RS67991B1 - N-fenil supstituisani indolni derivati kao inhibitori myt1 za lečenje kancera - Google Patents

N-fenil supstituisani indolni derivati kao inhibitori myt1 za lečenje kancera

Info

Publication number
RS67991B1
RS67991B1 RS20260411A RSP20260411A RS67991B1 RS 67991 B1 RS67991 B1 RS 67991B1 RS 20260411 A RS20260411 A RS 20260411A RS P20260411 A RSP20260411 A RS P20260411A RS 67991 B1 RS67991 B1 RS 67991B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
optionally substituted
mmol
alkyl
amino
pyrrolo
Prior art date
Application number
RS20260411A
Other languages
English (en)
Inventor
Janek Szychowski
Bingcan Liu
Evelyne Dietrich
Frédéric Vallée
Alexander Perryman
Jean-François Truchon
Robert Papp
Patrick Beaulieu
Original Assignee
Repare Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Repare Therapeutics Inc filed Critical Repare Therapeutics Inc
Publication of RS67991B1 publication Critical patent/RS67991B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
    • C07B59/002—Heterocyclic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

[0001] Opis
[0003] OBLAST PRONALASKA
[0005] Pronalazak se odnosi na jedinjenja i farmaceutske kompozicije, njihovu pripremu i njihovu upotrebu u lečenju bolesti ili stanja, npr. kancera, a posebno onih bolesti ili stanja (npr. kancera koji nose amplifikaciju/prekomernu ekspresiju CCNE1 ili kancera sa mutacijom FBXW7) koji zavise od aktivnosti membranski povezane tirozin i treonin-specifične cdc2-inhibitorne kinaze (Myt1) (naziv gena PKMYT1).
[0007] POZADINA
[0009] DNK je kontinuirano izložena i endogenim uticajima (npr. zaustavljenim replikacionim viljuškama, reaktivnim vrstama kiseonika) i egzogenim uticajima (UV zračenje, jonizujuće zračenje, hemikalije) koji mogu dovesti do oštećenja DNK. Kao rezultat toga, ćelije su uspostavile sofisticirane mehanizme za suzbijanje ovih štetnih događaja koji bi inače ugrozili integritet genoma i doveli do bolesti genomske nestabilnosti kao što je kancer. Ovi mehanizmi se zajednički nazivaju odgovor na oštećenje DNK (DDR). Jedna od komponenti ukupnog DDR je aktivacija različitih puteva kontrolnih tačaka koji moduliraju specifične mehanizme popravke DNK tokom različitih faza ćelijskog ciklusa, što uključuje kontrolne tačke G1, S, G2 i mitoze. Većina ćelija kancera je izgubila svoju kontrolnu tačku G1 zbog mutacija p53 i kao takve se oslanjaju na kontrolnu tačku G2 da izvrši neophodne korekcije oštećenja DNK pre nego što se obavežu na ulazak u mitozu i podelu na 2 ćerke ćelije.
[0010] Potrebni su novi terapijski pristupi borbi protiv kancera, npr. oni koji koriste male molekule, posebno terapije koje omogućavaju ciljano lečenje kancera.
[0012] KRATAK OPIS PRONALASKA
[0014] U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I):
[0015]
[0017] ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
[0018] pri čemu
[0020] svaki od X, Y i Z je nezavisno N ili CR<2>;
[0021] R<1>i svaki R<2>su nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6->
[0022] <10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, cijano, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, - C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>; ili se R<1>kombinuje sa jednim R<2>u blizini R<1>da bi se formirao opciono supstituisani C<3->
[0023] <6>alkilen;
[0024] svaki od R<3>i R<4>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil ili halogen;
[0025] R<5>je H ili -N(R<7>)<2>;
[0026] R<6>je -C(O)NH(R<8>), -C(O)R<7A>, ili -SO<2>R<7A>;
[0027] svaki R<7>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, ili -SO<2>R<7A>; ili dve R<7>grupe, zajedno sa atomom za koji su obe vezane, kombinuju se da bi formirale opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
[0028] svaki R<7A>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<6-10>aril;
[0029] svaki R<7B>je nezavisno hidroksil, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, -N(R<7>)<2>, - C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili opciono supstituisani alkoksi; svaki R<8>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkoksialkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroaril; ili dva R<8>, zajedno sa atomom za koji su vezani, kombinuju se da bi formirali opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
[0030] Q je opciono supstituisani C<1-6>alkilen, opciono supstituisani C<2-6>alkenilen, opciono supstituisani C<2-6>alkinilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenilen opciono supstituisani C<6-10>arilen, opciono supstituisani C<2-9>heterociklilen, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroarilen.
[0032] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je obogaćeno za atropizomer formule (IA):
[0035]
[0038] U nekim primerima izvođenja, X je CR<2>. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je formule (II):
[0041]
[0044] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je obogaćeno za atropizomer formule (IIA):
[0047]
[0050] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je formule (III):
[0051]
[0053] pri čemu, R<2A>je vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, -C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je obogaćeno za atropizomer formule (IIIA):
[0056]
[0059] U nekim primerima izvođenja, R<2A>je vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, ili halogen.
[0060] U nekim primerima izvođenja, R<3>je opciono supstituisani C<1-6>alkil. U nekim primerima izvođenja, R<3>je halogen. U nekim primerima izvođenja, R<4>je opciono supstituisani C<1-6>alkil. U nekim primerima izvođenja, R<4>je halogen (npr. hlor).
[0061] U nekim primerima izvođenja, R<2>je vodonik. U nekim primerima izvođenja, R<2>je opciono supstituisani C<1-6>alkil. U nekim primerima izvođenja, R<2>je opciono supstituisani metil ili opciono supstituisani izopropil. R<2>je halogen.
[0062] U nekim primerima izvođenja, R<1>je vodonik. U nekim primerima izvođenja, R<1>je halogen. U nekim primerima izvođenja, R<1>je hlor ili brom. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<1-6>alkil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani metil, opciono supstituisani etil, opciono supstituisani izopropil ili opciono supstituisani butil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<1-9>heteroaril. U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1,3-tiazolil, 1,2-tiazolil, 1,3-oksazolil, benzo-1,3-tiazolil, benzo-1,3-oksazolil, indolil, benzimidazolil, piridil, imidazolil, pirimidil, pirazinil, piridazinil ili pirazolil, pri čemu, R<1>je opciono supstituisan supstituentima kao što su definisani za opciono supstituisani C<1-9>heteroaril. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil, pri čemu, R<1>je opciono supstituisan supstituentima kao što su definisani za opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<2-9>heterociklil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, tiomorfolinil, oksa-aza-spiro[3,3]heptan ili oksa-aza-biciklo[3.2.1]oktan, pri čemu, R<1>je opciono supstituisan supstituentima kao što su definisani za opciono supstituisani C<2-9>heterociklil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani cikloheksenil ili opciono supstituisani ciklopentenil. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani C<6-10>aril. U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisani fenil.
[0063] U nekim primerima izvođenja, R<1>je -Q-R<7B>. U nekim primerima izvođenja, Q je opciono supstituisani C<2-6>alkinilen. U nekim primerima izvođenja, Q je opciono supstituisani C<1-6>alkilen. U nekim primerima izvođenja, Q je opciono supstituisani C<6-10>arilen. U nekim primerima izvođenja, R<7B>je opciono supstituisani C<2-9>heterociklil. U nekim primerima izvođenja, R<7B>je opciono supstituisani C<6-10>aril.
[0064] U nekim primerima izvođenja, R<1>je opciono supstituisan sa jednom, dve ili tri grupe nezavisno izabrane iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila, trifluorometila, fluora, hlora, broma, amino, hidroksila, cijano, okso, -C(O)NH<2>, -C(O)NH(Me), -C(O)N(Me)<2>, -(CH<2>)<n>-C(O)OH i -(CH<2>)<n>-C(O)Ot-Bu, pri čemu, n je 0 ili 1.
[0065] U nekim primerima izvođenja, R<1>je -N(R<7>)<2>. U nekim primerima izvođenja, R<1>je dietilamino.
[0066] U nekim primerima izvođenja, R<5>je vodonik. U nekim primerima izvođenja, R<5>je -N(R<7>)<2>. U nekim primerima izvođenja, R<5>je -NH<2>. U nekim primerima izvođenja, R<6>je -C(O)NH(R<8>). U nekim primerima izvođenja, R<6>je -C(O)NH<2>. U nekim primerima izvođenja, R<6>je -C(O)NH(Me). U nekim primerima izvođenja, R<6>je -SO<2>R<7A>. U nekim primerima izvođenja, R<6>je -SO<2>Me.
[0067] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je izabrano iz grupe koja se sastoji od jedinjenja 1-328 (npr. jedinjenja 1-288) i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
[0068] [0018] U sledećem aspektu, pronalazak pruža farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje opisano ovde, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. U nekim primerima izvođenja, kompozicija je izotopski obogaćena deuterijumom. Reference na postupke lečenja u narednim pasusima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).
[0069] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak inhibicije Myt1 u ćeliji koja eksprimira Myt1, pri čemu postupak sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa jedinjenjem koje je ovde opisano.
[0070] U nekim primerima izvođenja, ćelija prekomerno eksprimira CCNE1. U nekim primerima izvođenja, ćelija se nalazi u subjektu.
[0071] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak lečenja subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta jedinjenja opisanog ovde, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije opisane ovde.
[0072] U nekim primerima izvođenja, subjekt pati od bolesti ili stanja koje ima simptom ćelijske hiperproliferacije i potrebno mu je lečenje za tu bolest ili stanje. U nekim primerima izvođenja, bolest ili stanje je kancer. U nekim primerima izvođenja, kancer je kancer koji prekomerno eksprimira CCNE1.
[0073] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak lečenja kancera kod subjekta, pri čemu postupak sadrži primenu na subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine inhibitora Myt1, pri čemu je kancer prethodno identifikovan kao kancer sa prekomernom ekspresijom CCNE1.
[0074] U sledećem aspektu, pronalazak pruža postupak lečenja kancera kod subjekta, pri čemu postupak sadrži primenu na subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine inhibitora Myt1, pri čemu, kancer je kancer koji prekomerno eksprimira CCNE1.
[0075] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak za indukovanje ćelijske smrti u ćelijama kancera koje prekomerno eksprimiraju CCNE1, pri čemu postupak sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa efikasnom količinom inhibitora Myt1.
[0076] U nekim primerima izvođenja, ćelija se nalazi u subjektu. U nekim primerima izvođenja, inhibitor Myt1 je jedinjenje opisano ovde ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U nekim primerima izvođenja, kancer koji prekomerno eksprimira CCNE1 je kancer materice, kancer jajnika, kancer dojke, kancer želuca, kancer jednjaka, kancer pluća ili kancer endometrijuma.
[0077] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak lečenja kancera kod subjekta, pri čemu postupak sadrži primenu na subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine inhibitora Myt1, pri čemu je kancer prethodno identifikovan kao kancer koji ima inaktivirajuću mutaciju u FBXW7 genu.
[0078] U sledećem aspektu, pronalazak pruža postupak lečenja kancera kod subjekta, pri čemu postupak sadrži primenu na subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine inhibitora Myt1, pri čemu kancer ima inaktivirajuću mutaciju u FBXW7 genu.
[0079] U još jednom aspektu, pronalazak pruža postupak indukovanja ćelijske smrti u ćeliji kancera sa mutacijom FBXW7, pri čemu postupak sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa efikasnom količinom inhibitora Myt1.
[0080] U nekim primerima izvođenja, ćelija se nalazi u subjektu. Kancer je kancer materice, kolorektalni kancer, kancer dojke, kancer pluća ili kancer jednjaka. U nekim primerima izvođenja, inhibitor Myt1 je jedinjenje opisano ovde ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0082] SKRAĆENICE
[0084] [0031] U ovom dokumentu se koriste skraćenice i termini koji se uobičajeno koriste u oblastima organske hemije, medicinske hemije, farmakologije i medicine i koji su dobro poznati stručnjacima u ovim oblastima. Reprezentativne skraćenice i definicije date su u nastavku: Ac je acetil [CH<3>C(O)-], Ac<2>O je sirćetni anhidrid; AcOH je sirćetna kiselina; APC je ćelija koja prezentuje antigen; aq. je vodeni; 9-BBN je 9-borabiciklo[3.3.1]nonan; BINAP je (2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil); Bn je benzil; BOC je terc-butiloksikarbonil; CDI je karbonildiimidazol; DCM je dihlorometano; DIAD je diizopropilazodikarboksilat; DIBAL je diizobutilaluminijum hidrid; DIPEA je diizopropiletil amin; DMA je dimetilacetamid; DMAP je 4-dimetilaminopiridin; DMF je N,N-dimetilformamid; DMSO je dimetil sulfoksid; dppf je 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen; EDAC (ili EDC) je 1-etil-3-[3-(dimetilamino)propil]-karbodiimid HCl; ESI je masena spektrometrija sa elektrosprej jonizacijom; Et<2>O je dietil etar; Et<3>N je trietilamin; Et je etil; EtOAc je etil acetat; EtOH je etanol; 3-F-Ph je 3-fluorofenil, HATU je (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; HCl je hlorovodonična kiselina; HOBt je 1-hidroksibenzotriazol; HPLC je tečna hromatografija visokih performansi; LCMS je HPLC sa masenom spektralnom detekcijom; LiHMDS je litijum bis(trimetilsilil)amid; LG je odlazeća grupa; M je molarni; mCPBA je metahlorperbenzoeva kiselina; mmol je milimol; Me je metil; MeCN je acetonitril; MeOH je metanol; Ms je metansulfonil; MS je masena spektrometrija; N je normalan; NaHMDS je natrijum heksametildisiliazid; NaOAc je natrijum acetat; NaOtBu je natrijum tercbutoksid; NMO je N-metilmorfolin N-oksid; NMP je N-metil pirolidinon; NMR je nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija; Pd<2>(dba)<3>je tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum; PdCl<2>(PPh<3>)<2>je dihlorobis-(trifenilfosfen)paladijum; PG označava neodređenu zaštitnu grupu; Ph je fenil; PhMe je toluen; PPh<3>je trifenilfosfin; PMB je para-metoksibenzil; rt je sobna temperatura; RBF je boca sa okruglim dnom; RuPhos Pd G1 je hloro-(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksi-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil]paladijum(II); SEM je [2-(trimetilsilil)etoksi]metil; SFC je superkritična fluidna hromatografija; S<N>Ar je nukleofilna aromatična supstitucija; TBAB je tetrabutil amonijum bromid; TBAF je tetrabutil amonijum fluorid; TBS je terc-butildimetilsilil; tBu je terc-butil; Tf je triflat; TFA je trifluorosirćetna kiselina; THF je tetrahidrofuran; THP je tetrahidropiran; TLC je tankoslojna hromatografija; TMAD je tetrametilazodikarboksamid; TMS je trimetilsilil; TPAP je tetrapropilamonijum perutenat; Ts je p-toluensulfonil; UPLC je ultraperformansna tečna hromatografija.
[0086] DEFINICIJE
[0088] Termin „aberantno“, kako se ovde koristi, odnosi se na ono što se razlikuje od normalnog. Kada se koristi za opisivanje aktivnosti, aberantno se odnosi na aktivnost koja je veća ili manja od normalne kontrole ili proseka normalnih kontrolnih uzoraka bez bolesti. Aberantna aktivnost može se odnositi na količinu aktivnosti koja dovodi do bolesti, gde vraćanje aberantne aktivnosti na normalnu ili količinu koja nije povezana sa bolešću (npr. primenom jedinjenja ili korišćenjem postupka kako je ovde opisan), dovodi do smanjenja bolesti ili jednog ili više simptoma bolesti.
[0089] Termin „acil“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu -C(=O)-R, pri čemu, R je alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, cikloalkinil, aril, heteroaril ili heterociklil. Acil može biti opciono supstituisani kao što je ovde opisano za svaku odgovarajuću R grupu.
[0090] Termin „adenokarcinom“, kako se ovde koristi, predstavlja malignitet koji nastaje iz žlezdanih ćelija koje oblažu organe u organizmu. Neograničavajući primeri adenokarcinoma uključuju nesitnoćelijski kancer pluća, kancer prostate, kancer pankreasa, kancer jednjaka i kolorektalni kancer.
[0091] [0035] Termin „alkanoil“, kako se ovde koristi, predstavlja vodonik ili alkil grupu koja je vezana za matičnu molekulsku grupu preko karbonil grupe i ilustrovana je formilom (tj. karboksialdehidnom grupom), acetilom, propionilom, butirilom i izo-butirilom. Nesupstituisane alkanoil grupe sadrže od 1 do 7 ugljenika. Alkanoil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana (npr. opciono supstituisani C1-7 alkanoil) kao što je ovde opisano za alkil grupu. Završetak „-oil“ može se dodati drugoj grupi definisanoj ovde, npr. aril, cikloalkil i heterociklil, da bi se definisali „ariloil“, „cikloalkanoil“ i „(heterociklil)oil“. Ove grupe predstavljaju karbonil grupu supstituisanu arilom, cikloalkilom ili heterociklilom, respektivno. Svaki od „ariloil“, „cikloalkanoil“ i „(heterociklil)oil“ može biti opciono supstituisan kao što je definisano za „aril“, „cikloalkil“ ili „heterociklil“, respektivno.
[0092] Termin „alkenil“, kako se ovde koristi, predstavlja aciklične monovalentne ugljovodonične grupe pravog ili razgranatog lanca koje sadrže jednu, dve ili tri dvostruke veze ugljenik-ugljenik. Neograničavajući primeri alkenil grupa uključuju etenil, prop-1-enil, prop-2-enil, 1-metiletenil, but-1-enil, but-2-enil, but-3-enil, 1-metilprop-1-enil, 2-metilprop-1-enil i 1-metilprop-2-enil. Alkenil grupe mogu biti opciono supstituisane kao što je ovde definisano za alkil.
[0093] Termin „alkenilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na dvovalentnu alkenil grupu. Opciono supstituisani alkenilen je alkenilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za alkenil.
[0094] Termin „alkoksi“, kako se ovde koristi, predstavlja hemijski supstituent formule -OR, pri čemu, R je C<1-6>alkil grupa, osim ako nije drugačije naznačeno. U nekim primerima izvođenja, alkil grupa može biti dalje supstituisana kao što je ovde definisano. Termin „alkoksi“ može se kombinovati sa drugim terminima definisanim ovde, npr. aril, cikloalkil ili heterociklil, da bi se definisale grupe „aril alkoksi“, „cikloalkil alkoksi“ i „(heterociklil)alkoksi“. Ove grupe predstavljaju alkoksi koji je supstituisani aril, cikloalkil ili heterociklil, respektivno. Svaki od „aril alkoksi“, „cikloalkil alkoksi“ i „(heterociklil)alkoksi“ može opciono biti supstituisan kao što je ovde definisano za svaki pojedinačni deo.
[0095] Termin „alkoksialkil“, kako se ovde koristi, predstavlja hemijski supstituent formule -L-O-R, pri čemu, L je C<1-6>alkilen i R je C<1-6>alkil. Opciono supstituisani alkoksialkil je alkoksialkil koji je opciono supstituisani kao što je ovde opisano za alkil.
[0096] Termin „alkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na acikličnu zasićenu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca, koja, kada je nesupstituisana, ima od 1 do 12 ugljenika, osim ako nije drugačije naznačeno. U određenim poželjnim primerima izvođenja, nesupstituisani alkil ima od 1 do 6 ugljenika. Alkil grupe su ilustrovane metilom; etilom; n- i izo-propilom; n-, sek-, izo- i terc-butilom; neopentilom i slično, i mogu biti opciono supstituisane, ako valenca dozvoljava, sa jednim, dva, tri ili, u slučaju alkil grupa sa dva ili više ugljenika, četiri ili više supstituenata nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od: amino; alkoksi; aril; ariloksi; azido; cikloalkil; cikloalkoksi; cikloalkenil; cikloalkinil; halo; heterociklil; (heterociklil)oksi; heteroaril; hidroksi; nitro; tiol; silil; cijano; alkilsulfonil; alkilsulfinil; alkilsulfenil; =O; =S; -C(O)R ili -SO<2>R, pri čemu, R je amino; i =NR', pri čemu, R' je H, alkil, aril ili heterociklil. Svaki od supstituenata može sam biti nesupstituisan ili, ako
[0099] 1
[0100] valenca dozvoljava, supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu.
[0101] Termin „alkilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na dvovalentnu alkil grupu. Opciono supstituisani alkilen je alkilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za alkil.
[0102] Termin „alkilamino“, kako se ovde koristi, odnosi se na grupu koja ima formulu -N(R<N1>)<2>ili - NHR<N1>, u kojoj R<N1>je alkil, kao što je ovde definisan. Alkil deo alkilamino grupe može biti opciono supstituisan kao što je definisano za alkil. Svaki opcioni supstituent na supstituisanoj alkilamino grupi može sam biti nesupstituisan ili, ako valenca dozvoljava, supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu.
[0103] Termin „alkilsulfenil“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu formule -S-(alkil). Alkilsulfenil može biti opciono supstituisan kao što je definisano za alkil.
[0104] Termin „alkilsulfinil“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu formule -S(O)-(alkil). Alkilsulfinil može biti opciono supstituisan kao što je definisano za alkil.
[0105] Termin „alkilsulfonil“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu formule -S(O)2-(alkil). Alkilsulfonil može biti opciono supstituisan kao što je definisano za alkil.
[0106] Termin „alkinil“, kako se ovde koristi, predstavlja monovalentne ugljovodonične grupe pravog ili razgranatog lanca od dva do šest atoma ugljenika koje sadrže najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, a primeri su etinil, 1-propinil i slično. Alkinil grupe mogu biti nesupstituisane ili supstituisane (npr., opciono supstituisani alkinil) kao što je definisano za alkil.
[0107] Termin „alkinilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na dvovalentnu alkinil grupu. Opciono supstituisani alkinilen je alkinilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za alkinil.
[0108] Termin „amino“, kako se ovde koristi, predstavlja -N(R<N1>)<2>, pri čemu, ako je amino nesupstituisan, oba R<N1>su H; ili, ako je amino supstituisan, svaki R<N1>je nezavisno H, -OH, -NO<2>, -N(R<N2>)<2>, - SO<2>O<R>N2
, -SO<2>R<N2>, -SOR<N2>, -C(O)OR<N2>, N-zaštitna grupa, alkil, alkenil, alkinil, alkoksi, aril, arilalkil, ariloksi, cikloalkil, cikloalkenil, heteroalkil ili heterociklil, pod uslovom da najmanje jedan R<N1>nije H, i pri čemu svaki R<N2>je nezavisno H, alkil ili aril. Svaki od supstituenata može sam biti nesupstituisan ili supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu. U nekim primerima izvođenja, amino je nesupstituisani amino (tj. -NH<2>) ili supstituisani amino (npr., -NHR<N1>), pri čemu, R<N1>je nezavisno -OH, SO2OR<N2>, -SO<2>R<N2>, -SOR<N2>, -COOR<N2>, opciono supstituisani alkil ili opciono supstituisani aril, i svaki R<N2>može biti opciono supstituisani alkil ili opciono supstituisani aril. U nekim primerima izvođenja, supstituisani amino može biti alkilamino, u kome su alkil grupe opciono supstituisane kao što je ovde opisano za alkil. U nekim primerima izvođenja, amino grupa je -NHR<N1>, u kojoj R<N1>je opciono supstituisani alkil.
[0109] Termin „aril“, kako se ovde koristi, predstavlja mono-, biciklični ili multiciklični karbociklični sistem prstena koji ima jedan ili dva aromatična prstena. Aril grupa može da sadrži od 6 do 10 atoma ugljenika. Svi atomi unutar nesupstituisane karbociklične aril grupe su atomi ugljenika. Neograničavajući primeri karbocikličnih aril grupa uključuju fenil, naftil, 1,2-dihidronaftil, 1,2,3,4-tetrahidronaftil, fluorenil, indanil, indenil, itd. Aril grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana sa jednim, dva, tri, četiri ili pet supstituenata nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od: alkila; alkenila; alkinila; alkoksi; alkilsulfinila; alkilsulfenila; alkilsulfonila; amino; arila; ariloksi; azido; cikloalkila; cikloalkoksi; cikloalkenila; cikloalkinila; halo; heteroalkila; heterociklila; (heterociklil)oksi; hidroksi; nitro; tiola; silila; -(CH<2>)<n>-C(O)OR<A>; -C(O)R; i -SO<2>R, pri čemu, R je amino ili alkil, R<A>je H ili alkil i n je 0 ili 1. Svaki od supstituenata može sam biti nesupstituisan ili supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu.
[0110] Termin „aril alkil“, kako se ovde koristi, predstavlja alkil grupu supstituisanu aril grupom. Arilni i alkilni delovi mogu biti opciono supstituisani kao pojedinačne grupe kao što su ovde opisane.
[0111] Termin „arilen“, kako se ovde koristi, odnosi se na dvovalentnu aril grupu. Opciono supstituisani arilen je arilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za aril.
[0112] Termin „ariloksi“, kako se ovde koristi, predstavlja hemijski supstituent formule -OR, pri čemu, R je aril grupa, osim ako nije drugačije naznačeno. U opciono supstituisanom ariloksi, aril grupa je opciono supstituisana kao što je ovde opisano za aril.
[0113] Termin „azido“, kako se ovde koristi, predstavlja -N<3>grupu.
[0114] Termin „kancer“, kako se ovde koristi, odnosi se na sve vrste kancera, neoplazmi ili malignih tumora koji se nalaze kod sisara (npr. ljudi).
[0115] Termin „karbociklični“, kako se ovde koristi, predstavlja opciono supstituisanu C3-16 monocikličnu, bicikličnu ili tricikličnu strukturu u kojoj su prstenovi, koji mogu biti aromatični ili nearomatični, formirani atomima ugljenika. Karbociklične strukture uključuju cikloalkil, cikloalkenil, cikloalkinil i određene aril grupe.
[0116] Termin „karbonil“, kako se ovde koristi, predstavlja -C(O)- grupu.
[0117] Termin „karcinom“, kako se ovde koristi, odnosi se na maligni novi rast sastavljen od epitelnih ćelija koje teže da infiltriraju okolna tkiva i dovedu do metastaza.
[0118] Termin „cijano“, kako se ovde koristi, predstavlja -CN grupu.
[0119] Termini „CCNE1“ i „ciklin E1“, kako se ovde koriste naizmenično, odnose se na G1/S specifični ciklin E1 (naziv gena: CCNE1). Ćelija koja prekomerno eksprimira CCNE1 je ona koja pokazuje veću aktivnost CCNE1 od ćelije koja normalno eksprimira CCNE1. Na primer, ćelija koja prekomerno eksprimira CCNE1 je ćelija koja pokazuje broj kopija od najmanje 3 u poređenju sa diploidnom normalnom ćelijom sa 2 kopije. Dakle, ćelija koja pokazuje broj kopija CCNE1 veći od 3 je ćelija koja prekomerno eksmprimira CCNE1. Prekomerna ekspresija CCNE1 može se meriti identifikovanjem nivoa ekspresije genskog proizvoda u ćeliji (npr. broj transkripata iRNK CCNE1 ili nivo proteina CCNE1).
[0120] Termin „cikloalkenil“, kako se ovde koristi, odnosi se na nearomatičnu karbocikličnu grupu koja ima najmanje jednu dvostruku vezu u prstenu i od tri do deset ugljenika (npr. C<3-10>cikloalkenil), osim ako nije drugačije naznačeno. Neograničavajući primeri cikloalkenila uključuju cikloprop-1-enil, cikloprop-2-enil, ciklobut-1-enil, ciklobut-1-enil, ciklobut-2-enil, ciklopent-1-enil, ciklopent-2-enil, ciklopent-3-enil, norbornen-1-il, norbornen-2-il, norbornen-5-il i norbornen-7-il. Cikloalkenil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana (npr., opciono supstituisani cikloalkenil) kao što je opisano za cikloalkil.
[0121] Termin „cikloalkenil alkil“, kako se ovde koristi, predstavlja alkil grupu supstituisanu cikloalkenil grupom, svaka kao što je ovde definisana. Cikloalkenil i alkil delovi mogu biti supstituisani kao pojedinačne grupe definisane ovde.
[0122] Termin „cikloalkenilen“, kako se ovde koristi, predstavlja dvovalentnu cikloalkenil grupu. Opciono supstituisani cikloalkenilen je cikloalkenilen koji je opciono supstituisani kao što je ovde opisano za cikloalkil.
[0123] Termin „cikloalkoksi“, kako se ovde koristi, predstavlja hemijski supstituent formule -OR, pri čemu, R je cikloalkil grupa, osim ako nije drugačije naznačeno. U nekim primerima izvođenja, cikloalkil grupa može biti dalje supstituisana kao što je ovde definisano.
[0124] Termin „cikloalkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na cikličnu alkil grupu koja ima od tri do deset ugljenikovih atoma (npr. C<3-C10>cikloalkil), osim ako nije drugačije naznačeno. Cikloalkil grupe mogu biti monociklične ili biciklične. Biciklične cikloalkil grupe mogu biti biciklo[p.q.0]alkil tipa, u kojima je svaki od p i q, nezavisno, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7, pod uslovom da je zbir p i q jednak 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8. Alternativno, biciklične cikloalkil grupe mogu uključivati premošćene cikloalkil strukture, npr. biciklo[p.q.r]alkil, u kojima je r jednak 1, 2 ili 3, svaki od p i q je, nezavisno, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, pod uslovom da je zbir p, q i r jednak 3, 4, 5, 6, 7 ili 8. Cikloalkil grupa može biti spirociklična grupa, npr. spiro[p.q]alkil, u kojima je svaki od p i q, nezavisno, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7, pod uslovom da je zbir p i q jednak 4, 5, 6, 7, 8 ili 9. Neograničavajući primeri cikloalkila uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil,
[0127] 1
[0128] cikloheptil, 1-biciklo[2.2.1.]heptil, 2-biciklo[2.2.1.]heptil, 5-biciklo[2.2.1.]heptil, 7-biciklo[2.2.1.]heptil i dekalinil. Cikloalkil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana (npr., opciono supstituisani cikloalkil) sa jednim, dva, tri, četiri ili pet supstituenata nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od: alkila; alkenila; alkinila; alkoksi; alkilsulfinila; alkilsulfenila; alkilsulfonila; amino; arila; ariloksi; azido; cikloalkila; cikloalkoksi; cikloalkenila; cikloalkinila; halo; heteroalkila; heterociklila; (heterociklil)oksi; heteroaril; hidroksi; nitro; tiol; silil; cijano; =O; =S; -SO<2>R, pri čemu je R opciono supstituisani amino; =NR', pri čemu, R' je H, alkil, aril ili heterociklil; i -CON(R<A>)<2>, pri čemu svaki R<A>je nezavisno H ili alkil, ili oba R<A>, zajedno sa atomom za koji su vezani, kombinuju se da bi formirali heterociklil. Svaki od supstituenata može sam biti nesupstituisani ili supstituisani nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu.
[0129] Termin „cikloalkil alkil“, kako se ovde koristi, predstavlja alkil grupu supstituisanu cikloalkil grupom, svaka kao što je ovde definisana. Cikloalkil i alkil delovi mogu biti opciono supstituisani kao pojedinačne grupe opisane ovde.
[0130] Termin „cikloalkilen“, kako se ovde koristi, predstavlja dvovalentnu cikloalkil grupu. Opciono supstituisani cikloalkilen je cikloalkilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za cikloalkil.
[0131] Termin „cikloalkinil“, kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentnu karbocikličnu grupu koja ima jednu ili dve trostruke veze ugljenik-ugljenik i od osam do dvanaest ugljenika, osim ako nije drugačije naznačeno. Cikloalkinil može da sadrži jednu transanularnu vezu ili most. Neograničavajući primeri cikloalkinila uključuju ciklooktinil, ciklononinil, ciklodecinil i ciklodekadiinil. Cikloalkinil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana (npr., opciono supstituisani cikloalkinil) kao što je definisano za cikloalkil.
[0132] „Bolest“ ili „stanje“ se odnosi na stanje ili zdravstveni status pacijenta ili subjekta koji može biti lečen jedinjenjima ili postupcima koji su ovde dati.
[0133] Termin „FBXW7“, kako se ovde koristi, odnosi se na gen, transkript ili protein „F-box/WD Repeat-Containing Protein 7“. Gen mutiran u FBXW7, takođe ovde opisan kao FBXW7 gen sa inaktivirajućom mutacijom, je onaj koji ne uspeva da proizvede funkcionalni FBXW7 protein ili proizvodi smanjene količine FBXW7 proteina u ćeliji.
[0134] Termin „halo“, kako se ovde koristi, predstavlja halogen izabran iz grupe: brom, hlor, jod i fluor.
[0135] [0071] Termin „heteroalkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na alkil, alkenil ili alkinil grupu prekinutu jednom sa jednim ili dva heteroatoma; dva puta, svaki put, nezavisno, sa jednim ili dva heteroatoma; tri puta, svaki put, nezavisno, sa jednim ili dva heteroatoma; ili četiri puta, svaki put, nezavisno, sa jednim ili dva heteroatoma. Svaki heteroatom je, nezavisno, O, N ili S. U nekim primerima izvođenja, heteroatom je O ili N. Nijedna od heteroalkil grupa ne uključuje dva susedna atoma kiseonika ili sumpora. Heteroalkil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana (npr., opciono supstituisani heteroalkil). Kada je heteroalkil supstituisan i supstituent je vezan za heteroatom, supstituent se bira prema prirodi i valenci heteratoma. Dakle, supstituent vezan za heteroatom, ako valenca dozvoljava, bira se iz grupe koja se sastoji od sledećih: =O, -N(R<N2>)2, -SO2OR<N3>, -SO<2>R<N2>, -SOR<N3>, -COOR<N3>, N zaštitna grupa, alkil, alkenil, alkinil, aril, cikloalkil, cikloalkenil, cikloalkinil, heterociklil ili cijano, pri čemu svaki R<N2>je nezavisno H, alkil, cikloalkil, cikloalkenil, cikloalkinil, aril ili heterociklil, i svaki R<N3>je nezavisno alkil, cikloalkil, cikloalkenil, cikloalkinil, aril ili heterociklil. Svaki od ovih supstituenata može sam biti nesupstituisan ili supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu. Kada je heteroalkil supstituisan i supstituent je vezan za ugljenik, supstituent je izabran iz onih opisanih za alkil, pod uslovom da supstituent na atomu ugljenika vezanom za heteroatom nije Cl, Br ili I. Podrazumeva se da se atomi ugljenika nalaze na krajevima heteroalkil grupe.
[0136] Termin „heteroaril alkil“, kako se ovde koristi, predstavlja alkil grupu supstituisanu heteroaril grupom, svaka kao što je ovde definisana. Heteroaril i alkil delovi mogu biti opciono supstituisani kao pojedinačne grupe opisane ovde.
[0137] Termin „heteroarilen“, kako se ovde koristi, predstavlja dvovalentni heteroaril. Opciono supstituisani heteroarilen je heteroarilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za heteroaril.
[0138] Termin „heteroariloksi“, kako se ovde koristi, odnosi se na strukturu -OR, u kojoj je R jednako heteroaril. Heteroariloksi može biti opciono supstituisani kao što je definisano za heterociklil.
[0139] Termin „heterociklil“, kako se ovde koristi, predstavlja monociklični, biciklični, triciklični ili tetraciklični sistem prstena koji ima kondenzovane, premošćujuće i/ili spiro 3-, 4-, 5-, 6-, 7- ili 8-člane prstenove, osim ako nije drugačije naznačeno, koji sadrže jedan, dva, tri ili četiri heteroatoma nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od azota, kiseonika i sumpora. U nekim primerima izvođenja, „heterociklil“ je monociklični, biciklični, triciklični ili tetraciklični sistem prstena koji ima kondenzovane ili premošćujuće 5-, 6-, 7- ili 8-člane prstenove, osim ako nije drugačije naznačeno, koji sadrže jedan, dva, tri ili četiri heteroatoma nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od azota, kiseonika i sumpora. Heterociklil može biti aromatičan ili nearomatičan. Nearomatični 5-člani heterociklil ima nula ili jednu dvostruku vezu, nearomatične 6- i 7-člane heterociklil grupe imaju nula do dve dvostruke veze, a
[0142] 1
[0143] nearomatične 8-člane heterociklil grupe imaju nula do dve dvostruke veze i/ili nula ili jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik. Heterociklil grupe uključuju od 1 do 16 atoma ugljenika, osim ako nije drugačije naznačeno. Određene heterociklil grupe mogu da sadrže do 9 atoma ugljenika. Nearomatične heterociklične grupe uključuju pirolinil, pirolidinil, pirazolinil, pirazolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, piperidinil, homopiperidinil, piperazinil, piridazinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, morfolinil, tiomorfolinil, tiazolidinil, izotiazolidinil, tiazolidinil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil, dihidrotienil, dihidroindolil, tetrahidrohinolil, tetrahidroizohinolil, piranil, dihidropiranil, ditiazolil itd. Ako heterociklični prstenasti sistem ima najmanje jednu aromatičnu rezonantnu strukturu ili najmanje jedan aromatični tautomer, takva struktura je aromatični heterociklil (tj. heteroaril). Neograničavajući primeri heteroaril grupa uključuju benzimidazolil, benzofuril, benzotiazolil, benzotienil, benzoksazolil, furil, imidazolil, indolil, izoindazolil, izohinolinil, izotiazolil, izotiazolil, izoksazolil, oksadiazolil, oksazolil, purinil, pirolil, piridinil, pirazinil, pirimidinil, kvinazolinil, kvinolinil, tiadiazolil (npr.
[0144] 1,3,4-tiadiazol), tiazolil, tienil, triazolil, tetrazolil itd. Termin „heterociklil“ takođe predstavlja heterociklično jedinjenje koje ima premošćenu multicikličnu strukturu u kojoj jedan ili više ugljenika i/ili heteroatoma premošćuje dva nesusedna člana monocikličnog prstena, npr. kvinuklidin, tropani ili diaza-biciklo[2.2.2]oktan. Termin „heterociklil“ obuhvata biciklične, triciklične i tetraciklične grupe u kojima je bilo koji od gore navedenih heterocikličnih prstenova kondenzovan sa jednim, dva ili tri karbociklična prstena, npr. aril prsten, cikloheksanski prsten, cikloheksenski prsten, ciklopentanski prsten, ciklopentenski prsten ili drugi monociklični heterociklični prsten. Primeri kondenzovanih heterociklila uključuju 1,2,3,5,8,8a-heksahidroindolizin; 2,3-dihidrobenzofuran; 2,3-dihidroindol; i 2,3-dihidrobenzotiofen. Heterociklil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana sa jednim, dva, tri, četiri ili pet supstituenata nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od: alkila; alkenila; alkinila; alkoksi; alkilsulfinila; alkilsulfenila; alkilsulfonila; amino; arila; ariloksi; azido; cikloalkila; cikloalkoksi; cikloalkenila; cikloalkinila; halo; heteroalkila; heterociklila; (heterociklil)oksi; hidroksi; nitro; tiol; silil; cijano; -C(O)R ili -SO<2>R, pri čemu, R je amino ili alkil; =O; =S; =NR', pri čemu R' je H, alkil, aril ili heterociklil. Svaki od supstituenata može sam biti nesupstituisan ili supstituisan nesupstituisanim supstituentom(ima) definisanim ovde za svaku odgovarajuću grupu.
[0145] Termin „heterociklil alkil“, kako se ovde koristi, predstavlja alkil grupu supstituisanu heterociklil grupom, svaka kao što je ovde definisana. Heterociklilni i alkilni delovi mogu biti opciono supstituisani kao pojedinačne grupe opisane ovde.
[0148] 1
[0149] Termin „heterociklilen“, kako se ovde koristi, predstavlja dvovalentni heterociklil. Opciono supstituisani heterociklilen je heterociklilen koji je opciono supstituisan kao što je ovde opisano za heterociklil.
[0150] Termin „(heterociklil)oksi“, kako se ovde koristi, predstavlja hemijski supstituent formule -OR, pri čemu, R je heterociklilna grupa, osim ako nije drugačije naznačeno. (Heterociklil)oksi može biti opciono supstituisan na način opisan za heterociklil.
[0151] Termini „hidroksil“ i „hidroksi“, kako se ovde koriste naizmenično, predstavljaju -OH grupu.
[0152] Termin „izotopski obogaćen“, kako se ovde koristi, odnosi se na farmaceutski aktivno sredstvo sa izotopskim sadržajem za jedan izotop na unapred određenoj poziciji unutar molekula koji je najmanje 100 puta veći od prirodne količine ovog izotopa. Na primer, kompozicija koja je izotopski obogaćena deuterijumom uključuje aktivno sredstvo sa najmanje jednom pozicijom atoma vodonika koja ima najmanje 100 puta veću količinu deuterijuma od prirodne količine deuterijuma. Poželjno je da izotopsko obogaćenje deuterijumom bude najmanje 1000 puta veće od prirodne količine deuterijuma. Još poželjnije je da izotopsko obogaćenje deuterijumom bude najmanje 4000 puta veće (npr., najmanje 4750 puta veće, npr. do 5000 puta veće) od prirodne količine deuterijuma.
[0153] Termin „leukemija“, kako se ovde koristi, odnosi se u širem smislu na progresivne, maligne bolesti organa koji formiraju krv i generalno se karakteriše poremećajem proliferacije i razvoja leukocita i njihovih prekursora u krvi i koštanoj srži. Leukemija se generalno klinički klasifikuje na osnovu (1) trajanja i karaktera bolesti - akutna ili hronična; (2) vrste ćelija koje su zahvaćene; mijeloidna (mijelogena), limfoidna (limfogena) ili monocitna; i (3) povećanja ili nepovećanja broja abnormalnih ćelija u krvi - leukemijske ili aleukemijske (subleukemijske).
[0154] Termin „limfom“, kako se ovde koristi, odnosi se na kancer koji nastaje iz ćelija imunog porekla.
[0155] Termin „melanom“, kako se ovde koristi, označava tumor koji nastaje iz melanocitnog sistema kože i drugih organa.
[0156] Termin „Myt1“, kako se ovde koristi, odnosi se na membranski povezanu tirozin i treonin-specifičnu cdc2-inhibitornu kinazu (Myt1) (naziv gena PKMYT1).
[0157] Termin „inhibitor Myt1“, kako se ovde koristi, predstavlja jedinjenje koje nakon kontakta sa enzimom Myt1, bilo in vitro, u ćelijskoj kulturi ili kod životinje, smanjuje aktivnost Myt1, tako da izmerena IC<50>za Myt1 je 10 µM ili manje (npr. 5 µM ili manje ili 1 µM ili manje). Za određene inhibitore Myt1, Myt1 IC<50>može biti 100 nM ili manje (npr. 10 nM ili manje, ili 3 nM ili manje) i može biti samo 100 pM ili 10 pM. Poželjno je da je Myt1 IC<50>
[0160] 1
[0161] jednak 1 nM do 1 µM (npr., 1 nM do 750 nM, 1 nM do 500 nM ili 1 nM do 250 nM). Još poželjnije, Myt1 IC<50>je manja od 20 nm (npr. od 1 nM do 20 nM).
[0162] Termin „nitro“, kako se ovde koristi, predstavlja -NO<2>grupu.
[0163] Termin „okso“, kako se ovde koristi, predstavlja dvovalentni atom kiseonika (npr., struktura okso može biti prikazana kao =O).
[0164] Termin „Ph“, kako se ovde koristi, predstavlja fenil.
[0165] Termin „farmaceutska kompozicija“, kako se ovde koristi, predstavlja kompoziciju koja sadrži jedinjenje opisano ovde, formulisano sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom i proizvedeno ili prodato uz odobrenje vladine regulatorne agencije kao deo terapijskog režima za lečenje bolesti kod sisara. Farmaceutske kompozicije mogu biti formulisane, na primer, za oralnu primenu u obliku jedinične doze (npr. tableta, kapsula, kapleta, gel kapsula ili sirup); za lokalnu primenu (npr. kao krema, gel, losion ili mast); za intravensku primenu (npr. kao sterilni rastvor bez čestičnih embolija i u sistemu rastvarača pogodnom za intravensku upotrebu); ili u bilo kojoj drugoj formulaciji opisanoj ovde.
[0166] Termin „farmaceutski prihvatljiv ekscipijens“ ili „farmaceutski prihvatljiv nosač“, kako se ovde koristi naizmenično, odnosi se na bilo koji sastojak osim jedinjenja opisanih ovde (npr., nosač sposoban da suspenduje ili rastvori aktivno jedinjenje) i koji ima svojstva da bude netoksičan i neinflamatoran kod pacijenta. Ekscipijensi mogu da uključuju, na primer: antiadhezivne supstance, antioksidante, vezujuća sredstva, omotače, pomoćna sredstva za kompresiju, sredstva za raspadanje, boje, emolijense, emulgatore, punioce (razblaživače), sredstva za formiranje filmova ili omotača, arome, mirise, klizajuća sredstva (pojačivače protoka), lubrikante, konzervanse, štamparske boje, sorbente, sredstva za suspendovanje ili disperziju, zaslađivače ili vode za hidrataciju. Primeri ekscipijenasa uključuju, ali nisu ograničeni na: butilovani hidroksitoluen (BHT), kalcijum karbonat, kalcijum fosfat (dibazni), kalcijum stearat, kroskarmelozu, unakrsno vezani polivinil pirolidon, limunsku kiselinu, krospovidon, cistein, etilcelulozu, želatin, hidroksipropil celulozu, hidroksipropil metilcelulozu, laktozu, magnezijum stearat, maltitol, manitol, metionin, metilcelulozu, metilparaben, mikrokristalnu celulozu, polietilen glikol, polivinil pirolidon, povidon, preželatinizovani skrob, propilparaben, retinil palmitat, šelak, silicijum dioksid, natrijum karboksimetil celulozu, natrijum citrat, natrijum skrob glikolat, sorbitol, skrob (kukuruzni), stearinsku kiselinu, saharozu, talk, titanijum dioksid, vitamin A, vitamin E, vitamin C i ksilitol.
[0167] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“, kako se ovde koristi, predstavlja one soli koje su, u okviru racionalne medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije i slično, i koje su srazmerne
[0170] 1
[0171] razumnom odnosu koristi i rizika. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u struci. Na primer, farmaceutski prihvatljive soli su opisane u: Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977 i u Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008. Soli se mogu pripremiti in situ tokom konačne izolacije i prečišćavanja jedinjenja opisanih ovde ili odvojeno reakcijom slobodne bazne grupe sa odgovarajućom organskom kiselinom. Reprezentativne soli dobijene adicijom kiselina uključuju acetat, adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dodecilsulfat, etansulfonat, fumarat, glukoheptonat, glicerofosfat, hemisulfat, heptonat, heksanoat, hidrobromid, hidrohlorid, hidrojodid, 2-hidroksi-etansulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartrat, tiocijanat, toluensulfonat, undekanoat, valeratne soli i slično. Reprezentativne soli alkalnih ili zemnoalkalnih metala uključuju natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i slično, kao i netoksične amonijumove, kvaternarne amonijumove i aminske katjone, uključujući, ali ne ograničavajući se na, amonijum, tetrametilamonijum, tetraetilamonijum, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, trietilamin, etilamin i slično.
[0172] Termin „premaligni“ ili „prekancerozni“, kako se ovde koristi, odnosi se na stanje koje nije maligno, ali je spremno da postane maligno.
[0173] Termin „zaštitna grupa“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu namenjenu zaštiti hidroksi, amino ili karbonil grupe od učešća u jednoj ili više neželjenih reakcija tokom hemijske sinteze. Termin „O-zaštitna grupa“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu namenjenu zaštiti hidroksi ili karbonil grupe od učešća u jednoj ili više neželjenih reakcija tokom hemijske sinteze. Termin „N-zaštitna grupa“, kako se ovde koristi, predstavlja grupu namenjenu zaštiti grupe koja sadrži azot (npr. amino, amido, heterociklična N-H ili hidrazinska) od učešća u jednoj ili više neželjenih reakcija tokom hemijske sinteze. Uobičajeno korišćene O- i N-zaštitne grupe su otkrivene u Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3rd Edition (John Wiley & Sons, New York, 1999).
[0174] Primeri O- i N-zaštitnih grupa uključuju alkanoil, ariloil ili karbamil grupe kao što su formil, acetil, propionil, pivaloil, t-butilacetil, 2-hloroacetil, 2-bromoacetil, trifluoroacetil, trihloroacetil, ftalil, o-nitrofenoksiacetil, α-hlorobutiril, benzoil, 4-hlorobenzoil, 4-bromobenzoil, t-butildimetilsilil, tri-izo-propilsililoksimetil, 4,4'-dimetoksitritil, izobutiril, fenoksiacetil, 4-izopropilfenoksiacetil, dimetilformamidino i 4-nitrobenzoil.
[0177] 1
[0178] Primeri O-zaštitnih grupa za zaštitu grupa koje sadrže karbonil uključuju, ali nisu ograničeni na: acetale, acilale, 1,3-ditiane, 1,3-dioksane, 1,3-dioksolane i 1,3-ditiolane.
[0179] Druge O-zaštitne grupe uključuju, ali nisu ograničene na: supstituisane alkil, aril i arilalkil etre (npr. tritil; metiltiometil; metoksimetil; benziloksimetil; siloksimetil; 2,2,2,-trihloroetoksimetil; tetrahidropiranil; tetrahidrofuranil; etoksietil; 1-[2-(trimetilsilil)etoksi]etil; 2-trimetilsililetil; t-butil etar; p-hlorofenil, p-metoksifenil, p-nitrofenil, benzil, p-metoksibenzil i nitrobenzil); silil etre (npr. trimetilsilil; trietilsilil; triizopropilsilil; dimetilizopropilsilil; tbutildimetilsilil; t-butildifenilsilil; tribenzilsilil; trifenilsilil; i difenimetilsilil); karbonate (npr. metil, metoksimetil, 9-fluorenilmetil; etil; 2,2,2-trihloroetil; 2-(trimetilsilil)etil; vinil, alil, nitrofenil; benzil; metoksibenzil; 3,4-dimetoksibenzil; i nitrobenzil).
[0180] Druge N-zaštitne grupe uključuju, ali nisu ograničene na, hiralne pomoćne supstance kao što su zaštićene ili nezaštićene D, L ili D, L-aminokiseline kao što su alanin, leucin, fenilalanin i slično; grupe koje sadrže sulfonil kao što su benzensulfonil, p-toluensulfonil i slično; karbamatne grupe kao što su benziloksikarbonil, p-hlorobenziloksikarbonil, pmetoksibenziloksikarbonil, p-nitrobenziloksikarbonil, 2-nitrobenziloksikarbonil, pbromobenziloksikarbonil, 3,4-dimetoksibenziloksikarbonil, 3,5-dimetoksibenziloksikarbonil, 2,4-dimetoksibenziloksikarbonil, 4-metoksibenziloksikarbonil, 2-nitro-4,5-dimetoksibenziloksikarbonil, 3,4,5-trimetoksibenziloksikarbonil, 1-(p-bifenilil)-1-metiletoksikarbonil, α,α-dimetil-3,5-dimetoksibenziloksikarbonil, benzhidriloksikarbonil, tbutiloksikarbonil, diizopropilmetoksikarbonil, izopropiloksikarbonil, etoksikarbonil, metoksikarbonil, aliloksikarbonil, 2,2,2,-trihloroetoksikarbonil, fenoksikarbonil, 4-nitrofenoksikarbonil, fluorenil-9-metoksikarbonil, ciklopentiloksikarbonil, adamantiloksikarbonil, cikloheksiloksikarbonil, feniltiokarbonil, i slično, aril-alkil grupe kao što su benzil, p-metoksibenzil, 2,4-dimetoksibenzil, trifenilmetil, benziloksimetil i slično, sililalkilacetalne grupe kao što su [2-(trimetilsilil)etoksi]metil i silil grupe kao što je trimetilsilil i slično. Korisne N-zaštitne grupe su formil, acetil, benzoil, pivaloil, t-butilacetil, alanil, fenilsulfonil, benzil, dimetoksibenzil, [2-(trimetilsilil)etoksi]metil (SEM), tetrahidropiranil (THP), t-butiloksikarbonil (Boc) i benziloksikarbonil (Cbz).
[0181] Termin „tautomer“ odnosi se na strukturne izomere koji se lako međusobno pretvaraju, često premeštanjem protona. Tautomeri su različite hemijske vrste koje se mogu identifikovati različitim spektroskopskim karakteristikama, ali se generalno ne mogu pojedinačno izolovati. Neograničavajući primeri tautomera uključuju keton - enol, enamin - imin, amid - imidinsku kiselinu, nitrozo - oksim, keten - inol i aminokiselinu - amonijum karboksilat.
[0184] 2
[0185] Termin „sarkom“ se generalno odnosi na tumor koji je sastavljen od supstance poput embrionalnog vezivnog tkiva i generalno je sastavljen od gusto zbijenih ćelija ugrađenih u fibrilarnu ili homogenu supstancu.
[0186] Termin „subjekt“, kako se ovde koristi, predstavlja čoveka ili životinju koja nije čovek (npr. sisara) koja pati od bolesti ili stanja, ili je u riziku od bolesti ili stanja, kao što je utvrdio kvalifikovani stručnjak (npr. lekar ili medicinska sestra) sa ili bez poznatih u struci laboratorijskih testova uzoraka od subjekta. Poželjno je da je subjekt čovek. Neograničavajući primeri bolesti i stanja uključuju bolesti koje imaju simptom hiperproliferacije ćelija, npr. kancer.
[0187] „Tretman“ i „lečenje“, kako se ovde koriste, odnose se na medicinski menadžment subjekta sa namerom da se poboljša, ublaži, stabilizuje, spreči ili izleči bolest ili stanje. Ovaj termin obuhvata aktivno lečenje (lečenje usmereno na poboljšanje bolesti ili stanja); uzročno lečenje (lečenje usmereno na uzrok povezane bolesti ili stanja); palijativno lečenje (lečenje osmišljeno za ublažavanje simptoma bolesti ili stanja); preventivno lečenje (lečenje usmereno na minimiziranje ili delimično ili potpuno inhibiranje razvoja povezane bolesti ili stanja); i suportivno lečenje (lečenje koje se koristi kao dopuna drugoj terapiji).
[0189] KRATAK OPIS CRTEŽA
[0191]
[0192] Slika 1A je trakasti grafikon koji prikazuje amplifikaciju/prekomernu ekspresiju CCNE1 u tumorima sekvenciranim iz TCGA PanCancer Atlas.
[0193] Slika 1B je dijagram rasejanja koji prikazuje podatke o ekspresiji gena CCNE1 iz TCGA PanCancer Atlas.
[0194] Slika 2A je trakasti grafikon koji prikazuje FBXW7 mutacije u tumorima sekvencioniranim iz TCGA PanCancer Atlas.
[0195] Slika 2B je lollipop grafikon koji prikazuje učestalost FBXW7 mutacija u genu. Ovaj grafikon ističe tri uobičajene mutacije argininskih žarišta (R465, R479 i R505) unutar trećeg i četvrtog WD40 ponavljanja koje ometaju prepoznavanje supstrata ciklina E1 i klasifikovane su kao štetne.
[0196] Slika 3A je grafikon sa trakama koji prikazuje rezultate testa proliferacije upotrebom RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- i CCNE1-eksprimirajućih klonova tretiranih različitim dozama jedinjenja 133.
[0197] Slika 3B je serija slika koje prikazuju rezultate klonogenog testa preživljavanja korišćenjem RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova transdukovanih sa sgRNK PKMYT1. Inficirane ćelije su posejane u niskoj gustini da bi se izmerila njihova sposobnost da formiraju kolonije od >50 ćelija. Nakon 10 dana rasta, kolonije su obojene, snimljene i kvantifikovane. Rezultati su normalizovani u odnosu na preživljavanje RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- roditeljskih i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova transdukovanih sa neciljanom LacZ kontrolnom sgRNK.
[0198] Slika 3C je linijski grafikon koji prikazuje rezultate proliferacionog testa korišćenjem RPE1-hTERT Cas9 TP54-/- i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova tretiranih različitim dozama jedinjenja 133.
[0199] Slika 4A je grafikon sa trakama koji prikazuje rezultate klonogenog testa preživljavanja korišćenjem FT282-hTERT TP53<R175H>i CCNE1-prekoemrno eksprimirajućih ćelija transdukovanih sa sgRNK PKMYT1. Inficirane ćelije su posejane u niskoj gustini da bi se izmerila njihova sposobnost da formiraju kolonije od >50 ćelija. Nakon 10 dana rasta, kolonije su obojene, snimljene i kvantifikovane. Rezultati su normalizovani u odnosu na preživljavanje FT282-hTERT TP53<R175H>i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih ćelija transdukovanih sa kontrolnom sgRNK AAVS1.
[0200] Slika 4B je serija slika koje prikazuju obojene kolonije opisane na slici 4A.
[0201] Slika 4C je linijski grafikon koji prikazuje rezultate proliferacionog testa korišćenjem FT282-hTERT TP53<R175H>i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova tretiranih različitim dozama jedinjenja 133.
[0202] Slike 5A, 5B i 5C prikazuju rezultate klonogenih testova preživljavanja za stabilne RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- roditeljske i CCNE1-prekomerno eksprimirajuće klonove koji eksprimiraju ili divlji tip ili katalitički mrtvi FLAG-označeni PKMYT1 sgRNK-rezistentni ORF. Ove stabilne ćelijske linije su transdukovane ili sa LacZ neciljanom sgRNK ili PKMYT1 sgRNK #4 i posejane u niskoj gustini da bi se izmerila njihova sposobnost da formiraju kolonije od >50 ćelija. Nakon 10 dana rasta, kolonije su obojene, snimljene i kvantifikovane. Rezultati su normalizovani na preživljavanje RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova transdukovanih sa neciljanom LacZ kontrolnom sgRNK i predstavljeni kao trakasti grafikon na slici 5C. Oba klona 2 i 21 ponašaju se slično u ovoj studiji. Slika 6 je grafikon koji prikazuje rezultate proliferacionih testova za panel ćelijskih linija CCNE1 divljeg tipa i CCNE1-amplifikovanih/prekomerno eksprimirajućih ćelijskih linija kancera tretiranih različitim dozama jedinjenja 28. IC<50>vrednosti su prikazane za svaku ćelijsku liniju i pokazuju da ćelijske linije sa prekomernom ekspresijom CCNE1 pokazuju povećanu osetljivost na inhibitor Myt1 u poređenju sa ćelijskim linijama CCNE1 WT.
[0203] Slika 7 je grafikon koji prikazuje rezultate proliferacionih testova za panel ćelijskih linija kancera divljeg tipa FBXW7 i FBXW7-mutiranih tretiranih različitim dozama jedinjenja 95. Vrednosti IC50 su prikazane za svaku ćelijsku liniju i pokazuju da ćelijske linije mutirane FBXW7 pokazuju povećanu osetljivost na inhibitor Myt1 u poređenju sa FBXW7 WT ćelijskim linijama.
[0205] DETALJAN OPIS
[0207] Generalno, pronalazak pruža jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje ih sadrže, postupke pripreme jedinjenja i postupke upotrebe. Jedinjenja pronalaska mogu biti inhibitori Myt1. Ova jedinjenja se mogu koristiti za inhibiciju Myt1 u ćeliji, npr. ćeliji u subjektu (npr. ćeliji koja prekomerno eksprimira CCNE1 ili ima inaktivirajuću mutaciju u FBXW7 genu). Subjektu može biti potrebno lečenje bolesti ili stanja, npr. bolesti ili stanja koje ima simptom ćelijske hiperproliferacije, npr. kancera. Inhibitorna aktivnost jedinjenja opisanih ovde na Myt1 je korisna za lečenje subjekta kome je potrebno lečenje kancera.
[0208] Myt1 je kinaza koja reguliše ćelijski ciklus, lokalizovana pretežno u endoplazmatičnom retikulumu i Goldžijevom kompleksu. Deo je porodice kinaza Wee koja uključuje Wee1 i Wee1b. Uključena je u negativnu regulaciju CDK1-ciklin B kompleksa, što podstiče progresiju ćelija iz G2-faze u mitotičku fazu (M-fazu) ćelijskog ciklusa. Tokom oštećenja DNK, Myt1 pokreće fosforilaciju na CDK1 (i Tyr15 i Thr14 CDK1), što održava kinazni kompleks u neaktivnom stanju u G2 kao deo G2 kontrolnog odgovora zajedno sa Wee1 (koji posreduje samo u fosforilaciji Tyr15) i sprečava ulazak u mitozu dok se oštećenje ne popravi. Pored toga, pretpostavljeno je da Myt1 direktno interaguje sa CDK1 kompleksima u citoplazmi i sprečava njihovu jedarnu translokaciju, čime inhibira progresiju ćelijskog ciklusa.
[0209] Myt1 je impliciran kao potencijalno važno ciljno mesto kancera jer je neophodan u mnogim ćelijama kancera. Prekomerna ekspresija Myt1 je primećena kod različitih vrsta kancera, uključujući hepatocelularni karcinom, kao i svetloćelijski karcinom bubrežnih ćelija. Smanjenje ekspresije Myt1 ima manju ulogu u neporemećenim ćelijama, ali ima istaknutiju ulogu u ćelijama izloženim oštećenju DNK. Pored toga, ćelije koje pokazuju visok nivo replikacionog stresa pored defektne regulacije kontrolnih tačaka G1 mogu biti posebno osetljive na gubitak funkcije Myt1, jer će ove ćelije biti sklone prevremenom ulasku u mitozu sa ugroženim genomskim materijalom što dovodi do mitotske katastrofe.
[0212] 2
[0213] Inhibitori Myt1, regulatora tranzicije G2-M, mogu biti posebno korisni u lečenju tumora koji sadrže CCNE1-amplifikaciju ili FBXW7 mutacije gubitka funkcije korišćenjem sintetičke smrtonosne terapijske strategije.
[0214] Ciklin E1 (kodiran CCNE1 genom) je uključen u prelaz ćelijskog ciklusa iz G1 u S fazu. U kasnoj G1 fazi ćelijskog ciklusa, on se kompleksira sa ciklin-zavisnom kinazom 2 (CDK2) kako bi podstakao aktivaciju transkripcionog faktora E2F i ulazak u S-fazu. Nivoi ciklina E1 su strogo regulisani tokom normalnih ćelijskih ciklusa, akumulirajući se na G1/S tranziciji i potpuno se razgrađujući do kraja S faze. Proteazomska razgradnja ciklina E1 zavisna od ćelijskog ciklusa posredovana je preko SCF<FBW7>ubikvitin ligaznog kompleksa. Jednom aktiviran u kasnoj G1 fazi, ciklin E1/CDK2 kompleks stimuliše prelazak u S fazu kroz fosforilaciju i inaktivaciju RB1 i naknadno oslobađanje transkripcionih faktora E2F. S fazu stimuliše E2F-posredovana transkripcija brojnih gena uključenih u replikaciju DNK, uključujući podjedinice prereplikacionog kompleksa ORC1, CDC6, CDT1 i MCM helikazne faktore.
[0215] CCNE1 se često amplifikuje i/ili prekomerno eksprimira u humanim kancerima (Sl.1). Amplifikacija CCNE1 je prijavljena kod nekoliko vrsta kancera, uključujući endometrijalni, jajnika, dojki i želudca, sa učestalošću od 5-40%. Važno je napomenuti da su brojne studije potvrdile ciklin E1 kao pokretač tumorogeneze u ovim indikacijama, a amplifikacija CCNE1 je primećena kod agresivnijih podtipova, uključujući karcinosarkom materice (UCS; ~40%), serozni karcinom materice (USC; ~25%), serozni karcinom jajnika visokog stadijuma (HGSOC; ~25%) i trostruko negativni kancer dojke (TNBC; ~8%). Pacijenti sa dokazima o prekomernoj ekspresiji ciklina E1 u biopsijama tumora imunohistohemijom i/ili analizom broja genomskih kopija imaju niže ukupno preživljavanje u poređenju sa pacijentima sa normalnim nivoima ciklina E1. Pacijenti sa HGSOC i prekomernom ekspresijom ciklina E1 imaju nižu stopu odgovora na cisplatin, trenutni standard nege.
[0216] [0109] Defektna proteoliza ciklina E1 regulisana ćelijskim ciklusom pomoću SCF<FBW7>ubikvitin ligaznog kompleksa je još jedan mehanizam prekomerne ekspresije CCNE1 zabeležene kod tumora. Gen F-box proteina, FBXW7, često mutira kod nekoliko vrsta kancera, uključujući endometrijalni, kolorektalni i želudačni, sa učestalošću od 5-35% (slika 2). Kao CCNE1, FBXW7 mutacije pokretača su primećene kod agresivnijih podtipova kancera endometrijuma, uključujući UCS (~35%) i USC (~25%). FBXW7 ima raznolik spektar mutacija gubitka funkcije kod kancera, uključujući skraćene mutacije razbacane po genu i misens mutacije unutar ciklina E1 koje prepoznaju WD40 ponavljanja. FBW7 funkcioniše kao homodimer unutar SCF kompleksa i mnoge štetne misens mutacije unutar WD40 ponavljanja su uglavnom heterozigotne i dominantno negativne. Zanimljivo je da se nekoliko ponavljajućih hotspot misens mutacija nalazi u WD40 ponavljanjima, uključujući R465, R479 i R505 - sve one koje ometaju vezivanje i ubikvitilaciju ciklina E1.
[0217] Veruje se da prekomerna ekspresija ciklina E1 i/ili FBXW7 gubitak funkcije pokreće tumorogenezu izazivanjem nestabilnosti genoma (npr. povećano okidanje oridžina, defektni nukleotidni fondovi, sukobi transkripcije i replikacije i/ili nestabilnost viljuške). Pokazano je da prekomerna ekspresija ciklina E1 izaziva replikacioni stres koji karakterišu usporene ili zaustavljene replikacione viljuške i gubitak heterozigotnosti na krhkim mestima. Primarni mehanizam kojim prekomerna ekspresija ciklina E1 izaziva replikacioni stres je povećano okidanje oridžina u ranoj S-fazi, nakon čega sledi smanjenje faktora replikacije, uključujući nukleotidne pulove. Smanjenje ukupnih replikacionih proteina i nukleotida smanjuje progresiju viljuške i uzrokuje zaustavljanje i naknadni kolaps ili obrtanje.
[0218] Jedinjenje pronalaska može biti, npr., jedinjenje formule (I):
[0221]
[0223] ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
[0224] pri čemu
[0226] svaki od X, Y i Z je nezavisno N ili CR<2>;
[0227] R<1>i svaki R<2>su nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6->
[0228] <10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, -C(O)N(R<8>)<2>, - SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>; ili R<1>kombinuje se sa jednim R<2>u blizini R<1>da bi se formirao opciono supstituisani C<3-6>alkilen;
[0229] svaki od R<3>i R<4>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil ili halogen;
[0230] R<5>je H ili -N(R<7>)<2>;
[0231] R<6>je -C(O)NH(R<8>), -C(O)R<7A>, ili -SO<2>R<7A>;
[0234] 2
[0235] svaki R<7>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, ili -SO<2>R<7A>; ili dve R<7>grupe, zajedno sa atomom za koji su obe vezane, kombinuju se da bi formirale opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
[0236] svaki R<7A>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<6-10>aril;
[0237] svaki R<7B>je nezavisno hidroksil, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, -N(R<7>)<2>, - C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili opciono supstituisani alkoksi; svaki R<8>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkoksialkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroaril; ili dva R<8>, zajedno sa atomom za koji su vezani, kombinuju se da bi formirali opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
[0238] Q je opciono supstituisani C<1-6>alkilen, opciono supstituisani C<2-6>alkenilen, opciono supstituisani C<2-6>alkinilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenilen opciono supstituisani C<6-10>arilen, opciono supstituisani C<2-9>heterociklilen, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroarilen.
[0240] Poželjno je da je jedinjenje formule (I) obogaćeno za atropizomer formule (IA):
[0243]
[0246] pri čemu su sve promenljive kao što su ovde opisane.
[0247] Jedinjenje pronalaska može biti, npr., jedinjenje formule (II):
[0250]
[0253] pri čemu su sve promenljive kao što su ovde opisane.
[0256] 2
[0257] Poželjno, jedinjenje formule (II) je obogaćeno za atropizomer formule (IIA):
[0260]
[0263] pri čemu su sve promenljive kao što su ovde opisane.
[0264] Jedinjenje pronalaska može biti, npr., jedinjenje formule (III):
[0267]
[0270] pri čemu, R<2A>je vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, -C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>.
[0271] Poželjno, jedinjenje formule (III) je obogaćeno za atropizomer formule (IIIA):
[0274]
[0277] Jedinjenje pronalaska može biti, npr., jedinjenje navedeno u Tabeli 1 ispod ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0280] 2
[0281] Tabela 1
[0282]
[0285] 2
[0288] 
[0289]
[0292] 
[0295] 
[0296]
[0299] 
[0300]
[0301]
[0302]
[0303]
[0304]
[0307] 
[0308]
[0309]
[0312] 
[0313]
[0316] 
[0319] 
[0322] 
[0325] 
[0328] 
[0329]
[0332] 
[0335] 
[0336]
[0339] 
[0340]
[0343] Pronalazak obuhvata (gde je to moguće) pojedinačne dijastereomere, enantiomere, epimere i atropizomere jedinjenja opisanih ovde, i smeše njihovih dijastereomera i/ili enantiomera, uključujući racemske smeše. Iako su specifične stereohemije opisane ovde poželjne, drugi stereoizomeri, uključujući dijastereomere, enantiomere, epimere, atropizomere i njihove smeše, takođe mogu biti korisni u lečenju bolesti posredovanih preko Myt1. Neaktivni ili manje aktivni dijastereoizomeri i enantiomeri mogu biti korisni, npr., za naučne studije koje se odnose na receptor i mehanizam aktivacije.
[0344] Razume se da određeni molekuli mogu postojati u više tautomernih oblika. Ovaj pronalazak obuhvata sve tautomere iako u primerima može biti naznačen samo jedan tautomer.
[0345] Pronalazak takođe obuhvata farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja i farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja i farmaceutski prihvatljiv nosač. Jedinjenja su posebno korisna, npr. kod određenih vrsta kancera i za usporavanje progresije kancera kada se jednom razvije kod pacijenta.
[0346] [0121] Jedinjenja opisana ovde mogu se koristiti u farmaceutskim kompozicijama koje sadrže (a) jedinjenje(a) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i (b) farmaceutski prihvatljiv nosač. Jedinjenja se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama koje uključuju jedan ili više drugih aktivnih farmaceutskih sastojaka. Jedinjenja se takođe mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama u kojima je jedinjenje opisano ovde ili njegova farmaceutski prihvatljiva so jedini aktivni sastojak.
[0348] Optički izomeri - Dijastereomeri - Geometrijski izomeri - Tautomeri
[0350] Jedinjenja opisana ovde mogu sadržati, npr., jedan ili više stereogenih centara i mogu se javiti kao racemati, racemske smeše, pojedinačni enantiomeri, pojedinačni dijastereomeri i smeše dijastereomera i/ili enantiomera. Pronalazak obuhvata sve takve izomerne oblike jedinjenja opisanih ovde. Namera je da svi mogući stereoizomeri (npr. enantiomeri i/ili dijastereomeri) u smešama i kao čista ili delimično prečišćena jedinjenja budu uključeni u obim ovog pronalaska (tj. sve moguće kombinacije stereogenih centara kao čistih jedinjenja ili u smešama).
[0351] Neka od jedinjenja opisanih ovde mogu sadržati veze sa ometanom rotacijom tako da se dva odvojena rotomera, ili atropizomera, mogu razdvojiti i utvrditi da imaju različitu biološku aktivnost, što može biti korisno. Namera je da svi mogući atropizomeri budu uključeni u obim ovog pronalaska.
[0352] Neka od jedinjenja opisanih ovde mogu sadržati olefinske dvostruke veze i, osim ako nije drugačije naznačeno, podrazumeva se da uključuju i E i Z geometrijske izomere.
[0353] Neka od jedinjenja opisana ovde mogu postojati sa različitim tačkama vezivanja vodonika, koje se nazivaju tautomeri. Primer je keton i njegov enolni oblik, poznati kao ketoenolni tautomeri. Pojedinačni tautomeri, kao i njihove smeše, obuhvaćeni su pronalaskom.
[0354] Jedinjenja opisana ovde koja imaju jedan ili više asimetričnih centara mogu se razdvojiti na dijastereoizomere, enantiomere i slično postupcima dobro poznatim u struci.
[0355] Alternativno, enantiomeri i druga jedinjenja sa hiralnim centrima mogu se sintetizovati stereospecifičnom sintezom korišćenjem optički čistih polaznih materijala i/ili reagensa poznate konfiguracije.
[0357] Metaboliti - Prolekovi
[0359] [0128] Pronalazak obuhvata terapeutski aktivne metabolite, pri čemu sami metaboliti spadaju u obim patentnih zahteva. Otkriće takođe obuhvata prolekove, koji su jedinjenja koja se pretvaraju u jedinjenja za koja se traži zaštita dok se primenjuju na pacijenta ili nakon što su primenjena na pacijenta. Hemijske strukture ove prijave za koje se traži zaštita u nekim slučajevima mogu same biti prolekovi.
[0361] Izotopski obogaćeni derivati
[0363] Pronalazak obuhvata molekule koji su izotopski obogaćeni na jednoj ili više pozicija unutar molekula. Stoga, jedinjenja obogaćena deuterijumom spadaju u obim patentnih zahteva.
[0365] Postupci pripreme jedinjenja pronalaska
[0367] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti korišćenjem reakcija i tehnika poznatih u struci i onih opisanih ovde. Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da postupci pripreme jedinjenja pronalaska opisani ovde nisu ograničavajući i da koraci u okviru postupaka mogu biti zamenljivi bez uticaja na strukturu krajnjeg proizvoda.
[0369] Postupak A
[0371] [0131] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u šemi A i opisano ovde. Amino grupa komercijalno dostupnog 5-bromo-6-hloropirazin-2-amina može se pretvoriti u hidroksilnu grupu koja se može benzilovati benzil bromidom u prisustvu baze da bi se generisao ključni intermedijer B. Brom može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim metalom. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Hlor može biti supstituisani malononitrilom pod uslovima posredovanim metalom da bi se dobio aminopirol intermedijer C. Nitril se može hidrolizovati do karboksamida nakon tretmana kiselinom uz istovremeni raskid benzil grupe. Dobijeni hidroksil se može pretvoriti u triflat da bi se generisao triflatni ključni intermedijer D koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom posredovano kuplovanje ili pomeranje S<N>Ar može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>. U zavisnosti od prirode R<1>grupe, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije triflata. U slučaju kada R<1>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju kada arilamin i/ili R<1>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, atropizomerno čist intermedijer može se izolovati i može se dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, ključni intermedijer D može se prečistiti hiralnom hromatografijom da bi se dobio atropizomerno čist intermedijer koji se može manipulisati slično kao intermedijer D opisan gore da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0374]
[0377] Postupak B
[0379] [0132] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u šemi B i opisano ovde. Hlor intermedijera B može biti zamenjen aromatičnim aminom pod S<N>Ar uslovima. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Bromo se zatim može supstituisati malononitrilom pod uslovima posredovanim metalom da bi se dobio aminopirol. OBn se može hidrogenolizovati da bi se dobio ključni intermedijer E koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska nakon hidrolize nitrila. Na primer, Mitsunobu ili uslovi alkilacije mogu se koristiti za instaliranje grupe na R<2>. Alternativno, intermdijer E može se pretvoriti u triflatni ključni intermedijer F koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska nakon hidrolize nitrilom. Na primer, metalom posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<2>. U zavisnosti od prirode R<2>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije hidroksil ili triflata. U slučaju kada R<2>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju gde arilamin i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0381]
[0384] Postupak C
[0386] [0133] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi C i ovde opisano. 2-hlor komercijalno dostupnog 3-bromo-2,6-dihloropiridina može se supstituisati malononitrilom pod S<N>Ar uslovima sa bazom. Bromo može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim metalom da bi se dobio aminoazaindol. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Zaštitna(e) grupa(e) mogu biti uklonjene pre nego što se nitril može hidrolizovati do karboksamida nakon tretmana kiselinom da bi se dobio intermedijer G. Preostali hloro može biti derivatizovan na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom-posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>. U zavisnosti od prirode R<1>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije hloro derivatizacije. U slučaju kada je R<1>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju gde arilamin i/ili R<1>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0389]
[0392] Postupak D
[0394] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u šemi D i opisano ovde. Halogen na poziciji 2 adekvatno supstituisanog 5-nitropiridina može biti supstituisani aromatičnim aminom pod S<N>Ar uslovima ili uslovima metalom-posredovanog C-N kuplovanja. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. 3-Bromo može biti supstituisani malononitrilom pod uslovima posredovanim paladijumom da bi se dobio aminoazaindol. Dobijena amino grupa može biti zaštićena odgovarajućom zaštitnom grupom, npr. BOC. Nitro se može redukovati, a dobijeni amino se može pretvoriti u halogen pod Sandmeyer-ovim uslovima, dajući halogenovane derivate. N-zaštitna grupa aminopirola može se odvojiti, a nitril se može hidrolizovati do karboksamida, da bi se proizveo intermedijer I koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>U slučaju kada je R<1>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna
[0397] 1
[0398] reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode R<1>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije halogena. U slučaju kada arilamin i/ili R<1>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0401]
[0404] Postupak E
[0406] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi E i opisano ovde. Jedan hlor komercijalno dostupnog 2,3-dihloro-pirazina može se supstituisati malononitrilom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma. Preostali hloro može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma da bi se dobio aminopirol. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U slučaju da arilamin grupa nosi zaštitnu
[0409] 2
[0410] grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i može se dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0413]
[0416] Postupak F
[0418] [0136] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi F i opisano ovde. Jedan hlor komercijalno dostupnog 2,3-dihlorpirazina može se supstituisati malononitrilom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma. Drugi hlor može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma da bi se dobio aminopirol. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Pirazinski prsten se može bromovati korišćenjem odgovarajućeg reagensa za bromovanje kao što je NBS. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima, a zaštitna grupa se može odvojiti da bi se dobio ključni intermedijer H koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<2>. U zavisnosti od prirode R<2>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije bromo derivatizacije. U slučaju kada R<2>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju kada arilamin i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0421]
[0424] Postupak G
[0426] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi G i opisano ovde. Hlor komercijalno dostupnih 2-hlor-3-bromopiridina može se zameniti malononitrilom pod S<N>Ar uslovima. Bromo može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma da bi se dobio aminopirol. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Za arilamin grupu koja nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, atropizomerno čist intermedijer može se izolovati i može se dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0429] 4
[0430]
[0433] Postupak H
[0435] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi H i opisano ovde. Ključni intermedijer C može se bromovati korišćenjem odgovarajućeg reagensa za bromovanje kao što je NBS. Nitril se može hidrolizovati do karboksamida nakon tretmana kiselinom uz istovremeni raskid benzil grupe. Dobijeni hidroksil se može pretvoriti u triflat. Bromo i triflat mogu se derivatizovati sekvencijalno sa različitim grupama ili, alternativno, brom i triflat mogu se derivatizovati istovremeno sa istim grupama. Bromo i triflat mogu se derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom-posredovana kuplovanja mogu se koristiti za instaliranje grupe na R<1>i/ili R<2>sekvencijalno ili istovremeno. U zavisnosti od prirode R<1>i/ili R<2>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije broma ili triflata. U slučaju gde arilamin, R<1>i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, mogu biti potrebni koraci deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina koji se koristi za pripremu intermedijera C, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti neophodno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0436]
[0439] Postupak I
[0441] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u Šemi I i opisano ovde. Hlor u komercijalno dostupnom 3-bromo-2-hloro-5-(trifluorometil)piridinu može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim preko S<N>Ar ili paladijuma. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Bromo se može supstituisati malononitrilom pod uslovima posredovanim paladijumom da bi se dobio aminopirol. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U slučaju kada arilamin grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i može se dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0442]
[0445] Postupak J
[0447] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u šemi J i ovde opisano. Ključni intermedijer C može se halogenovati korišćenjem odgovarajućeg halogenirajućeg reagensa kao što su NBS ili NIS. Halogen se može derivatizovati na više različitih načina. Na primer, metalom-posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<2>. Nitril se može hidrolizovati do karboksamida nakon tretmana kiselinom uz istovremeni raskid benzil grupe. Dobijeni hidroksil se može pretvoriti u triflat. Triflat se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom-posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>. U zavisnosti od prirode R<1>i/ili R<2>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije halogena i/ili triflata. U slučaju gde arilamin, R<1>i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, mogu biti potrebni koraci deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina koji se koristi za pripremu intermedijera C, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti neophodno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0448]
[0451] Postupak K
[0453] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi K i ovde opisano. Fluoro u 3-bromo-2-fluoro-piridinu može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima S<N>Ar. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. Bromo se može supstituisati malononitrilom pod uslovima posredovanim paladijumom da bi se dobio aminoazaindol. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U slučaju gde arilamin ili R<1>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0456]
[0457] Postupak L
[0459] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano u šemi L i opisano ovde. Triflat ključnog intermedijera D može se derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>. Pirazin se može bromovati korišćenjem odgovarajućeg reagensa za bromiranje kao što je NBS. Bromo se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom-posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<2>. U zavisnosti od prirode R<1>i/ili R<2>grupa, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije triflata i/ili broma. U slučaju gde arilamin, R<1>i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, mogu biti potrebni koraci deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina koji se koristi za pripremu intermedijera D, Može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti neophodno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0462]
[0465] Postupak M
[0467] [0143] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi M i opisano ovde. Nitril ključnog intermedijera C može dati keton nakon tretmana Grignard-ovim reagensom. Benzil grupa se može odvojiti pod kiselim uslovima. Dobijeni hidroksil se može pretvoriti u triflat da bi se generisao triflat koji se može derivatizovati na više različitih načina da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Na primer, metalom-posredovano kuplovanje može se koristiti za instaliranje grupe na R<1>. U zavisnosti od prirode R<1>grupe, zaštitna grupa može biti potrebna pre reakcije derivatizacije triflata. U slučaju gde R<1>grupa nosi nezasićenost, može biti potrebna reakcija hidrogenacije da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju kada arilamin i/ili R<1>grupa nosi zaštitnu grupu, mogu biti potrebni koraci deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina koji se koristi za pripremu intermedijera C, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti neophodno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0470]
[0473] Postupak N
[0475] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi N i opisano ovde. Amino grupa aminopirola opisanog ovde može biti supstituisana protonom pod uslovima diazotizacije. Nitril se može hidrolizovati do karboksamida pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobilo jedinjenje ovog pronalaska. U slučaju gde arilamin, R<1>i/ili R<2>grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode N-aril grupe, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izolovati atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, može se izolovati atropizomerno čist intermedijer i dalje ga derivatizovati da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0476]
[0479] Postupak O
[0481] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti kao što je prikazano na šemi O i ovde opisano. 2-aminopiridin se može pretvoriti u 2-hidroksipiridin, koji se može pretvoriti u 2-bromopiridin. 2-bromo može biti supstituisani aromatičnim aminom pod uslovima posredovanim paladijumom. U zavisnosti od prirode arilamina, može biti potrebno da zaštitna grupa bude prisutna pre ove reakcije. 3-bromo može biti supstituisani malononitrilom pod uslovima posredovanim paladijumom da bi se dobio aminopirol. Hidroliza nitrila može se izvršiti pod kiselim ili baznim uslovima da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U slučaju kada arilaminska grupa nosi zaštitnu grupu, može biti potreban korak (koraci) deprotekcije korišćenjem kiseline, baze i/ili fluorida da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od prirode arilamina, može se dobiti atropizomerna smeša. U takvim slučajevima može biti potrebno izvršiti hiralnu hromatografiju da bi se izolovao atropizomer od interesa da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska. Alternativno, atropizomerno čist intermedijer može biti izolovan i može biti dalje derivatizovan da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.
[0484]
[0487] Postupci lečenja
[0490] 1
[0491] Jedinjenja pronalaska mogu se koristiti za lečenje bolesti ili stanja (npr. kancera koji prekomerno eksprimira CCNE1 ili ima inaktivirajuću mutaciju u FBXW7 genu) koji zavise od aktivnosti Myt1 (naziv gena PKMYT1).
[0492] Bolest ili stanje može imati simptom ćelijske hiperproliferacije. Na primer, bolest ili stanje može biti kancer (npr. kancer koji prekomerno eksprimira CCNE1 ili ima inaktivirajuću mutaciju u FBXW7 gen).
[0493] Kanceri koji imaju visoku učestalost prekomerne ekspresije CCNE1 uključuju npr. kancer materice, kancer jajnika, kancer dojke, kancer želuca, kancer jednjaka, kancer pluća i kancer endometrijuma.
[0494] Kanceri koji imaju deficijenciju u FBXW7 uključuju, na primer, kancer materice, kolorektalni kancer, kancer dojke, kancer pluća i kancer jednjaka.
[0495] Jedinjenje pronalaska može se primenjivati putem izabranim iz grupe koja se sastoji od oralne, sublingvalne, bukalne, transdermalne, intradermalne, intramuskularne, parenteralne, intravenske, intraarterijske, intrakranijalne, potkožne, intraorbitalne, intraventrikularne, intraspinalne, intraperitonealne, intranazalne, inhalacione, intratumoralne i topikalne primene.
[0497] Farmaceutske kompozicije
[0499] Jedinjenja koja se koriste u ovde opisanim postupcima su poželjno formulisana u farmaceutske kompozicije za primenu na ljudskim subjektima u biološki kompatibilnom obliku pogodnom za primenu in vivo. Farmaceutske kompozicije tipično uključuju jedinjenje kako je ovde opisano i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. Određene farmaceutske kompozicije mogu da sadrže jedan ili više dodatnih farmaceutski aktivnih agenasa opisanih ovde.
[0500] Jedinjenja opisana ovde mogu se takođe koristiti u obliku slobodne baze, u obliku soli, cviterjona, solvata ili kao prolekovi ili njihove farmaceutske kompozicije. Svi oblici su u okviru ovog pronalaska. Jedinjenja, soli, cviterjoni, solvati, prolekovi ili njihove farmaceutske kompozicije mogu se primenjivati kod pacijenta u različitim oblicima u zavisnosti od izabranog načina primene, što će biti jasno stručnjacima u ovoj oblasti. Jedinjenja koja se koriste u postupcima opisanim ovde mogu se primenjivati, na primer, oralno, parenteralno, bukalno, sublingvalno, nazalno, rektalnom, flasterom, pumpom ili transdermalnom primenom, a farmaceutske kompozicije formulisane u skladu sa tim. Parenteralna primena uključuje intravenski, intraperitonealni, subkutani, intramuskularni, transepitelni, nazalni, intrapulmonalni, intratekalni, rektalni i topikalni način primene. Parenteralna primena može se vršiti kontinuiranom infuzijom tokom izabranog vremenskog perioda.
[0503] 2
[0504] Za ljudsku upotrebu, jedinjenje pronalaska može se primenjivati samo ili u smeši sa farmaceutskim nosačem odabranim u odnosu na predviđeni način primene i standardnu farmaceutsku praksu. Farmaceutske kompozicije za upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom mogu se stoga formulisati na konvencionalan način koristeći jedan ili više fiziološki prihvatljivih nosača, uključujući ekscipijense i pomoćne materije koje olakšavaju preradu jedinjenja pronalaska u preparate koji se mogu farmaceutski koristiti.
[0505] Ovaj pronalazak takođe obuhvata farmaceutske kompozicije koje mogu da sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Prilikom pripreme farmaceutskih kompozicija pronalaska, aktivni sastojak se obično meša sa ekscipijensom, razblažuje ekscipijensom ili je zatvoren unutar takvog nosača u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira ili druge posude. Kada ekscipijens služi kao razblaživač, može biti čvrst, polučvrst ili tečni materijal (npr. fiziološki rastvor), koji deluje kao vehikulum, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Dakle, kompozicije mogu biti u obliku tableta, prahova, pastila, kesica, kapsula, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa i mekih i tvrdih želatinskih kapsula. Kao što je poznato u struci, vrsta razblaživača može da varira u zavisnosti od predviđenog načina primene. Dobijene kompozicije mogu da sadrže dodatna sredstva, npr. konzervanse.
[0506] Ekscipijens ili nosač se bira na osnovu načina i puta primene. Pogodni farmaceutski nosači, kao i farmaceutske potrebe za upotrebu u farmaceutskim formulacijama, opisani su u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005), dobro poznati referentni tekst u ovoj oblasti, i u USP/NF (United States Pharmacopeia and the National Formulary). Primeri odgovarajućih pomoćnih supstanci su laktoza, dekstroza, saharoza, sorbitol, manitol, skrobovi, guma akacija, kalcijum fosfat, alginati, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalna celuloza, polivinilpirolidon, celuloza, voda, sirup i metil celuloza. Formulacije mogu dodatno da sadrže: lubrikaciona sredstva, npr., talk, magnezijum stearat i mineralno ulje; sredstva za vlaženje; emulgatore i sredstva za suspendovanje; konzervanse, npr. metil- i propilhidroksibenzoate; zaslađivače; i sredstva za poboljšanje ukusa. Ostale primerne pomoćne supstance su opisane u Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th Edition, Rowe et al., Eds., Pharmaceutical Press (2009).
[0507] [0156] Ove farmaceutske kompozicije mogu se proizvesti na konvencionalan način, npr. konvencionalnim mešanjem, rastvaranjem, granulacijom, pripremom dražea, usitnjavanjem, emulgovanjem, kapsuliranjem, hvatanjem ili liofilizacijom. Postupci dobro poznati u struci za pripremu formulacija nalaze se, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005), i Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York. Odgovarajuća formulacija zavisi od izabranog načina primene. Formulacija i priprema takvih kompozicija su dobro poznati stručnjacima u oblasti farmaceutske formulacije. Prilikom pripreme formulacije, aktivno jedinjenje se može samleti da bi se dobila odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa ostalim sastojcima. Ako je aktivno jedinjenje suštinski nerastvorljivo, može se samleti do veličine čestica manje od 200 „mesh“. Ako je aktivno jedinjenje suštinski rastvorljivo u vodi, veličina čestica se može podesiti mlevenjem da bi se dobila suštinski ravnomerna raspodela u formulaciji, npr. oko 40 „mesh“.
[0509] Doze
[0511] Doza jedinjenja koje se koristi u ovde opisanim postupcima, ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli ili prolekova, ili njegovih farmaceutskih kompozicija, može varirati u zavisnosti od mnogih faktora, npr. farmakodinamičkih svojstava jedinjenja; načina primene; starosti, zdravstvenog stanja i težine primaoca; prirode i obima simptoma; učestalosti lečenja i vrste istovremenog lečenja, ako postoji; i brzine klirensa jedinjenja kod životinje koja se leči. Stručnjak u ovoj oblasti može odrediti odgovarajuću dozu na osnovu gore navedenih faktora. Jedinjenja koja se koriste u ovde opisanim postupcima mogu se početno primenjivati u odgovarajućoj dozi koja se može prilagoditi po potrebi, u zavisnosti od kliničkog odgovora. Generalno, odgovarajuća dnevna doza jedinjenja pronalaska biće ona količina jedinjenja koja je najniža doza efikasna za stvaranje terapeutskog efekta. Takva efikasna doza će generalno zavisiti od gore opisanih faktora.
[0512] Jedinjenje pronalaska može se primeniti pacijentu u jednoj dozi ili u više doza. Kada se primenjuje više doza, doze mogu biti razdvojene jedna od druge, na primer, za 1-24 sata, 1-7 dana, 1-4 nedelje ili 1-12 meseci. Jedinjenje se može primeniti prema rasporedu ili se jedinjenje može primeniti bez unapred određenog rasporeda. Aktivno jedinjenje može se primenjivati, na primer, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 puta dnevno, svakog drugog, trećeg, četvrtog, petog ili šestog dana, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 puta nedeljno, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 puta mesečno ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 puta godišnje. Treba razumeti da za svakog određenog subjekta, specifični režimi doziranja treba da se prilagođavaju tokom vremena u skladu sa individualnim potrebama i stručnom procenom osobe koja primenjuje ili nadgleda primenu kompozicija.
[0513] Iako će lekar koji leči pacijenta na kraju odlučiti o odgovarajućoj količini i režimu doziranja, efikasna količina jedinjenja pronalaska može biti, na primer, ukupna dnevna doza od, npr., između 0,05 mg i 3000 mg bilo kog od jedinjenja opisanih ovde. Alternativno, količina doze se može izračunati korišćenjem telesne težine pacijenta. Takvi rasponi doza mogu
[0516] 4
[0517] uključivati, na primer, između 10-1000 mg (npr., 50-800 mg). U nekim primerima izvođenja, primenjuje se 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 ili 1000 mg jedinjenja.
[0518] U postupcima pronalaska, vremenski period tokom kojeg se višestruke doze jedinjenja pronalaska primenjuju na pacijenta može da varira. Na primer, u nekim primerima izvođenja, doze jedinjenja pronalaska se primenjuju na pacijenta tokom vremenskog perioda koji je 1-7 dana; 1-12 nedelja; ili 1-3 meseca. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja se primenjuju na pacijenta tokom vremenskog perioda koji je, na primer, 4-11 meseci ili 1-30 godina. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja se primenjuju na pacijenta na početku simptoma. U bilo kom od ovih primera izvođenja, količina jedinjenja koja se primenjuje može da varira tokom vremenskog perioda primene. Kada se jedinjenje primenjuje svakodnevno, primena se može odvijati, na primer, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 puta dnevno.
[0520] Formulacije
[0522] Jedinjenje identifikovano kao sposobno za lečenje bilo kog od ovde opisanih stanja, korišćenjem bilo kojeg od ovde opisanih postupaka, može se primenjivati na pacijente ili životinje sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem, nosačem ili ekscipijensom, u obliku jedinične doze. Hemijska jedinjenja za upotrebu u takvim terapijama mogu se proizvesti i izolovati bilo kojom standardnom tehnikom poznatom stručnjacima u oblasti medicinske hemije. Konvencionalna farmaceutska praksa može se koristiti za obezbeđivanje odgovarajućih formulacija ili kompozicija za primenu identifikovanog jedinjenja pacijentima koji pate od bolesti ili stanja. Primena može početi pre nego što pacijent postane simptomatski.
[0523] Primeri puteva primene jedinjenja (npr. jedinjenja pronalaska) ili njihovih farmaceutskih kompozicija, korišćenih u ovom pronalasku, uključuju oralnu, sublingvalnu, bukalnu, transdermalnu, intradermalnu, parenteralnu, intravensku, intraarterijsku, intrakranijalnu, potkožnu, intraorbitalnu, intraventrikularnu, intraspinalnu, intraperitonealnu, intranazalnu, inhalacionu i topikalnu primenu. Jedinjenja se poželjno primenjuju sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Farmaceutske formulacije jedinjenja opisanih ovde, formulisane za lečenje ovde opisanih poremećaja, takođe su deo ovog pronalaska.
[0525] Formulacije za oralnu primenu
[0526] Farmaceutske kompozicije koje predviđa ovaj pronalazak uključuju one formulisane za oralnu primenu („oralni dozni oblici“). Oralni dozni oblici mogu biti, na primer, u obliku tableta, kapsula, tečnog rastvora ili suspenzije, praha ili tečnih ili čvrstih kristala, koji sadrže aktivni sastojak (sastojke) u smeši sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima. Ovi ekscipijensi mogu biti, na primer, inertni razblaživači ili punioci (npr. saharoza, sorbitol, šećer, manitol, mikrokristalna celuloza, skrobovi uključujući skrob od krompira, kalcijum karbonat, natrijum hlorid, laktoza, kalcijum fosfat, kalcijum sulfat ili natrijum fosfat); sredstva za granulaciju i raspadanje (npr. derivati celuloze uključujući mikrokristalnu celulozu, skrobovi uključujući skrob od krompira, kroskarmelozu natrijum, alginati ili alginsku kiselinu); vezujuća sredstva (npr. saharoza, glukoza, sorbitol, akacija, alginska kiselina, natrijum alginat, želatin, skrob, preželatinizovani skrob, mikrokristalna celuloza, magnezijum aluminijum silikat, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropil metilceluloza, etilceluloza, polivinilpirolidon ili polietilen glikol); i lubrikaciona sredstva, klizajuća sredstva i antiadhezivi (npr. magnezijum stearat, cink stearat, stearinska kiselina, silicijum dioksidi, hidrogenizovana biljna ulja ili talk). Drugi farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi mogu biti boje, sredstva za poboljšanje ukusa, plastifikatori, humektanti, puferi i slično.
[0527] Formulacije za oralnu primenu mogu se takođe predstaviti kao tablete za žvakanje, kao tvrde želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem (npr. krompirov skrob, laktoza, mikrokristalna celuloza, kalcijum karbonat, kalcijum fosfat ili kaolin), ili kao meke želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili uljanim medijumom, na primer, uljem od kikirikija, tečnim parafinom ili maslinovim uljem. Praškovi, granulati i peleti mogu se pripremiti korišćenjem gore navedenih sastojaka pod tabletama i kapsulama na konvencionalan način koristeći, npr. mikser, aparat sa fluidizovanim slojem ili opremu za sušenje raspršivanjem.
[0528] Kompozicije sa kontrolisanim oslobađanjem za oralnu upotrebu mogu biti konstruisane tako da oslobađaju aktivni lek kontrolisanjem rastvaranja i/ili difuzije aktivne supstance leka. Može se primeniti bilo koja od brojnih strategija kako bi se dobilo kontrolisano oslobađanje i ciljani profil koncentracije u plazmi u odnosu na vreme. U jednom primeru, kontrolisano oslobađanje se dobija odgovarajućim izborom različitih parametara formulacije i sastojaka, uključujući, npr., različite vrste kompozicija i omotača sa kontrolisanim oslobađanjem. Primeri uključuju pojedinačne ili višejedinične tablete ili kapsule, uljane rastvore, suspenzije, emulzije, mikrokapsule, mikrosfere, nanočestice, flastere i lipozome. U nekim primera izvođenja, kompozicije uključuju biorazgradive, osetljive na pH i/ili temperaturu polimerne omotače.
[0529] Kontrolisano oslobađanje rastvaranjem ili difuzijom može se postići odgovarajućim omotačem tablete, kapsule, pelete ili granulirane formulacije jedinjenja, ili ugradnjom jedinjenja u odgovarajuću matricu. Omotač sa kontrolisanim oslobađanjem može da sadrži jednu ili više gore pomenutih supstanci za omotač i/ili, npr., šelak, pčelinji vosak, glikovaks, ricinusov vosak, karnauba vosak, stearil alkohol, gliceril monostearat, gliceril distearat, glicerol palmitostearat, etilcelulozu, akrilne smole, dl-polimlečnu kiselinu, celulozni acetat butirat, polivinilhlorid, polivinil acetat, vinil pirolidon, polietilen, polimetakrilat, metilmetakrilat, 2-hidroksimetakrilat, metakrilatne hidrogelove, 1,3-butilen glikol, etilen glikol metakrilat i/ili polietilen glikole. U formulaciji matrice sa kontrolisanim oslobađanjem, materijal matrice može takođe da sadrži, npr., hidratisanu metilcelulozu, karnauba vosak i stearil alkohol, karbopol 934, silikon, gliceril tristearat, metil akrilat-metil metakrilat, polivinilhlorid, polietilen i/ili halogenizovani fluorougljenik.
[0530] Tečni oblici u kojima se jedinjenja i kompozicije ovog pronalaska mogu ugraditi za oralnu primenu uključuju vodene rastvore, sirupe sa odgovarajućim ukusom, vodene ili uljane suspenzije i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima, npr. uljem pamučnog semena, susamovim uljem, kokosovim uljem ili uljem kikirikija, kao i eliksire i slične farmaceutske nosače.
[0532] Formulacije za parenteralnu primenu
[0534] [0168] Jedinjenja opisana ovde za upotrebu u postupcima pronalaska mogu se primenjivati u farmaceutski prihvatljivoj parenteralnoj (npr. intravenskoj ili intramuskularnoj) formulaciji kao što je ovde opisana. Farmaceutska formulacija se takođe može primenjivati parenteralno (intravenski, intramuskularno, subkutano ili slično) u doznim oblicima ili formulacijama koje sadrže konvencionalne, netoksične farmaceutski prihvatljive nosače i adjuvanse. Posebno, formulacije pogodne za parenteralnu primenu uključuju vodene i nevodene sterilne rastvore za injekcije koji mogu sadržati antioksidante, pufere, bakteriostate i rastvorene supstance koje čine formulaciju izotoničnom sa krvlju predviđenog primaoca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu sadržati sredstva za suspendovanje i sredstva za zgušnjavanje. Na primer, da bi se pripremila takva kompozicija, jedinjenja pronalaska mogu se rastvoriti ili suspendovati u parenteralno prihvatljivom tečnom nosaču. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, voda podešena na odgovarajući pH dodatkom odgovarajuće količine hlorovodonične kiseline, natrijum hidroksida ili odgovarajućeg pufera, 1,3-butandiola, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Vodena formulacija može takođe da sadrži jedan ili više konzervanasa, na primer, metil, etil ili n-propil p-hidroksibenzoat. Dodatne informacije u vezi sa parenteralnim formulacijama mogu se naći, na primer, u United States Pharmacopeia-National Formulary (USP-NF).
[0535] Parenteralna formulacija može biti bilo koja od pet opštih vrsta preparata koje je USP-NF identifikovao kao pogodne za parenteralnu primenu:
[0537] (1) Injekcija leka: tečni preparat koji je lekovita supstanca (npr. jedinjenje pronalaska) ili njen rastvor;
[0538] (2) Lek za injekciju: lekovita supstanca (npr. jedinjenje pronalaska) kao suva čvrsta supstanca koja će biti kombinovana sa odgovarajućim sterilnim nosačem za parenteralnu primenu kao injekcija leka;
[0539] (3) Injekciona emulzija leka: tečni preparat lekovite supstance (npr. jedinjenja pronalaska) koji je rastvoren ili dispergovan u odgovarajućem emulzionom medijumu; (4) Suspenzija leka za injekcije: tečni preparat lekovite supstance (npr. jedinjenja pronalaska) suspendovanog u odgovarajućoj tečnoj sredini; i
[0540] (5) Lek za injekcionu suspenziju: lekovita supstanca (npr. jedinjenje pronalaska) kao suva čvrsta supstanca koja će biti kombinovana sa odgovarajućim sterilnim nosačem za parenteralnu primenu kao injekciona suspenzija leka.
[0542] Formulacije za parenteralnu primenu uključuju rastvore jedinjenja pripremljene u vodi, pogodno pomešane sa surfaktantnim sredstvom, npr. hidroksipropilcelulozom. Disperzije se takođe mogu pripremiti u glicerolu, tečnim polietilen glikolima, DMSO i njihovim smešama sa ili bez alkohola, i u uljima. Pod uobičajenim uslovima skladištenja i upotrebe, ovi preparati mogu sadržati konzervans za sprečavanje rasta mikroorganizama. Konvencionalni postupci i sastojci za izbor i pripremu odgovarajućih formulacija opisani su, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005) i u The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 36 NF31), objavljenoj 2013.
[0543] [0171] Formulacije za parenteralnu primenu mogu, na primer, da sadrže ekscipijense, sterilnu vodu ili fiziološki rastvor, polialkilen glikole, npr. polietilen glikol, ulja biljnog porekla ili hidrogenizovane naftalene. Biokompatibilni, biorazgradivi laktidni polimer, laktid/glikolidni kopolimer ili polioksietilen-polioksipropilen kopolimeri mogu se koristiti za kontrolu oslobađanja jedinjenja. Drugi potencijalno korisni sistemi za parenteralnu isporuku jedinjenja uključuju čestice etilen-vinil acetatnog kopolimera, osmotske pumpe, implantabilne infuzione sisteme i lipozome. Formulacije za inhalaciju mogu da sadrže ekscipijense, na primer, laktozu, ili mogu biti vodeni rastvori koji sadrže, na primer, polioksietilen-9-lauril etar, glikoholat i deoksiholat, ili mogu biti uljani rastvori za primenu u obliku kapi za nos ili kao gel.
[0544] Parenteralna formulacija može biti formulisana za brzo oslobađanje ili za produženo/odloženo oslobađanje jedinjenja. Primeri formulacija za parenteralno oslobađanje jedinjenja uključuju: vodene rastvore, praškove za rekonstituciju, rastvore ko-rastvarača, emulzije ulje/voda, suspenzije, rastvore na bazi ulja, lipozome, mikrosfere i polimerne gelove.
[0546] Kombinacije
[0548] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se primenjivati na subjekta u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih sredstava, npr.:
[0550] (a) citotoksično sredstvo;
[0551] (b) antimetabolit;
[0552] (c) alkilujuće sredstvo;
[0553] (d) antraciklin;
[0554] (e) antibiotik;
[0555] (f) antimitotičko sredstvo;
[0556] (g) hormonska terapija;
[0557] (h) inhibitor prenosa signala;
[0558] (i) modulator ekspresije gena;
[0559] (j) induktor apoptoze;
[0560] (k) inhibitor angiogeneze;
[0561] (l) imunoterapijsko sredstvo;
[0562] (m) inhibitor popravke oštećenja DNK;
[0563] ili
[0565] njihova kombinacija.
[0566] [0174] Citotoksično sredstvo može biti, npr., aktinomicin-D, alemtuzumab, alitretinoin, alopurinol, altretamin, amifostin, amfotericin, amsakrin, arsen trioksid, asparaginaza, azacitidin, azatioprin, bacil Calmette-Guérin (BCG), bendamustin, beksaroten, bevakuzimab, bleomicin, bortezomib, busulfan, kapecitabin, karboplatin, karfilzomib, karmustin, cetuksimab, cisplatin, hlorambucil, kladribin, klofarabin, kolhicin, krisantaspaza, ciklofosfamid, ciklosporin, citarabin, citohalazin B, dakarbazin, daktinomicin, darbepoetin alfa, dasatinib, daunorubicin, 1-dehidrotestosteron, denileukin, deksametazon, deksrazoksan, dihidroksiantracin dion, disulfiram, docetaksel, doksorubicin, emetin, epirubicin, erlotinib, epigalokatehin galat, epoetin alfa, estramustin, etidijum bromid, etopozid, everolimus, filgrastim, finasunat, floksuridin, fludarabin, flurouracil (5-FU), fulvestrant, ganciklovir, geldanamicin, gemcitabin, glukokortikoidi, gramicidin D, histrelin acetat, hidroksiurea, ibritumomab, idarubicin, ifosfamid, imatinib, irinotekan, interferoni, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, iksabepilon, laktat dehidrogenaza A (LDH-A), lenalidomid, letrozol, leukovorin, levamizol, lidokain, lomustin, mehloretamin, melfalan, 6-merkaptopurin, mesna, metotreksat, metoksalen, metoprin, metronidazol, mitramicin, mitomicin-C, mitoksantron, nandrolon, nelarabin, nilotinib, nofetumomab, oprelvekin, oksaliplatin, paklitaksel, pemetreksed, pentostatin, palifermin, pamidronat, pegademaza, pegaspargaza, pegfilgrastim, dinatrijum pemetreksed, plikamicin, porfimer natrijum, prokain, prokarbazin, propranolol, puromicin, kinakrin, radicikol, radioaktivni izotopi, raltitreksed, rapamicin, rasburikaza, salinosporamid A, sargramostim, sunitinib, temozolomid, tenipozid, tetrakain, 6-tioguanin, tiotepa, topotekan, toremifen, trastuzumab, treosulfan, tretinoin, valrubicin, vinblastin, vinkristin, vindezin, vinorelbin, zoledronat ili njihova kombinacija.
[0567] Antimetaboliti mogu biti, npr., metotreksat, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, citarabin, 5-fluorouracil dekarbazin, kladribin, pemetreksed, gemcitabin, kapecitabin, hidroksiurea, merkaptopurin, fludarabin, pralatreksat, klofarabin, citarabin, decitabin, floksuridin, nelarabin, trimetreksat, tioguanin, pentostatin ili njihova kombinacija.
[0568] Alkilujuće sredstvo može biti, npr., mehloretamin, tiotepa, hlorambucil, melfalan, karmustin (BSNU), lomustin (CCNU), ciklotosfamid, busulfan, dibrommanitol, streptozotocin, mitomicin C, cis-dihlordiamin platina (II) (DDP) cisplatin, altretamin, ciklofosfamid, ifosfamid, heksametilmelamin, altretamin, prokarbazin, dakarbazin, temozolomid, streptozocin, karboplatin, cisplatin, oksaliplatin, uramustin, bendamustin, trabektedin, semustin ili njihova kombinacija.
[0569] Antraciklin može biti, npr., daunorubicin, doksorubicin, aklarubicin, aldoksorubicin, amrubicin, anamicin, karubicin, epirubicin, idarubicin, mitoksantron, valrubicin ili njihova kombinacija.
[0570] [0178] Antibiotik može biti, npr., daktinomicin, bleomicin, mitramicin, antramicin (AMC), ampicilin, bakampicilin, karbenicilin, kloksacilin, dikloksacilin, flukloksacilin, mezlocilin, nafcilin, oksacilin, piperacilin, pivampicilin, pivmecilin, tikarcilin, aztreonam, imipenem, doripenem, ertapenem, meropenem, cefalosporini, klaritromicin, diritromicin, roksitromicin, telitromicin, linkomicin, pristinamicin, kinupristin, amikacin, gentamicin, kanamicin, neomicin, netilmicin, paromomicin, tobramicin, streptomicin, sulfametizol, sulfametoksazol, sulfizoksazol, demeklociklin, minociklin, oksitetraciklin, tetraciklin, penicilin, amoksicilin, cefaleksin, eritromicin, klaritromicin, azitromicin, ciprofloksacin, levofloksacin, ofloksacin, doksiciklin, klindamicin, metronidazol, tigeciklin, hloramfenikol, metronidazol, tinidazol, nitrofurantoin, vankomicin, teikoplanin, telavancin, linezolid, cikloserin, rifamicini, polimiksin B, bacitracin, viomicin, kapreomicin, hinoloni, daunorubicin, doksorubicin, 4'-deoksidoksorubicin, epirubicin, idarubicin, plikamicin, mitomicin-c, mitoksantron ili njihova kombinacija.
[0571] Antimitotičko sredstvo može biti, npr., vinkristin, vinblastin, vinorelbin, docetaksel, estramustin, iksabepilon, paklitaksel, majtanzinoid, dolastatin, kriptoficin ili njihova kombinacija.
[0572] Inhibitor prenosa signala može biti, npr., imatinib, trastuzumab, erlotinib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, vemurafenib, lapatinib, bortezomib, cetuksimab, panitumumab, matuzumab, gefitinib, STI 571, rapamicin, flavopiridol, imatinib mezilat, vatalanib, semaksinib, motesanib, aksitinib, afatinib, bosutinib, krizotinib, kabozantinib, dasatinib, entrektinib, pazopanib, lapatinib, vandetanib ili njihova kombinacija.
[0573] Modulator ekspresije gena može biti, npr., siRNK, shRNK, antisens oligonukleotid, inhibitor HDAC ili njihova kombinacija. Inhibitor HDAC može biti, npr., trihostatin A, trapoksin B, valproinska kiselina, vorinostat, belinostat, LAQ824, panobinostat, entinostat, tacedinalin, mocetiostat, givinostat, resminostat, abeksinostat, kvizinostat, rocilinostat, praktikunostat, CHR-3996, buterna kiselina, fenilbuterna kiselina, 4SC202, romidepsin, sirtinol, kambinol, EX-527, nikotinamid ili njihova kombinacija. Antisens oligonukleotid može biti, npr., kustirsen, apatorsen, AZD9150, trabadersen, EZN-2968, LErafAON-ETU ili njihova kombinacija. siRNK može biti, npr., ALN-VSP, CALAA-01, Atu-027, SPC2996 ili njihova kombinacija.
[0574] Hormonska terapija može biti, npr., antagonist hormona koji oslobađa luteinizujući hormon (LHRH). Hormonska terapija može biti, npr., firmagon, leuprolin, goserelin, buserelin, flutamid, bikalutadmid, ketokonazol, aminoglutetimid, prednizon, hidroksil-progesteron kaproat, medroksi-progesteron acetat, megestrol acetat, dietilstilbestrol, etinil estradiol, tamoksifen, testosteron propionat, fluoksimesteron, flutamid, raloksifen, droloksifen, jodoksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston, toremifin citrat, megestrol acetat, eksemestan, fadrozol, vorozol, letrozol, anastrozol, nilutamid, tripterelin,
[0577] 1
[0578] histerelin, arbirateron, medroksiprogesteron acetat, dietilstilbestrol, premarin, fluoksimesteron, tretinoin, fenretinid, troksacitabin ili njihova kombinacija.
[0579] Induktori apoptoze mogu biti, npr., rekombinantni humani ligand koji indukuje apoptozu povezan sa TNF (TRAIL), kamptotecin, bortezomib, etopozid, tamoksifen ili njihova kombinacija.
[0580] Inhibitori angiogeneze mogu biti, na primer, sorafenib, sunitinib, pazopanib, everolimus ili njihova kombinacija.
[0581] Imunoterapijsko sredstvo može biti, npr., monoklonsko antitelo, vakcina protiv kancera (npr. vakcina dendritskih ćelija (DC)), onkolitički virus, citokin, terapija adoptivnim T ćelijama, bacil Calmette-Guérin (BCG), GM-CSF, talidomid, lenalidomid, pomalidomid, imikvimod ili njihova kombinacija. Monoklonsko antitelo može biti, npr., anti-CTLA4, anti-PD1, anti-PD-L1, anti-LAG3, anti-KIR ili njihova kombinacija. Monoklonsko antitelo može biti, npr., alemtuzumab, trastuzumab, ibritumomab tiuketan, brentuksimab vedotin, trastuzumab, adotrastuzumab emtanzin, blinatumomab, bevacizumab, cetuksimab, patunizumab, patumucirumab, obinutuzumab, ofatumumab, rituksimab, pertuzumab, tositumomab, gemtuzumab ozogamicin, tositumomab ili njihova kombinacija. Vakcina protiv kancera može biti, na primer, Sipuleucel-T, BioVaxID, NeuVax, DCVax, SuVaxM, CIMAvax<®>, Provenge<®>, hsp110 šaperon kompleks vakcina, CDX-1401, MIS416, CDX-110, GVAX pankreas, HyperAcute<™>Pankreas, GTOP-99 (MyVax<®>), ili Imprime PGG<®>. Onkolitički virus može biti, npr., talimogen laherparepvek. Citokin može biti, npr., IL-2, IFNα ili njihova kombinacija. Adoptivna T ćelijska terapija može biti, npr., tisagenlekleucel, aksikabtagen ciloleucel ili njihova kombinacija.
[0582] Inhibitor popravke oštećenja DNK može biti, na primer, inhibitor PARP, inhibitor kinaze ćelijske kontrolne tačke ili njihova kombinacija. Inhibitor PARP može biti, na primer, olaparib, rukaparib, veliparib (ABT-888), niraparib (ZL-2306), iniparib (BSI-201), talazoparib (BMN 673), 2X-121, CEP-9722, KU-0059436 (AZD2281), PF-01367338 ili njihova kombinacija. Inhibitor kinaze kontrolnih tačaka ćelija može biti, npr., MK-1775 ili AZD1775, AZD7762, LY2606368, PF-0477736, AZD0156, GDC-0575, ARRY-575, CCT245737, PNT-737 ili njihova kombinacija.
[0584] PRIMERI
[0586] Sledeći primeri su imali za cilj da ilustruju pronalazak. Nisu imali za cilj da na bilo koji način ograniče pronalazak. Reakcije su tipično izvođene na sobnoj temperaturi (rt) u atmosferi
[0589] 2
[0590] azota korišćenjem suvih rastvarača (Sure/Seal<™>) ako nije drugačije opisano u dole navedenim primerima. Reakcije su praćene pomoću TLC ili ubrizgavanjem male alikvote na Waters Acquity-H UPLC<®>sistem klasa upotrebom Acquity<®>UPLC HSS C18 kolone 2,1x30 mm eluiranjem gradijentom (1,86 min) acetonitrila (15% do 98%) u vodi (oba sadrže 0,1% mravlje kiseline). Prečišćavanja preparativnim HPLC postupkom su izvršena na Teledyne Isco Combi Flash<®>EZ Prep sistemu upotrebom bilo Phenomenex Gemini<®>kolone NX-C185µm 110Å 150 x 21,2 mm pri protoku od 40 mL/min tokom 12 min (<100 mg ili višestruke injekcije <100 mg) ili HP C18 RediSep<®>Rf zlatne kolone (>100 mg) eluirajući odgovarajućim gradijentom acetonitrila u vodi (oba sadrže 0,1% mravlje kiseline), osim ako nije drugačije naznačeno. Gradijent je odabran na osnovu vremena zadržavanja primećenog praćenjem reakcije na Waters Acquity-H UPLC<®>Sistemu klasa (videti gore). Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su kombinovane i konačno liofilizovane. Prečišćavanja hromatografijom na silika gelu su izvršena na Teledyne Isco Combi Flash<®>Rf sistemu upotrebom RediSep<®>Rf kolona silika gela odgovarajućih veličina. Čistoća finalnih jedinjenja procenjena je ubrizgavanjem male alikvote na Waters Acquity-H UPLC<®>Sistem klasa upotrebom Acquity<®>UPLC BEH C18 kolone 2,1x50 mm eluiranjem gradijentom (7 min) acetonitrila (2% do 98%) u vodi (oba sadrže 0,1% mravlje kiseline).
[0592] Skraćenice
[0594] U ovom dokumentu se koriste skraćenice i termini koji se uobičajeno koriste u oblastima organske hemije, medicinske hemije, farmakologije i medicine i koji su dobro poznati stručnjacima u ovim oblastima. Reprezentativne skraćenice i definicije date su u nastavku:
[0596] Ac je acetil [CH<3>C(O)-];
[0597] ACN je acetonitril;
[0598] Ac<2>O je anhidrid sirćetne kiseline;
[0599] AcOH je sirćetna kiselina;
[0600] Ar je aril;
[0601] BOC je terc-butiloksikarbonil;
[0602] n-BuLi je n-butil litijum;
[0603] cmpd je jedinjenje;
[0604] konc. je koncentrovan;
[0605] DCM je dihlorometan;
[0606] DIPEA je diizopropiletilamin;
[0607] DMAP je 4-(dimetilamino)piridin;
[0608] DME je dimetoksietan;
[0609] DMF je N,N-dimetilformamid;
[0610] DMSO je dimetil sulfoksid;
[0611] EtOAc je etil acetat;
[0612] EtOH je etanol;
[0613] h je sat;
[0614] HATU je 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat;
[0615] HCl je hlorovodonična kiselina;
[0616] Heks su heksani;
[0617] HPLC je visokoefikasna tečna hromatografija;
[0618] IPA je izopropanol;
[0619] LCMS je HPLC sa masenom spektralnom detekcijom;
[0620] LiHMDS je litijum heksametildisilazan;
[0621] M je molarni; mmol je milimol;
[0622] Me je metil;
[0623] MeCN je acetonitril;
[0624] MeMgBr je metilmagnezijum bromid;
[0625] MeMgCl je metilmagnezijum hlorid;
[0626] MeOH je metanol;
[0627] MOM je metoksimetil;
[0628] min je minut;
[0629] N je normalam;
[0630] NBS je N-bromosukcinimid;
[0631] NCS je N-hlorsukcinimid;
[0632] NIS je N-jodosukcinimid;
[0633] NMP je N-metil pirolidinon;
[0634] NMR je nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija;
[0635] PdCl<2>(dppf) je [1,1-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II);
[0636] PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>je [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom;
[0637] Pd<2>(dba)<3>je tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0);
[0640] 4
[0641] Pd-PEPPSI<™>-SIPr je (1,3-bis(2,6-diizopropilfenil)imidazoliden)(3-hloropiridil)paladijum(II) dihlorid;
[0642] Ph je fenil;
[0643] PIV-Cl je pivaloil hlorid, trimetilacetil hlorid;
[0644] Reagens alkohol je smeša 90% etanola, 5% izopropanola i 5% metanola;
[0645] rt je sobna temperatura;
[0646] sat. je zasićen;
[0647] tBu je terc-butil;
[0648] Tf je trifluorometansulfonat;
[0649] TFA je trifluorosirćetna kiselina;
[0650] THF je tetrahidrofuran;
[0651] TMS je trimetilsilil;
[0652] Ts je p-toluensulfonil;
[0653] Xantphos je 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten.
[0654] U primerima 1 inč = 2,54 cm i 1 atm = 1013 mbar.
[0656] Primer 1. Priprema jedinjenja
[0658]
[0661]
[0664] Intermedijer B (5-benziloksi-2-bromo-3-hloro-pirazin)
[0666] Korak 1. Natrijum nitrit (40 g, 580 mmol) je dodat u porcijama rastvoru 5-bromo-6-hloro-pirazin-2-amina (110 g, 528 mmol) u sumpornoj kiselini (770 ml) na 0°C uz mehaničko mešanje. Dobijena gusta smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata, a zatim je polako sipana u 6 l hladne vode koja sadrži usitnjeni led, održavajući temperaturu ispod 30°C. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom, a zatim osušen ko-isparavanjem sa toluenom pod vakuumom dva puta da bi se dobio 5-bromo-6-hloro-pirazin-2-ol (104,6 g, prinos 95%) kao bledo bež čvrsta supstanca.
[0667] Korak 2. Benzil bromid (48 mL, 404 mmol) je dodat ukapavanjem u suspenziju 5-bromo-6-hloro-pirazin-2-ola (80 g, 382 mmol) i srebro karbonata (216 g, 778 mmol) u toluenu (2 L). Nakon mešanja tokom 3 sata, suspenzija je filtrirana na celitu. Filtrat je isparen do sušenja da bi se dobilo žuto ulje koje je rastvoreno u toplom EtOH. Nakon sporog dodavanja vode pod ultrazvukom, talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio 5-benziloksi-2-bromo-3-hloropirazin (85,2 g, prinos 75%) kao bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,27 (s, 1H), 7,51 - 7,46 (m, 2H), 7,44 - 7,33 (m, 3H), 5,36 (s, 2H).
[0670]
[0673] Intermedijer C (6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-bipirazin-7-karbonitril)
[0675] Korak 1. U rastvor Intermedijera B (90 g, 300 mmol) u toluenu (1350 ml) dodati su kalijum terc-butoksid (45,0 g, 401 mmol), 3-metoksi-2,6-dimetil-anilin (48 g, 318 mmol), Pd<2>(dba)<3>(14.4 g, 15,7 mmol) i Xantphos (18,0 g, 31 mmol). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom. Dobijena smeša je mešana na 80°C tokom 45 minuta, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (500 ml), dodato je 200 g silika gela, a suspenzija je isparena do sušenja pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na podlozi silika gela (1 kg silika gela) eluirajući gradijentom od 0 do 15% EtOAc u heksanima da bi se dobio 5-benziloksi-3-hloro-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirazin-2-amin (108,4 g, prinos 98%) kao bledo bež čvrsta supstanca.
[0676] Korak 2. U rastvor propandinitrila (42,1 g, 637 mmol) u DME (1800 ml) dodat je u porcijama NaH (25,0 g, 628 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju). Dobijena smeša je mešana 30 minuta, zatim je dodat 5-benziloksi-3-hloro-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirazin-2-amin (115 g, 311 mmol) u DME (500 ml) i Pd(PPh<3>)<4>(17,7 g, 15,3 mmol). Dobijena smeša je mešana na refluksu 2 sata, a zatim je koncentrovana u vakuumu do 1 l. Voda (1 l) je polako dodata i dobijena dvofazna smeša je mešana 18 sati mehaničkom mešalicom. Dobijena čvrsta supstanca je regenerisana filtracijom, isprana vodom i osušena u vakuumu. Trituracija u DCM je obezbedila prvu seriju željenog materijala kao bež čvrstu supstancu izolovanu filtracijom.
[0677] Matična tečnost je koncentrovana u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 10 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobila druga serija željenog materijala. Dve serije su spojene da bi se dobio 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (103,1 g, prinos 83%) kao bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,60 (s, 1H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,42 - 7,34 (m, 2H), 7,33 - 7,27 (m, 1H), 7,21 = 7,15 (m, 1H), 6,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,45 (s, 2H), 4,91 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 1,90 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,83 (s, 3H). MS: [M+1]: 400,4.
[0680]
[0683] Intermedijer D ([6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat)
[0685] Korak 1. Rastvor intermedijera C (83 g, 208 mmol) u sumpornoj kiselini (550 ml) mešan je mehaničkom mešalicom tokom 18 sati. Gusta braon smeša je polako sipana u ledenu vodu (2 l) u ledenom kupatilu, održavajući unutrašnju temperaturu ispod 20 °C uz mešanje mehaničkom mešalicom. Izdvojila se bledožuta čvrsta supstanca. Dobijena suspenzija u ledenom kupatilu je polako neutralisana do baznog pH pomoću vodenog amonijum hidroksida (28% rastvor; 850 ml) uz održavanje unutrašnje temperature ispod 40 °C. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom i osušen u vakuumu da bi se dobio 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (65,1 g, prinos 96%) kao bledo bež čvrsta supstanca.
[0686] [0195] Korak 2. U rastvor 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (30,5 g, 93,2 mmol) i Cs<2>CO<3>(34,9 g, 107 mmol) u DMF (300 ml) dodat je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (36,6 g, 103 mmol). Reakciona smeša je mešana 1 sat, razblažena vodom (900 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3x300 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (28 g, prinos 65%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,75 (s, 1H), 7,22 m, 2H), 6,97 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,37 (s, 2H), 5,49 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,84 (s, 3H). MS: [M+1]: 528,4.
[0687] Hiralno SFC odvajanje intermedijera D (7.0 g, 15 mmol) (Instrument: Waters Prep 100 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 25% MeOH sa 75% CO2; Brzina protoka: 70 ml/min) dalo je intermedijer D1 i intermedijer D2.
[0690]
[0693] Intermedijer D1 iz hiralnog SFC odvajanja intermedijera D. Pik 1 (vreme zadržavanja 4,95 min, 99,77%): R-6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il trifluorometansulfonat (1,93 g) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (s, 1H), 7,89 (br s, 2H), 7,50 (br s, 1H), 7,28 (dt, J = 8,4, 0,8 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,80 (br s, 1H), 3,85 (s, 3H), 1,82 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,74 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ - 72,83. MS: [M+1]: 460,0.
[0696]
[0699] Intermedijer D2 iz hiralnog SFC odvajanja intermedijera D. Pik 2 (vreme zadržavanja 6,44 min, 99,01%): S-6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il trifluorometansulfonat (1,95 g) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (s, 1H), 7,89 (br s, 2H), 7,50 (br s, 1H), 7,28 (dt, J = 8,5, 0,7 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,80 (br s, 1H), 3,85 (s, 3H), 1,82 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,74 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ - 72,83. MS: [M+1]: 460,0.
[0700]
[0702] Intermedijer E (6-amino-3-hidroksi-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril)
[0704] Korak 1. U rastvor 5-benziloksi-2-bromo-3-hloro-pirazina (5,08 g, 17,0 mmol) i 5-(metoksimetoksi)-2-metil-anilina (5,70 g, 34,1 mmol) u THF (40 ml) na 0 °C dodat je ukapavanjem kalijum terc-butoksid u THF (1 M, 48 ml). Nakon mešanja tokom 90 minuta na 0 °C, reakciona smeša je ugašena zasićenim NH<4>Cl, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-benziloksi-3-bromo-N-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirazin-2-amin (1,80 g, prinos 25%) kao bledožuta čvrsta supstanca.
[0705] Korak 2. U suspenziju NaH (631 mg, 16,5 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju) u THF (28 mL) na 0 °C, ukapavanjem je dodat malononitril (556 mg, 8,42 mmol) u THF (12 mL). Nakon mešanja na 0 °C tokom 30 minuta, ledeno kupatilo je uklonjeno i dodati su 6-benziloksi-3-bromo-N-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirazin-2-amin (1,80 g, 4,18 mmol) i Pd(PPh<3>)<4>(242 mg, 209 µmol). Dobijena smeša je isprana azotom i mešana na 60 °C tokom 1 sata. Dobijena smeša je ohlađena do sobne temperature, polako sipana u zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl, a zatim je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-3-benziloksi-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (1,63 g, prinos 94%) kao svetlo žućkasta čvrsta supstanca.
[0706] [0201] Korak 3. Smeša 6-amino-3-benziloksi-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (1,39 g, 3,35 mmol) i paladijuma na uglju (350 mg, 0,329 mmol, 10% tež./tež.) je isprana azotom i dodat je MeOH (40 ml). Reakciona smeša je isprana vodonikom i mešana u atmosferi vodonika (1 atm) tokom 2 sata, zatim isprana azotom, filtrirana na celitnoj podlozi koristeći DCM i MeOH. Filtrat je koncentrovan u vakuumu, a zatim osušen da bi se dobio 6-amino-3-hidroksi-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (1,12 g, 100%) kao oker čvrsta supstanca. MS: [M+1]: 326,1.
[0709]
[0711] Intermedijer F ([6-amino-7-cijano-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirolo[2,3-b]pirazin-3-il] trifluorometansulfonat)
[0713] Korak 1. U rastvor 6-amino-3-hidroksi-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (1,12 g, 3,44 mmol) i 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil) metansulfonamida (1,49 g, 4,17 mmol) u THF (45 ml) dodat je Et<3>N (1,23 g, 12,2 mmol, 1,70 ml). Reakciona smeša je mešana 18 sati, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio [6-amino-7-cijano-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]pirolo[2,3-b]pirazin-3-il] trifluorometansulfonat (1,72 g, 100%) kao tamno žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,38 (s, 1H), 8,13 (br s, 2H), 7,41 (dd, J = 8,5, 0,9 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 8,5, 2,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 1,90 (s, 3H). MS: [M+1]: 458,0.
[0716]
[0719] Intermedijer G (2-amino-5-hloro-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[0721] [0203] Korak 1. U rastvor propandinitrila (11,8 g, 179 mmol) u DME (200 ml) na 0 °C je u porcijama dodat NaH (7,0 g, 175,00 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju). Zatim je dodat 3-bromo-2,6-dihloro-piridin (20 g, 88,15 mmol) i dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 6 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, neutralisana sa 1M HCl, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC u više serija. Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane do suva da bi se dobio 2-(3-bromo-6-hloro-2-piridil)propandinitril (8,0 g, prinos 35%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0722] Korak 2. U rastvor 2-(3-bromo-6-hloro-2-piridil)propandinitrila (5 g, 19,5 mmol) u DMF (75 ml) dodat je Pd<2>(dba)<3>(1,75 g, 1,91 mmol), 5-(metoksimetoksi)-2-metil-anilin (3,6 g, 21,53 mmol), Cs<2>COO<3>(12.7 g) i Xantphos (1,12 g, 1,94 mmol). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom 3 puta. Dobijena smeša je mešana na 130 °C tokom 8 sati, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 10 do 60% EtOAc u heksanima. Željene frakcije su koncentrovane do sušenja, a ostatak je triturisan sa DCM da bi se dobio 2-amino-5-hloro-1-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitril (2,2 g, prinos 33%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0723] Korak 3. Suspenziji 2-amino-5-hloro-1-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitrila (2,20 g, 6,42 mmol) u DCM (5 ml) dodat je hlorovodonik 4M u dioksanu (4 M, 5 ml). Smeša je mešana 30 minuta. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu da bi se dobila HCl so 2-amino-5-hloro-1-(5-hidroksi-2-metilfenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitrila (2,10 g, prinos 98%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0724] Korak 4. Rastvor 2-amino-5-hloro-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitrila (2,3 g, 7,70 mmol) u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (25 ml) mešan je na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je razblažen usitnjenim ledom, alkaliziran koncentrovanim vodenim rastvorom amonijaka do pH 8. Suspenzija je filtrirana. Talog je ispran vodom, osušen u vakuumu da bi se dobila beličasta smeša koja uglavnom sadrži 2-amino-5-hloro-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (2 g, prinos 82%) koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,77 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,16 (m, 3H), 6,98 - 6,91 (m, 2H), 6,87 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 1,81 (s, 3H). MS: [M+1]: 317,1.
[0727]
[0731] 1
[0732] Intermedijer H (6-amino-3-bromo-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0734] Korak 1. Propandinitril (26,6 g, 403 mmol) je dodat ukapavanjem uz energično mešanje u suspenziju NaH 60% disperzije u mineralnom ulju (16 g, 418 mmol) u DME (600 ml). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim je dodat 2,3-dihloropirazin (30 g, 201 mmol). Reakciona smeša je mešana 3 sata, a zatim zagrejana do refluksa 1 sat. DME je isparen pod vakuumom, a dobijeni ostatak je tretiran hladnim vodenim rastvorom HCl 1 M da bi se dobio žuti proizvod koji je regenerisan filtracijom, ispran vodom i minimalnom količinom etanola da bi se dobio 2-(3-hloropirazin-2-il)propandinitril (34,2 g, prinos 95%) kao žuta čvrsta supstanca.
[0735] Korak 2. Mikrotalasna bočica koja sadrži 2-(3-hloropirazin-2-il)propandinitril (1,00 g, 5,60 mmol), 3-metoksi-2,6-dimetil-anilin (2,54 g, 16,8 mmol) i NMP (10 ml) je zatvorena, mešana na 150 °C tokom 1 sata, a zatim na 200 °C tokom 8 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, sipana u zasićeni vodeni rastvor NaHCO<3>i razblažena vodom i EtOAc. Smeša je filtrirana kroz sloj celita i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran, adsorbovan na silicijum dioksidu i prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima. Odgovarajuće frakcije su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu. Ostatak je ponovo prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 20% MeOH u DCM. Odgovarajuće frakcije su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (346 mg, prinos 21%) kao bež čvrsta supstanca.
[0736] Korak 3. U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (600 mg, 2,05 mmol) u DMF (10 ml) dodat je NBS (436 mg, 2,45 mmol). Smeša je mešana 10 minuta, razblažena vodom, mešana 20 minuta, a zatim filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana vodom i osušena u vakuumu. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima, dobijen je 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (350 mg, prinos 46%).
[0737] Korak 4. U rastvor 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (350 mg, 940 µmol) u DCM (10 ml) dodata je H<2>SO<4>(1,88 mmol, 1 mL). Smeša je mešana 60 minuta, ugašena usitnjenim ledom i ekstrahovana sa DCM. Organska faza je osušena preko Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen na silika gelu korišćenjem gradijenta od 0 do 20% MeOH u DCM da bi se dobio 6-amino-2-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (300 mg, prinos 82%).
[0740] 2
[0741] Korak 5. U rastvor 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (300 mg, 769 µmol) u DCM (3 mL) dodat je rastvor BBr<3>u DCM (1 M, 2,31 mL). Smeša je mešana 2 sata. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu da bi se dobila sirova smeša 6-amino-3-bromo-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (263 mg, prinos 91%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,31 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,13 - 7,06 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,78 (s, 3H), 1,70 (s, 3H). MS: [M+1]: 378,3.
[0744]
[0747] Intermedijer I (2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid)
[0749] Korak 1. U rastvor 2,3-dibromo-5-nitro-piridina (20 g, 63,85 mmol) u NMP (120 ml) dodati su 2,6-dimetilpiridin (11,08 g, 103,4 mmol, 12 ml), 3-metoksi-2,6-dimetil-anilin (14 g, 95,23 mmol). Smeša je zagrejana na 130 °C preko noći. Nakon što je hlađena na sobnu temperaturu, razblažena je vodom ukapavanjem, mešana na sobnoj temperaturi 20 minuta, filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana vodom, osušena u vakuumu. Ostatak je prečišćen korišćenjem 2 x 330 g silika gela eluirajući gradijentom od 10 do 30% EtOAc u heptanu da bi se dobio 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitro-piridin-2-amin (12 g, prinos 53%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.
[0750] [0213] Korak 2. U rastvor propandinitrila (4,4 g, 66,6 mmol, 4,19 ml) u DME (120 ml) dodat je u porcijama NaH (2,90 g, 66,9 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju). Dobijena smeša je mešana 5 minuta, zatim su dodati 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitro-piridin-2-amin (11,6 g, 32,9 mmol) i PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(1.34 g, 1,65 mmol). Smeša je mešana 2 sata na 110 °C. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom i ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Spojeni organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 2-amino-1-(3 metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (11 g, prinos 99%) kao žuta čvrsta supstanca.
[0751] Korak 3. U rastvor 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitrila (1,130 g, 3,35 mmol) u THF (15 ml) dodat je Et<3>N (3,37 mmol, 470 uL), DMAP (45 mg, 368 µmol) i terc-butoksikarbonil terc-butil karbonat (1,47 g, 6,73 mmol). Smeša je mešana na 50 °C tokom 1 sata, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Dodat je etilendiamin (500 µL) i smeša je mešana 2 sata. Dobijena smeša je razblažena vodom, ekstrahovana sa DCM (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 20 do 60% EtOAc da bi se dobio terc-butil N-[3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (1,27 g, prinos 87%).
[0752] Korak 4. U rastvor terc-butil N-[3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-nitropirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamata (2,94 g, 6,72 mmol) u DCM (30 ml) i MeOH (30 ml) dodat je paladijum na uglju (10% tež./tež., 400 mg, 376 µmol). Smeša je mešana 3 sata pod pritiskom od 1 atmosfere H<2>. Suspenzija je filtrirana preko sloja celita i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-[5-amino-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (2,7 g, prinos 99%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0753] Korak 5. U rastvor terc-butil N-[5-amino-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamata (15,1 g, 37,1 mmol) u smeši DMF (60 ml) i acetonitrila (80 ml) dodat je terc-butil nitrit (5,72 g, 55,5 mmol, 6,6 ml), a zatim bakar(II) bromid (10 g, 44,8 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 20 minuta, zatim je razblažena vodom, tretirana amonijakom, ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani. Filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen korišćenjem kolone sa silika gelom 3 X 330, eluirajući gradijentom od 0 do 5% EtOAc u DCM, da bi se dobio terc-butil N-[5-bromo-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (9,67 g, prinos 55%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS: 471,2 (M+H)<+>. Sledeći sporedni proizvod je takođe izolovan iz prečišćavanja: terc-butil (3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-2-il)karbamat (350 mg, prinos 2%).
[0754] Korak 6. U rastvor terc-butil N-[5-bromo-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamata (1,05 g, 2,23 mmol) u EtOH (15 ml) na 80 °C dodat je vodeni rastvor HCl (6 M, 6 ml). Smeša je mešana 20 minuta, zatim koncentrovana do sušenja, ko-isparena sa MeOH, tretirana sa Et<3>N, a zatim je koncentrovana do sušenja. Ostatak
[0757] 4
[0758] je prečišćen fleš hromatografijom sa obrnutom fazom na C18 kertridžu, eluirajući sa CH<3>CN/vodom/0,1% mravljom kiselinom da bi se dobio 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (515 mg, prinos 60%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0759] Korak 7. U rastvor 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitrila (580 mg, 1,56 mmol) u smeši EtOH (6 ml) i vode (2 ml) dodat je LiOH.H<2>O (500 mg, 11,9 mmol) i H<2>O<2>(27% tež./tež. vodeni rastvor, 21,02 mmol, 650 uL). Smeša je mešana na 60 °C tokom 20 minuta, ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana vodom, osušena u vakuumu da bi se dobio 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (600 mg, prinos 99%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,20 (dt, J = 8,4, 0,7 Hz, 1H), 7,13 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,83 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 1,75 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 469,1.
[0762]
[0765] Jedinjenje 2 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-2-(2-(pirolidin-2-il)etil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0767] Korak 1. U rastvor intermedijera D (0,25 g, 0,55 mmol) u DMF dodat je terc-butil 2-etinilpirolidin-1-karboksilat (0,213 g, 1,08 mmol) i Et<3>N (234 µL, 1,66 mmol). Gasoviti azot je propuštan kroz reakcionu smešu tokom 10 minuta. Cul (10 mg, 0,054 mmol) i PdCl<2>(PPh<3>)<2>(20 mg, 0,027 mmol) su zatim dodati i reakciona smeša je zagrejana na 100 °C tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena hladnom vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio terc-butil 2-((6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-I)etinil)pirolidin-1-karboksilat (0,27 g, prinos 83%) kao žuta čvrsta supstanca.
[0768] Korak 2. U rastvor terc-butil 2-((6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-I)etinil)pirolidin-1-karboksilata (0,13 g, 0,55 mmol) u metanolu je dodat paladijum na uglju (10% tež./tež., 50% vlage). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika tokom 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana preko celita i isprana metanolom. Filtrat je koncentrovan u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 30% EtOAc u heksanima da bi se dobio terc-butil 2-(2-(6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il)etil)pirolidin-1-karboksilat (0,105 g, prinos 49%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0769] Korak 3. Za deprotekciju O-Me korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-2-(2-(pirolidin-2-il)etil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (2,7 mg, prinos 3,5%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 9.79 (bs, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,35 (s, 2H), 7,27 (s, 1H), 7,07 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,39 (s, 2H), 3,06 (s, 1H), 2,99 (s, 1H), 2,80 (s, 2H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (s, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,46 (s, 1H). MS: [M+1]: 395,5.
[0772]
[0775] Jedinjenje 6 (2-amino-5-(ciklopenten-1-il)-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[0777] U rastvor intermedijera G (33 mg, 104 µmol) u dioksanu (1,5 mL) dodat je 2-(ciklopenten-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (40 mg, 206 µmol), PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(8 mg, 10 µmol) i vodeni rastvor Na<2>CO<3>(2 M, 200 µL). Smeša je mešana na 100 °C tokom 5 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 2-amino-5-(ciklopenten-1-il)-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (5 mg, prinos 14%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,77 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,25 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,91 (s, 2H), 6,88 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,41 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,50 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (s, 3H). MS: [M+1]: 349,1.
[0778]
[0781] Jedinjenje 16 (2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(3-morfolinoprop-1-inil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[0783] Rastvor 4-prop-2-inilmorfolina (40 mg, 0,32 mmol), intermedijera G (50 mg, 0,16 mmol), bakar(I) jodida (3 mg, 16 µmol), Na<2>CO<3>(70 mg, 0,66 mmol), tri-terc-butilfosfonijum tetrafluoroborata (9 mg, 31 µmol) i PdCl<2>(3 mg, 17 µmol) u DMF (2 ml) je degaziran u vakuumu i ponovo napunjen azotom. Smeša je mešana na 100 °C tokom 5 sati. Smeša je prečišćena preparativnom HPLC eluiranjem sa CH<3>CN/vodom/10 mM amonijum bikarbonatom (pH 10). Željene frakcije su spojene i liofilizovane da bi se dobio 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metilfenil)-5-(3-morfolinoprop-1-inil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (22 mg, prinos 35%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,76 (s, 1H), 7,74 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,38 - 7,16 (m, 1H), 7,06 (s, 3H), 6,98 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,88 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 3,57 (m, 4H), 3,50 (s, 2H), 2,52 - 2,47 (m, 4H), 1,77 (s, 3H). MS: [M+1]: 406,2.
[0786]
[0789] Jedinjenje 18 (2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(3-morfolinopropil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[0791] [0224] U rastvor 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(3-morfolinoprop-1-inil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamida (20 mg, 49 µmol) u MeOH (2 ml) dodat je paladijum na uglju (10% tež./tež., 6 mg). Smeša je mešana u atmosferi vodonika tokom 30 minuta. Dobijena smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(3-morfolinopropil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (17,8 mg, prinos 88%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,74 bs, 1H), 8,01 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,90 - 6,81 (m, 3H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 3,51 (m, 4H), 2,77 - 2,58 (m, 2H), 2,28 (m, 6H), 1,91 - 1,78 (m, 2H), 1,77 (s, 3H). MS: [M+1]: 410,2.
[0794]
[0797] Jedinjenje 23 (2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-pirimidin-2-il-pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[0799] U rastvor intermedijera G (50 mg, 0,158 mmol) u DMF (2 ml) dodati su tributil(pirimidin-2-il)stanan (73 mg, 0,199 mmol, 60 µL), Cul (3 mg, 16 µmol), LiCl (7 mg, 165 µmol) i PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(12 mg, 16 µmol). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom tri puta, a zatim mešana na 110 °C tokom 18 sati. Smeša je zatim prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-pirimidin-2-il-pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (8 mg, prinos 14%) kao žućkasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,79 (s, 1H), 8,90 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 8,32 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 7,05 (s, 2H), 7,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 1,82 (s, 3H). MS: [M+1]: 361,2.
[0802]
[0803] Jedinjenje 27 (2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-5-il)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamida HCl so)
[0805] U rastvor terc-butil 5-[2-amino-3-karbamoil-1-(5-hidroksi-2-metilfenil)pirolo[3,2-b]piridin-5-il]-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilata (75 mg, 0,162 mmol, pripremljen slično kao jedinjenje 6) u MeOH (1 mL) dodat je HCl u dioksanu (4 M, 0,5 mL). Smeša je mešana 2 sata. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i CH<3>CN je zatim liofilizovan da bi se dobila 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-5-il)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamidna HCl so (64 mg, prinos 99%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,76 (s, 1H), 9,20 (s, 2H), 8,01 - 7,41 (m, 1H), 7,26 (d, J = 8,4, Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,02 (s, 3H), 6,92 - 6,82 (m, 2H), 6,72 - 6,61 (m, 2H), 4,11 (s, 2H), 3,44 (m 2H), 3,19 (m, 2H), 1,77 (s, 3H). MS: [M+1]: 464,2.
[0808]
[0811] Jedinjenje 28 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0813] Korak 1. Smeša tributil(tiazol-2-il)stanana (345 mg, 0,922 mmol, 290 µL), intermedijera D (210 mg, 0,457 mmol), Cul (11 mg, 58 µmol), LiCl (40 mg, 0,943 mmol), PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(35 mg, 45 µmol) u DMF (3 ml) je degazirana u vakuumu, a zatim ponovo napunjena azotom. Konačna smeša je mešana na 120 °C tokom 4 sata. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (136 mg, prinos 75%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0814] [0228] Korak 2. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (23 mg, 58 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg, prinos 45%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,91 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,61 (s, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,06 (d, , J = 8,4 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 381,2.
[0817]
[0820] Jedinjenje 31 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0822] Korak 1. U rastvor 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila intermedijera C (4 g, 10 mmol) u DMF (40 ml) dodat je NBS (4 g, 10 mmol). Smeša je mešana 1 sat, razblažena vodom i konačno mešana 20 minuta. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena u vakuumu, a zatim prečišćena hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 80% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-2-benziloksi-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (3,86 g, prinos 81%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0823] Korak 2. U rastvor 6-amino-2-benziloksi-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (650 mg, 1,36 mmol) u dioksanu (10 ml) i vodi (3 ml) dodat je Pd(PPh<3>)<4>(80 mg, 69 µmol), K<2>CO<3>(800 mg, 5,79 mmol). Smeša je degazirana u vakuumu, a zatim ponovo napunjena azotom tri puta. Zatim je dodat 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioksatriborinan (712 mg, 2,84 mmol, 0,8 ml) i konačna smeša je mešana na 100 °C tokom 18 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc, isprana vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 45% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (300 mg, prinos 53%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0824] Korak 3. Za hidrolizu nitrila upotrebom sumporne kiseline, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 164 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (260 mg, 0,629 mmol) da bi se dobio 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (205 mg, prinos 96%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0825] Korak 4. U rastvor 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metilpirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (206 mg, 0,603 mmol) i Cs<2>CO<3>(390 mg, 1,20 mmol) u
[0828] 1
[0829] DMF (2 ml) dodat je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (235 mg, 0,658 mmol). Smeša je mešana 1 sat, zatim razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (4x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heksanima da bi se dobio [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (160 mg, prinos 56%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0830] Korak 5. Smeša tributil(tiazol-2-il)stanana (83 mg, 0,223 mmol, 70 µl), [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (50 mg, 0,106 mmol), Cul (3 mg, 16 µmol), LiCl (7 mg, 0,165 mmol), PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(8 mg, 11 µmol) u DMF (1,5 ml) je degaziran u vakuumu, a zatim ponovo napunjen azotom. Reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 4 sata, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (22 mg, prinos 51%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0831] Korak 6. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (22 mg, 53 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-metil-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg, prinos 24%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,64 (s, 1H), 7,94 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,47 (s, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,76 (s, 3H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 395,2.
[0834]
[0837] Jedinjenje 33 (6-amino-3-bromo-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0839] Korak 1. U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (Jedinjenje 28, 60 mg, 0,15 mmol) u DMF (1 ml) dodat je NBS (30 mg, 0,17 mmol). Smeša je mešana 18 sati, razblažena vodom, tretirana 20% vodenim rastvorom
[0842] 1 1
[0843] Na<2>S<2>O<3>, ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-ilpirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (45 mg, prinos 63%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0844] Korak 2. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (35 mg, 74 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-3-bromo-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg, prinos 29%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,71 (s, 1H), 7,97 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,75 (s, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,19 - 7,00 (m, 2H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,79 (s, 3H), 1,71
460,2.
[0846] Jedinjenje 35 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[2-(trifluorometil)-4-piridil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0848] Korak 1. U rastvor intermedijera D (50 mg, 0,109 mmol) u dioksanu (1 ml) dodat je PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(8 mg, 10 µmol). [2-(trifluorometil)-4-piridil]borna kiselina (40 mg, 0,209 mmol) i vodeni rastvor Na<2>CO<3>(2 M, 200 µL). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom. Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 4 sata, ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom, a zatim filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana vodom, osušena u vakuumu i konačno prečišćena hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[2-(trifluorometil)-4-piridil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (36 mg, prinos 72%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0849] Korak 2. (Opšti postupak za deprotekciju OMe upotrebu BBr3) U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[2-(trifluorometil)-4-piridil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-
[0852] 1 2
[0853] karboksamida (36 mg, 79 µmol) u DCM (1 ml) dodat je BBr<3>(1 M u DCM, 230 µL). Smeša je mešana 1 sat. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je rastvoren u MeOH i ponovo koncentrovan do sušenja. Zatim je rastvoren u MeOH, dodat je Et<3>N (100 µL) i smeša je ponovo koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[2-(trifluorometil)-4-piridil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (16 mg, prinos 46%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 8,81 (m, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,41 (m, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,07 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H).
[0854] MS: [M+1]: 443,2.
[0857]
[0860] Jedinjenje 46 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[4-(metilkarbamoil)-1-piperidil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0862] Korak 1. U rastvor intermedijera D (50 mg, 0,109 mmol) u DMSO (1 ml) dodat je N-metilpiperidin-4-karboksamid (80 mg, 0,563 mmol). Smeša je mešana na 130 °C tokom 2 sata u zatvorenoj bočici, zatim ohlađena do sobne temperature i prečišćena preparativnim HPLC da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[4-(metilkarbamoil)-1-piperidil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (14 mg, prinos 28%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0863] Korak 2. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (15 mg, 32 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[4-(metilkarbamoil)-1-piperidil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg, prinos 69%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,51 (s, 1H), 7,72 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,14 - 6,96 (m, 4H), 6,87 (d, J = 8,2 Hz,
[0866] 1
[0867] 1H), 4,13 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 2,85 - 2,68 (m, 2H), 2,53 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,35 - 2,20 (m, 1H), 1,74 (m, 5H), 1,65 (s, 3H), 1,64 - 1,50 (m, 2H). MS: [M+1]: 438,2.
[0870]
[0873] Jedinjenje 97 (1-[6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-pirazin-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etenon)
[0875] Korak 1. U rastvor intermedijera C (2.5 g, 6,26 mmol) u THF (20 ml) dodat je rastvor MeMgBr u THF (3 M, 6,50 ml) na 0°C. Smeša je zagrejana i mešana 18 sati. Dodata je dodatna količina rastvora MeMgBr u THF (3 M, 4,00 ml) i smeša je mešana dodatnih 5 sati. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl, razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću kolone sa silika gelom, eluirajući gradijentom od 0 do 30% EtOAc u heksanima, da bi se dobio 1-[6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanon (120 mg, prinos 5%).
[0876] Korak 2. U rastvor 1-[6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanona (100 mg, 0,240 mmol) u DCM (1 mL) dodata je TFA (500 µL). Smeša je mešana na 50 °C tokom 10 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom da bi se dobio 1-[6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanon (43 mg, prinos 55%).
[0877] Korak 3. U smešu 1-[6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanona (43 mg, 0,132 mmol) i Cs<2>COO<3>(50 mg, 0,153 mmol) u DMF (1 ml) dodat je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (52 mg, 0,146 mmol). Smeša je mešana 1 sat. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heksanima da bi se dobio [7-acetil-6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (46 mg, prinos 76%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0878] Korak 4. U rastvor [7-acetil-6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (46 mg, 0,100 mmol) u DMF (1 ml) dodati su LiCl (9
[0881] 1 4
[0882] mg, 0,212 mmol), tributil(pirazin-2-il)stanan (74 mg, 0,200 mmol) i PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(7 mg, 9,6 µmol). Smeša je mešana na 120 °C tokom 10 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 1-[6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-2-pirazin-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanon (38 mg, prinos 97%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0883] Korak 5. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (38 mg, 98 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 1-[6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-pirazin-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-il]etanon (18 mg, prinos 49%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,69 - 8,62 (m, 2H), 8,13 (s, 2H), 7,07 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,76 (s, 3H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 375.
[0886]
[0889] Jedinjenje 102 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)-2-vinilpirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0891] Korak 1. U rastvor intermedijera C (800 mg, 2,00 mmol) u DMF (10 ml) dodat je NIS (450 mg, 2,00 mmol). Smeša je mešana 30 minuta, razblažena vodom i mešana 20 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, a zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-2-benziloksi-3-jodo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (820 mg, prinos 78%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0892] Korak 2. U rastvor 6-amino-2-benziloksi-3-jodo-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (745 mg, 1,42 mmol) u DMF (10 mL) dodat je (1,10-fenantrolin)(trifluorometil)bakar(I) (900 mg, 2,88 mmol). Smeša je mešana na 70 °C tokom 4 sata. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-
[0895] 1
[0896] 2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (300 mg, prinos 45%).
[0897] Korak 3. Rastvor 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (300 mg, 0,642 mmol) u sumpornoj kiselini (1 ml) je mešan 5 sati, sipan u usitnjeni led, neutralisan rastvorom amonijaka i dobijeni talog je filtriran. Talog je ispran vodom, osušen u vakuumu da bi se dobio 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (232 mg, prinos 91%) kao žuta čvrsta supstanca.
[0898] Korak 4. U rastvor 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (232 mg, 0,587 mmol) i Cs<2>CO<3>(200 mg, 0,615 mmol) u DMF (2 ml) dodat je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (210 mg, 0,588 mmol). Smeša je mešana 1 sat, razblažena vodom i mešana 20 minuta. Dobijeni talog je filtriran, ispran vodom, osušen u vakuumu. Daljim prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima, dobijen je [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (190 mg, prinos 61%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0899] Korak 5. U rastvor [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (90 mg, 0,171 mmol) u dioksanu (1 ml) dodat je PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(14 mg, 17 µmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolan (30 mg, 0,195 mmol) i vodeni rastvor Na<2>CO<3>(2M, 100 µL). Smeša je mešana na 120 °C tokom 18 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-3-(trifluorometil)-2-vinil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg, prinos 14%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0900] Korak 6. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (10 mg, 25 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trifluorometil)-2-vinil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (3 mg, prinos 31%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,67 (s, 1H), 7,85 (s, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,10 - 6,89 (m, 3H), 6,50 (m, 1H), 5,60 (m, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H). MS: [M+1]: 392,2.
[0903] 1
[0904]
[0907] Jedinjenje 110 (6-amino-2-ciklopropil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0909] Korak 1. U suspenziju magnezijumovih strugotina (140 mg, 5,76 mmol) u THF (10 ml) dodat je jod (13 mg, 52 µmol). Smeša je mešana 10 minuta, zatim je dodat CD<3>I (5,14 mmol, 320 µL) i smeša je mešana 18 sati pod azotom da bi se dobila beličasta suspenzija. Smeši je ukapavanjem dodat ZnCl<2>(0.5 M u THF, 10,5 mL). Nakon dodavanja, smeša je mešana 20 minuta, zatim su dodati 6-amino-2-benziloksi-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (500 mg, 1,05 mmol) i Pd(PPh<3>)<4>(120 mg, 0,103 mmol). Konačna smeša je mešana na 70 °C tokom 6 sati. Reakcija je ugašena sa 1M HCl, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (328 mg, prinos 75%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0910] Korak 2. Smeša 6-amino-2-benziloksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (328 mg, 0,788 mmol) u H<2>SO<4>(2 mL) je mešana 4 sata. Smeša je ohlađena na 0 °C, a zatim neutralisana na pH 7 korišćenjem koncentrovanog vodenog rastvora amonijaka. Dobijena smeša je liofilizovana, a ostatak je trituriran vodom i filtriran. Čvrsta supstanca je osušena u vakuumu da bi se dobio 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (220 mg, prinos 81%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0911] Korak 3. U rastvor 6-amino-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (232 mg, 0,674 mmol) u DMF (3 ml) dodat je Cs<2>CO<3>(320 mg, 0,982 mmol) i 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (360 mg, 1,01 mmol). Smeša je mešana 1 sat. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika
[0914] 1
[0915] gelu eluiranjem sa gradijentom od 20 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (200 mg, prinos 62%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0916] Korak 4. U rastvor [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (200 mg, 0,420 µmol) u DMF (3 ml) dodati su litijum hlorid (36 mg, 0,849 mmol) i tributil(ciklopropil)stanan (275 mg, 0,831 mmol). Smeša je mešana na 120 °C tokom 10 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobio 6-amino-2-ciklopropil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (80 mg, prinos 52%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0917] Korak 5. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (35 mg, 95 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-ciklopropil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (20 mg, prinos 59%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,49 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,14 - 6,98 (m, 4H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,84 - 1,68 (s, 3H), 1,64 (s, 3H), 1,04 - 0,81 (m, 4H). MS: [M+1]: 356,2. Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 110 (20 mg, 0,056 mmol) (Instrument: Waters Prep 15 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 55% MeOH sa 45% CO2; Brzina protoka: 10 ml/min) Jedinjenje 111 i Jedinjenje 112.
[0920]
[0923] Jedinjenje 111 iz hiralnog SFC odvajanja 110. Pik 1 (vreme zadržavanja 5,33 min, 99,95%): S-6-amino-2-ciklopropil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo [2,3-b]pirazin-7-karboksamid (7,8 mg) je dobijen kao beličasta čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,49 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,14 -6,98 (m, 4H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,84 - 1,68 (s, 3H), 1,64 (s, 3H), 1,04 - 0,81 (m, 4H). MS: [M+1]: 356,2.
[0926] 1
[0927]
[0930] Jedinjenje 112 iz hiralnog SFC odvajanja 110. Pik 2 (vreme zadržavanja 6,00 min, 99,78%): R-6-amino-2-ciklopropil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-(trideuteriometil)pirolo [2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5,3 mg) je dobijen kao beličasta čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,49 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,14 - 6,98 (m, 4H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,84 - 1,68 (s, 3H), 1,64 (s, 3H), 1,04 - 0,81 (m, 4H). MS: [M+1]: 356,2.
[0933]
[0936] Jedinjenje 116 (2-amino-5-ciklopropil-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid)
[0938] Korak 1. U rastvor terc-butil N-[5-bromo-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamata (opisanog u sintezi Intermedijera I) (110 mg, 0,233 mmol) u vodi (0,5 ml) i dioksanu (2 ml) dodati su ciklopropilborna kiselina (41 mg, 0,477 mmol), Cs<2>CO<3>(270 mg, 0,829 mmol), PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(18 mg, 22 µmol) u zatvorenoj bočici. Smeša je degazirana i ponovo napunjena azotom 3 puta. Dobijena smeša je zagrejana na 100°C i mešana 18 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 2-amino-5-ciklopropil-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (63 mg, prinos 81%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0939] Korak 2. U rastvor 2-amino-5-ciklopropil-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitrila (73 mg, 0,220 mmol) u EtOH (1,5 ml) i vodi (300 µL) dodat je LiOH·H<2>O (50 mg, 1,19 mmol) i H<2>O<2>(700 µL, 27% tež./tež. vodenog rastvora). Smeša je mešana na 60 °C tokom 20 minuta, zatim su isparljive materije uklonjene u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 20 do 60% EtOAc u
[0942] 1
[0943] heksanima da bi se dobio 2-amino-5-ciklopropil-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (22 mg, prinos 29%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[0944] Korak 3. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (22 mg, 63 µmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 2-amino-5-ciklopropil-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (15 mg, prinos 71%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,43 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86 (m, 3H), 6,69 (s, 2H), 1,88 m, 1H), 1,69 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 0,86 (m, 2H), 0,81 - 0,68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337,2.
[0945] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 116 (410 mg, 1,22 mmol) (Instrument: Waters Prep 100 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 50% ACN/EtOH 1:1 sa 50% CO2; Brzina protoka: 70 ml/min) dalo je jedinjenje 117 i jedinjenje 118.
[0948]
[0951] Jedinjenje 117 iz hiralnog SFC odvajanja 116. Pik 1 (vreme zadržavanja 5,60 min, 99,83%): S-2-amino-5-ciklopropil-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (130 mg) je dobijen kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,52 (s, 1H), 8,12 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,08 - 7,92 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 0,96 (m, 2H), 0,68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337,2.
[0954]
[0957] Jedinjenje 118 iz hiralnog SFC odvajanja 116. Pik 2 (vreme zadržavanja 7,81 min, 98,81%): R-2-amino-5-ciklopropil-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (130 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,52 (s, 1H), 8,12 (d, J = 2,2 Hz,
[0960] 11
[0961] 1H), 8,08 - 7,92 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 0,96 (m, 2H), 0,68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337,2.
[0964]
[0967] Jedinjenje 132 (2-amino-5-hloro-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid)
[0969] Korak 1. U rastvor 3-metoksi-2,6-dimetil-anilina (3,61 g, 23,9 mmol) i 3-bromo-5-hloro-2-fluoro-piridina (5,02 g, 23,9 mmol) u THF (50 ml) ukapavanjem je dodat rastvor LiHMDS u THF (1 M, 48 ml) tokom 18 minuta. Primećena je egzotermna reakcija na 16 °C. Posle 30 minuta, reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je odvojen, ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% EtOAc u heptanu. Frakcije su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu da bi se dobio 3-bromo-5-hloro-N-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)piridin-2-amin (6,58 g, prinos 81%) kao čvrsta supstanca boje breskve.
[0970] Korak 2. Suspenziji NaH (1,08 g, 24,9 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju) u DME (60 ml) ukapavanjem je dodat propandinitril (1,62 g, 24,6 mmol) u DME (15 ml). Nakon mešanja tokom 30 minuta, dodaju se 3-bromo-5-hloro-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)piridin-2-amin (4,00 g, 11,7 mmol) u DME (15 ml) i PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(1.08 g, 1,32 mmol). Reakciona smeša je isprana azotom koji je propuštan kroz rastvor, a zatim je mešana na 100 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i ukapavanjem je dodata ledena voda (250 ml). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran vodom. Čvrsta supstanca je osušena na vazduhu, a zatim ko-isparena sa toluenom (2x), osušena u vakuumu da bi se dobilo 4,67 g sirovog proizvoda. Prečišćavanje je hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu. Frakcije su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu, da bi se dobio 2-amino-5-hloro-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (3,27 g, prinos 85%) kao kristalna čvrsta supstanca boje slonovače.
[0971] [0267] Korak 3. U suspenziju 2-amino-5-hloro-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitrila (7,50 g, 23,0 mmol) u vodi (60 ml) i reagens alkoholu (180 ml) dodat je LiOH·H<2>O, 98% (7,22 g, 172 mmol) i H<2>O<2>(27% tež./tež. vodeni rastvor, 9,8 mL). Smeša je mešana na 60 °C tokom 30 minuta, zatim ohlađena do sobne temperature. Voda je dodata ukapavanjem (500 mL) i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana vodom i osušena na vazduhu. Filtrat je razblažen vodom i dobijena je druga porcija čvrste supstance. Konačno, filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani, a zatim osušeni u vakuumu, čime je dobijena treća porcija sirovog proizvoda. Kombinovani sirov materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu koristeći gradijent od 50 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su spojene i koncentrovane, osušene u vakuumu, čime se dobija 2-amino-5-hloro-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (3,90 g, prinos 49%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Alternativno, hidroliza nitrila može se izvršiti pod H<2>SO<4>uslovima (koristeći isti postupak koji se koristi za jedinjenje 164) čime se dobija 2-amino-5-hloro-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid u kvantitativnom prinosu.
[0972] Korak 4. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je korišćen na odgovarajućem intermedijeru (3,90 g, 11,3 mmol) da bi se dobio ostatak koji je ko-isparen sa MeOH (4x), osušen u vakuumu, triturisan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>i filtriran. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu sa silicijum dioksidom koristeći gradijent od 0 do 20% MeOH u CH<2>Cl<2>da bi se dobio 2-amino-5-hloro-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (3,54 g, prinos 95%) kao svetlo bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 954 (s, 1H), 8,14 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,14 (br s, 2H), 7,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86 (br s, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331,1.
[0973] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 132 (3,54 g, 10,7 mmol) (Instrument: Waters Prep 100 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 45% ACN/EtOH 1:1 sa 55% CO2; Brzina protoka: 70 ml/min) dalo je jedinjenje 133 i jedinjenje 134.
[0976]
[0979] Jedinjenje 133 iz hiralnog SFC odvajanja 132. Pik 1 (vreme zadržavanja 5,37 min, 99,70%): S-2-amino-5-hloro-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (1,26 g) je dobijen kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 9,54 (s, 1H), 8,14 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,14 (br s, 2H), 7,06 (dt, J = 8,2, 0,7 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86 (br s, 2H), 1,74 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331,1.
[0982]
[0985] Jedinjenje 134 iz hiralnog SFC odvajanja 132. Pik 2 (vreme zadržavanja 7,79 min, 99,19%): R-2-amino-5-hloro-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (1,26 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,54 (s, 1H), 8,14 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,14 (br s, 2H), 7,06 (dt, J = 8,2, 0,7 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86 (br s, 2H), 1,74 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331,1.
[0988]
[0991] Jedinjenje 150 (6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-fenil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[0993] Korak 1. Intermedijer F (101 mg, 0,236 mmol), fenil borna kiselina (29 mg, 0,24 mmol), Pd(PPh<3>)<4>(30 mg, 0,026 mmol) i tribazni anhidrovani kalijum fosfat (176 mg, 0,829 mmol) su stavljeni u mikrotalasnu bočicu, koja je isprana azotom, zatim je dodat dioksan (2 ml), bočica je zatvorena i stavljena u termoblok podešen na 90 °C. Posle 90 minuta, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-(5-metoksi-2-metilfenil)-3-fenil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (30 mg, prinos 36%) kao narandžasta čvrsta supstanca.
[0994] Korak 2. Za hidrolizu nitrila upotrebom sumporne kiseline, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 164 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (28 mg, 0,079 mmol) da bi se
[0997] 11
[0998] dobio 6-amino-5-(5-metoksi-2-metil-fenil)-3-fenil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (20 mg, prinos 68%) kao bledožuta čvrsta supstanca.
[0999] Korak 3. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-fenil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (11 mg, prinos 57%) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,71 (br s, 1H), 8,73 (s, 1H), 7,92 - 7,76 (m, 2H), 7,49 (br s, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 3H), 7,35 - 7,28 (m, 2H), 7,26 (br s, 1H), 6,92 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 1,89 (s, 3H). MS:
[1000] [M+1]: 360,2.
[1003]
[1006] Jedinjenje 153 (6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1008] Korak 1. U smešu intermedijera E (51 mg, 0,16 mmol), 3-piridilmetanola (41 mg, 0,38 mmol) i trifenilfosfina (62 mg, 0,24 mmol) u THF (2 ml) dodat je diizopropil azodikarboksilat (47 µL, 0,24 mmol). Dobijena smeša je mešana 18 sati. Dodati su dodatni trifenilfosfin (62 mg, 0,24 mmol), 3-piridilmetanol (41 mg, 0,38 mmol) i diizopropil azodikarboksilat (47 µL, 0,24 mmol) i smeša je mešana još 2,5 sata i koncentrovana do sušenja. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metilfenil]-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (115 mg) kao nečista ćilibarna guma (koja sadrži trifenil fosfin oksid), koja je prebačena u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[1009] Korak 2. U rastvor 6-amino-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (65,0 mg, 0,156 mmol) u MeOH (1,5 ml) dodat je HCl u dioksanu (4 M, 1,50 ml). Nakon mešanja tokom 75 minuta, reakciona smeša je koncentrovana i osušena u vakuumu. Sirovi 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril, pretpostavljen kao bis HCl so, prenet je u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[1010] Korak 3. U rastvor sirovog 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (70 mg, 0,156 mmol, pretpostavljajući da je bis HCl so) u MeOH (1,0 ml) dodat je vodeni rastvor NaOH (4 M, 1,0 ml). Reakciona smeša je prebačena u prethodno zagrejani grejni blok na 90 °C i mešana 18 sati. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je neutralisana sa 3N HCl i razblažena vodom. Talog je sakupljen filtracijom i ispran vodom, a zatim osušen na vazduhu. Prečišćavanjem preparativnom HPLC dobijen je 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-(3-piridilmetoksi)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (4 mg, prinos 7%) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,68 (br s, 1H), 8,48 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,42 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,65 (dt, J = 7,8, 2,0 Hz, 1H), 7,26 (ddd, J = 7,9, 4,9, 0,9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,15 (br s, 1H), 7,04 (br s, 1H), 7,00 (br s, 2H), 6,87 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 1,72 (s, 3H). MS: [M+1]: 391,2.
[1013]
[1016] Jedinjenje 160 (6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1018] Korak 1. U mikrotalasnu bocu napunjenu intermedijerom F (251 mg, 0,549 mmol), Pd(PPh<3>)<4>(65 mg, 0,056 mmol), Cul (43 mg, 0,023 mmol) i ispranu azotom dodat je 3-etinilpiridin (72 mg, 0,698 mmol) u DMF (2,5 ml), a zatim Et<3>N (610 µL, 4,39 mmol). Boca je zatvorena, a zatim preneta u prethodno zagrejani termoblok (120°C). Posle 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, zatim rastvorena u THF i adsorbovana na silicijum dioksidu. Isparljive materije su isparene pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima, zatim 0 do 20% MeOH u EtOAc, da bi se dobio 6-amino-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (260 mg, 99%) kao žućkasto-braon čvrsta supstanca.
[1019] Korak 2. U suspenziju 6-amino-5-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (225 mg, 0,548 mmol) u MeOH (3 ml) dodata
[1022] 11
[1023] je HCl u dioksanu (4 M, 3 ml). Nakon mešanja tokom 30 minuta, reakciona smeša je koncentrovana do sušenja, a zatim osušena u vakuumu, čime je dobijen 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (319 mg, bis HCl so) kao žućkasto-braon lepljiva čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[1024] Korak 3. 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril bis HCl so (241 mg, 0,548 mmol) je mešana u konc. H<2>SO<4>(2 mL). Posle 3 dana, reakciona smeša je ugašena usitnjenim ledom, stavljena u ledeno kupatilo i napravljena alkalnom (pH oko 10) sa 1:1 NH<4>OH/H<2>. Čvrste materije su sakupljene filtracijom i sušene na vazduhu preko noći, što je dalo sirovi proizvod kao oker žutu čvrstu materiju (249 mg). Deo (67 mg) je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (26 mg, izračunati prinos 46%) kao svetlo žuta pahuljasta čvrsta materija.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,77 (br s, 1H), 8,75 (dd, J = 2,3, 0,9 Hz, 1H), 8,57 (dd, J = 4,9, 1,7 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,98 (dt, J = 7,9, 1,9 Hz, 1H), 7,73 (br s, 2H), 7,44 (ddd, J = 8,0, 4,9, 0,9 Hz, 1H), 7,35 (br d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,94 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 1,85 (s, 3H). MS: [M+1]: 385,3.
[1027]
[1030] Jedinjenje 162 (6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1032] Korak 1. 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (102 mg, 0,265 mmol) i paladijum na uglju (30 mg, 0,028 mmol, 10% tež./tež.) su mešani u MeOH (3 ml) pod atmosferom vodonika preko noći, filtrirani na disk filteru koristeći MeOH, koncentrovani i prečišćeni preparativnom HPLC da bi se dobio 6-amino-5-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-3-[2-(3-piridil)etil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (7 mg, prinos 7%) kao prljavo bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 8,31 (dd, J = 2,3, 0,8 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,55 (ddd, J = 7,8,
[1035] 11
[1036] 2,4, 1,7 Hz, 1H), 7,34 (br s, 1H), 7,30 (br s, 2H), 7,28 (dd, J = 8,4, 0,8 Hz, 1H), 7,23 (ddd, J = 7,8, 4,8, 0,9 Hz, 1H), 7,15 (br s, 1H), 6,92 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 3,01 - 2,93 (m, 2H), 2,92 - 2,84 (m, 2H), 1,82 (s, 3H). MS: [M+1]: 389,2.
[1039]
[1042] Jedinjenje 164 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1044] Korak 1. U suspenziju NaH (3,54 g, 92 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju) u THF (100 ml) na 0 °C dodat je malononitril (3,99 g, 60,4 mmol) u THF (30 ml) ukapavanjem preko levka za dodavanje. Hladno kupatilo je uklonjeno na kraju dodavanja i dobijena smeša je ostavljena da se meša 45 minuta na sobnoj temperaturi. Dodati su 2,3-dihloro-5,6-dimetilpirazin (5,49 g, 31,0 mmol) i Pd(PPh<3>)<4>(1.76 g, 1,52 mmol), reakciona smeša je refluksovana 3,25 sata, ohlađena do sobne temperature, sipana u 200 ml 1:1 usitnjenog leda i 1N HCl i ekstrahovana sa DCM (3x). Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je adsorbovan na silicijum dioksidu korišćenjem DCM/THF i prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima. Mešane frakcije su ponovo prečišćene drugom hromatografijom na silika gelu koristeći iste uslove. Čiste frakcije iz obe kolone su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu da bi se dobio 2-(3-hloro-5,6-dimetil-pirazin-2-il)propandinitril (5,0 g, prinos 78%) kao narandžasta čvrsta supstanca.
[1045] Korak 2. Reakcija je podeljena u 3 bočice, od kojih svaka sadrži po 1/3 količine. Mikrotalasne bočice su napunjene 2-(3-hloro-5,6-dimetil-pirazin-2-il)propandinitrilom (3,04 g, 14,7 mmol), 3-metoksi-2,6-dimetil-anilinom (6,61 g, 43,7 mmol), kalijum terc-butoksidom (3,30 g, 29,4 mmol) i Pd-PEPPSI<™>-SIPr katalizatorom (513 mg, 0,752 mmol), tri puta isprane azotom, zatim je dodat suvi NMP (30 mL), ponovo ispran azotom, zatvoren i podvrgnut mikrotalasnom zračenju (100 °C) tokom 30 minuta. Bočice su spojene i razblažene sa EtOAc, zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i vodom. Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je dva puta ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu.
[1048] 11
[1049] Željene frakcije su spojene, koncentrovane i osušene u vakuumu da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (2,57 g, prinos 54%) kao žuta čvrsta supstanca.
[1050] Korak 3. (Opšti postupak za hidrolizu nitrila upotrebom sumporne kiseline) 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (7,11 g, 22,1 mmol) je rastvoren u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (70 ml), a zatim mešan 45 minuta. Reakciona smeša je polako sipana u usitnjeni led (500 cc), zatim stavljena u ledeno kupatilo i neutralisana do pH 8-9 pomoću koncentrovanog NH<4>OH (oko 190 mL), održavajući unutrašnju temperaturu ispod 35°C. Nakon mešanja tokom 1 sata, talog je filtriran, ispran vodom, osušen na vazduhu, zatim dodatno osušen ko-isparavanjem sa toluenom pod vakuumom, a zatim osušen u vakuumu da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetilpirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (7,5 g, kvantitativni prinos) kao žuta čvrsta supstanca.
[1051] Korak 4. U suspenziju 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (7,50 g, 22,1 mmol) u DCM (132 ml) lagano je dodat BBr<3>(66,3 mmol, 6,4 mL). Nakon mešanja tokom 70 minuta, reakciona smeša je koncentrovana do sušenja, resuspendovana u DCM i dodat je MeOH (primećena je egzotermna reakcija). Nakon koncentrovanja, sirova smeša je ponovo ko-isparena sa DCM/MeOH, a zatim pažljivo triturisana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>(100 mL), razblažena vodom i mešana 1,5 sat. Talog je filtriran, ispran vodom i osušen na vazduhu, a zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluirajući gradijentom od 0 do 20% MeOH u DCM. Mešane frakcije su spojene i ponovo prečišćene hromatografijom na silika gelu koristeći iste uslove. Čisti materijal iz obe kolone je spojen, koncentrovan, a zatim osušen u vakuumu, čime je dobijen 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5,3 g, prinos 74%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 957 (s, 1H), 7,45 (br s, 1H), 7,18 - 7,02 (m, 4H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,48 - 2,45 (m, 3H), 2,35 - 2,24 (m, 3H), 1,81 - 1,73 (m, 3H), 1,68 (s, 3H). MS: [M+1]: 326,4.
[1052] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 164 (5.40 g, 16,6 mmol) (Instrument: Waters Prep 100 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 55% ACN/EtOH 1:1 sa 45% CO2; Brzina protoka: 70 ml/min) dalo je jedinjenje 165 i jedinjenje 166.
[1055]
[1059] 11
[1060] Jedinjenje 165 iz hiralnog SFC odvajanja 164. Pik 1 (vreme zadržavanja 4,07 min, 99,99%): S-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (1,31 g) je dobijen kao svetlo bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,57 (s, 1H), 7,45 (br s, 1H), 7,12 (br s, 1H), 7,09 (br s, 2H), 7,06 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H). MS: [M+1]: 327,3.
[1063]
[1066] Jedinjenje 166 iz hiralnog SFC odvajanja 164. Pik 2 (vreme zadržavanja 4,81 min, 99,83%): R-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (1,43 g) je dobijen kao svetlo bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,57 (s, 1H), 7,45 (širok s, 1H), 7,12 (širok s, 1H), 7,09 (širok s, 2H), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H). MS: [M+1]: 327,3.
[1069]
[1072] Jedinjenje 173 (6-amino-2-ciklobutil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1074] Korak 1. Mikrotalasna bočica je napunjena [6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonatom (200 mg, 0,435 µmol) i Pd(PPh<3>)<4>(56 mg, 49 µmol), isprana azotom, dodat je THF (2 mL), barbotirana azotom, dodat je rastvor ciklobutil cink bromida (0,5 M, 4,35 mL), barbotirana azotom, zatvorena i prebačena u termoblok prethodno zagrejan na 70 °C. Reakciona smeša je mešana 90 minuta, ohlađena na sobnu temperaturu, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (2x). Spojeni organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa
[1077] 11
[1078] gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-2-ciklobutil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (110 mg, prinos 69%) kao bela/bež čvrsta supstanca.
[1079] Korak 2. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (110 mg, 0,301 mmol) da bi se dobio ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-ciklobutil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (54 mg, prinos 51%) kao prljavo bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,59 (br s, 1H), 7,32 (br s, 2H), 7,23 (br s, 1H), 7,07 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,66 (p, J = 8,6 Hz, 1H), 2,42 - 2,17 (m, 4H), 2,10 - 1,94 (m, 1H), 1,88 (td, J = 8,5, 4,0 Hz, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H). MS: [M+1]: 352,4.
[1082]
[1085] Jedinjenje 178 (6-amino-2-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1087] Korak 1. U rastvor 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(1-hidroksi-1-metiletil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (Jedinjenje 190, 46.0 mg, 0,129 mmol) u DCM (2 ml) na -78 °C ukapavanjem je dodat rastvor Deoxo-fluor<®>(315 mg, 0,712 mmol, 50% u THF). Smeša je mešana na 0 °C tokom 45 minuta, koncentrovana i prečišćena preparativnom HPLC da bi se dobio 6-amino-2-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (23 mg, prinos 50%) kao prljavo bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 7,92 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,46 (br s, 2H), 7,37 (br s, 1H), 7,26 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,75 (d, J = 22,4 Hz, 6H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137,78 (hept, J = 22,1 Hz). MS: [M+1]: 358,2.
[1088] Hiralno SFC odvajanje jedinjenje 178 (19 mg, 0,053 mmol) (Instrument: Mettler Toledo Minigram SFC; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 45% ACN/EtOH 1:1 sa 55% CO2; Brzina protoka: 10 ml/min) dalo je jedinjenje 179 i jedinjenje 180.
[1091] 12
[1092]
[1095] Jedinjenje 179 iz hiralnog SFC odvajanja 178. Pik 1 (vreme zadržavanja 3,63 min, 99,87%): S-6-amino-2-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,46 (br s, 2H), 7,42 - 7,32 (m, 1H), 7,30 = 7,19 (m, 1H), 7,08 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,75 (d, J = 22,4 Hz, 6H), 1,69 (s, 3H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137,75 (hept, J = 22,1 Hz). MS: [M+1]: 358,2.
[1098]
[1101] Jedinjenje 180 iz hiralnog SFC odvajanja 178. Pik 2 (vreme zadržavanja 4,00 min, 99,90%): R-6-amino-2-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,46 (br s, 2H), 7,37 (br s, 1H), 7,26 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,74 (d, J = 22,4 Hz, 6H), 1,69 (s, 3H).
[1102] <19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137,75 (hept, J = 22,1 Hz). MS: [M+1]: 358,2.
[1105]
[1108] Jedinjenje 181 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (iz postupka D)
[1110] [0295] Korak 1. Posuda pod pritiskom je napunjena 3-bromo-2-hloro-6-metil-5-nitro-piridinom (10,11 g, 40,2 mmol) i 3-metoksi-2,6-dimetilanilinom (Anilin A2, 9,20 g, 60,8 mmol). Dodati su NMP (40 ml) i 2,6-dimetilpiridin (8,58 g, 80,1 mmol, 9,3 ml) i reakciona smeša je zagrejana na 130 °C (kupatilo sa peletom) tokom 5 dana dok se ne postigne zadovoljavajuća konverzija procenjena pomoću UPLCMS. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i dobijena pasta je prebačena u konusnu bocu i 500 ml HCl 0,5 N je dodat ukapavanjem uz mešanje, što je rezultiralo lepljivom gumom. Supernatant je filtriran na Buchner-ovom levku. Preostala guma je isprana sa H<2>O, rastvorena u DCM, i spojena sa čvrstom supstancom koja je takođe bila rastvorena u DCM (ukupno 200 mL). DCM rastvor je osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% DCM u heptanima da bi se dobio 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-piridin-2-amin (10,5 g, prinos 71%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.
[1111] Korak 2. U RBF koji sadrži natrijum hidrid (3,13 g, 72,2 mmol, 60% tež./tež. u mineralnom ulju) u DME (150 ml) polako je dodat rastvor propandinitrila (4,75 g, 71,9 mmol) u DME (50 ml). Nakon mešanja tokom 1 sata, dodati su 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-6-metil-5-nitro-piridin-2-amin (10,5 g, 28,7 mmol) i Pd(dppf)Cl<2>•DCM (2,31 g, 2,83 mmol). Dobijena smeša je degazirana barbotiranjem N<2>kroz rastvor, opremljena kondenzatorom, i zagrevana na 95 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl i ekstrahovana sa DCM (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa H<2>O, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i adsorbovani na silicijum dioksidu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanima. Odgovarajuće frakcije su spojene, koncentrovane i dobijena čvrsta supstanca je triturirana sa DCM, filtrirana i osušena u vakuumu, čime je dobijen 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (7,97 g, prinos 79%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Druga porcija materijala je dobijena iz filtrata iz prethodne trituracije prečišćavanjem fleš hromatografijom i trituracijom na isti način, čime je dobijen dodatni 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (1,04 g, prinos 10%) kao tamno žuta čvrsta supstanca.
[1112] [0297] Korak 3. U rastvor 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitrila (9,0 g, 25,6 mmol) u THF (120 ml) dodat je trietilamin (7,99 g, 78,9 mmol, 11 ml), DMAP (312 mg, 2,55 mmol) i terc-butoksikarbonil terc-butil karbonat (17,0 g, 77,9 mmol). Smeša je mešana na 50 °C tokom 40 minuta. Zagrevanje je prekinuto, dodat je etilendiamin (6,20 g, 103 mmol, 6,90 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta, a zatim razblažena sa H<2>O i DCM. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani poluzasićenim fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 60% EtOAc u heptanima da bi se dobio terc-butil N-[3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (13,94 g, kvantitativni prinos) kao beličasta čvrsta supstanca, koja je kontaminirana terc-butil N-[2-(terc-butoksikarbonilamino)etil]karbamatom (50 mol% pomoću<1>H NMR).
[1113] Korak 4. U RBF koji sadrži terc-butil N-[3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-5-nitro-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (13,94 g, 25,6 mmol) (pretpostavljeno kvantitativno iz prethodnog koraka) u DCM (280 ml) i MeOH (280 ml) dodat je paladijum na uglju (2,08 g, 1,95 mmol, 10% tež./tež.) kao suspenzija u delu smeše rastvarača. Reakciona smeša je isprana sa H<2>i mešana pod atmosferom H<2>(balonu) preko noći. Reakciona smeša je isprana sa N<2>, filtrirana na celitnoj podlozi, isprana sa DCM i MeOH. Filtrat je koncentrovan i osušen u vakuumu, dajući svetlo žutu čvrstu supstancu koja je prečišćena hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (20 do 100%) u heptanima. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-[5-amino-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (9,34 g, prinos 87%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.
[1114] Korak 5. U rastvor terc-butil N-[5-amino-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamata (10,34 g, 24,5 mmol) u acetonitrilu (100 ml) i DMF (60 ml) dodat je terc-butil nitrit (5,20 g, 50,5 mmol, 6,0 ml), a zatim bakar(II) bromid (6,58 g, 29,4 mmol). Smeša je zagrejana na 70 °C tokom 35 minuta, ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena sa H<2>O (600 ml) i konc. NH<4>OH (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni organski ekstrakti su isprani zasićenim NH<4>Cl (2x), poluzasićenim fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 100%) u heptanima. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-[5-bromo-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (6,18 g, prinos 52%) kao čvrsta supstanca boje slonovače.
[1115] Korak 6. Terc-butil N-[5-bromo-3-cijano-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metilpirolo[2,3-b]piridin-2-il]karbamat (6,18 g, 12,7 mmol) u EtOH (60 ml) je tretiran vodenim rastvorom HCl (6M, 34 ml) i mešan 70 minuta na 80 °C, zatim ohlađen na sobnu temperaturu i koncentrovan. Ostatak je rastvoren u MeOH, napravljen alkalnim viškom Et<3>N i ponovo koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 100%) u heptanima. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-
[1118] 12
[1119] metil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (3,70 g, prinos 75%) kao tamno magenta čvrsta supstanca.
[1120] Korak 7. 2-Amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (3,70 g, 9,6 mmol) je mešan u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (18 M, 25 ml) tokom 55 minuta, zatim je reakciona smeša ugašena usitnjenim ledom, stavljena u ledeno kupatilo i napravljena alkalnom do pH 8-9 pomoću zasićenog NH<4>OH koji je polako dodat. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom na Buchner-ovom levku i isprana sa H<2>O. Materijal je osušen na vazduhu, zatim dva puta ko-isparen sa toluenom i osušen u vakuumu, zatim mešan u 10% MeOH/DCM i filtriran na silicijum dioksidu, eluirajući sa 10% MeOH/DCM da bi se uklonile preostale amonijumove soli. Filtrat je koncentrovan, a zatim osušen u vakuumu, čime je dobijen 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-6-metilpirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (3,80 g, prinos 98%) kao roze čvrsta supstanca.
[1121] Korak 8. U rastvor metil magnezijum hlorida (3M, 18,8 mL) u THF (160 mL) u RBF pod N<2>ukapavanjem je dodat rastvor cink dihlorida u THF (0,5M, 112 mL) na sobnoj temperaturi preko levka za dodavanje. Nakon dodavanja, dobijena bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 35 minuta. U rastvor cinkata je dodat 2-amino-5-bromo-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (4,48 g, 11,1 mmol), posuda je isprana sa 20 mL THF, a zatim je dodat paladijum (0) tetrakis(trifenilfosfin) (1,14 g, 0,987 mmol). Smeša je barbotirana sa N<2>, zatim opremljena kondenzatorom i refluksovana (blok zagrevanja podešen na 80 °C) tokom 24 sata. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluirajući gradijentom EtOAc (0 do 100%) u heptanima, a zatim ponovo prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluirajući gradijentom MeOH (1 do 15%) u DCM. Odgovarajuće frakcije iz dve kolone su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (2,22 g, prinos 59%, čistoća 77%) kao svetlo roze čvrsta supstanca, koja je sadržala nešto sporednog proizvoda 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-6-metil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (19% pomoću UPLCMS).
[1122] [0303] Korak 9. U suspenziju 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamida (2,22 g, 6,56 mmol, čistoća 77%) u DCM (25 mL) ukapavanjem je dodat tribromoboran u DCM (1M, 26 mmol, 26 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 45 minuta, zatim koncentrovana do sušenja. Sirovi proizvod je stavljen u DCM i u ledeno kupatilo, a zatim je pažljivo dodat MeOH (egzotermna reakcija). Smeša je koncentrovana do sušenja, a zatim dva puta ko-isparena sa MeOH. Ostatak je triturisan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>. Čvrste materije su sakupljene filtracijom na Buchnerovom levku, isprane sa H<2>O i osušene na vazduhu. Još uvek vlažna čvrsta supstanca je rastvorena u DCM/MeOH, koncentrovana do sušenja i triturisana u 20% MeOH/DCM (50 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa 20% MeOH/DCM, osušena na vazduhu, a zatim osušena u vakuumu da bi se dobio 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (1,60 g, prinos 75%) kao svetlo bež čvrsta supstanca. MS: [M+1]: 325,1. Druga serija je prečišćena preparativnom HPLC hromatografijom da bi se dobio 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (prinos 63%) kao prljavo bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 951 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,71 (br s, 2H), 6,64 (br s, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS:
[1123] [M+1]: 325,1.
[1124] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 181 (1,60 g, 4,93 mmol) (Instrument: Waters Prep 100 SFC-MS; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: izokratski na 55% IPA 10 mM amonijum formijata sa 45% CO<2>; Brzina protoka: 70 ml/min) dalo je jedinjenje 182 i jedinjenje 183.
[1127]
[1130] Jedinjenje 182 iz SFC odvajanja 181. Pik 1 (vreme zadržavanja 3,94 min, 99,86%): (S)-2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (381 mg) je dobijen kao beličasta pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,50 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,72 (s, 2H), 6,65 (s, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 325,1.
[1133]
[1137] 12
[1138] Jedinjenje 183 iz SFC odvajanja 181. Pik 2 (vreme zadržavanja 4,35 min, 98,09%): (R)-2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (495 mg) je dobijen kao beličasta pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,50 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,72 (s, 2H), 6,66 (s, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 325,1.
[1141]
[1144] Jedinjenje 181 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (Iz postupka O)
[1146] Korak 1. Sumporna kiselina (140,1 ml, 2575 mmol) je polako dodata u vodu (1,15 l) i rastvor je ohlađen na 25 °C. 2-Amino-3-bromo-5,6-dimetilpiridin (114,8 g, 571,0 mmol) je dodat u jednoj porciji da bi se dobio rastvor. Rastvor je ohlađen na 0 °C - 5 °C pomoću kupatila sa ledenom vodom da bi se dobila suspenzija. Uz jako mešanje, rastvor natrijum nitrita (49,25 g, 713,7 mmol) u vodi (175,0 ml) je dodat ukapavanjem tokom 90 minuta. Kupatilo sa ledenom vodom je uklonjeno, a suspenzija je polako zagrejana na 11 °C i mešana 1 sat. Rastvor natrijum hidroksida (175 g, 4,37 mol) u 400 ml vode je dodat ukapavanjem da bi se temperatura održala ispod 20 °C. pH rastvora je podešen na 7 pomoću K<2>HPO<4>(~58 g, 0,33 mol) u 70 ml vode. Suspenzija je filtrirana na 10 °C. Filter kolač je triturisan u vodi (250 ml) i filtriran. Filter kolač je obilno ispran ledeno ohlađenom vodom i osušen vakuumskim usisavanjem. Proizvod je sušen u peći pod vakuumom na 60 °C preko noći da bi se dobio 3-bromo-5,6-dimetilpiridin-2-ol kao svetlo žuta kristalna čvrsta supstanca (105,69 g, 91,6%)<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,96 (širok s, 1H), 7,73 (s, 1H), 2,11 (s, 3H), 1,96 (s, 3H). MS: [M+1]: 202,0, 204,0.
[1147] Korak 2. U rastvor 3-bromo-5,6-dimetilpiridin-2-ola (105,3 g, 521,2 mmol) u N,N-dimetilformamida (316 mL) i toluena (527 mL) na 90 °C pod azotom ukapavanjem je dodat fosfor oksibromid (1,3:1, 56,5% (tež./tež.) u ksilenima) (278 mL, 781,7 mmol) tokom 90 minuta. Nakon završetka dodavanja, smeša je mešana na 90 °C preko noći. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i polako je dodata u vodu (2 L). Boca je isprana sa 500 mL vode. Spojene vodene faze su ekstrahovane sa MTBE (3 x 1 L). Organske faze su spojene i isprane sa 0,5N NaOH (1 L), vodom (3 x 1 L) i fiziološkim rastvorom (1 L), zatim sušene natrijum sulfatom i koncentrovane. Čvrsta supstanca je delimično rastvorena u MTBE (400 mL) i dodati su heptani
[1150] 12
[1151] (300 mL). Smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom do ~1,7 zapremine da bi se dobio talog. Smeša je filtrirana i isprana heptanima. Ostatak je osušen da bi se dobio 2,3-dibromo-5,6-dimetilpiridin kao bež čvrsta supstanca (114,290 g, 82,8%). Filtrat je dalje koncentrovan i filtriran da bi se dobio drugi prinos čvrste supstance: (8,73 g, 6,32%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,95 (s, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). MS: [M+1]: 264,0, 266,0, 268,0.
[1152] Korak 3. Boca sa okruglim dnom od 2000 ml sa 4 grlića je napunjena intermedijerom A2 (33.0 g, 218,0 mmol), degaziranim 1,2-dimetoksietanom (750 ml), 2,3-dibromo-5,6-dimetilpiridinom (55 g, 207,6 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksantenom (10,8 g, 18,68 mmol) i cezijum karbonatom (169,1 g, 519,0 mmol). Reakciona smeša je ukltrazvukom obrađena 20 minuta uz prskanje suspenzije azotom. Dodat je tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (8,55 g, 9,341 mmol) i suspenzija je zagrejana do refluksa. Nakon 13 sati mešanja, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana preko sloja silika gela. Filter kolač je ispran etil acetatom (1,2 l). Filtrat je isparen do zapremine od ~200 ml i dodati su heptani (300 ml). Rastvarači su ispareni da bi se dobila suspenzija u ~2 zapremine rastvarača. Suspenzija je filtrirana i isprana heptanima da bi se dobio 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5,6-dimetilpiridin-2-amin kao svetlo žuta čvrsta supstanca. (56,2 g, 80,8%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,57 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,94 (s, 3H). MS:
[1153] [M+1]: 335,2, 337,2.
[1154] Korak 4. U degazirani rastvor malononitrila (33,3 g, 503,5 mmol) u 1,2-dimetoksietanu (1000 ml) dodat je natrijum terc-butoksid (46,3 g, 482,0 mmol) u 4 porcije. Reakciona smeša je mešana 30 minuta na sobnoj temperaturi da bi se dobio rastvor.3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5,6-dimetilpiridin-2-amin (80 g, 238,6 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum(II) hlorid, kompleks sa dihlorometanom (14,9 g, 18,26 mmol) su dodati u jednoj porciji i suspenzija je zagrejana do jakog refluksa. Nakon 17 sati mešanja, reakciona smeša je prebačena u bocu od 5000 ml i dodat je etil acetat (1,5 l). Dodati su rastvor N-acetil-L-cisteina (12,1 g, 74 mmol, sadržaj 4x Pd mol) i Na<2>CO<3>(15.7 g, 148 mmol) u vodi (500 ml). Dvofazni rastvor je mešan 10 minuta na 60 °C, a zatim je polako hlađen na 40 °C tokom 75 minuta. Unutar boce od 5000 ml, dva sloja su razdvojena na 40 °C i organska faza je isprana vodom (2 x 250 ml) i fiziološkim rastvorom (200 ml), a zatim filtrirana preko sloja silika gela (7,5 cm, 185 g). Filter kolač je ispran sa DCM/EtOAc. Filtrat je isparen, a rastvarači su zamenjeni EtOAc tokom isparavanja na rotacionom isparivaču da bi se dobila suspenzija. Suspenzija je filtrirana na sobnoj temperaturi, a filter kolač je triturisan u 50 ml ledeno ohlađenog etil acetata. Proizvod je filtriran, a filter kolač je ispran sa 50 ml ledeno ohlađenog etil acetata. Proizvod je sušen u
[1157] 12
[1158] rerni pod vakuumom na 60 °C preko noći da bi se dobio 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5,6-dimetil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril kao svetlo žuta čvrsta supstanca. (65,38 g, 85,5%, 8% (tež./tež.) DME).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,38 (s, 1H), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,76 (br s, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,78 (s, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 321,2.
[1159] Korak 5. Metansulfonskoj kiselini (600 mL, 9239 mmol) je polako dodat rastvor sumporne kiseline (93 mL) / vode (7,0 mL) tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi.2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5,6-dimetil-1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (80 g, 249,7 mmol) je dodat u porcijama tokom 15 minuta da bi se temperatura reakcije održala ispod 40°C. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 90 minuta. DL-metionin (149,028 g, 998,8 mmol) je dodat u porcijama tokom 20 minuta ispod 40°C. Rastvor je mešan na 40°C. Nakon 37 sati mešanja, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, a zatim polako dodata tokom 1,5 sata u rastvor K<2>HPO<4>(100 g) i NaOH (540 g) u vodi (5 L). Dodat je EtOAc (1 L) i dvofazna smeša je mešana 5 minuta da bi se dobio talog. Proizvod je filtriran. Matični rastvori su ekstrahovani sa EtOAc (3 x 1 L). Organske faze su spojene, osušene preko Na<2>SO<4>, filtrirane i koncentrovane pod smanjenim pritiskom na ~ 100 mL da bi se dobila suspenzija. Suspenzija je filtrirana i isprana sa EtOAc (50 mL). Čvrste supstance su spojene i triturisane u vodi (800 mL) dva puta. Ostatak je suspendovan u EtOAc (500 mL), mešan 10 minuta i filtriran. Proizvod je sušen u rerni pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo 67,8 g sirovog proizvoda. Jedinjenje je suspendovano u DMSO (350 mL, 5 vol) i smeša je zagrejana na 65 °C da bi se dobio rastvor. Rastvor je polako hlađen na 28 °C pomoću vodenog kupatila. Voda (1,05 L) je dodavana ukapavanjem tokom 2 sata da bi se dobila suspenzija. Nakon 5 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, proizvod je filtriran. Čvrsta supstanca je triturisana u 100 mL vode i filtrirana. Filter kolač je ispran sa 2 x 100 mL vode. Proizvod je osušen u rerni na 60 °C pod vakuumom da bi se dobio 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5,6-dimetil-pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid kao svetlo žuta čvrsta supstanca. 61,5 g, (75%, 3% (tež./tež.) EtOAc i 6% (tež./tež.) DMSO).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,47 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,71 (širok s, 2H), 6,64 (širok s, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,75 (s, 3H), 1,66 (s, 3H). MS: [M+1]: 325,2.
[1162] 12
[1163]
[1165] Jedinjenje 184 i Jedinjenje 190
[1167] Korak 1. U rastvor intermedijera D (1.07 g, 2,33 mmol) u DCM (9 ml) dodat je BBr<3>rastvor u DCM (1 M, 9,3 mL, 9,3 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata, dodat je silicijum dioksid, smeša je koncentrovana, zatim prečišćena hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% MeOH u DCM da bi se dobio [6-amino-7-karbamoil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (744 mg, prinos 72%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[1168] Korak 2. Rastvor [6-amino-7-karbamoil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (744 mg, 1,67 mmol), PdCl<2>(PPh<3>)<2>(117 mg, 0,167 mmol) u smeši DMF (8 ml) i MeON (8 ml) i Et<3>N (1,40 mL, 10,0 mmol) je zagrejan na 70 °C u atmosferi ugljen-monoksida (balon). Aparat je prethodno jednom ispran ugljen-monoksidom. Posle 2 sata, dodato je još PdCl<2>(PPh<3>)<2>(117 mg, 0,167 mmol) i reakciona smeša je nastavljena tokom 18 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz celit, isprana sa MeOH i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% MeOH u DCM da bi se dobila tamnozelena lepljiva čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc, propuštena kroz silika čep koristeći EtOAc / MeOH (5%) koji je, nakon isparavanja isparljivih materija, obezbedio metil 6-amino-7-karbamoil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilat (418 mg, prinos 70%) kao svetlo braon lepljiva čvrsta supstanca.
[1169] Korak 3. Rastvor metil 6-amino-7-karbamoil-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilata (322 mg, 0,906 mmol) u THF (12 ml) je ohlađen na -40 °C i rastvor MeMgCl3 u THF (3 M, 4,53 ml, 13,1 mmol) je dodat ukapavanjem. Smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature preko noći, pa je reakcija ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (25 mL), pH je podešen na 7-8 sa 1N HCl i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x). Spojeni organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom
[1172] 12
[1173] od 0 do 20% MeOH u DCM da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid jedinjenje 190 (103 mg, prinos 32%) kao svetlo braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,50 (br s, 1H), 7,42 (br s, 2H), 7,23 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,95 - 5,81 (m, 1H), 5,30 - 5,17 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 1,78 (s, 3H), 1,70 (s, 3H). MS:
[1174] [M+1]: 338,1; i 2-acetil-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid jedinjenje 184 (31 mg, prinos 10%) kao svetlo braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,83 (širok s, 1H), 8,38 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,68 (širok s, 2H), 7,40 (s, 2H), 7,09 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,68 (s, 3H), 1,77 (s, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340,1.
[1175] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 190 (39 mg, 0,110 mmol) (Instrument: Mettler Toledo Minigram SFC; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 40% IPA 10 mM amonijum formijata sa 60% CO2; Brzina protoka: 10 ml/min) dalo je jedinjenje 191 i jedinjenje 192.
[1178]
[1181] Jedinjenje 191 iz hiralnog SFC odvajanja 190. Pik 1 (vreme zadržavanja 3,83 min, 100%): S-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (br s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,52 (br d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,32 (br s, 2H), 7,18 (br d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,08 (dt, J = 8,2, 0,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,26 (s, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,51 (s, 6H). MS: [M+1]: 356,2.
[1184]
[1187] Jedinjenje 192 iz hiralnog SFC odvajanja 190. Pik 2 (vreme zadržavanja 4,07 min): R-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(1-hidroksi-1-metil-etil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (br s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,52 (br
[1190] 1
[1191] d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,32 (br s, 2H), 7,18 (br d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,08 (dt, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,26 (s, 1H), 1,77 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,51 (s, 6H). MS: [M+1]: 356,2.
[1192] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 184 (103 mg, 0,290 mmol) (Instrument: Mettler Toledo Minigram SFC; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 40% IPA 10 mM amonijum formijata sa 60% CO2; Brzina protoka: 10 ml/min) dalo je jedinjenje 185 i jedinjenje 186.
[1195]
[1198] Jedinjenje 185 iz hiralnog SFC odvajanja 184. Pik 1 (vreme zadržavanja 3,87 min, 100%): S-2-acetil-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (9 mg) kao žuta pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,68 (širok s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,69 (širok s, 2H), 7,41 (širok s, 2H), 7,09 (dt, J = 8,3, 0,7 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,68 (s, 3H), 1,77 (d, J = 0,8 Hz, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340,2.
[1201]
[1204] Jedinjenje 186 iz hiralnog SFC odvajanja 184. Pik 2 (vreme zadržavanja 4,21 min, 99,80%): R-2-acetil-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (9 mg) kao žuta pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,69 (širok s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,69 (širok s, 2H), 7,41 (širok s, 2H), 7,09 (dt, J = 8,2, 0,7 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,68 (s, 3H), 1,77 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340,1.
[1207]
[1209] Jedinjenje 198 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)ciklopropil] pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1212] 1 1
[1213] Korak 1. Mikrotalasna boca je napunjena intermedijerom D (500 mg, 1,09 mmol), 4,4,6-trimetil-2-[1-(trifluorometil)vinil]-1,3,2-dioksaborinanom (502 mg, 2,26 mmol), dioksanom (5 ml) i vodenim rastvorom Na<2>CO<3>(2 M, 1,63 mL, 3,26 mmol), isprana azotom (kućni vakuum, zatim azot, 3x). PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(444 mg, 0,544 mmol), boca je ponovo isprana, zatvorena i prebačena u prethodno zagrejani (80 °C) termoblok i mešana preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je filtrirana na celitu, isprana vodom i sa DCM i razblažena fiziološkim rastvorom. Slojevi su razdvojeni (fazni separator). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 50% EtOAc u DCM, dajući 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)vinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (169 mg, prinos 38%) kao tamno žutu gumu.
[1214] Korak 2. U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)vinil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (42,0 mg, 0,104 mmol) u DCM (2 ml) na 0 °C dodat je rastvor diazometana u Et<2>O (0,5 M, 400 µL), zatim zagrejan do sobne temperature. Dodata je još jedna porcija rastvora diazometana (0,5 M, 400 µL). Nakon što je reakcija procenjena kao završena pomoću UPLCMS, reakciona smeša je ugašena sa AcOH (200 µL), mešana nekoliko minuta i koncentrovana do sušenja, a zatim rastvorena u zasićenom vodenom rastvoru NaHCO<3>i DCM. Slojevi su razdvojeni (fazni separator). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3 x). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani, a zatim osušeni u vakuumu, što je dalo 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[5-(trifluorometil)-3,4-dihidropirazol-5-il]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (48 mg, kvantitativni prinos) kao žutu gumu.
[1215] Korak 3. 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[5-(trifluorometil)-3,4-dihidropirazol-5-il]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (48,0 mg, 0,107 mmol) je rastvoren u ksilenima (3 ml) i zagrejan na 130 °C sa refluksnim kondenzatorom otvorenim za vazduh ukupno 75 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana, a zatim prečišćena hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim gradijentom od 0 do 20% MeOH u EtOAc da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)ciklopropil]pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (35 mg, prinos 81%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.
[1216] Korak 4. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)ciklopropil]pirolo[2,3-b]pirazin-
[1219] 1 2
[1220] 7-karboksamid (17 mg, prinos 50%) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,49 (br s, 2H), 7,36 (br s, 1H), 7,28 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,46 - 1,29 (m, 4H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -66,85. MS: [M+1]: 406,1.
[1221] Hiralno SFC odvajanje jedinjenja 198 (14.5 mg, 0,358 mmol) (Instrument: Mettler Toledo Minigram SFC; Kolona: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; Uslovi: Izokratski na 40% ACN/EtOH 1:1 sa 60% CO2; Brzina protoka: 10 ml/min) dalo je jedinjenje 199 i jedinjenje 200.
[1224]
[1227] Jedinjenje 199 iz hiralnog SFC odvajanja 198. Pik 1 (vreme zadržavanja 3,50 min, 99,99%): S-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)ciklopropil]pirolo [2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,48 (br s, 2H), 7,36 (br s, 1H), 7,27 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,43 - 1,33 (m, 4H). MS:
[1228] [M+1]: 406,2.
[1231]
[1234] Jedinjenje 200 iz hiralnog SFC odvajanja 198. Pik 2 ((vreme zadržavanja 3,81 min, 99,95%): R-6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-[1-(trifluorometil)ciklopropil]pirolo [2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,48 (br s, 2H), 7,36 (br s, 1H), 7,27 (br s, 1H), 7,08 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,43 - 1,35 (m, 4H). MS:
[1235] [M+1]: 406,2.
[1238] 1
[1239]
[1242] Jedinjenje 209 (5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1244] Korak 1. U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (298 mg, 0,927 mmol) u THF-u (7 ml) dodat je terc-butil nitrit (550 µL, 4,63 mmol). Nakon mešanja od 30 minuta, smeša je refluksovana 3,5 sata, zatim ohlađena do sobne temperature, koncentrovana do suva i prečišćena hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima. Spojene čiste frakcije su koncentrovane i osušene u vakuumu da bi se dobio 5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetilpirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitril (150 mg, prinos 53%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.
[1245] Korak 2. Za hidrolizu nitrila upotrebom sumporne kiseline, isti postupak koji se koristi za Jedinjenje 164 je urađeno na odgovarajućem intermedijeru (150 mg, 0,490 mmol) da bi se dobio 5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (144 mg, prinos 91%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[1246] Korak 3. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, ista procedura koja se koristi za Jedinjenje 35 dobijen je ostatak koji je prečišćen preparativnom HPLC metodom da bi se dobio 5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-2,3-dimetil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (76 mg, prinos 55%) kao prljavo bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,65 (br s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,86 (br s, 1H), 7,60 (br s, 1H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,64 (s, 3H), 1,75 (s, 3H), 1,64 (s, 3H).1 Me singlet verovatno zakopan ispod dmso pika. MS: [M+1]: 311,1.
[1249]
[1251] Jedinjenje 212 (2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-6-(trifluorometil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid)
[1254] 1 4
[1255] Korak 1. U suspenziju NaH (108 mg, 2,83 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju) u DME (3 mL) je ukapavanjem dodat 3-bromo-2-hloro-5-(trifluorometil)piridin (300 mg, 1,15 mmol) u DME (3 mL). Nakon dodavanja, smeša je mešana 25 minuta, a zatim je dodat propandinitril (188 mg, 2,85 mmol). Dobijena smeša je refluksovana 18 sati, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom da bi se dobio 2-[3-bromo-5-(trifluorometil)-2-piridil]propandinitril (100 mg, prinos 30%).
[1256] Korak 2. U rastvor 2-[3-bromo-5-(trifluorometil)-2-piridil]propandinitrila (50 mg, 172 µmol) u DMF (2 ml) dodat je Pd<2>dba<3>(16 mg, 17 µmol), 5-(metoksimetoksi)-2-metilanilin (33,3 mg, 199 µmol), Cs<2>CO<3>(84 mg, 259 µmol) i Xantphos (10,0 mg, 17,3 µmol). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom (3 puta). Smeša je mešana na 130 °C tokom 8 sati, ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 5 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 2-amino-1-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]-6-(trifluorometil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitril (30 mg, prinos 46%).
[1257] Korak 3. 2-amino-1-[5-(metoksimetoksi)-2-metil-fenil]-6-(trifluorometil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karbonitril (30 mg, 135 µmol) je mešan u H<2>SO<4>(1 mL). Posle 90 minuta, reakciona smeša je sipana u usitnjeni led, stavljena u ledeno kupatilo i neutralisana sa 1:1 NH<4>OH/H<2>O. Talog je filtriran, ispran vodom i sušen na vazduhu preko noći. Prečišćavanje preparativnim HPLC postupkom je dalo 2-amino-1-(5-hidroksi-2-metil-fenil)-6-(trifluorometil)pirolo[3,2-b]piridin-3-karboksamid (3,2 mg, prinos 11%) kao narandžastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,76 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 = 7,13 (m, 2H), 6,98 (s, 1H), 6,91 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 1,78 (s, 3H). MS: [M+1]: 351,3.
[1260]
[1263] Jedinjenje 214 (6-amino-3-(2-ciklopropiletinil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1266] 1
[1267] Korak 1. Rastvor 6-amino-2-benziloksi-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karbonitrila (400 mg, 836 µmol, opisan u pripremi jedinjenja 31) u konc. H<2>SO<4>(2 mL) i DCM (2 mL) je mešan 10 minuta. Dodat je NaOH 0,4 M, zatim voda i dobijeni talog je regenerisan filtracijom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu koristeći gradijent od 0 do 20% MeOH u DCM da bi se dobio 6-amino-3-bromo-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (300 mg, prinos 88%).
[1268] Korak 2. U rastvor 6-amino-3-bromo-2-hidroksi-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (300 mg, 739 µmol) i Cs<2>CO<3>(440 mg, 1,35 mmol) u DMF (3 ml) dodat je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil) metansulfonamid (288 mg, 807 µmol). Smeša je mešana 1 sat, razblažena vodom, ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu koristeći gradijent od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-3-bromo-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il trifluorometansulfonat (460 mg, prinos 43%).
[1269] Korak 3. Mikrotalasna bočica napunjena [6-amino-3-bromo-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonatom (35 mg, 65 µmol), etinilciklopropanom (5,0 mg, 75 µmol), Cul (1,3 mg, 7 µmol) i PdCl<2>(PPh<3>)<2>(5.0 mg, 7 µmol) u DMF (1 ml) je isprana azotom, zatim je dodat Et<3>N (520 µmol, 73 uL) i smeša je mešana 1 sat. Smeša je filtrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio [6-amino-7-karbamoil-3-(2-ciklopropiletinil)-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonat (10 mg, prinos 29%).
[1270] Korak 4. Smeša tributil(tiazol-2-il)stanana (38,5 µmol, 12,1 µL), [6-amino-7-karbamoil-3-(2-ciklopropiletinil)-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-il] trifluorometansulfonata (10,0 mg, 19,1 µmol). Cul (0,5 mg, 2,5 µmol), LiCl (1,7 mg, 40 µmol). PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(1.5 mg, 2 µmol) u DMF (3 ml) je degazirana u vakuumu, a zatim ponovo napunjena azotom. Reakciona smeša je mešana na 120°C tokom 3 sata. Dodata je voda, a dobijeni talog je regenerisan filtracijom da bi se dobio sirovi 6-amino-3-(2-ciklopropiletinil)-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5 mg, prinos 57%).
[1271] Korak 5. Za deprotekciju OMe korišćenjem BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio
[1274] 1
[1275] 6-amino-3-(2-ciklopropiletinil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2-tiazol-2-il-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (1,1 mg, prinos 23%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 9,16 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 7,89 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,55 - 2,47 (m, 1H), 1,88 (d, J = 21,7 Hz, 6H), 1,37 = 1,31 (m, 2H), 1,11 -1,05 (m, 2H). MS: [M+1]: 445,3.
[1278]
[1281] Jedinjenje 215 (2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid)
[1283] Korak 1. Mikrotalasna boca napunjena 4-prop-2-inilmorfolinom (26 mg, 204 umol), bakar (I) jodidom (3,5 mg, 19 umol) i trietilaminom (1,49 mmol, 207 umol) je isprana sa N2, zatim je dodat 6-amino-3-bromo-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-2-il trifluorometansulfonat (100 mg, 186 umol) u DMF (1 ml), a zatim PdCl<2>(PPh<3>)<2>(14 mg, 19 umol). Boca je zatvorena zagrejana na 120°C. Posle 1 sata, koncentrovana je pod vakuumom, a zatim adsorbovana na silicijum dioksidu (4 g) korišćenjem THF. Prečišćena je hromatografijom na silicijum dioksidu, eluirajući gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima, zatim 0 do 20% MeOH u EtOAc, da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)-2,3-bis(3-morfolinoprop-1-inil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (16 mg, prinos 15%).
[1284] Korak 2. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (7 mg, prinos 45%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 7,70 (s, 2H), 7,35 - 7,13 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,62 - 3,51 (m, 11H), 3,49 (s, 2H), 2,52 (q, J = 4,3, 3,9 Hz, 4H), 1,74 (s, 3H), 1,66 (s, 3H). MS: [M+1]: 544,5.
[1287] 1
[1288]
[1290] Jedinjenje 219 i Jedinjenje 220
[1292] Korak 1. Smeša intermedijera D (150 mg, 327 µmol), Zn(CN)<2>(38.3 mg, 327 µmol) i Zn u prahu (4 mg, 65 µmol) u NMP (3 mL) je degazirana. Dodat je Pd(PPh<3>)<4>(38 mg, 33 µmol) i smeša je mešana na 120°C tokom 24 sata, ohlađena do sobne temperature, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl, i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>i koncentrovani. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-cijano-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (50 mg, prinos 46%).
[1293] Korak 2. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 dobijen je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-cijano-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid jedinjenje 219 (2.6 mg, prinos od 9%)<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,64 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,88 (s, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,65 (s, 3H), MS: [M+1]: 324,2; i 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2,7-dikarboksamid jedinjenje 220 (10 mg, prinos 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,57 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,64 (s, 3H), 7,41 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,11 - 6,97 (m, 1H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,65
341,4.
[1295] Jedinjenje 221 (2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid)
[1298] 1
[1299] Korak 1. U rastvor 3-metoksi-2,6-dimetil-anilina (2,02 g, 13,4 mmol) u toluenu (15 ml) dodat je kalijum terc-butoksid (1,64 g, 14,6 mmol), 3-bromo-2-hloro-5-(trifluorometil)piridin (3,16 g, 12,1 mmol). Pd<2>dba<3>(582 mg, 635 µmol) i Xantphos (723 mg, 1,26 mmol). Smeša je degazirana u vakuumu i ponovo napunjena azotom. Dobijena smeša je mešana na 120°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc, isprana vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heksanima da bi se dobio 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)piridin-2-amin (1,55 g, prinos 34%).
[1300] Korak 2. U rastvor propandinitrila (556 mg, 8,41 mmol) u DME (20 ml) dodat je NaH (361 mg, 8,34 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju). Smeša je mešana 5 minuta, zatim su dodati 3-bromo-N-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)piridin-2-amin (1,55 g, 4,13 mmol) i Pd(PPh<3>)<4>(231 mg, 200 µmol). Dobijena smeša je mešana na 120 °C tokom 17 sati u bočici pod pritiskom. DME je uklonjen pod sniženim pritiskom, zatim je smeša razblažena sa EtOAc, isprana vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana do sušenja. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heksanima da bi se dobio 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karbonitril (44 mg, prinos 3%).
[1301] Korak 3. Za hidrolizu nitrila upotrebom sumporne kiseline, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 164 je izveden na odgovarajućem intermedijeru (44 mg, 0,121 mmol) da bi se dobio 2-amino-1-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (40 mg, prinos 87%).
[1302] Korak 4. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 2-amino-1-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-5-(trifluorometil)pirolo[2,3-b]piridin-3-karboksamid (25 mg, prinos 59%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,66 (s, 1H), 8,47 (dt, J = 2,0, 1,0 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,31 (s, 2H), 7,23 (s, 1H), 7,10 (dt, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 7,00 - 6,80 (m, 2H), 1,82 - 1,57 (m, 6H). MS: [M+1]: 365,3.
[1305] 1
[1306]
[1309] Jedinjenje 242 (6-amino-3-[2-(4,4-difluoro-1-hidroksi-cikloheksil)etinil]-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1311] U mikrotalasnu bocu napunjenu intermedijerom H (20.0 mg, 53,2 µmol), Cul (1,0 mg, 5,3 µmol), 1-etinil-4,4-difluoro-cikloheksanolom (43 mg, 266 µmol) u DMF (1 mL) je dodat PdCl<2>(PPh<3>)<2>(4 mg, 6 µmol) i Et<3>N (425 µmol, 60 uL). Boca je zatvorena i zagrejana na 80 °C tokom 3 sata. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je filtrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-3-[2-(4,4-difluoro-1-hidroksicikloheksil)etinil]-5-(3-hidroksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (5,1 mg, prinos 21%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,57 (d, J = 10,6 Hz, 2H), 7,28 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,77 (s, 1H), 2,11 - 1,74 (m, 8H), 1,73 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 456,4.
[1314]
[1317] Jedinjenje 243 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-N2-(3-piridil)pirolo[2,3-b]pirazin-2,7-dikarboksamid)
[1319] Korak 1. Smeša intermedijera D (1.00 g, 2,18 mmol), PdCl<2>(PPh<3>)<2>(319 mg, 435 □mol) u smeši DMF (5 mL), MeOH (5 mL) i Et<3>N (1,90 mL, 13,6 mmol) je zagrejana na 70°C u atmosferi ugljen-monoksida (balon) tokom 18 sati. Aparat je prethodno jednom ispran ugljenmonoksidom. Isparljive materije su isparene u vakuumu, a ostatak je prečišćen preparativnom
[1322] 14
[1323] HPLC hromatografijom da bi se dobio metil 6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilat (689 mg, prinos 86%).
[1324] Korak 2. U metil 6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilat (689 mg, 1,87 mmol) u THF (5 ml) dodat je NaOH (1 M, 5,60 ml) i smeša je mešana 1,5 sat. pH je zakiseljen korišćenjem konc. HCl, dodat je DMSO, isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom da bi se dobila 6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilna kiselina (366 mg, prinos 55%).
[1325] Korak 3. U piridin-3-aminu (7,95 mg, 84,4 µmol), 6-amino-7-karbamoil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-2-karboksilnu kiselinu (25 mg, 70 µmol) i HATU (29 mg, 77 µmol) u DCM (5 mL) dodat je DIPEA (211 µmol, 37 µL). Reakciona smeša je mešana 18 sati. U smešu je dodata voda, organska faza je odvojena, osušena preko Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-N2-(3-piridil)pirolo[2,3-b]pirazin-2,7-dikarboksamid (21 mg, prinos 34%, čistoća 49%).
[1326] Korak 4. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-N2-(3-piridil)pirolo[2,3-b]pirazin-2,7-dikarboksamid (3,5 mg, prinos 12%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,82 (s, 1H), 9,61 (s, 1H), 8,92 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,32 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1H), 8,20 - 8,10 (m, 1H), 7,75 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 7,40 (dd, J = 8,3, 4,7 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,07 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,67 (s, 3H). MS: [M+1]: 418,3.
[1329]
[1332] Jedinjenje 257 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-vinil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1334] [0352] Korak 1. Smeša tributil(vinil)stanana (37,1 mg, 117 µmol), intermedijera H (40.0 mg, 106 µmol), Cul (2,56 mg, 13,4 µmol), LiCl (9,30 mg, 220 µmol), PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(8.1 mg, 10 µmol) u DMF (1 ml) je degazirana u vakuumu, a zatim ponovo napunjena azotom. Konačna smeša je mešana na 130 °C tokom 3 sata, ohlađena do sobne temperature, filtrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-3-vinil-pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (1,4 mg, prinos 4%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,38 (d, J = 24,4 Hz, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 17,3, 10,8 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 17,3, 1,8 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,7, 1,8 Hz, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,67 (s, 3H). MS: [M+1]: 324,3.
[1337]
[1340] Jedinjenje 260 (6-amino-2-(ciklopropoksi)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1342] Korak 1. Rastvor ciklopropanola (12 mg, 202 µmol), intermedijera D (31 mg, 67 µmol) i Cs<2>CO<3>(66 mg, 202 µmol) u NMP (1 ml) je mešan na 140 °C tokom 16 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-(ciklopropoksi)-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (3 mg, prinos 12%).
[1343] Korak 2. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-(ciklopropoksi)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (0,52 mg, prinos 18%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,57 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,19 (d, J = 19,0 Hz, 3H), 7,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,25 - 4,14 (m, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,65 (s, 3H), 0,73 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 0,68 (s, 2H). MS: [M+1]: 354,4.
[1346]
[1349] Jedinjenje 263 (6-amino-2-(difluorometil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1350] Korak 1. Mikrotalasna boca je napunjena sa PdCl<2>(PPh<3>)<2>(79.6 mg, 109 µmol), intermedijerom D (1.00 g, 2,18 mmol) i natrijum formijatom (222 mg, 3,27 mmol). Boca je isprana ugljen-monoksidom. Dodat je DMF (5 ml) i spor mlaz ugljen-monoksida je propušten u suspenziju. Smeša je energično mešana na 100 °C tokom 2 sata u atmosferi ugljen-monoksida. Dobijena smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i supernatant je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobila sirova smeša 6-amino-2-formil-5-(3-metoksi-2,6-dimetilfenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (556 mg, prinos 75%).
[1351] Korak 2. U rastvor 6-amino-2-formil-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (180 mg, 530 µmol) u DCM (2 ml) na 0 °C ukapavanjem je dodat rastvor Deoxo-Fluor<®>(50% u THF, 1,46 M, 2,00 mL). Smeša je zagrejana do sobne temperature. Posle 2 sata, dodat je dodatni Deoxo-Fluor<®>(50% u THF, 1,17 g, 2,65 mmol). Posle 1 sata dodato je još rastvora Deoxo-Fluor<®>(50% u THF, 2,35 g, 5,30 mmol) i konačna smeša je mešana 4 sata, a zatim razblažena sa DCM i dodat je zasićeni vodeni rastvor Na<2>CO<3>. Dvofazna smeša je mešana 1 sat. Organski sloj je odvojen, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-(difluorometil)-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (10 mg, prinos 5%).
[1352] Korak 3. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak korišćen za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-2-(difluorometil)-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (3,0 mg, prinos 31%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,66 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,65 (s, 2H), 7,30 (d, J = 34,1 Hz, 2H), 7,11 - 6,98 (m, 2H), 6,99 - 6,69 (m, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,65 (s, 3H). MS: [M+1]: 348,2.
[1355]
[1358] Jedinjenje 266 (6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-bis(trideuteriometil)pirolo [2,3-b]pirazin-7-karboksamid)
[1360] Korak 1. U suspenziju magnezijumovih strugotina (380 mg, 15,7 mmol) u Et<2>O (20 ml) je dodat jod (33 mg, 130 µmol). Smeša je mešana 10 minuta, a zatim je dodat CD<3>I (975 µL,
[1363] 14
[1364] 15,7 mmol). Smeša je mešana 18 sati u atmosferi azota da bi se dobila beličasta suspenzija. ZnCl<2>(0.5 M u THF, 1,4 mL) je dodat ukapavanjem i smeša je mešana 20 minuta. Dodati su intermedijer D (1,2 g, 2,61 mmol) i Pd(PPh<3>)<4>(300 mg, 259 µmol). Smeša je mešana na 70 °C tokom 72 sata u atmosferi azota. Reakcija je ugašena vodenim rastvorom HCl 1M, razblažena vodom i ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 80% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (400 mg, prinos 46%).
[1365] Korak 2. U rastvor 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamida (400 mg, 1,22 mmol) u DMF (2 ml) dodat je NBS (259 mg, 1,46 mmol). Smeša je mešana 10 minuta, razblažena vodom, mešana 20 minuta i filtrirana. Talog je prečišćen preparativnom HPLC hromatografijom da bi se dobio 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (400 mg, prinos 81%).
[1366] Korak 3. U suspenziju magnezijuma (177 mg, 7,3 mmol) u etru (10 ml) dodat je jod (16 mg, 61 µmol). Smeša je mešana 10 minuta, a zatim joj je dodat CD<3>I (455 µL, 7,31 mmol). Smeša je mešana 18 sati u atmosferi azota da bi se dobila beličasta suspenzija. ZnCl<2>(0.5 M u THF, 14,6 mL) je dodat ukapavanjem. Nakon dodavanja, smeša je mešana 20 minuta. Dodati su 6-amino-3-bromo-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2-(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (496 mg, 1,22 mmol), Pd<2>dba<3>(111 mg, 122 µmol) i triterc-butilfosfonijum tetrafluoroborat (71 mg, 244 µmol) i smeša je mešana na 70 °C tokom 18 sati u atmosferi azota. Reakcija je ugašena vodenim rastvorom HCl 1M, razblažena vodom i ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 60% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-amino-5-(3-metoksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-bis(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (400 mg, prinos 95%).
[1367] Korak 4. Za deprotekciju OMe upotrebom BBr<3>, isti postupak koji se koristi za jedinjenje 35 dao je ostatak koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom da bi se dobio 6-amino-5-(3-hidroksi-2,6-dimetil-fenil)-2,3-bis(trideuteriometil)pirolo[2,3-b]pirazin-7-karboksamid (65 mg, prinos 17%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,55 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,22 - 6,98 (m, 4H), 6,89 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 1,74 - 1,69 (m, 3H), 1,63 (s, 3H). MS: [M+1]: 332,2.
[1368] Primeri pripreme arilamina
[1370] Za pripremu jedinjenja ovog pronalaska korišćeni su različiti arilamini. Neki od ovih arilamina bili su komercijalno dostupni, a neki su pripremljeni. Tabela 2 navodi neke primere takvih arilamina čija je priprema ovde opisana.
[1372] Tabela 2
[1375]
[1378] Priprema arilamina A1
[1380] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A1, koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A1 i ovde opisano. Komercijalno dostupan 4-metil-3-nitrofenol može biti O-zaštićen odgovarajućom zaštitnom grupom kao što je O-MOM. Nitro grupa se može redukovati da bi se dobio arilamin A1.
[1383] 14
[1384]
[1387] Korak 1. U suspenziju 4-metil-3-nitrofenola (25 g, 163 mmol) u DCM (250 ml) dodat je DIPEA (34 ml, 195 mmol), a zatim je ukapavanjem dodat hloro(metoksi)metan (26,0 g, 323 mmol, 24,5 ml). Nakon mešanja tokom 18 sati, reakciona smeša je isprana vodom. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa 0,2N HCl (2x), fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO<4>, filtriran i koncentrovan, zatim osušen u vakuumu, dajući 4-(metoksimetoksi)-1-metil-2-nitro-benzen (31,4 g, prinos 98%) kao tamnocrveno ulje.
[1388] Korak 2. U suspenziju 4-(metoksimetoksi)-1-metil-2-nitro-benzena (31,4 g, 159 mmol) u EtOH (200 ml) i vodi (75 ml) dodat je amonijum hlorid (43,3 g, 809 mmol), a zatim gvožđe u prahu (44,5 g, 796 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C tokom 3,5 sata, zatim je temperatura povećana na 90 °C, uz mešanje 4 dana. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana i isprana sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan i razblažen sa EtOAc i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>. Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO<4>, filtrirani i koncentrovani, što je dalo 26,3 g sirovog proizvoda kao tamno braon ulje koje je prečišćeno na silika gelu, eluirajući sa 20-30% EtOAc u heksanima. Čiste frakcije su spojene, koncentrovane, a zatim osušene u vakuumu, što je dalo 5-(metoksimetoksi)-2-metil-anilin (25,4 g, prinos 95%) kao ljubičasto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6,94 (dd, J = 8,0, 1,7 Hz, 1H), 6,45 - 6,30 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 3,47 (s, 3H), 2,10 (s, 3H). MS:
[1389] [M+1]: 168,3.
[1391] Priprema arilamina A2
[1393] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A2 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A2 i ovde opisano (adaptirano iz Can J Chem 2012, 90, 75-84). Komercijalno dostupan 1,3-dimetil-2-nitrobenzen može se bromirati pod odgovarajućim uslovima bromovanja. Dobijeni bromo se može pretvoriti u metoksi grupu tretmanom sa natrijum metoksidom i bakar(I) bromidom. Nitro se može redukovati da bi se dobio arilamin.
[1394] A2.
[1397] 14
[1398]
[1401] Korak 1. Boca od 3L sa 3 grlića i sa okruglim dnom je opremljena mehaničkom mešalicom, refluksnim kondenzatorom i levkom za dodavanje i napunjena je 1,3-dimetil-2-nitro-benzenom (300 g, 1,98 mol), sa DCM (900 ml), gvožđem u prahu (28,0 g, 501 mmol) i gvožđe(III) bromidom (11,9 g, 40,3 mmol). Brom (112 ml, 2,19 mol) je dodat ukapavanjem preko levka za dodavanje tokom 45-60 minuta. Interno praćenje temperature pokazalo je egzotermnu reakciju do 30 °C. 90 minuta nakon završetka dodavanja broma, dodato je još broma (5 ml, 97,6 mmol) i reakciona smeša je mešana još 45 minuta da bi se završila konverzija. Reakciona smeša je razblažena ledenom vodom (1,5 l) i Et<2>O (1,5 L). Slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa Et<2>O (0,5 L). Spojeni organski slojevi su isprani vodenim 20% rastvorom Na<2>S<2>O<3>(1 L), fiziološkim rastvorom (500 ml), sušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani preko silika gela (300 cc), koncentrovani, a zatim osušeni u vakuumu da bi se dobio 1-bromo-2,4-dimetil-3-nitro-benzen (451,5 g, prinos 99%) kao beličasta čvrsta supstanca.
[1402] Korak 2. Boca od 5L sa 4 grlića i sa okruglim dnom, opremljena mehaničkom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 1-bromo-2,4-dimetil-3-nitro-benzenom (451,5 g, 1,96 mol) u DMF (1,6 l). Dodat je CuBr (28,0 g, 195 mmol), a zatim MeONa (1,31 l, 5,89 mol, 25% u MeOH). Reakciona smeša je polako zagrejana na 95°C, postižući blagi refluks. Posle 6 sati, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa Et<2>O i zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (po 1,5 l). Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa Et<2>O (750 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (750 ml), osušeni preko Na<2>SO<4>i filtrirani preko silicijum dioksida, isprani sa Et<2>O i koncentrovani, sušeni u vakuumu da bi se dobio 1-metoksi-2,4-dimetil-3-nitro-benzen (352 g, prinos 99%) kao oker čvrsta supstanca.
[1403] Korak 3. U rastvor 1-metoksi-2,4-dimetil-3-nitro-benzena (115 g, 635 mmol) u EtOH (1,5 l) u boci od 3 l sa 3 glrića opremljenoj mehaničkom mešalicom dodato je gvožđe u prahu (213 g, 3,81 mol), zatim je u porcijama dodat rastvor amonijum hlorida (204 g, 3,81 mol) u vodi (500 ml). Smeša je zagrejana na 85 °C tokom 8 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana na celitu. Zapremina filtrata je smanjena (veći deo EtOH je isparen) i
[1406] 14
[1407] dobijena smeša je razblažena sa Et<2>O (800 mL) i vodom (150 mL). Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa Et<2>O (500 mL). Spojeni organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani, koncentrovani i osušeni u vakuumu da bi se dobio 3-metoksi-2,6-dimetil-anilin (89,1 g, prinos 93%) kao braon ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6,88 (dq, J = 8,3, 0,7 Hz, 1H), 6,31 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,61 (br s, 2H), 2,14 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 2,07 (s, 3H). MS: [M+1]: 152,3.
[1409] Priprema arilamina A3
[1411] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A3 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A3 i opisano ovde. Metoksi grupa 1-metoksi-2,4-dimetil-3-nitrobenzena opisana u pripremi intermedijera A2 može se cepati pomoću BBr<3>i dobijeni fenol može biti O-zaštićen odgovarajućom zaštitnom grupom kao što je O-MOM. Nitro se može redukovati da bi se dobio arilamin A3.
[1414]
[1417] Korak 1. U rastvor 1-metoksi-2,4-dimetil-3-nitro-benzena (20 g, 110 mmol) u DCM (200 ml), ohlađen u kupatilu sa suvim ledom/acetonitrilom, dodat je rastvor BBr<3>u DCM (1 M, 168 mL) ukapavanjem kroz levak za dodavanje. Smeša je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je zatim polako sipana u mešanu smešu leda, vode (1 L) i KH<2>PO<4>(75 g). Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x 500 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (500 ml), osušeni preko MgSO<4>, filtrirani preko silicijum dioksida (375 g), eluirajući sa DCM, koncentrovani i osušeni u vakuumu da bi se dobio 2,4-dimetil-3-nitrofenol (18,0 g, prinos 98%) kao žuta čvrsta supstanca.
[1418] Korak 2. U suspenziju 2,4-dimetil-3-nitrofenola (18,96 g, 113 mmol) u DCM (200 ml) dodat je DIPEA (23,7 ml, 136 mmol), a zatim hloro(metoksi)metan (9,5 ml, 125 mmol) ukapavanjem. Nakon mešanja tokom 3,5 sata, dodato je još hloro(metoksi)metana (2,0 ml, 26 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim
[1421] 14
[1422] rastvorom NH<4>Cl (100 mL) i razblažena vodom (100 mL). Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM (100 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa 0.2N HCl (2 x 100 mL), 1M NaOH (100 mL), fiziološkim rastvorom (100 mL), osušeni preko MgSO<4>, filtrirani na silicijum dioksidu (oko 100 cc), eluirajući sa DCM, koncentrovani i osušeni u vakuumu da bi se dobio 1-(metoksimetoksi)-2,4-dimetil-3-nitro-benzen (22,1 g, prinos 92%) kao bledožuta voštana čvrsta supstanca.
[1423] Korak 3. U posudu koja sadrži paladijum na ugljeniku (5,06 g, 4,76 mmol, 10% tež./tež.) pod azotom dodat je MeOH (300 ml), a zatim 1-(metoksimetoksi)-2,4-dimetil-3-nitrobenzen (20,1 g, 95,1 mmol). Posuda je isprana vodonikom i mešana pod atmosferom vodonika 2 dana. Reakciona smeša je isprana azotom 2 sata, a zatim je dodat Celit. Smeša je filtriran na celitnoj podlozi koristeći MeOH i DCM. Filtrat je koncentrovan i osušen u vakuumu da bi se dobio 3-(metoksimetoksi)-2,6-dimetil-anilin (17,1 g, prinos 99%) kao bledo narandžasto mutno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,15 (s, 2H), 3,48 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,11 (s, 3H). MS: [M+1]: 182,2.
[1425] Priprema arilamina A4
[1427] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A4 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A4 i opisano ovde. Komercijalno dostupna 2-hloro-3-metoksibenzoeva kiselina može se bromovati odgovarajućim reagensom za bromovanje, a karboksilna kiselina se može pretvoriti u NHBoc pod Curtius-ovim uslovima. Bromo se može pretvoriti u metil, a NHBoc se može razdvojiti pod kiselim uslovima da bi se dobio arilamin A4.
[1430]
[1433] Korak 1. U rastvor 2-hloro-3-metoksi-benzoeve kiseline (50 g, 268 mmol) u AcOH (250 ml) i vodi (250 ml) dodat je brom (27,5 ml, 537 mmol) ukapavanjem. Smeša je mešana na 60 °C tokom 18 sati, ohlađena na sobnu temperaturu, dodat je fiziološkim rastvor i smeša je dva puta ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da bi se dobila 6-bromo-2-hloro-3-metoksi-benzoeva kiselina (71
[1436] 14
[1437] g, kvantitativni prinos) kao braon ulje koje se stvrdnulo nakon stajanja u vakuumu tokom vikenda.
[1438] Korak 2. U rastvor 6-bromo-2-hloro-3-metoksi-benzoeve kiseline (23,6 g, 88,9 mmol). Et<3>N (38 mL, 271 mmol) i terc-butanola (42,5 mL, 450 mmol) u toluenu (500 mL) dodat je [azido(fenoksi)fosforil]oksibenzen (29,5 mL, 136 mmol). Smeša je zagrejana na 100 °C tokom 16 sati, ohlađena do sobne temperature, a zatim su isparljive materije uklonjene u vakuumu. Ostatak je razblažen sa EtOAc (100 mL), a organski sloj je ispran sa 5% limunskom kiselinom, vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>, fiziološkim rastvorom, sušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% EtOAc u heksanima da bi se dobio terc-butil N-(6-bromo-2-hloro-3-metoksi-fenil)karbamat (16,2 g, prinos 54%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
[1439] Korak 3. U rastvor terc-butil N-(6-bromo-2-hloro-3-metoksi-fenil)karbamata (25 g, 74,3 mmol) u dioksanu (500 ml) dodat je trimetilboroksin (50% tež./tež. u THF, 20,51 g, 81,7 mmol). PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(5,22 g, 7,43 mmol) i vodeni rastvor Na<2>CO<3>(2 M, 111 mL, 223 mmol). Smeša je zagrejana na 100 °C tokom 16 h, ohlađena do sobne temperature, a zatim su isparljive materije uklonjene u vakuumu. Dodati su EtOAc i voda. Organski sloj je odvojen i ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 30% EtOAc u heptanu da bi se dobio terc-butil N-(2-hloro-3-metoksi-6-metil-fenil)karbamat (13,8 g, prinos 68%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
[1440] Korak 4. HCl u dioksanu (4 M, 100 mL) je dodat u rastvor terc-butil N-(2-hloro-3-metoksi-6-metil-fenil)karbamata (13,8 g, 50,8 mmol) u MeOH (100 mL). Posle 3 h, isparljive materije su isparene do sušenja pod vakuumom da bi se dobila bela čvrsta supstanca kojoj je, uz energično mešanje, dodato 250 mL EtOAc i 250 mL zasićenog vodenog rastvora NaHCO<3>. Organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 30% EtOAc u heptanu da bi se dobio 2-hloro-3-metoksi-6-metil-anilin (7,9 g, prinos 91%) kao bistro ulje koje se stvrdnulo nakon stajanja.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6,95 - 6,79 (m, 1H), 6,27 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1H), 4,06 (br s, 2H), 3,83 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 2,12 (d, J = 0,8 Hz, 3H). MS: [M+1]: 172,2.
[1442] Priprema arilamina A5
[1445] 1
[1446] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A5 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A5 i ovde opisano. Komercijalno dostupan 3-metoksi-2-metilanilin može se hlorisati reagensom za hlorovanje da bi se dobio arilamin A5.
[1449]
[1452] Korak 1. NCS (98 g, 734 mmol) je dodat u 4 porcije (15 minuta između svakog dodavanja) u rastvor 3-metoksi-2-metil-anilina (100 g, 729 mmol) u DCM (500 ml) na 0 °C.
[1453] 30 minuta nakon poslednjeg dodavanja, dodato je 100 g silika gela, smeša je isparena pod vakuumom, a crni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% EtOAc u heksanima da bi se dobio 6-hloro-3-metoksi-2-metil-anilin (55,6 g, prinos 44%) kao narandžasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,02 (br s, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,07 (s, 3H). MS: [M+1]: 172,3.
[1455] Priprema arilamina A6
[1457] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od arilamina A6 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A6 i opisano ovde. Komercijalno dostupan 3-amino-2,4-dihlorofenol može biti O-zaštićen odgovarajućom zaštitnom grupom kao što je O-PMB da bi se dobio arilamin A6.
[1460]
[1463] U suspenziju 3-amino-2,4-dihloro-fenola.HCl soli (20 g, 93,3 mmol) u DMF (150 ml) dodat je 1-(hlorometil)-4-metoksi-benzen (14,0 ml, 103 mmol), tetrabutilamonijum jodid (1 g,
[1466] 1 1
[1467] 3,00 mmol) i Cs<2>CO<3>(64,0 g, 196 mmol). Smeša je mešana na 40 °C preko noći, zatim je razblažena vodom, mešana 20 minuta i filtrirana. Talog je ispran vodom i osušen u vakuumu. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 100% DCM u heksanima da bi se dobio 2,6-dihloro-3-[(4-metoksifenil)metoksi]anilin (20 g, prinos 72%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,38 - 7,30 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,92 - 6,77 (m, 2H), 6,32 (s, 1H), 5,01 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,79 (s, 3H). MS: [M+1]: 298,0.
[1469] Priprema arilamina A7.
[1471] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od ključnog intermedijera A7, A8 ili A9 koji se mogu pripremiti kao što je prikazano na šemi A7 i ovde opisano (adaptirano iz J. AM. CHEM. SOC.2004, 126, 1150-1160). Komercijalno dostupan 3-metoksianilin može biti N-zaštićen odgovarajućom zaštitnom grupom kao što je NH-PIV. Usmerena orto metalacija može se koristiti za uvođenje odgovarajućeg R<1>kao što je CH<3>ili CD<3>. NH-PIV zaštitna grupa može se odvojiti pod kiselim uslovima, a preostali orto-u odnosu na azot može se bromovati odgovarajućim reagensom za bromovanje kao što je NBS. U ovoj fazi, brom se može supstituisati boronatnim estrom pod uslovima posredovanim metalom i dalje derivatizovati odgovarajućim R<2>kao što je CH<3>ili CD<3>da generiše ključni intermedijer A7, A8 ili A9.
[1472] Alternativno, bromoanilin može biti N-zaštićen odgovarajućom zaštitnom grupom kao što je NH-Boc pre bromo supstitucije. U ovom slučaju, NH-Boc može biti razložen pod kiselim uslovima da bi se generisao ključni intermedijer A7, A8 ili A9.
[1475] 1 2
[1476]
[1479] Arilamin A7
[1481] Korak 1. 2,2-dimetilpropanoil hlorid (51 mL, 416 mmol) je polako dodat u rastvor 3-metoksianilina (50 g, 406 mmol, 45,5 mL), piridina (66 mL, 816 mmol) i DMAP (500 mg, 4,1 mmol) u DCM (500 mL). Posle 1 sata, dodat je vodeni rastvor 1 N HCl i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa CH<2>Cl<2>. Organski slojevi su spojeni, isprani vodenim rastvorom 1 N HCl, fiziološkim rastvorom, a zatim osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i ispareni do sušenja da bi se dobio N-(3-metoksifenil)-2,2-dimetil-propanamid (84 g, kvantitativni prinos).
[1482] Korak 2. U rastvor N-(3-metoksifenil)-2,2-dimetil-propanamida (82 g, 396 mmol) u THF (820 ml) na 0 °C ukapavanjem je dodat nBuLi (2,5 M, 325 ml, 813 mmol). Posle 2 sata na 0 °C, rastvor je ohlađen na -78 °C i ukapavanjem je dodat CD<3>I (27 mL, 434 mmol). Smeša je mešana 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša je sipana u vodeni 1 N HCl i ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani do sušenja da bi se dobio N-[3-metoksi-2-(trideuteriometil)fenil]-2,2-dimetilpropanamid (82 g, prinos 92%) kao bela čvrsta supstanca.
[1483] Korak 3. N-[3-metoksi-2-(trideuteriometil)fenil]-2,2-dimetil-propanamid (81,5 g, 363 mmol) u dioksanu (300 ml) i koncentrovanoj HCl (12 M, 300 ml) je zagrejan do refluksa tokom 24 sata. Tamna smeša je ohlađena na 0 °C u ledenom kupatilu, neutralisana vodenim 2N NaOH,
[1486] 1
[1487] ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani do sušenja da bi se dobio tamni ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 50% EtOAc u heptanu da bi se dobio 3-metoksi-2-(trideuteriometil)anilin (36 g, prinos 71%) kao bistro ulje.
[1488] Korak 4. U rastvor 3-metoksi-2-(trideuteriometil)anilina (35 g, 250 mmol) u DCM (500 ml) na 0°C dodat je NBS (45 g, 253 mmol). Smeša je mešana na 0°C tokom 3 sata, koncentrovana na približno 75 ml i filtrirana. Filtrat je isparen do suva, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 0% do 50% EtOAc u heptanu, da bi se dobio 6-bromo-3-metoksi-2-(trideuteriometil)anilin (35 g, prinos 64%).
[1489] Korak 5. Terc-butoksikarbonil terc-butil karbonat (87,2 g, 400 mmol) je dodat u rastvor 6-bromo-3-metoksi-2-(trideuteriometil)anilina (35 g, 160 mmol), DMAP (3,90 g, 32 mmol) i DIPEA (415 mmol, 72,3 ml) u THF (500 ml). Smeša je zagrejana do refluksa tokom 18 sati. Isparljive materije su uklonjene pod vakuumom, a ostatak je filtriran kroz silika gel eluirajući sa 50% EtOAc u heptanu da bi se dobila smeša terc-butil N-[6-bromo-3-metoksi-2-(trideuteriometil)fenil]karbamata i terc-butil N-[6-bromo-3-metoksi-2-(trideuteriometil)fenil]-N-terc-butoksikarbonil-karbamata (64 g) kao bistro ulje koje je rastvoreno u metanolu (500 ml). K<2>CO<3>(110 g, 796 mmol) je dodato i smeša je mešana na 60 °C tokom 48 sati. Isparljive materije su uklonjene pod vakuumom. Ostatku su dodati EtOAc i voda. Organski sloj je odvojen, ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 40% EtOAc da bi se dobio terc-butil N-[6-bromo-3-metoksi-2-trideuteriometil)fenil]karbamat (50 g, kvantitativni prinos) kao bistro ulje.
[1490] Korak 6. U rastvor terc-butil N-[6-bromo-3-metoksi-2-(trideuteriometil)fenil]karbamata (33 g, 103 mmol) u dioksanu (700 ml) dodati su bis(pinakolato)diboron (51 g, 201 mmol), KOAc (35,5 g, 362 mmol) i PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(7.6 g, 10,4 mmol). Smeša je degazirana u vakuumu, ponovo napunjena azotom i mešana na refluksu tokom 18 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana na manju zapreminu. Crni ostatak je razblažen sa EtOAc i filtriran kroz silika gel jastučić (250 g) eluirajući sa 2 l 50% EtOAc u heptanu. Filtrat je isparen, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom od 0 do 20% EtOAc u heptanu da bi se dobio terc-butil N-[3-metoksi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-(trideuteriometil)fenil]karbamat (22,5 g, prinos 59%), koji se stvrdnuo usled stajanja pod vakuumom.
[1493] 1 4
[1494] Korak 7. U rastvor PdCl<2>(dppf).CH<2>Cl<2>(5.3 g, 7,24 mmol) u DMF (500 ml) su brzo uzastopno dodati CD<3>I (60,6 g, 418 mmol, 26 ml), terc-butil N-[3-metoksi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-(trideuteriometil)fenil]karbamat (52 g, 142 mmol) i vodeni rastvor tribaznog kalijum fosfata (2 M, 350 ml). Azot je propuštan kroz rastvor tokom 2 minuta, zatim je smeša mešana na 80 °C tokom 30 minuta u atmosferi azota, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu i dodat je EtOAc. Organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 20% EtOAc u heptanu da bi se dobio terc-butil N-[3-metoksi-2,6-bis(trideuteriometil)fenil]karbamat (15 g, prinos 41%) kao gusto bistro ulje.
[1495] Korak 8. HCl u dioksanu (4 M, 100 mL) je dodat u rastvor terc-butil N-[3-metoksi-2,6-bis(trideuteriometil)fenil]karbamata (22,5 g, 87,4 mmol) u MeOH (100 mL). Posle 3 h isparljive materije su uklonjene pod vakuumom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Dodati su EtOAc i voda, a zatim zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 dok se ne postigne bazna pH vrednost. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i isparen do sušenja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 40% EtOAc u heptanu da bi se dobio 3-metoksi-2,6-bis(trideuteriometil)anilin (7,5 g, prinos 55%) kao bistro ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6,96 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 8,3, 2,5 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 2,4 Hz, 3H), 3,64 (s, 2H). MS: [M+1]: 158,3.
[1497] Alternativni put koji se koristi za pripremu arilamina A8 (bez Boc)
[1499] Korak 1. U zatvorenoj epruveti, 6-bromo-3-metoksi-2-metilanilin (3,4 g, 15,7 mmol), bis(pinakolato)diboron (5,58 g, 21,98 mmol) i Cs<2>CO<3>(15.4 g, 47,1 mmol) je uzet u anhidrovanom 1,4-dioksanu (68 ml) i azot je propuštan u reakcionu smešu tokom 15 minuta. Zatim je PdCl<2>(dppf) (1,92 g, 2,36 mmol) dodat u reakcionu smešu i zagrejan na 100 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 10 do 12% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 3-metoksi-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin (2,50 g, prinos 60%).
[1500] Korak 2. U zatvorenoj epruveti, 3-metoksi-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin (2,5 g, 9,39 mmol), jodometan-d<3>(4.08 g, 28,19 mmol) i tribazni kalijum fosfat (9,95 g, 46,9 mmol) su uzeti u anhidrovanom DMF (50 ml) i gasoviti azot je propuštan u reakcionu smešu tokom 15 minuta. Zatim je PdCl<2>(dppf) (0,766 g, 0,939 mmol)
[1503] 1
[1504] dodat i reakciona smeša je zagrejana na 80 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluirajući gradijentom od 6 do 8% EtOAc u heksanima) da bi se dobio čisti 3-metoksi-2-metil-6-(metil-d<3>) anilin kao bezbojna tečnost (0,75 g, prinos 51%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 6,68 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,31 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,63 (s, 2H), 3,55 (s, 3H), 1,94 (s, 3H). MS: [M+1]: 155,3.
[1506] Priprema arilamina A10
[1508] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od ključnog intermedijera A10 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A8 i ovde opisano. Komercijalno dostupna 3-metoksi-2-nitrobenzoeva kiselina može se bromovati. Kiselina se zatim može esterifikovati, bromo pretvoriti u metil, a nitro redukovati u amino. Dobijeni amino se može pretvoriti u bromo pod Sandmeyer-ovim uslovima, a estar se zatim može saponifikovati. Dobijena kiselina se zatim može pretvoriti u NHBoc pod Curtius-ovim uslovima. U ovom slučaju, NH-Boc se može razdvojiti pod kiselim uslovima da bi se generisao ključni intermedijer A10.
[1511]
[1514] Korak 1. U 3-metoksi-2-nitro-benzoevu kiselinu (10,04 g, 50,93 mmol) i Ag<2>SO<4>(8.10 g, 26,0 mmol) u mraku je dodata koncentrovana sumporna kiselina (200 ml) i molekularni brom (9,4 g, 58,6 mmol, 3,0 ml) ukapavanjem. Smeša je mešana u mraku 3,5 sata, zatim je ugašena
[1517] 1
[1518] dodavanjem usitnjenog leda, ohlađena u ledenom kupatilu i mešana. Čvrste materije su sakupljene filtracijom, isprane sa H<2>O i osušene na vazduhu. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u acetonu (300 ml), filtrirana, ostatak (soli srebra) ispran acetonom. Filtrat je osušen preko MgSO<4>, filtriran i koncentrovan, čime se dobija 6-bromo-3-metoksi-2-nitro-benzoeva kiselina (14,64 g, prinos 100%) kao ljubičasta čvrsta supstanca.
[1519] Korak 2. U rastvor 6-bromo-3-metoksi-2-nitro-benzoeve kiseline (14,64 g, 53,0 mmol) u DMF (140 ml) dodat je anhidrovani kalijum karbonat (14,66 g, 106,1 mmol), a zatim metil jodid (11,4 g, 80,3 mmol, 5,0 ml). Nakon mešanja reakcione smeše tokom 2 sata, ukapavanjem je dodata H<2>O (420 ml). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa H<2>O, osušena na vazduhu, a zatim osušena u vakuumu, dajući metil 6-bromo-3-metoksi-2-nitro-benzoat (12,89 g, prinos 84%) kao svetlo bež čvrstu supstancu.
[1520] Korak 3. U posudi pod pritiskom, rastvor metil 6-bromo-3-metoksi-2-nitro-benzoata (6,0 g, 20,7 mmol) u dioksanu (100 ml) i vodenom rastvoru Na<2>CO<3>(2 M, 31 mL, 62,3 mmol) je barbotiran sa N<2>, zatim su dodati Pd(dppf)Cl<2>(1.64 g, 2,01 mmol) i trimetilboroksin (6,74 g, 26,8 mmol, 7,5 ml). Rastvor je barbotiran sa N<2>. Posuda je zatvorena poklopcem i mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, sipana u H<2>O i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani preko silicijum dioksida i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 100%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio metil 3-metoksi-6-metil-2-nitro-benzoat (3,06 g, prinos 66%) kao svetlo bež voštana čvrsta supstanca.
[1521] Korak 4. U rastvor metil 3-metoksi-6-metil-2-nitro-benzoata (3,06 g, 13,6 mmol) u MeOH (225 ml) dodat je paladijum na uglju (10% tež./tež., 1,42 g, 1,33 mmol) razblažen u delu MeOH. Smeša je isprana sa H<2>i mešana u atmosferi vodonika tokom 2 sata. Suspenzija je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan, a zatim osušen u vakuumu, čime je dobijen metil 2-amino-3-metoksi-6-metil-benzoat (2,56 g, prinos 97%) kao svetlo ćilibarno ulje.
[1522] Korak 5. U rastvor metil 2-amino-3-metoksi-6-metil-benzoata (2,13 g, 10,9 mmol) u DMF (12 ml) i MeCN (18 ml) dodat je terc-butil nitrit (2,0 ml, 17 mmol), a zatim bakar (II) bromid (2,86 g, 12,8 mmol). Reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 9 minuta, zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena sa H<2>O i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Spojeni organski ekstrakti isprani zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 70%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio metil 2-bromo-3-metoksi-6-metil-benzoat
[1525] 1
[1526] (1,52 g, prinos 54%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,15 - 7,05 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 2,26 (d, J = 0,7 Hz, 3H).
[1527] Korak 6. U rastvor metil 2-bromo-3-metoksi-6-metil-benzoata (1,52 g, 5,87 mmol) u MeOH (15 ml) i THF (15 ml) dodat je vodeni rastvor NaOH (4 M, 15 ml, 60,0 mmol) i 30% rastvor vodonik-peroksida (1,5 ml). Reakciona smeša je mešana na 70 °C preko noći, zatim na 90 °C tokom 4 dana. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je razblažen sa 3N HCl (20 ml) i ekstrahovan sa CHCl<3>/iPrOH (4:1, 4x). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani, zatim osušeni u vakuumu i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom MeOH (0 do 10%) u CH<2>Cl<2>sa 1% AcOH modifikatorom. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobila 2-bromo-3-metoksi-6-metil-benzoeva kiselina (896 mg, prinos 62%) kao bela čvrsta supstanca.
[1528] Korak 7. U rastvor 2-bromo-3-metoksi-6-metil-benzoeve kiseline (1,15 g, 4,68 mmol), trietilamina (1,42 g, 14,1 mmol, 2,0 ml) i terc-butanola (1,73 g, 23,4 mmol, 2,25 ml) u toluenu (8 ml) dodat je DPPA (1,93 g, 7,01 mmol, 1,52 ml) i smeša je zagrejana do refluksa tokom 1 sata, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je razblažen 15% vodenim rastvorom limunske kiseline i ekstrahovan sa EtOAc (3x). Spojeni organski slojevi su isprani vodenim 1N NaOH, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 30%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-(2-bromo-3-metoksi-6-metil-fenil)karbamat (1,34 g, prinos 91%) kao bezbojno ulje.
[1529] Korak 8. U rastvor terc-butil N-(2-bromo-3-metoksi-6-metil-fenil)karbamata (1,34 g, 4,24 mmol) u MeOH (10 ml) dodat je HCl u dioksanu (4 M, 10,5 ml, 42,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 75 minuta. Rastvor je isparen do suva u vakuumu, a zatim suspendovan u zasićenom vodenom rastvoru NaHCO<3>i ekstrahovan sa DCM (3 x, fazni separator). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluirajući gradijentom EtOAc (0 do 50%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio 2-bromo-3-metoksi-6-metil-anilin (807 mg, prinos 88%) kao beličasta voštana čvrsta supstanca. MS: [M+1]: 218,0.
[1531] Priprema arilamina A11
[1534] 1
[1535] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti od ključnog intermedijera A11 koji se može pripremiti kao što je prikazano na šemi A9 i opisano ovde. Komercijalno dostupna 6-bromo-3-metoksi-2-metilbenzoeva kiselina može se pretvoriti u N-Boc pod uslovima Curtiusove preraspodele. NH-Boc se može razdvojiti pod kiselim uslovima da bi se generisao ključni intermedijer A11.
[1538]
[1541] Korak 1. U rastvor 6-bromo-3-metoksi-2-metil-benzoeve kiseline (1 g, 4,08 mmol), trietilamina (1,23 g, 12,2 mmol, 1,70 ml) i terc-butanola (1,55 g, 20,9 mmol) u toluenu (7 ml) dodat je [azido(fenoksi)fosforil]oksibenzen (1,72 g, 6,25 mmol, 1,35 ml). Smeša je zagrejana do refluksa tokom 5 sati i ohlađena na sobnu temperaturu. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Ostatak je razblažen vodenim rastvorom limunske kiseline 15% i ekstrahovan sa EtOAc (3x). Spojeni organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 30%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-(6-bromo-3-metoksi-2-metilfenil)karbamat (1,41 g, kvantitativni prinos) kao bezbojno ulje, koje nije bilo čisto, ali je korišćeno kakvo jeste u sledećem koraku.
[1542] Korak 2. U rastvor terc-butil N-(6-bromo-3-metoksi-2-metil-fenil)karbamata (1,41 g, 4,46 mmol) u MeOH (22 ml) dodat je HCl u dioksanu (4 M, 22 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 80 minuta. Rastvor je isparen do suva u vakuumu, a zatim suspendovan u zasićenom vodenom rastvoru NaHCO<3>i ekstrahovan sa DCM (3 x). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko Na<2>SO<4>, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (suvo punjenje) eluiranjem sa gradijentom EtOAc (0 do 50%) u Hep. Odgovarajuće frakcije su spojene i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio 6-bromo-3-metoksi-2-metil-anilin (586 mg, prinos 61%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,23 (dd, J = 8,8, 0,6 Hz, 1H), 6,26 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,06 (br s, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,09 (t, J = 0,5 Hz, 3H). MS: [M+1]: 218,0.
[1545] 1
[1546] Hiralno odvajanje odabranih jedinjenja
[1548] Racemske smeše atropizomera su razdvojene korišćenjem hiralnih SFC postupaka na Mettler Toledo Minigram SFC (MTM), Waters Prep 15 SFC-MS (WP15) ili Waters Prep 100 SFC-MS (WP100) (Tabela 3). Odgovarajuća kolona je odabrana da bi se postiglo zadovoljavajuće razdvajanje vrhova. Odgovarajuće frakcije za svaki vrh su kombinovane, koncentrovane i obično uzimane u smeši vode i odgovarajućeg organskog rastvarača koji se meša sa vodom, kao što su EtOH, IPA, CH<3>CN ili njihova smeša i liofilizovano. Odvojeni proizvodi su ponovo analizirani hiralnim SFC postupkom radi procene hiralne čistoće.
[1549] C1A je Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 µm; C1B je Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 µm; C2 je Chiral Technologies IA, 10 x 250 mm, 5 µm; C3 je Chiral Technologies IC, 10 x 250 mm, 5 µm; C4 je Chiral Technologies ID, 10 x 250 mm, 5 µm; C5 je Chiral Technologies IG, 10 x 250 mm, 5 µm; C6 je Chiral Technologies AS, 10 x 250 mm, 5 µm; C7 je Phenomenex Lux Cellulose-4, 10 x 250 mm, 5 µm.
[1550] Strukturna opredeljenja razdvojenih atropizomera potvrđena su biološkom aktivnošću gde je biološki aktivnom enantiomeru pripisano da ima (S) konfiguraciju, što je potvrđeno rendgenskom kristalografijom ključnih jedinjenja.
[1552] Tabela 3
[1555]
[1559] 1
[1560]
[1563] 11
[1566] 12
[1569] 1
[1570]
[1573] Primer 2. Enzimski test
[1575] Za detekciju aktivnosti Myt1 kinaze korišćen je rekombinantni test humane Myt1 kinaze koji je merio hidrolizu ATP-a korišćenjem komercijalno dostupnog ADP-Glo testa (ADP-Glo<™>Kinazni test od Promega, 10000 testova, #V9102). Ukratko, 5 µL rekombinantnog humanog Myt1 (rekombinantni humani protein PKMYT1 pune dužine eksprimiran u ćelijama insekata od Thermo Fisher #A33387; čistoća ~80%) je pripremljen u reakcionom puferu (70 mM HEPES, 3 mM MgCl<2>, 3 mM MnCl<2>, 50 µg/ml PEG 20000, 3µM Na-ortovanadata, 1,2 mM DTT) i dodato u belu, polistirensku netretiranu mikroploču sa ravnim dnom i sa 384 bunarčića, (Corning #3572). Nakon toga, 5 µL jedinjenja (razblaženih u reakcionom puferu do 0,5% DMSO) je dodato u mikroploču i ploča je kratko centrifugirana i inkubirana na 22 °C tokom 15 minuta. Ultra-čisti rastvor adenozin trifosfata (ATP) (ADP-Glo komplet od Promega) je razblažen u reakcionom puferu i 5 µL je dodato u mikroploču, kratko centrifugirano i inkubirano 60 minuta na 30 °C. Konačna koncentracija enzima Myt1 bila je 18 nM, a konačna koncentracija ATP-a bila je 10 µM. Nakon 60-minutne inkubacije, dodato je 15 µL ADP-Glo reagensa i ploča je kratko centrifugirana, zapečaćena i inkubirana u mraku 40 minuta na 22 °C. Nakon toga, dodato je 30 µL reagensa za detekciju kinaze po bunarčiću i ploča je kratko centrifugirana, zapečaćena i inkubirana 45-60 minuta na 22 °C u mraku. Luminescencija je očitana pomoću Envision (integracija od 250 ms). IC<50>i % maksimalne inhibicije su izračunati za svako testirano jedinjenje inhibitora.
[1576] Primeri pripremljenih jedinjenja i njihove aktivnosti prikazani su u Tabeli 4 ispod.
[1578] Tabela 4
[1581]
[1585] 1 4
[1586]
[1588] 1
[1590] 1
[1592] 1
[1594] 1
[1596] 1
[1598] 1
[1600] 11
[1602] 12
[1604] 1
[1606] 14
[1607]
[1610] U Tabeli 4, kolona Postupak označava gore opisani postupak pripreme koji se koristi u pripremi jedinjenja.
[1612] Primer 3. Genetska validacija
[1614] Dve sgRNK za PKMYT1 i jedna sgRNK za LacZ (kontrola) su transdukovane u RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- roditeljske (WT) i CCNE1-prekomerno eksprimirajuće klonove. Inficirane ćelije su posejane u niskoj gustini da bi se izmerila njihova sposobnost da formiraju kolonije od <50 ćelija. Nakon 10 dana rasta, kolonije su obojene, snimljene i kvantifikovane. Koristeći klonogene testove preživljavanja, primetili smo značajan defekt ćelijske kondicije u ćelijama sa prekomernom ekspresijom CCNE1 u poređenju sa roditeljskim ćelijama transdukovanim sa sgRNK PKMYT1 (slike 3A i 3B). Ovaj eksperiment je ponovljen korišćenjem FT282-hTERT TP53-/- roditeljskih (WT) i CCNE1-prekomerno eksprimirajućih klonova i primećeni su slični rezultati (slike 4A i 4B).
[1615] Da bi se utvrdilo da li je kinazna aktivnost PKMYT1 odgovorna za održavanje vijabilnosti ćelija RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- koje prekomerno eksprimiraju CCNE1, PKMYT1 otvoreni okvir čitanja (ORF) je kloniran u inducibilni sisarski ekspresioni vektor. sgRNK-rezistentne tihe mutacije u PKMYT1 ORF sekvence su zatim kreirane PCR mutagenezom. Generisana je tačkasta mutacija koja je rezultirala promenom aminokiseline asparagin (N) u alanin (A) na ostatku 238. Promena aminokiseline N238A u kinaznom domenu rezultirala je katalitički neaktivnim PKMYT1 mutantom. Generisane su stabilne ćelijske linije u RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- roditeljskim i klonovima sa prekomernom ekspresijom CCNE1 koje su ili eksprimirale divlji tip PKMYT1 ORF ili mutant N238A sa mrtvom kinazom (Sl. 5A). Ove stabilne ćelijske linije su transdukovane ili sa LacZ neciljanom sgRNK ili sa PKMYT1 sgRNK #4. Ćelije su zatim posejane na pločice niske gustine da bi se izmerila njihova sposobnost da formiraju kolonije od >50 ćelija. Nakon 10 dana rasta, kolonije su obojene, snimljene i kvantifikovane. Ekspresija sgRNK-rezistentne PKMYT1 ORF, ali ne i katalitički mrtve verzije, spasila je defekt rasta izazvan transdukcijom sgRNK #4 u oba klona sa prekomernom
[1617] 1
[1618] ekspresijom CCNE1 (slike 5B i 5C). Ovaj rezultat je pokazao da ciljanje kinazne aktivnosti PKMYT1 selektivno ubija ćelije sa prekomernom ekspresijom CCNE1.
[1620] Primer 4. Farmakološka validacija
[1622] RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- roditeljski (WT) i klonovi sa prekomernom ekspresijom CCNE1 tretirani su jedinjenjem 133 titracijom doze i određena je vijabilnost ćelija. Utvrđeno je da su ćelije sa prekomernom ekspresijom CCNE1 osetljivije na jedinjenje 133 nego odgovarajuće WT ćelije (Slika 3C). Sličan efekat je zavbeležen kod FT282-hTERT TP53<R175H>WT i klonova sa prekomernom ekspresijom CCNE1 (Sl.4C). Za testove proliferacije odgovora na dozu korišćenjem ćelijskih linija RPE1-hTERT i FT282-hTERT, ćelije su posejane na ploče sa 96 bunarčića i dozirane serijski razblaženim inhibitorom Myt1. Ćelije su snimane jednom dnevno pomoću IncuCyte S3 mikroskopa i procenat konfluentnosti bunarčića je izračunat tokom vremena. Kada su ćelije dostigle četiri udvostručenja populacije, eksperiment je završen i IC<50>krive su nacrtane za poslednju vremensku tačku. Procenat konfluentnosti je izračunat u odnosu na ćelijsku konfluentnost u netretiranim bunarčićima.
[1623] Panel od 16 ćelijskih linija kancera sa normalnim (n=8) ili povišenim nivoima CCNE1 (n=8) je procenjen na njihovu osetljivost na jedinjenje 28 u testu proliferacije ćelija (Sl. 6). Krive doza-odgovor u ovim testovima proliferacije ćelijskih linija kancera su generisane na sledeći način. Ćelije su posejane u ploče sa 96 bunarčića i dozirane serijski razblaženim jedinjenjem 28. Nakon 7 dana, korišćen je Cell Titer Glo (CTG) za procenu statusa proliferacije ovih ćelija i IC<50>vrednosti su bile prikazane na grafikonu.
[1624] Sličan eksperiment je sproveden na panelu od 8 ćelijskih linija kancera sa divljim tipom FBXW7 (n=5) ili FBXW7-mutacijama (n=3), u kojima je osetljivost ovih ćelija na jedinjenje 95 procenjena u testu proliferacije ćelija (Slika 7). Krive doza-odgovor u ovim testovima proliferacije ćelijskih linija kancera generisane su na sledeći način. Ćelije su posejane u ploče sa 96 bunarčića i dozirane serijski razblaženim inhibitorom Myt1. Ćelije su snimane jednom dnevno pomoću IncuCyte S3 mikroskopa, a procenat konfluentnosti bunarčića je izračunat tokom vremena. Kada su ćelije dostigle četiri udvostručenja populacije, eksperiment je završen i IC<50>krive su prikazane na grafikonu za poslednju vremensku tačku. Procenat konfluentnosti je izračunat u odnosu na ćelijsku konfluentnost u netretiranim bunarčićima.
[1627] 1

Claims (16)

1. Patentni zahtevi
1. Jedinjenje formule (I):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
pri čemu
svaki od X, Y i Z je nezavisno N ili CR<2>;
R<1>i svaki R<2>su nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6->
<10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, cijano, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, - C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>; ili R<1>se kombinuje se sa jednim R<2>koji je u blizini R<1>da bi se formirao opciono supstituisani C<3-6>alkilen;
svaki od R<3>i R<4>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil ili halogen;
R<5>je H ili -N(R<7>)<2>;
R<6>je -C(O)NH(R<8>), -C(O)R<7A>, ili -SO<2>R<7A>;
svaki R<7>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, ili -SO<2>R<7A>; ili dve R<7>grupe, zajedno sa atomom za koji su obe vezane, kombinuju se da bi formirale opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
svaki R<7A>je nezavisno opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<6-10>aril;
svaki R<7B>je nezavisno hidroksil, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, -N(R<7>)<2>, -C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili opciono supstituisani alkoksi; svaki R<8>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkoksialkil, opciono supstituisani C<6-10>aril C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroaril; ili dva R<8>, zajedno sa atomom za koji su vezani, kombinuju se da bi formirali opciono supstituisani C<2-9>heterociklil;
Q je opciono supstituisani C<1-6>alkilen, opciono supstituisani C<2-6>alkenilen, opciono supstituisani C<2-6>alkinilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkilen, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenilen opciono supstituisani C<6-10>arilen, opciono supstituisani C<2-9>heterociklilen, ili opciono supstituisani C<1-9>heteroarilen.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje obogaćeno za atropizomer formule (IA):
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, X je CR<2>.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je formule (II):
1
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje obogaćeno za atropizomer formule (IIA):
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je formule (III):
pri čemu, R<2A>je vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil, opciono supstituisani C<2-6>alkinil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkenil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil C<1-6>alkil, opciono supstituisani C<6-10>aril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril C<1-6>alkil, halogen, -N(R<7>)<2>, -OR<7>, -C(O)N(R<8>)<2>, -SO<2>N(R<8>)<2>, -SO<2>R<7A>, ili -Q-R<7B>.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje obogaćeno atropizomerom je formule (IIIA):
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 ili 7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<2A>je vodonik, opciono supstituisani C<1-6>alkil, ili halogen.
1
9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<3>je:
(a) opciono supstituisani C<1-6>alkil; ili
(b) halogen, opciono pri čemu, halogen je hlor.
10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<4>je:
(a) opciono supstituisani C<1-6>alkil; ili
(b) halogen, opciono pri čemu, halogen je hlor.
11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<2>je:
(a) vodonik; ili
(b) opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono pri čemu, C<1-6>alkil je opciono supstituisani metil ili opciono supstituisani izopropil; ili
(c) halogen.
12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<1>je:
(a) vodonik; ili
(b) halogen; opciono hlor ili brom; ili
(c) opciono supstituisani C<1-6>alkil; opciono pri čemu, opciono supstituisani C<1-6>alkil je opciono supstituisani metil, opciono supstituisani etil, opciono supstituisani izopropil, opciono supstituisani butil; ili
(d) opciono supstituisani C<1-9>heteroaril; opciono pri čemu, opciono supstituisani C<1-9>heteroaril je opciono supstituisani 1,3-tiazolil, opciono supstituisani 1,2-tiazolil, opciono supstituisani 1,3-oksazolil, opciono supstituisani benzo-1,3-tiazolil, opciono supstituisani benzo-1,3-oksazolil, opciono supstituisani indolil, opciono supstituisani benzimidazolil, opciono supstituisani piridil, opciono supstituisani imidazolil, opciono
1
supstituisani pirimidil, opciono supstituisani pirazinil, opciono supstituisani piridazinil, opciono supstituisani pirazolil; ili
(e) opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil; opciono pri čemu, opciono supstituisani C<3-8>cikloalkil je opciono supstituisani ciklopropil, opciono supstituisani ciklobutil, opciono supstituisani ciklopentil, opciono supstituisani cikloheksil; ili
(f) opciono supstituisani C<6-10>aril; opciono pri čemu, opciono supstituisani C<6-10>aril je opciono supstituisani fenil; ili
(g) opciono supstituisani C<2-9>heterociklil; opciono pri čemu, opciono supstituisani C<2-9>heterociklil je opciono supstituisani 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, opciono supstituisani piperidinil, opciono supstituisani morfolinil, opciono supstituisani piperazinil, opciono supstituisani tiomorfolinil, opciono supstituisani oksa-aza-spiro[3,3]heptan, opciono supstituisani oksa-aza-biciklo[3.2.1]oktan; ili
(h) opciono supstituisani cikloalkenil; ili
(i) -Q-R<7B>; opciono pri čemu, Q je opciono supstituisani C<2-6>alkinilen, C<1-6>alkilen, ili C<6-10>arilen;
(j) -Q-R<7B>; opciono pri čemu, R<7B>je opciono supstituisani C<2-9>heterociklil ili opciono supstituisani C<6-10>aril; i/ili
(j) -N(R<7>)<2>; opciono pri čemu, -N(R<7>)<2>je dietilamino;
opciono pri čemu, kada je R<1>opciono supstituisan, supstituent je jedna, dve ili tri grupe nezavisno izabrane iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila, trifluorometila, fluora, hlora, broma, amino, hidroksila, cijano, okso, -C(O)NH<2>, - C(O)NH(Me), -C(O)N(Me)<2>, -(CH<2>)<n>-C(O)OH i -(CH<2>)<n>-C(O)Ot-Bu, pri čemu, n je 0 ili 1.
13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<5>je
(a) vodonik; ili
(b) -N(R<7>), opciono pri čemu, -NR<7>je -NH<2>.
14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<6>je
(a) -C(O)NH(R<8>); opciono pri čemu -C(O)NH(R<8>) je -C(O)NH<2>ili -C(O)NH(Me); ili
1 1
(b) -SO<2>R<7A>, opciono pri čemu, -SO<2>R<7A>je -SO<2>Me.
15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima strukturu:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 15, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, opciono pri čemu je kompozicija izotopski obogaćena deuterijumom.
1 2
RS20260411A 2020-04-01 2021-04-01 N-fenil supstituisani indolni derivati kao inhibitori myt1 za lečenje kancera RS67991B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063003745P 2020-04-01 2020-04-01
EP21780725.4A EP4126879B1 (en) 2020-04-01 2021-04-01 N-phenyl substituted indole derivatives as myt1 inhibitors for the treatment of cancer
PCT/CA2021/050443 WO2021195781A1 (en) 2020-04-01 2021-04-01 Compounds, pharmaceutical compositions, and methods of preparing compounds and of their use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS67991B1 true RS67991B1 (sr) 2026-05-29

Family

ID=77927736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20260411A RS67991B1 (sr) 2020-04-01 2021-04-01 N-fenil supstituisani indolni derivati kao inhibitori myt1 za lečenje kancera

Country Status (25)

Country Link
US (1) US20230151014A1 (sr)
EP (1) EP4126879B1 (sr)
JP (2) JP7714570B2 (sr)
KR (1) KR102995398B1 (sr)
CN (1) CN115916783A (sr)
AU (1) AU2021250744B2 (sr)
BR (1) BR112022019611A2 (sr)
CA (1) CA3177200A1 (sr)
CO (1) CO2022015638A2 (sr)
CR (1) CR20220558A (sr)
DK (1) DK4126879T3 (sr)
EC (1) ECSP22083904A (sr)
ES (1) ES3067113T3 (sr)
FI (1) FI4126879T3 (sr)
HR (1) HRP20260460T1 (sr)
IL (1) IL296934B2 (sr)
LT (1) LT4126879T (sr)
MA (1) MA59217B1 (sr)
MX (1) MX2022012178A (sr)
PL (1) PL4126879T3 (sr)
PT (1) PT4126879T (sr)
RS (1) RS67991B1 (sr)
SI (1) SI4126879T1 (sr)
SM (1) SMT202600173T1 (sr)
WO (1) WO2021195781A1 (sr)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115811976A (zh) * 2020-04-01 2023-03-17 修复治疗公司 使用myt1抑制剂的方法
MX2023003677A (es) * 2020-09-30 2023-06-22 Fl2022 001 Inc Inhibidores de hidroxiesteroide 17beta- deshidrogenasa 13 (hsd17b13) y usos de estos.
US20240207300A1 (en) * 2021-04-07 2024-06-27 Repare Therapeutics Inc. Combination therapies including myt1 inhibitors
US12435090B2 (en) 2021-10-04 2025-10-07 Repare Therapeutics Inc. Compounds, pharmaceutical compositions, and methods of preparing compounds and of their use
US20250145624A1 (en) * 2022-02-18 2025-05-08 Insilico Medicine Ip Limited Membrane-associated tyrosine- and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase (pkmyt1) inhibitors and uses thereof
WO2023155870A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Insilico Medicine Ip Limited Membrane-associated tyrosine-and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase (pkmyt1) inhibitors and uses thereof
US20250197405A1 (en) * 2022-03-15 2025-06-19 Insilico Medicine Ip Limited Heteroaromatic compounds as pkmyt1 inhibitors and use thereof
CN119156388A (zh) * 2022-04-15 2024-12-17 海南先声再明医药股份有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂
US20250304537A1 (en) * 2022-05-18 2025-10-02 Repare Therapeutics Inc. Heteroarenes, pharmaceutical compositions containing the same, and methods of using the same
WO2023249563A1 (en) * 2022-06-23 2023-12-28 Engine Biosciences Pte. Ltd. Compounds and method for pkmyt1 inhibition
EP4556474A1 (en) 2022-07-12 2025-05-21 Wigen Biomedicine Technology (Shanghai) Co., Ltd. Compounds as myt1 inhibitors
CN119731177B (zh) * 2022-08-24 2026-01-30 北京丹擎医药科技有限公司 三环杂环衍生物及其组合物和应用
JPWO2024048687A1 (sr) 2022-08-31 2024-03-07
WO2024061343A1 (zh) * 2022-09-23 2024-03-28 先声再明医药有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂及其应用
WO2024104282A1 (zh) * 2022-11-14 2024-05-23 捷思英达控股有限公司 一种1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
JP2025538617A (ja) * 2022-11-25 2025-11-28 上海齊魯制藥研究中心有限公司 Ｐｋｍｙｔ１阻害剤、製造方法、医薬組成物及びその使用
EP4638449A1 (en) * 2022-12-22 2025-10-29 Repare Therapeutics Inc. Methods of making 2-amino-1-(3-hydroxy-2,6-dimethylphenyl)-5,6- dimethyl-1h-pyrrolo-[2,3-b]pyridine-3-carboxamide, a myt1 inhibitor
CN120641415A (zh) * 2023-01-20 2025-09-12 杭州英创医药科技有限公司 作为pkmyt1抑制剂的化合物
WO2024166131A1 (en) 2023-02-09 2024-08-15 Satyarx Pharma Innovations Private Limited Heteroaryl compounds as pkmyt1 inhibitors
WO2024179948A1 (en) * 2023-02-28 2024-09-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Indazole compounds as pkmyt1 kinase inhibitors
CN121002026A (zh) 2023-04-19 2025-11-21 赛诺菲 吡咯并吡嗪化合物、其制备及其治疗用途
JP2026516824A (ja) 2023-04-28 2026-05-26 サノフイ ピリドイミダゾロン化合物、その調製物及びその治療的使用
WO2024222899A1 (zh) * 2023-04-28 2024-10-31 海南先声再明医药股份有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂及其应用
WO2024252276A1 (en) * 2023-06-05 2024-12-12 Astrazeneca Ab Pyrrolopyrimidine carboxamides
CN121358735A (zh) * 2023-07-04 2026-01-16 杭州领业医药科技有限公司 Rp-6306的晶型及其制备方法和用途
WO2025007784A1 (zh) * 2023-07-06 2025-01-09 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 杂芳环化合物、药物组合物及其制备方法和用途
WO2025040014A1 (zh) * 2023-08-18 2025-02-27 英矽智能科技知识产权有限公司 并环化合物及其制备方法和用途
CN121712774A (zh) * 2023-08-23 2026-03-20 英矽智能科技知识产权有限公司 靶向pkmyt1的双官能化合物和使用方法
EP4777102A1 (en) 2023-09-14 2026-07-22 Debiopharm International SA Combination of a wee1 inhibitor and a pkmyt1 inhibitor
WO2025066504A1 (en) * 2023-09-28 2025-04-03 Laekna Therapeutics Shanghai Co., Ltd. Bicyclic heteroaromatic compounds and their use as pkmyt1 inhibitors
IL327457A (en) * 2023-10-02 2026-05-01 Repare Therapeutics Inc MYT1 inhibitors for the treatment of cancers containing mutations resulting from replication checkpoints
WO2025092773A1 (zh) * 2023-10-31 2025-05-08 微境生物医药科技(上海)有限公司 作为myt1抑制剂的化合物
WO2025119300A1 (zh) * 2023-12-08 2025-06-12 广东东阳光药业股份有限公司 Myt1激酶抑制剂化合物、其药物组合物及其用途
WO2025140592A1 (zh) * 2023-12-29 2025-07-03 华润医药研究院（深圳）有限公司 含氮杂环类化合物及其制备方法和医药用途
KR102981776B1 (ko) 2024-01-17 2026-06-24 성균관대학교산학협력단 회전 장애 이성질체를 포함하는 신규한 n-/2-/3-아릴인돌 유도체 화합물 및 이의 제조 방법
CN120365270A (zh) * 2024-01-23 2025-07-25 杭州中美华东制药有限公司 具有pkmyt1抑制作用的化合物
WO2025169150A1 (en) * 2024-02-09 2025-08-14 Repare Therapeutics Inc. Crystalline forms, crystalline salt forms, compositions containing the same, and methods of using the same
WO2025195505A1 (zh) * 2024-03-22 2025-09-25 海南先声再明医药股份有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂化合物及其应用
WO2025242167A1 (zh) * 2024-05-23 2025-11-27 齐鲁制药有限公司 Pkmyt1抑制剂的多晶型、其制备方法及其应用
WO2026017827A1 (en) * 2024-07-18 2026-01-22 Astrazeneca Ab Carboxamide compounds as pkmyt1 inhibitors
WO2026054021A1 (ja) * 2024-09-05 2026-03-12 中外製薬株式会社 Ｍｙｔ１阻害活性を有する含窒素複素環化合物の結晶
WO2026057598A1 (en) * 2024-09-10 2026-03-19 My-T Bio Limited Therapeutic compounds as pkmyt1 inhibitors and their use
NL2039212B1 (en) 2024-12-02 2026-06-23 Stichting Het Nederlands Kanker Inst Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis Mitotic cell phase enrichment and ionizing radiation
WO2026125935A1 (en) * 2024-12-09 2026-06-18 Repare Therapeutics Inc. Methods of treating cancers having fbxw7 mutations

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000033842A1 (en) * 1998-12-07 2000-06-15 Smithkline Beecham Corporation Myt1 kinase inhibitors
CO5261594A1 (es) * 2000-03-02 2003-03-31 Smithkline Beecham Corp Inhibidores de myt1 cinasa
WO2015073528A1 (en) * 2013-11-12 2015-05-21 Proteostasis Therapeutics, Inc. Proteasome activity enhancing compounds
ES2774177T3 (es) * 2014-09-15 2020-07-17 Plexxikon Inc Compuestos heterocíclicos y usos de estos

Also Published As

Publication number Publication date
SMT202600173T1 (it) 2026-05-12
LT4126879T (lt) 2026-04-27
SI4126879T1 (sl) 2026-06-30
AU2021250744A1 (en) 2022-11-17
HRP20260460T1 (hr) 2026-05-22
IL296934B1 (en) 2026-01-01
CO2022015638A2 (es) 2022-11-18
ES3067113T3 (en) 2026-05-19
FI4126879T3 (fi) 2026-04-01
EP4126879B1 (en) 2026-01-21
KR102995398B1 (ko) 2026-07-27
IL296934B2 (en) 2026-05-01
CR20220558A (es) 2022-12-12
WO2021195781A1 (en) 2021-10-07
MX2022012178A (es) 2022-12-08
CA3177200A1 (en) 2021-10-07
PL4126879T3 (pl) 2026-05-25
AU2021250744B2 (en) 2026-08-13
EP4126879A1 (en) 2023-02-08
JP2025142057A (ja) 2025-09-29
JP7714570B2 (ja) 2025-07-29
ECSP22083904A (es) 2022-11-30
JP2023521633A (ja) 2023-05-25
CN115916783A (zh) 2023-04-04
US20230151014A1 (en) 2023-05-18
KR20230011279A (ko) 2023-01-20
PT4126879T (pt) 2026-04-07
IL296934A (en) 2022-12-01
DK4126879T3 (da) 2026-04-13
BR112022019611A2 (pt) 2022-11-29
EP4126879A4 (en) 2024-04-10
MA59217B1 (fr) 2026-05-26