SU624562A3 - Способ получени вещества, обладающего гормональным действием - Google Patents

Description

В качестве осадител  белка примен ют трихлоруксусную кислоту, сульфосалициловую кислоту. Белки можно удалить при помощи растворителей и высаливани .

Отделение белковых веществ, полипептидов и других фракций осуществл ют и при помощи гель-фильтрации, вещество получают с высокой чистотой. Очистку концентрата биологически активного вещества осуществл ют и другими способами, например, хромотографии , диализа, экстракции, осаждени , адсорбции или комбинации этих способов .

.Дл  разрущени  кальцийактивного царагормона обрабатывают веществами, которые легко реагируют с белковыми веществами или с полипептидами. Дл  этого примен ют азотистую кислоту, окись этилена, формалин .

Содержание биологически активного вещества в препаратах может быть в щироких пределах и зависит от р да условий. Все эти препараты приготавливают известными способами из твердых или жидких концентратов или смесей в форме таблеток, свечек, растворов, мазей, порощкообразных смесей или составов дл  распылени . Таблет.. ки с содержанием биологически активного вещества 0,05-3 мг изготовл ют мокры.ми методами гранулировани , но примен ют и сухие методы. В качестве наполнителей и вспомогательных веществ примен ют неактивные вещества.

Инъекционные растворы получают из водных растворов с концентрацией 0,05- 5 мг/мл, с удалением белковых веществ. Приготавливают инъекционный раствор стерильным фильтрованием. Мази приготавливают с концентрацией биологически активного вещества 0,01 - 1 г/кг. Дл  этого используют гидрофильные и гидрофобные основы мазей. Также приготавливают свечи, дл  которых используют масло какао или дл  синтетических - карбовакс. Концентраци  биологически активного вещества в свечах составл ет 0,05-5 мг в зависимости от чистоты концентрата.

Приготавливают также косметические препараты, которые в качестве биологически активного вещества содержат вещество, обладающее тор.мональным действием. Эти косметические препараты изготавливают из твердых или жидких концентратов вещества с известными растворител .ми, добавкой присадок, наполнителей, разбавителей и эксципиентов в форме .мазей, растворов, кремов, эмульсий; порощкообразных -смесей, составов дл  распылени .

Содержание биологически активного вещества составл ет 0,01-0,5 мг/г.

Полученное вещество, обладающее гормональным действие.м, не оказывает вли ни  на уровень кальци  в сыворотке крови, но повыщает содержание кремни  и измен ет

концентрации других микроэлементов, например , Си, F и других.

В клинической терапии вещество оказывает благопри тное действие на синдром

Сьегрена, на Rhino-laringo-pharingitis sicea, склеродермию, кожный грибок, лучевую эритему и другие болезни.

Пример 1. 10 г подвергнутого лиофилизации и размолотого порошка железы обезжиривают известным образом. Порощок перемещивают с 25 мл ацетона при-.к о:у{натной температуре и фильтруют на стекл нном фильтре. Затем хорошо отжатый порощок железы оп ть смещивают с 25 мл хлороформа при комнатной температуре и фильтруj ют на стекл нном фильтре. Операцию повтор ют . Затем отжатое вещество оп ть суспендируют в 25 мл абсолютного ацетона при комнатной те.мпературе и отсасывают на стекл нном фильтре. Полученный порошок железы сущат в вакууме при комнатной температуре. Вес сухого вещества 7-9 г в зависимости от содержани  жира в исходном веществе. Затем 10 г обезжиренного, безводного порощка железы трижды э.кстрагируют в 100 мл дистиллированной воды при комнатной температуре в течение одного часа. Между стади .ми экстракции порошок железы отдел ют от экстракта центрифугированием .

Экстракты до переработки хран т в атмосфере азота при температуре.З-5°С. Водные выт жки имеют положительную реакцию относительно нингидрина, биурета и трихлоруксусной кислоты. Затем водные выт жки собирают и закапывают водный 50°/о-ный раствор трихлоруксусной кислоты при посто нном взбалтывании до тех пор, пока конечна  концентраци  трихлоруксусной кислоты не составит 15%. После одночасовой выдержки при 3-5°С осадок три .хлоруксусной кислоты подвергают центрифугированию .,

д Верхний слой представл ет прозрачный бледно-желтый водный раствор, дающий отрицательную реакцию на биурет и три.хлоруксусную кислоту, положительную реакцию на нпигидрин.

Избыток трихлоруксусной кис.юты удал ют пос.тедовательной экстракцией при комнатной температуре водным эфирным раствором . Экстракцию провод т 17-18 раз, чтобы полностью удалить трихлоруксусную кислоту . После последней экстракции водна  фаза должна иметь величину рН 4,5-5. Водную фазу освобождают от,.эфира при помощи водоструйного насосапри температуре не выше 30°С в течение 6 ч. Освобождение от эфира контролируют отсутствием запаха . После этого водный раствор подвергают лиофилизации и хран т в закрытом сосуде. Препарат гигроскопичен. Выход в пересчете на общий вес порошка железы (перед обезжириванием), составл ет 10- 15% (в зависимости от содержани  жира). Пример 2. По примеру 1 из водного экстракта обезжиренной околощнтовидной желе зы приготавливают экстракт, который не содержит белка и осадитель. 5 г инертного к трихлоруксусной-кислоте лйофилизата подвергают гель-фильтрованию на колонне с сефадексом G - 15. Масса колонны 4,3 х X 144 см. Элюентом  вл етс  вода. Скорость нотока 6 мл/ч. Размер фракции 15 мл. Основна  фракци  числа туб 46-83 с содержанием 913 мг богата веществом, обладающим гормональным действие.м и и.меет  рко выраженное физиологическое или терапевтическое действие при дозировке 5- 10 мкг/кг веса тела. Это вещество содержитс  в двух первых верхних част х гель-фильтровани . Разделение фракций производ т следующим образом. Спектрофотометрическое измерение абсорбции при 280 нм, затем при 234 и 360 нм, после этого измер ют электрическую проводимость , затем качественное исследование на хлорид-ион с реактивом - нитратом серебра . Измер ют величину рН соединенных фракций, относ щихс  к отдельным верщинам . Затем провод т исследование с реактивом-нингидрином и исследуют невооруженным глазом на опалесценцию и окраску. Выход основной фракции числа туб 46- 83 в пересчете на сухой необезжиренный порошок околощитовидной железы составл ет приблизительно 2-2,5%. Пример 3. Методика примера 2 с той разницей, что оба первых пика улавливают в отдельных основных фракци х. Таким путем получают из 5 г несодержащего белка водного экстракта 302 мг основной фракции 1 и 555 мг основной фракции 11. Затем основную фракцию 11 снова подвергают гельфильтрованию . 456 мг вещества нанос т на колонку, вода примен етс  как элюент. Размер колонки 4,3 X 144 см, скорость потока 50 мл/ч, раз.мер фракции 10 мл, сефадекс G - 15. Таким путем основную фракцию 11 раздел ют на три других верхних части. Фракции, относ щиес  к средней части, соедин ютс . Вес последней после лиофилизации составл ет 237,5 мг. Выход в пересчете на необезжиренный порошок околощитовидной железы составл ет 0,6-0,8°/о. Это желтое гигроскопическое вещество с содержанием CHNOS или Р. Характерные группы SH-СООН,-ОН. При исследовании массспектрометром получают следуюцхие характерные фрагменты: C/Hi iN вОзЗ; CsHgNgOg и С4НбНО. Фракци  содержит и другие структуры. Эта фракци  имеет физиологическое или терапевтическое действие уже при дозе I нм/кг веса тела. Продукт очищают хроматографией или другими методами. Выход ве1цества 0,3-0,4% в пересчете на сухой порощок околощитовидной железы. Пример 4. Полученный по примеру 1 лиофилизированный конечный продукт подвергают диализу. 700 .мг вещества, растворенные в 33 мл дистиллированной воды, подвергают диализу. Внещнюю водную фазу замен ют каждые 3,5 ч. В следующие 3 ночи водную фазу замен ют каждые 16 ч. Диализ провод т при температуре 5°С. Содержание сухого вещества после лиофилизации составл ет 35 мг. Внещн   фаза, сконцентрированна  в вакууме при 30°С и подвергнута  после этого лиофилизации, дает 662 мг сухого вещества. Пример 5. 20 г порощка железы (подвергнутого лиофилизации, необезжиренного) по примеру 1 раствор ют в воде. Зате.м сгущают освобожденный от белка и эфира водный раствор до 1/3 и экстрагируют путем встр хивани  3 раза 1:1 объемом хлороформа , а водную часть освобождают в вакууме от хлороформа. Не содержащий хлороформа водный раствор сгущают в вакууме до 20 мл и при комнатной температуре добавл ют 5 объемов ацетона. Раствор оставл ют на ночь на льду. Из почти бесцветной фазы ацетона осаждают желтую масл нистую часть. Ацетоновый раствор отстаивают и желтое масл нистое вещество сущат в вакууме до посто нного веса. Получают 1,1 г желтого смолистого концентрата. Ацетоновый раствор выпаривают в вакууме досуха . Получают 1 г смолистого концентрата. Пример 6. 50 г. лиофилизированного порощка железы обезжиривают по примеру 1. Полученный обезжнренный порошок железы (38 г) смешивают с 40 мл 10°/о-ного раствора мочевины. После одночасовой выдержки смесь перемешивают в 400 мл лед ной уксусной кислоты и 400 мл ацетона. Ее выдерживают в течение 1 ч, затем к раствору добавл ют остальные 1200 мл ацетона и 11,2 мл нормального раствора гидроокиси натри ; После осаждени  производ т фильт/рование через слой газа. К содержащему мочевину и ацетон экстракту добавл ют 2 л эфира. Смесь оставл ют на ночь и затем декантируют . Суспензию центрифугируют, промывают 2 раза по 50 мл в смеси ацетона и эфира (1:1). Полученный осадок смешивают С 200 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты , осадок раствор ют. Затем прибавл ют 10 г хлорида натри , из раствора выпадает осадок, который поглощаетс  в 50 мл воды. Производ т диализ 6 раз с 2 л воды, сливают диализную воду и остаток подвергают лиофилизации. Получают 732 г твердого концентрата . Остающеес  в растворе после осаждени  хлоридом натри  и центрифугировани  вещество (197 мл) обрабатывают 40 мл 45%-ной трихлоруксусной кислоты и затем центрифугируют. Верхнюю фазу подверга ют диализу 4 раза по 3 л воды, выпаривают в вакууме и подвергают лиофилизации. Получают 86 г концентрата.

7 ,8

Claims (2)

1. Формула изобретени дают из него белки и полипептиды трихлор .уксусной кислотой, затем удал ют избыток 1. Способ оолученн  вещества, обладаю-трихлоруксусной кислоты серией экстракций щего гормональным действием, orлычаюи4и1)-водным раствором дналкилового эфира и с  т«м, что околощнтовидную железу мле-5 целевой продукт подвергают очистке, копитающих высушивают, измельчают, за-
2. 2. Способ по п. I, отличающийс  тем, тем экстрагируют водой, полученный водныйчто водную экстракцию ведут при темпераэкстракт отдел ют от твердых частиц, осаж-туре 20-60°С,

   624562