RU2268942C1 - СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 - Google Patents
СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2268942C1 RU2268942C1 RU2004121536/13A RU2004121536A RU2268942C1 RU 2268942 C1 RU2268942 C1 RU 2268942C1 RU 2004121536/13 A RU2004121536/13 A RU 2004121536/13A RU 2004121536 A RU2004121536 A RU 2004121536A RU 2268942 C1 RU2268942 C1 RU 2268942C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vibrio cholerae
- differentiation
- phage
- strains
- Prior art date
Links
- 241000194314 Vibrio cholerae O139 Species 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 claims abstract description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000282342 Martes americana Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 claims abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 abstract description 19
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 abstract description 14
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 abstract description 10
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000607343 Vibrio cholerae O1 biovar El Tor Species 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 2
- PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2h-chromen-2-one Chemical group C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2C PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике холеры. Сущность изобретения заключается в том, что в качестве тест-штаммов используют фагочувствительные штаммы Vibrio cholerae eltor KM-199 и Vibrio cholerae O139 KM-152, а дифференциацию проводят в два этапа, по первому этапу в качестве индикаторного штамма используют Vibrio cholerae eltor КМ-199, инкубируют его с исследуемой культурой в течение 20-24 часов. Затем полученную смесь микроорганизмов при температуре 55-57°С прогревают 40-60 минут и высевают на газоны индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor KM-199, который предварительно засевают в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена. Через сутки выращивания при 37°С проводят регистрацию фаголизиса, при этом второй этап дифференциации осуществляют, используя фаг, полученный из лизогенного штамма испытуемой культуры путем его нанесения на индикаторный штамм Vibrio cholerae O139 КМ-152, с помощью которого выявляют только филаментозные фаги, проводя прямое фаготипирование. Использование способа позволяет с высокой точностью проводить фаготипирование с получением дополнительных характеристик холерных вибрионов, выделяемых из клинического материала. 1 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике холеры.
Особенностью штаммов Vibrio cholerae O139 «Бенгал», поступивших в Ростовский НИПЧИ из различных стран (Индия, Япония, Франция, Киргизия), и других выделенных в России явилось наличие лизогении. Обнаружение специфической метки в виде лизогенности по фагам различных морфогрупп и серологических типов было важно для идентификации токсигенных вибрионов O139 серогруппы. Холерные диагностические бактериофаги, используемые для индикации возбудителя холеры, а также специальные методы дифференциации холерных вибрионов по некоторым признакам оказались непригодными для Vibrio cholerae O139 в связи с фагорезистентностью последних. В связи с этим и возникла проблема разработки посредством фаговых методов, а именно профаготипированием и лизисом специфическим фагом, внутривидовой дифференциации штаммов Vibrio cholerae O139.
Известен способ фаготипирования Vibrio cholerae O139 (см. Индия, Чакрабати и др., журнал J. Clin Microbiol, 2000, Jan. 38 (1): 44-9), заключающийся в том, что посредством пяти фагов, выделенных в эпидемию, 500: штаммов холерных вибрионов O139 серогруппы распределили на 10 фаготипов.
Однако несмотря на то, что предложенный метод дает возможность дифференцировать штаммы нового серотипа, использовать его в России не представляется возможным, так как в нашей стране диагностические и типирующие фаги для холерных вибрионов O139 серогруппы отсутствуют.
За прототип выбран способ дифференциации эпидемических и неэпидемических вибрионов вида Vibrio eltor по типу иммунитета их умеренных фагов (см. RU пат. №1767879, кл. С 12 Q 1/04, 1994 г. (01.30), в котором применяют в качестве тест-системы две индикаторные культуры Vibrio eltor 570/КМ-114/ и 570/222 Н/КМ-117/, при этом штамм КМ-114 чувствителен к холерным умеренным фагам всех известных иммунотипов, а его субкультура штамм КМ-117 обладает устойчивостью к литическому действию фагов III иммунотипа, при этом выявляя посредством данной тест-системы штаммы V. eltor, несущие фаги III иммунотипа V морфогруппы, последние расцениваются как подозрительные на принадлежность к эпидемическим.
Недостатком известного способа дифференциации является то, что с его помощью невозможно осуществлять внутривидовую дифференциацию холерных вибрионов O139 серогруппы, которые содержат различные по морфологии и антигенным свойствам испытуемые на лизис фаги, так как у штаммов новой серогруппы встречается носительство фагов двух морфогрупп I и V, либо только I, либо только V. Это обстоятельство подтверждает недостаточную точность известного способа.
Задача предлагаемого изобретения состояла в разработке способа внутривидовой дифференциации V. cholerae O139, позволяющего с высокой точностью проводить разграничение штаммов по маркерному фаговому признаку.
Поставленная задача достигается тем, что в известном способе внутривидовой дифференциации V.cholerae O139, включающем совместное инкубирование испытываемой культуры с индикаторным тест-штаммом с последующим фаготипированием, в качестве тест-штаммов используют фагочувствительные штаммы V.cholerae eltor KM-199 и V.cholerae O139 KM-152, а дифференциацию проводят в два этапа, по первому этапу в качестве индикаторного штамма используют V. cholerae eltor KM-199, инкубируют его с исследуемой культурой в течение 20-24 часов, затем полученную смесь микроорганизмов при температуре 55-57°С прогревают 40-60 минут и высевают на газоны индикаторного штамма V. cholerae eltor KM-199, который предварительно засевают в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена, причем через сутки выращивания при 37°С проводят регистрацию фаголизиса, при этом второй этап дифференциации осуществляют, используя фаг, полученный из лизогенного штамма испытуемой культуры путем его нанесения на индикаторный штамм V. cholerae O139 КМ-152, с помощью которого выявляют только филаментозные фаги, проводя прямое фаготипирование.
Для осуществления способа используют два штамма холерных вибрионов в качестве тест-системы V. cholerae eltor и V. cholerae SG-36 (O139 серогруппа). Штамм V.cholerae eltor (P-13169) депонирован под номером КМ-199 в ГКПБРНИПЧИ «Микроб», г.Саратов и характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки.
Подвижные, слегка изогнутые палочки длиной 1,2-2,7 мкм, диаметр 0,2-0,4 мкм с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны.
На плотных средах - агар Мартена и агар Хоттингера, pH 7,6±0,2 - образует полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, 1,5±0,5 мм в диаметре.
В жидких средах - бульон Мартена и бульон Хоттингера, 1%-ная пептонная вода, pH 7,8±0,2 образует равномерную муть, тонкую пленку на поверхности среды.
Биохимические свойства.
Разлагает до кислоты без газа маннозу, сахарозу, глюкозу, манит, не расщепляет арабинозу, окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона в аэробных и анаэробных условиях (на 4-е сутки), декарбоксилирует лизин, не расщепляет аргинин, не образует сероводород. Штамм устойчив к 30 мкг/мл полимиксина.
Серологические свойства.
Отношение к гомо-гетерологичным фагам: штамм лизируется диагностическими фагами эльтор, ctx+, ctx-, фагом холерным классическим «С» не лизируется. Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам: штамм агглютинируется О-холерной сывороткой и сывороткой Огава, но не агглютинируется сыворотками Инаба, RO.
Штамм V. cholerae SG-36 (O139 серогруппа) депонирован под номером КМ-152 и характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки.
В мазках из агаровых и бульонных культур, окрашенных по Граму, клетки имеют вид грамотрицательных, полиморфных, слегка изогнутых и прямых палочек. Подвижны, при выращивании в 0,3% щелочном агаре наблюдается помутнение столбика агара. При просмотре в электронном микроскопе - монотрихи.
Рост на твердых питательных средах на щелочном агаре (pH 7,6-7,8), вибрионы образуют через 18 часов роста при 37°С колонии правильной формы, диаметром 1,5-2 мм, с влажной блестящей поверхностью, полупрозрачные в проходящем свете.
Рост на жидких питательных средах: на щелочном бульоне - помутнение с нежной пленкой.
Биохимическая активность штамма: штамм разлагает глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, маннозу, сахарозу, глюкозу, маннит, крахмал с образованием кислоты без газа, не продуцирует ацетилметилкарбинол, индол, декарбоксилирует лизин, не расщепляет аргинин, арабинозу, не образует сероводород. Штамм устойчив к 30 мкг/мл полимиксина.
Отношение к гомо-гетерологичным фагам: штамм не лизируется диагностическими фагами: холерными классическим эльтор, ТЭПВ 1-7, лизируется фагом I морфогруппы 16488, выделенным из V. cholerae O139-16488. Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам: штамм агглютинируется сывороткой O139 серогруппы, произведенной в РПЧИ; не агглютинируется О-холерной сывороткой и типоспецифическими сыворотками Инаба, Огава, RO. Штамм O139 серогруппы вирулентен для кроликов-сосунков в дозе 107 м.к.
Генетические особенности штамма: лизогенный, ctx+, tcp-. Штамм не способен расщеплять синтетический субстрат для нейраминидазы 2-(4-метилумбеллиферил)-N-ацетил-L-D-нейраминовую кислоту.
Продукт, синтезируемый штаммом: продуцент умеренного фага, серологически родственного фагам холерных вибрионов эльтор, II серотипа, III иммунной категории.
Активность (продуктивность) штамма: продуцирует умеренный фаг в титре 107/мл.
Пример 1.
Готовят взвесь из клеточной суспензии фагочувствительного индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor KM-199 и исследуемого штамма Vibrio cholerae O139 (Р-16488), для этого по 1 петле суточных агаровых культур вносят в одну пробирку с 2 мл бульона Мартена (pH 7,6-7,8), проводят инкубирование в течение 20 часов при температуре 37°С. Затем смесь прогревают до температуры 55-57°С в течение часа и наносят каплю взвеси на газон штамма Vibrio eltor KM-199, предварительно засеянного в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена.
Учет проводят через 24 часа выращивания при 37°С, при этом в месте нанесения капли образуется зона просветления газона. В результате исследуемый штамм V. cholerae O139 (Р-16488) является лизогенным и выделяет фаг.
Тест-штамм V. cholerae eltor KM-199 (Р-13169) является универсально чувствительным по всем типам фагов O139, позволяя таким образом осуществлять дифференциацию штаммов V.cholerae O139 по их лизогенности и нелизогенности (см. таблицу).
Следующим (вторым этапом) способа является использование индикаторного штамма V. cholerae KM-152 (Р-16373) для фагов V. cholerae O139 I морфогруппы. Для этого 0,5-1 мл 4 часовой бульонной культуры штамма КМ-152 вносят в 4 мл 0,7% агара Мартена и выливают на агаровую пластинку, затем на газон культуры наносят в виде «дорожки» каплю фага, выделенного из V. cholerae O139 (Р-16488) ФБ. На газоне штамма КМ-152 фаг БФ формирует мутные зоны лизиса. Штамм КМ-152 позволяет выявлять только филаментозные фаги, к которым штамм КМ-152 чувствителен и обладает устойчивостью к другим умеренным фагам III иммунотипа, имеющим головку и отросток.
Кроме того, в результате экспериментов было выявлено, что фаги I морфогруппы V. cholerae O139 отличаются от фагов V морфогруппы высокой чувствительностью к хлороформу. В результате воздействия на фаги хлороформом 1:10 фаги I морфогруппы погибали, а фаги V морфогруппы оставались жизнеспособными. В связи с этим для инактивации клеток смешанной культуры (индикаторный штамм с лизогенной культурой) при выделении фага используют прогревание при температуре 55-57°С в течение 40-60 минут, при этом фаги I и V морфогруппы сохраняются жизнеспособными.
Пример 2.
Выполняют, как описано в примере 1, используя смесь V. cholerae eltor KM-199 и V. cholerae O139 (Р-17625). Смесь прогревают при температуре 56°С в течение 40 минут, а затем наносят каплю взвеси в виде «дорожки» на газон штамма V. eltor KM-199, предварительно засеянного в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена. Учет проводят через 24 часа выращивания при 37°С, при этом в месте нанесения капли не образуется зона лизиса культуры.
Следовательно, исследуемый штамм V. cholerae O139 (Р-17625) нелизогенный и фаг не выделяет.
Предложенный способ внутривидовой дифференциации был разработан на основании изучения новых эпидемических штаммов токсигенных V. cholerae O139 серогруппы специалистами Ростовского НИПЧИ. Было изучено 50 штаммов, из которых 25 ctx+ tcp+ штаммов выделены от больных холерой и 25 ctx- tcp- культур изолированы из проб внешней среды (см. таблицу).
По известному способу штаммы были разделены на лизогенные (25 штаммов ctx+ tcp+) и нелизогенные (25 штаммов ctx- tcp-). Фаг III иммунотипа содержали 6 штаммов.
По предлагаемому способу фагопродукция на индикаторе КМ-199 обнаружена у 25 ctx+ tcp+ штаммов, 25 ctx- tcp- штаммы не содержали фаг в супернатанте. Фаг III иммунотипа выявлен у 6 штаммов, он не лизировал V. cholerae O139 KM-152. Вместе с тем фагопродукция отмечается у 19 штаммов на V. cholerae O139 КМ-152, обеспечивая дополнительно дифференциацию этой группы и повышая эффективность в 3 раза.
Практическую ценность представляет выделение по предлагаемому способу фага из штамма V. cholerae O139-P16488, что обеспечивает получение диагностического препарата фага V. cholerae O139.
Фаг, выделенный на штамме КМ-199, лизирует 13 штаммов ctx+ tcp+ V. cholerae O139, что улучшает лабораторную диагностику холерных вибрионов новой серогруппы.
В таблице представлены результаты повышения числа дифференцированных штаммов по предлагаемому способу.
Использование предлагаемого способа внутривидовой дифференциации V. cholerae O139 позволяет с помощью индикаторных штаммов КМ-199 и КМ-152 в определенной технологической последовательности с высокой точностью проводить фаготипирование, получая при этом дополнительные характеристики холерных вибрионов, выделяемых из клинического материала.
Кроме того, фагопродукция и чувствительность к фагу, выделенному из лизогенного штамма, позволяют провести прямое фаготипирование и дают чувствительный способ лабораторной диагностики V.cholerae O139 серогруппы, так как дифференцируются штаммы вибрионов между собой по маркерному фагу и упрощается первичная характеристика изучаемых штаммов по фаготипу, что значительно сокращает время проведения экспресс-анализов и позволяет быстро устанавливать источники инфекции, территорию, регион ее распространения, проведение дифференциации очагов.
| Таблица | ||||||
| Кол-во изученных штаммов V.cholerae O139 | Дифференциация холерных вибрионов O139 серогруппы | |||||
| По предлагаемому способу | По известному способу | |||||
| Фагопродукция | Иммунитет КМ-152 | Лизис фагом из V.cholerae O139 (16488) | Фагопродукция | Иммунитет | ||
| КМ-199 | КМ-152 | КМ-114 | КМ-117 | |||
| 25 ctx+ tcp+ | 25 | 19 | 6 | 13 | 25 | 6 |
| 25 ctx- tcp- | 25 | 0 | 0 | 0 | 25 | 0 |
Claims (1)
- Способ внутривидовой дифференциации Vibrio cholerae О139, включающий совместное инкубирование испытуемой культуры с индикаторным тест-штаммом с последующим фаготипированием, отличающийся тем, что в качестве тест-штаммов используют фагочувствительные штаммы Vibrio cholerae eltor KM-199 и Vibrio cholerae О139 KM-152, а дифференциацию проводят в два этапа, по первому этапу в качестве индикаторного штамма используют Vibrio cholerae KM-199, инкубируют его с исследуемой культурой в течение 20-24 ч, затем полученную смесь микроорганизмов при температуре 55-57°С прогревают 40-60 мин и высевают на газоны индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor KM-199, который предварительно засевают в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена, причем через сутки выращивания при 37°С проводят регистрацию фаголизиса, при этом второй этап дифференциации осуществляют, используя фаг, полученный из лизогенного штамма испытуемой культуры путем его нанесения на индикаторный штамм Vibrio cholerae О139 KM-152, с помощью которого выявляют только филаментозные фаги, проводя прямое фаготипирование.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (ru) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (ru) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2268942C1 true RU2268942C1 (ru) | 2006-01-27 |
Family
ID=36047893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004121536/13A RU2268942C1 (ru) | 2004-07-13 | 2004-07-13 | СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2268942C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360972C1 (ru) * | 2007-12-18 | 2009-07-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ детекции и определения биотипа, серогруппы и токсигенности возбудителя холеры и набор для его осуществления |
| RU2375457C1 (ru) * | 2008-04-29 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации атоксигенных штаммов холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп от токсигенных по гидролазной активности |
| RU2375437C1 (ru) * | 2008-03-11 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ выделения и дифференциации фага vibrio mimicus |
| RU2393231C1 (ru) * | 2008-12-29 | 2010-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ определения генетического родства штаммов холерных вибрионов методом секвенирования генов, фланкирующих кластер генов биосинтеза о-антигена |
| RU2404257C1 (ru) * | 2009-07-08 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Комплексная гено- и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп и оценки их вирулентности |
| CN102367475A (zh) * | 2011-09-20 | 2012-03-07 | 麻丽丹 | 不同血清型霍乱弧菌的m-PCR检测试剂盒及检测方法 |
| CN110177867A (zh) * | 2016-12-19 | 2019-08-27 | 绿洲科技有限公司 | 生物体选择性生长培养基 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU550850A1 (ru) * | 1975-06-25 | 1977-09-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Министерства Здравоохранения Ссср | Способ фаготипировани холерных вибрионов |
| SU1373729A1 (ru) * | 1986-09-23 | 1988-02-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Штамм VIвRIо сноLеRае еLтоR, используемый дл получени спонтанного фага 123 |
| SU1388423A1 (ru) * | 1986-10-27 | 1988-04-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRас еLтоR-продуцент умеренного фага П серотипа у1 гетероиммунной категории |
| SU1767879A1 (ru) * | 1989-11-09 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических вибрионов вида vibrio eltor по типу иммунитета их умеренных фагов |
-
2004
- 2004-07-13 RU RU2004121536/13A patent/RU2268942C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU550850A1 (ru) * | 1975-06-25 | 1977-09-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Министерства Здравоохранения Ссср | Способ фаготипировани холерных вибрионов |
| SU1373729A1 (ru) * | 1986-09-23 | 1988-02-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Штамм VIвRIо сноLеRае еLтоR, используемый дл получени спонтанного фага 123 |
| SU1388423A1 (ru) * | 1986-10-27 | 1988-04-15 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRас еLтоR-продуцент умеренного фага П серотипа у1 гетероиммунной категории |
| SU1767879A1 (ru) * | 1989-11-09 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" | Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических вибрионов вида vibrio eltor по типу иммунитета их умеренных фагов |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360972C1 (ru) * | 2007-12-18 | 2009-07-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ детекции и определения биотипа, серогруппы и токсигенности возбудителя холеры и набор для его осуществления |
| RU2375437C1 (ru) * | 2008-03-11 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ выделения и дифференциации фага vibrio mimicus |
| RU2375457C1 (ru) * | 2008-04-29 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации атоксигенных штаммов холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп от токсигенных по гидролазной активности |
| RU2393231C1 (ru) * | 2008-12-29 | 2010-06-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ определения генетического родства штаммов холерных вибрионов методом секвенирования генов, фланкирующих кластер генов биосинтеза о-антигена |
| RU2404257C1 (ru) * | 2009-07-08 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Комплексная гено- и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп и оценки их вирулентности |
| CN102367475A (zh) * | 2011-09-20 | 2012-03-07 | 麻丽丹 | 不同血清型霍乱弧菌的m-PCR检测试剂盒及检测方法 |
| CN110177867A (zh) * | 2016-12-19 | 2019-08-27 | 绿洲科技有限公司 | 生物体选择性生长培养基 |
| CN110177867B (zh) * | 2016-12-19 | 2023-11-21 | 北京百可测科技有限公司 | 生物体选择性生长培养基 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wilson et al. | Use of sodium taurocholate to enhance spore recovery on a medium selective for Clostridium difficile | |
| Bhatia et al. | Essentials of medical microbiology | |
| US4446230A (en) | Test method for the laboratory diagnosis of Gonorrhea and test strain of neisseria gonorrhoeae | |
| RU2268942C1 (ru) | СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ Vibrio cholerae О139 | |
| Luechtefeld et al. | Campylobacter fetus subsp. jejuni: background and laboratory diagnosis | |
| CN102807961B (zh) | 一种猪链球菌7型高密度发酵培养基及专用菌株 | |
| Brown et al. | The induction of motility in Bacillus anthracis by means of bacteriophage lysates: significance for the relationship of Bacillus anthracis to Bacillus cereus | |
| Kleven et al. | Mycoplasma infections of poultry | |
| CN111621451A (zh) | 一种芽孢杆菌、利用该芽孢杆菌进行抗生素残留检测的方法及其应用 | |
| Takahashi et al. | Correlation between adherence of Erysipelothrix rhusiopathiae strains of serovar 1a to tissue culture cells originated from porcine kidney and their pathogenicity in mice and swine | |
| RU2707640C1 (ru) | Штамм бактерий escherichia coli в качестве контрольного тест-штамма для фенотипических и молекулярных исследований эшерихий серологической группы о144 | |
| RU2101351C1 (ru) | Способ дифференциации штаммов сибиреязвенного микроба по вирулентности in vitro | |
| RU2819447C1 (ru) | Способ формирования биопленки lactobacillus casei, выделенных из пародонтальных карманов, на инертных поверхностях | |
| Kroeger et al. | Biochemical and serological reactions of an oral filamentous organism | |
| RU2332453C1 (ru) | Штамм бактерий vibrio metschnikovii, используемый в качестве индикаторной культуры для выявления специфического фага | |
| RU2817419C1 (ru) | Способ формирования биопленки lactobacillus fermentum, выделенных из пародонтальных карманов, на инертных поверхностях | |
| RU2375437C1 (ru) | Способ выделения и дифференциации фага vibrio mimicus | |
| RU2339690C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Burkholderia cepacia - АВИРУЛЕНТНЫЙ ПРОДУЦЕНТ БАКТЕРИОФАГА, ЛИЗИРУЮЩЕГО ВОЗБУДИТЕЛЯ САПА | |
| Parida et al. | Isolation and identification of pathogenic bacteria from brackish waters of Chilika Lagoon, Odisha, India for pharmaceutical use | |
| RU2149183C1 (ru) | Штамм бактерий brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных | |
| CN106167771B (zh) | 一种巨大芽孢杆菌d122及其菌剂和菌剂制备方法 | |
| RU2180349C1 (ru) | Штамм bacillus anthracis km 89 - продуцент сибиреязвенных антигенов | |
| SU1400075A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае OGaWa, используемый дл получени холерного токсина | |
| SU786329A1 (ru) | Штамм дл идентификации -плазмид | |
| SU1456468A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае серовара Огава-продуцент холерного токсина |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110714 |