SA01220457A - كاشف وطريقة تصنيف الكريات البيضاء وعدها . - Google Patents

كاشف وطريقة تصنيف الكريات البيضاء وعدها . Download PDF

Info

Publication number
SA01220457A
SA01220457A SA01220457A SA01220457A SA01220457A SA 01220457 A SA01220457 A SA 01220457A SA 01220457 A SA01220457 A SA 01220457A SA 01220457 A SA01220457 A SA 01220457A SA 01220457 A SA01220457 A SA 01220457A
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
leukocytes
alkyl group
atom
fluorescence
hydrogen atom
Prior art date
Application number
SA01220457A
Other languages
English (en)
Inventor
توشيهيرو ميزوكامي
مونيتاكا اشياما
تاكاشئ ساكاتا
Original Assignee
سيسمكس كوربوريشن
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by سيسمكس كوربوريشن filed Critical سيسمكس كوربوريشن
Publication of SA01220457A publication Critical patent/SA01220457A/ar

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5094Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/80Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10TTECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10TTECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/101666Particle count or volume standard or control [e.g., platelet count standards, etc.]
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10TTECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/107497Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

كاشف لتصنيف الكريات البيضاء وعدها يحتوي على صبغة واحدة على الأقل وله الصيغة التركيبية التاليةحيث تدل R1 على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل ، وتمثل كل من R2 و R2 ذرة هيدروجين ، مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة وتمثل R4 ذرة هيدروجين، مجموعة أسيل أو مجموعة الكيل ، وتمثل Z ذرة كبريت ، ذرة اكسجين ، ذرة كربون بها مجموعة الكيل منخفضة ، وتدل n على صفر ، ١ أو ٢ ، وتدل X على أنيون ، وترتبط بالتحديد ب RNA لزيادة شدة الفلورية ، وطريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها والتي تستخدم الكاشف ، وبذلك يتم تصنيف الخلايا غير الطبيعية مثل الكريات البيضاء غير الناضجة والكريات البيضاء غير الطبيعية وعدها بسهولة وبدقة متناهية ، وفي نفس الوقت يمكن القيام بعملية تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية وعدها وكذلك عد الكريات البيضاء .

Description

Y
‏كاشف وطريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها‎ ‏الوصف الكامل‎ : ‏خليفة الإختراع‎ ‏يتعلق هذا الإختراع بكاشف وطريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها بواسطة عد‎ ٠ ‏الكريات الإنسيابي‎ ‏في مجال الفحص المختبري يستطيع تصنيف الكريات البيضاء وعدها اعطاء معلومات‎ ‏مفيدة للغاية هو لتشخيص مرض ؛ فعلى سبيل المثال ؛ يشمل الدم المحيطي الطبيعي عادة خمسة‎ © ‏كريات وحيدة النواة ؛ كريات بيضاء‎ ٠ ‏أنواع طبيعية من الكريات البيضاء ؛ أي كريات ليمفية‎ ‏صبوغة بالأصباغ المتعادلة ؛ كريات بيضاء حمضة وكريات بيضاء تألف الصبغات الأساسية ؛‎ ‏وجود مرض ؛ يمكن أن تتفاوت نسب هذه الكريات البيضاء . ومقياس‎ Alla ‏بنسب ثابتة . في‎ ‏نسب الأنواع المختلفة من الكريات البيضاء بواسطة تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية وعدها ؛‎ ‏ووفقاً لنوع المرض ؛ فان الكريات البيضاء اوالحمراء غير الناضجة ؛ والتي عادة توجد‎ ‏الأرومات‎ Jie ‏في مخ العظام وليس في الدم المحيطي ؛ مثلاً الكريات المُحببة غير الناضجة‎ ‏النخاعية أو الخلايا النخاعية المتغيرة ؛ وأرومات‎ La ‏النخايعة أو طليعات الخلايا النفيية أو‎ ‏يمكن أن تظهر في الدم المحيطي بالإضافة إلى هذه الكريات البيضاء‎ ٠ ‏الكريات الحمراء‎ ‏الطبيعية. والكريات البيضاء غير الطبيعية ؛ مثل الأرومات الليفماوية ؛ الكريات اللمفية غير‎ ٠ ‏أن تظهر ؛ ويُعتبر كشف هذه الخلايا‎ Lad ‏يمكن‎ Aull ‏النمطية أو الكريات اللمفية غير‎ ٠ ‏وتصنيفها وعدها ذات أهمية قصوى لتشخيص الأمراض‎ ‏ولتصنيف الكريات البيضاء ¢ يوجد هناك أسلوب معتاد لتحضير مسحة دم وصبغها‎ ‏بدرجة مناسبة ومراقبة العينة المصبوغة مجهرياً لأجل التصنيف والعد . في السنوات الأخيرة ؛‎ ‏تم تقديم غُدادات للكريات البيضاء تفاضلية وآلية بالكامل قائمة على أساس مقياس كريات‎ ٠ ‏انسيابي . وتسمح هذه الأجهزة بالتصنيف الدقيق بدرجة مرتفعة للكريات البيضاء الطبيعية ولكنها‎
. لم تمكن من تصنيف الخلايا غير الطبيعية السابقة وعدها ؛ مثل الكريات البيضاء غير الناضجة ؛ في نفس الوقت مع تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية وعدها . فعلى سبيل المثال + ققدم كاشف وطريقة واللذان يكشفا ظهور الكريات البيضاء غير الطبيعية بدقة وبدرجة مرتفعة بواسطة عامل قياس ‎DO/RF‏ ( طلب براءة الإختراع اليابانية غير © المفحوص رقم 7-777,516) - تقيس طريقة هذا الطلب الكريات البيضاء الناضجة كهربائياً باستخدام طبيعتها والتي تحت ظروف معينة تكون أقل قابلية للتلف من الكريات البيضاء الطبيعية. ولقد أقترح أيضاً أنه يمكن القيام بقياسها علىأساس معلومات الضوء المستطير منها ؛ غير أن هذه الطريقة تهدف فقط إلى كشف الكريات البيضاء غيز الناضجة ولها أداء ممتاز في عملية كشفها ؛ ولكن لا تستطيع تصنيف الكريات البيضاء وعدها في وقت واحد مع قياس الكريات ‎Ve‏ البيضاء غير الناضجة . وينبغي اجراء طريقة بديلة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها . وتستخدم طريقة مختلفة تم تقديمها ؛ عامل قياس الفلورية لتصنيف الكريات البيضاء غير الناضجة وعدها في نفس الوقت مع تصنيف الكريات البيضاء إلى أربعة تجمعات مختلفة ( طلب براءة الإختراع ‎AU‏ غير المفحوص رقم 1-707,547) . وبهذه الطريقة ؛ يمكن تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية في أربعة تجمعات فقط في نفس الوقت ؛ وتحتاج الخلايا البيضاء التي ‎ve‏ تألف الصبغات الأساسية © إلى أن تُقاس بصورة منفصلة بأسلوب مختلف . وأيضاً ‎glad‏ ‏مجموعة من اشارات الفلورية إلى أن نُقاس ؛ ويتطلب ذلك جهازاً معقداً ومرتفع القيمة . وأيضاً لقد تم تقديم طريقة لتصنيف كريات بيضاء غير ناضجة متنوعة وعدها ؛ في نفس الوقت حيث تم تصنيف الكريات البيضاء في خمسة تجمعات ( طلب براءة الإختراع اليابانية غير المفحوص رقم ١75,؛2-7)‏ . وتتطلب هذه الطريقة جهاز كشف معقد لتصنيف الكريات البيضاء ‎٠‏ في خمسة تجمعات . وأيضاً يلزم توافر نوعين من معلومات الفلورية وبالتالي جهازاً كبيراً مرتفع القيمة . وصف عام للإختراع : أحد أهداف هذا الإختراع هو تقديم كاشف وطريقة قادرين على تصنيف الخلايا غير الطبيعية وعدها ؛ مثل الكريات البيضاء غير الناضجة والكريات البيضاء غير الطبيعية ؛ بسهولة ‎YO‏ وبدقة مرتفعة ؛ وفي نفس الوقت القيام بعملية قياس الكريات البيضاء الطبيعية وعدها وكذلك عد الكريات البيضاء .
لقد وجد مخترع هذا الطلب أنه يمكن تصنيف الكريات البيضاء في © تجمعات على الأقل بسهولة باستخدام صبغة معينة ؛ أي أن هذا الإختراع يحتوي على صبغة واحدة على الأقل والتي لها الصيغة التركيبية التالية : ‎Ra‏ ‎Joona N—Rq‏ ‎xX: 4‏ ب الح ° حيث تدل ,18 على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل ؛ وتمتل كل من ‎Ry‏ و ‎Ry‏ ذرة هيدروجين ؛ مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة وتمثل ‎Ry‏ ذرة هيدروجين؛ مجموعة أسيل أو مجموعة الكيل ¢ وتمثل 7 ذرة كبريت ¢ ذرة اكسجين ¢ ذرة كربون بها مجموعة الكيل منخفضة ¢ وتدل 11 على صفر ‎١٠‏ أو ‎«ov‏ وتدل ‎XxX‏ على أنيون ‘ وترتبط بالتحديد ب ‎RNA‏ لزيادة شدة الفلورية . ‎٠١‏ وطريقة لتصنيف الكريات البيضاء وفق هذا الإختراع تشمل الخطوات : ‎)١‏ خلط عينة دم مع عامل حال للدم والذي يحل الكريات الحمراء بعينة الدم إلى ‎Jie‏ هذه الدرجة التي لا تعوق عملية القياس ؛ وبذلك جعل الخلايا الطبيعية وغير الطبيعية في حالة مناسبة للإصطباغ ؛ ‏") خلط عينة محضرة بالخطوة ‎)١‏ مع صبغة بالصيغة التركيبية التالية . ‎Ra ‎ya ‏جج>‎ ‎| ‏يوسن سير‎ ّ: N—Rq ’y . 4 x
A Rs Yo ‏حيث ‎Rp Jo‏ على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل وتمثل كل من ‎Ry‏ و ‎Rs‏ ذرة هيدروجين» مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة ¢ وتمثل ‎Ry‏ _ذرة هيدروجين ؛ مجموعة آسيل أو مجموعة الكيل ؛ وتمثل 7 ذرة كريت ؛ ذرة اكسجين أو ذرة كربون بها مجموعة الكيل منخفضة ؛ وتدل 80 على صفر ء ‎١‏ أو ؟ وتمثل ‎XT‏ أنيون ؛ وترتبط بالتحديد
ب ‎RNA‏ الخلوي لزيادة شدة الفلورية ؛ وبالتالي الصباغة بالفلورية للخلايا ذات النواة في عينة الدم ؛ ") قياس عينة اختبار محضرة بالخطوة ‎(Y‏ بمقياس كريات انسيابي لقياس ضوء مستطير ‎als‏ ‏على الأقل وفلورية واحدة على الأقل ؛ و © 4) تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية إلى خمسة تجمعات على الأقل وعدها ؛ باستخدام الإختلافات في الضوء المستطيرة والفلورية المقاسة بالخطوة 3) . تشير عينة الدم بالإختراع إلى عينة سائلة من الجسم تحتوي على كريات بيضاء ؛ مثل الدم المحيطي أو سائل مخ العظام أو البول أو عينة دم مجمعة بواسطة بتر أو فصل . تشير الخلايا غير الطبيعية إلى خلايا غير ناضجة توجد عادة في مخ العظام وليس في ‎٠‏ الدم المحيطي , مثلاً كريات بيضاء غير ناضجة شاملة الكريات المُحببة ‎ie‏ الأرومات النخاعية أو طليعات الخلايا النفيية أو الخلايا النخاعية أو الخلايا النخاعية المتغيرة ؛ وكريات بيضاء غير طبيعية مثل الخلايا الليمفية غير النمطية أو الأرمات الليمفية أو كريات بيضاء مصبوغة بالصبغات المتعادلة غير طبيعية ¢ وارومات كريات حمراء ‎WDA)‏ دم حمراء ذات نواة ‎(NRBC‏ أو الخلايا التي لا توجد عادة في الدم المحيطي . وهناك خطوة خلط عينة دم مع عامل حال للدم والذي يحل الكريات الحمراء في عينة الدم إلى ‎Jia‏ هذه الدرجة التي لا تعوق عملية القياس وبذلك جعل الخلايا الطبيعية وغير الطبيعية في حالة مناسبة للإصطباغ ‎٠‏ حيث تشير أحد خطوات هذا الإختراع إلى خلط عينة دم بعامل حال للدم مناسب . وتهدف هذه الخطوة فقط إلى تكوين ثقوب بغشاء خلية الكرية البيضاء المراد قياسهاء وتكون الثقوب ذات حجم كاف لمرور جزيئيات الصبغة على الأقل خلالها . والعامل ‎Ye‏ الحال للدم المُستخدم لهذا الغرض هو محلول مائي بالرقم الهيدروجيني من 4.5 إلى ‎١١١١‏ ‏ويُفضل من ‎5,٠‏ إلى ‎٠٠٠١‏ ؛ والذي يحتوي على خافض توتر سطحي كاتيوني واحد على الأقل ؛ وخافض توتر سطحي غير أيوني واحد على الأقل ومنظم للحفاظ على رقم هيدروجيني ثابت . وكخافض توتر سطحي ‎٠‏ يُفضل خافض توتر سطحي من نوع ملح أمونيوم رباعي أو ‎Ye‏ خافض توتر سطحي من نوع ملح بيريدينيوم . وأمثلة خافض التوتر السطحي من نوع ملح
ٍ أمونيوم رباعي أو خافض التوتر السطحي من نوع ملح بيريدينيوم هي خافضات التوتر السطحي التي بها من 4 إلى © ذرة كربون تعبر عنها الصيغة : ب ‎I‏ ‏لل مستي \ ‎Ry i X or‏ ‎Ry‏ ‏حيث تمثل ,8 الكيل أو مجموعة الكينيل لها من 6 إلى ‎A‏ ذرة كربون وتمثل كل من ‎Rp‏ ‏© و ‎SIR;‏ أو مجموعة الكينيل بها من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون وتمثل ‎Ry‏ الكيل أو مجموعة الكينيل بها من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون أو مجموعة بنزيل وتدل ‎X‏ على ذرة هالوجين ‎٠‏ ‏وحيث أن ,8 تمثل الكيل أو مجموعة الكينيل بها من + إلى ‎٠8‏ ذرة كربون ؛ فإنه يمكن ‎Ji‏ هيكسيل ؛ أكتيل ؛ ديسيل ؛ ودوديسيل أو ثالثي ديسيل . وتفضل مجموعة الكيل ذات سلسلة مستقيمة مثل أكتيل ‎٠‏ ديسيل أو دوديسيل على ‎day‏ الخصوص . وأمثلة مع و يمآ التي تدل على ‎٠‏ مجموعة الكيل أو الكينيل بها من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون هي ميثيل ؛ إيثيل ؛ بروبيل وبيوتيل . وتُفضل على وجه الخصوص مجموعة الكيل بها من ‎١‏ إلى ' ذرات كربون مثل ميثيل ؛ إيثيل أو بروبيل . وحيث ‎BG Ry‏ الكيل أو مجموعة الكينيل بها من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون ؛ فان ‎Jad‏ أو الايثيل أو البروبيل أو البيوتيل يمكن أن ترد على سبيل المثال . وتفضل بالتحديد مجموعة الكيل بها من ‎١‏ إلى “؟ ذرات كربون مثل ميثيل ؛ إيثيل أو بروبيل . ‎Vo‏ وكخافض توتر سطحي غير أيوني ‎٠‏ يُفضل خافض التوتر السطحي غير الأيوني بسلسلة بولي أكسي الإيثيلين بالصيغة التالية : ‎R;-Ry-(CH,CH,0),-H‏ ‏حيث تدل ,18 على مجموعة الكيل ؛الكينيل أو الكانيل بها من 8 إلى ‎Yo‏ ذرة كربون و ‎Ro‏ ‏تمثل -0- ؛ ْ , )@ ‎Yo‏ 9
ل أو 000- ؛ وتدل ‎en‏ عدد صحيح من ‎٠١‏ إلى ‎9٠‏ . لا يوجد هناك قيد على تركيب العامل الحال للدم ؛ ولكن يُفضل استخدام العوامل الحالة للدم المبينة بطلبي براعتي الإختراع اليابانيتين غير المفحوصين رقمي ‎177١7,547‏ و ‎7-١817‏ على سبيل المثال .
° وفوق ذلك ؛ يُفضل أن يتضمن العامل ‎Jal‏ للدم ؛ حمض عضوي واحد على الأقل به حلقة عطرية واحدة على الأقل في جزيئي أو ملح منه بغرض ضبط توزيع شدة الضوء المستطيرة للكريات البيضاء لتكون مناسبة أكثر للتصنيف . فمثلا ؛ يُفضل استخدام حامض بنزيوك ؛ حامض فتاليك ؛ حامض هيبوريك ؛ ‎Gada‏ ساليسايليك ؛ حامض أمينو بنزين السلفونيك الفوسفوري أو حمض بنزين السلفونيك أو ملح من أي من هذه الأحماض ؛ كحامض
‎٠‏ عضوي أو ملحه . وادخال حامض عضوي يزيد من شدة الضوء المستطير للكريات البيضاء الحمضة ‎Lad,‏ يحسن انفصال الكريات البيضاء الحمضية عن الكريات ‎sland‏ الصبوغة بالأصباغ المتعادلة ؛ فعلى سبيل المثال ؛ يُستخدم الضوء المستطيرة الجانبي فقط جوهرياً لتمكين تصنيف الكريات البيضاء في ؛ تجمعات .
‏و الرقم الهيدروجيني للعامل الحال للدم هو من £0 إلى ‎١١١‏ و يُفضل من ‎5.٠‏ إلى
‎٠١,2. Ve‏ ء؛ وللحفاظ على رقم هيدروجيني ثابت يتم ادخال منظم مثل السترات « ‎HEPES‏ أو الفوسفات في العامل الحال للدم وعندما يعمل الحامض السابق كمنظم ؛ فان المنظم المذكور لا
‏يعتبر مكوناً ‎LY‏ بالكامل . وفي حالة إذا كان الرقم الهيدروجيني منخفضاً للغاية ؛ فإن الكريات البيضاء الحمضة ‎LAT,‏ البيضاء التي تألف الصبغات الأساسية ‎١‏ تُفصل بصورة ضعيفة ويصبح من الصعب تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية في © تجمعات ؛ غير أنه يمكن تصنيف
‎) ‏الكريات البيضاء الطبيعية في 7 فئات ( خلايا ليمفية ؛ كريات وحيدة النواة ؛ كريات محببة‎ ٠ . ‏وتصنيف الكريات البيضاء الناضجة و الكريات البيضاء غير الطبيعية وعدها‎
‏لا يُفضل الرقم الهيدروجيني المرتفع للغاية ؛ لأنه سوف يجعل الكريات البيضاء تتلف . وبالنسبة للصبغة التي ترتبط بالتحديد بالحمض الريبي النووي ‎RNA‏ الخلوي لتزيد في شدة الفلورية ء ‎ld‏ يمكن استخدام صبغة لها شدة فلورية منخفضة في بيئة خالية من ‎RNA‏ ‎Yo‏ وتزيد في شدة الفرورية بالإرتباط ب ‎RNA‏ .
A
‏ومعظم الخلايا غير الطبيعية مثل الكريات البيضاء غير الناضجة أو الكريات البيضاء‎ . ‏مقارنة بالكريات البيضا ءِِ الطبيعية‎ RNA ‏بالحمض الريبي النووي‎ ine ‏غير الطبيعية تكون‎ ‏والكريات البيضاء غير الناضجة ؛ مثلاً هي خلايا في طريقها للنضوج ومن ثم تقوم بنشاطات‎ ‏انتاجية عديدة مرتبطة بنضوج الخلية ( مثلا « الإصطناع البروتيني ) حتى يكون بها وفرة من‎ . RNA © ‏وللإستخدام في كاشف وطريقة هذا الإختراع لتصنيف الكريات البيضاء وعدها ؛ تفضل‎ : ‏أي من الصيغات التالية‎
Ra
Z ‏ممم م د مدني‎ ١ ‏متزحبح : اتيز حون سار‎ 1 ‏يد‎ ZL 4 Rs
RRs ‏و‎ Ry ‏على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل ؛ وتمثل كل من‎ Ry Jo ‏حيث‎ ‏ذرة‎ Ry ‏مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة + وتمثل‎ ٠ ‏هيدروجين‎ ٠ ‏هيدروجين ؛ مجموعة أسيل أو مجموعة الكيل وتمثل 7 ذرة كبريت ؛ ذرة اكسجين أو ذرة‎ ٠. ‏وتمثل 36 أنيون‎ Y ‏أو‎ ١ ‏علىصفر ؛‎ n ‏كربون بها مجموعة الكيل منخفضة ؛ وتدل‎ ‏للصبغات السابقة خاصية زيادة شدة الفلورية بصسورة ملحوظة بواسطة الإرتباط ب‎ . RNA ‏غير المتوقع ؛ فان استعمال هذه الصبغات يمكن من تصنيف الخلايا البيضاء التي‎ leg Yo . ‏تألف الصبغات الأساسية ؛ في وقت واحد‎
RNA ‏وكما هو مبين أعلاه تزيد هذه الصبغات شدة الفلورية (بالتحديد) عند الإرتباط ب‎ . RNA ‏ولكنها غالباً تزيد شدة الفلورية حتى عند الإرتباط ب‎ ‏في هذا الإختراع . غير أن‎ DNA ‏ويمكن كذلك استخدام الصبغات الخاصة ب‎ ‏وتسبب ميولا نحو تقليل‎ RNA ‏تُركب فوق اشارات الفلورية من‎ DNA ‏إشارات الفلورية من‎ © ‏الفروق في 50 الفلورية بين الكريات البيضاء الطبيعية و الكريات البيضاء الناضجة أو الكريات‎
البيضاء غير الناضجة . ومن ثم لتحقيق هدف هذا الإختراع ؛ تفضل الصبغات بألفة منخفضة (ألفة الضد ( ل ‎DNA‏ « بصورة أكثر . ولتقليل تأثير ارتباطها ب ‎DNA‏ وتعزيز ألفة الضد الخاصة بها ب ‎RNA‏ ؛ قمنا باصطناع تلك الصبغات الخاصة بالصبغات السابقة حيث أن واحد من ,18 و ‎Ry‏ على الأقل يدل على مجموعة الكيل ذات سلسلة طويلة ( عدد ذرات كربون من > إلى ‎(VA‏ . واستخدمنا هذه الصبغات لتصنيف الكريات البيضاء الطبيعية وغير الطبيعية وعدها . ونتيجة لذلك ؛ لقد وجد أنه برغم أن أسلوب العمل غير واضح ؛ فان الصبغات السابقة لا تستطيع المرور خلال الغشاء النووي للخلايا بسبب وجود مجموعة الكيل ذات سلسلة طويلة في تركيبها ‎snd‏ + أو أن ارتباطها بجزيئيات ‎DNA‏ يُثبط بسبب الإعاقة التجسمية الخاصة بها . ‎٠‏ ومن ثم وجد أن هذه الصبغات تستلزم زيادة فلورية صغيرة بسبب ‎DNA‏ وتعطي ميزة أن الفلورية المنسوبة أساساً إلى ‎RNA‏ يمكن قياسها . وبالتالي يمكن تحسين فصل الخلايا غير الطبيعية ؛ مثل الكريات البيضاء غير الناضجة أو الكريات البيضاء غير الطبيعية ؛ عن الكريات البيضا ءِِ الطبيعية بدرجة ملحوظة . وكلما كان طول السلسلة أكبر (عدد ذرات الكربون) لمجموعة الألكيل ذات السلسلة ‎١٠‏ الطويلة ‎١‏ كلما كانت الزيادة في شدة الفلورية بسبب أخماد ‎DNA‏ ؛ وكلما أصبحت الألفة المضادة ل ‎RNA‏ أعلى . ومن ناحية أخرى ؛ تميل السلسلة الطويلة إلى جعل الجزيئ كاره للماء أكثر . ومن ثم تصبح الصبغات قابلة للذوبان في الماء بصورة ضعيفة ويكون من الصعب معالجتها على الرغم من استخدامها . وبالنظر إلى هذه الحقائق ؛ فان الصبغات التي فيها تدل ‎Ri‏ ‏أو ب على مجموعة الكيل بها ‎CT‏ 8 أو ‎٠١‏ ذرات كربون ؛ تكون مفضلة . ‎٠‏ تشير مجموعة الألكيل المنخفضة أو مجموعة الكوكسي المنخفضة ل ‎Ry‏ و ‎Ro‏ إلى مجموعة الكيل أو الكوكسي ذات سلسلة طويلة بها من ‎١‏ إلى ‎A‏ ذرات كربون . والأمثلة المفضلة هي ميثيل ؛ ميثوكسي ؛ إيثيل وايثوكسي . الانيونات المفضلة مثل 76 تشمل ايونات هالوجين مثل "7 ء 01 ء ‎«Ie Br‏ 0507 و 514 .
١. ‏هي ذرة كبريت ؛ ذرة اكسجين ؛ اوذرة كربون مُستبدلة بواسطة‎ Z ‏الأمثلة المفضلة ل‎ ٠. ‏إيثيل أو ايزوبروبيل‎ Jie ‏مجموعة الكيل منخفضة مثل‎ ‏يختلف تركيز الصيغة وفقا لنوع الصبغة المُستخدمة . وعموما يكون تركيزها من‎ ‏جزء في المليون وأكثر‎ ٠٠١ ‏إلى‎ ١.01 ‏جزء في المليون و يُفضل من‎ ٠.00١ ‏إلى‎ 00 ‏جزء في المليون . وهذا التركيز هو تركيز في الكاشف لتصنيف‎ ٠١ ‏إلى‎ ١.٠ ‏تفضيلاً من‎ © ‏الكريات البيضاء وعدها ¢ وعند تحضير محلول الإصطباع والعامل الحال للدم بصورة مسثقلة ؛‎ . ‏فان التركيز يشير إلى التركيز في خليط محلول الإصطباع والعامل الحال للدم‎ ‏في هذا الإختراع بواسطة‎ ‘ axe ‏يمكن تحضير الكاشف لتصنيف الكريات البيضاء‎ ‏إذابة الصبغة السابقة في مذيب عضوي قابل للذوبان في الماء مثل جليكول الايثيلين ؛ الميثانول‎ ‏وتخزين المحلول كمحلول اصطباغ واضافته ؛ عند الإستخدام ؛ إلى عينة مُحضرة‎ DMSO ‏أو‎ ٠ ‏بخلط عينة مع العامل الحال للدم . وعلى نحو بديل ؛ يمكن ادخال الصبغة في العامل الحال للدم‎ ٍ . ‏لتصنيع كاشف بمكون واحد‎ ‏ويتم قياس عينة الإختبار المُحضرة هكذا بمقياس الكريات الإنسيابي لتحديد ضوء‎ . ‏مستطير واحد على الأقل وفلورية واحدة على الأقل‎ ‏يشير الضوء المستطير في هذا الإختراع إلى الضوء المستطير الذي يمكن قياسه بمقياس‎ Vo ‏يشمل هذا الضوء المستطير ؛ مثلا ضوء مستطير جانبي ؛ ضوء‎ ٠ ‏كريات انسيابي متوفر تجارياً‎ ‘ ( ‏درجات‎ 'o ‏مستطير بزاوية صغيرة أمامي (زاوية استقبال الضوء : تقريبا من صفر إلى‎ . ‏درجات)‎ ٠١ ‏وضوء مستطير بزاوية مرتفعة أمامي ( زاوية استقبال الضوء : تقريبا من © إلى‎ ‏ويتم انتقاء ضوء مستطير له زاوية الإستطارة هذه فيما يتعلق باعطاء معلومات عن أحجام‎ ‏كضوء مستطير لهذا الإختراع . ويُعتبر الضوء المستطير‎ ٠ ‏الكريات البيضاء وتركيبها الداخلي‎ ٠ ْ . ‏الجانبي هو الأفضل‎ . ‏واستخدام نوع واحد أو أكثر للضوء المستطير ‘ يمكن أن يزيد دقة التصنيف‎ ‏واستخدام ضوء مستطير بزاوية صغيرة ؛ بالتحديد ؛ يعطي معلومات عن أحجام الخلايا.‎ ‏يُمكن استعماله هذا الإختر | ع من كشف الخلايا غير الطبيعية المتغيرة فقط في الحجم ولا‎ ¢ liad ٠ ‏كما في لوكيما الخلايا الأشعرية‎ RNA ‏يستلزم زيادة في مضمون‎ Yo
١١ ‏واستخدام ضوء مستطير بزاوية مرتفعة أمامي « من ناحية أخرى ؛ يعطي المعلومات‎ ‏المتوسطة بين تلك التي يتم الحصول عليها باستخدام ضوء مستطير بزاوية منخفضة أمامي‎ ‏والمعلومات التي يتم الحصول عليها باستخدام ضوء مستطير جانبي . وبايجاز ؛ يتم الحصول‎ . ‏على المعلومات بما في ذلك معلومات عن حجم الخلية وتركيبها الداخلي‎ ‏ووفقا‎ . DNA ‏و‎ RNA (he ‏وتبتعث الفلورية من الصبغة المرتبطة بمكونات الخلية‎ > . ‏لنوع الصبغة يتم انتقاء الطول الموجي المفضل للضوء المطلوب استقباله‎ ‏ولا يكون مصدر الضوء لمقياس الكريات الإنسيابي محدوداً ولكنه يمكن أن يكون مصدر‎ ‏؛‎ He-Ne ‏ضوء بطول موجي مناسب لإستثارة الصبغة . فمثلا يتم استخدام ليزر ارجون ؛ ليزر‎ ‏ليزر شبه موصل احمر ؛ أو لمبة قوسية زئبقية . وبالتحديد يُفضل الليزر شبه الموصل لأنه‎ ‏مرتفع القيمة وصغير الحجم للغاية مقارنة بالليزر الغازي . ومن ثم يستطيع تخفيض تكاليف‎ Ve . ‏المعدات بصورة ملحوظة وكذلك تخفيض حجم المعدات‎ ‏لخطوة " تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية في © تجمعات على الأقل وعدها ؛ باستخدام‎ ‏عند رسم المخطط‎ )١( : ‏الفرق في الضوء المستطير والفلورية المقاسة " المحتويات التالية‎
XK ‏الإحصائي ( رسم بياني لتوزيع ثنائي الأبعاد) مع ضوء مستطير جانبي فوق المحور‎ ‏؛ تكون خلايا الدم البيضاء مقسمة في تجمعات الخلايا‎ Sia cy ‏والفلورية الحمراء فوق المحور‎ Vo ‏المتعلقة . (7) يتم تحليل تجمعات الخلايا هذه ببرنامج كمبيوتر تحليلي مناسب لحساب أعداد‎ ‏الكريات البيضاء بتجمعات الخلايا ونسب تجمعات الخلايا المتعلقة . فمثلا ؛ يتم توفير نافذة تحيط‎ ‏بكل تجمع خلوي ؛ ويتم عد الخلايا في كل نافذة ؛ وبذلك يمكن حساب عدد الخلايا في تجمع‎ ٠ ‏للكريات البيضاء ونسب تجمعات الكريات البيضاء المتعلقة‎ ‏وعند عدم استخدام كاشف وطريقة هذا الإختراع + فلا يمكن تصنيف الكريات البيضاء‎ ٠ ‏الطبيعية إلى © تجمعات على الأقل وعدها بواسطة نوع التجمع فقط ؛ ولكن أيضاً لا يمكن القيام‎ . ‏بعملية تصنيف الخلايا غير الطبيعية وعدها في وقت واحد مع تصنيف الخلايا الطبيعية وعدها‎ ‏والخلايا غير الطبيعية المناسبة للتصنيف والعد باستخدام كاشف وطريقة هذا الإختراع هي خلايا‎ ‏زائد عن الخلايا الطبيعية . فعلى سبيل المثال ؛ هي ( الخلايا غير الطبيعية)‎ RNA ‏بمحتوى‎ ‏عضو أو أكثر منتقى من المجموعة المتكونة من كريات محببة ؛ ارومات نخاعية ؛ ارومات‎ YO . ‏كريات حمراء وخلايا ليمفية غير نمطية غير ناضجة‎
ARS
‏شكل 0 : رسم بياني يوضح الارتباط بين النسبة المثوية لخلايا ليمفية مقاسة بطريقة تقليدية‎ ‏شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة ) وتلك المقاسة بالطريقة‎ + SE-9000) ‏للتصنيف والعد بمثال ؟ ؛‎ ‏رسم بياني يوضح الإرتباط بين النسبة المئوية للكريات البيضاء وحيدة النواة المقاسة‎ : ١ ‏شكل‎ ‏؛ شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة ) وتلك‎ SE-9000) ‏بالطريقة التقليدية‎ °
CF ‏المقاسة بالطريقة للتصنيف والعد بمثال‎ ‏شكل 7 : رسم بياني يوضح الإرتباط بين النسبة المئوية للكريات البيضاء الصبوغة بالأصباغ‎ ‏؛ شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية‎ SE-9000) ‏المتعادلة المقاسة بالطريقة التقليدية‎ ‏المحدودة ( وتلك المقاسة بالطريقة للتصنيف والعد بمثال ا‎ ‏للكرية بيضاء حمضة مقاسة بالطريقة‎ a shall ‏رسم بياني يوضح الإرتباط بين النسبة‎ : A ‏شكل‎ Ye ‏شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبيعية المحدودة ) وتلك المقاسة‎ + SE-9000) ‏التقليدية‎ ‎CF ‏بالطريقة للتصنيف والعد بمثال‎ ‏شكل 4 : رسم بياني يوضح الإرتباط بين النسبة المئوية للخلايا البيضاء التي تالف الأصباغ‎ ‏؛ شركة توا للأجهزة الالكترونية‎ SE-9000) ‏الأساسية المقاسة بالطريقة التقليدية‎ 7 ‏الطبيعية المحدودة ( وتلك المقاسة بالطريقة التصنيف والعد بمثال‎ Yo ‏رسم بياني يوضح الإرتباط بين تعداد خلايا الدم البيضاء المحدد بالطريقة التقليدية‎ : ٠١ ‏شكل‎ ‏؛ شركة توا 56230 5 الالكترونية الطبيعية المحدودة ) وذلك المجدد بالطريقة‎ SE-9000) 0 ‏التصنيف والعد بمثال‎ 2 ‏لفلورية حمراء بضوء مستطير جانبي لعينة مقاسة باستخدام كاشف‎ (ual ‏مُخطط‎ : ١ ‏شكل‎ ‏مثال 07 وتوضع العينة ظهور كريات محببة (خلايا نخاعية متغيرة ؛ خلايا نخاعية)‎ ٠ ْ . ‏غير ناضجة‎ ‏أم كاشف‎ REGIE ‏بضوء مستطيرة جانبي لعينة مقاسة‎ gl ‏مخطط احصائي لفلورية حمر‎ : ٠ ‏شكل‎ ‏مثال “ ؛ والعينة توضح ظهور ارومات نخاعية ؛‎ ‏مخطط احصائي لفلورية بضوء مستطير جانبي لعينة مقاسة باستخدام كاشف مثال ؟ء‎ : ١٠“ ‏شكل‎ ‏والعينة توضح ظهور ارومات كريات حمراء ؛‎ Yo
Ve ‏شكل ؛١ : مخطط احصائي لفلورية حمرا ء لضوء مستطير جانبي لعينة مقاسة باستخدام كاشف‎ ‏خلايا ليمفية غير نمطية وكريات محببة غير ناضجة ؛‎ seh ‏مثال © ؛ والعينة توضح‎ ‏مخطط احصائي لفلورية حمر اء بضوء مستطير جانبي لعينة طبيعية مقاسة باستخدام‎ : Yo ‏شكل‎ ‏تيازول بلو كصبغة بمثال * ؛‎ ‏لفلورية حمرا ءِ بضوء مستطير جاتبي لعينة مقاسة باستخدام ثيازول‎ (saa ‏مخطط‎ : ١ ‏شكل‎ © ‏بلو كصبغة بمثال © ؛ والعينة توضح ظهور وكريات محببة غير ناضجة ؛‎ ‏مخطط احصائي لفلورية بضوء مستطير جانبي لعينة طبيعية مقاسة باستخدام مكون‎ : ١١7 ‏شكل‎ ‎£0 ‏صبغة (أ) كصبغة بمثال‎ ‏مخطط احصائي لفلورية يضوء مستطير جانبي لعينة مقاسة باستخدام مركب صبغة‎ : VA ‏شكل‎ ‏كصبغة بمثال © والعينة توضح ظهور وكريات محببة غير ناضجة ؛‎ () Ve ‏مخطط احصائي لفلورية بضوء مستطير جانبي لعينة طبيعية باستخدام مركب صبغة‎ : ١4 J ‏(ب) كصبغة في مثال * ؛‎ ‏لفلورية بضوء مستطير جانبي لعينة مقاسة باستخدام مركب صبغة‎ (bas) ‏مخطط‎ : ٠٠١ ‏شكل‎ ‏(ب) كصبغة في مثال © ؛ والعينة توضح ظهور كريات محببة غير ناضجة ؛‎ ‏مخطط احصائي لفلورية بضوء مستطير جانبي لعينة دم من شخص طبيعي مقاسة‎ : 7١ ‏شكل‎ Yo ‏؛ و‎ ١ ‏باستخدام حامض الستريك كحامض بمثال‎ ‏جانبي لفلورية بضو ء مستطير جانبي لعينة دم من شخص طبيعي‎ (uaa ‏مخطط‎ : YY ‏شكل‎ ‎. ١ ‏مقاسة باستخدام حامض الأفثاليك كحامض بمثال‎ : ‏الوصف التفصيلي‎
و سيتم وصف هذا الإختراع بالتفصيل بواسطة الأمثلة التالية ؛ ولكن يمكن إجراء العديد من التغييرات والتحويرات به . وبالتالي فان نطاق هذا الإختراع لا يقتصر على هذه الأمثلة . بالرسومات المرفقة يكون للإختصارات المعاني التالية : ‎Lymph‏ : خلايا ليمفية ‎Mono‏ : كريات بيضاء وحيدة النواة vo ‏كريات بيضاء صبوغة بالأصباغ المتعادلة‎ : Neat ‏كريات محببةغير ناضجة‎ : 6 ‏خلايا دم حمراء ذات نواة أو أرومات كريات حمراء‎ : NRBC ‏كريات بيضاء غير نمطية‎ : A-Lymph ‏كريات بيضاء حمضة‎ : Eo © ‏خلايا بيضا تألف الصبغات الأساسية‎ : Baso ‏خلايا دم بيضاء‎ : WBC ‏أرومات نخاعية‎ : 4 : (0 ‏اصطناع مركب صبغة‎ : ١ ‏مثال‎ ‎«1=n « ‏اكتيل‎ - h=Ry « H=R; « R; ليثيم‎ = R, ) (1) ‏تم انتاج مركب صبغة‎ Ve ‏بنزو‎ die -7- Ji oF cake ‏بالطريقة التالية :تم تسخين‎ (CF3CO5=X + S=Z ‏ثنائي فينيل الفورماميدين في حامض‎ AN ‏ثيازوليوم ميثانول الكبريت وثلاثة مكافئات من 11 ؛‎ ‏لمدة ساعة ونصف فوق حمام زيت بدرجة حرارة 2% . وصلب خليط‎ ٠ ‏اسيتيك ؛ مع التقليب‎ ‏زيتية حمراء وهكسان وغسلت به لإزالة حامض‎ sale ‏التفاعل في هيكسان وأيضاً علقت‎ ‏الأسيتيك. وأعيد تبلر المنتج الخام من اسيتات - هيكسان الايثيل (النتاج : 9647) . أضيف إلى‎ ١٠ ‏الخليط ؛ مع‎ Gals ‏اكتيل ليبيدينيوم ثلاثي الفلورات والبيريدين ؛‎ -١ ‏البلورات مكافئ واحد من‎ ‏التقليب ؛ لمدة ساعات فوق حمام زيت بدرجة حرارة 40م . وركز خليط التفاعل ونقى المنتج‎ ‏الخام الأزرق الباقي مع كلوروفورم الميثانول بواسطة الفصل الكروماتوجرافي الوم'يضي (النتاج‎ .)96717 : "HER; «Ry dia =Ry ( (1) ‏في هذه الطريقة ؛ تم الحصول على مركب الصيغة‎ Ye . ‏على هيئة مسحوق أزرق غامق معقد‎ (CF3805=X « S=Z « 1=n ‏كتيل‎ h=R, 2 SRF ) ‏كلوريد ميثيلين الميثانول‎ 96٠0 ‏سيليكا ؛‎ Ja) TLC
Te ‏(ثلاثية‎ ١,48 : (TMS) ‏دلتا جزء في المليون‎ (CDCl) ‏الرنيني المغناطيسي النووي‎ -7 ‏(فردية ؛‎ 7,٠١ (HY ‏(عريضة‎ VAY (HY ¢ ‏فردية‎ ) VE (HY. ‏(عريضة‎ ٠,8 (H
Viv (HY ١ ‏مرتحا ,لا ( متعددة‎ (HOY « ‏5ر2 (ثنائية‎ (HY + ‏(ثلاثية‎ ¢, vr (Hr Ye
Vole ‏سم ) : متخ‎ IR (HY ةجودزم‎ AEE) 477-84, )11 6 + ‏(متعددة‎
نمل ‎YoY.‏ لمفكا ‎YET‏ حاكاد سكل = ‎AIF‏ حكعاد ‎IY Y=‏ ماد برل بل نكي الطيف الكتلي ‎FAB)‏ موجب) ‎al‏ / زد = 279 ‎96٠0( 9698,7 TLC‏ كلوريد ميثيلين الميثانول ) أقصى طيف امتصاص 179 نانومتر © (ميثانول ) . مثال ؟ : اصطناع مركب صبغة (ب) : أنتج مركب صيغة (ب) ‎=Ry 11 =R5 « Ry « (JS =R))‏ ميقل « ‎S=Z « 1 =n‏ « ‎(CF;S0;=X‏ بالطريقة التالية : سْخن مكافئ واحد من 7 - هيكسيل -7- ميثيل بنزوثيازوليوم ثلاثي الفلورات واربعة ‎Ve‏ مكافئات من ‎N‏ ؛ ‎N‏ ثنائي فينيل الفورماميدين في حامض اسيتيك ‎٠‏ مع التقليب ؛ لمدة ‎٠١‏ ‏ساعات فوق حمام ‎Coy‏ في درجة حرارة .9 م ‎٠‏ وركز خليط التفاعل ؛ ونقى المنتج الخام الباقي باسيتات إيثيل الهكسان بواسطة الفصل الكروماتوجرافي الوميضي (النتاج = لا %( . واضيف إلى المنتج ‎١,“‏ مكافئ من ‎-١‏ ميثيل ليبيدينيوم اليوديد والبيريدين وسخن الخليط ؛ مع التقليب ؛ ‎sad‏ ساعات فوق ‎plea‏ زيت في درجة حرارة 90م . وركز خليط التفاعل ونقى ‎Ve‏ المنتج الخام الأزرق الباقي لكلوروفورم الميثانول بواسطة الفصل الكروماتوجرافي الوميضي (النتاج = ‎(%ve‏ . في هذه الطريقة 3 ثم الحصول على مركب الصيغة (ب) ) +[ هيكسيل) ¢ ‎=R; ¢ R,‏ 1 ؛ بك ميثيل « ‎1=n‏ ء 58-7 ؛ ‎(CF380:;=X‏ على هيئة مسحوق أزرق غامق معقد . ‎Ja) TCL‏ سيليكا ؛ ‎96٠٠0‏ كلوريد ميثيلين الميثانول ) ‎=RF‏ 0,« ‎"HY‏ الرنيني المغناطيسي النووي (و0001) ‎Ws‏ جزء في المليون ‎ARE) ١,90 : (TMS)‏ ‎AY (H‏ لاحاخرا (متعددة ‎ENVY (HYYY‏ ) فردية ؛ ‎Loe (HY‏ (متعددة « ‎(HY‏ 1ي- م (متعددة م 01 ‎IR‏ (سم ( ‎١‏ نمحكقا مدت ‎Yor.‏ نئل ‎YET‏ — اللبحفالى جحججل حاأمل حجااكلد مالل .جلت ‎١ Vo—‏ الطيف الكتلي ‎FAB)‏ موجب) لم / زد = \+¢ ‎٠ ) 965,0 TLC‏ كلوريد ميثيلين ‎YO‏ _الميثائول) اقصى طيف امتصاص 174 نامومتر (ميثائول) .
VY
: ‏مثال ؟ : صياغة كاشف لتصنيف الكريات البيضاء وعدها‎ : ‏حضر كاشف بالتركيب التالي‎
HEPES ‏مل مولاري منتج متوفر تجاريا‎ ٠ ‏مل مولاري منتج متوفر تجاريا ثنائي الصوديوم‎ ٠ ‏حامض الافثاليك‎ ‏جزء في المليون (شركة نيكو‎ ١50٠0 ‏أكسي الايثيلين ) )+7( ايثير السيتيل‎ Js) BC30TX ‏للكيماويات)‎ ‏جزء في الميون منتج متوفر تجاريا‎ 525٠ ‏ثلاثي ميثيل امونيوم اللوريل‎ ‏كلوريد‎ ‏جزء في المليون مركب صيغة (أ)‎ ٠
Vir ‏ضبط الرقم الهيدروجيني إلى‎
HaOH ‏مع‎ ‏ل با‎ ‏ميكرولتر من دم معالج بمضاد للتجلط من‎ “٠ + ‏مل من الكاشف السابق‎ ٠١0 ‏أضيف إلى‎ ‏شخص طبيعي ؛ وتم تفاعل الخليط لمدة 50 ثانية في درجة حرارة ”م ؛ ثم قيس تفاعل الخليط‎ ‏للضوء المستطير الجانبي والضو ء المستطير بزاوية منخفضة أمامي والفلورية مع مقياس كريات‎ . ‏انسيابي كان مصدر الضوء المستخدم ليزر شبه موصل أحمر يعمل عند 77+ نانومتر‎ ٠ ) ‏نانومتر أو أكثر (فلورية حمراء‎ ٠ ‏والفلورية المقاسة كانت فلورية بطول موجي يبلغ‎ ‏وفلورية حمراء‎ X ‏هو مخطط احصائي مع ضوء مستطير جانبي مأخوذ على المحور‎ ١ ‏شكل‎ ‎٠ 7 ‏مأخوذة على المحور‎
X ‏شكل 7 هو مخطط احصائي مع ضوء مستطير بزاوية صغيرة امامي مأخوذ على المحور‎ ٠ ‏وفلورية حمرا ءِ مأخوذة على المحور وى‎ ‏تم تصنيف الكريات البيضاء في © تجمعات أي ؛ كريات بيضاء وحيدة النواة ؛ خلايا‎ ‏ء حمضة وكريات بيضاء‎ Lay Gl So ‏ء صبوغة بالصبغات المتعادلة‎ Lan ‏ليمفية ؛ كريات‎ . ‏تألف الصبغات الأساسية‎
YA coal ‏يوضح شكل © مُخطط احصائي مع ضوء مستطير جانبي مأخوذ على‎ ملعللو‎ ‏وضوء مستطير بزاوية صغيرة أمامي مأخوذ على المحور 7[ . في حين أن شكل ؛ يوضح‎ X ‏مخطط توزيع التواتر لدرجات شدة الضوء المستطير الجانبي . وتم تصنيف الكريات البيضاء في‎ ‏كريات بيضاء وحيدة النواة ؛ كريات بيضاء صبوغة بالصبغات‎ ٠ ‏؛ تجمعات ؛ أي ؛ خلايا ليمفية‎ . ‏ء حمضة‎ Lay ‏المتعادلة وكريات‎ © ‏تم تقديم نافذة لكل تجمع وتم حساب عدد الخلايا في كل نافذة ونسب الخلايا في النوافذ‎ . ‏المتعلقة‎ ‏الأشكال من * إلى 4 هي رسوم بيانية توضح الإرتباط بين النسبة المئوية للكريات‎ ) ‏شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة‎ + SE-9000) ‏البيضاء المقاسة بطريقة تقليدية‎ . ) ١ ‏وتك المقاسة بطريقة هذا الإختراع (شكل‎ ٠ ‏هو رسم بياني يوضح الإرتباط بين تعداد خلايا الدم البيضاء المحدد بطريقة‎ ٠١ ‏وشكل‎ ‏؛ شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة ) وذلك المحدد بطريقة هذا‎ SE-9000) ‏تقليدية‎ ‎. )١ ‏الإختراع (شكل‎ ‏ولوحظ ارتباط عال بين أي بارامترات مقاسة بالطريقة التقليدية وتلك المقاسة بطريقة هذا‎ ‏الإختراع . ض‎ Ye ‏أجريت القياسات بالطريقة التقليدية باستخدام الكواشف التالية بطريقة آلية بالكامل بواسطة‎ : SE-9000
Cellpack-3D (ID™ ‏من‎ ٠:١ ‏تعداد خلايا الدم البيضاء : المقاس بعد اضافة دم إلى خليط‎ ‏(شركة توا‎ stromatolyzer 20)01( ™ ‏(شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة) و‎ . ‏ا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة)‎ ٠ ‏الكريات الليمفية والكريات اليضاء وحيدة النواة - مقاسة بعد انحلال‎ ‏(شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة)؛ ثم‎ Cellpack-3D (ID™ ‏الدم مع‎ ٠ ‏(شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة)‎ stromatolyzer EO (II) ™ ‏اضافة‎
‎Va |‏ الكريات البيضاء الحمضة : مقاسة باستخدام ™ ‎stromatolyzer 3D (ID)‏ (شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة) . الكريات البيضاء القسي تف الأصباغ الأساسية مقاسة باستخدام ™ ‎stromatolyzer BA(IT)‏ (شركة توا للأجهزة الالكترونية الطبية المحدودة) . و كريات بيضاء صبوغة بالصباغت المتعادلة : محسوبة من المعادلة (تعداد خلايا الدم البيضاء - (إتعداد الكريات ‎sland) + ) daa‏ الكريات البيضاء وحيدة النواة ) + تعداد الكريات البيضاء ‎Ad‏ = = و الحمضة ) + ) تعداد الكريات البيضاء التي تالف الاصباغ الأساسية ) ) م ب و © مثال ؛ : تصنيف عينات وعدها حيث ظهرت كريات محببة غير ناضجة أو كريات بيضاء غير باستخدام كاشف وطريقة مثال ؟ ؛ قيست العينات التالية : ‎de‏ ظهرت فيها كريات محببة (خلايا نخاعية متغيرة ؛ خلايا نخاعية ) (شكل ‎٠ )١١‏ 2 04 للطريقة التقليدية (الفحص الظاهر) 6 ‎yr‏ 3 % لطريقة الإخترا 2 . ‎٠‏ عينة ظهرت فيها ارومات نخاعية (شكل ‎(VF‏ ‏5 للطريقة التقليدية ؛ ‎96/05,١‏ لطريقة الإختراع عينة ظهرت بها ارومات كريات حمرا ءِِ (شكل 7 ( ‎%Yo‏ للطريقة التقليدية ¢ 71,5 لطريقة الإختراع عينة ظهرت فيها كريات ليمفية غير نمطية وكريات محببة غير ناضجة (شكل ‎)١4‏ . ‎Vo‏ كريات ليمفية غير نمطية : ‎967,٠‏ للطريقة التقليدية ؛ 961,84 لطريقة الإختراع كريات محببة غير ناضجة : ‎967,٠‏ للطريقة التقليدية ؛ ‎967,1١‏ لطريقة الإختراع تم تمييز أي كريات محببة غير ناضجة وكريات بيضاء غير طبيعية ؛ بوضوح عن الكريات البيضاء الطبيعية وتصنيفها وعدها . طبقاً للطريقة التقليدية تم اصطباغ مسحة مرتين بواسطة اصطباغ ‎May-Grunwald-Giemsa‏ « وتم تصنيف الكريات البيضاء وعدها مجهريا (التكبير ‎٠ Yoo my APR X = 7‏
مثال : صياغة كاشف : ‎٠‏ مل مولاري منتج متوفر تجاريا ‎HEPES‏ ‎٠‏ مل مولاري منتج متوفر تجاريا ثنائي الصوديوم ‎ay Gal‏ 7276 (بولي أكسي الايثيلين ) ‎190١‏ جزء في المليون (شركة نيكو للكيماويات) )7( ايثير السيتيل) ثلاثي ميثيل امونيوم اللوريل ‎05٠‏ جزء في الميون منتج متوفر تجارياً كلوريد ‎hia‏ الرقم الهيدروجيني إلى ‎Vir‏ ‏مع ‎HaOH‏ ‏عند استخدام الصبغة التالية : ‎=R, « =R, ) 0010‏ إييل ‎(I=n «I'=X"¢S=Z «H=R; « R,‏ 1 جزء في المليون لامبداء فيزيك . 8 جزء في المليون مركب صبغة )1( ‎Y‏ جزء في المليون مركب صبغة (ب) ‎ue sea‏ م ا أضيف إلى ‎٠١‏ مل من الكاشف السابق ؛ ‎Te‏ ميكرولتر من دم معالج بمضاد للتجلط وتم ‎Jeli‏ الخليط لمدة ‎5٠‏ ثانية في درجة حرارة ١”*م‏ ؛ ثم قيس خليط التفاعل للضوء المستطير الجانبي والفلورية بمقياس كريات انسيابي . وكانت عينات الإختبار طبيعية وظهرت التي فيها © كريات محببة غير ناضجة . وكان مصدر الضوء المستخدم ليزر شبه موصل ‎seal‏ والذي يشتغل عند ‎TPT‏ نانومتر . والفلورية المقاسة هي فلورية بطول موجي يبلغ 160 نانومتر أو أكثر . وكان مصدر الضوء والطول الموجي للفلورية هو نفسه كما في مثال © . شكلي ‎٠‏ و ‎١١‏ هما مخططان احصائيان تم الحصول عليهما باستخدام ثيازول بلو . وشكلي ‎١١7‏ و ‎YA‏ هما مخططان احصائيان تم الحصول عليهما باستخدام مركب الصيغة (أ) ‎٠‏ ‎٠‏ شكلي 4١و ‎٠‏ هما مخططان احصائيان تم الحصول عليهما باستخدام مركب الصيغة (ب) ‎٠‏
نض عندما يدل كل من :8 و ‎Ry‏ على مجموعة الكيل منخفضة ؛ يكون من الصعب التمييز بين الكريات البيضاء الصبوغة بالصباغت المتعادلة الطبيعية والكريات المحببة غير الناضجة . وعند ادخال مجموعة الكيل بسلسلة طويلة ؛ بالإختلاف ؛ أصبح من الممكن التمييز بين الكريات البيضاء الصبوغة بالصباغات المتعادلة والكريات المحببة غير الناضجة بوضوح . © مثال + : صياغة كاشف ض ‎٠‏ مل مولاري منتج متوفر تجاريا ‎HEPES‏ ‏27 إ(بولي أكسي الايثيلين ) جزء في المليون (شركة نيكو للكيماويات) )7( ايثير السيتيل) ثلاثي ميثيل امونيوم اللوريل +00 جزء في الميون منتج متوفر تجاريا كلوريد 8,, جزء في المليون مركب صبغة )1( ‎٠‏ مل مولاري منتج متوفر تجاريا حامض ضبط الرقم الهيدروجيني إلى ‎Vir‏ ‏مع ‎HaOH‏ ‏لإ إس_ مس ست بالنسبة للحامض ؛ يُستخدم حامض الستريك أو حامض الأفثاليك . أضيف إلى ‎٠٠١‏ مل من الكاشف السابق إلى 70 ميكرولتر من دم معالج بمضاد للتجلط من شخص طبيعي + وتم تفاعل الخليط لمدة ‎5٠‏ دقيقة بمضاد للتجلط من شخص طبيعي ؛ وتم تفاعل الخليط لمدة ‎54٠0‏ دقيقة في درجة حرارة 5م . وقيس خليط التفاعل للضوء المستطير الجانبي والفلورية بمقياس ‎٠‏ كريات انسيابي . وكان مصدر الضوء المستخدم ليزر شبه موصل أحمر والذي يعمل عند 177 نانومتر . والفلورية المقاسة كانت فلورية بطول موجي يبلغ 60 نانومتر أو أكثر (فلورية حمراء) . شكل ‎YY‏ هو مُخطط احصائي تم الحصول عليه باستخدام حامض الستريك كحامض ؛ وشكل ‎YY‏ هو مخطط احصائي تم الحصول عليه باستخدام حامض الافثاليك كحامض .
YY
‏وعند استخدام حامض الافثاليك (حامض عضوي به حلقة عطرية في التركيب الجزيئي)‎ ‏كحامض ؛ تم تحسين فصل الكريات البيضاء الصبوغة بصبغات متعادلة عن الكريات البيضاء‎ . ‏الحمضة ؛ مقارنة باستخدام حامض الستريك‎ ‏طبقاً لكاشف لتصنيف الكريات البيضاء وعدها بهذا الإختراع ؛ يتم خلط عينة دم وعامل‎ ‏حال للدم ويُخلطا مع صبغة هذا الإختراع لصبغ الخلايا ذات النواة بعينة الدم . وبعد ذلك تم قياس‎ © ‏وبوضوح‎ ٠ ‏ضوء مستطير واحد على الأقل وفلورية واحدة على الأقل بمقياس الكريات الإنسيابي‎ ‏بعمل ذلك ؛ يمكن تصنيف الخلايا غير الطبيعية مثل الكريات البيضاء غير الناضجة والكريات‎ ‏البيضاء غير الطبيعية ¢ وعدها بسهولة وبدقة متتاهية ؛ وفي نفس الوقت يمكن إجراء عملية‎ . ‏تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية وعدها وكذلك عد الكريات البيضاء‎

Claims (1)

  1. yy ‏عناصر الحماية‎ ‏لتنصيف الكريات البيضاء وعدها ؛ يحتوي على صبغة واحدة على الأقل وله الصيغة‎ فشاك.١‎ ١ ‏التركيبية التالية‎ v Ra Z pr ‏هيوسن سير‎ : N—R,4 2 ‏يو‎ 4
    , ال
    ؟ ‎JU 8, Cus‏ على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل ؛ تمثل كل من ‎SR)‏ وكأ ذرة هيدروجين ؛ ° مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة ؛ وتمثل ‎Ry‏ ذرة هيدروجين ؛ 1 مجموعة اسيل أو مجموعة الكيل ¢ ويدل واحد من ,18 و ‎Ry‏ على الأقل على مجموعة الكيل بها من 8 إلى ‎٠‏ ذرة كربون + وتمثل 7 ذرة كبريت ؛ ذرة اكسجين أو ذرة كربون بها ‎A‏ مجموعة الكيل منخفضة ؛ وتدل 0 علىصفر ؛ ‎١‏ أو * وتمثل ‎X‏ أنيون؛ وترتبط بالتحديد ب ‎RNA 1‏ لتزيد في شدة الفلورية .
    : ‏طريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها تشمل الخطوات‎ .7 ١
    ‎)١ 7‏ خلط عينة دم مع عامل حال للدم والذي يحل الكريات الحمراء بعينة الدم إلى ‎Jiao‏ هذه ِ الدرجة التي لا تعوق عملية القياس ؛ وبذلك جعل الخلايا الطبيعية وغير الطبيعية في حالة ‎t‏ مناسبة للإصطباغ ؛
    ‎Y ©‏ ( خلط عينة محضرة بالخطوة ‎١‏ ( مع صبغة بالصيغة التركيبية التالية .
    ‎Ra : Z Pobssetbiumont Jac N—R;, Ry x 4 7 ‏و‎ 1
    ‎١"‏ حيث تدل ‎Rp‏ على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل وتمثل كل من ‎Ry‏ و وك1 ذرة هيدروجين؛ ‎A‏ مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة ؛ وتمثل ‎Ry‏ ذرة هيدروجين ؛ 9 مجموعة آسيل أو مجموعة الكيل ‎Biddy‏ 7 ذرة كريت ؛ ذرة اكسجين أو ذرة كربون بها ‎Ye‏ مجموعة الكيل منخفضة ؛ وتدل © على صفر ؛ ‎١‏ أو 7 وتمثل ‎XT‏ أنيون + وترتبط بالتحديد ‎١١‏ ب هلل الخلوي لزيادة شدة الفلورية ؛ وبالتالي الصباغة بالفلورية للخلايا ذات النواة في ‎wv‏ \ قياس ‎due‏ اختبار محضرة بالخطوة ‎(Y‏ بمقياس كريات انسيابي لقياس ضوء مستطير ‎Ve‏ واحد على الأقل وفلورية واحدة على الأقل ؛ و ‎Vo‏ ؛) تصنيف الكريات البيضاء الطبيعية إلى خمسة تجمعات على الأقل ‎loses‏ باستخدام ‎Vi‏ الإختلافات في الضوء المستطيرة والفلورية المقاسة بالخطوة 7( . ‎١‏ ١.طريقة‏ لتصنيف الكريات بيضاء وعدها كما في عنصر الحماية ‎Y‏ ؛ حيث أن العامل الحال للدم يحتوي على خافض توتر سطحي غير ايوني واحد على الأقل وخافض توتر سطحي كاتيوني 1 واحد على الأقل وله رقم هيدروجيني من ‎Ee‏ إلى ‎١١١‏ . ‎١‏ رذ طريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها كما في عنصر الحماية اا حيث يحتوي العامل للدم ‎A‏ أيضا على حامض عضوي به حلقة عطرية واحدة على الأقل أو ملحه . ‎١‏ “.طريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها كما في عنصرالحماية 7 ؛ حيث أن الضوء ‎Y‏ المستطير هو عضو واحد مُنتقى من المجموعة المتكونة من ضوء مستطير ‎Ag gl‏ صغيرة 3 أمامي ¢ ضوء مستطير بز اوية مرتفعة أمامي وضوء مستطير جانبي . ‎0١‏ 4.طريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها كما في عنصر الحماية 7 والتي تستطيع القيام ‎dg ke)‏ لتصنيف الكريات البيضاء كما في أي من عناصر الحماية من ‎IY‏ 6 ؛ حيث أن ‎١‏ +.طريقة لتصنيف الكريات البيضاء وعدها كما في عنصر الحماية 7 ؛ حيث أن الخلايا غير ‎A‏ الطبيعية هي عضو أو أكثر منتقى من المجموعة المتكونة من كريات محببة ؛ ارومات ‎v‏ نخاعية ؛ ارومات كريات حمراء وكريات ليمفية غير نمطية غير ناضجة .
    Yo : ‏عدة كاشف لتصنيف الكريات البيضاء وعدها تشمل‎ .7 ١ ‏عامل حال للدم يحل الكريات الحمراء في عينة دم إلى مثل هذه الدرجة التي لا تعوق‎ )١ 7 ‏عملية القياس ؛ وبذلك يجعل الخلايا الطبيعية أو غير الطبيعية في حالة مناسبة للإصطباع ؛ و‎ 7 ‏محلول اصطباغ يحتوي على صبغة واحدة على الأقل بالصيغة التركيبية التالية ؛‎ )" Ra Z ‏اسمس‎ ‎١ Joma ‏ةبح‎ ‎Ry ‏ب‎ 4 PA 3 o ‏و بك[ ذرة‎ Ry ‏على ذرة هيدروجين أو مجموعة الكيل وتمثل كل من‎ Rp ‏حيث تدل‎ L ‏ذرة‎ Ry ‏هيدروجين ¢ مجموعة الكيل منخفضة أو مجموعة الكوكسي منخفضة ؛ وتمثل‎ 7 ‏هيدروجين »+ مجموعة آأسيل أو مجموعة الكيل ¢ وتمثل 7 ذرة كبريت ‘ ذرة اكسجين أو ذرة‎ A ‏انيون ؛‎ XT ‏أو 7 ؛ وتمثل‎ ١ ‏علىصفر ؛‎ n ‏كربون لها مجموعة الكيل منخفضة + وتدل‎ a ٠ ‏لتزيد في شدة الفلورية‎ RNA ‏وبالتحديد ترتبط ب‎ ٠١
SA01220457A 1997-05-19 2001-10-15 كاشف وطريقة تصنيف الكريات البيضاء وعدها . SA01220457A (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP12847297A JP3783808B2 (ja) 1997-05-19 1997-05-19 白血球分類計数用試薬
US09/080,016 US6004816A (en) 1997-05-19 1998-05-15 Reagent and method for classification and counting of leukocytes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA01220457A true SA01220457A (ar) 2005-12-03

Family

ID=14985583

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA01220457A SA01220457A (ar) 1997-05-19 2001-10-15 كاشف وطريقة تصنيف الكريات البيضاء وعدها .

Country Status (5)

Country Link
US (1) US6004816A (ar)
EP (1) EP0882983B1 (ar)
JP (1) JP3783808B2 (ar)
DE (1) DE69829606T2 (ar)
SA (1) SA01220457A (ar)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3886271B2 (ja) * 1998-11-27 2007-02-28 シスメックス株式会社 赤芽球の分類計数用試薬及び分類計数方法
US6210969B1 (en) * 1999-04-28 2001-04-03 Coulter International Corp. Composition and method for differentiation of basophil and eosinophil subpopulations of leukocytes in blood
US6214625B1 (en) * 1999-04-28 2001-04-10 Coulter International Corp. Composition and method for differentiation of basophils and eosinophils in blood
US6232125B1 (en) * 1999-08-09 2001-05-15 Coulter International Corp. Method and apparatus for differentiating and enumerating leukocytes
US7309581B2 (en) * 2000-11-01 2007-12-18 Sysmex Corporation Method of staining, detection and counting bacteria, and a diluent for bacterial stain
US7625730B2 (en) * 2002-06-24 2009-12-01 Sysmex Corporation Method for classifying and counting leukocytes
JP4484442B2 (ja) 2003-04-10 2010-06-16 シスメックス株式会社 細菌測定方法と装置とプログラム
US7776529B2 (en) 2003-12-05 2010-08-17 Life Technologies Corporation Methine-substituted cyanine dye compounds
US7580120B2 (en) * 2005-04-07 2009-08-25 Sysmex Corporation Blood analyzer, sample analyzer, and flow cytometer
JP5306811B2 (ja) * 2005-05-11 2013-10-02 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 2本鎖dnaへの高い選択性を有する蛍光化学物質及びそれらの使用
JP4745030B2 (ja) * 2005-11-15 2011-08-10 シスメックス株式会社 血液分析装置
JP4976038B2 (ja) * 2006-03-29 2012-07-18 シスメックス株式会社 血液学的試料の測定方法
JP4918281B2 (ja) 2006-05-18 2012-04-18 シスメックス株式会社 尿中有形成分分析装置
JP4759438B2 (ja) * 2006-05-17 2011-08-31 シスメックス株式会社 尿中有形成分分析装置
EP1857805B1 (en) * 2006-05-17 2017-03-01 Sysmex Corporation Apparatus for analyzing particles in urine and method thereof
CN1945326A (zh) * 2006-10-13 2007-04-11 江西特康科技有限公司 基于视觉形态的五分类全血细胞分析方法
CN101343420B (zh) * 2007-07-12 2013-10-16 大连理工大学 一类不对称菁类荧光染料
KR101244501B1 (ko) * 2007-09-27 2013-03-18 시스멕스 가부시키가이샤 시료 분석용 시약 키트 및 시료 분석 방법
CN101475754A (zh) 2008-01-04 2009-07-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类荧光染料,组合物及在生物样品染色中的用途
CN101602762B (zh) 2008-06-10 2013-10-16 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类化合物、其制备方法及应用
CN101726579B (zh) 2008-10-17 2014-06-18 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液检测试剂和方法
CN101750274B (zh) 2008-12-17 2014-06-25 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒以及白细胞分类计数的方法
US7943320B2 (en) * 2008-12-30 2011-05-17 Canon U.S. Life Sciences, Inc. Unsymmetrical cyanine dyes for high resolution nucleic acid melting analysis
JP5670052B2 (ja) * 2009-03-26 2015-02-18 シスメックス株式会社 血液分析装置、血液分析方法及びコンピュータプログラム
JP5367598B2 (ja) * 2009-03-30 2013-12-11 シスメックス株式会社 血中濃度−時間曲線下面積を用いた血液中の測定対象成分の濃度変動の推定方法及び装置
JP5452058B2 (ja) 2009-03-31 2014-03-26 シスメックス株式会社 血液分析装置
US20100272651A1 (en) * 2009-04-22 2010-10-28 Tufts University Method for assessing potential for tumor development and metastasis
CN102472738B (zh) 2009-07-03 2014-08-06 希森美康株式会社 血液分析装置及血液分析方法
CN101988082B (zh) 2009-07-31 2015-04-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法
ES2720151T3 (es) 2011-04-07 2019-07-18 Beckman Coulter Inc Identificación y enumeración de células granuladas tempranas (EGC)
WO2012147451A1 (ja) * 2011-04-28 2012-11-01 シスメックス株式会社 血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラム
JP5583629B2 (ja) * 2011-04-28 2014-09-03 シスメックス株式会社 白血球の分類計数方法、白血球分類試薬キット及び白血球分類試薬
EP2520926B1 (en) * 2011-05-05 2022-06-15 Sysmex Corporation Blood analyzer, blood analysis method, and computer program product
JP5865009B2 (ja) * 2011-10-25 2016-02-17 シスメックス株式会社 活性化好中球の検出方法
WO2013082029A1 (en) 2011-11-28 2013-06-06 California Institute Of Technology Compositions and methods for leukocyte differential counting
ES2895391T3 (es) * 2011-12-27 2022-02-21 Abbott Lab Análisis celular de fluidos corporales
JP5416232B2 (ja) * 2012-01-23 2014-02-12 シスメックス株式会社 血液学的試料の測定装置
CN105026928B (zh) * 2013-02-28 2018-11-06 希森美康株式会社 尿样本分析装置及尿样本分析方法
US10208346B2 (en) * 2013-04-19 2019-02-19 Epiontis Gmbh Method for identifying the quantitative cellular composition in a biological sample
JP6170865B2 (ja) 2014-03-31 2017-07-26 シスメックス株式会社 血液分析装置
JP6238856B2 (ja) * 2014-08-25 2017-11-29 シスメックス株式会社 尿中異型細胞の分析方法、尿分析装置および体液中異型細胞の分析方法
CN106687810B (zh) 2014-12-31 2019-10-22 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种非诊断目的的有核红细胞报警方法、装置及流式细胞分析仪
CN106413535B (zh) 2015-01-05 2019-06-28 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血压测量仪及其气路结构以及气路盒
CN105004641A (zh) * 2015-08-27 2015-10-28 苏州柯尔医疗器械有限公司 一种血液分析仪及分析方法
CN106967302B (zh) * 2017-03-29 2019-04-12 苏州康铭诚业医用科技有限公司 一种血细胞分析用染料的合成方法
CN109270281A (zh) * 2017-07-18 2019-01-25 深圳市帝迈生物技术有限公司 提高白细胞分类结果准确性和计数结果重复性的方法及设备
CN109030156B (zh) * 2018-10-19 2021-03-16 武汉百合龙腾生物科技有限责任公司 一种流式分析用染色液
CN112789503B (zh) 2018-12-28 2024-06-21 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 分析有核红细胞的方法、血液细胞分析仪和存储介质
JP7293269B2 (ja) * 2021-02-22 2023-06-19 シスメックス株式会社 溶血試薬、試薬キットおよび白血球の分類方法
CN113218847A (zh) * 2021-04-12 2021-08-06 武汉凯普瑞生物技术有限公司 一种流式细胞分析用溶血剂及其制备方法及其应用方法
DE102021115737A1 (de) 2021-06-17 2022-12-22 Franz Ferdinand Becker Vorrichtung und Verfahren zur Erfassung der ungefähren Anzahl von Leukozyten in einem Dialysat nach dessen Verwendung in der Peritonealdialyse
BR102023003038A2 (pt) 2022-03-17 2024-01-02 Sysmex Corporation Método para classificar glóbulos brancos em subpopulações
US20260118247A1 (en) 2023-03-21 2026-04-30 Bit Group France Method of fluorescent dye variation compensation by free state fluorescence measurement
JP2024146270A (ja) 2023-03-31 2024-10-15 シスメックス株式会社 検体の分析方法及び染色試薬
CN117233067B (zh) * 2023-11-10 2024-03-05 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 一种白细胞检测试剂盒及其应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5772150A (en) * 1980-10-23 1982-05-06 Ishihara Sangyo Kaisha Ltd Electrophotographic sensitive material
US4957870A (en) * 1985-11-01 1990-09-18 Becton, Dickinson And Company Detection of Reticulocytes, RNA and DNA
US4883867A (en) * 1985-11-01 1989-11-28 Becton, Dickinson And Company Detection of reticulocytes, RNA or DNA
EP0226272B1 (en) * 1985-11-01 1991-03-06 Becton, Dickinson and Company Detection of reticulocytes
US5175109A (en) * 1986-09-10 1992-12-29 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Reagent for classifying leukocytes by flow cytometry
JPH06100596B2 (ja) * 1986-09-10 1994-12-12 東亜医用電子株式会社 フロ−サイトメトリ−による白血球の分類方法
US5039613A (en) * 1986-11-27 1991-08-13 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Reagents used in a method of classifying leukocytes by flow cytometry
US5047321A (en) * 1988-06-15 1991-09-10 Becton Dickinson & Co. Method for analysis of cellular components of a fluid
JPH07113632B2 (ja) * 1991-04-22 1995-12-06 株式会社日立製作所 白血球分析方法
JP3067849B2 (ja) * 1991-07-29 2000-07-24 シスメックス株式会社 白血球分類計数用試料調製方法
JP3048260B2 (ja) * 1991-07-29 2000-06-05 シスメックス株式会社 白血球分類計数用試料調製方法
JP3345135B2 (ja) * 1992-11-19 2002-11-18 シスメックス株式会社 血液分析方法
DE69327775T2 (de) * 1992-11-19 2000-06-21 Sysmex Corp., Kobe Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse
JP3301646B2 (ja) * 1993-03-19 2002-07-15 シスメックス株式会社 幼若細胞測定用試薬
US5534416A (en) * 1993-04-13 1996-07-09 Molecular Probes, Inc. Fluorescent viability assay using cyclic-substituted unsymmetrical cyanine dyes
US5658751A (en) * 1993-04-13 1997-08-19 Molecular Probes, Inc. Substituted unsymmetrical cyanine dyes with selected permeability
US5436134A (en) * 1993-04-13 1995-07-25 Molecular Probes, Inc. Cyclic-substituted unsymmetrical cyanine dyes
JP3320869B2 (ja) * 1993-12-22 2002-09-03 シスメックス株式会社 白血球分析用試薬
JP3467310B2 (ja) * 1994-04-21 2003-11-17 シスメックス株式会社 白血球分析用試薬及び白血球の分類方法
JP3553691B2 (ja) * 1995-04-12 2004-08-11 シスメックス株式会社 網状赤血球測定用試薬及び測定方法
JP3425830B2 (ja) * 1995-10-06 2003-07-14 シスメックス株式会社 新規化合物とその用途
US6495692B1 (en) * 1996-12-10 2002-12-17 Abbott Laboratories Helium-neon excitable reticulocyte dyes derivable from halolepidines

Also Published As

Publication number Publication date
EP0882983B1 (en) 2005-04-06
US6004816A (en) 1999-12-21
JP3783808B2 (ja) 2006-06-07
EP0882983A3 (en) 2001-02-07
DE69829606T2 (de) 2006-02-02
JPH10319010A (ja) 1998-12-04
DE69829606D1 (de) 2005-05-12
EP0882983A2 (en) 1998-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA01220457A (ar) كاشف وطريقة تصنيف الكريات البيضاء وعدها .
US4882284A (en) Method for quantitating and differentiating white blood cells
AU784651B2 (en) Reagent and process for the identification and counting of biological cells
JP3425830B2 (ja) 新規化合物とその用途
US5882934A (en) Composition and method for hemoglobin and cell analysis
US5763280A (en) Cyanide-free lytic reagent composition and method for hemoglobin and cell analysis
AU750108B2 (en) Fully automated method and reagent composition therefor for rapid identification and characterization of reticulocytes, erythrocytes and platelets in whole blood
US5958776A (en) Method for classifying and counting immature leukocytes
FI94180B (fi) Menetelmä solukomponenttien analysoimiseksi nesteestä
EP0842410B1 (en) Compositions and methods for the rapid analysis of reticulocytes
CA2024166C (en) Compounds and reagent compositions and their use in the quantitative determination of reticulocytes in whole blood
KR101331332B1 (ko) 유약 백혈구 분석용 시약 및 분석용 시약 키트
EP1604039A2 (en) Dye compositions which provide enhanced differential fluorescence and light scatter characteristics
JP4567082B2 (ja) 赤芽球の分類計数方法
CA2273959C (en) Helium-neon excitable reticulocyte dyes derivable from halolepidines
JP4248017B2 (ja) 白血球分類計数方法及び白血球分類計数試薬キット
EP1918709B1 (en) Analyzing method for platelets
EP0259833A2 (en) Reagent and method for classifying leukocytes by flow cytometry
JP3553691B2 (ja) 網状赤血球測定用試薬及び測定方法
CN119757168B (zh) 一种白细胞分类检测用溶血剂和应用
KR19980042627A (ko) 유약백혈구의 분류계수법