RU2264458C1 - Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations - Google Patents
Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2264458C1 RU2264458C1 RU2004101590/13A RU2004101590A RU2264458C1 RU 2264458 C1 RU2264458 C1 RU 2264458C1 RU 2004101590/13 A RU2004101590/13 A RU 2004101590/13A RU 2004101590 A RU2004101590 A RU 2004101590A RU 2264458 C1 RU2264458 C1 RU 2264458C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rotavirus
- strain
- cattle
- arriah
- antigenic
- Prior art date
Links
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 title claims abstract description 77
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims description 71
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 30
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 19
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002356 single layer Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 abstract 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 244000309466 calf Species 0.000 description 20
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 18
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 18
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 18
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 17
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 13
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 7
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 5
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 5
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 4
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 2
- 101100508406 Caenorhabditis elegans ifa-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007661 gastrointestinal function Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUBFWTUFPGFHOJ-UHFFFAOYSA-N 2-nitrofuran Chemical class [O-][N+](=O)C1=CC=CO1 FUBFWTUFPGFHOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100150099 Caenorhabditis elegans spk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- -1 freon Chemical compound 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств диагностики, специфической профилактики и лечения ротавирусной инфекции крупного рогатого скота (КРС).The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and can be used in the development and manufacture of diagnostic tools, specific prophylaxis and treatment of rotavirus infection in cattle (cattle).
Ротавирусная инфекция КРС (ротавирусный энтерит, диарея неонатальных телят) - остропротекающая контагиозная болезнь новорожденных телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта.Rotavirus infection of cattle (rotavirus enteritis, diarrhea of neonatal calves) is an acute flowing contagious disease of newborn calves, characterized by damage to the gastrointestinal tract.
Болезнь широко распространена во всех странах мира и наносит большой экономический ущерб промышленному животноводству за счет высокого уровня заболеваемости телят (50-78%), смертности до 25-53% в результате диареи, потери массы животных и снижения сопротивляемости другим инфекциям.The disease is widespread in all countries of the world and causes great economic damage to industrial livestock due to the high incidence of calves (50-78%), mortality up to 25-53% due to diarrhea, weight loss of animals and reduced resistance to other infections.
Чрезвычайно широкое распространение возбудителя заболевания, его приспособленность к паразитированию в организме некоторых видов животных, тенденция вызывать длительную персистенцию, антигенная полиморфность и относительная устойчивость к воздействию разнообразных факторов обусловливают энзоотическое течение болезни в хозяйствах с неблагополучными условиями содержания животных.The extremely wide spread of the causative agent of the disease, its adaptability to parasitism in the body of certain animal species, the tendency to cause long-term persistence, antigenic polymorphism, and relative resistance to various factors determine the enzootic course of the disease in farms with poor living conditions for animals.
Стационарность болезни поддерживается за счет длительной персистенции возбудителя в организме животных-реконвалесцентов.The stationarity of the disease is maintained due to the prolonged persistence of the pathogen in the body of animals-convalescents.
Важные условия успешной борьбы с этим заболеванием - своевременная и правильная его диагностика, проведение мер специфической профилактики, что в свою очередь предполагает получение в достаточном количестве активного вирусного антигена.Important conditions for the successful fight against this disease are timely and correct diagnosis, the implementation of specific preventive measures, which in turn implies the receipt of a sufficient amount of active viral antigen.
Для специфической профилактики ротавирусного энтерита применяют живые и инактивированные вакцины, которыми прививают глубокостельных коров. При этом практическое значение для профилактики ротавирусной диареи новорожденных телят имеет колостральный иммунитет, обусловленный поступлением с молозивом в организм новорожденных телят специфических антител, нейтрализующих возбудитель в просвете тонкого кишечника, а также иммунокомпетентных клеток и других протективных факторов.For specific prophylaxis of rotavirus enteritis, live and inactivated vaccines are used, which are used to vaccinate deep-shelled cows. In this case, colostral immunity due to the intake of specific antibodies that neutralize the pathogen in the lumen of the small intestine, as well as immunocompetent cells and other protective factors with colostrum, is of practical importance for the prevention of rotavirus diarrhea in newborn calves.
Ротавирусы КРС характеризуются значительным антигенным полиморфизмом и нестабильностью антигенной структуры. Сложная структура генома ротавируса, в том числе его фрагментарность, обусловливают постоянную возможность модификации антигенной структуры. Ротавирусы нейтрализуются гомологичными сыворотками в более высоких титрах, чем гетерологичными. При выборе производственного штамма с помощью реакции нейтрализации (РН) результаты, полученные при исследовании сыворотки с гетерологичными штаммами, более важны, чем результаты нейтрализации ротавируса гомологичными сыворотками.Cattle rotaviruses are characterized by significant antigenic polymorphism and instability of the antigenic structure. The complex structure of the rotavirus genome, including its fragmentation, makes it possible to constantly modify the antigenic structure. Rotaviruses are neutralized by homologous sera at higher titers than heterologous. When choosing a production strain using the neutralization reaction (PH), the results obtained in the study of serum with heterologous strains are more important than the results of neutralizing rotavirus with homologous serums.
Одним из основных требований, предъявляемых к производственным штаммам, является соответствие их антигенных свойств эпизоотическим штаммам возбудителя. Производственный штамм должен обладать широким антигенным спектром и доминировать над эпизоотическими. Возбудитель должен быть хорошо адаптированным к системе культивирования и обладать высокой антигенностью. Вакцины, изготовленные из таких штаммов, должны защищать животных против нескольких отличающихся штаммов возбудителя заболевания (1).One of the main requirements for production strains is the correspondence of their antigenic properties to epizootic strains of the pathogen. The production strain should have a wide antigenic spectrum and dominate epizootic. The causative agent must be well adapted to the cultivation system and have high antigenicity. Vaccines made from such strains should protect animals against several different strains of the pathogen (1).
Известен штамм Nebraska (Nebraska calf diarrheal virus, NCDV, он же Линкольн) ротавируса КРС, выделенный в 1969 году от теленка с диареей в США и используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (2-14).The known strain Nebraska (Nebraska calf diarrheal virus, NCDV, aka Lincoln) of cattle rotavirus isolated in 1969 from a calf with diarrhea in the United States and used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (2-14).
Известен штамм "Тиверваль" ротавируса КРС для изготовления диагностических препаратов (15, 16, 17).The Tiverval strain of cattle rotavirus is known for the manufacture of diagnostic drugs (15, 16, 17).
Известен штамм 81/36F ротавируса КРС для изготовления вакцинных препаратов (18).The known strain 81 / 36F of rotavirus cattle for the manufacture of vaccine preparations (18).
Известен штамм SA-11 ротавируса обезьян для изготовления вакцинных препаратов (19).A monkey strain SA-11 of rotavirus monkeys for the manufacture of vaccine preparations is known (19).
Известны также штаммы G6 Р5 и G10 Р11 ротавируса КРС для изготовления вакцинных препаратов (20).Also known are strains G6 P5 and G10 P11 of rotavirus cattle for the manufacture of vaccine preparations (20).
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм Nebraska, он же NCDV, он же Линкольн, ротавируса КРС для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (2-14).The closest to the proposed invention in terms of essential features is the Nebraska strain, aka NCDV, aka Lincoln, cattle rotavirus for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (2-14).
Недостатки штамма-прототипа состоят в его антигенных отличиях от эпизоотических изолятов ротавируса КРС, выделенных на территории России и Государств СНГ в различные временные промежутки.The disadvantages of the prototype strain are its antigenic differences from the epizootic isolates of bovine rotavirus isolated in Russia and the CIS countries at different time intervals.
В связи с этим актуальной остается проблема поиска новых штаммов ротавируса для производства высокочувствительных и специфичных средств диагностики, высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных средств профилактики и лечения заболевания.In this regard, the problem of searching for new rotavirus strains for the production of highly sensitive and specific diagnostic agents, highly immunogenic, harmless and areactogenic agents for the prevention and treatment of the disease remains relevant.
Является доказанным, что при выборе производственных штаммов возбудителя необходимо учитывать доминантность.It is proven that when choosing production strains of the pathogen, dominance must be taken into account.
Доминантность - это способность определенного штамма возбудителя, используемого для изготовления вакцины, создавать защиту против нескольких отличающихся вариантов того же возбудителя.Dominance is the ability of a particular strain of the pathogen used to make the vaccine to create protection against several different variants of the same pathogen.
В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового производственного штамма ротавируса КРС, обладающего высокой биологической, антигенной, иммуногенной активностью и широким антигенным спектром, что позволяет ему доминировать над эпизоотическими штаммами.The objective of the present invention was to obtain a new production strain of cattle rotavirus with high biological, antigenic, immunogenic activity and a wide antigenic spectrum, which allows it to dominate epizootic strains.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении биологической, антигенной и иммуногенной активности и стабильности штамма при инактивации в процессе изготовления биопрепаратов и доминантности над эпизоотическими штаммами, а также расширении арсенала производственных штаммов ротавируса КРС.The technical result from the use of the present invention is to increase the biological, antigenic and immunogenic activity and stability of the strain during inactivation during the manufacture of biological products and dominance over epizootic strains, as well as expanding the arsenal of production strains of rotavirus cattle.
Указанный технический результат достигнут получением штамма №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС. Штамм №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС является новым, ранее неизвестным.The specified technical result was achieved by obtaining strain No. 101 ARRIAH of cattle rotavirus. Strain No. 101 ARRIAH of cattle rotavirus is new, previously unknown.
Исходный ротавирус для получения штамма №101 ВНИИЗЖ выделен из фекалий новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта.The initial rotavirus to obtain strain No. 101 ARRIAH isolated from the feces of a newborn calf with impaired gastrointestinal function.
Производственный штамм №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС получен путем адаптации к перевиваемой культуре клеток почек теленка MDBK.Production strain No. 101 ARRIAH of bovine rotavirus was obtained by adaptation to transplanted MDBK calf kidney cell culture.
Полученный штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) МСХ РФ 12 марта 2001 под регистрационным №101 ВНИИЗЖ-ДЕП.The resulting strain was deposited in the All-Russian state collection of strains of microorganisms used in veterinary medicine and animal husbandry, the All-Russian State Research Institute of Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines (VGNKI) Ministry of Agriculture of the Russian Federation on March 12, 2001 under registration number 101 VNIIZZH-DEP.
По сравнению с прототипом штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, а также доминирует над эпизоотическими изолятами.Compared with the prototype strain No. 101 ARRIAH-DEPT of rotavirus cattle has a higher biological, antigenic and immunogenic activity, and also dominates epizootic isolates.
Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления средств диагностики, специфической профилактики и лечения ротавирусной инфекции КРС.The possibility of its use for the manufacture of diagnostic tools, specific prophylaxis and treatment of cattle rotavirus infection has been experimentally confirmed.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС характеризуется следующими признаками и свойствами.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus is characterized by the following features and properties.
Морфологические свойстваMorphological properties
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС относится к семейству Reoviridae, роду Rotavirus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ротавирусной инфекции КРС: сферическая форма диаметром 65-75 нм, имеющая вид "колеса". Вирион состоит из сердцевины, внутреннего и наружного капсида. Сердцевина диаметром 40-45 нм имеет гексагональную форму и состоит из 3-х белков (VP1, VP2 и VP3) и РНК. Внутренний капсид (диаметр 15-20 нм) имеет икосаэдрическую форму и построен из 260 морфологических единиц, каждая из которых представлена белком VP6. Наружный капсид представлен белком VP7. На поверхности наружного капсида расположены "шипики", представленные димером белка VP4.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus belongs to the Reoviridae family, the genus Rotavirus and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of rotavirus cattle infection: a spherical shape with a diameter of 65-75 nm, having the form of a "wheel". The virion consists of a core, inner and outer capsid. The core with a diameter of 40-45 nm has a hexagonal shape and consists of 3 proteins (VP1, VP2 and VP3) and RNA. The internal capsid (diameter 15–20 nm) has an icosahedral shape and is composed of 260 morphological units, each of which is represented by VP6 protein. The outer capsid is represented by VP7 protein. On the surface of the outer capsid are "spines" represented by the VP4 protein dimer.
Антигенные свойстваAntigenic properties
Антиген ротавируса КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП индуцирует в организме иммунизированных морских свинок и кроликов образование вирусспецифических антител, выявляемых в реакции диффузионной преципитации (РДП) в разведениях от 1:32 до 1:128 и от 1:32 до 1:256 соответственно. В иммуноферментном анализе (ИФА) сыворотки положительно реагировали в разведении от 1:128 до 1:2048, в реакции связывания комплемента (РСК) - от 1:40 до 1:160.The cattle rotavirus antigen of strain No. 101 ARRIAH-DEPT induces the formation of virus-specific antibodies in the body of immunized guinea pigs and rabbits detected in the diffusion precipitation reaction (RDP) in dilutions from 1:32 to 1: 128 and from 1:32 to 1: 256, respectively. In an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), serums reacted positively at a dilution of 1: 128 to 1: 2048, and in the complement binding reaction (CSC), from 1:40 to 1: 160.
В сыворотках крови глубокостельных коров через 10 дней после второй вакцинации антитела к ротавирусу в ИФА выявляли в титрах 8,5-10,5 log2 и 10,6-14,0 log2 в молозиве. Скармливание такого молозива обеспечивает высокий уровень колостральных антител (7,0-8,5 log2) в организме телят.In the blood serum of deep-shelled cows, 10 days after the second vaccination, antibodies to rotavirus in ELISA were detected in titers of 8.5-10.5 log 2 and 10.6-14.0 log 2 in colostrum. Feeding such colostrum provides a high level of colostral antibodies (7.0-8.5 log 2 ) in the body of calves.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП обладает широким антигенным спектром и доминантностью. Средний показатель двустороннего антигенного родства (R%) предлагаемого штамма в РН с 12 эталонными и эпизоотическими штаммами ротавируса КРС составил 56,3%. Результаты исследований представлены в таблице 1.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT has a wide antigenic spectrum and dominance. The average rate of bilateral antigenic relationship (R%) of the proposed strain in the pH with 12 reference and epizootic strains of rotavirus cattle was 56.3%. The research results are presented in table 1.
Как свидетельствуют данные таблицы 1, штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП доминирует над изученными возбудителями ротавирусной инфекции КРС.As shown by the data in table 1, strain No. 101 ARRIAH-DEPT dominates the studied causative agents of rotavirus infection of cattle.
Биотехнологическая характеристикаBiotechnological characteristic
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС предназначен для изготовления инактивированных вакцин против ротавирусной инфекции КРС, диагностических антигенов и сывороток, а также лечебных препаратов антител, из желтков яиц кур, иммунизированных вирусом КРС.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus is intended for the manufacture of inactivated vaccines against rotavirus infection of cattle, diagnostic antigens and sera, as well as therapeutic preparations of antibodies from the yolks of chicken eggs immunized with cattle virus.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации, обладает широким антигенным спектром и доминантностью по отношению к полевым штаммам.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus exhibits high biological, antigenic and immunogenic activity both in its native form and after inactivation, has a wide antigenic spectrum and dominance in relation to field strains.
Вирус штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП репродуцируется в монослойных перевиваемых культурах клеток MDBK, СПЭВ, ПСГК-30, Vero, Marc-145, KCT и в течение 24-48 часов инкубирования накапливается в титрах 5,5-7,5 Ig ТЦД50/см3. Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в культурах клеток.Virus strain No. 101 ARRIAH-DEPT is reproduced in monolayer transplantable cell cultures of MDBK, SPEV, PSGK-30, Vero, Marc-145, KCT and accumulates in titers 5.5-7.5 Ig TCD 50 / 24–48 hours of incubation cm 3 . Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus retains its original biological properties when passaged in cell cultures.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС устойчив к хлороформу, фреону, эфиру, кислой (рН≥4,0) и щелочной среде (рН 8,0). Возбудитель устойчив к воздействию трипсина.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus is resistant to chloroform, freon, ether, acidic (pH≥4.0) and alkaline medium (pH 8.0). The causative agent is resistant to trypsin.
Инактивированный ротавирус КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП устойчив в процессе хранения при 4°С как в нативном состоянии, так и в составе инактивированной сорбированной вакцины.Inactivated cattle rotavirus strain No. 101 ARRIAH-DEPT is stable during storage at 4 ° C both in the native state and as part of an inactivated sorbed vaccine.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Антигенная активность - обладает антигенностью в составе инактивированной вакцины и препарата для гипериммунизации доноров диагностических сывороток и антительных лечебных препаратов.Antigenic activity - has antigenicity in the composition of an inactivated vaccine and drug for hyperimmunization of donors of diagnostic sera and antibody therapeutic drugs.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Стабильность - сохраняет исходные биологические (антигенные) свойства при пассировании в культурах клеток в течение 20 пассажей.Stability - retains the original biological (antigenic) properties when passaged in cell cultures for 20 passages.
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным штаммом.Based on the data obtained, it can be argued that strain No. 101 ARRIAH-DEPT for antigenic and immunological spectra is an original, taxonomically new, previously unknown strain.
Использование диагностикумов, вакцины и препарата антител из желтков яиц кур, гипериммунизированных ротавирусом КРС, обеспечивает высокую эффективность мер борьбы с ротавирусной инфекцией КРС.The use of diagnosticums, a vaccine and an antibody preparation from the yolks of chicken eggs hyperimmunized with cattle rotavirus ensures high efficiency of measures to combat cattle rotavirus infection.
По мнению заявителя, предлагаемый штамм соответствует условиям патентоспособности "новизна" и "изобретательский уровень".According to the applicant, the proposed strain meets the conditions of patentability "novelty" and "inventive step".
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования.The essence of the invention is illustrated by examples of its use.
Пример 1Example 1
Получение штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС в культуре клеток MDVKObtaining strain No. 101 ARRIAH-DEPT of rotavirus cattle in cell culture MDVK
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса крупного рогатого скота был изолирован из пробы фекалий от новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта. При изоляции возбудителя был использован комплекс вирусологических методов, изложенных в "Руководстве по индикации возбудителей особо опасных болезней сельскохозяйственных животных в объектах ветнадзора", утвержденном ГУВ ГАПК СССР 15 марта 1990 г.Strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus was isolated from a feces sample from a newborn calf with impaired gastrointestinal function. When isolating the pathogen, a set of virological methods was used, described in the Guide to the Indication of Pathogens of Particularly Dangerous Diseases of Farm Animals in Veterinary Surveillance Facilities, approved by the GUV GAPK of the USSR on March 15, 1990.
С этой целью суспензию фекалий пропускали через фильтр ФПП-15-1,5. Сорбированный ротавирус элюировали смесью, состоящей из равных частей хлороформа и раствора Хенкса. Объем элюата составлял 1/100-1/200 объема суспензии фекалий. В очищенный элюат добавляли антибиотики, выдерживали при 37°С 2-4 часа. К суспензии добавляли трипсин до концентрации 15-20 мкг/см3 и термостатировали при 37°С в течение 30 минут. Перед заражением культуру клеток MDBK дважды отмывали от ростовой сыворотки раствором Хенкса. После заражения в культуру клеток MDBK вносили поддерживающую питательную среду, содержащую трипсин в концентрации 10-15 мкг/см3. Сосуды инкубировали при 37°С до появления изменений в клетках. Полученную вируссодержащую суспензию замораживали - оттаивали и использовали для последующих пассажей. После 9 пассажей в культуре клеток MDBK штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС обладал следующими характеристиками: титр инфекционности 7,5-8,0 lg ТЦД50/см3, активность в ИФА 7,0-8,5 log2.For this purpose, a feces suspension was passed through an FPP-15-1.5 filter. Sorbed rotavirus was eluted with a mixture consisting of equal parts of chloroform and Hanks solution. The volume of the eluate was 1 / 100-1 / 200 of the volume of the feces suspension. Antibiotics were added to the purified eluate, kept at 37 ° C for 2-4 hours. Trypsin was added to the suspension to a concentration of 15-20 μg / cm 3 and thermostated at 37 ° C for 30 minutes. Before infection, the MDBK cell culture was washed twice with growth serum from Hanks solution. After infection, a supporting nutrient medium containing trypsin at a concentration of 10-15 μg / cm 3 was added to the MDBK cell culture. The vessels were incubated at 37 ° C until changes in the cells appeared. The resulting virus-containing suspension was frozen - thawed and used for subsequent passages. After 9 passages in the MDBK cell culture, strain No. 101 ARRIAH-DEP of cattle rotavirus had the following characteristics: infectivity titer 7.5-8.0 lg TCD 50 / cm 3 , ELISA activity 7.0-8.5 log 2 .
Пример 2Example 2
Изучение адаптационных свойств штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРСThe study of the adaptive properties of strain No. 101 ARRIAH-DEPT of rotavirus cattle
Применение трипсина для предобработки штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС перед заражением, а также в процессе его репродукции, позволило значительно расширить круг чувствительных к нему перевиваемых культур клеток, в том числе и гетерологичных. Заражение культур клеток проводили 9 пассажем штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС (в MDBK). Результаты приведены в таблице 2.The use of trypsin for the pretreatment of strain No. 101 ARRIAH-DEP of cattle rotavirus before infection, as well as in the process of its reproduction, significantly expanded the range of transplantable cell cultures sensitive to it, including heterologous ones. Infection of cell cultures was carried out by the 9th passage of strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus (in MDBK). The results are shown in table 2.
Пример 3Example 3
Получение и испытание диагностических антигенов и сыворотокObtaining and testing diagnostic antigens and sera
Для получения антигена из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС исходную вируссодержащую суспензию трижды замораживают-оттаивают. После этого вируссодержащую жидкость осветляют низкоскоростным центрифугированием в течение 20-30 минут. Для получения диагностического антигена используют ротавирус, репродуцированный в культуре клеток СПЭВ, а антигена для иммунизации - в культуре клеток MDBK.To obtain antigen from strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus, the initial virus-containing suspension is thrice frozen and thawed. After that, the virus-containing liquid is clarified by low-speed centrifugation for 20-30 minutes. To obtain a diagnostic antigen, rotavirus is used, reproduced in SPEV cell culture, and antigen for immunization is used in MDBK cell culture.
Инактивацию вируса проводят 6%-ным рабочим раствором аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) в конечной концентрации 0,15% при 37°С в течение 24 часов.Inactivation of the virus is carried out with a 6% working solution of aminoethylethyleneimine (AEEI) at a final concentration of 0.15% at 37 ° C for 24 hours.
Концентрирование антигена проводят добавлением в суспензию инактивированного вируса 50%-ного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м 6000 до конечной концентрации 8-10% по сухому веществу. Смесь выдерживают в течение 16-18 часов при 4°С до формирования осадка. Осадок отделяют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 30-40 минут и ресуспендируют в растворе Хенкса, составляющем 1/100-1/300 от первоначального объема суспензии. Полученный препарат проверяют на активность и специфичность в РДП и в ИФА. Результаты исследований приведены в таблице 3.Antigen concentration is carried out by adding to the suspension of inactivated virus a 50% solution of polyethylene glycol (PEG) mm 6000 to a final concentration of 8-10% on a dry matter basis. The mixture was incubated for 16-18 hours at 4 ° C until a precipitate formed. The precipitate was separated by centrifugation at 5000 rpm for 30-40 minutes and resuspended in a Hanks solution of 1 / 100-1 / 300 of the initial volume of the suspension. The resulting preparation is checked for activity and specificity in RDP and ELISA. The research results are shown in table 3.
Гипериммунизацию доноров проводят эмульсией, изготовленной смешиванием инактивированного антигена и минерального или синтетического масла с соответствующим эмульгатором.Hyperimmunization of donors is carried out by an emulsion made by mixing inactivated antigen and mineral or synthetic oil with an appropriate emulsifier.
Морским свинкам живой массой 0,4-0,5 кг эмульсию антигена вводят 3 раза через 21 и 28 дней после первой инокуляции внутримышечно в дозе 1,0 см3.Guinea pigs with a live weight of 0.4-0.5 kg an antigen emulsion is administered 3 times 21 and 28 days after the first inoculation intramuscularly at a dose of 1.0 cm 3 .
Через 10-15 дней после окончания гипериммунизации морских свинок обескровливают. Результаты исследования полученных сывороток представлены в таблице 4.10-15 days after the end of hyperimmunization, guinea pigs are bled. The results of the study of the obtained sera are presented in table 4.
Кроликам живой массой 2,0-3,0 кг эмульсию антигена вводят три раза: в мякиши задних конечностей, в подколенные лимфоузлы и внутримышечно. Весь цикл иммунизации составляет 30-38 дней.For rabbits with a live weight of 2.0-3.0 kg, an antigen emulsion is administered three times: in the crumbs of the hind limbs, in the popliteal lymph nodes and intramuscularly. The entire immunization cycle is 30-38 days.
Приведенные в таблицах 3, 4 и 5 данные характеризуют высокую антигенную активность штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС, а полученные способом, описанным в примере 3, диагностические антигены и сыворотки позволяют диагностировать болезни желудочно-кишечного тракта новорожденных телят.The data presented in tables 3, 4 and 5 characterize the high antigenic activity of strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus, and diagnostic antigens and serum obtained by the method described in example 3 can diagnose diseases of the gastrointestinal tract of newborn calves.
Пример 4Example 4
Изготовление вакциныVaccine manufacture
Для получения сорбированной инактивированной вакцины против ротавирусной инфекции КРС вирусную суспензию из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП, хранившуюся при минус 20°С, размораживают и подогревают до 37°С. К суспензии добавляют трипсин до концентрации 15-20 мкг/см3 и термостатируют при 37°С в течение 30 минут. Перед заражением культуру с качественным монослоем дважды отмывают от ростовой сыворотки раствором Хенкса. В культуральные сосуды вносят вирус, обработанный трипсином. Доза заражения должна составлять 0,1-1,0 ИЕ/клетку. После заражения в культуру клеток вносят поддерживающую питательную среду, содержащую трипсин в концентрации 10-15 мкг/см3. Сосуды инкубируют при 37°С до появления ЦПД вируса более чем в 90% клеток монослоя (24-48 часов). Полученную вируссодержащую суспензию замораживают-оттаивают. Охлажденную суспензию осветляют. Инактивацию вирусной суспензии проводят АЭЭИ в конечной концентрации 0,15% при 37°С в течение 24 часов. Инактивированный вирус проверяется на стерильность и авирулентность. К инактивированной суспензии добавляют стерильный 3%-ный коллоидный раствор гидроокиси алюминия (ГОА). В качестве адъюванта используют сапонин из расчета 2,0 мг на дозу вакцины.To obtain a sorbed inactivated vaccine against rotavirus infection of cattle, the viral suspension from strain No. 101 ARRIAH-DEPT, stored at minus 20 ° C, is thawed and heated to 37 ° C. Trypsin was added to the suspension to a concentration of 15-20 μg / cm 3 and thermostated at 37 ° C for 30 minutes. Before infection, a culture with a high-quality monolayer is washed twice from growth serum with Hanks solution. Trypsin-treated virus is introduced into the culture vessels. The dose of infection should be 0.1-1.0 IE / cell. After infection, a supportive culture medium containing trypsin at a concentration of 10-15 μg / cm 3 is introduced into the cell culture. Vessels are incubated at 37 ° C until the appearance of the virus CPP in more than 90% of the monolayer cells (24-48 hours). The resulting virus-containing suspension is frozen-thawed. The cooled suspension is clarified. Inactivation of the viral suspension is carried out by AEEI in a final concentration of 0.15% at 37 ° C for 24 hours. Inactivated virus is tested for sterility and avirulence. A sterile 3% colloidal solution of aluminum hydroxide (GOA) is added to the inactivated suspension. As adjuvant use saponin at the rate of 2.0 mg per dose of the vaccine.
Полученный препарат контролируют на стерильность, безвредность и антигенную активность.The resulting preparation is monitored for sterility, safety and antigenic activity.
В таблицах 6-10 приведены результаты испытаний антигенной активности полученной вакцины на морских свинках, кроликах и глубокостельных коровах, свидетельствующие о высокой эффективности препарата.Tables 6-10 show the test results of the antigenic activity of the obtained vaccine in guinea pigs, rabbits and deep-shelled cows, indicating the high efficiency of the drug.
Применение вакцины с такой характеристикой позволяет профилактировать ротавирусную инфекцию КРС и предотвращать заболевание и гибель новорожденных телят. Эффективность вакцинации составляет 95,5%.The use of a vaccine with this characteristic allows the prevention of rotavirus infection of cattle and the prevention of disease and death of newborn calves. The vaccination efficiency is 95.5%.
Пример 5Example 5
Получение и испытание препаратов антител из желтков яиц кур, иммунизированных антигеном ротавируса КРС, штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕПObtaining and testing of antibody preparations from the yolks of chicken eggs immunized with cattle rotavirus antigen, strain No. 101 ARRIAH-DEP
Получение антигена. Для иммунизации кур используют производственный штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса крупного рогатого скота, выделенный от больных телят. Вирус выращивают в перевиваемой культуре клеток MDBK в среде Игла, содержащей 10-15 мкг/см3 трипсина. Для концентрирования используют ротавирус с титром не ниже 7,0 lg ТЦД50/см3. Вируссодержащую суспензию осветляют низкоскоростным центрифугированием и обрабатывают ПЭГ м.м. 6000 до конечной концентрации 8-10% по сухому веществу. Активность антигена определяют в иммуноферментном анализе.Antigen production. For immunization of chickens using production strain No. 101 ARRIAH-DEPT rotavirus cattle isolated from sick calves. The virus is grown in a transplanted MDBK cell culture in an Eagle medium containing 10-15 μg / cm 3 trypsin. For concentration use rotavirus with a titer of at least 7.0 lg TCD 50 / cm 3 . The virus-containing suspension is clarified by low-speed centrifugation and treated with PEG m.m. 6000 to a final concentration of 8-10% on a dry matter basis. Antigen activity is determined in an enzyme immunoassay.
Определение активности антигена в ИФА. Лунки панели (фирмы "Nunc") сенсибилизируют специфическими иммуноглобулинами в рабочем разведении в 0,015 М карбонатном буфере (18 ч, 4°С). Отмывку панели после этой и последующих стадий проводят 0,85%-ным физраствором, содержащим 0,05% Твин-20. Для блокирования оставшихся свободными сорбционных центров используют 1% раствор БСА на ФБР или 10% раствор фетальной сыворотки КРС (1 ч, 37°С). После промывки в лунки панели вносят исследуемые пробы антигена ротавируса в разведениях, а также положительные и отрицательные контроли (1-2 ч, 37°С). На следующем этапе добавляют антиротавирусный пероксидазный конъюгат (Москва, ВИЭВ) в рабочем разведении (1 ч, при 37°С). В качестве субстрата используют ортофенилендиамин (0,4 мг/см3 ОФД в цитратно-фосфатном буфере, рН 4,9-5,0 и 0,006% Н2O2). Учет реакции проводят через 10-15 мин визуально или спектрофотометрически (λ=490 нм). Для иммунизации кур используют антиген с активностью в ИФА в разведении не менее 1:1000-3000.Determination of antigen activity in ELISA. The wells of the panel (Nunc company) are sensitized with specific immunoglobulins in working dilution in 0.015 M carbonate buffer (18 h, 4 ° С). Panel washing after this and subsequent stages is carried out with 0.85% saline solution containing 0.05% Tween-20. To block the remaining free sorption centers, 1% BSA solution on the FBI or 10% solution of fetal bovine serum (1 h, 37 ° C) is used. After washing, the test samples of rotavirus antigen in dilutions, as well as positive and negative controls (1-2 hours, 37 ° C) are introduced into the panel wells. At the next stage, the antirotavirus peroxidase conjugate (Moscow, VIEV) is added in working dilution (1 h, at 37 ° C). Orthophenylenediamine (0.4 mg / cm 3 OFP in citrate-phosphate buffer, pH 4.9-5.0 and 0.006% H 2 O 2 ) is used as a substrate. Accounting for the reaction is carried out after 10-15 minutes visually or spectrophotometrically (λ = 490 nm). To immunize chickens, an antigen with an activity in ELISA in a dilution of at least 1: 1000-3000 is used.
30 голов 20-22-недельных кур-несушек породы белый леггорн дважды иммунизируют (с интервалом в 4 недели) внутримышечно в области шеи антигеном ротавируса, эмульгированным в масляном адъюванте Montanide ISA-70. Иммунный ответ кур на введение антигена контролируют по наличию вирусспецифических антител в сыворотке крови и желтках яиц в РДП и ИФА. Пробы крови отбирают до иммунизации кур и через 7, 14 и 21 день после каждой иммунизации. Сыворотки крови хранят при - 20°С.30 heads of 20-22-week-old white leggorn laying hens are immunized twice (with an interval of 4 weeks) intramuscularly in the neck with the rotavirus antigen emulsified in Montanide ISA-70 oil adjuvant. The chickens' immune response to antigen administration is monitored by the presence of virus-specific antibodies in the blood serum and egg yolks in RDP and ELISA. Blood samples are taken before immunization of chickens and 7, 14 and 21 days after each immunization. Blood serum is stored at -20 ° C.
Яйца от иммунизированных кур собирают ежедневно. Выделение глобулинов из желтков куриных яиц проводят следующим образом: желтки отделяют от белков, суспендируют в фосфатном буфере (0,01 М ФБР, рН 7,4, содержащий 0,1M NaCl), добавляют ПЭГ м.м. 6000 до конечной концентрации 3,5% и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 60 мин. К надосадочной жидкости добавляют ПЭГ м.м. 6000 до концентрации 12% и центрифугируют в том же режиме. Осадок (lgY) очищают переосаждением 12% ПЭГ м.м. 6000. Образцы глобулинов хранят при -20°С.Eggs from immunized chickens are harvested daily. Isolation of globulins from yolks of chicken eggs is carried out as follows: yolks are separated from proteins, suspended in phosphate buffer (0.01 M PBS, pH 7.4, containing 0.1 M NaCl), PEG m.m. 6000 to a final concentration of 3.5% and centrifuged at 6000 rpm for 60 minutes. PEG m.m. is added to the supernatant. 6000 to a concentration of 12% and centrifuged in the same mode. The precipitate (logY) was purified by reprecipitation of 12% PEG m.m. 6000. Samples of globulins stored at -20 ° C.
Исследование сывороток кур (глобулинов) в ИФА. Сенсибилизацию планшетов проводят антигеном ротавируса в рабочем разведении в 0,015 М Na-карбонатном буфере (18 ч, 4°С). После промывки панели в лунки вносят по 0,2 см3 контрольных (положительной и отрицательной) и исследуемых сывороток (глобулинов) в разведении 1:25 (1:45) и титруют их последовательно двукратным шагом. После инкубации (2 ч, при 37°С) вносят препарат меченных пероксидазой иммуноглобулинов козы против lgG курицы (Москва, НИИ им. Гамалеи), затем субстрат ОФД.The study of chicken sera (globulins) in ELISA. Sensitization of the plates is carried out with rotavirus antigen in working dilution in 0.015 M Na-carbonate buffer (18 h, 4 ° C). After washing the panels, 0.2 cm 3 of control (positive and negative) and test sera (globulins) in a 1:25 (1:45) dilution are added to the wells and titrated sequentially with a double step. After incubation (2 h, at 37 ° C), a preparation of goat-labeled goat immunoglobulins against chicken IgG is introduced (Moscow, Gamalei Research Institute), then the RPD substrate.
Исследование сывороток кур (глобулинов) в РДП. Расплавленный на водяной бане агар ("Difco") разливают по 25 см3 в чашки Петри с диаметром 9 см или на стеклянные пластинки размером 9×4 см. В застывшей агаровой пластинке штампами делают лунки по шестиугольной системе, в которой одна лунка расположена в центре, а шесть - вокруг. Диаметр каждой лунки 5 мм, расстояние между ними 5 мм. В центральную лунку вносят антиген, а в каждую пару периферических лунок - разведения сывороток (с 1:4 до 1:128) или глобулинов (с 1:32 до 1:1024). После постановки реакции агаровые пластинки выдерживают во влажной камере при 37°С. Реакцию учитывают через 16, 24, 48 и 72 ч после ее постановки. За предельный титр антител считают максимальное разведение испытуемой сыворотки (глобулина), с которым наблюдается положительная реакция. Результаты исследований представлены в таблице 11.The study of chicken sera (globulins) in the RDP. Agar melted in a water bath (Difco) is poured 25 cm 3 into 9 cm diameter Petri dishes or onto 9 × 4 cm glass plates. In a frozen agar plate, the holes are stamped according to the hexagonal system, in which one hole is located in the center and six are around. The diameter of each well is 5 mm, the distance between them is 5 mm. Antigen is introduced into the central hole, and dilutions of sera (from 1: 4 to 1: 128) or globulins (from 1:32 to 1: 1024) are added to each pair of peripheral wells. After the reaction, the agar plates are kept in a humid chamber at 37 ° C. The reaction is taken into account 16, 24, 48 and 72 hours after its formulation. For the maximum titer of antibodies, the maximum dilution of the test serum (globulin), with which a positive reaction is observed, is considered. The research results are presented in table 11.
В желтках яиц кур антитела к ротавирусу КРС были обнаружены через 2 недели после первой иммунизации с титрами 2 log2 в РДП, 3-4 log2 в ИФА. После второй иммунизации уровень антител увеличивается до 4,0 log2 (РДП) и 6,0 log2 (ИФА). В последующие 4 недели титры антител повышаются и достигают 6,0-7,0 log2 и 10,0 log2 соответственно. Максимальное количество специфических антител было выявлено через 14 недель после второй иммунизации в титре 12,85 log2 в ИФА. Высокий уровень антител наблюдали на протяжении 7 месяцев. В течение последующих 2 месяцев происходило плавное снижение количества ротавирусных антител до 6,5 log2 в ИФА.Antibodies to cattle rotavirus were detected in the yolks of chicken eggs 2 weeks after the first immunization with titers of 2 log 2 in RDP, 3-4 log 2 in ELISA. After the second immunization, the level of antibodies increases to 4.0 log 2 (RDP) and 6.0 log 2 (ELISA). In the next 4 weeks, antibody titers increase and reach 6.0-7.0 log 2 and 10.0 log 2, respectively. The maximum number of specific antibodies was detected 14 weeks after the second immunization in the titer of 12.85 log 2 in ELISA. High antibody levels were observed for 7 months. Over the next 2 months there was a gradual decrease in the number of rotavirus antibodies to 6.5 log 2 in ELISA.
В сыворотках крови иммунизированных кур антитела к ротавирусу КРС были выявлены на 14 день после второй иммунизации в титрах: 5,0-6,0 log2 в РДП и 9,65 log2 в ИФА.In the blood serum of immunized chickens, antibodies to cattle rotavirus were detected on the 14th day after the second immunization in titers: 5.0-6.0 log 2 in RDP and 9.65 log 2 in ELISA.
Полученные данные свидетельствуют о том, что в желтках яиц кур антитела к ротавирусу КРС появляются в более ранний период (через 2 недели после первой иммунизации), чем в крови иммунизированных кур-несушек. Титры антител в желтках яиц выше и сохраняют высокий уровень на протяжении длительного периода после иммунизации. Наряду с этим выделенные из желтков иммуноглобулины обладают высокой специфичностью.The data obtained indicate that antibodies to cattle rotavirus appear in the yolks of chicken eggs at an earlier period (2 weeks after the first immunization) than in the blood of immunized laying hens. Antibody titers in egg yolks are higher and remain high for a long period after immunization. Along with this, immunoglobulins isolated from yolks have high specificity.
На основании этого была изучена возможность использования желтков яиц для специфического лечения новорожденных телят. С этой целью в хозяйстве, неблагополучном по ротавирусной инфекции КРС, были подобраны две группы по 20 голов больных диареей 1-5-дневных телят. Каждому больному теленку опытной группы ежедневно добавляли в молозиво при утреннем и вечернем кормлении по одному яйцу. Курс лечения продолжался в течение 3-5 дней до полного выздоровления животного.Based on this, the possibility of using egg yolks for the specific treatment of newborn calves was studied. For this purpose, two groups of 20 animals with diarrhea of 1-5-day-old calves were selected in a farm that was not at risk for cattle rotavirus infection. For each sick calf of the experimental group, one egg was added daily to colostrum during morning and evening feeding. The course of treatment lasted for 3-5 days until the animal recovered completely.
Таким образом, каждой голове задавали по 6-10 яиц с титром антител к ротавирусу 10,0-11,0 log2 в ИФА.Thus, each head was assigned 6-10 eggs with a titer of antibodies to rotavirus 10.0-11.0 log 2 in ELISA.
Диарею у телят контрольной группы лечили по традиционной схеме с применением антибиотиков, нитрофуранов и сульфаниламидов. Терапевтический эффект в опытной группе составил 70% при 40% эффективности в контроле. Результаты исследований приведены в таблице 12.Diarrhea in the calves of the control group was treated according to the traditional regimen using antibiotics, nitrofurans and sulfonamides. The therapeutic effect in the experimental group was 70% with 40% effectiveness in the control. The research results are shown in table 12.
Таким образом, иммунизация кур-несушек антигеном ротавируса КРС приводит к появлению в желтках яиц специфических антител и сохранению их высокого уровня на протяжении длительного периода.Thus, immunization of laying hens with cattle rotavirus antigen leads to the appearance of specific antibodies in the yolks of the eggs and to maintain their high level for a long period.
Оральное введение специфических антител яичного желтка защищало новорожденных телят от диареи, вызванной ротавирусом КРС. При сопоставлении экономичности двух способов лечения телят расчеты показали, что себестоимость традиционного метода лечения превышает затраты предлагаемого в 9,75 раз.Oral administration of specific egg yolk antibodies protected newborn calves from diarrhea caused by cattle rotavirus. When comparing the cost-effectiveness of two methods of treating calves, the calculations showed that the cost of the traditional method of treatment exceeds the cost of the proposed 9.75 times.
Выделенные из желтков яиц иммунизированных кур иммуноглобулины обладали высокой активностью и специфичностью, что позволяет использовать их в диагностических целях, а также для технологического контроля вирусного сырья при изготовлении инактивированных вакцин.The immunoglobulins isolated from the yolks of eggs of immunized chickens had high activity and specificity, which allows them to be used for diagnostic purposes, as well as for technological control of viral raw materials in the manufacture of inactivated vaccines.
Приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:The above information indicates the fulfillment when using the invention of the following set of conditions:
- штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;- strain No. 101 ARRIAH-DEPT of rotavirus cattle, embodying the invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в формуле изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;- for the proposed invention in the form described in the claims, the possibility of its implementation using the means and methods described in the application or known prior to the priority date is confirmed;
- штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригоден для изготовления вакцинных, диагностических и лечебных препаратов против ротавирусной инфекции КРС.- strain No. 101 ARRIAH-DEPT, obtained in accordance with the invention, has high biological, antigenic and immunogenic activity and is suitable for the manufacture of vaccines, diagnostic and therapeutic drugs against rotavirus infection of cattle.
Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентноспособности "промышленная применимость".Therefore, the present invention meets the patentability condition "industrial applicability".
Источники информацииSources of information
1. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я. и др. Вирусные болезни животных. - М., ВНИТИБП,1998. - С.43-54.1. Syurin V.N., Samuilenko A.Ya. and other viral diseases of animals. - M., VNITIBP, 1998. - S. 43-54.
2. Mebus С.А., Underdahl N.R., Rhodes M.B., Twiehaus M. J. Calf diarrhea (scour): reproduced with a virus from a field outbreak. University of Nebraska College of Agric.and Home Econ., Res.Bull., 1969. -V.233. - P.1-16 (прототип).2. Mebus S.A., Underdahl N.R., Rhodes M. B., Twiehaus M. J. Calf diarrhea (scour): reproduced with a virus from a field outbreak. University of Nebraska College of Agric.and Home Econ., Res. Bull., 1969. -V.233. - P.1-16 (prototype).
3. Mebus C.A. et al. Pathology of neonatal calf diarrhea induced by reolike virus //Vet.Pathol., 1971. - V.8. - P.490-505.3. Mebus C.A. et al. Pathology of neonatal calf diarrhea induced by reolike virus // Vet.Pathol., 1971.- V.8. - P. 490-505.
4. Derbyshire В., Woode G.N. Classification of rotaviruses: report from the World Health Organisation/Foot and Agriculture Organisation Comparative Virology Program //J.Am.Med.Assoc., 1978.-V.173, N5, Pt 3. - P.123-125.4. Derbyshire B., Woode G.N. Classification of rotaviruses: report from the World Health Organization / Foot and Agriculture Organization Comparative Virology Program // J.Am.Med.Assoc., 1978.-V.173, N5, Pt 3. - P.123-125.
5. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, "Урожай", 1993. - С.77-82.5. Sergeev V.A. Viral vaccines. Kiev, "Harvest", 1993. - P.77-82.
6. Пат.США №3838004, 195-1.3, 24.09.74 г.6. Pat.USA No. 3838004, 195-1.3, 09.24.74.
7. Пат.США №3839556, 424-89, 01.10.74 г.7. Pat.USA No. 3839556, 424-89, 01.10.74.
8. Пат.США №3869547, 424-89, 04.03.75 г.8. Pat.USA No. 3869547, 424-89, 03/04/75.
9. Пат.США №3873422, 195-1.3, 25.03.75 г.9. Pat.USA No. 3873422, 195-1.3, 03.25.75.
10. Пат.США №3914408, 424-89, 21.10.75 г.10. Pat.USA No. 3914408, 424-89, 10.21.75.
11. Пат.США №3919413, 424-89, 11.11.75 г.11. Pat.USA No. 3919413, 424-89, 11.11.75.
12. Пат.США №3925544, 424-89, 09.12.75 г.12. Pat.USA No. 3925544, 424-89, 12/9/75.
13. Kurogi H., Inaba V. et al. Cytopathic effect of Nebraska calf diarrhea virus (Lincoln strain) on secondary bovine kidney cell monolayers //Nat.lnst. Anim.Helath.-Quart (Tokyo) - 1976. - V.16, N3. - P.33-34.13. Kurogi H., Inaba V. et al. Cytopathic effect of Nebraska calf diarrhea virus (Lincoln strain) on secondary bovine kidney cell monolayers //Nat.lnst. Anim.Helath.-Quart (Tokyo) - 1976.- V.16, N3. - P.33-34.
14. Kuroki M., Ohta M. et al. Passive protection against bovine rotavirus in calves by specific immunoglobulins from chicken egg yolk //Arch.Virol, 1994, N117. - P.143-148.14. Kuroki M., Ohta M. et al. Passive protection against bovine rotavirus in calves by specific immunoglobulins from chicken egg yolk // Arch. Virol, 1994, N117. - P.143-148.
15. Гоголев М.М., Матюшина Н.И. и др. Репродукция и индикация ротавируса крупного рогатого скота. Бюл.ВИЭВ, 1983. - Вып.49. - С.49-52.15. Gogolev M.M., Matyushina N.I. et al. Reproduction and indication of cattle rotavirus. Bull.VIEV, 1983 .-- Issue 49. - S. 49-52.
16. Скибицкий В.Г., Собко Ю.А. Электронномикроскопическое изучение ротавируса крупного рогатого скота (штамм Тиверваль), репродуцированного в гетерологической системе клеток //Тез.докл.Республ.науч.-техн.конф. "Ветеринарные проблемы промышл.животноводства" (17-19 октября, 1985 г., г.Белая Церовь). -Белая Церковь, 1985. - Ч.1. - С.74-75.16. Skibitsky V.G., Sobko Yu.A. Electron microscopic study of cattle rotavirus (Tiverval strain) reproduced in the heterologous system of cells // Tez. Dokl. Republ. Nauch. "Veterinary problems of livestock industry" (October 17-19, 1985, the city of White Tserov). -White Church, 1985. - Part 1. - S.74-75.
17. Скибицкий В.Г., Миськевич С.В. и др. Культивирование ротавирусов SA11 и Тиверваль в перевиваемой культуре клеток СПЭВ для получения диагностикумов //Тез.докл.Республ.науч.-техн.конф. "Ветеринарные проблемы промышл. животноводства" (17-19 октября, 1985 г., г.Белая Церовь). - Белая Церковь, 1985. - Ч.1.- С.75-76.17. Skibitsky V.G., Miskevich S.V. et al. Cultivation of rotaviruses SA11 and Tiverval in a transplantable cell culture of SPEV for diagnosticum // Tez dokl. Republ. nauch.-tekhn.konf. "Veterinary problems of industrial. Livestock" (October 17-19, 1985, the city of White Tserov). - White Church, 1985. - Part 1.- P.75-76.
18. Castrucci G., Frigeri F., Ferrari M. et al. Further studies on passive immunization of newborn calves against rotaviral infection //Comp.lmmun.Microbiol.lnfect.Dis., 1989.- V.12, N3.- P.71-76.18. Castrucci G., Frigeri F., Ferrari M. et al. Further studies on passive immunization of newborn calves against rotaviral infection // Comp.lmmun.Microbiol.lnfect.Dis., 1989.- V.12, N3.- P.71-76.
19. Пат.РФ №2095083, A 61 K 39/15, 10.11.97 г.19. Pat.RF No. 2095083, A 61 K 39/15, 11/10/97
20. Пат.Японии №2950273 В2; A 61 K 39/15, А 61 К 31/00; 20.09.99 г.20. Pat. Japan No. 2950273 B2; A 61 K 39/15, A 61 K 31/00; September 20, 1999
Результаты изучения антигенного родства (R%) штаммов ротавируса в реакции нейтрализацииTable 1
The results of the study of antigenic affinity (R%) of rotavirus strains in the neutralization reaction
Результаты изучения чувствительности перевиваемых культур клеток к штамму №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРСtable 2
The results of a study of the sensitivity of transplanted cell cultures to strain No. 101 ARRIAH-DEPT of cattle rotavirus
Активность антигена ротавируса КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП в иммунохимических реакцияхTable 3
Antigen activity of cattle rotavirus strain No. 101 ARRIAH-DEPT in immunochemical reactions
Активность сывороток морских свинок, гипериммунизированных ротавирусом КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕПTable 4
The activity of serum of guinea pigs hyperimmunized with cattle rotavirus strain No. 101 ARRIAH-DEP
Активность сывороток кроликов, гипериммунизированных ротавирусом КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕПTable 5
The activity of the serum of rabbits hyperimmunized with rotavirus cattle strain No. 101 ARRIAH-DEPT
Антигенная активность вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕПTable 6
Antigenic activity of the vaccine against rotavirus infection of cattle adsorbed inactivated from strain No. 101 ARRIAH-DEP
Изучение сохраняемости при 4-8°С иммуногенной активности вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕПTable 7
The study of the persistence at 4-8 ° C of the immunogenic activity of the vaccine against rotavirus infection of cattle adsorbed inactivated from strain No. 101 ARRIAH-DEPT
п/п№№
p / p
Изучение сохраняемости при 4-8°С иммуногенной активности ротавирусного антигена из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП в вакцине против рота- и коронавирусной инфекций КРС сорбированной инактивированнойTable 8
The study of the immunogenic activity of rotavirus antigen from strain No. 101 ARRIAH-DEPT in vaccine against rota- and coronavirus infections of cattle adsorbed inactivated at 4-8 ° C
Результаты исследования в РДП сывороток крови кроликов, привитых ассоциированными вакцинамиTable 9
The results of the study in the RDP of serum of rabbits vaccinated with associated vaccines
Результаты испытания антигенной активности вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП на глубокостельных коровахTable 10
The test results of the antigenic activity of the vaccine against rotavirus infection of cattle adsorbed inactivated from strain No. 101 ARRIAH-DEPT on deep-shelled cows
Титр антител к ротавирусу КРС в сыворотках крови и желтках яиц гипериммунизированных курTable 11
Antibody titer of cattle rotavirus in blood serum and yolks of hyperimmunized chicken eggs
Сравнительная оценка методов лечения диарей новорожденных телятTable 12
Comparative evaluation of methods for treating diarrhea of newborn calves
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (en) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (en) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004101590A RU2004101590A (en) | 2005-08-10 |
| RU2264458C1 true RU2264458C1 (en) | 2005-11-20 |
Family
ID=35844288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (en) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2264458C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2095083C1 (en) * | 1994-07-04 | 1997-11-10 | Закрытое акционерное общество "Саксесс" | Rotaviral inactivated vaccine for animal immunization |
| RU2137499C1 (en) * | 1998-11-25 | 1999-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Mixed vaccine against rota-, coronaviral and escherichia diarrhea in newborn piglets |
-
2004
- 2004-01-19 RU RU2004101590/13A patent/RU2264458C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2095083C1 (en) * | 1994-07-04 | 1997-11-10 | Закрытое акционерное общество "Саксесс" | Rotaviral inactivated vaccine for animal immunization |
| RU2137499C1 (en) * | 1998-11-25 | 1999-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Mixed vaccine against rota-, coronaviral and escherichia diarrhea in newborn piglets |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004101590A (en) | 2005-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4761282A (en) | Inactivated infectious bronchitis vaccine for poultry | |
| Pensaert et al. | Vaccination of chickens against a Belgian nephropathogenic strain of infectious bronchitis virus B1648 using attenuated homologous and heterologous strains | |
| US4559229A (en) | Avian proventriculitis vaccine | |
| KR100583259B1 (en) | Novel antigenic class of avian reoviruses | |
| US4302444A (en) | Vaccines for immunizing egg-laying birds against Egg Drop disease, preparation of said vaccines, and method of use of said vaccines | |
| DK163067B (en) | BIOLOGICALLY PREPARATION OF AN INFECTIVE BRONKITIS VIRUS STEM | |
| KR100531491B1 (en) | Bovine Respiratory Coronavirus As a Vaccine | |
| RU2403063C1 (en) | Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle | |
| RU2378014C2 (en) | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection | |
| RU2126268C1 (en) | Vaccine for prophylaxis of chicken bursa infectious sickness, lyophilized viral composition, method of chicken protection from this disease and a method of live vaccine preparing | |
| Saito et al. | Attenuation of the myxoma virus and use of the living attenuated virus as an immunizing agent for myxomatosis | |
| RU2264458C1 (en) | Cattle rotavirus strain for production of diagnosis, vaccine and therapeutic preparations | |
| RU2403061C1 (en) | Inactivated combined vaccine against infectious rhinotracheitis, paraflu-3, respiratory syncytial disease, viral diarrhea and pasteurellosis of cattle | |
| RU2452512C2 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for parvoviral, rheoviral, type i herpes-viral infections and viral diarrhoeia - cattle mucosal disease | |
| RU2517733C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine associated against adenoviral, herpes virus infection, parainfluenza-3 and viral diarrhea - mucosal disease of cattle | |
| RU2395298C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, parainfluenza-3, virus diarrhoea, respiratory syncytial rota- and coronaviral disease | |
| RU2302258C1 (en) | Sorbed inactivated vaccine against cattle rotaviral infection | |
| RU2395297C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea and leptospirosis | |
| CN111686246A (en) | Antigen-antibody complex vaccine for porcine epidemic diarrhea virus and preparation method thereof | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| RU2515058C1 (en) | Associated inactivated emulsion bovine viral diarrhoea, rotavirus and coronavirus infections vaccine | |
| RU2798283C1 (en) | Chlamydia vnitibp-21 chlamydia abortus strain for the production of immunobiological medicinal products | |
| Balaganesan et al. | Humoral immune response of turkey pox vaccine: Serological validation and histopathological study | |
| RU2457859C1 (en) | Cattle viral diarrhoeia vaccine | |
| RU2395299C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea, rota-, coronavirus disease and leptospirosis |