RS67663B1 - Anti-gprc5d monoklonska antitela i njihove primene - Google Patents

Anti-gprc5d monoklonska antitela i njihove primene

Info

Publication number
RS67663B1
RS67663B1 RS20260070A RSP20260070A RS67663B1 RS 67663 B1 RS67663 B1 RS 67663B1 RS 20260070 A RS20260070 A RS 20260070A RS P20260070 A RSP20260070 A RS P20260070A RS 67663 B1 RS67663 B1 RS 67663B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
antibody
seq
antigen
Prior art date
Application number
RS20260070A
Other languages
English (en)
Inventor
Runsheng Li
Wentao Huang
Original Assignee
Lanova Medicines Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanova Medicines Development Co Ltd filed Critical Lanova Medicines Development Co Ltd
Priority claimed from PCT/CN2022/070287 external-priority patent/WO2022148370A1/en
Publication of RS67663B1 publication Critical patent/RS67663B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/15—Natural-killer [NK] cells; Natural-killer T [NKT] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/17—Monocytes; Macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

[0001] Opis
[0003] Oblast pronalaska
[0005] Ovo obelodanjivanje se generalno odnosi na konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, konjugovan sa citotoksinom, i njegove upotrebe. Obelodanjivanje se takođe odnosi na antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, i njegove upotrebe.
[0007] Osnovne informacije
[0009] Član D porodice receptora vezanih za G-protein C grupe 5 (GPRC5D) je član porodice receptora vezanih za G-protein. GPRC5D je transmembranski protein. Prekomerna ekspresija GPRC5D primećena je kod pacijenata sa multiplim mijelomom. Konkretno, njegova visoka ekspresija imala je značajnu korelaciju sa lošim ishodom bolesti i tretmana.
[0011] WO2018/017786 se odnosi na GPRC5D-specifična antitela ili fragmente koji vezuju antigen, ćelije koje ekspresuju data antitela ili fragmente koji vezuju antigen, kao i na povezane vektore i detektabilno obeležena antitela ili fragmente koji vezuju antigen. WO2019/154890 otkriva antitela koja se vezuju za GPRC5D, uključujući bispecifične molekule koji vezuju antigen, npr. za aktiviranje T ćelija.
[0013] S obzirom na njegovu specifičnu visoku ekspresiju na malignim ćelijama, predloženo je da antitela koja su specifična za GPRC5D mogu biti korisna za lečenje malignosti, kao što je putem bispecifičnog antitela koje redirektuje T-ćelije, ili putem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC).
[0015] Sažetak
[0017] Anti-GPRC5D antitela, uključujući njihove humanizovane derivate, otkrivena su ovde i imaju visok afinitet za ljudski GPRC5D protein. Antitela ili njihovi fragmenti su sposobni da ciljaju ćelije kancera koje izražavaju GPRC5D, i stoga se mogu koristiti za tretmanu kancera, posebno hematološkog kancera.
[0018] Jedno otelotvorenje predmetnog obelodanjivanja obezbeđuje antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji ima specifičnost vezivanja za protein člana 5 porodice humanih G-proteinskih receptora C grupe D (GPRC5D), pri čemu antitelo ili njegov fragment sadrži promenjivi region teškog lanca (VH) koji sadrži regione koji određuju komplementarnost teškog lanca CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i promenjivi region lakog lanca (VL) koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3. U nekim otelotvorenjima, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:42-47.
[0020] U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:29-34. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:7 i 35-37, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:8 i 38-41. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalasku, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38.
[0022] U nekim otelotvorenjima, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:42-47. U nekim otelotvorenjima, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:9 i 48-50, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 10 i 51-53. U nekim otelotvorenjima, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:48, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:51.
[0024] U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:54-59. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:61-64, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 16 i 65-67. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalasku, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:61, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:65. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalasku, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:63, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:65.
[0026] U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:68-73. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:1 i 74-79, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:2 i 80-86. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalasku, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:76, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82. U nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalasku, VH sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:77, a VL sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82.
[0028] U nekim otelotvorenjima, antitelo ili njegov fragment je humanizovan. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili njegov fragment je ADCC-kompetentan.
[0030] Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima, antitelo ili njegov fragment dalje sadrži citotoksični lek konjugovan sa antitelima ili njihovim fragmentom.
[0032] Takođe je obezbeđeno bispecifično antitelo, koje sadrži fragment koji se vezuje za antigen iz predmetnog obelodanjivanja, i drugi fragmenta koji se vezuje za antigen koji ima specifičnost za drugi ciljni protein. U nekim otelotvorenjima, drugi ciljni protein se bira iz grupe koja se sastoji od CD3, CD16, CD19, CD28, CD64 i 4-1BB. U nekim otelotvorenjima, drugi ciljni protein je CD3. U nekim otelotvorenjima, drugi ciljni protein je 4-1BB.
[0034] Ovde je takođe predviđeno antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, koji se specifično vezuje za protein člana D (GPRC5D) porodice 5 humanih G-proteinskih receptora, koji se sadrži:
[0036] promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
[0037] promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
[0039] Ovde je takođe predviđen konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, konjugovan sa citotoksinom, naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen specifično vezuje za humani protein iz grupe 5 receptora vezanih za G-protein, član D (GPRC5D) i sadrži:
[0041] promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
[0043] promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
[0045] Ovde je takođe predviđen konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
[0047] promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
[0049] promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
[0051] Ovde je takođe predviđen konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
[0053] promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
[0055] promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
[0057] Ovde je takođe predviđen konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu u tretmanu hematološkog kancera, pri čemu konjugat antitelo-lek (ADC) sadrži antitelo, ili njegov fragmenta koji se vezuje za antigen, konjugovan sa monometil auristatin-E (MMAE), pri čemu se antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen specifično vezuje za humani član D grupe 5 G-proteinskih receptora (GPRC5D) i sadrži:
[0059] promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
[0061] promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
[0063] Ovde je takođe predviđen konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu u tretmanu hematološkog kancera, pri čemu konjugat antitelo-lek (ADC) sadrži antitelo, ili njegov fragmenta koji se vezuje za antigen, konjugovan sa monometil auristatin-E (MMAE), pri čemu se antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen specifično vezuje za humani član D grupe 5 G-proteinskih receptora (GPRC5D) i sadrži:
[0065] promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
[0066] promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
[0068] Takođe je obezbeđen konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu u tretmanu hematološkog kancera kod pacijenta kome je to potrebno, koji sadrži davanje pacijentu antitela ili njegovog fragmenta predmetnog obelodanjivanja. Takođe je obezbeđen, a nije deo patentiranog pronalaska, metod lečenja kancera kod pacijenta kome je to potrebno, koji sadrži (a) tretman T ćelije, ćelije prirodnog ubice (NK) ili makrofaga, in vitro, antitelima ili njihovim fragmentima predmetnog obelodanjivanja, i (b) primenu tretirane ćelije na pacijenta.
[0070] U nekim otelotvorenjima, kancer je hematološki kancer, kao što jekancer B ćelija koji izražava GPRC5D (npr. multipli mijelom).
[0072] Kratak opis crteža
[0074] SL. 1 pokazuje vezivanje mišjih antitela prikupljenih iz supernatanta hibridoma za GPRC5D izraženo na CHO-K1 ćelijama.
[0076] SL. 2 pokazuje vezivanje himernih antitela za GPRC5D izraženo na CHO-K1 ćelijama.
[0078] SL. 3 pokazuje da je vezivanje za antitela izazvalo endocitozu.
[0080] SL. 4 pokazuje da su antitela bila ADCC-kompetentna.
[0082] SL. 5-8 pokazuju rezultate ispitivanja afiniteta humanizovanih antitela izvedenih iz 6G10D9, 58F9G10, 34D3H1 i 37B9C4, respektivno.
[0084] SL. 9 potvrđuje vezivanje odabranih humanizovanih antitela za GPRC5D izraženo na CHO-K1 ćelijama.
[0086] SL. 10 potvrđuje vezivanje odabranih humanizovanih antitela za GPRC5D izraženo na NCI-H929 ćelijama.
[0088] SL. 11 pokazuje efikasnost ADCC-a testiranih humanizovanih antitela.
[0090] SL. 12 pokazuje indukcionu aktivnost internalizacije testiranih humanizovanih antitela.
[0091] SL. 13 prikazuje aktivnosti ubijanja ćelija testiranih konjugata antitela i leka.
[0093] SL. 14 pokazuje aktivnost inhibicije tumora testiranog antitela.
[0095] Detaljan opis
[0097] Definicije
[0099] Treba napomenuti da se termin „jedan“ entitet odnosi na jedan ili više tih entiteta; na primer, „antitelo“ se podrazumeva kao jedno ili više antitela.Stoga se termini „jedan“, „jedan ili više“ i „najmanje jedan“ mogu ovde koristiti naizmenično.
[0101] Kako se ovde koristi, termin „polipeptid“ treba da obuhvati jedninu „polipeptid“, kao i množinu „polipeptidi“, i odnosi se na molekul sastavljen od monomera (aminokiselina) linearno povezanih amidnim vezama (takođe poznatim kao peptidne veze).Termin „polipeptid“ se odnosi na bilo koji lanac ili lance dve ili više aminokiselina, i ne odnosi se na određenu dužinu produkta. Dakle, peptidi, dipeptidi, tripeptidi, oligopeptidi, „protein“, „lanac aminokiselina“ ili bilo koji drugi termin koji se koristi da se odnosi na lanac ili lance od dve ili više aminokiselina, uključeni su u definiciju „polipeptida“, a termin „polipeptid“ može se koristiti umesto, ili zamenjivo sa bilo kojim od ovih termina. Termin „polipeptid“ se takođe odnosi na produkte post-ekspresivnih modifikacija polipeptida, uključujući bez ograničenja glikozilaciju, acetilaciju, fosforilaciju, amidaciju, derivaciju poznatim zaštitnim/blokirajućim grupama, proteolitičko cepanje ili modifikaciju neprirodnim aminokiselinama. Polipeptid može biti izveden iz prirodnog biološkog izvora ili proizvedene rekombinantne tehnologije, ali nije nužno preveden iz određene sekvence nukleinskih kiselina. Može se generisati na bilo koji način, uključujući hemijskom sintezom.
[0103] „Homologija“ ili „identitet“ ili „sličnost“ se odnosi na sličnost sekvenci između dva peptida ili između dva molekula nukleinske kiseline. Homologija se može odrediti poređenjem pozicije u svakoj sekvenci koji se može poravnati u svrhu poređenja. Kada poziciju u upoređenoj sekvenci zauzima ista baza ili aminokiselina, onda su molekuli homologni na toj poziciji. Stepen homologije između sekvenci je funkcija broja podudarnih ili homolognih pozicija koje dele sekvence. „Nepovezana“ ili „nehomologna“ sekvenca deli manje od 40% identiteta, mada poželjno manje od 25% identiteta, sa jednom od sekvenci predmetnog obelodanjivanja.
[0105] Polinukleotidni ili polinukleotidni region (ili polipeptidni ili polipeptidni region) ima određeni procenat (na primer, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99%) „identiteta sekvence“ na drugu sekvencu, što znači da, kada se poravna, taj procenat baza (ili aminokiselina) je isti u poređenju dve sekvence.
[0107] Termin „ekvivalentna nukleinska kiselina ili polinukleotid“ odnosi se na nukleinsku kiselinu koja ima nukleotidnu sekvencu koja ima određeni stepen homologije, ili identiteta sekvence, sa nukleotidnom sekvencom nukleinske kiseline ili njenim komplementom. Homolog dvolančane nukleinske kiseline treba da uključi nukleinske kiseline koje imaju nukleotidnu sekvencu koja ima određeni stepen homologije sa ili sa njenim komplementom. U jednom aspektu, homologi nukleinskih kiselina su sposobni da se hibridizuju do nukleinske kiseline ili njenog komplementa. Isto tako, „ekvivalentni polipeptid“ se odnosi na polipeptid koji ima određeni stepen homologije, ili identiteta sekvence, sa aminokiselinskom sekvencom referentnog polipeptida. U nekim aspektima, identitet sekvence je najmanje oko 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99%. U nekim aspektima, ekvivalentni polipeptid ili polinukleotid ima jedan, dva, tri, četiri ili pet adicija, delecija, supstitucija i njihove kombinacije u poređenju sa referentnim polipeptidom ili polinukleotidom. U nekim aspektima, ekvivalentna sekvenca zadržava aktivnost (npr. vezivanje epitopa) ili strukturu (npr. solni most) referentne sekvence.
[0109] Kao što se ovde koristi, „antitelo“ ili „polipeptid koji se vezuje za antigen“ se odnosi na polipeptid ili polipeptidni kompleks koji specifično prepoznaje i vezuje se za antigen. Antitelo može biti celo antitelo i bilo koji fragment koji se vezuje za antigen ili njegov jedan lanac. Stoga termin „antitelo“ uključuje bilo koji protein ili molekul koji sadrži peptid koji sadrži najmanje deo molekula imunoglobulina koji ima biološku aktivnost vezivanja za antigen. Primeri takvih uključuju, ali nisu ograničeni na region koji određuje komplementarnost (CDR) teškog ili lakog lanca ili njegovog dela koji vezuje ligand, promenjivi region teškog lanca ili lakog lanca, konstantni region teškog lanca ili lakog lanca, okvirni region (FR) ili bilo koji njegov deo, ili najmanje jedan deo vezujućeg proteina.
[0111] Termini „fragment antitela“ ili „fragment koji se vezuje za antigen“, kao što se ovde koristi, je deo antitela kao što su F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv i slično. Bez obzira na strukturu, fragment antitela se vezuje sa istim antigenom koji prepoznaje netaknuto antitelo. Termin „fragment antitela“ uključuje aptamere, špigelmere i diatela. Termin „fragment antitela“ takođe uključuje bilo koji sintetički ili genetski modifikovan protein koji deluje kao antitelo vezivanjem za specifični antigen kako bi se formirao kompleks.
[0113] „Jednolančani varijabilni fragment“ ili „scFv“ odnosi se na fuzioni protein promenjivih regiona teških (VH) i lakih lanaca (VL) imunoglobulina. U nekim aspektima, regioni su povezani kratkim linker peptidom od deset do oko 25 aminokiselina. Linker može biti bogat glicinom radi fleksibilnosti, kao i serinom ili treoninom radi rastvorljivosti, i može ili povezati N-terminus VH sa C-terminusom VL, ili obrnuto. Ovaj protein zadržava specifičnost originalnog imunoglobulina, uprkos uklanjanju konstantnih regiona i uvođenju linkera. ScFv molekuli su poznati u predmetnoj oblasti i opisani su, npr. u američkom patentu 5,892,019.
[0115] Termin antitelo obuhvata različite široke klase polipeptida koji se mogu biohemijski razlikovati. Stručnjaci će ceniti da su teški lanci klasifikovani kao gama, mu, alfa, delta ili epsilon (y, µ, α, δ, ε) sa nekim podklasama među njima (npr., γ1-γ4).Priroda ovog lanca određuje „klasu“ antitela kao IgG, IgM, IgA IgG, odnosno IgE. Imunoglobulinske podklase (izotipovi) npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5 itd. su dobro okarakterisani i poznato je da pružaju funkcionalnu specijalizaciju.Izmenjene verzije svake od ovih klasa i izotipova lako su prepoznatljive stručnjaku u pogledu trenutnog obelodanjivanja i, shodno tome, nalaze se u okviru trenutnog obelodanjivanja. Sve klase imunoglobulina su jasno u okviru predmetnog obelodanjivanja, sledeća diskusija će generalno biti usmerena na IgG klasu molekula imunoglobulina. Što se tiče IgG, standardni molekul imunoglobulina sadrži dva identična polipeptida lakog lanca molekulske mase približno 23.000 Daltona i dva identična polipeptida teškog lanca molekulske mase 53.000-70.000. Četiri lanca su obično spojena disulfidnim vezama u „Y“ konfiguraciji, pri čemu laki lanci drže teške lance počevši od ušća „Y“ i nastavljajući kroz promenljivi region.
[0116] Antitela, polipeptidi koji vezuju antigen, varijante ili njihovi derivati obelodanjivanja uključuju, ali nisu ograničeni na, poliklonska, monoklonska, multispecifična, humana, humanizovana, primatizovana ili himerna antitela, jednolančana antitela, fragmente koji vezuju epitop, npr., Fab, Fab' i F(ab')2, Fd, Fvs, jednolančani Fvs (scFv), jednolančana antitela, disulfidno vezani Fvs (sdFv), fragmente koji sadrže ili VK ili VH domena, fragmente koje proizvodi biblioteka Fab ekspresije i anti idiotska (anti-Id) antitela (uključujući, npr., anti-Id antitela na LIGHT antitela koja su ovde obelodanjena). Molekuli imunoglobulina ili antitela iz ovog obelodanjivanja mogu biti bilo koje vrste (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), klase (npr. IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl i IgA2) ili podklase molekula imunoglobulina.
[0118] Laki lanci se klasifikuju kao kapa ili lambda (K, λ).Svaka klasa teških lanaca može biti vezana ili kapa ili lambda lakim lancem. Generalno, laki i teški lanci su međusobno kovalentno vezani, a „repni“ delovi dva teška lanca su međusobno vezani kovalentnim disulfidnim vezama ili nekovalentnim vezama kada imunoglobulini nastaju bilo hibridomima, B ćelijama ili genetski modifikovanim ćelijama domaćinima. U teškom lancu, aminokiselinske sekvence idu od N-terminusa na račvastim krajevima Y konfiguracije do C-terminusa na dnu svakog lanca.
[0120] I laki i teški lanci su podeljeni na regione strukturne i funkcionalne homologije. Funkcionalno se koriste termini „konstanta“ i „promenljiva“. U tom smislu, biće uvaženo da varijabilni domeni i lakih (VK) i teških (VH) delova lanca određuju prepoznavanje i specifičnost antigena. Nasuprot tome, konstantni domeni lakog lanca (CK) i teškog lanca (CH1, CH2 ili CH3) daju važna biološka svojstva kao što su sekrecija, transplacentalna pokretljivost, vezivanje Fc receptora, vezivanje komplementa i slično. Po konvenciji, numerisanje domena konstantnog regiona se povećava kako postaju distalniji od mesta vezivanja antigena ili amino terminusa antitela. N-terminus deo je promenljivi region, a na C-terminus delu je konstantni region; CH3 i CK domeni zapravo sadrže karboksiterminus teškog i lakog lanca, respektivno.
[0122] Kao što je gore navedeno, promenljivi region omogućava antitelima da selektivno prepoznaju i specifično vežu epitope na antigene. To jest, VK domen i VH domen, ili podskup regiona koji određuju komplementarnost (CDR), antitela se kombinuju da formiraju promenljivi region koji definiše trodimenzionalno mesto vezivanja antigena. Ova kvartarna struktura antitela formira mesto vezivanja antigena koje je prisutno na kraju svakog kraka Y. Preciznije, mesto vezivanja antigena je definisano sa tri CDR-a na svakom od VH i VK lanaca (tj. CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3). U nekim slučajevima, npr. određeni molekuli imunoglobulina izvedeni iz vrsta kamila ili konstruisani na osnovu imunoglobulina kamila, kompletan molekul imunoglobulina može se sastojati samo od teških lanaca, bez lakih lanaca. Vidi, npr. Hamers-Casterman i sar., Nature 363:446-448 (1993).
[0124] U prirodnim antitelima, šest „regiona koji određuju komplementarnost“ ili „CDR“ prisutnih u svakom domenu vezivanja antigena su kratke, nesusedne aminokiselinske sekvence koje su posebno pozicionirane da formiraju domen vezivanja antigena dok antitelo preuzima trodimenzionalnu konfiguraciju u vodenom okruženju. Ostatak aminokiselina u domenima vezivanja za antigen, koji se nazivaju „okvirnim“ regionima, pokazuju manju intermolekularnu varijabilnost. Okvirni regioni u velikoj meri usvajaju konformaciju β-liste i CDR-ovi formiraju petlje koje povezuju, a u nekim slučajevima čine deo strukture β-liste. Dakle, okvirni regioni deluju tako da formiraju skelu koja obezbeđuje pozicioniranje CDR-ova u ispravnoj orijentaciji interlančanim, nekovalentnim interakcijama. Domen vezivanja antigena formiran pozicioniranim CDR definiše površinu komplementarnu epitopu na imunoreaktivnom antigenu. Ova komplementarna površina promoviše nekovalentno vezivanje antitela za njegov srodni epitop.
[0125] Aminokiseline koje sadrže CDR i okvirni region, respektivno, mogu se lako identifikovati za bilo koji dati varijabilni region teškog ili lakog lanca od strane stručnjaka, jer su precizno definisane (vidi „Sequences of Proteins of Immunological Interest,“ Kabat, E., i sar., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); i Chothia i Lesk, J. MoI.Biol., 196:901-917 (1987)).
[0127] U slučaju kada postoje dve ili više definicija termina koji se koristi i/ili prihvata u oblasti, definicija termina koji se ovde koristi ima za cilj da uključi sva takva značenja, osim ako nije izričito navedeno suprotno. Specifičan primer je upotreba termina „region koji određuje komplementarnost“ („CDR“) za opisivanje nekontiguoznih mesta kombinovanja antigena koja se nalaze u promenljivom regionu i polipeptida teškog i lakog lanca. Ovaj region su opisali Kabat i sar., U.S. Dept. of Health and Human Services, „Sequences of Proteins of Immunological Interest“ (1983) i Chothia i sar., J. MoI. Biol.196:901-917 (1987). Definicije CDR prema Kabat i Chothia uključuju preklapanje ili podskupove aminokiselinskih ostataka u poređenju jedni sa drugima. Ipak, primena bilo koje definicije koja se odnosi na CDR antitela ili presađenih antitela ili njihovih varijanti je namenjena da bude u okviru termina kako je ovde definisano i korišćeno. Odgovarajući aminokiselinski ostaci koji obuhvataju CDR-ove kako je definisano u svakoj od gore navedenih referenci navedeni su u tabeli ispod radi poređenja. Tačan broj ostataka koji obuhvata određeni CDR variraće u zavisnosti od sekvence i veličine CDR-a. Stručnjaci u ovoj oblasti mogu rutinski da odrede koji ostaci sadrže određeni CDR s obzirom na aminokiselinsku sekvencu promenjivog regiona antitela.
[0130]
[0133] Kabat i sar. su takođe definisali sistem numeracije za sekvence promenljivog domena koji je primenljiv na bilo koje antitelo. Stručnjak može nedvosmisleno dodeliti ovaj sistem „Kabat numerisanja“ bilo kojoj sekvenci promenljivog domena, bez oslanjanja na bilo koje eksperimentalne podatke izvan same sekvence. Kao što se ovde koristi, „Kabat numerisanje“ se odnosi na sistem numerisanja koji su utvrdili Kabat i sar., U.S. Dept. of Health and Human Services, „Sequence of Proteins of Immunological Interest“ (1983).
[0135] Pored gornje tabele, Kabat sistem brojeva opisuje CDR regione na sledeći način: CDR-H1 počinje na približno aminokiselini 31 (tj. približno 9 ostataka nakon prvog cisteinskog ostatka), uključuje približno 5-7 aminokiselina i završava se na sledećem triptofanskom ostatku. CDR-H2 počinje na petnaestom ostatku nakon završetka CDR-H1, uključuje približno 16-19 aminokiselina, a završava se na sledećem ostatku arginina ili lizina. CDR-H3 počinje na približno trideset trećem aminokiselinskom ostatku nakon završetka CDR-H2; uključuje 3-25 aminokiselina; i završava se na sekvenci W-G-X-G, gde je X bilo koja aminokiselina. CDR-L1 počinje na približno ostatku 24 (tj. nakon ostatka cisteina); uključuje približno 10-17 ostataka; i završava se na sledećem ostatku triptofana. CDR-L2 počinje na približno šesnaestom ostatku nakon završetka CDR-L1 i uključuje približno 7 ostataka. CDR-L3 počinje na približno trideset trećem ostatku nakon završetka CDR-L2 (tj. nakon cisteinskog ostatka); uključuje približno 7-11 ostataka i završava se na sekvenci F ili W-G-X-G, pri čemu je X bilo koja aminokiselina.
[0137] Ovde navedena antitela mogu biti bilo kog životinjskog porekla, uključujući ptice i sisare. Po mogućnosti, antitela su humana, mišja, magareća, zečja, kozja, zamorčeva, kamelina, lama, konjska ili pileća antitela. U drugom otelotvorenju, promenljivi region može biti uslovnog porekla (npr. od ajkula).
[0139] Kao što se ovde koristi, termin „konstantni region teškog
[0140] lanca“ uključuje aminokiselinske sekvence izvedene iz teškog lanca imunoglobulina. Polipeptid koji sadrži konstantni region teškog lanca sadrži najmanje jedan od: domena CH1, domena šarke (npr. regiona gornje, srednje i/ili donje šarke), domena CH2, domena CH3 ili njihove varijante ili fragment. Na primer, polipeptid koji vezuje antigen za upotrebu u obelodanjivanju može da sadrži polipeptidni lanac koji sadrži CH1 domen; polipeptidni lanac koji sadrži CH1 domen, najmanje deo domena šarke i CH2 domen; polipeptidni lanac koji sadrži CH1 domen i CH3 domen; polipeptidni lanac koji sadrži CH1 domen, najmanje deo domena šarke i CH3 domen, ili polipeptidni lanac koji sadrži CH1 domen, najmanje deo domena šarke, CH2 domen i CH3 domen. U drugom otelotvorenju, polipeptid obelodanjivanja sadrži polipeptidni lanac koji sadrži CH3 domen. Dalje, antitelo za upotrebu u obelodanjivanju može nedostajati barem deo CH2 domena (npr. ceo ili deo CH2 domena). Kao što je gore navedeno, stručnjak će shvatiti da se konstantni region teškog lanca može modifikovati tako da varira u sekvenci aminokiselina od prirodnog molekula imunoglobulina.
[0142] Konstantni region teškog lanca antitela koji je ovde obelodanjen može biti izveden iz različitih molekula imunoglobulina. Na primer, konstantni region teškog lanca polipeptida može sadržati CH1 domen izveden iz molekula IgG1 i region šarke izveden iz molekula IgG3. U drugom primeru, konstantni region teškog lanca može sadržati region šarke izveden, delimično, iz molekula IgG1 i, delimično, iz molekula IgG3. U drugom primeru, deo teškog lanca može sadržati himernu šarku izvedenu, delimično, iz molekula IgG1 i, delimično, iz molekula IgG4.
[0144] Kao što se ovde koristi, termin „konstantni region lakog lanca“ uključuje aminokiselinske sekvence izvedene iz lakog lanca antitela. Po mogućnosti, konstantni region lakog lanca sadrži najmanje jedan konstantni kappa domen ili konstantni lambda domen.
[0146] „Par teških lanaca lakog lanca“ se odnosi na sakupljanje lakog lanca i teškog lanca koji mogu da formiraju dimer putem disulfidne veze između domena CL lakog lanca i domena CH1 teškog lanca.
[0148] Kao što je prethodno naznačeno, strukture podjedinica i trodimenzionalna konfiguracija konstantnih regiona različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate. Kao što se ovde koristi, termin „VH domen“ uključuje varijabilni domen amino terminala imunoglobulinskog teškog lanca, a termin „CH1 domen“ uključuje prvi (najviše amino terminala) domen konstantnog regiona imunoglobulinskog teškog lanca. CH1 domen je susedan VH domenu i predstavlja amino terminal za zglobni region molekula imunoglobulinskog teškog lanca.
[0150] Kao što se ovde koristi, termin „CH2 domen“ uključuje deo molekula teškog lanca koji se proteže, npr. od ostatka 244 do ostatka 360 antitela koristeći konvencionalne šeme numeracije (ostaci 244 do 360, Kabat sistem numeracije; i ostaci 231-340, EU sistem numeracije; vidi Kabat i sar., U.S. Dept. of Health and Human Services, „Sequences of Proteins of Immunological Interest“ (1983). CH2 domen je jedinstven po tome što nije usko uparen sa drugim domenom. Umesto toga, dva N-vezana razgranata ugljenohidratna lanca su umetnuta između dva CH2 domena netaknutog nativnog IgG molekula. Takođe je dobro dokumentovano da se CH3 domen proteže od CH2 domena do C-terminala IgG molekula i sadrži približno 108 ostataka.
[0152] Kao što se ovde koristi, termin „region šarke“ uključuje deo molekula teškog lanca koji povezuje CH1 domen sa CH2 domenom. Ovaj region šarke se sastoji od približno 25 ostataka i fleksibilan je, što omogućava da se dva N-terminalna regiona koja se vezuju za antigen kreću nezavisno. Regioni šarke mogu se podeliti u tri različita domena: domeni gornje, srednje i donje šarke (Roux i sar., J. Imunol 161:4083 (1998)).
[0154] Kao što se ovde koristi, termin „disulfidna veza“ uključuje kovalentnu vezu formiranu između dva atoma sumpora. Na primer, aminokiselina cistein sadrži tiolnu grupu koja može da formira disulfidnu vezu ili most sa tiolnom grupom na drugom ostatku cisteina. U većini prirodnih IgG molekula, CH1 i CL regioni su povezani disulfidnom vezom i dva teška lanca su povezana dvema disulfidnim vezama na pozicijama koje odgovaraju 239 i 242 koristeći Kabat sistem numeracije (pozicija 226 ili 229, sistem numeracije EU).
[0156] Kao što se ovde koristi, termin „himerno antitelo“ će se smatrati bilo kojim antitelima kod kojih je imunoreaktivni region ili mesto dobijeno ili izvedeno od prve vrste, a konstantni region (koji može biti netaknut, delimičan ili modifikovan u skladu sa trenutnim obelodanjivanjem) dobijen je od druge vrste. U određenim otelotvorenjima, ciljni region vezivanja ili mesto će biti iz nehumanog izvora (npr. miša ili primata), a konstantni region je human.
[0158] Kao što se ovde koristi, „procentualna humanizacija“ se izračunava određivanjem broja okvirnih razlika aminokiselina (tj. razlika koja nije CDR) između humanizovanog domena i domena zametne linije, oduzimanjem tog broja od ukupnog broja aminokiselina, a zatim deljenjem toga sa ukupnim brojem aminokiselina i množenjem sa 100.
[0160] Pod „specifično se vezuje“ ili „ima specifičnost za“, generalno se podrazumeva da se antitelo vezuje za epitop preko svog domena vezivanja za antigen i da vezivanje podrazumeva određenu komplementarnost između domena vezivanja za antigen i epitopa. Prema ovoj definiciji, za antitelo se kaže da se „specifično vezuje“ za epitop kada se vezuje za taj epitop, preko svog antigenvezujućeg domena lakše nego što bi se vezalo za slučajni, nepovezani epitop. Termin „specifičnost“ se ovde koristi za kvalifikaciju relativnog afiniteta kojim se određeno antitelo vezuje za određeni epitop. Na primer, može se smatrati da antitelo „A“ ima veću specifičnost za dati epitop od antitela „B“, ili može se reći da se antitelo „A“ vezuje za epitop „C“ sa većom specifičnošću nego što ima za povezani epitop „D“.
[0162] Kao što se ovde koristi, termini „tretirati“ ili „tretman“ odnose se i na terapijsko tretiranje i na profilaktičke ili preventivne mere, pri čemu je cilj sprečavanje ili usporavanje (umanjivanje) neželjene fiziološke promene ili poremećaja, kao što je progresija kancera. Korisni ili željeni klinički rezultati uključuju, ali nisu ograničeni na, ublažavanje simptoma, smanjenje obima bolesti, stabilizovano (tj. nepogoršanje) stanje bolesti, odlaganje ili usporavanje progresije bolesti, ublažavanje ili palijaciju bolesnog stanja i remisiju (delimičnu ili potpunu), bez obzira da li je otkrivena ili neotkrivena. „Tretman“ takođe može značiti produženje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem bez tretmana. Oni kojima je potreban tretman uključuju one koji imaju poremećaj, kao i one koji su skloni da imaju poremećaj ili one kod kojih poremećaj treba sprečiti.
[0164] Pod pojmom „subjekt“ ili „pojedinac“ ili „životinja“ ili „pacijent“ ili „sisar“ podrazumeva se svaki subjekt, posebno subjekt sisar, kome je poželjna dijagnoza, prognoza ili terapija. Subjekti sisara uključuju ljude, domaće životinje, životinje na farmi i životinje u zoološkim vrtovima, životinje za sport ili kućne ljubimce kao što su psi, mačke, zamorci, zečevi, pacovi, miševi, konji, goveda, krave i tako dalje.
[0166] Kao što se ovde koristi, fraze kao što su „pacijentu kome je potreban tretman“ ili „subjektu kome je potreban tretman“ uključuju subjekte, kao što su subjekti sisara, koji bi imali koristi od primene antitela ili kompozicija predmetnog obelodanjivanja koji se koriste, npr. za detekciju, za dijagnostičku proceduru i/ili za tretman.
[0168] Anti-GPRC5D antitela
[0170] Koristeći tehnologiju hibridoma, prateći eksperimentalni primeri pokazali su da je dobijen niz mišjih antitela. Sekvencirano je četrnaest mišjih antitela i napravljena su humanizovana antitela. Ova humanizovana antitela su pokazala snažnu aktivnost vezivanja za GPRC5D i bila su u stanju da indukuju endocitozu posredovanu receptorima. In vivo testiranje je pokazalo da su ova antitela aktivna u indukovanju ADCC-a i inhibiranju razvoja tumora.
[0172] Četiri mišja antitela, 34D3H1, 37B9C4, 58F9G10 i 6G10D9, prošla su proces humanizacije. Neka od humanizovanih antitela, uključujući 6-H3L3, 6-H4L3 (oba izvedena iz 6G10D9), 58-H1L1, 58-H3L1 (oba izvedena iz 58F9G10), 34-HIL1 (izvedeno iz 34D3H1) i 37-H1L1 (izvedeno iz 37B9C4) dalje su pokazala obećanje za nastavak kliničkog razvoja.
[0174] U skladu sa jednim otelotvorenjem predmetnog obelodanjivanja, pod uslovom da antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen ima specifičnost vezivanja za protein člana D (GPRC5D) iz porodice 5 humanih G-proteinskih receptora. Antitelo ili njegov fragment uključuje varijabilni region teškog lanca (VH) koji sadrži region za određivanje komplementarnosti teškog lanca CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i varijabilni region lakog lanca (VL) koji sadrži region za određivanje komplementarnosti CDRL1, CDRL2 i CDRL3.
[0176] U nekim otelotvorenjima, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 42–47.
[0178] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence EQ ID NO:29-34. Primer sekvenci za VH uključuje SEQ ID NO:7 i 35-37 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO:7 i 35-37. Primer sekvenci za VL uključuje SEQ ID NO:8 i 38-41 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO:8 i 38-41.
[0180] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:35 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:35. U jednom otelotvorenju VL uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:38 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:38.
[0181] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima koja nisu deo patentiranog pronalaska, su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38.
[0183] U jednom otelotvorenju, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:42-47.
[0184] Primeri sekvenci za VH uključuju SEQ ID NO: 9 i 48-50 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 9 i 48-50. Primeri sekvenci za VL uključuju SEQ ID NO: 10 i 51-53 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO:10 i 51-53.
[0186] U jednom otelotvorenju VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:48 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:48. U jednom otelotvorenju VL uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:51 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:51.
[0188] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:48 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:51.
[0190] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:54-59. Primeri sekvenci za VH uključuju SEQ ID NO: 61-64 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 61-64. Primeri sekvenci za VL uključuju SEQ ID NO: 16 i 65-67 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 16 i 65-67.
[0191] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:61 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:61. U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VL uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:65 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:65.
[0193] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima koja nisu deo patentiranog pronalaska, su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:61 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:65.
[0195] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:63 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:63. U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VL uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:65 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:65.
[0197] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima koja nisu deo patentiranog pronalaska, su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:63 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:65.
[0199] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:54, 60 i 56-59. Primeri sekvenci za VH uključuju SEQ ID NO: 15 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO:15. Primeri sekvenci za VL uključuju SEQ ID NO: 16 i 65-67 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 16 i 65-67.
[0201] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 68-73. Primeri sekvenci za VH uključuju SEQ ID NO: 1 i 74-79 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 1 i 74-79. Primeri sekvenci za VL uključuju SEQ ID NO: 2 i 80-86 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na bilo koju od SEQ ID NO: 2 i 80-86.
[0203] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:76 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO: 76. U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalasku, VL uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na SEQ ID NO:82.
[0205] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima koja nisu deo patentiranog pronalaska, su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:76 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:82.
[0207] U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalaska, VH uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO:77 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence SEQ ID NO:77. U jednom otelotvorenju, koje nije deo patentiranog pronalasku, VL uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 82 ili sekvencu koja ima najmanje 85%, 90% ili 95% identiteta sekvence u odnosu na SEQ ID NO:82.
[0208] Takođe su predviđena, u nekim otelotvorenjima, koja nisu deo patentiranog pronalaska, antitela i njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen koji se vezuju za isti epitop na FAPα kao i bilo koje od ovih antitela. Takođe pod uslovom, u nekim otelotvorenjima koja nisu deo patentiranog pronalaska, su antitela i njihovi fragmenti koji vezuju antigen koji se takmiče sa bilo kojim od ovih antitela u vezivanju za FAPα, kao što je ono koje ima VH koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:77 i VL koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:82.
[0210] U nekim otelotvorenjima, antitelo ili njegov fragment je ADCC-kompetentan. Metode i materijali pogodni za izradu ADCC-kompetentnog antitela poznati su u struci, kao što je upotreba odgovarajućih Fc fragmenata ili smanjenje/uklanjanje fukozilacije.
[0212] U nekim otelotvorenjima, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3, respektivno, uključuju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:42-47, pri čemu svaka od recitovanih CDR sekvenci uključuje jednu, dve ili tri konzervativne supstitucije aminokiselina.
[0214] „Konzervativna supstitucija aminokiselina“ je ona u kojoj se ostatak aminokiseline zamenjuje ostatkom aminokiseline koji ima sličan bočni lanac. Porodice aminokiselinskih ostataka sa sličnim bočnim lancima su definisane u struci, uključujući bazne bočne lance (npr. lizin, arginin, histidin), kisele bočne lance (npr. asparaginska kiselina, glutaminska kiselina), nenaelektrisane polarne bočne lance (npr. glicin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tirozin, cistein), nepolarne bočne lance (npr. alanin, valin, leucin, izoleucin, prolin, fenilalanin, metionin, triptofan), beta-razgranate bočne lance (npr. treonin, valin, izoleucin) i aromatične bočne lance (npr. tirozin, fenilalanin, triptofan, histidin).Stoga se neesencijalni aminokiselinski ostatak u polipeptidu imunoglobulina poželjno zamenjuje drugim aminokiselinskim ostatkom iz iste porodice bočnih lanaca. U drugom otelotvorenju, niz aminokiselina može se konzervativno zameniti strukturno sličnim nizom koji se razlikuje po redosledu i/ili kompoziciji članova porodice bočnih lanaca.
[0215] Neograničavajući primeri konzervativnih supstitucija aminokiselina dati su u tabeli ispod, gde ocena sličnosti od 0 ili više ukazuje na konzervativnu supstituciju između dve aminokiseline.
[0217] Tabela A. Matrica sličnosti aminokiselina
[0219]
[0222] Tabela B: Konzervativne supstitucije aminokiselina
[0225]
[0226]
[0229] Takođe će stručnjak shvatiti da antitela kao što je ovde obelodanjeno mogu biti modifikovana tako da se razlikuju u sekvenci aminokiselina od prirodnog vezujućeg polipeptida iz kojeg su izvedena. Na primer, polipeptidna ili aminokiselinska sekvenca izvedena iz određenog proteina može biti slična, npr. može imati određeni procenat identičnosti sa početnom sekvencom, npr. može biti 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% identična početnoj sekvenci.
[0231] U nekim otelotvorenjima, anti-CCR8 antitela su modifikovani mAbs koji sadrži modifikovani konstantni region teškog lanca, kao što je afukozilirani teški lanac, koji se vezuje sa većim afinitetom za aktiviranje Fcy receptora koji je posredovao poboljšani ADCC u poređenju sa nemodifikovanim mAb. U nekim otelotvorenjima, anti-CCR8 antitela sadrže teški lanac koji je humana IgG1 varijanta koja uključuje jedan ili kombinaciju L234Y, L235Q, G236W, S239D/M, F243L, H268D, D270E, R292P, S298A, Y300L, V305I, K326D, A330L/M, I332E, K334A/E, P396L koji poboljšavaju funkciju ADCC (sve EU numeracije).
[0233] U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži aminokiselinsku sekvencu ili jedan ili više delova koji obično nisu povezani sa antitelima. Primerne modifikacije su detaljnije opisane u nastavku. Na primer, antitelo obelodanjivanja može da sadrži fleksibilnu sekvencu linkera, ili može biti modifikovano da doda funkcionalni deo (npr., PEG, lek, toksin ili etiketa).
[0235] Antitela, varijante ili njihovi derivati obelodanjivanja uključuju derivate koji su modifikovani, tj. kovalentnim vezivanjem bilo koje vrste molekula za antitelo tako da kovalentno vezivanje ne sprečava vezivanje antitela za epitop. Na primer, ali ne ograničavanjem, antitela se mogu modifikovati, npr.. glikozilacijom, acetilacijom, pegilacijom, fosforilacijom, fosforilacijom, amidacijom, derivatizacijom poznatim zaštitnim/blokadnim grupama, proteolitičkim cepanjem, povezivanjem sa ćelijskim ligandom ili drugim proteinom, itd. Bilo koja od brojnih hemijskih modifikacija može se izvršiti poznatim tehnikama, uključujući, ali ne ograničavajući se na specifično hemijsko cepanje, acetilaciju, formilaciju, metaboličku sintezu tunikamicina itd. Pored toga, antitela mogu sadržati jednu ili više neklasičnih aminokiselina.
[0237] Konjugati antitelo-lek
[0239] GPRC5D je prekomerno izražen na određenim malignim hematološkim ćelijama, kao što su ćelije multiplog mijeloma. Stoga se antitela i fragmenti trenutnog obelodanjivanja mogu koristiti za ciljanje tih malignih ćelija za inhibiciju, inaktivaciju uništenja. U jednom primeru, antitelo ili fragment se konjuguje sa agensom koji pomaže u inhibiciji, neaktivnosti ili uništavanju maligne ćelije. Ovde je pokazano da su antitela u stanju da izazovu GPRC5D posredovanu endocitozu.
[0241] U nekim otelotvorenjima, antitela ili fragmenti mogu biti konjugovani sa terapijskim agensima, predlekovima, peptidima, proteinima, enzimima, virusima, lipidima, modifikatorima biološkog odgovora, farmaceutskim agensima ili PEG. U nekim otelotvorenjima, konjugovani agens može biti kratko interferirajuća RNK (siRNK) ili urođeni modulator, kao što je STimulator agonista gena interferona (UBOD) ili agonist TLR7/8.
[0243] U jednom otelotvorenju, antitela ili fragmenti obelodanjivanja su kovalentno vezani za deo leka. Deo leka može biti, ili biti modifikovan tako da uključuje, grupu reaktivnu sa tačkom konjugacije na antitelima. Na primer, deo leka se može vezati alkilacijom (npr. na lizinima epsilon-amino grupe ili N-terminusu antitela), reduktivnom aminacijom oksidovanog ugljenog hidrata, transesterifikacijom između hidroksilnih i karboksilnih grupa, amidacijom na amino grupama ili karboksilnim grupama i konjugacijom na tiole.
[0245] U nekim otelotvorenjima, broj delova leka, p, konjugovanih po molekulu antitela kreće se u proseku od 1 do 8; 1 do 7, 1 do 6, 1 do 5, 1 do 4, 1 do 3, ili 1 do 2. U nekim otelotvorenjima, p se kreće u proseku od 2 do 8, 2 do 7, 2 do 6, 2 do 5, 2 do 4 ili 2 do 3. U drugim otelotvorenjima, p je prosek od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8. U nekim otelotvorenjima, p se kreće u proseku od oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 10, oko 2 do oko 10, oko 2 do oko 9, oko 1 do oko 8, oko 1 do oko 7, oko 1 do oko 6, oko 1 do oko 5, oko 1 do oko 4, oko 1 do oko 3, ili oko 1 do oko 2. U nekim otelotvorenjima, p se kreće od oko 2 do oko 8, oko 2 do oko 7, oko 2 do oko 6, oko 2 do oko 5, oko 2 do oko 4 ili oko 2 do oko 3.
[0247] Na primer, kada hemijska aktivacija proteina rezultira stvaranjem slobodnih tiolnih grupa, protein može biti konjugovan sa sulfhidrilnim reaktivnim agensom. U jednom aspektu, agens je onaj koji je suštinski specifičan za slobodne tiolne grupe. Takvi agensi uključuju, na primer, malemid, haloacetamide (npr. jodo, bromo ili hloro), haloestere (npr. jodo, bromo ili hloro), halometil ketone (npr. jodo, bromo ili hloro), benzilne halogenide (npr. jodid, bromid ili hlorid), vinil sulfon i piridiltio.
[0249] Lek se može povezati sa antitelima ili fragmentima pomoću linkera. Odgovarajući linkeri uključuju, na primer, linkere koji se mogu cepati i one koji se ne mogu cepati. Cepljivi linker je tipično podložan cepanju u intracelularnim uslovima. Pogodni linkeri koji se mogu cepati uključuju, na primer, peptidni linker koji se može cepiti intracelularnom proteazom, kao što je lizosomska proteaza ili endosomska proteaza. U primernim otelotvorenjima, linker može biti dipeptidni linker, kao što je linker valin-citrulin (val-cit), fenilalanin-lizin (phe-lys) ili maleimidokapronic-valin-citrulin-p-aminobenziloksikarbonil (mc-Val-Cit-PABA). Drugi linker je sulfosukcinimidil-4-[N-maleimidometil]cikloheksan-1-karboksilat (smcc). Sulfo-smcc konjugacija se odvija preko maleimidne grupe koja reaguje sa sulfhidrilima (tioli, -SH), dok je njen Sulfo-NHS ester reaktivan prema primarnim aminima (kao što je pronađeno u lizinu i proteinu ili peptidu N-terminusu). Još jedan linker je maleimidokaproil (mc). Drugi pogodni linkeri uključuju linkere koji se hidrolizuju na određenoj pH vrednosti ili pH opsegu, kao što je hidrazonski linker. Dodatni pogodni cepljivi linkeri uključuju disulfidne linkere. Linker može biti kovalentno vezan za antitelo u tolikoj meri da se antitelo mora razgraditi intracelularno da bi se lek oslobodio npr. mc linker i slično.
[0251] Linker može uključivati grupu za povezivanje sa antitelima. Na primer, linker može uključivati amino, hidroksil, karboksil ili sulfhidril reaktivne grupe (npr. malemid, haloacetamide (npr. jodo, bromo ili hloro), haloestere (npr. jodo, bromo ili hloro), halometil ketone (npr. jodo, bromo ili hloro), benzilne halogenide (npr. jodid, bromid ili hlorid), vinil sulfon i piridiltio).
[0253] U nekim otelotvorenjima, deo leka je citotoksično ili citostatsko sredstvo, imunosupresivno sredstvo, radioizotop, toksin ili slično. Konjugat se može koristiti za inhibiciju umnožavanja tumorske ćelije ili ćelije kancera, izazivanje apoptoze u tumoru ili ćeliji kancera, ili za tretman kancera kod pacijenta. Konjugat se može koristiti u skladu sa tim u različitim okruženjima za tretman kancera životinja. Konjugat se može koristiti za isporuku leka u ćeliju tumora ili ćeliju kancera. Bez vezivanja teorijom, u nekim otelotvorenjima, konjugat se vezuje za ili se povezuje sa ćelijom kancera koja izražava GPRC5D, a konjugat i/ili lek se mogu preuzeti unutar ćelije tumora ili ćelije kancera putem receptorski posredovane endocitoze.
[0255] Jednom unutar ćelije, jedna ili više specifičnih peptidnih sekvenci unutar konjugata (npr. u linkeru) se hidrolitički cepaju jednom ili više proteaza tumorskih ćelija ili ćelija kancera, što rezultira oslobađanjem leka. Oslobođeni lek je tada slobodan da migrira unutar ćelije i izazove citotoksične ili citostatičke ili druge aktivnosti. U nekim otelotvorenjima, lek se odvaja od antitela izvan tumorske ćelije ili ćelije kancera, a lek naknadno prodire u ćeliju ili deluje na ćelijsku površinu.
[0256] Primeri lekova ili korisnih nosiva su odabrani iz grupe koja se sastoji od DM1 (majtanzin, N2'-deacetil-N2'-(3-merkapto-1-oksopropil)- ili N2'-deacetil-N2'-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtanzin), mc-MMAD (6-maleimidokaproilmonometilauristatin-D ili N-metil-L-valil-N-[(1S,2R)-2-metoksi-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-[[(1S)-2-fenil-1-(2-tiazolil)etil]amino]propil]-1-pirolidinil]-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oksobutil]-N-metil-(9Cl)-L-valinamid), mc-MMAF (maleimidokaproil-monometilauristatin F ili N-[6-(2,5-dihidro-2,5-diokso-1H-pirol-1-il)-1-oksoheksil]-N-metil-L-valil-L-valil-(3R,4S,5S)-3-metoksi-5-metil-4-(metilamino)heptanoil-(αR, βR,2S)-β-metoksi-α-metil-2-pirolidinpropanoil-L-fenilalanin) i mc-Val-Cit-PABA-MMAE (6-maleimidokaproil-Val-Cit-(paminobenziloksikarbonil)-monometilauristatin E ili N-[[[4-[[N-[6-(2,5-dihidro-2,5-diokso-1H-pirol-1-il)-1-oksoheksil]-L-valil-N5-(aminokarbonil)-L-ornitil]amino]fenil]metoksi]karbonil]-N-met il-L-valil-N-[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2-hidroksi-1-metil-2-feniletil]amino]-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil]-1-pirolidinil]-2-metoksi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oksobutil]-N-metil-L-valinamid).DM1 je derivat tubulinskog inhibitora majtanzina, dok su MMAD, MMAE i MMAF derivati auristatina. U nekim otelotvorenjima, deo leka se bira iz grupe koja se sastoji od mc-MMAF i mc-Val-Cit-PABA-MMAE. U nekim otelotvorenjima, deo leka je majtanzinoid ili auristatin.
[0258] Antitela ili fragmenti mogu biti konjugovani ili spojeni sa terapeutskim agensom, što može uključivati detektabilne etikete kao što su radioaktivne etikete, imunomodulator, hormon, enzim, oligonukleotid, fotoaktivni terapeutski ili dijagnostički agens, citotoksični agens, koji može biti lek ili toksin, agens za poboljšanje ultrazvuka, neradioaktivna etiketa, njihova kombinacija i drugi takvi agensi poznati u struci.
[0260] Antitela se mogu detektabilno označiti spajanjem sa hemiluminiscentnim jedinjenjem. Prisustvo hemiluminiscentno označenog polipeptida koji vezuje antigen se zatim određuje detekcijom prisustva luminiscencije koja nastaje tokom hemijske reakcije. Primeri posebno korisnih hemiluminiscentnih jedinjenja za obeležavanje su luminol, izoluminol, terromatski akridinijumski ester, imidazol, akridinijumska so i oksalatni ester.
[0261] Antitela se takođe mogu detektovati korišćenjem metala koji emituju fluorescenciju, kao što je<152>Eu, ili drugih iz serije lantanoida. Ovi metali se mogu vezati za antitelo koristeći takve helatne grupe metala kao dietilentriaminpentoctena kiselina (DTPA) ili etilendiamintetraoctena kiselina (EDTA). Tehnike za konjugaciju različitih delova antitela su dobro poznate, vidi, npr. Arnon i sar., „Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy“, u Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld i sar. (ur.), str.243-56 (Alan R. Liss, Inc. (1985); Hellstrom i sar., „Antibodies For Drug Delivery", u Controlled Drug Delivery (2. izdanje), Robinson i sar., (ur.), Marcel Dekker, Inc., str.623- 53 (1987); Thorpe, „Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review“, u Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera i sar. (ur.), str.475-506 (1985); „Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy“, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection and Therapy, Baldwin i sar. (ur.), Academic Press str. 303-16 (1985), i Thorpe i sar., „The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates“, Immunol. Rev. (52:119-58 (1982)).
[0263] Bifunkcionalni molekuli i kombinovane terapije
[0265] GPRC5D je prekomerno izražen na određenim malignim hematološkim ćelijama, kao što su ćelije multiplog mijeloma. Stoga se antitela i fragmenti trenutnog obelodanjivanja mogu koristiti za ciljanje tih malignih ćelija za inhibiciju, inaktivaciju uništenja. U nekim otelotvorenjima, obezbeđen je bifunkcionalni ili bispecifični molekul/antitelo koje cilja i GPRC5D protein i imunološku ćeliju.
[0267] U nekim otelotvorenjima, imunološka ćelija se bira iz grupe koja se sastoji od T ćelije, B ćelije, monocita, makrofaga, neutrofila, dendritičke ćelije, fagocita, prirodne ćelije ubice, eozinofila, bazofila i mastocita. Molekuli na imunološkoj ćeliji koji mogu biti ciljani uključuju, na primer, CD3, CD16, CD19, CD28, CD64 i 4-1BB (takođe poznat kao CD137). Drugi primeri uključuju PD-1, CTLA-4, LAG-3 (takođe poznat kao CD223), CD28, CD122, TIM3, OX-40 ili OX40L, CD40 ili CD40L, LIGHT, ICOS/ICOSL, GITR/GITRL, TIGIT, CD27, VISTA, B7H3, B7H4, HEVM ili BTLA (takođe poznat kao CD272), receptore slične imunoglobulinima ubica (KIR) i CD47. Specifični primeri bispecifičnosti uključuju, bez ograničenja, GPRC5D/CD3.
[0268] Takođe su predviđeni različiti formati bispecifičnih antitela. U nekim otelotvorenjima, svaki od anti-PD-L1 fragmenta i svaki od drugog fragmenta je nezavisno izabran iz Fab fragmenta, jednolančanog promenljivog fragmenta (scFv) ili jednodomenskog antitela. U nekim otelotvorenjima, bispecifično antitelo dalje uključuje Fc fragment.
[0270] Polinukleotidi koji kodiraju antitela i metode pripreme antitela
[0271] Ovo obelodanjivanje takođe pruža izolovane polinukleotide ili molekule nukleinske kiseline koji kodiraju antitela, varijante ili njihove derivate obelodanjivanja. Polinukleotidi predmetnog obelodanjivanja mogu da kodiraju celokupne varijabilne regione teškog i lakog lanca polipeptida koji vezuju antigen, njihovih varijanti ili derivata na istom molekulu polinukleotida ili na odvojenim molekulima polinukleotida. Pored toga, polinukleotidi predmetnog obelodanjivanja mogu da kodiraju delove varijabilnih regiona teškog i lakog lanca polipeptida koji vezuju antigen, njihovih varijanti ili derivata na istom molekulu polinukleotida ili na odvojenim molekulima polinukleotida.
[0273] Metode stvaranja antitela su dobro poznate u struci i opisane su u ovom dokumentu. U određenim otelotvorenjima, i promenljivi i konstantni regioni polipeptida koji vezuju antigen predmetnog obelodanjivanja su potpuno humani. Potpuno humana antitela mogu se napraviti korišćenjem tehnika opisanih u struci i na način opisan u ovom dokumentu. Humana antitela se mogu pripremiti primenom antigena na transgenoj životinji koja je modifikovana da proizvodi takva antitela kao odgovor na antigenski izazov, ali čiji su endogeni lokusi onemogućeni, npr. imunizovana ksenomicija. Primerne tehnike koje se mogu koristiti za pravljenje takvih antitela opisane su u američkim patentima:
[0274] 6,150,584; 6,458,592; 6,420,140.
[0276] Metode tretmana
[0278] Kao što je ovde opisano, antitela, varijante ili derivati predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti u određenim metodama tretmana i dijagnostike. Svako upućivanje na metode tretmana u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao upućivanje na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove predmetnog pronalaska za upotrebu u metodi tretmana ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).
[0280] Predmetno obelodanjivanje je dalje usmereno na terapije zasnovane na antitelima koje uključuju primenu antitela obelodanjivanja pacijentu kao što su životinja, sisar i čovek za lečenje jednog ili više poremećaja ili stanja opisanih u ovom dokumentu. Terapijska jedinjenja obelodanjivanja uključuju, ali nisu ograničena na, antitela obelodanjivanja (uključujući njihove varijante i derivate kako je ovde opisano) i nukleinske kiseline ili polinukleotide koji kodiraju antitela obelodanjivanja (uključujući njihove varijante i derivate kako je ovde opisano).
[0282] Antitela obelodanjivanja se takođe mogu koristiti za tretman ili inhibiciju kancera. Kao što je gore navedeno, GPRC5D može biti prekomerno izražen u ćelijama kancera, posebno multiplog mijeloma. Pokazalo se da je inhibicija GPRC5D korisna za tretman kancera.
[0284] Shodno tome, u nekim otelotvorenjima, predviđene su metode za tretman kancera kod pacijenta kome je to potrebno. Metoda, u jednom otelotvorenju, podrazumeva davanje pacijentu efikasne količine antitela predmetnog obelodanjivanja. U nekim otelotvorenjima, najmanje jedna od ćelija kancera kod pacijenta prekomerno izražava GPRC5D. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili fragment je ADCC-kompetentan. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili fragment dalje sadrži citotoksično sredstvo. U nekim otelotvorenjima, antitelo je bispecifično koje dalje cilja imunološku ćeliju, kao što je citotoksična T ćelija.
[0286] U predmetnom obelodanjivanju su takođe date ćelijske terapije, kao što su terapije himernim antigenskim receptorom (CAR) T-ćelijama (ili NK ćelijama, makrofagima). Može se koristiti odgovarajuća ćelija, koja se stavlja u kontakt sa anti-GPRC5D antitelima predmetnog obelodanjivanja (ili alternativno projektovana za izražavanje anti-GPRC5D antitela predmetnog obelodanjivanja). Nakon takvog kontakta ili inženjeringa, ćelija se zatim može upoznati sa pacijentom sa kancerom kome je potreban tretman. Pacijent sa kancerom može imati kancer bilo koje vrste kao što je ovde obelodanjeno. Ćelija (npr. T ćelija) može biti, na primer, T limfocit koji infiltrira tumor, CD4+ T ćelija, CD8+ T ćelija, ćelija prirodnog ubice (NK), makrofag ili njihova kombinacija, bez ograničenja.
[0287] U nekim otelotvorenjima, ćelija je izolovana od samog pacijenta obolelog od kancera. U nekim otelotvorenjima, ćeliju je obezbedio donator ili ćelijska banka. Kada je ćelija izolovana od pacijenta obolelog od kancera, neželjene imunološke reakcije mogu biti svedene na minimum.
[0289] Neograničavajući primeri kancera uključuju hematološke kancere kao što je multipli mijelom. Drugi primeri uključuju leukemiju (uključujući akutne leukemije (npr. akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu mijelocitnu leukemiju (uključujući mijeloblastičnu, promijelocitnu, mijelomonocitnu, monocitnu i eritroleukemiju)) i hronične leukemije (npr. hroničnu mijelocitnu (granulocitnu) leukemiju i hroničnu limfocitnu leukemiju)) i limfome (npr., Hodgkinova bolest i ne-Hodgkinova bolest), i multipli mijelom.
[0291] Specifična doza i režim tretmana za svakog određenog pacijenta zavisiće od različitih faktora, uključujući određena antitela, njihovu varijantu ili derivat, starost pacijenta, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i ishranu, kao i vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova i težinu određene bolesti koja se leči. Procena takvih faktora od strane medicinskih negovatelja je u okviru znanja stručnjaka. Količina će takođe zavisiti od pojedinačnog pacijenta koji se leči, načina primene, vrste formulacije, karakteristika korišćenog jedinjenja, težine bolesti i željenog efekta. Korišćena količina može se odrediti farmakološkim i farmakokinetičkim principima dobro poznatim u struci.
[0293] Postupci uvođenja uključuju, ali nisu ograničeni na intradermalne, intramuskularne, intraperitonealne, intravenske, subkutane, intranazalne, epiduralne i oralne puteve. Kompozicije se takođe mogu primeniti bilo kojim drugim pogodnim putem, na primer intravenskom infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelne ili mukokutane obloge (npr. oralna sluznica, rektalna i crevna sluznica itd.) i mogu se primeniti zajedno sa drugim biološki aktivnim agensom. Dakle, farmaceutske kompozicije koji sadrže antigen-vezujuće polipeptide obelodanjivanja mogu se primenjivati oralno, rektalno, parenteralno, intracistemalno, intravaginalno, intraperitonealno, lokalno (kao što su praškovi, masti, kapi ili transdermalni flasteri), bukalno ili kao oralni ili nazalni sprej.
[0294] Termin „parenteralno“ kako se ovde koristi odnosi se na načine primene koji uključuju intravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, intrasternalnu, supkutanu i intraartikularnu injekciju i infuziju.
[0296] Primena može biti sistemska ili lokalna. Pored toga, može biti poželjno uvesti antitela obelodanjivanja u centralni nervni sistem bilo kojim pogodnim putem, uključujući intraventrikularnu i intratekalnu injekciju; intraventrikularna injekcija može biti olakšana intraventrikularnim kateterom, na primer, pričvršćenim na rezervoar, kao što je rezervoar Ommaya. Plućna primena se takođe
[0297] može primeniti, npr. upotrebom inhalatora ili nebulizatora, i formulacijom sa aerosolizirajućim sredstvom.
[0299] Možda je poželjno lokalno primeniti antigen-vezujuće polipeptide ili kompozicije obelodanjivanja na oblast kojoj je potreban tretman; to se može postići, na primer, a ne ograničavanjem, lokalnom infuzijom tokom operacije, topikalnom primenom, npr. u kombinaciji, sa oblogom rane nakon operacije, injekcijom, pomoću katetera, pomoću supozitorija ili pomoću implantata, pri čemu je navedeni implantat od poroznog, neporoznog ili želatinoznog materijala, uključujući membrane, kao što su sialastične membrane ili vlakna. Po mogućnosti, prilikom primene proteina, uključujući antitelo obelodanjivanja, mora se voditi računa da se koriste materijali na koje se protein ne apsorbuje.
[0301] Količina antitela obelodanjivanja koja će biti efikasna u tretmanu, inhibiciji i prevenciji inflamatorne, imunološke ili maligne bolesti, poremećaja ili stanja može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama. Pored toga, opciono se mogu koristiti in vitro analize kako bi se pomoglo u određivanju optimalnih raspona doza. Precizna doza koja će se primeniti takođe će zavisiti od puta primene i ozbiljnosti bolesti, a o njoj treba odlučiti u skladu sa procenom lekara i okolnostima svakog pacijenta. Efektivne doze mogu se ekstrapolirati iz krivih doza-odgovor izvedenih iz in vitro ili sistema ispitivanja na životinjskim modelima.
[0303] Kao opšti predlog, doza koja se primjenjuje na pacijenta polipeptida koji vezuju antigen iz predmetnog obelodanjivanja je obično 0,1 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine pacijenta, između 0,1 mg/kg i 20 mg/kg telesne težine pacijenta, ili 1 mg/kg do 10 mg/kg telesne težine pacijenta. Generalno, humana antitela imaju duži poluživot unutar humanog tela od antitela drugih vrsta zbog imunološkog odgovora na strane polipeptide. Stoga su često moguće manje doze ljudskih antitela i manje česta primena. Dalje, doza i učestalost primene antitela obelodanjivanja mogu se smanjiti povećanjem apsorpcije i penetracije tkiva (npr. u mozak) antitela modifikacijama kao što je, na primer, lipidacija.
[0305] U dodatnom otelotvorenju, kompozicije obelodanjivanja se primenjuju u kombinaciji sa citokinima. Citokini koji se mogu primeniti uz kompozicije obelodanjivanja uključuju, ali nisu ograničeni na, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, anti-CD40, CD40L i TNF-α.
[0307] U dodatnim otelotvorenjima, kompozicije obelodanjivanja se primenjuju u kombinaciji sa drugim terapijskim ili profilaktičkim režimima, kao što je, na primer, terapija zračenjem.
[0309] Dijagnostičke metode
[0311] Prekomerna ekspresija GPRC5D primećena je u određenim uzorcima tumora, a pacijenti koji imaju ćelije koje prekomerno eksprimiraju GPRC5D verovatno reaguju na tretmane anti-GPRC5D antitelima iz predmetnog obelodanjivanja. Shodno tome, antitela iz predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti i u dijagnostičke i prognostičke svrhe. Upućivanja na dijagnostičke i prognostičke metode u ovom odeljku ovog opisa treba tumačiti kao upućivanja na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove predmetnog pronalaska za upotrebu u metodi dijagnoze ili prognoze koja se vrši na ljudskom/životinjskom telu.
[0313] Uzorak koji po mogućnosti uključuje ćeliju može se dobiti od pacijenta, koji može biti pacijent sa kancerom ili pacijent koji želi dijagnozu. Ćelija je ćelija tumorskog tkiva ili tumorskog bloka, uzorak krvi, uzorak urina ili bilo koji uzorak pacijenta. Nakon opcionog predtretmana uzorka, uzorak se može inkubirati antitelima predmetnog obelodanjivanja pod uslovima koji omogućavaju interakciju antitela sa GPRC5D proteinom potencijalno prisutnim u uzorku. Metode kao što je ELISA se mogu koristiti, koristeći anti-GPRC5D antitelo, za otkrivanje prisustva GPRC5D proteina u uzorku.
[0314] Prisustvo GPRC5D proteina u uzorku (opciono sa količinom ili koncentracijom) može se koristiti za dijagnozu kancera, kao indikacija da je pacijent pogodan za tretman antitelima, ili kao indikacija da je pacijent reagovao (ili nije reagovao) na tretman kancera. Za prognostičku metodu, detekcija se može uraditi odjednom, dva puta ili više, u određenim fazama, nakon započinjanja tretmana kancera kako bi se ukazalo na napredak tretmana.
[0316] Kompozicije
[0318] Ovo obelodanjivanje takođe otkriva farmaceutske kompozicije. Takve kompozicije sadrže efikasnu količinu antitela i prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, kompozicija dalje uključuje drugo sredstvo protiv raka (npr. inhibitor imunološke kontrolne tačke).
[0320] Poželjno, na način na koji se koristi ovde, termin „farmaceutski prihvatljivo“ označava da je nešto odobreno od strane regulatorne agencije savezne ili državne vlade ili navedeno u Farmakopeji SAD ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a posebno kod ljudi. Dalje, „farmaceutski prihvatljiv nosač“ će generalno biti netoksično čvrsto, polučvrsto ili tečno punilo, razblaživač, materijal za kapsuliranje ili pomoćna formulacija bilo koje vrste.
[0322] Termin „nosač“ se odnosi na razblaživač, pomoćnu supstancu ili nosač sa kojim se primenjuje terapeut. Takvi farmaceutski prihvatljivi nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulje, uključujući one naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što su ulje kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje i slično. Voda je poseban nosač kada se farmaceutska kompozicija primenjuje intravenski. Rastvori fiziološkog rastvora i vodene dekstroze, polietilenglikola (PEG) i glicerola takođe se mogu koristiti kao tečni nosioci, posebno za rastvore koji se ubrizgavaju. Neki primeri pomoćnih supstanci uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatinu, slad, pirinač, brašno, kredu, silikagel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Kompozicija, po želji, može da sadrži i manje količine sredstava za kvašenje ili emulgatora, ili sredstava za puferovanje pH vrednosti kao što su acetati, citrati ili fosfati. Predviđeni su i antibakterijski agensi kao što su benzilni alkohol ili metil parabeni; antioksidansi kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; helatni agensi kao što je etilendiamintetraoctena kiselina; i agensi za podešavanje toničnosti kao što su natrijum hlorid ili dekstroza. Ove kompozicije mogu biti u obliku rastvora, suspenzija, emulzije, tableta, pilula, kapsula, prašaka, formulacija sa produženim oslobađanjem i slično. Kompozicija se takođe može formulisati kao supozitorijum, sa tradicionalnim vezivima i nosačima kao što su trigliceridi. Oralna formulacija može uključivati standardne nosače kao što su farmaceutske klase manitola, laktoze, skroba, magnezijum stearata, natrijum saharina, celuloze, magnezijum karbonata itd. Primeri odgovarajućih farmaceutskih nosača opisani su u Remington's Pharmaceutical Sciences od strane E. W. Martin. Takve kompozicije će sadržati profilaktički ili terapijski efikasnu količinu antitela ili njegovog fragmenta, po mogućnosti u prečišćenom obliku, zajedno sa odgovarajućom količinom nosača kako bi se obezbedio oblik za pravilnu primenu pacijentu. Formulacija treba da odgovara načinu primene.
[0323] Parenteralni preparat može biti zatvoren u ampule, špriceve za jednokratnu upotrebu ili višedozne bočice od stakla ili plastike.
[0325] U jednom otelotvorenju, kompozicija je formulisana u skladu sa rutinskim procedurama kao farmaceutska kompozicija prilagođena za intravenoznu primenu ljudima. Tipično, kompozicije za primenu injekcijom su rastvori u sterilnom izotoničnom vodenom puferu. Po potrebi, kompozicija može sadržati sredstvo za rastvaranje i lokalni anestetik za ublažavanje bola na mestu injekcije. Generalno, sastojci se isporučuju odvojeno ili pomešani zajedno u obliku jedinične doze, na primer, kao suvi liofilizovani prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenom kontejneru kao što je ampula ili kesica, što označava količinu aktivnog sastojka. Kada se kompozicija primenjuje infuzijom, moguće je njeno izdavanje sa bočicom za infuziju koja sadrži sterilnu farmaceutsku vodu, fiziološki rastvor ili dekstrozu/vodu. Kada se kompozicija primenjuje injekcijom, može se obezbediti ampula sterilne vode za injekcije ili fiziološkog rastvora kako bi se sastojci mogli pomešati pre primene.
[0327] Jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja mogu biti formulisana kao neutralna ili soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju one formirane sa anjonima kao što su one izvedene iz hlorovodonične, fosforne, sirćetne, oksalne, vinske kiseline itd., i one formirane sa katjonima kao što su one izvedene iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, gvožđe hidroksida, izopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanola, histidina, prokaina itd.
[0329] PRIMERI
[0331] Primer 1: Generisanje mišjih monoklonskih antitela protiv
[0332] humanog GPRC5D
[0334] Humani GPRC5D protein je korišćen za imunizaciju različitih sojeva miševa i hibridomi su generisani u skladu sa tim. Za dalju analizu prikupljeno je više od dvadeset klonova hibrida.
[0336] Testirana su antitela sakupljena iz supernatanata hibrida na njihovo vezivanje za humani GPRC5D protein izražen na CHO K1 ćelijama. CHO-K1 ćelije stabilno izražene u ljudskom GPRC5D, sakupljene su iz boca.100 µl
[0337] 1×10<6>ćelija/ml ćelija je inkubirano mišjim antitelima u trostrukim serijskim razblaženjima tokom 30 minuta na ledu. Nakon što su dva puta isprane sa 200 µl FACS pufera, ćelije su inkubirane sa sekundarnim antitelima 30 minuta na ledu. Ćelije su isprane sa 200 µl FACS pufera dva puta i prebačene u BD Falcon epruvetu od 5 ml i analizirane FACS-om. Rezultati studije su pokazali da se mišja antitela mogu vezati za humana GPRC5D sa visokim EC50 (SL.1).Rezultati su prikazani u tabeli ispod. Svi su pokazali dobru vezujuću aktivnost.
[0339]
[0340]
[0342] Četrnaest hibrida je subklonirano i određene su VH/VL sekvence (vidi tabelu 1).
[0343] Tabela 1. VH/VL sekvenca olovnih mišjih antitela
[0344]
[0345]
[0346]
[0349] Primer 2 Vezivanje himernih antitela na GPRC5D
[0351] Geni mišjeg VH i VK proizvedeni su sintetički, a zatim klonirani u vektore koji sadrže konstantne domene humane gama 1 i humane kapa.
[0352] Prečišćena himerna antitela su proizvedena iz transficiranih CHO ćelija.
[0354] CHO-K1 ćelije stabilno izražene u ljudskom GPRC5D, sakupljene su iz boca. 100 µl 1× 10<6>ćelija/ml ćelija je inkubirano sa primarnim himernim antitelima u trostrukim serijskim razblaženjima počev od 300 nM do 0,001 nM tokom 30 minuta na ledu. Nakon što su dva puta isprane sa 200 µl FACS pufera, ćelije su inkubirane sa sekundarnim antitelima 30 minuta na ledu. Ćelije su isprane sa 200 µl FACS pufera dva puta i prebačene u BD Falcon epruvetu od 5 ml i analizirane FACS-om. Rezultati studije su pokazali da se himerna antitela mogu vezati za humani GPRC5D sa visokim EC50 (SL.2).
[0356] Rezultati su prikazani u tabeli ispod.
[0358]
[0361] Primer 3 EC50 internalizacije himernih GPRC5D antitela na CHO-GPRC5D ćelijama
[0363] pHAb boje su pH senzorske boje koje imaju veoma nisku fluorescenciju pri pH > 7 i dramatično povećanje fluorescencije kako pH rastvora postaje kiseo. pHAb boje imaju maksimume ekscitacije (Ex) na 532 nm i maksimume emisije (Em) na 560 nm. pHAb konjugovana antitela mogu se koristiti za praćenje internalizacije antitela posredovane receptorima. Kada se antitelo-pHAb konjugat boja vezuje za svoj receptor na ćelijskoj membrani, pokazuje minimalnu fluorescenciju. Međutim, nakon internalizacije posredovane receptorima, boja antitela-pHAb konjuguje saobraćaj do endosoma i lizosomskih vezikula gde je pH kiseo, uzrokujući fluorescenciju boje pHAb. Ova fluorescencija se može detektovati korišćenjem različitih tehnika, uključujući snimanje ćelija, protočnu citometriju i čitače na bazi fluorescentnih ploča sa odgovarajućim filterima.
[0365] Stabilno transficirane ljudske ćelije GPRC5D CHO ubrane su sa 0,05% tripsina/EDTA (Gibco, 25300-054) i obložene crnom pločom sa 96 jažica (Thermo Scientific # 165305) pri gustini od 10 K na 90 µl po bušotini. Ploče su inkubirane 20-24 sata pre tretmana sa pHAb označenim antitelima.
[0367] Za internalizaciju, pHAb konjugovana himerna GPRC5D antitela su dodata u ćelije na različitim mestima i lagano mešana 1-2 minuta na mikseru za ploče, a zatim inkubirana preko noći kako bi se omogućila internalizacija (internalizacija se može otkriti za nekoliko sati). Ploče su očitane na čitaču fluorescentnih ploča na Ex/Em: 532 nm/560 nm na Tecan Infinity M1000 Pro. Da bi se postigla veća osetljivost, medijum je zamenjen PBS-om pre čitanja ploče.
[0369] Rezultati normalizovani sa DAR prikazani su na SL.3. Kao što je prikazano na SL.3, testirana himerna antitela imaju snažnu aktivnost internalizacije.
[0371] Primer 4 Testiranje ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC)
[0372] ADCC biološki test reportera koristi alternativno očitavanje u ranijoj tački aktivacije ADCC MOA puta: aktivacija transkripcije gena putem NFAT (nuklearni faktor aktiviranih T-ćelija) puta u efektorskoj ćeliji. Pored toga, ADCC-ov biološki test reportera koristi inženjerske Jurkat ćelije koje stabilno izražavaju FcyRIIIa receptor, varijantu V158 (visokog afiniteta) i NFAT element odgovora koji pokreće ekspresiju luciferaze svitca kao efektorske ćelije. Biološka aktivnost antitela u ADCC MOA se kvantifikuje putem luciferaze proizvedene kao rezultat aktivacije NFAT puta; aktivnost luciferaze u efektorskoj ćeliji se kvantifikuje očitavanjem luminiscencije. Signal je visok, a pozadina testa je niska.
[0374] Serijska razblaženja GPRC5D himernih monoklonskih antitela inkubirana su tokom 6 sati indukcije na 37 °C inženjerskim Jurkat efektorskim ćelijama (ADCC Bioassay Effector Cells), sa ili bez ADCC Bioassay Target Cells (GPRC5D).
[0375] Aktivnost luciferaze je kvantifikovana pomoću Bio-Glo<™>reagensa (na SL.4.) Sva testirana antitela pokazala su snažnu sposobnost u indukovanju ADCC-a.
[0377] Primer 5 Humanizacija mišjih mAbs
[0379] Geni varijabilnog regiona mišjih antitela su korišćeni za stvaranje humanizovanih mAbs. U prvom koraku ovog procesa, aminokiselinske sekvence VH i VL mAb su upoređene sa dostupnom bazom podataka humanih Ig genskih sekvenci kako bi se pronašle ukupne najbolje podudarne humane germinativne Ig genske sekvence.
[0380] Sekvence aminokiselina humanizovanog antitela date su u nastavku. Humanizovane sekvence
[0381] A. 34D3H1
[0382] Tabela 2A.Humanizacija 34D3H1 - VH
[0384]
[0387] Tabela 2B. CDR sekvence
[0390]
[0393] Tabela 2C. Humanizacija 34D3H1 - VL
[0395]
[0396]
[0398] Tabela 2D. CDR sekvence
[0400]
[0402] Tabela 2E. Humanizovana antitela
[0404]
[0405] B. 37B9C4
[0406] Tabela 3A. Humanizacija 37B9C4 - VH
[0408]
[0410] Tabela 3B. CDR sekvence
[0413]
[0415] Tabela 3C. Humanizacija 37B9C4 - VL
[0417]
[0418] Tabela 3D. CDR sekvence
[0421]
[0423] Tabela 3E. Humanizovana antitela
[0426]
[0428] C. 58F9G10
[0429] Tabela 4A. Humanizacija 58F9G10 - VH
[0431]
[0432] Tabela 4B. CDR sekvence
[0435]
[0437] Tabela 4C. Humanizacija 58F9G10 - VL
[0439]
[0441] Tabela 4D. CDR sekvence
[0444]
[0446] Tabela 4E. Humanizovana antitela
[0449]
[0450]
[0452] D. 6G10D9
[0453] Tabela 5A. Humanizacija 6G10D9 - VH
[0454]
[0456] Tabela 5B. CDR sekvence
[0458]
[0459] Tabela 5C. Humanizacija 6G10D9 - VL
[0461]
[0463] Tabela 5D. CDR sekvence
[0466]
[0468] Tabela 5E. Humanizovana antitela
[0470]
[0471]
[0474] Primer 6 Testiranje humanizovanih antitela
[0476] Ovaj primer je testirao neka humanizovana antitela na sposobnost vezivanja za GPRC5D izraženu na CHO-K1 ćelijama.
[0478] Od testiranih humanizovanih antitela izvedenih iz 6G10D9, 6-H2L1 i 6-H3L3 nadmašili su druga (SL.5, tabela 6).
[0480] Tabela 6. Aktivnosti humanizovanih antitela 6G10D9 za
[0481] vezivanje GPRC5D
[0483]
[0484] Kao što je prikazano na SL.6 i tabeli 7, sve humanizovane verzije 58F9G10 su imale dobre performanse.
[0486] Tabela 7. Aktivnosti humanizovanih antitela 58F9G10 za vezivanje GPRC5D
[0488]
[0491] Isto tako, kao što je prikazano na SL.7 i tabeli 8, sve humanizovane verzije 34D3H1 su imale dobre performanse, uporedive sa himernim antitelima.
[0493] Tabela 8. Aktivnosti humanizovanih antitela 34D3H1 za vezivanje GPRC5D
[0495]
[0496]
[0499] Takođe, kao što je prikazano na SL.8 i tabeli 9, činilo se da sve humanizovane verzije 37B9C4 imaju dobre performanse, uporedive sa himernom verzijom.
[0501] Tabela 9. Aktivnosti humanizovanih antitela 37B9C4 za vezivanje GPRC5D
[0503]
[0504] Na osnovu gore navedenih podataka izabrana su humanizovana antitela 6-H3L3, 6-H4L3, 58-H1L1, 58-H3L1, 34-H1L1 i 37-H1L1 za dalje potvrdno testiranje.
[0506] Primer 7 Potvrdno testiranje odabranih humanizovanih antitela
[0507] Ovaj primer je testirao neke od humanizovanih antitela (6-H3L3, 6-H4L3, 58-H1L1, 58-H3L1, 34-H1L1 i 37-H1L1) na njihovu sposobnost vezivanja za humani GPRC5D protein izražen na CHO-K1 i NCI-H929 ćelijama.
[0509] Vezujući podaci za CHO-K1 su prikazani na SL.9 i sumiranu u tabeli 10 u nastavku.
[0511] Tabela 10 Vezivanje za GPRC5D na CHO-K1 ćelijama
[0513]
[0516] Tabela 11. Vezivanje za GPRC5D na NCI-H929 ćelijama
[0518]
[0519]
[0522] Ovi podaci, stoga, potvrđuju da su ova odabrana humanizovana antitela pogodna za dalji klinički razvoj.
[0524] Primer 8 ADCC humanizovanih antitela
[0526] ADCC biološki test reportera koristi alternativno očitavanje u ranijoj tački aktivacije ADCC MOA puta: aktivacija transkripcije gena putem NFAT (nuklearni faktor aktiviranih T-ćelija) puta u efektorskoj ćeliji. Pored toga, ADCC-ov biološki test reportera koristi inženjerske Jurkat ćelije koje stabilno izražavaju FcyRIIIa receptor, varijantu V158 (visokog afiniteta) i NFAT element odgovora koji pokreće ekspresiju luciferaze svitca kao efektorske ćelije. Biološka aktivnost antitela u ADCC MOA se kvantifikuje putem luciferaze proizvedene kao rezultat aktivacije NFAT puta; aktivnost luciferaze u efektorskoj ćeliji se kvantifikuje očitavanjem luminiscencije. Signal je visok, a pozadina testa je niska.
[0528] Serijska razblaženja GPRC5D hu Abs inkubirana su 6 sati indukcije na 37 °C sa inženjerskim Jurkat efektorskim ćelijama (ADCC Bioassay Effector Cells), sa ADCC Bioassay Target Cells (izražavajući GPRC5D). Aktivnost luciferaze je kvantifikovana pomoću Bio-GloTM reagensa.
[0530] Rezultati su prikazani na SL. 11, što pokazuje da su ova humanizovana antitela indukovala jake ADCC aktivnosti na ćelijskim linijama sa prekomernom ekspresijom GPRC5D i endogenim MM (multiplim mijelomom) ćelijskim linijama.
[0531] Primer 9 Internalizacija humanizovanih antitela
[0533] Ovaj primer je testirao humanizovana antitela za njihove indukcione aktivnosti internacionalizacije. Primer je koristio novu hidrofilnu i svetlu pH senzorsku boju (pHAb boja), koja nije fluorescentna na neutralnoj pH vrednosti, ali postaje visoko fluorescentna na kiseloj pH vrednosti sa internalizacijom. Može se koristiti za otkrivanje procesa internalizacije. NCI-H929 i MM.1R ćelije endogeno izražavaju ljudski GPRC5D kao ciljne ćelije, dodato je detekciono antitelo označeno pHAb bojom kako bi se procenila internalizacija GPRC5D hu antitela in vitro.
[0535] Serijska razblaženja antitela GPRC5D hu inkubirana su 24 sata na 37 °C. Detektovana je aktivnost luciferaze. Rezultati, na SL.12, pokazuju da ova humanizovana antitela imaju veoma jake aktivnosti internalizacije i na ćelijske linije koje prekomerno eksprimiraju GPRC5D i na endogene MM ćelijske linije.
[0537] Primer 10 Aktivnost ubijanja GPRC5D ADC
[0539] Ovaj primer je testirao dva konjugata antitela i leka (ADC) za njihovo ubijanje ciljnih ćelija. Ovi ADC su uključivali 37B9C4 i 58F9G10, respektivno, konjugovani sa toksičnim lekom Monometil auristatin E (MMAE).
[0541] Ljudske inženjerske ćelije GPRC5D koje eksprimiraju HEK293 i NCI-H929 (HEK293/H_GPRC5D i NCI-H929/H_GPRC5D), ćelije GPRC5D koje endogeno eksprimiraju NCI-H929 i MM.1R zasejane su u ploču sa 96 jažica na 3000~4000 ćelija po bušotini. Ćelije su tretirane sa 37B9C4-MMAE i 58F9G10-MMAE u odgovarajućim koncentracijama tokom 5 dana. Vijabilnost ćelije je izmerena pomoću CellTiteseed-a na ploči sa 96 bušotina na 3000~4000 ćelija po bušotini sa r-Glo reagensom. Envison je detektovao aktivnost luciferaze.
[0542] Rezultati, na SL.13 i tabeli 12 pokazuju da ova humanizovana antitela imaju veoma jake aktivnosti ubijanja.
[0543] Tabela 12. Aktivnosti ubijanja ADC-a
[0545]
[0548] Primer 11 Antitumorske aktivnosti in vivo
[0550] Ovaj primer je koristio CDX životinjski model za testiranje antitumorskih aktivnosti antitela 37B9C4 (HIL1).
[0552] U ovoj studiji korišćene su ženke NCG miševa od 6-8 nedelja (Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd). Svaki miš je inokulisan subkutano na desnoj aksilarnoj (lateralnoj) sa MM.1R tumorskim ćelijama (2×106) u 0,1 ml PBS-a sa matrigelom (V:V=1:1) za razvoj tumora. Životinje su nasumično grupisane kada zapremina tumora dostigne oko 60 mm<3>, a zatim je započeto lečenje za studiju efikasnosti.37B9C4 u dozi od 1 mg/kg, 3 mg/kg i 10 mg/kg primenjeni su intravenski (i.v.) na dan 0, dan 7, dan 14. Eksperiment je prekinut 19. dana kada je prosečna zapremina tumora u grupi nosača bila preko 2000 mm<3>. Prosečna zapremina tumora PBS grupe, 37B9C4 (1 mg/kg) grupe, 37B9C4 (3 mg/kg) grupe i 37B9C4 (10 mg/kg) grupe bila je 2498,58 mm<3>, 1196,15 mm<3>, 0,00 mm<3>(6/6 CR), odnosno 0,00 mm<3>(6/6 CR). Veličina tumora merena je tri puta nedeljno u dve dimenzije pomoću čeljusti, a zapremina je izražena u mm<3>pomoću formule: V = 0,5 a x b<2>, pri čemu su a i b bili dugi i kratki prečnici tumora, respektivno. Tačke podataka predstavljaju srednju vrednost grupe (n=6), trake grešaka predstavljaju standardnu grešku srednje vrednosti (sem).
[0554] Telesna težina MM.1R miševa koji nose tumor redovno je praćena kao indirektna mera toksičnosti. SL. 14A pokazuje krivu rasta tumora MM.1R miševa koji nose tumor nakon primene 37B9C4. Antitelo je u zavisnosti od doze inhibiralo rast tumora u ovom modelu tumora i postiglo potpunu inhibiciju tumora od 3 mg/kg ili više.
[0555] Detaljne promene telesne težine i relativna promena telesne težine MM.1R miševa koji nose tumor nakon primene prikazane su na SL.14B. Tokom perioda primene, sve grupe miševa nisu imale značajan gubitak telesne težine, a miševi u grupi primene su imali dobru toleranciju, što pokazuje bezbednost tretmana.
[0557] _____________________

Claims (19)

1. PATENTNI ZAHTEVI
1. Konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, konjugovan sa citotoksinom, naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen specifično vezuje za humani protein iz grupe 5 receptora vezanih za G-protein, član D (GPRC5D) i sadrži:
promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
2. ADC prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 9, 48, 49 ili 50.
3. ADC prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačen time što promenljivi region lakog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 10, 51, 52 ili 53.
4. ADC prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačen time što
promenjivi region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9, 48, 49 ili 50; i
promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 10, 51, 52 ili 53.
5. ADC prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, naznačen time što promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 48 i promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
6. ADC prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačen time što je citotoksin majtanzinoid ili auristatin.
7. ADC prema patentnom zahtevu 6, naznačen time što je citotoksin izabran iz grupe koja se sastoji od majtanzina, N2’-deacetil-N2’-(3-merkapto-l-oksopropil) ili N2’-deacetil-N2’-(3-merkapto-l-oksopropil)-majtanina (DM1); monometilauristatin-D (MMAD); monometil auristatin-E (MMAE); i monometilauristatin-F (MMAF).
8. Konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
9. Konjugat antitelo-lek (ADC), koji sadrži antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), naznačen time što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
10. Konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu u tretmanu
hematološkog kancera, naznačen time što konjugat antitelo-lek (ADC) sadrži antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), pri čemu se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
11. Konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu u tretmanu
hematološkog kancera, naznačen time što konjugat antitelo-lek (ADC) sadrži antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, konjugovan sa monometil auristatinom-E (MMAE), pri čemu se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D) i sadrži:
promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
12. Konjugat antitelo-lek (ADC) za upotrebu prema patentnom zahtevu 10 ili 11, naznačen time što je hematološki kancer multipli mijelom.
13. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, koje se specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D), koje sadrži:
promenljivi region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (HCDR1) SEQ ID NO: 42, HCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, HCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44; i
promenljivi region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja određuje komplementarnost regiona 1 (LCDR1) SEQ ID NO: 45, LCDR2 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, LCDR3 aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
14. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9, 48, 49 ili 50.
15. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema patentnom zahtevu 13 ili 14, naznačeno time što promenljivi region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10, 51, 52 ili 53.
16. Antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva 13 do 15, naznačeno time što
promenjivi region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9, 48,49 ili 50; i
promenljivi region teškog lanca sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 10, 51, 52 ili 53.
17. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, koje se specifično vezuje za protein člana D porodice C grupe 5 ljudskog G-proteina spregnutog sa G-proteinom (GPRC5D), koje sadrži:
promenjivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 48; i
promenljivi region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinu sekvencu SEQ ID NO: 51.
18. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od patentnih zahteva 13 do 17 za upotrebu u tretmanu hematološkog kancera.
19. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, naznačeno time što je hematološki kancer multipli mijelom.
RS20260070A 2021-01-05 2022-01-05 Anti-gprc5d monoklonska antitela i njihove primene RS67663B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2021070314 2021-01-05
EP22736532.7A EP4274851B1 (en) 2021-01-05 2022-01-05 Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
PCT/CN2022/070287 WO2022148370A1 (en) 2021-01-05 2022-01-05 Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67663B1 true RS67663B1 (sr) 2026-02-27

Family

ID=82322751

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20260070A RS67663B1 (sr) 2021-01-05 2022-01-05 Anti-gprc5d monoklonska antitela i njihove primene

Country Status (21)

Country Link
US (3) US11485783B2 (sr)
EP (2) EP4274851B1 (sr)
JP (1) JP7595176B2 (sr)
KR (1) KR20230130038A (sr)
CN (3) CN115038720B (sr)
AU (2) AU2022201736B2 (sr)
CA (1) CA3206645A1 (sr)
CO (1) CO2023010353A2 (sr)
CR (1) CR20230374A (sr)
DK (1) DK4274851T3 (sr)
ES (1) ES3061515T3 (sr)
FI (1) FI4274851T3 (sr)
HR (1) HRP20260098T1 (sr)
IL (1) IL304052A (sr)
LT (1) LT4274851T (sr)
MA (1) MA69688B1 (sr)
MX (1) MX2023008044A (sr)
PL (1) PL4274851T3 (sr)
RS (1) RS67663B1 (sr)
SI (1) SI4274851T1 (sr)
SM (1) SMT202600020T1 (sr)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4274851B1 (en) 2021-01-05 2025-11-26 Lanova Medicines Development Co., Ltd. Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
CN116003598B (zh) * 2022-08-30 2024-04-26 苏州缔码生物科技有限公司 靶向人gprc5d的重组人源化单克隆抗体及其应用
CN118108846B (zh) * 2024-02-04 2024-11-26 四川大学华西医院 靶向GPRC5D同种异体CAR-γδT细胞的制备及应用
CN120137041B (zh) * 2025-03-14 2025-11-28 深圳市欧安蒂生物科技有限公司 一种抗gprc5d抗体及其在car-t中的应用
US12545726B1 (en) 2025-07-22 2026-02-10 Integral Molecular, Inc. Compositions and methods related to GPRC5D binding agents and variants thereof

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5892019A (en) 1987-07-15 1999-04-06 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services Production of a single-gene-encoded immunoglobulin
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6420140B1 (en) 1996-10-11 2002-07-16 Abgenix, Inc. Production of multimeric protein by cell fusion method
BR112017011932A8 (pt) * 2014-12-05 2022-11-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorpos direcionados a receptor acoplado a proteína g e métodos de uso
WO2016187220A2 (en) 2015-05-18 2016-11-24 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-ror1 antibodies
TWI781108B (zh) 2016-07-20 2022-10-21 比利時商健生藥品公司 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途
SG11201907321TA (en) * 2017-02-07 2019-09-27 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-gprc5d antibody and molecule comprising the antibody
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
EP3873937A2 (en) 2018-11-01 2021-09-08 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
BR112021013824A2 (pt) * 2019-01-18 2021-12-14 Janssen Biotech Inc Receptores de antígeno quiméricos gprc5d e células que expressam os mesmos
CN111643676B (zh) 2020-07-10 2023-06-30 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种双特异性二聚体、双特异性二聚体-药物偶联物及其应用
EP4274851B1 (en) 2021-01-05 2025-11-26 Lanova Medicines Development Co., Ltd. Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP4670724A3 (en) 2026-04-01
CN116574184A (zh) 2023-08-11
US12281162B2 (en) 2025-04-22
CN116789824A (zh) 2023-09-22
US20230203160A1 (en) 2023-06-29
IL304052A (en) 2023-08-01
US11485783B2 (en) 2022-11-01
CA3206645A1 (en) 2022-07-14
FI4274851T3 (fi) 2026-01-16
MX2023008044A (es) 2023-07-14
MA69688B1 (fr) 2026-02-27
US20220220203A1 (en) 2022-07-14
EP4670724A2 (en) 2025-12-31
HRP20260098T1 (hr) 2026-03-13
US20250388671A1 (en) 2025-12-25
JP7595176B2 (ja) 2024-12-05
CN115038720B (zh) 2023-07-04
EP4274851A4 (en) 2024-05-15
ES3061515T3 (en) 2026-04-06
CO2023010353A2 (es) 2023-08-28
EP4274851A1 (en) 2023-11-15
AU2023203704A1 (en) 2023-08-10
AU2022201736B2 (en) 2023-03-16
CR20230374A (es) 2023-10-05
PL4274851T3 (pl) 2026-03-16
JP2024503617A (ja) 2024-01-26
AU2022201736A1 (en) 2022-07-21
LT4274851T (lt) 2026-02-25
SI4274851T1 (sl) 2026-03-31
SMT202600020T1 (it) 2026-03-09
KR20230130038A (ko) 2023-09-11
DK4274851T3 (da) 2026-01-19
CN115038720A (zh) 2022-09-09
EP4274851B1 (en) 2025-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11873342B2 (en) Anti-CCR8 monoclonal antibodies and uses thereof
EP4274851B1 (en) Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
WO2022206961A1 (en) Anti-cd24 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2023246879A1 (en) Anti-slc34a2 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2022148370A1 (en) Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
TWI883306B (zh) 抗ｇｐｒｃ５ｄ單株抗體及其用途
WO2025131027A1 (en) Anti-slc34a2/anti-4-1bb antibodies and uses thereof
WO2023155796A1 (en) Anti-il-13ra2 monoclonal antibodies and uses thereof
HK40080157A (en) Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
EA048142B1 (ru) Моноклональные антитела к gprc5d и варианты их применения
OA21935A (en) ‘‘Anti-IL-13RA2 Monoclonal Antibodies And Uses Thereof’’
HK40080157B (zh) 抗gprc5d单克隆抗体及其用途