RS67340B1 - Kokristal gabapentina, ketoprofena i lizina, farmaceutska kompozicija i njihova medicinska primena - Google Patents

Description

[0001] Opis

[0003] Predmetna prijava odnosi se na kokristale gabapentina, ketoprofena i lizina, kako je definisano u patentnim zahtevima, na postupak za njegovu pripremu, na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži navedeni kokristal i na primenu navedenog kokristala ili farmaceutske kompozicije u lečenju akutnog ili hroničnog bola, posebno u lečenju neuropatskog ili inflamatornog bola.

[0005] STANJE TEHNIKE

[0007] Bol je senzorno i emocionalno iskustvo koje obično nastaje usled stvarnog ili potencijalnog oštećenja tkiva.

[0008] Bolna stanja mogu se podeliti na akutna i hronična.

[0009] Akutni bol je bol koji traje kratko vreme, obično manje od 3 meseca, i obično je povezan sa povredom tkiva, upalom, hirurškom procedurom, porođajem, ili kratkim tokom bolesti.

[0010] Hronični bol je prepoznat kao bol koji traje duže od normalnog vremena zarastanja i stoga mu nedostaje akutna upozoravajuća funkcija fiziološke nocicepcije. Obično se bol klasifikuje kao hroničan kada traje ili se ponavlja duže od 3 meseca.

[0011] Hronični bol može imati različite etiologije i uključuje neuropatski bol, hronični inflamatorni bol, na primer artritis, ili bol nepoznatog porekla, kao što su fibromijalgija i sindrom nemirnih nogu.

[0012] Hronični neuropatski bol je uzrokovan lezijom ili bolešću somatosenzornog nervnog sistema koji pruža informacije o telu, uključujući kožu, mišićno-skeletne i visceralne organe. Brojne bolesti ili patološka stanja mogu izazvati oštećenje senzornih neurona što rezultuje hiperalgezijom ili alodinijom, kao što su na primer bol u donjem delu leđa, išijatalgija, postoperativni bol, bol usled kancera, bol fantomskog uda, bol usled HIV-a, bol usled dijabetičke neuropatije, bol usled herpes zostera ili trigeminalna neuralgija.

[0013] Hronični inflamatorni bol povezan je sa jakom upalom infektivne, autoimune ili metaboličke etiologije, kao što je reumatoidni artritis, i sa strukturnim promenama koje pogađaju kosti, zglobove, tetive ili mišiće, kao što je osteoartroza.

[0014] Terapija ove vrste bola obično uključuje upotrebu nesteroidnih antiinflamatornih lekova, acetaminofena, i drugih agenasa koji modifikuju tok bolesti.

[0015] Zbog svoje složene etiologije, farmakološki tretman neuropatskog bola razlikuje se od tretmana neuropatskog bola. Smernice preporučuju upotrebu inhibitora ponovnog preuzimanja serotonina i norepinefrina, tricikličnih antidepresiva, antikonvulziva ili lokalne terapije lidokainom kao lekova prve i druge linije za lečenje neuropatskog bola, dok se opioidi obično preporučuju kao terapije druge ili treće linije (Deng i saradnici BMC Anesthesiology (2016) 16:12). Acetaminofen i nesteroidni antiinflamatorni lekovi su uglavnom neefikasni kod neuropatskog bola.

[0016] Neuroinflamacija je fiziološko/patološko stanje koje karakteriše infiltracija imunih ćelija, aktivacija glijalnih ćelija i proizvodnja inflamatornih medijatora u perifernom i centralnom nervnom sistemu.

[0017] Nedavni napredak ukazuje na to da je razvoj neuroinflamacije tkiva, unutar perifernog nervnog sistema (PNS) i centralnog nervnog sistema (CNS), odgovoran za stvaranje i održavanje senzibilizacije nociceptivnih neurona što dovodi do hroničnog bola. Neuroinflamacija se javlja u PNS-u (tj. perifernim nervima i ganglijama) i CNS-u (tj. kičmenoj moždini i mozgu) i karakteriše se infiltracijom leukocita i povećanom proizvodnjom inflamatornih medijatora na ovim mestima. Promet različitih vrsta leukocita u PNS-u i CNS-u odvija se sa različitim vremenskim profilima. Neuroinflamacija se manifestuje kao aktivacija glijalnih ćelija, kao što su Švanove ćelije u nervu, satelitske glijalne ćelije u ganglijama i mikrogliji, i astrociti i oligodendrociti u kičmenoj moždini i mozgu. Aktivacija glijalnih ćelija dovodi do proizvodnje glijalnih medijatora koji mogu modulirati osetljivost na bol.

[0018] [0013] Neuroinflamacija je lokalna upala, što znači da je efikasnija u izazivanju i održavanju bola od sistemske upale, ali ju je teško otkriti u klinici. Na primer, fibromijalgija, hronično stanje bola u mišićima, ranije se smatrala atipičnim bolom, jer kod pogođenih pacijenata nisu mogle biti otkrivene očigledne patologije i upala. Međutim, nedavno sprovedena studija identifikovala je neuropatiju malih nervnih vlakana kod pacijenata sa fibromijalgijom, što bi moglo biti posledica, a takođe i uzrok hronične neuroinflamacije. Neuroinflamacija izgleda da je trajna kod pacijenata sa hroničnim bolom, ali se javlja i u nehroničnim stanjima kao što je, na primer postoperativni bol.

[0019] Nedostatak efikasnosti trenutno dostupnih terapija u lečenju neuroinflamatornih stanja zahteva identifikaciju novih specifičnih i bezbednih lekova za lečenje još uvek nezadovoljenih medicinskih potreba povezanih sa akutnim ili hroničnim neuroinflamatornim procesima (Ru-Rong Jil. Nat. Rev. Drug Discov. 2014 July; 13(7): 533-548.

[0020] Gabapentin je antikonvulzivni sintetički analog neurotransmitera gama-aminobuterne kiseline (GABA) formule (I)

[0023]

[0025] Iako je njegov tačan mehanizam delovanja nepoznat, izgleda da gabapentin inhibira aktivnost ekscitatornih neurona. Molekul je prvobitno razvijen kao hemijski analog gamaaminobuterne kiseline za smanjenje spinalnog refleksa za lečenje spastičnosti, ali je utvrđeno da nema aktivnost na GABAergički sistem. Njegov mehanizam delovanja uključuje vezivanje za kalcijumove kanale u nekoliko oblasti centralnog nervnog sistema i kičmene moždine u kojima su ovi kanali eksprimirani. Kalcijumovi kanali su lokalizovani na presinaptičkim terminalima, gde kontrolišu oslobađanje neurotransmitera.

[0026] Gabapentin je odobren za primenu kao dodatni tretman za parcijalne epileptičke napade kod odraslih i dece 1993. godine. U skorije vreme, gabapentin je takođe odobren za lečenje hroničnog bola, posebno neuropatskih bolnih sindroma. Takođe se tvrdilo da je koristan kod nekoliko drugih kliničkih poremećaja kao što su anksioznost, bipolarni poremećaj i valovi vrućine. Gabapentin se takođe pokazao efikasnim u visokim dozama u lečenju fibromijalgije (Moore i saradnici, Cochrane Database Syst Rev. 2014 Apr 27;(4):CD007938; Deng i saradnici, BMC Anesthesiology (2016) 16:12).

[0027] Međutim, brojne studije su pokazale nezadovoljavajući farmakološki i farmakokinetički profil kada se gabapentin koristi sam u terapiji bola, na primer u smislu oskudne efikasnosti kod određenih vrsta bola, neželjenih efekata ili odloženog početka odgovora. Zapravo, gabapentin se sporo apsorbuje nakon oralne adminsitracije i dostiže maksimalni nivo u plazmi u roku od 3-4 sata (Quintero, Journal of Experimental Pharmacology 2017:913-21).

[0028] Plazmatski nivo gabapentina se ne povećava proporcionalno ako se njegova doza poveća, što zahteva pažljivo titriranje na individualnoj osnovi na početku lečenja; gabapentin se ne vezuje za proteine plazme.

[0029] Gabapentin nije ni inhibiran niti metabolisan hepatičnim enzimima; osim toga, gabapentin može biti izlučen putem bubrega, a njegovo poluživot izlučivanja je otprilike 6 sati. Najčešći neželjeni efekti gabapentina su pospanost (20%), vrtoglavica (18%), ataksija (13%) i umor (11%).

[0030] Oralne doze gabapentina se administriraju tri puta dnevno (tds - three times a day) zbog njegovog kratkog poluživota. Brza titracija može se postići dozama od 300 mg jednom dnevno (često pred spavanje kako bi se minimizovala sedacija) prvog dana, zatim 300 mg dva puta dnevno drugog dana i 300 mg tri puta dnevno trećeg dana. Doza se može dodatno povećati ako se efikasnost ne postigne ovom dozom.

[0031] Preporučena početna doza u lečenju neuropatskog bola je 300 mg tri puta dnevno, sa titracijom ako je potrebno do maksimalno 3600 mg dnevno, ali su prijavljene doze do 4200 mg kada je primećena ograničena ili nikakva efikasnost (M. A. Rose, Anaesthesia, 2002, 57, strane 451-462).

[0032] Na primer, gabapentin se ne preporučuje za lečenje bolova u donjem delu leđa jer pokazuje malu efikasnost uz povećan rizik od neželjenih efekata (Low back pain and sciatica in over 16s: assessment and management, National Institute for Health and Care Excellence NICE Guidelines 2016).

[0033] Štaviše, gabapentin je malo aktivan na inflamatorni bol, što je takođe potvrđeno u ovom eksperimentalnom delu na modelu inflamatornog bola sa karagenanom kod pacova.

[0034] Takođe je pokazano da terapijski efekat gabapentina u lečenju osteoartritisa počinje tek nakon dužeg adminsitriranja od 3 meseca (Enteshari-Moghaddam i saradnici, Clinical Rheumatology 2019: 38, 2873-2880).

[0035] Podnosilac je sproveo studije kako bi poboljšao svojstva gabapentina, sa ciljem poboljšanja delovanja molekula na bolna stanja i proširenja efikasnosti na druge sindrome bola i mogućeg smanjenja neželjenih efekata povezanih sa dozom. Posebno, podnosilac je sproveo istraživanja gabapentina u kombinaciji sa ketoprofenom, tačnije sa ketoprofen lizinom.

[0036] Ketoprofen, (RS)-2-(3-benzoilfenil)-propionska kiselina, je dobro utvrđeni nesteroidni antiinflamatorni lek (NSAIL) sa analgetskim i antipiretskim dejstvom formule II

[0037]

[0039] Zbog svoje visoke podnošljivosti, ketoprofen je jedan od nesteroidnih antiinflamatornih lekova široko rasprostranjene primene u klinikama, kako za lečenje ozbiljnih inflamatornih stanja, tako i za primenu kao analgetik i antipiretik inhibiranjem proizvodnje prostaglandina u telu.

[0040] Farmaceutske kompozicije koje se trenutno koriste koje sadrže ketoprofen imaju kao aktivni sastojak racemat, gde su dva enantiomera S(+) i R(-) prisutna u ekvimolekularnom odnosu.

[0041] Trenutne farmaceutske kompozicije ketoprofena za oralnu primenu mogu da sadrže aktivni sastojak kao slobodnu kiselinu koja, međutim, pokazuje veoma nisku rastvorljivost u vodi i stoga nisku biodostupnost.

[0042] Da bi se poboljšao profil rastvaranja i biodostupnost aktivnog sastojka, povoljno se koriste i soli ketoprofena.

[0043] Ove soli se koriste na primer u lečenju oralnim administriranjem onih patoloških simptoma reumatoidnog i hroničnog tipa, koji zahtevaju da se lek administrira u visokim dozama, kontinuirano i tokom dužeg vremenskog perioda i kod manifestacija bola koje zahtevaju trenutni analgetski efekat.

[0044] Posebno, so ketoprofena sa aminokiselinom lizinom, iako pokazuje paralelan farmaceutski profil i sličnu antiinflamatorno-analgetsku moć u poređenju sa slobodnom kiselinom, nudi prednost znatno veće rastvorljivosti u vodi što omogućava brzu i skoro potpunu apsorpciju jedinjenja obezbeđujući brz početak delovanja i veću toleranciju u želucu.

[0045] Ketoprofen se generalno propisuje za inflamatorne bolove povezane sa artritisom, jake zubobolje, lečenje mišićno-skeletnog bola, neuropatskog bola kao što je išijas, postherpetična neuralgija i refluksni bol kod radikulopatije.

[0046] Mehanizam delovanja ketoprofena u suštini se zasniva na inhibiciji biosinteze prostaglandina, prostaciklina i tromboksana.

[0047] U zavisnosti od uslova procesa, ketoprofen i lizin mogu se kombinovati formirajući ili so ili kokristale sa različitim kristalnim oblicima (polimorfima) kao što je opisano u evropskim prijavama patenata br. EP18215336.1 i EP19219293.8 i u međunarodnoj prijavi patenta PCT/EP2019/025464.

[0048] SUŠTINA PRONALASKA

[0050] Podnosilac je tokom ovih istraživanja neočekivano otkrio da gabapentin formira stabilan kokristal sa ketoprofenom i lizinom.

[0051] Štaviše, podnosilac je takođe otkrio da novi kokristal pokazuje iznenađujuće biološke efekte.

[0052] U tom pogledu, podnosilac je primetio sinergistički efekat na upalu i bol kada se gabapentin kombinuje sa ketoprofenom i lizinom u kokristalu.

[0053] U stvari, kada su ovi aktivni sastojci povezani u kokristalu pronalaska, oni pokazuju antiinflamatornu i analgetsku aktivnost veću od aktivnosti gabapentina kada se administrira u kombinaciji sa ketoprofen lizinom.

[0054] Pored toga, u poređenju sa samim gabapentinom, primećeno je produženje efikasnosti tokom vremena.

[0055] Konačno, kokristal poboljšava brzinu rastvaranja ketoprofena, posebno ako se rastvara u vodenom fiziološkom okruženju, i poboljšava apsorpciju i/ili biodostupnost dva aktivna molekula.

[0056] Rastvorljivost i brzina rastvaranja lekova su odlučujući faktori koji se odnose na brzinu i koraken apsorpcije nakon administriranja.

[0057] Veća efikasnost ovog kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin, u poređenju sa istovremenim administriranjem odvojenih aktivnih sastojaka gabapentina i ketoprofen lizina, omogućava primenu niže terapijske doze gabapentina ili ketoprofena, ili oba, i minimiziranje neželjenih efekata.

[0058] Stoga je cilj predmetnog pronalaska kokristal gabapentina, ketoprofena i lizina gde je molarni odnos komponenti 1:1:1.

[0059] Kokristal karakterišu sledeći XRPD difrakcioni pikovi: 3.6, 9.5, 9.6, 18.5 i 20.0 korakeni 2-teta ± 0.2 korakena 2-teta, poželjno dalje okarakterisan sledećim XRPD difrakcionim pikovima: 15.4, 17.8, 21.0, 21.8 i 24.2 korakeni 2-teta ± 0.2 korakena 2-theta.

[0060] Dalji predmet predmetnog pronalaska je postupak za pripremu kokristala pronalaska, koji obuhvata:

[0061] a) suspendovanje gabapentina, ketoprofena i lizina u odgovarajućem rastvaraču, odabranom između alkohola, gde je molarni odnos gabapentina prema ketoprofenu između 1:1 i 1.5:1

[0062] b) rastvaranje gabapentina, ketoprofena i lizina zagrevanjem suspenzije, opciono uz mešanje, dok se ne dobije bistar rastvor

[0063] c) naknadno hlađenje rastvora, i

[0064] d) opciono dodavanje antirastvarača

[0065] Dalji predmet predmetnog pronalaska je farmaceutska kompozicija koja sadrži kokristal pronalaska i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. Dalji cilj predmetnog pronalaska je farmaceutska kompozicija koja sadrži kokristal pronalaska i najmanje još jedan farmaceutski aktivni sastojak.

[0066] Dalji predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu kao lek.

[0067] Dalji predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu u prevenciji, smanjenju ili lečenju bola i/ili upale.

[0068] Dalji predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu u postupku lečenje bola i/ili upale koji obuhvata administriranje pacijentu efikasne količine kokristala pronalaska.

[0070] DEFINICIJE

[0072] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "farmaceutski prihvatljiv ekscipijens" odnosi se na supstancu bez ikakvog sopstvenog farmakološkog dejstva i koja ne izaziva neželjene reakcije kada se primeni na sisara, poželjno čoveka.

[0073] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "sobna temperatura" označava temperaturni opseg od 18 do 25°C.

[0074] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "kokristal" označava višekomponentni sistem, u kome su sve komponente čvrste pod ambijentalnim uslovima kada su u svom čistom obliku. Komponente koegzistiraju na molekularnom nivou unutar jednog kristala. Barem neke od komponenti su povezane nekovalentnim, nejonskim interakcijama.

[0075] [0055] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "bol" označava bol uzrokovan poremećajima različite prirode i porekla, kao što su, na primer: glavobolja ili cefalalgija: i primarna i stoga nepovezana sa drugim faktorima ili bolestima, i sekundarna i stoga zavisna od traume, povrede i različitih bolesti; zubobolja: u slučaju apscesa ili karijesa koji stvaraju bol u zubnoj pulpi, sa brojnim krvnim sudovima i živcima; menstrualni bolovi: bol u stomaku i donjem delu stomaka i glavobolje izazvane hormonskim promenama tipičnim za period menstruacije; neuralgija, ili intenzivan nervni bol usled istegnuća, traume i infekcija; bol u mišićima, ili mijalgija: bolovi lokalizovani na nivou mišića pri njihovoj upotrebi ili dodirivanju, usled iznenadnih kontrakcija ili trauma; osteoartikularni bolovi, kao što su upale zglobova (kostiju, hrskavica, ligamenata i tetiva) nakon trauma, starosti, istegnuća i povreda.

[0076] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "upala" označava lokalni odgovor organizma na ćelijsku povredu koji se obeležava dilatacijom kapilara, leukocitnom infiltracijom, crvenilom, toplotom i bolom i koji služi kao mehanizam koji pokreće eliminaciju štetnih agenasa i oštećenog tkiva.

[0077] Za potrebe predmetnog pronalaska, termin "anti-rastvarač" označava rastvarač u kome je jedinjenje nerastvorljivo ili malo rastvorljivo.

[0078] Termini "približno" i "oko" ovde se odnose na opseg eksperimentalne greške, koja se može javiti tokom merenja.

[0080] KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0082]

[0083] Slika 1: Rendgenski difraktogram praha kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1

[0084] Slika 2: DSC termogram kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1

[0085] Slika 3: DSC termogram kokristala ketoprofen lizina oblika I

[0086] Slika 4: DSC termogram gabapentina

[0087] Slika 5: TG (kontinuirana linija) i dTG (isprekidana linija) termogrami kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1.

[0088] Slika 6: TG (kontinuirana linija) i dTG (isprekidana linija) termogrami kokristala ketoprofen lizina oblika I

[0089] Slika 7: TG termogram gabapentina

[0090] Slika 8:<1>H-NMR spektar (400 MHz, D<2>O) kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1.

[0091] Slika 9:<13>C CPMAS spektri kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin uodnosu 1:1:1, ketoprofena, lizina i gabapentina.

[0092] Slika 10: uvećanje karboksilne oblasti<13>C CPMAS spektra sa slike 9.

[0093] Slika 11: uvećanje karboksilne oblasti<13>C CPMAS spektra kokristala ketoprofen-lizingabapentin u odnosu 1:1:1, soli ketoprofen lizina i kokristala ketoprofen lizina oblika I. Slika 12: rastvorljivost pri različitim pH kokristala ketoprofen-lizin-gabapentina u odnosu 1:1:1 i kokristala ketoprofen lizina oblika I.

[0094] Slika 13: grafikon zapremine šape (ml) u odnosu na vreme (sati) u modelu edema šape pacova izazvanog karagenanom nakon intraplantarne injekcije 1% karagenana, nakon čega je usledilo administriranje kokristala ketoprofen-lizin-gabaretina u odnosu 1:1:1, smeše kokristala ketoprofen lizina oblika I i gabapentina u odnosu 1:1, kokristala ketoprofen lizina oblika I, gabapentina, indometacina ili nosača. Svaka vremenska tačka ili traka predstavlja srednju vrednost ± SEM za šest (nosač)/osam (lekovi) pacova. P < 0.05 je smatrano statistički značajnim i izračunato korišćenjem dvosmerne ANOVA analize, nakon čega je sledio Bonferonijev post-hoc test. *u odnosu na nosač, ° u odnosu na indometacin, § u odnosu na 1:1 smešu kokristala ketoprofen lizina u obliku I i gabapentina. Slika 14: Stubičasti dijagram % inhibicije zapremine šape u modelu edema šape pacova izazvanog karagenanom, izazvanog kokristalom ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1, smešom kokristala ketoprofen lizin oblika I i gabapentina u odnosu 1:1, kokristalom ketoprofen lizin oblika I, gabapentinom, indometacinom ili nosačem na 3, 4 i 5 sati nakon injekcije karagenana. Svaka vremenska tačka ili stubić predstavlja srednju vrednost ± SEM za šest (nosač)/osam (lekovi) pacova. P< 0.05 je smatrano statistički značajnim i izračunato korišćenjem dvosmerne ANOVA analize nakon Bonferonijevog post-hoc testa. * u odnosu na nosač, ° u odnosu na indometacin, § u odnosu na smešu kokristala ketoprofen lizin oblika I i gabapentina u odnosu 1:1.

[0095] Slika 15: grafik vremenskog toka antiinflamatornog efekta protiv bola kokristala ketoprofen-lizin-gabapentina u odnosu 1:1:1 ili kokristala ketoprofen lizina oblika I i GABA dodataka u poređenju sa kokristalom ketoprofen lizina oblika I, gabapentinom, indometacinom ili nosačem na reakciju pacova na povlačenje (g) nakon intraplantarne injekcije 1% karagenana. Svaka vremenska tačka ili traka predstavlja srednju vrednost ± SEM za šest (nosača)/osam (lekova) pacova. P < 0.05 je smatrano statistički značajnim i izračunato korišćenjem dvosmerne ANOVA analize, nakon čega je usledio Tukijev posthoc test višestrukog poređenja *u odnosu na nosač, §u odnosu na 1:1 smešu kokristala ketoprofen lizina oblika I i gabapentina, & u odnosu na kokristal ketoprofen lizina oblika I, ° u odnosu na indometacin.

[0096] Slika 16: stubičasti dijagram efekta tretmana različitim dozama kokristala ketoprofen-lizingabapentin u odnosu 1:1:1 pronalaska i gabapentina u poređenju sa nosačem na mehaničku alodiniju, mereno kao prag povlačenja od 50% (g), na 1, 2, 3 i 6 sati nakon administriranja. Sve vrednosti predstavljaju srednju vrednost ± standardnu grešku srednje vrednosti (SEM) u pojedinačnim grupama. Jednosmerna ANOVA analiza praćena Danetovim testom primenjena je za poređenje između grupa. Za kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1, značaj je razmatran na nivou p<0.05 u odnosu na gabapentin i u odnosu na nosač. Za grupu sa gabapentinom, značaj je razmatran na nivou p<0.05 u odnosu na nosač. Statistička analiza je izvršena pomoću GraphPad Prism 5.0

[0097] Slika 17: Odnos penetracije gabapentina u mozak (mozak/plazma %), kada se administrira oralno samostalno i kao kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1.

[0098] Slika 18: Koncentracija gabapentina u mozgu i plazmi, kada se administrira kao fizička smeša (MIX) gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I ili kao kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1.

[0099] Slika 19: Koncentracija ketoprofena u mozgu i plazmi, kada se administrira kao fizička smeša (MIX) gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I ili kao kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1.

[0100] Značenje na slikama: GAB gabapentin; KL ketoprofen lizin; Co-xx kokristal; MIX smeša; KL Co-xx kokristal ketoprofen lizina; K-L-GAB Co-xx kokristal ketoprofen lizin gabapentin; KL Co-xx - GAB MIX smeša kokristala ketoprofen lizina sa gabapentinom.

[0102] DETALAJ OPIS PRONALASKA

[0104] Predmet predmetnog pronalaska je kokristal gabapentina, ketoprofena i lizina gde je molarni odnos komponenti 1:1:1 kao što je definisano u patentnim zahtevima. U skladu sa<13>CNMR analizom čvrstog stanja prikazanom u eksperimentalnom delu, u ovom kokristalu ketoprofena karboksilna grupa je deprotonovana i interaguje sa protoniranom ε-NH3+ grupom lizina preko jonskih veza formirajući neutralnu so. Neutralna so ketoprofena lizina interaguje sa gabapentinom preko nejonskih veza. Kokristal predmetnog pronalaska karakterišu sledeći XRPD difrakcioni pikovi: 3.6, 9.5, 9.6, 18.5 i 20.0 korakeni 2-teta sa marginom greške na vrednosti naznačenoj za svaki pik od ± 0.2 korakena 2-teta, poželjno dodatno okarakterisan sledećim XRPD difrakcionim pikovima: 15.4, 17.8, 21.0, 21.8 i 24.2 korakena 2-teta ± 0.2 korakena 2-teta, kao što je prikazano na slici 1 i u tabeli 2. Ovaj kristalni oblik kokristala predmetnog pronalaska je ovde nazvan oblik I. Drugi polimorfi predmetnog kokristala su takođe u okviru pronalaska.

[0105] Kokristal predmetnog pronalaska je dalje okarakterisan DSC termogramom sa slike 2, sa endotermnim oštrim pikom kokristala koji odgovara tački topljenja na 141.4°C sa početkom na 136.9°C, TGA termogramom slike 5, FT Ramanovim i FT-IR spektrima sa tipičnim apsorpcionim trakama prikazanim u tabeli 6 i 7,<1>H-NMR spektrom rastvora sa slike 8 i relativnim dodeljivanjem u tabeli 8 i/ili<13>C CPMAS čvrstog stanja sa slika 9 do 11 i odgovarajućim dodeljivanjem u tabeli 9.

[0106] U kokristalu pronalaska, ketoprofen može biti racemski (S,R) ketoprofen, (S)-ketoprofen ili (R)-ketoprofen ili bilo koja njihova smeša.

[0107] U jednom tehničkom rešenju ketoprofen je (S)-ketoprofen (takođe nazvan deksketoprofen).

[0108] U drugom tehničkom rešenju ketoprofen je (R)-ketoprofen.

[0109] U kokristalu pronalaska, lizin može biti racemski (S,R) lizin, (S) lizin ili (R) lizin, ili bilo koja njihova smeša, poželjno je prirodna aminokiselina (S)-Lizin t akođe nazvan L-lizin.

[0110] U jednom tehničkom rešenju, kokristal pronalaska sadrži (S)-ketoprofen.

[0111] U jednom tehničkom rešenju, kokristal pronalaska sadrži (S)-lizin.

[0112] U jednom tehničkom rešenju, kokristal pronalaska sadrži (S)-ketoprofen i (S)-lizin.

[0113] Kokristal predmetnog pronalaska može postojati u nerastvorenim oblicima, kao i u rastvorenim oblicima, uključujući hidratisane oblike.

[0114] Kokristal predmetnog pronalaska se lako dobija i stabilan je.

[0115] Kokristal predmetnog pronalaska bi pokazao poboljšana farmaceutska svojstva, farmakokinetiku i efikasnost kod bolnih stanja, posebno u poređenju sa samim gabapentinom ili ketoprofenom, a iznenađujuće čak i u poređenju sa njihovom smešom, kao što je opisano u eksperimentalnom odeljku koji sledi.

[0116] Dalji predmet predmetnog pronalaska je postupak za pripremu kokristala pronalaska, koji obuhvata:

[0117] a) suspendovanje gabapentina, ketoprofena i lizina u odgovarajućem rastvaraču odabranom među alkoholima, gde je molarni odnos gabapentina prema ketoprofenu između 1:1 i 1.5:1, b) rastvaranje gabapentina, ketoprofena i lizina zagrevanjem suspenzije, opciono uz mešanje, dok se ne dobije bistri rastvor,

[0118] c) naknadno hlađenje rastvora, i

[0119] d) opciono dodavanje antirastvarača.

[0120] U predmetnom postupku, početni materijal za ketoprofen može biti slobodna kiselina ketoprofena ili so ketoprofena, poželjno ketoprofen lizinat, ili bilo koji kokristal ketoprofen lizina. U slučaju slobodne kiseline ketoprofena ili soli ketoprofena koja se razlikuje od lizinata, dodaje se lizin, poželjno u svom neutralnom obliku. Lizin se poželjno koristi u istoj molarnoj količini ketoprofena.

[0121] U koraku a) predmetnog postupka, molarni odnos gabapentina u odnosu na ketoprofen je između 1:1 i 1.5:1, poželjnije između 1:1 i 1.2:1, još poželjnije je oko 1:1.

[0122] U jednom tehničkom rešenju, molarni odnos gabapentin: ketoprofen: lizin u koraku a) je oko 1:1:1.

[0123] U predmetnom postupku, pogodni rastvarači su alkoholi, poželjno metanol i etanol, estri, poželjno etil acetat, etri, poželjno tetrahidrofuran i terc-butilmetil etar ili aromatični rastvarači, poželjno toluen.

[0124] Poželjno, korak b) se izvodi zagrevanjem na temperaturi refluksa rastvarača.

[0125] Poželjno rastvor iz koraka b) se ohladi na sobnoj temperaturi.

[0126] Poželjno rastvor iz koraka b) ohladi na sobnoj temperaturi i filtrira.

[0127] Poželjno taloženje kokristala se pospeši dodatkom antirastvarača. Predmetni postupak obezbeđuje kokristal pronalaska sa visokim prinosima. Jednostavan je i lako se može skalirati na industrijskom nivou.

[0128] Prema jednom tehničkom rešenju, u koraku a) postupka prema pronalasku, ketoprofen i lizin mogu biti prisutni kao prethodno formirana so ili kokristal, u bilo kom polimorfnom obliku.

[0129] Polazni materijal za proizvodnju kokristala predmetnog pronalaska, gabapentina, ketoprofena i ketoprofen lizin soli ili kokristala, može se pripremiti u skladu sa postupcima sinteze koje su prethodno objavljene i dobro poznate organskom hemičaru prosečne veštine.

[0130] So ketoprofen lizina može se pripremiti kao što je opisano na primer u GB1497044A i BE882889.

[0131] Kokristal ketoprofen lizina oblika I može se pripremiti kao što je opisano na primer u evropskoj prijavi patenta br. EP18215336.1 ili u međunarodnoj prijavi patenta PCT/EP2019/025464.

[0132] Kokristal ketoprofen lizina oblika IV može se pripremiti kao što je opisano na primer u EP19219293.8.

[0133] Prema alternativnom tehničkom rešenju, navedeni ketoprofen je slobodna kiselina i/ili je navedeni lizin u neutralnom obliku.

[0134] U predmetnom postupku pripreme, gabapentin se poželjno koristi u svom neutralnom obliku (cviterjonska interna so) ili u bilo kom kiselom ili baznnom obliku soli, na primer kao gabapentin hidrohlorid ili gabapentin natrijum so.

[0135] Poželjno, gabapentin se koristi u svom neutralnom obliku.

[0136] Gabapentin može biti u bilo kom polimorfnom obliku.

[0137] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kokristal ketoprofen-lizin-gabapentina prema predmetnom pronalasku, posebno kokristal ketoprofen-lizingabapentina kako je gore definisano i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0138] Na primer, kompozicija prema predmetnom pronalasku može da sadrži 0.5-60% mase kokristala kako je ovde definisano i 40-99.5% mase jednog ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

[0139] Izbor ekscipijenata će u velikoj meri zavisiti od faktora kao što su poseban način administriranja, efekat na rastvorljivost i stabilnost i priroda doznog oblika.

[0140] Farmaceutska kompozicija prema predmetnom pronalasku može biti u bilo kom obliku pogodnom za primenu na ljude i/ili životinje, uključujući odojčad, decu i odrasle, i mogu se proizvoditi standardnim postupcima poznatim stručnjacima u oblasti.

[0141] Farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska je čvrsta oralna kompozicija, kao što je na primer kapsula, peleta, tableta, skrobna kapsula, žvakaći dozni oblici, prah, pastila, granule, oralno rastvorljivi granulat, suspenzija, emulzija, sprej ili kao suvi praškasti oblik koji se rekonstituiše tečnim medijumom.

[0142] Farmaceutska kompozicija može dodatno da sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, kao što su punila, veziva, glidanti, dezintegranti, agensi za regulisanje tečenja i agensi za oslobađanje.

[0143] Pogodni ekscipijensi su, na primer, opisani u "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3. izdanje, koji su objavili A.H. Kibe, American Pharmaceutical Association, Washington, SAD, i Pharmaceutical Press, London.

[0144] Pogodni ekscipijensi su, na primer, laktoza (monohidrat, monohidrat osušen raspršivanjem, anhidrovana, i slično), manitol, ksilitol, dekstroza, saharoza, sorbitol, mikrokristalna celuloza, skrob, dibazni kalcijum fosfat dihidrat i kalcijum hidrogenfosfat.

[0145] Punila mogu biti prisutna u količini od 0 – 80% masenih, a posebno u količini od 10 - 60% masenih od ukupne mase kompozicije.

[0146] Pogodna veziva su na primer polivinilpirolidon, mikrokristalna celuloza, hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, metilceluloza, hidroksietil celuloza, šećeri, dekstran, kukuruzni skrob, želatin, polietilen glikol, prirodne i sintetičke gume, preželatinizovani skrob.

[0147] Veziva mogu biti prisutna u količini od 0 - 80% masenih, a posebno u količini od 10 - 60% masenih od ukupne mase kompozicije.

[0148] Veziva se generalno koriste za davanje kohezivnih svojstava formulaciji tableta.

[0149] Pogodna glidanti su na primer soli zemnoalkalnih metala masnih kiselina, poput stearinske kiseline, kao što su magnezijum stearat, kalcijum stearat, cink stearat, natrijum stearil fumarat, i smeše magnezijum stearata sa natrijum lauril sulfatom.

[0150] Glidant može biti prisutan na primer u količini od 0 - 2% masenih, možda u količini od 0.5 - 1.5% masenih od ukupne mase kompozicije.

[0151] Pogodna dezintegranti su na primer natrijum kroskarmeloza, natrijum karboksimetil skrob, umreženi polivinilpirolidon (krospovidon), natrijum karboksimetilglikolat, natrijum skrob glikolat, natrijum karboksimetil celuloza, kalcijum karboksimetil celuloza, polivinilpirolidon, metil celuloza, mikrokristalna celuloza, niži alkil-supstituisana hidroksipropil celuloza, skrob, preželatinizovani skrob, natrijum alginat i natrijum bikarbonat.

[0152] Dezintegranti može biti prisutno u količini od 0 - 20% masenih, možda u količini od 1 -15% masenih od ukupne mase kompozicije.

[0153] Pogodni agensi za regulaciju protoka je na primer koloidni silicijum dioksid. Agens za regulaciju protoka može biti prisutno u količini od 0 - 8% masenih, poželjno u količini od 0.1 - 3% masenih od ukupne mase ove kompozicije.

[0154] Pogodno sredstvo za odvajanje je na primer talk. Sredstvo za odvajanje može biti prisutno u količini od 0 - 5% masenih, poželjno u količini od 0.5 - 3% masenih od ukupne mase kompozicije.

[0155] Čvrsta kompozicija može biti obložena, poželjno obložen filmom.may be coated, poželjno film coated.

[0156] Pogodna sredstva za oblaganje su na primer derivati celuloze, poli(met)akrilat, polivinilpirolidon, polivinil acetat ftalat i/ili šelak ili prirodne gume kao što je karagenan.

[0157] Postoje mnoge situacije u kojima će biti korisno ili čak neophodno isporučiti kokristal predmetnog pronalaska u čvrstom stanju, na primer, ugradnjom čvrste implantne kompozicije u odgovarajuća telesna tkiva ili šupljine.

[0158] Implantat može da sadrži matricu biokompatibilnih i bioerodirajućih materijala u kojima su čestice kokristala predmetnog pronalaska dispergovane, ili u kojima su, eventualno, zarobljene globule ili izolovane ćelije tečne smeše predmetnog kokristala. Poželjno je da telo razgradi i potpuno apsorbuje matricu. Kompozicija matrice je takođe pažljivo odabrana tako da obezbedi kontrolisano, produženo i/ili odloženo oslobađanje kokristala predmetnog pronalaska tokom dužeg perioda.

[0159] Alternativno, kokristal pronalaska može biti formulisan kao čvrsta, polučvrsta ili tiksotropna tečnost za administriranje kao implantirani depo koji obezbeđuje modifikovano oslobađanje aktivnog jedinjenja. Primeri takvih formulacija uključuju

[0160] Predmetna kompozicija može se administrirati lokalno na kožu ili sluzokožu, odnosno dermalno, epidermalno, subepidermalno ili transdermalno.

[0161] Predmetna kompozicija može se administrirati sublingvalno ili putem supozitorije.

[0162] Tipične formulacije za ovu svrhu uključuju formulacije za posipanje, lokalno nanošenje, umakanje, sprej, mus, šampon, praškastu formulaciju, gelove, hidrogelove, losione, kreme, masti, talk puderi, obloge, pene, filmove, flastere za kožu, vafle, implantate, depoe, sunđere, vlakna, zavoje, mikroemulzije, oralno rastvorljive granule. Takođe se mogu koristiti lipozomi.

[0163] Farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska može biti čvrsta kompozicija za ekstemporalno pripremanje rastvora za oralno ili parenteralno padministriranje, na primer, za administriranje intramuskularnom, intraperitonealnom ili intravenskom injekcijom.

[0164] Farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska može se pripremiti postupcima koji su dobro poznati stručnjaku u oblasti.

[0165] Kompozicija pronalaska može biti tipa sa trenutnim, odloženim, modifikovanim, produženim, pulsnim ili kontrolisanim oslobađanjem.

[0166] Prema daljem tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija pronalaska može da sadrži kokristal pronalaska i najmanje još jedan farmaceutski aktivni sastojak.

[0167] Drugi farmaceutski aktivni sastojak biće određen okolnostima pod kojima se terapijski agens predmetnog pronalaska administrira.

[0168] Dalji predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu kao lek.

[0169] Medicinska primena može biti lekovita, profilaktička ili palijativna.

[0170] Udruživanje dva aktivna sastojka u istom kristalu pokazuje nekoliko prednosti za sadašnju medicinsku primenu.

[0171] Prvo, gabapentin i ketoprofen lizin budući da su povezani u kokristalu, često se ponašaju kao jedan hemijski entitet, što olakšava tretmane, formulaciju, doziranje itd. Štaviše, dva aktivna sastojka se međusobno dopunjuju u lečenju, posebno bola, ali moguće i raznih drugih bolesti ili simptoma.

[0172] Još jedna prednost je što udruživanje dva aktivna sastojka u jednu jedinstvenu vrstu može omogućiti bolju farmakokinetiku/farmakodinamiku (PKPD), uključujući i bolju penetraciju krvno-moždane barijere, što pomaže u lečenju bola.

[0173] Kokristal i kompozicija predmetnog pronalaska pokazuju sinergističko dejstvo aktivnih sastojaka gabapentina i ketoprofen lizina, što je pokazano u predmetnom testu prediktivnog uticaja na bol i upalu.

[0174] Ova neočekivana sinergija pruža poboljšanu kliničku efikasnost u poređenju sa pojedinačnim komponentama kokristala kada se administriraju odvojeno, ili smanjenje potrebne doze svakog jedinjenja, što dovodi do smanjenja neželjenih efekata uz održavanje ili poboljšanje kliničke efikasnosti jedinjenja i lečenja.

[0175] Na primer, pacijent može iskusiti poboljšano smanjenje učestalosti i jačine bola i/ili upale. Štaviše, pacijent može imati koristi od dužeg trajanja dejstva od lečenja kokristalom nego od lečenja gabapentinom ili ketoprofen lizinom ili njihovom kombinacijom.

[0176] Neophodno je da stručnjak, kao što je lekar ili veterinar, ne samo da odredi poželjni način administriranja i odgovarajući oblik doziranja i količinu, već da taj stručnjak mora da odredi i režim doziranja.

[0177] Dnevna doza za ljude i životinje može da varira u zavisnosti od faktora koji se zasnivaju na odgovarajućoj vrsti ili drugih faktora, kao što su starost, pol, težina ili stepen bolesti i tako dalje.

[0178] Dnevna doza kokristala prema pronalasku za ljude poželjno obezbeđuje da ketoprofen u obliku kiseline bude u količini između 25 i 200 mg, poželjno između 50 i 150 mg, poželjnije od 50 mg, od 1 do 8 puta dnevno, poželjno od 1 do 4 puta dnevno, što rezultuje veoma niskom ukupnom količinom gabapentina u poređenju sa normalnom dozom samog gabapentina.

[0179] Dalji predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu u prevenciji, smanjenju ili lečenju bola i/ili upale.

[0180] Kokristal i kompozicija predmetnog pronalaska se koriste za lečenje bola, poželjno akutnog ili hroničnog bola i upale, poželjno neuroinflamacije.

[0181] Poželjno, navedeni bol je izabran od glavobolje, zubobolje, menstrualnog bola, bola u mišićima, neuropatskog bola, dijabetičkog bola, neuropatije, bola povezanog sa neuroinflamacijom, bola izazvanog kancerom, osteoartritisa, bola u donjem delu leđa, išijatalgije, fibromijalgije, trigeminalne neuralgije; postoperativnog i postherpetičnog bola, reumatoidnog artritisa, ankilozirajućeg spondilitisa, smrznutog ramena, bola fantomskog uda ili bola izazvanog HIV-om.

[0182] Još jedan predmet predmetnog pronalaska je kokristal pronalaska za primenu u postupku za prevenciju, smanjenje ili lečenje bola i/ili upale koji obuhvata administriranje pacijentu efikasne količine kokristala pronalaska.

[0184] EKSPERIMENTALNI DEO

[0186] U nastavku, opisana JE proizvodnja kokristala gabapentina, ketoprofena i lizina, njegova analitička i biološka karakterizacija.

[0187] 1. Sinteza kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0189] Kokristal ketoprofen lizina oblika I (3.028 g, 1.05 ekv.), pripremljen kao što je opisano u evropskoj prijavi patenta br. EP18215336.1 ili u međunarodnoj prijavi patenta PCT/EP2019/025464 i gabapentin (1.233 g, 1.0 ekv.) su rastvoreni u 60 ml ključalog metanola. Bistar rastvor je ostavljen da se ohladi na sobnoj temperaturi, filtriran sa „polish“ filterom (0.45 µm HPLC filter) i zatim dodat u 240 ml THF uz mešanje. Taloženje čvrste supstance se dogodilo za približno 30 minuta i suspenzija je mešana na 25 °C tokom 5 sati (300 ob/min). Čvrsti proizvod je izolovan vakuumskom filtracijom na papirnom filteru, ispran metanolom (2 x 3 ml) i zatim isceđen pod protokom azota približno 10 minuta. Čvrsta supstanca je blago mlevena, a zatim sušena na 40 °C i 30 mbar preko noći, dajući 3.57 grama željenog proizvoda kao belu čvrstu supstancu (prinos: 87%).

[0191] 2. XRPD analiza

[0193] XRPD analiza je izvedena pomoću sledećeg instrumenta i pod uslovima navedenim u tabeli 1 ispod:

[0194] Tabela 1

[0197]

[0198]

[0200] Metod generisanja visokog napona: Visokofrekventni Kokroft-Voltonov metod

[0201]

[0202]

[0204] Rendgenski difraktogram praha kristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 je prikazan na slici 1.

[0205] XRPD lista pikova kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin je prikazana u tabeli 2 ispod: Tabela 2. XRPD pik najmanjeg kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0206]

[0207] Položaj [°2T.] Visina [ct] FWHM [°2T.] d-razmak [Å] Rel. int. [%]

[0210]

[0211]

[0213] 3. Termička analiza

[0215] DSC analiza

[0217] Analiza je sprovedena korišćenjem instrumenta DSC Mettler Toledo DSC1. Uzorak je izmeren u aluminijumskoj posudi hermetički zatvorenoj aluminijumskim poklopcem. Analiza je izvedena zagrevanjem uzorka od 25°C do 320°C brzinom od 10K/min, pod uslovima prikazanim u Tabeli 3 ispod:

[0218] Tabela 3

[0221]

[0222]

[0225] Analiza je sprovedena na uzorcima kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin (slika 2), kokristala ketoprofen lizina oblika I (slika 3) i gabapentina (slika 4).

[0227] Termogravimetrijska analiza TGA

[0229] Analiza je izvedena pomoću instrumenta Mettler Toledo TGA/DSC1.

[0230] Uzorak je izmeren u aluminijumskoj posudi hermetički zatvorenoj aluminijumskim poklopcem sa rupama. Analiza je sprovedena zagrevanjem uzorka od 25°C do 320°C brzinom od 10°/min, pod uslovima prikazanim u tabeli 4 ispod:

[0231] Tabela 4

[0233]

[0234]

[0237] TG analiza je izvedena na uzorcima kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin (slika 5, uzorak 10.33 mg, leva granica 113.90°C, desna granica 211.31°C), kokristala ketoprofen lizina oblika I (slika 6, uzorak 12.32 mg, leva granica 144.51°C, desna granica 207.29°C) i gabapentina (slika 7, uzorak 16.67 mg, leva granica 160.49°C, desna granica 198.27°C). Slike 5 i 6 prikazuju i TG (puna linija) i dTG (isprekidana linija) termograme dobijene za uzorke.

[0238] TG analiza kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 prema pronalasku ne pokazuje gubitak mase na temperaturama ispod tačke topljenja (videti sliku 4).

[0240] Analiza razvijenog gasa (EGA)

[0242] EGA analiza je izvedena na uzorku kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin.

[0243] DSC termogram sa slike 2 pokazao je jedan endotermni događaj na 141.4°C (početak 136.9°C), povezan sa topljenjem i razgradnjom uzorka. Ovaj pik se jasno razlikovao od endotermnih pikova termograma gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I prikazanih na slici 3.

[0244] TG analiza kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 potvrdila je prisustvo bezvodnog jedinjenja (slika 5).

[0245] EG analiza je pokazala prisustvo karakterističnih proizvoda razgradnje i gabapentina i kokristala ketoprofen lizin oblika I u razvijenom gasu (slika nije prikazana).

[0247] 4. FT-Raman i FT-IR

[0249] FT-Raman

[0251] Ramanovi spektri su snimljeni pomoću Nicolet iS50 FT-IR spektrometra. Izvor pobude bio je Nd-YAG laser (1064 nm) u konfiguraciji povratnog rasejanja (180°). Prečnik fokusiranog laserskog snopa bio je približno 50 mm a spektralna rezolucija 4 cm<-1>. Spektri su snimljeni sa snagom lasera na uzorku od približno 100 mW.

[0253] FT-IR

[0255] Analiza je izvedena korišćenjem instrumenta Thermo Nicolet iS50 - ATR modul spektrometar opremljenog sa Smart Performer Diamond, DTGS KBr detektorom, IR izvorom, KBr deliocem snopa, pod uslovima prikazanim u tabeli 5 ispod:

[0256] Tabela 5

[0259]

[0260]

[0263] Lista pikova Ramanovog spektra kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin je prikazana u tabeli 6 ispod:

[0264] Tabela 6: Ramanova lista pikova kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0267]

[0268]

[0271] Lista pikova FT-IR spektra kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin je prikazana u tabeli 7 ispod:

[0272] Tabela 7: Lista FT-IR pikova kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0275]

[0276]

[0279] 5. NMR u tečnom i čvrstom stanju

[0281] Spektri<1>H-Nuklearne magnetne rezonancije (NMR) su snimljeni u naznačenom rastvaraču sa tetrametilsilanom (TMS) kao internim standardom na Bruker Avance3 400 MHz instrumentu. Hemijski pomaci su prikazani u delovima na milion (ppm) u odnosu na interni standard. Skraćenice su korišćene kako sledi: s=singlet, d=dublet, t=triplet, q=kvartet, m=multiplet, dd=dubleti dubleta, br=široki. Konstante sprezanja (J vrednosti) su date u hercima (Hz).

[0282] <13>C CPMAS spektri u čvrstom stanju ketoprofen-lizin-gabapentina i čistog gabapentina su dobijeni pomoću Jeol ECZR 600 instrumenta, koji radi na 600.17 i 150.91 MHz, redom za<1>H i

[0283] <13>C jezgra. Uzorci praha su upakovani u cilindrični cirkonijumski rotor sa spoljašnjim prečnikom od 3.2 mm i zapreminom od 60 µl. Uzorak je sakupljen iz svake serije i korišćen bez daljih priprema za punjenje rotora.<13>C CPMAS spektri su dobijeni na sobnoj temperaturi, pri brzini rotacije od 20 kHz, korišćenjem sekvence impulsa sa unakrsnom polarizacijom sa kontinuiranim variranjem sa 90°<1>H impulsom od 2.1 µs i vremenom kontakta od 3.5 ms. Korišćeno je optimizovano kašnjenje ponovnog ciklusa od 5.7 (ketoprofen-lizin-gabapentin) ili 100 s (GAB), za broj skeniranja od 2200 (ketoprofen-lizin-gabapentin) ili 20 (GAB). Za svaki spektar ,korišćena je šema razdvajanja sa dva impulsa fazne modulacije (TPPM), sa radiofrekventnim poljem od 108.5 kHz. Skala hemijskog pomeranja<13>C je kalibrisana preko metilenskog signala spoljašnjeg standardnog glicina (na 43.7 ppm). Što se tiče analize<13>C T1-<1>H, snimljeno je 12 spektara za 350 skeniranja sa različitim kašnjenjima relaksacije, uključenim u opseg od 0.1-60 s i izračunatim pomoću softvera Delta v5.2.1 pomoću eksponencijalnog algoritma. Spektri su dobijeni pri brzini rotacije od 20 kHz na sobnoj temperaturi korišćenjem sekvence impulsa sa unakrsnom polarizacijom sa kontinuiranim variranjem, impulsom od 90°<1>H od 2.1 µs i vremenom kontakta od 2 ms.

[0285] <1>H-NMR spektri kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0287] <1>H-NMR spektar kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin potvrdio je istovremeno prisustvo ketoprofen-lizin-gabapentina u uzorku sa stehiometrijom 1:1:1. Takođe su mogli biti detektovani tragovi rezidualnog metanola (približno 0.2% mas/mas).

[0288] Multiplicitet i raspored signala u skladu sa numeracijom atoma prikazanom na šemi 1

[0291]

[0293] su prikazani u tabeli 8 ispod:

[0294] Table 8:<1>H-NMR

[0297]

[0300] <1>H-NMR spektar (400 MHz, D<2>O) kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin je prikazan na slici 6.

[0302] <13>C CPMAS spektri čvrstog stanja kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0304] Nova homogena faza ketoprofen-lizin-gabapentina potvrđena je sa<13>C-CPMAS spektrima. Stehiometrija je procenjena na 1:1:1, sa jednim nezavisnim molekulom ketoprofena, lizina i gabapentina u jediničnoj ćeliji. Karboksilna grupa ketoprofena je deprotonovana i interaguje sa protoniranom ε-NH<3>+

grupom lizina preko jonskih veza formirajući neutralnu so. Neutralna so ketoprofen lizina interaguje sa gabapentinom preko nejonskih veza formirajući kokristal. I lizin i gabapentin su u cviterjonskom stanju u novom kristalnom obliku.

[0305] U tabeli 9 ispod, karakteristične<13>C NMR rezonancije čvrstog stanja su sumirane:

[0307] Tabela 9:<13>C NMR čvrstog stanja

[0310]

[0311]

[0314] Slika 7 prikazuje<13>C CPMAS NMR spektre kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin i odvojenih početnih materijala, naime ketoprofena (KET), lizina (LYS) i gabapentina (GAB).

[0315] Svi signali u spektru kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin karakterišu se sličnim<1>H T1 vrednostima (oko 6.5 s), što znači da je spinska difuzija aktivna među molekulima ketoprofena, lizina i gabapentina, tj. tri molekula su u istoj jediničnoj ćeliji. Na slici 10 je prikazano uvećanje karboksilne oblasti.

[0316] U ovoj uvećanoj oblasti primećene su tri različite rezonancije za karboksilne/karboksilatne grupe, što ukazuje na stehiometrijski odnos 1:1:1 za sistem ketoprofen-lizin-gabapentin, sa jednim nezavisnim molekulom za svako jedinjenje.

[0317] Gabapentin je cviterjon u svom čistom polimorfu oblika II: njegova karboksilatna grupa ostaje deprotonirana u ketoprofen-lizin-gabapentinu sa minimalnim pomeranjem ka višim frekvencijama, što ukazuje da je hemijsko okruženje COO<->grupe gabapentina veoma slično između adukata i čistog reagensa.

[0318] Cviterjonski karboksilat lizina menja koncentraciju sa 176.7 ppm u čistom lizinu na 178.2 ppm u ketoprofen-lizin-gabapentinu, verovatno zbog učešća karboksilatne grupe u jačim vodoničnim vezama nego u početnom materijalu. Pretpostavlja se da je lizin u cviterjonskom obliku.

[0319] Konačno, karboksilna grupa ketoprofena, koja je uključena u homodimerni sinton u svom čistom obliku, pada na 181.2 ppm u ketoprofen-lizin-gabapentinu, smanjujući njegov hemijski pomak od skoro 3 ppm. Ovo snažno ukazuje na pojavu protonskog prenosa sa COOH grupe ketoprofena, koji se pretvara u karboksilatnu grupu, na jedini mogući akceptor, ε-NH2 lizina.

[0320] Slika 11 prikazuje poređenje karboksilnih regiona za kokristal ketoprofen-lizingabapentina predmetnog pronalaska, kokristal ketoprofen lizin (oblik I) i so ketoprofen lizin.

[0321] Poređenje signala sa slike 11 potvrđuje stanje deprotonacije karboksilne grupe ketoprofena u ketoprofen-lizin-gabapentinu. Zaista, hemijski pomak za odgovarajući pik je znatno sličniji onom karboksilatne grupe ketoprofena u soli ketoprofen-lizin nego signalu neutralne vodonično vezane COOH grupe ketoprofena u kokristalu ketoprofen-lizin.

[0323] 6. Test rastvorljivosti

[0325] Testovi rastvorljivosti su sprovedeni korišćenjem automatskog potenciometrijskog titratora koristeći SiriusT3 aparat (Pion Inc. Ltd., Istočni Saseks, Velika Britanija) opremljenog Ag/AgCl referentnom pH elektrodom sa dvostrukim spojem, Sirius D-PAS spektrometrom i uređajem za merenje zamućenosti. pH elektroda je titrimetrijski kalibrisana u pH opsegu od 1.8-12.2. Korišćena je „overhead“ mešalica, a temperaturna sonda je pratila temperaturu tokom trajanja testa. Eksperimenti rastvorljivosti su sprovedeni u 1.5 ml 0.15 M rastvora KCI (ISA voda) u atmosferi azota na temperaturi od 25 ± 1°C. Svi testovi su izvedeni korišćenjem standardizovanog 0.5 M KOH i 0.5 M HCl kao reagensa za titraciju. Testovi rastvorljivosti su sprovedeni merenjem 15-20 mg uzoraka praha, uzorci su mešani na 800 ob/min i automatski titrirani od pH 11 do pH 1.5.

[0327] Rastvorljivost kokristala ketoprofen lizin oblika I i kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0329] Rastvorljivost kokristala ketoprofen lizin oblika I i kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin merena je pri pH 1.2 (želudac), pH 4.5 (dvanaestopalačno crevo), pH 6.5 (jejunum/ileum), pH 7.4 (krv) i pH 8.0 (kolona). Uzorci su pokazali značajnu razliku u rastvorljivosti pri svim pH vrednostima. Iznad pH 5 (pKa ketoprofena 4.08) rastvorljivost se značajno povećala i stoga su bila potrebna dva grafikona sa različitom skalom (videti sliku 12). Rastvorljivost kokristala ketoprofenlizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 bila je generalno 2.5 puta veća od kokristala ketoprofen lizina oblika I. Kokristal ketoprofen lizin oblika I pri pH 1.2 pokazao je vrednost rastvorljivosti od 0.1624 ± 0.0016 mg/ml, dok je ketoprofen-lizin-gabapentin imao 0.4171 ± 0.0312 mg/ml.

[0330] Tabela 10 ispod prikazuje podatke o rastvorljivosti dobijene pri najreprezentativnijem pH gastrointestinalnog trakta.

[0331] Tabela 10: Rastvorljivost pri različitim pH vrednostima (mg/ml)

[0333]

[0336] 7. Test stabilnosti

[0338] Uzorci ketoprofen-lizin-gabapentina (približno 75 mg) su stavljeni u staklene bočice zatvorene PTFE/silikonskom pregradom i čuvani na željenoj temperaturi i vlažnosti tokom potrebnog vremena.

[0339] Kontrolisana vlažnost je postignuta korišćenjem zasićenih rastvora soli: NaCl za 75% relativne vlažnosti na 40 °C i NaBr za 60% relativne vlažnosti na 25 °C.

[0340] Nakon skladištenja, čvrsti uzorci su analizirani XRPD analizom. Svaki test stabilnosti je izvršen u duplikatu.

[0341] Stabilnost uzoraka je proverena nakon 3 meseca.

[0343] Test stabilnosti kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin

[0345] Stabilnost kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin testirana je nakon skladištenja tokom tri meseca pod kontrolisanim uslovima temperature i vlažnosti (zapečaćena bočica). Jedinjenje se pokazalo stabilnim pri oba testirana uslova, od 25 °C i 65% relativne vlažnosti i od 40 °C i 75% relativne vlažnosti.

[0346] Stabilnost uzorka procenjena je upoređivanjem XRPD dijagrama čvrstih uzoraka sakupljenih nakon testova stabilnosti sa difraktogramom netretiranog uzorka.

[0347] Stabilnost nakon skladištenja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti

[0349] Difraktogrami uzoraka ketoprofena-lizina-gabapentina čuvanih na 25°C i 60% relativne vlažnosti u zatvorenoj bočici tokom 3 meseca pokazali su da nije bilo značajnih razlika u XRPD difraktogramima čuvanog uzorka u poređenju sa neobrađenim početnim materijalom. Rezultati XRPD analize potvrdili su da je čvrsto stanje kokristala ostalo nepromenjeno tokom skladištenja pod ubrzanim uslovima.

[0351] Stabilnost nakon skladištenja na 40 °C i 75% relativne vlažnosti

[0353] Difraktogrami uzoraka ketoprofen-lizin-gabapentina skladištenih na 40 °C i 75% relativne vlažnosti u zatvorenoj bočici tokom 3 meseca pokazali su da nije bilo značajnih razlika u XRPD difraktogramima skladištenog uzorka u poređenju sa neobrađenim početnim materijalom. Rezultati XRPD analize potvrdili su da je čvrsto stanje kokristala ostalo nepromenjeno tokom skladištenja pod ubrzanim uslovima.

[0355] 8. In vivo studije

[0357] Inflamatorni bol kod pacova izazvan intraplantarnom injekcijom karagenana

[0359] Mužjaci pacova Wistar (270-280 g) (Envigo, Italija) su smešteni po 2-3 po kavezu pod kontrolisanim osvetljenjem (ciklus svetlo:mrak 12:12 sati; svetlo u 06:00 sati) i standardnim uslovima okoline (sobna temperatura 22 ± 1 °C, vlažnost 60 ± 10%) najmanje 1 nedelju pre eksperimentalne upotrebe. Hrana za pacove i voda iz slavine bili su dostupni po volji. Postupke je odobrio Komitet za etiku životinja Univerziteta u Kampaniji "Luigi Vanvitelli". Briga o životinjama je bila u skladu sa italijanskim Zakonodavnim dekretom (D.L. 116/92) i propisima Direktive Evropske komisije (Sl.list E.C. L358/1, 18/12/86) o zaštiti laboratorijskih životinja. Uloženi su svi napori da se patnja životinja i broj korišćenih životinja svedu na minimum.

[0361] Metoda ispitivanja edema šape pacova izazvanog karagenanom

[0362] Periferni inflamatorni bol je izazvan u levoj zadnjoj šapi svake životinje jednom intraplantarnom injekcijom 1% λ -karagenana (100 µl za svakog pacova u 0.9% NaCl). Nosač (2 kapsule Avicel PH101), indometacin (10 mg/kg, 100 µl), kokristal ketoprofen lizina oblika I (47.1 mg/kg, 1 kapsula), gabapentin (20.4 mg/kg, 2 kapsule), smeša gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I (47.1 mg/kg 20.4 mg/kg, 2 kapsule) i kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin (67.5 mg/kg, 2 kapsule) su oralno administrirani 1 sat pre injekcije karagenana. Zapremina šape životinja je merena pletizmometrom (Ugo Basile, Vareze, Italija) pre (0 sati) i posle injekcije karagenana u različitim vremenskim intervalima (1, 2, 3, 4, 5 i 6 sati nakon karagenana). Edem je izražen kao srednje povećanje zapremine šape (ml) u odnosu na kontrolu. životinje. Procenat inhibicije edema je izračunat pomoću sledeće jednačine:

[0365]

[0367] gde je Vc zapremina edema u kontrolnoj grupi, a Vt zapremina edema u tretiranoj grupi.

[0368] Procenat inhibicije edema koji je rezultat gore navedenog testa prikazan je u sledećoj tabeli 11:

[0369] Tabela 11: % inhibicije edema

[0370] Kokristal ketoprofen

[0371] Ketoprofen- Ketoprofen-lizint Nosač Indometacin Gabapentin lizina oblika I

[0374]

[0375] Kokristal ketoprofen

[0376] Ketoprofen- Ketoprofen-lizint Nosač Indometacin Gabapentin lizina oblika I

[0379]

[0382] Efekat testiranih jedinjenja na edem šape pacova izazvan karagenanom prikazan je na slikama 13 do 15.

[0383] Na slici 13 je prikazan vremenski tok antiinflamatornog dejstva kokristala ketoprofen-lizingabapentin u odnosu 1:1:1 i smeše gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I u odnosu 1:1 u poređenju sa kokristalom ketoprofen lizina oblika I, gabapentinom, indometacinom i nosačem na otok šape pacova (zapremina šape u ml) nakon intraplantarne injekcije 1% karagenana.

[0384] Na slici 14 je prikazan procenat inhibicije zapremine šape izazvane kokristalom ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 i gabapentinom i kokristalom ketoprofen lizin oblika I u smeši u poređenju sa kokristalom ketoprofen lizina oblika I, gabapentinom, indometacinom i nosačem 3, 4 i 5 sati nakon injekcije karagenana. Na grafikonu je vrednost procenta inhibicije za nosač nula.

[0385] Slika 15 prikazuje vremenski tok antiinflamatornog dejstva na bol kokristala ketoprofenlizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 ili kokristala ketoprofen lizina oblika I i GABA dodataka u poređenju sa kokristalom ketoprofen lizina oblika I, gabapentinom, indometacinom ili nosačem na reakciju povlačenja pacova (g) nakon intraplantarne injekcije 1% karagenana.

[0386] Na grafikonima na slikama 13 do 15, svaka vremenska tačka ili traka predstavlja srednju vrednost ± SEM za šest pacova po nosaču i osam pacova po leku. P < 0.05 je smatrano statistički značajnim i izračunato korišćenjem dvosmerne ANOVA analize praćene Bonferonijevim post-hoc testom. Značenje: * u odnosu na nosač, § u odnosu na KL Co-xx - GAB MIX, & u odnosu na KL Co-xx oblik I, ° u odnosu na indometacin.

[0387] Iz grafikona na slikama 13 i 15 se vidi da su kokristal ketoprofen lizina oblik I, mešavina gabapentina i kokristala ketoprofen lizina oblika I i kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 ublažili edem izazvan karagenanom, dok je gabapentin bio manje efikasan.

[0388] Štaviše, jasno je da je antiinflamatorni efekat kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 pronalaska bio veći ne samo od efekta pojedinačnih aktivnih sastojaka gabapentina i ketoprofen lizina, već, neočekivano, čak i veći od efekta dva aktivna sastojka kada se administriraju zajedno (sinergijski efekat). Kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin u odnosu 1:1:1 pronalaska jasno je pokazao sinergistički efekat i povećanje biodostupnosti, u poređenju sa mešavinom gabapentina i ketoprofen lizina, ili samo sa gabapentinom ili ketoprofen lizinom.

[0389] Takođe je primećeno da je kokristal ketoprofen-lizin-gabapentin predmetnog pronalaska izgledao znatno jači od indometacina u ovom testu. Konačno, nagnutija kriva kokristala ketoprofen-lizin-gabapentin predmetnog pronalaska prikazana na slici 13, mogla bi biti prediktor efikasnosti tokom dužeg vremenskog perioda, dužeg nego kod pojedinačnih aktivnih sastojaka datih sami ili čak u mešavini.

[0391] Uporedni efekti kokristala KSL-gabapentin i gabapentina u modelu neuropatskog bola izazvanog ligacijom nerava

[0393] Supstance za testiranje obezbedila je kompanija Dompé Farmaceutici S.p.A., gabapentin je kupljen od kompanije Spectrum (kat. br. G1092), a pirinčani skrob koji je korišćen u kontrolnoj grupi sa nosačem je dobijen od kompanije Sigma (kat. br. S7260) u ovom projektu. Gabapentin (Spectrum (kat. br. G1092)) sam ili kokristal KSL-gabapentin su administrirani oralno putem želatinske kapsule(a) Torpac® veličine 9. Za svakog pacova, date su 1-3 kapsule na osnovu predloženih doza. Gabapentin, koji služi kao pozitivna kontrola, formulisan je u vodi za injekcije (WFI) za PO administriranje u zapremini od 10 ml/kg.

[0394] [0194] Mužjake pacova Sprague Dawley težine 180 ± 20 g obezbedila je kompanija BioLasco Taiwan (pod licencom Charles River Laboratories). Prostor za 2-3 životinje bio je 45 x 25 x 21 cm. Sve životinje su držane u okruženju sa kontrolisanom temperaturom (20 - 24 °C) i vlažnosti okoline (30% - 70%) sa ciklusima svetlosti/mraka od 12 sati. Osiguran je slobodan pristup standardnoj laboratorijskoj ishrani [MFG (Oriental Yeast Co., Ltd., Japan)] i autoklaviranoj vodi. Svi aspekti ovog rada, uključujući smeštaj, eksperimentisanje i odlaganje životinja, obavljeni su u opštem skladu sa "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals: Eighth Edition" (National Academies Press, Vašington, D.C., 2011) u našem objektu za laboratorijske životinje akreditovanom od strane AAALAC. Pored toga, protokol za negu i korišćenje životinja pregledao je i odobrio IACUC u Pharmacology Discovery Services Taiwan, Ltd.

[0395] Na dan 0, pod anestezijom pentobarbitalom natrijum [50 mg/kg, intraperitonealno (IP)], levi išijadični nerv je izložen na nivou sredine butine. Četiri hromne ligature creva, udaljene oko 1 mm, labavo su vezane oko nerva. Životinje su zatim smeštene u kaveze sa mekom posteljinom 13 dana pre procene mehaničke alodinije.

[0396] Pacovi su smešteni u obrnute kaveze od pleksiglasa na žičanoj mreži i ostavljeni su da se aklimatizuju 20 do 30 minuta. Prag mehaničke alodinije procenjen je manuelnim fon Frejevim testom korišćenjem Čaplanove metode gore/dole. Životinjama je dato 20 - 30 minuta da se aklimatizuju na žičanu mrežu u pojedinačnim odeljcima pre testiranja ponašanja. Šapa je dodirnuta serijom od 8 ručnih fon Frejevih monofilamenata sa logaritamski inkrementalnom krutoćom [3.61 (0.4 g), 3.84 (0.6 g), 4.08 (1.0 g), 4.31 (2.0 g), 4.56 (4.0 g), 4.74 (6.0 g), 4.93 (8.0 g), i 5.18 (15.0 g)]. Ručni fon Frejev monofilament je primenjen normalno od ispod mrežastog poda do centralne plantarne površine sa dovoljnom silom da izazove blago savijanje šape, i držan je približno 6 - 8 sekundi. Pozitivan odgovor je primećen ako je šapa naglo povučena; kretanje se smatralo dvosmislenim odgovorom i u takvim slučajevima je stimulus ponovo primenjen. Mehanički prag [prag povlačenja od 50% (g)] je procenjen korišćenjem metode gore/dole prema postupku koji je opisao Čaplan (1994).

[0397] Dobijeni obrasci pozitivnih i negativnih odgovora je tabelarno prikazan koristeći konvenciju, X = povlačenje; O = bez povlačenja, a prag odgovora od 50% je interpoliran pomoću formule: Mehanički prag = (10 [Xf+kδ]) / 10,000, gde je Xf = vrednost (u logaritamskim jedinicama) konačne korišćene fon Frejeve kose; k = tabelarna vrednost za obrazac pozitivnih/negativnih odgovora; i δ = srednja razlika (u logaritamskim jedinicama) između stimulusa (ovde, 0.224).

[0398] [0198] Svi pacovi su procenjeni na mehaničku alodiniju za pragove pre operacije na dan -1 (početna vrednost pre operacije). Pacovi su prethodno odabrani za eksperimentisanje samo ako je prag bola na dan 13 nakon ligacije nerva (prethodni tretman) bio smanjen za 10 g sile u odnosu na odgovor pojedinačne šape pre ligacije nerva (pre operacije), naime, sa jasnim prisustvom alodinije. Pacovi su randomizovani na osnovu rezultata mehaničke alodinije pre doze u uravnotežene grupe za tretman. Jedinjenja su administrirana oralno (PO) pomoću želatinskih kapsula veličine 9 ili u predloženoj formulaciji. Mehanička alodinija je ponovo procenjena na 1, 3 i 6 sati nakon administriranja testiranog proizvoda, nosača ili referentnog jedinjenja na Dan 14 nakon operacije.

[0399] Rezultati su prikazani na slici 16.

[0400] Sve vrednosti predstavljaju srednju vrednost ± standardnu grešku srednje vrednosti (SEM) u pojedinačnim grupama. Jednosmerna ANOVA, praćena Danetovim testom, primenjena je za poređenje između kontrolne grupe tretirane nosačem i grupe tretirane jedinjenjem. Značajnost je razmatrana na nivou p<0.05. Statistička analiza je izvršena pomoću GraphPad Prism 5.0.

[0401] Slika 16 jasno pokazuje sinergistički efekat kokristala pronalaska 2 i 3 sata nakon doze.

[0403] Određivanje izloženosti KLS-a i gabapentina u plazmi i mozgu nakon njihovog oralnog administriranja u obliku kapsula kod pacova

[0405] Cilj studije bio je određivanje penetracije gabapentina u mozak u kokristalu KLS-gabapentin u poređenju sa fizičkom smešom KLS i gabapentina i samog gabapentina nakon administriranja u kapsulama kod pacova. U ovoj studiji korišćeni su mužjaci pacova Sprague Dawley (telesne težine 310 g u vreme tretmana). Životinje je prvobitno isporučio Harlan, Italija. Nakon prijema od dobavljača, životinje su podvrgnute zdravstvenim pregledima i prihvatanju. Životinje su smeštene, u grupi od po tri, u kaveze pogodne za vrstu i rutinski su držane u sledećem okruženju, osim u kratkim vremenskim periodima kada su eksperimentalne procedure nalagale drugačije. Životinje su aklimatizovane na lokalne uslove smeštaja približno 5 dana.

[0406] Životinje su smeštene u jednoj, ekskluzivnoj prostoriji, klimatizovanoj tako da se obezbedi najmanje 15 izmena vazduha/sat. Kontrole okoline su podešene da održavaju temperaturu u opsegu od 22°C i relativnu vlažnost u opsegu od 50 do 60%, sa ciklusom svetlosti na približno 12 sati i ciklusa tame na 12 sati koji se kontroliše automatski. Hrana (Mucedola standardna GLP dijeta) i voda su bile dostupne ad libitum tokom cele studije. Sve životinje su merene na dan svakog tretmana. Klinički znaci su praćeni u redovnim intervalima tokom cele studije kako bi se procenila bilo kakva reakcija na tretman. Svaka životinja je jedinstveno identifikovana obojenim sprejom na leđima pre eksperimenta.

[0407] Na kraju studije životinje su žrtvovane iskrvarenjem pod anestezijom.

[0408] Eksperiment je izveden u skladu sa italijanskim zakonom D. L. od 4. marta 2014, br.26.

[0409] Eksperimentalni protokol se sastojao od uzimanja uzoraka krvi i moždanog tkiva životinja prema sledećim tabelama 12 i 13 i analize uzoraka kao što je opisano u nastavku.

[0410] Tabela 12: Uzorkovanje krvi

[0411]

[0413] Tabela 13 Uzorkovanje moždanog tkiva

[0414]

[0415]

[0418] Osnovni rastvori ketoprofena i gabapentina su pripremljeni u koncentraciji od 1 mg/ml u MeOH, a mešani osnovni rastvor je pripremljen razblaživanjem gore pomenuta dva sastojka da bi se postigla konačna koncentracija od 100 µg/ml svakog analita. Osnovni rastvori DF1681Y i nečistoće gabapentina A su pripremljeni, redom, u koncentraciji od 2 mg/ml i 1 mg/ml u MeOH. Smeša ova dva sastojka je pripremljena u ACN sa konačnom koncentracijom od 5000 i 500 ng/ml redom (mix IS).

[0419] Kalibraciona kriva i QC uzorci su pripremljeni u slepoj probi plazme pacova dodavanjem 2 µL svakog osnovnog rastvora u 18 µL plazme. Uzorci plazme sa primesama su dodati u 200 µl mix_IS i centrifugirani 5 minuta na 9000g na 5°C. Uzorci iz oralnih tretmana su pripremljeni razblaženi 1:10 u slepoj probi plazme i 20 µl razblažene plazme je obrađeno kao što je gore opisano. 100 µl ekstrahovanih uzoraka je zatim razblaženo sa 120 µl mobilne faze A.

[0420] Prikupljeni uzorci mozga su homogenizovani u amonijum formijatnom puferu od 10 mM 1 g/5ml. Uzorci, kao i kalibranti i QC uzorci, pripremljeni su dodavanjem 20 µl homogenata mozga u 200 µl mix_IS i centrifugirani tokom 5 minuta na 9000g na 5°C.100 µl ekstrahovanih uzoraka je zatim razblaženo sa 120 µl mobilne faze A.

[0421] Nivoi ketoprofena i gabapentina u plazmi pacova mereni su nakon administriranja dve kapsule kokristala KLS-gabapentina i fizičke smeše dva analita. Koncentracije u plazmi i mozgu su prikazane na slikama 17 do 19.

[0422] Koncentracije dva jedinjenja u mozgu i plazmi procenjene su nakon 2 sata, što je rezultiralo odnosom penetracije u mozak/plazmu od 37.8% za gabapentin kada se administrira sam, naspram 56.1% kada se administrira kao kokristal KLS-Gabapentin (slika 17). Značajnost je razmatrana na nivou p<0.05. Zanimljivo je da su nivoi gabapentina i ketoprofena u mozgu i plazmi, primećeni u kokristalu KLS-Gabapentin, bili statistički značajno viši (p <0.05) u poređenju sa smešom KLS gabapentin (slike 18 i 19).

[0423] Slike 18 i 19 jasno pokazuju povećanje koncentracije ketoprofena iz kokristala predmetnog pronalaska u mozgu i plazmi u poređenju sa mešavinom gabapentina i ketoprofen lizina zbog bolje bioraspoloživosti.

Claims (16)

1. Patentni zahtevi

1. Kokristal gabapentina, ketoprofena i lizina pri čemu je molarni odnos komponenti 1:1:1, okarakterisan sledećim XRPD difrakcionim pikovima: 3.6, 9.5, 9.6, 18.5 i 20.0 stepeni 2-teta ± 0.2 stepena 2-teta.

2. Kokristal prema patentnom zahtevu 1, dalje okarakterisan sledećim XRPD difrakcionim pikovima: 15.4, 17.8, 21.0, 21.8 i 24.2 stepeni 2-teta ± 0.2 stepeni 2-teta.

3. Kokristal prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu je navedeni ketoprofen (S)-ketoprofen.

4. Kokristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je navedeni lizin (S)-lizin.

5. Kokristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 za primenu kao lek.

6. Kokristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5 za primenu u prevenciji, smanjenju ili lečenju bola i/ili upale.

7. Kokristal za primenu prema patentnom zahtevu 6, pri čemu je navedeni bol akutni ili hronični bol.

8. Kokristal za primenu prema patentnim zahtevima 6 ili 7, pri čemu je navedeni bol izabran iz glavobolje, zubobolje, menstrualnog bola, bola u mišićima, neuropatskog bola, bola povezanog sa neuroinflamacijom, dijabetičke neuropatije, bola usled kancera, osteoartritisa, bola u donjem delu leđa, išijatalgije, fibromijalgije, trigeminalne neuralgije; posthirurškog i postoperativnog bola, postherpetične neuralgije, reumatoidnog artritisa, ankilozirajućeg spondilitisa, smrznutog ramena, bola u fantomskim udovima ili bola izazvanog HIV-om.

9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kokristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

10. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, koja sadrži 0.5-60% masenih kokristala i 40-99.5% masenih jednog ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

11. Farmaceutska kompozicija prema patentnim zahtevima 9 ili 10, koja je oralna čvrsta kompozicija.

12. Postupak za pripremu kokristala prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, koji obuhvata:

a) suspendovanje gabapentina, ketoprofena i lizina u odgovarajućem rastvaraču odabranom između alkohola, gde je molarni odnos gabapentina prema ketoprofenu između 1:1 i 1.5:1, b) rastvaranje gabapentina, ketoprofena i lizina zagrevanjem suspenzije, opciono uz mešanje, dok se ne dobije bistar rastvor,

c) naknadno hlađenje rastvora, i

d) opciono dodavanje antirastvarača.

13. Postupak prema patentnom zahtevu 12, pri čemu su navedeni ketoprofen i lizin u koraku a) u obliku ketoprofen lizin soli ili kokristala.

14. Postupak prema patentnom zahtevu 12, pri čemu je navedeni ketoprofen slobodna kiselina i/ili je navedeni lizin u neutralnom obliku.

15. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 12 do 14, pri čemu je navedeni gabapentin u neutralnom obliku (cviterjonska interna so).

16. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 13 do 15 pri čemu je u koraku a) molarni odnos gabapentina prema ketoprofenu između 1:1 i 1.2:1, poželjnije je oko 1:1.