RU2268942C1 - METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 - Google Patents
METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2268942C1 RU2268942C1 RU2004121536/13A RU2004121536A RU2268942C1 RU 2268942 C1 RU2268942 C1 RU 2268942C1 RU 2004121536/13 A RU2004121536/13 A RU 2004121536/13A RU 2004121536 A RU2004121536 A RU 2004121536A RU 2268942 C1 RU2268942 C1 RU 2268942C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vibrio cholerae
- differentiation
- phage
- strains
- Prior art date
Links
- 241000194314 Vibrio cholerae O139 Species 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 claims abstract description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000282342 Martes americana Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 claims abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 abstract description 19
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 abstract description 14
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 abstract description 10
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000607343 Vibrio cholerae O1 biovar El Tor Species 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 2
- PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2h-chromen-2-one Chemical group C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2C PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике холеры.The present invention relates to medical microbiology and can be used in laboratory diagnosis of cholera.
Особенностью штаммов Vibrio cholerae O139 «Бенгал», поступивших в Ростовский НИПЧИ из различных стран (Индия, Япония, Франция, Киргизия), и других выделенных в России явилось наличие лизогении. Обнаружение специфической метки в виде лизогенности по фагам различных морфогрупп и серологических типов было важно для идентификации токсигенных вибрионов O139 серогруппы. Холерные диагностические бактериофаги, используемые для индикации возбудителя холеры, а также специальные методы дифференциации холерных вибрионов по некоторым признакам оказались непригодными для Vibrio cholerae O139 в связи с фагорезистентностью последних. В связи с этим и возникла проблема разработки посредством фаговых методов, а именно профаготипированием и лизисом специфическим фагом, внутривидовой дифференциации штаммов Vibrio cholerae O139.The peculiarity of the Vibrio cholerae O139 Bengal strains that arrived at the Rostov NIPCH from various countries (India, Japan, France, Kyrgyzstan) and other ones isolated in Russia was the presence of lysogenesis. The detection of a specific label in the form of lysogenicity in phages of various morphogroups and serological types was important for the identification of toxigenic vibrios of the O139 serogroup. The cholera diagnostic bacteriophages used to indicate the cholera causative agent, as well as special methods for differentiating cholera vibrioes by some signs, turned out to be unsuitable for Vibrio cholerae O139 due to the phage resistance of the latter. In this regard, a problem arose by means of phage methods, namely, profagotyping and lysis by a specific phage, of intraspecific differentiation of Vibrio cholerae O139 strains.
Известен способ фаготипирования Vibrio cholerae O139 (см. Индия, Чакрабати и др., журнал J. Clin Microbiol, 2000, Jan. 38 (1): 44-9), заключающийся в том, что посредством пяти фагов, выделенных в эпидемию, 500: штаммов холерных вибрионов O139 серогруппы распределили на 10 фаготипов.A known method for phagotyping Vibrio cholerae O139 (see India, Chakrabati et al., J. Clin Microbiol, 2000, Jan. 38 (1): 44-9), which consists in the fact that through five phages isolated in the epidemic, 500 : serogroup cholera vibrio O139 strains were distributed into 10 phagotypes.
Однако несмотря на то, что предложенный метод дает возможность дифференцировать штаммы нового серотипа, использовать его в России не представляется возможным, так как в нашей стране диагностические и типирующие фаги для холерных вибрионов O139 серогруппы отсутствуют.However, despite the fact that the proposed method makes it possible to differentiate strains of a new serotype, it is not possible to use it in Russia, since in our country there are no diagnostic and typing phages for serogroup O139 cholera vibrios.
За прототип выбран способ дифференциации эпидемических и неэпидемических вибрионов вида Vibrio eltor по типу иммунитета их умеренных фагов (см. RU пат. №1767879, кл. С 12 Q 1/04, 1994 г. (01.30), в котором применяют в качестве тест-системы две индикаторные культуры Vibrio eltor 570/КМ-114/ и 570/222 Н/КМ-117/, при этом штамм КМ-114 чувствителен к холерным умеренным фагам всех известных иммунотипов, а его субкультура штамм КМ-117 обладает устойчивостью к литическому действию фагов III иммунотипа, при этом выявляя посредством данной тест-системы штаммы V. eltor, несущие фаги III иммунотипа V морфогруппы, последние расцениваются как подозрительные на принадлежность к эпидемическим.For the prototype, a method of differentiation of epidemic and non-epidemic vibrios of the species Vibrio eltor according to the type of immunity of their moderate phages was selected (see RU Pat. No. 1767879, class C 12 Q 1/04, 1994 (01.30), in which they are used as a test the system is two indicator cultures of Vibrio eltor 570 / KM-114 / and 570/222 N / KM-117 /, the strain KM-114 is sensitive to cholera moderate phages of all known immunotypes, and its subculture strain KM-117 is resistant to lytic action phages of the III immunotype, while identifying through this test system strains of V. eltor carrying phages III of the immunotype V morfogruppy, last regarded as suspect of belonging to the epidemic.
Недостатком известного способа дифференциации является то, что с его помощью невозможно осуществлять внутривидовую дифференциацию холерных вибрионов O139 серогруппы, которые содержат различные по морфологии и антигенным свойствам испытуемые на лизис фаги, так как у штаммов новой серогруппы встречается носительство фагов двух морфогрупп I и V, либо только I, либо только V. Это обстоятельство подтверждает недостаточную точность известного способа.A disadvantage of the known method of differentiation is that it is impossible to carry out intraspecific differentiation of serogroup O139 cholera vibrios that contain phage lyses tested by morphology and antigenic properties, since the carriage of new serogroup strains contains carriage of phages of two morphogroups I and V, or only I, or only V. This circumstance confirms the insufficient accuracy of the known method.
Задача предлагаемого изобретения состояла в разработке способа внутривидовой дифференциации V. cholerae O139, позволяющего с высокой точностью проводить разграничение штаммов по маркерному фаговому признаку.The objective of the invention was to develop a method of intraspecific differentiation of V. cholerae O139, which allows high-precision differentiation of strains by marker phage trait.
Поставленная задача достигается тем, что в известном способе внутривидовой дифференциации V.cholerae O139, включающем совместное инкубирование испытываемой культуры с индикаторным тест-штаммом с последующим фаготипированием, в качестве тест-штаммов используют фагочувствительные штаммы V.cholerae eltor KM-199 и V.cholerae O139 KM-152, а дифференциацию проводят в два этапа, по первому этапу в качестве индикаторного штамма используют V. cholerae eltor KM-199, инкубируют его с исследуемой культурой в течение 20-24 часов, затем полученную смесь микроорганизмов при температуре 55-57°С прогревают 40-60 минут и высевают на газоны индикаторного штамма V. cholerae eltor KM-199, который предварительно засевают в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена, причем через сутки выращивания при 37°С проводят регистрацию фаголизиса, при этом второй этап дифференциации осуществляют, используя фаг, полученный из лизогенного штамма испытуемой культуры путем его нанесения на индикаторный штамм V. cholerae O139 КМ-152, с помощью которого выявляют только филаментозные фаги, проводя прямое фаготипирование.This object is achieved in that in the known method of intraspecific differentiation of V. cholerae O139, including co-incubation of the test culture with an indicator test strain followed by phagotyping, phage-sensitive strains of V. cholerae eltor KM-199 and V. cholerae O139 are used as test strains KM-152, and the differentiation is carried out in two stages, according to the first stage V. cholerae eltor KM-199 is used as an indicator strain, incubated with the test culture for 20-24 hours, then the resulting mixture of microorganisms at a temperature of 55- 57 ° C is heated for 40-60 minutes and sown on the lawns of the indicator strain V. cholerae eltor KM-199, which is previously seeded in a 0.7% agar layer on a plate of 1.5% Marten agar, and after one day of cultivation at 37 ° C, registration of phagolysis, while the second stage of differentiation is carried out using a phage obtained from a lysogenic strain of the test culture by applying it to the indicator strain V. cholerae O139 KM-152, with which only filamentous phages are detected by direct phagotyping.
Для осуществления способа используют два штамма холерных вибрионов в качестве тест-системы V. cholerae eltor и V. cholerae SG-36 (O139 серогруппа). Штамм V.cholerae eltor (P-13169) депонирован под номером КМ-199 в ГКПБРНИПЧИ «Микроб», г.Саратов и характеризуется следующими признаками.To implement the method, two strains of cholera vibrios are used as the test system V. cholerae eltor and V. cholerae SG-36 (O139 serogroup). The strain V. cholerae eltor (P-13169) was deposited under the number KM-199 in GKPRBNIPCHI "Microbe", Saratov and is characterized by the following characteristics.
Культурально-морфологические признаки.Cultural and morphological characters.
Подвижные, слегка изогнутые палочки длиной 1,2-2,7 мкм, диаметр 0,2-0,4 мкм с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны.Movable, slightly curved rods 1.2-2.7 microns long, 0.2-0.4 microns in diameter with one polar flagellum. Spore and capsules do not form. Gram-negative.
На плотных средах - агар Мартена и агар Хоттингера, pH 7,6±0,2 - образует полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, 1,5±0,5 мм в диаметре.On solid media - Marten agar and Hottinger agar, pH 7.6 ± 0.2 - forms translucent colonies with a bluish tint, 1.5 ± 0.5 mm in diameter.
В жидких средах - бульон Мартена и бульон Хоттингера, 1%-ная пептонная вода, pH 7,8±0,2 образует равномерную муть, тонкую пленку на поверхности среды.In liquid media - Marten broth and Hottinger broth, 1% peptone water, pH 7.8 ± 0.2 forms a uniform turbidity, a thin film on the surface of the medium.
Биохимические свойства.Biochemical properties.
Разлагает до кислоты без газа маннозу, сахарозу, глюкозу, манит, не расщепляет арабинозу, окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона в аэробных и анаэробных условиях (на 4-е сутки), декарбоксилирует лизин, не расщепляет аргинин, не образует сероводород. Штамм устойчив к 30 мкг/мл полимиксина.It decomposes mannose, sucrose, glucose, beckons to acid without gas, does not break down arabinose, oxidizes glucose in a Hugh-Leifson environment under aerobic and anaerobic conditions (on the 4th day), decarboxylates lysine, does not break down arginine, does not form hydrogen sulfide. The strain is resistant to 30 μg / ml polymyxin.
Серологические свойства.Serological properties.
Отношение к гомо-гетерологичным фагам: штамм лизируется диагностическими фагами эльтор, ctx+, ctx-, фагом холерным классическим «С» не лизируется. Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам: штамм агглютинируется О-холерной сывороткой и сывороткой Огава, но не агглютинируется сыворотками Инаба, RO.Relation to homo-heterologous phages: the strain is lysed by the diagnostic phages eltor, ctx + , ctx - , the classical cholera phage “C” is not lysed. The ratio of strain to species diagnostic sera: the strain is agglutinated with O-cholera serum and Ogawa serum, but not agglutinated with Inaba, RO sera.
Штамм V. cholerae SG-36 (O139 серогруппа) депонирован под номером КМ-152 и характеризуется следующими признаками.Strain V. cholerae SG-36 (O139 serogroup) is deposited under the number KM-152 and is characterized by the following features.
Культурально-морфологические признаки.Cultural and morphological characters.
В мазках из агаровых и бульонных культур, окрашенных по Граму, клетки имеют вид грамотрицательных, полиморфных, слегка изогнутых и прямых палочек. Подвижны, при выращивании в 0,3% щелочном агаре наблюдается помутнение столбика агара. При просмотре в электронном микроскопе - монотрихи.In smears from agar and broth cultures stained according to Gram, the cells look like gram-negative, polymorphic, slightly curved and straight sticks. They are motile; when grown in 0.3% alkaline agar, turbidity of the agar column is observed. When viewed in an electron microscope - monotrichi.
Рост на твердых питательных средах на щелочном агаре (pH 7,6-7,8), вибрионы образуют через 18 часов роста при 37°С колонии правильной формы, диаметром 1,5-2 мм, с влажной блестящей поверхностью, полупрозрачные в проходящем свете.Growth on solid nutrient media on alkaline agar (pH 7.6-7.8), vibrios form colonies of regular shape, diameter 1.5-2 mm, with a shiny shiny surface, translucent in transmitted light after 18 hours of growth at 37 ° C .
Рост на жидких питательных средах: на щелочном бульоне - помутнение с нежной пленкой.Growth on liquid nutrient media: on alkaline broth - turbidity with a delicate film.
Биохимическая активность штамма: штамм разлагает глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, маннозу, сахарозу, глюкозу, маннит, крахмал с образованием кислоты без газа, не продуцирует ацетилметилкарбинол, индол, декарбоксилирует лизин, не расщепляет аргинин, арабинозу, не образует сероводород. Штамм устойчив к 30 мкг/мл полимиксина.Biochemical activity of the strain: the strain decomposes glucose under aerobic and anaerobic conditions, mannose, sucrose, glucose, mannitol, starch with the formation of acid without gas, does not produce acetylmethylcarbinol, indole, decarboxylates lysine, does not break down arginine, arabinose, does not form hydrogen sulfide. The strain is resistant to 30 μg / ml polymyxin.
Отношение к гомо-гетерологичным фагам: штамм не лизируется диагностическими фагами: холерными классическим эльтор, ТЭПВ 1-7, лизируется фагом I морфогруппы 16488, выделенным из V. cholerae O139-16488. Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам: штамм агглютинируется сывороткой O139 серогруппы, произведенной в РПЧИ; не агглютинируется О-холерной сывороткой и типоспецифическими сыворотками Инаба, Огава, RO. Штамм O139 серогруппы вирулентен для кроликов-сосунков в дозе 107 м.к.Relation to homo-heterologous phages: the strain is not lysed by diagnostic phages: classical eltor cholera, TEPV 1-7, lysed by phage I of morphogroup 16488 isolated from V. cholerae O139-16488. The ratio of the strain to specific diagnostic sera: the strain is agglutinated with serum O139 of the serogroup produced in RFI; not agglutinated by O-cholera serum and type-specific sera of Inaba, Ogawa, RO. Strain O139 serogroup virulent for sucker rabbits at a dose of 10 7 MK
Генетические особенности штамма: лизогенный, ctx+, tcp-. Штамм не способен расщеплять синтетический субстрат для нейраминидазы 2-(4-метилумбеллиферил)-N-ацетил-L-D-нейраминовую кислоту.Genetic features of the strain: lysogenic, ctx + , tcp - . The strain is not able to cleave the synthetic substrate for neuraminidase 2- (4-methylumbelliferyl) -N-acetyl-LD-neuraminic acid.
Продукт, синтезируемый штаммом: продуцент умеренного фага, серологически родственного фагам холерных вибрионов эльтор, II серотипа, III иммунной категории.The product synthesized by the strain: producer of a moderate phage serologically related to the phages of cholera vibrios Eltor, II serotype, III immune category.
Активность (продуктивность) штамма: продуцирует умеренный фаг в титре 107/мл.The activity (productivity) of the strain: produces moderate phage in a titer of 10 7 / ml
Пример 1.Example 1
Готовят взвесь из клеточной суспензии фагочувствительного индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor KM-199 и исследуемого штамма Vibrio cholerae O139 (Р-16488), для этого по 1 петле суточных агаровых культур вносят в одну пробирку с 2 мл бульона Мартена (pH 7,6-7,8), проводят инкубирование в течение 20 часов при температуре 37°С. Затем смесь прогревают до температуры 55-57°С в течение часа и наносят каплю взвеси на газон штамма Vibrio eltor KM-199, предварительно засеянного в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена.A suspension is prepared from a cell suspension of the phagosensitive indicator strain Vibrio cholerae eltor KM-199 and the test strain Vibrio cholerae O139 (P-16488); for this, 1 loop of daily agar cultures is added to one tube with 2 ml of Marten broth (pH 7.6-7 , 8), incubation is carried out for 20 hours at a temperature of 37 ° C. Then the mixture is heated to a temperature of 55-57 ° C for one hour and a drop of suspension is applied to the lawn of strain Vibrio eltor KM-199, previously seeded in a layer of 0.7% agar on a plate of 1.5% Marten agar.
Учет проводят через 24 часа выращивания при 37°С, при этом в месте нанесения капли образуется зона просветления газона. В результате исследуемый штамм V. cholerae O139 (Р-16488) является лизогенным и выделяет фаг.Accounting is carried out after 24 hours of cultivation at 37 ° C, while a zone of enlightenment of the lawn is formed at the place of application of the drop. As a result, the studied strain V. cholerae O139 (P-16488) is lysogenic and secrete phage.
Тест-штамм V. cholerae eltor KM-199 (Р-13169) является универсально чувствительным по всем типам фагов O139, позволяя таким образом осуществлять дифференциацию штаммов V.cholerae O139 по их лизогенности и нелизогенности (см. таблицу).The test strain V. cholerae eltor KM-199 (P-13169) is universally sensitive for all types of O139 phages, thus allowing differentiation of V. cholerae O139 strains by their lysogenicity and non-lyzogenicity (see table).
Следующим (вторым этапом) способа является использование индикаторного штамма V. cholerae KM-152 (Р-16373) для фагов V. cholerae O139 I морфогруппы. Для этого 0,5-1 мл 4 часовой бульонной культуры штамма КМ-152 вносят в 4 мл 0,7% агара Мартена и выливают на агаровую пластинку, затем на газон культуры наносят в виде «дорожки» каплю фага, выделенного из V. cholerae O139 (Р-16488) ФБ. На газоне штамма КМ-152 фаг БФ формирует мутные зоны лизиса. Штамм КМ-152 позволяет выявлять только филаментозные фаги, к которым штамм КМ-152 чувствителен и обладает устойчивостью к другим умеренным фагам III иммунотипа, имеющим головку и отросток.The next (second step) of the method is the use of the indicator strain V. cholerae KM-152 (P-16373) for phages of V. cholerae O139 I morphogroup. To do this, 0.5-1 ml of a 4-hour broth culture of strain KM-152 is added to 4 ml of 0.7% Marten agar and poured onto an agar plate, then a drop of phage isolated from V. cholerae is applied in the form of a “path” O139 (P-16488) FB. On the lawn of strain KM-152, phage BF forms turbid lysis zones. The strain KM-152 allows only filamentous phages to be detected, to which the strain KM-152 is sensitive and resistant to other moderate phages of the III immunotype with a head and a process.
Кроме того, в результате экспериментов было выявлено, что фаги I морфогруппы V. cholerae O139 отличаются от фагов V морфогруппы высокой чувствительностью к хлороформу. В результате воздействия на фаги хлороформом 1:10 фаги I морфогруппы погибали, а фаги V морфогруппы оставались жизнеспособными. В связи с этим для инактивации клеток смешанной культуры (индикаторный штамм с лизогенной культурой) при выделении фага используют прогревание при температуре 55-57°С в течение 40-60 минут, при этом фаги I и V морфогруппы сохраняются жизнеспособными.In addition, as a result of experiments, it was revealed that phages I of the morphogroup V. cholerae O139 differ from phages V of the morphogroup with high sensitivity to chloroform. As a result of exposure to phages with chloroform 1:10, phages I of the morphogroup died, and phages V of the morphogroup remained viable. In this regard, to inactivate cells of a mixed culture (indicator strain with a lysogenic culture) when phage is isolated, heating is used at a temperature of 55-57 ° C for 40-60 minutes, while the phages I and V of the morphogroup remain viable.
Пример 2.Example 2
Выполняют, как описано в примере 1, используя смесь V. cholerae eltor KM-199 и V. cholerae O139 (Р-17625). Смесь прогревают при температуре 56°С в течение 40 минут, а затем наносят каплю взвеси в виде «дорожки» на газон штамма V. eltor KM-199, предварительно засеянного в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена. Учет проводят через 24 часа выращивания при 37°С, при этом в месте нанесения капли не образуется зона лизиса культуры.Perform, as described in example 1, using a mixture of V. cholerae eltor KM-199 and V. cholerae O139 (P-17625). The mixture is heated at a temperature of 56 ° C for 40 minutes, and then a drop of suspension is applied as a “track” on the lawn of strain V. eltor KM-199, previously seeded in a layer of 0.7% agar on a plate of 1.5% Marten agar. Accounting is carried out after 24 hours of cultivation at 37 ° C, while at the place of application of the drop, a zone of lysis of the culture is not formed.
Следовательно, исследуемый штамм V. cholerae O139 (Р-17625) нелизогенный и фаг не выделяет.Therefore, the studied strain V. cholerae O139 (P-17625) is non-isogenic and does not secrete phage.
Предложенный способ внутривидовой дифференциации был разработан на основании изучения новых эпидемических штаммов токсигенных V. cholerae O139 серогруппы специалистами Ростовского НИПЧИ. Было изучено 50 штаммов, из которых 25 ctx+ tcp+ штаммов выделены от больных холерой и 25 ctx- tcp- культур изолированы из проб внешней среды (см. таблицу).The proposed method of intraspecific differentiation was developed on the basis of the study of new epidemic strains of toxigenic V. cholerae O139 serogroup by specialists of the Rostov Research Institute of Nuclear Research. 50 strains were studied, of whom 25 ctx + tcp + strains isolated from patients with cholera and 25 ctx - tcp - cultures are isolated from the outside environment of samples (see table.).
По известному способу штаммы были разделены на лизогенные (25 штаммов ctx+ tcp+) и нелизогенные (25 штаммов ctx- tcp-). Фаг III иммунотипа содержали 6 штаммов.By a known method, the strains were divided into lysogenic (25 strains of ctx + tcp + ) and non-lysogenic (25 strains of ctx - tcp - ). Phage III immunotype contained 6 strains.
По предлагаемому способу фагопродукция на индикаторе КМ-199 обнаружена у 25 ctx+ tcp+ штаммов, 25 ctx- tcp- штаммы не содержали фаг в супернатанте. Фаг III иммунотипа выявлен у 6 штаммов, он не лизировал V. cholerae O139 KM-152. Вместе с тем фагопродукция отмечается у 19 штаммов на V. cholerae O139 КМ-152, обеспечивая дополнительно дифференциацию этой группы и повышая эффективность в 3 раза.According to the proposed method fagoproduktsiya KM-199 was detected in the indicator 25 ctx + tcp + strains 25 ctx - tcp - strains did not contain the phage in the supernatant. Phage III immunotype was detected in 6 strains; it did not lyse V. cholerae O139 KM-152. At the same time, phage production was observed in 19 strains on V. cholerae O139 KM-152, providing additional differentiation of this group and increasing efficiency by 3 times.
Практическую ценность представляет выделение по предлагаемому способу фага из штамма V. cholerae O139-P16488, что обеспечивает получение диагностического препарата фага V. cholerae O139.Of practical value is the isolation by the proposed method of phage from strain V. cholerae O139-P16488, which provides a diagnostic preparation of phage V. cholerae O139.
Фаг, выделенный на штамме КМ-199, лизирует 13 штаммов ctx+ tcp+ V. cholerae O139, что улучшает лабораторную диагностику холерных вибрионов новой серогруппы.The phage isolated on strain KM-199 lyses 13 strains of ctx + tcp + V. cholerae O139, which improves the laboratory diagnosis of cholera vibrios of the new serogroup.
В таблице представлены результаты повышения числа дифференцированных штаммов по предлагаемому способу.The table presents the results of increasing the number of differentiated strains of the proposed method.
Использование предлагаемого способа внутривидовой дифференциации V. cholerae O139 позволяет с помощью индикаторных штаммов КМ-199 и КМ-152 в определенной технологической последовательности с высокой точностью проводить фаготипирование, получая при этом дополнительные характеристики холерных вибрионов, выделяемых из клинического материала.Using the proposed method of intraspecific differentiation of V. cholerae O139 allows using indicator strains KM-199 and KM-152 in a certain technological sequence to carry out phagotyping with high accuracy, while receiving additional characteristics of cholera vibrios isolated from clinical material.
Кроме того, фагопродукция и чувствительность к фагу, выделенному из лизогенного штамма, позволяют провести прямое фаготипирование и дают чувствительный способ лабораторной диагностики V.cholerae O139 серогруппы, так как дифференцируются штаммы вибрионов между собой по маркерному фагу и упрощается первичная характеристика изучаемых штаммов по фаготипу, что значительно сокращает время проведения экспресс-анализов и позволяет быстро устанавливать источники инфекции, территорию, регион ее распространения, проведение дифференциации очагов.In addition, phage production and sensitivity to phage isolated from a lysogenic strain allow direct phagotyping and provide a sensitive method for laboratory diagnosis of V. cholerae O139 serogroups, since the vibrio strains differentiate by marker phage and the primary characteristic of the studied strains by phagotype is simplified, which significantly reduces the time for rapid tests and allows you to quickly identify the sources of infection, territory, region of its distribution, differentiation of foci.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (en) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (en) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2268942C1 true RU2268942C1 (en) | 2006-01-27 |
Family
ID=36047893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (en) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2268942C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360972C1 (en) * | 2007-12-18 | 2009-07-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method detection and evaluation of biotype, serogroup and toxigenicity of cholera agent and related kit |
| RU2375457C1 (en) * | 2008-04-29 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method of differentiating atoxigenic strains of cholera vibrios 01 and 0139 serogroups from toxigenic strains on hydrolase activity |
| RU2375437C1 (en) * | 2008-03-11 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for extraction and differentiation of phage vibrio mimicus |
| RU2393231C1 (en) * | 2008-12-29 | 2010-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method for determination of genetic relationship of comma bacilli strains by sequencing genes flanking cluster of o-antigen biosynthesis genes |
| RU2404257C1 (en) * | 2009-07-08 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Complex gene- and immunodiagnostic test-system for identification of cholera vibrions of o1 and o139 serogroups and estimation of their virulence |
| CN102367475A (en) * | 2011-09-20 | 2012-03-07 | 麻丽丹 | M-PCR (multiplex-polymerase chain reaction) detection kit for different serotype vibrio cholerae and detection method thereof |
| CN110177867A (en) * | 2016-12-19 | 2019-08-27 | 绿洲科技有限公司 | Organism selective growth culture medium |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU550850A1 (en) * | 1975-06-25 | 1977-09-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Министерства Здравоохранения Ссср | Method of phagotyping cholera germ |
| SU1373729A1 (en) * | 1986-09-23 | 1988-02-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Strain vibrio cholerae eltor used for cultivating spontaneous bacteriophage 123 |
| SU1388423A1 (en) * | 1986-10-27 | 1988-04-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Strain of vibro cholerae eltor bacteria as producer of moderate bacteriophage ii serotype vi of heteroimmune category |
| SU1767879A1 (en) * | 1989-11-09 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Method of differentiation of epidemic and non-epidemic vibrios species vibrio eltor by immunity of their temperate phages |
-
2004
- 2004-07-13 RU RU2004121536/13A patent/RU2268942C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU550850A1 (en) * | 1975-06-25 | 1977-09-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Министерства Здравоохранения Ссср | Method of phagotyping cholera germ |
| SU1373729A1 (en) * | 1986-09-23 | 1988-02-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Strain vibrio cholerae eltor used for cultivating spontaneous bacteriophage 123 |
| SU1388423A1 (en) * | 1986-10-27 | 1988-04-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Strain of vibro cholerae eltor bacteria as producer of moderate bacteriophage ii serotype vi of heteroimmune category |
| SU1767879A1 (en) * | 1989-11-09 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Method of differentiation of epidemic and non-epidemic vibrios species vibrio eltor by immunity of their temperate phages |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360972C1 (en) * | 2007-12-18 | 2009-07-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method detection and evaluation of biotype, serogroup and toxigenicity of cholera agent and related kit |
| RU2375437C1 (en) * | 2008-03-11 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for extraction and differentiation of phage vibrio mimicus |
| RU2375457C1 (en) * | 2008-04-29 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method of differentiating atoxigenic strains of cholera vibrios 01 and 0139 serogroups from toxigenic strains on hydrolase activity |
| RU2393231C1 (en) * | 2008-12-29 | 2010-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method for determination of genetic relationship of comma bacilli strains by sequencing genes flanking cluster of o-antigen biosynthesis genes |
| RU2404257C1 (en) * | 2009-07-08 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Complex gene- and immunodiagnostic test-system for identification of cholera vibrions of o1 and o139 serogroups and estimation of their virulence |
| CN102367475A (en) * | 2011-09-20 | 2012-03-07 | 麻丽丹 | M-PCR (multiplex-polymerase chain reaction) detection kit for different serotype vibrio cholerae and detection method thereof |
| CN110177867A (en) * | 2016-12-19 | 2019-08-27 | 绿洲科技有限公司 | Organism selective growth culture medium |
| CN110177867B (en) * | 2016-12-19 | 2023-11-21 | 北京百可测科技有限公司 | Organism Selective Growth Medium |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wilson et al. | Use of sodium taurocholate to enhance spore recovery on a medium selective for Clostridium difficile | |
| Bhatia et al. | Essentials of medical microbiology | |
| US4446230A (en) | Test method for the laboratory diagnosis of Gonorrhea and test strain of neisseria gonorrhoeae | |
| RU2268942C1 (en) | METHOD FOR INTRASPECIES DIFFERENTIATION OF Vibrio cholerae O139 | |
| Luechtefeld et al. | Campylobacter fetus subsp. jejuni: background and laboratory diagnosis | |
| CN102807961B (en) | Streptococcus suis 7-type high-density fermentation medium and special strain | |
| Brown et al. | The induction of motility in Bacillus anthracis by means of bacteriophage lysates: significance for the relationship of Bacillus anthracis to Bacillus cereus | |
| Kleven et al. | Mycoplasma infections of poultry | |
| CN111621451A (en) | A kind of bacillus, method for detecting antibiotic residues by using the bacillus and application thereof | |
| Takahashi et al. | Correlation between adherence of Erysipelothrix rhusiopathiae strains of serovar 1a to tissue culture cells originated from porcine kidney and their pathogenicity in mice and swine | |
| RU2707640C1 (en) | Bacterial strain escherichia coli as a control test strain for phenotypic and molecular studies of escherichia o144 serum group | |
| RU2101351C1 (en) | Method of differentiation of anthrax microbe strains by virulence in vitro | |
| RU2819447C1 (en) | Method of lactobacillus casei biofilm formation, separated from periodontal pockets, on inert surfaces | |
| Kroeger et al. | Biochemical and serological reactions of an oral filamentous organism | |
| RU2332453C1 (en) | Vibrio metschnikovii bacteria strain as indicator culture for specific phage detection | |
| RU2817419C1 (en) | Method of lactobacillus fermentum biofilm formation, recovered from periodontal pockets, on inert surfaces | |
| RU2375437C1 (en) | Method for extraction and differentiation of phage vibrio mimicus | |
| RU2339690C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Burkholderia cepacia - AVIRULENT PRODUCER OF BACTERIOPHAGE, LYSING ORIGINATOR OF GLANDERS | |
| Parida et al. | Isolation and identification of pathogenic bacteria from brackish waters of Chilika Lagoon, Odisha, India for pharmaceutical use | |
| RU2149183C1 (en) | Strain of bacterium brucella abortus used for preparing diagnostic and prophylactic biopreparations against brucellosis in animals | |
| CN106167771B (en) | A kind of Bacillus megaterium D122 and its inoculum and preparation method of inoculum | |
| RU2180349C1 (en) | Strain bacillus anthracis km89 as producer of anthrax antigens | |
| SU1400075A1 (en) | Strain of vibrio cholerae cholerae ogava bacteria used for producing cheloric toxin | |
| SU786329A1 (en) | Strain for identification - plasmid | |
| SU1456468A1 (en) | Strain of vibrio cholerae serovara ogava bacteria as producer of choleric toxin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110714 |