RU2012157307A - Снижение уровня лактата и увеличение продукции полипептида путем ингибирования экспрессии лактатдегидрогеназы и киназы пируватдегидрогеназы - Google Patents

Снижение уровня лактата и увеличение продукции полипептида путем ингибирования экспрессии лактатдегидрогеназы и киназы пируватдегидрогеназы Download PDF

Info

Publication number
RU2012157307A
RU2012157307A RU2012157307/10A RU2012157307A RU2012157307A RU 2012157307 A RU2012157307 A RU 2012157307A RU 2012157307/10 A RU2012157307/10 A RU 2012157307/10A RU 2012157307 A RU2012157307 A RU 2012157307A RU 2012157307 A RU2012157307 A RU 2012157307A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
pdhk
nucleic acid
heterologous nucleic
acid sequence
Prior art date
Application number
RU2012157307/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2614125C2 (ru
Inventor
Мэйся ЧЖОУ
Брэдли Ричард СНЕДЕКОР
Чи Кин Домингос НГ
Эми ШЭНЬ
Original Assignee
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45004831&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2012157307(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Дженентек, Инк. filed Critical Дженентек, Инк.
Publication of RU2012157307A publication Critical patent/RU2012157307A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2614125C2 publication Critical patent/RU2614125C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1068—Template (nucleic acid) mediated chemical library synthesis, e.g. chemical and enzymatical DNA-templated organic molecule synthesis, libraries prepared by non ribosomal polypeptide synthesis [NRPS], DNA/RNA-polymerase mediated polypeptide synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01027—L-Lactate dehydrogenase (1.1.1.27)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • C12Y102/04—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with a disulfide as acceptor (1.2.4)
    • C12Y102/04001—Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring) (1.2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

1. Способ снижения продукции лактата в культивируемых клетках, причем способ содержит культивирование клеток, содержащих последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для лактатдегидрогеназы (LDH), и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для пируватдегидрогеназкиназы (PDHK), где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором.2. Способ по п.1, в котором LDH представляет собой LDHa.3. Способ по п.1, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для второй PDHK, и последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с третьим промотором.4. Способ по п.3, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для третьей PDHK, и последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с четвертым промотором.5. Способ по п.4, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для пятой PDHK, и последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с пятым промотором.6. Способ по какому-либо из п.п.1, 3, 4 и 5, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1, PDHK2, PDHK3 и PDHK

Claims (46)

1. Способ снижения продукции лактата в культивируемых клетках, причем способ содержит культивирование клеток, содержащих последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для лактатдегидрогеназы (LDH), и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для пируватдегидрогеназкиназы (PDHK), где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором.
2. Способ по п.1, в котором LDH представляет собой LDHa.
3. Способ по п.1, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для второй PDHK, и последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с третьим промотором.
4. Способ по п.3, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для третьей PDHK, и последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с четвертым промотором.
5. Способ по п.4, в котором культивируемые клетки дополнительно содержат последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для пятой PDHK, и последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с пятым промотором.
6. Способ по какому-либо из п.п.1, 3, 4 и 5, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1, PDHK2, PDHK3 и PDHK4.
7. Способ по какому-либо из п.п.1, 3 и 4, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1, PDHK2 и PDHK3.
8. Способ по п.1 или 3, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1 и PDHK2.
9. Способ по п.1 или 3, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1 и PDHK3.
10. Способ по п.1 или 3, в котором PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK2 и PDHK3.
11. Способ по п.4, в котором LDH представляет собой LDHa, первая PDHK представляет собой PDHK1, вторая PDHK представляет собой PDHK2 и третья PDHK представляет собой PDHK3.
12. Способ по какому-либо из пп.1, 3, 4 и 5, в котором культивируемые клетки вырабатывают гетерологичный полипептид.
13. Способ по п.12, в котором гетерологичный полипептид представляет собой антитело.
14. Способ по п.4, в котором средняя скорость продукции лактата у культивируемых клеток меньше, чем около 0,02 мг/106 клеток/день со знаком минус.
15. Способ по п.4, в котором культивируемые клетки обладают специфической выработкой по меньшей мере на около 75% выше, чем культивируемые клетки в отсутствие последовательности гетерологичной нуклеиновой кислоты, содержащей PDHK и LDH.
16. Способ по п.4, в котором культивируемые клетки обладают осмолярностью меньше, чем около 300 мОсм.
17. Способ по п.4, в котором культивируемые клетки обладают выработкой полипептида по меньшей мере на около 68% выше, чем культивируемые клетки в отсутствие последовательности гетерологичной нуклеиновой кислоты, содержащей PDHK и LDH.
18. Способ по п.12 или 13, в котором культивируемые клетки представляют собой клетки млекопитающих.
19. Способ сайленсинга или снижения в культивируемой клетке транскрипции лактатдегидрогеназы (LDH) и киназы пируватдегидрогеназы (PDHK), содержащий: введение в клетку вектора, содержащего последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для LDH, и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для PDHK, где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором, и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором, причем siRNA экспрессируются, таким образом, приводя к сайленсингу или снижению транскрипции генов LDH и PDHK.
20. Способ создания клетки, в культуре которой наблюдается сниженная продукция лактата, содержащий введение в клетку вектора, содержащего последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для LDH, и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для PDHK, где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором, и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором.
21. Клетки в культуре, которые обладают средней скоростью продукции лактата меньше, чем около 0,02 мг/106 клеток/день со знаком минус.
22. Клетки в культуре, которые обладают специфической выработкой по меньшей мере на около 75% выше, чем культивируемые клетки в отсутствие одной или нескольких последовательностей гетерологичных нуклеиновых кислот, содержащих одну или несколько PDHK и LDH.
23. Клетки в культуре, которые обладают осмолярностью меньше, чем около 300 мОсм.
24. Клетки в культуре, содержащие последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую первую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для лактатдегидрогеназы (LDH), и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую вторую siRNA, специфичную для киназы пируватдегидрогеназы (PDHK), где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором, и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором.
25. Клетки по п.24, где клетки дополнительно содержат последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для второй PDHK, и последовательность третьей гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с третьим промотором.
26. Клетки по п.25, где клетки дополнительно содержат последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для третьей PDHK, и последовательность четвертой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с четвертым промотором.
27. Клетки по п.26, где клетки дополнительно содержат последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для пятой PDHK, и последовательность пятой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с пятым промотором.
28. Клетки по какому-либо из пп.24, 25, 26 и 27, где PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1, PDHK2, PDHK3 и PDHK4.
29. Клетки по какому-либо из пп.24, 25 и 26, где PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1, PDHK2 и PDHK3.
30. Клетки по п.24 или 25, где PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1 и PDHK2.
31. Клетки по п.24 или 25, где PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK1 и PDHK3.
32. Клетки по п.24 или 25, где PDHK выбирают из группы, состоящей из PDHK2 и PDHK3.
33. Клетки по п.26, где LDH представляет собой LDHa, первая PDHK представляет собой PDHK1, вторая PDHK представляет собой PDHK2 и третья PDHK представляет собой PDHK3.
34. Клетки по п.24, где клетки вырабатывают гетерологичный полипептид.
35. Клетки по п.34, где гетерологичный полипептид представляет собой антитело.
36. Клетки по п.26, клетки обладают средней скоростью продукции лактата меньше, чем около 0,02 мг/106 клеток/день со знаком минус.
37. Клетки по п.26, где клетки обладают специфической выработкой по меньшей мере на около 75% выше, чем клетки в отсутствие последовательности гетерологичной нуклеиновой кислоты, содержащей LDH и PDHK.
38. Клетки по п.26, где клетки обладают осмолярностью меньше, чем около 300 мОсм.
39. Клетки по п.26, где клетки обладают выработкой полипептида по меньшей мере на около 68% выше, чем клетки в отсутствие последовательности гетерологичной нуклеиновой кислоты, содержащей LDH и PDHK.
40. Клетки по п.34 или 35, где клетки представляют собой клетки млекопитающих.
41. Вектор, содержащий последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для лактатдегидрогеназы (LDH), и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую siRNA, специфичную для киназы пируватдегидрогеназы (PDHK), где последовательность первой гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана с первым промотором и последовательность второй гетерологичной нуклеиновой кислоты функционально связана со вторым промотором.
42. Способ снижения продукции лактата в культивируемых клетках, причем способ содержит культивирование клеток, экспрессирующих а) малую интерферирующую РНК (siRNA), специфичную для лактатдегидрогеназы (LDH), и b) siRNA, специфичную для киназы пируватдегидрогеназы (PDHK).
43. Способ по п.42, в котором культивируемые клетки дополнительно экспрессируют siRNA, специфичную для второй PDHK.
44. Способ по п.43, в котором культивируемые клетки дополнительно экспрессируют siRNA, специфичную для третьей PDHK.
45. Способ по п.43, в котором культивируемые клетки дополнительно экспрессируют siRNA, специфичную для четвертой PDHK.
46. Способ по п.44, в котором культивируемые клетки обладают выработкой полипептида по меньшей мере на около 68% выше, чем культивируемые клетки в отсутствие siRNA, специфичных для LDH и PDHK.
RU2012157307A 2010-05-28 2011-05-26 Снижение уровня лактата и увеличение продукции полипептида путем ингибирования экспрессии лактатдегидрогеназы и киназы пируватдегидрогеназы RU2614125C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34972710P 2010-05-28 2010-05-28
US61/349,727 2010-05-28
PCT/US2011/038191 WO2011150241A2 (en) 2010-05-28 2011-05-26 Decreasing lactate level and increasing polypeptide production by downregulating the expression of lactate dehydrogenase and pyruvate dehydrogenase kinase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012157307A true RU2012157307A (ru) 2014-07-10
RU2614125C2 RU2614125C2 (ru) 2017-03-22

Family

ID=45004831

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012157307A RU2614125C2 (ru) 2010-05-28 2011-05-26 Снижение уровня лактата и увеличение продукции полипептида путем ингибирования экспрессии лактатдегидрогеназы и киназы пируватдегидрогеназы

Country Status (15)

Country Link
US (4) US9487809B2 (ru)
EP (1) EP2576580B1 (ru)
JP (3) JP6050226B2 (ru)
KR (3) KR101989762B1 (ru)
CN (1) CN102985437B (ru)
BR (1) BR112012030197A2 (ru)
CA (1) CA2800728C (ru)
DK (1) DK2576580T3 (ru)
ES (1) ES2599412T3 (ru)
HU (1) HUE030820T2 (ru)
MX (3) MX374851B (ru)
PL (1) PL2576580T3 (ru)
RU (1) RU2614125C2 (ru)
SI (1) SI2576580T1 (ru)
WO (1) WO2011150241A2 (ru)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2831860B2 (ja) 1991-03-29 1998-12-02 株式会社東芝 連続ラインの連続式冷却槽温度制御装置
AU2007294731B2 (en) 2006-09-13 2014-04-17 Abbvie Inc. Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
NZ592095A (en) 2008-10-20 2013-01-25 Abbott Lab Isolation and purification of il-12 and tnf-alpha antibodies using protein a affinity chromatography
BRPI0920572A8 (pt) 2008-10-20 2015-10-27 Abbott Lab Inativação viral durante a purificação dos anticorpos
CA2800728C (en) 2010-05-28 2020-10-27 Genentech, Inc. Decreasing lactate level and increasing polypeptide production by downregulating the expression of lactate dehydrogenase and pyruvate dehydrogenase kinase
US9062106B2 (en) 2011-04-27 2015-06-23 Abbvie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
HK1207960A1 (en) 2013-03-12 2016-02-19 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
KR102243980B1 (ko) * 2013-10-11 2021-04-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 대사적으로 최적화된 세포 배양
US11390663B2 (en) 2013-10-11 2022-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Metabolically optimized cell culture
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2015142903A2 (en) * 2014-03-17 2015-09-24 Genentech, Inc. Method of controlling lactate production with piperdine-dione derivatives
AU2015330670B2 (en) 2014-10-10 2022-01-06 Novo Nordisk Health Care Ag Therapeutic inhibition of lactate dehydrogenase and agents therefor
KR102265924B1 (ko) 2014-10-31 2021-06-15 삼성바이오에피스 주식회사 Pdk 불활성화에 의한 폴리펩타이드의 생산
KR101978277B1 (ko) * 2015-02-06 2019-05-14 경북대학교 산학협력단 Pdk2를 이용한 여성 갱년기 질환 예방 또는 치료제의 스크리닝 방법 및 상기 방법으로 스크리닝 된 치료제를 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN105368839A (zh) * 2015-12-22 2016-03-02 中国人民解放军第三军医大学 一种有效抑制小鼠pdk2表达的rna干扰序列及其应用
EP3452080A4 (en) * 2016-05-02 2019-10-09 The Regents of the University of California MAMMALIAN CELLS WITHOUT LACTATE DEHYDROGENASE ACTIVITY
WO2019075419A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING LDHA EXPRESSION
CN107904257B (zh) * 2017-11-22 2021-05-04 上海药明生物技术有限公司 一种增加cho细胞群蛋白表达量的方法
JP2021505662A (ja) * 2017-12-04 2021-02-18 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 疾患を軽減するための細胞外酸化還元酵素系
JP2021519073A (ja) * 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
WO2020260327A1 (en) * 2019-06-26 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Mammalian cell lines with sirt-1 gene knockout
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
US12188060B2 (en) 2020-05-15 2025-01-07 Crispr Therapeutics Ag Messenger RNA encoding Cas9 for use in genome-editing systems
CN119534671A (zh) * 2021-03-08 2025-02-28 江成鸿 组合物在制备诊断婴幼儿血管瘤和/或监测其进展及预后的药物中的应用
CN115948404B (zh) * 2023-02-01 2024-06-04 重庆医科大学 一种抑制环状RNA circPDHK1的siRNA及其用途
EP4574966A1 (en) * 2023-12-18 2025-06-25 Good Meat, Inc. Engineered cell lines for the production of cultivated meat

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US30985A (en) 1860-12-18 Thomas l
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4515893A (en) 1979-04-26 1985-05-07 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3850542T2 (de) 1987-09-23 1994-11-24 Bristol Myers Squibb Co Antikörper-Heterokonjugate zur Töting von HIV-infizierten Zellen.
US5091313A (en) 1988-08-05 1992-02-25 Tanox Biosystems, Inc. Antigenic epitopes of IgE present on B cell but not basophil surface
US5720937A (en) 1988-01-12 1998-02-24 Genentech, Inc. In vivo tumor detection assay
DE68919361T2 (de) 1988-06-21 1995-05-24 Genentech Inc Therapeutische zusammensetzungen für die behandlung von myocard-infarkten.
ATE135397T1 (de) 1988-09-23 1996-03-15 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
ES2096590T3 (es) 1989-06-29 1997-03-16 Medarex Inc Reactivos biespecificos para la terapia del sida.
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1992020373A1 (en) 1991-05-14 1992-11-26 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
ES2193136T3 (es) 1991-08-14 2003-11-01 Genentech Inc Variantes de inmunoglubina para receptores especificos de fc epsilon.
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
AU687755B2 (en) 1992-08-21 1998-03-05 Genentech Inc. Method for treating an LFA-1-mediated disorder
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
ES2108566T3 (es) 1993-12-10 1997-12-16 Genentech Inc Procedimientos para diagnosticar alergias y para seleccionar agentes terapeuticos antialergicos.
WO1995019181A1 (en) 1994-01-18 1995-07-20 Genentech, Inc. A METHOD OF TREATMENT OF PARASITIC INFECTION USING IgE ANTAGONISTS
US5707622A (en) 1994-03-03 1998-01-13 Genentech, Inc. Methods for treating ulcerative colitis
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
JPH11507535A (ja) 1995-06-07 1999-07-06 イムクローン システムズ インコーポレイテッド 腫瘍の成長を抑制する抗体および抗体フラグメント類
CA2242414C (en) 1996-01-23 2012-01-03 Genentech, Inc. Anti-cd18 antibodies for use against stroke
US5726856A (en) 1996-02-28 1998-03-10 General Electric Company Hexasubstituted guanidinium salts and ultracapacitors employing them as electrolytes
US5714388A (en) 1996-08-14 1998-02-03 Bayer Corporation Apparatus and method for detecting chemiluminescent light
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
EP0941344B1 (en) 1996-11-27 2004-05-19 Genentech, Inc. HUMANIZED ANTI-CD11a ANTIBODIES
KR100816621B1 (ko) 1997-04-07 2008-03-24 제넨테크, 인크. 항-ｖｅｇｆ 항체
ES2293682T5 (es) 1997-05-15 2011-11-17 Genentech, Inc. Anticuerpo anti-apo2.
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
AU783250B2 (en) 1999-06-17 2005-10-06 Dartmouth College Autologous adoptive immunotherapy with primed antigen-specific T cells or B cells
CN100340575C (zh) 1999-06-25 2007-10-03 杰南技术公司 人源化抗ErbB2抗体及其在制备药物中的应用
ES2309012T3 (es) 1999-10-29 2008-12-16 Genentech, Inc. Composiciones del anticuerpo anti-psca y a sus procedimientos contra celulas cancerigenas que expresen psca.
AU2001275897A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-21 Immunex Corporation Improvement of cell culture performance
IL159756A0 (en) * 2001-07-12 2004-06-20 Univ Massachusetts IN VIVO PRODUCTION OF SMALL INTERFERING RNAs THAT MEDIATE GENE SILENCING
US20090215860A1 (en) 2004-06-17 2009-08-27 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for regulating gene transcription
US20090209618A1 (en) * 2004-10-08 2009-08-20 Dang Chi V Pyruvate dehydrogenase kinases as therapeutic targets for cancer and ischemic diseases
KR101577839B1 (ko) 2007-08-07 2015-12-15 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이종 단백질의 제조 방법
US20090325287A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-31 Haimanti Dorai Methods for Obtaining High Viable Cell Density in Mammalian Cell Culture
AU2009290563A1 (en) * 2008-09-15 2010-03-18 Genentech, Inc. Compositions and methods for regulating cell osmolarity
CA2800728C (en) 2010-05-28 2020-10-27 Genentech, Inc. Decreasing lactate level and increasing polypeptide production by downregulating the expression of lactate dehydrogenase and pyruvate dehydrogenase kinase
US9813410B2 (en) 2014-06-26 2017-11-07 Rakuten, Inc. Information processing apparatus, information processing method, and information processing program

Also Published As

Publication number Publication date
ES2599412T3 (es) 2017-02-01
BR112012030197A2 (pt) 2015-09-29
CN102985437B (zh) 2016-05-25
JP2018138030A (ja) 2018-09-06
US10011856B2 (en) 2018-07-03
KR101989762B1 (ko) 2019-06-14
CN102985437A (zh) 2013-03-20
JP6325060B2 (ja) 2018-05-16
US9487809B2 (en) 2016-11-08
MX2012013579A (es) 2013-01-24
MX343604B (es) 2016-11-11
DK2576580T3 (en) 2016-10-17
JP2013531978A (ja) 2013-08-15
US20130084605A1 (en) 2013-04-04
WO2011150241A8 (en) 2012-12-06
KR20180069130A (ko) 2018-06-22
EP2576580A4 (en) 2014-07-02
PL2576580T3 (pl) 2017-03-31
CA2800728C (en) 2020-10-27
WO2011150241A2 (en) 2011-12-01
WO2011150241A3 (en) 2012-03-08
MX2020009460A (es) 2020-11-06
JP6050226B2 (ja) 2016-12-21
CA2800728A1 (en) 2011-12-01
KR20190067277A (ko) 2019-06-14
US20170191102A1 (en) 2017-07-06
KR101869987B1 (ko) 2018-07-20
JP6706642B2 (ja) 2020-06-10
SI2576580T1 (sl) 2016-12-30
US20200377919A1 (en) 2020-12-03
KR20130077843A (ko) 2013-07-09
US20190040435A1 (en) 2019-02-07
HUE030820T2 (en) 2017-06-28
EP2576580B1 (en) 2016-09-14
EP2576580A2 (en) 2013-04-10
JP2017074052A (ja) 2017-04-20
MX374851B (es) 2025-03-06
US10704071B2 (en) 2020-07-07
US11046987B2 (en) 2021-06-29
RU2614125C2 (ru) 2017-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2012157307A (ru) Снижение уровня лактата и увеличение продукции полипептида путем ингибирования экспрессии лактатдегидрогеназы и киназы пируватдегидрогеназы
JP2013531978A5 (ru)
Fang et al. Genome-scale target identification in Escherichia coli for high-titer production of free fatty acids
Beer et al. Engineering algae for biohydrogen and biofuel production
Portnoy et al. Adaptive laboratory evolution—harnessing the power of biology for metabolic engineering
Jin et al. Engineering biofuel tolerance in non-native producing microorganisms
IN2014CN04590A (ru)
Liang et al. Two-stage cultivation of Dunaliella tertiolecta with glycerol and triethylamine for lipid accumulation: a viable way to alleviate the inhibitory effect of triethylamine on biomass
AU2015227693B2 (en) Method for preparing triacylglycerol high-productivity algae
MY166543A (en) A microorganism for methionine production with enhanced glucose import
JP2010110331A5 (ru)
RU2014128987A (ru) Быстрый способ клонирования и экспрессии сегментов гена родственной вариабельной области антитела
US20190359988A1 (en) Genetically optimised microorganism for producing molecules of interest
Rasala et al. Genetic engineering to improve algal biofuels production
Duan et al. Bioengineered non-coding RNA agent (BERA) in action
Higashi et al. Involvement of microRNA in copper deficiency-induced repression of chloroplastic CuZn-superoxide dismutase genes in the moss Physcomitrella patens
Lee et al. Cost-effective production of bioplastic polyhydroxybutyrate via introducing heterogeneous constitutive promoter and elevating acetyl-Coenzyme A pool of rapidly growing cyanobacteria
Garavaglia et al. Stable platform for mevalonate bioproduction from CO2
US10669541B2 (en) Means and methods for the generation of mammalian producer cells for the production of recombinant proteins
CN108018287A (zh) 一种抑制山羊卵泡颗粒细胞增殖的特异siRNA及方法
Srivastava et al. Engineering photosynthetic microbes for sustainable bioenergy production
Armshaw et al. Optimisation of ethanol production in Synechocystis PCC 6803, the DEMA approach
US20140272949A1 (en) Methods for Fully Segregating Recombinant Marine Cyanobacteria
CN120966739B (zh) 一种增强子RNA分子MZGAe1及其应用
CN110564743A (zh) 一种六盘山黄牛circR-UQCC1基因及其过表达载体、构建方法和应用