SK852012A3 - Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu - Google Patents

Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu Download PDF

Info

Publication number
SK852012A3
SK852012A3 SK85-2012A SK852012A SK852012A3 SK 852012 A3 SK852012 A3 SK 852012A3 SK 852012 A SK852012 A SK 852012A SK 852012 A3 SK852012 A3 SK 852012A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
glucan
weight
suspension
beta
water
Prior art date
Application number
SK85-2012A
Other languages
English (en)
Inventor
Matilda Matznerová
Original Assignee
Matilda Matznerová
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Matilda Matznerová filed Critical Matilda Matznerová
Priority to SK85-2012A priority Critical patent/SK852012A3/sk
Priority to ATGM8023/2015U priority patent/AT14719U1/de
Priority to ATA433/2013A priority patent/AT513524A1/de
Publication of SK852012A3 publication Critical patent/SK852012A3/sk

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08BPOLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08BPOLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Spôsob spočíva v dezintegrácii a rozvlákňovaní hlivy ustricovej spojenej s extrakciou vo vodnom prostredí s obsahom 0,10 až 0,60 % hmotn. aspoň jedného činidla spomedzi hydroxidov, uhličitanov a hydrouhličitanov alkalických kovov, oxalanu amónneho a fortifikujúcej prímesi, pri pH = 7,9 až 8,2, nasleduje extrakcia vodným roztokom hydroxidu sodného a/alebo draselného a po premytí a odstránení vodorozpustných komponentov sa suspenzia premyje zriedeným kyslým vodným roztokom na pH 4,8 až 5,2. Následne sa produkt bieli počas 3 až 26 h pôsobením vodných roztokov najmenej dvoch bieliacich činidiel. Získaný ß-D-glukán sa premyje vodou, okyslenou kyselinou octovou a/alebo kyselinou peroxyoctovou a nakoniec destilovanou vodou, a suší pri teplote pod 65 °C. Ďalej sa upravuje domieľaním, mikronizáciou a gélovatením.

Description

Vynález sa týka spôsobu získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu (ďalej β-D-glukán) hlavne z hlivy ustricovej (Pleurotus ostreatus), výhodne z jej hlúbikov dezintegráciou, defibráciou, extrakciou a účinným bielením technicky dobre dostupnými bieliacimi činidlami, sa4 dosahuje vysoká účinnosť deštrukcie chitínglukánových komplexov, proteínov a vysoká čistota získaného produktu.
Doterajší stav techniky β-D-Glukán, kjorý je v podstate homopolymérom glukózy s lineárnou molekulou, resp. makromolekulou, obsahujúcou (l,3)^-D-glukozidové väzby, prípadne s vetvenou molekulou, obsahujúcou navyše ešte postranný reťazec, viazaný (l,6)^-D-glukozidovými väzbami. A hoci ide chemicky o dosť heterogénnu skupinu, aj tak sa zvyčajne tieto polysacharidy označujú spoločným názvom glukány. β-Glukány vzbudzujú značnú pozornosť, lebo patria do skupiny fyziologicky účinných látok, ktoré sa súborne označujú ako modifikátory biologickej odpovede. Tak modifikátorom biologickej odpovede môže byť v podstate každá látka [Palisa V., Holan Z.: Prakt. Lék. 69, 770 (1989); Novák M.: Chem. Listy 101, 872-880 (2007)], ktorá stimuluje zvýšenie počtu efektorových buniek imunitného systému. Je známy väčší počet polysacharidov s imunomodulačným účinkom, medzi nimi k dostupným a bohatším zdrojom patrí najmä hliva ustricová (Pleurotus ostreatus) a rad ďalších, ako Laminaria sp., Poria cocos, Grifola frondosa, Sacharomyces cerevisiae a Lentinus edodes a ďalšie [Black W.A. P. et al: J. Appl. Chem. 1951, 505; Harada T et al: Árch. Biochem. Biophys. 124, 292 (1968); Bartnicki-Garcia S.: Ann. Rev. Microbiol. 22, 87(1968); Bohn J.A., Bemiller J.N.: Carbohydr. Polymér 28, 3 (1995); Chichara G. et al: Náture 222,687 (1969) a Cancer Res. 30,2776 (1981); US 3 943 247],
Tak imunofarmakologicky účiiné látky, teda aj β-D-glukány pôsobiace na základné obranné systémy “hostiteľa”, podstatne zvýšujú jeho odolnosť voči chorobám, k potlačeniu účinkov stresu a alergií, urýchleniu hojenia a zvýšenie rezistencie voči nebezpečným baktériáril a vírusom, ako aj v liečení nádorových onemocnení, inhibícii vzniku a rozvoju metastáz [Patchen M.: Suv. Immunal. Res. 2, 237 (1983); Pospíšil et al: Experiencia 38, 1232 (1982)]. V kombinácii s inými doplnkami výživy je účinný pri znižovaní cholesterolu a triglyceridov, zvýšení odolnosti pri ošetrovaní kože proti kožným onemocneniam, pričom pri terapii nádorových ochorení dávkovaní β-D-glukánu je dávkovanie minimálne 1 mg/kg živej hmotnosti denne (CS 243 173).
Známy je kvasničný β-D-glukán, izolovaný z bunečných stien pekárenských kvasníc viacstupňovou technológiou a s veľmi nízkymi výťažkami. Podobne je to aj v prípade izolácie β-D-glukánu z obilnín (US 6 323 338; US 6 749 885) a navyše, technológia získavania a rafinácie je technicky náročná a dosahované výťažky sú nízke. Podobná je situácia získavania β-D-glukánu z ďalších surovín (napr. US 6 444 448, US 6 485 945, US 6 197 952), pričom sa pre významné aplikácie vyžaduje podstatne vyššia čistota, hlavne podstatne nižší obsah zvyškov proteínov, chitínglukánových komplexov zvlášť [Speváček J., Synytsa A., Bras J., Ederová J., Čopíková J.: Osobné oznámenia].
Zaujímavý je účinný postup izolácie β-D-glukánu extrakciou z huby Lentinus edodes [Yap, Nog. Int. J. Med. Mushrooms 3, 6-19 (2001)] cez vyzrážanie v etanole a vymrazovaním v kvapalnom dusíku, čo je síce pravdepodobne ešte účinnejší spôsob, ako boli predtým známe postupy [Chichara et al: Cancer Res. 30, 2776-81 (1970); Mizumo: Int. J. Med. Mushrooms 1,
9-29(1999)].
Predsa sa však ukázala ako vhodná surovina na získanie β-D-glukánu hliva ustricová (Pleurotus ostreatus), z ktorej sa dosahuje vysoký výťažok na sušinu (Kuniak Ľ. et al: CS 274 918, CS 276 192), čo v princípe, pravda s technickými rozdielmi preukazujú aj ďalšie patenty (napr. Gabrižová L.: SK 282 870, Doboly T., Dobolyová L: SK 285 062). Ide aj o technicky zaujímavé postupy izolácie β-D-glukánu, dobré výťažky, ale žiada sa ešte vyššia čistota produktu, bez podstatne vyšších nárokov na potrebný čas na purifikáciu β-D-glukánu. Síce je známa purifikácia účinkom vodno-peroxidového, resp. vodno-peroxido-alkalického vodného roztoku, dokonca aj spôsob purfikácie kvasinkového β-D-glukánu (Masler L. et al: CS 274 030) od nežiadúceho α-D-glukánu enzýmami s amylázovou aktivitou, ale tento spôsob nie je výhodný na účinnejšiu purifikáciu β-D-glukánu, izolovaného z hlivy ustricovej.
Uvedené publikácie a patenty len sčasti vystihujú spôsob získavania β-D-glukánu, ako aj ďalších 109 citovaných prác a publikácií [Novák M.: Chem. Listy 101, 1872-1880 (2007)., Rastal R.A., Martin V.: Biotetchnology 13, 490 - 496 ( 2002 ); Gibson R.A.: Probit Nutr. Res. Rev. 17, 259 - 275 ( 2004 ); Synytsya A., Mičková K., Synytsya A., Jablonsky I., Speváček J., Erban V., Kováriková E., Čopíková J.: osobné oznámenia] poskytujú aj technicky cenné informácie, avšak ešte nástojčivo ostáva problém získavania vysokočistého β-D-glukánu. A tak známe vedecké i technické informácie využíva a ešte pretrvávajúce problémy rieši spôsob podľa tohto vynálezu.
Podstata vynálezu
Podstatou tohto vynálezu spôsob získavania vysokočistého beta-l,3/l,6-D-glukánu z hlivy ustricovej (Pleurotus ostreatus), výhodne po premytí čistou vodou a z jej hlúbikov, po premytí vodou, dezin-tegráciou, konjugovanou s defibráciou vo vodnom prostredí obsahujúcom 0,10 až 0,60 % hmotn. najmenej jedného činidla, vybraného spomedzi uhličitanov alkalických kovov, oxalanu amónneho a fortifikujúcej prímesi, pričom pH vodného roztoku suspenzie je 7,9 až 8,2 a po separácii suspenzie sa ešte vykonáva ešte jej extrakcia vodným roztokom hydroxidu sodného a/alebo draselného o koncentrácii 0,05 až 0,5 % hmotn. a po premytí, s odstránením vodorozpustných komponentov, sa suspenzia hlavne beta-1,3/1,6-D-glukánu obshujúca hydroxid sodný o koncentrácii 0,05 až 0,2 % hmotn. a po separácii suspenzie a premytí, s odstránením vodorozpustných komponentov, sa suspenzia hlavne beta-1,3/1,6-D-glukánu separuje a po premytí sozriedeným vodným roztokom karboxylovej kyseliny na pH 4,8 až 5,2 a premytí čistou vodou, sa nerozpustný produkt “surového” beta-1,3/1,6-D-glukánu bieli peroxidom vodíka a najmenej jedným ďalším oxidantom, pri teplote 6 až 36 °C, počas 3 až 26 h v prostredí hydroxidov a/alebo uhličitanov alkalických kovov, s následnou dehydratáciou organickým vodorozpustným atoxickým rozpúšťadlom alebo lyofilizáciou, so zbavením vody až dosušením a finálnou úpravou, pričom defibrácia nerozpustného beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje prevážne v suspenzii vodného roztoku najmenej jedného hydroxidu a/alebo uhličitanu až hydrouhličitanu alkalického kovu, navyše obsahujúceho 0,03 až 0,15 % hmotn. oxalanu amonného, a fortofikukúcej prímesi, tvorenej alkalickopu solou kyseliny peroxymravčej a/alebo peroxyoctovej v množstve 0,1 až 0,45 % hmotn., po čom sa následne premije vodou a vymyjú sa vodorozpustné komponenty, pričom sa aglomerovaná suspenzia, hlavne beta1,3/1,6-D-glukánu následne bieli pri teplote 6 až 36 °C, počas 3 až 26 h pôsobením vodných roztokov najmenej dvoch bieliacich činidiel, vybraných spomedzi oxidu chloričitého, hexahydrátu oxidu chloričitého v množstve 1,5 až 12 % hmotn., peroxidu vodíka, peroxidu alkalického kovu, kyseliny peroxymravčej a jej alkalickej soli, kyseliny peroxyoctovej a jej alkalickej soli, v množstve 2 až 35 % hmotn., počítané na sušinu suspenzie a následne získaný beta-l,3/l,6-D-glukán sa premyje vodou, okyslenou kyselinou octovou a/alebo kyselinou peroxyoctovou na obsah pod 0,25 % hmotn. a napokon premyje demineralizovanou alebo destilovanou vodou a dosuší pri teplote pod 65 °C.
Výhodou spôsobu podľa tohto vynálezu sú predovšetkým dosahované vysoké výťažky beta-1,3/1,6-D-glukánu, najmä jeho vysoká čistota, technická dostupnosť účinných oxidantov a ďalších komponentov potrebných pre účinnú izoláciu a purifikáciu. Oxidanty sa využívajú nielen na purifikáciu-bielenie, ale aj na účinný rozklad nežiadúcich komplexov beta-1,3/1,6-D-glukánu s chitínom a proteínmi vôbec. V neposlednom rade, je výhodou aj strojno-technologická dostupnosť, nízka energetická náročnosť, pričom aj pre väčší počet pripravených reakčných roztokov, prania “koláčov” suspenzie, hlavne β-D-glukánu možno vystačiť s demineralizovanou alebo dokonca z hygienického hľadiska dostupnou pitnou vodou. Len finálne premývanie je nutné viesť demineralizovanou až destilovanou vodou.
Fortifikujúcu prímes pri defibrizácii vo vodnom prostredí tvorí 0,05 až 0,25 % hmotn. alkalickej soli kyeliny peroxymravčej a/alebo peroxyoctovej.
Bielenie suspenzie beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje oxidom chloričitým, výhodne vo forme hexahydrátu oxidu chloričitého, v množstve 2 až 8 % hmotn., počítané na hmotnosť sušiny suspenzie beta-1,3/1,6-D-glukánu. Pritom jej spolubielenie sa uskutočňuje peroxidom vodíka a/alebo jeho alkalickou soľou, vybranou spomedzi peroxidu sodíka a peroxidu draslíka vo forme vodného roztoku o koncentrácii 2 až 25 % hmotn. a v množstve 10 až 35 % hmotn., počítané na hmotnosť sušiny.
Ďalšie spolubieliace činidlo môže byť vybrané spomedzi kyseliny peroxymravčej a peroxyoctovej a/alebo ich alkalických solí, v množstve 3 až 15 % hmotn., počítané na hmotnosť sušiny suspenzie.
Beta-1,3/1,6-D-glukán pred finálnym premytím demineralizovanou alebo destilovanou vodou sa premyje kyselinou octovou a/alebo kyselinou peroxyoctovou, o koncentrácii pod 0,2 % hmotn.
Vysušený beta-1,3/1,6-D-glukán sa ešte upravuje na aplikovateľnú formu, ako domieľaním, mikronizáciou, gélovatením a prípadne formuláciou s ďalšími látkami na produkty s nutričným a terapeutickým, hlavne ímunostimulačným účinkom, v humánnej výžive i vo výžive zvierat.
Ďalšie konkrétne údaje, ako aj ďalšie prednosti spôsobu podľa tohto vynálezu sú zrejmé z píkladov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
V laboratórnom dezintegrátore - mixéri, sa 12 h po zbere defibruje 5 kg hlúbikov hlivy ustricovej (Pleurotus ostreatus) v prostredí 8 kg vodného roztoku uhličitanu sodného o koncentrácii 0,15 % hmotn. počas 3,5 min, čím vznikne pomerne homogénna suspenzia vo vode, pričom pH prostredia dosahuje 7,9 až 8,1. Po defibrácii sa reakčná zmes prefiltruje na filtri ešte dokonale premyje pitnou vodou a ďalej sa odstredí, čím sa odstránia vo vode vodorozpustné komponety, ako sacharidy, proteíny, enzýmy, popoloviny, ako aj vodorozppustný glukán. Takto získaný nerozpustný podiel glukánu sa celkom zbaví kvapalnej fázy a dá sa do reaktora o objeme 15 dm3 a zaleje sa 60 g vodného roztoku hydroxidu sodného o koncentrácii 29 % hmotn. a 1 % hmotn. uhličitanu sodného. Vytvorená zmes sa intenzívne mieša a postupne sa do nej pridá na bielenie 430 g peroxidu vodíka o koncentrácii 30 % hmont. a nato sa nechá bieliť pri teplote 20 až 25 °C počas 16 h. Po vybielení sa získaný glukán dokonale premýva pitnou vodou až do zmiznutia fialovočrveného sfarbenia fenolftaleínového indikátora. Nato sa k získanému filtračnému koláču pridá 1 kg mierne okyslenej pitnej vody, s obsahom 0,005 % hmotn. kyseliny octovej a potom po dôslednom premiešaní sa filtračný koláč opäť premyje 2,5 kg demineralizovanej vody. Získaný mokrý glukán sa potom úúčinne lisuje a tak odlisovaný koláč v reaktore 4 kg koncentrovaného etanolu a nechá sa počas 1 h odstáť. Nato sa suspenzia opätovne dá do lisu a potom sa vylisuje. Takáto dehydratácia koláča etanolom sa ešte opakuje dvakrát, načo sa získaný glukán vysuší pri teplote 50 až 55 °C za mierne zníženého tlaku.
Výťažok získaného glukánu na hmotnosť sušiny hlúbikov hlivy ustricovej dosahuje 71 %, pričom je nerozpustný nielen vo vode, ale aj v zriedených kyselinách a organických rozpúšťadlách, obsahuje 0,72 % hmotn. chitínového dusíka, 1,57 % hmotn. popola, pričom ľahko sa melie na zrnenie 0,2 až 0,5 mm.
Príklad 2
Postupuje sa podobne ako v príklade 1, len s tým rozdielom, že najprv sa hlúbiky opláchnu pitnou vodou, potom v autoklave v prostredí fyziologického roztoku o koncentrácií 8,5 % hmotn. NaCj, nato sa ešte opláchnu demineralizovanou vodou pri teplote 30-38 °C a až potom nasleduje dezintegrácia a defibrácia 5 kg hlúbikov hlivy ustricovej v prostredí 8 kg vodného roztoku uhličitanu sodného o koncentrácii 0,15 % hmotn. sa navyše fortifikuje prímesou 0,28 % hmotn. peroxymravčanu draselného.
Do 15 dm3 reaktora sa postupne na bielenie okrem 430 kg peroxidu vodíka o koncentrácii 30 % hmotn. pridá 50 g hexahydrátu oxidu chloričitého.
Výťažok získaného glukánu na hmotnosť sušiny hlúbikov hliby ustricovej dosahuje 73,5 %, pričom obsahuje len 0,38 % hmotn. chitínového dusíka a 1,17 % hmotn. popola, pričom sa takisto ľahko melie na zrnenie 0,15 až 0,4 mm a je vhodný na prípravu gélov.
Príklad 3
Postupuje sa podobne ako v príklade 2, len pri defibrácii sa navyše použije ako fortifikačná prímed zmes 0,2 % hmotn. sodnej soli kyseliny peroxyoctovej a 0,1 % hmotn. draselnej soli kyseliny peroxymravčej.
Výťažok β-D-glukánu dosahuje 74,2 %, pričom obsahuje 0,21 % hmotn.chitínového dusíka a 0,97 % hmotn. popola. Vysokou čistotou je vhodný na formuláciu gélov s terapeutickým účinkom aj na pokožku.
Príklad 4
Postupuje sa podobne ako v príklade 2, pričom pri defibrácii sa ako fortifíkujúca prímes pridá 0,2 % hmotn. sodnej soli kyseliny peroxymravčej, len 8 kg vodného roztoku uhličitanu sodného o koncentrácii 0,15 % hmotn. sa ako spolubielidlo namiesto 0,08 % hmotn. hexahydrátu oxidu chloričitého s 0,14% hmotn. a navyše sa do roztoku privedie ešte na 0,05 % hmotn. suchého oxidu chloričitého.
Dosušenie sa robí za zníženého tlaku (0,5 kPa) pri teplote 50 °C a po domletí sa získa zrnenie 0,12 až 0,20 mm.
Výťažok β-D-glukánu je podobný ako v príklade 2, ale obsah chitínového dusíka je 0,15 % hmotn., popola 0,74 % hmotn.
Príklad 5
Postupuje sa podobne ako v príkladoch 2 a 3, ale k získanému filtračnému koláču sa pridá kg okyslenej pitnej vody, ktorá obsahuje 0,011 % hmotn. kyseliny mravčej a 0,15 % hmotn.
kyseliny peroxymravčej a ešte 0,07 % hmotn. kyseliny peroxyoctovej.
Výťažok je podobne vysoký, pričom obsah chitínového dusíka ďalej poklesol na 0,11 % hmotn. a popola na 0,51 % hmotn.Dehydratácia sa robí lyofilizáciou, získa sa zrnenie častíc 0,04 až 0,011 mm.
Príklad 6
Postupuje sa podobne ako v príklade 2, len namiesto uhličitanu sodného sa použije mólo vo rovnaké množstvo uhličitanu draselného a namiesto hydroxidu sodného sa použuje mólovo len polovičné množstv hydroxidu sodného a druhú polovicu tvorí mólovo rovnaké množstvo hydroxidu draselného.
Výťažok získaného glukánu dosahuje 72,9 %, pričom obsahuje 0,26 % hmotn. chitínového dusíka a 1,01 % hmotn. popola, pričom sa takisto dobre melie na zrnenie 0,1 až 0,3 mm.
Príklad 7
Postupuje sa podobne ako v príkladoch 2 a 3, ale pri defíbrácií a extrakcií sa použije navyše vodný roztok oxalánu amónného o koncentrácií 0,25 % hmotn. a mokrý glukán sa dehydratuje koncentrovaným etanolom, pričom výťažok a čistota sú podobné (výťažok 72,1 % a obsah chitínového dusíka je 0,31 % hmotn.) zrnenie prášku je ešte jemnejšie a dosahuje 0,04 až 0,16 mm.
Ak sa postupuje lyofilizáciou ako v príklade 3, zrnenie β-D-glukánu je 0,02 až 0,11 mm, obsah chitínového dusíka 0,24 % hmotn. Podobné výsledky sa dosahujú aj pri použití zmesi koncentrovaného etanolu s obsahom do 48 % hmotn. acetónu a metyletylketónu.
Príklad 8
V laboratórnom mixéri sa 18 h po zbere defibruje 5 kg hlúbikov hlivy ustricovej v 10 kg demimeralizovanej vody a potom sa disperzia odfiltruje a zvyšok (koláč) sa zaleje 10 kg vodného roztoku uhličitanu sodného a 0,2 % hmotn. šťave lanu amónneho. Extrakcia sa uskutočňuje pri teplote 80 + 5 °C počas 2 h. Zvyšok po tejto extrakcii sa premyje demineralizovanou vodou a hydrolyzuje sa vo vodnomroztoku v množstve 10 kg, obsahujúcom 0,4 % hmotn. uhličitanu sodného a 0,4 % hmotn. hydroxidu sodného, pri teplote 88 + 3 °C počas 3,5 h. Tým sa v podstate odstránia zo substrátu komponenty a nerozpustný P-l,3/l,6(l,4)-glukán. Ten sa dôkladne premyje demineralizovanou vodou a okyslí sa čistou kyselinou octovou na pH=5. Nerozpustný produkt sas za občasného premiešavania bieli počas 12 h vodným roztokom peroxidu vodíka o koncentrácii 21 % hmotn. a dehydratuje sa koncentrovaným etanolom, pričom etanol sa odstraňuje za zníženého tlaku ( 0,5 kPa ) pri teplote 36 + 2 °C. Získa sa po dezintegrácii a mikronizácii 232 g suchého práškového p-l,3/l,6(l,4)-glukánu s obsahom chitínového dusíka 0,34 % hmotn. a popola 1,13 % hmotn.a zmenia 0,03 až 0,09 mm.
Príklad 9
Postupuje sa podobne ako v príklade 8, len namiesto 10 kg vodného roztoku o koncentrácii 0,4 % hmotn. uhličitanu sodného a 0,4 % hmotn. hydroxidu sodného obsahuje navyše 0,25 % hmotn. hexahydrátu oxidu chloričitého a pri defibrácii sa do vodného roztoku pridá ešte 0,5 % hmotn. sodnej soli kyseliny peroxymravčej s 0,1 % hmotn. draselnej soli kyseliny octovej. Nerozpustný produkt sa však bieli najskôr počas 5 h vodným roztokom peroxidu sodíka o koncentrácii 15 % hmotn., nato sa dôkladne premyje demineralizovanou vodou do neutrálne reakcie a čiastočne sa okyslí zriedenou kyselinou octovou takisto na pH=5 a potom sa ešte dobieluje vodným roztokom peroxidu vodíka o koncentrácii 21 % hmotn. počas 12 h a dehydratuje sa etanolom, pričom etanol sa oddestiluje za zníženého tlaku pri teplote 36 + 2 °C.
Získa sa po rozomletí 233 g suchého práškového p-l,3/l,6(l,4)-glukánu s obsahom chitínového dusíka 0,71 % hmotn. a popola 0,91 % hmotn.
Príklad 10
Postupuje sa podobne ako v príkladoch 2 a 3, len bielenie β-D-glukánu sa vykonáva 200 g peroxidu vodíka takisto o koncentrácii 30 % hmotn. namiesto 50 g hexahydrátu oxidu chloričitého sa aplikuje 70 g a navyše sa privedie 10 g samotného oxidu chloričitého a 15 g peroxymravčanu sodného s 5 g peroxymravčanu draselného, pričom bielenie sa uskutočňuje pri teplote 14 + 2 °C, počas 16 h.
Výťažok β-D-glukán dosahuje 74,1 %, pričom obsahuje 0,18 % hmotn. chitínového dusíka a 0,61 % hmotn. popola, pričom zrnenie častíc β-D-glukánu dosahuje 0,06 až 0,22 mm.
Príklad 11
Postupuje sa podobne ako v príklade 2, len na bielenie sa aplikuje 150 g peroxidu vodíka o koncentrácii 33 % hmotn., 50 g hexahydrátu oxidu chloričitého, 15 g čistého oxidu chloričitého a 50 g kyseliny peroxymravčej, 70 g peroxymravčanu draselného a 100 g peroxyoctanu sodného.
Výťažok β-D-glukán dosahuje 72 až 72,9 %, pričom obsahuje 0,11 % hmotn. chitínového dusíka a 0,61 % hmotn. popola.
Príklad 12
Postupuje sa podobne ako v príkladoch 2 a 3, len sa mení teplota a čas bielenia surového β-D-glukánu, bieliace činidlá, fortifikačná prímes pri defibrácii a finálna úprava nerozpustného β-D-glukánu po premytí destilovanou vodou a vysušení, výťažky finálnehoβ-D-glukánu a jeho čistota, ako aj ďalšie údaje sú v tab.l
Tabulka 1
Fortifíkujúca prímes pri defibrácii Teplota a čas bielenia Bieliace činidlo dehyd ratáci a/post up Činidlo neutrál. Glukánu (%hmotn.) Výť ažo k gluk ánu Obsah nečistôt (% hmotn.)
druh %hm otn./r oztok °C H druh %hmo tn. druh %h mot n. popol N
CHjCOjNa 0,21 12 25 H2O2 32 C1O2x6 H2O 2,5 etanol CH3CO3H 0,1 72,4 1,12 0,46
HCO3K 0,15 32 6 Na2O2 15 HCO3K +C1O2 8+1 liofili zácia CH3CO3H 0,2 69,1 1,01 0,44
CH3CO3K +HCO3Na 0,8+ 0,7 10 24 H2O2+K2O2 5+18 C1O2x6 H2O 10 etanol +acet on CH3CO2H+ CH3CO3H 69,9 1,11 0,38
HCOjNa 0,08 25 20 H2O2+Na2O 2 18+4 C1O2x6 H2O 10 etanol CH3CO3H 0,14 73,1 0,91 0,16
- - 25 20 H2O2+Na2O 2 18+4 C1O2x6 H2O 10 etanol CH3CO3H 0,14 71,9 0,94 0,16
HCO3H+ CH3CO3Na 0,1+ 0,12 8 26 Na2O 2 8+14 C1O2x6 h2o 10 etanol CH3CO2H 0,18 70,5 1,01 0,35
CH3CO3K 0,14 30 20 H2O2^K2O2 +Na2O2 5+12 +6 C1O2x6 H2O 4 liofili zácia CH3CO3H 0,12 74,1 0,92 0,13
CH3CO3K 0,22 34 8 K2O2+Na2O 2ΉΗ2Ο2 16+8 +5 C1O2x6 H2O+CI O2 6+2 liofili zácia CH3CO2H 0,14 70,3 0,93 0,3
Priemyselná využiteľnosť
Vynález je využiteľný pri získávaní vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu ako imunomodulačného doplnku potravín v humánnej výžive, ale aj vo fortifikácii krmovín, imunostimulantov pri formulácii liečiv, pre prevenciu nielen proti vírusovým a bakteriálnym ochoreniam, ale aj proti nežiadúcim dôsledkom chemoterapie a rádioterapie pri nádorových ochoreniach. V neposlednom rade, ako účinný doplnok komponentov zvyšujúcich telesnú odolnosť a výkonnosť, ako v možnostiach efektívneho pestovania a využitia hlivy ustricovej.

Claims (7)

1. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu z hlivy ustricovej (Pleurotus ostreatus), výhodne po premytí čistou vodou a z jej hlúbikov, po premytí vodou, dezintegráciou, konjugovanou s defíbráciou vo vodnom prostredí obsahujúcom 0,10 až 0,60 % hmotn. najmenej jedného činidla, vybraného spomedzi uhličitanov alkalických kovov, oxalanu amónneho a fortifíkujúcej prímesi, pričom pEÍ vodného roztoku suspenzie je 7,9 až 8,2 a po separácii suspenzie sa ešte vykonáva ešte jej extrakcia vodným roztokom hydroxidu sodného a/alebo draselného o koncentrácii 0,05 až 0,5 % hmotn. a po premytí, s odstránením vodorozpustných komponentov, sa vodná suspenzia hlavne beta-1,3/1,6-D-glukánu obshujúca hydroxid sodný o koncentrácii 0,05 až 0,2 % hmotn. a po separácii suspenzie a premytí, s odstránením vodorozpustných komponentov, sa suspenzia hlavne beta-1,3/1,6-Dglukánu separuje a po premytí sozriedeným vodným roztokom karboxylovej kyseliny na pH 4,8 až 5,2 a premytí čistou vodou, sa nerozpustný produkt “surového” beta-1,3/1,6-Dglukánu bieli peroxidom vodíka a najmenej jedným ďalším oxidantom, pri teplote 6 až 36 °C, počas 3 až 26 h v prostredí hydroxidov a/alebo uhličitanov alkalických kovov, s následnou dehydratáciou organickým vodorozpustným atoxickým rozpúšťadlom alebo lyofilizáciou, so zbavením vody až dosušením a finálnou úpravou, vyznačujúci sa tým, že defibrácia nerozpustného beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje prevážne v suspenzii vodného roztoku najmenej jedného hydroxidu a/alebo uhličitanu až hydrouhličitanu alkalického kovu, navyše obsahujúceho 0,03 až 0,15 % hmotn. oxalanu amonného, a fortofikukúcej prímesi, tvorenej alkalickopu solou kyseliny peroxymravčej a/alebo peroxyoctovej v množstve 0,1 až 0,45 % hmotn., po čom sa následne premije vodou a vymyjú sa vodorozpustné komponenty, pričom sa aglomerovaná suspenzia, hlavne beta1,3/1,6-D-glukánu následne bieli pri teplote 6 až 36 °C, počas 3 až 26 h pôsobením vodných roztokov najmenej dvoch bieliacich činidiel, vybraných spomedzi oxidu chloričitého, hexahydrátu oxidu chloričitého v množstve 1,5 až 12 % hmotn., peroxidu vodíka, peroxidu alkalického kovu, kyseliny peroxymravčej a jej alkalickej soli, kyseliny peroxyoctovej a jej alkalickej soli, v množstve 2 až 35 % hmotn., počítané na sušinu suspenzie a následne získaný beta-1,3/1,6-D-glukán sa premyje vodou, okyslenou kyselinou octovou a/alebo kyselinou peroxyoctovou na obsah pod 0,25 % hmotn. a napokon premyje demineralizovanou alebo destilovanou vodou a dosuší pri teplote pod 65 °C.
2. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že fortifikujúcu prímes tvorí alkalická soľ kyseliny peroxymravčej a/alebo peroxyoctovej v množstve 0,05 až 0,25 % hmotn.
3. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nároku 1 a 2, vyznačujúci sa tým, že bielenie suspenzie beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje oxidom chloričitým, výhodne vo forme hexahydrátu, v množstve 2 až 8 % hmotn., počítané na hmotnosť sušiny suspenzie.
4. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že spolubielenie suspenzie beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje peroxidom vodíka a/alebo jeho alkalickou soľou, vybranou spomedzi peroxidu sodíka a peroxidu draslíka, v množstve 2 až 25 % hmotn., počítané na hmotnosť sušiny suspenzie.
5. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že spolubielenie suspenzie beta-1,3/1,6-D-glukánu sa uskutočňuje najmenej jednou kyselinou vybranou spomedzi kyseliny peroxymravčej a kyseliny peroxyoctovej a/alebo ich alkalických solí v mnžstve 3 až 15 % hmotn., počítané na hmotnosť suspenzie..
6. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nárokov 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že čistú okyslenú vodu kyselinou octovou a/alebo kyselinou peroxyoctovou s obsahom po 0,25 % hmotn. tvorí pitná alebo destilovaná voda.
7. Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu podľa nárokov 1 až 6 vyznačujúci sa tým, že vysušený beta-1,3/1,6*D-glukán sa upravuje na aplikovateľnú formu, ako domielaním, mikronizáciou, gelovatím a formuláciou s ďalšími látkami na produkty snutričným a terapeutickým, hlavne imunostimulačným účinkom.
SK85-2012A 2012-10-26 2012-10-26 Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu SK852012A3 (sk)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK85-2012A SK852012A3 (sk) 2012-10-26 2012-10-26 Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu
ATGM8023/2015U AT14719U1 (de) 2012-10-26 2013-05-27 Gewinnung von hochsauberem beta-1,3/1,6-D-Glukan
ATA433/2013A AT513524A1 (de) 2012-10-26 2013-05-27 Gewinnung von hochsauberem beta-1,3/1, 6-D-Glukan

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK85-2012A SK852012A3 (sk) 2012-10-26 2012-10-26 Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK852012A3 true SK852012A3 (sk) 2014-06-03

Family

ID=50686276

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK85-2012A SK852012A3 (sk) 2012-10-26 2012-10-26 Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu

Country Status (2)

Country Link
AT (2) AT14719U1 (sk)
SK (1) SK852012A3 (sk)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CS63090A2 (en) * 1991-12-16 1991-12-17 Univ Slovenska Tech method of fungal glucan insulation
SK282870B6 (sk) * 2001-04-23 2003-01-09 Pleuran, S. R. O. Spôsob izolácie imunostimulačného glukánu z hlivy ustricovej
SK288404B6 (sk) * 2009-07-13 2016-10-03 Tibor Doboly Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu
CZ305050B6 (cs) * 2009-07-22 2015-04-15 Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích, Zemědělská fakulta Způsob výroby surového β-glukanu z plodnic houby hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus) nebo ze substrátu pro pěstování hlívy ústřičné

Also Published As

Publication number Publication date
AT14719U1 (de) 2016-04-15
AT513524A1 (de) 2014-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Synowiecki et al. Production, properties, and some new applications of chitin and its derivatives
JP5102435B2 (ja) キトサン含有多糖、その製造方法及び用途
CN101451157B (zh) 一种低分子量海参多糖的制备方法
Je et al. Chitosan as potential marine nutraceutical
Shahbaz Chitin, characteristic, sources, and biomedical application
WO2021059119A1 (en) Process for extracting and purifying chitin by using green solvents
KR101345729B1 (ko) 미강으로부터 아라비노자일란을 추출하는 방법
JP2022535453A (ja) 植物性コンドロイチン硫酸およびヒアルロン酸の植物性出発物質の同定および選択、ならびに食品、栄養補助食品、医療機器または医薬に用いるための成分を得るための植物性出発物質の変換
WO2009017462A2 (en) New ganoderma tsugae var. jannieae strain tay-i and biologically active biomass and extracts therefrom
JP2011026525A (ja) β−グルカンを主体とする多糖類の抽出方法
Kalitukha et al. Medicinal potential of the insoluble extracted fibers isolated from the Fomes fomentarius (Agaricomycetes) fruiting bodies: A review
CN104725522A (zh) 一种高温高压提取银耳多糖的方法
CN117430555A (zh) 一种高速研磨破壁和低温提取食用菌麦角硫因和多糖的方法
KR20230035577A (ko) 진균으로부터 히알루론산 추출 방법, 식물 기원의 히알루론산 및 그 용도
KR101452612B1 (ko) 전복 사료 조성물
Ibram Studies on chitosan, chitin and chitooligosaccharides and their biomedical properties
SK492009A3 (sk) Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu
SK852012A3 (sk) Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu
ES2247104T3 (es) Metodo para aislar glucan inmunoestimulante del hongo de la ostra.
WO2008032134A1 (es) Proceso para la obtencion de glucan de levadura por autolisis de celulas de levadura saccharomyces cerevisiae de panaderia
RU2247574C2 (ru) Средство, обладающее антикоагулянтным и иммунотропным действием
JP2014221899A (ja) β−グルカンを主体とする多糖類の抽出方法
CN101703238B (zh) 海参壳聚糖胶囊及其制备方法
JPWO2008001770A1 (ja) 抗アレルギー組成物及び剤、並びにこれらを含有する飲食物及び飼料
SK285062B6 (sk) Spôsob prípravy beta-1,3/1,6(1,4)-glukánu z hlivy ustricovitej (Pleurotus ostreatus)

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application