SU1179111A1 - Проточна кювета дл анализа микроколичеств флуоресцирующих жидкостей - Google Patents

Description

11 Изобретение относитс  к флуоресцентному анализу и может быть использовано при разработке оптических детекторов, предназначенных дл  анализа малых количеств флуоресцирующих жидкостей, например, в хроматографии. Целью изобретени   вл етс  повышение чувствительности и разрешающей способности регистрации поступаюших после хроматографической колонки флуоресцирующих жидкоетей . На фиг. 1 изображена кювета, общий вид; на фиг. 2 - схема, по сн юща  вывод соотношени  R от и d ; на фиг. 3 схема установки дл  регистрации флуоресценции с данной кюветой. Кювета имеет форму рога Вуда 1, выполн ного из нефлуоресцируюшего под действием лазерного возбуждающего луча материала. 1ог Вуда представл ет собой изогнутый конус, обычно выполн емый из стекла,. с отверстием внутри него. Зачерненна  поверхность поз вол ет использовать его в качестве светоловушки . Дл  ввода исследуемой жидкости слу жит отверстие 2, дл  протока - внутренний канал 3, а дл  вывода - незапа нный конец 4.Торец кюветы закрыт, прозрачной дл  воз буждающего лазерного излучени  пластинкой 5.Области 6 контакта ее с кюветой зачернены , как и вс  кювета, за исключением окон 7 дл  регистрации прозрачной пластинки.5. Лазерный луч фокусируетс  в точке 8. Поступающа  в кювету после хроматографического разделени  жидкость возбуждаетс  лазерным лучом в точке 8 и после прохождени  по канап 3 выводитс . Лазерное излу чение после прохождени  через возбуждаемую жидкость при радиусе кривизны рога Вуда К R длакс отражаетс  от стенок кюветы и поглощаетс  зачерненной поверхностью. Регист раци  флуоресценции исследуемой жидкости происходит через окна, расположенные на одной оси, пересекающей ось бокового отвер сти  дл  ввода жидкости. Радиус кривизны кюветы должен быть больше, чем () 1-де 2 - длина кюветы; ( мыкс - радиус кривизны кюветы; ( J - максимальный диаметр кюветы ( фиг. 2) При R ., лазерный лvч, падающий п пендикул рно па входное окно в центр вход ного отверсти  во внутренний канал, отражаетс  олип раз от поверхности кюветы. Тогда из треуголыппси ЛОВ очевидно, что ( «4)Отсюда получаем искомую ормулу. При размерах кюветы Rд,,кc 55 мм, мм, о/ 8 мм вклад второго члена формулы (1) в значение составл ет - 9%, однако с уменьшением отношени  Р/о/ его вклад растет. При с/ , вклад второго члена составл ет 20%. Возбуждающее излучение фокусируетс  в точке пересечени  осей входного отверсти  и канала дл  протока жидкости, благодар  чему достигаетс  высока  разрещающа  способность анализа. Дл  устранени  перемешивани  исследуемой жидкости (например фракций в хроматографии) диаметр входного отверсти  равен диаметру канала дл  протока жидкости . Регистраци  флуоресценции происходит через два окна, что позвол ет учесть рзлеевское рассе ние возбуждающего излучени  на жидкости одновременно с регистрацией флуоресценции . Оси входного отверсти  и окон дл  регистрации пересекаютс . Сток жидкости осуществл етс  через незапа нный конец рога Вуда. Например, диаметр входного отверсти  2 и канала дл  протока жидкости 3 (вблизи точки 8) 0,5 мм; длина кюветы 20 мм; максимальна  толщина кюветы 8 мм; возбуждаемый объем, посредством соответствующей фокусировки лазерного луча, измен лс  от 0,5 .до 125 нл; диаметр окон 6 дл  флуоресценции 2 мм. Дл  выбранных размеров и материала кюветы (кварц марки KB высокой степени чистоты) максимальный радиус кривизны R (51 мм; R 40 мм. Из этого же кварца выполн лась и торцова  пластинка. Схема установки, на которой производились измерени , представлена на фиг. 3. Регистрировалась флуоресценци  водных и спиртовых растворов флуоресценции. Величина Детектируемого объема измен лась расположенными у окон диафрагмами D . Минимальна  скорость прокачки, реализованна  дл  этой кюветы, составила 1 мл/ч. Флуоресценци  в кювете возбуждалась гелий-кадмиевым лазером с длиной волны генерации 325 нм. Фотоприемники работали в режиме счета одноэлектронных импульсов. Через окна осуществл лась регистраци  флуоресценции, причем один из фотоприемников (ФЭУ-79) регистрировал флуоресценцию образца в области 550 нм, выдел емой фильтром F-, , а другой при помощи фильтра р2 измер л рэлеевское рассе ние

лазерного излучени  на жидкости. Учет вредного действи  рассе нного на жидкости возбуждающего излучени  происходил в регистрирующем устройстве.

При наименьшем значении во:)буждаем1 го и детектируемого объемов (0,5 нл) Пьик зарегистрировано рекордно малое количестж флуоресцирующего вещества (10 моль).

Claims (1)

1. Todoriki Н, G. W. Laser fluorometry using an optical fiberan application to high performance liquid chromatography. — J. Chem. Pharm. Bull., 1980, 28, p. 1337-1339. (54(57) ПРОТОЧНАЯ КЮВЕТА ДЛЯ АНАЛИЗА МИКРОКОЛИЧЕСТВ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ЖИДКОСТЕЙ, содержащая канал для Протока исследуемой жидкости с боковым отверстием для ее ввода, отличающаяся тем, что, с целью повышения чувствительности И разрешающей способности анализа, кювета имеет форму рога Вуда с максимальным радиусом кривизны

   R <

   Svcikc < ~ ’ где d - наибольшая толщина кюветы;

   ί — ее длина, один торец рога Вуда закрыт прозрачной для возбуждающего лазерного излучения пластинкой, а другой имеет отверстие для вывода жидкости, в боковой поверхности рога выполйены входное отверстие, диаметр которого ра- § вен диаметру канала для протока жидкости, и два окна для регистрации флуоресценции, оси которых пересекают ось входного отверстия для ввода жидкости.