TR201809382T4 - Antineoplastik etkiye sahip immünostimülatör ve söz konusu immünostimulatörün üretilmesine yönelik usul. - Google Patents

Abstract

Genellikle insanların bağırsak yollarından izole edilebilen ECHO Picornaviridae Enterovirus tipinde bir enterovirüs suşunun tümör dokusuna adapte edilmesiyle üretilen, patojenik olmayan viral kültürden oluşan, antitümoral etkiye sahip bir immünostimülatör açıklanmıştır. Özelliği bu enterovirüs suşunun genellikle 2-5 yaşında çocukların bağırsak yolundan izole edilmesi ve altkültürlemenin çeşitli hastaların tümör dokusunda gerçekleştirilmesi, akabinde adapte edilmiş suşun insan embriyonik fibroblast kültüründe altkültürlemeyle çoğaltılmasıdır. Geliştirilen usul, terkibin azami şekilde bağışıklığı uyarmasını sağlar. Söz konusu immnünostimülatör hastalığın nüksetmesi durumunda malign büyümesini aktif olarak baskılar, yayılma süresini uzatır. Bundan başka metastazlar ağırlıklı olarak deri altında ve lenf nodüllerindedir, bu da bunların diğer metastazlara kıyasla daha kolay çıkarabilmesi demektir.

Description

TARIFNAME ANTINEOPLASTIK ETKIYE SAHIP IMMÜNOSTIMÜLATÖR VE söz KONUSU IMMÜNOSTIMULATÖRÜN ÜRETILMESINE YÖNELIK USUL Ileri sürülen bulus tip alaniyla, malign tümörlerde, ör. malign melanomda aktif bagisiklik saglama tedavisine yönelik terkiplerin üretilmesi usulleriyle ilgilidir.

Halihazirda tümör antij enleri ve Mn++ (manganez iyonlari) karisimindan olusan immünostimülatörler (bagisiklik sistemini uyarici) bilininektedir (Birlesik Krallik Patent A61K39/00/). Bu tür immünostimülatörlerin hastaligin erken evrelerinde veya ilk tedaviden sonra geriye kalan az miktarda hücrelerle ikinci tedavi durumunda etkili oldugu kanitlanmistir.

Bununla birlikte eger Önemli büyüklükte bir tümöre uygulama yapilmasi gerekiyorsa enjeksiyon ise yaramayabilir veya hatta dolasimda olan tümör antijenlerinin sayisindaki artisa bagli olarak durumu daha da kötüye götürebilir, dolayisiyla bagisiklik hücrelerini bloke edebilir.

Ayri ayri tümörlerden spesifik asilarin hazirlanmasi olasiligi zamanla ve mevcut malzeme miktariyla sinirlidir.

Ayrica, diizosiyanat ile eslesmis ölü B.Pertussis NRRL-l 1,232 susundan primer antij en ile canli adenokarsinom hücrelerinden ikinci bir antijen içeren bagisikligi uyarici yardimci A61K39/12/).

Söz konusu stimülatörlerin uygulanmasi kompleks tedavinin etkisini arttirrnistir. Ayni zamanda bu tür terkiplerin uygulanmasina hem lokal hem genel yan etkiler, ör. granülomlarin enflamasyonu, ülserler, lenfadenopati, hipersensitivite olgulari, vb. eslik eder.

Bilinen stimülatörler içinde önerilen antitümöral etkiye sahip, hücresel bagisikligi stimüle eden ajan Vaksinia virüsü, sus AS ATTC No. VR 2010,un azaltilmis viral kültürünü içeren stimülatördür (A.B.D. Patent No. 4315914, 04..

Immünostimülatör, patojenik olmayan Vaksinia virüsünün izole edilmesi, bunun siçanin börek hücrelerinden olusan tek katmanli kültüre altkültürlenmesi (pasajlanmasi) ve bunun civciv embriyosunun tek katmanli kültüründe çogaltilmasiyla üretilir.

Bu immünostimülatör, kendini bagisiklik sisteminin poliklonal stimülatörü olarak eksprese eden, çogunlukla hücresel bagisikligi etkileyen en büyük ve antijenik olarak kompleks DNA- genomik virüsle temsil edilir. Bu immünostimülatörün kalici parenteral uygulamasi durumunda çesitli yan etkiler, ör. ayni zamanda bakteriyel spesifik olmayan immünostimülatörler içinde tipik olan hipersensitivite reaksiyonlari ortaya çikabilir.

Bu yan etkiler, hedefi ameliyattan sonra ortaya çikan tümörün gelismesini baskilamak olan terkibin uygulamada etkinligini azaltir.

Birçok durumda söz konusu yan etkiler genel olarak bu terkibin uygulanmasini olanaksiz Coxsackie A.grubu virüslerin in vitro ve in vivo ve Ekovirus tip 7”nin in vitro malign hücrelere karsi aktif oldugu ortaya konmustur (Uluslararasi Yayin WO 01/37866 31., ancak Ekovirüsün terkibi ele alinmamistir.

Virüsler ayni familyaya ait olsalar dahi, bunlarin tümünün kendiliginden esit derecede onkotropik ve onkolitik olmalari söz konusu degildir. gelistirildigi ve test edildigi belirtilmistir, ancak tip E7 kullanilarak bu tür bir asi ürününün gelistirilmesi ve üretilmesi konusunda hiçbir teknik detay verilmemistir.

Sinkovics ve digerleri tarafindan Journal of Clinical Virology 16: 1-15 (2000)”de temel olarak Newcastle hastaligi (Yalanci Veba) (NDV) virüsünün onkolitik özellikleri ele alinmis ve kisaca melanomun yeniden nüksetmesini önlemek için asi olarak kullanilan bir ekovirüs susu belirtilmis, ancak asinin hazirlanmasina yönelik asamalar tam tamina belirtilmemistir. fibroblast hücreleri ve melanom hücreleri dahil çesitli memeli hücre tiplerinde in vitro, Picomaviridae familyasina ait ensofalomiyokardit virüsünün çogalmasi incelenmistir.

Bu bulusun amaci, uzun süreli uygulama durumunda, ameliyattan sonra kötücül büyümenin In VIVO baskilanma etkinliginin arttirilmasi için patoj enik olmayan virüsler içeren, antitümöral etkiye sahip bir immünostimülatörün hazirlaninasina yönelik bir usulün saglanmasidir.

Bulusun amacina, imminostimülatörün üretilmesine yönelik usulde patojenik olmayan virüs susunun asagida belirtildigi sekilde elde edilmesi olgusuyla ulasilmistir: . ECHO-7 tipi enterovirüs (Picomaviridae Enterovirus tür Ekovirus) olan virüsün izole edilmesi, akabinde . çesitli hastalardaki melanoblastom olan tümör dokusuna virüsün birbirini izleyen sekilde altkültürlenmesiyle virüsün tümör dokusuna adapte edilmesi ve tümöre afinitesi olan susun seçilmesi, burada virüsün tümör dokusuna adapte edilmesi insan embriyonik fibroblast hücrelerinin test kültüründe tümör dokusu içinde çogalan virüsün çogaltilmasi ve yine virüsün tümör dokusunda altkültürlenmesi programina göre gerçeklestirilir, burada 3-10 ardisik altkültürleme dönüsümlü olarak ayri ayri tümörlerden ve test kültürlerinden elde edilen sinirli kültürlerde gerçeklestirilir, o bu adapte edilmis susun insan einbriyonik fibroblast hücresinde ECHO-7 tipi entovirüsün 5-7 log TCD 50 / 0.1 ml titreye kadar altkültürlenmesiyle ardisik olarak çogaltilmasi, bundan sonra çogaltilmis viral kültür izole edilir, 0 elde edilen ECHO-7 tipi enterovirüsün tümör büyümesini in VIVO baskilamada etkin olmasi.

Enterovirus (familya Picomaviridae, cins Enterovirus, tür Echovirus) en basit RNA virüslerin biri olarak bilinir. Yalnizca 4 yapisal polipeptide sahiptir ve dolayisiyla bagisiklik sistemi saglam olan hücrelerin çesitli klonlariyla etkilesim için çok da antijenik belirleyici (aktif merkezler) degildir.

Bu immünostimülatörün antitümöral etkisi esas olarak bagisiklik tepkisinin humoral asamasina (B-hücreleri) tesir eder. Malign sürecin baslamasi durumunda B hücrelerinin islevsel aktivitesinin T-hücrelerininkinden önce baskilandigi bilinmektedir.

Usulün bir grup spesifik özelligi, izole edilmis patoj enik olmayan kültürün çesitli hastalarin tümör dokusuna adapte edilmesine ve yani sira kültürün çogalmasina olanak saglar. Virüs titresinin 5 log TCD 50/0.1ml,den düsük olmasi durumunda bagisikligi uyarici etki gözlemlenmez, zira kültürün aktivitesi çok zayiftir.

Eger titreler 7 log TCD 5010.1mlsden yüksekse kültürün aktivitesinde düsme gözlemlenir.

Enterovirüsler erkeklerin, esas olarak 2-5 yasinda saglikli çocuklarin bagirsak yolundan elde edilir ve insan embriyonik primer kültüründe izole edilir. Daha sonra patojenik olmayan serotip Picomaviridae Enterovirus ECHO-7 seçilir. Virüsün yeniden geri kazanilmasinda diski kullanilir.

Baslangiç kültürü üretildikten sonra melanoblastom veya baska tümörler için kültürün onkoloj ik yönelimi tümörlerden elde edilen kisa süreli sinirli kültürlerde saptanir.

Seçilen kültür, etkinin özgüllügünün arttirilmasi için çesitli hastalardaki melanoblastomun tümör dokusunda ardisik altkültürlenmesiyle adapte edilir.

Altkültürlenen sus, insan embriyonik fibroblast kültüründe 5-7 log TCD 50/0.lml titreye çogaltilir.

Usulün detayli açiklamasi asagida verilmistir.

Picomaviridae Enterovirus tip ECHO-Tnin baslangiç, patalojik olmayan kültürü 2-5 yaslarindaki saglikli Çocuklarin bagirsak yolundan geri kazanilir. Virüsün ilk geri kazanimi için diski numuneleri kullanilir. Steril siselerdeki diski numunesi saklanmak üzere derhal - °C”lik sogutucu içine konur. Virüsün geri kazaniminda Hankss' dengelenmis tuz çözeltisi içinde %20 süspansiyon kullanilir. Süspansiyon 3000 devir/dakikada 30 dakika santrifüjlenir.

Santrifüj sonrasi üstte kalan sivi dondurulur ve bu sicaklikta 24 saat saklanir. Daha sonra süspansiyonun buzu çözülür, antibiyotikler ilave edilir: penisilin - 1000 U/ml, streptoinisin - dakika santrifüjlenir. Santriûij sonrasi üstte kalan nihai sivi sterillik açisindan teste tabi tutulduktan sonra yeniden dondurulur ve -10°C ila -20°C,da saklanir. Üretilen virüs içeren malzeme insan embriyonik fibroblast hücrelerinin tripsinlenmis kültürünün tek katmanina asilanir. Asilanmis kültürler için koruma buyonu olarak %2 buzagi serumu içeren Medium 199, büyütme buyonu olarak %10 buzagi serumu içeren Medium 199 kullanilir.

Hücrelerle 1 saat temastan sonra süspansiyon çikarilir ve koruma buyonu ilave edilir. Daha sonra hücre kültürü tüpleri 37°C ”da 1-10 gün inkübe edilir. Bu sürede insan embriyonik fîbroblast kültürlerindeki maddenin 2-3 ardisik altkültürlenmesi gerçeklestirilir.

Altkültürlemenin herhangi birinde tüplerin inkübasyonu hücreler tamamen dejenere olana kadar sürer.

Sitopatoj enik Virüsün izole edilmesinden sonra üretilen malzeme titre edilir ve serotiplenir.

Virüs içeren malzeme 3000 devir/dakikada 20 dakika santrifüjlenir, daha sonra dondurulur ve -20°C -ila -70°C°da saklanir.

Insan embriyonik fibroblast kültüründe virüs titresi 5-7 log TCD 50/0.] ml°dir.

Izole etme isleminden sonra virüs suslari sinirli tümör kültürlerinde onkotropizm açisindan test edilir.

Izole edilmis virüs kültürünün adaptasyonu, hiçbir bir tedavi görmemis çesitli hastalarin ameliyatla alinan materyalinden elde edilen tümör dokusunda gerçeklestirilir. Tümör dokusu yag dokusu, nekrotik lezyonlar ve kandan ayrilarak saflastirilir. Saflastirilmis tümör dokusu 18-20 saat, 0°C”da izole edilir, daha sonra 01-02 mm parçaciklar halinde ince kiyilir, serum içermeyen Medium 199 veya Eagles buyonu içine gömülür (100 mg doku/4ml buyon). isi deneticisi içinde inkübe edilir. 5 m1 taze buyon hergün degistirilir. Tümör parçaciklarinin ölümü gerçeklestiginde kültivasyon sonlandirilir, tümör ölümü buyon renginin degismesine göre morfolojik ve görsel olarak denetlenir.

Virüsün çogalma yogunlugunun tespiti için virüs titrasyonu tümör kültürünün sivi fazinda gerçeklestirilir, tümör kültürü için hergün numune alinir. Virüs üreme yogunlugu, enfeksiyon dozuna karsi enfekte kültürde saptanan Virüs miktari %”si hesabiyla degerlendirilir. Tümör dokusunda Virüs çogalmasi durumunda azami çogalmanin oldugu günden alinan materyal 3000 devir/dakikada 20 dakika santrifüjlenir.

Kültürün adaptasyonu izleyen programa göre gerçeklestirilir: tümör dokusunda çogaltilan virüs insan embriyonik fibroblast hücrelerinin test kültüründe altkültürlenir ve yeniden tümör dokusunda altkültürlenir. 3-10 ardisik altkültürlemenin tamami degisimli olarak kisinin tümöründen elde edilen sinirli kültürlerde ve test-kültürlerinde gerçeklestirilir.

Baslangiç virüs susu dondurulinus halde -20°C ila -70°C`da saklanir.

Susun çogaltilmasi insan embriyonik fibroblast kültüründe, titre serum olmadan 5-7 log TCD 50/ ilave edilmesiyle gerçeklestirilir. pH göstergesi fenol kirmizisi %0.002,lik bir konsantrasyonda buyona eklenebilir.

Hücrelerin tamamen dejenere olmasindan sonra insan embriyonik fibroblast hücrelerinin enfekte kültürünün sivi fazi 3000 devir/dakikada 20 dakika santrifüjlenir. Üretilen antitümöral etkiye sahip immünostimülatör rengi roze (pembe) olan bir steril sividir.

Bu sivi 2mlllik ( viyallere doldurulur- bu bir enj eksiyonun dozudur. Terkip dondurulmus halde saklanir. Üretilen immünostiinülatör primer tümörün veya bölgedeki lenf nodülleriyle birlikte primer tümörün ameliyatla alinmasindan sonra malign cilt tümörü (T 1-3 No M0) olan hastalarin tedavisinde uygulanir.

Terkip, ameliyattan 2-4 hafta sonra parenteral (kas içine) enjeksiyon seklinde üst lateral gluteal bölgeye uygulanir.

Uygulama programi izleyen sekildedir: ilk 3 ay, art arda 3 gün 2 ml”lik ( bir enjeksiyon; her bir tedavi küründen sonra üç ay ara; bir sonraki 3 ay ayda bir enjeksiyon.

Daha sonra üç aylik bir zaman araligi vardir ve aylik enjeksiyonlar ameliyattan sonra 9uncu- 12nci ay içinde tekrarlanir.

Terkibin uygulanmasi primer tümörün alinmasindan önce- ameliyattan 1-2 hafta önce art arda 3 gün 2 ml'lik ( bir enjeksiyondur.

Terkibin, 2 ml,lik aylik enjeksiyonlarla ameliyattan sonra 2-3 seneye kadar” daha uzun bir Terkibin uygulanmasi uygulamada hiçbir yan etkiye yol açmaz.

Asagida, malign melanom hastalari için, önerilen bagisiklik uyarici terkibin (ISVO 7 Viral orijinli immnostimülatör), bakteri orijinli C.P. (Corinebacterium Parvum) terkibinin ve bir kimyasal terkip Decarisün (Levamisole) klinik deney sonuçlari gösterilmistir.

Decaris asagidaki programa göre uygulanmistir: primer tümörün alinmasindan sonraki 2nci- 4üncü haftadan itibaren 8 ay içinde, 3 günlük zaman araliklariyla hafta iki kez agizdan alinan tabletler.

Terkip C.P. asagidaki programa göre uygulanmistir: Bagisikligin uyarilmasi radikal ameliyattan 1-4 hafta sonra baslatilmistir. Ilk bes günde terkip damar içinden gittikçe yükselen günlük 1-4 mg”lik bir dozda uygulanmistir. Daha sonra, bir yil boyunca terkip, karin bölgesine 4 noktadan haftada bir kez 1 m1”lik dozda deri altindan uygulanmistir. 3 yildan az olmayan bir süre gözlem altinda tutulan hastalarin bulgulari incelenmistir.

Asagida Tablo lsde radikal ameliyattan sonra cilt tümörü olan hastalarda hayatta kalma ve süreç dinamikleri verisi sunulmustur.

Gözlemlenen parametreler Immünostimülatör Yalnizca ameliyat C.P. Decaris ISVO Gözlemlenen parametreler Immünostimülatör Yalnizca ameliyat C.P. Decaris ISVO Sürecin stabilizasyonu M w @ %25.7 *- rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi pozitif bul gulu hasta sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu oranin yüzdesi belirtilmistir.

Veri, hayatta kalmada en iyi sonuçlarin önerilen enterovirüs kültürü bazli immünostimülatörün uygulanmasi durumunda elde edildigini ispatlamaktadir.

Tablo 2,de ameliyattan ve bagisikligin uyarilmasindan sonra melanom hastalarinin ölüm dinamikleriyle ilgili veri sunulmustur.

Gözlemlenen hastalarin grubu Asagida belirtilen yil içinde ölen hasta sayisi: linci yil 2nci yil 3üncü yil Decaris & w @ Yalnizca ameliyat %545 * rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi ölen hasta sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu oranin yüzdesi belirtilmistir.

Elde edilen veriden, önerilen immünostimülatörle saglanan iminünostimülasyonun hastalarin hayatta kalma süresini önemli derecede uzattigi sonucu çikarilabilir, zira diger gruplarda hastalarin sirasiyla %5 ve %Tsi ölürken ISVO ile tedavi edilmis grupta ilk yilda hiçbir hasta ölmemistir.

Ayrica ölüm oraninda fark, ikinci en iyi terkip Decarisle kiyasla iki yildan sonra gözlemlenmistir; ISVO sonuçlari 1.3 kat daha iyi indüklemistir. Önerilen terkip ayrica radikal ameliyattan sonra sürecin ilerleme sikligi derecesini azaltmistir.

Asagida Tablo 3,de radikal ameliyattan ve immünostimülasyondan sonra melanom hastalarinda sürecin ne siklikta ilerledigiyle ilgili veri yer almaktadir.

Zaman dönemi Terkip Yalnizca ameliyat C.P. Decaris ISVO *- rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi sürecin ilerledigi hasta sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu oranin yüzdesi belirtilmistir.

Tablodan görülebilecegi gibi en yavas ilerleyen süreç önerilen terkiple tedavi durumundadir.

Kullanilan terkipten bagimsiz olarak radikal ameliyattan sonra tümör-cilt melanomunun yayilma modeli Tablo 4”de gösterilmistir.

Immünostimülatör Nüksetme Metastazlar Deri Lenf Akcigerler Beyin altinda nodülleri Immünostimülatör Nüksetme Metastazlar Deri Lenf altinda nodülleri Decaris yok M M Akcigerler Beyin Q 1_;_8 *- rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi hastaligin nüksettigi (metastazli) hasta sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu Tablo 4,de gösterilen veri önerilen terkiple tedavi durumunda metastazlarin çogunlukla, görece kolayca saptanabilen ve çikarilabilen deri altinda ve lenf nodüllerinde olduguna isaret etmektedir. Akcigerlerde metastaz, bilinen diger terkiplerle tedavi durumunda bulunandan 6 ile 2.5 kez daha nadir bulunmustur. Ölen hastalar arasinda hastaligin ilerleme modeli Tablo ”de gösterilmistir.

Gözlemlenen Hasta GR 9 13 9 Decaris 6 10 5 Stabilizasyon süresi Yayilma süresi Hayatta kalma süresi (ay) Tablo 6,da sunulan veri, önerilen terkibin stabilizasyon süresini ve yayilma süresini önemli derecede uzattigini göstermektedir; ancak hayatta kalma süresi, Decaris terkibi durumundaki hayatta kalma süresinden 12 ay fazla ve Corinebacterium Parvum bazli terkip durumundaki hayatta kalma süresinden 7 ay daha fazladir.

Asagida Tablo 63da hastaligin 3üncü evresinde radikal ameliyattan sonra mide kanseri hastalarinin hayatta kalma verisi sunulmustur.

Gözlem süresi Hastalarin hayatta kalmasi (siklik %,si) Ameliyat+ISVO Ameliyat 2 yil M * 45.8 71.41 yil M 242 *- rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi yasayan hastalarin sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu oranin yüzdesi belirtilmistir.

Sunulan veriden, önerilen terkip ile tedavi edilmis hastalarda hayatta kalma sikliginin yalnizca ameliyat edilmis hastalara kiyasla 1.5-2 kat daha yüksek oldugu sonucuna varilabilir.

Asagida Tablo 7,de radikal ameliyattan sonra rektum kanseri hastalarinin hayattta kalma verisi sunulmustur.

Gözlein süresi Hastalarin hayatta kalmasi (siklik %,si) Ameliyat+lSVO Ameliyat yil M * 58.2 *- rakamsal bölümde gözlemlenen hastalarin toplam sayisina karsi yasayan hastalarin sayisi belirtilmistir; payda kisminda söz konusu oranin yüzdesi belirtilmistir.

Sonuçlardan görülebilecegi gibi önerilen terkibin uygulanmasi hayatta kalmayi %14 arttirmistir.

Asagida, önerilen immünostimülatör ile tedavi sirasinda bagisiklik durumunun kontrolünün sonuçlari açiklanmistir. 1. DTH,in tümörle iliskili melanom antijenine reaksiyonu Ilk 6 aylik sürede lSVO ile tedavi edilmis hastalarda pozitif DTH reaksiyonunun sikliginda önemli bir degisiklik yoktur (%50-%60). Immünostimülasyonun yeniden baslatilmasindan sonra (9-12 ay) bu indeks hastalarin %10lunda artmistir, bu da DTH”1n normal reaksiyon sikliginin ISVO ile stiinülasyon sirasinda degismedigini veya artmadigini belirtir.

Decaris ile tedavi durumunda DTHiin normal reaksiyonlarinin sikligi degisim gösterir, 2 aydan sonra hastalarin %353inde reaksiyon yoktur. Hastalarin bir kisminda bu reaksiyonun sikligi önemli derecede degisim gösterir (%20-%30).

DTHlnin reaksiyonu organizmanin tümörle iliskili antijeni ayirt etme, reaksiyon gösterme ve reddetme kabiliyetini gösterdiginden, bu indeksin stabilizasyonu veya yükseltilmesi olumlu göstergelerdir, ancak keskin dalgalanmalar ve bu reaksiyonun azalmasi iininünostimülasyon sirasinda bagisiklik durumuyla ilgili olumsuz göstergelerdir. Dolayisiyla, bu indekse göre 2. Tümörle iliskili melanom antiieni için RILA Ameliyat sonrasi dönemde ISVO ile tedavi reaksiyonlarda keskin dalgalanmalara neden olmaz. Immünostimülasyon boyunca bu reaksiyonun saptanma sikligi artmaya egilimlidir.

Decaris“le tedavi edilmis hastalar arasinda stimülasyon boyunca bu reaksiyonun saptanma sikligi %80'den %30'a düsmüstür, bu da sürenin sonunda hastalarin yalnizca %307unda lökositlerin teshis edildigini ve melanom antijenine reaksiyon gösterdigini belirtir. DTHR kadar RILA da T-lenfositlerin tümörle iliskili antijeni ayirt etme ve reaksiyon gösterme kabiliyetini gözler önüne serer. Bu reaktivitenin yoklugu veya azalmasi tümör direncinin zayiflamasi olarak kabul edilmelidir.

Decarisle tedavi sona erdikten sonra bu indeksin baslangiç degerine geri döndügünü belirtmek 3. Serum icindeki lökositlerin aderans inhibitörü indeksin saptanma sikligi sürenin basinda %40idan stimülasyon süresinin sonunda %20”ye RILAida saptanan lökositlerin aderans inhibitörü saglikli insanlarin %60-%80”inde saptanir.

Ayni indeks radikal ameliyattan ve ISVO ile tedaviden sonra ve stabilizasyon asamasinda melanom hastalarinda görülür. Inhibitör yayilma sürecinde kaybolur, bu da serum içinde lökositlerin aderans inhibitörünün mevcudiyetinin normal bagisiklik durumunun göstergelerinden biri oldugunu belirtir. Bunun ISVO ile tedavi edilmis hastalarin %45`inde görünmesi immünostimülasyonun pozitif etkisi olarak kabul edilir.

Bununla karsilastirildiginda Decarisle tedavi edilmis grupta tedaviden 4 ay sonra inhibitör hastalarin yalnizca %2073inde bulunur. 4. RILA,da saptanan serum icindeki engelleyici faktör Engelleyici faktör, antitümöral bagisiklik süreçlerine katilan immünokompetan hücrelerin blokaj durumunu gösterir.

Bu faktör, primer melanom lezyonu çikarildiktan sonra hastalarin %25 -%30”unda saptanir. yalnizca %10,unda saptanir.

Ayrica serumdaki engelleyici faktör de Decarisle stimülasyonun ilk 2 ayinda azalir ve hastalarin %10°unda saptanir, ancak 6nci ayda engelleyici faktör, tümör alindiktan sonra herhangi bir engelleyici faktörün bulunmadigi hastalar dahil olmak üzere hastalarin %30- . Serumdaki antiviral antikorlar bir artis olur; antiviral antikorlar alyuvar kümelesmesinin nötrlestirilme reaksiyonuyla ve inhibisyon reaksiyonuyla saptanir. Bu süre zarfinda antiviral antikorlarin titreleri 1:20iden titreleri düser ve daha sonra immünostimülasyonun yeniden baslatilmasiyla stabil hale gelir.

Bu da hastalarin organizmalarinda aktif viral bagisikligin meydana geldigini gösterir. Viral bagisikligin meydana gelme süresi, anti tümöral bagisikligin, tümörün büyümesiyle bloke edilmis olan süreçlerin yeniden baslamasi ve normallesmesi yoluyla ekspresyonu açisindan olumludur.

Bu da, primer melanom lezyonunun radikal ameliyatla çikarilmasindan sonraki ameliyat sonrasi dönemde lSVOanun uygulanmasinin organizmanin bagisiklik reaksiyonlarini stabil hale getirdigi veya aktive ettigi anlamina gelir.

Bunun yani sira, otoimmün reaksiyonlarin hiperstimülasyonun hiçbir belirtisi gözlemlenmemistir. Bagisiklik durumunun indeksleri, ISVO°nun kalici parenteral uygulamasi sirasinda toksik etkilerin gözlemlenmemis oldugunun delilidir.

Patojenik olmayan, tümöre adapte edilmis ECHO tipi Picomaviridae Enteroviruýün entovirüs susu tümör büyümesinin baskilaninasinda etkilidir.

Virüslerin bu tipi sarilmamis (zarflanmamis) virüsler grubuna aittir ve bu nedenle otoimmün reaksiyonlari baslatabilen hücresel orijinli antij enler tasimazlar.

Bundan baska virüslerin bu tipinin özelligi, konukçu hücre genomuna entegre olmayan ve diger virüslerin genomlariyla birlesmeyen genomun organizasyonu temelinde genetik açidan güvenli olmasidir.

Immünostimülatör üretilmesi için gelistirilmis usul elde edilen terkibin azami aktivitesini temin eder. Önerilen immünostimülatör nüksetme durumunda malign büyümesini aktif olarak baskilar, stabilizasyon süresini ve yayilma süresini uzatir. Ayrica, metastazlar agirlikli olarak deri altinda ve lenf nodüllerindedir, bunlar diger metastazlara kiyasla daha kolay çikarilabilir.

Claims (3)

ISTEMLER

1. Patojenik olmayan Virüs susu içeren, antitümöral etkiye sahip bir immünostimülatörün hazirlanmasina yönelik bir usul olup, özelligi bu susun asagida belirtilen sekilde elde edilmesidir: - ECHO-7 tipi enterovirüs (Picomaviridae Enterovirus tür Ekovirus) olan virüsün izole edilmesi, akabinde - çesitli hastalardan alinan melanoblastom olan tümör dokusuna virüsün birbirini izleyen sekilde altkültürlenmesiyle virüsün tümör dokusuna adapte edilmesi ve tümöre afinitesi olan susun seçilmesi, burada virüsün tümör dokusuna adapte edilmesi insan embriyonik fibroblast hücrelerinin test kültüründe tümör dokusu içinde çogalan virüsün çogaltilmasi ve yine virüsün tümör dokusunda altkültürlenmesi programina göre gerçeklestirilir, burada 3-10 ardisik altkültürleme dönüsümlü olarak ayri ayri tümörlerden elde edilen sinirli kültürlerde ve test kültürlerinde gerçeklestirilir, ve - bu adapte edilmis susun insan embriyonik Iibroblast kültüründe ECHO-7 tipi entovirüsün 5-7 log TCD 50 / 0.1 ml titreye kadar altkültürlenmesiyle ardisik olarak çogaltilmasi, bundan sonra çogaltilmis viral kültür izole edilir, - elde edilen ECHO-7 tipi enterovirüsün tümör büyümesini In VIVO baskilamada etkin olmasi.

2. Istem lle göre usul olup, özelligi söz konusu enterovirüs susunun 2-5 yasinda çocuklarin bagirsak yolundan izole edilmesidir.

3. Istem 1 veya 2,deki usulle elde edilen ECHO-7 tipi patojenik olmayan bir enterovirüs (Picornaviridae Enterovirus tür Echovirus).