TH613A - วิธีการเปลี่ยนแปลง dna เส้นคู่ - Google Patents

Abstract

การประดิษฐ์ที่เสนอนี้กล่าวถึงปัญหาซึ่งเกี่ยวกับทริปไตเฟนรีเพรสชั่นและแอทเทนเอชั่นในลักษณะที่แตกต่างออกไปและให้ (1) วิธีการที่จะได้พาหะของเอกซ์เพรสชั่น ซึ่งออกแบบไว้ สำหรับทำเอกซ์เพรสชั่นของยีนจากสิ่งที่มีชีวิตอื่นโดยตรง จากระบบ trp โปรโมเตอร์-โอเปอเรเตอร์ (2) วิธีการที่จะให้ ได้มาซึ่งพาหะที่ออกแบบไว้สำหรับเอกซ์เพรสชั่นของโพลีเพป ไทด์ซึ่งตัดได้อย่างจำเพาะจากทริปโตเฟนโอเปอเรเตอร์-โปรโม เตอร์ และกำหนดรหัสโดยยืนที่ได้จากการเชื่อมยีนของสิ่งที่ มีชีวิตชนิดอื่นกับยีนของแบคทีเรียนั้น (3) วิธีการหนึ่ง ของเอกซ์เพรสชั่นของโพลีเพปไทด์ของสิ่งที่มีชีวิตอื่นซึ่ง ควบคุมได้ดีมีประสิทธิภาพสูงและมีผลผลิตสูงไม่น้อย ไปกว่าวิธีที่เกี่ยวข้องกัน

Claims (3)

1. กรรมวิธีในการตัด DNA เส้นคู่ที่ตรงจุดใด ๆ ที่กำหนดให้ซึ่งประกอบด้วย (a) การเปลี่ยน DNA เส้นคู่ให้เป็น DNA เส้นเดี่ยวใน บริเวณรอบ ๆ จุดดังกล่าว (b) การจัดเข้าคู่ (hybridize) เข้ากับบริเวณเส้นเดี่ยว ที่ได้ในขั้นตอน (a) ด้วยไพรเมอร์เสริมซึ่งที่มีความยาว เท่ากับ DNA เส้นเดี่ยวปลาย 5' ของไพรเมอร์จะอยู่ตรงกัน ข้ามกับนิวคลีโอไทด์ที่อยู่ที่ 5' ก่อนหน้าตำแหน่งที่ตั้ง ใจจะตัด (c) การสร้างส่วนของเส้นที่สองที่ถูกกำจัดออกมากจากขั้น ตอน (a) ซึ่งอยู่ในทิศทาง 3' จากไพรเมอร์ดังกล่าว โดยการทำ ปฏิกิริยากับ DNA โพลีเมอเรสโดยมีดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟสที่มี อะดีนีน,ไธมีน,กวานีน และไซโตซีนอยู่ด้วย (d) การย่อยความยาวของเส้นเดี่ยวที่เหลืออยู่ของ DNA ซึ่ง ยื่นออกไปเลยจุดที่ตั้งใจจะตัด

2. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอน (c) และ (d) จะเกิดขึ้นพร้อมกันโดยการทำปฏิกิริยากับ DNA โพลีเมอเ รส ซึ่งจะเกิดโพลีเมอไรซ์ในทิศทางของ 5'-3' โดยจะเป็นเอกโซ นิวคลีโอไลติกในทิศทาง 3'-5' แต่จะเป็น นอน-เอกโซ-นิวคลี โอไลติคในทิศทาง 5'-3'

3. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่งโพลีเมอริค คือ คลีโนว์ โพลีเมอเรส I (ข้อถือสิทธิ 3 ข้อ, 1 หน้า, 13 รูป)