SK5372000A3 - Aryloxy-alkyl-dialkylamine compounds, process for their preparation and pharmaceutical composition containing them - Google Patents

Aryloxy-alkyl-dialkylamine compounds, process for their preparation and pharmaceutical composition containing them Download PDF

Info

Publication number
SK5372000A3
SK5372000A3 SK537-2000A SK5372000A SK5372000A3 SK 5372000 A3 SK5372000 A3 SK 5372000A3 SK 5372000 A SK5372000 A SK 5372000A SK 5372000 A3 SK5372000 A3 SK 5372000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
alkyl
group
halogen
formula
optionally substituted
Prior art date
Application number
SK537-2000A
Other languages
English (en)
Other versions
SK286460B6 (sk
Inventor
Panolil Raveendranath
Joseph Zeldis
Galina Vid
John Richard Potoski
Jianxin Ren
Original Assignee
American Home Prod
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US09/161,653 external-priority patent/US6005102A/en
Application filed by American Home Prod filed Critical American Home Prod
Publication of SK5372000A3 publication Critical patent/SK5372000A3/sk
Publication of SK286460B6 publication Critical patent/SK286460B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/084—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C07D295/088—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/12—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for climacteric disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/16—Masculine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/18—Feminine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/30—Oestrogens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/32—Antioestrogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/02—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C217/48—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated and containing rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny, spôsob ich výroby a farmaceutický prostriedok s ich obsahom
Oblasť techniky
Tento vynález sa týka nových zlúčenín užitočných pri výrobe biologicky účinných zlúčenín ako aj spôsobu ich prípravy. Vynález poskytuje nové aryloxyalkyldialkylamíny, ktoré môžu byť použité pri výrobe farmaceutických prostriedkov.
Doterajší stav techniky
Matricové metaloproteinázy (MMPs) sú skupinou enzýmov, ktoré sa zúčastňujú na patologickom rozklade spojivových tkanív a bazálnych membrán. [Woessner, J. F., ml. FASEB J. 1991, 5, 2145; Birkedal-Hansen, H.; Moore, W. G. I.; Bodden. M. K.; Winsor, L. J.; Birkedal-Hansen, B.; DeCarlo, A.; Engler, J. A. Crit. Rev. Oral Biol. Med. 1993, 4, 197; Cawston, T. E. Pharmacol. Ther. 1996, 70, 163; Powell, W. C.; Matrisian, L. M. Cur. Top. Microbiol. and Immunol. 1996, 213, 1]. Tieto endopeptidázy obsahujúce zinok, pozostávajú z niekoľkých podskupín enzýmov zahrnujúcich kolagenázy, stromelyzíny a gelatinázy. Zistilo sa, že z týchto tried sú želatinázy MMPs najtesnejšie spojené s rastom a šírením tumorov, kým kolagenázy sú spojené s patogenézou osteroartritídy [Howell, D. S.; Pelletier, J. P. In Arthritis and Allied Conditions; McCarthy, D. J.; Koopman, W. J.; Eds.; Lea and Febiger: Philadelphia, 1993; 12th Edition zv. 2, str. 1723; Dean, D. D. Sem. Arthritis Rheum., 1991, 20, 2; Crawford, H. C; Matrisian, L. M. Invasion Metast. 1994-95, 14, 234; Ray, J. M.; Stetler-Stevenson, W. G. Exp. Opin. Invest. Drugs. 1996, 5, 323].
Na prevenciu úbytku kostnej hmoty po menopauze u žien má prioritu použitie hormonálnej terapie. Na doplnkové použitie obvyklý zoznam uvádza prostriedky obsahujúce estrón, estriol, etinylestradiol alebo konjugované estrogény izolované z prírodných zdrojov (napríklad PremarinR konjugované estrogény od WyethAyerst). U niektorých pacientov môže byť táto terapia kontraindikovaná kvôli proliferatívnym účinkom, ktoré majú nekontrastné estrogény (estrogény, ktoré nie sú
-2kombinované s progestínmi) na maternicové tkanivo. Proliferácia je spojená so zvyšujúcim sa rizikom endometrióznej alebo endometriálnej rakoviny. Účinky nekontrastných estrogénov na prsníkové tkanivo sú menej zreteľné, ale tiež znepokojujú. Je potrebné nájsť estrogény, ktoré môžu inhibovať rednutie kostí s minimálnym proliferačným účinkom v maternici a prsníkoch. Ukázalo sa, že určité nesteroidné antiestrogény zachovávajú kostnú hmotu v ovarioktomizovanom potkaňom modeli ako aj pri ľudských klinických testoch. Tamoxifen (predávaný ako Novadex® obchodná značka tamoxiféncitrát od Zeneca Pharmaceuticals, Wilmington, Delaware) je napríklad užitočné paliatívum pri liečení rakoviny prsníka a bolo dokázané, že má estrogénový agonistický účinok na kosti u človeka. Je taktiež čiastočný agonista v maternici a toto je príčinou niektorých rakovín. Ukázalo sa, že raloxifén, benzotiofénový antiestrogén, stimuluje rast maternice v ovarioktomizovanom potkanovi do menšej miery ako tamoxifén, ale zachováva schopnosť rastu kostnej hmoty. Preskúmanie tkanivových selektívnych estrogénov je opísané v článku Tissue-Selective Actions Of Estrogen Analogs, Bone zv. 17, č. 4, október 1995,181S-190S.
Tento vynález poskytuje nové medziprodukty, ktoré môžu byť použité pri výrobe farmaceutických zlúčenín, ktoré sú užitočné ako anti-estrogénové látky a ktoré sú užitočné na inhibíciu MMP. Použitie 4-karbamoylmetoxymetoxybenzylchloridových zlúčenín vzorca
Cl
Cl je opísané v NL 6402393,1964 a Chem. Abstr. 1965, 62, 7698.
Použitie 4-(2-dialkylaminoetoxy)benzoylchloridových zlúčenín vzorca
-3je opísané v Sharpe, C. J. a ďalší, J. Med. Chem. 1972, 15, 523 a Jones, C. D. a ďalší J. Med. Chem. 1984, 27, 1057. Podobne, použitie 4-(2-chinolinylmetoxy)benzylchloridu vzorca
Cl je opísané v Huang, F. C. a ďalší, J. Med. Chem. 1990, 33,1194.
Tento vynález poskytuje nové zlúčeniny, ako aj spôsoby ich prípravy, ktoré sa môžu použiť na výrobu farmaceutický účinných zlúčenín. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť výhodne použité ako medziprodukty pri výrobe farmaceutických zlúčenín, ako sú napríklad zlúčeniny a nízkou molekulovou hmotnosťou, nepeptidové inhibítory matricových metaloproteináz (napríklad gelatinázy, stromelizíny a kolagenázy) a TNF-α konvertujúci enzým (TACE, enzým konvertujúci tumorový nekrotický faktor-a), ktoré sú užitočné na liečenie chorôb, v ktorých tieto enzýmy sú aplikované ako je napríklad artritída, nádorové metastázy, zvredovatenie tkaniva, abnormálne liečenie rán, choroby ozubnice, choroby kostí, proteinúria, aneuryzmálna choroba aorty, degeneratívna strata chrupiek nasledujúca traumatické poranenie kĺbov, demyelinizačná choroba nervového systému a HIV infekcie. Ďalej zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť použité na výrobu zlúčenín, ktoré sa chovajú podobne ako estrogénové antagonisty na zníženie cholesterolu a na prevenciu kostného úbytku. Preto tieto zlúčeniny sú použité na liečenie mnohých chorôb zahrnujúcich osteoporózu, prostatickú hypertrofiu, neplodnosť, rakovinu prsníka, endomatriálnu hyperplaziu a rakovinu, kardiovaskulárne choroby, pri používaní antikoncepcie, Alzheimerovu chorobu a rakovinu kože.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu sú aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny všeobecného vzorca I
-4c-x
R3 R' R2 \/
Y—(
(O kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C12alkylu, výhodne z Ci-Cealkylu, alebo Ci-Ceperfluorovaného alkylu, výhodne -CF3;
X je odštiepiteľná skupina, napríklad atóm halogénu, -O-SO2-CH3i -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca —o—
Z
Zje vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo -CF3;
A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-;
m je celé číslo 0 až 3, výhodne 1;
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, atómu halogénu, -NO2, alkylu (výhodne Ci-Ci2alkylu, výhodnejšie Ci-C6alkylu), alkoxylu (výhodne Ci-C12alkoxylu, výhodnejšie Ci-Cealkoxylu), Ci-Ceperfluorovaného alkylu (výhodne -CF3), OH alebo ich C4-C4esterov alebo ich alkyléterov, -CN, -O-R1, -O-Ar, -S-R1, -S-Ar, -SO-R1, -SO-Ar, -SO2-R1, -SO2-Ar, -CO-R1, -CO-Ar, -CO2-R1 alebo -CO2-Ar;
Y je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:
a) skupinu
(i) kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, CrCealkyl alebo fenyl,
-5b) päťčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(Ci-C4alkyl)-, -N= a -S(O)„, kde n je celé číslo 0 až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, C1-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, CrC^cyloxy, Ci-C4alkyltio, C1-C4alkylsulfinyl, CrC4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
c) šesťčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(Ci-C4alkyl)-, -N= a -S(O)n, kde n je celé číslo 0 až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, C1-C4alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, C1-C4alkylsulfinyl, CrC4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
d) sedemčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(Ci-C4alkyl)-, -N= a -S(0)„, kde n je celé číslo O až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, C1-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, CrC4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1,-NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1,-N02; alebo
e) bicyklický heterocyklus obsahujúci 6 až 12 uhlíkových atómov buď premostený alebo fúzovaný a obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(Ci-C4alkyl)-, a -S(0)n, kde n je celé číslo O až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy,
-6trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, CrC4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy (C i-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkyl-amino,
Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
Ako je uvedené vo všeobecnom opise vyššie, R1 a R2 sú nezávisle vybrané zo skupiny uvedených substituentov. Akýkoľvek R1 tu uvedený v akomkoľvek vzorci nemusí znamenať rovnaký substituent ako iné R1, ani akýkoľvek R2 nemusí byť ten istý substituent ako iné R2, dokonca ani keď je v jednom vzorci viac ako jeden R1 alebo R2.
V opise vyššie, symbol Ar znamená monocyklické alebo polycyklické arylové alebo heteroarylové skupiny, ktoré môžu byť voliteľne substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými z halogénu, Ci-C6alkylu alebo -CF3. Príklady výhodných arylových skupín zahrnujú antracenylovú a fenantrenylovú skupinu, ako aj výhodnejšiu fenylovú, kumenylovú, mesitylovú, tolylovú, xylylovú a naftalenylovú skupinu. Príklady výhodných heteroarylových skupín zahrnujú indolizinylovú, indazolylovú, purinylovú, chinozinylovú, izochinolinylovú, chinolinylovú, ftalozinylovú, naftyridinylovú, chinoxalinylovú, chinazolinylovú, cinnolinylovú a pteridinylovú skupinu a podobne ako aj výhodnejšiu pyridylovú, pyrazinylovú, pyrimidinylovú, pyridizinylovú a indolylovú skupinu.
Vynález zahrnuje aj farmaceutický prijateľné soli vytvorené adičnou reakciou s buď anorganickou alebo organickou kyselinou. Medzi anorganické kyseliny patrí kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforová, kyselina dusičná a ako organické kyseliny je použitá kyselina octová, kyselina propiónová, kyselina citrónová, kyselina maleínová, kyselina jablčná, kyselina vínna, kyselina ftálová, kyselina jantárová, kyselina metánsulfónová, kyselina toluénsulfónová, kyselina naftalénsulfónová, kyselina gáforsulfónová, kyselina benzénsulfónová. Je známe, že zlúčeniny obsahujúce bázický dusík môžu reagovať s mnohými rozličnými kyselinami (protickými i apriotickými) a zvyčajne je výhodné poskytnúť zlúčeninu podľa vynálezu vo forme adičnej soli s kyselinou. Naviac, tento vynález zahrnuje kvartérne amóniové soli uvedených zlúčenín, ktoré môžu byť pripravené reakciou nukleofilných amínov
-7bočného reťazca s vhodne reaktívnym alkylačným činidlom ako je alkylhalogenid alebo benzylhalogenid.
Medzi výhodné zlúčeniny podľa vynálezu patria zlúčeniny všeobecného vzorca I
R3 R1 R2
R5 kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C^alkylu, výhodne z C1-C6alkylu, alebo CrCeperfluorovaného alkylu, výhodne -CF3;
X je odštiepiteľná skupina, napríklad atóm halogénu, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
Z je vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo -CF3; A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-; m je celé číslo 0 až 3, výhodne 1;
Y je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:
a) skupinu 'N (0 kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, Ci-Cealkyl alebo fenyl,
-8b) skupinu vybranú z tiofénu, furánu, pyrolu, imidazolu, pyrazolu, tiazolu, izotiazolu, izoxazolu alebo oxatiolánu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, C1-C4alkyl, trihalogénmetyl, C1-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, CrC4acyloxy, C1-C4alkyltio, C1-C4alkylsulfinyl, C1-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1,-NO2;
c) skupinu vybranú z pyridínu, pyrazínu, pyrimidínu, pyridazínu, piperidínu, morfolínu a pyránu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, C^acyloxy, Ci-C4alkyitío, Ci-C4alkylsulfinyl, C1-C4alkylsulfonyi, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
d) skupinu vybranú z azepínu, diazepínu, oxazepínu, tiazepínu, oxapínu a tiepínu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, CrC4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, C1-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2; alebo
e) bicyklický heterocyklus vybraný zo skupiny bezofuránu, izobenzofuránu, benzotiofénu, indolu, izoindolu, indolizínu, indazolu, purínu, chinolizínu, izochinolínu, chinolínu, ftalazínu, naftyridínu, chinoxalínu, chinazolínu a cinnolinu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, C1-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsuifonyl, hydroxy(C1-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
-9a ich farmaceutický prijateľné soli.
Ďalej medzi ešte výhodnejšie zlúčeniny podľa vynálezu patria tie zlúčeniny všeobecného vzorca I
d) kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, CrCealkylu, výhodne z CrCealkylu, alebo Ci-C6perfluorovaného alkylu, výhodne -CF3;
X je odštiepiteľná skupina, napríklad atóm halogénu, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
Zje vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo -CF3; A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-; m je celé číslo 0 až 3, výhodne 1;
Y je vybrané zo zkupiny zahrnujúcej:
a) skupinu
-Z
R8 kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, Ci-Cealkyl alebo fenyl,
-10b) skupinu vybranú z tiofénu, furánu, pyrolu, imidazolu, pyrazolu, tiazolu, pyridínu, pyrazínu, pyrimidínu, pyridazínu, piperidínu, indolu alebo benzofuránu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, CrC^lkylsulfínyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyí, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (CrC4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
Medzi najvýhodnejšie zlúčeniny podľa vynálezu patria zlúčeniny všeobecného vzorca II
(II) kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-Ci2alkylu, výhodne z Ci-Cealkylu, Ci-Ceperfluorovaného alkylu, výhodne -CF3;
alebo
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, OH alebo z ich Ci-C4esterov alebo ich alkyléterov, atómu halogénu, -CN, Ci-Cgalkylu alebo trifluórmetylu, m je celé číslo 0 až 3, výhodne 1;
R7 a R8 sú nezávisle vybrané z H, Ci-Cealkylu alebo sú spojené pomocou (CH2)P-, kde p je celé číslo 2 až 6, aby vytvorili kruh, ktorý je voliteľne substituovaný až troma substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, C1-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(CrC4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONH(Ci-C4), -NH2, CrC^lkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2(Ci-C4), -NHCO(C1-C4) a -NO2; a
X je definované vyššie a a ich farmaceutický prijateľné soli.
-11 Takisto medzi ešte výhodnejšie zlúčeniny podľa vynálezu patria zlúčeniny všeobecného vzorca III
kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-Ci2alkylu, výhodne z Ci-C6alkylu, alebo Ci-Ceperfluorovaného alkylu, napríklad je to perfluórovaná alkylová skupina -CF3;
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, OH alebo z ich Ci-C4esterov alebo ich alkyléterov, atómu halogénu, -CN, CrCealkylu alebo trifluórmetylu, m je celé číslo 0 až 3, výhodne 1;
A je vybrané z -S-, -SO- alebo -SO2-;
R7 a R8 sú nezávisle vybrané z H, CrCealkylu alebo sú spojené pomocou (CH2)P-, kde p je celé číslo 2 až 6, aby vytvorili kruh, ktorý je voliteľne substituovaný až troma substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, C1-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONH(C1-C4), -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2(Ci-C4), -NHCO(CrC4) a -NO2; a
X je definované vyššie a a ich farmaceutický prijateľné soli.
Medzi najvýhodnejšie zlúčeniny podľa vynálezu patria tie zlúčeniny všeobecného vzorca II alebo III opísané vyššie, kde R3 až R6 sú určené vyššie; X je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z Cl, -CF3 alebo -CH3; a Y je skupina XNZ
R8
R7 (i)
-12a R7 a R8 sú zreťazené spolu ako -(CH2)r, kde r je celé číslo 4 až 6 za vytvorenia kruhu voliteľne substituovaného až troma substituentami vybranými zo skupiny, ktorú tvorí vodík, hydroxyl, atóm halogénu, C1-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci^alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONH(Ci-C4), -NH2, Cí^alkylamino, C1-C4dialkylamino, -NHSO2(Ci-C4), -NHCO(Ci-C4) a -NO2; a a ich farmaceutický prijateľné soli.
Výhodné sú tie zlúčeniny, kde R7 a R8 sú zreťazené spolu ako -(CH2)P- alebo -(CH2)r, pričom vytvorený kruh je voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej Ci-C3alkyl, trifluórmetyl, atóm halogénu, atóm vodíka, fenyl, nitro, -CN.
Tento vynález tiež zahŕňa spôsob výroby uvedených zlúčenín.
Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť pripravené spôsobom, ktorý zahŕňa:
a) konvertovanie alkoholu vzorca A
kde m, A, Y a R1 až R6 sú určené vyššie na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde X je odštiepiteľná skupina, pomocou vhodných prostriedkov, napríklad pomocou halogenačného, sulfonylačného alebo acylačného činidla obsahujúceho odštiepiteľnú skupinu X;
alebo
b) oxidáciu zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde A je S za vzniku zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde A je -SO- alebo -SO2-, alebo
c) konvertovanie zlúčeniny všeobecného vzorca I na jej farmaceutický prijateľnú soľ.
Zlúčeniny všeobecného vzorca A môžu byť pripravené reakciou fenolu vzorca B
kde P je hydroxy chrániaca skupina a R1 až R6 sú určené vyššie (napríklad R1 a R2 sú každý H alebo Ci-Ci2alkyl) so zlúčeninou všeobecného vzorca
Y“(C)m
R1
I
C —halo
R2 R2 kde Y, R1, R2 sú určené vyššie a halogén je F, Cl, Br alebo I a odstránenie chrániacej skupiny.
Zlúčeniny podľa vynálezu, v ktorých „A“ je kyslík môžu byť syntetizované spôsobom, ktorý zahŕňa kroky:
a) alkyláciu príslušného hydroxybenzaldehydu vzorca
kde R3 až R6 sú určené vyššie, s príslušným alkylhalogenidom všeobecného vzorca
-14Rl
I
Y (č λη R2
halo kde Y, R1, R2 a m sú definované vo všeobecnom vzorci a odvodenom vzorci uvedených vyššie a halogén môže byť Cl, F, Br alebo I, za vzniku aldehydu všeobecného vzorca
b) redukciu aldehydového produktu z kroku a), za vzniku zodpovedajúceho alkoholu vzorca
c) konvertovanie alkoholu z kroku b) na jeho hydrochloridovú soľ napríklad s HCI/THF; a
d) konvertovanie alkoholovej skupiny na výhodnú odštiepitefnú skupinu, napríklad opracovaním s metánsulfonylchloridom alebo anhydridom trifluóroctovej kyseliny v prítomnosti bázy, napríklad pyridínu alebo trietylamínu.
Podobne tento vynález poskytuje spôsob výroby zlúčenín podľa tohto vynálezu, kde „A“ je síra, ktorý zahŕňa kroky;
-15a) alkyláciu zlúčeniny všeobecného vzorca
s alkylačným činidlom vzorca
R1 R'
I I
Y—(C )m—C halo
R2 R2 kde Y a m sú definované vyššie a halogén je vybraný z Cl, F. Br alebo I za vzniku aldehydu vzorca
b) redukciu aldehydového produktu z kroku a), napríklad s bórhydridom sodným na alkohol vzorca
R*
I (C)m—
R2
CH,OH
-16c) opracovanie alkoholu z kroku b) plynným HCl za vytvorenia jeho hydrochloridovej soli a
d) konvertovanie hydrochloridu alkoholového produktu z kroku c) na zlúčeninu s výhodnou odštiepiteľnou skupinou, napríklad opracovaním s metánsulfonylchloridom, toluénsulfonylchloridom alebo anhydridom trifluóroctovej kyseliny v prítomnosti bázy, napríklad pyridínu alebo trietylamínu alebo ďalej opracovaním HCl za vzniku zodpovedajúceho benzylchloridu a
e) voliteľne doplňujúca riadená oxidácia síry na sulfoxid alebo sulfón, napríklad s mchlórperbenzoovou kyselinou.
Východiskový tiofénoxidaldehydový materiál z kroku a) môže byť vyrobený zo zodpovedajúceho tiofenolaldehydu, napríklad s hydridom sodným, tento krok môže ale nemusí byť uvažovaný v uvedenom spôsobe.
Nasledujúce reakčné schémy I až IV demonštrujú syntézu zlúčenín podľa vynálezu, za použitia rôznych obmien „Y. Činidlá a rozpúšťadlá pre jednotlivé kroky sú uvedené len na ilustráciu a môžu byť nahradené inými činidlami a rozpúšťadlami známymi odborníkom v danej oblasti techniky.
Schéma I
d>
-17a) R7R8 = (CH2)5; b) R7R8 = (CH2)6; c) R7 = R8 = CH3 a R3 = H.
Schéma II
O.
‘Cl
HO
/í
CHO
Krok 1 K2CO3/DMF 95% xr”
HCI
HO-^~^-CH2OH
80%
Krok 2
NaBH^j/MeOH
Cu£T° JS, q rr ch2oh
O
HCI
96%
Krok 4 SOCI2/THF
Cv~xr
HCIg/MeOH --'alebo CH2CI sOCIjj/THF
HCI
Schéma Ila
Schéma Ila ponúka alternatívnu syntézu bezylalkoholu podľa tohto vynálezu, napríklad syntézu 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu. V tejto syntéze 4-hydroxybenzylakohol je opracovaný s vhodným arylaminoalkylchloridom za poskytnutia zodpovedajúceho alkoxybenzylalkoholom. V špecifickom príklade v schéme Ila, 4hydroxybenzylalkohol môže byť opracovaný s hydrochloridom 1 -(2-chlóretyl)-18piperidínom v prítomnosti K2CO3/Me2CO za vzniku 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu.
Schéma Ha tiež špecifickejšie ilustruje iné výhodné uskutočnenie vynálezu. Tento vynález tiež zahŕňa spôsob výroby výhodných alkoholov vzorca OH
kde Y znamená skupiny Y a ich voliteľné substituenty ako je opísané vyššie. Vo výhodnej podskupine tohto vynálezu Y znamená:
a) skupinu
(i) kde R7 a R8 sú nezávisle zvolené z H, CrCealkylu alebo fenylu, alebo
b) 5-, 6- alebo 7-členný nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklický kruh obsahujúci jeden alebo dva atómy dusíka, pričom heterocyklický kruh je pripojený etoxylovým mostíkom na atóm dusíka v kruhu a je voliteľne substituovaný 1 až 3 skupinami vybranými z halogénu, CrCealkylu, CrCealkoxylu, CrCetioalkylu, -CF3 alebo -NO2.
Výhodné skupiny Y podľa tohto vynálezu sú azepín, pyrol, imidazolín, imidazolidín, hexametylénimín, pyrolidín, pyrazolidín, pyrazolín, piperidín, pirazín.
Spôsob zahŕňa reakciu v alkalickom médiu 4-hydroxybenzylalkoholu so soľou, napríklad octanovou, hydrochloridovou, hydrobromidovou alebo hydrojodidovou soľou zlúčeniny vzorca kde Y je uvedené vyššie.
-19Táto reakcia je uskutočnená v organickom rozpúšťadle alebo systéme rozpúšťadiel, napríklad v acetóne, dimetylformamide alebo tetrahydrofuráne. Výhodne pH média je udržované nad pH 8, výhodnejšie nad pH 9.
Schéma
CG ^ŕS^CHO (2b)
HCI komečne dostupné alebo
NaH/DMF (97%)
CUr
HO—^_^-CHaOH ’·χ
CHjOH Krok 3
HCI
67%
HCI (4b)
Krok 4 SOCIj/THF
HCIgZTHF kvánt. I Krok 2
NaBH4/MeOH í?
(3b) , CHjOH
CH2CI (1b)
HCIg/MeOH alebo x-* SOCIj/THF
Schéma IV N^CI+ H° HCI
(2c)
CHO H°-<>CH2OH-,, 88%
NaBHVMeOH
HCI <1c)
-20Použitím podobných krokov, zlúčeniny podľa vynálezu, kde „A“ je síra môžu byť vyrobené ako je uvedené v schéme V nižšie. V prvom kroku sa môže vyrobiť tiofénoxid reakciou s hydridom sodným, nasleduje alkylácia a redukcia na príslušný aldehyd, napríklad s bórhydridom sodným alebo katalytický s vodíkom a Raney niklom alebo platinou alebo paládiom na uhlíkovom katalyzátore. Výsledný alkohol môže byť potom opracovaný plynným HCI za vytvorenia jeho hydrochloridu, plynulým HCI opracovaním za vytvorenia benzylchloridu. Konečný produkt môže byť potom vytvorený pomocou riadenej oxidácie síry na sulfoxid a potom na sulfón, napríklad s m-chlórperbenzoovou kyselinou.
Schéma V R\
R8 /^^01 +
HCI rH
CHO r7
Krok 1 \
NaH r8 xŕ
Krok 2 NaBH4
<1)
Nasledujúce príklady sú uvedené na ilustráciu a nejdú nad rozsah tohto vynálezu.
V spôsoboch výroby vyššie uvedených zlúčenín všeobecného vzorca I, kde
R1 a R2 na priľahlej X skupine znamenajú vodík sú vyrobené z primárnych alkoholov (pozri schému I, zlúčeniny 3a-c) ktoré sú samotné vyrobené redukciou aldehydového prekurzora (pozri schému I, zlúčeniny 2a-c).
-21 Analogické zlúčeniny vzorca I, kde jeden z R1 a R2 pripojený na X skupinu je alkyl alebo perfluóralkyl a druhý je vodík, môžu byť pripravené z vhodných sekundárnych alkoholov, ktoré môžu byť pripravené zo zodpovedajúcich ketónov, napríklad zlúčenín, ktoré majú COR1 skupinu, kde R1 je alkyl alebo perfluóralkyl.
Analogické zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde oba R1 aj R2 pripojené na X skupinu sú každý vybraný z alkylu a perfluóralkylu, môžu byť vyrobené z vhodných terciárnych alkoholov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
4-(2-Piperidín-1 -yl-etoxy)benzylaldehyd (2a)
K dobre premiešanej suspenzii p-hydroxybenzaldehydu (83,5 g, 0,68 mol, 1,05 ekvivalentov) a K2CO3 (224 g, 1,6 mol, 2,5 ekvivalentov) v DMF (1 I) sa pridal hydrochlorid 1-(2-chIóretyl)piperidínu (120 g, 0,65 mol, 1,0 ekvivalent). Reakčná zmes sa refluxovala 2 hodiny za energického miešania. V tomto bode sa TLC (tenkovrstvová chromatografia) preukázal v prevažnej miere produkt bez východiskového materiálu (EtOAc/hexán 1:1). Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit, zriedila sa EtOAc (2 I) a premyla vodou (3 x 500 ml). Organická vrstva sa skoncentrovala na rotačnej odpárke za vzniku 147 g (97 %) aldehydu (2a) ako žltého oleja.
1H NMR (CDCb/TMS): 9,87 (s, 1H), 7,81 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,01 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,18 (t, 2H, J = 6,03 Hz), 2,79 (t, 2H, J = 6,03 Hz), 2,51 (m, 4H), 1,6-1,4 (m, 6H).
Príklad 2
4-(2-Hexametylénimín-1 -yl-etoxy)benzylaldehyd (2b)
K dobre premiešanej suspenzii NaH (65 g, 60% olejová disperzia, 1,6 mol,
2,2 ekvivalentov) v DMF (500 ml) sa pridal po kvapkách pri teplote 0 °C roztok hydrochloridu p-hydroxybenzaldehydu (90 g, 0,74 mol, 1,0 ekvivalent). Reakčná
-22zmes sa miešala 30 minút, potom sa pridal po častiach 4-[2-(hexametylénimino)]etylchlorid. Reakčná zmes sa miešala 1 hodinu. V tomto bode sa TLC preukázal v prevažnej miere produkt a len malé množstvo východiskového materiálu (EtOAc/hexán 1:1). Reakčná zmes sa zriedila vodou (1 I) a extrahovala éterom (5
I). Organická vrstva sa sušila nad MgSO4 a skoncentrovala na rotačnej odparke za vzniku 176,8 g (97 %) aldehydu (2b) ako žltého oleja.
1H NMR (CDCI3/TMS): 9,87 (s, 1H), 7,81 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,02 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,14 (t, 2H, J = 6,09 Hz), 2,98 (t, 2H, J = 6,14 Hz), 2,78 (m, 4H), 1,66 - 1,61 (m, 8H).
Príklad 3
4-(2-Dimetylaminoetoxy)benzylaldehyd (2c)
K dobre premiešanej suspenzii p-hydroxybenzaldehydu (9,54 g, 0,078 mol, 1,0 ekvivalentov) a K2CO3 (27 g, 0,195 mol, 2,5 ekvivalentov) v DMF (100 ml) sa pridal hydrochlorid 1-(2-chlóretyl)dimetylamínu (11,26 g, 0,078 mol, 1,0 ekvivalent). Reakčná zmes sa miešala 2 hodiny pri 60 až 70 °C. V tomto bode sa TLC preukázal v prevažnej miere produkt bez východiskového materiálu (EtOAc/hexán/EtaN 3:7:1). Reakčná zmes sa naliala do zmesi voda/ľad (200 ml) a extrahovala sa Et20 (3 x 200 ml). Organická vrstva sa sušila nad MgSO4 a skoncentrovala na rotačnej odparke za vzniku 5,9 g (39 %) aldehydu (2c) ako ružovkastej kvapaliny.
1H NMR (CDCI3/TMS): 9,88 (s, 1H), 7,8 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,02 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,15 (t, 2H, J = 5,64 Hz), 2,77 (t, 2H, J = 5,64 Hz), 2,35 (s, 6H).
Príklad 4
4-(2-Piperid í n-1 -yl-etoxy)benzylalkohol (3a)
K miešanému roztoku aldehydu 2a (115 g, 0,494 mol, 1,0 ekvivalent) v metanole (360 ml) sa pridal po častiach pri 0 až 5 °C bórhydrid sodný (9,44 g,
0,249 mol, 0,5 ekvivalentov). Reakčná zmes sa miešala 30 minút. V tomto bode sa
TLC preukázal v prevažnej miere produkt bez východiskového materiálu, (EtOAc/hexán/trietylamín 3:7:1). Reakčná zmes sa naliala do vody (1,1 I), extraho-23vala sa metylénchloridom (3 x 550 ml) a sušila sa nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval na rotačnej odpárke za vzniku 91,6 g (80 %) alkoholu (3a) ako hustého oleja, ktorý okamžite kryštalizoval.
1H NMR (CDCb/TMS): 7,23 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,80 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,56 (s, 2H), 3,99 (t, 2H, J = 6,12 Hz), 2,69 (t, 2H, J = 6,14 Hz), 2,47 (m, 4H), 1,6 - 1,25 (m, 6H).
13C NMR (DMSO-d6): 158,23, 135,34, 128,70, 114,84, 66,42, 63,44, 58,27, 55,29,
26,45, 24,80.
Príklad 5
4-(2-Piperidín-1-yl-etoxy)benzylakohol (3a)
4-Hydroxybenzylalkohol (6,2 g, 0,05 mol) sa rozpustil vo vodnom roztoku hydroxidu sodného (5N, 30 ml). Následne do pridaní hydrochloridu 1-(2-chlóretyl)piperidínu (9,29 g, 0,05 mol) a benzyltrietylamóniumbromide (0,3 g) sa pridal toluén (30 ml). Reakčná zmes sa za energického miešania zohrievala 1,5 hodiny. Oddelili sa vrstvy, vodná vrstva sa extrahovala toluénom (2 x 15 ml). Spojené organické extrakty a organická vrstva sa premyli vodou (50 ml), soľankou (50 ml), sušili sa nad síranom sodným a koncentrovali sa na rotačnej odpárke za vzniku 8,725 g (75 %) alkoholu (3a) ako žltohnedého oleja.
Príklad 6
4-(2-Hexametylénimín-1 -yl-etoxy)benzylalkohol (3b)
K miešanému roztoku aldehydu 2b (200 g, 0,72 mol, 1,0 ekvivalent) v metanole (400 ml) sa pridal po častiach pri 0 až 5 °C bórhydrid sodný (15,6 g, 0,41 mol, 0,57 ekvivalentov). Reakčná zmes sa miešala 30 minút. V tomto bode sa TLC preukázal v prevažnej miere produkt bez východiskového materiálu (EtOAc/hexán/trietylamín 3:7:1). Reakčná zmes sa zriedila vodou (400 ml), extrahovala sa metylénchloridom (3 x 400 ml) a sušila sa nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval na rotačnej odpárke za vzniku 201 g (100 %) alkoholu 3b ako hustého oleja.
-241H NMR (CDCI3/TMS): 7,27 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,87 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,60 (s, 2H), 4,05 (t, 2H, J = 6,21 Hz), 2,93 (t, 2H, J = 6,15 Hz), 2,77 (m, 4H), 1,7 - 1,5 (m, 8H).
Príklad 7
4-(2-Dimetylaminoetoxy)benzylalkohol (3c)
K miešanému roztoku aldehydu 2c (5,9 g, 0,031 mol, 1,0 ekvivalent) v metanole (20 ml) sa pri 22 °C pridal po častiach bórhydrid sodný (0,58 g, 0,015 mol, 0,5 ekvivalentov). Reakčná zmes sa miešala 30 minút. V tomto bode sa TLC preukázal v prevažnej miere produkt žiadny východiskový materiál (EtOAc/hexán/trietylamín 5:5:1). Reakčná zmes sa zriedila vodou (50 ml), extrahovala metylénchloridom (3 x 40 ml) a sušila nad MgSO4. Roztok sa koncentroval na rotačnej odparke za vzniku 5,25 g (88 %) alkoholu 3c ako hustého oleja.
1H NMR (CDCI3/TMS): 7,25 (d, 2H, J = 8,64 Hz), 6,85 (d, 2H, J = 8,64 Hz), 4,52 (s, 2H), 3,99 (t, 2H, J = 5,88 Hz), 2,67 (t, 2H, J = 5,79 Hz), 2,29 (s, 6H).
Príklad 8
Hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etylpiperidín-1-ylu (1a)
Roztok alkoholu 3a (61,3 g, 0,26 mol, 1 ekvivalent) v THF (500 ml) sa ochladil na 0 až -5 °C (kúpeľ ľad-voda) a nechal sa prebublávať plynným HCl. Prebublávanie pokračuje až do zhustnutia reakčnej zmesi. Vodný kúpeľ sa potom odstráni. Potom sa k hustej kaši hydrochloridu 4a pridal tionylchlorid (29 ml, 0,39 mol, 1,5 ekvivalentov) a zmes sa zohriala na 50 °C až kým sa nestala čírou. Reakčná zmes sa ochladila na -3 °C a miešala sa 30 minút. Získaná biela tuhá látka sa prefiltrovala a sušila za vzniku 72 g (96 %) chloridu 1a.
4a: 1H NMR (DMSO-d6): 10,9 (s, HCl), 7,25 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,94 (d, 2H, J = 8,5
Hz), 4,42 (m, 4H), 3,41 (m, 4H).
1a: 1H NMR (DMSO-d6): 11 (br s, HCl), 7,39 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,99 (d, 2H, J = 8,5
Hz), 4,74 (s, 2H), 4,46 (m, 2H), 3,45 (m, 4H), 2,69 (m, 2H) a 1,9 - 1,2 (m, 6H).
-25Príklad 9
Hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etylhexametylénimín-1-yl (1b)
K roztoku alkoholu 3b (179 g, 0,72 mol, 1 ekvivalent) v THF (300 ml) sa pridal po kvapkách pri 0 až 10 °C roztok HCI (26,3 g HCI v 263 ml THF, 0,72 mol, 1,0 ekvivalentov). Vytvorila sa biela zrazenina. K hustej suspenzii hydrochloridu 4b sa pridal tionylchlorid (80 ml, 1,1 mol, 1,5 ekvivalentov) a zmes sa zohriala na 50 °C až kým nezostala číra. Reakčná zmes sa skoncentrovala na 350 ml a nechala sa v chladničke cez noc. Získaná biela tuhá látka sa prefiltrovala, premyla studeným THF (100 ml) a sušila za vzniku 147 g (67 %) chloridu 1b.
1H NMR (DMSO-de): 11 (br s, HCI), 7,40 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,00 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,74 (s, 2H), 4,44 (t, 2H, J = 5,25), 3,64 - 3,39 (m, 4H), 3,25 - 3,17 (m, 2H), 1,84-1,54 (m, 8H).
Príklad 10
Hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etyldimetylamino (1c)
Roztokom alkoholu 3c (5,25 g, 0,027 mol, 1 ekvivalent) v THF (100 ml) sa nechal prebublávať plynný HCI pri teplote 0 až 25 °C počas 15 minút. Vytvorila sa biela zrazenina. K hustej kaši hydrochloridu 4c sa pridal tionylchlorid (6 ml, 9,6 g, 0,081 mol, 3 ekvivalenty) a zmes sa zohrievala na 30 °C, až kým nezostala číra. Reakčná zmes sa skoncentrovala na 350 ml a uložila sa do chladničky na noc. Získaná biela tuhá látka sa prefiltrovala, premyla studeným THF (100 ml) a sušila za vzniku 4,57 g (68 %) chloridu 1c.
Medzi farmaceutický účinné zlúčeniny, ktoré môžu byť vyrobené za použitia zlúčenín podľa vynálezu sú 2-fenyl-1-[4-(2-aminoetoxy)benzyl]indolové zlúčeniny, ktoré sú užitočné ako estrogénové látky. Tieto zlúčeniny zahrnujú zlúčeniny vzorcov IV a V uvedených nižšie:
kde
R11 je vybrané zo skupiny zahrnujúcej H, OH alebo C1.C12 estery s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom alebo ich Ci-C12 alkylétery s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom alebo halogény alebo halogenované étery zahrnujúce trifluórmetyléter a trichlórmetyléter,
R12, R9 a R10 sú nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej H, OH alebo CrCi2 estery s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom alebo ich Ci-Ci2 alkylétery s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom alebo halogény alebo halogenované étery zahrnujúce trifluórmetyléter a trichlórmetyléter, kyanoskupinu, Ο^Οε alkyl s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom alebo trifluórmetyl, s podmienkou, že R1 je H, R2 nie je OH,
R13 je vybrané zo skupiny zahrnujúcej H, C1-C6 alkyl, kyanoskupinu, nitroskupinu, trifluórmetyl, halogén; a
Y, A, m, R3 a R4 sú určené vyššie.
2-Fenyl-1-[4-(2-aminoetoxy)benzyl]indolové zlúčeniny tohto typu sú čiastočné estrogénové antagonisty a preukazujú vysokú afinitu pre estrogénové receptory. Na rozdiel od mnohých estrogénov, tieto zlúčeniny nespôsobujú zvyšovanie hmotnosti maternice. Tieto zlúčeniny majú antiestrogenické účinky v maternici a môžu kompletne antagonizovať trofické účinky estrogénových agonistov v maternicovom tkanive. Tieto zlúčeniny sú užitočné pri liečení alebo predchádzaní chorobných stavov alebo syndrómov u cicavcov, ktoré sú spôsobené alebo spojené s nedostatkom estrogénov.
-27Tieto zlúčeniny majú možnosť správať sa ako estrogénové agonisty znižovaním cholesterolu a predchádzaním úbytku kostnej hmoty. Preto sú tieto zlúčeniny užitočné pri liečení mnohých chorôb zahrnujúc osteoporózu, prostatickú hypertrofiu, neplodnosť, rakovinu prsníka, endometriálnu rakovinu, kardiovskulárne choroby, pri používaní antikoncepcie, Alzheimerovu chorobu a rakovinu kožu. Naviac, tieto zlúčeniny môžu byť použité pri náhradnej hormónovej liečbe u ženy po menopauze alebo pri iných nedostatkových estrogénových stavoch, kde by bol prísun estrogénu prospešný.
2-Fenyl-1-[4-(2-aminoetoxy)benzyl]indolové zlúčeniny vyrábané pomocou zlúčenín podľa vynálezu môžu byť tiež použité na liečenie úbytku kostnej hmoty, čo môže vyplývať z nerovnováhy v individuálnej tvorbe nového kostného tkaniva a resorpcie staršieho tkaniva, čo vedie k úbytku kostnej hmoty. Takéto spotrebovanie kostnej hmoty sa vyskytuje v rade prípadov, obzvlášť u žien po menopauze, u žien, ktoré podstúpili hysterektómiu, u tých, ktoré sa podrobili alebo podrobujú dlhým kortikosteroidným terapiám, u tých, ktoré prekonali gonádovú dysgenézu a u tých, ktoré trpia Cushingovým syndrómom. Špeciálna potreba obnovenia kostnej hmoty použitím týchto zlúčenín môže byť určená pacientom s fraktúrou kosti, chybnou štruktúrou kostí, a u tých, ktorí sa podrobili chirurgickým zákrokom kostí a/alebo implantácii protézy. Okrem problémov opísaných vyššie, tieto zlúčeniny môžu byť tiež použité pri liečení osteoartritídy, Pagetovej choroby, osteomalácie, osteohalisterézy, endometriálnej rakoviny, viacnásobného myelómu a iných foriem rakoviny, ktoré majú škodlivý účinok na kostné tkanivo. Spôsoby liečenia uvedených ochorení zahrnujú poskytnutie jedincovi pri potrebe takejto liečby farmaceutický účinné množstvo jednej alebo viacerých zlúčenín podľa vynálezu alebo ich farmaceutický prijateľných solí. Tento vynález tiež zahrnuje farmaceutické prostriedky obsahujúce jednu alebo viacero uvedených zlúčenín, a/alebo ich farmaceutický prijateľných solí, spolu s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi, excipientami, atď.
Predpokladá sa, že dávka a spôsob podávania týchto 2-fenyl-1-[4-(2-aminoetoxy)benzyl]indolových zlúčenín sa bude meniť vzhľadom na závažnosť ochorenia a stav pacienta, ktorý je liečený a bude predmetom na posúdenie ošetrujúceho
-28lekára. Je výhodné, aby podávanie jednej alebo viacerých týchto zlúčenín začínalo nižšou dávkou a bolo zvyšované pokiaľ nebude dosiahnutý žiadaný účinok.
Účinná dávka týchto zlúčenín môže byť od približne 0,1 mg/deň do približne 1000 mg/deň. Výhodne bude dávka od približne 50 mg/deň do približne 600 mg/deň v jednotlivej dávke alebo v dvoch alebo viacerých oddelených dávkach. Takéto dávky môžu byť podávané akýmkoľvek spôsobom vhodným na zavedenie zlúčeniny do pacientovho krvného obehu, zahrnujúc orálne, parentálne (vrátane intravenóznych, intraperitoneálnych a subkutánnych injekcií) a transdermálne podanie. Rozumie sa, že transdermálne podávanie zahrnuje všetky podania cez povrch tela a vnútorné povrchy telesných dutín zahrnujúc epitelové a mukózne tkanivo. Takéto podávanie môže byť uskutočnené použitím prítomných zlúčenín alebo ich farmaceutický prijateľných solí v pleťovej vode, kréme, pene, kvapkách, suspenziách, roztokoch a čapíkoch (rektálnych a vaginálnych).
Orálne farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú aktívne zlúčeniny podľa vynálezu môžu zahrnovať akýkoľvek bežne používaný orálny prostriedok, napríklad tablety, kapsuly, ústne prostriedky, pilulky, pastilky a orálne tekutiny, suspenzie a roztoky. Kapsuly môžu obsahovať zmes aktívnej zlúčeniny(nín) s inertným plnivom, a/alebo riedidlom, ako sú farmaceutický prijateľné škroby (napr. kukuričný, zemiakový alebo tapiokový škrob), cukry, umelé sladidlá, práškové celulózy, múky, želatíny, gumy, atď. Použité tabletové prostriedky môžu byť vyrobené bežným stlačením, vlhkými granulačnými alebo suchými granulačnými metódami a použitím farmaceutický prijateľných riedidiel, väzobných činidiel, lubrikantov, dezintegrantov, suspenzných alebo stabilizačných činidiel, ktoré zahrnujú ale nelimitujú, ako sú napríklad stearan horečnatý, kyselina stearová, mastenec, laurylsulfát sodný, mikrokryštalická celulóza, vápenatá soľ karboxymetylcelulózy, polyvinylpyrolidón, želatína, kyselina algínová, agátová guma, xantánová guma, citran sodný, komplexné kremičitany, uhličitan vápenatý, laktóza, kaolín, manitol, chlorid sodný, mastenec, suchý škrobový alebo práškový cukor. Orálne prostriedky môžu byť v štandardnej forme alebo ako prostriedky s postupným uvoľňovaním účinnej zložky za účelom pozmenenej absorpcie aktívnej zlúčeniny(nín). Čapíkové prostriedky môžu byť vyrobené z tradičných materiálov, zahrnujúc kakaové maslo, s alebo bez pridania vosku za účelom zmenenia bodu topenia čapíka a ďalej pridania glycerínu.
-29Vodorozpustný základ čapíkov môže byť tvorený polyetylénglykolmi rôznych molekulových hmotností.
Ako je ukázané v schéme VI, zlúčeniny tejto skupiny môžu byť vyrobené alkyláciou indolového dusíka zlúčeninami podľa vynálezu, ako je ukázané v príkladoch 11 až 13, uvedených nižšie, za použitia jednotlivo hydrochloridu (4chlórmetylfenoxy)etylpiperidín-1-ylu z príkladu 8, hydrochloridu (4-chlórmetylfenoxy)etylhexametylénimín-1-ylu z príkladu 9 a hydrochloridu (4-chlórmetylfenoxy)etyldimetylamínu z príkladu 10. Okrem NaH, môžu byť použité aj iné bázy, napríklad ŕerc-butoxid draselný, ŕerc-butoxid sodný.
Schéma VI
Schémy VII a VIII znázorňujú syntézu hydrochloridu 1-[4-(2-azepán-1-yletoxy)benzyl]-2-(4-hydroxyfenyl)-3-metyl-1H-indol-5-olu za použitia medziproduktov podľa vynálezu.
-30Schéma VII
Schéma VII znázorňuje alkyláciu 4-hydroxybenzaldehydu s hydrochloridom 2-(hexametylamino)etylchloridom, ktorá môže byť dokonalá za prítomnosti uhličitanu draselného za vzniku zodpovedajúceho aldehydu (krok 1). Keď reakcia je dokončená, zmes môže byť čistená, zmiešaná s toluénom a premytá vodou. Toluénový roztok môže byť skoncentrovaný a výsledný zvyšok opracovaný izopropanolom za vzniku roztoku aldehydu I. Izopropanolový roztok zlúčeniny I môže byť opracovaný katalytickou redukciou, napríklad s Raney niklom, za poskytnutia alkoholu II (krok 2). V nasledujúcej redukcii môže byť reakčná zmes čistená a skoncentrovaná, a výsledný zvyšok rozpustený v etyléndichloride za vzniku roztoku obsahujúceho alkohol II. Tento roztok môže byť opracovaný tionylchloridom, a následnou koncentráciou. Výsledný zvyšok môže byť potom opracovaný s 1,2-dimetoxyetánom za poskytnutia kryštalickej zlúčeniny lll (krok 3).
-31 Schéma VIII
V schéme VIII, krok 4, 4-benzyloxypropiofenón je bromovaný v kyseline octovej s brómom. Keď je reakcia ukončená, do zmesi sa pridá voda a výsledná zrazenina je premytá zriedenou kyselinou octovou, vodou a heptánom. Výsledná tuhá látka je sušená za vzniku zlúčeniny IV hydrochloridu 4-benzyloxyanilínu. V kroku 5 zmes zlúčeniny IV, A/,A/-diizopropyletylamínu a toluénu sa zohriala za refluxu za odstránenia vody. Keď sa reakcia ukončí, zmes sa môže ochladiť a zriediť s metanolom. Tuhý produkt môže byť zhromaždený, premytý s metanolom a sušený za vzniku indolovej zlúčeniny V. Zmes zlúčeniny V a III môže byť zmiešaná v kroku 6 s ŕerc-butoxidom sodným v A/,/V-dimetylformamide a miešaná až kým reakcia nie je ukončená. Potom k zmesi sa môže pridať soľanka a zmes sa môže extrahovať s toluénom. Extrakty sú koncentrované a zvyšok je zriedený metanolom. Zvyšná tuhá látka môže byť ochladená, rozpustená v etylacetáte, čistená a zriedená s metanolom. Tuhá látka môže byť zozbieraná s tohto roztoku a sušená za vzniku zlúčeniny VI.
V kroku 7 (neznázornený) zlúčenina VI v roztoku etanolu môže byť hydrogenovaná s Pd katalyzátorom na uhlí. Na vysvetlenie, hydrogenovaný materiál môže byť zmiešaný s malým množstvom kyseliny askorbovej a ošetrený kyselinou octovou. Výsledná kryštalická zrazenina môže byť ochladená, premytá etanolom a sušená za vzniku finálneho produktu, hydrochloridu 1-[4-(2-azepán-1-yletoxy)ben-32zyl]-2-(4-hydroxyfenyl)-3-metyl-1/7-indol-5-olu. Produkt môže byť rekryštalizovaný z etanolu, prípadne obsahujúci malé množstvo kyseliny askorbovej, výhodne napríklad približne 0,5 % hmotnostných až približne 3,0 % hmotnostných.
V opise uvedenom vyššie, medziprodukty III až VI môžu byť ľahko izolované ako tuhé látky. Všetky ďalšie medziprodukty môžu byť výhodnejšie použité ako roztoky v organických rozpúšťadlách.
Schémy IX až XII znázorňujú príklady syntézy 2-(4-hydroxyfenyl)-3-metyl-1[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)benzyl]-1H-indol-5-olu za použitia medziproduktov podľa tohto vynálezu. Schéma Ha, opísaná vyššie, môže byť považovaná ako krok 1 v schéme IX alebo ako predchádzajúci krok. V tomto kroku 4-hydroxybenzylalkohol je opracovaný s vhodným arylaminoalkylchloridom za poskytnutia zodpovedajúceho alkoxybenzylalkoholu. V špecifickom príklade schémy Ha, 4-hydroxybenzylakohol je opracovaný hydrochloridom 1-(2-chlóretyl)piperidínu v prítomnosti K2CO3/Me2CO za vzniku 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu. K výslednej zmesi alkoholu za môže pridať toluén a soľanka za oddelenia fáz. Toluénová fáza sa môže potom premyť postupne vodným roztokom zásady a potom soľankou. Výsledná zmes môže byť potom koncentrovaná a môže sa pridať etyléndichlorid za vzniku roztoku medziproduktu, 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu.
Roztok 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu v etyléndichloride sa môže zmiešať s tionylchloridom a zohrievať až kým reakcia nie je dokončená. Po okamžitom ochladení sa zmes môže koncentrovať, opätovné pridanie 1,2dimetoxyetánu a dodatočná koncentrácia. Zrazenina sa môže ochladiť a sušiť za vzniku medziproduktu hydrochloridu 4-(2-piperidinyletoxy)benzylchloridu, ako je znázornené v schéme IX.
Schéma IX
PH
SOCb ,ci
HCI
C1CH2CH2CI
-33Ako je ukázané v schéme IX, roztok 4-(2-piperidinyletoxy)benzylalkoholu môže byť spojený s etyléndichloridom a tionylchloridom a zohrievaný za vytvorenia reakčnej zmesi. Po ochladení, môže byť reakčná zmes opracovaná s 1,2dimetoxyetánom a znova koncentrovaná. Výsledná zrazenina hydrochloridu 4-(2piperidinyletoxy)benzylchloridu sa potom zhromaždí a suší.
Schéma X
Schéma X znázorňuje bromáciu 4-benzyloxypropiofenónu v kyseline octovej s brómom za poskytnutia 4‘-(benzyloxy)-2-brómpropiofenónu. Keď reakcia prebehne, stlmí sa vodou. Výsledná zrazenina sa ochladí, premyje zriedenou kyselinou octovou, vodou a heptánom a potom sa vysuší.
Schéma XI
-344‘-(Benzyloxy)-2-brómpropiofenónový produkt zo schémy X sa zohreje s hydrochloridom 4-benzyloxyanilínu v prítomnosti A/,A/-diizopropyletylamínu a toluénu za refluxu s azeotropickým odstránením vody, ako je znázornené v schéme XI. Keď je reakcia kompletná, zmes sa ochladí a zriedi metanolom. Výsledná tuhá látka 3-metyl-(2-(4-benzyloxy)fenyl)-5-benzyloxyindolu sa zhromaždí, premyje metanolom a suší.
Schéma XII
N.N-dimetylformamid
2. kyselina askorbová
3. HCI
3-Metyl-2-(4-benzyloxy)fenyl-5-benzyloxyindolový produkt zo schémy XI potom reaguje s hydrochloridom 4-(2-piperidinyletoxy)benzylchloridu v prítomnosti ŕerc-butoxidu sodného v A/,A/-dimetylformamide. K výslednej zmesi sa pridá soľanka na stlmenie reakcie a zmes sa nakoniec extrahuje toluénom. Nasleduje čistenie, extrakty sa koncentrujú a zriedia metanolom. Výsledná tuhá látka 5-benzyloxy-2-(4benzyloxyfenyl)-1-[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)benzyl]-1H-indol sa zhromaždí, rozpustí v etylacetáte, zriedi metanolom a potom sa suší. Táto tuhá látka sa rozpustí v etanol/tetrahydrofuráne a hydrogenuje sa použitím Pd katalyzátora na uhlí. Roztok sa potom čistí, prípadne sa zmieša s malým množstvom kyseliny askorbovej a potom sa ošetrí vodným roztokom HCI. Zrazenina sa potom zhromaždí, premyje etanol/tetrahydrofuránom a vodou a suší sa poskytnutia konečného produktu 2-(4hydroxyfenyl)-3-metyl-1 -[4-(2-piperid í n-1 -yl-etoxy)benzyl]-1 H-indol-5-olu.
Príklad 11
5-(Benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1 -[4-(2-piperidín-1 -yl-etoxy)benzyl]-1 Hindol
K roztoku 5-benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1H-indolu (117,5 g, 0,28 mol, 1,0 ekvivalent) v DMF (1,3 I) sa pridal po častiach NaH (28,0 g, 60% disperzia v oleji, 0,7 mol, 2,5 ekvivalentov) pri -5 až -8 °C počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa miešala 2 hodiny. Potom sa po kvapkách pridal roztok chloridu z príkladu 8 v THF (1,0 I) pri teplote -10 až 0 °C počas 2 hodín. Reakčná zmes sa ďalej miešala pri 25 °C 2 cez noc. V tomto bode TLC preukázala len produkt bez východiskového materiálu EtOAc/hexán 1:5). Reakčná zmes sa zriedila vodou (6 I), extrahovala sa
-36EtOAc (2 x 3 I) a sušila nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval na 1 I, čistil v MeOH (2,5 I) a miešal sa 1 hodinu. Zrazenina sa prefiltrovala a sušila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve (129 g, 73 %).
1H NMR (CDCI3/TMS): 7,64 - 6,63 (m, 21 H), 5,12 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,07 (s, 2H), 4,07 (t, 2H, J = 6,06 Hz), 2,72 (t, 2H, J = 6,06 Hz), 2,48 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,62-1,24 (m, 6H).
Príklad 12
5-(Benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1-[4-(2-hexametylénimín-1-yl-etoxy)benzyl]-1/7-indol
K suspenzii NaH (20,0 g, 60% olejová disperzia, 0,5 mol, 2,5 ekvivalentov) sa pridal roztok 5-benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1/7-indolu (84 g, 0,2 mol, 1,0 ekvivalent) v DMF (100 ml) pri 0 až 10 ’C počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa miešala 30 minút. Potom sa po kvapkách pridal roztok chloridu z príkladu 9 (67 g, 0,22 mol, 1,1 ekvivalent) v DMF (200 ml) pri teplote 0 až 10 ’C počas 2 hodín. Reakčná zmes sa ďalej miešala pri 25 ’C 2 hodiny. V tomto bode TLC preukázala najmä produkt bez východiskového materiálu EtOAc/hexán 1:5). Reakčná zmes sa zriedila vodou (1 I), extrahovala sa EtOAc (3 x 1 I) a sušila nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval na 150 ml, čistil v MeOH (750 ml) a miešal sa cez noc. Zrazenina sa prefiltrovala a sušila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve (99 g, 76 %).
1H NMR (CDCI3/TMS): 7,48 - 6,74 (m, 21 H), 5,13 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 4,00 (t, 2H, J = 6,24 Hz), 2,91 (t, 2H, J = 6,27 Hz), 2,75 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,71-1,52 (m, 8H).
Príklad 13
5-(Benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1-[4-(2-dimetylaminoetoxy)benzyl]-1/-/indol
K suspenzii NaH (1,1 g, 60% olejová disperzia, 0,05 mol, 2,5 ekvivalentov) sa pridal roztok 5-benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1H-indolu (6,97 g, 0,017 mol,
1,0 ekvivalent) v DMF (100 ml) pri 0 až 10 ’C počas 0,5 hodiny. Reakčná zmes sa
-37miešala 30 minút. Potom sa po častiach pridal roztok chloridu z príkladu 10 (4,57 g, 0,018 mol, 1,1 ekvivalent) pri teplote 0 až 10 °C počas 2 hodín. Reakčná zmes sa ďalej miešala pri 25 °C 0,5 hodiny. V tomto bode TLC preukázala najmä produkt bez východiskového materiálu EtOAc/hexán 1:5). Reakčná zmes sa zriedila vodou (200 ml), extrahovala sa EtOAc (3 x 200 ml) a sušila nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval na 150 ml, čistil v MeOH (300 ml) a miešal sa cez noc. Zrazenina sa prefiltrovala a sušila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve (5,6 g, 53 %).
1H NMR (CDCI3/TMS): 7,50 - 6,66 (m, 21 H), 5,13 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 3,99 (t, 2H, J = 5,76 Hz), 2,69 (t, 2H, J = 5,73 Hz), 2,31 (s, 6H), 2,42 (s, 3H).
Príklad 14
5-Benzyloxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-metyl-1H-indol
Do banky sa vložil 4-(benzyloxyanilín (45 g, 0,23 mol), 4‘-benzyloxy-2-brómfenylpropiofenón (66414-19-5) (21 g, 0,066 mol) a 50 ml DMF. Reakčná zmes sa zohriala do refluxu počas 30 minút, potom sa ochladila na teplotu miestnosti a potom sa rozdelila medzi 250 ml EtOAc a 100 ml 1N HCI (vodný roztok). EtOAc fáza sa premyla NaHCO3 (vodný roztok) a soľankou a sušila nad MgSO4. Roztok sa skoncentroval a pridal sa zvyšok vybraný z CH2CI2 a hexány za vzniku 25 g surovej tuhej látky. Tuhá látka sa rozpustila vCH2CI2 a odparila na silikagéli a chromatografia za použitia CH2CI2/hexán (1:5) poskytla 9,2 g svetlohnedej tuhej látky (33 %). Teplota topenia 150 až 152 °C.
1H NMR (DMSO): 10,88 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,48 (d, 4H, J = 7,9 Hz),
7,42-7,29 (m, 6H), 7,21 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,13 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 6,94 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 5,16 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 2,33 (s, 3H);
IR (KBr): 3470, 2880, 2820, 1620 cní1;
MS (El) m/z 419.
-38Príklad 15
2-(4-Hydroxyfenyl)-3-metyl-1 -[4-(2-piperid í n-1 -yl-etoxy)benzyl]-1 H-indol-5-ol
Suspenzia 10% Pd/C (1,1 g) v EtOH sa opracovala roztokom zlúčeniny z názvu príkladu 11 (2,2 g, 3,4 mmol) v THF/EtOH. Pridal sa cyklohexadién (6,0 ml, 63 mmol) a reakcia sa miešala 48 hodín. Katalyzátor sa prefiltroval cez celit a reakčná zmes sa skoncentrovala a chromatografovala na silikagéli za použitia elučného gradientu MeOH/CH2Cl2 (1:19 až 1:10) za vzniku 0,8 g produktu ako bielej tuhej látky s teplotou topenia 109 až 113 °C.
CH N vypočítané pre C29H32N2O3 + 0,5 H2O;
1H NMR 9.64 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,14 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,05 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,84 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,79 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 6,74 (s, 4H), 6,56 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 5,09 (s, 2H), 3,95 - 3,93 (m, 2H), 2,60 - 2,51 (m, 2H), 2,39 - 2,38 (m, 4H), 2,09 (s, 3H), 1,46 - 1,45 (m, 4H), 1,35 - 1,34 (m, 2H);
IR (KBr): 3350 (br), 2920,1620,1510 cm’1;
MS (EI) m/z 456.
Skúška viazania na estrogénový receptor in vitro
Príprava receptora
CHO bunky s nadexpresiou estrogénového receptora sa pestovali v 150 mm2 miskách s fetálnym teľacím sérom očisteným DMEM + aktívne uhlie pokryté 10 % hmotnostnými dextránu. Platne sa premyli dvakrát s PBS a jeden krát s 10 mmol/l Tris-HCI, pH 7,4, 1 mmol/l EDTA. Bunky sa odobrali zoškrabaním povrchu a potom sa bunková suspenzia umiestnila na ľad. Bunky sa rozbili v motorovom mlyne na tkanivá za použitia dvoch 10 sekundových zapnutí mlyna. Surový preparát sa centrifugoval pri 12 000 g počas 20 minút, po čom nasledovalo 60 minút odstreďovania pri 100 000 g, čím sa vytvoril cytozol bez ribozómov. Cytozol sa potom zmrazil a uložil pri -80 °C. Koncentrácia proteínu cytozolu sa odhadla pomocou BCA skúšky s referenčným štandardným proteínom.
-39Podmienky skúšky viazania
Kompetitívna skúška sa uskutočnila na 96 kalíškovej platni (polystyrén*), ktorá viazala <2,0 % hmotnostné celkového vstupného [3H]-17-a-estradiolu a všetky dátové hodnoty sa zberali trikrát. Na jeden kalíšok sa použilo alikvotné množstvo 100 pG/100 μΙ receptorového prípravku. Pridala sa sýtiaca dávka 2,5 nmol/l [3H]-17α-estradiolu + kompetítor (alebo pufor) v objeme 50 μΙ v predbežnom meraní, keď sa hodnotil 100-násobok a 500-násobok kompetítora, použilo sa len 0,8 nmol/l [3Hj17-a-estradiolu. Platňa sa inkubovala pri laboratórnej teplote počas 2,5 hodiny. Na konci tejto inkubačnej doby sa pridalo do každého kalíška 150 μΙ ľadovo studeného dextránu naneseného na aktívnom uhlí (5 % hmotnostných aktívneho uhlia s naneseným 0,05 % 69K dextránom) a platňa sa ihneď centrifugovala pri 99 g 5 minút pri 4 °C. Potom sa odobralo 200 μΙ roztoku supernatantu na scintilačné meranie. Vzorky sa merali tak, aby chyba bola 2 % alebo 10 minút, podľa toho čo sa dosiahlo prvé. Pretože polystyrén absorbuje malé množstvo [3H]-17-a-estradiolu, na kvantifikova-nie množstiev dostupného izotopu boli zároveň merané kalíšky obsahujúce rádioaktivitu a cytozol, ale nespracované aktívnym uhlím. Na vyhodnotenie neodstrániteľného DPM [3H]-17-a-estradiolu boli tiež spracované kalíšky obsahujúce rádioaktivitu, ale nie cytozol. Boli použité 96 kalíškové platne Corning #25880-96 pretože sa zistilo, že viažu najmenšie množstvo estradiolu.
Analýza výsledkov
Počty impulzov za minútu (CPM) rádioaktivity sa automaticky konvertovali na rozpady za minútu (DPM) pomocou Beckman LS 7500 Scintillation Counter za použitia sady zhášaných štandardov na generovanie H# pre každú vzorku. Na výpočet % viazania estradiolu v prítomnosti 100 alebo 500 násobku kompetítora sa použil nasledujúci vzorec:
% viazania estradiolu = (DPM vzorky - DPM nezachytený aktívnym uhlím)
-x 100 % (DPM estradiolu - DPM nezachytený aktívnym uhlím)
-40Na generovanie kriviek IC50 sa zaznamenala závislosť % viazania od látky. Hodnoty IC50 sa generovali pre látky, ktoré vykazovali >30 % kompetície pri 500násobku koncentrácie kompetítora. Opis týchto metód pozri v publikácii Hulme, E.C., a ďalší. 1992. Receptor-Ligand Interactions: A Practical Approach. IRL Press, New York (zvlášť pozri kapitolu 8). Zmienka v tabuľkách uvedených nižšie pre zlúčeninu z príkladu 1 odkazuje na konečný produkt 2-(4-hydroxyfenyl)-3-metyl-1[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)benzyl]-1H-indol-5-ol.
Afinita estrogénového receptora (zaznamenaná ako RBA: 17-a-estradiol=100)
Zlúčenina RBA
Raloxifen 200
Tamoxifen 1,8
Equilin 5,3
Príklad 15 400
Skúška alkalickej fosfatázy Ishikawových buniek
Udržiavanie a opracovanie buniek
Ishikawove bunky sa udržiavali v DMEM/F12 (50%:50%) obsahujúcom fenolovú červenú + 10 % hmotnostných fetálneho teľacieho séra a médium bolo doplnené s 2 mmol/l Glutamaxu, 1 % hmotnostným Pen/Strap a 1 mmol/l pyruvátom sodným. Päť dní pred začiatkom každého experimentu (opracovanie buniek) sa médium vymenilo za sérum očistené aktívnym uhlím pokrytým 10 % hmotnostnými dextránu, s DMEM/F12 bez fenolovej červenej. V deň pred opracovaním sa bunky zozbierali za použitia 0,5 % hmotnostných trypsínu/EDTA a naniesli sa na platne s hustotou 104 buniek/kalíšok na 96 kalíškové platne na pestovanie tkanivových kultúr. Testovaná zlúčenina sa dávkovala s koncentráciami 10®, 10‘7 a 10‘8 mol/l a okrem toho 10-6 mol/l (zlúčenina) + 10'9 mol/l 17a-estradiol na vyhodnotenie schopnosti látok pôsobiť ako antiestrogény. Bunky sa opracovali 48 hodín pred
-41 skúškou. Každá 96 kalíšková platňa obsahovala kontrolnú vzorku 17a-estradiolu.
Počet vzoriek pre každú dávku bol n = 8.
Skúška alkalickej fosfatázy
Na konci 48 hodín sa médium odsalo a bunky sa premyli trikrát so soľankou pufrovanou fosfátom (PBS). Do každého kalíška sa pridalo 50 μΙ rozpúšťacieho pufra (0,1 mol/l Tris-HCl, pH 9,8, 0,2 % hmotnostného Triton X-100). Platne sa umiestnili do -80 °C na najmenej 15 minút. Platne sa rozmrazili pri 37 °C, po čom nasledovalo pridanie 150 μΙ 0,1 M Tris-HCl, pH 9,8, ktorý obsahoval 4 mmol/l paranitrofenylfosfátu (pNPP) do každého kalíška (konečná koncentrácia, 3 mmol/l pNPP). Výpočty absorbancie a smernice sa uskutočnili pomocou programu KineticCalc Application (Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, VT). Výsledky sú vyjadrené ako stredná hodnota +/- štandardná odchýlka rýchlosti enzýmovej reakcie (smernica) určené v lineárnej časti kinetickej reakčnej krivky (odčítanie optickej hustoty každých 5 minút pre 30 minútové absorbančné meranie). Výsledky sú pre tieto zlúčeniny sumarizované ako percento odozvy vztiahnuté na 1 nmol/l 17aestradiolu. Estrogénová aktivita sa skúšala metódou alkalickej fosfatázy pre rôzne látky a vypočítali sa zodpovedajúce ED50 hodnoty (95 % interval spoľahlivosti).
Ďalej uvedené štyri látky sa použili ako referenčné štandardy:
17a-estradiol 0,03 nmol/l 17a-estradiol 1,42 nmol/l estriol 0,13 nmol/l estrón 0,36 nmol/l
Opis týchto metód je uvedený v publikácii Holinka, C. F., Hata, H., Kuramoto, H a Gurpide, E. (1986) Účinky steroidných hormónov a antisteroidov na aktivitu alkalickej fosfatázy u ľudských endometriálnych rakovinových buniek (Ishikawov kmeň). Cancer Research, 46: 2771 až 2774, a Littlefield, B. A., Gurpide, E., Markievicz. L., McKinley, B. a Hochberg, R. B. (1990). Jednoduchá a citlivá mikrotitračná estrogénová bioskúška založená na stimulácii alkalickej fosfatázy u Ishikawovych buniek; Estrogénové pôsobenie D5 adrenálnych steroidov. Endocrinology, 6: 2757 až 2762.
-42Skúška alkalickej fosfatázy Ishikawových buniek
Zlúčenina % aktivácie
17a-estradiol
Tamoxifen
Raloxifen
Príklad 15
100% aktivácia
0% aktivácia (45% s 1 nM 17a-estradiolu) 5% aktivácia (5% s 1 nM 17a-estradiolu) 1% aktivácia (1% s 1 nM 17a-estradiolu)
Skúška 2X VIT ERE transfekcie
Udržiavanie a opracovanie buniek
Bunky vaječníkov čínskeho škrečka (CHO), ktoré boli stabilne transfekované s ľudským estrogénovým receptorom sa udržiavali v DMEM + 10 % hmotnostných fetálneho teľacieho séra (FBS). 48 hodín pred opracovaním sa rastové médium nahradilo za FBS očistené aktívnym uhlím pokrytým 10 % hmotnostnými dextránu s DMEM bez fenolovej červenej (médium na opracovanie). Bunky sa naniesli na platne s hustotou 5000 buniek/kalíšok na 96-kalíškových platniach, ktoré obsahovali 200 μΙ média/kalíšok.
Transfekcia fosforečnanom vápenatým
Informačná DNA (Promega plazmid pGL2 obsahujúci dve tandemové kópie vitellogenínu ERE v prednej časti minimálneho tymidínkinázového promotóra nesúceho luciferázový gén) sa kombinovala s plazmidom pCH110 (Pharmacia) expresie B-galaktozidázy a nosičovou DNA (pTZ18U) v nasledujúcom pomere:
μθ informačnej DNA
5μΘ pCHUODNA
5pG pTZ18U μΘ DNA/1 ml transfekčný roztok
DNA (20 μΘ) sa rozpustila v 500 μΙ sterilného roztoku 250 mmol/l CaCI2 a po kvapkách sa pridala do 500 μΙ 2X HeBS (0,28 mol/l NaCl, 50 mmol/l HEPES, 1,5
-43mmol/l Na2HPO4, pH 7,05) a inkubovala sa pri laboratórnej teplote 20 minút. Do každého kaliska buniek sa pridalo 20 μΙ zmesi a zostala na bunkách počas 16 hodín. Pri konci tejto inkubácie sa zrazenina odstránila, bunky sa premyli médiom, vymenilo sa čerstvé médium na opracovanie a bunky sa opracovali s ďalším vehikulom, 1 nmol/l 17a-estradiolu, 1 μπτιοΙ/Ι látky alebo 1 pmol/l látky + 1 nmol/l 17a-estradiolu (testy na estrogénový antagonizmus). Každý spôsob opracovania sa vykonal v 8 kalíškoch (n = 8), ktoré sa inkubovali počas 24 hodín pred luciferázovou skúškou.
Luciferázová skúška
Po 24 hodinách expozície látkami sa kultivačné prostredie odstránilo a každý kalíšok sa premyl s 2X so 125 μΙ PBS s chýbajúcimi Mg++ a Ca++. Po odstránení PBS sa do každého kalíška pridalo 25 μΙ rozpúšťacieho pufra Promega a ponechali sa stáť pri laboratórnej teplote počas 15 minút, nasledovalo 15 minút pri -80 °C a 15 minút pri 37 °C. 20 μΙ lyzátu sa prenieslo a nepriehľadnú 96 kalíškovú platňu na hodnotenie luciferázovej aktivity a zvyšný lyzát (5 μΙ) sa použil na vyhodnotenie aktivity B-galaktozidázy (štandardizovaná transfekcia). Luciferanový substrát (Promega) sa pridal v 100 μΙ alikvótoch do každého kalíška automaticky pomocou luminometra a vytvorené svetlo (relatívne svetelné jednotky) sa odčítalo po 10 sekundách po pridaní.
Infekčná luciferázová skúška
Zlúčenina
17a-estradiol estriol
Tamoxifen
Raloxifen
Príklad 15 % aktivácie
100% aktivácia
38% aktivácia
0% aktivácia (10% s 1 nM 17a-estradiolu) 0% aktivácia (0% s 1 nM 17a-estradiolu) 0% aktivácia (0% s 1 nM 17a-estradiolu)
-44B-galaktozidázová skúška
K zostávajúcim 5 μΙ lyzátu sa pridalo 45 μΙ PBS. Potom sa pridalo 50 μΙ pufra na Promega B-galaktozidázovú 2X skúšku, kalíšky sa premiešali a inkubovali sa pri 37 °C 1 hodinu. Pre každý experiment sa pripravila platňa obsahujúca štandardnú krivku (0,1 až 1,5 milijednotiek, s tromi opakovaniami). Platne sa analyzovali pri 410 nm na spektrofotometrickom vyhodnocovacom zariadení na platne Molecular Devices. Optické hustoty sa konvertovali na milijednotky aktivity pomocou matematickej extrapolácie zo štandardnej krivky.
Analýza výsledkov
Luciferázové údaje sa generovali ako relatívne svetelné jednotky (RLU) akumulované za 10 sekúnd merania a automaticky prenesené na JMP (SAS Inc) záznam, pričom sa odčítalo pozadie v RLU. B-galaktozidázové hodnoty sa automaticky importovali do záznamu a tieto hodnoty sa podelili s RLU jednotkami, aby sa údaje normalizovali. Priemer a štandardná odchýlka sa určili z n = 8 pre každé opracovanie. Aktivita látok sa porovnávala s 17a-est rádio lom na každej platni. Percento aktivity v porovnaní s 17a-estradiolom sa počítalo za použitia vzorca % = ((estradiol-porovnávacia vzorka)/(látková hodnota)) x 100. Tieto techniky sú opísané v Tzukerman, M. T., Esty, A., Santiso-Mere, D., Danielian, P., Parker, M. G., Stein, R. P, Pike, J. W. a McDonnel, D. P. (1994). Transaktivačná kapacita ľudského estrogénového receptora sa určila pomocou bunkového aj promotórového kontextu a sprostredkovala sa dvoma zreteľnými intramolekulovými oblasťami (pozri Molecular Endocrinology, 8: 21 až 30).
Uterotrofická/antiuterotropická bioskúška na potkanoch
Estrogénne a antiestrogénne vlastnosti látok sa určili v uterotrofickej skúške nedospelých potkanov (4 dni) tak, ako bolo opísané vyššie v L. J. Black a R. L. Goode, Life Science, 26, 1453 (1980)). Nedospelé potkany Sprague-Dawley (samice, 18 dní staré) sa testovali v skupinách po šesť. Zvieratá sa opracovali denne ip injekciou s 10 μθ látky, 100 μΘ látky, (100 μθ látky + 1 μβ 17a-estradiolu) na kontrolu antiestrogenicity a 1 μθ 17a-estradiolu, s 50 % DMSO/50 % soľanky
-45ako injekčným vehikulom. V deň 4 sa zvieratá usmrtili pomocou asfýxie CO2 a ich maternice sa vybrali a premyli prebytkom lipidu, odstránila sa kvapalina a zistila sa vlhká hmotnosť maternice. Malá časť z jedného rohu sa podrobila histológii a zvyšok sa použil na izolovanie celkovej RNA na vyhodnotenie doplnkovej zložky 3 génovej expresie.
3-dňový model na ovarioktomizovaných potkanoch
Zlúčenina 10 pG
Tamoxifén 69,6 mg
Raloxifén 47,5 mg kontrolná vzorka = 42,7 mg
100 pG 71,4 mg 43,2 mg pG 17a-estradiol = 98,2 mg
Zlúčenina_10 pG
Príklad 15 39,9 mg kontrolná vzorka = 30,7 mg
100 pG_100 pG + 1 pG 17a-estradiol
27,4 mg 24,3 mg pG 17a-estradiol = 63,2 mg
Zlúčenina Raloxifén hydrochlorid [2-(4-hydroxyfenyl)-6-hydroxybenzo[b]tien3-yl][4-(1-piperidinyl)etoxy]fenylmetanónu je zástupcom triedy zlúčenín známych ako selektívne modulátory estrogénového receptora, ktoré majú podobný účinok ako estrogénové antagonisty na úbytok kostnej hmoty a vretencové lipidy, hoci prejavujú estrogénový antagonizmus v maternici a prsníkovom tkanive. Palkowitz a ďalší v J. Med. Chem. 1997, 40, 1407 uvádzajú účinné analógy Raloxifenu, ktoré môžu tiež byť vyrobené za použitia zlúčenín podľa vynálezu. Napríklad opísaná zlúčenina 4a hydrochlorid [2-(4-hydroxyfenyl)-6-hydroxybenzo[b]tien-3-yl]-[4-(1piperidinyl)etoxy]fenylmetánu môže byť vyrobená podľa všeobecnej schémy uvedenej nižšie.
Príklad 16
Metylester 2-(4-metoxybenzénsulfonylamino)benzoovej kyseliny
K roztoku 2,00 g (0,013 mmol) metylantranilátu rozpustenému v 20 ml chloroformu sa pridalo 3,2 ml (0,039 mol) pyridínu, potom 2,733 g (0,013 mol) pmetoxybenzénsulfonylchloridu. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 5 hodín a potom sa premyla 3N HCI a vodou. Organická vrstva sa sušila nad Na2SO4, filtrovala a koncentrovala vo vákuu. Výsledná biela tuhá látka sa premyla éterom a sušila sa vo vákuu za poskytnutia 3,7 g (87 %) požadovaného sulfénamidu.
Cl Hmotnostná spektrometria: 322 (M+H).
Príklad 17
Metylester kyseliny 2-(4-metoxybenzénsulfonylamino)-3-metylbenzoovej
CO2CH3
-47Tým istým spôsobom ako je opísané v príklade 16, 6,24 g (0,038 mol) metyl3- metylantranilátu poskytuje 6,21 g (49 %) požadovaného sulfónamidu ako bielej tuhej látky.
Elektrospejová hmotnostná spektrometria 336,2 (M+H).
Príklad 18
4- (2-Piperidín-1-yl-etoxy)benzylchlorid
CICH
K miešanému roztoku 4-hydroxybenzaldehydu (12,2 g, 0,1 mol) a K2CO3 (25 g, prebytok) v Λ/,/V-dimetylformamide (250 ml) sa pridal monohydrochlorid 1-(2chlóretyl)piperidínu (20,0 g, 1,08 mol). Reakčná zmes sa zohriala na 80 °C počas 24 hodín a ochladila sa potom na teplotu miestnosti. Reakcia sa stlmila ľadovo studenou vodou a extrahovala sa chloroformom. Organické podiely sa premyli vodou, sušili sa nad bezvodým MgSO4, filtrovali a koncentrovali sa vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v metanole a pomaly pri teplote 0 °C sa pridal bórhydrid sodný (10 g, prebytok). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 hodiny a potom sa reakcia utlmila vodou. Alkohol sa extrahoval chloroformom, organické podiely sa dobre premyli vodou, sušili sa nad Na2SO4, preflitrovali a koncentrovali sa vo vákuu.
Takto získaný surový alkohol sa rozpustil v THF (200 ml) a cez neho sa nechal prechádzať 30 minút pri 0 °C plynný HCI. K takto získanej suspenzii hydrochloridu sa pomaly pridal tionylchlorid (30 ml, prebytok). Reakčná zmes sa refluxovala 30 minút a potom sa ochladila na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa potom koncentrovala sušením a triturovala s bezvodým éterom. Tuhá zrazenina sa prefiltrovala a sušila za vákua pri teplote miestnosti za vzniku 25 g (86 %) produktu ako bielej tuhej látky s teplotou topenia 145 až 148 °C.
Elektrosprejová hmotnostná spektrometria: 256 (M+H).
-48Príklad 19
4-(2-/V,/V-dietyletoxy)benzylchlorid
CICH2'
l_
K miešanému roztoku 4-hydroxybenzaldehydu (12,2 g, 0,1 mol) a K2CO3 (25 g, prebytok) v /V,/V-dimetylformamide (250 ml), sa pridal monohydrochlorid 2-dietylaminoetylu (20,0 g, 1,2 mol). Reakčná zmes sa zohriala na 80 °C počas 24 hodín a ochladila sa potom na teplotu miestnosti. Reakcia sa stlmila ľadovo studenou vodou a extrahovala sa chloroformom. Organické podiely sa premyli vodou, sušili sa nad bezvodým MgSO4, filtrovali a koncentrovali sa vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v metanole a pomaly pri teplote 0 °C sa pridal bórhydrid sodný (10 g, prebytok). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 hodiny a potom sa reakcia utlmila vodou. Alkohol sa extrahoval chloroformom, premyl sa dobre vodou, sušil sa, preflitroval a koncentroval sa vo vákuu.
Takto získaný surový alkohol sa rozpustil v THF (200 ml) a cez neho sa nechal prechádzať 30 minút pri 0 °C plynný HCI. K takto získanej suspenzii hydrochloridu sa pomaly pridal tionylchlorid (30 ml, prebytok). Reakčná zmes sa refluxovala 30 minút a potom sa ochladila na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa potom koncentrovala sušením a triturovala s bezvodým éterom. Tuhá zrazenina sa prefiltrovala a sušila za vákua pri teplote miestnosti za vzniku 18 g (65 %) produktu ako bielej tuhej látky s teplotou topenia 76 až 79 °C.
Elektrosprejová hmotnostná spektrometria: 244 (M+H).
Príklad 20
A/-Hydroxy-2-[[4-metoxyfenyl)sulfonyl]-[[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]metyl]amino]-3-metylbenzamid
-49K roztoku 1,00 g (2,985 mmol) metylesteru 2-(4-metoxybenzénsulfonylamino)-3-metylbenzoovej kyseliny v 5 ml DMF sa pridalo 0,952 g (3,284 mmol) 4-(2piperidín-1-yl-etoxy)benzylchloridu a 1,65 g (11,9 mmol) uhličitanu draselného. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 18 hodín, zriedila sa vodou a extrahovala éterom. Organické podiely sa potom extrahovali 6N roztokom HCI a kyslá vodná vrstva sa potom alkalizovala 6N roztokom NaOH a extrahovala éterom. Výsledná éterová vrstva sa sušila nad síranom sodným, filtrovala sa a koncentrovala vo vákuu za poskytnutia 0,965 g esteru piperidínu ako bezfarebného oleja. Elektroprejová hmotnostná spektrometria: 553,5 (M+H)+.
K roztoku 0,889 g (1,611 mmol) esteru piperidínu v 7 ml THF sa pridalo 0,203 g monohydrátu hydroxidu lítneho. Výsledná zmes sa zohriala do refluxu počas 15 hodín a potom sa koncentrovala vo vákuu do vzniku tuhého zvyšku. Zvyšok sa zriedil vodou, neutralizoval sa 5% roztokom HCI a extrahoval sa dichlórmetánom. Organická vrstva sa sušila nad Na2SO4, filtrovala a koncentrovala sa vo vákuu za poskytnutia 0,872 g karboxylovej kyseliny ako bielej peny. Elektrosprejová hmotnostná spektrometria: 539,2 (M+H)+.
K roztoku 0,814 g (1,513 mmol) karboxylovej kyseliny v 10 ml DMF sa pridalo 0,245 g (1,82 mmol) HOBT a 0,386 (2,01 mmol) EDC. Reakčná zmes sa miešala potom 1 hodinu pri teplote miestnosti a pridalo sa 0,46 ml (7,57 mmol) 50% roztoku hydroxylamínu vo vode. Reakčná zmes sa miešala cez noc a potom sa koncentrovala vo vákuu do zostatku usadeniny. Zvyšok sa zriedil EtOAc, premyl sa vodou a roztokom hydrogénuhličitanu sodného, sušil sa nad Na2SO4, filtroval sa a koncentroval vo vákuu do zvyšku. Zvyšok sa rozpustil v 5 ml dichlórmetánu a pridal sa 0,69 ml 1N roztoku HCI v éteri. Po 1 hodine sa reakčná zmes zriedila s éterom a tuhý zvyšok sa prefiltroval a sušil vo vákuu za vzniku 0,179 g hydroxamátamínovej soli. Elektrosprejová hmotnostná spektrometria: 554,5 (M+H)+.
Príklad 21
2-[[4-(2-dietylaminoetoxy)benzyl](4-metoxybenzénsulfonyl)amino]-/V-hydroxy-3metylbenzamid
-50K roztoku 1,00 g (2,653 mmol) metylesteru 2-(4-metoxybenzénsulfonylamino)-3-metylbenzoovej kyseliny v 10 ml DMF sa pridalo 0,811 g (2,918 mmol) 4(2-W,/\/-dÍetyletoxy)benzylchloridu a 1,5 g (10,9 mmol) uhličitanu draselného. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 18 hodín, zriedila sa vodou a extrahovala éterom. Organické podiely sa potom extrahovali 6N roztokom HCl a kyslá vodná vrstva sa potom alkalizovala 6N roztokom NaOH a extrahovala éterom. Výsledná éterová vrstva sa sušila nad síranom sodným, filtrovala sa a koncentrovala vo vákuu za poskytnutia 0,575 g (37 %) ty/V-dietylaminoesteru ako svetlohnedej peny. Elektroprejová hmotnostné spektrometria: 583,1 (M+H)+.
K roztoku 0,539 g (0,926 mmol) Λ/,/V-dietylaminoesteru v dichlórmetáne sa pridali 2 ml trifluóroctovej kyseliny. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 hodiny a potom sa koncentrovala do zvyšku vo vákuu. Zvyšok sa trituroval s éterom a tuhý zvyšok sa zhromaždil filtráciou a sušil sa vo vákuu za vzniku 0,369 g karboxylovej kyseliny ako tuhej látky. Elektrosprejová hmotnostné spektrometria: 525,2 (M-H)’.
K roztoku 0,328 g (0,513 mmol) karboxylovej kyseliny v 6,5 ml dichlórmetánu sa pridalo 0,12 ml DMF, potom 0,77 ml 2,0M oxalylchloridu v CH2CI2 a reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 1 hodinu.
V samostatnej nádobe sa pri 0 °C pridalo k zmesi 0,47 ml (7,7 mmol) 50% roztoku hydroxylamínu vo vode, 8 ml THF a 1,7 ml vody. Potom táto zmes sa miešala 15 minút pri 0 °C, a k tomu sa pridal po častiach roztok HCl výsledný roztok sa nechal miešať cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa potom okyslila na pH 3 10% HCl a extrahovala sa EtOAc. Spojené organické vrstvy sa sušili nad Na2SO4, prefiltrovali a koncentrovali vo vákuu do zvyšku. Zvyšok sa trituroval s éterom za poskytnutia 0,194 g hydroxamátamínovej soli ako bielej tuhej látky. Elektrospejová hmotnostné spektrometria: 542,3 (M+H)+.
Príklad 22
Etylester 2-(4-metoxyfenylsulfanyl)propiónovej kyseliny
O
CH
-51 K miešanej zmesi 4-metoxybenzéntiolu (2,5 g, 14 mmol) a bezvodého K2CO3 (4,0 g, prebytok) v suchom acetóne (100 ml) v banke s guľatým dnom sa pridal etyl2-brómpropionát (3,0 g, 16 mmol) a reakčná zmes sa zohrievala do refluxu 8 hodín za dobrého miešania. Na konci reakcie sa reakčná zmes ochladila, prefiltrovala a koncentrovala do zvyšku. Zvyšok sa extrahoval chloroformom a premyl H2O a organická vrstva sa sušila nad MgSO4, filtrovala a koncentrovala za poskytnutia etylesteru 2-(4-metoxyfenylsulfanyl)propiónovej kyseliny ako svetložltého oleja. Výťažok 3,6 g (94 %).
Príklad 23
Etylester 2-(4-metoxybenzénsulfonyl)propiónovej kyseliny
O
K miešanému roztoku 12,0 g (50 mmol) etylesteru 2-(4-metoxyfenylsulfanyl)propiónovej kyseliny v 300 ml metylénchloridu pri 0 °C sa pomaly pridal na kontrolu exotermickej reakcie. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 hodiny a zriedila sa 600 ml hexánov. Reakčná zmes sa prefiltrovala a filtrát sa zmiešal s 500 m! nasýteného roztoku Na2CO3 počas 3 hodín. Organická vrstva sa oddelila, premyla dôkladne vodou, sušila a odparila vo vákuu za vzniku 12 g polotuhej látky.
Príklad 24
Etylester 2-(4-metoxybenzénsulfonyl)-2-metyl-3-[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)fenyl]propiónovej kyseliny
CH3O
-52Miešaná zmes 2,7 g (10 mmol) etylesteru 2-(4-metoxyfenylsulfonyl)propiónovej kyseliny, 3,03 g (10 mmol) 4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)benzylchloridu, 10 g K2CO3 a 500 mg 18-crown-6 v 250 ml acetónu sa refluxovala 16 hodín. Na konci sa reakčná zmes filtrovala a acetónová vrstva sa koncentrovala k zvyšku. Zvyšok sa extrahoval chloroformom, premyl sa dôkladne vodou, sušil sa nad bezvodým MgSO4, filtroval sa a koncentroval k zvyšku. Získaný zvyšok sa čistil stĺpcovou chromatografiou na stĺpci silikagélu eluovaním s 50% etylacetát-hexány za poskytnutia 4,8 g (92 %) požadovaného produktu ako oleja. MS: 490 (M+H)+.
Príklad 25
2-(4-Metoxybenzénsulfonyl)-2-metyl-3-[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)fenyl]propiónová kyselina
K miešanému roztoku etylesteru 2-(4-metoxybenzénsulfonyl)-2-metyl-3-[4-(2piperidín-1-yl-etoxy)fenyl]propiónovej kyseliny (4,9 g, 10 mmol) v metylalkohole sa pridal 10N NaOH (20 ml, prebytok). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 48 hodín. Na konci sa reakčná zmes koncentrovala a opatrne sa neutralizovala so zriedenou HCI. Získaný zvyšok sa extrahoval chloroformom, premyl sa dôkladne vodou, sušil sa a koncentroval. Získaný produkt sa čistil stĺpcovou chromatografiou na stĺpci silikagélu eluovaním s etylacetát/metanolom (95:5) za poskytnutia produktu ako bezfarebných kryštálov s teplotou topenia 106 °C. MS: 462,5 (M+H)+. Výťažok
4,1 g, (88%).
Príklad 26
2-(4-Metoxybenzénsulfonyl)-2-metyl-3-[4-(2-piperidín-1-yl-etoxy)fenyl]propiónamid
K miešanému roztoku 2-(4-metoxybenzénsulfonyl)-2-metyl-3-[4-(2-piperidín1-yl-etoxy)fenyl]propiónovej kyseliny (2,3 g, 5 mmol) DMF (2 kvapky) v CH2CI2 (100 ml) pri 0 °C sa pridal po kvapkách oxalylchlorid (1,2 g, 10 mmol). Po pridaní sa reakčná zmes miešala pri teplote miestnosti 1 hodinu. Súčasne sa v samostatnej banke miešala zmes hydrochloridu hydroxylamínu (3,4 g, 50 mmol) a trietylamínu (10,1 g, 100 mmol) v THF:voda (5:1, 50 ml) pri 0 °C 1 hodinu. Po hodine sa reakčná zmes oxalylchloridu koncentrovala a svetložltý zvyšok sa rozpustil v 10 ml CH2CI2 a pomaly sa pridal k hydroxylamínu pri 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 24 hodín a potom sa koncentrovala. Získaný zvyšok sa extrahoval chloroformom a premyl sa dôkladne vodou. Získaný produkt sa čistil stĺpcovou chromatografiou na stĺpci silikagélu eluovaním s etylacetátom. Produkt z príkladu bol izolovaný ako bezfarebná tuhá látka s teplotou topenia 98 °C. Výťažok 48 %.
MS: 477 (M+H)+; 1H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,2 (s, 3H), 3,5 - 1,5 (m, 16H), 3,9 (s, 3H), 4,4 (m, 1H), 6,5 - 7,8 (m, 8H), 10,8 (bs, 1H).
Zlúčeniny podľa vynálezu boli testované na biologickú aktivitu nasledujúcimi spôsobmi.
In vitro želatinázová skúška
Skúška je založená na štiepení tiopeptidového substrátu ((Ac-Pr-Leu-Gly(2merkapto-4-metyl-pentanoyl)-Leu-Gly-OEt), Bachem Bioscience) pomocou enzýmu, želatinázy, čím sa uvoľňuje substrátový produkt, ktorý reaguje kolorimetricky s
DTNB ((kyselinou 5,5'-ditio-bis(2-nitrobenzoovou)). Aktivita enzýmu sa merala
-54pomocou rýchlosti prírastku zafarbenia. Tiopeptidový substrát sa pripravil čerstvý ako 20 mmol/l zásobný roztok v 100% DMSO a DTNB je rozpustený v 100% DMSO ako 100 mmol/l zásobný roztok a uložil sa v tme pri laboratórnej teplote. Aj substrát aj DTNB sa pred použitím spolu zriedili na 1 mmol/l s substrátový pufor (50 mmol/l HEPES pH 7,5, 5 mmol/l CaCI2). Zásobný roztok z ľudskej neutrofilnej želatinázy B sa zriedil so skúšobným pufrom (50 mmol/l HEPES pH 7,5, 5 mmol/l CaCI2, 0,02 % Brij) na konečnú koncentráciu 0,15 nmol/l. Skúšobný pufor, enzým, DTNB/substrát (500 μπΊοΙ/Ι konečná koncentrácia) a vehikulum alebo inhibítor sa pridali do 96 kalíškovej platne (celkový objem reakčnej zmesi z 200 μΙ) a vzrast zafarbenia sa monitoroval spektrofotometricky počas 5 minút pri 405 nm pomocou zariadenia na čítanie platní. Nakreslil sa graf nárastu OD405 a vypočítala sa smernica priamky, ktorá predstavuje reakčnú rýchlosť. Potvrdila sa linearita reakčnej rýchlosti (r2 >0,85). Vypočítal sa priemer (x ± smerodajná odchýlka priemeru) rýchlosti kontrolnej vzorky a porovnal sa pre štatistickú významnosť (p<0,05) s rýchlosťami vzoriek opracovaných liečivom použitím Dunnettovho mnohonásobného porovnávacieho testu. Vzťahy dávka-odozva sa môžu generovať použitím viacnásobných dávok liečiva a hodnoty IC50 s 95 % intervalom spoľahlivosti sa odhadli použitím lineárnej regresie (IPRED, HTB). Literatúra: Weingarten, H. a Feder, J., Spectrophotometric assay for vertebrate collagenase, Anál. Biochem. 147, 437 - 440 (1985).
In vitro kolagenázová skúška
Táto skúška je založená na štiepení peptidového substrátu (Dnp-Pro-ChaGly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMa)-NH2), Peptide International, Inc.) pomocou kolagenázy, pričom sa uvoľní fluorescenčná NMa skupina, ktorá je kvantifikuje fluórometrom. Dnp zhasína NMa fluorescenciu v intaktnom substráte. Skúška prebieha v HCBC testovacom pufri (50 mmol/l HEPES, pH 7,0, 5 mmol/l CaCI2, 0,02 % Brij, 0,5 % cysteín), s ľudskou rekombinantnou fibroblastovou kolagenázou (skrátená, molekulová hmotnosť = 18828, WAR, Radnor). Substrát sa rozpustil v metanole a uskladnil sa zmrazený ako 1 mmol/l alikvóty. Kolagenáza sa uskladnila zmrazená v pufri v 25 mmol/l alikvótoch. Na skúšku sa substrát rozpustil v HCBC pufri na konečnú koncentráciu 10 μηηοΙ/Ι a kolagenáza na konečnú koncentráciu 5 nmol/l. Látky sa rozpustili v metanole, DMSO, alebo HCBC. Metanol a DMSO sa zriedili v
-55HCBC na < 1,0 %. Látky sa pridali do 96 kalíškovej platne obsahujúcej enzým a reakcia sa začala pridaním substrátu. Reakcia sa vyhodnocovala (excitácia 340 nm, emisia 444 nm) počas 10 minút a nárast fluorescencie oproti času sa nakreslil ako priamka. Vypočítala sa smernica priamky a predstavuje reakčnú rýchlosť. Potvrdila sa linearita reakčnej rýchlosti (r2 >0,85). Vypočítal sa priemer (x ± smerodajná odchýlka priemeru) rýchlosti kontrolnej vzorky a porovnal sa pre štatistickú významnosť (p<0,05) s rýchlosťami vzoriek opracovaných liečivom použitím Dunnettovho mnohonásobného porovnávacieho testu. Vzťahy dávka-odozva sa môžu generovať použitím viacnásobných dávok liečiva a hodnoty IC5o s 95 % intervalom spoľahlivosti sa odhadli použitím lineárnej regresie (IPRED, HTB). Literatúra: Bickett, D. M. a spol., A high throughput fluorogenic substráte for interstitial collagenase (MMP-1) and gelatinase (MMP-9), Anál. Biochemm 212, 58 64 (1993).
Postup merania TACE inhibície
Použili sa 96-kalíškové čierne mikrotitračné platne, každý kalíšok obsahoval roztok zložený z 10 μΙ TACE (Immunex, konečná koncentrácia 1 μg/ml), 70 μΙ Tris pufra, pH 7,4, obsahujúceho 10 % glycerolu (konečná koncentrácia 10 mmol/l), a 10 μΙ roztoku testovanej látky v DMSO (konečná koncentrácia 1 μίτιοΙ/Ι, DMSO koncentrácia <1 %) a inkuboval sa 10 minút pri laboratórnej teplote. Reakcia sa začala pridaním fluorescenčného peptidylového substrátu (konečná koncentrácia 100 μιποΙ/Ι) do každého kalíška a potom pretrepaním v trepačke počas 5 sekúnd. Reakcia sa vyhodnocovala (excitácia 340 nm, emisia 420 nm) počas 10 minút a nárast fluorescencie oproti času sa zakreslil ako priamka. Vypočítala sa smernica priamky a predstavuje reakčnú rýchlosť. Potvrdila sa linearita reakčnej rýchlosti (r2 >0,85). Vypočítal sa priemer (x ± smerodajná odchýlka priemeru) rýchlosti kontrolnej vzorky a porovnal sa pre štatistickú významnosť (p<0,05) s rýchlosťami vzoriek opracovaných liečivom použitím Dunnettovho mnohonásobného porovnávacieho testu. Vzťahy dávka-odozva sa môžu generovať použitím viacnásobných dávok liečiva a hodnoty ΙΟ50 s 95 % intervalom spoľahlivosti sa odhadli použitím lineárnej regresie.
-56Výsledky získané podľa týchto štandardných experimentálnych testovacích postupov sú uvedené v nasledujúcej tabuľke.
Tabuľka
IC50 (nmol/l alebo % inhibície pri 1 mikromolárnej koncentrácii)
Príklad MMP 1 MMP 9 MMP 13 TACE
26 238,6 8,9 1,4 41,00%
Spôsoby merania MMP-1, MMP-9 a MMP-13 inhibície
Skúška je založená na štiepení tiopeptidového substrátu Ac-Pr-Leu-Gly(2merkapto-4-metyl-pentanoyl)-Leu-Gly-OEt pomocou matricových metaloproteináz MMP-1, MMP-13 (kolagenázy) alebo MMP-9 (želatinázy), čím sa uvoľňuje substrátový produkt, ktorý reaguje kolorimetricky s DTNB ((kyselinou 5,5'-ditio-bis(2nitrobenzoovou)). Aktivita enzýmu sa merala pomocou rýchlosti prírastku zafarbenia. Tiopeptidový substrát sa pripravil čerstvý ako 20 mmol/l zásobný roztok v 100% DMSO a DTNB je rozpustený v 100% DMSO ako 100 mmol/l zásobný roztok a uložil sa v tme pri laboratórnej teplote. Aj substrát aj DTNB sa pred použitím spolu zriedili na 1 mmol/l s substrátový pufor (50 mmol/l HEPES pH 7,5, 5 mmol/l CaCI2). Zásobný roztok z enzýmu sa zriedil so skúšobným pufrom (50 mmol/l HEPES pH 7,5, 5 mmol/l CaCI2, 0,02 % Brij) na požadovanú konečnú koncentráciu. Skúšobný pufor, enzým, vehikulum alebo inhibítor a DTNB/substrát sa pridali do 96 kalíškovej platne (celkový objem reakčnej zmesi z 200 μΙ) a vzrast zafarbenia sa monitoroval spektrofotometricky počas 5 minút pri 405 nm pomocou zariadenia čítača platní a nakreslil sa graf nárastu intenzity farby ako lineárna priamka v závislosti od času.
Alebo sa použije fluorescenčný peptidový substrát. V tomto teste peptidový substrát obsahuje fluorescenčnú skupinu a tlmiacu skupinu. Po rozštiepení substrátu pomocou MMP, fluorescencia, ktorá je vytvorená, je kvantitatívne vyjadrená na fluorescenčnom čítači platní. Test prebieha v HCBC skúšobnom pufri (50 mmol/l HEPES, pH 7,0, 5 mmol/l Ca+2, 0,02 % Brij, 0,5 % cysteínu), s ľudským rekombinantným MMP-1, MMP-9 alebo MMP-13. Substrát je rozpustený v metanole
-57a uchováva sa zamrznutý v 1mM alikvótoch. Pre test sú zriedené substráty a enzýmy v HCBC pufri na žiadané koncentrácie. Zlúčeniny sú pridané na 96kalíškovú platňu obsahujúcu enzým a reakcia ja začatá pridaním substrátu. Reakcia prebieha 10 minút a zvyšovanie fluorescencie v závislosti od času je zakreslené ako lineárna priamka.
Pre ktorýkoľvek z tiopeptidového alebo fluorescenčného peptidového testu, sa vypočítal sklon priamky reprezentuje reakčnú rýchlosťou. Potvrdila sa linearita reakčnej rýchlosti (^>0,85). Vypočítal sa priemer (x ± smerodajná odchýlka priemeru) rýchlosti kontrolnej vzorky a porovnal sa pre štatistickú významnosť (p<0,05) s rýchlosťami vzoriek opracovaných liečivom použitím Dunnettovho mnohonásobného porovnávacieho testu. Vzťah medzi dávkou a odozvou môže byť generovaný použitím viacnásobných dávok liečiva a hodnoty IC50 s 95% intervalom spoľahlivosti sa odhadli použitím lineárnej regresie.
In vivo MMP inhibícia cm kúsok dialýznej rúrky (molekulová hmotnosť odrezku je 12000 až 14000, 10 mm dĺžky) obsahujúci matricu metaloproteinázového enzýmu (stromelyzín, kolagenáza alebo želatináza v 0,5 ml pufra) je implantovaný buď ip alebo sc (do chrbta) potkana (Sprague-Dawley, 150 až 200 g) alebo myši (CD-1, 25 až 50 g) pod anestézou. Liečivo je podávané PO, IP, SC alebo IV cez kanylu v krčnej žile. Liečivo je podávané v dávkovom objeme 0,1 až 0,25 ml/zviera. Obsah dialýznej rúrky sa zhromaždí a testuje sa enzýmová účinnosť.
Sú vypočítané enzýmové reakčné rýchlosti pre každú dialýznu rúrku. Rúrky z najmenej 3 rôznych zvierat sa použili na vypočítanie priemeru ± smerodajnej odchýlky priemeru. Štatistická významnosť (p<0,05) ošetrenia zvierat vehikulom oproti ošetreniu zvierat liečivom je stanovená variančnou analýzou. (Agents and r '
Actions 21:331,1987).
Spôsob merania TACE inhibície
Použili sa 96-kalíškové čierne mikrotitračné platne, každý kalíšok obsahoval roztok zložený z 10 μΙ TACE (Immunex, konečná koncentrácia 1 μg/ml), 70 μΙ Tris pufra, pH 7,4 obsahujúceho 10 % glycerolu (konečná koncentrácia 10 mmol/l), a 10
-58μΙ roztoku testovanej látky v DMSO (konečná koncentrácia 1 μηηοΙ/Ι, DMSO koncentrácia <1 %) a inkuboval sa počas 10 minút pri laboratórnej teplote. Reakcia sa začala pridaním fluorescenčného peptidylového substrátu (konečná koncentrácia
100 μΐηοΙ/Ι) do každého kalíška a potom pretrepaním v trepačke počas 5 sekúnd.
Reakcia sa vyhodnocovala (excitácia 340 nm, emisia 420 nm) počas 10 minút a nárast fluorescencie oproti času sa nakreslil ako priamka. Vypočítala sa smernica priamky a predstavuje reakčnú rýchlosť.
Potvrdila sa linearita reakčnej rýchlosti (r2 >0,85). Vypočítal sa priemer (x ± smerodajná odchýlka priemeru) rýchlosti kontrolnej vzorky a porovnal sa pre štatistickú významnosť (p<0,05) s rýchlosťami vzoriek opracovaných liečivom použitím Dunnettovho mnohonásobného porovnávacieho testu. Vzťahy dávkaodozva sa môžu generovať použitím viacnásobných dávok liečiva a hodnoty IC50 s 95 % intervalom spoľahlivosti sa odhadli použitím lineárnej regresie.
Výsledky získané podľa týchto štandardných experimentálnych testovacích postupov sú uvedené v nasledujúcej tabuľke.
Tabuľka
Inhibícia MMP a TACE
in vivo
Príklad MMP-11 2 MMP-91 MMP-131 MMP TACE1
20 176 6,9 56 277
21 96 2,3 8,8 215
1. IC5o nM alebo % inhibície pri 1 μΜ koncentrácii
2. % inhibície v závislosti na MMP-9 (dávka, mg/kg), ip = intraperitoneálne, po = orálne.

Claims (15)

1. Aryloxyalkyldialkylaminové zlúčeniny všeobecného vzorca I y—(C), c-x
R3 R1 R2 \/
R
R1 R' kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C^alkylu, výhodne z Ci-Cealkylu, alebo Cr C6perfluorovaného alkylu;
X je atóm halogénu, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
Zje vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo --CF3;
A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-;
m je celé číslo 0 až 3;
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, atómu halogénu, -NO2, alkylu, alkoxylu, Ci-C6perfluorovaného alkylu, OH alebo ich C4-C4esterov alebo ich alkyléterov, -CN, -O-R1,-O-Ar,-S-R1,-S-Ar, -SO-R1, -SO-Ar, -SO2-R1, -SO2-Ar, -CO-R1, -CO-Ar, -CO2-R1 alebo -CO2-Ar; a
Y je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:
a) skupinu (i)
R8 kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, Ci-Cgalkyl alebo fenyl,
-60b) päťčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-,
-N(Ci-C4alkyl)-, -N= a -S(O)„, kde n je celé číslo 0 až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Cr^alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, CvCLjacyloxy, Ci-C4alkyltio, CrC4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (C1-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
c) šesťčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(Ci-C4alkyl)-, -N= a -S(O)n, kde n je celé číslo 0 až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, CrC^cyloxy, Ci-C4alkyltio, C1-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
d) sedemčlenný nasýtený, nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklus obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -NíCrC^jalkyl)-, -N= a -S(0)„, kde n je celé číslo O až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, C1-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1,-NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -N02; alebo
e) bicyklický heterocyklus obsahujúci 6 až 12 uhlíkových atómov buď premostený alebo fúzovaný a obsahujúci až dva heteroatómy vybrané zo skupiny obsahujúcej -Ο-, -NH-, -N(CrC4alkyl)-, a -S(0)n, kde n je celé číslo O až 2, voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, tri-61 halogénmetoxy, C1-C4acyloxy, C1-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, CrC^ialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
2. Aryloxyalkyldialky lamí nové zlúčeniny podľa nároku 1 všeobecného vzorca
R3 R* R2
R5 kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-Ci2alkylu, výhodne z CpCealkylu, alebo Ci-C6perfluorovaného alkylu;
X je atóm halogénu, -O-SO2-CH
3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
Z je vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo -CF3; A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-; m je celé číslo 0 až 3; a
Y je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:
a) skupinu (0 kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, Ci-Cealkyl alebo fenyl,
-62b) skupinu vybranú z tiofénu, furánu, pyrolu, imidazolu, pyrazolu, tiazolu, izotiazolu, izoxazolu alebo oxatiolánu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Cr^alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(CrC4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, CrC4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -no2;
c) skupinu vybranú z pyridínu, pyrazínu, pyrimidínu, pyridazínu, piperidínu, morfolínu a pyránu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, CrC4alkyl, trihalogénmetyl, CrC^lkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, CrC4alkylsulfinyl, CrC4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1až3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl,-CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, CrC^ialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
d) skupinu vybranú z azepínu, diazepínu, oxazepínu, tiazepinu, oxapínu a tiepínu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, CrC4acyloxy, CrC4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2; alebo
e) bicyklický heterocyklus vybraný zo skupiny bezofuránu, izobenzofuránu, benzotiofénu, indolu, izoindolu, indolizínu, indazolu, purínu, chinolizínu, izochinolínu, chinolínu, ftalazínu, naftyridínu, chinoxalínu, chinazolínu a cinnolínu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, C1-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, CrC4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -ΝΗ2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
-633. Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny podľa nároku 1 všeobecného vzorca kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C12alkylu, výhodne z CrCealkylu, alebo Ci-C6perfluorovaného alkylu;
X je atóm halogénu, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
Z je vybrané z -NO2, atómu halogénu, -CH3 alebo -CF3; A je vybrané z -O- alebo -S-, -SO- alebo -SO2-; m je celé číslo 0 až 3;
Y je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:
a) skupinu (i)
R8 kde R7 a R8 sú nezávisle vybrané zo skupiny: H, Ci-Cealkyl alebo fenyl, alebo
b) skupinu vybranú ztiofénu, furánu, pyrolu, imidazolu, pyrazolu, tiazolu, pyridínu, pyrazínu, pyrimidínu, pyridazínu, piperidínu, indolu alebo benzofuránu, ktoré sú voliteľne substituované 1 až 3 substituentami nezávisle vybranými zo skupiny
-64obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, C^
C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4acyloxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, CrC4alkylsulfonyl, hydroxy(CrC4)alkyl, fenyl voliteľne substituovaný 1 až 3 substituentami vybranými zo skupiny: (CrC4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONHR1, -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2R1, -NHCOR1, -NO2;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
4. Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny podľa nároku 1 všeobecného vzorca kde
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C12alkylu, výhodne z Ci-Cealkylu, alebo Ci-C6perfluorovaného alkylu;
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, OH alebo z ich Ci-C4esterov alebo ich alkyléterov, atómu halogénu, -CN, Ci-C6alkylu alebo trifluórmetylu, m je celé číslo 0 až 3;
R7 a R8 sú nezávisle vybrané z H, Ci-Cealkylu alebo sú spojené pomocou (CH2)P-, kde p je celé číslo 2 až 6, aby vytvorili kruh, ktorý je voliteľne substituovaný až troma substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, Ci-C4alkoxy, trihalogénmetoxy, Ci-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONH(Ci-C4), -NH2, Ci-C4alkylamino, Ci-C4dialkylamino, -NHSO2(Ci-C4), NHCO-(CrC4) a -NO2; a
X je halogén, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
o
-65Z je vybrané z -NO2, halogénu, -CH3 alebo -CF3; a ich farmaceutický prijateľné soli.
5. Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny podľa nároku 1 všeobecného vzorca III kde
A je vybrané z -S-, -SO- alebo -SO2-;
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C^alkylu, výhodne z Ci-Cealkylu, alebo CrCeperfluorovaného alkylu;
R3, R4, R5 a R6 sú nezávisle vybrané z H, OH alebo z ich Ci-C4esterov alebo ich alkyléterov, atómu halogénu, -CN, Ci-Cealkylu alebo trifluórmetylu, m je celé číslo 0 až 3;
R7 a R8 sú nezávisle vybrané z H, Ci-C6alkylu alebo sú spojené pomocou (CH2)P-, kde p je celé číslo 2 až 6, aby vytvorili kruh, ktorý je voliteľne substituovaný až troma substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej vodík, hydroxyl, atóm halogénu, Ci-C4alkyl, trihalogénmetyl, CrC4alkoxy, trihalogénmetoxy, C1-C4alkyltio, Ci-C4alkylsulfinyl, Ci-C4alkylsulfonyl, hydroxy(Ci-C4)alkyl, -CO2H, -CN, -CONH(Ci-C4), -NH2, Ci-C4alkylamino, CrC4dialkylamino, -NHSO2(Ci-C4), -NHCO(Ci-C4) a -NO2; a
X je halogén, -O-SO2-CH3, -O-SO2-CF3 alebo skupina vzorca
O
-66Z je vybrané z -NO2, halogénu, -CH3 alebo -CF3;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
6. Aryloxyalkyldialkylamínová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etylpiperidín-1-ylu.
7. Aryloxyalkyldialkylamínová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etylhexametylénimín-1-ylu.
8. Aryloxyalkyldialkylamínová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je hydrochlorid (4-chlórmetylfenoxy)etyldimetylamínu.
9. Spôsob výroby aryloxyalkyldialkylamínovej zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa:
a) konvertovanie alkoholu vzorca A kde m, A, Y a R1 až R6 sú určené vyššie, na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde X je odštiepiteľná skupina, pomocou vhodných prostriedkov, napríklad pomocou halogenačného, sulfonylačného alebo acylačného činidla obsahujúceho odštiepiteľnú skupinu X;
alebo
b) oxidáciu zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde A je S za vzniku zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde A je -SO- alebo -SO2-, alebo
c) konvertovanie zlúčeniny všeobecného vzorca I na jej farmaceutický prijateľnú soľ.
-6710. Spôsob výroby aryloxyalkyldialkylamínovej zlúčeniny podľa nároku 1, kde A jeO, vyznačujúci sa t ý m, že zahŕňa:
a) alkyláciu hydroxybenzaldehydu vzorca kde R3 až R6 sú určené pre patentový nárok 1, s alkylhalogenidom všeobecného vzorca
R1 R1
I I
Y— (C )m— C— halo R2 R2 kde Y, R1, R2 a m sú definované pre patentový nárok 1, m je celé číslo 0 až 3 a halogén je vybraný z Cl, F, Br alebo I, za vzniku aldehydu všeobecného vzorca
b) redukciu aldehydového produktu z kroku a), za vzniku zodpovedajúceho alkoholu vzorca
CHiOH
c) konvertovanie alkoholu z kroku b) na jeho hydrochloridovú soľ; a
d) konvertovanie alkoholovej skupiny zlúčeniny z kroku c) na odštiepiteľnú skupinu.
11. Spôsob výroby aryloxyalkyldialkylamínovej zlúčeniny podľa nároku 1, kde A je S, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že zahŕňa kroky: a) alkyláciu zlúčeniny všeobecného vzorca
HS
CHO kde R3 až R6 sú určené v patentovom nároku 1, s alkylačným činidlom vzorca
R
R kde Y, R1, R2 a m sú určené v patentovom nároku 1, halogén je vybraný z Cl, F, Br alebo I za vzniku aldehydu vzorca
-69R1 R'
I I Y-(C,-CR2 R2
b) redukciu aldehydu napríklad s bórhydrid o m sodným na alkohol vzorca
c) opracovanie alkoholu z kroku b) plynným HCI za vytvorenia jeho hydrochloridovej soli a
d) konvertovanie alkoholovej skupiny hydrochloridu z kroku c) na odštiepiteľnú skupinu. '
12. Spôsob podľa nároku 11, vy z n a č u j ú c i sa t ý m, že zahŕňa krok riadenej oxidácie síry v hydrochloride alkoholu z kroku d) na sulfoxid alebo na sulfón.
13. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 9 až 12, vyznačujúci sa t ý m, že alkoholová skupina je konvertovaná na odštiepiteľnú skupinu pomocou opracovania s metánsulfonylchloridom, toluénsulfonylchloridom alebo anhydridom trifluóractovej kyseliny v prítomnosti pyridínu alebo trietylamínu.
14. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 9 až 13, vyznačujúci sa t ý m, že halogénom je Cl a m je 2.
-ΣΟΙ 5. Spôsob výroby zlúčeniny vzorca .OH kde Y znamená: a) skupinu (i) kde R7 a R8 sú nezávisle zvolené z H, CrC6alkylu alebo fenylu, alebo
b) 5-, 6- alebo 7-členný nenasýtený alebo čiastočne nenasýtený heterocyklický kruh obsahujúci jeden alebo dva atómy dusíka, pričom heterocyklický kruh je pripojený etoxylovým mostíkom na atóm dusíka v kruhu a je voliteľne substituovaný 1 až 3 skupinami vybranými z halogénu, Ci-C6alkylu, CrCealkoxylu, CrC6tioalkylu, -CF3 alebo -NO2.
vyznačujúci sa tým, že zahŕňa reakciu v alkalickom médiu, 4-hydroxybenzylalkoholu so soľou zlúčeniny vzorca kde Y je uvedené vyššie.
16. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že pH alkalického média sa udržuje na hodnote 9 alebo vyššej.
17. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 8 a farmaceutický prijateľný nosič.
SK537-2000A 1997-10-15 1998-10-14 Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny a spôsob ichvýroby SK286460B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US95081897A 1997-10-15 1997-10-15
US09/161,653 US6005102A (en) 1997-10-15 1998-09-28 Aryloxy-alkyl-dialkylamines
PCT/US1998/021609 WO1999019293A1 (en) 1997-10-15 1998-10-14 Novel aryloxy-alkyl-dialkylamines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK5372000A3 true SK5372000A3 (en) 2000-11-07
SK286460B6 SK286460B6 (sk) 2008-10-07

Family

ID=26858006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK537-2000A SK286460B6 (sk) 1997-10-15 1998-10-14 Aryloxyalkyldialkylamínové zlúčeniny a spôsob ichvýroby

Country Status (26)

Country Link
EP (2) EP1777214A3 (sk)
JP (1) JP2001519410A (sk)
KR (1) KR100669836B1 (sk)
CN (1) CN1231458C (sk)
AR (1) AR015183A1 (sk)
AT (1) ATE355264T1 (sk)
AU (1) AU757630C (sk)
BR (1) BR9813069A (sk)
CA (1) CA2306343C (sk)
CY (1) CY1106497T1 (sk)
DE (1) DE69837210T2 (sk)
DK (1) DK1025077T3 (sk)
EA (1) EA003937B1 (sk)
EE (1) EE200000225A (sk)
ES (1) ES2281937T3 (sk)
HU (1) HUP0004419A3 (sk)
ID (1) ID24417A (sk)
IL (2) IL135343A0 (sk)
NO (1) NO20001938L (sk)
NZ (1) NZ503793A (sk)
PL (1) PL198443B1 (sk)
PT (1) PT1025077E (sk)
SI (1) SI1025077T1 (sk)
SK (1) SK286460B6 (sk)
TR (1) TR200001012T2 (sk)
WO (1) WO1999019293A1 (sk)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA005932B1 (ru) * 1998-05-15 2005-08-25 Уайт 2-фенил-1-[4-(2-аминоэтокси)бензил]индол в комбинации с эстрогенами
US6479535B1 (en) 1998-05-15 2002-11-12 Wyeth 2-phenyl-1-[4-(2-aminoethoxy)-benzyl]-indole and estrogen formulations
CA2382683A1 (en) * 1999-09-13 2001-03-22 American Home Products Corporation Glucopyranosides conjugates of 2-(4-hydroxy-phenyl)-1-¬4-(2-amin-1-yl-ethoxy)-benzyl|-1h-indol-5-ols
US6455568B2 (en) 2000-07-06 2002-09-24 Wyeth Combination therapy for inhibiting sphincter incontinence
AR029538A1 (es) 2000-07-06 2003-07-02 Wyeth Corp Composiciones farmaceuticas de agentes estrogenicos
AU2001273144A1 (en) 2000-07-06 2002-01-21 Wyeth Use of substituted indole compounds for treating neuropeptide y-related conditions
MXPA03000170A (es) 2000-07-06 2003-05-27 Wyeth Corp Combinaciones de un inhibidor de recaptacion de serotonina selectivo y agentes estrogenicos.
AR029539A1 (es) 2000-07-06 2003-07-02 Wyeth Corp Combinaciones de estatinas y agentes estrogenicos
EP1656938A1 (en) 2000-07-06 2006-05-17 Wyeth Combinations of SSRI and estrogenic agents
WO2002003990A2 (en) 2000-07-06 2002-01-17 Wyeth Use of substituted insole compounds for treating excessive intraocular pressure
US6376486B1 (en) 2000-07-06 2002-04-23 American Home Products Corporation Methods of inhibiting sphincter incontinence
US6369051B1 (en) 2000-07-06 2002-04-09 American Home Products Corporation Combinations of SSRI and estrogenic agents
JP2004532834A (ja) * 2001-03-23 2004-10-28 イーライ・リリー・アンド・カンパニー ヒスタミンｈ３受容体アンタゴニストである非イミダゾール系アリールアルキルアミン化合物、その製造および治療的使用
JP2004531559A (ja) 2001-05-22 2004-10-14 イーライ・リリー・アンド・カンパニー エストロゲン欠乏または内因性エストロゲンに対する異常な生理反応に関連する疾患を抑制するためのテトラヒドロキノリン誘導体
EP1395563B1 (en) 2001-05-22 2006-03-29 Eli Lilly And Company 2-substituted 1,2,3,4-tetrahydroquinolines and derivatives thereof, compositions and methods
US7314937B2 (en) 2002-03-21 2008-01-01 Eli Lilly And Company Non-imidazole aryl alkylamines compounds as histamine H3 receptor antagonists, preparation and therapeutic uses
US7098241B2 (en) 2002-12-16 2006-08-29 Hoffmann-La Roche Inc. Thiophene hydroxamic acid derivatives
WO2005100316A1 (en) 2004-04-07 2005-10-27 Wyeth Crystalline polymorph of a bazedoxifene acetate
JP2007532548A (ja) 2004-04-07 2007-11-15 ワイス バゼドキシフェンアセテートの結晶質多形体
MXPA06011686A (es) 2004-04-08 2006-12-14 Wyeth Corp Ascorbato de bazedoxifeno como modulador del receptor de estrogeno selectivo.
JP2008509148A (ja) * 2004-08-05 2008-03-27 ワイス 塩酸ピピンドキシフェン一水和物の結晶多形
EP1836155A2 (en) * 2005-01-13 2007-09-26 Wyeth, A Corporation of the State of Delaware Processes for the preparation of aminoethoxybenzyl alcohols
US20100087661A1 (en) * 2007-02-12 2010-04-08 Josef Jirman Method for the preparation of 5-benzyloxy-2-(4-benzyloxphenyl)-3-methyl-1h-indole
WO2009102771A1 (en) * 2008-02-11 2009-08-20 Wyeth Methods of converting polymorphic form b of bazedoxifene acetate to polymorphic form a of bazedoxifene acetate
CA2758109A1 (en) * 2009-04-13 2010-10-21 Sandoz Ag Processes for the synthesis of bazedoxifene acetate and intermediates thereof
US8569483B2 (en) 2011-06-21 2013-10-29 Divi's Laboratories, Ltd. Process for the preparation of bazedoxifene acetate and intermediates thereof
CN104151265B (zh) * 2013-05-13 2016-10-05 上海医药工业研究院 醋酸巴多昔芬中间体的制备方法
US9751835B2 (en) 2013-05-15 2017-09-05 Indiana University Research And Technology Corporation Processes and intermediates for preparing indole pharmaceuticals
IT201800006562A1 (it) * 2018-06-21 2019-12-21 Procedimento e intermedi utili per la preparazione di indoli
IT201900001923A1 (it) 2019-02-11 2020-08-11 Erregierre Spa Sali di bazedoxifene utili per la preparazione di bazedoxifene acetato

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH448121A (de) 1963-03-13 1967-12-15 Hoffmann La Roche Verfahren zur Herstellung substituierter Hydrazinverbindungen
WO1991007107A1 (en) * 1989-11-13 1991-05-30 Pfizer Inc. Oxazolidinedione hypoglycemic agents
GB9326332D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Karo Bio Indole derivatives
CA2259487A1 (en) * 1996-07-01 1998-01-08 Margaret Mary Faul Hypoglycemic and hypolipidemic compounds
YU40999A (sh) * 1997-02-27 2002-06-19 American Cyanamid Company N-hidroksi-2-(alkil,aril ili heteroaril sulfanil,sulfinil ili sulfonil)-3-supstituisani alkil,aril ili heteroarilamidi, kao inhibitori za matrične metaloproteinaze
EP1011666A4 (en) * 1997-04-30 2004-03-31 Lilly Co Eli ANTITHROMBOTIC AGENTS

Also Published As

Publication number Publication date
WO1999019293A1 (en) 1999-04-22
AR015183A1 (es) 2001-04-18
EP1025077B1 (en) 2007-02-28
PT1025077E (pt) 2007-05-31
CA2306343A1 (en) 1999-04-22
AU757630B2 (en) 2003-02-27
EP1025077A1 (en) 2000-08-09
NZ503793A (en) 2002-10-25
HUP0004419A2 (hu) 2001-07-30
DE69837210T2 (de) 2007-12-27
CN1281429A (zh) 2001-01-24
IL135343A (en) 2007-12-03
ATE355264T1 (de) 2006-03-15
CN1231458C (zh) 2005-12-14
EA003937B1 (ru) 2003-10-30
AU757630C (en) 2006-10-26
SI1025077T1 (sl) 2007-06-30
PL339908A1 (en) 2001-01-15
JP2001519410A (ja) 2001-10-23
AU1083199A (en) 1999-05-03
TR200001012T2 (tr) 2000-09-21
CA2306343C (en) 2010-08-03
PL198443B1 (pl) 2008-06-30
DK1025077T3 (da) 2007-05-07
SK286460B6 (sk) 2008-10-07
EP1777214A3 (en) 2007-05-09
ID24417A (id) 2000-07-20
EE200000225A (et) 2001-06-15
ES2281937T3 (es) 2007-10-01
HUP0004419A3 (en) 2002-01-28
IL135343A0 (en) 2001-05-20
NO20001938D0 (no) 2000-04-13
HK1026889A1 (en) 2000-12-29
NO20001938L (no) 2000-06-07
CY1106497T1 (el) 2012-01-25
EA200000416A1 (ru) 2000-10-30
EP1777214A2 (en) 2007-04-25
KR20010024505A (ko) 2001-03-26
KR100669836B1 (ko) 2007-01-18
BR9813069A (pt) 2000-08-22
DE69837210D1 (de) 2007-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK5372000A3 (en) Aryloxy-alkyl-dialkylamine compounds, process for their preparation and pharmaceutical composition containing them
US6242605B1 (en) Aryloxy-alkyl-dialkylamines
RU2158737C2 (ru) Бензотиофеновые соединения или их фармацевтически приемлемые соли
US6121260A (en) Method of treating conditions susceptible to modulation of NPY receptors with diarylimidazole derivatives
KR100620772B1 (ko) 에스트로겐과 2-페닐-1-[4-(2-아미노에톡시)-벤질]-인돌을 포함하는 약제학적 조성물
SK47197A3 (en) Estrogenic agents, pharmauceutical composition containing them and their use
CZ291701B6 (cs) Indolové deriváty s estrogenním účinkem a farmaceutický prostředek s jejich obsahem
US5985910A (en) 3- [4- (2- Phenyl-Indole-1-ylmethyl) Phenyl]- Acrylamides as estrogenic agents
ES2257748T3 (es) Compuestos y composiciones con cadenas laterales que contienen hidrogeno no basicas.
CZ20001368A3 (cs) Aryloxyalkyldialkylaminy
HK1096954A (en) Novel aryloxy-alkyl-dialkylamines
MXPA00003694A (en) Novel aryloxy-alkyl-dialkylamines
HK1026889B (en) Novel aryloxy-alkyl-dialkylamines
CZ290200B6 (cs) Benzothiofenová sloučenina, meziprodukty pro její výrobu a farmaceutické prostředky tuto sloučeninu obsahující
UA73916C2 (en) Novel aryloxyalkyldialkylamines
JPH05262736A (ja) フェノキシ酢酸誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20091014