SU1165713A1 - Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината - Google Patents
Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината Download PDFInfo
- Publication number
- SU1165713A1 SU1165713A1 SU833571223A SU3571223A SU1165713A1 SU 1165713 A1 SU1165713 A1 SU 1165713A1 SU 833571223 A SU833571223 A SU 833571223A SU 3571223 A SU3571223 A SU 3571223A SU 1165713 A1 SU1165713 A1 SU 1165713A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- ammonium sulfate
- leaves
- buffer
- saturation
- dialysis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 241000219315 Spinacia Species 0.000 title abstract description 4
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 title abstract description 4
- 102000007382 Ribose-5-phosphate isomerase Human genes 0.000 title description 2
- 108020005610 ribose 5-phosphate isomerase Proteins 0.000 title description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract 3
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 claims abstract 2
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 claims abstract 2
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 abstract 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KTVPXOYAKDPRHY-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose 5-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O KTVPXOYAKDPRHY-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОЗО-JФОСФАТ ИЗОМЕРАЗЫ ИЗ ЛИСТЬЕВ ШПИНАТА путем.гомогенизации листьев в буфере, многократного фракционировани сульфатом .аммони , диализа н ионообмен- I ной хроматографии на ДЗАЭ-целлкотозе, отличающийс тем, что, с целью упрощени способа и повышени выхода целевого продукта, в качестве буфера использзтот трис-HClj экстракт двзгкратно фракционируют сульфатом аммони при насыщении 3767% , активную фракцию фермента прогревают , провод т диализ против дистиллированной воды -однократно в те- . чение 40 ч, вновь двукратно фракционируют сульфатом аммони при насыщении 40-85%, а ионообменную хроматографию провод т однократно.
Description
а сд Kj
со
I. 1
Изобретение относитс к производству ферментов, касаетс технологии их получени , и может быть использовано дл получени рибозо-5-фосфата, а также при моделировании системы карбоксилирующей фазы фотосинтеза.
Цель изобретени - упрощение способа и повышение выхода целевого продукта .
Пример. 100 г листьев шпината промывают охлажденной водой, затем дистиллированной водой и подсушивают с помощью фильтровальной бумаги . Приливают 100 мл 0,05 М трис-НС1 буфера рН 8,5и гомогенезируютв ступке или гомогенизаторе рт-1, полученный гомогенат фильтруют через четыре сло марли. Добавл ют к нему твердый сульфат аммони из расчета 23 г на 100 мл полученного гомогената. После растворени сульфата аммони гомогенат центрифугируют на центрифуге (любой ) при 8000 g в течение 25-30 мин. Полученньй осадок отбрасывают, а в супернатант добавл ют твердый сульфЬт аммони из расчета 19 г на 100 мл супернатанта.
После растворени сульфата аммони помутневший супернатант вновь Центрифугируют при 8000 g в течение 2530 мин. Ползп1енньй супернатант отбра1сывают , а осадок раствор ют в дистиллированной воде из расчета 65 мл на 100 г вз тка листьев. Полученный раствор.(70 мп) прогревают на вод ной бане 95С 1-1,5 мин, чтобы температура раствора достигла 60°С и вьщерживают в течение 10 мин в бане . Затем быстро охлаждают в лед ной бане до +4С и центрифугируют при 8000 g в течение 20-25 мин на любой центрифуге. Полученньш осадок отбрасьшают, а супернатант диализуют в диализных мешках против 10-12 л дистиллированной воды (воду по 1,52 л мей ют 6-8 раз втечение 40 ч). Помутневший раствор насыщают твердым сульфатом аммони .из расчета 29 г на 100 мл, затем центрифугируют при 8000 g в течение 25-30 мин. Осадок отбрасывают, а супернатант
132
вновь насыщают сульфатом аммони из расчета 32 г на 100 мл. Вновь центрфугируют при тех же услови х.
Полученный осадок раствор ют в минимальном (3-5 мл) объеме 0,02 М трис-НС1 буфера рИ 8-8,5 и обессоливают , использу диализ против 0,02 М трис-НС1 буфера рН 8,0 или, что лучше - обессоливают на колонке 1,5x25 см, заполненной сефадексом Q 50 и забуференной тем же буфером. Обессоленный белок нанос т на колонку с предварительно обработанной и забуференной ДЭАЭ-целлюлозой 0,02 М трис-НС рН 8,0. После св зывани с целлюлозой пропускают градиент концентраций NaCl 0-0,5 М в том же буфере общим объемом 300 мл (на колонку 2,5x15 см Активные фракции по вл ютс после прохождени примерно 150 мл градиента . Все остальные фракции (примерно 150 мл) объедин ют и приливают к ним нacьш eнный раствор сульфата аммони мл, предварит-ельно оттированный аммиачной водой до рН 7,5. Помутневший раствор центрифугируют. Полученный осадок - очищенна рибозо-5-фосфат изомераза может быть растворена в буфере, обессолена и использована дл дальнейщей работы (ее практического применени ). Выхо составл ет 1-2 мг.
В таблице представлены сравнителные данные дл предлагаемого и известного способов.
Полученный ферментный препарат характеризуетс электрофоретической однородностью в 5%, 7,5% и 10%-ном полиакриламидном гел х, имеет хара1 терную молекул рную массу в 53 000 дальтон и близкий аминокислотный состав к ферменту из табака.
Таким образом, предлагаемьй спос вьщелени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината позвол ет получать однородный высокоактивный ферментньй препарат со значительно меньшими затратами во времени и реактивах по сравнению с известным способом.
Количество затраченного
времени, ч
Количество очищенного
фермента на 100 г
листьев, мг
Электрофоретическа
однородностьУдельна активность,
нкат/мг белка
Количество растительного материала дл получени 1 мг очищенного фермента г/листьев
2,1 раза
60,65
1,4
5,83 раза
1500
80
5 раз
Claims (1)
- . СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОЗО-jФОСФАТ ИЗОМЕРАЗЫ ИЗ ЛИСТЬЕВ ШПИНАТА путем гомогенизации листьев в буфере, многократного фракционирования сульфатом аммония, диализа и ионообмен- I ной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, отличающийся тем, что,' с целью упрощения способа и повыше ния выхода целевого продукта, в качестве буфера используют трис-НС1; экстракт двукратно фракционируют сульфатом аммония при насыцении 3767%, активную фракцию фермента прогревают, проводят диализ против дистиллированной воды однократно в те- . чение 40 ч, вновь двукратно фракционируют сульфатом аммония при насыщении 40-85%, а ионообменную хроматографию ' Λ проводят однократно. 5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833571223A SU1165713A1 (ru) | 1983-02-25 | 1983-02-25 | Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833571223A SU1165713A1 (ru) | 1983-02-25 | 1983-02-25 | Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1165713A1 true SU1165713A1 (ru) | 1985-07-07 |
Family
ID=21056229
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833571223A SU1165713A1 (ru) | 1983-02-25 | 1983-02-25 | Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1165713A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997037028A3 (de) * | 1996-03-29 | 1997-12-04 | Basf Ag | Ribose-5-phosphat isomerase (d-ribose-5-phosphat ketol isomerase, ec 5.3.1.6) |
-
1983
- 1983-02-25 SU SU833571223A patent/SU1165713A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Rufner А.С. Spinach 5-phosphoribose isornerase. Purification arid properties of the eugynie.- Biocneaiistry, 1970, V. 9, N 1, p. 178-184. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997037028A3 (de) * | 1996-03-29 | 1997-12-04 | Basf Ag | Ribose-5-phosphat isomerase (d-ribose-5-phosphat ketol isomerase, ec 5.3.1.6) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3346336C2 (ru) | ||
| DE2720704C2 (de) | Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung | |
| Lincoln | [8] cGMP-dependent protein kinase | |
| US4400471A (en) | Preparation and crystallization of Fraction I protein from plant sources | |
| DE3877338T2 (de) | Isolierung einer immunoglobulinreichen molke-fraktion. | |
| DE2640387C3 (de) | Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung | |
| EP0100522B1 (de) | Neues Protein (PP17), Verfahren zu seiner Anreicherung und Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| US4312949A (en) | Method for the preparation of a gamma globulin solution suitable for intravenous use | |
| EP0033000A1 (de) | Neues Protein PP15, ein Verfahren zu seiner Herstellung sowie seine Verwendung | |
| DE69434001T2 (de) | Reinigung von vitamin-k abhaengigen proteinen durch membrane chromatographie | |
| US4874708A (en) | Process for the preparation of intra-venously administered gamma-globulins and the gamma-globulins obtained | |
| SU1165713A1 (ru) | Способ получени рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината | |
| EP0037963A2 (de) | Neues Protein PP9, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| Lis et al. | Isolation of two blood type A and N specific isolectins from Moluccella laevis seeds | |
| EP0529348B1 (de) | Verfahren zur Reinigung von Faktor XIII, monoklonale Antikörper gegen Faktor XIIIA, ihre Herstellung und Verwendung | |
| DE68924650T2 (de) | Verfahren zur reinigung von tenascin. | |
| JPS61233694A (ja) | ウシ脾臓中に含まれる成長因子及びその単離方法 | |
| US4495096A (en) | Process for producing and obtaining anaphylatoxin-and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
| US4960756A (en) | Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same | |
| DE3810331A1 (de) | Monoklonale vac-antikoerper | |
| SU1154329A1 (ru) | Способ получени фосфорибулокиназы | |
| PL85201B1 (ru) | ||
| HU182171B (en) | Process for isolating aminoacylase enzyme from kidney of mammalians | |
| RU1526226C (ru) | Способ получени коллагеназы | |
| EP0155676A2 (de) | Verfahren zur Gewinnung der globulären Domäne von Basalmembrankollagen und immunologische Bestimmung von Basalmembranmaterial und Autoantikörpern |