RU2012125367A - Комбинация термостабильных биокатализаторов для синтеза нуклеозидов - Google Patents

Комбинация термостабильных биокатализаторов для синтеза нуклеозидов Download PDF

Info

Publication number
RU2012125367A
RU2012125367A RU2012125367/10A RU2012125367A RU2012125367A RU 2012125367 A RU2012125367 A RU 2012125367A RU 2012125367/10 A RU2012125367/10 A RU 2012125367/10A RU 2012125367 A RU2012125367 A RU 2012125367A RU 2012125367 A RU2012125367 A RU 2012125367A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
transglycosylation
deoxyribose
phosphorylase
uvase
seq
Prior art date
Application number
RU2012125367/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2569110C2 (ru
Inventor
АРЕВАЛО Рафаэль МОНТИЛЬА
ТОМАС Виктор Мануэль ДЕРОНСЕЛЕ
ГОМЕС Кристина ЛОПЕС
ГИЛАБЕРТ Марта ПАСКУАЛЬ
КОМПАНИ Карлос ЭСТЕВЕС
БОЛИАРТ Хосеп КАСТЕЛЛС
Original Assignee
Пласмия Биотек, С.Л
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пласмия Биотек, С.Л filed Critical Пласмия Биотек, С.Л
Publication of RU2012125367A publication Critical patent/RU2012125367A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2569110C2 publication Critical patent/RU2569110C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10Transferases (2.)
    • C12N9/1048Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1077Pentosyltransferases (2.4.2)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28N-glycosides
    • C12P19/38Nucleosides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y204/00Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/02Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C12Y204/02001Purine-nucleoside phosphorylase (2.4.2.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y204/00Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/02Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C12Y204/02003Uridine phosphorylase (2.4.2.3)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Рекомбинантный экспрессионный вектор, включающий последовательность, кодирующую фосфорилазу пуриновых нуклеозидов (ПНФаза, ЕС 2.4.2.1) одну, или совместно с последовательностью, кодирующей уридинфосфорилазу (УФаза, ЕС 2.4.2.3); при этом каждая из последовательностей функционально связана с одной или более регуляторной последовательностью, которая контролирует продукцию указанной фосфорилазы в подходящем хозяине; при этом указанные последовательности происходят из архей класса Thermoprotei и характеризуются тем, что указанная ПНФаза происходит из Sulfolobus solfataricus (SEQ ID NO 7.), а указанная УФаза происходит из Aeropyrum pernix (SEQ ID NO. 8), а указанный хозяин представляет собой Escherichia coli.2. Рекомбинантный экспрессионный вектор по п.1, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальный штамм BL21 Е.coli.3. Клетка-хозяин Е.coli, которая содержит рекомбинантный экспрессионный вектор по п.1.4. Лизат, полученный посредством лизирования клетки-хозяина по п.3.5. Способ трансгликозилирования между нуклеиновым основанием, которое связано с сахаром, представляющим собой рибозу или дезоксирибозу, через бета-гликозидную связь и нуклеиновым основанием или модифицированным нуклеиновым основанием в присутствии фосфат-ионов, отличающийся тем, что указанный способ включает применение уридинфосфорилазы (УФазы) из Aeropyrum pernix (SEQ ID NO 7.), одной, или совместно с фосфорилазой пуриновых нуклеозидов (ПНФазы) из Sulfolobus solfataricus (SEQ ID NO 8), причем указанные фосфорилазы продуцируются с применением рекомбинантного экспрессионного вектора по п.1 или 2.6. Способ трансгликозилирования по п.5, по которому УФаза из Aeropyrum pernix и ПНФаза из Sulfolobus solfataricus обеспечива

Claims (13)

1. Рекомбинантный экспрессионный вектор, включающий последовательность, кодирующую фосфорилазу пуриновых нуклеозидов (ПНФаза, ЕС 2.4.2.1) одну, или совместно с последовательностью, кодирующей уридинфосфорилазу (УФаза, ЕС 2.4.2.3); при этом каждая из последовательностей функционально связана с одной или более регуляторной последовательностью, которая контролирует продукцию указанной фосфорилазы в подходящем хозяине; при этом указанные последовательности происходят из архей класса Thermoprotei и характеризуются тем, что указанная ПНФаза происходит из Sulfolobus solfataricus (SEQ ID NO 7.), а указанная УФаза происходит из Aeropyrum pernix (SEQ ID NO. 8), а указанный хозяин представляет собой Escherichia coli.
2. Рекомбинантный экспрессионный вектор по п.1, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальный штамм BL21 Е.coli.
3. Клетка-хозяин Е.coli, которая содержит рекомбинантный экспрессионный вектор по п.1.
4. Лизат, полученный посредством лизирования клетки-хозяина по п.3.
5. Способ трансгликозилирования между нуклеиновым основанием, которое связано с сахаром, представляющим собой рибозу или дезоксирибозу, через бета-гликозидную связь и нуклеиновым основанием или модифицированным нуклеиновым основанием в присутствии фосфат-ионов, отличающийся тем, что указанный способ включает применение уридинфосфорилазы (УФазы) из Aeropyrum pernix (SEQ ID NO 7.), одной, или совместно с фосфорилазой пуриновых нуклеозидов (ПНФазы) из Sulfolobus solfataricus (SEQ ID NO 8), причем указанные фосфорилазы продуцируются с применением рекомбинантного экспрессионного вектора по п.1 или 2.
6. Способ трансгликозилирования по п.5, по которому УФаза из Aeropyrum pernix и ПНФаза из Sulfolobus solfataricus обеспечиваются клеткой-хозяином по любому из пп.2-4.
7. Способ трансгликозилирования по п.5, по которому получаемые продукты представляют собой активные фармацевтические ингредиенты (АФИ) или их промежуточные соединения.
8. Способ трансгликозилирования по любому из пп.5-7, по которому указанное нуклеиновое основание, которое связано с сахаром, представляющим собой рибозу или дезоксирибозу, через бета-гликозидную связь, выбран из природных или модифицированных нуклеозидов, содержащих D-рибозу или 2'-дезоксирибозу; нуклеозидов, содержащих остаток рибозы, модифицированный по 2', 3' и/или 5' положению, и нуклеозидов, в которых сахар представляет собой бета-D-арабинозу, альфа-L-ксилозу, 3'-дезоксирибозу, 3',5'-дидезоксирибозу, 2',3'-дидезоксирибозу, 5'-дезоксирибозу, 2',5'-дидезоксирибозу, 2'-амино-2'-дезоксирибозу, 3'-амино-3'-дезоксирибозу или 2'-фтор-2'-дезоксирибозу.
9. Способ трансгликозилирования по любому из пп.5-7, по которому указанное нуклеиновое основание или модифицированное нуклеиновое основание выбрано из природного или замещенного пиримидинового и пуринового основания, пуринового основания, замещенного по одному или более из положений 1, 2, 6; пиримидинового основания, замещенного по одному или более из положений 3, 5, и пурина, 2-азапурина, 8-азапурина, 1-деазапурина (имидазопиридина), 3-деазапурина, 7-деазапурина, 2,6-диаминопурина, 5-фторурацила, 5-трифторметилурацила, транс-зеатина, 2-хлор-6-метиламинопурина, 6-диметиламинопурина, 6-меркаптопурина.
10. Способ трансгликозилирования по любому из пп.5-7, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют при температуре от 60° до 100°С.
11. Способ трансгликозилирования по любому из пп.5-7, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют в водной среде или в системе апротонного полярного сорастворителя.
12. Способ трансгликозилирования по п.11, по которому указанная система апротонного полярного сорастворителя выбрана из диметилсульфоксида, тетрагидрофурана, 2-метилтетрагидрофурана и диметилформамида.
13. Способ трансгликозилирования по любому из пп.5-7, отличающийся тем, что нуклеозид-донор сахара выбран из уридина и 2'-дезоксиуридина, и акцепторное основание выбрано из 2,6-диаминопурина, 5-фторурацила, 5-трифторметилурацила, транс-зеатина, 2-хлор-6-метиламинопурина, 6-диметиламинопурина и 6-меркаптопурина.
RU2012125367/10A 2009-12-22 2010-12-22 Комбинация термостабильных биокатализаторов для синтеза нуклеозидов RU2569110C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09382296.3 2009-12-22
EP09382296A EP2338985A1 (en) 2009-12-22 2009-12-22 Thermostable biocatalyst combination for nucleoside synthesis
PCT/EP2010/070581 WO2011076894A1 (en) 2009-12-22 2010-12-22 Thermostable biocatalyst combination for nucleoside synthesis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012125367A true RU2012125367A (ru) 2014-01-27
RU2569110C2 RU2569110C2 (ru) 2015-11-20

Family

ID=42199129

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012125367/10A RU2569110C2 (ru) 2009-12-22 2010-12-22 Комбинация термостабильных биокатализаторов для синтеза нуклеозидов

Country Status (11)

Country Link
US (2) US8512997B2 (ru)
EP (2) EP2338985A1 (ru)
JP (1) JP5819315B2 (ru)
KR (1) KR101779918B1 (ru)
CN (1) CN102770532A (ru)
BR (1) BR112012015376A2 (ru)
CA (1) CA2785229A1 (ru)
ES (1) ES2582216T3 (ru)
MX (1) MX2012007487A (ru)
RU (1) RU2569110C2 (ru)
WO (1) WO2011076894A1 (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2425997B8 (es) * 2012-04-13 2014-08-11 Universidad Complutense De Madrid Biocatalizador con actividad nucléosido desoxirribosiltransferasa inmovilizado sobre partículas magnéticas de quitosano
EP2711008A1 (en) 2012-09-19 2014-03-26 Institut Univ. de Ciència i Tecnologia, S.A. N6,N6-dimethyladenosine for use in treating or preventing primary and metastatic breast cancer
EP2711009A1 (en) 2012-09-19 2014-03-26 Institut Univ. de Ciència i Tecnologia, S.A. Compounds for use in treating or preventing primary and metastatic breast and prostate cancer
EP2883959A1 (en) 2013-12-13 2015-06-17 Plasmia Biotech, S.L. Enzymatic production of cytosinic nucleoside analogues
JP2016198075A (ja) * 2015-04-14 2016-12-01 プラズミア バイオテック,エス.エル. シトシンヌクレオシドアナログの酵素産生
US20160312261A1 (en) * 2015-04-24 2016-10-27 Plasmia Biotech, S.L. Enzymatic production of cytosinic nucleoside analogues
CN106191172A (zh) * 2015-05-06 2016-12-07 普拉斯米亚生物技术有限公司 胞嘧啶核苷类似物的酶法制备
RU2624023C2 (ru) * 2015-11-06 2017-06-30 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (ИБХ РАН) Способ получения пуриновых нуклеозидов ряда β-D-арабинофуранозы
RU2664472C1 (ru) * 2017-06-01 2018-08-17 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) Гидройодная соль 7-метил-2'-дезоксигуанозина в качестве субстрата для получения 2'-дезоксинуклеозидов методом ферментативного трансгликозилирования
RU2708971C1 (ru) * 2018-08-07 2019-12-12 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) Способ получения соли α-D-рибофуранозо-1-фосфата или α-D-2-дезоксирибофуранозо-1-фосфата
CN113373100A (zh) * 2021-04-20 2021-09-10 河南师范大学 一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用
CN115851855A (zh) 2022-08-24 2023-03-28 凯莱英医药集团(天津)股份有限公司 酶催化合成嘌呤核苷的方法及组合物
CN115896215A (zh) * 2022-10-21 2023-04-04 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 阿糖类核苷一锅法生物合成的方法及组合物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06253854A (ja) 1993-02-26 1994-09-13 Yamasa Shoyu Co Ltd 組換えdna手法によるヌクレオシド・ホスホリラーゼの製造法
RS49561B (sr) * 1993-12-14 2007-04-10 Galenika A.D., Postupak za enzimsku sintezu triazolo nukleozida primenom termofilnih bakterija
IT1304500B1 (it) * 1998-12-23 2001-03-19 Norpharma Spa Ceppi batterici ricombinati per la produzione di nucleosidi naturali edi analoghi modificati.
RU2177998C2 (ru) * 2000-03-03 2002-01-10 Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ УРИДИН-ФОСФОРИЛАЗЫ, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pERURPHO1 И ШТАММ ESCHERICHIA COLI BL 21(ДЕ3)/pERURPHO1 ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
US7488598B2 (en) * 2001-10-26 2009-02-10 Cornell Center For Technology Enterprise And Commercialization Mutant purine nucleoside phosphorylase proteins and cellular delivery thereof
US7037718B2 (en) * 2001-10-26 2006-05-02 Cornell Research Foundation, Inc. Mutant purine nucleoside phosphorylase proteins and cellular delivery thereof
CN101100658B (zh) * 2007-06-08 2010-05-26 中国农业科学院饲料研究所 一种海藻糖合成酶及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP5819315B2 (ja) 2015-11-24
US8512997B2 (en) 2013-08-20
EP2516637A1 (en) 2012-10-31
RU2569110C2 (ru) 2015-11-20
BR112012015376A2 (pt) 2020-09-08
JP2013514797A (ja) 2013-05-02
KR101779918B1 (ko) 2017-09-19
EP2516637B1 (en) 2016-04-20
CA2785229A1 (en) 2011-06-30
US20120264175A1 (en) 2012-10-18
WO2011076894A1 (en) 2011-06-30
CN102770532A (zh) 2012-11-07
EP2338985A1 (en) 2011-06-29
MX2012007487A (es) 2012-11-06
US8759034B2 (en) 2014-06-24
US20130337547A1 (en) 2013-12-19
KR20130027452A (ko) 2013-03-15
ES2582216T3 (es) 2016-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2012125367A (ru) Комбинация термостабильных биокатализаторов для синтеза нуклеозидов
Fresco-Taboada et al. New insights on nucleoside 2′-deoxyribosyltransferases: a versatile biocatalyst for one-pot one-step synthesis of nucleoside analogs
EP2992107B1 (en) Biocatalytic production of nucleoside analogues as active pharmaceutical ingredients
CN117070491B (zh) 嘌呤核苷磷酸化酶突变体及2'-氟代核苷的制备方法
CN115851855A (zh) 酶催化合成嘌呤核苷的方法及组合物
JP4505011B2 (ja) 3’−ホスホアデノシン−5’−ホスホ硫酸の酵素合成法
US7038039B2 (en) Process for selectively producing 1-phosphorylated sugar derivative anomer and process for producing nucleoside
Lewkowicz et al. Whole cell biocatalysts for the preparation of nucleosides and their derivatives
WO2002031176A1 (fr) Procédé permettant la production de nucléosides
EP1179598B1 (en) Process for producing nucleoside compound
Liu et al. A thermostable pyrimidine nucleoside phosphorylase from Brevibacillus borstelensis LK01 for synthesizing halogenated nucleosides
Lewkowicz et al. Enzymatic synthesis of nucleic acid derivatives using whole cells
CN117106744B (zh) 嘧啶核苷磷酸化酶突变体及2'-氟代核苷的制备方法
Ding et al. Enzymatic synthesis of nucleosides by nucleoside phosphorylase co-expressed in Escherichia coli
CN118931997A (zh) 一种三酶级联催化合成腺苷和/或尿苷的方法
JP2004313002A (ja) ヌクレオシドの製造方法
EP1925675B1 (en) Process for production of nucleoside compound
Ge et al. Co-expression of recombinant nucleoside phosphorylase from Escherichia coli and its application
JP4469460B2 (ja) ヌクレオシド化合物の製造方法
Koplūnaitė Chemoenzymatic synthesis of nucleoside 5'-monophosphates
CN121204191A (zh) 一种冷适应性嘌呤核苷磷酸化酶在核苷类化合物生物合成中的应用
KR20160123677A (ko) 시토신 뉴클레오시드 유사체의 효소적 생산
JP2003055392A (ja) 1−リン酸化糖の製造法並びにヌクレオシドの製造法
JP2002345497A (ja) ヌクレオシド化合物の製造方法
JP2002205996A (ja) 1−リン酸化糖誘導体のアノマーの選択的な製造法並びにヌクレオシドの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20150507

FZ9A Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal)

Effective date: 20150526

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20181223