharose FF je zatim inkubirana sa 5 mL kompletne His-Tag smole za prečišćavanje (Roche), prethodno uravnotežene sa IMAC puferom za pranje (20 mM hepes pH 7,4, 500 mM NaCl, 35 mM imidazol). Smola je isprana sa IMAC puferom za pranje, a vezani KAT5 eluiran sa IMAC puferom za eluiranje (20 mM hepes pH 7,4, 500 mM NaCl, 300 mM imidazol). IMAC-eluirani protein je odmah desoljen u puferu za skladištenje (50 mM Na citrat pH 6,5, 500 mM NaCl, 5% [v/v] glicerol) koristeći 2 x HiPrep 26/10 kolone za odsoljavanje (GE Healthcare) u seriji. Odsoljeni protein je dalje prečišćen propuštanjem kroz HiLoad 26/60 Superdex 75 kolonu prethodno uravnoteženu u puferu za skladištenje. Konačno, KAT5 protein je koncentrovan na 1,5 mg/ml korišćenjem Amicon Ultra centrifugalne filterske jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i čuvan u zamrzivaču na -70°C.
KAT6A
[0419] Molekularna biologija: DNK sekvenca koja kodira aminokiselinske ostatke od 507 do 778 (Uniprot Q92794-1) humanog KAT6A je amplifikovana PCR i vezana u modifikovani pET. Esherihia coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira NusA oznaku za rastvorljivost, nakon čega slede heksahistidinska oznaka i mesto cepanja proteaze virusa nagrizanja duvana (TEV) i KAT6A sekvenca. Dobijena proteinska sekvenca je navedena u nastavku (SEQ ID NO:6).
[0420] Ekspresija proteina: Da bi se proizveo rekombinantni KAT6A protein, ekspresioni plazmid je transformisan u Esherihia coli soj BL21 DE3 i uzgajan uz mućkanje na 37°C u zapremini od 1 L Terrific bujona (TB) dopunjenog sa 100 µg/mL ampicilina dok se ne postigne OD600 od 0,8. Kulture su prebačene na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodatkom izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do konačne koncentracije od 0,5 mM, a kulture su mućkane preko noći još 16 sati. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 x g tokom 20 minuta, a ćelijski pelet je čuvan zamrznut na -20°C.
[0421] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je započeto odmrzavanjem ćelijskog peleta (40 g vlažne težine) u liznom puferu (25 mM Tris-HCl pH 7,8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,01% [v/v] Triton-X 100, 5% [v/v] glicerol, 2 mM MgCl22, 10 mM Imidazol, 0,5 mg/mL lizozim, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) koristeći odnos od 5 mL pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dalje lizirane sa 3 prolaza (na 15000 psi) kroz ledom hlađenu drobilicu ćelija Avestin C5, a zatim centrifugirane na 48.000 x g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je filtriran kroz filter od 5 µm i nanet na 5 mL HiTrap IMAC Sepharose FF kolonu (GE Healthcare) prethodno uravnoteženu sa IMAC puferom za pranje (25 mM Tris-HCl pH 7,8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,01% [v/v] Triton-X 100, 5% [v/v] glicerol, 20 mM imidazol) korišćenjem Profinia Affinity hromatografskog sistema za prečišćavanje (Bio-Rad). IMAC kolona je zatim isprana IMAC puferom za pranje, a vezani KAT6A protein eluiran sa IMAC puferom za eluiranje (25 mM Tris-HCl pH 7,8, 500 mM NaCl, 5% [v/v] glicerol, 5 mM DTT, 250 mM imidazol). Protein eluiran IMAC-om je dalje prečišćen propuštanjem kroz HiLoad 26/60 Superdex 200 kolonu prethodno uravnoteženu u puferu za skladištenje (25 mM Tris-HCl pH 7,8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 5% [v/v] glicerol). Konačno, KAT6A protein je koncentrovan na ≤ 1 mg/mL korišćenjem Amicon Ultra centrifugalne filterske jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i čuvan u zamrzivaču na -70°C.
KAT7
[0422] Molekularna biologija: DNK sekvenca optimizovana za kodone koja kodira aminokiselinske ostatke od 325 do 611 (Uniprot 095251-1) humanog KAT7 sintetisana je od strane GenScript USA Inc (Piscataway, New Jersey, USA). Ovo je vezano u modifikovani pET43a. Esherihia coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira N-terminalnu heksahistidinsku oznaku, nakon čega sledi mesto cepanja proteaze virusa nagrizanja duvana (TEV) i KAT7 sekvenca. Dobijena proteinska sekvenca je navedena u nastavku (SEQ ID NO:7).
[0423] Ekspresija proteina: Da bi se proizveo rekombinantni KAT7 protein, ekspresioni plazmid je transformisan u Esherihia coli soj BL21 DE3 RIL i uzgajan uz mućkanje na 37°C u zapremini od 1 L Terrific bujona (TB) dopunjenog sa 100 µg/mL ampicilina i 50 µM cinka dok se ne postigne OD600 od 0,8. Kulture su prebačene na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodatkom izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do konačne koncentracije od 0,5 mM, a kulture su mućkane preko noći dodatnih 16 sati. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 x g tokom 20 minuta, a ćelijski pelet je čuvan zamrznut na -20°C.
[0424] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je započeto odmrzavanjem ćelijskog peleta (10 g vlažne težine) u liznom puferu (50 mM Hepes pH 7,5, 300 mM NaCl, 5 mM DTT, 5 mM imidazol, 0,05% [v/v] Brij 35, 10% [v/v] glicerol, 3 mM MgCl22, 0,5 mg/ml lizozima, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) koristeći odnos od 10 ml pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dalje lizirane sonikacijom pomoću Misonix Liquid Processor (6 x 30 sekundi impulsa, amplituda 60 [70 vati]), a zatim centrifugirane na 48.000 x g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je inkubiran sa 1 mL kompletne His-Tag smole za prečišćavanje (Roche), prethodno uravnotežene sa IMAC puferom za pranje 1 (25 mM Hepes pH 7,5, 800 mM NaCl, 5 mM imidazol, 10% [v/v] glicerol, 5 mM DTT, 0,01% [v/v] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminska kiselina). Smola je sekvencijalno isprana sa IMAC puferom za pranje 1 i IMAC puferom za pranje 2 (25 mM Hepes pH 7,5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazol, 10% [v/v] glicerol, 5 mM DTT, 0,01% [v/v] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminska kiselina). Vezani KAT7 protein je eluiran sa IMAC elucionim puferom (25 mM hepes pH 7,5, 200 mM NaCl, 500 mM imidazol, 10% [v/v] glicerol, 5 mM DTT 0,01% [v/v] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminska kiselina). Eluirani protein je sakupljen direktno u 4 zapremine pufera za odsoljavanje (50 mM Na citrat pH 6,5, 200 mM NaCl, 0,01% [v/v] Brij 35, 10% [v/v] glicerol, 5 mM DTT) da bi se konačna koncentracija imidazola dovela do 100 mM. IMAC-eluirani protein je odmah odsoljen u pufer za odsoljavanje korišćenjem 2 x HiPrep 26/10 kolone za odsoljavanje (GE Healthcare) u seriji. Odsoljeni protein je dalje prečišćen propuštanjem kroz HiLoad 26/60 Superdex 75 kolonu prethodno uravnoteženu u puferu za skladištenje (50 mM Na citrat pH 6,5, 200 mM NaCl, 10% [v/v] glicerol, 5 mM DTT). Konačno, KAT7 protein je koncentrovan na 3,5 mg/mL korišćenjem Amicon Ultra centrifugalne filterske jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i čuvan u zamrzivaču na -70°C.
Biohemijski test acetiltransferaze
[0425] Da bi se utvrdila inhibicija enzimske aktivnosti KAT test jedinjenjima, reakcije ispitivanja su sprovedene u zapremini od 8 µL na pločama za ispitivanje male zapremine sa 384 bunarčića. Reakcije su izvedene u puferu za ispitivanje (100 mM Tris-HCl, pH 7,8, 15 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0,01% Tween-20, 1 mM ditiotreitol i 0,01% m/v albumin belanca kokošijeg jajeta).
[0426] Reakcije su postavljene sa 1µM acetil koenzima A, 100 nM rekombinantnog histona pune dužine obeleženog ograničenom biotinilacijom (KAT6A, KAT7: H3.1, KAT5), 10/5/8/40/20 nM enzima KAT5/KAT6A/KAT7 respektivno, i antitelom specifičnim za acetillizin (H3.1: Cell Signaling Technology, H4: Abcam). Serije razblaženja test jedinjenja u 11 tačaka su pripremljene u DMSO; zapremina od 100 nL je preneta pomoću iglenog alata u ploče za ispitivanje koje sadrže supstrate, pre dodavanja enzima za početak reakcije. Pozitivne (bez jedinjenja, samo DMSO) i negativne (AcCoA izostavljen) kontrolne reakcije su uključene na iste ploče i primile su istu količinu DMSO kao i bunarčići tretirani jedinjenjem. Nakon dodavanja svih reagensa, ploče su zapečaćene lepljivim zaptivkama i inkubirane 90 minuta na sobnoj temperaturi. Dodatnih 4 µL pufera za ispitivanje koji sadrži AlphaScreen<®>akceptorske kuglice proteina A i donorske kuglice streptavidina (PerkinElmer, Waltham, MA) do konačne koncentracije od 8 µg/mL. Nakon inkubacije od 2 sata, ploče su očitane pomoću EnVision 2103 višeslojnog čitača ploča (PerkinElmer) u HTS AlphaScreen<®>režimu. Vrednosti IC50su dobijene iz sirovih očitavanja izračunavanjem procenta inhibicije (%I) za svaku reakciju u odnosu na kontrole na istoj ploči (%I=(I-CN)/(CP-CN) gde su CN/CP proseci negativnih/pozitivnih reakcija, respektivno), a zatim uklapanjem podataka %I u odnosu na koncentraciju jedinjenja [I] u %I=(A+((B-A)/(1+((C/[I])^D)))) gde je A donja asimptota, B je gornja asimptota, C je vrednost IC50, a D je nagib.
[0427] Rezultati su prikazani u Tabeli 23 ispod:
Tabela 23:
Test biomarkera acetilacije histona H3 lizina 23
[0428] Jedinjenja su testirana na svoju sposobnost da inhibiraju acetilaciju histonskog markera H3K23 u sledećem testu:
Ćelijska linija U2OS je posejana u gustini od 9.000 ćelija po bunarčiću u pločama za kulturu tkiva optičkog kvaliteta sa 96 bunarčića u RPMI medijumu i 10% fetalnom goveđem serumu, i ostavljena je da se vrši adhezija 24 sata pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2).
[0429] Na kraju ovog perioda, medijum je aspiriran. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum, pri čemu su negativni kontrolni bunarčići rezervisani za tretman samo sa DMSO, a kontrole sa 100% inhibicijom pozitivne kontrole su primile snažno inhibitorsko jedinjenje (npr. cas 2055397-28-7, benzoeva kiselina, 3-fluoro-5-(2-piridinil)-, 2-[(2-fluorofenil)sulfonil]hidrazid) (Baell, J., Nguyen, H.N., Leaver, D.J., Cleary, B.L., Lagiakos, H.R., Sheikh, B.N., Thomas. T.J., Aryl sulfonohydrazides, WO2016198507A1, 2016) pri koncentraciji od 10 µM i 200 µL prenete u ćelije.
[0430] Nakon inkubacije od 24 sata, ćelije su fiksirane sa 3,7% formaldehida u PBS tokom 20 minuta na sobnoj temperaturi, isprane (5 × 5 minuta) fosfatno puferovanim fiziološkim rastvorom koji sadrži 0,1% Tween 20 i blokirane sa Odyssey blokirajućim puferom (LI-COR, Lincoln, NE) koji sadrži 0,1% TritonX1 00. Dodato je specifično anti-H3K23ac antitelo (Abcam ab177275) u Odyssey blokirajućem puferu koji sadrži 0,1% Tween 20 i inkubirano 16 sati na 4 stepena Celzijusa. Nakon ispiranja (kao gore), dodato je sekundarno antitelo obeleženo bojom Alexa647 (LifeTechnologies) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, SigmaAldrich) za inkubaciju od 1 sata. Ploče su isprane kao i prethodno i očitane na PerkinElmer Phenix platformi za snimanje visokog sadržaja. Koristeći Columbus image analysis pipeline za analizu slika, pojedinačna jezgra su locirana pomoću bojenja Hoechst 33342, a nivo acetilacije je izračunat na osnovu intenziteta povezanog sa Alexa647 u istom području. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je direktno konvertovan u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči, a podaci su upoređeni sa logističkim modelom sa četiri parametra da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).
[0431] Rezultati su prikazani u Tabeli 24 ispod:
Tabela 24:
Test biomarkera acetilacije histona H3 lizina 14
[0432] Jedinjenja su testirana na svoju sposobnost da inhibiraju acetilaciju histonskog H3 lizin 14 markera u sledećem testu:
Ćelijska linija U2OS je posejana sa gustinom od 3.000 ćelija po bunarčiću u pločama za tkivnu kulturu optičkog kvaliteta sa 384 bunarčića u RPMI medijumu dopunjenom sa 10% fetalnog goveđeg seruma i 10 mM Hepes. Ćelijama je ostavljeno da se adheziraju 24 sata pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2). Na kraju ovog perioda ćelije su isprane medijumom bez seruma. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum bez seruma, pri čemu su bunarčići za negativnu kontrolu rezervisani za tretman samo sa DMSO, a kontrole sa 100% inhibicijom pozitivne kontrole su primale snažno inhibitorno jedinjenje (npr. (Z)-4-fluoro-N-((3-hidroksifenil)sulfonil)-5-metil-[1,1'-bifenil]-3-karbohidrazonska kiselina) u koncentraciji od 10 µM. Nakon inkubacije od 24 sata, ćelije su fiksirane sa 4% formaldehida u PBS tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, isprane fosfatno puferovanim fiziološkim rastvorom i blokirane blokirajućim puferom koji sadrži 0,2% TritonX100 i 2% BSA. Dodato je specifično anti-H3K14ac antitelo (Cell Signaling Technologies) u blokirajućem puferu i inkubirano preko noći na 4 stepena Celzijusa. Nakon ispiranja, dodato je sekundarno antitelo obeleženo bojom AlexaFluor 488 (ThermoFisher) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, Life Technologies) radi inkubacije od 2 sata na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane i očitane na PerkinElmer Opera HCS platformi za snimanje visokog sadržaja. Koristeći Columbus image analysis pipeline za analizu slika, pojedinačna jezgra su locirana pomoću bojenja Hoechst 33342, a nivo acetilacije je izračunat na osnovu intenziteta povezanog sa AlexaFluor 488 u istom području. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je konvertovan u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči, a podaci su upoređeni sa logističkim modelom sa četiri parametra da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).
[0433] Rezultati su prikazani u Tabeli 25 ispod:
Tabela 25:
Test biomarkera acetilacije lizina 7 H2A.Z
[0434] Jedinjenja su testirana na svoju sposobnost da inhibiraju marker acetilacije histona H2A.Z Lizin 7 u sledećem testu:
Ćelijska linija U2OS je posejana gustinom od 3.000 ćelija po bunarčiću u pločama za tkivnu kulturu optičkog kvaliteta sa 384 bunarčića u RPMI medijumu dopunjenom sa 10% fetalnog goveđeg seruma i 10 mM Hepes. Ćelijama je ostavljeno da se adheziraju 24 sata pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2). Na kraju ovog perioda ćelije su isprane medijumom bez seruma. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum bez seruma, pri čemu su bunarčići za negativnu kontrolu rezervisani za tretman samo sa DMSO, a kontrole za pozitivnu kontrolu od 100% inhibicije su primale snažno inhibitorno jedinjenje enantiomer 1 od 7-jodo-N-(2-(oksazol-2-il)-2-feniletil)-2H-benzo[e][1,2,4]tiadiazin-3-karboksamid 1,1-dioksid, koji je jedinjenje 146 iz istovremene prijave GB1713962.7, podneto 31. avgusta 2018., pri koncentraciji od 30 µM. Nakon inkubacije od 24 sata, ćelije su fiksirane sa 4% formaldehida u PBS tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, isprane fosfatno puferovanim fiziološkim rastvorom i blokirane blokirajućim puferom koji sadrži 0,2% TritonX100 i 2% BSA. Dodato je specifično antitelo protiv H2A.ZK7ac (Abcam) u blokirajućem puferu i inkubirano preko noći na 4 stepena Celzijusa. Nakon ispiranja, dodato je sekundarno antitelo obeleženo bojom AlexaFluor 488 (ThermoFisher) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, Life Technologies) radi inkubacije od 2 sata na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane i očitane na PerkinElmer Opera HCS platformi za snimanje visokog sadržaja. Koristeći Columbus image analysis pipeline za analizu slika, pojedinačna jezgra su locirana pomoću Hoechst 33342 boje, a nivo acetilacije je izračunat iz intenziteta povezanog sa AlexaFluor 488 u istom području. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je pretvoren u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči, a podaci su upoređeni sa logističkim modelom sa četiri parametra da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).
[0435] Rezultati su prikazani u Tabeli 26 ispod:
Tabela 26:
Reference
[0436]
Aggarwal and Calvi, Nature, 2004, 430, 372-376 doi:10.1038/nature02694
Avvakumov et al., Oncogene, 2007, 26, 5395-5407 doi:10.1038/sj.onc.1210608
Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 doi:10.1002/jps.2600660104
Borrow et al., Nat. Genet., 1996, 14, 33-41 doi:10.1038/ng0996-33
Dekker et al., Drug, Discov. Today, 2014, 19, 654-660 doi:10.1016/j.drudis.2013.11.012 Doyon et al., Mol. Cell., 2006, 21, 51-64 doi :10.1016/j.molcel.2005.12.007
Dhuban et al., Sci. Immunol., 2017, 2, 9297 doi:10.1126/sciimmunol.aai9297
Duong et al., Cancer Res., 2013, 73, 5556-5568 doi:10.1158/0008-5472.CAN-13-0013 Ghizzoni et al., Eur. J. Med. Chem., 2012, 47, 337-344
doi: 10.1 016/j.ejmech.2011.11.001
Gil et al., J. Proteomics, 2017, 150, 297-309 doi :10.1016/j.jprot.2016.10.003
Gobert, M. et al., Cancer Research, 2009, 69, 2000-2009 doi:10.1158/0008-5472.CAN-08-2360 Holbert et al., J. Biol. Chem., 2007, 282, 36603-36613 doi:10.1074/jbc.M705812200 lizuka et al., Mol. Cell. Biol., 2006, 26, 1098-1108 doi :10.1128/MCB.26.3.1098-1108.2006
lizuka et al., Cancer Sci., 2013, 104, 1647-1655 doi:10.1111/cas.12303
Jeong, et al., Blood Res 201651(3), 152-154 doi:10.5045/br.2016.51.3.152
Joshi, et al., Immunity 2015, 43, 579-590 doi:10.1016/j.immuni.2015.08.006
Li, B. et al., PNAS, 2007, 104, 4571-4576 doi:10.1073/pnas.0700298104
Melero, et al. Nature Reviews Cancer, 2015, 15, 457-472 doi:10.1038/nrc3973
Merson et al., J. Neurosci., 2006, 26, 11359-11370 doi :10.1523/JNEUROSCI.2247-06.2006 Miller, A.M. et al. J. Immunol., 2006, 177, 7398-7405 doi:10.4049/jimmunol.177.10.7398
Persa, E. et al. Cancer Letters, 2015368(2), 252-261 doi:10.1016/j.canlet.2015.03.003 Sheikh et al., Blood, 2015, 125(12), 1910-21 doi:10.1182/blood-2014-08-594655
Shi et al, Nature Biotech, 2015, 33, 661-667 doi:10.1038/nbt.3235
Su et al., Int. J. Mol. Sci., 2016, 17, 1-18 doi:10.3390/ijms17101594
Stern et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol., 2005, 54, 11-29 doi:10.1016/j.critrevonc.2004.10.011
Thomas et al., Development, 2000, 127, 2537-2548 PMID:10821753
Tao, H. et al., Lung Cancer, 2012, 75, 95-101 doi:10.1016/j.lungcan.2011.06.002 Turner-Ivey et al., Neoplasia, 2014, 16(8): 644-655 doi:10.1016/j.neo.2014.07.007 Valerio et al., Cancer Research, 2017, 77(7), 1753-62 doi:10.1158/0008-5472.CAN-16-2374 Vizmanos et al., Genes Chromosomes Cancer, 2003, 36(4), 402-405 doi:10.1002/gcc.10174 Voss et al., BioEssays, 2009, 31(10), 1050-1061 doi:10.1002/bies.200900051
Wang, L., et al. EBioMedicine, 2016, 13, 99-112 doi:10.1016/j.ebiom.2016.10.018 Wang, X. et al., Oncogene, 2017, 36, 3048-3058 doi:10.1038/onc.2016.458
Xiao, Y. et al., Cell reports, 2014, 7, 1471-1480 doi :10.1016/j.celrep.2014.04.021 Yan, M. et al., Breast Cancer Research, 2011, 13, R47 doi:10.1186/bcr2869
Zack et al., Nature Genetics 201345, 1134-1140 doi:10.1038/ng.2760
Zhang et al., Mini. Rev. Med. Chem., 2017, 17, 1-8
doi:10.2174/1389557516666160923125031

Claims (28)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I)
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<1>je vodonik; R<2>je -(CH2)n-(5-6 člani heteroaril) izborno supstituisan halogenom, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3; R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil; gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik; Prsten A je C6-C10aril ili 9-10-člani heteroaril; R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3; R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; R<7>je vodonik, brom, hlor, fluor ili metoksi; i n je 1.
  2. 2. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1, koje ima formulu (II)
    gde R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<3>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, C1-C4alkoksi, -OCHF2, ili -OCF3; R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil; gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik; Prsten A je C6-C10aril ili 9-10-člani heteroaril; R<6>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3; R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; i R<7>je vodonik, brom, hlor, fluoro ili metoksi.
  3. 3. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde je Prsten A fenil, hinolinil, benzoksazolil, indanil ili tetrahidronaftil.
  4. 4. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 3, gde je Prsten A fenil.
  5. 5. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, koje ima formulu (IV)
    gde R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<5>je vodonik, fluoro, cijano, C1-C3alkil, -CHF2, -CF3, ciklopropil, C1-C3alkoksi, -OCHF2, -OCF3, -O-ciklopropil, -CH2-O-CH3, -C(O)OCH3, ili -C(O)N(H)CH3; R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi; i R<7>je vodonik, brom, hlor, fluoro ili metoksi.
  6. 6. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde R<5>je metoksi, R<6>je metoksi, a R<7>je vodonik.
  7. 7. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde R<5>je metoksi, R<6>je vodonik, a R<7>je vodonik.
  8. 8. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, koje ima formulu (VI)
    gde R<2a>je odsutan, halogen, C1-C3alkil, -CH2OH, ili -OH; R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil; R<4>je vodonik, halogen, C1-C3alkil, ciklopropil, C1-C4alkoksi, ili -O-ciklopropil, gde bar jedan od R<3>i R<4>je vodonik; R<5>je vodonik, metil, -CH2-OCH3, -CF3, C1-C3alkoksi, ili -C(O)OCH3i R<6>je vodonik, fluoro, metil, -OH ili metoksi.
  9. 9. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 2-8, gde R<2a>je odsutan, fluoro, metil, -CH2OH ili -OH.
  10. 10. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 2-8, gde R<2a>je odsutan.
  11. 11. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili 8-10, gde R<3>je vodonik, halogen ili C1-C3alkil.
  12. 12. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili 8-10, gde R<3>je vodonik, fluoro, bromo ili metil.
  13. 13. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili 8-10, gde R<4>je vodonik, fluoro, metil, etil, ciklopropil, -O-ciklopropil ili C1-C4alkoksi.
  14. 14. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili 8-10, gde je R<4>je vodonik.
  15. 15. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili 8-10, gde R<4>je C1-C3alkoksi.
  16. 16. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 15, gde R<4>je metoksi.
  17. 17. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 8-16, gde R<5>je metoksi i R<6>je metoksi.
  18. 18. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 8-16, gde R<5>je metoksi i R<6>je vodonik.
  19. 19. Farmaceutska kompozicija koji sadrži jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
  20. 20. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta.
  21. 21. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je kancer izabran od kancera dojke, pluća, prostate, pankreasa ili jajnika.
  22. 22. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je kancer kancer dojke.
  23. 23. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je kancer ER-pozitivan kancer dojke.
  24. 24. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je kancer nesitnoćelijski kancer pluća.
  25. 25. Kombinacija jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa antitumorskim sredstvom ili sa radioterapijom, za upotrebu u lečenju kancera.
  26. 26. Kombinacija jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa antitumorskim sredstvom, za upotrebu u lečenju kancera.
  27. 27. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 25 ili 26, gde kancer je kancer dojke.
  28. 28. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 27, gde je kancer dojke ER-pozitivan kancer dojke.
RS20250987A 2019-06-18 2020-06-16 Derivati benzizoksazol sulfonamida RS67276B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962863199P 2019-06-18 2019-06-18
US201962953223P 2019-12-24 2019-12-24
US202063025278P 2020-05-15 2020-05-15
EP23203023.9A EP4299135B1 (en) 2019-06-18 2020-06-16 Benzisoxazole sulfonamide derivatives

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67276B1 true RS67276B1 (sr) 2025-10-31

Family

ID=71738189

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250987A RS67276B1 (sr) 2019-06-18 2020-06-16 Derivati benzizoksazol sulfonamida
RS20231177A RS64931B9 (sr) 2019-06-18 2020-06-16 Derivati benzizoxazol sulfonamida

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20231177A RS64931B9 (sr) 2019-06-18 2020-06-16 Derivati benzizoxazol sulfonamida

Country Status (34)

Country Link
US (3) US11492346B2 (sr)
EP (2) EP4299135B1 (sr)
JP (2) JP7352662B2 (sr)
KR (1) KR102823056B1 (sr)
CN (1) CN114364672B (sr)
AU (3) AU2020296361A1 (sr)
BR (1) BR112021025528A2 (sr)
CA (1) CA3143666C (sr)
CL (1) CL2021003372A1 (sr)
CO (1) CO2021017504A2 (sr)
CR (1) CR20210627A (sr)
DK (2) DK3986890T3 (sr)
EC (1) ECSP21091615A (sr)
ES (2) ES3043899T3 (sr)
FI (2) FI4299135T3 (sr)
HR (2) HRP20251225T1 (sr)
HU (1) HUE064683T2 (sr)
IL (1) IL288802B2 (sr)
LT (2) LT3986890T (sr)
MA (1) MA67365B1 (sr)
MD (2) MD3986890T3 (sr)
MX (1) MX2021016085A (sr)
MY (1) MY210207A (sr)
PE (1) PE20220808A1 (sr)
PH (1) PH12021553107A1 (sr)
PL (2) PL4299135T3 (sr)
PT (2) PT3986890T (sr)
PY (1) PY2027460A (sr)
RS (2) RS67276B1 (sr)
SI (2) SI3986890T1 (sr)
TW (1) TWI787620B (sr)
UA (1) UA129891C2 (sr)
UY (1) UY38752A (sr)
WO (1) WO2020254946A1 (sr)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
KR20220030222A (ko) 2019-05-31 2022-03-10 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Tead 억제제 및 이의 용도
WO2020243423A1 (en) 2019-05-31 2020-12-03 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
KR102823056B1 (ko) 2019-06-18 2025-06-23 화이자 인코포레이티드 벤즈이속사졸 설폰아마이드 유도체
US12545669B2 (en) * 2019-06-19 2026-02-10 Pfizer Inc. Cycloalkyl and heterocycloalkyl benzisoxazole sulfonamide derivatives
TW202216131A (zh) * 2020-07-15 2022-05-01 美商輝瑞大藥廠 用於癌症治療之ｋａｔ６抑制劑方法及組合
US20220024919A1 (en) * 2020-07-15 2022-01-27 Ifm Due, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with sting activity
WO2022187688A1 (en) * 2021-03-05 2022-09-09 Umbra Therapeutics Inc. Covalent kras-binding compounds for therapeutic purposes
WO2022187693A1 (en) * 2021-03-05 2022-09-09 Umbra Therapeutics Inc. Covalent cdk2-binding compounds for therapeutic purposes
EP4341259A4 (en) * 2021-05-21 2025-05-28 Aurigene Oncology Limited FUSED ISOXAZOLYL COMPOUNDS AS KAT6A INHIBITORS
US20240400545A1 (en) * 2021-07-05 2024-12-05 Hangzhou Innogate Pharma Co., Ltd. Compound serving as kat6 inhibitor
US20250145637A1 (en) * 2021-08-10 2025-05-08 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co. Ltd. Sulfonamide derivative, preparation method therefor and medical use thereof
MX2024005839A (es) 2021-11-16 2024-06-26 Insilico Medicine Ip Ltd Inhibidores de lisina acetiltransferasa 6a (kat6a) y usos de los mismos.
WO2023114710A1 (en) * 2021-12-13 2023-06-22 Aurigene Oncology Limited Fused benzoisoxazolyl compounds as kat6a inhibitors
CN116621859A (zh) * 2022-02-18 2023-08-22 山东轩竹医药科技有限公司 三并环类kat6抑制剂
US12187732B2 (en) 2022-03-28 2025-01-07 Isosterix, Inc. Inhibitors of the myst family of lysine acetyl transferases
CA3259017A1 (en) * 2022-06-16 2023-12-21 Prelude Therapeutics Incorporated KAT6 Targeting Compounds with Ubiquitin Ligasis Bonding Fraction
WO2024023703A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Pfizer Inc. Dosing regimens comprising a kat6 inhibitor for the treatment of cancer
CN120476113A (zh) * 2022-12-20 2025-08-12 杭州中美华东制药有限公司 具有sting抑制作用的含肟化合物及其药物组合物和用途
AU2024217108A1 (en) 2023-02-10 2025-09-18 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Crystalline form of sulfonamide derivative and preparation method therefor
KR20250155594A (ko) 2023-03-16 2025-10-30 올레마 파마슈티컬스 인코포레이티드 아실설폰아마이드 kat6a 억제제
EP4692094A1 (en) * 2023-03-27 2026-02-11 Beijing Konruns Pharmaceutical Co., Ltd. Sulfonamide compound, pharmaceutical composition thereof and use thereof
EP4689660A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Pfizer Inc. Kat6a as a predictive biomarker for treatment with a kat6a inhibitor and methods of treatment thereof
KR20250172879A (ko) * 2023-04-19 2025-12-09 인실리코 메디신 아이피 리미티드 리신 아세틸트랜스퍼라제 6a (kat6a) 억제제, 그의 조합 및 용도
KR20260016479A (ko) * 2023-04-25 2026-02-03 인실리코 메디신 아이피 리미티드 결정질 리신 아세틸트랜스퍼라제 6a (kat6a) 억제제 및 그의 용도
TW202504580A (zh) * 2023-07-04 2025-02-01 大陸商上海齊魯製藥研究中心有限公司 Kat6抑制劑
WO2025036382A1 (zh) * 2023-08-14 2025-02-20 上海复宏汉霖生物医药有限公司 一种磺酰胺类化合物、其制备方法及用途
US20250122182A1 (en) * 2023-09-27 2025-04-17 Isosterix, Inc. MYST Inhibitors
WO2025098417A1 (zh) * 2023-11-08 2025-05-15 再和医药科技（苏州）有限公司 磺酰胺类化合物及其应用
WO2025141469A1 (en) 2023-12-26 2025-07-03 Pfizer Inc. Crystalline form of 2-methoxy-n-{4-methoxy-6-[(1h-pyrazol-1-yl)methyl]-1,2-benzoxazol-3-yl}benzene-1-sulfonamide
WO2026003716A1 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Pfizer Inc. Process for preparing n-(6-((1h-pyrazol-1-yl)methyl)-4-methoxybenzo[d]isoxazol- 3-yl)-2-methoxybenzenesulfonamide
WO2026053122A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of treating retinoid responsive cancers
WO2026057050A1 (zh) * 2024-09-14 2026-03-19 北京康辰药业股份有限公司 磺酰胺化合物或其可药用盐的晶型

Family Cites Families (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3064003A (en) 1962-11-13 Carboxylic acid derivatives of sub-
US2358031A (en) 1944-09-12 Substituted thiadiazoles
US2525321A (en) 1949-01-07 1950-10-10 American Cyanamid Co Hydroxybenzenesulfonamidoisoxazoles and preparation of same
GB689281A (en) 1950-02-18 1953-03-25 Lunbeck Corp Improvements in or relating to the production of sulphanilamido-thiadiazoles
DE1102745B (de) 1959-06-06 1961-03-23 Boehringer & Soehne Gmbh Verfahren zur Herstellung von 5-Sulfanilamidoisoxazolen
BE617370A (fr) 1961-05-09 1962-11-08 Ciba Geigy Procédé de préparation du 2,5-di-[benzoxazolyl-(2')]-thiofène
US3332942A (en) 1962-11-02 1967-07-25 White Lab Inc Substituted thiadiazoles
JPS498255B1 (sr) 1970-10-08 1974-02-25
US3960854A (en) 1972-03-20 1976-06-01 Merck & Co., Inc. 7-Mercapto(or thio)-benzothiadiazine products
US3951967A (en) 1972-03-20 1976-04-20 Merck & Co., Inc. 7-Mercapto(or thio)-benzothiadiazine products
DE2617809C2 (de) 1976-04-23 1984-09-20 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur Stabilisierung von Chromdioxid-Magnetpigmenten und seine Verwendung
JPS6042794B2 (ja) 1977-09-27 1985-09-25 三共株式会社 イソオキサゾリウム塩，およびその製造方法
US4251664A (en) 1978-05-24 1981-02-17 Henkel Corporation Sulfonamidothiadiazoles, metal complexes thereof, and solutions containing such compounds for use in extraction of metal values
US4172896A (en) 1978-06-05 1979-10-30 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. Methane-sulfonamide derivatives, the preparation thereof and composition comprising the same
JPS603685B2 (ja) 1980-04-15 1985-01-30 日本コロムビア株式会社 絵入りレコ−ド盤の製造方法
GB8427618D0 (en) 1984-11-01 1984-12-05 Shell Int Research Anticoccidial compositions
GB8607683D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Ici Plc Anti-tumor agents
JPS63238006A (ja) 1987-03-26 1988-10-04 Shionogi & Co Ltd イモチ防除剤
US5962490A (en) 1987-09-25 1999-10-05 Texas Biotechnology Corporation Thienyl-, furyl- and pyrrolyl-sulfonamides and derivatives thereof that modulate the activity of endothelin
US5591761A (en) 1993-05-20 1997-01-07 Texas Biotechnology Corporation Thiophenyl-, furyl-and pyrrolyl-sulfonamides and derivatives thereof that modulate the activity of endothelin
NZ231534A (en) 1988-11-29 1992-02-25 Warner Lambert Co 3,5-di-t-butyl-4-hydroxyphenyl-triazoles, oxadiazoles and thiadiazoles; anti-inflammatory compositions
JPH03258771A (ja) 1990-03-09 1991-11-19 Tosoh Corp スルホンアミド誘導体、その製法及びそれを有効成分として含有する除草剤
JP2902834B2 (ja) 1991-10-09 1999-06-07 本田技研工業株式会社 自己伸縮型マウント
TW224462B (sr) 1992-02-24 1994-06-01 Squibb & Sons Inc
FR2690160A1 (fr) 1992-04-15 1993-10-22 Rhone Poulenc Rorer Sa Application de dérivés d'acide 2H-1,2,4-benzothiadiazine-1,1-dioxyde-3-carboxylique à la préparation de médicaments, les produits nouveaux, leur préparation et les médicaments les contenant.
NZ247440A (en) 1992-05-06 1995-04-27 Squibb & Sons Inc Phenyl sulphonamide derivatives, preparation and pharmaceutical compositions thereof
CA2121724A1 (en) 1993-04-21 1994-10-22 Toshifumi Watanabe Methods and compositions for the prophylactic and/or therapeutic treatment of organ hypofunction
JP3901229B2 (ja) 1994-05-13 2007-04-04 Ｎｔｎ株式会社 耐熱・潤滑性樹脂組成物
HUP9802034A3 (en) 1995-04-04 2000-04-28 Encysive Pharmaceuticals Inc H Thienyl-, furyl-, pyrrolyl- and biphenylsulfonamides and derivatives thereof that modulate the activity of endothelin and use of the compounds
US5804585A (en) 1996-04-15 1998-09-08 Texas Biotechnology Corporation Thieno-pyridine sulfonamides derivatives thereof and related compounds that modulate the activity of endothelin
EP0938477A4 (en) 1996-11-13 1999-12-29 Cephalon Inc BENZOTHIAZOLO AND RELATED HETEROCYCLIC GROUPS CONTAINING CYSTEIN AND SERINE PROTEASE INHIBITORS
AP9901643A0 (en) 1997-04-28 1999-10-02 Texas Biotechnology Corp Sulfonamides for treatment of endothelin-mediated disorders.
US5783705A (en) 1997-04-28 1998-07-21 Texas Biotechnology Corporation Process of preparing alkali metal salys of hydrophobic sulfonamides
JP2003509412A (ja) 1999-09-17 2003-03-11 シーオーアール セラピューティクス インコーポレイテッド Ｘａ因子阻害剤
AU2456701A (en) 1999-12-31 2001-07-16 Texas Biotechnology Corporation Pharmaceutical and veterinary uses of endothelin antagonists
AU2001250783A1 (en) 2000-02-29 2001-09-12 Cor Therapeutics, Inc. Benzamides and related inhibitors of factor xa
GB0127344D0 (en) 2001-11-14 2002-01-02 Cancer Res Ventures Ltd Assay method
WO2003044000A1 (en) 2001-11-22 2003-05-30 Biovitrum Ab Inhibitors of 11-beta-hydroxy steroid dehydrogenase type 1
JP2003292485A (ja) 2002-04-01 2003-10-15 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd スルホンアミド誘導体
TW200505902A (en) 2003-03-20 2005-02-16 Schering Corp Cannabinoid receptor ligands
WO2004103980A1 (en) 2003-05-21 2004-12-02 Biovitrum Ab Inhibitors of 11-beta-hydroxy steroid dehydrogenase type i
WO2004113310A1 (en) 2003-06-25 2004-12-29 Biovitrum Ab Use of an inhibitor of 11-b-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 compounds for promoting wound healing
AU2004259755A1 (en) 2003-07-22 2005-02-03 Janssen Pharmaceutica, N.V. Quinolinone derivatives as inhibitors of c-fms kinase
US7615563B2 (en) 2003-08-08 2009-11-10 Gonzalez Iii Jesus E Compositions useful as inhibitors of voltage-gated sodium channels
US8202861B2 (en) 2003-08-08 2012-06-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions useful as inhibitors of voltage-gated sodium channels
US7642260B2 (en) 2003-11-13 2010-01-05 Abbott Laboratories, Inc. Apoptosis promoters
US7767684B2 (en) 2003-11-13 2010-08-03 Abbott Laboratories Apoptosis promoters
US7973161B2 (en) 2003-11-13 2011-07-05 Abbott Laboratories Apoptosis promoters
WO2005049593A2 (en) 2003-11-13 2005-06-02 Abbott Laboratories N-acylsulfonamide apoptosis promoters
US8614318B2 (en) 2003-11-13 2013-12-24 Abbvie Inc. Apoptosis promoters
US20060142348A1 (en) 2004-10-12 2006-06-29 Decode Chemistry, Inc. Aryl sulfonamide peri-substituted bicyclics for occlusive artery disease
JP5049267B2 (ja) 2005-04-26 2012-10-17 ハイプニオン・インコーポレイテッド ベンズイソオキサゾールピペラジン化合物およびその使用方法
BRPI0610258A2 (pt) 2005-04-26 2012-09-25 Hypnion Inc composto ou um sal farmaceuticamente eficaz do mesmo, composição farmacêutica, e, uso de um composto
ATE527251T1 (de) 2005-05-16 2011-10-15 Vertex Pharma Bicyclische derivate als modulatoren von ionenkanälen
DE102005038947A1 (de) 2005-05-18 2006-11-30 Grünenthal GmbH Substituierte Benzo[d]isoxazol-3-yl-amin-Verbindungen und deren Verwendung in Arzneimitteln
WO2007039175A1 (en) 2005-10-06 2007-04-12 Sanofi-Aventis N-[1 ,3,4]-thiadiazol-2-yl-benzene sulfonamides, processes for their preparation and their use as pharmaceuticals
ATE513829T1 (de) 2005-10-06 2011-07-15 Sanofi Aventis Bicyclische arylsulfonsäureä1,3,4ü-thiadiazol-2- yl-amide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als pharmazeutika
DE102005055355A1 (de) 2005-11-21 2007-10-31 Merck Patent Gmbh 3,6-Dihydro-2-oxo-6H-[1,3,4]thiadiazinderivate
NZ593074A (en) 2005-12-21 2012-04-27 Vertex Pharma sulfonamide-pyrrolidone derivatives as Modulators of Ion Channels
EP2420494B1 (en) 2006-08-16 2014-10-08 The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established under The Will of J. David Gladstone Use of thiadiazole compounds as inhibitors of kynurenine-3-monooxygenase
WO2008064116A2 (en) 2006-11-16 2008-05-29 Abbott Laboratories Method of preventing or treating organ, hematopoietic stem cell or bone marrow transplant rejection
CA2670031A1 (en) 2006-11-20 2008-05-29 Alantos Pharmaceuticals Holding, Inc. Heterobicyclic metalloprotease inhibitors
US20080194557A1 (en) 2007-01-18 2008-08-14 Joseph Barbosa Methods and compositions for the treatment of pain, inflammation and cancer
CA2693588C (en) 2007-07-13 2015-11-17 Icagen, Inc. Sodium channel inhibitors
JP2011502984A (ja) 2007-11-01 2011-01-27 サートリス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド サーチュインモジュレーターとしてのアミド誘導体
CA2709784A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
BRPI0821915A2 (pt) 2007-12-26 2015-06-16 Sanofi Aventis Piridil-n-(1,3,4)-tiadiazol-2-il-benzeno sulfonamidas cíclicas, processos para sua preparação e seu uso como produtos farmacêuticos
US8475505B2 (en) 2008-08-13 2013-07-02 Smed-Ta/Td, Llc Orthopaedic screws
WO2010046780A2 (en) 2008-10-22 2010-04-29 Institut Pasteur Korea Anti viral compounds
WO2010121963A1 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Resorcinol derivatives as hsp90 inhibitors
UA107360C2 (en) 2009-08-05 2014-12-25 Biogen Idec Inc Bicyclic aryl sphingosine 1-phosphate analogs
PH12012500252A1 (en) 2009-08-07 2015-06-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Aminopyrazole derivative
WO2011082400A2 (en) 2010-01-04 2011-07-07 President And Fellows Of Harvard College Modulators of immunoinhibitory receptor pd-1, and methods of use thereof
CN101845043A (zh) 2010-01-15 2010-09-29 江苏省农药研究所股份有限公司 邻杂环甲酰苯胺类化合物及其合成方法和应用
CN101747325A (zh) 2010-01-15 2010-06-23 江苏省农药研究所股份有限公司 邻杂环甲酰苯胺类化合物及其合成方法和应用
WO2011085575A1 (zh) 2010-01-15 2011-07-21 江苏省农药研究所股份有限公司 邻杂环甲酰苯胺类化合物及其合成方法和应用
US20130109672A1 (en) 2010-04-29 2013-05-02 The United States Of America,As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Service Activators of human pyruvate kinase
TW201210597A (en) 2010-06-09 2012-03-16 Gilead Sciences Inc Inhibitors of hepatitis C virus
JP2013532185A (ja) 2010-07-12 2013-08-15 ファイザー・リミテッド 化合物
EP2651405A2 (en) 2010-12-14 2013-10-23 Electrophoretics Limited Casein kinase 1 (ck1 ) inhibitors
WO2012088438A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Eutropics Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods useful for treating diseases
WO2012129562A2 (en) 2011-03-24 2012-09-27 The Scripps Research Institute Compounds and methods for inducing chondrogenesis
PL220630B1 (pl) 2012-12-28 2015-11-30 Inst Immunologii I Terapii Doświadczalnej Pan Nowe sulfonamidowe pochodne izoksazolo[5,4-b]pirydyny o aktywności przeciwbakteryjnej, sposób ich wytwarzania oraz nowe zastosowanie 3-aminoizoksazolo[5,4-b]pirydyny
BR112015023397A2 (pt) 2013-03-15 2017-07-18 Genentech Inc benzoxazois substituídos e métodos de uso dos mesmos
WO2015102929A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 Novartis Ag Tricyclic sulfonamide derivatives
WO2015112465A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Isoquinoline derivatives as mgat2 inhibitors
BR112016024455B1 (pt) 2014-04-23 2023-02-07 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Composto heterocíclico bicíclico ou tricíclico
JP5900759B2 (ja) 2014-09-25 2016-04-06 Toto株式会社 小便器
JP6584521B2 (ja) 2015-02-24 2019-10-02 ファイザー・インク 抗がん剤として有用な置換ヌクレオシド誘導体
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
WO2017002120A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Selective inhibitors of senescent cells and uses thereof
WO2017098421A1 (en) 2015-12-08 2017-06-15 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Benzothiadiazine compounds
CN107098846B (zh) * 2016-02-26 2020-10-09 中国医学科学院药物研究所 N-酰基磺酰胺类FBPase抑制剂、其制备方法、药物组合物及用途
US11970486B2 (en) 2016-10-24 2024-04-30 Janssen Pharmaceutica Nv Compounds and uses thereof
AU2017367086A1 (en) 2016-11-29 2019-07-18 Epizyme, Inc. Compounds containing a sulfonic group as KAT inhibitors
US11542248B2 (en) 2017-06-08 2023-01-03 Kura Oncology, Inc. Methods and compositions for inhibiting the interaction of menin with MLL proteins
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
KR102823056B1 (ko) 2019-06-18 2025-06-23 화이자 인코포레이티드 벤즈이속사졸 설폰아마이드 유도체

Also Published As

Publication number Publication date
PT4299135T (pt) 2025-10-09
WO2020254946A1 (en) 2020-12-24
IL288802B2 (en) 2025-08-01
HRP20231501T1 (hr) 2024-03-01
ECSP21091615A (es) 2022-01-31
MD4299135T2 (ro) 2025-11-30
RS64931B1 (sr) 2023-12-29
AU2023274178A1 (en) 2024-02-15
US20200399258A1 (en) 2020-12-24
JP2023175821A (ja) 2023-12-12
HRP20251225T1 (hr) 2025-12-05
EP3986890A1 (en) 2022-04-27
SI4299135T1 (sl) 2025-12-31
CO2021017504A2 (es) 2022-01-17
UA129891C2 (uk) 2025-09-03
RS64931B9 (sr) 2025-06-30
LT4299135T (lt) 2025-09-10
IL288802B1 (en) 2025-04-01
US12371425B2 (en) 2025-07-29
MX2021016085A (es) 2022-04-20
CR20210627A (es) 2022-02-08
MA67365B1 (fr) 2025-10-31
EP4299135A2 (en) 2024-01-03
KR102823056B1 (ko) 2025-06-23
SI3986890T1 (sl) 2024-03-29
PH12021553107A1 (en) 2022-08-01
US11492346B2 (en) 2022-11-08
PL4299135T3 (pl) 2025-11-12
IL288802A (en) 2022-02-01
EP4299135B1 (en) 2025-08-06
PL3986890T3 (pl) 2024-03-11
CA3143666A1 (en) 2020-12-24
LT3986890T (lt) 2023-12-11
DK3986890T3 (da) 2023-12-18
CN114364672A (zh) 2022-04-15
PY2027460A (es) 2021-11-16
ES2969616T3 (es) 2024-05-21
AU2026200976A1 (en) 2026-03-05
FI4299135T3 (fi) 2025-10-01
JP2022537285A (ja) 2022-08-25
CL2021003372A1 (es) 2022-10-07
KR20220024671A (ko) 2022-03-03
MY210207A (en) 2025-09-03
AU2020296361A1 (en) 2022-01-06
US20230174522A1 (en) 2023-06-08
FI3986890T3 (fi) 2024-01-15
MD3986890T2 (ro) 2024-04-30
MD3986890T3 (ro) 2025-07-31
HUE064683T2 (hu) 2024-04-28
EP3986890B9 (en) 2025-04-16
US20260062406A1 (en) 2026-03-05
EP3986890B1 (en) 2023-11-15
TW202115048A (zh) 2021-04-16
BR112021025528A2 (pt) 2022-04-19
PE20220808A1 (es) 2022-05-20
CN114364672B (zh) 2024-09-06
DK4299135T3 (da) 2025-09-08
CA3143666C (en) 2024-06-11
UY38752A (es) 2021-01-29
PT3986890T (pt) 2024-01-17
EP4299135A3 (en) 2024-02-28
ES3043899T3 (en) 2025-11-26
JP7352662B2 (ja) 2023-09-28
TWI787620B (zh) 2022-12-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12371425B2 (en) Benzisoxazole sulfonamide derivatives
AU2012284540B2 (en) TRPV4 antagonists
AU2020295006B2 (en) Cycloalkyl and heterocycloalkyl benzisoxazole sulfonamide derivatives
BR112021003447A2 (pt) inibidor derivado de quinolina inovador
KR20140025326A (ko) 신규 인돌, 인다졸 유도체 또는 그 염
WO2023072096A1 (zh) 含四氢呋喃多环类衍生物、其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
RU2813356C2 (ru) Производные бензизоксазолсульфонамида
OA20447A (en) Benzisoxazole sulfonamide derivatives
HK40062353A (en) Benzisoxazole sulfonamide derivatives
HK40062353B (zh) 苯并异恶唑磺酰胺衍生物