SU1189448A1 - Среда для криоконсервации спермы быков - Google Patents
Среда для криоконсервации спермы быков Download PDFInfo
- Publication number
- SU1189448A1 SU1189448A1 SU843742635A SU3742635A SU1189448A1 SU 1189448 A1 SU1189448 A1 SU 1189448A1 SU 843742635 A SU843742635 A SU 843742635A SU 3742635 A SU3742635 A SU 3742635A SU 1189448 A1 SU1189448 A1 SU 1189448A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- sperm
- same
- medium
- list
- distilled water
- Prior art date
Links
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims description 3
- 241000283725 Bos Species 0.000 title 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 5
- 108010013296 Sericins Proteins 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 244000309464 bull Species 0.000 claims description 3
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims 2
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 description 1
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006837 my medium Substances 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к защитным средам для разбавления и криогенной консервации спермы животных, и может быть использовано на племпредприятиях и станциях искусственного осеменения.
Цель изобретения — повышение сохранности биологической полноценности сперми-
| ев при их криоконсервации. Пример 1. Используется с | :перма быков |
| черно-пестрой породы, а также | симментальс- |
| кой. Непосредственно после получения эяку- | |
| лят делят на 3 части, каждую из них раз- | |
| бавляют одной из сред: предлагаемой, извест | |
| ной или базовой. | |
| Известная среда содержит, | мас.%: |
| Рафиноза | 18,0 |
| Глутатион восстанов- | |
| ленный | 0,46 |
| Трис(гидроксиметил) | |
| аминометан | 0,15 |
| р-Амилаза | 0,1 |
| £-Глюкуронидаза | 0,26 |
| Альдолаза | 0,5 |
| Капроновая кислота | 0,25 |
| Яичный желток | 20,0 |
| Вода дистиллированная | Остальное |
Предварительно проведено сравнение различных вариантов известной среды. Указанный вариант имеет наиболее высокие показатели сохраняемой спермы, согласно рецептуре соотношение понижает качествен- 30 ные показатели оттаянной спермы более, чем в 2 раза.
В качестве базовой среды используют общеприменяемую в искусственном осеменении лактозо-глицерино-желточную среду, имеющую следующий состав:· 45
38—40°С. Жизнедеятельность оттаянной спермы оценивают по показателям подвижности и выживаемости.
Подвижность определяют в раздавлен5 ной капле спермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 100— 180 раз с использованием нагревательного столика при 40—41°С. Оценку подвижности производят по десятибальной шкале.
Выживаемость в часах определяют по количеству времени, прошедшего от размораживания спермы до ее гибели при хранении в термостате (ί = 38°С).
Абсолютный показатель выживаемости (5а): для его определения проводят оценку
15 подвижности оттаянной спермы, хранящейся при 38°С через каждый час до ее гибели. Суммарная подвижность спермиев за время их жизни и является абсолютным показателем выживаемости.
Показатели жизнедеятельности разморо20 женной спермы (п = 8) приведена в табл. 2.
Из табл. 2 следует, что предлагаемая среда обеспечивает повышение подвижности и выживаемости спермиев по сравнению с известной средой. При этом пока25 затель выживаемости увеличивается на 15—35%. В сравнении с базовой средой
предлагаемая обеспечивает повышение выживаемости и абсолютного показателя выживаемости на 42—73%.
Пример 2. В опыте используют известную среду, базовую, а также предлагаемую среду, переведенную методом сублимации в сухое состояние. Предварительно для высушивания готовят предлагаемую среду следующего состава:
| Лактоза, г | 11,5 |
| Желток куриных яиц, мл | 20,0 |
| Глицерин, мл | 5,0 |
| Спермосан-3, тыс.ед. | 50,0 |
| Вода дистиллированная, | |
| мл | 100,0 |
| Помимо указанных, в опыте используют |
предлагаемые среды, составы которых приведены в табл. 1.
Среды для криоконсервации спермы животных готовят следующим образом: навеску 45 сахарозы растворяют прокипяченной дистиллированной водой и стерилизуют в кипящей водяной бане 5—10 мин, затем охлаждают до 40—50°С и вводят остальные компоненты. 50
Разбавленную сперму охлаждают в холодильнике до 5°С и замораживают на фторопластовой пластине в парах азота при —60°С в течение З мин.
Замороженную сперму хранят в жидком 55 азоте при —196°С.
Размораживание спермы производят в 2,9% водном растворе цитрата натрия при
| Сахароза, г Глутатион восстановлен- | 9,5 |
| ный, г | 0,4 |
| Трис(гидроксиметил)- | 0,34 |
| аминометан, г | |
| Глутаминовая кисло- | |
| та, г | 0,22 |
| Серицин, г | 0,4 |
| Желток куриных яиц, мл | 20,0 |
| Спермосан-3, тыс.ед. Вода дистиллирован- | 50,0 |
| ная, мл | 100,0 |
| Затем среду замораживают и высуши- |
вают путем сублимации. Сухую среду хранят в запаянных ампулах. Непосредственно перед использованием растворяют в прокипяченной и остывшей дистиллированной воде в соотношении 1:4,5 или 1:5.
Сперму, разбавленную предлагаемой средой, а также известной средой и базовой охлаждают в холодильнике до 5°С и замораживают в гранулах на фторопластовой пластине в парах азота при —60°С.
Замороженную сперму хранят в жидком азоте при 1 = — 196°С. Размораживают сперму в 2,9% водном растворе цитрата натрия при с = 40°С.
I
3
1189448
4
Показатели жизнедеятельности размороженной спермы представлены в табл. 2 (см. сухая среда).
Пример 3. В опыте используют известную среду базовую, а также предлагаемые среды следующего состава (см. табл. 3).
Разбавление спермы предлагаемой средой проводят в два этапа — вначале состав А на половину конечной степени разбавления при 30°С.
Разбавленную сперму охлаждают в холодильнике до 4°С в течение 4—5 ч и затем вторично разбавляют предлагаемой средой Б. Температура среды в момент дополнительного разбавления равна 4°С. Замораживание проводят через час после вторичного разбавления на фторопластовой пластине при —60°С.
Замороженную сперму хранят в жидком азоте при —196°С.
Биологическую полноценность замороженной спермы оценивают по показателям подвижности и выживаемости.
Показатели жизнедеятельности размороженной спермы быков (п = 24) приведены в табл. 4.
Определение оплодотворяющей способности спермы, разбавленной и замороженной проверяемыми средами проводят в опытном хозяйстве. Оплодотворяемость коров определяли ректальным способом по истечении 120 дн.
Оплодотворяемость телок после осеменения спермой, замороженной в различных средах, приведена в табл. 5.
Приведенные в примерах результаты свидетельствуют о более высокой биологической полноценности спермы при применении предлагаемой среды в сравнении с из5 вестной средой (а также и с базовой средой). Это проявляется в более высокой подвижности оттаянных спермиев на 7% (табл. 3), что свидетельствует о более высокой устойчивости спермиев к замораживанию;
10
в повышении времени выживаемости оттаянных спермиев на 16% (табл. 4) — 19,5% (табл. 2);
в значительном увеличении абсолютного ,5 показателя выживаемости на 43% (табл. 4) при статистически значимой разнице (р<0,01). что свидетельствует о более высокой жизнеспособности оттаянной спермы и в повышении оплодотворяющей способности спермы, замороженной в предлагае20 мой среде в сравнении с известной на 17,1%.
Таким образом, предлагаемая среда эффективно защищает спермин при замораживании и позволяет сохранять их в тече25 ние длительного времени. При этом после размораживания спермин характеризуются хорошей подвижностью, выживаемостью и оплодотворяющей способностью. Кроме того, предлагаемая среда сохраняет свои качества и будучи переведена в сухое состоя30 ние, что значительно упрощает ее использование, транспортировку, а также длительное хранение.
| Табл | и ц а 1 | |||
| Компоненты состава | Состав | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Сахароза, г | 6,7 | 9,5 | 11,5 | 13,0 |
| Глутатион восстановленный, г | 0,2 | 0,4 | 0,8 | 0,2 |
| Трис(гидроксиметил)аминоме- | ||||
| тан, г | 0, 18 | 0,34 | 0,51 | 0,41 |
| Глутаминовая кислота, г | 0,1 | 0,22 | 0,22 | 0,3 |
| Серицин, г | 0,2 | 0,4 | 0,2 | 0,4 |
| Желток куриных яиц, мл | 15,0 | 20,0 | 20,0 | 20 |
| Спермосан-3, тыс. ед. | 75,0 | 50,0 | 75,0 | 50,0 |
| Вода дистиллированная, мл | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100 |
1189448
6
5
Таблица 2
| Защитные среды | Подвижность спермиев, баллы | Выживаемость, ч | Абсолютный показатель выживаемости |
| Предлагаемые | 4,08±0,174 | 8,25+0,619 | 26,2+1,69 |
| 4,23+0,125 | 8,38+0,460 | 25,5+1,401 | |
| 4,1 +0,149 | 7,13±0,718 | 21,8+1,98 | |
| 4,13+0,13 | 8,0 +0,91 | 24,4+2,34 | |
| Сухая | 4,21+0,113 | 9,21+0,648 | 26,5+2,56 |
| Известная | 4,07+0,175 | 6,18±0,81 | 21,2+2,93 |
| Базовая | 4,47+0,195 | 4,83+0,58 | 15,25+3,6 |
Таблица 3
| Компоненты состава | Состав | |
| А | Б | |
| Лактоза, г | 6,7 | 13 |
| Глутатион восстановленный, г | 0,4 | 0,8 |
| Трис(гидроксиметил)аминометан, г | 0,34 | 0,51 |
| Глутаминовая кислота, г | 0,22 | 0,22 |
| Серицин, г | 0,2 | 0,4 |
| Желток куриных яиц, мл | 20,0 | 20,0 |
| Спермосан-3, тыс. ед. | 50,0 | 50,0 |
| Вода дистиллированная, мл | До 100 | До 100 |
3
7
8
1189448
Таблица 4
| Показатели | Среда | Разница, | 2 | ||
| Предлагаемая | Известная | Базовая | к базовой | к известной | |
| Подвижность спер- | |||||
| миев, баллы | 4,69+0,09 | 4,3±0,36 | 4,60± | + 2 | + 7 |
| ±0,099 | |||||
| Выжимаемость, ч | 10,0+0,534 | 8,6+0,71 | 5,67+ | + 76 | + 16 |
| +0,683 | |||||
| Абсолютный показа- | |||||
| тель выживаемости | 36,96+2,229 | 25,88+ | 18,67+ | +98 | +43 |
| ±1,9 | ±2,806 |
Таблица 5
Среда
| Предлагаемая | Известная | Базовая | |
| Осеменено, голов | 52 | 36 | 29 |
| Оплодотворилось, голов | 45 | 25 | 20 |
| Оплодотворяемость, % | 86,5 | 69,4 | 69 |
Claims (2)
- СРЕДА ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМЫ БЫКОВ, содержащая сахарозу или лактозу, глутатион восстановленный, трис(гидроксиметил) аминометан, желток куриных яиц, спермосан-3 и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения сохранности биологической полноценности спермиев, она дополнительно содержит серицин и глутаминовую кислоту при следующем соотношении компонентов, мае. %:Сахароза или лактоза 6,7—13,0Глутатион восстановленный 0,2—0,8 Трис(гидроксиметил)аминометан 0,18—0,54Серицин 0,2—0,8Глутаминовая кислота 0,1-^-0,3Желток куриных яиц 15—20Спермосан-3, тыс.ед. 50—75Вода дистиллированная Остальное00001
- 21189448
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843742635A SU1189448A1 (ru) | 1984-04-13 | 1984-04-13 | Среда для криоконсервации спермы быков |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843742635A SU1189448A1 (ru) | 1984-04-13 | 1984-04-13 | Среда для криоконсервации спермы быков |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1189448A1 true SU1189448A1 (ru) | 1985-11-07 |
Family
ID=21119746
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU843742635A SU1189448A1 (ru) | 1984-04-13 | 1984-04-13 | Среда для криоконсервации спермы быков |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1189448A1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1051907A1 (fr) * | 1999-05-14 | 2000-11-15 | IMV Technologies | Dilueur pour la cryoconservation de spermatozoides de bovins |
| JP2002101869A (ja) * | 2000-09-29 | 2002-04-09 | Seiren Co Ltd | 脱水ストレス保護剤 |
| EP1321473A4 (en) * | 2000-09-29 | 2004-09-15 | Seiren Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PREVENTING A DECREASE IN PROTEIN ACTIVITY BASED ON FREEZING AND USE OF A POLYPEPTID IN THE PRODUCTION OF AGENTS WHICH REDUCE PROTEIN ACTIVITY |
| EP1820847A4 (en) * | 2004-09-24 | 2007-10-03 | Seiren Kabushiki Kaisha | COMPOSITION FOR STORAGE OF CELLS BY FREEZING |
-
1984
- 1984-04-13 SU SU843742635A patent/SU1189448A1/ru active
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1051907A1 (fr) * | 1999-05-14 | 2000-11-15 | IMV Technologies | Dilueur pour la cryoconservation de spermatozoides de bovins |
| FR2793495A1 (fr) * | 1999-05-14 | 2000-11-17 | Imv Technologies | Dilueur pour la cryoconservation de spermatozoides de bovins |
| JP2002101869A (ja) * | 2000-09-29 | 2002-04-09 | Seiren Co Ltd | 脱水ストレス保護剤 |
| EP1321473A4 (en) * | 2000-09-29 | 2004-09-15 | Seiren Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PREVENTING A DECREASE IN PROTEIN ACTIVITY BASED ON FREEZING AND USE OF A POLYPEPTID IN THE PRODUCTION OF AGENTS WHICH REDUCE PROTEIN ACTIVITY |
| EP1820847A4 (en) * | 2004-09-24 | 2007-10-03 | Seiren Kabushiki Kaisha | COMPOSITION FOR STORAGE OF CELLS BY FREEZING |
| US9055739B2 (en) | 2004-09-24 | 2015-06-16 | Seiren Kabushiki Kaisha | Compositions for cryopreservation of cells |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Graham | Cryopreservation of stallion spermatozoa | |
| US4980277A (en) | Cryoprotectant solution and method | |
| Polge | Low-temperature storage of mammalian spermatozoa | |
| Babiak et al. | Effect of extender composition and equilibration time on fertilization ability and enzymatic activity of rainbow trout cryopreserved spermatozoa | |
| Setchell et al. | Epididymal constituents and related substances in the storage of spermatozoa: a review | |
| Saeki | Crooked-necked spermatozoa in relation to low fertility in the artificial insemination of fowl | |
| Stoss et al. | Studies on cryopreservation of eggs from rainbow trout (Salmo gairdneri) and coho salmon (Oncorhynchus kisutch) | |
| KR102316820B1 (ko) | 소 생식세포의 동결 보존용 조성물 및 동결 보존 방법 | |
| Foote et al. | Fertility of bull semen stored up to four days at 5 C. in 20% egg yolk extenders | |
| Stachecki et al. | Cryopreservation of mouse oocytes using a medium with low sodium content: effect of plunge temperature | |
| Bag et al. | Effect of freezing temperature, at which straws were plunged into liquid nitrogen, on the post-thaw motility and acrosomal status of ram spermatozoa | |
| Shanmugam et al. | Pellet method of semen cryopreservation: Effect of cryoprotectants, semen diluents and chicken lines | |
| Hoyle et al. | Preliminary Results in the Fertilization of Eggs with Frozen Sperm of Atlantic Salmon (Saltno salar) | |
| Hulata et al. | Cold storage of carp semen for short periods | |
| Kalyani et al. | Cryopreservation of Black Bengal buck semen by Tris-based extenders containing different levels of egg-yolk | |
| Pérez-Garnelo et al. | Post-thaw viability of European bison (Bison bonasus) semen frozen with extenders containing egg yolk or lipids of plant origin and examined with a heterologous in vitro fertilization assay | |
| Rao et al. | Effect of thaw rates on motility, survival and acrosomal integrity of buffalo spermatozoa frozen in medium French straws | |
| Rehman et al. | Studies on the freezability of Kundhi buffalo bull semen | |
| 寺田隆登 et al. | Efficacy of trehalose in cryopreservation of chicken spermatozoa. | |
| Mortimer et al. | Influence of glycerol concentration and freezing rate on post-thaw motility of bovine spermatozoa in continental straws | |
| Sherman | Historical synopsis of human semen cryobanking | |
| Horváth et al. | Chapter 15 sperm cryopreservation of aquatic species | |
| Sherman | Long-term cryopreservation of motility and and fertility of human spermatozoa | |
| Larasati et al. | The Effect of Cryopreservation on the Sperm Ultrastructure of Mus Musculus Albinus Strain DDY: Comparison of Nakagata vs Modified vs Kitazato Cryoprotectants. | |
| Miles et al. | Analysis of chilling injury in the biological control agent Aphidoletes aphidimyza |