11 Изобретение относитс к флуоресцентному анализу и может быть использовано при разработке оптических детекторов, предназначенных дл анализа малых количеств флуоресцирующих жидкостей, например, в хроматографии. Целью изобретени вл етс повышение чувствительности и разрешающей способности регистрации поступаюших после хроматографической колонки флуоресцирующих жидкоетей . На фиг. 1 изображена кювета, общий вид; на фиг. 2 - схема, по сн юща вывод соотношени R от и d ; на фиг. 3 схема установки дл регистрации флуоресценции с данной кюветой. Кювета имеет форму рога Вуда 1, выполн ного из нефлуоресцируюшего под действием лазерного возбуждающего луча материала. 1ог Вуда представл ет собой изогнутый конус, обычно выполн емый из стекла,. с отверстием внутри него. Зачерненна поверхность поз вол ет использовать его в качестве светоловушки . Дл ввода исследуемой жидкости слу жит отверстие 2, дл протока - внутренний канал 3, а дл вывода - незапа нный конец 4.Торец кюветы закрыт, прозрачной дл воз буждающего лазерного излучени пластинкой 5.Области 6 контакта ее с кюветой зачернены , как и вс кювета, за исключением окон 7 дл регистрации прозрачной пластинки.5. Лазерный луч фокусируетс в точке 8. Поступающа в кювету после хроматографического разделени жидкость возбуждаетс лазерным лучом в точке 8 и после прохождени по канап 3 выводитс . Лазерное излу чение после прохождени через возбуждаемую жидкость при радиусе кривизны рога Вуда К R длакс отражаетс от стенок кюветы и поглощаетс зачерненной поверхностью. Регист раци флуоресценции исследуемой жидкости происходит через окна, расположенные на одной оси, пересекающей ось бокового отвер сти дл ввода жидкости. Радиус кривизны кюветы должен быть больше, чем () 1-де 2 - длина кюветы; ( мыкс - радиус кривизны кюветы; ( J - максимальный диаметр кюветы ( фиг. 2) При R ., лазерный лvч, падающий п пендикул рно па входное окно в центр вход ного отверсти во внутренний канал, отражаетс олип раз от поверхности кюветы. Тогда из треуголыппси ЛОВ очевидно, что ( «4)Отсюда получаем искомую ормулу. При размерах кюветы Rд,,кc 55 мм, мм, о/ 8 мм вклад второго члена формулы (1) в значение составл ет - 9%, однако с уменьшением отношени Р/о/ его вклад растет. При с/ , вклад второго члена составл ет 20%. Возбуждающее излучение фокусируетс в точке пересечени осей входного отверсти и канала дл протока жидкости, благодар чему достигаетс высока разрещающа способность анализа. Дл устранени перемешивани исследуемой жидкости (например фракций в хроматографии) диаметр входного отверсти равен диаметру канала дл протока жидкости . Регистраци флуоресценции происходит через два окна, что позвол ет учесть рзлеевское рассе ние возбуждающего излучени на жидкости одновременно с регистрацией флуоресценции . Оси входного отверсти и окон дл регистрации пересекаютс . Сток жидкости осуществл етс через незапа нный конец рога Вуда. Например, диаметр входного отверсти 2 и канала дл протока жидкости 3 (вблизи точки 8) 0,5 мм; длина кюветы 20 мм; максимальна толщина кюветы 8 мм; возбуждаемый объем, посредством соответствующей фокусировки лазерного луча, измен лс от 0,5 .до 125 нл; диаметр окон 6 дл флуоресценции 2 мм. Дл выбранных размеров и материала кюветы (кварц марки KB высокой степени чистоты) максимальный радиус кривизны R (51 мм; R 40 мм. Из этого же кварца выполн лась и торцова пластинка. Схема установки, на которой производились измерени , представлена на фиг. 3. Регистрировалась флуоресценци водных и спиртовых растворов флуоресценции. Величина Детектируемого объема измен лась расположенными у окон диафрагмами D . Минимальна скорость прокачки, реализованна дл этой кюветы, составила 1 мл/ч. Флуоресценци в кювете возбуждалась гелий-кадмиевым лазером с длиной волны генерации 325 нм. Фотоприемники работали в режиме счета одноэлектронных импульсов. Через окна осуществл лась регистраци флуоресценции, причем один из фотоприемников (ФЭУ-79) регистрировал флуоресценцию образца в области 550 нм, выдел емой фильтром F-, , а другой при помощи фильтра р2 измер л рэлеевское рассе ние11 The invention relates to fluorescence analysis and can be used in the development of optical detectors for analyzing small amounts of fluorescent liquids, for example, in chromatography. The aim of the invention is to increase the sensitivity and resolution of recording fluorescent fluids coming from a chromatographic column. FIG. 1 shows a cuvette, general view; in fig. 2 is a diagram illustrating the derivation of the relationship R from and d; in fig. 3 is a setup for recording fluorescence from a given cuvette. The cuvette has the shape of a Wood 1 horn, made of a material that does not fluoresce under the action of a laser excitation beam. Log Wood is a curved cone, usually made of glass ,. with a hole inside it. The blackened surface makes it possible to use it as a light trap. To enter the test liquid, the opening 2 serves, the internal channel 3 for the flow, and the empty end 4 for output. The end of the cuvette is closed, transparent for excitation laser radiation by the plate 5. The area 6 of its contact with the cuvette is blackened, as is the whole cuvette , with the exception of windows 7 for registering a transparent plate. The laser beam is focused at point 8. The liquid entering the cuvette after chromatographic separation is excited by the laser beam at point 8 and, after passing through cannap 3, is output. Laser radiation after passing through the excited fluid at a radius of curvature of the Wood's horn K R Dlux is reflected from the walls of the cuvette and absorbed by the blackened surface. The fluorescence register of the test liquid occurs through windows located on the same axis that intersects the axis of the side opening for the introduction of liquid. The radius of curvature of the cuvette should be greater than () 1-de 2 - the length of the cuvette; (myx is the radius of curvature of the cuvette; (J is the maximum diameter of the cuvette (Fig. 2) At R., laser lvch, the incident window falls into the center of the inlet to the internal channel, is reflected from the surface of the cuvette. Then from triangle protection of BWO it is obvious that ("4) From here we get the desired formula. With cell dimensions Rd ,, c 55 mm, mm, о / 8 mm, the contribution of the second term of formula (1) to the value is 9%, but with decreasing ratio P (o) its contribution grows. With c /, the contribution of the second term is 20%. The exciting radiation is focused at the intersection point. and the axes of the inlet and the channel for the flow of fluid, thereby achieving a high resolution of the analysis.To eliminate mixing of the test liquid (e.g. fractions in chromatography), the diameter of the entry opening is equal to the diameter of the channel for the flow of fluid.To record the fluorescence The liquid scattering of exciting radiation on a liquid simultaneously with the registration of fluorescence. The axes of the inlet and the registration window intersect. The liquid flows through the untamed end of the Wood horn. For example, the diameter of the inlet 2 and the channel for the flow of fluid 3 (near point 8) is 0.5 mm; cuvette length 20 mm; the maximum thickness of the cuvette is 8 mm; the excitation volume, by appropriately focusing the laser beam, varied from 0.5 to 125 nl; window diameter 6 for fluorescence 2 mm. For selected dimensions and cuvette material (high purity quartz brand KB), the maximum radius of curvature R (51 mm; R 40 mm. An end plate was also made from the same quartz. The setup diagram on which the measurements were made is shown in Fig. 3. The fluorescence of aqueous and alcohol fluorescence solutions was recorded, the magnitude of the detected volume varied by the diaphragms located near the windows D. The minimum flow rate realized for this cuvette was 1 ml / h. A laser with a generation wavelength of 325 nm. Photodetectors operated in the single-electron pulse counting mode. using a P2 filter, measuring Rayleigh scatter
лазерного излучени на жидкости. Учет вредного действи рассе нного на жидкости возбуждающего излучени происходил в регистрирующем устройстве.laser radiation on liquid. Accounting for the harmful effect of exciting radiation scattered in the liquid occurred in the recording device.
При наименьшем значении во:)буждаем1 го и детектируемого объемов (0,5 нл) Пьик зарегистрировано рекордно малое количестж флуоресцирующего вещества (10 моль).With the smallest value in:) boiling down and detectable volumes (0.5 nl) Peak, a record small number of fluorescent substances (10 mol) was recorded.