SU1188948A1 - Способ выделени фосфолипазы А2 из да кобры - Google Patents
Способ выделени фосфолипазы А2 из да кобры Download PDFInfo
- Publication number
- SU1188948A1 SU1188948A1 SU843718820A SU3718820A SU1188948A1 SU 1188948 A1 SU1188948 A1 SU 1188948A1 SU 843718820 A SU843718820 A SU 843718820A SU 3718820 A SU3718820 A SU 3718820A SU 1188948 A1 SU1188948 A1 SU 1188948A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- solution
- phospholipase
- ammonium
- acetic acid
- cobra
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 title abstract description 6
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 title 1
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 title 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 title 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 title 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 claims abstract description 12
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract 3
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 241000272060 Elapidae Species 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101710098556 Lipase A Proteins 0.000 description 1
- 101710099648 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102100026001 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Human genes 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPZPVAIBXPRLFD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;azane Chemical compound N.N.CC(O)=O GPZPVAIBXPRLFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПАЗЫ AJ , ИЗ ЯДА КОБРЫ, вк.гаочаюш;нй растворение да в буферном растворе с последующим центрифугированием, выделе- / нием целевого продукта путем аффинной хроматографии, элюции и лиофилизации , отличающийс тем, что, с целью упрощени процесса и повьшени степени очистки целевого продукта, растворение провод т в 0,045-0,055 М буферном растворе уксуско-кислого аммони при рй 7,4-7,6, хроматограф1го осуществл ют на пенткл-агарозе Б -r.oj же бу зерном растворе, а злюцию в 0,45-0,55 М растворе уксусно-кислого амьюни и лиофилизируют полученньм раствор двгкды. $
Description
Изобретение относитс к ферментной промь1шленности, в частности к получению чистой фосфолипазы А из да кобры.
Целью изобретени вл етс упрощение процесса и повышение степени очистки целевого продукта.
Пример 1. К 1,0г да кобры добавл ют 8,0 мл раствора 0,045 М уксусно-кислого аммони с удельной электропроводностью 4, S см, рН 7,4, смесь медленно перемешивают 4 ч при 4°С. Растворенный д цед1Трифугируют при 5000 об/мин при в течение 30 мин. Осадок выбрасывают., насадочную жидкость используют дл хроматографии. На уравновешенную с 0,045 М раствором уксусно-кислого
аммони (удельна электропроводность 4,4-10 S , рН 7,4) колонку с пентил-агарозой (размеры колонки
00 00 2,1 f-i6 см) нанос т раствор да. Ког- лонку злюируют с 0,045 М раствором
со уксусно-кислого аммони с удельной
4 электропроводностью 4,4 S ,
00 рН 7,4 со скоростью 30 мл/ч, отбирают фракции по 15 мл. Оптическую плотность элюата. регистрируют непрерывно с помощью Увикорд-11. Остальные компоненты да кобры кроме фосфолипазы А в данных услови х проход т колонку, а фосфолипаза А, имеюща оптиму 4 гидрофобности и активно : сти при рЦ.7,5, св зываетс на пентил-агарозе и ее элюируют градиентом ионной силь концентрацией уксуснокислого аммони 0,45 М с удельной электропроводнйстыо 32-10 S см , рН 7,4. Фракции, имеющие фосфолипазную активность, объедин ют (выход 92 мл) и лиофилизируют дважды.
Характеристика препарата: выход 65,1%. Степень очистки 25 раз.
..П ример2. К 1,0г да кобры добавл ют 8,0 мл раствора 0,050 М уксусно-кислого аммони с удельной электропроводностью 4,510 S см рН 7,5, смесь медленно перемешивают в течение 4 ч при . Растворенный д центрифугируют при 5000 об/мин при в течение 30 мин. Осадок выбрасьшают, надосадочную жидкость используют дл хроматографии. На уравновешенную с 0,050 М раствором уксусно-кислого аммони (удельна электропроводность 4, S см рН 7;5) колонку с пентш1 агарозой (размеры колонки 2,1 К 16 см) нанос т раствор да.
Колонку промывают с 0,050 М раствором уксусно-киелого аммони с ;-удельной электропроводностью 4,5)С к 10 S , рН 7,5 со скоростью 30 мл/ч, отбирают фракции по 15 мл. Оптическую плотность элюата регистрируют непрерывно с помощью Увикорда11 , Остальные компоненты да кобры кроме фосфолипазы А в данных услови х проход т колонку, а фосфолипаза А-, имеюща оптимум гидрофобности и активности при рН 7,5, св зываетс на пентил-агарозе и ее элюируют 0,50 М раствором уксусно-кислого ам;Мони с удельной электропроводно-,стью 34-10 S cM SpH 7,5. Фракции имеющие фосфолипазную активность, объедин ют (объем 90 мл) и лиофилизируют дважды.
Выход препарата 65,3% и степень очистки 25,2 раз.
Примерз. К 1,0г да добавл ют 8,0 мл раствора 0,055 М уксуснокислого аммони с удельной электропроводностью 4,6,-10 S см , рН 7,6 смесь медленно перемешивают 4 ч при . Растворенный д центрифугируют при 5000 об/мин при 4С в течение 30 мин. Осадок выбрасывают, надосадочную жидкость используют дл хроматографии . На ура вновешенную с 0,055 раствором уксусно-кислого аммони (удельна электропроводность 4,6)С iflO S , рН 7,6) колонку с пентил-агарозой (размеры колонки 2,1 х16) нанос т раствор да.
Колрн1су промь1вают с 0,055 Д раствором уксусно-кислого аммони с удельной электропроводностью 4,6 0 S см , рН 7,6 со скоростью 30 мл/ч, собирают фракции по 15 мп. Оптическую плотность элюата регистрируют непрерывно с помощью Увикорда-11 . Остальные компоненты да кроме фосфолипазы Ag в данных услови х проход т колонку, афосфолипаза А„, имеюща оптимум гидрофобности и активности при рН 7,5 св зываетс на пентил-агарозу и ее элюируют 0,55 М раствором уксусно-кислого аммони с удельной электропроводностью 36.10 S см , рН 7,6. Фракции, содержащие фосфолипазную активность, объедин ют (объем 92 мл) и лиофилизирзпот дважды.
Выход препарата 65,0% и степень очистки25 раз.
Технико-экономическа эффектна-. ность использовани предлагаемого способа выражаетс в возможности количественного вьщелени фосфолипазы А из да кобры простым и дешевым способом, а остальной д без фосфс- .липазы А можно использовать дл получени других биоактивных белков или после высушивани сохранить.
Claims (1)
- СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПАЗЫ ИЗ ЯДА КОБРЫ, включающий растроре-
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843718820A SU1188948A1 (ru) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | Способ выделени фосфолипазы А2 из да кобры |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843718820A SU1188948A1 (ru) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | Способ выделени фосфолипазы А2 из да кобры |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1188948A1 true SU1188948A1 (ru) | 1990-11-30 |
Family
ID=21110565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU843718820A SU1188948A1 (ru) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | Способ выделени фосфолипазы А2 из да кобры |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1188948A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008020741A3 (fr) * | 2006-08-16 | 2008-07-24 | Wisdom Asset Company | Procédé permettant d'extraire la phospholipase a2 du venin d'agkistrodon blomhoffii ussuriensis |
-
1984
- 1984-04-02 SU SU843718820A patent/SU1188948A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ансалон У.Р., Шамборапт О.Г., Мирошников А.И. Биоорганическа хк ми 3 (II) 1553-1559, 1977. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008020741A3 (fr) * | 2006-08-16 | 2008-07-24 | Wisdom Asset Company | Procédé permettant d'extraire la phospholipase a2 du venin d'agkistrodon blomhoffii ussuriensis |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH04505014A (ja) | 新規の蛋白質及びその製法 | |
| Lincoln | [8] cGMP-dependent protein kinase | |
| JPH06794B2 (ja) | グルタミン酸レセプタ−阻害物質 | |
| Myers | Trapped water of dental enamel | |
| WO2005049645A1 (en) | Recovery of a heat shock protein | |
| DE69333185T2 (de) | Für chitin-deacetylase kodierende dna | |
| KR100320394B1 (ko) | 멤브레인크로마토그래피시켜비타민-k의존형단백질을정제시키는방법 | |
| Synge et al. | Bound amino acids in protein-free extracts of Italian ryegrass | |
| EP0301374A2 (de) | Verfahren zur Reinigung des plazentaren Gewebeproteins PP4 | |
| EP0089218B1 (en) | A process for purifying human chorionic gonadotropin | |
| EP0057359B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Kallikrein aus Schweinepankreas-Extrakten | |
| JP2000178298A (ja) | グリコシル化および非グリコシル化タンパク質の分離法 | |
| Campargue et al. | Analysis of Hydroxyproline and Hydroxyproline-Arabinosides of Plant Origin by High-Performance Anion-Exchange Chromatography–Pulsed Amperometric Detection | |
| US4960756A (en) | Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same | |
| FUNATSU et al. | Structure and Toxic Function of Ricin I Purification Procedures of Ricin D | |
| CA2385371A1 (en) | Method of purifying calcium ion-binding protein | |
| KR20200022052A (ko) | 설파타아제 단백질을 정제하는 방법 | |
| JP3108767B1 (ja) | ｃｈｉｂ２型キチナーゼの製造法 | |
| WO1990005181A1 (de) | REINIGUNG VON Cu/Zn-SUPEROXIDDISMUTASE | |
| CA1334390C (en) | Glycoprotein growth modulation materials | |
| EP0042560A2 (en) | A process for producing and obtaining anaphylatoxin- and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
| SU1055732A1 (ru) | Способ выделени фактора роста нервной ткани из змеиного да | |
| GB2024228A (en) | Process and adsorbent for the isolation in purer form of enzyme(s) from a crude enzyme solution | |
| JP4112236B2 (ja) | レクチンの分離精製方法並びに動物血漿固定化担体及びアフィニティーカラム | |
| EP0059182B1 (en) | A process for isolating aminoacylase enzyme from a mammal kidney extract |