RU2264458C1 - Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов - Google Patents
Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2264458C1 RU2264458C1 RU2004101590/13A RU2004101590A RU2264458C1 RU 2264458 C1 RU2264458 C1 RU 2264458C1 RU 2004101590/13 A RU2004101590/13 A RU 2004101590/13A RU 2004101590 A RU2004101590 A RU 2004101590A RU 2264458 C1 RU2264458 C1 RU 2264458C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rotavirus
- strain
- cattle
- arriah
- antigenic
- Prior art date
Links
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 title claims abstract description 77
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims description 71
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 30
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 19
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002356 single layer Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 abstract 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 244000309466 calf Species 0.000 description 20
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 18
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 18
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 18
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 17
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 13
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 7
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 5
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 5
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 4
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 2
- 101100508406 Caenorhabditis elegans ifa-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007661 gastrointestinal function Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUBFWTUFPGFHOJ-UHFFFAOYSA-N 2-nitrofuran Chemical class [O-][N+](=O)C1=CC=CO1 FUBFWTUFPGFHOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100150099 Caenorhabditis elegans spk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- -1 freon Chemical compound 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, доминирующими свойствами над эпизоотическими изолятами. Штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов ВГНКИ МСХ РФ под регистрационным №101 ВНИИЗЖ-ДЕП. Вирус штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП репродуцируется в монослойных перевиваемых культурах клеток MDBK, СПЭВ, ПСГК-30, Vero, Marc-145 и КСТ, в которых в течение 24-48 часов инкубирования накапливается в титрах 5,5-7,5 Ig ТЦД50/см3. Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в культуре клеток. Технический результат: повышение биологической, антигенной и иммуногенной активности штамма, его стабильности при инактивации и доминантности над эпизоотическими изолятами, а также расширение арсенала производственных штаммов ротавируса КРС. 12 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств диагностики, специфической профилактики и лечения ротавирусной инфекции крупного рогатого скота (КРС).
Ротавирусная инфекция КРС (ротавирусный энтерит, диарея неонатальных телят) - остропротекающая контагиозная болезнь новорожденных телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта.
Болезнь широко распространена во всех странах мира и наносит большой экономический ущерб промышленному животноводству за счет высокого уровня заболеваемости телят (50-78%), смертности до 25-53% в результате диареи, потери массы животных и снижения сопротивляемости другим инфекциям.
Чрезвычайно широкое распространение возбудителя заболевания, его приспособленность к паразитированию в организме некоторых видов животных, тенденция вызывать длительную персистенцию, антигенная полиморфность и относительная устойчивость к воздействию разнообразных факторов обусловливают энзоотическое течение болезни в хозяйствах с неблагополучными условиями содержания животных.
Стационарность болезни поддерживается за счет длительной персистенции возбудителя в организме животных-реконвалесцентов.
Важные условия успешной борьбы с этим заболеванием - своевременная и правильная его диагностика, проведение мер специфической профилактики, что в свою очередь предполагает получение в достаточном количестве активного вирусного антигена.
Для специфической профилактики ротавирусного энтерита применяют живые и инактивированные вакцины, которыми прививают глубокостельных коров. При этом практическое значение для профилактики ротавирусной диареи новорожденных телят имеет колостральный иммунитет, обусловленный поступлением с молозивом в организм новорожденных телят специфических антител, нейтрализующих возбудитель в просвете тонкого кишечника, а также иммунокомпетентных клеток и других протективных факторов.
Ротавирусы КРС характеризуются значительным антигенным полиморфизмом и нестабильностью антигенной структуры. Сложная структура генома ротавируса, в том числе его фрагментарность, обусловливают постоянную возможность модификации антигенной структуры. Ротавирусы нейтрализуются гомологичными сыворотками в более высоких титрах, чем гетерологичными. При выборе производственного штамма с помощью реакции нейтрализации (РН) результаты, полученные при исследовании сыворотки с гетерологичными штаммами, более важны, чем результаты нейтрализации ротавируса гомологичными сыворотками.
Одним из основных требований, предъявляемых к производственным штаммам, является соответствие их антигенных свойств эпизоотическим штаммам возбудителя. Производственный штамм должен обладать широким антигенным спектром и доминировать над эпизоотическими. Возбудитель должен быть хорошо адаптированным к системе культивирования и обладать высокой антигенностью. Вакцины, изготовленные из таких штаммов, должны защищать животных против нескольких отличающихся штаммов возбудителя заболевания (1).
Известен штамм Nebraska (Nebraska calf diarrheal virus, NCDV, он же Линкольн) ротавируса КРС, выделенный в 1969 году от теленка с диареей в США и используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (2-14).
Известен штамм "Тиверваль" ротавируса КРС для изготовления диагностических препаратов (15, 16, 17).
Известен штамм 81/36F ротавируса КРС для изготовления вакцинных препаратов (18).
Известен штамм SA-11 ротавируса обезьян для изготовления вакцинных препаратов (19).
Известны также штаммы G6 Р5 и G10 Р11 ротавируса КРС для изготовления вакцинных препаратов (20).
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм Nebraska, он же NCDV, он же Линкольн, ротавируса КРС для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (2-14).
Недостатки штамма-прототипа состоят в его антигенных отличиях от эпизоотических изолятов ротавируса КРС, выделенных на территории России и Государств СНГ в различные временные промежутки.
В связи с этим актуальной остается проблема поиска новых штаммов ротавируса для производства высокочувствительных и специфичных средств диагностики, высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных средств профилактики и лечения заболевания.
Является доказанным, что при выборе производственных штаммов возбудителя необходимо учитывать доминантность.
Доминантность - это способность определенного штамма возбудителя, используемого для изготовления вакцины, создавать защиту против нескольких отличающихся вариантов того же возбудителя.
В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового производственного штамма ротавируса КРС, обладающего высокой биологической, антигенной, иммуногенной активностью и широким антигенным спектром, что позволяет ему доминировать над эпизоотическими штаммами.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении биологической, антигенной и иммуногенной активности и стабильности штамма при инактивации в процессе изготовления биопрепаратов и доминантности над эпизоотическими штаммами, а также расширении арсенала производственных штаммов ротавируса КРС.
Указанный технический результат достигнут получением штамма №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС. Штамм №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС является новым, ранее неизвестным.
Исходный ротавирус для получения штамма №101 ВНИИЗЖ выделен из фекалий новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта.
Производственный штамм №101 ВНИИЗЖ ротавируса КРС получен путем адаптации к перевиваемой культуре клеток почек теленка MDBK.
Полученный штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) МСХ РФ 12 марта 2001 под регистрационным №101 ВНИИЗЖ-ДЕП.
По сравнению с прототипом штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, а также доминирует над эпизоотическими изолятами.
Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления средств диагностики, специфической профилактики и лечения ротавирусной инфекции КРС.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС относится к семейству Reoviridae, роду Rotavirus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ротавирусной инфекции КРС: сферическая форма диаметром 65-75 нм, имеющая вид "колеса". Вирион состоит из сердцевины, внутреннего и наружного капсида. Сердцевина диаметром 40-45 нм имеет гексагональную форму и состоит из 3-х белков (VP1, VP2 и VP3) и РНК. Внутренний капсид (диаметр 15-20 нм) имеет икосаэдрическую форму и построен из 260 морфологических единиц, каждая из которых представлена белком VP6. Наружный капсид представлен белком VP7. На поверхности наружного капсида расположены "шипики", представленные димером белка VP4.
Антигенные свойства
Антиген ротавируса КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП индуцирует в организме иммунизированных морских свинок и кроликов образование вирусспецифических антител, выявляемых в реакции диффузионной преципитации (РДП) в разведениях от 1:32 до 1:128 и от 1:32 до 1:256 соответственно. В иммуноферментном анализе (ИФА) сыворотки положительно реагировали в разведении от 1:128 до 1:2048, в реакции связывания комплемента (РСК) - от 1:40 до 1:160.
В сыворотках крови глубокостельных коров через 10 дней после второй вакцинации антитела к ротавирусу в ИФА выявляли в титрах 8,5-10,5 log2 и 10,6-14,0 log2 в молозиве. Скармливание такого молозива обеспечивает высокий уровень колостральных антител (7,0-8,5 log2) в организме телят.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП обладает широким антигенным спектром и доминантностью. Средний показатель двустороннего антигенного родства (R%) предлагаемого штамма в РН с 12 эталонными и эпизоотическими штаммами ротавируса КРС составил 56,3%. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Как свидетельствуют данные таблицы 1, штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП доминирует над изученными возбудителями ротавирусной инфекции КРС.
Биотехнологическая характеристика
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС предназначен для изготовления инактивированных вакцин против ротавирусной инфекции КРС, диагностических антигенов и сывороток, а также лечебных препаратов антител, из желтков яиц кур, иммунизированных вирусом КРС.
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации, обладает широким антигенным спектром и доминантностью по отношению к полевым штаммам.
Вирус штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП репродуцируется в монослойных перевиваемых культурах клеток MDBK, СПЭВ, ПСГК-30, Vero, Marc-145, KCT и в течение 24-48 часов инкубирования накапливается в титрах 5,5-7,5 Ig ТЦД50/см3. Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в культурах клеток.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС устойчив к хлороформу, фреону, эфиру, кислой (рН≥4,0) и щелочной среде (рН 8,0). Возбудитель устойчив к воздействию трипсина.
Инактивированный ротавирус КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП устойчив в процессе хранения при 4°С как в нативном состоянии, так и в составе инактивированной сорбированной вакцины.
Дополнительные признаки и свойства
Антигенная активность - обладает антигенностью в составе инактивированной вакцины и препарата для гипериммунизации доноров диагностических сывороток и антительных лечебных препаратов.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Стабильность - сохраняет исходные биологические (антигенные) свойства при пассировании в культурах клеток в течение 20 пассажей.
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным штаммом.
Использование диагностикумов, вакцины и препарата антител из желтков яиц кур, гипериммунизированных ротавирусом КРС, обеспечивает высокую эффективность мер борьбы с ротавирусной инфекцией КРС.
По мнению заявителя, предлагаемый штамм соответствует условиям патентоспособности "новизна" и "изобретательский уровень".
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования.
Пример 1
Получение штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС в культуре клеток MDVK
Штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса крупного рогатого скота был изолирован из пробы фекалий от новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта. При изоляции возбудителя был использован комплекс вирусологических методов, изложенных в "Руководстве по индикации возбудителей особо опасных болезней сельскохозяйственных животных в объектах ветнадзора", утвержденном ГУВ ГАПК СССР 15 марта 1990 г.
С этой целью суспензию фекалий пропускали через фильтр ФПП-15-1,5. Сорбированный ротавирус элюировали смесью, состоящей из равных частей хлороформа и раствора Хенкса. Объем элюата составлял 1/100-1/200 объема суспензии фекалий. В очищенный элюат добавляли антибиотики, выдерживали при 37°С 2-4 часа. К суспензии добавляли трипсин до концентрации 15-20 мкг/см3 и термостатировали при 37°С в течение 30 минут. Перед заражением культуру клеток MDBK дважды отмывали от ростовой сыворотки раствором Хенкса. После заражения в культуру клеток MDBK вносили поддерживающую питательную среду, содержащую трипсин в концентрации 10-15 мкг/см3. Сосуды инкубировали при 37°С до появления изменений в клетках. Полученную вируссодержащую суспензию замораживали - оттаивали и использовали для последующих пассажей. После 9 пассажей в культуре клеток MDBK штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС обладал следующими характеристиками: титр инфекционности 7,5-8,0 lg ТЦД50/см3, активность в ИФА 7,0-8,5 log2.
Пример 2
Изучение адаптационных свойств штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС
Применение трипсина для предобработки штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС перед заражением, а также в процессе его репродукции, позволило значительно расширить круг чувствительных к нему перевиваемых культур клеток, в том числе и гетерологичных. Заражение культур клеток проводили 9 пассажем штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС (в MDBK). Результаты приведены в таблице 2.
Пример 3
Получение и испытание диагностических антигенов и сывороток
Для получения антигена из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС исходную вируссодержащую суспензию трижды замораживают-оттаивают. После этого вируссодержащую жидкость осветляют низкоскоростным центрифугированием в течение 20-30 минут. Для получения диагностического антигена используют ротавирус, репродуцированный в культуре клеток СПЭВ, а антигена для иммунизации - в культуре клеток MDBK.
Инактивацию вируса проводят 6%-ным рабочим раствором аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) в конечной концентрации 0,15% при 37°С в течение 24 часов.
Концентрирование антигена проводят добавлением в суспензию инактивированного вируса 50%-ного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м 6000 до конечной концентрации 8-10% по сухому веществу. Смесь выдерживают в течение 16-18 часов при 4°С до формирования осадка. Осадок отделяют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 30-40 минут и ресуспендируют в растворе Хенкса, составляющем 1/100-1/300 от первоначального объема суспензии. Полученный препарат проверяют на активность и специфичность в РДП и в ИФА. Результаты исследований приведены в таблице 3.
Гипериммунизацию доноров проводят эмульсией, изготовленной смешиванием инактивированного антигена и минерального или синтетического масла с соответствующим эмульгатором.
Морским свинкам живой массой 0,4-0,5 кг эмульсию антигена вводят 3 раза через 21 и 28 дней после первой инокуляции внутримышечно в дозе 1,0 см3.
Через 10-15 дней после окончания гипериммунизации морских свинок обескровливают. Результаты исследования полученных сывороток представлены в таблице 4.
Кроликам живой массой 2,0-3,0 кг эмульсию антигена вводят три раза: в мякиши задних конечностей, в подколенные лимфоузлы и внутримышечно. Весь цикл иммунизации составляет 30-38 дней.
Приведенные в таблицах 3, 4 и 5 данные характеризуют высокую антигенную активность штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС, а полученные способом, описанным в примере 3, диагностические антигены и сыворотки позволяют диагностировать болезни желудочно-кишечного тракта новорожденных телят.
Пример 4
Изготовление вакцины
Для получения сорбированной инактивированной вакцины против ротавирусной инфекции КРС вирусную суспензию из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП, хранившуюся при минус 20°С, размораживают и подогревают до 37°С. К суспензии добавляют трипсин до концентрации 15-20 мкг/см3 и термостатируют при 37°С в течение 30 минут. Перед заражением культуру с качественным монослоем дважды отмывают от ростовой сыворотки раствором Хенкса. В культуральные сосуды вносят вирус, обработанный трипсином. Доза заражения должна составлять 0,1-1,0 ИЕ/клетку. После заражения в культуру клеток вносят поддерживающую питательную среду, содержащую трипсин в концентрации 10-15 мкг/см3. Сосуды инкубируют при 37°С до появления ЦПД вируса более чем в 90% клеток монослоя (24-48 часов). Полученную вируссодержащую суспензию замораживают-оттаивают. Охлажденную суспензию осветляют. Инактивацию вирусной суспензии проводят АЭЭИ в конечной концентрации 0,15% при 37°С в течение 24 часов. Инактивированный вирус проверяется на стерильность и авирулентность. К инактивированной суспензии добавляют стерильный 3%-ный коллоидный раствор гидроокиси алюминия (ГОА). В качестве адъюванта используют сапонин из расчета 2,0 мг на дозу вакцины.
Полученный препарат контролируют на стерильность, безвредность и антигенную активность.
В таблицах 6-10 приведены результаты испытаний антигенной активности полученной вакцины на морских свинках, кроликах и глубокостельных коровах, свидетельствующие о высокой эффективности препарата.
Применение вакцины с такой характеристикой позволяет профилактировать ротавирусную инфекцию КРС и предотвращать заболевание и гибель новорожденных телят. Эффективность вакцинации составляет 95,5%.
Пример 5
Получение и испытание препаратов антител из желтков яиц кур, иммунизированных антигеном ротавируса КРС, штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП
Получение антигена. Для иммунизации кур используют производственный штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса крупного рогатого скота, выделенный от больных телят. Вирус выращивают в перевиваемой культуре клеток MDBK в среде Игла, содержащей 10-15 мкг/см3 трипсина. Для концентрирования используют ротавирус с титром не ниже 7,0 lg ТЦД50/см3. Вируссодержащую суспензию осветляют низкоскоростным центрифугированием и обрабатывают ПЭГ м.м. 6000 до конечной концентрации 8-10% по сухому веществу. Активность антигена определяют в иммуноферментном анализе.
Определение активности антигена в ИФА. Лунки панели (фирмы "Nunc") сенсибилизируют специфическими иммуноглобулинами в рабочем разведении в 0,015 М карбонатном буфере (18 ч, 4°С). Отмывку панели после этой и последующих стадий проводят 0,85%-ным физраствором, содержащим 0,05% Твин-20. Для блокирования оставшихся свободными сорбционных центров используют 1% раствор БСА на ФБР или 10% раствор фетальной сыворотки КРС (1 ч, 37°С). После промывки в лунки панели вносят исследуемые пробы антигена ротавируса в разведениях, а также положительные и отрицательные контроли (1-2 ч, 37°С). На следующем этапе добавляют антиротавирусный пероксидазный конъюгат (Москва, ВИЭВ) в рабочем разведении (1 ч, при 37°С). В качестве субстрата используют ортофенилендиамин (0,4 мг/см3 ОФД в цитратно-фосфатном буфере, рН 4,9-5,0 и 0,006% Н2O2). Учет реакции проводят через 10-15 мин визуально или спектрофотометрически (λ=490 нм). Для иммунизации кур используют антиген с активностью в ИФА в разведении не менее 1:1000-3000.
30 голов 20-22-недельных кур-несушек породы белый леггорн дважды иммунизируют (с интервалом в 4 недели) внутримышечно в области шеи антигеном ротавируса, эмульгированным в масляном адъюванте Montanide ISA-70. Иммунный ответ кур на введение антигена контролируют по наличию вирусспецифических антител в сыворотке крови и желтках яиц в РДП и ИФА. Пробы крови отбирают до иммунизации кур и через 7, 14 и 21 день после каждой иммунизации. Сыворотки крови хранят при - 20°С.
Яйца от иммунизированных кур собирают ежедневно. Выделение глобулинов из желтков куриных яиц проводят следующим образом: желтки отделяют от белков, суспендируют в фосфатном буфере (0,01 М ФБР, рН 7,4, содержащий 0,1M NaCl), добавляют ПЭГ м.м. 6000 до конечной концентрации 3,5% и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 60 мин. К надосадочной жидкости добавляют ПЭГ м.м. 6000 до концентрации 12% и центрифугируют в том же режиме. Осадок (lgY) очищают переосаждением 12% ПЭГ м.м. 6000. Образцы глобулинов хранят при -20°С.
Исследование сывороток кур (глобулинов) в ИФА. Сенсибилизацию планшетов проводят антигеном ротавируса в рабочем разведении в 0,015 М Na-карбонатном буфере (18 ч, 4°С). После промывки панели в лунки вносят по 0,2 см3 контрольных (положительной и отрицательной) и исследуемых сывороток (глобулинов) в разведении 1:25 (1:45) и титруют их последовательно двукратным шагом. После инкубации (2 ч, при 37°С) вносят препарат меченных пероксидазой иммуноглобулинов козы против lgG курицы (Москва, НИИ им. Гамалеи), затем субстрат ОФД.
Исследование сывороток кур (глобулинов) в РДП. Расплавленный на водяной бане агар ("Difco") разливают по 25 см3 в чашки Петри с диаметром 9 см или на стеклянные пластинки размером 9×4 см. В застывшей агаровой пластинке штампами делают лунки по шестиугольной системе, в которой одна лунка расположена в центре, а шесть - вокруг. Диаметр каждой лунки 5 мм, расстояние между ними 5 мм. В центральную лунку вносят антиген, а в каждую пару периферических лунок - разведения сывороток (с 1:4 до 1:128) или глобулинов (с 1:32 до 1:1024). После постановки реакции агаровые пластинки выдерживают во влажной камере при 37°С. Реакцию учитывают через 16, 24, 48 и 72 ч после ее постановки. За предельный титр антител считают максимальное разведение испытуемой сыворотки (глобулина), с которым наблюдается положительная реакция. Результаты исследований представлены в таблице 11.
В желтках яиц кур антитела к ротавирусу КРС были обнаружены через 2 недели после первой иммунизации с титрами 2 log2 в РДП, 3-4 log2 в ИФА. После второй иммунизации уровень антител увеличивается до 4,0 log2 (РДП) и 6,0 log2 (ИФА). В последующие 4 недели титры антител повышаются и достигают 6,0-7,0 log2 и 10,0 log2 соответственно. Максимальное количество специфических антител было выявлено через 14 недель после второй иммунизации в титре 12,85 log2 в ИФА. Высокий уровень антител наблюдали на протяжении 7 месяцев. В течение последующих 2 месяцев происходило плавное снижение количества ротавирусных антител до 6,5 log2 в ИФА.
В сыворотках крови иммунизированных кур антитела к ротавирусу КРС были выявлены на 14 день после второй иммунизации в титрах: 5,0-6,0 log2 в РДП и 9,65 log2 в ИФА.
Полученные данные свидетельствуют о том, что в желтках яиц кур антитела к ротавирусу КРС появляются в более ранний период (через 2 недели после первой иммунизации), чем в крови иммунизированных кур-несушек. Титры антител в желтках яиц выше и сохраняют высокий уровень на протяжении длительного периода после иммунизации. Наряду с этим выделенные из желтков иммуноглобулины обладают высокой специфичностью.
На основании этого была изучена возможность использования желтков яиц для специфического лечения новорожденных телят. С этой целью в хозяйстве, неблагополучном по ротавирусной инфекции КРС, были подобраны две группы по 20 голов больных диареей 1-5-дневных телят. Каждому больному теленку опытной группы ежедневно добавляли в молозиво при утреннем и вечернем кормлении по одному яйцу. Курс лечения продолжался в течение 3-5 дней до полного выздоровления животного.
Таким образом, каждой голове задавали по 6-10 яиц с титром антител к ротавирусу 10,0-11,0 log2 в ИФА.
Диарею у телят контрольной группы лечили по традиционной схеме с применением антибиотиков, нитрофуранов и сульфаниламидов. Терапевтический эффект в опытной группе составил 70% при 40% эффективности в контроле. Результаты исследований приведены в таблице 12.
Таким образом, иммунизация кур-несушек антигеном ротавируса КРС приводит к появлению в желтках яиц специфических антител и сохранению их высокого уровня на протяжении длительного периода.
Оральное введение специфических антител яичного желтка защищало новорожденных телят от диареи, вызванной ротавирусом КРС. При сопоставлении экономичности двух способов лечения телят расчеты показали, что себестоимость традиционного метода лечения превышает затраты предлагаемого в 9,75 раз.
Выделенные из желтков яиц иммунизированных кур иммуноглобулины обладали высокой активностью и специфичностью, что позволяет использовать их в диагностических целях, а также для технологического контроля вирусного сырья при изготовлении инактивированных вакцин.
Приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в формуле изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- штамм №101 ВНИИЗЖ-ДЕП, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригоден для изготовления вакцинных, диагностических и лечебных препаратов против ротавирусной инфекции КРС.
Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентноспособности "промышленная применимость".
Источники информации
1. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я. и др. Вирусные болезни животных. - М., ВНИТИБП,1998. - С.43-54.
2. Mebus С.А., Underdahl N.R., Rhodes M.B., Twiehaus M. J. Calf diarrhea (scour): reproduced with a virus from a field outbreak. University of Nebraska College of Agric.and Home Econ., Res.Bull., 1969. -V.233. - P.1-16 (прототип).
3. Mebus C.A. et al. Pathology of neonatal calf diarrhea induced by reolike virus //Vet.Pathol., 1971. - V.8. - P.490-505.
4. Derbyshire В., Woode G.N. Classification of rotaviruses: report from the World Health Organisation/Foot and Agriculture Organisation Comparative Virology Program //J.Am.Med.Assoc., 1978.-V.173, N5, Pt 3. - P.123-125.
5. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, "Урожай", 1993. - С.77-82.
6. Пат.США №3838004, 195-1.3, 24.09.74 г.
7. Пат.США №3839556, 424-89, 01.10.74 г.
8. Пат.США №3869547, 424-89, 04.03.75 г.
9. Пат.США №3873422, 195-1.3, 25.03.75 г.
10. Пат.США №3914408, 424-89, 21.10.75 г.
11. Пат.США №3919413, 424-89, 11.11.75 г.
12. Пат.США №3925544, 424-89, 09.12.75 г.
13. Kurogi H., Inaba V. et al. Cytopathic effect of Nebraska calf diarrhea virus (Lincoln strain) on secondary bovine kidney cell monolayers //Nat.lnst. Anim.Helath.-Quart (Tokyo) - 1976. - V.16, N3. - P.33-34.
14. Kuroki M., Ohta M. et al. Passive protection against bovine rotavirus in calves by specific immunoglobulins from chicken egg yolk //Arch.Virol, 1994, N117. - P.143-148.
15. Гоголев М.М., Матюшина Н.И. и др. Репродукция и индикация ротавируса крупного рогатого скота. Бюл.ВИЭВ, 1983. - Вып.49. - С.49-52.
16. Скибицкий В.Г., Собко Ю.А. Электронномикроскопическое изучение ротавируса крупного рогатого скота (штамм Тиверваль), репродуцированного в гетерологической системе клеток //Тез.докл.Республ.науч.-техн.конф. "Ветеринарные проблемы промышл.животноводства" (17-19 октября, 1985 г., г.Белая Церовь). -Белая Церковь, 1985. - Ч.1. - С.74-75.
17. Скибицкий В.Г., Миськевич С.В. и др. Культивирование ротавирусов SA11 и Тиверваль в перевиваемой культуре клеток СПЭВ для получения диагностикумов //Тез.докл.Республ.науч.-техн.конф. "Ветеринарные проблемы промышл. животноводства" (17-19 октября, 1985 г., г.Белая Церовь). - Белая Церковь, 1985. - Ч.1.- С.75-76.
18. Castrucci G., Frigeri F., Ferrari M. et al. Further studies on passive immunization of newborn calves against rotaviral infection //Comp.lmmun.Microbiol.lnfect.Dis., 1989.- V.12, N3.- P.71-76.
19. Пат.РФ №2095083, A 61 K 39/15, 10.11.97 г.
20. Пат.Японии №2950273 В2; A 61 K 39/15, А 61 К 31/00; 20.09.99 г.
| Таблица 1 Результаты изучения антигенного родства (R%) штаммов ротавируса в реакции нейтрализации |
||
| №№ п/п | Наименование штаммов ротавируса | Среднее (R%) антигенное родство изучаемых штаммов |
| 1. | Тиверваль | 31,6 |
| 2. | Линкольн | 44,5 |
| 3. | SA-11 | 12,5 |
| 4. | №101 | 56,3 |
| 5. | 3 | 21,3 |
| 6. | ЛА | 31,6 |
| 7. | В | 26,7 |
| 8. | С | 22,7 |
| 9. | ВО | 28,8 |
| 10. | К | 26,0 |
| 11. | П | 30,7 |
| 12. | Д | 32,8 |
| 13. | Б | 29,6 |
| Таблица 2 Результаты изучения чувствительности перевиваемых культур клеток к штамму №101 ВНИИЗЖ-ДЕП ротавируса КРС |
|||
| Культура клеток | Время репродукции, час. | Инфекционная активность, lg ТЦД50/см3 | Титр в ИФА, log2 |
| СПЭВ | 24-30 | 7,0-7,5 | 7,0-7,5 |
| ПСГК-30 | 24-30 | 6,0-6,5 | 5,0-5,5 |
| Vero | 48 | 5,5-6,0 | 6,0-6,5 |
| Магс-145 | 24 | 6,0-6,5 | 6,0-6,5 |
| КСТ | 48 | 6,0 | 5.0-6.0 |
| ПТ | 48-72 | 3,0-4,0 | 3,0-4,0 |
| Таблица 3 Активность антигена ротавируса КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП в иммунохимических реакциях |
|||
| №№ п/п | Кратность концентрирования антигена | Титр антител, log2 | |
| РДП | ИФА | ||
| 1 | 300 | 32 | 405 |
| 2 | 100 | 16 | 135 |
| 3 | 300 | 32 | 405 |
| 4 | 300 | 32 | 405 |
| 5 | 100 | 32 | 1215 |
| 6 | 100 | 8 | н/и |
| 7 | 100 | 16 | 405 |
| 8 | 50 | 25 | 1215 |
| 9 | 100 (с последующей ультрафильтрацией) | 64 | 1215 |
| 10 | 100 | 32 | 405 |
| 11 | 200 | 128 | 3000 |
| 12 | 7 | н/и | 1215 |
| 13 | 200 | 128 | 3000 |
| 14 | 200 | 128 | 1215 |
| 15 | 240 | 128 | 3645 |
| Примечание: Активность антигена указана в показателях, обратных разведению. н/и - не исследовали. | |||
| Таблица 4 Активность сывороток морских свинок, гипериммунизированных ротавирусом КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП |
|||
| Серия | Титр антител, log2 | ||
| РДП | ИФА | РСК | |
| 1 | 5,54±0,201 | 11,03±0,156 | 5,33±0,2 |
| 2 | 5,91±0,076 | 11,84±0,204 | 6,33±0,3 |
| 3 | 5,37±0,321 | 11,32±0,059 | 7,33±0,4 |
| Таблица 5 Активность сывороток кроликов, гипериммунизированных ротавирусом КРС штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП |
||
| Серия | Титр антител, log2 | |
| РДП | ИФА | |
| 1 | 5,73±0,065 | 10,43±0,402 |
| 2 | 5,64±0,024 | 10,82±0,153 |
| 3 | 5,49±0,121 | 10,71±0,127 |
| Таблица 6 Антигенная активность вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП |
|||
| №№ п/п | №№ серии | Средние титры антител (log2) в РДП к ротавирусу КРС в сыворотках крови вакцинированных | |
| морских свинок | кроликов | ||
| 1 | 1 | 5,33±0,79 | 4,85±0,72 |
| 2 | 6 | 5,10±0,77 | 6,32±0,69 |
| 3 | 9 | 5,95±0,72 | 4,80±0,76 |
| 4 | 10 | 5,33±0,81 | 8,20±0,90 |
| 5 | 11 | 5,23±0,78 | 4,65±0,75 |
| 6 | 12 | 6,50±0,76 | 6,50±0,81 |
| 7 | 13 | 6,20±0,83 | 6,30±0,70 |
| 8 | 14 | 5,70±0,69 | 5,90±0,51 |
| 9 | 15 | 4,80±0,75 | 6,70±0,47 |
| Среднее | 5,57±0,80 | 6,03±0,74 | |
| Таблица 7 Изучение сохраняемости при 4-8°С иммуногенной активности вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП |
||||
| №№ п/п |
№№ серии | Срок хранения, мес. | ИмД50 | |
| после изготовления | после хранения | |||
| 1 | 2 | 9 | 0,080 | 0,082 |
| 2 | 3 | 10 | 0,079 | 0,090 |
| 3 | 4 | 9 | 0,080 | 0,087 |
| 4 | 5 | 9 | 0,080 | 0,085 |
| 5 | 6 | 14 | 0,068 | 0,091 |
| 6 | 7 | 6 | 0,045 | 0,049 |
| 7 | 12 | 13 | 0,06 | 0,084 |
| Таблица 8 Изучение сохраняемости при 4-8°С иммуногенной активности ротавирусного антигена из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП в вакцине против рота- и коронавирусной инфекций КРС сорбированной инактивированной |
||||
| №№ п/п | №№ серии | Срок хранения, мес. | ИмД50 | |
| после изготовления | после хранения | |||
| 1 | 1 | 6 | 0,054 | 0,050 |
| 2 | 2 | 8 | 0,061 | 0,065 |
| 3 | 4 | 7 | 0,018 | 0,020 |
| 4 | 5 | 7 | 0,020 | 0,020 |
| 5 | 6 | 8 | 0,059 | 0,061 |
| 6 | 7 | 6 | 0,050 | 0,059 |
| 7 | 8 | 6 | 0,070 | 0,072 |
| 8 | 9 | 7 | 0,065 | 0,070 |
| 9 | 10 | 4 | 0,049 | 0,050 |
| 10 | 12 | 4 | 0,050 | 0,052 |
| Среднее | 0,050 | 0,052 | ||
| Таблица 9 Результаты исследования в РДП сывороток крови кроликов, привитых ассоциированными вакцинами |
|||
| №№ п/п | Кол-во серий | Антигенный состав вакцины | Средний титр антител к ротавирусу, log2 |
| 1 | 7 | Рота- и коронавирусы | 5,0±,57 |
| 2 | 3 | Рота-, корона- и реовирусы | 6,05±0,46 |
| Таблица 10 Результаты испытания антигенной активности вакцины против ротавирусной инфекции КРС сорбированной инактивированной из штамма №101 ВНИИЗЖ-ДЕП на глубокостельных коровах |
|||
| №№ п/п | Характеристика сыворотки | кол-во проб | Титр антител в ИФА, log2 |
| 1 | Кровь взята до вакцинации | 10 | 5,2±0,88 |
| 2 | Кровь взята от вакцинированных коров за 18 дней до отела | 10 | 8,1±0,77 |
| 3 | Кровь взята от вакцинированных коров за 7 дней до отела | 10 | 10,8±0,37 |
| 4 | Молозиво от вакцинированных коров, отобранное после отела в: | ||
| 1-й день | 10 | 13,0±0,71 | |
| 2-й день | 10 | 11,6±0,51 | |
| 3-й день | 10 | 10,6±0,43 | |
| Таблица 11 Титр антител к ротавирусу КРС в сыворотках крови и желтках яиц гипериммунизированных кур |
|||
| Проба | Титр антител, log2 | ||
| РДП | ИФА | ||
| Сыворотка крови кур | до иммунизации | - | - |
| после 1 иммунизации | 4,22±0,321 | 7,21±0,058 | |
| после 2 иммунизации | 4,44±0,013 | 9,65±0,131 | |
| Желтки яиц | до иммунизации | - | - |
| после 1 иммунизации | 5,51±0,130 | 10,83±0,221 | |
| после 2 иммунизации | 6,47±0,019 | 12,85±0,127 | |
| Таблица 12 Сравнительная оценка методов лечения диарей новорожденных телят |
||||
| Наименование препарата | Кол-во жив-ных | Возраст (дни) | Терапевтический эффект, (%) | Стоимость курса лечения, в руб. |
| Яичный желток от иммунизированных ротавирусом КРС кур | 20 | 1-5 | 70 | 8 |
| Традиционные методы лечения (контроль) | 20 | 1-5 | 40 | 78 |
Claims (1)
- Штамм Rotavirus крупного рогатого скота, сем. Reoviridae, род Rotavirus, коллекция ВГНКИ №101 ВНИИЗЖ-ДЕП, для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004101590A RU2004101590A (ru) | 2005-08-10 |
| RU2264458C1 true RU2264458C1 (ru) | 2005-11-20 |
Family
ID=35844288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004101590/13A RU2264458C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2264458C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2095083C1 (ru) * | 1994-07-04 | 1997-11-10 | Закрытое акционерное общество "Саксесс" | Вакцина ротавирусная инактивированная для иммунизации животных |
| RU2137499C1 (ru) * | 1998-11-25 | 1999-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Ассоциированная вакцина против рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи новорожденных поросят |
-
2004
- 2004-01-19 RU RU2004101590/13A patent/RU2264458C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2095083C1 (ru) * | 1994-07-04 | 1997-11-10 | Закрытое акционерное общество "Саксесс" | Вакцина ротавирусная инактивированная для иммунизации животных |
| RU2137499C1 (ru) * | 1998-11-25 | 1999-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Ассоциированная вакцина против рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи новорожденных поросят |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004101590A (ru) | 2005-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4761282A (en) | Inactivated infectious bronchitis vaccine for poultry | |
| Pensaert et al. | Vaccination of chickens against a Belgian nephropathogenic strain of infectious bronchitis virus B1648 using attenuated homologous and heterologous strains | |
| US4559229A (en) | Avian proventriculitis vaccine | |
| KR100583259B1 (ko) | 조류 레오바이러스의 신규한 항원 부류 | |
| US4302444A (en) | Vaccines for immunizing egg-laying birds against Egg Drop disease, preparation of said vaccines, and method of use of said vaccines | |
| DK163067B (da) | Biologisk ren praeparation af en smitsom bronkitis-virusstamme | |
| KR100531491B1 (ko) | 백신으로서 소 호흡 코로나바이러스 | |
| RU2403063C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза крупного рогатого скота | |
| RU2378014C2 (ru) | Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная | |
| RU2126268C1 (ru) | Вакцина для профилактики инфекционного заболевания сумки у цыплят, лиофилизированная вирусная композиция, способ защиты цыплят от этого заболевания и способ получения живой вакцины | |
| Saito et al. | Attenuation of the myxoma virus and use of the living attenuated virus as an immunizing agent for myxomatosis | |
| RU2264458C1 (ru) | Штамм n101 вниизж rotavirus крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов | |
| RU2403061C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной болезни, вирусной диареи и пастереллеза крупного рогатого скота | |
| RU2452512C2 (ru) | Вакцина ассоциированная против парвовирусной, реовирусной, герпесвирусной типа i инфекций и вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная | |
| RU2517733C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против аденовирусной, герпесвирусной инфекцией, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная | |
| RU2395298C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезней крупного рогатого скота | |
| RU2302258C1 (ru) | Вакцина против ротавирусной инфекции крупного рогатого скота сорбированная инактивированная | |
| RU2395297C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и лептоспироза крупного рогатого скота | |
| CN111686246A (zh) | 一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗及其制备方法 | |
| RU2802251C1 (ru) | Вакцинная композиция для профилактики энзоотического аборта у овец | |
| RU2515058C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против вирусной диареи, ротавирусной и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная | |
| RU2798283C1 (ru) | Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов | |
| Balaganesan et al. | Humoral immune response of turkey pox vaccine: Serological validation and histopathological study | |
| RU2457859C1 (ru) | Вакцина против вирусной диареи крупного рогатого скота | |
| RU2395299C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота |