JPH0347200A - マカラスムギ由来の糖タンパク質、その製造法及びそれを含有する免疫調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、マカラスムギの実のエキスからの単離により
製造される、３８ｋＤの分子量を有する糖タンパク質と
、該糖タンパク質の製造法と、該糖タンパク質を作用物
質として有する薬剤と、免疫調節剤を製造するための使
用とに関する。

新たに発見された糖タンパク質は水溶性であり、３８ｋ
Ｄの分子量を育し、アスパルテートのグルタメートに対
する比が０．９７、アラニンのバリンに対する比が１．
０３、バリンのヒスチジンに対する比が１０．８、バリ
ンのリジンに対する比が２．３及びバリンのアルギンに
対する比が３６５というアミノ酸比を有する。ポリペプ
チド鎖（アミノ酸残基のみ）の見掛けの分子量として、
２２．２ｋＤの値が生じる。

糖タンパク質の分子量はアミノ酸及び糖の分析の結果か
ら算出された。本発明の糖タンパク質は、更に、中性ヘ
キソース、詳しくは、グルコース（４５％）、ガラクト
ース（８％）、マンノース（３１％）及びアラビノース
（１５％）を含有する。

オサミン（グルコサミン及びガラクトースアミン）の含
量は０．１％以下である。アミノ酸残基部分は５８．４
％であり、糖残基部分は４１．６％である。算出された
値は全加水分解産物のガスクロマトグラフィ及びアミノ
酸分析によって得られた。

従って、本発明の糖タンパク質は、多糖類部分に結合さ
れているポリペプチド鎖によって形成される。

好ましい本発明の糖タンパク質では、タンパク質画分は
約１１モル％のアスパラギン酸、約１１モル％のグルタ
ミン酸及び約８モル％のトレオニンから成る。グルコー
ス、ガラクトース、マンノース及びアラビノースは、好
ましくは例えば６：１及び４：２の比で存在する。

本発明の糖タンパク質はマカラスムギの実のエキスから
抽出され得る。

このために好ましい本発明の方法では、抽出物の高分子
成分は、引続き加工するため、好ましくは透析によって
濾過される。次いで、高分子成分は、糖タンパク質に適
当な沈殿剤、好ましくは硫酸アンモニウムによって沈殿
される。生じた沈殿物は、例えば遠心分離によって得ら
れ、水に溶解され、不純塩を除去するため、透析される
。

精製した溶液を保存のために凍結乾燥して、新たに溶解
することは好ましい。次いで、成分を分子量領域に従っ
て分離し、分子量領域３８ｋＤを分離させる。好ましく
はゲルクロマトグラフィによって成分を分離する。発見
された活性画分を濃縮し、場合によっては新たに凍結乾
燥することができる。

本発明の方法を実施する前に、脂質及び核酸のような高
分子の夾雑物（Ｂｅｇｌｅｉｔｓｔｏｆｆ’ｅ　）をエ
キスから遊離させることは好ましい。このために、第４
級アンモニウム、例えば塩化ピリジルセチルアンモニウ
ム、好ましくは臭化トリメチルセチルアンモニウムと共
に沈殿を行ない、次いで、沈殿した夾雑物を分離させる
ために遠心分離を行なうことができる。

安定性の理由から、沈殿及び遠心分離を好ましくは冷温
（約＋４℃）で行なう。

透析のために、すなわち、ある分子量を有する分子を所
定の分子量と同じかそれより高いものも制限するために
、一定の多孔膜を用いる。こうした多孔膜は中空繊維カ
ートリッジであってもよいが、螺旋限外濾過モジュール
を用いることは好ましい。ＰＴＧＣの商品名で市販され
ているミリボーレ社の膜を用いることは好ましい。当然
ながら、所定の分子量以上の分子量を有する分子を、他
の方法により、例えば親水性の重合ゲルクロマトグラフ
ィで選択することができる。

成分を分子量に従って分離するために、ａｏ、ｏｏ。

ドルトン以上の排除量（Ａｕｓｓｃｈｌｕｓｓｖｏｌｕ
ＩＩｌｅｎ　）を有し且つ改質デキストランによって形
成されている親水性の重合ゲルを用いることは好ましい
。

「ゼファデックスＧ−５０Ｊという商品名で市販されて
いるゲルが適当である。

この場合、溶離された第１の両分を合体し、濃縮し、透
析する。次いで、濃縮して乾燥する。この乾燥を冷凍乾
燥によって行なうことは好ましい。

平均的な寸法であり小型実験装置としても市場で入手で
きる凍結昇華装置を用いて周知の方法で凍結乾燥を行な
う。

凍結乾燥物の溶解後、ゲル濾過を行なう。濾過すべき溶
液は緩衝されており、同じ緩衝液で溶離を行なう。０．
１　Ｍの炭酸アンモニウム緩衝液を用いるのは好ましい
。濾過を古典的な方法、特に紫外線スペクトル分析によ
って２１１１０ｎ１１の波長で追跡することができる。

このために用いられたゲルも、「セファクライニルＳ−
２００Ｊという商品名で市販されている改質デキストラ
ンであることが好ましい。

本発明の糖タンパク質は驚くべき薬理学的な性質、特に
、注目すべき免疫調節的性質及び良好な生体親和性を有
する。こうした性質の故に、本願の糖タンパク質を薬剤
として用いることの正しさが証明される。こうした薬剤
を、例えば、バクテリア又はウィルスの人間及び動物へ
の感染を処置し防止するために用いる。

急性及び慢性の感染の際に使用することは適当である。

バクテリアによる感染の例は気管支炎、扁桃炎、喉頭炎
、耳炎及び副鼻腔炎であり、ウィルスによる感染の例は
、ヘルペスウィルス、ピコルナウィルス、インフルエン
ザウィルス、ＨＩｖ又はサイトロメガロウイルスによっ
て引き起こされる例である。

更に、本発明の糖タンパク質を、遺伝による抵抗力の無
さか又は−時的な抵抗力の無さによる感染し易さを治療
するために用いることができる。

治療される患者及びその時々に治療すべき病気によって
、通常の用量を変える。例えば人間では、径口投与の場
合に日にＩＯ乃至２００　ｍｇ、直腸投与の場合に日に
１乃至１５１１ｇ及び非経腸投与の場合に２乃至２０ｍ
ｇである。

対応の薬学的組成物は例えば固体又は液体であってもよ
く、通常医学で用いられる薬学的形状で、例えば単衣錠
及び糖衣錠、ゲルカプセル、顆粒、溶液、シロップ、生
薬、注射可能な製剤、凍結乾燥製剤又は非凍結乾燥製剤
、卵、クリーム、ローション、満開、点眼剤、エアゾー
ルとして存在することができる。これらは通常の方法で
生成することができる。この場合、１つ又はそれ以上の
作用物質を、通常、以上のような薬学的組成物中に用い
られる賦形剤、例えばタルク、アラビアゴム、乳糖、澱
粉、ステアリン酸マグネシウム、カカオバター、水性又
は非水性担体、動物又は植物由来の油脂性物質、パラフ
ィン系誘導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散助剤又
は乳化剤及び防腐剤に加えることができる。

以下の例により、本発明を限定することなく、本発明を
説明する。

１、カラスムギの糖タンパク質を含有する錠剤５０ｍｇ
の糖タンパク質を含有するそれぞれ２００　ｍｇの重量
を有する錠剤を製造するために、カラスムギの糖タンパ
ク質　　　　　　５０１ｇ微結晶性セルロース　　　　
　　　　　１２９Ｂ（例えば［アビセルｐｈ　１０２　
Ｊ　）ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　２０ｍ
ｇ（例えば［ポリブラスドーネＸＬ　Ｊ　）ステアリン
酸マグネシウム　　　　　　　１ｍｇを必要とする。

２、カラスムギの糖タンパク質を３００ｍｇ含有するカ
プセル １００　ｍｇのカプセルに対し、 カラスムギの糖タンパク質 黄臘 大豆油 植物油 ０ｍｇ ｈｇ ０ｍｇ １３０＋＋＋ｇ カプセルケース　　　　　　　　　　　１００ａ＋ｇを
必要とする。

３、カラスムギの糖タンパク質を含有する溶液１００１
の溶液に対し、 カラスムギの糖タンパク質　　　　　５００　Ｂソルビ
ット　　　　　　　　　　　　　　１０ｇサッカリン中
ナトリウム　　　　　　０．０５　ｇＨ２０（ｂｉｄｅ
ｓｔ、　）　　　　　　　１００ａ＋Ｉ以下を必要とす
る。

４、カラスムギの糖タンパク質を含有する注射アンブル ２ＩＩ１ｇの糖タンパク質を含有するそれぞれ２＋ａｌ
の容量を有する注射アンプルを製造するために、カラス
ムギの糖タンパク質　　　　　　２ａ＋ｇ生理食塩水　
　　　　　　　　　２．０１以下を必要とする。

５、カラスムギの糖タンパク質を含有する注入溶液 ５００１の注入溶液に対し、 カラスムギの糖タンパク質　　　　　　２０１ｇ生理食
塩水　　　　　　　　　　５００１以下を必要とする。

６、カラスムギの糖タンパク質を含有する軟膏１００ｇ
の軟膏に対し、 カラスムギの糖タンパク質　　　　　　　１ｇＮａｔｒ
ｉｕａ＋ｅｅｔｙｌｓｔｅａｒｙｌｏｓｕｌｆｕｒｉｃ
ｕｓと　　　１７ｇ乳化剤（例えば「エムルガーデＦＪ
） との混合物 オレイン酸デシルエステル　　　　　　２０ｇ（例えば
「セチオルＶＪ） ｐ−ヒドロキシ安息香酸ニス　　　　　０．５ｇチルと
ソルビン酸との混合物 （例えばニパソルビン） Ｈ２０（ｂｌｄｅｓｔ、）　　　　　　　　　　　ｆｉ
ｌ、５ｇ免疫調節活性を、抗体の形成を刺激する能力に
基づいて、マウスのリンパ球によって試験した。

当業者に周知であるイエルネの抗体斑点試験では、第１
図に示すように、カラスムギに由来する糖タンパク質は
羊の赤血球に対する抗体合成を著しく高めることができ
た。濃度が１５゜６μｇ／ｍｌである場合、刺激は最大
限、すなわち未処理の対照よりも約８倍高かった。大腸
菌から由来するリボ多糖（ＬＰＳ）である周知の刺激剤
と比較して、６０又は３０ｇｇ／■ｌという比較可能な
濃度の場合の刺激は２倍乃至３倍高かった。

マイトジェン活性 糖タンパク質のマイトジェン活性を、マウスの牌臓細胞
におけるリンパ球の変態によって測定した。この場合、
第２図に示すように、リンパ球のＤＮＳ中への［６−’
Ｈ］チミジンの組込みを測定する。ゲル濾過によって得
られた糖タンパク質の両分は、１．２５μｇ／ｌの濃度
において、細菌Ｂ細胞マイトジェン（Ｌ　Ｐ　Ｓ）の３
０ｇｇ／ｍｌと同様に強い刺激を起こさせる。糖タンパ
ク質の同様な濃度をもって、１２５Ｂｇ／ｌの予め精製
された糖タンパク質によって刺激の５０％が達成される
。

インターロイキン１は、身体に固有の防御の中心的な両
受体として機能する免疫学的に非特異性のサイトカイニ
ンである。インターロイキン１は、リンパ球を活性化し
、急性期タンパクの発現を調節し、熱を誘導する性質に
基づき、炎症及び感染の分野において重要な意味を有す
る。単核細胞又はマクロファージはインターロイキン１
の主要な生産者である。従って、第３図に示すように、
マクロファージ系統の試験を行なった。７２時間内で、
カラスムギの糖タンパク質は、周知のようにインターロ
イキン１の分泌を誘導する、大腸菌由来のリポ多糖とほ
ぼ同様に強い刺激を起こさせる。予め精製された糖タン
パク質の濃度は６０ｕｇ／ｌｓＩであり、リポ多糖に対
してはＩＯμｇ／ｍｌであった。

これに対し、未処理の対照では、７２時間以内で、組込
みの割合の３分の１にしか達しなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第３図は、本発明による糖蛋白の薬理学的効果
を試験した結果を示すグラフである。 Ｆｉｇ、３ ｐ−ｔｏ季旧月きを用いたインターロイキン１め言大漏
支１；］０の４帖度 四゛ヌに 一−−子あ糟髪されｔ； カデス乙ギ漬漸瞥タン／ζり寞

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、マカラスムギの実のエキスからの単離により製造さ
   れる、３８ｋＤの分子量を有する糖タンパク質。 ２、アスパルテートのグルタメートに対する比が０．９
   ７、アラニンのバリンに対する比が１．０３、バリンの
   ヒスチジンに対する比が１０．６、バリンのリジンに対
   する比が２．３及びバリンのアルギンに対する比が３．
   ５というアミノ酸比を有する請求項１に記載の糖タンパ
   ク質。。 ３、２２．２ｋＤというポリペプチド鎖の見掛けの分子
   量を有する請求項２に記載の糖タンパク質。 ４、グルコース４５％、ガラクトース８％、マンノース
   ３１％及びアラビノース１５％という組成で中性ヘキソ
   ースを有し、且つ０．１％以下のオサミン含量を有する
   請求項１乃至３のいずれか１項に記載の糖タンパク質。 ５、５８．４％のアミノ酸残基部分と４１．６％の糖残
   基部分とを有する請求項４に記載の糖タンパク質。 ６、タンパク質画分が約１１モル％のアスパラギン酸、
   約１１モル％のグルタミン酸及び約８モル％のトレオニ
   ンから成る請求項１乃至５のいずれか１項に記載の糖タ
   ンパク質。７、グルコース対ガラクトース及びマンノー
   ス対アラビノースの比が約６：１又は４：２である請求
   項１乃至６のいずれか１項に記載の糖タンパク質。 ８、（ａ）高分子成分を濾過してそれを続けて加工する
   こと、 （ｂ）糖タンパク質に適した沈殿剤で高分子成分を沈殿
   すること、 （ｃ）沈殿物を分離して溶解すること、 （ｄ）不純塩を透析によって分離すること、 （ｅ）分子量領域に従って成分を分離し、分子量領域３
   ８ｋＤを分離すること、を特徴とする請求項１乃至７の
   いずれか１に記載の糖タンパク質の製造法。 ９、透析によって高分子成分を濾過することを特徴とす
   る請求項８に記載の糖タンパク質の製造法。 １０、沈殿剤として硫酸アンモニウムを用いることを特
   徴とする請求項８又は９に記載の糖タンパク質の製造法
   。 １１、透析後に凍結乾燥を行うことを特徴とする請求項
   ８乃至１０のいずれか１項に記載の糖タンパク質の製造
   法。 １２、ゲルクロマトグラフィによって、分子量領域に従
   って成分を分離することを特徴とする請求項８乃至１１
   のいずれか１項に記載の糖タンパク質の製造法。 １３、クロマトグラフィに用いられた溶液は緩衝されて
   おり、同様な緩衝液によって溶離することを特徴とする
   請求項１２に記載の糖タンパク質の製造法。 １４、０．１Ｍの炭酸アンモニウム緩衝液を用いること
   を特徴とする請求項１３に記載の糖タンパク質の製造法
   。 １５、高分子成分を選択する前に脂質及び核酸を沈殿さ
   せて分離することを特徴とする請求項８乃至１４のいず
   れか１項に記載の糖タンパク質の製造法。 １６、沈殿のために第４級アンモニウムを用いることを
   特徴とする請求項１５に記載の糖タンパク質の製造法。 １７、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の糖タンパ
   ク質を作用物質として含有する薬剤。 １８、免疫調節剤を製造するための請求項１乃至７のい
   ずれか１項に記載の糖タンパク質の使用。