RS67366B1 - Polipeptidi faktora ix i metode njihove upotrebe - Google Patents

Polipeptidi faktora ix i metode njihove upotrebe

Info

Publication number
RS67366B1
RS67366B1 RS20251092A RSP20251092A RS67366B1 RS 67366 B1 RS67366 B1 RS 67366B1 RS 20251092 A RS20251092 A RS 20251092A RS P20251092 A RSP20251092 A RS P20251092A RS 67366 B1 RS67366 B1 RS 67366B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
dose
activity
rfixfc
fix
fixfc
Prior art date
Application number
RS20251092A
Other languages
English (en)
Inventor
Glenn Pierce
Samantha Truex
Robert T Peters
Haiyan Jiang
Original Assignee
Bioverativ Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45441870&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS67366(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bioverativ Therapeutics Inc filed Critical Bioverativ Therapeutics Inc
Publication of RS67366B1 publication Critical patent/RS67366B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

[0001] Opis
[0003] OSNOVA PRONALASKA
[0005] Oblast pronalaska
[0007] Predmetni pronalazak se generalno odnosi na oblast terapeutika za hemostatske poremećaje.
[0009] Dosadašnje stanje tehnike
[0011] Hemofilija B (takođe poznata kao Božićna bolest) je jedan od najčešćih naslednih poremećaja krvarenja u svetu. Ona dovodi do smanjene aktivnosti zgrušavanja krvi in vivo i in vitro i zahteva opsežno medicinsko praćenje tokom celog života obolelog pojedinca. U odsustvu intervencije, pogođena osoba će patiti od spontanog krvarenja u zglobovima, što stvara jak bol i onesposobljavajuću nepokretnost; krvarenje u mišiće dovodi do nakupljanja krvi u tim tkivima; spontano krvarenje u grlu i vratu može izazvati gušenje ako se ne leči odmah; prisutno je i renalno krvarenje; a često su i ozbiljna krvarenja nakon hirurških zahvata, manjih slučajnih povreda ili vađenja zuba.
[0013] Normalno zgrušavanje krvi in vivo minimalno zahteva serinske proteaze: faktore II (protrombin), VII, IX, X i XI (rastvorljive proteine plazme); kofaktore uključujući transmembranski protein tkivni faktor i proteine plazme faktore V i VIII; fibrinogen, transglutaminazu faktor XIII, fosfolipid (uključujući aktivirane trombocite) i kalcijum. Dodatni proteini, uključujući kalikrein, kininogen visoke molekulske mase i faktor XII, potrebni su za neke testove zgrušavanja in vitro, a mogu igrati ulogu in vivo u patološkim stanjima.
[0015] [0004] Kod hemofilije, zgrušavanje krvi je poremećeno nedostatkom određenih faktora zgrušavanja krvi u plazmi. Hemofilija B je uzrokovana nedostatkom faktora IX koji može proizaći ili iz smanjene sinteze proteina faktora IX ili iz defektnog molekula sa smanjenom aktivnošću. Lečenje hemofilije se sprovodi nadoknadom nedostajućeg faktora zgrušavanja primenom egzogenih koncentrata faktora visoko obogaćenih faktorom IX. Međutim, proizvodnja takvog koncentrata iz krvi opterećena je tehničkim poteškoćama, kako je opisano u daljem tekstu.
[0017] Prečišćavanje faktora IX iz plazme (faktor IX dobijen iz plazme; pdFIX) gotovo isključivo daje aktivni faktor IX. Međutim, takvo prečišćavanje faktora IX iz plazme je veoma teško jer je faktor IX prisutan u plazmi samo u niskoj koncentraciji (5 μg/ml).
[0018] Andersson, Thrombosis Research 7: 451459 (1975). Nadalje, prečišćavanje iz krvi zahteva uklanjanje ili inaktivaciju infektivnih agenasa kao što su HIV i HCV. Pored toga, pdFIX ima kratak poluživot i stoga zahteva često doziranje. Rekombinantni faktor IX (rFIX) je takođe dostupan, ali pati od istog kratkog poluživota i potrebe za čestim doziranjem (npr.2-3 puta nedeljno za profilaksu) kao i pdFIX. rFIX takođe ima nižu inkrementalnu iskoristivost (K vrednost) u poređenju sa pdFIX, što zahteva korišćenje viših doza rFIX od onih za pdFIX. Peters et al. (Blood 2010, Vol.115(10): 2057-2064) obelodanjuju FIX i FcRn vezujuće fuzione proteine i njihovu primenu kod miševa i pasa. Shapiro et al. (Haemophilia 2010, Vol.
[0019] 16(Suppl. 4): 30) izveštavaju o bezbednosti i produženoj aktivnosti pojedinačne doze rekombinantnog FIXFc primenjenog kod odraslih pacijenata sa hemofilijom B.
[0021] Smanjena smrtnost, prevencija oštećenja zglobova i poboljšan kvalitet života bili su važni uspesi zahvaljujući razvoju faktora IX dobijenog iz plazme i rekombinantnog faktora IX. Produžena zaštita od krvarenja predstavljala bi još jedan ključni napredak u lečenju pacijenata sa hemofilijom B. Međutim, do danas, nisu razvijeni proizvodi koji omogućavaju produženu zaštitu. Stoga i dalje postoji potreba za poboljšanim polipeptidima faktora IX koji su podnošljiviji i efikasniji od trenutnih terapija.
[0023] KRATAK SAŽETAK PRONALASKA
[0025] [0007] Predmetni pronalazak obezbeđuje primenu himeričnih polipeptida faktora IX za upotrebu u metodi profilaktičkog lečenja krvarenja ili epizoda krvarenja kod ljudskog subjekta sa hemofilijom B, kao što je definisano u pratećim patentnim zahtevima. Konkretno, predmetni pronalazak obezbeđuje himerični polipeptid faktora IX („FIX“) koji obuhvata ljudski FIX sa aminokiselinskom sekvencom identičnom aminokiselinama 1 do 415 sekvence SEQ ID NO: 2 i ljudski Fc kao partnera za vezivanje FcRn, za upotrebu u metodi profilaktičkog lečenja krvarenja ili epizoda krvarenja kod ljudskog subjekta sa hemofilijom B, koja obuhvata intravensko davanje ljudskom subjektu višestrukih doza od 50 IU/kg do 100 IU/kg himeričnog FIX polipeptida u intervalu doziranja od 9 dana do 18 dana. Dalji aspekti i otelotvorenja obelodanjeni su u pratećim patentnim zahtevima.
[0027] U nekim otelotvorenjima, nivo u plazmi himeričnog polipeptida dostiže prosečnu najnižu koncentraciju od najmanje oko 1 IU/dl nakon najmanje oko 6 dana kod najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90% ili oko 100% populacije pacijenata ili dostiže najnižu koncentraciju od najmanje oko 1, 2, 3, 4 ili 5 IU/dl nakon najmanje oko 6 dana kod subjekta. U nekim otelotvorenjima, nivo u plazmi navedenog himeričnog polipeptida dostiže prosečnu najnižu koncentraciju od oko 1-5 ili 1-3 IU/dl. Takva najniža koncentracija ili prosečna najniža koncentracija može biti dostignuta nakon oko 6, oko 7, oko 8, oko 9, oko 10, oko 11, oko 12, oko 13, oko 14, oko 15, oko 16, oko 17, oko 18, oko 19, oko 20, oko 21, oko 22, oko 23, oko 24, oko 25, oko 26, oko 27, oko 28, oko 29, oko 30, oko 31, oko 32, oko 33, oko 34, oko 35, oko 36, oko 37, oko 38, oko 39 ili oko 40 dana.
[0029] U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid ima znatno smanjenu fosforilaciju i sulfataciju u poređenju sa faktorom IX dobijenim iz plazme. U nekim otelotvorenjima himerični polipeptid je manje od 25% fosforilovan i manje od 25% sulfatovan, npr. manje od 25% potpuno fosforilovan i sulfatovan. U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid je manje od oko 10% fosforilovan i manje od oko 9% sulfatovan. U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid ima obrazac/raspodelu gama karboksilacije, sadržaj gama karboksilacije, obrazac/raspodelu sijalilacije i/ili sadržaj sijalilacije sličan (tj. unutar 10% od) ili isti kao kod himeričnog polipeptida faktora IX Fc u primerima 5-6.
[0031] U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid ima inkrementalnu iskoristivost veću od 0,7 ili veću od 0,75 μg/ml (antigen). U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid ima srednju inkrementalnu iskoristivost (K-vrednost) (aktivnost; primećena) od najmanje oko 0,8, najmanje oko 0,9 ili najmanje oko 1 IU/dL po IU/kg.
[0033] [0011] U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid pokazuje jedan ili više farmakokinetičkih parametara kod navedene populacije pacijenata ili kod navedenog subjekta, odabranih iz grupe koja se sastoji od:
[0034] (a) srednjeg klirensa (CL) (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 3,36 ± 0,93 mL/h/kg; srednjeg klirensa (CL) (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7 ili 3,72 mL/h/kg; srednjeg klirensa (CL) (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata koji je oko 2,5 puta niži od klirensa polipeptida koji obuhvata navedeni faktor IX bez navedenog FcRn BP; klirensa (CL) (aktivnost) kod navedenog subjekta od oko 1,84-4,58 mL/h/kg;
[0035] (b) srednjeg vremena zadržavanja (MRT) (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od najmanje oko 68,05 ± 11,16 sati; srednjeg MRT (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 ili 78 sati; srednjeg MRT (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata koji je oko 3 puta duži od srednjeg MRT polipeptida koji obuhvata navedeni faktor IX bez navedenog FcRn BP; srednjeg vremena zadržavanja (MRT) (aktivnost) kod navedenog subjekta od oko 53,1-85,8 sati; srednjeg vremena zadržavanja (MRT) (aktivnost) kod navedenog subjekta od najmanje oko 45, oko 50, oko 55, oko 60, oko 65, oko 70, oko 75, oko 80, oko 85 ili oko 90 sati;
[0036] (c) srednjeg t<1/2beta>(aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 52,5 ± 9,2 sata; srednjeg tt<1/2beta>(aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata koji je oko 47-60 sati, oko 47, oko 48, oko 49, oko 50, oko 51, oko 52, oko 53, oko 54, oko 55, oko 56, oko 57, oko 58, oko 59, oko 60 sati; srednjeg t<1/2beta>(aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata koji je oko 3 puta duži od srednjeg t<1/2beta>polipeptida koji obuhvata navedeni faktor IX bez navedenog FcRn BP; t<1/2beta>(aktivnost) kod navedenog subjekta od oko 40-67,4, oko 40, oko 45, oko 50, oko 55, oko 60, oko 65, oko 70 ili oko 75 sati;
[0037] (d) srednje inkrementalne iskoristivosti (K-vrednost) (aktivnost; primećena) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 0,93 ± 0,18 IU/dL po IU/kg; srednje inkrementalne iskoristivosti (K-vrednost) (aktivnost; primećena) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 0,85-1,0, oko 0,85, oko 0,86, oko 0,87, oko 0,88, oko 0,89, oko 0,90, oko 0,91, oko 0,92, oko 0,93, oko 0,94, oko 0,95, oko 0,96, oko 0,97, oko 0,98, oko 0,99, oko 1,0, oko 1,05, oko 1,10 ili oko 1,15 IU/dL po IU/kg; srednje inkrementalne iskoristivosti (K-vrednost) (aktivnost; primećena) u navedenoj populaciji pacijenata koja je oko 24% bolja od srednje inkrementalne iskoristivosti polipeptida koji obuhvata navedeni faktor IX bez navedenog FcRn BP; inkrementalne iskoristivosti (K-vrednost) (aktivnost; primećena) kod navedenog subjekta od oko 0,62-1,17 IU/dL po IU/kg;
[0038] (e) srednjeg Vss (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 226 ± 67,76 (korigovano na 69,8) mL/kg; srednjeg Vss (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 200-300, oko 200, oko 210, oko 220, oko 230, oko 240, oko 250, oko 260, oko 270, oko 280, oko 290 ili oko 300 mL/kg; Vss (aktivnost) kod navedenog subjekta od oko 145-365 mL/kg;
[0039] (f) srednjeg AUC/doza (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 32,44 ± 10,75 IU*h/dL po IU/kg; srednjeg AUC/doza (aktivnost) u navedenoj populaciji pacijenata od oko 26-40, oko 26, oko 27, oko 28, oko 29, oko 30, oko 31, oko 32, oko 33, oko 34, oko 35, oko 36, oko 37, oko 38, oko 39 ili oko 40 IU*h/dL po IU/kg; AUC/doza kod navedenog subjekta od oko 21,80-54,30 IU*h/dL po IU/kg.
[0041] U nekim otelotvorenjima, doza himeričnog polipeptida sadrži značajno niži (10-100 puta) nivo (0,01-0,001%) aktiviranog FIX (FIXa), nego trenutno komercijalizovani proizvodi faktora IX kao što su MONONINE<™>(pdFIX; CSL Behring) ili BENEFIX<™>(Wyeth; rFIX) (0,1%). Takav nivo može biti 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 puta niži od trenutno komercijalizovanih proizvoda, ili 0,01, 0,05, 0,0033, 0,0025, 0,002, 0,00167, 0,00142, 0,00125, 0,00111 ili 0,001%.
[0043] Doza može biti fiksna doza ili individualizovana doza.
[0045] U nekim otelotvorenjima, himerični polipeptid se primenjuje intravenski ili subkutano.
[0047] Himerični polipeptid može biti u obliku hibrida koji obuhvata drugi polipeptid u vezi sa navedenim himeričnim polipeptidom, pri čemu navedeni drugi polipeptid obuhvata ili se suštinski sastoji od FcRn BP, npr. Fc. Himerični polipeptid može biti najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% identičan sekvenci faktora IX, Fc sekvenci, ili i sekvenci faktora IX i Fc sekvenci u tabelama 2A (SEQ ID NO:2) i/ili 2B (SEQ ID NO:4), sa ili bez signalne sekvence i propeptida.
[0049] Himerični polipeptid ili hibrid se može primeniti kao deo farmaceutske kompozicije koja obuhvata najmanje jedan ekscipijens.
[0050] KRATAK OPIS CRTEŽA/SLIKA
[0052]
[0054] SL. 1. Šematski prikaz jednog tipa himeričnog polipeptida faktora IX, hibrida faktor IX-Fc.
[0056] SL. 2. Grupni prosek koncentracije FIXFc u odnosu na vremenske profile; poređenje nominalne doze.
[0058] SL. 3. Grupni prosek aktivnosti FIXFc u odnosu na vremenske profile; poređenje nominalne doze.
[0060] SL. 4. Stablo odlučivanja za oduzimanje početne vrednosti.
[0062] SL. 5. Dozno proporcionalno povećanje Cmax i AUC za aktivnost FIX.
[0064] SL. 6. Procena terapijskog trajanja rFIXFc pri 50 IU/kg (A) i 100 IU/kg (B).
[0066] SL. 7. Dozno proporcionalno povećanje Cmax i AUC za FIX antigen.
[0068] SL. 8. Farmakokinetičke procene za rFIXFc antigen pri nominalnim dozama od 50 (A) i 100 (B) IU/kg.
[0070] SL. 9. Odlična korelacija između nivoa aktivnosti rFIXFc i antigena. Napomena da je usled ponovnog izračunavanja PK aktivnosti, kao što je objašnjeno u primeru 11, R<2>=0,946.
[0072] SL. 10. RFIX-FC Struktura domena rFIX-Fc i post-translacione modifikacije. PRO: propeptid odcepljen enzimom za obradu. GLA: sadrži 12 γ-karboksilovanih glutaminskih kiselina (Gla) rezidua. ACT PEP: aktivacioni peptid odcepljen radi dobijanja aktivne proteaze. Ostale modifikacije: N- i O-glikozilacija, Asp(64) β-hidroksilacija, tirozin sulfatacija, serin fosforilacija.
[0073] SL. 11. SDS-PAGE gel intermedijera prečišćavanja i prečišćenog FIXFc monomera. Uzorci iz različitih koraka prečišćavanja FIXFc analizirani su neredukujućom SDS-PAGE metodom. Kolona 1: SeeBlue Plus markeri molekulske mase (Invitrogen). Kolona 2: prazna kolona. Kolona 3: Protein A punjenje. Kolona 4: Protein A eluat. Kolona 5: Fractogel DEAE eluat. Kolona 6: Q Seph FF eluat. Kolona 7: konačni FIXFc u masi. Kolona 8: prazna kolona.
[0074] Kolona 9: konačni redukovani FIXFc u masi.
[0076] SL. 12. Funkcionalna aktivnost FIXFc kod miševa sa nedostatkom FIX-a. Funkcionalna aktivnost FIXFc kod miševa sa nedostatkom FIX-a.
[0077] Miševima sa nedostatkom FIX-a intravenozno je data doza od 219 IU/kg FIXFc (3 ili 4 po grupi, 6 grupa, n=23) ili 200 IU/kg rFIX (3 ili 4 po grupi, 5 grupa, n=23) u vremenu t=0. Uzorci krvi su sakupljeni u različitim vremenima nakon doziranja (0,25 sata do 96 sati) i analizirani su na aktivnost zgrušavanja pomoću testa aktivnosti FIX. * Aktivnost rFIX-a je nedetektabilna kod svih miševa u vremenskim tačkama kasnijim od 48 sati nakon doziranja.
[0079] SL. 13. Vreme zgrušavanja pune krvi FIXFc naspram rekombinantnog faktora IX kod miševa sa nedostatkom FIX-a. Miševima sa nedostatkom FIX-a (6 po grupi) intravenozno je data doza od 50 IU/kg FIXFc ili 50 IU/kg rFIX. Uzorci krvi su sakupljeni pre doziranja i u različitim vremenima nakon doziranja. Uzorci krvi su inkubirani na 37°C i vizuelno su pregledani na prisustvo ugruška jednom u minuti. Zabeleženo je vreme potrebno za formiranje ugruška i, kada se aktivnost zgrušavanja vratila na početnu vrednost (tj. nije došlo do formiranja ugruška), dodatni uzorci nisu sakupljani (uzorci sakupljeni 15 minuta do 144 sata za FIXFc ili 15 minuta do 72 sata za rFIX).
[0081] SL. 14. Farmakodinamika FIXFc kod miševa sa nedostatkom FIX-a. Miševima sa nedostatkom FIX-a data je doza od 219 IU/kg FIXFc (5 po grupi, 6 grupa, n=30) ili
[0082] 200 IU/kg rFIX (4 ili 5 po grupi, 6 grupa, n=28) dana 0,4 i 8. Uzorci plazme sakupljeni su punkcijom srca 15 minuta i 96 sati nakon svake doze, a aktivnost zgrušavanja je izmerena pomoću testa aktivnosti FIX. Plazma je takođe sakupljena puštanjem krvi iz repa 8, 24, 48 i 72 sata nakon svake doze. Nivoi FIXFc mereni su u svim uzorcima pomoću ELISA testa specifičnog za FIXFc. (A) Izmerena naspram Izračunata aktivnost. Aktivnost zgrušavanja za FIXFc je izmerena pomoću testa aktivnosti FIX 15 minuta i 96 sati nakon tri doze. In vitro aktivnost zgrušavanja za FIXFc je utvrđena kao 43,8 ± 5,4 IU/mg. Na osnovu ove aktivnosti (IU/mg) i izmerenih nivoa proteina, izračunat je nivo aktivnosti zgrušavanja plazme za vremenske tačke od 15 minuta, 8, 24, 48, 72 i 96 sati nakon svake doze. (B) Kod miševa sa nedostatkom FIX-a tretiranih do tri doze rFIX od 200 IU/kg, nivoi FIX-a su mereni pomoću ELISA testa specifičnog za FIX. Koristeći izmerene specifične aktivnosti FIXFc i rFIX, bilo je moguće uporediti izračunatu aktivnost zgrušavanja za sve uzorke analizirane ELISA testom.
[0084] SL. 15. Farmakokinetika i farmakodinamika FIXFc kod pasa sa nedostatkom FIX-a. Dva psa sa hemofilijom B intravenozno su primila infuziju FIXFc od 140 IU/kg. Uzorci krvi su sakupljeni na 5, 15 i 30 minuta, i na 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144 i 168 sati. (A) Sendvič ELISA test, koristeći FIX antitelo za hvatanje i Fc-HRP detekciono antitelo, korišćen je za merenje koncentracije intaktnog FIXFc u uzorcima plazme hemifiličnih B pasa. (B) Aktivnost zgrušavanja FIX-a je izmerena za sve vremenske tačke u odnosu na standardnu krivu generisanu sa FIXFc. (C) Krv sakupljena od životinja je odmah analizirana na vreme zgrušavanja pune krvi. Uzorci krvi su inkubirani na 28°C i vizuelno su pregledani na prisustvo ugruška jednom u minutu, a zabeleženo je vreme u kojem se ugrušak formirao.
[0086] SL. 16. Farmakokinetika FIXFc kod makaki majmuna. Majmunima je primenjena jedna doza (0,5, 2 i 10 mg/kg, što odgovara približno 25, 100 ili 500 IU/kg) FIXFc (respektivno, n=2, 3 i 3). Uzorci krvi su sakupljeni na 0,25, 0,5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 i 168 sati post-doza i plazma je pripremljena za analizu koncentracije proteina pomoću ELISA testa specifičnog za FIXFc.
[0088] SL. 17. rFIXFc i BENEFIX<™>pokazuju uporedivu aktivnost i odgovor na dozu u punoj krvi miševa sa HemB. (A) ROTEM<®>Parametri. rFIX ili BENEFIX<™>su dodati krvi miševa sa HemB i parametri zgrušavanja su izmereni pomoću ROTEM<®>. (B)-(D) Odgovor na dozu, merenje (B) CT, (C) CFT i (D) Alfa-ugla.
[0090] SL. 18. Evaluacija akutne efikasnosti u modelu krvarenja odsečenog repa kod miševa sa hemofilijom.
[0091] SL. 19. (A) Gubitak krvi nakon odsecanja repa kod pojedinačnih miševa sa HemB tretiranih sa rFIXFc ili BENEFIX<™>. (B) Odgovor na dozu rFIXFc i BENEFIX<™>u medijani gubitka krvi nakon odsecanja repa kod miševa sa HemB.
[0093] SL. 20. Presecanje vene repa (TVT) model krvarenja kod miševa sa HemB: model venskog krvarenja karakterističnog za pacijente sa teškom hemofilijom.
[0095] SL. 21. Produžena aktivnost rFIXFc u odnosu na BENEFIX<™>kod tretiranih miševa sa HemB merena ROTEM<®>testom pune krvi. (A) CT, (B) CFT, (C) Alfa-ugao i (D) Parcijalna korelacija između aktivnosti zgrušavanja pune krvi (CT) pomoću ROTEM<®>naspram aktivnosti plazme pomoću aPTT.
[0097] SL. 22. Produžena efikasnost FIXFc u odnosu na BENEFIX<™>u modelu krvarenja presecanja vene repa (TVT) kod miševa sa HemB. (A) Preživljavanje: Stopa preživljavanja bila je uporediva kod miševa koji su primili BENEFIX<™>24 sata pre TVT kao i kod miševa koji su primili rFIXFc 72 sata pre TVT, i (B) Ponovno krvarenje: Stopa krvarenja bila je uporediva kod miševa koji su primili BENEFIX<™>24 sata pre TVT kao i kod miševa koji su primili rFIXFc 72 sata pre TVT.
[0099] SL. 23. Korelacija između inkrementalne iskoristivosti aktivnosti rFIXFc naspram telesne težine kod 12 subjekata koji su primili jednu dozu rFIXFc od 12,5 do 100 IU/kg.
[0101] SL. 24. Monte Karlo simulacija korišćenjem strukturnog PK modela aktivnosti rFIXFc za konstruisanje profila aktivnost-vreme radi postizanja najniže koncentracije od 1 IU/dL iznad početne vrednosti nakon režima doziranja jednom nedeljno (A), svakih 10 dana (B) ili svake dve nedelje (C). Medijana populacionih PK parametara i relevantne varijabilnosti među subjektima i unutar subjekta usvojeni su iz kliničke studije faze 1/2a. Simulirano je 1000 subjekata po režimu doziranja sa 14 do 16 tačaka uzorkovanja za svakog subjekta, a srednja vrednost ± SD profila aktivnost-vreme od 1000 subjekata je grafički konstruisana za različite režime doziranja.
[0102] SL. 25. Monte Karlo simulacija za doze rFIXFc radi postizanja najniže koncentracije od 1 IU/dL (1%), na osnovu ponovo izračunatih farmakokinetičkih podataka. (A) Jednom nedeljno, (B) svakih 10 dana i (C) svake dve nedelje.
[0104] DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0106] Predmetni pronalazak obezbeđuje himerični polipeptid faktora IX za upotrebu, kao što je definisano u pratećim patentnim zahtevima. Takođe je obelodanjena, ali ne čini deo pronalaska, metoda lečenja deficita faktora IX, npr. hemofilije B, faktorom IX, korišćenjem dužeg intervala doziranja i/ili poboljšanih farmakokinetičkih parametara nego što je to moguće sa trenutno poznatim proizvodima faktora IX.
[0108] „Primena“, kako se ovde koristi, znači davanje farmaceutski prihvatljivog polipeptida faktora IX pronalaska subjektu, putem farmaceutski prihvatljivog puta. Preferirani putevi primene su intravenski, npr. intravenska injekcija i intravenska infuzija, npr. putem centralnog venskog pristupa. Dodatni putevi primene uključuju supkutanu, intramuskularnu, oralnu, nazalnu i pulmonalnu primenu, s tim da je supkutana primena preferirana. Himerični polipeptidi faktora IX i hibridni proteini se mogu primeniti kao deo farmaceutske kompozicije koja obuhvata najmanje jedan ekscipijens. Prednosti predmetnog pronalaska uključuju: poboljšanu usklađenost sa režimom; smanjeno probijajuće krvarenje; povećanu zaštitu zglobova od krvarenja; prevenciju oštećenja zglobova; smanjeni morbiditet; smanjeni mortalitet; produženu zaštitu od krvarenja; smanjene trombotičke događaje; i poboljšan kvalitet života.
[0110] [0020] „Himerični polipeptid“, kako se ovde koristi, znači polipeptid koji unutar sebe uključuje najmanje dva polipeptida (ili delova istih, kao što su podsekvence ili peptidi) iz različitih izvora. Himerični polipeptidi mogu uključivati dva, tri, četiri, pet, šest, sedam ili više polipeptida ili delova istih iz različitih izvora, kao što su različiti geni, različite cDNK, ili različite životinjske ili druge vrste. Himerični polipeptidi mogu uključivati jedan ili više linkera koji spajaju različite polipeptide ili delove istih. Dakle, polipeptidi ili delovi istih mogu biti spojeni direktno ili indirektno, putem linkera, ili oba, unutar jednog himeričnog polipeptida. Himerični polipeptidi mogu uključivati dodatne peptide kao što su signalne sekvence i sekvence kao što su 6His i FLAG koje pomažu u prečišćavanju ili detekciji proteina. Pored toga, himerični polipeptidi mogu imati dodatke aminokiselina ili peptida na N- i/ili C-krajevima. Primeri himeričnih polipeptida pronalaska su himerični polipeptidi faktor IX-FcRn BP, npr. himerični polipeptidi faktor IX-Fc, kao što je FIXFc na slici 1, SEQ ID NO:2 (tabela 2) i primerima 1-4, sa ili bez svoje signalne sekvence i propeptida. Drugi primeri himeričnih polipeptida pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, himerične polipeptide faktor IX-XTEN. Faktor IX može biti fuzionisan na N-kraj ili C-kraj XTEN polipeptida.
[0112] Himerični polipeptid može obuhvatati sekvencu najmanje 90% ili najmanje 95% ili 100% identičnu sekvenci aminokiselina faktora IX i FcRn BP, npr. sekvenci aminokiselina Fc prikazanoj u tabeli 2A bez signalne sekvence i propeptidne sekvence (aminokiseline 1 do 642 SEQ ID NO:2), ili alternativno, sa propeptidnom sekvencom, ili alternativno sa signalnom sekvencom i propeptidnom sekvencom.
[0114] „Kultura“, „kultivisati“ i „kultivisanje“, kako se ovde koristi, znači inkubiranje ćelija pod in vitro uslovima koji omogućavaju rast ili deobu ćelija ili održavanje ćelija u živom stanju. „Kultivisane ćelije“, kako se ovde koristi, znači ćelije koje se propagiraju in vitro.
[0116] „Faktor IX“ i „FIX“, kako se ovde koristi, znači funkcionalni polipeptid faktora IX u svojoj normalnoj ulozi u koagulaciji, osim ako nije drugačije naznačeno. Dakle, termin faktor IX uključuje varijantne polipeptide koji su funkcionalni. Sekvence pune dužine polipeptida i polinukleotida faktora IX su poznate, kao i mnoge funkcionalne varijante, npr. fragmenti, mutanti i modifikovane verzije. Faktor IX je poželjno napravljen rekombinantnim putem („rekombinantni faktor IX“ ili „rFIX“), tj. nije prirodno prisutan niti je dobijen iz plazme. Faktor IX u himeričnom proteinu prema predmetnom pronalasku ima aminokiselinsku sekvencu identičnu aminokiselinama 1 do 415 sekvence SEQ ID NO:2.
[0118] Poznat je veliki broj funkcionalnih varijanti faktora IX. Međunarodna publikacija broj WO 02/040544 A3, obelodanjuje mutante koji ispoljavaju povećanu otpornost na inhibiciju heparinom na strani 4, redovi 9-30 i strani 15, redovi 6-31. Međunarodna publikacija broj WO 03/020764 A2, obelodanjuje mutante faktora IX sa smanjenom T ćelijskom imunogenošću u tabelama 2 i 3 (na stranama 14-24), i na strani 12, redovi 1-27.
[0119] Međunarodna publikacija broj WO 2007/149406 A2, obelodanjuje funkcionalne mutirane molekule faktora IX koje ispoljavaju povećanu stabilnost proteina, povećani poluživot in vivo i in vitro, i povećanu otpornost na proteaze na strani 4, red 1 do strani 19, red 11.
[0120] WO 2007/149406 A2 takođe obelodanjuje himerične i druge varijantne molekule faktora IX na strani 19, red 12 do strani 20, red 9. Međunarodna publikacija broj WO 08/118507 A2, obelodanjuje mutante faktora IX koje ispoljavaju povećanu aktivnost zgrušavanja na strani 5, red 14 do strani 6, red 5. Međunarodna publikacija broj WO 09/051717 A2, obelodanjuje mutante faktora IX koji imaju povećan broj N-vezanih i/ili O-vezanih glikozilacionih mesta, što rezultira povećanim poluživotom i/ili iskoristivošću na strani 9, red 11 do strani 20, red 2. Međunarodna publikacija broj WO 09/137254 A2, takođe obelodanjuje mutante faktora IX sa povećanim brojem glikozilacionih mesta na strani 2, paragraf [006] do strani 5, paragraf [011] i strani 16, paragraf [044] do strani 24, paragraf [057]. Međunarodna publikacija broj WO 09/130198 A2, obelodanjuje funkcionalne mutirane molekule faktora IX koje imaju povećan broj glikozilacionih mesta, što rezultira povećanim poluživotom, na strani 4, red 26 do strani 12, red 6. Međunarodna publikacija broj WO 09/140015 A2, obelodanjuje funkcionalne mutante faktora IX koje imaju povećan broj Cys rezidua, koji se mogu koristiti za konjugaciju polimera (npr. PEG), na strani 11, paragraf [0043] do strani 13, paragraf [0053].
[0122] Pored toga, stotine nefunkcionalnih mutacija u faktoru IX identifikovane su kod pacijenata sa hemofilijom, od kojih su mnoge obelodanjene u tabeli 1, na stranama 11-14 Međunarodne publikacije broj WO 09/137254 A2. Takve nefunkcionalne mutacije nisu uključene u pronalazak, ali pružaju dodatne smernice o tome koje mutacije je verovatnije ili manje verovatno da rezultiraju funkcionalnim polipeptidom faktora IX.
[0124] Faktor IX (ili deo faktora IX himeričnog polipeptida) ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u tabeli 2A bez signalne sekvence i propeptidne sekvence (aminokiseline 1 do 415 SEQ ID NO:2).
[0126] [0027] Aktivnost koagulacije faktora IX izražava se kao Internacionalna jedinica (IU). Jedna IU aktivnosti faktora IX odgovara približno količini faktora IX u jednom mililitru normalne ljudske plazme. Dostupno je nekoliko testova za merenje aktivnosti faktora IX, uključujući test zgrušavanja u jednoj fazi (aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme; aPTT), vreme generisanja trombina (TGA) i rotacionu tromboelastometriju (ROTEM<®>). Videti, npr., primer 3.
[0128] „FcRn vezujući partner“, ili „FcRn BP“, kako se ovde koristi, himeričnog polipeptida faktora IX je ljudski Fc. FcRn vezujući partner može biti specifično vezan za FcRn receptor uz posledičan aktivni transport FcRn vezujućeg partnera putem FcRn receptora. Region Fc dela IgG koji se vezuje za FcRn receptor opisan je na osnovu kristalografije X-zraka (Burmeister et al.1994, Nature 372:379). Glavno kontaktno područje Fc sa FcRn receptorom je blizu spoja CH2 i CH3 domena. Fc-FcRn kontakti su svi unutar jednog Ig teškog lanca. Glavna kontaktna mesta uključuju aminokiselinske rezidue 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 i 314 CH2 domena i aminokiselinske rezidue 385-387, 428 i 433-436 CH3 domena. Reference na numerisanje aminokiselina imunoglobulina ili fragmenata imunoglobulina, ili regiona, zasnivaju se na Kabat et al.1991, „Sequences of Proteins of Immunological Interest“, U. S. Department of Public Health, Bethesda; MD. (FcRn receptor je izolovan iz nekoliko vrsta sisara uključujući ljude. Sekvence ljudskog FcRn, pacovskog FcRn, i mišjeg FcRn su poznate (Story et al.1994, J. Exp. Med.180: 2377).) .
[0130] FcRn BP (ili FcRn BP deo himeričnog polipeptida) može sadržati jednu ili više mutacija i kombinacije mutacija.
[0132] FcRn BP (ili FcRn BP deo himeričnog polipeptida) može sadržati mutacije koje obezbeđuju povećan poluživot, kao što su M252Y, S254T, T256E, i kombinacije istih, kao što je obelodanjeno u Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46:1750 (2009); H433K, N434F, i kombinacije istih, kao što je obelodanjeno u Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23:1283 (2005); mutanti obelodanjeni na stranama 1-2, paragraf [0012], i primeri 9 i 10
[0133] U.S. 2009/0264627 A1; i mutanti obelodanjeni na strani 2, paragrafi [0014] do [0021] U.S. 20090163699 A1.
[0135] [0031] FcRn BP (ili FcRn BP deo himeričnog polipeptida) takođe može uključivati sledeće mutacije: Fc region IgG-a može biti modifikovan prema dobro prepoznatim procedurama, kao što je mutagenaza usmerena na mesto i slično, radi dobijanja modifikovanih IgG ili Fc fragmenata ili delova istih koji će biti vezani za FcRn. Takve modifikacije uključuju modifikacije udaljene od kontaktnih mesta FcRn, kao i modifikacije unutar kontaktnih mesta koje zadržavaju ili čak poboljšavaju vezivanje za FcRn. Na primer, sledeći pojedinačni aminokiselinski rezidui u ljudskom IgG1 Fc (Fcγ1) mogu biti supstituisani bez značajnog gubitka afiniteta vezivanja Fc za FcRn: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A i K447A, gde na primer P238A predstavlja prolin divljeg tipa supstituisan alaninom na poziciji 238. Pored alanina, druge aminokiseline se mogu supstituisati za aminokiseline divljeg tipa na gore navedenim pozicijama. Mutacije se mogu uneti pojedinačno u Fc, dajući više od stotinu FcRn vezujućih partnera koji se razlikuju od nativnog Fc. Dodatno, kombinacije dve, tri ili više ovih pojedinačnih mutacija mogu se uneti zajedno, dajući još stotine FcRn vezujućih partnera. Određene od ovih mutacija mogu dati novu funkcionalnost FcRn vezujućem partneru. Na primer, N297A uklanja visoko konzervirano N-glikozilaciono mesto. Efekat ove mutacije je da smanji imunogenost, čime se poboljšava cirkulišući poluživot FcRn vezujućeg partnera, i da učini FcRn vezujući partner nesposobnim za vezivanje za FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, i FcγRIIIA, bez ugrožavanja afiniteta za FcRn (Routledge et al.1995, Transplantation 60:847; Friend et al.1999, Transplantation 68:1632; Shields et al.1995, J. Biol. Chem.276:6591). Dodatno, čini se da najmanje tri ljudska Fc gama receptora prepoznaju mesto vezivanja na IgG unutar donjeg regiona šarke, generalno aminokiseline 234-237. Stoga, drugi primer nove funkcionalnosti i potencijalno smanjene imunogenosti može proizaći iz mutacija ovog regiona, kao na primer zamenom aminokiselina 233-236 ljudskog IgG1 „ELLG“ odgovarajućom sekvencom iz IgG2 „PVA“ (sa brisanjem jedne aminokiseline). Pokazano je da se FcγRI, FcγRII, i FcγRIII koji posreduju različitim efektorskim funkcijama neće vezati za IgG1 kada su takve mutacije unete (Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77; and Armour et al.1999, Eur. J. Immunol.29:2613). Kao dalji primer nove funkcionalnosti koja proizlazi iz gore opisanih mutacija, afinitet za FcRn može biti povećan iznad afiniteta divljeg tipa u nekim slučajevima. Ovaj povećani afinitet može odražavati povećanu stopu „uključivanja“, smanjenu stopu „isključivanja“ ili i povećanu stopu „uključivanja“ i smanjenu stopu „isključivanja“. Smatra se da mutacije koje daju povećan afinitet za FcRn uključuju T256A, T307A, E380A, i N434A (Shields et al.2001, J. Biol. Chem. 276:6591).
[0137] „Hibridni“ polipeptidi i proteini, kako se ovde koriste, znače kombinaciju himeričnog polipeptida sa drugim polipeptidom. Himerični polipeptid i drugi polipeptid u hibridu mogu biti povezani jedan s drugim putem nekovalentnih interakcija protein-protein, kao što su interakcije naboj-naboj ili hidrofobne interakcije. Himerični polipeptid i drugi polipeptid u hibridu mogu biti povezani jedan s drugim putem kovalentne veze(a), kao što su disulfidne veze. Himerični peptid i drugi peptid mogu biti povezani jedan s drugim putem više od jednog tipa veze, kao što su nekovalentne i disulfidne veze. Hibridi su opisani u
[0138] WO 2004/101740, WO2005/001025, američkom patentu br.7,404,956, američkom patentu br. 7,348,004, i WO 2006/074199. Drugi polipeptid je opcionalno drugi primerak istog himeričnog polipeptida ili može biti neidentični himerični polipeptid. Drugi polipeptid je opcionalno polipeptid koji obuhvata FcRn BP, npr. Fc. Himerični polipeptid je himerični polipeptid faktor IX-Fc, a opcionalni drugi polipeptid se suštinski sastoji od Fc. Videti, npr., sliku 1, primere 1-3, i tabelu 2 (SEQ ID NO:2 i 4). Videti, npr., US 7404956.
[0140] Drugi polipeptid u hibridu može obuhvatati ili se suštinski sastojati od sekvence najmanje 90% ili najmanje 95% ili 100% identične sekvenci aminokiselina prikazanoj u tabeli 2B bez signalne sekvence (aminokiseline 1 do 227 SEQ ID NO:4), ili alternativno, sa signalnom sekvencom.
[0142] Polipeptid za upotrebu predmetnog pronalaska takođe uključuje faktor IX fuzionisan sa jednim ili više XTEN polipeptida. Schellenburger et al., Nat. Biotech. 27:1186-90 (2009). Faktor IX može biti fuzionisan na N-terminalni kraj XTEN polipeptida ili na C-terminalni kraj XTEN polipeptida. XTEN polipeptidi uključuju, ali nisu ograničeni na, one obelodanjene u WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682, i
[0143] US 2009/0092582.
[0145] „Interval doziranja“, kako se ovde koristi, znači vremenski period koji protekne između višestrukih doza koje se primenjuju subjektu. Interval doziranja himeričnog FIXFcRn BP, npr. himeričnog FIX-Fc, može biti najmanje oko jedan i po do osam puta duži od intervala doziranja koji je potreban za ekvivalentnu količinu (u IU/kg) navedenog faktora IX bez FcRn BP, npr. Fc dela (tj., polipeptida koji se sastoji od navedenog FIX-a). Interval doziranja prilikom primene, npr. himeričnog polipeptida faktor IX-Fc (ili hibrida) pronalaska, može biti najmanje oko jedan i po puta duži od intervala doziranja potrebnog za ekvivalentnu količinu navedenog faktora IX bez FcRn BP, npr. Fc, dela (tj., polipeptida koji se sastoji od navedenog faktora IX). Interval doziranja može biti najmanje oko jedan i po do osam puta duži od intervala doziranja potrebnog za ekvivalentnu količinu navedenog faktora IX bez, npr., Fc dela (ili polipeptida koji se sastoji od navedenog faktora IX).
[0147] Interval doziranja je 9-18 dana, npr. oko 9-17, oko 9-16, oko 9-15, oko 9-14, oko 9-13, oko 9-12, oko 9-11, oko 9-10 dana, oko 10-18, oko 11-18, oko 12-18, oko 13-18, oko 14-18, oko 15-18, oko 16-18, oko 17-18 dana, oko 10-11, oko 11-12, oko 12-13, oko 13-14, oko 14-15, oko 15-16, i oko 16-17 dana, oko 9, oko 10, oko 11, oko 12, oko 13, oko 14, oko 15, oko 16, oko 17, ili oko 18 dana. Interval doziranja može biti oko 10-14 dana. Interval doziranja može biti oko svake dve nedelje ili dva puta mesečno. Interval doziranja može biti fiksni interval, npr.10-13 dana za 50-100 IU/kg. Fiksni interval i doza su određeni tako da kombinacija intervala i doze rezultira najnižom koncentracijom od najmanje oko 1-5 ili najmanje oko 1-3, ili najmanje oko 1, najmanje oko 2, ili najmanje oko 3 IU/dl aktivnosti FIX u populaciji subjekata ili kod pojedinačnog subjekta. Fiksni interval doziranja takođe može biti 10-14 dana za 50-100 IU/kg. Fiksni interval doziranja takođe može biti 15 dana za 50-150 IU/kg.
[0149] Interval doziranja može, alternativno, biti individualizovani interval koji je određen za svakog subjekta na osnovu farmakokinetičkih podataka ili drugih informacija o tom subjektu. Kombinacija individualizovane doze/intervala doziranja može biti ista kao i za režime fiksnog intervala u prethodnim paragrafima, ili se može razlikovati, kao što je ilustrovano u primerima. Režim može u početku biti sa fiksnim intervalom doziranja, a zatim se može promeniti na individualizovani interval doziranja.
[0151] [0038] „Tretman na zahtev“, kako se ovde koristi, znači tretman koji je namenjen da se odvija u kratkom vremenskom periodu i predstavlja odgovor na postojeće stanje, kao što je epizoda krvarenja, ili percipirana kratkoročna potreba, kao što je planirana operacija. Stanija koja mogu zahtevati tretman na zahtev uključuju epizodu krvarenja, hemartrozu, krvarenje mišića, oralno krvarenje, hemoragiju, hemoragiju u mišiće, oralnu hemoragiju, traumu, traumu glave, gastrointestinalno krvarenje, intrakranijalnu hemoragiju, intraabdominalnu hemoragiju, intratorakalnu hemoragiju, prelom kosti, krvarenje centralnog nervnog sistema, krvarenje u retrofaringealnom prostoru, krvarenje u retroperitonealnom prostoru, ili krvarenje u iliopsoas omotaču. Uključene su i druge epizode krvarenja osim navedenih. Subjektu može biti potrebna hirurška profilaksa, perioperativno zbrinjavanje, ili tretman za operaciju. Takve operacije uključuju malu operaciju, veliku operaciju, vađenje zuba, tonzilektomiju, druge dentalne/torakofacijalne operacije, ingvinalnu hernijotomiju, sinovektomiju, totalnu zamenu kolena, drugu zamenu zglobova, kraniotomiju, osteosintezu, traumatsku hirurgiju, intrakranijalnu hirurgiju, intraabdominalnu hirurgiju, intratorakalnu hirurgiju. Uključene su i druge operacije osim navedenih. Dodatna stanja koja mogu zahtevati tretman na zahtev uključuju ona navedena u tabeli 26.
[0153] Dodatna stanja koja mogu zahtevati tretman na zahtev uključuju malu hemoragiju, hemartroze, površinsku mišićnu hemoragiju, meko tkivo hemoragiju, umerenu hemoragiju, intramuskularnu hemoragiju ili hemoragiju mekog tkiva sa disekcijom, hemoragiju sluzokože, hematuriju, veliku hemoragiju, hemoragiju farinksa, hemoragiju retrofarinksa, hemoragiju retroperitoneuma, krvarenje centralnog nervnog sistema, modrice, posekotine, ogrebotine, krvarenje zglobova, krvarenje iz nosa, krvarenje iz usta, krvarenje desni, intrakranijalno krvarenje, intraperitonealno krvarenje, malo spontano krvarenje, krvarenje nakon velike traume, umerene modrice na koži, ili spontano krvarenje u zglobove, mišiće, unutrašnje organe ili mozak. Dodatni razlozi za tretman na zahtev uključuju potrebu za perioperativnim zbrinjavanjem za operaciju ili vađenje zuba, veliku operaciju, opsežnu oralnu hirurgiju, urološku hirurgiju, hirurgiju hernije, ortopedsku hirurgiju kao što je zamena kolena, kuka, ili drugog velikog zgloba.
[0155] Skraćenice:
[0157]
[0159] AUC<INF>
[0160] Površina ispod krive koncentracija-vreme od nule do beskonačnosti
[0161] AUC<α>
[0162] Površina ispod krive koncentracija-vreme tokom faze distribucije
[0164] AUC<β>
[0165] Površina ispod krive koncentracija-vreme tokom faze eliminacije
[0167] Alpha HL
[0168] Poluživot faze distribucije
[0170] Beta HL
[0171] Poluživot faze eliminacije; takođe se naziva t<1/2>
[0173] C168
[0174] Procenjena aktivnost FIXFc iznad početne vrednosti na približno 168 sati nakon doze
[0176] C<max>
[0177] Maksimalna koncentracija, koja se javlja na T<max>
[0179] CV%
[0180] Procenat koeficijenta varijacije
[0182] Cl
[0183] Klirens
[0185] IVR
[0186] in vivo iskoristivost (%)
[0188] K-Value
[0189] Inkrementalna iskoristivost
[0191] MRT
[0192] Srednje vreme zadržavanja
[0193] Broj
[0195] NC
[0196] Nije izračunljivo
[0198] NR
[0199] Nije prijavljeno
[0201] SD
[0202] Standardna devijacija
[0204] SE
[0205] Standardna greška
[0207] TBLP1
[0208] Modelom predviđeno vreme nakon doze kada se aktivnost FIXFc smanjila na približno 1 IU/dL iznad početne vrednosti
[0210] TBLP3
[0211] Modelom predviđeno vreme nakon doze kada se aktivnost FIXFc smanjila na približno 3 IU/dL iznad početne vrednosti
[0213] TBLP5
[0214] Modelom predviđeno vreme nakon doze kada se aktivnost FIXFc smanjila na približno 5 IU/dL iznad početne vrednosti
[0216] V<SS>
[0217] Volumen distribucije u stanju ravnoteže
[0219] V<1>
[0220] Volumen distribucije centralnog kompartmenta
[0221] Farmakokinetički (PK) parametri uključuju gore navedene termine i sledeće termine, koji imaju svoje uobičajeno značenje u oblasti, osim ako nije drugačije naznačeno. Neki od termina su detaljnije objašnjeni u primerima. PK parametri mogu biti zasnovani na nivou FIX antigena (često je u zagradi naznačeno kao „antigen“) ili na nivou aktivnosti FIX (često je u zagradi naznačeno kao „aktivnost“). U literaturi se PK parametri često zasnivaju na nivou aktivnosti FIX zbog prisustva endogenog, neaktivnog FIX-a u plazmi nekih pacijenata, što ometa mogućnost merenja primenjenog (tj., egzogenog) FIX-a pomoću antitela protiv FIX. Međutim, kada se FIX primenjuje kao deo fuzionog proteina koji sadrži heterologni polipeptid kao što je FcRn BP, primenjeni (tj., egzogeni) FIX antigen može biti precizno izmeren pomoću antitela na heterologni polipeptid. Pored toga, određeni PK parametri mogu biti zasnovani na podacima predviđenim modelom (često je u zagradi naznačeno kao „predviđeno modelom“) ili na primećenim podacima (često je u zagradi naznačeno kao „primećeno“), i poželjno je da budu zasnovani na primećenim podacima.
[0223] „Početna vrednost“, kako se ovde koristi, je najniži izmereni nivo faktora IX u plazmi subjekta pre primene doze. U prvoj studiji na ljudima opisanoj u primeru 1, nivoi faktora IX u plazmi su mereni u dve vremenske tačke pre doziranja: prilikom skrining posete i neposredno pre doziranja. Vremena pre doze tretirana su kao nula (početna vrednost) za potrebe izračunavanja, tj., za generisanje podataka „sa oduzetom početnom vrednošću“. Videti, npr., sliku 4. Alternativno, (a) početna vrednost kod pacijenata čija je aktivnost FIX pre tretmana <1%, koji nemaju detektabilni FIX antigen i imaju nonsens genotipove definisana je kao 0%, (b) početna vrednost za pacijente sa aktivnošću FIX pre tretmana <1% i koji imaju detektabilni FIX antigen postavljena je na 0,5%, (c) početna vrednost za pacijente čija je aktivnost FIX pre tretmana između 1-2% je Cmin (najniža aktivnost tokom PK studije), i (d) početna vrednost za pacijente čija je aktivnost FIX pre tretmana ≥2% je 2%. Aktivnost iznad početne vrednosti pre doziranja smatra se rezidualnim lekom iz prethodnog tretmana, i svedena je na početnu vrednost i oduzeta od PK podataka nakon doziranja rFIXFc. Videti primer 11.
[0225] [0043] „Površina ispod krive koncentracija u plazmi naspram vremena“ (AUC), koja, kako se ovde koristi, zasnovana je na brzini i obimu eliminacije faktora IX nakon primene. AUC je određena tokom određenog vremenskog perioda, kao što je 12, 18, 24, 36, 48, ili 72 sata, ili za beskonačnost korišćenjem ekstrapolacije zasnovane na nagibu krive. Osim ako nije drugačije navedeno ovde, AUC je određena za beskonačnost (AUC<INF>). AUC se takođe može izračunati po dozi. Kao i kod mnogih drugih PK parametara, određivanje AUC može se sprovesti na jednom subjektu, ili na populaciji subjekata za koju se izračunava prosek. U primeru 1, srednja AUC/doza u populaciji pacijenata bila je 32,44 IU*h/dL po IU/kg, a raspon za pojedinačne subjekte bio je 21,80-54,30 IU*h/dL po IU/kg. (Videti tabelu 13 za srednju AUC/doza zasnovanu na aktivnosti.) Stoga, srednja AUC/doza u populaciji pacijenata može biti oko 26-40, oko 26, oko 27, oko 28, oko 29, oko 30, oko 31, oko 32, oko 33, oko 34, oko 35, oko 36, oko 37, oko 38, oko 39, ili oko 40 IU*h/dL po IU/kg. Videti tabelu 14 za AUC/doza i druge AUC parametre zasnovane na antigenu.
[0227] „In vivo iskoristivost“ (IVR) predstavljena je inkrementalnom iskoristivošću (K-vrednost), koja je primećena vršna aktivnost minus nivo pre doze, podeljena dozom. IVR se takođe može izračunati na procentualnoj osnovi, kao što je opisano u primerima. Radi jasnoće, ovde se koriste jedinice (K-vrednost ili IU/dl po IU/kg naspram %). Srednja IVR može se odrediti u populaciji pacijenata, ili se pojedinačna IVR može odrediti na jednom subjektu. FIXFc korišćen u prvoj studiji na ljudima opisanoj u primeru 1 pokazao je srednju IVR od oko 0,93 IU/dl po IU/kg u populaciji pacijenata; a IVR kod svakog subjekta kretala se od 0,62 do 1,17 IU/dl po IU/kg (tabela 13). Stoga, himerični polipeptid za upotrebu pronalaska pokazuje srednju IVR u populaciji pacijenata od 0,85-1,15 (npr. oko 0,85, oko 0,86, oko 0,87, oko 0,88, oko 0,89, oko 0,90, oko 0,91, oko 0,92, oko 0,93, oko 0,94, oko 0,95, oko 0,96, oko 0,97, oko 0,98, oko 0,99, oko 1,0, oko 1,05, oko 1,10, oko 1,15) i IVR kod subjekta od najmanje oko 0,6, oko 0,7,0,8, oko 0,9, oko 1,0, oko 1,1, ili oko 1,2 IU/dl po IU/kg.
[0229] „Stopa klirensa“ (CL), kako se ovde koristi, je mera sposobnosti tela da eliminiše lek, i izražava se kao volumen plazme očišćen od leka tokom vremena. FIXFc korišćen u studiji opisanoj u primeru 1 pokazao je srednju CL od oko 3,36 ml/h/kg (videti tabelu 13), što je oko 2,5 puta niže od CL (8,2 ml/h/kg) polipeptida koji se sastoji od faktora IX (BENEFIX<™>); raspon CL vrednosti kod pojedinačnih subjekata bio je 1,84-4,58 ml/h/kg. Stoga, himerični polipeptid za upotrebu pronalaska pokazuje srednju CL u populaciji od 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, ili 3,72 mL/h/kg. Za CL zasnovanu na antigenu, videti tabelu 14.
[0230] „Srednje vreme zadržavanja“ (MRT), kako se ovde koristi, je mera prosečnog poluživota molekula leka u telu. FIXFc korišćen u studiji opisanoj u primeru 1 pokazao je srednju MRT od oko 68,05 sati (videti tabelu 13); raspon MRT vrednosti bio je 53,1-85,8 sati kod pojedinačnih subjekata. Stoga, himerični polipeptid za upotrebu pronalaska pokazuje srednju MRT u populaciji od 60-78, oko 60, oko 62, oko 64, oko 66, oko 68, oko 70, oko 72, oko 74, oko 76, ili oko 78 sati, i MRT kod subjekta od najmanje oko 50, oko 55, oko 60, oko 65, oko 70, oko 75, oko 80, oko 85, ili oko 90 sati. Za MRT zasnovanu na antigenu, videti tabelu 14.
[0232] „t<1/2β>“, ili „t<1/2 beta>“ ili „Beta HL“, kako se ovde koristi, je poluživot povezan sa fazom eliminacije, t<1/2β>=(ln2)/konstanta brzine eliminacije povezane sa terminalnom fazom. U studiji opisanoj u primeru 1, korišćeni FIXFc pokazao je srednji t<1/2z>u populaciji pacijenata koji je bio oko 52,5 sati (videti tabelu 13), a raspon t<1/2 β>vrednosti kod pojedinačnih subjekata bio je 47-60 sati. Stoga, himerični polipeptid za upotrebu pronalaska pokazuje prosečan t<1/2β>veći od oko 47, oko 48, oko 49, oko 50, oko 51, oko 52, oko 53, oko 54, oko 55, oko 56, oko 57, oko 58, oko 59, ili oko 60 sati. Za T<1/2β>zasnovan na antigenu, videti tabelu 14.
[0234] [0048] „Najniža koncentracija“, kako se ovde koristi, je najniži nivo aktivnosti faktora IX u plazmi dostignut nakon primene doze himeričnog polipeptida za upotrebu pronalaska ili drugog molekula faktora IX i pre primene sledeće doze, ako je ima. Najniža koncentracija koristi se ovde naizmenično sa „pragom“. Nivoi faktora IX pre doziranja oduzimaju se od izmerenih nivoa faktora IX radi izračunavanja nivoa najniže koncentracije. U nekim otelotvorenjima, najniža koncentracija je 1-5 ili 1-3 IU/dl nakon oko 6, oko 7, oko 8, oko 9, oko 10, oko 11, oko 12 ili oko 13 ili oko 14 dana. U nekim otelotvorenjima, nivo u plazmi himeričnog polipeptida dostiže prosečnu najnižu koncentraciju od najmanje oko 1 IU/dl nakon najmanje oko 6 dana kod najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90% ili oko 100% populacije pacijenata ili dostiže najnižu koncentraciju od najmanje oko 1, 2, 3, 4 ili 5 IU/dl nakon najmanje oko 6 dana kod subjekta. U nekim otelotvorenjima, nivo u plazmi navedenog himeričnog polipeptida dostiže prosečnu najnižu koncentraciju od oko 1-5 ili 1-3 IU/dl. Takva najniža koncentracija ili prosečna najniža koncentracija može biti dostignuta nakon oko 6, oko 7, oko 8, oko 9, oko 10, oko 11, oko 12, oko 13, oko 14, oko 15, oko 16, oko 17, oko 18, oko 19, oko 20, oko 21, oko 22, oko 23, oko 24, oko 25, oko 26, oko 27, oko 28, oko 29, oko 30, oko 31, oko 32, oko 33, oko 34, oko 35, oko 36, oko 37, oko 38, oko 39 ili oko 40 dana.
[0236] „Volumen distribucije u stanju ravnoteže (Vss)“, kako se ovde koristi, je prividni prostor (volumen) u koji se lek distribuira. Vss = količina leka u telu podeljena sa koncentracijom u plazmi u stanju ravnoteže. U primeru 1, srednji Vss pronađen u populaciji bio je oko 226 mL/kg, a raspon za subjekte bio je oko 145-365 mL/kg. (Videti tabelu 13.) Stoga, srednji Vss u populaciji pacijenata može biti 200-300, oko 200, oko 210, oko 220, oko 230, oko 240, oko 250, oko 260, oko 270, oko 280, oko 290, ili oko 300 mL/kg. Vss za pojedinačne subjekte može biti oko 145, oko 150, oko 160, oko 170, oko 180, oko 190, oko 200, oko 210, oko 220, oko 230, oko 240, oko 250, oko 260, oko 270, oko 280, oko 290, oko 300, oko 310, oko 320, oko 330, oko 340, oko 350, oko 360, ili oko 370 ml/kg. Za Vss zasnovan na antigenu, videti tabelu 14.
[0238] „Polipeptid“, „peptid“ i „protein“ koriste se naizmenično i odnose se na polimerno jedinjenje sastavljeno od kovalentno povezanih aminokiselinskih rezidua.
[0240] „Polinukleotid“ i „nukleinska kiselina“ koriste se naizmenično i odnose se na polimerno jedinjenje sastavljeno od kovalentno povezanih nukleotidnih rezidua.
[0241] Polinukleotidi mogu biti DNK, cDNK, RNK, jednolančani ili dvolančani, vektori, plazmidi, fagi ili virusi. Polinukleotidi uključuju one u tabeli 1, koji kodiraju polipeptide iz tabele 2 (videti tabelu 1). Polinukleotidi takođe uključuju fragmente polinukleotida iz tabele 1, npr. one koji kodiraju fragmente polipeptida iz tabele 2, kao što su faktor IX, Fc, signalna sekvenca, propeptid, 6His i drugi fragmenti polipeptida iz tabele 2.
[0243] „Profilaktički tretman“, kako se ovde koristi, znači primenu polipeptida faktora IX u višestrukim dozama subjektu tokom određenog vremenskog perioda radi povećanja nivoa aktivnosti faktora IX u plazmi subjekta. Poželjno, povećani nivo je dovoljan da smanji učestalost spontanog krvarenja ili da spreči krvarenje u slučaju nepredviđene povrede.
[0244] Profilaktički tretman smanjuje ili sprečava epizode krvarenja, na primer, one opisane pod tretmanom na zahtev. Profilaktički tretman može biti fiksan ili individualizovan, kao što je objašnjeno pod „interval doziranja“, npr. radi kompenzovanja varijabilnosti između pacijenata.
[0245] „Subjekt“, kako se ovde koristi, znači čovek. Subjekti takođe uključuju pedijatrijske subjekte. Pedijatrijski subjekti su od rođenja do 20 godina, poželjno od rođenja do 18 godina, od rođenja do 16 godina, od rođenja do 15 godina, od rođenja do 12 godina, od rođenja do 11 godina, od rođenja do 6 godina, od rođenja do 5 godina, od rođenja do 2 godine, i od 2 do 11 godina starosti.
[0247] Ovde opisane upotrebe mogu se primenjivati na subjektu kome je potrebna kontrola ili prevencija krvarenja ili epizoda krvarenja. Takvi subjekti uključuju one kojima je potrebna kontrola ili prevencija krvarenja kod male hemoragije, hemartroze, površinske mišićne hemoragije, hemoragije mekog tkiva, umerene hemoragije, intramuskularne hemoragije ili hemoragije mekog tkiva sa disekcijom, hemoragije sluzokože, hematurije, velike hemoragije, hemoragije farinksa, hemoragije retrofarinksa, hemoragije retroperitoneuma, krvarenja centralnog nervnog sistema, modrica, posekotina, ogrebotina, krvarenja zglobova, krvarenja iz nosa, krvarenja iz usta, krvarenja desni, intrakranijalnog krvarenja, intraperitonealnog krvarenja, male spontane hemoragije, krvarenja nakon velike traume, umerenih modrica na koži, ili spontanog krvarenja u zglobove, mišiće, unutrašnje organe ili mozak. Takvi subjekti takođe uključuju one kojima je potrebno perioperativno zbrinjavanje, kao što je zbrinjavanje krvarenja povezanog sa operacijom ili vađenjem zuba.
[0249] „Terapijska doza“, kako se ovde koristi, znači doza koja postiže terapijski cilj, kao što je ovde opisano. Izračunavanje potrebne doze faktora IX dobijenog iz plazme (pdFIX) zasniva se na empirijskom nalazu da, u proseku, 1 IU pdFIX po kg telesne težine povećava aktivnost faktora IX u plazmi za približno 1 IU/dL (1%). Na toj osnovi, potrebna doza se određuje pomoću sledeće formule:
[0251] Potrebne jedinice = telesna težina (kg) x željeno povećanje faktora IX (IU/dL ili % normale) x1 (IU/kg po IU/dL)
[0253] [0056] Budući da FIXFc, npr. kako je opisano u primerima i na slici 1, ima inkrementalnu iskoristivost sličnu pdFIX-u (različitu od one kod BENEFIX<™>), potrebna doza se određuje pomoću gore navedene formule, ili njenim blagim prilagođavanjem. Videti takođe tabelu 26 za specifične preporučene doze za različite potrebe za tretmanom na zahtev. Za pedijatrijske subjekte koji koriste pdFIX, smernice za doziranje su iste kao i za odrasle. Međutim, pedijatrijski pacijenti mogu imati nižu inkrementalnu iskoristivost, i doza će stoga možda morati da se prilagodi naviše.
[0255] Terapijska doza je 50-100,50 i 100 IU/kg.
[0257] Dodatne kombinacije doze i intervala doziranja uključuju: dozu od najmanje oko 100 IU/kg i interval doziranja od najmanje oko 9 dana, dozu od najmanje oko 100 IU/kg i interval doziranja od najmanje oko 12 dana, ili dozu od 50-100 IU/kg i interval doziranja od 10-14 dana.
[0259] „Varijanta“, kako se ovde koristi, odnosi se na polinukleotid ili polipeptid koji se razlikuje od originalnog polinukleotida ili polipeptida, ali zadržava suštinske osobine istog, npr. aktivnost koagulacije faktora IX ili Fc (FcRn vezujuću) aktivnost. Generalno, varijante su ukupno bliske i, u mnogim regionima, identične originalnom polinukleotidu ili polipeptidu. Varijante uključuju polipeptidne i polinukleotidne fragmente, brisanja, umetanja i modifikovane verzije originalnih polipeptida.
[0261] Varijantni polinukleotidi mogu obuhvatati, ili alternativno sastojati se od, nukleotidne sekvence koja je najmanje 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% identična, na primer, nukleotidnoj kodirajućoj sekvenci u SEQ ID NO:1 ili 3 (deo faktora IX, Fc deo, pojedinačno ili zajedno) ili njenom komplementarnom lancu, nukleotidnoj kodirajućoj sekvenci poznatih mutiranih i rekombinantnih faktora IX ili Fc kao što su oni obelodanjeni u publikacijama i patentima navedenim ovde ili njenom komplementarnom lancu, nukleotidnoj sekvenci koja kodira polipeptid SEQ ID NO:2 ili 4 (deo faktora IX, Fc deo, pojedinačno ili zajedno), i/ili fragmentima polinukleotida bilo kojeg od ovih molekula nukleinske kiseline (npr. onim fragmentima opisanim ovde). Polinukleotidi koji se hibridizuju sa ovim molekulima nukleinske kiseline pod strogim uslovima hibridizacije ili pod uslovima niže strogosti takođe su uključeni kao varijante, kao i polipeptidi kodirani ovim polinukleotidima sve dok su funkcionalni.
[0263] [0061] Varijantni polipeptidi mogu obuhvatati, ili alternativno sastojati se od, aminokiselinske sekvence koja je najmanje 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% identična, na primer, polipeptidnoj sekvenci prikazanoj u SEQ ID NO:2 ili 4 (deo faktora IX, Fc deo, pojedinačno ili zajedno), i/ili polipeptidnim fragmentima bilo kojeg od ovih polipeptida (npr. onim fragmentima opisanim ovde).
[0265] Pod nukleinskom kiselinom koja ima nukleotidnu sekvencu najmanje, na primer, 95% „identičnu“ referentnoj nukleotidnoj sekvenci, podrazumeva se da je nukleotidna sekvenca nukleinske kiseline identična referentnoj sekvenci, osim što nukleotidna sekvenca može uključivati do pet tačkastih mutacija po svakih 100 nukleotida referentne nukleotidne sekvence. Drugim rečima, da bi se dobila nukleinska kiselina koja ima nukleotidnu sekvencu najmanje 95% identičnu referentnoj nukleotidnoj sekvenci, do 5% nukleotida u referentnoj sekvenci može biti obrisano ili zamenjeno drugim nukleotidom, ili se broj nukleotida do 5% od ukupnog broja nukleotida u referentnoj sekvenci može umetnuti u referentnu sekvencu. Upitna sekvenca može biti, na primer, cela sekvenca prikazana u SEQ ID NO:1 ili 3, ORF (otvoreni okvir čitanja), ili bilo koji fragment specifikovan kako je ovde opisano.
[0267] Praktično, da li je bilo koji određeni molekul nukleinske kiseline ili polipeptid najmanje 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% identičan nukleotidnoj sekvenci ili polipeptidu predmetnog pronalaska, može se konvencionalno utvrditi korišćenjem poznatih računarskih programa. Preferirana metoda za određivanje najboljeg ukupnog podudaranja između upitne sekvence (referentne ili originalne sekvence) i predmetne sekvence, koja se takođe naziva globalno poravnanje sekvenci, može se utvrditi korišćenjem računarskog programa FASTDB zasnovanog na algoritmu Brutlag et al. (Comp.
[0268] App. Biosci.(1990) 6:237-245). U poravnanju sekvenci upitna i predmetna sekvenca su obe DNK sekvence. RNK sekvenca se može uporediti konverzijom U u T. Rezultat navedenog globalnog poravnanja sekvenci je u procentu identiteta. Preferirani parametri korišćeni u FASTDB poravnanju DNK sekvenci za izračunavanje procenta identiteta su:
[0269] Matrica=jedinična, k-torka=4, penal za nepoklapanje=1, penal za spajanje=30, dužina grupe za randomizaciju=0, prekidni skor=1, penal za prazninu=5, penal za veličinu praznine=0,05, veličina prozora=500 ili dužina predmetne nukleotidne sekvence, šta god je kraće.
[0271] [0064] Ako je predmetna sekvenca kraća od upitne sekvence zbog brisanja na 5' ili 3' kraju, a ne zbog unutrašnjih brisanja, mora se izvršiti ručna korekcija rezultata. To je zato što program FASTDB ne uzima u obzir 5' i 3' skraćenja predmetne sekvence prilikom izračunavanja procenta identiteta. Za predmetne sekvence skraćene na 5' i 3' krajevima, u odnosu na upitnu sekvencu, procenat identiteta se koriguje izračunavanjem broja baza upitne sekvence koje su 5' i 3' od predmetne sekvence, a koje nisu uparene/poravnate, kao procenat ukupnih baza upitne sekvence. Da li je nukleotid uparen/poravnat, određuje se na osnovu rezultata FASTDB poravnanja sekvenci. Taj procenat se zatim oduzima od procenta identiteta, izračunatog pomoću gore navedenog FASTDB programa korišćenjem navedenih parametara, da bi se dobio konačni rezultat procenta identiteta. Ovaj korigovani rezultat se koristi za potrebe predmetnog pronalaska. Samo baze izvan 5' i 3' baza predmetne sekvence, kako je prikazano FASTDB poravnanjem, a koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom, izračunavaju se za potrebe ručnog prilagođavanja rezultata procenta identiteta.
[0273] Na primer, 90 baza predmetne sekvence se poravnava sa 100 baza upitne sekvence radi određivanja procenta identiteta. Brisanja se dešavaju na 5' kraju predmetne sekvence i stoga, FASTDB poravnanje ne pokazuje podudaranje/poravnanje prvih 10 baza na 5' kraju.
[0274] 10 neuparenih baza predstavljaju 10% sekvence (broj baza na 5' i 3' krajevima koje nisu uparene/ukupan broj baza u upitnoj sekvenci) tako da se 10% oduzima od rezultata procenta identiteta izračunatog FASTDB programom. Ako bi preostalih 90 baza bilo savršeno usklađeno, konačni procenat identiteta bi bio 90%. U drugom primeru, 90 baza predmetne sekvence se upoređuje sa 100 baza upitne sekvence. Ovog puta su brisanja unutrašnja brisanja, tako da nema baza na 5' i 3' kraju predmetne sekvence koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom. U ovom slučaju procenat identiteta izračunat FASTDB programom nije ručno korigovan. Ponovo, samo baze 5' i 3' od predmetne sekvence, kako je prikazano u FASTDB poravnanju, koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom, se ručno koriguju. Nikakve druge ručne korekcije se ne vrše za potrebe predmetnog pronalaska.
[0276] [0066] Pod polipeptidom koji ima aminokiselinsku sekvencu najmanje, na primer, 95% „identičnu“ upitnoj aminokiselinskoj sekvenci, podrazumeva se da je aminokiselinska sekvenca predmetnog polipeptida identična upitnoj sekvenci, osim što aminokiselinska sekvenca predmetnog polipeptida može uključivati do pet promena aminokiselina po svakih 100 aminokiselina upitne aminokiselinske sekvence. Drugim rečima, da bi se dobio polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu najmanje 95% identičnu upitnoj aminokiselinskoj sekvenci, do 5% aminokiselinskih rezidua u predmetnoj sekvenci može biti umetnuto, obrisano (indel) ili zamenjeno drugom aminokiselinom. Ove promene referentne sekvence mogu se desiti na amino ili karboksi terminalnim pozicijama referentne aminokiselinske sekvence ili bilo gde između tih terminalnih pozicija, interspersovano ili pojedinačno među reziduama u referentnoj sekvenci ili u jednoj ili više susednih grupa unutar referentne sekvence.
[0278] Praktično, da li je bilo koji određeni polipeptid najmanje 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% identičan, na primer, aminokiselinskim sekvencama SEQ ID NO:2 (deo faktora IX, Fc deo, pojedinačno ili zajedno) ili 4, ili poznatoj polipeptidnoj sekvenci faktora IX ili Fc, može se konvencionalno utvrditi korišćenjem poznatih računarskih programa. Preferirana metoda za određivanje najboljeg ukupnog podudaranja između upitne sekvence (referentne ili originalne sekvence) i predmetne sekvence, koja se takođe naziva globalno poravnanje sekvenci, može se utvrditi korišćenjem računarskog programa FASTDB zasnovanog na algoritmu Brutlag et al., Comp. App. Biosci.6:237-245(1990). U poravnanju sekvenci upitna i predmetna sekvenca su ili obe nukleotidne sekvence ili obe aminokiselinske sekvence. Rezultat navedenog globalnog poravnanja sekvenci je u procentu identiteta. Preferirani parametri korišćeni u FASTDB poravnanju aminokiselina su: Matrica=PAM 0, k-torka=2, penal za nepoklapanje=1, penal za spajanje=20, dužina grupe za randomizaciju=0, pPrekidni skor=1, Veličina prozora=dužina sekvence, penal za prazninu=5, penal za veličinu praznine=0,05, veličina prozora=500 ili dužina predmetne aminokiselinske sekvence, šta god je kraće.
[0280] Ako je predmetna sekvenca kraća od upitne sekvence zbog brisanja na N- ili C-terminalnom kraju, a ne zbog unutrašnjih brisanja, mora se izvršiti ručna korekcija rezultata. To je zato što program FASTDB ne uzima u obzir N- i C-terminalna skraćenja predmetne sekvence prilikom izračunavanja globalnog procenta identiteta. Za predmetne sekvence skraćene na N- i C-krajevima, u odnosu na upitnu sekvencu, procenat identiteta se koriguje izračunavanjem broja rezidua upitne sekvence koje su N- i C-terminalno od predmetne sekvence, a koje nisu uparene/poravnate sa odgovarajućim predmetnim reziduom, kao procenat ukupnih baza upitne sekvence. Da li je rezidua uparena/poravnata, određuje se na osnovu rezultata FASTDB poravnanja sekvenci. Taj procenat se zatim oduzima od procenta identiteta, izračunatog pomoću gore navedenog FASTDB programa korišćenjem navedenih parametara, da bi se dobio konačni rezultat procenta identiteta. Ovaj konačni rezultat procenta identiteta se koristi za potrebe predmetnog pronalaska. Samo rezidue N- i Cterminalno od predmetne sekvence, koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom, se razmatraju za potrebe ručnog prilagođavanja rezultata procenta identiteta. To jest, samo pozicije upitnih rezidua izvan najdaljih N- i C-terminalnih rezidua predmetne sekvence.
[0282] Na primer, 90 aminokiselinskih rezidua predmetne sekvence se poravnava sa 100 rezidua upitne sekvence radi određivanja procenta identiteta. Brisanje se dešava na N-kraju predmetne sekvence i stoga, FASTDB poravnanje ne pokazuje podudaranje/poravnanje prvih 10 rezidua na N-kraju.10 neuparenih rezidua predstavljaju 10% sekvence (broj rezidua na N-i C-krajevima koje nisu uparene/ukupan broj rezidua u upitnoj sekvenci) tako da se 10% oduzima od rezultata procenta identiteta izračunatog FASTDB programom. Ako bi preostalih 90 rezidua bilo savršeno usklađeno, konačni procenat identiteta bi bio 90%. U drugom primeru, 90 rezidua predmetne sekvence se upoređuje sa 100 rezidua upitne sekvence. Ovog puta su brisanja unutrašnja brisanja, tako da nema rezidua na N- ili C-krajevima predmetne sekvence koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom. U ovom slučaju procenat identiteta izračunat FASTDB programom nije ručno korigovan. Ponovo, samo pozicije rezidua izvan N- i C-terminalnih krajeva predmetne sekvence, kako je prikazano u FASTDB poravnanju, koje nisu uparene/poravnate sa upitnom sekvencom, se ručno koriguju. Nikakve druge ručne korekcije se ne vrše za potrebe predmetnog pronalaska.
[0284] Varijante polinukleotida mogu sadržati promene u kodirajućim regionima, nekodirajućim regionima, ili oba. Posebno su poželjne varijante polinukleotida koje sadrže promene koje proizvode tihe supstitucije, dodatke, ili brisanja, ali ne menjaju osobine ili aktivnosti kodiranog polipeptida. Nukleotidne varijante proizvedene tihim supstitucijama usled degeneracije genetskog koda su poželjne. Štaviše, varijante kod kojih je 5-10,1-5, ili 1-2 aminokiseline supstituisano, obrisano, ili dodato u bilo kojoj kombinaciji su takođe poželjne. Varijante polinukleotida mogu se proizvesti iz različitih razloga, npr. da bi se optimizovala ekspresija kodona za određenog domaćina (promena kodona u RNK čoveka u one koje preferira bakterijski domaćin kao što je E. coli).
[0286] [0071] Prirodno nastale varijante nazivaju se „alelne varijante“, i odnose se na jedan od nekoliko alternativnih oblika gena koji zauzima dati lokus na hromozomu organizma (Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)). Ove alelne varijante mogu varirati bilo na nivou polinukleotida i/ili polipeptida. Alternativno, varijante koje nisu prirodno nastale mogu se proizvesti tehnikama mutageneze ili direktnom sintezom.
[0288] Koristeći poznate metode proteinskog inženjeringa i rekombinantne DNK tehnologije, varijante se mogu generisati radi poboljšanja ili promene karakteristika polipeptida. Na primer, jedna ili više aminokiselina može biti obrisana sa N-kraja ili C-kraja izlučenog proteina bez značajnog gubitka biološke funkcije. Autori Ron et al., J. Biol. Chem.268: 2984-2988 (1993), izvestili su o varijantnim KGF proteinima koji imaju aktivnost vezivanja heparina čak i nakon brisanja 3, 8, ili 27 amino-terminalnih aminokiselinskih rezidua. Slično, Interferon gama je pokazao do deset puta veću aktivnost nakon brisanja 8-10 aminokiselinskih rezidua sa karboksi-kraja ovog proteina. (Dobeli et al., J. Biotechnology 7:199-216 (1988).)
[0290] Štaviše, obilje dokaza pokazuje da varijante često zadržavaju biološku aktivnost sličnu onoj kod prirodno nastalog proteina. Na primer, Gayle i saradnici (J. Biol. Chem.268:22105-22111 (1993)) sproveli su opsežnu analizu mutacija ljudskog citokina IL-1α. Koristili su slučajnu mutagenezu da generišu preko 3,500 pojedinačnih IL-1α mutanata koji su u proseku imali 2,5 promene aminokiselina po varijanti duž cele dužine molekula. Ispitano je više mutacija na svakoj mogućoj poziciji aminokiseline. Istraživači su otkrili da „[v]eći deo molekula može biti izmenjen sa malim uticajem na [vezivanje ili biološku aktivnost]“.
[0291] (Videti Abstract.) Zapravo, samo 23 jedinstvene aminokiselinske sekvence, od preko 3,500 ispitanih nukleotidnih sekvenci, proizvele su protein koji se značajno razlikovao u aktivnosti od divljeg tipa.
[0293] [0074] Kao što je gore navedeno, varijante polipeptida uključuju modifikovane polipeptide. Modifikacije uključuju acetilaciju, acilaciju, ADP-ribozilaciju, amidaciju, kovalentno vezivanje flavina, kovalentno vezivanje heme deo molekula, kovalentno vezivanje nukleotida ili derivata nukleotida, kovalentno vezivanje lipida ili derivata lipida, kovalentno vezivanje fosfotidilinozitola, unakrsno povezivanje, ciklizaciju, formiranje disulfidne veze, demetilaciju, formiranje kovalentnih unakrsnih veza, formiranje cisteina, formiranje piroglutamata, formilaciju, gama-karboksilaciju, glikozilaciju, formiranje GPI sidra, hidroksilaciju, jodovanje, metilaciju, miristoilaciju, oksidaciju, pegilaciju, proteolitičku obradu, fosforilaciju, prenilaciju, racemizaciju, selenoilaciju, sulfataciju, dodavanje aminokiselina proteinima posredovano tRNK-om kao što je arginilacija, i ubikvitinaciju.
[0295] Termin „oko“ se ovde koristi da znači približno, grubo, otprilike, ili u regionima. Kada se termin „oko“ koristi u vezi sa numeričkim opsegom, on modifikuje taj opseg proširujući granice iznad i ispod navedenih numeričkih vrednosti. Generalno, termin „oko“ se ovde koristi za modifikovanje numeričke vrednosti iznad i ispod navedene vrednosti varijacijom od 10 procenata, gore ili dole (više ili niže).
[0297] Nakon što je predmetni pronalazak detaljno opisan, isti će biti jasnije shvaćen uz pomoć sledećih primera, koji su ovde uključeni samo u svrhu ilustracije i nemaju za cilj da ograniče pronalazak.
[0299] Primer 1. Prva studija na ljudima (FiH)
[0301] Prva studija na ljudima bila je otvorena, sa eskalacijom doze, faza 1/2 studija za određivanje bezbednosti, podnošljivosti i farmakokinetičkih (PK) parametara FIXFc (rekombinantnog fuzionog proteina ljudskog faktora IX koagulacije). FIXFc je rekombinantni fuzioni protein koji obuhvata ljudski faktor IX zgrušavanja vezan za Fc domen ljudskog IgG1. Fuzioni protein je eksprimiran u ljudskim embrionalnim ćelijama bubrega (HEK 293). Videti primer 3.
[0303] FIXFc se razvija za kontrolu i prevenciju hemoragijskih epizoda kod pacijenata sa hemofilijom B (urođeni deficit faktora IX ili Božićna bolest), uključujući kontrolu i prevenciju krvarenja u hirurškim okruženjima.
[0305] FIXFc je rekombinantni fuzioni protein sastavljen od faktora IX koagulacije (FIX) i Fc domena ljudskog antitela (IgG1 izotip). FIXFc molekul je heterodimeran sa jednim lancem FIXFc (FIXFc-sc) i jednim lancem Fc (Fc-sc) vezanim zajedno preko dve disulfidne veze u regionu šarke Fc. Videti sliku 1 i tabelu 2.
[0307] [0080] rFIXFc medicinski proizvod je bistar bezbojni rastvor namenjen za intravensku (IV) primenu. rFIXFc se isporučuje kao 1000 IU po 5 mL volumena u bočici od 10 mL za jednokratnu upotrebu. Medicinski proizvod je pakovan u staklene bočice USP tip I sa bromobutil čepovima i aluminijumskim zatvaračima bez natpisa koji se cepaju. rFIXFc medicinski proizvod sadrži 200 IU/mL u 10 mM natrijum-fosfatnom puferu pH 7,0 uz dodatak 145 mM NaCl i 0,1% polisorbata 20. rFIXFc rastvor ne sme biti razređen.
[0309] Dizajn studije. Ukupno 14 prethodno lečenih pacijenata sa teškom hemofilijom B uključeno je i tretirano FIXFc-om kao intravenska (IV) infuzija tokom približno 10 minuta. U studiji je evaluirano šest nivoa doza: 1, 5, 12,5, 25, 50 i 100 IU/kg. Po jedan pacijent po nivou doze uključen je na nivoima doza 1, 5, 12,5, i 25 IU/kg, a najmanje tri pacijenta pogodna za evaluaciju po nivou doze uključena su na 50 i 100 IU/kg.
[0311] Nakon skrininga (zakazanog u roku od 14 dana od doze FIXFc), počeo je period lečenja za pacijente. Period lečenja za svaki nivo doze uključivao je jednu dozu FIXFc (dan 1) sve do završetka 72-satnog perioda praćenja bezbednosti (3 dana) za nivoe doza 1 i 5 IU/kg, ili do uzimanja poslednjeg PK uzorka za pacijente na nivoima doza od 12,5 do 100 IU/kg (približno 10 dana). Pacijenti tretirani sa 1, 5, 12,5 ili 25 IU/kg uključeni su i tretirani na sekvencijalni način počevši od 1 IU/kg. Pacijenti koji su primali 50 IU/kg nisu tretirani istog dana, a između doziranja postojao je najmanje jedan dan razmaka. Nakon tretmana pacijenata sa 50 IU/kg, počeo je tretman pacijenata sa 100 IU/kg.
[0313] Period nakon tretmana bio je 30-dnevni period praćenja bezbednosti, počevši od dana kada je pacijent primio dozu FIXFc, i preklapao se sa periodom lečenja jer su pacijenti tokom tog vremena prolazili neophodne studijske evaluacije, kao što je uzorkovanje za PK.
[0315] Pacijentima dodeljenim nivoima doza 12,5 do 100 IU/kg vađeni su uzorci krvi radi procene aktivnosti FIX i koncentracije FIXFc. Uzorci krvi su trebali biti izvađeni neposredno pre primene FIXFc; 15 minuta nakon završetka infuzije; i na 1, 3 , 6 , 9 , 24 , 48, 72, 96, 120, 168 i 240 sati nakon završetka infuzije ili dok se ne dostignu početni nivoi FIX-a. Ako je pacijent nastavio da ima nivoe FIX-a iznad početne vrednosti u vremenskoj tački od 240 sati (dan studije 11), uzorci su uzeti na 288 sati (dan studije 13) i ponovo na 336 sati (dan studije 15) ako je nivo FIX-a bio iznad početne vrednosti na dan studije 13.
[0316] Pacijent 10 je primio BENEFIX<™>tretman zbog krvarenja pre zakazanog uzorkovanja FIXFc na 216 sati nakon doziranja. Shodno tome, podaci o aktivnosti FIXFc i antigenu za 216 sati i sledeće vremenske tačke su isključeni iz analize. Nisu se dogodila dodatna odstupanja za koja se smatra da su uticala na rezultate privremene analize ove studije.
[0318] Za FIX antigen, farmakokinetičke analize su sprovedene na individualnim podacima pacijenata o primećenoj koncentraciji FIXFc naspram vremena nakon IV infuzije FIXFc. Primarna analiza je sprovedena korišćenjem modelom zavisne metodologije. Podaci o koncentraciji FIXFc su kompjuterski fitovani na dvokompartmentalni otvoreni model sa eliminacijom iz centralnog kompartmenta korišćenjem početnih procena parametara definisanih od strane korisnika za izračunavanje početnih vrednosti parametara. Generisane su WinNonlin-om procenjene mikroskopske konstante brzine, a podaci o koncentraciji FIXFc su ponderisani funkcijom 1/(Y<-hat>* Y<-hat>). Primećeni podaci za dva subjekta (npr. pacijenti 5 i 6) nisu bili adekvatno opisani dvokompartmentalnim modelom. Shodno tome, na ova dva pacijenta je sprovedena modelom nezavisna analiza korišćenjem WinNonlin nekompartmentalne analize IV-Infuzija ulaznog modela (linearno trapezoidno pravilo za izračunavanje AUC). Za nekompartmentalnu analizu, poluživot je izračunat iz beta faze korišćenjem tačaka podataka koje opisuju terminalni log-linearni pad u regresiji. Korišćen je minimum od tri tačke za opis faze eliminacije. Ovo se dogodilo približno između 4 i 14 dana. Za PK analizu antigena, korišćeni su ekvivalenti doze „mg/kg“. Ove vrednosti su određene na osnovu specifične aktivnosti za FIXFc od 60,2 IU/mg. Za izračunavanja su korišćena stvarna vremena uzorkovanja, doze i trajanja infuzije. Nominalna vremena uzorkovanja i doze korišćeni su za kreiranje tabela i slika koncentracija-vreme. Prikazani su individualni i srednji PK parametri i deskriptivna statistika. Formalna statistička analiza nije sprovedena jer su opseg doze i broj subjekata u svakoj kohorti bili premali za značajnu analizu.
[0320] Za aktivnost faktora IX, metod oduzimanja početne vrednosti primenjen je na profil aktivnost naspram vremena prema stablu odlučivanja za oduzimanje početne vrednosti (slika 4). Vrednosti aktivnosti <1% definisane su na 1 IU/dL za opadanje početne vrednosti.
[0321] Vremena pre doze tretirana su kao nula za potrebe izračunavanja. Pored toga, podaci o aktivnosti korigovani za početnu vrednost su skraćeni u vremenskim tačkama koje su predstavljale povratak na početne nivoe. Farmakokinetičke analize su sprovedene na podacima o aktivnosti FIX naspram vremena korigovanim za početnu vrednost, dobijenim nakon IV infuzije FIXFc. Za analizu grupa doza IV-infuzijom korišćena je modelom zavisna procena. Podaci korigovani za početnu vrednost su kompjuterski fitovani na dvokompartmentalni otvoreni model sa eliminacijom iz centralnog kompartmenta korišćenjem granica parametara definisanih programom WinNonlin za izračunavanje početnih vrednosti parametara. Mikroskopske konstante brzine procenjene u programu WinNonlin su generisane, a podaci o aktivnosti FIXFc su ponderisani funkcijom 1/(Y<-hat>* Y<-hat>). Za izračunavanja su korišćena stvarna vremena uzorkovanja, doze i trajanja infuzije. Nominalna vremena uzorkovanja i doze korišćeni su za kreiranje tabela i slika koncentracijavreme.
[0323] Kada nisu bile dostupne iz stvarnih podataka, aktivnost na 168 sati nakon doziranja (C168) i vreme do 1 IU/dL iznad početne vrednosti (TBLP1) rFIXFc-a su dobijeni korišćenjem mikroskopskih konstanti brzine generisanih u programu WinNonlin za simulaciju nivoa aktivnosti FIXFc naspram podataka o vremenu. Individualni i srednji PK parametri i deskriptivna statistika prikazani su u ovom primeru. Formalna statistička analiza nije sprovedena, jer su opseg doze i broj subjekata u svakoj kohorti bili premali za značajnu analizu.
[0325] Rezultati farmakokinetike FIXFc antigena pokazali su da su se koncentracije FIXFc u plazmi naglo povećale nakon kratke IV infuzije FIXFc, sa srednjim (±SD) C<max>vrednostima od 1670 (n=1), 2730 (n=1), 7510 ± 2480 i 15400 ± 3960 ng/mL za nominalne nivoe doze 12.5, 25, 50 i 100 IU/kg, respektivno, i dostignute su u roku od prve polovine sata kod svih pacijenata. Svi pacijenti tretirani FIXFc-om imali su povećanje sistemske izloženosti FIXFc u plazmi u zavisnosti od doze (procenjeno pomoću C<max>i AUC<INF>). Iako je ograničeno na jednog pacijenta pogodnog za evaluaciju na nominalnim dozama 12,5 i 25 IU/kg, primećeno povećanje i C<max>i AUC<INF>bilo je razumno proporcionalno dozi u procenjenom opsegu doza. (Tabela 3 pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek koncentracije FIXFc antigena naspram vremena; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta. Tabela 4 pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek FIXFc antigena PK sumarne podatke; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, ekvivalentnoj dozi „mg/kg“, i broju pacijenta, pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek FIXFc antigena PK sumarne podatke; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, ekvivalentnoj dozi „mg/kg“, i broju pacijenta, i videti tabelu 11.)
[0326] Koncentracije FIXFc u plazmi su opadale na bieksponencijalni način nakon kratke IV infuzije. Vrednosti poluživota i distribucije (alfa) i eliminacije (beta) izgledale su nezavisne od doze u procenjenom opsegu doza, pri čemu su individualne vrednosti poluživota alfa i beta kod pacijenata bile u rasponu od 9,79 do 21,2 sata i 71,0 do 140 sati, respektivno.
[0327] Srednje vrednosti poluživota alfa (±SD) za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 13,1 ± 4,77 i 12,1 ± 2,33 sata, respektivno. Srednje vrednosti poluživota beta (±SD) za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 110 ± 26,5 i 95,8 ± 11,1 sati, respektivno. Pored toga, određene su primarne vrednosti PK parametara za Cl, V<SS>, i MRT, i generalno, sve su izgledale nezavisne od doze u procenjenom opsegu doza. Kao što je naznačeno, ova procena je ograničena podacima jednog pacijenta na nominalnim nivoima doze 12,5 i 25 IU/kg.
[0328] (Tabela 12 i slike 2, 7, i 8.)
[0330] Nadalje, srednje Cl vrednosti bile su 2,28 ± 0,374 i 2,11 ± 0,464 mL/h/kg za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg, respektivno. Srednje V<SS>vrednosti bile su 259 ± 78,5 i 238 ± 52,2 mL/kg za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg, respektivno. Pored toga, srednje MRT vrednosti bile su 112 ± 21,5 i 114 ± 17,1 sata za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg.
[0332] Rezultati farmakokinetike aktivnosti FIXFc korigovani za početnu vrednost pokazali su da se aktivnost FIXFc naglo povećala nakon kratke IV infuzije FIXFc, sa srednjim (±SD) C<max>vrednostima predviđenim modelom od 11,9 (n=1),19,9 (n=1),41,6 ± 8,97 i 98,2 ± 8,21 IU/dL za nominalne nivoe doze 12,5, 25, 50 i 100 IU/kg, respektivno, i dostignute su u roku od prve polovine sata kod svih pacijenata. (Tabela 5 pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek aktivnosti FIXFc korigovane za početnu vrednost naspram vremena; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta. Tabela 6 pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek FIXFc aktivnosti PK sumarne podatke; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, ekvivalentnoj dozi „mg/kg“, i broju pacijenta.)
[0334] [0093] Svi pacijenti tretirani FIXFc-om imali su povećanje aktivnosti FIX u zavisnosti od doze (u odnosu na odgovor početne vrednosti pre doze). Iako je ograničeno na jednog pacijenta pogodnog za evaluaciju na nominalnim nivoima doze 12,5 i 25 IU/kg, primećeno povećanje i C<max>i AUC<INF>bilo je razumno proporcionalno dozi u procenjenom opsegu doza. (Tabele 6, 9, i 13 i slike 3 i 5.)
[0336] Nakon završetka infuzije, pad aktivnosti FIX korigovane za početnu vrednost pokazao je bieksponencijalni raspad; karakterisan brzom fazom distribucije (alfa) praćenom loglinearnom fazom eliminacije (beta). Tokom alfa faze, stopa opadanja aktivnosti FIXFc bila je promenljiva, pri čemu su individualne vrednosti poluživota alfa kod pacijenata bile u rasponu od 0,140 do 16,6 sati. Očigledno povećanje srednjih vrednosti poluživota alfa zavisno od doze bilo je narušeno podacima jednog pacijenta na nominalnim nivoima doze 12,5 i
[0337] 25 IU/kg. Nasuprot tome, vrednosti poluživota eliminacije (beta) izgledale su nezavisne od doze u opsegu doza, sa individualnim vrednostima poluživota beta kod pacijenata u rasponu od 42,1 do 67,4 sata u opsegu doze od 25 do 100 IU/kg. Iako je procenjen i prijavljen, poluživot eliminacije za pacijenta 1 tretiranog sa 12,5 IU/kg rFIXFc nije uključen u sumarnu evaluaciju zbog toga što su nivoi FIX-a kod ovog pacijenta bili detektabilni samo do 96 sati, što je rezultiralo skraćenom terminalnom fazom i doprinelo potcenjivanju terminalnog poluživota eliminacije. Srednje vrednosti poluživota beta (±SD) za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 52,1 ± 10,4 i 52,5 ± 10,1 sata, respektivno, i 52,5 ± 9,2 (raspon 40-67,4) sata za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. (Tabele 6, 8 i 13).
[0339] Pored toga, primarne PK vrednosti parametara za Cl, V<1>, V<SS>i MRT su određene, i generalno, sve su izgledale nezavisne od doze u procenjenom opsegu doza.
[0341] Nadalje, srednje Cl vrednosti bile su 3,77 ± 1,12 i 2,89 ± 0,615 mL/h/kg za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg, respektivno, i 3,36 ± 0,928 mL/h/kg za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. (Tabele 6, 8 i 13.)
[0343] Srednje V<SS>vrednosti bile su 264 ± 77,6 i 179 ± 31,1 mL/kg za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg, respektivno, i 226 ± 69,8 mL/kg za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. (Tabele 6, 8 i 13.) Pored toga, srednje MRT vrednosti bile su 71,7 ± 13,0 i 62,8 ± 8,82 sata za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg, respektivno, i 68,05 ± 11,16 sati za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. (Tabele 6, 8 i 13.)
[0344] Pored primarnih PK parametara, određeni su i sekundarni PK parametri (npr. C168, K-vrednosti, IVR, itd.) radi procene trajanja efekta FIXFc. Kao što se i očekivalo, primećena su povećanja C168, TBLP1, TBLP3 i TBLP5 vrednosti zavisna od doze. Nasuprot tome, K-vrednosti i IVR vrednosti izgledale su nezavisne od doze u procenjenom opsegu doza. U punom opsegu doza, individualne K-vrednosti pacijenata predviđene modelom i primećene kretale su se od 0,61 do 1,02 i 0,62 do 1,17 IU/dL po IU/kg, respektivno. Srednje K-vrednosti predviđene modelom za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 0,76 i 0,90 IU/dL po IU/kg, respektivno, i 0,821 ± 0,1387 (raspon 0,61-1,02) IU/dL po 1 IU/kg za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. Srednje IVR vrednosti predviđene modelom za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 34,5 i 35,1%, respektivno. Srednje primećene K-vrednosti za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 0,86 i 1,02 IU/dL po IU/kg, respektivno, i 0,926 ± 0,1787 (raspon 0,97-1,17) IU/dL po 1 IU/kg za kombinovane nominalne doze 25, 50 i 100 IU/kg. Srednje primećene IVR vrednosti za nominalne nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 39,2% i 39,8%, respektivno. (Tabele 6, 7, 8 i 13.) Tabela 7A-7B show7 pokazuje individualne podatke pacijenata i grupni prosek FIXFc aktivnosti sekundarne PK sumarne podatke; sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi i broju pacijenta.
[0346] Svaki 1 IU/kg infundovanog rFIXFc povećao je aktivnost FIX u plazmi za 0,93 ± 0,18 IU/dl u proseku, a ova inkrementalna iskoristivost (K-vrednost) pokazala je slabu pozitivnu korelaciju sa telesnom težinom (R<2>=0,336, p=0,048) (slika 23).
[0348] Farmakokinetičke procene za aktivnost FIXFc bile su konzistentne sa onima za rFIXFc antigen (npr., uporediti tabele 13 i 14). Nadalje, postojala je odlična korelacija između nivoa aktivnosti rFIXFc i antigena, što ukazuje na očuvanje rFIXFc in vivo aktivnosti. (Slika 9.) Pored toga, u odnosu na istorijske podatke za BENEFIX<™>(Wyeth), rFIXFc je pokazao (tabela 8) sledeće:
[0350] Doznu linearnost od 25-100 IU/kg
[0351] 3 puta veće povećanje t<1/2beta>
[0352] 3 puta veće povećanje srednjeg vremena zadržavanja
[0353] 24% poboljšanu inkrementalnu iskoristivost
[0354] 2.5 puta smanjen klirens
[0355] FIXFc je rekombinantni fuzioni protein sastavljen od FIX vezanog za Fc domen ljudskog IgG1. FIXFc je dizajniran da bude verzija FIX-a sa produženim delovanjem.
[0356] Prekliničke studije sa FIXFc-om pokazale su produženje poluživota aktivnosti FIX u poređenju sa BENEFIX<™>, komercijalno dostupnim rekombinantnim proizvodom faktora IX. Obrazloženje za ovu studiju bilo je proceniti bezbednost i PK FIXFc-a kod pacijenata sa teškom hemofilijom B. Za ovu studiju, 12 subjekata pogodnih za evaluaciju, starosti od 18 do 76 godina, bilo je dostupno za PK evaluaciju. Svaki subjekt je primio jednu primenu FIXFc-a u nominalnoj dozi od 12,5, 25, 50, ili 100 IU/kg telesne težine infundovane intravenski tokom približno 10 minuta. Uzorci plazme za PK procene i aktivnosti FIXFc i koncentracija antigena dobijeni su pre infuzije, kao i do 14 dana nakon doziranja. PK i FIXFc antigena i aktivnosti nezavisno su karakterisane u ovoj studiji korišćenjem modelom zavisnih i modelom nezavisnih metoda.
[0358] FIXFc je bio dobro tolerisan nakon primene pojedinačnih IV doza od 12,5, 25, 50 i 100 IU/kg telesne težine. U ovoj studiji nije bilo dokaza o ozbiljnim neželjenim događajima povezanim sa lekom. Kod bilo kog subjekta nisu detektovana neutralizujuća ili vezujuća antitela na rFIXFc.
[0360] Primećena su približna povećanja C<max>i AUC<INF>proporcionalna dozi i za FIXFc antigen i za aktivnost nakon primene doza od 12,5 do 100 IU/kg, ali su V i Cl bili slični kod svih doza. Ovi rezultati ukazuju na to da FIXFc antigen i aktivnost pokazuju linearnu PK u procenjenom opsegu doza. Relativno male vrednosti V parametra mogu ukazivati na to da FIXFc ulazi u intersticijalnu tečnost, ali ne prelazi ćelijsku membranu u unutarćelijske tečnosti.
[0362] Vršni nivoi FIXFc antigena i aktivnosti u plazmi primećeni su u roku od 0,5 sata nakon završetka infuzije i ostali su detektabilni nekoliko dana nakon doziranja. Primećen je dokaz smanjenog klirensa i produženog poluživota i za FIXFc antigen i za aktivnost.
[0364] [0105] Srednje vrednosti klirensa i terminalnog poluživota eliminacije povezane sa FIXFc antigenskim koncentracijama za nivoe doze 50 i 100 IU/kg bile su 2,28 i 2,11 mL/h/kg i 110 i 95,8 sati, respektivno. Slično, srednje vrednosti klirensa i terminalnog poluživota eliminacije povezane sa nivoima aktivnosti FIXFc u istom opsegu doze bile su 3,77 i 2,89 mL/h/kg i 52,1 i 52,5 sata, respektivno. Poređenje rezultata PK aktivnosti FIXFc primećenih u trenutnoj studiji sa prijavljenim PK za aktivnost BENEFIX<™>(Summary of Product Characteristics of BENEFIX<™>; Nov 18, 2009) otkrilo je približno 3-struko smanjenje FIXFc klirensa i približno 3-struko povećanje i FIXFc terminalnog poluživota eliminacije i srednjeg vremena zadržavanja u odnosu na BENEFIX<™>.
[0366] Sa primećenim poboljšanjima u PK, FIXFc će pružiti produženu zaštitu od krvarenja, omogućavajući ređe injekcije za osobe sa hemofilijom B. Na osnovu rezultata ovog ispitivanja, rFIXFc se može dozirati svake dve nedelje ili dva puta mesečno korišćenjem doza od 100 IU/kg i najmanje jednom nedeljno korišćenjem nižih doza. Takav režim zahteva manje injekcija. Pored toga, upotreba rFIXFc-a će imati i druge potencijalne kliničke implikacije kao što su: centralni venski pristup; poboljšana usklađenost sa režimom; smanjeno probijajuće krvarenje; i povećana zaštita zglobova od krvarenja.
[0368] Primer 2. B-LONG ispitivanje faze 1/2/3
[0370] Ovo će biti otvorena, multicentrična evaluacija bezbednosti, farmakokinetike i efikasnosti rekombinantnog, dugodelujućeg fuzionog proteina faktora IX Fc koagulacije (rFIXFc) u prevenciji i lečenju krvarenja kod prethodno lečenih subjekata sa teškom hemofilijom B. Tretman sa FIX proizvodima trenutno na tržištu zahteva doziranje 2-3 puta nedeljno. Proizvod sa produženim poluživotom koji produžava potreban interval doziranja na jednom nedeljno ili duže bi medicinska zajednica smatrala značajnim poboljšanjem za lečenje pacijenata sa teškom hemofilijom.
[0372] Nivoi doza znatno variraju za rFIX proizvode u kliničkim profilaktičkim studijama: prijavljene doze kreću se od 10 do 171 IU/kg (Roth et al., Blood 98:3600 (2001)) ili 40 do 100 IU/kg (MASAC Preporuka 177, National Hemophilia Foundation (Oct.2006)). Štaviše, predviđa se da će se najniže koncentracije aktivnosti FIX tokom profilaktičkog tretmana kod subjekata bez kliničkih znakova krvarenja kretati između 0,2 i 3,8 IU/dL (Carlsson et al., Hemophilia 4:83 (1998)). Uzimajući u obzir inter-individualnu varijabilnost pacijenata, individualizovani režimi doziranja zasnovani na kliničkom statusu pacijenta su uobičajena praksa.
[0373] Rezultati studije faze 1/2a (primer 1) koja je procenjivala bezbednost i farmakokinetiku jedne doze zamrznute tečne formulacije rFIXFc su pokazali da se lek dobro podnosi u dozama u rasponu od 1 do 100 IU/kg, a PK karakterizacija sugeriše nekoliko prednosti u odnosu na trenutno dostupne tretmane, naime poluživot i MRT koji su 3-struko duži od onih prethodno prijavljenih za BENEFIX<™>(61 sat naspram 19 sati). Svrha ove studije je prospektivno određivanje procena PK parametara liofilizovanog rFIXFc-a kod ljudi, upoređivanje ovih sa BENEFIX<™>PK procenama parametara kod ljudi i demonstracija efikasnosti liofilizovanog rFIXFc-a u prevenciji i lečenju krvarenja, kao i bezbednosti njegove ponovljene primene kod prethodno lečenih subjekata sa teškom hemofilijom B.
[0375] Studija će obuhvatiti četiri kraka: režim profilakse niske doze (n=25), režim profilakse visoke doze (n=25), režim na zahtev (n=20) i režim velike operacije (n=5). Krak režima niske doze profilakse uključivaće PK podgrupu (n=16) doziranu BENEFIX<™>-om, nakon čega sledi unakrsni prelazak na rFIXFc.
[0377] Primarni ciljevi studije su: procena bezbednosti i podnošljivosti rFIXFc-a u svim kracima tretmana; procena efikasnosti rFIXFc-a u svim kracima tretmana; i procena efikasnosti profilakse u odnosu na terapiju na zahtev (poređenje godišnjeg broja epizoda krvarenja između krakova 1 i 2 naspram kraka režima na zahtev 3).
[0379] Sekundarni ciljevi studije su: poređenje PK procena parametara rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a; procena efikasnosti rFIXFc-a u kracima na zahtev i hirurškom kraku; procena i poređenje PK procena parametara rFIXFc-a na početnoj vrednosti i nedelji 26 (±1 nedelja) u PK podgrupi; procena odgovora subjekata na tretman u svim kracima; i procena potrošnje rFIXFc-a u svim kracima.
[0381] Glavni kriterijumi za uključivanje:
[0383]
[0384] Muškarci starosti 12 godina i stariji i telesne težine najmanje 40 kg
[0385] Dijagnostikovana hemofilija B (početni nivo faktora IX manji ili jednak 2%)
[0386] Istorija od najmanje 100 dana izloženosti bilo kom proizvodu faktora IX
[0387] Broj trombocita ≥100.000 ćelija/μL
[0388] INR (međunarodni normalizovani odnos) ≤1,40 kako je definisano normalnim opsegom laboratorije za testiranje
[0389] CD4 broj ≥200 ćelija/μL
[0391] Glavni kriterijumi za isključivanje:
[0393]
[0394] Istorija inhibitora faktora IX
[0395] Disfunkcija bubrega ili jetre
[0396] Dijagnostikovan drugi koagulacioni defekt osim hemofilije B
[0397] Ranija istorija anafilakse povezane sa bilo kojom primenom FIX-a ili IV imunoglobulina Uzimanje sistemskih imunosupresivnih lekova (npr. sistemskih kortikosteroida; međutim, HAART (visoko aktivna antiretrovirusna terapija) je dozvoljena)
[0399] Primer 3. FIXFc proizvodnja u HEK293 ćelijama
[0401] FIXFc je proizveden u stabilno transfektovanim HEK293 ćelijama koje sadrže ekspresionu kasetu za FIXFc (nativni FIX fuzionisan direktno sa Fc regionom) i ekspresionu kasetu za sam Fc. Ćelije su takođe transfektovane ekspresionom kasetom za PC5, koji je procesni enzim koji omogućava potpunu obradu FIX propeptida. Transfektovane ćelije su uzgajane u medijumu bez seruma u suspenziji koji sadrži vitamin K, i sekretovale su tri proteina: FIXFc dimer, FIXFc monomer (jedan FIXFc lanac i jedan Fc lanac) i Fc dimer. FIXFc monomer („FIXFc“) je prečišćen hromatografijom na koloni (Protein A, Fractogel DEAE, i Q Sepharose pseudo-afinitetnom elucijom sa niskom jonskom snagom CaCl<2>), i virusno inaktivisan i filtriran za primenu ljudskim subjektima. Takođe videti Peters et al., Blood. 2010 Mar 11;115(10):2057-64 (Epub 2010 Jan 7); i američki patent br.7,566,565.
[0403] Aktivnost koagulacije FIXFc-a merena je kvantifikovanjem njegove sposobnosti da obnovi aktivnost zgrušavanja plazme sa nedostatkom FIX-a korišćenjem MLA Electra 1600C (Medical Laboratory Automation/Instrument Labs, Pleasantville, NY). Rezultati su upoređeni sa kalibracionom krivom generisanom korišćenjem serijskih razblaženja standarda FIX-a Svetske zdravstvene organizacije.
[0404] Smatra se da su serinska fosforilacija i tirozinska sulfatacija faktora IX važni za in vivo iskoristivost. Prijavljeno je da MONONINE<™>(faktor IX prečišćen iz plazme (pdFIX) koji proizvodi CSL Berhing) ima bolju in vivo iskoristivost od BENEFIX<™>(rekombinantni FIX (rFIX) koji proizvodi Wyeth) zbog višeg nivoa fosforilacije/sulfatacije MONONINE<™>-a (>90%/>90% naspram <10%/5%). Međutim, FIXFc proizveden u HEK293 ćelijama ima skoro nultu fosforilaciju/sulfataciju (<10%/4%, što je vrlo slično BENEFIX<™>), i pokazuje bolju IVR (1,0 IU/dl po IU/kg) od BENEFIX<™>-a (0,7).
[0406] Pored toga, FIXFc proizveden kako je gore opisano imao je značajno niži (10-100 puta) nivo (0,01-0,001%) aktiviranog FIX (FIXa), nečistoće povezane sa proizvodom, nego i MONONINE<™>(pdFIX) ili BENEFIX<™>(rFIX) (0,1%). Dobijeni FIXFc će imati manje neželjenih trombotičkih događaja nakon primene nego MONONINE<™>ili BENEFIX<™>.
[0408] Primer 4. Pedijatrijske studije: Ekstrapolacija i međusobna povezanost između razvoja u populaciji odraslih i pedijatrijskoj populaciji
[0410] Karakteristike pacijenata koje pokazuju odnose sa farmakokinetikom faktora IX uključuju fiziološke promene zavisne od starosti (Björkman and Berntorp, Clin.
[0411] Pharmacokinetics 40:815-32 (2001); i Bjorkman, Hemophilia 9(suppl 1):101-10 (2003)) i veličinu i sastav tela (Shapiro, Hemophilia 11:571-82 (2005)). Stoga je klirens faktora IX korigovan za težinu (CL) generalno opadao sa starošću i/ili telesnom težinom tokom rasta od detinjstva do odraslog doba, sa odgovarajućim povećanjem terminalnog poluživota (t<1/2>). Za rFIX proizvod (BENEFIX<™>), CL i volumen distribucije u stanju ravnoteže (Vss) su povećani kod dece i zatim ostaju konstantni tokom odraslog doba; stoga će ovi parametri biti pažljivo praćeni u pedijatrijskim studijama.
[0413] [0120] Vršni nivoi prokoagulantne aktivnosti faktora IX (FIX:C) zavise od početnog volumena distribucije FIX:C nakon pojedinačnih i/ili ponovljenih doza FIX-a. Početna distribucija FIX-a je brza. Međutim, pokazalo se da je in vivo iskoristivost (srednja inkrementalna iskoristivost) za BBENEFIX<™>obično bila 30% niža od one kod faktora IX koagulacije dobijenog iz plazme prečišćenog monoklonskim antitelima (pdFIX) (Roth et al., Blood 98:3600-3606 (2001)). Nadalje, studije sa pdFIX-om su pokazale da subjekti starosti 15 godina i mlađi imaju značajno nižu iskoristivost od onih koji su stariji (White et al., Thromb. Haemost. 73:779-84 (1995)). Stoga će se praćenje najnižih i vršnih nivoa takođe sprovoditi u pedijatrijskim studijama.
[0415] Budući da su studije pokazale da deca mogu reagovati drugačije u poređenju sa odraslima, procene farmakokinetike na početnoj vrednosti sa 50 IU/kg rFIXFc-a biće sprovedene kod dece sa skraćenim uzorkovanjem za farmakokinetiku.
[0417] Studija faze 1/2a (SYN-FIXFc-07-001) koja procenjuje bezbednost i farmakokinetički profil jedne intravenske primene rFIXFc-a kod PTP starosti 18 godina i više sa teškom hemofilijom B nedavno je završena. Preliminarni rezultati iz ovog početnog ispitivanja na ljudima pokazuju približno 3-struko povećanje farmakokinetičkih parametara (srednji terminalni poluživot, MRT, i AUC) rFIXFc-a u poređenju sa onim što je prijavljeno u literaturi za BENEFIX<™>(videti gore). Dodatno, rFIXFc je bio dobro tolerisan i nije bilo znakova reakcija na mestu injekcije, kao ni razvoja inhibitora. Zajedno, ovi rezultati bezbednosti i farmakokinetike podržavaju započinjanje registracione studije faze 1/2/3 (studija 998HB102 (B-LONG), videti gore) koja procenjuje bezbednost, farmakokinetiku i efikasnost rFIXFc-a u prevenciji i lečenju krvarenja kod 104 PTP (sa najmanje 100 dana izloženosti prethodnim proizvodima) starosti 12 godina i starijih sa teškom hemofilijom B (<2%). Nakon što budu dostupni dovoljni podaci o bezbednosti iz registracione studije, biće pokrenut pedijatrijski program radi daljeg istraživanja bezbednosti i efikasnosti rFIXFc-a kod dece. Dokaz produženog poluživota rFIX-a kod ljudi znači da će biti potrebno ređe injektiranje za prevenciju i lečenje krvarenja kod osoba sa hemofilijom B.
[0419] Pedijatrijska PTP studija faze 2/3 kod prethodno tretirane dece (<12 godina dtarosti)
[0421] [0123] Kada podaci o 10 PTP (≥12 godina) sa kompletnom farmakokinetikom i 50 dana izloženosti budu dostupni iz prethodne studije (studija 998HB 102), biće pokrenuta pedijatrijska studija, faza 3. Ova pedijatrijska studija faze 2/3, kod PTP koji su imali najmanje 50 dana izloženosti FIX proizvodima pre uključivanja, biće sprovedena globalno na približno 25 kliničkih lokacija. Približno 25 PTP (da bi se osiguralo 20 subjekata pogodnih za evaluaciju), starosti 2-11 godina sa teškom hemofilijom B (<2 IU/dL [<2%] endogenog FIX), biće skriningovani i odabrani prema unapred definisanim kriterijumima. Svi subjekti pogodni za evaluaciju završiće farmakokinetički deo studije (PK sa FIX proizvodom pre studije, a zatim PK sa rFIXFc) i primaće nedeljno doziranje rFIXFc-a tokom 52 nedelje. Ova studija će beležiti inkrementalnu iskoristivost, in vivo poluživot, AUC, i klirens rFIXFc-a. Svi subjekti će proći procenu farmakokinetike na početnoj vrednosti sa FIX-om pre studije i rFIXFc-om, a trajanje studije za svakog subjekta biće približno 69 nedelja, uključujući skrining i praćenje.
[0423] Svaki subjekt će primiti 50 IU/kg rFIXFc-a na početnoj vrednosti za procenu farmakokinetike, nakon čega sledi ponovljeno nedeljno doziranje sa 50-60 IU/kg rFIXFc-a. Što se tiče usklađenosti pacijenata, skraćeno uzorkovanje za farmakokinetiku biće primenjeno za proizvod pre studije i za rFIXFc kako sledi: pre doze, na kraju injekcije, 30 ± 10 minuta, 3 ± 1 sat, 24 ± 3 sata (dan 1), 72 ± 3 sata (dan 3), 120 ± 3 sata (dan 5) i 168 ± 3 sata (dan 7) nakon završetka injekcije. Da bi se ispitala imunogenost, svi subjekti će biti tretirani rFIXFc-om nedeljno tokom minimalno 50 dana izloženosti. Parametri bezbednosti biće uključeni za trenutnu procenu bezbednosti i podnošljivosti, kao što su: (a) vitalni znaci (puls, krvni pritisak, respiratorna frekvencija, temperatura) pre injekcije rFIXFc-a i 30 minuta nakon injekcije; (b) hematološki i koagulacioni parametri; (c) klinička hemija; (d) učestalo određivanje inhibitora FIX korišćenjem Nijmegen-modifikovanog Bethesda testa (neposredno pre prve izloženosti, dan izloženosti 4 [nedelja 4], dan izloženosti 12, dan izloženosti 24, dan izloženosti 36, i dan izloženosti 50); i (e) neželjeni događaji.
[0425] Efikasnost će biti procenjena evaluacijom broja epizoda krvarenja, intervala krvarenja i broja tretmana i potrošnje FIX-a po godišnjem periodu i po događaju.
[0427] Pedijatrijska PUP studija faze 2/3 kod prethodno netretirane dece (0-11 godina starosti)
[0429] Kada podaci od 10 prethodno lečene dece (2-11 godina) sa kompletnom farmakokinetikom i 50 dana izloženosti budu dostupni iz prethodne studije, biće pokrenuta pedijatrijska PUP studija faze 2/3. Ova studija će biti sprovedena globalno na približno 60 kliničkih lokacija. Do 30 PUP (da bi se osiguralo 20 subjekata pogodnih za evaluaciju), starosti 0 i više godina sa teškom hemofilijom B (<2 IU/dL [<2%] endogenog FIX), biće skriningovani i odabrani prema unapred definisanim kriterijumima.
[0431] [0127] Učešće u studiji će varirati budući da početak tretmana može započeti korišćenjem rFIXFc-a kao modifikovanog režima profilakse. Očekuje se da će učešće pacijenta u studiji biti približno četiri godine, uključujući skrining i praćenje. Očekuje se da će tokom ovog vremena većina pacijenata dostići 50 dana izloženosti rFIXFc-u. Da bi se ispitala imunogenost, svi subjekti će biti tretirani sa približno 50 dana izloženosti rFIXFc-u ili do 4 godine. Parametri bezbednosti biće uključeni za trenutnu procenu bezbednosti i podnošljivosti: (a) učestalo određivanje inhibitora FIX korišćenjem Nijmegen-modifikovanog Bethesda testa; i (b) neželjeni događaji.
[0433] Efikasnost će biti procenjena evaluacijom broja epizoda krvarenja, intervala krvarenja i broja tretmana i potrošnje FIX-a po godišnjem periodu i po događaju.
[0435] Primer 5. Biohemijska karakterizacija, aktivnost i PK analiza kod životinja koje nisu ljudi
[0437] rFIXFc proizveden u primeru 3 okarakterisan je za svoju posttranslaciju modifikaciju, a dobijeni su sledeći rezultati (videti tabelu 15 i sliku 11). Propeptid rFIXFc-a bio je pravilno obrađen tokom proizvodnje. Gama-karboksilacioni obrazac rFIXFc-a bio je sličan onom kod rFIX-a. Nadalje, ukupan Gla/molekul (11,2 ± 0,7) rFIXFc-a bio je uporediv sa rFIX-om. Budući da je gama-karboksilacija na određenim reziduama esencijalna za aktivnost FIX-a, ovo su važni rezultati. Pored toga, serinska 158 fosforilacija i tirozinska 155 sulfatacija rFIXFc-a bile su uporedive sa rFIX-om. N-vezani glikani u FIX-u nisu u potpunosti sijalilovani, slično rFIX-u. O-vezana glikozilacija rFIXFc-a u prvom EGF domenu bila je ista kao kod FIX-a, iako u različitim relativnim odnosima. Asp 64 rFIXFc-a imao je viši stepen beta-hidroksilacije od rFIX-a ili faktora IX dobijenog iz plazme (pdFIX). Aktivirani FIX bio je prisutan na mnogo nižem nivou u rFIXFc preparatu nego u rFIX ili pdFIX preparatima, kao što je detaljno objašnjeno u primeru 3.
[0439] Pored toga, rFIXFc je primenjen različitim životinjskim vrstama radi određivanja njegove aktivnosti i PK parametara. Rezultati su prikazani u tabeli 16 i slikama 12-16.
[0441] Primer 6. Gama-karboksilacija
[0443] [0131] Ciljevi ove studije bili su analiza i karakterizacija γ-karboksilacije glutaminskih kiselina (Gla) u prekliničkoj seriji FIXFc materijala i komercijalno dostupnim FIX proizvodima, karakterizacija Gla sadržaja obogaćene frakcije „vrha“ i frakcije „trake“ eluiranja visokom solju koja potiče iz pseudo-afinitetnog hromatografskog koraka jonske izmene, i dalje razdvajanje obogaćene frakcije „vrha“ i frakcije „trake“ eluiranja visokom solju pomoću analitičke jonoizmenjivačke HPLC i dalja karakterizacija razdvojenih vrsta.
[0445] Da bi se ovi ciljevi postigli, razvijen je niz komplementarnih analitičkih metoda. One uključuju analizu aminokiselina (AAA) korišćenjem bazne hidrolize za određivanje (ukupnog) Gla sadržaja, peptidne mape (LC/MS) korišćenjem Lys-C peptida za određivanje Gla distribucije, analitičku jonoizmenjivačku HPLC netaknutih molekula za razdvajanje izoformi, i aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme (aPTT) za određivanje biološke aktivnosti.
[0447] Dva peptida koja sadrže Gla (E) su:
[0448] ● K1K2: YNSGKL<7>E<8>EFVQGNL<15>ER<17>ECM<20>E<21>EK
[0450] o [M+H]+6 Gla = 2953,9
[0452] o [M+H]+5 Gla = 2909,9
[0453] ● K3: CSF<26>E<27>EAR<30>EVF<33>ENT<36>ERTT<40>EFWK
[0455] o [M+H]+6 Gla = 2959,9
[0457] o [M+H]+5 Gla = 2915,9
[0459] o [M+H]+4 Gla = 2871,9
[0461] Trideset mikrograma uzorka (koji potiče iz obogaćene frakcije vrha, frakcije trake visokom solju i svake vrste iz analitičke jonoizmenjivačke HPLC) je denaturisano, redukovano, alkiovano i digestirano sa Lys-C (1:20,E:S). Digest je zaustavljen sa 2% TFA i injektiran na Jupiter C18 (2,0 x 250 mm) Phenomenex kolonu. Razdvajanje je izvršeno na Agilent 1100 sistemu. Kolona je održavana na 25°C, a peptidi su eluirani višestepenim acetonitrilnim gradijentom. Masena spektrometrija (Thermo-Fisher LCQ) je izvršena u režimu „Triple Play“.
[0463] [0135] Komplementarne metode su razvijene za analizu i karakterizaciju Gla sadržaja i distribucije prekliničkog rFIXFc materijala. γ-karboksilacija glutaminskih kiselina (Gla) sadržaj i distribucija u prekliničkoj seriji rFIXFc (obogaćena frakcija vrha) sprovedena je i upoređena sa komercijalno dostupnim proizvodima. Analiza je pokazala sličan Gla sadržaj i distribuciju u odnosu na komercijalno dostupne proizvode. Frakcija „trake“ eluiranja visokom solju je analizirana i upoređena sa obogaćenom frakcijom vrha. Analiza je ukazala na smanjeni nivo γ-karboksilacije.
[0465] FIXFc (obogaćena frakcija vrha) izolovan je iz pseudo-afinitetnog hromatografskog koraka jonske izmene i dalje razdvojen u 3 izoforme pomoću analitičke jonoizmenjivačke HPLC. AEX punjenje kolone i razdvojene vrste bile su visoko γ-karboksilovane. ( AEX punjenje kolone je frakcija trake sakupljena tokom koraka eluiranja visokom solju iz pseudoafinitetnog hromatografskog koraka jonske izmene.) AEX punjenje kolone i razdvojene vrste bile su biološki aktivne. Gla sadržaj i distribucija bili su slični rFIX-u. Peptidna mapa ukazuje na distribuciju 4/5/6 Gla-ova na K3 peptidu. Peptidna mapa ukazuje na visoku populaciju 6 Gla-ova na K1K2 peptidu i nivo tragova od 5 Gla-ova.
[0467] FIXFc (frakcija vrha trake) izolovan je iz pseudo-afinitetnog hromatografskog koraka jonske izmene i dalje razdvojen u 2 izoforme pomoću analitičke jonoizmenjivačke HPLC. AEX punjenje kolone i razdvojene vrste su smanjene u nivou γ-karboksilacije. Primećen je smanjen Gla sadržaj u odnosu na FIXFc obogaćenu frakciju vrha. Primećen je smanjen nivo biološke aktivnosti. Peptidna mapa ukazuje na povećanu populaciju 5 Gla-ova u K1K2 u odnosu na obogaćenu frakciju vrha i može sugerisati uticaj na biološku aktivnost.
[0469] Reference: Dumont JA, et al., Monomeric Fc Fusion Molecules in Therapeutic Abs-From Bench to Clinic, Ch.33 p779-795; Gillis S, et al., Protein Science (1997) 6:185; White GC, et al., J. Thrombosis and Haemostasis (1997) 78:261; Hansson K, and Stenflo J, Journal Thrombosis and Haemostasis (2005) 3:2633; and Peters RT, et al., Blood (2010) 115:2057.
[0471] Primer 7. Evaluacija prokoagulantne aktivnosti rFIXFc-a u modelima krvarenja kod miševa sa HemB
[0473] Uporediva potentnost rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a demonstrirana je u ROTEM in vitro testu pune krvi miša sa HemB i u modelu krvarenja odsečenog repa miša sa HemB in vivo.
[0474] Sposobnost rFIXFc-a da formira čvrste i stabilne ugruške procenjena je rotacionom tromoboelastometrijom (ROTEM<®>, Pentapharm GmbH, Minhen, Nemačka) sa kalcijum hloridom kao aktivatorom (NATEM). Združena puna krv sakupljena putem vena cava od miševa sa HemB podeljena je u sedam alikvota, koji su bili dopunjeni rFIXFc-om do konačne koncentracije od 7,4%, 0,74% i 0,074% normalne aktivnosti FIX u plazmi, ili BENEFIX<™>-om do 10%,1%,0,1% normale. Kao negativna kontrola, uzorak krvi je dopunjen puferom za FIX formulaciju. Ukupno 10 udruženih uzoraka krvi od 5 miševa sa HemB generisano je da bi se završila procena. NATEM reakcija je inicirana dodatkom CaCl<2>. Procenjeni su parametri koagulacije, uključujući vreme zgrušavanja (CT), Vreme formiranja ugruška (CFT) i alfa ugao. Srednja vrednost i SD CT, CFT i alfa ugla sumirani su u tabeli 17. Krive odgovora na dozu za tri parametra su prikazane na slici 17. Sva tri parametra su uporediva između rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a u testiranom opsegu doze (p>0,05 pomoću jednosmerne ANOVA (Kruskal-Wallis) analize).
[0476] Akutna efikasnost rFIXFc-a je takođe procenjena u modelu krvarenja odsečenog repa miša sa HemB. (Slika 18.) Mužjaci miševa sa HemB su stratifikovani za jednaku zastupljenost telesne težine i starosti u različitim grupama za tretman. Pre povrede odsecanja repa, miševi su anestezirani koktelom od 50 mg/kg Ketamina i 0,5 mg/kg Deksmidetomidina i postavljeni na grejnu podlogu da bi se održala telesna temperatura. Repovi miševa su zatim uronjeni u vodu temperature 37°C tokom 10 minuta radi širenja bočne vene. Nakon širenja vene, rFIXFc, BENEFIX<™>ili vozilo su injektirani kroz venu repa, a 5 minuta kasnije, distalnih 4 mm repa je odsečeno korišćenjem hirurškog skalpela br.11 sa ravnom oštricom. Ispuštena krv je sakupljena u 13 ml toplog fiziološkog rastvora tokom 30 minuta, a gubitak krvi je kvantifikovan gravimetrijski. Testirano je šest grupa za tretman rFIXFc-om (720, 360, 240, 120, 80, 40 IU/kg, n=15) i tri grupe za tretman BENEFIX<™>-om (360, 120, 40 IU/kg, n=15). Vrednost gubitka krvi individualne životinje i kriva odgovora na dozu medijane gubitka krvi prikazani su na slici 19(A), a medijana volumena gubitka krvi svake grupe za tretman sumirana je u tabeli 18. Odgovor na dozu u medijani volumena gubitka krvi za oba rFIXFc i BENEFIX<™>je uporediv (p=0,9315 pomoću neparenog t-testa sa Welchovom korekcijom).
[0478] [0141] Da bi se utvrdilo da li je trostruko produžen poluživot rFIXFc-a u odnosu na BENEFIX<™>rezultirao produženom efikasnošću rFIXFc-a, predmetni pronalazači su procenili efikasnost rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a i u ex vivo ROTEM<®>testu i u modelu krvarenja presecanja vene repa (TVT) kod miševa sa HemB. Slika 20.
[0480] Za ROTEM<®>ex vivo test, muški miševi sa HemB primili su 50 IU/kg rFIXFc-a ili 100 IU/kg BENEFIX<™>-a intravenskom injekcijom. Puna krv je sakupljena iz vena cava tretiranih životinja 5 minuta, 24, 72, 96, 120, 168 i 216 sati nakon doziranja rFIXFc-om (n=8 miševa u svakoj vremenskoj tački) ili 5 minuta, 24, 48, 72 i 96 sati nakon doziranja BENEFIX<™>-om (n=4 miša/vremenska tačka). Uzorci krvi su analizirani odmah pomoću NATEM. Srednja vrednost i SD za CT, CFT, i alfa ugao prikazani su u tabeli 19, a krivulje CT, CFT i alfa-ugao naspram vremena prikazane su na slici 21. U poređenju sa BENEFIX<™>, rFIXFc je pokazao uporediv CT, CFT, i alfa ugao na 5 minuta, ali značajno poboljšan CT, CFT i alfa ugao nakon 72 sata uprkos 2-struko nižoj dozi u odnosu na BENEFIX<™>.
[0482] [0143] Da bi se procenila profilaktička efikasnost rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a, muški miševi sa HemB su stratifikovani za jednaku zastupljenost telesne težine i starosti u 9 različitih grupa za tretman. rFIXFc je primenjen IV injekcijom u dozi od 4 IU/kg,13 IU/kg, 40 IU/kg i 120 IU/kg 72 sata pre presecanja vene repa, dok su iste doze BENEFIX<™>-a primenjene 24 sata pre povrede. Pre presecanja vene repa, miševi su anestezirani koktelom od 50 mg/kg Ketamina/0,125 mg/kg Deksmidetomidina/0,1 mg/kg Bupreneksta. Da bi se miševima omogućilo da održe normalnu aktivnost nakon presecanja vene repa, dat je 1 mg/kg rastvor Atipamezola da bi se preokrenuo efekat Deksmidetomidina, što je odmah praćeno presecanjem bočne vene repa sa ravnom hirurškom oštricom br.11 na području gde je prečnik repa približno 3 mm. Izgubljena krv je isprana toplim fiziološkim rastvorom da bi se osiguralo jasno posmatranje rane, a miš je zatim pojedinačno smešten u čist kavez sa belom papirnom podlogom tokom sledeća 24 sata. Ponovno krvarenje i fizička aktivnost su posmatrani i zabeleženi svakog sata do 12 sati nakon povrede. Moribundni miševi su eutanazirani odmah nakon identifikacije, a provera 24 sata nakon povrede je sprovedena radi završetka studije. Kaplan-Meier kriva za vreme do eutanazije i grafikon stopa preživljavanja 24 sata nakon TVT-a prikazani su na slici 22. Log-rank test je utvrdio da su sve grupe za tretman sa dozom većom od 4 IU/kg značajno bolje od grupe vozila (p<0,001). Nadalje, preživljavanje je uporedivo između miševa koji su primili istu dozu rFIXFc-a 72 sata pre povrede kao i onih koji su primili BENEFIX<™>24 sata pre povrede(p=0,4886, 0,9268, 0,7279 i 0,5209 za grupe doza 4, 13, 40 i 120 IU/kg, respektivno). Stope preživljavanja 24 sata nakon TVT-a su prikazane, a ED50 vrednost za svaki molekul je ekstrapolirana iz krive; ED50 za dva tretmana su slične: 17,8 IU/kg za rFIXFc i 15,4 IU/kg za rFIX. Stoga, rFIXFc je obezbedio 3-struko duže trajanje zaštite kod miševa sa HemB u odnosu na uporedivu dozu BENEFIX<™>, mereno preživljavanjem i ponovnim krvarenjem nakon povrede presecanja vene repa. Stoga, rFIXFc je obezbedio 3-struko duže trajanje zaštite kod miševa sa HemB u odnosu na uporedivu dozu BENEFIX<™>, mereno preživljavanjem i ponovnim krvarenjem nakon povrede presecanja vene repa.
[0484] Zaključno, kako podaci pokazuju, dok je 15,4 IU/kg BENEFIX<™>-a rezultiralo da 50% miševa sa HemB preživi presecanje vene repa 24 sata nakon doziranja, 17,8 IU/kg rFIXFc-a je postiglo 50% preživljavanja kod životinja koje su povređene 72 sata nakon doziranja. Stoga, rFIXFc demonstrira 3-struko dužu profilaktičku efikasnost u korelaciji sa produženjem svog poluživota u odnosu na BENEFIX<™>. Rezultati iz modela krvarenja dodatno su potkrepljeni ROTEM<®>ex vivo analizom pune krvi miševa sa HemB tretiranih ili 100 IU/kg BENEFIX<™>-om ili 50 IU/kg rFIXFc-om.5 minuta nakon doziranja, primećeno je uporedivo poboljšanje u formiranju ugruška u obe grupe za tretman. Međutim, glavni ROTEM<®>parametri kao što su vreme zgrušavanja, vreme formiranja ugruška i alfa-ugao bili su značajno poboljšani kod miševa tretiranih rFIXFc-om 72 do 216 sati nakon doziranja uprkos 2-struko nižoj dozi rFIXFc-a u odnosu na BENEFIX<™>.
[0486] Ukratko, akutna potentnost rFIXFc-a je uporediva sa potentnošću BENEFIX<™>-a, kao što je pokazano i ROTEM<®>in vitro testom pune krvi i modelom krvarenja odsečenog repa kod miševa sa HemB. Produžena profilaktička efikasnost rFIXFc-a pokazana je u ROTEM<®>ex vivo analizi pune krvi od tretiranih miševa sa HemB i utvrđeno je da je približno 3-struko duža u poređenju sa BENEFIX<™>-om u modelu krvarenja presecanja vene repa kod miševa sa HemB. Produžena efikasnost rFIXFc-a dobro korelira sa 3-struko dužim T<1/2>rFIXFc-a u odnosu na BENEFIX<™>prethodno demonstriranim u farmakokinetičkoj studiji na miševima sa HemB. Stoga, rFIXFc je potpuno aktivan za tretman na zahtev, dok postiže značajno produženu profilaktičku zaštitu sa potencijalom smanjenja učestalosti doziranja, što se istražuje u fazi 3 studije.
[0488] Primer 8. Farmakokinetička i farmakodinamička analiza rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a nakon pojedinačne supkutane doze kod miševa sa nedostatkom FIX-a
[0489] Farmakokinetički (PK) i farmakodinamički (PD) profili rekombinantnog faktora IX-Fc (rFIXFc) i BENEFIX<™>(rFIX) su određeni nakon pojedinačne intravenske ili supkutane injekcije od 200 ili 400 IU/kg kod miševa sa nedostatkom FIX-a. Puna krv je sakupljena putem vene cave (n=4 miša/vremenska tačka/tretman). Koncentracije rFIXFc-a i BENEFIX<™>u plazmi su određene pomoću ELISA testa specifičnog za ljudski FIX. Aktivnosti rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a su određene pomoću testa aktiviranog parcijalnog tromboplastinskog vremena (aPTT testa). PK analize su sprovedene korišćenjem modelom zavisne metodologije koristeći WinNonLin. Rezultati su prikazani u tabelama 22 i 23.
[0491] Za FIXFc, bioraspoloživost kod miševa sa nedostatkom FIX-a bila je 38% za dozu od 200 IU/kg i 38-46% za kombinovanu dozu (antigen ELISA test) i 29% za dozu od 200 IU/kg i 29-39% za kombinovanu dozu (aPTT test aktivnosti) u poređenju sa rFIX, 23% i 19%, respektivno. rFIXFc je imao 1,5-1,7 puta (doza od 200 IU/kg) i 1,5-2,5 puta (kombinovane doze) poboljšanu bioraspoloživost u poređenju sa BENEFIX<™>.
[0493] Za rFIXFc, terminalni poluživot (antigen ELISA test) bio je 62 sata za dozu od 200 IU/kg i 51-62 sata za kombinovane doze, a terminalni poluživot (aPTT test aktivnosti) bio je 42 sata za dozu od 200 IU/kg i 40-42 sata za kombinovane doze, dok je za BENEFIX<™>terminalni poluživot bio 24 sata (antigen ELISA test) za dozu od 200 IU/kg i 17 sati (aPTT test aktivnosti) za dozu od 200 IU/kg. Ovo ukazuje na 2,5-2,6 puta (doza od 200 IU/kg i kombinovana doza) poboljšanje poluživota sa rFIXFc.
[0495] Pored toga, kao što tabele 22 i 23 pokazuju, rFIXFc je imao 4,5-5,6 puta povećanje AUC/doza i 1,9-3,7 puta povećanje Cmax/doza u odnosu na BENEFIX<™>.
[0497] [0150] Rekombinantni faktor IX Fc fuzioni (rFIXFc) protein je dugodelujući oblik rekombinantnog FIX (rFIX) koji će obezbediti ređe doziranje rFIX-a za lečenje hemofilije B. Od miševa do primata koji nisu ljudi i kod pacijenata sa hemofilijom B, rFIXFc ima približno 3-struko duži poluživot u odnosu na rFIX (BENEFIX<™>). Za profilaktički tretman, intravenska isporuka rFIX-a ostaje opterećujući metod primene, posebno za decu i kod pacijenata sa teško dostupnim venama. Supkutana primena rFIX-a predstavlja atraktivniji put isporuke koji je manje invazivan i sa ređim doziranjem. Kao takva, supkutana isporuka rFIXFc-a će izazvati manje bola i nelagodnosti od intravenske isporuke i rezultiraće poboljšanom usklađenošću zbog lakše primene i primene za manje vremena nego intravenski put. Režimi profilakse će takođe poboljšati kvalitet života, a klinički ishodi će uključivati smanjenu učestalost krvarenja.
[0499] Koncentracija rFIXFc-a u plazmi miša merena je ELISA testom specifičnim za ljudski FIX, koji je merio FIX deo molekula, a u analizi je korišćena nominalna doza mg/kg.
[0500] Sumarni pregled PK parametara za rFIXFc i BENEFIX<™>prikazan je u tabeli 20 (antigen ELISA test) i tabeli 21 (aPTT test aktivnosti) za n=4/grupa. Oba testa, i analiza antigena i analiza aktivnosti, pokazala su da su Cmax i AUC značajno poboljšani za rFIXFc u odnosu na BENEFIX<™>. Koristeći antigen ELISA test, bioraspoloživost (F%) bila je 38% za rFIXFc naspram 23% za BENEFIX<™>. Slično, koristeći aPTT test aktivnosti, bioraspoloživost je bila 29% za rFIXFc naspram 19% za BENEFIX<™>. Dakle, rFIXFc je pokazao povećanje bioraspoloživosti u odnosu na BENEFIX<™>za 1,5 do 1,6 puta. Merenja poluživota eliminacije pokazala su da je rFIXFc značajno povećao poluživot, bilo da je meren testom antigena (rFIXFc 62 sata naspram BENEFIX<™>24 sata) ili testom aktivnosti (rFIXFc 42 sata naspram BENEFIX<™>17 sati). Ovi podaci pokazuju da je rFIXFc imao produžen poluživot u poređenju sa BENEFIX<™>za 2,6 do 2,5 puta.
[0502] rFIXFc primenjen supkutano miševima sa nedostatkom FIX-a pokazao je PK i PD profil sa povećanjem Cmax i AUC za rFIXFc u poređenju sa BENEFIX<™>. Sveukupno, bioraspoloživost za rFIXFc kretala se od 29% (aktivnost) do 38% (antigen) sa poluživotom od 42 sata (aktivnost) do 62 sata (antigen) u poređenju sa BENEFIX<™>, koji je imao bioraspoloživost od 19-23% i poluživot od 17-24%, respektivno. Dakle, poluživot za rFIXFc isporučen supkutano miševima sa nedostatkom FIX-a pokazao je povećanje od oko 2,2 (antigen) do 3,3 (aktivnost) puta u odnosu na trenutno komercijalizovane rFIX proizvode primenjene intravenski. Sveukupno, ovi podaci podržavaju ideju da će rFIXFc isporučen supkutano biti od kliničke koristi za profilaktički tretman kod pacijenata sa hemofilijom B.
[0504] Primer 9. Farmakokinetička analiza rFIXFc-a nakon pojedinačne supkutane doze kod makaki majmuna
[0505] Farmakokinetički (PK) profil rekombinantnog faktora IX-Fc (rFIXFc) proučavan je nakon jedne supkutane doze od 50 IU/kg,100 IU/kg ili 200 IU/kg kod makaki majmuna. Koncentracija rFIXFc-a u plazmi je merena pomoću ELISA testa specifičnog za FIX.
[0506] Primarna analiza je sprovedena korišćenjem modelom zavisne metodologije koristeći WinNonLin. Videti tabele 22-25.
[0508] Farmakokinetička analiza podataka o koncentraciji u plazmi naspram vremena (merena ELISA testom specifičnim za FIX) pokazala je da su bioraspoloživost i terminalni poluživot slični među dozama. Bioraspoloživost za rFIXFc bila je 40% (50 IU/kg), 34% (100 IU/kg), 36% (200 IU/kg) i 36-45% (kombinovane doze). Terminalni poluživot za rFIXFc bio je 61 sat (50 IU/kg), 45 sati (100 IU/kg), 49 sati (200 IU/kg) i 44-58 sati (kombinovane doze).
[0510] Koncentracija rFIXFc-a u plazmi majmuna merena je ELISA testom specifičnim za FIX koji je merio FIX deo molekula, a u analizi je korišćena nominalna doza mg/kg. Analiza vrha i oporavka demonstrirala je tačnost ovog ELISA testa specifičnog za FIX za detekciju rFIXFc-a u opsegu procenjenih koncentracija u plazmi. Sumarni pregled PK parametara za rFIXFc prikazan je u tabeli 22 (50 IU/kg), tabeli 23 (100 IU/kg) i tabeli 24 (200 IU/kg) za n=3/grupa. Za rFIXFc SC, geometrijske sredine i CV% geometrijske sredine za Cmax bile su 860 22 (50 IU/kg), 1630 97 (100 IU/kg) i 3,750 26 (200 IU/kg), respektivno, što ukazuje na povećanje zavisno od doze. Slična povećanja su primećena i za AUC.
[0511] Geometrijske sredine za bioraspoloživost (F%) bile su 40 16 (50 IU/kg), 30 75
[0512] (100 IU/kg) i 36 27 (200 IU/kg), što pokazuje da je bioraspoloživost bila slična među dozama. Merenja terminalnog poluživota pokazala su da je poluživot bio sličan među dozama i iznosio 58 39 sati (50 IU/kg), 45 3 sata (100 IU/kg) i 46 44 sata (200 IU/kg).
[0514] rFIXFc primenjen supkutano makacima demonstrirao je PK profil sa povećanjima Cmax i AUC zavisnim od doze. Sveukupno, bioraspoloživost se kretala od 30-40% sa poluživotom od 45-58 sati. Dakle, poluživot za rFIXFc isporučen supkutano majmunima pokazao je oko 2,8-struko povećanje u odnosu na trenutno komercijalizovane rFIX proizvode primenjene intravenski. Sveukupno, ovi podaci podržavaju ideju da će rFIXFc isporučen supkutano biti od kliničke koristi za profilaktički tretman kod pacijenata sa hemofilijom B.
[0515] Primer 10. Predviđeni režimi profilaktičkog doziranja
[0517] U poređenju sa standardnim preporučenim režimom doze od 25 do 40 IU/kg FIX-a dva ili tri puta nedeljno, rezultati PK aktivnosti srednje vrednosti rFIXFc-a iz studije faze 1/2a opisane gore sugerišu da je doziranje rFIXFc-a oko jednom nedeljno sa oko 22,5 IU/kg, ili oko svakih 10 dana sa oko 45 IU/kg, ili oko svake 2 nedelje sa oko 120 IU/kg dovoljno za održavanje najniže koncentracije od 1% iznad početne vrednosti (slika 24). Ove procene simulirane modelom potvrđene su dostupnim podacima iz ispitivanja faze 1/2a, koji se u potpunosti uklapaju unutar 95% intervala pouzdanosti simulirane krive aktivnosti u odnosu na vreme. Ovi režimi će često služiti na početku terapije. Uzimajući u obzir heterogenost prijavljenih kliničkih događaja probojnog krvarenja u odnosu na najniži nivo aktivnosti FIX u plazmi, doze održavanja će morati da se prilagođavaju individualno.
[0519] Nakon ponovnog izračunavanja PK rezultata iz studije faze 1/2 (videti primer 11), novi predviđeni režim doziranja, npr. za profilaksu, je 20 IU/kg jednom nedeljno, 40 IU/kg svakih 10 dana, ili 100 IU/kg svake dve nedelje (dva puta mesečno). Videti takođe tabelu 27 i sliku 25.
[0521] Primer 11. Ponovno izračunavanje farmakokinetičkih podataka iz prve studije na ljudima (FiH) (primer 1)
[0523] Subjekti sa različitim genotipovima hemofilije B, kao što su stop kodon/nonsens i missens mutacije, bili su uključeni u FiH studiju o kojoj se raspravlja u primeru 1. Nekoliko subjekata je imalo značajno smanjene nivoe endogenog FIX antigena koji su korelisali sa značajno smanjenom aktivnošću FIX, dok je nekoliko subjekata sa missens genotipovima imalo više antigena od izmerene aktivnosti, što ukazuje na nefunkcionalan cirkulišući protein. Aktivnost FIX pre tretmana kod 2 subjekta premašila je 2 IU/dL, verovatno zbog nekompletnog ispiranja iz njihove poslednje infuzije FIX koncentrata na osnovu istorijskog testiranja i fenotipa bolesti. Na osnovu ovih informacija, PK podaci iz primera 1 su ponovo izračunati bez oduzimanja početne vrednosti, kao što je detaljno opisano u daljem tekstu. Videti tabelu 27.
[0524] Nasuprot PK izračunavanjima (zasnovanim na aktivnosti) u primeru 1, ako se rFIXFc aktivnost PK modeluje bez oduzimanja početne vrednosti, kao što je nedavno prijavljeno za PK analizu glikoPEGilovanog rFIX (Negrier et al., Blood DOI 10.1182/blood 201102 335596 (2011)), rezultirajuće procene poluživota eliminacije i MRT su mnogo duže od procena u primeru 1, i iznose 82,2 ± 21,6 i 96,8 ± 22,0 sati (srednja vrednost ±SD), respektivno. Međutim, znajući da svi pacijenti sa teškom hemofilijom B nemaju 0% endogene aktivnosti FIX, i uzimajući u obzir pacijentov genotip i nivo endogenog FIX antigena, predmetni pronalazači su usvojili metodu analize oduzimanja početne vrednosti u svom PK modelovanju. Konkretno, (a) početna vrednost kod dva pacijenta definisana je kao 0% jer je njihova aktivnost FIX pre tretmana bila <1%, nisu imali detektabilni FIX antigen i imali su nonsens genotipove, (b) početna vrednost za tri pacijenta postavljena je na 0,5% jer je njihova aktivnost FIX pre tretmana bila <1% i imali su detektabilni FIX antigen, (c) za pacijente čija je aktivnost FIX pre tretmana bila između 1-2%, Cmin (najniža aktivnost tokom PK studije) je definisana kao početna vrednost, i (d) za pacijente čija je aktivnost FIX pre tretmana bila ≥2%, 2% (koja je bila gornja granica za uključivanje u ispitivanje) je bila početna vrednost. Aktivnost iznad početne vrednosti pre doziranja smatrana je rezidualnim lekom iz prethodnog tretmana, i svedena je na početnu vrednost i oduzeta od PK podataka nakon doziranja rFIXFc.
[0526] Rezultujući srednji terminalni poluživot (56,7 ± 10,9 sati, raspon 42,4-74,5 sati) i MRT (71,8 ± 10 sati, raspon 53,2-85,9 sati) rFIXFc-a su približno 3-struko duži od onih prijavljenih za rFIX. Prijavljeni terminalni poluživot rFIX-a je 19,3 ± 4,97 sati (raspon 11,1-36,4 sati) i MRT 26,0 ± 6,07 sati (raspon 15,8-46,1 sati). Roth et al., Blood 98:3600-3606 (2001); i Summary of Product Characteristics for BENEFIX<™>, Electronic Medicines Compendium (2010) (http://www.medicines.org.uk/emc/medicine/20376/SPC/BENEFIX<™>/#PHARMACODYNA MIC_PROPS). Dakle, rasponi za rFIXFc se ne preklapaju sa rasponima za rFIX. Slično, srednji CL aktivnosti rFIXFc (3,18 ± 0,78 mL/hkg, raspon 2,05-4,18 mL/h/kg) je približno 2,6-puta manji od onog prijavljenog za rFIX (8,40 ± 2,01 mL/h/kg, raspon 4,66-13,64 mL/h/kg), dok je Vss oba proteina uporediv na 4-5 puta volumena plazme.
[0528] [0162] Iako je isti trend poboljšanja primećen u rFIXFc antigen PK, i T<1/2>α i TT<1/2>β rFIXFc antigena bili su značajno duži od onih izvedenih iz merenja aktivnosti FIX. T<1/2>α procenjen za rFIXFc antigen jasno odstupa od onog koji se normalno povezuje sa FIX-om (2-3 sata). Štaviše, verovatno nekompletno ispiranje pre-studijske supstitucione terapije pre infuzije rFIXFc ponekad je rezultiralo višom početnom vrednošću, što bi zauzvrat moglo dovesti do potcenjivanja rFIXFc T<1/2>β, merenog aktivnošću FIX. Broj subjekata je imao aPTT aktivnost do 3 IU/dL, znatno iznad granice kvantifikacije (1 IU/dL) za aPTT test, u kasnijim vremenskim tačkama do 336 sati (14 dana) nakon doze. Međutim, ove vremenske tačke su isključene iz procene terminalnog poluživota jer su vrednosti bile na ili samo neznatno iznad početnih vrednosti pre tretmana, te se smatralo da su se vratile na početnu vrednost. Nasuprot tome, niski, ali detektabilni terminalni nivoi rFIXFc-a mogu biti demaskirani pomoću specifičnog i visoko osetljivog rFIXFc antigen ELISA testa, koji detektuje čak 0,1 IU/dL u poređenju sa donjom granicom aPTT od 1,0 IU/dl.
[0530] Preostali PK parametri (aktivnost) promenili su se za malu količinu u odnosu na poluživot eliminacije i MRT. Videti tabelu 27(B). Primećeno je linearno povećanje aktivnosti FIX proporcionalno dozi, zasnovano na C<max>koja se javlja odmah nakon infuzije i AUC<INF>(tabela 4). Aktivnost FIX pokazala je biekponencijalni pad nakon infuzije rFIXFc, i bila je karakterisana brzom fazom distribucije (alfa) praćenom log-linearnom fazom eliminacije (beta). Srednji poluživot distribucije (T<1/2>α) bio je visoko varijabilan za pojedinačne subjekte (srednja vrednost 3,4 i 10,3 sata za dve grupe sa višom dozom) (tabela 27(B)). Srednji poluživot eliminacije (T<1/2>β) bio je nezavisan od doze u opsegu terapijske doze koja je testirana, tj., 53,5 sati, 57,5 ± 8,2 sata i 56,5 ± 14,1 sat na 25 IU/kg, 50 IU/kg i 100 IU/kg, respektivno. Vreme do 1% (1 IU/dL) iznad početne vrednosti, procena aktivnosti rFIXFc, pokazalo je povećanje proporcionalno dozi. Iznosilo je 7,3, 10,1 ± 1,5 i 12,3 ± 2,5 dana za doze od 25, 50 i 100 IU/kg, respektivno. Na 168 sati (1 nedelja) nakon doze, aktivnost FIX u plazmi održana je na 1,1 IU/dL, 2,5 ± 0,9 IU/dL i 4,6 ± 1,7 IU/dL iznad početne vrednosti za grupe doze od 25, 50 i 100 IU/kg, respektivno. Takođe su nezavisni od doze bili MRT, CL i Vss u opsegu doze od 25 do 100 IU/kg. Nadalje, svaki 1 IU/kg infundovanog rFIXFc povećao je aktivnost FIX u plazmi za 0,93 ± 0,18 IU/dL u proseku (tabela 27(B)), a ova inkrementalna iskoristivost (K) pokazala je slabu pozitivnu korelaciju sa telesnom težinom (R<2>=0,336, p=0,048)
[0532] [0164] Dugoročno empirijsko kliničko iskustvo sugeriše da će održavana aktivnost faktora u plazmi čak 1 do 2 IU/dL biti adekvatna za sprečavanje spontanih događaja krvarenja kod pacijenata sa teškom hemofilijom A i B (Nilsson et al., J. Intern. Med.232:25-32 (1992)), a povećani događaji krvarenja povezani su sa dužinom vremena ispod 1% normalne aktivnosti FVIII. Collins et al., Thromb Haemost 7:413-420 (2009). Dakle, PK analize pružaju sredstvo za optimizaciju profilaktičkog tretmana pomoću modelovanja individualizovane doze za postizanje održanih najnižih nivoa iznad 1% (1 IU/dL) početne vrednosti, smanjenje varijacije vršna/najniža koncentracija i poboljšanje isplativosti tretmana. Carlsson et al., Haemophilia 4:83-88 (1998); Kisker et al., Haemophilia 9:279-284 (2003).
[0534] Da bi se konstruisali profili koncentracija-vreme nakon različitih režima doziranja, sprovedena je Monte Karlo simulacija korišćenjem populacionog PK modela aktivnosti rFIXFc. Srednje procene parametara modela (CL, volumen distribucije, interkompartmentalni klirens i volumen drugog kompartmenta) u testiranoj populaciji, inter-individualna varijansa i rezidualna varijabilnost usvojeni su za ovu studiju faze 1/2a. Wang et al., J. Clin. Pharmacol.
[0535] 49:1012-1024 (2009). Simulirano je hiljadu subjekata po režimu doziranja sa 14 do 16 tačaka uzorkovanja za svakog subjekta. Bilo je 14 tačaka uzorkovanja za nedeljno doziranje, 15 za doziranje svakih 10 dana, i 16 za doziranje svake druge nedelje. TTelesna težina (BW) je generisana prema objavljenoj metodi, Wang et al. (2009), tj., na osnovu jednačine snage Z=BW-0,5. PPretpostavljeno je da je medijana BW kod 1000 subjekata 75 kg. Na osnovu simuliranih profila koncentracija-vreme, srednja vrednost ± standardna devijacija (SD) profila koncentracija-vreme leka kod 1000 subjekata konstruisana je grafički za različite režime doziranja. Slika 25.
[0537] U poređenju sa standardnim preporučenim režimom doze od 25 do 40 IU/kg FIX-a dva puta nedeljno, rezultati modelovanja PK aktivnosti srednje vrednosti rFIXFc-a iz ove studije pokazuju da je doziranje rFIXFc-a jednom nedeljno sa 20 IU/kg, ili svakih 10 dana sa 40 IU/kg, ili svake 2 nedelje sa 100 IU/kg dovoljno za održavanje najniže koncentracije od 1% iznad početne vrednosti. Slika 25. Ove procene simulirane modelom potvrđene su dostupnim podacima iz ove studije faze 1/2a, koji se u potpunosti uklapaju unutar 95% intervala pouzdanosti simulirane krive aktivnosti u odnosu na vreme. Međutim, s obzirom na heterogenost prijavljenih kliničkih događaja probojnog krvarenja u odnosu na najniži nivo aktivnosti FIX u plazmi (Bjorkman, Haemophilia 9:101-110 (2003); Ahnstrom et al., Haemophilia 10:689-697 (2004)), doza održavanja bi verovatno zahtevala individualno prilagođavanje.
[0538] Tabele
[0539]
[0540] Tabela 1: Polinukleotidne sekvence: FIX-Fc
[0541]
[0542] A. DNK sekvenca FIX-Fc lanca (SEQ ID NO:1, koja kodira SEQ ID NO:2
[0543]
[0545] Ċ
[0546]
[0547]
[0549] Tabela 2: Polipeptidne sekvence
[0550]
[0551]
[0552] Tabela 3. Individualni podaci pacijenata o koncentraciji FIXFc antigena naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta
[0553]
[0554] Tabela 3. Individualni podaci pacijenata o koncentraciji FIXFc antigena naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta (nastavak)
[0555]
[0556] Tabela 3. Individualni podaci pacijenata o koncentraciji FIXFc antigena naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta (nastavak)
[0557]
[0558] Tabela 4. Individualni i grupni prosek FIXFc Antigena PK sumarni podaci
[0559]
[0560]
[0561] Tabela 5. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti i FIXFc aktivnosti korigovane za početnu vrednost naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju Infuzije i broju pacijenta
[0563]
[0564]
[0566] Tabela 5. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti i FIXFc aktivnosti korigovane za početnu vrednost naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta (nastavak)
[0567]
[0568]
[0570] Tabela 5. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti i FIXFc aktivnosti korigovane za početnu vrednost naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta (nastavak)
[0571]
[0572] Tabela 5. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti i FIXFc aktivnosti korigovane za početnu vrednost naspram vremena; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi, trajanju infuzije i broju pacijenta (nastavak)
[0574]
[0575]
[0577] Tabela 6. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti farmakokinetički sumarni podaci; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi i broju pacijenta
[0578]
[0579]
[0580]
[0582] Tabela 7A-7B. Individualni i grupni prosek FIXFc aktivnosti sekundarni farmakokinetički sumarni podaci; Sortirano po nominalnoj dozi, stvarnoj dozi i broju pacijenta
[0583]
[0584]
[0585]
[0587] Tabela 7B
[0588]
[0589]
[0591] Tabela 8. Studija faze 1/2a: Poređenje PK parametara za rFIXFc i BENEFIX<™>
[0592]
[0594] U odnosu na istorijske podatke za BENEFIX<™>, rFIX-Fc je demonstrirao:
[0595] ● 3x povećanje u poluživotu i srednjem vremenu zadržavanja
[0596] ● 24% poboljšanu inkrementalnu iskoristivost u odnosu na
[0597] ● 2,5x smanjen klirens
[0598] Tabela 9. Studija faze 1/2a: Dozno proporcionalno povećanje Cmax i AUC rFIXFc-a (aktivnost)
[0599]
[0601] Tabela 10A-10B. Procenjeno terapijsko trajanje rFIXFc-a pri 50 i 100 IU/kg dozama.
[0602]
[0603]
[0604]
[0606] Tabela 11. Dozno proporcionalno povećanje Cmax i AUC za rFIXFc antigen.
[0607]
[0609] Tabela 12. Farmakokinetičke procene za rFIXFc antigen
[0610]
[0611]
[0613] Tabela 13. Srednje PK vrednosti zasnovane na aktivnosti
[0614]
[0615]
[0616]
[0617]
[0619] Tabela 14. Srednje PK vrednosti zasnovane na nivou antigena.
[0620]
[0621]
[0623] Tabela 15: Biohemijska karakterizacija faktora IX
[0624]
[0625]
[0627] Tabela 16: Sažetak terminalnih poluživota FIXFc-a i BENEFIX<™>-a nakon jedne intravenske doze.
[0628]
[0629] Tabela 17. Sažetak in vitro ROTEM<®>parametara za rFIXFc i BENEFIX<™>dodatih punoj krvi miša sa HemB
[0631]
[0634] Tabela 18. Medijana gubitka krvi nakon odsecanja repa kod miševa sa HemB tretiranih sa rFIXFc ili BENEFIX<™>
[0636]
[0637] Tabela 19. Ex vivo ROTEM<®>parametar kod HemB miševa tretiranih sa rFIXFc i
[0638] BENEFIX<™>
[0640]
[0643] Tabela 20A. PK parametri rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a (200 IU/kg) nakon supkutane injekcije jedne doze kod miševa sa nedostatkom FIX-a (antigen ELISA)
[0645]
[0646] Tabela 20B. PK parametri rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a (200 IU/kg) nakon supkutane injekcije jedne doze kod miševa sa nedostatkom FIX-a (aPTT test aktivnosti)
[0647]
[0649] Tabela 21. PK i PD analiza rFIXFc-a i BENEFIX<™>-a nakon jedne supkutane doze kod miševa sa nedostatkom FIX-a.
[0650]
[0651]
[0653] Tabela 22. PK parametri rFIXFc-a (50 IU/kg) nakon supkutane injekcije jedne doze kod makaki majmuna.
[0654]
[0655]
[0657] Tabela 23. PK parametri rFIXFc-a (100 IU/kg) nakon supkutane injekcije jedne doze kod makaki majmuna.
[0658]
[0659]
[0661] Tabela 24. PK parametri rFIXFc-a (200 IU/kg) nakon supkutane injekcije jedne doze kod makaki majmuna.
[0662]
[0663]
[0665] Tabela 25. PK analiza rFIXFc-a nakon supkutane injekcije jedne doze kod makaki majmuna
[0666]
[0667]
[0669] Tabela 26. Smernice doziranja za rFIXFc terapiju kod hemofilije B
[0670]
[0671]
[0672]
[0674] Tabele 27A i 27B. Poređenje podataka korišćenjem izračunavanja u (A) primeru 1 i (B) primeru 11.
[0675]
[0676]
[0677]

Claims (11)

1. Patentni zahtevi
1. Himerični polipeptid faktora IX („FIX“) koji obuhvata ljudski FIX sa aminokiselinskom sekvencom identičnom aminokiselinama 1 do 415 sekvence SEQ ID NO:2 i ljudski Fc kao FcRn vezujući partner, za upotrebu u metodi profilaktičkog lečenja krvarenja ili epizoda krvarenja kod ljudskog subjekta sa hemofilijom B, koja obuhvata intravensku primenu ljudskom subjektu višestrukih doza od 50 IU/kg do 100 IU/kg himeričnog FIX polipeptida u intervalu doziranja od 9 dana do 18 dana.
2. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu nivo u plazmi himeričnog polipeptida dostiže najnižu koncentraciju od najmanje oko 1 IU/dl nakon najmanje oko 6 dana kod subjekta.
3. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, pri čemu je svaka od višestrukih doza 50 IU/kg ili 100 IU/kg.
4. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je interval doziranja 9 do 17 dana.
5. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je interval doziranja 9 do 16 dana.
6. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je interval doziranja 9 do 15 dana.
7. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je interval doziranja 9 do 14 dana.
8. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je interval doziranja 10 do 14 dana.
9. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, pri čemu himerični FIX polipeptid obuhvata ljudski FIX sa aminokiselinskom sekvencom identičnom aminokiselinama 1 do 415 sekvence SEQ ID NO:2 i ljudski Fc.
10. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema patentnom zahtevu 9, pri čemu ljudski Fc obuhvata aminokiseline 1 do 227 sekvence SEQ ID NO:4.
11. Himerični FIX polipeptid za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 2 do 10, pri čemu je aktivnost FIX u plazmi merena testom zgrušavanja u jednoj fazi koji određuje parcijalno tromboplastinsko vreme.
RS20251092A 2010-07-09 2011-07-11 Polipeptidi faktora ix i metode njihove upotrebe RS67366B1 (sr)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36306410P 2010-07-09 2010-07-09
US201061424555P 2010-12-17 2010-12-17
US201161430819P 2011-01-07 2011-01-07
US201161438572P 2011-02-01 2011-02-01
US201161442079P 2011-02-11 2011-02-11
US201161470951P 2011-04-01 2011-04-01
EP19156074.7A EP3552619B1 (en) 2010-07-09 2011-07-11 Factor ix polypeptides and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67366B1 true RS67366B1 (sr) 2025-11-28

Family

ID=45441870

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20251092A RS67366B1 (sr) 2010-07-09 2011-07-11 Polipeptidi faktora ix i metode njihove upotrebe

Country Status (26)

Country Link
US (13) US9670475B2 (sr)
EP (3) EP4653528A3 (sr)
JP (5) JP2013534426A (sr)
KR (5) KR20140017480A (sr)
CN (1) CN103140237A (sr)
AU (5) AU2011274414B2 (sr)
BR (1) BR112013000650A8 (sr)
CA (1) CA2804274A1 (sr)
CL (1) CL2013000058A1 (sr)
DK (1) DK3552619T3 (sr)
EA (2) EA028067B1 (sr)
ES (1) ES3050283T3 (sr)
FI (1) FI3552619T3 (sr)
HU (1) HUE073325T2 (sr)
IL (3) IL223990B (sr)
LT (1) LT3552619T (sr)
MX (3) MX356527B (sr)
MY (2) MY192639A (sr)
NZ (1) NZ605348A (sr)
PL (1) PL3552619T3 (sr)
PT (1) PT3552619T (sr)
RS (1) RS67366B1 (sr)
SG (3) SG10201913700SA (sr)
SI (1) SI3552619T1 (sr)
UA (2) UA126265C2 (sr)
WO (1) WO2012006624A2 (sr)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
SI2393828T1 (sl) 2009-02-03 2017-01-31 Amunix Operating Inc. Podaljšani rekombinantni polipetidi in sestavki, ki jih obsegajo
US20110046060A1 (en) 2009-08-24 2011-02-24 Amunix Operating, Inc., Coagulation factor IX compositions and methods of making and using same
ES2739503T3 (es) 2010-07-09 2020-01-31 Bioverativ Therapeutics Inc Moléculas de cadena simple procesables y polipéptidos producidos usándolas
SG10201913700SA (en) 2010-07-09 2020-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
DK4108671T3 (da) 2010-10-01 2025-01-06 Modernatx Inc Modificerede nukleosider, nukleotider og nukleinsyrer samt anvendelser deraf
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
WO2013016454A1 (en) 2011-07-25 2013-01-31 Biogen Idec Hemophilia Inc. Assays to monitor bleeding disorders
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP6113737B2 (ja) 2011-10-03 2017-04-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 修飾型のヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸、ならびにそれらの使用方法
KR20140102759A (ko) 2011-12-16 2014-08-22 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물
BR112014017111A8 (pt) * 2012-01-12 2018-05-15 Biogen Idec Inc métodos de redução de imunogenicidade contra o fator viii em indivíduos submetidos à terapia de fator viii
CN111548418A (zh) 2012-02-15 2020-08-18 比奥贝拉蒂治疗公司 因子viii组合物及其制备和使用方法
NZ628014A (en) 2012-02-15 2016-09-30 Biogen Ma Inc Recombinant factor viii proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
EP3521321B1 (en) 2012-04-11 2020-11-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
US10202595B2 (en) 2012-06-08 2019-02-12 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric clotting factors
EP2858659B1 (en) 2012-06-08 2019-12-25 Bioverativ Therapeutics Inc. Procoagulant compounds
EP3970738A1 (en) 2012-07-25 2022-03-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Blood factor monitoring assay and uses thereof
HK1213521A1 (zh) * 2012-09-25 2016-07-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Fix多肽的應用
EP2908847B1 (en) * 2012-10-18 2022-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
JP2015536148A (ja) * 2012-11-20 2015-12-21 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル 改変第ｉｘ因子タンパク質についての方法および組成物
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
DK2956477T4 (da) 2013-02-15 2024-04-15 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EA037906B1 (ru) * 2013-03-15 2021-06-04 Биовератив Терапьютикс Инк. Препараты полипептида фактора ix
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
EP3048899B1 (en) 2013-09-25 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US10325687B2 (en) 2013-12-06 2019-06-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
US20160289633A1 (en) 2013-12-20 2016-10-06 Biogen Ma Inc. Use of Perfusion Seed Cultures to Improve Biopharmaceutical Fed-Batch Production Capacity and Product Quality
WO2015095925A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
KR102382402B1 (ko) 2014-02-04 2022-04-01 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 번역 후 변형을 강화시키기 위한 통류 방식 양이온 교환 크로마토그래피의 용도
EP3123090A4 (en) * 2014-03-24 2017-12-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Lyophilized factor ix formulations
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
AU2016301303B2 (en) * 2015-08-03 2021-10-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX fusion proteins and methods of making and using same
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
MY197302A (en) 2016-04-15 2023-06-12 Takeda Pharmaceuticals Co Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regimen
TW201739448A (zh) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 用於治療及/或預防血液相關疾病之方法及配方
JP6971301B2 (ja) 2016-07-08 2021-11-24 ツェー・エス・エル・ベーリング・レングナウ・アクチエンゲゼルシャフト ヒトにおける長時間作用性第ｉｘ因子の皮下投与
US11123438B2 (en) 2016-08-19 2021-09-21 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Linker peptide for constructing fusion protein
CN107759694B (zh) 2016-08-19 2023-01-13 安源医药科技（上海）有限公司 双特异性抗体及其制备方法与用途
CN106279437B (zh) 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
CN110520149A (zh) 2016-12-02 2019-11-29 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 诱导对凝血因子的免疫耐受性的方法
WO2018102743A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
EP3576762A1 (en) 2017-01-31 2019-12-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor ix fusion proteins and methods of making and using same
US10813589B2 (en) 2017-06-03 2020-10-27 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring uterine contraction pressure
US11045143B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter with connectable hub for monitoring pressure
US11045128B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intra-abdominal pressure
US10799131B2 (en) 2017-06-03 2020-10-13 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intrauterine pressure to protect the fallopian tubes
US11185245B2 (en) 2017-06-03 2021-11-30 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure for muscle compartment syndrome
US20200115436A1 (en) * 2017-06-29 2020-04-16 CSL Behring Lengnau AG 21-day dosing regimen for fusion proteins comprising factor ix and human albumin for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
TWI904068B (zh) 2017-08-09 2025-11-11 美商生物化學醫療公司 核酸分子及其用途
AU2018338608B2 (en) 2017-09-27 2025-09-11 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising active cells
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
MX2020010369A (es) 2018-04-04 2020-10-22 Sigilon Therapeutics Inc Particulas implantables y metodos relacionados.
JP7763589B2 (ja) 2018-05-18 2025-11-04 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 血友病ａを処置する方法
WO2020033863A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
US11672457B2 (en) 2018-11-24 2023-06-13 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11779263B2 (en) 2019-02-08 2023-10-10 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring intra-abdominal pressure for assessing preeclampsia
EP3941509B1 (en) 2019-03-19 2025-12-03 CSL Innovation Pty Ltd Factor ix variants and uses thereof in therapy
AU2020258483A1 (en) 2019-04-17 2021-11-11 Evox Therapeutics, Ltd. Compositions of exosomes and AAV
CN112175088B (zh) * 2019-07-02 2023-03-28 江苏晟斯生物制药有限公司 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用
WO2021026020A1 (en) 2019-08-08 2021-02-11 Sentinel Medical Technologies, LLC Cable for use with pressure monitoring catheters
TW202126284A (zh) 2019-09-30 2021-07-16 美商百歐維拉提夫治療公司 慢病毒載體配製物
US11617543B2 (en) 2019-12-30 2023-04-04 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11981718B2 (en) 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
WO2021262963A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
US20240293516A1 (en) * 2021-07-01 2024-09-05 CSL Behring Lengnau AG Factor ix subcutaneous administration with enhanced safety
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
CN120659872A (zh) 2022-10-11 2025-09-16 西吉隆医疗股份有限公司 用于治疗疾病的经工程化的细胞和可植入元件

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4786726A (en) * 1986-01-06 1988-11-22 Blood Systems, Inc. Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US6406697B1 (en) 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
ATE92107T1 (de) 1989-04-29 1993-08-15 Delta Biotechnology Ltd N-terminale fragmente von menschliches serumalbumin enthaltenden fusionsproteinen.
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
DE10399023I2 (de) 1989-09-12 2006-11-23 Ahp Mfg B V TFN-bindende Proteine
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
DE69123241T2 (de) 1990-12-14 1997-04-17 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
CA2131003A1 (en) 1992-05-26 1993-12-09 Raymond G. Goodwin Novel cytokine that binds cd30
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
US5621039A (en) 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
JPH09509054A (ja) 1994-02-01 1997-09-16 アメリカ合衆国 抗体部分および非抗体部分を含む融合タンパク質
CA2196200A1 (en) 1994-07-29 1996-02-15 Michael Joseph Browne Novel compounds
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
EP0805628B1 (en) 1995-01-17 2003-05-02 Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
AU728657B2 (en) 1996-03-18 2001-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
ATE455552T1 (de) 1997-02-14 2010-02-15 American Nat Red Cross Expression des active human factor ix im brustdrüsengewebe transgener tiere
BR9815975A (pt) 1998-07-31 2001-12-04 Wallace E Carroll Método e aparelho para a determinação defatores de terapia anticoagulante
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
US20030096355A1 (en) * 1999-07-09 2003-05-22 Ke Zhang Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family
DK1252192T3 (da) 2000-02-11 2006-11-20 Merck Patent Gmbh Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid
JP2003530838A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
AP1825A (en) 2000-04-28 2008-02-03 Inflazyme Pharm Ltd 3-Nitrogen-6, 7-dioxygen steroids and uses related thereto.
AU2002226028A1 (en) 2000-11-14 2002-05-27 Board Of Regents, Unversity Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
US20030203845A1 (en) 2001-02-05 2003-10-30 Knudsen Jens Bjerre Combined use of factor VII polypeptides and factor IX polypeptides
MXPA04001982A (es) 2001-09-04 2004-06-07 Merck Patent Gmbh Factor ix modificado.
EP2305312B1 (en) 2001-10-10 2015-03-04 ratiopharm GmbH Remodelling and glycoconjugation of follicle-stimulating hormone (FSH)
AU2002364587A1 (en) 2001-12-21 2003-07-30 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
ES2425738T3 (es) 2001-12-21 2013-10-17 Human Genome Sciences, Inc. Proteínas de fusión de la albúmina
US7217798B2 (en) * 2003-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of Fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis
JP4885707B2 (ja) * 2003-03-18 2012-02-29 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト セリンプロテアーゼを含むｇｌａ−残基の生産方法
WO2006127896A2 (en) 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor ix
CA2520970A1 (en) 2003-04-09 2004-10-28 Robert G. Schaub Hemophilia treatment by inhalation of coagulation factors
PT1624891E (pt) 2003-05-06 2010-01-05 Syntonix Pharmaceuticals Inc Proteínas quiméricas de factor de coagulação-fc destinadas ao tratamento da hemofilia
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7212798B1 (en) * 2003-07-17 2007-05-01 Cisco Technology, Inc. Adaptive AGC in a wireless network receiver
JP2007501811A (ja) 2003-08-08 2007-02-01 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 治療的な関心対象のタンパク質に対する遅延分子の選択的な化学物質接合のためのガラクトースオキシダーゼの使用。
EP1694315A4 (en) 2003-12-03 2009-10-28 Novo Nordisk As FACTOR IX GLYCOPEGYL
MX2007001294A (es) 2004-08-17 2008-03-04 Zlb Behring Gmbh Polipeptidos modificados que dependen de vitamina k.
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
JP2008523837A (ja) 2004-12-21 2008-07-10 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト ガンマ―カルボキシル化に欠陥のある宿主系におけるガンマ―カルボキシル化ポリペプチドの発現
US20060162552A1 (en) 2005-01-26 2006-07-27 Mohawk Valley Energy Solutions, Inc. Systems and methods for controlling room air quality
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
UA97234C2 (ru) 2005-11-01 2012-01-25 Уайєт Раствор хлорида натрия для восстановления влагосодержания композиции лиофилизированного фактора ix
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
EP2863222A1 (en) 2006-03-06 2015-04-22 Amunix Operating Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
HRP20160990T1 (hr) 2006-03-24 2016-10-07 Biogen Hemophilia Inc. Pc5 kao enzim obrade faktor ix propeptida
DK2007885T3 (da) * 2006-04-11 2010-11-08 Csl Behring Gmbh Fremgangsmåde til forøgelse af in vivo-genvindingen af terapeutiske polypeptider
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
PL2032607T5 (pl) * 2006-06-14 2017-10-31 Csl Behring Gmbh Rozszczepialne proteolitycznie białko fuzyjne obejmujące czynnik krzepnięcia krwi
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
US8383388B2 (en) 2006-06-19 2013-02-26 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
JP5122562B2 (ja) 2006-07-17 2013-01-16 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 増加した活性を有する第ｖｉｉａ因子アナログの新規用途
WO2008022151A1 (en) 2006-08-15 2008-02-21 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Prophylactic treatment of hemophilia
EP2069402A2 (en) * 2006-09-08 2009-06-17 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
WO2008119815A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Novo Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor ix
CN103298935A (zh) 2007-08-15 2013-09-11 阿穆尼克斯公司 用于改善生物活性多肽性能的组合物和方法
AU2008311973B2 (en) 2007-10-15 2013-10-03 Cangene Corporation Human Factor IX variants with an extended half life
RU2010146387A (ru) 2008-04-16 2012-05-27 БАЙЕР ХЕЛСКЕР ЛЛСи (US) Модифицированные полипептиды фактора ix и их применение
WO2009140015A2 (en) 2008-04-16 2009-11-19 Bayer Healthcare Llc Site-directed modification of factor ix
EP2811017A2 (en) 2008-04-21 2014-12-10 Novo Nordisk Health Care AG Hyperglycosylated human coagulation factor IX
US20110183906A1 (en) 2008-04-24 2011-07-28 Celtic Pharma Peg Ltd. Factor ix conjugates with extended half-lives
US20090282865A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ortloff Engineers, Ltd. Liquefied Natural Gas and Hydrocarbon Gas Processing
MX2011001624A (es) 2008-08-21 2011-03-28 Octapharma Ag Factor viii y ix humano producido en forma recombinante.
US20110236412A1 (en) 2008-09-24 2011-09-29 Stabilitech Ltd. Method for Preserving Polypeptides Using a Sugar and Polyethyleneimine
SI2393828T1 (sl) 2009-02-03 2017-01-31 Amunix Operating Inc. Podaljšani rekombinantni polipetidi in sestavki, ki jih obsegajo
SG172789A1 (en) 2009-02-11 2011-08-29 Novozymes Biopharma Dk As Albumin variants and conjugates
WO2011030641A1 (ja) 2009-09-08 2011-03-17 コニカミノルタホールディングス株式会社 身体用装具
BR112012009450A2 (pt) 2009-10-30 2017-05-23 Novozymes Biopharma Dk As variantes de albumina
EP2353588B1 (en) 2010-01-21 2015-04-15 Agricultural Technology Research Institute A sustained release preparation of factor IX
EP2556087A1 (en) 2010-04-09 2013-02-13 Novozymes Biopharma DK A/S Albumin derivatives and variants
SG10201913700SA (en) 2010-07-09 2020-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
AU2012251583B2 (en) 2011-05-05 2017-06-08 Albumedix Ltd. Albumin variants
EP2780364A2 (en) 2011-11-18 2014-09-24 Eleven Biotherapeutics, Inc. Proteins with improved half-life and other properties
HK1213521A1 (zh) 2012-09-25 2016-07-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Fix多肽的應用
KR20150118123A (ko) 2013-02-16 2015-10-21 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 약동학적 동물 모델
EA037906B1 (ru) 2013-03-15 2021-06-04 Биовератив Терапьютикс Инк. Препараты полипептида фактора ix
WO2015095925A1 (en) 2013-12-23 2015-07-02 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof

Also Published As

Publication number Publication date
MX2020009702A (es) 2020-10-07
DK3552619T3 (da) 2025-10-20
EA201790876A1 (ru) 2017-12-29
MX375112B (es) 2025-03-06
US20190192640A1 (en) 2019-06-27
US9867873B2 (en) 2018-01-16
AU2020200118A1 (en) 2020-01-30
US9675676B2 (en) 2017-06-13
IL223990B (en) 2020-10-29
LT3552619T (lt) 2025-11-10
KR20230156435A (ko) 2023-11-14
US20210008178A1 (en) 2021-01-14
ES3050283T3 (en) 2025-12-19
CN103140237A (zh) 2013-06-05
AU2017268650A1 (en) 2017-12-21
FI3552619T3 (fi) 2025-11-05
EA028067B1 (ru) 2017-10-31
UA126265C2 (uk) 2022-09-14
AU2022204643A1 (en) 2022-07-21
WO2012006624A3 (en) 2012-08-02
PL3552619T3 (pl) 2025-12-01
US20160346365A1 (en) 2016-12-01
SG10201913700SA (en) 2020-03-30
EP2590668A2 (en) 2013-05-15
EA037095B1 (ru) 2021-02-05
JP2019023242A (ja) 2019-02-14
UA115120C2 (uk) 2017-09-25
KR20180118808A (ko) 2018-10-31
US20180228879A1 (en) 2018-08-16
CA2804274A1 (en) 2012-01-12
SI3552619T1 (sl) 2025-12-31
US10898554B1 (en) 2021-01-26
US20160243206A1 (en) 2016-08-25
JP2016034973A (ja) 2016-03-17
BR112013000650A2 (pt) 2016-05-31
US20160166657A1 (en) 2016-06-16
US9670475B2 (en) 2017-06-06
US9233145B2 (en) 2016-01-12
MX2013000281A (es) 2013-03-22
AU2011274414A1 (en) 2013-01-24
US9623091B2 (en) 2017-04-18
US20210023185A1 (en) 2021-01-28
IL284368A (en) 2021-07-29
AU2016228243B2 (en) 2017-08-31
EP3552619A1 (en) 2019-10-16
US20130202595A1 (en) 2013-08-08
SG10201505218YA (en) 2015-08-28
PT3552619T (pt) 2025-10-23
US20180207244A1 (en) 2018-07-26
KR20190104442A (ko) 2019-09-09
EA201291480A1 (ru) 2013-09-30
HUE073325T2 (hu) 2026-01-28
US10548954B2 (en) 2020-02-04
EP4653528A3 (en) 2026-02-18
EP3552619B1 (en) 2025-07-30
AU2022204643B2 (en) 2025-08-28
WO2012006624A2 (en) 2012-01-12
JP2017036328A (ja) 2017-02-16
US20130171175A1 (en) 2013-07-04
IL277432A (en) 2020-11-30
JP2022044828A (ja) 2022-03-17
US20190192641A1 (en) 2019-06-27
US9629903B2 (en) 2017-04-25
JP2013534426A (ja) 2013-09-05
US10568943B2 (en) 2020-02-25
BR112013000650A8 (pt) 2017-10-17
MY192639A (en) 2022-08-29
KR20220097518A (ko) 2022-07-07
IL277432B (en) 2021-07-29
KR20140017480A (ko) 2014-02-11
US20180228878A1 (en) 2018-08-16
EP4653528A2 (en) 2025-11-26
AU2011274414B2 (en) 2016-10-06
SG186856A1 (en) 2013-02-28
US10561714B2 (en) 2020-02-18
EP2590668A4 (en) 2014-04-02
AU2016228243A1 (en) 2016-10-06
AU2017268650B2 (en) 2019-10-10
US20160257943A1 (en) 2016-09-08
MY166954A (en) 2018-07-25
MX356527B (es) 2018-06-01
AU2020200118B2 (en) 2022-04-07
CL2013000058A1 (es) 2014-03-28
NZ605348A (en) 2015-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10898554B1 (en) Factor IX polypeptides and methods of use thereof
TWI810729B (zh) Ｆｉｘ多肽的應用
HK40015680B (en) Factor ix polypeptides and methods of use thereof
HK40015680A (en) Factor ix polypeptides and methods of use thereof