RS67845B1 - Agonisti cnp sa kontrolisanim oslobađanjem i smanjenim neželjenim efektima - Google Patents

Description

[0001] Opis

[0003] Predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem koji smanjuje neželjene efekte povezane sa agonistom CNP i na upotrebu takvog agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem.

[0004] Ahondroplazija (ACH) je uzrokovana mutacijom dobitka funkcije u FGFR3. Vezivanje CNP za njegov receptor, natriuretski-peptidni receptor B (NPR-B), inhibira nishodni prenos signala FGFR3 i time pokreće endohondralni rast i prekomerni rast skeleta, što je primećeno i kod miševa i kod ljudi koji prekomerno eksprimiraju CNP. Prekomerna proizvodnja CNP u hrskavici ili kontinuirana isporuka CNP putem intravenske (iv) infuzije normalizuje patuljasti rast kod ahondroplaznih miševa, što sugeriše da je primena CNP na suprafiziološkim nivoima strategija za lečenje ACH.

[0005] Međutim, s obzirom na kratko vreme poluraspada prirodnog CNP-22 (2 minuta nakon intravenske primene), upotreba CNP kao terapijskog sredstva predstavlja izazov kod pedijatrijske populacije jer bi zahtevala kontinuiranu infuziju. Pored toga, pošto je CNP u velikoj meri inaktiviran u potkožnom tkivu, potrebna je intravenska infuzija.

[0006] Povećanje izloženosti efikasnim nivoima natriuretskog peptida CNP predstavlja izazov. Pošto su natriuretski peptidi porodica hormona koji mogu uticati na volumen krvi i krvni pritisak, povećanje doze može biti povezano sa kardiovaskularnim neželjenim efektima. Studija na zdravim dobrovoljcima pokazala je da je injekcija CNP izazvala prolazno, ali značajno smanjenje i sistolnog i dijastolnog krvnog pritiska sa značajnim povećanjem pulsa (Igaki, et al. Hypertens Res 1998; 21: 7-13). Slično tome, varijanta CNP sa povećanom rezistencijom na NEP (BMN-111) koja je u razvoju za lečenje ahondroplazije, pokazala je blagu hipotenziju u studiji faze 1 kod zdravih dobrovoljaca (BioMarin press release Sep 26, 2012). Studije BMN-111 na životinjama i ljudima su pokazale da se sa povećanjem doze arterijski krvni pritisak (BP) smanjuje i puls (HR) se povećava.

[0007] [0005] CNP proizvodi hemodinamske efekte kod miševa, nehumanih primata, pacova, pasa i ljudi. Da bi se procenili kardiovaskularni efekti različitih varijanti CNP, anestezirani mužjaci miševa divljeg tipa FVB/nJ su opremljeni kateterom za praćenje pritiska povezanim sa telemetrijskim predajnikom. Sve varijante su pokazale sličnu aktivnost smanjenja krvnog pritiska i povećanja pulsa. Kod većine životinja, efekti su primećeni u roku od 5 minuta od potkožne primene, sa maksimalnim padom srednjeg krvnog pritiska (MAP) između 5 i 20 minuta nakon primene doze. Ovo vreme je dobro koreliralo sa maksimalnom koncentracijom CNP varijanti i pokazalo je jasnu FK/FD vezu sa ovaj fiziološki odgovor. Pošto su hemodinamski odgovori bili slični između testiranih doza i varijanti, utvrđeno je da kardiovaskularna aktivnost nije diferencirajuće svojstvo (Wendt et. al. J Pharmacol Exp Ther 353:132-149, April 2015).

[0008] Pored istraživanja različitih varijanti CNP, različiti CNP konjugati su dobijeni konjugacijom CNP ostatka sa PEG ili proteinskim jedinjenjima. Ovi PEGilovani i himerni CNP pokazali su sličan hemodinamski odgovor kao što je primećeno kod nePEGilovanih varijanti CNP (Wendt, J Pharmacol Exp Ther 353:132-149, April 2015).

[0009] Stoga, povećanje doze leka koji ima CNP aktivnost radi povećanja izloženosti leku može biti povezano sa neprihvatljivim kardiovaskularnim neželjenim efektima, kao što je hipotenzija.

[0010] Ukratko, postoji potreba za efikasnijim i bezbednijim tretmanom koji izbegava kardiovaskularne neželjene efekte, kao što je hipotenzija.

[0011] Stoga je cilj ovog pronalaska da najmanje delimično prevaziđe gore opisane nedostatke.

[0012] Ovaj cilj se postiže farmaceutskom kompozicijom koja sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, pri čemu se nakon potkožne primene pomenutog agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem dobija smanjenje ili eliminisanje jednog ili više neželjenih efekata u poređenju sa subkutanom primenom odgovarajućeg slobodnog agonista CNP u ekvivalentnoj dozi, pri čemu, agonist CNP je CNP, pri čemu, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem je formule (Ia):

[0015]

[0018] pri čemu

[0019] x je 1;

[0020] -D je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96;

[0021] -L<1>- je reverzibilni linkerski ostatak proleka koji je konjugovan sa bočnim lancem aminokiselinskih ostataka prstenastog ostatka -D ili sa osnovom prstenastog ostatka -D, pri čemu, -L<1>- je formule (IIa):

[0022]

[0025] pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D formiranjem amidne veze;

[0026] -X<2>- je -C(R<8>R<8a>)- ili -C(R<8>R<8a>)-C(R<9>R<9a>)-;

[0027] -R<1>, -R<1a>, -R<2>, -R<2a>, -R<4>, -R<4a>, -R<8>, -R<8a>, -R<9>i -R<9a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila;

[0028] -R<3>i -R<3a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pod uslovom da u slučaju da jedan od -R<3>i -R<3a>ili oba nisu -H, povezani su sa azotom za koji su vezani preko sp<3>-hibridizovanog atoma ugljenika;

[0029] opciono, jedan ili oba para -R<1a>/-R<4a>i -R<8a>/-R<9a>formiraju hemijsku vezu; opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<1a>, -R<2>/-R<2a>, -R<4>/-R<4a>, -R<8>/-R<8a>i -R<9>/-R<9a>su spojeni zajedno sa atomom za koji su vezani tako da formiraju C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil;

[0030] opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<4>, -R<8>/-R<9>i -R<2>/-R<3>su spojeni zajedno sa atomima za koje su vezani tako da formiraju prsten A;

[0031] opciono, -R<3>/-R<3a>su spojeni zajedno sa atomom azota za koji su vezani da bi formirali 3- do 10-člani heterociklus;

[0032] A je fenil, naftil, indenil, indanil, tetralinil, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-člani heterociklil ili 8- do 11-člani heterobiciklil;

[0033] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIa) nije zamenjen sa -L<2>-Z;

[0034] -L<2>- je formule (i):

[0037]

[0039] pri čemu

[0040] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-;

[0041] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z;

[0042] -R<1>je -H, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil;

[0043] n je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ili 18;

[0044] -Z je ostatak nosača rastvorljiv u vodi koji sadrži ostatak formule (a)

[0045]

[0047] pri čemu

[0048] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[0049] BP<a>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

[0050] -R je -H ili C<1-6>alkil;

[0051] a je 0 ako je BP<a>jednak -N< ili -CR< i a je 1 ako je BP<a>jednak >C<;

[0052] -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">- i -S<a‴>- su međusobno nezavisno hemijska veza ili su izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[0053] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[0054] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso(=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>su nezavisno polimerni ostatak; i

[0055] pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 2 nmol/kg ekvivalenata CNP, i pri čemu su jedan ili više neželjenih efekata kardiovaskularni neželjeni efekti.

[0056] Iznenađujuće je otkriveno da se agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem mogu primenjivati na pacijenta u većoj dozi sa smanjenim efektima na mestu primene u poređenju sa odgovarajućim slobodnim agonistom CNP, što dovodi do pogodnijeg i efikasnijeg lečenja za pacijenta.

[0057] U sledećem aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem u lečenju pacijenta koji ima bolest koja se može lečiti agonistom CNP, pri čemu primena agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem smanjuje ili eliminiše jedan ili više neželjenih efekata povezanih sa primenom odgovarajućeg slobodnog agonista CNP u ekvivalentnoj dozi.

[0058] U okviru ovog pronalaska, termini se koriste sa sledećim značenjem.

[0059] Kako se ovde koristi, termin „agonist CNP“ odnosi se na bilo koje jedinjenje koje aktivira natriuretski peptidni receptor B (NPR-B) i ima EC<50>koja je najviše 50 puta veća od NPR-B aktivnosti CNP-22 (SEQ ID NO:1).

[0060] Kako se ovde koristi „EC<50>“ u vezi sa agonistom CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i agonistom CNP odnosi se na koncentraciju agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i agonista CNP kojom se izaziva polumaksimalna cGMP proizvodnja NPR-B. Aktivnost NPR-B u obliku njegove EC<50>agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, oslobođenog agonista CNP i CNP-22 se meri kultivacijom ćelija NIH-3T3 (ćelijska linija fibroblasta mišjih embriona) koje eksprimiraju NPR-B na površini ćelija, inkubacijom ćelija sa agonistom CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, odgovarajućim oslobođenim agonistom CNP ili CNP-22, respektivno, i određivanjem intracelularne proizvodnje sekundarnog mesindžera cGMP standardnim cGMP testom. Konkretno, test se izvodi na sledeći način:

[0062] (1) Mišje NIH-3T3 ćelije koje eksprimiraju endogeni NPR-B kultivisane su u DMEM F-12 medijumu sa 5% FBS i 5 mM glutamina na 37°C i 5% CO<2>;

[0063] (2) Za svaki test, 50.000 ćelija se resuspenduje u Dulbecco-ovom PBS sa IBMX i inkubira ili sa agonistom CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, odgovarajućim oslobođenim agonistom CNP ili CNP-22; svaki u različitim koncentracijama;

[0064] (3) nakon inkubacije od 30 minuta na 37°C i 5% CO<2>, ćelije se liziraju i određuju se nivoi cGMP; i

[0065] (4) generiše se EC<50>vrednost od određenih nivoa cGMP.

[0067] Poželjno, koncentracija IBMX u koraku (2) je 0,5 mM.

[0068] Korak (3) se može izvršiti korišćenjem bilo kog testa za merenje cGMP, što je standardni postupak dobro poznat stručnjaku u ovoj oblasti. Poželjno je da se korak (3) izvodi cGMP TR-FRET testom, još poželjnije cGMP TR-FRET testom od Cisbio, kat. br. 62GM2PEB. Pošto tokom takvih eksperimenata, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem oslobađa određenu količinu agonista CNP, što bi iskrivilo rezultate, merenja NPR-B aktivnosti agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem se poželjno vrše u obliku stabilnog analoga koji ne oslobađa agonist CNP.

[0069] Kako se ovde koristi, termin „agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem“ odnosi se na bilo koje jedinjenje, konjugat, kristal ili smešu koja sadrži najmanje jedan agonist CNP i iz koje se taj najmanje jedan agonist CNP oslobađa sa poluživotom oslobađanja od najmanje 6 sati.

[0070] Kako se ovde koristi, termin „ekvivalentna doza“ u vezi sa agonistom CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i odgovarajućim slobodnim agonistom CNP odnosi se na ekvimolarnu dozu CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i odgovarajućeg slobodnog agonista CNP.

[0071] Kako se ovde koristi, termin „jedinična doza“ odnosi se na dozu agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem koja se primenjuje na pacijenta u jednoj primeni.

[0072] Kako se ovde koristi, termin „ekvivalent agonista CNP“ odnosi se na ukupnu masu agonista CNP ili agonista CNP sadržanih u agonistu CNP sa kontrolisanim oslobađanjem. Drugim rečima, ako je agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem na primer prolek u kome je agonist CNP reverzibilno konjugovan sa polimerom, termin „ekvivalent agonista CNP“ odnosi se na ukupnu masu agonista CNP, ali ne i na ukupnu masu agonista CNP. Ako je agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem na primer fuzioni protein u kome je agonist CNP fuzioni sa prirodnom ili neprirodnom aminokiselinskom sekvencom, termin „ekvivalent agonista CNP“ odnosi se na ukupnu masu agonista CNP, ali ne i na ukupnu masu fuzionog proteina.

[0073] Kako se ovde koristi, termin „poluživot oslobađanja“ odnosi se na vreme potrebno da se polovina svih molekula agonista CNP oslobodi iz agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem. Takvo oslobađanje može se, na primer, dogoditi putem difuzije, hidrolize ili enzimskog cepanja.

[0074] [0023] Kako se ovde koristi, termin „CNP“ odnosi se na sve CNP polipeptide, poželjno od vrsta sisara, poželjnije od ljudi i vrsta sisara, još poželjnije od ljudi i vrsta miševa, kao i na njihove varijante, analoge, ortologe, homologe i derivate i fragmente istih, koji se karakterišu regulisanjem rasta, proliferacije i diferencijacije hondrocita hrskavičave ploče rasta. Poželjno je da se termin „CNP“ odnosi na CNP polipeptid SEQ ID NO:24, kao i na njegove varijante, homologe i derivate koji pokazuju u suštini istu biološku aktivnost, tj. regulisanje rasta, proliferacije i diferencijacije hondrocita hrskavičave ploče rasta. Poželjnije je da se termin „CNP“ odnosi na polipeptid SEQ ID NO:24. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na polipeptid SEQ ID NO:20. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na polipeptid SEQ ID NO:21. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na polipeptid SEQ ID NO:22. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na polipeptid SEQ ID NO:23. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na polipeptid SEQ ID NO:30.

[0075] CNP-22 (SEQ ID NO: 1) koji se javlja u prirodi ima sledeću sekvencu:

[0077] GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC,

[0079] pri čemu su cisteini na pozicijama 6 i 22 povezani preko disulfidnog mosta, kao što je ilustrovano na slici 1.

[0080] SEQ ID NO:24 ima sledeću sekvencu:

[0081] LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC,

[0082] pri čemu su cisteini na pozicijama 22 i 38 povezani preko disulfidnog mosta.

[0083] Termin „CNP“ takođe obuhvata sve CNP varijante, analoge, ortologe, homologe i derivate i njihove fragmente, kao što je opisano u WO 2009/067639 A2 i WO 2010/135541 A2.

[0084] Shodno tome, termin „CNP“ se takođe poželjno odnosi na sledeće peptidne sekvence:

[0086] SEQ ID NO:2 (CNP-53):

[0087] DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:3 (G-CNP-53):

[0088] GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:4 (M-CNP-53):

[0089] MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:5 (P-CNP-53):

[0090] PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:6 (CNP-53 M48N):

[0091] DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC; SEQ ID NO:7 (CNP-53 Δ15-31):

[0092] DLRVDTKSRAAWARGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0093] SEQ ID NO:8 (CNP-52):

[0094] LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:9 (CNP-51):

[0095] RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:10 (CNP-50):

[0096] VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:11 (CNP-49):

[0097] DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:12 (CNP-48):

[0098] TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0099] SEQ ID NO: 13 (CNP-47):

[0100] KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0101] SEQ ID NO: 14 (CNP-46):

[0102] SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0103] SEQ ID NO:15 (CNP-45):

[0104] RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0105] SEQ ID NO:16 (CNP-44):

[0106] AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0107] SEQ ID NO:17 (CNP-44 Δ14-22):

[0108] AAWARLLQEHPNAGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0109] SEQ ID NO:18 (CNP-44 Δ15-22):

[0110] AAWARLLQEHPNARGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0111] SEQ ID NO:19 (CNP-43):

[0112] AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0113] SEQ ID NO:20 (CNP-42):

[0114] WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0115] SEQ ID NO:21 (CNP-41):

[0116] ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0117] SEQ ID NO:22 (CNP-40):

[0118] RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0119] SEQ ID NO:23 (CNP-39):

[0120] LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0121] SEQ ID NO:24 (CNP-38):

[0122] LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0123] SEQ ID NO:25 (CNP-37):

[0124] QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:26 (CNP-37 Q1pQ, pri čemu pQ = piroglutamat): pQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:27 (G-CNP-37):

[0125] GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:28 (P-CNP-37):

[0126] PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:29 (M-CNP-37):

[0127] MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:30 (PG-CNP-37):

[0128] PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:31 (MG-CNP-37):

[0129] MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:32 (CNP-37 M32N):

[0130] QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC; SEQ ID NO:33 (G-CNP-37 M32N):

[0131] GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC; SEQ ID NO:34 (G-CNP-37 K14Q):

[0132] GQEHPNARKYKGANQKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:35 (G-CNP-37 K14P):

[0133] GQEHPNARKYKGANPKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:36 (G-CNP-37 K14Q, Δ15):

[0134] GQEHPNARKYKGANQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:37 (G-CNP-37 K14Q, K15Q):

[0135] GQEHPNARKYKGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:38 (CNP-36):

[0136] EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:39 (CNP-35):

[0137] HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0138] SEQ ID NO:40 (CNP-34):

[0139] PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0140] SEQ ID NO:41 (CNP-33):

[0141] NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0142] SEQ ID NO:42 (CNP-32):

[0143] ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0144] SEQ ID NO:43 (CNP-31):

[0145] RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0146] SEQ ID NO:44 (CNP-30):

[0147] KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0148] SEQ ID NO:45 (CNP-29):

[0149] YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0150] SEQ ID NO:46 (CNP-28):

[0151] KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0152] SEQ ID NO:47 (GHKSEVAHRF-CNP-28):

[0153] GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:48 (CNP-27):

[0154] GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0155] SEQ ID NO:49 (CNP-27 K4Q, K5Q):

[0156] GANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0157] SEQ ID NO:50 (CNP-27 K4R,K5R):

[0158] GANRRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0159] SEQ ID NO:51 (CNP-27 K4P,K5R):

[0160] GANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0161] SEQ ID NO:52 (CNP-27 K4S,K5S):

[0162] GANSSGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0163] SEQ ID NO:53 (CNP-27 K4P,K5R):

[0164] GANGANPRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0165] SEQ ID NO:54 (CNP-27 K4R, K5R, K9R):

[0166] GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0167] SEQ ID NO:55 (CNP-27 K4R, K5R, K9R, M22N):

[0168] GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC;

[0169] SEQ ID NO:56 (P-CNP-27 K4R, K5R, K9R):

[0170] PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0171] SEQ ID NO:57 (M-CNP-27 K4R, K5R, K9R):

[0172] MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0173] SEQ ID NO:58 (HSA fragment-CNP-27):

[0174] GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLG; SEQ ID NO:59 (HSA fragment-CNP-27 M22N): GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC; SEQ ID NO:60 (M-HSA fragment-CNP-27):

[0175] MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:61 (P-HSA fragment-CNP-27):

[0176] PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:62 (CNP-26):

[0177] ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0178] SEQ ID NO:63 (CNP-25):

[0179] NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0180] SEQ ID NO:64 (CNP-24):

[0181] KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0182] SEQ ID NO:65 (CNP-23):

[0183] KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0184] SEQ ID NO:66 (R-CNP-22):

[0185] RGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0186] SEQ ID NO:67 (ER-CNP-22):

[0187] ERGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0188] SEQ ID NO:68 (R-CNP-22 K4R):

[0189] RGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0190] SEQ ID NO:69 (ER-CNP-224KR):

[0191] ERGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0192] SEQ ID NO:70 (RR-CNP-22):

[0193] RRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0194] SEQ ID NO:71 (HRGP fragment-CNP-22):

[0195] GHHSHEQHPHGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:72 (HRGP fragment-CNP-22):

[0196] GAHHPHEHDTHGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:73 (HRGP fragment-CNP-22):

[0197] GHHSHEQHPHGANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:74 (IgG<1>(F<c>) fragment-CNP-22):

[0198] GQPREPQVYTLPPSGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0199] SEQ ID NO:75 (HSA fragment-CNP-22):

[0200] GQHKDDNPNLPRGANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:76 (HSA fragment-CNP-22): GERAFKAWAVARLSQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0201] SEQ ID NO:77 (fragment-CNP22 inhibitora osteokrin NPR C): FGIPMDRIGRNPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0202] SEQ ID NO:78 (fragment-CNP22 FGF2 heparin-vezujućeg domena): GKRTGQYKLGSKTGPGPKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:79 (fragment-CNP-22 K4R IgG<1>(F<c>)):

[0203] GQPREPQVYTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0204] SEQ ID NO:80 (HSA fragment-CNP-22 K4R):

[0205] GVPQVSTSTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0206] SEQ ID NO:81 (fragment-CNP-22 K4R fibronektina):

[0207] GQPSSSSQSTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0208] SEQ ID NO:82 (fragment-CNP-22 K4R fibronektina):

[0209] GQTHSSGTQSGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0210] SEQ ID NO:83 (fragment-CNP-22 K4R fibronektina):

[0211] GSTGQWHSESGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0212] SEQ ID NO:84 (fragment-CNP-22 K4R cinkovog prsta):

[0213] GSSSSSSSSSGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0214] SEQ ID NO:85 (CNP-21):

[0215] LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0216] SEQ ID NO:86 (CNP-20):

[0217] SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0218] SEQ ID NO:87 (CNP-19):

[0219] KGCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0220] SEQ ID NO:88 (CNP-18):

[0221] GCFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0222] SEQ ID NO:89 (CNP-17):

[0223] CFGLKLDRIGSMSGLGC;

[0224] SEQ ID NO:90 (BNP fragment-CNP-17-BNP fragment):

[0225] SPKMVQGSGCFGLKLDRIGSMSGLGCKVLRRH;

[0226] SEQ ID NO:91 (CNP-38 L1G):

[0227] GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC; SEQ ID NO:92 (Ac-CNP-37; pri čemu je Ac= acetil):

[0228] Ac-QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC.

[0229] Razume se da su ekvivalenti cisteina na pozicijama 22 i 38 SEQ ID NO:24 takođe povezani preko disulfidnog mosta u SEQ ID NO:2 do 92.

[0230] Poželjnije je da se termin „CNP“ odnosi na sekvencu SEQ IDNO: 2, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 30, 32, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 91 ili 92. Još poželjnije je da se termin „CNP“ odnosi na sekvencu SEQ IDNO: 23, 24, 25, 26, 38, 39, 91 ili 92. U posebno poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na sekvencu SEQ ID NO: 24.

[0231] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, termin „CNP“ se odnosi na sekvencu SEQ ID NO:93 QEHPNARX<1>YX<2>GANX<3>X<4>GLSX<5>GCFGLX<6>LDRIGSMSGLGC,

[0232] pri čemu, X<1>, X<2>, X<3>, X<4>, X<5>i X<6>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od K, R, P, S i Q, uz uslov da je najmanje jedan od X<1>, X<2>, X<3>, X<4>, X<5>i X<6>izabran iz grupe koja se sastoji od R, P, S i Q; poželjno X<1>, X<2>, X<3>, X<4>, X<5>i X<6>su izabrani iz grupe koja se sastoji od K i R, uz uslov da je najmanje jedan od X<1>, X<2>, X<3>, X<4>, X<5>i X<6>jednak R;

[0233] još poželjnije u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:94

[0234] QEHPNARKYKGANX<1>X<2>GLSX<3>GCFGLX<4>LDRIGSMSGLGC,

[0235] pri čemu, X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od K, R, P, S i Q, uz uslov da je najmanje jedan od X<1>, X<2>, X<3>i X<4>izabran iz grupe koja se sastoji od R, P, S i Q; poželjno X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su izabrani od K i R, uz uslov da je najmanje jedan od X<1>, X<2>, X<3>i X<4>jednak R;

[0236] i najpoželjnije na sekvencu SEQ ID NO:95

[0237] QEHPNARKYKGANX<1>X<2>GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC,

[0238] pri čemu su X<1>X<2>izabrani iz grupe koja se sastoji od KR, RK, KP, PK, SS, RS, SR, QK, QR, KQ, RQ, RR i QQ.

[0240] Razume se da su u svim CNP sekvencama datim u ovoj specifikaciji ekvivalenti cisteina na pozicijama 22 i 38 SEQ ID NO:24 takođe povezani preko disulfidnog mosta u SEQ ID NO: 93 do 95.

[0241] Razume se da ovaj pronalazak takođe obuhvata varijante CNP u kojima bilo koji ili više, do svih, ostataka podložnih deamidaciji ili reakciji sličnoj deamidaciji (npr. izomerizaciji) mogu biti konvertovani u drugi(e) ostatak(e) putem deamidacije ili reakcije slične deamidaciji u bilo kom stepenu, do 100% konverzije po konvertovanom ostatku. U određenim primerima izvođenja, otkriće obuhvata varijante CNP u kojima:

[0243] (1) bilo koji ili više, do svih, ostataka asparagina (Asn/N) mogu se pretvoriti u asparaginsku kiselinu ili aspartat, i/ili u izoasparaginsku kiselinu ili izoaspartat, putem deamidacije do oko 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% konverzije po konvertovanom ostatku; ili

[0244] (2) bilo koji ili više, do svih, ostataka glutamina (Gln/Q) mogu se pretvoriti u glutaminsku kiselinu ili glutamat, i/ili u izoglutaminsku kiselinu ili izoglutamat, putem deamidacije do oko 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% konverzije po konvertovanom ostatku; ili

[0245] (3) bilo koji ili više, do svih, ostataka asparaginske kiseline ili aspartata (Asp/D) mogu se pretvoriti u izoasparaginsku kiselinu ili izoaspartat putem reakcije slične deamidaciji (takođe nazvane izomerizacija) do oko 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% konverzije po konvertovanom ostatku; ili

[0246] (4) bilo koji ili više, do svih, ostataka glutaminske kiseline ili glutamata (Glu/E) mogu se pretvoriti u izoglutaminsku kiselinu ili izoglutamat putem reakcije slične deamidaciji (takođe nazvane izomerizacija) do oko 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% konverzije po konvertovanom ostatku; ili

[0247] (5) N-terminalni glutamin (ako je prisutan) može se pretvoriti u piroglutamat do oko 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% konverzije; ili

[0248] (6) kombinacija gore navedenog.

[0250] [0033] Kako se ovde koristi, termin „varijanta CNP polipeptida“ odnosi se na polipeptid iste vrste koji se razlikuje od referentnog CNP polipeptida. Poželjno je da takva referentna sekvenca CNP polipeptida bude sekvenca SEQ ID NO:24. Generalno, razlike su ograničene tako da su aminokiselinska sekvenca reference i varijante u celini veoma slične i, u mnogim regionima, identične. Poželjno je da su varijante CNP polipeptida najmanje 70%, 80%, 90% ili 95% identične referentnom CNP polipeptidu, poželjno CNP polipeptidu SEQ ID NO:24. Pod polipeptidom koji ima aminokiselinsku sekvencu najmanje, na primer, 95% „identičnu“ ispitivanoj aminokiselinskoj sekvenci, podrazumeva se da je aminokiselinska sekvenca predmetnog polipeptida identična ispitivanoj sekvenci, osim što ispitivana polipeptidna sekvenca može da sadrži do pet aminokiselinskih promena na svakih 100 aminokiselina ispitivane aminokiselinske sekvence. Ove izmene referentne sekvence mogu se javiti na amino (N-terminalnim) ili karboksi terminalnim (C-terminalnim) pozicijama referentne aminokiselinske sekvence ili bilo gde između tih terminalnih pozicija, rasute pojedinačno među ostacima u referentnoj sekvenci ili u jednoj ili više susednih grupa unutar referentne sekvence. Ispitivana sekvenca može biti cela aminokiselinska sekvenca referentne sekvence ili bilo koji fragment naveden kao što je ovde opisan. Poželjno, ispitivana sekvenca je sekvenca SEQ ID NO:24.

[0251] Takve varijante CNP polipeptida mogu biti prirodno prisutne varijante, kao što su prirodno prisutne alelne varijante kodirane jednim od nekoliko alternativnih oblika CNP koji zauzimaju dati lokus na hromozomu ili organizmu, ili izoforme kodirane prirodno prisutnim splajs varijantama koje potiču iz jednog primarnog transkripta. Alternativno, varijanta CNP polipeptida može biti varijanta za koju nije poznato da se javlja u prirodi i koja se može napraviti tehnikama mutageneze poznatim u struci.

[0252] U struci je poznato da se jedna ili više aminokiselina mogu biti deletirane sa N-terminusa ili C-terminusa bioaktivnog peptida ili proteina bez značajnog gubitka biološke funkcije. Takve N- i/ili C-terminalne delecije su takođe obuhvaćene terminom CNP polipeptidna varijanta.

[0253] Takođe je stručnjaku u ovoj oblasti poznato da se neke aminokiselinske sekvence CNP polipeptida mogu menjati bez značajnog uticaja na strukturu ili funkciju peptida. Takvi mutanti uključuju delecije, insercije, inverzije, ponovke i supstitucije odabrane prema opštim pravilima poznatim u struci, tako da imaju mali uticaj na aktivnost. Na primer, smernice o tome kako napraviti fenotipski tihe aminokiselinske supstitucije date su u Bowie et al. (1990), Science 247:1306-1310, gde autori ukazuju da postoje dva glavna pristupa za proučavanje tolerancije aminokiselinske sekvence na promenu.

[0254] Termin CNP polipeptid takođe obuhvata sve CNP polipeptide kodirane analozima, ortologima i/ili homolozima vrsta CNP. Kako se ovde koristi, termin „analog CNP“ odnosi se na CNP različitih i nesrodnih organizama koji obavljaju iste funkcije u svakom organizmu, ali koji nisu potekli od predačke strukture koju su preci organizama imali zajedničku. Umesto toga, analogni CNP su nastali odvojeno, a zatim kasnije evoluirali da obavljaju iste ili slične funkcije. Drugim rečima, analogni CNP polipeptidi su polipeptidi sa sasvim različitim aminokiselinskim sekvencama, ali koji obavljaju istu biološku aktivnost, naime regulišu rast, proliferaciju i diferencijaciju hondrocita hrskavičave ploče rasta.

[0255] Kako se ovde koristi, termin „ortolog CNP“ odnosi se na CNP unutar dve različite vrste čije su sekvence međusobno povezane preko zajedničkog homolognog CNP kod predačke vrste, ali koje su evoluirale tako da se razlikuju jedna od druge.

[0256] [0039] Kako se ovde koristi, termin „homolog CNP“ odnosi se na CNP različitih organizama koji obavljaju iste funkcije u svakom organizmu i koji potiču od predačke strukture koju su preci organizama imali zajedničku. Drugim rečima, homologni CNP polipeptidi su polipeptidi sa prilično sličnim aminokiselinskim sekvencama koji obavljaju istu biološku aktivnost, naime regulišu rast, proliferaciju i diferencijaciju hondrocita hrskavičave ploče rasta. Poželjno je da se homolozi CNP polipeptida definišu kao polipeptidi koji pokazuju najmanje 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 95% identičnosti sa referentnim CNP polipeptidom, poželjno CNP polipeptidom SEQ ID NO:24.

[0257] Dakle, CNP polipeptid prema pronalasku može biti, na primer: (i) onaj u kome je najmanje jedan od aminokiselinskih ostataka supstituisan konzervativnim ili nekonzervativnim aminokiselinskim ostatkom, poželjno konzervativnim aminokiselinskim ostatkom, i takav supstituisani aminokiselinski ostatak može, ali i ne mora biti onaj kodiran genetskim kodom; i/ili (ii) onaj u kome najmanje jedan od aminokiselinskih ostataka uključuje supstituentsku grupu; i/ili (iii) onaj u kome je CNP polipeptid fuzionisan sa drugim jedinjenjem, kao što je jedinjenje za povećanje poluživota polipeptida (na primer, polietilen glikol); i/ili (iv) onaj u kome su dodatne aminokiseline fuzirane sa CNP polipeptidom, kao što je IgG Fc fuzioni region peptid ili liderska ili sekretorna sekvenca ili sekvenca koja se koristi za prečišćavanje gore navedenog oblika polipeptida ili pre-proteinske sekvence.

[0258] Kako se ovde koristi, termin „fragment CNP polipeptida“ odnosi se na bilo koji peptid koji obuhvata kontinuirani raspon dela aminokiselinske sekvence CNP polipeptida, poželjno polipeptida SEQ ID NO:24.

[0259] Konkretnije, fragment CNP polipeptida sadrži najmanje 6, kao što je najmanje 8, najmanje 10 ili najmanje 17 uzastopnih aminokiselina CNP polipeptida, poželjnije polipeptida SEQ ID NO:24. Fragment CNP polipeptida može se dodatno opisati kao podrod CNP polipeptida koji sadrži najmanje 6 aminokiselina, pri čemu je „najmanje 6“ definisano kao bilo koji ceo broj između 6 i celog broja koji predstavlja C-terminalnu aminokiselinu CNP polipeptida, poželjno polipeptida SEQ ID NO:24. Dalje su uključene vrste fragmenata CNP polipeptida dužine najmanje 6 aminokiselina, kao što je gore opisano, koje su dalje specificirane u smislu njihovih N-terminalnih i C-terminalnih položaja. Takođe, termin „fragment CNP polipeptida“ kao pojedinačne vrste obuhvata sve fragmente CNP polipeptida, dužine najmanje 6 aminokiselina, kao što je gore opisano, koji mogu biti posebno specificirani N-terminalnim i C-terminalnim položajem. To jest, svaka kombinacija N-terminalne i C-terminalne pozicije koju fragment dužine najmanje 6 susednih aminokiselinskih ostataka može da zauzme, na bilo kojoj datoj aminokiselinskoj sekvenci CNP polipeptida, poželjno CNP polipeptida SEQ ID:NO24, je uključena u ovaj pronalazak.

[0260] [0043] Termin „CNP“ takođe obuhvata poli(aminokiselinske) konjugate koji imaju sekvencu kao što je gore opisana, ali imaju lanac koji sadrži i amidne i neamidne veze, kao što su estarske veze, kao na primer depsipeptidi. Depsipeptidi su lanci aminokiselinskih ostataka u kojima lanac sadrži i amidne (peptidne) i estarske veze. Shodno tome, termin „bočni lanac“, kako se ovde koristi, odnosi se ili na ostatak vezan za alfa-ugljenik aminokiselinskog dela, ako je aminokiselinski ostatak povezan preko aminskih veza kao što je u polipeptidima, ili na bilo koji ostatak koji sadrži atom ugljenika vezan za lanac poli(aminokiselinskog) konjugata, kao na primer u slučaju depsipeptida. Poželjno je da se termin „CNP“ odnosi na polipeptide koji imaju lanac formiran preko amidnih (peptidnih) veza.

[0261] Pošto termin CNP obuhvata gore opisane varijante, analoge, ortologe, homologe, derivate i fragmente CNP, sve reference na specifične pozicije unutar referentne sekvence takođe uključuju ekvivalentne pozicije u varijantama, analozima, ortologima, homologima, derivatima i fragmentima CNP ostatka, čak i ako nisu posebno pomenute.

[0262] Kako se ovde koristi, termin „prstenasti ostatak“ odnosi se na niz uzastopnih aminokiselinskih ostataka CNP leka ili ostatka koji se nalazi između dva cisteinska ostatka koji formiraju intramolekularni disulfidni most ili između homolognih aminokiselinskih ostataka koji su povezani hemijskim linkerom. Poželjno je da se prstenasti deo nalazi između dva cisteinska ostatka koji formiraju intramolekularni disulfidni most. Ova dva cisteina odgovaraju cisteinima na poziciji 22 i poziciji 38 u sekvenci CNP-38 (SEQ ID NO:24). Shodno tome, aminokiseline od 23 do 37 se nalaze u navedenom prstenastom ostatku, ako CNP lek ili ostatak ima sekvencu CNP-22.

[0263] Nezavisno od dužine CNP ostatka, sekvenca prstenastog ostatka CNP divljeg tipa je FGLKLDRIGSMSGLG (SEQ ID NO.: 96).

[0264] Kao što je gore opisano, termin „CNP“ se odnosi na CNP lekove ili ostatke koji imaju različit broj aminokiselina. Stručnjak u ovoj oblasti razume da se u CNP lekovima ili ostacima različitih dužina položaji ekvivalentnih aminokiselina razlikuju i stručnjak neće imati poteškoća da identifikuje dva cisteina koji formiraju disulfidni most ili njihova dva homologna aminokiselinska ostatka povezana jedan sa drugim preko hemijskog linkera u dužim, kraćim i/ili na drugi način modifikovanim verzijama CNP.

[0265] Kako termin CNP obuhvata gore opisane varijante, analoge, ortologe, homologe, derivate i fragmente CNP, termin „prstenasti ostatak“ takođe obuhvata odgovarajuće varijante, analoge, ortologe, homologe, derivate i fragmente sekvence SEQ ID NO:96. Shodno tome, sve reference na specifične pozicije unutar referentne sekvence takođe uključuju ekvivalentne pozicije u varijantama, analozima, ortologima, homologima, derivatima i fragmentima CNP dela, čak i ako nisu eksplicitno pomenuti.

[0266] [0049] Kako se ovde koristi, termin „micela“ označava agregat amfifilnih molekula dispergovanih u tečnom koloidu. U vodenom rastvoru, tipična micela formira agregat sa hidrofilnim delom molekula surfaktanta okrenutim ka okolnom rastvaraču, a hidrofobnim ostatkom molekula surfaktanta okrenutim ka unutra, što se naziva i „micela normalne faze“. „Inverzne micele“ imaju hidrofilni ostatak okrenut ka unutra, a hidrofobni ostatak okrenut ka okolnom rastvaraču.

[0267] Kako se ovde koristi, termin „lipozom“ se odnosi na vezikulu, poželjno sfernu vezikulu, koja ima najmanje jedan lipidni dvosloj. Poželjno je da lipozomi sadrže fosfolipide, još poželjnije fosfatidilholin. Termin „lipozom“ se odnosi na različite strukture i veličine, kao što su, na primer, multilamelarne lipozomske vezikule (MLV) koje imaju više od jednog koncentričnog lipidnog dvosloja sa prosečnim prečnikom od 100 do 1000 nm, male unilamelarne lipozomske vezikule (SUV) koje imaju jedan lipidni dvosloj i prosečan prečnik od 25 do 100 nm, velike unilamelarne lipozomske vezikule (LUV) koje imaju jedan lipidni dvosloj i prosečan prečnik od oko 1000 µm i džinovske unilamelarne vezikule (GUV) koje imaju jedan lipidni dvosloj i prosečan prečnik od 1 do 100 µm. Termin „lipozom“ takođe uključuje elastične vezikule kao što su, na primer, transferozomi i etozomi.

[0268] Kako se ovde koristi, termin „akvazom“ odnosi se na sferne nanočestice prečnika od 60 do 300 nm koje sadrže najmanje tri sloja samoorganizovane strukture, naime čvrstofazno nanokristalno jezgro obloženo oligomernim filmom na koji se adsorbuju molekuli leka sa ili bez modifikacije leka.

[0269] Kako se ovde koristi, termin „etozom“ odnosi se na lipidne vezikule koje sadrže fosfolipide i etanol i/ili izopropanol u relativno visokoj koncentraciji i vodu, veličine u rasponu od desetina nanometara do mikrometara.

[0270] Kako se ovde koristi, termin „LeciPlex“ odnosi se na pozitivno naelektrisani vezikularni sistem na bazi fosfolipida koji sadrži sojin PC, katjonski agens i biokompatibilni rastvarač kao što su PEG 300, PEG 400, dietilen glikol monoetil etar, tetrahidrofurfuril alkohol polietilen glikol etar ili 2-pirolidon ili N-metil-2-pirolidon.

[0271] Kako se ovde koristi, termin „niozom“ odnosi se na unilamelarne ili multilamelarne vezikule koje sadrže nejonske surfaktante.

[0272] Kako se ovde koristi, termin „farmakozom“ odnosi se na ultrafine vezikularne, micelarne ili heksagonalne agregate lipida kovalentno vezanih za biološki aktivne delove.

[0273] Kako se ovde koristi, termin „proniozom“ odnosi se na suve formulacije nosača obloženog surfaktantnom aktivnom supstancom koje nakon rehidratacije i blagog mućenja daju niozome.

[0274] Kako se ovde koristi, termin „polimerzom“ odnosi se na veštačku sfernu vezikulu koja sadrži membranu formiranu od amfifilnih sintetičkih blok kopolimera i može opciono da sadrži vodeni rastvor u svom jezgru. Polimerzom ima prečnik u rasponu od 50 nm do 5 µm i više.

[0275] Termin takođe uključuje sintozome, koji su polimerzomi projektovani tako da sadrže kanale koji omogućavaju određenim hemikalijama da prolaze kroz membranu u ili iz vezikule.

[0276] Kako se ovde koristi, termin „sfingozom“ odnosi se na koncentričnu, dvoslojnu vezikulu u kojoj je vodena zapremina u potpunosti obuhvaćena membranskim lipidnim dvoslojem koji je uglavnom sastavljen od prirodnog ili sintetičkog sfingolipida.

[0277] Kako se ovde koristi, termin „transferozom“ odnosi se na ultrafleksibilne lipidne vezikule koje sadrže vodeno jezgro, a koje su formirane od mešavine uobičajenih polarnih i odgovarajućih lipida aktiviranih ivicama, što olakšava formiranje visoko zakrivljenih dvoslojeva koji čine transferozom veoma deformabilnim.

[0278] Kako se ovde koristi, termin „ufazom“ odnosi se na vezikulu koja sadrži nezasićene masne kiseline.

[0279] Kako se ovde koristi, termin „aptamer“ odnosi se na oligonukleotidni ili peptidni molekul koji se vezuje za određeni molekul. Termin „aptamer“ obuhvata DNK, RNK, XNA i peptidne aptamere.

[0280] Kako se ovde koristi, termin „oligonukleotid“ se odnosi na kratki polimer nukleinske kiseline dužine do 100 baza.

[0281] Kako se ovde koristi, termin „polipeptid“ odnosi se na peptid koji sadrži do i uključujući 50 monomera aminokiselina. Samo za CNP lekove i CNP ostatke, sekvence koje imaju više od 50 aminokiselina će se radi pojednostavljenja nazivati „polipeptidom“.

[0282] Kako se ovde koristi, termin „protein“ odnosi se na peptid sa više od 50 aminokiselinskih ostataka. Poželjno je da protein sadrži najviše 20000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 15000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 10000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 5000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 4000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 3000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 2000 aminokiselinskih ostataka, kao što je najviše 1000 aminokiselinskih ostataka.

[0283] Kako se ovde koriste, termini „lek mali molekul“ i „biološki aktivni ostatak mali molekul“ odnose se na lekove i biološki aktivne ostatke koji su organska jedinjenja sa molekulskom težinom ne većom od 1 kDa, kao što je do 900 kDa.

[0284] Kako se ovde koristi, termin „prirodni proizvod“ odnosi se na prečišćena organska jedinjenja izolovana iz prirodnih izvora koja nastaju putevima primarnog ili sekundarnog metabolizma.

[0285] Kako se ovde koristi, termin „fiziološki uslovi“ odnosi se na vodeni pufer na pH 7,4, 37°C.

[0286] Kako se ovde koristi, termin „farmaceutska kompozicija“ odnosi se na kompoziciju koja sadrži jedan ili više aktivnih sastojaka, kao što su na primer agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska, i jedan ili više ekscipijenasa, kao i na bilo koji proizvod koji je rezultat, direktno ili indirektno, kombinacije, kompleksacije ili agregacije bilo koja dva ili više sastojaka kompozicije, ili disocijacije jednog ili više sastojaka, ili drugih vrsta reakcija ili interakcija jednog ili više sastojaka. Shodno tome, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska obuhvataju bilo koju kompoziciju napravljenu mešanjem jednog ili više agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska i farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa.

[0287] Kako se ovde koristi, termin „tečna kompozicija“ odnosi se na smešu koja sadrži agonist CNP rastvorljiv u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem i jedan ili više rastvarača, kao što je voda.

[0288] Termin „kompozicija suspenzije“ odnosi se na smešu koja sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, nerastvorljiv u vodi, i jedan ili više rastvarača, kao što je voda.

[0289] Kako se ovde koristi, termin „suva kompozicija“ znači da je farmaceutska kompozicija obezbeđena u suvom obliku. Pogodni postupci za sušenje su sušenje raspršivanjem i liofilizacija, tj. sušenje smrzavanjem. Takva suva kompozicija agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska ima rezidualni sadržaj vode od najviše 10%, poželjno manje od 5%, a još poželjnije manje od 2%, određeno prema Karl Fischer-u. Poželjno je da se farmaceutska kompozicija ovog pronalaska suši liofilizacijom.

[0290] Termin „lek“, kako se ovde koristi, odnosi se na supstancu koja se koristi u lečenju, izlečenju, prevenciji ili dijagnozi bolesti ili se koristi za poboljšanje fizičkog ili mentalnog blagostanja. Ako je lek konjugovan sa drugim ostatkom, ostatak rezultujućeg proizvoda koji je nastao iz leka naziva se „biološki aktivni ostatak“.

[0291] [0073] Kako se ovde koristi, termin „prolek“ odnosi se na biološki aktivni ostatak reverzibilno i kovalentno povezan sa specijalizovanom zaštitnom grupom preko reverzibilnog linkerskog ostatka proleka, koji je linkerski ostatak koji sadrži reverzibilnu vezu sa biološki aktivnim ostatkom i gde specijalizovana zaštitna grupa menja ili eliminiše neželjena svojstva u matičnom molekulu. Ovo takođe uključuje poboljšanje poželjnih svojstava leka i suzbijanje neželjenih svojstava. Specijalizovana netoksična zaštitna grupa se naziva „nosač“. Prolek oslobađa reverzibilno i kovalentno vezani biološki aktivni ostatak u obliku odgovarajućeg leka. Drugim rečima, prolek je konjugat koji sadrži biološki aktivni ostatak koji je kovalentno i reverzibilno konjugovan sa nosećim ostatkom preko reverzibilnog linkerskog ostatka proleka, pri čemu je kovalentna i reverzibilna konjugacija nosača sa reverzibilnim linkerskim ostatkom proleka direktno ili preko razmaknice. Takav konjugat oslobađa ranije konjugovani biološki aktivni ostatak u obliku slobodnog leka.

[0292] „Biorazgradiva veza“ ili „reverzibilna veza“ je veza koja je hidrolitički razgradiva, tj. može da se cepa, u odsustvu enzima pod fiziološkim uslovima (vodeni pufer na pH 7,4, 37°C) sa vremenom poluraspada od jednog sata do šest meseci, poželjno od jednog sata do četiri meseca, još poželjnije od jednog sata do tri meseca, još poželjnije od jednog sata do dva meseca, još poželjnije od jednog sata do jednog meseca. Shodno tome, stabilna veza je veza koja ima vreme poluraspada pod fiziološkim uslovima (vodeni pufer na pH 7,4, 37°C) duže od šest meseci.

[0293] Shodno tome, „reverzibilni linkerski ostatak proleka“ je ostatak koji je kovalentno konjugovan sa biološki aktivnim ostatkom, kao što je ostatak agonista CNP, preko reverzibilne veze i takođe je kovalentno konjugovan sa nosačkim ostatkom, kao što su -Z ili -Z', pri čemu je kovalentna konjugacija sa navedenim nosačkim ostatkom ili direktno ili preko ostatka razmaknice, kao što je -L<2>-. Poželjno je da veza između -Z ili -Z' i -L<2>- stabilna veza.

[0294] Kako se ovde koristi, termin „linker proleka bez traga“ označava reverzibilni linker proleka koji nakon cepanja oslobađa lek u njegovom slobodnom obliku. Kako se ovde koristi, termin „slobodan oblik“ leka označava lek u njegovom nemodifikovanom, farmakološki aktivnom obliku.

[0295] Kako se ovde koristi, termin „ekscipiens“ odnosi se na razblaživač, ađuvans ili nosač sa kojim se terapijski lek, kao što je lek ili prolek, primenjuje. Takav farmaceutski ekscipijens može biti sterilna tečnost, kao što su voda i ulja, uključujući ona od nafte, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, uključujući, ali ne ograničavajući se na, ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje i susamovo ulje. Voda je poželjan ekscipiens kada se farmaceutska kompozicija primenjuje oralno. Fiziološki rastvor i vodeni rastvor dekstroze su poželjni ekscipijensi kada se farmaceutska kompozicija primenjuje intravenoski. Fiziološki rastvori i vodeni rastvori dekstroze i glicerola se poželjno koriste kao tečni ekscipijensi za injekcione rastvore. Pogodni farmaceutski ekscipijensi uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, manitol, trehalozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu i etanol. Farmaceutska kompozicija, po želji, može takođe da sadrži manje količine sredstava za vlaženje ili emulgatora, sredstava za puferovanje pH vrednosti, kao što su, na primer, acetat, sukcinat, tris, karbonat, fosfat, HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonska kiselina), MES (2-(N-morfolino)etansulfonska kiselina), ili mogu da sadrže deterdžente, poput Tween, poloksamera, poloksamina, CHAPS, Igepal ili aminokiselina kao što su, na primer, glicin, lizin ili histidin.

[0296] Ove farmaceutske kompozicije mogu biti u obliku rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova i formulacija sa produženim oslobađanjem. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana kao supozitorija, sa tradicionalnim vezujućim sredstvima i ekscipijensima kao što su trigliceridi. Oralna formulacija može da sadrži standardne ekscipijense kao što su manitol, laktoza, skrob, magnezijum stearat, natrijum saharin, celuloza ili magnezijum karbonat farmaceutskog kvaliteta. Takve kompozicije će sadržati terapeutski efikasnu količinu leka ili biološki aktivnog ostatka, zajedno sa odgovarajućom količinom ekscipijensa kako bi se obezbedio oblik za pravilnu primenu na pacijenta. Formulacija treba da odgovara načinu primene.

[0297] Kako se ovde koristi, termin „reagens“ označava hemijsko jedinjenje koje sadrži najmanje jednu funkcionalnu grupu za reakciju sa funkcionalnom grupom drugog hemijskog jedinjenja ili leka.

[0298] Razume se da je lek koji sadrži funkcionalnu grupu (kao što je primarna ili sekundarna aminska ili hidroksilna funkcionalna grupa) takođe reagens.

[0299] Kako se ovde koristi, termin „ostatak“ označava deo molekula kome nedostaje jedan ili više atoma u poređenju sa odgovarajućim reagensom. Ako, na primer, reagens formule „H-X-H“ reaguje sa drugim reagensom i postane deo reakcionog proizvoda, odgovarajući ostatak reakcionog proizvoda ima strukturu „H-X-“ ili „-X-“, gde svaki „-“ označava vezivanje za drugi ostatak. Shodno tome, biološki aktivni ostatak se oslobađa iz proleka kao lek.

[0300] Podrazumeva se da ako je navedena sekvenca ili hemijska struktura grupe atoma koja je vezana za dva ostatka ili prekida ostatak, navedena sekvenca ili hemijska struktura može biti vezana za dva ostatka u bilo kojoj orijentaciji, osim ako nije eksplicitno drugačije naznačeno. Na primer, ostatak "-C(O)N(R<1>)-" može biti vezan za dva ostatka ili prekida ostatak kao "-C(O)N(R<1>)-" ili kao "-N(R<1>)C(O)-". Slično tome, ostatak

[0303]

[0305] može biti vezan za dva ostatka ili može prekinuti ostatak bilo kao

[0308]

[0310] ili kao

[0311]

[0314] Kako se ovde koristi, termin „funkcionalna grupa“ označava grupu atoma koji mogu reagovati sa drugim grupama atoma. Funkcionalne grupe uključuju, ali nisu ograničene na sledeće grupe: karboksilnu kiselinu (-(C=O)OH), primarni ili sekundarni amin (-NH<2>, -NH-), maleimid, tiol (-SH), sulfonsku kiselinu (-(O=S=O)OH), karbonat, karbamat (-O(C=O)N<), hidroksil (-OH), aldehid (-(C=O)H), keton (-(C=O)-), hidrazin (>N-N<), izocijanat, izotiocijanat, fosfornu kiselinu (-O(P=O)OHOH), fosfonsku kiselinu (-O(P=O)OHH), haloacetil, alkil halid, akriloil, aril fluorid, hidroksilamin, disulfid, sulfonamide, sumpornu kiselinu, vinil sulfon, vinil keton, diazoalkan, oksiran i aziridin.

[0315] [0083] U slučaju da agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska sadrže jednu ili više kiselih ili baznih grupa, pronalazak takođe sadrži njihove odgovarajuće farmaceutski ili toksikološki prihvatljive soli, posebno njihove farmaceutski upotrebljive soli. Dakle, agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska koji sadrže kisele grupe mogu se koristiti prema pronalasku, na primer, kao soli alkalnih metala, soli zemnoalkalnih metala ili kao amonijumove soli. Precizniji primeri takvih soli uključuju natrijumove soli, kalijumove soli, kalcijumove soli, magnezijumove soli ili soli sa amonijakom ili organskim aminima kao što su, na primer, etilamin, etanolamin, trietanolamin ili aminokiseline. Agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska koji sadrže jednu ili više baznih grupa, tj. grupa koje se mogu protonovati, mogu biti prisutni i mogu se koristiti prema pronalasku u obliku njihovih adicionih soli sa neorganskim ili organskim kiselinama. Primeri odgovarajućih kiselina uključuju hlorovodonik, bromovodonik, fosfornu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, p-toluensulfonsku kiselinu, naftalendisulfonske kiseline, oksalnu kiselinu, sirćetnu kiselinu, vinsku kiselinu, mlečnu kiselinu, salicilnu kiselinu, benzoevu kiselinu, mravlju kiselinu, propionsku kiselinu, pivalinsku kiselinu, dietilsirćetnu kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, pimelinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, maleinsku kiselinu, jabučnu kiselinu, sulfaminsku kiselinu, fenilpropionsku kiselinu, glukonsku kiselinu, askorbinsku kiselinu, izonikotinsku kiselinu, limunsku kiselinu, adipinsku kiselinu i druge kiseline poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Za stručnjaka u ovoj oblasti poznati su dodatni postupci za pretvaranje bazne grupe u katjon, kao što je alkilacija aminske grupe, što rezultira pozitivno naelektrisanom amonijum grupom i odgovarajućim kontrajonom soli. Ako agonisti CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska istovremeno sadrže kisele i bazne grupe, pronalazak takođe uključuje, pored pomenutih oblika soli, unutrašnje soli ili betaine (cviterjone). Odgovarajuće soli se mogu dobiti uobičajenim postupcima koji su poznati stručnjaku u ovoj oblasti, kao što je, na primer, kontaktiranje ovih prolekova sa organskom ili neorganskom kiselinom ili bazom u rastvaraču ili disperzantu ili anjonskom izmenom ili katjonskom izmenom sa drugim solima. Ovaj pronalazak takođe uključuje sve soli prolekova ovog pronalaska koje, zbog niske fiziološke kompatibilnosti, nisu direktno pogodne za upotrebu u farmaceutskim proizvodima, ali koje se mogu koristiti, na primer, kao intermedijeri za hemijske reakcije ili za pripremu farmaceutski prihvatljivih soli.

[0316] Termin „farmaceutski prihvatljiv“ označava supstancu koja ne uzrokuje štetu kada se primeni na pacijenta i poželjno je da znači da ju je odobrila regulatorna agencija, kao što je EMA (Evropa) i/ili FDA (SAD) i/ili bilo koja druga nacionalna regulatorna agencija za upotrebu kod životinja, poželjno za upotrebu kod ljudi.

[0317] Kako se ovde koristi, termin „oko“ u kombinaciji sa numeričkom vrednošću koristi se za označavanje opsega koji se kreće od i uključujući numeričku vrednost plus i minus ne više od 10% navedene numeričke vrednosti, poželjnije ne više od 8% navedene numeričke vrednosti, još poželjnije ne više od 5% navedene numeričke vrednosti i najpoželjnije ne više od 2% navedene numeričke vrednosti. Na primer, izraz „oko 200“ koristi se da označi opseg koji se kreće od i uključujući 200 /- 10%, tj. u rasponu od i uključujući 180 do 220; poželjno 200 /- 8%, tj. u rasponu od i uključujući 184 do 216; još poželjnije u rasponu od i uključujući 200 /- 5%, tj. u rasponu od i uključujući 190 do 210; i najpoželjnije 200 /- 2%, tj. u rasponu od i uključujući 196 do 204. Razume se da procenat dat kao „oko 20%“ ne znači „20% /- 10%“, tj. u rasponu od i uključujući 10 do 30%, već „oko 20%“ znači u rasponu od i uključujući 18 do 22%, tj. plus i minus 10% od numeričke vrednosti koja je 20.

[0318] [0086] Kako se ovde koristi, termin „polimer“ označava molekul koji sadrži ponavljajuće strukturne jedinice, tj. monomere, povezane hemijskim vezama na linearan, kružan, razgranat, umrežen ili dendrimeran način ili njihovu kombinaciju, koje mogu biti sintetičkog ili biološkog porekla ili kombinacija oba. Podrazumeva se da polimer može takođe da sadrži jednu ili više drugih hemijskih grupa i/ili ostataka, kao što su, na primer, jedna ili više funkcionalnih grupa. Poželjno je da rastvorljivi polimer ima molekulsku težinu od najmanje 0,5 kDa, npr. molekulsku težinu od najmanje 1 kDa, molekulsku težinu od najmanje 2 kDa, molekulsku težinu od najmanje 3 kDa ili molekulsku težinu od najmanje 5 kDa. Ako je polimer rastvorljiv, poželjno je da ima molekulsku težinu od najviše 1000 kDa, kao što je najviše 750 kDa, kao što je najviše 500 kDa, kao što je najviše 300 kDa, kao što je najviše 200 kDa, kao što je najviše 100 kDa. Razume se da za nerastvorljive polimere, kao što su hidrogelovi, ne mogu se dati značajni opsezi molekulskih težina. Takođe se razume da je protein polimer u kome su aminokiseline ponavljajuće strukturne jedinice, čak i ako bočni lanci svake aminokiseline mogu biti različiti.

[0319] Kako se ovde koristi, termin „polimerni“ označava reagens ili ostatak koji sadrži jedan ili više polimera ili polimernih ostataka. Polimerni reagens ili ostatak može opciono takođe da sadrži jedan ili više drugih ostataka, koji su poželjno izabrani iz grupe koja se sastoji od:

[0321] • C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila, C<2-50>alkinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, fenila, naftila, indenila, indanila i tetralinila; i

[0323] • veza izabranih iz grupe koja sadrži

[0326]

[0329] pri čemu

[0330] isprekidane linije označavaju vezu sa preostalim ostatkom ili reagensom, i

[0331] -R i -R<a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila, butila, pentila i heksila.

[0333] Stručnjak u ovoj oblasti razume da proizvodi polimerizacije dobijeni reakcijom polimerizacije nemaju svi istu molekulsku težinu, već pokazuju raspodelu molekulske težine. Shodno tome, opsezi molekulskih težina, molekulske težine, opsezi broja monomera u polimeru i brojevi monomera u polimeru, kako se ovde koriste, odnose se na prosečnu brojčanu molekulsku težinu i prosečan broj monomera, tj. na aritmetičku sredinu molekulske težine polimera ili polimernog dela i aritmetičku sredinu broja monomera polimera ili polimernog ostatka.

[0334] [0089] Shodno tome, u polimernom delu koji sadrži „x“ monomernih jedinica, svaki ceo broj dat za „x“ stoga odgovara aritmetičkoj sredini broja monomera. Bilo koji opseg celih brojeva dat za „x“ pruža opseg celih brojeva u kome se nalazi aritmetička srednja vrednost broja monomera. Ceo broj za „x“ dat kao „oko x“ znači da se aritmetička srednja vrednost broja monomera nalazi u opsegu celih brojeva od x /- 10%, poželjno x /- 8%, još poželjnije x /-5% i najpoželjnije x /- 2%.

[0335] Kako se ovde koristi, termin „prosečna molekulska težina“ označava običnu aritmetičku sredinu molekulskih težina pojedinačnih polimera.

[0336] Kako se ovde koristi, termin „rastvorljiv u vodi“ u vezi sa nosačem znači da kada je takav nosač deo agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska, najmanje 1 g agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem koji sadrže takav nosač rastvorljiv u vodi može se rastvoriti u jednom litru vode na 20°C da bi se formirao homogeni rastvor. Shodno tome, termin „nerastvorljiv u vodi“ u vezi sa nosačem znači da kada je takav nosač deo agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska, manje od 1 g agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem koji sadrže takav nosač nerastvorljiv u vodi može se rastvoriti u jednom litru vode na 20°C da bi se formirao homogeni rastvor.

[0337] Kako se ovde koristi, termin „hidrogel“ označava hidrofilnu ili amfifilnu polimernu mrežu sastavljenu od homopolimera ili kopolimera, koja je nerastvorljiva zbog prisustva kovalentnih hemijskih unakrsnih veza. Unakrsne veze obezbeđuju strukturu mreže i fizički integritet.

[0338] Kako se ovde koristi, termin „termogeliranje“ označava jedinjenje koje je tečnost ili rastvor niskog viskoziteta koji ima viskozitet manji od 500 cps na 25°C pri brzini smicanja od oko 0,1/sekundi na niskoj temperaturi, pri čemu se niska temperatura kreće između oko 0°C i oko 10°C, ali koje je jedinjenje višeg viskoziteta manje od 10000 cps na 25°C pri brzini smicanja od oko 0,1/sekundi na višoj temperaturi, pri čemu se viša temperatura kreće između oko 30°C i oko 40°C, kao što je na oko 37°C.

[0339] Kako se ovde koristi, termin „na bazi PEG“ u vezi sa ostatkom ili reagensom znači da navedeni ostatak ili reagens sadrži PEG. Poželjno je da ostatak ili reagens na bazi PEG sadrži najmanje 10% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 20% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 30% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 40% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 50% (tež./tež.), kao što je najmanje 60 (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 70% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 80% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 90% (tež./tež.) PEG, kao što je najmanje 95% (tež./tež.) PEG. Preostali težinski procenat ostatka ili reagensa na bazi PEG su drugi ostaci, poželjno izabrani od sledećih ostataka i veza:

[0340] • C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila, C<2-50>alkinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, fenila, naftila, indenila, indanila i tetralinila; i

[0342] • veza izabranih iz grupe koja sadrži

[0343]

[0345] pri čemu

[0346] isprekidane linije označavaju vezivanje za preostali ostatak ili reagens, i

[0347] -R i -R<a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila, butila, pentila i heksila.

[0349] Kako se ovde koristi, termin „na bazi PEG koji sadrži najmanje X% PEG“ u vezi sa ostatkom ili reagensom znači da navedeni ostatak ili reagens sadrži najmanje X% (tež./tež.) jedinica etilen glikola (-CH<2>CH<2>O-), gde jedinice etilen glikola mogu biti raspoređene blokovski, naizmenično ili mogu biti nasumično raspoređene unutar ostatka ili reagensa i poželjno je da su sve jedinice etilen glikola navedenog ostatka ili reagensa prisutne u jednom bloku; preostali težinski procenat ostatka ili reagensa na bazi PEG su drugi ostaci, poželjno odabrani od sledećih ostataka i veza:

[0350] • C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila, C<2-50>alkinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, fenila, naftila, indenila, indanila i tetralinila; i

[0351] • veza izabranih iz grupe koja sadrži

[0352]

[0354] pri čemu

[0355] isprekidane linije označavaju vezu sa preostalim sotatkom ili reagensom, i

[0356] -R i -R<a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila, butila, pentila i heksila.

[0358] Termin „na bazi hijaluronske kiseline koji sadrži najmanje X% hijaluronske kiseline“ se koristi u skladu sa tim.

[0359] Termin „supstituisan“, kako se ovde koristi, znači da su jedan ili više atoma -H molekula ili ostatka zamenjeni drugim atomom ili grupom atoma, koji se nazivaju „supstituent“.

[0360] Poželjno je da su jedan ili više dodatnih opcionih supstituenata međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, -COOR<x1>, -OR<x1>, -C(O)R<x1>, -C(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>N(R<x1>R<x1a>), -S(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>R<x1>, -S(O)R<x1>, -N(R<x1>)S(O)<2>N(R<x1a>R<x1b>), -SR<x1>, -N(R<x1>R<x1a>), -NO<2>, -OC(O)R<x1>, -N(R<x1>)C(O)R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)<2>R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)R<x1a>, -N(R<x1>)C(O)OR<x1a>, -N(R<x1>)C(O)N(R<x1a>R<x1b>), -OC(O)N(R<x1>R<x1a>), -T<0>, C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu -T<0>, C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti. i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T<0>-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>N(R<x3>)-, -S(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<x3>) S(O)<2>N(R<x3a>)-, -S-, -N(R<x3>)-, -OC(OR<x3>)(R<x3a>)-, -N(R<x3>)C(O)N(R<x3a>)- i -OC(O)N(R<x3>)-;

[0361] -R<x1>, -R<x1a>i -R<x1b>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, -T<0>, C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu -T<0>, C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T<0>-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>N(R<x3>)-, -S(O)N(R<x3>)-; -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<x3>) S(O)<2>N(R<x3a>)-, -S-, -N(R<x3>)-, -OC(OR<x3>)(R<x3a>)-, -N(R<x3>)C(O)N(R<x3a>)- i -OC(O)N(R<x3>)-;

[0362] svaki T<0>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila i 8- do 11-članog heterobiciklila; pri čemu svaki T<0>je nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti; svaki -R<h2>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<x4>, -OR<×4>,<_>C(O)R<x4>, -C(O)N(R<x4>R<x4a>), -S(O)<2>N(R<x4>R<x4a>), -S(O)N(R<x4>R<x4a>), -S(O)<2>R<x4>, -S(O)R<x4>, -N(R<x4>)S(O)<2>N(R<x4a>R<x4b>), -SR<x4>, -N(R<x4>R<x4a>), -NO<2>, -OC(O)R<x4>, -N(R<x4>)C(O)R<x4a>, -N(R<x4>)S(O)<2>R<x4a>, -N(R<x4>)S(O)R<x4a>, -N(R<x4>)C(O)OR<x4a>, -N(R<x4>)C(O)N(R<x4a>R<x4b>), -OC(O)N(R<x4>R<x4a>) i C<1-6>alkil; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti;

[0363] svaki -R<x3>, -R<x3a>, -R<x4>, -R<x4a>i -R<x4b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti.

[0365] Poželjnije, jedan ili više dodatnih opcionih supstituenata su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, -COOR<x1>, -OR<x1>, -C(O)R<x1>, -C(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>N(R<x1>R<x1a>), -S(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>R<x1>, -S(O)R<x1>, -N(R<x1>)S(O)<2>N(R<x1a>R<x1b>), -SR<x1>, -N(R<x1>R<x1a>), -NO<2>, -OC(O)R<x1>, -N(R<x1>)C(O)R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)<2>R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)R<x1a>, -N(R<x1>)C(O)OR<x1a>, -N(R<x1>)C(O)N(R<x1a>R<x1b>), -OC(O)N(R<x1>R<x1a>), -T<0>, C<1-10>alkila, C<2-10>alkenila i C<2-10>alkinila; pri čemu -T<0>, C<1-19>alkil, C<2-10>alkenil i C<2-10>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil i C<2-10>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T<0>-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>N(R<x3>)-, -S(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<x3>) S(O)<2>N(R<x3a>)-, -S-, -N(R<x3>)-, -OC(OR<x3>)(R<x3a>)-, -N(R<x3>)C(O)N(R<x3a>)- i -OC(O)N(R<x3>)-;

[0366] svaki -R<x1>, -R<x1a>, -R<x1b>, -R<x3>i -R<x3a>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, halogena, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil i C<2-6>alkinil;

[0367] svaki T<0>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-članog heterociklila i 8- do 11-članog heterobiciklila; pri čemu svaki T<0>je nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti; svaki -R<h2>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<x4>, -OR<x4>, -C(O)R<x4>, -C(O)N(R<x4>R<x4a>), -S(O)<2>N(R<x4>R<x4a>), -S(O)N(R<x4>R<x4a>), -S(O)<2>R<x4>, -S(O)R<x4>, -N(R<x4>)S(O)<2>N(R<x4a>R<x4b>), -SR<x4>, -N(R<x4>R<x4a>), -NO<2>, -OC(O)R<x4>, -N(R<x4>)C(O)R<x4a>, -N(R<x4>)S(O)<2>R<x4a>, -N(R<x4>)S(O)R<x4a>, -N(R<x4>)C(O)OR<x4a>, -N(R<x4>)C(O)N(R<x4a>R<x4b>), -OC(O)N(R<x4>R<x4a>) i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti;

[0368] svaki -R<x4>, -R<x4a>i -R<x4b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, halogena, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila;

[0370] Još poželjnije, jedan ili više dodatnih opcionih supstituenata su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, -COOR<x1>, -OR<x1>, -C(O)R<x1>, -C(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>N(R<x1>R<x1a>), -S(O)N(R<x1>R<x1a>), -S(O)<2>R<x1>, -S(O)R<x1>, -N(R<x1>)S(O)<2>N(R<x1a>R<x1b>), -SR<x1>, -N(R<x1>R<x1a>), -NO<2>, -OC(O)R<x1>, -N(R<x1>)C(O)R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)<2>R<x1a>, -N(R<x1>)S(O)R<x1a>, -N(R<x1>)C(O)OR<x1a>, -N(R<x1>)C(O)N(R<x1a>R<x1b>), -OC(O)N(R<x1>R<x1a>), -T<0>, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila; pri čemu -T<0>, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil i C<2-6>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil i C<2-6>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T<0>-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>N(R<x3>)-, -S(O)N(R<x3>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<x3>) S(O)<2>N(R<x3a>)-, -S-, -N(R<x3>)-, -OC(OR<x3>)(R<x3a>)-, -N(R<x3>)C(O)N(R<x3a>)- i -OC(O)N(R<x3>)-;

[0371] svaki -R<x1>, -R<x1a>, -R<x1b>, -R<h2>, -R<x3>i -R<x3a>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, halogena, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila;

[0372] svaki T<0>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila i 8- do 11-članog heterobiciklila; pri čemu svaki T<0>je nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<h2>, koji su isti ili različiti.

[0374] Poželjno, najviše 6 -H atoma opciono supstituisanog molekula su nezavisno zamenjeni supstituentom, npr.5 -H atoma su nezavisno zamenjeni supstituentom, 4 -H atoma su nezavisno zamenjeni supstituentom, 3 -H atoma su nezavisno zamenjeni supstituentom, 2 -H atoma su nezavisno zamenjeni supstituentom ili 1 -H atom je zamenjen supstituentom.

[0375] Termin „prekinut“ znači da je ostatak umetnut između dva atoma ugljenika ili - ako je umetanje na jednom od krajeva ostatka - između ugljenika ili heteroatoma i atoma vodonika, poželjno između ugljenika i atoma vodonika.

[0376] Kako se ovde koristi, termin

alkil“ sam po sebi ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati alkil deo koji ima 1 do 4 atoma ugljenika. Ako je prisutan na kraju molekula, primeri pravolančanog ili razgranatog C<1-4>alkil su metil, etil, n-propil, izopropil, nbutil, izobutil, sek-butil i terc-butil. Kada su dva ostatka molekula povezana pomoću C<1-4>alkila, onda primeri za takve C<1-4>alkil grupe su -CH<2>-, -CH<2>-CH<2>-, -CH(CH<3>)-, -CH<2>-CH<2>-CH<2>-, -CH(C<2>H<5>)-, -C(CH<3>)<2>-. Svaki vodonik od C<1-4>alkil ugljenika može opciono biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, C<1-4>alkil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što je definisano u nastavku.

[0377] Kako se ovde koristi, termin

alkil“ sam po sebi ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati alkil ostatak koji ima 1 do 6 atoma ugljenika. Ako je prisutan na kraju molekula, primeri pravolančanih i razgranatih C<1-6>alkil grupa su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, n-pentil, 2-metilbutil, 2,2-dimetilpropil, nheksil, 2-metilpentil, 3-metilpentil, 2,2-dimetilbutil, 2,3-dimetilbutil i 3,3-dimetilpropil. Kada su dva dela molekula povezana pomoću C<1-6>alkil grupe, onda primeri za takve C<1-6>alkil grupe su -CH<2>-, -CH<2>-CH<2>-, -CH(CH<3>)-, -CH<2>-CH<2>-CH<2>-, -CH(C<2>H<5>)- i -C(CH<3>)<2>-. Svaki atom vodonika od C<1-6>ugljenika može opciono biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, C<1-6>alkil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0378] Shodno tome, „C<1-10>alkil", "C<1-20>alkil" ili "C<1-50>alkil“ označava alkil lanac koji ima 1 do 10, 1 do 20 ili 1 do 50 atoma ugljenika, respektivno, gde svaki atom vodonika od C<1-10>, C<1->

[0379] <20>ili C<1-50>ugljenika može opciono biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, C<1-10>ili C<1-50>alkil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0380] Kako se ovde koristi, termin

alkenil“ sam ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati ugljovodonični ostatak koji sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenikugljenik sa 2 do 6 atoma ugljenika. Ako je prisutan na kraju molekula, primeri su -CH=CH<2>, -CH=CH-CH<3>, -CH<2>-CH=CH<2>, -CH=CHCH<2>-CH<3>i -CH=CH-CH=CH<2>. Kada su dva ostatka molekula povezana pomoću C<2-6>alkenil grupa, onda primer za takav C<2-6>alkenil je -CH=CH-. Svaki atom vodonika C<2-6>alkenil ostatka može opciono biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, C<2-6>alkenil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0381] Shodno tome, termin

alkenil", "C<2-20>alkenil" ili "C<2-50>alkenil“ sam po sebi ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati ugljovodonični ostatak koji sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik sa 2 do 10, 2 do 20 ili 2 do 50 atoma ugljenika. Svaki atom vodonika C<2-10>alkenil, C<2-20>alkenil ili C<2-50>alkenil grupe može opciono biti zamenjena supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, C<2-10>alkenil, C<2-20>alkenil ili C<2-50>alkenil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0382] Kako se ovde koristi, termin

alkinil“ sam po sebi ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati ugljovodonični ostatak koji sadrži najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik sa 2 do 6 atoma ugljenika. Ako je prisutan na kraju molekula, primeri su -Kada su dva ostatka molekula povezana alkinil grupom, onda je primer -C≡C-. Svaki atom vodonika C<2-6>alkinil grupa može opciono biti zamenjena supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, mogu se javiti jedna ili više dvostrukih veza. Opciono, C<2-6>alkinil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0383] Shodno tome, kako se ovde koristi, termin

alkinil", "C<2-20>alkinil" i "C<2-50>alkinil“ sam po sebi ili u kombinaciji označava pravolančani ili razgranati ugljovodonični ostatak koji sadrži najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik sa 2 do 10, 2 do 20 ili 2 do 50 atoma ugljenika, respektivno. Svaki atom vodonika C<2-10>alkinil, C<2-20>alkinil ili C<2-50>alkinil grupa može opciono biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Opciono, mogu se javiti jedna ili više dvostrukih veza. Opciono, C<2-10>alkinil, C<2-20>alkinil ili C<2-50>alkinil može biti prekinut jednim ili više ostataka kao što su definisani u nastavku.

[0384] Kao što je gore pomenuto, C<1-4>alkil, C<1-6>alkil, C<1-10>alkil, C<1-20>alkil, C<1-50>alkil, C<2-6>alkenil, C<2-10>alkenil, C<2-20>alkenil, C<2-50>alkenil, C<2-6>alkinil, C<2-10>alkinil, C<2-20>alkenil ili C<2-50>alkinil može opciono biti prekinut jednim ili više ostataka koji su poželjno izabrani iz grupe koja se sastoji od

[0387]

[0390] pri čemu

[0391] isprekidane linije označavaju vezu sa preostalim ostatkom ili reagenssom; i

[0392] -R i -R<a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila, butila, pentila i heksila.

[0394] Kako se ovde koristi, termin

cikloalkil“ označava ciklični alkil lanac koji ima 3 do 10 atoma ugljenika, koji može biti zasićen ili nezasićen, npr. ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil, cikloheptil, ciklooktil, ciklononil ili ciklodecil. Svaki atom vodonika C<3-10>cikloalkil ugljenika može biti zamenjen supstituentom kao što je gore definisan. Termin

cikloalkil" takođe uključuje premošćene bicikle poput norbornana ili norbornena.

[0395] Termin „8- do 30-člani karbopoliciklil“ ili „8- do 30-člani karbopoliciklus“ označava ciklični ostatak od dva ili više prstenova sa 8 do 30 atoma u prstenu, gde dva susedna prstena dele najmanje jedan atom u prstenu i koji može sadržati do maksimalnog broja dvostrukih veza (aromatični ili nearomatični prsten koji je potpuno, delimično ili nezasićen). Poželjno je da 8-do 30-člani karbopoliciklil označava ciklični ostatak od dva, tri, četiri ili pet prstenova, poželjnije dva, tri ili četiri prstena.

[0396] Kako se ovde koristi, termin „3- do 10-člani heterociklil“ ili „3- do 10-člani heterociklus“ označava prsten sa 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 atoma u prstenu koji može da sadrži do maksimalnog broja dvostrukih veza (aromatični ili nearomatični prsten koji je potpuno, delimično ili nezasićen) gde je najmanje jedan atom u prstenu do 4 atoma u prstenu zamenjen heteroatomom izabranim iz grupe koja se sastoji od sumpora (uključujući -S(O)-, -S(O)<2>-), kiseonik i azot (uključujući =N(O)-) i gde je prsten povezan sa ostatkom molekula preko atoma ugljenika ili azota. Primeri za 3- do 10-člane heterocikluse uključuju, ali nisu ograničeni na, aziridin, oksiran, tiiran, azirin, oksiren, tiiren, azetidin, oksetan, tietan, furan, tiofen, pirol, pirolin, imidazol, imidazolin, pirazol, pirazolin, oksazol, oksazolin, izoksazol, izoksazolin, tiazol, tiazolin, izotiazol, izotiazolin, tiadiazol, tiadiazolin, tetrahidrofuran, tetrahidrotiofen, pirolidin, imidazolidin, pirazolidin, oksazolidin, izoksazolidin, tiazolidin, izotiazolidin, tiazolidin, izotiazolidin, tiadiazolin, sulfolan, piran, dihidropiran, tetrahidropiran, imidazolidin, piridin, piridazin, pirazin, pirimidin, piperazin, piperidin, piperidin, piperidin, morfolin, tetrazol, triazol, triazolidin, tetrazolidin, diazepan, azepin i homopiperazin. Svaki atom vodonika 3- do 10-člane heterociklične grupe ili 3- do 10-člane heterociklične grupe može biti zamenjen supstituentom kao što je definisan u nastavku.

[0397] [0114] Kako se ovde koristi, termin „8- do 11-člani heterobiciklil“ ili „8- do 11-člani heterobiciklus“ označava heterociklični ostatak od dva prstena sa 8 do 11 atoma u prstenu, gde je najmanje jedan atom u prstenu zajednički za oba prstena i koji može sadržati do maksimalnog broja dvostrukih veza (aromatični ili nearomatični prsten koji je potpuno, delimično ili nezasićen) gde je najmanje jedan atom u prstenu do 6 atoma u prstenu zamenjen heteroatomom izabranim iz grupe koja se sastoji od sumpora (uključujući -S(O)-, -S(O)<2>-), kiseonika i azota (uključujući =N(O)-) i gde je prsten povezan sa ostatkom molekula preko atoma ugljenika ili azota. Primeri za 8- do 11-člani heterobiciklus su indol, indolin, benzofuran, benzotiofen, benzoksazol, benzizoksazol, benzotiazol, benzizotiazol, benzimidazol, benzimidazol, hinolin, hinazolin, dihidrohinazolin, hinolin, dihidrohinolin, tetrahidrohinolin, dekahidrohinolin, izohinolin, dekahidroizohinolin, tetrahidroizohinolin, dihidroizohinolin, benzazepin, purin i pteridin. Termin 8- do 11-člani heterobiciklus takođe obuhvata spiro strukture od dva prstena poput 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekana ili premošćenih heterocikla poput 8-azabiciklo[3.2.1]oktana. Svaki atom vodonika ugljenika 8- do 11-članog heterobiciklila ili 8- do 11-članog heterobiciklila može biti zamenjen supstituentom kao što je definisan u nastavku.

[0398] Slično tome, termin „8- do 30-člani heteropoliciklil“ ili „8- do 30-člani heteropoliciklus“ označava heterociklični ostatak sa više od dva prstena sa 8 do 30 atoma u prstenu, poželjno sa tri, četiri ili pet prstena, gde dva susedna prstena dele najmanje jedan atom u prstenu i koji može sadržati do maksimalnog broja dvostrukih veza (aromatični ili nearomatični prsten koji je potpuno, delimično ili nezasićen), gde su najmanje jedan atom u prstenu do 10 atoma u prstenu zamenjeni heteroatomom izabranim iz grupe sumpora (uključujući -S(O)-, -S(O)<2>-), kiseonika i azota (uključujući =N(O)-) i gde je prsten povezan sa ostatkom molekula preko atoma ugljenika ili azota.

[0399] Razume se da izraz „par R<x>/R<y>je spojen sa atomom za koji je vezan tako da formira C<3->

[0400] <10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil" u odnosu na ostatak strukture

[0403]

[0405] znači da R<x>i R<y>formiraju sledeću strukturu:

[0408]

[0410] pri čemu, R je C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil.

[0411] Takođe se razume da izraz „par R<x>/R<y>je spojen sa atomima za koje je vezan tako da formira prsten A" u odnosu na ostatak strukture

[0414]

[0416] znači da R<x>i R<x>formiraju sledeću strukturu:

[0417] Kako se ovde koristi, „halogen“ označava fluoro, hloro, bromo ili jodo. Generalno je poželjno, halogen je fluoro ili hloro.

[0418] Generalno, termin „sadrži“ ili „koji sadrži“ takođe obuhvata „sastoji se od“ ili „koji se sastoji od“.

[0419] Poželjno je da farmaceutska kompozicija ovog pronalaska sadrži najmanje 25 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP. Poželjnije je da farmaceutska kompozicija sadrži najmanje 50 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 75 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 100 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 150 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 250 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 500 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP, kao što je najmanje 750 nmol/ml ekvivalenata agonista CNP ili kao što je najmanje 1 µmol/ml ekvivalenata agonista CNP. Poželjno je da farmaceutska kompozicija ovog pronalaska sadrži najviše 10 µmol/ml ekvivalenata agonista CNP.

[0420] Poželjno je da jedna jedinična doza agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži najmanje 5 nmol/kg; kao što je najmanje 10 nmol/kg, kao što je najmanje 20 nmol/kg; kao što je najmanje 30 nmol/kg, kao što je najmanje 40 nmol/kg, kao što je najmanje 50 nmol/kg ili kao što je najmanje 100 nmol/kg. Poželjno je da jedna jedinična doza agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži dozu ne veću od 250 µmol/kg.

[0421] Poželjno je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 24 sata. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 48 sati. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 72 sata. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 96 sati. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 120 sati. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 144 sata. Još poželjnije je da primena jedne jedinične doze farmaceutske kompozicije obezbeđuje farmaceutski efikasnu količinu agonista CNP tokom najmanje 168 sati.

[0422] Navedena farmaceutska kompozicija sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i najmanje jedan ekscipijens.

[0423] U jednom primeru izvođenja, navedena farmaceutska kompozicija je tečna ili suspenziona formulacija. Podrazumeva se da je farmaceutska kompozicija suspenziona formulacija ako je agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljiv u vodi.

[0424] U sledećem primeru izvođenja, navedena farmaceutska kompozicija je suva formulacija.

[0425] Ekscipijensi koji se koriste u parenteralnim formulacijama mogu se kategorisati kao, na primer, puferi, modifikatori izotoničnosti, konzervansi, stabilizatori, antiadsorpciona sredstva, sredstva za zaštitu od oksidacije, sredstva za povećanje viskoznosti/povećanje viskoznosti ili druga pomoćna sredstva. Međutim, u nekim slučajevima, jedan ekscipijens može imati dvostruke ili trostruke funkcije. Poželjno je da je najmanje jedan ekscipijens sadržan u farmaceutskoj kompoziciji ovog pronalaska izabran iz grupe koja se sastoji od

[0427] (i) Puferujućih sredstava: fiziološki tolerisani puferi za održavanje pH vrednosti u željenom opsegu, kao što su natrijum-fosfat, bikarbonat, sukcinat, histidin, citrat i acetat, sulfat, nitrat, hlorid, piruvat; takođe se mogu koristiti antacidi kao što su Mg(OH)<2>ili ZnCO<3>;

[0428] (ii) Modifikatora izotoničnosti: da bi se minimizirao bol koji može nastati usled oštećenja ćelija usled razlika u osmotskom pritisku na mestu injekcije; glicerin i natrijum hlorid su primeri; efikasne koncentracije se mogu odrediti osmometrijom koristeći pretpostavljenu osmolalnost od 285-315 mOsmol/kg za serum;

[0429] (iii) Konzervanasa i/ili antimikrobnih sredstava: višedozne parenteralne formulacije zahtevaju dodavanje konzervansa u dovoljnoj koncentraciji da bi se smanjio rizik od infekcije pacijenata nakon injekcije, a utvrđeni su i odgovarajući regulatorni zahtevi; tipični konzervansi uključuju m-krezol, fenol, metilparaben, etilparaben, propilparaben, butilparaben, hlorobutanol, benzil alkohol, fenilmerkurin nitrat, timerosol, sorbinsku kiselinu, kalijum sorbat, benzoevu kiselinu, hlorokrezol i benzalkonijum hlorid;

[0430] (iv) Stabilizatora: Stabilizacija se postiže jačanjem sila stabilizacije proteina, destabilizacijom denaturisanog stanja ili direktnim vezivanjem ekscipijenasa za protein; stabilizatori mogu biti aminokiseline kao što su alanin, arginin, asparaginska kiselina, glicin, histidin, lizin, prolin, šećeri kao što su glukoza, saharoza, trehaloza, polioli kao što su glicerol, manitol, sorbitol, soli kao što su kalijum fosfat, natrijum sulfat, helatni agensi kao što su EDTA, heksafosfat, ligandi kao što su dvovalentni metalni joni (cink, kalcijum), druge soli ili organski molekuli kao što su fenolni derivati; pored toga, mogu se koristiti oligomeri ili polimeri kao što su ciklodekstrini, dekstran, dendrimeri, PEG ili PVP ili protamin ili HSA;

[0431] (v) Sredstva protiv adsorpcije: Uglavnom se koriste jonski ili nejonski surfaktanti ili drugi proteini ili rastvorljivi polimeri za kompetitivno oblaganje ili adsorpciju na unutrašnju površinu posude formulacije; npr. poloksamer (Pluronic F-68), PEG dodecil etar (Brij 35), polisorbat 20 i 80, dekstran, polietilen glikol, PEG-polihistidin, BSA i HSA i želatini; izabrana koncentracija i vrsta pomoćne supstance zavise od efekta koji treba izbeći, ali se obično na granici neposredno iznad CMC vrednosti formira monosloj surfaktanta;

[0432] (vi) Sredstva za zaštitu od oksidacije: antioksidansi kao što su askorbinska kiselina, ektoin, metionin, glutation, monotioglicerol, morin, polietilenimin (PEI), propil galat i vitamin E; mogu se koristiti i helatirajuća sredstva kao što su limunska kiselina, EDTA, heksafosfat i tioglikolna kiselina;

[0433] (vii) Viskozifikatora ili pojačivača viskoznosti: usporavaju taloženje čestica u bočici i špricu i koriste se kako bi se olakšalo mešanje i resuspendovanje čestica i kako bi se suspenzija lakše ubrizgala (tj. mala sila na klip šprica); Pogodni viskozifikatori ili pojačivači viskoznosti su, na primer, karbomerni viskozifikatori poput Carbopol 940, Carbopol Ultrez 10, derivati celuloze poput hidroksipropilmetilceluloze (hipromeloza, HPMC) ili dietilaminoetil celuloze (DEAE ili DEAE-C), koloidni magnezijum silikat (Veegum) ili natrijum silikat, hidroksiapatitni gel, trikalcijum fosfatni gel, ksantani, karagenani poput Satia gume UTC 30, alifatične poli(hidroksi kiseline), kao što su poli(D,L- ili L-mlečna kiselina) (PLA) i poli(glikolna kiselina) (PGA) i njihovi kopolimeri (PLGA), terpolimeri D,L-laktida, glikolida i kaprolaktona, poloksameri, hidrofilni poli(oksietilen) blokovi i hidrofobni poli(oksipropilen) blokovi za formiranje tribloka poli(oksietilen)-poli(oksipropilen)-poli(oksietilen) (npr. Pluronic<®>), polietestarski kopolimer, kao što je kopolimer polietilen glikol tereftalat/polibutilen tereftalat, saharoza acetat izobutirat (SAIB), dekstran ili njegovi derivati, kombinacije dekstrana i PEG, polidimetilsiloksan, kolagen, hitozan, polivinil alkohol (PVA) i derivati, polialkilimidi, poli(akrilamid-kodijalildimetil amonijum (DADMA)), polivinilpirolidon (PVP), glikozaminoglikani (GAG) kao što su dermatan sulfat, hondroitin sulfat, keratan sulfat, heparin, heparan sulfat, hijaluronan, ABA triblok ili AB blok kopolimeri sastavljeni od hidrofobnih A-blokova, kao što su polilaktid (PLA) ili poli(laktid-ko-glikolid) (PLGA), i hidrofilnih B-blokova, kao što su polietilen glikol (PEG) ili polivinil pirolidon; takvi blok kopolimeri, kao i gore pomenuti poloksameri, mogu pokazivati ponašanje obrnute termičke želatinizacije (tečno stanje na sobnoj temperaturi radi olakšavanja primene i stanje gela iznad temperature sol-gel prelaza na telesnoj temperaturi nakon injekcije);

[0434] (viii) Sredstva za širenje ili difuziju: modifikuje propustljivost vezivnog tkiva kroz hidrolizu komponenti ekstracelularnog matriksa u intrasticijalnom prostoru, kao što je, ali ne ograničavajući se na hijaluronsku kiselinu, polisaharid koji se nalazi u međućelijskom prostoru vezivnog tkiva; sredstvo za širenje, kao što je, ali ne ograničavajući se na hijaluronidazu, privremeno smanjuje viskoznost ekstracelularnog matriksa i podstiče difuziju injektiranih lekova; i

[0435] (ix) Ostala pomoćna sredstva: kao što su sredstva za vlaženje, modifikatori viskoznosti, antibiotici, hijaluronidaza; kiseline i baze kao što su hlorovodonična kiselina i natrijum hidroksid su pomoćna sredstva neophodna za podešavanje pH vrednosti tokom proizvodnje.

[0437] U sledećem aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem za upotrebu u lečenju pacijenta koji ima bolest koja se može lečiti agonistom CNP, pri čemu primena agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem smanjuje ili eliminiše jedan ili više neželjenih efekata povezanih sa primenom odgovarajućeg slobodnog agonista CNP u ekvivalentnoj dozi, pri čemu, agonist CNP je CNP, pri čemu, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem je formule (Ia):

[0440]

[0443] pri čemu

[0444] x je 1;

[0445] -D je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96;

[0446] -L<1>- je reverzibilni linkerski ostatak proleka koji je konjugovan sa bočnim lancem aminokiselinskih ostataka prstenastog ostatka -D ili sa osnovom prstenastog ostatka -D, pri čemu, -L<1>- je formule (IIa):

[0449]

[0452] pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D formiranjem amidne veze;

[0453] -X<2>- je -C(R<8>R<8a>)- ili -C(R<8>R<8a>)-C(R<9>R<9a>)-;

[0454] -R<1>, -R<1a>, -R<2>, -R<2a>, -R<4>, -R<4a>, -R<8>, -R<8a>, -R<9>i -R<9a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila;

[0455] -R<3>i -R<3a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pod uslovom da u slučaju da jedan od -R<3>i -R<3a>ili oba nisu -H, oni su povezani sa azotom za koji su vezani preko sp<3>-hibridizovanog atoma ugljenika;

[0456] opciono, jedan ili oba para -R<1a>/-R<4a>i -R<8a>/-R<9a>formiraju hemijsku vezu;

[0457] opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<1a>, -R<2>/-R<2a>, -R<4>/-R<4a>, -R<8>/-R<8a>i -R<9>/-R<9a>su spojeni zajedno sa atomom za koji su vezani i formiraju C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil; opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<4>, -R<8>/-R<9>i -R<2>/-R<3>su spojeni zajedno sa atomima za koje su vezani da bi formirali prsten A;

[0458] opciono, -R<3>/-R<3a>su spojeni zajedno sa atomom azota za koji su vezani da bi formirali 3- do 10-člani heterociklus;

[0459] A je fenil, naftil, indenil, indanil, tetralinil, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-člani heterociklil ili 8- do 11-člani heterobiciklil;

[0460] pri čemu, -L<1>- je supstituisan sa -L<2>-Z pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIa) nije zamenjen sa -L<2>-Z;

[0461] -L<2>- je formule (i):

[0464]

[0466] pri čemu

[0467] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-;

[0468] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z;

[0469] -R<1>je -H, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil;

[0470] n je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ili 18;

[0471] -Z je nosač rastvorljiv u vodi koji sadrži ostatak formule (a):

[0474]

[0476] pri čemu

[0477] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[0478] BP<a>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

[0479] -R je -H ili C<1-6>alkil;

[0480] a je 0 ako je BP<a>jednako -N< ili -CR< i a je 1 ako je BP<a>jednako >C<;

[0481] -S<a>-, -s<a'>-, -S<a">- i -S<a‴>- su međusobno nezavisno hemijska veza ili su izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[0482] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[0483] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso(=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; -p<a'>, -P<a">i -P<a‴>su nezavisno polimerni ostatak; i

[0484] pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 2 nmol/kg ekvivalenata CNP, i pri čemu su jedan ili više neželjenih efekata kardiovaskularni neželjeni efekti.

[0486] Još poželjnije je da je neželjeni efekat hipotenzija.

[0487] [0129] Navedena bolest je izabrana iz grupe koja se sastoji od ahondroplazije, hipohondroplazije, niskog rasta, patuljastog rasta, osteohondrodisplazije, tanatoforne displazije, osteogeneze imperfekte, ahondrogeneze, tačkaste hondrodisplazije, homozigotne ahondroplazije, kamptomelične displazije, kongenitalne letalne hipofosfatazije, perinatalno letalnog tipa osteogeneze imperfekte, sindroma polidaktilije kratkih rebara, rizomeličkog tipa tačkaste hondrodisplazije, metafizne displazije Jansen-ovog tipa, spondiloepifizne displazije kongenite, atelosteogeneze, dijastrofične displazije, kongenitalnog kratkog femura, mezomelične displazije Langer-ovog tipa, mezomelične displazije Nievergelt-ovog tipa, Robinow-ljevog sindroma, Reinhardt-ovog sindroma, akrodizostoze, periferne dizostoze, Kniest-ove displazije, fibrohondrogeneze, Roberts-ovog sindroma, akromezomelične displazije, mikromelije, Morquio-ovog sindroma, Kniest-ovog sindroma, metatrofične displazije, spondiloepimetafizne displazije, neurofibromatoze, Legiusov-ovog sindroma, LEOPARD sindrom, Noonan-ovog sindroma, nasledne gingivalne fibromatoze, neurofibromatoze tipa 1, Legius-ovog sindroma, kardiofaciokutanog sindroma, Costello-ovog sindroma, deficijencije SHOX, idiopatskog niskog rasta, deficijencije hormona rasta, osteoartritisa, kleidokranijalne dizostoze, kraniosinostoze (npr., Muenke-ovog sindroma, Crouzon-ovog sindroma, Apert-ovog sindroma, Jackson-Weiss-ovog sindroma, Pfeiffer-ovog sindroma ili Crouzonodermoskeletnog sindroma), brahidaktilije, kamptodaktilije, polidaktilije, sindaktilije, disegmentalne displazije, enhondromatoze, fibrozne displazije, nasledne multiple egzostoze, hipofosfatemijskog rahitisa, Jaffe-Lichtenstein-ovog sindroma, Marfan-ovog sindroma, McCune-Albright-ovog sindroma, osteopetroze i osteopoikiloze.

[0488] Najpoželjnije je da je navedena bolest ahondroplazija.

[0489] Poželjno je da se agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem dozira sisaru, poželjno čoveku, u dozi od najmanje 5 nmol/kg, kao što je doza od najmanje 10 nmol/kg, kao što je doza od najmanje 20 nmol/kg, kao što je doza od najmanje 30 nmol/kg, kao što je doza od najmanje 40 nmol/kg, kao što je doza od najmanje 50 nmol/kg ili kao što je doza od najmanje 100 nmol/kg. Poželjno je da se agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem dozira sisaru, poželjno čoveku, u dozi koja nije veća od 250 µmol/kg.

[0490] [0132] U svim primerima izvođenja, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 6 sati. Poželjno je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 12 sati. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 24 sata. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 48 sati. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 72 sata. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 96 sati. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 120 sati. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 144 sata. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 168 sati. Još poželjnije je da agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska oslobađa najmanje jedan agonist CNP pod fiziološkim uslovima sa poluživotom oslobađanja od najmanje 192 sata.

[0491] Agonist CNP je CNP. Još poželjnije je da agonist CNP sadrži CNP molekul ili ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 24, SEQ ID NO.: 25 ili SEQ ID NO.: 30. Još poželjnije, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 24, SEQ ID NO.: 25 ili SEQ ID NO.: 30. Još poželjnije, agonist CNP sadrži molekul CNP ili ostatak CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 24. Najpoželjnije, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 24. Takođe poželjno, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 20. Takođe poželjno, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 21. Takođe poželjno, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 22. Takođe poželjno, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 22. Takođe poželjno, agonist CNP je CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO.: 30.

[0492] U sledećem primeru izvođenja, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem je rastvorljiv u vodi.

[0493] Agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem je prolek agonista CNP formule (Ia) sa x = 1.

[0494] Ostatak -L<1>- je reverzibilni linker proleka iz kojeg se lek, tj. CNP, oslobađa u svom slobodnom obliku, tj. -L<1>- je linker proleka bez tragova. U jednom otkriću, pogodni linkeri prolekova su poznati u struci, kao što su na primer reverzibilni delovi linkera prolekova otkriveni u WO 2005/099768 A2, WO 2006/136586 A2, WO 2011/089216 A1 i WO 2013/024053 A1.

[0495] Takođe je otkriveno -L<1>- što je reverzibilni linker proleka kao što je opisano u WO 2011/012722 A1, WO 2011/089214 A1, WO 2011/089215 A1, WO 2013/024052 A1 i WO 2013/160340 A1.

[0496] -L<1>- je povezan sa -D preko amidne veze. Razume se da ova veza ne mora per se biti reverzibilna, ali da susedne grupe sadržane u -L<1>- može učiniti vezu reverzibilnom.

[0497] Ostatak -L<1>- je formule (IIa):

[0500]

[0503] pri čemu isprekidana linija označava vezivanje za azot u -D koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti deo SEQ ID NO:96 formiranjem amidne veze;

[0504] -X<2>- je -C(R<8>R<8a>)- ili -C(R<8>R<8a>)-C(R<9>R<9a>)-;

[0505] -R<1>, -R<8a>, -R<2>, -R<2a>, -R<4>, -R<4a>, -R<8>, -R<8a>, -R<9>i -R<9a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila;

[0506] -R<3>i -R<3a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pod uslovom da u slučaju da jedan od -R<3>i -R<3a>ili oba nisu -H, povezani su sa azotom za koji su vezani preko sp<3>-hibridizovanog atoma ugljenika;

[0507] opciono, jedan ili oba para -R<1a>/-R<4a>, -R<8a>/-R<9a>formiraju hemijsku vezu;

[0508] opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<1a>, -R<2>/-R<2a>, -R<4>/-R<4a>, -R<8>/-R<8a>i -R<9>/-R<9a>su spojeni zajedno sa atomom za koji su vezani tako da formiraju C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil; opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<4>, -R<8>/-R<9>i -R<2>/-R<3>su spojeni zajedno sa atomima za koje su vezani tako da formiraju prsten A;

[0509] opciono, -R<3>/-R<3a>su spojeni zajedno sa atomom azota za koji su vezani tako da formiraju 3- do 10-člani heterociklus;

[0510] A je fenil, naftil, indenil, indanil, tetralinil, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-člani heterociklil ili 8- do 11-člani heterobiciklil;

[0511] pri čemu -L<1>- se zamenjuje sa -L<2>-Z pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIa) nije zamenjen sa -L<2>-Z; pri čemu -L<1>- se zamenjuje sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIa) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0513] Poželjno, -L<1>- formule (IIa) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0514] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIa) nije dalje supstituisan.

[0515] Poželjno, -R<1>i -R<1a>formule (IIa) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<1>i -R<1a>formule (IIa) je -H. Još poželjnije, oba -R<1>i -R<1a>formule (IIa) su -H.

[0516] Poželjno, -R<4>i -R<4a>formule (IIa) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<4>i -R<4a>formule (IIa) je -H. Još poželjnije, oba -R<4>i -R<4a>formule (IIa) su -H.

[0517] Poželjno, -X<2>- formule (IIa) je -C(R<8>R<8a>)-.

[0518] Poželjno, -R<8>i -R<8a>formule (IIa) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<8>i -R<8a>formule (IIa) je -H. Još poželjnije, oba -R<8>i -R<8a>formule (IIa) su -H.

[0519] Poželjno, -R<2>i -R<2a>formule (IIa) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<2>i -R<2a>formule (IIa) je -H. Još poželjnije, oba -R<2>i -R<2a>formule (IIa) su H.

[0520] Poželjno, -R<3>i -R<3a>formule (IIa) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Još poželjnije, najmanje jedan od -R<3>i -R<3a>formule (IIa) je metil. U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIa) su oba -H. U drugom podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIa) su oba metil.

[0521] Poželjno, -R<3>formule (IIa) je -H i -R<3a>formule (IIa) je metil.

[0522] Poželjno, ostatak -L<1>- je formule (IIb):

[0525]

[0528] pri čemu isprekidana linija označava vezivanje za azot -D koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti deo SEQ ID NO:96 formiranjem amidne veze;

[0529] -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -X<2>- koriste se kao što je definisano u formuli (IIa); i

[0530] pri čemu -L<1>- se zamenjuje sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIb) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0532] Poželjno, -L<1>- formule (IIb) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0533] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIb) nije dalje supstituisan.

[0534] Poželjno, -X<2>- formule (IIb) je -C(R<8>R<8a>)-.

[0535] Poželjno, -R<8>i -R<8a>formule (IIb) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<8>i -R<8a>formule (IIb) je -H. Još poželjnije, oba -R<8>i -R<8a>formule (IIb) su -H.

[0536] Poželjno, -R<2>i -R<2a>formule (IIb) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<2>i -R<2a>formule (IIb) je -H. Još poželjnije, oba -R<2>i -R<2a>formule (IIb) su H.

[0537] Poželjno, -R<3>i -R<3a>formule (IIb) su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Još poželjnije, najmanje jedan od -R<3>i -R<3a>formule (IIb) je metil. U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIb) su oba -H. U drugom podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIb) su oba metil.

[0538] Najpoželjnije, -R<3>formule (IIb) je -H i -R<3a>formule (IIb) je metil.

[0539] Još poželjnije, ostatak -L<1>- je formule (IIb'):

[0540]

[0543] pri čemu isprekidana linija označava vezivanje za azot -D koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96 formiranjem amidne veze;

[0544] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-;

[0545] -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -X<2>- koriste se kako su definisani u formuli (IIa).

[0547] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIb') nije dalje supstituisan.

[0548] Poželjno, -X<2>- formule (IIb') je -C(R<8>R<8a>)-.

[0549] Poželjno -R<8>i -R<8a>formule (IIb') su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<8>i -R<8a>formule (IIb') je -H. Još poželjnije, oba -R<8>i -R<8a>formule (IIb') su -H.

[0550] Poželjno, -R<2>i -R<2a>formule (IIb') su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila. Poželjnije, najmanje jedan od -R<2>i -R<2a>formule (IIb') je -H. Još poželjnije, oba -R<2>i -R<2a>formule (IIb') su H.

[0551] Poželjno, -R<3>i -R<3a>formule (IIb') su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Još poželjnije, najmanje jedan od -R<3>i -R<3a>formule (IIb') je metil. U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIb') su oba -H. U drugom podjednako poželjnom primeru izvođenja, -R<3>i -R<3a>formule (IIb') su oba metil.

[0552] Najpoželjnije, -R<3>formule (IIb') je -H i -R<3a>formule (IIb') je metil.

[0553] Poželjno, ostatak -L<1>- je formule (IIc):

[0556]

[0559] pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96 formiranjem amidne veze; i

[0560] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIc) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0562] Poželjno, -L<1>- formule (IIc) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0563] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIc) nije dalje supstituisan.

[0564] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-a):

[0567]

[0570] pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem amidne veze; i

[0571] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIc-a) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0573] Poželjno -L<1>- formule (IIc-a) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0574] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIc-a) nije dalje supstituisan.

[0575] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-b):

[0578]

[0581] pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96 formiranjem amidne veze; i

[0582] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIc-b) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0584] Poželjno -L<1>- formule (IIc-b) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0585] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIc-b) nije dalje supstituisan.

[0586] Još poželjnije, ostatak -L<1>- je formule (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) ili (IIc-v):

[0587]

[0589] ili

[0592]

[0595] pri čemu

[0596] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze;

[0597] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formulama (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) i (IIc-v) nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0599] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) i (IIc-v) nije dalje supstituisan.

[0600] U posebno poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-ii)

[0603]

[0605] pri čemu

[0606] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0607] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z.

[0609] Poželjno -L<1>- formule (IIc-ii) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0610] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') ili (IIc-v'):

[0611]

[0613] ili

[0616]

[0618] pri čemu

[0619] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze;

[0620] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formulama (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') i (IIc-v') nije zamenjen sa a-L<2>-Z.

[0622] Poželjno ostatak -L<1>- formule (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') i (IIc-v') nije dalje supstituisan.

[0623] [0179] U sledećem posebno poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-ii') pri čemu

[0624] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0625] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z.

[0627] Poželjno -L<1>- formule (IIc-ii') je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0628] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii'') ili (IIc-iv''):

[0631]

[0633] ili

[0636]

[0638] pri čemu

[0639] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze;

[0640] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z, pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formulama (IIc-i"), (IIc-ii"), (IIc-iii") i (IIc-iv'') nije zamenjen sa -L<2>-Z.

[0642] Poželjno, ostatak -L<1>- formule (IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii") i (IIc-iv'') nije dalje supstituisan.

[0643] U sledećem posebno poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (IIc-ii'')

[0644]

[0646] pri čemu

[0647] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0648] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<2>-Z.

[0650] Poželjno, -L<1>- formule (IIc-ii") je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z.

[0651] U sledećem otkriću, -L<1>- je kako je otkriveno u WO2016/020373A1. Shodno tome, u sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>- je formule (III):

[0654]

[0656] pri čemu

[0657] isprekidana linija označava vezu sa primarni ili sekundarni amin ili hidroksil -D koji je CNP ostatak formiranjem amidne ili estarske veze, respektivno;

[0658] -R<1>, -R<1a>, -R<2>, -R<2a>, -R<3>i -R<3a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, -C(R<8>R<8a>R<8b>), -C(=O)R<8>, -C≡N, -C(=NR<8>)R<8a>, -CR<8>(=CR<8a>R<8b>), -C≡CR<8>i -T;

[0659] -R<4>, -R<5>i -R<5a>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, -C(R<9>R<9a>R<9b>) i -T;

[0660] a1 i a2 su međusobno nezavisno 0 ili 1;

[0661] svaki -R<6>, -R<6a>, -R<7>, -R<7a>, -R<8>, -R<8a>, -R<8b>, -R<9>, -R<9a>i -R<9b>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, halogena, -CN, -COOR<10>, -OR<10>, -C(O)R<10>, -C(O)N(R<10>R<10a>), -S(O)<2>N(R<10>R<10a>), -S(O)N(R<10>R<10a>), -S(O)<2>R<10>, -S(O)R<10>, -N(R<10>)S(O)<2>N(R<10a>R<10b>), -SR<10>, -N(R<10>R<10a>), -NO<2>, -OC(O)R<10>, -N(R<10>)C(O)R<10a>, -N(R<10>)S(O)<2>R<10a>, -N(R<10>)S(O)R<10a>, -N(R<10>)C(O)OR<10a>, -N(R<10>)C(O)N(R<10a>R<10b>), -OC(O)N(R<10>R<10a>), -T, C<1-20>alkil, C<2-20>alkenil i C<2-20>alkinil; pri čemu -T, C<1-20>alkil, C<2-20>alkenil i C<2-20>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<11>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-20>alkil, C<2-20>alkenil i C<2-20>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<12>)-, -S(O)<2>N(R<12>)-, -S(O)N(R<12>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<12>)S(O)<2>N(R<12a>)-, -S-, -N(R<12>)-, -OC(OR<12>)(R<12a>)-, -N(R<12>)C(O)N(R<12a>)- i -OC(O)N(R<12>)-;

[0662] svaki -R<10>, -R<10a>i -R<10b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, -T, C<1-20>alkila, C<2->

[0663] <20>alkenila i C<2-20>alkinila; pri čemu -T, C<1-20>alkil, C<2-20>alkenil i C<2-20>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<11>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-20>alkil, C<2-20>alkenil i C<2-20>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<12>)-, -S(O)<2>N(R<12>)-, -S(O)N(R<12>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<12>)S(O)<2>N(R<12a>)-, -S-, -N(R<12>)-, -OC(OR<12>)(R<12a>)-, -N(R<12>)C(O)N(R<12a>)- i -OC(O)N(R<12>)-; svaki T je nezavisno jedan od drugog izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila i 8- do 11-članog heterobiciklila; pri čemu je svaki T nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<11>, koji su isti ili različiti;

[0664] svaki -R<11>je nezavisno jedan od drugog izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<13>, -OR<13>, -C(O)R<13>, -C(O)N(R<13>R<13a>), -S(O)<2>N(R<13>R<13a>), -S(O)N(R<13>R<13a>), -S(O)<2>R<13>, -S(O)R<13>, -N(R<13>)S(O)<2>N(R<13a>R<13b>), -SR<13>, -N(R<13>R<13a>), -NO<2>, -OC(O)R<13>, -N(R<13>)C(O)R<13a>, -N(R<13>)S(O)<2>R<13a>, -N(R<13>)S(O)R<13a>, -N(R<13>)C(O)OR<13a>, -N(R<13>)C(O)N(R<13a>R<13b>), -OC(O)N(R<13>R<13a>), i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti;

[0665] svaki -R<12>, -R<12a>, -R<13>, -R<13a>i -R<13b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<1a>, -R<2>/-R<2a>, -R<3>/-R<3a>, -R<6>/-R<6a>i -R<7>/-R<7a>su spojeni zajedno sa atomom za koji su vezani i formiraju C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil; opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<2>, -R<1>/-R<3>, -R<1>/-R<4>, -R<1>/-R<5>, -R<1>/-R<6>, -R<1>/-R<7>, -R<2>/-R<3>, -R<2>/-R<4>, -R<2>/-R<5>, -R<2>/-R<6>, -R<2>/-R<7>, -R<3>/-R<4>, -R<3>/-R<5>, -R<3>/-R<6>, -R<3>/-R<7>, -R<4>/-R<5>, -R<4>/-R<6>, -R<4>/-R<7>, -R<5>/-R<6>, -R<5>/-R<7>i -R<6>/-R<7>su spojeni zajedno sa atomima za koje su vezani da bi formirali prsten A;

[0666] A je fenil, naftil, indenil, indanil, tetralinil, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-člani heterociklil ili 8- do 11-člani heterobiciklil;

[0667] pri čemu, -L<1>- je supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0668] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0669] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0670] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0672] Opcioni dodatni supstituenti -L<1>- formule (III) su poželjno kao što su gore opisani.

[0673] Poželjno -L<1>- formule (III) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0674] U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (III) nije dalje supstituisan.

[0675] Takođe su otkriveni primeri izvođenja za -L<1>- kako su otkriveni u EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2i US8618124B2.

[0676] Dodatno otkrivanje za -L<1>- uključuje primere izvođenja kao što su otkriveni u US8946405B2 i US8754190B2. Shodno tome, poželjni ostatak -L<1>- je formule (IV):

[0679]

[0681] pri čemu

[0682] isprekidana linija označava vezu sa -D, koji je ostatak agonista CNP, i pri čemu se vezivanje vrši preko funkcionalne grupe -D izabrane iz grupe koja se sastoji od -OH, -SH i -NH<2>; m je 0 ili 1;

[0683] najmanje jedan ili oba od -R<1>i -R<2>je/su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -CN, -NO<2>, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog alkenila, opciono supstituisanog alkinila, -C(O)R<3>, -S(O)R<3>, -S(O)<2>R<3>i -SR<4>, jedan i samo jedan od -R<1>i -R<2>je izabran iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog arilalkila i opciono supstituisanog heteroarilalkila;

[0684] -R<3>je -H, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani arilalkil, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani heteroarilalkil, -OR<9>ili -N(R<9>)<2>;

[0685] -R<4>je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani arilalkil, opciono supstituisani heteroaril ili opciono supstituisani heteroarilalkil;

[0686] svaki -R<5>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog alkenilalkila, opciono supstituisanog alkinilalkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog arilalkila, opciono supstituisanog heteroarila i opciono supstituisanog heteroarilalkila;

[0687] -R<9>je -H ili opciono supstituisani alkil;

[0688] -Y- je odsutan i -X- je -O- ili -S-; ili

[0689] -Y- je -N(Q)CH<2>- i -X- je -O-;

[0690] Q je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani arilalkil, opciono supstituisani heteroaril ili opciono supstituisani heteroarilalkil;

[0691] opciono, -R<1>i -R<2>mogu biti spojeni da bi formirali 3- do 8-člani prsten; i

[0692] opciono, oba -R<9>zajedno sa azotom za koji su vezani formiraju heterociklični prsten;

[0693] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0694] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0695] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0696] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0698] Opcioni dodatni supstituenti -L<1>- formule (IV) su poželjno kao što su gore opisani.

[0699] Poželjno -L<1>- formule (IV) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0700] U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (IV) nije dalje supstituisan.

[0701] Samo u kontekstu formule (IV) korišćeni termini imaju sledeće značenje:

[0702] Termin „alkil“, kako se ovde koristi, obuhvata linearne, razgranate ili ciklične zasićene ugljovodonične grupe od 1 do 8 atoma ugljenika, ili u nekim primerima izvođenja od 1 do 6 ili od 1 do 4 atoma ugljenika.

[0703] Termin „alkoksi“ obuhvata alkil grupe vezane za kiseonik, uključujući metoksi, etoksi, izopropoksi, ciklopropoksi, ciklobutoksi i slične.

[0704] Termin „alkenil“ obuhvata nearomatične nezasićene ugljovodonike sa dvostrukim vezama ugljenik-ugljenik.

[0705] Termin „alkinil“ obuhvata nearomatične nezasićene ugljovodonike sa trostrukim vezama ugljenik-ugljenik.

[0706] Termin „aril“ obuhvata aromatične ugljovodonične grupe od 6 do 18 ugljenika, poželjno 6 do 10 ugljenika, uključujući grupe kao što su fenil, naftil i antracenil. Termin „heteroaril“ obuhvata aromatične prstenove koji sadrže 3 do 15 ugljenika koji sadrže najmanje jedan atom N, O ili S, poželjno 3 do 7 ugljenika koji sadrže najmanje jedan atom N, O ili S, uključujući grupe kao što su pirolil, piridil, pirimidinil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, hinolil, indolil, indenil i slično.

[0707] U nekim slučajevima, alkenil, alkinil, aril ili heteroaril delovi mogu biti povezani sa ostatkom molekula preko alkilenske veze. Pod tim okolnostima, supstituent će se nazivati alkenilalkil, alkinilalkil, arilalkil ili heteroarilalkil, što ukazuje da se alkilen ostatak nalazi između alkenil, alkinil, aril ili heteroaril ostatka i molekula sa kojim je alkenil, alkinil, aril ili heteroaril povezan.

[0708] Termin „halogen“ obuhvata brom, fluoro, hloro i jodo.

[0709] Termin „heterociklični prsten“ odnosi se na aromatični ili nearomatični 4- do 8-člani prsten koji sadrži 3 do 7 atoma ugljenika i najmanje jedan atom N, O ili S. Primeri su piperidinil, piperazinil, tetrahidropiranil, pirolidin i tetrahidrofuranil, kao i primeri grupa datih za termin „heteroaril“ gore.

[0710] Kada je sistem prstena opciono supstituisan, odgovarajući supstituenti su izabrani iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, alkinila ili dodatnog prstena, svaki opciono dalje supstituisan. Opcioni supstituenti na bilo kojoj grupi, uključujući gore navedene, uključuju halo, nitro, cijano, -OR, -SR, -NR<2>, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR<2>, -SOR, -SO<2>R, -SONR<2>i -SO<2>NR<2>, pri čemu je svaki R nezavisno alkil, alkenil, alkinil, aril ili heteroaril, ili dve R grupe uzete zajedno sa atomima za koje su vezane formiraju prsten.

[0711] Takođe je otkriven primer izvođenja za -L<1>- kako je otkriven u WO2013/036857A1. Shodno tome, poželjni ostatak -L<1>- je formule (V):

[0714]

[0716] pri čemu

[0717] isprekidana linija označava vezu sa -D, koji je ostatak agonista CNP, i pri čemu se vezivanje vrši preko aminske funkcionalne grupe -D;

[0718] -R<1>je opciono supstituisan C<1>-C<6>linearni, razgranati ili ciklični alkil; opciono supstituisani aril; opciono supstituisani heteroaril; alkoksi; ili -NR<5>2

;

[0719] -R<2>je -H, opciono supstituisan C<1>-C<6>alkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisani heteroaril;

[0720] -R<3>je -H, opciono supstituisan C<1>-C<6>alkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisani heteroaril;

[0721] -R<4>je -H, opciono supstituisan C<1>-C<6>alkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisani heteroaril;

[0722] svaki -R<5>je međusobno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, opciono supstituisanog C<1>-C<6>alkila, opciono supstituisanog arila i opciono supstituisanog heteroarila; ili kada se uzmu zajedno dva -R<5>mogu biti cikloalkil ili cikloheteroalkil;

[0723] pri čemu je L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0724] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0725] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0726] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0728] Opcioni dodatni supstituenti -L<1>- formule (V) su poželjno kao što su gore opisani.

[0729] Poželjno -L<1>- formule (V) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0730] U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (V) nije dalje supstituisan.

[0731] Samo u kontekstu formule (V) korišćeni termini imaju sledeće značenje:

[0732] „Alkil“, „alkenil“ i „alkinil“ obuhvataju linearne, razgranate ili ciklične ugljovodonične grupe sa 1-8 ugljenika ili 1-6 ugljenika ili 1-4 ugljenika, pri čemu alkil je zasićeni ugljovodonik, alkenil uključuje jednu ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik, a alkinil uključuje jednu ili više trostrukih veza ugljenik-ugljenik. Osim ako nije drugačije naznačeno, one sadrže 1-6 C.

[0733] „Aril“ obuhvata aromatične ugljovodonične grupe sa 6-18 ugljenika, poželjno 6-10 ugljenika, uključujući grupe kao što su fenil, naftil i antracen. „Heteroaril“ obuhvata aromatične prstenove koji sadrže 3-15 ugljenika koji sadrže najmanje jedan atom N, O ili S, poželjno 3-7 ugljenika koji sadrže najmanje jedan atom N, O ili S, uključujući grupe kao što su pirolil, piridil, pirimidinil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tizolil, izotiazolil, hinolil, indolil, indenil i slično.

[0734] Termin „supstituisan“ označava alkil, alkenil, alkinil, aril ili heteroaril grupu koja sadrži jednu ili više supstituentskih grupa umesto jednog ili više atoma vodonika. Supstituenti se generalno mogu odabrati od halogena, uključujući F, Cl, Br i I; nižeg alkila, uključujući linearne, razgranate i ciklične; nižeg haloalkila, uključujući fluoroalkil, hloroalkil, bromoalkil i jodoalkil; OH; nižeg alkoksi, uključujući linearne, razgranate i ciklične; SH; nižeg alkiltio, uključujući linearne, razgranate i ciklične; amino, alkilamino, dialkilamino, silil, uključujući alkilsilil, alkoksisilil i arilsilil; nitro; cijano; karbonila; karboksilne kiseline, karboksilnog estra, karboksilnog amida, aminokarbonila; aminoacila; karbamata; uree; tiokarbamata; tiouree; ketona; sulfona; sulfonamida; arila, uključujući fenil, naftil i antracenil; heteroarila uključujući 5-člane heteroarile kao što su pirol, imidazol, furan, tiofen, oksazol, tiazol, izoksazol, izotiazol, tiadiazol, triazol, oksadiazol i tetrazol, 6-člani heteroarili uključujući piridin, pirimidin, pirazin i kondenzovane heteroarile uključujući benzofuran, benzotiofen, benzoksazol, benzimidazol, indol, benzotiazol, benzizoksazol i benzizotiazol.

[0735] Takođe je otkriven primer izvođenja za -L<1>- kako je otkriven u US7585837B2. Shodno tome, poželjan ostatak -L<1>- je formule (VI):

[0738]

[0740] pri čemu

[0741] isprekidana linija označava vezu sa -D, koji je ostatak agonista CNP, i pri čemu se vezivanje vrši preko aminske funkcionalne grupe -D;

[0742] -R<1>i -R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, alkila, alkoksi, alkoksialkila, arila, alkarila, aralkila, halogena, nitro, -SO<3>H, -SO<2>NHR<5>, amino, amonijuma, karboksila, PO<3>H<2>i OPO<3>H<2>;

[0743] -R<3>, -R<4>i -R<5>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, alkila i arila; pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0744] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0745] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0746] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0748] Pogodni supstituenti za formule (VI) su alkil (kao što je C<1-6>alkil), alkenil (kao što je C<2-6>alkenil), alkinil (kao što je C<2-6>alkinil), aril (kao što je fenil), heteroalkil, heteroalkenil, heteroalkinil, heteroaril (kao što je aromatični 4- do 7-člani heterociklus) ili halogene grupe.

[0749] Poželjno -L<1>- formule (VI) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0750] U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (VI) nije dalje supstituisan.

[0751] Samo u kontekstu formule (VI) korišćeni termini imaju sledeće značenje:

[0752] Termini „alkil“, „alkoksi“, „alkoksialkil“, „aril“, „alkaril“ i „aralkil“ označavaju alkil radikale sa 1-8, poželjno 1-4 atoma ugljenika, npr. metil, etil, propil, izopropil i butil, i aril radikale sa 6-10 atoma ugljenika, npr. fenil i naftil. Termin „halogen“ obuhvata bromo, fluoro, hloro i jodo.

[0753] Dalje otkrivanje za -L<1>- uključuje primere izvođenja otkrivene u WO2002/089789A1. Shodno tome, poželjan ostatak -L<1>- je formule (VII):

[0756]

[0758] pri čemu

[0759] isprekidana linija označava vezu sa -D, koji je ostatak agonista CNP, i pri čemu se vezivanje vrši preko aminske funkcionalne grupe -D;

[0760] -L<1>- je bifunkcionalna vezujuća grupa,

[0761] =Y<1>i =Y<2>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od O, S i NR<7>;

[0762] -R<2>, -R<3>, -R<4>, -R<5>, -R<6>i -R<7>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C<1-6>alkila, C<3-12>razgranatih alkila, C<3-8>cikloalkila, C<1-6>supstituisanog alkila, C<3-8>supstituisanih cikloalkila, arila, supstituisanih arila, aralkila, C<1-6>heteroalkila, supstituisanih C<1-6>heteroalkila, C<1-6>alkoksi, fenoksi i C<1-6>heteroalkoksi;

[0763] Ar je ostatak koji kada je uključen u formulu (VII) formira multisupstituisani aromatični ugljovodonik ili multisupstituisanu heterocikličnu grupu;

[0764] -X- je hemijska veza ili ostatak koji se aktivno transportuje u ciljnu ćeliju, hidrofobni ostatak ili njihovu kombinaciju,

[0765] y je 0 ili 1;

[0766] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0767] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0768] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0769] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0771] Poželjno, -L<1>- formule (VII) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0772] U jednom primeru izvođenja, -L<1>- formule (VII) nije dalje supstituisan.

[0773] Opcioni dodatni supstituenti, -L<1>- formule (VII) su poželjno kao što su gore opisani.

[0774] Samo u kontekstu formule (VII) korišćeni termini imaju sledeće značenje:

[0775] Termin „alkil“ treba da se shvati tako da obuhvata, npr. ravne, razgranate, supstituisane C<1-12>alkile, uključujući alkoksi, C<3-8>cikloalkile ili supstituisane cikloalkile.

[0776] Termin „supstituisan“ treba shvatiti tako da uključuje dodavanje ili zamenu jednog ili više atoma sadržanih u funkcionalnoj grupi ili jedinjenjima sa jednim ili više različitih atoma.

[0777] Supstituisani alkili uključuju karboksialkile, aminoalkile, dialkilamino, hidroksialkile i merkaptoalkile; supstituisani cikloalkili uključuju grupe kao što je 4-hlorcikloheksil; arili uključuju grupe kao što je naftil; supstituisani arili uključuju grupe kao što je 3-bromo-fenil; aralkili uključuju grupe kao što je toluil; heteroalkili uključuju grupe kao što je etiltiofen; supstituisani heteroalkili uključuju grupe kao što je 3-metoksitiofon; alkoksi uključuje grupe kao što je metoksi; i fenoksi uključuje grupe kao što je 3-nitrofenoksi. Halo- treba razumeti kao fluoro, hloro, jodo i bromo.

[0778] Takođe je otkriven -L<1>- koji sadrži podstrukturu formule (VIII)

[0779] pri čemu

[0780] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa azotom -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem amidne veze;

[0781] neoznačene isprekidane linije označavaju vezu sa ostatak -L<1>-; i

[0782] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- je opciono dodatno supstituisan;

[0783] pri čemu

[0784] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0785] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0786] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0788] Poželjno -L<1>- formule (VIII) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0789] Opcioni dodatni supstituenti -L<1>- formule (VIII) su poželjno kao što su gore opisani. U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (VIII) nije dalje supstituisan.

[0790] Takođe je otkriven -L<1>- koja sadrži podstrukturu formule (IX)

[0793]

[0795] pri čemu

[0796] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezivanje za azot -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem karbamatne veze;

[0797] neoznačene isprekidane linije označavaju vezu sa ostatak -L<1>-; i

[0798] pri čemu je -L<1>- supstituisan sa -L<2>-Z ili -L<2>-Z' i pri čemu je -L<1>- opciono dodatno supstituisan; pri čemu

[0799] -L<2>- je jednostruka hemijska veza ili razmaknica;

[0800] -Z je nosač rastvorljiv u vodi; i

[0801] -Z' je nosač nerastvorljiv u vodi.

[0803] Poželjno -L<1>- formule (IX) je supstituisan jednim ostatkom -L<2>-Z ili -L<2>-Z'.

[0804] Opcioni dodatni supstituenti -L<1>- formule (IX) su poželjno kao što su gore opisani.

[0805] U jednom primeru izvođenja -L<1>- formule (IX) nije dalje supstituisan.

[0806] [0229] Poželjno -D formule (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (IIb'), (IIc), (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIciv), (IIc-v), (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv'), (IIc-v'), (IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii''), (IIc-iv''), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) i (IX) je CNP ostatak. Ostatak -D može biti povezan sa -L<1>- preko bilo koje funkcionalne grupe D-H i poželjno je povezan sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe D-H. Ovo može biti N-terminalna aminska funkcionalna grupa ili aminska funkcionalna grupa koju obezbeđuje lizinski bočni lanac, tj. lizini na pozicijama 9, 11, 15, 16, 20 i 26, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[0807] Iznenađujuće je utvrđeno da veza -L<1>- za prsten CNP ostatka značajno smanjuje afinitet CNP proleka prema NPR-B u poređenju sa vezom na N-terminusu ili na ostatku CNP koji nije prsten, što smanjeni afinitet prema NPR-B zauzvrat smanjuje rizik od kardiovaskularnih neželjenih efekata, kao što je hipotenzija.

[0808] Shodno tome, -L<1>- je konjugovan sa bočnim lancem aminokiselinskog ostatka pomenutog prstenastog ostatka -D ili sa osnovom pomenutog prstenastog ostatka -D. Još poželjnije, -L<1>- je kovalentno i reverzibilno konjugovan sa bočnim lancem aminokiselinskog ostatka pomenutog prstenastog ostatka -D. Ako je -D CNP ostatak sa sekvencom SEQ ID NO:24, -L<1>- je poželjno konjugovan sa aminskom funkcionalnom grupom koju obezbeđuje lizin na poziciji 26 odgovarajućeg leka D-H.

[0809] Ostatak -L<2>- može se vezati za -L<1>- zamenom bilo kog prisutnog -H, osim ako nije eksplicitno isključeno.

[0810] Poželjno, -L<2>- ima molekulsku težinu u opsegu od 14 g/mol do 750 g/mol.

[0811] U jednom poželjnom primeru izvođenja -L<2>- ima dužinu lanca od 1 do 20 atoma.

[0812] Kako se ovde koristi, termin „dužina lanca“ u vezi sa ostatkom -L<2>- se odnosi na broj atoma -L<2>- prisutan u najkraćoj vezi između -L<1>- i -Z.

[0813] -L<2>- je formule (i)

[0816]

[0818] pri čemu

[0819] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-;

[0820] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z ili -Z';

[0821] -R<1>je -H, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil;

[0822] n je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ili 18; i

[0823] pri čemu je ostatak formule (i) opciono dodatno supstituisan.

[0824] Poželjno -R<1>formule (i) je -H, metil, etil, propil ili butil. Još poželjnije -R<1>formule (i) je -H, metil, etil ili propil. Još poželjnije -R<1>formule (i) je -H ili metil. Najpoželjnije -R<1>formule (i) je metil.

[0825] Poželjno, n u formuli (i) je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10. Još poželjnije, n u formuli (i) je 0, 1, 2, 3, 4 ili 5. Još poželjnije, n u formuli (i) je 0, 1, 2 ili 3. Još poželjnije, n u formuli (i) je 0 ili 1. Najpoželjnije, n u formuli (i) je 0.

[0826] U jednom poželjnom primeru izvođenja, -L<2>- je

[0827]

[0830] pri čemu

[0831] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-;

[0832] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z ili -Z'; i

[0833] pri čemu su ostaci (ii), (iii), (iv), (v), (vi), (vii), (viii), (ix), (x), (xi), (xii), (xiii), (xiv), (xv), (xvi) i (xvii) opciono dalje supstituisani.

[0835] U poželjnom primeru izvođenja -L<2>-

[0838]

[0840] ili

[0842] pri čemu

[0843] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-; i

[0844] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa-Z ili -Z'.

[0846] Još poželjnije -L<2>- je

[0849]

[0851] ili

[0852] pri čemu

[0853] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-; i

[0854] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z ili -Z'.

[0856] Još poželjnije -L<2>- je formule (xvi)

[0857]

[0860] pri čemu

[0861] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-; i

[0862] neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z ili -Z'.

[0864] U jednom poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je

[0867]

[0869] ili

[0871] pri čemu

[0872] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0873] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0875] U još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-ii)

[0878]

[0881] pri čemu

[0882] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0883] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0885] U najpoželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-ii')

[0888]

[0890] pri čemu

[0891] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0892] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0894] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je

[0897]

[0899] ili

[0901] pri čemu

[0902] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0903] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0904] U još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-iia)

[0907]

[0910] pri čemu

[0911] neobeležena isprekidana linija označava vezivanje za azot -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0912] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0914] U najpoželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-iia')

[0917]

[0919] pri čemu

[0920] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0921] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0923] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je izabran iz grupe koja se sastoji od

[0926]

[0927] pri čemu

[0928] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0929] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0931] U još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-iib)

[0934]

[0937] pri čemu

[0938] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0939] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0941] U najpoželjnijem primeru izvođenja, ostatak -L<1>-L<2>- je formule (IId-iib')

[0944]

[0946] pri čemu

[0947] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[0948] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z.

[0950] Poželjno, -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu u rasponu od 5 do 200 kDa. Još poželjnije, -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu u rasponu od 8 do 100 kDa, još poželjnije u rasponu od 10 do 80 kDa, još poželjnije od 12 do 60, još poželjnije od 15 do 40 i najpoželjnije da -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu od oko 20 kDa. U drugom podjednako poželjnom primeru izvođenja, -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu od oko 40 kDa.

[0951] -Z formule (Ia) sadrži polimer, poželjno polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietil-oksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina), poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečne-koglikolne kiseline), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estri), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitosana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronske kiseline i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[0952] -Z formule (Ia) je razgranati polimer. U jednom primeru izvođenja -Z formule (Ia) je razgranati polimer koji ima jednu, dve, tri, četiri, pet ili šest tačaka grananja. Poželjno je da je -Z formule (Ia) razgranati polimer koji ima jednu, dve ili tri tačke grananja. U jednom primeru izvođenja -Z formule (Ia) je razgranati polimer koji ima jednu tačku grananja. U sledećem primeru izvođenja -Z formule (Ia) je razgranati polimer koji ima dve tačke grananja. U sledećem primeru izvođenja -Z formule (Ia) je razgranati polimer koji ima tri tačke grananja.

[0953] Tačka grananja je poželjno izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CH< i >C<.

[0954] Poželjno je da je takav razgranati ostatak -Z formule (Ia) ili (Ib) baziran na PEG.

[0955] U jednom primeru izvođenja, takav razgranati ostatak -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu u rasponu od i uključujući 5 kDa do 500 kDa, poželjnije u rasponu od i uključujući 10 kDa do 250 Da, još poželjnije u rasponu od i uključujući 10 kDa do 150 kDa, još poželjnije u rasponu od i uključujući 12 kDa do 100 kDa i najpoželjnije u rasponu od i uključujući 15 kDa do 80 kDa.

[0956] [0258] Poželjno je da takav razgranati ostatak -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu u rasponu od i uključujući 10 kDa do 80 kDa. U jednom primeru izvođenja, molekulska težina je oko 10 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 20 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 30 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 40 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 50 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 60 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 70 kDa. U sledećem primeru izvođenja, molekulska težina takvog razgranatog ostatka -Z formule (Ia) je oko 80 kDa. Najpoželjnije je da takav razgranati ostatak -Z formule (Ia) ima molekulsku težinu od oko 40 kDa.

[0957] Prijavioci su otkrili da je N-terminalna veza ostatka -L<1>-L<2>-Z znatno efikasnija u pogledu NEP-stabilnosti nego veza na unutrašnjem mestu i da je najmanje efikasno mesto vezivanja u pogledu NEP-stabilnosti prstenasti ostatak CNP grupe. Međutim, prijavioci su iznenađujuće otkrili da se ovaj nedostatak vezivanja za prsten u pogledu NEP-stabilnosti može kompenzovati korišćenjem razgranatog ostatka -Z koji ima molekulsku težinu od najmanje 10 kDa, kao što je najmanje 12 kDa, kao što je najmanje 15 kDa, kao što je najmanje 18 kDa, kao što je najmanje 20 kDa, kao što je najmanje 24 kDa, kao što je najmanje 25 kDa, kao što je najmanje 27 kDa ili kao što je najmanje 30 kDa. Poželjno je da takav razgranati ostatak -Z ima molekulsku težinu ne veću od 500 kDa, poželjno ne veću od 250 kDa, poželjno ne veću od 200 Da, poželjno ne veću od 150 kDa i najpoželjnije ne veću od 100 kDa. Najpoželjnije je da takav razgranati ostatak -Z ima molekulsku težinu od oko 40 kDa. Shodno tome, upotreba takvog razgranatog ostatka -Z na prstenastom delu CNP ostatka ne samo da dovodi do povećane NEP-stabilnosti, već kombinuje povećanu NEP-stabilnost sa smanjenim vezivanjem NPR-B povezanim sa vezivanjem za prsten.

[0958] Iznenađujuće je utvrđeno da, iako je prstenasti ostatak uključen u vezivanje za NPR-C, vezivanje nosača od 5 kDa za prstenasti ostatak nije imalo značajan uticaj na afinitet za NPR-C. Pored toga, iznenađujuće je utvrđeno da je nosač od 4x 10 kDa, tj. razgranati nosač sa četiri grane od 10 kDa, vezan za prstenasti ostatak, efikasniji u smanjenju afiniteta za NPR-C nego nosač od 2x 20 kDa, tj. razgranati nosač sa dve grane od 20 kDa, iako je ukupna molekulska težina ista. Dakle, ne samo ukupna molekulska težina nosača vezanog za prstenasti ostatak, već i poseban obrazac grananja nosača utiče na afinitet vezivanja za NPR-C.

[0959] Ovo otkriće je takođe potkrepljeno afinitetom prema NPR-C izmerenim sa nosačem od 40 kDa sa 4 grane koji ima drugačiji obrazac grananja, a koji je i dalje pokazao visok afinitet prema NPR-C.

[0960] [0262] Ukratko, iznenađujuće je otkriveno da se afinitet prema NPR-C može efikasno smanjiti pomoću višegranatog nosača vezanog za prstenasti ostatak koji ima prvu tačku grananja blizu CNP ostatka, kao što je manje od 300 atoma od CNP ostatka, poželjno 200 atoma od CNP ostatka, još poželjnije 100 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 50 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 25 atoma od CNP ostatka i najpoželjnije manje od 10 atoma od CNP ostatka.

[0961] Još poželjnije, jedna ili više daljih tačaka grananja se nalaze na manje od 500 atoma od CNP ostatka, još poželjnije 300 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 200 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 100 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 75 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 50 atoma od CNP ostatka, još poželjnije manje od 40 atoma od CNP ostatka i najpoželjnije manje od 35 atoma od CNP ostatka.

[0962] Pored toga, utvrđeno je da je takav obrazac grananja koristan za in vivo stabilnost CNP ostatka, tj. zaštitu od proteolitičke degradacije. Iznenađujuće je utvrđeno da je N-terminalna degradacija bila jača kada se koristi nosač od 2x 20 kDa u poređenju sa nosačem od 4x 10 kDa. Slično tome, korišćenje nosača od 40 kDa sa 4 grane koji ima drugačiji obrazac grananja pokazalo je još jaču N-terminalnu degradaciju.

[0963] Poželjno je da -Z sadrži ostatak

[0966]

[0969] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -Z sadrži amidnu vezu.

[0970] -Z formule (Ia) sadrži ostatak formule (a)

[0973]

[0975] pri čemu

[0976] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>- ili sa ostatkom -Z;

[0977] BP<a>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

[0978] -R je -H ili C<1-6>alkil;

[0979] a je 0 ako je BP<a>jednak -N< ili -CR< i n je 1 ako je BP<a>jednak >C<;

[0980] -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">- i -S<a‴>- su međusobno nezavisno hemijska veza ili su izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu su C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[0981] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[0982] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>su nezavisno polimerni ostatak.

[0984] Opciono, ostatak formule (a) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[0985] U jednom primeru izvođenja BP<a>formule (a) je -N<.

[0986] U sledećem primeru izvođenja BP<a>formule (a) je -CR<. Poželjno, -R je -H. Shodno tome, a u formuli (a) je poželjno 0.

[0987] U sledećem primeru izvođenja BP<a>formule (a) je >C<.

[0988] U jednom primeru izvođenja -S<a>- formule (a) je hemijska veza.

[0989] U sledećem primeru izvođenja -S<a>- formule (a) je C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil ili C<2-10>alkinil, koji C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil ili C<2-10>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>N(R<4>)-, -S(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<4>)S(O)<2>N(R<4a>)-, -S-, -N(R<4>)-, -OC(OR<4>)(R<4a>)-, -N(R<4>)C(O)N(R<4a>)- i -OC(O)N(R<4>)-; pri čemu -R<4>i -R<4a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Poželjno, -S<a>- formule (a) je metil, etil, propil ili butil, koji su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -O-, -C(O)- i -C(O)N(R<4>)-.

[0990] U jednom primeru izvođenja -S<a'>- formule (a) je hemijska veza.

[0991] U sledećem primeru izvođenja -S<a'>- formule (a) je C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil ili C<2-10>alkinil, koji C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil ili C<2-10>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>N(R<4>)-, S(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<4>)S(O)<2>N(R<4a>)-, -S-, -N(R<4>)-, -OC(OR<4>)(R<4a>)-, -N(R<4>)C(O)N(R<4a>)- i -OC(O)N(R<4>)-; pri čemu -R<4>i -R<4a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Poželjno, -S<a'>- formule (a) je metil, etil, propil ili butil, koji su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -O-, -C(O)- i -C(O)N(R<4>)-.

[0992] U jednom primeru izvođenja -S<a">- formule (a) je hemijska veza.

[0993] U sledećem primeru izvođenja -S<a">- formule (a) je C<1-10>alkil, C<2-10>alkenil ili C<2-10>alkinil, koji C<1-10>alkil, alkenil ili alkinil su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>N(R<4>)-, -S(O)N(R<4>)-,-S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<4>)S(O)<2>N(R<4a>)-, -S-, -N(R<4>)-, -OC(OR<4>)(R<4a>)-, -N(R<4>)C(O)N(R<4a>)- i -OC(O)N(R<4>)-; pri čemu -R<4>i -R<4a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Poželjno, -S<a">- formule (a) je metil, etil, propil ili butil, koji su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -O-, -C(O)- i -C(O)N(R<4>)-.

[0994] U jednom primeru izvođenja -S<a‴>- formule (a) je hemijska veza.

[0995] U sledećem primeru izvođenja -S<a‴>- formule (a) je C<1-10>alkil, alkenil ili alkinil, koji C<1->

[0996] <10>alkil, alkenil ili alkinil su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<4>)-, -S(O)<2>N(R<4>)-, -S(O)N(R<4>)-,-S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<4>)S(O)<2>N(R<4a>)-, -S-, -N(R<4>)-, -OC(OR<4>)(R<4a>)-, -N(R<4>)C(O)N(R<4a>)- i -OC(O)N(R<4>)-; pri čemu -R<4>i -R<4a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila, etila, propila i butila. Poželjno, -S<a‴>- formule (a) je metil, etil, propil ili butil, koji su opciono prekinuti jednom ili više hemijskih grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -O-, -C(O)- i -C(O)N(R<4>)-.

[0997] [0280] Poželjno, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) nezavisno sadrže polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietiloksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina), poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečnih-ko-glikolnih kiselina), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estara), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitosana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronskih kiselina i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[0998] Poželjno, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) nezavisno imaju molekulsku težinu u rasponu od i uključujući 5 kDa do 50 kDa, poželjnije imaju molekulsku težinu u rasponu od i uključujući 5 kDa do 40 kDa, još poželjnije u rasponu od i uključujući 7,5 kDa do 35 kDa, još poželjnije u rasponu od i uključujući 7,5 kDa do 30 kDa, još poželjnije u rasponu od i uključujući 10 do 30 kDa.

[0999] U jednom primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 5 kDa.

[1000] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 7,5 kDa.

[1001] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 10 kDa.

[1002] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 12,5 kDa.

[1003] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 15 kDa.

[1004] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) imaju molekulsku težinu od oko 20 kDa.

[1005] Poželjnije, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) nezavisno sadrže ostatak zasnovan na PEG. Još poželjnije, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) nezavisno sadrže ostatak zasnovan na PEG koji sadrži najmanje 20% PEG, još poželjnije najmanje 30%, još poželjnije najmanje 40% PEG, još poželjnije najmanje 50% PEG, još poželjnije najmanje 60% PEG, još poželjnije najmanje 70% PEG, još poželjnije najmanje 80% PEG i najpoželjnije najmanje 90% PEG.

[1006] U podjednako poželjnom primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) nezavisno sadrže proteinski ostatak, poželjnije ostatak proteina sa slučajnim namotajem, a najpoželjnije ostatak proteina sa slučajnim namotajem izabran iz grupe koja se sastoji od PA, PAS, PAG, PG i XTEN ostataka.

[1007] U jednom primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) su PA ostatak.

[1008] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) su PAS ostatak.

[1009] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) su PAG ostatak.

[1010] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) su PG ostatak.

[1011] U sledećem primeru izvođenja -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (a) su XTEN ostatak.

[1012] U jednom primeru izvođenja, -Z sadrži jedan ostatak formule (a).

[1013] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (a).

[1014] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži tri ostatka formule (a).

[1015] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži četiri ostatka formule (a).

[1016] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži pet ostataka formule (a).

[1017] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži šest ostataka formule (a).

[1018] U poželjnom primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (a).

[1019] U poželjnom obliku, -Z sadrži ostatak formule (b)

[1022]

[1024] pri čemu

[1025] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>- ili sa ostatkom -Z;

[1026] b1 je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8;

[1027] b2 je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8;

[1028] b3 je ceo broj u rasponu od 150 do 1000, uključujući i 150; poželjno u rasponu od 150 do 500, uključujući i 150; i najpoželjnije u rasponu od 200 do 460, uključujući i 200; i

[1029] b4 je ceo broj u rasponu od i uključujući 150 do 1000; poželjno u rasponu od i uključujući 150 do 500; i najpoželjnije u rasponu od i uključujući 200 do 460.

[1031] Opciono, deo formule (b) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1032] Poželjno, b3 i b4 formule (b) su isti ceo broj.

[1033] U jednom poželjnom primeru izvođenja, b3 i b4 su oba ceo broj u rasponu od 200 do 250, a najpoželjnije b3 i b4 formule (b) su oko 225.

[1034] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, b3 i b4 su oba ceo broj u rasponu od 400 do 500, a najpoželjnije b3 i b4 formule (b) su oko 450.

[1035] Poželjno, b1 formule (b) je 0, 1, 2, 3 ili 4. Još poželjnije b1 formule (b) je 1, 2 ili 3. Najpoželjnije b1 formule (b) je 2.

[1036] Poželjno, b2 formule (b) je 1, 2, 3, 4 ili 5. Još poželjnije, b2 formule (b) je 2, 3 ili 4. Najpoželjnije, b2 formule (b) je 3.

[1037] U jednom posebno poželjnom primeru izvođenja, b1 formule (b) je 2, b2 formule (b) je 3, a b3 i b4 su oba oko 450.

[1038] U sledećem posebno poželjnom primeru izvođenja, b1 formule (b) je 2, b2 formule (b) je 3, a b3 i b4 su oba oko 225.

[1039] U jednom primeru izvođenja, -Z sadrži jedan ostatak formule (b).

[1040] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (b).

[1041] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži tri ostatka formule (b).

[1042] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži četiri ostatka formule (b).

[1043] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži pet ostataka formule (b).

[1044] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži šest ostataka formule (b).

[1045] U poželjnom primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (b).

[1046] U još poželjnijem obliku, -Z sadrži ostatak formule (c)

[1049]

[1051] pri čemu

[1052] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>- ili sa ostatkom -Z;

[1053] c1 i c2 su nezavisno ceo broj u rasponu od i uključujući 150 do 500;

[1054] poželjno u rasponu od i uključujući 200 do 460.

[1056] Opciono, ostatak formule (c) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1057] Poželjno, i c1 i c2 formule (c) su isti ceo broj.

[1058] U jednom poželjnom primeru izvođenja, c1 i c2 formule (c) su u rasponu i uključuju 200 do 250, a najpoželjnije su oko 225. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, c1 i c2 formule (c) su u rasponu i uključuju 400 do 500, a najpoželjnije su oko 450.

[1059] U poželjnom primeru izvođenja, ostatak -Z je razgranati polimer na bazi PEG koji sadrži najmanje 10% PEG, ima jednu tačku grananja i dve polimerne grane na bazi PEG i ima molekulsku težinu od oko 40 kDa. Shodno tome, svaka od dve polimerne grane na bazi PEG ima molekulsku težinu od oko 20 kDa. Poželjno, tačka grananja je -CH<.

[1060] U jednom primeru izvođenja, -Z sadrži jedan ostatak formule (c).

[1061] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (c).

[1062] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži tri ostatka formule (c).

[1063] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži četiri ostatka formule (c).

[1064] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži pet ostataka formule (c).

[1065] U sledećem primeru izvođenja, -Z sadrži šest ostataka formule (c).

[1066] U poželjnom primeru izvođenja, -Z sadrži dva ostatka formule (c).

[1067] U još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -Z formule (Ia) je formule (e)

[1070]

[1072] pri čemu

[1073] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1074] e je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15; i

[1075] -Z<a>je

[1078]

[1081] pri čemu

[1082] b1, b2, b3 i b4 se koriste kao što su definisani za formulu (b).

[1084] Opciono, ostatak formule (e) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1085] Poželjni primeri izvođenja za b1, b2, b3 i b4 formule (e) su kao što su gore definisani za formulu (b).

[1086] U jednom primeru izvođenja, e formule (e) je 1. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 2. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 3. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 4. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 5. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 6. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 7. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 8. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 9. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 10. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 11. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 12. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 13. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 14. U sledećem primeru izvođenja, e formule (e) je 15.

[1087] Poželjno, e formule (e) je 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ili 9. Još poželjnije, e formule (e) je 3, 4, 5 ili 6. Najpoželjnije, e formule (e) je 5.

[1088] Poželjno, e formule (e) je 5, b1 formule (e) je 2, b2 formule (e) je 3, a b3 i b4 formule (e) su oba oko 450.

[1089] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, ostatak -Z formule (Ia) je formule (e-i) ili (e-i'):

[1092]

[1094] pri čemu

[1095] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-,

[1096] e je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15;

[1097] -Z<a>je

[1100]

[1103] pri čemu

[1104] b1, b2, b3 i b4 se koriste kao što su definisani za formulu (b).

[1106] Poželjni primeri izvođenja za b1, b2, b3 i b4 formula (e-i) i (e-i') su kao što su gore definisani za formulu (b).

[1107] Poželjni primeri izvođenja za e formule (e-i) i (e-i') su kao što su opisani za formulu (e).

[1108] Poželjno, b1 formule (e-i) i (e-i') je 2, b2 formule (e-i) i (e-i') je 3, a b3 i b4 formule (ei) i (e-i') su oba oko 450.

[1109] U poželjnom primeru izvođenja -Z formule (Ia) je formule (e-i).

[1110] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, ostatak -Z je razgranati polimer na bazi PEG koji sadrži najmanje 10% PEG, ima tri tačke grananja i četiri polimerne grane na bazi PEG i ima molekulsku težinu od oko 40 kDa. Shodno tome, svaka od četiri polimerne grane na bazi PEG ima molekulsku težinu od oko 10 kDa. Poželjno, svaka od tri tačke grananja je -CH<.

[1111] Ostatak -Z je formule (f)

[1112]

[1114] pri čemu

[1115] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1116] BP<f>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

[1117] -R je -H ili C<1-6>alkil;

[1118] f je 0 ako je BP<f>jednako -N< ili -CR< i f je 1 ako je BP<f>jednako >C<;

[1119] -S<f>-, -S<f>-, -S<f">- i -S<j‴>- su nezavisno ili hemijska veza ili su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[1120] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[1121] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

[1122] -Z<a'>, -Z<a">i -Z<a‴>su nezavisno

[1123] pri čemu

[1124] BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">, -P<a‴>i a se koriste kao što su definisani za formulu (a).

[1126] Opciono, ostatak formule (f) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1127] Poželjni primeri izvođenja BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (f) su kao što su gore definisani za formulu (a).

[1128] Poželjno BP<f>formule (f) je -CR< i r je 0. Poželjno -R je -H.

[1129] Poželjno -S<f>- formule (f) je hemijska veza.

[1130] Poželjno, -Z<a'>, -Z<a">i -Z<a‴>formule (f) imaju istu strukturu. Poželjno, -Z<a'>, -Z<a">i -Z<a‴>formule (f) su formule (b).

[1131] Poželjni primeri izvođenja b1, b2, b3 i b4 su onakvi kakvi su opisani za formulu (b).

[1132] Poželjno -S<f>- formule (f) je hemijska veza, BP<a>formule (f) je -CR< pri čemu je -R isti kao -H. Još poželjnije, -S<f>- formule (f) je hemijska veza, BP<a>formule (f) je -CR< pri čemu -R je -H i -Z<a'>, -Z<a">i -Z<a‴>formule (f) su formule (b).

[1133] Još poželjnije, -Z je formule (g)

[1136]

[1138] pri čemu

[1139] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1140] -S<g>-, -S<g>- i -S<g">- su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2->

[1141] <50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[1142] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[1143] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

[1144] -Z<a>i -Z<a'>su nezavisno

[1147]

[1149] pri čemu

[1150] BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">, -P<a‴>i a se koriste kao što su definisani za formulu (a).

[1152] Opciono, ostatak formule (g) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1153] Poželjni primeri izvođenja BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (g) su kao što su gore definisani za formulu (a).

[1154] Poželjno, -S<g>- formule (g) je C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil, koji su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, što je isto ili različito,

[1155] pri čemu

[1156] -R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

[1157] -R<3>, -R<3a>i -R<3b>su nezavisno izabrani od -H, metila, etila, propila i butila.

[1159] Još poželjnije, -S<g>- formule (g) je C<1-6>alkil.

[1160] Poželjno, -S<g>- formule (g) je C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil, koji su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji je isti ili različit,

[1161] pri čemu

[1162] -R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

[1163] -R<3>, -R<3a>i -R<3b>su nezavisno izabrani od -H, metila, etila, propila i butila.

[1165] Još poželjnije, -S<g>- formule (g) je C<1-6>alkil.

[1166] Poželjno, -S<g">- formule (g) je C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil, koji su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti,

[1167] pri čemu

[1168] -R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan sa jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

[1169] -R<3>, -R<3a>i -R<3b>su nezavisno izabrani od -H, metila, etila, propila i butila.

[1171] Još poželjnije -S<g">- formule (g) je C<1-6>alkil.

[1172] Poželjno, -Z<a>i -Z<a'>formule (g) imaju istu strukturu. Poželjno -Z<a>i -Z<a'>formule (g) su formule (b).

[1173] U alternativnom, još poželjnijem primeru izvođenja, -Z formule (Ia) ili (Ib) je formule (g-i)

[1176]

[1178] pri čemu

[1179] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-; -S<g>-, -S<g>- i -S<g">- su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

[1180] svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

[1181] svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila; pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu C<1-6>alkil je opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; -Y<a1>- i -Y<a1>- su

[1184]

[1187] i

[1188] -Z<a>i -Z<a'>su nezavisno

[1191]

[1193] pri čemu

[1194] BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">, -P<a‴>i a se koriste kao što su definisani za formulu (a).

[1196] Opciono, ostatak formule (g-i) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1197] Poželjno, -Y<a1>- i -Y<a1>- formule (g-i) su oba

[1198]

[1201] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom vezana sa -Z<a>ili -z<a'>, respektivno.

[1202] Poželjni primeri izvođenja BP<a>, -S<a>-, -S<a'>-, -S<a">-, -S<a‴>-, -P<a'>, -P<a">i -P<a‴>formule (g-i) su kao što su gore definisani za formulu (a).

[1203] Poželjni primeri izvođenja -S<g>-, -S<g>- i -S<g">- formule (g-i) su kao što su definisani za formulu (g).

[1204] Poželjno, -Z<a>i -Z<a'>formule (g-i) imaju istu strukturu. Poželjno, -Z<a>i -Z<a'>formule (g-i) su formule (b). Poželjni primeri izvođenja za b1, b2, b3 i b4 su kao što su opisani za formulu (b).

[1205] Još poželjnije, -Z je formule (h)

[1208]

[1210] pri čemu

[1211] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-; i

[1212] svaki -Z<c>je ostatak

[1215]

[1218] pri čemu

[1219] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od oko 200 do 250.

[1221] Opciono, ostatak formule (h) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1222] Poželjno, c1 u formuli (h) su isti.

[1223] Poželjno, c1 u formuli (h) su oko 225.

[1224] Još poželjnije, -Z formule (Ia) je formule (h-a)

[1227]

[1229] pri čemu

[1230] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1231] svako k je međusobno nezavisno izabrano iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 i 12;

[1232] -Y<a1>- i -Y<a1>- su

[1235]

[1238] i

[1239] svaki -Z<c>je ostatak

[1242]

[1245] pri čemu

[1246] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od oko 200 do 250.

[1248] Opciono, ostatak formule (h-a) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1249] Poželjno, svaki k formule (h-a) je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5, 6 i 7. Poželjno, oba k formule (h-a) su identična.

[1250] Poželjno, oba c1 u formuli (h-a) su ista.

[1251] Poželjno, oba c1 u formuli (h-a) su oko 225.

[1252] Poželjno, -Y<a1>- i -Y<a1>- formule (h-a) su oba

[1255]

[1258] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom povezana sa -Z<c>.

[1259] U još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -Z je formule (h-i)

[1260]

[1262] pri čemu

[1263] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-; i

[1264] svaki -Z<c>je ostatak

[1267]

[1270] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1272] Opciono, ostatak formule (h-i) je supstituisan jednim ili više supstituenata.

[1273] Poželjno oba c1 u formuli (h-i) su ista.

[1274] Poželjno oba c1 u formuli (h-i) su oko 225.

[1275] U alternativnom, još poželjnijem primeru izvođenja, ostatak -Z formule (Ia) je formule (h-ia)

[1278]

[1280] pri čemu

[1281] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1282] svako k je međusobno nezavisno izabrano iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 i 12;

[1283] -Y<a1>- i -Y<a1>- su

[1284]

[1287] svaki -Z<c>je ostatak

[1290]

[1293] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1294] Poželjno svaki k formule (h-ia) je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5, 6 i 7. Poželjno, oba k formule (h-ia) su identična.

[1295] Poželjno, oba c1 u formuli (h-ia) su ista.

[1296] Poželjno, oba c1 u formuli (h-ia) su oko 225.

[1297] Poželjno, -Y<a1>- i -Y<a1>- formule (h-ia) su oba

[1300]

[1303] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom povezana sa -Z<c>.

[1304] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -Z formule (Ia) sadrži ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od

[1305]

[1306]

[1307]

[1310] pri čemu

[1311] isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

[1312] s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8, s9, s10, s11, s12, s13, s14 i s15 su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 i 10;

[1313] -X<d1>, -X<d2>, -X<d3>i -X<d4>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -OH, -SH i -NR<g1>R<g2>; poželjno -OH;

[1314] -X<e1>, -X<e2>, -X<e3>i -X<e4>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila;

[1315] -R<g1>i -R<g2>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila;

[1316] -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>, -X<f10>, -X<11>, -X<f12>, -X<f13>i -X<f14>su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila i C<2-6>alkinila; poželjno -H;

[1317] -Y<d1>-, -Y<d2>-, -Y<d3>- i -Y<d4>- su međusobno nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od

[1320]

[1322] i

[1323] i

[1324] -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>su međusobno nezavisno protein, poželjnije protein sa slučajnim namotajem, a najpoželjnije protein sa slučajnim namotajem izabran iz grupe koja se sastoji od PA, PAS, PAG, PG i XTEN.

[1325] U jednom poželjnom primeru izvođenja, -Y<d1>- i -Y<d2>- formula (j-iv), (j-v) i (j-vi) i -Y<d1>-, -Y<d2>-, -Y<d3>- i -Y<d4>- formule (j-vii) su

[1328]

[1331] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, -Y<d1>- i -Y<d2>- formula (j-iv), (j-v) i (j-vi) i -Y<d1>-, -Y<d2>-, -Y<d3>- i -Y<d4>- formule (j-vii) su

[1334]

[1337] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom orijentisana ka -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>, respektivno, a neoznačena isprekidana linija je orijentisana ka -L<2>-.

[1338] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>i -X<f8>formule (j-i) su -H; -X<d1>i -X<d2>formule (j-i) su -OH; -X<e1>i -X<e2>formule (j-i) su izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i metila; i s1, s2, s3 i s4 formule (j-i) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5 i 6. Još poželjnije -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>i -X<f8>formule (j-i) su -H; -X<d1>i -X<d2>formule (j-i) su -OH; -X<e1>i -X<e2>formule (j-i) su -H; i s1, s2, s3 i s4 formule (j-i) su 4.

[1339] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>i -X<f4>formule (j-ii) su -H; -X<d1>, -X<d2>, -X<d3>i -X<d2>formule (j-ii) su -OH; -X<e1>, -X<e2>, -X<e3>i -X<e4>formule (j-ii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i metila; s1, s2, s3, s4 i s5 formule (j-ii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5 i 6. Još poželjnije -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>i -X<f4>formule (j-ii) su -H; -X<d1>, -X<d2>, -X<d3>i -X<d2>formule (j-ii) su -OH; -X<e1>, -X<e2>, -X<e3>i -X<e4>formule (j-ii) su -H; s1 je 4 formule (j-ii) i s2, s3, s4 i s5 formule (jii) su 1.

[1340] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>i -X<f10>formule (j-iii) su -H; -X<d1>, -X<d2>, -X<d3>i -X<d4>formule (j-iii) su -OH; -X<e1>, -X<e2>, -X<e3>i -X<e4>formule (j-iii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i metila; i s1, s2 i s3 formule (j-iii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5 i 6. Još poželjnije -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>i -X<f10>formule (jiii) su -H; -X<d1>, -X<d2>, -X<d3>i -X<d4>formule (j-iii) su -OH; -X<e1>, -X<e2>, -X<e3>i -X<e4>formule (j-iii) su -H; a s1, s2 i s3 formule (j-iii) su 4.

[1341] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>i -X<f6>formule (j-iv) su -H; s1, s2, s3, s4, s5, s6 i s7 formule (j-iv) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7; -Y<d1>- i -Y<d2>- su izabrani iz grupe koja se sastoji od

[1342]

[1344] U još poželjnijem primeru izvođenja, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>i -X<f6>formule (j-iv) su -H; s1 formule (j-iv) je 3, s2 formule (j-iv) je 5, s3 formule (j-iv) je 2, s4 formule (j-iv) je 4, s5 formule (j-iv) je 5, s6 formule (j-iv) je 2 i s7 formule (j-iv) je 4; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-iv) su

[1347]

[1350] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>i -X<f6>formule (j-iv) su -H; s1 formule (j-iv) je 3, s2 formule (j-iv) je 5, s3 formule (j-iv) je 2, s4 formule (j-iv) je 4, s5 formule (j-iv) je 5, s6 formule (j-iv) je 2 i s7 formule (j-iv) je 4; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-iv) su

[1353]

[1356] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom orijentisana ka -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>, respektivno, a neoznačena isprekidana linija je orijentisana ka -L<2>-.

[1357] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, i -X<f4>formule (j-v) su -H; s1, s2, s3, s4 i s5 formule (j-v) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7; -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-v) su izabrani iz grupe koja se sastoji od

[1360]

[1362] U još poželjnijem primeru izvođenja, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>i -X<f4>formule (j-v) su -H; s1 formule (jv) je 3, s2 formule (j-v) je 2, s3 formule (j-v) je 1, s4 formule (j-v) je 2 i s5 formule (j-v) je 1; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-v) su

[1363] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>i -X<f4>formule (j-v) su -H; s1 formule (j-v) je 3, s2 formule (j-v) je 2, s3 formule (j-v) je 1, s4 formule (j-v) je 2 i s5 formule (j-v) je 1; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-v) su

[1366]

[1369] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom orijentisana ka -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>, respektivno, a neoznačena isprekidana linija je orijentisana ka -L<2>-.

[1370] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>-X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>i -X<f10>formule (j-vi) su -H; s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8 i s9 formule (j-vi) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7; -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-vi) su izabrani iz grupe koja se sastoji od

[1373]

[1375] U još poželjnijem primeru izvođenja -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>i -X<f10>formule (j-vi) su -H; s1 formule (j-vi) je 4, s2 formule (j-vi) je 5, s3 formule (j-vi) je 2, s4 formule (j-vi) je 4, s5 formule (j-vi) je 4, s6 formule (j-vi) je 5, s7 formule (j-vi) je 2, s8 formule (j-vi) je 4 i s9 formule (j-vi) je 4; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-v) su

[1378]

[1381] U podjednako poželjnom primeru izvođenja -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>i -X<f10>formule (j-vi) su -H; s1 formule (j-vi) je 4, s2 formule (j-vi) je 5, s3 formule (j-vi) je 2, s4 formule (j-vi) je 4, s5 formule (j-vi) je 4, s6 formule (j-vi) je 5, s7 formule (j-vi) je 2, s8 formule (j-vi) je 4 i s9 formule (j-vi) je 4; i -Y<d1>- i -Y<d2>- formule (j-v) su

[1384]

[1387] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom orijentisana ka -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>, respektivno, a neoznačena isprekidana linija je orijentisana ka -L<2>-.

[1388] [0393] Poželjno, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>, -X<f10>, -X<f11>, -X<f12>, -X<f13>i -X<f14>formule (j-vii) su -H; s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8, s9, s10, s11, s12, s13, s14 i s15 formule (j vii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7; -Y<d1>-, -Y<d2>- -Y<d3>- i -Y<d4>- formule (j-vii) su izabrani iz grupe koja se sastoji od

[1391]

[1393] U još poželjnijem primeru izvođenja -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>, -X<f10>, -X<f11>, -X<f12>, -X<f13>i -X<f14>formule (j-vii) su -H; su -H; s1 formule (j-vii) je 4, s2 formule (j-vii) je 4, s3 formule (j-vii) je 5, s4 formule (j-vii) je 2, s5 formule (j-vii) je 4, s6 formule (j-vii) je 5, s7 formule (j-vii) je 2, s8 formule (j-vii) je 4, s9 formule (j-vii) je 4, s10 formule (j-vii) je 5, s11 formule (j-vii) je 2, s12 formule (j-vii) je 4, s13 formule (j-vii) je 5, s14 formule (j-vii) je 2 i s15 formule (j-vii) je 4; i -Y<d1>-, -Y<d2>-, -Y<d3>- i -Y<d4>- formule (j-vii) su

[1396]

[1399] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, -X<f1>, -X<f2>, -X<f3>, -X<f4>, -X<f5>, -X<f6>, -X<f7>, -X<f8>, -X<f9>, -X<f10>, -X<f11>-X<f12>, -X<f13>i -X<f14>formule (j-vii) su -H; su -H; s1 formule (j-vii) je 4, s2 formule (jvii) je 4, s3 formule (j-vii) je 5, s4 formule (j-vii) je 2, s5 formule (j-vii) je 4, s6 formule (j-vii) je 5, s7 formule (j-vii) je 2, s8 formule (j-vii) je 4, s9 formule (j-vii) je 4, s10 formule (j-vii) je 5, s11 formule (j-vii) je 2, s12 formule (j-vii) je 4, s13 formule (j-vii) je 5, s14 formule (j-vii) je 2 i s15 formule (j-vii) j

formule (j-vii) su

[1401] pri čemu je isprekidana linija označena zvezdicom orijentisana ka -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>, respektivno, a neoznačena isprekidana linija je orijentisana ka -L<2>-.

[1402] Poželjno -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formule (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) i (j-vii) imaju istu strukturu.

[1403] U jednom primeru izvođenja -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formule (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) i (j-vii) su PA ostatak.

[1404] U sledećem primeru izvođenja -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formule (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (jv), (j-vi) i (j-vii) su PAS ostatak.

[1405] U sledećem primeru izvođenja -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formula (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (jv), (j-vi) i (j-vii) su PAG ostatak.

[1406] U sledećem primeru izvođenja -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formula (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (jv), (j-vi) i (j-vii) su PG ostatak.

[1407] U sledećem primeru izvođenja -Z<d1>, -Z<d2>, -Z<d3>i -Z<d4>formula (j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (jv), (j-vi) i (j-vii) su XTEN ostatak.

[1408] U poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIe)

[1411]

[1413] pri čemu

[1414] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1415] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1418]

[1421] pri čemu

[1422] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1424] Poželjno c1 formule (IIe) je oko 450.

[1425] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIe-i)

[1426]

[1428] pri čemu

[1429] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1430] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1433]

[1436] pri čemu

[1437] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1439] Poželjno c1 formule (IIe-i) je oko 450.

[1440] U sledećem podjednako poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIe-ii)

[1441]

[1443] pri čemu

[1444] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1445] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1448]

[1451] pri čemu

[1452] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1454] Poželjno c1 formule (IIe-ii) je oko 450.

[1455] Poželjno -D formule (Iie), (Iie-i) i (Iie-ii) je CNP ostatak, tj. prolek formule (Iie), (Iie-i) i (Iie-ii) je CNP prolek. Još poželjnije -D formule (Iie), (Iie-i) i (Iie-ii) je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ili SEQ ID NO:30. Najpoželjnije -D formule (Iie), (Iie-i) i (Iie-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24. Takođe poželjno D formule ((Iie), (Iie-i) i (Iie-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:20. -D formule ((IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:21. -D formule ((IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:22. D formule ((IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:23. D formule ((IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:30.

[1456] U jednom primeru izvođenja -D formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak koji je vezan sa -L<1>- preko azota N-terminalne aminske funkcionalne grupe CNP.

[1457] U poželjnom primeru izvođenja -D formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) je CNP ostatak koji je vezan sa -L<1>- preko azota koji obezbeđuje aminska funkcionalna grupa lizinskog bočnog lanca CNP ostatka.

[1458] U jednom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac nije deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1459] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je povezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 9, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1460] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 11, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1461] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 15, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1462] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 16, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1463] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 20, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1464] U poželjnom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac je deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1465] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIe), (IIe-i) i (IIe-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1466] Razume se da položaji gore pomenutih cisteina i lizina variraju u zavisnosti od dužine CNP ostatka i da stručnjak u ovoj oblasti neće imati poteškoća da identifikuje odgovarajuće cisteine i lizine u dužim ili kraćim verzijama CNP ostatka, a takođe razume da, na primer, neki lizini možda nisu prisutni u kraćim CNP ostacima. Dalje se razume da kao rezultat, na primer, usmerene mutageneze na mesto može biti više lizinskih ostataka u delu CNP ostatka koji ne formira prsten i/ili delu koji formira prsten.

[1467] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1468] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1469] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1470] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>-preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1471] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1472] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1473] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1474] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1475] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1476] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1477] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1478] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1479] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1480] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1481] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1482] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIe), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1483] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIei), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1484] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1485] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIf)

[1488]

[1490] pri čemu

[1491] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1492] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koji ima strukturu

[1493]

[1496] pri čemu

[1497] svaki

[1499] pri čemu

[1500] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1502] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf) je oko 225.

[1503] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIf-i)

[1506]

[1508] pri čemu

[1509] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1510] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koji ima strukturu

[1511]

[1514] pri čemu

[1515] svaki

[1517] pri čemu

[1518] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1520] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf-i) je oko 225.

[1521] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIf-ii)

[1524]

[1526] pri čemu

[1527] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D, koji je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, formiranjem amidne veze; i

[1528] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koji ima strukturu

[1529]

[1532] pri čemu

[1533] svaki

[1535] pri čemu

[1536] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1538] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf-ii) je oko 225.

[1539] Poželjno -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, tj. prolek formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP prolek. Još poželjnije -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ili SEQ ID NO:30. Najpoželjnije -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24. Takođe poželjno -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:20. -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:21. -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:22. -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:23. -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:30.

[1540] U jednom primeru izvođenja, -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak koji je vezan sa -L<1>- preko azota N-terminalne aminske funkcionalne grupe CNP.

[1541] U poželjnom primeru izvođenja, -D formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) je CNP ostatak koji je vezan sa -L<1>- preko azota koji obezbeđuje aminska funkcionalna grupa lizinskog bočnog lanca CNP ostatka.

[1542] U jednom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac nije deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1543] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 9, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1544] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 11, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1545] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 15, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1546] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 16, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1547] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf), (IIf-i) i (IIf-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 20, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1548] U poželjnom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac je deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1549] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIf) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1550] Razume se da položaji gore pomenutih cisteina i lizina variraju u zavisnosti od dužine CNP ostatka i da stručnjak u ovoj oblasti neće imati poteškoća da identifikuje odgovarajuće cisteine i lizine u dužim ili kraćim verzijama CNP ostatka, a takođe razume da, na primer, neki lizini možda nisu prisutni u kraćim CNP ostacima. Dalje se razume da kao rezultat, na primer, usmerene mutageneze na mesto može biti više lizinskih ostataka u delu CNP ostatka koji ne formira prsten i/ili delu koji formira prsten.

[1551] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1552] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1553] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1554] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1555] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1556] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1557] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1558] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1559] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1560] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1561] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1562] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1563] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1564] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1565] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1566] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf), pri čemu c1 je oko 225, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1567] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfi), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1568] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii), pri čemu c1 je oko 225, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1569] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIf')

[1572]

[1574] pri čemu

[1575] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1576]

[1579] pri čemu

[1580] svaki Z<a>je

[1583]

[1585] pri čemu

[1586] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1588] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf') je oko 225.

[1589] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, prolek CNP ovog pronalaska je formule (IIfi')

[1592]

[1594] pri čemu

[1595] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1596]

[1599] pri čemu

[1600] svaki Z<a>je

[1603]

[1605] pri čemu

[1606] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1608] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf-i') je oko 225.

[1609] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfii')

[1612]

[1614] pri čemu

[1615] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1616]

[1619] pri čemu

[1620] svaki Z<a>je

[1623]

[1625] pri čemu

[1626] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1628] Poželjno svaki c1 u formuli (IIf-ii') je oko 225.

[1629] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIea)

[1632]

[1634] pri čemu

[1635] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem amidne veze;

[1636] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1637] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1638]

[1641] pri čemu

[1642] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1644] Poželjno, c1 formule (IIea) je oko 450.

[1645] Poželjno, k u formuli (IIea) je izabran iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5, 6 i 7.

[1646] U podjednako poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIea-i)

[1649]

[1651] pri čemu

[1652] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem amidne veze;

[1653] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1654] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1657]

[1660] pri čemu

[1661] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1663] Poželjno k u formuli (IIea-i) je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1664] Poželjno c1 formule (IIea-i) je oko 450.

[1665] U sledećem podjednako poželjnom primeru izvođenja, prolek agonista CNP ovog pronalaska je formule (IIea-ii)

[1666]

[1668] pri čemu

[1669] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je ostatak agonista CNP formiranjem amidne veze;

[1670] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1671] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1674]

[1677] pri čemu

[1678] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1680] Poželjno, k u formuli (IIea-ii) je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1681] Poželjno, c1 formule (IIea-ii) je oko 450.

[1682] Poželjno, -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96, tj. prolek formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP prolek. Još poželjnije -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ili SEQ ID NO:30. Najpoželjnije -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24. Takođe poželjno -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIeaii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:20. Takođe poželjno -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:21. Takođe poželjno -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:22. Takođe poželjno -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:23. Takođe poželjno -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak CNP koji ima sekvencu SEQ ID NO:30.

[1683] U poželjnom primeru izvođenja, -D formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) je CNP ostatak koji je vezan sa -L<1>- preko azota koji obezbeđuje aminska funkcionalna grupa lizinskog bočnog lanca CNP ostatka.

[1684] U jednom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac nije deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1685] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 9, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1686] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 11, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1687] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 15, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1688] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 16, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1689] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 20, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1690] U poželjnom primeru izvođenja, navedeni lizinski bočni lanac je deo prstena formiranog disulfidnim mostom između cisteinskih ostataka na pozicijama 22 i 38, ako je CNP ostatak SEQ ID NO:24.

[1691] Shodno tome, u jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIea), (IIea-i) i (IIea-ii) preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26, ako CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1692] Razume se da položaji gore pomenutih cisteina i lizina variraju u zavisnosti od dužine CNP ostatka i da stručnjak u ovoj oblasti neće imati poteškoća da identifikuje odgovarajuće cisteine i lizine u dužim ili kraćim verzijama CNP ostatka, a takođe razume da, na primer, neki lizini možda nisu prisutni u kraćim CNP ostacima. Dalje se razume da kao rezultat, na primer, usmerene mutageneze na mesto može biti više lizinskih ostataka u delu CNP ostatka koji ne formira prsten i/ili delu koji formira prsten.

[1693] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1694] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1695] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:24 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26.

[1696] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1697] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1698] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:20 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 30.

[1699] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1700] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1701] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:21 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 29.

[1702] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1703] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1704] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:22 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 28.

[1705] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1706] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1707] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:23 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1708] U poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea), pri čemu c1 je oko 450, -D je CNP ostatak koji ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1709] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1710] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii), pri čemu c1 je oko 450, CNP ostatak ima sekvencu SEQ ID NO:30 i vezan je sa -L<1>- preko aminske funkcionalne grupe koju obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 27.

[1711] Shodno tome, u poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIea')

[1714]

[1716] pri čemu

[1717] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze;

[1718] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1719] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1720] pri čemu

[1721] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1723] Poželjno, k u formuli (IIea') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1724] Poželjno, svaki c1 formule (IIea') je oko 450.

[1725] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeai')

[1728]

[1730] pri čemu

[1731] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze;

[1732] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1733] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1736]

[1738] pri čemu

[1739] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1741] Poželjno, k u formuli (IIea-i') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1742] Poželjno, svaki c1 formule (IIea-i') je oko 450.

[1743] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIeaii')

[1744] pri čemu

[1745] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze;

[1746] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12; i

[1747] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa ostatkom

[1750]

[1752] pri čemu

[1753] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 400 do 500.

[1755] Poželjno, k u formuli (IIea-ii') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1756] Poželjno, svaki c1 formule (IIea-ii') je oko 450.

[1757] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfa)

[1760]

[1762] pri čemu

[1763] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je CNP ostatak formiranjem amidne veze; i

[1764] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1767]

[1770] pri čemu

[1771] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1772] svaki

[1773] pri čemu

[1774] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1776] Poželjno, k u formuli (IIfa) je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1777] Poželjno, svaki c1 u formuli (IIfa) je oko 225.

[1778] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfai)

[1781]

[1783] pri čemu

[1784] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je CNP ostatak formiranjem amidne veze; i

[1785] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1788]

[1791] pri čemu

[1792] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1793] svaki

[1795] pri čemu

[1796] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1798] Poželjno, k u formuli (IIfa-i) je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1799] Poželjno, svaki c1 formule (IIfa-i) je oko 225.

[1800] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfaii)

[1801]

[1803] pri čemu

[1804] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom -D koji je CNP ostatak formiranjem amidne veze; i

[1805] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1808]

[1811] pri čemu

[1812] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1813] svaki

[1815] pri čemu

[1816] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1818] Poželjno svaki c1 u formuli (IIfa-ii) je oko 225.

[1819] U jednom primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:25.

[1820] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:30.

[1821] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:20.

[1822] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:21.

[1823] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:22.

[1824] U sledećem primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:23.

[1825] U poželjnom primeru izvođenja, CNP ostatak CNP proleka formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfaii) ima sekvencu SEQ ID NO:24.

[1826] U jednom primeru izvođenja, CNP ostatak je vezan sa -L<1>- u CNP proleku formule (IIfa), (IIfa-i) i (IIfa-ii) preko azota N-terminalne aminske funkcionalne grupe CNP.

[1827] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, prolek CNP ovog pronalaska je formule (IIf a')

[1830]

[1832] pri čemu

[1833] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i

[1834] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1837]

[1840] pri čemu

[1841] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1842] svaki Z<a>je

[1845]

[1847] pri čemu

[1848] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1850] Poželjno k u formuli (IIfa') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1851] Poželjno svaki c1 formule (IIfa') je oko 225.

[1852] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfai')

[1855]

[1857] pri čemu

[1858] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji obezbeđuje bočni lanac lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i

[1859] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koja ima strukturu

[1862]

[1865] pri čemu

[1866] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1867] svaki Z<a>je

[1870]

[1872] pri čemu

[1873] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1875] Poželjno, k u formuli (IIfa-i') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1876] Poželjno, svaki c1 formule (IIfa-i') je oko 225.

[1877] U sledećem poželjnom primeru izvođenja, CNP prolek ovog pronalaska je formule (IIfaii')

[1880]

[1882] pri čemu

[1883] neobeležena isprekidana linija označava vezu sa azotom koji je obezbeđen bočnim lancem lizina na poziciji 26 CNP ostatka SEQ ID NO:24 formiranjem amidne veze; i

[1884] isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -Z koji ima strukturu

[1887]

[1890] pri čemu

[1891] k je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12;

[1892] svaki Z<a>je

[1895]

[1897] pri čemu

[1898] svaki c1 je ceo broj nezavisno u rasponu od 200 do 250.

[1900] Poželjno k u formuli (IIfa-ii') je 2, 3, 4, 5, 6 ili 7.

[1901] Poželjno svaki c1 u formuli (IIfa-ii') je oko 225.

[1902] U dodatnom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži najmanje jedan agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem ovog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek.

[1903] Najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek može biti u svom slobodnom obliku (tj. u obliku slobodnog leka), može biti u obliku stabilnog konjugata ili može biti u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem.

[1904] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek je lek u svom slobodnom obliku, tj. farmaceutska kompozicija ovog pronalaska sadrži najmanje jedan agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem i najmanje jedan dodatni lek.

[1905] Poželjno, najmanje jedan dodatni lek je izabran iz grupe koja se sastoji od antihistaminika, humanih anti-FGFR3 antitela, rastvorljivih oblika receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta, inhibitora tirozin kinaze, statina, agonista CNP, hormona rasta, IGF-1, ANP, BNP, inhibitora peptidaza i proteaza i inhibitora NPR-C.

[1906] Poželjni antihistaminik je meklozin.

[1907] Poželjni inhibitor tirozin kinaze je NVP-BGJ398.

[1908] Poželjni statin je rozuvastatin.

[1909] Poželjni agonist CNP za najmanje jedan dodatni lek je vosoritid.

[1910] Poželjni inhibitori peptidaza i proteaza su inhibitori NEP i furina.

[1911] Poželjni inhibitor za NEP je tiorfan ili kandoksatril.

[1912] Poželjni inhibitori NPR-C su fragment SEQ ID NO:98 (FGIPMDRIGRNPR) i antitelo B701.

[1913] Poželjni inhibitori tirozin kinaza su oni koji su opisani u U.S. patentima 6329375 i 6344459.

[1914] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je antihistaminik.

[1915] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je humano anti-FGFR3 antitelo.

[1916] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je rastvorljivi oblik receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3).

[1917] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je inhibitor tirozin kinaze.

[1918] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je statin.

[1919] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je hormon rasta.

[1920] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je agonist CNP.

[1921] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je IGF-1.

[1922] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je ANP.

[1923] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni je BNP.

[1924] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je inhibitor peptidaza i proteaza.

[1925] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni lek je inhibitor NPR-C.

[1926] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek je u obliku stabilnog konjugata.

[1927] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak kovalentno konjugovan preko stabilne veze sa polimernim ostatkom, poželjno sa polimernim ostatkom rastvorljivim u vodi, bilo direktno ili preko ostatka razmaknice.

[1928] [0576] Poželjno je da takav polimerni ostatak, još poželjnije polimerni ostatak rastvorljiv u vodi, sadrži polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietil-oksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina, poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečno-koglikolnih kiselina), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estara), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitosana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronskih kiselina i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[1929] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata je kovalentno konjugovan preko stabilne veze sa ostatkom koji vezuje albumin. Poželjno, navedeni ostatak koji vezuje albumin je C<8-24>alkil ostatak ili derivat masne kiseline. Poželjni derivati masnih kiselina su oni koji su opisani u WO 2005/027978 A2 i WO 2014/060512 A1.

[1930] Poželjno je da najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži biološki aktivni ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od antihistaminika, humanih anti-FGFR3 antitela, rastvorljivih oblika receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3), inhibitora tirozin kinaze, statina, agonista CNP, hormona rasta, IGF-1, ANP, BNP, inhibitora peptidaza i proteaza i inhibitora NPR-C.

[1931] Poželjni antihistaminik je meklozin.

[1932] Poželjni inhibitor tirozin kinaze je NVP-BGJ398.

[1933] Poželjni statin je rosuvastatin.

[1934] Poželjni agonist CNP za najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak je vosoritid.

[1935] Poželjni inhibitori peptidaza i proteaza su inhibitori NEP i furina.

[1936] Poželjni inhibitor za NEP je tiorfan ili kandoksatril.

[1937] Poželjni inhibitori NPR-C su fragment SEQ ID NO:98 (FGIPMDRIGRNPR) i antitelo B701.

[1938] Poželjni inhibitori tirozin kinaza su oni koji su opisani u U.S. patentima 6329375 i 6344459.

[1939] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži antihistaminski ostatak.

[1940] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak humanog anti-FGFR3 antitela.

[1941] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži rastvorljive oblike ostatka receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3).

[1942] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak inhibitora tirozin kinaze.

[1943] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži statinski ostatak.

[1944] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak hormona rasta.

[1945] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak agonista CNP.

[1946] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak IGF-1.

[1947] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak ANP.

[1948] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak BNP.

[1949] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak inhibitora peptidaza i proteaza.

[1950] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku stabilnog konjugata sadrži ostatak inhibitora NPR-C.

[1951] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek je u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem.

[1952] Poželjno je da najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak ili lek izabran iz grupe koja se sastoji od antihistaminika, humanih anti-FGFR3 antitela, rastvorljivih oblika receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta, statina, agonista CNP, hormona rasta, IGF-1, ANP, BNP, inhibitora peptidaza i proteaza, inhibitora tirozin kinaza i inhibitora NPR-C.

[1953] Poželjni antihistaminik je meklozin.

[1954] Poželjni inhibitor tirozin kinaze je NVP-BGJ398.

[1955] Poželjni statin je rosuvastatin.

[1956] Poželjni agonist CNP za najmanje jedan dodatni lek je vosoritid.

[1957] Poželjni inhibitori peptidaza i proteaza su inhibitori NEP i furina.

[1958] Poželjni inhibitor za NEP je tiorfan ili kandoksatril.

[1959] Poželjni inhibitori NPR-C su fragment SEQ ID NO:98 (FGIPMDRIGRNPR) i antitelo B701.

[1960] Poželjni inhibitori tirozin kinaza su oni koji su opisani u U.S. patentima 6329375 i 6344459.

[1961] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži antihistaminski ostatak ili lek.

[1962] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ostatak ili lek humanog anti-FGFR3 antitela.

[1963] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži rastvorljive oblike ostatka ili leka receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3).

[1964] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ostatak ili lek inhibitor tirozin kinaze.

[1965] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži statinski ostatak ili lek.

[1966] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ostatak ili lek hormona rasta.

[1967] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ostatak ili lek agonista CNP.

[1968] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži IGF-1 ostatak ili lek.

[1969] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ANP ostatak ili lek.

[1970] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži BNP ostatak ili lek.

[1971] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži ostatak ili lek inhibitora peptidaza i proteaza.

[1972] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja sadrži inhibitor NPR-C ostatka ili leka.

[1973] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem je nerastvorljiv u vodi.

[1974] Poželjno je da je takvo jedinjenje sa kontrolisanim oslobađanjem, nerastvorljivo u vodi, izabrano iz grupe koja se sastoji od kristala, nanočestica, mikročestica, nanosfera i mikrosfera.

[1975] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je kristal koji sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1976] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je nanočestica koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1977] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je mikročestica koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1978] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je nanosfera koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1979] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je mikrosfera koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1980] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je vezikula koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak. Poželjno je da takva vezikula koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak bude micela, lipozom ili polimerzom.

[1981] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je micela koja sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak.

[1982] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je lipozom koji sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak. Poželjno je da je takav lipozom izabran iz grupe koja se sastoji od akvazoma; nejonskih vezikula surfaktanta, kao što su niozomi i proniozomi; katjonskih lipozoma, kao što je LeciPlex; transferzoma; etozoma; ufazoma; sfingozoma; i farmakozoma.

[1983] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi je polimerzom najmanje jednog leka ili biološki aktivnog ostatka.

[1984] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak ili lek nekovalentno ugrađen u polimer nerastvorljiv u vodi. Poželjno je da takav polimer nerastvorljiv u vodi sadrži polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietil-oksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina), poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečnih-koglikolnih kiselina), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estara), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitozana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronskih kiselina i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[1985] U poželjnom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi sadrži najmanje jedan lek ili biološki aktivni ostatak nekovalentno ugrađen u poli(mlečnu-ko-glikolnu kiselinu) (PLGA).

[1986] [0634] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak kovalentno i reverzibilno konjugovan sa polimerom nerastvorljivim u vodi. Poželjno je da takav polimer nerastvorljiv u vodi sadrži polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietiloksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina), poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečnih-ko-glikolnih kiselina), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estara), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitozana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronskih kiselina i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[1987] Poželjno je da najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem nerastvorljivog u vodi sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak ili lek izabran iz grupe koja se sastoji od antihistaminika, humanih anti-FGFR3 antitela, rastvorljivih oblika receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta, inhibitora tirozin kinaze, statina, agonista CNP, hormona rasta, IGF-1, ANP, BNP, inhibitora peptidaza i proteaza i inhibitora NPR-C.

[1988] Poželjni antihistaminik je meklozin.

[1989] Poželjni inhibitor tirozin kinaze je NVP-BGJ398.

[1990] Poželjni statin je rosuvastatin.

[1991] Poželjni agonist CNP za najmanje jedan dodatni lek je vosoritid.

[1992] Poželjni inhibitori peptidaza i proteaza su inhibitori NEP i furina.

[1993] Poželjni inhibitor za NEP je tiorfan ili kandoksatril.

[1994] Poželjni inhibitori NPR-C su fragment SEQ ID NO:98 (FGIPMDRIGRNPR) i antitelo B701.

[1995] Poželjni inhibitori tirozin kinaza su oni koji su opisani u U.S. patentima 6329375 i 6344459.

[1996] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži antihistaminski ostatak ili lek.

[1997] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek humanog anti-FGFR3 antitela.

[1998] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži rastvorljive oblike ostatka ili leka receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3).

[1999] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek inhibitor tirozin kinaze.

[2000] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži statinski ostatak ili lek.

[2001] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek hormona rasta.

[2002] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek agonista CNP.

[2003] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži IGF-1 ostatak ili lek.

[2004] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ANP ostatak ili lek.

[2005] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži BNP ostatak ili lek.

[2006] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek koji je inhibitor peptidaza i proteaza.

[2007] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku kontrolisanog oslobađanja nerastvorljivog u vodi sadrži ostatak ili lek inhibitor NPR-C.

[2008] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem je rastvorljiv u vodi.

[2009] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem rastvorljivog u vodi sadrži najmanje jedan biološki aktivni ostatak kovalentno konjugovan preko reverzibilne veze sa polimernim ostatkom rastvorljivim u vodi, bilo direktno ili preko ostatka razmaknice.

[2010] [0658] Poželjno je da takav polimerni ostatak rastvorljiv u vodi sadrži polimer izabran iz grupe koja se sastoji od 2-metakriloil-oksietil fosfoil holina, poli(akrilnih kiselina), poli(akrilata), poli(akrilamida), poli(alkiloksi) polimera, poli(amida), poli(amidoamina), poli(aminokiselina), poli(anhidrida), poli(aspartamida), poli(buternih kiselina), poli(glikolnih kiselina), polibutilen tereftalata, poli(kaprolaktona), poli(karbonata), poli(cijanoakrilata), poli(dimetilakrilamida), poli(estara), poli(etilena), poli(etilenglikola), poli(etilen oksida), poli(etil fosfata), poli(etiloksazolina), poli(glikolnih kiselina), poli(hidroksietil akrilata), poli(hidroksietiloksazolina), poli(hidroksimetakrilata), poli(hidroksipropilmetakrilamida), poli(hidroksipropil metakrilata), poli(hidroksipropiloksazolina), poli(iminokarbonata), poli(mlečnih kiselina), poli(mlečnih-ko-glikolnih kiselina), poli(metakrilamida), poli(metakrilata), poli(metiloksazolina), poli(organofosfazena), poli(orto estara), poli(oksazolina), poli(propilen glikola), poli(siloksana), poli(uretana), poli(vinil alkohola), poli(vinil amina), poli(vinilmetiletara), poli(vinilpirolidona), silikona, celuloza, karbometil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hitina, hitozana, dekstrana, dekstrina, želatina, hijaluronskih kiselina i derivata, funkcionalizovanih hijaluronskih kiselina, manana, pektina, ramnogalakturonana, skrobova, hidroksialkil skrobova, hidroksietil skrobova i drugih polimera na bazi ugljenih hidrata, ksilana i njihovih kopolimera.

[2011] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku jedinjenja sa kontrolisanim oslobađanjem rastvorljivog u vodi je kovalentno konjugovan preko stabilne veze sa ostatkom koji vezuje albumin. Poželjno, navedeni ostatak koji vezuje albumin je C<8-24>alkil ostatak ili derivat masne kiseline. Poželjni derivati masnih kiselina su oni koji su opisani u WO 2005/027978 A2 i WO 2014/060512 A1.

[2012] Poželjno je da najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak u obliku sredstva rastvorljivog u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži biološki aktivni ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od antihistaminika, humanih anti-FGFR3 antitela, rastvorljivih oblika receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta, inhibitora tirozin kinaze, statina, agonista CNP, hormona rasta, IGF-1, ANP, BNP, inhibitora peptidaza i proteaza i inhibitora NPR-C.

[2013] Poželjni antihistaminik je meklozin.

[2014] Poželjni inhibitor tirozin kinaze je NVP-BGJ398.

[2015] Poželjni statin je rosuvastatin.

[2016] Poželjni agonist CNP za najmanje jedan dodatni lek je vosoritid.

[2017] Poželjni inhibitori peptidaza i proteaza su inhibitori NEP i furina.

[2018] Poželjni inhibitor za NEP je tiorfan ili kandoksatril.

[2019] Poželjni inhibitori NPR-C su fragment SEQ ID NO:98 (FGIPMDRIGRNPR) i antitelo B701.

[2020] Poželjni inhibitori tirozin kinaza su oni koji su opisani u U.S. patentima 6329375 i 6344459.

[2021] U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži antihistaminski ostatak ili lek.

[2022] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku antitela rastvorljivog u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ostatak ili lek humanog anti-FGFR3 antitela.

[2023] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži rastvorljive oblike ostatka ili leka receptora 3 humanog faktora rasta fibroblasta (sFGFR3).

[2024] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ostatak ili lek inhibitor tirozin kinaze.

[2025] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži statinski deo ili lek.

[2026] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku jedinjenja rastvorljivog u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ostatak ili lek hormona rasta. Poželjno jedinjenje hormona rasta sa kontrolisanim oslobađanjem rastvorljivo u vodi je jedinjenje 2 iz primera 2 WO2016/079114A1. Shodno tome, poželjno jedinjenje hormona rasta rastvorljivo u vodi sa kontrolisanim oslobađanjem ima sledeću strukturu

[2029]

[2032] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ostatak agonista CNP ili lek.

[2033] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži IGF-1 ostatak ili lek.

[2034] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ANP ostatak ili lek.

[2035] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži BNP ostatak ili lek.

[2036] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži ostatak ili lek inhibitor peptidaza i proteaza.

[2037] U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan dodatni biološki aktivni ostatak ili lek u obliku rastvorljivom u vodi, sa kontrolisanim oslobađanjem sadrži inhibitor NPR-C ostatka ili leka.

[2038] Sledeći aspekt ovog pronalaska je farmaceutska kompozicija ovog pronalaska za upotrebu kao lek.

[2039] Poželjno, navedeni lek se koristi u lečenju ahondroplazije, hipohondroplazije, niskog rasta, patuljastog rasta, osteohondrodisplazije, tanatoforne displazije, osteogeneze imperfekte, ahondrogeneze, tačkaste hondrodisplazije, homozigotne ahondroplazije, kamptomelične displazije, kongenitalne letalne hipofosfatazije, perinatalno letalnog tipa osteogeneze imperfekte, sindroma polidaktilije kratkih rebara, rizomelične vrste tačkaste hondrodisplazije, metafizne displazije Jansenovog tipa, spondiloepifizne displazije kongenite, atelosteogeneze, dijastrofične displazije, kongenitalnog kratkog femura, mezomelične displazije Langer-ovog tipa, mezomelične displazije Nievergelt-ovog tipa, Robinow-ljevog sindroma, Reinhardt-ovog sindroma, akrodizostoze, periferne dizostoze, Kniest-ove displazije, fibrohondrogeneze, Roberts-ovog sindroma, akromezomelične displazije, mikromelije, Morquio-ovog sindroma, Kniest-ovog sindroma, metatrofične displazije, spondiloepimetafizne displazije, neurofibromatoze. Legius-ovog sindroma, LEOPARD sindroma, Noonan-ovog sindroma, nasledne gingivalne fibromatoze, neurofibromatoze tipa 1, Legiusov-ovog sindroma, kardiofaciokutanog sindroma, Costello-ovog sindroma, deficijencije SHOX, idiopatskog niskog rasta, deficijencije hormona rasta, osteoartritisa, kleidokranijalne dizostoze, kraniosinostoze (npr. Muenke-ovog sindroma, Crouzon-ovog sindroma, Apert-ovog sindroma, Jackson-Weiss-ovog sindroma, Pfeiffer-ovog sindroma ili Crouzon-ovog dermoskeletnog sindroma), brahidaktilije, kamptodaktilije, polidaktilije, sindaktilije, disegmentalne displazije, enhondromatoze, fibrozne displazije, nasledne multiple egzostoze, hipofosfatemijskog rahitisa, Jaffe-Lichtenstein-ovog sindroma, Marfan-ovog sindroma, McCune-Albright-ovog sindroma, osteopetroze ili osteopoikiloze.

[2040] U sledećem primeru izvođenja, navedeni lek se koristi u lečenju oftalmološkog poremećaja, kao što je glaukom i/ili povišen intraokularni pritisak.

[2041] U sledećem primeru izvođenja, navedeni lek se koristi u lečenju kancerogene bolesti povezane sa prekomernom aktivacijom FGFR3, npr. multiplog mijeloma, mijeloproliferativnog sindroma, leukemije, leukemije plazma ćelija, limfoma, glioblastoma, kancera prostate, kancera bešike ili kancera dojke.

[2042] U sledećem primeru izvođenja, navedeni lek se koristi u lečenju poremećaja vaskularnih glatkih mišića, poželjno izabranog iz grupe koja se sastoji od hipertenzije, restenoze, arterioskleroze, akutne dekompenzovane srčane insuficijencije, kongestivne srčane insuficijencije, srčanog edema, nefredema, hepatičnog edema, akutne bubrežne insuficijencije i hronične bubrežne insuficijencije.

[2043] U sledećem primeru izvođenja, navedeni lek se koristi u lečenju hemoragičnog šoka.

[2044] Poželjno je da se navedeni lek koristi u lečenju fenotipa ahondroplazije izabranog iz grupe koja se sastoji od zaostajanja u rastu, deformacija lobanje, ortodontskih defekata, kompresije cervikalne kičme, spinalne stenoze, hidrocefalusa, gubitka sluha usled hroničnog otitisa, kardiovaskularnih bolesti, neuroloških bolesti i gojaznosti.

[2045] Najpoželjnije je da se navedeni lek koristi u lečenju ahondroplazije.

[2046] Još jedan aspekt ovog pronalaska je farmaceutska kompozicija ovog pronalaska za upotrebu u lečenju pacijenta koji pati od poremećaja koji ima koristi od stimulacije rasta.

[2047] Poželjno, pacijent je sisar, još poželjnije ljudski pacijent.

[2048] Poželjno, takvi poremećaji koji imaju koristi od stimulacije rasta su odabrani iz grupe koja sadrži ahondroplaziju, hipohondroplaziju, nizak rast, patuljasti rast, osteohondrodisplazije, tanatoforičnu displaziju, osteogenezu imperfektu, ahondrogenezu, tačkastu hondrodisplaziju, homozigotnu ahondroplaziju, kamptomeličnu displaziju, kongenitalnu letalnu hipofosfataziju, perinatalni letalni tip osteogeneze imperfekte, sindrome polidaktilije kratkih rebara, rizomeličan tip hondrodisplazije tačkaste, metafiznu displaziju Jansen-ovog tipa, spondiloepifiznu displaziju kongenitu, atelosteogenezu, dijastrofičnu displaziju, kongenitalni kratki femur, mezomeličnu displaziju Langer-ovog tipa, mezomeličnu displaziju Nievergeltovog tipa, Robinow-ljev sindrom, Reinhardt-ov sindrom, akrodizostozu, perifernu dizostozu, Kniest-ovu displaziju, fibrohondrogenezu, Roberts-ov sindrom, akromezomeličnu displaziju, mikromeliju, Morquio-ov sindrom, Kniest-ov sindrom, metatrofičnu displaziju i spondiloepimetafiznu displaziju. Najpoželjnije je da poremećaj koji ima koristi od stimulacije rasta bude ahondroplazija.

[2049] Ako je agonist CNP polipeptid, takav polipeptid se može pripremiti standardnim postupcima sinteze peptida u čvrstoj fazi, npr. Boc hemijom (R. B. Merifild, J. Am. Chem. Soc., 85(14): 2149-2154 (1963)). Alternativno, može se koristiti Fmoc (fluorenilmetoksikarbonil) hemija.

[2050] Postupci poznati u struci mogu se koristiti za poboljšanje čistoće i/ili prinosa, uključujući upotrebu pseudoprolina ili drugih dipeptidnih gradivnih blokova, spajanje fragmenata i druge (J.Wade et al., Lett. Pept. Sci., 7(2):107- 112 (2000); Y.Fujiwara et al., Chem. Pharm.Bull., 44(7):1326-1331 (1996); P. Cherkupally et al., Eur. J. Org. Chem., 6372-6378 (2013)).

[2051] Alternativno, ako je agonist CNP polipeptid, takav polipeptid može biti proizveden postupcima rekombinantne sinteze.

[2052] Sl.1: Struktura CNP prema SEQ ID NO:1.

[2054] Primeri

[2056] Materijali i metode

[2058] CNP SEQ ID No.: 1 je dobijen od Bachem AG, Bubendorf, Švajcarska (CNP-22, humani, kataloški br. H-1296). CNP-34 SEQ ID No.: 40 i CNP-38 SEQ ID No.: 24 su dobijeni od CASLO ApS, Kongens Lyngby, Danska.

[2059] Bočni lanac zaštićen CNP-38 na CTC smoli sa Boc zaštićenim N-terminusom i ivDde zaštićenim bočnim lancem Lys26 (sintetisanim Fmoc-strategijom) je dobijen od CASLO ApS, Kongens Lingbi, Danska.

[2060] Bočni lanac zaštićen CNP-34 na TCP Tentagel smoli sa Boc zaštićenim N-terminusom i ivDde zaštićenim bočnim lancem Lys12, Lys16 ili Lys22 (sintetisan Fmoc-strategijom) je dobijen od Peptide Specialty Laboratories GmbH, Heidelberg, Nemačka. Bočni lanac zaštićen CNP-38 na TCP Tentagel smoli sa slobodnim N-terminusom (sintetisan Fmoc-strategijom) je dobijen od Peptide Specialty Laboratories GmbH, Heidelberg, Nemačka.

[2061] Metoksi PEG amin 5 kDa je dobijen od Rapp Polymere GmbH, Tuebingen, Nemačka. Svi ostali PEG korišćeni u ovom radu su nabavljeni od NOF Europe N.V., Grobbendonk, Belgija.

[2062] Fmoc-N-Me-Asp(OtBu)-OH je dobijen od Bachem AG, Bubendorf, Švajcarska. S-Tritil-6-merkaptoheksanojska kiselina je kupljena od Polypeptide, Strasbourg, Francuska. HATU je dobijen od Merck Biosciences GmbH, Schwalbach/Ts, Nemačka.

[2063] 2,4-Dimetilbenzil alkohol je dobijen od abcr GmbH, Karlsrue, Nemačka.

[2064] Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH je dobijen od Peptide International Inc., Louisville, KY, SAD.

[2065] Neutralna endopeptidaza (NEP) je dobijena od Enzo Life Sciences GmbH, Lörrach, Nemačka.

[2066] Sve ostale hemikalije i reagensi su kupljeni od Sigma Aldrich GmbH, Taufkirchen, Nemačka.

[2067] Špricevi opremljeni polietilenskim fritama (MultiSynTech GmbH, Witten, Nemačka) korišćeni su kao reakcione posude ili za korake pranja peptidnih smola.

[2069] Opšti postupak za uklanjanje zaštitne grupe ivDde sa CNP zaštićenih bočnim lancem na smoli

[2071] Smola je prethodno nabubrela u DMF tokom 30 minuta, a zatim je rastvarač odbačen. ivDde grupa je uklonjena inkubacijom smole sa DMF/hidrazin hidratom 4/1 (v/v, 2,5 mL/g smole) tokom 8 x 15 minuta. Za svaki korak je korišćen svež rastvor DMF/hidrazin hidrata. Konačno, smola je isprana sa DMF (10 x), DCM-om (10 x) i osušena u vakuumu.

[2073] RP-HPLC prečišćavanje

[2075] Za preparativnu RP-HPLC korišćen je Waters 600 kontroler i 2487 dvostruki apsorbansni detektor, opremljeni sledećim kolonama: Waters XBridge<™>BEH300 Prep C185 µm, 150 x 10 mm, brzina protoka 6 mL/min, ili Waters XBridge<™>BEH300 Prep C1810 µm, 150 x 30 mm, brzina protoka 40 mL/min. Korišćeni su linearni gradijenti sistema rastvarača A (voda koja sadrži 0,1% TFA v/v ili 0,01% konc. HCl v/v) i sistema rastvarača B (acetonitril koji sadrži 0,1% TFA v/v ili 0,01% konc. HCl v/v).

[2076] HPLC frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i liofilizovane ako nije drugačije naznačeno.

[2078] Fleš hromatografija

[2080] Prečišćavanja fleš hromatografijom su izvršena na Isolera One sistemu proizvođača Biotage AB, Švedska, koristeći Biotage KP-Sil silicijumske kertridže i n-heptan i etil acetat kao eluente. Proizvodi su detektovani na 254 nm.

[2081] Analitičke metode

[2083] Analitička ultra-performansna LC (UPLC)-MS je izvedena na Waters Acquity sistemu opremljenom Waters BEH300 C18 kolonom (2,1 x 50 mm, veličina čestica 1,7 µm, protok: 0,25 mL/min; rastvarač A: voda koja sadrži 0,04% TFA (v/v), rastvarač B: acetonitril koji sadrži 0,05% TFA (v/v)) povezanom sa LTQ Orbitrap Discovery masenim spektrometrom od Thermo Scientific ili povezanim sa Waters Micromass ZQ.

[2084] Hromatografija isključivanja po veličini (SEC) je izvedena korišćenjem Amersham Bioscience AEKTAbasic sistema opremljenog kolonom Superdex 2005/150 GL (Amersham Bioscience/GE Healthcare) sa ulaznim filterom od 0,45 µm, ako nije drugačije naznačeno. Kao mobilna faza korišćeno je 20 mM natrijum fosfata, 140 mM NaCl, pH 7,4.

[2085] Zbog reverzibilne prirode vezivanja -L<1>- za -D merenja za NEP-stabilnost i afinitet receptora su izvršena korišćenjem stabilnih analoga CNP prolekova ovog pronalaska, tj. izvršena su korišćenjem sličnih struktura kao one kod CNP prolekova ovog pronalaska koji umesto reverzibilnog vezivanja -Z za -D imaju stabilno vezivanje.

[2086] Ovo je bilo neophodno, jer bi CNP prolekovi ovog pronalaska oslobađali CNP tokom eksperimenta, a navedeni oslobođeni CNP bi uticao na rezultat.

[2088] Kvantitativno određivanje ukupnih koncentracija CNP-38 u plazmi

[2090] Ukupne koncentracije CNP-38 u plazmi (konjugovane i oslobođene CNP-38) određene su kvantitativnim određivanjem N-terminalnog signalnog peptida (sekvenca: LQEHPNAR) i C-terminalnog signalnog peptida (sekvenca: IGSMSGLGC) nakon tripsinske digestije.

[2091] LC-MS analiza je sprovedena korišćenjem Agilent 1290 UPLC spektrometra povezanog sa Agilent 6550 iFunnel Q-TOF masenim spektrometrom preko ESI sonde. Hromatografija je izvedena na Waters Acquity BEH300 C18 analitičkoj koloni (50 x 2,1 mm I.D., veličina čestica 1,7 µm) sa pretfilterom pri brzini protoka od 0,25 mL/min (T = 25 °C). Voda (UPLC kvaliteta) koja sadrži 0,2% mravlje kiseline (v/v) korišćena je kao mobilna faza A i acetonitril (UPLC kvaliteta) sa 0,2% mravlje kiseline kao mobilna faza B. Gradijentni sistem se sastojao od kratkog izokratskog koraka pri početnim parametrima od 0,1% B tokom 3,0 min, nakon čega je usledilo linearno povećanje od 0,1% B do 16% B za 17 min. Masena analiza je sprovedena u režimu praćenja pojedinačnih jona (SIM), praćenje jona m/z 482,75 [M+2H]<2+>(N-kraj) i m/z 824,36 [M+H]<1+>(C-kraj). Kao interni standard korišćen je deuterizovani CNP-38 peptid.

[2092] Kalibracioni standardi CNP-38 konjugata u slepoj plazmi su pripremljeni na sledeći način: Odmrznuta Li-heparin plazma makaki majmuna je prvo homogenizovana, a zatim centrifugirana 5 minuta. Formulacija CNP-38 konjugata je razblažena do radnog rastvora od 10 µg/mL (ekv. konjugata CNP-38) u DMSO i dodata u slepu plazmu u koncentracijama između 9,3 ng/100 µL (ekv. konjugata CNP-38) i 139,5 ng/100 µL (ekv. konjugata CNP-38). Ovi rastvori su korišćeni za generisanje kalibracione krive. Kalibracione krive su ponderisane 1/x<2>za oba signalna peptida (N- i C-terminalni). Radi kontrole kvaliteta, pripremljena su tri uzorka za kontrolu kvaliteta sa sadržajem od 116,2 ng/100 µL (visoka kontrola kvaliteta, konjugat CNP-38 ekvivalent), 69,75 ng/100 µL (srednja kontrola kvaliteta, konjugat CNP-38 ekvivalent) i 23,25 ng/100 µL (niska kontrola kvaliteta, konjugat CNP-38 ekvivalent).

[2093] Za pripremu uzorka, precipitacija proteina je izvršena dodatkom 300 µL prethodno ohlađenog (0 °C) metanola u 100 µL uzorka plazme. 200 µL supernatanta je preneto u novu ploču sa bunarčićima i ispareno do sušenja (pod blagom strujom azota na 35 °C). 100 µL rastvarača za rekonstituciju (Thermo digestion puffer, broj za porudžbinu 60109-101, Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Nemačka) je korišćeno za rastvaranje ostatka.20 µg tripsina (broj za porudžbinu V5111, Promega GmbH, Mannheim, Nemačka) je rastvoreno u 20 µL 10 mM sirćetne kiseline.2 µL rastvora tripsina je dodato u svaku šupljinu.

[2094] Nakon 4 sata inkubacije na 37 °C (vodeno kupatilo), u svaku šupljinu je dodato 5 µL 0,5 M rastvora TCEP i ponovo inkubirano 5 minuta na 96 °C. Nakon što su se uzorci ohladili na sobnu temperaturu, dodato je 3 µL acetonitrila. Eluati su prebačeni u bočice. 10 µL je ubrizgano u UPLC-MS sistem.

[2096] Primer 1

[2098] Sinteza linkerskog reagensa 1f

[2100] Linkerski reagens 1f sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2101]

[2104] U rastvor N-metil-N-Boc-etilendiamina (2 g, 11,48 mmol) i NaCNBH<3>(819 mg, 12,63 mmol) u MeOH (20 ml) dodat je 2,4,6-trimetoksibenzaldehid (2,08 g, 10,61 mmol) u porcijama. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 90 minuta, zakiseljena sa 3 M HCl (4 ml) i mešana dodatnih 15 minuta. Reakciona smeša je dodata u zasićeni rastvor NaHCO<3>(200 mL) i ekstrahovana 5 x sa CH<2>Cl<2>. Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i rastvarači su ispareni pod sniženim pritiskom. Dobijeni N-metil-N-Boc-N'-Tmob-etilendiamin 1a je osušen u vakuumu i korišćen u sledećem reakcionom koraku bez daljeg prečišćavanja.

[2106]

[2109] U rastvor 1a (2 g, 5,65 mmol) u CH<2>Cl<2>(24 mL) dodati su COMU (4,84 g, 11,3 mmol), N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH (2,08 g, 4,52 mmol) i 2,4,6-kolidin (2,65 mL, 20,34 mmol).

[2110] Reakciona smeša je mešana 3 h na sobnoj temperaturi, razblažena sa CH<2>Cl<2>(250 mL) i isprana 3 puta sa 0,1 M H<2>SO<4>(100 mL) i 3 x sa fiziološkim rastvorom (100 mL). Vodene faze su ponovo ekstrahovane sa CH<2>Cl<2>(100 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i ostatak je koncentrovan do zapremine od 24 ml. 1b je prečišćen upotrebom fleš hromatografije.

[2112]

[2115] U rastvor 1b (5,31 g, maks. 4,52 mmol ref. na N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH) u THF (60 mL) Dodat je DBU (1,8 mL, 3% v/v). Rastvor je mešan 12 minuta na sobnoj temperaturi, razblažen sa CH<2>Cl<2>(400 mL) i ispran 3 puta sa 0,1 M H<2>SO<4>(150 mL) i 3 x fiziološkim rastvorom (150 mL). Vodene faze su ponovo ekstrahovane sa CH<2>Cl<2>(100 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i filtrirane.1c je izolovan nakon isparavanja rastvarača i korišćen u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.

[2117]

[2120] 1c (5,31 g, 4,52 mmol, sirov) je rastvoren u acetonitrilu (26 ml) i dodati su COMU (3,87 g, 9,04 mmol), 6-tritilmerkaptoheksanska kiselina (2,12 g, 5,42 mmol) i 2,4,6-kolidin (2,35 ml, 18,08 mmol). Reakciona smeša je mešana 4 sata na sobnoj temperaturi, razblažena sa CH<2>Cl<2>(400 mL) i isprana 3 puta sa 0,1 M H<2>SO<4>(100 mL) i 3 x fiziološkim rastvorom (100 mL). Vodene faze su ponovo ekstrahovane sa CH<2>Cl<2>(100 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i 1d je izolovan nakon isparavanja rastvarača. Proizvod 1d je prečišćen upotrebom fleš hromatografije.

[2122]

[2125] [0724] U rastvor 1d (2,63 g, 2,78 mmol) u i-PrOH (33 ml) i H<2>O (11 ml) je dodat LiOH (267 mg, 11,12 mmol) i reakciona smeša je mešana 70 minuta na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa CH<2>Cl<2>(200 mL) i isprana 3 puta sa 0,1 M H<2>SO<4>(50 mL) i 3 x fiziološkim rastvorom (50 mL). Vodene faze su ponovo ekstrahovane sa CH<2>Cl<2>(100 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i 1e je izolovan nakon isparavanja rastvarača.

[2126] 1e je prečišćen upotrebom fleš hromatografije.

[2128]

[2131] U rastvor 1e (170 mg, 0,198 mmol) u anhidrovanom DCM (4 ml) dodat je DCC (123 mg, 0,59 mmol) i katalitička količina DMAP. Posle 5 minuta dodat je N-hidroksi-sukcinimid (114 mg, 0,99 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je filtrirana, rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je rastvoren u 90% acetonitrilu plus 0,1% TFA (3,4 mL). Sirova smeša je prečišćena pomoću RP-HPLC. Frakcije proizvoda su neutralisane sa 0,5 M pH 7,4 fosfatnim puferom i koncentrovane. Preostala vodena faza je ekstrahovana sa DCM i 1f je izolovan nakon isparavanja rastvarača.

[2133]

[2136] Primer 2

[2138] Sinteza N<εK4/εK10>-CNP mono-linker tiola 2, N<εK4>-CNP mono-linker tiola 2c i N<εK10>-CNP mono-linker tiola 2d

[2140]

[2143]

[2146] [0727] N<εK4/εK10>-CNP mono-linker tiol (smeša regioizomera sa linkerom konjugovanim na amino grupi bočnog lanca Lys4 ili Lys10) 2 se priprema rastvaranjem CNP-22 (5,2 µmol) u 0,6 mL DMSO, 0,15 mL 0,375 M boratnog pufera, podešenog na pH 8,5 dodavanjem tetrabutilamonijumhidroksid hidrata, 60 µL DIPEA i 1f (6,1 mg, 7,1 µmol) u 0,34 mL DMSO i smeša se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razblaži sa 2 mL acetonitrila/vode 1/1 (v/v) i 200 µL AcOH i zaštićeni N<εK4/εK10>-CNP mono-linker konjugat je izolovan iz reakcione smeše pomoću RP-HPLC.

[2147] Optimizovani RP-HPLC gradijenti mogu se koristiti za izolaciju N<εK4>-CNP mono-linker tiola 2a i N<εK10>-CNP mono-linker tiola 2b.

[2148] Uklanjanje zaštitnih grupa se vrši tretmanom liofilizovanih frakcija proizvoda sa 0,6 mL 90/10/2/2 (v/v/v/v) HFIP/TFA/TES/vode tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Deprotektovani N<εK4/εK10>-CNP mono-linker tiol 2 prečišćen je pomoću RP-HPLC. Identitet i čistoća proizvoda su određeni ESI-LCMS postupkom.

[2149] Deprotektovani N<εK4>-CNP mono-linker tiol 2c i N<εK10>-CNP mono-linker tiol 2d može se dobiti isto tako od 2a i 2b, respektivno.

[2151] Primer 3

[2153] Sinteza N<αG1>-CNP mono-linker tiola 3

[2155]

[2158]

[2161] N<αG1>-CNP mono-linker tiol 3 se priprema rastvaranjem CNP-22 (5,2 µmol) u 0,6 mL DMSO. Dodato je 0,25 mL 0,5 M fosfatnog pufera pH 7,4 i 1f (6.1 mg, 7,1 µmol) u 0,34 mL DMSO i smeša se meša nekoliko sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razblaži sa 2 mL acetonitrila/vode 1/1 (v/v) i 200 µL AcOH i zaštićeni N<αG1>-CNP mono-linker tiol je izolovan iz reakcione smeše pomoću RP-HPLC.

[2162] Uklanjanje zaštitnih grupa se vrši tretmanom liofilizovanih frakcija proizvoda sa 0,6 mL 90/10/2/2 (v/v/v/v) HFIP/TFA/TES/vodom tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Deprotektovani N<αG1>-CNP mono-linker tiol 3 prečišćen je pomoću RP-HPLC. Identitet i čistoća proizvoda su određeni ESI-LCMS postupkom.

[2163] Primer 4

[2165] PEGilacija CNP mono-linker tiola 2c, 2d i 3

[2167]

[2170]

[2173] 1 µmol CNP mono-linker tiol 2c rastvoren je u 0,5 mL acetonitrila / 0,2 M sukcinatni pufer pH 3,81/1 (v/v). Dodato je 1,2 µmol linearnog 40 kDa PEG-maleimida i smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodavanjem 20 µL AcOH i CNP konjugat 4 je prečišćen preparativnim RP-HPLC postupkom.

[2174] CNP konjugati 5 i 6 se pripremaju slično od 1 µmol CNP mono-linker tiola 2d i 3.

[2175] Sadržaj CNP se određuje kvantitativnom analizom aminokiselina nakon potpune hidrolize pod kiselim uslovima.

[2177] Primer 5

[2179] Kinetika oslobađanja in vitro

[2181] [0738] CNP konjugati 4, 5 i 6 su rastvoreni u 60 mM natrijum fosfatu, 3 mM EDTA, 0,01% Tween-20, pH 7,4 pri koncentraciji od približno 2 mg/mL i sterilno filtriraju. Smeše se inkubiraju na 37 °C. U određenim vremenskim tačkama alikvote se vade i analiziraju pomoću RP-HPLC i ESI-MS. UV-signali koji koreliraju sa oslobođenim CNP se integrišu i prikazuju u odnosu na vreme inkubacije.

[2182] Softver za uklapanje krive se primenjuje da bi se procenilo odgovarajuće vreme poluraspada.

[2184] Primer 6

[2186] Farmakokinetika i proizvodnja cGMP kod pacova

[2188] Ekvimolarne doze CNP-22, CNP konjugata 4, 5 ili 6 se injektiraju i.v. i s.c. normalnim pacovima. Nivoi CNP i cGMP u plazmi tokom vremena su određeni kao što je opisano u literaturi (US patent 8,377,884 B2).

[2190] Primer 7

[2192] Sinteza 6-merkaptoheksanske kiseline 7 zaštićene sa Dmb

[2194] Jedinjenje 7 je sintetisano prema sledećoj šemi:

[2197]

[2200] U rastvor 6-merkaptoheksanske kiseline (7,10 g, 47,90 mmol) u trifluorosirćetnoj kiselini (20 ml) dodat je 2,4-dimetilbenzil alkohol (13,5 g, 95,80 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 60 minuta, a zatim je trifluorosirćetna kiselina uklonjena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u smeši od 95,8 ml LiOH (3 M) i THF (81 ml) i mešan na sobnoj temperaturi 60 minuta. Rastvor je uklonjen u vakuumu i vodeni ostatak je ekstrahovan 3x sa EtOAc (200 mL). Spojene organske faze su osušene preko MgSO<4>, i rastvarač je uklonjen u vakuumu. 7 je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2202]

[2203] Primer 8

[2205] Sinteza linkerskog reagensa 8c

[2207] Linkerski reagens 8c sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2210]

[2213] U rastvor 1b (21.6 g, 27,18 mmol) u izopropanolu (401 ml) dodati su voda (130 ml) i LiOH (3,90 g, 163,06 mmol). Reakciona smeša je mešana 3 sata na sobnoj temperaturi, zatim je razblažena toluenom (300 ml) i isprana 3 puta sa 0,1 M HCl (200 ml). Spojene vodene faze su isprane 3 puta toluenom (100 ml). Vodena faza je alkalizovana sa 4 M NaOH (4 ml) do pH vrednosti 8,5 i ekstrahovana 8 puta sa CH<2>Cl<2>(200 ml). Kombinovane CH<2>Cl<2>faze su isprane fiziološkim rastvorom (50 ml), osušene preko Na<2>SO<4>. 8b je izolovan nakon isparavanja rastvarača i korišćen u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.

[2215]

[2218] [0745] U rastvor 7 (293 mg, 1,10 mmol) i PyBOP (572 mg, 1,10 mmol) u THF (10 ml) je dodat DIEA (0,52 ml, 3,00 mmol) pod atmosferom N<2>. Reakciona smeša je mešana 60 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je rastvor 8b (484 mg, 1,00 mmol) u THF (2 ml) i reakcija je mešana dodatnih 60 minuta. Reakcija je ugašena sa 2 M rastvorom limunske kiseline (10 ml) i THF je uklonjen u vakuumu. Dobijena vodena faza je zatim ekstrahovana 2 puta sa EtOAc (15 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (10 mL) i fiziološkim rastvorom (10 mL), i osušeni preko MgSO<4>. Rastvor je uklonjen u vakuumu i 8c prečišćen je pomoću RP HPLC.

[2220]

[2223] Primer 9

[2225] Sinteza linkerskog reagensa 9

[2227] Linker reagens 9 sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2230]

[2233] U rastvor 8b (2,00 g, 4,14 mmol) i Fmoc-Cl (1,07 g, 4,14 mmol) u dioksanu (20 ml) dodat je 1 M rastvor Na<2>CO<3>(20 mL). Reakciona smeša je mešana 40 minuta na sobnoj temperaturi. Dodati su voda (100 mL) i dietil etar (100 mL) i vodena faza je ekstrahovana 2 x dietil etrom (100 mL). Vodena faza je zakiseljena konc. HCl do pH 1 i ponovo ekstrahovana 3 x dietil etrom. Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i rastvarač je uklonjen u vakuumu. 9 je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[2235]

[2238] Primer 10

[2240] Sinteza reverzibilnog Lys26 CNP-38 PEG2x20 kDa konjugata 10f

[2242] Konjugat 10f sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2243]

[2244]

[2247] [0749] 2.00 g (0,21 mmol) CNP-38 sa zaštićenim bočnim lancem na CTC smoli koja ima Boc zaštićeni N-terminus i ivDde zaštićeni bočni lanac Lys26 je ivDde deprotektovan prema postupku datom u Materijalima i metodama da bi se dobilo 10a. Rastvor linkerskog reagensa 8c (336 mg, 0,46 mmol), PyBOP (239 mg, 0,46 mmol) i DIEA (182 µL, 1,04 mmol) u DMF (5 ml) je inkubiran 10 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim je dodat u smolu 10a. Suspenzija je mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi. Smola je isprana 10 puta sa DMF (10 mL) i 10 puta sa DCM (10 mL) i osušena u vakuumu tokom 15 min. Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 15 ml prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za odvajanje 68,5/10/10/5/3,5/1 (v/tež./v/v/v/v) TFA/DTT/tioanizola/fenola/vode/TIPS. Smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 60 min. Smola je filtrirana i sirovi proizvod 10c je istaložen u prethodno ohlađenom dietil etru (-18 °C). Talog je rastvoren u ACN/vodi i prečišćen pomoću RP-HPLC. Spojene HPLC frakcije su direktno korišćene u sledećem koraku.

[2249]

[2252] U kombinovane HPLC frakcije 10c (250 ml) dodato je 40 ml 0,5 M pufera limunske kiseline (pH = 5,00) i 7 ml 0,01 M rastvora 2,2'-ditiobis(piridin-N-oksida) u 1/1 (v/v) acetonitrilu/vodi. Nakon inkubacije tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija je bila završena. Smeša je razblažena sa 500 ml vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v) i zakiseljena sa AcOH (20 ml) do pH vrednosti od približno 2.10d je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2254]

[2257] Razgradnja zaštitne grupe Dmb je postignuta dodavanjem 30 mL prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za razgradnju 100/5/3/2/1 (v/v/tež./v/v) TFA/MSA/DTT/vode/tioanizola u 10d (101 mg, 17,3 µmol) i mešanjem tokom 3 sata na 0 °C. Sirovi proizvod 10e je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru. Talog je rastvoren u vodi koja sadrži 0,1 % TFA (v/v) i inkubiran 10 minuta kako bi se hidrolizovali svi TFA estri.10e je prečišćen pomoću RP-HPLC. Frakcije proizvoda su spojene i liofilizovane.

[2259]

[2262] U rastvor 10 e (46 mg, 8,43 µmol) u 1,15 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v) dodat je rastvor PEG 2x20 kDa maleimida (Sunbright GL2-400MA, 870 mg, 21,75 µmol) u 4,35 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v), a zatim 0,5 M pufer mlečne kiseline (1,07 mL, pH = 4,20). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Konjugat 10f je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2263]

[2265] Primer 11

[2266] Sinteza reverzibilnog Lys26 CNP-38 PEG4x10 kDa konjugata 11i [0753] Konjugat 11i je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2267]

[2268]

[2271] U rastvor 9 (353 mg, 0,50 mmol) i PyBOP (260 mg, 0,50 mmol) u DMF (9 ml) je dodat DIEA (105 µL, 0,60 mmol). Ova smeša je naneta na CNP-38 smolu 10a (2,00 g, 0,21 mmol) sa deprotektovanim Lys26-bočnim lancem i suspenzija je mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi da bi se dobila smola 11a. Smola je isprana 10 puta sa DMF (7 mL). Cepanje Fmoc zaštitne grupe u 11a je izvedeno sa rastvorom HOBt (0,68 g, 5,03 mmol) i piperazina (3,00 g, 34,83 mmol) u DMF (47 ml). Stoga je smola inkubirana 5 puta sa 10 ml smeše za razlaganje tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi svaki put. Zatim je smola isprana 7 puta sa DMF (7 ml).

[2272] Rastvor Fmoc-Lys(Fmoc)-OH (449 mg, 0,76 mmol), COMU (325 mg, 0,76 mmol) i DIEA (165 µL, 0,95 mmol) u DMF (9 mL) je pripremljen i nanet na smolu. Smeša je mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi. Postupak je ponovljen dva puta, svaki put po 1 sat sa sveže pripremljenom smešom za kuplovanje. Smola je isprana 10 puta sa DMF (7 mL), a preostale slobodne amino grupe su poklopljene sa 8 mL 1/1/2 (v/v/v) Ac<2>O/piridina/DMF.

[2273] Cepanje Fmoc zaštitnih grupa u 11c je izvedeno sa rastvorom HOBt (0,68 g, 5,03 mmol), piperazina (3,00 g, 34,83 mmol) u DMF (47 ml). Stoga je smola inkubirana 5 puta sa 10 ml smeše za razlaganje tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi svaki put. Smola je isprana 7 puta sa DMF (7 ml).

[2274] U rastvor jedinjenja 7 (266 mg, 1,00 mmol) i PyBOP (520 mg, 1,00 mmol) u DMF (9 ml) dodat je DIEA (209 µL, 1,20 mmol). Ova smeša je naneta na smolu i mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi. Smola je isprana 7 puta sa DMF (7 ml), što je dalo smolu 11e. Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 15 ml prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za odvajanje 68,5/10/10/5/3,5/1 (v/tež./v/v/v/v) TFA/DTT/tioanizola/fenola/vode/TIPS. Smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 3 sata na sobnoj temperaturi. Smola je filtrirana i sirovi proizvod 11f je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru i prečišćen pomoću RP-HPLC. Spojene HPLC frakcije su direktno korišćene u sledećem koraku.

[2275]

[2278] U kombinovane frakcije HPLC proizvoda 11f (1 L) dodato je 160 mL 0,5 M pufera limunske kiseline (pH = 5,00) i 100 mL 50 mM rastvora 2,2'-ditiobis(piridin-N-oksida) u 9/1 (v/v) acetonitrilu/vodi. Smeša je mešana 4 sata na sobnoj temperaturi, a zatim razblažena sa 1 L vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v).11 g je prečišćen pomoću RP-HPLC. Frakcije proizvoda su spojene i liofilizovane.

[2280]

[2283] Razgradnja zaštitne grupe Dmb je postignuta dodavanjem 45 mL prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za razgradnju 100/5/3/2/1 (v/v/tež./v/v) TFA/MSA/DTT/vode/tioanizola u 11 g (61,8 mg, 10,3 µmol), a zatim mešanjem tokom 4 sata na 0 °C. Sirovi proizvod 11h je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) etru. Talog je rastvoren u rastvoru 1/1 (v/v) acetonitrila/vode koji sadrži 0,1% TFA (v/v) i inkubiran 4 sata na sobnoj temperaturi kako bi se hidrolizovali svi TFA estri.11h je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2285]

[2288] U rastvor 11h (34,6 mg, 5,99 µmol) u 1 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v) dodat je rastvor PEG 2x10 kDa maleimida (Sunbright GL2-200MA, 1,12 g, 56,03 µmol) u 6,1 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v), a zatim 0,5 M pufer mlečne kiseline (1,46 mL, pH = 4,00). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Konjugat 11i je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2290]

[2293] Primer 12 - nije prema pronalasku

[2294] Sinteza permanentnog Lys26 CNP-38 PEG4x10 kDa konjugata 12g

[2295] Konjugat 12 g sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2296]

[2297]

[2298] U rastvor Fmoc-Lys(Fmoc)-OH (365 mg, 0,62 mmol) i PyBOP (322 mg, 0,62 mmol) u DMF (4,6 mL) dodat je DIEA (0,11 mL, 0,62 mmol). Smeša je naneta na smolu 10a (2,0 g, 0,21 mmol). Suspenzija je mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi. Smola je isprana 10 puta sa DMF (7 ml). Odvajanje Fmoc zaštitnih grupa u 12a je izvedeno sa rastvorom HOBt (1,35 g, 9,99 mmol), piperazina (6,00 g, 69,66 mmol) u DMF (94 ml).

[2299] Stoga je smola inkubirana 5 puta sa smešom za razlaganje tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi svaki put, što je dalo smolu 12b. Zatim je smola isprana 7 puta sa DMF (7 mL).

[2300] U rastvor 7 (283 mg, 1,06 mmol) i PyBOP (552 mg, 1,06 mmol) u DMF (6,5 ml), dodat je DIEA (185 µL, 1,06 mmol) i smeša je naneta na smolu 12b (2,07 g, 0,10 mmol/g, 0,21 mmol). Smeša je mućkana 2 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je smola isprana 10 puta sa DMF (7 ml) i CH<2>Cl<2>(7 ml) i osušena u vakuumu.

[2301] Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 15 ml prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za odvajanje 68,5/10/10/5/3,5/1 (v/tež./v/v/v/v) TFA/DTT/tioanizola/fenola/vode/TIPS. Smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 2,5 sata. Smola je filtrirana i sirovi proizvod 12d je istaložen u prethodno ohlađenom dietil etru (-18 °C) i prečišćen pomoću RP-HPLC. Spojene HPLC frakcije su direktno korišćene u sledećem koraku.

[2303]

[2306] U kombinovane frakcije HPLC proizvoda 12d (390 ml) dodato je 58,5 ml 0,5 M pufera limunske kiseline (pH = 5,00) i 8,9 ml 10 mM rastvora 2,2'-ditiobis(piridin-N-oksida) u 1/1 (v/v) acetonitrilu/vodi. Smeša je mešana 10 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim razblažena sa 400 ml vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v).12e je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2308]

[2311] [0766] Odvajanje zaštitne grupe Dmb postignuta je dodavanjem 65 mL prethodno ohlađenog (-18 °C) koktela za odvajanje 100/5/3/2/1 (v/v/tež./v/v) TFA/MSA/DTT/vode/tioanizola u 12e (100 mg, 17,5 µmol) i mešanjem tokom 3,5 sata na 0 °C. Sirovi proizvod 12f je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru. Talog je rastvoren u vodi koja sadrži 0,1 % TFA (v/v) i inkubiran 2 sata na sobnoj temperaturi kako bi se hidrolizovali svi TFA estri.12f je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2314]

[2317] U rastvor 12f (39,6 mg, 7,22 µmol) u 1 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v) dodat je rastvor PEG 2x10 kDa maleimida (Sunbright GL2-200MA, 1,22 g, 59,94 µmol) u 6,16 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v), a zatim 0,5 M pufer mlečne kiseline (1,41 mL, pH = 4,20). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Konjugat 12 g je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2320]

[2323] Primer 13 - nije prema pronalasku

[2325] Sinteza PEG5kDa tiola 13c

[2327] PEG5kDa tiol 13c je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2329]

[2330] U rastvor 13b (58,6 mg, 0,15 mmol), HOBt (22,9 mg, 0,15 mmol) i EDC hidrohlorida (28,8 mg, 0,15 mmol) u DCM (1,00 ml) je dodat 2,4,6-kolidin (121 mg, 1,00 mmol). Zatim je dodat rastvor metoksi PEG amina 5 kDa 13a (500 mg, 0,10 mmol) u DCM (4,00 ml) i smeša je mešana 16 sati na sobnoj temperaturi. Rastvor je isparen, a smeša je rastvorena u ACN/vodi i prečišćena pomoću RP-HPLC. Količina rastvarača je smanjena u vakuumu i vodeni ostatak je ekstrahovan sa DCM (1 x 100 mL, 2 x 50 mL). Spojeni organski slojevi su redukovani u vakuumu do 20 mL. Dodati su TFA (1,6 mL) i TES (3,5 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4,5 h. 13c je istaložen u dietil etru, čuvan preko noći na -20 °C, filtriran i osušen u vakuumu.

[2332]

[2335] Primer 14 - nije prema pronalasku

[2337] Sinteza permanentnog N-terminalnog CNP-34 PEG 5 kDa konjugata 14e

[2339] Konjugat 14e je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2340]

[2343] CNP-34 zaštićen bočnim lancem na TCP tentagel smoli sa slobodnim N-terminusom 14a (0.78 g, 70 µmol) je prethodno nabubren u DMF tokom 30 minuta. Rastvor maleimidoheksanske kiseline (85,3 mg, 0,40 mmol), DIC (50,9 mg, 0,40 mmol) i Oxyma (57,4 ml, 0,40 mmol) u DMF (6 ml) je nanet na smolu i smeša je mućkana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Kuplovanje je zatim ponovljeno jednom sa sveže pripremljenim rastvorom za kuplovanje. Smola je isprana 10 puta sa DMF i CH<2>Cl<2>i osušena u vakuumu čime se dobija 14b.

[2344] Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 6 mL koktela za odvajanje 100/3/2/1 (v/v/v/v) TFA/TES/vode/tioanizola tokom 1,5 h na sobnoj temperaturi. Sirovi peptid je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru.

[2345] MS: m/z 937,77 = [M+4H]<4+>, (izračunata monoizotopska masa za [M+4H]<4+>= 937,74).

[2346] Talog je rastvoren u 15 mL TFA. Dodat je rastvor difenilsulfoksida (68,06 mg, 0,34 mmol) i anizola (0,18 mL, 1,68 mmol) u 5 mL TFA. Dodat je trihlorometilsilan (0,47 mL, 4,17 mmol) i smeša je mešana 15 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je amonijum fluorid (0,38 g, 10,3 mmol) i rastvor je mešan još 2 minuta. Sirovi materijal je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru i prečišćen pomoću RP-HPLC, čime se dobija 14d.

[2348]

[2351] U rastvor 14d (7,34 mg, 1,57 µmol) u 200 µL 1/1 (v/v) acetonitrila/vode koji sadrži 0,1% TFA (v/v) dodat je rastvor 13c (20 mg, 3,90 µmol) u 200 µL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v), a zatim sa 200 µL 0,5 M acetatnog pufera (pH = 5,00). Smeša je inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Konjugat 14e je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2353]

[2356] Primer 15 - nije prema pronalasku

[2358] Sinteza permanentnog N-terminalnog CNP-38 PEG 5kDa konjugata 15e

[2360] Konjugat 15e je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2361]

[2364] Jedinjenje 15d sintetisano je kako je opisano za 14d, osim što je CNP-38 zaštićen bočnim lancem na TCP tentagel smoli sa slobodnim N-terminusom 15a (1,34 g, 0,12 mmol) je korišćen kao početni materijal.

[2366]

[2369] Konjugat 15e sintetisan je kako je opisano za 14e, osim što je 15d (8.34 g, 1,58 mmol) korišćen kao početni materijal.

[2371]

[2372] Primer 16 - nije prema pronalasku

[2374] Sinteza permanentnog Lys12 CNP-34 PEG 5 kDa konjugata 16e

[2376] Konjugat 16e sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2379]

[2382] 1,00 g (0,10 mmol) CNP-34 sa zaštićenim bočnim lancem na TCP tentagel smoli koja ima Boc zaštićeni N-terminus i ivDde zaštićeni bočni lanac Lys12 je ivDde deprotektovan prema postupku datom u Materijalima i metodama da bi se dobilo 16a.

[2383] Jedinjenje 16d sintetisano je kako je opisano za 14d, osim što je smola 16a (1,00 g, 0,10 mmol) korišćena kao početni materijal.

[2384]

[2386] Konjugat 16e je sintetisan kako je opisano za 14e, osim što je 16d (17 mg, 3,65 µmol) korišćen kao početni materijal.

[2387]

[2389] Primer 17 - nije prema pronalasku

[2390] Sinteza permanentnog Lys16 CNP-34 PEG 5 kDa konjugata 17e

[2391] Konjugat 17e je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2392]

[2395] 0,78 g (0,07 mmol) CNP-34 sa zaštićenim bočnim lancem na TCP tentagel smoli koja ima Boc zaštićeni N-terminus i ivDde zaštićeni bočni lanac Lys16 je ivDde deprotektovan prema postupku datom u Materijalima i metodama da bi se dobilo 17a.

[2396] Jedinjenje 17d je sintetisano kako je opisano za 14d, osim što je smola 17a (0,78 g, 0,13 mmol) korišćena kao početni materijal.

[2398]

[2401] Konjugat 17e je sintetisan kako je opisano za 14e, osim što je 17d (5.39 mg, 1,16 µmol) korišćen kao početni materijal.

[2403]

[2406] Primer 18 - nije prema pronalasku

[2407] Sinteza permanentnog Lys22 CNP-34 PEG 5 kDa konjugata 18e

[2409] Konjugat 18e je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2412]

[2415] 1,07 g (0,11 mmol) CNP-34 sa zaštićenim bočnim lancem na TCP tentagel smoli koja ima Boc zaštićeni N-terminus i ivDde zaštićeni bočni lanac Lys22 je ivDde deprotektovan prema postupku datom u Materijalima i metodama da bi se dobilo 18a.

[2416] Jedinjenje 18d je sintetisano kako je opisano za 14d, osim što je smola 18a (1,07 g, 0,11 mmol) korišćena kao početni materijal.

[2418]

[2419]

[2421] Konjugat 18e je sintetisan kako je opisano za 14e, osim što je 18d (5,2 mg, 1,12 µmol) korišćen kao početni materijal.

[2422]

[2424] Primer 19 - nije prema pronalasku

[2425] Sinteza permanentnog Lys26 CNP-38 PEG 5 kDa konjugata 19e

[2426] Konjugat 19e je sintetisan prema sledećoj šemi:

[2427] (0,865 g, 0,10 mmol) CNP-38 zaštićenog bočnog lanca na TCP tentagel smoli koja ima Boc zaštićeni N-terminus i ivDde zaštićeni bočni lanac Lys26 je ivDde deprotektovan prema postupku datom u Materijalima i metodama da bi se dobilo 19a.

[2428] Jedinjenje 19d je sintetisano kako je opisano za 14d, osim što je smola 19a (0,865 g, 0,10 mmol) korišćena kao početni materijal.

[2430]

[2433] Konjugat 19e je sintetisan kako je opisano za 14e, osim što je 19d (4,70 mg, 1,10 µmol) korišćen kao početni materijal.

[2435]

[2438] Primer 20

[2440] Kinetika oslobađanja in vitro

[2442] CNP konjugati 10f i 11i rastvoreni su u PBS puferu koji sadrži 3 mM EDTA i 10 mM metionina, pH 7,4, pri koncentraciji od približno 1 mg konjugata/mL. Rastvori su sterilno filtrirani i inkubirani na 37 °C. U određenim vremenskim tačkama alikvoti su uzeti i analizirani pomoću RP-HPLC i ESI-MS. UV-signali koji koreliraju sa oslobođenim CNP su integrisani i prikazani u odnosu na vreme inkubacije.

[2443] Softver za uklapanje krive je primenjen da bi se procenilo odgovarajuće vreme poluoslobađanja.

[2445] Rezultati:

[2447] Za konjugat 10f dobijeno je vreme poluraspada od 8,5 dana (± 1 dan).

[2448] Za konjugat 11i dobijeno je vreme poluraspada od 9,5 dana (± 1,5 dana).

[2450] Primer 21

[2451] Funkcionalna cGMP stimulacija u NIH-3T3 ćelijama sa CNP varijantama

[2453] Funkcionalna aktivnost CNP varijanti određena je ćelijskim testom sa NIH-3T3 ćelijama (ćelijska linija mišjih embrionalnih fibroblasta). Ove ćelije endogeno eksprimiraju NPR-B receptor na površini ćelije. Stimulacija NPR-B receptora sa CNP dovodi do intracelularne proizvodnje sekundarnog mesindžera cGMP, što se detektuje komercijalno dostupnim cGMP testom. NIH-3T3 ćelije su rutinski kultivisane u DMEM F-12 medijumu sa 5% FBS i 5 mM glutamina na 37°C i 5% CO<2>. Za svaki test, 50.000 ćelija je resuspendovano u stimulacionom puferu (Dulbekov PBS sa IBMX) i inkubirano sa CNP varijantama u različitim koncentracijama. CNP (razblaženja su napravljena u PBS sa 0,2% BSA). Nakon inkubacije od 30 minuta na 37°C i 5% CO<2>, ćelije su lizirane i nivoi cGMP su određeni komercijalno dostupnim cGMP TR-FRET testom (Cisbio, cGMP komplet, kat. br.62GM2PEB). PEGilisane varijante CNP su uvek okarakterisane u poređenju sa nepegilovanom verzijom u istoj eksperimentalnoj seriji. Ako je bilo moguće, procena rezidualne aktivnosti je vršena preko relativnog EC<50>- parametra rezultujuće krive doza-odgovor (ograničeni model sa zajedničkim nagibom).

[2455] Tabela 1: Rezidualna NPR-B aktivnost PEGilovanih CNP varijanti u ćelijskom testu određena u odnosu na nePEGilovanu CNP varijantu

[2458]

[2461] U poređenju testiranih mesta vezivanja PEG, vezivanje na Lys26 (prsten-lizin) pokazalo je najveće smanjenje funkcionalne aktivnosti, dok je N-terminalno vezivanje pokazalo relativno visoke vrednosti rezidualne funkcionalne aktivnosti. Povećanje veličine PEG rezultiralo je boljom zaštitom molekula CNP i manjom rezidualnom funkcionalnom aktivnošću.

[2463] Primer 22

[2464] Studija rasta kod FVB miševa posle 5 nedelja tretmana sa CNP-38 dnevnom subkutanom bolusnom injekcijom ili kontinuiranom subkutanom infuzijom

[2466] Ova studija je sprovedena kako bi se testirao efekat dnevne potkožne bolus injekcije u odnosu na kontinuiranu subkutanu infuziju CNP-38 na rast životinja. Mužjacima miševa divljeg tipa FVB, starim 21 do 22 dana (n = 9/grupi), dato je 50 nmol/kg/dan CNP-38 ili nosača (30 mM acetat pH 4 koji sadrži 5% saharoze i 1% benzil alkohola) ili putem dnevne subkutane bolus injekcije ili kontinuiranom subkutanom infuzijom u skapularnu regiju tokom 35 dana. Kontinuirana infuzija je primenjivana Alzet osmotskim pumpama model 1002 tokom 1-2. nedelje, a zatim modelom 1004 tokom 3.-5. nedelje. Koncentracije CNP-38 u pumpama su prilagođene prosečnoj težini životinje na 7. dan studije (model pumpe 1002) ili 25. dan studije (model pumpe 1004). Rast je određen na 35. dan merenjem ukupne dužine tela i rendgenskim merenjima desne butne kosti i tibije.

[2467] Rezultati životinja tretiranih svakodnevnom subkutanom bolus injekcijom: Na 35. dan, ukupna dužina tela životinja tretiranih CNP-38 bila je 110,2%, dužina desne butne kosti bila je 105,6%, a dužina desne tibije bila je 104,0% u poređenju sa životinjama tretiranim nosačem.

[2468] Rezultati životinja tretiranih kontinuiranom subkutanom infuzijom: Na 35. dan, ukupna dužina tela životinja tretiranih CNP-38 bila je 121,7%, dužina desne butne kosti bila je 107,5%, a dužina desne tibije bila je 112,2% u poređenju sa životinjama tretiranim nosačem.

[2469] Zaključeno je da su kontinuirana subkutana infuzija ili srodne formulacije CNP-38 sa sporim oslobađanjem (npr. prolek CNP-38 sa sporim oslobađanjem) najmanje jednako efikasne kao i dnevna subkutana bolus injekcija u izazivanju rasta apendikularnog i aksijalnog skeleta.

[2471] Primer 23 - nije prema pronalasku

[2473] Farmakokinetička studija permanentnog Lys26 CNP-38 PEG4x10 kDa konjugata 12g kod makaki majmuna

[2475] [0805] Ova studija je sprovedena kako bi se pokazala pogodnost 12 g kao model jedinjenja za prolek CNP-38 sa sporim oslobađanjem kod makaki majmuna. Mužjaci makaki majmuna (2-4 godine, 3,5-4,1 kg) primili su ili jednu intravensku (n = 3 životinje) ili jednu subkutanu (n = 2 životinje) dozu 12 g u dozi od 0,146 mg CNP-38 ekvivalenta/kg. Uzorci krvi su sakupljeni do 168 sati nakon doze, a zatim je generisana plazma. Ukupne koncentracije CNP-38 u plazmi su određene kvantitativnim određivanjem N-terminalnog signalnog peptida (sekvenca: LQEHPNAR) i C-terminalnog signalnog peptida (sekvenca: IGSMSGLGC) nakon tripsinske digestije kao što je opisano u odeljku Materijali i metode.

[2476] Rezultati: Primene doza su bile dobro tolerisane bez vidljivih znakova nelagodnosti tokom primene i nakon primene. Nisu primećene reakcije na mestu primene tokom cele studije. Nakon intravenske injekcije, CNP-38 t<max>je zabeležen posle 15 minuta (najranija analizirana vremenska tačka), nakon čega je usledilo sporo opadanje sadržaja CNP-38 sa vremenom poluraspada od približno 24 sata. Nakon potkožne injekcije, koncentracija CNP-38 je dostigla pik na t<max>od 48 sati. Nakon 168 sati koncentracija CNP-38 je i dalje bila visoka, oko 50% od c<max>. Bioraspoloživost je bila oko 50%.

[2477] Slične PK krive su dobijene za N- i C-terminalni signalni peptid do 168 sati posle doze, što ukazuje na prisustvo intaktnog CNP-38 u konjugatu.

[2478] Povoljna dugotrajna farmakokinetika tokom nekoliko dana i stabilnost CNP-38 u konjugatu ukazuju na pogodnost permanentnog model jedinjenja Lys26 CNP-38 PEG 4x10 kDa konjugata 12g kao proleka CNP-38 sa sporim oslobađanjem nakon subkutane injekcije. Može se zaključiti da slični konjugati koji imaju prolazno Lys26 povezan CNP-38 (kao npr. 11i) su pogodni CNP-38 prolekovi koji obezbeđuju dugotrajne nivoe oslobođenog bioaktivnog CNP-38 tokom nekoliko dana.

[2480] Primer 24

[2482] Farmakokinetička studija prolaznih konjugata 10f i 11i kod makaki majmuna

[2484] Ova studija je sprovedena kako bi se pokazala pogodnost 10f i 11i kao prolekova CNP-38 sa sporim oslobađanjem kod makaki majmuna. Mužjaci makaki majmuna (2-4 godine, 3-5 kg) primili su ili jednu subkutanu primenu (n = 3 životinje) jedinjenja 10f ili jednu subkutanu primenu (n = 3 životinje) 11i u dozi od 0,146 mg CNP-38 ekvivalenta/kg. Uzorci krvi su sakupljeni do 168 sati posle doze, a zatim je generisana plazma. Nivoi ukupnog sadržaja CNP-38 u plazmi su analizirani kao što je opisano u primeru 24. Da bi se analizirao sadržaj slobodnog CNP-38 u plazmi, uzorci krvi su zakiseljeni nakon vađenja dodavanjem 20 vol% 0,5 M natrijum citratnog pufera pH 4 kako bi se zaustavilo dalje oslobađanje CNP-38 iz konjugata. Nivoi slobodnog CNP-38 u plazmi mogu se npr. odrediti ELISA testom korišćenjem CNP antitela koje se vezuje za prstenasti region CNP, kao što je opisano u literaturi (US patent 8,377,884 B2), ili pomoću LC-MS/MS.

[2485] Rezultati: Primene doza su bile dobro tolerisane bez vidljivih znakova nelagodnosti tokom primene i posle primene. Nisu primećene reakcije na mestu primene tokom cele studije. Posle primene doze, ukupni CNP-38 t<max>je primećen posle 12 sati za jedinjenje 10f i 24 sata za jedinjenje 11i. Ukupni nivoi CNP-38 u plazmi bili su ispod LOQ (100 ng/ml, C-terminalni peptid) nakon 120 sati za jedinjenje 10f, dok je nivo u plazmi i dalje bio visok kao oko 30% c<max>za jedinjenje 11i posle 168 sati (C-terminalni peptid). Za jedinjenje 11i sličan terminalni poluživot od 3-4 dana pronađen je za C-terminalni i N-terminalni peptid, što ukazuje na prisustvo intaktnog CNP-38 u konjugatu.

[2486] Zaključak: Povoljna dugotrajna farmakokinetika tokom nekoliko dana i stabilnost CNP-38 u konjugatu 11i ukazuje na njegovu pogodnost kao proleka CNP-38 za obezbeđivanje dugotrajnih nivoa oslobođenog bioaktivnog CNP-38 tokom nekoliko dana.

[2488] Primer 25

[2490] Digestija CNP varijanti pomoću neutralne endopeptidaze In vitro

[2492] Da bi se utvrdila in vitro stabilnost različitih CNP varijanti, uključujući različite dužine peptidnih lanaca i PEGilacije korišćenjem različitih mesta PEGilacije i PEG molekula u prisustvu neutralne endopeptidaze (NEP), uspostavljen je NEP digestioni test. Ovaj test je pratio smanjenje nedigestiranih CNP varijanti (normalizovanih internim standardom PFP) tokom vremena u odnosu na t<0>- vremensku tačku.

[2493] Detaljno, rekombinantni humani NEP (konačna koncentracija 2,5 µg/ml) i standardni pentafluorofenol (PFP; konačna koncentracija 40 µg/ml) dodati su CNP varijanti (100 µg CNP ekvivalenata/ml) u puferu za digestiju (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 10 mM NaCl). Rastvor je inkubiran na 37 °C i 500 rpm do 4 dana. Uzorci su uzimani u različitim vremenskim intervalima. Reakcija je zaustavljena kombinovanom redukcijom i denaturacijom toplotom dodavanjem TCEP (tris(2-karboksietil)fosfin; konačna koncentracija 25 mM) i inkubacijom smeše na 95 °C, 500 rpm tokom 5 minuta. Dobijeni reakcioni proizvodi su određeni korišćenjem HPLC-MS. Poluživot svake CNP varijante izračunat je preko promene odnosa u HPLC-UV površinama pikova CNP i PFP tokom vremena. Da bi se kompenzovale varijacije u aktivnosti proteaze, u svakom merenju serije je sprovedena digestija CNP-38 ili CNP-34 kao referenca.

[2494] Tabela 3 navodi vremena poluraspada, na osnovu in vitro testa cepanja NEP, različitih varijanti CNP različitih dužina i sa različitim PEG molekulima vezanim za različite bočne lance.

[2497]

[2500] Rangiranje otpornosti na NEP je sledeće: Duža CNP-varijanta (CNP-38) je stabilnija od kraće CNP varijante (CNP-34), koja je zauzvrat stabilnija od kraćeg CNP-22. Redosled mesta za vezivanje PEG je sledeći: N-kraj > pored prstena > prsten. Stoga, N-terminalno vezivanje PEG pruža najveću stabilnost prema proteolitičkoj digestiji sa NEP za testirane konjugate. Stabilnost CNP-38 pegilovanog na Lys26 može se povećati sa povećanjem veličine PEG.

[2501] Primer 27 - nije prema pronalasku

[2503] Sinteza fluoresceinom obeleženog CNP-38 27d i test afiniteta prema NPR-C

[2505] Jedinjenje 27d je sintetisano prema sledećoj šemi:

[2508]

[2511] CNP-38 zaštićen bočnim lancem na TCP tentagel smoli sa slobodnim N-terminusom 27a (0,50 g, 35,4 µmol) je prethodno nabubren u DMF tokom 30 minuta. Rastvor 5(6)-karboksifluorescein-N-sukcinimidil estra (41,9 mg, 88,5 µmol) i DIEA (30,9 µL, 177 µmol) u DMF (1,6 mL) je nanet na smolu i smeša je mućkana preko noći na sobnoj temperaturi. Smola je isprana 10 puta sa DMF i CH<2>Cl<2>i osušena u vakuumu čime se dobija 27b.

[2512] [0817] Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 7 mL koktela za odvajanje 100/3/3/2/1 (v/tež./v/v/v) TFA/DTT/TES/vode/tioanizola tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Smola je otfiltrirana i sirovi proizvod 27c je istaložen u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru i prečišćen pomoću RP-HPLC, čime se dobija 27c. Kombinovane HPLC frakcije su direktno korišćene u sledećem koraku.

[2513] MS: m/z 1105,80 = [M+4H]<4+>, (izračunata monoizotopska masa za [M+4H]<4+>= 1105,81).

[2514] U kombinovane frakcije HPLC proizvoda 27c (115 mL), dodato je 30 mL 0,5 M pufera limunske kiseline (pH = 5,00) i 8 mL 10 mM rastvora 2,2'-ditiobis(piridin-N-oksida) u 1/1 (v/v) acetonitrilu/vodi. Smeša je mešana 60 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim razblažena sa 350 mL vode koja sadrži 0,1% TFA (v/v).27d je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2516]

[2519] Za test afiniteta prema NPR-C, razvijena je ćelijska linija Hek293 koja eksprimira NPR-C. Kodirajući region NPR-C sekvence (BC131540) kloniran je u lentivirusni vektor pod CMV promotorom za konstitutivnu ekspresiju receptora. Bicistronski element lociran na vektoru za rezistenciju na puromicin korišćen je kao eukariotski selekcioni marker. Nakon transdukcije, stabilno rastući ćelijski fondovi podvrgnuti su qRT-PCR radi potvrde ekspresije receptorske iRNK u poređenju sa matičnim Hek293 ćelijama. Ćelijski fond koji eksprimira NPR-C je proširen i zamrznut kao glavna ćelijska banka za testiranje CNP uzoraka.

[2520] Za analizu, ćelije u rastu su tripsinizirane sa dna posude sa ćelijama, prebrojane i posejane na ploču sa 96 bunarčića (1,5 x 10<5>/bunarčiću) i centrifugirane. Supernatanti su odbačeni. CNP standard i uzorak su serijski razblaženi tokom 9 koraka u PBS 0,2% BSA i preneti na mikroploču u duplikatima i pomešani sa ćelijama. Nakon 30 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, fluoresceinom obeležen CNP 27d je dodat u svaki bunarčić sa konstantnom koncentracijom i ćelije su inkubirane dodatnih 45 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon toga, ćelije su analizirane protočnom citometrijom koristeći srednji intenzitet fluorescencije FITC kanala (FL1, Beckman Coulter FC500MPL) kao što je očitano.

[2521] Standardna kriva i kriva uzorka su generisane u softveru za analizu (PLA 2.0) korišćenjem 4PL aproksimacije za potenciju i/ili izračunavanja IC<50>.

[2523] Tabela 3: Rezidualni afinitet pegilovanih CNP-38 varijanti prema NPR-C u ćelijskom testu u odnosu na CNP-38

[2524]

[2526] Primer 29

[2527] Sinteza Asn-linker reagensa 29b

[2528] Asn-linker reagens 29b sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2529]

[2532] U rastvor 1b (12,85 g, 16,14 mmol) u izopropanolu (238 ml) dodati su H<2>O (77,5 mL) i LiOH (2,32 g, 96,87 mmol). Reakciona smeša je mešana 4 h na sobnoj temperaturi. Nakon toga, reakciona smeša je razblažena toluenom (300 mL). Faze su razdvojene i organska faza je isprana 3 x sa 0,1 M HCl (200 mL). Faze su ponovo razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana 3 x toluenom (100 mL). Proizvod je pronađen u kiseloj vodenoj fazi i pH vrednost ove faze je podešena na pH 8,5 dodatkom 4 N NaOH. Zatim je vodena faza ekstrahovana 3 x sa CH<2>Cl<2>(200 ml). Organska faza je isprana fiziološkim rastvorom (50 ml), osušena preko Na<2>SO<4>i filtrirana. 29a je izolovan nakon isparavanja rastvarača i korišćen u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.

[2534]

[2537] [0825] U rastvor 6-maleimidoheksanske kiseline (1,73 g, 8,19 mmol) u THF (70 ml), dodati su PyBOP (4,26 g, 8,19 mmol) i DIEA (3,89 ml, 22,33 mmol). Zatim je reakciona smeša mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon toga, 29a (3,60 g, 7,44 mmol) je rastvoren u THF (10 ml) i dodat u reakcionu smešu. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je dodat metil-terc-butil etar (300 ml). Organska faza je isprana 2 puta sa 0,1 M rastvorom HCl (200 ml). Spojene vodene faze su ekstrahovane 2 puta sa metil-terc-butil etrom (200 ml). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (150 ml), osušene preko Na<2>SO<4>i filtrirane. Rastvor je isparen u vakuumu. 29b je prečišćen upotrebom fleš hromatografije.

[2539]

[2542] Primer 30

[2544] Sinteza 4-kraka-tiol-PEG 40kDa 30c

[2546] 4-krak-tiol PEG 30c sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2548]

[2551] [0827] U rastvor 6-tritilmerkapto-heksanske kiseline (111,72 mg, 286,02 µmol), HOBt (43,81 mg, 286,06 µmol) i EDC*HCl (54,84 mg, 286,06 µmol) u CH<2>Cl<2>(5 mL) je dodat 2,4,6-kolidin (251 µL, 1,91 mmol). Zatim je ovaj rastvor dodat u rastvor 4-krakog amino PEG 40 kDa (NOF, Sunbright PTE-400PA, 1,30 g, 31,78 µmol) u CH<2>Cl<2>(10 mL). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon toga, rastvarač je isparen (vodeno kupatilo 30 °C).

[2552] 30b je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2553] Prinos: 650,5 mg (48%).

[2554] Razgradnja Trt zaštitne grupe postignuta je dodavanjem koktela za odvajanje (DTT 500 mg/TFA 500 µL/vode 500 µL, TES 2,5 mL/HFIP 5,0 mL/CH<2>Cl<2>25,0 ml) u 30b (500 mg, 11,79 µmol) i inkubiranjem tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. 30c je dobijen posle taloženja u prethodno ohlađenom (-18 °C) dietil etru.

[2556]

[2559] Primer 31

[2561] Sinteza konjugata 31d

[2563] Konjugat 31d sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2564]

[2565]

[2568] [0831] Rastvor linkerskog reagensa 29b (3,82 g, 5,64 mmol), OxymaPure (802 mg, 5,64 mmol) i DIC (868 µL, 5,64 mmol) u DMF (42,5 ml) dodat je u smolu 10a (18 g, 1,85 mmol). Suspenzija je mućkana 100 minuta na sobnoj temperaturi da bi se dobila smola 31a. Smola je isprana 10 puta sa DMF (10 mL) i 10 puta sa DCM (10 mL) i osušena u vakuumu tokom 15 min. Odvajanje peptida od smole i uklanjanje zaštitnih grupa postignuto je tretmanom smole sa 135 ml koktela za odvajanje 100/3/2/1 (v/v/v/v) TFA/TES/vode/tioanizola. Smeša je mešana 60 min na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod 31b je istaložen u prethodno ohlađenom dietil etru (-18 °C).

[2569] Talog je rastvoren u TFA (423 mL). Ovom rastvoru je dodat rastvor difenil sulfoksida (1,87 g, 9,25 mmol) i anizola (5,05 mL, 46,25 mmol) u TFA (40 mL). Nakon toga, dodat je trihlorometilsilan (13,3 mL, 114,7 mmol) i reakciona smeša je mešana 15 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat amonijum fluorid (10,96 g, 296 mmol) i rastvor je mešan 2 minuta u vodenom kupatilu na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod 31c je istaložen u prethodno ohlađenom dietil etru (-18 °C) i prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2571]

[2574] U rastvor 31c (88,0 mg, 16,1 µmol) u 4,40 ml MeCN/H<2>O (1:1) koji sadrži 0,1% TFA (v/v) je dodat rastvor 4-krak-tiol-PEG 40kDa 30c (107,35 mg, 2,59 µmol) u 1,45 ml vode koja sadrži 0,1% TFA i 1 mM EDTA, a zatim 0,5 M fosfatnog pufera koji sadrži 3 mM EDTA (1,46 ml, pH 6,0). Smeša je inkubirana 2 sata na sobnoj temperaturi. Konjugat 31d je prečišćen pomoću RP-HPLC.

[2576]

[2579] Primer 32

[2581] Alternativna sinteza Dmb zaštićene 6-merkaptoheksanske kiseline 7

[2583] Dmb-zaštićena merkapto heksanska kiselina 7 sintetisana je prema sledećoj šemi:

[2584]

[2587] U rastvor 6-bromheksanske kiseline (100 g, 0,513 mmol) u EtOH (1,0 l) dodata je tiourea (47 g, 0,615 mmol) u jednoj porciji na 20 °C. Zatim je suspenzija zagrejana do 78 °C (formiran je bistri rastvor) i mešana 12 sati. Dodat je rastvor NaOH (62 g, 1,54 mol) u H<2>O (1,0 L) ukapavanjem pomoću levka pod konstantnim pritiskom. Nakon toga, refluks je nastavljen još 2 sata. Reakciona smeša je sipana u H<2>O (1 L) i ekstrahovana sa EtOAc (1 L). Vodena faza je zakiseljena sa konc. HCl do pH = 2, a zatim ekstrahovana 3 x sa EtOAc (500 mL). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (400 mL). Nakon toga, spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom na 45 °C.6-merkaptoheksanojska kiselina je korišćena u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.

[2589]

[2592] <1>H-NMR (400 MHz, CDCl<3>):

[2593] δ = 2,50 - 2,55 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2,36 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,66 - 1,61 (m, 4H), 1,41 -1,49 (m, 2H), 1,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H) ppm.

[2594] [0838] 6-merkaptoheksanska kiselina (27,0 g, 0,182 mmol) je dodata u bocu od 1 l sa tri grlića sa anhidrovanim THF (540 ml). Rastvor je degaziran tehnikom zamrzavanja-pumpeodmrzavanja i ohlađen na 0 °C pomoću spoljašnjeg ledenog kupatila. NaH (18,2 g, 455,4 mmol, 4,16 ml, čistoća 60%) je dodat kašičicom tokom 30 minuta na 0 °C. Zatim je dodat 2,6-dimetilbenzilhlorid (28,2 g, 0,182 mol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana na 20 °C i mešana 12 sati. Reakciona smeša je sipana u H<2>O (540 mL) i ekstrahovana 2 x sa MTBE (540 mL). Nakon toga, vodena faza je zakiseljena sa konc. HCl do pH = 2, a zatim ekstrahovana 3 x sa MTBE (500 mL). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (500 mL), osušene preko Na<2>SO<4>i filtrirane. 7 izolovan je nakon isparavanja rastvarača pod sniženim pritiskom na 45 °C kao žuto ulje.

[2596]

[2599] <1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d<6>):

[2600] δ = 11,99 (s, 1 H), 7,05 - 7,07 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,91 - 6,92 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,66 (s, 2H), 2,38 - 2,39 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,16 - 2,19 (m, 2H), 1,40 - 1,55 (m, 4H), 1,22 - 1,38 (m, 2H) ppm

[2602]

[2605] Primer 33

[2607] Sinteza linkerskog reagensa 33c

[2609] Linker reagens 33c sintetisan je prema sledećoj šemi:

[2610]

[2613] Paralelno su sprovedene četiri reakcije. U rastvor jedinjenja 1b (60 g, 75 mmol) u CH<2>Cl<2>(300 mL) je dodat piperidin (58 g, 0,68 mol, 67 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Četiri reakcije koje su izvedene paralelno su spojene radi obrade. Reakciona smeša je razblažena sa H<2>O (500 mL) i podešena sa 0,5 N rastvorom HCl do pH = 3 ~ 4. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa CH<2>Cl<2>(800 mL). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (400 mL) i 5% zasićenim rastvorom NaHCO<3>(400 ml) redom. Zatim su spojene organske faze osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i rastvarač je isparen u vakuumu. 33a je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu (100-200 mesh) sa DCM/MeOH (20/1 do 4/1).

[2615]

[2618] <1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d<6>):

[2619] δ = 7,34 - 7,38 (m, 4H), 6,25 - 7,29 (m, 2H), 5,08 - 5,19 (m, 2H), 4,60 - 4,68 (m, 1H), 4,32 -4,40 (m, 2H), 3,73 - 3,79 (m, 9H), 3,10 - 3,27 (m, 3H), 2,65 - 3,05 (m, 8H), 1,36 (s, 9H) ppm.

[2620] Dve reakcije su sprovedene paralelno. U rastvor Fmoc-L-Lys(Fmoc)-OH (79 g, 0,13 mol), 33a (70 g, 0,12 mol), 4-etil-morfolina (70 g, 0,61 mol, 77 mL) u MeCN (850 mL) ukapavanjem je dodat T<3>P (50% u EtOAc; 140 g, 0,22 mol) tokom perioda od 30 minuta. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Dve reakcije koje su izvedene paralelno su spojene radi obrade. Reakciona smeša je razblažena sa H<2>O/CH<2>Cl<2>(1:1, 2 L) a zatim je podešena pomoću 0,5 N rastvora HCl do pH = 3 ~ 4. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa CH<2>Cl<2>(1 L). Spojene organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (800 mL) i 5% rastvorom NaHCO<3>(800 ml) redom. Zatim su spojene organske faze osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i rastvarač je isparen u vakuumu. 33b je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu (100-200 mesh) sa petrolej etrom/etil acetatom (5/1 do 1/1).

[2622]

[2625] <1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d<6>):

[2626] δ = 7,80 - 7,90 (m, 4H), 7,61 - 7,68 (m, 5H), 7,20 - 7,40 (m, 14H), 6,14 - 6,28 (m, 3H), 5,01 -5,07 (m, 2H), 4,15 - 4,36 (m, 8H), 3,71 - 3,77 (m, 9H), 2,80 - 3,53 (m, 9H), 2,66 - 2,75 (m, 4H), 2,36 - 2,39 (m, 1H), 1,52 - 1,55 (m, 2H), 0,88 - 1,19 (m, 13H) ppm.

[2627] Dve reakcije su sprovedene paralelno. U rastvor 33b (60 g, 52 mmol) u MeOH (1,2 l) dodato je 10% Pd/C (18 g) u hidrogenizovanoj boci od 2 l. Reakciona smeša je degazirana i pročišćena 3 puta sa H<2>i zatim mešana na 25 °C pod H<2>-atmosferom (45 psi) tokom 2,5 sata. Dve reakcije koje su izvedene paralelno su spojene radi obrade. Reakciona smeša je filtrirana kroz dijatomit, a filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo sirovo jedinjenje 33c. Jedinjenje 33c je prečišćeno hromatografijom na silicijum dioksidu (100-200 mesh) sa DCM/MeOH (200/1 do 100/3).

[2629]

[2632] <1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d<6>):

[2633] δ = 12,15 (s, 1H), 7,87 - 7,89 (m, 4H), 7,50 - 7,70 (m, 5H), 7,31 - 7,40 (m, 9H), 6,20 - 6,23 (m, 2H), 4,13 - 4,36 (m, 10H), 3,70 - 3,77 (m, 9H), 2,62 - 3,10 (m, 12H), 2,30 - 2,34 (m, 1H), 2,14 - 2,18 (m, 1H), 1,50 - 1,58 (m, 2H), 1,25 - 1,34 (m, 13H) ppm

[2634]

[2637] Primer 34

[2639] Alternativna sinteza 11c

[2641] Jedinjenje 11c je sintetisano prema sledećoj šemi:

[2644]

[2647] Rastvor linkerskog reagensa 33c (3,21 g, 3,04 mmol), PyBOP (1,58 g, 3,04 mmol) i DIPEA (848 ml, 4,86 mmol) u DMF (24,0 ml) je inkubiran 5 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim je dodat smoli 10a (12 g, 1,21 mmol). Suspenzija je mućkana 2,5 sata na sobnoj temperaturi. Smola je isprana 10 puta sa DMF (10 ml) i 10 puta sa DCM (10 ml) i osušena u vakuumu tokom 60 minuta.

[2649] Primer 35

[2651] CNP-38 i konjugat 11i: Procena kardiovaskularnih efekata kod svesnog miša (subkutana primena)

[2652] Cilj ove studije bio je da se procene hemodinamski neželjeni efekti 11i u dozi ekvivalentnoj dozi CNP-38 koja izaziva hemodinamske neželjene efekte (smanjenje krvnog pritiska) kod telemetrisanog miša.

[2653] Mužjacima miševa Crl:CD1(ICR) (starosti 8-13 nedelja i telesne težine 27,3-35,6 g na početku doziranja) hirurški je implantiran telemetrijski predajnik TA11PA-C10 (Data Sciences International (DSI)) u karotidnu arteriju. Telo predajnika je postavljeno potkožno u lateralni bok miša. Miševima je doza data potkožno po latinskom kvadratnom ukrštenom dizajnu sa najmanje 72 sata između doza. Miševima je doziran 1) nosač (10 mM sukcinat, 46,0 g/L manitol, pH 4,00), 2) CNP-38 (800 µg CNP-38/kg, 10 mM sukcinat, 46,0 g/L manitol, pH 4,00) ili 3) 11i (800 µg CNP-38 ekv./kg, 10 mM sukcinat, 46,0 g/L manitol, pH 4,00). Najmanje četiri miša su bila uključena u svaki nivo doze. Krvni pritisak (sistolni (SAP), dijastolni (DAP) i srednji (MAP) i srčani ritam (SR, izveden iz krvnog pritiska), zabeleženi su korišćenjem digitalnog sistema za snimanje podataka povezanog sa DSITM Ponemah sistemom za akviziciju i analizu podataka. Sistem za snimanje je omogućio snimanje kardiovaskularnih parametara dok su miševi bili u pojedinačnim kavezima. Na dan svake sesije testiranja, životinje su merene i obavljeno je snimanje pre doziranja najmanje 60 minuta pre doziranja. Svaki miš je vraćen u kućni kavez i kardiovaskularni parametri su zabeleženi približno 48 sati nakon doziranja. Krvni pritisak i SR su zabeleženi u sledećim vremenskim tačkama: -30, -20, -10, 5, 15 i 30 minuta nakon doziranja i 1, 2, 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 i 48 sati nakon doziranja. Svaka vremenska tačka je predstavljena kao prosečna vrednost snimanja od pet minuta pre vremenske tačke. Period praćenja je izabran tako da obuhvati izloženost testiranim supstancama i pre i posle T<max>.

[2654] Rezultati: U poređenju sa vrednostima pre doze, životinje kojima je doziran nosač imale su povećan MAP 5, 15 i 30 minuta nakon uzorkovanja doze. Ovo se smatralo normalnim fiziološkim odgovorom usled rukovanja i doziranja. Isto fiziološko povećanje MAP primećeno je kod životinja kojima je doziran 11i 5, 15 i 30 minuta nakon uzorkovanja doze pre doze. Kod 3 od 4 životinje kojima je doziran CNP-38, fiziološko povećanje MAP nije bilo evidentno. Naprotiv, 3 od 4 životinje kojima je doziran CNP-38 pokazale su značajno smanjenje MAP 5, 15 i 30 minuta nakon uzorkovanja doze. Tokom preostalih deset vremenskih tačaka nije bilo razlike u MAP između životinja kojima je doziran nosač, CNP-38 i 11i.

[2656] MAP (mmHg) pre doze do 30 minuta nakon doze (srednja vrednost ±SD)

[2658]

[2659]

[2662] Slični trendovi su primećeni za SAP i DAP za sve nivoe doza. HR nije bio pogođen tretmanom sa CNP-38 ili 11i.

[2663] Zaključno, potkožna primena 11i nije smanjila krvni pritisak kao što je primećeno kod ekvivalentne doze CNP-38.

[2665] Primer 36

[2667] Farmakokinetički profil CNP-38 nakon subkutane primene jedne doze kod makaki majmuna

[2669] Ova studija je sprovedena kako bi se testirala farmakokinetika CNP-38 nakon subkutane (s.c.) primene kod makaki majmuna. Tri mužjaka majmuna (2-4 godine, 3-5 kg) primila su jednu s.c. injekciju u dozi od 40 µg/kg CNP-38. Uzorci krvi su prikupljeni na 5, 10, 15, 30, 45 minuta i 1, 2, 4, 8 sati posle primene doze.

[2670] Postupak: Nivoi CNP u plazmi analizirani su korišćenjem komercijalno dostupnog kompetitivnog radioimunološkog testa (RK-012-03, Phoenix Pharmaceuticals, CA). Test je primenjen u suštini onako kako je opisao proizvođač. Test se zasniva na kompetitivnom vezivanju između CNP obeleženog sa 1251 (isporučuje se u kompletu) i neobeleženog CNP (iz uzorka za proučavanje ili kalibranata) za anti-CNP antitelo. Kada se koncentracija CNP u uzorku poveća, količina CNP obeleženog sa 125I koja je sposobna da se veže za antitelo se smanjuje. Merenjem količine vezanog CNP obeleženog sa 125I u zavisnosti od koncentracije peptida, moguće je konstruisati kalibracionu krivu iz koje se može odrediti koncentracija peptida u uzorku.

[2671] [0857] Napravljeno je nekoliko izmena u priloženom protokolu analize. Ove izmene su uključivale korišćenje internog kalibranta CNP i QC uzoraka kako bi se osigurala konzistentnost između analiza. Da bi se skratilo trajanje analize, početna inkubacija uzoraka sa antitelima je izvršena na sobnoj temperaturi tokom 5 sati (umesto 16-24 sata na 4°C). Zbog efekata matriksa u plazmi majmuna, minimalno potrebno razblaženje je postavljeno na 1:10, što daje opseg analize od 150-1080 pg/mL CNP.

[2672] Rezultati: Primena CNP-38 kod makaki majmuna je bila dobro tolerisana. Nakon s.c. injekcije, medijana T<max>CNP-38 je primećena nakon 10 minuta, sa srednjim vremenom poluraspada od približno 7 minuta.

[2674]

[2677] Primer 37

[2679] Farmakokinetički profil konjugata 11i posle subkutane primene jedne doze kod makaki majmuna

[2681] Ova studija je sprovedena kako bi se ispitala farmakokinetika 11i nakon s.c. primene kod makaki majmuna. Četiri mužjaka (2-4 godine, 3-5 kg) primila su jednu s.c. injekciju 11i u dozi od 40 µg CNP-38 ekvivalenta/kg. Uzorci krvi su sakupljeni do 168 sati nakon doze i generisana je plazma (LiHeparin). Ukupne koncentracije CNP-38 su određene pomoću LC-MS/MS

[2682] Postupak: Termin „ukupni CNP-38“ odnosi se na kombinaciju slobodnog CNP-38 i CNP-38 vezanog u CNP-38 konjugatu. Koncentracije ukupnog CNP-38 u plazmi određene su kvantitativnim određivanjem C-terminalnog signalnog peptida (sekvenca: IGSMSGLGC) nakon triptinske digestije i redukcije disulfidnog mosta.

[2683] [0861] LC-MS analiza je sprovedena korišćenjem Agilent 1290 UPLC povezanog sa Agilent 6460 Triple Quad masenim spektrometrom preko ESI sonde. Hromatografija je izvedena na Waters Acquity BEH C18 analitičkoj koloni (50 x 1,0 mm I.D., veličina čestica 1,7 µm, 130 Å) sa pretfilterom pri brzini protoka od 0,5 mL/min (T = 45 °C). Voda (Ultrapure ≤ 500 ppt natrijuma) koja sadrži 0,1% mravlje kiseline (v/v) korišćena je kao mobilna faza A i acetonitril (ULC/MS kvalitet) sa 0,1% mravlje kiseline kao mobilna faza B. Gradijentni sistem se sastojao od kratkog izokratskog koraka pri početnim parametrima od 0,1% B tokom 0,5 minuta, posle čega je usledilo linearno povećanje od 0,1% B do 30% B za 1,5 minuta. Masena analiza je sprovedena u režimu višestrukog praćenja reakcija (MRM), prateći reakcije jonizacije m/z 824,5 [M+H]<1+>do 515,2. Kao interni standard korišćen je deuterizovani CNP-38 konjugat.

[2684] Kalibracioni standardi CNP-38 konjugata u slepoj plazmi pripremljeni su na sledeći način: Odmrznuta Li-heparin plazma makakija je prvo homogenizovana, a zatim centrifugirana 5 minuta.

[2685] Formulacija CNP-38 konjugata je razblažena u osam različitih radnih rastvora za kalibraciju koji sadrže između 0,103 i 51,28 µg/ml (CNP-38 ekv.) u 50% metanolu/50% vodi/0,1% mravljoj kiselini (v/v/v). Radni rastvori su dodati u slepu plazmu u koncentracijama između 10,3 ng/ml (CNP-38 ekv.) i 5128 ng/ml (CNP-38 ekv.). Standardi su korišćeni za generisanje kalibracione krive. Kalibraciona kriva je generisana na osnovu odnosa površina pikova analita i internog standarda korišćenjem ponderisane (1/x<2>) linearne regresije i koncentracije uzoraka su određene povratnim izračunavanjem u odnosu na kalibracionu krivu.

[2686] Za pripremu uzorka, precipitacija proteina je izvršena dodatkom 200 µL prethodno ohlađenog (0°C) acetonitrila u 50 µL uzorka plazme i 10 µL rastvora internog standarda (2,8 µg/mL CNP-38 ekvivalenta u 50% metanola/50% vode/0,1% mravlje kiseline (v/v/v)).200 µL supernatanta je preneto u novu ploču sa bunarčićima i ispareno do sušenja (pod blagom strujom azota na 35°C). Za rastvarač za rekonstituciju, 100 µg tripsina (broj za porudžbinu V5111, Promega GmbH, Mannheim, Nemačka) je rastvoreno u 100 µL 10 mM sirćetne kiseline. Dodato je 2,5 mL Tris pufera i 500 µL metanola.50 µL dobijenog rastvarača za rekonstituciju je dodato u svaku šupljinu ploče sa bunarčićma. Nakon 3 sata inkubacije na 37°C (Eppendorf ThermoMixer sa ThermoTop), dodato je 5 µL 0,5 M TCEP rastvora u svaku šupljinu i ponovo inkubirano 30 minuta na 37°C. Nakon što su se uzorci ohladili na sobnu temperaturu, dodato je 2 µL 60% mravlje kiseline u vodi.10 µL je ubrizgano u UHPLC-MS sistem. Rezultati: Primena 11i kod makaki majmuna je dobro tolerisana. Posle s.c. injekcije, medijana T<max>za 11i bila je 36 sati, i sa srednjim vremenom poluraspada od 107 sati.

[2688]

[2691] Primer 38

[2692] Funkcionalna cGMP stimulacija u NIH-3T3 ćelijama sa oslobođenim CNP

[2694] 11i inkubiran je pod fiziološkim uslovima (1 mg CNP-38 ekvivalent/ml), kao što je opisano u Primeru 20. Nakon 7 dana, oslobođeni CNP-38 je izolovan pomoću RP-HPLC i analiziran na biološku aktivnost kao što je opisano u Primeru 21.

[2696]

[2699] Primer 39

[2701] Alternativna sinteza jedinjenja 11h

[2703]

[2704]

[2707] Alternativna sinteza jedinjenja 11d: 39a je sintetisano sintezom na čvrstoj fazi kao što je opisano u odeljku „Materijal i metode“. Zaštitna grupa PG1 za bočni lanac lizina prstena i zaštitne grupe PG2 za bočne lance cisteina je Mmt. Blago cepanje smole i formiranje disulfida tretmanom jodom daje jedinjenje 39c. Nakon spajanja molekula linkera 39d i globalne deprotekcije, 11h je prečišćeno pomoću RP-HPLC.

[2709] Skraćenice:

[2711]

[2712] ACH ahondroplazija

[2713] ACN acetonitril

[2714] AcOH sirćetna kiselina

[2715] AUC<tposlednje>Površina ispod krive do poslednje kvantifikovane vremenske tačke Bn benzil

[2716] Boc terc-butiloksikarbonil

[2717] BSA goveđi serum albumin

[2718] cGMP ciklični guanozin monofosfat

[2719] C<max>Maksimalna koncentracija

[2720] CMV citomegalovirus

[2721] CNP Natriuretski peptid C-tipa

[2722] COMU (1-cijano-2-etoksi-2-oksoetilidenaminooksi)dimetilamino-morfolinokarbenijum heksafluorofosfat

[2723] konc. koncentrovan

[2724] d dan

[2725] CTC Hlorotritilhlorid polistirol

[2726] DAP Dijastolni arterijski pritisak

[2727] DBU 1,3-diazabiciklo[5.4.0]undecen

[2728] DCC N,N'-dicikloheksilkarbodiimid

[2729] DCM dihlorometan

[2730] DIC N,N'-diizopropilkarbodiimid

[2731] DIEA N,N-diizopropiletilamin

[2732] DIPEA N,N-diizopropiletilamin

[2733] DMAP dimetilamino-piridin

[2734] DMEM Dulbekov modifikovani Eagle medijum

[2735] Dmb 2,4-dimetilbenzil

[2736] DMEM Dulbekov modifikovani Eagle medijum

[2737] DMF N,N-dimetilformamid

[2738] DMSO dimetilsulfoksid

[2739] DTT ditiotreitol

[2740] EC50 polovina maksimalne efikasne koncentracije

[2741] EDC 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid

[2742] EDTA etilendiamintetrasirćetna kiselina

[2743] ELISA enzimski imunosorbentni test

[2744] ekv. stehiometrijski ekvivalent

[2745] ESI-MS elektrosprej jonizaciona masena spektrometrija

[2746] Et etil

[2747] EtOAc etil acetat

[2748] EtOH etanol

[2749] FBS fetalni goveđi serum

[2750] FGFR3 receptor 3 faktora rasta fibroblasta

[2751] FITC fluorescein izotiocijanat

[2752] Fmoc 9-fluorenilmetiloksikarbonil

[2753] h sat

[2754] HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HCH hipohondroplazija

[2755] HFIP heksafluoroizopropanol

[2756] HPLC visokoefikasna tečna hromatografija

[2757] HOBt N-hidroksibenzotriazol

[2758] HR Srčani puls

[2759] IBMX 3-izobutil-1-metilksantin

[2760] iPrOH 2-propanol

[2761] iv intravenski

[2762] ivDde 4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheks-1-iliden)-3-metilbutil

[2763] LC tečna hromatografija

[2764] LTQ linearni zamka kvadrupol

[2765] Mal 3-maleimido propil

[2766] MAP Srednji arterijski pritisak

[2767] Me metil

[2768] MeON metanol

[2769] min minuta

[2770] Mmt monometoksitritil

[2771] MS maseni spektar / masena spektrometrija

[2772] MSA metansulfonska kiselina

[2773] MTBE metil-terc-butil etar

[2774] Mtt metiltritil

[2775] MW molekulska težina

[2776] m/z odnos mase i naelektrisanja

[2777] NEP neutralna endopeptidaza

[2778] NHS N-hidroksi sukcinimid

[2779] NPR receptor natriuretskog peptida

[2780] OtBu terc-butiloksi

[2781] PBS fosfatno puferovani fiziološki rastvor

[2782] PEG poli(etilen glikol)

[2783] PFP pentafluorofenol

[2784] pH potentia Hydrogenii

[2785] Pr propil

[2786] PyBOP benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat Q-TOF kvadrupolno vreme leta

[2787] qRT-PCR kvantitativna lančana reakcija polimeraze u realnom vremenu RP-HPLC visokoefikasne tečne hromatografije sa obrnutom fazom rpm rundi u minuti

[2788] rt sobna temperatura

[2789] SIM praćenje pojedinačnih jona

[2790] SAP Sistolni arterijski pritisak

[2791] SEC hromatografija isključivanja veličine

[2792] sc subkutano

[2793] Su sukcinimidil

[2794] T<3>P 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosforinan-2,4,6-trioksid TCEP tris(2-karboksietil)fosfin

[2795] TCP tritilhlorid polistirol

[2796] TD tanatoforna displazija

[2797] TES trietilsilan

[2798] TFA trifluorosirćetna kiselina

[2799] THF tetrahidrofuran

[2800] TIPS triizoproilsilan

[2801] T<max>Vreme maksimalne koncentracije

[2802] TMEDA N,N,N'N'-tetrametiletilen diamin

[2803] Tmob 2,4,6-trimetoksibenzil

[2804] TR-FRET vremenski razložen prenos energije fluorescencije

[2805] Trt trifenilmetil, tritil

[2806] UPLC ultraperformansna tečna hromatografija

[2807] UV ultraljubičasto

[2808] vs. naspram

[2809] ZQ jedan kvadrupol

Claims (15)

1. Patentni zahtevi

1. Farmaceutska kompozicija koja sadrži agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem, pri čemu se posle subkutane primene pomenutog agonista CNP sa kontrolisanim oslobađanjem dobija smanjenje ili eliminisanje jednog ili više neželjenih efekata u poređenju sa subkutanom primenom odgovarajućeg slobodnog agonista CNP u ekvivalentnoj dozi, pri čemu, agonist CNP je CNP, pri čemu, agonist CNP sa kontrolisanim oslobađanjem je formule (Ia)

pri čemu

x je 1;

-D je CNP ostatak koji sadrži prstenasti ostatak SEQ ID NO:96;

-L<1>- je reverzibilni ostatak linkera proleka koji je konjugovan sa bočnim lancem aminokiselinskih ostataka prstenastog ostatka -D ili sa osnovom prstenastog ostatka -D, pri čemu, -L<1>- je formule (IIa)

pri čemu isprekidana linija označava vezu sa azotom -D formiranjem amidne veze;

-X<2>- je -C(R<8>R<8a>)- ili -C(R<8>R<8a>)-C(R<9>R<9a>)-;

-R<1>, -R<1a>, -R<2>, -R<2a>, -R<4>, -R<4a>, -R<8>, -R<8a>, -R<9>i -R<9a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila;

-R<3>i -R<3a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pod uslovom da u slučaju da su jedan od -R<3>i -R<3a>ili oba drugačija od -H, oni su povezani sa azotom za koji su vezani preko sp<3>-hibridizovanog atoma ugljenika;

opciono, jedan ili oba para -R<1a>/-R<4a>i -R<8a>/-R<9a>formiraju hemijsku vezu;

opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<1a>, -R<2>/-R<2a>, -R<4>/-R<4a>, -R<8>/-R<8a>i -R<9>/-R<9a>su spojeni zajedno sa atomom za koji su vezani tako da formiraju C<3-10>cikloalkil ili 3- do 10-člani heterociklil;

opciono, jedan ili više parova -R<1>/-R<4>, -R<8>/-R<9>i -R<2>/-R<3>su spojeni zajedno sa atomima za koje su vezani tako da formiraju prsten A;

opciono, -R<3>/-R<3a>su spojeni zajedno sa atomom azota za koji su vezani tako da fomiraju 3- do 10-člani heterociklus;

A je fenil, naftil, indenil, indanil, tetralinil, C<3-10>cikloalkil, 3- do 10-člani heterociklil ili 8- do 11-člani heterobiciklil;

pri čemu, -L<1>- je supstituisan sa -L<2>-Z pod uslovom da vodonik označen zvezdicom u formuli (IIa) nije zamenjen sa -L<2>-Z;

-L<2>- je formule (i):

pri čemu

isprekidana linija označena zvezdicom označava vezu sa -L<1>-;

neoznačena isprekidana linija označava vezu sa -Z;

-R<1>je -H, C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil;

n je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ili 18;

-Z je ostatak nosača rastvorljivog u vodi koji sadrži ostatak formule (a)

pri čemu

isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

BP<a>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

-R je -H ili C<1-6>alkil;

a je 0 ako je BP<a>jednak -N< ili -CR< i a je 1 ako je BP<a>jednak >C<;

-S<a>-, -S<a>'-, -S<a>"- i -S<a‴>- su nezavisno jedna od druge hemijska veza ili su izabrane iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso(=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; -P<a>', -P<a>" i -P<a>‴ su nezavisno polimerni ostatak; i

pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 2 nmol/kg ekvivalenata CNP, i pri čemu su jedan ili više neželjenih efekata kardiovaskularni neželjeni efekti.

2. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu, neželjeni efekat je hipotenzija.

3. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži najmanje 25 nmol/ml ekvivalenata CNP.

4. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 5 nmol/kg ekvivalenata CNP.

5. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 10 nmol/kg ekvivalenata CNP.

6. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, pri čemu jedna jedinična doza farmaceutske kompozicije sadrži najmanje 20 nmol/kg ekvivalenata CNP.

7. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, pri čemu -R<1>i -R<1a>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od -H, metila i etila.

8. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, pri čemu -Z ima formulu (f)

pri čemu

isprekidana linija označava vezu sa -L<2>-;

BP<f>je tačka grananja izabrana iz grupe koja se sastoji od -N<, -CR< i >C<;

-R je -H ili C<1-6>alkil;

f je 0 ako je BP<f>jednako -N< ili -CR< i f je 1 ako je BP<f>jednako >C<;

-S<f>-, -S<f>-, -S<f>"- i -S<j‴>- su nezavisno ili hemijska veza ili su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od C<1-50>alkila, C<2-50>alkenila i C<2-50>alkinila; pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono supstituisani sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti, i pri čemu C<1-50>alkil, C<2-50>alkenil i C<2-50>alkinil su opciono prekinuti jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>N(R<2>)-, -S(O)N(R<2>)-, -S(O)<2>-, -S(O)-, -N(R<2>)S(O)<2>N(R<2a>)-, -S-, -N(R<2>)-, -OC(OR<2>)(R<2a>)-, -N(R<2>)C(O)N(R<2a>)- i -OC(O)N(R<2>)-;

svaki -T- je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, C<3-10>cikloalkila, 3- do 10-članog heterociklila, 8- do 11-članog heterobiciklila, 8- do 30-članog karbopoliciklila i 8- do 30-članog heteropoliciklila; pri čemu je svaki -T- nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više -R<1>, koji su isti ili različiti;

svaki -R<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halogena, -CN, okso (=O), -COOR<3>, -OR<3>, -C(O)R<3>, -C(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>N(R<3>R<3a>), -S(O)N(R<3>R<3a>), -S(O)<2>R<3>, -S(O)R<3>, -N(R<3>)S(O)<2>N(R<3a>R<3b>), -SR<3>, -N(R<3>R<3a>), -NO<2>, -OC(O)R<3>, -N(R<3>)C(O)R<3a>, -N(R<3>)S(O)<2>R<3a>, -N(R<3>)S(O)R<3a>, -N(R<3>)C(O)OR<3a>, -N(R<3>)C(O)N(R<3a>R<3b>), -OC(O)N(R<3>R<3a>) i C<1-6>alkil; pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti;

svaki -R<2>, -R<2a>, -R<3>, -R<3a>i -R<3b>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H i C<1-6>alkila, pri čemu je C<1-6>alkil opciono supstituisan jednim ili više halogena, koji su isti ili različiti; i

-Z<a>', -Z<a>" i -Z<a‴>su nezavisno

pri čemu

BP<a>, -S<a>-, -S<a>'-, -S<a>"- , -S<a‴>- , -P<a>', -P<a>", -P<a‴>i a se koriste kao što su definisani u patentnom zahtevu 1.

9. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, pri čemu, a je 0.

10. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, pri čemu -P<a>', -P<a>" i -P<a‴>nezavisno imaju molekulsku težinu u rasponu od i uključujući 5 kDa do 50 kDa.

11. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, pri čemu BP<a>je -CH<.

12. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68,

SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:91 ili SEQ ID NO:92.

13. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, pri čemu CNP ima sekvencu SEQ ID NO:24.

14. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13 za upotrebu u lečenju bolesti, pri čemu je bolest ahondroplazija, hipohondroplazija, nizak rast, patuljasti rast, osteohondrodisplazija, tanatoforična displazija, osteogeneza imperfekta, ahondrogeneza, tačkasta hondrodisplazija, homozigotna ahondroplazija, kamptomelična displazija, kongenitalna letalna hipofosfatazija, perinatalni letalni tip osteogeneze imperfekte, sindrom polidaktilije kratkih rebara, rizomeličan tip tačkaste hondrodisplazije, metafizna displazija Jansen-ovog tipa, spondiloepifizna displazija kongenita, atelosteogeneza, dijastrofična displazija, kongenitalni kratki femur, mezomelična displazija Langer-ovog tipa, mezomelična displazija Nievergelt-ovog tipa, Robinow-ljev sindrom, Reinhardt-ov sindrom, akrodizostoza, periferna dizostoza, Kniest-ova displazija, fibrohondrogeneza, Roberts-ov sindrom, akromezomelična displazija, mikromelija, Morquio-ov sindrom, Kniest-ov sindrom, metatrofična displazija, spondiloepimetafizna displazija, neurofibromatoza, Legius-ov sindrom, LEOPARD sindrom, Noonan-ov sindrom, nasledna gingivalna fibromatoza, neurofibromatoza tip 1, kardiofacijektuanski sindrom, Costello-ov sindrom, deficijencija SHOX, idiopatski niski rast, nedostatak hormona rasta, osteoartritis, kleidokranijalna dizostoza, kraniosinostoza, brahidaktilija, kamptodaktilija, polidaktilija, sindaktilija, disegmentalna displazija, enhondromatoza, fibrozna displazija, nasledne multiple egzostoze, hipofosfatemijski rahitis, Jaffe-Lichtenstein-ov sindrom, Marfan-ov sindrom, McCune-Albright-ov sindrom, osteopetroza ili osteopoikiloza.

15. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 14, pri čemu je bolest ahondroplazija.