SA01220163B1 - جهاز وطرق لتحضير خلايا غير متمايزة undiferentiated CELLS - Google Patents

جهاز وطرق لتحضير خلايا غير متمايزة undiferentiated CELLS Download PDF

Info

Publication number
SA01220163B1
SA01220163B1 SA01220163A SA01220163A SA01220163B1 SA 01220163 B1 SA01220163 B1 SA 01220163B1 SA 01220163 A SA01220163 A SA 01220163A SA 01220163 A SA01220163 A SA 01220163A SA 01220163 B1 SA01220163 B1 SA 01220163B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
cells
cell
receptor
undifferentiated
hla
Prior art date
Application number
SA01220163A
Other languages
English (en)
Inventor
د. الهام محمد صالح سعيد ابو الجدايل
Original Assignee
تريستيم تريدنج (قبرص) ليمتد
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27447916&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SA01220163(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US09/568,254 external-priority patent/US9068164B1/en
Priority claimed from GB0101315A external-priority patent/GB0101315D0/en
Priority claimed from GB0107093A external-priority patent/GB0107093D0/en
Application filed by تريستيم تريدنج (قبرص) ليمتد filed Critical تريستيم تريدنج (قبرص) ليمتد
Publication of SA01220163B1 publication Critical patent/SA01220163B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/12—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of temperature
    • C12M41/14—Incubators; Climatic chambers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/04—Flat or tray type, drawers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/26—Constructional details, e.g. recesses, hinges flexible
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M27/00—Means for mixing, agitating or circulating fluids in the vessel
    • C12M27/02—Stirrer or mobile mixing elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/48—Automatic or computerized control
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/14—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
    • C12N2506/11—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from blood or immune system cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Computer Hardware Design (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

الملخص: يتعلق هذا الاختراع بجهاز لتحضير خلايا جذعية غير متمايزة undifferentiated stem cells أو من أجل إجراء تمايز ارتجاعي retrodifferentiate للخلايا من تجمع لخلايا متحولة committed cells، حيث يتكون هذا الجهاز من حجرة chamber، وسيلة لإدخال خلايا إلى هذه الحجرة، وسيلة لإدخال وسيلة تمايز ارتجاعي إلى الحجرة المذكورة ووسيلة حضن incubation للخلايا المذكورة. ويمكن أن يشتمل الجهاز على وسيلة لعد الخلايا، حجرات تخزين storage chambers، وسيلة للتحكم بمستويات ثاني أكسيد الكربون carbon dioxide، وسائل توقيت timers، إلخ. ويمكن أن تكون الخلايا عبارة عن خلايا مكونة للدم haematopoietic cells تختار باستخدام واسمات على السطح surface markers وتتضمن +CD38- ،HLA-DR- ،CD34، CD90 ،AC133 ،CD117 أو CD451ow وتكون عبارة عن معقد توافق الأنسجة الرئيسيMajor Histocompatibility Complex(MHC) من الفئة +I أو الفئة +II. ويمكن أن يكون عامل التمايز الارتجاعي عبارة عن جسم مضادantibody لمستقبل HLA-DR. والأفضل أن يحصل على الخلايا المتحولة من عينة دم من طبقة طافية buffy coat blood sample. وبشكل بديل يتعلق الاختراع بطرق لتحضير خلايا غير متمايزة من خلايا متحولة عن طريق تغيير تركيز الأيونات الحرة free ions، التي تتضمن الكالسيوم calcium والمغنيسيوم magnesium، في الأوساط media. ، ٢٣ شكل

Description

Y undifferentiated cells ‏غير متمايزة‎ WDA ‏جهاز وطرق لتحضير‎ ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع:‎ ‏يتعلق الاختراع الراهن بجهاز. وأكثر تفصيلا؛ يتعلق الاختراع الراهن بجهاز لتحضير‎
J yan ‏وليس‎ dass ‏ويتعلق الاختراع الراهن‎ undifferentiated cell ‏خلية غير متمايزة‎ ‏بجهاز لتحضير خلية غير متمايزة من خلية أكثر تحولاً. وفي جانب آخرء يتعلق الاختراع‎ ‏الراهن بطريقة لتشكيل خلايا غير متمايزة.‎ 6 إن عملية التمايز ‎differentiation‏ هي عملية تحويل بنيات ‎structure‏ ووظائف ‎function‏ ‏الخلايا بشكل متواصل لإنتاج خلايا أكثر تخصيصاً؛ ‎Jie‏ تكوين الخلايا 7 أو الخلايا 8 من أسلاف مكونة للدم غير ناضجة ‎immature haematopoietic precursors‏ ولذلك ‎Lexie‏ تصبح الخلايا أكثر تحولاء فإنها تزداد تخصصاً. وفي غالبية أنواع الخلايا الثدبية ‎«mammalian cells‏ ‎١١‏ نتم عملية تمايز الخلايا في اتجاه واحد وتؤدي جوهرياً إلى خلايا متمايزة في النهاية ‎٠‏ ومع أن بعض أنواع الخلايا يوجد طوال الحياة بدون انقسام وبدون استبدال؛ فإن العديد من أنواع الخلايا تستمر بالانقسام أثناء حياة الكائن العضوي ‎organism‏ ويحدث تجديد لها. وقد يتم هذا بالاتقسام البسيط ‎simple division‏ (مثل خلايا الكبد ‎(liver‏ أو كما يحدث في خلايا مكونة للدم وخلايا بشروية ‎epidermal cells‏ عن طريق انقسام الخلايا الجذعية ‎stem cells‏ غير المتمايزة ‎Lows Vo‏ الذي يتبعه تحول ‎WAY gaa)‏ الإبنة ‎daughter cells‏ وفقاً لبرنامج تمايز لاحق غير عكوس. غير أن جميع هذه العمليات تشترك بسمة واحدة وهي أن الخلايا تحافظ على حالة التمايز الخاصة بها أو تصبح أكثر تمايزآ؛ لكنها لا تصبح غير متمايزة أو أقل تمايزاً. وعملية التمايز الارتجاعي ‎retrodifferentiation‏ هي عملية يتم بواسطتها تغيير بنيات ووظائف الخلايا بشكل متواصل لإنتاج ‎WDA‏ أقل تخصصاً. وتخضع بعض ‎WRN‏ بشكل
YVYAA v ‏استجابة لتلف الأنسجة‎ 18 vive ‏طبيعي لتمايز عكوس محدود (تمايز ارتجاعي) في جسم الحي‎ ‏فعلى سبيل المثال لوحظ أن خلايا الكبد تعود إلى نموذج تعبير أنزيمي‎ tissue damage ‏أثناء‎ foetal enzymic pattern ‏للنموذج الأنزيمي الجنيني‎ Flas enzyme expression ‏عنتمم‎ ‎Curtin and Snell, 1983, BrJ. aa al ‏(انظر ما جاء في‎ liver regeneration ‏تكوين الكبد‎ (Cancer, Vol. 48; 495-505 ٠ ‏أنه بالإمكان معالجة خلايا‎ AT YYAY ‏الاختراع الدولي رقم‎ Bel ‏وأوضح طلب‎ ‏فيها الخلايا الجذعية. وتكون هذه الخلايا غير‎ Le ‏متمايزة بحيث تصبح خلايا غير متمايزة؛‎ redifferentiated progeny ‏وإنتاج نسل أعيد تمايزه‎ proliferating ‏المتمايزة قادرة على التكاثر‎ ‏أو سلالة أخرى. وفي حالة الخلايا المكونة للدم المتمايزة ارتجاعياء‎ lineage ‏من نفس السلالة‎ ‏ويمكن أن تعطي أكثر من‎ pluripotent ‏وافرة القوة‎ LOA ‏تكون هذه الخلايا الجذعية عبارة عن‎ yo ‏في طلب براءة الاختراع الدولي‎ seminal ‏سلالة خلوية واحدة. وكانت النتيجة الخاصة بالمني‎
Lila ‏رقم 97/777976 غير متوقعة‎ ‏لهذه النتيجة كثيرة؛ فالخلايا الجذعية‎ clinical implications ‏الدلائل الإكلينيكية‎ cals ‏ويتم الحصول عليها عادة من النسيج السري‎ lll ‏يصعب جدآً الحصول عليها من مرضى‎
Jaa ‏تتواجد بكميات صغيرة‎ Cua blood ‏أو الدم‎ bone marrow ‏نضاع العظم‎ umbilical tissue yo ‏وتحديد‎ snd ‏غير أن الاختراع الراهن يزو جهازا لإنتاج الخلايا الجذعية من خلايا أكثر‎ ‏باستخدام عملية التمايز الارتجاعي.‎ ‏طريقة للتمايز التبادلي‎ ge TAVITA ‏وكشفت براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ ‏يتم فيها إزالة تمايز‎ 0600081 cells ‏عصبية‎ WA ‏البشروية إلى‎ WAN transdifferentiating ‏وبالمثل‎ cabin ‏البشروية أو تمايزها ارتجاعياً باستخدام وسط‎ WAY dedifferentiated ٠
Journal of Cell Science 113, 556-566 ‏ومعاونوه في المرجع‎ Lake JA ‏وكشف جيه ايه لاك‎
Journal of Cell Science 112, 601-612 (1999) ‏في المرجع‎ Rathjen J Cadi y ‏وجيه‎ (2000) ‏مشابهة‎ WA ‏إلى‎ embryonic stem (ES) ‏عن التمايز الارتجاعي للخلايا الجذعية الجنينية‎ ‏استجابة لعاملين‎ early primitive ectoderm-like (EPL) cells ‏للأدمة الظاهرة الأولية المبكرة‎ ‏منفصلين.‎ > ٠
YVAA
الوصف العام للاختراع في جانب واسع؛ ‎oj‏ الاختراع ‎lea‏ لتحضير خلية غير متمايزة حيث يحتوي الجهاز على وسيلة للسماح لخلية أكثر تحولا بالتمايز الارتجاعي إلى خلية غير متمايزة. ولم تكشف أي من الوثائق المذكورة في هذا المجال ‎sel Ji) lle‏ الاختراع ‎٠‏ الأمريكية رقم 60891548 أو ما جاء عن لاك ‎Lake‏ ومعاونيه أو راثجين ‎Rathjen‏ ومعاونيه) عن جهاز مناسب للاستخدام في تحضير خلايا غير متمايزة. وعلى الرغم من أنه يمكن تحضير الخلايا غير المتمايزة من قبل الشخص المتمرس في هذا المجال بدون استخدام الجهاز ‎Ga,‏ لهذا الاختراع فإن الناتج النهائي يكون غير متوافق في كل مرة يتم إجراء العملية حيث تعتمد النتائج على مهارات وخبرة الشخص الذي يقوم بالعملية. وبالإضافة لذلك؛ فإن وقت ‎٠‏ "استخدام الأيادي ‎"hands-on‏ المطلوب للتحضير اليدوي ‎WAN‏ غير المتمايزة يكون ‎pf‏ ‏وبالتالي لا يكون اقتصادياً للاستخدام في المختبر. وفي تجسيد محدد؛ يزود الاختراع ‎Toles‏ لتكوين و/أو زيادة العدد النسبي للخلايا غير المتمايزة في تجمع خلوي ‎cell population‏ يحتوي على الخلايا المتحولة؛ حيث يتكون هذا الجهاز من حجرة ‎cchamber‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة إلى هذه ‎١‏ الحجرة؛ وسيلة لإدخال عامل ‎agent‏ يجعل خلية متحولة تتمايز ارتجاعيا إلى خلية غير متمايزة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة حضن ‎incubation‏ لحضن هذا العامل مع هذه الخلايا المتحولة بحيث تتمايز خلية متحولة ارتجاعياً إلى خلية غير متمايزة؛ وسيلة قياس ‎measuring‏ لقياس ‎ana‏ هذا التجمع الخلوي؛ وسيلة لعد الخلايا ولقياس التركيز الخلوي ‎cell concentration‏ في هذا التجمع الخلوي ووسيلة حساب ‎calculator‏ لحساب حجم العامل الذي يراد إضافته إلى الحجرة. ‎Ys‏ وفي تجسيد محدد آخرء ‎So‏ الاختراع جهازاً لتكوين و/أو زيادة العدد النسبي للخلايا غير المتمايزة في تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة؛ حيث يتكون هذا الجهاز من حجرة؛ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على ‎WAY‏ المتحولة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة لإدخال عامل يجعل خلية متحولة تتمايز ارتجاعيا إلى خلية غير متمايزة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة حضن لحضن هذا العامل وهذه الخلايا المتحولة بحيث تتمايز الخلية المتحولة ارتجاعيا ‎YVAA‏
إلى خلية غير متمايز» وسيلة خلط لخلط التجمع الخلوي والعامل في الحجرة حيث تشتمل وسيلة الخاط المذكورة على ذراع ذي أرياش ‎paddle arm‏ واحد على الأقل. ويفضل أن يرتبط العامل بمستقبل ‎receptor‏ يحفز احتجاز ‎«capture‏ التعرف على ‎recognition‏ أو عرض ‎presentation‏ مولد مضاد ‎antigen‏ على سطح الخلايا المتحولة. ‎oo‏ والأفضل أن يكون المستقبل عبارة عن مولد مضاد معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ من الفئة 1 أو من الفئة ‎IT‏ مثل مولد مضاد من الفئة 1 مختار من مستقبل ‎cA‏ المرتبط بخلايا الدم البيضاء البشرية ‎«Human-Leukocyte-Associated (HLA)-A receptor‏ مستقبل ‎(HLA-B‏ مستقبل ‎(HLA-C‏ مستقبل ‎<HLA-E‏ مستقبل ‎HLA-F‏ أو مستقبل ‎HLA-G‏ أو مولد مضاد من الفئة 1 مختار من مستقبل ‎(HLA-DM ٠‏ مستقبل ‎(HLA-DP‏ مستقبل ‎HLA-DQ‏ أو مستقبل ‎HLA-DR‏ ‏وبشكل مناسب»؛ قد يضم المستقبل سلسلة بيتا ‎B-chain‏ بها مناطق متمائلة ‎.homologous‏ ‏ويفضل أن يضم المستقبل على الأقل على المنطقة المتماثلة لسلسلة بيتا من ‎HLADR‏ ‎ds‏ تكون الخلايا المتحولة عبارة عن خلايا متمايزة. ويفضل أن تكون الخلاي المتحولة عبارة عن خلايا مكونة للدم متحولة ويفضل الخلايا المختارة من الخلايا المكونة ‎١‏ المستعمرة خلايا ‎T-cell colony-forming cells T‏ (خلايا ‎«(CFC-T‏ الخلايا المكونة لمستعمرة خلايا ‎B‏ (خلايا ‎(CECB‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا الايزينوفيلية ‎eosinophils‏ (خلايا ‎((CFC-Eosin‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا القاعدية ‎basophils‏ (خلايا ‎«(CFC-Bas‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا الحبيبية ‎hall /granulocytes‏ البيضاء أحادية النواة ‎monocytes‏ ‏(خلايا ‎Wall ((CFC-GM‏ المكونة لمستعمرة الخلايا النقيية الكبيرة ‎megakarycocytes‏ (خلايا ‎((CFC-MEG Ye‏ الخلايا المكونة لانفجار خلايا الدم الحمراء ‎erythrocyte burst-formig cells‏ (خلايا ‎((BFCE‏ الخلايا المكونة لمستعمرة ‎LA‏ الدم الحمراء (خلايا ‎T WIA (CECE‏ وخلايا ‎B‏ ‏وفي أحد التجسيدات المفضلة في هذا الاختراع لا تكون الخلية الأكثر تحولاً عبارة عن خلية ‎cancer cell Ala yu‏ وفي تجسيد مفضل آخر في هذا الاختراع؛ لا يكون العامل ‎alge‏ ‏للسرطان ‎carcinogenic‏ ولا يكون 108 على تحفيز النمو السرطاني. ‎YVAA‏
وفي تجسيد مفضل؛ يكون العامل عبارة عن جسم مضاد ‎antibody‏ للمستقبل؛ مثل جسم مضاد أحادي النسيلة ‎monoclonal antibody‏ للمستقبل. وتشمل الأمثلة المحددة 0183/43 والجسم المضاد أحادي النسيلة ‎.TAL.1B5‏ ‏وفي أحد التجسيدات المفضلة؛ يقوم العامل بتعديل التعبير عن جين ‎MHC‏ وبشكل 0 مناسبء؛ قد يقوم العامل بتعديل التعبير عن ‎MHC‏ من الفئة “1 و/أو ‎MHC‏ من الفئة ‎IT‏ ‏ويفضل أن يتم استخدام العامل مع معدل استجابة حيوية ‎biological response modifier‏ مثل عامل ألكلة ‎calkylating agent‏ على سبيل ‎(JB‏ عامل ألكلة يكون عبارة عن أو يضم الفوسفو أميد الحلقي ‎.cyclophosphoamide‏ ‏وتضم الخلايا غير المتمايزة المفضلة مولد مضاد خلية جذعية. وفي تجسيد مفضل؛ ‎٠‏ يتم اختيار الخلايا غير المتمايزة من خلية جذعية جنينية وافرة القوة؛ خلية جذعية وافرة القوة» خلية جذعية شبه ليمفية ‎dymphoid‏ خلية ‎Leda‏ مكونة للدم؛ خلية جذعية عصبية؛ خلية جذعية ظهارية ‎cepithelial stem cell‏ خلية جذعية من الطبقة المتوسطة ‎(mesenchymal‏ خلية جذعية باطنية الأدمة ‎endodemal‏ وخلية جذعية شبه نخاعية ‎myeloid‏ ويفضل؛ أن تتميز ‎WAY‏ غير المتمايزة بواحدة أو أكثر من الواسمات على السطح الخلوي ‎cell surface marker‏ بالرموز ‎eo‏ التالية: *0034) ‎¢AC133 «CD117 «CD38 (HLA-DR‏ ووه و/أرن ‎.CD45low‏ والأفضل أن تكون الخلية غير المتمايزة عبارة عن ‎CD34"‏ 5 0038 والأفضل من ذلك ‎(CD38 CD34"‏ ‎.CD45low HLA-DR’‏ ‎Xa‏ في تجسيد مفضل ‎Sy‏ هذا الاختراع أيضاً جهازاً لزيادة العدد النسبي للخلايا التي تحتوي على واسم على سطح خلوي بالرمز *0034 ‎ifs‏ 038 و/أر ‎HLA-DR‏ ر/أر ‎CD4Slow 0.‏ و/أو ‎CD90‏ 4/5 117 و/أو 3 في تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة حيث يتكون هذا الجهاز من: ‎(i)‏ حجرة؛ ‎(il)‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة إلى هذه الحجرة؛ ‎(ii)‏ وسيلة لإدخال عامل يعمل على الارتباط بشكل فعال مع هذه الخلايا المتحولة إلى ‎Yo‏ هذه الحجرة؛ ‎YVAA‏
‎(iv)‏ وسيلة حضن ‎incubation‏ تعمل على حضن هذه الخلايا المتحولة التي ترتبط بهذا العامل في هذه الحجرة بحيث يزداد العدد النسبي لخلايا ‎CD34"‏ و/أو :8 و/أو ‎CD45 low s/s HLA-DR‏ رإأر ‎CD90‏ و/أو 0117© و/أو 0133م كنتيجة لهذا الارتباط ‎(v) °‏ وسيلة لقياس حجم هذا التجمع الخلوي؛ ‎(vi)‏ وسيلة لعد الخلايا ولقياس التركيز الخلوي في هذا التجمع الخلوي؛ و ‎(vid)‏ وسيلة لحساب حجم العامل المراد إضافته إلى الحجرة. وهكذا ؛ في تجسيد مفضل آخر ‎Spi‏ هذا الاختراع أيضاً جهاز لزيادة العدد النسبي ‎LOW‏ التي تحتوي على واسم على السطح الخلوي بالرمز *034© و/أو 0038 و/أو ‎0٠‏ صخت ر/أن ‎cDaslow‏ و/أو 0 و/أو 0117© و/أو 3 في تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة حيث يتكون هذا الجهاز من: ‎(i)‏ حجرة. ‎(i)‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة إلى هذه الحجرة؛ 0 وسيلة لإدخال عامل يعمل على الارتباط بشكل فعال مع هذه الخلايا المتحولة إلى ‎Vo‏ هذه الحجرة؛ ‎(iv)‏ وسيلة حضن تعمل على حضن هذه الخلايا المتحولة التي ترتبط بهذا العامل في هذه الحجرة بحيث يزداد العدد النسبي لخلايا ‎HLA-DR s/s CD38 l/s CD34"‏ و/أو ‎CD45 low‏ و/أو 090 و/أو 7 و/أو 0133م كنتيجة لهذا الارتباط» و ‎(v)‏ وسيلة لخلط التجمع الخلوي مع العامل في الحجرة حيث تشتمل وسيلة الخلط 7 المذكورة على ذراع ذي أرياش واحد على الأقل. ويمكن أيضاً أن يحتوي جهاز ‎Gay‏ لهذا الاختراع؛ ‎(Goal‏ على وسيلة تنقية أو فصل لإغناء هذه الخلايا غير المتمايزة؛ إزالة العامل و/أو استعادة الخلايا غير المتمايزة من التجمع الخلوي المتغير. ويفضل أن تضم وسيلة التنقية وسيلة لتمييز واسم موجود على سطح الخلية غير المتمايزة أو واسم موجود على سطح الخلايا المتحولة ولكنه غير موجود بشكل أساسي ‎Ye‏ على سطح الخلايا غير المتمايزة. وبشكل مناسب؛ يمكن أن تستخدم وسيلة التنقية أجسام خلا
A
CD45 «CD34 ‏مضادة ضد واسم على السطح الخلوي مثلاً. وتشمل أمثلة الواسمات المناسبة‎ ‏مناسبة عبارة عن نظام تنقية‎ BED Amy ‏سبيل_المثال فقطء تكون‎ es HLA-DR ‏وفي تجسيد آخر لهذا الاختراع يتم تزويد وسيلة تنقية أو فصل‎ CliniMACs/Isolex CD34+ ‏اختيارياً كوسيلة منفصلة.‎ ‏لهذا الاختراع؛ اختيارياً؛ وسيلة انتقاء سلبي سابق‎ TE ‏ويمكن أيضاً أن يضم الجهاز‎ ° ‏وكبديل عن ذلك؛ قد‎ cell enrichment ‏و/أو وسيلة إغناء الخلايا‎ upstream negative selection ‏يتم اختيار التجمع الخلوي اختياريا بشكل سلبي و/أو إغناء الخلايا قبل إدخالها إلى هذا الجهاز.‎ 0034 ‏تكون الخلية غير المتمايزة في هذا الاختراع هي‎ AT ‏وفي تجسيد مفضل‎ ‏وسالبة لواسمات السلالات المكونة للدم.‎ 5 ‏من نفس سلالة الخلايا المتحولة الأصلية أو من سلالة‎ Tl ‏وقد تكون الخلايا الأكثر‎ ١ ‏لهذا الاختراع يمكن‎ Gy ‏وهكذاء بالإضافة إلى إنتاج خلايا غير متمايزة فإن الجهاز‎ ‏استخدامه لتحويل الخلايا من سلالة ما إلى تلك من سلالة أخرى.‎ ‏لهذا الاختراع؛ يزو جهاز لتحفيز تحويل تجمع خلوي يحتوي‎ AT ‏وعليه؛ في جانب‎ ‏على الخلايا المكونة للدم المتحولة من سلالة مكونة للدم إلى خلايا من سلالة مكونة للدم أخرى‎ ve ‏حيث يحتوي هذا الجهاز على:‎ ‏د‎ (i) ‏هذه‎ Jah ‏وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على هذه الخلايا المتحولة إلى‎ (ii) ‏الحجرة؛‎ ‏وسيلة لإدخال عامل إلى هذه الحجرة يرتبط بشكل فعال مع مستقبل يحفز احتجازء‎ (i) :. ‏التعرف على أو عرض مولد مضاد على سطح هذه الخلايا المتحولة المكونة للدم؛‎ ‏وسيلة حضن تعمل على حضن هذه الخلايا المكونة للدم المتحولة التي ترتبط بهذا‎ (iV) ‏العامل في هذه الحجرة بحيث تصبح خلايا من سلالة أخرى مكونة للدم كنتيجة‎
Jala py ‏لهذا‎ ‏وسيلة لقياس حجم هذا التجمع الخلوي؛‎ (viii) Yo
YYAA
\ ‎(ix)‏ وسيلة لعد الخلايا ولقياس التركيز الخلوي في هذا التجمع الخلوي؛ و ‎(x)‏ وسيلة لحساب حجم العامل المراد إضافته إلى الحجرة. وعليه؛ في جانب آخر لهذا الاختراع؛ يزو جهاز لتحفيز تحويل تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المكونة للدم المتحولة من سلالة مكونة للدم إلى خلايا من سلالة مكونة للدم أخرى ‎٠‏ حيث يحتوي هذا الجهاز على: ‎(i)‏ حجرة؛ ‎(ii)‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة إلى هذه الحجرة؛ ‎(i)‏ وسيلة لإدخال عامل إلى هذه الحجرة يرتبط بشكل فعال مع مستقبل يحفز احتجازء التعرف على أو عرض مولد مضاد على سطح هذه الخلايا المتحولة المكونة للدم ‎(iv) ve‏ وسيلة حضن تعمل على حضن هذه الخلايا المتحولة المكونة للدم التي ترتبط بهذا العامل في هذه الحجرة بحيث تصبح خلايا من سلالة أخرى مكونة للدم كنتيجة لهذا الارتباط؛ ‎(v)‏ وسيلة خلط لخلط التجمع الخلوي مع العامل في الحجرة ‎Cus‏ تشتمل وسيلة ‎Lala‏ ‏المذكورة على ذراع ذي أرياش واحد على الأقل. ‎vo‏ ويفضل أن تكون هذه الخلايا المتحولة المكونة للدم عبارة عن سلالة خلية ‎B‏ وتصبح خلايا من سلالة أخرى مكونة للدم مختارة من سلالة خلية ‎T‏ وسلالة شبه نخاعية ‎.myeloid‏ ‏ويمكن استخدام الخلايا غير المتمايزة المنتجة بواسطة جهاز هذا الاختراع لتصنيع دواء لعلاج اضطراب أو مرض مناعي ‎.immunological disorder‏ وبالمثل؛ يمكن استخدام الخلايا معادة التحويل المنتجة باتباع طرق هذا الاختراع لتصنيع دواء لعلاج اضطراب أو ى مرض مناعي. وهذا الاختراع مفيد ‎Tan‏ حيث أنه أصبح الآن بالإمكان تحضير خلايا غير متمايزة بسهولة من خلايا أكثر تحولاً ثم استخدام هذه الخلايا غير المتمايزة كما هي أو لتحضير أدوية إما داخل المختبر أو داخل الجسم الحي أو توليفات منها لعلاج اضطرابات. وهذا الاختراع مفيد ‎Lad Tan‏ حيث أنه بالإمكان استخدام الجهاز لتحويل الخلية غير ‎ve‏ المتمايزة المحضرة بالتمايز الارتجاعي إلى خلية معادة التحويل؛ مثل خلية متمايزة جديدة مع ‎RZ‏ ye ‏تحولاً أو تصحيح أو إزالة الناتج منه. فعلى‎ SY) ‏مراعاة تصحيح أو إزالة الخلية الأصلية‎ ‏سبيل المثال « يمكن استخدام الخلايا غير المتمايزة لإنتاج خلايا معادة التحويل مثل الخلايا‎ ‏مما يوجد آلية يمكن بها‎ clungs ‏في الرئتين‎ alveoli ‏المبطنة للحويصسلات الهوائية‎ ‏استبدال أو إمسلاح نسيج الرثة التالف أو المريض (انظر ما جاء في المرجع‎ . (Le Page, New Scientist 19 December 2000, p 20 ° ‏خلية مشتقة من خلية غير‎ "recommitted cell ‏ويعني مصطلح "خلية معادة التحويل‎ ‏متمايزة أي خلية جديدة أكثر تحولاً. وتعني "أكثر تحولا" أكثر تمايزاً ويمكن تحديد ذلك بسهولة‎ ‏بالرجوع إلى المسارات والمراحل المعروفة للتمايز الخلوي.‎ ‏غير المتمايزة والخلايا المتمايزة مولدات المضادات المعقدة‎ LDA ‏وتشمل غالبية‎ ‏من الفئة 1 و/أو الفئة 17 وإذا ارتبطت مولدات المضادات‎ (MHC) ‏المتوافقة نسيجياً الرئيسية‎ - ٠ ‏ويفضل أن تكون الخلية‎ IT ‏هذه بتلك الخلايا فإنه يطلق عليها خلايا من الفئة 7 و/أو الفئة‎ ‏غير متمايزة من الفئة 7 و/أو‎ MHC ‏الأكثر تحولا قادرة على التمايز الارتجاعي إلى خلية‎
Jr ‏الفئة‎ ‏ويفضل أن تكون الخلية الأكثر تحولاً قادرة على التمايز الارتجاعي إلى خلية غير‎ ‏متمايزة تضم مولد مضاد خلية جذعية.‎ yo
CD ‏ويفضل أن تكون الخلية الأكثر تحولاً قادرة على التمايز الارتجاعي إلى خلية‎ ‏غير متمايزة.‎ ‏ويفضل أن تكون الخلية الأكثر تحولاً قادرة على التمايز الارتجاعي إلى خلية سلف‎ .lymphohaematopoietic progenitor cell ‏مكونة للدم والليمف‎ ‏ويفضل أن تكون الخلية الأكثر تحولاً قادرة على التمايز الارتجاعي إلى خلية جذعية‎ Ye ‏وافرة القوة.‎ ‏ساعات (بحيث لا‎ A ‏ساعة ويفضل ؛ إلى‎ YE ‏ويفضل أن تحدث هذه الزيادة خلال‎ ‏يمكن أن ترجع التغيرات فقط إلى تكاثر الخلايا).‎ ‏وفعلياًء يتم إجراء عملية تحديد التغيرات في أعداد الخلايا غير المتمايزة عن طريق‎ ‏متابعة التغيرات في أعداد الخلايا التي بها واسمات على سطحها الخلوي تكون مميزة للخلايا‎ vo
YYAA
نل غير المتمايزة. وتشمل أمثلة الواسمات المناسبة على السطح الخلوي كل من ‎CD34"‏ ‎<HLA-DR'‏ 0038؛ 0133م ‎CD90‏ و/أو ‎.CD45low‏ وكبديل عن ‎ld‏ أو بالإضافة لذلك؛ يمكن متابعة الانخفاضات في أعداد الخلايا التي بها واسمات على السطح الخلوي تكون مميزة للخلايا المتمايزة وليس الخلايا غير المتمايزة. ° وبشكل مناسب؛ يمكن أيضاً أن يشمل الجهاز ‎Gs‏ لهذا الاختراع اختيارياً وسيلة تتبع ‎tracking‏ لمتابعة التغيرات في عدد الخلايا التي بها واسمات على السطح الخلوي تكون مميزة للخلايا غير المتمايزة. ويفضل أن تكون الخلايا المتحولة المستخدمة في المعايرة ‎assay‏ عبارة عن خلايا متحولة مكونة للدم مثل الخلايا المختارة من خلايا ‎(CFC-T‏ خلايا ‎(CFC-B‏ خلايا ‎«CFC-Eosin 0٠‏ خلايا ‎«CFC-GM WA «CFC-Bas‏ خلايا ‎(CFC-MEG‏ خلايا ‎(BFC-E‏ خلايا ‎T WIA «CFC-E‏ وخلايا 8 والأفضل ‎B WA‏ ويفضل أن يضم الجهاز ‎Gy‏ لهذا الاختراع ‎Lad‏ واحدآً أو أكثر ويفضل اثنين أو أكثر والأفضل ثلاثة أو أكثر والأفضل من ذلك أربعة أو أكثر من المعالم التالية: ‎(i)‏ وسيلة قياس لقياس حجم التجمع الخلوي؛ ‎(ii) yo‏ وسيلة عد (مثل ‎dae‏ كولتر ‎coulter‏ المصمم بحجم صغير إذا كان ضرورياً أو مقياس خلوي ‎cytometer‏ آخر مناسب) من أجل عد الخلايا وبالتالي قياس تركيز الخلايا في التجمع الخلوي؛ ‎(ii)‏ وسيلة نقل لنقل كمية (مثل الكمية المحددة ‎(Gane‏ من تجمع خلوي من وعاء تخزين ‎storage container‏ إلى الحجرة بحيث تحتوي وسيلة النقل ‎Lola)‏ على ‎Ye‏ مضخة ‎pump‏ على سبيل ‎Jad‏ ‎(iv)‏ وسيلة حساب لحساب حجم العامل المضاف إلى الحجرة وحجم العامل المعتمد على كل من حجم وتركيز الخلايا في التجمع الخلوي؛ ‎(V)‏ وسيلة ‎JB‏ أخرى ‎Ji‏ حجم ‎Jie)‏ حجم محسوب) من العامل إلى الحجرة» حيث يمكن أن تضم وسيلة النقل الأخرى هذه اختيارياً على سبيل المثال محقنة ‎syringe‏ ‎Yo‏ تعمل بواسطة محرك ‎motor‏ مثل المحرك الخطوي ‎stepper-motor‏ ‎YYAA |‏
VY
‏(كجزء من وسيلة الحضن‎ carbon dioxide ‏للتحكم في ثاني أكسيد الكربون‎ ay (vi) ‏في‎ carbon dioxide ‏على سبيل المثال) للتحكم في تركيز ثاني أكسيد الكربون‎ ‏الحجرة؛‎ ‏المثال)‎ Juss ‏وسيلة تحكم في درجة الحرارة (كجزء من وسيلة الحضن على‎ (vil) ‏للتحكم في درجة حرارة الحجرة؛‎ ° ‏وسيلة خلط (كجزء من وسيلة الحضن على سبيل المثال) لخلط التجمع الخلوي‎ (vii) ‏الحجرة؛‎ data ‏والعامل‎ ‏وسيلة توقيت (كجزء من وسيلة الحضن على سبيل المثال) لحساب فترة الحضن‎ (i) ‏لعرض الفترة الزمنية المتبقية للمستخدم و/أو‎ display ‏واختيارياً وسيلة عرض‎ ‏لتنبيه المستخدم باكتمال فترة الحضنء‎ alarm ‏وسيلة تنبيه‎ ye ‏وسيلة جمع لجمع الخلايا من الحجرة وبخاصة لجمع الخلايا غير المتمايزة من‎ (x) ‏الحجرة؛‎ ‏وسيلة إزالة لإزالة تجمع الخلايا الذي يحتوي على الخلايا غير المتمايزة من‎ (xi) ‏الحجرة إلى وعاء تخزين وقد تضم وسيلة الإزالة مضخة على سبيل المثال» و‎ ‏تخزين يحتوي على تجمع من الخلايا يحتوي على‎ eles ‏لغلق‎ sealing ‏وسيلة غلق‎ (xii) ve ‏الخلايا غير المتمايزة.‎
Ha) ‏كمية‎ (iif) ‏وبشكل مناسب؛ في جهاز هذا الاختراع؛ يمكن أن تنقل وسيلة النقل‎ ‏من تجمع خلوي مباشرة من مريض إلى هذه الحجرة (أي بدون الحاجة‎ (lass ‏كمية محددة‎ ‏تجمع من خلايا يحتوي على الخلايا‎ (xi) ‏لوعاء التخزين) و/أو يمكن أن تزيل وسيلة الإزالة‎ ‏غير المتمايزة من الحجرة مباشرة إلى مريض (أي بدون الحاجة لوعاء التخزين).‎ Ye ‏تنقل‎ Cus peristaltic ‏مضخة تمعجية‎ (if) ‏وبشكل مناسب؛ يمكن أن تضم وسيلة النقل‎ ‏على‎ tubing ‏هذه المضخة تجمع خلايا من وعاء تخزين من خلال وسيلة ربط بيني؛ كأنبوبة‎ ‏سبيل المثال؛ إلى الحجرة. ويفضل أن تمر وسيلة الربط البيني خلال عداد كولتر أو مقياس‎ ‏خلوي مناسب آخر (كما هو مذكور في (نا)). وبهذه الطريقة؛ يمكن حساب التركيز الخلوي‎ ‏للتجمع الخلوي أثناء نقل التجمع الخلوي من وعاء التخزين إلى الحجرة.‎ vo
YVAA
ويفضل أن تكون أوعية التخزين المذكورة في ‎Gil (xi). (if)‏ عبارة عن أكياس تخزين ‎storage bags‏ تكون معدة للاستخدام مرة واحدة بشكل مفضل. ويفضل أكثر أن يكون وعاء التخزين في ‎Wid (iii)‏ عن وعاء التخزين في ‎(xi)‏ حيث يكون الأول عبارة عن وعاء تخزين للإدخال والأخير عبارة عن وعاء تخزين للإخراج.
° ويفضل أن تضم وسيلة النقل الأخرى ‎(V)‏ مستودعاً ‎reservoir‏ للعامل من أجل التأكد من وجود عامل كاف في أي وقت. وعندما تكون وسيلة النقل عبارة عن محقنة فإنه يمكن تزويد المستودع بمحقنة أخرى بحيث عندما تصبح إحدى المحاقن فارغة فإن المحقنة الأخرى تبدأ في تزويد العامل.
ويفضل أن تشمل وسيلة التحكم في ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ للتحكم في ‎٠‏ > تركيز ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ في الحجرة صماماً ‎valve‏ يسمح بإدخال كمية محددة مسبقاً من ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ من اسطوانة غاز ‎-gas cylinder‏ ويتم
حساب الكمية المحددة مسبقاً من ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ باستخدام الحجم المعروف من الهواء في الحجرة. الأنبوبة ووعاء التخزين الإخراجي والحجم المقاس للتجمع
الخلوي من وعاء التخزين الإدخالي. وبشكل مناسب؛ يتم إدخال ثاني أكسيد الكربون ‎arbor‏
‎dioxide vo‏ إلى الحجرة من خلال فتحة ‎port‏ تكون مماثلة لتلك التي من خلالها يتم إضافة العامل؛ وبهذه الطريقة يمكن استخدام ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ لدفع كل العامل المتبقي في
‏الفتحة والمعدات المحيطة. وبالإضافة لما سبق فإن وسيلة التحكم في ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ قد تضم أيضاً كيس هوائي غشائي قابل للنفخ ‎inflatable air bladder‏ للتكيف مع
‏الحجم الزائد من الهواء الذي ينتج عن إدخال المزيد من ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏
‏- إلى النظام. وكبديل عن ذلك ؛ وبمجرد تفريغ وعاء التخزين الإدخالي فإنه يعمل ككيس هوائي غشائي ‎٠‏ ويفضل أن يتم إدخال ثاني أكسيد الكربون ‎J gall carbon dioxide‏ على 7#من
‏ا
‏وقد تضم وسيلة التحكم في درجة الحرارة ‎(vid)‏ بشكل مناسب وسيلة تسخين حيث
‏يمكن تزويد وسيلة التسخين بلوح تسخين ‎plate‏ 1681 يوضع تحت الحجرة مثلاً. وكبديل عن
‏| ذلك؛ يمكن تزويد وسيلة التسخين بغلاف ماء ساخن ‎heated water jacket‏ موجود بالقرب من
‎YYAA
VE
‏الحجرة أو جزء منها. ويفضل أن يتم التحكم في درجة الحرارة داخل الحجرة ما بين حوالي‎
STV ‏5م إلى حوالي‎ ‏ذراعاً ذا أرياش واحدآً على الأقل يدور ببطء من‎ (viii) ‏ويفضل أن تشمل وسيلة الخلط‎ ‏أجل خلط التجمع الخلوي والعامل في الحجرة. ويمكن استخدام أداة تقليب مغناطيسي‎ ‏يمكن رج الحجرة آلياآً؛ على سبيل المثال بالرج‎ Lad ‏كبديل عنه. وكبديل آخر‎ magnetic stirrer © ‏ومن مزايا استخدام وسيلة الخلط التي بها ذراع ذو أرياش واحد على الأقل هو أن‎ ٠ ‏الخفيف‎ ‏أثناء تجميع الخلاياء أي بحيث عندما يدور‎ scraper ‏للعمل ككاشط‎ Lead ‏تصميمه‎ (Say ‏الذراع‎ ‏الذراع ببطء فإنه يقوم بإزالة الخلايا المتصلة بسطح الحجرة بلطف. ويفضل أن تكون وسيلة‎ ‏الخلط فعالة في إحداث الحركة الدوارة.‎ ‏مضخة تمعجية. ويفضل أن تقوم وسيلة الإزالة‎ (xi) ‏ويفضل؛ أن تضم وسيلة الإزالة‎ Ve ‏بسحب التجمع الخلوي الذي يحتوي على الخلايا غير المتمايزة من خلال فتحة الإخراج عند‎ ‏قاع الحجرة وداخل وعاء التخزين الإخراجي من خلال وسيلة ربط بيني مثل أنبوبة.‎ sequestering ‏وكبديل عن وسيلة الإزالة أو بالإضافة إليهاء يمكن إضافة عامل منحي‎
Jie anticoagulant ‏على سبيل المثال مضاد للتجلد‎ free ion ‏للأيون الحر‎ chelating ‏و/أو خلابي‎ ‏إلى‎ (ethylene diamine tertaacetic acid ‏إثيلين ثنائي أمين رباعي الاسيتيك‎ aes) EDTA Vo ‏ويؤدي إضافة هذا العامل المنحي و/أو الخلابي للأيون‎ ٠ ‏الحجرة قبل إزالة التجمع الخلوي منها‎ ‏إلى الحجرة إلى جعل مستعمرات الخلايا الجذعية تتفكك إلى معلق خلايا فردية وبالتالي تسهيل‎ flushing ‏إزالة الخلايا من الحجرة باستخدام وسيلة تنظيف‎ ‏تقوم هذه السدادة‎ Cua heat sealer ‏سدادة حرارية‎ (xii) ‏ويفضل أن تضم وسيلة الغلق‎ ‏الحرارية بغلق وعاء التخزين الإخراجي عن طريق ضغط جزأين من الوعاء أو جزأين من‎ Ye ‏وسيلة الربط البيني على بعضهما مباشرة قبل الوعاء حتى يتم الإغلاق بشكل كامل. فى‎ ‏سبيل المثال؛ يمكن أن تنتج السدادة الحرارية سدادة عرضها حوالي ؟ سم ثم تقوم السدادة‎ ‏الحرارية بقطع السدادة على امتداد جزئها المركزي.‎ ‏لهذا الاختراع على حدة باستخدام‎ Tay ‏ويفضل أن يتم التحكم في كل جزء من الجهاز‎
TM ‏لدتاد»». ويفضل أن يكون النظام الكمبيوتري‎ computer system ‏نظام كمبيوتر مركزي‎ ve
YVAA
على استقبال الإشارات المدخلة ‎input signals‏ من جزء من الجهاز وإجراء الحسابات اعتماداً على هذه الإشارات المدخلة وإرسال إشارات إخراج إلى نفس الجزء أو جزء آخر من الجهاز. ويكون لجهاز هذا الاختراع مزايا ‎ane‏ وبخاصة يؤكد الجهاز على أنه يتم الحصول على نتيجة متوافقة في كل مرة يتم فيها إجراء العملية وأنه لا يحدث فقدان في العامل المهم. © وبالإضافة لذلك؛ يمكن برمجة الجهاز لتنبيه المستخدم عندما ينتهي التمايز الارتجاعي و/أو لعرض الوقت المتبقي قبل الانتهاء. وإذا تم برمجته لإجراء ذلك؛ فإن الجهاز يمكنه أن ينبه المستخدم بشراء عامل جديد. وهذا يعني أن الجهاز يمكن أن يراقب استخدام العامل والكمية المخزنة وبالتالي ينبه المستخدم ‎Loic‏ تصبح كمية العامل المخزنة أقل من الحد الحرج. وقد يضم جهاز هذا الاختراع أيضاً العديد من الغرف كل واحدة منها لإنتاج خلية غير > متمايزة تتحول إلى سلالات خلوية مختلفة ‎cmuscles <li all Hie‏ الشعر ‎chair‏ الخلايا العصبية ‎neurons‏ إلخ. وهكذاء قد يحدث إنتاج متزامن للخلايا غير المتمايزة المتحولة إلى سلالات خلايا مختلفة. ويفضل عندما يتم استخدام العديد من الغرف أن تحتوي كل حجرة على فتحة إخراج منفصلة ووعاء تخزين إخراجي منفصل. ويمكن التحكم في السلالة الخلوية في جهاز هذا الاختراع عن طريق استخدام مواد ‎yo‏ بلادستيكية ‎plastics‏ معالجة بشكل مختلف الغرف أو عن طريق إضافة مواد كيميائية ‎chemicals‏ ‏مختلفة لكل حجرة. ويفضل أن تكون واحدة أو أكثر من مكونات الجهاز قابلة للاستخدام مرة واحدة. فعلى سبيل المثال؛ قد تكون واحدة أو أكثر من المكونات التالية قابلة للاستخدام مرة واحدة: الحجرة؛ وعاء التخزين الإدخالي؛ وعاء التخزين الإخراجي؛ وسيلة الربط البيني التي تربط أوعية © التخزين مع الحجرة ووسيلة النقل الإضافية (»). وبشكل مناسب قد يتم تزويد المكونات القابلة للاستخدام مرة واحدة على هيئة خرطوشة ‎cartridge‏ للإدخال داخل الجهاز. وعلى سبيل المثال ‎Ladd‏ قد تضم الخرطوشة كيس دم أول (وعاء تخزين إدخالي) وحجرة وكيس دم (إخراجي) ثان حيث يتم ربط الحجرة بكل من أكياس الدم الأولى والثانية بواسطة أنبوبة (وسيلة ربط بيني). وبشكل مناسب ‎(Say‏ اعتبار الجهاز كنظام يكون جزء منه جهازياً وجزء ‎Wd‏ ‎vo‏ للاستخدام مرة واحدة. ‎YVAA‏ v1 ‏ويفضل أن يتم تحضير الحجرة و/أو المكونات الأخرى في الجهاز المتلامسة مع‎ ‏ولويحات‎ (USP Class VI) 1 ‏لدستور الأدوية الأمريكي من الفئة‎ Gg ‏التجمع الخلوي من مادة‎ ‏أو مواد بلاستيكية أخرى غير قادرة على تكوين الأشكال‎ polycarbonate ‏من متعدد كربونات‎ .cell transformants ‏الأخرى من متحولات الخلايا‎ ‏ويفضل أن يكون التجمع الخلوي الذي يضم الخلايا المتحولة عبارة عن الدم؛ ويفضل‎ ° ‏أن يكون العامل عبارة عن جسم مضاد.‎ ‏من الفئة +1 و/أو‎ MHC ‏وبشكل مناسب تكون الخلايا غير المتمايزة عبارة عن خلايا‎
Ji aaa ‏المتحولة عبارة عن‎ WAY ‏وفي احد التجسيدات؛ يكون التجمع الخلوي المحتوي على‎ ‏أو من عينة دم من الطبقة الطافية.‎ buffy coat ‏عينة دم من الطبقة الطافية‎ ٠ ‏شرح مختصر للرسوم‎ ‏من أجل فهم هذا الاختراع بوضوح وإجراؤه بسهولة فإنه سيتم الرجوع الآن» على‎ ‏سبيل المثال؛ إلى الرسوم المرفقة؛ حيث:‎ ‏لهذا الاختراع مع فتح‎ Ga, ‏لجهاز‎ perspective view ‏منظورياً‎ Low) ‏يبين‎ : ١ ‏الشكل‎ ‏توضح مقطعاً في الجهاز تم‎ insert ‏صورة مقحمة‎ Load ‏اللوحة الأمامية ويبين‎ yo ‏إزالته من الأجزاء المحيطة به؛‎ ‏مع غلق اللوحة الأمامية‎ ١ ‏يبين رسماً منظورياً للجهاز الموضح في الشكل‎ : ١ ‏الشكل‎ ‏له؛‎ ‏لخلايا الدم؛‎ photograph ‏الشكل ؟ : يبين صورة‎
BWIA 5 T ‏لتكوين خلايا‎ LSC ‏الشكل ؛ : يبين مخططا لتمايز الخلايا‎ 7 ‏لتكوين الخلايا الايزينوفيلية؛ الخلايا‎ MSC Wal ‏يبين مخططً لتمايز‎ : o ‏الشكل‎ ‏القاعدية؛ الخلايا المتعادلة كنتامهتان©»؛ الخلايا النقيية الكبيرة؛ الخلايا البيضاء‎ ‏ععمى‎ cells ‏الحبيبية؛ الخلايا البدنية‎ LAY ‏الدم الحمراء؛‎ LOA ‏أحادية النواة؛‎ ‏والخلايا الليمفاوية؛‎ natural killers (NK) ‏الخلايا القاتلة الطبيعية‎ ‏يبين الخلايا السلف المكونة الدم والليمف؛‎ : ١ ‏الشكل‎ vo ‏غلا‎ vy ‏الشكل 7 : يبين مظهر خلايا 00450014 بعد المعالجة بأجسام 083/43 المضادة؛‎ ‏المتمايزة؛‎ B ‏لخلايا‎ microscope picture ‏الشكل م : يبين صورة مجهرية‎ ‏الشكل ؟ : يبين صورة مجهرية لخلايا غير متمايزة تتكون عن طريق التمايز‎
B ‏الارتجاعي لخلايا‎ 4 ‏يبين صورة مجهرية لنفس الخلايا غير المتمايزة الموضحة في الشكل‎ : ٠١ ‏هه الشكل‎ ‏ولكن بتكبير أقل؛‎ ‏يبين صورة مجهرية لخلايا 8 المتمايزة؛‎ : ١١ ‏الشكل‎ ‏يبين صورة مجهرية لخلايا غير متمايزة تتكون عن طريق التمايز‎ : VY ‏الشكل‎ ‏الارتجاعي لخلايا 5؛‎ ‏الحبيبية المتمايزة من نفس الخلايا غير‎ LAY ‏يبين صورة مجهرية لتكوين‎ : NT ‏الشكل‎ ٠
OY ‏المتمايزة الموضحة في الشكل‎ ‏مجهرية لعينة دم‎ Toga ‏:يبين على مرحلتي تكبير مختلفتين؛‎ ME ‏الشكل‎ ‏الليمفاوية‎ B ‏غير معالجة من مريض مصاب بلوكيميا الخلايا‎ ¢B-cell lymphocyte leukemia (B-CLL) ‏مجهرية لعينة دم معالجة؛‎ pa ‏يبين‎ : VO ‏الشكل‎ ve ‏يبينان صوراً مجهرية على فترات زمنية أثناء معالجة عينات الدم؛‎ :١7 ‏و‎ ١6 ‏الشكلان‎ ‎¢southern blot ‏يبين بقعة سذرن‎ : YA ‏الشكل‎ ‏الشكل ؟١ : يبين بقع سذرن أخرى ناتجة عن استخدام خلايا الدم المحيطي‎ ¢B-CLL ‏من المرضى المصابين ب‎ peripheral blood cells ‏يبين استخدام ثلاثة عوامل لزيادة العدد النسبي لخلايا “0034 في التجمع‎ : Yo ‏الشكل‎ vy. ‏الخلوي؛‎ ‏يبين معايرة مستعمرة من الخلايا الجذعية باستخدام المجهر ذو مجال‎ : YY ‏الشكل‎ ‎¢inverted bright field microscopy ‏السطوع المعكوس‎ ‏يبين طبقة خلايا ملتصقة عند معاينتها باستخدام المجهر ذي مجال السطوع‎ : YY ‏الشكل‎ ‏المعكوس؛ و‎ Yo
YYAA
VA
‏يبين صورتين ساكنتين من تصوير بالفيديو على فترات زمنية أثناء معالجة‎ : TT ‏الشكل‎ ‏بالجسم المضاد 083/43 أحادي النسيلة.‎ B ‏خلايا‎ ‏الوصف التفصيلى‎ ‏الجهاز‎ (1) ‏له لوحة‎ 7 housing ‏وهو يضم مبيت‎ ١ ‏يصور الجهاز بشكل عام بالرقم المرجعي‎ > ‏ويتدلى وعاء‎ .١ ‏فتح هذه اللوحة ¥ للسماح بالدخول إلى داخل الجهاز‎ (Say ‏أمامية ¥ حيث‎ ‏ويكون خطاف الحمل‎ .© support hook ‏من خطاف حمل‎ of ‏تخزين إدخالي ؛ وتحديداً كيس دم‎ ‏(غير موضح) يعمل على توزين كيس الدم‎ electronic balance ‏من ميزان الكتروني‎ fe a © .4 ‏الإدخالي‎ ‏بينيا مع كيس الدم الإدخالي‎ ١ ‏حجرة >7 حيث تتصل هذه الحجرة‎ Lead ‏ويضم الجهاز‎ ‏ثم‎ A transparent window ‏على نافذة شفافة‎ ١ ‏؛ من خلال أنبوبة لا حيث تحتوي الأنبوبة‎ ‏وتعمل مضخة تمعجية (غير موضحة) على سحب‎ A ‏وضعها داخل خلية عداد كولتر للتدفق‎ .6 ‏الحجرة‎ Jala ‏الدم من كيس الدم الإدخالي ؛ عبر خلية عداد كولتر للتدفق 9 إلى‎ ‏على جسم مضاد ويتم إدارة كل منهما باستخدام محرك‎ ١١و‎ ٠ ‏وتحتوي المحقنتان‎ ‏بيلتييه‎ "aed ‏بشكل دائم عند ؛أم داخل‎ ١١و‎ ٠١ ‏خطوي (غير موضح). ويتم إبقاء المحقنتان‎ ve ٠١ ‏ويتم تزويد المحقنثين‎ VY lockable insulated Peltier "refrigerator” ‏العازل القابل للغلق‎ ‏ويتم الإبقاء على تعقيم‎ HS ‏به مصدر جسم مضاد‎ Li ‏من أجل التأكد من أن الجهاز‎ ١١و‎ ‏قابلة‎ filters ‏بواسطة كل من المضادين الحيويين 98 ومرشحات‎ ١١و‎ ٠ ‏المحقنتين‎ ‎OF ‏(يرمز إليها عموما بالرقم المرجعي‎ micron ‏ميكرون‎ ٠.7 ‏للاستخدام مرة واحدة قياسها‎ ‏توجه ثاني‎ ٠4 carbon dioxide ‏فتحة إدخال ثاني أكسيد الكربون‎ Lad ‏أ ويضم الجهاز‎ ‏من اسطوانة غاز (غير موضحة) إلى داخل الحجرة + من‎ carbon dioxide ‏أكسيد الكربون‎ ‏مع الحجرة 6 من‎ Lay ‏اتصال مائعي‎ Alla ‏في‎ ١١و‎ ٠ ‏وتكون المحقنتان‎ Yo ‏خلال الأنبوبة‎ ‏ومولد‎ carbon dioxide ‏ويتحكم الصمام 1 في تدفق ثاني أكسيد الكربون‎ Vo ‏خلال الأنبوبة‎ ‏المضاد خلال الأنبوبة © ويتم تزويد وسيلة تسخين (غير موضحة) أسفل الحجرة 1 وداخل‎ .6 ‏تعمل على خلط الجسم المضاد والدم داخل الحجرة‎ VY ‏يوجد ريشة دوارة‎ ١ ‏الحجرة‎ vo
YYAA
Va ‏ويراقب جهاز توقيت (غير موضح) فترة حضن عندما يظل الجسم المضاد والدم داخل الحجرة‎ control panel display ‏التحكم‎ dag ‏ويمكن إظهار الوقت المتبقي للحضن على شاشة عرض‎ ١
AA
١ ‏في الجهاز‎ Lad ١9 ‏ويتدلى وعاء تخزين إخراجي ؛ وتحديدً كيس دم إخراجي‎ ‏من خلال سدادة حرارية‎ ٠١ ‏وتمر الأنبوبة‎ .٠ ‏مع الحجرة 7 من خلال الأنبوبة‎ bin ‏ويرتبط‎ © ‏ويتم تزويد مضخة تمعجية‎ 2.٠9 ‏وبالتالي كيس الدم الإخراجي‎ ٠ ‏تعمل على غلق الأنبوبة‎ "١
AA ‏الإخراجي‎ all ‏إلى داخل كيس‎ ١ ‏أخرى (غير موضحة) لضخ محتويات الحجرة‎ ‏للاستخدام‎ ALE ١9 ‏وكيس الدم الإخراجي‎ 7١و‎ ١ ‏وتكون الحجرة + مع الأنبوبتين‎ ‏مرة واحدة ويتم التخلص منها بعد كل عملية.‎ ‏الحجرة 6 والأنبوبتين‎ AA al AY ‏وعند التشغيل؛ يقوم المستخدم بإدخال كيس الدم‎ Ve ‏والمضخة‎ YY ‏خلال السدادة الحرارية‎ ٠٠ ‏ويتم إمرار الأنبوبة‎ .١ ‏إلى داخل الجهاز‎ Yes ‏ا‎ ‎.9 ‏خلال المضخة التمعجية الأخرى وخلية عداد كولتر للتدفق‎ ١ ‏التمعجية. ويتم إمرار لأنبوبة‎ ‏من مريض وربطه مع الأنبوبة‎ pl ‏بإدخال كيس الدم ؛ المحتوي على‎ Lad ‏ويقوم المستخدم‎ ‏ا. وبالإضافة إلى ما سبق فإن المستخدم يربط الأنبوبة 5 في الحجرة + مع المرشح المعقم‎ ‏باستخدام لوحة‎ ١ ‏ثم يقوم المستخدم بغلق اللوحة الأمامية ؟ في المبيت " وتشغيل الجهاز‎ ١7 ١
XY ‏الجهاز‎ keypad ‏مفاتيح‎ ‏اتوماتيكيآً بتوزين كيس الدم الإدخالي 4. ويتم إرسال وزن كيس الدم‎ ١ ‏ويقوم الجهاز‎ .١ ‏الإدخالي 4 اتوماتيكياً إلى نظام كمبيوتر مركزي (غير موضح) موضوع داخل الجهاز‎ ‏ومن وزن كيس الدم الإدخالي ؛ يمكن لنظام المعالجة أن يحدد حجم الدم في الكيس 4. وتقوم‎ ‏ويتدفق‎ LY ‏المضخة التمعجية بعد ذلك بسحب الدم من كيس الدم الإدخالي ؛ من خلال الأنبوبة‎ ve ‏في الأنبوبة 7 ويحدد عداد كولتر 9 تركيز الخلايا التي تمر‎ A ‏من خلال النافذة الشفافة‎ pal ‏ويرسل عداد كولتر إشارة مباشرة إلى نظام الكمبيوتر المركزي. ويحدد نظام‎ .١ ‏عبر الأنبوبة‎ ‏الكمبيوتر المركزي من الحجم المحسوب للدم والتركيز الخلوي الحجم الصحيح للجسم المضاد‎ ‏وتستمر المضخة‎ .١١و‎ ٠١ ‏الذي يتم حقنه داخل الحجرة 6 بواحدة أو أكثر من المحقنتين‎ ‏التمعجية في ضخ الدم من الكيس ؛ حتى يتم استقبال إشارة من نظام الكمبيوتر المركزي الذي‎ Yo ‏غلا‎
Y. ‏يوقف المضخة. ويتم إرسال الإشارة من نظام الكمبيوتر المركزي استجابة لإشارة من عداد‎
ALE ‏كولتر 4 إلى نظام الكمبيوتر المركزي حيث يتم إرسال هذه الإشارة عندما يحس عداد‎ .8 ‏بأنه لا توجد خلايا أخرى تمر عبر النافذة‎ 4 ‏ثم يقوم نظام الكمبيوتر المركزي بإرسال إشارة إلى المحرك الخطوي (غير موضح)‎ ‏لتوصيل الحجم‎ ١١ ‏و‎ ٠١ ‏لضغط واحدة أو أكثر من المحقنتين‎ ١١ ‏و‎ ٠١ ‏المتصل بالمحقنتين‎ ٠ .١١ ‏الحجرة > من خلال الأنبوبة‎ Jala ‏المحسوب من الجسم المضاد إلى‎ ‏خلال‎ carbon dioxide ‏ثم يقوم الجهاز بعد ذلك؛ اختيارياً؛ بإدخال ثاني أكسيد الكربون‎ ‏عن طريق فتح الصمام 1 (حيث يتم‎ ٠4 carbon dioxide ‏فتحة إدخال ثاني أكسيد الكربون‎ ‏بواسطة النظام الكمبيوتري المركزي). ويتم حساب‎ ١١ ‏التحكم في آلية فتح وغلق الصمام‎ ‏المراد إضافتها بواسطة النظام الكمبيوتري‎ carbon dioxide ‏كمية ثاني أكسيد الكربون‎ ٠ ‏المركزي؛ اعتماداً على الحجم المعروف للهواء في الحجرة 6 والأنبوبتين /ا و١٠ وكيس الدم‎ ‏والحجم المحسوب للدم من كيس الدم الإدخالي. ويكون التركيز النهائي لثاني‎ ١9 ‏الإخراجي‎ ‏ويتم إدخال ثاني أكسيد الكربون‎ ge ‏حوالي‎ ١ ‏في الحجرة‎ carbon dioxide ‏أكسيد الكربون‎ ‏وهكذا يقوم ثاني أكسيد الكربون‎ .٠ ‏من خلال الأنبوبة‎ ١ ‏الحجرة‎ carbon dioxide ‏وبالتالي التأكد من أن كل الجسم‎ VO ‏بدفع أي جسم مضاد متبقي في الأنبوبة‎ carbon dioxide ٠٠ ‏المضاد المطلق قد تم إضافته إلى الحجرة 7. وبمجرد تفريغ كيس الدم الإدخالي ؛ فإنه يعمل‎ ‏ككيس هواء غشائي للتكيف مع حجم الغاز الإضافي بعد إدخال ثاني أكسيد الكربون‎ .carbon dioxide ‏(غير موضح) تحت تحكم النظام‎ heater ‏على سخان‎ bad ‏وقد يحتوي الجهاز‎ ‏والتحكم في درجة الحرارة‎ ١ ‏الكمبيوتري المركزي حيث يتم وضع هذا السخان تحت الحجرة‎ Y. ‏مرتبط بالسخان زيادة أو‎ thermostat ‏ويمنع ثرموستات‎ ٠ ‏ولام‎ Yo ‏ما بين‎ ١ ‏داخل الحجرة‎ ‏انخفاض التسخين.‎ ‏لفترة محددة مسبقاً. ولا تتعدى‎ ١ ‏ثم يتم حضن عامل الدم والجسم المضاد في الحجرة‎ ‏ساعات؛ ويجب أن تكون الفترة‎ A ‏ساعة ويفضل ما بين ؛ إلى‎ YE ‏فترة الحضن بشكل ملاثم‎ ‏الزمنية المختارة كافية للسماح بحدوث التمايز الارتجاعي.‎ ve
YYAA
نض وأثناء الحضن تدور أذرع ذات أرياش ‎VY‏ ببطء لإجراء خلط للجسم المضاد والدم. وبعد اكتمال فترة الحضن تستمر الأذرع ذات الأرياش ‎١١7‏ في الدوران وتعمل بشكل فعال كأذرع كشط لفصل أي خلايا متصلة بسطح الحجرة ‎١‏ وبالتالي تسهيل تجميع الخلايا. وتسحب المضخة التمعجية محتويات الحجرة 6 (أي الدم المحتوي على الخلايا غير المتمايزة؛ ‎٠‏ أي الخلايا الجذعية) من قاع الحجرة ‎١‏ وإلى داخل كيس الدم الإخراجي ‎NA‏ وتستمر المضخة في الضخ حتى يتم إدخال حجم مقاس من الدم (كما هو محدد باستخدام مضخة تمعجية معايرة) إلى كيس الدم الإخراجي ‎AA‏ ‏وفي النهاية؛ تتشابك السدادة الحرارية ‎YY‏ مع الأنبوبة ‎Ve‏ وتؤدي إلى غلق طول يبلغ حوالي ؟ سم من الأنبوبة ‎٠‏ ثم تقطع السدادة ‎YY‏ الأنبوبة ‎٠١‏ عند مركز السدادة تقريباً. ‎١‏ ويمكن أن ‎al‏ الجهاز ‎١‏ المستخدم باكتمال العملية. ويمكن أن يزيل المستخدم كيس الدم الإخراجي ‎NG‏ ويمكن التخلص من الحجرة + مع الأنبوبتين لا و١‏ وكيس الدم الإدخالي 4. ويمكن؛ إذا كان ضروريا؛ تقل كيس ‎pall‏ الإخراجي ‎١9‏ إلى نظام ‎RD‏ على سبيل المثال إلى نظام لتمييز الخلايا التي بها واسمات على سطح خلوي ‎Fd‏ خلايا غير متمايزة ‎١‏ على الرغم من أنه يمكن استخدام التغيرات الشكلية ‎Lia)‏ كدليل. ويمكن استخدام نظام التنقية لإزالة عامل الجسم المضاد و/أو اختيارياً إغناء الخلايا (الجذعية) غير المتمايزة. ويكون نظام التتقية المناسب هو نظام تنقية ‎clini MACs/Tsolex‏ ‎(IM)‏ الخلايا غير المتمايزة والمتمايزة هناك العديد من الخلايا غير المتمايزة والمتمايزة الموجودة ‎Jal‏ جسم الحي والتقنية © - العامة مليئة بالتعاليم العامة الخاصة بها. وعلى سبيل المثال + ‎Led‏ يتعلق بالخلايا من سلالات الخلايا المكونة للدم؛ يمكن الرجوع إلى ما ‎ela‏ عن ليفيت ‎Levitt‏ وميرتيلسمان ‎Y990 Mertelsman‏ (في مرجع بعنوان الخلايا الجذعية المكونة للدم ‎haematopoietic stem cells‏ والمنشور بواسطة شركة مارسيل ديكر انك ‎Marcel Dekker Inc‏ وبخاصة الصفحات 95-48) وما جاء عن رويت ‎Roitt‏ ومعاونيه غلا
YY
Immunology, 4th Edition, Eds. Roitt, Brostoff and Male 1996, Publ. Mosby ax yal ‏(في‎ ‎.)٠١ ‏وبخاصة الفصل‎ ‏وتعتبر الخلية غير المتمايزة خلية غير ناضجة لا تظهر معلم تمايز تام ولكنها قادرة‎ ‏على إنتاج نسل به هذا المعلم. وأحد الأمثلة المعروفة للخلية غير المتمايزة هي الخلية الجذعية.‎ ‏وتكون الخلايا الجذعية عبارة عن خلايا غير متمايزة وغير ناضجة قادرة على‎ (specialization ‏حدود) والتمايز (التخصص‎ Os division ‏(انقسام‎ self-renewal ‏التجديد الذاتي‎ ‏وتكون هذه الخلايا الصغيرة كثيرة في الجنين النامي ؛ وبالرغم من ذلك فإن إعدادها تقل بتقدم‎ ‏عملية النمو. وعلى النقيض فإن الكائن العضوي البالغ يحتوي على عدد محدود من الخلايا‎ ‏الجذعية التي تحصر في أجزاء معينة من الجسم.‎ ‏ويعتقد بشكل عام أن الخلايا الجذعية تكون أحادية القوة أو ثنائية القوة أو وافرة القوة.‎ ١ ‏وتكون الخلايا الجذعية أحادية القوة وثنائية القوة محدودة النمو وتعطي نوعاآً واحدآً أو نوعين‎ (PSCs) ‏من الخلايا المتخصصة على التوالي. وعلى النقيض فإن الخلايا الجذعية وافرة القوة‎ ‏يمكن أن تتمايز إلى العديد من الأنواع المختلفة من الخلايا للحصول على نسيج ( يكون‎ ‏عضوي كامل.‎ (AS ‏الأعضاء) أو في حالة الخلايا الجذعية ذات القوة العامة إلى‎ ‏وتكون الخلايا الجذعية وافرة القوة على عكس أحادية القوة أو ثنائية القوة قادرة على‎ vo ‏التمايز إلى سلالات متعددة للحصول على نسيج يتكون من مجموعة من الخلايا ذات الأنواع‎ ‏أو السلالات المختلفة.‎ ‏وتعتبر الخلية الجذعية المكونة للدم مثالا لخلية جذعية وافرة القوة تتواجد بين الخلايا‎ ‏وتعطي كل الأنواع المختلفة من خلايا الدم (بما فيها خلايا الدم البيضاء‎ marrow cells ‏النخاعية‎ ‏وخلايا الدم الحمراء).‎ | © ‏ويعتبر الدم نسيج مائع يتكون من الخلايا الليمفية ()؛ الخلايا البيضاء أحادية النواة‎ ‏الصفائح‎ (Eso) ‏الخلايا الأيزينوفيلية‎ (Ba) ‏الخلايا القاعدية‎ (Ne) ‏الخلايا المتعادلة‎ (Mo) ‏وخلايا الدم الحمراء (:ط8)؛ انظر الشكل ©. ويتم إنتاج هذا النسيج المتخصص‎ (PI) ‏الدموية‎ ‏الدم البيضاء‎ WA ‏وبشكل عام تكافح‎ ٠ (Hse) ‏عن طريق تمايز الخلايا الجذعية المكونة للدم‎
ZN
YY
‏(داخل دائرة أكبر) العدوى في حين تتقل خلايا الدم الحمراء (داخل دائرة أصغر) المواد‎ ‏الغذائية والأكسجين والفضلات حول الجسم.‎ ‏يتم استخلاص الخلايا الجذعية المكونة للدم عن طريق الفصل من‎ hel ‏ذكر‎ WS
Jad ‏دم‎ (iid) ‏أو‎ growth factor sell ‏الدم الطرفي المتحرك بعامل‎ (ii) ‏نخاع العظم»‎ (i) ‏ومؤخراً؛ تم تحضير الخلايا الجذعية المكونة للدم من الخلايا‎ ٠ (placenta ‏(المشيمة‎ cord blood ° ‏التي تم استخلاصها من الأجنة الناتجة باستخدام طرق التخصيب في‎ (BS) ‏الجذعية الجنينية‎ ‏المختبر. وتكون هذه الخلايا غير المتمايزة قادرة على التمايز متعدد السلالات وإعادة تكوين‎ ‏كل نسيج الجسم أي تكون عامة القوة.‎ ‏وتكون طرق الاستخلاص سابقة الذكر مرهقة وخطرة في بعض الأحيان وفي بعض‎ ‎٠‏ > الحالات يمكن اعتبارها لا أخلاقية وبخاصة في حالة طريقة استخلاص الخلايا الجذعية ‏الجنينية. ‏وهناك العديد من الخلايا الجذعية غير المتمايزة في السلالة المكونة ‎pall‏ وهي تشمل الخلايا الجذعية وافرة القوة ‎((PSCs)‏ الخلايا الجذعية شبه الليمفية ‎(LSCs)‏ والخلايا الجذعية شبه النخاعية ‎(MSCs)‏ والمعروفة جميعاً بالخلايا السلف المكونة للدم والليمف ‎(LCs)‏ ويتم ‎he‏ تكوين ‎MSCs LSCs‏ عن طريق تمايز ‎PSCs‏ ومن ثم تكون ‎MSCs LSCs‏ أكثر تحولاً من ‎.PSCs ‏وتشمل أمثلة الخلايا المتمايزة من السلالة المكونة للدم خلايا ‎B WAT‏ الخلايا الأيزوينوفيلية؛ الخلايا القاعدية؛ الخلايا المتعادلة؛ الخلايا النقيية الكبيرة؛ الخلايا البيضاء أحادية النواة؛ خلايا الدم الحمراء؛ الخلايا الحبيبية؛ الخلايا البدنية والخلايا الليمفية. ‎١‏ ويتم تكوين خلايا 7 وخلايا ‎B‏ عن طريق تمايز 15©4. ومن ثم تكون خلايا 7 وخلايا ‎B‏ أكثر تحولاً من :©15. وبتفصيل أكثر؛ تكون سلسلة التمايز هي خلية ‎LSC‏ خلية 8 الأولية أو الخلية التيموسية الأولية ‎.prothymocyte‏ خلية 8-الأولية « خلية ‎B‏ البدئية « خلية 3 الناضجة ‎AA‏ البلازما. الخلية التيموسية الأولية -> الخلية التيموسية العامة -> ‎LAY‏ ‏التيموسية الناضجة (سلالات الخلايا المساعدة :©م061/المستحثة ‎inducer‏ الناضجة أو المسممة ‎. 4 ‏انظر الشكل‎ (suppresser Aladiall/cytotoxic ‏للخلايا‎ ye ‎YVAA
Ye ‏الأيزينوفيلية؛ الخلايا القاعدية؛ الخلايا المتعادلة؛ الخلايا النقيية‎ WAY ‏ويتم تكوين‎ ‏البدنية؛‎ LAY ‏الكبيرة؛ الخلايا البيضاء أحادية النواة؛ خلايا الدم الحمراء؛ الخلايا الحبيبية؛‎ ‏ولهذاء تكون كل خلية من هذه الخلايا أكثر‎ MSCs ‏والخلايا الليمفاوية عن طريق تمايز‎ NK ‏الأورمة النقيية‎ MSC ‏وبتفصيل أكثر ؛ تكون سلسلة التمايز عبارة عن‎ MSCs ‏تحولاً من‎ ‏الأرومة النقيية الكبيرة -> الخلية النقيية‎ -( immature megakaryoblast ‏الكبيرة غير الناضجة‎ ° «) proerythroblast ‏أو الأرومة الدموية الحمراء الأولية‎ (platelet ‏الكبيرة -+ الصفائح الدموية‎ ‏خلية الدم الحمراء)‎ « reticulocyte ‏الخلية الشبكية‎ « erythroblast ‏الأرومة الدموية الحمراء‎ ‏وهي خلية‎ «myelomonocytic stem cell ‏أو الخلية الجذعية النخاعية البيضاء أحادية النواة‎ promyelocyt ‏خلية نخاعية أولية‎ «) myeloblast ‏جذعية ثنائية القوة تتمايز إلى أرومة نخاعية‎ ‏خلية‎ >-( monoblast ‏خلية حبيبية) أو أرومة أحادية النواة‎ >- myelocyt ‏خلية نخاعية‎ >- Ve ‏خلية وحيدة النواة -> خلية ملتهمة كبيرة‎ > promonocyte ‏بيضاء أحادية النواة أولية‎ .0 ‏انظر الشكل‎ (macrophage ‏بصورة شاملة وأمكن تحديد‎ haemotopoiesis ‏ولقد تم تمييز مسارات تمايز تكوين الدم‎ ‏مراحل الخلية المختلفة بسهولة وفقآ للشكل وواسمات السطح الخلوي المحددة للسلالة (أنظر‎ . ‏أدناه)‎ Vo ‏خلايا جذعية‎ cpeural stem cells ‏وتشمل خلايا جذعية أخرى خلايا جذعية عصبية‎ ‏والخلايا‎ neurons ‏يمكنها أن تكون الخلايا العصبية‎ multipotent stem cells ‏متعددة القوة‎ ‏ما جاء في‎ kil) oligodendrocytes ‏والخلايا الدبقية العصبية قليلة الزوائد‎ atrocytes ‏الضامرة‎ ‎Anderson, ¢Nakafuku and Nakamura, 1995, J. Neurosci Res., vol 41(2): 153-68 ‏المراجع‎ ‎.(Morshead et al., 1994, Neuron, Vol 13(5): 1071-82 ‏و‎ ¢1994, FASEB J, vol 8(10): 707-13 Yo ‏من الخلايا‎ Tal ‏نوعاً‎ skeletal muscle satellite cells ‏وتعد الخلايا العضلية الهيكلية الردفية‎ ‏التي‎ myogenic cells ‏للنسيج العضلي‎ 33 gall ‏من الخلايا‎ Thea leg ‏الجذعية؛ وبعبارة أدق‎ ‏يُحافظ عليها في صورة خلايا جذعية ساكنة عند البالغين والتي يمكن أن تكوّن خلايا عضلية‎ (Bischoff, 1986, Dev Biol., vol 115(1): 129-39 aa yall ‏جديدة عند الحاجة. (انظر ما جاء في‎ ‏وهي‎ «epithelial stem cells ‏وتتمثل أنواع أخرى من الخلايا الجذعية في خلايا جذعية ظهارية‎ Yo
YVYAA
Yo endodermal stem cells ‏من الخلايا القاعدية؛ خلايا جذعية باطنية الأدمة‎ de BAe sens .mesenchymal stem cells ‏جذعية من الطبقة المتوسطة‎ LOA ‏من الخلايا الجذعية في الخلايا الجذعية الجنينية‎ Tan ‏ويتمثل نوع هام‎ ‏ولقد تمت دراسة هذه الخلايا وتمييزها بصورة شاملة. وبالفعلء‎ .embryonic stem (ES) cells ‏ولقد‎ .transgenic animals ‏بشكل متكرر في إنتاج الحيوانات المعذّلة ورائياً‎ ES ‏تستخدم خلايا‎ - ٠ ‏في أنبوب الاختيار تمايزاآ إلى أنواع عديدة من الخلايا بما في ذلك‎ 85 WA ‏أظهرت‎ ‏(انظر ماجاء في المرجع‎ lymphoid precursors ‏أسلاف الخلايا شبه الليمفية‎ ‏عصبية. وتكشف براءتا‎ WA (Potocnik et al., 1994, EMBO 1. vol 13(22): 5274-83
ES ‏أولية. وتتميز خلايا‎ BS ‏الاختراع الأمريكيتان 88479858 و 1700805 عن عزل خلايا‎ ‏الواسمين الجنينيين المحددين للمرحلة و ؛‎ Jie ‏بعدد من الواسمات المحددة للمرحلة‎ - ٠ ‏مرتفعي الوزن الجزيئمي‎ glycoproteins ‏و 4-م555)؛ البروتينين السكريين‎ SSEA-3) ‏(انظر ما جاء في‎ alkaline phosphatase ‏و الفوسفاتاز القلوي‎ TRA-1-81 ‏و‎ TRA-1-60
Kannagi er al., 1983, EMBO ¢Andrews et al., 1984, Hybridoma, vol 3: 347-361 ‏المراجع‎ ‎Ozawa et al, ‘Fox et al, 1984, Dev. Biol., vol 103: 263-266 ¢J., vol 2: 2355-2361 (1985, Cell. Differ., vol 16: 169-173 ٠ ‏مع الخلايا غير المتمايزة أو المتمايزة.‎ antigens ‏وترتبط مختلف مولدات المضادات‎ ‏ويقصد بمصطلح 'مرتبط" في هذا البيان الخلايا التي تعبر عن أو القادرة على التعبيرء أو‎ ‏حثها لعرض مولد المضاد المعني (مولدات المضادات المعنية) أو‎ (Se ‏العرض أو التي‎ ‏الاحتواء عليها.‎ ‏وتحتوي معظم الخلايا غير المتمايزة أو المتمايزة على مولدات مضادات التوافق‎ 7 ‏وإذا ارتبطت مولدات المضادات هذه‎ J ‏النسيجي الرئيسية المعقدة من الفئة 1 و/أو من الفئة‎
JIA ‏مع تلك الخلايا فإنها تسمى خلايا الفئة *1 و/أو خلايا‎ ‏وقد يعمل كل مولد مضاد محدد يرتبط بخلية غير متمايزة أو بخلية متمايزة بصفته‎ ‏واسم. ولهذاء يمكن تمييز أنواع مختلفة من الخلايا عن بعضها البعض على أساس مولد‎
YVAA
المضاد الخاص المرتبط (مولدات المضادات الخاصة المرتبطة) بها أو على أساس توليفة خاصة من مولدات المضادات المرتبطة. ومن أمثلة مولدات المضادات الواسمة هذه ‎«CD34‏ 0019 و ‎.CD3‏ وإذا وجدت مولدات المضادات هذه فإن هذه الخلايا الخاصة تسمي خلايا *0034؛ “0019 و ‎CD3*‏ على ‎٠‏ الترتيب. وإذا لم تكن مولدات المضادات هذه موجودة فإن هذه الخلايا تسمى ‎(CD34 LA‏ 9 و 003 على الترتيب. وبتفصيل أكثر ؛» تكون ‎PSCs‏ عبارة عن خلايا *034©؛ ‎DR‏ و ‎TAT‏ (حيث ‎clad‏ ‏المفيدة الأخرى هي 0038 و *6036). وتكون ‎LSCs‏ عبارة عن خلايا ‎CD34* DR"‏ و +707 (وأيضاً *0038). وتكون ‎MSCs‏ عبارة عن خلايا ‎CD7* «CD33 «CD13* (DR* «CD34"‏ و ‎TdT" ٠‏ وتكون خلايا ‎B‏ عبارة عن خلايا *“0019؛ *021©؛ ‎CD22‏ و *08. وتكون خلايا ‎T‏ ‏عبارة عن خلايا *02©؛ *003؛ وإما *004 أو *008. وتكون الخلايا الليمفاوية غير الناضجة عبارة عن ‎WA‏ *4م0 و “008. وتكون ‎T LA‏ المنشطة عبارة عن خلايا ‎DRY‏ وتكون الخلايا القاتلة الطبيعية ‎natural killer cells (NKs)‏ عبارة عن خلايا ‎CD56"‏ و *0016. وتكون خلايا ‎T‏ الليمفاوية عبارة عن خلايا *007. وتكون ‎LAY‏ البيضاء ‎leukocytes‏ عبارة عن ‎ve‏ خلايا *0045. وتكون الخلايا الحبيبية عبارة عن خلايا ‎CD13"‏ و 0033*7. وتكون الخلايا الملتهمة الكبيرة البيضاء أحادية النواة عبارة عن *0014 و ‎DRT‏ ويتم تزويد تفاصيل إضافية في الشكلين ؛ و 0 وتعبر الخلايا الجذعية الجنينية عن ‎SSEA3‏ و ‎ifs ll (SSEA-4‏ السكريين ‎glycoproteins‏ مرتفعي الوزن الجزيئي ‎TRA-1-60‏ و ‎TRA-1-81‏ والفوسفاتاز_القلوي ‎alkaline phosphatase ٠‏ وهي ‎Lad‏ لا تعبر عن 1-م888؛ الذي يعتبر وجوده مؤشراً على التمايز. وتكون واسمات أخرى معروفة بالنسبة لأنواع أخرى من الخلايا الجذعية؛ ‎Jie‏ نيستيئين ‎Nestein‏ بالنسبة للخلايا الجذعية العصبية الظهارية (انظر ما جاء في المرجع ‎٠ 0 Neurosci, 1985, Vol 5: 3310‏ وتكون الخلايا الجذعية من الطبقة المتوسطة إيجابية بالنسبة لب 2 5113 ‎CD120a «CD106 «CD90 «CD71 «CD44 «CD29‏ و ‎«CD124‏ على سبيل ‎ve‏ المثال؛ وسلبية بالنسبة لنب ‎«CD34‏ 45م رو ‎.CD14‏ ‏غلا
ب
وبشكل ‎ed‏ أو إضافي؛ يمكن تمييز العديد من الخلايا من خلال الميزات الشكلية. ويعتبر تمييز الخلايا باستخدام المجهرء اختيارياً باستخدام تقنيات الصبغ ‎Tob‏ متطوراً ‎Tan‏ من العلم الذي يسمى علم الأنسجة 0087 وتوجد بشكل واسع مهارات ذات صلة في التقنية. وبشكل واضح سيتم صبغ الخلايا فقط باستخدام عينات وافية من الخلايا للتأكد من هويتها ‎Lo‏
‎oe‏ الصبغات تؤدي بشكل عام إلى موت الخلايا.
‏ولهذا السبب؛ يمكن تمييز أنواع معينة من الخلايا بالبحث عن واسمات مولدات المضادات المذكورة أعلاه ‎ig)‏ ما إذا كانت الخلية غير متمايزة أو متمايزة) وتخصص هذا النوع من الخلايا ‎Se)‏ ما إذا كانت هذه الخلية عبارة عن خلية 7 أو خلية 8).
‏وقد تحتوي الخلايا غير المتمايزة على أي مكونات تتعلق بعرض مولد المضادء
‎٠‏ احتجازه أو تمييزه. ويفضل؛ أن تكون الخلية غير المتمايزة» عبارة عن خلية ‎MHC‏ من الفئة
‏1 و/أو خلية ‎MHC‏ من الفئة ‎JI‏
‏وقد تحتوي الخلية الأكثر تحولاً على أي مكونات تتعلق بعرض مولد المضادء احتجازه أو تمييزه. ويفضل أن تكون الخلية الأكثر ‎Yad‏ عبارة عن خلية ‎MHC‏ من الفئة “1 و/أو من ‎JIA‏
‏والخلية الأكثر ‎Yd‏ هي أي خلية يتم اشتقاقها أو يمكن اشتقاقها من خلية غير متمايزة. وهكذاء في أحد التجسيدات المفضلة؛ تكون الخلية الأكثر تحولاً ‎Load‏ عبارة عن خلية متمايزة. وعلى سبيل المثال؛ يمكن ‎Bly‏ على ذلك أن تكون الخلية غير المتمايزة والأكثر تحول عبارة عن خلية جذعية شبه ليمفية أو خلية جذعية شبه نخاعية؛ وتكون الخلية غير المتمايزة عبارة عن خلية جذعية وافرة القوة.
‎١‏ وفي تجسيد مفضل آخر؛ تكون الخلية الأكثر تحوّلاً عبارة عن خلية متمايزة؛ ‎Je‏ خلية ‎(CFC-B 44a «CFC-T‏ خلية ‎«CFC-Eosin‏ خلية ‎«CFC-Bas‏ خلية ‎«CFC-GM‏ خلية ‎(CFC-MEG‏ ‏خلية ‎(BFC-E‏ خلية ‎«CFC-E‏ خلية ‎(T‏ خلية ‎B‏ خلية أيزينوفيلية؛ خلية قاعدية؛ خلية متعادلة, ‎Ada‏ بيضاء أحادية النواة؛ خلية نقيية كبيرة؛ خلية دم حمراء؛ وتكون الخلية غير المتمايزة عبارة عن خلية جذعية شبه نخاعية؛ خلية جذعية شبه ليمفية أو خلية جذعية وافرة القوة.
‎1 VAA
YA
‏وإذا كانت الخلية الأكثر تحوّلاً عبارة عن خلية متمايزة فإنه يفضل أن تكون الخلية‎ ‏ليمفاوية (منشطة أو غير منشطة)؛ خلية 7 ليمفاوية (منشطة أو‎ B ‏المتمايزة عبارة عن خلية‎ ‏غير منشطة)؛ خلية من سلالة خلية بيضاء أحادية النواة ملتهمة كبيرة؛ خلية ذات نواة‎ ‏خلية يمكن حثها‎ or ‏قادرة على التعبير عن مولدات مضادات من الفئة 1 أو الفئة‎ nucleated cell enucleated ‏للتعبير عن مولدات مضادات من الفئة 1 أو من الفئة 11 أو خلية ليست ذات نواة‎ 0 ‏(أي خلية لا تحتوي على نواة مثل خلية دم حمراء).‎ ‏وفي تجسيدات مفضلة بديلة؛ تختار الخلية المتمايزة من أي خلية من مجموعة الخلايا‎ null lymphocytes ‏التي تشتمل على خلايا ليمفاوية حبيبية كبيرة؛ خلايا ليمفاوية ليس لها تأثير‎ .016 ‏و/أر‎ CD56 ‏وخلايا قاتلة طبيعية؛ يعبر كل منها عن مستقبلات السطح الخلوي‎ ‏خلية لا تحتوي على نواة.‎ nucleation ‏بتنوية‎ Load ‏وقد يتم تكوين الخلية المتمايزة‎ Ve ‏العوامل‎ .1 ‏يرتبط العامل بشكل فعلي بالخلية الأكثر تحولاً من أجل حدوث تمايز ارتجاعي لهذه‎ ‏الخلية إلى خلية غير متمايزة. وفي هذا الخصوص؛ يمكن أن يعمل العامل الخاص بالتمايز‎ ‏الارتجاعي للخلية الأكثر تحولاً إلى خلية غير متمايزة في ارتباط مباشر أو في ارتباط غير‎ ‏مباشر مع الخلية الأكثر تحولا.‎ ve ‏ويمكن أن يعمل العامل داخل الخلية الأكثر تحولاً. ومع ذلك؛ يفضل أن يعمل العامل‎ ‏الأكثر تحولا.‎ Adal ‏خارج‎ ‏ومن أمثلة الارتباط المباشر أنه عندما يكون للخلية الأكثر تحولاً مستقبل سطح خلوي‎ ‏التي بها مناطق متماثلة (مناطق وجد‎ Gy ‏واحد على الأقل على سطحها الخلوي؛ مثل سلسلة‎
Cum BDA ‏بشكل عام أن لها نفس السياق أو سياق مشابه) مثل تلك التي قد تتواجد على‎ ‏يرتبط العامل مباشرة مع مستقبل السطح الخلوي. ومن الأمثلة الأخرى أنه يكون بالخلية الأكثر‎ ‏تحولاً مستقبل سطح خلوي على سطحها الخلوي مثل سلسلة ألفا بها مناطق متماثلة مثل تلك‎ ‏التي يمكن أن تتواجد على خلايا 7» حيث يرتبط العامل مباشرة بمستقبل السطح الخلوي.‎ ‏ملا‎
Ya ‏ومن أمثلة الارتباط غير المباشر أنه يكون بالخلية الأكثر تحولاً مستقبلين على الأقل‎ ‏للسطح الخلوي على سطحها الخلوي وحيث يؤثر ارتباط العامل مع أحد المستقبلات على‎ ‏المستقبل الآخر الذي يمكن أن يستحث بعد ذلك التمايز الارتجاعي للخلية الأكثر تحولا.‎ ‏ويمكن أن يكون العامل المستخدم للتمايز الارتجاعي للخلية الأكثر تحولاً إلى خلية‎ ‏غير متمايزة عبارة عن مركب أو تركيب كيميائي. ويفضل؛ بالرغم من ذلك؛ أن يكون العامل‎ ٠ ‏قادر على الارتباط بمستقبل سطح خلوي موجود على سطح الخلية الأكثر تحولاً. وهكذاء في‎ ‏يرتبط العامل بشكل فعلي مع مستقبل موجود على سطح الخلية الأكثر تحولا‎ (inde ‏تجسيد‎ ‏مستقبل قابل للتعبير‎ Jie Yad ‏حيث قد يتم التعبير عن هذا المستقبل بواسطة الخلية الأكثر‎ ‏عنه بواسطة الخلية الأكثر تحولا.‎ ‏وعلى سبيل المثال؛ تشمل العوامل المفضلة عامل واحد أو أكثر من العوامل التالية:‎ \. «CD4 ‏جزيء‎ cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ‏أحادي فوسفات الأدينوسين الحلقي‎ cpeptide ‏(ثابتة أو حرة)؛ ببتيد‎ ligand ‏جزيء 008؛ جزء من أو كل مستقبل خلية 7؛ ربيطة‎ «cross-reactive antibody ‏جسم مضادء؛ جسم مضاد متفاعل تادلياً‎ (TCR) T ‏مستقبل خلية‎ ‏أو جسم مضاد متعدد النسائل‎ «monoclonal antibody ‏جسم مضاد أحادي النسيلة‎ ‏:0»0ع؛ مثل عوامل النمو‎ factors ‏النمو‎ Jal so ‏017010001ع. كما يمكن استخدام‎ antibody Vo ‏وعلى سبيل المثال الإرثروبوتين‎ chaematopoietic growth factors ‏المكونة للدم‎ ‏وعامل تنشيط مستعمرة الخلايا الحبيبية-الخلايا البيضاء أحادية النواة‎ erythropoietin .granulocyte-monocyte colony stimulating factor (GM-CSF) ‏عن جسم مضادء جسم مضاد متفاعل تبادلياً» جسم مضاد‎ 3 ke ‏وإذا كان العامل‎ ‏أحادي النسيلة؛ أو جسم مضاد متعدد النسائل؛ فإنه يفضل أن يكون العامل عبارة عن جسم‎ ©
Gals ‏مضاد واحد أو أكثر من الأجسام المضادة الثالية: جسم مضاد؛ جسم مضاد متفاعل‎ ‏جسم مضاد أحادي النسيلة؛ أو جسم مضاد متعدد النسائل لمولد مضاد واحد أو أكثر من‎ ‏سلسلة بيتا من مولد‎ IT ‏من الفئة‎ MHC ‏المضاد‎ alge ‏مولدات المضادات التالية: سلسلة بيتا من‎ ‏سلسلة ألفا‎ or ‏من الفئة 1 أو الفئة‎ MHC ‏سلسلة ألفا من مولد المضاد‎ (MHC HLA-DR ‏المضاد‎ ‏من الفئة 11 أو مولد‎ MHC ‏سلسلة ألفا وبيتا من مولد المضاد‎ (HLA-DR ‏المضاد‎ alse (3a Yo
YVYAA r. ‏مثالا على جسم مضاد ملائم (يحصل عليه من شركة‎ CR3/43 ‏من الفئة 1. ويعد‎ MHC ‏المضاد‎ ‎.(Dako ‏داكو‎ ‏المشتقة بالانقسام الحال‎ of gu) ‏ويشمل مصطلح "جسم مضاد" الأجزاء المختلفة‎ ‏والمشتقات‎ (recombinant technology ‏أو بتكنولوجيا التأشيب‎ proteolytic cleavage ‏للبروتين‎ ‏المضادة؛‎ scFv ‏و‎ F(ab’), «Fab ‏أجسام‎ Jie binding activity ‏التي تحتفظ بفاعلية الارتباط‎ ° ‏منها. ويشمل‎ bioisosteres ‏أو الجزيئات المتماثلة حيوياً‎ mimetics ‏بالإضافة إلى المحاكيات‎ ‏كأجسام مضادة الأنواع المهندسة وراثياً حيث تم تعديل بعض سياقات الحمض الأميني‎ Lay ‏لتحفيز‎ amino acid ‏على سبيل المثال عن طريق استبدال شقوق حمض أميني‎ camino acid ‏الارتباط أو؛ عندما يتم تحضير الأجسام المضادة في نوع مختلف عن الكائن العضوي الذي‎ ‏تكون خلاياه مطلوبة للمعالجة 5 لطرق هذا الاختراع لخفض إمكانية حدوث تفاعلات مناعية‎ ٠ ‏(ومن أمثلتها الأجسام المضادة أحادية النسيلة الفأرية‎ adverse immune reactions ‏عكسية‎ ‏"المعذلة في صورة بشرية').‎ ‏ويفضل أن تعمل العوامل المستخدمة لإحداث التحويل من خلية أكثر تحولاً إلى خلية‎ ‏غير متمايزة خارج الخلية الأكثر تحولاً. وبشكل خاص؛ يفضل أن تضم الخلية الأكثر تحولاً‎ ‏مستقبل قابل للارتباط بشكل فعلي بواسطة العامل حيث يرتبط العامل بشكل فعلي مع المستقبل.‎ - ١ ‏فعلى سبيل المثال؛ يمكن أن يكون المستقبل عبارة عن مستقبل سطح خلوي. وتشمل‎ ‏ويفضلء‎ TT ‏من الفئة 1 ومن الفئة‎ MHC ‏أمثلة محددة على مستقبلات السطح الخلوي مستقبلات‎ ‏أن يحتوي المستقبل على مكون ألفا و/أو مكون بيتا كما هو الحال بالنسبة لمستقبلات 14 من‎
JI ‏الفئة 1 ومن الفئة‎ ‏ويفضل أكثر؛ أن يضم المستقبل سلسلة بيتا بها مناطق متماثلة. على سبيل المثال‎ ‏على الأقل.‎ HLA-DR ‏المناطق المتماثلة في سلسلة بيتا من‎ ‏وبشكل بديل أو إضافي؛ يضم المستقبل سلسلة ألفا بها مناطق متماثلة؛ على سبيل‎ ‏على الأقل.‎ HLA-DR (se Wl ‏المثال المناطق المتماثلة في سلسلة‎ ‏ويفضل؛ أن يكون المستقبل عبارة عن مولد مضاد من الفئة 1 أو الفئة 11 معقد التوافق‎ ‏وفي تجسيدات مفضلة؛ يكون مستقبل السطح الخلوي عبارة عن‎ (MHC) ‏النسيجي الرئيسي‎ Ye
YVYAA
(DQ ‏مستقبل‎ «DP ‏مستقبل 014؛ مستقبل‎ (HLA-DR ‏أي مستقبل من المستقبلات التالية: مستقبل‎ ‏أو‎ (HLA-F ‏مستقبل‎ (HLA-E ‏_مستقبل‎ (HLA-C ‏مستقبل‎ (HLA-B ‏مستقبل‎ (HLA-A ‏مستقبل‎ ‏وفي تجسيدات مفضلة أكثر يكون مستقبل السطح الخلوي عبارة عن مستقبل‎ HLA-G ‏مستقبل‎ ‎HLA-DR ‏ويفضل؛ أن يكون العامل عبارة عن جسم مضاد للمستقبل؛ والأفضل أن يكون العامل‎ ‏عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة للمستقبل.‎ ‏ومن الأمثلة المفضلة الأخرى على عامل ؛ ذلك العامل الذي يعدل التعبير عن جين‎
JAE) ‏من الفئة "1 و/أو من‎ MHC ‏التعبير عن‎ Jie MHC ‏وفي تجسيد مفضل؛ يستخدم العامل بالاقتران مع معدل استجابة حيوية‎ ‏وتشمل أمثلة مُعدّلات الاستجابة الحيوية عامل الكلة‎ .biological response modifier ٠١ ‏سيتوكين‎ cgrowth factor ‏عامل نمو‎ <immunomodulator ‏معدل مناعي‎ alkylating agent ‏سياق‎ nucleic acid ‏حمسض نووي‎ <hormone ‏مستقبل سطح خلويء هرمون‎ ccytokine ‏ويكون عامل الألكلة المفشضل‎ -peptide ‏مولد مضاد أو ببتيد‎ cnucleotide sequence ‏نيوكليوتيد‎ ‏أو يحتوي عليه.‎ cyclophosphoamide ‏عبارة عن فوسفو أميد حلقي‎ ‏وتشمل مُعدلات الاستجابة الحيوية المفضلة الأخرى المركبات القادرة على التنظيم‎ yo ‏من الفئة 1 و/أو الفئة 11. وفي تجسيد مفضل؛ يكون هذا‎ MHC ‏العالي للتعبير عن مولد مضاد‎ ‏للعمل بشكل فعال أكثر. وبما أنه يمكن تحضير أي‎ MHC ‏للسماح للعامل الذي يرتبط بمستقبل‎ ‏من الفئة 1 و/أو من الفئة 11 يجب أن يزود ذلك‎ MHC ‏نوع خلية للتعبير عن مولدات مضادات‎ ‏طريقة للتمايز الارتجاعي لتشكيلة واسعة من أنواع الخلايا سواء أكانت تعبر بشكل أساسي عن‎ ‏من الفئة 1 و/أو من الفئة ]1 أم لا.‎ MHC ‏مولدات مضادات‎ Ye ‏ويفضل أن تتضمن خطوة الملامسة ارتباط العامل مع أي واحدة أو أكثر مما يلي:‎ ‏المناطق المتمائلة في سلسلة‎ of ‏المناطق المتماثلة في سلسلة ألفا من مولد ات مضادات من الفئة‎ ‏مستقبل السطح الخلوي 004؛ مستقبل السطح الخلوي‎ IF ‏ألفا من مولدات مضادات من الفثئة‎ ‏؛ المناطق المتماثلة في سلسلة بيتا من مولدات مضادات_من الفئة 11 في وجود الخلايا‎ 08 ‏الليمفاوية؛ المناطق المتماثلة في سلسلة ألفا من مولدات مضادات من الفئة 1 في وجود الخلايا‎ vo
YYAA vy ‏الليمفاوية؛ المناطق المتماثلة في سلسلة ألفا من مولدات مضادات من الفئة 11 في وجود الخلايا‎ ‏الاستجابة الحيوية (انظر ما ذكر‎ Jak ‏الليمفاوية. ويفضل أن تحدث خطوة الملامسة في وجود‎ ‏أعلاه).‎ وعادة؛ يتم اشتقاق التجمع الخلوي من عينة حيوية؛ ‎Jie‏ الدم أو الأنسجة ذات الصلة ‎٠‏ التي تشمل نخاع العظم ‎cbone marrow‏ والنسيج العصبي من الجهاز العصبي المركزي ‎central nervous system‏ أو ‎lead‏ العصبي المحيطي ‎cperipheral nervous system‏ النسيج العضلي؛ أي نسيج بشرة الجلد و/أو الأدمة في الجلد (أي عن طريق الكشط الفموي ‎oral scraping‏ على سبيل المثال) ‎٠‏ ويفضل أن تكون المادة الحيوية من مصدر بعد الولادة. ويفضل استخدام دم كامل أو منتجات معالجة ‎Jie die‏ البلازما ‎plasma‏ أو الطبقة الطافية ‎cbuffy coat ٠‏ حيث أنه يمكن إزالتها من الأشخاص الخاضعين للمعالجة بأقل إشراف طبي. وتتم معالجة عينات الدم عادة بمضادات التجلط ‎Jie anticoagulents‏ الهيبارين ‎heparin‏ السترات ‎citrate‏ ويمكن معالجة الخلايا الموجودة في العينة الحيوية لاغناء أنواع خلايا معينة؛ إزالة بعض أنواع الخلايا أو فصل الخلايا من كتلة نسيجية. وتشمل الطرق المفيدة لتنقية وفصل الخلايا الفصل بالطرد المركزي ‎centrifugation‏ (مثل الفصل بالطرد المركزي ‎bag‏ لتدرج الكثافة) وقياس التدفق الخلوي ‎flow cytometry‏ والاستشراب الألفوي ‎affinity chromatography‏ (مثل استخدام حبيبات مغناطيسية تحتوي على أجسام مضادة أحادية النسيلة لواسمات السطح الخلوي أو الفصل الدوار ‎(panning‏ (انظر ما ‎ela‏ في المرجع ‎Vettese Dadey The Scientist‏ 21 :)18( 13 )1999 13 .عع58)). وعلى سبيل المثال؛ يكون الفصل بطريقة فيكول-هايباك ‎Ficoll-Hypaque‏ مفيداً في إزالة خلايا الدم الحمراء والخلايا الحبيبية لترك الخلايا أحادية النواة ‏الليمفاوية والخلايا البيضاء أحادية النواة.‎ LAY (Fav. ‏وحيث أن الخلايا تكون عبارة عن مزارع أولية بشكل أساسيء فإنه قد يكون من‎ ‏الضروري تزويد التجمعات الخلوية بمواد غذائية مناسبة للحفاظ على الحيوية. وتكون ظروف‎ ‏الزراعة المناسبة معروفة للمتمرسين في التقنية. وبالرغم من ذلك؛ يفضل بدء معالجة التجمع‎ ‏الخلوي بأسرع ما يمكن بعد إزالة العينات الحيوية من المرضى؛ وبشكل نموذجي خلال‎
YYAA vy ‏ساعة؛ ويفضل خلال فترة من ؟ إلى ؛ ساعات. ويمكن التأكد من حيوية الخلايا باستخدام‎ VY .trypan blue exclusion ‏الاستبعاد بالتريبان الأزرق‎ Jie Tam ‏الطرق المعروفة‎ ‏ويتم حضن التجمعات الخلوية بشكل عام مع عامل لمدة لا تقل عن ساعتين؛ وبشكل‎ ‏ساعة. ويتم إجراء عمليات‎ VY ‏ساعة؛ ويفضل ما بين 7 إلى‎ YE JY ‏نموذجي ما بين‎ ‏الحضن بشكل نموذجي عند حوالي درجة حرارة الغرفة؛ على سبيل المثال حوالي 77م إلى‎ ٠ ‏ويمكن التأكد من سير إجراء التمايز الارتجاعي‎ ٠ ATV ‏ما يصل إلى حوالي لام بما فيها‎ ‏مجهرياً و/أو بقياس‎ WAY ‏بشكل دوري عن طريق إزالة جزء صغير من العينة وفحص‎ ‏التدفق الخلوي. وبشكل بديل؛ يمكن أن يحتوي الجهاز على وسيلة تتبع لمراقبة سير إجراء‎ ‏التمايز الارتجاعي بشكل مباشر.‎ ‏وبمجرد زيادة الأعداد النسبية لنوع الخلية المطلوب إلى مستوى مناسب؛ قد يكون على‎ Ve ‏سبيل المثال؛ منخفضاً إلى نسبة تبلغ 7811 أو مرتفعاً حتى نسبة تبلغ 78 تستخدم التجمعات‎ ‏وفيما يتعلق بأعداد الخلايا غير المتمايزة المتكونة. من‎ ٠ ‏الخلوية المعذّلة الناتجة بعدة طرق‎ ‏المهم الأخذ بعين الاعتبار القدرة التكاثرية للخلايا الجذعية. وعلى الرغم من أنه في بعض‎ ‏فإن‎ AL ‏الجذعية أو الخلايا غير المتمايزة الأخرى المتكونة‎ AY ‏الظروف؛ قد تكون أعداد‎ ‏خلية جذعية وافرة القوة مكونة للدم فقط يمكن أن تعيد تكوين‎ ٠ ‏الدراسات قد أظهرت أن‎ ve ‏نظام مكون للدم كامل في فأر مانح. وهكذا لا يتطلب الاستخدام العلاجي تكوين عدد كبير من‎ ‏الخلايا.‎ ‏ويمكن إجراء عملية تحويل الخلايا الأكثر تحولاً إلى الخلايا غير المتمايزة أيضاً داخل‎ ‏إلى‎ carrier ‏أو مخفف صيدلي‎ diluent ‏الجسم عن طريق إعطاء العامل ؛» وخلطه مع ناقل‎ ‏وبالرغم من ذلك يفضل في حالات عديدة أن يتم إجراء التمايز الارتجاعي داخل‎ pms ٠ ‏أنبوب الاختبار وخارج جسم الحي.‎ ‏ويمكن استخدام التجمعات الخلوية المعالجة الناتجة في أنبوب الاختبار بعد ذلك بأقل‎ ‏أو مخفف مقبول‎ Waa ‏معالجة. فعلى سبيل المثال يمكن مزجها ببساطة مع ناقل مقبول‎ ‏صيدلياً وإعطائها إلى مريض بحاجة للخلايا الجذعية.‎
YVAA ve ‏وبالرغم من ذلك قد من يكون المطلوب إغناء التجمع الخلوي بالخلايا غير المتمايزة‎ ‏أو تنقية الخلايا من التجمع الخلوي. ويمكن إجراء ذلك بشكل ملائم باستخدام عدة طرق (انظر‎ ‏وقد يحتوي جهاز‎ .(Vattese-Dadey - The Scientist 13 (18): 21 Sep 1999 ‏ما جاء في المرجع‎ ‏على وسيلة تتقية أو فصل للإغناء بالخلايا غير المتمايزة‎ Gobi) ‏للاختراع الراهن‎ Tay ‏المذكورة أو استعادة الخلايا غير المتمايزة المذكورة من التجمع الخلوي المتغير. على سبيل‎ ‏المثال يمكن تنقية الخلايا اعلى أساس واسمات السطح الخلوي باستخدام الاستشراب و/أو قياس‎ ‏التدفق الخلوي. وبالرغم من ذلك؛ قد لا يكون من الضروري غالبا ولا من المرغوب تتقية‎ ‏غير المتمايزة بشكل كثيف من التجمع الخلوي حيث أن الخلايا الأخرى الموجودة في‎ LDA) ‏قد تحافظ على حيوية ووظيفة الخلية الجذعية.‎ (stromal cells ‏التجمع (مثل الخلايا اللحمية‎ ‏ويعتبر قياس التدفق الخلوي تقنية معروفة جيدا وقوية ويمكن الاعتماد عليها لتمييز‎ Ve
Aan) ‏التجمعات المختلطة بالإضافة إلى تصنيف الخلايا. وهكذاء قد تشتمل وسيلة‎ Jala ‏الخلايا‎ ‏أو الفصل على مقياس للتدفق خلوي. حيث يعمل مقياس التدفق الخلوي على أساس الميزات‎ ‏الفيزيائية للجسيمات في المعلق السائل؛ التي يمكن تمييزها عند فحصها باستخدام شعاع من‎ ‏وتشمل الميزات الفيزيائية حجم‎ ADA ‏الضوء. وبالطبع قد تكون هذه الجسيمات عبارة عن‎ ‏الخلية وتركيبهاء أو كما أصبح شائعآً في السنوات الأخيرة؛ واسمات السطح الخلوي المرتبطة‎ ve ‏بأجسام مضادة أحادية النسيلة مقترنة بالجزيئات الفلورية.‎ 1994, J. Hematother 3(4): 263-89 aa yall ‏ومعاونوه في‎ Kreisseg ‏ويذكر كريسيج‎ ‏أصبح استخدام مقياس التدفق‎ (CD34 ‏أنه "نتيجة لتوافر الأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد‎ ‏الخلوي متعدد الوسائط الأداة الأمثتل لتحديد الخلايا الجذعية والخلايا السلف المكونة للدم"‎
CD34 ‏ويستمر في وصف التقنيات العامة للتقدير الكمي وتمييز الخلايا التي تعبر عن‎ | © ‏ومعاونوه؛ في المرجع‎ Korbling ‏بقياس التدفق الخلوي. وعلاوة على ذلك يصف كوربلينج‎ ‏باستخدام الامتزاز‎ 0034* WIA 48% ‏عملية‎ <1994, Bone Marrow Transplant. 13: 649-54
HLA-DR ‏متبوعاً بقياس التدفق الخلوي اعتمادآً على التعبير عن‎ immunoadsorption ‏المناعي‎ ‏يتعلق بالخلايا الجذعية/الخلايا‎ Lad fade ‏يكون *6034 واسماً‎ (Blu ‏وكما هو موصوف‎ ‏السلف.‎ Yo
YVAA ro ‏على الميزات‎ Tle) ‏وتكون طرق قياس التدفق الخلوي لتصنيف الخلايا الجذعية‎ ‏ومعاونوه في‎ Visser ‏يصف فيسر‎ (Jha) ‏سبيل‎ ad ‏الفيزيائية الأخرى متاحة أيضاً.‎ ‏,1980؛ أنه يمكن فصل تلك الخلايا الجذعية اعتمادا على‎ Blood Cells 6:391-407 ‏المرجع‎ ‏ومعاونوه في المرجع‎ Grogan ‏حجومها ودرجة تعقيد تركيبها. ويصسف جروجان‎ ‏الجذعية الحية من الأنسجة‎ WAY ‏تصنيف‎ Say’ ‏أنه‎ Lad 1980, Blood Cells, 6: 625-44 © ‏البسيطة المكونة للدم بدرجة نقاء مرتفعة وقابلة للتأكد".‎ ‏وبالإضافة إلى اختيار الخلايا على أساس وجود واسم سطح خلوي أو خاصية فيزيائية‎ ‏أخرى (اختيار إيجابي)؛ فإنه يمكن إغناء التجمعات الخلوية؛ وتنقيتها باستخدام المعايير السلبية.‎ (CDS «CD4 ‏وعلى سبيل المثال؛ يمكن إزالة الخلايا التي بها واسمات محددة للسلالة مثل‎ ‏من التجمع الخلوي بقياس التدفق الخلوي أو بالاستشراب الألفوي.‎ CD3 ‏و‎ ©042٠ ‏لتنقية الخلايا استخدام الأجسام المضادة أو الربيطات‎ Tas sade ‏وتتضمن طريقة‎ ‏الألفوية الأخرى المرتبطة بالحبيبات المغناطيسية. حيث يتم حضن الحبيبات مع التجمع الخلوي‎ ‏الذي ترتبط به ربيطة‎ CD34 Jie ‏ويتم احتجاز الخلايا التي بها واسم سطح خلوي؛‎ ‏ألفوية. ويتم وضع أنبوب_العينة المحتوية على الخلايا في مُركّز عينة مغناطيسي‎ ‏يتم جذب الحبيبات إلى جوانب الأنبوب. وبعد مرحلة‎ Cus magnetic sample concentrator Vo ‏غسل واحدة أو أكثر؛ يكون قد تم تنقية الخلايا المطلوبة جزئياً أو بالكامل بشكل أساسي من‎ ‏الخلايا الأخرى. وعند استخدامها في نمط الاختيار السلبي فإنه بدلا من غسل الخلايا المرتبطة‎ ‏بالحبيبات عن طريق التخلص من الطور السائل؛ فإنه يتم إبقاء الطور السائل وبالتالي يتم إزالة‎ ‏الخلايا المرتبطة بالحبيبات بشكل فعال من التجمع الخلوي.‎ ‏ويمكن استخدام طرق التنقية المعتمدة على الربيطة الألفوية مع أي نوع خلية تم تمييز‎ , ‏أو يمكن تمييز واسمات مناسبة له.‎ ‏(في المرجع‎ pV 447 ‏ومعاونوة‎ 8 Lbs Ly) ‏ويصف‎ ‏التحضير الدقيق للخلايا الجذعية المكونة‎ (J. Chromatogr B Biomed Appl. 687: 449-52 ‏عظم فأر باستخدام التجزئة بالتدفق في مجال الجاذبية‎ pla ‏من معلق‎ pal ‏ويعلق أربانكوفا 8 ومعاونوه؛ 197١م مرة‎ gravitational field-flow fractionation Yo
YYAA
أخرى على أنه تم استخدام الطريقة لتمييز الخلايا الجذعية من نخاع عظم الفأر نتيجة لكون هذه الخلايا أكبر من الخلايا الأخرى في نخاع العظم ويكون بالإمكان بناء على ذلك فصلها عن الخليط. وهكذا يمكن استخدام الوسائط الفيزيائية ‏ غير واسمات السطح الخلوي للتنقية/للإغناء بالخلايا الجذعية.
° ويمكن الإبقاء على التجمعات الخلوية التي تضم الخلايا غير المتمايزة والخلايا غير المتمايزة النقية الناتجة بواسطة الطرق ‎Tay‏ لهذا الاختراع في أنبوب الاختبار باستخدام تقنيات معروفة. وعادة؛ يتم استخدام أوساط النمو الأدنى مثل أوساط هانكس ‎RPMI 1640 «Hanks‏ وأوساط أساسية أصغرية لدالبيكى ‎Dulbecco's Miminal Essential Media (DMEM)‏ أو وسط دالبيكو الذي عذله أيزكوف ‎cIscove's Modified Dulbecco Medium‏ والمزودة بمصل ثديي مثل
‎FBS 0٠‏ واختيارياً ‎plasma Le hs‏ الفرد نفسه؛ للحصول على بيئة نمو مناسبة للخلايا. وفي تجسيد مفضل » يتم زراعة الخلايا الجذعية على طبقات تغذية مثل طبقات الخلايا اللحمية (انظر ما جاء في المرجع 115-150 :13 ‎Crit Rev.
Immunology, vol‏ ,1993 ماد ‎(Deryugina et‏ . ويعتقد أن الخلايا اللحمية تفرز عوامل تحافظ على الخلايا السلف في حالة غير متمايزة. وتم وصف نظام زراعة طويل الأمد للخلايا الجذعية من قبل دكستر ‎Dexter‏ ومعاونوة؛ 4974 ام ‎٠‏ (في المرجع 5 :91 ‎(J.
Cell Physiol, vol‏ وما كتبه دكستر ‎Dexter‏ ومعاونوة 47/9 ام (في المرجع 9 :62 ‎.(Acta.
Haematol., vol‏ فعلى سبيل ‎(JG‏ وصف ليبكوفيسكي ‎Lebkowski‏ ومعاونوه؛ 997١م‏ (في المرجع ‎(Transplantation 53(5): 1011-9‏ أنه يمكن تنقية خلايا “0034 المكونة للدم البشرية باستخدام تقنية تعتمد على استخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي يتم تثبيتها تساهمياً على أسطح ‎٠‏ متعدد ستيرين ‎polystyrene‏ وأنه يمكن الحفاظ على خلايا *0034 المنقاة بهذه الطريقة مع احتفاظها ‎Le‏ يزيد عن 788 من الحيوية. ووصف ليبكوفيسكسي ‎Lebkowski‏ ومعاونوه؛ 7م (في المرجع 339-42 :)2(3 ‎Hematother,‏ .1( أيضاً كيفية فصل وزراعة خلايا “47 البشرية. وانظر ‎Lad‏ ما كتبه هايالوك ‎Haylock‏ ومعاونوه»؛ 994١م‏ (في المرجع ‎(Immunomethods, vol 5(3): 217-25‏ لمراجعة مختلف الطرق. خلا
بي ويمكن التأكد من هوية الخلايا الجذعية باستخدام عدد من المعايرات في أنبوب الاختبار مثل معايرات ‎CFC‏ (انظر ‎Lad‏ الأمثلة). حيث يتم غالبا قياس ‎WAY‏ الجذعية المكونة للدم الأولية ‎Tas‏ باستخدام معايرة الخلية البادئة للزراعة طويلة الأمد ‎(LTC-IC)‏ ‏(انظر ما جاء في المرجع 55-62 :13 ‎.(Eaves et al, 1991, J.
Tiss.
Cult.
Meth.
Vol‏ ‎٠‏ وتحتفظ ‎LTCICs‏ بقدرة تكوين الدم لمدة تتراوح من © إلى ‎VY‏ أسبوع. ويمكن تجميد التجمعات الخلوية التي تحتوي على الخلايا غير المتمايزة والمستحضرات النقية التي تحتوي على الخلايا غير المتمايزة للاستخدام ‎Stine‏ وتكون الطرق المناسبة لتجميد الخلايا ثم تنشيطها لاحقاً معروفة في التقنية. ويمكن أن يضم جهاز وفقا للاختراع الراهن اختياريً ‎Lad‏ وسيلة تجميد لتجميد التجمعات الخلوية التي تحتوي على - الخلايا غير المتمايزة و/أو المستحضرات النقية التي تحتوي على الخلايا غير المتمايزة. وفي أحد التجسيدات؛ يفضل أن يحدث التمايز الارتجاعي للخلايا من أو في عينات دم من الطبقة الطافية. ويقصد بمصطلح "الطبقة الطافية" طبقة الخلايا البيضاء التي تتكون بين طبقة خلايا الدم الحمراء والبلازما عندما يتم فصل الدم غير المتجلط بالطرد المركزي أو عند تركه ليستقر. ‎IV ne‏ استبدال نسبة الخلايا المتمايزة الطبيعية في تجمع خلوي في النسيج الطبيعي يكون العدد النسبي لمختلف أنواع الخلاياء ‎led Ly‏ الخلايا المتمايزة وغير المتمايزة؛ عند زمن محدد ‎Bale‏ ثابث. وعلى سبيل المثال؛ يبلغ عدد خلايا الدم البيضاء عند شخص سليم عمره ‎7١‏ عام عادة حوالي ‎"٠١78‏ لكل ‎cde‏ من بينها 777 خلايا ليمفاوية؛ و77 خلايا بيضاء أحادية النواة و 779 ‎WA‏ حبيبية. ويختل مستوى هذه الخلايا © | (بما فيها كل من العدد النسبي وعدد الخلايا المطلق) أثناء المرض؛ كما هو الحال في دم مرضى اللوكيميا (سرطان ‎(pall‏ المصابين بلوكيميا الخلايا الليمفاوية المزمنة في خلايا ‎B‏ 8 ‎.cell choronic lymphocytic leukaemia (B-CLL)‏ ويمكن أن يحدث تغيير أو اختلال أو إحلال للعدد النسبي (أي نسبة) للخلايا المتمايزة على سبيل المثال في أجزاء الخلايا أحادية النواة عن طريق وضع الدم الكامل أو الطبقات ‎vo‏ الطافية على هيئة طبقات فوق وسط من نوع هستوباك ‎histopaque‏ لإزالة الخلايا الحبيبية؛ ‎YYAA‏
YA
‏حيث تجدد الخلايا‎ baie ‏وهكذا يحدث التمايز الارتجاعي للخلايا المتمايزة إلى خلية غير‎ ‏غير المتمايزة نفسها (تتكاثر) وتتمايز ارتجاعياً إلى العديد من أنواع الخلايا لتعويض الخلايا‎ ‏المستبدلة.‎ ‏للعدد النسبي (أي نسبة) للخلايا‎ Dla) ‏اضطراب أو اختلال أو‎ Lad ‏ويمكن أن يحدث‎ ‏المتمايزة؛ على سبيل المثال؛ الطبقات الطافية (التي تم الحصول عليها من مانحي الدم) بعد‎ ٠ ‏إزالة (عن طريق الفصل بالطرد المركزي على وسط متدرج الكثافة أو الانتقاء السلبي‎ ‏باستخدام الحبيبات المغناطيسية المغطاة بجسم مضاد) خلايا الدم الحمراء؛ الصفائح الدموية؛‎ ‏الخلايا الحبيبية؛ الخلايا البيضاء أحادية النواة وخلايا 7 الليمفاوية. ويمكن أن يطلق على هذه‎ ‏المعالجة الانتقاء السلبي أو إغناء نوع معين من الخلايا المتمايزة ويكون مثال لنسيج مستبدل.‎ calcium ‏وعندما يتم زراعة هذه الخلاياء على سبيل المثال؛ في وسط يحتوي على الكالسيوم‎ ٠ ‏فإن الخلايا المتمايزة؛ تتمايز ارتجاعياً إلى‎ ((ISDM) ‏وسط دالبيكوس الذي عله أيزكوف‎ Jie ‏خلايا غير متمايزة؛ والتي تجدد نفسها (تتكاثر) وتتمايز ارتجاعياً إلى مختلف أنواع الخلايا‎ ‏لتعويض الخلايا المستبدلة.‎ ‏وأثناء هذه العملية لوحظ أن الخلايا في البداية تتجمع في مستعمرات (يحدث لها تكتل‎ ‏من أجل التمايز ارتجاعياً. وبمجرد تحويل الخلايا الأكثر تحولاً إلى خلايا غير‎ (Ll ‏متماثل‎ ١ ‏متمايزة فإنها تكتسب القدرة على التكاثر والنمو إلى مختلف أنواع الخلايا المتمايزة ارتجاعياء‎ ‏في محاولة لتعويض العدد النسبي للخلايا المستبدلة.‎ ‏وتشمل وسيلة التمايز الارتجاعي القادرة على الاستعاضة عن نسبة الخلايا المتمايزة‎ ‏الطبيعية في تجمع خلوي يشمل؛ على سبيل المثال؛ الأجسام المضادة (النقية والمقترنة) أي‎ ‏المرتبطة بربيطات ثابتة وحرة مثل الحبيبات المغناطيسية؛ الزجاجية؛ حبيبات من متعدد‎ - ٠ ‏أو ليمفوبريب‎ Histopaque ‏على سبيل المثال)؛ وسط من نوع هستوباك‎ polystyrene ‏ستيرين‎ ‏لكثافتها؛ أو‎ ban ‏متدرج الكثافة يستخدم لفصل الخلايا‎ dawg ‏أو أي‎ LymphoPrep ‏الدم الحمراء على سبيل المثال). ويمكن‎ WDA ‏(القادر على ترسيب‎ Dextran ‏الدكسترين‎ ‏كتبه فيتس دادي‎ Load ‏التعرف على وسائل التمايز الارتجاعي المناسبة الأخرى‎ .(The Scientist (Sep. 13 1999) 13 (18): 21 ‏(انظر المرجع‎ Vettese-Dadey | Yo
YVAA
Ya ‏ويمكن أن يؤدي تعرض الخلايا المستبدلة لعامل خلابي مناسب؛ بما في ذلك‎ ‏7<-رباعي أسيتيك‎ N-( ‏(حمض غليكول إثيلين ثنائي (بيتا-أمينو إثيل‎ EGTA EDTA ‏(حيث‎ <heparin ‏والهيبارين‎ (ethylene glycol-bis (B-aminoethyl ether)-N,N-tetraacetic acid
Load ‏يُشار إلى هذا العامل الخلابي بمعدّل الاستجابة الحيوية) إلى جعل الخلايا الأكثر تحولاً‎ ‏يؤدي تعرض الخلايا المستبدلة‎ JB ‏غير متمايزة. فعلى سبيل‎ WA ‏تتمايز ارتجاعيا إلى‎ ٠ ‏لفترة زمنية محددة مسبقاً متبوعاً بزراعة الخلايا في وسط يحتوي على الكالسيوم‎ EDTA ‏إلى‎ ‏تتمايز‎ Yeas ‏إلى جعل الخلايا الأكثر‎ cortisone ‏على الكورتيزون‎ Lad ‏يحتوي‎ calcium ‏ارتجاعيا إلى خلايا غير متمايزة. حيث تقوم هذه الخلايا بدورها بالتجديد الذاتي والبدء في‎ ‏مسار تمايز جديد؛ الحصول على خلايا سلف شبيهة بخلايا الدم الحمراء مثل وحدة تكوين‎ .burst forming unit-erythroid (BFU-erythroid) ‏انفجار الخلايا الشبيهة بخلايا الدم الحمراء‎ ye ‏ويمكن زراعة الخلايا السلف الشبيهة بخلايا الدم الحمراء وتكبيرها لفترات طويلة من الزمن‎ ‏ويمكن استخدامها لعلاج اضطراب ونقص خلايا الدم الحمراء.‎ ‏تغيير تركيز الأيون الحر لوسط يحتوي على تجمع خلوي‎ V ‏لفترة محددة من‎ 5078 Jie ‏يؤدي تعرض الخلايا المتمايزة إلى عامل خلابي أيوني؛‎ (IMDM Jie calcium ‏الزمن متبوعاً بزراعة هذه الخلايا في وسط يحتوي على الكالسيوم‎ ve ‏الأكثر تحولاً تتمايز‎ WAY ‏إلى جعل‎ hydrocortisone ‏المحتوي على الهيدروكورتيزون‎ ‏بدورها بالتجديد والبدء ذاتياً في مسار‎ WAY ‏ارتجاعياً إلى خلايا غير متمايزة. وتقوم هذه‎ ‏تمايز جديد للحصول على خلايا سلف ثقيية كبيرة؛ مثل وحدة تكوين مستعمرة من الخلايا‎ ‏تؤدي في النهاية‎ Ally «colony forming unit-megakaryocytes (CFU-Meg) ‏النقيية الكبيرة‎ ‏إلى الحصول على الصفائح الدموية.‎ Y. ‏طرق إعادة تحويل الخلايا غير المتمايزة‎ VI sale) ‏للاختراع الراهن في‎ Ga ‏يتمثل أحد الاستخدامات الهامة للخلايا غير المتمايزة‎ ‏تكوين الأنسجة على سبيل المثال النسيج العصبي أو الخلايا المكونة للدم. وذلك يتضمن تمايز‎ ‏للاختراع. ويمكن إجراء ذلك عن طريق إعطاء‎ Ty ‏غير المتمايزة المنتجة بطرق‎ LA ‏الخلايا غير المتمايزة ببساطة إلى المريض » وعادة في الموقع المطلوب بشكل محدد مثل نخاع‎ vo
YVAA
‎ala‏ الحبل الشوكي أو ‎dl‏ وترك الظروف الفسيولوجية الطبيعية داخل المريض لإحداث التمايز. ومن الأمثلة المحددة لذلك إعادة تكوين أو إكمال النظام المكون للدم؛ على سبيل المثال في حالة مرضى الإيدز (متلازمة نقص المناعة المكتسب ‎(AIDS)‏ ‎(Acquired Immunodeficiency Syndrome‏ الذين لديهم عدد منخفض من ‎LA‏ “004 الليمفاوية. . وبشكل بديلء يمكن إجراء التمايز (يطلق عليه ‎Lad‏ "إعادة التحويل» في هذا البيان) في أنبوب الاختبار ثم يتم إعطاء الخلايا التي تم تكبيرها على سبيل المثال؛ كعلاج. ويتم إجراء ذلك بشكل عام عن طريق إعطاء عوامل النمو. فعلى سبيل المثال؛ تم استخدام حمض الريتينويك ‎retinoic acid‏ لتمايز ‎ES WA‏ إلى ‎LDA‏ عصبية. وتم استخدام مثيل سليلوز ‎methylcellulose‏ متبوعاً بالزراعة التصاحبية ‎co-culture‏ مع خط للحمي من ‎glad‏ ‏العظم و 11-7 لتمايز ‎WA‏ 85 إلى أسلاف الخلايا الليمفاوية (انظر ما جاء في المرجع ‎.(Nisitani et al., 1994, Int. Immuno., vol 6(6): 909-916‏ ووصف لي بيج ‎Le Page‏ (في المرجع 2000 ‎(New Scientist 16 December‏ أنه يمكن أن تتمايز خلايا ‎ES‏ إلى خلايا ظهارية في الرئة. ووصف بيشوف ‎(Bischoff‏ 1987م في المرجع ) :)115(1 ‎Dev. 3101, vol‏ ‎44S (129-39‏ تمايز الخلايا العضلية الردفية إلى ألياف عضلية ناضجة. ويمكن تكبير أسلاف ‎Vo‏ الخلايا العصبية باستخدام عامل نمو الأورمات الليفية الأساسية ‎basic fibroblast growth factor‏ وعامل نمو بشروي ‎epidermal growth factor‏ (انظر ماجاء في المرجع ‎Nakafuku and‏ ‎.(Nakamura, 1995, J. Neurosci. Res., vol 41(2): 153-168‏ ويمكن تكبير الخلايا الجذعية المكونة للدم باستخدام عدد ‏ من عوامل النمو ‏ بما فيها ‎GM-CSF‏ والارثروبوتين ‎cerythropoietin‏ عامل الخلية الجذعية وانترلوكينات ‎interleukins‏ (1ستاء قسلاء ‎(IL-6‏ راجع ‎Lov.‏ كتبه ميتكالف ‎(Metcalf‏ 989١م‏ (في المرجع 27-30 :339 ‎(Nature, vol‏ لمراجعة مختلف هذه العوامل. وأوضح بوتوكنيك ‎Potocnik‏ ومعاونوه؛ 994١م‏ (في المرجع ‎EMBO 1.. vol‏ ‎Lad (1322): 5274-83‏ عملية تمايز خلايا ‎BS‏ إلى الخلايا المكونة للدم باستخدام ظروف منخفضة نسبة الأكسجين ‎oxygen‏ )7.0( .
YVAA
لا وقد تكون الخلية معادة التحويل من نفس سلالة الخلية الأكثر ‎Yeas‏ التي تم اشتقاق الخلية غير المتمايزة منهاء وبشكل بديل؛ يمكن أن تكون الخلية معادة التحويل من سلالة مختلفة عن الخلية الأكثر تحولا التي تم اشتقاق الخلية غير المتمايزة منها. فعلى سبيل المثال؛ ‎(Sa‏ أن تتمايز خلية ‎B‏ ليمفاوية ارتجاعياً إلى خلية ‎«CD34‏ أو 0038 أو ‎HLA-DR‏ جذعية. ‎٠‏ ويمكن أن تتحول الخلية الجذعية ‎Gal‏ عبر سلالة خلية 8 (نفس سلالة) أو سلالة خلية شبه ليمفية ‎ADL)‏ مختلفة). ‎(Sas‏ إجراء تحويل الخلية غير المتمايزة إلى خلية معاد التحويل؛ مثل خلية متمايزة؛ باستخدام عدة طرق معروفة للمتمرسين في التقنية. ومن الملاحظ أنه يمكن بزراعة الخلايا غير المتمايزة في أوساط معينة وبطريقة معينة أن تتمايز الخلايا إلى ‎LA‏ مختارة. ‎٠‏ وعلى سبيل المثال ‎dal‏ يمكن أن تتمايز الخلايا غير المتمايزة إلى خلايا عضلية قلبية ‎cardiac myocytes‏ باتباع نظام الزراعة التالي: اليوم ‎:١‏ يتم تمرير الخلايا غير المتمايزة بكثافة عيارية على طبق هلامي لإخلاء المزرعة من أسلاف الخلايا الليفية الموجودة كشوائب. ثم يضاف تريبسين 0810 ‎WAL‏ التي تمر بشكل طبيعي حتى يتم فصل ‎ve‏ المستعمرات. ثم يتم إجراء الطريقة بشكل معتدل للحفاظ على التجمعات الخلوية المتشابكة ‎JS‏ غير ثابت معاً. ثم توضع الخلايا مباشرة بنسب ‎©:١‏ في أطباق بترى ‎Petri dishes‏ من النوع المستخدم للبكتيريا في وسط زراعة خلية ‎ES‏ خالي من ‎LIF‏ (انظر أدناه). اليوم ؟: يتم سحب الغاز من الوسط بحرص. مع تجنب شفط الكثير من التكتلات ثم يضاف وسط جديد. ‎٠‏ ‏أ اليوم ©: يتم سحب الغاز كما في اليوم 7 واستبدال الوسط. اليوم ‎:١‏ توضع الخلايا داخل طبق من نوع زراعة الأنسجة ذو ‎TE‏ عين. اليوم 9: يتم تغيير نصف الوسط وملاحظة قدرة التحمل ‎beating‏ ‏اليوم ‎:١١‏ يتم تغيير نصف الوسط وملاحظة قدرة التحمل. وعلى سبيل المثال ‎bad‏ يمكن أن تتمايز الخلايا غير المتمايزة إلى خلايا الغراء ‎Yo‏ العصبي ‎glial cells‏ وخلايا عصبية باستخدام الإجراء التالي: ‎YVAA‏
‎Ly |‏ اليوم ‎:١‏ تمرر الخلايا غير المتمايزة بكثافة عيارية على طبق هلامي ‎DAY‏ المزرعة من الأرومات الليفية الموجودة كشوائب. ثم يضاف تريبسين ‎uypsin‏ للخلايا التي تمر بشكل طبيعي حتى يتم فصل المستعمرات. ويتم إجراء الطريقة بشكل معتدل للحفاظ على التجمعات الخلوية المتشابكة بشكل 0 غير ثابت معاً. ثم توضع الخلايا مباشرة بنسبة ١:؟‏ في أطباق بترى ‎Petri dishes‏ من النوع المستخدم للبكتيريا في وسط خالي من ‎LIF‏ يحتوي على ‎١‏ ميكروجزيئي من حمض الريتينويك ‎retinoic acid‏ الذي تكون كل جزيئاته من النوع المقابل. (يحصل عليه من شركة سيجما ‎(Sigma‏ . اليوم ؟ : تجمع تكتلات الخلايا ويعاد وضعها في أطباق زراعة أنسجة (بكثافة تبلغ ‎٠‏ حوالي © تكتل خلوي لكل ‎١‏ سم في طبق زراعة الأنسجة) في وسط زراعة خلية ‎ES‏ بدون ‎RA LIF‏ ثم يتم سحب الغاز من الوسط بحرص. اليوم ‎tA‏ يتم تغيير نصف الوسط. ابتداءاً من هذا اليوم يظهر ما نسبته ‎7٠١‏ على الأقل من الخلايا أنماط ظاهرية عصبية. حيث يتم صبغها بشكل محدد بواسطة صبغة الكريزيل البنفسجية ‎Cresyl Violet‏ وتكون إيجابية بدرجة قوية لمولد مضاد 14م17-0. ‎Vo‏ ويدرك شخص متمرس بسهولة الطرق المناسبة لإجراء ‎Adee‏ تحول خلية غير متمايزة إلى أي خلية متمايزة يتم اختيارها. ويمكن زراعة خلية جذعية غير متمايزة وفقآً للاختراع الراهن باستخدام أي طريقة روتينية لزراعة خلية جذعية جنينية (85). وعلى سبيل المثال لا الحصرء تم وصف أوساط مناسبة لزراعة خلية غير متمايزة أو خلية ‎ES‏ بالتفصيل فيما يلي. ‎YYAA‏
LY
‏مل من الوسط:‎ ٠٠١ ‏لتحضير‎ ‏لل‎ ‏مل‎ ١ | ‏رقم‎ GIBCO Sua ‏الأحماض الأمينية غير الأساسية (من شركة‎ 41 )1١١50-66 6 ‏الكتالوج‎ ‎LIF ESGRO AMRAD ‏مل في صورة‎ ١ ‏سعة‎ ampules ‏في أمبولات‎ Lif ‏ويأتي‎ ‎1٠١ ‏بتركيز‎ FCS ‏و‎ DMEM ‏مل من‎ ٠٠١ ‏وحدة/مل؛ ويمكن تخفيفه في‎ "٠١ ‏بتركيز‎ ‎a Yom ‏وتخزينه بتقسيمه إلى عينات حجم كل منها © مل عند درجة حرارة تبلغ‎ ‏جزيئي) إلى‎ VEE) BME ‏مل من‎ ١.١ ‏يمكن إضافة‎ BME ‏يتعلق بوسط‎ Lads ‏قطره 6.7 ميكرون؛ وتخزينه عند‎ acrodisc ‏وترشيحه خلال طرفي‎ PBS ‏من‎ Je VEY
YJ NINE INP SE ‏درجة حرارة تبلغ‎ ‏الذي يمكن‎ PMEF ‏وقد يكون وسط مناسب إضافي على سبيل المثال عبارة عن وسط‎ fh ‏مل منه كما‎ ٠٠١ ‏تحضير‎ ‏بسهولة للمتمرسين في‎ BS WA ‏وسوف تتضح الأوساط المناسبة الأخرى لزراعة‎ ve ‏الثقنية.‎ ‎YVAA tt ‏التعرف على عوامل التمايز الارتجاعي‎ .1 ‏يمكن التعرف على عوامل مناسبة أخرى‎ (Bila ‏بالإضافة إلى العوامل المذكورة‎ ‏باستخدام طرق المعايرة الموصوفة في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 97/774968 أو في‎ ‏الاختراع الراهن. وفيما يتعلق بالوجه الأخير؛ فإن الاختراع الراهن يزود أيضاً طريقة للتعرف‎ ‏حيث‎ lie ‏إلى خلية غير‎ Lela) ‏على مادة قادرة على تمايز خلية متحولة/متمايزة‎ ٠ ‏تتضمن هذه الطريقة ملامسة تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة مع مادة مرشحة‎ ‏وتحديد ما إذا كان هناك زيادة في الأعداد النسبية للخلايا غير المتمايزة في التجمع الخلوي‎ ‏حيث يحدث التلامس المذكور في وجود طبقة طافية.‎ Sad) ‏وتشمل المواد المرشحة المناسبة الربيطات التي ترتبط بمستقبلات السطح الخلوي مثل‎ ‏منتجات الجسم المضاد (على سبيل المثال؛ الأجسام المضادة أحادية النسيلة وعديدة‎ > ٠ ‏والأجسام المضادة أحادية السلسلة؛ الأجسام المضادة الخيمرية والأجسام المضادة‎ Jib ‏مثل الأجسام المضادة التي ترتبط بمستقبلات السطح الخلوي. وتم وصف‎ ((CDR — ‏المطعمة‎ ‏وبروتينات‎ MHC ‏مستقبلات السطح الخلوي المهمة بشكل خاص أعلاه وتشمل مستقبلات‎ ‏وتشمل الربيطات الأخرى التي ترتبط‎ .CD8 ‏و‎ CD4 ‏مثل‎ «CD ‏السطح التي بها رموز‎ ‏بمستقبلات السطح الخلوي عوامل النمو.‎ ١ ‏وعلاوة على ذلك؛ فإنه يمكن فحص المكتبات التوالفية ومحاكيات الببتيد‎ ‏المحددة؛ النيوكليوتيدات قصيرة‎ Aleta) Al peptide ‏علنامعم»_والببتيد‎ mimetics ‏ومكتبات المنتجات الطبيعية من حيث فاعليتها كعوامل تمايز‎ coligonucleotides ‏السلسلة‎ ‏مواد‎ ٠١ Dae ‏ارتجاعي. حيث يمكن استخدام المواد المرشحة في فحص مبدئي على دفعات؛‎ ‏لكل تفاعل؛ ويتم اختبار المواد التي توجد في تلك الدفعات والتي تظهر تثبيط كل على حدة.‎ x ‏وتتضمن معايرة نموذجية وضع عينة من الخلايا تضم الخلايا المتحولة في وعاء‎ ‏مناسب مثل طبق متعدد العيون. ثم يتم إضافة مادة مرشحة إلى عين ثم يتم حضن الخلايا في‎ ‏إجراء عمليات حضن عند درجة حرارة تتراوح من حوالي درجة حرارة‎ Bale ‏العين. ويتم‎
AVY ‏بما فيها‎ a TY ‏الغرفة (77م) إلى حوالي‎
YVAA
ويمكن قياس التمايز الارتجاعي عن طريق إزالة عينة صغيرة من الخلايا وفحص الخلايا بالمجهر و/أو بمقياس التدفق الخلوي لتحديد إذا ما كان قد حدث تغيير في أعداد الخلايا غير المتمايزة. وعادة؛ يتم تحديد التغييرات في أعداد الخلايا غير المتمايزة بمراقبة التغييرات في أعداد الخلايا التي بها واسمات سطح خلوي مميزة للخلايا غير المتمايزة؛ على الرغم من ‎٠‏ أنه يمكن استخدام التغيرات الشكلية ‎Load‏ كدليل. وتشمل أمثلة واسمات السطح الخلوي المناسبة *0034. _وبشكل بديل» أو إضافي؛ ‎Ad se (Sa‏ الانخفاضات في أعداد الخلايا التي بها واسمات سطح خلوي مميزة للخلايا المتمايزة وليس الخلايا غير المتمايزة؛ على سبيل المثال الانخفاض في الأعداد النسبية للخلايا التي بها واسمات محددة للسلالة ‎CD4 «CD3 (ie‏ و 008. ‎٠‏ ويفضل؛ أن تحدث أي زيادة في أعداد الخلايا التي لها خصائص مميزة للخلايا غير المتمايزة خلال ‎YE‏ ساعة. ويفضل خلال ؛ إلى ‎A‏ ساعات؛ بحيث لا يمكن حدوث أي تغيير ناتج فقط عن تكاثر الخلايا. وقد يكون من المطلوب إجراء فحص تمهيدي للعوامل التي ترتبطء على سبيل المثال؛ بمستقبلات السطح الخلوي؛ ‎Jie‏ مستقبلات ‎MHC‏ من الفئة 1 و/أو الفئة ‎IT‏ ويمكن استخدام أي ‎١‏ عوامل تم تمييز ارتباطها بمستقبلات السطح الخلوي المستهدفة بعد ذلك في المعايرة المذكورة أعلاه لتحديد تأثيرهم على التمايز الارتجاعي. وكمثال محدد؛ يمكن استخدام مكتبات عرض الخلايا الملتهمة التي تعبر عن حقول ارتباط الجسم المضاد للتعرف على أجزاء الجسم المضاد (بشكل نموذجي ‎(scFvs‏ التي ترتبط بواسم السطح الخلوي المستهدف ؛ ‎Jie‏ المنطقة المتماثلة في سلسلة بيتا من مستقبلات ‎MHC‏ من الفئة ‎JI‏ وتكون معايرات الارتباط المناسبة معروفة في ‎x.‏ التقنية؛ ‎Jie‏ إنتاج وفحص مكتبات عرض الخلايا الملتهمة. ويمكن استخدام المعايرات ‎Lead‏ ‏للتعرف على الأجسام المضادة المستمثلة أو أجزاء الجسم المضاد المستمثلة. على سبيل المثالء لفحص مكتبة مطفرة من مشتقات جسم مضاد أظهرت سابقآ أنها تؤدي إلى التمايز الارتجاعي. 1.. الاستخدامات يزود الاختراع الراهن جهاز للتمايز الارتجاعي للخلايا المتحولة إلى خلايا غير ‎Ye‏ متمايزة. وبصفة خاصة؛ يزود الاختراع الراهن جهاز لتحضير خلية جذعية من خلية أكثر ‎YYAA‏
تمايزاً. وتكون الاستخدامات الأكلينيكية لهذا عديدة ‎Cua‏ أنه يتم استخدام الخلايا الجذعية في تشكيلة واسعة من الاستخدامات العلاجية ولكن حتى الآن مازال الحصول عليها صعبآء ‎Ga ye‏ وفي بعض الأحيان ‎Tie‏ للجدل من الناحية الأخلاقية. ويمكن استخدام الخلايا الجذعية الناتجة وفقاآً للاختراع الراهن لإعادة تجميع التجمعات ‎٠‏ - الخلوية المحددة في مريض؛ مثل تجمع خلايا مكونة للدم أو تجمع فرعي منهاء مثل خلايا 7 الليمفاوية. ويمكن أن تأتي الخلايا الأكثر تحولا المستخدمة لإنتاج الخلايا الجذعية من نفس المريض أو من مانح ‎Silas‏ وهكذا يمكن استخدام الخلايا الجذعية الناتجة وفقآً للاختراع الراهن لمعالجة تكوين النسيج الخلوي المتخصص والأعضاء المتخصصة. فعلى سبيل ‎(Jal‏ ‏يمكن استخدام ‎Wal‏ غير المتمايزة لإنتاج الخلايا معادة التحويل ‎Jie‏ الخلايا المبطنة ‎٠‏ للحويصلات الهوائية في الرئتين؛ وبالتالي إيجاد آلية يمكن بها استبدال نسيج الرئة التالف أو المريض أو ترميمه (انظر المرجع 20 م ,2000 ‎.(Le Page, New Scientist 19 December‏ وبشكل بديل؛ يمكن استخدام الخلية غير المتمايزة لإنتاج خلية أكثر تحولاً تنتج تركيب يعالج أي أعراض أو حالات تحدث بسبب أو تصاحب خلية أكثر تحولاً لها تركيب مجيني ‎Vo‏ وعلى سبيل ‎(JE‏ يمكن استخدام الاختراع الراهن لتحضير أجسام مضادة أو مستقبلات خلايا ‎T‏ لمولد مضاد يعبر عنه بواسطة الخلية الأكثر تحولا التي تمايزت ارتجاعياً إلى خلية غير متمايزة. وفي هذا الخصوص؛ قد يكون مولد مضاد عبارة عن مولد مضاد خاص بالجنين أو مولد مضاد خاص بالجنين متفاعل تبادلياً. ‎IX‏ الإعطاء ‎Ye‏ يمكن استخدام ‎DAD‏ الجذعية ‎WAN,‏ معادة التحويل ‎Gay‏ للاختراع الراهن؛ بالإضافة إلى العوامل التي تؤدي إلى تمايز الخلايا ارتجاعياً؛ في الطرق العلاجية. ويفضل أن يتم دمج الخلايا أو العوامل ‎Gay‏ للاختراع الراهن مع مختلف المكونات لإنتاج تراكيب ‎Gy‏ ‏للاختراع. ويفضل أكثر أن يتم دمج التراكيب مع ناقل. أو مخفف مقبول ‎Wana‏ لإنتاج تركيب صيدلي (قد يكون للاستخدام البشري أو الحيواني). وتشمل الناقلات والمخففات المناسبة ‎vo‏ المحاليل الملحية متساوية التوتر ‎saline solutions‏ عنههاه»_ على سبيل المثال المحلول الملحي خلا
المنظم بفوسفات ‎-phosphate-buffered saline‏ ويمكن إعطاء التركيب ‎Gs‏ للاختراع عن طريق الحقن المباشر. ويمكن تحضير التركيب للإعطاء في العضل؛ في الوريد؛ تحت الجلد؛ في ‎cd‏ عن طريق الفم أو عبر الجلد. ويتم توصيل التراكيب التي تحتوي على الخلايا عادة عن طريق الحقن أو الغرز. © ويمكن توصيل ‎AWAY‏ معلق أو مغمورة في نسيج داعم مثل الأنسجة القابلة للتحلل الحيوي الطبيعية و/أو التصنيعية. وتشمل الأنسجة الطبيعية الأنسجة الكى لاجينية ‎collagen matrices‏ وتشمل الأنسجة التصنيعية القابلة للتحلل الحيوي متعددات الأنهيدريد 15م وحمض متعدد اللاكتيك ‎-polylactic acid‏ وتعطي هذه الأنسجة دعامة للخلايا الهشة ‎Jala fragile cells‏ الجسم ويفضل للخلايا غير المكونة للدم. ‎ve‏ ويمكن أن يكون التوصيل أيضاً عبارة عن توصيل مضبوط أي على فترة زمنية قد تمتد من عدة دقائق إلى عدة ساعات أو أيام ‎٠‏ ويمكن أن يكون التوصيل جهازي (على سبيل المثال عن طريق الحقن في الوريد) أو موجه نحو موقع محدد ذو أهمية. وتعطى الخلايا على نحو نموذجي بجرعات تتراوح من ‎"٠١١‏ إلى ‎"٠١7١‏ خلية/كغم. مثلاً؛ يمكن إعطاء 4 ‎Tex)‏ من خلايا ‎CD34"‏ لمريض وزنه ‎Ve‏ كغم ‎ne‏ لإعادة بناء الأنسجة المكونة للدم. والغرض من طرق الإعطاء والجرعات الموصوفة أن تستخدم كموجه لأن الشخص المتمرس قادر على تحديد طريقة الإعطاء والجرعة المثلى بسهولة لأي مريض وحالة محددة. وكل الطرق التي ستوصف أدناه ملائمة للاستخدام مع الجهاز ‎Gy‏ للاختراع الراهن. أ. المواد والطرق - المرضى تم الحصول على عينات دم وضعت في أنابيب لون الجزء العلوي منها أرجواني شاحب ‎lavender top tubes‏ تحتوي على ‎EDTA‏ (حمض إثيلين ثنائي أمين رباعي أسيتيك ‎(ethylene diamine tetra acetic acid‏ من مرضى مصابين بلوكيميا ‎Aad‏ مزمنة في خلايا ‎B‏ مرضى مصابين بنقص في الأجسام المضادة (بما في ذلك نقص في ‎IgA vo‏ وأمراض هبط غاما غلوبين الدم الطفولية المرتبطة بالكروموسوم ‎X‏ ‎YYAA‏
‎«(X-linked infantile hypogammaglobulinaemias‏ المرضى المصابين بعدوى ناتجة عن 1117 (فيروس نقص المناعة البشري ‎(human immunodeficiency virus‏ ومتلازمة ‎AY)‏ مريض مصاب بعدوى الفيروس المضخم ‎ccytomegalo virus (CMV) all‏ مريض مصاب بليمفوما هودجكن ‎(Hodgkin's lymphomas‏ مريض مصاب بلوكيميا في خلايا 7 ‎dia‏ رضيع عمره © ستة أيام مصاب بمرض كثرة الخلايا الأرومية 5 .مم مرضى مختلفين مصابين بعدوى مختلفة وحالات إكلينيكية مختلفة؛ دم من الحبل السري؛ نخاع عظام» ومستحضرات غنية بخلايا ‎B‏ الليمفية من مانحين دم أصحاء. وبالإضافة إلى ذلك؛ تم الحصول على عينات طبقات طافية من الدم من مانحين أصحاء. الظروف الإكلينيكية والتجريبية ‎Ve‏ توصف ظروف المعالجة الإكلينيكية والتجريبية للمرضى؛ بما في ذلك مختلف أنواع المعالجات المستخدمة على عينات الدم الخاصة بهم؛ في الجدول ‎.١‏ وتم الحصول على الأعداد التفاضلية لخلايا الدم البيضاء ‎white blood cells (WBC)‏ باستخدام عداد كولتر ‎Coulter Counter‏ وهي مشمولة في نفس الجدول. معالجة الدم ‎Vo‏ عندما تم الحصول على عينات الدم؛ أدخلت في حجيرة بالإضافة إلى جسم مضاد أحادي النسيلة نقي ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة م ‎algal‏ المضاد ‎HLA-DR‏ (يحصل عليه من شركة داكو ‎(DAKO‏ وتركت لتختلط عند درجة حرارة الغرفة لمدة لا تزيد عن ‎YE‏ ساعة. ومزجت بعض العينات ‎Yo‏ لمدة ‎١١‏ دقيقة ثم تركت لتحضن في الحجيرة عند "كم . وتفاوت تركيز الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاف إلى عينات الدم من ‎0-٠ Ye‏ ميكرولتر/مل من الدم. وبالإضافة إلى ذلك؛ استخدمت معالجات أخرى عند نفس التراكيز وتضمنت هذه المعالجات إضافة جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة » لمولد المضاد ‎(HLA-DR‏ إضافة جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتمائلة لمولدات المضادات من الصنف ‎of‏ إضافة جسم مضاد أحادي النسيلة ضد 004؛ ضد 008 وجسم ‎ae Yo‏ أحادي النسيلة مقترن بفيكوإريثرين ‎phycoerythrin (PE)‏ ضد المنطقة المتماثلة في ‎YVYAA‏
سلسلة 8م ‎al sal‏ المضاد ‎HLA-DR‏ ‏وتشمل معالجات أخرى الإضافة المتزامنة للأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد المناطق المتماثلة في سلسلتي » و 8م لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ إلى عينات الدم. وعلاوة على ذلك؛ أضيفت عوامل مؤلكلة ‎Jie‏ فوسفاميد حلقي ‎cyclophosphamide‏ ‎٠‏ - إلى عينات الدم في توليفة مع جسم مضاد أحادي النسيلة نقي ضد المنطقة المتماثئلة في سلسلة 8ع لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ ‏وبعد هذه المعالجات صبغت عينات الدم بألواح من أجسام مضادة أحادية النسيلة موسومة وفقآ لتعليمات ‎ba Thal)‏ حللت بقياس التدفق الخلوي. وتراوحت فترات الحضن مع الأجسام المضادة أحادية النسيلة من ساعتين؛ ‎٠‏ 40 ساعات؛ ‎١‏ ساعات؛ ‎١١‏ ساعة إلى ‎Ye‏ ساعة. الأجسام المضادة الموسومة استخدمت الأجسام المضادة أحادية النسيلة التالية للكشف عن الواسمات التالية على الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي: ‎CD4 «CD35 CD19‏ رقم ‎CD56 «CD35 DR‏ و ‎CD8 «CD14 5 CD45 «CD35 CD16‏ و003؛ ‎«CD28 5 CD8‏ ضابط اختبار التزامن ذا ‎CDS «CD25 5 CD10 «CD33 s CD13 5 CD7 «CD25 CD34 «(IgG2a PE + IgGl FITC)‏ ‎CD25 5 CD57. CD23 «CD20 5 CD13 «CD55 CD7 «CD21 5 005 «CD10 3‏ ومع ‎CD45‏ ‏(يحصل عليها من شركة بكتون آند ديكنسون ‎Becton & Dickenson‏ وداكو ‎.(DAKO‏ وقد تشمل واسمات إضافية ‎CD71‏ (واسم على خلايا الدم الحمراء)؛ 0061 (واسم على الخلايا النقيية الكبيرة)؛ غليكوفورين إيه ‎Glycophorin A‏ (واسم على ‎WA‏ الدم الحمراء)؛ 0133م ‎OY‏ (واسم على الخلايا الجذعية)؛ ‎CD38‏ (واسم على الخلايا الجذعية الأولية)؛ 0090 (واسم على الخلايا الجذعية) و0117 (واسم على الخلايا الجذعية وافرة القوة). وتم تحليل كل عينة دم لمريض؛ معالجة وغير معالجة؛ وبما في ذلك كل عينة طبقة طافية؛ باستخدام مجموعة من الألواح الموصوفة أعلاه في جهاز وفقآً للاختراع الراهن لتفسير التغيرات في النمط المناعي المرافقة للأنواع المختلفة من المعالجات ‎٠‏ | وأجريت هذه التحاليل باستخدام عينات وافية مختلفة من نفس ‎Ale‏ الدم. وصبغت العينات ‎YYAA‏
غير المعالجة وعينات ضابطة أخرى وحللت في نفس الوقت. قياس التدفق الخلوي صبغت عينة دم كلية وحللت ‎ly‏ لتعليمات ‎a Taal)‏ وأجري التحليل عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام البرنامج فاكسكان آت 8 مع البرنامج ‎٠‏ سملتست ‎simultest‏ أو البرنامج باينت إيه غايت ‎PAINT A GATE‏ (يحصل عليه من شركة بي دي آي إس ‎(BDIS‏ حيث تضمن متابعة بطريقة خلفية للضوابط السلبية. وتم الحصول على ‎٠‏ إلى ‎٠06688‏ حدث وخزن في ملفات مرتبة بنمط قائمة. الشكل تم تحليل الشكل باستخدام مجهر وصبغة رايت ‎Wright's stain‏ ‎٠‏ تحضير خلايا جذعية من خلايا ليمفية غنية أو منقاة مأخوذة من مصابين ب ‎B-CLL‏ ‏(أو من أشخاص أصحاء) أو من الطبقة الطافية لعينات الدم ينبغي استخدام تقنيات تجرى في ظروف معقمة خلال الإجراءات التالية: (أ) فصل الخلايا البيضاء أحادية النواة: ‎(i)‏ تم الحصول على ‎WA‏ بيضاء أحادية النواة من دم محيطي/عينات طبقات طافية عن طريق الفرز بالطرد المركزي في وسط للفصل من نوع هستوباك ‎¢Histopaque‏ ليمفوبريب ‎«Lymphoprep‏ أو أي وسط لفصل الخلايا الليمفيمة (الثقل النوعي ‎V,+ VV specific gravity‏ ( لمدة ‎٠‏ دقيقة عند تسارع مقداره ‎X 6‏ تسارع الجاذبية. ‎(id)‏ جمعت الخلايا البيضاء أحادية النواة في أنبوب مخروطي سعته ‎5٠0‏ مل 7 وغسلت باستخدام ‎٠١‏ مل من محلول هانك الملحي المتوازن ‎Hank's balanced salt solution‏ (يخلو من ‎Ca’‏ و ‎Mgt‏ يحصل عليه من شركة سيغما ‎(sigma‏ يحتوي على مصل جنين عجل ‎fetal calf serum (FCS)‏ مثبط بالحرارة تركيزه 77 و 207/8 تركيزه ‎١‏ ملي جزيئي أو سيترات ‎citrate‏ ‏تركيزه 750.7 وفرزت بالطرد المركزي عند تسارع مقداره 4660 ‎X‏ تسارع ‎Yo‏ الجاذبية لمدة ‎٠١‏ دقائق. ‎YYAA‏ trypan blue ‏بعد الغسل؛ تم تعداد الخلايا وتقييم حيويتها باستخدام أزرق الترييان‎ (ii) .haemocytometer pall ‏وعداد خلايا‎ ‏؛ من خلايا الدم‎ SVT) 79760 ‏عندما كان عدد خلايا 8 كبيراً؛ يزيد عن‎ (iv) ‏في أ.‎ (vi) ‏البيضاء ©178)؛ تمت المتابعة مباشرة من الخطوة‎ (WBC ‏من‎ AY OXY) 796 ‏من‎ Ji ‏عندما كان عدد خلايا 3 منخفض»‎ )( ° ‏أو‎ Macs microbeads ‏أجري انتقاء سلبي باستخدام كريات 4882 من نوع ماكس‎ ‏كما سيوصف أدناه في القسم ج.‎ (FacsVantage ‏لفاكس فانتاج‎ Gd ‏تقنية تنقية‎ ‏(يحتوي على‎ IMDM ‏أعيد تعليق كرية الخلايا عند تركيز “*١٠"/مل في‎ (vi)
FCS ‏ميكروغرام/مل)؛ يحتوي على‎ ٠٠١ ‏بتركيز‎ streptomycin ‏ستربتوميسين‎ ‏(مثبط‎ (horse serum ‏حصان‎ dra) HS ‏و‎ ٠١ ‏(مثبط بالحرارة) تركيزه‎ ve ‏ووضعت في كيس للدم. ملاحظة: 13 لم يتوفر 208 و‎ 7٠١ ‏بالحرارة) تركيزه‎ ‏يتراوح تركيزها من‎ autologous plasma ‏فإنه تستخدم بلازما ذاتية المنشأ‎ (HS
Joe ‏إلى‎ ٠ ‏تحضير خلايا جذعية (غير متمايزة) في أجزاء أحادية النواة حصل عليها من عينات دم‎
B-CLL ‏محيطي مأخوذة من مرضى مصابين ب‎ ٠ ‏باتباع بروتوكول فصل الخلايا البيضاء أحادية النواة (أ) أعلاه؛ باستثناء عدم إجراء‎ ‏منها على‎ 5 ٠ ‏خلية/مل حيث‎ "٠١*7١ ‏يتجاوز عدد خلايا الدم البيضاء‎ Lexie ‏الانتقاء السلبي‎ .8 ‏الأقل خلايا‎ ‏للاختراع الراهن.‎ Gy ‏ويمكن إجراء الإجراءات التالية في جهاز‎ ‏(ب) معالجة الخلايا باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 النقي (يحصل عليه من‎ | ٠ :(Dako ‏شركة داكي‎ ‏بعد فصل الخلايا البيضاء أحادية النواة في أ (ه)؛ تمت المباشرة بالتالي:‎ (Jala ‏أعلاه) على خطاف‎ (vi) ‏وضع كيس الدم المزود (من أ‎ (i)
YVYAA oY ‏استخدمت حجيزة ذات ستة عيون؛ وتمت برمجة الجهاز بحيث أضيف ؟‎ 0 ‏أعلاه] إلى كل عين في‎ (vi) ‏مل من المعلق الخلوي من كيس الدم المزود [من أ‎ ‏صينية أو حجيرة الاستنبات هذه متعددة العيون.‎ 14 ‏تمت برمجة الجهاز لمعالجة عدد ملائم من العيون ب‎ (iii) ‏ميكرولتر/مل (أو 58 ميكرولتر/مل بالنسبة لعينات الطبقات الطافية) من‎ ° (Dako ‏(جسم مضاد أحادي النسيلة نقي؛ يحصل عليه من شركة داكو‎ 3 ‏من محقنة تحتوي على الجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 ولم تعالج العيون‎ ‏الأخرى (ضابط سلبي).‎ ‏فيه 10 عند 29م (أو 7م).‎ CO, ‏حضنت الحجيرة في جو رطب نسبة‎ (iv) ‏(ج) تنقية الخلايا:‎ ٠١ ead ‏تعرف طرق مختلفة لفصل وتتقية الخلايا (انظر ما جاء في‎ .(Vettese-Dadey Scientist 13(18):21 Sep 13 1999 ‏وإحدى هذه الطرق الملاثئمة الانتقاء السلبي لخلايا 3 باستخدام كريات دقيقة من نوع‎ ‏ومن الأفضل اتباع‎ Miltenyi Biotec ‏(يحصل عليها من شركة ميلتيني بيوتيك‎ MACS ‏ماكس‎ ‏تعليمات المُصنسّع):‎ ١ ‏تم الحصول على الخلايا البيضاء أحادية النواة كما في القسم أ أعلاه.‎ (i) ‏.تم تكوير وإعادة تعليق الخلايا حتى بلغ الحجم النهائي 700 ميكرولتر لكل‎ (i)
EDTA ‏تركيزه 7 و‎ FCS ‏(يتكون من‎ HBSS ‏من إجمالي الخلايا في‎ Ma . (7 ٠,1 ‏تركيزه‎ citrate ‏ملي جزيثي أو سيترات‎ ١ ‏تركيزه‎ ‏من جسم مضاد أحادي‎ WAN ‏من إجمالي‎ ”٠١ ‏ميكرولتر لكل‎ ٠٠١ ‏أضيف‎ (ii) Y. (DAKO ‏(1801؛ يحصل عليه من شركة داكو‎ CD2 ‏النسيلة نقي إلى‎ ‏من إجمالي الخلايا‎ "٠١ ‏ميكرولتر لكل‎ ٠٠ ‏وإلى نفس المعلق الخلوي أضيف‎ (1) ‏من الجسم المضاد أحادي النسيلة النقي إلى 0033 (1801»؛ يحصل عليه من‎ (DAKO ‏شركة داكو‎ ‏دقائق عند درجة حرارة الغرفة.‎ ٠١ ‏ترك المزيج ليحضن لمدة‎ (V) Yo \ VAA oY
EDTA 5 7.Y ‏تركيزه‎ FCS ‏(يحتوي على‎ HBSS ‏غسلت الخلايا باستخدام‎ (vi) ‏تركيزه ' ملي جزيئي) وأعيد تعليقها حتى أصبح تركيزها النهائي‎ ‏باستخدام نفس المحلول الملحي‎ (DAN ‏من إجمالي‎ *٠١/رتلوركيم‎ rs ‏المنظم لدرجة الحموضة. وفرزت بالطرد المركزي عند تسارع مقداره‎ ‎X £0 °‏ تسارع الجاذبية لمدة ‎٠١‏ دقائق. وأعيد تعليق الكرية في ‎HBSS‏ ‏(كما في أعلاه). ‎(vid)‏ أضيف ‎٠٠١‏ ميكرولتر من كريات دقيقة موسومة من 1:01 من أرنب مضاد لفأر لكل ‎*٠١‏ من إجمالي الخلايا (أو يمكن اتباع تعليمات ‎(al)‏ ‎AY ‏وحضنت عند درجة حرارة تراوحت من أأم إلى‎ Tua ‏مزجت الخلايا‎ (viii) ‎١‏ (في ثلاجة) لمدة ‎١١‏ دقيقة. ‎(ix)‏ غسلت الخلايا مرة أخرى باستخدام ‎HBSS‏ (يحتوي على 705 تركيزه 177و ‎EDTA‏ تركيزه ‎١‏ ملي جزيئي) ؛ وفرزت بالطرد المركزي عند تسارع مقداره ‎X Es‏ تسارع الجاذبية لمدة ‎٠١‏ دقائق وأعيد تعليقها حتى أصبح تركيزها النهائي ‎٠0٠‏ ميكرولتر/١٠”*‏ من ‎(DAY Jaa)‏ باستخدام نفس المحلول ‎vo‏ المنظم لدرجة الحموضة. ‎(x)‏ تم تركيب عمود ‎RS*/MS*‏ في المجال المغنطيسي لجهاز الفصل من نوع ماكس ‎MACS separator‏ وعندما كان عدد الخلايا البيضاء أحادية النواة كبيراً باستخدام عمودي ‎RS*/MS*‏ ‎Jue (xi)‏ العمود باستخدام ؟ مل من ‎HBSS‏ (يحتوي على ‎FCS‏ تركيزه 177و ‏9 801 تركيزه ‎١‏ ملي جزيئي). ‎(xii)‏ تم تمرير الخلايا خلال العمود ثم غسلت ؛ مرات باستخدام ‎Ore‏ ميكرولتر من 11355 (يحتوي على 05 تركيزه ‎7Y‏ و ‎EDTA‏ تركيزه ‎١‏ ملي جزيئي) في كل مرة. ‎(xii)‏ تم تصويل وجمع الخلايا في أنبوب مخروطي؛ ثم تم تكويرها وأعيد تعليقها ‎Yo‏ في ‎IMDM‏ ووضعت في كيس للدم كما في القسم أ ‎(vi)‏ ‎Y VAA‏ of :FACSVantage ‏د) خلايا 3 المنقاه بواسطة فاكس فانتاج‎ ‏البيضاء أحادية النواة من عينات دم محيطي مأخوذة‎ WAY ‏تم الحصول على‎ (i) ‏كما وصف في القسم أ؛ أعلاه.‎ B-CLL ‏من مرضى مصابين ب‎ ‏صبغت هذه الخلايا باستخدام توليفة من أجسام مضادة أحادية النسيلة مقرنة‎ (ii) .B ‏لتحديد خلايا‎ CD20-FITC ‏و‎ CD19-PE ‏ب‎ ° ‏خلية تقريباً باستخدام جهاز من‎ "٠١ ‏على أساس فلورية 0020/0019؛ صنفت‎ (iid) ‏يحصل عليها من شركة بكتون ديكنسون‎ FACS Vantage ‏نوع فاكس فانتاج‎ ‏نانومتر.‎ EAA ‏يبتعث عند‎ argon laser ‏وليزر أرغون‎ Beckton Dickenson ‏المنثقاه باستخدام محلول هانكس الملحي المتوازن الذي يحتوي‎ WAY ‏غسلت‎ (iv) ‏تم تركت لتستعيد وضعها الطبيعي طوال الليل عند‎ 75٠ ‏على 705 تركيزه‎ ٠١ 70 ‏فيها‎ CO, ‏لم في محضنة رطبة تركيز‎ ‏تم تكوير وإعادة تعليق الخلاياء ووضعت في كيس للدم؛ كما وصف في القسم‎ (v)
A
‏كما وصف في القسم ب أعلاه.‎ (CR3/43 ‏أعلاه ثم عولجت باستخدام‎ (vi) ‏جذعية في خلايا الدم الكاملة‎ WIA ‏تحضير‎ o ‏يمكن معالجة الخلايا باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 النقي (يحصل‎ ‏للاختراع الراهن:‎ Ey ‏في دم كامل في جهاز‎ (DAKO ‏عليه من شركة داكو‎ aN XY mT ‏لديهم من‎ WBC ‏تم اختيار المرضى الذين تراوح عدد‎ (i) (780=YY ‏(تراوحت نسبة الخلايا الليمفية من‎ ‎(id) 7‏ جمع الدم المأخوذ بثقب الوريد في أنابيب تحتوي على سيترات ‎EDTA «citrate‏ أو هبارين ‎heparin‏ خالية من المواد الحافظة؛ ووضع الدم في كيس للدم. وعلى نحو مفضل؛ استخدم الدم الذي جمع مباشرة؛ وعلى نحو ملائم؛ خلال حوالي 1 ساعات من جمعه. إلا أنه؛ بالإمكان ‎Load‏ استخدام دم مخزن/مجمد في جو من النتروجين بعد إزالة التجمد. ‎YVAA
‎(ii)‏ وضع كيس الدم الذي حصل عليه من الخطوة ‎(ii)‏ الذي يشتمل على الدم الكامل في جهاز الاختراع الراهن.
‎SS dae ‏أجري عد تفاضلي أوتوماتي لخلايا الدم البيضاء باستخدام‎ (vidi) ‏عع11ه0©. واختير المرضى الذين تراوح عدد كريات الدم‎ counter
‏َ البيضاء عندهم من ‎Jaf Ve XY eam‏ (تراوحت نسبة خلايا تمن ‎A o—"1.‏ على نحو مفضل.
‎WS (ix)‏ يمكن تقييم حيوية خلايا الدم أوتوماتيا؛ وتشمل طرق ملائمة استخدام يوديد البروبيديوم ‎propidium iodide‏ وقياس التدفق الخلوي واستخدام أزرق التريبان ‎Trypan blue‏ وعداد خلايا الدم بعد تحليل خلايا الدم الحمراء باستخدام محلول
‎.ammonium chloride ‏من كلوريد الأمونيوم‎ Ve
‎(x)‏ أضيف الجسم المضاد 53 إلى عينة من دم كلي في الحجيرة في الجهازء حتى تراوح التركيز النهائي من ‎©-١‏ ميكرولتر/١٠"‏ خلية (مثلاً؛ عندما كان عدد ‎WBC‏ يساوي ‎SYM exer‏ أضيف ‎٠٠‏ ميكرولتر من الجسم المضاد أحادي النسيلة ‎IgG «CR3/43‏ فأري ‎5S‏ 0 104 ميكروغرام/مل لكل مل واحد
‎Vo‏ من الدم). ‎(xi)‏ مزج الدم والجسم المضاد ‎Tus‏ باستخدام مقلب في حجيرة الجهاز وترك المزيج لفترة زمنية محددة؛ لا تقل عن ساعتين؛ عند درجة حرارة الغرفة؛ ويفضل عند درجة حرارة تتراوح ما بين 8٠م‏ و ‎FY‏ م؛ في الحجيرة المحضونة. ‎(xii)‏ تم تحليل عينات الدم عن طريق قياس التدفق الخلوي؛ معايرات التنسيلء ‎Y.‏ الاستتبات طويل الأمد و/أو تحليل ‎PCT‏ في نفس اللحظة؛ بعد ساعتينء ‎١‏ ساعات و ‎YE‏ ساعة من إضافة الأجسام المضادة أحادية النسيلة باستخدام وسيلة التعقب للجهاز. ملاحظة: بسبب التكتل التمائلي النوعي لخلايا ‎B‏ وتشكل خلايا ملتصقة في قاع أنبوب الاختبار؛ المستحث عن طريق الجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43؛ مزجت الخلايا ‎faa‏ ‎Ye‏ وتمت معاينتها باستخدام رؤوس ماصة مخبرية عريضة التجويف قبل التحليل. غلا
وللحصول على تجمع خلوي منتظم في التحليل؛ قسمت عينة الدم إلى مقادير وافية منفصلة في عدة حجيرات قبل المعالجة ب ‎.CR3/43‏ ‏التحضير لتحليل خلايا جذعية تم الحصول عليها عن طريق ‎B LDA dallas‏ مستنبتة بالجسم المضاد أحادي النسيلة ‎CR3/43‏ ‏يمكن تقييم الخلايا الجذعية التي تم الحصول عليها باستخدام طرق الاختراع عند عدة نقاط زمنية؛ ‎Sha‏ كل ساعتين؛ ‎١‏ ساعات؛ ‎YE‏ ساعة؛ ‎lag‏ كل ‎١‏ أيام أو فترات أطول (أشهر ‎٠‏ بتغذية الخلايا ‎Ge sand‏ بوسط استنبات طويل الأمد). ويمكن تحليل عين معالجة وضابطة واحدة أو أكثر عند كل نقطة زمنية؛ وبعد ذلك يتم تحليل العيون المعالجة والضابطة المتبقية عند فترات زمنية متعاقبة. ‎ve‏ كما يمكن إجراء هذا التقييم أوتوماتياً بواسطة وسيلة تعقب مدمجة في جهاز الاختراع الراهن. ‎(i)‏ أزيلت الطبقة غير الملتصقة بلطف باستخدام ماصة مخبرية عريضة التجويف وتم تمزيق كتل الخلايا بالسفط المتكرر من خلال ماصة مخبرية عريضة التجويف للحصول على معلق من خلايا أحادية. ‎(ii) vo‏ باستخدام كاشطة خلايا تم كشط الطبقة الملتصقة وتمزيق كتل الخلايا بلطف للحصول على معلق من خلايا أحادية بالسفط المتكرر من خلال ماصة مخبرية عريضة التجويف. ‎(iii)‏ على نحو بديل؛ ‎Cale‏ الطبقة الملقصقة بالتربسين ‎trypsin‏ بغسلها ‎Y of‏ باستخدام ‎HBSS‏ ثم بإضافة ‎١‏ مل من تربسين ‎trypsin‏ تركيزه ‎7Y0‏ لكل عين 9 وحضنت عند 7١م‏ لمدة ‎٠١‏ دقائق. ‎cide (iv)‏ كتل الخلايا بلطف بالمص المخبري المتكرر في ماصة مخبرية عريضة التجويف. ‎(V)‏ بعد ‎٠١‏ دقائق حضنت الخلايا مع 705 تركيزه ‎77١‏ حتى الوصول إلى تركيز ‎Sled‏ بحيث تم تثبيط التربسين ‎trypsin‏ ‏خلا ov ‏أعلاه لكل‎ (v) ‏أو‎ (ii) ‏يمكن جمع الخلايا المستنبتة التي تم الحصول عليها في‎ (vi) ‏نوع (أي الخلايا المعالجة وغير المعالجة) عند كل نقطة زمنية وفرزها بالطرد‎ ‏دقائق.‎ ٠١ ‏تسارع الجاذبية لمدة‎ X 50٠0 ‏المركزي عند تسارع مقداره‎ polymerase chain reaction ‏للتحليل عن طريق تفاعل بلمرة أنزيمية متستسل‎ (vii) ‏(انظر القسم ج)؛ ينبغي استخدام كرية الخلايا (الخلايا المعالجة وغير‎ (PCR) ° ‏مباشرة.‎ (vi) ‏المعالجة) التي تم الحصول عليها في‎ ‏(نننه)_للتحليل عن طريق معايرة نسيلية؛ أعيد تعليق كرية الخلايا (الخلايا المعالجة‎ ‏أعلاه‎ (v) ‏أو الخطوة‎ (ii) ‏وغير المعالجة) التي ثم الحصول عليها في الخطوة‎ ‏مثبط بالحرارة تركيزه 7/ ويمكن إزالة جزء‎ FCS ‏يحتوي على‎ IMDM ‏في‎ ‏صغير من الخلايا لعدها ولتقييم حيويتها باستخدام أزرق التريبان‎ il ٠١ ‏وعداد خلايا الدم.‎ trypan blue ‏()_للتحليل عن طريق فاكس :8.0 أعيد تعليق كرية الخلايا (الخلايا المعالجة‎ ‏أعلاه في‎ (v) ‏أو الخطوة‎ (ii) ‏وغير المعالجة) التي حصل عليها في الخطوة‎ ‏والمغنيسيوم‎ calcium ‏محلول هانكس الملحي المتوازن (يخلو من الكالسيوم‎ ‏تركيزه‎ EDTA ‏مثبط بالحرارة تركيزه 77 و‎ FCS ‏يحتوي على‎ (magnesium Vo ‏ملي جزيئي.‎ © ‏تحليل الخلايا الجذعية:‎ ‏يمكن استخدام الطرق التالية لتقييم الخلايا الجذعية. وقد يشتمل جهاز الاختراع الراهن‎ ‏على وسيلة تعقب لإجراء الطرق التي ستوصف بالتفصيل أدناه في هذا البيان أو لإجراء جزء‎ ‏منها.‎ ‏(أ) النمط المناعي:‎ ‏لتحليل النمط المناعي (عن طريق قياس التدفق الخلوي) لعينات الدم الكاملة:‎ ‏لتعليمات المُصنّع)؛ تم تحليل خلايا الدم الحمراء‎ Gig) Lelia ‏تم صبغها‎ )( ‏وغسلت الخلايا بعد فترة الحضن وعولجت بجسم مضاد أحادي النسيلة. ويمكن‎
YYAA oA ‏على نحو‎ Beckton Dickenson ‏استخدام محاليل من شركة بكتون ديكنسون‎ ‏نموذجي.‎ ‎8 ‏ينبغي وسم الكريات البيضاء (في الدم الكامل؛ الجزء أحادي النواة؛ خلايا‎ (i) ‏أو‎ MACS ‏المنتقاة على نحو سلبي عن طريق الكريات الدقيقة من نوع ماكس‎ ‏خلايا 8 مفروزة مأخوذة من شخص مصاب بلوكيميا ليمفية مزمنة) باستخدام‎ o ‏أجسام مضادة أحادية النسيلة مقترنة مباشرة بأيزوثيوسيانات الفلوريسين‎ .phycoerythrin (PE) ‏أو الفيكوإريثرين‎ fluorescein isothiocyanate (FITC) ‏وقد تكون واسمات الألواح المستخدمة في تحليل النمط المناعي كالتالي:‎ (id) .CD34 PE-Cy5 + CD45 FITC + 003875 ه٠‎
CD34 PE-CyS t+ CDIO FITC + CDI9PE ه٠‎ ٠
CD34 PE-Cy5 + CD3 FITC + CD117PE ‏ه‎ ‎CD34 PE-CyS5 + CD61 FITC + CD33 PE ‏كه‎ ‎CD34 + CD71 FITC + PE glycophorine A 43 ‏ه غليكوفورين‎
PE-Cy5
CD34 PE-Cy5 + CD90 FITC + ACI33PE ه٠‎ \o
CDS FITC + CDI9PE ‏ه»‎ ‏(ضابط سلبي ذي نمط‎ 1501 PE-Cy 5 + IgGI FITC + IgGl PE ٠ ‏إسوي).‎ ‏يمكن إجراء وسم مزدوج باستخدام 1016 + طقم (يحصل عليه من شركة‎ (iv) : (Beckton Dickenson ‏بكتون ديكنسون‎ Y. ‏حيث يتضمن أزواج الأجسام المضادة أحادية النسيلة التالية:‎ t{CD14-PE ‏و‎ CD45-FITC ٠. ‏و 13-2110 ؛‎ 0019775 ه٠‎ ‏و 104-1110 ؛‎ CD8-PE ه٠‎ ‏و‎ ¢CD3-FITC ‏للمعصضتتة و‎ ٠ Yo
YYAA oq .CD3-FITC ‏و‎ CDI16-PE «CD56 ه٠‎
IgG2-PE 5 IgG-FITC ‏كما كانت ضوابط سلبية مطابقة للنمط الأسوي ل‎ ‏مشمولة.‎ ‏يمكن استخدام الأجسام المضادة التالية الإضافية التي تصنعها شركتي داكو‎ LS )»( ‘Beckton Dickenson ‏وبكستون ديكينسون‎ DAKO ° «CD13 ‏مضادة ل‎ «CD33 ‏مضادة ل‎ «CDS ‏مضادة ل‎ PE ‏مقترنة مع‎ «CD14 ‏مضادة ل‎ «CD2 ‏مضادة ل‎ «CD19 ‏مضادة ل‎ «CD34 ‏مضادة ل‎ «CD3 ‏مضادة ل‎ FITC ‏مضادة ل 0033 ومضادة ل 605؛ مقترنة مع‎ «CD20 ‏مضادة ل‎ «CD22 ‏مضادة ل‎ (IgM ‏مضادة ل‎ «CD7 ‏مضادة ل‎
TCRap ‏ومضادة ل‎ «CD16 ‏مضادة ل‎ «CD7 ‏مضادة ل‎ «CD10 ‏مضادة ل‎ vs ‏كما يمكن استخدام ما يلي:‎ (vi) 0034 ‏المنقسى المتخصص ب‎ IgG; ‏الجسم المضاد أحادي النسيلة‎ ٠ ‏ويكشف عنه باستخدام شدفة‎ (DAKO ‏(يحصل عليه من شركة داكو‎ ‏أو‎ FITC ‏من غلوبيولين مناعي مضاد لفأر من ماعز موسوم ب‎ F(ab), (DAKO ‏بصفته جسم مضاد ثانوي (يحصل عليه من شركة داكو‎ PE Vo كوائتم رد ‎(PE-CyS) Quantum Red‏ مقترن مع جسم مضاد ل ‎CD34‏ ‏(يحصل عليه من شركة داكو ‎(DAKO‏
FACS Vantage ‏أو فاكس فانتاج‎ FACScan ‏ثم تحليل الخلايا باستخدام فاكسكان‎ (vii) ‏أو أي مقياس‎ (Beckton Dickenson ‏(يحصل عليه من شركة بكتون ديكنسون‎ ‏آخر للتدفق الخلوي. وينبغي تحليل عدد متساوي من الأحداث في‎ Y. ‎٠‏ خلية وينبغي تسجيل الوقت. ‎(viii)‏ حللت البيانات باستخدام برامج بروبريتاري بأينثت- إيه غايت ‎Consort 30 Y'+ ‏كونسورت‎ «Lysis II 11 ‏ليسس‎ «Proprietary Paint-a-Gate ‎.CellQuest ‏وسل كويست‎
YYAA
ولتحليل النمط المناعي (عن طريق قياس التدفق الخلوي) لعينات الطبقات الطافية أجري على سبيل المثال: () - صبغ مناعي (وفقآً لتعليمات المُسنّع)؛ تحليل لخلايا الدم الحمراء وغسل للخلايا بعد فترة الحضن ومعالجتها بجسم مضاد أحادي النسيلة. ويمكن ° استخدام محاليل التحليل والغسل لشركة بكتون ديكنسون ‎Beckton Dickenson‏ على نحو نموذجي. ‎(ii)‏ وسم للكريات البيضاء مزدوج أو مفرد بأجسام مضادة أحادية النسيلة مقترنة مباشرة بأيزوثيوسيانات الفلوريسين ‎¢(FITC)‏ فيكوإريثرين ‎(PE)‏ أو ‎RPE-Cy5‏ ‏كما يمكن استخدام الواسمات التالية على نحو ملائم: - 0034 (واسم على الخلايا جذعية)؛ 009 (واسم على خلايا ‎B‏ الليمفية)؛ ‎CD45‏ (واسم على الكريات البيضاء)؛ ‎CD3‏ (واسم على خلايا 7 الليمفية)؛ 3 (واسم على الخلايا النخاعية)؛ 1 (واسم على خلايا الدم الحمراء)؛ 1 (واسم على الخلايا النقيية الكبيرة)؛ غليكوفورين إيه ‎Glycophorin A‏ (واسم على خلايا الدم الحمراء)؛ 80133 ‎aud)‏ على الخلايا الجذعية)؛ 0038 (واسم على الخلايا الجذعية الأولية)؛ 0090 (واسم على الخلايا الجذعية)؛ ‎vo‏ 0010 (واسم على الخلايا الجذعية شبه الليمفية)؛ 00117 (واسم على الخلايا الجذعية وافرة القوة)؛ 1801 (ضابط سلبي). (ب) الشكل: لتحليل الشكل: بالمجهر الضوئي ‎(i) 7‏ أعيد تعليق الخلايا على نحو جيد في ‎IMDM‏ يحتوي على ‎FCS‏ مثبط بالحرارة تركيزه 77 باستخدام أطراف ماصات مخبرية عريضة التجويف.
‎(ii)‏ فحصت بواسطة مجهر من نوع ليتز ‎Leitz‏ بامستخدام محلول صبغ ملاثم؛ مثلاً يمكن استخدام محلول ماي وغرينوالد للصبغ ‎May and Greenwald Staining Solution‏ (يحصل عليه من شركة بي دي إتش
‎(BDH Chemical Ltd Yo‏ لتحليل الخلايا النخاعية وشبه الليمفية. وسيدرك الشخص ‎YYAA‏
المتمرس بسهولة أنه يمكن استخدام صبغات أخرى ملائمة لتحديد مستعمرات أخرى؛ ‎Sia‏ صبغة رايت ‎Wright's‏ أو غيمزا ‎Giemsa‏ ‎(i)‏ يمكن إجراء تحليل للشكل لخلايا ‎B‏ ليمفية مأخوذة من شخص مصاب بلوكيميا ليمفية مزمنة بواسطة أغشية دموية أو مستحضرات خلوية مفروزة بالطرد : المركزي؛ على الترتيب. التحليل باستخدام مجهر متحد البؤر ‎(i)‏ تم الحصول على خلايا ‎WEB‏ وصف أعلاه (خلايا ‎B‏ من شخص مصاب بلوكيميا ليمفية مزمنة ومن شخص سليم من عينات طافية من مانحين دم أصحاء). ‎(ii) ve‏ عولجت ‎B WIA‏ باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 كما وصسف أعلاه. ‎(ii)‏ أضيف ‎١‏ مل من معلق خلوي إلى طبق اسثتبات أعضاء ‎organ culture dish‏ (تمت هندسة قاع هذا الطبق بحيث يحتوي على شريحة تغطية). ‎(iv)‏ أضيف ‎VO‏ ميكرولتر من جسم مضاد أحادي النسيلة لمركب مقترن من ‎FITC‏ ‎vo‏ و 0019 و ‎١١‏ ميكرولتر من جسم مضاد أحادي النسيلة لمركب مقترن من ‎Cy 5/CD34 PE‏ (كوانتم رد ‎-(Quantum Red‏ 0 استخدام يوديد البروبيديوم ‎propidium iodide‏ لتقييم الحيوية وصبغة هوكسث ‎dual Hoechst‏ الأنوية. )=( تحليل عن طريق ‎PCR‏ لاعادة ترتيب جين ‎JHE/VDJ‏ ‎Y.‏ تم تحليل منطقة ‎VDI‏ و/أو ‎THE‏ لجين 1817 عن طريق ‎PCR‏ (في جهاز تدوير حراري من نوع بيركن ‎(Perkin Elmer thermal cycler jal‏ باستخدام مرصاف ‎DNA‏ من دم محيطي من شخص مصاب ب ‎B-CLL‏ وعينات طبقات طافية قبل وبعد ‎Y)‏ ساعتين؛ ‎7٠‏ ساعات و ‎YE‏ ساعة) المعالجة بجسم مضاد. وتم اقتباس هذا البروتوكول من ستولك ‎Stole‏ ومعاونيه ‎(American Journal of Hematology 38:1-8; 1991 )‏ . واستخدمت بادئات ‎THF‏ للكشف الموجب ‎ve‏ عن جين السلسلة الثقيلة للغلوبيولين المناعي في تشسكيلة خط جرومي ‎YVYAA‏ iy ‏واستخدمت بادئات 1116 كضابط داخلي إيجابي لجين السلسلة الثقيلة‎ germ line configuration ‏اللوكيمية بالإضافة إلى تلك الليمفية السليمة تحذف دائما‎ 8 LDA ‏للغلوبيولين المناعي. وفي‎
Tals ‏وهو ضابط داخلي؛‎ THE ‏وبالتالي لا يمكن تضخيمها؛ بينما يبقى جين‎ THF dilate ‏كضابط.‎ Boactin ‏واستخدم جين ال 8-أكتين‎ ‏المجيني من الدم الكامل باستخدام طقم للدم من نوع كياجين‎ DNA ‏فصل‎ (i) o ‏واستخدم بروتول أكبر مقدار يمكن‎ .Qiagen QiAmp Maxi ‏كيامب ماكسي‎ ‏(معالجة وغير معالجة).‎ due ‏من كل‎ DNA ‏إنتاجه. واستخلص كل‎ ‏وبنسبة )01 باستخدام هلام أغاروز‎ DNA ‏أجريت عمليات تخفيف دقيقة ل‎ (ii) ‏تركيزه 73,0 لتقييم التركيز والنوعية.‎ agarose gel ‏مجيني صرف‎ DNA ‏أجري 70©8-تسخين 1 7-7 ميكرولتر من مرصاف‎ (iii) ٠١ ‏عند 97م لمدة © دقائق.‎
JHFg/JHFa «JH6g/TH6a (I ‏تفاعلات معالجة وغير‎ A) ‏يكفي لأربعة مرضى‎ "'mastermix ‏تم تحضير "مزيج رئيسي‎ ‏للجدول المفصل أدناه. ويمكن زيادة المقادير وتقليلها حسب ما هو ملائم.‎ Gia y ‏معالجة)‎ ‎Gel | ‏لحجواميكرولش‎ |] — vy. ‏ماء خالي من النيوكلياز‎ ‏ضعف‎ As ‏محلول منظم لدرجة الحموضة‎ X PCR ٠ ‏؟ ملي جزيئي‎ ne ‏ملي جزيئي‎ YO ‏تركيزه‎ MgCl, ‏ملي جزيئي‎ 8 ٠8 ‏تركيزه © ملي جزيثي‎ ANTPs* ‏ميكروجزيثي‎ ١ ‏ميكروجزيثني ف‎ ٠١ ‏تركيزه‎ 1 ‏ميكروجزيثي‎ ١ A ‏ميكروجزيثي‎ ٠١ ‏تركيزه‎ 2 ‏وحدات‎ ٠ Y ‏بوليمراز 780 تركيزه © وحدات/ميكرولتر‎ ‏مرات لمدة © ثواني قبل الاستخدام لمعايرة العينة.‎ Yo ‏تم تدويم الأنابيب من مرتين‎ ٠
YYAA
وأضيفت كمية وافية مقدارها 40 ميكرولتر من "المزيج الرئيسي" إلى كل أنبوب يحتوي على ‎DNA‏ مجيني ممسخ. وضبط جهاز التدوير الحراري عند 96م لمدة دقيقة واحدة و ‎Ve‏ ثانية؛ عند 500 لمدة دقيقتين؛ 7م لمدة دقيقة واحدة و ‎Yu‏ ثانية ‎YO)‏ دورة)؛ وعند "لام لمدة © دقائق (دورة واحدة) : ‎٠‏ 2) م -أكتين ‎Bractin‏ ‏تم تحضير "مزيج رئيسي" يكفي لثمانية تفاعلات كما وصف في القسم ‎(I‏ أعلاه. ويمكن زيادة المقادير وتقليلها حسب ما هو ملاثم. ‎esl | se ||‏ ماء خالي من النيوكلياز ‎YA:‏ — ‎X PCR ٠‏ محلول منظم لدرجة الحموضة ‎As‏ ضعف ‎MgCl,*‏ تركيزه ‎YO‏ ملي جزيئي د ‎V0‏ ملي جزيثي ‎ANTPs*‏ تركيزه © ملي جزيئي 178 4 ملي جزيئي 1 تركيزه ‎٠١‏ ميكروجزيثي ‎١ As‏ ميكروجزيثي 2 تركيزه ‎٠١‏ ميكروجزيئي ‎١ As‏ ميكروجزيئي بوليمراز ‎Tag‏ تركيزه 0 وحدات/ميكرولتر ‎٠‏ وحدات ‎٠‏ تم تدويم الأنابيب من مرتين ‎Fo‏ مرات لمدة © ثواني قبل الاستخدام لمعايرة العينة. وأضيفت كمية وافية مقدارها 95 ميكرولتر من "المزيج الرئيسي" إلى كل أنبوب يحتوي على ‎DNA‏ مجيني ممسخ. وضبط جهاز التدوير الحراري عند 95م لمدة دقيقة واحدة ‎Ye 5 “©‏ ثانية؛ عند 200 لمدة دقيقتين؛ عند ‎AVY‏ لمدة دقيقة واحدة و ‎Yu‏ ثانية ‎YO)‏ دورة)؛ ‎a VY die 4‏ لمدة © دقائق (دورة واحدة). كانت المجموعة الأولى من البادئات؛ المصممة لتضخيم شدفة طولها 7450 زوج قاعدة من جين ‎IgH THF‏ كالتالي: ‎JHFa AAA GGT GCT GGG GGT CCC CTG - ٠‏ ‎YYAA‏
‎JHFb CCC AGT 601 GGA AGT ATT CAG C‏ وكانت المجموعة الثانية من البادئات؛ المصممة لتضخيم شدفة طولها ‎VEY‏ زوج قاعدة من جين ‎IgH JHE‏ يرتبط بالمنطقة رقم > كالتالي: ‎JH6a CAT 161 GAT TAC TAC TAC TAC TAC‏ ‎JH6b GAT CCT CAA GGC ACC CCA 016 © ٠‏ وكانت المجموعة الثالثة من البادئات؛ المصممة لتضخيم شدفة طولها 191 ؟ زوج قاعدة من جين 8م-أكتين ‎B-actine‏ كالتالي: ‎Beta ACT-1 AAG GCC AAC CGC GAG AAG AT‏ ‎Beta ACT-2 TCG GTG AGG ATC TTC ATG AG‏ ‎Ve‏ (د) تحليل سذرن لإعادة ترتيب جين ‎VDJ‏ ‎DNA pat (i)‏ المجيني من عينات دم محيطي معالجة وغير معالجة أو خلايا 3[ منقاة (مأخوذة من مرضى مصابين ب ‎¢(B-CLL‏ باستخدام ‎~Hindll[BamHI‏ ‏وهي خلايا على نحو نموذجي من عدة عيون تلزم لتزويد مقداراً كافياً من ‎DNA‏ لإجراء التحليل. ‎Vo‏ 0 ثم تحليل الخلايا المهضومة باستخدام هلامات أغاروز ‎agarose gels‏ تركيزها 8 وتقلت إلى أغشية من النايلون ‎nylon‏ من نوع جين سكرين (علائمة تجارية مسجلة) ‎GeneScreen®‏ (يحصل ‎Lede‏ من شركة دوبونت ‎(Dupont‏ ‎Ga‏ لتعليمات ‎aT all‏ (انظر ما ‎ela‏ عن سذرن ‎(Southern‏ 99/58 ١م).‏ ‎(ii)‏ وتتميز إعادة ترتيب جين 1817 بتحليل المنطقة ‎(J‏ موضع ‎IgH‏ باستخدام ‎١‏ مسبار ‎Jy DNA‏ بشري موسوم ب ‎PP‏ مفصول من ‎DNA‏ مجيني مشيمي ‎Jian)‏ عليه من شركة كالبيوكيم ‎٠‏ أونكوجين سينس ‎Calbiochem, Oncogene‏ ‎(Science‏ . ‎(iv)‏ ينبغي حفظ الصور بالاشعاع الذاتي ‎autoradiographs‏ عند ‎٠-‏ ب لبضعة أيام قبل إظهارها. ‎YVYAA‏
+ (ه) مستتبت طويل الأمد: يمكن المحافظة على المستنبتات الخلوية المحضرة كما وصف أعلاه لفترات طويلة (مستنبت طويل الأمد) بتغذيتها أسبوعياً بوسط استنبات طويل الأمد (وسط إسكوف معدل لدولبيكو ‎Jaa IMDM)‏ عليه من شركة جيبكو بي آر إل لايسف تكنولوجيز ليمتد ‎FCS «(Gibco BRL Life Technologies Ltd ٠‏ مثبط بالحرارة تركيزه ‎٠‏ مصل حصان ‎(HS)‏ ‏مثبط بالحرارة تركيزه ‎7٠١‏ هيدروكورتيزون ‎hydrocortisone‏ تركيزه 71 محلول أم من بنسلين 0601011110/ستربتوميسين ‎streptomycin‏ تركيزه م 5 جزيئي). ‎(i)‏ أولاء؛ بعد فترة زمنية معينة؛ ‎YE (Sa‏ ساعة؛ من بدء المعالجة ب 083/43 تم تخفيف الخلايا في كل عين بإضافة ‎١‏ مل من وسط استنبات طويل الأمد. ‎(i) Ve‏ تمت تغذية العيون أسبوعياً بعد إزالة نصف وسط النمو. ‎(iid)‏ تمت معاينة العيون باستخدام مجهر متباين الطور ‎microscopy‏ 11856-00117856 (و) معايرة نسيلية: ‎(i)‏ بعد انتهاء كل فترة زمنية من بدء المعالجة؛ يمكن الحصسول على ‎٠‏ ميكرولتر من خلايا غير ملتصقة في وسط الاستنبات كما وصف أعلاه. ‎(i)‏ أضيف إلى المعلق الخلوي في وسط الاستتبات أعلاه؛ " مل مسن ‎methocult GFH4434‏ (يحصل عليه من شركة ستم سل تكنولوجيز ‎«StemCell Technologies‏ يتكون من مثيل سليلوز ‎methylcellulose‏ في ‎(FCS IMDM‏ ألبومين مصلل بقري ‎<bovine serum albumin (BSA)‏ ‎Y.‏ 1-غلوتامين ‎L-glutamine‏ العامل الريصسي للخلايا الجذعيسة ‎eth stem cell factor‏ العامل الريصي المنبه لمستعمرة الخلايا الحبيبية والخلايا الملتهمة الكبيرة ‎th GM-CSF‏ العامل الريصي ل 3-.1 والعامل الريصي للإريثربويتين ‎.(rherythropoietin‏ ‎(ii)‏ أخذ ‎١,١‏ مل من مزيج الخلايا ووضع في ألواح ثلاثية. ‎YVAA‏
‎(iv)‏ حضتت الألواح عند 7م في طبق بتري رطب في جو نسبة ,00 فيه 15 ‎dui‏ ,0 فيه 70 لمدة ‎VE‏ يوم. ‎(v)‏ تمت معاينة العيون قبل وبعد المعالجة باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 3 باستخدام مجهر متباين الطور. ‎(vi)‏ بعد ‎VE‏ يوم يمكن تحليل الخلايا (المستعمرات) بقياس التدفق الخلوي؛ باستخدام مجهر متحد البؤر و/أو باستخدام ‎PCR‏ ‎(vid)‏ عند إجراء المعايرة النسيلية ينبغي تجنب رذيذ الكحول ‎calcohol aerosol‏ حيث يسبب تكتل الخلايا وتدمرهاء مما يعيق بقاء نوعي الخلايا (المعالجة وغير المعالجة) حية. لوح ‎CD19‏ و ‎CD3‏ ‏قللت معالجة عينات الدم في جهاز الاختراع الراهن باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 8 لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ من العدد النسبي ‎Load‏ ‎CD19?‏ على الدوام. وهذا الواسم عبارة عن مولد مضاد كامل على خلايا 3 (انظر الجداول). ‎ve‏ ويوجد مولد المضاد هذا على كل خلايا 3 الليمفية البشرية في كل مراحل نضجها لكنه غير موجود على خلايا البلازما المتمايزة ‎Toles‏ وبالتالي؛ تلك إشارة إلى أن ‎BB WDA‏ تمايزت بشكل ارتجاعي ‎retrodifferentiating‏ إلى خلايا غير متمايزة. وقد تسببت نفس المعالجة بزيادة في العدد النسبي لخلايا “0103 على نحو مفاجئ خصوصاً في دماء المرضى المصابين ب ‎B-CLL‏ حيث رافقها دائما زيادة في العدد النسبي © ا لخلايا ‎.CD3CDIY‏ ويوجد 003 على كل ‎T WA‏ الليمفية الناضجة وعلى 7789-7165 من الخلايا التيموسية. وهذا الواسم موجود دائما بشكل مقترن مع مستقبلات خلايا 7 ‎T-cell receptors (TCR)‏ من نوع ‎—B/a‏ أو غاما/دلتا وهذين المعقدين ‎Lae‏ مهمين في نقل الإشارات إلى داخل الخلية. وبالتالي؛ ذلك دليل على أن خلايا 3 قد تمايزت بشكل ارتجباعي إلى خلايا غير متمايزة ثم تحولت إلى خلايا متمايزة جديدة؛ أي خلايا 7. ‎YVAA‏ vy ‏المعالج المأخوذ من مرضى مصابين‎ pall ‏وظهرت نسيلة جديدة من الخلايا في‎ ©003* ‏تعبر عن الواسمين 6019© و 003 بشكل إسهامي-أي خلايا *0019 و‎ B-CLL ‏ب‎ ‏ساعة من بدء‎ YE ‏ساعات و‎ ١ ‏(انظر المخطط ١؛ المريض رقم ؛ £5 بعد ساعتين؛‎
CoAT ‏ويمكن إجراء هذه المعالجة في جهاز الاختراع الراهن. وأظهر مرضى‎ ٠ ‏المعالجة)‎ ‏مصابين بحالات مختلفة زيادة في العدد النسبي لنسائل الخلايا هذه. وكانت هذه الخلايا كبيرة‎ © ‏على غشائها‎ fas ‏على نحو استثنائي وحبيبية بدرجة كثيفة وعبرت عن 0019 بمستويات عالية‎ ‏لتلك على‎ Alles ‏الخلوي. ومن الظاهر أنه عبر عن الواسم 603 على هذه الخلايا بمستويات‎ ‏الخلايا الليمفية الناضجة الطبيعية.‎ ‏و ؛ هي أرقام فعلية تمثل نفس المريض‎ WY ‏وفي الجدول 7 أرقام المريض‎ ‏للحالة التجريبية‎ ١ ‏ووضعت لتبين تأثير المعالجة على الدم بمرور الوقت فقط (انظر الجدول‎ > ٠ ‏والإكلينيكية لهذا المريض).‎ ‏ومن الظاهر أنه تقل نسائل “0019*003 في العينات المعالجة بمرور الوقت؛ وتصل‎ ‏ساعات و‎ ٠ ‏إلى المستويات الأصلية لتلك المحددة في العينة غير المعالجة بعد ساعتين؛‎ ‏ساعة.‎ Ye ‏وتم الكشف عن نوع آخر من الخلايا من نفس الحجم وحبيبية بنفس الدرجة في‎ ‏العينات غير المعالجة وعبرت هذه الخلايا عن 0019 بمستويات عالية على سطحها لكنها لم‎ ‏كان من الظاهر أن العدد النسبي‎ cad ‏إلا‎ FC ‏تعبر عن الواسم 03 وكانت غنية بمستقبلات‎ ‏ساعة من معالجة عينة الدم (7؛ ؟ و‎ YE ‏لهذه الخلايا قل بمرور الوقت. وعلى نحو مهم؛ بعد‎ ‏انخفض العدد النسبي لخلايا 0019003 في مجموعة الخلايا التي لوحظ زيادة عددها‎ (¢ ‏بشكل أولي بعد ساعتين و 1 ساعات من معالجة عينات الدم. إلا أنه؛ انخفضت أعداد كولتر‎ - ‏عند معالجة الدم بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة‎ WBC ‏لتجمعات‎ Coulter counts ‏ويشير هذا الاكتشاف إلى أنه نتج عن هذا‎ JHLA-DR ‏المتماثتلة في سلسلة م لمولد المضاد‎
Coulter counter ‏النوع من المعالجة خلايا شاذة لا يمكن الكشف عنها بواسطة عداد كولتر‎ ‏لكن تؤخذ بعين الاعتبار عند قياس التدفق الخلوي حيث يعد الخلايا على أساس‎ )١ ‏(الجدول‎ ‏الواسمات السطحية؛ الحجم والحبيبية. وبالإضافة إلى ذلك؛ تؤخذ هذه الخلايا الشاذة بعين‎ ve
YVYAA
TA
‏الاعتبار عند تحليل الشكل باستخدام صبغة رايت تحت المجهر. وتبين مخططات قياس التدفق‎ ‏و 4) ويبدو أن التغيرات في النمط المناعي‎ * YO) ‏الخلوي لهذه الظواهر في المخططات‎ ‏التي تم الحصول عليها بمعالجة عينات دم تشير إلى أن الخلايا الليمفية “6719 و *003 عبارة‎ ‏عن مجموعة متصلة بينياً من الخلايا لكن تبقى مميزة على أساس التعبير النسبي عن 0019 و‎ ‏مقارنة مع الخلايا الجذعية.‎ 003 ٠ ‏نفس المريض لكن تمت مراقبة تحليل‎ ١ ‏يمثل رقمي المريض © و‎ oY ‏وفي الجدول‎ .)١ ‏عينات الدم المعالجة وغير المعالجة بمرور الوقت وعند نفس الوقت (انظر الجدول‎ ‏ميول مماثلة للتغيرات في النمط‎ B WA ‏وأظهر دم المريض غير المصاب بخبث في‎ ‏المناعي مقارنة بدم مرضى مصابين ب .3-017 لكن التغيرات لم تكن بنفس الدرجة. إلا أنه؛‎ ‏في دم‎ I ‏من الصنف‎ MHC ‏كان العدد النسبي والمطلق لخلايا 3 الليمفية والخلايا إيجابية‎
B-CLL ‏هؤلاء المرضى منخفضاً جدآً مقارنة مع ذلك في دم المرضى المصابين ب‎ ‏وأظهر أخين مصابين بهبط غاما غلوبين الدم طفولي مرتبط بالكروموسوم # كانت‎ ‏تتقصهم خلايا 8 تغيرات في النمط المناعي مختلفة بالنسبة للعدد النسبي لخلايا *003 عند‎ ‏معالجة دميهما. وكان عمر الأخ الأصغر شهرين ولم يكن مريضاً؛ وعند معالجة دمه؛ أظهر‎ ‏في العدد النسبي لخلايا *003 حيث كان مصحوباً بانخفاض في العدد النسبي‎ SB ‏ارتفاعا‎ vo ‏وكان‎ Tan ‏لخلايا 00019 003. ومن ناحية أخرى؛ كان عمر الأخ الثاني سنتين وكان مريضاً‎ ‏وأظهر انخفاض في عدد‎ Lows Tail je DR ‏عدد خلايا 7 النشطة التي تعبر عن مولدات المضاد‎ ‏خلايا “003 في دمه. ولم تستخدم واسمات أخرى لقياس تغيرات أخرى في النمط المناعي قد‎ ‏و‎ 10 43/BD «¥ ‏حدثت بسبب كمية الدم القليلة جد المأخوذة من هذين المريضين (الجدول‎ .(040BD v. ‏بعد‎ CD3" ‏في الجدول ؟ انخفاض في العدد النسبي لخلايا‎ 9١ ‏وأظهر المريض رقم‎ ‏عند‎ ad ‏كان مصحوباً بزيادة في العدد النسبي لخلايا 003:0019. إلا‎ Cua ‏معالجة الدم‎ ‏لوحظ بأن العدد‎ (Y ‏تحليل واسمات على السطح أخرى مثل 004 و 008 (انظر الجدول‎ ‏النسبي لخلايا 0047008 في دمه مرتفعاً ولوحظ ذلك قبل معالجة عينات الدم بالجسم المضاد‎ ‏وانخفض عدد هذه الخلايا مزدوجة الإيجابيبة‎ DR ‏أحادي النسيلة ضد سلسلة 8 لمولد المضاد‎ vo
YVYAA
على نحو ملحوظ بعد معالجة الدم. وبالإضافة إلى ذلك؛ عندما تم تحليل واسمات ‎AT‏ لوحظ ارتفاع في العدد النسبي لخلايا “03 (انظر الجدول 4). وأظهر مستحضر غني ‎BLA‏ الليمفية من مانحي دم أصحاء عند معالجته بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة م لمولدات المضادات ‎DR‏ في جهاز ‎Ey‏ للاختراع الراهن ‎٠‏ ارتفاع مفاجئ في العدد النسبي لخلايا *0103 حيث رافقه دائماً انخفاض في العدد النسبي لخلايا “0019 وزيادة في العدد النسبي ‎LDA)‏ 0019003. وأظهر تحليل ‎AT‏ باستخدام واسمات مثل ‎CD4‏ و 008 زيادة مرافقة في العدد النسبي لهذه الواسمات. إلا أنه؛ لم يظهر مستحضر غني بخلايا ‎T‏ الليمفية من نفس مانحي الدم عند معالجته بنفس الجسم المضاد أحادي النسيلة نفس التغييرات. ‎٠‏ لوح 004و ‎CD8‏ ‏إن مولد المضاد ‎CDA‏ هو مستقبل فيروس نقص المناعة البشري. ويرتبط جزيء ‎CD4‏ بمولد المضاد ‎MHC‏ من الصنف ]1 في ‎<B2 Jia‏ وهو منطقة مماثلة لمواقع ارتباط ‎CD8‏ ‏على مولدات المضادات من الصنف 1. ويعزز ارتباط 604 بمولدات المضادات من الصنف ‎II‏ ‏استجابة خلايا 7 لمولدات المضادات ويعزز ارتباط 008 بمولدات المضادات من الصنف 1 ‎yo‏ ذلك ‎Lad‏ . وتوجد مولدات المضادات 008 على المجموعة الفرعية من خلايا ‎T‏ الليمفية البشرية الكابتة/السامة للخلايا بالإضافة إلى أنها توجد على مجموعة فرعية من الخلايا الليمفية القاتلة الطبيعية وغالبية الخلايا التيموسية الطبيعية. ويعبر عن مولدات المضادات 004 و ‎CD8‏ ‏بشكل إسهامي على الخلايا التيموسية وتفقد هذه الخلايا أحد الواسمين عندما تنضج إلى خلايا 7 ليمفية. ‎Y.‏ وعند تحليل الواسمين ‎CD4‏ و 08©-انظر أدناه- ومن غالبية عينات الدم المبينة في الجدول ‎oY‏ يظهر أسلوب للصبغ يدعم وجود عملية التمايز الارتجاعي لخلايا ‎B‏ الليمفية إلى خلايا غير متمايزة وتمايزها ‎Gal‏ إلى خلايا 7 الليمفية. وظهرت ‎WA‏ *004*008؛ وهي ‎WIA‏ مزدوجة الإيجابية؛ ‎Lila‏ بعد معالجة ‎Sle‏ ‏الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 8 وازدادت أنواع هذه الخلايا ‎vo‏ على نحو ملحوظ في دم العينات المعالجة المأخوذة من مرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ وحيث لم خا
تكن موجودة في العينات غير المعالجة (انظر الجدول “ والمخططات ‎١‏ 7 8 و 4). وفي نفس العينات لوحظ كذلك زيادة في العدد النسبي للخلايا أحادية الإيجابية ‎Jie‏ خلايا ‎CD8"‏ و ‎CDA”‏ بشكل متزامن. وعلاوة على ذلك؛ لوحظ انخفاض مفاجئ للعدد النسبي لخلايا ‎CD4‏ ‏8©؛ حيث على الأقل في حالة المصابين ب ‎B-CLL‏ تقابل خلايا 3 في العينات المعالجة م مقارنة بالعينات غير المعالجة ‎Cus‏ بقي عند نفس المستوى عند قياسه بمرور الوقت. إلا أنه؛ أظهر قياس العدد النسبي ‎LAY‏ “004*008 مع مرور الوقت في العينات المعالجة زيادة مرافقة في عدد الخلايا أحادية الإيجابية مع انخفاض في العدد النسبي للخلايا مزدوجة الإيجابية. ويعتبر هذا النوع من التغير في النمط المناعي خاصية مميزة للتطور التيمورسي للخلايا السلف لسلالة خلايا ‎T‏ الليمفية في الغدة التيموسية (المريض رقم 7؛ ‏ و 4). ويوجد ‎٠‏ مولد المضاد ‎CD4‏ على المجموعة الفرعية من ‎LDA‏ 7 الليمفية المساعدة/الحاثة ‎(CD4*CD3")‏ ‏وعلى غالبية ‎WAY‏ التيموسية الطبيعية. إلا ‎cad)‏ يوجد مولد المضاد هذا بكثافة منخفضة على سطح الخلايا البيضاء أحادية النواة وفي سيتوبلازم الخلايا البيضاء أحادية النواة والخلايا الملتهمة الكبيرة ‎(CD3CD4%)‏ ‏وتأثر العدد النسبي للخلايا منخفضة *004 على نحو مختلف في عينات الدم المختلفة ‎ve‏ بعد المعالجة في جهاز الاختراع الراهن. ويبدو أن العدد النسبي لهذا النوع من الخلايا لا يتغير في عينات الدم من المرضى المصابين ب ‎B-CLL‏ بعد المعالجة مقارنة مع العينات غير المعالجة. وتوجد هذه المستويات المنخفضة من التعبير عن 004 على الخلايا البيضاء أحادية النواة والخلايا التيموسية البدائية ‎Joa‏ ‏وأظهر مريض 1117*25 عند المعالجة زيادة جوهرية في عدد الخلايا مزدوجة © الإيجابية التي تعبر عن 04© و ‎CDS‏ في نفس الوقت. ومن ناحية أخرى؛ أظهر المريض رقم ‎9١‏ عند المعالجة انخفاض في هذا النوع الفرعي من الخلايا وتعتمد ملاحظة هذه الظاهرة على الوقت. ولوحظت زيادة في العدد النسبي لخلايا *008 في عينات الدم غير المعالجة المأخوذة من مرضى مصابين ‎B-CLL‏ عند قياسها بمرور الوقت بينما لوحظ انخفاض في العدد النسبي لخلايا ‎CD4*‏ والخلايا منخفضة *004 عند نفس الأوقات (الجدول ‎F‏ المريض رقم 7؛ ‎ve‏ “و4 مما
اه لوح 11و ‎CD3‏ ‏توجد واسمات ‎DR‏ على الخلايا البيضاء أحادية النواة؛ الخلايا ‎(dc iid‏ خلايا ‎B‏ ‏وخلايا 7 الليمفاوية النشطة. وأظهرت العينات المعالجة وغير المعالجة المحللة باستخدام هذا اللوح تغييرات في م النمط المناعي مماثلة لتلك التي حصل عليها عندما تم تحليل عينات الدم باستخدام الواسمين 09 و 003 ‎kil)‏ الجدول ‎(Y‏ ومولدات المضادات هذه كما ذكرت سابقاً عبارة عن واسمات كاملة على خلايا 3 و 17 على الترتيب. واتضح أن معالجة الدم في ‎Gay lea‏ للاختراع الراهن باستخدام أجسام مضادة أحادية النسيلة تؤثر في العدد النسبي لخلايا ‎DRT B‏ الليمفية بحيث ينخفض مستوى خلايا 0187. وبالمقابل؛ ازداد العدد النسبي لخلايا “003 ‎WDA)‏ 7) على نحو ملحوظ (انظر الجدول ؛ والمخطط). وبالإضافة إلى ذلك؛ ازداد العدد النسبي لخلايا 7 النشطة في غالبية عينات الدم المعالجة المأخوذة من مرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ وتأثرت هذه الأنواع من ‎WAY‏ على نحو متفاوت في العينات المعالجة المأخوذة من مرضى مصابين بحالات أخرى. وفضلاً عن ذلك ظهر العدد النسبي للخلايا الإيجابية مرتفعة ‎DR‏ بأرقام كبيرة في العينات المعالجة المأخوذة من - مرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ ورضيع عمره “ أيام لديه ارتفاع في أرومة *0034 ‎DR"‏ في دمه. غير أنه؛ من الجدير بالذكر أن الأرومة التي وجدت في دم هذا المريض كانت سلبية لواسمات 7 و 3 قبل وبعد المعالجة لكن أصحبت أكثر إيجابية لمولدات مضادات السلالات النخاعية بعد المعالجة. وازداد العدد النسبي لخلايا 003708 في غالبية عينات الدم المعالجة وازداد العدد النسبي لخلايا “003 ‎WDA)‏ 7) بشكل تناسبي وانخفض العدد النسبي لخلايا ‎DR‏ ‎vy.‏ (خلايا ‎(B‏ بشكل متناسب عكسياً. لوح ‎CD56‏ و ‎CD16‏ و ‎CD3‏ ‏توجد واسمات ‎CD56‏ و 0016 على مجموعة متغايرة من الخلاياء مجموعة فرعية من الخلايا الليمفية المعروفة بشكل عام بخلايا ليمفية حبيبية كبيرة وخلايا قاتلة طبيعية ‎(NK)‏ ‏ليمفية. ويعبر عن مولد المضاد 0016 فعلياً على كل ‎NK WIA‏ الليمفية الساكنة ويعبر عنه ‎vo‏ بشكل ضعيف على بعض خلايا 7 *003 الليمفية من بعض الأشخاص. ويوجد مولد المضاد ‎YYAA‏
YY
‏هذا على الخلايا الحبيبية بمقدار قليل ويوجد على الخلايا الليمفية التي تحتوي على حبيبات‎ ‏عبارة عن‎ CD16 ‏المضاد‎ Al gay ‏عع:14.‎ azurophilic granules ‏سهلة الاصطباغ بالنيلي كبيرة‎ .11 ‏من النوع‎ IgG ‏ل‎ FC ‏مستقبل‎ ‏أو‎ CD57 ‏ويعبر عدد متباين من خلايا *0016 الليمفية بشكل إسهامي عن مولد المضاد‎ م مولد المضاد ‎CDS‏ منخفض الكثافة أو كليهما. وفي معظم الأشخاص؛ ليس هناك تداخل على نحو فعلي مع مولدات مضادات أخرى على ‎WIA‏ 7 الليمفية مثل مولدات المضادات ‎«CD5‏ ‎«CD4‏ أو ‎.CD3‏ ويوجد مولد المضاد ‎CD56‏ على كل خلايا ‎NK‏ *0016 الليمفية الساكنة والنشطة بشكل أساسي وهذه المجموعات الفرعية من الخلايا هي المسؤولة عن السمية الخلوية المحددة بمعقد التوافق النسيجي غير الرئيسي. ‎١‏ وأظهر تحديد النمط المناعي لعينات الدم المعالجة وغير المعالجة المأخوذة من مصابين ب ‎B-CLL‏ ومرضى آخرين مصابين بحالات أخرى زيادة في العدد النسبي للخلايا التي تعبر عن مولدات المضادات 0256© و 0016 بشكل إسهامي والتي كانت حبيبية بدرجة كثيفة ومتوسطة الحجم (انظر الجدول © والمخططات ‎١٠‏ 7؛ ‎oF‏ و 4). كما صاحب هذه الملاحظات زيادة ملحوظة في العدد النسبي للخلايا التي تعبر عن مولد المضاد 003 فقط ‎CD16 ‏و‎ CD56 ‏والخلايا التي تعبر عن الواسمات‎ (CD16 ‏(لا تعبر عن الواسمين 056© و‎ Vo ‏بشكل إسهامي.‎ Tae CD3 ‏و‎ ‏وفي الجدول 0 تمثل أرقام المريض ‎oF OY‏ و ؛ نفس عينة الدم لكن تم تحليلها بعد ساعتين؛ + ساعات و ‎YE‏ ساعة على الترتيب (قبل وبعد المعالجة) . وبينت هذه العينة أن معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 8 لمولد المضاد ‎DR‏ ‎©0016 CD3" ‏تؤدي إلى انتاج تلقائي لخلايا “0056 و *016©؛ خلايا “003 و 0056 وخاايا‎ ov. ©0016 «CD56 «DR «CD19) 8 ‏اختفاء الواسمات على خلايا‎ Lily ‏ورافق هذه الملاحظات‎ .))03 ‏وأظهر التحليل المتقدم لعينة الدم هذه قبل وبعد المعالجة انخفاض في مستويات “0056 و “0016 بمرور الوقت وزيادة في مستوى خلايا “003 بمرور الوقت. ‎YVAA‏ yy ‏أي تغيرات في عدد‎ B-CLL ‏المصاب ب‎ V ‏ولم تظهر عينات الدم من المريض‎ ‏و 003 عند مقارنتها مع التغيرات في‎ CD16 ‏الخلايا التي تعبر عن مولدات المضادات 0056؛‎ ‏النمط المناعي الملاحظة في العينات المعالجة وغير المعالجة وهذا بسبب المقدار القليل جدآ‎ ‏من الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاف بالنسبة لعدد خلايا 3 الليمفية. إلا أنه؛ أظهرت‎
م معالجة ‎die‏ الدم لهذا المريض في حادثة منفصلة بمقدار ملائم من جسم مضاد أحادي النسيلة زيادات كبيرة في العدد النسبي لخلايا ‎CD56" «CD3"‏ و ‎CD16"‏ و ‎CD56"‏ و *003 0016.
وأظهرت عينات دم من مرضى آخرين مصابين بحالات أخرى تغيرات متباينة في مستوى هذه الخلايا ومن الظاهر أن ذلك يعتمد على عدد خلايا 3 الليمفية الموجودة في الدم قبل المعالجة؛ خلال فترة المعالجة وعلى الأرجح الحالة الإكلينيكية للمرضى.
.© لوح 045 و ‎CD14‏
يوجد مولد المضاد ‎CD45‏ على كل الخلايا البيضاء البشرية؛ بما ‎Led‏ الخلايا الليمفية؛ الخلايا البيضاء أحادية النواة؛ الخلايا المشكلة ‎co oil)‏ الخلايا الإيزينوفيلية؛ والخلايا القاعدية في الدم المحيطيء الغدة التيموسية؛ الطحال؛ واللوزتين؛ وعلى الخلايا السلف للخلايا البيضاء في نخاع العظم.
‎vo‏ ويوجد 0014 على 770 إلى 797 من الخلايا البيضاء أحادية النواة الطبيعية من دم محيطي؛ على 797/7 إلى 798 من الخلايا الملتهمة في المائع البلوري أو البريتوني. ويعبر عن مولد المضاد هذا على نحو ضعيف على الخلايا الحبيبية ولا يوجد على الخلايا الليمفية غير المنبهة؛ خلايا 7 الليمفية المنشطة بمفتل ‎cmitogen-activated T lymphocytes‏ خلايا الدم الحمراء؛ أو الصفائح الدموية.
‎Y.‏ ويمثل مولد المضاد 0045 عائلة من أنزيمات فوسفاتاز تيروزين بروتيتنية ‎protein tyrosine phosphatases‏ ويتفاعل هذا الجزيء مع منبهات خارجية (مولدات مضادات) ويؤدي إلى انتقال الإشارة بواسطة أعضاء ‎Ser Ale‏ مما يؤدي إلى تنظيم النمو الخلوي والتمايز الخلوي.
‏وقد أشار ارتباط سلسلة م لمولدات المضادات ‎DR‏ في عينات الدم المعالجة خصوصاً ‎ve‏ تلك التي حصل عليها من مرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ إلى أن هذه المعالجة أثرت في مستوى ‎YYAA‏
Vi ‏الليمفية. ومن الظاهر أنه أدت التغييرات الكلية في‎ B ‏مولدات المضادات 0045 على خلايا‎ ‏إلى نشوء أنواع مختلفة من‎ DR ‏النمط المناعي التي حدثت عند تنبيه سلسلة م لمولد المضاد‎ ‏الخلايا التي يمكن فصلها على أساس مستوى التعبير عن 0045 و 0014 بالإضافة إلى الشكل‎ ‏الذي حدد عن طريق التشتيت الأمامي والجانبي (الحجم والتحبب على الترتيب) وتبين هذه‎ ‏الشكل 7 الذي يوضح مظهر‎ Lad ‏و 4). انظر‎ oY ١ ( ‏م النتائج في الجدول 1 والمخططات‎ ‏مكونة‎ WA ‏بعد المعالجة بالجسم المضاد 083/43. وهذه الخلايا ليست‎ 00450014 WA ‏للدم.‎ ‏وعند المعالجة بالجهاز وفقآ للاختراع الراهن ازداد العدد النسبي للخلايا منخفضة‎ ‏(مقارنة مع العينات غير المعالجة) على نحو ملحوظ كما ارتفع العدد النسبي للخلاديا‎ 5 ‏التي تعبر عن مولدات المضادات 0045© و 0014 بشكل إسهامي. وتزامن هذا النوع من‎ -- ٠ ‏التغيرات في النمط المناعي مع انخفاض في العدد النسبي للخلايا مرتفعة 0045 (مقارنة مع‎ ‏قد يقسم هذا التجمع الخلوي الأخير بشكل إضافي على أساس‎ cad ‏العينات غير المعالجة). إلا‎ ‏الشكل ودرجة التعبير عن 0045. وكان أحد هذه الأنواع من التغيرات كبيراً وقد عبر عن‎ ‏مقارنة مع باقي الخلايا الموجودة في المخططات‎ Tan ‏مولد المضاد 0045 بمستويات مرتفعة‎ ‏7ء © و 4). وعند تحليل هذا اللوح بعد المعالجة بمرور الوقت‎ ١١ ‏(نظر المخططات‎ ae 00745“ ‏انخفض العدد النسبي لخلايا‎ )١ ‏و ؛ والمخطط‎ © oY ‏(انظر الجدول + المريض رقم‎ ‏بشكل أولي على نحو شديد بمرور الوقت مما أدى إلى نشوء خلايا منخفضة 0045. إلا أنه؛‎ ‏ساعة حالة معاكسة.‎ YE ‏أظهر تحليل الدم بعد‎ ‏وأظهرت العينتين © و 7 تغيرات في النمط المناعي معاكسة مقارنة بتلك التي تم‎ ‏وهذا بسبب‎ B-CLL ‏الحصول عليها من عينات أخرى مأخوذة من مرضى آخرين مصابين ب‎ - © ‏مع الجسم المضاد أحادي النسيلة. وفي الواقع من‎ Tan ‏تحليل العينات بعد فترة حضن مبكرة‎ ‏الظاهر أنه أشار التحليل المتعاقب لعينات الدم بعد المعالجة إلى أن التغيرات في النمط المناعي‎ ‏مرحلة من التطور ولا تكون‎ Ji ‏التي تحدثها خلايا 3 الليمفية تعتمد على الزمن لأنها‎ ‏(وهي غير‎ Xt ‏نفس تلك المقاسة عند الزمن‎ X ‏التغيرات في النمط المناعي المقاسة عند الزمن‎ ‏غير ثابتة عند حثها). إلا أنه؛ ينبغي أن تحدث هذه الأنواع من التغيرات بكيفية شديدة بدرجة‎ vo
YYAA vo ‏أكبر في الجسم وإلا سيحدث مرض مناعي. وأظهر تأثير معالجة عينات الدم من مرضى‎ ‏تغيرات مختلفة في الأنماط المناعية للخلايا وذلك‎ B ‏آخرين غير مصابين بخبث في خلايا‎
B ‏أظهرت معالجة أجزاء غنية بخلايا‎ cad ‏الليمفية بمقادير صغيرة. غير‎ B ‏بسبب وجود خلايا‎ ‏ليمفية مأخوذة من مانحي دم أصحاء نفس التغيرات في النمط المناعي مقارنة بتلك التي حصل‎ ‎٠‏ عليها من أشخاص مصابين ب ‎B-CLL‏ لديهم عدد خلايا 3 الليمفية مرتفع. لوح 008 و ‎CD3‏ ‏تتفاعل معينة مولد المضاد ل 608 مع جزيئات ‎MHC‏ من الصنف ل مما يؤدي إلى زيادة الالتصاق بين خلايا 7 +008 الليمفية والخلايا المستهدفة. ويعزز هذا النوع من التفاعل تنشيط الخلايا الليمفية الساكنة. ويقترن ‎alge‏ المضاد 0108 مع كيناز تيروزين بروتيني ‎(pS6ick) protein tyrosine kinase Ve‏ وبالتالي قد يلعب المعقد ‎pS6ick/CD8‏ دوراً في تنشيط خلايا ‎T‏ الليمفية. وتؤدي معالجة عينات الدم في الجهاز ‎Gi‏ للاختراع الراهن المأخوذة من مرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة 8م إلى زيادة العدد النسبي للخلايا إيجابية ‎CD3CD8‏ و 003 (غالباً على الأرجح ‎(CDACD3‏ على نحو كبير مما يشير على نحو ‎ve‏ واضح بدرجة كبيرة إلى أن الخلايا مزدوجة الإيجابية التي تولدت على نحو أولي قد تطورت إلى خلايا 7 ليمفية ناضجة. وهذه عملية يمكن قياسها بشكل مباشر عن طريق ‎DR 5 CD19‏ وبشكل غير مباشر عن طريق مولدات المضادات 008:003. ومن الواضح أنه يتوافق تقييم متسلسل لعينات الدم المعالجة من نفس المريض بمرور الوقت مع عملية مطابقة لتطور الخلايا التيموسية (الجدول 7؛ المريض رقم ‎OY‏ و ؛ والمخطط ‎.)١‏ ‏02 وازداد العدد النسبي لخلايا “008 بمرور الوقت في العينات المعالجة وغير المعالجة لكن بدرجة كبيرة في العينات غير المعالجة. ومن ناحية ‎gal‏ انخفض العدد النسبي لخلايا “008*003 بمرور الوقت في العينات غير المعالجة. إلا ‎cad‏ ازداد العدد النسبي لخلايا ‎CD3"‏ ‏في عينات الدم المعالجة عند قياسها بمرور الوقت وتقابل هذه الأنواع من الخلايا على نحو كبير ‎WIA‏ “004*003 مفردة الإيجابية؛ وهي شكل أكثر نضجاً من الخلايا التيموسية. ‎ve‏ وبالإضافة إلى ذلك؛ لأنه تمت كذلك مقارنة النمط المناعي لهذه العينات مع ألواح أخرى ‎YVAA
(مذكورة أعلاه في الجداول ‎oF‏ 4؛ © و ‎)١‏ فإن التغيرات الكلية ترجع بشكل كبير إلى خلايا 8 في توليد خلايا سلف وأنسال من خلايا 7 الليمفية. وأخذت مقادير وافية منفصلة من عينات دم مأخوذة من مريض ‎lias‏ ب ‎B-CLL‏ ‏(العدد 7 ء ‎of‏ الجداول ‎٠‏ 7ء ‎oF‏ 4؛ 5 ‎(VT‏ حيث لم تعالج بشيء؛ عولجت بجسم ‎٠‏ مضاد أحادي النسيلة مقترن ب ‎PE‏ ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 8 لمولد المضاد ‎DR‏ ‏وبالشكل غير المقترن من نفس الجسم المضاد أحادي النسيلة. وعند المقارنة أشارت المعالجة بجسم ‎alias‏ مقترن ب 25 على نحو واضح إلى عدم حدوث تغيير في العدد النسبي للخلايا إيجابية ‎CD3‏ والواسمات المرتبطة ‎Jie‏ 004 التي لوحظت بمستويات كبيرة عندما عولجت نفس عينة الدم بالشكل غير المقترن من الجسم المضاد. إلا ‎call‏ لوحظت زيادة في عدد الخلايا ‎y.‏ إيجابية 0045 بدون التعبير عند مولد المضاد ‎DR‏ على سطحها عند قياسها بمرور الوقت (انظر الجدول ‎(A‏ . وهو اكتشاف مماثل لذلك الملاحظ في العينات غير المعالجة عند تحديد نمطها المناعي بمرور الوقت (الجدول 7). وفضلاً عن ذلك؛ انخفض العدد النسبي للخلايا التي تعبر عن 0045 بدرجة منخفضة بمرور الوقت؛ وهي ظاهرة لوحظت كذلك في العينات غير المعالجة (عند قياسها بمرور الوقت) من نفس المريض (انظر المخطط ١أ).‏ ‎vo‏ تحليل ‎FAC‏ للخلايا المشتقة من عينات طبقات طافية بشرية نتج عن معالجة عينات طبقات طافية في جهاز وفقآ للاختراع الراهن بالجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 زيادة وجود 0034 (واسم على الخلايا الجذعية) وانخفاض وجود 9 (واسم على خلايا ‎B‏ الليمفية)-انظر الجدول ‎YY‏ ‏وأظهرت معايرات تكوين مستعمرة أنه في العينات غير المعالجة؛ كانت المستعمرة ‎vy.‏ السائدة من النوع الشبيه بخلايا الدم الحمراء؛ بينما كان الاختلاف في نوع المستعمرات في العينات المعالجة ‎Cua Tu‏ شكلت مستعمرات الخلايا وافرة القوة النوع الرئيسي من المستعمرات؛ حيث لوحظت خلايا حبيبية/خلايا ملتهمة كبيرة وخلايا نقيية كبيرة بالإضافة إلى ملاحظة وحدات تكوين مستعمرة شبيهة بخلايا الدم الحمراء كذلك. خم
لال وتوضح هذه النتائج أن الخلايا المعالجة قادرة على التمايز عبر المسارات المكونة للدم والليمف بدرجة أكبر مما يؤدي إلى الحصول على مجموعة متنوعة من النسائل الخلوية المتخصصة. ج. مقارنة تأثير أجسام مضادة أحادية النسيلة أخرى ذات تخصصية مختلفة على تكوين م خلايا 7 الليمفية لوح 019 و 003 قللت معالجة عينات الدم في جهاز ‎Tig‏ للاختراع الراهن بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة » لمولد المضاد ‎DR‏ والمنطقة المتماثلة في مولدات مضادات ‎MHC‏ من الصنف 1 من عدد ‎WIA‏ *023© وزادت عدد خلايا *“0019. وقللت معالجة نفس عينة ‎٠١‏ الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 8م لمولد المضاد ‎DR‏ من عدد خلايا *019 وزادت عدد خلايا “023. وأظهرت المعالجة بالجسم المضاد أحادي النسيلة الأخير وبفوسفاميد حلقي ‎cyclophosphoamide‏ نفس التأثير (الجدول ‎VE‏ المريض 1/5 مصاب ب ‎B-CLL‏ بعد ساعتين من المعالجة). كما أظهر تحليل متقدم لخلايا “0019 و *003 في نفس العينات زيادات في الأعداد ‎١‏ النسبية لخلايا “003 فقط في الدم المعالج بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة م لمولد المضاد ‎DR‏ (الجدول 4٠؛‏ المريض 1/0 بعد ‎YE‏ ساعة من المعالجة). إلا أنه؛ أظهر تحليل متقدم (بعد ‎YE‏ ساعة؛ المريض 1/0 الجدول ‎(VE‏ لعينات الدم المعالجة بفوسفاميد حلقي ‎cyclophosphamide‏ بالإضافة إلى الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد ‎Bali bu‏ لمولد المضاد ‎DR‏ عكس للعدد النسبي لخلايا *“0019 و *003 مقارنة مع ذلك الملاحظ بعد ساعتين ‎Ge ©‏ الحضن في نفس الظروف بالضبط. وبشكل عام؛ أظهرت معالجة عينات الدم لنفس المريض بجسم مضاد أحادي النسيلة للمنطقة المتماثلة في سلسلة ألفا في مولد المضاد ‎DR‏ أو بالجسم المضاد أحادي النسيلة للمنطقة المتماثلة في سلسلة ألفا في مولد المضاد من الصنف ؟ زيادة في العدد النسبي لخلايا ‎CD19"‏ ‏(واسم من الحوض ‎(B‏ عند مقارنتها بالعينات غير المعالجة. وانخفض العدد النسبي لخلايا ‎SU 0019003 +»‏ في عينات الدم المعالجة بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة ألفا في ‎YYAA‏
YA
‏أو المعالجة بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد مولدات المضادات من‎ DR ‏مولد المضاد‎ 4 ‏و 4). وبمعالجة عينات الدم للمريض‎ FY ‏والمخططات‎ VE ‏الصنف 1 (انظر الجدول‎ ‏بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد مولدات المضادات من الصنف 1 ازداد العدد النسبي لخلايا‎ ‏لخلايا “0019 و :0019003. وبالرغم من ذلك؛ فقد‎ SH ‏وانخفض العدد النسبي‎ 03“ ‏أظهرت معالجة مستحضر غني بخلايا 3 الليمفاوية مأخوذ من متبرعين بالدم أصحاء بالجسم‎ ٠ ‏تغيرات في النمط‎ DR ‏المضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا أو سلسلة ألفا في مولد المضاد‎
B-CLL ‏المناعي الظاهري مماثلة لتلك التي حصل عليها من مريض مصاب ب‎ ‏بجسم مضاد أحادي‎ IgA ‏وبمعالجة مرضى مصابين بمرض *1177 ومرض نقص‎ ‏ازداد العدد النسبي لخلايا *003 وانخفض العدد‎ DR ‏النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ‏النسبي لخلايا “0019. وبالرغم من ذلك؛ فإن معالجة نفس عينة الدم بجسم مضاد أحادي‎ - ٠ ‏تنتج نفس التأثير. وقد أظهرت‎ YT ‏المضاد من الصنف‎ al ge ‏النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في‎
B ‏معالجة عينات الدم المأخوذة من المرضى (4 33/7 و 80/4) المصابين بنقص الخلايا‎ ‏تغيرات متباينة في النمط المناعي الظاهري عند معالجتها بالأجسام المضادة أحادية النسيلة‎ .CD4 ‏ومولد المضاد‎ I ‏ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد 01؛ مولدات المضادات من الصنف‎ 008 ‏لوح 004 و‎ Vo ‏تم أيضاً تحديد النمط المناعي الظاهري لعينات الدم التي تم تحليلها باستخدام اللوح‎ ‏ويتفق كلا اللوحين‎ (Yo ‏(الجدول‎ CDS ‏و‎ CD4 ‏باستخدام اللوح‎ (VE ‏و 003 (الجدول‎ 09 ‏مع بعضهما ويؤكد كل منهما الآخر. وقد أدى حضن عينات الدم الخاصة بالمرضى المصابين‎ ‏ساعتين مع‎ sad )4 ‏و‎ FF ‏المخططات‎ ٠١ ‏المريضان 1/5 و‎ VO ‏(الجدول‎ B-CLL ‏ب‎ ‏أو مع‎ DR ‏المضاد‎ alge ‏في‎ Uy ‏الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة‎ - © ‏إلى‎ cyclophosphoamide ‏هذا الجسم المضاد أحادي النسيلة بالإضافة إلى فوسفو أميد حلقي‎ ‏زيادة العدد النسبي للخلايا “0008 و *004 والخلايا التي تعبر إسهامياً عن كلا الواسمين. ومن‎ ‏أخرىء لا ينتج عن معالجة نفس العينات بالأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد المنطقة‎ dea ‏أو المنطقة المتماثلة في سلسلة ألفا في مولد‎ DR ‏المتماثلة في سلسلة ألفا في مولد المضاد‎ ‏نفس الآثار.‎ T ‏المضاد من الصنف‎ vo
YVAA va ‏وقد أظهرت مقارنة اتجاهات النمط المناعي الظاهري التي حصل عليها بعد مرور‎ ‏ساعة على الحضن مع جسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في‎ YE ‏ساعتين وبعد مرور‎ ‏تغيرات عكسية في‎ cyclophosphoamide ‏بالإضافة إلى فوسفو أميد حلقي‎ DR ‏مولد المضاد‎
B-CLL — ‏المريض 1/0 المصاب‎ «Vo ‏و 008 الإيجابية (الجدول‎ CD4 ‏العدد النسبي لخلايا‎ ‏ساعة) وكانت هذه التغيرات متوافقة مع تلك التي حصل عليها عندما تم‎ YE ‏م بعد ساعتين وبعد‎ ‏لنفس المريض). وتشير‎ VE ‏و003 (الجدول‎ CD19 ‏تحليل نفس عينات الدم باستخدام اللوح‎ ‏النتائج الأخيرة إلى أن التمايز التالي يكون عكوسآً لأن الخلايا غير المتمايزة يمكن أن‎ ‏الليمفاوية أو خلايا 3 الليمفاوية.‎ 7 WA ‏تتمايز إلى‎
CD34 DR ‏لوح‎ ‏أكدت التغيرات في النمط الظاهري المناعي التي حصل عليها باستخدام لوح‎ vs ‏ولوح‎ CD35 CD19 ‏النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام لوح‎ (VI ‏(الجدول‎ CD35 CD pl ‏و 4) التي تلت معالجة نفس عينات‎ * oY ‏والمخططات‎ ١5و‎ VE ‏(الجدولان‎ CD85 CD4
DR ‏المضاد‎ alge ‏أو ألفا في‎ ty ‏بالأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة‎ al ‏أو بالجسم المضاد‎ I ‏أو بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد مولدات المضادات بالصنف‎ ‏بالإضافة إلى فوسفو أميد حلقي‎ DR ‏النسيلة ضد سلسلة بيتقا في مولد المضاد‎ \o ‏بعد ساعتين من التحليل.‎ cyclophosphoamide ‏ومن هذه النتائج؛ يتضح أن الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في‎ ‏يكون 108 بشكل كبير على تحفيز إنتاج خلايا 003 الإيجابية‎ DR ‏سلسلة بيتا في مولد المضاد‎
DR" LA ‏من‎ ‏وعلاوة على ذلك؛ قفد أدت معالجات كتلك التي تتضمن ارتباط سلسلة ألفا لمولدات‎ 2 cyclophosphoamide ‏أو ارتباط الجانب بيتا للجزيء مع فوسفو أميد حلقي‎ DR ‏المضادات‎ ‎DR” ‏أو خلايا‎ CD19" ‏(فترة حضن مطولة) إلى تحفيز زيادة العدد النسبي لخلايا‎
CD3 ‏و‎ CD16 ‏لوح 0056 و‎ ‏للاختراع الراهن؛ وخاصة تلك العينات‎ Gy ‏أدت معالجة عينات الدم في جهاز‎ ‏والذين لديهم أعداد مرتفعة من خلايا 3 الليمفاوية‎ B-CLL ‏الخاصة بالمرضى المصابين ب‎ vo ‏غخ/اا‎
بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎DR‏ إلى زيادة العدد النسبي لخلايا 6056© و 0016 الإيجابية. وفي هؤلاء المرضى ازداد العدد النسبي لخلايا ‎CD3*‏ و “0056 و ‎CD16°CD3*‏ أيضاً بعد معالجة عينات الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتاء مما يؤكد المشاهدات م المبكرة الملحوظة باستخدام نفس المعالجة عند تحليل نفس عينات الدم باستخدام ألواح دده ر واه و ٠0و ‎.CD3‏ ‏لوح ‎CD45‏ و ‎CD14‏ ‏تم أيضاً تحليل عينات الدم المعالجة في جهاز ‎Gy‏ للاختراع الراهن بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد سلاسل بيتا أو ألفا في مولد المضاد ‎DR‏ أو سلسلة ‎Gy‏ بالإضافة إلى فوسفو ‎٠١‏ أميد حلقي ‎cyclophosphoamide‏ أو مولدات المضادات من الصنف 1 باستخدام اللوح ‎CD45‏ و 4 (الجدول ‎(YA‏ وتم تحديد ‎LDA‏ 0045 المنخفضة؛ خلايا ‎CD45‏ المرتفعة وخلايا ‎CD45‏ ‏المتوسطة بشكل عشوائي . وأدت معالجة ‎due‏ دم للمريض 0[ (بعد ساعتين) بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎DR‏ أو بهذا الجسم المضاد أحادي النسيلة بالإضافة إلى فوسفو أميد حلقي ‎cyclophosphoamide‏ إلى إنتاج خلايا *0045 منخفضة وزيادة ‎١‏ . العدد النسبي لخلايا *0045 المتوسطة. وبالرغم من ذلك؛ فإن المعالجة السابقة أدت إلى زيادة العدد النسبي لخلايا “0045 المرتفعة. وأدت المعالجة الأخيرة إلى انخفاض العدد النسبي لخلايا “0045 المتوسطة واتضح أن هذه التغيرات تعتمد على الوقت. وأظهرت عينات الدم للمريضين 51/0 ‎٠١‏ (المصابين ب ‎(B-CLL‏ بعد المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد مولدات المضادات من الصنف ‎T‏ انخفاضاً في العدد النسبي + الخلايا ‎CD45‏ المتوسطة ولوحظت مشاهدات مماثلة في عينات الدم للمريض ؟ والمريض المصاب بي *1117 بعد نفس المعالجة عند مقارئنتها مع العينات غير المعالجة. وبمعالجة عينات الدم لمرضى مصابين — *1177 و ‎BAD‏ بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد مولد المضاد من الصنف 1 زاد العدد النسبي لخلايا *0045 المنخفضة مقارنة بالعينات غير المعالجة أو العينات المعالجة بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في ‎alge‏ المضاد ‎DR‏ وبالرغم من ‎vo‏ ذلك؛ فقد أظهرت عينات الدم لهؤلاء المرضى انخفاضاً في العدد النسبي لخلايا ‎CD45"‏ ‎YVAA‏
A
‏المتوسطة عند معالجتها بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المناطق المتماثلة في سلسلة بيتا في‎ — ‏المتوسطة في عينات الدم لمريض مصاب‎ 0045* LDA ‏وقد ازدادت‎ LDR ‏مولد المضاد‎ ‏بعد المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة لمولد المضاد من الصنف 1. وتم ملاحظطة‎ [gA/D
CD45 ‏الخلايا التي كانت كبيرة للغاية ومحببة بشدة وتعبر عن المستويات الكثيفة لمولد المضاد‎ ‏في عينات الدم المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة بيتا في‎ ٠ ‏7؛ و‎ ١١ ‏(انظر المخططات‎ IT ‏من الصنف‎ MHC ‏أو مولدات المضادات‎ DR ‏المضاد‎ al ge (¢
CD28 ‏و‎ CD8 ‏لوح‎ ‏الليمفاوية‎ 7 (CD3Y) ‏يتواجد مولد المضاد 0028 على حوالي 7780 إلى 7860 من خلايا‎ 23 ‏من خلايا‎ dal ‏.من دم محيطي؛ 0 من خلايا 7 *008 الليمفاوية و75 في‎ ٠ ‏وأثناء نضوج الخلية التيموسية يزداد‎ immature ©03- thymocytes ‏التيموسية غير الناضجة‎ ‏التعبير عن مولد المضاد 0028 من الكثافة المنخفضة لغالبية خلايا “004*008 التيموسية غير‎ ‏أو *003 التيموسية الناضجة فعلياً.‎ CDA" ‏أو‎ CDS" ‏الناضجة إلى الكثافة المرتفعة لكل خلايا‎ ‏أيضاً‎ CD28 ‏ويزيد التنشيط الخلوي أيضاً من كثافة مولد المضاد 0028. ويقسم التعبير عن‎ ‏خلايا “008 الليمفاوية إلى مجموعتين وظيفتين. وتحفز خلايا *00870028 الليمفاوية السمية‎ yo ‏الخلوية المتخصصة بمولد المضاد المغاير والتي تكون مقيدة بمركب التوافق النسيجي الرئيسي‎ ‏من الصنف ]. ويتم تحفيز تثبيط تكاتر‎ major histocompatibility complex (MHC) ‏المعقد‎ ‏عبارة عن جزيء‎ CD28 ‏الفرعية. ويكون مولد المضاد‎ CDS'CD28* ‏الخلايا بواسطة مجموعة‎
B ‏التصاق خلوي ويعمل كربيطة لمولد المضاد 37/33-1 الذي يتواجد على خلايا‎ ‏الليمفاوية المنشطة.‎ vy. ‏في جهاز وفقاً للاختراع‎ B-CLL ‏وبمعالجة عينات الدم الخاصة بمرضى مصابين بي‎ ‏بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماتلة‎ (As 1/0 ‏الراهن (الجدول ؛ المريضان‎ 001080028“ ‏و‎ CD28" ‏و‎ CD8" ‏ازداد العدد النسبي لخلايا‎ DR ‏في سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ‏في حين لم تؤدي كل الأنواع الأخرى للمعالجات إلى نفس الزيادة.‎
YYAA
AY
CD2 ‏و‎ CD34 ‏لوح‎ ‏على خلايا سلف مكونة للدم غير ناضجة وكل الخلايا‎ CD34 ‏يتواجد مولد المضاد‎ ‏المكونة لمستعمرات مكونة للدم في نخاع العظم؛ بما فيها الخلايا السلف أحادية‎ ‏والخلايا السلف وافرة القوة‎ (BFU-E «CFU-GM) unipotent progenitors ‏القوة‎ ‎CD34 ‏ويتم التعبير عن‎ .(CFU- ‏وأرومة‎ CFU-Mix «CFU-GEMM) pluripotent progenitors ° ‏أيضا على أسلاف الخلايا اللحمية. وتكون أسلاف الترانسفيراز نيوكليوتيديل منقوص‎ 1 ‏الشبيهة بالخلايا 3و‎ terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)* ‏الأكسجين الطرفي‎ ‏على الخلايا‎ CD34 ‏الليمفاوية في العظم الطبيعي عبارة عن *0034. ويتواجد مولد المضاد‎ ‏التي تعبر عن مولد المضاد 0033 ولكنها تفتقر‎ early myeloid cells ‏الشبيهة بالنخاع البدائية‎ ‏وعلى الخلايا البدائية الشبيهة بالخلايا الحمراء‎ CDIS ‏و‎ CD14 ‏إلى مولدات المضادات‎ Ve .0045 ‏راتوء التي تعبر عن مولد المضاد 0071 وتعبر بالكاد عن مولد المضاد‎ erythroid cells ‏ويتواجد مولد المضاد 0034 أيضاً على خلايا البطانة الداخلية للشعيرات‎ ‏تقريباً من الخلايا التيموسية البشرية. ولم تعبر الخلايا‎ #١ ‏وعلى‎ capillary endothelial cells ‏الليمفاوية؛ الخلايا أحادية النواة؛ الخلايا الحبيبية والصفائح الدموية من الدم المحيطي الطبيعي‎ ‏مرتفعة بدرجة كبيرة على الخلايا‎ CD34 ‏عن مولد المضاد 034. وتكون كثافة مولد المضاد‎
Taya ge ‏السلف البدائية المكونة للدم وتنخفض كلما نضجت الخلايا. ولا يكون مولد المضاد‎ ‏على الخلايا المكونة للدم المتمايزة بالكامل.‎ ‏وتفتقر إلى مولدات‎ DR CD38 ‏وتكون خلايا “0034 السلف غير المتحولة عبارة عن‎ ‏و 0010 و 005 في حين تعبر خلايا‎ CD33 ‏و‎ CD71 ‏مضادات متخصصة بالسلالة؛ مثل‎ ‏بكثافة مرتفعة.‎ CD38 ‏التي تكون متحولة السلالة عن مولد المضاد‎ CD34* Y. ‏وتعبر غالبية خلايا *0034 بشكل تبادلي إما عن مولد المضاد 004580 أو عن مولد‎ ‏الليمفاوية مصابة بلوكيميا‎ B ‏من خلايا شبيهة بخلايا‎ Tus 710 ‏المضاد 004588. ويعبر‎ ‏حادة وخلايا شبيهة بالتخاع مصابة بلوكيميا حادة عن مولد المضاد 0034. ولا يتم التعبير عن‎ ‏مولد المضاد هذا على الخلايا المصابة بلوكيميا مزمنة الشبيهة بالخلايا الليمفاوية‎
YYAA
AY
‏الليمفاوية‎ T ‏على خلايا‎ CD2 ‏(سلالة 8 أو 2) أو الأورام الليمفاوية. ويتواجد مولد المضاد‎ -natural killer lymphocytes (NK) ‏ومجموعة فرعية من الخلايا الليمفاوية القاتلة الطبيعية‎ .4 ‏وقد تم توضيح النتائج في المخططات 7 و‎ fo ‏المريض‎ (Yr ‏(الجدول‎ BOLL ‏وأظهر تحليل عينات الدم في مريض مصاب ب‎
DR ‏بعد ساعتين) بعد المعالجة بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ٠ ‏و‎ CD34" ‏أو سلسلة ألفا في نفس مولد المضاد زيادات ملحوظة في العدد النسبي لخلايا‎ ‏بعد المعالجة بالجسم المضاد السابق. ونظر؟ لأنه تم تحديد النمط الظطاهري‎ 0034*002“ (V8 ‏إلى‎ VE ‏المناعي لنفس عينات الدم باستخدام الألواح المذكورة سابقآ (انظر الجداول من‎ ‏و “00347002 الملاحظة‎ CD34" ‏للواسمات الأخرى؛ اتضح أن الزيادة في العدد النسبي لخلايا‎ single positive (SP) cells ‏هنا متوافقة مع الزيادات في الأعداد النسبية للخلايا وحيدة الإيجابية‎ Ve ‏وعلاوة على ذلك؛ فإن هذه النتائج التي يبدو‎ .CD4'CD3* ‏و “008*003 و‎ CD4'CDS* ‏من‎ ‏تؤيد بشكل غير مباشر أن‎ HLA-DR ‏أنها مقتصرة على ارتباط سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ‏العملية تؤدي لتكوين خلايا 7 الليمفاوية من خلال تراجع خلايا 3 الليمفاوية.‎ ‏مما سبب‎ 0034* LDA ‏ساعة انخفضت مستويات‎ YE ‏بعد‎ dalled) ‏تحليل نفس‎ die ‏التمايز الارتجاعي التي‎ Adee ‏زيادة أخرى في العدد النسبي لخلايا 7 الليمفاوية. ويمكن عكس‎ ١ ‏إلى تكوين خلايا 7 الليمفاوية بهدف تكوين خلايا 5 الليمفاوية. وتم ملاحظة‎ Loe ‏تؤدي‎ ‏الظاهرة السابقة بعد ساعتين من الحضن مع جسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في‎ ‏في حين تم‎ «cylophosphoamide ‏بالإضافة إلى فوسفو أميد حلقي‎ HLA-DR ‏مولد المضاد‎ ‏ساعة من الحضن باستخدام نفس المعالجة في نفس العينة‎ YE ‏ملاحظة الطريقة الأخيرة بعد‎ (Y ‏(المخطط‎ 7 ‏مريض مصاب ب‎ Yo ‏وأدت معالجة عينات دم مريض مصاب ب *1117 (الجدول‎ ‏إلى ازدياد العدد‎ HLA-DR ‏المضاد‎ a ge ‏بجسم مضاد أحادي التسيلة ضد سلسلة بيتا في‎ )1117“* ‏و “0027034 بشكل ملحوظ وأجريت كذلك معالجة نفس عينة الدم‎ CD34" ‏النسبي لخلايا‎ ‏وبجسم مضاد أحادي‎ HLA-DR ‏بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ‏النسيلة ضد سلسلة ألفا في نفس مولد المضاد عند إضافتهم سوياً. وبالرغم من ذلك؛ لم تؤثر‎ vo
YYAA
عم معالجة عينة الدم هذه بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة ألفا في مولد المضاد ‎HLA-DR‏ ‏على مستوى ‎LDA‏ *0034. وبمعالجة عينات الدم التي حصل عليها من طفل عمره ‎١‏ أيام ‎BB/ST)‏ الجدول ‎)٠١‏ تم فحصه عند هذا الوقت بالنسبة لوجود اللوكيميا وكان دمه يحتوي على عدد كبير ‎Tan‏ من الخلايا غير السوية (الأرومات ‎(blasts‏ باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة م ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎(HLA-DR‏ أو جسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة ألفا في نفس مولد المضاد أو كلا الجسمين المضادين أحاديي النسيلة المضافين سوياً تم الحصول على التغيرات المناعية الظاهرية التالية. وعند تحليل عينات الدم غير المعالجة ازداد العدد النسبي لخلايا ‎CD34"‏ و 08 بشكل ملحوظ وعند المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا ازداد العدد النسبي لخلايا - *0034 مرة أخرى ولكن لوحظ انخفاض في العدد النسبي عند المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة ألفا في مولد المضاد ‎HLA-DR‏ وعند المعالجة بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد سلسلتي » و 8 في الجزيء عند إضافتها سوياً. وبالرغم من ذلك؛ فإن المعالجة الأخيرة زادت العدد النسبي لخلايا “0034*002 وحدث العكس عند معالجة نفس عينة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في ‎al ga‏ المضاد ‎HLA-DR‏ بمفرده. وعند تحليل عينات الدم ‎Vo‏ المعالجة وغير المعالجة لنفس المريض بعد ‎YE‏ ساعة انخفض العدد النسبي لخلايا ‎CD34"‏ مع كل العلاجات سابقة الذكر إلا أنه حوفظ عليه عند مستوى أكبر بكثير مقارنة بالمعالجة بجبسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎JHLADR‏ واستمرت المعالجة الأخيرة في خفض العدد النسبي لخلايا “0034*002 بعد ؛؟ ‎١‏ ساعة. وتوضح هذه النتائج أن ارتباط مولد المضاد ‎HLA-DR‏ من خلال سلسلة بيتا يحفز © إنتاج خلايا *0034 أكثر من تجمع خلايا “002*034 أو من أنواع ناضجة أكثر من الخلايا مثل خلايا ‎B‏ الليمفاوية لمرضى مصابين ب ‎B-CLL‏ وتشير هذه النتائج إلى أن هذا النوع من المعالجة يحفز التمايز الارتجاعي. وبالرغم من ذلك»؛ فإن تحديد النمط المناعي الظطاهري لعينات الدم بعد ‎YE‏ ساعة يشير إلى أن هذه الأنواع من الخلايا تتواجد ‎Lila‏ في سلالة أخرى وفي هذه الحالة تتواجد الخلايا أو تتحول بدلا من ذلك إلى ‎ADL‏ الشبيهة بالنخاع الملاحظطة ‎Yo‏ عند تحليل عينة الدم المعالجة بلوح 607 و 0013 و ‎«CD33‏ ‎YVAA‏
Ao ‏والأجزاء‎ B-CLL ‏في‎ B ‏ويغير الشكل الخصائص المناعية الظاهرية للخلايا الليمفاوية‎ ‏عند المعالجة بالأجسام المضادة أحادية‎ (CD19 ‏للأشخاص الأصحاء (باستخدام حبيبات‎ dual
A ‏من الصنف‎ MHC ‏في مولدات المضادات‎ Uy ‏النسيلة ضد المناطق المتماثلة في سلسلة‎ ‏والتي كانت مصحوبة بتغير في شكل خلايا 3 الليمفاوية. ولوحظ أن الخلايا 3 الليمفاوية‎ ‏م تتتكاثر على الشرائح الزجاجية في لطاخات الدم غير المعالجة واستبدلت بالخلايا الحبيبية؛‎ ‏أعداد كبيرة من خلايا المراقبة الأولية وخلايا الدم الحمراء المنواة. ولم‎ al gall ‏الخلايا أحادية‎ ‏يلاحظ أي أشكال فتيلية أو موت خلية مميز في لطاخات الدم المعالجة وغير المعالجة.‎ ‏كذلك أنه طبقاً لطريقة الاختراع‎ Lala ‏استنتاجاً‎ Lad Yo ‏وتوضح النتائج في الجدول‎ ‏الراهن يكون بالإمكان تحضير خلية غير متمايزة عن طريق التمايز الارتجاعي لخلية غير‎ ‏متمايزة أكثر نضوجاً.‎ -. ٠ ‏د. الصور المجهرية‎ ‏بالإضافة إلى اختبار مولد المضاد المذكور سابقاً؛ تم إتباع طريقة الاختراع الراهن‎ ‏بشكل مرئي باستخدام مجهر. ويمكن برمجة جهاز الاختراع الراهن لتتبع التغيرات أوتوماتيكياً‎ ‏باستخدام وسيلة تتبع.‎ ‏المتمايزة قبل إجراء‎ B ‏صورة مجهرية لخلايا‎ A ‏هذا الخصوص؛ يمثل الشكل‎ ig ve ‏طريقة الاختراع الراهن. ويمثل الشكل 9 صورة مجهرية للخلايا غير المتمايزة المتكونة عن‎ ‏كان العامل عبارة عن جسم‎ Cum ‏للاختراع الراهن‎ Gla B ‏طريق التمايز الارتجاعي للخلايا‎ ‏وتكون‎ HLA-DR ‏المضاد‎ alge ‏مضاد أحادي النسيلة ضد المناطق المتماثلة في سلسلة بيتا في‎ ‏صورة‎ ٠١ ‏الخلايا غير المتمايزة عبارة عن تكتلات خلوية مصبوغة بلون قاتم. ويمثل الشكل‎ ‏غير المتمايزة ولكن بتكبير أقل.‎ WAY ‏مجهرية لنفس‎ > © ‏بشكل مرئي التمايز الارتجاعي لخلايا 8 إلى‎ ٠١ ‏وبالتالي توضح الأشكال من 8 إلى‎ ‏جذعية غير متمايزة باستخدام طريقة الاختراع الراهن.‎ WDA ‏المتمايزة قبل إجراء طريقة الاختراع‎ B ‏صورة مجهرية لخلايا‎ ١١ ‏ويمثل الشكل‎ ‏صورة مجهرية للخلايا غير المتمايزة المتكونة بواسطة التمايز‎ VY ‏الراهن. ويمثل الشكل‎ ‏للاختراع الراهن حيث يكون العامل المستخدم عبارة عن جسم‎ Gag 8 ‏الارتجاعي للخلايا‎ vo
YYAA
تم مضاد أحادي النسيلة ضد المناطق المتماثلة في سلسلة بيتا في ‎alge‏ المضاد ‎HLA-DR‏ ومرة ‎og al‏ تكون الخلايا غير المتمايزة عبارة عن تكتلات خلوية مصبوغة بلون قاتم. والشكل ‎١١‏ ‏يمثل صورة مجهرية لتكوين الخلايا الحبيبية المتمايزة من نفس الخلايا غير المتمايزة المبينة في الشكل ‎AY‏ ‏0 وبالتالي توضح الأشكال من ‎١١‏ إلى ‎١“‏ بشكل مرئي التمايز الارتجاعي لخلايا 83 إلى ‎DA‏ جذعية غير متمايزة باستخدام طريقة الاختراع الراهن متبوعاً بتحول الخلايا غير المتمايزة إلى خلايا متمايزة جديدة من سلالة مختلفة عن الخلايا المتمايزة الأصلية. وقد تم إجراء هذه التجارب المجهرية باستخدام دم مأخوذ من مرضى مصابين ب 501 تمت معالجته بالجسم المضاد أحادي النسيلة 083/43 كما وصف سابقاً. وكما ذكر © أعلاه؛ فإن الدم المأخود من خلايا ‎BOLL‏ يكون أداة مفيدة في دراسة طريقة التمايز الارتجاعي ‎Tl‏ لأن الدم يحتوي على أعداد أكثر من الطبيعي من خلايا 3 الليمفاوية. وتم توضيح النتائج بالتفصيل في الأشكال من ؛١‏ إلى ‎AY‏ ‏ويوضح الشكل ‎VE‏ بتكبيرين مختلفين عينة دم غير معالجة مأخوذة من مريض مصاب ب ‎(BOLL‏ وتظهر خلايا ‎B‏ الليمفاوية غير المعالجة (الخلايا الزرقاء) شكلاً نموذجياً ‎wl ٠‏ بنية كروماتين مكثفة وسيتوبلازم ضئيل. وتكون الخلايا المتبقية عبارة عن كرية حمراء (خلايا الدم الحمراء). وتؤدي معالجة عينات الدم بالجسم المضاد 083/43 مبدئياً إلى تكتل خلايا ‎B‏ الليمفاوية على شكل تكتلات (الشكل ‎i \o‏ وتفقد خلايا 5 المتكتلة تدريجياً شكلها النموذجي؛ والذي يتميز بتكون مناطق خلوية »+ > مشابهة للأحجار المكوّرة؛ إزالة تكاثف بنية الكروماتين؛ ظهور النويات الدائمة؛ تضخم حجم الخلية والمناطق القاعدية السيتوبلازمية الموجودة فعلياً في الخلايا غير المتمايزة (الشكل ‎.)1١‏ ‏وتكون بنية الكروماتين المرتخية (مزالة التكاثف) سمة هامة للخلايا غير المتمايزة مقارنة بالخلايا المتمايزة. ويرجع ذلك إلى الحاجة لمساحة أكثر اتساعاآً لوحدات النسخ لتحديد التغيرات في التعبير الجيني المطلوب للتحول عبر سلالة خلوية محددة. وبالمقابل؛ فمن ‎YYAA‏
AV
‏أن الخلايا الأكثر تمايزآ تحتوي على بنية كروماتين أكثر تكائفا نظرآً لأن كمية‎ Tam ‏المعروف‎ ‏صغيرة فقط من الكروماتين تحتاج لأن تكون نشطة للنسخ.‎
NY ‏بمظهر الخلايا (الأشكال من‎ Lass ‏ويكون مظهر الخلايا غير المتمايزة مصحوباً‎ ‏عن طريق‎ lis ‏التي لها شكل متمايز. ومن المهم أن لا تكون هذه الخلايا قا‎ (VY ‏إلى‎ ‏لحدوث انقسام واحد أو أكثر من‎ fan ‏فترة الحضن كانت قصيرة‎ (i) ‏التكاثر حيث أن‎ ٠ ‏بقي العدد المطلق للخلايا‎ (iii) 5 ‏لم يلاحظ وجود أشكال فتيلية؛‎ (ii) ‏الانقسامات الخلوية الكاملة؛‎ od ‏البيضاء كما هو قبل وبعد المعالجة. وعلاوة على ذلك لوحظت خلايا سلف أقل‎ ‏مما‎ og) ‏بالارتباط مع أنسالها الأكثر تمايزآً (انظر إلى السلف الشبيه بالنخاع في الشكل‎ ‏يشير إلى أن هذه الخلايا المتخصصة تظهر عن طريق التمايز.‎ ‏إلى ١١ي أنواع الخلايا المتمايزة المشاهدة‎ IVY ‏وتوضح الصور الدقيقة في الأشكال‎ ve ‏وهي: الصفائح‎ CR3/43 ‏الليمفاوية بالأجسام المضادة أحادية النسيلة‎ B-CLL ‏بعد معالجة خلايا‎
WAY «VY ‏116طمم:ن»1<71-الشكل‎ (Ne) ‏المتعادلة‎ WAY 1٠١ ‏6ا21861-الشكل‎ (Pl) ‏الدموية‎ ‎Megakaryocytes ‏119م205100-الشكل ١1١ج؛ الخلايا النقيية الكبيرة‎ (Eso) ‏الأيزينوفيلية‎ ‏وانطدوديو3-الشكل 7١١زء؛ الخلايا الليمفاورية‎ (Ba) ‏القاعدية‎ LAY د١١‎ Jisli—(Meg)
LV ‏:ع1ع14000-الشكل‎ (Mo) ‏معارءمطمس1-الشكل ١١ح الخلايا أحادية النواة‎ (Ly) ‏مد‎ ‏الشكل ل١اي. وتم أيضاً ملاحظة‎ 1/1711 progenitors (Mp) ‏والخلايا السلف الشبيهة بالنخاع‎ ‏الخلايا السلف الشبيهة بالخلايا الحمراء والخلايا الملتهمة الكبيرة (البيانات غير موضحة).‎ ‏وبالتالي توضح نتائج الفحص المجهري بشكل مجمل التغيرات في شكل الخلية 35 في‎ 3 LOA ‏الذين لديهم مستويات مرتفعة من‎ BOLL ‏العينات المأخوذة من المرضى المصابين ب‎ ‏الليمفاوية؛ التي‎ B LOA ‏الليمفاوية الناضجة. وتوضح الصور المجهرية التغيرات في شكل‎ - © ‏ويلي ذلك ظهور مختلف الخلايا بمدى متدرج من الأشكال من الخلايا السلف إلى‎ hae ‏تتكتل‎ ‏الخلايا المتمايزة (الخلايا المتعادلة؛ الخلايا القاعدية؛ الخلايا الأيزينوفيلية؛ الخلايا النقيية‎ ‏الكبيرة؛ الصفائح الدموية؛ الخلايا الليمفاوية؛ الخلايا الملتهمة الكبيرة والخلايا الحبيبية والخلايا‎ ‏الحبيبية المقحمة والخلايا المشابهة للخلايا اللحمية).‎
YVAA
AA
‏وبشكل هام جدآء لوحظ وجود الخلايا السلف الشبيهة بالخلايا‎ cll) ‏وبالإضافة‎ ‏الحمراء والخلايا السلف الشبيهة بالنخاع (الشكل ١١ي والبيانات غير موضحة). وتكون‎ ‏الخلايا السلف الشبيهة بالنخاع قابلة للتمييز بوضوح شكلياً عن الخلايا الأخرى في كونها أكبر‎ ‏ولها شكل نووي مميز بالإضافة إلى احتوائها على حبيبات سيتوبلامية.‎ ° وبالتالي تدعم البيانات المجهرية عن طريق الشكل ما أوضحته بيانات مقياس التدفق الخلوي فيما يتعلق بالواسمات الموجودة على سطح الخلية. وتسمح هذه البيانات باستنتاج أن معالجة ‎BADIA‏ الليمفاوية بجسم مضاد لسلسلة م في ‎MHC HLA-DR‏ تؤدي إلى انخفاض أعداد خلايا ‎B‏ الليمفاوية وزيادة عدد الخلايا من السلالات المكونة للدم الأخرى بما فيها الخلايا السلف غير الناضجة.
MHC ‏المعالجة بجسم مضاد لسلسلة ألفا في‎ T ‏وتم كذلك تتبع التمايز الارتجاعي لخلايا‎ ١ ‏جذعية غير متمايزة وفقاً‎ WA ‏إلى‎ (TAL.IBS ‏(الجسم المضاد أحادي النسيلة‎ I ‏من الصنف‎ ‏لطريقة الاختراع الراهن ثم تحول الخلايا غير المتمايزة إلى خلايا متمايزة جديدة من سلاالة‎ ‏مختلفة عن الخلايا المتمايزة الأصلية باستخدام الفحص المجهري (البيانات غير موضحة).‎ ‏في الخلايا الليمفاوية المتمايزة ارتجاعياً‎ VDT ‏تحليل عمليات إعادة ترتيب تأشب‎ — على سبيل الخلفية؛ تحتوي الخلايا المتمايزة المستخدمة في هذه التجارب (خلايا ‎B‏ ‏الليمفاوية أو الخلايا التي لها خصائص معينة لخلايا 7 الليمفاوية) على جينات خضعت بالفعل لإعادة ترتيب من أجل تشفير ‎Tp‏ ناضج أو ‎TCR‏ على التوالي. وفي عملية إعادة الترتيب؛ يتم فصل الأجزاء المتوسطة في ‎DNA‏ التي لا تمثل ‎Te Ja‏ من ال ‎DNA‏ النهائي الذي يعبر عن جين ‎TCR‏ أو ع1؛ وبشكل أساسي ال ‎DNA‏ الذي يقع ما بين الجزء الذي يحمل شيفرة المنطقة المتباينة (7) والجزء الذي يحمل شيفرة المنطقة الثابتة (©) لهذه المستقبلات عن المجين (مجموعة العوامل الوراثية) ‎genome‏ ويتم الإبقاء على هذه الأجزاء المفصولة في الخلية على هيئة ‎DNA‏ خارج الكروموسوم. وبالنسبة للخلايا لكي تتمايز ارتجاعياً بشكل حقيقي؛ يجب إعادة إدخال ال ‎DNA‏ المفصول إلى داخل المجين؛ ووضع الخلايا في حالة مماثلة لتلك التي تسبق تمايزهم الأصلي. ونتيجة لذلك؛ فمن المتوقع أن يتهجن مسبار متمم للسياق في الجين ‎vo‏ معاد الترتيب إلى جزء ‎DNA‏ قصري أكبر عندما يتم ارجاع ال ‎DNA‏ إلى حالته غير معادة ‏خلا
Ad ‏معاد الترتيب الذي يميز الحالة‎ DNA ‏الترتيب أو حالة الخط الجرثومي مقارنة مع ال‎ ‏المتمايزة.‎ ‎Daudi ‏في خلايا‎ TCR ‏إعادة ترتيب جينات‎ .٠ ‏تم استخدام‎ VA ‏في التجربة التي تؤدي إلى تشكل بقعة سذرن الموضحة في الشكل‎ ‏واحد معاد‎ TCR ‏وهو ورم ليمفي في خلايا 3 به جين‎ Daudi ‏م خط خلوي معروف جيدآً هو‎ ‏وهضمه‎ Daudi ‏المجيني من خلايا‎ DNA ‏الترتيب (والآخرين محذوفين). وتم تحضير ال‎
B ‏لسلسلة‎ DNA ‏وتعريضه لرحلان كهربائي هلامي وجسه بمسبار موسوم من‎ EcoRI ‏بواسطة‎ ‏الليمفاوية المنقاة والمأخوذة من مرضى‎ B WDA ‏بدلا من‎ Daudi ‏وتم استخدام خلايا‎ TCR ‏في‎ ‏بشريين نتيجة لكون هذه الخلايا متصلة نسيلياً ولأنها تكون تجمعاً خلوياً متجانساً باستخدام نفس‎
DNA ‏عمليات إعادة ترتيب الجينات التي يمكن رؤيتها بوضوح باستخدام تبقع سذرن لل‎ ‏المجيني المهضوم. وفي عينة دم طبيعي؛ يكون للخلايا المختلفة عمليات إعادة ترتيب مختلفة‎ ‏وبالتالي تظهر بقعة سذرن على هيئة لطاخة.‎ ‏في الخلايا الليمفاوية‎ TOR ‏ويتم تركيب جين وظيفي يحمل شيفرة سلسلة بيتا ل‎ ‏باستخدام سلسلة من عمليات إعادة الترتيب البدنية التي تحدث أثناء نضوج الخلايا الليمفاوية‎ ‏الترتيب هذه‎ Bale] ‏والجزء 1 سوياً. ووصف تفسير واضح لعمليات‎ D ‏الجزء‎ ov ‏لجمع الجزء‎ ١
US ‏وهو‎ Genes VI, Lewin, Oxford University Press, 1997 (pages 1994-1023) ‏في كتاب‎ ‏مرجعي قياسي لطلاب الجامعة. وذكرت الصفحات المحددة أدناه.‎ ‏المتعددة‎ J ‏ربط الجزء © عن طريق عملية تأشب لجزء واحد من الأجزاء‎ Vl ‏ويتم‎ ‎DJ ‏مع جزء‎ (Vr >) ‏العديدة الممكنة‎ V ‏في تفاعل ربط [-0. ثم يتم ربط جزء واحد من أجزاء‎ ‏ل 208. ويتواجد جين المنطقة‎ B ‏لتكوين جين كامل يحمل شيفرة سلسلة‎ (V-D ‏الناتج (ربط‎ vy, ‏متشابكة يتم‎ To) Sal ‏معاد الترتيب؛ على الرغم من أنه قد تتواجد‎ VDT ‏الثابتة مباشرة بعد جزء‎ ‏بالقرب من‎ constant gene exon ‏للحصول على إكسون الجين الثابت‎ RNA ‏فصلها أثناء معالجة‎ -(Lewin, p998 ‏معاد الترتيب (انظر المرجع‎ VDT ‏جزء جين‎ ‏وفي الخلايا البشرية؛ يتواجد جزءان مختلفان لجين المنطقة الثابتة في سلسلة 8 ل‎ ‏و 082 المتواجدان في موقعين مختلفين وكل منهما مسبوق بتجمع من ستة أو‎ CBI ‏هما‎ TCR vo
YYAA q. ‏(انظر‎ (DB2 ‏و‎ DBI) ‏وهما (181 و 182) وجزء © واحد‎ (IB) ‏سبعة أجزاء جينية لمنطقة الربط‎ «Toyonaga et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 8624-8628 ‏الشكل ١ء والمرجعين‎ . (Lewin, pl017 ‏و‎ ‏ويتم تحفيز عمليات التأشب التي تؤدي إلى تقريب الأجزاء 7؛ 0 و10 باستخدام‎ ‏الذين يتعرفان على سياقي التنونامير‎ RAG2 ‏م العديد من البروتينات؛ بما في ذلك 8806-1 و‎ ‏(وحدة سباعية) الموجودين عند أطراف التأشب‎ heptamer ‏والهبتامير‎ nonamer ‏(وحدة تساعية)‎ ‏للسياقات الجينية 7 0 و©-1. واعتماد على اتجاه سياقات النونامير/الهبتامير هذه؛ يؤدي‎ ‏التأشب إما إلى الانعكاس أو الحذف. ويؤدي كلا نوعي العملية إلى تغير في نمط جزء الإنزيم‎ ‏المجيني. وعلاوة على ذلك؛ ليس من الضروري أن تؤدي عملية الحذف‎ DNA ‏المقيد في ال‎ ‏إلى فقدان كامل للجزء المفصول. ويتم بالأحرى إعادة ربط أطراف الجزء المفصول لإنتاج‎ ‘Okazaki ef ‏.لد‎ 1987, Cell 49: 477-85 ‏تظل في الخلية (انظر المراجع‎ DNA ‏حلقة من‎
Livak and Schatz, 1996, Mol. Cell Biol. 16: ¢Davis er al., 1991, J. Exp. Med. 173: 743-6 ‏ويكون لكل جزء جيني‎ . (Harriman et al. 1993, Annu Rev Immunol. 11:361-84 ¢609-18 ‏نظراً لأن الخلايا تحتوي على كروموسوم ضعفاني متمم.‎ alleles ‏بالطبع أليلان‎ ‏و 082 كما هو‎ CBI ‏وفي الحالة الخطية الجرثومية الطبيعية؛ يتم ترتيب جينات‎ Veo
DNA ‏ويؤدي الهضم القصري لل‎ .Toyonaga et al., 1985 ‏موضح في الشكل ١؛ انظر المرجع‎ ‏المجيني باستخدام 26087 إلى تكون شريطين مناسبين يمكن اكتشافهما باستخدام المسبار‎ ‏الذي يتهجن‎ CBI ‏موسوم مشتق من‎ DNA ‏المستخدم في التجربة (المسبار عبارة عن جزء‎ ‏ألف‎ ١١ ‏شريط مكون من‎ (i) ‏إلى 082 نتيجة للدرجة المرتفعة من تماثل السياق) وهما:‎ Lid .©82 ‏شريط مكون من £ آلاف قاعدة يحتوي على سياق‎ (ii) 5 (CPT ‏قاعدة يحتوي على سياق‎ | ٠ ‏ولوحظت تشكيلة الخط الجرثومي هذه في الخلايا غير المتمايزة غير الناضجة (الصف م في‎ ‏(بعد ساعتين من‎ V ‏ويفضل توضيح هذه التشكيلة للخط الجرثومي بالصف‎ (VA ‏الشكل‎ ‏لذلك‎ Plas ‏للحصول على نموذج‎ VA ‏في الشكل‎ (CR3/43 ‏المعالجة باستخدام الجسم المضاد‎
A ‏في الصف‎
YYAA
وفي الحالة المتمايزة؛ يتم إعادة ترتيب كلا الأليلين في جينات ‎CPI‏ و 002 بحيث لا يتواجد جزء مكون من ‎١١‏ ألف قاعدة عند الموقع 1 أو جزء مكون من ؛ آلاف قاعدة عند الموقع 082. وفي الحقيقة لا يتواجد جزء مهجن مشتق من الموقع ‎CBI‏ على الهلام (يرجع ذلك لحذف السياق المهجن من كلا الأليلين ‎CBI‏ كنتيجة للتأشب). وبالنسبة للموقع 082؛ يوجد ‎Wd oo‏ الآن شريطان رئيسيان يناظران الألائل المختلفة الناتجة من عمليات إعادة الترتيب على كلا الكروموسومين. ويناظر الشريط الأكبرء الذي يقل مقياسه عن £ آلاف قاعدة جزءاً من الأليلين معادي الترتيب. ويكون الشريط الأصغر عبارة عن جزء من أليل آخر معاد الترتيب. ويمكن اشتقاق الشريط المتوسط الأقل من نسيلة فرعية لخلايا ‎Daudi‏ مع إعادة ترتيب مختلف وبالتالي فإنه يتواجد بكمية دون الكمية المولية في أي من الأليلين. وبالرغم من ذلك؛ فإن ‎Ala‏ ‏إعادة الترتيب موضحة بشكل كبير في الصف ‎١‏ حيث يكون كلا الشريطين الرئيسيين مرثيين بوضوح. ويؤدي التواجد ساعتين مع الجسم المضاد السلبي الضابط (181.135) الذي يرتبط بسلسلة ألفا في ‎lad MEC-DR‏ إلى فقدان الشريط العلوي؛ في حين يكون للشريط الأدنى ‎Bad‏ ‏مماثلة للخلايا غير المعالجة في الصف ‎١‏ (انظر الصف ‎.)١‏ وأحد التفسيرات المحتملة لذلك ‎١‏ هو أن الخلايا تكون متمايزة مما يؤدي ‎Lia‏ إلى عملية تأشب أخرى عند الموقع 082 في أحد الأليلين والذي يؤدي إلى فقدان سياقات ‎C2‏ ويتوافق ذلك كلية مع الظاهرة المعروفة. واتضح أن قضاء ‎YE‏ ساعة مع الجسم المضاد الضابط السلبي يستعيد الأشرطة الثلاثة الملحوظة في الخلايا غير المعالجة (انظر الصف ؛). وبالرغم من هذاء فإن الأشرطة تنتقل فعلياً إلى موضع أدنى مقارنة بالأشرطة الملحوظة في الصف . ولا يكون واضحاآ تماماً © كيفية حدوث ذلك. وأحد التفسيرات المحتملة هو أن إعادة التكامل للسياقات المحذوفة قد حدث ‎Gi) si‏ مع نموذج التحلق-الانفصال-إعادة التكامل (انظر المرجع ,1986 ‎Malissen er al.,‏ ‎(Nature 319: 28-32‏ وبالرغم من هذاء؛ لا تشير أي من النتائج الملاحظة باستخدام الجسم المضاد ‎TAL-IBS‏ بعد ساعتين أو بعد ‎YE‏ ساعة إلى حدوث إعادة ترتيب لنموذج الخط الجرثومي. ويمثل الصفان 7 و ؛ فعلياً ضابطا سلبياً من الجسم المضاد لسلسلة ألفا الذي لا ‎vo‏ يؤدي إلى استعادة سياقات الخط الجرثومي. ‎VAA‏ \
ay ‏وعلى النقيض؛ توضح النتائج التي حصل عليها باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة‎ ‏بعد ساعتين نموذجاً من الأشرطة التي تناظر تشكيلة‎ MHCDR ‏لسلسلة بيتا في‎ (CR3/43) ‏ألف قاعدة والشريط المكون من ؛ آلاف قاعدة‎ ١١ ‏الخط الجرثومي»؛ أي الشريط المكون من‎ ball ‏تبين هذه النتائج أن نموذج تقييد‎ gal ‏(قارن الصف 7 مع الصف م). وبعبارة‎ ‏م الجرثومي عند المواقع 1 و 082 قد تم استعادته بالنسبة لكل الألائل.‎ ‏ومن هذه النتائج نستنتج أن نموذج الأشرطة الملاحظ في الصف * يشير إلى إعادة‎ ‏المجيني للخلايا المتمايزة لتكوين تشكيلة الخط الجرثومي.‎ DNA ‏ترتيب ال‎ ‏وينبغي عدم تقليل أهمية هذه النتائج. ويمكن عكس عملية إعادة الترتيب المجينية؛ بما‎ ‏في ذلك عمليات الحذف؛ لاستعادة المجين إلى الحالة التي كان عليها قبل إجراء عملية التمايز.‎ ‏ويكون التفسير الأكثر احتمالاً هو أن الانعكاس الناتج عن إعادة ترثيب الألاثل 082 أثناء‎ ٠ ‏التمايز قد تم عكسه؛ وأنه قد تم عكس الحذف في سياق 081 الذي أدى إلى فقدان الشريط‎ ‏حلقي‎ DNA ‏المفقود هو‎ CBI ‏قاعدة أيضاً. ويعتقد أن مصدر سياق‎ Call VY ‏المكون من‎
DNA ‏إيبيسومي موجود في النواة من عملية الحذف الأصلية. وقد وصف تواجد هذا ال‎ ‏الحلقي في التقنية السابقة (انظر المراجع المذكورة سابقا). وبالرغم من ذلك؛ فإن الآلية‎ ‏المحددة التي بها حدثت هذه الإستعادة لمجين الخط الجرثومي ليست هامة. ولكن ما هو مهم‎ . ١ ‏هو أنها قد حدثت بالفعل.‎ ‏لسلسلة بيتا في‎ (CR3/43) ‏وينتج عن الحضن المستمر مع الجسم المضاد أحادي النسيلة‎ ‏للاختراع الراهن نموذج شريط أكثر تعقيدآً (الصف‎ lds ‏لمدة ؛ 7 ساعة في الجهاز‎ MHCDR ‏وبالرغم من ذلك فإن هذه الأشرطة لا تمثل نفس الأشرطة كما في العينة الضابطة غير‎ (0 ‏ألف قاعدة والتي تتهجن إلى‎ ١١ ‏المعالجة. وبشكل خاص؛ تظل الأجزاء المكونة من حوالي‎ YL ‏وعلاوة على ذلك؛ من المهم أن ندرك أن الأشرطة المميزة‎ . ('CB2 JVI) ‏المسبار موجودة‎ ‏"الألائل 082" لا تناظر شريطا يقل مقياسه عن ؛ آلاف قاعدة ملاحظ في العينة الضابطة غير‎ ‏ويكون التفسير الأكثر احتمالاً للنتائج الملحوظة في الصف 0 هو أن‎ . )١ ‏المعالجة (الصف‎ ‏عملية إعادة الترتيب الثانوية قد حدثت لأن نموذج التهجين يمائل ذلك الخاص بخلايا +7 من‎ ‏معاد الترتيب (يتماشى هذا التفسير مع بيانات مقياس التدفق‎ TCR ‏حيث تميزه بوجود جين‎ vo
YVAA
ير الخلوي الذي يوضح وجود زيادة في الخلايا التي بها واسمات خلوية مميزة لخلايا ‎AT‏ ‏وبالرغم من ذلك؛ وبغض النظر عن التفسير الجزيئي المحدد؛ فإن النتائج الملحوظة في الصف © بعد ‎YE‏ ساعة من التعرض إلى الجسم المضاد 083/43 تدعم النتائج التي تم الحصول عليها بعد ساعتين من التعرض في الصف 7. ‎.Y | ٠‏ إعادة ترتيب جين ع1 في خلايا ‎B-CLL‏ ‏تم الحصول على بقعة سذرن الموضحة في الشكل 9١ب‏ باستخدام خلايا من دم محيطي مأخوذة من المرضى المصابين بلوكيميا ‎LAY‏ الليمفاوية المزمنة ‎(B-CLL)‏ وتم تحضير ال ‎DNA‏ المجيني من خلايا 3 أحادية النسيلة الكبيرة هذه وهضمه بواسطة ‎HindIII 5 BamHI‏ وتعريضه لرحلان كهربائي هلامي وجسه بمسبار موسوم من ‎DNA‏ ل ‎00٠‏ 10©8. وتم ‎B-CLL WA dallas‏ لمدة ؛ ؟ ساعة بالجسم المضاد 083/43 إضد سلسلة ‎MHC‏ من الصنف ‎I‏ في ‎DP HLA-DR‏ و ‎(DQ‏ الذي تم وصفه سابقاً. وتم جس البقع بمسبار منطقة 1 ‎Ig‏ الموسوم إشعاعياً. ويمثل الشريطان الناتجان من الخلايا غير المعالجة في الصف ‎A‏ أليلين من ‎Ig‏ معادي الترتيب (أليل والدي وأليل أمومي). ولم تظهر هذه الأشرطة في الصف 3 الذي يوضح النموذج بعد ‎YE‏ ساعة من معالجة الخلايا بالجسم المضاد. وفي مكانهم ‎ye‏ ظهر شريط مكون من 0,8 ألف قاعدة مميز لجين ع1 في ‎ball‏ الجرثومي. وفي تجربة أخرى؛ موضحة في الشكل ‎VA‏ تركت الخلايا بدون معالجة أو عولجت خلال الفترات الزمنية المشار إليها باستخدام الجسم الضماد لسلسلة ‎Uy‏ في ‎MHC‏ من الصنف ‎WII‏ وتم تضخيم منطقة ‎Ig VDJ‏ بواسطة ‎PCR‏ في خلايا ‎B-CLL‏ المعالجة بالجسم المضاد والمتمايزة (الضابطة) (ترك نصف الهلام). وأدى ذلك لتكوين منتتج ‎VDI‏ مضخم من الخلايا - غير المعالجة. وبالرغم من ذلك؛ لم يتم رؤية هذا الشريط في الخلايا المعالجة بالجسم المضاد ‎(ls‏ لأنه نتيجة لإدخال ال ‎DNA‏ المجيني المفصول لم تكن تشكيلة ال ‎DNA‏ هذه "الخط الجرثومي" معرضة للتضخيم بواسطة ‎PCR‏ باستخدام البوادئ المحددة لمنطقة ‎VDJ‏ وتم إجراء تجربة مماثلة (على الجانب الأيمن من الهلام) لرؤية سلوك جين إدامة ضابط يحمل شيفرة ق-أكتين «ناءه-8. ولم يكن هناك اختلاف في منتج تضخيم ‎POR‏ للبيتا-أكتين؛ بغض النظر عن ‎YYAA‏ at ‏المعالجة. وبالتالي ؛ فإن هذا الجين "الضابط" لم يظهر أنه قد تاثر بعملية التمايز الارتجباعي‎ ‏التي أدت إلى تغيرات بالغة في جين 18 في نفس الخلايا تحت نفس الظروف.‎ ‏وتوضح النتائج المبينة سابقاً أن معالجة الخلايا بعامل يرتبط مع مستقبل مناسب‎ موجود على سطح الخلية تستحث التمايز الارتجاعي لهذه الخلايا الذي تم اثباته على المستوى ‎٠‏ الجزيئي (ومتابعته) عن طريق ملاحظة التراجع في عمليات إعادة الترتيب في ال ‎DNA‏ الكروموسومي الذي يميز الحالة المتمايزة. وبالتالي استنتج على أساس الدليل الجيني ‎ud‏ والدليل الشكلي أن الخلايا الخاصة بسلالة خلايا ‎B‏ الليمفاوية المعالجة بعامل ‎(mAb)‏ يرتبط بسلسلة 8 في ‎MHC‏ من الصنف ‎oI‏ تخضع لتمايز ارتجاعي. وعلى النقيض؛ لا تستحث نفس الخلايا المعالجة بالأجسام المضادة التي ترتبط بسلسلة ‎Wl‏ من الصنف ]1 على نحو مماثئل ‎٠‏ ا لتتمايز ارتجاعياً. وإذا حدث أي شئ فإنها تتمايز (إلى الأمام) عبر مسار الخلية ‎B‏ و. دراسات أخرى على التمايز الارتجاعي لخلايا ‎B‏ الليمفاوية ثم ‎BCLL WA dallas‏ منقاة باستخدام تقنية ‎Facs Vantage‏ (خلايا 3 نقية بنسبة 790( مأخوذة من مرضى مصابين — ‎BOLL‏ باستخدام الجسم المضاد ‎CR3/43‏ في جهاز ‎Ly‏ للاختراع الراهن كما هو موصوف ‎Gils‏ وتم معالجة الخلايا وفقاً لقياس التدفق الخلوي. وتؤكد ‎١‏ النتائج المبينة أدناه في الجدول أ كذلك النتائج التي تم الحصول عليها سابقاً. وتم الحصول على زيادات واضحة في عدد خلايا *0034 مع انخفاض كبير في عدد الخلايا التي بها واسمات موجودة عى سطح الخلية مميزة لسلالة خلايا ‎B‏ الليمفاوية ‎CD20 «CD19)‏ و 0022). وأحد النقاط الهامة التي يجب ملاحظتها من الجدول أ هي أنه يوضح أيضاً زيادة في عدد الخلايا التي تمثل كل من ‎CD43‏ السلبي والسلالة السلبية. ولم تتحول هذه الخلايا غير المتمايزة إلى ‎ADL.‏ المكونة للدم كما أنها تسبق خلايا *0043 الجذعية في التمايز. وعلاوة على ذلك؛ أظهر فحص العينات بالمجهر الضوئي مدى من أنواع الخلايا الملتصقة التي لها خصائص شكلية خاصة بالخلايا غير المكونة للدم.
YVAA
‎em‏ ال وتم ‎Lad‏ توضيح فقدان الواسمات على السطح الخلوي ‎CD19‏ المصحوب بظهور
‏الواسمات على السطح الخلوي ‎CD34‏ على نفس الخلية وتسجيله على شريط فيديو في الوقت الفعلي باستخدام مجهر متحد البؤرة ‎confocal microscopy‏ وصبغت ‎LA‏ 3 الليمفاوية قبل
‏© إضافة ‎mab‏ 083/43 باللون الأخضر باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة المقترن مع ‎FITC‏ ‏ضد 0019. وبعد إضافة ‎mab‏ 083/43 فقدت الخلايا لونها الأخضر المتألق وبدأت في الاصطباغ بواسطة الجسم المضاد أحادي النسيلة المققرن مع ‎PE/CYS‏ (أو الكوانتم ريد
‎(quanium red‏ باللون الأحمر وليس اللون الأخضر (انظر الشكل 17 الذي يوضح صورتين ثابتتين من شريط الفيديو الذي يعمل بفارق زمني). وتؤكد النتائج بشكل واضح أنه اثناء
‎CD19 ‏الليمفاوية؛ يتم فقدان الواسمات المتخصصة بالسلالة مثل‎ B ‏التمايز الارتجاعي لخلايا‎ Ve
‏في حين يتم إعادة التعبير عن واسم الخلية الجذعية مثل ‎CD34‏ ‎YVAA‏
ز. العوامل الأخرى ‎al‏ تستحث التمايز الارتجاعي لخلايا 3 لليمفاورية إلى خلايا جذعية مكونة للدم عرفت الدراسات المبدئية فعلياً ثلاثة عوامل-عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية/الخلايا أحادية النواة ‎«granulocyte/monocyte-colony stimulating factor(GM-CSF)‏ 0 معزز تكون الكريات الحمر ‎.mAb CR3/43 erythropoietin‏ وتم معالجدة مستحضر من خلايا ‎B‏ الليمفاوية الغنية؛ المنقاة والطبيعة في جهاز ‎Gy‏ للاختراع الراهن باستخدام عامل واحد من تلك ‎Jaf gall‏ الثلاثة بكيفية مماثلة لتلك الموصوفة لكل من ‎TALIB5 3 CR3/43‏ سابقاً وفحصت العينات المعالجة بمقياس التدفق الخلوي كما هو موصوف ‎Gila‏ ومقارنة بالضابط السلبي أظهرت كافة العينات الثلاثة المعالجة بأي من ‎«GM-CSF‏ معزز تكون الكريات الحمر أو ‎mAb CR3/43 ١‏ تغيرات متوافقة مع التمايز الارتجاعي. وبصفة خاصة زادت كافة العوامل الثلاثة العدد النسبي لخلايا “0034 في التجمع الخلوي (انظر الشكل ‎.)٠١‏ وبالرغم من ذلك؛ لوحظ التأثير الأكبر عند استخدام 083/43 وبالتالي تم اختيار هذا العامل ليستخدم في الدراسات الأكثر تفصيلاً الموضحة في هذا البيان. ح. خواص الخلايا الجذعية المكونة للدم الناتجة بعملية التمايز الارتجاعي ‎yo‏ معايرات تكوين المستعمرة للتأكد من أن الخلايا *0034 الملحوظة بمقياس التدفق الخلوي والخلايا غير المتمايزة التي تم تمييزها بالفحص المجهري لها خواص الخلايا المكونة للدم غير المتمايزة؛ تم تعريض عينات الدم المعالجة بجسم مضاد لسلسلة ‎B‏ في ‎MHC‏ من الصنف ‎IT‏ (83/43©-انظر ما سبق) لمعايرات تكوين المستعمرة-وهي طريقة قياسية معروفة في التقنية لتحديد قدرات الخلايا © - المكونة للدم الأولية. ويمكن إجراء معايرات تكوين المستعمرة أتوماتيكياً في الجهاز وفقاً للاختراع الراهن كجزء من آلية التتبع. وتتيح المعايرات النسيلية التي تجري في أنبوب اختبار للخلايا الجذعية المكونة للدم إجراء تقدير كمي للخلايا السلف الأولية التي لديها القدرة على التكاثرء التمايز والتطور إلى خلايا شبيهة بالخلايا الحمراء و/أو شبيهة بالنخاع ناضجة وظيفياً وظاهرياً. فعلى سبيل المثال ‎YYAA‏ qv ‏في وجود عوامل النمو؛ تكون الخلايا الجذعية عند زراعتها/تثبيتها في مادة أساس هلامية لينة‎ ‏في أنبوب اختبار قاردة على النمو النسيلي (التكاثر) والتمايز.‎ ‏معايرة مستعمرة للخلايا الجذعية الناتجة وفقاآً لطرق الاختراع؛‎ 7١ ‏ويمثل الشكل‎ ‏باستخدام مجهر ذي مجال إضاءة معكوس. وفي هذه المعايرة تم معالجة خلايا 5 التي حصل‎ ‏ثم إخضاعها‎ 083/43 mab ‏م عليها من الطبقة الطافية من متبرعين بالدم أصحاء باستخدام‎ ‏لمعايرات المستعمرة كما هو موصوف في قسم المواد والطرق.‎ ‏ما يلي:‎ 7١ ‏توضح الألواح من (أ) إلى (ه) في الشكل‎ ‏أ) الفحص المجهري بمجال الإضاءة لطبق الاستنبات المعاين بالتكبير بمقدار يبلغ أضعاف‎ ‏حيث يوضح مستعمرات الخلايا الشبيهة بالخلايا الحمراء والشبيهة بالنخاع والمخلطة (المكونة‎ ‏...من الخلايا الشبيهة بالنخاع والخلايا الشبيهة بالخلايا الحمراء الناضجة) التي يمكن رؤيتها‎ ٠ ‏بسهولة حتى بالعين المجردة. وتنشأ كل مستعمرة من خلية جذعية فردية مكونة للدم عن‎ ‏طريق التكاثر والتمايز بعد ذلك.‎ ‏نشأت من خلية جذعية فردية مكونة للدم وافرة القوة (خلية جذعية‎ MIX-CFC ‏ب) مستعمرة‎ ‏قادرة على إنتاج خلايا من سلالات مشابهة للنخاع والخلايا الحمراء).‎ ‏مكونة من خلايا ملتهمة كبيرة.‎ M-CFC ‏ج) مستعمرة‎ ‏في ذلك الخلايا الملتهمة الكبيرة؛‎ Lay ‏مستعمرة 011-070 مكونة من سلالة شبيهة بالنخاع‎ (2 ‏الخلايا الحبيبية والخلايا النقيية الكبيرة.‎ ‏مكونة من الخلايا التي تنتمي إلى سلالة شبيهة بالخلايا الحمراء مثل‎ BFU-E ‏ه) مستعمرة‎ ‏أرومة الحمراء السوية والخلايا الحمراء التي ليس بها نواة. ويوضح اللون الأحمر للخلايا أنه‎ ‏قد تم تكوين الهيموغلوبين بها بشكل جيد. ويشير الحجم الكبير لهذه المستعمرة إلى أنها ناتجة‎ © ‏من خلية جذعية أولية للغاية.‎ ‏(البيانات غير موضحة). ولم‎ B-CLL WA ‏وتم الحصول على نفس النتائج باستخدام‎ ‏ينشأ عن خلايا 8 غير المعالجة مستعمرات مكونة للدم (البيانات غير موضحة). وبالتالي‎ ‏توضح هذه النتائج وجود خلايا جذعية مكونة للدم حيوية في عينات الدم المعالجة بالجسم‎
YYAA
المضاد أحادي النسيلة ‎CR3/43‏ ضد سلسلة 8 في ‎MHC‏ من الصنف 17 ولكن ليس في عينات الدم غير المعالجة. الاستنبات طويل المدى تفحص المعايرة طويلة المدى التجديد الذاتي المحتمل للخلايا الجذعية المكونة للدم. ‎oo‏ وفي هذا المستنبت يتم إعادة إنتاج ‎Alle‏ مكونات تكوين الدم في نخاع العظم في أنبوب اختبار. وتتمثل السمة الهامة لهذا المستنبت في تكوين الدم الدائم الذي يحدث في غياب عوامل النمو المضافة. وفي هذه المعايرة تكون عملية تكوين الدم معتمدة بشكل كامل على إنشاء طبقة لاصقة من الخلايا اللحمية المشتقة من نخاع العظم. وتدعم الخلايا اللحمية (التي تتكون من تشكيلة متنوعة من الخلايا غير المكونة للدم مثل الأرومة الليفية؛ الخلايا الدهنية والتي تشمل ‎٠‏ كل أنواع الخلايا التي تنتمي إلى جهاز الطبقة المتوسطة ‎(mesenchymal system‏ تكون الدم بتوفير البيئة المناسبة (إفراز عوامل النمو وتحضير مادة أساس خارج الخلايا) لتعزيز البقاء؛ التجديد الذاتي؛ التكاثر والتمايز للخلايا الجذعية. وفي هذه المعايرة؛ تؤدي معالجة ‎B LDA‏ المأخوذة من الطبقة الطافية لمتبرعين بالدم أصحاء (تم الحصول على نفس النتائج باستخدام خلايا-8-01177) باستخدام ‎mab‏ 083/43 إلى ‎yo‏ تكوين طبقة خلية ملتصقة خلال ساعات إضافة الجسم المضاد التي ازدادت بمرور الوقت ‎Lad‏ ‏وتتكون الطبقة الملتصقة من الخلايا اللحمية (خلايا البطانة؛ التي تتكون بشكل أساسي من الأرومة الليفية/الخلايا من نوع الطبقة المتوسطة/لخلايا الكبيرة الكاسرة للضوء ‎light refringent large cells‏ عند معاينتها باستخدام المجهر بمجال الإضاءة المعكوس-انظر © الشكل ‎(YY‏ التي تدعم نمو وتطور الخلايا المكونة للدم إلى ما يصل إلى ‎١١‏ أسبوع وأطول (تظهر هذه الخلايا اتصال محكم مع الخلايا المكونة للدم). كما تم كذلك رؤية مجموعات من الخلايا المكونة للدم الأولية في الطبقة الملتصقة (المعروفة ‎La J‏ بمناطق الأحجار المكورة/تكتلات الخلايا التي تظهر بلون قاتم) التي هي مصدر الإنتاج المستمر للخلايا المكونة للدم. ‎YYAA‏
وتتكون الطبقات غير الملتصقة التي على قمة الطبقة اللحمية (تكتلات من الخلايا التي تظهر مضيئة) من خلايا دائرية صغيرة تكون تكتلات من البؤر المكونة للدم. وتحتوي هذه الطبقة على الخلايا الجذعية وكذلك على الخلايا السلف الأكثر تحولاً في النظام المكون للدم. وكانت الطبقة غير الملتصقة قادرة على تكوين ‎«GM-CFC (MIX-CFC‏ 06ل ‎BFU-E‏ ‎٠‏ (كما حدد باستخدام المعايرة النسيلية) و0517-77 (الأرومة الليفية لوحدة تكوين المستعمرة) (عند استنباتها فرعياً بوسط استنبات طويل المدى). ط. ‎RT-PCR‏ للخلايا المعالجة بجسم مضاد لسلسلة ‎Uy‏ في ‎HLA-DR‏ ‏تم قياس نسخ الجينات في ‎Ramos WIA‏ (ورم ‎B‏ الليمفاوي) و2562 (لوكيميا الخلايا المشابهة للحمراء) المعالجة ب ‎mab‏ 083/43 لكل من ‎«CD34‏ ننعد» (ربيطة عامل الخلية ‎٠‏ الجذعية) وع-هيموغلوبين ‎e-haemoglobin‏ (الشكل الجنيني للهيموغلوبين) وجينات بيتا-أكتين. ‎Goh‏ ‏تم استخلاص ‎mRNA‏ قبل وبعد المعالجة ب ‎CR3/43 mab‏ باستخدام ‎RNAZOL‏ ‏(من سينا بيوتيك ‎BIOTECH‏ 0178). وخضع ال ‎MRNA‏ للنسخ العكسي المبرمج بالهكسامير (وحدة سداسية) عن طريق الحضن عند درجة حرارة ‎Ad all‏ لمدة 0 دقائق مع ؛ ميكرولتر ‎١‏ .من محلول منظم قياسي؛ ؟ ميكرولتر من ‎١ «dNTPs‏ ميكرولتر من ‎١ RNASIN‏ ميكرولتر من بادئ عكسي (بادئ من هكسامير عشوائي) و١‏ ميكرولتر من إنزيم الترانسكريبتاز العكسي 7. وحضن هذا الخليط مرة أخرى لمدة ساعة واحدة عند 748 م ثم خضعت المخاليط بعد ذلك لعملية ‎PCR‏ تحت ظروف قياسية باستخدام البوادئ المصممة لتضخيم السياقات ‎cc-kit «CD34‏ ع-هيموغلوبين وبيتا-أكتين. وتم تحضير البوادئ في كلية ‎Randell Institute‏ ‎Kings College Ye‏ وفقاً للبيانات المنشورة. ‎Fill‏ ‏توضح النتائج التي تم الحصول عليها أنه في حين لم تتغير مستويات بيتا-أكتين في ‎«mRNA‏ إلا أن جميع مستويات ‎cokit «CD34‏ ع-هيموغلوبين في ‎mRNA‏ قد زادت بشكل ملحوظ بعد المعالجة بواسطة ‎mAb‏ 083/43. وتوفر النتائج لكل من 0034 وئنعا» دعماً أخر ‎Y VAA‏ ve
Lal ‏الليمفاوية لإنتاج‎ B ‏التي توضح التمايز الارتجاعي لخلايا‎ (le ‏للبيانات المفصلة‎ ‏الجذعية المكونة للدم.‎ ‏ع-هيموغلوبين أكثر أهمية حيث أن‎ lee ‏وتكون النتائج التي تم الحصول‎ ‏ع-هيموغلوبين يعبر عنه بشكل طبيعي في الخلايا الجنينية فقط. وبالتالي من الممكن أن لا‎ ‏الخلايا الجذعية المكونة للدم فقط ولكن كذلك الخلايا‎ 083/43 mAb ‏ينشأ عن المعالجة بواسطة‎ © ‏الأولية غير المتمايزة مثل الخلايا الجذعية الجنينية.‎ ‏ي. المللخص‎ ‏للاختراع الراهن في التمايز الارتجاعي‎ Gy ‏بشكل مختصر؛ يمكن استخدام الجهاز‎ ‏للخلايا المتمايزة إلى الخلايا الجذعية. وتصف الأمثلة تجارب أجريت في أنبوب اختبار تظهر‎ ‏الليمفاوية التي يمكن‎ B ‏النتائج المنوية التي تتعلق بنشوء وتطور خلايا 1 و‎ fas ‏بشكل مهم‎ > ٠ ‏استخدامها في إنتاج الخلايا الجذعية لتكوين الدم والليمف في عينات الدم المحيطي في خلال‎ ‏ساعات.‎ ‏عينات الدم المحيطي المأخوذة من مرضى مصابين ب لوكيميا‎ dallas ‏وينشأ عن‎ ‏الليمفاوية باستخدام‎ B ‏التي بها أعداد كبيرة من خلايا‎ (B-CLL) ‏الليمفاوية المزمنة‎ B ‏الخلايا‎ ‏جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة بيتا في مولدات المضادات من‎ ve ‏وخلاياها‎ (SP) ‏الليمفاوية وحيدة الإيجابية‎ T ‏زيادة ملحوظة في العدد النسبي لخلايا‎ IT ‏الصنف‎ ‎CD8 ‏و‎ CD4 ‏السلف التي كانت مزدوجة الإيجابية لواسمات الخلايا التيموسية لمولد المضاد‎ logy ‏وتم التعبير عنها إسهامياً بشكل متزامن. وبالرغم من ذلك؛ كانت هذه الظواهر مصحوبة‎ ‏الليمفاوية. ولم يتم ملاحظة هذه المشاهدات عندما‎ BLOAT ‏بانخفاض ملحوظ في العدد النسبي‎ ‏تم معالجة نفس عينات الدم بالأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة‎ © ‏أو ضد المنطقة المتماثلة في مولدات المضادات من‎ IT ‏ألفا في مولدات المضادات من الصنف‎
J ‏الصنف‎ ‎B ‏وينشأ عن معالجة الدم الكامل المأخوذ من مرضى مصابين ب لوكيميا الخلايا‎ ‏للاختراع الراهن باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة‎ Gy ‏في جهاز‎ (CLL) ‏الليمفاوية المزمئة‎ ‏الليمفاوية. وتم‎ 7 LDA ‏تكون‎ HLA-DR ‏المضاد‎ alge ‏في‎ Gy ‏ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة‎ vo
YYAA
٠١١ ‏ملاحظة هذه العملية بظهور الخلايا مزدوجة الإيجابية التي تعبر إسهامياً عن الواسمات‎ ‏و 008؛ وبظهور الخلايا التي تعبر عن 6034 والزيادة المرافقة في عدد خلايا‎ CD4 ‏و *008*7003 الليمفاوية وحيدة الإيجابية. وعلاوة على ذلك كانت التغيرات‎ 004*003“ ‏المناعية الظاهرة التي حدثت في تكوين هذه الخلايا متطابقة مع تلك المذكورة لتطور الخلايا‎ ‏التيموسية؛ وبخاصة عند قياسيها بمرور الوقت.‎ 6 double positive cells (DP) ‏وانتخفضت النسب المئوية للخلايا مزدوجة الايجابية‎ ‏المتكونة بعد ساعتين من حضن الدم الكامل مع جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة‎ ‏بمرور الوقت وكانت هذه العمليات مصحوبة‎ DR ‏المتماثلة لسلسلة بيتا في المولد المضاد‎ ‏بزيادة في النسب المئوية لخلايا “004*003 و *008*003 وحيدة الايجابية في نفس الوقت‎ ‏في هذه الأنواع‎ TCR ‏ل‎ Lis ‏وفي فترات متأخرة أيضاً. وتم أيضاً التعبير عن سلاسل ألفا‎ ٠ ‏من الخلايا.‎ ‏0023؛‎ «CD21 «CD19 Jie ‏الليمفاوية تفقد باستمرار الواسمات‎ B ‏ولوحظ أن خلايا‎ ‏وهذا يتفق مع مظهر الخلايا “0034© و *00347002؛ الزيادات التي تحدث في‎ DR ‏و‎ 41 ‏و *0028؛ الزيادات التي تحدث في‎ 00870028 LA ‏الزيادات التي تحدث في‎ «CDT ‏خلايا‎ ‏و *0019؛ الزيادات التي‎ CD34* ‏و 00347 والخلايا‎ CD10* ‏خلايا *025؛ مظهر الخلايا‎ Vo
CD45 ‏المضاد‎ a gal ‏تحدث في خلايا “005؛ والخلايا التي تعبر عن المستويات المنخفضة‎ ‏وكانت هذه التغيرات ناتجة عن معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة‎ ‘HLA-DR ‏في سلسلة بيتا في مولد المضاد‎ ‏وتتفق التغيرات في النمط المناعي الظاهري المصاحبة لهذه المعالجة مع التمايز‎ ‏الارتجاعي والتحول اللاحق (أي إعادة التحول) لخلايا 8 الليمفاوية؛ نتيجة لكون غالبية خلايا‎ >» ‏قبل المعالجة عبارة عن خلايا 3 الليمفاوية.‎ B-CLL ‏الدم البيضاء في دم مرضى مصابين ب‎ ‏لأن تصبح‎ B-CLL ‏الليمفاوية في مرضى مصابين ب‎ B ‏وعلاوة على ذلك؛ تم تحفيز خلايا‎ ‏والجسم المضاد أحادي‎ cyclophosphamide ‏ليمفاوية بعد المعالجة بالفوسفاميد الحلقي‎ T WDA 8 ‏قادرة على التحول عكسياً إلى خلايا‎ HLA-DR ‏المضاد‎ alge ‏النسيلة ضد سلسلة بيتا في‎ ‏الليمفاوية بعد الحضن المطول مع هذه المعالجة.‎ vo
YYAA
١
وعند تحليل العينات المعالجة بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎(HLA-DR‏ باستخدام الألسواح ‎CD16‏ و ‎CD56‏ و ‎CD3‏ و 08© و 03©؛ ازداد بشكل ثابت العدد النسبي للخلايا المعبرة عن هذه الواسمات زيادة مطردة متوافقة مع تلك التي تم تحديدها باستخدام الألواح ‎CD19 Jie‏ و 03© و 28 و 003. وبين فحص السائل الطافي © للعينات المعالجة وغير المعالجة للمرضى المصابين ب ‎HIV‏ باستخدام مقياس التعكر ‎nephlometry‏ والرحلان الكهربائي المناعي مستويات 190 المتزايدة التي تشير إلى وجوب مرور ‎LDA‏ 8 عبر مرحلة خلية البلازما. وكانت الزيادة في العدد النسبي لكل الخلايا المذكورة سابقاآً مصحوبة أيضاً بظهور ‎WIA‏ محببة بشدة متوسطة الحجم تعبر عن مولدات المضادات 0056 و 0016 بكميات كبيرة جدآ. ولوحظت ‎LWIA‏ أخرى كبيرة للغاية ومحببة ‎٠‏ .> بشدة بشكل مؤقت وكانت إيجابية بالنسبة ل ‎CD34‏ ومزدوجة الإيجابية للواسمات ‎.CD4CD8‏ ‏ولوحظت خلايا مؤقتة أخرى أيضاً وكانت كبيرة ومحببة وإيجابية بالنسبة للمستقبلات 003 و 09©. وفقد 0025 الموجود على غالبية خلايا 3 الليمفاوية وأصبح معبرآ عنه بخلايا 7
الليمفاوية المتكونة حديثاً حيث لوحظ زيادة عددها باستمرار. وظهرت خلايا *00287008 و 00287 بعد معالجة الدم بالكامل لمرضى مصابين ب ‎B-CLL ١‏ بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة في سلسلة 3 في مولد المضاد ‎DR‏ ‏وكانت هذه النتائج ناجمة عن معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتمائلة
لسلسلة بيتا في مولد المضاد ‎HLA-DR‏ ‏ولوحظ ‎AIX‏ تكون خلايا 7 الليمفاوية المتولدة بهذه الكيفية في الدم المحيطي للمتبرعين بالدم الأصحاءء الدم الحبلي؛ نخاع العظم والمرضى المصابين بمختلف أنواع © العدوى بما في ذلك المرضى المصابين بي *1117 ومرضى الايدز؛ء والأجزاء الغنية بخلايا ‎B‏ ‏الليمفاوية التي حصل عليها من عينات الدم الخاصة بالمتبرعين بالدم الأصحاء؛ والمرضى الذين يعانون من نقص ‎IgA‏ والمرضى الآخرين المصابين بمختلف الحالات الأخرى. وعلاوة على ذلك؛ أظهر تحليل الواسمات الشبيهة بالنخاع في العينات المعالجة للمريضين المصابين ب ‎B-CLL‏ بجسم مضاد أحادي النسيلة للمنطقة المتمائلة في سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎HLA-DR Yo‏ زيادة واضحة في العدد النسبي للخلايا التي تعبر عن الواسمات الشبيهة بالنخاع مثل ‎YYAA‏
ا 3 و 0033. وتم التعبير عن هذه الواسمات إسهامياً بمولدات المضادات 0056 و 0016 أو 07. وبالرغم من ذلك؛ فقد لوحظ العدد النسبي لخلايا *007 باستخدام واسمات خلايا ‎T‏ ‏الليمفاوية وبدون استخدام مولدات المضادات من جزء شبيه بالنخاع على تجمع خلوي منفصل. ولم تلاحظ هذه المشاهدات المحددة في العينات غير المعالجة أو في العينات المعالجة بأجسام ‎٠‏ مضادة أحادية النسيلة ضد مولدات المضادات من الصنف ؟ أو المنطقة المتماثلة في سلسلة ألفا في مولد المضاد ‎HLA-DR‏ (انظر المخططين ‎١‏ و 7). وتشير هذه النتائج أنه بمجرد سحب ‎B LA‏ الليمفاوية من خلال سلسلة بيتا في مولد المضاد ‎HLA-DR‏ فإنها لا تكون قادرة فقط على التراجع إلى الخلايا السلف الليمفاوية 7 ولكنها تصبح قادرة أيضاً على التواجد في السلالات الشبيهة بالنخاع والشبيهة بالخلايا الحمراء.
‎١‏ وبالتالي ؛ توضح البيانات الموضحة في الطلب الراهن بشكل مجمل أنه في الجهاز ‎Gi‏ للاختراع الراهن ‎(i)‏ يكون بالإمكان تحويل خلايا صحيحة من إحدى السلالات إلى خلايا بها واسمات على سطح الخلية وتتمتع بالخواص الشكلية الخاصة بخلايا من سلالات أخرى متعددة 5 ‎(i)‏ يكون بالإمكان الحصول على الخلايا التي بها واسمات على سطح الخلية وتتمتع بالخواص الشكلية الخاصة بالخلايا السلف الأولية (على سبيل المثال الخلايا الجذعية)؛ من
‎Vo‏ خلايا 5 و ‎T‏ الليمفاوية المتمايزة.
‏ويجب أن نلاحظ أنه تم إجراء ‎dae‏ من التجارب باستخدام ‎BOLL WIA‏ وقد كانت ‎Wa‏ 8017 عبارة عن خلايا ‎B‏ ليمفاوية ناضجة غير قادرة على التمايز إلى المرحلة النهائية المتمايزة طرفياً لخلية البلازما. ‎Yang‏ من ذلك؛ ونتيجة لخلل في الكروموسومات فإنها تظهر مستويات مرتفعة من التكاثر نتيجة للأعداد الكبيرة من خلايا 3 الليمفاوية في دم المرضى
‎vv.‏ المصابين ب ‎BOLL‏ ومقابل عدد من خلايا الأورام الموصوفة في التقنية السابقة؛ لم تخضع خلايا ‎BOLL‏ لأي شكل من التمايز العكسي المحدود قبل الاستخدام في طرق هذا الاختراع. وعلاوة على ذلك؛ فإنها لا تظهر أي خواص خاصة بالخلايا غير المتمايزة من حيث البنية المجينية؛ الواسمات الخلوية أو شكل الخلية. وكانت ‎JS‏ المقاييس عبارة عن خلايا ‎B‏ ليمفاوية ناضجة.
‎YYAA
Vet ‏وبالتالي» في حين يمكن أن يكون لبعض خلايا الأورام الخبيثة إلى حد ما بعض‎ ‏التي تكون‎ BCLL ‏خصائص الخلايا غير المتمايزة؛ لأن ذلك ليس هو الحال بالنسبة لخلايا‎ ‏عبارة عن نظام تجريبي مقبول بشكل تام لدارسة الخلايا 3 الليمفاوية. وفي الواقع لا تكون‎ ‏عن الخلايا الطبيعة في العديد من المجالات المتعلقة‎ (BIS ‏مميزة بشكلٍ‎ Daudi ‏و‎ BCLL Wa ‏مناسبة كنظام نموذجي من خلال المرجع‎ BOLL WA ‏م - بهذه التجارب. وبالفعل؛ ثبت أن‎ . (Martensson et al., 1989, Eur. J. Immunol. 19: 1625-1629 (see page 1625 rhs, 1% para) ‏وبالإضافة لذلك» تؤدي معالجة الطبقة الطافية من عينات الدم البشرية المأخوذة من‎
CD34 ‏متبرعين أصحاء بجسم مضاد أحادي النسيلة 083/43 إلى الحصول على الكثير من‎ ‏الليمفاوية).‎ B ‏(واسم الخلية الجذعية) والقليل من 6019 (واسم خلية‎ ‏ويجب ملاحظة أن الخلايا الجذعية الناتجة بطريقة الاختراع الراهن قد تكون خلايا‎ Ve ‏جذعية من أي نسيج وليس بالضرورة أن تقتصر على الخلايا السلف المكونة للدم والليمف.‎ ‏وسوف تتضح تعديلات أخرى للاختراع الراهن لأولئك المتمرسين في التقنية.‎ ‏وكما سيتضح بسهولة لأولئك المتمرسين في التقنية أنه ليس بالضرورة قصر الجهاز‎ ‏للاختاراع الراهن على الاستخدام مع تجمع خلوي يحتوي على خلايا متحولة و/أو عامل‎ Gg ‏كما أن الجهاز مناسب للاستخدام مع أي طريقة تتطلب خلط مائع‎ ola) ‏كما وصف في هذا‎ ١ ‏مع عامل وحضنه.‎ ‏ولقد ذكرت جميع النشرات الواردة في المواصفة أعلاه في هذا البيان للإحالة إليها‎ ‏للاختراع‎ Tay ‏كمرجع. وتتضح تعديلات وتغييرات مختلفة في الطرق والأنظمة الموصوفة‎ ‏الاختراع. وعلى الرغم من أنه تم‎ Tass ‏لأولئك المتمرسين في التقنية دون الخروج عن نطاق‎ ‏وصف الاختراع بالاقتران مع تجسيدات مفضلة خاصة؛ فإنه ينبغي إدراك أن الاختراع كما‎ © ‏هو مطالب بحمايته لا يُحدد بشكلٍ غير ملائم بهذه التجسيدات الخاصة. وبالفعل؛ تقع تعديلات‎ ‏مختلفة للأنماط الموصوفة لإجراء الاختراع والتي تكون واضحة لأولئك المتمرسين في علم‎ ‏الأحياء الجزيئي أو المجالات ذات الصلة ضمن نطاق عناصر الحماية التالية.‎
YYAA
١٠١ ١ ‏الجدول‎ ‏الدم التي تشتمل على تعدادات كولتر‎ clad ‏التشخيص السريري للمرضى والحالات التجريبية‎ ‏بعد وقبل معالجة عينات الدم بأجسام مضادة أحادية النسيلة مختلفة وعوامل أخرى‎ (WBC) ‏نسبة الخلايا عدد الخلايا العامل‎ AYWBC ‏هوية التشخيص الحالة التجريبية‎ ‏الليمفية )7( الليمفية/لتر ميكرولتر/مل‎ )١( ‏المريض‎ ‎)١( ‎A B A B A B
ANTI-B 50 1) YA | 7 VEE | ‏رق‎ Fa ١ م١7 ‏ساعتان عند‎ B-CLL Y
ANTI-B YAY Ya, | ‏ارفلا‎ VEE YVY ‏1ر4‎ ١ YY ‏ساعتان عند‎
PE 50
ANTI-B 50 ‏رأ‎ YAY | ‏رح ارال أرلا‎ vee | YY ‏ساعات عند‎ B-CLL 7
ANTI-B YV,E YAY | VY,e VAAL ‏الإر/ا‎ 4 | YY ‏ساعات عند‎
PE 50
ANTI-B 50 LY ‏كما‎ [Te VY ١ ‏“رح‎ Ye | م١ ‏ساعة عند‎ YE | B-CLL ¢
ANTI-B Yoo ‏كما‎ | Yet VY ١ ‏ساعة عند كلام | 4 رك‎ YE
PE 50
ANTI-B 50 ‏ساعتان عند 77م‎ B-CLL
ANTI-A 50
ANTI-I 50
ANTI-B ‏سام‎ Jale 25+25 owmsn | |] fever] mon | +
YYAA
Ve ‏نسبة الخلايا عدد الخلايا العامل‎ A/WBC ‏هوية التشخيص الحالة التجريبية‎ ‏الليمفية )7( الليمفية/لتر ميكرولتر/مل‎ ().١( ‏المريض‎ ‎("r) ‎A B A B A B
ANTI-B 10 1 ‏ا .8 1 ا‎ ٠ ‏م‎ YY ‏ساعة عند‎ YE B-CLL ‏ل‎ ‎ANTI-I 10 ‏لاا 7 متا‎
ANTI-B ١ 5 7 ‏وعامل سام‎ 10+20
ANTLB 30 VY +++ | ‏81م‎ AY | ‏م +++ مركم‎ Y ‏ساعة عند‎ VY B-CLL 4
ANTI-I 30 +++ Ao, ¢ +++
ANTI-4 30 +++ AQ, ¢ +++
ANTI-I+11+4 ‏رم‎ 48.4 10+10+0
ANTI-B 0 ND yy ND A ND 14,7 aX Y ‏ساعتان عند‎ B-CLL ٠١ ‏احم‎ 11-0 ‏خارجي‎ ‏الم الا الت‎ ove m= fm rem ‏خارجي‎ ‏خارجي‎ ‏خارجي‎ ‎YYAA
لا هوية التشخيص الحالة التجريبية ‎AYWBC‏ نسبة الخلايا عدد الخلايا العامل المريض ‎(‘"v)‏ الليمفية )7( الليمفية/لتر ميكرولتر/مل )71( ‎A B A B A B‏ دا رضيع ؛ ساعات عند ‎ANTI-B 20 ND 7 | ND ١4 YY‏ مصاب بي ‎CMV‏ ‏97 رضيع ‎ND‏ ل ‎ANTI-B 20 ND ND‏ مصاب — ‎HIV+‏ ‎BB/ST‏ أرومة بنسبة | ساعتان عتد ١م‏ ]1.0 ‎ANTI-B 50 ND YY | ND ١ | ND‏ في دم | ‎YE‏ ساعة عند 77م 50 ‎ANTI-A‏ ‏رضيع عمره ‎ANTIL-AB‏ ‏+ أيام 2+5 ‎lela AIDS HIV25‏ عند ١م‏ | ف ‎ANTI-B 0 ND 1 ND 8 ND‏ ‎ANTI-A 50‏ ‎ANTI-AB‏ ‏25+25 ‏43/8 نقص ؛ ساعات عند 77م 20 ‎ANTI-B‏ ‏خلايا ‎B‏ 20 -11ثم ‎ANTI-4 0‏ ‎0B/BD‏ نقص ؛ ساعات عند 77م 20 ‎ANTI-B‏ ‎ANTI 20 B Wa‏ ‎ANTI-4 20‏ ‎YYAA‏
د هوية التشخيص الحالة التجريبية ‎AYWBC‏ نسبة الخلايا عدد الخلايا العامل المريض ‎(ve)‏ الليمفية )7( الليمفية/لتر ميكرولتر/مل )7( ‎A B A B A B‏ ‎[p=]‏ = ‎ANTI-I‏ ‏==[ = ‎ANTI 20‏ 3: قبل ‎A‏ بعد ‎:ANTI-B‏ جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ ‎:ANTI-A‏ جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-ألفا لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ ‎:ANTLI‏ جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لمولدات المضادات من الفئة 1 ‎:ANTI-AB‏ كل من ‎ANTI-B‏ و ‎(lila ANTI-A‏ معاً ‎:ANTI4‏ جسم مضاد أحادي النسيلة ضد المولد المضاد ‎CD4‏ ‎ANTI :ANTI-I+11+4‏ و ‎ANTI-B‏ و ‎ANTI-4‏ تضاف ‎las‏ ‏عامل سام للخلايا: فوسفوأميد حلقي ‎cyclophosphoamide‏ ‎ND‏ غير محدد ‎YYAA‏
٠ ‏الجدول ؟‎ ‏وحالات أخرى قبل وبعد معالجة عينات الدم بجسم مضاد‎ B-CLL om ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين‎ ‏باستخدام الجسمين المضادين أحاديي‎ HLA-DR — ‏أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎
CD3 ‏النسيلة ضد 0019 و‎ ‏نسبة +003 نسبة نسبة نسبة‎ ١ CD19+ ‏المريض نسبة‎
CD19+HGCD3- | CD3-CD19- | CD19+CD3+ (7) (7) (4) FC+ (7) (7)
A nla ‏هماه‎ wr de vf af eee |e
YYAA
٠ ‏نسبة نسبة نسبة‎ CD3+ du CD19+ ‏المريض نسبة‎
CD19+HGCD3- | CD3-CD19- | CD19+CD3+ (7) (7) (1) FC+ 0 0 ‏اد‎ ‏قبل المعالجة‎ :3 ‏ه: بعد المعالجة‎
YYAA
ا الجدول ‎Y‏ ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين بِ ‎B-CLL‏ وحالات أخرى قبل وبعد معالجة عينات الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد سلسلة-بيتا للمنطقة المتماثلة لب ‎HLA-DR‏ باستخدام الجسمين المضادين أحاديي ‎dll‏ ضد ‎CD4‏ و 0-8 المريض نسبة +008 نسبة +004 نسبة نسبة ‎CD4+LOW‏ ‎CD4-CD8- | CD4+CD8+ (7) (7)‏ )1( )1( ‎AB | A 8 | |‏ ‎(va ar va |e‏ ‎YVYAA‏
١١ ‏الجدول ؛‎ ‏وحالات أخرى قبل وبعد معالجة العينات بجسم مضاد‎ B-CLL — ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين‎ ‏باستخدام الجسمين المضادين أحاديي النسيلة ضد‎ HLA-DR — ‏أحادي النسيلة ضد سلسلة-بيتا‎
DR ‏و‎ )3
A BA BA B|lA ‏داه‎ B
VY ‏ا صفر‎ ND [44 ND ‏مادا‎ ND | ‏د‎ ND | oe
I
Tw Te
EE ET
YYAA
YAY
ه٠ ‏الجدول‎ ‏وحالات أخرى قبل وبعد معالجة عينات الدم بجسم مضاد‎ B-CLL — ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين‎ ‏باستخدام الجسمين المضادين أحاديي‎ HLA-DR od ‏أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎
CD3 ‏و‎ CD16+CD56 ‏النسيلة ضد‎
CD16-CD3- CD16+CD3+
Ao B | A Bl A 8B vr vey |e we Ima ve [va wr [oe vn Np | ‏امه‎ wp [ava Np | ‏ه‎ rr wv rr ws
YVAA
ARR
+١ ‏الجدول‎ ‏وحالات أخرى قبل وبعد معالجة عينات الدم بجسم مضاد‎ B-CLL ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين ببٍ‎ ‏باستخدام الجسمين المضادين أحاديي‎ HLA-DR — ‏أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎
CD14 ‏و‎ CD45 ‏النسيلة ضد‎ : ‏م‎ ‏لي‎ ‏سي‎ ‏سي‎ ‎YVAA
اا الجدول ‎V‏ ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب ‎B-CLL mt‏ وحالات أخرى قبل وبعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا ل ‎HLA-DR‏ باستخدام الجسمين المضادين أحاديي النسيلة 003 ‏و‎ CD8 ‏ضد‎ ‎CDSCD3- | CD8+CD3+ a 8 | a 8 | a 8 | a BB
YYAA
١ + ‏الجدول‎ ‏بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي‎ B-CLL a ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب‎ ‏مقاس باستخدام الجسمين‎ HLA-DR ‏ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب‎ PE — ‏النسيلة مقترن‎
CD14 3 CD45 ‏المضادين أحاديي النسيلة ضد‎
CD45+H CD45+L DR+CD45+CD14+r 4 ‏الجدول‎ ‏بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي‎ B-CLL — ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب‎ ‏مقاس باستخدام الجسمين‎ HLA-DR od ‏ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎ PE omy ‏النسيلة مقترن‎
CD3 ‏و‎ CD19 ‏المضادين أحاديي النسيلة ضد‎
CD19-CD3-DR- | CD3+DR+ CD19+DR+r ‏ااا‎
إلا الجدو | ‎٠‏ ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب = ‎B-CLL‏ بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة مقترن — ‎PE‏ ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب ‎HLA-DR‏ مقاس باستخدام الجسمين المضادين أحاديي النسيلة ضد ‎CD4‏ و 0105 +08 و ‎CD4-CD8-DR- CD4+DR+ | DR+rjs CD8+3 004+ DR+r‏ الجدول ‎١١‏ ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب — ‎B-CLL‏ بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي النسيلة مقترن ‎PE wm‏ ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب ‎HLA-DR‏ مقاس باستخدام الجسمين المضادين أحاديي النسيلة ضد ‎CD3‏ وى ‎DR‏ ‎ow | en |‏ ‎YVAA‏
غلا الجدول ‎VY‏ ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب — ‎B-CLL‏ بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحاد يِ النسيلة مقترن بٍِ ‎PE‏ ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب ‎HLA-DR‏ مقاس باستخدام الجسمين ° المضادين أحاديي النسيلة ضد ‎CD16‏ و ‎CD56‏ و ‎CD3‏ ‎CD56+‏ و ‎CD56+CD16+ CD16+DR+r‏ و ‎CD56-CD16- | CD3+DR‏ و ‎CD16-DR-‏ ‏ةا ا ‎EE EY ET‏ الجدول ‎VY‏ ‏تحديد النمط المناعي لمريض مصاب ب ‎B-CLL‏ بالنسبة للزمن بعد معالجة الدم بجسم مضاد أحادي ‎٠١‏ النسيلة مقترن ‎PE my‏ ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب ‎HLA-DR‏ مقاس باستخدام الجسمين المضادين أحاديي النسيلة ضد ‎CD8‏ و ‎CD3‏ ‎CD8+CD3+ CD8+DR+‏ و ‎CD8-CD3-DR- DR+r‏ ‎YYAA‏
١؛ ‏الجدول‎ ‏قبل وبعد معالجة الدم بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد‎ B-CLL mt ‏تحديد النمط المناعي لمرضى مصابين‎ ‏الجسمين‎ (HLA-DR ‏المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لب‎ (HLA-DR ‏المنطقة المتماثلة لسلسلة-ألفا لب‎ ‏المضادين أحاديي النسيلة معاً؛ الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لمسلسلة-بيتا‎ 5 ‏والمنطقة المتماثلة لمولدات المضادات من الفئة 1 مقاس‎ cyclophosphoamide ‏وفوسفوأميد حلقي‎ ‏بالنسبة للزمسن‎
Al ABC AB AA B Al ABC AB A B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B 5/6 ry Yv t a \ 7 7 1 ١ o y AR! ¢ ° Ad t of 91 Al ‏ساعتثان‎ ‎vy YA Ya £ N 7 Y ١ Y N t Vo YA ¢ N A 1. oy AA N aclu ‏؛‎ ‎10 ‎VY N 71 N Ve ‏صفر‎ N \ N ١ 7 N 7 N 7 As N oq N vy Stele 09 05 N N N 84 ١ N N N ١ YA N N N 7 1 N N N A aclu ‏؛‎ ‎43/BD ‎7 of of N oA ١ ‏صفر‎ ١ N ‏صفر‎ | 4 ty iY N fe ‏صفر صفر صفر‎ N ‏ساعات | صفر‎ 1 04/BD £9 ft £Y N fy ‏و‎ 1١ 7 N ua | 1 to 51 N £4 ‏صفر صفر صفر‎ N ‏ساعات | صفر‎
HIV+
AY N Al N ‏صفر | 5م‎ N ‏صفر‎ ١] ‏صفر‎ | ١" N 14 N ve \ N ‏صفر‎ N ١ ‏ساعات‎ 1
IgA/D
TA N YA N 1v Y N \ N Y Ye N Ye N 7 1 N ١ N ye ‏ساعات‎ + ‏بعد إضافة‎ =ABC ‏بعد؛ 8م- بعد إضافة الجسم المضاد إلى سلسلة بيتا؛ مم- بعد إضافة الجسم المضاد إلى سلسلة ألفا؛‎ =p ‏قبل؛‎ -8 ‏1م بعد إضافة الجسم المضاد إلى مولدات المضادات‎ fcyclophosphoamide ‏الجسم المضاد إلى سلسلة ألفا أو بيتا وفوسفوأميد حلقي‎ ١ ٍ .1 ‏من الفئة‎
YVAA
YY.
Vo ‏الجدول‎ ‎CD4 ‏و‎ CD8
Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B ‏م‎ ‎5/6 ‎iv va vi 9 9 \ 7 Y ‏و صفر صفر‎ A A 7 7 3 ve 1 7 7 Sela qy q. AN qt N ‏صفر‎ 7 Y ‏صفر‎ N ‏و‎ ٌ A r N £ i q 7 N ‏ساعة‎ YE ay N AY N 91 \ N 7 N \ r N 97 N t t N 7 N ¥ ‏ساعتان‎ ‎09 ‎oy N N N 10 7 N N N Y YA N N N 71 Vo N N N Va ‏ساعة‎ Yt ١١ ‏الجدول‎ ‎DR ‏و‎ CD3
Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B B 5/6 ° N YY ° N Y N Yeo 7 N £ N 1 t N AY N -X q. N ‏ساعتان‎ ‎10 ‎VY N YY N 9 £ N 7 N £ ¢ N A N £ AY N 1 N AY ‏ساعتان‎ ‎09 ‎7 N N N 3 7 N N N Y 74 N N N Ye ‏ار‎ N N N Ve ‏ساعة‎ Yi
YYAA
YY
١١ ‏الجدول‎ ‎CD3 ‏و‎ CD56 5 CD16
Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B 5/6 q. N VE qt N \ N 7 ١ N ° N q ° N t N 7 ‏صفر‎ N ‏ساعتان‎ ‎10 ‎97 N 10 N 97 \ N 7 N 1١ 1 N Vi N 1 \ N \ N ‏ساعتان صفر‎ 09 14 N N N Yu Y N N N 7 ‏م‎ N N N 71 ١ N N N ‏ساعة ب‎ YE : : VA ‏الجدول‎ ‎CD14 ‏و‎ CD45
CD45+CD14+ CD45+H CD45+M CD45+L Co]
A
Al ABC AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B ID
B
5/6 ‏صفر‎ ١ 1 ١ 1 iy i on £Y oo ry o. o. ‏صفر 13 رذ‎ Ye ° ‏ساعتان صفر صفر‎ 10 ‏صفر‎ N \ N ١ TY N £Y N of Yo N of N ty ‏صفر‎ N ‏صفر‎ N ‏ساعتان صفر‎ 09 2 N N N 7 vi N N N vy 11 N N N YA \ N N N Y dell YE
HIV+ 97 N 7 N 7 1 N XY N yy ١ N ١ N 217 1 N ‏و‎ N £ ‏ساعات‎ 1
IgA/D
N { N 1 i N Te N ty £f N 791١ N £ $ N ‏ا‎ N Y ‏ساعات‎ +١
YYAA
١١ ‏الجدول‎ ‎CD28 ‏و‎ CDS cos cozs Cosco cos =
Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B ‏ن‎ ‎5/6 ‎qf N A qo N ١ N ‏ع‎ 1 N 7 N £ ١ N ‏ين‎ N 1 7 N ‏ساعتان‎ ‎8 ‎N N Al N ay N N Y N \ N N ° N 7 N N 1 N t Clie la
Y. { ‏الجدو‎ ‎CD2 ‏و‎ )4 ‏بمومبوق‎ Cosco cor
Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B Al ABC AB AA B . 5/6
N N 1١ 1. N N N Ye 7 N N N 17 1 N N N Yi ١ N ‏ساعتان‎ ‎N Ye Ye AY N N ‏ين 7 لا‎ N N H Yy 7 N N 9 4 ١ N ‏ساعة‎ Yt
HIV+
N +4 1 77 YY N Ve 3 5 t N 17 ١ AS! XY. N 7 1 ١ 0 ‏ساعتان‎ ‎BB/ST ‎N Yo YA vy YY N ‏أ‎ YY Ye. 71 N Yo Vo Ve Vo N ١ rr YY 7 ‏ساعتان‎ ‎N 1 £9 ‏م‎ N N YA 4 Yv N N 4 7 7 N N AR! Yq ١ N ‏ساعة‎ Y¢
YYAA
الجدول ‎YY‏ ‏تحليل ‎FACS‏ باستخدام خلايا مشتقة من الطبقة الطافية البشرية تحليل لمدة تحليل ‎saad‏ | تحليل لمدة ‎YE‏ | تحليل لمدة 4 تحليل لمدة تحليل لمدة ساعتين ساعتين ساعة ساعة © أيام © أيام ‎Salsas les ee‏ واسم ‎CD‏ ‏الابتدائي غير المعالجة المعالجة غير المعالجة المعالجة غير المعالجة المعالجة م ااا ‎|r | ene‏ سي ‎ver |e Loe Lone foe bom |e | ooo |‏ ‎|e‏ صر | ‎ova en‏ ‎ee fons Love Lover [oes |e | ooow |‏ ‎oar‏ ال | ‎oo‏ ‏يُعبر عن القيم بالنسبة المئوية للخلايا التي تُعبر عن الواسمات ‎YVYAA‏
٠+ ١ ‏المخطط‎ ‏التغيرات في النمط المناعي لعينة الدم غير المعالجة والمعالجة للمرضى (؛ و ؛) باستخدام جسم‎ ‏مقاسة بالنسبة للزمن‎ HLA-DR ‏المضاد‎ Al gal ‏مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎ ‏الزمن‎ FL2 FL1 ‏بدون في وجود‎ ‏ساعتان‎ CD14 CD45 WITHO002 NOTHINGO001 ‏ساعات‎ 1 CD14 CD45 WE002 NO001 ‏ساعة‎ YE CD14 CD45 002002 001001 ‏ساعتان‎ CD19 CD3 WITHO04 NOTHING003 ‏ساعات‎ 1 CD19 CD3 04 NOO003 ‏؛؟ ساعة‎ CD19 CD3 002004 001003 ‏ساعثان‎ 008 CD4 WITHO005 NOTHING004 ‏ساعات‎ 1 008 CD4 WEO005 NO004 dela YE 008 CD4 002005 001004 ‏ساعتان‎ DR CD3 WITHO006 NOTHINGO005 ‏ساعات‎ 1 DR CD3 WEO006 NOO005 ‏ساعة‎ YE DR CD3 002006 001005 ‏ساعتان‎ CD16 ‏6,ر,‎ CD3 WITHO007 NOTHING006 ‏ساعات‎ CD16 5 CD56 CD3 WEO007 NOO006 ‏ساعة‎ YE CD16 5 CD56 CD3 002007 001006 ‏ساعتان‎ 008 CD3 W004 N003 ‏ساعات‎ 1 008 003 WEO008 NOO007 dela YE 008 CD3 002008 001007 ‏غلا‎
‘Yeo iY ‏المخطط‎ ‏؛) باستخدام جسم‎ 7 (Y) ‏التغيرات في النمط المناعي لعينة الدم غير المعالجة والمعالجة للمرضى‎ ‏مقاسة‎ PE ‏المقترن ب‎ HLA-DR ‏مضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لمولد المضاد‎ ‏بالنسبة للزمن‎ ° ‏الزمن‎ FL2 FL1 ID ‏ساعتان‎ 00014 CD45 WL003 ‏ساعات‎ 1 CD14 CD45 WELO003 ‏ساعة‎ YE CD14 CD45 003003 ‏ساعتان‎ CD19 CD3 WL005 ‏ساعات‎ 1 CD19 CD3 ‏15م‎ ‏ساعة‎ Ye CD19 CD3 003005 ‏ساعتان‎ 008 CD4 © WL006 ‏ساعات‎ CD8 CD4 WELO006 ‏ساعة‎ Yi CD8 ‏فسن‎ 003006 ae la DR CD3 WL007 ‏ساعات‎ 1 DR CD3 WELO007 ‏ساعتان‎ CD16 5 CD65 CD3 WL008 ‏ساعات‎ 1 CD16 5 CD56 CD3 WELO008 ‏ساعتان‎ CD8 CD3 WL005 ‏ساعات‎ 1 008 CD3 WELO009
YYAA
١ ‏المخطط‎
التغيرات في النمط المناعي لعينة الدم غير المعالجة والمعالجة للمريض ‎)١(‏ باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لمولد المضاد ‎(HLA-DR‏ هذا الجسم المضاد والفوسفوأميد
° الحلقي ‎ccyclophosphoamide‏ الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-ألفا لمولد
المضاد ‎(HLA-DR‏ والجسم المضاد أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لمولد المضاد من ‎TAG‏
مقاسة بالنسبة للزمن
في وجود بدون ‎FL2 FL1‏ الزمن 1م17 ‎CD14 CD45‏ ساعتان
‎CD14 CD45 A2B001:AB‏ ساعتان ‎CD45 A2A:AA‏ 0014 ساعتان ‎CD45 DNAAOO1:ABC‏ 0014 ساعتان ‎CD14 CD45 A1001:Al‏ ساعتان ‎NC001‏ 003 009 ساعتان
‎CD3 C2B001:AB‏ 0019 ساعتان ‎CD19 CD3 C2A001:AA‏ ساعتان ‎CD19 CD3 DNACO001:ABC‏ ساعتان ‎CD3 C1001:A1‏ و0 ساعتان 21م ‎YE CD19 CD3‏ ساعة 8 4ه 003 009 ‎YE‏ ساعة ‎YE | CD19 CD3 A2A24HO001:AA‏ ساعة ‎YE CD19 CD3 A2BX24H001:ABC‏ ساعة ‎CD4 1101‏ 008 ساعتان
‎CD4 D2B001:AB‏ 008 ساعتان ‎CD4 D2A001:AA‏ 008 ساعتان ‎CD4 DNADO01:ABC‏ 008 ساعتان ‎CD4 D1001:A1‏ 008 ساعتان
‎YVYAA
YY
‏الزمن‎ FL2 FL1 ‏في وجود بدون‎ ‏ساعة‎ YE ‏قم‎ CD4 D124H001:Al ‏ساعة‎ YE ‏قم‎ CD4 D2BX24H001:ABC ‏ساعة‎ YE ‏قم‎ CD4 D2B001:AB ‏ساعة‎ Yi CD8 CD4 D2A001:AA ‏ساعتان‎ DR CD3 E1001:Al ‏ساعتان‎ DR CD3 E2B001:AB ‏ساعتان‎ DR CD3 E2A001:AA ‏ساعتان‎ CD16 CD56 CD3 F1001:Al ‏ساعتان‎ CD16 ‏6ه ر,‎ CD3 F2B001:AB ‏ساعتان‎ CD16 5 CD56 CD3 F2A001:AA ‏ساعتان‎ 008 CD28 G1001:Al ‏ساعتان‎ 0058 CD28 G2A001:AA ‏ساعتان‎ CDS CD28 G2B001:AB ‏ساعتان‎ CD13 ‏3ه‎ 00 H1001:Al ‏ساعتان‎ CD13 CD33 CD7 H2A001:AA ‏ساعتان‎ CD13 5 CD33 CD7 H2B001:AB ‏ساعتان‎ CD5 CD21 12A001:AA ‏ساعتان‎ CD5 CD21 12B001:AB ‏ساعتان‎ CD2 CD34 J2A001:AA ‏ساعتان‎ CD2 CD34 J2B001:AB ‏ساعة‎ YE ‏يمن‎ CD34 B2A24H001:AA ‏ساعة‎ Y¢ CD2 CD34 B2B24H001:AB ‏ساعة‎ YE ‏دمن‎ CD34 B2BX24H001:ABC ‏ساعتان‎ CD25 CD10 K2B001:AB ‏ساعتان‎ CD25 CD10 K2A001:AA
YVAA
YYA
‏المخطط ؟‎ ‏باستخدام الجسم المضاد أحادي‎ (A) ‏التغيرات في النمط المناعي لعينة الدم غير المعالجة والمعالجة للمريض‎
HLA-DR ‏المضاد‎ a gal ‏النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا‎ ‏الزمن‎ FL2 FL1 ‏في وجود بدون‎ ‏ساعتان‎ CD14 CD45 NAO0O1 ‏ساعتان‎ 0014 CD45 A2001 ‏ساعتان‎ CD19 CD3 CNO001 ‏و00 ساعتان‎ CD3 C2001 ‏ساعتان‎ CD8 ‏فسن‎ DNO001 ‏ساعتان‎ 008 CD4 D2001 ‏ساعتان‎ DR CD3 ENO001 ‏ساعتان‎ DR CD3 E2001 ‏ساعتان‎ CD16 ‏6م ر‎ 003 11101 ‏ساعتان‎ CD16 ‏6م ر‎ CD3 F2001 ‏ساعتان‎ 008 CD28 06001 ‏ساعتان‎ CDS CD28 G2001 ‏وس ساعتان‎ CD7 HNO0O01 ‏5س ساعتان‎ CD7 H2001 ‏ساعتان‎ CD20 CD13 IN0O1 ‏ساعتان‎ CD20 CD13 12001 ‏ساعتان‎ CD25 CD45RA 1101 ‏ساعتان‎ CD25 CD45RA 12001 ‏ساعتان‎ CD23 CD57 KNO001 ‏ساعتان‎ CD23 CD57 K2001
YVAA
٠ ‏المخطط ؛‎
التغيرات في النمط المناعي لعينة الدم غير المعالجة والمعالجة للمريض ‎)٠١(‏ باستخدام الجسم المضاد
أحادي النسيلة ضد المنطقة المتماثلة لسلسلة-بيتا لمولد المضاد ‎HLA-DR‏ والجسم المضاد أحادي النسيلة ° ضد المنطقة المتماثلة لمولدات المضادات من الفئة 1
في وجود بدون ‎FL2 FL1‏ الزمن
‎CD14 CD45 CLLO0001‏ ساعتان
‎CD14 CD45 CLL1001‏ ساعتان
‎CD14 CD45 CLL2001‏ ساعتان
‎CD3 CLLO0003‏ و0019 ساعتان
‏003 و0019 ساعتان
‎CD19 CD3 CLL1003‏ ساعتان
‎CD19 CD3 CLL2003‏ ساعتان
‎CD8 CD4 CLL0004‏ ساعتان
‎CDS CD4 CLL1004‏ ساعتان
‎CD4 CLL2004‏ 0058 ساعتان
‎DR CD3 0011005‏ ساعتان
‎DR CD3 CLL1005‏ ساعتان
‎DR CD3 CLL2005‏ ساعتان
‎CD16 CD56 3 CLL0006‏ ساعتان
‎ CD3 CLL1006‏ 6كس, ‎CD16‏ ساعتان
‎Cela CD16 sCD56 CD3 CLL2006
‎YVAA

Claims (1)

  1. VY. ‏عناصر الحماية‎
    ‎-١ ١‏ جهاز لتكوين و/أو زيادة العدد النسبي للخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ في تجمع خلوي ‎cell population‏ يحتوي على ‎LOA‏ متحولة ‎Gus committed cells‏ يتكون ¥ هذا الجهاز من حجرة ‎chamber‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا المتحولة ¢ إلى هذه ‎pall‏ وسيلة لإدخال عامل يجعل خلية متحولة تتمايز ارتجاعياً ‎retrodifferentiate °‏ إلى خلية غير متمايزة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة حضن ‎incubation‏ ‏ّي لحضن هذا العامل مع هذه الخلايا المتحولة بحيث تتمايز خلية متحولة ارتجاعياً إلى خلية 7 غير متمايزة؛ وسيلة قياس ‎measuring‏ لقياس حجم هذا التجمع الخلوي؛ وسيلة للعد ‎al counting A‏ الخلايا ولقياس التركيز الخلوي ‎cell concentration‏ في هذا التجمع الخلوي 9 ووسيلة حساب ‎calculator‏ لحساب حجم العامل الذي يراد إضافته إلى الحجرة.
    ‎١‏ ؟- الجهاز ‎Ty‏ لعنصر الحماية ) ‎Cum‏ يكون مكون ‎component‏ واحد أو أكثر من مكونات ‎Y‏ الجهاز قابلة للاستخدام مرة واحدة ‎.disposable‏
    ‏7< الجهاز ‎Ty‏ لعنصر الحماية ‎١‏ أو ؛ حيث تكون وسيلة العد ‎counting‏ عبارة عداد كولتر ‎coulter counter Y‏ أو مقياس خلوي ‎cytometer‏ مناسب أخر.
    ‎٠‏ +- الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث يشتمل على وسيلة نقل ‎transfer Y‏ لنقل كمية من التجمع الخلوي ‎cell population‏ المذكور من وعاء تخزين و ‎storage container‏ إلى الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎١‏ #- الجهاز ‎Gy‏ لأي ‎pale‏ من عناصر الحماية ‎dil‏ حيث يشتمل على وسيلة نقل ‎Ja transfer Y‏ كمية محددة مسبقاً من التجمع الخلوي ‎cell population‏ المذكور من وعاء ‎v‏ تخزين ‎storage container‏ إلى الحجرة ‎chamber‏ المذكورة. ‎YYAA‏
    YT
    ‎0١‏ +- الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث ‎Jad‏ على وسيلة نقل ‎Jad transfer Y‏ حجم معين من العامل ‎agent‏ إلى الحجرة ‎chamber‏
    ‎١‏ 7- الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث يشتمل على وسيلة نقل ‎transfer Y‏ لنقل حجم محسوب من العامل ‎agent‏ إلى الحجرة ‎.chamber‏
    ‎—A ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لعنصر الحماية 6 أو ١؛‏ حيث تكون وسيلة ‎transfer Jil‏ الإضافية المذكورة ‎Y‏ عبارة عن محقنة ‎syringe‏ تعمل بواسطة محرك عدئم.
    ‎١‏ 4- الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎Aiud)‏ حيث يشتمل على وسيلة للتحكم في ‎Y‏ ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ للتحكم في تركيز ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ 7 في الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎-٠ ١‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث يشتمل على وسيلة تحكم في ‎Y‏ درجة الحرارة للتحكم في درجة حرارة الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎-١ ١‏ الجهاز وفقآ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث يشتمل على وسيلة خلط لخلط ‎Y‏ التجمع الخلوي ‎cell population‏ والعامل ‎agent‏ داخل الحجرة ‎.chamber‏
    ‎IY‏ الجهاز ‎Gs‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎Al‏ حيث يشتمل على وسيلة توقيت ‎Y‏ 8 لحساب فترة الحضن ‎.incubation‏
    ‎-١* ١‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎dl‏ حيث يشتمل على وسيلة عرض ‎display Y‏ لعرض الفترة الزمنية المتبقية من فترة الحضن 0 للمستخدم.
    ‎YVAA :
    اد
    ‎VE‏ الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎dil‏ حيث يشتمل على وسيلة تتبيه ‎alarm Y‏ لتتبيه المستخدم باكتمال فترة الحضن ‎.incubation‏
    ‎-١# ١‏ الجهاز وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية السابقةء حيث يشتمل على وسيلة جمع ‎harvesting Y‏ لجمع الخلايا ‎cells‏ من الحجرة ‎.chamber‏
    ‎-١١ 0١‏ الجهاز ‎Gy‏ لعنصر الحماية 10 حيث تقوم وسيلة الجمع ‎harvesting‏ بجمع الخلايا غير ‎Y‏ المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ من الحجرة ‎.chamber‏
    ‎Gy Sead -١١7 ١‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ ‎Jad Cus‏ على وسيلة إزالة ‎removal Y‏ لإزالة عينة من الخلايا تشتمل على ‎WA‏ غير متمايزة ‎undifferentiated cells‏ ¥ من الحجرة ‎chamber‏ إلى ‎eles‏ تخزين ‎.storage container‏
    ‎YA ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎dill‏ حيث يشتمل على وسيلة غلق ‎Y‏ 8 لغلق وعاء التخزين ‎storage container‏ الذي يشتمل على تجمع الخلايا ‎cell population 3‏ التي تشمل الخلايا غير المتمايزة ‎.undifferentiated cells‏
    ‎١‏ - الجهاز ‎Ty‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎ABD‏ حيث تكون الخلايا المتحولة ‎committed cells 7‏ عبارة عن ‎WA‏ غير سرطانية ‎.non-cancer cells‏
    ‎Yo ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎Cun ABD‏ تكون الخلايا المتحولة ‎committed cells Y‏ عبارة عن ‎WIA‏ متمايزة ‎.differentiated cells‏
    ‏لاا
    ‎-7١ \‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث تكون الخلايا ‎Y‏ المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن خلايا ‎Ne Sed Jp ana‏ للدم
    و ‎.committed haematopoietic cells‏ ‎١‏ 77”- الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية ‎Ail‏ حيث تختار الخلايا المتحولة ‎committed cells Y‏ من الخلايا المكونة لمستعمرة خلاياً ‎T-cell colony-forming cells T‏ ¥ (خلايا ‎((CFC-T‏ الخلايا المكونة لمستعمرة خلايا ‎B-cell colony-forming cells B‏ (خلايا ‎((CFC-B ¢‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا الايزينوفيلية ‎eosinophil cell colony-forming‏ ‎cells °‏ (خلايا ‎«(CFC-Eosin‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخحاايا القاعدية ‎basophils cell colony-forming cells 1‏ (خلايا ‎¢(CFC-Bas‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا 7 الحبيبية/الخلايا البيضاء أحادية النواة ‎granulocyte/monocyte colony-forming cells‏ ‎A‏ (خلايا ‎((CFC-GM‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا النقيية الكبيرة ‎megakaryocyte colony-forming cells q‏ (خلايا ‎((CFC-MEG‏ الخلايا المكونة لانفجار ‎٠١‏ خلايا الدم الحمراء ‎erythrocyte burst-formig cells‏ (خلايا ‎(BFC-E‏ الخلايا المكونة ‎١‏ لمستعمرة ‎LOA‏ الدم الحمراء ‎erythrocyte colony-forming cells‏ (خلايا ‎«(CFC-E‏ خلايا ‎B WAST ‏الجهاز وفقآ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث تكون الخلايا غير المتمايزة‎ SYY ١ .pluripotent stem cells ‏عبارة عن خلايا جذعية وافرة القوة‎ undifferentiated cells Y ‏لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث تكون الخلايا غير‎ Gy ‏الجهاز‎ YE ١ ‏عبارة عن خلايا جذعية تختار من الفكة‎ undifferentiated cells ‏المتمايزة‎ 1 ‏خلايا‎ haematopoietic stem cells ‏التى تتكون من خلايا جذعية مكونة للدم‎ v epithelial stem cell ‏جذعية ظهارية‎ LA (neuronal stem cells ‏جذعية عصبية‎ ¢ ‏خلايا جذعية‎ mesenchymal stem cells ‏خلايا جذعية من الطبقة المتوسطة‎ ° ‏لاا‎
    VY
    1 باطنية الأدمة ‎LOA yendodermal stem cells‏ جذعية جنتينية وافرة ل القوة ‎.embryonic pluripotent stem cells‏
    ‎—Yo ١‏ الجهاز وفقا لأي ‎pale‏ من عناصر الحماية ‎AGL‏ حيث تتميز الخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells Y‏ بواسم واحدٍ أو اكثر من الواسمات 5 الموجودة على سطح 7 الخلية ‎cell surface‏ بالرموز التالية: ‎(AC133 «CD117 «CD38 HLA-DR «CD34*‏ ‎CD90 £‏ ر/أر ‎.CD45low‏
    ‎١‏ 7- الجهاز ‎Gay‏ لأي من عناصر الحماية ‎١‏ إلى ؛7؛ حيث تتميز الخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ بواسم على سطح الخلية ‎cell surface marker‏ بالرمزين 1 05 و 014.
    ‎-7١ ١‏ الجهاز وفقاً لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة حيث تكون الخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ عبارة عن خلايا معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC) ¥‏ من الفئة 1 و/أو من الفئة *1.
    ‎-YA ١‏ الجهاز ‎Way‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة؛ حيث يرتبط العامل ‎agent‏ بمستقبل ‎day receptor Y‏ احتجاز ‎capture‏ التعرف على ‎recognition‏ أو عرض ‎presentation‏ ‏¥ مولد مضاد ‎antigen‏ على سطح الخلايا المتحولة ‎.committed cells‏
    ‎١‏ 4- الجهاز وفقاً لعنصر الحماية ‎(YA‏ حيث يكون المستقبل ‎receptor‏ عبارة عن ‎Age‏ مضاد ‎Y‏ معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ من الفئة 1 أو من الفئة 11. ‎YVAA‏
    \Yo il ‏من‎ antigen ‏حيث يكون مولد المضاد‎ (YA ‏الجهاز وفقاً لعنصر الحماية‎ -٠ ١ iy a ‏ع‎ al) ‏الدم‎ Wan ‏عبارة عن مستقبل اذ المرتبط‎ 1 Y (HLA-C ‏مستقبل‎ «HLA-B ‏مستقبل‎ <Human-Leukocyte-Associated (HLA)-A receptor v ‏من‎ antigen ‏أو يكون مولد المضاد‎ HLA-G ‏أو مستقبل‎ HLAF ‏مستقبل‎ (HLA-E ‏مستقبل‎ ¢ ‏أو‎ HLA-DQ ‏مستقبل‎ <HLA-DP ‏مستقبل‎ (HLA-DM ‏الفئة 11 المذكور عبارة عن مستقبل‎ ° HLA-DR ‏مستقبل‎ 1
    ‎١‏ ١؟-‏ الجهاز ‎Gay‏ لعنصر الحماية ‎Cus "٠‏ يكون المستقبل ‎Le receptor‏ 3 عن مستقبل ‎HLA-DR Y‏
    ‎١‏ 7- الجهاز ‎Tay‏ لعنصر الحماية ‎(YA‏ حيث يشتمل المستقبل ‎receptor‏ على سلسلة بيتا ‎B-chain Y‏ بها مناطق متماظة ‎.homologous regions‏
    ‎-YY ١‏ الجهاز ‎Ty‏ لعنصر الحماية ‎FY‏ حيث يشتمل المستقبل ‎receptor‏ على الأقل على ‎Y‏ المناطق ‎homologous regions Able)‏ من السلسلة بيتا«نهط»-8 من ‎HLA-DR‏
    ‎-Y¢ ١‏ الجهاز وفقاً لعنصر الحماية ‎YA‏ « حيث يكون العامل ‎agent‏ عبارة عن جسم مضاد ‎antibody Y‏ للمستقبل ‎receptor‏
    ‎-١ 5 ١‏ الجهاز وفقاً لعنصر الحماية ‎(YE‏ حيث يكون العامل ‎agent‏ عبارة عن جسم مضاد أحادي ‎Y‏ النسيلة ‎monoclonal antibody‏ للمستقبل ‎receptor‏
    ‎١‏ “©- الجهاز ‎Gay‏ لعنصر الحماية ‎VE‏ أو 75 حيث يتم اختيار الجسم المضاد ‎antibody‏ من ‎Y‏ المجموعة التي تتكون من الجسم المضاد ‎AN‏ النسيلة ‎CR3/43 monoclonal antibody‏ ‎v‏ والجسم المضاد أحادي النسيلة ‎"TAL 1B5‏
    ‎YYAA
    ‎TV‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة حيث يقوم العامل ‎agent‏ بتعديل 1 التعبير عن جين معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex‏ ‎(MHC) v‏ ‎١‏ 6 - الجهاز وفقاً لعنصر الحماية ‎YY‏ حيث يقوم العامل ‎agent‏ بتعديل التعبير عن معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ من الفئة ‎I‏ و/أو من ‎asl 1‏ *]1. ‎TA‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية السابقة حيث يكون التجمع الخلوي ‎Lay cell population Y‏ فيه الخلايا المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن عينة دم من الطبقة 1 الطافية ‎buffy coat blood sample‏ أو يحصل عليها من عينة دم من الطبقة الطافية. ‎١‏ 6- جهاز لتكوين و/أو زيادة العدد النسبي للخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ في ‎Y‏ تجمع خلوي ‎cell population‏ يحتوي على خلايا متحولة ‎Cua ccommitted cells‏ يتكون هذا الجهاز من حجرة ‎chamber‏ وسيلة لإدخال تجمع خلوي يحتوي على الخلايا $ المتحولة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة لإدخال عامل ‎agent‏ يجعل خلية متحولة تتمايز ° ارتجاعياً ‎retrodifferentiate‏ إلى خلية غير متمايزة إلى هذه الحجرة؛ وسيلة حضن ‎incubation 1‏ لحضن هذا العامل مع هذه الخلايا المتحولة بحيث تتمايز خلية متحولة ل ارتجاعياً إلى خلية غير متمايزة؛ ووسيلة خلط لخلط التجمع الخلوي والعامل داخل ‎A‏ الحجرة حيث تشتمل وسيلة الخلط المذكورة على ذراع ذي أرياش ‎paddle arm‏ واحد 9 على الأقل. ‎١‏ 49- الجهاز ‎Wy‏ لعنصر الحماية ‎cfr‏ حيث يكون مكون ‎component‏ واحد أو أكثر من 1 مكونات الجهاز ‎ALE‏ للاستخدام مرة واحدة ‎.disposable‏
    YYAA
    لا
    Jac ‏عبارة‎ counting ‏حيث تكون وسيلة العد‎ cf) ‏لعنصر الحماية 560 أو‎ Tay ‏؛- الجهاز‎ ١ ‏مناسب أخر.‎ cytometer ‏أو مقياس خلوي‎ coulter counter ‏كولئر‎ Y
    ‎١‏ 9؛- الجهاز ‎GE‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎5٠0‏ إلى 47؛ حيث يشتمل على وسيلة ‎transfer Jas Y‏ لنقل كمية من التجمع الخلوي ‎cell population‏ المذكور من ‎sles‏ تخزين ‎storage container v‏ إلى الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎١‏ - الجهاز وفقاً لأي عنصر من عناصر الحماية من 560 إلى ‎Cua cf Y‏ يشتمل على وسيلة ‎Ja Y‏ :© لنقل كمية محددة مسبقاً من التجمع الخلوي ‎cell population‏ المذكور من ‎ele v‏ تخزين ‎storage container‏ إلى الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎٠‏ ©5؛- الجهاز وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية من £0 إلى 44؛ حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ نقل ‎transfer‏ لنقل حجم معين من العامل ‎agent‏ إلى الحجرة ‎.chamber‏
    ‎—E1 ١‏ الجهاز وفقاً لأي عنصر من عناصر الحماية من 560 إلى 80 حيث يشتمل على وسيلة نقل ‎Jill transfer‏ حجم محسوب من العامل ‎agent‏ إلى الحجرة ‎.chamber‏
    ‎١‏ 7؛- الجهاز وفقاً لعنصر الحماية 8؛ حيث تكون وسيلة النقل ‎transfer‏ الإضافية المذكورة ‎Y‏ عبارة عن محقنة ‎syringe‏ تعمل بواسطة ‎.motor & yaa‏
    ‎١‏ 8؛- الجهاز وفقآ لأي عنصر من عناصر الحماية من 460 إلى ‎EY‏ حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ للتحكم في ثاني أ كسيد الكربون ‎carbon dioxide‏ للتحكم في تركيز ثاني أكسيد الكربون ‎carbon dioxide ¥‏ في الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎YYAA
    ١
    ٠9؛-‏ الجهاز وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية من £0 إلى ‎(EA‏ حيث يشتمل على وسيلة ل تحكم في درجة الحرارة للتحكم في درجة حرارة الحجرة ‎chamber‏ المذكورة.
    ‎mor ١‏ الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 58 إلى £9( حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ توقيت ‎timing‏ لحساب فترة الحضن ‎.incubation‏
    ‎m0)‏ الجهاز وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية من £0 إلى +©؛ حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ عرض ‎display‏ لعرض الفترة الزمنية المتبقية من فترة الحضن ‎incubation‏ للمستخدم .
    ‎-oY \‏ الجهاز وفقاً لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎Ev‏ إلى )0( ‎dus‏ يشتمل على وسيلة ‎Y‏ تنبيه ‎alarm‏ لتنبيه المستخدم باكتمال فترة الحضن ‎.incubation‏
    ‎—oT ١‏ الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 560 إلى ‎OF‏ حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ جمع ‎harvesting‏ لجمع الخلايا ‎cells‏ من الحجرة ‎.chamber‏
    ‎١‏ 0€— الجهاز ‎By‏ لعنصر الحماية ‎oF‏ حيث تقوم وسيلة الجمع ‎harvesting‏ بجمع ‎WAY‏ غير ‎Y‏ المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ من الحجرة ‎.chamber‏
    ‎moo ٠١‏ الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 560 إلى ‎0F‏ حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ إزالة ‎removal‏ لإزالة ‎due‏ من الخلايا تشتمل على ‎WA‏ غير متمايزة ‎undifferentiated‏ ‎cells ¥‏ من الحجرة ‎chamber‏ إلى وعاء تخزين ‎.storage container‏
    ‎—0T ١‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎5٠0‏ إلى 00 حيث يشتمل على وسيلة ‎Y‏ غلق ‎sealing‏ لغلق وعاء التخزين ‎storage container‏ الذي يشتمل على التجمع 3 الخلوي ‎cell population‏ التي تشمل ‎WAN‏ غير المتمايزة ‎.undifferentiated cells‏
    ‎YYAA
    8ق ‎OV ١‏ الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 56 إلى 01 ‎Cua‏ تكون الخلايا ‎Y‏ المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن خلايا غير سرطانية ‎.non-cancer cells‏ ‎١‏ #8- الجهاز ‎Gi‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎fr‏ إلى ‎OV‏ حيث تكون الخلايا ‎Y‏ المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن خلايا متمايزة ‎.differentiated cells‏ ‎0١‏ 24- الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 50 إلى ‎OA‏ حيث تكون الخلايا 4 المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن ‎WA‏ متحولة مكونة للدم
    ؤ ‎.committed haematopoietic cells‏ ‎-٠ \‏ الجهاز ‎Gay‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 56 إلى 08 حيث تختار الخلايا 4 المتحولة ‎committed cells‏ من الخلايا المكونة لمستعمرة خلايا ‎T-cell T‏ و ‎colony-forming cells‏ (خلايا ‎LSA) «(CFC-T‏ المكونة لمستعمرة خلايا ‎B-cell B‏ ‎((CFC-B WA) colony-forming cells ¢‏ الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا الايزينوفيلية ‎eosinophil cell colony-forming cells °‏ (خلايا ‎«(CFC-Eosin‏ الخلايا المكوفة 1 لمستعمرة الخلايا القاعدية ‎basophils cell colony-forming cells‏ (خلايا ‎«(CFC-Bas‏ ‏الخلايا المكونة لمستعمرة الخلايا الحبيبية/الخلايا البيضاء أحادية النواة ‎granulocyte/monocyte colony-forming cells A‏ (خلايا ‎«(CFC-GM‏ الخلايا المكونة 9 لمستعمرة الخلايا النقيية الكبيرة ‎megakaryocyte colony-forming cells‏ (خلايا ‎(CFC-MEG ٠١‏ « الخلايا المكونة لانفجار خلايا الدم الحمراء ‎erythrocyte burst-formig cells‏ ‎١‏ (خلايا ‎(BFCE‏ » الخلايا المكونة لمستعمرة خلايا الدم ‎erythrocytes! y—aadl‏ ‎colony-forming cells VY‏ (خلايا ‎(CECE‏ خلايا 7 وخلايا 8. ‎YYAA
    ٠ ‎١ ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎fe‏ إلى 0 حيث تكون الخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ عبارة عن ‎WA‏ جذعية وافرة القوة
    ‎.pluripotent stem cells v‏ ‎CTY ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎5٠0‏ إلى )1 حيث تكون الخلايا ‎Y‏ غير المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ عبارة عن خلايا جذعية تختار من الففة ‎v‏ التي تتكون من خلايا جذعية مكونة للدم ‎LOLA chaematopoietic stem cells‏ ¢ جذعية عصبية ‎UA ¢neuronal stem cells‏ جذعية ظهارية ‎cepithelial stem cell‏ خلايا ° جذعية من الطبقة المتوسطة ‎(mesenchymal stem cells‏ خلايا جذعية باطنية 1 الأدمة ‎endodermal stem cells‏ وخلايا ‎ial 5,8, Aan a A eds‏
    ل ‎.embryonic pluripotent stem cells‏ ‎١‏ 17- الجهاز ‎By‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من ‎fe‏ إلى ‎AY‏ حيث تتميز ‎WAY‏ غير ‎Y‏ المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ بواسم واحد أو ‎ASI‏ من الواسمات ‎markers‏ الموجودة ¥ على سطح الخلية ‎cell surface‏ بالرموز التالية: ‎«CD117 «CD38 «HLA-DR «CD34*‏
    ‎.CD45low sl CD90 (ACI33 ¢‏ ‎١‏ 4- الجهاز ‎GE‏ لأي من عناصر الحماية 560 إلى ‎AY‏ حيث تتميز الخلايا غير المتمايزة ‎undifferentiated cells Y‏ بواسم على سطح الخلية ‎cell surface marker‏ بالرمزين 0045 :0 و ‎.CD14"‏ ‎١‏ 16 الجهاز وفقآ لأي عنصر من عناصر الحماية من 56 إلى ‎VE‏ حيث تكون الخلايا غير ‎Y‏ المتمايزة ‎undifferentiated cells‏ عبارة عن خلايا معقد توافق الأنسجة ‎Y‏ الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ من الفئة “1 و/أو من الفئة ‎JI‏ ‎YYAA
    ٠6١ agent ‏يرتبط العامل‎ Cus «10 ‏إلى‎ 4٠0 ‏لأي عنصر من عناصر الحماية من‎ Gy ‏الجهاز‎ -7 ١ ‏أو عرض‎ recognition ‏التعرف على‎ «capture ‏بمستقبل 07 ._يحفز احتجاز‎ Y .committed cells ‏المتحولة‎ LAY ‏على سطح‎ antigen ‏مضاد‎ Al 5 presentation Y ‏عبارة عن مولد مضاد‎ receptor ‏لعنصر الحماية 11( حيث يكون المستقبل‎ Gy ‏الجهاز‎ 7 ١ ‏من الفئة 1 أو‎ Major Histocompatibility Complex (MHC) ‏معقد توافق الأنسجة الرئيسي‎ Y JI ‏من الفئة‎ ¥ ‏من الففة‎ antigen ‏حيث يكون مولد المضاد‎ VY ‏لعنصر الحماية‎ Lady ‏الجهاز‎ -8 ١ ayy dll ‏المرتبط بخاايا الدم الببضاء‎ —A ‏عبارة عن مستقبسل‎ 1 Y (HLA-C ‏مستقبل‎ (HLA-B ‏مستقبل‎ <Human-Leukocyte-Associated (HLA)-A receptor ¥ ‏من‎ antigen ‏أو يكون مولد المضاد‎ HLA-G ‏أو مستقبل‎ HLAF ‏مستقبل‎ (HLAE ‏مستقبل‎ ¢ ‏أو‎ HLA-DQ ‏مستقبل‎ (HLA-DP ‏مستقبل‎ (HLA-DM ‏المذكور عبارة عن مستقبل‎ IT ‏الفئة‎ o HLA-DR ‏مستقبل‎ 1 ‏عبارة عن مستقبل‎ receptor ‏حيث يكون المستقبل‎ CA ‏لعنصر الحماية‎ Tay ‏الجهاز‎ -4 ١ HLA-DR Y Ly ‏على سلسلة‎ receptor ‏لعنصر الحماية 11 حيث يشتمل المستقبل‎ By ‏الجهاز‎ ٠ ١ .homologous regions ‏بها مناطق متماظة‎ B-chain Y ‏على الأقل على‎ receptor ‏حيث يشتمل المستقبل‎ Ve ‏لعنصر الحماية‎ Gy ‏الجهاز‎ —V) ١ HLA-DR ‏من‎ B-chaintiy ‏من السلسلة‎ homologous regions ‏المناطق المتماظة‎ Y
    YYAA
    VEY ‎١/7 ١‏ الجهاز 4 ‎{as‏ لعنصر الحماية 17 حيث يكون العامل ‎agent‏ عبارة عن جسم مضاد ‎antibody Y‏ للمستقبل ‎receptor‏ ‎١‏ 77- الجهاز ‎Ty‏ لعنصر الحماية ‎VY‏ حيث يكون العامل ‎agent‏ عبارة عن جسم مضاد أحادي ‎Y‏ النسيلة ‎monoclonal antibody‏ للمستقبل ‎receptor‏ ‎—VE ١‏ الجهاز ‎Gy‏ لعنصر الحماية ‎VY‏ أو ‎١7‏ حيث يتم اختيار الجسم المضاد ‎antibody‏ من ‎Y‏ المجموعة التي تتكون من الجسم المضاد ‎PAN‏ النسيلة ‎CR3/43 monoclonal antibody‏ 1 والجسم المضاد أحادي النسيلة ‎TAL 1B5‏ ‎٠١‏ #لا- الجهاز ‎Gis‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من 46 إلى ‎VE‏ حيث يقوم 7 العامل ‎agent‏ بتعديل التعبير عن جين معقد توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major‏
    ‎.Histocompatibility Complex (MHC) v‏ ‎١‏ - الجهاز ‎Gy‏ لعنصر الحماية ‎VE‏ حيث يقوم العامل ‎agent‏ بتعديل التعبير عن معقد ‎Y‏ توافق الأنسجة الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ من الفئة ‎I*‏ ‏7 و/أو من الفكة ‎Ir‏ ‎YY‏ الجهاز ‎Gy‏ لأي عنصر من عناصر الحماية من٠؟‏ إلى ‎VT‏ حيث يكون التجمع الخلوي ‎Lay cell population‏ فيه الخلايا المتحولة ‎committed cells‏ عبارة عن عينة دم من الطبقة ‎v‏ الطافية ‎buffy coat blood sample‏ أو يحصل عليها من عيئلة دم من الطبقة الطافية. ‎YYAA
SA01220163A 2000-05-10 2001-06-13 جهاز وطرق لتحضير خلايا غير متمايزة undiferentiated CELLS SA01220163B1 (ar)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/568,254 US9068164B1 (en) 1995-02-02 2000-05-10 Method of preparing an undifferentiated cell
GB0101315A GB0101315D0 (en) 2001-01-18 2001-01-18 A device
US27149701P 2001-02-26 2001-02-26
GB0107093A GB0107093D0 (en) 2001-03-21 2001-03-21 A device

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA01220163B1 true SA01220163B1 (ar) 2007-04-24

Family

ID=27447916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA01220163A SA01220163B1 (ar) 2000-05-10 2001-06-13 جهاز وطرق لتحضير خلايا غير متمايزة undiferentiated CELLS

Country Status (27)

Country Link
US (1) US8163536B2 (ar)
EP (1) EP1366144B1 (ar)
JP (2) JP4860883B2 (ar)
KR (2) KR100967071B1 (ar)
AR (1) AR030280A1 (ar)
AT (1) ATE440944T1 (ar)
AU (1) AU5647701A (ar)
BE (1) BE1014172A3 (ar)
BR (2) BR0110751A (ar)
CA (2) CA2446955C (ar)
CH (1) CH696146B9 (ar)
CY (1) CY1109515T1 (ar)
DE (1) DE60139716D1 (ar)
DK (1) DK1366144T3 (ar)
ES (2) ES2190727B1 (ar)
FR (1) FR2808800B1 (ar)
GB (2) GB2375351B (ar)
HK (1) HK1044172A1 (ar)
IL (2) IL152737A0 (ar)
IT (1) ITMI20010952A1 (ar)
JO (1) JO2295B1 (ar)
MA (1) MA25677A1 (ar)
MX (1) MXPA02012295A (ar)
NL (1) NL1017973C2 (ar)
NZ (2) NZ540481A (ar)
SA (1) SA01220163B1 (ar)
WO (1) WO2001085917A2 (ar)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6946246B1 (en) * 1997-04-08 2005-09-20 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Production of functional proteins: balance of shear stress and gravity
US7565647B2 (en) * 2002-03-22 2009-07-21 Sun Microsystems, Inc. Markup compiler that outputs MIDlets
TWI288779B (en) * 2002-03-28 2007-10-21 Blasticon Biotech Forschung Dedifferentiated, programmable stem cells of monocytic origin, and their production and use
DE10231655A1 (de) * 2002-07-12 2004-02-26 Blasticon Biotechnologische Forschung Gmbh Transplantat-Akzeptanz induzierende Zellen monozytären Ursprungs, sowie deren Herstellung und Verwendung
WO2004011049A1 (ja) * 2002-07-25 2004-02-05 Japan Science And Technology Agency 生体組織材料を処理する交互浸漬装置および交互浸漬方法
US20060188485A1 (en) * 2003-07-11 2006-08-24 Bernd Karl Friedrich Kremer Autologous self-tolerance inducing cells of monocytic origin and their use in pharmaceutical preparations
GB0410130D0 (en) * 2004-05-06 2004-06-09 Molmed Spa Cell preparation
WO2005113754A1 (en) * 2004-05-20 2005-12-01 New York Medical College Pluripotent adult stem cells
US7909806B2 (en) * 2004-09-23 2011-03-22 Anthrogenesis Corporation Cord blood and placenta collection kit
US7147626B2 (en) * 2004-09-23 2006-12-12 Celgene Corporation Cord blood and placenta collection kit
EP1962719A4 (en) 2005-08-29 2011-05-04 Technion Res And Dev Of Foundation Ltd MEDIA FOR BREEDING STEM CELLS
JP5649786B2 (ja) 2006-03-07 2015-01-07 ギータ シュロフ ヒト胚性幹細胞およびそれらの誘導体を含む組成物、使用方法、ならびに調製方法
DK3441459T3 (da) 2006-08-02 2021-06-07 Technion Res & Dev Foundation Fremgangsmåder til ekspansion af embryonale stamceller i en suspensionskultur
TW200902718A (en) * 2007-03-01 2009-01-16 Cryo Cell Int Procurement, isolation, and cryopreservation of endometrial/menstrual cells
GB0917565D0 (en) * 2009-10-08 2009-11-25 Univ Nottingham An observation cell arrangement
GB2474492B (en) * 2009-10-19 2014-05-21 Tristem Trading Cyprus Ltd Treatment using reprogrammed mature adult cells
US9018010B2 (en) 2009-11-12 2015-04-28 Technion Research & Development Foundation Limited Culture media, cell cultures and methods of culturing pluripotent stem cells in an undifferentiated state
EP2639294A1 (fr) * 2012-03-15 2013-09-18 CellProthera Automate et procédé automatisé de culture cellulaire
EP3060670B1 (en) 2013-10-24 2019-07-10 Ospedale San Raffaele S.r.l. Method
WO2016183231A1 (en) 2015-05-12 2016-11-17 Baker Group, LLP Method and system for a bioartificial organ
CN116376812A (zh) 2016-05-25 2023-07-04 国家医疗保健研究所 治疗癌症的方法和组合物
US10711237B2 (en) * 2017-08-22 2020-07-14 Idex Health & Science Llc Apparatus and methods for bioprocesses and other processes
JP7408036B2 (ja) 2017-11-24 2024-01-05 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル ガンを処置するための方法及び組成物
CN108889357A (zh) * 2018-05-10 2018-11-27 刘英文 一种检验科样品临时存储装置
CN112703011A (zh) 2018-08-06 2021-04-23 国家医疗保健研究所 用于治疗癌症的方法和组合物
CN111560345A (zh) * 2019-05-10 2020-08-21 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种猪原代瓣膜内皮细胞分离纯化方法
EP4314246A1 (en) 2021-04-01 2024-02-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Liver organoid manufacturing methods, liver organoids obtained with the same, and uses thereof

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4058367A (en) * 1976-05-19 1977-11-15 Gilford Instrument Laboratories Inc. Automatic asynchronous fluid processing apparatus
US4563907A (en) * 1983-10-31 1986-01-14 Micromedic Systems Inc. Direct reading automatic pipette
US4812314A (en) * 1986-02-24 1989-03-14 Yissum Research & Dev. Co. Of The Hebrew Univ. Of Jerusalem And Hadassah Medical Organization Lipid replacement therapy
JPS63196854A (ja) * 1987-02-10 1988-08-15 Toa Medical Electronics Co Ltd リンパ球亜群の測定方法およびその装置
US5004681B1 (en) 1987-11-12 2000-04-11 Biocyte Corp Preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood
US5399493A (en) * 1989-06-15 1995-03-21 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the optimization of human hematopoietic progenitor cell cultures
US5763266A (en) * 1989-06-15 1998-06-09 The Regents Of The University Of Michigan Methods, compositions and devices for maintaining and growing human stem and/or hematopoietics cells
US5635387A (en) * 1990-04-23 1997-06-03 Cellpro, Inc. Methods and device for culturing human hematopoietic cells and their precursors
JP2565844B2 (ja) * 1992-02-07 1996-12-18 アボツト・ラボラトリーズ 細胞溶解処理条件下で異種細胞集団を正確に計数し，感受性に関する格付けを行う方法
ATE225847T1 (de) * 1992-03-04 2002-10-15 Univ Michigan Verfahren,zusammensetzungen und vorrichtungen zur erhaltung und zur züchtung menschlicher stammzellen und/oder hämatopoetischer zellen
WO1996002255A1 (en) * 1994-07-15 1996-02-01 Taiyo Kagaku Co., Ltd. Medicinal composition containing sialic acid derivative
US5843780A (en) 1995-01-20 1998-12-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Primate embryonic stem cells
GB2297558B (en) * 1995-02-02 1997-01-08 Ilham Mohamed Sale Abuljadayel Conversion of a more committed cell to an undifferentiated cell
GB9502022D0 (en) * 1995-02-02 1995-03-22 Abuljadayel Ilham M S A method for preparing lymphohaematopoietic progenitor cells
WO1996023872A1 (en) * 1995-02-02 1996-08-08 Stichting Centraal Laboratorium Van De Bloedtransfusiedienst Van Het Nederlandse Rode Kruis Enrichment of hematopoietic stem cells from blood or bone marrow
US5627070A (en) * 1995-07-26 1997-05-06 Celltherapy, Inc. Cell growing device for in vitro cell population expansion
US5902732A (en) * 1995-10-04 1999-05-11 Cytoscan Sciences Llc Drug screening process measuring changes in cell volume
US6227202B1 (en) * 1996-09-03 2001-05-08 Maulana Azad Medical College Method of organogenesis and tissue regeneration/repair using surgical techniques
PL189641B1 (pl) * 1996-11-11 2005-09-30 Altana Pharma Ag Benzonaftyrydyny, środki farmaceutyczne je zawierające oraz zastosowanie benzonaftyrydyn
US6054587A (en) * 1997-03-07 2000-04-25 Metabasis Therapeutics, Inc. Indole and azaindole inhibitors of fructose-1,6-bisphosphatase
FR2771421B1 (fr) * 1997-11-27 2001-05-04 Bertin & Cie Dispositif d'amplification de cellules hematopoietiques et ses applications
WO1999040783A1 (en) * 1998-02-17 1999-08-19 Gamida Cell Ltd. Method of controlling proliferation and differentiation of stem and progenitor cells
WO2000018885A1 (en) * 1998-09-29 2000-04-06 Gamida Cell Ltd. Methods of controlling proliferation and differentiation of stem and progenitor cells
BR0009403A (pt) * 1999-02-04 2001-11-27 Technion Res & Dev Foundation Método de expansão/conservação das células detronco hemopoiéticas indiferenciadas ou dascélulas progenitoras, método de preparação deum meio condicionado de célula estomacal útil naexpansão/conservação das células de troncohemopoiéticas indiferenciadas ou das célulasprogenitoras, método de transplante de célulasde tronco hemopoiéticas indiferenciadas ou decélulas progenitoras em um recipiente, tampão debiorreator e biorreator
WO2000053797A1 (de) * 1999-03-09 2000-09-14 Acordis Industrial Fibers Gmbh Verfahren zum in vitro testen von wirkstoffen, vorrichtung und deren verwendung
FR2794130B1 (fr) * 1999-05-26 2003-01-03 Bertin Technologies Sa Procede et dispositif de culture de cellules a applications multiples
EP1200101A4 (en) * 1999-07-29 2003-02-05 Steven Baranowitz METHODS FOR TRANSDIFFERENTIATING BODY TISSUES
US6624621B2 (en) * 2000-04-03 2003-09-23 Howard L. North, Jr. Particle counter volume sensor

Also Published As

Publication number Publication date
IL152737A0 (en) 2003-07-06
FR2808800A1 (fr) 2001-11-16
ITMI20010952A1 (it) 2002-11-10
HK1044172A1 (zh) 2002-10-11
BR0110751A (pt) 2004-04-06
KR20030034069A (ko) 2003-05-01
US8163536B2 (en) 2012-04-24
ES2330190T3 (es) 2009-12-07
AU5647701A (en) 2001-11-20
KR100967071B1 (ko) 2010-07-01
ITMI20010952A0 (it) 2001-05-10
DE60139716D1 (de) 2009-10-08
WO2001085917A2 (en) 2001-11-15
CY1109515T1 (el) 2014-08-13
FR2808800B1 (fr) 2007-07-06
DK1366144T3 (da) 2009-12-21
JP2011155984A (ja) 2011-08-18
CA2776904A1 (en) 2001-11-15
KR20070103522A (ko) 2007-10-23
GB2375351A (en) 2002-11-13
IL152737A (en) 2010-11-30
ES2190727B1 (es) 2004-09-01
CH696146B9 (fr) 2009-06-15
WO2001085917A3 (en) 2003-10-09
CH696146A5 (fr) 2007-01-15
NL1017973C2 (nl) 2002-11-08
EP1366144A2 (en) 2003-12-03
MA25677A1 (fr) 2003-04-01
JP4860883B2 (ja) 2012-01-25
HK1091860A1 (zh) 2007-01-26
GB0111488D0 (en) 2001-07-04
ATE440944T1 (de) 2009-09-15
NZ540481A (en) 2009-02-28
AR030280A1 (es) 2003-08-20
JP2004515211A (ja) 2004-05-27
CA2446955A1 (en) 2001-11-15
ES2190727A1 (es) 2003-08-01
GB2375351B (en) 2003-11-26
US20030064503A1 (en) 2003-04-03
MXPA02012295A (es) 2004-08-12
GB0215519D0 (en) 2002-08-14
GB2366295B (en) 2003-09-10
NZ556592A (en) 2011-03-31
CA2446955C (en) 2012-07-17
KR100875089B1 (ko) 2008-12-22
JO2295B1 (ar) 2005-09-12
GB2366295A (en) 2002-03-06
BRPI0110751B1 (pt) 2019-10-01
BE1014172A3 (fr) 2003-06-03
EP1366144B1 (en) 2009-08-26
NL1017973A1 (nl) 2001-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA01220163B1 (ar) جهاز وطرق لتحضير خلايا غير متمايزة undiferentiated CELLS
US7410773B2 (en) Method of preparing an undifferentiated cell
US20110143431A1 (en) Method Of Preparing An Undifferentiated Cell
WO1996015228A1 (en) Method of purifying a population of cells enriched for hematopoietic stem cells
JP7239567B2 (ja) Ｎｋ細胞画分の増殖及び増殖ｎｋ細胞画分の使用
US7220412B2 (en) Method of preparing an undifferentiated cell
CN100390264C (zh) 一种设备
AU2006203449B2 (en) A Device
AU7243100A (en) A method of preparing an undifferentiated cell
AU2005201200B2 (en) A Method of Preparing an Undifferentiated Cell
BR122012019753B1 (pt) processo de retrodiferenciação de células comprometidas
HK1091860B (en) A device
HK1136313A (en) A device
Gluckman Umbilical Cord Biology and Transplant
HK1128089A (en) A device
Roberts et al. Impact of cell culture technology on transfusion medicine