SK8282000A3 - Conjugates useful in the treatment of prostate cancer, pharmaceutical composition containing the same and use thereof - Google Patents

Conjugates useful in the treatment of prostate cancer, pharmaceutical composition containing the same and use thereof Download PDF

Info

Publication number
SK8282000A3
SK8282000A3 SK828-2000A SK8282000A SK8282000A3 SK 8282000 A3 SK8282000 A3 SK 8282000A3 SK 8282000 A SK8282000 A SK 8282000A SK 8282000 A3 SK8282000 A3 SK 8282000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
seq
ser
trans
hyp
chg
Prior art date
Application number
SK828-2000A
Other languages
English (en)
Inventor
Stephen F Brady
Dong-Mei Feng
Victor M Garsky
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9804399.5A external-priority patent/GB9804399D0/en
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of SK8282000A3 publication Critical patent/SK8282000A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1013—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Konjugát)ŕía liečenie rakoviny prostaty, farmaceutický prostriedok s jeho obsahom a jeho použitie
Oblasť techniky
Tento vynález sa týka konjugátov, farmaceutických prostriedkov s ich obsahom a ich použitia na liečbu rakoviny prostaty.
Doterajší stav techniky
V roku 1996 sa očakávalo, že rakovina prostaty bude diagnostikovaná u 317 000 mužov v USA, a že 42 000 amerických mužov zomrie na toto ochorenie (Garnick, M.B. (1994), The Dilemmas of Prostate Cancer, Scientific Američan, Apríl: 72-81). Takže rakovina prostaty je desiatou najčastejšie diagnostikovanou malignitou (inou ako kožnou) u mužov v USA a druhou vedúcou príčinou smrtí majúcich nejaký vzťah k rakovine (za rakovinou pľúc) v tejto skupine.
Antigén špecifický pre prostatu (PSA) je jednoreťazcový glykoproteín s veľkosťou 33 kDa, ktorý sa takmer výlučne produkuje epitelom ľudskej prostaty a vyskytuje sa v ľudskej seminálnej tekutine v hladinách od 0,5 do 2,0 mg/ml (Nadji, M., Taber, S.Z., Castro, A., a iný, (1981), Cancer 48: 1229; Papsidero, L., Kuriyama, M., Wang, M., a iný, (1981), JNCI 66: 37; Qui, S.D., Young, C.Y.F., Bihartz, D.L., a iný, (1990), J. Urol. 144: 1550; Wang, M.C., Valenzuela, L.A., Murphy, G.P., a iný, (1979), Invest. Urol. 17:159). Samostatná uhľovodíková jednotka sa pripája na asparagínový zvyšok číslo 45 a predstavuje 2 až 3 kDa celkovej molekulovej hmotnosti. PSA je proteáza so špecificitou podobnou chymotrypsínu (Christensson, A., Laurell, C.B., Lilja, H. (1990), Eur. J. Biochem, 194: 755-763). Dokázalo sa, že PSA je zodpovedný najmä za rozpustenie gélovitej štruktúry vytvorenej pri ejakulácii prostredníctvom proteolýzy hlavných proteínov v géli zachytávajúcom spermu, Semenogelínu I a Semenogelínu II a fibronektínu (Lilja, H. (1985), J. Clin. Invest. 76: 1899; Lilja, H., Oldbring, J., Rannevik, G., a iný, (1987), J. Clin. Invest. 80: 281; McGee, R.S., Herr, J.C. (1988), Biol. Reprod.
- 2 39:499). PSA sprostredkúvajúci proteolýzu gél-vytvárajúcich proteínov generuje niekoľko rozpustných Semenogelín I a Semenogelín II fragmentov a rozpustné fibronektínové fragmenty so skvapalňovaním ejakulátu a uvoľňuje progresívne pohyblivé spermie (Lilja, H., Laurell, C.B. (1984), Scand. J. Clin. Lab. Invest. 44: 447; McGee, R.S., Herr, J.C. (1987), Biol. Reprod. 37: 431). Navyše PSA môže proteolyticky degradovať IGFBP-3 (proteín viažuci rastový faktor podobný inzulínu
3), čím umožní IGF stimulovať špecificky rast buniek, ktoré vylučujú PSA (Cohen a iný, (1992) J. Clin. Endo. & Metá. 75:1046-1053).
PSA v komplexe s alfa-l-antichymotrypsínom je predominantnou molekulovou formou sérového PSA a môže predstavovať až 95 % detegovaného sérového PSA (Christensson, A., Bjôrk, T., Nilsson, O., a iný, (1993), J. Urol.150: 100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlén, U. (1991), Clin. Chem. 37: 1618-1625; Stenman, U.H., Leinoven, J., Alfthan, a iný, (1991), Cancer Res. 51: 222-226). Prostatické tkanivo (normálne, benígne hyperplastické alebo malígne tkanivo) predominantne vylučuje zrelú, enzymaticky aktívnu formu PSA, keďže táto forma je potrebná na vytvorenie komplexu s alfa-1-antichymotrypsínom (Mast, A.E., Enahild, J.J., Pizzo,
S.V., a iný, (1991), Biochemistry 30: 1723-1730; Perlmutter, D.H., Glover, G.I., Rivetna, M., a iný, (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 3753-3757). Preto sa predpokladá, že v mikroprostredí prostatických PSA sekrečných buniek je PSA spracovávané a vylučované v svojej zrelej enzymaticky aktívnej forme a nie v komplexe s nejakou inhibičnou molekulou. PSA vytvára stabilné komplexy aj s alfa-2-makroglobulínom, ale, keďže výsledkom vytvorenia takéhoto komplexu je enkapsulácia PSA a úplná strata epitopov PSA, nie je jasný in vivo význam vytvárania tohto komplexu. Voľný PSA, ktorý nevytvára komplexnú formu je minoritnou frakciou sérového PSA (Christensson, A., Bjôrk, T., Nilsson, O., a iný, (1993), J. Urol. 150: 100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlén, U. (1991), Clin. Chem. 37:1618-1625). Veľkosť tejto formy sérového PSA je podobná veľkosti PSA v seminálnej kvapaline (Lilja, H., Christensson, A., Dahlén, U. (1991), Clin. Chem. 37: 1618-1625), ale ešte nie je známe, či voľná forma sérového PSA môže byť zymogén; vnútorne štiepená neaktívna forma zrelého PSA; alebo PSA manifestujúci enzýmovú aktivitu. Avšak zdá sa nepravdepodobné, že voľná forma
- 3 sérového PSA manifestuje enzýmovú aktivitu, keďže v sére je značný (100 až 1000 násobný) molárny nadbytok tak nezreagovaného alfa-l-antichymotrypsínu, ako aj alfa-2-makroglobulínu v porovnaní s detegovanými hladinami voľnej 33 kDa formy PSA (Christensson, A., Bjôrk, T., Nilsson, O., a iný, (1993), J. Urol. 150: 100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlén, U. (1991), Clin. Chem.37:1618-1625).
Sérové merania PSA sú užitočné na monitorovanie liečby adenokarcinómu prostaty (Duffy, M.S. (1989), Ann. Clin. Biochem. 26: 379-387; Brawer, M.K. a Lange, P.H. (1989), Urol. Suppl. 5:11-16; Hara, M. a Kimura, H. (I989), J. Lab. Clin. Med.113: 541-548), hoci vyššie uvedené normálne sérové koncentrácie PSA boli publikované aj pri benígnej prostatickej hyperplázii a následnej chirurgickej traume prostaty (Lilja, H., Christensson, A., Dahlén, U. (1991), Clin. Chem. 37:1618-1625). Je známe, že aj prostatické metastázy vylučujú imunologický reaktívny PSA, keďže u postatektomických pacientov, ktorí majú rakovinu prostaty so značne rozšírenými metastázami, je detekovateľné sérové PSA vo vysokých hladinách (Ford, T.F., Butcher, D.N., Masters, R.W., a iný, (1985), Brit. J. Urology 57: 50-55). Preto by mohla byť cytotoxická zlúčenina, ktorá by sa mohla aktivovať proteolytickou aktivitou PSA, špecifická pre bunky prostaty, ako aj špecifická pre PSA sekretujúce prostatické metastázy.
Úlohou predloženého vynálezu je poskytnúť novú protirakovinovú zlúčeninu užitočnú na liečbu rakoviny prostaty, ktorá zahŕňa oligopeptidy, ktoré sú selektívne proteolyticky štiepené voľným antigénom špecifickým pre prostatu (PSA), ako konjugát s vinea alkaloidovým cytotoxickým činidlom.
Ďalšou úlohou tohto vynálezu je poskytnúť spôsob liečby rakoviny prostaty, ktorý zahŕňa podávanie novej protirakovinovej zlúčeniny.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu sú chemické konjugáty, ktoré obsahujú oligopeptidy, ktorých aminokyselinové sekvencie sú selektívne proteolyticky štiepené voľným antigénom špecifickým pre prostatu (PST), a vinea alkaloidové cytotoxické činidlo. Konjugáty podľa vynálezu sa vyznačujú pripojením štiepiteľného oligopeptidu na
- 4 atóm kyslíka v polohe 4 na vinea liečive, ktoré bolo deacetylované. Takéto konjugáty sú užitočné na liečbu rakoviny prostaty a benígnej prostatickej hyperplázie (BPH).
Predložený vynález sa teda týka nových protirakovinových zlúčenín, ktoré sú užitočné na liečbu rakoviny prostaty. Takéto zlúčeniny obsahujú oligopeptid, ktorý je kovalentne spojený, voliteľne cez chemický spojovník, s vinea alkaloidovým cytotoxickým činidlom. Miestom pripojenia oligopeptidu na vinea alkaloidové cytotoxické činidlo je atóm kyslíka v polohe 4 vinea alkaloidového cytotoxického činidla. Je zrejmé, že tieto vinea alkaloidové cytotoxické činidlá, ktoré majú acetylovú časť na atóme kyslíka v polohe 4, musia byť najprv, pred vytvorením nárokovaných konjugátov, deacetylované. Oligopeptidy sú vybrané z oligomérov, ktoré sú selektívne rozoznávané voľným antigénom špecifickým pre prostatu (PSA), a ktoré môžu byť proteolyticky štiepené prostredníctvom enzymatickej aktivity antigénu špecifického pre prostatu. Takúto kombináciu oligopeptidu a cytotoxického činidla je možné nazvať konjugát.
Ideálne je cytotoxická aktivita vinea liečiva značne redukovaná alebo eliminovaná, v prípade, že je oligopeptid, obsahujúci PSA proteolytické štiepiace miesto, pripojený, buď priamo, alebo cez chemický spojovník, na vinea liečivo a je intaktný. Ideálne je tiež, ak je cytotoxická aktivita vinea liečiva významne zvýšená alebo ak sa aktivizuje nemodifikované vinea liečivo proteolytickým štiepením pripojeného oligopeptidu v peptidovej väzbe, kde je oligopeptid štiepený voľným PSA a akoukoľvek následnou hydrolýzou endogénnymi peptidázami.
Navyše je výhodné, ak je oligopeptid vybraný z oligopeptidov, ktoré sa neštiepia, alebo sa štiepia v oveľa menšej miere v prítomnosti iných ako PSA proteolytických enzýmov, ako napríklad enzýmov v ľudskom sére, pred tým, ako sú poštiepené voľným PSA v porovnaní so štiepením oligopeptidov v prítomnosti enzymaticky aktívneho PSA. Zistilo sa, že výhodne je aminokyselina v mieste pripojenia oligopeptidu na vinea liečivo alebo v mieste pripojenia voliteľného spojovníka, sekundárnou aminokyselinou, vybraná zo skupiny zahŕňajúcej prolín, 3hydroxyprolín, 3-fluoroprolin, kyselinu pipekolovú, kyselinu 3-hydroxypipekolovú, 2azetidín, 3-hydroxy-2-azetidin, sarkozín a podobne. Výhodnejšie je aminokyselina v
- 5 mieste pripojenia oligopeptidu na vinea liečivo alebo v mieste pripojenia voliteľného spojovníka, cyklickou aminokyselinou vybranou zo skupiny, ktorá zahŕňa prolín, 3hydroxyprolín, 3-fluoroprolín, kyselina pipekolová, kyselina 3-hydroxypipekolová, 2azetidín, 3-hydroxy-2-azetidín a podobne.
Z vyššie uvedených dôvodov je želateľné, aby oligopeptid obsahoval krátku peptidovú sekvenciu, výhodne kratšiu ako desať aminokyselín. Výhodnejšie je, ak oligopeptid obsahuje sedem alebo šesť aminokyselín. Keďže konjugát výhodne obsahuje krátku aminokyselinovú sekvenciu, môže byť rozpustnosť konjugátu ovplyvnená v značnom rozsahu všeobecným hydrofóbnym charakterom zložky cytotoxického činidla. Preto je možné začleniť hydrofilné substituenty do oligopeptidovej sekvencie alebo môžu byť N-koncové blokovacie skupiny vybrané ako kompenzácia, alebo na elimináciu tohto hydrofóbneho podielu cytotoxického činidla.
Výhodným uskutočnením tohto vynálezu je konjugát, v ktorom je oligopeptid, a voliteľne, ak je prítomný, chemický spojovník, odpojený od cytotoxického činidla proteolytickou aktivitou voľného PSA a akýchkoľvek iných proteolytických enzýmov prítomných v blízkosti tkaniva, čím sa uvoľňuje cytotoxické činidlo alebo cytotoxické činidlo, ktoré si zachováva časť oligopeptidovej/spojovníkovej jednotky, ale ostáva cytotoxické, do fyziologického prostredia v mieste proteolytického štiepenia. Zahrnuté sú aj farmaceutický prijateľné soli konjugátov.
Je zrejmé, že oligopeptid, ktorý je konjugovaný s cytotoxickým činidlom, či už priamo kovalentnou väzbou alebo chemickým spojovníkom, nemusí byť oligopeptidom, ktorý je najlepšie rozoznávaný voľným PSA a je najjednoduchšie proteolyticky štiepený voľným PSA. Takže oligopeptid, ktorý je vybraný na začlenenie do takéhoto protirakovinového prostriedku bude vybraný tak na základe selektivity, proteolytického štiepenia voľným PSA, ako aj na základe cytotoxickej aktivity konjugátu cytotoxické činidlo - proteolytický zvyšok (alebo, čo je považované za ideálnu situáciu, nemodifikovaného cytotoxického činidla), ktoré sú výsledkom tohto štiepenia. Výraz selektívny ako je použitý v spojení proteolytickým PSA štiepením znamená vyšší podiel štiepenia oligopeptidovej zložky podľa predloženého vynálezu voľným PSA relatívne ku štiepeniu oligopeptidu, ktorý
-6obsahuje náhodnú sekvenciu aminokyselín. Preto je oligopeptidová zložka podľa predloženého vynálezu výhodným substrátom pre voľný PSA. Výraz selektívny tiež indikuje, že oligopeptid je proteolyticky štiepený voľným PSA medzi špecifickými dvoma aminokyselinami v oligopeptide.
Oligopeptidové zložky podľa predloženého vynálezu sú selektívne rozoznávané antigénom špecifickým pre prostatu (PSA) a môžu byť proteolyticky štiepené prostredníctvom enzymatickej aktivity voľného antigénu špecifického pre prostatu. Takéto oligopeptidy obsahujú oligomér vybraný z:
a) AsnLyslleSerTyrGInISer
b) LyslleSerTyrGInISer
c) AsnLyslleSerTyrTyrISer
d) AsnLysAlaSerTyrGInISer
e) SerTyrGInISerSer
f) LysTyrGInISerSer
g) hArgTyrGInISerSer
h) hArgChaGInISerSer
i) TyrGInlSerSer
j) TyrGInISerLeu
k) TyrGInISerNIe
l) ChgGInISerLeu
m) ChgGInISerNIe
n) SerTyrGInlSer
o) SerChgGInISer
p) SerTyrGInISerVal
q) SerChgGInISerVal
r) SerTyrGInISerLeu
s) SerChgGInISerLeu
t) HaaXaaSerTyrGInISer
u) HaaXaaLysTyrGInISer
v) HaaXaahArgTyrGInISer
w) HaaXaahArgChaGInISer (SEKV. Č. 1), (SEKV. Č. 2), (SEKV. Č. 3), (SEKV. Č. 4), (SEKV. Č. 5); (SEKV. Č. 6); (SEKV. Č. 7); (SEKV. Č. 8); (SEKV. Č. 9);
(SEKV. Č. 10); (SEKV. Č. 11); (SEKV. Č. 12); (SEKV. Č. 13); (SEKV. Č. 14); (SEKV. Č. 15); (SEKV. Č. 16); (SEKV. Č. 17); (SEKV. Č. 18);
(SEKV. Č. 19);
(SEKV. Č. 20);
(SEKV. Č. 21);
(SEKV. Č. 22);
(SEKV. Č. 23);
x) HaaTyrGInISer (SEKV. Č. 24);
y) HaaXaaSerChgGInlSer (SEKV. Č. 25);
z) HaaChgGInISer (SEKV. Č. 26);
kde Haa je cyklická aminokyselina substituovaná hydrofilickou časťou, hArg je
homoarginín, Xaa je akákoľvek aminokyselina, Cha je cyklohexylalanín a Chg je
cyklohexylglycin.
Podľa jedného uskutočnenia predloženého vynálezu oligopeptid obsahuje
oligomér, ktorý je vybraný z:
a) SerSerTyrGInlSerAla (SEKV. Č.27);
b) SerSerChgGInISerSer (SEKV. Č.28);
c) SerSerTyrGInlSerAla (SEKV. Č.29);
d) SerSerChgGInISerSer (SEKV. Č.30);
e) 4-|lypSerSerTyrGlnlSer (SEKV. Č.31);
f) 4-HypSerSerChgGlnlSer (SEKV. Č.32);
h) AlaSerTyrGInISerSer (SEKV. Č.33);
i) AlaSerChgGInISerSer (SEKV. Č.34);
j) AlaSerTyrGInISerAla (SEKV. Č.35);
k) AlaSerChgGInISerAla (SEKV. Č.36);
1) 4-HypAlaSerTyrGlnlSer (SEKV. Č.37);
m) 4-HypAlaSerChQGInlSer (SEKV. Č.38);
kde 4-Hyp je 4-hydroxyprolín, Xaa je akákoľvek aminokyselina hArg je homoarginín,
Cha je cyklohexylalanín a Chg je cyklohexylglycin.
Vo výhodnejšom uskutočnení predloženého vynálezu oligopeptid obsahuje
oligomér vybraný z:
SerSerChgGInISerAlaPro (SEKV. Č.39);
SerSerChgGInISerSerPro (SEKV. Č.40);
SerSerChgGlnlSerAla4-Hyp (SEKV. Č.41);
SerSerChaGlnlSerSer4-Hyp (SEKV. Č.42);
AbuSerSerChgGInlSerPro (SEKV. Č.43);
AbuSerSerChgGlnlSer4-Hyp (SEKV. Č.44);
SerSerSerChgGInISerLeuPro (SEKV. Č.45);
- 8SerSerSerChgGInlSerValPro SerAlaSerChgGlnlSerl_eu4-Hyp SerAlaSerChgGInISerValPro /V-metyl-Ser/SerSerChgGInISerLeuPip /V-metyl-Ser/SerSerChgGInISerValPíp 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerPro
4-HypSerSerTyrGlnlSerSer4-Hyp 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerPro 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerSer 4-HypSerSerTyrGlnlSer4-Hyp 4-HypSerSerChgGlnlSerPro 4-HypSerSerChgGlnlSerSerPro 4-HypSerSerChgGlnlSerLeu 4-HypSerSerChgGlnlSerVal 4-HypAlaSerChgGlnlSerValPro 4-HypAlaSerChgGlnlSerSerPip 4-HypSerSerChgGlnlSer 4-HypSerSerChgGlnlSerGly SerSerChgGInISerGly 3-PalSerSerTyrGlnlSer4-Hyp 3-PalSerSerChgGlnlSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGlnlSerSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGlnlSerSer4-Hyp kde Abu je kyselina aminobutyrová, 4-1 (SEKV. C.46);
(SEKV. Č.47);
(SEKV. Č.48);
(SEKV. Č.49);
(SEKV. Č.50);
(SEKV. Č.51);
(SEKV. Č.52);
(SEKV. Č.53);
(SEKV. Č.54);
(SEKV. Č.55);
(SEKV. Č.56);
(SEKV. Č.57);
(SEKV. Č.58);
(SEKV. Č.59);
(SEKV. Č.60);
(SEKV. Č.61);
(SEKV. Č.62);
(SEKV. Č.63);
(SEKV. Č.64);
(SEKV. Č.65);
(SEKV. Č.66);
(SEKV. Č.67); a (SEKV. Č.68);
je 4-hydroxyprolín, Pip je kyselina pipekolová, 3,4-DiHyp je 3,4-dihydroxyprolin, 3-Pal je 3-pyridylalanín, Sar je sarkozín a Chg je cyklohexylglycín.
Výraz oligoméry, ktoré obsahujú aminokyselinovú sekvenciu, ako je uvedený vyššie a ďalej v podrobnom opise vynálezu, opisuje oligoméry s dĺžkou približne 3 až približne 100 aminokyselinových zvyškov, ktoré vo svojej aminokyselinovej sekvencii obsahujú opísanú špecifickú aminokyselinovú sekvenciu, a ktoré sa preto môžu proteolyticky štiepiť vo vnútri opísanej aminokyselinovej sekvencie voľným PSA. Výhodne obsahuje oligomér od 5 do 10 aminokyselinových zvyškov. Takže napríklad nasledujúci oligomér: hArgSerAlaChgGInISerLeu (sekv. č.: 69); obsahuje aminokyselinovú sekvenciu: ChgGInISerLeu (sekv.č.: 12); a spadá preto do rozsahu predloženého vynálezu. A oligomér hArgSer4-HypChgGlnlSerLeu (sekv. č.: 70); obsahuje aminokyselinovú sekvenciu: 4-HypChgGlnlSerLeu (sekv. č.: 71); a spadá preto do rozsahu predloženého vynálezu. Je zrejmé, že takéto oligoméry nezahŕňajú semenogelin I a semenogelín II.
Pre priemerného odborníka v oblasti peptidovej chémie by bolo samozrejmé zrejmé, že určité aminokyseliny v biologicky účinnom oligopeptide môžu byť nahradené inými homologickými, izosterickými a/alebo izoelektronickými aminokyselinami, pričom biologická aktivita pôvodného oligopeptidu ostáva v modifikovanom oligopeptide zachovaná. Využité môžu byť aj určité neprirodzené a modifikované prirodzené aminokyseliny na nahradenie zodpovedajúcej prirodzenej aminokyseliny v oligopeptidoch podľa predloženého vynálezu. Takže napríklad tyrozín môže byť nahradený 3-iodotyrozínom, 2-metyltyrozínom, 3-fluorotyrozínom, 3-metyltyrozínom a podobne. Ďalej môže byť napríklad lyží n nahradený N'-(2imidazolyl)lyzínom a podobne. Nasledujúci zoznam aminokyselinových nahradzovaní je mienený ako ilustrativny a nie obmedzujúci:
Pôvodná aminokyselina Ala
Arg
Asn
Asp
Glu
Gin
Gly lle
Leu
Lys
Met
Nahradzujúce aminokyseliny Gly, Abu
Lys.Ornitín
Gin
Glu
Asp
Asn
Ala
Val, Leu, Met, Nie, Nva lle, Val, Met, Nie, Nva
Arg, Ornitín
Leu, lle, Nie, Val
Ornitín Lys, Arg
Phe Tyr, Trp
Ser Thr, Abu, Hyp, Ala
Thr Ser, Abu, Hyp
Trp Phe, Tyr
Tyr Phe, Trp
Val Leu, íle, Met, Nie, Nva
Takže napríklad nasledujúce oligopeptidy môžu byť syntetizované technikami dobre známymi priemerným odborníkom v oblasti a očakávalo by sa, že sú
proteolyticky štiepené voľným PSA:
AsnArglIeSerTyrGInISer (SEKV. Č.:72)
AsnLysValSerTyrGInISer (SEKV. Č.:73)
AsnLysMetSerTyrGInISerSer (SEKV. Č.:74)
AsnLysLeuSerTyrGInlSerSer (SEKV. Č.:75)
AsnLyslleSerTyrGInISer (SEKV. Č.:76)
GlnLyslleSerTyrGInlSerSer (SEKV. Č.:77).
Asn4-HyplleSerTyrGlnlSer (SEKV. Č.:78)
Asn4-HypValSerTyrGlnlSer (SEKV. Č.:79)
4-HypAlaSerTyrGlnlSerSer (SEKV. Č.:80)
(3,4-dihydroxyproline)AlaSerTyrGlnlSerSer (SEKV. Č.:81)
3-hydroxyprolineSerChgGlnlSer (SEKV. Č.:82)
4-HypAlaSerChgGlnlSerSer (SEKV. Č.:83).
Zavedenie symbolu I do vnútra aminokyselinovej sekvencie označuje miesto vo vnútri sekvencie, v ktorom je oligopeptid proteolyticky štiepený voľným PSA.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu mať asymetrické centrá a nachádzať sa vo forme racemátov, racemických zmesí a ako jednotlivé diastereoméry, so všetkými možnými izomérmi, vrátane optických izomérov, ktoré sú zahrnuté do predloženého vynálezu. Ak nie je uvedené inak, uvedené aminokyseliny sú brané ako aminokyseliny s prirodzenou L stereokonfiguráciou.
V predloženom vynáleze sú opísané aminokyseliny označené tak bežnými 3
písmenovými, ako aj jednopísmenovými skratkami ako je uvedené nižšie:
Alaníne Ala A
Arginín Arg R
Asparagín Asn N
Kyselina asparágová Asp D
Asparagín alebo kyselina asparágová Asx B
Cysteín Cys C
Glutamín Gin Q
Kyselina glutámová alebo glutamín Glu E
Kyselina glutámová Glx Z
Glycín Gly G
Histidín His H
Izoleucín lle I
Leucín Leu L
Lyží n Lys K
Metionín Met M
Fenylalanín Phe F
Prolín Pro P
Šerí n Ser S
Threonín Thr T
Tryptofán Trp w
Tyrozín Tyr Y
Valín Val v
Nasledujúce skratky sú použité v opise a obrázkoch na označenie uvedených aminokyselín a častí: hR alebo hArg: homoarginín h Y alebo hTyr: homotyrozín
Cha: cyklohexylalanín
Amf: 4-aminometylfenylalanín
DAP: 1,3-diaminopropyl
DPL: 2-(4,6-dimetylpyrimidinyl)lyzín
(imidazolyl)K: N'-(2-imidazolyl)lyzín
Me2PO3-Y: O-d imetylfosfotyrozí n
O-Me-Y: O-metyltyrozín
TIC: kyselina 1,2,3,4-tetrahydro-3-izochinolín karboxylová
DAP: 1,3-diaminopropán
TFA: kyselina trifluorooctová
AA: kyselina octová
3PAL: 3-pyridylalanín
4-Hyp: 4-hydroxyprolín
dAc-Vin: 4-ctes-acetylvinblastín
Pip: kyselina pipekolová
Abu: kyselina 2-aminobutyrová
Nva: norvalín
V oblasti je dobre známe a zrejmé v predloženom vynáleze, že peptidylové terapeutické činidlá, ako nárokované konjugáty oligopeptidu a cytotoxického činidla, majú výhodne koncovú aminovú časť akéhokoľvek oligopeptidového substituentu chránenú vhodnou ochrannou skupinou, ako acetylom, benzoylom, pivaloylom a podobne. Takáto ochranná koncová aminoskupina znižuje alebo eliminuje enzymatickú degradáciu takýchto peptidylových terapeutických činidiel činnosťou exogénnych aminopeptidáz, ktoré sú prítomné v krvnej plazme teplokrvných živočíchov. Takéto ochranné skupiny zahŕňajú aj hydrofilické blokovacie skupiny, ktoré sú vybrané na základe prítomnosti hydrofilnej funkcie. Blokovacie skupiny, ktoré zvyšujú hydrofilitu konjugátov a tým zvyšujú rozpustnosť konjugátov vo vode, zahŕňajú, ale nie sú obmedzené na hydroylované alkanoyli, polyhydroxylované alkanoyli, polyetylénglykol, glykozyláty, sacharidy a korunkové étery. N-konce
- 13neprirodzených amiminokyselinových častí môžu tiež zlepšiť enzymatickú degradáciu exogénnymi aminopeptidázami.
Výhodne je W-koncová ochranná skupina vybraná z nasledujúcich skupín:
a) acetyl;
b)
d)
O O kde
R1 a R2 sú nezávislé vybrané zo skupín zahŕňajúcich:
a) vodík,
b) substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú zlúčeninu, C3-C10 cykloalkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkinyl, halogén, CrCg perfluóralkyl, R3O-, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R32N-C(NR3)-, R4S(O)2NH, CN, NO2, R3C(O)-, N3i -N(R3)2 alebo R4OC(O)NR3-,
c) nesubstituovaný C^Ce alkyl,
d) substituovaný CpCe alkyl, kde substituent na substituovanom alkyle je vybraný zo skupiny, ktorá zahŕňa substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú zlúčeninu C3-C10 cykloalkyl,
C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkinyl, R30-, R4S(O)2NH, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R32NC(NR3)-, CN, R3C(O)-, N3, -N(R3)2 a R4OC(O)NR3-; alebo
R1 a R2 sú spojené a vytvárajú -(CH2)S- kde jeden z atómov uhlíka je voliteľne nahradený časťou vybranou z: O, S(O)m, -NC(O)-, NH a -N(COR4)-;
R3 je vybraný zo skupiny, ktorá zahŕňa vodík, aryl, substituovaný aryl, heterocyklickú zlúčeninu, substituovanú heterocyklickú zlúčeninu, C^Ce alkyl a C3-C10 cykloalkyl;
R4 je vybraný zo skupiny, ktorá zahŕňa aryl, substituovaný aryl, heterocyklickú zlúčeninu, substituovanú heterocyklickú zlúčeninu, C^Cg alkyl a C3-C10 cykloalkyl;
m je 0, 1 alebo 2;
n je 1, 2, 3 alebo 4 p je nula alebo prirodzené číslo medzi 1 a 100; a q je 0 alebo 1, s podmienkou, že ak p je 0, q je 1; a r je 1, 2 alebo 3;
s je 3, 4 alebo 5.
Určité oligopeptidy v opísaných konjugátoch obsahujú cyklickú aminokyselinu substituovanú hydrofilnou časťou, ktorá bola vyššie označovaná skratkou Haa, a ktorá sa dá vyjadriť aj vzorcom:
kde:
R5 je vybrané z HO- a CrC6 alkoxy;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorá obsahuje vodík, halogén CrC6 alkyl, HO- a CrC6 alkoxy; a t je 3 alebo 4.
-15 Štruktúra
predstavuje cyklickú amínovú časť, ktorá má 5 alebo 6 členný kruh, ako napríklad cyklický amín, ktorý môže byť voliteľne fúzovaný na fenylový alebo na cyklohexylový kruh. Príklady takejto cyklickej amínovej časti zahŕňajú, ale nie sú obmedzené na nasledujúce špecifické štruktúry:
Konjugáty podľa predloženého vynálezu môžu mať asymetrické centrá a môžu sa vyskytovať vo forme racemátov, racemických zmesi a ako jednotlivé diastereoméry, so všetkými možnými izomérmi vrátane optických izomérov, pričom sú všetky zahrnuté do predloženého vynálezu. Ak sa akýkoľvek substituent (napr. aryl, heterocyklická zlúčenina, R3 atď.) nachádza v akejkoľvek zložke viac ako raz, jeho definície pre rôzne miesta výskytu sú navzájom nezávislé. Napríklad HO(CR1R2)2- predstavuje HOCH2CH2-, HOCH2CH(OH)-, HOCH(CH3)CH(OH)-, atď. Treba tiež uviesť, že kombinácie substituentov a/alebo rôznych zložiek sú možné, len ak sú výsledkom takýchto kombinácií stabilné zlúčeniny.
Výraz alkyl ako je tu použitý a alkylová časť aralkylu a podobné výrazy, sú mienené ako výrazy, ktoré zahŕňajú tak rozvetvené, ako aj priame reťazce nasýtených alifatických uhľovodíkových skupín, ktoré majú špecifikovaný počet atómov uhlíka; alkoxy” predstavuje alkylovú skupinu s uvedeným počtom atómov uhlíka, ktorá je pripojená cez kyslíkový mostík.
-16 Výraz cykloalkyľ, tak ako je použitý tu, zahŕňa nearomatické cyklické uhľovodíkové skupiny, ktoré majú uvedený počet atómov uhlíka. Príklady cykloalkylových skupín zahŕňajú cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a podobne
Alkenylové” skupiny zahŕňajú tie skupiny, ktoré majú uvedený počet atómov uhlíka a majú jednu alebo niekoľko dvojitých väzieb. Príklady alkenylových skupín zahŕňajú vinyl, alyl, izopropenyl, pentenyl, hexenyl, heptenyl, cykloperopenyl, cyklobutenyl, cyklopentenyl, cyklohexenyl, 1-propenyl, 2-butenyl, 2-metyl-2-butenyl, izoprenyl, farnezyl, geranyl, geranylgeranyl a podobne.
’Alkinylové” skupiny zahŕňajú skupiny, ktoré majú uvedený počet atómov uhlíka a majú jednu trojitú väzbu. Príklady alkinylových skupín zahŕňajú acetylén, 2butinyl, 2-pentinyl, 3-pentinyl a podobne.
Výraz halogén, ako je použitý tu, znamená fluór, chlór, bróm a jód.
Výraz aryl, a arylová časť aralkylu a aroyl, ako sú tu použité, znamenajú akýkoľvek stabilný monocyklický alebo bicyklický uhlíkový kruh, ktoré majú do 7 členov v každom kruhu, pričom najmenej jeden kruh je aromatický. Príklady takýchto arylových zložiek zahŕňajú fenyl, naftyl, tetrahydronaftyl, indanyl, bifenyl, fenantryl, antryl alebo acenaftyl.
Výraz heterocyklická zlúčenina, ako je tu použitý, znamená stabilný 5 až 7 členný monocyklický alebo stabilný 8 až 11 členný bicyclický heterocyklický kruh, ktorý je buď nasýtený alebo nenasýtený, a ktorý pozostáva z uhlíkových atómov a z jedného až štyroch heteroatómov, ktoré sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S a zahŕňa akúkoľvek bicyklickú skupinu, v ktorej môže byť ktorýkoľvek z vyššie definovaných heterocyklických kruhov fúzovaný na benzénový kruh. Heterocyklický kruh môže byť pripojený na ktorýkoľvek heteroatóm alebo na atóm uhlíka, čoho výsledkom je vytvorenie stabilnej štruktúry. Príklady takýchto heterocyklických zložiek zahŕňajú, ale nie sú obmedzené na: azepinyl, benzimidazolyl, benzizoxazolyl, benzofurazanyl, benzopyranyl, benzotiopyranyl, benzofuryl, benzotiazolyl, benzotienyl, bezoxazolyl, chromanyl, cinolinyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzotienyl, dihydrobenzotiopyranyl, dihydrobenzotiopyranyl sulfón, furyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, indolinyl, indolyl, izochromanyl, izoindolinyl, izochinolinyl, izotiazolidinyl, izotiazolyl, izotiazolidinyl, morfolinyl, naftyridinyl, oxadiazolyl, 2-oxoazepinyl, oxazolyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperdinyl, 2oxopyrolidinyl, piperidyl, piperazinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrazolidinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrolidinyl, pyrolyl, chinazolinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydroizochinolinyl, tetrahydrochinolinyl, tiamorfolinyl, tiamorfolinylsulfoxid, tiazolyl, tiazolinyl, tienofuryl, tienotienyl a tienyl.
Výrazy substituovaný C^ alkyl, substituovaný aryl a substituovaná heterocyklická zlúčenina, ako sú tu použité zahŕňajú skupiny, ktoré obsahujú 1 až 3 substituenty, okrem miesta pripojenia ku zvyšku zlúčeniny. Takéto ďalšie substituenty sú vybrané z F, Cl, Br, CF3, NH2, N(CrC6 alkyl)2, NO2, CN, (CrC6 alkyl)O-, -OH, (CrCealkylJSíO)™-, (CrCealkyl)C(O)NH-, H2N-C(NH)-, (CrC6 alkyl)C(O)-, (CrCe alkyl)OC(O)-, N3, (CrC6 alkyl)OC(O)NH- a CrC^ alkyl.
Keď sa R1 a R2 spoja a vytvoria -(CH2)S-, takto vymedzené cyklické štruktúry a cyklické štruktúry obsahujúce heteroatóm obsahujú, ale nie sú obmedzené na:
Tu používaný výraz hydroxylovaný znamená substitúciu na substituovateľnom uhlíku v opísanom kruhovom systéme hydroxylovou skupinou. Výraz polyhydroxylovaný, ako je tu používaný, predstavuje substitúciou na dvoch alebo viacerých substituovateľných uhlíkoch v opísanom kruhovom systéme 2, 3 alebo 4 hydroxylovými skupinami.
- 18 Tu používaný výraz PEG predstavuje určité substituenty, ktoré obsahujú polyetylénglykol a majú určený počet etylénoxy podjednotiek. Takže výraz PEG(2) znamená
a výraz PEG(6) znamená
Tu používaný výraz (d)(2,3-dihydroxypropionyl) má nasledujúci vzorec:
Tu používaný výraz (2R,3S)2,3,4-trihydroxybutanoyľ má nasledujúci vzorec:
Tu používaný výraz chinyľ má nasledujúci vzorec:
alebo jej diastereomér.
-19 Tu používaný výraz kotininyľ má nasledujúci vzorec:
alebo jej diastereomér.
Tu používaný výraz galyľ má nasledujúci vzorec:
alebo jej diastereomér.
Tu používaný výraz 4-etoxyskvaráť má nasledujúci vzorec:
Cytotoxické činidlo, ktoré sa používa v konjugátoch podľa predloženého vynálezu môže byť vybrané z vinea cytotoxických činidiel. Užitoční sú najmä členovia triedy, ktorá zahŕňa, napríklad vinea alkaloid vybraný z vinblastinu, vinkristínu, leurosidinu, vindezínu, vinorelbínu, navelbínu, leurozínu a podobne
-20alebo ich optických izomérov. Je zrejmé, že konjugáty podľa predloženého vynálezu majú oligopeptid pripojený cez atóm kyslíka, ktorý je na 4. uhlíku vinea alkaloidu. Preto musia byť určité vinea alkaloidy, ktoré majú na kyslíku acetylovú skupinu, najprv, pred tým, ako sa pripoja na oligopeptid (alebo voliteľne na spojovaciu jednotku), deacetylované. Navyše, priemerný odborník v oblasti môže uskutočniť chemické modifikácie na požadovanom cytotoxickom činidle, aby vytvoril zlúčeninu vhodnejšiu na účely pripravovaných konjugátov podľa vynálezu.
Výhodná skupina 4-deacetyl-vinca alkaloidových cytotoxických činidiel pre predložený vynález zahŕňa liečivá nasledujúceho vzorca:
Vinea alkaloid skupiny liečiv vzorca I:
R8
COR12 v ktorom
R7 znamená H, CH3 alebo COH;
kde R9 a R10 sa berú jednotlivo, R10 je H, a jeden z R8 a R9 je etyl a druhý je H alebo OH;
kde R9 a R10 sú brané spolu a vytvárajú dvojitú väzbu a R8 je etyl;
R11 je vodík;
R12 je OH, 0-(0^03 alkyl) alebo NH2.
Konjugát oligopeptidu a cytotoxického činidla podľa predloženého vynálezu, kde cytotoxickým činidlom je výhodne cytotoxické činidlo 4-0-deacetylvinblastín, je možné opísať všeobecným vzorcom la uvedeným nižšie:
oligopeptid-R
C-koniec kde oligopeptidom je oligopeptid, ktorý je špecificky rozoznávaný voľným antigénom špecifickým pre prostatu (PSA), a je možné ho proteolyticky štiepiť prostredníctvom enzymatickej aktivity voľného antigénu špecifického pre prostatu,
XL je vybraný z: väzba, -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-O- a - C(O)-(CH2)U-W-(CH2)U-NH
R je vybrané z
a) vodík,
b) -(C=O)R1a,
c)
d)
X
f) etoxyskvarát; a
g) kotininyl;
R1 a R2 sú nezávisle vybrané z: vodík, OH, CrC6 alkyl, CrC6 alkoxy, CrC6 aralkyl a aryl;
R1a je Ci-Ce-alkyl, hydroxylovaný C3-C8-cykloalkyl, polyhydroxylovaný C3-C8-cykloalkyl, hydroxylovaný aryl, polyhydroxylovaný aryl alebo aryl,
R9 je vodík, (CrC3 alkyl)-CO alebo chlórom substituovaný (CrC3 alkyl)-CO;
W je vybrané zo skupiny, ktorá obsahuje rozvetvený alebo nerozvetvený reťazec
CľCe-alkyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl alebo bicyklo[2.2.2]oktanyl;
n je 1, 2, 3 alebo 4 p je nula alebo prirodzené číslo medzi 1 a 100 q je 0 alebo 1, s podmienkou, že ak p je nula, potom q je 1 r je 1, 2 alebo 3 t je 3 alebo 4 u je 0, 1,2 alebo 3 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli.
XL je výhodne väzba.
V jednom uskutočnení predloženej prihlášky vynálezu je skupina oligopeptidR vybraná z:
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro; (SEKV.Č.
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly; (SEKV.Č.
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar; (SEKV.Č.
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro; (SEKV.Č.
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerVal; (SEKV.Č.
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-4-trans-L-Hyp; (SEKV. Č. Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro; (SEKV.Č.
84)
85)
86)
87)
88)
89)
90) hydroxyacetylAbu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro;
acetyl3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
Ac--4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSer4-trans-L-Hyp; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro;
Ac-SerSerChgGInSerGly; ΑοδθΓδβιΌΓ^ΟΙηδβΓδβΜ-^ηε-Ι-Ηγρ; Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar; Ac-SerSerChgGInSerSerHyp;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro; Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro; Ac-AbuSerSerChgGInSerSerPro; Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro; Ac-SerChgGIn-SerSerPro;
Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp; Ac--SerChgGlnSerSerSar; Ac-SerChgGInSerSerAibPro; Ac-SerChgGInSerSer/V-Me-Ala;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip; Ac-SerChgGInSerSer/V-Me-dA;
(SEKV. Č.: 91) (SEKV. Č.
92)
(SEKV. Č. 93)
(SEKV. Č. 94)
(SEKV. Č. 95)
(SEKV. Č. 96)
(SEKV. Č. 98)
(SEKV. Č. 99)
(SEKV. Č. 100)
(SEKV. Č. 103)
(SEKV. Č. 104)
(SEKV. Č. 105)
(SEKV. Č. 106)
(SEKV. Č. 107)
(SEKV. Č. 108)
(SEKV. Č. 109)
(SEKV. Č. 111)
(SEKV. Č. 114)
(SEKV. Č. 115)
(SEKV. Č. 116)
(SEKV. Č. 117)
(SEKV. Č. 118)
(SEKV. Č. 119)
(SEKV. Č. 120)
(SEKV. Č. 124) a
(SEKV. Č. 125)
kde Abu je kyselina aminobutyrová, 4-trans-L-Hyp je 4-trans-L-hydroxyprolín, Pip je kyselina pipekolínová, 3,4-DiHyp je 3,4-dihydroxyprolin, 3-PAL je 3-pyridylalanín, Sar je sarkozín a Chg je cyklohexylglycín.
Nasledujúce zlúčeniny sú konkrétnymi príkladmi konjugátu oligopeptidu a deacetylvinblastínu podľa predloženého vynálezu:
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser (sekv. č.: 85) J
C-koniec
CHo O i
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser Ser-Chg-GIn-Ser Ser x (sekv. č.: 86)
C-koniec
I
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-N (sekv. č.: 87) /
C-koniec
-25O O X Ac-4-trans-L-H -Ser-Ser-Chg-GIn-SerVal x (sekv. č.: 88) /
C-koniec
ΟΗ
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser Chg-GIn(sekv. č.: 89)
I x/w*
Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-N (sekv. č.: 90) /
C-koniec
I %A/V*
(sekv. č.: 92)
-26Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-SerChg-Gln-Ser-Val (sekv. č.: 93) /
CH3
C-koniec
C-koniec
CH3 alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo optické izoméry.
Oligopeptidy, peptidové podjednotky a peptidové deriváty (tiež nazývané peptidy) podľa predloženého vynálezu sa môžu syntetizovať z aminokyselín, z ktorých sa skladajú, bežnými technikami peptidovej syntézy, výhodnej technológiou na pevnej fáze. Peptidy sa potom purifikujú kvapalnou chromatografiou s vysokou presnosťou na reverznej fáze (HPLC).
Opísané sú štandardné metódy peptidovej syntézy, napríklad v nasledujúcich prácach: Schroeder a iný, The Peptides, Zv. I, Academic Press 1965; Bodansky a iný, Peptide Synthesis, Interscience Publishers,1966; McOmie (ed.) Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press, 1973; Barany a iný, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology 2, kapitola 1, Academic Press; I980 a Stewart a iný, Solid Phase Peptide Synthesis , druhé vydanie, Pierce Chemical Company,1984. Týmto odkazom sú techniky týchto prác zahrnuté do prihlášky vynálezu.
Vhodná substituovaná cyklická aminokyselina, ktorá má hydrofilný substituent, ktorý môže byť zavedený do nárokovaných konjugátov technikami štandardnej peptidovej syntézy, je samotná buď komerčne dostupná, alebo je možné ju jednoducho syntetizovať technikami dobre známymi v oblasti alebo technikami, ktoré sú tu opísané. Takže syntézy vhodných substituovaných prolínov sú opísané v nasledujúcich článkoch a tu citovaných publikáciách: J. Ezquerra a iný, J. Org. Chem. 60: 2925-2930 (1995); P. Gill a W. D. Lubell, J. Org. Chem., 60:
-272658-2659 (1995); a M. W. Holladay a iný, J. Med. Chem., 34: 457-461 (1991). Týmto odkazom sú opisy týchto prác zahrnuté do prihlášky vynálezu.
Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín podľa vynálezu zahŕňajú bežné, netoxické soli zlúčenín podľa vynálezu vytvorené, napr. s netoxickými anorganickými alebo organickými kyselinami. Takéto bežné netoxické soli zahŕňajú napríklad soli, ktoré sú odvodené od anorganických kyselín ako, kyselina chlorovodíková, bromovodiková, sírová, sulfámová, fosforečná, dusitá a podobne, a soli pripravené z organických kyselín ako kyselina octová, propiónová, jantárová, glykolová, stearová, mliečna, jablčná, vinná, citrónová, askorbová, pamoová, maleátová, hydroxymaleátová, fenyloctová, glutámová, benzoová, salicylová, sulfanilínová, 2-acetoxybenzoová, fumarová, toluénsulfónová, metánsulfónová, etándisulfónová, oxálová, isetiónová, trifluorooctová a podobne.
Konjugáty podľa predloženého vynálezu, ktoré obsahujú oligopeptid zahŕňajúci PSA štiepiace miesto a vinea alkaloidové cytotoxické činidlo, sa môžu syntetizovať technikami, ktoré sú dobre známe v oblasti medicínskej chémie. Napríklad hydroxylová časť vinea liečiva môže byť bežným spôsobom pripojená na oligopeptid na karboxylovom konci, tak, aby sa vytvorila esterová väzba. Na tento účel je možné použiť reakčné činidlá, ako napríklad kombináciu HBTU a HOBT, kombináciu BOP a imidazol, kombináciu DCC a DMAP a podobne. Karboxylová kyselina sa môže aktivovať aj vytvorením nitrofenylového esteru alebo podobne, a môže reagovať v prítomnosti DBU (1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-én).
Pre priemerného odborníka v oblasti je zrejmé, že pri syntéze zlúčenín podľa vynálezu môže byť potrebné chrániť rôzne reaktívne funkčné skupiny východiskových zlúčenín a medziproduktov, zatiaľ čo prebieha reakcia na iných častiach molekuly. Po ukončení požadovaných reakcií, alebo v akomkoľvek želateľnom čase sa takéto ochranné skupiny normálne odstránia, napríklad hydrolytickými alebo hydrogenolytickými prostriedkami. Takéto ochranné a deprotekčné kroky sú v organickej chémii bežné. Publikácie Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, vyd., Plénum Press, NY, NY (1973); a Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, vyd., John Wiley & Sons, NY, NY (1981) opisujú ochranné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu.
-28Len ako príklad sú uvedené užitočné amino-ochranné skupiny, ktoré môžu zahŕňat CpCío alkanoylové skupiny, ako formyl, acetyl, dichloroacetyl, propionyl, hexanoyl, 3,3-dietylhexanoyl, γ-chlorobutryl, a podobne; alkoxykarbonylové a C5-C15 aryloxykarbonylové skupiny ako terc-butoxykarbonyl, benzyloxykarbonyl, alyloxykarbonyl, 4-nitrobenzyloxykarbonyl, fluorenylmetyloxykarbonyl a cinamoyloxykarbonyl; halogén-ÍCrC^J-alkoxykarbonyl ako 2,2,2-trichlóretoxykarbonyl; a Cr C15 arylalkylové a alkenylové skupiny ako benzyl, fenetyl, alyl, trityl, a podobne. Inými bežne používanými amino-ochrannými skupinami sú skupiny, ktoré vytvárajú enamíny pripravené s β-keto-estermi ako metyl alebo etylacetoacetát.
Užitočné karboxy-ochranné skupiny môžu napríklad zahŕňať C1-C10 alkylové skupiny ako metyl, ŕerc-butyl, decyl; halogén-CpCw alkyl ako 2,2,2-trichlóretyl, a 2jódetyl; C5-C15 arylalkyl ako benzyl, 4-metoxybenzyl, 4-nitrobenzyl, trifenylmetyl, difenylmetyl; C1-C10 alkanoyloxymetyl ako acetoxymetyl, propionoxymetyl a podobne; a skupiny ako fenacyl, 4-halogénfenacyl, alyl, dimetylalyl, tri-(C1-C3 alkyl)silyl, ako trimetylsilyl, β-ρ-toluénsulfonyletyl, (3-p-nitrofenyltioetyl, 2,4,6trimetylbenzyl, (3-metyltioetyl, ftalimidometyl, 2,4-dinitro-fenylsulfenyl, 2-nitrobenzhydryl a príbuzné skupiny.
Podobne, užitočné hydroxy-ochranné skupiny môžu napríklad zahŕňať formylovú skupiny, chlóracetylovú skupinu, benzylovú skupinu, benzhydrylovú skupinu, tritylovú skupinu, 4-nitrobenzylovú skupinu, trimetylsilylovú skupinu, fenacylovú skupinu, ŕerc-butylovú skupinu, metoxymetylovú skupinu, tetrahydropyranylovú skupinu, a podobne.
Čo sa týka výhodného uskutočnenia oligopeptidu v kombinácii s deacetylvinblastínom, nasledujúce reakčné schémy ilustrujú syntézu konjugátov podľa predloženého vynálezu.
Reakčná schéma I ilustruje prípravu konjugátov oligopeptidov podľa predloženého vynálezu a vinea alkaloidového cytotoxického činidla vinblastínu, pričom kyslík 4-deacetylvinblastínu sa pripája na C-koniec oligopeptidu. Hoci na vytvorenie takýchto konjugátov môžu byť použité iné postupnosti reakcii, zistilo sa, že počiatočné pripojenie jednej aminokyseliny na 4-kyslik a následné pripojenie
-29ostávajúcej oligopeptidovej sekvencie na túto aminokyselinu, je výhodným spôsobom. Zistilo sa tiež, že vo finálnom spojovacom kroku je možné namiesto HOAt použiť 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazín (ODHBT).
Reakčná schéma II ilustruje prípravu konjugátov oligopeptidov podľa predloženého vynálezu, pričom sa používa hydroxyalkanolylová kyselina ako spojovník medzi vinea liečivom a oligopeptidom.
Reakčná schéma I
OH
vinblastín CO2CH3
deacetylvinblastín ;CH3
-30Reakčná schéma I (pokračovanie)
OH
CO2CH3
OH
CO2CH3 N-koniec
-31Reakčná schéma II
N-chránená aminokyselina + DMAP/ DCC
HO- (CH2)uW(CH2)u - CO^enzyl //
N-chránená aminokyselina - O- (CH2)UW(CH2)U - CO^enzyl
CO2CH3
OH
-32Reakčná schéma II (pokračovanie)
OH
C-koniec
N-koniec
-33Konjugáty oligopeptidu a cytotoxického činidla podľa vynálezu sú užitočné na liečbu chorôb, pre ktoré sú typické abnormálne bunky alebo abnormálna proliferácia buniek, či už malígna alebo benígna, pričom tieto bunky sa vyznačujú tým, že vylučujú enzymaticky aktívny PSA. Takéto ochorenia zahŕňajú, ale nie sú obmedzené na rakovinu prostaty, benígnu hyperpláziu prostaty, rakovinu prostaty, ktorá vytvára metastázy, rakovinu prsníka a podobne.
Konjugáty oligopeptidu a cytotoxického činidla podľa vynálezu sa podávajú pacientovi vo forme farmaceutického prostriedku, ktorý obsahuje konjugát podľa predloženého vynálezu a farmaceutický prijateľný nosič, vehikulum alebo riedidlo. Tu používaný výraz “farmaceutický prijateľný” znamená také činidlá, ktoré sú užitočné na liečbu alebo diagnostiku u teplokrvných živočíchov, zahŕňajúc, napríklad, ľudí, kone, ošípané, hlodavce, psov, mačky a iných cicavcov ako aj vtáky alebo iné teplokrvné živočíchy. Výhodný spôsob podávania je parenterálne intravenóznou, intramuskulárnou, podkožnou, intraperitoneálou alebo intralymfatickou cestou. Takéto prostriedky sa dajú pripraviť použitím nosičov, riedidiel alebo vehikúl, ktoré sú pre priemerného odborníka v oblasti bežné. V tomto ohľade pozri napr. Remington's Pharmaceutical Sciences, 16. vyd., 1980, Mack Publishing Company, vydavateľ Osol a ďalší. Takéto prostriedky môžu zahŕňať proteíny, ako sérové proteíny, napríklad ľudský sérový albumín, tlmivé roztoky alebo tlmivé látky, ako fosfáty, iné soli alebo elektrolyty a podobne. Vhodné riedidlá môžu zahŕňať napríklad sterilnú vodu, izotonický fyziologický roztok, riedenú vodnú dextrózu, polyhydrický alkohol alebo zmesi takýchto alkoholov, napríklad glycerín, propylénglykol, polyetylénglykol a podobne. Prostriedky môžu obsahovať konzervačné látky ako fenetylalkohol, metyl a propyl parabény, timerozal a podobne. Ak je to želateľné, môže prostriedok obsahovať približne 0,05 až približne 0,20 percent hmotnostných antioxidantu ako metabisulfid sodný alebo bisulfid sodný.
Tu používaný výraz “prostriedok” je mienený tak, že zahŕňa produkt, ktorý obsahuje špecifické zložky v konkrétnych množstvách, ako aj akýkoľvek produkt, ktorý je priamym alebo nepriamym výsledkom kombinácie špecifických zložiek v špecifických množstvách.
-34Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilných vodných roztokov, ktoré je možné podať injekčné. Medzi prijateľné vehikulá a rozpúšťadlá, ktoré môžu byť použité, patrí voda, Ringersov roztok a izotonický roztok chloridu sodného.
Sterilnými injekčnými prípravkami môžu byť aj sterilné injektovateľné mikroemulzie oleja vo vode, v ktorých je účinná zložka rozpustná v olejovej fáze. Účinná zložka môže byť napríklad najprv rozpustená v zmesi sójového oleja a lecitínu. Olejový roztok sa potom zavedie do zmesi vody a glycerolu a spracuje sa tak, aby vytvoril mikroemulziu.
Injekčné roztoky alebo mikroemulzie sa môžu zavádzať do pacientovho krvného riečišťa lokálnou bolusovou injekciou. Alternatívne, môže byť výhodné podávať roztok alebo mikroemulziu takým spôsobom, aby sa udržiavala konštantná cirkulujúca koncentrácia danej zlúčeniny. Na udržanie takejto konštantnej koncentrácie je možné použiť kontinuálne intravenózne dodávacie zariadenie. Príkladom takéhoto zariadenia je Deltec CADD-PLUSTM model 5400 intravenózna pumpa.
Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilnej injekčnej vodnej alebo olejovej suspenzie na intramuskulárne a podkožné podanie. Takáto suspenzia môže byť vytvorená v súlade so známym stavom techniky použitím takých vhodných dispergačných alebo zmáčacích činidiel a suspendačných činidiel, ktoré boli uvedené vyššie. Sterilným injekčným prípravkom môže byť aj sterilný injekčný roztok alebo suspenzia v netoxickom parenterálne prijateľnom riedidle alebo rozpúšťadle, napríklad roztok v 1,3-butándiole. Navyše sa bežne používajú sterilné, fixované oleje ako rozpúšťadlo alebo suspenzné médiu. Na tento účel môže byť použitý akýkoľvek fixovaný olej bez chuti, vrátane syntetických mono- alebo diglyceridov. Pri príprave injekcií našli použitie aj mastné kyseliny ako kyselina olejová.
Na intravenózne podanie bude prostriedok výhodne pripravený tak, aby množstvo podané pacientovi bolo v rozsahu približne 0,01 až približne 1 g konjugátu. Výhodne bude podávané množstvo v rozsahu približne 0,2 g až približne 1 g konjugátu. Konjugáty podľa vynálezu sú účinné v závislosti od množstva faktorov, ako napríklad chorobný stav, ktorý sa má liečiť, alebo na tom, aký
-35biologický efekt sa má modifikovať, na spôsobe podávania konjugátu, na veku, hmotnosti a stave pacienta, ako aj na iných faktoroch, ktoré musia byť stanovené ošetrujúcim lekárom. Takže množstvo podávané akémukoľvek pacientovi je potrebné stanoviť na individuálnom základe.
Pre priemerného odborníka v oblasti bude zrejmé, že hoci sú v nasledujúcich príkladoch uvedené špecifické reakčné činidlá a reakčné podmienky, je možné uskutočniť určité modifikácie, ktoré spadajú do rozsahu predloženého vynálezu. Takže nasledujúce prípravky a príklady sú poskytnuté na lepšiu ilustráciu vynálezu a nelimitujú ho
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1 des-Acetylvinblastín-4-O-(/\/-Acetyl-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Prol ester
Krok A: Príprava 4-cfes-Acetylvinblastínu
Vzorka 2,40 g (2.63 mmol) vinblastínsulfátu (Sigma V-1377) sa rozpustila pod N2 v 135 ml absolútneho metanolu a aplikovalo sa 45 ml bezvodného hydrazínu a roztok sa miešal pri 20 až 25 °C počas 18 hodín. Reakčná zmes sa evaporovala na silnú pastu, ktorá sa rozdelila medzi 300 ml CH2CI2 a 150 ml nasýteného NaHCO3. Vodná vrstva sa premyla s 2100mi podielmi CH2CI2l a každá z 3 CH2CI2 vrstiev sa spätne premyla so 100 ml každého z roztokov H2O (2X) a nasýtený NaCI (1X). Spojené organické vrstvy sa vysušili na bezvodnom Na2SO4 a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve kroku ako šedobiela kryštalická tuhá látka. Tento materiál sa uskladnil pri 20 °C až do použitia.
Krok B: Príprava 4-ctes-Acetylvinblastín-4-O-(prolyl) esteru
Vzorka 804 mg ( 1,047 mmol) 4-des-acetylvinblastínu sa rozpustila v 3 ml CH2CI2 a 18 ml bezvodného pyridinu pod dusíkom, a pôsobilo sa na ňu 1,39 g
-36chloridu kyseliny Fmoc-prolínovej (Fmoc-Pro-CI, Advanced Chemtech) a zmes sa miešala 20 hodín pri 25 °C. Keď analýza prostredníctvom HPLC odhalila prítomnosť nezreagovaného východiskového des-acetylvinblastínu, pridalo sa ďalších 0,50 g Fmoc-Pro-CI a miešalo sa ďalších 20 hodín, aby sa ukončila reakcia. Pridala sa voda (približne 3 ml), aby zreagovala s nadbytkom chloridu kyseliny, a roztok sa potom evaporoval do sucha a rozdelil sa medzi 300 ml EtOAc a 150 ml nasýteného NaHCO3, a nasledovalo dvakrát premývanie s nasýteným NaCI. Po vysušení (Na2S04) sa rozpúšťadlo odstránilo za zníženého tlaku, pričom výsledkom bol oranžovo-hnedý zvyšok, ku ktorému sa pridalo 30 ml DMF a 14 ml piperidinu a po 5 minútach sa roztok evaporoval za zníženého tlaku, čím vznikol oranžovo-žltý polotuhý zvyšok. Po vysušení in vacuo počas približne 1 hodiny, sa k tomuto materiálu pridalo približne 200 ml H2O a 100 ml éteru, potom po kvapkách nasledovala ľadová HOAc s premiešavaním a sonifikáciou, až kým nenastalo úplné rozpustenie a vodná vrstva dosiahla stabilné pH 4,5-5,0 (pH na zvlhčenom papieri bolo v rozsahu 4 až 6). Vodná vrstva sa potom premyla s 1 100-ml podielom éteru a každá éterová vrstva sa spätne premyla s 50 ml H2O. Spojené vodné vrstvy sa podrobili preparatívnej HPLC v 2 dieloch Waters C4 Delta-Pak kolóny 15 μΜ 300A (A = 0,1% TFA/H2O; B = 0,1% TFA/CH3CN), elučný gradient 95 -> 70% A/70 min. Zo zozbieraných frakcií sa po koncentrácii a lyofilizácii získala zlúčenina uvedená v názve kroku.
Krok C: /V-Acetyl-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-WANG-živica
Ochranný peptid sa syntetizoval vychádzajúc z 0,5 mmol (0,61 g) FmocSer(t-Bu)-WANG živice v množstve 0,82 mmol/g, na ABI modeli 430A peptidového syntezátora, ktorý bol prispôsobený na syntézu na základe Fmoc/t-butylu. Postup využíval 2-násobný nadbytok (1,0 mmol) každej z nasledujúcich ochranných aminokyselín: Fmoc-Ser(t-Bu)-OH, Fmoc-GIn-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-4-trans-LHyp-OH; a kyselina octová (dvojité párovanie). Počas každého párovacieho cyklu sa Fmoc ochranná skupina odstránila použitím 20% piperidinu v A/-metyl-2pyrolidinóne (NMP), nasledovalo premývanie s NMP. Párovanie sa dosiahlo
-37použitím DCC a HOBt aktiváciou v NMP. Pri ukončovaní syntézy sa peptidová živica vysušila, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve kroku.
Krok D: N-Acetyl-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser- OH
Jedna 0,5-mmol séria vyššie uvedenej peptidovej živice sa rozsuspendovala v 25 ml TFA, nasledovalo pridanie 0,625 ml vody a 0,625 ml triizopropylsilánu, potom sa reakčná zmes miešala pri 25 °C počas 2,0 hodín. Štiepiaca zmes sa prefiltrovala a tuhé látky sa premyli s TFA, rozpúšťadlá sa odstránili z filtrátu za zníženého tlaku a zvyšok sa rozomlel s éterom, čím vznikla slabožltá tuhá látka, ktorá sa izolovala filtráciou a vysušením in vacuo, čím vznikla zlúčenina uvedená v názve kroku.
HPLC podmienky, systém A:
Kolóna... Vydac 15 cm #218TP5415, C18
Elučné činidlo... Gradient (95%A --> 50%A) počas 45 min. A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/acetonitril
Prietok... 1,5 ml/min.
Vysoká rozlíšiteľnosť ES/FT-MS: 789,3
Krok E: ctes-Acetylvinblastín-4-O-(A/-Acetyl-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerSer-Pro) ester
Vzorky 522 mg (0,66 mmol) peptidu z kroku D a 555 mg (približne 0.6 mmol) 4-des-Acetylvinblastín 4-0-(Prolyl) esteru z kroku B, pripravené ako bolo opísané vyššie, sa rozpustili v 17 ml DMF pod dusíkom. Potom sa pridalo 163 mg (1,13 mmol) 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (HOAt) a pH sa nastavilo na 6,5 až 7 (pH navlhčeného papiera bolo v rozsahu 5 až 10) s 2,4,6-kolidínom, nasledovalo ochladenie na 0 °C a pridalo sa 155 mg (0,81 mmol) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3etylkarbodiimid hydrochloridu (EDC). Miešanie pokračovalo pri 0 °C, až kým sa neukončilo párovanie, čo bolo monitorované analytickou HPLC (A = 0,1 % TFA/H2O; B = 0.1 % TFA/CH3CN), pričom pH sa udržiavalo na 6,5 až 7 periodickým
-38pridávaním 2,4,6-kolidínu. Po 12 hodinách sa reakcia podnietila pridaním približne 4 ml H2O a po hodinovom miešaní sa reakčná zmes zakoncentrovala do malého objemu in vacuo a rozpustila sa v približnel 50 ml 5% HOAc a spojené vodné vrstvy sa podrobili preparatívnej HPLC v 2 podieloch na Waters C4 Delta-Pak kolóne 15 μΜ 300A (A = 0,1 % TFA/H2O; B = 0,1 % TFA/CH3CN), gradientová elúcia 95 -> 65% A / 70 min. Homogénne frakcie obsahujúce vyeluovaný produkt (zhodnotený prostredníctvom HPLC, systém A, 95 -> 65% A/30 min) z oboch sérií sa zlúčili, zakoncentrovali sa na objem približne 50 ml a prešli cez približne 40ml AG4X4 iónovú výmennú živicu (acetátový cyklus), nasledovalo vysušenie vymrazením, čím vznikla zlúčenina uvedená v názve kroku vo forme lyofilizovaného prášku.
Vysoké rozlíšenie ES/FT-MS: 1637,0
Príklad 1A des-Acetylvinblastín-4-O-(/V-Acetyl-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro) ester acetát
Vzorka 4,50 g (3,7 mmol) 4-O-(prolyl)des-acetylvinblastínovej TFA soli, ktorá bola pripravená spôsobom opísaným v príklade 1, kroku B, sa rozpustila v 300 ml DMF pod dusíkom, a roztok sa ochladil na 0 °C. Potom sa pridalo 1,72 g (10,5 mmol) 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazínu (ODHBT) a pH sa nastavilo na 7,0 (pH navlhčeného papiera bolo v rozmedzí 5 až 10) s /V-metylmorfolínom (NMM), nasledovalo pridanie 4,95 g (5,23 mmol) A/-acetyl-heptapeptidu podľa príkladu 1, krok D, po častiach, aby sa umožnilo úplné rozpustenie pred každým pridávaním. pH sa opäť nastavilo na 7,0 s NMM, a pridalo sa 1,88 g (9,8 mmol) 1(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidového hydrochloridu (EDC), nasledovalo miešanie roztoku pri 0 až 5 °C, až kým sa neukončilo párovanie, čo bolo monitorované prostredníctvom analytickej HPLC (systém A), pričom pH sa udržiavalo na približne 7 periodickým pridávaním NMM. Analýza ukázala, že hlavnej zložke v 26,3 minúte retenčného času predchádza minoritná zložka (približne 10%) v 26,1 minúte, ktorá bola identifikovaná ako D-Ser izomér zlúčeniny uvedenej v
-39názve kroku. Po 20 hodinách sa reakcia povzbudila pridaním 30 ml H2O a po jednohodinovom miešaní sa in vacuo zakoncentrovala a rozpustila v približne 500 ml 20% HOAc a aplikovala sa HPLC v 12 podieloch na Waters C 18 Delta-Pak kolóne 15 μΜ 300A (A = 0,1 % TFA/H2O; B = 0,1 % TFA/CH3CN), gradientová elúcia 85 --> 65% A / 90 min, pri rýchlosti prietoku 80 ml/min.
Homogénne frakcie (zhodnotené prostredníctvom HPLC, systém C) predstavujúce približne jednu štvrtinu celkovej série sa zhromaždili a zakoncentrovali na objem približne 150 ml a prepasážovali sa cez približne 200 ml Bio-Rad AG4X4 iónovej výmennej živice (acetátový cyklus), výsledkom následného sušenia vymrazením bola acetátová soľ zlúčeniny uvedenej v názve kroku vo forme lyofilzovaného prášku: retenčný čas (systém A) 26,7 min, 98.9% čistota; vysoká rozlišovacia schopnosť ES/FT-MS m/e 1636,82; analýza aminokyselinového zloženia - 20 hodín, 100 °C, 6N HCI (teoretická/zistená hodnota), Ser4/3,91 (opravené), Glu 1/0,92 (Gin konvertoval na Glu), Chg 1/1,11, Hyp 1/1,07, Pro 1/0,99, obsah peptidu 0,516 mmol/mg.
Ďalšie kombinovanie homogénnych frakcii a purifikácia z vedľajších frakcií, ktoré boli spracovávané ako bolo uvedené vyššie cez približne 500 ml iónovej výmennej živice, vyústilo do ďalšieho množstva zlúčeniny uvedenej v názve kroku. HPLC podmienky, systém A:
Kolóna... Vydac 15 cm #218TP5415, C 18
Prietok... 1,5 ml/min.
Elučné činidlo... Gradient (95%A --> 50%A) počas 45 min. A = 0,1 % TFA/H2O, B = 0,1 % TFA/acetonitril
Vlnová dĺžka... 214 nm, 280 nm
HPLC podmienky, systém C:
Kolóna... Vydac 15 cm #218TP5415, C18
Prietok... 1,5 ml/min.
Elučné činidlo... Gradient (85%A -> 65%A) počas 30 min. A = 0,1% TFA/H2O, B = 0,1% TFA/acetonitril
Vlnová dĺžka... 214 nm,280 nm
-40Tabuľka 1 uvádza iné konjugáty peptidu a vinea liečiva, ktoré boli pripravené spôsobom opísaným v príkladoch 1 a 1A, pričom sa využívali príslušné aminokyselinové zvyšky a blokovanie skupinovej acylácie. Ak nie je uvedené inak, bola pripravená a testovaná acetátová soľ.
Tabuľka 1
Sekv. č. Peptid-vin konjugát Čas v min na 50% poštiepenie substrátu prostredníctvom York PSA
95 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)dAc-VIN 13
96 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 1 h =8 %
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ-SP)-dAc-VIN 80
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChQ-S-P)-dAc-VIN 110
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChg QS-P)-dAc-VIN 80
97 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQ(dS)- P)-dAc-VIN 3 h = 0 %
93 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-laktyl)-dAc-VIN 10 (mierna degradácia)
94 4-O- Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-laktyl) -dAc-VIN 7 (stabilný)
88 4-O- Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-glykolyl)-VIN 8
85 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQS -Glycín)-(dAc)-VIN 30
86 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Sar)-(dAc)-VIN 32
84 4-O-(Ac-4-trans-L-HySSChgQSSPro)- (dAc)-VIN 17
87 4-0-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(d)-Pro)-(dAc)-VIN 1 h. = 34%
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 55
99 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 22
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-P)-dAc-VIN 15
101 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S(dS)-4-trans-L-Hyp)- dAc-VIN 1 h = 12%
102 (4-O)-Ac-(4-trans-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)-VIN 35
103 Ac-4-trans-L-HypSSChgQS-(4-O-Ala)-(dAc) -VIN 23 (prod konvertuje na 4- O-A-dAc-VIN)
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-(4-O-glykolyl)-VIN 12
105 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)- dAc -VIN 15
102 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-lactyl)- (dAc)-VIN 10
106 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 22
107 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-Vindezín 12
108 Ac-AbuSSChgQ-S(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 60
109 Ac-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 7
110 Ac-AbuSSChgQ-(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 1 h = 0 %
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SChg-(4-O- lactyl)-dAc-VIN 14
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-P)-Vindezín 22
112 4-O-[Ac-SSChgQ-S(dS)- 4-trans-L-Hyp]- dAc-VIN 1 h =14 %
113 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-(dS)SP]- dAc-VIN 6h(10XENZ)
114 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)SSP]dAc-VIN 10XENZ o/n = 0%
115 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)(dS)SP]-dAc-VIN 10X ENZo/n = 0%
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 15
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-trans-L-Hyp]-dAc-VIN 15
118 4-O-[Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 39 n = 2
119 4-O-[Ac-SChgQSS-Aib-P]-dAc-VIN 15, 23
120 4-O-[A.c-SChgQSS(N-Me-Ala)]-dAc-VIN 30
121 4-O-[Ac-SChgQS-Aib-P)-dAc-VIN 1 h = 8%
122 4-O-[(2-OH)Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 1 h = 4%
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip)-dAc-VI N 15
124 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Pip)- dAc-VIN 13
125 4-O-[Ac-SChgQSS-(N-Me-dA)]-dAc-VIN 1 h = 26%
4-trans-L-Hyp je ŕrans-4-hydroxy-L-prolín, kde n > 1; hodno ta je priemerná
Príklad 4
Stanovenie rozoznávania konjugátov oligopeptidu a vinea liečiva voľným PSA
-42Konjugáty pripravené ako bolo opísané v príklade 3 sa jednotlivo rozpustili v PSA štiepiacom tlmivom roztoku (50 mM tris(hydroxymetyl)aminometán pH 7,4, 140 mM NaCI) a roztok sa pridal k PSA v molárnom pomere 100 ku 1. Alternatívne používaným PSA štiepiacim tlmivým roztokom bol 50 mM tris(hydroxymetyl)aminometán pH 7,4, 140 mM NaCI. Reakcia sa ukončovala v rôznych reakčných časoch pridaním kyseliny trifluóroctovej (TFA) do finálnej koncentrácie 1 % (objem/objem). Alternatívne sa reakcia ukončovala s 10 mM ZnCI2. Ukončená reakcia sa analyzovala prostredníctvom HPLC na reverznej fázovej kolóne C18 použitím vodného 0,1 % TFA/acetonitrilového gradientu. Vypočítal sa čas (v minútach) potrebný na 50% poštiepenie uvedených konjugátov oligopeptidu a cytotoxického činidla s enzymaticky aktívnym voľným PSA. Výsledky sú uvedené v tabuľke 1.
Príklad 5
In vitro test cytotoxicity peptidových derivátov vinea liečiv
Cytotoxicity štiepiteľných konjugátov oligopeptidu a vinea liečiva, ktoré sa pripravili ako bolo opísané v príklade 3, voči línii buniek, o ktorých je známe, že sú usmrcované nemodiftkovaným vinea liečivom, sa stanovili Alamar Blue testom. Konkrétne, bunkové kultúry LNCap prostatických nádorových buniek, Colo320DM bunky (označené C320) alebo T47D bunky sa v 96 jamkových platniach nariedili s médiom obsahujúcim rôzne koncentrácie daného konjugátu (konečný objem v jamke platne bol 200 μΙ). Colo320DM bunky, ktoré neexprimujú voľný PSA, boli použité ako kontrolná bunková línia na stanovenie toxicity nezaloženej na žiadnom mechanizme. Bunky sa inkubovali 3 dni pri 37 °C, a do testovacej jamky sa pridalo 20 μΙ Alamar Blue. Bunky sa ďalej inkubovali a testovacie platne sa snímali EL-310 ELISA snímačom pri duálnych vlnových dĺžkach 570 a 600 nm po 4 a 7 hodinách po pridaní Alamar Blue. Potom sa vypočítalo relatívne percento prežívania pri rôznych koncentráciách testovaného konjugátu versus kontrolné (bez konjugátu)
-43kultúry a stanovilo sa ECS0. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2. Ak nie je uvedené inak, testovala sa acetátová soľ konjugátu.
Tabuľka 2
Sekv. č. Peptid-VIN konjugát (Cytotoxické činidlo) Usmrtenie LNCaP buniek po 72 h (48 h) ECS0 (μΜ)
VINBLASTlN 0,5 (Colo320DM = 0,5)
(4-O-4-trans-L-Hyp)-dAc-VI N 0,6(Colo320DM = 1,1) n=2
4-O-glycí n-(dAc)-VI N 0,3(Colo320DM =1,8)
4-O-sarkozyl-(dAc)-VI N 1,3(Colo320DM =1,8)
95 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS-4-trans-L- Hyp)-dAc-VIN 16,3(Colo320DM=13,1)
96 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 47,9(Colo320DM=83.9)
96 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQS-Pro)-(dAc)-VIN > 16(Colo320DM=26) v 5% FBS
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 9,7(Colo320DM=14,5) n=2
90 II >5(Co10320DM =23,8) v 0,5% FBS
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 11,9(Coio320DM=52,5)
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQS-P)-dAc-VIN 5,8(Colo320DM=8,0) PS
93 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-laktyl)-dAc-VIN 1,1(Colo320DM=13,3)
94 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-laktyl)-dAc- VIN 3,1(Colo320DM=8,1)
88 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-glykolyl)-VIN 4,1(Colo320DM=13,0)
86 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Sar)-(dAc)- VIN 4,1(Colo320DM=13,0)
84 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSSPro)- (dAc)-VIN 3,0(Colo320DM=12) n=3
87 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(d)-Pro)(dAc)-VIN 4,1 (Colo320DM = 8,1)
85 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSGIy)-(dAc)-VIN 9,3(Colo320DM=13,5) n = 2
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 16,3(Colo320DM=16,3)
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 6,8(Colo320DM =8,1) n = 2
4-O-leucyl-(dAc)-VIN 4,5 (Colo320DM=4,5)
4-O-Abu-(dAc)-VIN, racemická zmes 3,8 (Colo320DM=5,5)
4-O-Abu-(dAc)-VIN, I izoforma 3,9 (Colo320DM=2,3)
102 (4-O)-Ac-(4-trans-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)- VIN 40 (Colo320DM=86.7)SF; 50 (97) 0,5 % FBS
4-O-(prolyl)-dAc-VIN 0,7 (Colo320DM=4,1 ) n=2
(4-O-Phe)-(dAc)-VIN 3,8 (Colo320DM=2,2)
(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 0,6 (Colo320DM=4,2)
103 Ac-4-trans-L-HypŠSChgQS-(4-O-Ala)- (dAc)-VIN 12,5 (Colo320DM=32,5)
4-hydroxyacetyl-VIN=4-O-glycolyl-dAc-VIN 1,3 (Colo320DM=3,3)
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-(4-0-glykolyl)- VIN 4,1(Colo320DM =4,1
4-0-(d)-prolyl-(dAc)-VIN ester 2,0(Colo320DM =4,1)
Chg-(4-0-Glycolyf)-VIN
105 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)-(dAc)- VIN 12 (Colo320DM=12)
102 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-laktyl)-(dAc)- VIN 1,1(Colo320DM=13,3)
4-O-(V-laktyl)-dAc-VIN 1,3 (Colo320DM=2,6)
4-O-(L-laktyl)-dAc-VIN 0,7 (Colo320DM=2,0)
4-0-(Chg-laktyl)-dAc-VIN 4,1 (Colo320DM=8,4)
104 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-laktyl)-dAc- VIN 8,1 (Colo320DM=27,9) PS
106 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-Hyp)-dAc-VIN 6,8 (Colo320DM = 8,1) n=2
107 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-Vindezín 12,5 (Colo320DM >73)
108 Ac-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 12,8(Colo320DM=28,4)
Prolyl-Vindezin 0,3(Colo320DM =6,9)
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-P)-Vindezín 32,5(Colo320DM >73)
4-O-(SP)-dAc-VIN 0,1(Colo320DM =0,3
4-O-(SSP)-dAc-VIN 2,0(Colo320DM =14,5)
114 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)SSP]-dAc-VIN 12,2(Colo320DM=43,7)
115 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)(d5)SP]-dAc- VIN 16,3(Colo320DM=47,7)
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 16,3(Colo320DM=47,7)
4-O-pipekolyl-dAc-VIN 0,7(Colo320DM=0,7)
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-trans-L-Hyp]-dAc-VIN 5,6(Colo320DM=5,6)
4-O-N-metylalanyl-dAc-VIN 2,9(Colo320DM=2,9)
118 4-O-(Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 0,8(Colo=3,0)
119 4-O-[Ac-SChgQSS-Aib-P)-dAc-VI N > 25(Colo320DM >25)
120 4-O-[Ac-SChgQSS(N-Me-Ala))-dAc-VIN 2,3(Colo320DM=3,1)
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip]-dAc-VIN 80(Colo320DM >75)
124 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Pip]-dAc- VIN 7,5(Colo320DM= 60)
4-O-[N-Me-dA)-dAc-VIN 1,0(Colo320 DM=1,7)
Pip je kyselina pipekolínová; Sar je sarkozín; Chg je cyklohexylglycín; Abu je kyselina 2-aminobutyrová, Aib je kyselina 2-aminoizobutyrová.
Príklad 6
In vivo účinnosť konjugátov peptidu a cytoxického činidla
LNCaP.FGC alebo DuPRO-1 bunky sa trypsinovali, rozsupsendovali sa v rastovom médiu a centrifugovali sa 5 minút pri 200 x g. Bunky sa resuspendovali v sére bez α-MEM a spočítali sa. Príslušný objem tohto roztoku obsahujúci požadovaný počet buniek sa potom preniesol do kužeľovitej centrifugačnej skúmavky, scentrifugoval sa ako je uvedené vyššie a rozsuspendoval v príslušnom objeme studenej zmesi α-MEM-Matrigel v pomere 1:1. Suspenzia sa udržiavala na ľade, až kým sa neinokulovala zvieratám.
Harlan Sprague Dawley samčeky nahých myší (10 až 12 týždňov staré) sa kontrolovali bez anestézy a inokulovali sa s 0,5 ml bunkovej suspenzie na ľavej slabiny podkožnou injekciou použitím 22G ihly. Myšiam sa podalo buď približne 5 x 105 DuPRO buniek alebo 1,5 x 107 LNCaFGC buniek.
Po inokulácii tumorových buniek sa myši ošetrovali podľa jedného z dvoch protokolov.
-46Protokol A:
Jeden deň po inokulácii sa zvieratám podala dávka v objeme 0,1 až 0,5 ml testovaného konjugátu, vinea liečiva alebo vehiklovej kontroly (sterilná voda). Dávky konjugátu a vinea liečiva boli najprv maximálne neletálne dávky, ale následne sa mohli titrovať nižšie. Prvé dávky sa podávali v 24 hodinových intervaloch 5 dní. Po
10. dňoch sa odobrala vzorka krvi myší a stanovila sa hladina PSA v sére. Rovnako sa stanovili hladiny PSA v sére v 5 až 10 dňových intervaloch. Po 5,5 týždni sa myši usmrtili, odvážili sa akékoľvek existujúce tumory a znova sa stanovila hladina PSA v sére. Na začiatku a na konci pokusu sa zvieratá odvážili.
Protokol B:
Desať dní po inokulácii buniek sa odobrali zvieratám vzorky krvi a stanovili sa hladiny PSA. Zvieratá sa potom rozdelili do skupín podľa ich hladín PSA. 14 až 15 dní po inokulácii sa zvieratám podala dávka v objeme 0,1 až 0,5 ml testovaného konjugátu, vinea liečiva alebo vehikulovej kontroly (sterilná voda). Dávky konjugátu a vinea liečiva boli najprv maximálne neletálne dávky, ale následne sa mohli titrovať nižšie. Rovnaké dávky sa podávali v 24 hodinových intervaloch 5 dní. Hladiny PSA v sére sa stanovovali v 5 až 10 dňových intervaloch. Po 5,5 týždni sa myši usmrtili, odvážili sa akékoľvek existujúce tumory a znova sa stanovila hladina PSA v sére. Na začiatku a na konci pokusu sa zvieratá odvážili.
Príklad 7
In vitro stanovenie štiepenia konjugátov endogénnymi proteázami, inými ako PSA
Krok A: Príprava proteolytických tkanivových extraktov
Všetky postupy sa uskutočňujú pri 4 °C. Príslušné zvieratá sa usmrtili a izolovali sa relevantné tkanivá a uskladnili sa v kvapalnom dusíku. Mrazené tkanivo sa rozdrtilo použitím trecej misky a mažíara a rozdrtené tkanivo sa prenieslo do Potter-Elvejeh homogenizátora a pridali sa 2 objemy tlmivého roztoku A (50 mM Tris s obsahom 1,150 KCI, pH 7,5). Tkanivo sa rozrušilo 20 ťahmi použitím najprv málo zapadajúceho tíčika a potom tesne zapadajúceho tíčika. Homogenát sa
-47centrifugoval pri 10 000 x g v kolísavom lopatkovom rotore (HB4-5), pelet sa odložil a resupernatnat sa centrifugoval pri 100 000 x g (Ti 70). Supernatant (cytoplazma) sa uschoval.
Pelet sa rozsupendoval v tlmivom roztoku B (10 mM EDTA s obsahom 1,15% KCI, pH 7,5) použitím rovnakého objemu ako bol použitý vyššie s tlmivým roztokom A. Suspenzia sa homogenizovala v dounce homogenizátore a roztok sa centrifugoval pri 100 000 x g. Supernatant sa odložil a pelet sa resuspendoval v tlmivom roztoku C (10 mM fosforečnodraselný tlmivý roztok s obsahom 0,25 M sacharózy, pH 7,4), použitím 1/2 toho objemu, ktorý bol opísaný vyššie, a homogenizoval sa v dounce homogenizátore.
Stanovil sa obsah proteínu v dvoch roztokoch (cytoplazmovom a membránovom) použitím Bradfordového testu. Odobrali sa potom testované alikvoty a zamrazili sa v kvapalnom dusíku. Alikvoty sa uskladnili pri -70 °C.
Krok B: Proteolytický štiepiaci test
V každom časovom bode sa 20 mikrogramov konjugátu peptidu a vinea liečiva a 150 mikrogramov tkanivového proteínu pripraveného ako bolo opísané v kroku A a zhodnoteného Bradfordovým testom, v reakčnom tlmivom roztoku, sa dalo do roztoku v konečnom objeme 200 mikrolitrov v tlmivom roztoku (50 mM TRIS, 140 mM NaCI, pH 7,2). Testovacie reakcie bežali 0, 30, 60, 120 a 180 minút a potom sa zastavili 9 mikrolitrami 0,1 M ZnCI2 a okamžite sa umiestnili do vriacej vody na 90 sekúnd. Reakčné produkty sa analyzovali prostredníctvom HPLC použitím VYDAC C18 15 cm kolóny v zmesi voda/acetonitril (5% až 50% acetonitril počas 30 minút).
ZOZNAM SEKVENCII <110> Merck & Co., Inc.
Brady, Stephen F.
Feng, Dong-Mei
Garsky, Vietor M.
<120> Konjugáty užitočné na liečbu rakoviny prostaty <130> 20120Y <150> 60/067,110 <151 > 1997-12-02 <160> 125 <170> FastSEQ for Windows Version 3.0 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 1
Asn Lys íle Ser Tyr Gin Ser
5 <210>2 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 2
Lys íle Ser Tyr Gin Ser
- w<210>3 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400>3
Asn Lys íle Ser Tyr Tyr Ser
5 <210>4 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 4
Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 5
Ser Tyr Gin Ser Ser
5 <210>6 <211>5 <212> PRT
-51)<213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400>6
Lys Tyr Gin Ser Ser
5 <210>7 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginín <400> 7
Xaa Tyr Gin Ser Ser
5 <210>8 <211>5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginín <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylalanín
-51<400> 8
Xaa Xaa Gin Ser Ser
5 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400>9
Tyr Gin Ser Ser <210> 10 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 10
Tyr Gin Ser Leu <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MODRES <222> (4)...(4) <223> Nie _ 52.
<400> 11
Tyr Gin Ser Leu <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklohexylglycin <400> 12
Xaa Gin Ser Leu <210> 13 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklohexylglycin <221 > MOD.RES <222> (4)...(4) <223> Nie <400> 13
Xaa Gin Ser Leu
-53<210> 14 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 14
Ser Tyr Gin Ser <210> 15 <211> 4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 15
Ser Xaa Gin Ser <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 16
Ser Tyr Gin Ser Val
5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 17
Ser Xaa Gin Ser Val
5 <210> 18 <211>5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 18
Ser Tyr Gin Ser Leu
5 <210 19 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 19
Ser Xaa Gin Ser Leu
5 <210> 20 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <400> 20
Xaa Xaa Ser Tyr Gin Ser
5 <210>21 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <400> 21
Xaa Xaa Lys Tyr Gin Ser
5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT
-'56<213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> homoarginín <400> 22
Xaa Xaa Xaa Tyr Gin Šer
5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220 <223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> homoarginín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylalanín <400 23
Xaa Xaa Xaa Xaa Gin Ser <210> 24 <211>4 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <400> 24
Xaa Tyr Gin Ser <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220 <223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400 25
Xaa Xaa Ser Xaa Gin Ser
5 <210> 26 <211>4 <212> PRT
-5f<213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> cyklická aminokyselina substituovaná s hydrofilným substituentom <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 26
Xaa Xaa Gin Ser <210> 27 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 27
Ser Ser Tyr Gin Ser Ala
5 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín
-51<400> 28
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser
5 <210> 29 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 29
Ser Ser Tyr Gin Ser Ala
5 <210> 30 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 30
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser
5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná
-GO<221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 31
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221>MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 32
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser
5 <210> 33 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 33
Ala Ser Tyr Gin Ser Ser
5
-G4 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 34
Ala Ser Xaa Gin Ser Ser
5 <210> 35 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 35
Ala Ser Tyr Gin Ser Ala
5 <210> 36 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín
-6l<400> 36
Ala Ser Xaa Gin Ser Ala
5 <210> 37 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 37
Pro Ala Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 38
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser
5
-63 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 39
Ser Ser Xaa Gin Ser Ala Pro
5 <210 40 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220 <223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 40
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210 41 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 41
Ser Ser Xaa Gin Ser Ala Pro 1 5 <210> 42 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222* (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 42
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 43 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná
-esr<221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> Abu <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 43
Ala Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> Abu <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 44
Ala Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 45 <211>8 <212> PRT
-Q6<213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 45
Ser Ser Šer Xaa Gin Šer Leu Pro
5 <210> 46 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 46
Ser Ser Ser Xaa Gin Ser Val Pro
5 <210> 47 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (8)...(8) <223> 4Hyp <400> 47
Ser Ala Ser Xaa Gin Ser Leu Pro
5 <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycin <400> 48
Ser Ala Ser Xaa Gin Ser Val Pro
5 <210> 49 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > METHYLATION <222> (1)...(1) <223> N-metylserín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycin
- 6i<221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> kyselina pípekolínová <400> 49
Xaa Ser Ser Xaa Gin Šer Leu Xaa
5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> METHYLATION <222> (1)...(1) <223> A/-metylserín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> pipekolín <400> 50
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Val Xaa
5 <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná
-w <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 51
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro
5 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221>MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > MOD_RES <222> (8)...(8) <223> 4Hyp <400> 52
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro
5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp
-W<400> 53
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro
5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 54
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Ser
5 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221>MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > MOD_RES <222> (8)...(8) <223> 4Hyp <400> 55
Pro Ser Ser Tyr Gin Ser Pro
5
-ΊΊ<210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 56
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 57 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 57
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
- 72<210> 58 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 58
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Leu
5 <210> 59 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MODRES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 59
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Val
-η<210> 60 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400 60
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser Val Pro
5 <210>61 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (8)...(8) <223> kyselina pipekolínová <400> 61
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 62 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 62
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser
5 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín
- 7Γ<400> 63
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Gly
5 <210> 64 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 64
Ser Ser Xaa Gin Ser Gly
5 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> 3-pyridylalanín <221 > MOD.RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 65
Xaa Ser Ser Tyr Gin Ser Pro
- %<210> 66 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> 3-pyridylalanín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 66
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 67 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroxyprolín <400> 67
Xaa Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro
5 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroxyprolín <221 > MOD_RES <222> (8)...(8) <223> 4Hyp <400> 68
Xaa Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro
5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 69
Xaa Ser Ala Xaa Gin Ser Leu
5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT
- 7Í <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginín <221 > MOD_RES <222> (3)...(3) <223> 4Hyp <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 70
Xaa Ser Pro Xaa Gin Ser Leu
5 <210>71 <211> 5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 71
Pro Xaa Gin Ser Leu
5
- 77<210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 72
Asn Arg íle Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 73
Asn Lys Val Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 74 <211>10 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 74
Asn Lys Met Glu Thr Ser Tyr Gin Ser Ser
10 <210> 75 <211> 8 <212> PRT
- 0(? <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 75
Asn Lys Leu Ser Tyr Gin Ser Ser
5 <210> 76 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 76
Asn Lys íle Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <400> 77
Gin Lys íle Ser Tyr Gin Ser Ser
5 <210> 78 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná
- bi <221 > MOD_RES <222> (2)...(2) <223> 4Hyp <400> 78
Asn Pro íle Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> MOD RES <222> (2)...(2) <223> 4Hyp <400> 79
Asn Pro Val Ser Tyr Gin Ser
5 <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 80
Pro Ala Ser Tyr Gin Ser Ser
5 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroxyprolín <400> 81
Xaa Ala Ser Tyr Gin Ser Ser
5 <210> 82 <211>5 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 3Hyp <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 82
Pro Ser Xaa Gin Ser
5 <210> 83 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycin <400> 83
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser Ser
5 <210> 84 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycin <400> 84
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 85 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 85
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Gly
5 <210> 86 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (8)...(8) <223> MeGly <400> 86
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Gly
-85<210> 87 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 87
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 88 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 88
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Val
- bG <210> 89 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (8)...(8) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 89
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> Kyselina /V-acetyl-2-aminobutyrová <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 90
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 91 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> Kyselina /V-hydroxyacetyl-2-aminobutyrová <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 91
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 92 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-3-pyridylalanín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 92
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> /\/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 93
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Val
5 <210> 94 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 94
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Leu
5 <210> 95 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 95
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 96 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín
- qo <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 96
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro
5 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-3-pyridylalanín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (6)...(6) <223> d-serín <400> 97
Xaa Ser Ser Xaa Gin Xaa Pro
5 <210> 98 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> /V-metylserín <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 98
Xaa Ser Xaa Gin Ser Gly
5 <210> 99 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 99
Xaa Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 100 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 100
Xaa Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 101 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> d-serín <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 101
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Xaa Xaa
5 <210> 102 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 102
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Leu
5 <210> 103 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 103
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ala
5 <210> 104 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexyIglycín <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> cyklohexyIglycín <400> 104
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Xaa
5 <210> 105 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221>MOD_RES <222> (8)...(8) <223> MeGly <400> 105
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Gly
5 <210> 106 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (8)...(8) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 106
Xaa Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 107 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 107
Xaa Ser Ser Xaa Gin Šer Ser Pro
5 <210> 108 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> Kyselina /V-acetyl-aminobutyrová <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (7)...(7) <223> d-serín <400> 108
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Xaa Pro <210> 109 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> Kyselina A/-acetyl-2-aminobutyrová <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <400> 109
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 110 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> Kyselina A/-acetyl-2-aminobutyiOvá <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (6)...(6) <223> d-serín
- U <400> 110
Xaa Ser Ser Xaa Gin Xaa Pro
5 <210> 111 <211> 7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > ACETYLÁCIA <222> (1)...(1) <223> N-acetylserín <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <400> 111
Xaa Ser Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 112 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylserín <221 > VARIANT <222> (3)...(3) <223> cyklohexylglycín <221 > KONFLICT <222> (6)...(6) <223> d-serín <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 112
Xaa Ser Xaa Gin Ser Xaa Pro
5 <210> 113 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycin <221 > VARIANT <222> (6)...(6) <223> d-serín <400> 113
Xaa Ser Ser Xaa Gin Xaa Ser Pro
5 <210> 114 <211> 8 <212> PRT
- m .
<213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> d-glutamín <400> 114
Xaa Ser Ser Xaa Xaa Ser Ser Pro
5 <210> 115 <211> 8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> d-glutamín
- 1V1 <221 > VARIANT <222> (6)...(6) <223> d-serín <400> 115
Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Ser Pro
5 <210> 116 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylserín <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <400> 116
Xaa Xaa Gin Ser Ser Pro
5 <210> 117 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín
- 4ΌΖ<221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (6)...(6) <223> 4-trans-L-hydroxyprolín <400> 117
Xaa Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 118 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (6)...(6) <223> MeGly <400> 118
Xaa Xaa Gin Ser Ser Gly
5 <210> 119 <211>7 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetylserín <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (6)...(6) <223> Aib <400> 119
Xaa Xaa Gin Ser Ser Ala Pro
5 <210> 120 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylserín <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (6)...(6) <223> /V-metyl-alanín <400> 120
Xaa Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 121 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (5)...(5) <223> Aib <400> 121
Xaa Xaa Gin Ser Ala Pro
5 <210> 122 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-hydroxyacetyl serín
-φ?5<221 > VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > MOD_RES <222> (6)...(6) <223> MeGly <400> 122
Xaa Xaa Gin Ser Ser Gly
5 <210> 123 <211> 6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> /V-acetylserín <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221 > VARIANT <222> (6)...(6) <223> kyselina pipekolínová <400> 123
Xaa Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 124 <211>8 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> A/-acetyl-4-trans-L-hydroxyprolín <221 > VARIANT <222> (4)...(4) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> kyselina pipekolínová <400> 124
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5 <210> 125 <211>6 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> celá syntetizovaná <221 > VARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylserín <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> cyklohexylglycín <221> VARIANT <222> (6)...(6) <223> N-metyl-d-alanín
-κ%-

Claims (23)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    HCb poltil-h’^
    1. KonjugátVla-liečbu rakoviny prostaty, ktorý zahrnuje vinea alkaloidové cytotoxické činidlo, ktoré je pripojené na oligopeptid, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu selektívne proteolyticky štiepenú voľným antigénom špecifickým pre prostatu, pričom pripojenie je voliteľne uskutočnené prostredníctvom chemického spojovníka, a miesto pripojenia oligopeptidu je na kyslíku v polohe 4 vinea alkaloidového cytotoxického činidla, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  2. 2. Konjugát podľa nároku 1, v ktorom cytotoxické činidlo vybrané z nasledujúcich cytotoxických činidiel:
    a) vinblastin,
    b) 4-deacetylvinblastín,
    c) vinkristín,
    d) leurozidín a
    e) vindezín, alebo ich optický izomér.
  3. 3. Konjugát podľa nároku 2, v ktorom je cytotoxickým činidlom 4-deacetylvinblastín.
  4. 4. Konjugát podľa nároku 1, v ktorom oligopeptid obsahuje oligomér vybraný z:
    a) AsnLyslleSerTyrGInISer (SEKV. Č. 1), b) LyslleSerTyrGInISer (SEKV. Č. 2), c) AsnLyslleSerTyrTyrISer (SEKV. Č. 3), d) AsnLysAlaSerTyrGInISer (SEKV. Č. 4), e) SerTyrGInISerSer (SEKV. Č. 5); f) LysTyrGInISerSer (SEKV. Č. 6); g) hArgTyrGInlSerSer (SEKV. Č. 7);
    h) hArgChaGInISerSer
    i) TyrGInISerSer
    j) TyrGInISerLeu
    k) TyrGInISerNIe
    l) ChgGInISerLeu
    m) ChgGInISerNIe
    n) SerTyrGInISer
    o) SerChgGInISer
    p) SerTyrGInISerVal
    q) SerChgGInISerVal
    r) SerTyrGInISerLeu
    s) SerChgGInISerLeu
    t) HaaXaaSerTyrGInISer
    u) HaaXaaLysTyrGInISer
    v) HaaXaahArgTyrGInISer
    w) HaaXaahArgChaGInISer
    x) HaaTyrGInISer
    y) HaaXaaSerChgGInlSer
    z) HaaChgGInISer (SEKV. Č. 8);
    (SEKV. Č. 9);
    (SEKV. Č. 10);
    (SEKV. Č. 11);
    (SEKV. Č. 12);
    (SEKV. Č. 13);
    (SEKV. Č. 14);
    (SEKV. Č. 15);
    (SEKV. Č. 16);
    (SEKV. Č. 17);
    (SEKV. Č. 18);
    (SEKV. Č. 19);
    (SEKV. Č. 20);
    (SEKV. Č. 21);
    (SEKV. Č. 22);
    (SEKV. Č. 23);
    (SEKV. Č. 24);
    (SEKV. Č. 25);
    (SEKV. Č. 26);
    kde Haa je cyklická aminokyselina substituovaná hydrofilickou časťou, hArg je homoarginín, Xaa je akákoľvek aminokyselina, Cha je cyklohexylalanín a Chg je cyklohexylglycín.
  5. 5. Konjugát podľa nároku 1, v ktorom oligopeptid obsahuje oligomér vybraný z:
    SerSerChgGInISerAlaPro SerSerChgGInISerSerPro SerSerChgGlnlSerAla4-Hyp SerSerChaGlnlSerSer4-Hyp AbuSerSerChgGInISerPro AbuSerSerChgGlnlSer4-Hyp (SEKV. Č.39);
    (SEKV. Č.40);
    (SEKV. Č.41);
    (SEKV. Č.42);
    (SEKV. Č.43);
    (SEKV. Č.44);
    -Ί10SerSerSerChgGInlSerLeuPro
    SerSerSerChgGInISerValPro SerAlaSerChgGlnlSerl_eu4-Hyp SerAlaSerChgGInISerValPro A/-metyl-SeijSerSerChgGlnlSerl_euPip /V-metyl-Ser)SerSerChgGlnlSerValPip 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerPro 4-HypSerSerTyrGlnlSerSer4-Hyp 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerPro 4-HypSerSerTyrGlnlSerSerSer 4-HypSerSerTyrGlnlSer4-Hyp 4-HypSerSerChgGlnlSerPro 4-HypSerSerChgGlnlSerSerPro 4-HypSerSerChgGlnlSerLeu 4-HypSerSerChgGlnlSerVal 4-HypAlaSerChgGlnlSerValPro 4-HypAlaSerChgGlnlSerSerPip 4-HypSerSerChgGlnlSer 4-HypSerSerChgGlnlSerGly SerSerChgGInISerGly 3-PalSerSerTyrGlnlSer4-Hyp 3-PalSerSerChgGlnlSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGlnlSerSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGlnlSerSer4-Hyp (SEKV. Č.45); (SEKV. Č.46); (SEKV. Č.47); (SEKV. Č.48); (SEKV. Č.49); (SEKV. Č.50); (SEKV. Č.51); (SEKV. Č.52); (SEKV. Č.53); (SEKV. Č.54); (SEKV. Č.55); (SEKV. Č.56); (SEKV. Č.57); (SEKV. Č.58); (SEKV. Č.59); (SEKV. Č.60); (SEKV. Č.61); (SEKV. Č.62); (SEKV. Č.63); (SEKV. Č.64); (SEKV. Č.65); (SEKV. Č.66);
    (SEKV. Č.67); a (SEKV. Č.68);
    kde Abu je kyselina aminobutyrová, 4-Hyp je 4-hydroxyprolín, Pip je kyselina pipekolová, 3,4-DiHyp je 3,4-dihydroxyprolín, 3-Pal je 3-pyridylalanín, Sar je sarkozín a Chg je cyklohexylglycín.
  6. 6. Konjugát podľa nároku 1, v ktorom oligopeptid obsahuje oligomér vybraný z:
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro;
    (SEKV. Č.: 84)
    -wr
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar;
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerVal;
    (SEKV. Č.: 85) (SEKV. Č
    86) (SEKV. Č.: 87) (SEKV. Č.: 88)
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-4-trans-L-Hyp; (SEKV. Č
    89)
    Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro; hydroxyacetylAbu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro; acetyl3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro; Ac--4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val; Ac--4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro; Ac-SerSerChgGInSerGly;
    Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp; Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar; Ac-SerSerChgGInSerSerHyp;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro; Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro; Ac-AbuSerSerChgGInSerSerPro; Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro; Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro; Ac-SerChgGIn-SerSerPro;
    Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp; Ac-SerChgGInSerSerSar; Ac-SerChgGInSerSerAibPro; Ac-SerChgGInSerSer/V-Me-Ala; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip;
    (SEKV. Č (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č. (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    90)
    91)
    92)
    93)
    94)
    95)
    96)
    98)
    99)
    100)
    103)
    104)
    105)
    106)
    107)
    108)
    109)
    111)
    114)
    115)
    116)
    117)
    118)
    119)
    120)
    124) a
    -1ΊΖ'
    Ac-SerChgGlnSerSerA/-Me-dA; (SEKV. Č.: 125) kde Abu je kyselina aminobutyrová, 4-trans-L-Hyp je 4-trans-L-hydroxyprolín, Pip je kyselina pipekolínová, 3,4-DiHyp je 3,4-dihydroxyprolin, 3-PAL je 3-pyridylalanín, Sar je sarkozín a Chg je cyklohexylglycín.
  7. 7. Konjugát vzorca la
    OH oligopeptid-R (la) kde
    C-koniec oligopeptidom je oligopeptid, ktorý je špecificky rozoznávaný voľným antigénom špecifickým pre prostatu (PSA), a je možné ho proteolyticky štiepiť prostredníctvom enzymatickej aktivity voľného antigénu špecifického pre prostatu,
    XL je vybraný z: väzba, -C(O)-(CH2)U-W-(CH2)U-O- a - C(O)-(CH2)U-W-(CH2)U-NH-;
    R je vybrané zo skupiny obsahujúcej:
    a) vodík,
    b) -(C=O)R1a,
    d)
    -η3-
    e)
    O O
    f) etoxyskvarát; a
    g) kotininyl;
    R1 a R2 sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, OH, CrC6 alkyl, CrC6 alkoxy, CrC6 aralkyl a aryl;
    R1a je CrCe-alkyl, hydroxylovaný C3-C8-cykloalkyl, polyhydroxylovaný C3-C8cykloalkyl, hydroxylovaný aryl, polyhydroxylovaný aryl alebo aryl,
    R9 je vodík, (CrC3 alkyl)-CO alebo chlórom substituovaný (CrC3 alkyl)-CO;
    W je vybrané zo skupiny, ktorá obsahuje rozvetvený alebo nerozvetvený reťazec CrCe-alkyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl alebo bicyklo[2.2.2]oktanyl;
    n je 1, 2, 3 alebo 4;
    p je nula alebo prirodzené číslo medzi 1 a 100;
    q je 0 alebo 1, s podmienkou, že ak p je nula, potom q je 1;
    r je 1, 2 alebo 3;
    t je 3 alebo 4;
    u je 0,1, 2 alebo 3;
    alebo jeho farmaceutický prijateľné soli.
  8. 8. Konjugát podľa nároku 7, v ktorom je oligopeptid oligomér, ktorý obsahuje
    aminokyselinové sekvenciu vybranú z: a) AsnLyslleSerTyrGInISer (SEKV. Č. 1), b) LyslleSerTyrGInISer (SEKV. Č. 2), c) AsnLyslleSerTyrTyrISer (SEKV. Č. 3), d) AsnLysAlaSerTyrGInISer (SEKV. Č. 4), e) SerTyrGInISerSer (SEKV. Č. 5); f) LysTyrGInISerSer (SEKV. Č. 6); g) hArgTyrGInISerSer (SEKV. Č. 7);
    h) hArgChaGInISerSer
    i) TyrGInISerSer
    j) TyrGInISerLeu
    k) TyrGInISerNIe
    l) ChgGInISerLeu
    m) ChgGInISerNIe
    n) SerTyrGInISer
    o) SerChgGInISer
    p) SerTyrGInISerVal
    q) SerChgGInISerVal
    r) SerTyrGInISerLeu
    s) SerChgGInISerLeu
    t) HaaXaaSerTyrGInISer
    u) HaaXaaLysTyrGInISer
    v) HaaXaahArgTyrGInISer
    w) HaaXaahArgChaGInISer
    x) HaaTyrGInISer
    y) HaaXaaSerChgGInISer
    z) HaaChgGInISer (SEKV. Č. 8);
    (SEKV. Č. 9);
    (SEKV. Č. 10);
    (SEKV. Č. 11);
    (SEKV. Č. 12);
    (SEKV. Č. 13);
    (SEKV. Č. 14);
    (SEKV. Č. 15);
    (SEKV. Č. 16);
    (SEKV. Č. 17);
    (SEKV. Č. 18);
    (SEKV. Č. 19);
    (SEKV. Č. 20);
    (SEKV. Č. 21);
    (SEKV. Č. 22);
    (SEKV. Č. 23);
    (SEKV. Č. 24);
    (SEKV. Č. 25);
    (SEKV. Č. 26);
    kde Haa je cyklická aminokyselina substituovaná hydrofilickou časťou, hArg je homoarginín, Xaa je akákoľvek aminokyselina, Cha je cyklohexylalanín a Chg je cyklohexylglycin, alebo ich optické izoméry.
  9. 9. Konjugát podľa nároku 8, kde Haa je ŕrans-4-hydroxy-L-prolín; alebo jeho optický izomér.
  10. 10. Konjugát podľa nároku 7, v ktorom je oligopeptid-R je vybraný z:
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly; Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar; (SEKV. Č.: 84) (SEKV. Č.: 85) (SEKV. Č.: 86)
    -1%kde Abu je kyselina aminobutyrová, 4-trans-L-Hyp je 4-trans-L-hydroxyprolín, Pip je kyselina pipekolínová, 3,4-DiHyp je 3,4-dihydroxyprolín, 3-PAL je 3-pyridylalanín, Sar je sarkozín a Chg je cyklohexylglycín.
  11. 11. Konjugát podľa nároku 7, ktorý je vybraný z:
    C-koniec
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser Ser-Chg-GIn-Ser Ser (sekv. č.: 86) /
    C-koniec
    -ľtfAc-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerVal;
    (SEKV. Č.: 87) (SEKV. Č.: 88)
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-4-trans-L-Hyp; (SEKV. Č.
    89)
    Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro; hydroxyacetylAbu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-Pro; acetyl3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro; Ac--4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val; Ac--4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu;
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    (SEKV. Č.
    90)
    91)
    92)
    93)
    94)
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro;
    Ac-SerSerChgGInSerGly;
    Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
    Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar; Ac-SerSerChgGInSerSerHyp;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro; Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro; Ac-AbuSerSerChgGInSerSerPro;
    Ac-SerSerChgGInSerSerPro;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro; Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro; Ac-SerChgGIn-SerSerPro;
    Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
    Ac-SerChgGInSerSerSar;
    Ac-SerChgGInSerSerAibPro;
    Ac-SerChgGInSerSer/V-Me-Ala;
    Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip;
    Ac-SerChgGInSerSer/V-Me-dA;
    (SEKV. Č.
    95)
    (SEKV. Č. 96) (SEKV. Č. 98) (SEKV. Č. 99) (SEKV. Č. 100) (SEKV. Č. 103) (SEKV. Č. 104) (SEKV. Č. 105) (SEKV. Č. 106) (SEKV. Č. 107) (SEKV. Č. 108) (SEKV. Č. 109) (SEKV. Č. 111) (SEKV. Č. 114) (SEKV. Č. 115) (SEKV. Č. 116) (SEKV. Č. 117) (SEKV. Č. 118) (SEKV. Č. 119) (SEKV. Č. 120) (SEKV. Č. 124) a (SEKV. Č. 125)
    -m-
    O x JL
    Ac-4-trans-L-H -Ser-Ser-Chg-GIn-SerVal ' (sekv. č.: 88) /
    C-koniec
    I OÄ H Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser Chg-GIn-Ser-Ser-N (sekv. č.: 89) /
    OH
    C-koniec /
    Abu-Ser-Ser-Chg-GIn-Ser-N (sekv. č.: 91 ) /
    C-koniec ο
    AcHN (sekv. č.: 92)
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser Chg-GIn-Ser-Val (sekv. č.: 93) alebo
    C-koniec
    Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu (sekv. č.: 94)
    O
    C-koniec alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo optické izoméry.
  12. 12. Konjugát podľa nároku 7, ktorým je:
    alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ alebo optický izomér.
  13. 13. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje konjugát podľa podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.
  14. 14. Spôsob výroby farmaceutického prostriedku, vyznačujúci sa tým , že zahŕňa zmiešanie konjugátu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľného nosiča.
  15. 15. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický nosič a v ňom dispergované terapeuticky účinné množstvo konjugátu podľa nároku 1.
  16. 16. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický nosič a v ňom dispergované terapeuticky účinné množstvo konjugátu podľa nároku 7.
  17. 17. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický nosič a v ňom dispergované terapeuticky účinné množstvo konjugátu podľa nároku 11.
  18. 18. Použitie konjugátu podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie rakoviny prostaty.
  19. 19. Použitie konjugátu podľa nároku 7 na výrobu liečiva na liečenie rakoviny prostaty.
  20. 20. Použitie konjugátu podľa nároku 11 na výrobu liečiva na liečenie rakoviny prostaty.
    -W -
  21. 21. Použitie konjugátu podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie benígnej hyperplázie prostaty.
  22. 22. Použitie konjugátu podľa nároku 7 na výrobu liečiva na liečenie benígnej hyperplázie prostaty.
  23. 23. Použitie konjugátu podľa nároku 11 na výrobu liečiva na liečenie benígnej hyperplázie prostaty.
SK828-2000A 1997-12-02 1998-11-25 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer, pharmaceutical composition containing the same and use thereof SK8282000A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6711097P 1997-12-02 1997-12-02
GBGB9804399.5A GB9804399D0 (en) 1998-03-02 1998-03-02 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
PCT/US1998/025358 WO1999028345A1 (en) 1997-12-02 1998-11-25 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK8282000A3 true SK8282000A3 (en) 2000-11-07

Family

ID=26313204

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK828-2000A SK8282000A3 (en) 1997-12-02 1998-11-25 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer, pharmaceutical composition containing the same and use thereof

Country Status (26)

Country Link
US (2) US20060148718A1 (sk)
EP (1) EP1036093A1 (sk)
JP (1) JP2001525337A (sk)
KR (1) KR100580137B1 (sk)
CN (1) CN1181092C (sk)
AR (1) AR016427A1 (sk)
AU (1) AU744652B2 (sk)
BG (1) BG65486B1 (sk)
BR (1) BR9815116A (sk)
CA (1) CA2311615A1 (sk)
DZ (1) DZ2665A1 (sk)
EA (1) EA002745B1 (sk)
EE (1) EE200000333A (sk)
HR (1) HRP20000367A2 (sk)
HU (1) HUP0100350A3 (sk)
ID (1) ID24735A (sk)
IL (1) IL136167A0 (sk)
IS (1) IS5502A (sk)
NO (1) NO20002804L (sk)
NZ (1) NZ504615A (sk)
PE (1) PE20000009A1 (sk)
PL (1) PL197006B1 (sk)
SK (1) SK8282000A3 (sk)
TR (1) TR200002260T2 (sk)
TW (1) TW577897B (sk)
WO (1) WO1999028345A1 (sk)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003518000A (ja) * 1998-12-11 2003-06-03 コールター ファーマシューティカル，インコーポレイティド プロドラッグ化合物およびその調製方法
GB9924759D0 (en) 1999-10-19 1999-12-22 Merck Sharp & Dohme Process for preparing peptide intermediates
US7842581B2 (en) 2003-03-27 2010-11-30 Samsung Electronics Co., Ltd. Methods of forming metal layers using oxygen gas as a reaction source and methods of fabricating capacitors using such metal layers
DK2187965T3 (da) 2007-08-17 2020-01-20 Purdue Research Foundation Psma-bindingsligand-linker-konjugater og fremgangsmåder til anvendelse
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
WO2014028057A1 (en) * 2012-08-15 2014-02-20 Visen Medical, Inc. Prostate specific antigen agents and methods of using same for prostate cancer imaging
CN104884056A (zh) * 2012-11-12 2015-09-02 雷德伍德生物科技股份有限公司 用于制备缀合物的化合物和方法
KR102318999B1 (ko) 2012-11-15 2021-10-29 엔도사이트, 인코포레이티드 Psma 발현 세포에 의해 야기되는 질병을 치료하기 위한 컨쥬게이트
US11474706B2 (en) 2013-04-30 2022-10-18 Hewlett Packard Enterprise Development Lp Memory access rate
AU2014336638C1 (en) 2013-10-18 2020-09-17 Novartis Ag Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (PSMA), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer
WO2015073678A1 (en) 2013-11-14 2015-05-21 Endocyte, Inc. Compounds for positron emission tomography
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
MX2020010813A (es) 2018-04-17 2021-01-08 Endocyte Inc Metodos de tratamiento de cancer.
EP3972627A4 (en) 2019-05-20 2023-06-21 Endocyte, Inc. Methods for preparing psma conjugates
WO2022106629A1 (en) 2020-11-19 2022-05-27 Novartis Ag Synthesis of prostate specific membrane antigen (psma) ligands
AU2021405744A1 (en) 2020-12-22 2023-08-03 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
WO2022167664A1 (en) 2021-02-07 2022-08-11 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4203898A (en) * 1977-08-29 1980-05-20 Eli Lilly And Company Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids
US4296105A (en) * 1978-08-03 1981-10-20 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Derivatives of doxorubicine, their preparation and use
US4719312A (en) * 1978-10-02 1988-01-12 Merck & Co., Inc. Lysosometropic detergent therapeutic agents
US4376765A (en) * 1980-03-31 1983-03-15 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Medicaments, their preparation and compositions containing same
US4639456A (en) * 1980-06-10 1987-01-27 Omnichem S.A. Vinblastin-23-oyl amino acid derivatives
GR81790B (sk) * 1983-04-29 1984-12-12 Omnichem Sa
FR2546163B1 (fr) * 1983-05-16 1987-10-09 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives acyles hydrosolubles de peptides ou d'amino-acides, leur preparation et leur application
FR2626882B1 (fr) * 1988-02-08 1991-11-08 Ire Celltarg Sa Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
US5391723A (en) * 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
EP0647450A1 (en) * 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
US6143864A (en) * 1994-06-28 2000-11-07 Merck & Co., Inc. Peptides
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
EP0855910A4 (en) * 1995-10-18 2000-07-05 Merck & Co Inc Conjugates that can be used to treat benign prostate hyperplasia
US5998362A (en) * 1996-09-12 1999-12-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU715632B2 (en) * 1996-09-12 2000-02-03 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
HRP970566A2 (en) * 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser

Also Published As

Publication number Publication date
JP2001525337A (ja) 2001-12-11
AR016427A1 (es) 2001-07-04
TR200002260T2 (tr) 2000-12-21
HRP20000367A2 (en) 2000-12-31
CN1181092C (zh) 2004-12-22
WO1999028345A1 (en) 1999-06-10
HUP0100350A3 (en) 2001-09-28
KR100580137B1 (ko) 2006-05-16
HUP0100350A2 (hu) 2001-08-28
AU744652B2 (en) 2002-02-28
BR9815116A (pt) 2000-10-10
KR20010032687A (ko) 2001-04-25
CN1284086A (zh) 2001-02-14
ID24735A (id) 2000-08-03
BG104563A (en) 2001-04-30
DZ2665A1 (fr) 2003-03-22
TW577897B (en) 2004-03-01
EE200000333A (et) 2001-08-15
IL136167A0 (en) 2001-05-20
PE20000009A1 (es) 2000-01-27
NO20002804L (no) 2000-07-21
NO20002804D0 (no) 2000-05-31
US20070021350A1 (en) 2007-01-25
PL197006B1 (pl) 2008-02-29
AU1612399A (en) 1999-06-16
BG65486B1 (bg) 2008-09-30
EP1036093A1 (en) 2000-09-20
IS5502A (is) 2000-05-19
PL340768A1 (en) 2001-02-26
EA002745B1 (ru) 2002-08-29
NZ504615A (en) 2003-05-30
US20060148718A1 (en) 2006-07-06
CA2311615A1 (en) 1999-06-10
EA200000603A1 (ru) 2000-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU715632B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20020103136A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US5998362A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU726434B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU740597B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6174858B1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20070244055A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU744652B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6127333A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20020115596A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
JP2000506494A (ja) 良性前立腺過形成の治療に有用な複合体
US20040081659A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU749063B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostrate cancer
MXPA00005434A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
CZ20002056A3 (cs) Konjugáty použitelné v léčbě karcinomu prostaty