SU552953A1 - Способ получени биологически активных дрожжевых автолизатов - Google Patents

Description

вой кислоты до определенного предела (от 0,1 до 1%). Однако лишь совместное присутствие в реакционной смеси как пропионовой кислоты, так и этилацетата резко увеличивает концентрацию аминного азота и выход аминокислот (см. табл. 1), что говорит о синергическом эффекте найденной комнозиции, обеспечивающей как стерильность ироцесса, так и нолноту автолиза. Аналогичными свойствами обладает и уксусна  кислота, котора  подобно пропионовой  вл етс  также активатором Ко фермента А и участвует в цикле Кребса.

Однако, антисептическими свойствами обладает и р д других карбоновых кислот, участие которых в качестве ускорителей метаболизма не известно, как например, каприлова  кислота, салицилова , бензойна  и т. д.

Изобретение по вл етс  примерами.

Пример 1. В стерильно чистые ферментеры , емкостью около 3 л, внос т 1,250 кг свежих прессованных пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae с 20%-ным содержанием сухого вещества, добавл ют 300 мл дистиллированной воды, 19,5 мл этилацетата, и 6,3 мл концентрированной пропионовой кислоты. Аппарат герметически закрывают. Автолиз идет при температуре 45-55°С при посто нном перемешивании .

После разжижени  дрожжевой массы и прекращени  пенообразовани  из ферментера периодически отбирают пробы в стерильные пробирки по 20 мл. Пробы центрифугируют , а в надосадочной жидкости определ ют аминный азот и выдел ют из нее смесь L-аминокислот и пептидов. Автолизованную дрожжевую суспензию подвергают также микробиологическим испытани м , дл  чего ее высеивают в чашки Петри на нейтральный сусло-агар и сусло-агар с м со-пептонным бульоном. После 24 ч инкубации при 37°С на нейтральном сусле происходит рост дрожжевых колоний в том случае, если автолиз не прошел до конца и, следовательно, в суспензии имелись неразрушенные клетки. Отсутствие клеток на сусле свидетельствует о том, что к моменту высева в суспензии нет целых живых клеток, т. е. их автолиз прошел до конца. На м со-пептонном агаре можно наблюдать развитие посторонней микрофлоры, и таким образом, судить о наличии или отсутствии стерильности в ферментере.

Как свидетельствуют микробиологические испытани , автолиз дрожжей, провод щийс  в присутствии только одной пропионовой кислоты, шел стерильно, при этом выход аминного азота был неудовлетворительно мал. Проведение процесса только в присутствии лизирующего агента - этилацетата, не всегда обеспечивало стерильность среды в аппарате. И только совместное воздействие на дрожжевые

клетки иропиоиовой кислоты и этилацетата дает возможность закончить весь процесс за 15-20 ч без риска заражени  автолиза посторонней микрофлорой. Полученный автолизат подвергают центрифугированию , после чего из прозрачного фильтрата выдел ют смесь L-аминокислот и пептидов путем последовательного пропускани  через колонку с ионообменной

смолой-анионитом ИА-1р в ОН-форме, а затем вытекающий раствор аминокислот и пептидов сажают на смолу - сильнокислотный катионит КУ 2X8 в Н-форме. Элюирование аминокислот с катионита провод т 1-1,5%-ным раствором аммиака, а затем полученный раствор упаривают в вакуумном испарителе до полного удалени  аммиака. Полученный светлый порошок, представл ющий смесь аминокислот и пептидов, высушивают досуха и подвергают полному аминокислотному анализу (см. табл. 2) на аминокислотном анализаторе KLA-3B фирмы «Хитачи с точностью 3%.

Пример 2. Параметры процесса и соотношение вводимых компонентов такие же, как в примере 1, однако вместо пропионовой в ферментер добавл ют одинаковое количество лед ной уксусной кислоты.

Результаты приведены в табл. 1.

Пример 3. В качестве консерванта в реакционную смесь ввод т концентрированную каприловую кислоту в таком же количестве, как в примере 1. Все остальные параметры автолиза также воспроизвод т по примеру 1. Результаты приведены в табл. 1.

Пример 4. В качестве субстрата берут дрожжи Ovidiuni lactis и Mycoderma

vini (спиртовые).

В однолитровые стерильно чистые ферментеры загружают по 500 г указанных дрожжей, 120 мл дистиллированной воды, 2,5 мл концентрированной пропионовой

кислоты (0,4 об. %) и 7,8 мл этилацетата (1 об. %). Процесс ведут 33-40 ч в герметично закрытых ферментерах при посто нном перемешивании и температуре 50±1°С.

Как показали анализы, максимальный выход аминного азота приводитс  на 20- 22 ч процесса. Таким образом, выделение смеси аминокислот целесообразно проводить из 20-22-часовых автолизатов. Микробиологические испытани  показали стерильность среды в аппарате в течение всего процесса.

Пример 5. Процесс провод т на стендовой установке в столитровом ферментере,

который предварительно стерилизуют острым иаром.

50 кг свежих прессованных пекарских дрожжей загружают в ферментер, куда добавл ют 250 мл концентрированной пропионовой кислоты, 780 мл этилацетата и 12 л

в Ef

s ч ю

о

S

m s- u

+

о

s о

о

VO

о

3 а, о ч 9 О

о.

м s г

s а X X

о

о, о н и о п

« о н tu ч X

X 3 о си

и

о о.

1(

о

s э- s

п;

та

з: Динамика аминокислотного состава автолизатов дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Таблица