TARIFNAME GASTROINTESTINAL BOZUKLUKLAR IÇIN TEDAVILER BULUSUN ALANI Bu bulus, gastrointestinal bozukluklari tedavi etmek için yöntemlerde peptitler, bilesimler ve bunlarin kullanimlari ile ilgilidir. BULUSUN ALT YAPISI Gastrointestinal bozukluklar (GI), ince bagirsagin yalnizca ABDtde 20 ila 60 milyon bireyi etkileyen yaygin kronik bir bozuklugu olan huzursuz bagirsak sendromunu (lBS) içerir (Lehman Brothers, Global Healthcare-Irritable bowel syndrome industry update, September 1999). lBS, gastroenterologlar tarafindan tani koyulan en yaygin bozukluktur ve birinci basamak hekimlere yapilan ABD'de, IBS'nin ekonomik etkisinin, saglik hizmeti kullaniminin dogrudan maliyetleri ve ise gitmemenin dolayli maliyetleri yoluyla, yillik olarak 25$ milyar hastalar ise üç kat daha fazla ara vermek zorunda kalir ve düsük bir yasam kalitesi bildirir. IBStyi tedavi etmek için bir kaç reçete opsiyonunun olmasina ragmen, IBS'den muzdarip olan hastalar için karsilanmamis büyük bir tibbi ihtiyaç vardir. muzdariptir. IBS hastalarinin üç alt-grubu, baskin bagirsak aliskanligina göre tanimlanmistir: konstipasyon-baskin huzursuz bagirsak sendromu (c-IBS), diyare-baskin huzursuz bagirsak sendromu (d-IBS) veya iki huzursuz bagirsak sendromu arasinda degisken olan durum (a-IBS). c-IBS'den muzdarip olan bireylerin tahminleri, siklikla %30 alinti yapilmis olan IBS hastalarinin %20-50'si araligindadir. Benzer bir cinsiyet oranina sahip olan diger iki alt-grubun aksine, c-IBS, kadinlarda daha yaygindir (3:1'Iik oran) (Talley et al., 1995, Am J Epidemiol 142:76-83). resmiyet kazandirilmistir. Yakin tarihlerde, enflamasyonun lBS'nin etiyolojisindeki bir rolü için artan bulgular vardir. Raporlar, lBS hastalarinin alt- kümelerinin kolonik enflamatuvar ve mast hücrelerinde küçük ancak anlamli artisa, artmis indüklenebilir nitrik okside (NO) ve sentaza (iNOS) ve enflamatuvar sitokinlerin degistirilmis ekspresyonuna sahip oldugunu gösterir Gastrointestinal bozukluklar ayrica, konstipasyonu da içerir, burada 34 milyon kadar çok Amerikan kronik konstipasyon (CC) ile iliskili semptomlara sahiptir ve 8,5 milyon hasta tedavi aramistir. CC'si olan hastalar siklikla, zor ve topakli diskilara, diskilama sirasinda zorlanmalara, bir tamamlanmamis diskilama hissine ve bir haftada üçten az bagirsak hareketliligine sahiptir. CC'nin huzursuzlugu ve siskinligi hastalarin yasam kalitesini, bunlarin çalisma ve tipik günlük aktivitelere katilma yetisini bozarak, yasam kalitelerini anlamli bir sekilde etkiler. CC hastalarinin yarisi, CC için güncel mevcut tedavilerden tatmin olmamistir. Böylelikle, burada CC'yi tedavinin etmenin yeni bilesikleri ve yöntemleri için bir ihtiyaç vardir. tedavisi Için guanilat siklaz C (GC-C) reseptörünün agonistleri olarak etki eden peptitleri açiklar. Açiklanan özel bir peptit asagidaki amino asit dizininden olusan Iinaklotittir: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr. Bu patentler ayni zamanda, Iinaklotit ve ilgili peptitleri hazirlamak için yöntemleri de açiklar. Linaklotit, asagidaki amino asit yapisina sahiptir: H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr-OH Linaklotit oral olarak uygulanir ve konstipasyonlu huzursuz bagirsak sendromunun (lBS-c) tedavisi için klinik çalismalarda güncel olarak, GI fizyolojisi üzerinde asagidakileri içeren çok sayida etkiye sahiptir: (1) azalmis viseral agri, (2) azalmis siskinlik ve (3) artmis diski sikligina ve iyilesmis diski kivamliligina yol açabilen artmis GI geçisi. Oral olarak uygulanan Iinaklotit düzeylerinde oral uygulamadan sonra Iinaklotidin sistemik olarak saptanamayan düzeyleri görülür. Böylelikle, Iinaklotidin klinik çalismalarindan ayni zamanda sonuçlar, GC-C peptidi agonistlerinin terapötik olarak kullanilabilecegini öne Mevcut açiklama, bunlarin amin gruplarina imidazolidinon türevlerine ve/veya bunlarin karboksil gruplarinda guanilat siklaz-C (GC-C) reseptörlerini farkli afinitelerde aktive edebilen ve/veya baglayabilen alkil esterlere modifiye edilebilen peptitler özelligi gösterir. GC-C, düsük düzeylerdeki GC-C'nin diger dokularda saptanmasina ragmen, memelilerde ince bagirsak fonksiyonunun önemli bir regülatörüdür. GC-C endojen hormonlara, guaniline ve üroguaniline ve isi-kararli enterotoksin familyasinin enterik bakteriyel peptitlerine (ST peptitlerine) yanit verir. Antagonist GC-Ciyi baglandiginda, burada, intestinal akiskan salgilanmasinda bir artis ile sonuçlanarak, sekonder mesajcinin, siklik GMP'nin (c-GMP'nin) bir yükselmesi, ve klorür ve bikarbonat salgilanmasinda bir artis vardir. Mevcut açiklamanin bazi örneklerinde, burada tarif edilen peptitler, c-GMP düzeylerinde artmis yükselme üretebilir ve gastrointestinal bozukluklari tedavi etmek için terapötik bir opsiyon saglayabilir. KISA AÇIKLAMA Mevcut bulus, ekli istemlerde tanimlandigi sekilde bir peptit ve bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar. Ekli istemlerde tanimlandigi sekilde farmasötik bilesimler ve dozaj birimleri de saglanir. Daha genel olarak, mevcut açiklama, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, huzursuz bagirsak sendromunu (IBS), gastrointestinal hareket bozukluklarini, konstipasyonu, fonksiyonel gastrointestinal bozukluklari, gastroözofageal reflü hastaligini (GERD), duodenogastrik reflüyü, Crohn hastaligini, ülseratif koliti, enflamatuvar bagirsak hastaligini, fonksiyonel mide yanmasini, dispepsiyi, viseral agriyi, gastroparezi, kronik intestinal psödo-obstrüksiyonu (veya kolonik psödo-obstrüksiyonu) ve burada tarif edilen diger rahatsizliklari ve bozukluklari içeren gastrointestinal bozukluklari ve rahatsizliklari guanilat siklaz C (GC-C) reseptörünü aktive eden peptitleri ve bilesimleri kullanarak tedavi etmek için peptitler, bilesimler ve ilgili yöntemler özelligi gösterir. Mevcut açiklamanin bir yönü bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizinini içerir, burada peptidin en az bir karboksil grubu, (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada R, C1-e alkildir. Bir uygulamada, peptit asagidaki amino asit yapisini veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir: <|3H2 CH2 Cys-Cys-NH-(L-c_Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-Cys_NH-(|3-c-o-R' burada, R', H'dir veya bir 01-6 alkildir ve en az bir R', 01-6 alkildir. Mevcut açiklamanin bir ikinci yönü, asagidaki amino asit yapisini içeren bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu Cys-Cys NH C Cl Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr burada, R, bir C1-6alkildir veya asagidaki amino asit yapisini içeren bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys_NH-C-C-O-R burada, R, C1-e alkildir. Mevcut açiklamanin bir üçüncü yönü, bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit asagidaki amino asit yapisini Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Mevcut açiklamanin bir dördüncü yönü, mevcut açiklamanin bir peptidini içeren Mevcut açiklamanin bir besinci yönü, bir gastrointestinal bozuklugu tedavi etmek için mevcut açiklamaya göre farmasötik bir bilesimi uygulamayi içeren bir yöntem saglar. Açiklamanin bir veya birden fazla uygulamasinin detaylari, eslik eden tarifnamede izah edilir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, mevcut açiklamanin emsal peptitlerinin bir T84 hücreli c-GMP analizindeki doz yanitini gösterir. Sekil 2, emsal peptitlerin RP-HPLC ile bir analizinin bir örnegini gösterir, burada imidazolidinon türevini ifade eder. Sekil 3, Iinaklotidin ve Cys1-lMD'nin bir kompetitif radyoligant baglama analizinde T84 hücreleri üzerindeki hücre-yüzeyi GC-C reseptörlerini spesifik baglamasini gösterir. Sekil 4, emsal peptitlerin bir T84 hücreli c-GMP analizinde doz yanitini gösterir. Sekiller, örnek olarak saglanir ve mevcut bulusun kapsamini sinirlandirmasi amaçlanmaz. DETAYLI AÇIKLAMA Guanilat siklaz C (GC-C), mide ve ince bagirsaktaki epitelyal hücrelerin apikal yüzeyi üzerinde yer alan bir transmembran reseptörüdür. Reseptör bir ekstraselüler Iigand-baglama alanina, bir tek transmembran bölgesine ve bir C- ucu guanilil siklaz alanina sahiptir. Bir ligand GC-C'nin ekstraselüler alanini baglandiginda, intraselüler katalitik alan, GTP'den cGMP'nin üretimini katalizler. In vivo, intraselüler cGMPsdeki bu artis, klorürün ve bikarbonatin intestinal emilimine, artis akiskan salgilanmasina ve intestinal geçisin hizlandirilmasina yol açan olaylarin bir kaskadini baslatir. cGMP epitelyumdan mukozaya ve ince bagirsaktaki akiskan ve elektrolit dengesinin bir regülatörü olan intestinal GC-C reseptörünü baglar. Bazi durumlarda, intestinal GC-C reseptörlerini baglayan ve aktive eden ancak bir peptidin non-varyant formuna kiyasla daha az aktif veya daha daha fazla aktif olan bir varyant veya modifiye edilmis peptide sahip olan hastalari tedavi etmek arzu edilebilir. Düsük aktivite, reseptör için düsük afiniteden veya bagli oldugunda reseptörü aktive etmeye yönelik düsük bir yetiden veya peptidin düsük kararliligindan kaynaklanabilir. Yüksek aktivite, reseptör için yüksek afiniteden veya bagli oldugunda reseptörü aktive etmeye yönelik yüksek bir yetiden veya peptidin yüksek kararliligindan kaynaklanabilir. Emsal Peptitlerin Açiklamasi: Mevcut açiklamanin çesitli uygulamalarinda, bir peptit modifiye edilebilir, burada peptidin amino asit rezidüsünün en az bir karboksil grubu bir alkil estere modifiye edilir. Bu modifikasyon, örnegin, bir karboksilik aside bir dehidratlama ajani varliginda bir alkol ile muamele etme ile üretilebilir, burada dehidratlama ajani, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, güçlü bir asidi, örnegin, sülfürik asidi, içerebilir. Karboksil gruplarindan alkil esterler üretmenin diger yöntemleri, tekniklerde uzmanligi olan kisiler tarafindan hâlihazirda bilinir. Burada kullanildigi sekliyle, bir karboksil grubu asagidaki formüle sahiptir: (- Burada kullanildigi sekliyle, "alkil" terimi, bir doymus lineer veya dallanmis- çinkoirli monovalan hidrokarbon radikalini ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, bir grup, bu grup amino asit dizininin sonunda bulundugunda, terminal veya uçtur. Burada kullanildigi sekliyle, bir peptit üzerindeki bir amin grubu asagidaki formüle sahiptir: H2N-g-R2 burada, R2, peptidin geri kalanidir. Burada kullanildigi sekliyle, bir peptit üzerindeki bir imin grubu asagidaki formüle sahiptir: burada, R2, peptidin geri kalanidir. Bazi uygulamalarda, bir peptitteki bir glutamat amino asidinin yan çinkoirinin karboksilik asidi bir alkil estere modifiye edilir. Ilave uygulamalarda, bir peptitteki bir glutamat amino asidinin yan çinkoirinin karboksilik asidi bir etil estere modifiye edilir. Diger uygulamalarda, bir peptit dizinindeki bir tirozin amino asidinin C-ucu karboksilik asidi bir alkil estere modifiye edilir. Ilave uygulamalarda, bir peptit dizinindeki bir tirozin amino asidinin C-ucu karboksilik asidi bir etil estere modifiye edilir. Bir kaç uygulamada, mevcut açiklama, bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizinine sahiptir, burada peptidin en az bir karboksil grubu, (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada R, bir 01-6 alkildir. Bir kaç uygulamada, peptit asagidaki bir amino asit yapisini veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir: Cys-Cys-NH-C-c_Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-CysâNH-#clz-- burada, R`, H'dir veya bir C1-s alkildir ve en az R', 01-5 alkildir. Bazi uygulamada, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu asagidaki bir amino asit yapisina sahip olan bir peptit içerir: Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr Cys-Cys NH (l) C burada, R, bir 01-5 alkildir ("Glu3-alkil esterdir"). Diger uygulamalarda, R, 01.4 alkildir. Ilave uygulamalarda, R, metildir, etildir veya propildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ("Glus-alkil esterin") bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys_N H- C-C-Tyr-Cys-CyS-Asn- Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: (î Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys NH 0 (I Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, Glu3-alkil esterinin veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzunun C-ucu tirozini yoktur. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-NH-î-C-O-R burada, R, C1-6 alkildir. Diger uygulamalarda, R, C1.4 alkildir. Ilave uygulamalarda, R, metildir, etildir veya propildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ("Tyr14-etil esterin") bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-CyshNH--C--C-O-CHZCHg Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-As n-Pro-AIa-Cys-Thr-Gly-Cys_NH-C -C-O-CH2CHZCH3 Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-Cys_NH--C--C-O-CH3 u 8-84 i l Herhangi bir teoriye bagli kalmadan, bir peptit modifiye edilebilir, burada peptidin amino asit rezidülerinin en az bir amin grubu bir imine modifiye edilebilir. Bu modifikasyon, örnegin, bir amin grubuna asit katalizör varliginda bir karbonil, örnegin, bir aldehit veya keton, ile muamele etme ile üretilebilir. Amin gruplarindan iminler üretmenin diger yöntemleri, tekniklerde uzmanligi olan kisiler tarafindan hâlihazirda bilinir. Bazi uygulamalarda, imin modifikasyonu, asit katalizör varliginda bir formaldehit aracili reaksiyona ile üretilebilir. Ilave uygulamalarda, imin karbonu, peptidin bir baska amin grubuna çapraz- bagli olabilir. Diger uygulamalarda, bir peptit N-ucu amino asidinin d-amin grubunda bir imine modifiye edilebilir, burada imin karbonu, bes üyeli bir halka olusturarak peptidin ikinci amino asit rezidüsünün bir amin grubu ile çapraz-baglidir. Diger uygulamalarda, Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys imidazolidinon 5 üyeli halka olusturmak için Cysz'nin amin grubuna çapraz-bagli olan N-ucu Cysfin o-amin grubunda metilen eklenmesi ile modifiye edilebilir. Bir yönüyle, açiklama gastrointestinal bozukluklarin tedavisi için yararli olan yeni GC-C peptit agonistleri saglar. Bir kaç uygulamada, mevcut açiklama, bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizinini içerir, burada peptidin en az bir amin grubu, formülüne sahip olan bir imindir, burada R2, peptidin geri kalanidir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu bir peptit saglar, burada peptidin N-ucu amin grubu, formülüne sahip olan bir imindir, burada R2, peptidin geri kalanidir. Ilave uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: l 12C` _ Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bir kaç uygulamada, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GiW*CyS-Tyr Bazi uygulamalarda, Cys1-IMD peptidinin veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun C-ucu tirozini yoktur. Bazi uygulamalarda, Cysi-IMD peptidi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu ilaveten, bir veya birden fazla peptit modifikasyonu içerir, burada peptidin en az bir karboksil grubu (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada, R, 01-6 alkildir. Bir kaç uygulamada, mevcut açiklama bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizininden olusur, burada peptidin en az bir karboksil grubu, (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada R, 01-6 alkildir. Bir kaç uygulamada, peptit, asagidaki bir amino asit yapisindan veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzundan olusur: Cys-Cys-NH-C-C Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys_NH--C-î3-O_R' H 0 8-8 H 0 burada, R', H'dir veya bir C1-6 alkildir ve en az bir R', C1-e alkildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: Cys-Cys NH (I) I Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr burada, R, C1-6 alkildir. Ilave uygulamalarda, C-ucu tirozin yoktur. Diger uygulamalarda, R, bir C1-4 alkildir. Ilave uygulamalarda, R, metildir, etildir veya propildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisina sahip olan bir peptitten olusur: îH2CH3 Cys-Cys NH (|3 îll Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisina sahip olan bir peptitten olusur: ClîHZCHzCH3 Cys-Cys NH Cl) îî Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisina sahip olan bir peptitten olusur: Cys-Cys NH Cl: 0 Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisina sahip olan bir peptitten olusur: Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-NH-Clî-îlî-O-R burada, R, CH; alkildir. Diger uygulamalarda, R, bir 01-4 alkildir. Ilave uygulamalarda, R, metildir, etildir veya propildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-Gly-Cys_N H-C _C_O_CHZCH3 Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys -N H-C -C-O-CHZCH2CH3 Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: Cys-Cys-GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys_NH-C-C-O_CH3 Bir kaç uygulamada, mevcut açiklama, bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu saglar, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizininden olusur, burada peptidin en az H20_N-g-R2 bir amin grubu, formülüne sahip olan bir imindir, burada R2, peptidin geri kalanidir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu bir peptitten olusur, burada peptidin N-ucu amin grubu, formülüne sahip olan bir imindir, burada R2, peptidin geri kalanidir. Ilave uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: HEC_ Cys-Cys-(îlLi-Tyi'-Cys-C_ys-Asn-Pr0-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, asagidaki bir amino asit yapisindan olusur: Glu-Tyr- Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr Bazi uygulamalarda, Cys1-IMD peptidinin veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun C-ucu tirozini yoktur. Bazi uygulamalarda, Cys1-IMD peptidi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ilaveten, bir veya birden fazla peptit modifikasyonu içerir, örn., burada peptidin en az bir karboksil grubu, (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada R; C1-6 alkildir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, guanilat siklaz C reseptörünü aktive eder. Diger uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu veya daha az amino asit içerir. Ilave uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu veya daha az amino asit içerir. Diger uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, bir peptit içerir, burada besten az amino asit, amino asit dizininin birinci Cys rezidüsünden önce gelir. Bazi uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu izole edilir_ Diger uygulamalarda, peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu saflastirilir. Bazi uygulamalarda, peptidin farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu saglanir. Bazi durumlarda, farmasötik olarak kabul edilebilir tuz, bir klorür tuzudur. Varvant veva modifive edilmis peptitler Çesitli uygulamalarda, peptit, bir disült'it bag olusturan iki Cys içerir, peptit iki disülfit bag olusturan dört Cys içerir veya peptit üç disülfit bag olusturan alti Cys Bazi peptitlerde, normal olarak bir disülfit bag olusturan Cys rezidülerinin bir veya her iki çiftinin bir veya her iki üyesi, normal disülfit baglarin pozisyonlarinda alternatif iç çapraz-baglar olusturmak için homosistein, penisilinamin, 3- dimetilsistein (Hunt et al., 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) veya diaminopropiyonik asit (Smith et al., 1978 J Med Chem 21:11?) ile degistirilebilir. Diger uygulamalarda, disülfit baglar, hidrokarbon çapraz-baglama 12:692). Pegtitlerin Üretilmesi Bir uygulamada, açiklamanin peptitleri veya öncül peptitleri, sinirlandirma olmaksizin, bakterileri (örn., E. Gol/"yi veya Baci'l/us subti'lisî), böcek hücresi sistemlerini (örn., Drosophila Sf9 hücre sistemlerini), maya hücresi sistemlerini (örn., S. cerevisiae'yi, S. saccharomyces'i) veya filamentöz fungal ekspresyon sistemlerini veya hayvan hücresi ekspresyon sistemlerini (örn., memeli hücresi ekspresyon sistemlerini) içeren bilinen herhangi bir protein ekspresyon sisteminde rekombinant olarak üretilebilir. Açiklamanin peptitleri veya öncül peptitleri ayrica, kimyasal olarak da sentezlenebilir. Peptit veya varyant peptit rekombinant olarak üretildiginde, örn., E. coli, peptidi sifreleyen nükleik asit molekülü ayrica, hücreden matür peptidin salgilanmasina10 izin veren bir ön-bilgi dizinini de sifreler. Böylelikle, peptidi sifreleyen dizin, örnegin, bir dogal-olusumlu bakteriyel ST peptidinin pre-dizinini ve pro-dizinini içerebilir. Salgilanan, matür peptit hücre vasatindan saflastirilabilir. Burada tarif edilen bir peptidi sifreleyen dizin, nükleik asit molekülünü bir bakteriyel hücre içine aktarabilen veya bir bakteriyel hücre içinde idame ettirebilen bir vektör içine yerlestirilebilir. DNA molekülü, otonom bir sekilde replike eden bir vektör içine yerlestirilebilir (uygun vektörler, örnegin, pGEMBZ'yi ve pcDNA3,ü ve bunlarin türevlerini içerir). Vektör nükleik asidi, bir bakteriyel veya bakteriyofaj DNA,si, örnegin, bakteriyofaj Iamda veya M13 ve bunlarin türevleri olabilir. Burada tarif edilen bir nükleik asidi içeren bir vektörün yapilmasi, bir konak hücrenin, örnegin, bir bakterinin, transformasyonu ile takip edilebilir. Uygun bakteriyel konaklar, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, E. Gol/`yi, B. subti/isii Pseudomonas'i ve SalmoneI/a'yi içerir. Genetik yapi ayrica, nükleik asit molekülünü sifrelemeyen ek olarak, ekspresyona izin veren elemanlar, örnegin, bir promotör veya regülatör dizinleri de içerir. Ekspresyon vektörleri, transkripsiyonel baslamayi kontrol eden transkripsiyonel kontrol dizinleri, örnegin, promotör, hizlandirici, operatör ve represör dizinleri (örn., bir aktarilmamis 5' dizini, bir aktarilmamis 3` dizini veya bir iç ribozom giris yeri) içerebilir. Vektör otonom replikasyon yapabilir veya bu peptit üretimi sirasinda kararliligi garanti etmek için konak DNA içine entegre olabilir. Burada tarif edilen bir peptidi içeren protein kodlama dizini ayrica, saflastirmayi kolaylastirmak için, bir peptit afinite etiketi, örn., glutatyon S-transferaz (GST), maltoz E baglama proteini, protein A, FLAG etiketi, hekza-histidin, myo etiketi veya influenza HA etiketi sifreleyen bir nükleik aside kaynastirilabilir. Afinite etiketi veya röportör füzyon söz konusu peptidin okuma çerçevesini afinite etiketini sifreleyen genin okuma çerçevesine birlestirir, böylece bir translasyonel füzyon üretilebilir. Füzyon geninin ekspresyonu, hem söz konusu peptidi hem de afinite etiketini içeren bir tek peptidin translasyonu ile sonuçlanir. Afinite etiketinden yararlanilan bazi durumlarda, bir proteaz tanima yeri sifreleyen DNA dizini, afinite etiketi ve söz konusu peptit için okuma çerçeveleri arasinda kaynastirilacaktir.10 Burada tarif edilen peptitlerin veya varyantlarin immatür ve matür formlarinin bakteriler disindaki protein ekspresyon sistemlerinde üretimi için uygun olan ve teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan iyi bilinen genetik yapilar ve yöntemler ayrica, bir biyolojik sistemde peptitler üretmek için de kullanilabilir. Diger uygulamalarda, normalde translasyon mekanizmasi tarafindan dâhil edilmeyen ve yukarida tarif edilen amino asitler içeren peptitler (örn., -- ß- karboksillenmis Asp, v-karboksillenmis Glu, Asu, Aad ve Apm) tRNA modifikasyon yöntemleri ile rekombinant olarak üretilebilir. tRNA'yi saflastirmak için, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, anti-kodonu, amino asit eklenme yerini ve/veya akseptör kökünü dogal-olmayan ve/veya keyfi amino asitlerin bünyeye katilmasina izin vermesi için modifiye etmeyi içeren yöntemler teknikte bilinir Bazi uygulamalarda, peptitler kimyasal olarak üretilebilir. Peptitler geleneksel 800 veya FMOC koruma kullanilan çözünürlük ve kati faz sentezini içeren çok sayida farkli yöntem ile sentezlenebilir. Örnegin, peptit birbirini izleyen amino asit kuplajlari kullanilarak 2-Klorotritil veya Wang reçinesi üzerinde sentezlenebilir. Asagidaki koruma gruplari kullanilabilir: Florenilmetiloksikarbonil veya ter-bütiloksikarbonil (alfa-amino gruplari, N-ucu); tritil veya ter-bütil (Cys'nin tiyol gruplari); ter-bütil (mevcut oldugunda, glutamik asidin v-karboksili ve treoninin hidroksil grubu) ve tritil (mevcut oldugunda, asparajin yan çinkoirinin ß-amid fonksiyonu ve tirozinin fenolik grubu). Kuplaj bir tersiyer amin varliginda DIC ve HOBt ile etkilenebilir ve peptit kokteyl K (%81 trifloroasetik asit, %5 fenol, %5 tiyoanizol, %2,5 1,2-etanditiyol, %3 su, %2 dimetilsülfit, ag/ag destekten yarilabilir. Trifloroasetik asidin ve diger uçucularin uzaklastirilmasindan sonra, peptit bir organik çözücü kullanilarak çökeltilebilir.10 Cys rezidüleri arasindaki disülfit baglar, dimetil sülfoksit (Tam et al., (1991) J. Am. Chem. Soc. 113-6657-62) kullanilarak veya bir hava oksidasyon stratejisi kullanilarak olusturulabilir. Elde edilen peptit, ters-faz kromatografi ile saflastirilabilir ve liyofilize edilebilir. Bu peptitler yapilabilir, izole edilebilir veya baz formunda veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari olarak kullanilabilir. Tuzlarin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, peptidin asetat, klorür, sülfat veya fosfat tuzlarini Peptitlerin ve GC-C reseptörü aqonistlerinin bilesimleri Mevcut açiklamanin bir baska yönünde, farmasötik bilesimler saglanir, burada peptitler, tek basina veya kombinasyon hâlinde, farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir tasiyici veya vasat ile birlestirilebilir. Bir kaç uygulamada, farmasötik bilesim burada tarif edildigi üzere bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzunu içerir. Farmasötik bilesim, burada tarif edildigi üzere iki veya daha fazla peptit veya bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini içerebilir. Bazi uygulamalarda, farmasötik bilesim asagidakiler arasindan seçilen iki veya daha fazla peptit içerir: i. bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, burada peptit asagidaki amino asit yapisini içerir: GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-Glthys-Tyr ii. bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, burada peptit asagidaki amino asit yapisini içerir: H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-(jly-Cys-Tyr-OH iii. bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, burada peptit Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr amino asit dizini içerir, burada peptidin en az bir karboksil grubu, (-COOR) formülüne sahip olan bir alkil esterdir, burada R, bir 01-6 alkildir. Diger uygulamalarda, farmasötik bilesim, Iinaklotidi ve bunun bir peptidini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr ve peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, linaklotidin agirligina kiyasla agirlik olarak %10'dan, %20'den, %30"dan, %40'tan, Ilave uygulamalarda, farmasötik bilesim, linaklotidi ve bunun bir peptidini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr ve peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, linaklotidin agirligina kiyasla agirlik olarak %9'dan az, %8'den az, %7"den az, azini içerir. Bazi uygulamalarda, linaklotidin imidazolidinon türevi bilesimin agirlik olarak yaklasik %15'inden azini, bilesimin agirlik olarak yaklasik %10'undan azini, bilesimin agirlik olarak yaklasik %Tsinden azini veya bilesimin agirlik olarak yaklasik %5iinden azini içerir. Diger emsal uygulamalarda, linaklotidin imidazolidinon türevi, bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,01'i ila yaklasik agirlik olarak yaklasik %0,05'i ila yaklasik %7"sini veya bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,05'i ila yaklasik %5,ini içerir. Diger uygulamalarda, farmasötik bilesim Iinaklotidi ve bunun bir peptidini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: CyS-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-AIa-Cys-Thr-Gly-CySEN H--C _C_O_C H 2CH3 ve peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, Iinaklotidin agirligina kiyasla agirlik olarak %10'dan, %20'den, %30'dan, %40'tan, Ilave uygulamalarda, farmasötik bilesim linaklotidi ve bunun bir peptidini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys_NH-(|3-îî-O_CH2CH3 agirligina kiyasla agirlik olarak %9'dan az, %8'den az, %7'den az, azini içerir. Bazi uygulamalarda, Tyr14-etil ester peptidi bilesimin agirlik olarak yaklasik agirlik olarak yaklasik %7'sinden azini veya bilesimin agirlik olarak yaklasik bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,01"i ila yaklasik %15lini, bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,05'i ila yaklasik %10"unu, bilesimin agirlik olarak yaklasik yaklasik %5'ini içerir. Diger uygulamalarda, farmasötik bilesim linaklotidi ve bunun bir peptidini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: TH2CH3 Cys-Cys NH Cl: lclî Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr ve peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, Iinaklotidin agirligina kiyasla agirlik olarak %10'dan, %20'den, %30'dan, %40`tan, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisini içerir: CH20H3 Cys-Cys NH C C Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr ve peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzu, Iinaklotidin agirligina kiyasla agirlik olarak %9'dan az, %8'den az, %7'den az, azini içerir. Bazi uygulamalarda, GIus-etil ester peptidi bilesimin agirlik olarak yaklasik agirlik olarak yaklasik %7"sinden azini veya bilesimin agirlik olarak yaklasik bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,01,i ila yaklasik %15,ini, bilesimin agirlik olarak yaklasik %0,05'i ile yaklasik %10'unu, bilesimin agirlik olarak yaklasik yaklasik %5`ini içerir. Bazi uygulamalarda, farmasötik bilesim bir peptit veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzunu içerir, burada peptit asagidaki bir amino asit yapisindan GIu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr Diger uygulamalarda, farmasötik bilesim esas olarak bir peptitten veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzundan olusur, burada peptit asagidaki amino asit yapisini içerir: Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-GIy-Cys-Tyr Bilesimi ifade etmek için kullanildiginda, "esas olarak olusan" terimi ve bunun varyantlari burada, bilesimin bir tek aktif peptit ve diger arzu edilen farmasötik olarak inaktif katki maddelerini, eksipiyanlari ve/veya bilesenleri (örn., polimerleri, sterik olarak engellenmis primer aminleri, katyonlari, dolgu ajanlarini, baglayicilari, tasiyicilari, eksipiyanlari, diluentleri, parçalama katki maddelerini, kontrollü salim katki maddelerini, topaklanmayi önleyici katki maddelerini, anti-mikrobiyal katki maddelerini, koruyuculari, tatlandirici katki maddelerini, renklendiricileri, aroma vericileri, nem tutuculari, plastiklestiricileri, boyalari veya benzerlerini) içermesi ve baska aktif farmasötik içerik maddesi (maddeleri) içermemesi anlaminda kullanilir. Burada tarif edilen peptitler, farmasötik olarak tolere edilebilen herhangi bir tasiyici veya vasat, örn., çözücüler, parçalayicilar, kaplayicilar, emilim arttirma ajanlari, kontrollü salim ajanlari ve (nisastalari, poliolleri, granüle etme ajanlarini, mikrokristalli selülozu (örn., selferi, Celphere beads®). diluentleri, yaglayicilari, baglayicilari, parçalama ajanlarini ve benzerlerini içeren) bir veya10 birden fazla inert eksipiyan ile birlestirilebilir. Arzu edildiginde, açiklanan bilesimlerin tablet dozajlari, standart sulu veya sulu olmayan teknikler ile kaplanabilir. Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar veya farmasötik olarak kabul edilebilir inert tasiyicilar ve yukarida bahsedilen ilave içerik maddeleri olarak kullanim için eksipiyanlari örnekleri, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, baglayicilari, dolgulari, parçalayicilari, yaglayicilari, anti-mikrobiyal ajanlari ve kaplama ajanlarini içerir. Burada kullanildigi üzere, "baglayici" terimi, açiklamanin uygulanmasinda kullanilabilen farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir baglayiciyi ifade eder. Farmasötik olarak kabul edilebilir baglayicilarin örnekleri. sinirlandirma olmaksizin, bir nisastayi (örn., misir nisastasini, patates nisastasini ve önceden-jelatinlestirilmis nisastayi (örn., Colorcon, Ltd. tarafindan satilan STARCH , maltodekstrini, jelatini, dogal ve sentetik zamklari, örnegin, akasyayi, toz hâline getirilmis kitreyi, guar zamkini, selülozu ve bunun türevlerini (örn., metilselülozu, hidroksietil selülozu, hidroksietil metilselülozu, hidroksipropil selülozu ve hidroksipropi metilselülozu (hipromellozu), etil selülozu, selüloz asetati, karboksimetil selüloz kalsiyumu, sodyum karboksimetil selülozu, karboksimetilselülozu, mikrokristalli selülozu (örn., FMC Corporation, Marcus Hook, PA, USA, tarafindan satilan AVICELTM, örnegin, AVlCEL-PH-101TM,- 103W' ve-105TM)), polivinil alkolü, polivinil pirrolidonu (örn., polivinil pirrolidon K30'u) ve bunlarin karisimlarini içerir. Burada kullanildigi sekliyle, "dolgu" terimi, açiklamanin uygulanmasinda kullanilabilen farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir dolguyu ifade eder. Farmasötik olarak kabul edilebilir dolgularin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, talki, kalsiyum karbonati (örn., granüller veya toz), dibazik kalsiyum fosfati, tribazik kalsiyum fosfati, kalsiyum sülfati (örn., granüller veya toz), mikrokristalli selülozu (örn., Avicel PH101 veya Celphere CP305), toz hâline getirilmis selülozu, dekstratlari, kaolini, mannitolü, silisik asidi, sorbitolü, nisastayi (örn.,10 Starch 1500), önceden-jelatinlestirilmis nisastayi, laktozu, glukozu, früktozu, galaktozu, trehalozu, sükrozu, maltozu, izomalti, raffinozu, maltitolü, melezitozu, stakiyoz, Iaktitolü, palatiniti, ksilitolü, miyoinositolü ve bunlarin karisimlarini Peptitleri kaplamak için özel olarak kullanilabilen farmasötik olarak kabul edilebilir dolgularin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, talki, mikrokristalli selülozu (örn., Avicel PH101 veya Celphere CP-305), toz hâline getirilmis selülozu, dekstratlari, kaolini, mannitolü, silisik asidi, sorbitolü, nisastayi, önceden-jelatinlestirilmis nisastayi, laktozu, glukozu, früktozu, galaktozu, trehalozu, sükrozu, maltozu, izomalti, dibazik kalsiyum fosfati, raffinozu, maltitolü, melezitozu, stakiyoz, Iaktitolü, palatiniti, ksilitolü, mannitolü, miyoinositolü ve bunlarin karisimlarini içerir. Burada kullanildigi üzere, "katki maddeler" terimi, farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir katki maddesini ifade eder. Farmasötik olarak kabul edilebilir katki maddeleri, sinirlandirma olmaksizin, parçalayicilari, dagitma katki maddelerini, yaglayicilari, glidantlari, antioksidanlari, kaplama katki maddelerini, diluentleri, sürfaktanlari, aroma verici katki maddelerini, nemlendiricileri, emilim arttirma katki maddelerini, kontrol salim katki maddelerini, topaklanmayi önleyici katki maddelerini, anti-mikrobiyal ajanlari (örn., koruyuculari), renklendiricileri, nem tutuculari, plastiklestiricileri ve boyalari içerir. Burada kullanildigi sekliyle, bir "eksipiyan" farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir katki maddesidir, dolgudur, baglayicidir veya ajandir. Mevcut açiklamanin bilesimleri ayrica, opsiyonel olarak, diger terapötik içerik maddelerini, topaklanmayi önleyici ajanlari, koruyuculari, tatlandirici ajanlari, renklendiricileri, aroma vericileri, nem tutuculari, plastiklestiricileri, boyalari, glidantlari, anti-yapiskanlari, anti-statik ajanlari, sürfaktanlari (islatma ajanlarini), anti-oksidanlari, film-kaplama ajanlarini ve benzerlerini de içerebilir. Bu tarz opsiyonel herhangi bir içerik maddesinin, formülasyonun kararliligini garanti etmek için burada tarif edilen bilesik ile uyumlu olmak zorundadir.10 Bilesik, gerektiginde, örnegin, Iaktozu, glukozu, früktozu, galaktozu, trehalozu, sükrozu, maltozu, raffinozu, maltitolü, melezitozu, stakiyoz, laktitolü, palatiniti, nisastayi, ksilitolü, mannitolü, miyoinositolü ve benzerlerini ve bunlarin hidratlarini ve amino asitleri, örnegin, alanini, glisini ve betaini ve peptitleri ve proteinleri, örnegin, albümini, içeren diger katki maddelerini içerebilir. Bilesimler, örnegin, çesitli ilave çözücüleri, dagiticilari, kaplamalari, emilim arttirma katki maddelerini, kontrollü salim katki maddelerini ve (örnegin, nisastalari, poliolleri, granüle etme katki maddelerini, mikrokristalli selülozu, diluentleri, yaglayicilari, baglayicilari, parçalama katki maddelerini ve benzerlerini içeren) bir veya birden fazla inert eksipiyani, vb. içerebilir. Arzu edildiginde, açiklanan bilesimlerin tablet dozajlari, standart 5qu veya sulu olmayan teknikler ile kaplanabilir. Bilesimler ayrica, örnegin, topaklanmayi önleyici katki maddeleri, koruyucular, tatlandirma katki maddeleri, renklendiriciler, aroma vericiler, nem tutucular, plastiklestiriciler, boyalar ve benzerlerini de içerebilir. Uygun parçalayicilar, örnegin, agar-agari, kalsiyum karbonati, mikrokristalli selülozu, kroskarmelloz sodyumu, krospovidonu, povidonu, polakrilin potasyumu, sodyum nisasta glikolati, patates veya tapyoka nisastasini, diger nisastalari, önceden-jelatinlestirilmis nisastayi, killeri, diger aljinleri, diger selülozlari, zamklari ve bunlarin karisimlarini içerir. Uygun yaglayicilar, örnegin, kalsiyum stearati, magnezyum stearati, mineral yagini, hafif mineral yagini, gliserini, sorbitolü, mannitolü, polietilen glikolü, diger glikolleri, stearik asidi, sodyum lauril sülfati, talki, hidrojenlenmis bitkisel sivi yagi (örn., yer fistigi yagini, pamuk tohumu sivi yagini, ay çiçegi yagini, susam yagini, zeytin yagini, misir yagini ve soya fasulyesi yagini), çinko stearati, etil oleati, etil Iaurati, agari, siloid silika jeli (AEROSlL 200, WR. Grace Co., Baltimore, MD USA), bir sentetik silikanin bir koagüle edilmis aerosolünü (Evonik Degussa Co., Plano TX USA), bir pirojenik silikon dioksidini (CAB-O- SIL, Cabot Co., Boston, MA USA) ve bunlarin karisimlarini içerir. Uygun glidantlar, örnegin, Iösini, kolloidal silikon dioksidi, magnezyum trisilikati, toz hâline getirilmis selülozu, nisastayi, talki ve tribazik kalsiyum fosfati içerir. Uygun topaklanmayi önleyici katki maddeleri, örnegin, kalsiyum silikati, magnezyum silikati, silikon dioksidi, kolloidal silikon dioksidi, talki ve bunlarin karisimlarini içerir. Örn., peptit bilesimleri için bir koruyucu olarak kullanilabilen uygun anti- mikrobiyal katki maddeleri, örnegin, benzalkonyum klorürü, benzetonyum klorürü, benzoik asidi, benzil alkolü, bütil parabeni, setilpiridinyum klorürü, kresolü, klorobütanolü, dehidroasetik asidi, etilparabeni, metilparabeni, fenolü, feniletil alkolü, fenoksietanolü, fenilmerkürik asetati, fenilmekürik nitrati, potasyum sorbati, propilparabeni, sodyum benzoati, sodyum dehidroasetati, sodyum propiyonati, sorbik asidi, timersolü, timoyu ve bunlarin karisimlarini Uygun antioksidanlar, örnegin, BHA (bütillenmis hidroksianizolü), BHT (bütillenmis hidroksitolueni), E vitaminini, propil gallati, askorbik asidi ve bunlarin tuzlarini veya esterlerini, tokoferolü ve bunlarin esterlerini, alfa-lipoik Uygun kaplama katki maddeleri, örnegin, sodyum karboksimetil selülozu, selüloz asetat ftalati, etilselülozu, jelatini, farmasötik sirri, hidroksipropil selülozu, hidroksipropil metilselülozu, hidroksipropil metil selüloz ftalati, metilselülozu, polietilen glikolü, polivinil asetat ftalati, sellagi, sükrozu, titanyum dioksidi, karnauba vaksini, mikrokrsitalli vaksi ve bunlarin karisimlarini içerir. Uygun koruyucu kaplamalar, Aquacoat (örn., Aquacoat Ethylcellulose Aquaeous Dispersion, ag/ag %15, FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (örn., Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) ve Opadry (örn., Opadry AMB dispersiyonu, ag/ag %20, Colorcon) içerir. Bazi uygulamalarda, peptit bilesimleri için uygun katki maddeleri, sükrozun, talkin, magnezyum stearatin, krospovidonun veya BHA'nin bir veya birden fazlasini içerir. Mevcut açiklamanin bilesimleri ayrica, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, L- histidini, Pluronic'i®, Poloxamer'leri (örnegin, Lutrol® ve Poloxamer 188), askorbik asidi, glutatyonu, geçirgenlik arttiricilari (örn., lipitleri, sodyum kolati, açilkarnitini, salisiklatlari, karma safra tuzlarini, yag asidi misellerini, selatörleri, yag asidini, sürfaktanlari, vasat çinkoir gliseritlerini) proteaz inhibitörlerini (örn., soya fasulyesi tripsin inhibitörünü, organik asitleri), pH düsürme ajanlarini ve biyoyararlanimi arttirmak için etkili olan emilim hizlandiricilari (bunlarla sinirli çignenebilen tabletler için malzemeleri (dekstroz, früktoz, laktoz, monohidrat, laktoz ve aspartam, laktoz ve selüloz, maltodekstrin, maltoz, mannitol, mikrokristalli selüloz ve guar zamki, kristalli sorbitol gibi); parenteralleri (mannitol ve povidon gibi); plastiklestiricileri (dibütil sebasat, kaplamalar için plastiklestiriciler, polivinilasetat ftalat gibi); toz yaglayicilari (gliseril behenat gibi); yumusak jelatin kapsülleri (sorbitol özel çözelti gibi), kaplama için küreleri (seker küreleri gibi); küresellestirme ajanlarini (gliseril behenat ve mikrokrsitalli selüloz gibi); süspanse etme/jelleme ajanlari (karajenan, jellan zamki, mannitol, mikrokristalli selüloz, povidon, sodyum nisasta glikolati, ksantan zamki gibi), tatlandiricilari (aspartam, aspartam ve laktoz, dektroz, früktoz, bal, maltodektrin, maltoz, mannitol, seker pekmezi, kristalli sorbitol, sorbitol özel çözeltisi, sükroz gibi); islak granülasyon ajanlari (kalsiyum karbonat, laktoz anhidröz, laktoz monohidrat, maltodektrin, mannitol, mikrokristalli selüloz, povidon, nisasta gibi), karameli, karboksimetilselüloz sodyumu, kiraz kremasi aromasini ve kiraz aromasini, sitrik asit anhidrözü, sitrik asidi, pudra sekerini, D&C Kirmizi No. 33, D&C Sari #10 Alüminyum Lakeyi, disodyum edetati, %15 etil alkolü, FD&C Sari Bo. 6 Alüminyum Lakeyi, FD&C Mavi #1 Alüminyum Lakeyi, FD&C Mavi No. 1, FD&C Mavi no. 2 alüminyum Iakeyi, FD&C Yesil No.3, FD&C Kirmizi No. 40, FD&C Sari No. 6 Alüminyum Lakeyi, FD&C Sari No. 6, FD&C Sari No.10, gliserol palmitostearati, gliseril monostearati, indigo karmini, Iesitini, mannitolü, metil ve propil parabenleri, mono amonyum glisirrhizinati, dogal ve yapay10 portakal tadini, farmasötik sirri, poloxamer 188W, Polidekstrozu, polisorbat 'yi, polisorbat 80'i, polividonu, önceden-jelatinlestirilmis misir nisastasini, önceden-jelatinIestirilmis nisastayi, kirmizi demir oksidi, sakkarin sodyumu, sodyum karboksimetil eteri, sodyum klorürü, sodyum sitrati, sodyum fosfati, çilek tadini, sentetik siyah demir oksidi, sentetik kirmizi demir oksidi, titanyum dioksidi ve beyaz vaksi içeren diger eksipiyanlari, ajanlari ve bunlarin kategorilerini de içerebilir. Bazi uygulamalarda, burada tarif edilen bir peptit ve Mg", Ca", Zn2+, Mn2+, K+, Na+ ve Al3+ arasindan seçilen bir veya birde fazla ajani, bunlarin bir kombinasyonunu ve/veya sterik olarak engellenmis bir primer amini içeren farmasötik bir bilesim saglanir. Ilave uygulamalarda, ajan, M92+, Caz* veya Zn2+ veya bunlarin bir kombinasyonudur. Bazi uygulamalarda, katyon, sinirlandirma olmaksizin, magnezyum asetat, magnezyum klorür, magnezyum fosfat, magnezyum sülfat, kalsiyum asetat, kalsiyum klorür, kalsiyum fosfat, kalsiyum sülfat, çinko asetat, çinko klorür, çinko fosfat, çinko sülfat, manganez asetat, manganez klorür, manganez fosfat, manganez sülfat, potasyum asetat, potasyum klorür, potasyum fosfat, potasyum sülfat, sodyum asetat, sodyum klorür, sodyum fosfat, sodyum sülfat, alüminyum asetat, alüminyum klorür, alüminyum fosfat veya alüminyum sülfat olarak saglanir. Ilave uygulamalarda, katyon, magnezyum klorür, kalsiyum klorür, kalsiyum fosfat, kalsiyum sülfat, çinko asetat, manganez klorür, potasyum klorür, sodyum klorür veya alüminyum klorür olarak saglanir. Diger uygulamalarda, katyon, kalsiyum klorür, magnezyum klorür veya çinko asetat olarak saglanir. Bir baska uygulamada, ajan, sterik olarak engellenmis bir primer amindir. Ilave bir uygulamada, sterik olarak engellenmis primer amin bir amino asittir, Daha ilave bir uygulamada, amino asit dogal-olusumlu bir amino asittir. Daha da ilave bir uygulamada, dogal-olusumlu amino asit, asagidakilerden olusan gruptan seçilir: histidin, fenilalanin, alanin, glutamik asit, aspartik asit, glutamin, Iösin, metiyonin, asparajin, tirozin, treonin, izolösin, triptofan, glisin ve valin; daha ilaveten, dogal-olusumlu amino asit, lösindir, izolösindir, alanindir veya methionindir. Daha ilave bir uygulamada, dogal-olusumlu amino asit lösindir, Bir10 baska uygulamada, sterik olarak engellenmis primer amin, dogal-olusumlu olmayan bir amino asittir (örn., 1-aminosiklohekzan karboksilik asittir). Ilave bir uygulamada, sterik olarak engellenmis primer amin, siklohekzilamindir, 2- metilbütilamindir veya kitozandir. Bir baska uygulamada, bir veya birden fazla sterik olarak engellenmis primer aminler bir bilesim içinde kullanilabilir. Bazi durumlarda, sterik olarak engellenmis primer amino asagidaki formüle sahiptir: burada, R1, R2 ve R3 bagimsiz bir sekilde asagidakiler arasindan seçilir: karboksilik asit, C1-Cö alkil karboksilamid ve akilaril, burada herhangi bir grup bir kere veya birden fazla kere asagidakiler ile sübstüte edilebilir: halojen veya amino ve Ri'in, Rgtnin ve Rgtün en fazla ikisinin H olma sarti vardir. Bir baska uygulamada, R1lin, Rz'nin ve Rglün en fazla birinin H olma sarti vardir. Diger uygulamalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici, peptit, M92+, Ca2+, Zn", Mn2+, K*, Na+ veya Al3+ arasindan seçilen bir katyon veya bunlarin bir karisimini ve/veya sterik olarak engellenmis bir primer amini içeren farmasötik bir bilesim saglanir. Bir uygulamada, katyon, Mg", Ca2+ veya Zn2+ veya bunlarin bir karisimidir. Ilave bir uygulamada, farmasötik bilesim ilaveten, farmasötik olarak kabul edilebilir bir baglayici ve/veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir glidant, yaglayici veya hem bir glidant hem de bir yaglayici ve/veya bir antioksidan olarak etki eden katki maddesi içerir. Bazi uygulamalarda, farmasötik bilesim bir tasiyiciya uygulanir. Bazi uygulamalarda, tasiyici bir dolgudur. Bazi durumlarda, sulu bir çözelti içinde tasiyiciya uygulanan katyonzsterik olarak engellenmis primer aminzpeptit'in molar orani, 5-100:5-50:1'dir. Bazi durumlarda, katyonzsterik olarak engellenmis primer aminin molar orani, 2:1'e esit veya bundan büyük (örn., 521 ve 221 arasinda) olabilir. Böylelikle, bazi durumlarda tasiyiciya uygulanan katyonzsterik olarak engellenmis primer :10:1'dir. Baglayici, örn., metilselüloz, tasiyiciya uygulanan GC-C agonist peptit çözeltinde bulundugunda, bu, agirlik olarak %0,5 - %2,5 araliginda (örn., Ilave bir uygulamada, farmasötik bilesim ilaveten farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya katki maddesi ve/veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir glidant, yaglayici veya hem bir glidant hem de yaglayici ve/veya bir antioksidan olarak etki eden katki maddesi içerir. Açiklamaya uygun sekilde uygun farmasötik bilesimler genel olarak, hedeflenen kullanima bagli olarak, nihai konsantrasyonlarin bir araligini vermesi için kabul edilebilir farmasötik bir diiuent veya eksipiyan, örnegin, bir steril sulu çözelti, ile aktif bilesigin (bilesiklerin) bir miktarini içerecektir. Preparasyon için teknikler Remington's Pharmaceutical Sciences'ta (18th Edition, Mack Publishing Company, 1995) örneklendirildigi üzere teknikte genel olarak iyi bilinir. Burada tarif edilen bilesimler, tedavi edilecek olan hastaligin siddetine ve tipine bagli olarak, sistemik veya lokal olarak, örn., (örn., kapsüller, tozlar, çözeltiler, süspansiyonlar, tabletler, dil-atli tabletleri ve benzerlerini kullanilarak) oral olarak, (örn., bir aerosol, gaz, solunum cihazi, nebülizör veya benzeri ile) inhalasyon ile (örn., kulak damlalari kullanilarak) kulaga, (örn., kremler, jeller, linimentler, losyonlar, merhemler, macunlar, transdermal yamalar, vb. kullanilarak) topikal olarak, (örn., göz damlalari, oftalmik jeller, oftalmik merhemler ile) oftalmik olarak, (örn., enemalar veya süpozituvarlar kullanilarak) rektal olarak, nazal olarak, bukkal olarak, (örn., antiseptik sular, intrauterin cihazlar, vajinal süpozituvarlar, vajinal halkalar veya tabletler, vb. kullanilarak)10 vajinal olarak, implante edilmis rezervuar veya benzeri yoluyla veya parenteral olarak uygulanabilir. Burada kullanildigi sekliyle, "parenteral" terimi, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, subkütan, intravenöz, intramüsküler, intra-artiküler, intra-sinoviyal, intrasternal, intratekal, intrahepatik, intralezyonel ve intrakraniyal enjeksiyon veya infüzyon tekniklerini içerir. Tercihen, bilesimler oral olarak, intraperitoneal olarak veya intravenöz olarak uygulanir. Gastrointestinal bozukluklarin tedavisi için, burada tarif edilen peptitler tercihen, oral olarak, örn., bir tablet, kapsül, etken maddenin önceden belirlenmis bir miktarini içeren tek dozluk paket, pellet, elektuar, bulamaç, toz, Iiyofilize edilmis toz, granüller olarak, bir çözelti veya bir sulu sivi ve bir sulu-olmayan sivi içinde bir süspansiyon olarak; bir su içinde yag sivi emülsiyonu veya bir yag içinde su sivi emülsiyonu olarak, bir lipozomal formülasyon yoluyla (bakiniz, örn., EP 736299) veya bazi baska formlarda uygulanir. Oral olarak uygulanmis olan bilesimler, baglayicilari, yaglayicilari, inert diluentleri, yaglamayi, yüzey aktif veya dagitma ajanlarini, aroma verici ajanlari ve nem tutuculari içerir. Oral olarak uygulanan formülasyonlar, örnegin, tabletler, opsiyonel olarak, kaplanabilir veya skorlanabilir ve burada etken maddenin sürdürülmüs, geciktirilmis veya kontrollü salimini saglamak amaciyla formüle edilebilir. Peptitler, gastrointestinal bozukluklari tedavi etmek için kullanilan, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla burada tarif edilen ajanlari içeren, diger ajanlar ile birlikte-uygulanabilir. Bir baska yönüyle, uygun farmasötik bilesimler, bir veya birden fazla terapötik ajan içerebilir. Bu tarz terapötik ajanlar, sinirlandirma olmaksizin, analjezik ajanlari; proton pompasi inhibitörlerini, asit pompasi antagonistlerini, H2 reseptör antagonistlerini içeren anti-sekretuar ajanlari; PDE5 inhibitörlerini; GABA-B antagonistlerini; safra asidi sekuestrantlari; prokinetik ve promotiliye ajanlarini; antidepresanlari; antibiyotikleri; anti-emetikleri ve mukozal koruma ajanlarini içerir. Tedavinin Yöntemleri10 Çesitli uygulamalarda, burada tarif edilen peptitler ve bilesimler gastrointestinal bozukluk hastasinin tedavisi için yararlidir. Bazi uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk, huzursuz bagirsak sendromundan (IBS), konstipasyondan, bir fonksiyonel gastrointestinal bozukluktan, gastrozöofageal reflü hastaligindan, fonksiyonel mide yanmasindan, dispepsiden, viseral agridan, gastoparezden, kronik intestinal psödo-obstrüksiyondan, kolonik psödo-obstrüksiyondan, Crohn hastaligindan, ülseratif kolitten ve enflamatuvar bagirsak hastaligindan olusan gruptan seçilir. Ilave bir uygulamada, gastrointestinal bozukluk konstipasyondur. Konstipasyon, kronik konstipasyon, idiyopatik konstipasyon, post-operatif ileusten dolayi olabilir veya opiat kullanimdan kaynaklanabilir. Konstipasyonu tanimlayan klinik olarak kabul edilen kriterler, bagirsak hareketlerinin sikligini, feçesin kivamliligini ve bagirsak hareketinin kolayligini içerir. Konstipasyonun ortak bir tanimi, bir haftada üçten az bagirsak hareketidir. Diger tanimlar anormal olarak sert diskiyi ve asiri ikinma gerektiren diskilamayi içerir (Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763). Konstipasyon, idiyopatik (fonksiyonel konstipasyon veya yavas geçisli konstipasyon) veya nörolojik, metabolik veya endokrin bozukluklari içeren diger nedenlere sekonder olabilir. Bu bozukluklar, diabetes mellitusu, hipotiroidizmi, hipertiroidizmi, hipokalsemiyi, Multipl Sklerozu, Parkinson hastaligini, omurilik Iezyonlarini, Nörofibromatozu, atonomik nöropatiyi, Chagas hastaligini, Hirschsprung hastaligini ve Kistik fibrozu içerir. Konstipasyon ayrica, cerrahinin (post-operatif ileusun) sonucu olabilir veya ilaçlarin, örnegin, analjeziklerin (opioidler gibi), anti-hipertansiflerin, anti-konvülsanlarin, antidepresanlarin, antispazmodiklerin ve antipsikotilerin kullanilmasindan dolayi olabilir. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk, huzursuz bagirsak sendromudur (lBS). Huzursuz bagirsak sendromu, konstipasyon-baskin huzursuz bagirsak sendromu (c-IBS), diyare-baskin huzursuz bagirsak sendromu (d-IBS) veya iki huzursuz bagirsak sendromu arasinda degisken olan durum (a-IBS) olabilir. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk, dispepsidir. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk, gastroparezdir. Gastroparez idiyopatik, diyabetik veya cerrajhi-sonrasi gastroparezi arasindan seçilebilir. Daha baska uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk kronik intestinal psödo obstrü ksiyondur. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk Crohn hastaligidir. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk ülseratif kolittir. Diger uygulamalarda, gastrointestinal bozukluk enflamatuvar bagirsak hastaligidir. Bir baska uygulamada, gastrointestinal bozukluk viseral agridir. Ilave bir uygulamada, mevcut açiklama bir hastada gastrointestinal agriyi veya viseral agriyi düsürmek için, hastaya burada tarif edilen peptidi içeren farmasötik bir bilesimi uygulamayi içeren bir yöntem özelligi gösterir. Burada tarif edilen peptit agonistleri, bir gastrointestinal bozukluk ile iliskili viseral agrinin veya bir baska bozukluk ile iliskili agrinin tedavisi, önlenmesi veya azaltilmasi için tek basina veya kombinasyon terapisi içinde kullanilabilir. Bir baska uygulamada, açiklama gastrointestinal yolu enflamasyonunu içeren, enflamasyonu, örn., bir gastrointestinal bozukluk veya enfeksiyon veya diger bazi bozukluklar ile iliskili enflamasyonu, tedavi etmek için, burada tarif edilen saflastirilmis bir peptidi içeren farmasötik bir bilesimi bir hastaya uygulamayi içeren bir yöntem özelligi gösterir. Bir baska uygulamada, açiklama, bir gastrointestinal bozuklugu tedavi etmek için, intestinal guanilat siklaz (GC-C) reseptörünün bir agonistini oral olarak, rektal süpozituvar ile veya parenteral olarak uygulamayi içeren bir yöntem özelligi gösterir. Daha baska bir uygulamada, açiklama, bir gastrointestinal bozuklugu tedavi etmek için intestinal guanilat siklaz (GC-C) reseptörünün bir agonistini uygulamayi içeren bir yöntem özelligi gösterir. Bir baska yönüyle, açiklama, siklik guanozin 3'-monofosfatin (CGMP) düzeyini bir biyolojik örnek, doku (örn., intestinal mukoza) veya hücre (örn., GC-A reseptörü tasiyan bir hücre) veya tüm organizma içindeki düzeyini örnegi, dokuyu veya organizmayi burada tarif edilen bir peptide temas ettirme ile arttirmanin bir yöntemi özelligi gösterir. Burada tarif edilen peptit GC-C reseptörü agonistleri, diger ajanlar ile kombinasyon hâlinde uygulanabilir. Örnegin, peptitler bir analjezik peptit veya bilesik ile uygulanabilir. Analjezik peptit veya bilesik burada tarif edilen bir peptide kovalent olarak eklenebilir veya bu, bir kombinasyon terapisinde burada tarif edilen bir peptit ile birlikte veya sirali olarak uygulanan ayri bir ajan olabilir. Burada tarif edilen peptitler ayrica, GI bozukluklarini tedavi etmek için kullanilan antidepresanlari, promotilite veya prokinetik ajanlari, anti-emetikleri, antibiyotikleri, proton pompasi inhibitörlerini, asit blokerlerini (örn., histamin H2 reseptörü antagonistlerini), asit pompasi antagonistlerini, PDE5 inhibitörlerini, GABA-B agonistlerini, safra asidi sekuestrantlarini ve mukozal koruma ajanlarini içeren diger ajanlar ile kombinasyon hâlinde de uygulanabilir. Bazi uygulamalarda, burada tarif edilen peptitler ile kullanilabilen yararli analjezik ajanlar, Ca kanali blokerlerini (örn., zikonotidi), 5HT reseptörü antagonistlerini (örn., 5HT3, 5HT4 ve 5HT1 reseptörü antagonistlerini), 5HT4 agonistlerini (örn., tegaserodu [Zelnorm®], mosapridi, zakopridi, sisapridi, renzapridi, prukalopridi [Resolor®], benzimidazolon türevlerini, örnegin, BlMU 1'i ve BlMU 8'i ve lireksapridi), 5HT1 agonistlerini (örn., sumatriptani ve10 buspironu), opioid reseptörü agonistlerini (örn., Ioperamidi, fedotozini,enkepalin pentapeptidi, morfini, difeniloksilati, frakefamidi, trimebütini ve fentanili),CCK reseptörü agonistlerini (örn., Ioksiglumidi ve deksloxiglumidi), NK1 reseptörü antagonistlerini (örn., aprepitanti, vofopitanti, ezlopitanti, R-673'ü (Hoffmann-La reseptörü antagonistlerini (örn., nepadutanti, saredutanti, GW597599 (Glaxo Smith Kline), SR-, NK3 reseptörü antagonistlerini (örn., osanetanti (SR-142801; Sanofi-Synthelabo), (örn., milnakiprani), karma ve selektif dopamin reseptörü antagonistlerini (örn.- metoklopramidi, itopridi,d0mperidonu), vanilloidi ve kannabanoid reseptörü agonistlerini, sialorûni ve sialorfin-iliskili peptitleri içerir. Çesitli siniflardaki analjezik ajanlar, literatürde tarif edilir. Bazi uygulamalarda, bir veya birden fazla baska terapötik ajan, burada tarif edilen peptitler ile kombinasyon hâlinde kullanilabilir. Bu tarz ajanlar, antidepresanlar, promotilite veya prokinetik ajanlarini, anti-emetikleri, antibiyotikleri, proton pompasi inhibitörlerni, asit blokerleri (örn., histamine H2 reseptör antagonistlerini), asit pompasi antagonistlerini, PDE5 inhibitörlerini, GABA-B agonistlerini, safra asidi sekuestrantlarini ve mukozal koruma ajanlarini içerir. Antidepresanlarin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, trisiklik antidepresanlari, örnegin, amitriptilini (Elavil®), desipramini (N0rpramin®), imipramini (Tofranil®), amoksapini (Asendin®), nortriptilini; selektif serotonin geri-alim inhibitörlerini (SSRI'Iari), örnegin, paroksetini (Paxil®), fluoksetini (Prozac®), sertralini (Zoloft®) ve sitraloprami (Celexa®) ve digerlerini, örnegin, doksepini (Sinequan®) ve trazodonu (Desyrel®) içerir. Promotilite ve prokinetik ajanlarinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, itopridi, oktreotidi, betanekolü, metoklopramidi (Reglan®), domperidonu (Motilium®), eritromisini (ve bunlarin türevlerini) ve sisapridi (Propulsid®) içerir. Antiemetiklerin bir örnegi, sinirlandirma olmaksizin, proklorperazini içerir. Kullanilabilen antibiyotiklerin örnekleri, Heliobacter pylori enfeksiyonlarini tedavi etmek için kullanilabilenleri, örnegin, amoksisilini, tetrasiklini, metronidazolü veya klaritromisini içerir. Diger antibiyotikler, örnegin, eritromisin veya bunun türevleri ayricai burada tarif edilen peptitler ile kombinasyon hâlinde de kullanilabilir. Proton pompasi inhibitörlerinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, omeprazolü (Prilosec®), ezomeprazolü (Nexium®), lansoprazolü (Prevacid®), pantoprazolü (Protonix®) ve rabeprazolü (Aciphex®) içerir. H2 reseptörü blokerlerinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, simetidini, ranitidini, famotidini ve nizatidini içerir. Asit pompasi antagonistlerinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, PDE5 inhibitörlerinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, avanafili, Iodenafili, mirodenafili, sildenafil sitrati, tadalafili, vardenafili ve udenafili içerir. GABA-B agonistleri, sinirlandirma olmaksizin, baklofeni ve XP19986"yi (CAS Kayit No. 847353-30-4) içerir. Safra asidi sekuestrantlarinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, GT102-279'u, kolestiramini, kolesevelami, kolesevelam hidroklorürü, ursodeoksikolik asidi, kolestipolü, kolestilani, sevelameri, epiklorohidrin ile çapraz-bagli polidiallilamini, bir çapraz-bagli dekstranin dialkilaminoalkil türevlerini ve N-(sikloalkil)alkilaminleri içerir. Mukozal koruma ajanlarinin örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, sükralfati (Carafate), teprenonu, polaprezinc'i, setraksati ve bizmut subsalisilati içerir. Kombinasyon terapisi, her birinin ayri ayri formüle edildigi veya uygulandigi iki veya daha fazla ajani, örn., burada tarif edilen bir peptidi ve bir baska terapötik peptidi veya bilesigi uygulama ile veya iki veya daha fazla ajani bir tek formülasyon içinde uygulama ile basarilabilir. Diger kombinasyonlar ayrica,EP-17011 kombinasyon terapisi tarafindan da kapsanir. Örnegin, iki ajan birlikte formüle edilebilir ve bir üçüncü ajani içeren ayri bir formülasyon ile birlikte uygulanabilir. Kombinasyon terapisindeki iki veya daha fazla ajan es-zamanli olarak uygulanabilirken, bu zorunlu degildir. Örnegin, bir birinci ajanin (veya ajanlarin kombinasyonunun) uygulanmasi, bir ikinci ajanin (veya ajanlarin kombinasyonunun) uygulanmasindan dakikalar, saatler, günler veya haftalar önce olabilir. Böylelikle, iki veya daha fazla ajan, bir digerinden sonra dakikalar durumlarda, daha uzun araliklar olasidir. Çogu durumda bir kombinasyon terapisinde kullanilan iki veya daha fazla ajanin hastanin vücudunda ayni zamanda bulunmasi arzu edilirken, bunun böyle olmasi zorunlu degildir. Doza'i Eriskin insanlar için doz araligi genel olarak, burada tarif edilen peptitlerin oral olarak 5 ug ila 100 mg/gün araliginda olabilir. Ayri birimlerde saglanan tabletler kapsüller veya sunumun diger formlari, burada tarif edilen bilesigin, bu tarz dozajda etkili olan miktarini veya bu miktarin birden fazla olarak, örnegin, 25 ug"i ila 2 mg'i veya 100 ugH ila 1 mg'i civarinda içeren birimleri içerebilir. Bir hastaya reçete edilen bilesigin tam miktari, ilgili hekimin sorumlulugundadir. Buna ragmen, kullanilan doz hastanin yasini ve cinsiyetini, tedavi edilmekte olan kesin bozuklugu ve bunun siddetini içeren çok sayida faktöre bagli olacaktir. Çesitli uygulamalarda, dozaj birimi, gün içinde herhangi bir zamanda yemek ile, günün herhangi bir zamaninda yemek olmadan, bir gece yarisi açligindan sonra (örn., kahvalti ile) besin ile, düsük yagli bir atistirmaliktan sonra yatma zamaninda uygulanir. Özel bir uygulamada, dozaj birimi besin tüketimi (örn., bir yemek) öncesinde veya sonrasinda uygulanir. Ilave bir uygulamada, dozaj birimi, besin tüketiminden yaklasik olarak 15 dakika ile 1 saat önce uygulanir. Çesitli uygulamalarda, dozaj birimi, günde bir defa, bir günde iki defa, bir günde10 üç defa, bir günde dört defa, bir günde bes defa, bir günde alti defa uygulanir. Bazi uygulamalarda, dozaj birimi ve günlük doz es-degerdir. Iki veya daha fazla etken maddenin her birinin bir dozaj birimi içinde tam miktari, her bir bilesenin arzu edilen dozajina bagli olacaktir. Böylelikle, bu, özel bir dozaj planlamasina (örn., belirli bir sayida birimi ve uygulama için özel bir zamanlamayi belirleyen bir dozaj planlamasina) göre uygulandiginda, her bir bilesenin hasta yalnizca bir tek bilesen ile tedavi edildiginde uygulanacak olan ile ayni dozajini aktaracak olan bir dozaj birimi olusturmak için yararli olabilir. Diger durumlarda, bir veya birden fazla bilesenin hasta yalnizca bir tek bilesen ile tedavi edildiginde uygulanacak olandan daha az olan bir dozaji aktaracak olan bir dozaj birimi olusturmak arzu edilebilir. Son olarak, bir veya birden fazla bilesenin hasta yalnizca bir tek bilesen ile tedavi edildiginde uygulanacak olandan daha fazla olan bir dozaji aktaracak olan bir dozaj birimi olusturmak arzu edilebilir. Farmasötik bilesim, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla burada tarif edilen eksipiyanlari içeren ilave içerik maddelerini içerebilir. Bazi uygulamalarda, dozaj biriminin bir veya birden fazla terapötik ajani bir uzatilmis veya kontrollü salim formülasyonu içinde olabilir ve ilave terapötik ajanlar uzatilmis salim formülasyonu içinde var olmayabilir. Örnegin, burada tarif edilen bir peptit veya agonist, bir kontrollü salim ve uzatilmis salim formülasyonu olabilen veya olmayabilen bir baska ajan ile ayni dozaj birimi içinde bir kontrollü salim formülasyonu veya uzatilmis salim formülasyonu içinde var olabilir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, burada tarif edilen ajanlarin birinin veya birden fazlasinin hemen salimini ve bir veya birden fazla baska ajanin kontrollü salimini saglamak arzu edilebilir. Mevcut bulus, bunun bazi emsal uygulamalarina atfen tarif edilmistir. Buna ragmen, bulusu yukarida tarif edilen emsal uygulamalardan baska spesifik formlarda kullanmanin olasi oldugu teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan kolaylikla anlasilacaktir. Emsal uygulamalar, yalnizca açiklayicidir ve herhangi bir sekilde sinirlayici oldugu sekilde düsünülmemelidir. Bulusun kapsami önceki tarifnameden ziyade ekli istemler ile tanimlanir.10 ÖRNEKLER Burada tarif edildigi üzere, GC-C agonist peptitleri veya bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, American Peptide Company (Sunnyvale, CA) tarafindan kati faz kimyasal sentez veya dogal katlanma (hava oksidasyonu) ile hazirlanmistir. Bazi durumlarda, peptitier, burada tarif edildigi üzere sentezden sonra modifiye edilmistir. Cys1-IMD peptidi, 4,6 9 (3,0 mmol) Iinaklotidi 200 ml EtOH içinde karistirma ile sentezlenmistir. %37'lik (1,12 ml/5 es-deger) formaldehit bu karisima eklenmistir. Reaksiyon karisimi bir su banyosu içinde (45°C) gece boyu inkübe edilmistir. Sonraki gün, çözücü rotari-buharlastirma ile uzaklastirilmistir. Peptit ilaveten ters-faz kromatografi ile saflastirilmistir. Glu3-etil ester peptidi (bir referans peptit), 20 mmol'lük bir Fmoc-Tyr(tBu)-Wang reçinesi üzerinde sentezlenmistir. Amino asitler için kullanilan koruma gruplari asagidakilerdir: Tyr ve Thr için t-Bütil grubu, Asn ve Cys için Trt grubu. Peptit çinkoiri, Fmoc koruma grubunun tekrarli uzaklastirilmasi ve korunmus amino asidin kuplaji ile reçine üzerinde birlestirilmistir. DlC ve HOBt kuplaj reaktifleri olarak kullanilmistir ve NMM bu reaksiyon için baz olarak kullanilmistir. DMF içinde %20 piperidin de-Fmoc-reaktifi olarak kullanilmistir. Son Fmoc koruma grubunun uzaklastirilmasindan sonra, reçineye peptidi reçineden yarmak ve yan çinkoir koruma gruplarinin uzaklastirilmasi için 3 saat boyunca kokteyl K ile muamele edilmistir. Ayristirilmis peptit soguk eterde çökeltilmistir ve kurutulmustur. Kurutulmus peptit, 1 ila 10*Iuk (g/hacim) bir orandaki bir TFA/TlS/su (952322 hacim/hacim) karisimi içinde çözünmüstür. Bu karisim oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. izole edilmis peptit ayrica, soguk eterde çökeltilmistir, filtrasyon ile toplanmistir ve yüksek vakum altinda kurutulmustur. Tyr14-etil ester peptidi (bir referans peptit) bir fragman kondensasyon yöntemi ile sentezlenmistir. Fragman A (Boc-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Glu-(OtBu)-Tyr(tBu)- Cys(Trt)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pr0-AIa-Cys(Trt)-Thr(tBu)-GIy-OH) 15 mmol'lük CTC10 reçinesi üzerinde Fmoc kimyasi kullanilarak hazirlanmistir. Bu peptit çinkoiri ayrica, Fmoc koruma grubunun tekrarli uzaklastirilmasi ve korunmus amino asidin kuplaji ile reçine üzerinde de birlestirilmistir. DlC ve HOBt kuplaj reaktifleri olarak kullanilmistir ve NMM baz olarak kullanilmistir. DMF içinde grubunun uzaklastirilmasindan sonra, 800 N-ucu amino grubunu korumasi için kuple edilmistir. Peptit reçinesi yikanmistir, kurutulmustur ve reçineden peptidi yarmak için buna %1 TFA/DCM ile muamele edilmistir. Fragman B (Cys(Trt)- Tyr-OEt), Fmoc-Cys(Trt)-OH'in ve Tyr-OEt'nin kuplajindan hazirlanmistir. HCI. Fmoc grubu, bu di-peptide DMF içinde %20 piperidin ile muamele etme ile uzaklastirilmistir. Tyr14-etil ester peptidi son olarak, iki fragmani DMF içinde kuple etme ile sentezlenmistir. HBTU/HOBt/NMM bu reaksiyon için kuplaj reaktifi olarak kullanilmistir. Koruma gruplari peptide kokteyl K ile 2 saat muamele etme ile uzaklastirilmistir. Bu peptit, soguk eterde çökeltilmistir ve kurutulmustur. Kurutulmus peptit 1 ila 10'luk (g/hacim) bir orandaki bir TFA/TIS/su (95:3:2 hacim/hacim) karisimi içinde çözünmüstür. Bu karisim oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Izole edilmis peptit yine soguk eterde çökeltilmistir, filtrasyon ile toplanmistir ve yüksek vakum altinda kurutulmustur. Örnek 1: GC-C aktivitesinin analizi için T84 hücrelerinde cGMP birikmesi cGMP analizi için, 4,5 x 105 hücre/mL T84 hücresi 24 kuyucuklu doku kültürü plakalari içinde gece boyu büyütülmüstür. Sonraki gün, T84 hücreleri 1 mL DMEM (pH 7) ile iki kere yikanmistir. Ikinci yikamadan sonra, hücreler, herhangi bir fosfodiesteraz aktivitesini inhibe etmek için pH 7'Iik tampon içinde 450 uL 1 mM izobütilmetilksantin (IBMX) ile 37°C'de 10 dakika inkübe edilmistir. Akabinde, peptitler, DMEM tamponu (pH 7) içinde 10x'lik bir konsantrasyona seyreltilmistir. 50 uL peptit çözeltisi, her bir peptit konsantrasyonunu 1x'e getirerek, T84 hücreler ile 500 uLilik bir nihai hacme seyreltilmistir. Peptitler 100 nM'da iki kopya hâlinde test edilmistir. cGMP'nin endojen düzeylerini belirlemek için kullanilan peptit kontrolü yoktur. Peptitler 37°C'de 30 dakika inkübe edilmistir. 30 dakika sonra, süpernatantlar uzaklastirilmistir ve hücreler 0,1 M HCI ile Iize edilmistir. Hücreler buz üzerinde dakika boyunca Iize edilmistir. 30 dakikadan sonra, lizatlar pipetlenmistir ve 96 kuyucuklu bir HPLC plakasina yerlestirilmistir ve herhangi bir hücre debrisini uzaklastirmak için 10.000 @de 10 dakika çevrilmistir. Önceki çevirmeden elde edilen süpernatantlar uzaklastirilmistir ve 96 kuyucuklu yeni bir HPLC plakasina yerlestirilmistir. cGMP konsantrasyonlari, LC/MS kosullari (asagidaki Tablo 1) ve hesaplanmis standart egri kullanilarak her bir örnekten belirlenmistir. EC50 degerleri, GraphPad Prism Software ile üretilen konsantrasyon-yanit egrilerinden hesaplanmistir. Tablo 1: LC/MS kosullari MS: Thermo Quantum Iyon Modu: ESI+ Tarama Tipi: MRM Geçis Bekletme Çarpisma Tüp Alikonma Süresi Enerjisi Lensleri Süresi Bilesik: (mili-sn) (V) (dk) HPLC: CTC Analytics HTS PAL ile Agilent Technologies 1200 Series Kolon: Thermo Hypersil Gold 2,1 x 50 mm 5 mikron parçacik boyutu Akis Hizi: 400 uL/dk Sicakligi: RT örnekleyici Sicakligi: 6°C Enjeksiyon 20 uL A = 982 SuzAsetonitril + %0,1 Formik Asit Mobil Fazlar: B = 2:98 SuzAsetonitril + %0,1 Formik Asit Gradyan: Süre (dk) %A %B 0 100 0 0,3 30 70 2,00 30 70 2,01 100 Örnek 2: Emsal peptitlerin T84 hücrelerinin GC-C reseptörünü bagil baglama afinitesi Linaklotidin ve Cys1-IMD'nin guanilat siklaz-C reseptörünü (GC-C) bagil baglama afiniteleri, peptitlerin insan kolonik epitelyal (T84) hücreleri üzerindeki hücre-yüzeyi GC-C reseptörlerindeki baglama yerleri için bilinen bir GC-C agonisti, domuz-kaynakli isi-Iabil enterotoksin (pSTa), ile rekabet ettigi bir kompetitif-baglama analizi kullanilarak belirlenmistir. pSTa, bunun reseptör baglamasinin ölçümüne olanak saglamak için 125I ile radyoaktif olarak etiketlenmistir. Kompetitif-baglama analizi, her bir peptidin çesitli konsantrasyonlarinin (0,1 ila , Dulbecco modifiye edilmis Eagle ile yapilmistir. Veriler, kompetitif radyoligand-baglama egrileri yapmak ve bagil baglama afinitelerini belirlemek için kullanilmistir. Hem Iinaklotit hem de Cys1-IMD, [125I]-pSTa,nin T84 hücrelerinin üzerinde hücre-yüzeyi GC-C reseptörlerini spesifik baglamasini kompetitif olarak inhibe etmistir. Bunlarin inhibisyon sabitleri (K,) ile ölçüldügü üzere, bunlarin bagil baglama afiniteleri asagidaki sekildedir: Linaklotit K; = 3,9 ± 1,6 nM ve Cy1-lMD Örnek 3: T84 hücrelerinde emsal peptitler ile indüklenen cGMP Yaniti Linaklotit ve Cys1-IMD asagida oldugu üzere T84 hücrelerinde guanilat siklaz-C (GC-C) agonist aktivitesi için test edilmistir. 96-kuyucuklu plakanin her bir Dulbecco modifiye edilmis Eagle vasati (DMEM) içinde 1 mM 3-izobütil-1- metilksantin (IBMX) ile 37°C'de 10 dakika inkübe edilmistir. Her bir peptit, 0,1 ila .000 nM araligindaki nihai konsantrasyonlara seyreltilmistir ve her bir seyreltmenin 0,02 mL'si, kuyucuk basina 0,20 mL'lik bir nihai hacim için, T84 hücreleri içeren 96-kuyucuklu bir plakaya iki kopya hâlinde eklenmistir. Peptit reaksiyonlari 37°C*de 30 dk inkübe edilmistir. Inkübasyonu takiben, süpernatantlar uzaklastirilmistir ve atilmistir ve hücreler soguk 0,1 M hidroklorik asit (HCI) ile buz üzerinde 30 dk lize edilmistir. Hücre debrisi sentrifügasyon ile uzaklastirilmistir ve her bir lizattaki guanozin 3,,5'-siklik monofosfat (siklik GMP) konsantrasyonu tandem kütle spektrometrili sivi kromatografisi kullanilarak belirlenmistir. Veriler doz-yanit egrileri yapmak ve her bir test maddesi için yari- maksimal etkili konsantrasyon (ECso) degerlerini hesaplamak için kullanilmistir. Linaklotit ve Cys1-IMD, intraselüler cGMP'deki artis ile ölçüldügü üzere, T84 hücrelerinde GC-C agonist aktivitesi göstermistir (Sekil 4). Linaklotit ve Cys1- Örnek 4: Emsal peptitlerin içeriginin ve safliGinin ölçülmesi Mevcut açiklamanin peptitlerinin içerigi ve safligi, Chemstation Rev A.09.03 yazilimi veya es-degeri ile birlikte bir Agilent Series 1100 LC System kullanilarak ters faz gradyan sivi kromatografisi ile belirlenebilir. Bir YMC ProTM veya es-degeri kullanilir ve 40°C'de idame ettirilir. Mobil faz A (MPA), %0,1 trifloroasetik asit ile sudan olusurken mobil faz B (MP8) %01 trifloroasetik asit ile %95 asetonitril:%5 sudan olusur. Peptitlerin elüsyonu, 28 dakika içinde %0 ila %47,lik bir MPB gradyani, akabinde, kolonu yikamak Için %100 MPB,de 510 dakikalik bir bekletme ile 4 dakika içinde %100 MPB'ye bir ramp ile tamamlanir. Kolonun yeniden-dengelenmesi, 1 dakika içinde %0 MPB'ye geri dönme, akabinde %100 MPA,da 10 dakikalik bir bekletme ile yapilir. Akis hizi, 0,6 mL/dkldir ve saptama 220 nm*de UV ile saptanir. Analiz için örnekler emsal peptitlerin kapsüllerinin içeriklerinin 20 ug peptit/mL'Iik bir hedef konsantrasyon elde etmek için 0,1 N HCllye eklenmesi ile hazirlanir. Bu çözeltinin 100 uL'si, kolona enjekte edilir. Cys1-IMD peptidi Cys1-IMD peptidi, 100 mL/dk*lik akis hizinda tampon B`nin 60 dakikasi içinde kolonu kullanilarak saflastirilmistir. %95 civarinda saflik ile toplanmis fraksiyonlar, C18 kolonu üzerine yüklenmistir. Kolonu TEAP tamponu ve AA tamponu ile dengeledikten sonra, peptit saflastirilmistir ve 60 dakika içinde tampon B`nin %15-75'Iik lineer bir gradyani ile HAC tamponu ile ayristirilmistir. Saflastirilmis peptit ile toplanmis fraksiyonlar kurumasi için Iiyofilize edilmistir. Linaklotit ve Cys1-IMD ürününün RP-HPLC ile bir analizinin bir örnegi, Sekil 2'de gösterilir. Glu3-etil ester peptidi GIU3-etil ester peptidi (6,0 9), su içinde 12 L 0,05 M amonyum bikarbonat içinde çözünmüstür ve oksidasyon prosesi Ellman testi, MS ve analitik HPLC ile görüntülenmistir. Oksidasyon prosesinin tamamlanmasi yaklasik olarak 48 saat sürmüstür. Yukarida çözelti filtreden geçirilmistir ve 2-inçlik bir C18 kolonuna yüklenmistir ve 100 mL/dk'lik akis hizinda 60 dakika içinde tampon Binin %10-40'lik bir lineer gradyani ile 0,05 M amonyum asetat tamponu kullanilmasi ile saflastirilmistir. %95 saflik ile toplanmis fraksiyonlar kurumasi için Iiyofilize edilmistir. Peptitler kurutulduktan sonra, peptit asetonitriI-su içinde yeniden-çözünmüstür ve asetik asit eklenmesi için pH 4-5 civarina asitlestirilmistir ve kurumasi için yeniden- Tyr14-etil ester peptidi Tyr14-etil ester peptidi, izole edilmis peptidin 2,5 g'ini su içindeki 5 L 0,05 M amonyum bikarbonat içinde çözme ile saflastirilmistir ve oksidasyon prosesi Ellman testi, MS ve analitik HPLC ile görüntülenmistir. Bu oksidasyon prosesinin tamamlanmasi yaklasik olarak 16 saat sürmüstür. Yukaridaki çözelti filtreden geçirilmistir ve 2-inçlik bir Polimer kolona yüklenmistir ve 100 mL/dk*lik akis hizinda 60 dakika içinde tampon Binin %15- 45'Iik bir lineer gradyani ile 0,05 M amonyum bikarbonat tamponu kullanilarak saflastirilmistir. Peptit ile toplanmis fraksiyonlari, kurumasi için Iiyofilize edilmistir. Peptit kurutulduktan sonra, peptit asetonitriI-su içinde yeniden- çözünmüstür ve asetik asidin eklenmesi ile pH 4-5'e asitlestirilmistir ve kurumasi için yeniden-Iiyofilize edilmistir. Saflastirilmis peptitlerin içerikleri, hazirlanmis örnek içindeki peptit konsantrasyonunu benzer bir sekilde hazirlanmis dis peptit standardina karsi belirleme ile ölçülmüstür. DIGER UYGULAMALAR Yukaridaki tartisma yalnizca mevcut bulusun emsal uygulamalarini açiklar ve tarif eder. Teknikte uzmanligi olan biri, bu tarz bir tartismadan ve esli sekillerden ve istemlerden, asagidaki istemlerde tanimlandigi üzere bulusun kapsamindan ayrilmadan buna çesitli degisimlerin, modifikasyonlarin ve varyasyonlarin yapilabileceginin kolaylikla farkina varacaktir. TR TR TR TR TR TR TR TR