SA08290697B1 - أجسام مضادة ضد gdf8 واستخداماتها - Google Patents

Abstract

GDF8 واستخداماتها ANTIBODIES TO GDF8 AS USES THEREOF الملخص يتعلق الاختراع الحالي بتوفير جزيئات (molecules) جديدة متعلقة بعامل النمو والتباين 8 (growth and differentiation factor‑8) (GDF8)، بالتحديد epitopes يخص GDF8 ومضادات نوعية (specific antagonists) أخرى من GDF8 بالتحديد مضادات أجسام مضادة GDF8 (anti‑GDF8 antibodies) أو protein ارتباط مولد مضاد (antigen binding protein) أو أجزاء منهما، التي قد تثبط نشاط GDF8 والإشارة في المعمل و/أو في الجسم الحي. يتعلق الشرح أيضا بتوفير اختبار مناعي (immunoassay) يستخدم للكشف عن وتقدير كمية GDF8. يتعلق الشرح أيضا بتوفير طرق لتشخيص، منع، تخفيف، وعلاج اضطرابات تصاحب GDF8، مثلا، اضطرابات تحللية للعضلات، العظام، وأيض insulin. أخيرا، يتعلق الشرح بتوفير أدوية لمعالجة هذه الاضطرابات باستخدام مضادات الأجسام (antibodies)، polypeptides، polynucleotides، والنواقل (vectors) من الاختراع.

Description

¥ : مضادات أجسام ضد 0118 واستخداماتها ‎ANTIBODIES TO 6158 AS USES THEREOF‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع إ يتعلق المجال التقني للاختراع ب ‎epitope(s)‏ خاصة بنمو وتباين العامل ‎١ A‏ ‎(GDF8) (growth and differentiation factor-8)‏ ومضاداته ‎(Mix)‏ ممائلات ‎«peptide‏ مضادات أجسام مضادة 6018 (مثلاء مضادات أجسام فأرية؛ آدمية ومكتسبة السمة الآدمية؛ © أجزاء منهاء إلخ)؛ ‎«dali. polynucleotides‏ 8 تتثبيطية؛ إلخ) التي يمكن استخدامها لتثبيط نشاط ‎GDF8‏ في المعمل و/أو في الجسم الحي. يتعلق المجال التقني إضافيا بطرق اختبار مناعي للكشف عن 078 في عينات بيولوجية بجانب طرق معالجة؛ تخفيف؛ منع؛ تشخيص؛ توقع حدوث؛ و/أو مراقبة اضطرابات تصاحب ‎GDF‏ (مثلاء اضطرابات عضلية؛ اضطرابات عصبية عضلية؛ اضطرابات تحلل عظمي؛ اضطرابات عظمية مستحثة ‎٠‏ أو أيضية؛ اضطرابات غير ‎dias‏ اضطرابات أيض ‎glucose‏ أو اضطرابات متعلقة ب ‎(insulin‏ ؛ بصفة خاصة في نساء لديهم القدرة على الإنجاب. إن نمو وتباين العامل ‎((GDF8) (growth and differentiation factor-8) A‏ المعروف أيضا بأنه ‎statin‏ عضلي ؛ هو ‎protein‏ تم إفرازه وعضو عائلة فائقة ‎Jalal‏ النمو المحول ‎beta‏ ‎(TGF-B) (transforming growth factor-beta)‏ من عوامل نمو مرتبطة بنائيا. لأعضاء هذه ‎٠‏ العائلة الفائقة خواص مولدة ‎morphene‏ ومنظمة للنمو: ‎(Kingsley et al. (1994) Genes Dev. 8:1 33-46; Hoodless et al. (1998) Curr.

Topics‏ ‎Microbiol.

Immunol. 228:235-72).‏ يخلق ‎GDF8‏ آدمي على أنه ‎protein‏ مصدر أولي 42 ‎amino‏ 375 الذي يشكل معقد ‎.homodimer‏ أثناء المعالجة؛ ينشق ‎peptide‏ | لأولي الطرفي-800100؛ المعروف بأنه ‎peptide’‏ ‎٠‏ - مصاحب للكمون ‎(LAP) '(latency-associated peptide)‏ كما يظل مرتبطا بصورة غير تساهمية مع ‎chomodimer‏ مما يعمل على تشكيل معقد غير نشط مصمم 'معقد كامن صغير ‎:"(small latent complex)‏ ‎(Miyazono et al. (1988) J.

Biol.

Chem. 263:6407-15; Wakefield et al. (1988) J.

Biol.‏ ‎Chem. 263:7646-54; Brown et al. (1999) Growth Factors 3 :35-43; Thies et al.‏ ‎Growth Factors 18:251-59; Gentry et al. (1990) Biochemistry 29: 6851-57; Yo‏ )2001( عل .

ذ ‎v‏ ‎Derynck et al. (1995) Nature 1 -05; Massague (1990) Ann.

Rev.

Cell Biol.‏ .)12:597-641 إن ‎statin Jie proteins‏ جريبي 5 ‎proteins‏ متعلقة ب ‎statin‏ جريبي تتضمن ‎:GASP-1‏ ‎(Gamer et. al. (1999) Dev Biol. 208:222-232, US Patent Pub No. 2003-01 80306-Al;‏ ‎US Patent Pub No. 2003-0162714-A1) 8‏ كما تربط ‎GDF8 homodimers‏ ناضجة وتثبط النشاط البيولوجي لأجل ‎.GDF8‏ ‏يظهر اصطفاف ترتيب ‎GDF8 amino acid‏ المستنتج من أنوا 2 عديدة أن 8 تتم حمايته بدرجة كبيرة: ‎(McPherron et al. (1997) Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

U.S.A. 94:12457-61).‏ ‎٠‏ تكون ترتيبات ‎GDF8‏ آدمي؛ فأري؛ من حيوان قارض؛ من خنزير؛ ومن دجاج مماثلة بنسبة ‎٠‏ في منطقة الطرف-0؛ بينما يختلف 01018 من قرد ‎ob ly‏ وضأني بمقدار 3 ‎Ladd amino acids‏ عند الطرف-). إن المستوى الحالي من حماية ‎GDF8‏ خلال | لأنواع يقترح أن 00178 له وظيفة فسيولوجية أساسية. لقد اتضح أن 0118 يلعب دورا رئيسيا في تنظيم التطور العضلي والاتزان البدني بتثبيط ‎٠‏ كل من انقسام وتباين الخلايا الأولية العضلية والخلايا التابعة: ‎(Lee and McPherron (1999) Curr.

Opin.

Genet.

Dev. 9:604-7; McCroskery et al.‏ ‎J.

Cell.

Biol. 162:1135-47).‏ )2003( يتم مبكرا إظهار ذلك في العضلات الهيكلية النامية؛ ويستمر الإظهار في العضلات الهيكلية ‎calla‏ يفضل في أنوا ع ارتجافات سريعة. لقد تدخل ‎GDF8‏ أيضا في إنتاج ‎enzymes‏ معينة ‎"٠‏ للعضلة (مثلاء ‎(creatine kinase‏ وانقسام خلية عضلية أولية (00/43781 ‎(WO‏ ‏إن الإظهار الزائد لأجل 0018 في ‎ob‏ بالغة يؤدي إلى فقد عضلي كبير: ‎(Zimmers et al. (2002) Science 296:1486-88).‏ بصورة مشابهة؛ تشير دراسات عديدة إلى أن إظهار 00178 زائد يصاحبه فقدان عضلي بسبب ‎‘HIV‏ ‎(Gonzalez-Cadavid et al. (1998) Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

U.S.A. 95:14938-43). Yo‏ على العكس من هذاء تتميز فئران طفرية ناقصة 8 بتضخم ملحوظ وتنسج مفرط في عضلة هيكلية وبناء عظمي لحائي متغير: نعل

. ¢ ‎(McPherron et al. (1997) Nature 387:83-90; Hamrick et al. (2000) Bone 27:343-49).‏ أيضاء لقد اتضح أن الطفرات الطبيعية التي تحول جين ‎GDF8‏ غير نشط تتسبب في كل من تضخم مفرط وتنسج مفرط في الحيوانات والآدميين: ‎(Lee and McPherron (1997), supra).‏ 0 على سبيل ‎JG‏ تكون الزيادة في كتلة العضلة الهيكلية واضحة في طفرات 8 طبيعي في الماشية: ‎(Ashmore et al. (1974) Growth 38:501-07; Swatland et al. (1994) J.

Anim.

Sci.‏ ‎McPherron et al., supra; Kambadur et al. (1 997) Genome Res. 7:910-15).‏ ;38:752-57 إن عدد من الاضطرابات العظمية والعضلية في الآدميين والحيوانات يصاحبها خلل وظيفي ‎٠‏ لنسيج عضليء وبذلك؛ قد يصاحبها أيضا 8. على سبيل المثال؛ قد يدخل 0018 في ! السبب المرضي للتصلب الجانبي غير مغذي للعضلات ‎(amyotrophic lateral sclerosis)‏ ‎«(“ALS”)‏ سوء تغذية عضلية ‎¢“MD”) (muscular dystrophy)‏ متضمنا سوء تغذية عضلة ‎«Duchenne‏ سوء تغذية عضلة في لفافة لوح الكتف؛ وسوء تغذية عضلي عضدي في لفافة من لوح ‎(SH‏ ضمور عضلي؛ عرض النفق الرسغي؛ ضمور عضو؛ هشاشة؛ مرض إعاقة ! ‎Ye‏ رثئوية احتقاني ‎(COPD) (congestive obstructive pulmonary disease)‏ فقدان قوة وكتلة العضلات» ‎(dla‏ أو أعراض فقدان عضلي تتسبب فيها أمراض وحالات أخرى. يعتقد أيضا أن 0018 يشارك في عمليات فسيولوجية أخرى واضطرابات متعلقة بذلك؛ : متضمنة الاتزان البدني بواسطة ‎glucose‏ أثناء تطور مرض السكر من النوع ‎oY‏ خلل تحمل ُ ‎glucose‏ أعراض أيضية (أي؛ أعراض ‎edie)‏ العرض ‎(X‏ مشتملة على ‎Ulla‏ متزامنة ‎٠‏ المجموعة شروط صحية (والتي قد تتضمن مقاومة ‎cinsulin‏ سمنة حول منطقة البطن» خلل إٍْ مستوى الدهن في الدم؛ ارتفاع الضغط» التهاب مزمن؛ حالة تخثرية أولية؛ إلخ) التي تعرض { شخص ما لخطورة كبيرة للإصابة بمرض السكر من النوع 7 و/أو مرض قلبي)؛ مقاومة ْ ‎insulin‏ (مثلاء مقاومة تسببها إصابة رضية مثل الحروق أو عدم توازن ‎i (nitrogen‏ واضطرابات نسيج غير دهني ‎(Jia)‏ السمنة؛ خلل مستوى الدهن في الدم؛ مرض كبدي دهني ‎Ye‏ غير ‎«alcoholic‏ إلخ): ُ ‎(Kim et al. (2000) Biochem.

Biophys.

Res.

Comm. 281:902-06).‏ ‎YALE‏ 4

° حاليا » هناك القليل من العلاجات الموثوق بها أو الفعالة لمعالجة تلك الأمراض. إن السبب المرضي لهذه العمليات يؤكد أن 8 يعمل كهدف محتمل في معالجة هذه الاضطرابات : المتعلقة بذلك. بالإضافة إلى اضطرابات عصبية عضلية في آدميين» هناك أيضا حالات متعلقة بعامل © نمو مع فقد في العظم؛ ‎Jia‏ هشاشة العظام والتهاب مفصلي عظميء الذي يؤثر بصورة سائدة في النساء كبيرات السن و/أو النساء ما بعد سن اليأس. إن هذه الأمراض والاضطرابات : العظمية الأيضية تتضمن انخفاض كتلة العظم بسبب علاج ‎glucocorticoid‏ مزمن؛ فشل ٍ تتاسلي قبل الأوان ؛ كبح ‎candrogen‏ نقص ‎cvitamin D‏ فرط ثانوي لنشاط الغدة الجاردرقية؛ ا أمراض نقص التغذية؛ وفقدان شهية عصابي. على الرغم من تفعيل علاجات حالية عديدة ؛ ‎٠‏ بتثبيط ارتشاف العظم فإن العلاج الذي يحث على تكوين العظام عبارة عن معالجة بديلة مفيدة. لأن 0118 يلعب دورا في تطور العظم بالإضافة إلى تطور عضلي؛ يكون أيضا 8 هو هدف فارماكولوجي ممتاز لمعالجة اضطرابات محللة للعظم. : بالمتل مع أعضا ء أخرى من عائلة عامل النمو المحول م ‎(transforming growth factor-B)‏ : ‎«(TGF-p)‏ يخلق 0088 على أنه ‎protein‏ مصدر أولي ‎amino acid‏ 376 محتوي على ترتيب : ‎٠‏ إشارة؛ مجال سيطرة ‎peptide‏ أولي طرفي-8» ومجال سيطرة طرفي-© عبارة عن جزيء نشط. يفرز ‎GDF8‏ في شكل متأخر بالارتباط مع ‎peptide‏ أولي خاص به ‎peptide)‏ مصاحب : للتأخير ‎¢(LAP «(latency-associated peptide)‏ إن معالجة محللة ‎protein‏ بين مجال سيطرة ‎peptide‏ أولي ومجال سيطرة طرفي-0 تنتج ‎peptide‏ أولي طرفي-11 وشكل ناضج من ‎i .GDF8‏ إن كلا من ‎dimers‏ متصلة بواسطة ‎disulfide‏ لشكل 8 ناضج وغير معالج؛ و ‎GDF8‏ ‎dimer ٠٠‏ المعالج يمثل الشكل النشط فقط من ‎protein‏ في المصل؛ بجانب العضلة الهيكلية؛ إٍْ وجد أن 8 مرتبطا مع عدة ‎proteins‏ قادرة على تعديل نشاطه؛ إفرازه أو ارتباط مستقبله. ا يوضح 00178 تأثيراته خلال عائلة مستقيل ‎serine/threonine kinase heterotetramer‏ إ غشاء انتقالي؛ حيث يعزز نشاطه مستقبل ‎ctransphosphorylation‏ مما يؤدي إلى إشارة 1 نشاط ‎.serine/threonin kinase‏ لقد اتضح أن مسار ‎GDF8‏ يشمل ارتباط ‎dimer‏ 01178 نشط إ ‎YO‏ مع مستقبل ‎Je‏ الانجذاب» ‎¢ACtIIRB‏ الذي يقوم بتوظيف وتنشيط ‎transphosphorylation‏ ا ‎Jit dl‏ منخفض الانجذاب؛ ‎ALKA/ALKS‏ لقد تبين أيضا أن [ ‎proteins Smad 2‏ و3 ‎proteins Smad‏ يتم تنشيطهما على التوالي حيث يشكلان معقدات مع 3 ‎YAS‏ 3

0 ‎Smad 4‏ ثم تنقل إلى ‎algal‏ حيث يتم بعدئذ تنشيط نسخ الجين المستهدف. يوضح ‎Lee‏ ‎(Proc Natl Acad Sci USA 2001, 98 :9306-9311) McPherron y‏ أن مستقبل ‎i ActRIIB‏ قادر على إنتاج تأثير 0088 في الجسم الحي؛ كإظهار شكل سائد سالب من 8001805 في الفئران التي تحاكي نقصان جين ‎.GDF8‏ هه لقد اتضح أنه تحت تأثير 8 . تتراكم الخلايا الأولية ‎C2C12‏ في الطورين 60/01 و02 من دورة الخلية؛ بالتالي يقل عدد خلايا الطور 8. يحث 0118 ‎Lind‏ على فشل تباين ‎١‏ ‏خلية عضلية ‎dull‏ مصاحب لانخفاض شديد في إظهار علامات التباين. إن إظهار 60:8 ‎J‏ أيضا من معدل الموت المبرمج للخلايا تحت شروط كل من الانقسام والتباين: ‎(Thomas et al., J.

Biol Chem 2000, 275 :40235-40243).‏ ‎٠١‏ يؤدي تثبيط إظهار ‎statin‏ عضلي ‎(GDFS)‏ إلى ‎US‏ من تضخم وفرط تنسج عضلي: ! ‎(Lee and McPherron, supra; McPherron et al., supra).‏ , إن ‎statin‏ عضلي ينظم بصورة سلبية تجديد العضلات بعد الإصابة؛ ويؤدي نقص ‎statin‏ ‏عضلي في ‎oly‏ مزالة 01178 إلى سرعة تجدد العضلات: ‎[١ (McCroskery et al., (2005) J.

Cell.

Sci. 118:3531-41).‏ ‎١٠‏ لقد اتضح أن مضادات الأجسام المضادة 010178 آدمي (طلب منشور براءة اختراع الولايات المتحدة الأمريكية رقم ‎)٠٠١١4/0147747‏ بأنه يربط 00178 ويثبط نشاط 01178 في المعمل ْ والجسم الحي؛ متضمنا نشاط ‎GDF8‏ المصاحب لتنتظيم كتلة عضلة هيكلية وكثافة عظمية : بصورة سلبية. على سبيل المثال؛ إن مضادات ‎١‏ لأجسام التي تعادل ‎statin‏ عضلي تزيد وزن ِ: الجسم؛ كتلة عضلة هيكلية؛ وحجم العضلة وقوتها في العضلات الهيكلية لفئران من النوع ‎٠‏ البري: : ‎(Whittemore et al. (2003) Biochem.

Biophys.

Res.

Commun. 300:965-71)‏ : وفأر ‎emdx‏ نموذج للضمور العضلي: : ‎(Bogdanovich et al. (2002) Nature 420:418-21; Wagner et al. (2002) Ann.

Neurol.‏ : .)52:832-36 : ‎Yo‏ بالإضافة لذلك؛ إن مضادات أجسام ‎statin‏ عضلي في هذه الفئران تقلل من تلف الحجاب الحاجزء وهو أيضا عضلة مستهدفة أثناء البحث عن سبب مرض ‎ALS‏ لقد تم افتراض أن تاثير عوامل النمو؛ ‎HGF Jie‏ على العضلات قد يرجع سببه إلى تثبيط إظهار ‎statin‏ عضلي : م :

‎«(McCroskery et al. (2005), supra)‏ وبذلك يساعد في انتقال التوازن بين التجديد والتحلل في اتجاه موجب. مع هذاء لم تكن مضادات الأجسام تلك من الفن السابق معينة لأجل ‎(GDF8‏ ‏أي أن مضادات الأجسام هذه لها انجذاب عال لأعضاء أخرى من العائلة الفائقة ‎Jie (TGF-B‏ ‎.BMP11‏ ‏° حتى الآن؛ تقوم أيضا كل المثبطات المعروفة لنشاط ‎peptide Nis) GDF‏ أولي؛ مستقبل 8008118 قابل ‎«lisa ll‏ مضادات أجسام مضادة ‎«GDF8‏ إلخ) بمعادلة الأنشطة البيولوجية لعوامل أخرى (مثلا؛ 84011؛ ‎cactivin‏ إلخ) التي لها وظائف بيولوجية هامة. على سبيل المثال؛ يلعب ‎activin‏ و330011 أدوار هامة ‎Sl‏ التخلق الجنيني. يعرف ‎activin BA‏ على أنه عامل نمو تناسلي حرج؛ ويكون 31011 مسئولا عن نقل مثيل للهيكل ‎٠‏ المحوري. إن فثران ناقصة 314011 متماثلة الجينات معرضة للوفاة أثناء التوالد؛ وتكون الفئران التي بها نسخة من النوع البري واحدة لجين 1 حية لكن بها عيوب في هياكلها. عندما يلعب ‎activin‏ و ‎BMP11‏ أدوار هامة أثناء التخلق الجنيني؛ فإن مضاد يثبط ‎GDF8‏ وعوامل أخرى؛ ‎Mia‏ 31011 يعرض مخاطر أمنية نظرية والتي تستطيع أن تقدم سواء كسمية في المرضى أو كسمية إنتاجية في؛ ‎lia‏ نساء لديهم القدرة على الإنجاب. لذلك؛ هناك حاجة ‎٠‏ لمركبات وطرق معالجة تساهم في زيادة كلية لكتلة العضلة و/أو قوتها و/أو كثافة العظم؛ ‎diay‏ خاصة في الآدميين؛ لكنها لا تتدخل ‎cae‏ مثلاء 81/011. بمعنى آخر؛ هناك ‎Lala‏ ‏لتثبيط ‎(pes‏ لنشاط 01018 في معالجات اضطرابات مصاحبة ‎GDF8‏ التي يفضل فيها أن تزيد كتلة العضلة؛ حجمهاء قوتهاء إلخ؛ بالتحديد في نساء لديهم القدرة على الإنجاب. بسبب تطور طرق استخدام عوامل تضبط ‎«GDF-8‏ هناك حاجة لتطوير طرق مراقبة وجعل ‎Te‏ (عطاء هذه العوامل نموذجيا إلى الفردد. بصفة خاصة؛ لقابلية قياس مستويات ‎GDF-8 protein‏ في الموائع البيولوجية تطبيقات هامة لمحاولات إكلينيكية متقدمة. على سبيل المثال ؛ قد تكون مستويات ‎GDF-8‏ للتدوير تشخيصية لحالات مرضية يمكنها الاستفادة من علاج مضاد 007-8؛ أو يمكنها توقع أي الأفراد أكثر استجابة لعلاج مضاد 0017-8. ٍ بالإضافة لذلك؛ إن التغيرات في مستويات ‎GDF-8‏ في الدم الطرفي أثناء المعالجة المضادة ‎Yo‏ 0017-48 قد تكون مؤشرات مبكرة لاستجابة مقاسة لاحقة في ‎AS‏ و/أو وظيفة العضلة. لتحقيق هذه الأهداف التي تسعى للوصول للمستوى الأمثل؛ تتطلب طرق للكشف عن أو مراقبة مستويات ‎GDF-8 protein‏ في الموائع الحيوية؛ ‎Jie‏ المصل والبلازما. من المرغوب

A

‏لتحديد الأفراد‎ GDF-8 ‏؛ وبعد المعالجة مع عامل يضبط‎ Lil ‏قبل؛‎ GDF-8 ‏مراقبة مستويات‎ ‏الملاثئمين لتلك المعالجة؛ على سبيل المثال؛ مراقبة استجاباتهم للمعالجة؛ وتطورهم بعد‎ ‏المعالجة. بالتحديد؛ تتطلب طرق تسمح بتحديد و/أو تقدير كمية مستويات 0017-8 الداخلي‎ ‏ومضادات أجسام‎ GDF-8 ‏متضمنة مثبطات‎ «GDF-8 ‏كاستجابة لإعطاء عوامل تضبط‎ .GDF-8 ‏مضادة‎ © ‏طبقا لذلك يعتبر الغرض الرئيسي للاختراع الحالي هو توفير مركبات وطرق تثبط بالتحديد‎ ‏في‎ GDF-8 ‏نشاط 06018 بالإضافة إلى اختبارات مناعية للكشف عن وتقدير كمية مستويات‎ ‏في المصل والبلازما.‎ Ola ‏العينات الحيوية؛‎ ‏الوصف العام للاختراع‎ ‏ارتباط مولد مضاد ترتّبط‎ proteins ‏يعتمد الاختراع على اكتشاف مضادات أجسام أو‎ Ve (GDF8) (Growth and Differentiation Factor 8) A ‏بصورة محددة مع عامل النمو والتباين‎ ‏ارتباط 01178 مع مستقبله أو‎ Die) ‏و/أو تعارض بالتحديد نشاط 60178 واحد على الأقل‎ ‏على تعريف‎ Mal ‏حالات أخرى لإرسال إشارات عن طريق 0018). يعتمد أيضا الاختراع‎ proteins 5) GDF8 ‏لأجسام المضادة‎ ١ ‏على 00178 المدركة بواسطة مضادات‎ 05

GDF8 ‏ارتباط مولد مضاد المحددة هذه؛ هذا بسبب أن مضادات الأجسام للاختراع الخاصة ب‎ ٠

BMP11 ‏ولا ترتبط بالتحديد مع مثلا‎ ‏يوفر الاختراع أيضا مضادات خاصة‎ «GDF ‏الخاصة ب‎ epitope(s) ‏علاوة على توفير‎ (specific 0018 antagonists) ‏خاصة‎ GDF8 ‏لأجل 8 (إيشار إليها هنا 'بمضادات‎

Nid) ‏إلخ)؛ مثلاء مضادات تعارض بصفة خاصة‎ ")06078 antagonist) 8 Alias’ ‏حالات إرسال إشارة عن طريق‎ (Bid) ‏تثبطء تقلل؛ و/أو تعادل) نشاط 0018 واحد على الأقل‎ ٠ ‏ولا تعارض بصفة‎ o((ALKA/ALKS ‏(مثلا؛ ارتباط 01018 مع مستقبله (مثل؛ مستقبل‎ 8

GDF-8 ‏يوفر الاختراع الحالي أيضا طرق للكشف عن وتقدير كمية‎ .BMP11 ‏خاصة نشاط‎ ‏في العينات الحيوية. في تجسيدات معينة؛ تشتمل الطرق على اختبارات مناعية؛ وتكون العينة‎ ‏يوفر إضافيا الاختراع مجموعات لاستخدامها في طرق الاختراع.‎ ٠ ‏هي المصل و/أو البلازما‎ ‏الخاصة المعلنة في طرق معالجة (التي‎ GDF ‏الاختراع طرق استخدام مضادات‎ Lad jig YO ‏مثلاء‎ (GDFS ‏تتضمن تخفيف؛ منع؛ تشخيص؛ توقع حدوث)؛ أو مراقبة اضطرابات مصاحبة‎ ‏اضطرابات عضلية؛ اضطرابات عصبية عضلية؛ اضطرابات تحلل العظام» اضطرابات عظمية‎

YAET q ‏اضطرابات متعلقة ب‎ glucose ‏اضطرابات غير دهنية؛ اضطرابات أيض‎ dad ‏مستحثة أو‎ ‏إلخ.‎ cinsulin ‏لذلك» في أحد الجوانب؛ يوفر الاختراع مضادات لأجل 0178 حيث تشتمل المضادات‎ ‏معزول‎ nucleic acid $GDF8 ‏مجال سيطرة ربط‎ (A peptide ‏على واحد على الأقل من ممائل‎ ‏تثبيطية‎ polynucleotide ‏لممائل 56 في مجال سيطرة ربط 06318؛‎ amino acid ‏يشفر‎ © ٍ ‏مولد مضاد يرتبط بصفة‎ Jali) proteins ‏أو‎ GDF8 ‏ومضاد جسم مضاد‎ ¢GDF8 ‏خاصة ب‎ .81/011 ‏خاصة مع 0018 ولا يرتبط بالتحديد مع‎

Jian ‏في أحد التجسيدات؛ يوفر الاختراع مضاد موصوف هنا حيث يكون المضاد هو‎ ‏مجال سيطرة ربط 0018 وينتقى من المجموعة المتكونة أساسيا من ترتيب‎ (A peptide ‏من تعريف الترثيب رقم:‎ amino acid ‏المنتقى من المجموعة المتكونة من ترتيب‎ amino ‏ونع‎ ٠ ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 7؛ ترتيب‎ amino acid AA ‏؛‎ ¢ ‏من تعريف‎ amino acid ‏وترثيب‎ 4٠١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏؛ ترتيب‎ A ‏رقم:‎ ‏الموصوف‎ peptide ‏في بعض التجسيدات؛ يوفر الاختراع مضاد وهو مماثل‎ .١7 : ‏الترتيب رقم‎ peptide ‏هنا والذي تم تدويره. في بعض التجسيدات؛ يوفر الاختراع مضاد وهو مماثل‎ ‏الموصوف هنا والذي تم تدويرهِ بواسطة رابطة ع0180150. في أي واحد أو أكثر من التجسيدات‎ ١٠ ‏يوفر الاختراع مضاد وهو مماقل 56م الموصوف هنا والذي به‎ ‏في بعض التجسيدات يوفر الاختراع مضاد وهو مماثل‎ ٠ ‏واحد على الأقل‎ D-amino 41 ‏الذي قد يستخدم كمولد مناعي.‎ peptide ‏في تجسيد آخر يوفر الاختراع مضاد موصوف هنا حيث يكون المضاد هو مضاد جسم‎

GDF8 ‏ارتباط مولد مضاد أو جزء منه الذي يرتبط بصفة خاصة مع‎ protein «GDF8 ‏مضاد‎ ٠ ‏ارتباط مولد المضاد‎ protein ‏كما ينتقى مضاد الجسم أو‎ (BMPIT ‏لكنه لا يرتبط بالتحديد مع‎ ‏أحادي‎ Ab (mAb) gill ‏أحادي‎ Ab ‏عديد النسخ؛‎ Ab ‏من المجموعة المتكونة من:‎ ‏ثلاثي‎ Ab tetrameric Ab ‏مكتسب السمة الأدمية؛‎ Ab ‏عديد الخصوصية؛‎ Ab ‏الخصوصية؛‎ ‏وحيد‎ Ab ‏خاص بمجال سيطرة؛‎ Ab ‏سلسلة وحيدة؛‎ Ab ‏متعدد الخصوصية؛‎ Ab ‏التكافؤ؛‎ ‎Ab ¢ScFe ‏اندماج‎ protein ‏اندماج؛‎ protein ‏محذوف مجال السيطرة؛‎ Ab ‏مجال السيطرة؛‎ Yo

Abs ‏طفري؛‎ Ab ‏مهجن؛‎ Ab ‏مخلق؛‎ Ab ‏مصنع؛‎ Ab ‏هجين؛‎ Ab ‏وحيد السلسلة؛‎ ‏جزء‎ (Fv ‏جزء‎ tFab' ‏مطعمةة«0؛ جزء مضاد جسم الذي قد يتضمن ط178؛ 17)80(2؛ جزء‎

YA£T yo ‏ارتباط مولد مضاد الذي قد يتضمن‎ protein ¢dAb ‏جزء‎ ¢Fd ‏جزء‎ «(ScFv) ‏وحيد السلسلة‎ Fy ‏مقيد؛ جسم مقاس بالنانو؛ جسم‎ FR3-CDR3-FR4 peptide tCDR3 peptide ‏أجسام ثنائية؛‎

IgNAR ‏مجال سيطرة‎ ¢(SMIPs) ‏مقاس بالنانو ثنائي التكافؤ؛ أدوية مناعية نسقية صغيرة‎ ‏متغير فائق؛ وجسم صغير. في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع هو مضاد جسم‎ ‏أحادي النسخ. في بعض التجسيدات؛ يكون مضاد الاختراع هو مضاد جسم مكتسب السمة‎ 0 ‏الآدمية.‎ ‎protein ‏في بعض التجسيدات يوفر الاختراع مضاد عبارة عن مضاد جسم؛‎ ‏ارتباط مولد مضاد أو جزء منه خاص لأجل 0318 متكون من منطقة تحديد تكملة‎ cui ‏واحدة على الأقل مشتملة على‎ (CDR) (complementarity determining region) tad) ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏منتقى من المجموعة المتكونة من: ترتيب‎ 0 acid ٠ ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ ٠١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ٠ ‏ترتيب‎ VY ‏مسن تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ١ ‏رقم:‎ ‏من تعريف الترتيب رقم: 64 7؛‎ amino acid ‏ترتيب‎ YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 0 acid ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏؛ ترتيب‎ Yo ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ «YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 0 acid ‏ترتيب‎ 17 ٠ ‏من تعريف‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 79 ترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ (YA ‏رقم:‎ ‎.3١ ‏الترتيب رقم:‎ «GDF8 ‏في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع عبارة عن مضاد جسم مضاد‎ ‏أولىء ثانية‎ CDR ‏منه مشتمل على سلسلة ثقيلة تشمل‎ gh ‏ارتباط مولد مضاد أو‎ protein ‏من تعريف‎ amino acid ‏منتقى من ترثيب‎ amino acid ‏الأولى على‎ CDR ‏وثالثة؛ حيث تشتمل‎ ٠ ‏الثانية‎ CDR ‏تشتمل‎ (YO ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏الترتيب رقم: $19 وترتيب‎ ‏من تعريف‎ amino acid ‏وترتيب‎ ¢Y ٠ ‏منتقى من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏على‎ ‎i ‏منتقى من ترتيب‎ amino acid ‏الثالقة على‎ CDR ‏وتشتمل‎ YU ‏الترتيب رقم:‎

XY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: ١؟ ¢ وترتيب‎ amino acid ‏ارتباط مولد مضاد للاختراع على‎ protein ‏في بعض التجسيدات يشتمل مضاد الجسم أو‎ amino acid ‏منتقى من المجموعة المتكونة من: ترتيب‎ amino acid ‏تشمل ترتيب‎ ald ‏سلسلة‎ ‎NA ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏وترتيب‎ VE ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ ‏تم‎

١١ ‏في بعض التجسيدات » يكون مضاد الاختراع عبارة عن مضاد جسم مضاد 0078 أو‎ ‏أولى؛ ثانية وثالثة؛‎ CDR ‏ارتباط مولد مضاد مشتمل على سلسلة خفيفة تشمل‎ protein ‏من تعريف‎ amino acid BA ‏منتقى من‎ amino acid ‏لأولى على‎ ١ CDR Jain ‏حيث‎ ‏الثانية‎ CDR ‏تشتمل‎ «YA : ‏من تعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏وترتيب‎ ¢VY ‏الترتيب رقم:‎ amino ‏وترتيب‎ ¢YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏منتقى من ترتيب‎ amino acid ‏على‎ © ‏منتقى من ترتيب‎ amino acid ‏الثالثة على‎ CDR ‏من تعريف الترتيب رقم: 79؛ تشتمل‎ acid

Xo ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏وترتيب‎ ¢Y 4 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ارتباط‎ protein ‏أو‎ GDF8 ‏في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع هو مضاد جسم مضاد‎ ‏منتقى‎ amino acid ‏مولد مضاد مشتمل على سلسلة خفيفة تشمل ترتيب‎ amino ‏من تعريف الترتيب رقم: 11 وترتيب‎ amino acid ‏من المجموعة المتكونة من: ترتيب‎ ٠

AY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ acid ‏في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع عبارة عن مضاد جسم مضاد 00178 أو‎ ‏من تعريف‎ amino acid ‏ارتباط مولد مضاد مشتمل على سلسلة خفيفة تشمل ترتيب‎ protein ‏من تعريف‎ amino acid ‏الترتيب رقم: ١٠؛ ومشتمل إضافيا على سلسلة ثقيلة تشمل ترتيب‎ ‏في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع عبارة عن مضاد جسم مضاد‎ .٠ ‏الترتيب رقم:‎ ٠ amino acid ‏ارتباط مولد مضاد مشتمل على سلسلة خفيفة تشمل ترتيب‎ protein ‏أو‎ 88 ‏من‎ amino acid ‏ومشتمل إضافيا على سلسلة ثقيلة تشمل ترتيب‎ VY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ ‏يشفر أي‎ polynucleotide ‏بعض التجسيدات؛ يوفر الاختراع‎ AVA ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ia ‏للاختراع» حسب الوصف‎ GDF alias ‏مشتمل على‎ amino acids ‏واحد أو أكثر من‎ ‏تثبيطي يرتبط‎ polynucleotide ‏في بعض التجسيدات يكون مضاد الاختراع عبارة عن‎ Y. ‏وجزيء مضاد‎ SIRNA ‏بصفة خاصة مع 60178 وينتقى من المجموعة المتكونة من: جزيء‎ polynucleotides ‏في بعض التجسيدات يوفر الاختراع أي واحد أو أكثر من‎ ٠. ‏للإحساس‎ ‏الموصوفة هنا التي تشفر مضادات الاختراع. في بعض التجسيدات يوفر الاختراع‎ ‏منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيب‎ amino acid ‏يشفر ترتيب‎ polynucleotide 1 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: ؛ ؛ ترتيب‎ amino acid YO ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: /؛ ترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‏تجسيد آخر يوفر الاختراع‎ BY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 0 acid ‏وترتيب‎ ¢)

YAEL

VY

‏المعزول من ترتيسب‎ polynucleotide bul] ‏رحيث يتكون‎ 06 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ nucleic acid ‏منتقى من المجموعة المتكونة من: ترتيب‎ 60 acid ‏من تعريف الترثيب‎ nucleic acid ‏من تعريف الترتيب رقم : © ترثيب‎ 6 acid ‏ترتيب‎ «VF ‏من تعريف‎ nucleic acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 9 ترتيب‎ nucleic acid ‏ترتيب‎ oY : ‏رقم‎ ‏لأجزاء من ذلك.‎ nucleic acid ‏وترتيبات‎ VY ‏الترتيب رقم:‎ © في بعض التجسيدات يوفر الاختراع خلية عائلة تشمل أي واحد أو أكثر من ام الاختراع؛ حيث يكون ‎polynucleotide‏ متصل تشغيليا مع ترتيب تنظيمي. في تجسيد أخر يوفر الاختراع ناقل يشمل أيضا أي من ‎polynucleotides‏ | لاختراع. في تجسيد آخر يوفر الاختراع خلية عائلة تشمل ناقل مشتمل على أي واحد أو أكثر من ‎Ve‏ 55 سوام الاختراع. ‏في بعض التجسيدات يوفر الاختراع طريقة لإنتاج مضاد 01078 من خلية ‎Able‏ مزروعة حسب الوصف هنا مشتملة على أي واحد أو أكثر من ‎polynucleotides‏ الاختراع ولعزل مضاد 60178 الظاهر بواسطة الخلية العائلة. في تجسيد آخر أيضا يوفر الاختراع مضاد 8 معزول ناتج من خلال طريقة لإنتاج مضاد 010178 حسب الوصف هنا. ‏ب في جانب آخر للاختراع؛ يوفر الاختراع اختبار للكشف عن وجود 0118 في عينة من كائن ويشتمل على الخطوات التالية: اتحاد ( ‎)١‏ العينة مع (7) عامل كاشف إمساك يربط 8 بصفة خاصة و(©) عامل كاشف للتحديد يربط ‎GDFS‏ بصفة خاصة ويكشف عن حدوث الارتباط النوعي أو عدمه بين عامل كاشف إمساك و0018 حيث يشير الكشف عن الارتباط النوعي إلى وجود ‎GDF8‏ في العينة. ‏7 في أحد تجسيدات الاختراع يتفكك ‎GDF8‏ الموجود في العينة من ‎proteins‏ ربط 01178 ومضاد 60178 الموجود في العينة. في أحد التجسيدات؛ يشتمل اختبار الاختراع إضافيا على اتحاد العينة مع مثبت للأس الهميدروجيني حامضي قبل اتحاد ‎dal)‏ مع عامل كاشف الإمساك؛ كما هو موصوف هنا. في تجسيد ‎HAT‏ يكون لمثبت الأس الهيدروجيني الحامضي في الاختبار للاختراع أس هيدروجيني بين ‎١‏ و١.‏ في تجسيد آخر يكون الأس الهيدروجيني ‎Xoo ‏الهيدروجيني الحامضي حوالي‎ oY ‏لمثبت‎ ve ‏في أحد التجسيدات؛ يوفر الاختراع أي واحد أو أكثر من الاختبارات الموصوفة هنا حيث تنتقى العينة من المجموعة المتكونة من المصلء الدم الكامل؛ البلازماء العينة التشريحية؛ ا

VY

‏العينة النسيجية؛ معلق الخلية؛ اللعابء السائل الفمي؛ السائل المخي الشوكي؛ السائل السلوي؛‎ ‏العرق؛ السائل الدمعي؛ السائل‎ esl ‏اللبأء إفراز من غدة الثدي؛ السائل الليمفاوي؛‎ all ‏المعوي؛ السائل الزليلي والمخاط. في تجسيد آخرء يوفر الاختراع اختيار العينة من الدم‎ ‏الكامل؛ المصل أو البلازما.‎ ° في أحد التجسيدات؛ يوفر الاختراع أي واحد أو أكثر من الاختبارات الموصوفة هنا حيث تشتمل خطوة الكشف على واحد على الأقل من اختبار ساندويتش واختبار الارتباط التنافسي. في بعض التجسيدات تشتمل خطوة الكشف عن اختبار ساندويتش. في بعض التجسيدات؛ تشتمل خطوة الكشف على واحد على الأقل من: الكشف عن التغير في معامل الانكسار عند السطح الضوئي الصلب المتلامس مع العينة؛ الكشف عن التغير ‎٠‏ في الإضاءة؛ قياس التغير في اللون؛ الكشضف عن التغيهر في النشاط الإشعاعي؛ القياس باستخدام مقياس تداخل ذي طبقة حيوية؛ القياس باستخدام الكشف بالكابول؛ القياس باستخدام التصوير الداخلي الخالي من العلامات؛ والقياس باستخدام الكشف الصوتي. في بعض التجسيدات؛ إن خطوة الكشف الخاصة بالاختراع تقيس التغير في اللون. في بعض التجسيدات؛ تشتمل خطوة الكشف عن اختبار منتقى من ‎enzyme ‏المجموعة المتكونة من: اختبار مادة ماصة مناعية متصلة مع‎ ١ ‏اختبار مادة كيميائية مشعة كهربية‎ ¢(ELISA) (enzyme-linked immunosorbent assay) (radioimmunoassay) ‏اختبار متاعي إشعاعي‎ ¢(ECL) (electro-chemiluminescent assay) ¢(SPRIA) (solid-phase radioimmunoassay) ‏اختبار مناعي إشعاعي طور صلب‎ ¢(RIA) ‏تصنيف خلية‎ ¢(immunoprecipitation) ‏؛ ترسيب مناعي‎ (immunoblotting) ‏تبقع مناعي‎ ‎٠‏ منشطة مشعة ‎(FACS) (Fluorescent Activated Cell Sorting)‏ في تجسيد آخر تشتمل خطوة الكشف على ‎ELISA‏ ‏في أحد التجسيدات يتم الكشف عن وجود 00178 بواسطة الارتباط النوعي لمركب مع ‏عامل الكشف الذي يربط 8 بصفة خاصة حيث يشتمل المركب إضافيا على ‎Ade‏ يمكن ‏الكشف عنها. في تجسيد آخر تشتمل العلامة التي يمكن الكشف عنها على علامة واحدة على ‏© الأقل منتقاة من المجموعة المتكونة من علامة ‎enzyme‏ علامة مشعة؛ ‎¢protein ile‏ علامة ‎¢vitamin‏ علامة لمادة سهلة الاصطباغ بالألوان ؛ علامة لنظير إشعاعي وعلامة جزيء

١ protein ‏في تجسيد آخر تكون العلامة التي يمكن الكشف عنها هي علامة‎ ASS electron ‏والتي تشمل إضافيا صتامزط.‎ ‏في أحد التجسيدات؛ يوفر اختبار الاختراع عامل كاشف إمساك منتقى من المجموعة‎ protein ‏مضاد أو جزء منه؛‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏المتكونة من مضاد جسم مضاد 8 ؛‎ ‏ومجال سيطرة ربط 8. في تجسيد آخر؛ يوفر اختبار الاختراع أن يكون‎ ¢GDF8 ‏ربط‎ © ‏مضاد أو جزء منه‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏عامل كاشف إمساك هو مضاد جسم مضاد 0018؛‎

JA16.5 170-029 (MYO-028 RK22 81635 ‏والذي ينتقى من المجموعة المتكونة من‎ ‏في بعض التجسيدات يكون عامل كاشف الإمساك هو 81635. في بعض التجسيدات يكون‎

RK22 ‏عامل كاشف إمساك هو‎ ‏في أحد التجسيدات لاختبار الاختراع يتوافر عامل كاشف التحديد المنتقى من المجموعة‎ Ve protein ‏أو جزء منة؛‎ alias alge ‏ارتباط‎ protein «GDF8 ‏المتكونة من: مضاد جسم مضاد‎ ‏في أحد التجسيدات؛ عامل الكاشف يكون مضاد جسم‎ .GDF8 ‏ربط 8 ومجال سيطرة ربط‎ ‏وينتقى من المجموعة المتكونة من:‎ Ade ‏مضاد أو جزءٍ‎ alge ‏ارتباط‎ protein «GDF8 ‏مضاد‎ ‎RK35 ‏يوفر اختبار الاختراع بأن يكون عامل الكشف هو‎ «AT ‏و635ل0. في تجسيد‎ 2

RK22 ‏يوفر اختبار الاختراع بأن يكون عامل الكشف هو‎ «AT ‏في تجسيد‎ 00 ‏في أحد التجسيدات يوفر الاختراع اختبار يكون فيه عامل كاشف الإمساك عبارة عن‎ ‏يوفر الاختراع اختبار يكون‎ OAT ‏في تجسيد‎ RK35 ‏ويكون عامل الكشف عبارة عن‎ RK22 ٍ RK22 ‏وعامل الكشف عبارة عن‎ RK35 ‏عبارة عن‎ lady) ‏فيه عامل كاشف‎ : ‏للاختراع؛ يوفر الاختراع اختبار لتقدير كمية 0018 الموجودة في عينة من‎ AT ‏في جانب‎ : ‏عامل كاشف إمساك يربط‎ (Y) ‏كائن ويشتمل على الخطوات التالية: اتحاد )1( العينة مع‎ Tr ‏بصفة خاصة 5 )¥( عامل كشف يربط 01178 بصفة خاصة ويكشف عن حدوث‎ 8 ‏الارتباط النوعي أو عدمه بين عامل كاشف إمساك و6078 كما يتم تقدير كمية مستوى‎ 1 ‏في العيئة؛ حيث يشير الكشف عن الارتباط النوعي إلى وجود 0018 في العينة كما‎ 8 i proteins ‏يمكن تقدير كميته. في أحد التجسيدات للاختراع يتوافر 8 في العينة متفكك من‎ 1 ‏ومضاد 00178 الموجود في العينة. في أحد التجسيدات؛ يشتمل اختبار الاختراع‎ GDF ‏ربط‎ 7 ‏إضافيا على اتحاد العينة مع مثبت أس هيدروجيني حامضي قبل اتحاد العينة مع عامل كاشف ا‎ ] ‏الإمساك؛ كما هو موصوف هنا. في تجسيد آخر يكون لمثبت الأس الهيدروجيني الحامضي‎ i YALE vo ‏تجسيد آخر يكون الأس الهيدروجيني لمثبت الأس‎ ET) ‏أس هيدروجيني بين حوالي‎

Yoo ‏الهيدروجيني الحامضي حوالي‎ ‏في جانب آخر للاختراع» يوفر الاختراع تركيبة دوائية لمعالجة (التي تتضمن تخفيف» و/أو‎ ‏منع) اضطراب مصاحب 8 في كائن تشتمل على مادة حاملة مقبولة دوائيا وينتقى مضاد‎ ‏في مجال سيطرة ربط‎ peptide ‏واحد على الأقل من المجموعة المتكونة من مماثل‎ 60178 © ‏في مجال سيطرةٍ ربط‎ peptide Silos ‏لأجل‎ amino acid ‏معزول يشفره‎ nucleic acid ‏؛‎ ‎protein «GDF ‏ومضاد جسم مضاد‎ GDF8 ‏خاص ب‎ hii polynucleotide ‏؛‎ 38 ‏ارتباط مولد مضاد أو جزء منه مرتبط بصفة خاصة مع 6018 قد لا يرتبط بالتحديد مع‎ .BMP11 peptide ‏لاختراع على مماثل‎ ١ ‏في أحد التجسيدات تشتمل التركيبة الدوائية من‎ Va ‏منتقى من‎ amino acid ‏مكون أساسيا من ترتيب‎ GDF8 ‏لأجل‎ pals ‏لمجال سيطرة ربط‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 4 ؛ ترثتيب‎ amino acid ‏المجموعة المتكونة من ترتيب‎ amino ‏ترتيب‎ ¢A ad) ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: > ؛ ترتيب‎

AY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏؛ وترتيب‎ ٠١ ‏تعريف الترتيب رقم:‎ ge acid ‏معزول يشفر‎ nucleic acid ‏في أحد التجسيدات تشتمل التركيبة الدوائية من الاختراع على‎ Vo ‏منتقى‎ nucleic acid ‏ويتكون أساسيا من ترتيب‎ GDF8 ‏خاص ب‎ amino ‏ا‎ 4 nucleic ‏من تعريف الترتيب رقم: ؟؛ ترتيب‎ nucleic acid ‏من المجموعة المتكونة من ترتيب‎ ‏ترتيب‎ ¢V ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ nucleic acid ‏من تعريف الترتيب رقم : ©؛ ترتيب‎ 120 ١١ ‏من تعريف الترثيب رقم:‎ nucleic acid ‏من تعريف الترتيب رقم: ؟ ؛ ترتيب‎ nucleic acid ‏لأجزاء من ذلك.‎ nucleic acid ‏وترتيبات‎ ٠ (GDF8 ‏في أحد التجسيدات تشتمل التركيبة الدوائية من الاختراع على مضاد جسم مضاد‎ ‏ولا‎ GDF8 ‏مولد مضاد أو جزء منه مرتبط بصفة خاصة مع‎ Jalil protein ‏من تعريف‎ amino acid ‏يرتبط بالتحديد مع 314011 ويشتمل على سلسلة خفيفة تشمل ترتيب‎ ‏وحيث يشتمل مضاد الجسم إضافيا على سلسلة ثقيلة تشمل‎ OV ‏الترتيب رقم:‎ ‏توفر التركيبة الدوائية‎ «HAT ‏في تجسيد‎ .٠ ‏رقم:‎ ill ‏من تعريف‎ amino acid ‏ترتيب‎ TO ‏ارتباط مولد مضاد أو جزءٍ منه مرتبط بصفة‎ protein «GDF ‏للاختراع مضاد جسم مضاد‎ ‏خاصة مع 6018 ولا يرتبط بالتحديد مع 1314011 ويشتمل على سلسلة خفيفة تشمل ترتيب‎ ‏علض‎

له ‎acid‏ 00 من تعريف الترتيب رقم: ‎VA‏ وحيث يشتمل مضاد الجسم» ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد أو جزء منه إضافيا على سلسلة ثقيلة تشمل ترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم ‎AY ‏في أحد التجسيدات تشتمل التركيبة الدوائية للاختراع على مضاد جسم مضاد 00178 أو‎

BMP11 ‏مضاد مرتبط بصفة خاصة مع 61178 ولا يرتبط بالتحديد مع‎ alge ‏ارتباط‎ protein © ‏واحدة‎ (CDR) (complementarity determining region) ‏ويشتمل على منطقة تحديد تكملة‎ amino acid ‏من المجموعة المتكونة من ترتيب‎ Hike amino acid ‏على الأقل تشمل ترتيب‎ amino ‏ترتيب‎ 7١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 0 acid ‏ترتيب‎ «V4 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ ‏ترتيب‎ YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ 7١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ 40 ‎(Yt ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ » YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ٠١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ¢ Yo ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 79 ترتيب‎ amino acid ‏1؟؛ ترتيب‎ ‏من تعريف‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 79 ترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ «YA ‏رقم:‎ ‎.٠١ ‏الترتيب رقم:‎ ‎٠‏ - في أحد التجسيدات تستخدم التركيبة الدوائية من الاختراع لمعالجة اضطراب مصاحب 8 منتقى من المجموعة المتكونة من اضطراب عضلي؛ اضطراب عصبي عضلي؛ اضطراب محلل للعظام؛ اضطراب عظمي مستحث أو أيضي؛ اضطراب غير دهني؛ اضطراب أيض ‎glucose‏ اضطراب متعلق ب ‎insulin‏ في مريض ثديي. في تجسيد آخرء تتوافر التركيبة الدوائية من الاختراع حيث ينتقى الاضطراب المصاحب ‎GDF‏ من المجموعة المتكونة من ‎ve‏ سوء تغذية عضلية؛ ‎(ALS‏ ضمور ‎(lame‏ ضمور عضو؛ عرض نفق رسغي؛ هشاشة مرض إعاقة رئوية احتقاني؛ فقدان قوة وكتلة العضلات» هزال» أعراض فقدان عضلي؛ سمنة؛ مرض السكر من النوع ‎oY‏ خلل تحمل ‎glucose‏ أعراض أيضية؛ مقاومة ‎cinsulin‏ اضطرابات ‎A (ald‏ فشل تناسلي قبل الولادة» كبح ‎candrogen‏ فرط ثانوي لنشاط الغدة الجاردرقية؛ هشاشة العظام» قلة العظم» التهاب مفصلي عظمي؛ انخفاض ‎ALS‏ العظم؛ نقص ‎vitamin D‏ ‎Yo‏ وفقدان شهية عصابي. إن جانب آخر من الاختراع هو توفير طريقة لمعالجة (التي تتضمن تخفيف و/أو منع) اضطراب مصاحب 60178 في مريض ‎(at‏ تشمل إعطاء المريض كمية مؤثرةٍ ‎Ladle‏ من تم

لاا مضاد خاص لأجل 8 به القليل من السمية أو ليس به سمية أساسيا. في تجسيد آخر توفر طريقة الاختراع أن ينتقى مضاد الاختراع من المجموعة المتكونة من مماثل 8601006 في مجال سيطرة ربط 8 ؛ ‎nucleic acid‏ معزول يشفر ‎amino acid‏ لأجل مماثل ‎peptide‏ في مجال سيطرة ربط ‎polynucleotide «GDF8‏ تثبيطي خاص ب 01018 ومضاد جسم مضاد ‎protein «GDF8 ©‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد أو جزء منه مرتبط بصفة خاصة مع 0078 ولا يرتبط بالتحديد مع ‎BMP11‏ ‏في أحد التجسيدات يوفر الاختراع مضاد خاص به عبارة عن مماثل ‎peptide‏ في مجال سيطرة ربط ‎GDF8‏ ومجال سيطرة ربط 01178 متكون أساسيا من ترتيب ‎amino acid‏ منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيب ‎acid‏ 00 من تعريف الترتيب رقم: 4 ؛ ‎amino if‏ ‎acid ٠‏ من تعريف ‎ill‏ رقم: 1 ترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎eA‏ ترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ ؛ وترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ ‏في أحد التجسيدات توفر طرق المعالجة من الاختراع طرق معالجة يكون فيها مضاد الاختراع عبارة عن ‎nucleic acid‏ معزول يشفر ‎amino acid‏ خاص ب 00178 متكون أساسيا من ترتيب ‎acid‏ 6 منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيب ‎nucleic acid‏ ‎Yo‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎oF‏ ترتيب ‎nucleic acid‏ من تعريف الترتيب رقم: 0« ترتيب ‎nucleic‏ ‎Ge acid‏ تعريف الترتيب رقم: 7؛ ترتيب ‎nucleic acid‏ من تعريف الترتيب رقم: 9؛ ترتيب ‎nucleic acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ وترتيبات ‎nucleic acid‏ لأجزاء من ذلك. في أحد تجسيدات الاختراع تتوافر طريقة معالجة حيث يكون فيها مضاد الاختراع عبارة عن مضاد جسم مضاد ‎protein (GDF8‏ ارتباط مولد مضاد أو جزءٍ منه مرتبط بصفة خاصة ‎٠٠‏ 0 مع 6018 ولا يرتبط بالتحديد مع 3141011 ويشمل سلسلة خفيفة تشمل ترتيب ‎acid‏ 0 من تعريف الترتيب رقم: ‎VT‏ ويشمل إضافيا سلسلة ‎Add‏ تشمل ترتيب ‎amino 40‏ من تعريف الترتيب ‎(AVE aS)‏ بعض التجسيدات توفر طريقة المعالجة الخاصة بالاختراع مضاد خاص به عبارة عن مضاد جسم مضاد ‎protein «GDF8‏ ارتباط مولد مضاد أو جزء منه يرتبط بصفة خاصة مع 01018 ولا يرتبط بصفة خاصة مع 811011 ‎YO‏ حيث يشمل سلسلة خفيفة تشمل ترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎VA‏ ويشتمل مضاد الجسم ‎protein‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد أو جزء منه إضافيا على سلسلة ثقيلة تشمل ترتيب ‎amino 40‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎.١١‏ في بعض التجسيدات توفر طريقة المعالجة

YA

‏ارتباط‎ protein «GDF8 ‏عن مضاد جسم مضاد‎ Hle ‏الخاصة بالاختراع مضاد خاص به‎ ‏مولد مضاد أو جزء منه يرتبط بصفة خاصة مع 00178 ولا يرتبط بالتحديد‎ ‏واحدة على الأقل تشمل ترتيب‎ (CDR) ‏مع 1314011 حيث يشمل منطقة تحديد تكملة‎ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏منتقى من المجموعة المتكونة من: ترتيب‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ Ve ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ 149 ‏ترتيب‎ YY ‏مدص من تعريف الترتيب رقم:‎ acid ‏ترتيب‎ (VY ‏رقم:‎ ‎7 4 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ «YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid tad) ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ YO ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‏من تعريف الترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ VV ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ 1 ‏من تعريف‎ amino acid ‏من تعريف الترتيب رقم: 79 ترتيب‎ amino acid ‏ترتيب‎ «YA ‏رقم:‎ ٠ .٠١ ‏الترتيب رقم:‎ في أحد تجسيدات الاختراع توفر طريقة المعالجة الخاصة بالاختراع انتقاء الاضطراب المصاحب 017178 من المجموعة المتكونة من اضطراب عضلي؛ اضطراب عصبي عضليء اضطراب محلل للعظام؛ اضطراب عظمي مستحث أو أيضي؛ اضطراب غير دهني؛ اضطراب ‎٠‏ أيض 06]؛ واضطراب متعلق ب 1080110 في كائن. في بعض تجسيدات الاختراع توفر طريقة المعالجة الخاصة بالاختراع انتقاء الاضطراب المصاحب 61178 من المجموعة المتكونة من سوء تغذية عضلية؛ ‎(ALS‏ ضمور عضلي؛ ضمور عضو؛ عرض نفق رسغي» هشاشة؛ مرض إعاقة رئوية احتقاني؛ فقدان قوة وكتلة العضلات» ‎(Jia‏ أعراض فقدان عضلي؛ سمنة؛ مرض السكر من النوع ‎oY‏ خلل تحمل ‎glucose‏ أعراض أيضية؛ مقاومة ‎dnsulin ٠‏ أمراض نقص التغذية؛ فشل تناسلي قبل ‎Vel‏ كبح ‎androgen‏ فرط ثانوي لنشاط الغدة الجاردرقية؛ هشاشة العظام؛ قلة العظم؛ التهاب مفصلي عظمي؛ انخفاض كتلة العظم؛ ‎vitamin D all‏ وفقدان شهية عصابي. يوفر جانب آخر للاختراع طريقة تشخيص؛ توقع حدوث أو الكشف عن إصابة كائن باضطراب مصاحب 00178 وتشتمل على خطوات: الحصول على عينة أولى من الكائن؛ ‎Yo‏ اتحاد عينة أولى مع مضاد الاختراع؛ الكشف عن وجود 0018 في العينة الأولى؛ تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الأولى؛ الحصول على عينة ثانية من كائن غير مصاب باضطراب مصاحب ‎¢GDF8‏ اتحاد العينة الثانية مع المضاد؛ الكشف عن مستوى ‎GDF8‏ في العينة ‎YAER

الثانية؛ تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الثانية ومقارنة مستويات ‎GDF8‏ في العينتين الأولى والثانية؛ حيث إن الزيادة؛ النقصانء أو التماثل في مستوى 6178 في العينة الثانية مقارنة بالعينة الأولى يشير إلى حدوث تغير في شدة الاضطراب المصاحب ‎.GDF8‏ ‏يوفر جانب آخر للاختراع طريقة لمراقبة شدة اضطراب مصاحب ‎GDF8‏ تشمل خطوات: ‎)١( ©‏ الحصول على عينة أولى من الكائن؛ (7) اتحاد عينة أولى مع المضاد كما تحدد في أي واحد من عناصر الحماية ١-96؛‏ (©) الكشف عن وجود ‎GDF8‏ في العينة الأولى؛ )£( تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الأولى؛ )0( الحصول على عينة ثانية من كائن غير مصاب باضطراب مصاحب ‎¢GDF8‏ (1) اتحاد العينة الثانية مع ‎alias‏ الاختراع؛ ‎(V)‏ الكشف عن مستوى 0018 في العينة الثانية؛ ‎(A)‏ تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الثانية و(4) ‎٠‏ مقارنة مستويات 0018 في العينتين الأولى والثانية؛ حيث إن الزيادة؛ النقصانء أو التماتل في مستوى 06078 في العينة الأولى مقارنة بالعينة الثانية يشير إلى حدوث تغير في شدة الاضطراب المصاحب ‎.GDF8‏ ‏يوفر جانب ‎AT‏ من الاختراع طريقة لتوقع احتمالية الإصابة باضطراب مصاحب ‎GDF8‏ ‏في كائن تشمل خطوات: ‎)١(‏ الحصول على عينة أولى من الكائن؛ (7) اتحاد عينة أولى مع ‎١٠‏ المضاد كما تحدد في أي واحد من عناصر الحماية ١-9176؛‏ (©) الكشف عن وجود ‎GDF8‏ ‏في العينة الأولى؛ )£( تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الأولى؛ )0( الحصول على ‎Le‏ ‎dl‏ من كائن غير مصاب باضطراب مصاحب 00178؛ (1) اتحاد العينة الثانية مع مضاد الاختراع؛ ‎(V)‏ الكشف عن مستوى 0018 في العينة الثانية؛ ‎(A)‏ تقدير كمية مستوى 0118 في العينة الثانية )4( مقارنة مستويات 0118 في العينتين الأولى والثانية» حيث إن الزيادة؛ ‎٠‏ النقصان؛ أو التماثل في مستوى 60178 في العينة الثانية مقارنة بالعينة الأولى يشير إلى احتمالية الإصابة باضطراب مصاحب 00178 في الكائن. يوفر جانب آخر من الاختراع طريقة لتوقع احتمالية الإصابة باضطراب ‎GDF8 alias‏ في كائن تشمل خطوات: ‎)١(‏ الحصول على عينة أولى من الكائن؛ (7) اتحاد عينة أولى مع مضاد الاختراع كما تحدد في أي واحد من عناصر الحماية )1 ‎(TF)‏ الكشف عن وجود ‎Yo‏ 0078 في العينة الأولى؛ )£( تقدير كمية مستوى 0018 في العينة الأولى؛ )0( الحصول على عينة ثانية من كائن غير مصاب باضطراب مصاحب 0078؛ (1) اتحاد العينة الثانية مع المضاد؛ (7) الكشف عن مستوى ‎GDF8‏ في العينة الثانية؛ ‎(A)‏ تقدير كمية مستوى م7

Ne ‏في العينتين الأولى والثانية؛ حيث إن‎ GDF8 ‏في العينة الثانية 5 )1( مقارنة مستويات‎ 8 ‏الزيادة؛ النقصانء أو التماثل في مستوى 6018 في العينة الأولى مقارنة بالعينة الثانية يشير‎ ‏إلى احتمالية الإصابة باضطراب مصاحب 0078 في الكائن.‎ ‏يوفر جانب آخر من الاختراع استخدام تركيبة دوائية في تحضير دواء لمعالجة (التي‎ ‏تتضمن تخفيف؛ و/أو منع) اضطراب مصاحب 00178 في مريض ثديي حيث تشتمل التركيبة‎ © ‏واحد على الأقل من المجموعة‎ GDF8 ‏الدوائية على مادة حاملة مقبولة دوائيا وينتقى مضاد‎ ‏معزول يشفر‎ nucleic acid ‏في مجال سيطرة ربط 6018؛‎ peptide ‏المتكونة من مماثل‎ ‏تثبيطي‎ polynucleotide ¢GDF8 ‏في مجال سيطرة ربط‎ peptide ‏لأجل مماثل‎ amino acid ‏مضاد أو جزءٍ منه يرتبط‎ alse ‏ارتباط‎ protein «GDF§ ‏ومضاد جسم مضاد‎ GDF ‏خاص ب‎

BMP11 ‏بصفة خاصة مع 0078 ولا يرتبط بالتحديد مع‎ ٠ (AS ‏جانب آخر من الاختراع مجموعة للكشف عن وجود 061778 في عينة من‎ Lis ‏تشمل المجموعة عامل كاشف إمساك يربط بصفة خاصة 0178 وعامل كاشف للتحديد‎ Cus ‏مع عامل‎ GDF8 ‏يربط بصفة خاصة 010178 حيث إن الكشف عن الارتباط النوعي لأجل‎ ‏كاشف إمساك وعامل كاشف للتحديد يشير إلى وجود 6118 في العينة. في بعض التجسيدات‎ ‏تشتمل مجموعة الاختراع إضافيا على مثبت أس هيدروجيني حامضي.‎ Vo ‏يوفر جانب آخر من الاختراع مجموعة لتقدير كمية 6118 في عينة من كائن؛ حيث‎ ‏تشمل المجموعة عامل كاشف إمساك يربط بصفة خاصة 0118 وعامل كاشف للتحديد يربط‎ ‏بصفة خاصة 0610178 حيث إن الكشف عن الارتباط النوعي لأجل 0118 مع عامل كاشف‎ ‏في العينة. في بعض التجسيدات تشتمل‎ GDF ‏إمساك وعامل كاشف للتحديد يتيح تقدير كمية‎ ‏مجموعة الاختراع إضافيا على مثبت أس هيدروجيني حامضي.‎ ٠ ‏وصف مختصر للترتيبات‎ .١ ‏في قائمة الترتيب التي تعد جدول‎ amino acid y DNA ‏تندرج ترتيبات‎ ١ ‏جدول‎ ‎i ‎ ‎ ‎| YALE

١

YAEL

YY

‏شرح مختصر. للرسومات‎ (y ‏شكلا ١(أ) و١(ب) يوضحان ارتباط (كثافة بصرية (0.0) £04 نانومتر؛ محور‎ ‏(مضاد جسم‎ RK35 9 RK22 ‏للمادة الطافية من‎ (x ‏لتركيزات عديدة (نانوجرام/ ملليلتر؛ محور‎ ‏أو‎ GDF8 ‏و81011) بإظهار الأورام الهجينة لأجل‎ GDF8 ‏مقارن يرتبط مع كل من‎ .BMP11 © ‏و6018 كما‎ RK22 ‏شكل ¥ يبين ثوابت معدل الحركية للتفاعل البيني بين مضاد جسم‎ .BIAcore 2000 system Sensor Chip SA ‏حددته‎ ‏كما تم‎ pGL3 (CAGA)12- TGF-f ‏شكل © يبين حث نشاط جين مخبر مادة محثة‎

A204 ‏في خلايا سرقوم عضلة مخططة‎ (y ‏محور‎ (LCPS) luciferase ‏القياس بواسطة نشاط‎ ‏ملليلتر) أو غياب تركيزات‎ fase ٠١( ibe ‏نانوجرام/ ملليلتر من 00178 في‎ ٠١ ‏معالجة مع‎ ٠ (00) ‏أخرى‎ RK ‏ومضادات أجسام‎ RK35 9 RK22 ‏محور *) من مضاد جسم‎ (IM Ig) ‏عديدة‎ ‎BMP11 ‏حتى (ه)) ترتبط سواء مع 60178 و/أو‎ ‏محور «) عضلات بطن الساق (©68800)» عضلة رباعية‎ faa) ‏شكل ؛ يبين وزن‎ 4 ‏بعد‎ SCID ‏المنزوعة من فئران‎ (Tibialis anterior) ‏والظنبوب الأمامي‎ (Quad) ‏الرؤوس‎ ‏أو 50 مجم/‎ ٠١ ١١ ‏أسابيع من المعالجة مع وسط ناقل في غياب (وسط ناقل)؛ أو وجود‎ ٠

My0-29 ‏أو‎ RK22 ‏كجم/ أسبوعيا من‎ ‏بواسطة 0118 بمفرده أو‎ (y ‏شكل 0 يبين الارتباط مع 8008113 (010450؛ محور‎ ‏مضاد‎ (RK22 ‏من‎ (x ‏محضن مسبقا مع تركيزات عديدة ([جزيئي جرامي]؛ محور‎ 8 ‏أخرى ((د) و(ه))؛ مضاد جسم مقارن يعوق ارتباط‎ RK ‏جسم غير نوعي؛ مضادات أجسام‎ ‏قابل للذوبان.‎ ACtRIIB ‏مقارن» أو‎ IgG ‏مضاد جسم‎ «(RK35) ACtRIIB ‏مع‎ 00378 ٠

YAER

YY

‏نانوجرام/ ملليلتر من مضاد جسم‎ ٠١ ‏ببقع منقطة من‎ epitope ‏يبين نتيجة تخطيط‎ ١ ‏شكل‎ ‏متخلف متراكب يمثلون‎ peptides ١١و ‏محضنين مع 4/8 فرد‎ RK22 ‏مقارن» مضاد جسم‎ ‏مع‎ GDF8 ‏ناضج كامل. يقع تحت كل بقعة منقطة ترتيب‎ 84 peptide ‏هو مشار إليه في البقع‎ LS) ‏لأجسام الموضوع تحتها خط‎ ١ ‏لأجل مضادات‎ 0107178 epitopes ‏المنقطة الخاصة).‎ ٠ ‏مع ترتيبات‎ (RK22_VH) RK22 ‏شكل 7 يبين اصطفاف مجال سيطرة سلسلة ثقيلة متغير‎ ‏وإن‎ ¢(DP-5_germl_VH) DP-5 5 (DP-7_germl_VH) DP-7 ‏إطار خط جرثومة آدمي‎ ‏فأري والذي تغير إلى مجال سيطرة‎ RK22 ‏من مجال سيطرة سلسلة ثقيلة متغير‎ amino acids

CDRs ‏مكتسب السمة الآدمية تتخذ شكل علامة نجمية كما توضع‎ RK22 ‏سلسلة ثقيلة متغير‎

Jad ‏من 181222 في صناديق ويوضع تحتها‎ ٠ ‏مع ترتيب إطار خط‎ RK22 ‏يبين اصطفاف مجال سيطرة سلسلة خفيفة متغير‎ A ‏شكل‎ ‏من مجال سيطرةٍ سلسلة خفيفة متغير‎ amino acids ‏وإن‎ ¢DPK 24 VL ‏جرثومة آدمي من‎ ‏مكتسب السمة الآدمية‎ RK22 ‏فأري والذي تغير إلى مجال سيطرة سلسلة خفيفة متغير‎ RK22 ‏في صناديق ويوضع تحتها خط.‎ RK22 ‏من‎ CDRs ‏تتخذ شكل علامة نجمية كما توضع‎ ‏عامل كاشف الإمساك‎ (RK35 ‏4ل) يبين مقارنة لهيئات الاختبار المناعي:‎ Ja ‏مع‎ JL SE RK22 ‏كعامل كاشف للتحديد. شكل 4(ب) يبين‎ biotinyloted ‏و1222‎ ‏كمضاد الجسم للكشف.‎ biotinylated RK35 ‏الموصوفة سابقا تظهر الخلفية؛ وأن هذه الخلفية‎ ELISA ‏يوضح أن اختبارات‎ ٠١ ‏شكل‎ ‏يرجع سبب وجود خلفية‎ (HAMA) ‏يحتمل أن يكون تأثير مضاد جسم مضاد فأري من آدمي‎ ‏مضاد جسم أحادي النسخ المستخدم كمضاد‎ RK22 ‏الاختبار إلى تفاعل متقاطع للمصل مع‎ ٠ ‏كمضاد جسم إمساك‎ RK35 ‏يلاحظ نفس التأثير عند استخدام‎ (ELISA ‏جسم إمساك في‎ ‏(بيانات غير مبينة).‎ ‏يغطي الطبق؛‎ RK35 ‏حيث إن مضاد الجسم‎ GDF-8 ELISA ‏يبين نتائج‎ ١١ ‏شكل‎ ‏بامستخدام العامل الكاشضف 114 المتقاح تجاريا‎ ELISA ‏وتقل خلفية‎ ‏يفضل مقارنة النتائج التي‎ (Immunoglobulin Inhibiting Reagent-Bioreclamation, NY) ٠ ‏تستخدم 118 مع الخلفية بواسطة مثبت أس هيدروجيني فقط.‎ ‏م7‎

شكل ‎VY‏ يبين عدم ارتباط مضاد الجسم ‎RK35‏ مع ‎GDF-8‏ في وجود 1470-029. إن مضاد الجسم 1470-029 يغطي أطباق اختبار ‎HBX‏ ويضاف ‎GDF-8‏ عند + + ‎VY‏ بيكوجرام/ ملليلتر مع تركيزات متزايدة من مضادات ‎١‏ لأجسام للكشف ‎.(RK35 0 RK22) biotinylated‏ لا تنتج إشارات مع ‎biotinylated RK35‏ تشير النتائج إلى التفاعل المتقاطع بين ‎RK35‏ ‏© و1/70-029 للارتباط مع ‎.GDF-8‏ ‏شكل ‎(N YF‏ و"١٠(ب)‏ يبينان إمكانية استخدام ‎MY0-029‏ كمثبط ‎GDF-8‏ في اختبار ه8115. إن التركيزات المتزايدة من ‎MYO-029‏ مع تركيز ثابت من ‎YO) GDF-8‏ بيكوجرام/ ملليلتر) خامد النشاط في مثبت أس هيدروجيني الاختبار أو في ‎7٠١‏ مصل آدمي يتم اختبارها لأجل ‎GDF-8‏ عن طريق ‎(ELISA‏ يبين شكل 7( أن هناك ‎77٠‏ تقريبا من تثبيط الإشارة ‎٠‏ عند استخدام ‎RK22‏ كمضاد جسم إمساك. يبين شكل ‎(QF‏ تقدير التثبيط بنسبة تقريبا ‎٠‏ (من # إلى ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر في ‎(MYO-029‏ عند استخدام ‎RK35‏ كمضاد جسم إمساك. يتضح أيضا انخفاض إشارة الخلفية (المصل) بواسطة استخدام 218 (المعروف أيضا بأنه ”118"). تظهر الإشارة الإجمالية في كلا الرسمين التخطيطيين لكن بدون تحويلها إلى نسبة مئوية للتثبيط. ‎Vo‏ الشكلان ؛١(أ)‏ و؛١(ب)‏ يبينان نتائج “تجربة استرجاع ثابت”؛ حيث يضاف ‎GDF-8‏ إلى مصل ‎7٠٠0‏ في ¥ عينات مصل منفصلة (الأمصال رقم )6 رقم ‎١‏ ورقم ؟). تحلل كل عينة ‎١-/+‏ ؟ ميكروجرام/ ملليلتر من 1470-029. إن إضافة ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر من ‎MYO-‏ ‏9 تعوق إشارة الاختبار عند كل تركيزات 0017-8 المختبر (شكل ؟١لأ)).‏ شكل ‎(VY‏ ‏يبين نتائج اختبار استرجاع مثبت تضاف فيه الأمصال؛ وليس 1470-029. تظهر النتائج ‎٠‏ زيادة خطية في الإشارة مع إضافة ‎-GDF-8‏ ‏شكل ‎Vo‏ يبين مقارنة منحنيات قياسية ناتجة في مصل آدمي وفأري ناقص مناعيا ‎(KO)‏ ‏فأري طبيعي. إن انحدار المنحنى مع مثبت أس هيدروجيني ‎THST‏ بمفرده ‎HASH‏ شدة من المنحنيات الناتجة في المصل ولا يمكن استخدامه لتقدير القيم في المصل. شكل ‎١6‏ يظهر قيم 60178 الملحوظة مقابل المتوقعة الناتجة في مثبت أس هيدروجيني ‎Yo‏ 11181. شكل ‎١7‏ يقدم نتائج التجربة التي تبين إمكانية إخماد/ تفكك ‎MYO0-029‏ عند تسخينه إلى ‎٠‏ تقريبا. تكون عينات المصل خامدة التشاط مع ‎GDF-8‏ أو ‎GDF-8‏ متأخر +/-ه

Yo ‏وتسخن إلى 80"مئوية. تبين النتائج أن تسخين عينات‎ MYO0-029 ‏ميكروجرام/ ملليلتر من‎ ‏مشيرا إلى أن 170-029 يتفكك عن‎ «GDF-8 ‏يعيد القدرة على الكشف عن‎ MYO-029 170-029 ‏وينشط عند التسخين إلى 0٠8"مئوية. تبين أيضا النتائج أنه عند إضافة‎ «GDF-8

GDF-8 ‏مرة أخرى إلى العينة المسخنة؛ تقل ثانية إشارة 017-8. تتضح أيضا زيادة في إشارة‎

GDF-8 ‏الداخلي عند التسخين والذي يعد ملحوظا بدرجة أكبر في العينات خامدة النشاط مع‎ © ‏ناضج.‎ GDF-8 ‏متأخرة مقارنة بعينات‎ ‏من‎ GDF-8 ‏قبل وبعد استنزاف‎ GDF-8 ‏لأجل‎ ELISA ‏يبين نتائج اختبار‎ VA ‏شكل‎ ‏لأجل‎ MYO0-029 ‏المصل الآدمي. يحلل مصل آدمي طبيعي +/-» 7 ميكروجرام/ ملليلتر من‎ ‏عند درجة حرارة الغرفة (1877)؛ وبعد التسخين إلى ٠8”مئوية. تقارن هذه القيم بنفس‎ GDF-8 ‏دقائق؛ وإمرارها‎ ٠١ ‏العينات المستنزفة أولا من 0017-8 بالتسخين المسبق إلى 16"مئوية لمدة‎ ٠

GDF-8 ‏مجم من عمود انجذاب 2470-029. تشير النتائج إلى أن استنزاف‎ ١ ‏مرات فوق‎ © ‏هذا. توضح النتائج‎ ELISA ‏في‎ GDF-8 ‏من المصل الآدمي مؤثرا عند انخفاض مستوى خلفية‎ ‏أيضا أن تسخين المصل المستنزف لا يظهر زيادة أصلية في الإشارة الملحوظة مع المصل‎ ‏لإتتاج‎ (HD) ‏المسخن‎ [GDF-8 ‏الطبيعي عند تسخينه. يمكن استخدام هذا المص المستنزف‎ ‏قياسية.‎ GDF-8 ‏منحنيات‎ Vo (GDF-8 ‏يبين رسما تخطيطيا لمنحنيات قياسية ناتجة في المصل المستنزف‎ ١9 ‏شكل‎ ‏المسخن؛ ثم يبرز مع تركيزات متزايدة من 0017-8 ناضج أو 0017-8 متأخر. تختبر‎ ‏أو مع التسخين إلى 0٠8”مئوية. إن عينات‎ (RT) ‏المنحنيات القياسية عند درجة حرارة الغرفة‎ ‏متأخر توضح زيادة كبيرة في الإشارة بعد التسخين وهذا لم‎ GDF-8 ‏المصل خامدة النشاط مع‎ ‏ناضج.‎ GDF-8 ‏يلاحظ في العينات خامدة النشاط مع‎ ٠ ‏يبين تحليل منحنيين قياسيين يطبقان على أطباق مختلفة لمدة يومين متعاقبين.‎ ٠١ ‏شكل‎ ‏ناضج لإنتاج‎ GDF-8 ‏المسخن مع تركيزات معروفة من‎ [GDF-8 ‏يستخدم المصل المستنزف‎ ‏ناضج. إن تطابق‎ GDF-8 ‏لكل منحنى مقابل تركيز‎ OD ‏منحنيات قياسية. ترسم بيانيا قيم‎ ‏منحنى الانحسار غير الخطي هو علاقة تبادلية أكثر دقة لقيم 0017-8 الناتجة في المصل‎ ‏المسخن. لدى تطابق المنحنى علاقة تبادلية أفضل فعالة بصورة تعاونية‎ /GDF-8 ‏المستنزف‎ Yo

Prism Graph ‏كما له نطاق دقة أكبر من منحنيات الانحسار الخطي. يستخدم برنامج من‎ .GDF-8 ELISA ‏الناتجة في اختبار‎ OD ‏من قيم‎ GDF-8 ‏لحساب تركيز‎

YALE

Yi ‏يبين نتائج اختبار يقيس 0017-8 الحر والإجمالي في 4 عينات للمصل‎ YY ‏شكل‎ ‏الطبيعي. تعرض النتائج على أنها +/- 2470-029. تقاس القيم بالبيكوجرام/ ملليلتر من‎ .7٠٠0 ‏في مصل‎ GDF-8 ‏وتقابل المستوى الداخلي من‎ GDF-8 ‏عينات للمصل‎ A ‏يبين نتائج اختبار يقيس 0017-8 الحر والإجمالي في‎ YY ‏شكل‎ ‏الرسم التخطيطي تجربتين منفصلتين منفذتين لمدة يومين منفصلين. في اليوم‎ Jig ‏الطبيعي.‎ © ‏دقائق (بالمقارنة مع‎ ٠١ ‏بتسخين العينات لمدة‎ GDF-8 ‏الثاني من التجربة؛ يحلل إجمالي‎ ١74١ ‏إلى‎ 77١ ‏التسخين لمدة © دقائق المجرى في اليوم الأول من التجربة). تتراوح القيم من‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر لأجل 6017-8 الحر ومن )0 إلى 749؛ لأجل 0017-8 الإجمالي.‎ ‏بعد تغير صفاته الطبيعية‎ ELISA ‏عن طريق‎ GDF-8 ‏يبين نتائج اختبار يقيس‎ YY ‏شكل‎ ‏بالتسخين. تحضن قواسم تامة من المصل الآدمي عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر من 14770-029. تزول بعدئذ الصفات الطبيعية للعينة بالتسخين‎ ٠١-/+ ‏يجرى التقدير لمستويات‎ ELISA ‏في دوارة حرارية مدرجة عند درجات حرارة متعددة قبل تحليل‎ ‏في عينات الاختبار عن طريق الاستيفاء من نتائج لمنحنى قياسي مكون من سلسلة‎ GDF-8 ‏مخلق منقى له تركيز معروف خامد النشاط في مصل آدمي‎ 0017-8 dimer ‏تخفيفات من‎ ‏مجمع مستنزف من 6017-8 بواسطة تحليل كروماتوجرافي للانجذاب. يحدث أقصى كشف عن‎ 0 ‏"مئوية. إن وجبود‎ ٠١ ‏عند تقريبا‎ MYO-029 ‏في غياب‎ 48 ‏يخفي الكشف عن 6017-8 في المصل عند درجة حرارة منخفضة؛ لكن عند‎ MYO-029 ja GDF-8 ‏من *>"مئوية؛ يعود الكشف عن‎ lef ‏درجات حرارة‎ ‏في وجود 170-029 عند أس‎ GDF-8 ‏شكلا 4 ؟(أ) و؛ (ب) يبينان إمكانية الكشف عن‎ ‏المخفف في أس هيدروجيني‎ GDF-8 dimer ‏هيدروجيني منخفض. في شكل ؛ ؟لأ)؛ إن‎ ٠ ‏يخفف © أضعاف سواء في مثبت أس‎ MY0-029 ‏ميكروجرام/ ملليلتر من‎ ٠١-/+ 7 le ٠٠١ sodium acetate «(THST) ‏هيدروجيني الاختبار عند أس هيدروجيني متعادل‎ ٠٠١ phosphate-citrate ‏مثبت أس هيدروجيني‎ «(NaOAc) © ‏جزيئي جرامي أس هيدروجيني‎ ‏مللي جزيئي‎ ٠٠١ glycine-HCI ‏أو‎ «(PO4CH) ١ ‏مللي جزيئي جرامي أس هيدروجيني © إلى‎

ELISA ‏في عيون‎ 1:١ ‏تخفف بعدئذ العينات بنسبة‎ .)01(( Y.0 ‏جرامي أس هيدروجيني‎ YO ‏غير‎ Tris ‏أو‎ THST ‏هيدروجيني‎ oof ‏(مغطاة بمضاد جسم 81635) محتوية إما على مثبت‎ ‏مع محاليل أس هيدروجيني مختلفة وقدرات‎ GDF-8 ‏ثابت الأس الهيدروجيني. إن تخفيف‎ ‏ادن‎

فل

تثبيت أس هيدروجيني وتخفيف لاحق في ‎THST‏ أو ‎Tris‏ غير ثابت الأس الهيدروجيني يسمحون بقياس فعالية خطوة إمساك مادة التحليل عند نطاق أس هيدروجيني من حوالي © إلى ‎LA‏ تحت شروط الاختبار التي تقترب من الأس الهيدروجيني المتعادل» إن 170-029 يقلل ‎ii‏ عن ‎.(THST/THST) GDF-8‏ إن ‎GDF-8‏ الحامفضسي مع © !©06-11ن»واع والمخفف لاحقا في مثبت أس هيدروجيني 11157 يظل ‎Wl‏ هيدروجينيا منخفضا لدرجة تكفي لمنع ربط 14770-029 وتسمح بالكشف الكامل عن ‎GDF-8‏ في وجود أو غياب ‎(Gly / THST) MYO-029‏ على أيه حال» إن تخفيف ‎GDF-8‏ الحامضي مع ‎glycine‏ ‎Tris‏ غير ثابت الأس الهيدروجيني ينتج شروط إمساك مادة التحليل عند أس هيدروجيني أكبر من 7 ويقلل من الكشف عن ‎GDF-8‏ في وجود ‎Tris [Gly) MYO-029‏ غير ثابت الأس ‎٠‏ الهيدروجيني). شكل ‎(OYE‏ يبين رسما تخطيطيا لاختبار ‎ELISA‏ عند أس هيدروجيني ؟

(القطاع الأيسر) وأس هيدروجيني 7 (القطاع الأيمن). شكل ‎Yo‏ يوفر نتائج تجربة تظهر أن مضاد الجسم الفأري ‎RK35‏ يرتبط مع ‎GDF-8‏ تحت ‎Jag pi‏ حامضية؛ بينما 170-029 لا يفعل ذلك. يحضن مسبقا المصل الأدمي +/- تركيزات متعددة من ‎RK35‏ أو ‎(MY0-029‏ ويخفف 0 أضعاف مع مثبت أس هيدروجيني ‎THST‏ (أس ‎١‏ هيدروجيني متعادل) أو 817006-11©1 لأس هيدروجيني حامضي). يضاف المصل إلى عيون ‎ELISA‏ المحتوية على 81635 المرتبط بالطبق ‎Cutie Ly‏ أس هيدروجيني ‎glycine- sl THST‏ ‎HCI‏ في غياب ‎RK35‏ أو ‎(MYO0-029‏ يتم الكششسف عن ‎GDF-8‏ ‏الداخلي في شروط حامضية بدرجة أكبر من الشروط المتعادلة بسبب تفكك المعقد وإطلاق ‎GDF-8 proteins‏ الحر (انظر أول عمودين). ‎Juss‏ الأعمدة الستة الأخيرة البيانات الناتجة عند ‎٠‏ أس هيدروجيني حامضي. إن الكميات المتزايدة من ‎RK35‏ في المحلول قادرة على الارتباط والتنافس لارتباط ‎GDF-8‏ مع ‎RK35‏ المرتبط مع الطبق؛ مما يؤدي إلى كشف قليل لأجل 74 تحت شروط حامضية. إن ‎MYO0-029‏ غير قادر على ربط ‎GDF-8‏ في المحلول الذي يقترب أسه الهيدروجيني إلى 9 تاركا 6017-8 في المحلول حرا في الارتباط مع مضاد

الجسم ‎RK35‏ الذي يغطي ‎ELISA Gib‏ ‎Yo‏ شكل ‎7١‏ يبين أن زيادة تركيز ‎MYO0-029‏ إلى ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر لا يقلل الكشف عن ‎GDF-8‏ المستخدم لبروتوكول ‎ELISA‏ لتفكك الحمض. يختبر المصل الآدمي +/-0٠؛‏ ‎٠‏ أو ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر من 1470-029 ثم يجرى التسخين أو تفكك الحمض. يقدر ‎YAS‏

YA

تركيز ‎GDF-8‏ بالاستيفاء من منحنى قياسي ‎GDF-8 dimer Ja¥‏ ناضج مخلق خامد النشاط في مصل آدمي مجمع مستنزف من ‎.GDF-8‏ في غياب 2/70-029؛ يتحدد تركيز ‎GDF-8‏ ‏في المصل بأن يكون حوالي ‎١‏ نانوجرام/ ملليلتر عند إتمام إمساك مادة التحليل بالقرب من الأس الهيدروجيني المتعادل (015. إن الكشف عن ‎GDF-8‏ بإتباع إطلاق ‎proteins‏ ربط © مصل عبر التفكك بالتسخين يكون حوالي ¥ نانوجرام/ ملليلتر في غياب ‎+HS) MYO-029‏ ‎Myo‏ 717"مثوية؛ بدون ‎(Ab‏ في غياب 470-029 حتى عند أدنى تركيز مختبرء يفشل التفكك بالتسخين في أن يسمح بإجراء نفس مستوى الكشف كما في غياب ‎+HS) MY0-029‏ ‎(MYO‏ “لا"مئوية). إن المعالجة الحمضية لعينات المصل تكشف عن كميات مماثلة من ‎GDF-8‏ دون الاعتماد على كمية ‎MYO-029‏ الموجودة ‎MYO (HS)‏ حمضي). ‎٠١‏ شكل ‎YY‏ يظهر أن الشروط الحامضية أثناء إمساك مادة التحليل لا تقلل خصوصية الاختبار. تؤدي المعالجة الحمضية للمصل إلى كشف أكبر عن الإشارة (الأعمدة البيضاء مقابل الأعمدة السوداء) في كل الحيوانات من النوع البري ‎(WT)‏ المختبرة» قرد سينومولجس ‎«(NHP-31)‏ فأر ‎WT Mm)‏ وبقرةٍ حلوب (بقرة ‎(WT‏ إن المصل المقاس عند أس هيدروجيني متعادل أو حامضي سواء من فأر ناقص ‎(KO Mm) GDF-8‏ معدلة وراثيا أو بقرة ‎GDF-8 KO Belgian Blue ٠‏ (بقرة ‎(KO‏ يفشل في إنتاج إشارة خلال خلفية الطبق. ‏أشكال 8؟(ا)-(ج) تقارن بين ؟ طرق مختلفة لمطابقة منحنى معايرة لأجل 0 أطباق ‎GDF-8 ELISA‏ بالنسبة إلى أخطائها النسبية من التركيزات المحسوبة عكسيا للمقاييس المعايرة. ترسم بيانيا النتائج من © أطباق ‎.GDF-8 ELISA‏ يعرف الخطأ النسبي على أنه ‎Gua Vo XN /)8 —N)‏ 3 هو التركيز المحسوب عكسيا للمقياس باستخدام منحنى المعايرة؛ ‎٠‏ وا هو التركيز التقريبي للمقياس. إن ؟ طرق لمطابقة منحنى هي: ‎)١‏ شكل 6؟(ا): نموذج منطقي رباعي الحدود على كثافة بصرية بأقل المربعات (1.8)؛ ‎(Y‏ شكل ‎(TT‏ نموذج منطقي رباعي الحدود على جذر التربيعي للكثافة البصرية بواسطة 18؛ و ؟) شكل 76؟(ج): نموذج منطقي خماسي الحدود على الجذر التربيعي للكثافة البصرية بواسطة 1.8. الخطوط المرجعية عند ‎Yom‏ و١٠.‏ ‎Yo‏ شكل 4؟(أ) هو مستويات ‎statin‏ عضلي للمصل في حيوانات منزوعة ‎statin‏ عضلي أو طبيعية. إن المصل من ماشية ‎Belgian Blue‏ ماشية عادية (بقرةٍ ‎(wt‏ فئران منزوعة ‎statin‏ ‏عضلي ‎(mstn KO Bit)‏ والحيوانات متعددة الصغار في الولادة الواحدة من النوع البري (فأر ‎YALE

‎(wt‏ يقاس تحت شروط تفككية حامضية (أس هيدروجيني ©١7)؛‏ وتستنتج القيم من منحنى قياسي لأجل ‎statin‏ عضلي آدمي مخلق في نسيج بيني لمصل ناقص ‎statin‏ عضلي. تمثل الأعمدة متوسط +/- ‎SD‏ للعينات المستنسخة ‎=n)‏ ؟). إن تركيزات ‎statin‏ عضلي في حيوانات منزوعة ‎statin‏ عضلي تقع أدنى تركيز أقل عينة لأداة المعايرة ‎£V)‏ 1 بيكوجرام/ (Ae ٠ ‏عضلي في مصل قرد سينومولجس مقاس‎ statin ‏شكلا 9؟(ب) و ؟(ج) هي مستويات‎ ‏القطاع (ب)) أو‎ A ‏عضلي تحت شروط غير تفككية لأس هيدروجيني‎ statin EIISA ‏في‎ ‏تفككية (أس هيدروجيني ©١9؛ القطاع (ج)) بإتباع إضافة تركيزات متزايدة من مضاد جسم‎ ‏تمثل‎ . ACtRIIB-Fe ‏عضلي قابل للذوبان‎ statin ‏أو مستقبل‎ 170-029 Lac statin alias

LLQ ‏يشير الخط المتقطع إلى‎ .)7 =n) ‏للعينات المستنسخة‎ SD -/+ ‏الأعمدة متوسط‎ ٠ ‏عضلي للمصل‎ statin ‏عبارة عن رسوم بيانية من صندوق وعلامة لمستويات‎ (yr ٠ ‏شكل‎ ‏قيم متوسطة وأولى وثالثة رباعية) في رجال صغار السن ورجال كبار السن.‎ (SD ‏(متوسط؛‎ ‏يمثل الخط الأفقي في الخانة متوسط؛ الحدود الأدنى والأعلى من ذلك في الصندوق تمثل‎ ‏(ب) هو رسم‎ To ‏شكل‎ ....3 =P SDs ‏الأرباع الأولى والثالثة؛ والأعمدة الرأسية تمثل‎ ‏عضلي لخط القاعدة مع كتلة الجسم‎ statin ‏بياني للانحسار يوضح العلاقة التبادلية لمستويات‎ Ve

ABD ‏بدون دهن في رجال صغار السن. شكل ١٠(ج) هو رسم بياني للانحسار يوضح‎

OLS ‏عضلي لخط القاعدة مع كتلة الجسم بدون دهن في رجال‎ statin ‏التبادلية لمستويات‎ ‏السن.‎ ‏عضلي في رجال صغار السن كاستجابة‎ statin ‏هو التغيرات في مستويات‎ TY ‏شكل‎ ‏(مخطط أعمدة يوضح متوسط +/- مستويات‎ testosterone ‏ا لإعطاء جرعات متدرجة من‎ ٠ ‏عضلي عند‎ statin ‏شكل ١؟ل() يبين مستويات‎ (V0 501 ‏عند خط القاعدة؛ والأيام‎ 4 ‏خط القاعدة؛ يوم المعالجة 007 و460١ في رجال صغار السن (القطاع الأيسر) ورجال كبار‎ ‏بالمقارنة مع مستويات‎ P ‏قيمة‎ "SEM -/+ ‏السن (القطاع الأيمن). تعد البيانات هي متوسط‎ ‏عن مستويات خط‎ ٠4٠0 ‏عضلي في اليوم‎ statin ‏خط القاعدة. لا تختلف بدرجة كبيرة مستويات‎ statin ‏يبين التغير بالنسبة المئوية من خط القاعدة من مستويات‎ (VY ‏القاعدة. شكل‎ Yo ce =P ‏في رجال صغار وكبار السن.‎ 0T ‏عضلي للمصل من خط القاعدة إلى اليوم‎ ‏عم‎

Ye statin ‏هو رسوم بيانية للانحسار توضح العلاقة التبادلية للتغير في مستويات‎ TY ‏شكل‎ ‏الإجمالية والحرة‎ testosterone ‏عضلي من خط القاعدة إلى اليوم 07 والتغيرات في تركيزات‎ ‏يبين رسما تخطيطيا‎ (NYY ‏الجسم بدون دهن في رجال صغار وكبار السن. شكل‎ AS, ‏عضلي من خط القاعدة إلى‎ statin ‏في مستويات‎ Agia) ‏للانحسار الخطي للتغيير بالنسبة‎ ‏في المصل في الرجال‎ testosterone ‏اليوم 07 والتغير بالنسبة المئوية في إجمالي تركيزات‎ © myostatin ‏صغار السن. يبين شكل 77(ب) رسم بياني تراجع خطي للتغير7 في مستويات‎ ‏الكلية في المصل في‎ testosterone ‏من خط القاعدة حتى اليوم 071 والتغير7 في تركيزات‎ ‏من خط‎ myostatin ‏رجال أكبر سنا. يبين شكل 7”(ج) التراجع الخطي للتغير7 في مستويات‎ ‏في الرجال صغار‎ plasma ‏الحر في‎ testosterone ‏إلى اليوم 0 والتغير7 في تركيزات‎ sac al) ‏من خط القاعدة‎ myostatin ‏التراجع الخطي للتغير7 في مستويات‎ (PTY ‏السن. يبين شكل‎ ٠ ‏في الرجال الأكبر سنا.‎ plasma ‏الحر في‎ testosterone ‏إلى اليوم 071 والتغير7 في تركيزات‎ ‏من خط القاعدة حتى‎ myostatin ‏يبين شكل 77(ه) التراجع الخطي للتغير7 في مستويات‎ ‏في‎ ٠6٠8 ‏اليوم 07 والتغير” في كتلة الجسم الخالية من الدهن من خط القاعدة إلى اليوم‎ ‏من‎ myostatin ‏التراجع الخطي للتغير7 في مستويات‎ (YY ‏شكل‎ Gay ‏الرجال صغار السن.‎ ‏خط القاعدة حتى اليوم 07 والتغير” في كتلة الجسم الخالية من الدهن في المصل من خط‎ Vo ‏في الرجال الأكبر سنا.‎ ١6٠8 ‏القاعدة إلى اليوم‎ ‏(قيم المتوسط‎ myostatin ‏لمستويات‎ whisker 5 Box ‏رسومات بيانية‎ YY ‏الشكل‎ ‏الحسابي؛ 580؛ الوسطية والربع الأول والثالث) في سيدة حائضة صغيرة السن؛ في سن اليأس‎ ‏المتوسط الحسابي ويمثل الحد السفلي‎ Box ‏جراحيا؛ والأكبر سنا. يمثل الخط الأفققي في‎ ‏إن مستويات‎ SDs ‏أول وثالث ربع؛ وتمثل القطع المستطيلة الرأسية‎ Box ‏والعمودي في‎ ٠ ‏في المجموعات الثلاثة غير هامة إحصائيا.‎ myostatin ‏لتعريفات‎ ‎"an" "a" ‏حسب الاستخدام في المواصفة وعناصر الحماية الملحقة؛ فإن أشكال المفرد‎ ‏تتضمن إشارة إلى الجمع إذا لم يفرض السياق خلاف ذلك بوضوح.‎ thes »* ‏مناعي‎ globulin ‏إلى‎ «Lia ‏حسب الاستخدام‎ (antibody) ‏يشير المصطلح "مضاد جسم‎

Ab ‏عديد النسخ؛‎ Ab ‏أو جزء منه؛ ويتضمن؛ لكن بدون تحديد:‎ (Ig) (immunoglobulin)

أنه أحادي النسخ ‎Ab (mAb)‏ أحادي الخصوصية؛ ‎Ab‏ عديد الخصوصية؛ ‎Ab‏ مكتسب السمة الآدمية؛ ‎Ab tetrameric Ab‏ ثلاثي التكافوق؛ ‎Ab‏ متعدد الخصوصية؛ ‎Ab‏ سلسلة وحيدة ‎Ab‏ ‏خاص بمجال سيطرة؛ ‎Ab‏ وحيد مجال السيطرة؛ ‎Ab‏ محذوف مجال السيطرة» ‎protein‏ اندماج؛ ‎protein‏ اندماج ع801؛ ‎Ab‏ وحيد السلسلة؛ ‎Ab‏ هجين؛ ‎Ab‏ مصنع؛ ‎Ab‏ مخلق؛ ‎Ab‏ مهجن؛ © طم طفري»؛ ‎Abs‏ مطعمة-001؛ وأجزاء مضاد جسم تتضمن: ‎(Fab‏ 1)8072 جزء ‎Fab'‏ جزء ‎Py‏ جزء ‎Fv‏ وحيد السلسلة ‎«(ScFv)‏ جزء ‎(Fd‏ وجزء ‎dAD‏ أو أي من أجزائها ‎ALE‏ المعالجة كيميائيا أو جينياء مما سبق التي تحتفظ بوظيفة ارتباط مولد مضاد. يوفر الاختراع أيضا ‎protein‏ ارتباط مولد ‎(alias‏ الذي يختلف عن مضادات الأجسام حسب الوصف هناء ويتضمن أجسام قنائية ‎FR3-CDR3-FR4 peptide 00173 peptide‏ ‎٠‏ مقيدء جسم مقاس بالنانو (طلب براءة الاختراع الأمريكية 2008/0107601)؛ جسم مقاس بالنانو ثنائي التكافؤء أدوية مناعية نسقية صغيرة ‎«(SMIPS)‏ مجال سيطرة ‎IgNAR‏ متغير فائق ‎(WO‏ ‏)03/014161< جسم صغير وأي جزء أو أجزائها المقابلة المعالجة كيميائيا أو جينيا التي تحتفظ بوظيفة ارتباط مولد مضاد. نموذجياء سوف تشمل تلك الأجزاء مجال سيطرة ربط مولد مضاد. كما سيدرك المهرة في الفن؛ فإن أيا من تلك الجزيئات؛ ‎Ab lie‏ "مكتسب السمة الآدمية" أو ‎protein ٠‏ ارتباط مولد مضاد؛ ‎Say‏ تصميمه هندسيا (على سبيل المثال؛ 'تكوين خط جرثومة') لتقليل توليده للمناعة؛ زيادة انجذابه؛ تغيير خصوصيته؛ أو لأغراض أخرى. يمكن تحضير ‎Abs‏ الاختراع» مثلاء بتقنيات ورم هجين تقليدية ‎«(Kohler etal, Nature 256:495-499 | )1975(‏ طرق ‎DNA‏ مخلق (براءة الاختراع الأمريكية رقم 48178591)؛ أو تقنيات إظهار بلعم باستخدام مكتبات ‎Ab‏ ‎(Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Marks et al., J.

Mol.

Biol. 222:581-597 ٠‏ .)1991( بالنسبة لتقنيات إنتاج ‎Ab‏ عديدة أخرى؛ انظر ‎Antibodies: A Laboratory Manual, eds.

Harlow et al., Cold Spring Harbor‏ ‎Laboratory, 1988.‏ ‎Yo‏ يشير المصطلح "مولد مضاد ‎"(antigen)‏ إلى مركب؛ تركيبة؛ أو مادة مولدة للمناعة يمكن أن يثير إنتاج ‎Abs‏ أو استجابة خلية-7؛ أو كل منهماء في حيوان؛ يتضمن تركيبات يتم حقنها في أو امتصاصها في حيوان. يمكن أن تتولد استجابة مناعية للجزء الكامل؛ أو لقسم من ك7

YY

‏استخدام المصطلح للإشارة إلى جزيء كبير منفرد‎ (Say (hapten ‏أو‎ epitope ‏الجزيء (مثلاء‎ ‏أو إلى مجموعة متماثلة أو مغايرة من جزيئات كبيرة مولدة لمضاد. يتفاعل مولد المضاد مع‎ ‏مضاد (0©عن01ة)" على‎ alse’ ‏منتجات مناعية تكييفية و/أو خلوية خاصة. يشمل المصطلح‎ nucleic ‏مولدة لمضادء‎ protein ‏أجزاء‎ «polypeptides ‏نطاق كبير أجزاء تتضمن وصنعام«م‎ ‏مواد كيميائية أو تركيبات عضوية أو غير‎ cpolysaccharides «oligosaccharides cacids ٠ ‏المولدة لمضاد‎ epitopes ‏كل‎ (antigen) ‏مضاد‎ sa’ ‏عضوية؛ وإلخ. يتضمن المصطلح‎ ‏مضاد محدد باستخدام أي عدد من تقنيات تخطيط‎ alge epitopes ‏الخاصة بذلك. يمكن تحديد‎

Sia ‏المعروفة جيدا في الفن. انظر؛‎ cepitope

Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.

Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, N. J. Ye ‏تصنيع متلازم لأعداد كبيرة‎ Nie ‏خطية بواسطة؛‎ epitopes ‏على سبيل المثال؛ يمكن تحديد‎ ‏وتفاعل‎ protein ‏المقابلة لأقسام من جزيء‎ peptides ‏على دعامات صلبة؛‎ peptides ‏من‎ ‏مرتبطة مع الدعامات. إن تلك التقنيات معروفة في‎ peptides ‏بينما لا تزال‎ Abs aw peptides الفن وموصوفة في» ‎lia‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎4976/1١‏ ؛ ‎Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998-4002; Geysen et al. (1986) Vo‏ ‎Molec. Immunol. 23:709-715,‏ كل المندمج هنا كمرجع بالكامل. بصورة مشابهة؛ تتحدد تماما ‎epitopes‏ بنائية بتحديد البناء المكاني من ‎amino acids‏ مثلا بواسطة؛ تصوير بلوري بأشعة ‎X‏ ورنين مغناطيسي نووي ثنائي الأبعاد. انظرء ‎Epitope Mapping Protocols, supra «Nia‏ إضافة لذلك» لأغراض الاختراع ‎vs‏ الحالي؛ يمكن أيضا أن يتضمن ‎alge’‏ مضاد ‎(antigen)‏ تعديلات؛ مثل إزالات؛ إضافات واستبدالات (حامية عامة في طبيعتها؛ لكنها قد تكون غير حامية)؛ للترتيب ‎La)‏ طالما أن ‎protein‏ يستبقي القدرة على إحداث استجابة مناعية. قد تكون تلك التعديلات متعمدة؛ ‎Nie‏ من خلال تكوين طفري موجه لمكان؛ أو من خلال إجراءات تصنيع خاصة؛ أو من خلال طريقة الهندسة الوراثية؛ أو قد تتم بالمصادفة؛ ‎Wie‏ من خلال طفرات لعوائل؛ تنتج مولدات المضاد. ‎Yo‏ إضافة لذلك؛ يمكن أن يشتق مولد المضاد أو نحصل عليه من أي فيروس» ‎(Lis‏ طفيل؛ برزوي؛ أو فطر؛ ويمكن أن يكون عبارة عن كائن حي كامل. بصورة مشابهة؛ يتضمن التعريف أيضا ‎oligonucleotide‏ أو 0017000160008 يظهر مولد مضاد؛ مثل استخدامات

YAER

YY

«polypeptides «Nia ‏إن مولدات المضاد المصنعة متضمنة أيضا‎ -nucleic acid ‏تحصين‎ ‏تفرع جانبي؛ ومولدات مضاد أخرى مشتقة تخليقيا أو تصنيعيا‎ 05 (Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:2777 2781; Bergmann et al. (1996) J.

Immunol. 157:3242 3249; Suhrbier, A. (1997) Immunol. and Cell Biol. 75:402 408;

Gardner et al. (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, Jun. 28 °

Jul. 3, 1998). ‏'أجزاء‎ ‘(antigen-binding domain) ‏يشير المصطلح "مجال سيطرة يربط مولد مضاد‎ ‏مضاد‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏أو‎ ¢'(active fragments of an antibody) Ab ‏نشطة من‎ ‏ارتباط مولد مضاد يشمل المنطقة التي‎ protein ‏أو‎ Ab ‏أو ما شابه إلى جزء من جزيء‎ ha ‏ترتبط بصفة خاصة مع أو تكمل جزء من أو كل مولد مضاد. عندما يكون مولد المضاد‎ ٠ aan ofp a1 epitope” ‏فقط مع جزءٍ من مولد المضاد. إن‎ Ab ‏فقد يرتبط‎ : ‏أو 'منطقة محددة مولدة لمضاد‎ "(active fragments of an epitope) epitope ‏من‎ ‏مضاد مسئول عن تفاعلات‎ Age ‏أو ما شابه هو قسم من جزيء‎ "(antigenic determinant) ‏خاصة مع مجال سيطرةٍ ربط مولد مضاد من مضاد الجسم. قد يتوافر مجال سيطرة ربط مولد‎ ‏ما يسمى جزء‎ lik) Ab ‏مضاد بواسطة واحد أو أكثر من مجالات سيطرة متغيرة‎ Vo ‏مضاد مجال سيطرة‎ alge ‏يتكون من مجال سيطرة 111). قد يشمل مجال سيطرة ربط‎ Fd Ab ‏مضاد‎ (VH) ‏ومضاد جسم أو مجال سيطرة متغير سلسلة تقيلة‎ (VL) ‏متغير سلسلة خفيفة‎ .)55760777 ‏جسم (براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ ‏هي مادة حيوية مجمعة من خلاياء أنسجة؛ أعضاء,؛ أو كائنات حية؛‎ (sample) ‏إن "عينة‎ ‏عينة تشويحية؛‎ plasma (ad ‏مثلاء؛ لتحديد مادة تحلل. تتضمن عينات حيوية تمثيلية مصل؛‎ Yo ‏عينة نسيج؛ معلق خلية؛ لعاب؛ مادة مائعة فمية؛ مادة مائعة مخية شوكية؛ مادة مائعة‎ ‏أمينوسية؛ لبن لبن السرسوبء إفراز غدة ثديية؛ سائل ليمفاوي؛ بول؛ عرق؛ مادة مائعة دمعية؛‎ ‏مادة مائعة معدية؛ مادة مائعة من السائل المصلي؛ مخاط؛ ونماذج وعينات إكلينيكية أخرى.‎ ‏أو‎ Ab ‏إلى عامل كاشف مثلا‎ "(capture reagent) ‏يشير المصطلح "عامل كاشف إمساك‎ ‏مضاد قادر على ربط جزيء مستهدف أو مادة تحلل مراد تحديده‎ alge ‏ارتباط‎ protein Yo ‏على‎ JU ‏حيوية. نموذجياء يكون عامل كاشف الإمساك ساكناء على سبيل‎ die ‏في‎ ‎YAER

نين سطح اختيار؛ ‎sale Die‏ تحتية صلبة أو وعاء تفاعل. إن "عامل كاشف إمساك ‎GDF-8‏ ‎"(GDF-8 capture reagent)‏ يرتبط بصفة خاصة مع ‎-GDF-8‏ ‏إن "عامل كاشف تحديد ‎"(detection reagent)‏ هو عامل كاشف؛ مثلا ‎Ab‏ أو ‎protein‏ ‏ارتباط ‎alias alge‏ يستخدم في الاختبارات المناعية للاختراع الحالي ليرتبط بصفة خاصة مع ‎protein ©‏ مستهدف»؛ ‎«Sis‏ 0117-8. قد يشمل عامل كاشف تحديد اختياريا علامة يمكن تحديدها. إن عامل كاشف تحديد يدرك ويربط نموذجيا ‎protein‏ المستهدف عند مكان ارتباط أو ‎epitope‏ مميز عن عامل كاشف الإمساك. قد يقترن عامل كاشف التحديد مع علامة يمكن تحديدها. إن "عامل كاشف تحديد ‎"(GDF-8 detection reagent) GDF-8‏ يرتبط بصفة خاصة مع ‎.GDF-8‏ ‎٠١‏ يشير المصطلح "منطقة تحديد التكملة ‎"(complimentary determining region)‏ أو ‎"CDR"‏ إلى المناطق مفرطة التغير من جزيء ‎Ab‏ أو ‎protein‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد؛ التي تتكون من 7 لوالب من السلسلة الثقيلة و3 من السلسلة الخفيفة والتي تشكل مع دعمها مجال سيطرة ربط مولد المضاد. إن المصطلح "تحديد ‎"(detecting)‏ مستخدم بمعناه واسع النطاق ليتضمن كلا من القياسات ‎٠‏ النوعية والكمية لمادة تحلل مستهدفة؛ وهي هنا قياسات جزيء مستهدف خاص مثل ‎GDF-8‏ ‏أو ‎.BMP-11‏ يمكن استخدام طرق الاختبارات الموصوفة هنا لتحديد وجود 6017-8 أو ‎BMP-‏ ‎il‏ عينة حيوية؛ أو ‎(Say‏ استخدامها لتحديد كمي لكمية ‎GDF-8‏ أو 310-11 في عينة. يمكن استخدام "عامل تحديد ‎"(detection agent)‏ أو "عامل كاشف تحديد ‎"(detection reagent)‏ في طرق الاختراع الحالي لتحديد الإشارة المتولدة من ‎Ab‏ أو ‎protein‏ ‎٠‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد تحديد الذي يشمل علامة غير مباشرة. إن عامل أو عامل كاشف تحديد هو ‎protein‏ أو جزيء صغير يسمح بتحديد عامل يضبط ‎GDF-8‏ أو مركب. في تطبيق مفضل؛ يرتبط عامل التحديد بصفة خاصة مع عامل ضبط ‎.GDF-8‏ قد يشمل عامل التحديد اختياريا علامة يمكن تحديدها. إن عامل التحديد يمكن أيضا تحديده بذاته بواسطة مادة تشمل علامة يمكن تحديدها. إن عوامل ضبط 0017-8 المحددة بالطرق المتوافرة هناء يمكن استخدامها أيضا ‎Yo‏ في الطرق لتحديد عوامل أخرى ضابطة ‎(ODF-8‏ على سبيل المثال. إن "اضطراب ملازم لنشاط 0178 ‎«'(disorder associated with 00178 activity)‏ 'اضطراب ملازم 63 ‎"(disorder associated with GDF8)‏ "اضطراب مصاحب ‎GDF8‏ vo

‎"(GDF8-associated disorder)‏ أو ما شابه يشير إلى اضطراب يمكن أن يسببه؛ كليا أو جزئياء خلل تتظيم 6018 (مثلاء إظهار و/أو نشاط 0018 زائد أو ناقص) ‎l/s‏ اضطراب يمكن علاجه؛ تحسينه؛ منعه؛ تحسين مصيره؛ و/أو مراقبته بتنظيم و/أو مراقبته بتنظيم و/أو مراقبة ‎protein‏ و/أو نشاط ‎.GDF8‏ تتضمن اضطرابات مصاحبة 0118 اضطرابات عضلية؛ © اضطرابات عصبية عضلية؛ اضطرابات تحلل ‎(abe‏ اضطرابات أيضية أو عظمية محثة؛

‏اضطرابات النسيج الدهنيء اضطرابات أيض ‎(glucose‏ أو اضطرابات متعلقة ‎insulin‏ ‏يشير المصطلح "جرعة مؤثرة ‎(effective dose)‏ "جرعة مؤثرةٍ ‎(therapeutically Ladle‏ ‎"effective dose)‏ أو 'كمية مؤثرةٍ ‎"(effective amount)‏ إلى جرعة أو مستوى كافية لتحسين الأعراض الإكلينيكية؛ أو تحقيق نتيجة حيوية مطلوبة ‎lie)‏ زيادة كتلة عضلة؛ شدة عضلة ‎٠‏ و/أو كثافة عظمية) في كائئات؛ متضمنة كائنات التي لديها اضطراب مصاحب ‎.GDF-8‏ ‏سوف تكون تلك الكمية كافية لتقليل نشاط 0017-8 المصحوب بتنظيم سلبي لكتلة عضلة هيكلية وكثافة عظمية؛ على سبيل المثال. قد تتضمن النتائج العلاجية والأعراض الإكلينيكية زيادة في كتلة عضلة؛ تحسين مؤشرات القلب والأوعية الدموية أو تحسين تنظيم أيض ©110ع. إن مشبط 0117-8 يمكن أن يزيد كتلة عضلة؛ قوة عضلة؛ يضبط مستويات ‎enzymes Vo‏ خاصة بعضلة و/أو يثير أقسام خلية عضلية ‎Al‏ على سبيل المثال. في تطبيق مفضل؛ يقلل مثبط 6007-8 الظواهر الإكلينيكية لاضطراب مصاحب ‎.GDF-8‏ يمكن لعامل ضبط ‎GDF-8‏ أن يضبط تباين خلايا دهنية أولية إلى خلايا دهنية؛ يقلل تراكم الدهن؛ يقلل مستويات ‎triglyceride‏ المصل؛ يقلل مستويات ‎cholesterol‏ المصلء يضبط أيض ‎«glucose‏ ‏يضبط الكثافة العظمية ويقلل ارتفاع ‎glucose‏ الدم. يمكن أيضا إعطاء مثبط ‎GDF-8‏ لكائن ‎Yo‏ وذلك لزيادة كتلة عضلة؛ لزيادة أو تعجيل النمو؛ متضمنا نمو عضلة. تشير كمية مؤثرة علاجيا من متبط ‎GDF-8‏ إلى كمية مؤثرة؛ عند إعطاء جرعة واحدة أو متعددة لكائن عند علاج؛ منع؛ شفاء؛ تأخير» تقليل شدة؛ أو تحسين عرض واحد على الأقل لاضطراب متكرر؛

‏أو إطالة إبقاء حياة الكائن أكثر من المتوقع في غياب تلك المعالجة. إن كائن مع اضطراب ملازم 06117-8» كائن معرض للإصابة باضطراب ملازم ‎Yo‏ 0074؛ كائن خاضع لعلاج مع عامل يضبط ‎(GDF-8‏ وكائن مرشح لإعطاء عامل يضبط ‎«GDF-8‏ قد يكون مرشحا للطرق المتوافرة هنا. إن طرق الاختراع قد تحدد أو تمنع استجابة

مناعية ضارة؛ و/أو تحدد الفعالية؛ الثبات الحيوي أو ملائمة استخدام العامل الضابط ‎.GDF-8‏ ‏إن كائن مصاب؛ أو معرض للإصابة مع اضطراب ملازم ‎Jie GDF-8‏ اضطراب خاص بعضلة أو اضطراب عصبي عضلي مرشح للطرق المتوافرة هنا. إن تثبيط نشاط ‎GDF-8‏ يزيد © نسيج عضلة في كائنات؛ متضمنة تلك التي تعاني من اضطرابات خاصة بعضلة. يوجد هناك عدد من الاضطرابات مصاحبة لعضل أو نسيج عصب معتلة وظيفياء على سبيل المثال بدون تحديد سوء التغذية العضلية؛ تصلب جانبي غير مغذي للعضلات ‎(ALS)‏ نقص الخلايا العضلية الأولية؛ الهزال؛ الهزال العضلي؛ الضمور العضلي؛ أو الهشاشة. تتضمن أمراض سوء التغذية العضلية؛ مثلاء سوء التغذية مع تضخم كاذب؛ الوجهي اللوحي العضدي؛ زناد ‎٠‏ (قوس عظمي لتثبيت الطرف)- طرف. تتضمن سوء التغذية العضلية التمثيلية سوء تغذية عضلية ‎¢(Leyden-Mobius) Duchennes‏ سوء تغذية عضلية ‎Becker‏ سوء تغذية عضلية ‎«Emery Dreifuss‏ سوء تغذية عضلية زناد-- طرف؛ متلازمة العمود الفقري المتصلب؛ متلازمة 111 مسو تغنيسسسة عضيلية مسدول متلازمسسسة ‎«Walker Warberg‏ مرض مخ- عضلة- ‎(pe‏ سوء تغذية وجهي لوحي عضدي ‎(Landouzy-Dejerine) ٠‏ سوء تغذية عضلية خلقي؛ سوء تغذية وتيري عضلي (مرض ‎٠ (Steinart‏ ومرض خلل 5,840 العضلية ‎Jal‏ و:0086. يتضمن أيضا اضطراب عضلة ملازم ‎GDF-8‏ اضطراب مختار من تحلل عضلة ملازم لمرض قلبي وعائي دموي؛ أو نتيجة لمرض أو ‎Ala‏ أخرى ‎Jie‏ ضمور عضو؛ فشل ‎(some‏ ‏سرطانء الإيدز؛ الراحة بالسرير؛ عدم الحركة؛ قلة الاستخدام طويل الأمد؛ أو مرض أو ‎Ula‏ ‎٠‏ آخر متضمن أيضا في المصطلح. إن كائن مصاب مع أو معرض للإصابة مع اضطرابات نسيج دهني؛ مثلا السمنة؛ اضطرابات القلب والأوعية الدموية (عندما يصاحبه فقد عضلة أو هزال عضلة) واضطرابات أيض ‎insulin‏ مرشح أيضا. بصورة مشابهة؛ فإن الكائئنات المصابة مع أو المعرضة للإصابة مع؛ اضطراب يلازمه فقد عظمي؛ متضمنا هشاشة عظام؛ خاصة في السيدات كبار السن ‎Yo‏ و/أو بعد سن اليأس؛ هشاشة العظام التي يحثها ‎glucocorticoid‏ نقص ‎LAY‏ العظمية؛ التهاب عظمي مفصلي؛ وكسور متعلقة بهشاشة العظام مرشحة لطرق المعالجة المتوافرة هنا. تتضمن حالات أخرى ملازمة ‎GDF-8‏ مرض أيضي عظمي؛ واضطرابات تتميز بكتلة عظمية ال vv ‏فشل الغدد التناسلية السابق لأوانه؛ تثبيط‎ <a glucocorticoid ‏تلك بسبب علاج‎ Jie ‏قليلة‎ ‏نقص فيتامين (د)؛ ارتفاع الهرمون الجاردرقي الثانوي؛ النقص الغذائي؛ وفقدان‎ candrogen ‏الشهية العصابي.‎ ‏تتضمن أمثلة لاضطرابات القلب والأوعية الدموية مرض شريان تاجي (تصلب عصيدي)؛‎ ‏(تتضمن ذبحة حادة وغير مستقرة)؛ نوبة قلبية؛ سكتة ( متضمنة سكتة فقر دم موصفي)؛‎ dad © ‏فشل قلب محتقن؛‎ Ql ‏ارتفاع الضغط المصاحب لأمراض القلب والأوعية الدموية؛ فشل‎ ‏مرض شريان طرفي» ومرض وعائي‎ pall ‏مرض شريان تاجي؛ ارتفاع الضغط؛ ارتفاع دهن‎ ‏حالات مصاحبة لاتزان بدني شاذ‎ insulin ‏دموي طرفي. تتضمن أمثلة لاضطرابات أيض‎ insulin ‏ومقاومة‎ ¢(X ‏خلل دهن الدم؛ المتلازمة الأيضية (مثلا المتلازمة‎ cglucose ‏لأجل‎ ‎nitrogen ‏تحثها إصابة رضية مثل حروق أو عدم توازن‎ ٠ ‏يشير المصطلح "0017-8" إلى عامل نمو وتباين-/ خاص؛ وقد يسمى أيضا‎ ‏يشير المصطلح إلى شكل المصدر الأولي غير المعالج كامل الطول من‎ "myostatin' ‏الأولي‎ peptide 5 ‏بالإضافة إلى الأشكال الناضجة (كاملة الطول والوظيفة)‎ 48 ‏فإن‎ ¢'(inactive) ‏الناتجة من فصل بعد الترجمة. إذا لم يحدد خلاف ذلك أنه "غير نشط‎ ‏يحتفظ بواحد أو أكثر من أنشطة 6001-8 الحيوية. يشير المصطلح أيضا‎ "GDF-8 protein” ٠ ‏محتفظة بنشاط حيوي واحد على الأقل مصاحب‎ GDF-8 ‏أو أشكال متباينة من‎ 03a ‏إلى أي‎ (amino acid ‏ناضج؛ كما هو موضح هناء متضمنة ترتيبات تم تعديلها. إن ترتيب‎ GDF-8

GDF-8 ‏آدمي ناضج متوافر في تعريف الترتيب رقم:٠. يتعلق الاختراع الحالي‎ GDF-8 ‏أجل‎ ‏حيوان قارض؛‎ Ol ‏من كل الأنواع الفقارية؛ المتضمنة؛ بدون تحديد؛ آدمي؛ بقرة؛ دجاجة؛‎

Sie ‏قرد البابون» وسمكة (من أجل معلومات الترتيب؛ انظر؛‎ (egy ‏خنزير؛ طائرء ديك‎ ٠ -(McPherron et al., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 94:12457-12461 (1997) ‏إلى واحد أو أكثر من الأنشطة‎ "(GDF-8 activity) GDF-8 ‏يشير المصطلح "نشاط‎ ‏نشط. على سبيل‎ GDF-8 protein ‏التنتظيمية للنمو فسيولوجيا أو الجينية الشكلية المصاحبة‎ ‏نشط هو منظم سلبي لكتلة عضلة هيكلية. إن 0117-8 نشط يمكنه أيضا‎ GDF-8 ‏المثال؛ فإن‎ ‏إثارة انقسام خلية عضلية‎ ¢(creatine kinase ‏خاصة بعضلة (مثلاء‎ enzymes ‏ضبط إنتاج‎ Yo ‏وضبط تباين خلية دهنية أولية إلى خلايا دهنية. يتضمن "نشاط 0117-8" 'نشاط ربط‎ cdf peptide ‏على سبيل المثال؛ فإن 6017-8 الناضج يرتبط بصفة خاصة مع منطقة‎ ."0074

YAS

YA

‏مع‎ cfollistatin ‏مع‎ cactivin ‏مع‎ «GDF-8 ‏مع مستقبل‎ ¢ACtRIIB ‏مع‎ «GDF-8 ‏الأولي من‎ ‏أخرى. إن مثبط‎ proteins ‏ومع‎ «GASP-1 ‏مع‎ «follistatin ‏تحتوي على مجال سيطرة‎ proteins ‏مضاد أو قسم مته؛ قد يقلل واحدة أو أكثر من‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏أو‎ Ab ‏مثل‎ «<GDF-8 ‏طلب‎ lia ‏انظر؛‎ (yall ‏أنشطة الارتباط هذه. إن أنشطة 0017-8 الحيوية معروفة للمهرة في‎ .١7-8و‎ 1-0٠ ‏براءة الاختراع الأمريكية رقم 2004/0223966 عند الأمثلة‎ © ‏إن 'اضطراب مصاحب 0017-8" هو اضطراب أو حالة سوف يستفيد فيه الكائن من‎

GDF-8 ‏يتضمن اضطراب مصاحب‎ .GDF-8 ‏مثل مثبط‎ «GDF-8 ‏إعطاء مادة ضابطة‎

Jia ‏خاصة بعضلة أو عضلي عصبي؛ على سبيل‎ Alla ‏اضطراب طبي مثل اضطراب أو‎ ‏نقص الخلايا العضلية‎ (ALS) ‏سوء التغذية العضلية؛ تصلب جانبي غير مغذي للعضلات‎ ‏ضمور؛ أو‎ clip ‏الهزال العضلي؛ الضمور العضلي؛ أو تحلل عضلة متضمنا‎ cell ‏الأولية؛‎ ٠ ‏الوجهي‎ «lS ‏سوء التغذية مع تضخم‎ lia ‏هشاشة. تتضمن أمراض سوء التغذية العضلية؛‎ ‏اللوحي العضدي؛ زناد (قوس عظمي لتثبيت الطرف)- طرف. تتضمن سوء التغذية العضلية‎ «Beker ‏سوء تغذية عضلية‎ ¢(Leyden-Mobius) Duchennes ‏التمثيلية سوء تغذية عضلية‎ ‏سوء تغذية عضلية زناد-- طرف؛ متلازمة العمود الفقري‎ «Emery Dreifuss ‏سوء تغذية عضلية‎ ‏متلازمة‎ Fukuyama ‏سوء تغذية عضلية‎ Ullrich ‏المتصسلب؛ متلازمة‎ ٠ (Landouzy- ‏مرض مخ- عضلة عين؛ سوء تغذية وجهي لوحي عضدي‎ «Walker Warberg ‏مرض‎ «(Steinart ‏©0©©0؛ سوء تغذية عضلية خلقي؛ سوء تغذية وتيري عضلي (مرض‎ .Gower 5 ‏خلل الوتيرة العضلية آخر‎ ‏يتضمن المصطلح أيضا تحلل عضلة ملازم لمرض قلبي وعائي دموي؛ أو نتيجة لمرض‎ ‏الراحة بالسرير؛ عدم الحركة؛‎ Gal ‏ضمور عضوء فشل عضو؛ سرطان؛‎ Jia ‏أو حالة آخر‎ ٠ ‏أو مرض أو حالة آخر متضمن أيضا في المصطلح.‎ cad) ‏قلة الاستخدام طويل‎ ‏السمنة؛‎ Mia ‏اضطرابات نسيج دهني؛‎ GDF-8 ‏تتضمن أيضا اضطرابات ملازمة‎ ‏اضطرابات القلب والأوعية الدموية (عندما يصاحبه فقد عضلة أو هزال عضلة) واضطرابات‎ ‏اضطراب يلازمه فقد عظمي؛‎ GDF-8 ‏أيض (09011:. تتضمن أيضا اضطرابات ملازمة‎ ‏السن و/أو بعد سن اليأس؛ هشاشة العظام‎ HLS ‏متضمنا هشاشة عظام؛ خاصة في السيدات‎ Yo ‏نقص الخلايا العظمية؛ التهاب عظمي مفصلي؛ وكسور متعلقة‎ cglucocorticoid ‏التي يحثها‎ ‏واضطرابات تتميز بكتلة عظمية‎ (adie ‏بهشاشة العظام. تتضمن حالات أخرى مرض أيضي‎

قليلة متل تلك بسبب علاج ‎glucocorticoid‏ مزمن؛ فشل الغدد التناسلية السابق لأوانه؛ تثبيط 00 نقص فيتامين (د)»؛ ارتفاع الهرمون الجاردرقي الثانوي؛ النقص الغذائي؛ وفقدان الشهية العصابي. تتضمن أمثلة لاضطرابات القلب والأوعية الدموية مرض شريان تاجي (تصلب عصيدي)؛ © ذبحة (تتضمن ذبحة حادة وغير مستقرة)؛ نوبة قلبية؛ سكتة ( متضمنة سكتة فقر دم موصفي)؛ ارتفاع الضغط المصاحب لأمراض القلب والأوعية الدموية؛ فشل القلب؛ فشل قلب محتقن؛ مرض شريان تاجي؛ ارتفاع الضغط؛ ارتفاع دهن ‎all‏ مرض شريان ‎sb‏ ومرض وعائي دموي طرفي. تتضمن أمثلة لاضطرابات أيض ‎insulin‏ حالات مصاحبة لاتزان بدني شاذ لأجل ‎glucose‏ خلل دهن الدم؛ المتلازمة الأيضية (مثلا المتلازمة ‎o(X‏ ومقاومة ‎insulin‏ التي ‎٠‏ تحثها إصابة رضية ‎Jie‏ حروق أو عدم توازن ‎nitrogen‏ ‏تشير المصطلحات "مركب كامن ‎"GDF-8‏ إلى مركب ‎proteins‏ المتكون بين ‎dimer‏ ‏المتمائل ‎GDF-8‏ الناضج 5 ‎peptide‏ الأولي ‎.GDF-8‏ يعتقد أن ‎peptides‏ الأوليين 0717-8 الاثنين يتلازمان مع جزيئي ‎GDF-8‏ الناضجين في ‎dimer‏ المتماثل لتكوين مركب ‎tetrameric‏ ‏غير نشط. قد يتضمن المركب الكامن مثبطات ‎GDF‏ أخرى بدلا من أو بالإضافة إلى واحدة ‎١٠‏ أو أكثر من ‎peptides‏ الأولية ‎.GDF-8‏ ‏يشير المصطلح ‎GDF-8"‏ ناضج إلى ‎protein‏ ينفصل من مجال السيطرة الطرفي ‎carboxy‏ لأجل ‎protein‏ المصدر الأولي ‎.GDF-8‏ قد يتواجد 6017-8 الناضج ‎Jie‏ ‎dimer 100006‏ متماشل؛ أو في مركب كامن ‎.GDF-8‏ اعتمادا على الشروط» فإن ‎GDF-8‏ الناضج قد يرشح اتزان بين أي من أو كل من هذه الأشكال المختلفة. في شكله النشط ‎٠‏ حيوياء يشار أيضا إلى 0017-8 الناضج بأنه ‎GDF-8"‏ نشط". إن 0017-8 النشط حيويا ليس في مركب كامن ‎.GDF-8‏ يشير المصطلح أيضا إلى أي أجزاء وأشكال متباينة من ‎GDF-8‏ ‏تستبقى نشاط حيوي واحد على الأقل ملازم 6017-8 الناضج؛ حسب الشرح هناء متضمنة ترتيبات تم تعديلها. يشير المصطلح ‎peptide”‏ أولي ‎'(GDF-8 propeptide) GDF-8‏ إلى ‎polypeptide‏ ‎Yo‏ المنفصل من مجال السيطرة الطرفي-0100ة من ‎protein‏ المصدر الأولي ‎-GDF-8‏ إن ‎peptide‏ الأولي ‎GDF-8‏ قادر على الارتباط مع مجال سيطرة ربط ‎peptide‏ الأولي على ‎GDF-8‏ الناضج. يشكل ‎١ peptide‏ لأولي ‎GDF-8‏ مركبا مع ‎dimer‏ المتماثل ‎GDF-8‏ الناضج.

$e ‏الناضج في‎ GDF-8 ‏الاثنين يتلازمان مع جزيئين من‎ GDF-8 ‏الأوليين‎ peptide ‏يعتقد أن‎ ‏غير نشط؛ يسمى "مركب كامن". قد يتضمن‎ tetrameric ‏المتماثل لتكوين مركب‎ dimer peptides ‏أخرى بدلا من أو بالإضافة إلى واحدة أو أكثر من‎ GDF ‏المركب الكامن مثبطات‎ .GDF-8 ‏الأولية‎ ‏أي عامل قادر‎ "(GDF-8 modulating agent) GDF-8 ‏يتضمن المصطلح "عامل يضبط‎ ° ‏أو مشتق مقبول دوائيا منه. إن العوامل‎ «GDF-8 ‏على ضبط نشاط؛ إظهار؛ تصنيع؛ أو إفراز‎ sale ‏يمكن استخدام‎ .GDF-8 ‏سوف تزيد أو تقلل واحدة أو أكثر من أنشطة‎ GDF-8 ‏الضابطة‎ ‏متضمنة 'مثبط 0101-8" لعلاج اضطرابات خلية دهنية؛ اضطرابات متعلقة‎ «GDF-§ ‏ضابطة‎ ‏أو اضطرابات عظمية؛ على سبيل المثال. يشتمل المصطلح مشتقات حيوية‎ cglucose ‏بأيض‎ ‎GDF-8 ‏في تطبيقات خاصة؛ سوف يؤثر عامل ضابط أو متبط‎ .GDF-8 ‏من عامل ضابط‎ ٠ ‏على ارتباط 0017-8 مع واحد أو أكثر من قرناء الارتباط الفسيولوجي له؛ متضمنة بدون تحديد‎ «follistatin ‏(مثلا‎ follistatin ‏يحتوي على مجال سيطرة‎ protein «(ActRIB ‏مستقبل (مثلا‎ ‏طفرات‎ GDF-8 ‏أولي‎ peptide ‏مقثل‎ GDF-8 protein i «(GASP-2 «GASP-1 ‏مشت‎ ‏ترتبط بصفة خاصة مع‎ Abs «Sa «GDF-8 ‏ومشتقات من ذلك. تتضمن العوامل الضابطة‎ ‏وأجزاء ومشتقات من‎ JA-16 170-022 (MYO-028 (MYO-029 ‏(متضمنة‎ GDF-8 ١٠ ‏براءة الاختراع الأمريكية‎ Nia ‏ترتبط بصفة خاصة مع مستقبل 6017-8 (انظر؛‎ Abs «(ld ‏رقم 11074970 منشور براءة الاختراع الأمريكية رقم 2004/0077053-81)؛ مستقبلات معدلة‎ ¢(ActRIIB-Fc ‏اندماج‎ protein ‏اندماج مستقبل؛ مثل‎ proteins ‏قابلة للذوبان (متضمنة‎ ‏أو‎ GDF-8 ‏أولي‎ peptide Jie) BMP-11 ‏أو‎ GDF-8 ‏أخرى ترتبط بصفة خاصة مع‎ proteins ‏تحتوي‎ proteins «follistatin «GDF-8 ‏لأولي‎ | peptide ‏81/0-11؛ مواد طفرية ومشتقات من‎ | ٠ ‏ترتبط مع‎ proteins «(proteins ‏من هذه‎ Fe ‏واندماجات‎ follistatin ‏على مجال سيطرة‎ ‏ومواد مماثلة. هناك مثبطات غير‎ proteins ‏من هذه‎ Fo ‏واندماجات‎ GDF-8 ‏المستقبل‎ ‏مشتملة أيضا في المصطلح مثبط 61017-8. تتضمن‎ (nucleic acids J) proteinaceous «ribozymes «peptide ‏مماتاات‎ ¢peptides «Abs «proteins GDF-8 ‏مببطسات‎ ‏أو‎ siRNA ‏مؤدوج الشريط (متضمنا‎ RNA ‏مضادة للإحساس؛»‎ oligonucleotides Yo .011-8 ‏التي تثبط بصفة خاصة‎ ga] ‏وجزيئات صغيرة‎ «(microRNA

YAEL

ف يشير المصطلح "كائن ‎(individual)‏ إلى أي كائن فقاري؛ متضمنا كائن ثديي؛ طائرء ‎lial‏ حيوان برمائي؛ أو سمكة. يتضمن المصطلح "كائن ثديي ‎(mammal)‏ أي كائن مصنف مثل؛ ذكر أو أنثى؛ متضمنا الآدميين» الحيوانات الرئيسية؛ القردة؛ الكلاب؛ الخيولء القطط؛ الخراف؛ الخنازير؛ الماعز؛ الماشية؛ إلخ. تتضمن أمثلة حيوانات غير ثديية دجاجة؛ © ديك رومي؛ بطة؛ أوزة؛ سمكة (مثل؛ سالمون؛ سمك السلورء ‎coup la‏ سمك الزرد؛ والسلمون المرقط)؛ والضفادع. يمكن اختيار الكائن من الآدميين؛ أو الحيوانات الأليفة؛ الحيوانات المستخدمة في الغذاء؛ الدواب» حيوانات حديقة الحيوان» حيوانات الرياضة؛ حيوانات السباق؛ أو الحيوانات المدللة» على سبيل ‎JE‏ ‏تشير المصطلحات ‎(inhibit) Jad’‏ و"تثبيطي ‎(inhibitory)‏ إلى تقليل واحد أو أكثر من ‎٠‏ أنشطة ‎GDF-8‏ بواسطة مثبط ‎«GDF-8‏ مقارنة بنشاط ‎GDF-8‏ في غياب نفس المثبط. يفضل أن يكون التقليل في النشاط على الأقل ‎JX JY Nga‏ يال قال كال ‎JN‏ ‎٠‏ 0 أو أكبر. في تطبيقات خاصة؛ يقل نشاط 0017-8 عند ‎ols‏ بواحد أو أكثر من المثبطات المعلنة حالياء على الأقل ‎75٠‏ يفضل على الأقل حوالي 60 ‎JAE SAY‏ ‎TNA TNT TNE TINY TN TRA JA‏ للك ‎SAN TAN TNE TAY‏ نكل ‎JAY ٠‏ حك ححا ‎ZA‏ أو 799 ويفضل أكثر أيضا على الأقل 7905 إلى ‎.7٠٠١‏ يشير المصطلح 'يعادل ‎"(neutralize)‏ و'معادلة ‎"(neutralizing)‏ إلى تقليل واحد أو أكثر من أنشطة 0074 بمقدار على الأقل ‎A‏ 7/85 290 أو 715. ‎(Say‏ قياس تثبيط نشاط ‎GDF-8‏ ‏على سبيل المثال؛ في اختبارات جين مخبر 0013)0804(12 حسب الوصف في ‎Thies et al.

Growth Factors 18:251-259 (2001)‏ أو في اختبارات مستقبل ‎ACtRIIB‏ حسب ‎٠‏ التوضيح في الأمثلة أدناه. يشير المصطلح "معزول (058018:0)" إلى جزيء منفصل جوهريا عن بيئته الطبيعية. على سبيل المثال» فإن ‎protein‏ معزول هو ‎protein‏ منفصل جوهريا من الخلية أو مصدر النسيج المشتق منها. قد تكون العلامة أيضا هي ‎enzyme‏ مثلاء ‎enzyme‏ يحول مادة خاضعة؛ مثل ‎peroxidase Yo‏ (مثلاء ‎peroxidase‏ فجل ‎phosphatase «(ls‏ قلوي؛ ‎«glucose oxidase‏ ‎.B-galactosidase‏ إن ‎peroxidase‏ عند إجراء حضانة له مع مواد خاضعة ‎ALE‏ للذوبان (مثلاء ‎«(OPD) o-phenylenediamine «(TMB) 3,3°,5,5’ tetramethylbenzidine‏ ‎YAEL‏ ty

«polyphenols ¢luminol (ABTS) 2,27 -azino-di [3-ethyl-benzthiazoline] sulfonate ‏يؤدي إلى تغير مولد لصبغ أو مضيء في المادة الخاضعة‎ ¢(luciferin «acridine esters ‏يمكن تحديده بقياس مجهري طيفي. نموذجيا؛ بعد فترة حضانة ثابتة مع المادة الخاضعة؛ يخمد‎ ‏بالتحميض)؛ وتقدر النتيجة كميا بقياس الكثافة البصرية (الامتصاص) أو‎ Nik) ‏التفاعل‎ ‏في النطاق الخطي لتفاعلات مولدة‎ OD ‏الإضاءة. يمكن مقارنة نتائج الامتصاص مع قيم‎ ©

الصبغ؛ وتقاس اختبارات مناعية مضيئة بوحدات ضوء نسبية (نا/ل8. قد تكون العلامة أيضا هي ‎<hapten «biotin‏ أو جزء ملحق مع ‎epitope‏ (مثلا؛ ‎«(hemagglutinin peptide) HA «histidine‏ صاعامتم يربط ‎«AviTag® ¢maltose‏ أو ‎¢(glutathione-S-transferase‏ يمكن تحديدها بإضافة عامل تحديد معلم يتفاعل مع العلامة ‎٠‏ المصاحبة لعامل ضبط أو عامل تحديد 8 ‎.GDF‏ يمكن تحديد عامل تحديد معلم ‎biotin‏ ‎(“biotinylated”)‏ من خلال تفاعله مع اتحاد ‎peroxidase—avidin «Mis cavidin-enzyme‏ ‎Jad‏ حار؛ بعد حضانة متعاقبة مع اتحاد ‎avidin-enzyme‏ ومادة خاضعة مناسبة مولدة لصبغ

أو مضيئة. إن ‎Europium‏ هو علامة أيضا. يشير المصطلح " مثيل ‎(peptide mimetic) peptide‏ حسب الاستخدام هناء إلى ‎peptide‏ ‎Vo‏ يماثل حيويا مواد محددة نشطة على هرمونات» ‎cytokines‏ مواد خاضعة ‎enzyme‏ فيروسات أو جزيئات حيوية ‎opal‏ وقد يعارض» يثيرء أو بطريقة أخرى يضبط النشاط الفسيولوجي لمركب ترابطي طبيعي. يحدد مثيل ‎peptide‏ بصورة مفضلة ‎Jie‏ مركبات لها بناء ثانوي يشبه 6 وسمات بنائية إضافية اختياريا؛ إن طريقة تأثيرها مشابهة بدرجة كبيرة أو مماثلة لطريقة تأثير ‎peptide‏ الأصلي وعلى أية حال يمكن تعديل نشاطها (مثلا كمضاد أو كمثبط) ‎٠‏ -_ مقارنة مع ‎peptide‏ الأصلي بصفة خاصة مستقبلات أو ‎enzymes‏ على أية حال؛ يمكن أن تقلد تأثير ‎peptide‏ الأصلي (معضدة). على مدار هذه المواصفة يشير المصطلح ‎Joie’‏ ‎"(peptide mimetic) peptide‏ جزيء نظرا لخواصه البنائية يكون قادرا على محاكاة الوظائف الحيوية من أجل 00178 إما الوظيفي أو غير الوظيفي. في الاختراع الحالي؛ يفترض أن جزء من ‎GDF8‏ يشمل مجال سيطرة ربط/ ‎dimerization‏ من ‎GDF8‏ يقوم بوظيفة مادة ‎Yo‏ سائدة سلبية من أجل ‎.GDF8‏ إن مثيل ‎cpeptide‏ بذاته؛ من مجال سيطرةٍ ربط/ ‎dimerization‏ ‏8 يمكن أن يتواجد في زيادة جزيئية جرامية متعددة ويمكن أن 'يتنافس بصورة فائقة” مع 8 نوع بري ويشكل ‎dimers‏ مغايرة مع جزيئات النوع البري وبالتالي يؤثر كمادة سائدة ‎YAER‏

¢y ‏سلبية لوظيفة 6018 الحيوية. في هذا الجانب؛ ستتم إعاقة وظيفة 6018 وبالتالي تخف حدة‎ ‏تثبيط نمو العضلة. إن مثالا لاختبار حيوي في الجسم لذلك النشاط المحاكي 01178 المحث‎ ‏بإعطاء كمية مؤثرة‎ AT ‏هو زيادة كتلة عضلة هيكلية في فئران طبيعية أو حيوان اختبار‎ al ‏من مثيل محث للنمو واحد على الأقل من الاختراع الحالي.‎ ° يشير المصطلح "نقي ‎(purified)‏ إلى جزيء خالي جوهريا من مادة أخرى مصاحبة للجزيء في بيئته الطبيعية. على سبيل المثال» يكون ‎protein‏ النقي خاليا جوهريا من المادة الخلوية أو ‎proteins‏ أخرى من الخلية أو النسيج المشتق منها. يشير المصطلح إلى مستحضرات يكون ‎protein les‏ المعزول نقيا جوهريا للإعطاء كتركيبة علاجية؛ أو نقي بنسبة ‎7٠‏ إلى 780 على الأقل (وزن/ وزن)؛ يفضل أكثر؛ نقي بنسبة 740-7850 على الأقل 795 ‏نقي بنسبة‎ SH ‏(وزن/ وزن؛ يفضل أكثر أيضاء نقي بنسبة 6790-90« يفضل‎ ٠ (cos ‏على الأقل (وزن/‎ ٠٠١ ‏أو‎ 44 JAA ay ‏تر‎ يشير المصطلح ‎SIRNA”‏ حسب الاستخدام هناء إلى جزيئات ‎RNA‏ متفاعلة صغيرة يمكن استخدامها لإخماد نشاط ‎leds)‏ جينات مستهدفة. يمكن أن يكون ‎dsRNA sa siRNA‏ به 79-19 ‎nucleotides‏ يمكن إنتاج هلله داخليا بتحلل جزيئات ‎dsRNA‏ أطول بواسطة

Layla ‏في خلية‎ siRNAs ‏يمكن أيضا إدخال‎ Dicer ‏يسمى‎ RNase 1 ‏متعلق مع‎ nuclease ٠ أو بنسخ بنية إظهار. بمجرد تكوينها؛ تتجمع ‎SIRNAS‏ مع مكونات 0016105 في مركبات تحتوي على ‎ribonuclease‏ داخلي تسمى مركبات إخماد نشاط يحثه-م101 (081505. إن منع التفاف ‎SIRNA‏ الذي يولده ‎ATP‏ ينشط ‎RISCs‏ والتي تستهدف في المقابل نسخة ‎MRNA‏ المكمل بازدواج قاعدة ‎«Watson-Crick‏ وبذلك ينفصل ويتحلل ‎mRNA‏ يحدث فصل ‎mRNA‏ ‎Ye‏ قرب وسط المنطقة المحددة بشريط ‎siRNA‏ إن تحلل ‎mRNA‏ هذا الخاص بالترتيب يؤدي إلى إخماد نشاط الجين. ‏يمكن استعمال طريقتين على الأقل لتحقيق إخماد نشاط جين من خلال ‎SIRNA‏ الأولى؛ ‏يمكن تصنيع ‎siRNAs‏ في المعمل وإدخاله في خلايا لإخماد إظهار الجين مؤقتا. إن ‎siRNAs‏ ‏عبارة عن أزوا ج من ‎oligonucleotides‏ قصيرة مختلطة يمكن أن تتضمن؛ مثلاء ‎RNAs ٠9‏ ‎nucleotides Yo‏ مع أجزاء متدلية متماثلة '3 ‎dinucleotide‏ باستخدام أزوا ‎siRNA z‏ مصنعة من ‏١؟‏ زوج قاعدة (مثلاء ‎٠9‏ قاعدة ‎RNA‏ يليها ‎UU‏ أو جزء متدلي '3 ‎(TAT‏ يمكن تحقيق ‏إخماد نشاط جين خاص بترتيب في خلايا ثديية. إن ‎SIRNAS‏ هذه يمكنها إخماد ترجمة جين

مستهدف في خلايا ثديية بدون تنشيط ‎protein kinase‏ معتمد على ‎(PKR) DNA‏ بواسطة ‎RNAS‏ أطول مزدوجة الشريط ‎(dsRNA)‏ وذلك قد يؤدي إلى كبح غير خاص لترجمة ‎proteins‏ كثيرة. الثانية؛ يمكن إظهار ‎SIRNAS‏ في الجسم من نواقل. يمكن استخدام هذه الطريقة لإظهار ‎siRNAs ©‏ بدرجة ثابتة في خلايا أو حيوانات طفرية. تصميم هندسيا نواقل ‎SIRNA leds]‏ للقيام بنسخ ‎SIRNA‏ من وحدات نسخ ‎«(pol III) polymerase II‏ إن وحدات نسخ ‎pol TIT‏ مناسبة لإظهار ‎siRNA‏ دبوس شعر لأنها تضاعف مكان نهاية نسخ غني مع ‎AT‏ قصير ذلك ما يسبب إضافة أجزاء متدلية من ¥ زوج قاعدة ‎(UU Die)‏ إلى ‎SIRNAS‏ دبوس شعر- وهذه سمة مساعدة لوظيفة ‎siRNA‏ يمكن أيضا استخدام نواقل إظهار ]11 ‎pol‏ لتوليد فئران طفرية ‎٠‏ تظهر ‎SIRNA‏ ‏يمكن ‎Lad‏ إظهار ‎SIRNA‏ بطريقة خاصة بنسيج. تحت هذه الطريقة؛ تظهر أولاً ‎dsRNAs‏ ‏طويلة من محث (مثل ‎(pol II) CMV‏ في أنوية خطوط خلية أو حيوانات طفرية منتقاة. تصنع ‎dSRNAS‏ الطويلة في شكل ‎siRNAs‏ في الأنوية (مثلاء بواسطة ‎«(Dicer‏ تخرج ‎SIRNA‏ ‏من الأنوية وتسبب إخماد نشاط خاص بجين. يمكن استخدام طريقة مشابهة في اتحاد مع ‎Vo‏ محثات خاصة بنسيج ‎(pol IT)‏ لتوليد فئران ناقصة خاصة بنسيج. يشير المصطلح ”جزيء صغير ‎(small molecule)‏ إلى مركبات ليست جزيئات كبيرة. ‎ia «hail‏ ‎Karp, (2000) Bioinformatics Ontology 16:269-85; Verkman, (2004) AJP-Cell‏ ‎Physiol. 286:465-74.‏ ‎coll ¥.‏ فإن الجزيئات الصغيرة تعتبر غالبا هي تلك المركبات الأقل من ‎٠٠٠١‏ دالتون» مثلاء ‎Voet and Voet, Biochemistry, 2nd ed., ed.

N.

Rose, Wiley and Sons, New York, 14‏ .)1995( على سبيل المثال؛ استخدام ‎Davis et al. ((2005) Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

USA 102:5981-86)‏ ‎Yo‏ عبارةٍ الجزيء الصغير للإشارة إلى ‎peptides 5 «methotrexate «folates‏ عصبية؛ بينما استخدام )2:1022-30 ‎Halpin and Harbury ((2004) PLos Biology‏ العبارة للإشارة إلى منتجات جين جزيء صغيرة؛ ‎peptides s RNAs (DNAs «Mis‏ تتضمن أمثلة جزيئات صغيرة

م طبيعية 58 مواد توصيل عصبي؛ 3 ‎(SIRNAS‏ تتضمن جزيئات صغيرة مصنعة مواد كيميائية عديدة مذكورة في قواعد بيانات جزيء صغير كثيرة متوافرة تجارياء مثلاء ‎(Fine FCD‏ ‎ChEBI «(Small Molecule Interaction Database) SMID «Chemicals Database)‏ ‎CSD 5 «(Chemical Entities of Biological Interest)‏ ‎«(Cambridge Structural Database) ©‏ انظرء ‎Mia‏ ‎JAlfarano et al. (2005) Nuc.

Acids Res.

Database Issue 33:D416-24‏ إن المصطلحات "ارتباط خاص ‎(specific binding)‏ 'يربط بصفة خاصة ‎(specifically binds)‏ إلخ؛ تعني تشكيل اثنين أو أكثر من الجزيئات لمركب يمكن قياسه تحت شروط فسيولوجية أو اختبار ويكون انتقائيا. يقال أن ‎Ab‏ أو ‎protein‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد ‎٠‏ أو مثبط آخر 'يرتبط بصفة خاصة ‎"(specifically bind)‏ مع ‎protein‏ إذا كان تحت شروط منتقاة بدرجة ملائمة؛ لا يتم تثبيط ذلك الارتباط جوهرياء بينما في نفس الوقت يتم تثبيط الارتباط غير الخاص. يتميز الارتباط الخاص بانجذاب كبير ويكون انتقائيا لمركب أو ‎protein‏ إن الارتباط غير الخاص له عادة انجذاب قليل. يتميز عامة الارتباط في ‎IgG Abs‏ على سبيل المثال بانجذاب على الأقل حوالي ‎7-٠١‏ جزيئي جرامي أو أكبر؛ مثل على الأقل ‎٠‏ حوالي ‎8-٠١‏ جزيئي جرامي أو أكبرء أو على الأقل حوالي ‎9-٠١‏ جزيئي جرامي أو أكبرء أو على الأقل حوالي ‎٠١-٠١‏ جزيئي جرامي أو ‎ul‏ أو على الأقل حوالي ‎١١-٠١‏ جزيئي جرامي أو أكبر؛ أو على الأقل حوالي ‎١-٠١‏ جزيئي جرامي أو أكبر. إن المصطلح يمكن أيضا استخدامه عندما يكون؛ ‎Sia‏ مجال سيطرة ربط مولد مضاد خاصا ‎epitope‏ معين لا تحمله مولدات مضاد كثيرة؛ وفي تلك الحالة فإن ‎Ab‏ أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الحامل ‎٠‏ لمجال سيطرة ربط مولد المضاد سوف لا يربط ‎dale‏ مولدات مضاد أخرى. تحتاج طرق خاصة انجذابا كبيرا للربط الخاص؛ بينما توجد طرق أخرى؛ مثل اختبار رنين ‎plasmon‏ سطح؛ قد تحدد مركبات أقل ثباتا وتفاعلات أقل انجذابا. عند الضرورة؛ يمكن تقليل ‎Lala)‏ غير الخاص بدون التأثير جوهريا على الارتباط الخاص بتغيير شروط الارتباط. إن تلك الشروط معروفة في الفن؛ ويمكن للصانع الماهر بانتقاء تقنيات روتينية أن ينتقى شروط ‎YO‏ ملائمة. تحدد الشروط ‎sale‏ بالنسبة لتركيز أقران الارتباط؛» الشدة الأيونية للمحلول» ‎Lag‏ ‏الحرارة؛ الزمن المسموح به ‎bli‏ تركيز الجزيئات غير الخاصة (مثلاء ‎albumin‏ مصلء ‎«(sd casein‏ إلخ. هناك شروط ارتباط تمثيلية مذكورة في الأمثلة أدناه. ‎YAER‏

يتضمن المصطلح 'مضاد ‎GDF8‏ خاص ‎"(specific 0018 antagonist)‏ أو ‎his‏ 01178 خاص ‎GDF8 inhibitor)‏ عقك»مه)" أي عامل قادر على تثبيط» تقليل و/أو معادلة نشاط؛ إظهار؛ تصنيع؛ أو إفراز 0018 لكنه لا يشبط بدرجة ملحوظة؛ يقلل و/أو يعادل نشاط؛ إظهار» تصنيع؛ أو إفراز ‎proteins‏ أخرى؛ ‎Nia‏ من عائلة 2067-8 الفائق» ‎BMP11 ie‏ © تتضمن تلك المثبطات ‎Glia‏ كبيرة وجزيئات صغيرق ‎«proteins Nia‏ وطف ‎«peptides‏ ‏مماثلات ‎oligonucleotides «ribozymes «siRNA «peptide‏ مضادة للإحساس؛ ‎RNA‏ ‏مزدوج الشريط» وجزيئات صغيرة أخرى؛ تثبط بصفة خاصة نشاط ‎.GDF-8‏ يقال أن تلك المثبطات 'تعارض ‎(antagonize)‏ بصفة خاصة ‎Mie)‏ "تثبط (0أطانطد)"؛ 'تنقص ‎"(decrease)‏ ‏أو 'تقلل ‎"(reduce)‏ أو ‎doled’‏ (©2نلة0600)") نشاط ‎GDF-8‏ الحيوي. إن مثبط ‎GDF-8‏ سوف ‎٠‏ يثبط أو يعادل أو يقلل نشاط حيوي واحد على الأقل يخص 0017-8؛ ‎Jia‏ نشاط فسيولوجي؛ منظم للنمو؛ أو مولد للشكل مصاحب ‎GDF-8 protein‏ نشط. على سبيل المثال؛ فإن ‎GDF-8‏ ‏هو منظم سلبي ‎gail‏ عضلة هيكلية. يمكن لمثبط ‎GDF-8‏ أن يزيد كتلة عضلة؛ يزيد قوة عضلة؛ يضبط مستويات ‎enzymes‏ خاصة بعضلة؛ يثير انقسام خلية عضلية أولية؛ يضبط ‎WA cls‏ دهن أولية إلى خلايا دهنية؛ يقلل تراكم الدهن؛ يقلل مستويات ‎triglyceride‏ ‎١‏ المصل؛ يقلل مستويات ‎cholesterol‏ المصل»؛ يضبط أيض ‎glucose‏ و/أو يقلل ارتفاع ضغط الدم. يستخدم مصطلح 'معالجة ‎(treatment)‏ هنا تبادليًا مع المصطلح "طريقة علاجية ‎"(therapeutic method)‏ ويشير إلى كل من معالجة وإجراءات وقائية/ حامية. يعرف المصطلح معالجة ‎Lad‏ بأنه القدرة على تحسين؛ علاج أو منع اضطراب. قد يتضمن الأفراد المحتاجين ‎٠‏ للمعالجة أشخاص لديهم بالفعل اضطراب طبي معين بالإضافة إلى الأشخاص المعرضين للإصابة بالاضطراب في النهاية (أي؛ هؤلاء المحتاجين إجراءات واقية). إن ممارسة الاختراع الحالي تستعمل؛ ما لم يشر خلاف هذاء تقنيات تقليدية للعلم الحيوي الخاص بالجزيئات؛ المعلم الحيوي الخاص بالجراثيم؛ ‎DNA‏ مخلق؛ وعلم المناعة؛ ‎Ally‏ تدخل ضمن المهارة الفنية. يتم بالكامل شرح هذه التقنيات في الأدبيات. انظر مثلاء ‎Sambrook, et al., Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition (1 989); Yo‏ ‎DNA Cloning, Volumes I And II (D.

N Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis‏ ‎(M.

J.

Gait ed., 1984); Nucleic Acid Hybridization (B.

D.

Hames & S.

J.

Higgins‏

و ‎eds. 1984); Transcription And Translation (B.

D.

Hames & S.

J.

Higgins eds. 1984);‏ ‎Animal Cell Culture (R.

I.

Freshney ed. 1986); Immobilized Cells And Enzymes‏ ‎(IRL Press, 1986); B.

Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the‏ ‎series, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc.); Gene Transfer Vectors For‏ ‎Mammalian Cells (J.

H.

Miller and M.

P.

Calos eds. 1987, Cold Spring Harbor °‏ ‎Laboratory), Methods in Enzymology Vol. 154 and Vol. 155 (Wu and Grossman,‏ ‎and Wu, eds., respectively), Mayer and Walker, eds. (1 987), Immunochemical‏ ‎Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London), Scopes, (1987),‏ ‎Protein Purification: Principles And Practice, Second Edition (Springer-Verlag,‏ ‎N.Y.), and Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I IV (D.

M.

Weirand ٠‏ ‎C.

C.

Blackwell eds. (1986).‏ ‎GDF8 add epitopes‏ ومضاداته تخطيط 06م باستخدام مضادات أجسام 8 خاصة و ‎amino acid peptides ١١‏ متراكبة من ‎GDF8‏ آدمي يظهر 5 مختارة تخص 60178 التي قد تستهدف المعارضة ‎GDF Ve‏ خاصة (مثال ؛-7). على أساس هذا البحث؛ تعرف © ‎epitope(s)‏ مستقلة تخص 8. يوفر الاختراع الحالي هذه 5 (متضمنة مماثلات ‎peptide‏ منها)؛ ‎polynucleotides «epitopes iS polynucleotides‏ تثبيطية لهاء ومضادات أجسام متعلقة بها كمضادات خاصة بنشاط ‎.GDF8‏ ‏8 تخص ‎GDF8‏ ومماثلات ‎Peptide‏ منها ‎Ye‏ يوفر الاختراع الحالي 58 جديدة معزولة ومنتقاة مماثلة إلى ‎cepitopes‏ والتي قد تتميز بيولوجيا بأنها تخص ‎(GDF8‏ وبذلك؛ يشار ‎Lea)‏ هنا بأنها ‎epitope(s)‏ يخص (تخص) 8. يعد جزء من الاختراع أن مماثلات ‎peptide‏ لهذه ‎epitopes‏ خاصة 8 قد تستخدم كمضادات ‎«GDF8‏ أي المعارضة نشاط 0018؛ ‎Mia‏ ارتباط ‎GDF‏ مع مستقبله. على سبيل المثتال ¢ يوفر الاختراع ‎polynucleotides‏ منتقاة ومعزولة تشفر 0 مجالات ‎YO‏ سيطرة ربط تخص 60178 (التي قد تتضمن مواقع ارتباط مستقبل ‎ALK4 [ALK4‏ من 8 ) والتي قد تعمل كمضادات مستقبل ‎[GDF8‏ مماثلات ‎cpeptide‏ يشار إليها هنا ‎«“GE4” «“GE3” «“GE2” «“GE1”‏ و062557». قد يشتمل ‎nucleic acid‏ طبقا للاختراع علض

م الحالي على ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ وقد يخلق ‎WS‏ أو جزئيا. تشتمل الإشارة إلى ترتيب ‎nucleotide‏ ‏كما هو مذكور هنا على جزيئات ‎DNA‏ مع الترتيبات المخصصة أو مكافئات جينومية ‎ie)‏ ‏ترتيبات تكميلية)؛ بالإضافة إلى جزيئات ‎RNA‏ مع الترتيبات المخصصة التي تستبدل فيها ‎T‏ ‏مع لآ؛ ما لم يحدد السياق غير ذلك. إن ترتيبات ‎DNA‏ مفضلة للاختراع تتضمن ترتيبات ‎٠‏ جينومية ‎cDNA g‏ وترتيبات ‎DNA‏ مخلقة كيميائيا. تذكر لاحقا ترتيبات ‎nucleotide‏ من ‎GE5 5 «GE4 «GE3 «GE2 «GE1 iii cDNAs‏ آدمية؛ المعروفة بأنها ‎cDNA‏ آدميء كتعريفات الترتيب أرقام: ‎Yo oF‏ 4 و11 على الترتيب. إن ‎polynucleotides‏ من | لاختراع الحالي تتضمن أيضا ‎polynucleotides‏ تتهجن تحت شروط صارمة إلى ‎polynucleotides‏ لها و/أو متكون أساسيا من ترتيبات ‎nucleotide‏ ‎٠‏ المذكورة كتعريفات الترتيب أرقام نك قف اك ‎ARNE‏ أو تكملاتهاء و/أو تشفر ‎polypeptides‏ ‏التي تحتفظ بالنشاط الحيوي الجوهري من 0121» ‎«GE3 (GE2‏ 084؛ ‎«GES sl‏ على الترتيب. إن 085 من الاختراع الحالي تتضمن أيضا أقسام مستمرة من ترتيبات ‎nucleotide‏ المذكورة لاحقا كتعريفات ‎afi ll‏ أرقام ‎YoY‏ 9 و١١‏ مشتملة على الأقل على ‎nucleotides VY‏ متعاقبة. ‎Vo‏ تذكر لاحقا ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎GES «GE4 083 «GE2 «GEl‏ آدمية ‎A Biles polypeptides‏ كتعريفات الترتيب أرقام: ‎٠١ A ef‏ و17 على الترتيب. إن ‎(a polypeptides‏ الاختراع الحالي تتضمن أيضا ‎aw polypeptides‏ ترتيب ‎amino acid‏ له و/أو متكون أساسيا من أقسام مستمرة من أي من الترتّيبات المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام :4 1 6 ‎٠١‏ و17 مشتملة على الأقل على § ‎amino acids‏ متعاقبة. إن ‎polypeptides ٠‏ للاختراع تتضمن أيضا أي من الترتيبات المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام ‎(VY 9 ٠١ cA Tet:‏ متضمنة أقسام مستمرةٍ منهاء حيث يحل واحد أو أكثر من ‎L-amino acids‏ محل ‎D-amino acids‏ المقابلة الخاصة بها. إن ‎polypeptides‏ للاختراع الحالي تتضمن أيضا أجزاء نشطة من تعريفات الترتيب أرقام: 64 2 8» ‎٠١‏ و17 أي؛ ‎Gh‏ ‏قسم مستمر من أي من الترتيبات المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎٠١ eA oot‏ و7١‏ ‎Ye‏ التي تحتفظ بالنشاط الحيوي الجوهري من ‎«GE4 «GE3 (GE2 (GEl‏ أو ‎GES‏ آدمية كاملة الطول» أي؛ ‎Gh‏ جزء من تعريفات الترتيب أرقام: 4 7 ‎٠١ A‏ و١١‏ والذي يعد مجال سيطرة ربط خاص لأجل 00178 و/أو التي يكون لها ‎peptide‏ مماثل ‎syle‏ عن مضاد خاص لنشاط ‎YAY‏

8. بالإضافة لهذاء قد يكون ‎polypeptide‏ الاختراع هو ‎amide lf 5 acetylated‏ تمت إعاقته باستخدام طرق معروفة جيدا. إن 8 الاختراع الحالي تتضمن أيضاء بالإضافة لهذه ‎polynucleotides‏ الموصوفة أعلاه؛ ‎polynucleotides‏ تشفر أي من ترتيبات ‎amino acid‏ المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام ‎٠١ A Tet‏ و١١‏ وأقسام مستمرة منهاء © وتختلف عن ‎polynucleotides‏ المصدر الآدمي الموصوفة أعلاه فقط بسبب تحلل الشفرة الوراثية المعروفة جيدا. يوفر الاختراع أيضا ‎Ei polynucleotides‏ ومعزولة تشفر ‎peptides‏ مماثلة تم تدويرها إلى ‎epitope(s)‏ تخص ‎«GDF‏ مثلا ‎«GE4 «GE3 «GE2 «GE1‏ و ‎GES‏ إن ترتيبات ‎DNA‏ ‏مفضلة للاختراع تتضمن ترتيبات جينومية 5 ‎cDNA‏ وترتيبات ‎DNA‏ مخلقة كيميائيا. إن أحدى ‎٠‏ المهارات الفنية هي إدراك أن الاختراع الحالي يتضمن أيضا جزيئات أخرى تم تدويرهاء ‎Jie‏ ‎Alles peptides‏ تم تدويرها معتمدة على مجالات سيطرة ربط أخرى تخص 0078. بالإضافة لما سبق؛ قد يصبح ‎peptide‏ مماثل تم تدويره من الاختراع ‎acetylated‏ و/أو ‎amide‏ تمت إعاقته باستخدام طرق معروفة جيدا. مضادات أجسام تخص 011:8 ‎Vo‏ يوفر الشرح الحالي مضادات أجسام جديدة ‎ie)‏ أجزاء مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد) ‎Jeli‏ بينيا بصفة خاصة مع 00178. إن تجسيدات توضيحية غير مقيدة لمضادات الأجسام هذه تسمى 81622. لدى مضادات الأجسام للاختراع سمات مميزة فريدة ومفيدة. ‎Yl‏ تكون مضادات الأجسام هذه قادرة على ربط 6118 ناضج بانجذاب كبير (مثال "). ثانياء تتفاعل بينيا مضادات الأجسام المعلنة مع ‎GDF8‏ بصفة ‎dala‏ أي؛ لا ترتبط ‎٠‏ مضادات الأجسام للاختراع بانجذاب كبير مع أعضاء أخرى من العائلة الفائقة ‎(TGF-B‏ مثلاء 71 (مثال ‎L(Y‏ ثالثاء إن مضادات الأجسام للاختراع تثبط نشاط 6018 في المعمل وفي الجسم الحي كما هو موضح (مثال ‎(YF‏ رابعاء إن مضادات الأجسام المعلنة قد تثبط نشاط 8 المصاحب للتنظيم السالب لكتلة عضلة هيكلية وكثافة العظم (مثال 3). في ‎asl‏ التجسيدات؛ إن مضادات الأجسام المعلنة هنا قادرة بصفة خاصة على التفاعل ‎YO‏ بينيا مع ‎«sl ¢GDF8‏ يتم تصور أن مضادات الأجسام لن تتفاعل بصورة شديدة مع ‎proteins‏ ‏أخرى؛ على سبيل المثال؛ تلك المضادات المنتمية إلى العائلة الفائقة ‎TGF-B‏ مثل ‎BMP11‏ ‎cactivin‏ مادة تثبط ‎cmullerian‏ عامل مغذي عصبي مشتق من خلية دبقية؛ أو عوامل النمو ‎YALE‏

والتباين بخلاف ‎.GDF8‏ في أحد التجسيدات غير المقيدة للاختراع؛ إن مضاد جسم ‎GDF8‏ أو 0 ارتباط ‎alias alge‏ خاص للاختراع يربط 6018 بأفضلية تصل لأكثر من ه-١٠‏ أضعاف عن ربطه لأجل 1. في أحد التجسيدات غير المقيدة للاختراع؛ إن مضاد جسم مضاد 0018 أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد خاص للاختراع يربط 0018 بأفضلية تصل © لأكثر من ‎٠00١-٠١‏ ضعف عن ربطه لأجل 1. في تجسيد غير مقيد للاختراع إن مضاد جسم مضاد ‎GDF‏ أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد خاص ذا أهمية يربط 01:78 بأفضلية تصل لأكثر من ‎٠٠٠١-٠١٠١‏ عن ربطه لأجل 814011. في تجسيد ‎AT‏ إن مضاد جسم مضاد ‎GDF8‏ أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد خاص للاختراع يرتبط مع ‎epitope(s)‏ مع ‎«GDF8‏ متضمنة تلك الموصوفة هنا (مثلاء ‎epitope(s)‏ تخص 0118 و/أو مكونة أساسيا من ‎٠‏ ترتيب ‎amino acid‏ المذكور لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: 4» 1 8» ‎٠١‏ و١‏ أو أجزاء نشطة منها). في أحد تجسيدات ‎op HAY)‏ تتفاعل بينيا مضادات الأجسام المتصورة بصفة خاصة مع موقع ارتباط ‎JALKS‏ 4 متوقع من ‎GDF8‏ ناضج ‎epitopes «Jia‏ 017178 مع ترتيب ‎amino acid‏ مذكور لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎ct‏ 1 أو 8. سوف يدرك صاحب المهارة العادية في الفن أن مضادات الأجسام للاختراع ‎V0‏ قد تستخدم الكشف عن؛ قياس؛ وتثبيط ‎proteins‏ 0018 المشتقة من أنوا ع عديدة؛ مثلاء تلك الموصوفة في المواصفة الحالية. يتحدد التعريف بالنسبة المئوية بواسطة حسابات اصطفاف قياسية ‎Basic Local Alignment Tool (BLAST) Mis‏ الموصوف في )215:403-10 ‎«Altschul et al. ((1990) J.

Mol Biol.‏ أو حساب )48:444-53 ‎lus of Needleman et al. ((1970) J.

Mol.

Biol.‏ ‎Meyers et al. ((1988) Comput.

Appl.

Biosci. 4:11-17) ٠‏ بصفة ‎(dale‏ يمكن استخدام أجزاء مضادات الأجسام أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد من الاختراع مع أي ‎protein‏ يحتفظ بالنشاط الحيوي الجوهري من 06118 ويشمل ترتيب ‎amino acid‏ مماثل على الأقل بنسبة تقريبا ‎(Ae 860 Ve‏ 7495 أو أكثر مع أي ترتيب 00 بف ‎(Te‏ نكف ‎amino ٠١ of ٠١‏ ‎diana acids‏ على الأقل لشكل ناضج من 00178 المذكور لاحقا كتعريف الترتيب رقم: ‎.١‏ ‎Yo‏ تكون مضادات الأجسام السليمة؛ المعروفة أيضا بأنها ‎globulins‏ مناعية؛ عبارة عن ‎tetrameric glycosylated proteins‏ نموذجيا مكونة من سلسلتين خفيفتين (1) لكل منهما ‎Yo‏ ‏كيلودالتون تقريباء وسلسلتين ثقيلتين ‎(H)‏ لكل منهما ‎٠٠‏ كيلودالتون تقريبا. هناك نوعان سلسلة 5م17 amino acid ‏في مضادات الأجسام . بالاعتماد على ترتيب‎ kappa y lambda ‏يسميان‎ (Adis

D (A ‏المناعية إلى © فئات رئيسية:‎ globulins ‏تصنف‎ Aldi ‏لمجال سيطرة ثابت السلاسل‎ 1:01 Nie ‏وقد يقسم العديد منها إضافيا إلى فئات فرعية (أنواع مماثلة)؛‎ My © <E (V) ‏تتكون كل سلسلة خفيفة من مجال سيطرة متغير‎ IgA2 5 IgA1 1804 1603 IgG2

V ‏تتكون كل سلسلة ثقيلة من مجال سيطرةٍ‎ .)©1( (C) ‏طرفي-17 ومجال سيطرة ثابت‎ (VI) ©

CH ‏ومنطقة مفصلة. إن مجال سيطرة‎ «(CHs) © ‏أو ؛ مجالات سيطرة‎ ¥ ((VH) ‏طرفي-11‎ ‏من ؛ مناطق من ترتيبات‎ VL VH ‏سيطرة‎ Mae ‏يسمى 0111. يتكون‎ VH ‏الأكثر قربا إلى‎ ‏التي تشكل الدعامة لثلاثة‎ ((FR4 «FR3 ‏12؛‎ «FR1) ‏محمية نسبيا تسمى مناطق الإطار‎ ‏على‎ CDRs ‏تحتوي‎ (CDRs ‏مناطق من ترتيبات متغيرة بدرجة مفرطة (مناطق تحديد تكملة؛‎ ‏ارتباط‎ protein sl ‏معظم المتخلفات المسئولة عن التفاعلات البينية الخاصة لمضاد الجسم‎ ٠ ‏طبقا لذلك؛‎ .CDR3 5 «<CDR2 ‏بأنها 00181؛‎ CDRs ‏مولد مضاد مع مولد المضاد. يشار إلى‎ ‏و113؛ بينما يشار إلى مكونات‎ (H2 HI ‏على السلسلة الثقيلة بأنها‎ CDR ‏يشار إلى مكونات‎ ‏أكبر مصدر للتنوع الجزيئي‎ CDR3 ‏على السلسلة الخفيفة بأنها 1 12 و13. تعتبر‎ CDR

Nie (H3 ‏مضاد. يمكن أن تكون‎ Alga ‏ارتباط‎ protein ‏موقع ارتباط مضاد الجسم أو‎ Jah ‏تعرف جيدا في الفن أبنية‎ amino acid 7١ ‏أو أكثر من‎ amino acid ‏قصيرة مثلا كمتخلفي‎ ٠ ‏مناعية. لنظرة عامة على‎ globulins ‏الوحدة الفرعية وهيئات ثلاثية الأبعاد من فئات مختلفة من‎ ‏بناء مضاد الجسم؛ انظر‎

Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Eds. Harlow et al., 1988. «CDR VL «CL «VH «CH Mia ‏سوف يدرك الماهر في الفن أن كل بناء وحدة فرعية؛‎ ٠ ‏يشتمل على أجزاء نشطة. على سبيل المثال؛ قد تتكون الأجزاء النشطة من‎ FR ‏و/أو بناء‎ ‏المضادء أيء الجزء الذي يربط مولد‎ alga ‏تربط‎ CDR ‏أو وحدة فرعية‎ «VL «VH ‏قسم من‎ المضاد؛ أو قسم من وحدة فرعية ‎CH‏ يرتبط مع و/أو ينشط مستقبل و/أو تكملة ‎Fe‏ ‏إن أمثلة غير مقيدة لأجزاء ارتباط داخلة ضمن المصطلح ‎gia”‏ مضاد جسم | ‎protein‏ ‎Yo‏ ارتباط ‎"alias alge‏ مستخدم هنا تتضمن: ‎)١(‏ جزء ‎(Fab‏ جزء أحادي التكافؤ مكون من مجالات سيطرة ‎(Y) (CHI CL ¢VH «VL‏ جزء ‎F(ab’)2‏ جزء ثنائي التكافؤ يشمل جزأي ‎Fab‏ متصل بواسطة جسر ‎disulfide‏ عند منطقة المفصلة؛ )1( جزء ‎Fd‏ مكون من مجالي م7 oY ‏لطرف مفرد من مضاد‎ VH 3 VL ‏مكون من مجالي سيطرة‎ Fv ‏و0111؛ )£( جزء‎ VH ‏سيطرة‎ ‏معزولة. علاوة على هذاء‎ CDR (1) 5 ‏مكون من مجال سيطرة 1711؛‎ «dAD ‏جسم؛ )©( جزءٍ‎ ‏بجينات منفصلة؛ فإنها قد تتصل‎ «VH 5 VL Fv ‏على الرغم من تشفير مجالي سيطرة الجزء‎ ‏و1711‎ VL ‏مفرد يكون فيها زوج مجالات سيطرة‎ protein ‏تخليقيا بوصلة تخليقية؛ لتخليق سلسلة‎ ‏إن الوصلة الأكثر‎ (scFv) ‏مفردة‎ Fy ‏لتشكيل جزيئات أحادية التكافؤ (المعروفة كسلسلة‎ eo ‏لكن تكون الوصلات الأخرى‎ ؛1٠١-فلختم‎ (GlydSer)3 peptide ‏استخداما وشيوعا هي‎ ‏معروفة أيضا في الفن. يقصد بمضادات أجسام سلسلة مفردة بدخولها أيضا ضمن‎ ‏ارتباط مولد مضاد"؛ أو "جزء يربط مولد مضاد‎ protein ‏المصطلحين "مضاد جسم أو‎ ‏من مضاد الجسم.‎ “(antigen-binding fragment) ‎٠١‏ يتم الحصول على مضادات الأجسام هذه باستخدام تقنيات تقليدية معروفة للمهرة في الفن؛ وتفحص الأجزاء لاستعمالها بنفس الطريقة كمضادات أجسام سليمة. ينتج تنوع في مضاد الجسم بواسطة جينات خط جرثومة عديدة تشفر مجالات سيطرة متغيرة وتشكيلة من حوادث جسدية. إن الحوادث الجسدية تتضمن تخليق ‎ahd‏ جين متغير به قطع جين للتنوع ‎(D)‏ ‏والاتصال ([) لصنع مجال سيطرة ‎VH‏ كامل؛ وتخليق جينات متغيرة واتصالية لصنع مجال ‎amino ‏كامل. تكون عملية التخليق ذاتها غير دقيقة؛ مما يؤدي إلى فقد أو إضافة‎ VL ‏سيطرة‎ ٠ ‏الوصلات [(700. تحدث هذه الآليات الخاصة بالتنوع في خلية 3 نامية قبل‎ aie acids ‏التعرض لمولد المضاد. بعد التحفيز المولد للمضاد؛ تخضع جينات مضاد الجسم الظاهر في‎ ‏خلايا 5 إلى عملية طفرية جسدية. بالاعتماد على العدد المقدر من قطع جين خط جرثومة؛‎ ‏عشوائية؛ لما يصل إلى‎ VH-VL ‏يمكن تحقيق التخليق العشوائي لهذه القطع؛ ومزاوجة‎ ‎٠١771.10 ٠‏ مضاد جسم مختلفا ‎(Fundamental Immunology, 3rd ed. (1993), ed. Paul, Raven Press, New York, NY). ‏عند الأخذ في الاعتبار عمليات أخرى تشارك في تنوع مضاد الجسم (مثلا عملية طفرية‎ ‏أو أكثر من مضادات أجسام مختلفة‎ ٠١٠١7١ ‏جسدية)؛ فمن المعتقد تولد‎ (Immunoglobulin Genes, 2nd ed. (1995), eds. Jonio et al., Academic Press, San

Diego, CA). Yo oy ‏بسبب تدخل العديد من العمليات في إنتاج تنوع لمضاد الجسم؛ فمن غير المحتمل أن مضادات‎ ‏الأجسام أحادية النسخ المشتقة بصورة مستقلة لها نفس خصوصية مولد مضاد سوف يكون لها‎ ‏متماثلة.‎ amino acid ‏ترتيبات‎ ‎(GDF8 ‏مضادات أجسام جديدة تتفاعل بينيا بصفة خاصة مع‎ Mall ‏لذلك؛ يوفر الاختراع‎ protein ‏أي؛ مضادات أجسام 0178 خاصة. سوف تكون عموما قطع مضاد الجسم أو‎ 0 ‏عبارة عن تريب سلسلة ثقيلة‎ «CDR ‏أبنية محتوية على‎ lia ‏مضاد من الاختراع؛‎ alse ‏ارتباط‎ ‎CDR ‏مضاد؛ أو جزء نشط منه؛ حيث توضع‎ alse ‏ارتباط‎ protein ‏أو خفيفة لمضاد جسم أو‎ ‏طبيعية الوجود. قد تتحدد أبنية وأماكن مجالات‎ VL 5 VH ‏من‎ CDR ‏عند مكان مقابل إلى‎ ‏باستخدام أنظمة ترقيم معروفة جيدا؛ مثل؛ نظام ترقيم‎ «CDRs Mie (gels globulin ‏سيطرة‎ ‎«Mia ‏إلخ انظر؛‎ «(AbM) Chothia y Kabat ‏اتحاد‎ «Chothia ‏نظام ترقيم‎ Kabat ٠

Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and

Human Services (1991), eds. Kabat et al.; Al-Lazikani et al. (1997) J. Mol. Bio. 273:927-948. ‏جديدة. سوف يكون عموما البناء‎ CDRs ‏لذلك؛ يوفر الاختراع الحالي إضافيا‎ ‏مثل؛ ترتيب سلسلة ثقيلة أو‎ polypeptide ‏للاختراع عبارة عن‎ CDR ‏الذي يحمل‎ 0 ‏ارتباط مولد مضاد أو قسم جوهري منه؛ يكون فيه‎ protein ‏خفيفة لمضاد جسم أو‎ ‏طبيعية الوجود. قد‎ VL 5 VH ‏من مجالات سيطرة‎ CDR ‏عند موضع مقابل إلى‎ CDR ‏موضع‎ ‏مناعي كما هو موصوف في؛ مثلا‎ globulin ‏تتحدد أبنية وأماكن مجالات سيطرة متغيرة‎

Kabat et al., supra and Al-Lazikani et al., supra ‏بصفة‎ Liy ‏ارتباط مولد مضاد 3506 على التفاعل‎ protein ‏قد تنتج جزيئات مضاد جسم أو‎ Ye ‏للاختراع الحالي بطرق معروفة جيدا لهؤلاء المهرة في الفن. على‎ polypeptides ‏خاصة مع‎ ‏سبيل المثال؛ يمكن إنتاج مضادات أجسام أحادية النسخ بتوليد أورام هجيئة طبقا للطرق‎ sala ‏الأورام الهجينة بهذه الطريقة باستخدام طرق قياسية؛ مثل اختبار‎ Baie ‏المعروفة. تفحص‎ ‏لتحديد واحد أو أكثر من‎ (Biacore ‏وتحليل‎ (ELISA) enzyme ‏ماصة مناعية متصلة مع‎ ‏يربط‎ Nic) GDF8 ‏الأورام الهجينة التي تنتج مضاد جسم يتفاعل بينيا بصفة خاصة مع‎ Yo ‏يثبط» يقلل؛ و/أو يعادل) نشاط 0018 واحد على الأقل (مثل؛‎ Sia) ‏و/أو يعارض‎ )8 ‏ارتباط 061088 مع مستقبله أو أحداث إرسال إشارة 06018 لاحقة).‎

YAER of

قد يستخدم ‎GDF8‏ مخلق؛ 06018 طبيعي الوجود»؛ وأجزاء ‎peptide‏ مولدة لمضاد من : 8 كمولد مناعي. يشمل جزء ‎alge peptide‏ لمضاد على 1 ‎amino acids‏ مستمرة على ‎JY‏ ويشمل ‎epitope‏ بحيث إن مضاد جسم ‎alias‏ له يشكل معقد مناعة ‎pala‏ مع 00178. بطريقة مفضلة؛ يشتمل ‎peptide‏ مولد لمضاد على 4 متخلفات ‎amino acids‏ على الأقل. © بالإضافة لما سبق؛ يفضل أن يشتمل جزء ‎peptide‏ مولد لمضاد من ‎GDF8‏ على ‎epitope‏ ‏يخص ‎peptide ic) GDF8‏ له و/أو مكون أساسيا من ترتيب ‎amino acid‏ مذكور لاحقا

كتعريفات الترتيب أرقام: ‎OY ٠١ »8 Ct‏ أو نقل أجزاء نشطة). في أحد تجسيدات الاختراع؛ قد تستخدم ‎polypeptide‏ 06118 كامل الطول كمولد مناعي؛ أو ¢ بصورة بديلة؛ قد تستخدم أجزاء 6 مولدة لمضاد من ‎polypeptide‏ على سبيل ‎٠‏ المثال ؛ قد يكون المولد المناعي عبارة عن ‎epitope‏ خاص ‎GDF8‏ (مثلاء ‎epitope‏ يخص ‎«GDF8‏ و/أو 6 به مضادات أجسام مضادة ‎GDF8‏ خاصة و/أو ‎peptides‏ محاكية موجهة له هي مضادات خاصة لإرسال إشارة 601:8 ‎Oia)‏ واحد أو أكثر من ترتيبات ‎amino‏ ‎acid‏ لتعريفات الترتيب أرقام: ‎VY (Ve A Vet‏ وأجزاء نشطة ‎(Lee‏ و/أو ‎peptide‏ ذي صلة أو ‎peptide‏ تم تدويره. يشتمل ‎peptide‏ مولد لمضاد من ‎polypeptide‏ للاختراع الحالي ‎١‏ على ؛ متخلفات ‎amino acid‏ مستمرة على الأقل ويشمل ‎epitope‏ بحيث إن مضاد جسم مضاد ‎peptide‏ يشكل معقد مناعة خاص مع ع00170©000. بصورة مفضلة؛ يشتمل ‎peptide‏ ‎alge‏ لمضاد مع ؛ متخلفات ‎amino acid‏ على ‎«JY‏ يفضل أكثر 6 متخلفات ‎amino acid‏

على الأقل؛ ويفضل أكثر أيضا 4 متخلفات ‎amino acid‏ على الأقل. كطريقة بديلة لتحضير ‎abs!‏ هجينة تفرز مضاد جسم أحادي النسخ؛ قد يتحدد مضاد جسم ‎٠‏ أحادي النسخ تجاه ‎polypeptide‏ للاختراع الحالي كما يعزل بفحص مكتبة ‎globulin‏ مناعي اتحادي مخلق ‎lie)‏ مكتبة عرض خلية بلعمة لمضاد جسم) مع ‎polypeptide‏ الاختراع الحالي لتنفصل بذلك أعضاء مكتبة ‎globulin‏ مناعي مرتبطة مع ‎polypeptide‏ يعرف جيدا الماهرون في الفن التقنيات والمجموعات المتاحة تجاريا لتوليد وفحص مكتبات عرض خلية بلعمة. علاوة على ذلك؛ هناك في الأدبيات أمثلة لطرق وعوامل كاشفة قادرة بصفة خاصة

‎Yo‏ للاستخدام في توليد وفحص مكتبات عرض مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد. قد تنتج مضادات أجسام وأمصال عديدة النسخ بتحصين كائن مناسب مع ‎(GDF8‏ أشكاله المتباينة؛ و/أو 0 منه؛ ‎«ia‏ مع ‎epitope‏ 610178 خاص من الاختراع الحالي. قد ‎ily‏ ‏انغلا

00 عيار مضاد الجسم في الكائن المحصن خلال فترة زمنية عن طريق تقنيات قياسية؛ مثلا مع ‎«ELISA‏ أو باستخدام 0118 محصن أو ‎protein‏ علامة أخرى (مثل؛ ‎(FLAG‏ عند الرغبة؛ قد تعزل جزيئات مضاد الجسم المضادة ‎polypeptide‏ الاختراع الحالي من الكائن أو أوساط المزرعة وتنقى إضافيا بتقنيات معروفة جيداء مثل تحليل كروماتوجرافي ‎cprotein A‏ للحصول © على جزء ‎IgG‏ ‏بصورة إضافية؛ إن مضادات أجسام مختلطة؛ مكتسبة السمة الآدمية؛ ووحيدة السلسلة مضادة ‎polypeptides‏ الاختراع الحالي؛ مشتملة على أقسام آدمية وغير آدمية؛ قد يتم إنتاجها باستخدام تقنيات ‎DNA‏ مخلق قياسية. قد تنتج أيضا مضادات أجسام مكتسبة السمة الآدمية باستخدام فئران طفرية غير قادرة على إظهار جينات سلسلة تقيلة وخفيفة ‎globulin‏ مناعي ‎٠‏ داخلي ‎Land)‏ لكن يمكنها إظهار جينات سلسلة ‎ALE‏ وخفيفة آدمية. إن جزيئات مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد (التي تتضمن ‎(hal‏ من الاختراع الحالي ‎lia)‏ جزيئات مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد التي تتفاعل بينيا بصفة خاصة مع 60178) تتضمن؛ بدون تحديد؛ مضاد جسم ‎RK22‏ أحادي النسخ؛ أشكاله المتباينة (مثلا أشكال متباينة مكتسبة السمة الآدمية) وأجزاء من ذلك. إن جزيئات مضاد الجسم أو ‎protein ٠‏ ارتباط مولد مضاد للاختراع التي تتفاعل بينيا بصفة خاصة مع 0118 خاصة؛ وبذلك؛ قد تكون هذه الجزيئات من مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد مفيدة في منع أو معالجة اضطراب مصاحبة ‎Nis (GDF8‏ أمراض متعلقة بأيض الجلوكوز؛ غير دهنية؛ عضلية وعظمية. ‎olla)‏ يوفر أيضا الاختراع ‎polynucleotides‏ منتقاة ومعزولة تشفر مناطق مضادات ‎٠‏ أجسام 00178 الخاصة التي قد تعارض نشاط 00178 واحد على الأقل مثلاء 81622 وأشكاله المتباينة. تتضمن ترتيبات ‎DNA‏ منفصلة ترتيبات جينومية؛ ‎DNA 5 «cDNA‏ مخلق كيميائيا . كما هو موصوف أعلاه؛ تشتمل ‎polynucleotides‏ تشفر مناطق مضاد الجسم أى ‎protein‏ ‏ارتباط مولد ‎alias‏ للاختراع على ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ وتكون مخلقة كليا أو جزئيا. إن الإشارة إلى ترتيب ‎nucleotide‏ المذكور هنا تشمل جزيئات ‎DNA‏ بالترتيبات الخاصة أو مكافئاتها ‎٠‏ الجينومية (مثلا؛ ترتيبات تكميلية)؛ بالإضافة إلى ترتيبات ‎RNA‏ بالترتيب الخاص حيث يستبدل ‎T‏ مع ‎LU‏ لم يحدد السياق خلاف ذلك.

إن ترتيبات ‎nucleotide‏ من الاختراع تتضمن تلك الترتيبات التي تشفر مجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة من ‎RK22‏ فأري ‎«Ha ٠‏ ترتيب ‎nucleotide‏ المذكور لاحقا كتعريف الترتيب رقم: ‎VO‏ تتضمن أيضا ترتيبات ‎nucleotide‏ للاختراع تلك الترتيبات التي تشفر مجال سيطرة متغير سلسلة ‎ALS‏ من 81622 فأري؛ ‎«Sie‏ ترتيب ‎nucleotide‏ المذكور لاحقا كتعريف الترتيب رقم: ‎١ ©‏ . تتضمن أيضا ‎polynucleotides‏ الاختراع الحالي ‎polynucleotides‏ تتهجن تحت شروط صارمة إلى ‎polynucleotides‏ لها و/أو مكونة أساسيا من ترتيب (ترتيبات) ‎nucleic acid‏ مذكورة لاحقا جوهريا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎١١‏ و5١‏ وتكملاتهاء و/أو التي تشفر 5 التي تحتفظ بنشاط حيوي جوهري (أي ¢ أجزاء نشطة) من مجالات سيطرة متغيرة من ‎.RK22‏ تتضمن أيضا ‎haa) polynucleotides‏ الحالي أقسام مستمرة من الترتيب ‎٠‏ المذكور لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎VF‏ و5٠؛‏ مشتملة على ‎nucleotides ١١‏ متعاقبة على الأقل. يذكر لاحقا ترتيب ‎amino acid‏ لمجالات سيطرة متغيرة سلسلة خفيفة من ‎RK22‏ فأري كتعريف الترتيب رقم: 16. تذكر لاحقا ترتيبات ‎amino acid‏ لمجالات سيطرة متغيرة سلسلة ثقيلة من ‎RK22‏ فأري كتعريف الترتيب رقم: ‎.٠4‏ يذكر لاحقا ترتيب ‎amino acid‏ من مجالات ‎١‏ سيطرة سلسلة ثقيلة وخفيفة متغيرة مكتسبة السمة الآدمية كتعريفات الترتيب أرقام: ‎OAS 1١‏ على الترتيب. تذكر لاحقا ترتيبات ‎amino acid‏ من ‎CDRs‏ الموجودة ضمن السلاسل الثقيلة من 81222 فأري كتعريفات الترتيب أرقام: 11-14 و77-78. تذكر لاحقا ترتيبات ‎amino‏ ‎acid‏ من ‎CDRS‏ الموجودة ضمن السلاسل الخفيفة من ‎RK22‏ فاري كتعريفات الترتيب أرقام: 1-77 1 و8 ‎.7١-”‏ تتضمن أيضا ‎polypeptides‏ الاختراع الحالي أقسام مستمرة من أي من ‎٠‏ ترتيبات مذكورة لاحقا جوهريا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎Foo OA OY 15 ٠6‏ مشتملة على © ‎amino acids‏ متعاقبة على الأقل . يتضمن ‎polypeptide‏ مفضل للاختراع الحالي أجزاء نشطة كتعريفات الترتيب أرقام: 0164 ‎FeV AA AY AT‏ أي؛ أيّ قسم مستمد من أي ترتيب مذكور لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎STV A AY OTE‏ تحتفظ بالنشاط الحيوي الجوهري لمضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد من الاختراع. ‎Yo‏ بالإضافة لتلك ‎polynucleotides‏ الموصوفة أعلاه؛ يتضمن أيضا الاختراع الحالي 565 ام تشفر ترتيب ‎amino acid‏ مذكور لاحقا جوهريا كتعريفات الترتيب أرقام : ‎Fema 5 VA OY 16 NE‏ أو قسم مستمر من ذلك؛ وتختلف عن ‎polynucleotides‏

YAER

لات لمضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الموصوفة أعلاه فقط بسبب تحلل الشفرةٍ الوراثية المعروف جيدا.

كما هو موصوف أعلاه؛ تحتوي ‎CDRs‏ على معظم المتخلفات المسئولة عن التفاعلات البينية الخاصة مع ‎alse‏ المضاد؛ والموجودة ضمن مجالات السيطرة ‎(VL 5 VH‏ أي؛ مجال © سيطرة متغير سلسلة ثقيلة ومجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة؛ على الترتيب. بالتالي؛ يتوافر مضاد جسم مشتمل على ‎CDR‏ واحدة على الأقل من مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الاختراع» ‎CDR Sie‏ مشتملة على ترتيب ‎amino acid‏ منتقى من ترتيبات ‎amino 40‏ المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎0-١9‏ 32؛ أو أجزاء مضاد جسم أو ‎Jali) protein‏ مولد مضاد نشطة من ذلك؛ والتي تعد مضاد الجسم من الاختراع؛ أي؛ مضاد ‎٠‏ يتفاعل بينيا بصفة خاصة مع 60178 (مثلاء يرتبط مع ‎(GDF8‏ و/أو يعارض بصفة خاصة نشاط 0118. ‎«lA‏ يتضمن تجسيد الاختراع مضادات أجسام محتوية على واحدة أو أكثر من ‎CDRs‏ تشمل ترتيب ‎amino acid‏ منتقى من ترتيب ‎amino acid‏ مذكور لاحقا كتعريفات ‎aii ill‏ أرقام ‎0-٠:‏ أو ترتيب ‎amino acid‏ من الأجزاء النشطة منه. بعد ذلك سوف يدرك الماهر في الفن أن مضادات الأجسام للاختراع تتضمن مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط ‎alge V0‏ مضاد تكون فيه ‎CDRs‏ من سلسلة ‎VL‏ هي واحدة أو أكثر من ‎CDRs‏ لسلاسل مذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: 74-77 ‎«Fo =YA5‏ و/أو تكون ‎CDRs‏ من سلسلة ‎VH‏ هي واحدة أو أكثر من ‎CDRs‏ لسلاسل مذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: 71-146 5 ‎V=Y0‏ ‏قد يكون جزء يربط ‎alge‏ مضاد عبارة عن ‎FV eda‏ متكون من مجالات سيطرة ‎VL VH‏ ‎lll]‏ جزء ‎Fv‏ من ‎RK22‏ قد يشكل مضاد جسم الاختراع؛ بشرط أن يتفاعل بينيا الجزء بصفة ‎٠‏ خاصة مع ‎.GDF8‏ سوف يدرك الماهر في الفن أن أي ‎ha‏ لمضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد محتوي على جزءٍ ‎Fv‏ من 81222 قد يكون أيضا عبارة عن مضاد جسم الاختراع. بالإضافة كما سبق أن أي جزء ‎Fv‏ جزء ‎«scFv‏ جزء ‎Fab‏ أو جزء ‎F@b’)2‏ محتوي على واحدة أو أكثر من ‎CDRs‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيبات ‎amino acid‏ المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام: ‎"0-١9‏ قد يكون أيضا مضاد جسم أو

‎protein Yo‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد الاختراع. تشتمل تجسيدات خاصة للاختراع على مجال سيطرة ‎VH‏ و/أو ‎VL‏ من جزء ‎FV‏ من 2. إن أجزاء مضادات الأجسام من الاختراع الحالي؛ مثلا؛ أجزاء ‎(Fd «F(ab’)2 «Fab‏

‏اد oA ‏طبقا لطرق معروفة جيدا في الفن.‎ RK22 ie ‏وطاهل؛ قد تنتج بانشقاق مضادات الأجسام‎ ‏و7)802 بمعالجة مضادات الأجسام مع‎ Fab ‏على سبيل المثال؛ قد تنتج أجزاء نشطة مناعيا‎ ‏وصزومعم على الترثيب.‎ papain Mis cenzyme

CDRs ‏واحدة أو أكثر من‎ Nic) CDRs ‏تشتمل تجسيدات إضافية على واحدة أو أكثر من‎ ‏من أي مجالات سيطرة 1711 من‎ (YY=Y0 5 71-19 ‏المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام:‎ ٠ ‏(المذكورة لاحقا كتعريفات‎ RK22 ‏من‎ VH ‏مجالات سيطرة‎ Oli) ‏مضاد الجسم المعلن هنا‎ ‏من مضاد الجسم المعلن هنا (مثلاء مجالات‎ VL ‏ومجالات سيطرة‎ )١١7و‎ VE ‏الترتيب أرقام:‎ ‏يشتمل أحد‎ .)١8و‎ ١١6 ‏(المذكورة لاحقا كتعريفات الترتيب أرقام:‎ RK22 ‏من‎ VL ‏سيطرة‎ ‏(المذكورة لاحقا كتعريف الترتيب‎ RK22 ‏من‎ VH ‏التجسيدات على جزء 113 من مجال سيطرة‎ .)١١ ‏رقم:‎ ٠

VH ‏ضمن مجالات سيطرةٍ‎ CDR ‏في جدول ¥ المواضع القريبة لكل‎ mati ‏للملاءمة؛‎ ‎VL ‏جدول ؟‎ ‏(حروف مائلة)‎ ABM ‏(بحروف غير مائلة) أو‎ Kabat ‏لتعريفات‎ Lia ‏القريبة‎ CDR ‏موضع‎ ‏فأري‎ RK22 ‏ضمن مجالات سيطرة متغيرة من مضادات أجسام مكتسبة السمة الآدمية‎ Vo

Wb ern | pester ‏قد تشتمل إضافيا مضادات أجسام معلنة حاليا على مجالات سيطرة ثابتة مضاد جسم أو‎

VL ‏قد يرتبط مجال سيطرة‎ (JU ‏ارتباط مولد مضاد أو أجزاء منها. على سبيل‎ protein protein sl ‏مع مجال سيطرة ثابت سلسلة خفيفة لمضاد جسم‎ C30 hall ‏للاختراع عند نهايته‎ ‏بصورة مماثلة؛ قد‎ «CA ‏أو »0 آدمية؛ يفضل سلسلة‎ CA ‏ارتباط مولد مضاد؛ مثلاء سلسلة‎

يرتبط جزء يربط ‎alge‏ مضاد خاص معتمد على مجال سيطرة ‎VH‏ عند نهايته الطرفية-© مع كل أو جزء من سلسلة ثقيلة ‎globulin‏ مناعي مشتقة من أي نوع مماثل لمضاد الجسم؛ ‎Sia‏ ‎IgM 5 (IGE «IgA «IgG‏ وأي من الفئات الفرعية للنوع المماتل. بصفة خاصة 1801 و1804. في تجسيدات تمثيلية؛ تشتمل مضادات الأجسام على أجزاء طرفية-© لسلاسل ‎ALE‏ وخفيفة من ‎٠‏ 18011 آدمي. من المفهوم ‎cdl‏ بسبب تحلل الشفرة الوراثية؛ تعتبر ترتيبات ‎DNA‏ المندرجة في الوصف المختصر للترتيبات ‎١‏ تمثيلية فقط لأجل ‎nucleic acids‏ تشفر ترتيبات ‎camino acid‏

56م ومضادات أجسام ذات أهمية؛ كما لا تعتبر أمثلة مقيدة. تشتمل تجسيدات خاصة للاختراع على مجال سيطرة ‎VH‏ و/أو ‎VL‏ من جزء ‎Fv‏ من 2. تشتمل تجسيدات إضافية على واحدة أو أكثر من مناطق تحديد تكملة ‎(CDRs)‏ من ‎٠‏ أي من مجالات سيطرة ‎VL VH‏ هذه. يشتمل أحد التجسيدات على جزءٍ 113 من مجال سيطرة 1711 من ‎RK22‏ تصبح مجالات سيطرة ‎VH‏ وآ من الاختراع؛ في تجسيدات خاصة؛ عبارة عن خط جرثومة؛ أي؛ تتغير مناطق الإطار ‎(FRs)‏ لمجالات السيطرة هذه باستخدام تقنيات العلم الحيوي للجزيئات تقليدية لتطابق ترتيبات ‎amino acid‏ المتوافقة من منحنيات جين خط جرثومة آدمي. يعرف هذا أيضا بمضاد جسم خط جرثومة أو مكتسب ‎١‏ السمة الآدمية. في تجسيدات ‎gal‏ تظل ترتيبات الإطار متشعبة من خط الجرثومة. قد تنتج مضادات الأجسام مكتسبة السمة الآدمية باستخدام فئران طفرية قادرة على إظهار جينات سلسلة ثقيلة وخفيفة ‎globulin‏ مناعي داخلي المنشاًء لكنها قادرة على إظهار جينات سلسلة

تقيلة وخفيفة آدمية. يوفر جانب آخر للاختراع طرق للحصول على مجال سيطرةٍ يربط مولد مضاد لمضاد ‎Ye‏ جسم يخص ‎.GDF8‏ سوف يدرك الفني الماهر أن مضادات الأجسام من الاختراع غير مقيدة للترتيبات الخاصة من مجالات سيطرة ‎VL 5 VH‏ كما هو موضح في جدول ؟؛ لكنها تتضمن أيضا أشكال متباينة من هذه الترتيبات التي تحتفظ 5508 ربط ‎alge‏ المضاد. قد تشتق الأشكال المتباينة هذه من الترتيبات المتوافرة باستخدام تقنيات معروفة في الفن. قد تجرى استبدالات ‎camino acid‏ محذوفات؛ أو إضافات سواء في ‎FRs‏ أو ‎.CDRs‏ بينما تجهز مناطق الإطار ‎Yo‏ عادة لتحسين الثبات وتقليل التولد المناعي لمضاد الجسم؛ تجرى تغيرات في ‎CDRs‏ عادة لزيادة انجذاب مضاد الجسم نحو هدفه. تتحدد نموذجيا وتجريبيا تلك التغييرات التي تزيد ‎YA£R‏

Te ‏واختبار مضاد الجسم. قد تجرى تلك التعديلات طبقا لطرق موصوفة‎ CDR ‏الانجذاب بتعديل‎

Ma ‏في؛‎ ‎Antibody Engineering, 2nd ed., ed. Borrebaeck, Oxford University Press, 1995. ‏مضاد (أو أجزاء منها) من‎ alse ‏ارتباط‎ protein of ‏تتضمن أيضا مضادات الجسم‎ cli] ‏الاختراع تلك المضادات التي تتفاعل بينيا بصفة خاصة مع 0018؛ ولها طفرات في مجالات‎ © ‏وخفيفة. من المرغوب في بعض الأحيان أن تجرى عملية طفرية‎ ALE ‏سيطرة ثابتة من سلاسل‎ ‏لأجزاء معينة من مجال السيطرة الثابت ويتم تنشيطها. على سبيل المثال؛ إن الطفرات في‎ ‏مجال السيطرة الثقيل مرغوبة في بعض الأحيان لإنتاج مضادات أجسام لها ارتباط منخفض‎ ‏و/أو تكملته؛ تعرف جيدا في الفن هذه الطفرات. سوف يدرك الماهر‎ (FER) Fo ‏مع مستقبل‎ ‏و11© ضرورية‎ CL ‏في الفن أيضا أن تحديد أي من الأجزاء النشطة من الوحدات الفرعية‎ ٠ ‏سوف‎ JU ‏يجرى على أساس تطبيقها على مضاد جسم الاختراع المستخدم. على سبيل‎ ‏و011 الداخلة في وصلتها تساهمية التكافؤ مع‎ CL ‏تكون الأجزاء النشطة في الوحدات الفرعية‎ ‏بعضها البعض مهمة في توليد مضاد جسم سليم.‎ ‏من مجال سيطرة‎ amino acid ‏وهو شكل متباين لترتيب‎ VH ‏مجال سيطرة‎ gina ‏إن طريقة‎ ‏المذكور هنا تشتمل على خطوة إضافة؛ حذف؛ استبدال أو إقحام واحد أو أكثر من‎ 1711 ١٠ ‏المعلنة حالياء اتحاد اختياريا‎ VH ‏من مجال سيطرةٍ‎ amino acid ‏في ترتيب‎ amino acids ‏واختبار مجال سيطرة‎ (VL ‏وبذلك تزود بواحد أو أكثر من مجالات سيطرة‎ VH ‏لمجال سيطرةٍ‎ ‏و(يفضل) اختبار قدرة‎ «GDF8 ‏أو اتحاد أو اتحادات ,711/71 للتفاعل البيني النوعي مع‎ VL ‏مجال السيطرةٍ الذي يربط مولد المضاد هذا لتضبط واحدة أو أكثر من أنشطة مصاحبة‎ ‏مذكور هنا جوهريا. قد تستخدم طريقة‎ amino acid ‏ترتيب‎ VL ‏قد يكون لمجال سيطرة‎ .00178 | ٠٠ ‏المعلنة هنا‎ VL ‏مماثلة يتحد فيها واحد أو أكثر من الأشكال المتباينة للترتيب من مجال سيطرة‎

VH ‏مع واحد أو أكثر من مجالات سيطرة‎ ‏جانب آخر من الاختراع طريقة لتحضير جزء يربط مولد مضاد يتفاعل بينيا بصفة‎ ig ‏تشفر مجال‎ nucleic acids ‏تشتمل الطريقة: توفير مخزون بادئ من‎ .GDF8 ‏خاصة مع‎

VH ‏مثلاء 0013؛ المراد استبدالها أو مجال سيطرة‎ «CDR ‏التي تتضمن سواء‎ VH ‏سيطرة‎ Yo ‏مانح‎ nucleic acid ‏التي تشفر المنطقة؛ اتحاد المخزون مع‎ «CDR3 «Mis «CDR ‏تتقصها‎ ‏مشتملة على جزء‎ CDR ‏مانح يشفر‎ nucleic acid ‏مانحة من الاختراع (مثلاً؛‎ CDR ‏يشفر‎

١

نشط من تعريف الترتيب رقم: ‎YA AY AT ٠4‏ بحيث يقحم ‎nucleic acid‏ المانح في ‎«CDR3 «Mie «CDR‏ منطقة في المخزون لتوفير مخزون منتج من ‎nucleic acids‏ تشفر مجال سيطرة 711؛ إظهار ‎nucleic acids‏ من مخزون منتج؛ انتقاء جزء يربط مولد مضاد خاص لأجل 38 واسترجاع جزءٍ يربط ‎alge‏ مضاد خاص أو ‎nucleic acid‏ يشفره. مرة ‎٠‏ أخرى؛ قد تستخدم طريقة مماثلة تتحد فيها ‎«VL CDR‏ (مثلاء ‎(L3‏ من الاختراع مع مخزون من ‎nucleic acids‏ تشفر مجال سيطرة ‎VL‏ التي تتضمن سواء ‎CDR‏ المراد استيدالها أو

تتقصها ‎CDR‏ تشفر المنطقة. قد يتم إدخال ترتيب شفري من ‎CDR‏ من الاختراع (مثلاء ‎(CDR3‏ على مخزون مجالات سيطرة متغيرة تنقصها ‎((CDR3 Mia) CDR‏ باستخدام تقنية ‎DNA‏ مخلق. على سبيل المثال؛

‎٠‏ يصف ‎Marks‏ وآخرين (10:779-83 ‎Bio/Technology‏ (1992)) طرق لإنتاج مخزونات لمجالات سيطرة متغيرة لمضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد تستخدم ‎primers Led‏ التوافق موجهة إلى أو بالقرب من النهاية 0 من مساحة مجال السيطرة المتغير في اتحاد مع التوافق مع منطقة الإطار الثالثة من جينات ‎VH‏ آدمي لتوفير مخزون من مجالات سيطرة متغيرة ‎VH‏ تنقصها ‎.CDR3‏ قد يتحد المخزون مع ‎CDR3‏ من مضاد جسم معين.

‎Ve‏ باستخدام تقنيات مماثلة؛ قد تخلط الترتيبات المشتقة من ‎CDR3‏ للاختراع الحالي مع مخزونات من مجالات سيطرة ‎VH‏ أو ‎VL‏ تتقصها 00173؛ وتتحد مجالات سيطرة ‎VH‏ أو ‎VL‏ كاملة مخلطة مع مجال سيطرة ‎VL‏ أو ‎VH‏ قريب لتوفير أجزاء تربط ‎alge‏ مضاد خاصة من الاختراع. قد يتم بعدئذ عرض المخزون في نظام عائل مناسب؛ ‎Jie‏ نظام عرض خلية بلعمة من 92/01047 ‎WO‏ بحيث يمكن انتقاء أجزاء مناسبة تربط ‎alge‏ المضاد.

‎Stemmer ‏تعلن أيضا تقنيات اتحادية أو خاصة بالخلط المتمافل في‎ ٠ ‏لكنه‎ B-lactamase ‏(1994))؛ والذي يصف تقنية فيما يتعلق بجين‎ Nature 370:389-91) ‏يلاحظ أن الطريقة قد تستخدم لتوليد مضادات الأجسام. تكمن هذه الطريقة البديلة الإضافية في‎ ‏للاختراع باستخدام‎ CDR ‏جديدة تحمل ترتيب مشتق من‎ VL ‏أو‎ VH ‏توليد مجالات سيطرة‎ ‏منتقاة لتوليد طفرات ضمن‎ VL ‏و/أو‎ VH ‏التوليد الطفري العشوائي لواحد أو أكثر من جينات‎

‎))1992( Proc.

Natl. ‏وآخرين‎ Gram ‏مجال السيطرة المتغير الكامل. توصف تلك التقنية في‎ Yo ‏عرضة للخطاً.‎ PCR ‏باستخدام‎ Acad Sci.

U.S.A. 89:3576-80) ‏قد تستخدم لتوليد مضادات أجسام جديدة أو أجزاء منها في توجيه‎ gyal ‏تكمن طريقة‎

+4

Barbas ‏تعلن هذه التقنيات في‎ LVL ‏أو‎ VH ‏من جينات‎ CDRs ‏التوليد الطفري إلى‎ ‏وآخرين‎ Schier s (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91:3809-1 3) ‏وآخرين‎ ‎.)1996( J. Mol. Biol. 263:551-67) بصورة مماثلة؛ قد ترقع واحدة؛ اثنتين؛ أو كل ‎CDRs‏ الثلاثة في مخزون من مجالات ‎٠‏ سيطرة 711 أو ‎VL‏ التي تم فحصها بعدئذ لأجل شريك الارتباط النوعي أو أجزاء الارتباط التي تخص ‎.GDF8‏ سوف يشتمل قسم جوهري من مجال سيطرة متغير ‎globulin‏ مناعي على ‎CDRs‏ على الأقل 5« اختيارياء مناطق الإطار المتدخلة الخاصة بها من أجزاء مضاد الجسم المذكورة ‎Lin‏ سوف يتضمن أيضا القسم حوالي ‎٠‏ 725 على الأقل سواء من ‎FRI‏ أو ‎FRA‏ أو كليهما؛ حيث تكون نسبة ‎75٠‏ هي ‎٠‏ 75 طرفية-© من ‎FRI‏ و7590 طرفية-11 من ‎.FR4‏ قد ‎٠‏ تكون المتخلفات الإضافية عند النهاية الطرفية-© أو الطرفية-17 من ‎shall‏ الجوهري لمجال السيطرة المتغير هي تلك المتخلفات غير المصاحبة بصورة طبيعية لمجالات سيطرة متغيرة طبيعية الوجود. على سبيل المثال؛ إن تشييد أجزاء مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الخاصة للاختراع الحالي المصنعة بواسطة تقنيات ‎DNA‏ مخلق قد يؤدي إلى إدخال متخلفات طرفية-11 أو طرفية-0 المشفرة بواسطة وصلات داخلة لتسهيل خطوات النسخ أو ‎٠‏ التطبيق الأخرى. تتضمن خطوات التطبيق الأخرى إدخال وصلات لتوصيل مجالات سيطرة متغيرة من الاختراع مع ترتيبات ‎protein‏ إضافية متضمنة سلاسل ثقيلة ‎globulin‏ مناعي؛ مجالات سيطرة متغيرة أخرى (على سبيل المثال؛ في إنتاج أجسام ثنائية) أو علامات ‎protein‏ كما هو مناقش بمزيد من التفصيل أدناه. على الرغم من أن التجسيدات الموضحة في الأمثلة تشتمل على زوج 'تطابق ‎"(matching)‏ ‎٠‏ من مجالات سيطرة ‎VH‏ أو ‎VL‏ يشتمل أيضا الاختراع على أجزاء ارتباط محتوية على مجال سيطرة متغير واحد؛ مثلاء جزءٍ ‎«dADb‏ مشتق من ترتيبات مجال سيطرةٍ سواء ‎VH‏ أو ‎VL‏ ‏بصفة خاصة مجالات سيطرةٍ 1711. في حالة أي من مجالات سيطرة ربط نوعي سلسلة وحيدة؛ قد تستخدم مجالات السيطرة هذه لتفحص مجالات السيطرة التكميلية القادرة على تشكيل مجال سيطرة يربط مولد مضاد خاص مزدوج مجال السيطرةٍ قادر على ربط ‎.GDF8‏ قد يتحقق ذلك ‎YO‏ بطرق فحص عرض خلية بلعمة باستخدام ما يسمى بطريقة اتحادية ثنائية متدرجة كالمعلنة في؛ ‎WO 92/01047 Nia‏ في هذه ‎gill‏ تستخدم مستعمرةٍ واحدة محتوية على نسخة سلسلة سواء ‎Lol H‏ لتلويث مكتسبة كاملة من النسخ المشفرة لسلسلة أخرى (1 أو ‎(H‏ وينتقى مجال

YAS iy ‏مضاد خاص مزدوج مجال السيطرة طبقا لتقنيات عرض خلية بلعمة؛‎ alga ‏سيطرة ناتج يربط‎ ‏وآخرين» أعلاه.‎ Marks ‏في‎ Lad ‏الموصوف في ذلك المرجع. يعلن عن هذه التقنية‎ Jie ‏إشعاعية؛ عقاقير؛ جزيئات‎ nuclides ‏قد تقترن مضادات الأجسام بطرق كيميائية مع‎

CDRs ‏التحام مشتملة على واحدة أو أكثر من‎ proteins ‏عيانية؛ أو عوامل أخرىء وقد تصبح‎ ‏من الاختراع.‎ ©

VH-VL ‏ارتباط مولد مضاد على زوج‎ protein ‏التحام لمضاد جسم أو‎ protein ‏يحتوي‎ ‏وحيدة.‎ polypeptide ‏آخر كسلسلة‎ proteins (VH sale) ‏تخلق فيه واحدة من هذه السلاسل‎ ‏تختلف هذه الأنواع من المنتجات عن مضادات الأجسام في أن لها عموما عنصر وظيفي‎ ‏إضافي؛ (مثلا؛ الجزء النشط من جزيء صغير أو سمة بنائية جزيئية رئيسية من جزيء عياني‎ ‏مقترن أو ملتحم).‎ ٠ ‏الموضح أعلاه؛ قد‎ amino acid ‏بالإضافة إلى التغييرات المجارة على ترتيب‎ ‏أو‎ albumin ‏أو متصلة مع‎ «pegylated «glycosylated ‏لأجسام هي‎ ١ ‏تكون مضادات‎ ‏لأجسام المعلنة حاليا‎ ١ ‏على سبيل المثال؛ قد تتصل مضادات‎ .nonproteinaceous polymer «polyethylene glycol «ix ¢non-proteinaceous polymers ‏مع واحد من تشكيلة‎ ‏لأجسام؛ مثلاء‎ ١ ‏قد تعدل كيميائيا مضادات‎ .polyoxyalkylenes ‏أو‎ cpolypropylene glycol ٠ ‏تعرف في الفن‎ polymer ‏لزيادة عمر نصف التدوير الخاص بها بالاقتران التساهمي مع‎ .peptides ‏تمثيلية؛ وطرق اتصالها مع‎ 358 ‏مضاد بأن يكون له‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏قد يعدل مضاد الجسم أو‎ (gral ‏في تجسيدات‎ ‏لأصلي 0 البدائي). كما‎ | glycosylation ‏معدل (أي؛ بالنسبة إلى نمط‎ glycosylation ‏نمط‎ ‎carbohydrate ‏يعني "معدل (166:60)" وجود واحد أو أكثر من أجزاء‎ (Lia ‏هو مستخدم‎ ٠ ‏مضاف إلى مضاد الجسم‎ glycosylation ‏محذوف؛ و/أو وجود واحد أو أكثر من مواقع‎ ‏بطرق‎ Lilla ‏إلى مضادات الأجسام المعلنة‎ glycosylation ‏الأصلي. تتحقق إضافة مواقع‎ ‏حتى يحتوي على ترتيبات التوافق لموقع‎ amino acid ‏معروفة جيدا لتعديل ترتيب‎ ‏على مضادات‎ carbohydrate ‏«ادا057»راع. تكمن وسيلة أخرى لزيادة عدد من أجزاء‎ ‏في مضاد الجسم.‎ amino acid ‏كيميائيا أو إنزيميا مع متخلفات‎ glycosides ‏لأجسام في اقتران‎ ١ Yo ‏أو إنزيميا‎ Lila ‏الموجودة على مضادات الأجسام‎ carbohydrate ‏قد تتجز إزالة أية أجزاء‎ ‏كما هو معروف في الفن.‎ ‏1م‎

1¢ قد يلحق جزء بمضادات الأجسام من الاختراع أيضا مع علامة قابلة للكشف أو علامة وظيفية مثل 1311 أو ©991؛ والتي قد تتصل بمضادات الأجسام من الاختراع باستخدام الكيمياء التقليدية المعروفة في الفن. تتضمن العلامات أيضا علامات ‎Jie enzyme‏ ‎Jad peroxidase‏ حار أو ‎phosphatase‏ عدصناع:لله. تتضمن العلامات إضافيا أجزاء كيميائية © مثل ‎biotin‏ والتي يمكن الكشف عنها خلال الارتباط مع ‎gia‏ قابل للكشف عنه قريب خاص؛ مثلا ‎avidin‏ معلم. يشتمل مجال الاختراع الحالي على مضادات أجسام تختلف فيها ترتيبات ‎CDR‏ غير جوهريا عن ترتيبات ‎CDR‏ مضادات الأجسام التي تم ‎Gal‏ ‎Lee‏ هنا. تشتمل ‎١‏ لاختلافات غير الجوهرية على التغيرات الصغيرة في ‎camino acid‏ ‎٠‏ مثلء استبدالات واحد أو ‎Bl‏ من أي خمسة ‎amino acid‏ ترتيب «00. بصورة نموذجية؛ يستبدل ‎amino acid‏ محل ‎amino acid‏ مناسب له شحنة ‎(ables‏ ‏رهاب ‎ela‏ خواص كيميائية فراغية ‎ye SLA Blea‏ هذه الاستبدالات ضمن مهارات أي من العاملين في الفن. يمكن تحسين مناطق الإطار البنائي ‎(FRs)‏ ‏بصورة أكثر فاعلية من ‎CDRs‏ دون التأثير المعارض على خواص ارتباط أي ‎V0‏ مضاد جسم. تشتمل التغيرات إلى ‎(FRs‏ دون تحديد؛ على إكساب السمة الآدمية إطار غير آدمي المنشاً أو التعديل الهندسي لمتخلفات إطار معين والتي تعد مهمة لتوصيل المولد المضاد أو لتثبيت موضع الارتباط؛ مثلاء تغير الصنف أو الصنف الفرعي لمجال سيطرة ثابت؛ تغيير متخلفات ‎acid‏ #قاصتة محدد والذي قد يؤدي إلى تعديل وظيفة الاستجابة مثل ارتباط مستقبل ‎Fo‏ (مثلاء ‎Lund et al.‏ ‎J. Immunol. 147:2657-62; Morgan et al. (1995) Immunology 86:319-24( ٠‏ )1991(« أو تغيير الأنواع التي يتم منها اشتقاق مجال السيطرة الثابت. قد تتضمن مضادات الأجسام طفرات في مجال سيطرة 0112 لسلسلة ثقيلة مما يخفض أو يعدل من وظيفة الاستجابة؛ مثل؛ ارتباط مستقبل ‎Fo‏ والتنشيط المكمل. على سبيل ‎(JU)‏ قد تشتمل مضادات الأجسام على طفرات كالموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية أرقام 0774471 5 ‎OTEAY Ts‏ قد تشتمل ‎Yo‏ مضادات الأجسام على طفرات لتثبيت ارتباط ‎disulfide‏ بين السلسلتين الثقيلتين لأجل ‎globulin‏ مناعي؛ ‎Jie‏ الطفرات في منطقة مفصلة 1804 كما هو موضح؛ ‎Nie‏ في .Angal et al. (1993) Mol. Immunol. 30:105-08

YAEL

تشتمل ‎polypeptides‏ ومضادات أجسام الاختراع الحالي على ‎proteins‏ تختلف ‎Wily‏ عن ‎polypeptides‏ ومضادات ‎١‏ لأجسام التي تم الكشف عنهاء مثل؛ التي لها ترتيب معدل مع نفس الخواص الكيميائية الحيوية حيث تتضمن ‎polypeptides‏ ومضادات الأجسام المكتشفة؛ ‎Sia‏ ‏لها تغييرات في ‎amino acids‏ غير الأساسية وظيفيا. تشتمل هذه الجزيئات على أشكال متباينة ‎allelic ©‏ طبيعية الوجود وأشكال ‎Aili‏ مصممة هندسيا بصورة محكمة تحتوي على تغيرات؛ استبدالاتء إحلالات؛ إدخالات؛ أو إزالات. إن تقنيات التغير؛ ‎Jama!‏ الإحلال؛ الإدخال؛

أو الإزالات تكون معروفة جيدا للماهرين في الفن. قد يتم إضافيا إنتاج مضادات أجسام من الاختراع باستخدام حيوانات طفرية غير آدمية محسنة لإنتاج مضادات أجسام آدمية كليا بدلا من مضادات الأجسام داخلية ‎Load)‏ استجابة ‎٠‏ الاختبار التحدي بواسطة مولد مضاد. انظر؛ مثلاء منشور ‎WO 94/02602 PCT‏ يتم إضعاف الجينات الداخلية المشفرة لسلاسل ‎globulin‏ المناعي الثقيلة والخفيفة في عائل غير ‎(ool‏ ‏وتدخل المواقع النشطة المشفرة لأجل ‎globulins‏ المناعية للسلاسل الخفيفة والثقيلة الآدمية في ‎genome‏ العائل. تندمج جينات العائل؛ ‎Sle‏ باستخدام ‎chromosomes‏ صناعية الخميرة تشمل أجزاء ‎DNA‏ الآدمية اللازمة. يتم عندئذ الحصول على حيوان يوفر جميع التحسينات المطلوبة ‎١‏ كذرية بتهجين الحيوانات الطفرية الوسطية التي تتضمن أقل من الإكمال التام للتحسينات. تتضمن أحد تجسيدات هذا الحيوان غير الآدمي على فأرء؛ ويطلق عليه اسم ‎LS XENOMOUSE™‏ هو موضح في منشورات ‎WO 96/34096 3 WO 96/33735 PCT‏ يقوم هذا الحيوان بإنتاج خلايا ‎B‏ تفرز ‎globulins‏ مناعية آدمية كليا. يمكن الحصول على مضادات الأجسام مباشرة من الحيوان بعد التحصين مع مولدات مناعية معينة؛ كتحضير» ‎٠‏ مثلاء لمضاد جسم عديد النسخ؛ أو بصورة بديلة من خلايا ‎B‏ مستبقاة من الحيوان» ‎Fie‏ ‏مضادات الأجسام عديدة النسخ المنتجة للأورام الهجينة. بالإضافة لذلك؛ تستخلص الجينات المشفرة لأجل ‎globulins‏ المناعية مع مجالات سيطرة متغيرة آدمية وتظهر للحصول على مضادات الأجسام مباشرة؛ أو تحسن إضافيا للحصول على مماثلات مضادات أجسام؛ ‎(Jia‏

جزيئات ‎Fv‏ وحيدة السلسلة. ‎Yo‏ بناءا على ذلك؛ يشتمل مصطلح مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد ‎alias‏ كما هو مستخدم هنا على مضادات أجسام سليمة؛ ‎shal‏ مضادات ‎calual‏ مثل؛ أجزاء ‎F(ab%)2 Fab‏ ‎dAb Fd‏ و5677 ومضادات أجسام سليمة وأجزاء طفرية في مجالات السيطرة الثابتة و/ أو 1ّ""

المتغيرة (متل؛ طفرات إنتاج مضادات أجسام مختلطة؛ مكتسبة السمة الآدمية جزئيا أو مكتسبة السمة الآدمية ‎(LIS‏ بالإضافة إلى إنتاج مضادات أجسام لها سمات مطلوبة؛ مثل؛ ارتباط 4 المعزز و/ أو ارتباط ‎FeR‏ المنخفض). حيث تدخل مضادات الأجسام ‎protein sl‏ ارتباط مولد مضاد هذه ضمن مجال الاختراع؛ بشرط أن يتفاعل مضاد الجسم أو ‎protein‏ ‏© ارتباط مولد مضاد بينيا مع ‎-GDF8‏ ‏قد تستخدم جزيئات ارتباط ‎protein‏ الأخرى لضبط نشاط ‎-GDF8‏ إن جزيئات ارتباط مول مضاد هذه تتضمن عقاقير دوائية مناعية ضابطة صغيرة ‎(SMIP™)‏ ‎.(Trubion Pharmaceuticals, Seattle, WA)‏ تكون ‎SMIPs‏ هي ‎polypeptides‏ وحيدة السلسلة تتكون من مجال سيطرة رابط لبناء قرين ‎alge Jie‏ مضاد؛ مستقبل مضاد أو ما شابه؛ ‎polypeptide ٠‏ منطقة مفصلة به واحد أو بدون متخلفات ‎cysteine‏ ومجالات سيطرة ‎CH2‏ ‎globulin CH3‏ مناعي. يتم الكشف عن ‎SMIPs‏ واستخداماتها وتطبيقاتها في؛ مثلا طلب براءة الاختراع الأمريكية المنشور أرقام لكمغدد عقت تمر 6 رك ‎ITT Eq‏ رتك كلنكعادإعمكت ‎YAY.‏ ارم 1 فك تدك إفيك كك اف نإل ‎٠١١/١7781471870 75874- ٠‏ وأعضاء مجموعة براءات الاختراع المتعلقة بنفس الموضع؛ والتي تندمج محتوياتها هنا كمرجع بالكامل. يمكن قياس قدرةٍ ارتباط مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط ‎alias ase‏ الاختراع بالطرق التالية: تحليل ‎(Biacore‏ تحليل اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بواسطة ‎enzyme‏ ‎(ELISA)‏ تحليل البلورات بأشعة #6 تحليل الترتيب وتكوين طفرات مسح كما هو موصوف ‎٠‏ في الأمثلة ‎olf‏ وطرق أخرى معروفة جيدا في الفن. قد يتم قياس قدرة مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد من الاختراع على تثبيط» خفض»؛ و/ أو معادلة واحد أو أكثر من الأنشطة المصاحبة 01178 عن طريق قائمة الطرق غير المحددة التالية: اختبارات قياس انقسام خط خلية معتمد على ‎¢GDF8‏ اختبارات قياس إظهار ‎polypeptides‏ تتوسطها ‎¢GDF8‏ ‏اختبارات قياس نشاط جزيئات الإشارة اللاحقة؛ اختبارات فحص كفاءة مضاد جسم أو ‎protein‏ ‏© ارتباط مولد ‎alias‏ من الاختراع لمنع الاضطرابات العضلية في نموذج حيواني مناسب؛ اختبارات كما هي موصوفة في الأمثلة أدناه؛ واختبارات أخرى معروفة جيدا في الفن.

ب ‎jig‏ جانب آخر من الاختراع طريقة لاختبار مضادات أجسام قادرة على التفاعل البيني مع ‎«GDF8‏ و أو للتثبيط المحدد لواحد أو أكثر من أنشطة . تشتمل الطريقة على: خفض مجموعة مضادات الأجسام مع 0018؛ اختيار مجموعة ثانية من مضادات الأجسام المرتبطة مع 0018؛ اختيار قدرة المجموعة الثانية من مضادات الأجسام لربط أعضاء أخرى © من الطائفة العليا 101-0؛ واختيار مجموعة ثالثة لمضادات الأجسام من المجموعة الثانية لمضادات الأجسام حيث ترتبط المجموعة الثالثة لمضادات الأجسام بانجذاب أقل مع أعضاء أخرى من الطائفة العليا 1017-8. في تجسيد آخر؛ تشتمل الطريقة ‎Lala)‏ على الخطوات: اختبار قدرةٍ المجموعة الثالثة لمضادات أجسام لتثبيط نشاط 610178 واحد على الأقل (مثل منع ارتباط ‎GDF‏ مع مستقبل ‎((GDFS ٠‏ واختيار مضادات الأجسام القادرة على تثبيط واحد أو أكثر من أنشطة 00178 (مثل؛ منع ارتباط ‎GDF8‏ مع مستقبله). تكون مضادات أجسام مضاد 0118 الخاصة بالاختراع مفيدة أيضا في ‎(ie‏ تنقية و/ أو الكشف عن 0018 في مادة (مواد) طافية؛ مادة تحلل خلوية؛ أو على سطح خلية. يمكن استخدام مضادات الأجسام المكتشفة في هذا الاختراع تشخيصيا لرصد مستويات ‎protein‏ ‎٠‏ 60178 كجزء من أجزاء اختبار تحليلي. بصورة إضافية؛ يمكن استخدام مضادات أجسام الاختراع في العلاجات التي تتطلب معادلة و/ أو تثبيط واحد أو أكثر من الاضطرابات المصاحبة 0018؛ مثل؛ علاجات الأمراض التي تصيب العضلات. كما يوفر الاختراع الحالي ‎polynucleotides‏ نقية ومعزولة جديدة و ‎polypeptides‏ متعلقة بمضادات أجسام جديدة موجهة ضد ‎GDF8‏ آأدمي . ‎Jain‏ جينات؛ ‎polypeptides proteins «polynucleotides‏ ‎Ye‏ الخاصة بالاختراع الحالي؛ دون تحديد؛ على مضادات أجسام فأرية ومكتسبة السمة الآدمية إلى ‎RK22 «Jie «GDFS‏ والأشكال المتباينة منها. مضاد ‎Polynucleotides‏ و ‎Polypeptides‏ المخلق يوفر الاختراع الحالي ‎nucleic acids‏ منعزلة ونقية تشفر ‎epitopes‏ تخص ‎«GDF8‏ أو مماثلات ‎peptide‏ أو مضادات أجسام منهاء كمضادات 0118 محددة؛ كما هو موضح أعلاه. ‎Yo‏ تشتمل ‎nucleic acids‏ وفقا للاختراع الحالي على ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ وقد تكون مخلقة كليا أو جزئيا. إن مرجع ترتيب ‎nucleotide‏ كما هو موضح هنا يتضمن جزيئات ‎DNA‏ مع ترتيبات ‎YAEL‏

TA

‏ذات ترتيبات محددة يتم فيها‎ RNA ‏محددة أو مكافئات جينومية؛ بالإضافة إلى جزيئات‎ ‏استبدال 7 محل لا ما لم يتطلب السياق خلاف ذلك.‎ ‏تعريفات‎ (Jha ‏المعزولة الخاصة بالاختراع الحالي؛‎ polynucleotides ‏يمكن استخدام‎ ‏كمجسات ومواد أولية للتهجين لتحديد وعزل‎ ١9و‎ ١ NY) (4 ‏الترتيب رقم: 7 8؛ 7ء‎ ‏لها ترتيبات مطابقة أو مماثلة للمجسات والمواد الأولية التي تشفر‎ nucleic acids © ‏المعزولة‎ polynucleotide ‏المكتشفة. كمثال غير محدد؛ يمكن استخدام‎ polynucleotides lia ‏مضاد في هذه الطريقة؛‎ Age ‏ارتباط‎ protein ‏مضاد جسم أو‎ polynucleotides ‏باستخدام‎ ‏لإنتاج مضادات أجسام محددة مضادة 0018 أو لتحديد خلايا إظهار مضادات الأجسام‎ polymerase ‏على تفاعل سلسلة‎ nucleic acids ‏المذكورة. تشتمل طرق التهجين لتحديد وعزل‎ ‏وتكون معروفة جيدا‎ Northern ‏تهجين في الموضع وتهجين‎ «Southern ‏تهجينات‎ «(PCR)» ‏للماهرين في الفن.‎ ‏تنفذ تفاعلات التهجين تحت شروط الصرامة المختلفة. تشتمل صرامة تفاعل التهجين على‎ ‏إلى بعضهم البعض. بصورة مفضلة؛ يتهجن كل‎ nucleic acid ‏صعوبة تهجين أي جزيثان‎ ‏المقابل له تحت شروط صرامة قليلة؛ والأفضل‎ polynucleotide ‏تهجين إلى‎ polynucleotide ‏شروط صارمة والأفضل أكثر أن تكون شروط صارمة للغاية. يوضح الجدول ؟ أدناه أمثلة‎ ٠ ‏على شروط الصرامة. إن الشروط الصارمة للغاية هي شروط صارمة على الأقل بنفس درجة‎ ‏الشروط (أ) إلى (و)؛ مثلا؛ وتكون الشروط الصارمة هي شروط الصرامة على الأقل بنفس‎ ‏درجة الشروط (ز) إلى (ل)؛ وتكون شروط الصرامة القليلة هي شروط صارمة على الأقل‎ ‏بنفس درجة الشروط (م) إلى (ص).‎ ‏جدول ؟‎ ٠ ‏الشروط | التهجين | طول | درجة حرارة التهجين ومثبت | درجة حرارة الغسل‎ ‏ومثبت الأس‎ ١ ‏التهجين الأس الهيدروجيني‎ ‏الهيدروجيني ؟‎ = ‏أو- 0 مئوية؛‎ 1X SSC ‏منوية؛‎ 15 | 0.< |DNA:DNA| (J) 0.3X SSC | Jo. (AX SSC ‏"؛تمئوية؛‎ mn formamide

YAEL

7 ١ 0" 1 ٍْ ّ' 0 an > EEE formamide 1X SSC ¢TD* 1X SSC ¢TD* DNA:DNA ‏لاأمئوية؛‎ ٠ ‏أو-‎ -172 SSC ‏لاشمنوية؛‎ ١ | o.< | RNARNAT ‏(م)‎ ‎0.3 X SSC 7 Oe 1X SSC 445140 ٠ formamide 1X SSC ¢TF* 1X SSC ¢TF* RNA:RNA $3,401 0 - ‏أو‎ 4X SSC ‏مئوية؛‎ 15 | ©0+< |DNA:DNA| (J) 1X 85C 70. «4X SSC ‏7؛تمنوية؛‎ ‎formamide ‎4X SSC ¢TH* 4X SSC ¢TH* DNA:DNA (3g TY ‏أو-‎ —4X SSC ‏17تمنوية؛‎ | ©.< | RNADDNA | ‏(ط)‎ ‎1X 88C 150 4X SSC ‏تمئوية؛‎ 0 formamide 4X SSC ‏*[1؛‎ 4X SSC ¢TJ* RNA:DNA (ATV — Jf 4X SSC ‏.صخري‎ | o.< | RNARNA | ‏ك)‎ ‎1X 53 /5 6 «4X SSC 4350 « formamide 2X SSC ¢TL* 2X SSC ¢TL* RNA:RNA ‏أو- « مثوية؛‎ —4X SSC ‏.#ثمئوية؛‎ | 0> DNA:DNA (2) 2X SSC 704 6X SSC ‏تمئوية؛‎ ٠ formamide 6X SSC ¢TN* 6X SSC ¢TN* DNA:DNA tdy4iloo ‏أو‎ -432 SSC ‏...م #5تمئوية؛‎ | DNA:DNA ‏(س)‎ ‎2X SSC 704 «6X SSC ‏تمنوية؛‎ 7 formamide 6X SSC ¢«TP* 6X SSC ¢TP* RNA:DNA (Aggies ‏أو-‎ 4x SSC ign. | ou< | RNARNA )ف‎ 2X SSC 70+ 6X SSC ‏تمئوية؛‎ 0 formamide 4X SSC ¢TR* 4X SSC ¢TR* RNA:RNA

فل ‎:١‏ يتوقع أن الطول الهجين لمنطقة (مناطق) مهجنة ‎polynucleotides‏ التهجين. عند تهجين ‎polynucleotide‏ إلى ‎polynucleotide‏ المستهدف من الترتيب المعروف. قد يتم فرض الطول الهجين بأنه طول ‎polynucleotide‏ التهجين. عند تهجين ‎polynucleotides‏ المعروف ترتيبهاء يمكن عندئذ تحديد الطول الهجين باصطفاف ترتيبات ‎polynucleotides‏ وتحديد منطقة 0 أو مناطق من تكملة الترتيب المثلى. ‎I1xSSPE) SSPE :Y‏ هو ‎١.٠١ NaCl‏ جزيني جرامي؛ ‎٠١ NaH;POy‏ مللي جزينئي جرامي» و ‎٠١7١# EDTA‏ مللي ‎As‏ جرامي؛ أس هيدروجيني ‎(Vf‏ يمكن استبداله لأجل ‎1xSSC) SSC‏ هو ‎٠.٠١ NaCl‏ جزيئي جرامي 5 ‎Vo sodium citrate‏ مللي جزيئي جرامي) في التهجين ومثبتات الأس الهيدروجيني للغسيل؛ تجرى الغسلات لمدة 10 دقيقة بعد اكتمال ‎Ye‏ التهجين. ‎Tr‏ - *و1: يجب أن تكون درجة حرارة تهجين الأجزاء المهجنة المتوقع أن يكون طولها أقل من ‎٠‏ © زوج قاعدة في نطاق ‎Augie’) =o‏ وهي درجة ‎ha‏ أقل من درجة حرارة انصهار الهجين ‎(Ty‏ حيث يتحدد ,1 طبقا للمعادلات التالية. بالنسبة للأجزاء المهجنة التي يكون طولها ‎VA‏ زوج قاعدة» ,1 (*مثوية)- ‎١‏ (رقم ‎+A‏ قواعد ‎(T‏ +4 (رقم 6+ قواعد ©). بالنسبة ‎١‏ للأجزاء المهجنة التي يكون طولها بين ‎VA‏ £95 زوج قاعدة؛ ,1 ("مئوية)- ‎١.1 +A).‏ ‎C+G) ٠.4١ +008:187(‏ 7)-(٠٠21/1)؛‏ حيث يمثل ‎N‏ عدد القواعد في الجزءٍ المهجنء ويمثل و11 تركيز ‎sodium ions‏ في مثبت الأس الهيدروجيني التهجين ‎Na’)‏ من أجل ‎x)‏ ‎١# - 060‏ جزيئي جرامي). تتوافر أمثلة إضافية للشروط الصارمة التي يتم تهجين ‎polynucleotide‏ تحتها في ‎Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Chs. 9& 11, Cold Ye‏ ‎Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989), and Ausubel et‏ ‎al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., sections‏ ‎and 6.3-6.4,‏ 2.10 المندمج هنا كمرجع. ‎Yo‏ يمكن استخدام ‎polynucleotides‏ المنعزلة الخاصة بالاختراع ‎Mall‏ كمجسات ومواد أولية للتهجين لتحديد وعزل ‎DNA‏ له ترتيبات تشفر أشكال متباينة ‎polynucleotides Jay allelic‏ المعلنة. إن الأشكال المتباينة ‎allelic‏ أشكال بديلة طبيعية الوجود لأجل ‎polynucleotides‏

١لا‏ المعلنة تشفر ‎polypeptides‏ المماثلة أو التي لها تشابه ملحوظ مع ‎polypeptides‏ التي تشفرها ‎polynucleotides‏ المعلنة. يفضل؛ أن يكون للأشكال المتباينة ‎allelic‏ تمائل ترتيب 798 على الأقل (يفضل أكثر؛ ‎Jala‏ 745 على الأقل؛ الأكثر تفضيلا؛ تماثل 799 على الأقل) مع ‎polynucleotides‏ المعلنة. ° يمكن ‎Lad‏ استخدام ‎polynucleotides‏ المنعزلة الخاصة بالاختراع الحالي كمجسات ومواد أولية للتهجين لتحديد وعزل ‎DNAs‏ لها ترتيبات تشضفر ‎polypeptides‏ مماثئلة لأجل 055 المعلنة. إن هذه المماثلات هي ‎polynucleotides‏ و ‎polypeptides‏ منعزلة من أنوا ع مختلفة عن تلك ‎polypeptides‏ و ‎polynucleotides‏ المعلنة؛ أو في نفس الأنوا ع لكن مع تشابه ترتيب ملحوظ مع ‎polypeptides 5 polynucleotides‏ المعلنة. بصورة مفضلة؛ ‎٠‏ فإن مماثلات ‎polynucleotide‏ لها ‎JAWS‏ ترتقيب من ‎٠‏ 79 على الأقل (يفضل أكثر؛ تماثل ‎lve‏ على الأقل؛ يفضل أكثر ‎Jala‏ 7980 على الأقل) مع ‎polynucleotides‏ المعلنة؛ بينما يكون لمماثلات ‎polypeptide‏ تماثل ترتيب من 770 على الأقل (يفضل أكثر؛ تماثل ‎go‏ ‏على الأقل؛ الأكثر تفضيلا؛ تماثل 7760 على الأقل) مع 0088م©00170/ مضادات الأجسام المعلنة. يفضل أن تكون مماثلات ‎polynucleotides‏ و ‎polypeptides‏ المعلنة هي تلك ‎Ve‏ المماثلات المنعزلة من أنواع ثديية. قد يتم أيضا استخدام ‎polynucleotides‏ المنعزلة من الاختراع الحالي كمجسات ومواد أولية للتهجين لتحديد الخلايا والأنسجة التي ‎epitope(s) edad‏ تخص ‎GDF8‏ أو مضادات أجسام من الاختراع الحالي والشروط التي تظهر تحتها. بصورة إضافية؛ قد يتم استخدام ‎polynucleotides‏ المنعزلة من الاختراع الحالي لتعديل ‎٠٠‏ (أي؛ تعزيزء خفض أو تحسين) إظهار الجينات المقابلة إلى ‎polynucleotides‏ الاختراع الحالي في خلية أو ‎AS‏ حي. إن هذه "الجينات المقابلة" هي ترتيبات ‎DNA‏ جينومي من الاختراع الحالي المنسوخة لإنتاج ‎mRNAs‏ التي يتم منها اشتفاق ‎polynucleotides‏ الاختراع الحالي. قد يتم الإظهار المتغير لترتيبات الاختراع في خلية أو كائن خلال استخدام ‎polynucleotides ٠‏ تثبيطية مختلفة؛ مثل ‎polynucleotides‏ مضادة للإحساس؛ ‎ribozymes‏ ‏التي تربط و/ أو تفصل ‎Mma‏ المنسوخة من جينات الاختراع؛ ‎oligonucleotides‏ تشكيل بناء ‎YAEL‏

‎(DU‏ تستهدف مناطق تنظيمية مستهدفة للجينات 5 ‎RNA‏ التداخلية القصيرة التي تسبب تحلل خاص بترتيب ‎mRNA‏ مستهدف؛ مثلاء ‎Galderisi et al. (1999) J.

Cell.

Physiol. 181:251-57; Sioud (2001) Curr.

Mol.

Med.‏ ‎Knauert and Glazer (2001) Hum.

Mol.

Genet. 10:2243-51; Bass (2001)‏ ;1:575-88 ‎Nature 411:428-29. 8‏ تعتبر ‎polynucleotides‏ التثبيطية هي مضادات من الاختراع. يعرف الماهر في الفن ضرورة توجيه ‎polynucleotides‏ التثبيطية من الاختراع في مقابل ‎epitope(s)‏ تخص ‎GDF8‏ كما هو موضح أعلاه (وغير مضادة لمضاد جسم الاختراع). ترتبط ‎oligonucleotides‏ تشسكيل بناء ثلاثي ‎(TFOs)‏ المذكور ضمن الاختراع ‎٠‏ الحالي مع أخدود كبير من 018 مزدوج له خصوصية كبيرة أو انجذاب كبير ‎.(Knauert and Glazer, supra)‏ يمكن تثبيط إظهار جينات الاختراع الحالي عن طريق استهداف 1705 التكميلية للمناطق التنظيمية للجينات (أي؛ ترتيبات العامل المحث و/ أو العامل المعزز) لتكوين بنيات حلزونية ثلاثية تمنع نسخ الجينات. في أحد تجسيدات الاختراع؛ تكون ‎polynucleotides‏ التثبيطية من الاختراع عبارة عن ‎٠‏ جزيئات ‎RNA‏ تدخلية قصيرة ‎(siRNA)‏ (انظرء ‎Galderisi et al. (1999) J.

Cell «ia‏ ‎(Physiol. 181:251-57; Sioud (2001) Curr.

Mol.

Med. 1:575-88‏ - إن جزيئات ‎siRNA‏ ‏هي جزيئات ‎RNA‏ ثنائية قصيرة تتسبب في انحلال خاص بالترتيب من ‎MRNA‏ المستهدفة. يعرف هذا الانحلال بتدخل ‎(RNAi) RNA‏ (مثلء 411:428-29 ‎.(Bass (2001) Nature‏ مع التحديد ‎Lal)‏ في كائنات حية أدنى؛ تستخدم ‎RNA]‏ بصورة مؤثرة في خلايا ‎٠‏ شيية وقد ظهرت حديثا قدرتها على منع التهاب الكبد المستفحل في الفئران المعالجة مع جزيئات ‎siRNA‏ التي تستهدف ‎(Song et al. (2003) Nature Med. 9:347-51) Fas Mma‏ بالإضافة إلى ذلك؛ تقرر حديثا أن ‎SIRNA‏ الموصلة داخلة الغمد يشبط استجابات الألم في نموذجين (نموذج ألم يحثه معضد ونموذج ألم اعتلال عصبي) في فار ‎.(Dorn et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(5):e49)‏ ‎Yo‏ تشتمل البنية المزدوجة لجزيئات ‎SIRNA‏ الخاصة بالاختراع على واحد أو أكثر من جدائل ‎RNA‏ المتبلمرء أي؛ يمكن تكوين البنية المزدوجة بواسطة شريط ‎RNA‏ ذاتية التكامل فردية تشمل لولب دبوسي أو شريطين تكميليين. قد وجد أن ترتيبات ‎SIRNA‏ مع إدخالات؛ إزالات؛ ‎YAER‏ vy وطفرات نقطة فردية بالنسبة إلى الترتيبات المستهدفة تكون فعالة في تثبيط إظهار ‎till‏ ‏المستهدف )6,506,559 ‎(Fire et al., U.S. Patent No.‏ وفقا ‎«al‏ يفضل أن تشتمل جزيئات ‎siRNA‏ الخاصة بالاختراع على ترتيب ‎nucleotide‏ مع تماثل ترتيب جوهري مع قسم على الأقل من ‎mRNA‏ المقابلة إلى ‎epitope‏ مستهدف يخص 0018 الاختراع. على سبيل المثال؛ © يكون للمنطقة المزدوجة؛ من جزيء ‎siRNA‏ ما يزيد عن 790 من تماثل الترتيب؛ ويفضل ‎٠‏ من تماثل الترتيب ؛ مع قسم من ‎MRNA‏ المقابلة إلى ‎epitope‏ المستهدف الذي يخص ‎.GDFB‏ بصورة بديلة؛ يتحدد تمائل الترتيب الجوهري بقدرة شريط واحد على الأقل من المنطقة المزدوجة لجزيء ‎SIRNA‏ على التهجين إلى قسم على الأقل من ‎epitope‏ مستهدفة تخص 8 تحت شروط صارمة على الأقل ‎Jie‏ الشروط (ز)-(ل) في الجدول ‎oF‏ أعلاه. في ‎٠‏ تجسيد مفضل؛ غير محدد؛ من الاختراع؛ يتهجن جزيء ‎SIRNA‏ إلى قسم على الأقل من ‎epitope‏ مستهدف يخص ‎GDF8‏ تحت شروط ‎Alle‏ الصرامة؛ مثل شروط بنفس صرامة الشروط (أ)-(و) في الجدول ‎oF‏ أعلاه. يصل طول ترتيبات ‎nucleotide‏ المتماثل جوهريا إلى د ذال كل لكت ‎(YO (YY‏ نف بنك ‎(Yeu‏ بنك ‎Ev‏ أو 0 ‎nucleotides‏ على الأقل؛ ويفضل أن تصل إلى 77-19 ‎nucleotides‏ والأفضل أن تصل إلى ‎١9‏ أو ‎YY‏ (Fire, et al., supra + ‏(انظر‎ nucleotides ٠١ ‏التثبيطية اعتمادا على معايير معروفة جيدا في الفن (مثلاء‎ polynucleotides ‏تصمم‎ ‎hus ‏و/ أو باستخدام حلول حسابية معروفة‎ (Elbashir et al. (2001) EMBO J. 20:6877-88 ‏القسم المستهدف من‎ lay ‏(مثل؛ الحلول الحسابية المتوافرة عموما). على سبيل المثال؛ يفضل‎ ‏مع‎ (SIRNA ‏المنطقة المزدوجة من جزيء‎ (Jie) ‏التثبيطي الخاص بالاختراع‎ 01701006 ‏الخاص بالاختراع‎ SIRNA ‏أو ه©؛ يفضل أن يشتمل جزيء‎ (GA (TA ‏(مفضل أكثر)؛‎ AA ٠ ‏على ثلاثة‎ SIRNA ‏يجب ألا يحتوي جزيء‎ 6700-80) GC ‏على ترتيب تصل به نسبة‎

G/Cs ‏على سبعة‎ SIRNA ‏في صف واحد؛ كما يجب ألا يحتوي جزيء‎ nucleotides ‏من نفس‎ ia) ‏مختلطة في صف واحد. اعتمادا على هذه المعايير؛ أو على معايير أخرى معروفة‎ ‏قد يقوم أحد الماهرين في الفن‎ «(Reynolds et al. (2004) Nat. Biotechnol. 22:326-30 ‏على سبيل‎ .GDF8 ‏يخص‎ epitope ‏الاختراع الحالي التي تستهدف‎ siRNA ‏بتصميم جزيئات‎ YO ‏الخاص بالاختراع و/ أو يتكون أساسيا من‎ SIRNA ‏المثال» في أحد التجسيدات؛ يكون لجزيء‎ ‏من تعريف الترتيب‎ nucleotide ‏منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيب‎ nucleotide ‏ترتيب‎

رقم: ؟؛ ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: ©« ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: لاء ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: 4؛ ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎VY‏ وأجزاء منها. في هذا التجسيدء يشتمل جزيء ‎SIRNA‏ الخاص بالاختراع على مكمل ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎oF‏ مكمل ترتيب ‎nucleotide‏ ‏© من تعريف الترتيب رقم: © مكمل ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎oY‏ مكمل ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: 9؛ مكمل ترتيب ‎nucleotide‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎٠١‏ ومكملات أجزاء منها. على سبيل ‎(JE‏ يمكن أن تتولد جزيئات ‎SIRNA‏ من الاختراع الحالي بتقسية اثنين من جزيئات ‎RNA‏ فردي الشريط تكميلية مع بعضهما ‎Fire)‏ وآخرين؛ أعلاه) أو من خلال استخدام ‎٠‏ جزيء 1018 فردي يشبه دبوس شعر ينطوي إلى الخلف فوق بعضه لإنتاج القسم مزدوج الشريط المطلوب (99:6047-52 ‎(Yu et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA‏ قد تكون جزيئات ‎siRNA‏ مخلقة كيميائيا )411:494-98 ‎(Elbashir et al. (2001) Nature‏ أو قد تنتج بواسطة نسخ في المعمل باستخدام جزيئات تركيبية ‎DNA‏ فردي الشريط ‎(Yu et al, supra)‏ بطريقة بديلة؛ يمكن إنتاج جزيئات ‎SIRNA‏ حيويا؛ سواء بصورة مؤقتة ‎(Yu et al., supra; Sui et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:5515-20( ٠‏ أو بدرجة ثابتة )99:1443-48 ‎«(Paddison et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA‏ باستخدام ‎Jib‏ ‏(نواقل) إظهار؛ موضح أدناه؛ يحتوي على ترتيبات ‎SIRNA‏ إحساس ومضادة للإحساس. حديثاء ظهر تقليل لمستويات ‎mRNA‏ مستهدف في خلايا آدمية أولية؛ بطريقة مؤثرة وخاصة بالترتيب» باستخدام نواقل فيروس غدي تظهر ‎RNAS‏ دبوس شعرء التي تعالج إضافيا إلى .(Arts et al. (2003) Genome Res. 13:2325-32) siRNAs | ٠ ‏التثبيطية الخاصة بالاختراع باستخدام تفاعلات التخليق الكيميائي‎ polynucleotides ‏تتكون‎ ‏الذي يشمل إجراءات معروفة جيدا في الفن. يمكن تعديل وصلات‎ enzymatic ‏والربط‎ ‏المخلقة كيميائيا لتعزيز قدرتهم على مقاومة الانحلال بسبب‎ polynucleotides ( nucleotide

RNA ‏تتولد بواسطة‎ Ally ‏تجنب استجابة الخوف العامة في بعض الكائنات الحية‎ nuclease ‏مزدوج؛ و/ أو لزيادة خصوصية ترتيبها. تشتمل تلك التعديلات للوصلات؛ دون تحديد على‎ YO «phosphoroamidate «methylphosphonate «phosphorothioate <b ua) (Galderisi et al, (PNA) peptide nucleic acids <morpholino <boranophosphate ع7 vo supra; Heasman (2002) Dev.

Biol. 243 :209-14; Micklefield (2001) Curr.

Med. .Chem. 8:1157-79) ‏المستمرة منهاء‎ portions ‏المعزولة؛ أو‎ polynucleotides ‏تتصل‎ de ‏كما هو موضح‎ ‏المتعلقة بالاختراع الحالي عمليا في اتجاه إحساس أو مضاد إحساس لترتيب التحكم في‎ ‏التثبيطية (مثل‎ polynucleotides ‏الإظهار و/ أو ترتبط في ناقل إظهار للإظهار المخلق من‎ ٠ ‏الخاصة بالاختراع.‎ (siRNA ‏جزيئات‎ ‏ناقل؛ حافظات نسخ أو إظهار التي‎ plasmids ‏كما يوفر الاختراع الحالي بنيات في شكل‎ ‏واحد على الأقل من الاختراع كما هو موضح أعلاه.‎ nucleic acid ‏تشمل‎ ‏من الاختراع الحالي المعزول مع ترتيب تحكم في إظهار‎ polynucleotide ‏يتصل عمليا‎ ‏أو مضادات أجسام من الاختراع‎ (peptide ‏النوعية (مثل؛ كمماثلات‎ epitopes ‏إنتاج مخلق من‎ ٠ ‏ارتباط‎ protein ‏الحالي. بصورة إضافية يعرف الماهر في الفن إمكانية اتصال مضاد الجسم أو‎ ‏معروفة جيدا‎ nucleotide ‏من الاختراع الحالي مع ترتيبات‎ polynucleotides ‏مولد مضاد يشفر‎ polynucleotide «(Jia ‏تشفر مجال السيطرة الثابت للأنواع المماثلة لمضاد جسم مختلف.‎ ie) ‏الاختراع الذي يشفر مجال السيطرة المتغير لسلسلة خفيفة من الاختراع يرتبط عمليا‎ ‏مع ترتيب‎ ٠١ ‏مذكور كتعريف ترتيب رقم:‎ nucleotide ‏لها ترتيسب‎ (polynucleotides ٠ 2. ‏يشفر مجال السيطرة الثابت (أو مشتقاته) من سلسلة خفيفة » أو سلسلة خفيفة‎ nucleotide ‏أو 120002 كاملة‎ kappa ‏بحيث يتسبب إظهار 55 المتصلة في تكون سلسلة خفيفة‎ ‏بصورة مماثلة؛‎ -GDF8 ‏مع مجال سيطرة متغير يتفاعل بينيا مع و/ أو يثبط تحديدا‎ ‏من الاختراع (يرتبط‎ ALE ‏من الاختراع يشفر مجال سيطرة متغير سلسلة‎ polynucleotide ‏مع‎ ١١ ‏المذكور كتعريف ترتيب رقم:‎ nucleotide ‏له ترتقيب‎ polynucleotide ‏عملياء مثلاء‎ ٠ (Jia ‏(أو مشتقاته)؛‎ ALE ‏يشفر مجال السيطرة الثابت لنوع مماتل لسلسلة‎ nucleotide ‏ترتيب‎ ‏المخلقة هي طرق‎ proteins ‏وطع1. تكون الطرق العامة لإظهار‎ IgG ‏و1 ع1‎ IgM ‏المخلقة في شكل قابل للذوبان للاستخدام في‎ proteins ‏معروفة جيدا في الفن. تظهر هذه‎ .GDF8 ‏علاج اضطرابات مصاحبة مع‎ ‏قد تحمل نواقل الإظهار المخلقة من الاختراع ترتيبات إضافية؛ مثل الترتيبات التي تنظم‎ Yo ‏وجينات‎ chistidine ‏مصادر نسخ)؛ ترتيبات ملحق مثل‎ Sli) Alle ‏نسخ الناقل في خلايا‎ ‏الناقل.‎ Led ‏دلالة قابلة للانتقاء. يسهل جين الدلالة القابلة للانتقاء انتقاء خلايا عائلة يدخل‎ vi ‏يوفر جين الدلالة القابلة للانتقاء نموذجيا مقاومة لعقاقير؛ مثل 0418؛‎ Jud ‏على سبيل‎ ‏على خلية عائلة يدخل فيها الناقل. تشتمل جينات الدلالة‎ cmethotrexate ‏أو‎ hygromycin ‏(للاستخدام في خلايا‎ dihydrofolate reductase (DHFR) ‏القابلة للانتقاء المفضلة على جين‎ .)0418 ‏(لانتقاء‎ neo pally (methotrexate ‏مع انتقاء/ تكبير‎ hy ‏عائلة‎ ‏يمكن اختيار أو تشييد نواقل مناسبة؛ تحتوي على ترتيبات تنظيمية ملائمة؛ تتضمن‎ © ‏ترتيبات محثة؛ ترتيبات إنهاء؛ ترتيبات 001780607121100 ترتيبات معززة؛ جينات دلالة‎ ‏أو فيروسية؛ مثلاء بلعم؛ أو‎ plasmids ‏وترتيبات أخرى حسب الملائمة. قد تكون النواقل‎ ‏حسب الملاثمة. لتفاصيل إضافية انظر مثلاء‎ phagemid

Molecular Cloning: A Laboratory Manual: 2nd ed., Sambrook et al., Cold Spring

Harbor Laboratory Press, 1989. Ye ‏على سبيل‎ nucleic acids ‏يتم تفصيليا وصف تقنيات وبروتوكولات كثيرة معروفة لمعالجة‎ ‏في خلايا‎ DNA ‏تكوين طفري؛ ترتيب؛ إدخال‎ nucleic acid ‏في تحضير بنيات‎ (JU ‏في‎ «proteins ‏وتحليل‎ copa ‏واظهار‎ ‎Current Protocols in Molecular Biology, 2nd ed., Ausubel et al. eds., John Wiley &

Sons, 1992. \o ‏يوفر الاختراع الحالي خلية عائل تشتمل على واحد أو أكثر من البنيات المذكورة أعلاه؛‎ 13 12 (H1) CDR «GDF8 ‏يخص‎ epitope ‏مخلق يشفر أي‎ nucleic acid ‏يشكل‎ «Jw ‏مضاد محدد كما‎ alge ‏مجال سيطرة .771؛ أو جزءٍ ربط‎ ¢VH ‏مجال سيطرة‎ ¢(L3 ‏أو‎ 12 <LI ‏هو موضح هناء جانب من جوانب الاختراع الحالي.‎ ‏من‎ protein ‏بإظهار‎ peptide ‏على طريقة لإنتاج‎ Lad ‏كما يشتمل الاختراع الحالي‎ ٠ ‏المشفر في الخلية العائلة. يتحقق الإظهار عن طريق زرع خلايا عائلة مخلقة‎ nucleic acid ‏تحت شروط ملائمة.‎ nucleic acid ‏تشمل‎ ‎polypeptides ‏يعتبر عدد من خطوط الخلايا هو خلايا عائلة مناسبة للإظهار مخلق من‎ ‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي. تشتمل خطوط الخلايا العائلة الثديية؛ دون تحديد؛ على:‎

LA «CV-1 ‏خلايا‎ 3T3 ‏خلايا‎ (A431 ‏خلايا 1. خلايا‎ «CHO ‏خلايا‎ «COS ‏خلايا‎ Yo

Jurkat LA (HaK ‏خلايا 1937 خلايا‎ (HL-60 LWA 8111621 ‏خلايا‎ (L LDA «Hela

YAER vy ‏بالإضافة إلى سلالات خلايا مشتقة من مزرعة في المعمل لنسيج أولي وازدراعات أولية. تسمح‎ ‏جينومي.‎ DNA ‏من | لاختراع والتي تتكون من‎ polynucleotides ‏هذه الخلايا العائلة باقتران‎ ‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي تخليقيا في‎ polypeptides ‏بصورة بديلةء يمكن إنتاج‎ ‏تكوينات حقيقية النواة دنيا مثل الخميرة أو في تكوين بدائي النواة. تشتمل سلالات الخميرة‎ «Saccharomyces cerevisiae ‏على سلالات‎ (aaah ‏المناسبة بدرجة ممكنة؛ دون‎ ©

Jain ‏كما‎ Candida ‏وسلالات‎ «Kluyveromyces «Schizosaccharomyces pombe «Bacillus subtilis «Escherichia coli ‏السلالات البكتيرية المناسبة بدرجة ممكنة على‎ ‏الخاصة بالاختراع الحالي في‎ polypeptides ‏عند تحضير‎ Salmonella typhimurium 3 ‏أو‎ phosphorylation «Mis ‏خميرة أو بكترياء؛ يكون من الضروري تعديلها بواسطة؛‎ ‏وظيفية. قد تتحقق هذه الارتباطات‎ proteins ‏لمواضع ملائمة؛ للحصول على‎ glycosylation ٠ ‏معروفة جيدا.‎ enzymatic ‏التساهمية باستخدام طرق كيميائية أو‎ ‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي تخليقيا عن طريق‎ polypeptides ‏قد يتم أيضا إنتاج‎ ‏المعزولة من الاختراع الحالي مع ترتيبات التحكم‎ polynucleotides ‏الاتصال الفعلي لأجل‎ ‏المناسبة في واحد أو أكثر من نواقل إظهار حشرة؛ مثل نواقل فيروس عصوي؛ واستخدام نظام‎ ‏متوافرة تجاريا في‎ SIO ‏إظهار خلية حشرة. تكون مواد وطرق أنظمة إظهار فيروس عصوي/‎ ١ .(CA Carlsbad «Invitrogen ‏م تقال‎ 0© kit Jin) ‏شكل مجموعة‎ ‏ومضادات‎ polypeptides ‏بعد الإظهار المخلق في الخلايا العائلة الملائمة؛ يتم تنقية‎ ‏أجسام الاختراع الحالي من وسط مزرعة أو خلاصات خلية باستخدام عملية تنقية معروفة؛ مثل‎ ‏الترشيح الهلامي والتحليل الكروماتوجرافي للتبادل الأيوني. تشتمل التنقية على التحليل‎ ‏ومضادات أجسام الاختراع‎ polypeptides ‏الكروماتوجرافي للانجذاب مع عوامل معروفة لربط‎ ٠ ‏ومضادات أجسام الاختراع‎ polypeptides ‏الحالي. قد يتم أيضا استخدام عمليات التنقية لتنقية‎ ‏من مصدر طبيعي.‎ ‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي‎ polypeptides ‏يتم تخليقيا إظهار‎ Aly ‏بصورة‎ ‏في شكل يسهل التنقية. على سبيل المثال»؛ قد تظهر 5 ا كاندماجات مع‎ 0 «(GST) glutathione-S ‏ناقل‎ enzyme «(MBP) maltose ‏ربط‎ protein ‏مثل‎ proteins ‏؟‎ ‏الاندماج من‎ proteins Any ‏عللامك»«منط. تتوافر تجاريا مجموعات إظهار‎ (TRX) «New England BioLabs (Beverly, MA), Pharmacia (Piscataway, NJ), and Invitrogen ‏تع‎

YA

‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي على أجزاء ملحقة‎ polypeptides ‏على التوالي. قد تشتمل‎ ‏ارتباط مولد‎ protein ‏صغيرة وتحدد بعد ذلك أو تنقى باستخدام مضاد جسم أو‎ epitope ‏من‎ ‏مفضل ومتوافر تجاريا من‎ epitope ‏هو‎ FLAG epitope ‏يعد‎ .epitope ‏مضاد يخص‎ .Eastman Kodak (New Haven, CT) ‏ومضادات أجسام الاختراع الحالي عن طريق تخليق‎ polypeptides ‏يمكن أيضا إنتاج‎ ° ‏كيميائي تقليدي معروف. تعتبر طرق التخليق الكيميائي لأجل 5 ومضادات أجسام‎ polypeptides ‏ا لاختراع الحالي هي طرق معروفة جيدا للماهرين في الفن. قد تحتوي‎ polypeptides ‏ومضادات الأجسام المخلقة كيميائيا على خواص بيولوجية مشتركة مع‎ ‏ومضادات الأجسام النقية طبيعياء وتستخدم لذلك كبدائل مناعية أو نشطة بيولوجيا لأجل‎ ‏ومضادات | لأجسام الطبيعية.‎ polypeptides | ٠ aucleic acids ‏يوفر جانب إضافي من الاختراع الحالي خلية عائلة تشتمل‎ ‏نواقل؛ أو مضادات أجسام وأجزاء منها كما هو موضح هنا. كما يوفر جانب‎ 48 ‏الاختراع في خلية عائلة. قد يتم الإدخال بأي تقنية‎ nucleic acid ‏إضافي طريقة تتضمن إدخال‎ «calcium phosphate ‏تشتمل التقنيات المناسبة على استقيال‎ eukaryotic ‏متاحة. لخلايا‎ ‏الكهربي؛ استقبال حامل الجين من العائل بواسطة جسم دهني‎ dill (DEAE Dextran ٠ ‏مثل؛ فيروس جدري البقر أو؛‎ AT ‏والتحويل باستخدام فيروس ارتجاعي أو فيروس‎ ‏عصوي. للخلايا البكتيرية؛ تشتمل التقنيات المناسبة على تحويل‎ (ug pad ‏لخلايا حشرة؛‎ ‏التثقيب الكهربي والعدوى ببلعم بكتيري.‎ «calcium chloride «nucleic acid ‏من‎ protein ‏عن طريق إنتاج 0 للسماح بإنتاج‎ nucleic acids ‏يتبع إدخال‎ ‏مثلاء بزراعة الخلايا العائلة تحت شروط مناسبة لإظهار الجين. تكون هذه الشروط معروفة‎ ٠ ‏جيدا في الفن.‎ peptide ‏(مثل؛ ممائلات‎ GDF8 ‏تخص‎ epitope(s) ‏تتوافر 5 ام التثبيطية؛‎ ‏مجالات‎ (ala ‏ارتباط مولد مضاد‎ protein ‏و/ أو المولدات المناعية)؛ أجزاء مضاد جسم أو‎ ‏المشفرة والنواقل وفقا‎ nucleic acid ‏وجزيئات‎ «VL ‏سيطرة 1711 5[ أو مجالات سيطرة‎ ‏في شكل‎ Ole ‏معزولة أو نقية؛ من بيئة طبيعية‎ polynucleotides ‏للاختراع؛ وتكون هذه‎ © ‏أو شكل خالي أو خالي جوهريا من‎ nucleic acids ‏متجانس أومنقى جوهريا؛ أو؛ في حالة‎ ‏يض‎

‎nucleic acids‏ أو جينات من مصدر بخلاف الترتيب المشفر لأجل ‎polypeptide‏ مع الوظيفة اللازمة. طرق لكشف وتقدير 61718 في عينات بيولوجية يتعلق الاختراع الحالي بطرق لكشف وتقدير 6117-8 في عينات بيولوجية. في بعض ‎٠‏ التجسيدات؛ تشتمل الطريقة على اختبارات مناعية لكشف وتقدير 6117-8 حر وإجمالي في ‎(uaa‏ دم وبلازما. في أحد الحالات؛ توفر الاختبارات المناعية ‎lily‏ مفيدة كدلالات حيوية من علاجات مضاد 0017-8. بصورة محددة؛ تكون الاختبارات المناعية المكتشفة مفيدة كدلالات تشخيصية/ تنبؤية لنتاج إكلينيكي عند خط قاعدة قبل علاج مضاد ‎ANS (GDF-8‏ على التعرض لعلاجات مضاد ‎AVS (GDF-8‏ على استجابة وكفاءة عقار ‎¢GDF-8 alias‏ ‎٠‏ وكدلالة لاشتراك ‎GDF-8‏ في ‎Alls‏ مرضية معينة أو عملية بيولوجية. بصورة محددة؛ تعمل الطرق على توفير طرق تشخيصية و/ أو تنبؤية لكشف؛ تشخيص أو توقع مرض أو اضطراب مصاحب مع ‎GDF-8‏ في كائنات ثديية مع أو عند مخاطر تطور المرض أو الاضطراب المصاحب مع ‎.GDF-8‏ تكون هذه الطرق مناسبة تحديدا للاستخدام في تقييم ملائمة المرضى الآدميين لاستقبال عوامل ضبط 001-8؛ مثل؛ العوامل التي ترتبط مع ‎(GDF-8 ١٠‏ أو تثبط النشاط البيولوجي من 601-8. في تجسيدات محددة؛ يوفر الاختراع طرق لرصد تطور الأفراد المستقبلين لعوامل ضبط 00748 أو علاجات ‎.GDF-8 alias‏ على سبيل المثال؛ تتوافر طرق لتقدير استجابة الأفراد للعلاج مع عامل ضبط 001-8. لتقدير استجابة الأفراد للعلاج؛ يتم إجراء طرق الاختبار المناعي قبل؛ أثناء؛ وبعد إعطاء عامل ضبط 6117-8. كما يتضمن الاختراع طرق الكشف ‎Ye‏ عن وجود ‎GDF-8‏ في الكائنات الثديية التي تستقبل ‎MY0-029‏ مضاد الجسم العلاجي. في أحد التجسيدات؛ تقوم طرق الاختبار المناعي بالكشف عن ‎GDF-8‏ الحر. على سبيل المثال» يكون ‎GDF-8‏ الحر هو ‎GDF-8‏ غير مرتبط مع ‎proteins‏ ربط ‎GDF-8‏ أو عوامل ضبط 0017-8؛ مثل؛ مضادات أجسام ربط أو معادلة ‎.GDF-8‏ في تجسيد آخر؛ يتضمن الاختراع طرق الكشف عن إجمالي ‎«is «GDF-8‏ 6017-8 الحر وأي ‎GDF-8‏ مرتبط. ‎vo‏ يعتبر الشخص الذي يعاني من أو اضطراب عضلي أو يعاني من خطورة تطوره هو الشخص المرشح للطرق الموضحة هنا. يؤدي تثبيط نشاط ‎GDF-8‏ إلى زيادة ‎AS‏ العضلات في الأفرادء ‎Ley‏ في ذلك الأفراد المصابين بالاضطرابات المتعلقة بالعضلات. يرتبط عدد من ا

Ae ‏هذه الاضطرابات بالنسيج العضلي الضعيف وظيفيا؛ مثل الحثل العضلي؛ التصلب الجانبي‎ ‏الضمور العضلي؛ الضمور العضوي؛ الهشاشة؛ مرض رئوي انسدادي‎ (ALS) ‏الضموري‎ ‏فقدان قوة العضلات؛ الدنف» وأعراض الهزال العضلي بسبب الأمراض‎ ofall ‏احتقاني؛ فشل‎ ‏والحالات الأخرى. علاوة على ذلك؛ يعد الفرد أو الكائن الثديي الراغب في زيادة الكتلة‎ ‏العضلية أو القوة العضلية؛ لزيادة نمو أو كتلة النسيج العضلي في الحيوانات الداجنة؛ هو فرد‎ © ‏مرشح للطريقة الموضحة هنا.‎ ‏كما يورشقح لهذه الطريقة أي فرد يعاني من حالة أو اضطراب‎ ‏متعلق بنسيج دهنيء أيضي؛ أو متعلق بالعظم؛ كما هو موضح ومذكور هنا.‎ ‏تشتمل هذه الاضطرابات والحالات على الاضطابات والحالات المصاحبة‎ «glucose ‏تحمل‎ Cann +7 ‏ا لاستتباب 086عن1ع مثل تطور سكر النوع‎ ٠ ‏المحثة بإصابة رضية؛ مثل‎ insulin ‏مقاومة‎ ((X ‏الأعراض الأيضية (مثل العرض‎ ‏وأمراض الأنسجة الدهنية (مثل السمنة)‎ nitrogen ‏الحروق أو اختلال توازن‎ ‏على سبيل المثال؛‎ (Kim et al., Biochem.

Biophys.

Res.

Comm. 281:902-906 (2001)) ‏ويثبط‎ (1d) ‏بضبط تباين الخلايا الدهنية الناضجة إلى خلايا دهنية‎ GDF-8 ‏يقوم‎ ‏تكون الخلايا الدهنية من خلايا المصدر الأولي المتوسط والخلايا‎ ٠ -(Rebbapragada et al., Mol.

Cell Bio. 23:7230-7242 (2003)) ‏الدهنية الناضجة‎ ‏وفأر ناضج بري النوع‎ GDF-8 ‏يؤدي تراكم الدهون إلى خفض كل من فأر ناقص المناعة‎ ‏نظاميا‎ GDF-8 protein ‏والذي يتم فيه إعطاء‎ (McPherron et ‏ملة‎ J.

Clinical Invest. 109:595-601 (2002); Zimmers et al., Science 296:1486-1488 (2002). Y. ‏يتضح للماهرين في الفن استخدامات أخرى لطرق الاختراع الحالي؛ وتتضح إضافيا‎ ‏بالأمثلة أدناه.‎ ‏الاختبارات المناعية:‎ ‏من نوع ساندويتش تستخدم مضادين‎ ELISA ‏إن الاختبارات المناعية الموصوفة هنا هي‎ ‏يخص‎ GDF-8 ‏على الأقل؛ يتواجد أحدهما كعامل كاشف إمساك‎ GDF-8 alias ‏أجسام‎ vo ‏يكون كلا من مضادين‎ .GDF8 ‏يخص‎ GDF-8 ‏ويتواجد أحدهما كعامل كاشف لكشف‎ GDF-8 ‏الأجسام قادرين على ربط المولدات المضادة 6018 الموجودة في العينات البيولوجية. يتعرف‎

AY

‏يكون مضادين الأجسام قادرين على‎ -BMP-11 ‏عن‎ GDF8 ‏أحد مضادات الأجسام على‎ ‏علاوة على ذلك؛ في تجسيدات محددة؛ تتمكن مضادات الأجسام من‎ .GDF-8 ‏معرفة ربط‎

GDF-8 ‏نشط؛‎ GDF-8 ‏الموجود في أي من الأشكال البيولوجية (مثلء‎ GDF-8 ‏الارتباط مع‎ ‏مرتبط مع 1070-29 مضادات أجسام‎ GDF-8 ‏مصل؛‎ protein ‏مرتبط مع‎ GDF-8 ‏كامن؛‎ ‏مضاد 6017-8 معادلة).‎ © ‏(انظر‎ RK35 ‏في تجسيدات محددة؛ يكون مضاد الجسم المستخدم في الاختبار المعني هو‎ ‏المندمج هنا كمرجع)؛‎ ٠٠١7/00097500 ‏تعريف الترتيب رقم: ١0-7؟ والطلب الأمريكي‎ ‏والذي يعد مضاد جسم أحادي النسخ فأري معزول يرتبط مع 011-8. في بعض التجسيدات؛‎ ‏التي ترتبط مع‎ RK35 ‏يستخدم 81635 كمضاد جسم إمساك. كما يمكن استخدام أجزاء من‎ ‏في طرق الاختراع.‎ 60748 ٠ ‏في تجسيدات محددة؛ يكون مضاد الجسم الثاني المستخدم في الاختبار المعني هو‎ ‏مع‎ RK22 ‏لا يرتبط‎ .GDF-8 ‏مضاد جسم أحادي النسخ فأري معزول يرتبط مع‎ (RK22 ‏كعامل كاشف‎ RK22 ‏كما هو موضح أدناه. في بعض التجسيدات؛ يستخدم‎ (BMP-11 ‏للكشف؛ ويستخدم في بعض التجسيدات كعامل كاشف إمساك. كما يمكن استخدام أجزاء‎ ‏التي ترتبط مع 6017-8 في اختبارات الاختراع.‎ 816222 ٠ ‏في تجسيد آخر؛ تستخدم الاختبارات المناعية من الاختراع الحالي 170-029 مضاد‎ ‏(انظر‎ MY0-029 ‏آدمي. يمكن استخدام‎ 1501 GDF-8 ‏الجسم؛ وهو مضاد جسم مضاد‎ ٠٠١/١٠ 48 ‏تعريف الترتيب رقم: ؟؟ و4 ؟. الطلبات الأمريكية المنشورة‎ ‏في الاختبارات المناعية‎ GDF-8 ‏المندمجة هنا كمرجع) لإخماد كشف‎ ؛)٠٠١‎ ١/١75 £AY ‏للحصول على مستوى خلفية يمكن فصله عن الإشارة المتولدة في غياب 1470-029. يمكن‎ ٠٠ ‏استخدام هذا التجسيد لزيادة حساسية ودقة الاختبارات الكمية.‎ lime alge ‏كما تشتمل مضادات الأجسام المفيدة في طرق الاختراع على أجزاء ربط‎ ‏مضاد‎ alge ‏(ارتباط‎ Fab shal VL ys VH ‏التي تتكون من مجالات سيطرة‎ Fy ‏أجزاء‎ Sie ‏المتصلة تساهميا برابطة‎ VL-CL 3 711-0111 ‏جزء)ء؛ والتي تتكون من مجالات سيطرة‎ ‏بين المناطق الثابتة. لأجزاء ارتباط المولد المضاد المتاحة الأخرى؛ وتوضيح أبنية‎ disulfide Yo ‏مضاد الجسم؛ انظر‎

AY

Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds. Harlow et al., 1988. ‏يشفر‎ phagemid ‏ناقل‎ pCANTAB6 ‏المتحولة فرديا مع‎ E.coli ‏تم إيداع مزارع‎ ‏غير خطية الجراثيم في ؟ أكتوبر 07٠٠7؛ في‎ 5018170-29

American Tissue Culture Collection (ATCC) under respective Deposit Designation °

Numbers PTA-4741. -10801 University Blvd, Manassas, VA 20110, U.S.A ‏يقع محل الإيدا 2 في‎ ‏بعد اتحاد العينة المحتوية على 00178 مع العامل الكاشف للإمساك؛ تزال بالغسل أي‎ ‏تحت‎ GDF-8 ‏مكونات غير مرتبطة؛ وتتصل عندئذ المكونات مع عينة يشتبه في احتوائها على‎ ‏شروط ارتباط ملائمة. بعد الغسل لإزالة أي جزيئات غير مرتبطة؛ يضاف مضاد جسم مضاد‎ ٠ ‏ثان تحت شروط ارتباط مناسبة. يطلق على مضاد الجسم الثاني اسم مضاد جسم‎ 00748 ‏الكشف أو العامل الكاشف. قد يشتمل مضاد جسم الكشف. قد يشتمل مضاد جسم الكشف‎

GDF-8 ‏على علامة بارزة؛ وجزيئات ارتباط تتفاعل مع مضاد جسم الإمساك. لذلك؛ يقوم أي‎ ‏في العينة؛ وعامل كاشف‎ GDF ‏موجود بربط كل من عامل كاشف الإمساك المرتبط مع‎ ‏مضاد جسم الكشف. تزال الجزيئات والمكونات غير المرتبطة عن طريق الغسل. يشير وجود‎ Vo ‏العلامة إلى وجود 0127-8 في العينة البيولوجية.‎ ‏ساندويتش. تكون العينة البيولوجية‎ ELISA ‏بصورة أكثر تحديدا؛ يمكن استخدام طريقة‎ -GDF8 ‏هي عامل كاشف إمساك يخص‎ GDF-8 ‏المحتوية على أو المشتبه في احتوائها على‎ ‏مع العامل الكاشف للإمساك؛ يغسل‎ GDF-8 ‏بعد مدة من التحضين الكافي للسماح بارتباط‎ ‏الطبق (الأطباق) لإزالة المكونات غير المرتبطة ويضاف مكون كشف. تترك هذه الجزيئات‎ Ye ‏عينة إمساك؛ تغسل الأطباق ويتم الكشف عن وجود العلامة باستخدام‎ GDF-8 ‏للتفاعل مع أي‎ ‏طرق معروفة جيدا في الفن.‎ ‏قد يتم توفير العوامل الكاشفة للاختبار الموصوفة أعلاه؛ بما في ذلك الاختبار الحيوي مع‎ ‏مولدات مضادة؛ بالإضافة إلى مضادات الأجسام المقرر تفاعلها مع عينة الإمساك؛ في‎ ‏مجموعات؛ مع تعليمات مناسبة وعوامل كاشفة ضرورية أخرىء لإجراء الاختبارات المناعية‎ Yo ‏كما هو موضح أعلاه. قد تحتوي المجموعة؛ اعتمادا على الاختبار المناعي المحدد المستخدم؛‎

AY

‏على علامات مناسبة وعوامل كاشفة معبئة أخرى ومواد (أي مواد تثبيت غسلء إلخ). يمكن‎ ‏إجراء اختبارات مناعية؛ كالموضحة أعلاه؛ باستخدام هذه المجموعات.‎ ‏تجسيدات خاصة للاختبارات المناعية‎ ‏تحليل 6017-8 الحر‎ ‏الحر‎ GDF-8 ‏على طريقة للكشف عن وجود‎ Mall ‏في أحد التجسيدات؛ يشتمل الاختراع‎ ° ‏مثال تمثيلي لهذا التجسيد.‎ ١١ ‏في عينة بيولوجية. يوضح الشكل‎ ‏الحر على 6101-8 الموجود في حالته‎ GDF-8 ‏يشتمل مصطلح‎ (Lia ‏كما هو مستخدم‎ .homodimer | «dimmer «monomer ‏الناضج عبارة عن‎ GDF-8 ‏الناضجة النشطة. يكون‎ ‏ناضج مصاحب مع‎ GDF-8 ‏(أي‎ («LS GDF-8 ‏الحر على‎ GDF-8 ‏لا يشتمل‎ ‏المصاحب‎ GDF-8 ‏أو‎ «GDF-8 ‏ربط‎ proteins ‏مصاحب لأجل‎ GDF8 «(GDF-8 propeptide ٠ :GDF-8 ‏مضادات أجسام معادلة وربط‎ «Jia ‏لعوامل ضبط مضاد 011-8؛‎ ‏في أحد التجسيدات؛ تشتمل طرق كشف وتقدير 0017-8 الحر على الخطوات التالية: (أ)‎ ‏عند التواجد في‎ (GDF-8 ‏وعينة تحت شروط تسمح بارتباط‎ GDF-8 ‏اتحاد مضاد جسم إمساك‎ ‏مضاد‎ GDF-8 ‏عينة بيولوجية؛ مع واحد أو أكثر من مضادات أجسام إمساك تشمل معقد‎ ‏حسن إمساك؛ إضافة مضاد جسم كشف تحت شروط تكوين المعقدء حيث يقوم مضاد جسم‎ ١ ‏مضاد جسم الإمساك؛ و(ب) الكشف عن المعقدات المتكونة بين‎ GDF-8 ‏الكشف بربط معقد‎ ‏في‎ GDF-8 ‏معقد 0101-8 مضاد جسم الإمساك ومضاد جسم الكشف؛ إن وجد؛ كدلالة على‎ ‏العينة البيولوجية.‎ ‏ارتباط مولد مضاد الكشف على علامة بارزة. في‎ protein ‏قد يشتمل أيضا مضاد جسم أو‎ ‏بعض الحالات؛ لا يتم تعليم مضاد جسم الكشف ويستخدم عامل كشف يميز تحديدا مضاد‎ Ye ‏جسم الكشف.‎

GDE-8 ‏تحليل إجمالي‎

GDF- ‏في أحد التجسيدات؛ يشتمل الاختراع الحالي على طريقة للكشف عن وجود إجمالي‎ ‏في عينة بيولوجية.‎ 8 ‏الموجود في حالته‎ GDF-8 ‏يشتمل مصطلح إجمالي 04 على‎ lia ‏حسب الاستخدام‎ Yo ‏الناضجة النشطة؛ وأي 0117-8 موجود في شكله الكامن (أي 0117-8 ناضج مصاحب مع‎ ‏أو 0117-8 مصاحب‎ «GDF-8 ‏ربط‎ proteins ‏مصاحب لأجل‎ 00748 «(GDF-8 propeptide

At ‏يشتمل قياس‎ .GDF-8 ‏مضادات أجسام معادلة وربط‎ (Jie «GDF-8 ‏لعوامل ضبط مضاد‎ ‏مضاد جسم علاجي.‎ MYO0-029 ‏إجمالي 6017-8 على قياس 0017-8 الذي يرتبط بواسطة‎ ‏التفكك الحمضى‎ ‏باستخدام طريقة التفكك‎ GDF-8 ‏في أحد التجسيدات؛ تقوم طرق كشف وتقدير إجمالي‎ ‏مع عينة بيولوجية‎ GDF-8 ‏الحمضي؛ وتشمل الخطوات التالية: (أ) اتحاد مضاد جسم إمساك‎ © ‏أس هدروجيني إلى حوالي 76 أس هيدروجيني؛ ويفضل‎ ١ ‏تحت شروط حمضية (بين حوالي‎ ‏عند الوجود في العينة البيولوجية؛‎ (GDF-8 ‏أس هيدروجيني) مما يسمح بارتباط‎ Y.0 ‏حوالي‎ ‏مع واحد أو أكثر من مضاد أجسام إمساك تكوين معقد 0611-8 مضاد جسم إمساك؛ إضافة‎ ‏تحت شروط تكوين معقد؛ حيث يقوم مضاد جسم الكشف بربط‎ (GDF-8 ‏مضاد جسم كشف‎

GDF-8 ‏مضاد جسم الإمساك؛ و(ب) الكشف عن المعقدات المتكونة بين معقد‎ GDF-8 ‏معقد‎ V+ ‏مضاد جسم الإمساك ومضاد جسم الكشف؛ إن وجد؛ كدلالة على 0117-8 في عينة بيولوجية.‎ ‏مضاد الكشف على علامة بارزة. في بعض‎ alse ‏ارتباط‎ protein ‏يشتمل مضاد جسم أو‎ ‏الحالات؛ لا يتم تعليم مضاد جسم الكشف ويستخدم عامل الكشف المميز لمضاد جسم‎ ‏الكشف.‎ ‏التفكك الحراري:‎ ١٠ ‏باستخدام طريقة التفكك‎ GDF-8 (laa) ‏في تجسيد آخرء؛ تقوم طرق كشف وتقدير‎ ‏مضاد‎ alse ‏ارتباط‎ protein ‏الحراري؛ وتشمل الخطوات التالية: (أ) توصيل مضاد جسم أو‎ ‏إمساك 0117-8 مع سطح دعامة صلبة؛ (ب) تسخين عينة بيولوجية إلى "١”مئوية على‎ ‏أو ٠٠”مئوية؛ لمدة ؟‎ PAL ‏5أ"مئوية؛ ١7أمئوية؛ 5ل7ا"مئوية؛ 80"مئوية؛‎ Jie ‏الأقل؛‎ ‏دقيقة واتحاد عينة بيولوجية مع‎ ١٠5 ‏أو‎ ١4 OY ٠١ 4 07 co (Jha ‏دقائق على الأقل؛‎ Y. ‏عند وجوده في العينة البيولوجية؛ مع‎ (GDF-8 ‏الدعامة الصلبة تحت شروط تسمح بارتباط‎ (=) ‏مضاد جسم إمساك؛‎ GDF-8 ‏واحد أو أكثر من مضادات أجسام إمساك تكوين معقد‎ ‏إضافة مضاد جسم كشف إلى دعامة صلبة من الخطوة (ب) تحت شروط حمضية لتكوين‎ ‏يقوم مضاد جسم الكشف بربط معقد 0117-8 مضاد جسم الإمساك؛ و(د) الكشف‎ Cua ‏معقد؛‎ ‏مضاد جسم الإمساك ومضاد جسم الكشف؛ إن وجد؛‎ GDF-8 ‏عن المعقدات المتكونة بين معقد‎ Yo ‏على 6101-8 في العينة البيولوجية.‎ AVS

Ao ‏مضاد الكشف على علامة بارزة. في‎ alse ‏ارتباط‎ protein ‏يشتمل أيضا مضاد جسم أو‎ ‏بعض الحالات؛ لا يتم تعليم مضاد جسم الكشف ويستخدم عامل الكشف المميز لمضاد جسم‎ ‏الكشف.‎ ‏أحد تجسيدات هذه الطريقة؛ حيث يوضح قيام 14770-029 مضاد الجسم‎ ١١ ‏يصور الشكل‎ ‏في هذه‎ . (biotinylated-RK22 ‏بتثبيط الإشارة الناتجة بواسطة مضاد جسم الكشف (مثل؛‎ ٠ ‏الطريقة؛ يمكن حساب خلفية الاختبار ويطرح من القيمة الناتجة في الخطوة (د).‎ ‏والمجمل:‎ all GDF-8 ‏تجسيدات بديلة لتحليل‎ ‏في تجسيدات محددة؛ يتصل مضاد جسم الإمساك مع سطح دعامة صلبة؛ أو قارورة‎ ‏تفاعل» مثلا عن طريق الارتباط تساهميا أو غير تساهميا مع السطح. قد يكون هذا الاتصال‎ ‏عن طريق المعالجة الكيميائية أو الإشعاعية‎ Sle ‏مباشر أو غير مباشر. قد يتحسن السطح؛‎ Ye ‏للتأثير على خواص ارتباط السطح.‎ ‏في تجسيدات محددة؛ بعد اتصال مضاد جسم الإمساك مع العينة البيولوجية وغسله لإزالة‎ ‏المكونات غير المرتبطة. تنخفض التفاعلات البينية غير المحددة إلى الحد الأدنى عن طريق‎ ‏خطوة الإخماد. حيث يضاف مثبت الأس الهيدروجيني المشتمل على عامل إخماد واحد على‎ ‏غير المرتبط تحديدا مع الهدف إلى قارورة التفاعل. قد تشتمل مثبتات‎ protein Jie ‏الأقل؛‎ ٠ ‏الأس الهيدروجيني للإخماد على مثبتات الأس الهيدروجيني للإخماد؛ المصل؛ مصل الجنين‎ ‏دو/ أو عوامل التفكك غير الأيونية المتوافرة تجاريا. في بعض‎ sgelatin «casein ‏البقري؛ اللبن‎ © ‏التجسيدات؛ تغسل قارورة التفاعل بمثبت أس هيدروجيني مع أس هيدروجيني بين حوالي‎ ‏بصورة‎ acetate ‏أو مثبت‎ Tris ‏مثبت‎ cphosphate ‏مثبت‎ «citrate ‏وحوالي 9؛ مثل مثبت‎ ‏بديلة؛ يكون مثبت الأس الهيدروجيني بين حوالي ؟ أس هيدروجيني و© أس هيدروجيني؛‎ ٠٠ .GDF-8 ‏مثلاء في طرق التفكك الحمضي لكشف وتقدير إجمالي‎ ‏اختبارها في طرق الاختراع من مصلء دم؛ بلازماء‎ abl ‏قد يتم استخدام العينة البيولوجية‎ ‏خزعة؛ عينة نسيج؛ معلق خلية؛ لعاب؛ مائع معوي؛ مائع دماغي نخاعي, مائع سلي؛‎ die ‏إفراز غدة ثديية؛ سائل الأوعية الليمفاوية؛ البول؛ العرق؛ مائع زلالي ومائع دمعي. في‎ ll ‏لبن؛‎ ‏تجسيدات محددة؛ تكون العينة البيولوجية عبارة عن مائع. في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار‎ Yo ‏العينة البيولوجية من الدم؛ المصلء والبلازما. في تجسيدات محددة؛ تكون العينة البيولوجية هي‎ ‏بقرة؛ خروف؛ أو دجاجة.‎ la ai ‏إنسان»‎ lia ‏مصل من؛‎

لم في تجسيدات ‎pal‏ تؤخذ العينة البيولوجية من 358 أو أفراد وتعالج اختياريا قبل الاختبار. على سبيل المثال؛ قد يتم تخفيف العينة. قد يشتمل مثبت التخفيف على كمية ثابتة من عينة بيولوجية مقارنة؛ مختارة لتقابل العينة البيولوجية ‎Lad‏ مثلا للتحكم في تأثير الخلفية أو تدخل المادة البينية للعينة. في أحد التجسيدات؛ تخفف عينة اختبار ‎plasma‏ أدمية في ‎AY‏ ‏0 أضعاف من مثبت الأس الهيدروجيني )04 مللي جزيئي جرامي من ‎A (Tris-HCI‏ أس هيدروجيني» يشمل ‎١‏ مللي جزيئي جرامي من 6:08راع» ‎(a ٠.*‏ جرامي من ‎NaCl‏ ‏و70.05 (حجم/ ‎(Tween 20® (aaa‏ وتحضر تخفيفات العينة البيولوجية بعد ‎A‏ أضعاف في ‎THST‏ مع 717.5 من مصل آدمي مستنفد ‎.GDF-8‏ تخفف العينة البيولوجية إلى ‎EF‏ ‎TY OT 0 VE VY ل١ A co‏ 14 أو ‎١78‏ ضعف. في تجسيدات ‎gyal‏ تخفف ‎٠‏ العينة البيولوجية بالتسلسل )1.00 أو )1.7 للحصول على مدى نقاط بيانات تسمح بتأكيد خطية التخفيف وتأثيرات المادة البينية. في بعض المواد البينية للعينة البيولوجية؛ يتم اختيار التخفيف الذي يصل عنده تداخل المادة البينية وحساسية الاختبار إلى الحد الأمثل. لا تتقيد المادة المخففة تحديدا ولكنها قد تشتمل؛ ‎Die‏ على مصل آدميء؛ مصل = مستنفد ‎(GDF-8‏ مصل فأري؛ مصل فأري مستنفد 0017-8؛ ماء مزال التأين أو مثبتات أس ‎١٠‏ هيدروجيني أخرى لها تأثير مثبت ‎GU‏ الهيدروجيني في مدى أس هيدروجيني من حوالي ؟ إلى حوالي ‎od‏ اعتمادا على سواء أتم تنفيذ الاختبار في شروط حمضية ‎of‏ لا. لتحليل ‎GDF-8‏ ‏الحرء المنفذ عند أس هيدروجيني معادل؛ يصل أس الهيدروجيني إلى حوالي 1.5 إلى حوالي ‎Ao‏ حوالي 1.5 إلى حوالي ‎oY‏ حوالي 7 إلى حوالي 7.8ء. حوالي 7.5 إلى ‎oh‏ ‏حوالي 8 إلى حوالي 8.5 (مثل مثبت الأس الهيدروجيني ‎citrate‏ مثبت الأس الهيدروجيني ‎«phosphate ٠‏ مثبت الأس الهميدروجيني ‎Tris‏ مثبت الأس الههيدروجيني ‎cacetate‏ أو مثبت الأس الهيدروجيني ‎(borate‏ لتحليل إجمالي ‎«GDF-8‏ المنفذ عند أس هيدروجيني حمضي؛ يتراوح الأس الهيدروجيني بين حوالي ‎١‏ إلى حوالي ‎Yoo‏ حوالي 7.8 إلى حوالي 0.0 حوالي ‎Yeo‏ إلى حوالي ‎oF‏ حوالي ؟ إلى حوالي ‎vie‏ حوالي *.؟ إلى حوالي 4؛ حوالي ؛ إلى حوالي 4.0 أو حوالي 4.0 إلى حوالي ‎coo‏ حوالي ‎(Hoo‏ حوالي ‎eo‏ ‎Yo‏ في بعض التجسيدات؛ يمكن اختياريا تجزئة أو تركيز العينة البيولوجية باستخدام طرق معروفة جيدا ثم تضاف إلى اختبار كما هو موصوف هنا لكشف ‎.GDF-8‏ يمكن استخدام التجزئة ‎Ley)‏ في ذلك التنقية) أو التركيز؛ مثلا؛ إذا قام تدخل المادة البينية يكشف عامل ضبط

AY

‏في الاختبار. تشتمل تقنيات التجزئة والتركيزء دون تحديد؛ على الطرد المركزي؛‎ GDF-8 trichloroacetic acid ‏ترسيب‎ <polyethylene glycol ‏ترسيب‎ cammonium sulfate ‏ترسيب‎ ‎Jia ‏مرتبط مع شريك ارتباط نوعي‎ resin ‏الترسيب المناعي مع‎ Jin) ‏تقنيات انجذاب‎ (TCA) ‏تقنيات التحليل الكروماتوجرافي؛ وتقنيات‎ ((GDF-8 ‏مضاد جسم مضاد‎ (Jie ‏مضاد جسم؛‎ ‏فصل أخرى.‎ ٠ ‏بيولوجية مأخوذة قبل؛ أثناء أو بعد‎ due ‏يمكن جمع العينة البيولوجية من فرد أصليء أو‎ ؛١ ‏إعطاء عامل ضبط 001-8. على سبيل المثال؛ يمكن الحصول على عينة من الفرد بعد‎ ‏أو أكثر من إعطاء عامل ضبط‎ ١ Yo ٠١ Yo ‏كك لأ ىنال ال كل‎ oY

AY ‏ف‎ AY ‏كت‎ FY ‏كما يمكن الحصول على عينة بيولوجية بعد فت‎ .0074 ‏أو أسبوع أو أكثر من إعطاء عامل ضبط 6117-8. في بعض الحالات؛ تكون‎ 11 ae. ‏النقاط الزمنية لما يزيد إلى عام أو أكثر ملائمة. تختبر العينات البيولوجية لأجل كل من‎ ‏المجمل والحر. يعتبر تحليل إجمالي 0601-8 مهما تحديدا في الأفراد المعالجين‎ GDF-8 ‏حيث تتدخل هذه العوامل في قدرة عامل على كشف أو إمساك على‎ (GDF-8 ‏بعوامل ضبط‎ ‏أصبحت طريقة التفكك الحمضي أو الحراري المستخدمة‎ GA ‏في عينة بيولوجية.‎ GDF-8 ‏ربط‎ ‏هي طريقة هامة تحديدا.‎ GDF-8 ‏في تحليل إجمالي‎ ١ ‏في تجسيد محدد؛ يتصل قاسم تام من العينة البيولوجية المراد اختبارها مع مضاد جسم أو‎ =) ‏دقيقة؛ أو‎ ١١-١ (Jie) ‏ارثباط مولد مضاد إمساك ويحضن لمدة زمنية كافية‎ protein

GDF- ‏؟؟"مئوية) للسماح بربط مضاد جسم الإمساك مع‎ (Jia) ‏ساعات) وتحت شروط مناسبة‎ ‏إن وجدء في العينة البيولوجية والسماح بتكوين معقدات مضاد الجسم/ 0117-8. في تجسيد‎ 8 ‏آخرء يتم تفاعل مضاد الجسم/ 6117-8 تحت شروط استخدام الطريقة العادية الاختبارات‎ Ye ‏المناعية التقليدية. يشتمل الإجراء النموذجي على تحضين أو السماح بإقامة نظام تفاعل‎ ‏يتضمن مضاد جسم إمساك وعينة بيولوجية عند درجة حرارة لا تزيد عن 5؟*مئوية؛ مثل؛ بين‎ ‏؛"مئوية أو بين حوالي‎ ٠ ‏4*مئوية؛ أو بين حوالي ؟7"مئوية وحوالي‎ ٠ ‏وحوالي‎ Buse ‏حوالي‎ ‏و4 ساعة؛ مثل؛ بين حوالي ساعة واحدة و١٠ ساعة.‎ 0.0 ‏بعد فترة التحضين؛ يغسل معقد مضاد الجسم/ 0611-8؛ في بعض الحالات؛ مع مثبت‎ Yo ‏الأس الهيدروجيني لإزالة المواد المنحلة غير المرتبطة. في تجسيدات أخرى؛ يجرى اختبار‎

AA

‏متزامن؛ يتم فيه إضافة العينة البيولوجية ومضاد جسم الكشف إلى قارورة التفاعل في نفس‎ ‏الوقت.‎ ‏في تجسيدات محددة؛ يتم فيها إضافة مضاد جسم الكشف بعد العينة البيولوجية؛ يشتمل‎

GDF-8 ‏الجسم/‎ alias ‏الإجراء على تحضين أو السماح بإقامة نظام تفاعل يتضمن معقد‎ ‏ومضاد جسم كشف عند درجة حرارة لا تزيد عن ©4"مئوية؛ مثل بين حوالي ؟"مئوية وحوالي‎ ٠ cio ‏"مئوية أو بين حوالي 0.5 و50 ساعة؛‎ 4 ٠ ‏أو بين حوالي © 7"مئوية وحوالي‎ ؛ةيوثم“٠‎ ‏ساعة.‎ Yo ‏أو بين حوالي ساعة واحدة‎ ‏مضاد أو أجزاء منهما‎ alge ‏ارتباط‎ protein ‏في بعض التجسيدات؛ يشتمل مضاد جسم»‎ ‏الكشف على علامة بارزة. في تجسيدات إضافية؛ يتم الكشف عن مضاد جسم الكشف بطريقة‎ ‏عن طريق عامل كشف. في بعض التجسيدات؛ يكون عامل الكشف زائداء‎ Ol ‏غير مباشرة؛‎ ٠ ‏بحيث ترتبط جوهريا كل مضادات أجسام الكشف الموجودة في قارورة التفاعل.‎ ‏هي أي جزيء مرتبط أو‎ ile ‏في بعض التجسيدات؛ قد تكون علامة‎ ‏مقترن بعضو ارتباط محدد قادر على الإنتاج التلقائي لإشارة بارزة دون إضافة‎

SH 1251 ‏عامل كاشف مساعد. تشتمل بعض التجسيدات على نظائر إشعاعية (مثل‎ fluorescein ءرضخأ‎ fluorescent protein «luciferase ‏(مثل؛‎ fluorophore ¢(14C ٠ 1-N-(2,2,6,6-tetramethyl-1- «tetramethylrhodamine isothiocyanate «isothiocyanate «phycocyanin «Ji x) ‏صبغة‎ «(oxyl-4-piperidyl)-5-N-(aspartate)-2,4-dinitrobenzene ‏جزيئات ضوئية؛ تشتمل جزيئات ضوئية‎ ((o-phthalaldehyde «Texas Red «phycoerythrin ‏غروانية؛ جسيمات معادن‎ silver ‏غروانية؛ جسيمات‎ gold ‏كيميائية وضوئية حيوية؛ جسيمات‎ ‏محاليل صبغية؛‎ Jie ‏جسيمات لحظية التلون‎ polystyrene ‏جسيمات صبغة‎ (yal ‏غروانية‎ ٠٠ ‏المتلونة. تعرف العديد من جزيئات العلامة المناسبة للماهرين في الفن وقد يتم‎ latex ‏وجسيمات‎ ‏استخدامهم في طرق الاختراع.‎ ‏قلويء‎ phosphatase «J's enzyme ‏في بعض الحالات؛ قد تكون العلامة عبارة عن‎ ‏في تجسيدات مختلفة؛ يتم‎ .B-galactosidase ‏أو‎ «glucose oxidase ‏الفجل الحارء‎ peroxidase ‏المقابل؛‎ enzyme ‏المحددة لإنتاج؛ في وجود‎ enzymes ‏اختيار المواد المقرر استخدامها مع‎ Yo ‏مع مضاد‎ enzyme ‏قد يقترن‎ luminescence ‏أو‎ «fluorescence ‏تغير ملحوظ في اللون؛‎ amination ‏أو تشابك‎ glutaraldehyde ‏ارتباط مولد مضاد بواسطة‎ protein sl ‏الجسم‎

قم الاختزالي. كما سيتضح بسهولة؛ يوجد العديد من تقنيات الاقتران المختلفة والتي تتوافر بسهولة للماهرين في الفن. في تجسيد مفضل؛ يكون مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الكشف معالج مع صناماط. إن مضادات أجسام مضاد 6017-8 المفيدة كمضادات أجسام كشف؛ تكون ‎biotinylated‏ ‏0 كما هو موضح بالمثال ‎١‏ (انظر ‎Sle‏ مثال ١؛‏ المقطع ‎١‏ الفقرة ©). تكون العوامل الكاشفة ‎biotinylation‏ قادرة على تعليم ‎proteins‏ بكفاءة؛ ‎Le‏ في ذلك مضادات ‎١‏ لأجسام . تكون النسب الجزيئية جرامية من مشتقات ‎biotin‏ إلى مضاد الجسم هي حوالي ‎Ye ao 0٠١‏ 40 أو 86 إلى ‎»٠‏ وقد تختلف أزمنة التفاعل؛ تركيزات المواد المتفاعلة؛ ودرجات الحرارة لضبط كمية ‎biotin‏ المندمج في التفاعل. تعتبر مشتقات ‎biotin‏ معروفة جيدا أو متوافرة في الفن؛ بما في ‎٠‏ ذلك الأذرع المباعدة المتغيرة؛ تحسينات للتأثير على قابلية الذوبان» و/أو مجموعات متفاعلة للسماح بانشقاق أجزاء ‎biotin‏ قد يتم استخدام ‎succinimidyl esters‏ من ‎biotin‏ ومشتقاته؛ ‎Les‏ ‏في ذلك ‎sulfosuccinimidyl esters‏ القابلة للذويان لإجراء ‎biotinylation‏ لأجل ‎«GDF-8‏ مثلاء لتقدير كمية ‎biotin‏ المندمج؛ تستخدم تقنيات قياسية وتحليلية معروفة جيدا تشمل؛ مثلا؛ التحليل الكروماتوجرافي السائل عالي ضغط الطور العكسي؛ التحليل الطيفي الكتلي؛ إلخ. ‎Ve‏ بصورةٍ إضافية؛ تتوافر مجموعات تجارية لتقدير ‎biotin‏ بواسطة اختيارات قياس اللون أو قياس ‎ee ey Bebe sma‏ ‎«Pierce «EZ™ Biotin Quantitation Kit‏ يستخدم ‎HABA (2-(4’-hydroxyazo benzenc)-‏ ‎-(benzoic acid)‏ في أحد التجسيدات؛ يكون ‎RK-22‏ المعالج مع ‎biotin‏ هو عامل كشف للكشف عن ‎GDF-‏ ‎٠‏ 8 المرتبط مع ‎RK35‏ ‏في تجسيد محدد؛ يضاف عامل الكشف المعلم ‎enzyme‏ و/أو المعالج مع ‎biotin‏ مثل مضاد الجسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد إلى معقد مضاد الجسم/ ‎(GDF-8‏ ويترك للارتباط. يزال العامل الكاشف الزائد بالغسل»؛ ويضاف عندئذ محلول يحتوي على ‎ale‏ ملاثمة إلى قارورة التفاعل. تخضع المادة إلى تفاعل تحفيز ‎enzyme‏ الذي يتسبب في تغير قابل ‎Yo‏ للقياس بمقياس الطيف الضوئي والذي يشير إلى كمية ‎GDF-8‏ الموجودة في العينة. على سبيل المثال؛ يمكن الكشف عن مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط ‎alge‏ مضاد الكشف المعالج مع ‎biotin‏ خلال تفاعله البيني مع اقتران ‎peroxidase Jie «avidin enzyme‏ الفجل ‎YAER‏

الحار ‎avidin‏ بعد التحضين المتعاقب مع اقتران ‎avidin enzyme‏ ومواد مناسبة مولدة للون أو مولدة الاستشعاع. كما يمكن الكشف عن مضاد جسم كشف معالج مع ‎biotin‏ بواسطة ‎streptavidin‏ معلم ‎-Europium‏ ‏في تجسيدات معينة؛ يتم الكشف عن معقد مضاد جسم/011-8/ مضاد جسم المرتبط ‎٠‏ بسطح قارورة التفاعل عن طريق التقديرات النوعية والكمية لإشارة العلامة. في بعض الحالات؛ تقاس العلامة مباشرة؛ ‎lia‏ عن طريق ‎fluorescence‏ أو ‎luminescence‏ أو بطريقة غير مباشرة؛ خلال إضافة مادة؛ في تجسيدات أخرى تقاس العلامة بعد التحضين مع عامل كاشف إضافي. في التجسيدات التي تكون فيها العلامة هي ‎biotin‏ يضاف اقتران ‎Mie) avidin‏ ‎peroxidase‏ الفجل الحار) في خطوة لاحقة. في أحد التجسيدات المحددة»؛ يرتبط اقتران ‎avidin‏ ‎٠‏ مع مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد الكشف الثابت. يزال اقتران ‎avidin‏ الزائد بالغسل. تضاف عندئذ مادة ‎enzyme‏ مما يتسبب في حدوث تغير قابل للقياس في؛ ‎Ola‏ ‏اللون» ‎fluorescence‏ أو ‎-lumincscence‏ في بعض التجسيدات؛ تكون مادة ‎peroxidase‏ ‏الفجل الحار هي ‎-3,3",5,5tetramethylbenzidine‏ ‏التقدير الكمي لأجل ‎GDF-8‏ الحر والمجمل ‎Vo‏ قد يتم تقدير مستويات 01-8 باستخدام طرق معروفة للماهرين في الفن. في تجسيدات محددة؛ تقارن مستويات ‎GDF-8‏ في العينة البيولوجية مع المستويات المعروفة؛ كالناتجة؛ ‎a‏ ‏باستخدام منحنى قياسي. يتضح توليد المنحنيات القياسية لأجل 6017-8 في المثال 28.10 يشتمل المنحنى القياسي على 0101-8 من تركيزات معروفة مخففة في مثبت الأس الهيدروجيني. في تجسيدات معينة يكون مثبت الأس الهيدروجيني هو مصل؛ مثل؛ مصل ‎٠‏ آدميء مصل فأري؛ مصل حيوان ‎pu‏ مصل بقري؛ أو مصل خراف. يفرغ المصل اختياريا من ‎GDF-8‏ الداخلي المنشاً قبل إضافة التركيزات المعروفة من 0101-8. يمكن الحصول على المصل من ماشية ‎(Belgian Blue‏ المحرومة طبيعيا من ‎GDF-8‏ ‏في أحد التجسيدات؛ تشتمل طريقة التقدير الكمي لأجل 0617-8 الحر في ‎Lie‏ بيولوجية على اتحاد مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط ‎alse‏ مضاد إمساك 0171-8 وعينة بيولوجية تحت ‎Yo‏ شروط تسمح بارتباط ‎(GDF-8‏ عند وجوده في العينة البيولوجية؛ مع واحد أو أكثر من مضادات أجسام الإمساك التي تشكل معقد ‎GDE-8‏ مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد إمساك؛ إضافة مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد ‎slime‏ كشف ‎GDF-8‏ معلم إلى الدعامة

الصلبة من الخطوة (ب)؛ (د) الكشف عن المعقدات المتكونة بين معقد ‎GDF-8‏ مضاد جسم الإمساك ومضاد جسم الكشف عن طريق الكشف عن الإشارة المتولدة من العلامة على مضاد جسم كشف ‎¢GDF-8‏ و(ه) تقدير مستوى 0117-8 في العينة البيولوجية عن طريق مقارنة الإشارة المتولدة بواسطة المعقدات المحتوية على مضاد جسم كشف 0017-8 المعلم مع ‎٠‏ المنحنيات القياسية المتولدة بواسطة تحديد هويات الإشارة المقابلة لكميات معروفة من ‎GDF-‏ ‏8 ‏تتشابه طرق التقدير الكمي لإجمالي ‎(GDF-8‏ فيما عدا أن العينة البيولوجية يتم تخفيفها في مثبت أس هيدروجيني حمضي. طرق معالجة؛ تحسين؛ ‎aie‏ تثبيط تطور الاضطرابات المصاحبة مع ‎GDF-8‏ ‎Ve‏ إن تدخل 6017-8 في تطور و/أو تنظيم اضطرابات مصاحبة مع ‎Mie GDF-8‏ استقرار ‎glucose‏ العظم؛ العضلات الهيكلية؛ إلخ؛ واكتشاف مضادات 0101-8 محددة جديدة من الاختراع» يوفر طرق لمعالجة؛ تحسين أو منع الاضطرابات المصاحبة مع ‎(GDF-8‏ مثل؛ الاضطرابات العضلية؛ الاضطرابات العضلية العصبية؛ اضطرابات الانحلال العظمي؛ اضطرابات العظم المحثة أو الأيضية؛ اضطرابات أيض ‎glucose‏ الاضطرابات الدهنية؛ ‎٠‏ وإلاضطرابات المتعلقة ‎insulin‏ بالإضافة إلى ذلك؛ تسمح المضادات بتشخيص؛ توقع ورصد تطور هذه الاضطرابات عن طريق قياس مستوى 6121-8 في عينة بيولوجية. بصورة محددة؛ يمكن استخدام مضاد ‎epitope‏ تخص 61-8 (مثل؛ مماتلات ‎peptide‏ لهاء ‎polynucleotides‏ تثبيطية ‎(Led‏ مضادات أجسام لهاء جزيئات صغيرة؛ ‎(Fd)‏ من الاختراع لمعالجة ‎Hd‏ يعاني من اضطراب مصاحب مع 001-8؛ أو في طريقة تمييز سواء أكان ‎٠‏ المريض يعاني من الاضطراب المصاحب مع 0017-8 أو لا. تكون مضادات الاختراع الحالي مفيدة لمنع؛ تشخيص؛ أو معالجة اضطرابات مصاحبة مع ‎GDF-8‏ الطبية المختلفة في آدميين أو حيوانات. تستخدم المضادات لتثبيط» خفض و/أو معادلة واحد أو أكثر من الأنشطة المصاحبة مع 001-8. والأفضل؛ أن تقوم المضادات بتثبيط أو خفض واحد أو أكثر من أنشطة 0017-8 بالنسبة إلى 6017-8 في حالة عدم وجود ‎Yo‏ مضادات الاختراع. في تجسيدات محددة؛ تقوم مضادات الاختراع بتثبيط نشاط ‎GDF-8‏ بنسبة ‎٠‏ على الأقل ريفضل ١ت‏ تتشت كت ‎CTA CTT‏ للك الاك كلا كلا خلا فى ‎GAY‏ ‏4 1 أو ‎TAA‏ على الأقل؛ والأفضل 50 ‎JAY AY OY‏ 294 والأفضل من ذلك ay ‏الناضج والذي لا يرتبط بواحد أو أكثر‎ GDF-8 protein ‏على الأقل بالنسبة إلى‎ 7) +0 JY) 5 ‏مثلاء في‎ (GDF-8 ‏من مضادات أجسام مضاد 017-8. يمكن قياس تثبيط أو معادلة نشاط‎ ‏وآخرين» أعلاه؛ وفي‎ Thies ‏كما هو موصوف في‎ pGL3(CAGA)I2 ‏اختبار الجين المخبر‎ ‏اختبارات مستقبل 8008118 كما هو موضح في الأمثلة.‎

° تشتمل الاضطرابات الطبية التي يتم تشخيصهاء توقعهاء رصدها؛ معالجتها؛ تحسينها أو منعها بالمضادات المكتشفة حاليا على اضطرابات مصاحبة مع ‎Jie (GDF-§‏ الاضطرابات العضلية أو العضلية العصبية؛ مثل؛ الحثل العضلي ‎MD)‏ يشمل الحثل العضلي ‎(Duchenne‏ التصلب الجافي الضموري ‎(ALS)‏ ضمور العضلات» ضمور عضوء الهشاشة؛ متلازمة النفق الرسغي» مرض روي انسدادي ‎lial‏ فقدان قوة العضلات؛ الدنف؛

‎٠‏ ومتلازمات ضمور العضلات ‎lie)‏ الناتجة عن أمراض وحالات أخرى). بالإضافة إلى ذلك تشتمل الاضطرابات الطبية الأخرى التي يتم تشخيصها؛ توقعها؛ء رصدهاء معالجتهاء تحسينها أو منعها بواسطة مضادات أجسام 0121-8 على اضطرابات أنسجة دهنية ‎Jie‏ السمنة؛ السكر من النوع ‎of‏ فشل تحمل ‎cglucose‏ متلازمات أيضية ‎(Ji)‏ متلازمة ‎¢(X‏ مقاومة ‎insulin‏ ‏المحثة بالإصابات الرضية (مثل الحروق أو عدم توازن ‎«(nitrogen‏ أو أمراض انحلال العظم

‎٠‏ (مثل؛ التهاب المفاصل؛ هشاشة العظام). في تجسيد مفضل؛ وغير محدد؛ من الاختراع؛ تشتمل الاضطرابات الطبية التي يتم تشخيصها؛ توقعها؛ رصدهاء معالجتهاء تحسينها أو منعها بالمضادات المكتشفة ‎Ulla‏ على اضطرابات عضلية أو عضلية عصبية. في تجسيد أفضل؛ غير محدد؛ من الاختراع» يكون الاضطراب العضلي والعضلي العصبي الذي يتم تشخيصه؛ توقعه؛ رصده؛ معالجته؛ تحسينه أو منعه بالمضادات المكتشفة هنا هو ‎MD‏ أو ‎ALS‏

‏.9 تشتمل الاضطرابات الطبية الأخرى الممكن تشخيصها؛ معالجتهاء؛ تحسينها أو منعها بواسطة المضادات المكتشفة حاليا على الاضطرابات المصاحبة لفقد العظم؛ والتي تشتمل هشاشة العظام؛ خاصة عند كبار السن والنساء بعد سن اليأسء الهشاشة بسبب 40 نقص كثافة العظم؛ التهاب المفاصل؛ والكسور المتعلقة بالهشاشة. تشتمل ‎aly‏ واضطرابات العظم الأيضي المستهدف على انخفاض كتلة العظم بسبب علاج

‎glucocorticoid Yo‏ الحاد؛ الفشل الغددي المبتسر؛ كبح ‎androgen‏ نقص فيتامين د؛ فرط نشاط الغدة الدرقية؛ نقص العوامل الغذائية؛ وفقدان الشهية العصبي. يفضل استخدام مضادات

‎YALE

KY

‏الاختراع لمنع؛ تشخيص؛ تحسين؛ أو معالجة هذه الاضطرابات الطبية في كائئات ثديية؛‎ ‏تحديدا في الآدميين؛ مثل النساء الحوامل أو المتوقع حملهم.‎ ‏يتم إعطاء مضادات الاختراع الحالي بكميات فعالة علاجيا. بصفة عامة؛ تتنوع الكمية‎ ‏ونوع الكائن؛ الإضافة إلى شدة الحالة الطبية في الكائن. قد‎ Alla ‏المؤثرة علاجيا مع عمر؛‎ ‏تتحدد الجرعة بواسطة الطبيب وتضبط؛ عند الضرورة؛ لملائمة التأثيرات الملاحظة للعلاج.‎ © ‏تتحدد السمية والكفاءة العلاجية لهذه المركبات عن طريق إجراءات دوائية قياسية في مزارع‎ ‏من الجمهرة)‎ 75 ٠ ‏الخلية أو حيوانات التجارب؛ مثلاء لتحديد 11050 (جرعة مميتة لأجل‎ ‏من الجمهرة). تكون نسبة الجرعة بين التأثير السام‎ 75 ٠ ‏و2050 (الجرعة المؤثرة علاجيا في‎ ‏هي المؤشر العلاجي وتفضل مؤشرات علاجية أكبر لتثبيط‎ 5050 /150 «gf ‏والعلاجي»‎ ‏المضادات.‎ ٠ ‏يمكن استخدام البيانات الناتجة عن اختبارات مزرعة الخلية والدراسات الحيوانية في تكوين‎ ‏مدى جرعة للاستخدام في الآدميين. تقع جرعة هذه المركبات بين مدى تركيزات الدورة الدموية‎ ‏أو منعدمة. تتنوع الجرعة في هذا المدى اعتمادا على شكل الجرعة‎ Jif ‏تشمل 2050 مع سمية‎

Ladle ‏وطريقة الإعطاء. لأي مضاد مستخدم في الاختراع الحالي؛ تقدر مبدئيا الجرعة الفعالة‎ plasma ‏من اختبارات مزرعة الخلية. تتكون الجرعة في نماذج حيوانية لتحقيق مدى تركيز‎ Ve ‏الدورة الدموية الذي يشمل 1050 (مثل تركيز مضاد الاختبار الذي يحقق نصف التثبيط‎ ‏الأقصى للمتلازمات أو النشاط البيولوجي) كما هو محدد في مزرعة الخلية. قد يتم قياس‎ ‏عن طريق التحليل الكروماتوجرافي السائل عالي الأداء. يميكن‎ «Nia cplasma ‏المستويات في‎ ‏رصد تأثيرات أي جرعة محددة بواسطة الاختبار الحيوي المناسب. تحتوي أمثلة الاختبارات‎

A Niger alla ead ٠

GDF8 ‏اختبارات معتمدة على الاستنساخ؛ اختبار ارتباط مستقبل/‎ (DNA ‏على اختبارات نسخ‎ ‏اختبارات معتمدة على تباين الخلايا الدهنية الأولية؛‎ creatine kinase ‏اختبارات‎ «protein ‏في الخلايا الدهنية؛ والاختبارات المناعية.‎ glucose ‏اختبارات معتمدة على امتصاص‎ ‏بصورة عامة؛ يتم إعطاء التركيبات بحيث يتم إعطاء المضادات أو أجزاء ارتباطها عند‎ ‏مجم/‎ ٠٠١ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏مجم/ كجم؛ من‎ ٠5١0 ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏جرعة من‎ Yo ‏مجم/‎ Yo ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏مجم/ كجم؛ من‎ 5٠ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏كجم؛ من‎ ‏مجم/ كجم؛‎ ١ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏مجم/ كجم؛ من‎ ٠١ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏كجم؛ من‎ q¢ ‏ميكروجرام/‎ ٠٠١ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ٠١ ‏مجم/ كجم؛ من‎ ١ ‏ميكروجرام/ كجم إلى‎ ٠١ ‏من‎ ‏مجم/ كجم.‎ ١ ‏مجم/ كجم؛ و0٠٠5 ميكروجرام/ كجم إلى‎ ١ ‏ميكروجرام إلى‎ ٠٠١ ‏كجم؛ من‎ ‏بصورة مفضلة؛ يتم إعطاء المضادات كجرعة قرص دوائي لرفع مستويات تدوير المضادات‎ ‏إلى أقصى حد لأكبر مدى زمني بعد الجرعة. يستخدم التشريب المستمر قبل؛ بعد أو في محل‎ ‏الدوائي.‎ all ‏جرعة‎ © 011:8 ‏طرق تحديد العوامل العلاجية للاضطرابات المصاحبة مع‎ ‏يوفر جانب آخر من الاختراع طريقة لتحديد عوامل علاجية مفيدة في علاج؛ مثلا؛‎ ‏الجسيمات الدهنية والعظم. إن اختبارات الفحص الملائمة؛ مثل‎ glucose ‏اضطرابات أيض‎ ‏تكون معروفة في الفن. في اختبار الفحص؛ يتكون خليط‎ (ELISA ‏الاختبارات المعتمدة على‎ protein ‏يخص 61118 أو مضاد جسم أى‎ peptide ‏ربط أول بواسطة اتحاد مضاد؛ مماثل‎ ٠ ‏ارتباط مولد مضاد الاختراع ومركباته الترابطية؛ 0118؛ وتقاس كمية الارتباط بين المركب‎ ‏كما يتكون خليط ربط ثاني بواسطة‎ (MO) ‏الترابطي ومضاد الجسم في خليط الارتباط الأول‎ ‏اتحاد المضاد؛ المركب الترابطي؛ والمركب أو العامل المقرر فحصه؛ وتقاس كمية الارتباط بين‎ ‏تقارن عندئذ كميات الارتباط‎ (M1) ‏المركب الترابطي ومضاد الجسم في خليط الارتباط الثاني‎ ‏يعتبر المركب أو‎ MOM ‏في خلطات الارتباط الأول والثاني؛ مثلاء عن طريق حساب نسبة‎ ٠ ‏إذا لوحظ انخفاض ارتباط خليط الارتباط الأول‎ (GDP ‏قادر على التفاعل البيني مع‎ Jalal ‏يتم إنتاج وصياغة خليط الارتباط ضمن مستوى الماهر في الفن؛ وقد‎ .)١ > MO MI ‏(أي؛‎ ‏تحتوي خلطات الارتباط هذه على مثبتات الأس الهيدروجيني وأملاح لازمة لتعزيز أو لتحسين‎ ‏وقد تدخل اختبارات المقارنة الإضافية في اختبار الفحص الخاصة بالاختراع.‎ cali) ‏يتم تحديد المركبات القادرة على خفض ارتباط مضاد المركب الترابطي بنسبة تصل إلى‎ Ye ‏)؛ ويفضل أن تكون أكبر من حوالي 7780 ثم‎ ٠.1 < MO MIL ‏على الأقل (أي‎ 7٠١ ‏حوالي‎ ‏مثل اختبار‎ gyal ‏تتحل ثانوياء عند الرغبة؛ للقدرة على تثبيط نشاط 60178 في اختبارات‎ ‏أو الاختبارات في الجسم والاختبارات المعتمدة على الخلية كما هو موضح‎ (ACtRIIB ‏ارتباط‎ ‏في الأمثلة أو كما هو معروف جيدا في الفن.‎ ‏الجزئيات الصغيرة‎ Yo ‏في كائن حي (أو كائن) مصاب (أو معرض للإصابة)‎ GDFS ‏يمكن تثبيط نشاط‎ ‏باضطراب مصاحب مع 00178؛ أو في خلية من هذا الكائن الذي يعاني من هذه‎

ان الاضطرابات»؛ وذلك من خلال استخدام جزيئات صغيرة مضادة (عادة جزيئات صغيرة عضوية) التي تعارض؛ أي؛ تبط نشاط 01378. يمكن تحديد جزيئات صغيرة مضادة جديدة بواسطة طرق الفحص الموصوفة أعلاه وقد يتم استخدامها في طرق علاج الاختراع الحالي الموصوفة هنا .

° بصورة عكسية؛ تتم زيادة نشاط 6018 في كائن حي (أو كائن) مصاب (أو معرض للإصابة) باضطراب مصاحب لنشاط و/أو لإظهار 61018 منخفض أو اضطراب مصاحب لمستويات 00178 المنخفضة ويتم ذلك من خلال استخدام جزيئات صغيرة (جزيئات صغيرة عضوية) تعضد؛ أي تعزز نشاط 017178. قد يتم تحديد الجزيئات الصغيرة المعضدة الجديدة بواسطة طرق النخل وقد يتم استخدامها في طرق علاج الاختراع الحالي الموصوفة هنا.

01018 ‏توقع؛ ورصد تطور_الاضطرابات المصاحبة مع‎ (adds ‏طرق‎ ٠ ‏العظم؛ العضلات؛ والاضطرابات الدهنية؛‎ colucose ‏بالإضافة إلى معالجة مثلاء أيض‎ ‏يوفر الاختراع الحالي طرق لتشخيص هذه الاضطرابات عن طريق الكشف عن انخفاض أو‎ ‏مائع غسل القصبي الحويصلي؛‎ plasma «Jaane ‏زيادة 0118 في عينة بيولوجية؛ مثل؛‎ ‏أو‎ (diagnostic) ‏النسيج العضلي)؛ إلخ. يشير مصطلح 'تشخيصي‎ (Jia) ‏نخامة؛ خزعة‎ ‏إلى تحديد وجود أو غياب حالة مرضية. تشتمل طرق‎ (diagnosing) ‏"تشخيص‎ Ve ‏تحديد كمية اختبار‎ Mw ‏التشخيص على الكشضف عن وجود 00118 عن طريق؛‎ ‏في عينة بيولوجية من كائن (كائن ثديي آدمي أو غير آدمي)؛‎ GDF8 polypeptide ‏من‎ ‏ومقارنة كمية الاختبار مع كمية أو مدى عادي (كمية أو مدى من فرد (أفراد) لا يعاني من هذا‎ ‏بينما لا تتمكن طريقة تشخيص محددة من توفير‎ 60178 polypeptide ‏الاضطراب) لأجل‎

‎٠‏ تشخيص حاسم للاضطرابات المصاحبة مع ‎«GDI‏ ويمكن أن توفر الطريقة دلالة إيجابية تساعد في التشخيص.

‏كما يوفر الاختراع الحالي طرق لتوقع حدوث الاضطرابات المصاحبة مع ‎(GDF‏ مثل؛ أيض ‎glucose‏ العظم؛ العضلات والاضطرابات الدهنية؛ بالكشف عن زيادة المكونات الخلوية لأجل . يشير مصطلح "توقعي 00800510 أو 'توقع (ع01:08:005108)" إلى توقع

‎vo‏ التطور ‎Gif,‏ الشدة المحتملة لحالة مرضية. تشتمل طرق التوقع على تحديد كمية اختبار من

‏8 في عينة بيولوجية من كائن؛ ومقارنة كمية الاختبار بالكمية أو المدى المتوقع (مثل؛

‏كمية أو مدى من أفراد يعانون من مستويات مختلفة من شدة ‎ALS‏ مثلا) لأجل 00178.

تتناسب كميات مختلفة من 0118 في عينة الاختبار مع توقع معين لاضطراب مصاحب مع

8. يؤدي الكشف عن كمية 61278 عند مستوى متوقع محدد إلى التوقع بحالة الكاثئن. كما يوفر الاختراع الحالي طرق لرصد مسار أيض ‎glucose‏ عظم؛ عضلات واضطرابات دهنية مصاحبة مع 01718 عن طريق الكشف عن زيادة أو انخفاض المكونات الخلوية لأجل ‎.GDF§ ©‏ تشتمل طرق الرصد على تحديد كميات اختبار 6018 في عينة بيولوجية مأخوذة من كائن لمرة أولى وثانية؛ مع مقارنة الكميات. يشير التغير في كمية 0118 بين المرةٍ الأولى والثانية إلى تغير مسار شدة الاضطرابات المصاحبة مع 01178. يعرف الماهر في الفن أنه في الاضطرابات المصاحبة مع 61288 وحيث تفضل زيادة الكتلة العضلية؛ يشير انخفاض كمية ‎protein‏ و/أو نشاط 0018 بين المرة الأولى والثانية إلى سكون الاضطراب؛ وتشير زيادة ‎٠‏ الكمية إلى توقع الاضطراب. بصورة عكسية؛ في الاضطرابات المصاحبة مع 01018 حيث يفضل انخفاض الكتلة العضلية؛ يشير انخفاض كمية ‎protein‏ و/أو نشاط 0018 بين المرة الأولى والثانية إلى تطور الاضطراب؛ كما تشير زيادة الكمية إلى سكون الاضطراب. كما تكون اختبارات الرصد مفيدة لتقييم كفاءة التدخل العلاجي المحدد (مثل؛ انعكاس و/أو تخفيض

المرض) في مرضى معالجين من الاضطرابات المصاحبة مع ‎GDI‏ ‎Vo‏ يمكن استخدام مضادات الاختراع الحالي لتشخيص؛ توقع أو رصد بالكشف عن وجود 98 في الجسم أو في المعمل. تكون طرق الكشف معروفة جيدا في الفن وتشمل ‎ELISA‏ ‏الاختبار المناعي الإشعاعي؛ اختبار البقعة المناعية؛ اختبار بقعة ‎(Western‏ اختبار الاستشعاع المناعي؛ اختبار الترسيب المناعي؛ وتقنيات ‎Ailes‏ أخرى. قد تتوافر المضادات أيضا في مجموعة تشخيصية تضم واحد أو أكثر من هذه التقنيات الكشف عن ‎.GDF8‏ وقد ‎Ye‏ تشتمل هذه المجموعة على مكونات أخرى؛ تعبئة؛ تعليمات؛ أو مواد أخرى للمساعدة في الكشف عن ‎protein‏ واستخدام المجموعة. عند استخدام المضادات لأغراض ‎(Gad ll‏ التوقع؛ أو الرصد؛ يفضل تحسين هذه المضادات؛ ‎Nie‏ مع مجموعة مركبات ترابطية ‎(biotin Jie)‏ أو مجموعة دلالة بارزة ‎Jie)‏ ‏مجموعة ‎cfluorescent‏ مماثل إشعاعي أو ‎(enzyme‏ عند الرغبة؛ قد يتم تعليم المضادات © (سواء أحادية التكافؤ أو عديدة التكافو) باستخدام تقنيات تقليدية. تشتمل العلامات المناسبة على ‎chromophores «fluorophores‏ ذرات إشعاعية؛ عامل كاشضف شديد الإلكترون؛ ‎«enzymes‏ ومركبات ترابطية لها شركاء ارتباط محدد. يتم نموذجيا الكشف عن ‎enzymes‏ عن

Vv

طريق نشاطهم. على سبيل المثال؛ يمكن الكشف عن ‎peroxidase‏ الفجل الحار بقدرته على تحويل ‎(TMB) tetramethylbenzidine‏ مع صبغة زرقاء؛ مقدرة كميا بواسطة قياس الطيف الضوئي. تشتمل العلامات المناسبة الأخرى على ‎A IgG streptavidin sl avidiny biotin‏ ‎«protein‏ وأزواج مركبات ترابطية لمستقبل متعددة معروفة في الفن. تتضح بسهولة التعديلات

‎٠‏ والاحتمالات للماهرين في الفن؛ وتعتبر مكافئات ضمن مجال الاختراع الحالي.

‏تركيبات دوائية وطرق للإعطاء يوفر الاختراع الحالي تركيبات؛ تشمل مضادات الاختراع المكتشفة حالياء أي؛ ‎«polypeptides‏ 001701101601108 نواقل؛ مضادات أجسام؛ أجزاء مضاد جسم أو ‎protein‏ ‏ارتباط مولد مضاد وجزيئات صغيرة. تكون هذه التركيبة مناسبة للاستخدام الدوائي والإعطاء ‎٠‏ للمرضى. تشتمل التركيبات نموذجيا على واحد أو أكثر من جزيئات الاختراع الحالي؛ يفضل مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد؛ ومادة مسوغة مقبولة دوائيا. يمكن استخدام مضادات الاختراع في المعمل؛ خارج الجسم أو مندمجة في تركيبة دوائية عند الاتحاد مع مادة حاملة مقبولة دوائيا. حسب الاستخدام هناء تشتمل عبارة 'مادة مسوغة مقبولة دوائيا ‎"(pharmaccutically acceptable excipient)‏ على أي وكل مذيب؛ محلول؛ مثبت الأس ‎٠‏ الهيدروجيني؛ أوساط تشتيت؛ عوامل تغليف؛ عوامل مضادة للبكتيريا ومضادة للفطريات؛ محلول متساوي التوتر وعوامل تأخير الامتصاص؛ إلخ؛ ‎ally‏ تكون ملائمة للإعطاء الدوائي. قد تحتوي هذه التركيبة؛ بالإضافة إلى مضادات الاختراع ومادة حاملة؛ على مواد تخفيف متعددة؛ مواد حشوء؛ أملاح؛ ‎Gl Sie‏ أس هيدروجيني»؛ مواد تثبيت؛ مواد إذابة ومواد أخرى معروفة جيدا في الفن. يشير المصسطلح ‎Joie’‏ دوائيا ‎"(pharmaceutically acceptable) ٠‏ إلى مواد غير سامة لا تتدخل في فاعلية النشاط البيولوجي للمقومات النشطة. تعتمد خواص الحامل على طريقة الإعطاء. يعتبر استخدام هذه الأوساط والعوامل لمواد نشطة دوائيا هو أمر معروف جيدا في الفن وقد تحتوي التركيبات أيضا على مركبات نشطة أخرى ‎ig‏ وظائف علاجية تكميلية؛ إضافية؛ أو تعزيزية. كما توضع التركيبات الدوائية في حاوية؛ عبوة؛ أو موزع أدوية مع تعليمات عن كيفية الإعطاء. ‎Yo‏ قد تأخذ التركيبة الدوائية الخاصة بالاختراع شكل جسيم دهني يتحد فيه مضاد الاختراع؛ بالإضافة إلى أوساط حاملة مقبولة دوائيا أخرى؛ مع عامل كاره للماء ‎Jie‏ الدهون الموجودة في شكل متراكم كأيونات غروية؛ طبقات أحادية غير قابلة للذوبان؛ بلورات سائلة؛ أو طبقات ‎YAEL‏ aA ‏رقائقية في محلول مائي. تشتمل الدهون المناسبة للتكوين الدهني؛ دون تحديدء على‎ «saponin ¢phospholipids «lysolecithin «sulfatides «diglycerides «monoglycerides ‏إلخ. يدخل تحضير هذه المستحضرات الدهنية ضمن مستوى الماهر في الفن.‎ ebile acids (therapeutically effective Ladle ‏كما هو مستخدم هناء يشير مصطلح "كمية مؤثرة‎ ‏كمية كل مكون نشط في الطريقة أو التركيبة الدوائية والتي تكفي‎ laa) ‏(صنمصة" إلى‎ © ‏تحسين المتلازمات؛ الشفاء؛ أو زيادة معدل شفاء بعض‎ (Jia ‏لإظهار فائدة واضحة للمريض؛‎ ‏الحالات. عند تطبيق هذا المصطلح على مقوم نشط فردي؛ يعطى بمفرده؛ فإنه يشير إلى‎ ‏المقوم وحده. عند التطبيق على اتحاد؛ فإن هذا المصطلح يشير إلى كميات متحدة من‎ ‏المقومات النشطة التي تتسبب في تأثير علاجي؛ سواء تم إعطائها في اتحاد؛ تتابعي أو‎ ‏تزامني.‎ ٠ ‏عند تطبيق طريقة لمعالجة أو استخدام الاختراع الحالي؛ تعطى كمية مؤثرة علاجيا من؛‎ ‏مضاد يخص 01278 إلى كائن؛ مثل؛ كائن ثديي (مثل؛ الإنسان). يتم إعطاء مضاد‎ «is ‏الاختراع وفقا لطريقة الاختراع وحده أو في اتحاد مع علاجات أخرى مثل العامل المضاد‎ ‏للالتهاب. عند الإعطاء المشترك مع واحد أو أكثر من العوامل؛ يمكن إعطاء مضاد الاختراع‎ ‏تزامنيا مع العامل الثاني؛ أو تتابعيا. عند الإعطاء التتابعي؛ يقرر الطبيب المعالج النظام‎ Vo ‏الملائم لإعطاء مضاد الاختراع في اتحاد مع عوامل أخرى.‎ ‏التركيبات الدوائية منهاء في‎ (Jie ‏في أحد التجسيدات؛ يتم إعطاء مضادات الاختراع؛‎ ‏علاج اتحادي»؛ أي؛ في اتحاد مع عوامل أخرى مثل؛ العوامل العلاجية المفيدة لعلاج حالات‎ ‏أو اضطرابات مرضية؛ مثل الاضطرابات العضلية؛ الاضطرابات العضلية العصبية؛‎ ‏اضطرابات العظم المحثة أو الأيضية؛ اضطرابات دهنية؛ اضطرابات‎ ball ‏اضطرابات تحلل‎ ٠ ‏مثلا؛ بالإضافة إلى الاضطرابات الالتهابية‎ dnsulin ‏أو اضطرابات متعلقة ب‎ glucose ‏أيض‎ ‏في هذا السياق إلى إعطاء العوامل‎ "(in combination) ‏والحساسية. يشير مصطلح "في اتحاد‎ ‏تزامنيا أو تتابعيا. عند الإعطاء التتابعي؛ عند بداية إعطاء‎ Lal ‏في نفس الوقت جوهريا؛‎ ‏المركب الثاني يفضل أن يبقى أول المركبين مكتشف عند تركيزات فعالة في موضع المعالجة‎ ‏*؟ أو في الكاثن.‎ ‏تتكون التركيبة الدوائية للاختراع لتناسب الطريقة المقررة لإعطائها. تكون طرق الإعطاء‎ ‏معروفة للماهرين في الفن. كما يمكن الحصول على تركيبات يمكن إعطائها موضعيا أو‎

معوياء أو تكون قادرة على التنقل خلال الأغشية المخاطية. يمكن إعطاء مضاد الاختراع المستخدم في تركيبة دوائية لتطبيق طريقة الاختراع الحالي في تنوع من الطرق التقليدية؛ ‎(Jie‏ ‏التناول المعوي؛ الاستنشاق؛ الحقن في الجلد؛ تحت الجلدء؛ أو الوريد. تشتمل المحاليل أو المعلقات المستخدمة للتطبيق تحت الجلد أو في الأدمة على واحد © أو أكثر من المكونات التالية: مادة مخففة معقمة مثل ماء الحقن؛ محلول ملحي؛ زيوت ثابتة ‎propylene glycol «glycerine «polyethylene glycols‏ أو مذيبات تخليقية أخرى؛ عوامل مضادة للبكتريا مثل ‎¢methyl parabens sl benzyl alcohol‏ مضادات أكسدة مثل ‎ascorbic acid‏ أى ‎¢sodium bisulfite‏ عوامل كلابية ‎tethylenediaminetetraacetic acid Jie‏ مثبتات ‎citrates acetates Jia pH‏ أو ‎¢phosphates‏ وعوامل ضبط التواتر مثل ‎sodium chloride ٠‏ أو ©0©01:05. يمكن ضبط ‎pH‏ مع أحماض أو قواعد؛ مقل ‎hydrochloric acid‏ أو ‎sodium hydroxide‏ تغلف هذه المستحضرات في أمبولات؛ محاقن طرح أو قوارير جرعة متعددة مصنوعة من الزجاج أو البلاستيك. تشتمل التركيبات الدوائية المناسبة للحقن على محاليل مائية معقمة أو مشتقات ومساحيق معقمة لمستحضر مرتجل من محلول أو مشتت معقم قابل للحقن. للإعطاء في الوريد؛ تشتمل ‎٠‏ المواد الحاملة المقبولة دوائيا المناسبة على محلول ملحي فسيولوجي؛ ماء كابح للجراثيم؛ ‎(BASF, Parsippany, NJ) Cremophor™ EL‏ أو محلول ملحي مثبت ‎phosphate pH‏ ‎-(PBS)‏ في جميع الحالات» يجب أن تكون التركيبة معقمة كما يجب أن تكون مائعة إلى مدى قابلية الحقن السهل. يجب أن تكون المادة الحاملة المقبولة دوائيا مناسبة تحت شروط تصنيع وتخزين وتحفظ ضد التأثيرات الملوثة من الكائئنات المتعضية مثل البكتريا والفطريات. تكون ‎٠‏ المادة الحاملة هي مذيب أو وسط تشتيت يحتوي؛ ‎Nia‏ على ما امصقطاء؛ ‎polyol‏ (على سبيل ‎polyethylene glycol 5 cpropylene glycol «glycerol «lial‏ سائل؛ إلخ)؛ وخلطات مناسبة منها. يمكن الحفاظ على الميوعة الملائمة؛ مثلاء بواسطة استخدام غلاف مثل ‎lecithin‏ عن طريق صيانة القياس الجسيمي اللازم في حالة التشتيت وبواسطة استخدام منشطات السطح. يتحقق منع تأثيرات ‎cl KH‏ المتعضية بواسطة ‎Yo‏ عوامل مضادة للبكتريا ومضادة للفطريات مثل ‎«phenol «chlorobutanol «parabens‏ ‎«thimerosal «ascorbic acid‏ إلخ. في حالات معينة؛ يفضل احتواء التركيبة على عوامل متساوية التواترء ‎Jie‏ « السكريات» ‎sodium ¢sorbitol mannitol Jie polyalcohols‏

Yeo

‎chloride‏ يتم امتصاص المطول لتركيبات الحقن عن طريق احتواء التركيبة على عامل يؤخر الامتصاص؛ ‎١ .gelatin 5 aluminum monostearate «fia‏

‏عند إعطاء كمية مؤثرة علاجيا من مضاد جسم أو ‎protein‏ ارتباط مولد مضاد من

‎'ٍ ‏يكون عامل الربط في شكل‎ cada ‏بالحقن في الوريد؛ في الجلد أو تحت‎ ia ep aay)

‏© محلول مائي مقبول عن غير الطريق المعوي خال من ‎.pyrogen‏ إن تحضير محاليل ‎protein‏ إٍْ المقبولة عن غير الطريق المعوي؛ والتي لها ‎pH‏ مقرر؛ تساوي تواتر» ثبات؛ :

‏إلخ» تدخل ضمن الماهر في الفن. تحتوي تركيبة دوائية مفضلة للحقن في الوريد؛ في إ

‎cals‏ أو تحت الجلد؛ بالإضافة إلى عوامل ربط» على وسط ناقل متساوي التواتر مثل حقن ض ‎¢sodium chloride‏ حقن ‎<Ringer‏ حقن ‎«dextrose‏ حقن ‎«sodium chloride 5 dextrose‏ حقن ‎J‏ ‎dactated Ringer ٠‏ أو أوساط ناقلة أخرى معروفة في الفن. قد تشتمل أيضا التركيبات الدوائية للاختراع على مواد تثبيت؛ مواد حافظة؛ مثبتات ‎(pH‏ مضادات أكسدة؛ أو مواد إضافية أخرى إٍْ معروفة للماهر في الفن. ا تعتمد كمية مضاد الاختراع في التركيبة الدوائية للاختراع الحالي على طبيعة وشدة الحالة '

‏المراد علاجهاء وعلى طبيعة العلاجات السابقة التي يخضع لها المريض. بصورة نهائية؛ يقوم ‎i‏

‎'ٍ ‏الطبيب المعالج بتقرير كمية المضاد التي يتم بها معالجة كل مريض. مبدئيا؛ يقوم الطبيب‎ ٠ ‏بإعطاء جرع منخفضة من المضادات ويلاحظ استجابة المريض. قد يتم إعطاء جرع أكبر من إْ‎ : ‏المضادات حتى الوصول إلى أمثل تأثير علاجي على المريض؛ وفي هذه النقطة لا تزيد‎

‎i ‏إضافيا. يعتقد أن التركيبات الدوائية المختلفة المستخدمة لتنفيذ طريقة الاختراع الحالي‎ de yall

‏يجب أن تشمل ‎١٠‏ مجم إلى 00 ميكروجرام من المضاد لكل كجم من وزن الجسم. ‏© تختلف مدة العلاج باستخدام التركيبة الدوائية من الاختراع الحالي؛ بالاعتماد على شدة ' المرض المعالج والحالة والاستجابة الذاتية المحتملة لكل مريض. يعتقد أن تكون مدة كل } تطبيق من مضادء ‎ia‏ خلال طريق تحت الجلد و» ‎Sie‏ في مدى أسبوع واحد. بصورة ْ نهائية؛ يقرر الطبيب المدة المناسبة للعلاج باستخدام التركيبة العلاجية الخاصة بالاختراع ا الحالي. :

‎i ‏تشتمل التركيبات المعوية عموما على مادة مخففة خاملة أو مادة حاملة صالحة للأكل.‎ Yo ‏أو تضغط في أقراص. لأغراض الإعطاء العلاجي‎ gelatin ‏هذه التركيبات في كبسولات‎ Calis : ‏مضادء جزيء‎ Age ‏ارتباط‎ protein ‏المعوي؛ تندمج مضادات الاختراع (مثل؛ مضاد جسم أو‎ ! YAER

٠١١ ِ ‏صغير؛ إلخ) مع مواد مسوغة وتستخدم في شكل أقراص أو كبسولات. تدخل عوامل الربط‎ ‏المناسبة دوائياء و/أو المواد المساعدة كجزء من التركيبة. تحتوي الأقراص؛ الحبوب؛‎

Jie ‏الكبسولات؛ إلخ؛ على أي من المقومات التالية؛ أو مركبات لها طبيعة متماثلة؛ رابط‎ lactose ‏مجهري التبلور» صمغ كثيراء أو «ناداءع؛ مادة مسوغة مثل النشا أو‎ 6 magnesium Jie ‏أو نشا الذرة؛ مادة مزلجة‎ <Primogel™ «alginic acid ‏عامل تفكك مثل‎ © sucrose ‏غروي؛ عامل تحلية مثل‎ silicon dioxide Jie ‏مزلقة‎ 30k ¢Sterotes™ ‏أو‎ stearate ‏أو نكهة البرتقال.‎ cmethyl salicylate ‏أو متتقطععةة؛ أو عامل نكهة مثل النعناع الفلفلي»‎ ‏عند الإعطاء المعوي لكمية مؤثرة علاجيا من تركيبة دوائية من الاختراع؛ مثل؛‎ ‏يكون عامل الربط في شكل قرص؛ كبسولة؛ مسحوق؛ محلول أو‎ «GDF ‏مضاد يخص‎ ‎٠‏ إلكسير. عند الإعطاء في شكل ‎cpm‏ تحتوي التركيبة الدوائية من الاختراع إضافيا على مادة حاملة صلبة ‎gelatin Jie‏ أو مادة مساعدة. يحتوي القرصء الكبسولة؛ والمسحوق على ما بين حوالي © إلى 7245 من عامل الربطء ويفضل من حوالي ‎Yo‏ إلى 7960 من عامل الربط. عند الإعطاء في شكل سائل؛ قد تضاف المادة الحاملة السائلة كماء؛ بترول؛ زيوت حيوانية أو نباتية ‎Jie‏ زيت الفول السوداني؛ زيت معدني؛ زيت فول الصوياء أو زيت السمسم؛ أو زيوت ‎٠‏ صناعية (بعد مراعاة حساسية كل مريض و/أو مجموعة كبيرة من الأفراد لهذه المواد الحاملة السائلة) . يشتمل شكل السائل من التركيبة الدوائية على محلول ملحي فسيولوجي؛ ‎dextrose‏ أو محلول ‎saccharide‏ آخرء أو ‎propylene glycol «ethylene glycol Jie glycols‏ أو ‎polyethylene glycol‏ عند الإعطاء في شكل سائل؛ تشتمل التركيبة الدوائية على ما بين ‎٠.٠‏ إلى 7/98 من وزن عامل الربط» ويفضل من حوالي ‎١‏ إلى ‎٠‏ 75 من عامل الربط. ‎Y.‏ للإعطاء بالاستنشاق؛ يتم توصيل مضاد الاختراع في شكل بخاخ رذاذ من حاوية مضغوطة أو أداة توزيع؛ تحتوي على عامل دفع مناسب؛ ‎«Jia‏ غاز ‎«carbon dioxide Jie‏ أو رذاذة. وفقا لذلك» يمكن إعطاء المركبات الموصوفة هنا بواسطة الاستنشاق إلى النسيج الرئوي. : يشير مصطلح 'نسيج رثوي ‎(pulmonary tissue)‏ كما هو مستخدم هنا إلى أي نسيج من الجهاز التنفسي ويشمل الجهاز التنفسي العلوي والسفلي؛ ما لم يحدد خلاف ذلك. يمكن إعطاء ‎YO‏ مضاد 6078 المحدد في اتحاد مع واحد أو أكثر من الأشكال الموجودة لعلاج الأمراض الرئوية. ‏م7

في أحد أمثلة الإعطاء؛ يتكون المركب لرذاذة. في أحد التجسيدات؛ يمكن تخزين المركب في شكل مجفد ‎lia)‏ عند درجة حرارة الغرفة) ويعاد تكونها في محلول قبل الاستنشاق. يمكن أيضا صياغة مركب الاستنشاق باستخدام جهاز طبي؛ ‎(Jia‏ أداة استتشاق ‎ail)‏ ‏مثلا براءة الاختراع الأمريكية أرقام ‎1٠07٠0708‏ (أداة استتشاق مسحوق) و4 48 ‎10٠7‏ (أداة © استنشاق مسحوق جاف)). تشتمل أداة الاستنشاق على أقسام منفصلة لمركب نشط عند ‎pH‏ ‏مناسب للتخزين وقسم آخر لمثبت ‎pH‏ معادل؛ وآلية اتحاد المركب مع مثبت ‎pH‏ معادل قبل الترذيذ. في أحد التجسيدات؛ تكون أداة الاستنشاق عبارة عن أداة استتشاق جرعة مقاسة. على الرغم من عدم وجود ضرورة؛ يمكن استخدام مواد تعزيز توصيل من منشطات السطح لتعزيز التوصيل الرئوي. يشير "منشط السطح ‎(surfactant)‏ المستخدم هنا إلى مركب له أجزاء ‎٠‏ محبة للماء ومحبة للدهون تحث امتصاص أي عقار بالتفاعل البيني مع السطح البيني بين طورين غير مختلطين. تكون منشطات السطح مفيدة مع الجسيمات الجافة لأسباب متعددة؛ ‎Jie‏ اختزال تكتل الجسيمات؛ اختزال خلايا بلعمية كبيرة؛ إلخ. عند الاقتران مع منشط سطح رئة؛ يمكن إجراء امتصاص أكثر كفاءة للمركب؛ بسبب قيام منشطات السطح؛ مثل ‎DPPC‏ ‏بتسهيل انتشار المركب إلى حد كبير. تكون منشطات السطح معروفة جيدا في الفن وتشتمل؛ 1° دون تحديد؛ على ‎«phosphoglycerides‏ مثلا ‎«phosphatidylcholines‏ ‎diphosphatidyl glycerol 5 (DPPC) L-alpha-phosphatidylcholine dipalmitoyl‏ ‎¢(PEG) polyethylene glycol ¢fatty acids ¢hexadecanol ¢{(DPPG)‏ ‎sorbitan trioleate ¢oleic acid ¢palmitic acid ¢auryl ether ¢polyoxyethylene-9-‏ ‎¢sorbitan fatty acid ester ¢poloxomer ¢surfactin ¢glycocholate ¢(Span 85)‏ ‎.phospholipids ¢tyloxapol ¢sorbitan trioleate ٠‏ قد يتم الإعطاء التظامي بوسائل عبر الغشاء المخاطي أو عبر الجلد. على سبيل ‎JB‏ ‏في حالة مضادات الأجسام المشتملة على قسم ‎Fe‏ تكون التركيبات قادرة على التنقل عبر الغشاء المخاطي ‎(Jia)‏ الأمعاء؛ الفم؛ الرئة) خلال مسار متوسط بمستقبل ‎FoRn‏ (مثل؛ براءة الاختراع الأمريكية رقم 0517 107). بصفة عامة؛ يتم الإعطاء عبر الغشاء المخاطي؛ ‎Sie‏ ‎vo‏ .خلال استخدام أقراص مصء رشاشات أنفية؛ أدوات استنشاق؛ أو تحاميل. للإعطاء عبر الأدمة؛ تتكون المركبات النشطة في مراهم؛ دهانات ملطفة؛ هلامات؛ رقع أو كريمات كما هو معروف عموما في الفن. للإعطاء عبر الغشاء المخاطي أو عبر ‎YAER‏

YoY ‏الأدمة؛ تستخدم عوامل الإنفاذ الملائمة للحاجز المراد اختراقه في المستحضر. تكون عوامل‎ ٍ ‏مادة تنظيف؛ أملاح الصفراء؛ ومشتقات‎ Sia ‏الإنفاذ هذه معروفة عموما في الفن؛ وتشمل؛‎ -fusidic acid ‏تتكون التركيبات الدوائية من تركيبات مناسبة لعلاج الجينات؛ أي؛ التركيبات المشتملة على‎ ‏علاج الجينات؛ تشتمل المادة الحاملة المقبولة‎ Alla ‏المكتشفة هناء في‎ polynucleotides © pH ‏ماء؛ مثبتات‎ cationic ‏أنظمة استحلاب‎ collagen ‏على دهون؛ كريات‎ Dia ‏دوائيا؛‎ ‎Mi) polymer ‏جسيمات مجهرية‎ chylomicron ‏محلول ملحي؛ نواقل فيروسية؛ بواقي‎ dlipoplexes «polymer ‏جسيمات ذهبية؛ معقدات‎ ¢(chitosan-DNA ‏أو‎ gelatin-DNA ‏إلخ؛ انظرء مثلا:‎ epolyplexes (Gardlik et al. (2005) Med. Sci. Monit. 11(4):RA110-21). Ve ‏التثبيت والاستبقاء‎ ‏في أحد التجسيدات؛ يرتبط فيزيائيا مضاد 061178 محدد مع جزء يحسن من ثباته واستبقائه‎ ‏في الدورة الدموية؛ مثلا؛ في الدم؛ المصلء السائل الليمفاوي. غسل قصبي حويصلي أو قصبي‎ ‏ضعف.‎ 5٠0 ‏أو‎ ٠0 8 7 1.0 ‏بما لا يقل عن‎ a ‏رثوي؛ أو أنسجة أخرى؛‎ ‏لاختراع مع مواد حاملة تحمي من‎ ١ ‏يمكن تحضير المضادات المكتشفة حاليا من‎ yo ‏الإزالة السريعة من الجسم؛ مثل مستحضر الإطلاق الموجه؛ الذي يشمل ازدراعات‎ ‏ملائمة‎ polymers ‏وأنظمة توصيل مجهرية مكبسلة. يمكن استخدام مواد الانحلال الحيوي؛‎ «collagen «polyglycolic acid «polyanhydrides ‏عصعايطا‎ vinyl acetate ‏حيوياء مثل‎ ‏ولاعه ع11ه01718. تتضح طرق تحضير هذه المستحضرات للماهرين في‎ ¢polyorthoesters ‏الفن . كما يمكن استخدام معلقات الجسيمات الدهنية المحتوية على المضادات المكتشفة كمواد‎ ٠ ‏حاملة مقبولة دوائيا. يمكن تحضير هذه المعلقات وفقا لطرق معروفة للماهرين في الفن.‎ ‏غير مولد‎ polymer ‏مثل»‎ cpolymer ‏على سبيل المثال؛ يرتبط مضاد 6018 المحدد مع‎ : polymers ‏تتغير‎ polyethylene oxides ‏أو‎ polyalkylene oxides Jie ‏مضاد جوهرياء‎

Yoo ‏الجزيئي بين حوالي‎ base ‏التي متوسط أوزان‎ polymers ‏المناسبة بالوزن. يمكن استخدام‎ ‏إلى حوالي‎ ٠000 ‏إلى حوالي ٠١٠٠5٠ء أو حوالي‎ ٠٠٠١ ‏(أو حوالي‎ Youre ‏إلى حوالي‎ 5 88

0 على سبيل المثال؛ يتحد مضاد 0178 المحدد مع ‎polymer‏ قابل للذوبان في الماء؛ ‎Jie‏ ‎polyvinyl polymers‏ محب للماء؛ مثلاء ‎.polyvinylpyrrolidone s polyvinylalcohol‏ تشتمل القائمة غير المحددة من ‎polymers‏ على ‎Jie polyalkylene oxide homopolymers‏ ‎(PEG) polyethylene glycol‏ أو ‎«polyoxyethylenated polyols «polypropylene glycols‏ ‎copolymers ©‏ منها 5 ‎copolymers‏ إخماد منهاء بشرط الحفاظ على قابلية الذوبان في الماء لأجل 35 مم0 الإخماد. تشتمل ‎polymers‏ المفيدة ‎Lilia)‏ على ‎Jis polyoxyalkylenes‏ ‎copolymers 5 ¢polyoxypropylene «polyoxyethylene‏ إخماد من ‎polyoxyethylene‏ ‎polysaccharides ¢carbomers ¢polymethacrylates ¢(Pluronics) polyoxypropylene s‏ متفرعة أو غير متفرعة؛ التي تشتمل على ‎«saccharide monomers D-mannose‏ ‎«D-glucuronic acid <L-arabinose «D-xylose «fructose «fucose «<D- and L-galactose Ve‏ ا ‎D-mannuronic acid «D-galacturonic acid «sialic acid‏ (مثلاء ‎«polymannuronic acid‏ أو ‎neuraminic acid y D-glucose «D-galactosamine «D-glucosamine «(alginic acid‏ ض متضمنا ‎homopolysaccharides‏ و ‎heteropolysaccharides‏ مقل ‎«amylopectin «lactose‏ نشاء نشا ‎«glycogen «dextrins «dextran «dextrane sulfate <amylose <hydroxyethyl‏ 0 ‎VO‏ وحدة فرعية ‎polysaccharide‏ من ‎mucopolysaccharides‏ قتعي ‎¢hyaluronic acid «Mis‏ ‎polymers‏ من ‎alcohols‏ السكر ‎¢heparin ¢polymannitol 5 polysorbitol Jie‏ إلخ. ترتبط مركبات أخرى مع نفس ‎«polymer‏ مثل؛ ‎cytotoxin‏ علامة؛ أو عامل استهداف ‎aT‏ مثل مضاد 0610178 آخر أو مركب ترابطي غير مرتبط. يمكن استخدام ‎«(PAOs) alkoxy-terminated ~~ polyalkylene oxides‏ أحادي النخاط» مثلاء ‎alkyl-terminated «(mPEGs) monomethoxy-terminated polyethylene glycols | ٠‏ بن ‎polyethylene oxides (glycols) 5 <polymers‏ متكرر النشاط لتنفيذ ارتباط مستعرض (انظرء ‎Ola‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 54514914). في أحد التجسيدات؛ يفضل»؛ دون ضرورة لذلك؛ أن يكون ‎polymer‏ قابل للذوبان في الماء قبل الارتباط المستعرض مع المركب الترابطي. بصورة عامة؛ بعد الارتباط المستعرض» يكون ‎Yo‏ المنتج قابل للذوبان في الماء؛ ‎Sie‏ يظهر قابلية ذوبان في الماء من حوالي ‎000٠1‏ مجم/ ملليلتر على الأقل؛ والأفضل أن يكون حوالي )+ مجم/ ملليلتر على ‎(JH)‏ والأفضل من ذلك أن يكون من ‎١‏ مجم/ ملليلتر على الأقل. بالإضافة إلى ذلك؛ لا يكون ‎polymer‏ مولد ‎YAER‏ i § Veo ٍ ‏للمناعة عال في شكل اقتران؛ لا يكون له لزوجة غير ملائمة للانتشار في الوريدء الرشء أو‎ ; ‏الحقن؛ إذا تقرر إعطاء الاقتران بهذه الطرق.‎ ‏على مجموعة فردية متفاعلة. يساعد ذلك على ا‎ polymer ‏في أحد التجسيدات؛ يحتوي‎ ‏تفادي الارتباط المستعرض لجزيئات المركب الترابطي مع بعضها البعض. على الرغم من‎ ‏ذلك؛ تدخل ضمن نطاق الاختراع؛ زيادة شروط التفاعل إلى الحد الأقصى لخفض الارتباط إِ‎ ‏المستعرض بين جزيئات المركب الترابطي؛ أو لتنقية منتجات التفاعل خلال الترشيح الهلامي إٍُ‎ ‏أو التحليل الكروماتوجرافي للتبادل الأيوني لاستخلاص مشتقات متجانسة جوهريا. في ا‎ : ‏على اثنين أو أكثر من المجموعات المتفاعلة لأغراض ربط‎ polymer ‏تجسيدات أخرى؛ يحتوي‎ ‏مرة أخرى؛ يمكن استخدام الترشيح الهلامي‎ polymer ‏المركبات الترابطية المتعددة مع أساس‎ ْ ‏لأيوني لاستخلاص المشتقات المطلوبة في شكل متجانس‎ ١ ‏أو التحليل الكروماتوجرافي للتبادل‎ ٠ ‏جوهريا.‎ ‎i ‏دالتون‎ ٠7٠080١0 ‏دالتون؛ ويفضل‎ 500٠0٠6١ ‏بين حوالي‎ polymer ‏يتراوح الوزن الجزيئي من‎ ‏على الأقل؛ أو 000636 دالتون على الأقل؛ أو 400659 دالتون على الأقل. يعتمد الوزن‎ ‏(مثل؛ بنيته؛ ا[‎ polymer ‏الجزيئي المختار على المقاس المؤثر للاقتران المقرر تنفيذه؛ طبيعة‎ ‏خطي أو متفرع مثلا)؛ ودرجة الاشتقاق.‎ VO ْ ‏الارتباط‎ Mia 001006: ‏المحدد مع‎ GDF8 ‏يمكن استخدام رابطة تساهمية لربط مضاد‎ i epsilon amino ‏طرفي لمركبات ترابطية ومجموعات‎ -N amino ‏المستعرض مع مجموعة‎ } «carboxyl «imino «amino ‏المركب الترابطي» بالإضافة إلى‎ lysine ‏الموجودة على متخلفات‎ ّ ‏تساهميا مباشرة‎ polymer ‏أو مجموعات محبة للماء أخرى. قد يرتبط‎ hydroxyl «sulfhydryl ‏مع مضادات 0178 دون استخدام عامل ارتباط مستعرض متعدد الوظائف (ثنائي الوظيفة‎ Ve 1 ‏بطرق كيميائية معروفة تعتمد على‎ amino ‏عادة). يتحقق الارتباط التساهمي مع مجموعات‎ ) PEG ) ‏متفاعلة‎ aldehyde ‏ومجموعات‎ carbonyl diimidazole <cyanuric chloride acetic ‏و‎ DMSO ‏زائد‎ PEG <bromoacetaldehyde ‏من‎ diethyl acetyl ‏زائد‎ alkoxide «4-hydroxybenzaldehyde ‏من‎ phenoxide +l) PEG chloride ‏أو‎ «anhydride ] 2,4,5-trichlorophenyl «Ja i dithiocarbonate PEG «dda ii succinimidyl esters 8

J ‏يمكن اشتقاق مجموعات‎ .(P-nitrophenylchloroformate ‏نشط‎ PEG ‏أو‎ cloroformate ‏يمكن اشتقاق مجموعات إ‎ carbodiimide ‏باستخدام‎ PEG-amine ‏عن طريق اقتران‎ carboxyl ُ YAR

1 ١ : alkoxy-PEG ‏(مثلاء‎ maleimido ‏مستبدل مع‎ PEG ‏عن طريق الاقتران مع‎ sulfhydryl sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1 -carboxylate) ‏زائد‎ amine 1 ‏لمجموعات‎ thiolated ‏بصورة بديلة؛ قد تتم‎ . (PEG-maleimide ‏أو‎ (WO 97/10847 ail) 3 (lysine ‏على متخلفات‎ epsilon amino ‏حر على المركب الترابطي (مثل » مجموعات‎ amino i ‏وتقترن عندئذ مع مشتقات تحتوي على‎ (Traut ‏(عامل كاشف‎ 2-imino-thiolane ‏مع‎ © 4 ‏مثلاء كما هو موصوف هنا في:‎ (PEG ‏من‎ maleimide { Pedley et al. (1994) Br. J. Cancer 70:1126-30. 1 ‏مثلاء من:‎ (GDF ‏الوظيفية التي يمكن ارتباطها مع مضاد‎ PEG polymers ‏تتوافر‎ ‎| Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, AL). : PEG amino acid esters «<amino-PEG ‏على‎ «Nie ‏المتوافرة تجارياء‎ PEG ‏تشتمل مشتقات‎ ٠ 1 «carboxymethylated PEG «PEG-succinate «PEG-thiol (PEG-hydrazide 1 (PEG succinimidyl succinate <PEG amino acids «PEG-propionic acid 1 «carboxymethylated PEG ‏من‎ succinimidyl ester <PEG succinimidyl propionate ً camino acid PEGs ‏من‎ succinimidyl esters <PEG ‏من‎ succinimidyl carbonate

PEG tresylate <PEG-nitrophenyl carbonate «PEG-oxycarbonylimidazole 1° : «PEG-maleimide PEG vinylsulfone «PEG-aldehyde «PEG-glycidyl ether : PEG vinyl ‏مشتقات‎ cheterofunctional PEGs «PEG-orthopyridyl-disulfide i ‏هذه‎ PEG ‏تختلف شروط تفاعل اقتران مشتقات‎ .PEG phospholides y «PEG silanes i PEG ‏ومشتق‎ PEGylation ‏بالاعتماد على مضاد 00178 المحدد؛ الدرجة المطلوبة من‎ ‏على: النقطة المطلوبة‎ PEG ‏المستخدم. تشتمل بعض العوامل المشاركة في اختيار مشتقات‎ ٠ : ‏الثبات الهيدروليتي وتفاعلية المشتقات؛‎ (cysteine R ‏أو مجموعات‎ lysine Jie) ‏من الارتباط‎ ‏الثبات؛ السمية والتوليد المضاد للاتصال. الملائمة للتحليل؛ إلخ. يوفر الصانع تعليمات محددة‎ : ‏لاستخدام أي مشتق محدد.‎ j ‏عن‎ ie ‏عن المواد البادئة غير المتفاعلة؛‎ polymer s GDF8 ‏قد تنفصل اقترانات مضاد‎ ‏طريق الترشيح الهلامي أو التحليل الكروماتوجرافي للتبادل الأيوني؛ أو أشكال أخرى من ل‎ Yo 1 ‏تتقى الأنواع المتغايرة للاقترانات مع بعضهم البعض‎ HPLC ‏التحليل الكروماتوجرافي؛ مثل؛‎ ‏الأنواع المحتوية على واحد أو اثنين إَ‎ (Jie) ‏بنفس الطريقة. كما يمكن انحلال الأنواع المختلفة‎ ‏م"‎

و

من متخلفات ‎(PEG‏ بسبب الاختلاف في الخواص الأيونية ‎amino acids Jay‏ غير المتفاعلة ‎i‏ ‏(انظر؛ مثلاء 96/34015 ‎(WO‏ يعتقد أن تقوم ‎proteins 5 polynucleotides‏ الاختراع الحالي بإظهار واحد أو أكثر من ! ض الاستخدامات أو الأنشطة البيولوجية المذكورة هنا (بما في ذلك الأنشطة المصاحبة للاختبارات ‎i‏ ‏© المذكورة أدناه) . تتوافر الاستخدامات أو الأنشطة المحددة لأجل 0165م الاختراع الحالي عن ‎i‏ ‏طريق إعطاء أو استخدام هذه ‎«proteins‏ أو عن طريق إعطاء أو استخدام ‎i polynucleotides‏ تشفر هذه ‎lia) proteins‏ في علاجات الجينات أو نواقل مناسبة لإدخال ‎(DNA‏ 1 قد يكون من المفيد أن يتم صياغة تركيبات معوية أو غير معوية في شكل وحدة جرعة ‎i‏ ‏لسهولة الإعطاء وانتظام الجرعة. يشير شكل وحدة الجرعة كما هو مستخدم هنا إلى وحدات ‎i‏ ‎٠‏ منفصلة ماديا ملائمة كجرعات وحدية للكائن المراد علاجه؛ تحتوي كل جرعة على كمية مقدرة ' مسبقا من مركب نشط محسوب للحصول على التأثير العلاجي المرغوب مع المادة الحاملة الدوائية المطلوبة. تتحدد مواصفة أشكال وحدة الجرعة من الاختراع بواسطة وتعتمد مباشرة على السمات الفريدة للمركب النشط؛ التأثير العلاجي الخاص المراد تحقيقه؛ والحدود المتداولة 1 في فن صياغة ذلك المركب النشط لمعالجة الأفراد. ل ‎Vo‏ يتعلق جانب آخر للاختراع الحالي طبقًا لذلك بمجموعات لإعطاء مضادات 0118 من ‎i‏ ‏الاختراع الحالي؛ مثلاء مع أو بدون مركبات علاجية ‎coral‏ أو باستخدام مضادات 01:18 : كأداة بحثية أو علاجية لتحديد وجود و/أو مستوى 0118 في عينة حيوية؛ مثل مجموعة ; ‎.ELISA‏ في تطبيق؛ تشمل المجموعة واحدًا أو أكثر من مضادات 01178 مصاغة في مادة : حاملة دوائية؛ وعاملاً واحدًا على الأقل؛ ‎ie‏ عامل علاجي؛ مصاغ حسب الملاءمة؛ في 1 ‎٠‏ واحد أو أكثر من المستحضرات الدوائية المفضلة. 3 إن الأمثلة التالية مذكورة للمساعدة في فهم الاختراع» لكن لا يقصد بهاء ولا يجب اعتبارهاء 5 138 على نطاق الاختراع بأية طريقة. لا تتضمن الأمثلة الوصف التفصيلي للطرق التقليدية؛ : مثل تكوين ورم هجين» ‎ELISA‏ اختبارات الانقسام؛ تحليل قياس خلوي انسيابي وتقنيات ا ‎DNA‏ مخلق. إن تلك الطرق معروفة ‎Tus‏ لأصحاب المهارة العادية في الفن. ‎i‏ ‎Yo‏ إن المحتويات الكلية لكل المراجع؛ براءات الاختراع؛ طلبات براءة الاختراع المنشورة؛ :ٍ ووثائق براءة الاختراع الأخرى المذكورة على مدار هذا الطلب مدمجة هنا بالإشارة. ' م" إ

٠١ ‏ومدعم بالأمثلة التالية. على أية حال؛ لا يجب اعتبار‎ Lila) ‏إن الاختراع الحالي موضح‎ ‏هذه الأمثلة بأية طريقة محددة إضافيًا لنطاق الاختراع. على النقيض؛ من له مهارة عادية في‎ ‏سوف يدرك تمامًا أن هناك تطبيقات؛ تعديلات ومكافئات أخرى للاختراع الحالي بدون‎ dl ‏التخلي عن جوهر الاختراع الحالي و/أو نطاق عناصر الحماية الملحقة.‎ ‏الأمثلة‎ ©

GDF8 ‏مضاد‎ RK22 ‏توليد خلايا ورم هجين وعزل‎ :١ ‏مثال‎ ‎(myostatin) GDF8 ‏مزالة‎ (jy ‏تحصن‎ ‎(McPherron et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:12457-61) ‏مخلق‎ GDF8 dimer ‏ميكروجرام من‎ ٠١و‎ Freund ‏بحقن تحت الجلد مع مادة مساعدة كاملة‎ ‏في أوساط مشروطة حسب الوصف في‎ CHO ‏منقى من خلية‎ ٠

Lee and McPherron (1999) Curr. Opin. Genet. Dev. 9:604-07.

Freund ‏تعطى حقنات تعززية عديدة من نفس الكمية من 0118 ومادة مساعدة غير كاملة‎ ‏ميكروجرام‎ ١ ‏عند فترات فاصلة أسبوعين. يعطى حقن نهائي في الوريد في وريد الذيل بكمية‎ ‏قبل عزل خلايا الطحال من الفئران التي تظهر العيارات العالية من 808 مضادة‎ 5 : ‏فأري‎ el aia ‏تندمج خلايا الطحال المعزولة مع خلايا‎ .60178 ١٠ : ‏يوم تجمع المواد الطافية من‎ ١-٠١ ‏بعد‎ (ATCC Accession No. P3X63.Ag8.653) ! ‏انظر مثال‎ (GDF8 ‏المضاد‎ WAb ‏من أجل مستويات‎ ELISA ‏الأورام الهجينة وتختبر بواسطة‎ : ‏لتأكيد أحادية النسخ؛ تنسخ الأورام الهجينة المختارة لدراسات إضافية بتخفيف مقيد متكرر.‎ ." ] ‏منتقاة من المواد الطافية‎ Abs ‏إن المواد الطافية من أورام هجينة تظهر مضاد 01178 و/أو‎ ‏باستخدام طرق تحليل كروماتوجرافي بالانجذاب قياسية معروفة جيدًا في الفنء يتم اختبارها من‎ ٠ : ‏نسخة مختيرة أوليًا للارتباط‎ VF ‏أجل الخصوصية في الاختبارات الموصوفة في المثال 7. من‎ ‏من بين هذه المنتقاة للتحليل الإضافي.‎ RK22 ‏كان‎ «GDF8 ‏مع‎ ‎: 0118 ‏متفاعل بصفة خاصة مع‎ RK22 Ab :Y ‏مثال‎ ‎: ELISA ‏له انجذاب كبير من أجل 8 أكبر من 314011 في اختبارات‎ 81+22 :١-١ ‏مثال‎ ‏إ‎ antibodies ‏مضادات أجسام‎ = Abs © i antibody ‏مضاد جسم‎ = Ab ©

7.4 تستخدم تقنيات ‎ELISA‏ قياسية تستخدم ‎GDF8 Le)‏ أو 311011 لتحديد خصوصية ‎RK22‏ ‏للارتباط مع ‎«GDF8‏ أي؛ لتحديد ما )13 كانت ‎Abs‏ تظهر انجذابًا من أجل 00178 أكبر من الانجذاب من أجل 1. ينتقى ‎GDF8 protein‏ = مخلق ‎GDF8)‏ ناضج 5 ‎peptide‏ أولي 8) ‎proteins‏ 314011 ويتم تمييزهما حسب الشرح مسبقًا في ‎U.S.

Patent Published Application No. 2004/0142382. °‏ تجرى عملية ‎biotinylated‏ منفردة من أجل معقد كامن 31/0011 عند نسبة ‎٠١‏ جزيء جرامي من )21217 ‎EZ-link Sulfo-NHS-Biotin (Pierce, Rockford, IL, Cat.

No.‏ إلى ‎١‏ جزيء جرامي من المعقد لمدة ساعتين على ثلج. ينتهي التفاعل بتقليل الأس الهيدروجيني باستخدم م ‎«TFA‏ ويخضع المعقد 40 لتحليل كروماتوجرافي على عمود ‎C4 Jupiter 250 x 4.6 mm column (Phenomenex, Torrance, CA) ٠‏ لفصل ‎protein‏ الناضج ‎Ji)‏ 06118 ناضج من ‎peptide‏ أولي 58 أو 1 ناضج من ‎peptide‏ أولي ‎.(BMP11‏ تجمع أجزاء ‎biotinylated GDF8‏ الناضج أو ‎biotinylated BMP11‏ الناضج المنفصلة مع تدرج ‎«TFA/CH3CN‏ تركز؛ وتقدر كميًا بواسطة مجموعة عامل كاشف اختبار ‎.(Pierce, Rockford, IL, Cat.

No. 23235) MicroBCATM protein‏ ‎١٠‏ - يغطى طبق دقيق العيار به 97 عين (مغطى مسبقًا طوال الليل عند ؛؟"مئوية مع 0 ض ميكروجرام/ ‎streptavidin alle‏ في ‎(PBS‏ مع 0.+ ميكروجرام/ ماليلتقر ‎GDF8‏ ‎biotinylated‏ أو ‎biotinylated BMP11‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. تزال الزيادة من 0018 أو 314011 بالغسيل مع ‎PBS‏ يحتوي على 7001 (حجم/ حجم) ‎Tween 20‏ (مثبت أس هيدروجيني ‎٠ (PBST‏ يخمد نشاط الأطباق لمدة ساعة واحدة عند درجة إٍ ‎٠‏ حرارة الغرفة في محلول ‎(Pierce) SuperBlock™‏ ثم تشطف عندئذ مع ‎PBS‏ تحضن الأطباق المغطاة مع 60178 أو 1334011 عند درجة حرارة الغرفة ‎sad‏ ساعة واحدة مع ‎٠٠١‏ ‏| ميكرولتر من مادة طافية مسبق إخماد نشاطها مجمعة من أورام ‎dish‏ 81222 أو مع ‎RK22‏ ‎Ab‏ نقي عند تركيزات مختلفة. لمقارنة الارتباط غير الخاص يستخدم ‎RK22 Ab‏ (انظر طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم: 708/10 4 ‎Ve‏ المندمج محتوياتها بالإشارة الكاملة كمرجع). ‎Yo‏ الذي يرتبط مع ويثبط كلا من ‎BMP11 5 GDF8‏ إلى جانب أن ‎Ab‏ غير الخاص ‎(Irr.

Ab)‏ لا ‎i‏ ‏يرتبط مع أي من ‎GDF8‏ أو 514011 وتختبر ‎ad‏ بصورة منفردة أوساط المقارنة. يزال ‎Ab‏ ‏غير المرتبط بثلاث مرات غسيل مع ‎PBST‏ ثم ؟ مرات غسيل مع ‎PBS‏ يضاف إلى كل ‎YAEL‏

1 ١٠ ele ‏فأري من‎ IgG ‏ميكرولتر من تخفيف )402 © من اتحاد (118- مضاد‎ ٠5٠ ‏عين‎ ‎| ‏تحضن الأطباق عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. يغسل كل طبق © مرات مع‎ : TMB ‏ويجهز لتفاعل لون بإضافة عامل كاشضف‎ PBS ‏وبعد ذلك ؟ مرات مع‎ PBST vA 112804 ‏ميكرولتر من‎ ٠٠١ ‏(عص0 هدص 710إا602008)). يتوقف تفاعل اللون بإضافة‎ 1 ‏جزيئي جرامي . تقاس الإشارة المتولدة بقراءة الكثافة البصرية عند £04 نائومتر لكل عين‎ © ‏باستخدام قارئ طبق دقيق العيار.‎ ْ RK22 ‏يكون للمواد الطافية من الأورام الهجين‎ ؛)ب(١و‎ (NY ‏كما هو مبين في الشكلين‎ ! ‏المقارن؛‎ Ab ‏ارتباط أكبر مع 00178 من 314011 مقارنة بالمادة الطافية المعزولة من‎ : ‏بتوضيح أن الانجذاب‎ RK22 ‏يتأكد تمائل الانجذاب الأكبر من أجل 8 بواسطة‎ .5

J ‏الأكبر من أجل 6078 لمضادات الأجسام هذه غير معتمد على الجرعة. كما يتضح في‎ ٠ ‏المختبرة تظهر ارتباطًا مع 001:8 أكبر‎ RK22 Abs ‏الشكلين ١(أ) و(ب)؛ عند كل تركيز فإن‎ ‏مع 314011 بينما على النقيض؛ يرتبط‎ aa ‏ارتباطًا ضئيلاً‎ RK22 ‏يظهر‎ BMPI1 ‏منه مع‎ i .BMP11 5 GDF8 ‏مع كل من‎ RK35 ‏المقارن‎ Ab

GDF8 Jal ‏من‎ RK22 ‏انجذابات ارتباط‎ :Y-Y ‏مثال‎ ‎BlAcore ‏بتقنية‎ GDF-8 ‏مع‎ RK22 ‏التفاعلات الحركية الجزيئية لمضاد الجسم‎ GS ‏تحلل‎ Ne ْ' ‏وتشتق ثوابت المعدل الحركي الظاهرة. في هذه الدراسات قمنا بقياس‎ plasmon resonance ‏مرتبط بطور صلب. يتم التحكم في التوجيه‎ GDF-8 ‏مع‎ (AD) ‏قابل للذوبان‎ Ab ‏ارتباط‎ ‎' GDF-8 ‏السطحي من أجل 0017-8 الساكن فوق سطح أداة الإحساس الحيوية باستخدام‎ streptavidin ‏فوق رقاقات إحساس حيوي‎ bio-GDF-8 ‏يسكن‎ «(bio-GDF-8) biotinylated ْ ‏في ثلاثة مقادير متساوية ويقاس الارتباط كوظيفة‎ Ab ‏وعندئذ؛ تستخدم تركيزات مختلفة من‎ ٠ ; ‏والتلازم (ي6) الظاهرة وتستخدم‎ (Ko) ‏للزمن. من هذه القياسات تشتق ثوابت معدل التفكك‎ ‏النشط؛ المحدد أنه الجزء إٍ‎ RK22 ‏للتفاعل. يتحدد تركيز‎ (Kg) ‏لحساب ثابت انجذاب الارتباط‎ : ‏القادر على الارتباط مع‎ Ab ‏بقياس جزء‎ (ps ‏الوظيفي‎ AD ‏من‎ ‏تحت قيود تحول كتلة جزئي بتغطية‎ BlAcore ‏الساكن على الرقاقة باستخدام‎ bio-GDF-8 ‏عند معدلات تدفق مختلفة. يحسب معدل التلازم والتفكك لكل إ‎ Ab ‏كثافة سطحية كبيرة وحقن‎ Yo ‏صفر-؟‎ -١ BIA ‏في نفس الوقت باستخدام مطابقة شاملة مع طراز برنامج تقييم‎ Ab ‏تركيز‎ ‎ْ .(biaevaluation version 3.0.2) y YA£R

١ «(BR-1000-32) Sensor Chip SA «BlAcore 2000 ‏يمكن الحصول على نظام‎ 7.4 ‏عند أس هيدروجيني‎ HEPES ‏مثبت أس هيدروجيني )00+ جزيئي جرامي‎ 0 ٠١ polysorbate 70.205 3 EDTA ‏؟ مللي جزيئي جرامي‎ NaCl ‏جرامي‎ Apa ‏.؛‎ . .BIAcore AB, Uppsala, Sweden ‏من‎ (NHS-EP) N-hydroxysuccinimide ‏(حجم/حجم)‎ ‏في‎ (Sigma) ‏(حجم/ حجم)‎ TFA 7001 ‏يحضر‎ (Lot 25251-15) ‏الآدمي‎ bio-GDF8 ‏ينقى‎ © ‏ماء. تحلل البيانات التجريبية من التحديدات الحركية لتفاعل 0م- مولد مضاد باستخدام‎ .BIAevaluation software version 3.0.2 ‏فوق‎ HBS/EP ‏يستبقى تدفق مستمر من مثبت أس هيدروجين‎ «bio-GFDS ‏لتجهيز سطح‎ ‏منها ض‎ JS) ‏على سطح أداة الإحساس مع © حقنات‎ streptavidin ‏سطح أداة الإحساس. يتكيف‎ ‏مللي جزيئي جرامي‎ YO 3 NaCl ‏جزيئي جرامي‎ ١ ‏المدة دقيقة واحدة) من محلول يحتوي على‎ ٠ ‏ميكروجرام/ ملليلتر ض‎ ١ ‏إلى‎ bio-GDF8 ‏يخفف‎ (RU Yo + + >( ‏لتغليف عالي الكثافة‎ .NaOH ‏بالتدفق فوقها. لتغليف‎ streptavidin ‏ويسكن على رقاقة‎ HBS/EP ‏في مثبت أس هيدروجيني‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر ويختلف‎ ٠.١ ‏يخفف 0017-8 إضافيا إلى‎ (RU T+—Y +) ‏قليل الكثافة‎ ‏على خلية‎ streptavidin ‏المحقون طبقًا للكثافة المطلوبة. يستخدم سطح‎ bio-GDF-8 ‏حجم‎ ‎| ‏مقارن تستخدم خلية التدفق الأولى كسطح مرجعي لتصحيح‎ JUS ‏كسطح مرجعي.‎ ١ ‏تدفق‎ ١ ‏مؤشر انكسار الكتلة؛ تأثيرات المادة البينية والارتباط غير الخاص؛ وتغلف خلايا التدفق‎ ‏الثانية؛ الثالثة والرابعة مع جزيء الإمساك.‎ ‏الساكن على الرقاقة باستخدام‎ bio-GDF-8 ‏القادر على الارتباط مع‎ RK22 Ab ‏يحلل جزء‎ ‏مضاد 0178 عند‎ Ab ‏تحت قيود انتقال الكتلة الجزيئية. في هذه التجارب يحقن‎ BlAcore ‏عند معدلات تدفق‎ (YA OD ‏نانوجزيئي جرامي (تركيزات مقاسة على أساس‎ ٠١٠١و‎ You ٠٠ ‏ميكرولتر/ دقيقة. يمكن تحديد قيود انتقال الكتلة بالفحص البصري‎ ٠٠١١و‎ 00 (Fe ٠٠ ‏لرسوم أداة الإحساس» لأن قيم الميل تزداد مع زيادة معدلات التدفق. تتجدد أسطح أداة‎

Jv) TFA ‏الإحساس الحيوية باستخدام © ميكرولتر من‎ «(BlAcore) HBS-EP ‏في مثبت أس هيدروجيني‎ GDF ‏المضاد‎ RK22 ففخي‎ ‏ميكرولتر/ دقيقة؛ وبعد الحقن‎ 7٠ ‏الساكن عند معدل تدفق‎ bio-GDF-8 (358 ‏تحقن قواسم تامة‎ Yo ‏دقائق عند نفس‎ ٠١ ‏لمدة‎ BlAcore ‏يراقب التفكك في مثبت أس هيدروجيني‎ (iE T ‏لمدة‎ ‏أت تك‎ AY ‏ذلا فلك‎ You 700 ‏المحقونة هي‎ Ab ‏معدل التدفق. إن تركيزات‎ ‏ا‎

ARR

‏وصفر نانوجزيئي جرامي؛ يتم كل حقن في ثلاثة مقادير متساوية. تطرح تأثيرات العين‎ ٠" ‏الخالية ومثبت الأس الهيدروجيني لكل رسم إحساس باستخدام المقدار المرجعي المزدوج. تتجدد‎

HBS- ‏7؛ قبل حقن عينة‎ 001 TFA ‏أسطح أداة الإحساس الحيوية باستخدام © ميكرولتر من‎ ‏تمثل كتلة‎ (RU) ‏التالية وحدها المتدفقة خلال كل خلية. تقاس الاستجابة في وحدات رنين‎ EP

RK22 ‏ارثباط‎ ٠ ‏بافتراض أن مادة التحلل‎ BlAevaluation 3.0.2 ‏تحلل البيانات الحركية باستخدام برنامج‎ .)8( ‏مرتبطة مع مركب ترابطي أحادي التكافؤ‎ (A) ‏ثنائية التكافؤ‎

A+B = AB K,1*Kq1; AB+B = AB2 K;2*K42; :)8( ‏مرتبطة مع مركب ترابطي أحادي التكافؤ‎ (A) ‏ومادة التحلل أحادية التكافؤ‎

A+B = AB ‏1مكا*1يكز‎ ) ‏الظاهرة من المناطق الملائمة في رسوم‎ (Ky) ‏والتلازم‎ (Ko) ‏تحسب ثوابت معدل التفكك‎ ‏و0018 من توابت المعدل الحركي‎ Ab ‏الإحساس. يحسب ثابت انجذاب الارتباط للتفاعل بين‎ ‏نانوجزيئي‎ ١ Ky ‏قيمة‎ RK22 ‏يظهر‎ of ‏كما يتضح في شكل‎ Kg = kd / ka ‏بالمعادلة التالية:‎ ‏جرامي في متوسط ثلاث تجارب.‎ ‏يثبط إشارات 6018 في المعمل وفي الجسم‎ RK22 :“ ‏مثال‎ Ve ‏آدمي مخلق نقي في اختبار جين مخبر‎ GDF-8 ‏تثبيط النشاط الحيوي من أجل‎ 0) -F Jl

RK22 ‏معتمد على خلية باستخدام‎ ‏في اختبار معملي معتمد على خلية؛ يستخدم اختبار جين مخبر‎ GDF-8 ‏لتوضيح نشاط‎ ‏تحت سيطرة محث يحثه‎ luciferase ‏يظهر‎ (CAGA)12 pGL3 ‏مخبر‎ Jil ‏يستعمل‎ (RGA) ‏هو ترتيب مستجيب 1017-8 في محث جين يحثه‎ CAGA ‏تقرر مسبقًا أن ترتيب‎ .106©-8 ٠

CAGA ‏صندوق‎ VY ‏مخبر يحتوي على‎ Jil ‏يحضر‎ (Thies 5 et al 2001) PAI-1 TGF-B ‏يدخل‎ (Promega, Madison, WI) pGL3 ‏لأساسي‎ | luciferase ‏مخبر‎ plasmid ‏باستخدام‎ ‏بين‎ ( ٠١+ 5-( ‏ومكان بداية نسخ من محث كامن كبير لفيروس غدي‎ TATA ‏صندوق‎ ‏تكرار من صناديق‎ ١١ ‏تحتوي على‎ Oligonucleotides ‏الأماكن 1 و]11100111. تتم تقسية‎ ‏وتتنسخ في مكان 1م7. يستقبل بدرجة مؤقتة خط خلية‎ AGCCAGACA :CAGA ٠ pGL3 ‏مع‎ (ATCC HTB-82) A204 ‏عضلي آدمي به ألياف مخططة‎ rhabdomyosarcoma

FuGENE 6 ‏2م باستخدام عامل كاشف استقبال حامل جين من العائل‎

YAER

١7 ‏بعد استقبال حامل الجين من العائل ؛ تزرع الخلايا في‎ (Boehringer Manheim, Germany) [UY «+ glutamine ‏مع ؟ مللي جزيئي جرامي‎ McCoy SA ‏أطباق بها 97 عين في وسط‎ ‏مصل جنين بقري لمدة‎ 7٠و‎ penicillin ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ٠٠١ cstreptomycin ‏ملليلتر‎ ‎| ‏نانوجرام/ ملليلتر 0117-4 في أوساط‎ ٠١ ‏ساعة. تعالج الخلايا عندئذ مع أو بدون‎ V1 ‏صتللتعنه»م» و١ ملليجرام/ ملليلتر مصل جنين‎ «streptomycin «glutamine ‏مع‎ McCoy 5A 8 ‏كميًا في الخلايا المعالجة‎ Luciferase ‏لمدة 7 ساعات عند 7١7”مئوية. يقدر‎ albumin ‏بقري‎ ‏نانوجرام/‎ ٠١ ‏يكرر الاختبار باستخدام‎ .the Luciferase Assay System (Promega) ‏باستخدام‎ ‎BMP-11 ‏ملليلتر من‎ ‏لمدة ساعة واحدة‎ RK22 Ab ‏مسبقًا مع‎ GDF-8 ‏التثبيطي» يحضن‎ RK22 ‏لاختبار نشاط‎ ‏عند درجة حرارة الغرفة. يضاف هذا الخليط عندئذ إلى الخلايا المستقبلة حامل الجين من‎ ٠ ‏كميّا باستخدام‎ Luciferase ‏العائل ويحضن لمدة 1 ساعات عند 7١7"مئوية. يقدر‎ ‏على إخماد نشاط‎ RK22 ‏تقاس قدرة‎ .The Luciferase Assay System (Promega) ‏باستخدام نفس البروتوكول.‎ BMP-11 ‏مثل 1.008 عندما‎ pGL3(CAGA)I2 ‏يتم حث نشاط مخبر‎ oF ‏كما يتضح في الشكل‎ ‏نانوجرام/ ملليلتر 0118 في غياب أو‎ ٠١ ‏مع‎ dallas ‏أو‎ (bkgd) ‏تكون الخلايا غير معالجة‎ ١ ‏من‎ luciferase ‏واحد على الأقل؛ أي؛ حث‎ GDF8 ‏هذه نشاط‎ Abs ‏وجود 101622. تقلل كل من‎

RK22 ‏خلال 00178؛ بطريقة مستجيبة للجرعة» مع 1050 0.4 نانوجزيئي جرامي من أجل‎ ‏نانوجزيئي جرامي؛ وطذد!" له‎ ١." IC50 ‏المقارن 81635 له‎ Ab ‏إن‎ ‎Abs ‏يثبط إشارات من خلال 0018 فإن‎ RK22 ‏نانوجزيئي جرامي. برغم أن‎ ٠٠١ > 0 ‏هذه لا تثبط بدرجة ملحوظة نشاط 334011 الحيوي؛ إن 1050 لتثبيط نشاط 31,011 بواسطة‎ Yo ‏نانوجزيئي جرامي؛ على الترتيب. توضح هذه‎ ٠٠١ ‏و>‎ oF ‏لم يمكن تحديدهاء‎ 2

Ab ‏في المعمل إلى درجة مشابهة مثل‎ GDF8 ‏يثبط بصفة خاصة إشارات‎ RK22 ‏البيانات أن‎ .RK35 ‏غير الخاص‎ ‏يثبط نشاط 0018 في الجسم‎ RK22 :7-“ ‏مثال‎ ‏كمضاد‎ RK22 ‏في الجسم؛ ينتقى‎ GDF8 ‏تعارض نشاط‎ RK22 Abs ‏لتحديد ما إذا كانت‎ Yo ‏من نقص‎ SCID ‏بالغة. تعاني فئران‎ SCID ‏جسم تمثيلي من أجل اختبار إضافي في فئران‎ itelevant antibody = irTAb (*

YAER

ARE

‏في‎ RK22 ‏يحقن‎ \RK22 ‏مثل‎ Abs ‏مناعي شديد متحد؛ ولذلك لا تولد تفاعل مناعي بعد حقن‎ ‏كجم/‎ [ama ‏و46‎ ٠١ ١٠ ‏خلال فترة ؛ أسابيع. تعطى ؟ جرعات من 622ل8:‎ SCID ‏فئران‎ ‏كجم/ أسبوع كمثال مقارن موجب‎ [ana ٠١ ‏أسبوع. يستخدم 1470-29 معطى عند جرعة‎ ‏المعطاة.‎ RK22 ‏ويقارن مع تركيزات مختلفة من‎ 0 تستخدم كتلة عضلة كمؤشر لنشاط 0618 في فثئران معالجة مع 81222. تزال ؟ مجموعات عضلة مختلفة: عضلة السمانة؛ العضلة الظنبوبية الأمامية والعضلة رباعية الرؤوس؛ ويتحدد وزن العضلة. كما هو مبين في الشكل ‎of‏ يزيد ‎RK22‏ بدرجة ملحوظة كتلة العضلة عند جرعة ‎٠١‏ مجم/ كجم/ أسبوع. مقارنة بالمثال المقارن الموجبء 847029؛ تزداد كتلة العضلة ‎77٠0‏ تقريبًا في كل من ‎٠١‏ مجم/ كجم/ أسبوع لكل من ‎My029 5 RK22‏

RK22 ‏مثال 4: تمييز أماكن ربط‎ ٠

ACtRIIB ‏مع‎ GDF8 ‏لارتباط‎ RK22 ‏مثال 4 -1: تحديد تثبيط‎ ‏من ربط‎ GDF8 ‏بمنع‎ GDF8 ‏قادرة على معارضة نشاط‎ RK22 Abs ‏لتحديد ما إذا كانت‎ ‏اختبار تعادل). تفحص‎ is) 800183 ‏في اختبار ربط‎ Abs ‏مستقبله 8.008113؛ تختبر‎ ‏اندماج‎ protein ‏مع‎ biotinylated GDF8 ‏نقية من أجل القدرة على تثبيط ارتباط‎ RK22 Abs ‏ساكن على مادة لدنة في اختبار طبق دقيق العيار به 97 عين. تغطى هجائن‎ 800818 ٠ ‏فوق‎ (R&D Systems, Minneapolis, MN, Cat. No. 339-RB/CF) ‏مخلقة‎ ActRIIB-Fe ١ ‏عند‎ (Costar, NY, Cat. No. 3590) ‏أطباق اختبار مسطحة القاعدة بها 97 عين‎ ‏جزيئي جرامي طوال‎ ٠.7 sodium carbonate ‏ميكروجرام/ ملليلتر في مثبت أس هيدروجيني‎ ‏مصل بقري وتغسل‎ albumin ‏مجم/ ملليلتر‎ ١ ‏الليل عند ؛"مئوية. تخمد الأطباق عندئذ مع‎ ‏وحده أو‎ biotinylated GDF8 ‏نانوجرام/ ملليلتر‎ Yo ‏قياسي. يضاف‎ ELISA ‏باتباع بروتوكول‎ ٠ ‏إلى‎ RK22 ‏محضن مسبقًا لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع تركيزات مختلفة من‎ ‏تضاف معايرة‎ ICs ‏خامد النشاط. لتحقيق فعالية النسخة حسب القياس بقيم‎ ELISA ‏طبق‎ ‏مقارن‎ Ab ‏غير خاص أو‎ Ab ‏محضن مسبقًا مع‎ biotinylated GDF8 ‏يتم تضمن‎ Abs ‏بعد ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة؛ تزال بالغسيل‎ LACtIRB ‏مع‎ GDF8 ‏يخمد ارتباط‎ ‏وتتحدد كمية 6018 المرتبط مع 8201813 المرتبط بالطبق‎ «Ab ‏المخمدة مع‎ protein ‏مركبات‎ Yo

DELFIATM ‏باستخدام مجموعة عامل كاشف‎ Buropeium ‏معلم-‎ streptavidin ‏مع‎

١١ ‏في اختبار قياس استشعاع متلاشي مع الزمن‎ (PerkinElmer LifeSciences, Boston, MA) .(TRF)

Lut ‏يبين شكل © نتائج اختبار معادلة 008118م. لذلك؛ برغم أنه من الممكن أن‎ ‏إشارات 0018 بتثبيط قدرة 0018 على الارتباط مع 8008118؛ فمن المحتمل‎ AK22 Abs ‏أكثر أن تكون هناك آلية أخرى مشتملة.‎ ٠

GDF8 ‏تخص‎ epitopes ‏يرتبط مع‎ RK22 :7-4 ‏مثال‎ ‎.00178 ‏يخص‎ RK22 ‏متعلقان ببعضهما بدرجة كبيرة؛ فإن‎ BMP11 5 01018 ‏برغم أن‎ ‏تخص أيضا 8م ولذلك؛ يمكن‎ Abs ‏نتيجة لذلك؛ يفترض أن 065 التي تدركها هذه‎ ‏إشارات‎ Jay fl (peptide ‏كمضادات (مثلا؛ كمماثلات‎ GDF8 ‏تخص‎ epitopes ‏استخدام‎ ‎.00178 ‏بصفة خاصة و/أو لفحص أو تحضير مضادات تخص‎ 06078 ٠ -١١ ‏متراكب مع‎ peptides £A ‏يصنع‎ <Abs RK22 ‏التي تدركها‎ 61018 epitopes ‏لتحديد‎ ‏متخلف تمثل الترتيب الكلي من أجل 6078 الناضج المذكور كتعريف الترتقيب‎ ‏باستخدام تقنية تكوين بقعة‎ cellulose ‏رقم: )¢ يصنع مباشرة‎ (Molina et al. (1996) Peptide Res. 9:151-55; Frank et al. (1992) Tetrahedron 48:9217-32). Vo cysteine ‏في هذا الترتيب» تستبدل متخلفات‎ .amino acids ١١ ‏عن‎ 8)lie peptides ‏إن تراكب‎ ‏تشترى أغشية‎ cysteines ‏لتقليل المضاعفات الكيميائية التي يسببها وجود‎ serine ‏مع‎ ‏محمية :11:0 مسن‎ amino acids s "PEG ‏معدلسة مع‎ 86 «B-alanine ‏يتحدد الترتيب على الغشاء باقتران مباعد‎ .Abimed (Lagenfeld, Germany) ‏باستخدام كيمياء اقتران‎ peptides ‏وتصنع‎ ٠

DIC (diisopropylcarbodiimide)/HOBt (hydroxybenzotriazole) .(Molina et al., supra; Frank et al., supra) Base ‏قياسية حسب الوصف‎ ‏1060طم. تتم خطوات الغسيل‎ ASP 222 ‏نشطة باستخدام إنسان آلي‎ amino acids ‏ترش‎ ‏بعد دورةٍ التكوين النهائية.‎ peptides ‏طرفية-17 لأجل‎ acetylated ‏وتجرى‎ Gay ‏وإزالة الحماية‎ ‏إخماد النشاط‎ sale ‏دقائق وفي‎ ٠١ ‏لمدة‎ methanol ‏يغسل الغشاء في‎ cpeptide ‏بعد تصنيع‎ © ‏محلول ملح مثبت الأس الهيدورجيني-1:18 مع 7001 (حجم]/ حجم)‎ -1118( TBST) polyethylene glycol :PEG ©

YAEL

١٠١ ٠.5 ‏دقائق. يحضن الغشاء عندئذ مع‎ ٠١ ‏لمدة‎ (casein ‏(حجم/ وزن)‎ 2١و‎ )٠١ 41 ‏مضاد 6118 في مادة إخماده لمدة ساعة واحدة مع الرج‎ RK22 Ab ‏ميكروجرام/ ملليلتر من‎ ‏ثانوي‎ Ab ‏دقائق؛ يحضن الغشاء مع‎ ٠١ ‏برفق. بعد الغسيل مع مادة ا لإخماد ؟ مرات لمدة‎ ‏دقيقة. يغسل الغشاء عندئذ‎ 3٠0 ‏ميكروجرام/ ملليلتر في مادة الإخماد) لمدة‎ +. YO) ‏معلم-118‎ ‏دقائق في كل مرة مع‎ ٠١ ‏دقائق في كل مرةٍ مع مادة ا لإخماد ومرتين لمدة‎ ٠١ Bad ‏؟ مرات‎ (Pierce) SUPERSIGNALTM West ‏المرتبط باستخدام عامل كاشف‎ Ab ‏تتم رؤية‎ TBST + ‏02001600هملم). إن بقع النقطة مبينة في شكل‎ Fluoromager) ‏وأداة تصوير رقمية‎ ‏والنتائج ملخصة في جدول 4. توضح بقع النقطة أن 181622 يرتبط مع‎ ‏ينتقى من المجموعة‎ amino acid ‏لها و/أو تتكون أساسيًا من ترتيب‎ GDF8 epitope(s) ‏(تعريف‎ FEAFGWDWIIAPKRY ‏(تعريف الترتيب رقم: 4)؛‎ DFGLDS ‏المتكونة من‎ ٠

SSGESEFVF «(A ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ FVFLQKYPHTLVHQ «(1 ‏الترتيب رقم:‎ ‏(تعريف الترتيب‎ WIAPKRYKANYSSGESEFVFLQKY »)٠١ ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ ‏من أجل‎ epitope(s) ‏رقم: ١١)؛ وبصورة ممكنة ترتيبات فرعية من ذلك. بصفة خاصة» فإن‎

I ‏تخطط لمنطقة 0018 التي تتفاعل بصورة مفترضة مع مستقبل 0118 من النوع‎ 2 (ALK4/ALKS) ٠ ‏جدول ؛‎ ‏مناطق تقريبية من أجل 0018 آدمي مرتبط بمضادات أجسام فأرية أحادية النسخ‎ ‏الا‎ ‏(تقريبية)‎ ١ ‏رقم:‎ ‎RK22 ‏مثال ©: إكساب السمة الآدمية لمضاد الجسم‎

Ab ‏مثال 1-05: ترتيب‎ ‏من خلايا‎ RK22 ‏التي تشفر‎ (VL) ‏والخفيفة المتغيرة‎ (VH) ‏تنسخ الجينات الثقيلة المتغيرة‎ Y. ‏إن هذه الترتيبات مذكورة في‎ amino acids ‏وعندئذ تتحدد ترتيبات‎ RK22 Ab ‏ورم هجين تنتج‎

Ag VE ‏مثل تعريف الترتيب رقم:‎ ١ ‏جدول‎ ‎RK22 ‏مثال ©-؟: تحديد الخط الجرثومي لمضاد الجسم‎

فلا تستخدم بيانات الترتّيب لمضادات الأجسام لتحديد ترتيب خط الجرثومة الأقرب للسلسلة الثقيلة والخفيفة من ‎(RK22‏ مثلاء يظهر 07-5 و00-7 تمائل حوالي 778 و7771 مع ‎RK22‏ ‏1؛ على الترتيب (شكل ‎¢(Y‏ بينما يظهر 24 0016 تماثل حوالي ‎IVA‏ مع ‎RK22 VL‏ (شكل ‎(A‏ . تجرى طفرات ملائمة باستخدام تقنيات تكوين طفري موجه لمكان © قياسية مع المواد الأولية الملائمة المولدة لطفرة. تتأكد طفرة الترتيبات 5 ‎Abs‏ بتحليل الترتيب. إن المواصفة يتم فهمها بصورة أكثر دقة على ضوء تعاليم المراجع المذكورة في المواصفة؛ المدمجة كل منها هنا بالإشارة الكاملة. توفر التطبيقات في المواصفة توضيحًا لتطبيقات الاختراع ولا يجب اعتبارها مقيدة لنطاق الاختراع. يدرك الصانع الماهر أن هناك تطبيقات أخرى كثيرة يشملها الاختراع المحدد. ‎٠‏ مثال ‎:١‏ هيئات اختبار مناعي ساندويتش للتقدير الكمي والتحديد من أجل ‎GDF8‏ ‏تجرى ‎biotinylated‏ لكل من ‎Abs‏ الموصوفة في الأمثلة أدناه باستخدام مجموعة ‎Sulfo-LC biotinylation‏ متصلة ب ‎MEZ‏ من ع2160. من دراسات سابقة؛ تحدد أن زيادة 6 مرة في ‎NHS-biotin‏ مثالية لأجل ‎biotinylation‏ كل من ‎Abs‏ هذه. تجرى ‎biotinylated‏ ‏لمقدار 6 ميكروجرام من كل ‎AD‏ باستخدام زيادة جزيئية جرامية ‎bra 5 ٠‏ من ‎biotin‏ يؤدي ‎٠‏ هذا إلى دمج من ؟ إلى © مللي جزيء جرامي تقريبًا من ‎[biotin‏ مللي جزيء جرامي من ‎Ab‏ ‏بعد ‎cbiotinylation‏ تجرى ‎dialyzed‏ لكل مضادات | لأجسام في ‎PBS‏ طوال الليل عند ؛ “مئوية ويتحدد تركيز ‎protein‏ الكلي مع 808. لتحديد النسبة الجزيئية الجرامية لدمج ‎«biotin‏ يضاف محلول ‎biotinylated Ab‏ إلى خليط من ‎2-(4’-Hydroxyazobenzene)‏ ‎Ha avidin s (HABA) benzoic acid‏ لانجذابه الكبير لأجل ‎avidin‏ فإن ‎biotin‏ يزيح ‎HABA ٠‏ من تفاعله مع ‎avidin‏ ويقل تناسبيًا الامتصاص عند ‎5٠٠‏ نانومتر. يمكن إجراء تقدير كمي لكمية ‎biotin‏ المتحد مع ‎Ab‏ بقياس امتصاص محلول ‎HABA-avidin‏ قبل وبعد إضافة العينة ‎biotinylated‏ إن التغير في الامتصاص مرتبط بكمية ‎biotin‏ المدمجة في ‎Ab‏ ‏بالإضافة لذلك؛ فإن المصل المستخدم في الدراسات الموصوفة أدناه خالٍ من 01178 داخلي. يحضر عمود انجذاب لإنقاص مصل 6017-8 باستخدام ‎١‏ مجم من ‎OmAb‏ ‎MYO-029 Ye‏ ساكن فوق خرزات ‎Sepharose‏ منشطة مع ‎cyanogen bromide‏ يغسل العمود © 52: إتزيم ‎enzyme‏ ‎:mAb )*(‏ مضاد جسم أحادي السلسلة ‎monoclonal antibody‏

لا مسبقًا مع ‎0.٠‏ جزيئي جرامي ‎acetic acid‏ ويتعادل مع ‎PBS‏ يحتوي على ‎You‏ مللي جزيئي جرامي 11801 عند أس هيدروجيني 7.7 قبل إضافة مصل آدمي. ‎Blas‏ للتنشيط الظاهر من أجل ‎GDF-8‏ الكامن بالتسخين إلى ©+"مئوية؛ يسخن المصل مسبقًا إلى 15"مئوية لمدة ‎٠١‏ ‏دقائق ثم يمرر عندئذ ؟ مرات فوق عمود انجذاب 1470-029 المضاد-00178 (١مجم)‏ ‎٠‏ ويفحص من أجل النشاط في اختبارات 0017-8 الحر والكلي. تمرر ‎Ul‏ أحجام 7.5 ملليلتر من المصل فوق العمود. بعد الاختبار الأولي؛ تسخن أحجام أكبر من المصل (قاسم تامة ‎VY‏ ‏ملليلتر) وتحرم من ‎GDF-8‏ بالتمرير عدة مرات على عمود الانجذاب مع مرات غسيل وسطية للعمود في 8610 ‎acetic‏ ).+ جزيئي جرامي. يستخدم هذا المصل الناقص كمادة بينية لتوليد منحنيات قياسية مع تركيزات معلومة من ‎GDF-8‏ الناضج. ‎Ye‏ مثال ‎:٠-١‏ تجارب ازدواج طم: مقارنة هيئات الاختبار ‎old‏ : إمساك ‎RK35‏ مع محدد 2 أو إمساك ‎RK22‏ مع محدد ‎RK35‏ ‏يغطي كل ‎mAb‏ مضاد 0101-8 بصورة منفردة في ‎sodium borate‏ ).+ جزيئي جرامي على طبق ربط كبير به 93 عين ‎(Immulon 4 HBX)‏ طوال الليل عند ؛"مئوية أو لمدة ساعة واحدة عند ١””مئوية‏ عند تركيز ‎١‏ ميكروجرام/ ملليلتر. يغسل الطبق ويخمد عندئذ لمدة ‎٠١‏ ‎١‏ دقائق مع عامل كاشف ‎Pierce Superblock‏ يخفف مخزون ‎V.VY) GDF-8‏ مجم/ ملليلتر في ‎trifluoroacetic acid-TFA‏ 001 7) إلى ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر في ‎trifluoroacetic acid‏ ‎(TFA)‏ 2001 في أنابيب لدنة ‎siliconized‏ ويخفف إضافيا في مصل آدمي ناقص ‎GDF-8‏ ‏عند تركيزات تتراوح من ‎١.١8‏ إلى ‎oY‏ نانوجرام/ ملليلتر كمقادير معايرة لتوليد المنحنيات القياسية. ينفذ المنحنى القياسي في * مقادير متساوية باستخدام الأعمدة ‎3-١‏ من طبق ‎٠‏ الاختبار. في طبق منفصل مسبق الإخماد به 97 عين؛ تضاف قواسم تامة ‎3٠‏ ميكرولتر من مصل الاختبار إللى كل من الستة عيون (لتقديرات ¥ مقادير متساوية) يحتوي مثبت أس هيدروجيني ‎١8١ THST‏ ميكرولتر (تركيز نهائي» مصل 7730؛ حجم كلي؛ ‎١٠٠١‏ ميكرولتر). لاختبار 010178 الكلي؛ ينقل ‎Av‏ ميكرولتر من هذا المحلول إلى طبق ‎PCR‏ به 40 عين ويسخن إلى 80"مئوية لمدة © دقائق. تبرد العينات الساخنة على ثلج قبل الإضافة إلى طبق ‎Ye‏ الاختبار. إلى العيون المستخدمة للمنحنى القياسي؛ يضاف 10 ميكرولتر من مثبت أس هيدروجيني 1 إلى كل العيون ثم يضاف ‎٠١‏ ميكرولتر من مصل المعايرة؛ ليصل الحجم النهائي إلى م17

كلد ‎٠‏ ميكرولتر. من طبق التحضير؛ يزال 00 ميكرولتر من عينة المصل ‎77١‏ غير الساخنة وتضاف إلى طبق الاختبار من أجل تركيز مصل نهائي ‎1٠١‏ مصل في حجم كلي ‎٠٠١‏ ‏ميكرولتر؛ من الطبق الساخن؛ يضاف ‎٠٠‏ ميكرولتر من مصل 770 إلى طبق اختبار ثانٍ. تحضن أطباق الاختبار الثانية هذه عند درجة حرارة الغرفة مع الرج. بعد ساعة ونصف؛ تغسل ‎٠‏ الأطباق ويضاف عامل كاشف ‎Superblock‏ لمدة © دقائق. يضاف ‎biotinylated RK22‏ أو ‎biotinylated RK35‏ إلى العيون عند ‎You‏ نانوجرام/ ملليلتر لمدة ساعة ونصف مع الرج. تغسل الأطباق ويعاد إخمادها مرة أخرى قبل إضافة ‎٠٠١‏ ميكرولتر من تخفيف ‎strepavidin-‏ ‎)٠٠٠٠١:١( HRP‏ حساس للغاية لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع الرج. تغسل الأطباق ويعاد إخمادها قبل إضافة مادة خاضعة ‎TMB‏ لمدة ‎١١‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ‎Ve‏ مع الرج. يتوقف التفاعل بإضافة 112504 وصفر- ‎٠‏ © جزيئي جرامي وتتم القراءة على قارئ طبق ‎Molecular Devices Spectramax‏ عند £04 نانومتر. هناك مقارنة لهيئات الاختبار المناعي: إمساك ‎[RK35‏ محدد ‎RK22‏ أو إمساك ‎[RK22‏ محدد 181635 موجودة في الشكلين 4 (ب). كما هو مبين؛ فإن أية صيغة قادرة على تحديد بين ‎٠٠١‏ و١٠‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎GDF‏ في مثبت أس هيدروجيني اختبار 11187 أو في مصل ‎.7٠١‏ ‎Vo‏ مثال 1-¥: تأثيرات المصل على اختبار ‎GDF-8‏ ‏تقترح نتائج سابقة أن تأثيرات المصل الأساسية تزيد قيم الامتصاص في نطاق 0.7 وحدة ‎OD‏ إلى ‎١5‏ وحدة ‎OD‏ تقريبًا اعتمااًا على عينة المصل المحللة (البيانات غير مبينة). لقد تحدد أن سبب زيادة الإشارة هو تأثير ‎HAMA‏ (أي؛ تفاعل ‎IgG‏ مصل أدمي مع ‎MAbs‏ ‏الفأرية المستخدمة في الاختبار) باختبار مصل آدمي ضد أطباق اختبار ‎HBX‏ مغطاة مع ‎RK22 "٠‏ أو غير معطاة معه (مقارنة) (شكل ‎.)٠١‏ إن الأطباق بدون ‎mAb‏ لا تظهر زيادة في الإشارة مما يقترح أن الزيادة الأساسية ليست بسبب المصل المرتبط بصفة غير خاصة مع الطبق لكنها معتمدة على وجود ‎.mAb‏ ‏لقد أجريت محاولات كثيرة لتقليل القيمة الأساسية وكانت ناجحة وتتضمن تفكك حمض وإضافة زيادة من ‎IgG‏ من أنوا ع مختلفة لإخماد ارتباط ‎IgG‏ الآدمي مع ‎IgGs‏ الفأرية (البيانات ‎YO‏ غير مبينة). إن إضافة عامل كاشف متوافر ‎(lad‏ مصمم بصفة خاصة لتقليل تدخل عامل كاشف مثبط ‎Ig‏ لاختبار ‎(IT R) HAMA‏ كانت ناجحة عند الإضافة إلى الاختبار المناعي التالي. يستخدم ‎١‏ ميكروجرام/ ملليلتر من ‎RK35‏ مخفف في ‎Na Borate‏ ).+ جزيئي جرامي ‎YAEL‏

YY. +/- ‏فوق الطبق -/+ المصل‎ Myo-029 ‏بأس هيدروجيني 8.5 كعامل كاشف للإمساك. يعاير‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر من 01018 ويحضن لمدة ساعة ونصف. يضاف‎ Yoo ‏وأيضًا‎ 118

THST ‏هيدروجيني اختبار‎ oof ‏في مثبت‎ ٠٠٠١٠١١: ‏عند تخفيف‎ biotinylated RK22 7٠٠٠٠١:١ ‏مخفف‎ strepavidin-HRP ‏ميكرولتر‎ ٠٠١ ‏ويحضن لمدة ساعة ونصف. يخفف‎ ‏كما يتضح في الشكل ١١؛ تقل القيمة الأساسية‎ TMB ‏.في 11151 ثم يحدث تفاعل في‎ © .111 ‏باستخدام العامل الكاشف‎ AHMA

MyO-029 Ab ‏مع‎ GDF8 ‏مثال 1—¥: تثبيط ارتباط‎

My0-029 ‏إن‎ ‎(deposited on October 2, 2002, at American Tissue Culture Collection (ATCC) under respective Deposit Designation Numbers PTA-4741) Ve ‏علاجي تم استخدامه في تجارب إكلينيكية في محاولة لزيادة قوة العضلة في المرضى‎ Ab ‏هو‎ ‏مع الاضطرابات العضلية. في الاختبار المناعي لتحديد 8 في مرضى تم إعطاؤهم‎

RK35 ‏حسب الوصف هنا اتضح أن هناك تفاعلاً متبادلاً لمضاد جسم الاختبار‎ 2470-9 ‏للارتباط مع 06017-8. لتحديد هذا التفاعل المتبادلء‎ Myo-029 ‏مع‎ ‎GDF-8 ‏بيكوجرام/ ملليلتر من‎ ٠١٠١ ‏فوق أطباق الاختبار. يضاف‎ Myo-029 ‏يغطى‎ ١ biotinylated RK22 ‏إلى كل عين. تضاف عندئذ تركيزات متزايدة من سواء‎ ‏يتنافس 00178 غير المعلم مع‎ ١١ ‏كما يتضح في شكل‎ biotinylated RK35 ‏أو‎ ‏لأنه لا تتولد إشارة في هذه الهيئة. لا تنتج‎ MY0-029 ‏للارتباط مع‎ biotinylated RK3S ‏و10-029‎ RK35 ‏متبادل بين‎ Jeli ‏مما يدل على وجود‎ chiotinylated RK35 ‏إشارة مع‎ .GDF8 ‏للارتباط مع‎ ٠

GDF8 ‏مثال 4-7: استخدام 1470-029 كمنافس من أجل‎ ‏وكميات‎ (RK22/RK35 ‏أو‎ RK35/RK22) ‏تجرى اختبارات باستخدام كل هيئات الاختبار‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر)‎ YOu) GDF-8 ‏علاجي 1470-029 مع تركيز ثابت من‎ Ab ‏متزايدة من‎ ‏هو مبين في‎ LSI ‏يتم نثرها في مثبت أس هيدروجيني الاختبار أو في المصل الآدمي‎ ‏بيكوجرام/‎ You ‏كمضاد جسم إمساك. يحضن 0017-8 عند‎ RK22 ‏يستخدم‎ (IY ‏شكل‎ Yo

Vo. ‏عند‎ biotinylated RK35 ‏لمدة ساعة ونصف عند درجة حرارة الغرفة مع‎ able ‏ميكروجرام/ ملليلتر). حتى‎ ٠١ ‏بيكوجرام/ ملليلتر وتركيزات متزايدة من 14770-029 (صفر إلى‎

١7١ ‏يستخدم‎ (IT ‏تقريبًا. في شكل‎ 727٠ ‏يظهر فقط تثبيط‎ MYO-029 ‏عند أعلى تركيز من‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر لمدة ساعة ونصف‎ YOu ‏عند‎ GDF-8 ‏كمضاد جسم إمساك. يحضن‎ 5 ‏وتركيزات متزايدة من 1170-029. يلاحظ‎ biotinylated RK22 ‏عند درجة حرارة الغرفة مع‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر.‎ © > MYO-029 ‏تقريبًا للإشارة عند تركيزات‎ 7٠٠0 ‏تثبيط‎ ‎RK22 ‏تحديد‎ [RK35 ‏باستخدام هيئة إمساك‎ , dl ‏مثال 10-1 استرجاع ثابت في مصل‎ © ‏في تجربة استرجاع ثابت. تخفف كل عينة‎ GDF-8 ‏تحلل ؟ عينات مصل آدمي لاسترجاع‎ ‏من أجل 06118 ناضج 5« تخفف بالتسلسل‎ 7٠٠0 ‏بيكوجرام/ ملليلتر في مصل‎ ٠٠١ ‏إلى‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر 0118. تحلل كل من هذه العينات‎ Yor 5 00 600 ‏مرتين لتنتج عينات‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر من‎ ٠١ ‏مع أو بدون إضافة‎ RK22 ‏تحديد‎ [RK35 ‏في هيئة إمساك‎ ‏يحسب التقليل في الإشارة بسبب إضافة‎ .)(١4 ‏انظر الشكل‎ MYO-029 ٠ ‏متولد في مثبت‎ GDF-8 ‏انظر شكل ؟١(ب). تقارن هذه القيم مع منحنى قياسي‎ 70-9

GDF8 ‏أس هيدروجيني اختبار 111571 وترسم بيانيًا القيم الملحوظة مقابل المتوقعة من أجل‎ ‏إن القيم الملحوظة أقل بصورة واضحة من القيم المتوقعة مما يدل على أن‎ Vo ‏في شكل‎ ‏المنحنيات القياسية في مثبت الأس الهيدروجيني وحده لا تقدر كميًا بدقة قيم 0017-8 الموجودة‎ ‏في عينات المصل.‎ VO ‏مثال 1-7: استخدام مصل مقابل مثبت أس هيدروجيني الاختبار لتوليد منحنيات قياسية‎ ‏تستعمل هذه‎ .GDF-8 ‏ومصل فأري مزال‎ gale ‏يستخدم في هذه الدراسة مصل فأري‎ ‏لتوليد‎ (THST ‏الأمصسال » إلى جانب المصل الآدمي العادي ومثبت الأس الهيدروجيني‎ ‏إن الاختلاف في الميل‎ V0 ‏ناضج؛ انظر شكل‎ GDF-8 protein ‏منحنيات قياسية باستخدام‎ ‏_بين المنحنيات القياسية المتولدة في المصل مقابل مثبت الأس الهيدروجيني يفسر اختلاف القيم‎ ٠ ‏الملحوظة مقابل المتوقعة في تجارب إخماد مفعول/ استرجاع بدرجة كبيرةٍ جدًا‎ ‏عندما يكون مثبت الأس الهيدروجيني هو الوسط المستخدم لتوليد منحنيات قياسية.‎ (VT ‏(شكل‎ ‏إن الميل القليل للمنحنى القياسي في المصل مقارنة بالمنحنى القياسي في مثبت الأس‎ ‏الهيدروجيني يلفت الانتباه إلى تأثيرات المادة البينية للمصل على الإشارة الناتجة ويقترح أن‎ ‏غير متوافر بالكميات‎ KO ‏المنحنيات القياسية يجب تولدها في المصل. إن مصل فأر‎ ٠ ‏الضرورية لإجراء الاختبار ومصل الفأر العادي به مستويات داخلية عالية من 0117-8 سوف‎ ‏في عينات المصل غير المعلوم. إن المصل الآدمي العادي به‎ GDF-8 ‏تعوق التنبؤ بوجود‎

YAS

١77 ‏يضيف‎ Wal ‏أيضا مستويات داخلية من 001-8؛ برغم أنها أقل من الفأر العادي؛ وذلك‎ ‏عامل إعاقة غير مطلوب. إن البديل الممكن هو حرمان مجموعة المصل الآدمي العادي من‎ ‏للاستخدام كبنية معايرة اختبار.‎ 8 ‏في المصل‎ Myo-029 Ab ‏إخماد نشاط/ تفكك‎ :7-7١ ‏مثال‎ ‏يعوق التقدير الكمي الدقيق من أجل‎ MYO-029 ‏أظهرت دراسات سابقة أن وجود‎ ° ‏يفترض‎ .RK35 ‏لمضاد الجسم‎ epitope ‏بتفاعل متبادل مع‎ RK35/RK22 ‏في هيئة‎ GDF-8 ‏في العينة؛ فقد يمكن تطوير‎ GDF-8/MY0-029 ‏أنه إذا كانت هناك إمكانية لتفكك معقدات‎ ‏من‎ Abs ‏اختبار مناعي يقيس بدقة 0118 في وجود 11770-029. هناك احتمالات قليلة لتفكك‎ ‏تتضمن التفكك الحمضي وتغيير الطبيعة بالحرارة. اعتمادًا على التقدير‎ (alias ‏مولدات‎ ‏فإن 1017-8 الكامن يمكن تنشيطه بصورة‎ (Brown et al., 1990, Growth Factors 3, 35-43) ٠ ‏غير معكوسة بالمعالجة بالحرارة. إن تدرج درجة الحرارة من 15”مئوية إلى 80"مئوية في‎ ‏في‎ Myo-029 ‏مثبت أس هيدروجيني اختبار 11187 ليس له تأثير على التثبيط الذي يظهره‎ ‏اختبار 001-8. على أية حال» تجرى تجربة إرشادية مع مصل عادي غير باطل المفعول؛‎ ‏مصل باطل المفعول مع 4050 بيكوجرام/ ملليلتر 0101-8 ناضج؛ أو مصل باطل المفعول مع‎ ‏ويسخن إلى‎ 77٠١ ‏و1470-029 في مصل‎ Ab ‏كامن. في هذه التجربة؛ ينثر‎ 6101-3 Ve ‏في الاختبار‎ GDF-8 ‏تدل النتائج على أن نشاط‎ (VY ‏دقائق (انظر شكل‎ ١ ‏لمدة‎ ةيوئم٠‎ ‏يكون خامد النشاط في مصل مسخن إلى‎ 14770-029 Ab ‏هذه وأن‎ hall ‏مستبقى عند درجة‎ ‏أن عينات المصل المخففة في وجود‎ )١( ‏يتضح هذا النشاط الخامد بطريقتين:‎ .ةيوثم٠‎ ‏لها نفس خرج الإشارة مثل عينات ساخنة مقارنة بدون إضافة‎ Myo-029 ‏يمكن مرة ثانية تقليل إشارةٍ الاختبار إلى مستويات الخلفية الأساسية بإضافة‎ )١(و‎ 070-029 ٠ ‏حديث التحضير بعد تسخين العينة. تلاحظ هذه النتائج في مصل عادي؛ مصل‎ 1470-9 ‏كامن. تظهر عينات المصل المخمدة‎ GDF8 ‏مخمد مع 610178 ناضج؛ وفي مصل مخمد مع‎

GDF8 ‏كامن زيادة في الإشارة يبدو أنها معتمدة على مادة 0017-8 الكامن وليس‎ GDF-8 ‏مع‎ ‏الناضج. لتحديد مدة زمنية دقيقة أكثر لإخماد النشاط المؤثر؛ تجرى تجربة المدى الزمني‎ ‏النتائج على أن‎ Jas .MYO0-029 ‏باستخدام مصل عادي مخمد مع © ميكروجرام/ ملليلتر‎ YO ‏وقت مبكر مثل “ دقائق عند 0 8"مئوية.‎ die GIS ‏يكون خامد النشاط‎ MYO-029 Ab ‏في المصل الأدمىي‎ GDF8 ‏مثال 8-7: إنقاص‎

١77 ‏مجم‎ ١ ‏من أجل حرمان المصل الآدمي من 0017-8 داخلي» يحضر عمود انجذاب مع‎ ‏من خلال تتنشيط‎ Sepharose ‏ساكن تساهميًا مع خرزات‎ MYO-029 | ‏من تل‎ ‏0ععم200ن. يغسل العمود مسبقًا وتمرر قواسم تامة صغيرة من مصل آدمي فوق‎ bromide ‏بالإضافة لذلك؛ يسخن‎ .007-8 ELISA ‏العمود وتختبر من أجل نشاط 0017-8 في اختبار‎ (AL ‏المصل مسبقًا إلى 16 "مئوية ثم يبرد عندئذ قبل تمريره فوق العمود. يظهر المصل‎ © ‏إشارة زائدة قد تكون بسبب التنشيط المناعي من أجل‎ «GDF8 ‏عند استخدامه في اختبار‎ ‏زيادة الإشارة في اختبار 0118 عند التسخين‎ VA ‏كامن في المصل. يبين شكل‎ GDF-8 ‏زيادة ملحوظة‎ ang ‏وأيضًا نقص في الإشارة في المصل الساخن/ الناقص 11/0. بالتحديد؛ لا‎ ‏8"مئوية‎ ٠ ‏التسخين إلى‎ sale) ‏عند‎ H/D ‏في الإشارة في مصل‎

H/D ‏مثال 14-1 المنحنيات القياسية فى مصل‎ Ve ‏داخلي تتولد منحنيات تفاعل مناعي قياسية تحت شروط‎ GDF-8 ‏باستخدام مصل بدون‎ ‏ينثر 0171-8 في‎ ٠ ‏الكامن‎ GDF-8 5 ‏الناضج‎ GDF-8 ‏تسخين وعدم تسخين باستخدام كل من‎ ‏مع/ ملليلتر. يستخدم 0017-8 الكامن‎ 5٠0 ‏إلى‎ You ‏ويخفف بالتسلسل من‎ 7/٠٠١ ‏مصل‎ ‎Aer ‏إلى‎ ٠٠000٠ ‏مرةٍ مثل ذلك من أجل 8 الناضج يتراوح من‎ Yo protein ‏عند تركيز‎ ‏بيكوجرام/ ملليلتر (شكل ؟١) . تبين نتائج هذه التجربة زيادة ملحوظة في إشارةٍ الاختبار عند‎ ٠ ‏فإن‎ ١8 ‏إلى 860”مئوية. يلاحظ أنه في شكل‎ 77٠٠0 H/D ‏تسخين 001-8 الكامن في مصل‎ ‏المسخن إلى 80”مثوية لا يظهر زيادة الإشارة المميزة الملحوظة في المصل‎ HD ‏المصل‎ ‎GDF-8 ‏العادي. يوفر هذا تصديقًا لفرضية أن الزيادة الموجودة في المصل العادي بسبب‎ ‏الناضج لا تزداد عند التسخين‎ GDF-8 ‏الداخلي الكامن. على النقيض» فإن الإشارة المتولدة مع‎ ‏وفي تجارب متكررة تميل إلى أن تقل مع التسخين عند 860"مئوية.‎ ٠ gle Jae ‏عينات‎ A ‏تحليل 60178 الحر والكلي في‎ :٠١-١ ‏مثال‎ ‎GDF-8 ‏عينات مصل عادي؛ مجمدة مسبقًا؛ ذائبة من التجمد وتختبر من أجل‎ A ‏تستخدم‎ ‏باستخدام اختبار درجة حرارة الغرفة (الحر) وخطوة تسخين 0 8"مئوية (الكلي)‎ ly ‏الحر‎ ‏مع تركيزات‎ H/D ‏الكامن. يتولد المنحنى القياسي لهذا التحليل باستخدام مصل‎ GDF-8 ‏لتنشيط‎ ‏يتراوح المنحنى القياسي‎ (GDF-8 ‏الناضج مضافة كمادة معايرة‎ 0017-8 protein ‏معلومة من‎ YO ‏إلى 188 بيكوجرام/ ملليلتر ويستخدم تحليل مطابقة منحنى تراجع خطي مع‎ ١5900 ‏من‎ ‏لحساب قيم 610178 في عينات المصل الثماني غير‎ (Yo ‏(انظر شكل‎ ٠.9949 ‏معامل ارتباط‎

YAS

"١7 170-029 ‏فإن التغير في الكثافة البصرية بسبب إضافة‎ « Bie ‏المعلومة. حسب الوصف‎ ‏هو تمثيل للبيانات‎ YY ‏مع الكمية الداخلية من 0101-8 في العينة. إن شكل‎ Layla ‏تتناسب‎ ‏يوضح هذا الشكل إشارة 6017-8 الحر وإشاراته‎ (GDF-8 ‏المجردة المستخدمة لتحديد تركيز‎ ‏الكلي وإشارته القليلة‎ GDF-8 ‏بالإضافة إلى‎ (MY0-029 Ab ‏القليلة المقابلة عند إضافة‎ ‏نتائج تجربة تجديد الاختبار. يظهر اختبار‎ YY ‏المقابلة بإضافة 1470-029. يقدم شكل‎ ©

GDF-8 ‏من التجدد. إن هذا حقيقي بصفة خاصة لاختبار‎ Ale ‏الحر والكلي درجة‎ 8 ‏الحر (درجة حرارة الغرفة). إن إشارة الاختبار الزائدة في الاختبار الكلي (تسخين إلى‎ ‏دقائق. إن التقليل‎ ٠١ ‏مئوية)؛ من يوم إلى يوم سببها زيادة في زمن التسخين من * إلى‎ ٠ ‏الاختبار مع زيادة زمن تسخين العينة ملحوظ بصورة متكررة وقد يعكس تغير طبيعة‎ BLE ‏في‎ ‏مولد المضاد وفقد النشاط المناعي.‎ ٠

MYO-029 ‏مثال 11-7: 6018 داخلي نشط بالحرارة محدد دونيًا في وجود‎ 170-029 ‏يحضن مصل آدمي في وجود أو غياب‎ 7١ ‏في التجربة المبينة في شكل‎ ‏يجرى‎ (ELISA ‏وتتغير طبيعته بالحرارة عندئذ عند درجات حرارة مختلفة قبل التحليل بواسطة‎ ‏تقدير كمي لمستويات 8 في عينات الاختبار بالاستقراء من نتائج اختبار منحنى قياسي‎ ‏مخلق نقي معلوم التركيز مضاف في مصل‎ GDF-8 dimer ‏يتكون من سلسلة تخفيف لأجل‎ ‏بتحليل كروماتوجرافي بالانجذاب. يحدث تحدي أقصى من أجل‎ GDF-8 ‏مجمع بدون‎ =) ‏يخفي تحديد‎ MY0-029 5 ‏عند ١٠”مئوية تقريبًا. إن وجود‎ MYO0-029 ‏في غياب‎ GDF-8 ‏في المصل عند درجات الحرارة المنخفضة. إن الحضانة عند درجات حرارة أكبر من‎ 8 ‏تبين تركيزات‎ dla ‏في وجود 14770-029. على أية‎ GDF-8 ‏مئوية تستعيد جزئيًا تحديد‎ ٠ ‏محسوية من أجل 0017-8 عند درجات حرارة أكبر من 15"مئوية أن الاختبار يقدر دونيًا‎ ٠ ‏جوهريًا الكمية الكلية من 60178 الموجودة في المصل.‎ ‏عند أس هيدروجيني منخفض‎ Myo-029 ‏في وجود‎ GDF8 ‏تحديد‎ 1) Y—1 ‏مثال‎ ‏إن التحديد دون الأمتل من أجل 06118 عند التسخين إلى درجات الحرارة الضرورية لتفكك‎ ‏تفكك الحمض على‎ ELISA ‏قدرة‎ YE ‏يحث تقييم الطرق البديلة. يوضح شكل‎ 1770-9 ‏في غياب ووجود 14770-029. في تجارب سابقة يتعادل‎ GDF-8 ‏تحديد مستويات متشابهة من‎ YO

MYO- ‏الإمساك. تحت هذه الشروط يكون‎ Ab ‏قبل الارتباط مع‎ GDF-8/MYO0-029 ‏خليط‎ ‏عند التعادل. في شكل‎ (RK35 ‏قادرًا على التنافس بالارتباط مع مضاد الجسم للإمساك؛‎ 9 ‏م17‎

١١٠

RK35 ‏يتضح أنه عند استبقاء شروط الإمساك عند أس هيدروجيني حمضي قليل» لا يزال‎ Y 8 ‏ولذلك يمكن تحقيق استرجاع كامل‎ My0-029 ‏بينما لا يستطيع ذلك‎ GDF-8 ‏قادرًا على ربط‎ ‏العلاجي.‎ Ab ‏لتحديد 0117-8 في وجود أو غياب‎ ‏تحت شروط حمضية‎ 0117-8 Jay RK35 :١-١ ‏مثال‎ ‏قادر على ربط 0127-8 تحت شروط حمضية؛‎ (MY0-029 ‏لتحديد أن 5 (لكن ليس‎ ° ‏في مصل آدمي وتجرى خطوة إمساك مادة التحلل في‎ Myo-029 5 RK35 ‏يعاير بصورة منفردة‎ ‏شروط حمضية. إن الكميات الزائدة من 181635 في المحلول قادرة على ربط والتنافس لربط‎ ‏تحت شروط‎ GDF-8 ‏المرتبط بالطبق؛ مما يؤدي إلى تحديد قليل من أجل‎ RK35 ‏مع‎ GDF-8 ‏حمضية. إن 1470-029 غير قادر على ربط 0117-8 في محلول يقترب من أس هيدروجيني‎ ‏في محلول المتوافر للإرتباط‎ GDF-8 ‏بغض النظر عن تركيز 14770-029 المضاف؛ تاركًا‎ oF ٠ ‏على‎ RK35 ‏لذلك» يمكن تحديد قدرة‎ (Yo ‏(شكل‎ ELISA ‏المغطى في عين‎ RK35 Ab ‏مع‎ ‏تحت شروط لا يمكن أن يخدم فيها 170-029 كمادة مساهمة مفيدة يمكن‎ GDF-8 ‏ربط‎ ‏في وجود 2170-029. إن تفكك حمض لمضاد الجسم‎ GDF-8 ‏إنجازها لقياس مستويات‎ ‏تبين البيانات‎ MYO0-029 ‏مؤثر حتى عند زيادة تدريجية لتركيزات‎ GDF-8 ‏من‎ MYO-029

GDF-8 ‏ميكروجرام/ ملليلتر لا تقلل تحديد‎ ٠٠١ ‏أن زيادة تركيز 170-029 إلى‎ Yo ‏في شكل‎ ٠

GDF-8 ‏التقليل الملحوظ في تحديد‎ Wad ‏باستخدام بروتوكول تفكك الحمض. يبين هذا الشكل‎

XT ‏باستخدام بروتوكول تفكك بالحرارة في شكل‎ ‏من تلك‎ GDF-8 ‏يؤدي تحميض المصل الآدمي إلى تقديرات أكبر بكثير لمستويات مصل‎

GDF-8 ‏المقررة مسبقًا . لتوضيح أن تقديرات المصل الزائدة هي نتيجة لتحديد أكبر من أجل‎ ‏وليست بسبب صنيع يحثه حمض. يحلل المصل من كل من فأر مزال 0017-8 بالهندسة‎ ٠٠ ‏أن المصل‎ YV ‏يبين شكل‎ Belgian Blue ‏موجود طبيعيًا» البقرة‎ GDF-8 ‏الوراثية وحيوان مزال‎ ‏يفشل في إنتاج إشارة أكثر من الخلفية‎ Belgian Blue ‏من كل الفأر مزال 0017-8 والبقرة‎ ‏الأساسية للطبق مع القياس عند أس هيدروجيني سواء متعادل أو حمضي. إن القيم المقررة هنا‎ ‏تكون بوحدات كثافة بصرية وتسمح بتقييم مقارن وأيضا يؤدي فقد منحنى المعايرة إلى عدم‎ .GDF-8 ‏القدرة على تحديد الكمية المطلقة من‎ Yo ‏مطابقة منحني معايرة‎ :١ 1-7 ‏مثال‎

لتقييم التباين بين الاختبارات وفي الاختبار ذاته لطريقة تفكك بالحمض» تتحلل قواسم تامة من مصل ‎Belgian Blue‏ خامد المفعول مع ‎GDF-8 dimer‏ مخلق. تحضر أربعة محاليل مخزون غير معتمدة على منحنى المعايرة وتختبر في ثلاثة مقادير متساوية في خمسة مواقع مختلفة من طبق به 97 عين.

° يمكن استخدام نموذج منطقي من ؛ إلى © معايير لمطابقة منحنى المعايرة لهذا الاختبار. يمكن استخدام المتوسط الحسابي للثلاثة مقادير المتساوية كبيانات مجردة لمطابقة النموذج. نموذجيًا؛ فإن التباينات عند مستويات تركيز مختلفة تميل إلى كونها مختلفة. للحصول على منحنى معايرة دقيق عند كل من التركيزات القليلة والمرتفعة؛ لابد من استخدام طريقة أقل مربعات غير خطية موزونة؛ أو تحويل يثبت التباين لبيانات الكثافة البصرية متبوعًا بطريقة

‎٠‏ أقل المربعات غير الخطية غير الموزونة. تبين الأشكال ‎YA‏ (أ)-(ج) ثلاث طرق مختلفة لمطابقة منحنى المعايرة لخمسة أطباق ‎GDF-8 ELISA‏ بالنسبة للأخطاء النسبية للتركيزات المعاد حسابها للمقادير القياسية المعايرة. إذا كانت الأخطاء بنسبة ‎77١0‏ مقبولة؛ فعندئذ يمكن استخدام كل من النموذج المنطقي 4- و*©- للمعايير المطابقة على الجذر التربيعي للكثافة البصرية. ‎Ve‏ مثال 19-7: دقة وضبط الاختبار لتقييم التباين بين وفي نفس الاختبار لطريقة التفكك بالحمض تتحلل قواسم تامة من مصل ‎Belgian Blue‏ خامد النشاط مع ‎GDF-8 dimer‏ مخلق. تحضر أربعة محاليل مخزون غير معتمدة على منحنى المعايرة وتختبر في ثلاثة مقادير متساوية في خمسة مواقع مختلفة من طبق به 97 عين. يبين شكل ‎YA‏ نظام الطبق لخمسة أطباق معالجة في ثلاثة أيام مختلفة. ‎Yo‏ تحسب تركيزات العينة خامدة النشاط من منحنى المعايرة المطابق مع كل طبق نموذج منطقي من ©- معايير. إن معاملات التباين ‎(CV)‏ في الطبق وبين الأطباق والأخطاء النسبية ‎(RE)‏ ‏تلخص في جدول ١و‏ ؟. إن الدقة في كل من داخل الطبق وبين الأطباق تكون بصورة جيدة في حدود ‎727٠‏ اعتماذًا على طريقة حسابات ‎CV‏ ‏جدول © ‎Yo‏ التباين في الطبق للعينات مخمدة النشاط قيمة اسمية عدد متوسط | متوسط ‎CV‏ | المتوسط العينة 0171 ‎YAS‏

يكرد ‎wr‏ ‎al ewe elu‏ ‎a eel eve‏ ‎er eevee‏ ‎vel [eee‏ ‎[SD = 1‏ متوسط العينة ‎[SD << 82‏ تركيز القيمة الاسمية جدول ‎١‏ ‏التباين في الطبق للعينات مخمدة النشاط 08 0 ً' اله اعد | ‎al‏ اس ‎[Inter-Plate SD = CV#1 ©‏ متوسط العينة ‎[Inter-Plate SD = CV#2‏ تركيز القيمة الاسمية مثال ‎VY‏ قياس تركيزات ‎Myostatin‏ في مصل )2 باستخدام الاختبار حسب الوصف أعلاه؛ تقاس تركيزات ‎myostatin‏ في الدورة الدموية وتقارن في أمصال آدمية صحيحة الجسم. في دراسة؛ يتم تقييم أمصال رجال صغار السن ‎٠‏ وأكبر ‎Gu‏ من أجل مستويات ‎myostatin‏ تختبر أيضا تأثيرات معالجة ‎testosterone‏ على مستويات ‎myostatin‏ في الدورة الدموية باستخدام عينات مخزونة من دراسة استجابة جرعة ‎testosterone‏ في تلك الدراسة؛ التي تم نشر تفاصيلها مسبقًا ‎(Bhasin S et al.

J Clin Endocrinol Metab 2005;90:678-88, Bhasin S et al.

Am J‏ ‎Physiol Endocrinol Metab 2001 ;281 :El 172-81, and Storer TVV et al.

J Clin‏ ‎Endocrinol Metab 2003;88: 1478-85), Yo‏ ‎YAEL‏

YYA

‏مصاحبة‎ a ‏لرجال أصحاء صغار السن وأكبر‎ testosterone ‏تعطى جرعات متدرجة من‎ ‏بزيادة معتمدة على الجرعة في كتلة وقوة عضلة هيكلية. في دراسة أخرى يتم تقييم أمصال‎ ‏سيدات صحيحات الجسم ومنقطعة الطمث جراحيًا.‎ ‏في الدراسة الأولى تشتق عينات المصل من رجال أصحاء صغار السن؛ تتراوح أعمارهم‎ ‏طبيعية؛‎ testosterone ‏من 19-68 عام؛ مع مستويات‎ a ‏ورجال أكبر‎ ale ؟-١8 ‏من‎ © ‏شاركوا في دراسته استجابة لجرعة كما هو مذكور أعلاء. إن بروتوكولات الدراسة المصرح بها‎ testosterone ‏في لوحات الدراسة المعهدية‎

Charles R. Drew University and Harbor-UCLA Research and Education Institute.

VY > ‏نانوجرام/ ملليلترء درجة‎ 4 > PSA ٠ ‏تتضمن معايير الإقصاء تاريخ سرطان البروستاتا‎ ‏قيمة نسبة حجم الخلايا الحمراء في الدم‎ AUA ‏في استقصاء أعراض مجرى بولي سفلي‎ ٠ ‏الكلي > 48 7؛ توقف شديد للتنفس أثناء النوم؛ داء السكر؛ فشل قلب محتقن؛ احتشاء قلبي‎ ‏في السنة السابقة؛ أو المشاركة في‎ androgens ‏عضلي في الستة شهور السابقة؛ استخدام‎ ‏برامج تدريب متوسطة إلى شديدة التمرينات. بعد فترة تحكم ؛ أسابيع؛ يقسم المشاركون‎

GnRH ‏إلى © مجموعات معالجة لتعاطي حقنات شهريًا من معضد‎ ١ ‏عشوائيًا من‎ (leuprolide depot, 7.5 mg; TAP, North Chicago, IL) Vo ‏داخلي. يتعاطى المشاركون أيضا حقنات في العضل أسبوعيًا من‎ gonadotropin ‏لكبح إنتاج‎ testosterone enanthate (TE, Delatestryl, 200 mg/ml; Savient Pharmaceuticals, Inc., Iselin, NJ) ‏مجمء أو 30 مجم أسبوعيًا.‎ ١75 ‏مجم؛‎ ٠٠ ‏مجم؛‎ Yo ‏إلى © جرعات:‎ ١ ‏من‎ 7 تخلط عينات المصل (أو عينات معايرة في مصل ‎(Belgian Blue‏ مع مثبت أس هيدروجيني تفكك حمض ‎Glycine HCI)‏ .+ جزيئي جرامي أس هيدروجيني ‎(Y.0‏ عند المعدل ‎YLT‏ لاختبارات غير تفككية؛ تخلط العينات مع مثبت أس هيدروجيني ‎THST‏ ‎٠٠ Tris-HCI)‏ مللي جزيئي جرامي أس هيدروجيني ‎00s NaCl A‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎١ Glycine‏ مللي جزيثي جرامي» ‎Tween-20‏ 0.0.0 7؛ أس هيدروجيني ‎(A‏ بدلا من مثبت

Y ‏مع‎ (Immulon 4 HBX # 3855) ‏تحضن أطباق الاختبار‎ .Glycine-HCT ‏أس هيدروجيني‎ Yo ‏مللي جزيئي‎ ٠٠١ Sodium Borate) ‏مجم/ ملليلتر 11635 في مثبت أس هيدروجيني تغليف‎ ‏ميكرولتر/‎ ٠00 ‏الليل عند ؛”مئوية؛ تغسل؛ وتخمد مع‎ isha )1.١ ‏جرامي؛ أس هيدروجيني‎ ال

‎i 4‏ عين مع )#37535 ‎.SuperBlock-TBS (Pierce‏ تنقل عينات الممسل المخففة ‎٠٠١(‏ ميكرولتر) إلى طبق الاختبار؛ تحضن لمدة 90 دقيقة عند درجة حرارة ‎al‏ تغسل ؛ مرات مع ‎THST‏ ويضاف لكل عين ‎٠٠١‏ ميكرولتر من ‎Ab‏ ثانوي ‎biotinlylated‏ ٍْ ‎0.١( RK-22‏ ميكروجرام/ ملليلتر) لمدة 90 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تغسل الأطباق ؛ ّْ © مرات مع ‎«THST‏ ويضاف ‎٠٠١‏ ميكرولتر من ‎(SouthernBiotech ~~ Streptavidin-HRP‏ '! )#7100-05 مخفف :40000 في مثبت ‎oof‏ هيدروجيني ‎(THST‏ لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تغسل الأطباق مرة أخرى ؛ مرات مع 11187؛ وتتطور بإضافة ‎٠٠١‏ ميكرولتر ْ من مادة خاضعة ‎TMB‏ لمدة ‎١١‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. يضاف ‎٠٠١‏ ميكرولتر من ٍ] 4 © جزيئي جرامي للعين؛ وتتم قراءة أطباق ‎ELISA‏ عند ‎4٠0 OD‏ نانومتر مع : ‎٠‏ تصحيح طول الموجة المضبوط عند +06 نانومتر. نطاق منحني المعايرة: يتولد منحنى معايرة برسم بياني لقيم ‎OD‏ والتركيز المقابل لكل مادة معايرة. تستخدم مطابقة ا منطقية من © معايير لمطابقة منحنى المعايرة. يحضر منحنى معايرة المتكون من تخفيفات ْ مرتين لأجل 0 ناضج آدمي مخلق في مصل ‎Belgian Blue‏ ممتد من ‎VY‏ إلى ٍ ‎٠‏ 25000 بيكوجرام/ ملليلتر قبل كل اختبار. تتحدد عدم الدقة في وبين الاختبارات لقيم القراءة إٍ المتكررة لعدد ‎١١‏ مادة معايرة من ‎١‏ دورات تحليلية. يحسب المتوسط الحسابي؛ ‎JCV SD‏ ٍ والميل 7 للتركيزات المستقرئة لكل دورة تحليلية (لتحديد عدم الدقة في الاختبار) ولكل الدورات إٍْ التحليلية (لتحديد عدم الدقة بين الاختبارات). يتحدد الحد السفلي والعلوي للتقدير الكمي بأنه ‎i‏ ‏أقل ‎(LQ)‏ وأعلى ‎(ULQ)‏ تركيزات مادة معايرة (على الترتيب) يمكن قياسيها مع ‎TCV‏ : ‎ddl ٠‏ في الاختبار < 120 : تحضير عينات تحديد صلاحية: : تحضر © مجموعات لعينات تحديد صلاحية مقابلة لتركيزات مصل ‎ALE‏ متوسط النطاق ّْ وعالية لأجل ‎myostatin‏ باستخدام عينات مصل من أشخاص أصحاء مع تركيزات ‎myostatin‏ آ داخلي في النطاق السفلي والمتوسط لمنحنى المعايرة؛ على الترتيب. إن عينة تحديد الصلاحية ْ ‎Yo‏ الكبيرة هي عينة مصل من شخص صحيح مخمدة مع ‎myostatin protein‏ مخلق. : عدم الدقة في وبين الاختبارات: إْ ‎YA£T‏

ا : ‎i‏ ‏. ‏تقاس ‎CVs‏ في وبين الاختبارات في ‎١‏ قواسم تامة منفصلة لكل من عينات تحديد الصلاحية الثلاثة ‎ALE)‏ متوسطة؛ عالية) في * دورات تحليلية منفصلة. يتحدد نطاق قبول دورة تحليلية ‎QC‏ (المتوسط الحسابي للتباين الكلي للاختبار 0-/+) من تركيزات ‎myostatin‏ ‏المقاسة في 77 قاسم تام منفصل لكل من © عينات ‎QC‏ في ‎YO‏ دورة تحليلة مستقلة. يحلل © قاسم تام من كل من عينات ‎QC‏ الثلاثة ‎(QC-AL)‏ متوسط-00؛ وعالية ‎(QC-‏ في كل دورة تحليلة للعينات. تكون الدورة التحليلية مقبولة إذا كانت تركيزات ‎myostatin‏ المقاسة في ‎١‏ من عينات ‎QC‏ الثلاثة في نطاق القبول المقرر. اختبارات أخرى: تقاس مستويات ‎testosterone‏ الكلية في المصل باختبار مناعي إشعاعي خاص محدد ‎٠‏ الصلاحية مسبقًا مقابل تحليل كروماتوجرافي سائل ترادفي مع قياس طيف كتلة ِْ ‎(LC-MS/MS)‏ تكون معاملات التباين في وبين الاختبارات لاختبار 7 كلي 78.7 ‎TY‏ على الترتيب. يقاس ‎T‏ الحرء المنتفصل من المصل بإجراء ‎dialysis‏ اتزان» باختبار مناعي إشعاعي حساس له حساسية 0.77 بيكوجرام/ملليلتر وتكون معاملات التباين في وبين الاختبارات 74.7 و 2717.7 على الترتيب ‎(Sinha-Hikim et al.

J Clin Endocrinol Metab 1998;83: 1312-8). Vo‏ يقارن الاختبار المناعي الإشعاعي وطرق ‎LC-MS/MS‏ بتحليل عينات محضرة في مصل منزوع بفحم نباتي مضافة إليه كميات معلومة من 1. توضح هذه القياسات ارتباط ‎١.94‏ بين قياس الاختبار المناعي الإشعاعي 5 ‎LC-MS/MS‏ تقاس مستويات ‎globulin‏ ربط هرمون جنس في المصل ‎(SHBG)‏ باختبار قياس استشعاع مناعي الحساسية 1.75 نانوجزيء ‎٠‏ جرامي/ لتر. تتحدد تركيبة الجسم عند خط القاعدة وخلال الأسبوع + ¥ بقياس امتصاص أشعة ‎X‏ مزدوجة الطاقة ‎(DEW, Hologic 4500, Waltham, MA)‏ تستخدم صورة تركيبة الجسم لمعايرة الماكينة قبل كل قياس. تحليلات إحصائية يتم تقييم المتغيرات الناتجة لتوزيع وتجانس التباين؛ إن المتغيرات التي لا تحقق افتراضات ‎Yo‏ تجانس التباين أو توزيع طيفي تكون متحولة لوغاريتميًا. يستخدم ‎ANOVA‏ لتقييم الاختلافات عبر مجموعات الجرعة طبقًا للسن؛ الأصغر مقابل الأكبرء عند نقطة زمنية واحدة مع اختبار ‎Sheffe‏ لتحديد المجموعات المختلفة بدرجة ملحوظة إذا تم تحديد وجود فرق بواسطة ‎YAEL‏

ض ‎YY‏ ‎ANOVA‏ يتم التغيرات في المجموعات من خط القاعدة إلى المعالجة مع اختبارات-7 مزدوجة. يضبط ألفا عند ‎٠.05‏ لتحديد الدلالة الإحصائية. إن البيانات مقدمة مثل متوسط حسابي ‎+/-SEM‏ أو متوسط حسابي للتغير 7 من خط القاعدة 520/4-/+,؛ إذا لم يشار بخلاف ذلك في الرموز التفسيرية للشكل. 0 السمات المميزة لاختبار ‎:myostatin‏ النطاق الخطي: يتحدد متوسط عدم الدقة في وبين الاختبارات من ‎١‏ دورات تحليلية لكل من ‎١١‏ مادة ًَ معايرة (77- ‎١‏ بيكوجرام/ ملليلتر) في المنحنى القياسي (جدول 7ء أدناه) ‎٠‏ إن ‎CV‏ بين الاختبارات من أجل مادة مغايرة ‎VT‏ بيكوجرام/ ملليلتر هي ‎AYE‏ ولك تزيد عن الحد المقبول )5 ‎(T+‏ لذلك؛ يتحدد ‎LLQ‏ للاختبار بواسطة نقطة مادة المعايرة التالية ‎١7(‏ ‎٠‏ بيكوجرام/ ملليلتر) التي يكون عندها ‎CV‏ بين الاختبارات والميل7 7189-7 ‎vgs‏ على الترتيب. إن ‎CV‏ بين الاختبارات بمقدار 777.4 لمادة معايرة 59006 بيكوجرام/ ملليلتر ليست دكاة اه > ‎CT Co‏ ‎La‏ في النطاق المقبول )> ‎٠0‏ 77) وبذلك يتحدد ‎ULQ‏ لنقطة مادة المعايرة الأقل التالية ( 7790 بيكوجرام/ ملليلتر) التي يكون عندها ‎CV‏ والميل 7 77.7 و8. 7 على الترتيب. إن النطاق الكمي الخطي للاختبار يمتد من ‎VET‏ إلى 7500© بيكوجرام/ ملليلتر في مادة بينية ‎Vo‏ هامة حيويًا. ِ] ‎t‏ ‏! ‏ ‏. ‎YAY‏

Q

— mn) a | ‏و‎ ‎| 5١ ‏ا‎ 1 of FX : + = = . J *| 23 : 5 3 ٠ > ‏”ا‎ 3] 53 223 1 0 1 +. 0 . +a, + 3 . 5 ' : + 1, 5 - ‏يو‎ ‎> ‎< | < >» ‏في‎ ‎| > Pa © 5 7 > > > |r > o |Z 4 5 > 98 19 3 > < | a + + | 3 9 Q r > o >» 2 < 2 Sle : £ <= o ‏ااي ~ في‎ > 1 ْ . j 3 > ha 4 . 3 =| > — o o 32, ‏سي | م‎ 2722 > | | ‏س3‎ ‎3 ‏الى | ا[‎ i > 1 ١ =) <Z 9 24 9 J ro J < > 3 > ~ < 3 ‏صو | صو‎ . 2) > . . ‏ب‎ = 4 > 0 ‏ا‎ : w | ‏لم‎ ‎| w | ~ 7 ; sa 3 ‏في وي 3 . بي‎ ‏ب‎ > <£ i 3 w 4| > | > } = 3 . . g FF

S| | 7 ِ 3 > |< : — 4 << ‏و‎ ‎| ~ z ST > = 1 ‏ل أل‎

NE 2

Z |= 0 7 ‏ا و‎ i < o | ‏ل‎ ‎| : 0 | ‏مر‎ ‎1 3 ‏ف‎ ‎| > ‏سر‎ > > 9 r= ‏و‎ < > > 2 > | ‏مو‎ ‎; ‏ب‎ — | ~ 1 ‏صر اي‎ ‏ج الس إ‎ 3 ‏في‎ ‎> |= z 202 !

YAER

= الح 3 25 2 4 - ب | 1 ‎“a‏ ‏.ا ‏+ ‏4 ‏> ‏1 : << | - | | جو ا << ‎a — < r =‏ فيا 0 > ‎Q -— a”‏ -3 > 3 —- ~ ويح ‎a Ww Q‏ ‎Q > 3 ao” < ~~ < ~‏ ” ‎ww 3 J‏ << ب > 0 ‎ww‏ ‏3 > 0 وي > . ‎Q > < > -—‏ > 3 3 3 3 3 ص > < > ~ ‎Q > rr‏ 0 ‎a” w J J‏ »> و |> ‎yd‏ ‏بي > ‎a”‏ < < < < < < < < —- لحي اي اي حي سو | < ‎Q‏ و في فها | ‎w‏ حو وي ‎J‏ > 3 و و © £< . سق | |> سن ‎a a a a‏ 3 1 ~ »> و و > | ‎w a‏ ¥ ‎a‏ < 3 < > - > > < صر > ولح لإا ليبا ‎ww ww‏ ‎rr‏ | — — ~ 0 ~~ > في ‎Q - — > > > * <‏ . + 3 ا ود | ‎w‏ »> ‎ba > >» >» >‏ ‎a 3 0 Q w a > | ~‏ - > سو سس > ‎p= pos‏ . اي اب . اب سور ويح . . . ‎٠‏ . ص 3 3 صر — 0 ‎a‏ ‎w * .‏ << ار اي - »> ‎o >‏ | 0 || ~ ~ | -1 0 3 سر —- . ~~ ‎|r| > > + <‏ << | ع > > > و > »> و ص ‎ao < >» ٠ > Ww‏ > رب ‎a Q 3 ; °‏ ليح يي 0 ‎a +‏ —- سي حي اي — — حيو | حو | فيا | صر م | ‎Ww‏ | امن | حو ‎r 0 3 : *‏ . . ‎YAEL‏

7" ض عدم دقة في وبين الاختبارات: , إن المتوسط الحسابي لتركيزات ‎myostatin‏ (بيكوجرام/ملليلتر « ‎(SD‏ في عينات صلاحية قليلة؛ متوسطة وعالية في * دورات تحليلية هفو قمتحكئك ‎AYOEVTYIO‏ ‎AEARIATIA,‏ على الترتيب. إن ‎CV‏ في الاختبار المقاسة لعينات الصلاحية القليلة؛ © والمتوسطة والعالية (العددد 0 لكل عينة صلاحية) هي 401 ‎IVY EY‏ على الترتيبء ‎CV‏ بين الاختبارات هي ‎AYA‏ 0.1 و 759.7 على الترتيب. خصوصية الاختبار: إن ‎myostatin protein‏ الناضج له درجة كبيرة من حماية الترتيب بين الأنوا ع الثديية (4)؛ مما يسمح باستخدام اختبار ‎myostatin‏ في عينات كثيرة غير ‎Gaal‏ تتضمن ‎«JL‏ حيوان ‎٠‏ قارض؛ كلب بقرةة؛ وقرد. تختبر عينات مصل من ماشية ناقصة ‎(Belgian Blue) myostatin‏ ومن ‎Ohi‏ مع طفرة إخمادية للنشاط في جين ‎(mstn KO) myostatin‏ تحت شروط حمضية تفككية؛ وتقارن مع حيوانات ‎Ale‏ من نفس النوع (شكل 9؟لأ)). إن ‎myostatin‏ المصل وفير بغزارة في الفثران العادية (حوالي ‎١٠١‏ نانوجرام/ ملليلتر)؛ بينما يكون المتوسط في مصل بقرة طبيعيهية ‎٠‏ ناانوجرام/ ملليلتر ‎LT‏ على ‎par wl‏ فإن ‎myostatin protein ٠‏ لا يمن تحديده في أمصال من كل من ماشية ‎Belgian Blue‏ وفئران ‎Lee «myostatin KO‏ يؤكد خصوصية الاختبار لأجل ‎myostatin‏ لأن الطفرات في هذه الحيوانات ناقصة ‎myostatin‏ توقف تكوين ‎.protein‏ ‏سمات خط القاعدة للآدميين: تكمل مرحلة المعالجة ‎OF‏ من ‎TY‏ رجل صغير السن و٠5‏ من 10 رجل كبير السن ‎٠‏ - مقسمين عشوائيًا. إن المصل الكافي لاختبارات ‎myostatin‏ وبيانات تركيبة الجسم يتوافران خلال الأسبوع ‎٠‏ في 90 رجل صغير السن و48 رجل أكبر ‎tl‏ إن هؤلاء الأشخاص متضمنون في هذا التحليل الثانوي وسمات خط القاعدة لهم مبينة في جدول ‎cA‏ أدناه. إن معدل الإذعان الكلي للعقار أكبر من 749 إن ‎testosterone‏ خط القاعدة الكلي؛ ‎testosterone‏ الحرء ‎testosterone‏ الحر#؛ تركيز ‎SHBG Yo‏ لا يختلفون بين © مجموعات جرعة عند خط القاعدة في أي من مجموعات الصغار أو الكبار في السن. على أية حال؛ فإن الرجال الأكبر سنا لديهم 06:06 كلي وحر في المصل أقل؛ 5 ‎SHBG‏ أعلى من الرجال صغار السن. إن وزن الجسم مؤشر كتلة الجسم؛ 13م

٠ ‏وكتلة الدهن7 أكبر في كبار السن عن الأصغر سدًاء بينما يكون الطول متشابهًا في كل‎ ‏منهما.‎ ‎4 ‏جدول‎ ‏سمات خط القاعدة للأفراد المقيمين‎ gen] pode] ‏في رجال أصغر وأكبر سنًا:‎ Myostatin ‏مستويات‎ © ‏المصل موزعة طبيعيًا في كل من الرجال صغار السن وكبار‎ myostatin ‏إن مستويات‎ السن. إن الرجال الصغار في السن لديهم مستويات ‎myostatin‏ أكبر بدرجة ملحوظة من الرجال كبار السن (8+ ‎٠.4 EV Lvs LT‏ نانوجرام/ملليلتر» ‎)٠..7-«‏ (شكل ‎٠‏ ؟()). إن مستويات ‎myostatin‏ المصل لا ترتبط بدرجة ملحوظة بكتلة الجسم الخالية من الدهن المقاسة ‎٠‏ مع م016 في الرجال سواء صغار السن أو كبار السن (الشكلان ‎٠‏ ؟(ب) و + "(ج)). بصورة مشابهة؛ لا توجد علاقة ملحوظة بين مستويات ‎myostatin‏ ووزن الجسم مؤشر ‎ATS‏ الجسم أو مستويات ‎testosterone‏ المصل عند خط القاعدة (غير مبينة). تأثيرات إعطاء ‎Testosterone‏ على مستويات ‎Myostatin‏ في الرجال: إن مستويات 70 المصل عند خط القاعدة لا تختلف بدرجة ملحوظة عبر ه myostatin ‏جرعات المعالجة في الرجال سواء صغار السن أو كبار السن. إن مستويات‎ ٠ المصل أعلى بدرجة ملحوظة في اليوم 07 مقارنة مع خط القاعدة في كل من صغار وكبار السن (شكل ‎(NY‏ إن التغيرات في تركيزات ‎myostatin‏ المصل لا تختلف بدرجة ملحوظة بين © مجموعات المعالجة سواء في صغار السن أو كبار السن. إن الرجال الأكبر سنا لديهم زيادة أكبر بدرجة ملحوظة في مستويات ‎myostatin‏ عن الرجال صغار السن (شكل ١

YAS

‎yy‏ ١(ب)).‏ إن الزيادات في مستويات ‎myostatin‏ المصل أثناء علاج ‎testosterone‏ غير دائمة البقاء؛ لذلك؛ فإن مستويات 0 المصل في اليوم لا تختلف بدرجة ملحوظة عن تلك عند خط القاعدة. إن مقادير الزيادة في مستويات ‎myostatin‏ أعلى من خط القاعدة مرتبطة بالتغيرات في © تركيزات ‎testosterone‏ إن التغيرات في مستويات ‎myostatin‏ من خط القاعدة إلى اليوم 57 مرتبطة إيجاببًا بدرجة ملحوظة بالتغيرات في تركيزات ‎ASH testosterone‏ (شكل ‎(hry‏ ‏والحر (شكل ‎(ITY‏ في الرجال صغار السن, لكن ليس في الرجال الأكبر سنا (إشكل ‎(VY‏ و7 ؟(د)). كما هو مقرر مسبقًا » فإن المعالجة بواسطة ‎testosterone‏ تصاحبها زيادات ملحوظة في ‎ABS‏ الجسم الخالية من الدهن ؛ إن التغيرات في كتلة الجسم الخالية من ‎٠‏ الدهن مرتبطة بدرجة ملحوظة مع جرعة وتركيز ‎testosterone‏ حسب الوصف مسبقًا. على أية ‎Jl‏ فإن التغيرات في ‎ABS‏ الجسم بدون دهن غير مرتبطة بدرجة ملحوظة مع سواء التغير المطلق أو التغير (شكل 7؟(ه) و 7 ؟(و)) في تركيزات ‎myostatin‏ ‏مستويات ‎Myostatin‏ في الإناث في دراسة ‎yl‏ تشترى عينات المصل لسيدات حائضات صحيحات الجسم صغيرات ‎Ve‏ السن ‎71-١9‏ سنة من العمرء وسيدات بعد سن اليأس؛ 897-71 سنة من العمرء من ‎MD «Beltsville 076‏ تقر المشاركات بالمشاركة في دراسة ‎Bioserve‏ مصرح بها من ‎IRB‏ إن السيدات منقطعة الطمث جراحيًا أعمارهن 00-7 ‎ale‏ خضعن لجراحة للمبيض لمدة 7 شهور على الأقل قبل انضمامهم للدراسة ولديهم ‎FSH‏ في المصل ‎Tos‏ وحدة/ لترء ‎To > BMI‏ كجم/ مأ؛ عينة ‎PAP‏ طبيعية ومسح ثديي طبيعي في الأثنى عشر ‎AL) Bed‏ ‎٠‏ ويوقعون على موافقة مكتوبة معلومة مصرح بها من جامعة بوسطن ‎IRB‏ ‏إن مستويات 0 المصل في السيدات صغيرات السن لا تختلف بدرجة ملحوظة عن تلك في الرجال صغار السن (شكل ‎(VY‏ إن مستويات ‎Myostatin‏ في السيدات الحائضات صغيرات ‎(oll‏ السيدات منقطعة الطمث جراحيًا والسيدات في سن اليأس طبيعيًا لا تختلف بدرجة ملحوظة.

: ‏ود‎ ‎, ‏قائمة الترثيب‎

Wyeth <\) «> ‏مضاد جسم مضاد 0118 واستخدامات من ذلك‎ <VY >

Am102658 <\Y +> : 61/001783 <)o0+> ٠.ءاححئجملا‎ >< ١ ‏م‎ >< : PatentIn Version 3.3 >19 +> ١ >< : ٠١١ >7 ١< : PRT >< i ‏الجنس البشري‎ <YIY> d ١ >. ١ Asp phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 3 ‏أ ها‎ Yo

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lle

Ye Yo AK : Ile Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu : Yo ga ¢0 ] Phe Val Phe Leu Gln Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala

Oa 00 ‏أ‎ ٠ ّْ Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 1 o 7 ٠ ‏ل‎ 2 A ٠

Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly ; YAEL

‎VFA‏ ض ‎Ao a. qo‏ ‎Lys lle Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser‏ ‎٠ ٠.‏ ‎Y > ٠٠<‏ ‎١<‏ ؟> ‎Yvo‏ ‎PRT <Y\Y>‏ ‎>7١<‏ الجنس البشري ‎Y <g>‏ ‎Met Gln Lys Leu Gln Leu Cys Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu Ile‏ ‎١ 2 ١١ yo‏ ‎Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gin Lys Glu Asn‏ ‎7٠ Yo Y.‏ ‎Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr‏ ‎Yo ٠ to‏ ‎Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu‏ ‎On 00 Te‏ ‎Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lle Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu‏ ‎Ye Yo A‏ 10 ‎Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val‏ ‎Ao 4 qo‏ ‎Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His‏ ‎٠ ٠١ ١٠١‏ ‎Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu‏ ‎١١١ YY.

Yo‏ ‎Met Gin Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser‏ ‎٠١٠ ١٠ Yeo‏ ‎Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu‏ ‎V¢o You Yoo "٠‏ ‎Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln lle Leu Arg Leu‏ دلا ‎Vo VV‏ ‎lle Lys pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu‏ ‎YAEL‏

‏بد نما‎ Yq.

Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser He Asp Val ١5 Yoo Y.o

Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly ٠ 7١١ YY.

Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr

YYo YY. YYo 4

Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys

Y¢o YO. Yoo

Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys

Ye Ye YV.

Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val ‏ذا‎ YA ‏ع‎ ‎Asp Phe Glu Ala Phe Gly Tip Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr

Ya. Yao Yeo

Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys

Y.o 7٠ 7١١ YY.

Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala 77١ YY. YYyo

Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr

Vee Yio You

Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val

Yoo Ye Yio

Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser

YV. Yvoe 2 > ٠<

YA ><

DNA ‏؟>‎ ١< ‏الجنس البشري‎ >7 ١< >).مء<‎ ‏م7‎

‎١٠‏ إ ‎gattttggtc ~~ ttgactgt YA‏ إٍْ ‎<Y\).>‏ ¢ : <١١؟>‏ 1 ‎PRT <Y\Y>‏ <> الجنس البشري \ ل ّ ‎Asp Phe Gly Leu Asp Cys‏ ‎١ o‏ ‎<Y\.>‏ © ‎go <Y\V\>‏ ‎١<‏ ؟> ‎DNA‏ <١؟>‏ الجنس البشري ‎er‏ ¢< 0 ٍِْ م ‎tttgaagctt ttggatggga ttggattatc gctcctaaaa gatat‏ ‎<YY >‏ 4“ ا <ا > ‎Yo‏ ‎PRT <Y\Y>‏ ٍِ ‎١ ١<‏ > لجنس البشري ‎<g>‏ 1 : ‎Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr‏ 1 ‎YAET‏

٠١ \ 0 ‏أ‎ yo ‏لا‎ >< ْ go ><

DNA ‏؟>‎ ١١< ‏الجنس البشري ا‎ >؟١<‎ ‏لا‎ >. tttgtatttt 228 tcctcatact catctggtac accaa to / >< ‏إْ‎ Yo ‏؟>‎ ١<

PRT <Y)Y> ‏الجنس البشري‎ >” ١< ‏ا‎ ‎Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln \ 5 Vo Vo q <YVY.>

YY > ١اا<‎ i DNA ‏؟>‎ ١< i ‏الجنس البشري‎ >7 ١< ' q ‏<ي.)>‎

١١ tgctctggag agtgtgaatt tgtattt ‏ف‎ ‎٠١ <YY > ><

PRT <Y\Y> ‏الجنس البشري‎ ><

Yo >.

Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe ١ 5

VY > ٠٠< ‏علا‎ > ١<

DNA ‏؟>‎ ١< ‏7؟> الجنس البشري‎ ١١<

VY ‏<ي.>‎ ‎tggattatcg ctcctaaaag atataaggce aattactgct ctggagagtg tgaatttgta Te tttttacaaa aatat Vo ١٠١ ><

Yo ‏7؟>‎ ١<

PRT >< ‏الجنس البشري‎ > ١؟<‎

VY >.

{ i

Vey

Trp Ile lle Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu ١ 5 Ye ١

Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys Tyr

Ye. Yo ٠١ > ٠٠< ٠١١ > ‏<اا‎ ‎DNA <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ > ١١<

VW >. caggttcage tccagcagtc tggggetgag ctggcaagac ctggggcttc ‏ع‎ ٠ tcctgcaagg cttctggeta cacctttact agctactgga tgcagtgggt aaaacagagg ١٠١ cctggacagg gtctggaatg 211668681 atttatcctg gagatggtga tactaggtac YA actcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagata aatcctceag cacagcctac ٠ atgcaactca gcagcttgge atctgaggac tctgeggtet attactgtge aagaatgggt Yoo ggttacgacc ggtactactt tgactactgg ggccaaggea ccactctcac agtetectca Ye ٠١ > ٠٠< ١٠١ >ا١١<‎

PRT > <

Mus ‏عضلة‎ <YIY> ١ < $ “>

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala ١ o Ye Yo

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr ‏نك‎

١ ٠ Yo Ye

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lle

Yo $e ‏م‎ ‎Gly Ala lle Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys phe

Ow oo Te

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 4 ‏ل حت‎ ٠ 7 Oo A ٠

Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

AO 5 ٠ q o

Ala Arg Met Gly Gly Tyr Asp Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin ٠ ٠١٠ ٠٠

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser ١١٠١ ١١

Yo > ٠١< 771 ><

DNA <Y\Y>

Mus ‏؟> عضلة‎ ١<

VO > v2 gacattgtga tgacacagtc tccatcctee ctggctatgt cagtaggaca gaaggtcact Te atgagctgca agtccagtca gagcectttta aatagtgcca atcaaaagaa ctatttggee ٠ tggtaccage agaaaccagg acagtctcct 8 tatactttgc atccactagg YA. gaatctgggg tccctgatcg cttcatagge agtggatctg ggacagattt cactcttace 97 atcagcagtg tgcaggcetga agacciggea gattacttct gtcagcaaca ttataacact ٠ ccgetcacgt teggtgetgg gaccaagetg gagetgaaa 771 ٠١ > ٠٠< ١٠١ ><

Veo

PRT ><

Mus ‏عضلة‎ > ١< ١٠١ >.

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly ١ ° ٠١ ١١

Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser ‏عله‎ Ser Leu Leu Asn Ser

Xe Yo Ye

Ala Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gin

Yo ‏مع م‎

Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 84 00 Te

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lo Ve. vo Ae le Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln

Ao 9. 40

His Tyr Asn Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu ١١ ١ «0 ١ ١ ٠

Lys

VV > ٠١<

YY. > ١<

PRT >؟١١<‎ ‏الجنس البشري‎ >” ١< ٠١ >.

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala ١ 2 ‏أ‎ ١ ‏م‎ ‎Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr ‏أ‎ ٠ Y 0 ‏أ‎ ٠

YAER

١١

Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

Yo ge ¢o

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe oO. oo Ta

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

Ya Yo Ae

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

Ao 9. 0

Ala Arg Met Gly Gly Tyr Asp Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

Yoo ٠١ ١٠

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ١١٠١ ١١

YA > ٠١<

YAY ><

PRT <Y)Y> ‏الجنس البشري‎ >7 ١١<

YA >. ‏حي‎ ‎| Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly ١ ° ٠١ yo

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

Yo Yo Ye

Ala Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

Yo 2 to

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

Oo. 00 Toe

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr oe ‏ولا‎ Yo Ae

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

Ao q. qo

His Tyr Asn Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

YAER

٠

Yoo Y.o ١٠١

Lys 14 > ٠٠< ه>؟١<‎

PRT >< ‏ض‎ Mus ‏عضلة‎ > ١١< ‏ض‎ ‎Yq >)..<

Ser Tyr Trp Met ‏ماه‎ ‎\ ‏هت‎ ‎Yo > ٠٠<

VV > ١<

PRT <Y\Y>

Mus ‏؟> عضلة‎ ١١<

Yeo <{ «>

Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe Lys \ 0 Ye Vo

Gly

YY <Y).> ١١ > ‏<ا‎ ‎PRT <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ >” ١١< ‏انعلا‎

) 1 1 ‏؛ٍ‎ ‎1 ‏إٍْ‎ ‎| YEA

YY >].

Ala Arg Met Gly Gly Tyr Asp Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr ١ ° ٠١

YY >" ٠<

VV > ١<

PRT <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ >١7 ١١< ‏إ‎ YY >..< : Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ala Asn Gln Lys Asn Tyr Leu ١ 2 ‏أ‎ ١١

Ala

YY >< ‏لا‎ > ١< : PRT <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ <YYY> k yy <¢ “>

Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser 0 ٠ >١١ ٠١< ٍ 1 >7١< ْ PRT <Y\Y>

<4

Mus ‏عضلة‎ > ١<

YE >)..< ‏ض‎ Gln Gln His Tyr Asn Thr Pro Leu Thr ‏ض‎ ١ °

Yo > ٠١< ٠١ >7١١<

PRT >< ٍ Mus ‏عضلة‎ >77 ١١<

Yo <$ “> ٍْ Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Gin ١ ‏هه‎ ١ ْ Y1<YY o> q <)>

PRT <Y)Y>

Mus ‏عضلة‎ <Y)¥> ٠١ <g>

Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr 0

YV ‏؟>‎ ٠< : ٠١ YY

YA£Y

You

PRT <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ >17 ١١< ‏اجا‎ <¢ a>

Ala Arg Met Gly Gly Tyr Asp Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr ١ ° ٠١ ‏<دا اكلا‎ ‏ض‎ ١١ ‏<7؟>‎ ‎| PRT <Y)Y>

Mus ‏عضلة‎ >77 ١<

YA > ‏حر ع‎

Lys Ser Ser ‏ماه‎ Ser Leu Leu Asn Ser Ala Asn Gln Lys Asn Tyr Leu \ 0 ١٠ ١١

Ala

Yq <Y\.> ‏لا‎ > ١١<

PRT <Y\)Y>

Mus ‏عضلة‎ > ١١<

Yq <¢ve>

Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser ١ 0

YALE

J

! ٠٠١ ٠١ > ٠١< 1 >؟١١<‎

PRT ><

Mus ‏عضلة‎ > ١١<©. <g>

Gln Gln His Tyr Asn Thr Pro Leu Thr \ ٍ

YY > ٠٠<

YEA >ا١١<‎ j PRT <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ <YYY>

FY >..< igaagtgcage tggtggagte tgggggaggce ttagtgaage ctggagggtc cctgaaacte Te tcctgtgeag cctctggatt cactttcagt agetatgeca tgtettgggt tcgecagact ١٠١١ ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcaace attagtagtg gtggtagtta cacctectat YAccagacagtg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac ٠ ‎ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggecatgt attactgtge aagacaagac Yoo‏ ا ‎; tatgctatga actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg 16018 YEA ‎| YY <Y).> ©... >ا١١<‎ ْ DNA <Y\Y>

Mus ‏عضلة‎ <Y)Y> 1 ‎ ‎ ‎YAEL

YoY

YY >. gacattgaga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc Te atcacctgca aggecagtca ggatgtgagt actgetgtag cctggtatca acagaaacca ٠١ ggacaatctc ctaaactact gctttactcg 1606 ggtacactgg agtccctgat ‏ا‎ ‎cggttcactg gcagtggatc tgggacggat 8 ccatcagcag tgtgcaggct Yeo gaagacctgg cagittatta ctgtcagcaa cattatagta ctccgtggac gttcggtgga Yoo

YY > ٠< ‏ض‎ Yo) ‏؟>‎ ١

DNA <Y\Y> ‏الجنس البشري‎ > ١١<

FY <a> caggtgcage tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaage ctggggcecte agtgaaggtt Te tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgeactgggt gcgacaggee ٠١ cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac YA ! gcacagaagt tccagggeag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac Yo atggagctga gcagectgag atctgaggac acggecgtgt attactgtge gagagacgag Yeo aactgggggt tcgacccctg gggecaggga accetggtea ccgtetcgag t Yo) i { Ye > ٠٠<

Yio ><

DNA ‏؟>‎ ١< ‏الجنس البشري‎ >” ١< ‏إ‎ ‏ذ‎

YoY

Ye <€ve> tcctatgage tgactcagec accctcagtg teegtgicte caggacagac agccaccatt Te acctgetctg gacatgecact gggggacaaa fttgtttcct ggtatcagea gggatcaggc ١٠١ cagtccectg tattggtcat ctatgacgat acccagegge cctcagggat ccctgggega YA ttctctgget ccaactctgg gaacacagec actclgacca tcagegggac ccaggctatg ٠ gatgaggetg actatttttg 482228166 2800661 181011256 cggagggace Yoo aaggtcaccg tccta Yio

Yo > ٠٠< ‏:دا ض‎ > ١٠< , DNA >؟١7<‎ ‏الجنس البشري‎ >7 ١<

Yo >. ‏<ي‎ ‎gaacatgacg gegeeetggg tggeectege 01016166 ‏مدع‎ gegeeggcete To tgggegtgge gaggetgaga cacgggagtg catctactac aacgecaact gggagcetgga ١٠١ gcgeaccaac cagageggee tggagegetg cgaaggegag caggacaage ggetgeactg YA. ctacgcetce tggegeaaca getctggeac catcgagetc gtgaagaagg getgetgget ٠ agatgacttc aactgctacg ataggcagga gtgtgtggee actgaggaga acccccaggt Yoo gtacttctge tgctgtgaag gcaacttctg caacgaacge ttcactcatt 6 Ye tgggggeeeg gaagtcacgt acgagecace cccgacagece 0080600186 tecacggtget "١ ggcctactca ctgetgeecca tegggggect ticcctcate gteetgetgg ‏1ه‎ EA gtaccggeat cgcaagecce cctacggtca tgtggacatc catgaggace ctgggectce of accaccatcc cctetggtgg gectgaagee actgeagetg ctggagatca aggetegggg 1٠ gegetttgge tgtgtctgga aggeccaget catgaatgac tttgtagetg tcaagatctt 1. cccactccag gacaageagt cgtggcagag tgaacgggag atcttcageca cacctggeat ‏ألا‎

ا gaagcacgag aacctgetac agticattge 166828006 cgaggeteca acctcgaagt YA agagctgtgg ctcatcacgg ccttccatga caagggcetee ctcacggatt acctcaaggg Ag gaacatcatc acatggaacg aactgtgtca tgtagcagag acgatgtcac gaggcctcte 4.6 atacctgcat gaggatgtge cctggtgeeg tggegaggec cacaagcegt ctattgecca 7. cagggacttt aaaagtaaga atgtattgct gaagagcgac ctcacagecg tgctggetga ٠١ ! ctttggettg getgttegat ttgagecagg gaaacctcca 666 acggacaggt ٠١ ! aggcacgaga cggtacatgg ctcctgaggt getcgaggga gccatcaact tccagagaga ١١ ' tgccttectg cgeattgaca tgtatgecat ggggttgglg ctgtgggage ttgtgtcteg ١٠١٠ ctgcaagget geagacggac ccgtggatga gtacatgetg cectttgagg aagagattgg YY. ccagcaccet tcgttggagg agetgeagga ggtggtggtg cacaagaaga tgaggeccac ١١ ٠ ' cattaaagat cactggttga aacacccggg cctggeecag ctttgtgtga 8 ٠ ِ gtgctgggac catgatgcag aggcetegett gtcegeggge tgtgtggagg agcgggatgatc ١8 ْ' cctgattcgg aggteggtca acggeactac ctcggactgt ctegtttcee tggtgacctc YO uu : tgtcaccaat gtggacctge cccctaaaga gtcaageatc taa YotY ‏م‎ >7٠١< : ‏7ه‎ <Y))> ْ PRT <Y\Y> i ‏؟> الجنس البشري‎ ١< ١ ١ >< i Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys : ١ ° Ye yo : Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 1 1 Yo 7

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

J Yo $e ‏مع‎ ‎: Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg . on oo Te

YAER

] yoo : Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 10 ‏ول‎ vo A : Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn : Ao qe qo

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg ٠ ٠١ ١٠ : Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro : "١ VY. 7 : Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu : YY ١ ١ i pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr i ‏م‎ Yo. yoo 1. i Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro { Vio VV. ‏مل‎ ً Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu : VA YAO "٠٠ ‎Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln‏ ا ‎Y.o‏ مل ‎I Yao‏ ‎i Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

YY. Yio YY. ‎i Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys ; Yo YY. Yvo Yi. 3 His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

Yéo Yo. Yoo ‎: Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser 0 Y1. Yio YV. ‎i Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys f ‏ب مدل‎ YAo ‎1 His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp ; Yd. Ydo Yo ‎§ Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

I Yio Fy. Yio YY. i Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val i Yo YY. Yvo ‎1 Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro k ‏1م‎

٠ ‏ض‎ Yio Yio Yo. ‏ض‎ Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

Yoo Yi. Yio

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg lle

YV. rvo YA.

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys ‏م‎ va. ٠ 6

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu $0 ٠٠ ١١

Glu lle Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

EY ¢Yo ٠ ! His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro {yo ten t¢o

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp £0 {oo 8 : Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu ; 16 ٠ ‏ف دلا‎ : lle Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu ‏م‎ 86 5 i Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

Ou 0.0 oY. : YA£T

Claims (1)

1. ‎yov‏ ض

   ‏عناصر الحماية ض

   ‎| ‏جزء ربط مولد مضاد‎ ol (isolated antibody) ‏جسم مضاد معزول‎ -١ ١ ‏ويشتمل على: ض‎ «GDF11 ‏وليس‎ GDF-8 ‏منه يربط بصفة خاصة‎ (antigen binding fragment) ‏لجسم مضاد محتوي على‎ (VH) (variable heavy domain) ‏مجال سيطرة سلسلة ثقيلة متغيرة‎ " ‏أولى يحددها ترتيب‎ (CDR) (complementarity determining region) ‏؛ منطقة تحديد تكميلية‎ ‏ثانية يحددها ترتيب ا‎ CDR «Yo FREE ‏مصتصتة من تعريف الترتيب رقم‎ acid © amino acid ‏ثالثة يحددها ترتيب‎ CDR 1 ‏أو‎ ١: ‏من تعريف الترتيب رقم‎ amino acid 1 : YY ‏أو‎ 7١ ‏".من تعريف الترتيب رقم:‎ , ‏لجسم مضاد محتوي على‎ (VL) (variable light domain) ‏مجال سيطرة سلسلة خفيفة متغيرة‎ A ' ‏ثانية‎ CDR «YA ‏أو‎ YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏أولى يحددها تريب‎ 008 4 ‏أو 749؛ و0017 ثالثة يحددها ترتيب أ‎ YY ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏يحددها ترتيب‎ ٠ .٠١ ‏أو‎ ١: ‏من تعريف الترتيب رقم‎ amino acid) ّ ‏حيث يشتمل‎ ١١ ‏من عنصر الحماية‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ =Y ١ ّْ AY ‏أو‎ ٠: ‏من تعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏المذكور على ترتيب‎ VH ‏مجال السيطرة‎ " : ‏أو‎ ١١ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏المذكور على ترتيب‎ VE ‏ويشتمل مجال السيطرة‎ " NA ¢ ] ‏أو 7؛ يشتمل‎ ١ ‏من عنصر الحماية‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏؟- الجسم المضاد‎ ١ ‏مناعي آدمي منتقى‎ globulin ‏إضافيا على مجال سيطرة ثقيل ثابت لجسم مضاد من نوع فرعي‎ " : IgM 5 IgE «IgA2 <IgAl ‏04عل‎ IgG3 dgG2 IgGl ‏من المجموعة المتكونة من‎ ¥ : ‏حيث يعدل‎ oF ‏من عنصر الحماية‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -4 ١ ّ: ‏مجال السيطرة الثقيل الثابت المذكور لتعديل وظيفة مستجيب لمجال سيطرة ثابت.‎ Y : ‏يشتمل‎ «FY ‏أو‎ ١ ‏من عنصر الحماية‎ (fragment) jal) ‏أو‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -*© ١ ; Jambda ‏أو‎ kappa ‏لجسم مضاد آدمي‎ cull ‏إضافيا على مجال سيطرة خفيف‎ " : «GDF11 ‏وليس‎ GDF-8 ‏يربط بصفة خاصة‎ (isolated antibody) ‏جسم مضاد معزول‎ -١ ١ : ‏ويشتمل على:‎ ¥ 1 ‏يحدده ترتيب‎ VH ‏سلسلتين ثقيلتين للجسم المضاد؛ تشمل كل منهما مجال سيطرة‎ ¥ : ‏متصل مع مجال سيطرة ثقيل ثابت آدمي؛ و‎ ١١7 ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino ‏1م‎ 4 ‏ّم" أ‎

   ' ٠٠١ ‏يحدده ترتيب‎ VL ‏سلسلتين خفيفتين للجسم المضاد؛ تشمل كل منهما مجال سيطرة‎ © ‏متصل مع مجال سيطرة خفيف ثابت آدمي. ض‎ VA ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ amino 2010 ١ ١ ‏من أي واحد من عناصر الحماية من‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -7 ١ ٠١ ‏إلى 7؛ حيث يربط الجسم المضاد أو الجزء المذكور 0018 بانجذاب أكبر بمقدار‎ " BMPI11 ‏أضعاف على الأقل عن‎ " , ١ ‏من عناصر الحماية من‎ aly ‏من أي‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ =A ١ ٠٠١ ‏إلى 7؛ حيث يربط الجسم المضاد أو الجزءٍ المذكور 0018 بانجذاب أكبر بمقدار‎ " ! BMP11 ‏أضعاف على الأقل عن‎ " .ٍ ١ ‏من أي واحد من عناصر الحماية من‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -4 ١ ' ‏نانوجزيئي جرامي‎ ٠١ ‏إلى 1 حيث يرتبط الجسم المضاد المذكور مع 00178 بانجذاب حوالي‎ " ' ‏أو أكثر.‎ " : ‏من أي واحد من عناصر الحماية من‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -٠١ ١ : ‏إلى 1 حيث يكون الجسم المضاد أو الجزء المذكور مكتسبا للسمة الآدمية كليا.‎ ١ " ّ ‏من أي واحد من عناصر الحماية من‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -١١ ١ : ‏إلى ؛ حيث يكون الجسم المضاد أو الجزء المذكور معادلا.‎ ١ " ِ ‏على ترتيب‎ Jade (isolated polynucleotide) ‏معزول‎ polynucleotide -١7 ١ ّ ‏من الجسم المضاد أو الجزء من‎ polypeptide ‏أو مكمل له؛ يشفر سلسلة‎ «nucleic acid ¥

   ' .6 ‏إلى‎ ١ ‏عناصر الحماية‎ ¥ : ‏من عنصر الحماية‎ polynucleotide ‏مشتمل على‎ (expression vector) ‏إظهار‎ JAG -١ ١ ْ wo ' VY ‏كما في عنصر الحماية‎ polynucleotide ‏تشتمل على‎ (host cell) ‏خلية عائل‎ —VE ١ ' ‏متصل تشغيليا مع ترتيب تنظيمي.‎ " ٌْ ‏لإنتاج جسم مضاد أو جزء ربط مولد مضاد منه يربط بصفة خاصة‎ (method) ‏طريقة‎ -١٠١ ١ ‏واسترجاع الجسم‎ ٠4 ‏عائل كما في عنصر الحماية‎ Aa ‏0078؛ تشتمل على خطوة زراعة‎ Y : ‏المضاد أو الجزء الناتج بهذه الطريقة.‎ " ' 10 ‏الناتج عن طريقة عنصر الحماية‎ (fragment) ‏أو الجزء‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -٠١ ١ : YAET

   ض + ١4 ‏يتهجن تحت شروط قاسية إلى‎ (isolated polynucleotide) ‏معزول‎ polynucleotide -١١ ١ " ترتيب ‎nucleic acid‏ من تعريف الترتيب رقم ‎١١‏ أو ‎Vo‏ أو مكملات لهما. ! ‏إلى‎ ١ ‏مشتملة على الجسم المضاد أو الجزء من عناصر الحماية‎ (composition) ‏تركيبة‎ -١١ ١ ‎١ "‏ أو ‎١١‏ ومادة حاملة ‎(carrier)‏ مقبولة دوائيا. ٍ ‎ٍ' ‏في تحضير‎ ١١ ‏إلى 6 أو‎ ١ ‏من عناصر الحماية‎ (antibody) ‏استخدام الجسم المضاد‎ -١9 ١ ‏" دواء لزيادة ‎ABS‏ عضلة في كائن ثديي. :

   ‏).= استخدام الجسم المضاد ‎(antibody)‏ من عناصر الحماية ‎١‏ إلى + أو 1 في تحضير ٍ ‏" دواء لمعالجة اضطراب يصاحبه 6018 منتقى من المجموعة المتكونة من: سوء تغذية ' ‏" عضلية؛ سوء تغذية عضلية مع تضخم كاذب؛ سوء تغذية عضلية وجهي لوحي عضدي؛ سوء : ‏¢ تغذية عضلية لزناد (قوس عظمي لتثبيت الطرف)- طرف»؛ سوء تغذية عضلية ‎(Duchenne‏ ' ‏© سوء تغذية عضلية ‎(Becker‏ سوء تغذية عضلية ‎Emery Dreifuss‏ متلازمة العمود الفقري أ ‎; «Walker Warberg ‏متلازمة‎ «Fukuyama ‏سوء 45345 عضلية‎ «Ullrich ‏المتصلب؛ متلازمة‎ ١ ‎: ‏مرض مخ- عضلة- عين؛ سوء تغذية عضلية خلقي؛ سوء تغذية وتيري عضلي (مرض‎ ١" ‎: ‏ضمور العضلات الهيكلية مع تقدم‎ ((ALS) ‏تصلب عضلي جانبي‎ «Gower ‏مرض‎ «(Steinart A ‏4 السن؛ ‎eda‏ فقدان قوة وكتلة العضلات؛ ضمور عضلي؛ هشاشة؛ اضطراب نسيج دهني؛ : ‎! ‏خلل مستوى الدهن‎ cglucose ‏سمنةء اضطراب أيضي؛ مرض السكرء بوادر سكرء خلل تحمل‎ ٠ : ‏بسبب إصابة رضية؛ اضطراب بسبب فقدان عظم؛‎ insulin ‏في الدم؛ متلازمة أيضية؛ مقاومة‎ ١ ‏قلة العظم؛ التهاب المفاصل العظمي؛‎ glucocorticoid ‏«شاشة العظام؛ هشاشة العظام بسبب‎ ١٠" i ‏مزمن؛ فقدان العظم‎ glucocorticoid ‏كسر بسبب هشاشة العظام؛ فقدان العظم بسبب علاج‎ ١" : ‏فقدان عظم بسبب نقص‎ androgen ‏بسبب فشل تناسلي سابق للأوان؛ فقدان عظم بسبب كبح‎ VE :ِ ‏فقدان عظم بسبب فرط ثانوي لنشاط الغدة الجاردرقية؛ فقدان عظم بسبب أمراض‎ vitamin © ٠٠ : ‏نقص التغذية؛ وفقدان عظم بسبب فقدان شهية عصابي.‎ ١١ ٍ ‏م"‎