RS67634B1 - Formulacija za anti-alpha4beta7 antitelo - Google Patents

Formulacija za anti-alpha4beta7 antitelo

Info

Publication number
RS67634B1
RS67634B1 RS20260037A RSP20260037A RS67634B1 RS 67634 B1 RS67634 B1 RS 67634B1 RS 20260037 A RS20260037 A RS 20260037A RS P20260037 A RSP20260037 A RS P20260037A RS 67634 B1 RS67634 B1 RS 67634B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
formulation
antibody
weeks
seq
antigen
Prior art date
Application number
RS20260037A
Other languages
English (en)
Inventor
Willow Diluzio
Phuong M Nguyen
Csanad M Varga
Vaithianathan Palaniappan
Jason Brown
Irving H Fox
Catherine Scholz
Erica Helen Jenkins
Maria Rosario
Original Assignee
Millennium Pharm Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46147702&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS67634(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Millennium Pharm Inc filed Critical Millennium Pharm Inc
Publication of RS67634B1 publication Critical patent/RS67634B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2839—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)

Description

[0001] Opis
[0002] SRODNE PRIJAVE
[0003] Ova prijava ima prioritet od SAD privremene prijave br. 61/544,054 koja je podneta 06.10.2011. i SAD privremene prijave br.61/481,522 koja je podneta 02.05.2011.
[0004] LISTA SEKVENCI
[0005] Predmetna prijava sadrži Listu sekvenci.
[0006] OSNOVA PRONALASKA
[0007] Napreci u biotehnologiji su učinili mogućom proizvodnju različitih proteina za farmaceutske primene korišćenjem tehnika rekombinante DNK. Budući da su proteini veći i složeniji od uobičajenih organskih i neorganskih lekova (tj., poseduju višestruke funkcionalne grupe pored složenih trodimenzionalnih struktura), formulacija takvih proteina nosi posebne teškoće. Da bi protein ostao biološki aktivan, formulacija mora da očuva konformacionu celovitost bar centralne sekvence aminokiselina u proteinu, dok u isto vreme štiti višestruke funkcionalne grupe proteina od degradacije. Proteini mogu da se odlikuju nedostatkom stabilnosti, a posebno monoklonska i poliklonska antitela mogu da budu relativno nestabilna (Videti e.g., Wang, et al., J. Pharm Sci.96:1-26 (2007)). Veliki broj mogućnosti za formulaciju je dostupan, i nije samo jedan pristup ili sistem pogodan za sve proteine. Objavljeno je nekoliko faktora koje treba razmotriti (Videti e.g., Wang et al.).
[0008] Brojna svojstva mogu da utiču na stabilnost proteina. Zapravo, čak i u slučaju prečišćenih antitela, strukture antitela mogu da budu heterogene, što dodatno komplikuje formulaciju takvih sistema. Šta više, ekscipijensi uključeni u formulacije antitela poželjno smanjuju bilo kakav potencijalni imunski odgovor.
[0009] U slučaju antitela, očuvanje konformacione celovitosti je čak važnije. Putevi degradacije proteina mogu da uključuju hemijsku nestabilnost (tj., bilo koji proces koji uključuje modifikaciju proteina obrazovanjem veze ili njenim raskidanjem rezultuje u novom hemijskom entitetu) ili fizičku nestabilnost (tj., promene u strukturi višeg reda proteina). Hemijska nestabilnost se ogleda u, na primer, deamidaciji, izomerizaciji, hidrolizi, oksidaciji, fragmentaciji, beta-eliminaciji glikana ili disulfidnoj izmeni. Fizička nestabilnost može da nastane usled denaturacije, agregacije, precipitacije ili adsorpcije, na primer. Četiri najuobičajenija puta degradacije proteina su fragmentacija, agregacija, deamidacija i oksidacija proteina. Posledice hemijske ili fizičke nestabilnosti terapeutskog proteina uključuju smanjenje efikasne primenjene doze, smanjenu bezbednost terapije zbog, na primer, iritacije ili imunološke reaktivnosti, i učestaliju proizvodnju zbog kratkog roka trajanja.
[0010] U nekoliko objava uopšteno su opisani različiti postupci za lečenje zapaljenskih bolesti creva, i obezbeđene su šeme doziranja za primenu sredstava određenih za lečenje zapaljenske bolesti creva. Na primer, WO 96/24673 opisuje mukozne vaskularne adresine i lečenje bolesti povezanih sa nakupljanjem leukocita u gastrointestinalnom traktu koje nastaje kao rezultat vezivanja leukocita za ćelije koje eksprimiraju MAdCAM. SAD 2005/0095238 opisuje postupke za lečenje bolesti povezane sa leukocitnom infiltracijom mukoznog tkiva, i primenu kod čoveka efikasne količine humanog ili humanizovanog imunoglobulina ili antigenvezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za integrin α4β7. SAD 2005/0095238 dalje opisuje različite doze (npr.0.15, oko 0.5, oko 1.0, oko 1.5 ili oko 2.0 mg imunoglobulina ili fragmenta na kg telesne težine) i različite intervale između doza (7, 14, 21, 28, ili 30 dana). Međutim, prethodno pomenuti patenti i objave ne opisuju specifične formulacije anti-α4β7 antitela ili specifične doze i režime doziranja koji su ovde opisani i za koje se traži zaštita. Važno je napomenuti da prethodno pomenuti patenti ne opisuju formulacije, doze, i režime doziranja koji obezbeđuju postupke za lečenje (podržane podacima kliničkog ispitivanja) koji su ovde opisani i za koje se traži zaštita.
[0011] Formulacije antitela predmetnog pronalaska mogu da budu korisne za inhibiciju vezivanja leukocita za ćelije koje eksprimiraju MAdCAM i da na taj način budu od pomoći u lečenju zapaljenskih bolesti creva kod pacijenata. Postoji, prema tome, hitna potreba za utvrđivanjem pogodnih doziranja i rasporeda doziranja ovih jedinjenja, i za razvojem formulacija, poželjno subkutanih formulacija, koje vode stabilnim, terapeutski efikasnim nivoima u krvi formulacija antitela tokom produženog perioda vremena u stabilnom i pogodnom obliku.
[0012] SAŽETAK PRONALASKA
[0013] Pronalazak se odnosi na identifikaciju antioksidansa ili helirajućeg sredstva, i najmanje jedne aminokiseline, kao korisnih ekscipijenasa za proizvodnju formulacija anti-α4β7 antitela čija nestabilnost ih čini podložnim deamidaciji, oksidaciji, izomerizaciji i/ili agregaciji. Formulacija poboljšava stabilnost, smanjuje obrazovanje agregata i usporava degradaciju antitela koje se nalazi u njoj. Ovaj pronalazak je definisan u priloženim patentnim zahtevima.
[0014] Tako, u prvom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju definisanu u patentnim zahtevima.
[0015] U nekim primerima izvođenja, stabilna tečna farmaceutska formulacija obrazuje manje od oko 1.0% agregata nakon 12 meseci na sobnoj temperaturi. Stabilna tečna farmaceutska formulacija može da obrazuje manje od oko 0.2% agregata nakon 12 meseci na sobnoj temperaturi. Antioksidans ili helirajuće sredstvo je citrat.
[0016] U nekim primerima izvođenja, slobodna aminokiselina formulacije je histidin, samostalno ili u kombinaciji sa alaninom, argininom, glicinom, glutaminskom kiselinom, ili bilo kojom njihovom kombinacijom. Formulacija može da sadrži između oko 50 mM do oko 175 mM slobodne aminokiseline. Formulacija može da sadrži između oko 100 mM i oko 175 mM slobodne aminokiseline. Molarni odnos slobodne aminokiseline prema antitelu može da bude najmanje 250:1.
[0017] Formulacija može takođe da sadrži površinski aktivno sredstvo. Površinski aktivno sredstvo može da bude polisorbat 20, polisorbat 80, poloksamer, ili bilo koja njihova kombinacija.
[0018] U nekim primerima izvođenja, molarni odnos antioksidansa prema površinski aktivnom sredstvu je oko 3:1 do oko 156:1.
[0019] Formulacija može da ima vrednost pH između oko 6.3 i oko 7.0. Vrednost pH formulacije može da bude između oko 6.5 i oko 6.8. Formulacija može da ima pH između oko 6.1 i oko 7.0, ili između oko 6.2 i 6.8.
[0020] U nekim primerima izvođenja, stabilna tečna farmaceutska formulacija sadrži bar oko 60 mg/ml do oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela. Formulacija može da sadrži najmanje oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela. Formulacija može da sadrži oko 150 do oko 180 mg/ml antitela ili oko 165 mg/ml antitela.
[0021] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja sadrži najmanje oko 60 mg/ml do oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje i najmanje oko 10 mM citrata. Sredstvo za puferisanje može da bude histidinski pufer, a formulacija je dalje definisana u patentnim zahtevima.
[0022] U još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja sadrži najmanje oko 60 mg/ml do oko 180 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje i najmanje oko 5 mM citrata. Sredstvo za puferisanje može da bude histidinski pufer.
[0023] U još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja sadrži najmanje oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela i najmanje oko 10 mM citrata, kako je dalje definisano u patentnim zahtevima. Formulacija može dodatno da sadrži polisorbat 80.
[0024] U još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja sadrži oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela i najmanje oko 5 mM citrata, kako je dalje definisano u patentnim zahtevima. Formulacija može dodatno da sadrži polisorbat 80.
[0025] U još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja sadrži smešu anti-α4β7 antitela, citrata, histidina, arginina i polisorbata 80. Formulacija može da bude prisutna u kontejneru, kao što je bočica, kertridž, špric ili autoinjektor.
[0026] Anti-α4β7 antitelo u stabilnoj tečnoj farmaceutskoj formulaciji pronalaska može da bude vedolizumab. Formulacija pronalaska može da bude za subkutanu, intravensku, ili intramuskularnu primenu.
[0027] U nekim aspektima, formulacija može da smanji imunogenost anti-α4β7 antitela.
[0028] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti u postupku za lečenje zapaljenske bolesti creva, koji obuhvata primenu kod pacijenta kome je lečenje potrebno stabilne tečne farmaceutske formulacije koja je ovde opisana. Primena može da bude subkutana primena. Primena može da bude samo-primena.
[0029] U još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na proizvodni artikal, koji sadrži kontejner, stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju koja je ovde opisana, i uputstva za upotrebu.
[0030] U jednom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti u postupku za lečenje humanog pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, gde postupak obuhvata korak primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema sledećem režimu doziranja: (a) početne doze, npr., u indukcionoj fazi režima lečenja, šest doza po 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svakog drugog dana; (b) nakon toga, u šestoj nedelji, sedma i naredne doze, npr., u fazi održavanja režima lečenja, od 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svake dve nedelje ili svake četiri nedelje po potrebi; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dalje humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u nastavku teksta: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO: 11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo definisano u patentnim zahtevima.
[0031] [0026] U jednom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti u postupku za lečenje humanog pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, pri čemu postupak obuhvata korak primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region koji nije humanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, gde se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema sledećem režimu doziranja koji obuhvata indukcionu fazu intravenskih doza i fazu održavanja subkutanih doza: (a) početna intravenska doza od 300 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao intravenska infuzija; (b) zatim sledeća druga intravenska doza od 300 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao intravenska infuzija na oko dve nedelje posle početne doze; (c) zatim, počevši od šeste nedelje, treća i sledeće doze od 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje ili svake četiri nedelje po potrebi; pri čemu dozni režim izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dalje humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u nastavku teksta: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO: 11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo definisano u patentnim zahtevima.
[0032] [0027] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti u režimu doziranja za terapeutsko lečenje zapaljenske bolesti creva, pri čemu režim doziranja obuhvata korak: primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region koji nije humanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, gde se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema subkutanom ili intramuskularnom režimu doziranja koji održava srednju minimalnu preostalu koncentraciju u serumu u stanju ravnoteže imunoglobulina ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta od oko 9 do oko 13 µg/mL; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dalje humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u nastavku teksta: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO: 11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO: 14, pri čemu je antitelo definisano u patentnim zahtevima.
[0033] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti kod doziranja za terapeutsko lečenje zapaljenske bolesti creva, pri čemu režim doziranja obuhvata korak: primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani α4β7 integrin, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigenvezujući region koji nije humanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema subkutanom ili intramuskularnom režimu doziranja koji održava srednju minimalnu preostalu koncentraciju u serumu u stanju ravnoteže imunoglobulina ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta od oko 35 do oko 40 µg/mL; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dalje humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u nastavku teksta: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO:11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo definisano u patentnim zahtevima.
[0034] [0029] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može koristiti u postupku za lečenje humanog pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, pri čemu postupak obuhvata korak: primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region koji nije humanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema sledećem režimu doziranja: (a) višestruke doze indukcione faze humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta dovoljne da se postigne srednja minimalna preostala koncentracija u serumu od oko 20 do oko 30 µg/mL humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta do oko šest nedelja od početnog doziranja; (b) zatim višestruke doze faze održavanja humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta neophodne da se održi srednja minimalna preostala koncentracija u serumu u stanju ravnoteže od oko 9 do oko 13 µg/mL ili oko 35 do 40 µg/mL imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dalje humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u nastavku teksta: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO: 11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo definisano u patentnim zahtevima [0030] U nekim aspektima, formulacija ili njena upotreba u postupku za lečenje, doza i/ili režim doziranja pružaju minimalnu verovatnoću da će pacijent razviti antitela reaktivna prema anti-α4β7 antitelu.
[0035] Pacijent je mogao da pokaže nedostatak adekvatnog odgovora, gubitak odgovora, ili je bio netolerantan na lečenje sa najmanje jednim od imunomodulatora, antagonistom faktora nekroze tumora-alfa (TNF-α) ili njihovim kombinacijama.
[0036] Zapaljenska bolest creva može da bude Kronova bolest ili ulcerozni kolitis. Zapaljenska bolest creva može da bude umereno do ozbiljno aktivan ulcerozni kolitis.
[0037] Režim doziranja može da rezultuje u izlečenju mukoze kod pacijenata koji pate od umereno do ozbiljno aktivnog ulceroznog kolitisa.
[0038] Pacijent je mogao prethodno da bude lečen najmanje jednim kortikosteroidom od zapaljenske bolesti creva. Pacijent može istovremeno da bude lečen najmanje jednim kortikosteroidom od zapaljenske bolesti creva. Režim doziranja može da rezultuje u smanjenju, eliminaciji ili smanjenju i eliminaciji primene kortikosteroida kod pacijenta.
[0039] U nekim aspektima, humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment se primenjuje u finalnom doznom obliku u koncentraciji od između oko 1.0 mg/ml do oko 1.4 mg/ml. Humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment može da bude primenjen u finalnom doznom obliku od oko 1.2 mg/ml.
[0040] U nekim aspektima, humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment se primenjuje u finalnom doznom obliku koji ima količinu anti-α4β7 antitela između oko 70 do oko 250 mg, između oko 90 do oko 200 mg, između oko 150 do oko 180 mg, ili najmanje 160 mg.
[0041] U nekim aspektima, režim doziranja ne menja odnos CD4 prema CD8 u cerebrospinalnom fluidu pacijenata koji primaju pomenuti tretman.
[0042] Pacijent može da bude osoba starosti 65 godina, ili starija, što ne zahteva nikakvo prilagođavanje režima doziranja.
[0043] U nekim aspektima formulacija pronalaska za upotrebu u postupku lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela, doza, ili režim doziranja mogu da smanje imunogenost antiα4β7 antitela.
[0044] KRATAK OPIS CRTEŽA
[0045]
[0046] SLIKA 1 je ilustracija nukleotidne sekvence (SEQ ID NO: 1) koja kodira teški lanac humanizovanog anti-α4β7 imunoglobulina, i dešifrovanu aminokiselinsku sekvencu teškog lanca (SEQ ID NO:2). Nukleotidna sekvenca sadrži mesta za kloniranje (mala slova), Kozak sekvencu (velika slova, nukleotidi 18-23 u SEQ ID NO: 1) i vodeću sekvencu (mala slova, nukleotidi 24-86 u SEQ ID NO:1) na 5' kraju teškog lanca. Otvoreni okvir čitanja nukleotidne sekvence su nukleotidi 24-1433 u SEQ ID NO: 1. SLIKA 2 je ilustracija nukleotidne sekvence (SEQ ID NO:3) koja kodira laki lanac humanizovanog imunoglobulina ovde označenog kao vedolizumab, i dešifrovanu aminokiselinsku sekvencu (SEQ ID NO: 4) lakog lanca. Nukleotidna sekvenca sadrži mesta za kloniranje (mala slova), Kozak sekvencu (velika slova, nukleotidi 18-23 u SEQ ID NO:3) i vodeću sekvencu (mala slova, nukleotidi 24-80 u SEQ ID NO:3) na 5' kraju teškog lanca. Otvoreni okvir čitanja nukleotidne sekvence su nukleotidi 24-737 u SEQ ID NO:3.
[0047] SLIKA 3 predstavlja poravnanje aminokiselinskih sekvenci (A) zrelog humanizovanog lakog lanca (aminokiseline 20-238 u SEQ ID NO:4) humanizovanog imunoglobulina koji je ovde označen kao vedolizumab i (B) zrelog humanizovanog lakog lanca humanizovanog imunoglobulina koji je ovde označen kao LDP-02 (SEQ ID NO:5). (U vezi sa LDP-02, videti, WO 98/06248 i Feagan et al., N. Eng. J. Med.352:2499-2507 (2005)). Feagan et al. opisuju kliničko ispitivanje LDP-02, ali u tekstu oni označavaju LDP-02 kao MLN02.) Poravnanje ilustruje da se aminokiselinske sekvence lakih lanaca vedolizumaba i LDP-02 razlikuju na pozicijama 114 i 115 zrelih lakih lanaca. SLIKA 4 predstavlja poravnanje aminokiselinih sekvenci (A) konstantnog regiona generičkog humanog kapa lakog lanca (SEQ ID NO:6) i (B) konstantnog regiona generičkog mišjeg kapa lakog lanca (SEQ ID NO:7). Aminokiselinske rezidue Thr i Val (koje su prisutne na pozicijama 114 i 115 zrelog lakog lanca vedolizumaba (aminokiseline 133 i 134 u SEQ ID NO:4)) prisutne su u konstantnom regionu humanog kapa lakog lanca, dok su aminokiselinske rezidue Ala i Asp (koje su prisutne na pozicijama 114 i 115 zrelog lakog lanca LDP-02 (SEQ ID NO:5)) prisutne u konstantnom regionu mišjeg kapa lakog lanca.
[0048] SLIKA 5 je mapa vektora pLKTOK38D (takođe označenog kao pTOK38MLN02-TV), koji kodira humanizovani teški lanac i humanizovani laki lanac u MLN02, i pogodan je za proizvodnju vedolizumaba u CHO ćelijama. (Videti, SAD objavu patentne prijave br. 2004/0033561 A1 koja opisuje pLKTOK38. pLKTOK38D je varijanta pLKTOK38 u kojoj restrikciona mesta označena na mapi uokviruju sekvencu koja kodira varijabilni region lakog lanca.)
[0049] SLIKA 6 prikazuje krivu obrazovanja SEC agregata (% dnevno) kao rezultat promena u koncentraciji proteina, pH i molarnog odnosa površinski aktivna supstanca:protein. Pri pH u opsegu od 6.0 do 6.5, obrazovanje agregata je bilo slično za formulaciju sa opsegom molarnog odnosa polisorbat 80:protein od 0.7 do 1.5.
[0050] SLIKA 7 je grafikon koji pokazuje da pri molarnim odnosima polisorbat 80:protein većim od 1.5, brzina obrazovanja agregata raste sa povećanjem pH vrednosti.
[0051] SLIKA 8 je grafikon koji pokazuje dejstvo ekscipijenasa na obrazovanje agregata. Formulacijama su dodati 25mM citrat, 5 mM citrat, 5 mM EDTA, 25 mM cistein, ili 5 mM cistein. Sva tri ekscipijensa su smanjila obrazovanje agregata.
[0052] SLIKA 9 predstavlja niz grafikona koji pokazuju smanjenje obrazovanja agregata u prisustvu 25 mM citrata u formulaciji, i korelaciju između povećane koncentracije proteina i povećane brzine obrazovanje agregata.
[0053] SLIKA 10 je grafikon koji pokazuje rezultate degradacije vrsta CEX na 40°C. Podaci pokazuju uticaj promene pH na degradaciju CEX.
[0054] SLIKA 11 je grafikon koji pokazuje dejstvo temperature na pH formulacija. Vrednost pH formulacija koje sadrže histidin opada sa temperaturom, dok pH citratnih formulacija nije pod uticajem temperature.
[0055] SLIKA 12 je grafikon koji pokazuje procenat glavne izoforme CEX tokom perioda od dvanaest meseci. Formulacije koje imaju pH od 6.0-6.2 su pokazale oko 1-2% manje glavne izoforme nego formulacije koje imaju pH od 6.3-6.4.
[0056] SLIKA 13 prikazuje niz grafikona koji pokazuju da na viskoznost uglavnom utiču koncentracija proteina i pH. Za dodavanja saharoze, histidina i arginina se pokazalo da imaju mali uticaj na viskoznost formulacije.
[0059] 1
[0060] SLIKA 14 prikazuje aminokiselinske sekvence (A) varijabilni region kapa lakog lanca zrelog humanog GM607'CL antitela i (B) varijabilni region teškog lanca humanog 21/28'CL.
[0061] SLIKA 15 pokazuje komponente proteinskog proizvoda u prethodno napunjenom špricu.
[0062] SLIKE 16A-B pokazuju dejstvo (A) koncentracije proteina i (B) viskoznosti na silu injektovanja za različite ispitane špriceve.
[0063] SLIKA 17 (A) pokazuje početnu silu klizanja u funkciji koncentracije proteina i veličine igle. SLIKA 17 (B) pokazuje početnu silu klizanja za svakog proizvođača šprica i veličinu igle.
[0064] SLIKA 18 pokazuje apsorpcioni profil za vedolizumab. Grafikon pokazuje da se koncentracije intramuskularnih i subkutanih doza uglavnom preklapaju. Ne postoje očigledne velike razlike u apsorpcionim profilima ovih puteva primene.
[0066] DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0067] Pronalazak se odnosi na farmaceutsku formulaciju koja sadrži anti-α4β7 antitela, kako je dalje definisano u patentnim zahtevima. Farmaceutska formulacija je u tečnom obliku. Definicije
[0068] Termin "farmaceutska formulacija" se odnosi na preparat koji sadrži anti-α4β7 antitelo u takvom obliku koji dozvoljava da biološka aktivnost antitela bude efikasna, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za subjekta kod koga bi formulacija bila primenjena.
[0069] [0043] "Stabilna" formulacija je ona u kojoj antitelo u njoj suštinski zadržava svoju fizičku stabilnost i/ili svoju hemijsku stabilnost i/ili svoju biološku aktivnost pri skladištenju. U jednom aspektu, formulacija suštinski zadržava svoju fizičku i hemijsku stabilnost, kao i svoju biološku aktivnost pri skladištenju. Period skladištenja se uopšteno određuje na osnovu predviđenog roka trajanja formulacije. Različiti analitički postupci za merenje stabilnosti proteina su dostupni u stanju tehnike i prikazani su, na primer, u Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) and Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev.10: 29-90 (1993). Stabilnost može da se meri na odabranoj temperaturi tokom odabranog vremenskog perioda. Na primer, tečna formulacija je stabilna na oko 40 °C najmanje oko 3 dana, 5 dana, 1 nedelju, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili 6 nedelja. U drugom aspektu, liofilizovana formulacija je stabilna na oko 40 °C najmanje oko 2-4 nedelje, najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 6 meseci, najmanje oko 9 meseci, najmanje oko 12 meseci, ili najmanje oko 18 meseci. Tečna i/ili liofilizovana formulacija u drugom aspektu je stabilna na oko 5 °C i/ili 25 °C najmanje oko 1 mesec, najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 6 meseci, najmanje oko 9 meseci, najmanje oko 12 meseci, najmanje oko 18 meseci, najmanje oko 24 meseca, najmanje oko 30 meseci, ili najmanje oko 36 meseci; i/ili stabilna na oko -20 °C i/ili -70 °C najmanje oko 1 mesec, najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 6 meseci, najmanje oko 9 meseci, najmanje oko 12 meseci, najmanje oko 18 meseci, najmanje oko 24 meseca, najmanje oko 30 meseci, najmanje oko 36 meseci, najmanje oko 42 meseca, ili najmanje oko 48 meseci. Osim toga, tečna formulacija može, u nekim primerima izvođenja, da bude stabilna nakon zamrzavanja (do, npr., -80 °C) i odmrzavanja, na primer nakon 1, 2 ili 3 ciklusa zamrzavanja i odmrzavanja.
[0070] [0044] Stabilnost tečne formulacije može da bude ocenjena kvalitativno i/ili kvantitativno na mnogo različitih načina, uključujući ocenu obrazovanja dimera, multimera i/ili agregata (na primer korišćenjem ekskluzione hromatografije (SEC), masene spektrometrije u kojoj se meri vreme leta jona s laserskom desorpcijom/jonizacijom iz matrice (MALDI-TOF MS), analitičkog ultracentrifugiranja, rasipanja svetlosti (foton-korelaciona spektroskopija, dinamičko rasipanje svetlosti (DLS), statičko rasipanje svetlosti, višeugaono lasersko rasipanje svetlosti (MALLS)), protočne mikroskopske vizuelizacije, merenjem električnog otpora (uređajem coulter), merenjem slabljenja svetlosti ili drugim sistemima za brojanje čestica u tečnosti, merenjem zamućenosti, i/ili vizuelnim pregledom); procenu heterogenosti naelektrisanja korišćenjem katjonske jonoizmenjivačke hromatografije (CEX), izoelektričnim fokusiranjem (IEF), npr. kapilarnom tehnikom (cIEF), ili kapilarnom zonalnom elektroforezom; analizu amino-terminalne ili karboksi-terminalne sekvence; masenu spektrometrijsku analizu; SDS-PAGE ili SEC analizu za poređenje fragmentisanog, intaktnog i multimernog (tj., dimernog, trimernog, itd.) antitela; analizu peptidne mape (na primer tripsinska ili LYS-C); ocenu biološke aktivnosti ili antigen-vezujuće funkcije antitela; i slično. Stabilnost formulacije u čvrstom stanju može takođe da bude ocenjena kvalitativno i/ili kvantitativno na mnogo različitih načina, uključujući direktna ispitivanja, kao što je identifikacija kristalne strukture difrakcijom X-zraka na prahu (XRPD); procena strukture antitela u čvrstom stanju korišćenjem tehnike infracrvene spektroskopije sa Furijeovom transformacijom (FTIR); i merenje termičkih prelaza u liofilizovanoj čvrstoj supstanci (topljenje, prelazak u staklasto stanje, itd.) korišćenjem diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) i indirektnim ispitivanjima kao što je merenje sadržaja vlage pomoću testa prema Karl Fišeru, npr., za ekstrapolaciju verovatnoće hemijske nestabilnosti zbog hidrolize. Nestabilnost može da uključuje bilo koji, ili nekoliko parametara od: agregacije (npr., nekovalentne agregacije rastvorljivih supstanci, kovalentne agregacije rastvorljivih supstanci (npr., preuređenje/premeštanje disulfidne veze), agregacije nerastvorljivih supstanci), deamidacije (npr. deamidacije Asn), oksidacije (npr. oksidacije Met), izomerizacije (npr. izomerizacije Asp), isecanja/hidrolize/fragmentacije (npr. fragmentacija regiona zgloba), obrazovanja sukcinimida, produženja N-kraja, obrade C-kraja, razlika u glikozilaciji, i slično.
[0071] Monoklonsko antitelo "nastalo deamidacijom" je ono kod koga je jedna ili više asparaginskih ili glutaminskih rezidua izmenjena, npr. u asparaginsku kiselinu ili izoasparaginsku kiselinu.
[0072] Antitelo koje je "podložno deamidaciji" je ono koje sadrži jednu ili više rezidua za koje je utvrđeno da su podložne deamidaciji.
[0073] Antitelo koje je "podložno oksidaciji" je ono koje sadrži jednu ili više rezidua za koje je utvrđeno da su podložne oksidaciji.
[0074] Antitelo koje je "podložno agregaciji" je ono za koje je utvrđeno da agregira sa drugim molekulom(ima) antitela, naročito nakon zamrzavanja, zagrevanja, sušenja, rekonstituisanja i/ili mućkanja.
[0075] Antitelo koje je "podložno fragmentaciji" je ono za koje utvrđeno da je isečeno na dva ili više fragmenata, na primer u regionu zgloba.
[0076] Pod "smanjenjem deamidacije, oksidacije, agregacije, ili fragmentacije", podrazumeva se sprečavanje ili smanjenje (npr., do 80%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% ili 10% od) veličine deamidacije, agregacije, ili fragmentacije, u odnosu na monoklonsko antitelo formulisano na drugom pH ili u drugom puferu.
[0077] "Agregat", "SEC agregat", ili "rastvorni agregat" predstavlja više od jednog i manje od, ili jednako, deset proteina i/ili fragmenata antitela povezanih zajedno preko kovalentnih, jonskih, ili hidrofobnih interakcija, čime se obrazuje veće proteinsko telo.
[0078] "Nerastvorni agregat" ili "čestica" predstavlja više od deset proteina i/ili fragmenata antitela povezanih zajedno preko kovalentnih, jonskih, ili hidrofobnih interakcija, čime se obrazuje veće proteinsko telo.
[0079] Kako se ovde koristi, "biološka aktivnost" monoklonskog antitela odnosi se na sposobnost antitela da se veže za antigen i da to rezultuje u merljivom biološkom odgovoru koji može da bude izmeren in vitro ili in vivo. Takva aktivnost može da bude antagonistička ili agonistička.
[0080] Molekul na površini ćelije, "integrin α4β7", ili "α4β7", predstavlja heterodimer α<4>lanca (CD49D, ITGA4) i β<7>lanca (ITGB7). Svaki lanac može da obrazuje heterodimer sa alternativnim lancem integrina, da obrazuje na primer α<4>β<1>ili α<E>β<7>. Humani α<4>i β<7>geni
[0083] 1
[0084] (GenBank (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD) RefSeq pristupni brojevi NM_000885 i NM_000889, redom) se eksprimiraju u B i T limfocitima, naročito memorijskim CD4+ limfocitima. Topično za mnoge integrine, α4β7 može da postoji ili u stanju mirovanja ili u aktiviranom stanju. Ligandi za α4β7 uključuju vaskularni ćelijski adhezioni molekul (VCAM), fibronektin i mukozni adresin (MAdCAM, npr., MAdCAM-1).
[0085] Kako se ovde koristi, humani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment koji ima "specifičnost vezivanja za kompleks α4β7 " vezuje se za α4β7, ali ne i za α4β1 ili αEB7.
[0086] Kako se ovde koristi, "izotonična" formulacija ima suštinski isti osmotski pritisak kao ljudska krv. Izotonične formulacije će uopšteno imati osmotski pritisak od oko 250 do 350 mOsm. Izotoničnost može da bude merena korišćenjem pritiska pare ili osmometra tipa mržnjenja, na primer.
[0087] Kako se ovde koristi, "pufersko sredstvo" se odnosi na pufer koji se opire promenama pH delovanjem svojih kiselo-baznih konjugovanih komponenata. Pufersko sredstvo može da bude prisutno u tečnoj formulaciji pronalaska. U nekim primerima izvođenja, pufersko sredstvo ovog pronalaska podešava pH formulacije na oko 5.0 do oko 7.5, na oko pH 5.5 do oko 7.5, na oko pH 6.0 do oko 7.0, ili na pH od oko 6.3 do oko 6.5. U jednom aspektu, primeri puferskih sredstava koja će sama, ili u kombinaciji, kontrolisati pH u opsegu od 5.0 do 7.5 uključuju acetat, sukcinat, glukonat, histidin, citrat, fosfat, maleat, kakodilat, 2-[N-morfolino]etansulfonsku kiselinu (MES), bis(2-hidroksietil)iminotris[hidroksimetil]metan (Bis-Tris), N-[2-acetamido]-2-iminodisirćetnu kiselinu (ADA), glicilglicin i druge pufere na bazi organske kiseline. U drugom aspektu, pufersko sredstvo ovde je histidin ili citrat.
[0088] "Histidinski pufer" je pufer koja sadrži jone histidina. Primeri histidinskih pufera uključuju rastvore histidin hlorida, histidin acetata, histidin fosfata, histidin sulfata. Histidinski pufer ili histidin-HCl pufer ima pH između oko pH 5.5 do oko 7.0, između oko pH 6.1 do oko 6.9, ili oko pH 6.5.
[0089] "Citratni pufer" je pufer koja sadrži citratne jone. Primeri citratnih pufera uključuju rastvore natrijum citrata, amonijum citrata, kalcijum citrata, i kalijum citrata. Citratni pufer ima pH od oko 3.0 do 6.2, oko pH 5.5 do 6.5, oko pH 6.1 do oko 6.5, oko pH 6.1, oko pH 6.2, ili oko pH 6.5.
[0090] [0060] "Saharid" je ovde jedinjenje opšte formule (CH<2>O)<n>i njegovi derivati, uključujući monosaharide, disaharide, trisaharide, polisaharide, šećerne alkohole, redukujuće šećere, neredukujuće šećere, i slično. Primeri saharida ovde uključuju glukozu, saharozu, trehalozu, laktozu, fruktozu, maltozu, dekstran, eritritol, glicerol, arabitol, silitol, sorbitol, manitol, melibiozu, melezitozu, rafinozu, manotriozu, stahiozu, maltozu, laktulozu, maltulozu, glucitol, maltitol, laktitol, izo-maltulozu, i slično. Saharid može da bude lioprotektant. U jednom aspektu, saharid je ovde neredukujući disaharid, kao što je saharoza.
[0091] Ovde, "površinski aktivna supstanca" odnosi se na sredstvo koje snižava površinski napon tečnosti. U jednom aspektu, površinski aktivna supstanca je nejonska površinski aktivna supstanca. Primeri površinski aktivnih supstanci ovde uključuju polisorbat (polioksietilen sorbitan monolaurat, na primer, polisorbat 20 i polisorbat 80); TRITON (t-Oktilfenoksipolietoksietanol, nejonski deterdžent, Union Carbide subsidiary of Dow Chemical Co., Midland MI); natrijum dodecil sulfat (SDS); natrijum laurel sulfat; natrijum oktil glikozid; lauril-, miristil-, linoleil-, ili stearil-sulfobetain; lauril-, miristil-, linoleil- ili stearil-sarkozin; linoleil-, miristil-, ili cetil-betain; lauroamidopropil-, kokamidopropil-, linolamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil-, ili izostearamidopropil-betain (npr. lauroamidopropil); miristamidopropil-, palmidopropil-, ili izostearamidopropil-dimetilamin; natrijum metil kokoil-, ili dinatrijum metil oleil-taurat; sorbitan monopalmitat; i MONAQUAT serije (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); polietil glikol (PEG), polipropilen glikol (PPG), i kopolimere poloksietilen i poloksipropilen glikola (npr. Pluronics/Poloxamer, PF68 itd); itd. U drugom aspektu, površinski aktivna supstanca ovde predstavlja polisorbat 80.
[0092] Termin "helirajuće sredstvo" odnosi se na sredstvo koje se vezuje za atom preko više od jedne veze. U jednom aspektu, primeri helirajućih sredstava ovde uključuju citrat, etilendiamintetrasirćetnu kiselinu, etilenglikoltetrasirćetnu kiselinu (EGTA), dimerkaprol, dietilentriaminpentasirćetnu kiselinu, i N,N-bis(karboksimetil)glicin. U drugom aspektu, helirajuće sredstvo je citrat ili EDTA.
[0093] Termin "antioksidans" odnosi se na sredstvo koje inhibira oksidaciju drugih molekula. Primeri antioksidanasa ovde uključuju citrat, lipoinsku kiselinu, mokraćnu kiselinu, glutation, tokoferol, karoten, likopen, cistein, fosfonatna jedinjenja, npr., etidronsku kiselinu, desferoksamin i malat.
[0094] Termin "antitelo" se ovde koristi u najširem smislu i specifično obuhvata monoklonska antitela pune dužine, imunoglobuline, poliklonska antitela, multispecifična antitela (npr. bispecifična antitela) obrazovana od najmanje dva antitela pune dužine, npr., svako za drugačiji antigen ili epitop, i pojedinačne antigen-vezujuće fragmente, uključujući dAbs, scFv, Fab, F(ab)'<2>, Fab', uključujući humana, humanizovana i antitela iz nehumanih vrsta i rekombinantne antigen-vezujuće oblike kao što su monotela i dijatela.
[0095] Molarne količine i odnosi anti-α4β7 antitela prema drugim ekscipijensima koji su ovde opisani se izračunavaju pod pretpostavkom približne molekulske težine od oko 150000 daltona za antitelo. Stvarna molekulska težina antitela može da se kreće od 150 000 daltona, u
[0098] 1
[0099] zavisnosti od aminokiselinskog sastava ili post-translacione modifikacije, npr., u zavisnosti od ćelijske linije korišćene za eksprimiranje antitela. Stvarna molekulske težina antitela može da bude /- 5% od 150000 daltona.
[0100] Termin "humano antitelo" uključuje antitelo koje ima sekvencu izvedenu iz humane imunoglobulinske sekvence klicine linije, kao što je antitelo izvedeno iz transgenih miševa koji imaju humane imunoglobulinske gene (npr., XENOMOUSE miševi dobijeni genetskim inžinjeringom (Abgenix, Fremont, CA), HUMAB-MOUSE<®>, KIRIN TC MOUSE™ transhromozomskih miševa, KMMOUSE<®>(MEDAREX, Princeton, NJ)), humanih biblioteka prikazanih na fagu, ćelija humanog mijeloma, ili humanih B ćelija.
[0101] Termin "monoklonsko antitelo", kako se ovde koristi, odnosi se na antitelo dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, tj., pojedinačna antitela koja čine populaciju su identična i/ili se vezuju za isti epitop, osim mogućih varijanti koje mogu da nastanu tokom proizvodnje monoklonskog antitela, takve varijante su uglavnom prisutne u manjim količinama. Nasuprot preparatima poliklonskog antitela koji obično uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonsko antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Modifikator "monoklonsko" ukazuje na svojstvo antitela da je dobijeno iz suštinski homogene populacije antitela, i nije predviđen da zahteva proizvodnju antitela bilo kojim određenim postupkom. Na primer, monoklonska antitela za upotrebu prema predmetnom pronalasku mogu da budu proizvedena metodom hibridoma koju je prvi opisao Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), ili mogu da budu napravljena metodama rekombinantne DNK (videti, npr., SAD pat. br. 4,816,567). "Monoklonska antitela" mogu takođe da budu izdvojena iz biblioteka antitela prikazanih na fagu korišćenjem tehnika opisanih kod Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) i Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991), na primer.
[0102] Monoklonska antitela ovde specifično uključuju "himerna" antitela u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan sa, ili homolog odgovarajućim sekvencama u antitelima izvedenim iz određenih vrsta, ili pripada određenoj klasi ili podklasi antitela, dok je ostatak lan(a)ca identičan ili homolog odgovarajućim sekvencama u antitelima izvedenim iz drugih vrsta ili pripada drugoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmenti takvih antitela, sve dok ispoljavaju željenu biološku aktivnost (SAD pat. br. 4,816,567; i Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Himerna antitela od interesa ovde uključuju "primatizovana" antitela koja sadrže antigen-vezujuće sekvence varijabilnog domena izvedene iz nehumanog primata (npr. majmuni starog sveta, čovekoliki majmuni, itd.) i humane sekvence konstantnog regiona.
[0105] 1
[0106] "Antigen-vezujući fragmenti" humanizovanog imunoglobulina pripremljeni u formulaciji pronalaska sadrže najmanje varijabilne regione teških i/ili lakih lanaca anti-α4β7 antitela. Na primer, antigen-vezujući fragment vedolizumaba sadrži aminokiselinske rezidue 20-131 sekvence humanizovanog lakog lanca ozmačene kao SEQ ID NO:4. Primeri takvih antigen-vezujućih fragmenata uključuju Fab fragmente, Fab' fragmente, scFv i F(ab')<2>fragmente humanizovanog imunoglobulina poznate u stanju tehnike. Antigen-vezujući fragmenti humanizovanog imunoglobulina pronalaska mogu da budu proizvedeni enzimskim sečenjem ili pomoću rekombinantnih tehnika. Na primer, sečenje papainom ili pepsinom može da se koristi za proizvodnju Fab ili F(ab')<2>fragmenata, redom. Antitela mogu takođe da se proizvedu u različitim skraćenim oblicima korišćenjem gena za antitelo u koje je uveden jedan ili više stop kodona ushodno od prirodnog mesta zaustavljanja. Na primer, rekombinantni konstrukt koji kodira teški lanac F(ab')<2>fragmenta može da bude dizajniran tako da uključuje DNK sekvence koje kodiraju CH<I>domen i region zgloba teškog lanca. U jednom aspektu, antigen-vezujući fragmenti inhibiraju vezivanje integrina α4β7 za jedan ili više njegovih liganda (npr. mukozni adresin MAdCAM (npr., MAdCAM-1), fibronektin).
[0107] Digestija antitela papainom proizvodi dva identična antigen-vezujuća fragmenta, nazvana "Fab" fragmenti, svaki sa jednim antigen-vezujućim mestom, i preostali "Fc" fragment, čiji naziv odražava njegovu sposobnost da lako kristališe. Obrada pepsinom daje F(ab')<2>fragment koji ima dva antigen-vezujuća mesta i koji je i dalje sposoban za unakrsno vezivanje antigena.
[0108] "Fv" je fragment antitela koji se sastoji od dimera jednog varijabilnog domena teškog lanca i jednog varijabilnog domena lakog lanca koji su nekovalentno povezani.
[0109] Fab fragment takođe sadrži konstantni domen lakog lanca i prvi konstantni domen (CH1) teškog lanca. Fab' fragmenti se razlikuju od Fab fragmenata po dodatku od nekoliko rezidua na karboksi-kraju CH1 domena teškog lanca, uključujući jedan ili više cisteina iz regiona zgloba antitela. Fab'-SH je oznaka koja se ovde koristi za Fab' u kome cisteinska(e) rezidua(e) konstantnih domena nose najmanje jednu slobodnu tiolnu grupu. F(ab')<2>fragmenti antitela su prvobitno proizvedeni kao parovi Fab' fragmenata koji imaju povezujuće cisteine između sebe. Druga hemijska kuplovanja fragmenata antitela su takođe poznata.
[0110] "Jednolančani Fv" ili "scFv" fragmenti antitela sadrže V<H>i V<L>domene antitela, u kojima su ovi domeni prisutni u jednom polipeptidnom lancu. U jednom aspektu, Fv polipeptid dalje sadrži polipeptidni linker između V<H>i V<L>domena koji omogućava da scFv obrazuje željenu strukturu za vezivanje antigena. Za pregled scFv videti Pluckthun u The Pharmacology
[0113] 1
[0114] of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
[0115] Termin "dijatela" odnosi se na male fragmente antitela sa dva antigen-vezujuća mesta, pri čemu fragmenti sadrže varijabilni teški domen (V<H>) povezan sa varijabilnim lakim domenom (V<L>) u istom polipeptidnom lancu (V<H>-V<L>). Korišćenjem linkera koji je previše kratak da omogući sparivanje između dva domena na istom lancu, domeni su prinuđeni da se sparuju sa komplementarnim domenima drugog lanca i obrazuju dva antigen-vezujuća mesta. Dijatela su potpunije opisana u, na primer, EP 404,097; WO 93/11161; i Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).
[0116] "Antitelo pune dužine" je ono koje sadrži antigen-vezujući varijabilni region kao i konstantni domen lakog lanca (C<L>) i konstantne domene teškog lanca, C<H1>, C<H2>i C<H3>. Konstantni domeni mogu da budu konstantni domeni sa nativnom sekvencom (npr. konstantni domeni sa humanom nativnom sekvencom) ili sa njihovom varijantom aminokiselinske sekvence. U jednom aspektu, antitelo pune dužine ima jednu ili više efektorskih funkcija.
[0117] Antitelo sa "varijantom aminokiselinske sekvence" ovde je antitelo sa aminokiselinskom sekvencom koja se razlikuje od glavne vrste antitela. Obično, varijante aminokiselinske sekvence će posedovati najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 85%, najmanje oko 90%, ili najmanje oko 95% homologije sa glavnom vrstom antitela. Varijante aminokiselinske sekvence imaju supstitucije, delecije, i/ili adicije na određenim pozicijama u, ili oko aminokiselinske sekvence glavne vrste antitela, ali zadržavaju antigenvezujuću aktivnost. Varijacije u sekvenci konstantnih regiona antitela će imati manje efekta na antigen-vezujuću aktivnost nego varijacije u varijabilnim regionima. U varijabilnim regionima, varijante aminokiselinske sekvence će biti najmanje oko 90% homologe, najmanje oko 95% homologe, najmanje oko 97% homologe, najmanje oko 98% homologe, ili najmanje oko 99% homologe sa glavnom vrstom antitela.
[0118] "Homologija" se definiše kao procenat rezidua u varijanti aminokiselinske sekvence koje su identične nakon poravnanja sekvenci i uvođenja praznina, ako je neophodno, da bi se postigao najveći procenat homologije. Postupci i kompjuterski programi za poravnanje su dobro poznati u stanju tehnike.
[0119] "Terapeutsko monoklonsko antitelo" je antitelo koje se koristi u terapiji humanog subjekta. Terapeutska monoklonska antitela koja su ovde opisana uključuju anti-α4β7 antitela.
[0120] "Glikozilaciona varijanta" antitela ovde predstavlja antitelo sa jednom ili više ugljovodoničnih grupa koje su vezane za njega, koje se razlikuju od jedne ili više ugljovodoničnih grupa vezanih za glavnu vrstu antitela. Primeri glikozilacionih varijanti ovde
[0123] 1
[0124] uključuju antitelo sa G1 ili G2 oligosaharidnom strukturom, umesto G0 oligosaharidne strukture, vezanom za njegov Fc region, antitelo sa jednom ili više ugljovodoničnih grupa koje su vezane za jedan ili dva njegova laka lanaca, antitelo bez ugljovodonika vezanog za jedan ili dva teška lanaca antitela, itd, i kombinacije glikozilacionih izmena.
[0125] "Efektorske funcije" antitela se odnose na one biološke aktivnosti koje mogu da se pripišu Fc regionu (nativnoj sekvenci Fc regiona ili varijanti aminokiselinske sekvence Fc regiona) antitela. Primeri efektorskih funcija antitela uključuju vezivanje C1q; citotoksičnost zavisnu od komplementa; vezivanje Fc-receptor; ćelijski posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC); fagocitozu; nishodnu regulaciju receptora površine ćelija (npr. B ćelijskog receptora; BCR), i slično.
[0126] U zavisnosti od aminokiselinske sekvence konstantnog domena njihovih teških lanaca, antitela pune dužine mogu da budu raspoređena u različite "klase". Postoji pet glavnih klasa antitela pune dužine: IgA, IgD, IgE, IgG, i IgM, i nekoliko od njih može dalje da se podeli u "podklase" (izotipove), npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, i IgA2. Konstantni domeni teškog lanca koji odgovaraju različitim klasama antitela nazivaju se α, δ, ε, γ, i µ, redom. Subjedinične strukture i trodimenzionalne konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate.
[0127] "Laki lanaci" antitela bilo koje vrste kičmenjaka mogu da se svrstaju u jednu od dve jasno razdvojene vrste, nazvane kapa (κ) i lambda (λ), na osnovu aminokiselinske sekvence njihovih konstantnih domena.
[0128] "Ćelijski posredovana citotoksičnost zavisna od antitela " i "ADCC" odnosi se na ćelijski posredovanu reakciju u kojoj nespecifične citotoksične ćelije koje eksprimiraju Fc receptore (FcRs) (npr. ćelije prirodne ubice (NK), neutrofili, i makrofagi) prepoznaju vezano antitelo na ciljnoj ćeliji i zatim izazivaju lizu ciljne ćelije. Primarne ćelije za posredovanje u ADCC, NK ćelije, eksprimiraju samo FcyRIII, dok monociti eksprimiraju FcyRI, FcyRII i FcyRIII. FcR ekspresija na hematopoeznim ćelijama je sumirana u tabeli 3 na strani 464 prema Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Za ocenu ADCC aktivnosti molekula od interesa, može da se izvede in vitro biološki test ADCC, kao što je onaj opisan u SAD pat. br. 5,500,362 ili 5,821,337. Korisne efektorske ćelije za takve biološke testove uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i ćelije prirodne ubice (NK). Alternativno, ili dodatno, ADCC aktivnost molekula od interesa može da se oceni in vivo, npr., u životinjskom modelu kao što je onaj opisan kod Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998).
[0129] Termini "Fc receptor" ili "FcR" se koriste da opišu receptor koji se vezuje za Fc region antitela. U jednom aspektu, FcR je nativna sekvenca humanog FcR. U drugom aspektu, FcR je
[0132] 1
[0133] onaj koji vezuje IgG antitelo (gama receptor) i uključuje receptore podklasa FcyRI, FcyRII, i FcyRIII, uključujući alelne varijante i alternativno splajsovane oblike ovih receptora. FcyRII receptori uključuju FcyRIIA ("aktivirajući receptor") i FcyRIIB ("inhibitorni receptor"), koji imaju slične aminokiselinske sekvence koje se prvenstveno razlikuju u svojim citoplazmatskim domenima. Aktivirajući receptor FcγRIIA sadrži imunoreceptorski aktivacioni motiv (ITAM) na bazi tirozina u svom citoplazmatskom domenu. Inhibitorni receptor FcyRIIB sadrži imunoreceptorski inhibitorni motiv (ITIM) na bazi tirozina u svom citoplazmatskom domenu. (Videti, pregled u M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Receptori FcR su prikazani u Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); i de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:33-41 (1995). Drugi receptori FcR, uključujući one koji će biti identifikovani u budućnosti, ovde su obuhvaćeni terminom "FcR". Termin takođe uključuje neonatalni receptor, FcRn, koji je odgovoran za prenos majčinih imunoglobulina IgG na fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) i Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)).
[0134] Termin "hipervarijabilni region" kada se ovde koristi, odnosi se na aminokiselinske rezidue antitela koje su odgovorne za vezivanje antigena. Hipervarijabilni region uopšteno sadrži aminokiselinske rezidue iz "regiona koji određuje komplementarnost" ili "CDR" (npr. rezidue 24-34 (L1), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) u varijabilnom domenu lakog lanca i 31-35 (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) u varijabilnom domenu teškog lanca; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) i/ili one rezidue iz "hipervarijabilne petlje" (npr. rezidue 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) u varijabilnom domenu lakog lanca i 26-32 (H1), 53-55 (H2) i 96-101 (H3) u varijabilnom domenu teškog lanca; Chothia and Lesk J. Mol. Biol.196:901-917 (1987)). Rezidue „okvirnog regiona" ili "FR" rezidue su one rezidue varijabilnog domena koje nisu rezidue hipervarijabilnog regiona, kako je ovde definisano. Hipervarijabilni region ili njegovi CDR regioni mogu da budu prebačeni sa jednog lanca antitela na drugi, ili na drugi protein da bi dodelili specifičnost vezivanja za antigen rezultujućem (složenom) antitelu ili vezujućem proteinu.
[0135] "Humanizovani" oblici nehumanih (npr., glodarskih) antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu izvedenu iz nehumanog imunoglobulina. Najvećim delom, humanizovana antitela su humani imunoglobulini (recipijentno antitelo) u kojima su rezidue iz hipervarijabilnog regiona recipijenta zamenjene reziduama iz hipervarijabilnog regiona vrsta koje nisu humane (donorsko antitelo) kao što je miš, pacov, zec ili nehumani primat, koje imaju željenu specifičnost, afinitet i kapacitet. U nekim slučajevima, rezidue okvirnog regiona (FR)
[0138] 2
[0139] humanog imunoglobulina su zamenjene odgovarajućim nehumanim reziduama. Pored toga, humanizovana antitela mogu da sadrže rezidue koje nisu nađene u recipijentnom antitelu ili u donorskom antitelu. Ove modifikacije se rade da bi se dodatno poboljšao učinak antitela. Uopšteno, humanizovano antitelo će uključivati suštinski ceo najmanje jedan, i tipično dva varijabilna domena, u kojima cele ili suštinski cele hipervarijabilne petlje odgovaraju onima iz nehumanog imunoglobulina, i celi ili suštinski celi FR regioni su oni sa humanom imunoglobulinskom sekvencom. Humanizovani antitelo će opciono sadržati i najmanje deo imunoglobulinskog konstantnog regiona (Fc), tipično onog iz humanog imunoglobulina. Za dodatne detalje, videti Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); i Presta, Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596 (1992).
[0140] Antitelo "sazrelog afiniteta" je ono sa jednom ili više izmena u jednom ili više njegovih hipervarijabilnih regiona koje rezultuju u poboljšanom afinitetu antitela za antigen, u poređenju sa roditeljskim antitelom koje nema ovu izmenu(e). U jednom aspektu, antitela sazrelog afiniteta će imati nanomolarne ili čak pikomolarne afinitete za ciljni antigen. Antitela sazrelog afiniteta se proizvode postupcima poznatim u stanju tehnike. Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992) opisuje sazrevanje afiniteta putem mešanja VH i VL domena. Nasumična mutageneza u CDR i/ili okvirnim reziduama je opisana kod: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol.
[0141] 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); i Hawkins et al., J. Mol. Biol.226:889-896 (1992).
[0142] "Izolovano" antitelo je ono koje je identifikovano i razdvojeno i/ili izdvojeno iz komponente njegovog prirodnog okruženja. U određenim primerima izvođenja, antitelo će biti prečišćeno (1) do više od 95 tež.% proteina određeno postupkom po Lowry-ju, i alternativno, više od 99 tež.%, (2) do stepena dovoljnog da se dobije najmanje 15 rezidua N-terminalne ili unutrašnje aminokiselinske sekvence upotrebom sekvenatora sa rotirajućom posudom, ili (3) do homogenosti pomoću SDS-PAGE pod redukujućim ili neredukujućim uslovima korišćenjem Coomassie plave ili srebrne boje. Izolovano antitelo uključuje antitelo in situ u rekombinantnim ćelijama budući da najmanje jedna komponenta iz prirodnog okruženja antitela neće biti prisutna. Međutim, obično će izolovano antitelo biti pripremljeno pomoću najmanje jednog koraka prečišćavanja.
[0143] [0089] "Lečenje" se odnosi i na terapeutsko lečenje i na profilaktičke ili preventivne mere. Oni kojima je lečenje potrebno uključuju one koji već imaju bolest, kao i one kod kojih bolest ili njen recidiv treba da se spreči. Dakle, pacijent koji ovde treba da se leči može da ima dijagnozu bolesti ili može da ima predispoziciju za, ili podložnost bolesti. Termini "pacijent" i "subjekat" se ovde koriste međusobno zamenljivo.
[0144] Antitelo koje je formulisano je suštinski čisto i poželjno suštinski homogeno (tj. bez kontaminirajućih proteina itd). "Suštinski čisto" antitelo označava kompoziciju koja sadrži najmanje oko 90 tež.% antitela, u odnosu na ukupnu težinu proteina, alternativno, najmanje oko 95 tež.% ili 97 tež.%. "Suštinski homogeno" antitelo označava kompoziciju koja sadrži protein u kome je najmanje oko 99 tež.% proteina specifično antitelo, npr., anti-α4β7 antitelo, u odnosu na ukupnu težinu proteina.
[0145] "Klinička remisija", kako se ovde koristi, u vezi sa subjektima sa ulceroznim kolitisom, odnosi se na kompletni Mayo rezultat od 2 ili manje poena i bez pojedinačnih podrezultata većih od 1 poena. "Klinička remisija" Kronove bolesti se odnosi na CDAI rezultat od 150 poena ili manje.
[0146] "Klinički odgovor", kako se ovde koristi, u vezi sa subjektima sa ulceroznim kolitisom, odnosi se na smanjenje kompletnog Mayo rezultata od 3 ili više poena i 30% od polazne vrednosti, (ili delimični Mayo rezultat od 2 ili više poena i 25% ili više od polazne vrednosti, ako procena kompletnog Mayo rezultata nije obavljena pri poseti) sa pratećim smanjenjem podrezultata rektalnog krvarenja od 1 ili više poena ili apsolutnim rezultatom rektalnog krvarenja od 1 ili manje poena. "Klinički odgovor", kako se ovde koristi, u vezi sa subjektima sa Kronovom bolešću, odnosi se na smanjenje CDAI rezultata od 70 poena ili više od polazne vrednosti (nulta nedelja).
[0147] "Izlečenje mukoze", kako se ovde koristi, u vezi sa subjektima sa ulceroznim kolitisom, odnosi se na endoskopski podrezultat od 1 poena ili manje.
[0148] Kako se ovde koristi, "neuspeh lečenja" se odnosi na pogoršanje bolesti, potreba za lekovima za brzo otklanjanje simptoma ili hirurškom intervencijom za lečenje ulceroznog kolitisa ili Kronove bolesti. Lekovi za brzo otklanjanje simptoma su bilo koji novi lekovi ili bilo kakvo povećanje doze u odnosu na osnovne lekove, potrebno za lečenje novih ili nerazrešenih simptoma ulceroznog kolitisa ili Kronove bolesti (koji nisu protiv dijareje za kontrolu hronične dijareje).
[0149] Formulacije
[0150] [0095] Kao što je ovde opisano, otkriveno je da su anti-α4β7 antitela stabilnija kada su formulisana sa antioksidansom ili helirajućim sredstvom. Pored toga, kao što je ovde opisano, anti-α4β7 antitela mogu da budu formulisana tako da se smanji obrazovanje agregata (npr., količina polisorbata 80 u formulaciji može da se smanji). Na primer, formulacije koje sadrže citrat ili EDTA i anti-α4β7 antitela smanjuju brzinu obrazovanja agregata antitela tokom skladištenja. Formulacije mogu takođe da se skladište bez kiseonika da bi se smanjilo obrazovanja agregata. U jednom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 2.5% na 25 °C nakon 12 meseci. U jednom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 2.0% na 25 °C nakon 12 meseci. U jednom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 1.6% na 25 °C nakon 12 meseci. U jednom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 1.3% na 25 °C nakon 12 meseci. U jednom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 1.0% na 25 °C nakon 12 meseci. U drugom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 0.5% na 5°C nakon 12 meseci. U drugom primeru izvođenja, formulacija pokazuje obrazovanje agregata antitela manje od oko 0.3% na 5°C nakon 12 meseci.
[0151] Predmetni pronalazak obezbeđuje, u prvom aspektu, stabilnu formulaciju anti-α4β7 antitela, kako je definisano u patentnim zahtevima. Formulacija može izborno dodatno da sadrži površinski aktivnu supstancu. Antitelo u formulaciji može da bude antitelo pune dužine ili njegov antigen-vezujući fragment, kao što je Fab, Fv, scFv, Fab' ili F(ab')<2>fragment.
[0152] Obrazovanje agregata može da se smanji uklanjanjem kiseonika iz formulacije. Alternativno, formulacija može da sadrži antioksidans ili helirajuće sredstvo. U jednom aspektu, primeri antioksidanasa i helirajućih sredstava koja mogu da budu uključena u formulaciju uključuju lipoinsku kiselinu, mokraćnu kiselinu, glutation, tokoferol, karoten, likopen, cistein, etilendiamintetrasirćetnu kiselinu (EDTA), etilenglikoltetrasirćetnu kiselinu (EGTA), dimerkaprol, dietilen triamin pentasirćetnu kiselinu, i N, N-bis (karboksimetil) glicin, fosfonatna jedinjenja, npr., etidronsku kiselinu, desferoksamin, malat i citrat. Neki antioksidansi i helirajuća sredstva mogu da smanje brzinu obrazovanja agregata tokom skladištenja formulacije. U drugom aspektu, helirajuće sredstvo i/ili antioksidans je citrat ili EDTA. Primeri koncentracija helirajućeg sredstva za tečne formulacije su u opsegu od oko više od 0 mM do oko 60 mM, oko 5 mM do oko 50 mM, oko 5 mM do oko 15 mM, oko 10 mM do oko 25 mM, i oko 20 do oko 30 mM. U drugom aspektu, koncentracija helirajućeg sredstva je od oko 0 mM do oko 30 mM. U jednom primeru izvođenja, helirajuće sredstvo i/ili antioksidans je citrat, i koncentracija citrata je od oko 0 mM do oko 15 mM, oko 0 mM do oko 10 mM, ili oko 0 mM do oko 5 mM.
[0153] Formulacija može da sadrži bilo koju željenu slobodnu aminokiselinu, koja može da bude u L-obliku, D-obliku, ili bilo koju željenu smešu ovih oblika. U jednom aspektu, slobodne aminokiseline koje mogu da budu uključene u formulaciju uključuju, na primer, histidin,
[0156] 2
[0157] alanin, arginin, glicin, glutaminsku kiselinu, serin, lizin, triptofan, valin, cistein i njihove kombinacije. Neke aminokiseline mogu da stabilizuju proteine u smislu degradacije tokom proizvodnje, sušenja, liofilizacije i/ili skladištenja, npr., preko vodoničnih veza, sonih mostova, antioksidantnih svojstava, ili hidrofobnih interakcija ili isključivanjem sa površine proteina. Aminokiseline mogu da deluju kao modifikatori toničnosti ili mogu da smanje viskoznost formulacije. U drugom aspektu, slobodne aminokiseline, kao što su histidin i arginin, mogu da imaju ulogu lioprotektanata, i ne kristalizuju kada se liofilizuju kao komponente formulacije. Slobodne aminokiseline, kao što su glutaminska kiselina i histidin, same ili u kombinaciji, mogu da imaju ulogu sredstava za puferisanje u vodenom rastvoru u opsegu pH od 5 do 7.5. U još jednom aspektu, formulacija sadrži histidin, arginin, ili kombinaciju histidina i arginina. U još jednom aspektu, koncentracije slobodnih aminokiselina za tečne formulacije su u opsegu od oko 9 mM do oko 0.5 M, na primer, od oko 10 mM do oko 90 mM, oko 10 mM do oko 75 mM, oko 10 mM do oko 40 mM, oko 25 mM do oko 50 mM, oko 15 mM do oko 300 mM, oko 20 mM do oko 200 mM, oko 25 mM do oko 150 mM, oko 50 mM do oko 75 mM, oko 50 mM do oko 120 mM, oko 50 do oko 150 mM, ili oko 50 mM ili oko 125 mM.
[0158] Formulacija može po izboru dalje da sadrži najmanje jednu površinski aktivnu supstancu, npr., za kontrolu obrazovanja rastvornih i nerastvornih agregata. U jednom aspektu, površinski aktivna supstanca je nejonska površinski aktivna supstanca. U drugom aspektu, površinski aktivna supstanca je jonska površinski aktivna supstanca. Primeri površinski aktivnih supstanci koje mogu da budu uključene u formulaciju uključuju, na primer, polisorbat 20, polisorbat 80, poloksamer (Pluronic<®>) i njihove kombinacije. Kada je prisutna, površinski aktivna supstanca je uopšteno uključena u količini koja smanjuje obrazovanje nerastvornih agregata antitela, npr., tokom pakovanja u ambalažu, zamrzavanja, sušenja, liofilizacije i/ili rekonstitucije, u prisustvu silikona, bočica za punjenje, prethodno napunjenih špriceva, i/ili kertridža. Koncentracija površinski aktivne supstance je uopšteno od oko 0.0001 % do oko 1.0%, od oko 0.01% do oko 0.5%, na primer, oko 0.05%, 0.1%, 0.15%, 0.20%, 0.3%, 0.4%, ili 0.5% (tež./zapr.). Više koncentracije površinski aktivne supstance, npr., polisorbata 80 mogu da vode većem obrazovanju SEC agregata. Smanjenje koncentracije polisorbata 80 može da smanji obrazovanje SEC agregata pri skladištenju. U jednom aspektu, molarni odnos površinski aktivna supstanca:antitelo je od oko 0.7:1 do oko 2.0:1. U drugom aspektu, molarni odnos površinski aktivna supstanca:antitelo je 1.5:1.
[0159] [0100] Primer izvođenja formulacije anti-α4β7 antitela sadrži visoku koncentraciju anti-α4β7 antitela. Na primer, u jednom primeru izvođenja, tečne formulacije mogu da sadrže najmanje oko 60 mg/ml, najmanje oko 70 mg/ml, najmanje oko 80 mg/ml, najmanje oko 90 mg/ml, najmanje oko 100 mg/ml, najmanje oko 110 mg/ml, najmanje oko 120 mg/ml, najmanje oko 130 mg/ml, najmanje oko 140 mg/ml, najmanje oko 150 mg/ml, najmanje oko 160 mg/ml, najmanje oko 170 mg/ml, najmanje oko 180 mg/ml, najmanje oko 190 mg/ml, najmanje oko 200 mg/ml, najmanje oko 250 mg/ml, najmanje oko 300 mg/ml, od oko 60 mg/ml do oko 190 mg/ml, od oko 60 mg/ml do oko 170 mg/ml anti-α4β7 antitela, od oko 150 mg/ml do oko 180 mg/ml, ili oko 160 mg/ml ili oko 165 mg/ml anti-α4β7 antitela. Alternativno, u drugom aspektu, tečne formulacije mogu da sadrže najmanje oko 154 mg/ml, najmanje oko 176 mg/ml.
[0160] Formulacija je tečna. Tečne formulacije su vodeni rastvori ili suspenzije, pripremljene u pogodnom vodenom rastvaraču, kao što je voda ili smeša voda/organska supstanca, kao što su smeše vode i alkohola. Tečne formulacije imaju pH između oko 5.5 i oko 7.5, između oko 6.0 i 7.3, između oko 6.0 i oko 7.0, između oko 6.0 i 6.5, između oko 6.0 i 6.3, između oko 6.3 i 7.1, ili između oko 6.4 i 7.0, ili između 6.3 i 6.8, kao što je oko 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, ili 6.9. Tečne formulacije mogu da budu skladištene na sobnoj temperaturi, u frižideru (npr., 2-8°C), ili zamrznute (npr., -20 °C ili -70 °C). Čvrsta formulacija može da bude rastvorena, tj. rekonstituisana, u pogodnom medijumu ili rastvaraču da bi postala tečna i pogodna za primenu. Pogodni rastvarači za rekonstituisanje čvrste formulacije uključuju vodu, izotonični fiziološki rastvor, pufer, npr., fosfatno-puferisani fiziološki rastvor, Ringerov (sa laktatom ili dekstrozom) rastvor, minimalni esencijalni medijum, rastvore alkohol/voda, rastvor dekstroze, itd. Količina rastvarača može da rezultuje u koncentraciji terapeutskog proteina koja je viša, ista, ili niža od koncentracije pre sušenja. U drugom aspektu, koncentracija rekonstituisanog anti-α4β7 antitela je ista kao njegova koncentracija u tečnoj formulaciji pre sušenja.
[0161] Formulacija može da bude sterilna, i ovo može da se postigne postupcima poznatim stručnjaku u oblasti za proizvodnju sterilnih farmaceutskih formulacija pogodnih za primenu kod humanih subjekata, pre, ili nakon, pripreme formulacije. Formulacija može da bude sterilisana kao tečna, npr., pre sušenja i/ili nakon rekonstitucije filtracijom kroz male pore, putem aseptične obrade ili izlaganjem ultra ljubičastom zračenju. Veličina pora filtera može da bude 0.1 µm ili 0.2 µm za otklanjanje mikroorganizama, ili 10 do 20 nm za otklanjanje virusnih čestica. Alternativno, ili dodatno, osušena formulacija može da bude sterilisana, npr., izlaganjem gama zračenju. U jednom aspektu, tečna formulacija anti-α4β7 antitela se steriliše filtracijom pre sušenja.
[0162] U jednom aspektu, formulacija je stabilna pri skladištenju. Različiti testovi za ispitivanje stabilnosti su dostupni iskusnom praktičaru za potvrđivanje stabilnosti formulacije. Na primer, antitelo u tečnoj formulaciji može da bude stabilno pri skladištenju na oko 25°C
[0165] 2
[0166] najmanje oko 4 nedelje, najmanje oko 2 meseca, najmanje oko 3 meseca, ili najmanje oko 6 meseci, ili najmanje oko 9 meseci, ili najmanje oko 12 meseci; na oko 2-8°C najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 1 godinu, najmanje oko 2 godine, najmanje oko 3 godine ili duže. Alternativno ili dodatno, antitelo u formulaciji može da bude stabilno pri skladištenju na oko 15°C najmanje oko 4 nedelje, najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 6 meseci, najmanje oko 9 meseci, najmanje oko 1 godinu, ili duže. Alternativno ili dodatno, antitelo u formulaciji može da bude stabilno pri skladištenju na oko -20°C ili -70°C najmanje oko 4 nedelje; najmanje oko 3 meseca, najmanje oko 6 meseci, najmanje oko 9 meseci, najmanje oko 1 godinu, najmanje oko 2 godine, najmanje oko 3 godine, najmanje oko 4 godine ili duže.
[0167] Stabilnost može da bude ispitivana procenom fizičke stabilnosti, hemijske stabilnosti, i/ili biološke aktivnosti antitela u formulaciji u vreme formulisanja kao i nakon skladištenja na zabeleženim temperaturama. Fizička i/ili hemijska stabilnost tečne formulacije ili rekonstituisanog suvog praška može da bude procenjena kvalitativno i/ili kvantitativno na mnogo različitih načina (videti, npr., Analytical Techniques for Biofarmaceutical Development, Rodriguez-Diaz et al. eds. Informa Healthcare (2005)), uključujući procenu obrazovanja rastvornih i nerastvornih agregata (na primer korišćenjem ekskluzione hromatografije, analitičkog ultracentrifugiranja, MALDI-TOF MS, rasipanja svetlosti (dinamičkog (DLS) ili MALLS), protočne mikroskopske vizuelizacije, ili drugih sistema za brojanje čestica u tečnosti, merenjem zamućenosti, centrifugiranjem u gradijentu gustine i/ili vizuelnim pregledom); procenu heterogenosti naelektrisanja korišćenjem katjonske jonoizmenjivačke hromatografije (videti takođe Vlasak and Ionescu, Curr. Pharm. Biotechnol.
[0168] 9:468-481 (2008) i Harris et al. J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl. 752:233-245 (2001)), izoelektrično fokusiranje ili kapilarnu zonalnu elektroforezu; analizu amino-terminalne ili karboksi terminalne sekvence; masenu spektrometrijsku analizu; SDS-PAGE analizu za poređenje fragmentisanog, intaktnog i multimernog (tj., dimernog, trimernog, itd.) antitela; analizu peptidne mape (na primer tripsinske ili LYS- i slično). Nestabilnost može da rezultuje u agregaciji, deamidaciji (npr., deamidaciji Asn), oksidaciji (npr., oksidaciji Met), izomerizaciji (npr., izomerizaciji Asp), denaturaciji, isecanju/hidrolizi/fragmentaciji (npr. fragmentaciji regiona zgloba), obrazovanju sukcinimida, nesparenom cisteinu(ima), produženju N-kraja, obradi C-kraja, razlikama u glikozilaciji, i slično. Biološka aktivnost ili antigen-vezujuća funkcija, npr., vezivanje anti-α4β7 antitela za MAdCAM (npr., MAdCAM-1) ili inhibicija vezivanja ćelija koje eksprimiraju integrin α4β7 za MAdCAM (npr., MAdCAM-1), npr., imobilisani MAdCAM (npr., MAdCAM-1), može da bude procenjena korišćenjem različitih tehnika dostupnih iskusnom praktičaru (videti npr., Soler et al., J. Pharmacol. Exper. Ther.
[0171] 2
[0172] 330:864-875 (2009)). Merenje sadržaja vlage u suvoj formulaciji može da ukaže na to koliko je verovatno da formulacija podlegne hemijskoj ili fizičkoj degradaciji, pri čemu veći sadržaj vlage vodi većoj degradaciji.
[0173] Stabilna formulacija može da doprinese niskoj imunogenosti anti-α4β7 antitela. Imunogeno anti-α4β7 antitelo može da vodi odgovoru u kome se obrazuje humano-antihumano antitelo (HAHA) kod humanih subjekata ili pacijenata. Kod pacijenata koji razviju HAHA odgovor na anti-α4β7 antitelo mogu da se jave neželjeni događaji (npr., reakcija na mestu infuzije) nakon lečenja ili pacijenti mogu da eliminišu anti-α4β7 antitelo brzo, što rezultuje u smanjenju doze u odnosu na onu koja je planirana lečenjem. Izveštaj (Feagen et al. (2005) N. Engl. J. Med. 352:2499-2507) ranog ispitivanja lečenja anti-α4β7 antitelom je ukazao na to da se humana anti-humana antitela razvijaju do 8. nedelje kod 44% lečenih pacijenata. Antitelo u ovom ispitivanju je skladišteno kao tečno i nije sadržalo polisorbat.
[0174] U nekim primerima izvođenja, formulacija može da poveća proporciju HAHA negativnih pacijenata do najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80% ili najmanje 90% pacijenata u poređenju sa rezultatom HAHA za manje stabilnu formulaciju.
[0175] U nekim primerima izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela ima ≥ 50% glavne naelektrisane izoforme, ≥ 55% glavne naelektrisane izoforme, ili 65 do 70% glavne naelektrisane izoforme. U drugim aspektima, stabilna formulacija anti-α4β7 antitela ima ≤ 45% kiselih naelektrisanih izoformi, ≤ 40% kiselih naelektrisanih izoformi, ≤ 30% kiselih naelektrisanih izoformi ili 22 do 28% kiselih izoformi. U drugim aspektima, stabilna formulacija anti-α4β7 antitela ima ≤ 25% baznih izoformi, ≤ 20% baznih izoformi, ≤ 15% baznih izoformi, oko 5% baznih izoformi ili oko 10% baznih izoformi. U jednom aspektu, stabilna formulacija anti-α4β7 antitela ima ≥ 55% glavne izoforme, ≤ 30 % kiselih izoformi i/ili ≤ 20% baznih izoformi, npr., kao što je određeno pomoću CEX. U drugom aspektu, stabilna formulacija anti-α4β7 antitela ima ≥ 50% glavne izoforme, ≤ 45 % kiselih izoformi i/ili < 10% baznih izoformi, npr., kao što je određeno pomoću cIEF.
[0176] Vreme potrebno za rekonstituciju je ≤ 60 minuta, ≤ 50 minuta ili ≤ 40 minuta ili ≤ 30 minuta ili ≤ 20 minuta.
[0177] Sadržaj monomera i/ili sadržaj agregata (npr., kao dimera, trimera, tetramera, pentamera, oligomera i agregata višeg reda), na primer, u tečnoj formulaciji, ili u rekonstituisanoj formulaciji, može da bude izmeren pomoću SEC, analitičkog ultracentrifugiranja, rasipanja svetlosti (DLS ili MALLS), MALDI-TOF MS ili merenja na nano skali, kao što je analiza praćenja nano čestica NTA, (NanoSight Ltd, Wiltshire, UK).
[0180] 2
[0181] Razlaganje, karakterizacija i kvantifikacija agregata može da bude postignuta na brojne načine, uključujući povećanje dužine kolone za razdvajanje u SEC, npr., dužom kolonom ili dodavanjem serijski povezane druge ili više SEC kolona u liniji sa prvom analitičkom SEC kolonom, dopunjavanjem SEC kvantifikacije monomera metodom rasipanja svetlosti, ili primenom NTA.
[0182] U jednom primeru izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela ima ≥ 90% monomernog antitela, ≥ 95% monomernog antitela, ili 97 do 99% monomernog antitela. U drugom primeru izvođenja, većina materijala u formulaciji anti-α4β7 antitela ima srednju vrednost poluprečnika od ≤ 20 nm, ≤ 15 nm, ≤ 10 nm, ili oko 5 do oko 7 nm. U jednom aspektu, formulacija antiα4β7 antitela sadrži ≥ 80% po količini teškog plus lakog lanca prema rezultatima analize proteina. U jednom aspektu, prisutno je ≥ 90% teškog plus lakog lanca. U drugom aspektu, formulacija anti-α4β7 antitela sadrži ≤ 10% agregata, ≤ 5% agregata, ≤ 2.5% agregata, ≤ 1.5% agregata, ≤ 1.0% agregata ili ≤ 0.5% agregata. U drugom aspektu, stabilna formulacija antiα4β7 antitela sadrži ≥ 96% monomera i/ili ≤ 2.5% agregata. U još jednom aspektu, stabilna formulacija anti-α4β7 antitela sadrži oko 99% monomera i/ili oko < 1% agregata.
[0183] Veličina čestica, većih od 1 do 2 mikrona, npr., agregata ili nerastvorenog ekscipijensa, na primer, u tečnoj formulaciji, ili u rekonstituisanoj formulaciji, može da bude izmerena metodom slabljenja svetlosti (npr., sistemom za brojanje čestica u tečnosti (HIAC) proizvođača Hach Ultra Analytics (Grants Pass, OR)), mikroskopski, uređajem coulter, ili sistemom zasnovanim na digitalnoj (npr., protočnoj) mikroskopskoj vizuelizaciji kao što je mikrofluidna vizuelizacija (MFI) proizvođača Brightwell (Ottawa, CA) ili analizator čestica FLOWCAM<®>Image proizvođača Fluid Imaging Technologies (Yarmouth, ME). U jednom aspektu, veličina čestica u preparatu anti-α4β7 antitela je oko 30 µm, oko 25 µm, oko 10 µm, oko 5 µm, oko 2 µm ili 1 µm ili manja. Količina čestica treba da bude što manja u formulacijama antitela. U jednom aspektu, količina čestica u formulaciji anti-α4β7 antitela je < 6000 čestica prečnika ≥ 10 µm i/ili < 600 čestica prečnika ≥ 25 µm u jednoj dozi (SAD farmakopeja, pogl.788, brojanje metodom slabljenja svetla; polovina ovih količina za metodu mikroskopske kvantifikacije). U drugom aspektu, količina čestica u dozi formulacije anti-α4β7 antitela je oko 1000 čestica ≥10 µm i oko 0-100 čestica ≥25 µm (MFI metoda). U još jednom aspektu, količina čestica po mililitru, npr., merena pomoću MFI, u dozi formulacije anti-α4β7 antitela je oko 500 do oko 2000 čestica veličine 2-10 µm po ml, oko 50 do oko 350 čestica veličine ≥10 µm po ml i oko 0 do oko 50 čestica veličine ≥25 µm po ml. U još jednom aspektu, količina čestica u dozi formulacije anti-α4β7 antitela je oko 500 do oko 100000, oko 1000 do oko 5000 ili oko 1500 do oko 3000 čestica veličine 2-10 µm po ml.
[0186] 2
[0187] Viskoznost formulacije anti-α4β7 antitela može da bude kontrolisana za subkutanu ili intramuskularnu primenu. Na viskoznost mogu da utiču koncentracija proteina i pH. Na primer, sa povećanjem koncentracije proteina, viskoznost može da se poveća. Povećanje pH može da smanji viskoznost formulacije anti-α4β7 antitela. U nekim formulacijama proteina, natrijum hlorid se dodaje kako bi se smanjila viskoznost formulacije. Dodatne komponente koje mogu da utiču na viskoznost formulacije anti-α4β7 antitela su aminokiseline kao histidin i arginin.
[0188] Formulacija anti-α4β7 antitela može da bude izotonična (npr., 250-350 mOsm) ili hipertonična (npr., veća od 350 mOsm, veća od 450 mOsm, veća od 550 mOsm ili veća od 650 mOsm), npr., za subkutanu ili intramuskularnu primenu. U jednom aspektu, formulacija antiα4β7 antitela nije hipotonična, npr., manje od 250 mOsm. U drugom aspektu, formulacija antiα4β7 antitela pokazuje vrednost oko 350 do oko 400 mOsm, oko 400 do oko 450 mOsm ili oko 350 do oko 450 mOsm.
[0189] Nestabilnost koja vodi denaturaciji može da bude procenjena pomoću diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC). Antitela imaju dve temperature topljenja (Tm) u DSC, npr., Tm1 i Tm2. Određeni ekscipijensi mogu da utiču na stabilnost nativnog anti-α4β7 antitela. Nalaz više temperature topljenja, pri poređenju formulacija pomoću DSC može da ukaže na stabilniju formulaciju anti-α4β7 antitela sa višom Tm. Na primer, na pH 5.7, Tm formulacije anti-α4β7 antitela je niža, i stoga je ona manje stabilna nego na pH 6.5. U jednom aspektu, Tm1 formulacije anti-α4β7 antitela je >60°C. U drugom aspektu, Tm1 formulacije anti-α4β7 antitela je oko 65 °C do oko 70°C ili oko 69°C. U jednom aspektu, Tm2 formulacije anti-α4β7 antitela je >80°C. U drugom aspektu, Tm2 formulacije anti-α4β7 antitela je oko 82°C do oko 88 °C ili oko 86°C.
[0190] U jednom primeru izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela ima afinitet vezivanja ili EC50 vrednost oko 60% do oko 140% referentnog standardnog anti-α4β7 antitela. U jednom aspektu, anti-α4β7 antitelo u formulaciji koja je ovde opisana vezuje se za α4β7, npr., na ćeliji (WO98/06248 ili SAD patent br. 7,147,851), sa vrednošću od oko 80% do oko 120% referentnog standarda. U drugom primeru izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela ima sposobnost da inhibira najmanje 50%, ili najmanje 60% vezivanja ćelije koja eksprimira integrin α4β7 za MAdCAM (npr., MAdCAM-1), npr., himerni molekul MAdCAM-Ig (videti SAD objavu patentne prijave br.20070122404, kao i za primere referentnog standarda).
[0191] Kao što je prethodno napomenuto, zamrzavanje formulacije je ovde specifično obuhvaćeno. Stoga, formulacija može da bude ispitana na stabilnost pri zamrzavanju i odmrzavanju. Prema tome, antitelo u tečnoj formulaciji može da bude stabilno pri zamrzavanju
[0194] 2
[0195] i odmrzavanju formulacije, na primer antitelo može da bude stabilno nakon jednog, dva, tri, četiri, pet ili više ciklusa zamrzavanja/odmrzavanja.
[0196] U nekim primerima izvođenja, farmaceutska formulacija je tečna formulacija koja sadrži najmanje oko 60 mg/ml do oko 170 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje (npr., histidin), i najmanje oko 5 mM citrata, kao što je dalje definisano u patentnim zahtevima. U drugim primerima izvođenja, formulacija je tečna formulacija koja sadrži najmanje oko 60 mg/ml do oko 170 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje (npr., citrat), aminokiselinu (npr., arginin) i površinski aktivnu supstancu (npr., polisorbat 80), kao što je dalje definisano u patentnim zahtevima.
[0197] U drugom primeru izvođenja, formulacija sadrži najmanje oko 140 mg/ml ili oko 150 mg/ml do oko 170 mg/ml, na primer, oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje (npr., histidin), najmanje oko 5 mM citrata i slobodnu aminokiselinu (npr., arginin) kao što je dalje definisano u patentnim zahtevima.
[0198] U još jednom primeru izvođenja, formulacija sadrži najmanje oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela, sredstvo za puferisanje (npr., histidin), najmanje oko 5 mM citrata, 0.2% polisorbata 80, i slobodnu aminokiselinu (npr., arginin). U jednom primeru izvođenja, koncentracija pufera u formulaciji je oko 15 do oko 75 mM, oko 25 do oko 65 mM, ili oko 50 mM. Koncentracija slobodne aminokiseline u formulaciji je oko 50 do oko 250 mM, oko 75 do oko 200 mM, oko 100 do oko 150 mM ili oko 125 mM; koncentracija polisorbata 80 u formulaciji je oko 0.05% do 0.4%, oko 0.1% do 0.4%, oko 0.1% do 0.3%, oko 0.1 % do 0.25%, oko 0.1 % do 0.2%, ili oko 0.2%.
[0199] U jednom primeru izvođenja, formulacija je liofilizovana i skladišti se kao pojedinačna doza u jednom kontejneru, npr., bočici, špricu, kertridžu, i/ili autoinjektoru. Kontejner može da bude skladišten na oko 2-8°C ili 25 °C do primene kod subjekta kome je to potrebno. Bočica može, na primer, da bude bočica od 5, 10 ili 20 kubnih centimetara (na primer za dozu od 160 mg/ml). Bočica može da sadrži najmanje oko 20 mg, najmanje oko 50 mg, najmanje oko 70 mg, najmanje oko 80 mg, najmanje oko 100 mg, najmanje oko 120 mg, najmanje oko 155 mg, najmanje oko 180 mg, najmanje oko 200 mg, najmanje oko 240 mg, najmanje oko 300 mg, najmanje oko 360 mg, najmanje oko 400 mg, najmanje oko 540 mg, ili najmanje oko 900 mg anti-α4β7 antitela. U jednom aspektu, kontejner sadrži oko 165 mg anti-α4β7 antitela.
[0200] [0121] Formulacija je tečna i može se skladištiti kao pojedinačna doza u jednoj ili dve bočice, kertridža, šprica, ili autoinjektora. Bočica, kertridž, špric, ili autoinjektor može da bude skladišten na oko 2-8°C dok se njegovi sadržaji, npr., anti-α4β7 antitelo, ne primene kod subjekta kome je to potrebno. Bočica može, na primer, da bude bočica od 5, 10 ili 20 kubnih centimetara (na primer za dozu od 160 mg/ml). Bočica može da sadrži najmanje oko 20 mg, najmanje oko 50 mg, najmanje oko 70 mg, najmanje oko 80 mg, najmanje oko 100 mg, najmanje oko 120 mg, najmanje oko 155 mg, najmanje oko 180 mg, najmanje oko 200 mg, najmanje oko 240 mg, najmanje oko 300 mg, najmanje oko 360 mg, najmanje oko 400 mg, najmanje oko 540 mg, ili najmanje oko 900 mg anti-α4β7 antitela. U jednom aspektu, bočica sadrži oko 165 mg anti-α4β7 antitela. Špric ili kertridž može da bude kontejner od 1 mL ili 2 mL (na primer za dozu od 160 mg/mL) ili više od 2 ml, npr., za veću dozu (najmanje 320 mg ili 400 mg ili veću). Špric ili kertridž može da sadrži najmanje oko 20 mg, najmanje oko 50 mg, najmanje oko 70 mg, najmanje oko 80 mg, najmanje oko 100 mg, najmanje oko 120 mg, najmanje oko 155 mg, najmanje oko 180 mg, najmanje oko 200 mg, najmanje oko 240 mg, najmanje oko 300 mg, najmanje oko 360 mg, najmanje oko 400 mg, ili najmanje oko 500 mg anti-α4β7 antitela.
[0201] Jedan ili više drugih farmaceutski prihvatljivih nosača, ekscipijenasa ili stabilizatora kao što su oni opisani kod Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Hendrickson, R. Ed. (2005) mogu da budu uključeni u formulaciji pod uslovom da nemaju negativan uticaj na željena svojstva formulacije. Prihvatljivi nosači, ekscipijensi ili stabilizatori su netoksični za one koji ih primaju u dozama i koncentracijama u kojima su primenjeni i uključuju; dodatna sredstva za puferisanje; ko-rastvarače; antioksidanse uključujući citrat i cistein; helirajuća sredstva kao što je EDTA; komplekse metala (npr., komplekse Zn-protein); biorazgradive polimere kao što su poliesteri; konzervanse; lubrikante za zid kontejnera, npr., silikon, mineralno ulje, glicerin, ili TRIBOGLIDE<®>(Tribo Film Research, Inc.) derivat perfluoropolietra, za olakšavanje injektovanja i/ili protiv-jone koji obrazuju soli kao što je natrijum.
[0203] α4β7 Antitela
[0204] Anti-α4β7 antitela pogodna za upotrebu u formulacijama uključuju antitela iz bilo kog željenog izvora, kao što su u potpunosti humana antitela, mišja antitela, zečja antitela i slično, i bilo koja željena antitela nastala inžinjeringom, kao što su himerna antitela, humanizovana antitela, i slično. Antigen-vezujući fragmenti bilo kog od ovih tipova antitela, kao što su Fab, Fv, scFv, Fab' i F(ab')<2>fragmenti, takođe su pogodni za upotrebu u formulacijama. Antitela su dalje definisana u patentnim zahtevima.
[0205] Anti-α4β7 antitelo može da se veže za epitop na α4 lancu (npr., humanizovano MAb 21.6 (Bendig et al., SAD pat. br. 5,840,299)), na β7 lancu (npr., FIB504 ili humanizovani derivat (npr., Fong et al., SAD pat. br. 7,528,236)), ili za kombinovani epitop obrazovan
[0208] 1
[0209] udruživanjem α4 lanca sa β7 lancem. U jednom aspektu, antitelo se vezuje za kombinovani epitop na kompleksu α4β7, ali se ne vezuje za epitop na α4 lancu ili β7 lancu, osim ako lanci nisu povezani jedan sa drugim. Udruživanje α4 integrina sa β7 integrinom može da stvori kombinovani epitop, na primer dovođenjem u blizinu rezidua prisutnih na oba lanca koje zajedno sačinjavaju epitop ili konformacionim izlaganjem na jednom lancu, npr., lancu α4 integrina ili lancu β7 integrina, vezivnog mesta u epitopu koje je nepristupačno za vezivanje antitela u odsustvu odgovarajućeg partnera integrina, ili u odsustvu aktivacije integrina. U drugom aspektu, anti-α4β7 antitelo se vezuje i za lanac α4 integrina i za lanac β7 integrina, i na taj način je specifično za kompleks α4β7 integrina. Takva antitela mogu da se vežu za α4β7 ali se ne vezuju za α4β1, i/ili za α<E>β7, na primer. U drugom aspektu, anti-α4β7 antitelo se vezuje za isti ili suštinski isti epitop kao Act-1 antitelo (Lazarovits, A. I. et al., J. Immunol., 133(4): 1857-1862 (1984), Schweighoffer et al., J Immunol., 151(2): 717-729, 1993; Bednarczyk et al., J Biol Chem., 269(11): 8348-8354, 1994). Ćelijska linija mišjeg hibridoma ACT-1, koja proizvodi mišje Act-1 monoklonsko antitelo, deponovana je prema odredbama Budimpeštanskog ugovora 22.08.2001, u ime Millennium Pharmaceuticals, Inc., 40 Landsdowne Street, Cambridge, Mass. 02139, SAD, u Američkoj kolekciji kultura sojeva, 10801 University Boulevard, Manassas, Va.20110-2209, SAD, pod pristupnim brojem PTA-3663. U drugom aspektu, anti-α4β7 antitelo je humano antitelo ili α4β7-vezujući protein u kome se koriste CDR regioni obezbeđeni u SAD objavi patentne prijave br.2010/0254975.
[0210] U jednom aspektu, anti-α4β7 antitelo inhibira vezivanje α4β7 za jedan ili više od njegovih liganda (npr. mukozni adresin, npr., MAdCAM (npr., MAdCAM-1), fibronektin, i/ili vaskularni adresin (VCAM)). MAdCAM primata (npr., MAdCAM-1) su opisani u PCT objavi WO 96/24673, čiji je celokupni sadržaj ovde obuhvaćen ovom referencom. U drugom aspektu, anti-α4β7 antitelo inhibira vezivanje α4β7 za MAdCAM (npr., MAdCAM-1) i/ili fibronektin bez inhibicije vezivanja za VCAM.
[0211] U jednom aspektu, anti-α4β7 antitela za upotrebu u formulacijama su humanizovane verzije mišjeg Act-1 antitela. Pogodni postupci za pripremu humanizovanih antitela su dobro poznati u stanju tehnike. Uopšteno, humanizovano anti-α4β7 antitelo će sadržati teški lanac koji sadrži 3 regiona koji određuju komplementarnost (CDRs, CDR1, SEQ ID NO:8, CDR2, SEQ ID NO:9 i CDR3, SEQ ID NO: 10) teškog lanca mišjeg Act-1 antitela i odgovarajuće okvirne regione humanog teškog lanca; i takođe sadrže laki lanac koji sadrži 3 CDR regiona (CDR1, SEQ ID NO:11, CDR2, SEQ ID NO:12 i CDR3, SEQ ID NO:13) lakog lanca mišjeg Act-1 antitela i odgovarajuće okvirne regione humanog lakog lanca. Humanizovano Act-1 antitelo može da sadrži bilo koje pogodne humane okvirne regione, uključujući konsenzus
[0214] 2
[0215] okvirne regione, sa ili bez aminokiselinskih supstitucija. Na primer, jedna ili više aminokiselina okvirnog regiona može da bude zamenjena drugom aminokiselinom, kao što je aminokiselina na odgovarajućoj poziciji u mišjem Act-1 antitelu. Humani konstantni region ili njegov deo, ako je prisutan, može da bude izveden iz κ ili λ lakih lanaca, i/ili γ (npr., γ1, γ2, y3, γ4), µ, α (npr., α1, α2), δ ili ε teških lanaca humanih antitela, uključujući alelne varijante. Određeni konstantni region (npr., IgG1), njegova varijanta ili delovi, mogu da budu odabrani u tom cilju da kreiraju efektorsku funkciju. Na primer, mutirani konstantni region (varijanta) može da bude ubačen u fuzioni protein da smanji vezivanje za Fc receptore i/ili sposobnost fiksacije komplementa (videti npr., Winter et al., GB 2,209,757 B; Morrison et al., WO 89/07142; Morgan et al., WO 94/29351, Dec.22, 1994). Humanizovane verzije Act-1 antitela su opisane u PCT objavama br. WO98/06248 i WO07/61679.
[0216] Anti-α4β7 humanizovana antitela za upotrebu u formulaciji pronalaska sadrže varijabilni region teškog lanca koja sadrži aminokiseline 20 do 140 u SEQ ID NO:2, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiseline 20 do 131 u SEQ ID NO:4 ili aminokiseline 21 do 132 u SEQ ID NO:5. Po želji, može da bude prisutan pogodan humani konstantni region(i). Na primer, humanizovano anti-α4β7 antitelo može da sadrži teški lanac koji sadrži aminokiseline 20 do 470 u SEQ ID NO:2 i laki lanac koji sadrži aminokiseline 21 do 239 u SEQ ID NO:5. U drugom primeru, humanizovano anti-α4β7 antitelo može da sadrži teški lanac koji sadrži aminokiseline 20 do 470 u SEQ ID NO:2 i laki lanac koja sadrži aminokiseline 20 do 238 u SEQ ID NO:4. Slika 4 prikazuje poravnanje koje poredi generičke lake lance humanih antitela sa mišjim antitelima. Poravnanje ilustruje da je humanizovani laki lanac vedolizumaba (npr., Chemical Abstract Service (CAS, American Chemical Society) registarski broj 943609-66-3), sa dve mišje rezidue zamenjene humanim reziduama, više human nego laki lanac LDP-02 (Slika 3). Osim toga, LDP-02 ima unekoliko hidrofobni, fleksibilni alanin 114 i hidrofilno mesto (Aspartat 115) koji su u vedolizumabu zamenjeni neznatno hidrofilnim treoninom 114 koji sadrži hidroksil i hidrofobnom reziduom valina 115 koja je potencijalno okrenuta ka unutra.
[0217] [0128] Dodatne supstitucije u sekvenci antitela mogu da budu, na primer, mutacije u okvirnim regionima teškog i lakog lanca, kao što su mutacija izoleucina u valin na rezidui 2 u SEQ ID NO: 14; mutacija metionina u valin na rezidui 4 u SEQ ID NO: 14; mutacija alanina u glicin na rezidui 24 u SEQ ID NO:15; mutacija arginina u lizin na rezidui 38 u SEQ ID NO:15; mutacija alanina u arginin na rezidui 40 u SEQ ID NO: 15; mutacija metionina u izoleucin na rezidui 48 u SEQ ID NO: 15; mutacija izoleucina u leucin na rezidui 69 u SEQ ID NO:15; mutacija arginina u valin na rezidui 71 u SEQ ID NO:15; mutacija treonina u izoleucin na rezidui 73 u SEQ ID NO:15; ili bilo koja njihova kombinacija; i zamena CDR regiona teškog lanca CDR regionima (CDR1, SEQ ID NO:8, CDR2, SEQ ID NO:9 i CDR3, SEQ ID NO: 10) mišjeg Act-1 antitela; i zamena CDR regiona lakog lanca CDR regionima lakog lanca (CDR1, SEQ ID NO:11, CDR2, SEQ ID NO:12 i CDR3, SEQ ID NO:13) mišjeg Act-1 antitela.
[0218] U nekim primerima izvođenja, anti-α4β7 humanizovana antitela za upotrebu u formulaciji sadrže varijabilni region teškog lanca koji ima oko 95%, 96%, 97%, 98%, ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinama 20 do 140 u SEQ ID NO:2, i varijabilni region lakog lanca koji ima oko 95%, 96%, 97%, 98%, ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinama 20 do 131 u SEQ ID NO:4 ili aminokiselinama 21 do 132 u SEQ ID NO:5. Identičnost aminokiselinske sekvence može da bude određena korišćenjem pogodnog algoritma za poravnanje sekvence, kao što su sistem Lasergene (DNASTAR, Inc., Madison, Wis.), korišćenjem podrazumevanih parametara. U primeru izvođenja, anti-α4β7 antitelo za upotrebu u formulaciji je vedolizumab (CAS, American Chemical Society, registracioni broj 943609-66-3).
[0219] Druga α4β7 antitela mogu takođe da se koriste u formulacijama i režimima doziranja koji su ovde opisani. Na primer, α4β7 antitela opisana u SAD 2010/0254975 (Amgen, Inc.), pogodna su za upotrebu u formulacijama i za formulacije koje se koriste u postupcima za lečenje zapaljenske bolesti creva kod pojedinca.
[0220] Anti-α4β7 antitelo može da bude proizvedeno ekspresijom sekvenci nukleinske kiseline koje kodiraju svaki lanac u živim ćelijama, npr., ćelijama u kulturi. Različiti sistemi domaćin-ekspresioni vektor mogu da se koriste za eksprimiranje molekula antitela pronalaska. Takvi sistemi ekspresije u domaćinu predstavljaju nosače pomoću kojih kodirajuće sekvence od interesa mogu da se proizvedu i zatim prečiste, ali predstavljaju i ćelije koje mogu, kada su transformisane ili transfekovane odgovarajućim nukleotidnim kodirajućim sekvencama, da eksprimiraju anti-α4β7 antitelo in situ. One uključuju, ali nisu ograničene na mikroorganizme kao što su bakterije (npr., E. coli, B. subtilis) transformisane rekombinantnom DNK bakteriofaga, ekspresionim vektorima sa plazmidnom DNK ili kozmidnom DNK koja sadrži sekvence koje kodiraju antitelo; kvasac (npr., Saccharomyces, Pichia) transformisan rekombinantnim ekspresionim vektorima kvasca koji sadrže sekvence koje kodiraju antitelo; sistemi insekatskih ćelija inficiranih rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr., bakulovirus) koji sadrže sekvence koje kodiraju antitelo; sistemi biljnih ćelija inficiranih rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr., mozaični virus karfiola, CaMV; mozaični virus duvana, TMV) ili transformisanih rekombinantnim plazmidnim ekspresionim vektorima (npr., Ti plazmid) koji sadrže sekvence koje kodiraju antitelo; ili sistemi sisarskih
[0223] 4
[0224] ćelija (npr., COS, CHO, BHK, 293, 3T3, NS0 ćelije) koje sadrže rekombinantne ekspresione konstrukte koji sadrže promotere izvedene iz genoma sisarskih ćelija (npr., metalotionein promoter) ili iz sisarskih virusa (npr., adenovirusni kasni promoter; 7.5K promoter virusa vakcinije). Na primer, spoj sisarskih ćelija kao što su ćelije ovarijuma kineskog hrčka (CHO), sa vektorom kao što je promoterski element glavnog intermedijarno-ranog gena humanog citomegalovirusa predstavlja efikasan ekspresioni sistem za antitela (Foecking et al., Gene 45:101 (1986); Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)).
[0225] U bakterijskim sistemima, brojni ekspresioni vektori mogu da budu pogono odabrani u zavisnosti od predviđene upotrebe molekula antitela koje se eksprimira. Na primer, kada treba da se proizvede velika količina takvih proteina, za proizvodnju farmaceutskih kompozicija molekula antitela, mogu da budu poželjni vektori koji upravljaju ekspresijom visokih nivoa proizvoda fuzionog proteina koji se lako prečišćavaju. Takvi vektori uključuju, ali bez ograničenja, E. coli ekspresioni vektor pUR278 (Ruther et al., EMBO J.2:1791 (1983)), u kome sekvenca koja kodira antitelo može da bude pojedinačno ubačena u vektor u isti okvir čitanja sa regionom koji kodira lac Z, tako da se proizvodi fuzioni protein; pIN vektori (Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, J Biol. Chem.
[0226] 24:5503-5509 (1989)); i slično. Vektori pGEX mogu takođe da se koriste za eksprimiranje stranih polipeptida kao fuzionih proteina sa glutation S-transferazom (GST). Uopšteno, takvi fuzioni proteini su rastvorni i mogu lako da se prečiste iz liziranih ćelija adsorpcijom i vezivanjem za matricu od glutation-agaroza perli, praćenim eluiranjem u prisustvu slobodnog glutationa. Vektori pGEX su dizajnirani da uključuju proteazna mesta razlaganja za trombin ili faktor Xa, tako da proizvod kloniranog ciljnog gena može da bude odvojen od GST fragmenta.
[0227] U insekatskom sistemu, virus nuklearne poliedroze (AcNPV) Autographa californica se koristi kao vektor za eksprimiranje stranih gena. Virus raste u ćelijama Spodoptera frugiperda. Sekvenca koja kodira antitelo može da bude pojedinačno klonirana u neesencijalne regione (na primer poliedrinski gen) virusa i stavljena pod kontrolu AcNPV promotera (na primer poliedrinskog promotera).
[0228] [0134] U sisarskim ćelijama-domaćinima, brojni ekspresioni sistemi zasnovani na virusima mogu da se koriste. U slučajevima kada se adenovirus koristi kao ekspresioni vektor, sekvenca koja kodira antitelo od interesa može da bude ubačena u adenovirusni kompleks koji kontroliše transkripciju/translaciju, npr., kasni promoter i trokomponentna vodeća sekvenca. Ovaj himerni gen može zatim da se ubaci u adenovirusni genom pomoću in vitro ili in vivo rekombinacije. Insercija u neesencijalni region virusnog genoma (npr., region E1 ili E3) će rezultovati u rekombinantnom virusu koji je vijabilan i sposoban da eksprimira molekul antitela u inficiranim domaćinima (npr., videti Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359 (1984)). Specifični inicijacioni signali mogu takođe da budu potrebni za efikasnu translaciju ubačenih sekvenci koje kodiraju antitelo. Ovi signali uključuju ATG inicijacioni kodon i susedne sekvence. Osim toga, inicijacioni kodon mora da bude u fazi sa okvirom čitanja željene kodirajuće sekvence da bi se osigurala translacija celog inserta. Ovi egzogeni translacioni kontrolni signali i inicijacioni kodoni mogu da budu različitog porekla, i prirodnog i sintetičkog. Efikasnost ekspresije može da se poveća uključivanjem odgovarajućih pojačivača transkripcije, transkripcionih terminatora, itd. (videti Bittner et al., Methods in Enzymol.
[0229] 153:51-544 (1987)).
[0230] Osim toga, soj ćelije-domaćina može da bude odabran tako da modulira ekspresiju ubačenih sekvenci, ili da modifikuje i obrađuje proizvod gena na specifičan način koji je poželjan. Takve modifikacije (npr., glikozilacija) i obrada (npr., sečenje) proteinskih proizvoda mogu da budu važne za funkcionisanje proteina. Različite ćelije-domaćini imaju osobene i specifične mehanizme post-translacione obrade i modifikacije proteina i genskih proizvoda. Odgovarajuće ćelijske linije ili sistemi domaćina mogu da se odaberu kako bi se osigurala ispravna modifikacija i obrada stranog proteina koji je eksprimiran. U tom cilju, mogu da se koriste eukariotske ćelije-domaćini koje imaju ćelijski mehanizam za ispravnu obradu primarnog transkripta, glikozilaciju, i fosforilaciju genskog proizvoda. Takve sisarske ćelijedomaćine uključuju, ali bez ograničenja, ćelije ovarijuma kineskog hrčka (CHO), NS0, HeLa, VERY, bubreg bebe-hrčka (BHK), majmunski bubreg (COS), MDCK, 293, 3T3, WI38, ćelije humanog hepatocelularnog karcinoma (npr., Hep G2), ćelijske linije kancera dojke kao što su, na primer, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 i T47D, i ćelijsku liniju normalne mlečne žlezde kao što je, na primer, CRL7030 i Hs578Bst.
[0231] [0136] Mehanizam glikozilacije različitih vrsta ćelija može da proizvede antitela sa drugačijom kompozicijom glikozilacije u odnosu na drugu vrstu ćelija, ili bez glikozilacije, kao u bakterijskim ćelijama. U jednom aspektu, vrste ćelija za proizvodnju anti-α4β7 antitela su sisarske ćelije, kao što su NS0 ili CHO ćelije. U jednom aspektu, sisarske ćelije mogu da sadrže deleciju enzima uključenog u ćelijski metabolizam i egzogeni gen od interesa može da bude operativno povezan sa zamenskim enzimom, npr., u konstruktu ili vektoru za uvođenje u ćelije, npr., transformacijom ili transfekcijom. Konstrukt ili vektor sa egzogenim genom donosi selektivnu prednost ćelijama koje nose konstrukt ili vektor kako bi se povećala proizvodnja polipeptida kodiranog egzogenim genom. U jednom primeru izvođenja, CHO ćelije su DG44 ćelije (Chasin and Urlaub (1980) PNAS SAD 77:4216), koje sadrže deleciju ili inaktivaciju gena za dihidrofolat reduktazu. U drugom primeru izvođenja, CHO ćelije su CHO K1 ćelije koje sadrže deleciju ili inaktivaciju gena za glutamin sintazu (videti, npr., SAD patent br. 5,122,464 ili 5,827,739).
[0232] Čvrste formulacije
[0233] Čvrste formulacije (nisu deo pronalaska) se uopšteno pripremaju sušenjem tečne formulacije. Bilo koji pogodan postupak za sušenje može se koristi, kao što je liofilizacija ili sušenje raspršivanjem. U jednom aspektu, lioprotektant se dodaje formulaciji pre liofilizacije. Liofilizacija uključuje zamrzavanje tečne formulacije, obično u kontejneru koji će se koristiti za skladištenje, otpremanje i distribuciju formulacije (npr., bočica, špric (npr., špric sa jednom ili dve komore), ili kertridž (npr., kertridž sa jednom ili dve komore) (Videti, npr., Gatlin and Nail u Protein Purification Process Engineering, ed. Roger G. Harrison, Marcel Dekker Inc., 317-367 (1994).) Jednom kada se formulacija zamrzne, atmosferski pritisak se snižava i temperatura se podešava da bi se omogućilo uklanjanje zamrznutog rastvarača npr., putem sublimacije. Ovaj korak postupka liofilizacije se ponekad naziva primarno sušenje. Po želji, temperatura tada može da se poveća da bi se uklonio sav rastvarač koji je još uvek vezan za suvu formulaciju isparavanjem. Ovaj korak postupka liofilizacije se ponekad naziva sekundarno sušenje. Kada formulacija dostigne željeni stepen suvoće, postupak sušenja je završen i kontejneri se tada zatvaraju. Finalna čvrsta formulacija se ponekad naziva "liofilizovana formulacija" ili "kolač." Postupak liofilizacije može da bude izveden korišćenjem bilo koje pogodne opreme. Pogodna oprema za liofilizaciju je dostupna iz brojnih komercijalnih izvora (npr., SP Scientific, Stone Ridge, NY).
[0234] Različite pogodne aparature mogu da se koriste za sušenje tečnih formulacija kako bi se proizvela čvrsta (npr., liofilizovana) formulacija. Uopšteno, liofilizovane formulacije pripremaju stručnjaci u oblasti korišćenjem zapečaćene komore sa policama na koje su smeštene bočice sa tečnom formulacijom koja treba da se osuši. Temperatura polica, kao i brzina hlađenja i zagrevanja može da se kontroliše, kao i pritisak u komori. Jasno je da se različiti parametri postupka koji su ovde diskutovani odnose na postupak izveden korišćenjem ovog tipa aparature. Osobe sa uobičajenim znanjem u ovoj oblasti mogu lako da prilagode parametre koji su ovde opisani drugim tipovima aparatura za sušenje po želji.
[0235] [0139] Pogodne temperature i vrednost vakuuma za primarno i sekundarno sušenje može lako da odredi stručnjak u oblasti. Uopšteno, formulacija se zamrzava na temperaturi od oko -30°C ili manje, kao što je -40°C ili - 50°C. Brzina hlađenja može da utiče na količinu i veličinu kristala leda u matrici. Primarno sušenje se uopšteno izvodi na temperaturi koja je oko 10°C, oko 20°C, oko 30°C, oko 40°C ili oko 50°C viša od temperature zamrzavanja. U jednom aspektu, uslovi primarnog sušenja mogu da se podese tako da se anti-α4β7 antitelo održava ispod temperature staklastog prelaza ili temperature kolapsa formulacije. Iznad temperature kolapsa, amorfna zamrznuta matrica može da teče (dolazi do kolapsa), sa rezultatom takvim da molekuli proteina mogu da ne budu okruženi rigidnom, čvrstom matricom, i molekuli proteina mogu da ne budu stabilni u matrici u kojoj je došlo do kolapsa. Takođe, može da bude teško u potpunosti osušiti formulaciju ukoliko dođe do kolapsa. Rezultujuće veće količine vlage u formulaciji mogu da vode većim brzinama degradacije proteina i smanjenja vremena tokom koga liofilizovani proizvod može da bude skladišten pre nego što njegov kvalitet opadne do neprihvatljivih nivoa. U jednom aspektu, temperatura police i pritisak u komori su odabrani tako da održavaju temperaturu proizvoda ispod temperature kolapsa tokom primarnog sušenja. Temperatura staklastog prelaza zamrznute formulacije može da se meri postupcima poznatim u stanju tehnike, npr., diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC). Temperatura kolapsa može da se meri postupcima poznatim u stanju tehnike, npr. mikroskopiranjem sušenja zamrzavanjem, optičkom koherentnom tomografijom. Korak sušenja može da ukloni najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70% ili više rastvarača. U jednom aspektu, primarni korak sušenja uklanja više od 80% rastvarača iz formulacije anti-α4β7 antitela.
[0236] Veličina bočice može da bude odabrana na osnovu površine koja će biti izložena polici i vakuumu tokom liofilizacije. Vreme sušenja je direktno proporcionalno visini kolača, tako da veličina bočice može da se izabere na osnovu visine kolača koja je ocenjena kao razumna. Bočica sa velikim prečnikom u odnosu na zapreminu može da obezbedi bolji kontakt sa policom za efikasni prenos toplote tokom ciklusa liofilizacije. Razblaženi rastvor antitela u velikoj zapremini tečnosti će zahtevati duže vreme sušenja. Neophodno je obezbediti ravnotežu između veličine bočice i zapremine formulacije, jer veće bočice mogu da budu skuplje za skladištenje i otpremanje i imaju veći odnos praznog prostora i formulacije, i mogu da izlože veliki udeo formulacije degradativnim efektima vlage tokom dugotrajnog skladištenja. Za dozu od 165 mg, veličina bočice za formulaciju anti-α4β7 antitela može da bude 3 mL, 5 ml ili 10 ml. U jednom aspektu, veličina bočice je 5 ml za rastvor od 160 mg/ml.
[0237] Principi izbora veličine kertridža ili šprica za liofilizaciju su slični kao i kod izbora bočice. Povećanje debljine kolača će takođe povećati vreme sušenja. Prečnik i veličina šprica ili kertridža mora da bude uravnotežena sa finalnom zapreminom formulacije. Veći prečnici mogu da povećaju brzinu upijanja vlage u liofilizovanom kolaču, povećavajući tako degradativne efekte vlage tokom skladištenja. Za dozu od 165 mg, zapremina formulacije antiα4β7 antitela može da bude 1 ml ili 2 mL. U jednom aspektu, veličina šprica ili kertridža je veća od 1 mL za rastvor od 160 mg/mL.
[0238] Nakon liofilizacije, bočica, špric ili kertridž mogu da se zapečate, npr., zapušavanjem, pod vakuumom. Alternativno, gas, npr., suvi vazduh ili azot, može da bude uveden u kontejner pre nego što se ovaj zapečati. Tamo gde je problem oksidacija, gas uveden u komoru za liofilizaciju može da sadrži gas koji usporava ili sprečava oksidaciju liofilizovanog proizvoda. U jednom aspektu gasovi su neoksigenisani gasovi, npr., azot, ili inertni gas, npr., helijum, neon, argon, kripton ili ksenon. U drugom aspektu, gas je azot ili argon.
[0239] Formulacija antitela za upotrebu u lečenju
[0240] U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje formulaciju za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili poremećaja kod subjekta, koji obuhvata primenu kod subjekta formulacije anti-α4β7 antitela koja je ovde opisana, u količini koja je efikasna u lečenju bolesti ili poremećaja, npr., kod ljudi. Humani subjekat može da bude odrasla osoba (npr., 18 godina ili starija), adolescent, ili dete. Humani subjekat može da bude osoba od 65 godina ili starija. Nasuprot alternativnim terapeutskim režimima doziranja, kod humanog subjekta starosti 65 godina ili starijeg, nisu potrebne nikakve modifikacije režima doziranja koji je ovde opisan, i može da bude primenjena uobičajena formulacija anti-α4β7 antitela koja je ovde opisana.
[0241] Subjekat je mogao da pokazuje nedostatak adekvatnog odgovora, gubitak odgovora, ili da bude netolerantan na lečenje imunomodulatorom, antagonistom TNF-α, ili njihovim kombinacijama. Pacijent je mogao prethodno da bude lečen najmanje jednim kortikosteroidom (npr., prednizonom) od zapaljenske bolesti creva. Neadekvatan odgovor na kortikosteroide odnosi se na znake i simptome perzistentno aktivnog oblika bolesti uprkos istoriji od najmanje jednog, 4-nedeljnog indukcionog režima koji je uključivao dozu ekvivalentnu sa 30 mg prednizona, dnevno, oralno tokom 2 nedelje, ili intravenski tokom 1 nedelje. Gubitak odgovora na kortikosteroide odnosi se na dva neuspela pokušaja da se smanji doza kortikosteroida ispod doze ekvivalentne sa 10 mg prednizona, dnevno, oralno. Netolerancija na kortikosteroide uključuje istoriju Kušingovog sindroma, osteopenje/osteoporoze, hiperglikemje, nesanice i/ili infekcije.
[0242] Imunomodulator može da bude, na primer, oralni azatioprin, 6-merkaptopurin, ili metotreksat. Neadekvatan odgovor na imunomodulator odnosi se na znake i simptome perzistentno aktivnog oblika bolesti uprkos istoriji od najmanje jednog, 8-nedeljnog režima oralne primene azatioprina (≥ 1.5 mg/kg), 6-merkaptopurina (≥0.75 mg/kg), ili metotreksata (≥12.5 mg/nedelja). Netolerancija na imunomodulator uključuje, ali bez ograničenja, mučninu/povraćanje, abdominalni bol, pankreatitis, anomalije LFT, limfopeniju, genetsku mutaciju TPMT i/ili infekciju.
[0243] Antagonist TNF-α, na primer, predstavlja sredstvo koje inhibira biološku akitivnost TNF-α, i poželjno se vezuje za TNF-α, kao što je monoklonsko antitelo, npr., REMICADE (infliksimab), HUMIRA (adalimumab), CIMZIA (certolizumab pegol), SIMPONI (golimumab) ili cirkulišući receptorski fuzioni protein kao što je ENBREL (etanercept). Neadekvatan odgovor na antagonist TNF-α odnosi se na znake i simptome perzistentno aktivnog oblika bolesti uprkos istoriji od najmanje jednog, 4-nedeljnog indukcionog režima od 5 mg/kg infliksimaba, IV, 2 doze s razmakom od najmanje 2 nedelje; jedna doza od 80 mg adalimumaba subkutano, nakon toga, jedna doza od 40 mg, s razmakom od najmanje dve nedelje; ili 400 mg certolizumab pegola subkutano, 2 doze s razmakom od najmanje 2 nedelje. Gubitak odgovora na antagonist TNF-α odnosi se na recidiv simptoma tokom terapije održavanja nakon prethodno postignutog kliničkog efekta. Netolerancija na antagoniste TNF-α uključuje, ali bez ograničenja, reakciju povezanu sa infuzijom, demijelinizaciju, srčanu insuficijenciju, i/ili infekciju.
[0244] Gubitak održavanja remisije, kako se ovde koristi za subjekte obolele od ulceroznog kolitisa, odnosi se na povećanje Mayo rezultata od najmanje 3 poena i modifikovanog Baron rezultata od najmanje 2.
[0245] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje formulacije anti-α4β7 antitela, kao što je definisano u patentnim zahtevima, koje (1) mogu da se vežu za integrin α4β7 in vitro i/ili in vivo; i (2) mogu da moduliraju aktivnost ili funkciju integrina α4β7, kao što je (a) funkcija vezivanja (npr., sposobnost integrina α4β7 da se veže za MAdCAM (npr., MAdCAM-1), fibronektin i/ili VCAM-1) i/ili (b) funkcija leukocitne infiltracije, uključujući angažovanje i/ili nakupljanje leukocita u tkivima (npr., sposobnost inhibiranja migracije limfocita u tkivo mukoze tankog creva). U jednom primeru izvođenja, antitelo u formulaciji može da se veže za integrin α4β7, i može da inhibira vezivanje integrina α4β7 za jedan ili više njegovih liganda (npr., MAdCAM (npr., MAdCAM-1), VCAM-1, fibronektin), inhibirajući tako leukocitnu infiltraciju tkiva (uključujući angažovanje i/ili nakupljanje leukocita u tkivima). U drugom primeru izvođenja, antitelo u formulaciji, kako je definisano u patentnim zahtevima, može da se veže za integrin α4β7, i može selektivno da inhibira vezivanje integrina α4β7 za jedan ili više njegovih liganda (npr., MAdCAM (npr., MAdCAM-1), VCAM-1, fibronektin), inhibirajući tako leukocitnu infiltraciju tkiva (uključujući angažovanje i/ili nakupljanje leukocita u tkivima). Takve formulacije anti-α4β7 antitela, kako je definisano u patentnim zahtevima, mogu da inhibiraju ćelijsku adheziju ćelija koje nose integrin α4β7 za vaskularne endotelijalne ćelije u mukoznim tkivima, uključujući tkiva povezana sa gastrointestinalnim traktom, limfoidne organe ili leukocite (posebno limfocite kao što su T ili B ćelije) in
[0248] 4
[0249] vitro i/ili in vivo. U još jednom primeru izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela predmetnog pronalaska, kako je definisano u patentnim zahtevima, može da inhibira interakciju α4β7 sa MAdCAM (npr., MAdCAM-1) i/ili fibronektinom. U još jednom primeru izvođenja, formulacija anti-α4β7 antitela predmetnog pronalaska, kako je definisano u patentnim zahtevima, može da inhibira interakciju α4β7 sa MAdCAM (npr., MAdCAM-1) i/ili fibronektinom selektivno, npr., bez inhibiranja interakcije α4β7 sa VCAM.
[0250] Formulacije anti-α4β7 antitela predmetnog pronalaska, kako je definisano u patentnim zahtevima, mogu da se koriste da moduliraju (npr., inhibiraju (smanje ili spreče)) funkciju vezivanja i/ili funkciju leukocitne infiltracije (npr., limfocitne, monocitne) integrina α4β7. Na primer, humanizovani imunoglobulini koji inhibiraju vezivanje integrina α4β7 za ligand (tj., jedan ili više liganda) mogu da budu primenjeni prema postupku za lečenje bolesti povezanih sa leukocitnom infiltracijom (npr., limfocitnom, monocitnom) tkiva (uključujući angažovanje i/ili nakupljanje leukocita u tkivima), naročito tkiva koja eksprimiraju molekul MAdCAM (npr., MAdCAM-1).
[0251] Efikasna količina formulacije anti-α4β7 antitela predmetnog pronalaska, kako je definisano u patentnim zahtevima (tj., jedna ili više) primenjuje se kod pojedinca (npr., sisara, kao što je čovek ili drugi primat) u cilju lečenja takve bolesti. Na primer, inflamatorne bolesti, uključujući bolesti koje su povezane sa leukocitnom infiltracijom gastrointestinalnog trakta (uključujući endotelijum povezan sa gastrointestinalnim traktom), drugih mukoznih tkiva, ili tkiva koja eksprimiraju molekul MAdCAM (npr., MAdCAM-1) (npr., tkiva povezana sa gastrointestinalnim traktom, kao što su venule u lamina propria tankog i debelog creva; i mlečna žlezda (npr., mlečna žlezda u laktaciji)), mogu da budu lečene prema predmetnom postupku. Slično, pojedinac koji ima bolest povezanu sa leukocitnom infiltracijom tkiva kao rezultat vezivanja leukocita za ćelije (npr., endotelijalne ćelije) koje eksprimiraju MAdCAM (npr., MAdCAM-1) može da se leči formulacijom predmetnog pronalaska.
[0252] U jednom primeru izvođenja, bolesti koje mogu da se leče prema tome uključuju zapaljensku bolest creva (IBD), kao što je ulcerozni kolitis, Kronova bolest, ileitis, celijakiju, netropski spru, enteropatiju povezana sa seronegativnim artropatijama, mikroskopski ili kolageni kolitis, eozinofilni gastroenteritis, ili paučitis nastao nakon proktokolektomije, i ileoanalnu anastomozu. U nekim primerima izvođenja, zapaljenska bolest creva je Kronova bolest ili ulcerozni kolitis. Ulcerozni kolitis može da pokazuje umereni do teški oblik aktivnosti ulceroznog kolitisa. Lečenje može da rezultuje u izlečenju mukoze kod pacijenata koji pate od umerenog do teškog oblika aktivnosti ulceroznog kolitisa. Lečenje može takođe da rezultuje u smanjenju, eliminaciji, ili smanjenju i eliminaciji upotrebe kortikosteroida kod pacijenta.
[0253] Druge bolesti koje mogu da se leče korišćenjem formulacija pronalaska su pankreatitis i insulin-zavisni dijabetes melitus. Objavljeno je da MAdCAM (npr., MAdCAM-1) eksprimiraju neki sudovi u egzokrinom pankreasu kod NOD (negojaznih dijabetičnih) miševa, kao i kod BALB/c i SJL miševa. Ekspresija MAdCAM (npr., MAdCAM-1) je navodno bila indukovana na endotelijumu ostrvaca pankreasa koja su u inflamatornom stanju kod NOD miša, i MAdCAM (npr., MAdCAM-1) je bio preovlađujući adresin eksprimiran u NOD endotelijumu ostrvaca u ranim stadijumima insulitisa (Hanninen, A., et al., J Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)). Lečenje NOD miševa bilo sa anti-MAdCAM ili anti-β7 antitelima sprečilo je razvoj dijabetesa (Yang et al., Diabetes, 46:1542-1547 (1997)). Dalje, primećeno je nakupljanje limfocita koji eksprimiraju α4β7 u ostrvcima, i MAdCAM-1 je bio uključen u vezivanje ćelija limfoma preko α4β7 za sudove u inflamatornim ostrvcima (Hanninen, A., et al., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)) ili za gastrointestinalni trakt u limfomu mantle ćelija (Geissmann et al., Am. J. Pathol., 153:1701-1705 (1998)).
[0254] Primeri zapaljenskih bolesti povezanih sa mukoznim tkivima koje mogu da se leče korišćenjem formulacije pronalaska uključuju holecistitis, holangitis (Adams and Eksteen Nature Reviews 6:244-251 (2006) Grant et al., Hepatology 33:1065-1072 (2001)), npr., primarni sklerozni holangitis, Behčetova bolest, npr., tankog creva, ili periholangitis (žučni kanal i tkivo koje okružuje jetru), i bolest grafta prema domaćinu (npr., u gastrointestinalnom traktu (npr., nakon transplantacije kosne srži) (Petrovic et al. Blood 103:1542-1547 (2004)). Kao što je viđeno kod Kronove bolesti, zapaljenje se često proširuje izvan mukozne površine, shodno tome, hronične zapaljenske bolesti, kao što su sarkoidoza, hronični gastritis, npr., autoimuni gastritis (Katakai et al., Int. Immunol., 14:167-175 (2002)) i druga idiopatska stanja mogu da budu podložna lečenju.
[0255] Pronalazak se takođe odnosi na postupak za inhibiranje leukocitne infiltracije mukoznog tkiva. Opis se takođe odnosi na postupak za lečenje kancera (npr., tumora pozitivnog na α4β7, kao što je limfom). Drugi primeri zapaljenskih bolesti povezanih sa mukoznim tkivima koje mogu da se leče korišćenjem formulacije pronalaska uključuju mastitis (mlečna žlezda) i sindrom iritabilnog kolona.
[0256] Bolesti ili patogeni čije etiologije koriste interakciju MAdCAM (npr., MAdCAM-1) i α4β7 mogu da se leče anti-α4β7 antitelom u formulaciji koja je ovde opisana. Primeri takvih bolesti uključuju poremećaje imunodeficijencije, kao one izazvane virusom humane imunodeficijencije (Videti, npr., WO2008140602).
[0257] [0156] Formulacija pronalaska se primenjuje u efikasnoj količini koja inhibitra vezivanje integrina α4β7 za njegov ligand. Za terapiju, efikasna količina će biti dovoljna da se postigne željeno terapeutsko (uključujući profilaktičko) dejstvo (kao što je količina dovoljna da smanji ili spreči vezivanje i/ili prenos signala posredovan integrinom α4β7, inhibirajući tako adheziju i infiltraciju leukocita i/ili povezane ćelijske odgovore). Efikasna količina anti-α4β7 antitela, npr., efikasan titar dovoljan da održi zasićenost, npr., neutralizaciju, integrina α4β7, može da izazove klinički odgovor ili remisiju zapaljenske bolesti creva. Efikasna količina anti-α4β7 antitela može da dovede do izlečenja mukoze u ulceroznom kolitisu ili Kronovoj bolesti. Formulacija pronalaska može da se primeni kao pojedinačna doza ili višestruke doze. Doziranje može da bude određeno postupcima poznatim u stanju tehnike i može da zavisi, na primer, od starosti pojedinca, osetljivosti, tolerancije i opšteg zdravstvenog stanja. Primeri načina primene uključuju topikalne puteve kao što su nazalna ili inhalaciona ili transdermalna primena, enteralne puteve, kao što su kroz cev za hranjenje ili supozitorija, i parenteralne puteve, kao što su intravenska, intramuskularna, subkutana, intraarterijska, intraperitonealna, ili intravitrealna primena. Pogodna doziranja antitela mogu da budu od oko 0.1 mg/kg telesne težine do oko 10.0 mg/kg telesne težine po tretmanu, na primer oko 2 mg/kg do oko 7 mg/kg, oko 3 mg/kg do oko 6 mg/kg, ili oko 3.5 do oko 5 mg/kg. U određenim primerima izvođenja, primenjena doza je oko 0.3 mg/kg, oko 0.5 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 2 mg/kg, oko 3 mg/kg, oko 4 mg/kg, oko 5 mg/kg, oko 6 mg/kg, oko 7 mg/kg, oko 8 mg/kg, oko 9 mg/kg, ili oko 10 mg/kg. Ukupna doza može da bude oko 22 mg, oko 50 mg, oko 72 mg, oko 125 mg, oko 165 mg, ili oko 432 mg. Ukupna doza može da bude najmanje 77 mg, najmanje 125 mg ili najmanje 356 mg. U jednom primeru izvođenja, ukupna doza je 165 mg. U drugom primeru izvođenja, ukupna doza je 108 mg. U drugom primeru izvođenja, ukupna doza je 216 mg.
[0258] Modeliranjem i simulacijama (program BERKELEY MADONNA™, Univerzitet u Kaliforniji) korišćenjem farmakokinetičkih (PK) podataka iz ispitivanja raspoloživosti antiα4β7 antitela tokom vremena nakon primene, mogu da se procene potencijalni režimi doziranja za subkutanu ili intramuskularnu primenu. PK podaci mogu da budu procenjeni za indukcione režime i režime održavanja. Još jedan pristup koji uključuje modeliranje je populaciona farmakokinetička/farmakodinamska analiza (NONMEM<®>alat za modeliranje nelinearnih mešanih dejstava, ICON plc, Dublin, Ireland). Mogu da se analiziraju i nivoi izloženosti i rezidualni nivoi.
[0259] Tipično, nakon što se dostigne zasićenost ciljnog molekula, npr., integrina α4β7, koncentracija antitela u krvi ima linearni odnos prema primenjenoj dozi. Anti-α4β7 antitelo koje se primeni subkutanim ili intramuskularnim putem ima oko 60% do oko 90% biološke raspoloživosti anti-α4β7 antitela koje je primenjeno intravenskim putem. U jednom primeru ovog odnosa, ako se pretpostavi da IV doza ima 100% biološke raspoloživosti, a nađeno je da
[0262] 4
[0263] subkutana doza ima 69.5% biološke raspoloživosti, tada intravenska doza od 300 mg može da odgovara dozi od 432 mg koja je subkutano primenjena. Prema tome, intravenska doza od 150 mg može da odgovara subkutanoj dozi od 216 mg pri relativnoj biološkoj raspoloživosti od 69.5%. Slično, ako je nađeno da subkutana doza ima 75% raspoloživosti i za intramuskularnu dozu je nađeno da ima 80% biološke raspoloživosti, tada, da bi odgovarala intravenskoj dozi od 300 mg, subkutana doza može da bude 400 mg, a intramuskularna doza može da bude 375 mg. Tabele 40-43 u primerima ilustruju ove odnose i obezbeđuju korisne doze i režime doziranja anti-α4β7 antitela.
[0264] U nekim aspektima, režim doziranja ima dve faze, indukcionu fazu i fazu održavanja. U indukcionoj fazi, antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment se primenjuje na način koji brzo obezbeđuje efikasnu količinu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta pogodnu za određene svrhe, kao što su indukovanje imunološke tolerancije na antitelo ili njegov antigenvezujući fragment ili za izazivanje kliničkog odgovora i ublažavanja simptoma zapaljenske bolesti creva. Kod pacijenta može da se primeni indukciona faza lečenja kada se prvi put leči anti-α4β7 antitelom, kada se leči nakon dugog odsustva terapije, npr., više od tri meseca, više od četiri meseca, više od šest meseci, više od devet meseci, više od jednu godinu, više od osamnaest meseci ili više od dve godine od terapije anti-α4β7 antitelom, ili tokom faze održavanja terapije anti-α4β7 antitelom, ukoliko je došlo do povratka simptoma zapaljenske bolesti creva, npr., do recidiva nakon remisije bolesti. U nekim primerima izvođenja, indukciona faza režima rezultuje u višoj vrednosti srednje minimalne preostale serumske koncentracije, npr., koncentracije neposredno pre sledeće doze, od srednje minimalne preostale serumske koncentracije u ravnotežnom stanju održavane tokom režima održavanja.
[0265] U fazi održavanja, antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment se primenjuje na način koji održava odgovor postignut indukcionom terapijom sa stabilnim nivoom antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta. Režim održavanja može da spreči povratak simptoma ili recidiv zapaljenske bolesti creva. Režim održavanja može da obezbedi pogodnost za pacijenta, npr., da bude jednostavan režim doziranja ili da ne zahteva česta putovanja zbog lečenja. U nekim primerima izvođenja, režim održavanja može da uključuje primenu anti-α4β7 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, npr., u formulaciji koja je ovde opisana, prema strategiji izabranoj iz grupe koja se sastoji od niske doze, primene koja nije česta, samoprimene i kombinacije svega prethodno pomenutog.
[0266] U jednom primeru izvođenja, npr., tokom indukcione faze terapije, režim doziranja obezbeđuje efikasnu količinu anti-α4β7 antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta u formulaciji koja je ovde opisana za uvođenje u remisiju zapaljenske bolesti creva kod humanog pacijenta.
[0267] U nekim primerima izvođenja, efikasna količina anti-α4β7 antitela je ona koja je dovoljna za postizanje srednje minimalne preostale serumske koncentracije anti-α4β7 antitela od oko 5 µg/ml do oko 60 µg/ml, oko 15 µg/ml do oko 45 µg/ml, oko 20 µg/ml do oko 30 µg/ml, ili oko 25 µg/ml do oko 35 µg/ml, do kraja indukcione faze. Trajanje indukcione faze može da bude oko četiri nedelje, oko pet nedelja, oko šest nedelja, oko sedam nedelja, ili oko osam nedelja lečenja. U nekim primerima izvođenja, indukcioni režim može da koristi strategiju odabranu iz grupe koja se sastoji od visoke doze, česte primene, i kombinacije visoke doze i česte primene anti-α4β7 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, npr., u formulaciji koja je ovde opisana. Indukciono doziranje može da bude jednom, ili više puta više od jednom dozom, npr., sa najmanje dve doze. Tokom indukcione faze, doza može da se primeni jednom dnevno, svaki drugi dan, dva puta nedeljno, jednom nedeljno, jednom na svakih deset dana, jednom na svake dve nedelje ili jednom svake tri nedelje. U nekim primerima izvođenja, indukcione doze se primenjuju u prve dve nedelje terapije anti-α4β7 antitelom. U jednom primeru izvođenja, indukciono doziranje može da bude jednom na početku lečenja (nulti dan) i jednom na oko dve nedelje nakon započinjanja lečenja. U drugom primeru izvođenja, trajanje indukcione faze je šest nedelja. U drugom primeru izvođenja, trajanje indukcione faze je šest nedelja i veći broj indukcionih doza se primenjuje tokom prve dve nedelje.
[0268] U nekim primerima izvođenja, npr., kada se započinje lečenje pacijenta sa ozbiljnom zapaljenskom bolešću creva (npr., kod pacijenata kod kojih nije uspela terapija sa anti-TNFα,), indukciona faza treba da traje duže nego kod pacijenata sa blagom ili umerenom bolešću. U nekim primerima izvođenja, indukciona faza kod pacijenta sa ozbiljnom bolešću može da traje najmanje 6 nedelja, najmanje 8 nedelja, najmanje 10 nedelja, najmanje 12 nedelja ili najmanje 14 nedelja. U jednom primeru izvođenja, indukcioni režim doziranja kod pacijenta sa ozbiljnom bolešću može da uključuju dozu u nultoj nedelji (početak lečenja), dozu u 2. nedelji i dozu u 6. nedelji. U drugom primeru izvođenja, indukcioni režim doziranja kod pacijenta sa ozbiljnom bolešću može da uključuju dozu u nultoj nedelji (početak lečenja), dozu u 2. nedelji i dozu u 6. nedelji i dozu u 10. nedelji.
[0269] U jednom primeru izvođenja, npr., tokom faze održavanja terapije, režim doziranja održava srednju minimalnu preostalu serumsku koncentraciju u ravnotežnom stanju, npr., koncentraciju platoa neposredno pre sledeće doze, od oko 5 do oko 25 µg/mL, oko 7 do oko 20 µg/mL, oko 5 do oko 10 µg/mL, oko 10 do oko 20 µg/mL, oko 15 do oko 25 µg/mL ili oko 9 do oko 13 µg/mL anti-α4β7 antitela. U drugom primeru izvođenja, režim doziranja npr., tokom faze održavanja terapije, održava srednju minimalnu preostalu serumsku koncentraciju u ravnotežnom stanju od oko 20 do oko 30 µg/mL, oko 20 do oko 55 µg/mL, oko 30 do oko
[0272] 4
[0273] 45 µg/mL, oko 45 do oko 55 µg/mL ili oko 35 do oko 40 µg/mL anti-α4β7 antitela. U drugom primeru izvođenja, režim doziranja npr., tokom faze održavanja terapije, održava dugoročnu srednju serumsku koncentraciju, npr., izloženost (npr., površina ispod krive koncentracijavreme) od oko 15 do oko 40 µg/mL, oko 10 do oko 50 µg/mL, oko 18 do oko 26 µg/mL, ili oko 22 do oko 33 µg/mL anti-α4β7 antitela. U još jednom primeru izvođenja, režim doziranja npr., tokom faze održavanja terapije, održava dugoročnu srednju serumsku koncentraciju, npr., izloženost (npr., površina ispod krive koncentracija-vreme) od oko 35 do oko 90 µg/mL, oko 45 do oko 75 µg/mL, oko 52 do oko 60 µg/mL ili oko 50 do oko 65 µg/mL anti-α4β7 antitela.
[0274] Finalni dozni oblik može da sadrži celokupnu dozu u oko 0.5 ml, u oko 1 ml, u oko 1.5 ml, u oko 2 ml, u oko 2.5 ml, u oko 3 ml formulacije antitela.
[0275] Finalni dozni oblik za intravensku primenu može da bude koncentracije od između oko 1.0 mg/ml do oko 1.4 mg/ml, oko 1.0 mg/ml do oko 1.3 mg/ml, oko 1.0 mg/ml do oko 1.2 mg/ml, oko 1.0 do oko 1.1 mg/ml, oko 1.1 mg/ml do oko 1.4 mg/ml, oko 1.1 mg/ml do oko 1.3 mg/ml, oko 1.1 mg/ml do oko 1.2 mg/ml, oko 1.2 mg/ml do oko 1.4 mg/ml, oko 1.2 mg/ml do oko 1.3 mg/ml, ili oko 1.3 mg/ml do oko 1.4 mg/ml. Finalni dozni oblik može da bude koncentracije od oko 0.6 mg/ml, 0.8 mg/ml, 1.0 mg/ml, 1.1 mg/ml, oko 1.2 mg/ml, oko 1.3 mg/ml, oko 1.4 mg/ml, oko 1.5 mg/ml, oko 1.6 mg/ml, oko 1.8 mg/ml ili oko 2.0 mg/ml.
[0276] Doza može da se primeni jednom nedeljno, jednom svake 2 nedelje, jednom svake 3 nedelje, jednom svake 4 nedelje, jednom svakih 6 nedelja, jednom svakih 8 nedelja ili jednom svakih 10 nedelja. Viša doza ili doza koja se češće primenjuje, npr., svaki drugi dan, jednom nedeljno, jednom svake 2 nedelje, jednom svake 3 nedelje ili jednom svake 4 nedelje može da bude korisna za uvođenje u remisiju aktivne bolesti ili za lečenje novog pacijenta, npr., za indukovanje tolerancije na anti- α4β7 antitelo. Doza jednom svake 2 nedelje, jednom svake 3 nedelje, jednom svake 4 nedelje, jednom svakih 5 nedelja, jednom svakih 6 nedelja, jednom svakih 8 nedelja ili jednom svakih 10 nedelja, može da bude korisna za preventivnu terapiju, npr., za održavanje remisije kod pacijenta sa hroničnom bolešću. U jednom aspektu, režim lečenja predstavlja lečenje nultog dana, oko 2. nedelje, oko 6. nedelje i svake 1 ili 2 nedelje nakon toga. U drugom aspektu, indukcioni režim lečenja predstavlja lečenje svakog drugog dana, do ukupno 6 tretmana.
[0277] Režim doziranja može da bude optimizovan tako da izazove klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta. U nekim primerima izvođenja, režim doziranja ne menja odnos CD4 prema CD8 u cerebrospinalnom fluidu pacijenata koji se leče.
[0278] U nekim aspektima, dugotrajna klinička remisija, na primer, klinička remisija koja se održava tokom najmanje dve, najmanje tri, najmanje četiri posete nadležnog lekara u toku
[0281] 4
[0282] perioda od šest meseci ili jedne godine nakon početka lečenja, može da se postigne optimizovanim režimom doziranja.
[0283] U nekim aspektima, dugotrajan klinički odgovor, na primer, klinički odgovor koji se održava tokom najmanje 6 meseci, najmanje 9 meseci, najmanje jedne godine, nakon početka lečenja, može da se postigne optimizovanim režimom doziranja.
[0284] Formulacija može da se primeni subkutano jednom ili višestrukim injekcijama. Na primer, zapremina pojedinačne injekcije može da bude u opsegu od oko 0.5 ml do oko 3 ml. U primeru izvođenja, zapremina pojedinačne injekcije može da bude oko 0.6 ml do oko 1.1 ml ili oko 1 ml do oko 3 ml. U jednom aspektu, zapremina pojedinačne injekcije je oko 1 ml. Prečnik igle koja se koristi za subkutanu primenu formulacije može da bude oko 25, oko 26, oko 27, oko 28, oko 29 ili oko 30 G.
[0285] Formulacija može se primeni intramuskularno jednom ili višestrukim injekcijama. Na primer, zapremina pojedinačne injekcije može da bude u opsegu od oko 0.5 ml do oko 5 ml. U primeru izvođenja, zapremina pojedinačne injekcije može da bude oko 2 ml do oko 5 ml, oko 0.6 ml do oko 1.1 ml ili oko 1 ml do oko 3 ml. U jednom aspektu, zapremina pojedinačne injekcije je oko 1 ml, oko 2 ml, oko 3 ml, oko 4 ml, ili oko 5 ml. Igla koja se koristi za intramuskularnu primenu formulacije može da bude oko 5/8", oko 7/8", oko 1", oko 1.25", oko 1.5", oko 2", ili oko 3". Prečnik igle može da bude između 20-22 G za intramuskularnu primenu.
[0286] U jednom aspektu, formulacija pronalaska se može upotrebljavati u postupku za lečenje humanog pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, gde postupak obuhvata korak primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema sledećem režimu doziranja: (a) početne doze od 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svaki drugi dan za šest doza; (b) nakon toga, sedma i sledeće doze od 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svake dve nedelje ili svake četiri nedelje po potrebi; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dodatno humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, u kome antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa
[0289] 4
[0290] aminokiselinskom sekvencom koja je prikazana u nastavku: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO:10, CDR3 SEQ ID NO:11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO: 13, CDR3 SEQ ID NO:14. pri čemu je antitelo dalje definisano u patentnim zahtevima.
[0291] U jednom aspektu, formulacija pronalaska se može upotrebljavati u postupku za lečenje humanog pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, gde postupak obuhvata korak primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region nehumanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema sledećem režimu doziranja: (a) početna intravenska doza od 300 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao intravenska infuzija; (b) nakon toga, sledeća druga intravenska doza od 300 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao intravenska infuzija na oko dve nedelje nakon početne doze; (c) nakon toga, počevši od šeste nedelje, treća i sledeće doze od 165 mg humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta kao subkutana injekcija svake nedelje, svake dve nedelje ili svake tri nedelje, po potrebi; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dodatno humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, u kome antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom koja je prikazana u nastavku: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO:10, CDR3 SEQ ID NO:11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo dalje definisano u patentnim zahtevima.
[0292] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može upotrebljavati u režimu doziranja za terapeutsko lečenje zapaljenske bolesti creva, gde režim doziranja obuhvata korak: primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region nehumanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema subkutanom ili intramuskularnom režimu doziranja koji održava srednju serumsku minimalnu preostalu koncentraciju u ravnotežnom stanju od oko 9 do oko 13 µg/mL antitela ili njegovog
[0295] 4
[0296] antigen-vezujućeg fragmenta; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dodatno humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, u kome antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom koja je prikazana u nastavku: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO: 10, CDR3 SEQ ID NO:11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO:12, CDR2 SEQ ID NO:13, CDR3 SEQ ID NO:14, kako je dalje opisano u patentnim zahtevima.
[0297] U drugom aspektu, formulacija pronalaska se može upotrebljavati u režimu doziranja za terapeutsko lečenje zapaljenske bolesti creva, gde režim doziranja obuhvata korak: primene kod pacijenta koji pati od zapaljenske bolesti creva, humanizovanog imunoglobulina ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji ima specifičnost vezivanja za humani integrin α4β7, gde humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment sadrži antigen-vezujući region nehumanog porekla i najmanje deo antitela humanog porekla, pri čemu se humanizovani imunoglobulin ili njegov antigen-vezujući fragment primenjuje kod pacijenta prema subkutanom ili intramuskularnom režimu doziranja koji održava serumske minimalne preostale koncentracije u ravnotežnom stanju od oko 35 do oko 40 µg/mL antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta; pri čemu režim doziranja izaziva klinički odgovor i kliničku remisiju zapaljenske bolesti creva kod pacijenta; i pri čemu dodatno humanizovani imunoglobulin ili antigen-vezujući fragment ima specifičnost vezivanja za kompleks α4β7, gde antigen-vezujući region sadrži tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona lakog lanca i tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR1, CDR2, i CDR3) varijabilnog regiona teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom koja je prikazana u nastavku: laki lanac: CDR1 SEQ ID NO:9, CDR2 SEQ ID NO:10, CDR3 SEQ ID NO:11; teški lanac: CDR1 SEQ ID NO: 12, CDR2 SEQ ID NO: 13, CDR3 SEQ ID NO:14, pri čemu je antitelo dalje definisano u patentnim zahtevima.
[0298] U nekim primerima izvođenja, postupak za lečenje, formulacija za upotrebljavanje u dozi ili režimu doziranja smanjuje verovatnoću da će pacijent razviti HAHA odgovor na antiα4β7 antitelo. Razvoj HAHA, npr., mereno pomoću antitela koja su reaktivna prema anti-α4β7 antitelu, može da poveća klirens anti-α4β7 antitela, npr., da smanji serumsku koncentraciju anti-α4β7 antitela, npr., snižavanjem broja anti-α4β7 antitela vezanih za integrin α4β7, čineći tako lečenje manje efikasnim. U nekim primerima izvođenja, da bi se sprečio HAHA, pacijent može da se leči indukcionim režimom praćenim režimom održavanja. U nekim primerima
[0301] 4
[0302] izvođenja, nema prekida između indukcionog režima i režima održavanja. U nekim primerima izvođenja, indukcioni režim obuhvata primenu višestrukih doza anti-α4β7 antitela kod pacijenta. Da bi se sprečio HAHA, pacijent može da se leči visokom početnom dozom, npr., najmanje 1.5 mg/kg, najmanje 2 mg/kg, najmanje 2.5 mg/kg, najmanje 3 mg/kg, najmanje 5 mg/kg, najmanje 8 mg/kg, najmanje 10 mg/kg ili oko 2 do oko 6 mg/kg, ili učestalim početnim primenama, npr., oko jednom nedeljno, oko jednom svake dve nedelje ili oko jednom svake tri nedelje, standardne doze kada se započinje lečenje anti-α4β7 antitelom. U nekim primerima izvođenja, upotreba u postupku za lečenje održava najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 90% ili najmanje 95% pacijenata HAHA-negativnim. U drugim primerima izvođenja, upotreba u postupku za lečenje održava pacijente HAHA-negativnim najmanje 6 nedelja, najmanje 10 nedelja, najmanje 15 nedelja, najmanje šest meseci, najmanje 1 godinu, najmanje 2 godine, ili tokom trajanja lečenja. U nekim primerima izvođenja, pacijenti, ili najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50% ili najmanje 60% pacijenata koji razviju HAHA održavaju nizak titar, npr., ≤125, anti-α4β7 antitela. U primeru izvođenja, upotreba u postupku za lečenje održava najmanje 70% pacijenata HAHA-negativnim najmanje 12 nedelja nakon početka lečenja anti-α4β7 antitelom.
[0303] [0177] Formulacija može da se primeni kod pojedinca (npr., čoveka) samostalno ili zajedno sa drugim sredstvom. Formulacija pronalaska može da se primeni pre, zajedno sa ili nakon primene dodatnog sredstva. U jednom primeru izvođenja, primenjuje se više od jedne formulacije koja inhibira vezivanje integrina α4β7 za njegove ligande. U takvom primeru izvođenja, može da se primeni sredstvo, npr., monoklonsko antitelo, kao što je anti-MAdCAM ili anti-VCAM-1 monoklonsko antitelo. U drugom primeru izvođenja, dodatno sredstvo inhibira vezivanje leukocita za endotelijalni ligand putem drugačijim od puta delovanja α4β7. Takvo sredstvo može da inhibira vezivanje, npr. limfocita koji eksprimiraju hemokinski (C-C motiv) receptor 9 (CCR9) za hemokin (TECK ili CCL25) koji eksprimira timus, ili sredstvo koje sprečava vezivanje LFA-1 za međućelijski adhezioni molekul (ICAM). Na primer, kao dodatak formulaciji predmetnog pronalaska primenjuje se anti-TECK ili anti-CCR9 antitelo ili mali molekul CCR9 inhibitor, kao što su inhibitori opisani u PCT objavi WO03/099773 ili WO04/046092, ili anti-ICAM-1 antitelo ili oligonukleotid koji sprečava ekspresiju ICAM. U još jednom primeru izvođenja, dodatni aktivni sastojak (npr., antiinflamatorno jedinjenje, kao što je sulfasalazin, azatioprin, 6-merkaptopurin, anti-inflamatorne supstance koje sadrže 5-aminosalicilnu kiselinu, drugo nesteroidno anti-inflamatorno jedinjenje, steroidno anti-inflamatorno jedinjenje, ili antibiotici koji se uobičajeno primenjuju za IBD (npr. ciprofloksacin, metronidazol), ili drugo biološko sredstvo (npr. antagonisti TNF alfa) može da se primeni u kombinaciji sa formulacijom predmetnog pronalaska.
[0304] U primeru izvođenja, doza leka za kombinovanu primenu može da bude s vremenom smanjena tokom perioda lečenja formulacijom koja sadrži anti-α4β7 antitelo. Na primer, pacijent koji se leči steroidom (npr. prednizonom, prednizolonom) na početku, ili pre, lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela bio bi podvrgnut režimu snižavanja doze steroida počevši već od 6 nedelja lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela. Doza steroida će biti smanjena za oko 25% u okviru 4-8 nedelja od započinjanja smanjenja, za 50 % na oko 8-12 nedelja i 75% na oko 12-16 nedelja smanjenja doze tokom lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela. U jednom aspektu, za oko 16-24 nedelja lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela, doza steroida može da se isključi. U drugom primeru, pacijent koji se leči anti-inflamatornim jedinjenjem, kao što je 6-merkaptopurin na početku, ili pre, lečenja formulacijom anti-α4β7 antitela bio bi podvrgnut režimu snižavanja doza anti-inflamatornog jedinjenja slično režimu smanjivanja za doziranje steroida, kao što je prethodno opisano.
[0305] U jednom primeru izvođenja, formulacija za upotrebu u postupku obuhvata subkutanu primenu ili intramuskularnu primenu efikasne količine formulacije pronalaska kod pacijenta. U drugom primeru izvođenja, formulacija može da bude pripremljena za samo-primenu. U jednom aspektu, suva formulacija može da bude rekonstituisana, npr., tečnošću kao što je prethodno opisano, za primenu injekcijom, npr. intravenskom, intramuskularnom ili subkutanom injekcijom.
[0306] Pronalazak se takođe odnosi na formulaciju za upotrebu u postupku za lečenje bolesti povezane sa leukocitnom infiltracijom tkiva koja eksprimiraju molekul MAdCAM (npr., MAdCAM-1). Postupak obuhvata primenu kod pacijenta kome je to potrebno efikasne količine formulacije anti-α4β7 antitela pronalaska. U primeru izvođenja, bolest predstavlja bolest grafta protiv domaćina. U nekim primerima izvođenja, bolest je bolest povezana sa leukocitnom infiltracijom tkiva kao rezultat vezivanja leukocita koji eksprimiraju integrin α4β7 za endotelijum povezan sa gastrointestinalnim traktom koji eksprimira molekul MAdCAM (npr., MAdCAM-1). U drugim primerima izvođenja bolest je gastritis (npr., eozinofilni gastritis ili autoimuni gastritis), pankreatitis, ili insulin-zavisni dijabetes melitus. U drugim primerima izvođenja, bolest je holecistitis, holangitis, ili periholangitis.
[0307] Pronalazak se takođe odnosi na formulaciju za upotrebu u postupku za lečenje zapaljenske bolesti creva kod pacijenta. U jednom primeru izvođenja, postupak obuhvata subkutanu primenu kod pacijenta efikasne količine formulacije anti-α4β7 antitela pronalaska. U nekim primerima izvođenja, zapaljenska bolest creva je ulcerozni kolitis ili Kronova bolest.
[0310] 1
[0311] U drugim primerima izvođenja, zapaljenska bolest creva je celijakija, enteropatija povezana sa seronegativnim artropatijama, mikroskopski ili kolageni kolitis, gastroenteritis (npr., eozinofilni gastroenteritis), ili paučitis.
[0312] U nekim primerima izvođenja, lečenje anti-α4β7 antitelom ne menja odnos limfocita CD4:CD8. Odnosi CD4:CD8 mogu da se mere u krvi, aspiratu limfnog čvora, i cerebrospinalnom fluidu (CSF). Odnosi limfocita CD4+:CD8+ u CSF kod zdravih pojedinaca su tipično veći od ili jednaki do oko 1. (Svenningsson et al., J. Neuroimmunol. 1995;63:39-46; Svenningsson et al., Ann Neurol. 1993; 34:155-161). Imunomodulator može da menja odnos CD4:CD8 do vrednosti manje od 1.
[0313] Proizvodni artikli
[0314] U drugom aspektu, pronalazak je proizvodni artikal koji sadrži farmaceutsku formulaciju predmetnog pronalaska i obezbeđuje uputstva za njenu upotrebu. Proizvodni artikal sadrži kontejner. Pogodni kontejneri uključuju, na primer, boce, bočice (npr., bočice sa dve komore, bočicu tečne formulacije sa ili bez igle, bočicu čvrste formulacije sa ili bez bočice tečnosti za rekonstituciju sa ili bez igle), špriceve (kao što su špricevi sa dve komore, prethodno napunjeni špricevi, auto-injektor), kertridže, i test-epruvete. Kontejner može da bude napravljen od različitih materijala kao što je staklo, metal ili plastika. Kontejner sadrži formulaciju i oznaku na njemu, ili povezanu sa njim, kontejner može da naznači uputstva za upotrebu. U drugom primeru izvođenja, formulacija može da bude pripremljena za samoprimenu i/ili sadrži uputstva za samo-primenu. U jednom aspektu, kontejner koji sadrži formulaciju može da bude bočica za pojedinačnu upotrebu. U drugom aspektu, kontejner koji sadrži formulaciju može da bude multidozna bočica, koja omogućava ponovljenu primenu (npr., od 2-6 primena) formulacije, npr., korišćenjem više od jednog dela rekonstituisane formulacije. Proizvodni artikal može dodatno da uključuje druge materijale poželjne sa komercijalne i korisničke tačke gledišta, uključujući druge pufere, razblaživače, filtere, igle, špriceve i dodatke za pakovanje sa uputstvima za upotrebu kao što je napomenuto u prethodnom odeljku.
[0315] U jednom primeru izvođenja, proizvodni artikal je špric sa iglom. Prečnik igle može da bude 25 G, 26 G, 27 G, 29 G, 30 G. Igla tankog zida, npr, 19 G ili 23 G, ili više, može da olakša injektovanje formulacije sa velikom viskoznošću. U jednom aspektu, prečnik igle je 27 G ili veći. Dužina igle može da bude pogodna za subkutanu primenu, i može da bude oko 1/2 inča (12.7 mm), oko 5/8 inča (15.9 mm) ili 1 inč (25.4 mm) duga (1 inč = 2.54 cm). U nekim primerima izvođenja, špric je prethodno napunjeni špric.
[0318] 2
[0319] Razvoj proizvoda u vidu prethodno napunjenog šprica
[0320] U nekim aspektima, postoji nekoliko karakteristika proizvoda koje su poželjne za proteinski proizvod (npr., anti-α4β7 antitelo) u prethodno napunjenom špricu (PFS) (npr., za upotrebu u primeni formulacije za subkutanu ili intramuskularnu dostavu leka). Korisno je uravnotežiti neke od karakteristika kako bi se ublažili konkurentski efekti. Na primer, kada je poželjna mala zapremina injekcije, može da bude poželjna visoka koncentracija proteina za formulaciju. Međutim, u slučaju visoke koncentracije proteina, može da dođe do veće brzine formiranja nečistoća (npr., agregirane nečistoće koje špric otpušta u formulaciju) i većih ručnih sila potrebnih za rukovanje špricom. Mala veličina igle korišćena zbog komfora za pacijenta na mestu injekcije može da zahteva veće sile za rukovanje špricom. Razumevanje toga kako na stabilnost i učinak proizvoda deluju parametri formulacije i šprica, kao što su koncentracija proteina, pH, i unutrašnji prečnik igle, pomaže razvoju proteinskog proizvoda (npr., anti-α4β7 antitelo u prethodno napunjenom špricu).
[0321] U jednom aspektu, postupak za razvoj proteinskog proizvoda (npr., anti-α4β7 antitela) za upotrebu u prethodno napunjenom špricu obuhvata uporedno menjanje parametara šprica i parametara formulacije, npr., na koordinisani način ili istovremeno. Ovo može da vodi boljem razumevanju opsega stabilnosti proteina i učinku proizvoda koji može da se očekuje od proteinskog proizvoda u prethodno napunjenom špricu, nego kada se svaki aspekt menja odvojeno ili u serijama.
[0322] [0187] Razvoj proizvoda u prethodno napunjenom špricu (npr., anti-α4β7 antitela) odnosi se na razumevanje toga da u jednom trenutku, postoji tečna formulacija u dodiru sa nekoliko komponenata prethodno napunjenog šprica (Slika 15). Na primer, formulacija može da bude u dodiru sa cilindrom šprica, koji može da bude konstruisan od stakla (npr., tipa I borosilikatnog stakla) ili plastike (npr., cikličnog olefinskog polimera (COP), cikličnog olefinskog kopolimera (COC), polipropilena ili politetrafluoroetilena). Formulacija može da bude u dodiru sa špricom, klipom i/ili poklopcem za vrh, koji mogu da budu elastomerni (npr., od istog ili različitih materijala (npr., plastike, kao što je polietilen, polistiren ili polipropilen, ili elastični, kao što je guma (prirodna, sintetička, butil) ili silikon)). Formulacija može da bude u dodiru sa lubrikantom koji se dodaje unutrašnjoj površini cilindra da bi se klip lakše kretao. Lubrikant može da bude, na primer, silikonsko ulje, mineralno ulje ili glicerin. U primeru izvođenja šprica sa pričvršćenom iglom, igla može da bude od legure metala (npr., igla od nerđajućeg čelika i adheziv upotrebljen da pričvrsti iglu na mestu). Kod proteinskog proizvoda u prethodno napunjenom špricu treba uzeti u obzir da je tečni proteinski rastvor u neposrednom dodiru sa jednim ili više od ovih komponenata šprica tokom roka trajanja proizvoda. I komponente formulacije i šprica mogu imaju uticaj na stabilnost proizvoda.
[0323] Parametri formulacije koji mogu da utiču na stabilnost proizvoda u prethodno napunjenom špricu uključuju koncentraciju proteina, pH, vrstu pufera, koncentraciju pufera, jonsku snagu, vrstu stabilizatora, i koncentraciju stabilizatora. Primeri stabilizatora za formulacije proteina uključuju, na primer, jonske soli, polisaharide, aminokiseline, antioksidanse, helirajuća sredstva, i površinski aktivne supstance kao što je opisano u prethodnim odeljcima.
[0324] Komponente šprica koje mogu da utiču na stabilnost proizvoda u prethodno napunjenom špricu uključuju, na primer, lubrikant, sastav klipa i poklopca za vrh, i nečistoće. Količina lubrikanta (npr., silionsko ulje na cilindru šprica) može da utiče na stabilnost proizvoda. Sastav klipa i poklopca za vrh, koji može da utiče na propustljivost za kiseonik ovih komponenti i dovede do otpuštanja supstanci iz ovih komponenata u proteinski proizvod (npr., formulaciju anti-α4β7 antitela) može takođe da utiče na stabilnost proizvoda. Ostali parametri šprica koji mogu da utiču na stabilnost proizvoda uključuju vrstu i/ili količinu nečistoća (npr., teški metal (npr., tungsten)) koji može da bude otpušten u formulaciju proizvoda (npr., iz cilindra (npr., stakleni cilindar) i/ili igle (npr., igla od nerđajućeg čelika)). (Videti takođe Ludwig et al. J.Pharm. Sci. 99:1721-1733 (2010); Nashed-Samuel et al., American Pharmaceutical Review Jan/Feb:74-80 (2011); Badkar et al. AAPS PharmSciTech 12:564-572)
[0325] Prethodno napunjeni špric može da bude injektovan ručno ili upotrebljen sa autoinjektorskim uređajem. Funkcionalno ispitivanje prethodno napunjenog šprica uključuje merenje sile oslobađanja klipa, sile potrebne za pokretanje klipa, i sile klizanja, sile potrebne da se injektuju sadržaji šprica konstantnom brzinom. Mehanički učinak prethodno napunjenog šprica može da zavisi od nekoliko parametara formulacije i šprica, kao što je viskoznost formulacije i količina lubrikanta (npr., silikonskog ulja) u špricu.
[0326] Nekoliko osobina proteinskih proizvoda u prethodno napunjenim špricevima i faktora formulacije ili šprica koji mogu da utiču na ove osobine proizvoda prikazani su u tabeli 1. Mnoge osobine proizvoda mogu da budu složena funkcija nekoliko parametara formulacije i šprica. Na primer, sila klizanja šprica je funkcija viskoznosti formulacije, mada viskoznost može da zavisi od nekoliko faktora formulacije, kao što su koncentracija proteina, koncentracije stabilizacije, i pH.
[0329] 4
[0330] Tabela 1: Osobine proizvoda za proteinske proizvode u prethodno napunjenim špricevima i potencijalna formulacija i parametri šprica koji mogu da utiču na ove osobine
[0332]
[0334] [0192] U jednom aspektu, površinski aktivna supstanca, kao što je polisorbat 20 ili polisorbat 80 može da se doda formulacijama proteina u prethodno napunjenim špricevima (npr., za sprečavanje adsorpcije i denaturaciju molekula proteina na dodirnim površinama tečnost/vazduh i/ili tečnost/lubrikant (npr., silikonsko ulje)). Površinska adsorpcija i denaturacija molekula proteina može da bude jedan mehanizam nukleacije golim okom nevidljivih i vidljivih proteinskih čestica. Dodatak površinski aktivne supstance u prethodno napunjen špric, na taj način, može da smanji obrazovanje golim okom nevidljivih i vidljivih čestica u proizvodima u prethodno napunjenom špricu. U jednom primeru izvođenja, mala količina površinski aktivne supstance može da emulzifikuje lubrikant (npr., kapljice silikonskog ulja u rastvoru i tako smanji obrazovanje golim okom nevidljivih i vidljivih čestica lubrikanta (npr., kapljice silikonskog ulja)) (Ludwig et al., supra). U drugom primeru izvođenja, količina površinski aktivne supstance u formulaciji je smanjena, zbog mogućih štetnih efekata velikih količina površinski aktivnih supstanci na formulacije proteina. Nečistoće peroksida prisutne u polisorbatima mogu da vode povećanju oksidacije proteina (Wang and Wang J. Pharm. Sci. 91:2252-2264 (2002)). Velike količine površinski aktivne supstance mogu da emulzifikuju značajnu količinu silikonskog ulja sa zidova šprica i vode povećanju funkcionalne sile klizanja tokom roka trajanja. Ispitivanja razvoja proizvoda treba da budu dizajnirana tako da ispitaju efekat menjanja nivoa površinski aktivne supstance i na stabilnost proizvoda i na učinak šprica.
[0335] Složene interakcije između parametara formulacije i šprica u sistemima protein/PFS su podložne ispitivanju ovih sistema korišćenjem pristupa „dizajnom do kvaliteta“ (QbD) ili dizajna eksperimenata (DOE). Ispitivanja mogu da budu dizajnirana tako da istovremeno menjaju parametre formulacije i šprica, kako bi se postiglo bolje razumevanje ovih složenih sistema. Ovo rezultuje u sveobuhvatnom pristupu razvoju proizvoda u prethodno napunjenom špricu. Tabela 2 prikazuje primer ulaznih parametara i nivoa koji mogu da se uključe u dizajn eksperimenta za proizvod u prethodno napunjenom špricu i primer analitičkog ispitivanja koje se koristi. U zavisnosti od vrste eksperimentalnog dizajna koji se koristi za ispitivanje QbD, broj eksperimenata može da bude od 9 za skrining dizajna do 81 za dizajn koji obuhvata sve faktore (sve moguće kombinacije). Što je veći broj eksperimenata, veći je broj interakcija između parametara proizvoda koje mogu da se razjasne. Kompjuterski program dizajniran za ova ispitivanja, na primer, program za interaktivnu statističku analizu JIMP<®>(Cary, NC), može da bude od pomoći za ispitivanja QbD. Ovo ispitivanje rezultuje u kvantitativnom razumevanju kako interakcija parametara formulacije i šprica utiče na osobine proizvoda.
[0337] Tabela 2: Primer eksperimentalnog dizajna za tečni proteinski proizvod u prethodno napunjenom špricu
[0339]
[0340]
[0343] Primer prediktivnog modela koji može da se dobije iz primera eksperimenta prikazanog u tabeli 2 dat je u nastavku teksta, gde su C<n>brojčane konstante.
[0344] Obrazovanje rastvornog agregata tokom vremena = C<0>+ C<1>[Koncentracija proteina] C<2>[Koncentracija proteina]<2>+ C<3>[pH] C<4>[Koncentracija površinski aktivne supstance] C<5>[Količina lubrikanta]
[0346] Brojni parametri šprica mogu da utiču na stabilnost i učinak proizvoda, tako da jedan primer izvođenja uključuje karakterizaciju toga, kako dozvoljene tolerancije u parametrima špriceva utiču na stabilnost i učinak proizvoda. Količina lubrikanta (npr., silikonskog ulja) na cilindru šprica može da varira 50-100% od šprica do šprica. Ovo variranje u količini može da utiče na nekoliko svojstava proizvoda kao što je prikazano u tabeli 1. Unutrašnji prečnik cilindra šprica može da varira od šprica do šprica što utiče na sile injektovanja. Za špriceve sa pričvršćenom iglom, unutrašnji prečnik igle može da varira od serije do serije ili od proizvođača do proizvođača, što će uticati na sile injektovanja. Korišćenjem pristupa QbD za ispitivanje kako parametri šprica utiču na učinak, prediktivni modeli mogu da se dobiju tako da mogu da se koriste za procenu kako dozvoljene tolerancije u parametrima šprica mogu da utiču na učinak proizvoda. Prediktivni modeli koji su dobijeni korišćenjem pristupa QbD mogu da se koriste za izbor parametara formulacije i šprica koji odgovaraju željenim osobinama proizvoda i za predviđanje stabilnosti i učinka proizvoda.
[0347] [0196] Prethodno napunjeni špric može da sadrži dodatak silikonske emulzije ili tungstena u formulaciji proteina. Primeri količina silikona koje mogu da budu prisutne u prethodno napunjenom špricu su u opsegu od oko 0.3 mg do oko 0.8 mg. U jednom aspektu, količina silikona koja može da bude prisutna u prethodno napunjenom špricu je oko 0.3 mg, oko 0.4 mg, oko 0.5 mg, oko 0.6 mg, oko 0.7 mg, ili oko 0.8 mg. U drugom aspektu, viskoznost formulacije će biti u opsegu od 2 do 60 cP (1 cP = 0.001 Pa.s), rezultujući u sili injektovanja od 5N do 80N pri brzini od 200 mm/min. U još jednom aspektu, viskoznost formulacije će biti u opsegu od 4 do 27 cP rezultujući u silama injektovanja od 10 N do 40 N pri brzini od 200 mm/min.
[0348] Pronalazak će biti jasniji pozivanjem na primere koji slede.
[0349] PROTOKOL ZA PRAVLJENJE FORMULACIJE
[0351] Rastvor anti-α4β7 antitela se podvrgava dijafiltraciji u sistemu za tangencijalnu filtraciju da bi dostigao specifikovanu koncentraciju u citratnom, histidinskom, argininskom puferu, zatim sakuplja i meša sa rastvorom polisorbata 80 u citratnom, histidinskom, argininskom puferu. Rastvor se skladišti na -70 °C u bocama od 2L ili 5L. Rastvor se zatim odmrzava i filtrira dva puta kroz filter od 0.2 µm. Približno 1.0 mL se puni u sterilisani špric i zatvara sterilisanim klipom (zapušačem). Formulacija se skladišti i finalni lek se otprema u špricevima na 2-8 °C.
[0352] PRIMERI PRIMER 1
[0353] PROIZVODNJA FORMULACIJE
[0354] Faktori
[0355] Koncentracije ekscipijensa
[0356] Ispitivano je obrazovanje agregata u formulaciji antitela. Model SEC agregata je razvijen iz eksperimentalnih podataka ispitivanja koncentracije proteina, pH, i molarnog odnosa površinski aktivna supstanca:protein. U opsegu pH od 6.0 do 6.5, obrazovanje agregata je bilo slično za molarni odnos polisorbata 80 prema proteinu u opsegu od 0.7 do 1.5. (Slika 6) Uopšteno, pri odnosima PS80:protein većim od 1.5, brzina obrazovanja agregata raste sa porastom pH. (Slika 7).
[0357] Izveden je eksperiment koji ispituje obrazovanje SEC agregata u prisustvu vazduha. Jedanaest različitih formulacija različitog sastava je stavljeno u borosilikatne bočice i zatvoreno elastomernim zatvaračima sa vazduhom u prostoru koji nije ispunjen proizvodom. Napravljen je identičan niz formulacija, i vazduh u prostoru bez proizvoda je zamenjen argonom. Uzorci su postavljeni na stabilnost na 40°C tokom dve nedelje. Svi uzorci sa vazduhom u prostoru bez proizvoda rezultovali su u velikim količinama agregata na kraju eksperimenta u poređenju sa istom formulacijom sa argonom u prostoru bez proizvoda.
[0358] Tabela 3
[0360]
[0363] Na osnovu ovih eksperimenata, predpostavljeno je da se SEC agregati obrazuju oksidacijom ili obrazovanjem disulfidne veze. Ispitivan je dodatak antioksidanasa i/ili helirajućih sredstava. Napravljena je formulacija koja sadrži 40 mM histidina, 90 mM arginina, i 160 mg/mL proteina sa molarnim odnosom polisorbata 80 prema proteinu od 1.5 na pH 6.6. Formulaciji je dodato, 25 mM citrata, 5 mM citrata, 5 mM EDTA, 25 mM cisteina, ili 5 mM cisteina. Sva 3 dodatna ekscipijensa su smanjila obrazovanje agregata (slika 8). Dodatak antioksidanasa i/ili helirajućih sredstava je rangiran po redu učinka kao citrat>EDTA>cistein. Dodatak 5 ili 25 mM citrata je smanjio obrazovanje SEC agregata u poređenju sa kontrolnom formulacijom.
[0364] Izveden je eksperiment za određivanje dejstava pH, koncentracije proteina, koncentracije citrata, koncentracije histidina i molarnog odnosa polisorbata 80 prema proteinu. Vrednost pH je menjana od 6.0 do 6.3, koncentracija proteina je menjana od 60 do 160 mg/mL, koncentracija citrata je menjana od 0 do 25 mM, koncentracija histidina je menjana od 25 do 50 mM, i molarni odnos polisorbata 80 prema proteinu je menjan od 0.7 do 1.5. Formulacije su napunjene u duge špriceve od 1 ml 27G 1/2" (0.55 /- 0.2 mg silikona). Sve formulacije su sadržale približno 125 mM arginina.
[0365] [0203] Stabilnost je ispitivana na 40°C tokom dve nedelje, korišćenjem CEX i SEC. Rezultati (slika 9 i tabela 4) pokazuju smanjenje obrazovanja agregata u prisustvu 25 mM citrata u formulaciji, dok je povećanje koncentracije proteina povećalo obrazovanje agregata. Količina monomera pokazuje suprotne trendove obrazovanju agregata na 25 °C i 40 °C, dok je na 5 °C količina monomera suštinski nepromenjena sve do 24 meseca (tabela 5).
[0366] Još jedan niz formulacija je ispitivao brzinu obrazovanja SEC agregata u prisustvu 40-63 mM citrata, ali bez histidina na 40 °C, 25 °C, 5 °C. Brzina obrazovanja agregata u ovim formulacijama bila ja blago povišena u odnosu na formulacije sa histidinom na 40 °C. Međutim, na 5 °C, brzina obrazovanja agregata u formulacijama sa citratom i bez histidina bila je uporediva sa formulacijama koje sadrže citrat i histidin (tabela 6). Takođe na 5 °C, količina monomera je suštinski nepromenjena sve do 24 meseca (tabela 7).
[0367]
[0370] 
[0371]
[0374] 
[0375]
[0378] 
[0379]
[0380] Nekoliko pH eksperimenata je izvedeno da bi se odredili efekti pH na degradaciju praćenu pomoću CEX na 5 °C. Formulacija antitela vedolizumab sadržala je 160 mg/ml antiα4β7 antitela, 125 mM arginina, 50 mM histidina, i 25 mM citrata. Nekoliko različitih nivoa pH, 6.3, 6.5, 6.7 i 6.9 su ispitivani na stabilnost na 40°C, 25°C, i 5°C.
[0381] Modeli CEX na 40°C pokazuju (SLIKA 10) da pH najviše utiče na CEX degradaciju. Vrednost pH formulacija koje sadrže histidin opada sa povećanjem temperature, međutim pokazalo se da na pH citratnih formulacija ne utiče temperatura (SLIKA 11). Definisano je da formulacija sa histidinom/citratom ima dobru stabilnost na pH od 6.8 na 40 °C nakon 1 nedelje, 6.3-6.5 na 25 °C nakon 6 meseci i 6.3-6.5 na 5 °C nakon 6 meseci. Na osnovu dodatnih ispitivanja, stabilnost formulacija bila je slična na 25°C i 5°C za pH opseg od 6.2 do 6.9 (tabele 8 i 9).
[0382]
[0383]
[0384]
[0385] PRIMER 2
[0386] STABILNOST
[0387] Četiri različite formulacije anti-α4β7 antitela su ispitane na stabilnost tokom dvanaest meseci. Formulacije koje imaju pH od 6.0-6.2 pokazale su približno 1-2% manje glavnih vrsta od formulacija koje imaju pH od 6.3-6.4 (SLIKA 12). Formulacije koje imaju pH od 6.3-6.4 pokazale su manje od 1% promene u baznim ili glavnim vrstama na 5 °C.
[0388] Deset različitih formulacija anti-α4β7 antitela je ispitano na stabilnost pomoću SEC tokom dvanaest meseci (tabela 10). Formulacije sa koncentracijom proteina od 60 mg/mL i koje sadrže 25 mM citrata imale su promenu količine agregata od 0.1-0.2% nakon 1 godine, dok su formulacije koje sadrže 160 mg/mL proteina i 25 mM citrata pokazale povećanje količine agregata od 0.2-0.3% tokom 1 godine. Postojalo je povećanje od 0.4-0.6% količine agregata za formulacije koje sadrže 60, 110, ili 160 mg/mL proteina bez citrata.
[0391]
[0393] PRIMER 3
[0394] VISKOZNOST
[0396] [0209] Sila injektovanja potrebna da bi se farmaceutska formulacija primenila povezana je sa viskoznošću formulacije. Napravljene su formulacije sa varirajućim pH i varirajućim koncentracijama proteina, arginina, histidina, citrata, saharoze i polisorbata 80. Ispitana je viskoznost ovih formulacija. Razvijen je statistički model Ln (viskoznost). Model je pokazao da je viskoznost uglavnom pod uticajem koncentracije proteina i pH (slika 13). Saharoza, histidin i arginin takođe mogu da imaju mali efekat na viskoznost. U nekim proteinskim formulacijama, natrijum hlorid se dodaje da bi se smanjila viskoznost formulacije. Poznato je, međutim, da efekat natrijum hlorida na viskoznost zavisi od proteina i formulacije.
[0397] Natrijum hlorid je dodat u formulaciju koja sadrži 140 mg/ml vedolizumaba, 125 mM arginina, 25 mM histidina, 25 mM citrata, i polisorbata 80 pri molarnom odnosu polisorbata 80 prema proteinu od 1.5, i pH vrednosti od 6.4. NaCl nije imao nikakav efekat na viskoznost formulacije.
[0398] Efekti viskoznosti na silu injektovanja različitih špriceva koji su ispitivani su prikazani na slikama 16A i 16B.
[0399] PRIMER 4
[0400] POSTUPCI
[0401] Katjonska jonoizmenjivačka hromatografija (CEX)
[0402] Gradijent fosfata/natrijum hlorida na slaboj katjonskoj izmenjivačkoj koloni korišćen je u sistemu za tečnu hromatografiju visokih performansi za razdvajanje naelektrisanih vrsta u formulacijama anti-α4β7 antitela i određivanje sastava naelektrisanja vrsta antitela. Kisele izoforme eluiraju pre glavne izoforme, a bazne izoforme eluiraju nakon glavne izoforme.
[0403] Podaci o stabilnosti za formulaciju vedolizumaba nastali korišćenjem testa CEX ukazali su na to da je % glavne izoforme bio iznad 55.0%.
[0404] Kapilarno izoelektrično fokusiranje (cIEF)
[0406] Postupak cIEF se izvodi korišćenjem cIEF sistema za detekciju sa celom kolonom iCE280 (Convergent Biosciences, Toronto, Ontario). Izbor amfolita može da bude kao što je preporučio proizvođač, ili može da bude kombinacija komercijalno dostupnih amfolita. Korisna kombinacija je smeša 3-10 i 5-8 PHARMALYTE™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ).
[0407] Podaci o stabilnosti za formulaciju vedolizumaba nastali korišćenjem testa cIEF su ukazali na to da je % glavne izoforme bio oko 53%, % kiselih vrsta oko 42% i % baznih vrsta oko 5%.
[0408] Ekskluziona hromatografija (SEC)
[0410] Postupak SEC se izvodi korišćenjem analitičke SEC kolone (Tosoh Bioscience, LLC, King of Prussia, PA). Mobilna faza je fosfatno-puferisani fiziološki rastvor i apsorbanca se prati na 280 nm.
[0413] 1
[0414] Podaci o stabilnosti za formulaciju vedolizumaba nastali korišćenjem testa SEC pokazali su da je % monomera bio 99.0%, % agregata je bio <0.5% i % supstanci niske molekulske težine je bio <1.0%.
[0415] Test SDS-PAGE
[0416] Test SDS-PAGE se izvodi korišćenjem Tris-Glicin gela proizvođača Invitrogen (Carlsbad, CA), 4-20% za redukujuće stanje i 4-12% za neredukujuće stanje. Uzorak rekonstituisane formulacije antitela se razblažuje u puferu za tečnu formulaciju, zatim razblažuje u odnosu jedan prema dva sa Tris-Glicin SDS puferom za uzorak (2X, Invitrogen) bilo sa 10% 2-merkaptoetanolom (redukujući pufer za uzorak) ili bez 2-merkaptoetanola (neredukujući pufer za uzorak). Uzorci su kratko zagrevaju i nanose na gel uporedo sa markerom molekulske težine (Invitrogen). Gelovi se boje koloidnom „coomassie“ plavom bojom (Invitrogen) prema uputstvu proizvođača. Trake proteina se ispituju denzitometrijski da bi se identifikovao % teškog i lakog lanca za redukujuće gelove i % IgG za neredukujuće gelove.
[0417] Efikasnost vezivanja
[0418] Ćelije HuT78 (ćelije humanog T ćelijskog limfoma, Američka kolekcija kultura sojeva, Manassas, VA) suspendovane u 1% BSA u PBS, sa 0.01% natrijum azidom, dovedene su u kontakt sa serijskim razblaženjima primarnog antitela testa. Nakon inkubacije na ledu, ćelije se opranu i obrade fluorescentno obeleženim sekundarnim antitelom. Nakon sledećeg pranja, ćelije se fiksiraju i suspenduju u FACS reagensu za analizu pomoću protočne citometrije (Becton Dickinson Franklin Lakes, NJ); videti takođe SAD patent br.7,147,851.
[0419] Vlaga prema Karl Fišeru
[0420] Formulacija se titrira metanolom za kulometrijsko određivanje sadržaja vlage prema Karl Fišeru.
[0421] PRIMER 5
[0422] Efekti silikona iz špriceva prethodno napunjenih formulacijom anti-α4β7 antitela
[0423] Subkutana formulacija koja se sastoji od 60-160 mg/mL anti-α4β7 proteina u puferu koji sadrži L-histidin, L-arginin hidrohlorid, citrat i polisorbat 80 korišćena je za proučavanje efekata silikona na stabilnost proteinskih formulacija i osobine sistema kontejner/zatvarač. Ispitivanje je izvedeno sa punjenjem od 0.5 mL.
[0424] Ispitani su parametri, uključujući koncentraciju proteina, molarni odnos polisorbata 80 prema proteinu i količinu silikona koja je naprskana na cilindre šprica. Opseg svakog od ulaznih parametara prikazan je u tabeli 11.
[0427] 2
[0428] Tabela 11. Opsezi ulaznih parametara
[0431]
[0434] Dizajn eksperimenta je korišćen za određivanje niza formulacija za ispitivanje. Razuman broj formulacija se nalazi u opsegu od 6 do 8 formulacija. Primer formulacija koje su ispitane prikazan je u tabeli 12.
[0435] Tabela 12
[0437]
[0440] Neke kontrole mogu da se dodaju nizu formulacija i ispitaju na nekoliko odabranih vremenskih tačaka.
[0441] Ove formulacije su postavljene u test stabilnosti na nekoliko različitih temperatura (npr., 5°C, 25°C/60%RH, 40°C/75% RH) i uzorkovane u različitim vremenskim tačkama (npr., 0 nedelja, 1 nedelja, 2 nedelje, 4 nedelje, 8 nedelja, 12 nedelja, 6 meseci i 12 meseci) za ispitivanje. Kontrole su ispitane na 0 nedelja, 12 nedelja, 6 meseci i 12 meseci.
[0442] Ispitivanja koja su izvedena u svakoj vremenskoj tački testa stabilnosti uključuju SEC, CEX, Instron, MFI i kvantifikaciju silikona. Za test Instron, ispitan je 1 špric, sa izdvojenim materijalom korišćenim za SEC, CEX, merenja sile injektovanja i mikrofluidnu vizuelizaciju (MFI) i kvantifikaciju silikona.
[0443] PRIMER 6
[0444] Ispitivanje komponenti prethodno napunjenog šprica napunjenog formulacijom anti-α4β7 antitela
[0445] Ovo ispitivanje je istraživalo koliko različiti proizvođači špriceva, elastomernih materijala za klip (zapušač), i količina PS80 u formulaciji utiču na mehanička svojstva sistema i stabilnost formulacije.
[0446] Dizajn eksperimenta je napravljen tako da ispituje 3 različita proizvođača šprica, 2 vrste različitih materijala klipa (zapušača), i 2 različita molarna odnosa PS80 prema proteinu. Ostatak formulacije je održavan konstantnim na 170 mg/mL proteina, 125 mM arginina, 50 mM histidina, 25 mM citrata i pH od 6.5. Veličina igle na ovim prethodno napunjenim špricevima bila je 27G ½' ili 29G ½" tankog zida. Detalji izvedenih eksperimenata su dati u tabeli 15.
[0447] Ulazne vrednosti eksperimentalnog dizajna za aktivni deo eksperimenta su prikazane u nastavku teksta u tabeli 13, dok su konstante prikazane u tabeli 14. Eksperimentalni dizajn je stvoren korišćenjem ulaznih vrednosti prikazanih u tabeli 13.
[0448] Lista eksperimenata je prikazana u tabeli 10.
[0450] Tabela 13. Promenljive DOE i nivoi sa aktivnom formulacijom
[0453]
[0456] Tabela 14. Konstante za aktivnu formulaciju
[0459]
[0463] 4
[0464] Tabela 15. Eksperimentalni detalji
[0467]
[0469] U koncentrovanu formulaciju anti-α4β7 antitela dodat je polisorbat 80 i formulacija je razblažena do 170 mg/mL. Sastav polazne formulacije prikazan je dole u tabeli 16.
[0471] Tabela 16. Detalji pufera polazne formulacije
[0474]
[0476] Za razblaživanje materijala do željenog sastava formulacije, napravljeni su stok rastvori PS80 u 25 mM citratu, 50 mM histidinu, 125 mM argininu, pH 6.48.
[0478] Tabela 17. Detalji stok rastvora
[0481]
[0483] ema razblaživanja za formulacije detaljno je prikazana u tabeli 18.
[0485] Tabela 18. Detalji razblaživanja
[0488]
[0489] Mešanje se izvodi prema šemi razblaživanja, i težina polazne formulacije treba da se izmeri, dok ostali stok rastvori mogu da se pipetiraju volumetrijski. Formulacije se filtriraju. Po 0.5 mL formulacije se rasporedi u toliko dugačkih špriceva od 1 mL koliko je moguće. Špricevi se zapušavaju mašinom za zatvaranje sa mehurom od 2-4 mm. Za svaku vremensku tačku, jedan špric je skladišten iglom nadole i jedan špric je skladišten postrance. Dodatni špricevi su skladišteni iglom nadole.
[0490] Špricevi su ispitivani na 5, 25 i 40 °C, 2. nedelje i nakon jednog meseca. Analitičko ispitivanje (izgled, Instron, pH, osmolalnost, gustina, viskoznost, SEC, CEX, i Brightwell) je izvedeno na početku i zatim ponovo na 2 nedelje na 25 i 40 °C i na 4 nedelje na 25 °C.
[0491] PRIMER 7
[0492] Ispitivanje sistema zatvaramja kontejnera za subkutanu primenu korišćenih u špricevima sa 27 G iglom tankog zida prethodno napunjenim formulacijom anti-α4β7 antitela
[0494] Ovo ispitivanje istražuje kako različiti modeli špriceva sa iglom tankog zida 27G i različiti proizvođači i modeli klipa (zapušača) utiču na mehanička svojstva sistema i stabilnost formulacije tokom vremena.
[0495] Ispitivanje istražuje kako na stabilnost subkutane tečne formulacije anti-α4β7 u prethodno napunjenom špricu i mehanička svojstva šprica utiče proizvođač šprica i model klipa (zapušača) za špriceve sa 27GTW iglom. Podaci dobijeni ovim ispitivanjem mogu da odrede komponente sistema kontejner/zatvarač za tečnu subkutanu anti-α4β7 formulaciju.
[0496] Ulazne vrednosti eksperimentalnog dizajna su prikazane u nastavku teksta u tabeli 19, dok su konstante prikazane u tabeli 20. Eksperimentalni dizajn je stvoren korišćenjem ulaznih vrednosti prikazanih u tabeli 19.
[0497] Lista eksperimenata za izvođenje je prikazana u tabeli 21.
[0498] Tabela 19. Promenljive DOE i nivoi sa aktivnom formulacijom
[0501]
[0503] Tabela 20. Konstante za aktivnu formulaciju
[0506]
[0507]
[0509] Tabela 21. Detalji eksperimenta
[0512]
[0515] U koncentrovanu anti-α4β7 formulaciju dodaje se polisorbat 80 i formulacija se razblaži do 160 mg/mL. Sastav polazne formulacije je prikazan dole u tabeli 22.
[0516] Tabela 22. Detalji pufera polazne formulacije
[0519]
[0521] Za razblaživanje materijala do željenog sastava formulacije, napravljeni su stok rastvori PS80 u 25 mM citratu, 50 mM histidinu, 125 mM argininu, pH 6.3.
[0523] Tabela 23. Detalji stok rastvora
[0526]
[0528] ema razblaživanja za formulacije detaljno je prikazana u tabeli 24.
[0529] Tabela 24. Detalji razblaživanja
[0532]
[0535] Mešanje se izvodi prema šemi razblaživanja, i težina polazne formulacije treba da se izmeri, dok ostali stok rastvori mogu da se pipetiraju volumetrijski. Formulacije se filtriraju. Po 0.5 mL formulacije se rasporedi u toliko dugačkih špriceva od 1 mL koliko je moguće. Špricevi se zapušavju mašinom za zatvaranje sa mehurom od 2-4 mm. Za svaku vremensku tačku, jedan špric je skladišten iglom nadole (horizontalna pozicija).
[0536] Špricevi su ispitivani na 5 °C, 25 °C/60% RH, i 40 °C/75% RH na 1 mesec, 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci (izborno), 12 meseci, 18 meseci i 24 meseca.
[0537] Tečna formulacije su analitički ispitivane (koncentracija, osmolalnost, pH, Instron, MFI, SEC, i/ili CEX) na 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24 meseca (5°C); 1, 3, 6, 9, 12, 18 meseci (25°C); 1, 3, 6, 9, 12 meseci (40°C); i 1, 3 meseca (40°C).
[0538] PRIMER 8
[0539] Ispitivanje subkutane formulacije anti-α4β7 antitela u plastičnim prethodno napunjenim špricevima
[0540] Ovo ispitivanje je namenjeno da istraži upotrebu plastičnih špriceva kao sistema kontejner/zatvarač za subkutanu formulaciju anti-α4β7 antitela. Ispitana je stabilnost reprezentativne subkutane formulacije anti-α4β7 antitela u plastičnim prethodno napunjenim špricevima- kandidatima. Podaci dobijeni ovim ispitivanjem pomažu da se proceni primenljivost korišćenja plastičnog šprica za tečnu subkutanu formulaciju anti-α4β7 antitela.
[0541] Uzorci za test stabilnosti su pripremljeni kao što je dole prikazano. Ispitivanja stabilnosti su izvedeni pod uslovima skladištenja od 40 °C/75% RH, 25 °C/60% RH, i 5 °C.
[0542] Dve vrste plastičnih špriceva i jedan stakleni špric (kontrola) u tabeli 25 su ispitivani sa tečnom subkutanom formulacijom anti-α4β7 antitela prikazanom u tabeli 26. Tabela 27 prikazuje detalje svakog niza uzoraka koji treba da se ispitaju u eksperimentu.
[0543] Tabela 25. Plastični špricevi
[0546]
[0547]
[0550] Tabela 26. Subkutana formulacija anti-α467 antitela (pH 6.5)
[0553]
[0555] Za ovo ispitivanje se koristi prethodno pripremljena tečna subkutana anti-α4β7 formulacija. Formulacije se filtriraju. Filtrirani rastvor se uzorkuje za ispitivanje kvaliteta kao uzorak "pre punjenja" (izgled, MFI, DLS). Po 0.5 mL formulacije se raspoređuje u plastične špriceve od 1 mL. Špricevi se zapušavaju pomoću vakuumske mašine za zapušavanje. Špricevi se skladište iglom nadole.
[0556] Početna provera se izvodi da bi se izmerio pH, osmolalnost, gustina, viskoznost i koncentracija proteina. Analitičko ispitivanje (izgled, SEC (agregati, monomer, LMW), CEX (kiseli, glavni, bazni), sila klizanja, MFI, DLS, i/ili težina) izvodi se nakon 1 nedelje, na 40 °C, 2 nedelje, 40 °C, 1 meseca, 5, 25 i 40 °C, 3 meseca, 5 i 25 °C, 6 meseci na 5 i 25 °C, 9 meseci na 5 i 25 °C, i 12 meseci na 5 i 25 °C.
[0557] Uzorci se uzimaju na 1 mesec, 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci i 12 meseci na 5 °C i 25 °C. Uzorci se uzimaju na 1 nedelju, 2 nedelje i 1 mesec na 40 °C.
[0558] Primer 9:
[0559] Ispitivan je izgled uzoraka, sila injektovanja, SEC, CEX, i mikrofluidna vizuelizacija na 5 °C i 25 °C u različitim vremenskim tačkama koje su mogle da uključuju 0, 1, 3, 6, i 12 meseci. Stabilnost formulacije merena pomoću SEC i CEX bila je slična onome o čemu je diskutovano u primerima 1 i 2. Za ispitivanje sile injektovanja, merena je sila klizanja (tabela 28). Statistički model je odredio da je jedini statistički značajan faktor koji utiče na silu klizanja bio proizvođač šprica, gde je A imao veće sile klizanja od B, koje su bile veća od C (slika 17). Promene sile klizanja špriceva tokom 12 meseci na 5 °C i 6 meseci na 25 °C su bile manje od 10 N, ali uglavnom manje od 5 N.
[0560] Tabela 28
[0563]
[0566] PRIMER 10
[0567] Ispitivanje komponenata prethodno napunjenog šprica korišćenih kod špriceva sa iglom tankog zida od 27 G napunjenih formulacijom anti-α4β7 antitela
[0568] Ovo ispitivanje je istraživalo kako su različiti proizvođači šprica sa iglom tankog zida od 27 G i različiti proizvođači klipa (zapušača) i elastomerni materijali uticali na mehanička svojstva sistema prethodno napunjenog šprica i stabilnost formulacije tokom vremena.
[0569] Tri različita proizvođača šprica i 4 različita modela klipa (zapušača) su ispitivana sa iglama tankog zida 27G ½" i formulacijom koja sadrži 160 mg/mL proteina, 125 mM arginina, 50 mM histidina, 25 mM citrata, 0.2% PS80, na pH 6.5. Svi napravljeni i ispitivani uzorci su prikazani u tabeli 29.
[0570] Tabela 29. Detalji eksperimenta
[0573]
[0576] Ispitivan je izgled uzoraka, sila injektovanja, SEC, CEX, i mikrofluidna vizuelizacija na 5 °C, 25 °C i 40 °C u različitim vremenskim tačkama koje su mogle da uključuju 0, 1, 3, 6, i 12 meseci. Stabilnost formulacije merena pomoću SEC i CEX bila je slična onome o čemu je diskutovano u primerima 1 i 2. Za ispitivanje sile injektovanja, merena je sila potrebna za pokretanje klipa i sila klizanja. Rezultati za početnu vremensku tačku su prikazani u tabeli 30.
[0578] Tabela 30
[0580]
[0584] 1
[0585]
[0587] Statistički model je pokazao da su proizvođači šprica A i C bili slični i imali manje sile klizanja od proizvođača B, dok je klip (zapušač) E imao neznatno veću silu klizanja od ostalih klipova (zapušača).
[0588] Uopšteno, početne sile potrebne za pokretanje klipa su bile slične između svih uzoraka koji su ispitivani.
[0589] Nakon 12 meseci na 5 °C, 25 °C, i 40 °C, sile klizanja se nisu značajno izmenile. Međutim, sila potrebna za pokretanje klipa za špriceve sa klipom (zapušačem) F se povećala za 12 meseci na 25 °C i 40 °C.
[0590] PRIMER 11
[0591] Ispitivanje formulacije anti-α4β7 antitela u prethodno napunjenim špricevima
[0592] Ovo ispitivanje određuje kako menjanje nivoa koncentracije proteina, koncentracije polisorbata 80, koncentracije citrata i pH utiče na formulacije anti-α4β7 antitela u formatu prethodno napunjenog šprica.
[0593] Deo eksperimentalnog dizajna je stvoren u JMP sa frakcionim faktorskim dizajnom sa dva nivoa koncentracije proteina (60 do 160 mg/mL), pH (6.0 do 6.3), molarnog odnosa polisorbat 80:protein (0.723 do 1.5) i koncentracije citrata (0 do 25 mM). Ove formulacije imaju konstantnu vrednost koncentracije histidina (50 mM) i arginina (125 mM) (formulacije 1-8). Varijacije ovih formulacija sa 25 mM histidina su dodate (formulacije 9-10).
[0594] Dodatni niz formulacija je razvijen da bi se istražile formulacije bez histidina i samo sa citratom koji ima ulogu pufera (formulacije 11-16). Nivoi ulaznih vrednosti za sve formulacije koje su ispitivane su prikazani u tabeli 31. Konstante korišćene za sve formulacije su prikazane u tabeli 32.
[0595] Tabela 31. Promenljive DOE i nivoi
[0598]
[0602] 2
[0603]
[0605] Tabela 32. Konstante
[0608]
[0610] Tabela 33 navodi formulacije za ispitivanje.
[0613]
[0615] Svaka formulacija je napravljena iz polazne stok formulacije koja sadrži anti-α4β7 antitelo i razblažena različitim stok rastvorima ekscipijensa. U cilju postizanja razumnih zapremina razblaženja, korišćeni stok rastvor anti-α4β7 antitela je prikazan u tabeli 34. Dve različite TFF operacije su izvedene za postizanje formulacije TFF 1 i 2. Deo TFF 1 se koristi u dijalizi za dobijanje formulacije obeležene sa "Dijaliza".
[0616] Tabela 34. Detalji pufera polazne formulacije
[0619]
[0622] Za razblaživanje materijala do željenog sastava formulacije, stok rastvori svakog ekscipijensa u vodi su napravljeni u koncentracijama prikazanim u tabeli 35.
[0623] Tabela 35. Detalji stok rastvora
[0626]
[0628] ema razblaženja za formulacije je detaljno prikazana u tabeli 36 i 37.
[0629] Tabela 36. Detalji razblaženja
[0632]
[0636] 4
[0637]
[0639] Tabela 37. Detalji razblaženja
[0642]
[0644] Mešanje se izvodi prema šemi razblaženja, i težina polazne formulacije se odmeri, dok se ostali stok rastvori pipetiraju volumetrijski. Formulacije se filtriraju. Po 0.5 mL formulacije se raspodeli u toliko dugih špriceva od 1 mL koliko je moguće. Špricevi se zapušavaju mašinom za zatvaranje. Špricevi se čuvaju iglom nadole.
[0645] Tečne formulacije se ispituju analitički (izgled, pH, osmolalnost, gustina, DLS, SEC, CEX, i/ili Brightwell) početno, i na 1 nedelju, 40 °C, 2 nedelje, 40 °C, 1 mesec 25 i 40 °C, 2 meseca, 5 i 25 °C, 3 meseca, 5 i 25 °C, 6 meseci, 5 i 25 °C, 9 meseci, 5 i 25 °C, i 12 meseci, 5 i 25 °C. Takođe su izvedena specifična uzorkovanja formulacije prema tabeli 38.
[0646]
[0647]
[0650] PRIMER 12
[0651] Formulacija koja sadrži 160 mg/mL proteina, 50 mM histidina, 25 mM citrata, 125 mM arginina na pH 6.5 je ispitana na stabilnost ili u staklenom špricu, ili u dva različita plastična COP šprica. Na 5 °C i 25 °C nakon 12 meseci, količina agregata i monomera je bila uporediva između plastičnih špriceva i staklenog šprica.
[0652] Tabela 39
[0654]
[0655] Primer 13: Biološka raspoloživost vedolizumaba primenjenog subkutanom i intramuskularnom injekcijom (referentni primer)
[0656] Faza I ispitivanja biološke raspoloživosti vedolizumaba primenjenog subkutanom i intramuskularnom injekcijom kod zdravih subjekata muškog pola je završena. Ukupno 42 zdrava subjekta muškog pola su bila uključena u ispitivanje. Subjekti su bili podeljeni u tri grupe (subkutana, intramuskularna i intravenska primena) od po 14 subjekata svaka. Subjektima je dato 180 mg vedolizumaba jednog dana. Doza je rekonstituisana iz liofilizovane formulacije od 60 mg/ml antitela u 50 mM histidina, 125 mM arginina, 0.06% polisorbata 80, 10% saharoze, na pH 6.3. Za subjekte u intramuskularnoj i subkutanoj grupi, doza je bila podeljena na dve injekcije po 1.5 ml svaka. Krv je uzorkovana da bi se odredila koncentracija vedolizumaba u plazmi, i biološka raspoloživost vedolizumaba u svakoj grupi subjekata je određena.
[0657] Nisu prijavljeni neželjeni događaji ili značajne infekcije, klinički značajne abnormalnosti, pozitivne subjektivno/objektivne RAMP liste za proveru, niti klinički značajni nalazi ECG.
[0658] PK/PD modelovanje i simulacija je urađena da bi se odredila doza i režimi ekstravaskularnih doza koji rezultuju u sličnim izloženostima kao kod intravenskih doza u cilju održavanja ovih željenih serumskih koncentracija na minimalnim preostalim nivoima.
[0659] Apsorpcioni profil (SLIKA 18) je pokazao da se koncentracije intramuskularnih i subkutanih doza uglavnom preklapaju. Nema uočljivih velikih razlika u apsorpcionim profilima ovih puteva primene. Apsolutna biološka raspoloživost vedolizumaba nakon SC injekcije bila je približno 75%, a nakon IM injekcije bila je približno 80%.
[0660] Primer 14. Modelovanje subkutanih doznih režima
[0661] PK/PD modelovanje i simulacija je urađena da bi se odredila doza i režimi ekstravaskularnih doza koji rezultuju u sličnim izloženostima kao kod intravenskih doza u cilju održavanja određenih željenih serumskih koncentracija na minimalnim preostalim nivoima.
[0662] Konačni kombinovani skup podataka (podaci o IV, SC i IM) je pokazao dvokompartmentne linearne modele parametrizovane po klirensu (CL) i centralnom volumenu distribucije (V2), perifernom volumenu distribucije (V3), konstanti brzine apsorpcije zavisne od ekstra-vaskularnog puta (KA) i relativnoj biološkoj raspoloživosti (u poređenju sa intravenskom primenom) ekstra-vaskularnih doza (F). Faktori IIV su bili uključeni u CL, V2 i V3 sa telesnom težinom kao jedinom kovarijansom koja utiče na CL i V3 putem alometrijskog efekta.
[0663] Prihvatljivost i prediktabilnost modela je pokazana putem butstrep-postupaka ocena parametra, vizuelnih provera predviđenih parametara i dobre usaglašenosti grafičkog prikaza. Analiza modela je identifikovala telesnu težinu kao prognostički faktor za PK vedolizumaba sa promenljivošću PK pripisanom među-subjekatskim i unutar-subjekatskim činiocima.
[0664] Jednom kada je pokazano da je model adekvatan za simulaciju, simulacije su izvođene u cilju procene efekta puta primene (IV, IM ili SC), i procene efekta učestalosti doziranja (nedeljno, svake 2 nedelje, svake 4 nedelje, i svakih 8 nedelja) na minimalne preostale koncentracije u ravnotežnom stanju. Na osnovu vrednosti i relativne biološke raspoloživosti vedolizumaba nakon IM i SC primene (F=69.5%), odabrane su doze da bi se postigle slične minimalne preostale koncentracije kao kod IV doza.
[0665] Simulacije su modelovale doze i režime tako da odgovaraju intravenskim indukcionim režimima i režimima održavanja. Ciljevi su bili izloženi (površina ispod krive serumska koncentracija leka-vreme (AUC)) i minimalna preostala koncentracija leka. Tabele 40-43 prikazuju rezultate simulacija.
[0666] Tabela 40. Indukcioni režim koji odgovara AUC pri IV primeni tokom nedelja 0-6
[0669]
[0671] Tabela 41. Indukcioni režim koji odgovara minimalnoj preostaloj koncentraciji pri IV primeni, nedelje 0-6
[0674]
[0676] Tabela 42. Režim održavanja koji odgovara IV dozi od 300 mg svake 4 nedelje
[0678]
[0679]
[0681] Tabela 43. Režim održavanja koji odgovara IV dozi od 300 mg svakih 8 nedelja
[0683]
[0685] Primer 15: Faza 2a multidoznog ispitivanja
[0686] Faza 2a multidoznog ispitivanja može da proceni bezbednost, tolerabilnost i PK ravnotežnog stanja vedolizumaba nakon višestrukih doza vedolizumaba primenjenih subkutanim putem i da proceni relativnu biološku raspoloživost subkutanog režima u poređenju sa intravenskim režimom. Moguće je proceniti razvoj HAHA i neutralisanje HAHA i efekat višestrukih doza vedolizumaba na PD nakon subkutane primene.
[0687] Pacijenti sa ulceroznim kolitisom koji imaju parcijalni Mayo rezultat od 1-12 i pacijenti sa Kronovom bolešću koji imaju CDAI veći od 150 mogu da budu uključeni u ispitivanje.
[0688] Kohorte mogu da prime indukcioni režim vedolizumaba (300 mg) primenjen IV putem u nultoj i 2. nedelji, praćen režimom održavanja bilo sa
[0689] vedolizumabom (300 mg) primenjenim IV putem svake 4 nedelje u nedeljama 6-22 vedolizumabom (300 mg) primenjenim IV putem svakih 8 nedelja u nedeljama 6-22 vedolizumabom (108 mg) primenjenim SC putem svake nedelje u nedeljama 6-22 vedolizumabom (108 mg) primenjenim SC putem svake 2 nedelje u nedeljama 6-22 vedolizumabom (165 mg) primenjenim SC putem svake 3 nedelje u nedeljama 6-22.
[0690] Uzorci mogu da se prikupe pre doziranja na dan 1, i zatim ponovo na dan 1 (12 časova), 2, 3, 5, 8, 15, 29, 43, 127, 127 (12 časova), 128, 129, 131, 134, 141 i 155 za procenu PK i PD. Primer 16: Dugoročno kliničko iskustvo sa vedolizumabom za lečenje IBD (referentni primer)
[0691] Produženo, otvoreno obeleženo ispitivanja bezbednosti faze 2 obavljeno je da bi se procenila dugoročna farmakokinetika (PK), farmakodinamika (PD), bezbednost i efikasnost vedolizumaba. Pacijenti su bili starosti od 18 do 75 godina, i prethodno su učestvovali u ranijem ispitivanju PK/PD/bezbednosti kod pacijenata sa ulceroznim kolitisom, ili su imali simptome IBD najmanje 2 meseca potvrđene endoskopski i/ili histopatološki i/ili radiološki unutar 36 meseci od skrininga.
[0692] Svi pacijenti su primili intravenski režim doziranja od 2 mg/kg ili 6 mg/kg vedolizumaba (5 mg/mL antitela, 20 mM citrat/limunska kiselina, 125 mM natrijum hlorid, 0.05% polisorbat 80, pH 6.0 (dugotrajno skladišten na -70°C i do 3 meseca na -20°C)) na dan 1, 15 i 43, praćeno dozom na svakih 8 nedelja do ukupno 78 nedelja. Pacijenti su bili ili pacijenti sa ulceroznim kolitisom ili Kronovom bolešću koji nisu bili ranije lečeni, ili pacijenti sa ulceroznim kolitisom koji su učestvovali u ranijem kliničkom ispitivanju.
[0693] Efikasnost/kvalitet života (QoL); parcijalni Mayo rezultat (PMS), indeks aktivnosti Kronove bolesti (CDAI) i upitnik za zapaljensku bolest creva (IBDQ) korišćeni su za procenu rezultata ispitivanja.
[0694] PK Rezultati
[0695] Srednje koncentracije vedolizumaba pre infuzije su bile dozno-proporcionalne, i ostale stabilne i detektabilne tokom ispitivanja.
[0696] PD Rezultati
[0697] Receptori (%ACT-1 [CD4+CD45RO HIGH] i % MADCAM+ [CD4+CD45RO HIGH] su bili skoro u potpunosti inhibirani tokom perioda ispitivanja na svim doznim nivoima. Parcijalni Mayo rezultat
[0698] Polazna srednja vrednost PMS je bila viša za pacijente sa ulceroznim kolitisom koji nisu bili ranije lečeni (5.4) nego za kontinuirano lečene pacijente sa ulceroznim kolitisom (2.3).
[0701] 1
[0702] Do 43. dana, srednja vrednost PMS je pokazala izrazito smanjenje i za kontinuirano lečene, i za pacijente sa ulceroznim kolitisom koji nisu bili ranije lečeni. Do 155. dana, srednji rezultati dve grupe su bili slični. Srednja vrednost PMS je nastavila da se smanjuje do 267. dana, i nakon toga je dostigla plato.
[0703] Indeks aktivnosti Kronove bolesti
[0704] Polazna srednja vrednost CDAI kod pacijenata sa CD smanjila se 43. dana sa 294.6 na 237.7, i nastavila da se smanjuje do 155. dana (156.1).
[0705] IBDQ
[0706] Kontinuirano lečeni pacijenti sa ulceroznim kolitisom su imali najviše polazne srednje rezultate IBDQ. Do 43. dana, srednji rezultati IBDQ su se povećali za sve tri grupe bolesti. Srednji rezultati IBDQ su nastavili da rastu tokom vremena za sve 3 grupe bolesti, dostižući najveću vrednost 155. dana za pacijente sa Kronovom bolešću, i 491. dana, i za pacijente sa ulceroznim kolitisom koji nisu bili ranije lečeni, i za kontinuirano lečene pacijente sa ulceroznim kolitisom.
[0707] C- reaktivni protein
[0708] I kontinuirano lečeni pacijenti sa ulceroznim kolitisom i pacijenti sa Kronovom bolešću su pokazali smanjene srednje nivoe CRP do 155. dana, a zatim dostizanje platoa. Pacijenti sa ulceroznim kolitisom koji nisu bili ranije lečeni imali su niži polazni srednji nivo CRP nego kontinuirano lečeni pacijenti sa ulceroznim kolitisom (2.28 nasuprot 7.09). Srednji nivoi CRP pacijenata sa ulceroznim kolitisom koji nisu bili ranije lečeni ostali su relativno konstantni u svim procenjivanim vremenskim tačkama.
[0709] Drugi rezultati ispitivanja bezbednosti
[0710] Tokom ispitivanja nisu prijavljene sistemske oportunističke infekcije (uključujući PML). Jedan pacijent je imao pozitivan rezultat testa na JC viremiju u jednoj vremenskoj tački, iako je bio negativan na JCV u svim drugim vremenskim tačkama. Tri od 72 pacijenta (4%) imalo je pozitivne HAHA rezultate (dva od njih su bila prolazno pozitivna). Ispitivanje nije pružilo dokaze toksičnosti jetre, limfocitoze, ili limfopenije, ili bilo kojih drugih promena laboratorijskih rezultata povezanih sa lekom.
[0711] Zaključci
[0712] Vedolizumab primenjen u dozi od 2.0 ili 6.0 mg/kg, jednom svakih 8 nedelja tokom 78 nedelja, postigao je zasićenja ciljnog receptora, bio je povezan sa dugotrajnim smanjenjima srednje aktivnosti bolesti i poboljšanim rezutatima IBDQ, bio je uopšteno bezbedan i pokazao dobru podnošljivost, kao i prihvatljivu imunogenost.
[0715] 2
[0716] Primer 17: Indukcija i održavanje odgovora i remisije kod pacijenata sa umereno do ozbiljno aktivnim ulceroznim kolitisom (referentni primer)
[0717] Jedno ispitivanje koje obuhvata dva randomizovana, dvostruko-slepa, multi-centrična ispitivanja, dizajnirano je za procenu indukcije i održavanja odgovora i remisije kod pacijenata sa umereno do ozbiljno aktivnim ulceroznim kolitisom. Demografske i polazne karakteristike bolesti su bile uporedive u svim tretmanskim grupama.
[0718] Ispitivanje indukcije, korišćenjem intravenske primene, poredilo je placebo sa vedolizumabom, u dozi od 300 mg, rekonstituisanoj iz liofilizovane formulacije od 60 mg/ml antitela u 50 mM histidina, 125 mM arginina, 0.06% polisorbata 80, 10% saharoze, na pH 6.3, sa krajnjom tačkom na 6 nedelja nakon 2 doze vedolizumaba.
[0719] Ispitivanje održavanja, korišćenjem iste formulacije i puta primene kao u ispitivanju indukcije, poredilo je placebo sa vedolizumabom doziranim na svake četiri nedelje, i placebo sa vedolizumabom doziranim na svakih osam nedelja. Krajnja tačka ispitivanja je bila na 52 nedelje, kada je analiziran indukcioni odgovor populacije.
[0720] Uzorci krvi su sakupljeni da bi se merile koncentracije vedolizumaba tokom ispitivanja. Srednja serumska koncentracija vedolizumaba na kraju indukcione faze bila je 20 do 30 µg/mL. Srednje minimalne preostale serumske koncentracije vedolizimaba u stabilnom stanju nakon 30 min primene IV infuzije doze od 300mg bile su između 9 do 13 µg/mL za režim q8wks (jednom na svakih 8 nedelja) i između 35 do 40 µg/mL za režim q4wks (jednom na svake 4 nedelje). Na kraju infuzije, srednje koncentracije vedolizimaba u plazmi su bile između 98 i 101 µg/mL za režim jednom na svakih 8 nedelja i oko 129 i 137 µg/mL za režim jednom na svake 4 nedelje.
[0721] [0293] Rezimei odgovora u ispitivanjima indukcije i održavanja su prikazani u tabelama 44-47. Značajno veća proporcija pacijenata lečenih vedolizumabom je dostigla klinički odgovor, remisiju, i izlečenje mukoze za 6 nedelja, u poređenju sa placebom (tabela 44). U indukcionoj fazi 39% populacije predviđene za terapiju (ITT) je imalo prethodni neuspeh u lečenju sa anti-TNFα. Stope kliničkog odgovora i remisije su bile više kod pacijenata koji su primali vedolizumab, u odnosu na placebo, i među onima sa prethodno neuspelom anti-TNF terapijom, i onima koji nisu bili prethodno izloženi delovanju anti-TNF. U preliminarnim analizama do 6. nedelje, stope neželjenih događaja (AEs), ozbiljnih AEs, i neželjenih događaja koji vode prestanku ispitivanja bio je viši u placebo grupi nego u vedolizumab grupi. Značajno veća proporcija pacijenata koji primaju vedolizumab nego pacijenata koji primaju placebo je postigla kliničku remisiju, izlečenje mukoze, i remisiju bez upotrebe kortikosteroida za 52 nedelje i dugotrajan odgovor i remisiju (tabela 45). U ispitivanju održavanja, 32% populacije je imalo prethodno neuspelu terapiju sa anti-TNFα. Stope kliničke remisije i dugotrajnog kliničkog odgovora bile su veće sa vedolizumabom nego sa placebom i kod pacijenata sa neuspelom terapijom sa TNF i kod pacijenata koji nisu lečeni sa TNF. U populaciji za ispitivanje bezbednosti (N=895) tokom nedelja 0-52, stope neželjenih događaja (AEs), ozbiljnih AEs, i ozbiljnih infekcija bile su slične za vedolizumab i placebo grupe. Nije primećeno povećanje stopa oportunističkih ili enteričnih infekcija u vedolizumab grupi.
[0722] Tabela 44: Rezultati ispitivanja indukcije -primarne i ključne sekundarne krajnje tačke
[0725]
[0727] Tabela 45: Rezultati ispitivanja održavanja -primarne i ključne sekundarne krajnje tačke
[0729]
[0733] 4
[0734] Tabela 46: Ispitivanje indukcije: klinički odgovor i remisija za 6 nedelja kod pacijenata sa prethodno neuspelom terapijom anti-TNF-α antagonistom i bez izlaganja anti-TNF, ITT populacija
[0736]
[0739] Tabela 47: Klinička remisija i dugotrajan klinički odgovor za 52 nedelje: pacijenti sa prethodno neuspelom terapijom anti-TNF-α antagonistom ili bez izlaganja anti-TNF-αantagonistu, ITT populacija
[0741]
[0742]
[0745] Primer 18: Indukcija i održavanje odgovora i remisije kod pacijenata sa umereno do ozbiljno aktivnim oblikom Kronove bolesti (referentni primer)
[0747] Jedno ispitivanje koje obuhvata dva randomizovana, dvostruko-slepa, multi-centrična ispitivanja dizajnirano je za procenu indukcije i održavanja odgovora i remisije kod pacijenata sa umereno do ozbiljno aktivnom Kronovom bolešću. Demografske i polazne karakteristike bolesti su bile uporedive u svim tretmanskim grupama.
[0748] Ispitivanje indukcije, korišćenjem intravenske primene, poredilo je placebo sa vedolizumabom, u dozi od 300 mg rekonstituisanoj iz liofilizovane formulacije od 60 mg/ml antitela u 50 mM histidina, 125 mM arginina, 0.06% polisorbata 80, 10% saharoze, na pH 6.3, sa krajnjom tačkom na 6 nedelja nakon 2 doze vedolizumaba.
[0749] Ispitivanje održavanja, korišćenjem iste formulacije i puta primene kao u ispitivanju indukcije, poredilo je placebo sa vedolizumabom doziranim na svake četiri nedelje, i placebo sa vedolizumabom doziranim na svakih osam nedelja. Krajnja tačka ispitivanja je bila na 52 nedelje, kada je analiziran indukcioni odgovor populacije.
[0750] Iznenađujuće, ovo ispitivanje je pokazalo da su grupe jednom na svake 4 nedelje i jednom na svakih 8 nedelja dale veoma slične rezultate. Rezimei odgovora u ispitivanjima indukcije i održavanja su prikazani u tabelama 48-51. Značajno veća proporcija pacijenata lečenih vedolizumabom postigla je kliničku remisiju i pojačani odgovor, u poređenju sa placebom (Tabela 48). Stope kliničke remisije i pojačanog odgovora bile su više kod pacijenata koji su primali vedolizumab u odnosu na placebo, i među onima sa prethodno neuspelom terapijom sa anti-TNF, i među onima koji nisu bili prethodno izloženi delovanju anti-TNF. Stope neželjenih događaja (AEs), ozbiljnih AEs, i ozbiljnih infekcija ble su slične u vedolizumab i placebo grupama. Nije primećeno povećanje stopa oportunističkih ili enteričnih infekcija u vedolizumab grupi.
[0751] Tabela 48: Rezultati ispitivanja indukcije - primarne i sekundarne krajnje tačke
[0753]
[0755] Tabela 49: Rezultati ispitivanja održavanja - primarne i ključne sekundarne krajnje tačke
[0757]
[0759] Tabela 50: Klinička remisija i pojačani odgovor za 6 nedelja kod pacijenata sa prethodno neuspelom terapijom anti-TNF-α antagonistom i bez izlaganja anti-TNF, ITT populacija
[0760]
[0761]
[0763] Tabela 51: Klinička remisija i pojačani odgovor za 52 nedelje: pacijenti sa prethodno neuspelom terapijom anti-TNF-α antagonistom ili bez izlaganja anti-TNF-α antagonistu, ITT populacija
[0765]
[0766] Primer 19: Indukcija odgovora i remisije kod pacijenata sa umerenim do ozbiljno aktivnim oblikom Kronove bolesti (rerferentni primer)
[0767] Randomizovano, dvostruko-slepo, placebo kontrolisano multi-centrično ispitivanje je izvršeno kako bi se ocenio indukcioni efekat vedolizumaba u dozi od 300 mg (rekonstituisanog iz formulacije od 60 mg/ml antitela u 50 mM histidina, 125 mM arginina, 0.06% polisorbata 80, 10% saharoze, na pH6.3 koja je bila liofilizovana), kod pacijenata sa neuspehom u lečenju sa TNFα antagonistom u 6. nedelji (nakon 2 doze - nulte i 2. nedelje) i u 10. nedelji (nakon 3 doze). Ispitivanje se sastojalo od 416 pacijenata, od kojih je 75% imalo neuspeh u lečenju sa TNFα antagonistom, a 25% nije bilo lečeno sa TNFα. Demografija i istovremena primena lekova za IBD bila je ujednačena u tretmanskim grupama. Polazne karakteristike bolesti su takođe bile ujednačene u tretmanskim grupama, osim za polaznu aktivnost bolesti.
[0768] Primarna krajnja tačka dizajnirana za ispitivanje bila je (%) remisije u 6. nedelji u populaciji sa neuspehom u lečenju sa anti-TNF-α antagonistom. Ključne sekundarne krajnje tačke koje su procenjivane (postupak sekvencijalnog ispitivanja) bile su: (%) remisije u 6. nedelji u ukupnoj populaciji, (%) remisije u 10. nedelji u populaciji sa neuspehom u lečenju sa anti-TNF-α antagonistom i ukupnoj populaciji (korišćenjem postupka prema Hochberg-u), (%) neprekidne remisije u 6. i 10. nedelji u populaciji sa neuspehom u lečenju sa anti-TNF-α antagonistom i ukupnoj populaciji (korišćenjem postupka prema Hochberg-u), i (%) pojačanog odgovora u 6. nedelji u populaciji sa neuspehom u lečenju sa anti-TNF-α antagonistom.
[0770] Tabela 52: Polazni CDAI:
[0773]
[0776] Tabela 53: Rezultati ispitivanja indukcije: primarne i ključne sekundarne krajnje tačke
[0779]
[0780]
[0782] Tabela 54: Rezultati kod pacijenata koji nisu lečeni sa anti-TNF-α antagonistom (n=101, 24% od ukupnog broja)
[0785]
[0787] Tabela 55: Rezultati ispitivanja: klinička remisija u 6. i 10. nedelji, ključna podgrupaprethodne neuspele terapije, ukupna ITT
[0790]
[0794] 1
[0795]
[0798] Ispitivanje je pokazalo da su pacijenti sa neuspehom u lečenju sa TNF-α antagonistom zahtevali 3 doze za indukciju remisije. Stope remisije kod pacijenata sa neuspelom terapijom TNF-α antagonistom su se povećale između 6. nedelje i 10. nedelje, ali samo za vedolizumab grupu (ne i placebo). Stope remisije za pacijente koji nisu lečeni sa TNF-α antagonistom se nisu suštinski povećale između 6. i 10. nedelje. Od populacije sa neuspelom terapijom sa TNF-α antagonistom sa visokim stepenom ozbiljnosti bolesti, 43% nikad nije odgovorilo na TNF-α antagonist, i 45% je izgubilo odgovor.
[0799] Primer 20: Stabilnost
[0800] Različite formulacije anti-α4β7 antitela su ispitivane na stabilnost tokom 6 do 24 meseca na 5°C (tabele 6 i 7). Formulacije koje imaju pH od 6.0-6.2 pokazale su približno manje od 4% degradacije glavnih vrsta nakon 6 meseci i za 24 meseca.
[0801] Različite formulacije anti-α4β7 antitela su ispitivane na stabilnost pomoću SEC sve do 24 meseca (Tabele 4 i 5). Formulacije sa koncentracijom proteina od 60 mg/mL i sadržajem od 25 mM citrata imale su promenu u agregatima od 0.1-0.2% nakon 2 godine, dok su formulacije koje sadrže 160 mg/mL proteina i 25 mM citrata imale povećanje količine agregata od približno 0.3% tokom 2 godine. Povećanje količine agregata od 0.6-1.1% pojavilo se kod formulacija koje sadrže 60, 110, ili 160 mg/mL proteina bez citrata. Kod ispitivanih formulacija koje sadrže citrat, ali ne i histidin, nakon 12 meseci i 24 meseca, javilo se povećanje količine agregata od 0.3-0.4%.
[0802] Primer 21: Određivanje efekta vedolizumaba na odnos CD4:CD8 (referentni primer)
[0803] Zdravi subjekti starosti 18-45 godina su primili jednu dozu od 450 mg vedolizumaba rekonstituisanog iz liofilizovane formulacije u 10% saharozi i razblaženog u infuzionom sistemu sa 0.9% fiziološkim rastvorom. Cerebrospinalni fluid (CSF) je sakupljen lumbalnom punkcijom pre (polazna tačka), i 5 nedelja nakon jedne doze od 450 mg vedolizumaba. Svaki subjekat je služio kao svoja sopstvena kontrola.
[0806] 1 1
[0807] Vremenska tačka od 5 nedelja je odabrana na osnovu prethodnog ispitivanja koje je pokazalo da pacijenti sa MS lečeni natalizumabom pokazuju efekte na odnos limfocita CD4+:CD8+ u CSF i smanjenje broja lezija u mozgu nakon samo jedne doze (Stuve et al. Arch Neurol.2006;63:1383-1387; Stuve et al. Ann Neurol. 2006;59:743-747. Miller et al. N Engl J Med. 2003;348(1):15-23); i takođe zato što je tokom 5 nedelja, doza od 450 mg vedolizumaba dovoljna da zasiti ciljni molekul i obezbedi serumske koncentracije koje prevazilaze procenjene minimalne preostale nivoe u ravnotežnom stanju povezane sa fazom 3 režima doziranja od 300 mg svake 4 nedelje.
[0808] Približno 15 mL CSF je dobijeno odsvakog subjekta za imunofenotipizaciju. Uzorci CSF su bili uključeni u ispitivanja ukoliko su ispunjavali sledeće kriterijume: ≤10 RBCs/µL po uzorku (da bi se smanjila kontaminacija perifernom krvi); negativan rezultat kulture CSF; adekvatni brojevi T-limfocita u svakom uzorku za protočnu citometriju; i bez detektovanih serumskih antitela na vedolizumab.
[0809] Srednja vrednost za 5. nedelju (34.80 µg/mL) i pojedinačne serumske koncentracije vedolizumaba subjekta (opseg od 24.9-47.9 µg/mL) bile su više od projektovane minimalne preostale koncentracije u ravnotežnom stanju (∼24 µg/mL) za fazu 3 režima doziranja. Visok stepen (>90%) zasićenosti α4β7 receptora primećen je u 5. nedelji merenjem pomoću MAdCAM-1-Fc, ukazujući na zasićenost ciljnog molekula vedolizumabom u vreme procene krajnje tačke.
[0810] Vedolizumab nije detektovan ni u jednom uzorku CSF (granica detekcije = 0.125 µg/mL).
[0811] Efekat na brojeve i odnos CD4+ i CD8+ T limfocita
[0813] Vedolizumab nije značajno smanjio odnos CD4+:CD8+ (tabela 56). Ni jedan od subjekata nije imao odnos CD4+:CD8+ <1 nakon doze (p < 0.0001 (1-struki t-test)). Vedolizumab nije značajno smanjio broj CD4+ ili CD8+ T limfocita u CSF. Osim toga, nije bilo značajnih promena % CD4+ i % CD8+ T limfocita u CSF (tabela 57). Takođe, nisu primećene značajne promene u WBC, CD4+ i CD8+ memorijskim T limfocitima periferne krvi (tabela 58).
[0815] Tabela 56: Efekat tretmana na odnos CD4+:CD8+ u CSF (ocenjivana populacija, n=13)
[0817]
[0821] 1 2
[0822]
[0825] Tabela 57: Efekat tretmana na broj limfocita CD4+ i CD8+ u CSF (ocenjivana populacija, n=13)
[0828]
[0831] Tabela 58: Broj memorijskih T limfocita periferne krvi (RO+) (ocenjivana populacija, n=13)
[0834]
[0837] Sažetak
[0838] Vedolizumab nije uticao na brojeve ćelija CD4+ i CD8+ u CSF ili odnos CD4+:CD8+ kod zdravih volontera nakon jedne doze od 450 mg. Niko od subjekata nije imao smanjenje odnosa CD4+:CD8+ u CSF nakon primanja doze do vrednosti manju od 1. Vedolizumab nije detektovan u CSF. Osim toga, nije primećena promena u ukupnom broju ćelija WBC ili podsetova memorijskih T limfocita CD4+ i CD8+ u perifernoj krvi. Do zasićenja ciljnog molekula (α4β7) u krvi došlo je kod svih subjekata u vreme procene krajnje tačke. Nivoi i odnos CD4+ i CD8+ limfocita u CSF bili su slični onima prethodno objavljenim u literaturi.
[0839] Ovi rezultati su konzistentni sa izostankom delovanja vedolizumaba na fiziološki imunološki nadzor u CNS i patološki zapaljenski proces u CNS majmuna.
[0842] 1
[0843] Tabela 59: Sekvence
[0844]
[0847] 14
[0850] 1

Claims (12)

1. Patentni zahtevi
1. Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja sadrži najmanje oko 60 mg/ml do oko 180 mg/ml anti-α4β7 antitela, histidinski pufer i najmanje oko 5 mM citrata, pri čemu je navedena formulacija tečna formulacija, i pri čemu anti-α4β7 antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline 20 do 140 u SEQ ID NO:2 i sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokoseline 20 do 131 SEQ ID NO:4 ili aminokiseline 21 do 132 SEQ ID NO:5.
2. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1, koja dalje sadrži površinski aktivnu supstancu.
3. Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja sadrži smešu anti-α4β7 antitela, citrata, histidina, arginina i polisorbata 80, pri čemu je data formulacija tečna formulacija i pri čemu anti-α4β7 antitelo obuhvata varijabilni region teškog lanca koji obuhvata aminokiseline od 20 do 140 iz SEQ ID NO: 2, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji obuhvata aminokiseline od 20 do 131 iz SEQ ID NO: 4 ili aminokiseline od 21 do 132 iz SEQ ID NO: 5.
4. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1–3, pri čemu navedena formulacija obuhvata oko 60 mg/ml do oko 160 mg/ml anti-α4β7 antitela.
5. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1–3, pri čemu formulacija obuhvata oko 150 do oko 180 mg/ml anti-α4β7 antitela ili oko 165 mg/ml anti-α4β7 antitela.
6. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je navedeno anti-α4β7 antitelo vedolizumab.
7. Formulacija prema bilo kom od prethodnih zahteva za upotrebu u postupku lečenja zapaljenskih bolesti creva.
8. Formulacija za upotrebu patentnog zahteva 7, pri čemu se formulacija primenjuje subkutano.
9. Formulacija za upotrebu patentnog zahteva 7, pri čemu je formulacija namenjena za samostalnu primenu.
10. Formulacija za upotrebu patentnog zahteva 8, pri čemu se formulacija primenjuje u jednoj injekciji zapremine oko 0.6 ml do oko 1.1 ml.
11. Proizvodni artikal koji sadrži kontejner, stabilnu tečnu farmaceutsku formulaciju prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva i uputstva za njegovu upotrebu.
12. Proizvodni artikal patentnog zahteva 11, naznačen time što je artikal prethodno napunjeni špric.
1
RS20260037A 2011-05-02 2012-05-02 Formulacija za anti-alpha4beta7 antitelo RS67634B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161481522P 2011-05-02 2011-05-02
US201161544054P 2011-10-06 2011-10-06
EP24167554.5A EP4403579B1 (en) 2011-05-02 2012-05-02 Formulation for anti-alpha4beta7 antibody

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67634B1 true RS67634B1 (sr) 2026-02-27

Family

ID=46147702

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20171015A RS56429B1 (sr) 2011-05-02 2012-05-02 Formulacija za anti- 4 7 antitelo
RS20260037A RS67634B1 (sr) 2011-05-02 2012-05-02 Formulacija za anti-alpha4beta7 antitelo

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20171015A RS56429B1 (sr) 2011-05-02 2012-05-02 Formulacija za anti- 4 7 antitelo

Country Status (39)

Country Link
US (7) US10040855B2 (sr)
EP (5) EP4378959A3 (sr)
JP (6) JP6190359B2 (sr)
KR (8) KR102493433B1 (sr)
CN (4) CN108969469A (sr)
AR (1) AR086238A1 (sr)
AU (5) AU2012250872B2 (sr)
CA (2) CA3051418C (sr)
CL (3) CL2013003145A1 (sr)
CO (1) CO6801648A2 (sr)
CR (1) CR20130556A (sr)
CY (1) CY1119436T1 (sr)
DK (3) DK3311834T3 (sr)
DO (1) DOP2013000252A (sr)
EA (1) EA032625B1 (sr)
EC (1) ECSP22046340A (sr)
ES (1) ES2646717T3 (sr)
FI (2) FI4403579T3 (sr)
GE (2) GEP20186866B (sr)
HK (1) HK1253911A1 (sr)
HR (2) HRP20171457T1 (sr)
HU (1) HUE036664T2 (sr)
IL (6) IL305583B2 (sr)
LT (2) LT2704742T (sr)
ME (1) ME02858B (sr)
MX (4) MX354101B (sr)
MY (1) MY188820A (sr)
PE (1) PE20141672A1 (sr)
PH (3) PH12018502221B1 (sr)
PL (2) PL4403579T3 (sr)
PT (2) PT4403579T (sr)
RS (2) RS56429B1 (sr)
SG (1) SG194730A1 (sr)
SI (2) SI2704742T1 (sr)
SM (2) SMT201700515T1 (sr)
TW (6) TWI723339B (sr)
UY (1) UY34054A (sr)
WO (1) WO2012151247A2 (sr)
ZA (2) ZA201308168B (sr)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
EP3459564B1 (en) 2010-01-06 2021-10-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein binding proteins
BR112013008366B1 (pt) * 2010-10-06 2022-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Formulações farmacêuticas líquidas estáveis contendo anticorpos anti-receptor de interleucina-4 humana alfa, e recipiente contendo as referidas formulações
CA2823776A1 (en) 2011-01-06 2012-07-12 Dyax Corp. Plasma kallikrein binding proteins
PL3395836T3 (pl) 2011-01-28 2021-12-13 Sanofi Biotechnology Ludzkie przeciwciała przeciwko pcsk9 do zastosowania w sposobach leczenia konkretnych grup osobników
DK3311834T3 (da) 2011-05-02 2026-04-20 Millennium Pharmaceuticals Inc Formulering til anti-alfa4beta7-antistof
UA116189C2 (uk) 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
MX343324B (es) 2011-07-06 2016-11-01 Nestec Sa Ensayos para detectar auto anticuerpos neutralizadores de la terapia biologica con tnf alpha.
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
US9764093B2 (en) * 2012-11-30 2017-09-19 Sio2 Medical Products, Inc. Controlling the uniformity of PECVD deposition
WO2014152232A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Dyax Corp. Anti-plasma kallikrein antibodies
JP6908998B2 (ja) * 2013-07-05 2021-07-28 ステラー・バイオウム・インコーポレーテッド 口腔組成物
MX2016006226A (es) 2013-11-12 2016-09-07 Sanofi Biotechnology Regimenes de dosificacion para uso con inhibidores de pcsk9.
EP3073992A4 (en) * 2013-11-29 2017-09-13 Ares Trading S.A. A liquid formulation of a fusion protein comprising tnfr and fc region
AU2015209481C1 (en) 2014-01-21 2020-10-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein binding proteins and uses thereof in treating hereditary angioedema
IL295414B2 (en) 2014-03-27 2026-02-01 Takeda Pharmaceuticals Co Compositions and methods for treating macular edema due to diabetes
MX2017004344A (es) 2014-10-06 2017-06-07 Chemocentryx Inc COMPOSICIONES Y METODOS PARA TRATAR ENFERMEDAD INFLAMATORIA DE INTESTINO USANDO UNA TERAPIA DE COMBINACION DE INHIBIDORES DE MOLECULA PEQUENA DEL RECEPTOR DE QUIMIOCINA C-C TIPO 9 (CCR9) Y ANTICUERPOS BLOQUEADORES ANTI-A4ß7 INTEGRINA.
WO2016086147A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Vedolizumab for the treatment of fistulizing crohn's disease
ES2825704T3 (es) * 2014-12-03 2021-05-17 Csl Behring Ag Producto farmacéutico con mayor estabilidad que comprende inmunoglobulinas
WO2016088104A2 (en) * 2014-12-05 2016-06-09 Nestec S.A. Indirect homogeneous mobility shift assays for the detection of biologics in patient samples
AR103173A1 (es) 2014-12-22 2017-04-19 Novarits Ag Productos farmacéuticos y composiciones líquidas estables de anticuerpos il-17
JP6904905B2 (ja) 2014-12-24 2021-07-21 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗α４β７インテグリン抗体による治療の結果の予測
MA41636A (fr) 2015-03-06 2018-01-09 Millennium Pharm Inc Méthode de traitement de la cholangite sclérosante primitive
BR112017020864A2 (en) * 2015-03-30 2018-07-10 Dyax Corp. plasma kallikrein inhibitors and their uses for the prevention of hereditary angioedema attack
JP2018523684A (ja) 2015-08-18 2018-08-23 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． リポタンパク質アフェレーシスを受けている高脂血症の患者を治療するための抗ｐｃｓｋ９阻害抗体
AU2016366557B2 (en) 2015-12-11 2024-01-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
HRP20250951T1 (hr) * 2015-12-30 2025-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Formulacije sa smanjenom razgradnjom polisorbata
USD866757S1 (en) 2016-03-11 2019-11-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Autoinjector
IL261750B2 (en) * 2016-03-14 2024-07-01 Millennium Pharm Inc Method of preventing graft versus host disease
BR112018068625A2 (pt) 2016-03-14 2019-07-30 Millennium Pharm Inc métodos de tratamento ou prevenção de doença de enxerto contra hospedeiro
MA44483A (fr) 2016-03-24 2019-01-30 Millennium Pharm Inc Procédés pour traiter des événements indésirables gastro-intestinaux d'origine immunitaire dans des traitements oncologiques immunitaires
WO2017165742A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in anti-ctla4 anti-pd-1 combination treatments
JP7162533B2 (ja) 2016-05-04 2022-10-28 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 炎症性腸疾患の治療を目的とする三剤併用療法
CN109414502A (zh) * 2016-06-12 2019-03-01 千禧制药公司 治疗炎症性肠病的方法
JOP20170170B1 (ar) * 2016-08-31 2022-09-15 Omeros Corp صيغ لجسم مضاد تثبيطية لـ masp-2 بتركيز عالي ولزوجة منخفضة وأطقم، وطرق
WO2018104893A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Alpha4-beta7 antibodies with incrased fcrn binding and/or half-life
CR20190291A (es) * 2016-12-23 2019-11-05 Serum Institute Of India Pvt Ltd Métodos mejorados para estimular la productividad de anticuerpos en el cultivo de células de mamiferos y reducir la agregación durante los procesos de formulación post-tratamiento (downstream) y formulaciones de anticuerpos estables obtenidas a partir de los mismos
CN108686204A (zh) * 2017-04-07 2018-10-23 浙江海正药业股份有限公司 包含组氨酸缓冲体系的英夫利西单抗组合物
BR112019022268A2 (pt) 2017-04-28 2020-05-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. método para o tratamento de distúrbios pediátricos
JP2020531523A (ja) * 2017-08-25 2020-11-05 オメロス コーポレーション 高度に濃縮された低粘度のｍａｓｐ−２阻害抗体製剤、キット、および非定型溶血性症候群に罹患した対象の治療方法
AU2019251452A1 (en) * 2018-04-10 2020-11-26 Dr. Reddy's Laboratories Limited Stable antibody formulation
AU2019251453A1 (en) 2018-04-10 2020-11-26 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Stable formulations of therapeutic antibody
US12030948B2 (en) 2018-04-10 2024-07-09 Dr. Reddy's Laboratories Limited Antibody formulation
EP3843783A1 (en) * 2018-08-29 2021-07-07 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Methods of preparing stable liquid therapeutic protein compositions
US20220142977A1 (en) * 2019-01-08 2022-05-12 Arena Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating conditions related to the s1p1 receptor
KR102735988B1 (ko) 2019-02-18 2024-12-03 일라이 릴리 앤드 캄파니 치료 항체 제제
EP3956358A4 (en) * 2019-04-17 2023-01-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. COMBINATION THERAPY WITH ALPHA4BETA7 INHIBITOR AND IL-23 INHIBITOR
AU2020290999A1 (en) * 2019-06-10 2022-02-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibody purification methods and compositions thereof
CN114746439A (zh) * 2019-10-11 2022-07-12 雷迪博士实验室有限公司 整合蛋白抗体的稳定制剂
US12528880B2 (en) 2020-01-13 2026-01-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating pediatric hereditary angioedema attack
CN115515984B (zh) * 2020-05-08 2026-02-06 亘利生物科技(上海)有限公司 一种抗cd19抗体的抗体及其制备和应用
UY39327A (es) * 2020-07-16 2022-02-25 Abbvie Inc Anticuerpos anti- alpha-4-beta-7
MX2023001157A (es) * 2020-07-31 2023-02-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-integrina beta7 y dispositivos.
WO2022101935A1 (en) * 2020-11-12 2022-05-19 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Stable aqueous high concentration formulation of integrin antibody
US20240101679A1 (en) * 2020-12-09 2024-03-28 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Stable aqueous buffer free formulation of an integrin antibody
US20240254237A1 (en) * 2021-06-04 2024-08-01 Polpharma Biologics S.A. Vedolizumab formulation
CN113813377A (zh) * 2021-09-07 2021-12-21 杭州远大生物制药有限公司 抗α4β7抗体制剂及其应用
EP4717712A2 (en) 2021-12-27 2026-04-01 Polpharma Biologics S.A. Vedolizumab formulation
AU2023277646A1 (en) * 2022-05-27 2024-12-05 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Il-12-albumin-binding domain fusion protein formulations and methods of use thereof
WO2024249568A1 (en) * 2023-05-30 2024-12-05 Paragon Therapeutics, Inc. Alpha4beta7 integrin antibody compositions and methods of use
WO2024252368A2 (en) 2023-06-09 2024-12-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods and compositions for treating ulcerative colitis
CN121889424A (zh) 2023-08-14 2026-04-17 派拉冈医疗公司 α4β7整联蛋白结合蛋白及使用方法
WO2025041000A1 (en) * 2023-08-21 2025-02-27 Intas Pharmaceuticals Ltd. STABLE LIQUID CITRATE FREE FORMULATION OF AN ANTI-α4β7 ANTIBODY
US12134635B1 (en) 2023-12-29 2024-11-05 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Interleukin 18 (IL-18) variants and fusion proteins comprising same
WO2025149974A1 (en) 2024-01-11 2025-07-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Combination therapy with an anti-alpha4beta7 antibody
WO2025177214A1 (en) 2024-02-20 2025-08-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Therapeutic methods
WO2025177055A1 (en) * 2024-02-20 2025-08-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Combination therapy for treating inflammatory bowel disease
WO2026022216A1 (en) * 2024-07-23 2026-01-29 Ose Immunotherapeutics Uses of anti-cd127 antibodies in the treatment of inflammatory bowel diseases
WO2026058045A1 (en) 2024-09-12 2026-03-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Alpha4beta7 inhibitor and il-23 inhibitor combination therapy

Family Cites Families (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US4699880A (en) 1984-09-25 1987-10-13 Immunomedics, Inc. Method of producing monoclonal anti-idiotype antibody
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5403919A (en) 1987-08-11 1995-04-04 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Stanford University Method to control leukocyte extravasation
US5538724A (en) 1987-08-11 1996-07-23 The Board Of Trustees For The Leland Stanford Junior Univ. Method of control leukocyte extravasation
ATE114478T1 (de) 1987-08-11 1994-12-15 Univ Leland Stanford Junior Verfahren zur kontrolle der leukozyten- extravasation.
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
US5223392A (en) 1988-01-25 1993-06-29 Exocell, Inc. Monoclonal antibodies against glycated albumin, hybrid cell lines producing these antibodies, and use therefore
JP3095168B2 (ja) 1988-02-05 2000-10-03 エル． モリソン，シェリー ドメイン‐変性不変部を有する抗体
EP0462111A4 (en) 1988-12-23 1992-07-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Homing sequences and their uses
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5225538A (en) 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
IL113261A (en) 1989-09-01 1996-10-16 Hutchinson Fred Cancer Res Inhibition by peptides of lymphocyte adherence to vascular endothelium utilizing an extracellular matrix receptor-ligand interaction and pharmaceutical compositions containing said peptides
US5730978A (en) 1989-09-01 1998-03-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Inhibition of lymphocyte adherence with α4β1-specific antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
EP0531472B1 (en) 1991-03-06 2003-08-13 MERCK PATENT GmbH Humanized monoclonal antibodies
US5665595A (en) 1991-06-07 1997-09-09 Dowelanco Immunoglobulins against insect tissue
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
DE69232137T2 (de) 1991-11-25 2002-05-29 Enzon Inc Multivalente antigen-bindende proteine
US5871734A (en) 1992-01-13 1999-02-16 Biogen, Inc. Treatment for asthma with VLA-4 blocking agents
JPH07506566A (ja) 1992-02-12 1995-07-20 バイオゲン　インコーポレイテッド 炎症性胃腸病の処置
US5932214A (en) 1994-08-11 1999-08-03 Biogen, Inc. Treatment for inflammatory bowel disease with VLA-4 blockers
WO1993023526A1 (en) 1992-05-21 1993-11-25 Center For Blood Research, Inc. A NOVEL RECEPTOR FOR α4 INTEGRINS AND METHODS BASED THEREON
WO1994012214A1 (en) 1992-12-01 1994-06-09 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with cd18
AU5675794A (en) 1992-12-15 1994-07-04 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Mucosal vascular addressin, dna and expression
DK0678122T3 (da) 1993-01-12 2000-03-06 Biogen Inc Rekombinante anti-VLA4 antistofmolekyler
WO1994017828A2 (en) 1993-02-09 1994-08-18 Biogen, Inc. Treatment for insulin dependent diabetes
US6017695A (en) 1993-03-26 2000-01-25 Becton Dickinson And Company Nucleic acids encoding human cell adhesion molecule
JPH06303990A (ja) 1993-04-24 1994-11-01 Kanebo Ltd モノクローナル抗体、それを産生するハイブリドーマおよび該抗体の製造方法
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
EP0804237B8 (en) 1994-01-25 2006-11-08 Elan Pharmaceuticals, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule vla-4
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
US5594120A (en) 1994-02-18 1997-01-14 Brigham And Women's Hospital, Inc. Integrin alpha subunit
US5610281A (en) 1994-05-03 1997-03-11 Brigham & Women's Hospital, Inc. Antibodies for modulating heterotypic E-cadherin interactions with human T lymphocytes
GB2292079B (en) 1994-08-12 1998-07-15 Flexpharm Ltd Coated prednisolone preparation for the treatment of inflamatory bowel disease
US5624321A (en) 1994-12-23 1997-04-29 Snyder; Stephen D. Spring-actuated swing device
EP0808367B1 (en) 1995-02-10 2007-07-11 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mucosal vascular addressins and uses thereof
US6551593B1 (en) 1995-02-10 2003-04-22 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Treatment of Inflammatory bowel disease by inhibiting binding and/or signalling through α 4 β 7 and its ligands and madcam
US7750137B2 (en) 1995-09-01 2010-07-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mucosal vascular addressins
US7803904B2 (en) 1995-09-01 2010-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mucosal vascular addressing and uses thereof
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6189195B1 (en) 1995-08-22 2001-02-20 Medrad, Inc. Manufacture of prefilled syringes
US6037324A (en) 1996-01-04 2000-03-14 Leukosite, Inc. Inhibitors of MAdCAM-1-mediated interactions and methods of use therefor
US6015662A (en) 1996-01-23 2000-01-18 Abbott Laboratories Reagents for use as calibrators and controls
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
GB0007911D0 (en) * 2000-03-30 2000-05-17 Novartis Ag Organic compounds
US20010046496A1 (en) * 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
CA2817619A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US7053202B2 (en) 2001-10-19 2006-05-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin DNA cassette molecules, monobody constructs, methods of production, and methods of use therefor
PL215263B1 (pl) 2002-02-25 2013-11-29 Elan Pharm Inc Kompozycja do przewleklego leczenia patologicznego zapalenia i zastosowanie natalizumabu lub jego immunologicznie aktywnego fragmentu do wytwarzania leku
EP2399903A1 (en) 2002-05-24 2011-12-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Ccr9 inhibitors and methods of use thereof
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US6939885B2 (en) 2002-11-18 2005-09-06 Chemocentryx Aryl sulfonamides
AU2003293543A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
US6886838B1 (en) 2003-01-22 2005-05-03 Zimmco Easy dumping cart
KR101235507B1 (ko) 2003-02-28 2013-02-20 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 단백질을 함유하는 안정화 제제
CN1798575A (zh) 2003-04-04 2006-07-05 健泰科生物技术公司 高浓度抗体和蛋白制剂
MY162179A (en) 2004-04-01 2017-05-31 Elan Pharm Inc Steroid sparing agents and methods of using same
RS52213B (sr) 2004-09-03 2012-10-31 Genentech, Inc. Humanizovani anti-beta7 antagonisti i njihove primene
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
JP5216328B2 (ja) 2005-01-24 2013-06-19 アンタレス ファーマ インコーポレイテッド あらかじめ充填された針補助シリンジジェット式注射器
GT200600031A (es) * 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
EP1871806A2 (en) 2005-03-08 2008-01-02 Pharmacia & Upjohn Company LLC ANTI-MAdCAM ANTIBODY COMPOSITIONS
WO2007007159A2 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Anti-madcam antibodies to treat uterine disorders
JP2009515552A (ja) * 2005-11-17 2009-04-16 ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド α４β７インテグリン反応性ヒト化免疫グロブリン
CN101426527A (zh) * 2006-02-03 2009-05-06 米迪缪尼有限公司 蛋白质制剂
CA2638811A1 (en) 2006-02-03 2007-08-16 Medimmune, Llc Protein formulations
TW200806317A (en) * 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
MX2008013508A (es) 2006-04-21 2008-10-31 Novartis Ag Composiciones farmaceuticas de anticuerpos antagonistas anti-cd40.
EP2109480B1 (en) 2006-12-07 2017-06-28 The Government of the United States of America as Represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Use of antagonists of the interaction between hiv gp120 and alpha4beta7 integrin
JP2010512356A (ja) * 2006-12-11 2010-04-22 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 非経口ａベータ抗体製剤
WO2009009497A1 (en) 2007-07-06 2009-01-15 Stereotaxis, Inc. Management of live remote medical display
UA107557C2 (xx) * 2007-07-06 2015-01-26 Композиція антитіла офатумумабу
CN102131827A (zh) * 2007-12-13 2011-07-20 葛兰素集团有限公司 用于肺部传递给药的组合物
IL188647A0 (en) * 2008-01-08 2008-11-03 Orina Gribova Adaptable structured drug and supplements administration system (for oral and/or transdermal applications)
EP2249801A2 (en) * 2008-02-07 2010-11-17 Amgen Inc. Stabilized protein compositions
WO2009141239A1 (en) * 2008-05-20 2009-11-26 F. Hoffmann-La Roche Ag A pharmaceutical formulation comprising an antibody against ox40l, uses thereof
WO2010007376A2 (en) * 2008-07-18 2010-01-21 Domantis Limited Compositions monovalent for cd28 binding and methods of use
AU2009347206C1 (en) * 2008-10-20 2016-12-08 Abbvie Inc. Isolation and purification of antibodies using Protein A affinity chromatography
CN103382222B (zh) 2009-03-20 2016-12-28 安姆根有限公司 α-4-β-7异二聚体特异性拮抗剂抗体
BRPI1011389A2 (pt) * 2009-04-17 2018-07-10 Biogen Idec Inc método para tratar a leucemia mielógena aguda (aml) em um paciente
CN101533504A (zh) * 2009-04-27 2009-09-16 刘文祥 电子医务系统及其装置
MX2011011772A (es) * 2009-05-04 2012-02-08 Abbott Biotech Ltd Formulaicones estables de anticuerpos humanos anti-tnf-alfa con alta concentracion de proteina.
BR112012021576A2 (pt) 2010-02-26 2016-10-25 Novo Nordisk As composições estáveis contendo anticorpo.
UA116189C2 (uk) 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
DK3311834T3 (da) * 2011-05-02 2026-04-20 Millennium Pharmaceuticals Inc Formulering til anti-alfa4beta7-antistof
JP7162533B2 (ja) 2016-05-04 2022-10-28 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 炎症性腸疾患の治療を目的とする三剤併用療法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108969761A (zh) 2018-12-11
IL272237A (en) 2020-02-27
KR102493433B1 (ko) 2023-01-27
AU2021225160B2 (en) 2023-12-21
CA3051418C (en) 2021-05-18
DK3311834T3 (da) 2026-04-20
MX354101B (es) 2018-02-13
JP2019052191A (ja) 2019-04-04
IL274846B1 (en) 2024-12-01
JP2022132430A (ja) 2022-09-08
CN103533959A (zh) 2014-01-22
TWI638661B (zh) 2018-10-21
EP3311834A1 (en) 2018-04-25
EA201391613A8 (ru) 2016-05-31
IL274846B2 (en) 2025-04-01
IL229169A0 (en) 2013-12-31
TW202317193A (zh) 2023-05-01
IL305583B1 (en) 2025-12-01
EP3311834B1 (en) 2026-03-11
CL2017000829A1 (es) 2017-12-29
KR20230021758A (ko) 2023-02-14
SMT202600024T1 (it) 2026-03-09
CN107998388A (zh) 2018-05-08
AU2019216679A1 (en) 2019-09-05
US20210340261A1 (en) 2021-11-04
JP2020180163A (ja) 2020-11-05
AU2012250872A1 (en) 2013-11-21
US20200377601A1 (en) 2020-12-03
JP2014515763A (ja) 2014-07-03
HRP20171457T1 (hr) 2017-11-03
IL305583A (en) 2023-10-01
IL305583B2 (en) 2026-04-01
EP2704742B1 (en) 2017-07-12
IL290848A (en) 2022-04-01
CN108969469A (zh) 2018-12-11
SMT201700515T1 (it) 2018-01-11
US11560434B2 (en) 2023-01-24
TWI832619B (zh) 2024-02-11
KR20250093426A (ko) 2025-06-24
PH12018502221A1 (en) 2019-10-28
CY1119436T1 (el) 2018-03-07
DOP2013000252A (es) 2013-12-31
MY188820A (en) 2022-01-05
AU2023274233A1 (en) 2023-12-21
US20230312727A1 (en) 2023-10-05
TWI698254B (zh) 2020-07-11
IL229169B (en) 2020-06-30
KR101884406B1 (ko) 2018-08-02
ES2646717T3 (es) 2017-12-15
ME02858B (me) 2018-04-20
TWI907924B (zh) 2025-12-11
US20180327497A1 (en) 2018-11-15
JP7107997B2 (ja) 2022-07-27
SI2704742T1 (sl) 2017-12-29
UY34054A (es) 2012-11-30
TW202133878A (zh) 2021-09-16
JP7636651B2 (ja) 2025-02-27
FI4403579T3 (fi) 2026-01-28
IL290849A (en) 2022-04-01
JP6751450B2 (ja) 2020-09-02
HK1253911A1 (en) 2019-07-05
AU2017204192A1 (en) 2017-07-13
PH12019501662A1 (en) 2021-03-15
SI4403579T1 (sl) 2026-02-27
RS56429B1 (sr) 2018-01-31
KR20210120144A (ko) 2021-10-06
JP6467457B2 (ja) 2019-02-13
EA201391613A1 (ru) 2014-07-30
ZA201308168B (en) 2018-11-28
WO2012151247A3 (en) 2013-02-28
AU2021225160A1 (en) 2021-09-30
CL2020001579A1 (es) 2020-11-06
CR20130556A (es) 2014-03-05
KR20180080354A (ko) 2018-07-11
US20180346578A1 (en) 2018-12-06
KR102136208B1 (ko) 2020-07-21
NZ617340A (en) 2015-12-24
GEAP201813302A (en) 2018-02-26
PH12013502237A1 (en) 2014-01-06
PL4403579T3 (pl) 2026-03-09
KR20200088517A (ko) 2020-07-22
MX2021008112A (es) 2022-06-02
EP4438625A3 (en) 2024-12-11
AU2019216679B2 (en) 2021-09-23
KR102014512B1 (ko) 2019-08-26
PE20141672A1 (es) 2014-11-26
CO6801648A2 (es) 2013-11-29
EA032625B1 (ru) 2019-06-28
KR101875155B1 (ko) 2018-07-09
EP4378959A2 (en) 2024-06-05
DK4403579T3 (en) 2026-02-02
TW201300128A (zh) 2013-01-01
TWI723339B (zh) 2021-04-01
HRP20260026T1 (hr) 2026-02-27
US20250034263A1 (en) 2025-01-30
US12286479B2 (en) 2025-04-29
LT4403579T (lt) 2026-01-26
PL2704742T3 (pl) 2018-01-31
EP2704742A2 (en) 2014-03-12
CA3051418A1 (en) 2012-11-08
KR20140145952A (ko) 2014-12-24
ZA201707310B (en) 2022-04-28
MX2013012725A (es) 2013-12-06
PH12018502221B1 (en) 2023-05-10
GEP20186866B (en) 2018-06-25
IL274846A (en) 2020-07-30
TWI799757B (zh) 2023-04-21
WO2012151247A2 (en) 2012-11-08
CN103533959B (zh) 2018-06-05
CA2834900A1 (en) 2012-11-08
CL2013003145A1 (es) 2014-07-25
US20140341885A1 (en) 2014-11-20
IL272237B (en) 2022-05-01
MX2019009244A (es) 2019-09-13
AU2017204192B2 (en) 2019-09-12
KR20170056713A (ko) 2017-05-23
KR102493433B9 (ko) 2023-09-01
AU2012250872B2 (en) 2017-07-13
PT4403579T (pt) 2026-02-05
KR20190100451A (ko) 2019-08-28
DK2704742T3 (en) 2017-10-23
FI3311834T3 (fi) 2026-04-23
EP4378959A3 (en) 2024-09-04
EP4403579A2 (en) 2024-07-24
EP4403579B1 (en) 2025-12-10
ECSP22046340A (es) 2022-07-29
CN107998388B (zh) 2023-07-14
EP4403579A3 (en) 2024-10-16
JP2025061332A (ja) 2025-04-10
TW201940195A (zh) 2019-10-16
TW201813665A (zh) 2018-04-16
AR086238A1 (es) 2013-11-27
JP6190359B2 (ja) 2017-08-30
US10040855B2 (en) 2018-08-07
MX384203B (es) 2025-03-14
SG194730A1 (en) 2013-12-30
CA2834900C (en) 2021-03-02
TW202434293A (zh) 2024-09-01
HUE036664T2 (hu) 2018-07-30
BR112013028169A2 (pt) 2017-06-27
PT2704742T (pt) 2017-11-15
MX367097B (es) 2019-08-05
KR102308938B1 (ko) 2021-10-01
LT2704742T (lt) 2017-10-25
JP2017137353A (ja) 2017-08-10
EP4438625A2 (en) 2024-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250034263A1 (en) Formulation for anti-alpha4beta7 antibody
RS56397B1 (sr) Formulacija za anti- alfa4beta7 antitelo
HK40114266A (en) Formulation for anti-alpha4beta7 antibody
HK40112201A (en) Formulation for anti-alpha4beta7 antibody
HK40118152A (en) Formulation for anti-alpha4beta7 antibody
HK1195485A (en) FORMULATION FOR ANTI-α4β7 ANTIBODY
HK1195485B (en) FORMULATION FOR ANTI-α4β7 ANTIBODY