RU2058788C1 - Способ получения препарата инсулина для перорального применения - Google Patents
Способ получения препарата инсулина для перорального применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2058788C1 RU2058788C1 SU5000106A RU2058788C1 RU 2058788 C1 RU2058788 C1 RU 2058788C1 SU 5000106 A SU5000106 A SU 5000106A RU 2058788 C1 RU2058788 C1 RU 2058788C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- insulin
- preparation
- glutaraldehyde
- drug
- binding agent
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 90
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims abstract description 45
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 29
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims abstract description 10
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N toluene 2,4-diisocyanate Chemical compound CC1=CC=C(N=C=O)C=C1N=C=O DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 2
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 4
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 abstract 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 229940125395 oral insulin Drugs 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 3
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 208000007241 Experimental Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 206010049287 Lipodystrophy acquired Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 244000247617 Teramnus labialis var. labialis Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- NABCNSQIAUKDCR-UHFFFAOYSA-N [[4-(4-diazonioimino-2-sulfocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)-3-sulfocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]hydrazinylidene]azanide Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1S(O)(=O)=O NABCNSQIAUKDCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 208000006132 lipodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Использование: для лечения сахарного диабета, а также при других видах патологии, сопровождающихся гипергликемией или характеризующихся повышенным распадом белка и сниженным его синтезом. Сущность изобретения: проводят одноэтапную инкубацию инсулина с эритроцитами, взятыми в соотношении 1 - 4: 100, в присутствии связующего агента в конечной концентрации 0,15 - 0,25 %. В качестве связующего агента используют n-бензохинон, водорастворимые карбодиамиды, 2,4 - диизоцианататтолуол, 4,4-дифтор-2,2′-динитродифенилсульфон, N,N′-бисдиазобензидин-2,2′-дисульфокислоту, бромистый циан, хлористый цианур или глутаровый диальдегид. Положительный эффект: изобретение обеспечивает получение препарата с содержанием в нем инсулина 1000 ед/1 г сухой массы, т. е. в 1 г сухого препарата содержится 40 мг инсулина с активностью 25 ед/мг. Препарат полностью сохраняет свою активность при пероральном введении. В лиофилизованном виде препарат может храниться в течение нескольких лет. 4 з. п. ф-лы, 4 табл.
Description
Изобретение относится к способам получения перорального препарата инсулина, используемым в медицине, в частности в фармакологии и эндокринологии.
До настоящего времени лечение больных сахарным диабетом (инсулинозависимых) осуществляется путем регулярных подкожных инъекций (у наиболее тяжелых больных до 4 раз в сутки). На протяжении многих лет предпринимались неоднократные попытки по созданию перорального инсулина.
Преимущества перорального инсулина по сравнению с инъекционными коммерческими формами очевидны, поскольку длительные ежедневные инъекции могут вызывать различные серьезные осложнения: сопровождаются болевыми синдромами; приводят к развитию липодистрофии, представляющих не только косметический дефект, но и вызывающий потребность в увеличении доз гормона; травмируют психику, особенно у детей; вызывают стрессовые состояния, приводящие к еще более выраженной гипергликемии, что, в свою очередь, увеличивает потребность в гормоне и т.д.
Кроме того, проблема создания препарата инсулина для перорального применения заключается в необходимости защиты его от разрушающего действия протеолитическими ферментами желудочно-кишечного тракта таким образом, чтобы инсулин в конечном итоге поступал в системную циркуляцию в биоактивной форме.
Известен препарат инсулина перорального назначения, представляющий собой водно-масляную микроэмульсию, состоящую из инсулина, липидов и протеазного ингибитора. Микроэмульсия покрывается затем карбоксиметилцеллюлозой.
Существенным недостатком этого препарата, наряду с трудоемкой и дорогостоящей технологией изготовления, является использование носителя карбоксиметилцеллюлозы, которая подвержена воздействию микробов, особенно в условиях промышленного производства. Кроме того, целлюлоза способна сорбировать значительные количества белка, который необходимо отмывать буфером с высокой ионной силой. Проведение такой процедуры в больших масштабах является дорогостоящим и может приводить к значительной инактивации инсулина.
Задача изобретения получение препарата инсулина, устойчивого к действию протеолитических ферментов в желудочно-кишеч- ном тракте и обладающего выраженным гипогликемическим эффектом при пероральном применении.
Согласно изобретению способ осуществляют путем инкубации инсулина с эритроцитами, взятых в соотношении 1-4:100 в присутствии используемого для иммобилизации ферментов многофункционального связующего агента, в конечной концентрации 0,15-0,25%
При этом обычно в качестве носителя используются эритроциты, выделенные из крови крупного рогатого скота, свиней или крови человека.
При этом обычно в качестве носителя используются эритроциты, выделенные из крови крупного рогатого скота, свиней или крови человека.
Преимущество эритроцитов по сравнению с другими носителями заключается в том, что они, являясь составной частью организма, не могут вызвать никаких нежелательных побочных явлений у пациентов.
Наряду с этим можно было предположить, что инсулин, связанный с эритроцитами, будет в меньшей степени подвержен протеолитической деградации, подобно тому как инсулин, связанный с белками крови, более устойчив к протеолитическому распаду. Однако эритроциты, связавшиеся с инсулином, не могут полностью защитить его от разрушения в желудочно-кишечном тракте без дополнительной защиты от протеолитического распада в желудочно-кишечном тракте. Для этих целей необходим подбор подходящего покрытия инсулинового препарата.
Для связывания эритроцита с инсулином применяются известные многофункциональные реагенты, обычно используемые для иммобилизации ферментов (Michael D.TREVAN "Immobilized Enzymes", М. Мир, 1983, с. 16-20), например n-бензохинон, водорастворимые карбодиамиды, 2,4-диизоцианаттолуол, 4,4-дифтор-2,2'-динитродифенилсульфон, N, N'-бисдиазобензи- дин-2,2'-дисульфокислота, бромистый циан, хлористый цианур или глутаровый диальдегид.
Наиболее предпочтительными являются бромистый циан, хлористый цианур и глутаровый диальдегид, так как они обеспечивают высокую биологическую эффективность готового препарата за счет обеспечения прочной связи инсулина с эритроцитами. В результате такого связывания инсулина с носителем препарат делается более устойчивым к действию протеолитических ферментов. Однако наиболее приемлемым из вышеуказанных трех связующих агентов является глутаровый диальдегид, как наименее токсичное соединение, хотя активность препарата инсулина, полученного с помощью глутарового диальдегида, была аналогична таковой препарата, содержащего в качестве связующего агента хлористый цианур.
Способ осуществляют следующим образом.
Эритроциты, выделенные из свежей крови кролика или крупного рогатого скота или людей путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 мин при 4оС и отмытые дважды 4-кратными объемами 0,15 М раствора хлористого натрия, инкубируют с 1%-ным раствором кристаллического инсулина в фосфатном буфере (рН 6,8) в присутствии одного из многофункциональных связующих агентов, например глутарового диальдегида в конечной концентрации 0,15-0,25% при комнатной температуре в течение 2 ч при медленном качании инкубационной смеси. Затем суспензию отмывают от несвязавшегося инсулина и глутарового диальдегида 10 раз 10-кратными объемами 0,15 М раствора хлористого натрия центрифугированием при 2000 об/мин в течение 2 мин. После удаления последней порции хлористого натрия к осадку добавляют 1%-ный раствор желатина, тщательно размешивают, инкубируют при комнатной температуре 10 мин и лиофильно высушивают. Перед использованием препарат эмульгируют в воде.
П р и м е р 1. Получение препарата иммобилизованного инсулина и определение его активности. Используют кристаллический инсулин с активностью 25 ед/мг. Эритроциты выделяют из свежей крови кролика (с использованием в качестве антикоагулянта 1/10 объема 3,8% цитрата натрия) путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 мин при 4оС. Эритроциты затем отмывают 2 раза четырехкратными объемами 0,15 М раствора хлористого натрия. К 10 мл взвеси эритроцитов добавляют 10 мл 0,1 М раствора фосфатного буфера (рН 6,8), содержащего 0,15 М раствор хлористого натрия, 10 мл 1%-ного раствора кристаллического инсулина и 10 мл 1%-ного раствора глутарового диальдегида или хлористого цианура и инкубируют при комнатной температуре 2 ч при медленном качании инкубационной смеси. Затем суспензию отмывают от несвязавшегося инсулина и глутарового диальдегида 10 раз 10-кратным объемами 0,15 М раствора хлористого натрия центрифугированием при 2000 об/мин в течение 2 мин. После удаления последней порции хлористого натрия к осадку добавляют 1%-ный раствор желатина, тщательно размешивают, инкубируют 10 мин при комнатной температуре и лиофильно высушивают. Препарат представляет собой порошок бурого цвета. Перед использованием препарат эмульгируют в воде. В полученном препарате содержание активного начала инсулина составляет 40 мг на 1 г.
П р и м е р 2. Получение препарата иммобилизованного инсулина как в примере 1, за исключением того, что к инкубационной смеси добавляли 5,3 мл 1%-ного глутарового диальдегида (конечная концентрация 0,15%), или 3,3 мл 1% -ного глутарового диальдегида (конечная концентрация 0,1%) или 13,1 мл 1%-ного глутарового диальдегида (конечная концентрация 0,3%). Эритроциты выделяли из свежей крови рогатого скота. Сопоставление активности препарата, полученного с использованием глутарового диальдегида в конечной концентрации 0,15% (Препарат-0,15) и 0,25 (Препарат-0,25) показало, что оба препарата не отличаются по активности (табл.1). В то же время более низкие концентрации глутарового диальдегида (Препарат-0,10) приводили к снижению активности препарата, а использование более высоких концентраций (Препарат-0,30) не повышали активности препарата (табл.1).
Активность препарата (содержание в нем инсулина) определяют методом биологического тестирования по судорожному эффекту на мышах. Судорожный эффект и снижение глюкозы в крови ниже 1,65 мМ/л (что соответствует 0,05 ед. стандартного раствора инсулина) наблюдали при подкожном введении мышам минимальной дозы 0,05 мг препарата, что соответствует содержанию в ней инсулина 1000 ед/1 г сухой массы. Таким образом, в 1 г сухого препарата содержится 40 мг инсулина с активностью 25 ед./мг, т.е. соотношение инсулина и эритроцитов в препарате равно 1:25.
Испытание препарата, хранимого в виде водной эмульсии при 4оС в течение 4 недель показало, что он полностью сохраняет свою активность при пероральном введении. В лиофилизованном виде препарат может храниться в течение нескольких лет.
П р и м е р 3. Испытание препарата (согласно изобретению) на крысах с экспериментальным диабетом, вызванным стрептозотоцином. Крысам-самцам вводили внутрибрюшинно стрептозотоцин из расчета 120 мг/мг массы животного. Стрептозотоцин растворяли в цитратном буфере, рН 4,5 непосредственно перед введением. Через 48 ч животным через зонд вводили препараты инсулина, иммобилизован- ного с помощью глутарового диальдегида (ИНСглут) и помощью хлористого цианура (ИНСциан) из расчета по 15-20 ед. инсулина в препарате (на одно животное), приготовленном по примеру 1, и через 3 ч у животных определяли в крови содержание глюкозы. Контролем служили животные с стрептозотоциновым диабетом, не получавшие препаратов. Данные приведены в табл.2.
Как видно из данных табл.2, у животных со стрептозотоциновым диабетом через 3 ч после введения препаратов инсулина ИНСглут и ИНСциан уровень глюкозы в крови снижался в среднем на 62% и 57% соответственно по сравнению в диабетическими животными, не получавшими препаратов.
П р и м е р 4. Испытание препарата иммобилизованного инсулина для достижения гипогликемического эффекта на диабетических мышах при пероральном введении. Препарат, полученный по примеру 1, вводят животным (взрослым самцам массой 20 г) через зонд в объеме 0,2 мл. Животные получают 2,0-2,5 ед. инсулина в препарате. Содержание глюкозы в крови определяют глюкозооксидазным методом. Результаты приведены в табл.3.
Из приведенных данных видно, что препарат согласно изобретению при введении мышам снижает уровень глюкозы в крови в среднем на 52% по сравнению с животными не получавшими препарата.
П р и м е р 5. Испытание препарата инсулина (ИНСглут) на диабетических крысах через 3 и 6 ч после введения препарата инсулина. Крысам-самцам массой 150-180 г вводили через зонд в пищевод препарат инсулина из расчета 10-15 ед. и через 3-6 ч после введения препарата определяли уровень глюкозы. Контролем служили крысы, не получавшие препарата. Данные приведены в табл.4.
Как видно из данных табл.4, у крыс, получавших препарат инсулина через 3 и 6 ч, происходит значительное снижение уровня глюкозы в крови, составляющее 48% и 47% соответственно к исходному уровню, в то время как у животных, не получавших препарат инсулина, уровень глюкозы в крови в исследуемом интервале времени не меняется.
Согласно изобретению препарат инсулина может быть успешно использован не только при лечении сахарного диабета, но также при других видах патологии, сопровождающихся гипергликемией (обширные хирургические раны, термические повреждения, септические состояния, геморрагический шок, анестезия и др.), а также при патологических состояниях, характеризующихся повышенным распадом белка и сниженным его синтезом (различные стадии ожоговой болезни, нефропатии и т.д.).
Препарат в ходе изготовления или в готовом виде может быть обработан желатином, кератином или каким-либо другим инертным соединением, а перед употреблением суспендироваться в воде. Препарат может быть также изготовлен в виде таблеток, защищенных каким-либо инертным по отношению к препарату соединением, а также применяться в виде суспензии, сохраняющейся при +4оС не менее одного месяца.
Claims (4)
1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ИНСУЛИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ, отличающийся тем, что одномоментно проводят инкубацию инсулина с эритроцитами в соотношении 1 4 10 в присутствии связующего агента в конечной концентрации 0,15 0,25
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве связующего агента используют п-бензохинон, водорастворимый карбодиамид, 2,4-диизоцианататтолуол, 4,4-дифтор-2,2'-динитродифенилсульфон, N, N'-бисдиазобензидин-2,2'-дисульфокислоту, бромистый циан, хлористый цианур или глутаровый диальдегид.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве связующего агента используют п-бензохинон, водорастворимый карбодиамид, 2,4-диизоцианататтолуол, 4,4-дифтор-2,2'-динитродифенилсульфон, N, N'-бисдиазобензидин-2,2'-дисульфокислоту, бромистый циан, хлористый цианур или глутаровый диальдегид.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве связующего агента используют бромистый циан, хлористый цианур или глутаровый диальдегид.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что в качестве связующего агента используют глутаровый диальдегид.
5. Способ по пп. 1 4, отличающийся тем, что в качестве эритроцитов используют эритроциты крови крупного рогатого скота, свиней или человека.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5000106 RU2058788C1 (ru) | 1991-07-26 | 1991-07-26 | Способ получения препарата инсулина для перорального применения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5000106 RU2058788C1 (ru) | 1991-07-26 | 1991-07-26 | Способ получения препарата инсулина для перорального применения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2058788C1 true RU2058788C1 (ru) | 1996-04-27 |
Family
ID=21584549
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5000106 RU2058788C1 (ru) | 1991-07-26 | 1991-07-26 | Способ получения препарата инсулина для перорального применения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2058788C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1243275A4 (en) * | 1999-11-30 | 2003-05-28 | Oao Quantum Satis | INSULIN-CONTAINING MEDICINE FOR PERSONAL USE AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION |
| RU2659383C2 (ru) * | 2015-10-20 | 2018-06-29 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Биоактивный гидрогель для регенерации кожи |
-
1991
- 1991-07-26 RU SU5000106 patent/RU2058788C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Y.W.Cho, M. Flynm, Lancet, 1989, 30, р. 1518. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1243275A4 (en) * | 1999-11-30 | 2003-05-28 | Oao Quantum Satis | INSULIN-CONTAINING MEDICINE FOR PERSONAL USE AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION |
| US6770276B1 (en) | 1999-11-30 | 2004-08-03 | Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo “Quantum Satis” | Insulin-containing medicament for peroral application and method for the production thereof |
| RU2659383C2 (ru) * | 2015-10-20 | 2018-06-29 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Биоактивный гидрогель для регенерации кожи |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3835811B2 (ja) | ホスファターゼ又はその誘導体を含む製薬学的組成物 | |
| Taylor et al. | Protamine is an inhibitor of angiogenesis | |
| JP2960947B2 (ja) | 脂質分解酵素阻害剤 | |
| Cheng et al. | Physiological factors regulating secretion of neurophysin | |
| RU2170084C1 (ru) | Способ получения таблеток днк | |
| US20040146565A1 (en) | First lipoprotein fraction and therapeutic compositions of same | |
| RU2066551C1 (ru) | Способ получения инсулинсодержащих полимерных гидрогелей | |
| Barrett et al. | The pharmacology of hydrochlorothiazide (Esidrix™), a new, orally effective sulfonamide diuretic | |
| JPS6353970B2 (ru) | ||
| WO2008033058A2 (en) | Method for producing insulin in the form of an oral preparation | |
| CA1223202A (en) | Fibronectin-physiologically active substance complex and method of preparation thereof | |
| JPH10511974A (ja) | リソチーム二量体の新しい応用 | |
| US4837017A (en) | Urease antigen product and process | |
| Grossman | The physiology of secretin | |
| EP0978289A1 (en) | Virucide drug containing iodine | |
| RU2076733C1 (ru) | Способ получения производных инсулина | |
| RU2250106C1 (ru) | Способ получения олигосахаридов хитозана (варианты) | |
| US5436004A (en) | Administration of cholesterol reductase to humans | |
| RU2155602C1 (ru) | Инсулинсодержащее лекарственное средство для перорального применения и способ его получения | |
| RU2217158C1 (ru) | Способ профилактики и лечения язв желудка у животных | |
| Hughes et al. | Influence of ultra-violet light on young laying hens | |
| JPH11222437A (ja) | カキ由来粉末を含むｎｉｄｄｍ治療用の医薬組成物および健康食品 | |
| Kyle et al. | Evaluation of tryptophan mustard (NSC-62403) in patients with plasmacytic myeloma | |
| US4534966A (en) | Composition for treating infectious diseases, gout or arteriosclerosis containing human pepsin and/or human leukocyte pepsin-like enzyme and method for using same | |
| JP4695629B2 (ja) | 難消化剤 |