RS67481B1 - Intermedijeri remdesivira - Google Patents

Description

[0001] Opis

[0003] OBLAST PRONALASKA

[0005] Prikazani pronalazak se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja formule (I) i na nove intermedijer sinteze.

[0007] STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0009] Remdesivir (GS‑5734) je fosforamidatni prolek 1’-cijano nukleozidnog analoga (GS‑441524). Pristup fosfoamidatnog proleka je primenjen u cilju maskiranja nukleozida da se omogući intracelularno dostavljanje i oslobađanje slobodnog oblika fosfata (McGuigan et al., J. Med. Chem. 1993, 36(8):1048‑1052). Trifosfatni nukleotidni oblik (GS‑443902) liči na ATP i korišćen je kao supstrat nekoliko virusnih RNK-zavisnih RNK polimeraznih (RdRp) enzima ili kompleksa (Cho et al., Bioorg Med Chem Lett., 2012, 22(8):2705‑2707). Remdesivir je antivirusni lek koji deluje direktno da inhibira RNK-zavisnu RNK polimerazu (Gordon et al., J Biol Chem. 2020 May 15; 295(20):6785‑6797) za koju je pokazano da inhibira ozbiljni akutni respiratorni sindrom korona virusa 2 (SARS-CoV‑2), RNK virus pozitivnog smera, uzročnik koronavirusne bolesti 2019 (Covid‑19), i efikasan je u smanjenju vremena oporavka sa 15 do 11 dana kod ljudi hospitalizovanih sa Covid‑19 (Biegel et al., NEJM, May 22, 2020; doi:10.1056/NEJMoa2007764). Remdesivir je odobren za medicinsku upotrebu u Evropskoj Uniji u julu 2020 (vidi SmPC za Veklury).

[0011] U krajnjem koraku u sintezi remdesivira, tj reakciji spajanja između 1’-cijano nukleozida (ili njegovog derivata) i dela proleka fosforamidata je dobro poznata u ovoj oblasti (videti npr. CN 111471070 A; CN 111440176 A; CN 111393478 A; CN 111269263 A; CN 111233931 A; CN 111233930 A; CN 111171078 A; CN 111116656 A; WO 2016/069825 A1; WO 2012/012776 A1).

[0013] WO 2009/132135 A1 opisuje 1’-cijano nukleozid i njegov postupak dobijanja, gde je reakcija spajanja između zaštićenog ribonolaktona i 7-bromo-pirolo[2,1 ‑f][1,2,4]triazin‑4-ilamina izvedena uvođenjem litijuma i zatim je cijano grupa uvedena kako je prikazano na Reakcionoj šemi 1:

[0014]

[0016] Reakciona šema 1

[0018] WO 2012/012776 A1 opisuje diastereomernu smešu remdesivira i njegovo dobijanje, gde dobijanje 1’-hidroksi nukleozida se sastoji od istih koraka kao gore, ali je korišćen trimetilsilil trifluorometansulfonat (TMSOTf) u koraku cijanizacije (Reakciona šema 2):

[0021]

[0023] Reakciona šema 2

[0025] WO 2016/069825 A1 opisuje (S)‑diastereomer, tj remdesivir i njegov sintetički postupak dobijanja. Postupci alternativnog dobijanja (videti 3. a)‑e)) su opisani kako je prikazano u Reakcionoj šemi 3 za obrazovanje 1’- hidroksi nukleozida primenom inter alia lantanidnih elemenata u Grinjarovoj reakciji između zaštićenog ribonolaktona i 7-jodo-pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-ilamina gde je sredstvo za spajanje / deprotonovanje litijum‑, ili magnezijumovo sredstvo, takav n-BuLi, i-PrMgCl, ili PhMgCl, halo-silansko jedinjenje, kao što je TMSCI ili Cl-Si(CH<3>)<2>(CH<2>)<2>Si(CH<3>)<2>‑Cl, u prisustvu Luisove kiseline, kao što su La‑, Nd, Y‑ ili Ce-halogenidi i svaka hidroksi grupa ribonolaktona može biti zaštićena nezavisno sa zaštitnom grupom za hidroksil, kao što su trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil, ili benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju acetonidnu grupu. Cijanizacija je izvedena u identičnim okolnostima kao što je gore pomenuto u periodičnom modu ili protočnoj hemiji.

[0028]

[0030] Reakciona šema 3

[0032] [0007] CN 111233870 A odnosi se na dobijanje pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-ilamina i njegove 7- supstituisane derivate gde X je halogen visoke čistoće i prinosa bez potrebe za komplikovanim koracima za prečišćavanje ili odvajanje kako je prikazano u Reakcionoj šemi 4:

[0035]

[0037] Reakciona šema 4

[0039] CN 111393392 A opisuje postupak dobijanja 2,3,5-tribenzilo zaštićenog ribonolaktona kako je prikazano u Reakcionoj šemi 5.

[0041]

[0043] Reakciona šema 5

[0045] Siegel et al., J Med Chem. 2017;60(5):1648‑1661 opisuju optimizaciju sinteze remdesivira. Prema prvoj generaciji sinteze prikazanoj u Reakcionoj šemi 6, (odgovara onima opisanim u WO 2009/132135 A1 reakcija glikozilacije preko izmene metal-halogen bromo-baze praćene dodavanjem u ribonolakton, gde uslovi a) i b) su identifikovani da omoguće obrazovanje željene C-C veze, dajući zaštićeni ribolakton u prinosu 25% i 60%. Obrazovani 4-mono-TMS zasićeni amino intermedijer je izolovan. Efikasnost oba uslova je podoptimalna jer su prinosi bili hirovoti i u velikoj meri zavisni od kriogenih temperatura i brzine dodavanja n-BuLi potrebne za transformaciju.

[0048]

[0050]

1,2-bis(hlorodimetilsilil)etan

[0052] Reakciona šema 6

[0054] U sintezi druge generacije – koja omogućava diastereoselektivnu sintezu na skali pogodnoj za unapređenje remdesivira u pretkliničke studije – kako je prikazano u Reakcionoj šemi 7, korak glikozilacije koristi jodo-bazu preko izmene metal-halogen sa kompleksom i‑PrMgCl·LiCl dobijen je benzil-zaštićeni hidroksi nukleozid u prinosu 40% dok naknadna cijanizacija je dala benzil-zaštićeni 1’-cijano nukleozid u prinosu 85%. Obrazovani 4-mono-TMS zasićeni amino intermedijer nije bio izolovan. Warren et al., Nature. 2016;531(7594):381‑385 (5) se takođe odnosi na isti postupak dobijanja (Šeme S1-S3).

[0055]

[0057] Reakciona šema 7

[0059] Vieira et al., OPRD, May 21, 2020 (https://dx.doi.org/10.1021/acs.oprd.0c00172) se odnosi na robustan postupak sinteze ključnih intermedijera remdesivira. Pored prekidnih i kontinualnih protočnih hemijskih postupaka za stvaranje benzil-zaštićenog 1’-cijano nukleozida, obezbeđen je postupak na industrijskoj skali za dobijanje 1’-hidroksi nukleozida (odgovara onima opisanim u WO 2016/069825 A1) koji je dobijen u prinosu 69% kada je ekvimolarna količina izuzetno skupog anhidrovanog neodimijum‑(III) hlorida korišćena kako je prikazano u Reakcionoj šemi 8.

[0062]

[0064] Reakciona šema 8

[0066] CN 111233869 A se odnosi na alternativne intermedijer korisne u sintezi remdesivira. Kao u koracima glikozilacije prema Reakcionoj šemi 1, 3, 6‑8 silan grupa koja štiti 4-amino grupu je nestabilna, novi prilaz je razvijen prema Reakcionoj šemi 9 (gde X je fluor, hlor, brom ili metiltio; Y je brom ili jod; i PG je nezavisno hidroksil zaštitna grupa, ili dve PG grupe na susednim ugljenikovim atomima zajedno obrazuju npr. alkilen i glikozilacioni korak je izveden u prisustvu magnezijuma ili alkilmagnezijum halogenida, kao što je iPrMgCl, iPrMgCl-LiCl ili PhMgCl) da zaobiđe neophodnost zaštite amina i teškoću kontrolisanja reakcija na niskoj temperaturi. Koraci glikolizacije i cijanizacije su dali odgovarajuće intermedije u dobrim prinosima, ali sintetsku put zahteva dalje korak uvodeći 4-amine grupu i korak prečišćavanja.

[0069]

[0071] Reakciona šema 9

[0072] CN 111205327 opisuje sintetski put od devet koraka remdesivira, gde – kako je prikazano u Reakcionoj šemi 10 – u prvom koraku mono-BOC zaštićena 4-amino grupa je obrazovana pomoću baze, kao što je TEA, amino zaštitnog sredstva kao što je (Boc)<2>O, rastvarač je npr. dichlorometan i reakciona temperatura je izmedju 40 do 80°C, zatim u drugom koraku korišćen je jedan od n-BuLi, i-BuLi, LDA, iPrMgCl ili iPrMgBr. Posle koraka cijanizacije pomoću alkil cijanosilana, poželjno TMSCN ili TBDMSCN i uklanjanja 4’-benil zaštitne grupe, rezolucija β- anomera zahteva druge reagense i korake prečišćavanja.

[0075]

[0077] Reakciona šema 10

[0079] CN 111205294 Opisuje još jedan alternativni sintetski put i njegove intermedijere kao što je prikazano u Reakcionoj šemi 11, gde u prvom koraku benzil-zaštićeni ribonolakton je cijanizovan u 1’-položaju poželjno u DCM, THF, ili 1,2-dihloroetanu na 0° do 50°C pomoću Luisove kiseline npr. AlCl<3>i cijano reagensa kao što je TMSCN ili TBDMSCN gde je hiralna čistoća poboljšava nanošenjem rekristalizacije, da bi se dobilo jedinjenje u prinosu 64.2%‑74%, zatim je glikolizacija izvedena u THF ili ACN pomoću MsCl ili TsCl na ‑10°C do 20°C u prisustvu baze, npr. TEA ili DIPEA (prinos 68‑55%).

[0082]

[0084] Reakciona šema 11

[0086] [0014] CN 111187269 A odnosi se na postupak dobijanja koji dovodi do 1’-hidroksi nukleozida izbegavanjem upotrebe 7-jodo polaznog materijala prema Reakcionoj šemi 12, gde u prvom koraku 4-amino grupa je zaštićena sa benzil, Boc, Cbz, ili Fmoc u DCM, THF, MeOH i/ili vodi na 0°C do 50°C (prinos: 90‑86.6%); zatim je glikozilacija izvedena u DCM/THF na ‑78°C do ‑40°C da bi se dobio mono-zaštićeni intermedijer u prinosu 47‑48%, koji zahteva dalji korak skidanja zaštite (prinos: 75‑82%).

[0089]

[0092] Reakciona šema 12

[0094] CN 110776512 A opisuje nediastereoselektivni sintetski put kao što je prikazano u Reakcionoj šemi 13 gde je reakcija glikolizacije izvedena na način kako je prikazano u Reakcionoj šemi 1 (prinos: 29.2%), korak cijanizacije je prikazan u Reakcionoj šemi 2 (prinos: 85.3%) dovodi do racemske smeše koja dalje reaguje sa BCl<3>da bi se dobilo 1’-cijano nukleozid (prinos: 55.6%).

[0097]

[0100] Reakciona šema 13

[0102] CN 110330540 A se odnosi na višestruki sintetski put kao što je prikazano u Reakcionoj šemi 14 da obezbedi soli 1’-cijano nukleozida sa svrhom zamene proleka remdesivira. Korak glikolizacije je izveden između zaštićenog ribonolaktona i 7-jodo baze prema Reakcionoj šemi 7 (takođe, 4-mono-TMS-zaštićeni aminski intermedijer je obrazovan in situ).

[0103]

[0106] Reakciona šema 14

[0108] CN 111620876 A opisuje postupak dobijanja 1’-hidroksi nukleozidnog intermedijera kako je prikazano u Reakcionoj šemi 15 gde je organometalno jedinjenje dobijeno iz halogenovane baze (gde X je Cl, Br ili I) primenom aktivnog cinka i jodo praha koji dalje reaguju sa benzil-zaštićenim ribonolaktonom da bi se dobio pomenuti intermedijer.

[0111]

[0113] Reakciona šema 15

[0115] CN 111620903 A takođe se odnosi na postupak dobijanja 1’-hidroksi nukleozida gde reakcija kuplovanja između beze (gde R<2>, R<3>je nezavisno H ili terc-butoksikarbonil grupe) i zaštićenog ribonolaktona (gde Ra i Rb su oba ‑CH<2>-aril (kao što je benzil) ili ‑Sihidrokarbil (kao što je terc-butildimetil, triizopropil, trietil i terc-butildifeni) i Rc je alkil ili supstituisani fenil) je izveden u prisutvu jake organske baze koja sadrži alkalni metal (kao što je terc-butil litijum, sek-butil litijum, litijum diizopropilamid i litijum pirolidin) da bi se dobio 1’-hidroksi nukleozidni intermedijer ili postupak (čak i ako je 4-amino grupa zaštićena ili nije pomoću R<2>i/ili R<3>) može sadržati korak dodavanja silan-supstance da spreči bilo koju modifikaciju 4-amino grupe u toku postupka, gde pomenuti silansupstanca je trimetilhlorosilan koji dovodi do 1’-trimetilsilil-zaštićenog analoga kako je prikazano u Reakcionoj šemi 16.

[0116]

[0118] Reakciona šema 16

[0120] Glimi su glikolni etri, kao što su 1,2-dimetoksietan (monoglim), 1-metoksi‑2‑(2-metoksietoksi)etan (diglim), 1-metoksi‑2‑[2‑(2-metoksietoksi)etoksi]etan (triglim) ili 1-metoksi‑2‑[2‑[2‑(2-metoksietoksi)etoksi] etoksi]etan (tetraglim). Glimi imaju široki opseg industrijskih primena, kao što su njihove upotrebe u proizvodima za čišćenje, mastilima, lepkovima i oblogama, baterijama i elektronici, apsorpcionom hlađenju i toplotnim pumpama, farmaceutskim formulacijama i takođe igraju ulogu u organskim reakcijama, kao što su redukcija, oksidacija, supstitucija, kuplovanje, hemija borana, uglavnom kao rekacioni medijum (rastvarač), ali takođe može biti korišćeni kao metalni helatori, katalizatori, reagensi ili reakcioni aditivi. U izvesnim adicionim reakcijama sa različitim Grinjarovim reagensima pomoću NBu<4>Cl kao katalizatorom diglim je primenjen u drugoj ulozi (Huang et al,. J Org Chem 2012; 77(10):4645‑4652).

[0122] Kako pandemija pogađa milione ljudi širom sveta, potreban je efikasan proces proizvodnje remdesivira koji omogućava njegovu proizvodnju u industrijskim razmerama putem intermedijera sa povoljnim osobinama.

[0124] Prema postupcima poznatim u struci, obezbeđivanje 1'-cijano nukleozida u industrijskoj razmeri i u većim prinosima rešava se različitim putevima koji zahtevaju ili teško dostupne i/ili skupe reagense, ekstremne reakcione uslove i/ili nepoželjne reakcione korake, ali bez međuproizvoda koji olakšavaju sintezu.

[0126] Stoga, i dalje postoji nezadovoljena potreba da se obezbede alternativni postupci za pripremu jedinjenja formule (I) i njihovih intermedijera korisnih u sintezi remdesivira i/ili njegovog 1'-cijano nukleozida.

[0128] KRATAK OPIS SLIKA

[0130] Slika 1: Sistem za dostavljanje reagensa koji se koristi u postupku kontinuiranog protoka za reakciju spajanja prema ovom pronalasku.

[0131] SUŠTINA PRONALASKA

[0133] Prikazani pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) koji obuhvata povezivanje jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjem formule (III) da bi se dobilo jedinjenje formule (II), i cijanizacija jedinjenja formule (II) da bi se dobilo jedinjenje formule (I). Postupak dalje obuhvata zaštitu jedinjenja formule (V) da bi se dobilo jedinjenje formule (IV).

[0135] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na postupak povezivanja jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjem formule (III) u prisustvu jedinjenja formule (VI).

[0137] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na jedinjenja formule (II) i formule (IV).

[0139] DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0141] Poznata jedinjenja formula (I) u stanju tennike su ključni intermedijeri u sintezi 1’-cijano nukleozida i/ili remdesivir.

[0143] Odgovarajući postupci iz stanja tehnike uprkos prihvatljivim prinosima imaju nedostatke kao što je upotreba reagenasa koji nisu lako dostupni i/ili su skupi, kao (anhidrovanih) lantanida, ekstremnih reakcionih uslova i/ili nepoželjnih reakcionih koraka, kao što je nepotrebni koraci zaštite i skidanja zaštite ili razdvajanje izvesnih intermedijera. Ovi uslovi dovode u pitanje izvodljivost na industrujskoj skali ovih postupaka.

[0145] Prikazani pronalazak obezbeđuje postupak za dobijenje jedinjenja formule (I) preko intermedijera koji olakšavaju sintezu, kao što su jedinjenja formule (II) i (IV). Prednost je da nisu potrebni teško dostupni i/ili skupi reagensi i/ili postupak ima smanjen broj reakcionih koraka. Dalja prednost prikazane sinteze, tj. primene njegovih intermedijera je da postupak dobijanja jedinjenja formule (I) se može primeniti na industrijskoj skali.

[0147] Prikazani pronalazak se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja formule (I) koji obuhvata korak

[0149] a) zaštite jedinjenja formule (V) da bi se dobilo jedinjenje formule (IV),

[0151] korak b1) reagovanja jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjem formule (III) da bi se dobilo jedinjenje formule (II), ili

[0153] korak b2) izvođenja koraka b1) u prisustvu jedinjenja formule (VI); i

[0155] korak c) cijanizacije jedinjenja formule (II) da bi se dobilo jedinjenje formule (I)

[0156] prema Reakcionoj šemi I gde X je vodonik, brom ili jod; R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil; R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil ili tbutildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil- metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da se obrazuje ‑C(R<3>)<2>‑ grupa gde R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0159]

[0161] Reakciona šema I

[0163] Polazni materijali tj. zaštićeni ribonolaktoni formule (III) ili baze formule (V) su komercijalno dostupni ili mogu biti dobijeni prema poznatim postupcima iz stanja tehnike (npr. WO 2007/056170 A1; WO 2009/132135 A1; WO 2015/069939 A1; WO 2016/069825 A1).

[0165] U jednom aspektu prikazani pronalazak se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja formule (V) da bi se dobilo jedinjenje formule (IV) prema Reakcionoj šemi II gde je X vodonik, brom ili jod; i R<1>je zaštitna grupa izabrana od grupe koju čine tbutildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil.

[0168]

[0171] Reakciona šema II

[0173] U još jednom aspektu prikazani pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) dobijenog reakcijom jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjem formule (III) prema Reakcionoj šemi III- a gde je X vodonik, brom ili jod; R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildi-metilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil; R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu gde R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0176]

[0179] Reakciona šema III-a

[0181] U još jednom aspektu prikazani pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) dobijenog reakcijom jedinjenja formule (IV) sa jedinjenjem formule (III) u prisustvu jedinjenja formule (VI) prema Reakcionoj šemi III-b gde je X vodonik, brom ili jod; R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil; R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil- metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu gde R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa i n je 2, 3 ili 4.

[0184]

[0186] Reakciona šema III-b

[0188] [0035] U drugom aspektu prikazani pronalazak se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja formule (I) dobijenog cijanizacijom jedinjenja formule (II) prema Reakcionoj šemi IV gde je R<2>vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil; i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil- metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da se obrazuje - C(R<3>)<2>‑ grupa u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0191]

[0193] Reakciona šema IV

[0195] korak a) zaštita 4-amino group prema Reakcionoj šemi II

[0197] Prema koraku a), jedinjenje formule (V) je rastvoreno u pogodnom rastvaraču, ohlađeno na oko 0 do 5°C, zatim je dodata pogodna baza, a zatim je dodato zaštitno sredstvo, zatim obrada dobijene reakcione smeše da bi se dobilo jedinjenje formule (IV) gde je X vodonik, brom ili jod i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine tbutildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil.

[0199] Pogodan rastvarač je ciklični etar, kao što je tetrahidrofuran ili 2-metiltetrahidrofuran.

[0201] Pogodna baza je alkillitijum, i alkalni hidroksid ili alkalni alkoksid, kao što je nheksillitijum, kalijum- hidroksid, ili kalijum terc-butoksid.

[0203] Zaštitno sredstvo je t-butildimetilsilil hlorid, triizopropilsilil hlorid ili tbutildifenilsilil hlorid.

[0205] Obrada dalje obuhvata ekstrakciju, koncentrovanje, rastvaranje u drugom pogodnom rastvaraču, ceđenje i ispiranje, i/ili rekristalizaciju.

[0207] Korišćeni rastvarač u rekristalizacije je viši alkan, tj. C<6>‑<8>alkan, kao što je n-heksan ili n-heptan.

[0209] U poželjnom izvođenju jedinjenje formule (IV), gde X je vodonik i R<1>je tbutildimetilsilil, je dobijeno iz jedinjenja formule (V) gde je X vodonik.

[0211] Neočekivano, ustanovljeno je da jedinjenja formule (IV), u poređenju sa onim reakcijama u kojima je korišćen trimetilsilil hlorid kao zaštitno sredstvo, može biti izolovano i ostati stabilno što omogućava njegovu upotrebu u narednim reakcionim koracima u serijskim postupcima i postupcima sa kontinualnim tokom. Tako, jedinjenja formule (IV) omogućavaju efikasan postupak za proizvodnju remdesivira i/ili 1’-cijano nukleozida na industrijskoj skali.

[0212] Dalja prednost postupka je da kada je X vodonik, nije potrebno njegovo halogenovanje, tj. bromovanje ili jodovanje, takav polazni materijal se može regenerisati u toku postupaka što vodi ka povećanju prinosa, dalje, nije potrebna osetljiva Grinjarova reakcija u sledećem reakcionom koraku.

[0214] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na jedinjenjenja formule (IV) gde je X vodonik, brom ili jod; i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil.

[0217]

[0220] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (IV) gde X je vodonik, brom ili jod i R<1>je t-butildimetilsilil.

[0222] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (IV) gde X je vodonik, brom ili jod i R<1>je triizopropilsilil.

[0224] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (IV) gde X je vodonik, brom ili jod i R<1>je t-butildifenilsilil.

[0226] U izvesnom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (IV) gde X je vodonik ili brom i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t- butildifenilsilil.

[0228] U još jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (IV) gde X je vodonik ili brom i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine triizopropilsilil i t-butildifenilsilil.

[0230] U poželjnom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (IV) izabrane iz grupe koju čine

[0232] terc-butil(dimetil)silil-N‑4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin,

[0234] terc-butil(dimetil)silil-N‑4-amino‑7-bromo-pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin,

[0236] 1,1,1-tris(propan‑2-il)‑N‑{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamin,

[0238] N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamin, i

[0239] 1-terc-butil‑1,1-difenil-N‑{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamin.

[0240] korak b1) reakcija povezivanja prema Reakcionoj šemi III-a

[0242] Reakcioni korak b1) može biti izveden u serijskim postupcima ili postupcima sa kontinualnim tokom.

[0244] Prema serijskom postupku, jedinjenje formule (IV) je rastvoreno u pogodnom rastvaraču, u rastvor je dodat reagens za uvođenje litijuma, zatim jedinjenje formule (III) u pogodnom rastvaraču na temperaturi između ‑78 i ‑50°C, praćeno obradom dobijene reakcione smeše da bi se dobilo jedinjenje formule(II) gde je X vodonik, brom ili jod; R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil; R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine tbutildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0246] Prema kontinualnom protočnom postupku, sistem dva sekvencijalna protočna mikroreaktora (1 i 2) je korišćen u rasporedu prema Slici 1 koji obuhvata:

[0248] - mikroreaktor 1 koji obuhvata mikromikser i reaktor sa zavojnicom za mešanje N-zaštićenog supstrata sa reagensom za uvođenje litijuma i njihovo reagovanje da bi se dobio intermedijer sa litijumom,

[0250] <->mikroreaktor 2 koji obuhvata mikromikser i reaktor sa zavojnicom za mešanje intermedijera sa litijumom sa zaštićenim ribonolaktonom i njihovo reagovanje da bi se dobio zaštićeni proizvod ,

[0252] <->ulazna skladišta, pumpe i module za ubrizgavanje koji obezbeđuju tri različina ulaza A, B i C koji su povezani za dva sekvencijalna mikroreaktora,

[0254] <->petlje za prethodno hlađenje za svaki ulaz, i

[0256] <->termostatirano kupatilo.

[0258] Mikroreaktori 1 i 2 i petlje koje se prethodno hlade su termostatirani na ‑30°C.

[0260] Reakciona temperatura u mikroreaktorima je ‑10 do ‑30°C.

[0262] Rastvor injektora A, i rastvora injektora B (mikroreaktor 1) i injektor C (mikroreaktor 2) su sekvencionalno injektovani u protočnu struju suvog THF za prethodno određene vremenske periode, praćeno sakupljanjem smeše i njena obrada sa vodom.

[0264] Injektor A je napunjen sa rastvorom jedinjenja formule (IV), injektor B je napunjen sa rastvorom reagensa za uvođenje litijuma, injektor C je napunjen sa rastvorom jedinjenja formule (III).

[0265] Brzina protoka za ulaz A je 1.7 mL/min, za ulaz B je 0.31 mL/min i za ulaz C je 0.34 mL/min.

[0267] Vreme zadržavanja je 20 do 45 s za mikroreaktor 1 i 70 do 150 s za mikroreaktor 2.

[0269] Pogodan rastvarač za jedinjenje formule (IV) je ciklični etar, kao što je tetrahidrofuran ili 2-metiltetrahidrofuran.

[0271] Reagens za uvođenje litijuma je alkillitijum, kao što je n-heksillitijum, rastvoren u pogodnom rastvaraču, kao što je visoki alkan, npr. n-heksan.

[0273] Jedinjenja formule (III) su zaštićeni ribonolaktoni u kojima PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovani da obrazuju - C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa. Poželjno, jedinjenja formule (III) su zaštićeni ribonolaktoni u kojima PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i benzil, ili dve zaštitne grupe susednim ugljenikovih atoma mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<3>alkilen grupa. Njapoželjnije, jedinjenja formule (III) su zaštićena ribonolaktonima u kojima je PG benzil group.

[0275] Rastvarač rastvora jedinjenja formule (III) je toluen ili tetrahidrofuran.

[0277] Dalja obrada obuhvata ekstrakciju, koncentrovanje, rastvaranje drugog pogodnog rastvarača, ceđenje i ispiranje, i/ili rekristalizaciju.

[0279] U aspektu pronalaska izolovana su jedinjenja formule (II).

[0281] U drugom aspektu pronalaska jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil dalje reaguju bez izolovanja tako što reakcija povezivanja dovodi do jedinjenja formule (II) gde je R<2>vodonik.

[0283] U izvođenju, reakcija povezivanja dalje obuhvata skidanje skidanje zaštite aminske funkcionalne grupe, pomoću sredstva za cepanje, kao što je tetrabutilamonijum fluorid trihidrat ili sirćetna kiselina da bi se dobila jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je vodonik. Alternativno, korak cepanja je izveden bez daljeg izolovanja jedinjenja formule (II) gde je R<2>zaštitna grupa kao što je gore pomenuto.

[0285] U izvođenju, reakcija povezivanja dalje obuhvata prečišćavanje dobijenog jedinjenja formule (II) gde je R<2>vodonik.

[0287] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (II) u kojoj R<2>je vodonik i PG je benzil grupa dobijena reakcijom jedinjenja formule (IV) gde je X vodonik i R’ je t-butildimetilsilil i jedinjenje formule (III) gde je PG benzil grupa u kojoj zaštićeno jedinjenje formule formula (II) je obrazovano in situ, ili skidanjem zaštite bez izolovanja zaštitnog jedinjenja formule (II).

[0288] Iznenađujuće, ustanovljeno je da su dobijena jedinjenja formule (II) u reakcionim uslovima između jedinjenja formule (III) i (IV) i ne zahtevaju ili nepristupačne i/ili skupe reagense, ekstremne reakcione uslove i/ili neželjene reakcione korake. Pored toga, intermedijeri formule (IV) su ili izolovani što je korisno za povećanje prinosa, ili su pogodni za izvođenje povezivanja, ili za reakcije povezivanja i cijanizacije in situ, tako dozvoljavajući redukciju u broju potrebnih reakcionih koraka.

[0290] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na jedinjenja formule (II) u kojima R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil; i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t- butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0293]

[0296] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (II) u kome R<2>je t-butildimetilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0298] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (II) u kome R<2>je triizopropilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0300] U jednom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (II) u kojoj R<2>je t-butildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, tbutildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju -C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupu.

[0301] U poželjnom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (II) gde R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil; i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i benzil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<3>alkilen group.

[0303] U drugom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil; i PG je benzil grupa.

[0305] U poželjnom izvođenju prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (II) izabrana iz grupe koju čine

[0307] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(terc-butildimetilsilil)amino] pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il}oksolan‑2-ol,

[0309] (3R,4R,5R)‑2‑{4‑[(terc-butildimetilsilil)amino]pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il}‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil) oksi]‑5‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}oksolan‑2-ol,

[0310] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)oksolan‑2-ol,

[0312] (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}‑2,2-dimetil‑4‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1‑f] [1,2,4]triazin‑7-il)‑tetrahidro‑2H-furo[3,4-d][1,3]dioksol‑4-ol,

[0313] (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}‑2,2-dimetil‑4‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1‑f] [1,2,4]triazin‑7-il)‑tetrahidro‑2H-furo[3,4‑d][1,3]dioksol‑4-ol,

[0314] (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil)oksi]‑5‑{[(tercbutildimetilsilil)oksi]metil}‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil] amino}pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)oksolan‑2-ol, i

[0316] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑14‑[(terc-butildifenilsilil)amino] pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il}oksolan‑2-ol.

[0318] korak b2) reakcija povezivanja prema Reakcionoj šemi III-b

[0320] [0079] Prema koraku b2), jedinjenje formule (IV) i jedinjenje formule (VI) u kojoj n je 2, 3 ili 4 je rastvoreno u rastvaraču, u rastvor je dodat reagens za uvođenje litijuma, zatim jedinjenje formule (III) u pogodnom rastvaraču na temperaturi između ‑78 i ‑40°C, praćeno obradom dobijene reakcione smeše da bi se dobilo jedinjenje formule (II) u kojoj X je vodonik, brom ili jod; R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil; R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil ili t-butildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidro- piran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0322] Jedinjenja formule (VI) su komercijalno dostupna i nisu skupi glikolni etri u kojima gde n=2 označava metoksi‑2‑(2-metoksietoksi)etan (diglim), n=3 označava 1-metoksi‑2‑[2‑(2-metoksietoksi)etoksi]etan (triglim) i n=4 označava 1-metoksi‑2‑[2‑[2‑(2-metoksietoksi)etoksi]etoksi]etan (tetraglim).

[0324] Pogodni rastvarači za jedinjenje formule (IV) su ciklični etar, kao što je tetrahidrofuran ili 2-metilt-trahidrofuran.

[0326] Pogodni rastvarač za jedinjenje formule (VI) je ciklični etar, kao što je tetrahidrofuran ili 2-metilt- trahidrofuran.

[0328] Reagens za uvođenje litijuma je alkillitijum, kao što je n-heksillitijum, rastvoren u pogodnom rastvaraču, kao što su viši alkan, npr. heksani.

[0330] Rastvarač rastvora jedinjenja formule (III) je ciklični etar, kao što je tetrahidrofuran ili 2- metiltetrahidrofuran.

[0332] Dalja obrada obuhvata ekstrakciju, koncentraciju, rastvaranje u drugom pogodnom rastvaraču, kao što je 2- butanon i/ili viši alkan, npr. heksani, ceđenje i ispiranje, i/ili rekristalizaciju.

[0334] U jednom izvođenju, rekacija povezivanja je izvedena u prisustvu jedinjenja formule (VI) gde je n 2, 3 ili 4. U poželjnom izvođenju, n je 2 ili 3. U poželjnijem izvođenju n je 2.

[0336] U jednom izvođenju, reakcija kuplovanja dalje obuhvata skidanje zaštite aminske funkcionalne grupe, pomoću sredstva za cepanje, kao što su tetrabutilamonijum fluorid trihidrat ili sirćetna kiselina da se dobiju jedinjenja formule (II) gde R<2>je vodonik. Alternativno, korak cepanja je izveden bez izolovanja jedinjenja formule (II) gde je R<2>zaštitna grupa kako je gore pomenuto.

[0338] U jednom izvođenju postupak dalje obuhvata kristalizaciju u kojoj je reakciona smeša zasejana sa odgovarajućim jedinjenjem formule (II) gde je R<2>vodonik.

[0340] U još jednom izvođenju postupak dalje obuhvata kristalizaciju u kojoj reakciona smeša je zasejana sa odgovarajućim jedinjenjem formule (II) gde je R<2>zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t- butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil i PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupu.

[0342] Zasejani kristali jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je vodonik mogu biti dobijeni postupcima poznatim u stanju tehnike ili odgovarajućim ovde prikazanim postupcima.

[0343] U jednom izvođenju, reakcija povezivanja dalje obuhvata prečišćavanje dobijenog jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je vodonik.

[0345] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (II) gde R<2>je vodonik i PG je benzil grupa dobijena reakcijom jedinjenja formule (IV) gde je X vodonik i R’ je t-butildimetilsilil i jedinjenje formule (III) gde je PG benzil grupa u kojoj zaštićeno jedinjenje formule (II) je obrazovano in situ, ili skidanje zaštite bez izolovanja zaštićenog jedinjenja formule (II).

[0347] U poželjnom izvođenju, postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) obuhvata povezivanje jedinjenja formule (IV) gde je X vodonik ili brom i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i triizopropilsilil sa jedinjenjem formule (III) gde je PG benzil grupa u prisustvu jedinjenja formule (VI) u kojoj n je 2 ili 3.

[0349] U drugom poželjnom izvođenju, postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) obuhvata povezivanje jedinjenja formule (IV) u kojoj X je vodonik ili brom i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i triizopropilsilil sa jedinjenjem formule (III) gde je PG benzil grupa u prisustvu jedinjenja formule (VI) u kojoj n je 2 ili 3 i postupak dalje obuhvata kristalizaciju u kojoj je reakciona smeša zasejana sa odgovarajućim jedinjenjem formule (II).

[0351] U poželjnijem izvođenju, postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) obuhvata povezivanje jedinjenja formula (IV) gde je X vodonik i R<1>je t-butildimetilsilil sa jedinjenjem formule (III) gde je PG benzil grupa u prisustvu jedinjenja formule (VI) gde je n 2.

[0353] U drugom poželjnijem izvođenju, postupak za dobijanje jedinjenja formule (II) obuhvata povezivanje jedinjenja formule (IV) u kojima je X vodonik i R<1>je t-butildimetilsilil sa jedinjenjem formule (III) gde je PG benzil group u prisustvu jedinjenja formule (VI) gde je n 2 i postupak dalje obuhvata kristalizaciju u kojoj je reakciona smeša zasejana sa odgovarajućim jedinjenjem formule (II).

[0355] Pogodno je to što je utvrđeno da izvođenje reakcije spajanja između jedinjenja formule (III) i jedinjenja formule (IV) u prisustvu jedinjenja formule (VI) neočekivano dovodi do povećanja u prinosima jedinjenja formule (II) u poređenju sa onima sprovedenim prema koraku b1).

[0357] Pored toga, kristalizacija u kojoj je reakciona smeša zasejana odgovarajućim jedinjenjem formule (II) nema ili ima zanemarljiv uticaj na povećanje prinosa, kao što je prikazano u Tabeli 2.

[0359] Korak c) reakcija cijanizacije prema Reakcionoj šemi IV

[0361] [0099] Prema koraku c), jedinjenje formule (II) u kojoj R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil ili t-butildifenilsilil je rastvoreno u pogodnom rastvaraču, kao što je dihlorometan, ohlađeno u inertnoj temperaturi i Brønsted-ovoj kiselini, kao što je trifluoro-sirćetna kiselina, a zatim rastvor Luisove kiseline, kao što je trimetilsilil trifluorometansulfonat i sredstvo za cijanizaciju, kao što je trimetilsilil cijanid u pogodnom rastvaraču, kao što je dihlorometan su dodati, praćeno obradom dobijene smeše da bi se dobilo jedinjenje formule (I) gde je PG zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t- butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metilmetoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovani da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu gde je R<3>H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

[0363] Obrada dalje obuhvata ekstrakciju, koncentraciju, rastvaranje u drugom pogodnom rastvaraču, ceđenje i ispiranje, i/ili rekristalizaciju pomoću različitog rastvarača kao što je toluen.

[0365] U jednom aspektu pronalaska reakcija cijanizacije je izvedena polazeći od jedinjenja formule (II) gde je R<2>vodonik.

[0367] U drugom aspektu pronalaska reakcija cijanizacije je izvedena polazeći od jedinjenja formule (II) u kojoj R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine tbutildimetilsilil, triizopropilsilil i t- butildifenilsilil.

[0369] Izraz "C<1>‑<6>alkilen" označava prav ili razgranati, jednostruki ili razgranati, ugljovodonični radikal i sastoji se od 1 do 6 ugljenikovih atoma. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, metilen, etilen, propilen, i-propilen, n-butilen, 2-butilen, t-butilen, npentilen ili n-heksilen. Poželjne alkilen grupe se sastoje od 1 do 3 ugljenikovih atoma. Naročito poželjna je metilenska grupa.

[0371] Primeri

[0373] Prikazani pronalazak će dalje biti ilustrovan sledećim Primerima bez ograničavanja obima prikazanog pronalaska na njih. Iz gornjeg opisa i iz primera, stručnjak iz ove oblasti može utvrditi bitne karakteristike pronalaska i bez odstupanja od suštine i obima, može učiniti izvesne izmene i modifikacije u cilju prilagođavanja pronalaska različitim primenama i stanjima. Kao rezultat, pronalazak nije ograničen na sledeće primere, nego pre na obim određen priloženim patentnim zahtevima.

[0375] Tabela 1: Lista skraćenica

[0378]

[0379]

[0382] Primer 1

[0384] Terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin

[0386] 4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin (10g, 74.54 mmol) je suspendovan u suvom THF (80 mL) u atmosferi azota. Suspenzija je ohlađena do 0‑5°C i KOtBu (8.8 g, 78.27 mmol) je dodat i mešan u toku 10 minuta. Posle 10 minuta dodat je u kapima rastvor TBDMS-Cl (11.8g, 78.27 mmol) u suvom THF (20 mL). Posle mešanja u toku 45 minuta reakcija je završena prema GC-MS analizi (Konverzija 99%).

[0388] Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do 55‑60 g. Ostatak je ponovo rastvoren u n- Heksanu (175 mL) i koncentrovan je ponovo do 70‑75 g. Dodat je u ostatak n-Heksana (175 mL) i mešan je u atmosferi azota u toku 15 minuta. Čvrste susptance su proceđene i isprane su tri puta sa 50‑50 mL n- Heksanom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do 70‑75 g.

[0390] Koncentrovani filtrat je ohlađen do ‑10°C u toku 40 minuta i mešan je na - 10°C u toku 20 minuta pošto su staloženi kristali proceđeni i isprani dva puta sa 10 mL n-Heksanom (‑20°C). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do 5‑15 g ohlađen do ‑10°C i kristali su ponovo proceđeni.

[0392] Beli kristali iz obe generacije su osušeni pod sniženim pritiskom (14.11g+1.89g, 86.5%).

[0394] <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) 0.33 s (6H) [H<3>‑11, H<3>‑11’]; 0.99 s (9H) [H<3>‑13, H<3>‑13’, H<3>‑13"]; 6.64 dd J = 4.4, 2.6 Hz (1H) [H‑8]; 6.89 br s (1H) [NH‑10]; 7.17 dd J = 4.4, 1.6 Hz (1H) [H‑7]; 7.64 dd J = 2.6, 1.6 Hz (1H) [H‑9]; 7.86 s (1H) [H‑3].

[0396] <13>C NMR (100 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) ‑4.1 [C‑11, C‑11’]; 18.0 [C‑12]; 26.7 [C‑13, C‑13’, C‑13"]; 102.1 [C‑7]; 110.3[C‑8]; 115.9 [C‑6]; 118.4 [C‑9]; 147.1 [C‑3]; 158.0 [C‑5].

[0398] ESI-HRMS: izrač. za C<12>H<21>N<4>Si [M+H]+: 249.15300; nađeno: 249.15292; delta= ‑0.32 ppm.

[0399] Primer 2

[0401] Terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin

[0403] 4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin (10 g, 74.54 mmol) je suspendovan u suvom THF-u (80 mL) u atmosferi azota. Suspenzija je ohlađena do 0‑5 °C i 2.5 M rastvor u heksanu heksillitijuma je dodat u kapima u toku 15 minuta i mešan u toku 10 minuta. Posle 10 minuta dodat je u kapima rastvor TBDMS-Cl (11.8 g, 78.27 mmol) u suvom THF-u (20 mL). Posle mešanja u toku 45 minuta reakcija je bila blizu gotove prema GC-MS analizi.

[0405] Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do 55‑60 g. Ostatak je ponovo rastvoren u n- Heksanu (175 mL) i koncentrovan je ponovo do 70‑75 g. U ostatak je dodat-Heksan (175 mL) i mešan u atmosferi azota u toku 15 minuta. Čvrste supstance su proceđene i isprane tri puta sa 50‑50 mL n-Heksana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do 50 g.

[0407] Koncentrovan filtrat je mešan pod gasom azota i ohlađen je na ‑10°C u toku 40 minuta i mešan na ‑10°C u toku 20 minuta pošto staloženi kirstali su proceđeni i isprani dva puta sa 10 mL n-Heksana (‑20°C).

[0409] Beli kristali su osušeni pod sniženim pritiskom (12.97 g, 70.1%).

[0411] Primer 3

[0413] Terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin

[0415] 4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin (5.00 g, 37.3 mmol) je suspendovan u suvom THF-u (40 mL) u atmosferi azota. Suspenzija je ohlađena do 0‑5°C i 2.61 g (46.6 mmol) sprašenog kalijum hidroksida je dodato i mešano u toku 30 minuta. Posle 30 minuta rastvor TBDMS-Cl (7.02 g, 46.6 mmol) u svom THF (10 mL) je dodat u kapima. Posle mešanja u toku 30 minuta reakcija je proverena pomoću TLC. Dodatnih 1.40 g (9.29 mmol) TBDMS-Cl je dodato u smešu. Posle 45 minuta mešanja reakcija je brzo završena.

[0417] Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do 27‑30 g. Ostatak je suspendovan u n- Heksanu (90 mL) i koncentrovan je ponovo do 27‑30 g. U ostatak je dodat n-Heksan (90 mL) i mešan u atmosferi azota u toku 15 minuta. Čvrste supstance su proceđene i isprane tri puta pomoću 25‑25 mL n- Heksana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do 35‑37 g.

[0419] Koncentrovan filtrat je mešan pod gasom azota i ohlađen je na ‑10°C u toku 40 minuta i mešan je na ‑10°C u toku 20 minuta pošto su staloženi kristali proceđeni i isprani dva puta sa 5 mL n-Heksana (‑20°C). Beli kristali su osušeni pod sniženim pritiskom.

[0421] Prinos: 1.00 g (11%).

[0422] Primer 4

[0424] Terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Amino‑7-bromo-pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin

[0426] 4-Amino‑7-bromo-pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin (7.95 g, 37.3 mmol) je suspendovan u 80 mL suvog 2-Metiltetra-hidrofurana u atmosferi azota. Suspenzija je ohlađena do 0‑5 °C i dodat je KOtBu (5.86 g, 52.0 mmol) i suspenzija je mešana u toku 20 minuta. Posle 20 minuta rastvor TBDMS-Cl (7.48 g, 49.6 mmol) u suvom 2-Metiltetrahidrofuranu (13 mL) je dodat u kapima u toku 10 °C. Posle mešanja u toku 20 minuta reakcija je gotovo završena prema TLC analizi.

[0428] Reakciona smeša je proceđena kroz sloj celita. Sloj celita je ispran sa 2-Metiltetrahidrofuranom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je suspendovan u 160 mL toluena. Čvrsta supstanca je uklonjena ceđenjem. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je mešan sa n- heptanom na 0‑5 °C. Naslovni proizvod je proceđen, ispran sa hladnim n-heptanom. Beli kristali su osušeni pod sniženim pritiskom.

[0430] Prinos: 8.97 g (73.5%) beli kristali.

[0432] <1>H NMR (500 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) 0.33 s (6H) [H3‑13, H3‑13’]; 0.98 s (9H) [H3‑12, H‑12’, H‑12"]; 6.83 d J = 4.6 Hz (1H) [H‑8]; 7.06 br s (1H) [NH‑10]; 7.33 d J = 4.6 Hz (1H) [H‑7]; 8.01 s (1H) [H‑3].

[0434] parcijalni<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) ‑4.2 [C‑13, C‑13’]; 26.6 [C‑12, C‑12’, C‑12"]; 103.3 [C‑7]; 112.5 [C‑8];147.8 [C‑3].

[0436] ESI-LRMS m/z(rel int%): 327(99) = [M+H]+; 349(3) = [M+Na]+. ESI-LRMS-MS m/z(rel int%): 311(100); 269(19).

[0438] Primer 5

[0440] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑ ((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0442] [0120] Pod azotom smeša 3.00 g (12.1 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina u 30 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led /etanol. 10.5 mL 2.3 M n-Heksillitijum rastvora (24.15 mmol) je dodato u kapima na ‑70 - ‑60 °C u rastvor. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, rastvor 5.05 g (12.1 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 10.5 mL suvog toluena je dodat u kapima na ‑70 °C. Posle dodvanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 30 mL destilovane vode. Slojevi su odvojeni, i 1.15 g (3.64 mmol) tetrabutilamonijum fluorid trihidrata je dodato u organsku fazu. Posle 20 minuta, organska faza je isprana 4 puta sa 30 mL 5% rastvora limunske kiseline, 30 mL zasićenog NaHCO<3>rastvora i koncentrovana in vacuo da bi se dobilo 8.01 g braon ulje. Sirovi proizvod je rastvoren u 60 mL toluena, i dodato je 28 g silikagela (Silikagel 60 (0.40‑0.063 mm) Merck 1.0938530). Suspenzija je proceđena, i silikagel je ispran sa dodatnih 15‑20 mL toluena. Organske faze su odbačene. Silikagel je ispran sa 3x120 mL acetona. Spojeni filtrati su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo braon ulje. Proizvod je rastvoren u 30 mL metil terc-butil etra na 45 °C, ohlađen na ‑20 °C, i proceđen da se dobije 3.03 g (46%) naslovnog jedinjenja. LC-MS (ESI) m/z 535.3 [MH-H<2>O]+

[0444] Primer 6

[0446] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑ ((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ol

[0448] Svaki fizički i hemijski korak je izveden u struji suvog azota. Kriogenski reaktor od 50 L je napunjen sa 9.0 L suvog 2-Metiltetrahidrofurana, 1.62 kg (6.53 mol) tercbutil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina i 7.2 L 2-Metiltetrahidrofurana. Smeša je mešana do potpunog rastvaranja. Smeša je ohlađena na ‑65 do ‑70 °C sa tečnim azotom.

[0450] 5.4 L 33% rastvora n-Heksillitijuma je dodato na ‑70 do ‑60 °C u rastvor u toku 45‑60 minuta. Cevovod je ispran sa 0.1‑0.2 L heksana u reaktor. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je rastvor 2,72 kg (6.50 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 5.67 L suvog toluena na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h.

[0452] Reaktor od nerđajućeg čelika je napunjen sa 20 L 5% rastvora limunske kiseline. Hladna reakciona smeša je premeštena u rastvor limunske kiseline. Kriogeni reaktor je ispran sa 2.0 L 2-metiltetrahidrofurana u ugašenu smešu. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta i faze su odvojene. Organske faze su premeštene u staklenu posudu reaktora.

[0454] 0.82 kg (2.61 mol) TBAF trihidrata je dodatu u organsku fazu. Posle 30 minuta mešanja na 20‑25 °C, dodatnih 0.21 kg (0.65 mol) TBAF trihidrata je dodato u smešu. Krajnja tačka reakcije skidanja zaštite je proverena TLC-om. Ukupno reakciono vreme je bilo 1 sat.

[0456] 8.10 L 5% rastvora limunske kiseline je dodato u reakcionu smešu. Faze su staložene i odvojene posle 10 minuta mešanja. Organska faza je isprana tri puta sa 3x8.0 L 5% rastvora limunske kiseline. Neorganske faze su spojene i ponovo obrađene da se regeneriše 4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin.

[0457] Organska faza je isprana sa 4.50 L 10% rastvorom natrijum-hidrogenkarbonata. Posle odvajanja faza organaska faza je uparena u rotacionom uparivaču od 50 L, pomoću vodenog kupatila na 45 °C i pritiska od (‑0.8)‑(‑1.0) bar.6.0 L toluena je dodato u ostatak i uparavanje je ponovljeno. Ostatak je razblažen do 11.3 kg sa dihlorometanom. Smeša je prečišćena hromatografijom.

[0459] Sadržaj naslovnog proizvoda u rastvoru (meren HPLC): 1.90‑2.24 kg (53‑62%)

[0461] Primer 7

[0463] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5 ‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ol

[0465] Pod azotom smeša 5.00 g (20.1 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led /etanol. 17.0 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijuma (42.5 mmol) je dodato u kapima na ‑70 - ‑65 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je rastvor 8.39 g (20.0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 17.5 mL suvog toluena u kapima na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 2.45 mL sirćetne kiseline. Temperatura je podignuta na 0 °C.3.45 mL sirćetne kiseline je dodato u smešu i smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1.5 h. Dodatnih 1.00 mL sirćetne kiseline je dodato u reakcionu smešu. Krajnja tačka reakcije je proveravana TLC-om. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i isprana je 4 puta sa 25 mL 5% rastvora limunske kiseline, i 13 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo. Sastav ostatka je odgovarao sirovom proizvodu iz primera 5.

[0467] Primer 8

[0469] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑ ((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0471] Svaki fizički i hemijski korak je izveden u struji suvog azota. U stakleni reaktor sa košuljicom od 30 L je napunjeno 5.7 kg suvog 2-Metiltetrahidrofurana, 1.20 kg (4.83 mol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina i 4.60 kg 2-Metiltetrahidrofurana. Smeša je mešana do potpunog rastvaranja. Smeša je ohlađena na ‑65 do ‑70 °C sa temepraturom košuljice od ‑80°C.

[0473] [0130] 2.80 L 33% rastvora n-Heksillitijuma je dodato na ‑70 - ‑55 °C u rastvor u toku 2.5‑3 sata. Cevovod je ispran sa 0.25 L 2-metiltetrahidrofurana u reaktor. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑60 °C do ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, rastvor 2.00 kg (4.78 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 3.40 kg suvom toluenu je dodat u toku 30 minuta na ‑65 do ‑40 °C. Posle dodadavanja smeša je mešana na ‑40 do ‑65 °C u toku 0.5 h.

[0475] 0.59 L sirćetne kiseline je dodato u reakcionu smešu na ‑65°C. Temperatura je podignuta na 0 °C. Dodatnih 0.83 L sirćetne kiseline je dodato u smešu. Reakcija je čuvana na 55 do 60 °C u toku 1.5 h. Dodatnih 0.24 L sirćetne kiseline je dodato i smeša je mešana na istoj temperaturi. Krajnja tačka reakcije je proverena TLC-om.

[0477] Smeša je ohlađena od 20 do 23 °C. 6.00 kg 5% rastvora limunske kiseline je dodato. Posle 10 minuta mešanja faze su odvojene. Organska faza je isprana 3x6.00 kg 5% rastvora sirćetne kiseline. Spojene faze limunske kiseline su ponovo obrađene da se regeneriše 4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin.

[0479] Organska faza je isprana dva puta 3.70 kg 10% rastvorom natrijumhidrogenkarbonata. Posle odvajanja organska faza je uparena u rotacionom uparivaču od 50 L, pomoću vodenog kupatila na 45 °C i pritiska (‑0.8)‑(‑1.0) bara. 2.3 kg toluena je dodato u ostatak i uparavanje je ponovljeno. Ostatak je razblažen do 7.70‑8.00 kg DCM-om. Smeša je prečišćena hromatografijom.

[0481] Sadržaj naslovnog proizvoda u rastvoru (meren pomoću HPLC-a): 1.44‑1.45 kg (54%)

[0483] Primer 9

[0485] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benzil oksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ol

[0487] Svrha odvajanja je da ukloni gornje nečistoće (zaštićene derivate šećera) sirovog (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi) metil)tetrahidrofuran‑2-ola (benzil-adukta) uglavnom zasnovanog na TLC analizi, koja može biti izvedena pri velikom opterećenju sa hromatografskim prečišćavanjem i naknadnom kristalizacijom.

[0489] Hromatografski uslovi

[0491] Preparativno hromatografsko prečišćavanje je izvedeno na Merck Novaprep 800 tipu preparativnog HPLC instrumenta.

[0493] Kolona:

[0495] Aksijalna kompresiona kolona od nerdjajućeg čelika

[0497] Efikasna dužina: pribl. 60 cm

[0499] prečnik: 5 cm

[0500] efektivna zapremina: pribl. 1180 cm<3>

[0502] Radni uslovi:

[0504] Stacionarna faza: Merck 60 (0,040‑0,063 mm) silikagel

[0506] masa: 510 g

[0508] Eluent: A: Dihlorometan 100 V/V %, B: Etil-acetat 100 V/V%

[0510] Tabela gradijenta

[0513]

[0516] Regeneracioni eluent: Metanol 100 V/V%

[0518] Nanošenje uzorka na kolonu: 0.3 g sirovog benzil-adukta / g stacionarne faze (165 g / 510 g)

[0520] Detekcija: UV

[0522] Talasna dužina: 254 nm

[0524] osetljivost: 3

[0526] brzina protoka eluenta: 100 cm<3>/ minutu

[0528] Punjenje kolone

[0530] Sklapanje, punjenje i kompresija kolone se vrši kao što je opisano za punjenje kolone, koristeći dihlorometan kao rastvarač za suspendovanje.

[0532] Materijali korišćeni za punjenje kolone: 510 g silikagel i1500 mL DCM.

[0534] Priprema kolone pre odvajanja

[0536] Nakon punjenja, kolona se direktno ispira (od vrha do dna) sa 1200 ml DCM-a. Ovaj korak ispiranja je potreban samo pre prvog ubrizgavanja na sveže napunjenu kolonu. Za dalja ubrizgavanja, kolonu treba regenerisati i kondicionirati.

[0537] Priprema ubrizganog rastvora uzorka

[0539] 30 g sirovog benzil-adukta se rastvori u 700 ml DCM-a. Rastvor se filtrira na staklenom filteru G4, filter se ispere sa 15 ml DCM-a, a rastvori se spoje. Ovako pripremljen rastvor se kontinuirano ubrizgava u kolonu.

[0541] Izvođenje hromatografije

[0543] Pripremljeni rastvor uzorka se nanosi na pripremljenu kolonu kroz liniju za dovod uzorka sa određenom brzinom protoka pomoću pumpe za eluent, zatim se dodatnih 1800 mL DCM kontinuirano pumpa na kolonu kroz liniju za dovod uzorka pomoću pumpe za eluent. Nakon toga se koristi linearni gradijent, gde se sastav eluenta menja sa 100 V/V% DCM na 100 V/V% etil-acetata za 10 minuta, nakon čega se na kolonu pumpa 2100 mL etil-acetata. (t<e>= vreme elucije, t<e>=0 vreme početka elucije)

[0545] t<e>=0- pribl.38 minuta

[0547] Na približno 38 minuta signal detektora počinje strmo da raste zbog pojave benziladukta. 1. frakcija koja sadrži prečišćeni benzil-adukt se sakuplja od ovog vremena, približno 38 minuta. Sakupljanje frakcije prečišćenog benzil-adukta traje do približno 56 minuta.

[0549] t<e>= pribl.38- pribl. 56 minuta (frakcija je sadržala prečišćeni benzil-adukt)

[0551] Sakupljanje frakcija traje 18 minuta, zatim se pumpa i instrument zaustavljaju, nakon čega se kolona regeneriše. Zapremina frakcije je približno 1800 ml.

[0553] Regeneracija i kondicioniranje kolone

[0555] Kolona se regeneriše u protivstrujnom režimu (smer odozdo nagore) sa protokom od 100 mL/min koristeći 1500 mL metanola, zatim se kolona kondicionira koristeći 3000 mL DCM.

[0557] Obrada čiste frakcije

[0559] Frakcija benzil-adukta, zapremine približno 1800 ml, iz hromatografskog razdvajanja se uparava na rotacionom uparivaču na 40 °C i pritisku od 200 mbar do zapremine približno 100‑200 ml.

[0561] Kristalizacija

[0563] Rastvor benzil-adukta iz hromatografije je pripremljen pod sniženim pritiskom na rotacionom uparivaču, koristeći vodeno kupatilo na 46‑48 °C i pritisak od (‑0.8)‑(‑1.0) bar. Ostatak je rastvoren u 650 mL metil-terc-butil etra na 45‑50 °C. Rastvor je pripremljen na rotacionom uparivaču, koristeći vodeno kupatilo na 40‑45 °C do 520‑580 mL ostatka.

[0564] Smeša je zasejana i polako ohlađena na 20‑25 °C. Suspenzija je mešana na 20‑25 °C tokom 2 sata i na 0‑5 °C tokom 1 sata. Proizvod je filtriran, ispran sa 2x40 mL hladnog metil-terc-butil etra i osušen pod vakuumom na 40 °C.

[0566] Prinos: 37‑45 g belih beličastih kristala.

[0568] Primer 10

[0570] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(terc-butildimetilsilil) amino]pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il}oksolan‑2-ol

[0572] Sistem za isporuku reagensa, koji se sastoji od skladišta pod pritiskom, špric pumpi i modula za ubrizgavanje reagensa (Syrris, Royston, UK) sa tri različita ulaza (A, B i C), povezan je sa dva sekvencijalna mikroreaktora.

[0574] Ulazi A i B su povezani sa PEEK T-adapterom (unutrašnji prečnik 0,5 mm; IDEX, Rohnert Park, CA, SAD; broj dela P‑727), nakon čega sledi reaktor sa spiralom unutrašnje zapremine 1 mL (PTFE cev, spoljašnji prečnik 1/16 inča, unutrašnji prečnik 0,8 mm). Izlaz prvog mikroreaktora i ulaz C su povezani sa drugim, identičnim PEEK T-adapterom, nakon čega se postavlja reaktor sa spiralom unutrašnje zapremine 4 mL (PTFE cev, spoljašnji prečnik 1/16 inča, unutrašnji prečnik 0,.8 mm). Svaki ulaz je prethodno ohlađen pre postavljanja reaktora u PTFE petlje zapremine 0.5 mL (spoljašnji prečnik 1/16 inča, unutrašnji prečnik 0,8 mm).

[0576] Sistem se sekvencijalno pere metanolom, acetonom i suvim THF-om. Reaktori i prethodno hlađenje se hlade na -30°C potapanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0578] Petlje injektora su napunjene sledećim rastvorima: 248 mg (1,0 mmol) 1-tercbutil‑1,1-dimetil-N‑{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamina rastvorenog u 5,0 ml suvog THF (0,2 M) za ulaz A; 1.0 ml (2,3 mmol) 2.3 M rastvora heksilitijuma u heksanu za ulaz B; i 418 mg (1.0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil] oksolan‑2-ona rastvorenog u 1.0 ml suvog THF (1,0 M) za ulaz C.

[0580] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2.1 ekvivalent) i 0,34 mL/min (ulaz C; 1.0 ekvivalent), što obezbeđuje vreme zadržavanja od 0.5 min i 1.7 min u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL početnog materijala i odgovarajuće količine ostalih reaktanata se sekvencijalno ubrizgavaju u protok suvog THF-a tokom unapred određenih vremenskih perioda. Mrtva zapremina se odbacuje u otpad, dok se reakciona smeša ne pojavi na izlazu iz drugog mikroreaktora. Zatim se proizvodna smeša sakuplja u posudi za mešanje, koja sadrži destilovanu vodu.

[0582] [0152] Faze su razdvojene, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom. Spojene organske faze su isprane rastvorom soli, sušene preko natrijum sulfata i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LC-MS (ESI) m/z 649.4 [M+H+‑H<2>O].

[0584] Primer 11

[0586] (3R,4R,5R)‑2‑{4‑[(terc-butildimetilsilil)amino]pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il}‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil) oksi]‑5‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}oksolan‑2-ol

[0587] Koristeći identičan sistem reaktora sa kontinuiranim protokom kao u Primeru 10, sistem se sekvencijalno pere metanolom, acetonom i suvim THF-om. Reaktori i petlje za prethodno hlađenje se hlade na -30°C, potapanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0589] Petlje injektora su napunjene sledećim rastvorima: 248 mg (1,0 mmol) 1-tercbutil‑1,1-dimetil-N‑{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamina rastvorenog u 5.0 ml suvog THF (0,2 M) za ulaz A; 1.0 ml (2,3 mmol) 2.3 M rastvora heksilitijuma u heksanu za ulaz B; i 491 mg (1,0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil)oksi]‑5‑{[(tercbutildimetilsilil)oksi]metil}oksolan‑2-ona rastvorenog u 1.0 ml suvog THF (1,0 M) za ulaz C.

[0591] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2,1 ekvivalent) i 0,34 mL/min (ulaz C; 1,0 ekvivalent), što obezbeđuje vreme zadržavanja od 0.5 min i 1.7 min u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL početnog materijala i odgovarajuće količine ostalih reaktanata se sekvencijalno ubrizgavaju u protok suvog THF-a tokom unapred određenih vremenskih perioda. Mrtva zapremina se odbacuje u otpad, dok se reakciona smeša ne pojavi na izlazu iz drugog mikroreaktora. Zatim se proizvodna smeša sakuplja u posudi za mešanje, koja sadrži destilovanu vodu.

[0593] Faze su razdvojene, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom. Spojene organske faze su isprane rastvorom soli, osušene preko natrijum sulfata i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod jedinjenja iz naslova kao žuta polučvrsta smeša. LC-MS (ESI) m/z 721.5 [M+H+‑H<2>O].

[0595] Primer 12

[0597] 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitril

[0599] Dobijanje (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ola

[0601] Naslovni proizvod je dobijen prema postupku iz Primera 6.

[0603] Pilot alikvot rastvora DCM-a iz kilogramske količine je uparen do suvog. Preostalo je 13.0 g smeđeg ulja.

[0604] Dobijanje 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitrila

[0606] Rastvor A: 13.0 g (23.6 mmol) sirovog (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ola je rastvoren u 130 mL DCM. Rastvor je ohlađen pod gasom azota na ‑40 °C.6.0 mL (78.3 mmol) TFA je dodato u rastvor i mešan je 15‑20 minuta.

[0608] Rastvor B: U trogrli balon od 250 mL sa suvim DCM (65 mL) ohlađen na ‑10°C u atmosferi azota dodati su TMSOTf (26.0 mL, 143 mmol) i TMSCN (18.0 mL, 144 mmoli držani na ‑10°C.

[0610] Rastvor B je dodat u rastvor A što je pre moguće dok je temperatura održavana ispod ‑25°C. Posle dodavanja reakciona smeša je mešana na ‑40°C. Posle jednog sata reakciona smeša je sipana na rastvor KOH (55.0 g,) na ‑10 °C u destilovanoj vodi (182 mL). Faze su odvojene organski sloj je ispran tri puta sa rastvorom soli (3x75 mL) i dva puta sa vodom (2x75 mL). Organska faza je koncentrovana do 83 g ostatka pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa 105 mL DCM. Rastvor je uparen do 80 g ostatka i razblažen sa 150 mL toluena. Rastvor je uparen u 40 g ostatka. Smeša je mešana u toku 16 h na sobnoj i 0.5 h na 0‑5 °C. Proizvod je proceđen i ispran sa 2x2 mL 0‑5 °C toluena. Kristali su osušeni pod vakuumom, u struji azota na sobnoj temperaturi.

[0612] Prinos: 2.36 g belih kristala.

[0614] Primer 13

[0616] 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitril

[0618] Dobijanje (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetra- hidrofuran‑2-ola

[0620] Pod azotom smeša 8.50 g (26.0 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Amino‑7-bromo-pirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin u 85 mL suvog THF je ohlađena u kupatilu suvi led/etanol. 21.5 ml 2.5 M n-Heksillitijum rastvora (53.7 mmol) je dodato u kapima na ‑70 do ‑60 °C u rastvor. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, rastvor 10.90 g (26.0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 10.5 mL suvog tetrahidrofurana je dodat u kapima na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 80 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida. Faze su odvojene. Organska faza je uparena na rotacionom uparivaču do ostatka od 49 g.

[0621] 50 mL metanol je dodat u ostatak i rastvor je uparen do suvog pod sniženim pritiskom. Dodatnih 45 mL metanola je dodato u ostatak i rastvor je uparen pod sniženim pritiskom.

[0622] Ostatak je rastvoren u 100 mL metanola. 40 mL 5% rastvora limunske kiseline je dodato u rastvor i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 h. Metanol je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak od dve faze je ispran sa 100 mL etil-acetata. Organska faza je razblažena sa 25 mL etil- acetata i isprana je sa 20 mL 5% rastvora limunske kiseline i 20 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>. Rastvor je uparen do suvog pod sniženim pritiskom.

[0624] Prinos: 13.4 g ulja

[0626] Dobijanje 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f|[1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitrila

[0628] Ovaj eksperiment je počeo od trećine prethodno pripremljenog sirovog (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo [2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi) metiltetrahidrofuran‑2-ola.

[0630] Rastvor A: 4.47 g (8.00 mmol) sirovog (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ola je rastvoren u 40 mL DCM .Rastvor je ohlađen pod gasom azota na ‑40 °C. 1.84 mL (24.0 mmol) TFA je dodat u rastvor i mešan je 15‑20 minuta.

[0632] Rastvor B: U trogrlom balonu od 100 mL suvi DCM (20 mL) je ohlađen na ‑10°C u atmosferi azota i dodati su TMSOTf (8.69 ml, 48.0 mmol) i TMSCN (6.00 ml, 48.0 mmol) i održavani na ‑10°C.

[0634] Rastvor B je dodat u rastvor A koliko god je moguće bilo dok je temepratura održavana ispod ‑25°C. Posle dodavanja reakciona smeša je mešana na ‑40°C. Posle jednog sata reakciona smeša je sipana na rastvor KOH (16.1 g,) na ‑10 °C u destilovanoj vodi (65 mL). Faze su odvojene organski sloje je ispran tri puta sa rastvorom soli (3x50 mL) i dva puta sa vodom (2x20 mL). Organska faza je koncentrovana do suvog pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u toluenu. Smeša je mešana u toku 2 dana na soboj temperaturi i 0.5 h na 0‑5 °C. Proizvod je proceđen i ispran sa 2x2 mL 0‑5 °C toluena. Kristali su osušeni pod vakuumom, u struji azota na sobnoj temperaturi.

[0636] Prinos: 1.57 g belih kristala. (32%)

[0638] Primer 14

[0640] N‑{7-bromopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamin

[0641] U rastvor koji se meša 8 g (37.55 mmol) 7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-amina u 5 mL suvog THF-a dodato je 4.49 g (40 mmol) KOtBu. Posle je dodat rastvor 7.7 g (8.5 ml, 40 mmol) TIPS-Cl na sobnoj temepraturi. Smeša je mešana na ovoj temperaturi u toku 1.5 h. Zatim 0.2245 g (2 mmol) KOtBu i 0.425 mL (2 mmol) TIPS-Cl je dodato u smešu.

[0642] Posle mešanja u toku 0.5 sati 0. 2245 g (2 mmol) kalijum terc-butoksida i. 0.425 mL (2 mmol) TIPS-Cl je dodato ponovo u smešu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 h, razblažena sa vodom i staloženi kristali su proceđeni, isprani sa vodom. Sirovi proizvod je rastvoren u dihlorometanu, ispran sa vodom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan in vacuo. Ostatak je tretiran nheksanom i staloženi kristali su proceđeni da bi se dobilo 12.89 g (92.9 %) naslovnog jedinjenja.

[0644] Primer15

[0646] N‑{7-bromopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamin

[0647] KOtBu (11.60 g, 103.37 mmol) je dodat u porcijama u suspenziju jedinjenja 7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑4-amina (20.00 g, 93.88 mmol) u suvom THF -a (250 mL) na 10°C. Posle 20 minuta TIPS-Cl (22.1 mL, 103 mmol) je dodat u kapima dok unutrašnja temperatura je održavana ispod 10 °C. Posle mešanja u toku 1 h na sobnoj temperaturi još jedna količina je dodata KOtBu (3.9 g, 34.76 mmol) i TIPS-Cl (6.6 mL, 30.84 mmol) na 10 °C. Posle mešanja u toku 1 h na sobnoj temperaturi reakcija je zaustavljena prema TLC anaizi (eluent: cikloheksan-EtOAc 4:1). Reakciona smeša je ohlađena na 10 °C zatim je dodata voda (260 mL) (unutrašnja temperatura je podignuta do 20‑22 °C). Ekstrahovana je sa EtOAc (250 mL, zatim 2x 100 mL). Organski sloj je osušen preko Na<2>SO<4>i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Kristali su triturisani sa heksanom, proceđeni i osušeni da bi se dobili svetlo braon kristali (31.55 g, 91%).

[0649] <1>H NMR (500 MHz, CD<2>Cl<2>): δ (ppm) 1.13 d J = 7.5 Hz (18H) [H3‑12, H3‑12’, H3‑12", H3‑12‴, H3‑12ʺʺ, H3‑12ʺʺ′ ]; 1.49 sept J = 7.5 Hz (3H) [H<3>‑11, H‑11’, H‑11"]; 4.74 br s (1H) [NH‑10]; 6.72 m (2H) [H‑7, H‑8]; 7.99 s (1H) [H‑3].

[0651] <13>C NMR (125 MHz, CD<2>Cl<2>):δ (ppm) 11.9 [C‑11, C‑11’, C‑11"]; 18.2 [C‑12, C‑12’, C‑12", C‑12"’, C‑12"", C‑12""’]; 100.4 [C‑7]; 100.7 [C‑9]; 112.9 [C‑8]; 117.5 [C‑6]; 148.3 [C‑3]; 157.8 [C‑5].

[0653] ESI-LRMS m/z(rel int%): 369(100) = [M+H]+. ESI-LRMS-MS m/z(rel int%): 325(100).

[0655] Primer 16

[0657] N‑{7-bromopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamin

[0658] [0172] U suspenziju od 525 mg (2,46 mmol) 7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-amina u 10 ml suvog THF-a, uz mešanje, dodato je 184 mg (3,28 mmol) praškastog KOH. Iz suspenzije je dobijen bistri rastvor. Dodato je 0,70 ml (3,28 mmol) TIPS-Cl na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na ovoj temperaturi 1 sat. Reakcija je proverena TLC-om. Konverzija je bila približno 50%. Proizvod je odgovarao proizvodu iz Primera 14.

[0660] Primer 17

[0662] 1,1,1-tris(propan‑2-il)‑N‑{pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamin

[0664] Trogrli balon od 500 mL osušen u sušnici je snabdeven sa kapalicom i ispiran je sa N<2>. Polazni materijal pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-amin (12.0 g; 89.5 mmol; 1.0 ekv.) je dodat i suspendovan u anhidorvanom THF (271 ml; 0.33 M). Bela suspenzija je ohlađena na 0‑10°C i dodat je KOtBu (12.0 g; 107 mmol; 1.2 ekv.) u malim porcijama takvom brzinom da je temperatura održavana ispod 15°C, dok se suspenzija pretvorila u zelenožuti rastvor. Smeša je mešana na 0‑10°C u toku 15‑20 min, zatim je dodat TIPS-Cl (22.0 ml; 103 mmol; 1.15 ekv.) u kapima preko kapalice pri takvoj brzini da je omogućeno da temperatura raste ne više od 25°C. Pošto je dodavanje završeno, pretvaranje je praćeno pomoću TLC (cikloheksan-EtOAc 4:1; detekcija:UV 254nm). Posle 20 min, TLC je prikazao da je preostalo dosta polaznog materijala, tako da je reakcija ohlađena ponovo do 0‑10°C, i su dodati drugi deo KOtBu (4.0 g; 35.8 mmol; 0.4 ekv.) a zatim TIPS-Cl (6.7 ml; 31.3 mmol; 0.35 ekv.) reagensa. Posle mešanja 20 min, TLC je pokazao da je mala količina polaznog materijal preostala, tako da je prethodna sekvenca ponovljena sa KOtBu (3.0 g; 26.8 mmol; 0.3 ekv.) i TIPS-Cl (4.9 ml; 22.8 mmol; 0.255 ekv.) Posle 20 min TLC je pokazao potupunu konverziju. Rastvor je sipan na smešu 200 ml cikloheksan- 200 ml voda, intenzivno mešan. Dva sloja su odvojena, organska faza je isprana sa 100 ml rastvora soli, osušena iznad Na<2>SO<4>, proceđena i uparena do suvog pod sniženim pritiskom dajući 35.5 g bledo žutog ulja kao sirovog proizvoda koji je kristalizovan u nekoliko minuta. Izolovanje je izvedeno rekristalizacijom iz 48 ml n- heksan: posle potpunog rastvaranja sirovog proizvoda zagrevanjem bistar rastvor je ohlađen na ‑10 do 0°C i suspenzija je mešana u toku još 1 h na ovoj temperaturi. Beli kristali su sakupljeni ceđenjem, isprani sa 12 mL ledeno hladnog n-heksana dajući 20.0 g (77%) čistog proizvoda.

[0666] GC-MS (EI): m/z [M]*+= 290; GC-čistoću: 97%

[0668] <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) 1.09 d J = 7.5 Hz (18H) [H3‑12, H3‑12’, H3‑12", H3‑12‴, H3‑12ʺʺ, H3‑12ʺʺ′]; 1.43‑1.54 m (3H) [H‑11, H‑11’, H‑11"]; 6.65 dd J = 4.4, 2.6 Hz (1H) [H‑8]; 6.69 br s (1H) [NH‑10]; 7.22 dd J = 4.4, 1.6 Hz (1H) [H‑7]; 7.65 dd J = 2.6, 1.6 Hz (1H) [H‑9]; 7.85 s (1H) [H‑3].

[0670] <13>C NMR (100 MHz, DMSO-d<6>): δ (ppm) 11.6 [C‑11, C‑11’, C‑11"]; 18.2 [C‑12, C‑12’, C‑12", C‑12‴, C‑12ʺʺ, C‑12ʺʺ′];102.2 [C‑7]; 110.2 [C‑8]; 115.6 [C‑6]; 118.3 [C‑9]; 147.1 [C‑3]; 158.2 [C‑5].

[0672] ESI-LRMS m/z(rel int%): 291 (100) = [M+H]+. ESI-LRMS-MS m/z(rel int%): 247(100).

[0673] Primer 18

[0675] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il)oksolan‑2-ol ↔ (2R,3R,4R)‑2,3,5-tris(benziloksi)‑4-hidroksi‑1‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)pentan‑1-on

[0677] Pod azotom u rastvor 500 mg (1.35 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(pro- pan‑2-il)silanamina u 15 mL suvog THF dodato je u kapima 1.18 mL 2.3 M n-heksillitijum u rastvoru n-heksana (2.71 mmol) na ‑78°C do ‑70°C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑78°C do ‑70°C u toku 1.5 h, 566.5 mg (1.35 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u rastvoru THF-u (2 mL) je dodata u kapima na ‑70°C do ‑65°C. Posle dodavanja smeša je mešana ispod ‑70°C u toku 1 h. Tako dobijena smeša je omogućeno da se zagreje na sobnu temperaturu u toku 45 minuta. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 2 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida i 30 mL vode. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom, spojeni organski sloj je ispran sa vodom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo sirovi proizvod kao ulje (63 % pomoću LC-MS). Sirovi proizvod je hromatografisan na silikagelu eluiranjem sa etil acetatom i cikloheksanom (1:2) da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao ulje u prinosu od 0.4 g (42 %). Čistoće LC-MS: 97.9 %.

[0679] Primer 19

[0681] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il)oksolan‑2-ol

[0683] [0175] Trogrli balon od 100 mL osušen u sušnici u atmosferi N<2>je napunjen sa polaznim materijalom N‑{7- bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanaminom (5.0g; 13.5 mmol; 1.0 eq) i rastvoren u suvom 2-Metiltetrahidrofuranu (34 ml; 0.4 M). Bistar rastvor je ohlađen do ‑70°C i rastvor n-Heksillitijuma (11.8 ml; 2.3 M; 27.0 mmol; 2.0 ekv.) je dodat u kapima pri takvoj brzini da je temperatura održavana ispod ‑55°C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, je dodat rastvor(3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona (5.66 g; 13.5 mmol; 1.0 ekv.) u suvom toluenu (12 mL; 1.0M;) pri takvoj brzini da je temperatura održavana ispod ‑55 °C. U međeuvremenu, bezbojni rastvor se pretvorio u žut. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Hladna reakciona smeša je sipana na 50 ml 10% rastvora sirćetne kiseline, kada je organska faza postala bezbojna. Slojevi su odvojeni, organska faza je isprana sa 50 mL cc. rastvora NaHCO<3>, 50 mL slanog rastvora, osušena preko Na<2>SO<4>, proceđena i uparena do suvog pod sniženim pritiskom dajući 10.75 g žutog ulja. Izolacija je izvedena pomoću fleš hromatografije (100% DCM, zatim cikloheksan-EtOAc 4:1 -> 1:1) dajući 5.0 g (52%) bledo žuto ulje.

[0685] LC-MS (ESI): m/z [M-H<2>O+H]+= 691.5; čistoća: 98%.

[0687] Primer 20

[0689] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il)oksolan‑2-ol

[0691] Pomoću identičnih uslova sistema reaktora sa kontinualnim protokom kao u Primeru 10, sistem je uzastopno ispran metanolom, acetonom i suvim THF. Reaktori i petlje za predhlađenje su ohlađeni na ‑30°C, uranjanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0693] Injektorska petlja je napunjena sa sledećim rastvorima: 369 mg (1.0 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamina rastvorenim u 5.0 mL suvog THF-a (0.2 M) za ulaz A; 1.0 mL (2.3 mmol) 2.3 M heksillitijumskim rastvora u heksanu za ulaz B; i 418 mg (1.0 mmol) đ(3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi) metil]oksolan‑2-ona rastvorenog u 1.0 mL suvog THF (1.0 M) za ulaz C.

[0695] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2.1 ekv.) i 0.34 mL/min (ulaz C; 1.0 ekv.), dajući 0.5 min i 1.7 min vreme zadržavanja u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL polaznog materijala i odgovarajuće količine drugih reaktanata su uzastopno injektovane u protočnu struju suvog THF za prethodno određeno vreme. Mrtva zapremina je odbačena u otpad, dok se reakciona smeša nije pojavila na izlazu drugog mikroreaktora. Zatim, smeša proizvoda je sakupljena u sudu koji se meša, koja je sadžala 10% vodenog rastvora sirćetne kiseline.

[0697] Organske faze su odvojene, vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojene organske faze su isprane sa zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata, osušene preko natrijum sulfata i uparene. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije (25% EtAc/cikloheksana) da se dobije 133 mg željenog proizvoda (19% prinos) kao bezbojno ulje. LC-MS (ESI) m/z 961.5 [M+H+‑H<2>O].

[0699] Primer 21

[0701] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il)oksolan‑2-ol

[0703] Pomoću identičnih uslova sistema reaktora sa kontinualnim protokom kao u primeru 10, sistem je ispran uzastopno metanolom, acetonom i suvim THF. Reaktori i petlje za prethodno hlađenje su ohlađeni na ‑30°C, uranjanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0704] Injektorske petlje su napunjene sa sledećim rastvorima: 290 mg (1.0 mmol) 1,1,1-tris(propan‑2-il)‑N‑{pirolo[2,1‑f] [1,2,4]triazin‑4-il}silanamina rastvorenog u 5.0 mL suvog THF (0.2 M) za ulaz A; 1.0 mL (2.3 mmol) 2.3 M rastvora heksillitijuma u heksanu za ulaz B; i 418 mg (1.0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona rastvorenog u 1.0 mL suvog THF (1.0 M) za ulaz C.

[0706] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2.1 ekv.) i 0.34 mL/min (ulaz C; 1.0 ekv.), dajući 0.5 min i 1.7 min vreme zadržavanja u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL polaznog materijala i odgovarajuće količine drugih reaktanata su uzastopno injektovane u protočnu struju suvog THF za prethodno određene vremenske periode. Mrtva zapremina je odbačena u otpad, dok se reakciona smeša nije pojavila na izlazu drugog reaktora. Zatim, smeša proizvoda je sakupljena u sudu koji se meša, koji je sadržao 10% vodenog rastvora sirćetne kiseline.

[0708] Faze su odvojene, vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojene organske faze su isprane zasićenim rastvorom natrijum hidrogen sulfata, osušene preko natrijum sulfata i uparene. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije (25% EtAc/cikloheksan) da bi se dobilo 99 mg željenog proizvoda (14% prinos) kao bezbojno ulje LC-MS (ESI) m/z 961.5 [M+H+‑H<2>O].

[0710] Primer 22

[0712] (2R,3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il)oksolan‑2-karbonitril

[0714] Trogrli balon od 100 mL osušen u sušnici pod N<2>-atmosferom je napunjen polaznim materijalom (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑7-il) oksolan‑2-olom (1.0 g; 1.41 mmol; 1.0 ekv.) i rastvorenim u DCM (10 ml; 0.145M). Rastvor je ohlađen na ‑60 do ‑50°C i TFA (324 µl; 4.23 mmol; 3.0 ekv.) je dodat u kapima U toku dodavanja privremeno je obrazovan beli talog. U međuvremenu, posebni balon od 25 mL je napunjen sa 5 mL DCM, ohlađen na - 10°C zatim su dodati TMSOTf (1.54 mL; 8.46 mmol; 6.0 ekv.) i TMSCN (1.06 mL; 8.46 mmol; 6.0 ekv.) uzastopno. Ovaj rastvor TMSOTf/TMSCN je dodat u balon koji koji sadrži polazni materijal ispod ‑50°C. U toku dodavanja bezbojni rastvor se pretvorio u žuti. Rastvor je mešan na ‑50°C u toku 1h, i u međuvremenu je posvetleo do bledo žute. Smeša je sipana na 14 mL 20% rastvora KOH, slojevi su odvojeni. Neorganska faza je ekstrahovana 1x10mL DCM, spojene organske faze su isprane 1x10mL rastvorom soli, osušene iznad Na<2>SO<4>, proceđene i uparene do suvog pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (cikloheksan-EtOAc 3:1) dajući 660 mg (66%) žutog ulja koje je kristalisalo u toku nekoliko sati daljući bele kristale.

[0715] LC-MS (ESI): m/z [M+H]+= 718.5; čistoća: 99%. Odnos anomera: a/b=3/1

[0717] Primer 23

[0719] (3R,4R,5R)‑2‑{4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il}‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑

[0720] [(benziloksi)metil]oksolan‑2-ol

[0722] Pod azotom u smešu 5.00 g (17.21 mmol) 1,1,1-tris(propan‑2-il)‑N-{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il} silanamina u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana dodato je u kapima 15.5 mL 2.3 M rastvora n-Heksillitijumu (35.6 mmol) na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, je dodat u kapima rastvor 7.20 g (17.2 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 15 mL suvog toluena na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 40 mL destilovane vode. Slojevi su odvojeni, i dodato je 2.17 g (6.89 mmol) TBAF trihidrata u organsku fazu. Posle 0.5 h, Organska faza je isprana sa rastvorom limunske kiseline, zasićenim rastvorom NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo da bi se dobilo 12.50 g braon ulja. Sirovi proizvod je rastvoren u 100 mL toluena, i dodato je 43 g silikagela. Suspenzija je proceđena, i silikagel je ispran sa dodatnih 100 mL toluena. Organska faze su odbačene. Silikagel je ispran 2x175 mL, zatim sa 100 mL acetona. Spojeni filtrati su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo 6.80 g braon ulja. Proizvod je rastvoren u 34 mL metil terc-butil etra na 45 °C, ohlađen na ‑20 °C, i proceđen da bi se dobilo 1.97 g (20.6%) naslovnog jedinjenja. LC-MS (ESI) m/z 535.3 [MH-H2O]+

[0724] Primer 24

[0726] (3R,4R,5R)‑2‑{4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il}‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑

[0727] [(benziloksi)metil]oksolan‑2-ol

[0729] Pod azotom u smešu 5.00 g (13.54 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamina u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana, dodato je u kapima 12.2 mL 2.3 M rastvora n-Heksillitijuma (28 mmol) na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, je dodat rastvor 5.66 g (13.5 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 10 mL suvog toluena u kapima na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem 40 mL destilovane vode. Slojevi su odvojeni, i 1.71 g (5.41 mmol) TBAF trihidrata je dodato u organsku fazu. Posle 0.5 h, organska faza je isprana sa rastvorom limunske kiseline, zasićenim rastvorom NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo da bi se dobil 10.49 g braon ulja. Sirovi proizvod je rastvoren u 100 mL toluena, i dodato je 37 g silikagela. Suspenzija je proceđena, i silikagel je ispran sa dodatnih 100 mL toluena. Organske faze su odbačene. Silikagel je ispran 2x175 mL, zatim sa 100 mL acetona.

[0730] Spojeni filtrati su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo 6.57 g braon ulja. Proizvod je rastvoren u 33 mL metil terc-butil etra na 45 °C, ohlađen na ‑20 °C, i proceđen da bi se dobilo 2.81 g (37.5%) naslovnog jedinjenja. LC-MS (ESI) m/z 535.3 [MH-H<2>O]+

[0732] Primer 25

[0734] (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}‑2,2-dimetil‑4‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo [2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑tetrahidro‑2H-furo[3,4-d][1,3]dioksol‑4-ol

[0736] Pod azotom u rastvor 2 g (5.41 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2- il)silanamina u 30 mL suvog THF-a 4.71 mL dodat je 2.3 M nheksillitijum u rastvoru n-heksana (4.71 mmol) u kapima na (‑78) °C - (‑70) °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑78 °C do ‑70 °C u toku 0.5 h, 1.64 g (5.41 mmol) rastvora (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc- butildimetilsilil)oksi]metil}‑2,2-dimetil-tetrahidro‑2H-furo[3,4‑d][1,3]dioksol‑4-ona u THF-u (5 mL) je dodato u kapima na ‑70 °C do ‑65 °C. Posle dodavanja smeša je mešana ispod ‑70°C u toku 1 h. Tako dobijena smeša je omogućeno da se zagreje na sobnoj temperaturi u toku 45 minuta. Reakciona smeša je zaustavljena dodavanjem 5 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida i 30 mL vode. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom, spojeni organski sloj je ispran sa vodom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo 3.6 g naslovog sirovog proizvoda naslovnog jedinjenja kao ulja (75 % by LC-MS).

[0738] Primer 26

[0740] (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}‑2,2-dimetil‑4‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo [2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑tetrahidro‑2H-furo[3,4-d][1,3]dioksol‑4-ol

[0742] Pomoću identičnih uslova sistema reaktora sa kontinualnim protokom kao u primeru 10, sistem je ispran uzastopno metanolom, acetonom i suvim THF. Reaktori i petlje za prethodno hlađenje su ohlađeni na ‑30°C, uranjanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0744] Injektorske petlje su napunjene sa sledećim rastvorima: 369 mg (1.0 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamina rastvorenog u 5.0 mL suvog THF (0.2 M) za ulaz A; 1.0 mL (2.3 mmol) 2.3 M heksillitijum rastvora u heksanu za ulaz B; i 302 mg (1.0 mmol) (3aR,6R,6aR)‑6‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi] metil}‑2,2-dimetil-tetrahidro‑2H-furo[3,4‑d][1,3]dioksol‑4-ona rastvorenog u 1.0 mL suvog THF (1.0 M) za ulaz C.

[0745] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2.1 ekv.) i 0.34 mL/min (ulaz C; 1.0 ekv.), dajući 0.5 min i 1.7 min vreme zadržavanja u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL polaznog materijala i odgovarajuće količine drugih reaktanata su uzastopno injektovane u protočnu struju suvog THF za prethodno određene vremenske periode. Mrtva zapremina je odbačena u otpad, dok se reakciona smeša nije pojavila na izlazu drugog reaktora. Zatim, smeša proizvoda je sakupljena u sudu koji se meša, koji sadrži 10% vodeni rastvor sirćetne kiseline.

[0747] Faze su odvojene, vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojene organske faze su isprane zasićenim rastvorom natrijum hidrogen sulfata, osušene iznad natrijum sulfata i koncentrovane in vacuo da bi se dobilo 562 mg sirovog proizvoda naslovnog jedinjenja kao žutog ulja. LC-MS (ESI) m/z 575.4 [M+H+].

[0749] Primer 27

[0751] (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil)oksi]‑5‑{[(tercbutildimetilsilil)oksi]metil}‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il)silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)oksolan‑2-ol

[0753] Pod azotom u rastvor 500 mg (1.35 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamina u 15 mL suvog THF-a dodato je u kapima 1.18 mL 2.3 M rastvora n-heksillitijuma u n-heksanu (2.71 mmol) na ‑78 °C do ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑78 °C do ‑70 °C u toku 1.5 h, 664 mg (1.35 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil)oksi]‑5‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}

[0754] oksolan‑2-ona u rastvoru THF-a (2 mL) je dodato u kapima na ‑70 °C do ‑65 °C. Posle dodavanja smeša je mešana ispod ‑70 °C u toku 1 h. Tako dobijena smeša je omogućeno da se zagreje na sobnu temperaturu u toku 45 minuta. Reakciona smeša je zaustavljena dodavanjem 2 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida i 30 mL vode. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom, spojeni organski sloj je ispran sa vodom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo 0.9 g sirovog proizvoda naslovnog jedinjenja kao braon ulja (55 % pomoću LC-MS).

[0756] Primer 28

[0758] (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil)oksi]‑5‑{[(tercbutildimetilsilil)oksi]metil}‑2‑(4‑{[tris(propan‑2-il) silil]amino}pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)oksolan‑2-ol

[0760] [0193] Pomoću identičnih uslova sistema reaktora sa kontinualnim protokom kao u primeru 1, sistem je ispran uzastopno metanolom, acetonom i suvim THF-om. Reaktori i petlje za prethodno hlađenje su ohlađeni na ‑30°C, uranjanjem u termostatirano IPA kupatilo.

[0762] Injektorske petlje su napunjene sa sledećim rastvorima: 369 mg (1.0 mmol) N‑{7-bromopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑4-il}‑1,1,1-tris(propan‑2-il)silanamina rastvorenog u 5.0 mL suvog THF-a (0.2 M) za ulaz A; 1.0 mL (2.3 mmol) 2.3 M rastvora heksillitijuma u heksanu za ulaz B; i 490 mg (1.0 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis[(terc-butildimetilsilil oksi]‑5‑{[(terc-butildimetilsilil)oksi]metil}oksolan‑2-ona rastvorenog u 1.0 mL suvog THF (1.0 M) za ulaz C.

[0764] Brzine protoka su podešene na 1.7 mL/min (ulaz A), 0.31 mL/min (ulaz B; 2.1 ekv.) i 0.34 mL/min (ulaz C; 1.0 ekv.), dajući 0.5 min i 1.7 min vreme zadržavanja u prvom i drugom mikroreaktoru. 5.0 mL polaznog materijala i odgovarajuće količine drugih reaktanata su uzastopno injektovane u protočnu struju suvog THF za prethodno određene vremenske periode. Mrtva zapremina je odbačena u otpad, dok se reakciona smeša pojavila na izlazu sekundarnog mikroreaktora. Zatim, smeša proizvoda je sakupljena u sudu koji se meša, koji sadrži 10% vodenog rastvora sirćetne kiseline.

[0766] Faze su odvojene, vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojene organske faze su isprane zasićenim rastvorom natrijum hidrogen sulfata, osušene preko natrijum sulfata i uparene. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije (6% EtAc/cikloheksan) da bi se dobilo 60 mg željenog proizvoda (8% prinos) kao bezbojnog ulja LC-MS (ESI) m/z 763.6 [M+H+‑H<2>O].

[0768] Primer 29

[0770] 1-Terc-butil‑1,1-difenil-N‑{pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamin

[0772] KOtBu (5.52 g, 49.20 mmol) je dodat u porcijama u suspenziju jedinjenja pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4- amina (6.00 g, 44.73 mmol) u suvom THF-u (171 mL) na 10 °C. Posle 20 minuta dodat je u kapima TBDPS-Cl (12.8 mL, 49.20 mmol) dok unutrašnja temperatura je održavana ispod 10 °C. Posle mešanja u toku 40 min na st dodata je druga količina kalijum terc- butoksida (1.7 g, 15.15 mmol) i TBDPS-Cl (3.85 mL, 14.81 mmol) na 10 °C. Posle mešanja u toku 40 min na st reakcija je završena prema TLC analizi (eluent: cikloheksan-EtOAc 4:1). Reakciona smeša je sipana u smešu EtOAc (171 mL) i ledeno hladne vode (171 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana EtOAc (2x 100 mL). Organski sloj je osušen iznad Na<2>SO<4>i koncentrovan pod sniženim pritiskom – U sirovi proizvod dodat je toluen (240 ml) i mešan je u u toku 10 minuta. Proceđen je i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Kristali su triturisani sa heksanom, proceđeni i osušeni da bi se dobili beli kristali (12.15 g, 73%).

[0773] <1>H NMR (500 MHz, DMSO‑d<6>): δ (ppm) 1.07 s (9H) [H3‑13, H3‑13’, H3‑13"]; 6.73 dd J = 4.4, 2.6 Hz (1H) [H‑8]; 7.27 s (1H) [H‑10]; 7.35‑7.44 m (6H) [H‑16, H‑16’, H‑16", H‑16"’, H‑17, H‑17’]; 7.45 dd J = 4.4, 1.5 Hz (1H) [H‑7]; 7.61 s (1H) [H‑3]; 7.62‑7.67 m (4H) [H‑15, H‑15’, H‑15", H‑15"]’; 7.71 dd J = 2.6, 1.5 Hz (1H) [H‑9].

[0775] <13>C{1H} NMR (126 MHz, DMSO‑d<6>): δ (ppm) 18.1 [C‑12]; 27.4 [C‑13, C‑13’, C‑13"]; 102.8 [C‑7]; 110.6 [C‑8]; 115.6 [C‑6]; 118.6 [C‑9]; 127.5 [C‑16, C‑16’, C‑16", C‑16"’]; 129.2 [C‑17, C‑17’]; 133.1 [C‑14, C‑14’]; 134.7 [C‑15, C‑15’, C‑15", C‑15"’]; 146.5 [C‑3]; 157.5 [C‑5].

[0777] ESI-LRMS m/z(rel int%): 373(100) = [M+H]+; 395(2) = [M+Na]+. ESI-LRMS-MS m/z(rel int%): 295(100).

[0779] Primer 30

[0781] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(tercbutildifenilsilil)amino]pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il}oksolan‑2-ol

[0783] U inertnoj atmosferi 1-terc-butil‑1,1-difenil-N‑{pirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑4-il}silanamin (600 mg, 1.61 mmol) je rastvoren u suvom THF (15 mL) i ohlađen ispod ‑60 °C. n-Heksillitijum u heksanu (2.3 M, 1.4 mL) je dodat u kapima dok je unutrašnja temperatura održavana ispod ‑60 °C. Posle mešanja u toku 1 h na ovoj temperaturi dodat je (3R,4R,5R)‑3,4- bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2(3H)‑on (674 mg, 1.61 mmol) u suvom THF-u (2 mL) i mešan je u toku 1 h ispod‑60 °C. Reakciona smeša je omogućeno da se zagreje na 0 °C i dodati su zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl (3.5 mL) i voda (10 mL). Ekstrahovana je sa EtOAc (4x 20 mL). Organski sloj je osušen iznad Na<2>SO<4>i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Zaštićeni proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (eluent cikloheksan- EtOAc 100:0 do 80:20) da bi se dobilo bezbojno ulje (998.4 mg). LC-MS (ESI) m/z 773.4 [MH-H<2>O]+.

[0785] Primer 31

[0787] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0789] [0199] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(terc-butildifenilsilil) amino]pirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑7-il}oksolan‑2-ol (998.4 mg, 1.26 mmol) je rastvoren u 2-metiltetrahidrofuranu (20 mL) i dodat je TBAF trihidrat (230 mg, 0,73 mmol) i mešan u toku 30 minuta na sobnoj temperaturi. Završetak skidanja zaštite je praćen pomoću TLC-a (eluent cikloheksan-EtOAc 4:1). Toluen (20 mL) je dodat i organska faza je isprana vodom (3x 25 mL). Organski sloj je osušen iznad Na<2>SO<4>i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje (1.20 g) kao sirovi proizvod. Rastvoren je u toluenu (15 mL) i sikagel (4.2 g) je dodat i zatim mešan na sobnoj temperaturi u toku 30 min. Silikagel je proceđen ispran sa toluenom. Organske faze su odbačene. Zatim silikagel je ispran sa acetonom (3x 50 mL) u cilju dobijanja sirovog proizvoda iz silicijum dioksida. Organske frakcije su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Rastvorene su u metil terc-butil etru (4 ml) na 40 °C i zasejane na sobnoj temperaturi. Ohlađene su na ‑20 °C i mešane u toku 2 sata.Kristali su proceđeni, isprani sa metil terc-butil etrom i osušeni do suvog da bi se dobili beli kristali (495.2 mg, 55% za dva reakciona koraka). LC-MS (ESI) m/z 553.6 [MH+].

[0791] Primer 32

[0793] (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(tercbutildifenilsilil)amino]pirolo[2,1-f][1,2,4] triazin‑7-il}oksolan‑2-karbonitril

[0794] Rastvor A: U inertnoj atmosferi TMSOTf (1.90 mL, 10.43 mmol) je rastvoren u DCM (6 mL) na ‑10 °C. TMSCN (1.31 mL, 10.48 mmol) je dodat i mešan na ovoj temperaturi. Rastvor B: U inertnoj atmosferi (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]‑2‑{4‑[(terc-butildifenilsilil)amino]pirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑7- il}oksolan‑2-ol (1379 mg, 1.74 mmol) je rastvoren u DCM (12 mL) i ohlađen ispod ‑50 °C. TFA (0.40 mL, 5.23 mmol) je dodat i mešan je u toku 10 min. Zatim rastvor A je dodat dok unutrašnja temperatura je održavana ispod ‑50 °C. Posle mešanja u toku 1 h na ovoj temperatrui sipan je u vodeni rastvor KOH (pripremljen iz KOH (3.52 g) i vode (14 mL)). Faze su odvojene i vodeni sloj je ispran sa dihlorometanom (3x 15 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa vodom (15 mL), osušena iznad Na<2>SO<4>i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćena je fleš hromatografijom (eluent: cikloheksan-EtOAc 100:0 do 90:10) da bi se dobilo 314.2 mg (1.74 mmol, 23%) bele pene kao naslovnog proizvoda kao α-anomer. LC-MS (ESI) m/z 800.5 [MH+].

[0796] Primer 33

[0798] 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitril

[0800] Rastvor A: (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil) tetrahidrofuran‑2-ola (35 g, 63 mmol) je izmeren u 3-grlom balonu od 1000 mL u atmosferi azota i rastvoren je u suvom DCM (350 mL) i rastvor je ohlađen na ‑40°C. TFA (14.5 mL) je dodat u rastvor koji se meša.

[0802] Rastvor B: U 3-grli balon od 500 mL suvi DCM (130 mL) je ohlađen na ‑10°C u atmosferi azota i dodati su TMSOTf (69 mL, 380 mmol) i TMSCN (48 mL, 380 mmol) i održavani na ‑10°C.

[0803] Rastvor B je dodat u rastvor A što je pre moguće dok je temperatura održavana ispod ‑25°C. Posle dodavanja reakciona smeša je mešana na ‑40°C. Posle jednog sata reakciona smeša je sipana na rastvor KOH (127g, 2267 mmol) u vodi (490 mL) na ‑10°C. Faze su odvojene organski sloj je ispran tri puta sa rastvorom soli (3x180 mL) i dva puta sa vodom (2x180 mL). Organska faza je koncentrovana na 210‑220 g. U koncentrovani rastvor dodat je DCM (280 mL) i koncentrovan je do 200‑315 g kada je koncentrovani rastvor proceđen i dalje je koncentrovan do 210‑220 g. U koncentrovani rastvor dodat je Toluen (665 mL) i koncentrovan je do 440‑470 g, zatim je suspenzija smeštena u kupatilo na 90°C dok kristali nisu ponovo rastvoreni. Na ovoj tački grejanje je isključeno i omogućeno je da se suspenzija ohladi na sobnu temperaturu. Kristali su proceđeni na sobnoj temperaturi isprani sa hladnim Toluenom i osušeni pod sniženim pritiskom da bi se dobili kristali (24.79 g, 69.7%)

[0805] Primer 34

[0807] 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitril

[0809] Rastvor A: Suvog DCM (1000 mL) je meren u reakcionom sudu od 2000 mL u atmosferi azota i (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ola (100 g, 181 mmol) je rastvoren, rastvor je ohlađen na ‑40°C. TFA (42 mL) je dodat u rastvor koji se meša.

[0811] Rastvor B: U 3-grli balon od 1000 mL suvi DCM (500 mL) je ohlađen na ‑10°C u atmosferi azota dodati su TMSOTf (242 g, 1090 mmol) i TMSCN (242 mL, 1090 mmol) i držani na ‑10°C.

[0813] Rastvor B je dodat u rastvor A što je brže moguće dok je temperatura držana ispod ‑25°C. Posle dodavanja reakciona smeša je mešana na ‑40°C. Posle jednog sata reakciona smeša je sipana na rastvor KOH (182 g, 3240 mmol) u vodi (700 mL) na ‑10°C. Faze su odvojene organski sloj je ispran tri puta sa rastvorom soli (3x540 mL) i dva puta sa vodom (2x540 mL). Organska faza je koncentrovana do oko 600 mL. U koncentrovani rastvor dodat je DCM (800 mL) i koncentrovana je do oko 650 mL kada je koncentrovani rastvor proceđen i dalje je koncentrovan do 450 mL. U koncentrovan rastvor dodat je Toluen (1900 mL) i koncentrovan je do 1200 mL zatim je suspenzija zagrejana na 90°C dok su kristali ponovo rastvoreni. Rastvor je ohlađen na 55°C u toku 30 minuta. Dobijena suspenzija je ohlađena na 22°C u toku 90 minuta.

[0815] Kristali su proceđeni, isprani sa Toluenom (200 mL in three portions) i osušeni do suvog dajući bele kristale (76.48g, 74.98%).

[0816] Primer 35

[0818] 2-C‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑2,5-anhidro‑3,4,6-tris-O‑(fenilmetil)‑D-Altrononitril

[0820] Rastvor A: Rastvor (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ola (3 kg) u suvom DCM (40.8 kg) je ohlađen na ‑40°C i TFA (2 kg) je napunjen u inertnoj atmosferi.

[0822] Rastvor B: U prethodno ohlađeni (‑10°C) suvi DCM (20.4 kg) napunjeni su TMSOTf (7.2 kg) i TMSCN (3.2 kg) u inertnoj atmosferi.

[0824] U Rastvor A koji se meša je sipan rastvor B, dok je održavana temperatura ispod ‑25°C. Reakciona smeša je mešana na ‑40°C u toku 60 minuta. Posle jednog sata reakciona smeše je ugašena na prethodno ohlađenom (‑10°C) rastvoru KOH (12.6g) u vodi (42 L). Bifazna smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i faze su odvojene. Organski sloj je ispran tri puta rastvorom soli (3x18 kg) i dva puta vodom (2x18 L). Organska faza je koncentrovana do oko 18 L. U koncentrovani rastvor je sipan DCM (32.6 kg) i koncentrovan do oko 18 L kada je koncentrovani rastvor proceđen. U koncentrovani rastvor dodat je Toluen (50.8 kg) i koncentrovan je do 39 L zatim smeša je zagrejana do 90°C u toku 10 minuta i ohlađena na 55°C u toku 60 minuta. Rastvor je ohlađen na 22°C u toku 120 minuta. Dobijena suspenzija je proceđena, isprana Toluenom i osušena do suvog dajući bele kristale (1.9 kg, 62.3%).

[0826] Primer 36

[0828] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑ ((benziloksi)metil)tetrahidrofur-an‑2-ol

[0830] Pod azotom smeša 10.00 g (40.0 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazina u 100 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led/etanol. Dodato je u kapima 33.5 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijuma u heksanu (83.7 mmol) na ‑70 - ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5h. U ovu smešu, rastvor 14.00 g (33.45 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 30 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je dodat u kapima na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 16.5 mL sirćetne kiseline i 56 mL vode. Posle gašenja, smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta sa 50 mL 5% rastvora limunske kiseline, i dva puta sa 50 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovan in vacuo do 36 g zaostalog rastvora. 70 mL 2-butanona je dodato u ostatak i rastvor je koncentrovan in vacuo do 35 g ostatka Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Dodato je 60 mL heksana u rastvor. Smeša je mešana u toku 16 sati.

[0831] Dodatnih 10 mL heksana je dodat u kapima i suspenzija je mešana u toku 1 sat na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa 3x3 mL smeše 2-butanon:heksani (1:4) i sa 3x3 mL heksanima. Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C. Matična tečnost je uparena. Ostatak je bio 10.14 g ulje. Ostatak je sadržao 4.60% (466 mg) naslovnog proizvoda (merenog pomoću HPLC, 2.5% teorijski prinos)

[0833] Teorijski prinos: 18.5 g

[0835] Izolovani prinos: 10.94 g beli kristali (59%)

[0837] Ukupni prinos: 11.406 g (61.5%)

[0839] Primer 37

[0841] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur-an‑2-ol

[0843] Pod azotom smeša 10.00 g (40.0 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazina i 6.00 mL (5.664 g, 42.2 mmol) suvog diglima u 100 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led /etanol. Dodato je u kapima 33.5 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijum u heksanima (83.7 mmol) na ‑70 - ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, rastvor 14.00 g (33.45 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4- bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 30 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je dodat u kapima na ‑70°C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 16.5 mL sirćetne kiseline i 56 mL vode. Posle gašenja smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta sa 50 mL 5% rastvorom limunske kiseline, i dva puta sa 50 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do 40 g zaostalog rastvora. 70 mL 2-butanona je dodato u ostatak i rastvor je koncentrovan in vacuo do 40 g ostatka. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. 25 mL heksana je dodato u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo [2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil) tetrahidrofuran‑2-olom (pripremljen prema Primeru 36) i mešana je u toku 60 minuta. Dodatnih 50 mL heksana je dodato u kapima i suspenzija je mešana u toku 1 sat na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana smešom 4x6 mL 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C. Matična tečnost je uparena. Ostatak je bio 7.425 g ulja. Ostatak je sadržao 4.64% (345 mg) naslovnog proizvoda (mereno pomoću HPLC, 1.9% teorijskog prinosa)

[0845] Teorijski prinos: 18.5 g

[0847] Izolovani prinos: 14.47 g belih kristala (78.2%)

[0849] Ukupni prinos: 14.815 g (80.1%)

[0850] Primer 38

[0852] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0854] Pod azotom smeša 10.00 g (40.0 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazina i 6.00 mL (5.92 g, 33.2 mmol) suvog triglima u 100 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led/etanol. Dodato je u kapima 33.5 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijuma u heksanima (83.7 mmol) na ‑70 - ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je u kapima rastvor 14.00 g (33.45 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4- bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 30 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 16.5 mL sirćetne kiseline i 56 mL vode. Posle gašenja smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta s 50 mL 5% rastvora limunske kiseline, i dva puta sa 50 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do pribl. 20 g ostatka. Dodato je 20 mL 2-butanona da rastvori sirovi proizvod. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Dodato je 22 mL heksana u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksiy)‑5‑((benziloksi)metil)-tetrahidrofuran‑2-ola (dobijenog prema primeru Primer 36) i mešano je u toku 60 minuta. Dodatnih 58 mL heksana je dodato u kapima i suspenzija je mešana u toku 16 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana smešom 4x5 mL 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C.

[0856] Teorijski prinos: 18.5 g

[0858] Prinos: 13.58 g belih kristala (73%)

[0860] Primer 39

[0862] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur-an‑2-ol

[0864] [0214] Pod azotom smeša 5.00 g (20.1 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina i 4.60 mL (4.30 g, 32 mmol) suvog tetraglima u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvog leda/acetonitrila (pribl. ‑40 °C). Dodato je u kapima 17 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijum u heksanima (42.0 mmol) na ‑40 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑40 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je u kapima rastvor 7.00 g (16.7 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u15 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑40°C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑40°C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 8.25 mL sirćetna kiseline i 28 mL vode. Posle gašenja smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta sa 50 mL 5% rastvora limunske kiseline, i 50 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do približno.20 g ostatka. Dodato je 20 mL 2-butanona da rastvori sirovi proizvod. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. 10 mL heksana je dodato u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)-tetrahidrofuran‑2-olom (pripremljenim prema Primeru 36) i mešana je u toku 60 minuta. Dodatnih 28 mL heksana je dodato u kapima i suspenzija je mešana u toku 16 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa 4x2.5 mL smešom 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C.

[0866] Teorijski prinos: 9.23 g

[0868] Prinos: 6.53 g beli kristali (70%)

[0870] Primer 40

[0872] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ol

[0874] Pod azotom smeša 5.85 g (20.2 mmol) tri(izopropil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina i3.00 mL (2.81 g, 21.0 mmol) suvog diglima u 60 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvi led/etanol. Dodato je u kapima 17.0 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijuma u heksanima (42 mmol) na ‑70 - ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je u kapima rastvor 7.00 g (16.7 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 15 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u 100 mL 10% rastvora sirćetne kiseline. Posle 10 minuta mešanja faze su odvojene. Dodato je 2.25 g (8.06 mmol) tetrabutilamonijum fluoride hidrata u organsku fazu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Smeša je isprana 4 puta sa 25 mL 5% rastvorom limunske kiseline, i sa 25 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do 16.5 g ostatka. Dodato je 15 mL 2-butanona u ostatak i rastvarač je koncentrovan in vacuo do 14.8 g ostatka. Ostatak je rastvoren u 10 mL 2-butanona. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. 40 mL heksana je dodato u kapima u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)-metil)tetrahidrofuran‑2-olom (dobijenim prema Primeru 36) i mešana je u toku 60 minuta. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa smešom 4x3 mL 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušen pod vakuumom na 30 °C.

[0876] Teorijski prinos: 9.23 g

[0878] Prinos: 6.35 g (69%) beličastih kristala

[0879] Primer 41

[0881] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0883] Pod azotom smeša 5.00 g (13.5 mmol) 7-bromo-tri(izopropil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazina i 2.00 mL (1.87 g, 14.0 mmol) suvog diglima u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kupatilu suvog leda/etanola. 12.5 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijum u heksanu (29 mmol) je dodato u kapima na‑70 - ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je u kapima rastvor 4.53 g (10.8 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4- bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-ona u 10 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑70 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u rastvor sirćetne kiseline (6.0 mL sirćetna kiselina i 20 mL voda). Posle 60 minuta mešanja faze su odvojene. Organska faza je isprana tri puta sa 25 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>. Dodato je 2.14 g (6.77 mmol) tetrabutilamonijum fluorid hidrata u organsku fazu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Smeša je isprana 4 puta sa 35 mL 5% rastvora limunske kiseline, i sa 35 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do 15.3 g ostatka. 30 mL 2-butanona je dodato u ostatak i rastvor je koncentrovan in vacuo do 15.3 g ostatka. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. 10 mL heksana je dodato u kapima u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)-tetrahidrofuran‑2-olom (pripremljeno prema Primeru 36). Dodatnih 20 mL heksana je dodato u kapima i mešano je u toku 10 minuta na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa 4x2.5 mL smeše 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuum na 30 °C.

[0885] Teorijski prinos: 5.97 g

[0887] Prinos: 3.55 g, 59% belih kristala

[0889] Primer 42

[0891] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofur- an‑2-ol

[0893] [0217] Pod azotom smeša 75.00 g (301.9 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazina i 45.0 mL (42.2 g, 314 mmol) suvog digima u 750 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena na ‑70°C. Dodato je u kapima 250 mL 2.5 M n-Heksillitijum rastvora u heksanima(620 mmol) na ‑70 - ‑58 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, dodat je rastvor 105.0 g (250.9 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi) metil]oksolan‑2-ona u 210 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑71 - ‑56 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 125 mL sirćetne kiseline i 420 mL vode. Posle gašenja smeša je mešana na 55‑60 °C u toku 1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta sa 375 mL 5% rastvora sirćetne kiseline, i dva puta sa 375 mL zasićenog rastvora NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do 300 mL zaostalog rastvora. Dodato je 525 mL 2-butanona u ostatak i rastvor je koncentrovan in vacuo do 285 mL ostatka. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. 110 mL heksana je dodato u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)-metil)tetrahidrofuran‑2-olom (dobijenim prema Primeru 36) i mešana je u toku 60 minuta. Dodato je u kapima dodatnih 450 mL heksana i suspenzija je mešana u toku 1 sat na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa smešom 4x45 mL 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C.

[0895] Teorijski prinos: 138.7 g

[0897] Izolovani prinos: 104.7 g beli kristali (75.5%)

[0899] NMR SPEKTROSKOPSKA KARAKTERIZACIJA

[0901]

[0903] Instrument: BRUKER‑800 NMR spectrometer (1H: 799.7 MHz, 13C: 201.1 MHz)

[0904] Rastvarač: DMSO-d<6>

[0906] Temperatura: 25 °C

[0908] Referenca: δ<TMS>= 0.00 ppm (1H), δ<TMS>= 0.00 (13C)

[0909]

[0912] Glavni izomer je u obliku otvorenog lanca u rastvoru DMSO-d<6>, α-OH furanoza i β-OH furanoza su prisutni u 0.07 i 0.09 molarnom odnosu. Relativna konfiguracije je dokazana preko prostorne 2D ROESY korelacije u furanoznim oblicima.

[0915]

[0916]

[0917]

[0920] Primer 43

[0922] (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1-f][1,2,4]triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)tetrahidrofuran‑2-ol

[0924] Pod azotom smeša 5.00 g (20.1 mmol) terc-butil(dimetil)silil-N‑4-Aminopirolo[2,1‑f][1,2,4]triazina i 4.45 mL (4.49 g, 20.2 mmol) suvog tetraglima u 50 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana je ohlađena u kuptilu suvi led/etanol (pribl. ‑70 °C).17 mL 2.5 M rastvora n-Heksillitijum u heksanima (42.0 mmol) je dodat u kapima. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70 °C u toku 0.5 h. U ovu smešu, je dodat u kapima rastvor 7.00 g (16.7 mmol) (3R,4R,5R)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑[(benziloksi)metil]oksolan‑2-on u 15 mL suvog 2-Metiltetrahidrofurana na ‑70‑ ‑60 °C. Posle dodavanja smeša je mešana na ‑70°C u toku 0.5 h. Reakciona smeša je dodata u smešu 9.0 mL sirćetne kiseline i 28 mL vode. Posle gašenja smeša je mešana na 55‑60 °C u toku1 h. Smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi. Faze su odvojene. Organska faza je isprana 4 puta sa 30 mL 5% rastvora limunske kiseline, i dva puta sa 30 mL zasićenim rastvorom NaHCO<3>i koncentrovana in vacuo do približ.20 g ostatka. Dodato je 35 mL 2-butanona da rastvori sirovi proizvod. Rastvor je uparen do 20.1 g ostatka. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Dodato je 7.3 mL heksana u rastvor. Smeša je zasejana sa (3R,4R,5R)‑2‑(4-aminopirolo[2,1‑f][1,2,4] triazin‑7-il)‑3,4-bis(benziloksi)‑5‑((benziloksi)metil)-tetrahidrofuran‑2-olom i mešana je u toku 60 minuta. Dodatnih 30 mL heksana je dodato u kapima i suspenzija je mešana u toku jednog sata na sobnoj temperaturi. Smeša je ohlađena na 0‑5 °C, proceđena i isprana sa 4x3.0 mL smeše 2-butanon:heksani (1:4). Kristali su osušeni pod vakuumom na 30 °C.

[0926] Teorijski prinos: 9.23 g

[0928] Prinos: 7.00 g belih kristala (76%)

[0929] Tabela 2: Dejstvo dodavanja jedinjenja formule (VI) na prinos jedinjenja formule (II)

[0930]

Claims (15)

1. Patentni zahtevi

1. Postupak dobijanja jedinjenja formule (I)

u kojoj

PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, tbutildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa obuhvata cijanizaciju jedinjenja formule (II)

u kojoj

R<2>je vodonik ili zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i t-butildifenilsilil, i

PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, tbutildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i

benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa

naznačen time, što

jedinjenje formule (II) je dobijeno reakcijom spajanja jedinjenja formule (IV)

u kojoj

X je vodonik, brom ili jod, i

R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil

i jedinjenja formule (III)

gde

PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa u prisustvu reagensa za uvođenje litijuma.

2. Postupak prema zahtevu 1, u kome korak cijanizacije je izveden u pogodnom rastvaraču i u prisustvu Brønstedove kiseline sa rastvorom Luisove kiseline i sredstvo za cijanizaciju.

3. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 ili 2, gde je u koraku cijanizacije rastvarač dihlorometan,

Brønstedova kiselina je trifluoro-sirćetna kiselina,

Luisova kiselina je trimetilsilil trifluorometansulfonat i

sredstvo za cijanaizaciju je trimetilsilil cijanid.

4. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 3,

<->dalje obuhvata rekristalizaciju jedinjenja formule (I) iz toluena, i/ili

<->gde je jedinjenje formule (IV) rastvoreno u cikličnom etru, i/ili

<->gde je sredstvo za uvođenje litijuma alkillitijum rastvoreno u višem alkanu, i/ili

- gde jedinjenja formule (II) su izolovana ili gde u jedinjenjima formule (II) R<2>je zaštitna grupa pa reaguju dalje bez izolovanja, poželjno dalje obuhvataju skidanje zaštite jedinjenja formule (II) u kojima R<2>je zaštitna grupa pomoću sredstva za cepanje da bi se dobilo jedinjenje formule (II) gde je R<2>vodonik, poželjno gde sredstvo za cepanje je tetrabutilamonijum fluorid trihidrat ili sirćetna kiselina.

5. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde u jedinjenju formule (II) R<2>je vodonik.

6. Postupak prema zahtevu 5, dalje obuhvata prečišćavanje jedinjenja formule (II) gde je R<2>vodonik.

7. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 6, gde je jedinjenje formule (III) PG zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i benzil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju ‑C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<3>alkilen grupa.

8. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7,

<->gde je u jedinjenju formule (III) PG benzil grupa; i/ili

<->gde je u jedinjenju formule (IV) X vodonik ili brom i R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil i triizopropilsilil; i/ili

- gde je u jedinjenjima formule (IV) X vodonik i R<1>je t-butildimetilsilil; i/ili

<->gde je jedinjenje formule (III) rastvoreno u toluenu ili cikličnom etru; i/ili

<->dalje obuhvata zaštitno jedinjenje formule (V) da bi se dobila jedinjenja formule (IV)

gde

X je vodonik, brom ili jod

u pogodnom rastvaraču i u prisustvu pogodne baze dodavanjem zaštitnog sredstva izabranog iz grupe koju čine t-butildimetilsilil hlorid, triizopropilsilil hlorid i t-butildifenilsilil hlorida, poželjno

- u koraku zaštite pogodni rastvarač za jedinjenje formule (V) je ciklini etar, i pogodna baza je alkillitijum, alkalni hidroksid ili alkalni alkoksid, i/ili

- korak zaštite dalje obuhvata rekristalizaciju iz višeg alkana, i/ili

- jedinjenje formule (V) X je vodonik.

9. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, gde reakcija spajanja jedinjenja formule (IV) i jedinjenja formule (III) je izvedena u prisustvu jedinjenja formule (VI) gde n je 2, 3 ili 4

10. Postupak prema zahtevu 9, gde jedinjenje formule (VI) je rastvoren u cikličnom etru, i/ili gde u jedinjenjima formula (VI) n je 2 ili 3.

11. Postupak prema bilo kom zahtevu 10, gde u jedinjenju formule (VI) n je 2.

12. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 8, gde je reakcija spajanja izvedena postupkom sa kontinualnim tokom gde je korišćen sistem sa sva uzastopna mikroreaktora (1 i 2) sa kontinualnim tokom koji obuhvata:

- mikroreaktor 1 koji sadrži mikromikser i reaktor sa zavojnicom za mešanje jedinjenja formule (IV) sa sredstvom za uvođenje litijuma i njihovo reagovanje

za vreme zadržavanja od 20 do 45 sekundi da bi se dobio odgovarajući intermedijer koji sadrži litijum,

<->mikroreaktor 2 koji sadrži mikromikser i reaktor sa zavojnicom za mešanje pomenutog intermedijera koji sadrži litijum sa jedinjenjem formule (III) i njihovim reagovanjem u toku vremena zadržavanja od 70 do 150 sekundi da bi se dobilo jedinjenje formule (II),

- moduli ulaznih skladišta, pumpi i injektora obezbeđuju tri različita ulaza A, B i C koji su povezani sa dva uzastopna mikroreaktora,

<->petlje za prethodno hlađenje za svaki ulaz, i

<->termostatirano kupatilo,

gde rastvor injektora A, i rastvori injektora B (mikroreaktor 1) i injektora C (mikroreaktor 2) su uzastopno injektovani u protočnu struju suvog THF-a za prethodno određene vremenske periode, a zatim sledi sakupljanje smeše i njena obrada vodom, i gde

rastvor Injektora A je rastvor jedinjenja formule (IV),

rastvor injektora B je rastvor sredstva za uvođenje litijuma, i

rastvor injektora C je rastvor jedinjenja formule (III).

13. Postupak prema zahtevu 12, u kome mikroreaktori 1 i 2 i prethodno hlađene petlje svakog ulaza su termostatirane na ‑30°C, i/ili gde je reakciona temperatura u mikroreaktoru ‑10 do ‑30°C.

14. Jedinjenje formule (II)

gde

R<2>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil, i

PG je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine trimetilsilil, t-butildimetilsilil, tbutildifenilsilil, metil-metoksi, tetrahidropiran, t-butil, alil, benzil, acetil, pivaloil i benzoil, ili dve zaštitne grupe na susednim ugljenikovim atomima mogu biti kombinovane da obrazuju -C(R<3>)<2>‑ grupu u kojoj R<3>je H, ili C<1>‑<6>alkilen grupa.

15. Jedinjenje formule (IV)

u kojoj

X je vodonik, brom ili jod, i

R<1>je zaštitna grupa izabrana iz grupe koju čine t-butildimetilsilil, triizopropilsilil i tbutildifenilsilil.