TR201816518T4 - Farmasötik anti-tnf-alfa antikor formülasyonu. - Google Patents

Abstract

Buluş, alternatif bir sitrat/fosfat tampon sistemine dayanan, iyileştirilmiş, depolama durumunda stabil sıvı farmasötik antikor formülasyonları ve bunları içeren oto-enjeksiyon aletleri gibi kaplar ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME FARMASOTIK ANTI-TN F-ALFA ANTIKOR FORMULASYONU Bulus Sahasi Mevcut bulus, genel itibariyla farmasötik formülasyonlar sahasi ile ilgilidir. Daha özel olarak bu bulus, Adalimumab ajaninin, alternatif bir sitrat/fosfat tampon sistemine dayanan, iyilestirilmis, depolama durumunda stabil sivi farmasötik antikor formülasyonlari ve bunlari içeren oto- enjeksiyon aletleri gibi kaplar ile ilgilidir.

Bulusun Arka Plani Çözeltide bulunan pek çok protein çok az stabildir ve aritma, isleme ve depolama esnasinda çesitli streslerden kaynaklanan konformasyonel degisimler geçirir. Bu tip streslerin arasinda artmis sicaklik, kesme gerilmesi, yüzey adzorpsiyonu ve yüksek protein konsantrasyonu bulunabilir (Arakawa T ve ark., 2006). Yapisal olarak degismis proteinler, kümelesmeye (agregasyon) karsi yüksek egilim içindedir ve nihayetinde siklikla çökelmeye sebep olur.

Tersinmez kümelesme, terapötik proteinin uzun dönemli depolama stabilitesi ve sevkiyatlari ve tabi olduklari çesitli muameleler bakimindan önemli bir problemdir.

Yüksek derecede kompleks proteinler olarak antikorlar, çesitli fiziksel ve kimyasal yikim yolaklarina karsi duyarlidir. Antikor kümelenmesi, sivi durumdayken depolama esnasinda kolaylikla meydana gelerek (Chen B ve ark., 2003), biyolojik aktivitede kayba ve artan immünojenisiteye sebep olur, ki bu durumlar ise anafilaktik sok ve baska güvenilirlik meseleleri gibi ciddi olumsuz reaksiyonlara neden olabilir. Dolayisiyla, antikor kümelesmesini azaltan farmasötik antikor formülasyonlarini gelistirmeye yönelik bir ihtiyaç söz konusudur. Antikorlarin terapötik ajanlar olarak formüle edilmesinin ana amaci, antikorun çözünürlügü, stabilitesi ve biyoaktivitesini, özellikle yüksek antikor konsantrasyonlarinda muhafaza etmek ve dünya çapinda sevkiyat ve depolanma bakimindan kabul edilebilir bir raf ömrü saglamak amaciyla, antikor yikim hizini kontrol altina almaktir.

Istenmeyen Immünojenisite veya degismis yari ömre sebep olabilen kümelesmelerin olusmasini önlemek üzere farmasötik antikor formülasyonlari, belirli bir pH araligini muhafaza etmek üzere genellikle bir ya da daha fazla tampon ve fizyolojik sivilar ile benzer bir ozmolarite saglamak üzere bir izotonik yapici ajan ihtiva eder. Sekerler, poliollar, amino asitler ve yüzey aktifler de dahil olmak üzere çesitli formülasyon eksipiyanlarinin, antikorlari farkli isleme sartlari altinda ve depolama esnasinda stabilize ettigi gösterilmistir (Paborji M ve ark., 1994; Sarno MEC ve ark., 1999). Kümelesme; antikor konsantrasyonu ve formülasyonun pH seviyesine yüksek ölçüde bagli oldugundan, uygun bir tampon sisteminin seçimi, özellikle de bir sitrat ve fosfat tamponunda formüle edilen, anti-TNFa antikoru Adalimumab (HUMIRA®, Abeie Inc; 50 mg/mL) ajaninin subkütanöz uygulamasi için uygun olan yüksek ölçüde konsantre monoklonal antikor formülasyonlari ile ilgili olarak, stabil birformülasyon bakimindan dezavantajlari, sitrat tamponunun (Kappelgaard A 2004, Frenken ve ark., 1993) ve fosfat tamponunun sebep oldugu enjeksiyon yeri agrisi (Fransson ve ark., 1996) ve fosfat tabanli tamponlarin donmasi üzerine pH kararsizligi (Kolhe P ve ark., 2010) bakimindan ilgili teknikte iyi bilinir. Dolayisiyla farmasötik ilaç ürününün stabilitesi ve güvenilirligi, bir tamponlayici ajanin hem tipine hem de konsantrasyonuna bagli olmaktadir.

Ornegin romatoit artrit, sedef hastaligi veya ülseratif kolit gibi kronik hastaliklar bakimindan, ki bu durumlarda nihayetinde ilaçlarin uzun dönemli olarak uygulanmasi ve hasta uyuncu ve maliyetlerin azaltilmasi amaciyla evde (kendi kendine) ilaç uygulamasi gerekir, subkütanöz uygulama tercih edilen uygulama sekli olmaktadir. Ancak dokunun geri basinci ve enjeksiyon agrisi sebebiyle subkütanöz yoldan ilaç uygulamasi, 1 ml ila 15 ml'lik bir enjeksiyon hacmi ile sinirlandirilmistir (Gatlin LA ve Gatlin CAB 1999). Romatoit artrit, sedef hastaligi veya ülseratif kolit tedavisi için, HUMIRA® gibi onaylanmis olan monoklonal antikor ürünleri, göreli olarak yüksek klinik dozlar gerektirir (5-700 mg I hasta; gerek bir sabit doz, gerekse beden agirligi (kg) veya beden yüzeyi (m2) esasinda belirlenen dozlar olarak uygulanir, (Roskos LK ve ark., 2004).

Adalimumab gibi bir antikorun uygunluguna (uzun dönemde kendi kendine uygulanabilme) ve klinik etkinliginden tam olarak istifa etmeye yönelik gereklilikleri karsilamak bakimindan, iyilesmis depolama stabilitesine sahip yüksek ölçüde konsantre antikorlarin sivi sulu farmasötik formülasyonlarinin gelistirilmesi bakimindan bir ihtiyaç söz konusudur. Mevcut bulus, artmis stabiliteye sahip olan ve önceki teknigin bilinen formülasyonlarindaki dezavantajlarin üstesinden gelen Adalimumab ajaninin uygun farmasötik kaplar (oto-enjektör aletleri) içerisinde yeni, yüksek konsantre farmasötik formülasyonlarini saglamak suretiyle, yukarida bahsedilen ihtiyaci karsilamaktadir.

Bulusun Kisa Açiklamasi Mevcut bulus, istemlerde karakterize edilen yapilanmalar ile ilgilidir ve fosfat tamponu içermeyen ve Adalimumab ajaninin, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide terapötik olarak etkili bir miktarini içeren stabil bir sivi sulu farmasötik formülasyonunu açiklamakta olup bahsedilen stabil sivi sulu farmasötik formülasyon, 5 ila 55'lik bir pH seviyesi sergilemekte ve Adalimumab konsantrasyonu, 50 mg/mL olmakta ve formülasyon ayrica bir poliol içermekte ve bir polisorbat olan bir yüzey aktif ihtiva etmektedir.

Mevcut bulusun temeli, Adalimumab ajaninin, birfosfat tamponu içermeyen veya büyük ölçüde içermeyen ve L-histidin tabanli tampon sistemlerinde formüle edilen sivi sulu farmasötik bilesimlerinin, kümelesme ve asidik türlerin üretimi bakimindan, artmis uzun dönemli stabilite sergilediginin gözlenmis olmasidir.

HP-SEC analizi ile gösterildigi ve Örnekler ve Sekiller içerisinde bulunan tablolar ile sergilendigi üzere, Adalimumab ajaninin mevcut bulus ile açiklanan fosfat-tamponu içermeyen farmasötik formülasyonlari, pazarlanan HUMIRA® ürününe ait formülasyona göre yapilan, sitrat-fosfat tamponu tabanli farmasötik Adalimumab referans formülasyonuna göre avantajli olmaktadir. Daha özel bir anlatimla mevcut bulusun, histidin-sitrat içerisinde tamponlanan farmasötik Adalimumab formülasyonlari, sitrat ve fosfat ile tamponlanan referans Adalimumab formülasyonundan (#01) daha stabil olmustur.

Mevcut bulusun diger yapilanmalari, tarifnamenin ilerleyen kisimlarindan ve Orneklerden açikça anlasilacaktir. Bu baglamda histidin-asetat tamponlu Adalimumab farmasötik formülasyonlari, sadece örneklemek amaciyla kullanilmis ve açiklanmistir.

Sekillerin Kisa Açiklamasi Referans formülasyon(lar) ile göreli olarak, alternatif Adalimumab formülasyonlarinin agrega (kümelesme) içerigi (ID NO #01- #03, tampon bilesenlerinin detayli bir özeti için bkz. tablolar 11 ve 13). Test edilen Adalimumab formülasyonlarinin, 6 aylik bir periyot boyunca 5 °C (A-C) ve 25 'C (D-E) sicaklikta depolanmasi esnasinda, kü melesen piklerin göreli alan yüzdesi (%) olarak HP-SEC ile ölçüldügü üzere, agrega olusumu bakimindan stabilitesi. Ornek ID NO. #01, NO. #02, #05, #08 ve #11 ise, EDTA içeren formülasyonlarin (B, E) verilerini temsil eder ve örnek lD NO. #03, #06, #09 ve #12, L-arginin (L-Arg) içeren formülasyonlarin (C, F; L-arginin içeren formülasyonlar için sadece 3 aylik stabilite verileri mevcuttur) verilerini temsil eder.

Histidin-sitrat (örnek ID NO. #07) ve histidin-asetat (örnek ID NO. #10) ile tamponlanan Adalimumab formülasyonlari, sitrat-fosfat tabanli referans formülasyonlari ile kiyasli olarak belirgin sekilde daha düsük bir kümelesme hizina sahiptir. Test edilen tüm Adalimumab formülasyonlarindan, sadece sitrat tamponlu olanlar, kümelesmeye en yatkin olanlardir. Ne üzerinde önleyici veya stabilize edici bir etki gösterir. Sonuç olarak histidin-asetat tamponlu Adalimumab farmasötik formülasyonu (akabinde mevcut bulusun histidin-sitrat tamponu), pazarda bulunan Adalimumab formülasyonu için daha stabil bir alternatiftir.

Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin, stres sartlari (55 °C) altinda referans formülasyonuna göreli olarak agrega içerigi. 55 (C sicakliga yapilan isitma üzerine agrega olusumu, katkilar kullanilmayan formülasyonlarda (8, örnek ID NO. #01, #04, #07 ve #10) ve EDTA kullanilan formülasyonlarda (C, örnek ID NO. #02, #05, #08 ve #11) HP-SEC ile degerlendirilmistir. (A) Agrega Içerigi, alan yüzdesi (sol sütunlar) olarak gösterilir. Sag sütunlar (A isareti ile gösterilir), ilk sonuçlar için referans formülasyon(lar)inin (#01 ve #02) tamponu içerisindeki örnegin farklarini ve stres altindaki örneklere yönelik ilk sonucun farkini (stres kaynakli degisim) temsil eder. (A, B) Test edilen tüm Adalimumab formülasyonlarinin arasinda, ilave bir stabilizör olmaksizin histidin-asetat ile tamponlanan farmasötik formülasyon #10, en yüksek stabiliteyi, yani 55 cC'de en düsük kümelesmeyi göstermistir. (A, C) Bu tampon kombinasyonuna EDTA eklenmesi, 55 °C sicakliga isitma yapilirken ilgili formülasyonda agrega olusumunu belirgin sekilde artirir (#11). Histidin-sitrat ile tamponlanan ve EDTA içeren Adalimumab farmasötik formülasyonu (#08), 55 CC'de benzer bir stabilite gösterir.

Referans formülasyon(lar) ile göreli olarak, alternatif Adalimumab formülasyonlarinin asidik safsizligi/tür içerigi (ID NO #01-#03), tampon bilesenlerinin detayli bir özeti için bkz. tablolar ve 17). Test edilen Adalimumab formülasyonlarinin, 6 aylik bir periyot boyunca 5 ve 25 cC (D- D) sicaklikta depolanmasi esnasinda, a sidik safsizlik piklerinin göreli alan yüzdesi (%) olarak SCX-HPLC ile ölçüldügü üzere, asidik tür olusumu bakimindan stabilitesi. Ornek ID NO. #01, #04, #07 ve #10, katkilar kullanilmayan formülasyonlarin (A, D) verilerini temsil eder, örnek ID NO. #02, #05, #08 ve #11 ise, EDTA içeren formülasyonlarin (B, E) verilerini temsil eder ve örnek ID NO. #03, #06, #09 ve #12, L-arginin (L-Arg) içeren formülasyonlarin (C, F; L- arginin içeren formülasyonlar için sadece 3 aylik stabilite verileri mevcuttur) verilerini temsil eder. 5 cC'de depolanan, test edilen tüm alternatif Adalimumab farmasötik formülasyonlari, sitrat-fosfat tamponu içeren referans formülasyonlarindan biraz daha düsük seviyelerde asidik safsizlik sergiler, ancak farkliliklar anlamli degildir. 25 °C'deki stabilite çalismalari, histidin- asetat ve histidin-sitrat bazli formülasyonlarin, referans tamponuna dayali formülasyonlar ile kiyasli olarak, 6 aylik depolama üzerine anlamli ölçüde daha düsük seviyelerde asidik safsizliklar sergiledigini gösterir (L-Arg içeren formülasyonlar durumunda en az 3 ay söz konusudur). Test edilen, histidin-asetat ile tamponlanan Adalimumab farmasötik formülasyonu (#10), en yüksek göreli safliga sahiptir (referans formülasyonu ile kiyasli olarak, %3.1 daha düsük asidik safsizliklar/tür seviyesi, buna karsi salt sitrat tamponuna dayanan Adalimumab formülasyonlari (#04), en yüksek miktarda asidik tür göstermistir. Ne EDTA eklenmesi (örnek sonrasinda belirlendigi üzere L-Arg), alternatif formülasyonlarda asidik safsizlik olusumu üzerinde önleyici veya stabilize edici bir etki gösterir.

Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin, stres sartlari (55 °C) altinda referans formülasyonuna göreli olarak asidik tür içerigi. Asidik safsizlik üretimi, deamidasyon yoluyla majör yikim yolagidir. 55 °C sicakliga yapilan isitma üzerine asidik safsizlik içerigi, katkilar kullanilmayan formülasyonlarda (B, örnek ID NO. #01, #04, #07 ve #10) ve EDTA kullanilan formülasyonlarda (0, örnek ID NO. #02, #05, #08 ve #11) SCX-HPLC ile degerlendirilmistir.

(A) Asidik safsizlik içerigi, alan yüzdesi (sol sütunlar) olarak gösterilir. Sag sütunlar (A isareti ile gösterilir), ilk sonuçlar için referans ürününün (#01, #02) tamponu içerisindeki örnegin farklarini ve stres altindaki örneklere yönelik ilk sonucun farkini (stres kaynakli degisim) temsil eder. (A, B) Test edilen tüm Adalimumab farmasötik formülasyonlari arasinda, ilave stabilizör içermeyen histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek lD NO. #10), en yüksek stabiliteyi, yani 55`C'de en dü sük asidik tür olusumunu göstermistir. (A-C) Geriye kalan tüm Adalimumab formülasyonlari, incelenen stres faktörüne karsi benzer yikim hizlari gösterir.

Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin, bu siraya göre zaman ve referans formülasyonuna göreli olarak, stres sartlari altindaki biyolojik aktivitesi. Referans çözeltisi ve test örnegi ID NO. altinda, yani 5 :C ve 25 CC sicaklikta 3 ay sonra, 5 :C ve 25 cC sicaklikta 6 ay sonra, dondurma- çözme döngüsünden sonra, mekanik stres sartlarindan sonra ve ayrica SST) sicaklikta isil stresten sonra, TNFd ve Aktinomisin-D ile muamele edilen L929 hücreleri üzerinde karsilastirilmistir. (A, B) O zaman noktasina göreli olarak, ilave bir stabilizör içermeyen histidin- asetat ile tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #10), 5 cC ve 25C'de 6 ay sonrasinda TNF oi nötralizasyonunda en yüksek beceriyi göstermis ve bu formülasyonu, L-Arg içeren histidin- asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #12) izlemistir. Dahasi, L-Arg içeren histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #12), bir dondurma-eritme döngüsünden ve ayrica mekanik stres sonrasinda 5 cC ve 25 cC'de 3 ay sonr a en iyi performansi göstermistir. Ilave bir stabilizör içermeyen histidin-sitrat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #07), 5 °C'de 6 ay sonra ve ayrica 55“C'de isil stresten sonra en yüksek TNFa nötralizasyonunu göstermistir.

Geriye kalan tüm Adalimumab formülasyonlari, incelenen stres faktörüne karsi benzer yikim hizlari gösterir. (A, C) Referans formülasyonuna göreli olarak, ilave bir stabilizör içermeyen histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #10), 5 'C ve 25 cC'de 6 ay sonrasinda TNFci nötralizasyonunda en yüksek beceriyi göstermis ve bu formülasyonu, 5 'C'de 6 ay sonrasi sartlarda histidin-sitrat (örnek ID NO. #07) izlemistir. L-Arg içeren histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek lD NO. #12), incelenen tüm stres faktörlerine karsi toplamda en iyi performansi göstermistir. Sekil 5 içerisinde özetlenen deneyler, alternatif Adalimumab formülasyonlarinin bir ikinci partisi ile gerçeklestirilmistir.

Bulusun Detayli Açiklamasi Genel itibariyla mevcut bulus, özellikle de istemlerde karakterize edildigi üzere, bir histidin tampon sistemine dayali Adalimumab olmak üzere, bir anti-TNFa antikorunun uzun dönemli stabil farmasötik formülasyonlari ile ilgilidir. Daha özel bir anlatimla, mevcut bulus ile Adalimumab ajaninin fosfat tamponu içermeyen farmasötik formülasyonlari saglanmakta olup bu formülasyonlar, histidin-sitrat tamponu ile tamponlanmakta ve pazarlanan HUMlRA® ürününün formülasyonuna göre olusturulan, sitrat-fosfat tamponuna dayali, referans amaçli farmasötik Adalimumab formülasyonu ile kiyasli olarak, en az üç ila alti aylik bir periyot boyunca 25°C'de depolanma üzerine iyile smis stabilite sergilemektedir.

Mevcut bulus, Adalimumab ajaninin, bir fosfat tamponu içermeyen veya büyük ölçüde içermeyen ve L-histidin tabanli tampon sistemlerinde formüle edilen sivi sulu farmasötik formülasyonlarinin, agrega olusumu ve asidik türlerin üretimi bakimindan, artmis uzun dönemli stabilite sergileyen, uygun alternatif farmasötik Adalimumab formülasyonlari sagladiginin gözlemine dayanmaktadir, bkz. Ornekler 5 ila 9 ve Sekiller 1 ila 5. Onceleri, digerlerinin yani sira, gerek tek basina gerekse asetat, sitrat ve fosfat gibi baska tampon bilesenleri ile birlikte histidin içeren Adalimumab formülasyonlarina yönelik alternatif tampon sistemleri önerilmistir; bkz. Bender "Alternative buffers for pharmaceutical anti-TNFaIpha monoclonal antibody formulations" (www.technik2day.net, yayin tarihi 6 Subat 2013, yayin numarasi PAPDEOTT002384). Ancak, Adalimumab ajaninin histidin ile tamponlanan herhangi bir formülasyonunun stabilitesi hakkinda, Adalimumab ajaninin uzun dönemli stabil farmasötik formülasyonlarinin, yani histidin ile tamponlu daha jenerik formülasyonlarin elde edilebilecegi daha somut formülasyonlarin gelistirilmesi için baslangiç noktasi olusturacak bilgi veya veri verilmemistir.

Gerçekten de bugüne kadar histidin ve örnegin asetat veya sitrat içeren birlesik sulu tampon çözeltileri, tek tampon bileseni olarak veya baska bilesenler ile birlikte histidin kullanilan durumlar ile kiyasli olarak daha kötü ya da uygunsuz görülerek göz ardi edilmistir. Ornek HI içerisinde, histidin-asetat ve histidin-sitrat ile biyolojik olarak benzer tescilli bir Adalimumab ajaninin 6 ve 10. formülasyonlari olarak, digerlerinin yani sira iki formülasyon, sadece bir veya iki haftalik kisa dönemli bir stabilite testinde tarif edilir ve birfarmasötik formülasyonun baskaca kullanimindan sakinmayi, aksine tek basina veya bir süksinat tamponu ile birlikte histidin kullanilmasini ögretir. Gene de bir yapilanmaya göre mevcut bulusun farmasötik veya 10. formülasyona uygun bir formülasyondan olusmamaktadir. Benzer olarak daha yakin Adalimumab formüle etmeye yönelik tek tampon bileseni olarak ve asetat ve sitrat kullanimindan sakinilmasi ögretilir.

Dolayisiyla, sadece mevcut bulusa uygun olarak gerçeklestirilen gayretli çalismalar ve deneyler sayesinde, bir kombine histidin tamponuna dayali uzun dönemli stabil bir antikor formülasyonu elde etmek için yeterli ve gerekli parametreler, yani histidin ile bir ikinci tampon bileseni, `özellikle sitrat arasindaki etkilesim, pH degeri ve özellikle Adalimumab gibi bir antikorun formülasyon içindeki miktari / konsantrasyonu belirlenebilmistir.

Buna göre mevcut bulus, bir fosfat tamponu içermeyen ve Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren ve yaklasik 5 ila 55'lik bir pH degerine sahip olan bir tamponlu çözeltide içeren ve asagida belirtilenlerden olusan gruptan seçilen bir stabil sivi sulu farmasötik formülasyon ile ilgilidir: (a) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve &C'de 3 ila 6 ay süresince depolandiktan sonra kümelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmas'otik formülasyon, bkz. Ornek 5 ve Sekil 1A-C; (b) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 25'C'de 3 ila 6 ay süresince depolandiktan sonra kümelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon, bkz. Ornek 5 ve Sekil 1D-F; (c) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 25C'de 3 ila 6 ay süresince depolandiktan sonra asidik Adalimumab içerigi, %40'tan daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon, bkz. Ornek 7 ve Sekil 3D-F; (d) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 55°C'de isil stres sartlari altinda kümelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon, bkz. Ornek 6 ve Sekil 2; (e) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 55°C'de isil stres sartlari altinda asidik Adalimumab içerigi, %40'tan daha az olan, tercih edildigi haliyle (f) Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve yaklasik olarak °C'Iik ve / veya 25“C'lik bir sicaklikta 6 ay süre since depolandiktan sonra ve / veya 5913'de isil strese, -20°C ila 5°C`de dondurma-erit me sartlarina ve / veya mekanik strese maruz kaldiktan sonra TNFd nötralizasyonu bakimindan sergiledigi aktivite en az %80, tercih edildigi haliyle %85, daha fazla tercih edildigi haliyle %90 ve en çok tercih edildigi haliyle %95 olan bir sivi sulu farmasötik form'ulasyon, bkz. Ornek 9 ve ayrica Sekil 5, burada Adalimumab konsantrasyonu, 50 mg/mL olmaktadir.

Söz konusu formülasyonun, antikor bakimindan belirli seviyede kümelesme ve / veya asidik içerik sergiledigine ve / veya yaklasik 3 ila 6 ay süresince artmis stabiliteye sahip olduguna yönelik olarak yukarida bahsedilen özellikler, Orneklere uygun olarak ve / veya aksi belirtilmedigi sürece, Tablo 6 içerisinde gösterilen referans Adalimumab formülasyonu ile kiyasli olarak belirlenecektir. Antikorun kümelesme ve / veya asidik tür seviyesi ve / veya formülasyonun artmis stabilitesi mutlak degerler olarak ve / veya referans formülasyonu ile karsilastirmali olarak 3, 4, 5 ve / veya 6 ay için verilmis ise, bu özellikler zaman çerçevesi ile ilgili olarak basarilabilir. Tercih edildigi haliyle bu özellikler, 3 aylik bir dönem için saglanir ve en çok tercih edildigi haliyle, ilave veya alternatif olarak 6 aylik bir dönem için saglanir. Dahasi, mevcut bulusun farmasötik form'ulasyonu, özellikler (a) ila (e) ve istege göre (f)'den herhangi biri, ikisi, 'üçü, dördü, besi veya altisini herhangi biri kombinasyonda veya bunlarin tamamini karsilayabilir. Ilave veya alternatif olarak mevcut bulusun farmasötik formülasyonu, bilhassa 1 ila 5'in herhangi biri veya tamaminda gösterilen profiller ile neredeyse benzer veya yüksek ölçüde benzer bir stabilite profili gösterebilir. "Yüksek ölçüde benzer" terimi, tercihen Adalimumab olmak 'üzere bir anti-TNFa antikorunun, histidin içeren iki bilesenli bir tampon sistemine dayanan bir farmasötik formülasyonunun stabilite degerlerinin, yukarida bahsedilen özellikler (a) ila (e)'den herhangi biri ve istege göre (f) için, özellikle de ekli Orneklere uygun olarak referans formülasyonu ile karsilastirmali olarak analiz edildiginde, formülasyonlar ID göstermemesi, %40'tan fazla farklilik göstermemesi, daha fazla tercih edildigi haliyle %30'dan fazla farklilik göstermemesi, daha da fazla tercih edildigi haliyle %20'den fazla farklilik göstermemesi ve en çok tercih edildigi haliyle %10 veya %5'ten fazla farklilik göstermemesi anlamina gelir. Tipik oldugu 'üzere belirli bir aday farmasötik antikor formülasyonuna yönelik degerlerin tipik olarak ID NO. 7, 8, 9, 10, 11 veya 12'ye sahip olan ve aday farmasötik formülasyon ile ortak en fazla bileseni içeren bir farmasötik formülasyonun degerleri ile karsilastirildigini belirtmeye gerek dahi yoktur.

Bir yapilanmaya göre mevcut bulusun farmasötik formülasyonu ayrica bir poliol, tercih edildigi haliyle mannitol; bir yüzey aktif, tercih edildigi haliyle Polysorbate 80; ve / veya bir alkali tuzu, tercih edildigi haliyle sodyum klor'ür ihtiva eder.

Burada kullanildigi haliyle "farmasötik formülasyon" terimi, bir hastaligi veya bozuklugu tedavi etmede faydali olan ve ihtiyaç halindeki bir insan hastaya parenteral uygulama (bunlarla sinirli olmamak üzere intravenöz, intramusküler, ya da subkütanöz uygulama) ve / veya enjeksiyon için uygun olan, biyolojik olarak aktif bir protein gibi (örnegin anti-TNFa antikor Adalimumab) farmasötik olarak etkili bir ilacin bir formülasyonunu ifade eder.

Mevcut bulus kapsaminda isaret edildigi haliyle "farmasötik formülasyon", etkin maddenin etkili olmasina izin verilecek bir formda hazirlanir ve sadece farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyanlar, seyrelticiler ve düzenleyici makamlar tarafindan güvenilir kabul edilen baska katki maddelerini içerir ve formülasyonun uygulanacagi bireylere toksik olan ilave bilesenler içermez.

Burada kullanildigi haliyle "sivi sulu farmasötik formülasyon" terimi, yukarida tanimlandigi gibi, solvent olarak su kullanilan ve farmasötik etkin ilaci bir ya da daha fazla eksipiyan ile birlikte içeren bir farmasötik formülasyonu ifade eder. Bir diger yapilanmaya göre mevcut bulusun sivi sulu farmasötik formülasyonu, yukarida tanimlandigi gibi, depolanmasi üzerine, Iiyofilizasyon, püskürterek kurutma ve / veya dondurma ihtiyaci olmaksizin stabilitesini (örnegin kimyasal ve / veya fiziksel stabilite ve / veya biyolojik aktivite) muhafaza eden bir farmasötik formülasyon anlamina gelir.

Mevcut bulusun açiklamalarinda kullanildigi haliyle "içermez" veya "neredeyse hiç / büyük ölçüde içermez" terimi, belirtilen unsurlarin veya unsurlara ait bir grubun içerilmemesini I mevcut olmamasini ve belirtilen dozaj rejimi, usulü veya bilesimin temel veya yeni özelliklerini maddi olarak degistirmeyen, belirtilen unsur ile benzer veya farkli tabiattaki baska unsurlarin içerilmesini ifade eder.

Mevcut bulusun baglaminda farmakolojik anlamda bir antikorun "terapötik olarak etkili miktari" veya "etkili miktari", antikorun tedavisinde etkili oldugu bir bozuklugun önlenmesi veya tedavisi için etkili oldugu bir miktarini ifade eder.

Burada kullanildigi haliyle “Adalimumab” terimi, insan TNF-alfa (hTNFoi) ile baglanan ve Kimyasal Abstrakt Servisi'nde (CAS) Kayit No 331731-18-1 ile kaydedilmis olan, tamamen insan kökenli rekombinant monoklonal lgG1 antikorunu ifade eder. Adalimumab, 1330 amino asitten olusur ve molekülün glikozilasyonuna bagli olarak degisiklik gösterebilen 148 kDa degerinde bir molekül agirliga sahiptir. Çin hamster over (CHO) hücrelerinde rekombinant DNA teknolojisi ile üretilir. Yönlendirmeli seleksiyon faj gösterimi kullanilarak kemirici kökenli monoklonal antikor MAK195'ten türetilmistir. Tamamen insan kökenli olan, afinite olgunlasmasindan geçmis klon (klon ID. D2E7), insandan türetilmis agir ve hafif zincir degisken bölgeleri (ki bunlarin amino asit dizileri, uluslararasi basvuru WO 97/29131`e karsilik gelen US patent No. 6,090,382 içerisinde açiklanir ve bir insan lgG1 kappa sabit bölgesi ihtiva eder. Her bir IgG1 antikor molekülü, iki adet kappa hafif zinciri ve iki adet insan IgG1 agir zinciri içerir. Her bir hafif zincir, 214 amino asit rezidüsünden ve her bir agir zincir ise 451 amino asit rezidüsünden olusur. Adalimumab, TNFoi ile spesifik olarak baglanir ve p55 ve p75 hücre yüzeyi TNF reseptörleri ile etkilesimini bloke ederek, TNF'nin biyolojik fonksiyonunu nötrlestirir.

Adalimumab, Abbott Laboratories US (simdiki Abeie Inc US) tarafindan subkütanöz uygulamalik sivi farmasötik formülasyon olarak HUMIRA® ticari adiyla pazarlanir; ayrica bkz. uluslararasi basvuru WO tarafindan tarafindan 2003 yilinda romatoit artrit tedavisi için onaylanmistir. O tarihlerden beri, ps'oriatik artrit, poliartiküler jüvenil idiopatik artrit, sedef hastaligi, plak tipi psöriazis, ankilozan spondilit (AS), aksiyal spondiloartrit, radyografik AS bulgusu olmaksizin aksiyal spondiloartrit, Crohn hastaligi, pediatrik Crohn hastaligi ve ülseratif kolit de dahil olmak üzere, TNF araciliginda gerçeklesen baska kronik enflamatuar hastaliklarin tedavisi için ilave onay almistir. Adalimumab, tek basina, ya da metotreksat (MTX) ile veya hastaligi biyolojik olmayan sekilde modifiye eden baska anti-romatizmal ilaçlar (DMARD) ile birlikte kullanilabilir. Romatoit hastaliginin tedavisi bakimindan Adalimumab, tipik olarak haftada bir veya iki haftada bir olacak sekilde 40 mg olarak subkütanöz enjeksiyon yoluyla uygulanir. Subkütan'oz uygulama için cam siseciklerde, `Önceden doldurulmus cam siringalarda ve bir oto-enjeksiyon aleti (HUMIRA® Pen) olarak, steril, koruyucu içermeyen bir çözelti formunda sunulur. HUMIRA® çözeltisi berraktir ve renksizdir ve yaklasik 52'lik bir pH degerine sahiptir. Onceden doldurulmus siringalar ve oto-enjektör (kalem); mannitol, sitrik asit monohidrat, sodyum sitrat, disodyum fosfat dihidrat, monosodyum fosfat dihidrat, sodyum klorür ve Polysorbate 80 içeren 0.8 mL'Iik birtamponlu çözelti içinde 40 mg Adalimumab içerir.

Dahasi, mevcut bulusta kullanildigi haliyle "Adalimumab" terimi, FDA ve EMA tarafindan düzenlenen, yayinlanmis yönergelerde açiklanan çalisma tanimina uygun olarak, Adalimumab ile "biyolojik olarak benzer" olan proteinleri de kapsar; bu yönergeler, biyolojik olarak benzer bir ürünü, klinik olarak etkisiz bilesenlerde 'Önemsiz farkliliklara ragmen bir referans ürün ile containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues (gözden (DRAFT GUIDANCE), U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Subat 2012 itibariyla). Pratikte, referans ürün ile biyolojik olarak benzer ürün arasinda güvenilirlik, saflik ve etki gücü bakimindan klinik bakimdan anlamli farkliliklar söz konusu olmayabilir (Public Health Service (PHS), Kamu Sagligi Servisi Kanunu Madde 262).

Bir baska anlatimla Adalimumab ajaninin biyolojik olarak benzer bir formu / proteini, bir düzenleme makaminin, HUMIRA® referans ürünü ile kisaltilmis düzenleme sunumu esasinda Bir yapilanmaya göre mevcut bulusun biyolojik olarak benzer Adalimumab proteini ve referans veya sartlari için ayni etki mekanizmasini veya mekanizmalarini, söz konusu etki mekanizmasi veya mekanizmalari HUMlRA® ajaninin etkin farmasötik bileseni için bilindigi sürece kullanir.

Bir baska yapilanmaya göre mevcut bulusun biyolojik olarak benzer Adalimumab proteini için bildirilen, önerilen veya ileri sürülen kullanim sarti veya sartlari, EMA ve FDA tarafindan onaylandigi haliyle HUMIRA® ürününe yönelik Urün Karakteristikleri Ozeti (SMPC) ve etiket bilgisinde saglananlar ile aynidir. Bir yapilanmaya göre mevcut bulusun biyolojik olarak benzer Adalimumab proteininin uygulama sekli, dozaj formu ve / veya kuvveti, EMA ve FDA tarafindan onaylandigi haliyle HUMIRA® ürününe yönelik Urün Karakteristikleri Ozeti (SMPC) ve etiket bilgisinde tavsiye edilenler ile aynidir.

Mevcut bulusun açiklamalarinda kullanildigi haliyle "referans ürün" terimi, FDA/EMA tarafindan onaylanmis olan, subkütanöz uygulama için "yüksek konsantrasyonlu formülasyon“ olarak HUMIRA® ticari adiyla pazarlanan, Abbott/Abeie firmasinin anti-TNFa antikoru Adalimumab olmaktadir. Sivi farmasbtik formülasyon; sitrat-fosfat (sodyum dihidrojen fosfat dihidrat, disodyum fosfat dihidrat, sodyum sitrat, sitrik asit monohidrat) ile yaklasik pH 5.2 seviyesinde tamponlanan 50 mg/mL Adalimumab ihtiva eder ve ayrica sodyum klorür, Mevcut bulusun açiklamasinda kullanildigi haliyle "referans farmasötik formülasyon" terimi veya "referans formülasyon“ terimi, mevcut bulus Ornek 1 içerisinde açiklandigi üzere bir sitrat- fosfat tampon sistemi ile formüle edilen anti-TNFa antikoru Adalimumab içeren bir farmasötik formülasyona isaret eder (Tablo 6, Ornek ID NO #01, #02, #03). Dolayisiyla, mevcut bulusun tamaminda kullanildigi haliyle "referans tampon“ terimi, bilesim içerisinde sitrat ve fosfat içeren tampon sistemine isaret eder ve referans formülasyonun konsantrasyonlari yukarida tanimlandigi gibi olur.

Mevcut bulus kapsaminda kullanildigi haliyle "anti-TNFalfa antikoru" veya "anti-TNFa antikoru" terimi, 17 kDa`Iik salinmis bir form ve 26 kDa'Iik membranla birlesik bir formda bulunan ve biyolojik olarak aktif formu, kovalent olmayan sekilde bagli 17 kDa'Iik moleküllerin bir trimerinden olusan bir insan sitokini olarak tümör nekroz faktörü alfaya (human TNFaIfa, hTNFaIfa, hTNFoi, TNFa) karsi yönlenmis monoklonal antikorlar ve bunlarin fragmanlarini (Fab ve / veya (Fab): fragmanlari, Fv fragmanlari, tek zincirli Fv (scFv) fragmanlari ve benzerleri) ve ayrica Fc-Füzyon proteinlerini ifade eder (Pennica D ve ark., 1984). Özel bir yapilanmaya göre, mevcut bulus kapsaminda kullanildigi haliyle "anti-TNFaIfa antikoru" veya "anti-TNFoi açiklanan agir ve hafif zincir degisken bölgelerinin amino asit dizisi ile tanimlandigi üzere Adalimumab (CAS No. 331731-18-1) ajanina ve Adalimumab ajaninin biyolojik olarak benzer formlarina / proteinlerine isaret eder. Ornek olmasi bakimindan, dogal antikor ile kiyasli olarak FcRn reseptörüne artmis baglanma veya artmis yari ömür sergiledigi söylenen Adalimumab Tümör nekroz faktörü alfa, örnegin romatoit artrit, ankilozan spondilit, enflamatuar bagirsak hastaligi, sedef hastaligi, hidradenitis suppurativa, ülseratif koIit ve refrakter astim gibi, otoimmün bozukluklar ile iliskili klinik belirtilerin çogundan sorumlu olan sistemik enflamasyon süreçlerine karisir.

Mevcut bulusa uygun olarak gerçeklestirilen deneylerde, L-histidin ve sitrat içeren, 5 ila 5.5'Iik pH degerine sahip bir tampon çözeltisinde, terapötik olarak etkili miktarda Adalimumab içeren bir sivi sulu farmasötik formülasyonun, 5°C ve / ve ya 25°C'lik bir sicaklikta 6 ay depolandiktan sonra ve / veya SS“C'de isil strese tabi tutuldukta n sonra, -20“C ila 5°C`de dondurma-eritme sartlarina ve / veya mekanik strese maruz birakildiktan sonra, TNFoi'nin biyolojik aktivitesini yaklasik olarak %80, tercih edildigi haliyle yaklasik olarak %85, daha fazla tercih edildigi haliyle yaklasik olarak %90, en çok tercih edildigi haliyle yaklasik olarak %95 kadar nötrlestirebildigi gösterilmistir. Bir baska anlatimla, mevcut bulusun bir sivi sulu farmasötik formülasyonunda formüle edilen Adalimumab, çesitli depolama ve stres sartlari altinda kaldiktan sonra dahi, bahsedilen sartlara tabi tutulmayan bir kontrol ile kiyasli olarak, örnegin Ornek 9 içerisinde tarif edildigi gibi TNFci'nin biyolojik aktivitesini en az %80 kadar veya daha yüksek oranda azaltma aktivitesini büyük ölçüde korumakta ve hatta TNFoi'nin biyolojik aktivitesini tamamen etkisizlestirebilmektedir. Ornek olmasi bakimindan, ilave stabilizörler kullanilmayan histidin- sitrat tampon formülasyonu (örnek ID NO. #07), 5 °C veya 25 °C`de 6 ay depolanabilir ve TNFoi'nin %90'indan fazlasini hala nötralize edebilir iken, histidin-sitrat tampon formülasyonuna L-Arg eklenmesi (örnek ID NO. #09), dondurma-eritme stabilitesini ve mekanik stres stabilitesini daha da artirmaktadir. Gerçekten de Ornek 9'dan ve Sekil 5C'den toparlanacagi üzere, mevcut bulusun her bir Adalimumab formülasyonu, test edilen depolama ve stres sartlarinin en az birinde referans Adalimumab formülasyonundan üstündür.

Dondurma-eritme sartlari, isil stres sartlari ve mekanik stres sartlari (yani ajitasyon çalismalari) da dahil olmak üzere depolama ve stres sartlari, Ornekler içinde tarif edilir. Ornek olmasi bakimindan isil stres, örnegin, yaklasik olarak 5“C ve / veya 25“(3'Iik bir sicakli ga tabi tutularak uygulanabilir ve / veya 55°C'de 10 dakika isil stre se tabi tutularak uygulanabilir; örnekler 30 dakika içinde 5C'den -20°C'ye so gutulur ve -20°C sicaklikta 1 saat tutulur, daha son ra 2 dakika içinde -20°C`den 5°C'ye eritilir ve dondurma ve eritme döngüsü ise 5 ve 10 kere tekrar edilir ve mekanik stres ise, örnekler bir düzlemsel çalkalayici üzerinde 400 RPM seviyesindeki bir karistirma hizinda 25°C'de 24 saat çalkalanarak uygulana bilir. Adalimumab ajaninin test formülasyonundaki konsantrasyonu, esasen Ornekler içinde kullanilan ile aynidir, yani 50 mg/mL'dir. Mevcut bulusun bir sivi sulu farmasötik formülasyonunun TNFoi nötrlestirici etkisi tercih edildigi haliyle Ornekler içinde gösterildigi gibi belirlenir, yani TNFoi ve Actinomycin-D ile muamele edilmis olan L929 hücrelerinin hücre ölümünü inhibe etme etkisi, zamana karsi ve / veya Tablo 6 içinde gösterilen referans Adalimumab formülasyonuna kiyasli olarak belirlenir ve mevcut bulusun bir sivi sulu farmasötik formülasyonunun birkaç seyreltisi, Ornek 9 içinde tarif edildigi gibi hazirlanir.

Burada kullanildigi haliyle "eksipiyan" terimi, mevcut bulusun farmasötik formülasyonunun terapötik olarak etkisiz bilesenlerini kapsar. Eksipiyanlar, münferit özelliklerine bagli olarak bir farmasötik formülasyona çok çesitli amaçlar için dahil edilebilir; örnek olmasi bakimindan pH kontrolü için tamponlayici ajanlar, liyofilizasyon amaciyla hacim artirici ajanlar olarak karbonhidratlar, çözeltinin viskozitesini artirmak üzere polimerler, proteinleri stabilize etmek üzere ve fizyolojik tonisite ve ozmolalite elde etmek amaciyla tonisite ajanlari olarak islev gösteren tuzlar veya sekerler, arayüzlerde protein tutulumunu inhibe etmek üzere sürfaktanlar, mikrobiyal büyümeyi Önlemek üzere koruyucu maddeler, anti-oksidanlar, kriyoprotektanlar veya seyrelticiler kullanilabilir. Ornegin sakkaroz, laktoz veya dekstroz gibi sekerler, Örnegin mannitol veya sorbitol gibi poliollar (ayrica seker alkoller olarak bilinir), örnegin sodyum klorür gibi tuzlar, örnegin arginin, histidin, Iizin, aspartik asit, ya da glutamik asit gibi amino asitler, sürfaktanlar ve solvent olarak su gibi çesitli formülasyon eksipiyanlarinin, antikorlari, farkli islem sartlari ve depolama esnasinda stabilize ettigi gösterilmistir (Paborji M ve ark., 1994; Sarno MEC ve ark., 1999).

Burada kullanildigi haliyle "tampon" veya "tampon çözelti" terimleri, pH seviyesindeki degisimlere direnecek sekilde, bir zayif asit ve kendi konjügat bazinin ya da bir zayif baz ve kendi konjügat asidinin bir karisimindan olusan bir sulu çözeltiyi ifade eder. Bir tamponlayici ajanin her iki tipi ve konsantrasyonunun, proteinlerin stabilitesi üzerinde etki gösterdigi iyi bilinmektedir (Wang W 1999). Dolayisiyla tamponlayici ajanin seçimi, antikor formülasyonlarinin pH kontrolünü ve istenen stabilizasyonunu saglamada kritik öneme sahiptir.

Antikor kümelesmesi ile ilgili olarak, uygun bir tampon sistemi ve pH degerinin seçimi kritik öneme sahiptir, çünkü çözeltinin artan asitligi veya bazikligine göreli olarak protein/antikor yapisinin net yükünü ve takip eden elektrostatik etkilesimleri belirler (Chi EY ve ark., 2003). Çözeltide antikor içindeki yüklü gruplarin arasinda artan yük itmesi, kendi katlanmis veya dogal durumunu destabilize edebilir (Vermeer AWP ve Norde W 2000). Genel itibariyla hafif asidik sartlarin (pH 4.5-5.5), çogu antikorlar için optimum oldugu görülür, çünkü kümelesme, nötr pH degerlerinin yakininda veya izoelektrik noktanin (pl) yakininda artis gösterir (Moore JM ve ark., izoelektrik noktasindan bir birimden fazla olacak sekilde farkli tutmak genellikle önerilebilir.

Memeli kökenli IgG antikorlari tipik olarak pH 6-9 araliginda göreli yüksek pl degerlerine sahiptir. Dolayisiyla çogu formülasyon pH degerleri, antikoru daha çözünür bir katyonik durumda tutmak amaciyla bir asidik aralik (pH 4-6) içerisinde seçilir.

Halihazirda pazarlanmakta olan Adalimumab anti-enflamatuar ilacinin (HUMIRA®, Abeie formülasyon" (50 mg/mL), sitrat ve fosfat ile pH 5.2 degerinde tamponlanir. Sitrat ve / veya fosfat içeren tampon sistemlerine dayanan farmasötik formülasyonlarin dezavantajlari, sitrat tamponunun (Kappelgaard A 2004, Frenken ve ark., 1993) ve fosfat tamponunun sebep oldugu enjeksiyon yeri agrisi (Fransson ve ark., 1996) bakimindan ilgili teknikte iyi bilinir. Bazi durumlarda, fosfat tamponunun zararli oldugu gösterilmistir. Ornegin fosfat tamponu, 25C'de depolama esnasinda hem pH 6.5 hem de 7.0 degerlerindeki sitrat tamponu ile göreli olarak, bir IgG1'in deamidasyonunu hizlandirmistir (Zheng JY ve Janis LJ 2005). Ve Son ve Kwon degerindeki Tris-HCI içerisinde 60“C'de 2 günlük inküb asyon üzerine deamide olur ve deamide olan hEGF miktarlari, PBS, sodyum fosfat, sodyum borat, sodyum sitrat ve sodyum asetat 1995). Dahasi fosfat tabanli tamponlar, dondurulmasi üzerine pH kararsizligi bakimindan kötü bir seçim olarak görülür (Kolhe P ve ark., 2010), çünkü fosfat, 25“C'den 30“C'ye giderken pH seviyesinde en büyük degisimi gösterir. Buna karsi histidin hidroklorür, sodyum asetat, histidin asetat, sitrat ve süksinat gibi baska tamponlar, 25-30“C'Iik sicak araligi boyunca 1'den küçük bir pH birim degisimi (artis) göstermistir. Fosfatin donma-erime üzerine kararsizligi, örnegin bir kimerik antikorda dondurma-eritmenin sebep oldugu kümelesmenin, artan fosfat tampon konsantrasyonu (0.01 ve 0.05) ile daha yüksek oldugu bir çalismada gösterildigi üzere konsantrasyona bagimlidir (Paborji M ve ark., 1994).

Dolayisiyla mevcut bulusun sivi sulu farmasötik Adalimumab formülasyonu, bir fosfat tamponu içermemektedir.

Mevcut bulusun tampon sistemi, sivi sulu farmasötik formülasyonun pH degerini, yaklasik olarak pH 5 ila yaklasik olarak 55'lik bir aralikta tamponlar. Tercih edildigi haliyle pH degeri, asagidaki Orneklerdeki formülasyonlar için gösterildigi üzere yaklasik olarak 5.1 ila 5.4, daha fazla tercih edildigi haliyle 5.15 ila 5.3 ve en çok tercih edildigi haliyle yaklasik olarak 5.2 olur.

Dolayisiyla tercih edilen bir yapilanmaya göre mevcut bulusun sivi sulu farmasötik Adalimumab formülasyonu, 52'lik bir pH degerine sahiptir.

Mevcut bulusun sivi sulu farmasötik Adalimumab formülasyonu, bir fosfat tamponu içermez ve sitrat ile birlikte L-histidin ile tamponlanir.

Tercih edilen bir baska yapilanmaya göre mevcut bulusun sivi sulu farmasbtik Adalimumab formülasyonu ayrica bir poliol, bir sürfaktan ve sodyum klorür ihtiva eder.

Mevcut bulus içerisinde açiklanan tanima göre bir "poliol", çoklu hidroksil gruplarina sahip bir maddedir ve sekerleri (indirgen ve indirgen olmayan sekerler), seker alkolleri ve seker asitlerini ihtiva eder. Iyilesmis donma-erime stabilitesine sahip farmasötik antikor formülasyonlarinin gelistirilmesi ile ilgili olarak tercih edilen poliollar, donma sicakliklarinda (örnegin -20“C) kristalize olmazlar ve dolayisiyla formülasyonda bulunan antikoru destabilize etmezler. Söz konusu poliol, bir tonisite ajani seklinde davranabilir. Mevcut bulusun tercih edilen poliollari; seker alkolleri, örnegin mannitol, ksilitol, eritritol, treitol, sorbitol ve gliseroldur. Mevcut bulusun tercih edilen bir poliolu, bir seker alkolü ve özellikle mannitoldur. Mevcut bulusun bir yapilanmasina göre mannitolun farmasötik formülasyondaki konsantrasyonu, 5 ila 20 mg/mL olmaktadir. Mevcut bulusun tercih edilen bir yapilanmasina göre mannitolun farmasötik formülasyondaki konsantrasyonu 10 ila 14 mg/mL ve daha fazla tercih edildigi haliyle mannitolun farmasötik formülasyon içerisindeki konsantrasyonu, 12 mg/mL olmaktadir.

Burada kullanildigi haliyle "tonisite ajani" veya "izotonik yapici ajan" veya "tonisite degistirici“ veya "toniklestirici" terimleri, bir sivi sulu farmas'otik formülasyonu, ozmotik karakteristikleri bakimindan fizyolojik sivilar ile benzer hale getirecek sekilde islev gösteren bir ajani ifade eder, bir baska anlatimla bu sekilde elde edilen farmas'otik formülasyon, insan kani ile esasen ayni ozmotik basinci sergiler. Tipik olarak kullanilan tonisite ajanlari arasinda dekstroz, mannitol, sodyum klorür, potasyum klorür ve gliserin bulunur. Izotonik veya fizyolojik formülasyonlar genellikle yaklasik olarak 275-325 mOsm'lik bir ozmotik basinca sahip olacaktir. Mevcut bulusun sivi sulu farmasötik Adalimumab formülasyonuna dahil edilen, tercihli bir izotonik yapici ajan, sodyum klorür olmaktadir. Bir yapilanmaya göre sodyum klorürün mevcut bulusun farmasötik formülasyonundaki konsantrasyonu, 5 ila 7.5 mg/mL, tercih edildigi haliyle 5.5 ila 6.5 mg/mL sodyum klorür olmaktadir. Daha fazla tercih edilen bir yapilanmaya göre sodyum klorürün mevcut bulusun farmas'otik formülasyonundaki konsantrasyonu, yaklasik olarak 6.2 mg/mL sodyum klorür ve tercih edildigi haliyle 6.16 mgImL sodyum klorür olmaktadir.

Mevcut bulusun tercih edilen bir baska yapilanmasina göre farmas'ötik Adalimumab formülasyonu ayrica bir sürfaktan ihtiva eder. Temel olarak, iyonik olmayan ve iyonik olan olmak üzere, iki tip sürfaktan vardir. Bu sürfaktanlar, protein çözeltilerinin yüzey gerilimini düsürür ve protein adzorpsiyonuna veya hidrofobik yüzeylerde kümelesmeye y'onelik tahrik kuvvetini azaltir. iyonik olmayan sürfaktanlar genellikle protein stabilizasyonunda tercih edilir. iyonik olmayan süriaktanlarin düsük konsantrasyonlari, kendi göreli düsük "kritik misel konsantrasyonlari“ (CMC) sebebiyle protein yüzey adzorpsiyonunu ve / veya kümelesmesini önlemek veya azaltmak üzere çogunlukla yeterli olur (Bam ve ark., 1995). Dolayisiyla, mevcut bulus kapsaminda kullanildigi haliyle "sürfaktan" terimi, ozellikle proteini stabilize etmek, kümelesmeyi baskilamak ve protein geri katlanmasinda yardimci olmak üzere yaygin olarak kullanilan, iyonik olmayan sürfaktanlari ifade eder (Chi EY ve ark., 2003). Tercih edildigi haliyle bahsedilen sürfaktan, yag asitleri ile esterlesmis PEGlenmis sorbitandan (bir sorbitol türevidir) türetilen bir emülgatör olarak, bir polisorbat olmaktadir. Polysorbate 80 ve Polysorbate 20 (ayni zamanda Tween 80 ve Tween 20 olarak bilinir), pazarlanan protein farmasötiklerine °/o0.0003- 0.3 araliginda yaygin olarak dahil edilmistir. Mevcut bulusun farmasötik Adalimumab formülasyonuna dahil edilen tercihli bir sürfaktan, Polysorbate 80 (polioksietilen(20)-sorbitan- monooleat) olmaktadir. Polysorbate 80 ürünün, mevcut bulusun farmasötik Adalimumab formülasyonu içerisinde tercih edilen konsantrasyon araligi, yaklasik olarak 01-10 mg/mL'dir.

Daha fazla tercih edildigi haliyle mevcut bulusun farmasötik Adalimumab formülasyonu, yaklasik olarak 0.5 ila 1.5 mg/mL, en çok tercih edildigi haliyle yaklasik olarak 1 mg/mL Polysorbate 80 içerir.

Yukarida bahsedildigi ve Ornekler içerisinde gösterildigi üzere, Adalimumab ajaninin, bir fosfat tamponu içermeyen ve L-histidin tabanli tampon sistemlerinde formüle edilen sivi sulu farmasötik formülasyonlari, agrega olusumu ve asidik türlerin üretimi bakimindan, artmis uzun dönemli stabilite sergileyen, uygun alternatif farmasötik Adalimumab formülasyonlari saglamaktadir. Daha özel bir anlatimla, mevcut bulusun histidin-sitrat tamponu ile tamponlanan, fosfat tamponu içermeyen farmasötik Adalimumab formülasyonlari, pazarlanan HUMIRA® ürününün formülasyonuna göre olusturulan, sitrat-fosfat tamponuna dayali, referans amaçli farmasötik Adalimumab formülasyonu ile kiyasli olarak, en az üç ila alti aylik bir periyot boyunca 25°C'de depolanma üzerine iyile smis stabilite sergilemektedir. Daha özel bir anlatimla mevcut bulusun histidin-sitrat ile tamponlanan Adalimumab formülasyonlari, Ornek 5 ve Sekil 1D-F ile gösterildigi üzere 25°C ± 3“C'de alti ay kadar depolandiktan s onra dahi ve ayrica Ornek 6 ve Sekil 2 içerisinde gösterildigi üzere, 55°C'de isil strese tabi tutulduktan sonra dahi, boyuta göre ayirma kromatografisi ile belirlendigi üzere, sitrat-fosfat tamponlu referans farmasötik formülasyonu ile kiyasli olarak, daha az kümelesme olusumu sergiler.

Dahasi, mevcut bulusun histidin-sitrat ile tamponlanan Adalimumab formülasyonlari, Ornek 7 ve Sekil 3D-F ile gösterildigi üzere 25°C ± 3°C`de alti ay kadar depolandiktan s onra dahi ve ayrica Ornek 8 ve Sekil 4 içerisinde gösterildigi üzere, 55C`de isil strese tabi tutulduktan sonra dahi, kuvvetli katyon degistirme kromatografisi ile belirlendigi üzere, sitrat-fosfat tamponlu referans farmasötik formülasyonu ile kiyasli olarak, daha az asidik tür olusumu bakimindan azalmis deamidasyon göstermistir.

Mevcut bulusun "stabil farmasötik formülasyonu" ifadesiyle kasit, örnegin Adalimumab gibi ilgi dahilindeki antikorun, onay almasi için düzenleme makaminca istendigi üzere, hedeflenen depolama sicakliginda (örnegin 5°C ve / veya 25%) depolanmasi üzerine kendi fi ziksel stabilitesini ve / veya kimyasal stabilitesini ve / veya biyolojik aktivitesini muhafaza ettigi bir farmasötik formülasyondur. Örnegin bir stabil farmasötik bilesim, yapildigi zaman ile kullanildigi zaman (veya kendi hedeflenmis raf ömrünün sonuna ulastigi zaman) arasinda, kendi fiziksel, kimyasal veya biyolojik özelliklerinde, ICH Q5C içinde belirlenmis standartlara göre kendi hedefli farmasötik kullanimi bakimindan kendisini etkisiz veya güvenliksiz kilacak herhangi bir degisim geçirmeyen bir formülasyondur (Quality of Biotechnological Products: Stability Testing of BiotechnologicaI/Biological Products, International Conference on Harmonization of Technical Requirements of Pharmaceuticals for Human Use). Ornegin Adalimumab gibi bir proteinin stabilitesi, proteinin kimyasal olarak degismis formlari saptanarak ve kantifiye edilerek belirlenebilir. Monomerik antikorlarin farmasötik formülasyondaki miktari, uygun bir farmasötik formülasyonun belirlenmesi bakimindan temel niteliksel özelliktir. Kümelesmeler, (siddetli) yan etkiler için bir öncü sebep oldugundan, monomerlerin içerigi, ilacin (yani antikorun) gerçek farmasötik aktif miktarini yansitir. Yukarida ele alindigi üzere bu husus, örnegin yüksek sicakliklar gibi uygunsuz depolama sartlari riski bakimindan, kendi kendine uygulanan farmasötik formülasyonlar için özellikle geçerlidir. stabil" olan sivi sulu farmasötik formülasyon(lar) veya tampon(lar), proteinin, yani antikorun, iki durum (örnegin antikor gibi proteinin fiziksel stabilitesi ve / veya kimyasal stabilitesi ve I veya biyolojik aktivitesi) arasinda, en azindan istatistiksel olarak anlamli farkliliklar olacak sekilde, kantitatif farkliklari ifade ettigi sivi sulu farmasötik formülasyon(lar)i veya tampon(lar)i ifade Burada kullanildigi haliyle "kümelesme" terimi, hem “protein kümelesmesi" hem de "antikor kümelesmesi" terimlerini kapsar ve biyofarmasötik ilacin (örnegin bir monomer) istenen tanimli türü yerine, örnegin oligomerler veya multimerler gibi daha büyük molekül agirligina sahip protein türlerinin olusumuna isaret eder. Dolayisiyla protein kümelesmesi; kovalent baglar veya kovalent olmayan etkilesimler ile olusan, baskaca tanimlanmayan multimerik türlerin (kümelenmis türler) her çesidinin olusumuna yönelik üniversal bir terimdir. Protein kümelesmesi; deamidasyon ve oksidasyonun yaninda, en yaygin üç protein yikim yolaklarinin birisidir (Cleland JL ve ark., 1993). Çözeltide protein kümelesmesine, esas olarak solvent ortami (pH, tuz, ko-solventler vs.), sicaklik, ya da yüzey etkilesimleri neden olur. Kümelesme problemleri, protein farmasötiklerinin klinik uygulamalarinin baslangicindan beri, ters reaksiyonlara ve baska güvenilirlik meselelerine karistigi yönünde bildirilmistir.

Immünoglobulin kümelerinin anafilaktik reaksiyonlara sebep oldugu uzun zamandir bilinmektedir (Cleland .JL ve ark., 1993, Carpenter JF ve ark., 1999). Klinik uygulamalarda terapötik proteinlerden gelen bu tip riskleri minimize etmek üzere, depolama, muamele ve sevkiyat esnasinda kümelesmeyi azaltmak üzere farmasötik formülasyonlarin optimizasyonuna yönelik bir ihtiyaç vardir (Remmele RL ve ark., 2006).

Burada kullanildigi haliyle "deamidasyon" terimi, mevcut bulusun anti-TNFoi antikoru Adalimumab ajaninin asparagin rezidülerinin deamidasyonuna isaret eder. Deamidasyon, baskin bir protein yikim yolagidir ve normal olarak saflastirilmis antikor preparatlari pek çok asidik form ihtiva eder. Depolama, büyük miktarlarda asidik ürünleri kolaylikla üretebilir.

Asparagin rezidülerinin deamidasyonu, rekombinant DNA teknolojisi kullanilarak üretilen terapötik proteinlerde meydana gelen en yaygin post-translasyonel modifikasyonlarin biridir.

Protein deamidasyonu, esas olarak bir asparagin rezidüsünün, izoaspartat ve aspartatin bir karisimina dönüsümü ile sonuçlanir. Glutamin rezidülerinin deamidasyonu da söz konusudur, ancak daha düsük bir derecede gerçeklesir (Chelius D ve ark., 2005).

Burada kullanildigi haliyle "asidik tür , asidik safsizlik(lar)" ve "asidik varyant(lar)" terimi, bir hedef proteinin, hedef proteinden daha asidik olan bir varyanti veya varyantlarini ifade eder (örnegin kuvvetli katyon degistirme kromatografisi (SCX-HPLC) ile belirlenir). Bir asidik tür/ safsizlik / varyantin bir örnegi, deamidasyon geçirmis bir tür/ safsizlik I varyant olmaktadir.

Tercih edilen bir baska yapilanmaya göre mevcut bulusun farmasötik formülasyonu, tek kullanimlik subkütanöz enjeksiyon için uygundur ve bir farmasötik kap içerisine konulur.

Tekrarli tedavi gerektiren terapötik rejimlerde tercih edilen uygulama yolu, subkütanöz uygulamadir, çünkü bu uygulama, ilaç aliminin esasen ömür boyu gerçeklestirilecegi ve hasta uyuncu ve maliyet azaltimi bakimindan evde (kendi kendine) ilaç vermenin arzu edilecegi, örnegin otoimmün hastaliklar (mesela romatoit artrit, ankilozan Spondilit, enflamatuar bagirsak hastaligi, sedef hastaligi, hidradenitis suppurativa, ülseratif kolit ve refrakter astim) gibi çogu kronik hastalik durumunda geçerlidir.

Mevcut bulusun bir yapilanmasina göre önceden doldurulmus farmasötik kap; mevcut bulusun sivi sulu farmasötik formülasyonunu içeren önceden doldurulmus bir siringa, enjeksiyon kalemi, ampul, sise, oto-enjektör veya bir infüzyon torbasi olmaktadir. Tercih edildigi haliyle bu kap, azot koruyucu atmosfer altinda kapatilir.

Burada kullanildigi haliyle "koruyucu atmosfer" terimi, artmis azot içerigine sahip bir koruyucu atmosferi ifade eder. Koruyucu gaz atmosferleri (ayrica koruyucu / modifiye atmosfer veya koruyucu/modifiye gaz olarak bilinir), örnegin depolama esnasinda ürünün hizla bozulmasina sebep olan mikrobiyolojik, enzimatik ve biyokimyasal ters fiziksel süreçleri yavaslatmak ve hatta durdurmak amaciyla, gaz sizd irmaz bir ambalajdaki gidalar veya ilaçlar/farmasötikler gibi ürünlerin raf ömrünü uzatmak için yaygin olarak kullanilir. Tipik oldugu üzere koruyucu gaz olarak kullanilanlari, karbon dioksit ve azotun gaz karisimlaridir ve burada karbon dioksit, örnegin bakteriler ve mantarlar gibi mikroorganizmalarin büyümesi üzerinde bir inhibitör etki gösterir iken azot gazi, esas olarak ambalajin çökmesini 'Önlemek üzere bir mesnet olarak islev gösterir. Dahasi çogu koruyucu gaz atmosferindeki oksijen konsantrasyonu, mikroorganizmalarin büyümesini önlemek üzere havaya göre daha azdir.

Mevcut bulusun tercih edilen bir baska yapilanmasina göre, farmas'ötik formülasyon içerisinde saglanan Adalimumab ajaninin dozu, tercih edildigi haliyle 40 mg olmaktadir.

Bugüne kadar, Adalimumab ajaninin güncel toplam dozu, romatoit artrit (RA), ankilozan spondilit (AS), ya da psöriatik artrit (PsA) hastaliklarindan sikayetçi eriskin hastalari tedavi etmek için 40 mg olmustur. Ancak, jüvenil idiopatik artrit (JIA) hastaligindan mustarip pediatrik hastalar için (2 ila < 4 yas), 20 mg'lik bir toplam doz tavsiye edilir ve maksimum 40 mg'a artirilabilir. Crohn hastaligindan (CS) mustarip pediatrik hastalar (< 40 kg beden agirligi) için tavsiye edilen endüksiyon dozu, 40 mg Adalimumab, akabinde antikorun 20 mg'lik bir idame dozunu ihtiva eder. Buna karsi, siddetli CD'den mustarip pediatrik hastalara (2 40 kg beden agirligi) yönelik olarak tavsiye edilen doz, 80 mg Adalimumab, akabinde 40 mg Adalimumab olmaktadir. Siddetli CD tedavisine daha hizli bir yanit elde etmek amaciyla 160 mg'lik bir indüksiyon dozu, akabinde Adalimumab ajaninin 80 mg'lik bir idame dozu seçilebilir. Buna göre, bir yapilanmaya göre Adalimumab ajaninin `önceden doldurulmus siringalardaki dozu, tercih edildigi haliyle 20 mg veya eslik eden bir kapta bunun tam katlari olmaktadir (tercihen 2 Ulseratif koliti olan eriskin hastalara yönelik olarak tavsiye edilen Adalimumab doz rejimi, bir olacak sekilde 40 mg'lik bir idame dozu verilir. Plak tipi psöriazisi (Ps) olan eriskin hastalara yönelik olarak tavsiye edilen Adalimumab dozu, 80 mg'lik bir baslangiç dozu, akabinde baslangiç dozundan bir hafta sonra baslayacak sekilde, iki haftada bir 40 mg olmaktadir. Buna göre, bir baska yapilanmaya göre Adalimumab ajaninin 'Önceden doldurulmus siringalardaki dozu, tercih edildigi haliyle 40 mg veya eslik eden bir kapta bunun tam katlari olmaktadir (tercihen 2 x 40 mg, 4 X 40 mg).

Mevcut bulus kapsaminda kullanildigi haliyle "bozukluk" terimi, antikor ile, yani Adalimumab ajani ile tedaviden faydalanilacak olan her durumdur. Bu durum ise, bireyi ilgili bozukluga yatkin hale getiren patolojik sartlar da dahil olmak üzere kronik ve akut bozukluklari veya hastaliklari kapsar. Bir yapilanmaya göre mevcut bulus, "TNFoi aktivitesinin zararli oldugu bir bozuklugun tedavisinde“ kullanilmaya yönelik bir ilaç olarak kullanilmak üzere, Örnegin yukarida tanimlandigi gibi bir kapta veya kaplarin bir grubunda bir sivi sulu farmasbtik formülasyon saglamaktadir. Bu tip bozukluklar, bunlarla sinirli olmamak üzere sepsis, enfeksiyöz hastaliklar, otoimmün hastaliklar, transplant rejeksiyonu, malignite, pulmoner bozukluklar, kalp rahatsizliklari, bagirsak bozukluklari, greft versus host hastaligi, sinir sisteminin hastaliklari ve benzerlerini ihtiva eder. Örnegin yukarida tanimlandigi gibi bir kapta veya kaplarin bir grubunda bulunan mevcut bulusun sivi sulu farmas'otik Adalimumab formülasyonu ile tedavi için uygun olan otoimmün hastaliklarin arasinda, bunlarla sinirli olmamak 'üzere artritik ve romatoit artrit, 'Örnegin romatoit artrit (RA), psöriatik artrit (PSA), poliartik'uler jüvenil idiopatik artrit, sedef hastaligi, plak tipi psöriazis (Ps), ankilozan spondilit (AS), aksiyal spondiloartrit, radyografik AS bulgusu olmaksizin aksiyal spondiloartrit, Crohn hastaligi (CD), pediatrik Crohn hastaligi ve 'ülseratif kolit bulunur.

Ornegin yukarida tanimlandigi gibi bir kapta veya kaplarin bir grubunda bulunan mevcut bulusun sivi sulu farmasötik Adalimumab formülasyonu ile tedavi için uygun olan enflamatuar hastaliklarin arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere enflamatuar kemik bozukluklari ve kemik rezorpsiyon hastaligi, hepatit, mesela alkole bagli hepatit ve viral hepatit, pihtilasma bozukluklari, reperf'üzyon hasari, keloit olusumu, skar doku olusumu, pireksi, periodontal hastalik, obezite ve radyasyon toksisitesi bulunur.

Uygun enfeksiyöz hastaliklar viral ve / veya bakteriyel enfeksiyonlardir. Sinir sisteminin uygun hastaliklari, digerlerinin yani sira, nörodejeneratif bozukluklar, 'Örnegin Parkinson hastaligi, Alzheimer hastaligi, multipl skleroz, Huntington hastaligi, ya da amyotrofik lateral sklerozdur.

Daha fazla tercih edilen bir yapilanmaya göre sivi sulu farmasötik formülasyon (ve mevcut bulusa uygun olarak kullanilacak kap veya kaplar grubu), ihtiyaç halindeki insan hastaya, 13- günde bir olarak iki haftada bir, subkütanöz olarak verilecek sekilde dizayn edilir.

Tercih edilen bir yapilanmaya göre mevcut bulusun sivi sulu farmasötik formülasyonu, TNFoi üretimi veya aktivitesini inhibe eden, bununla sinirli olmamak 'üzere metotreksat gibi bir ilave terapötik ajan ile birlikte verilecek sekilde tasarlanir. Asagidaki Örnekler 1 ila 9 ve karsilik gelen Sekiller 1 ila 5 bu bulusu açiklamaya devam edecektir. Ornegin burada kullanilanlar gibi konvansiyonel metotlarin detayli tarifleri, atif yapilan literatürde bulunabilir.

ORNEKLER Adalimumab ajaninin piyasada bulunan sitrat-fosfat tamponlu formülasyonuna yönelik alternatif tampon sistemleri içeren birkaç form'ülasyon mevcuttur ve bunlarin arasinda, mono- veya dikarboksilik asitleri veya bunlarin tuzlarini bir amino asit veya poliol stabiliz'or ile birlikte tamponlari, süksinat tamponlari, sitrat-tamponlari veya asetat tamponlari arasindan seçilen tamponlar ve amino asitler ve siklodekstrinler arasindan seçilen stabilizörler (bkz. örnegin haliyle 6.25 +/- 0.5) tamponlanan Adalimumab formülasyonlari bulunur. Ancak, Adalimumab gibi bir antikorun uzun dönemli kendi kendine uygulamaya uygunlugu ve klinik etkisinden tam olarak faydalanabilme bakimindan bir stabil sivi farmasötik formülasyon ile ilgili olarak, iyilesmis depolama stabilitesine sahip baska sivi sulu farmas'ötik Adalimumab formülasyonlarinin gelistirilmesine yönelik bir ihtiyaç söz konusudur.

Piyasada bulunan sitrat-fosfat tamponlu Adalimumab formülasyonuna yönelik olanlardan üstün alternatifler olarak uygun tampon sistemlerinin taranmasi amaciyla, 4 farkli tampon sisteminde baska Adalimumab farmasötik formülasyonlari hazirlanmistir: a) sitrat (tekli tampon sistemi), b) histidin-sitrat, c) histidin-asetat ve d) sitrat-fosfat (referans tamponu). Ilave stabilizörlerin etkisini degerlendirmek 'üzere dört adet alternatif Alternatif formülasyonu ayrica L-Arginin veya EDTA stabilizörlerinden birini içermistir. Diger tüm bilesenler (sodyum klorür, mannitol, Polysorbate 80), piyasada satilan Adalimumab formülasyonu HUMIRA® ürününe niteliksel ve niceliksel anlamda uygun sekilde muhafaza edilmistir. Farkli Adalimumab formülasyonlarinin stabilitesi, 5“C ve 25°C'de 6 ay lik bir süre boyunca uzun dönemli depolama esnasinda ve 55“C'ye isitma yapilmasi gibi stres sartlari altinda test edilmistir. Test edilen tüm formülasyonlarin bir özetii Tablo 1 içerisinde verilir. Bu baglamda histidin-asetat tamponlu Adalimumab farmas'otik form'ulasyonlari, sadece örneklemek amaciyla kullanilmis ve açiklanmistir.

Tablo 1. Test edilen alternatif Adalimumab farmasötik formülasyonlari ve bunlarin parti numaralari (Ornek ID No. 1 ila 12) 01 + + + + + + 02 + + + + + + + 03 + + + + + + 04 + + + + + 05 + + + + + + 06 + + + + + 07 + + + + + 08 + + + + + + + 09 + + + + + + + + + + + + + 11 + + + + + + + 12 + + + + + + + Mevcut bulusa göre kullanilan materyallere ve metotlara yer veren deneyler ve bunlarin sonuçlari asagidaki gibi özetlenir.

Tablo 2. Ekipman Ekipman Uretici Model Seri Numarasi Tablo 3. HPLC Kolonlari Kolon Uretici Parça Numarasi Parti Sayisi 2.1 X100mm YMC-BioPro SP-F 1OOX4.6mmI.D. S- YMC SFOOSOS- 10183 5i.im 1046WP Tablo 4. Materyaller! Reaktiflerin Listesi Materyalleri Reaktifler Uretici Parça Parti Numarasi Numarasi monohidrat BioUItra tuzu BioPerformance Aldrich 2%990 2%995 Aldrich Fosfatla tamponlu salin Sigma P4417 SLBJ2117V Adi Üretici/Tedarikçi Saflik Parti Sayisi dodekahidrat Hidroklorik asit L-Histidin baz Ajinomoto %985 R016E013 Mannitol Roquette Freres %989 E636Y yüksek kaliteli Sodyum dihidrojen fosfat Honeywell Speciality Chemicals %100.0 C0130 dihidrat Seelze Gmbh Trisodyum sitrat dihidrat Honeywell Speciality Chemicals %100.4 A3330 Seelze Gmbh Adalimumab Uretimi/Saflastirilmag Burada kullanilan etkin farmasötik bilesenler, CHO hücrelerinden (DG44) türetilen bir klonda üretilen ve protein A afinite kromatografi, katyon degistirme kromatografisi (CEX) ve anyon degistirme kromatografisi (AEX) adimlari ile saflastirilan Adalimumab ajanidir. Son saflastirma adimindan sonra antikor, istenen tamponda yaklasik 50 mg/mL'Iik bir nihai konsantrasyona konsantre edilmis ve -60“C altindaki bir sicaklikta depolanmi stir.

Farmasötik Adalimumab formülasyonlarinin hazirlanmasi Adalimumab, protein A antikor afinite kromatografisi ile saflastirilmis ve prosedürün takip eden kisminda ise akabinde katyon ve anyon degistirme kromatografisi kullanilmistir. Bu saflastirma adimlarindan sonra diafiltrasyon yoluyla baska formülasyonlar hazirlanmistir. Mannitol ve sodyum klor'ur içeren tamponlar kullanilarak, farkli sekilde diafiltrasyondan geçirilen çözeltiler hazirlanmis iken Arginin, EDTA ve Tween 80 stabilizör eksipiyanlari, sonraki adimlarda katilmistir. Diafiltrasyon yapildiktan sonra protein çözeltisi, yaklasik olarak 65 mg/mL'ye konsantre edilmistir. Mannitol ve sodyum klorür ile ayni tampon çözeltilerini içeren konsantre (10 misli konsantre) çözeltiden Tween 80 ilave edilmistir. Protein konsantrasyonu ve pH degerleri, elde edilen formülasyon örneklerinde ölçülm'ustür. Orneklerin hedef konsantrasyonu, 55 ± 2.5 mg/mL'dir. Orneklerin protein konsantrasyonu ve pH degeri belirlenmis ve daha sonra çözeltiler, 0.22 pm gözenek boyutundaki steril bir filtre içerisinden, tek kullanimlik steril polikarbonat tüplerin içine filtrelenmistir.

Mannitol ve sodyum klorür içeren tampon çözeltilerine arginin veya EDTA eksipiyanlari eklenmistir. Protein çözeltisi, 50 mg/mL seviyesine seyreltilerek farkli farmasötik formülasyonlar hazirlanmistir. Protein çözeltisi, sadece farkli tampon çözeltileri ile, ya da EDTA veya L-Arginin içeren tampon çözeltileri ile birlikte seyreltilmistir. Orneklerin konsantrasyonu, istenen araligin disinda kalmis ise, hedef konsantrasyona seyreltilerek ayarlanmistir.

Hazirlanan örnekler, 0.22-pm gözenek boyutundaki steril bir filtre içerisinden filtrelenmistir.

Orneklerin küçük miktarlari, Iaminar hava akisi altinda steril ekipman kullanilarak steril santrifüj tüplerine aktarilmis ve tüpler azot gaz akisi altinda kapatilmistir. Adalimumab formülasyon örnekleri bu sekilde stabilite deneyleri için hazir hale gelmistir.

Uzun dönemli stabilite çalismalari Farkli Adalimumab formülasyonu örnekleri, 5“C ± 3“C ve 25°C ± 2`C'de 6 ay süresince depolanmistir. Ornekler, 1, 2, 3 ve 6 ay sonra analiz edilmistir.

Dondurma-eritme sartlari Dondurma-eritme örnekleri, t=0 olacak sekilde analizin yapildigi gün hazirlanmistir. Orneklerin donma-erme stresi, bir Telstar Liobeta 15 dondurma kurutma cihazi içerisinde uygulanmistir.

Söz konusu örnekler, 30 dakika içerisinde 5“C'den - 20°C'ye dondurulmu s ve -20°C'de 1 saat muhafaza edilmistir. Ornekler, 2 saat içerisinde -20°C'den 5°C`ye e ritilmistir. Dondurma ve eritme döngüsü, her bir örnek için 5 ve 10 kere tekrar edilmistir. lsil stres sartlari Ornekler, proteinin erime noktasina yakin bir sicaklik olarak 55°C'de 10 dakika süresince inkübe edilerek isil stres uygulanmistir.

Aiitaszon çalismalari Ornekler, 400 RPM'Iik bir karistirma hizinda bir düzlemsel bir çalkalayici üzerinde 25°C'de 24 saat süresince çalkalanarak mekanik strese tabi tutulmustur.

Yüksek sicaklikta bir aylik depolama Ornekler, %75 ± 5'Iik nispi nem sartlarinda 40 ± 2 °C`de 1 ay süresince depolanmi stir. Mekanik strese tabi tutulmus, dondurulmus-eritilmis ve yüksek sicaklikta strese maruz birakilmis Örnekler, 25 ± 2 °C sicaklikta bir ay daha depolanm is ve yeniden analiz edilmistir.

RP-UHPLC-UVzao ile protein içerigj Farkli formülasyon örneklerindeki Adalimumab konsantrasyonunu ölçmek üzere, 280 nm'de abzorbans kullanilarak, UV detektörü ile donatili ters fazli ultra yüksek performansli sivi kromatografi (RP-UHPLC-UV) kullanilmistir.

QH ÖIg'ümIeri Her bir örnegin pH degeri, bir mikro-pH probu kullanilarak ölçülmüstür. Analiz baslamadan önce pH probu, üç pH standardi ile kalibre edilmistir. Stabilite örneklerinin pH degerleri, her bir stabilite örneginden 500 pL, 1000 uL'Iik PCR tüpüne aktarilarak ölçülmüstür. Mikro-pH probu daha sonra örnek içerisine daldirilmis ve deger kararli hale geldikten sonra kaydedilmistir. gyükl'ügggöre ayirma kromatoqrafisi (HP-SE) Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin saflik/kümelesme ve parçalanma bakimindan stabilitesi, molekülleri boyut tabaninda ayiran boyuta göre ayirmali yüksek performansli likit kromatografi (HP-SEC) kullanilarak ölçülmüstür. Erkenden elüe olan pik, yüksek molekül agirligina sahip türe veya kümelesme yüzdesine (%) karsilik gelir. Ana pik (intakt protein), monomer yüzdesine (%) karsilik gelir. Geç elüe olan pik, düsük molekül agirligina sahip türe veya parçalanma yüzdesine (%) karsilik gelir. SEC metot parametreleri, asagida kisa sekilde özetlenir: o Ornek hazirlama: su ile 50 misli seyreltme o Analiz tamponu: , 100 mM potasyum klorür içerir 0 Debi: 0.35 mL/dk o Kolon sicakligi: 30°C o Deteksiyon: UV, A: 215 nm o Enjeksiyon hacmi: 2 pl 0 Ornek sicakligi: 5°C SEC verileri, ana, kümelenmis ve parçalanmis piklerin göreli alan yüzdesi (%) esasinda Kuvvetli ka tyon degistirme (S CX) kromatografisi (SCX-HPLC) Saglam olarak bölünen Adalimumab formülasyonu örneklerinin yük anlaminda heterojen yapisi ve post translasyonel modifikasyonlari, kuvvetli katyon degistirmeli (SCX) yüksek performansli likit kromatografi (SCX-HPLC) ile analiz edilmistir.

SEC kromatografi metodu parametreleri, asagida kisa sekilde özetlenir: Saglam ölçüm: o Ornek hazirlama: su ile 50 misli seyreltme o Kolon bilgisi: YMC-BioPro SP-F 100X4.6mml.D. S-5um 0 Mobil faz A: 10 mM MES tamponu (pH z 6,0) 0 Mobil faz B: 200 mM sodyum klorür, mobil faz A içinde o Debi: 0.85 mL/dk o Kolon sicakligi: 25°C o Deteksiyon: Flüoresans, Aex = 280 nm, AEM = 350 nm o Enjeksiyon hacmi: 5 pl 0 Ornek sicakligi: S“C Süre (dakika) Mobil faz A [%] Mobil faz B [%] 0 56.6 43.4 18 33.6 66.4 19 33.6 66.4 19.5 56.6 43.4 56.6 43.4 Asagidaki sinirlayici olmayan Ornekler, mevcut bulusu örneklendiren birkaç alternatif Adalimumab formülasyonunu temsil eder. formülasyonu) Adalimumab, ilgili teknigin iyi bilinen usullerine göre saflastirilmistir. Bu örnekte, saflastirilmis olan Adalimumab; mannitol, sodyum klorür ve Polysorbat 80 ile birlikte ve ilave stabilizörler EDTA (#02) ve L-Arginin (#03) ile veya olmaksizin, sürat-fosfat tamponu varliginda, Tablo 6 içinde gösterilen konsantrasyonlarda formüle edilmistir. Formülasyonun pH degeri, yaklasik olarak pH 5.2'ye ayarlanmistir. Protein çözeltisine, nihai konsantrasyonu ayarlamak üzere kendi stok çözeltilerinden eksipiyanlar ilave edilmis ve hacim, steril su ile veya enjeksiyonluk su ile istenen seviyeye kadar getirilmistir. Formüle edilen yigin, uygun bir kabin (örnegin küçük siseler, siringalar vs) içerisine, normal ve stres sartlari altinda depolanmak üzere aktarilmistir.

Ilgili formülasyonlarda kümelesme olusumu ve asidik safsizliklarin (türlerin) deamidasyonu / olusumu bakimindan stabilite ölçümleri, HP boyuta göre ayirma kromatografisi ve isitma üzerine HP-SCX yoluyla farkli zaman noktalarinda gerçeklestirilmistir. Sonuçlar, Sekiller 1 ila 4 içerisinde gösterilir.

Tablo 6: #01 Sitrat-fosfat tamponu (referans formülasyonu)*.

Bilesenler Konsantrasyon Adalimumab 50.00 Sodyum klorür 6.16 105.45 Sodyum dihidrojen fosfat dihidrat 0.86 5.53 Disodyum hidrojen fosfat dodekahidrat 3.07 8.57 Trisodyum sitrat dihidrat 0.30 1.02 Sitrik asit monohidrat 1.30 6.19 Mannitol 12.00 65.87 Polisorbat 80 1.00 Adalimumab, ilgili teknigin iyi bilinen usullerine göre saflastirilmistir. Bu örnekte, saflastirilmis olan Adalimumab; mannitol, sodyum klorür ve Polysorbat 80 ile birlikte ve ilave stabilizörler EDTA (#05) ve L-Arginin (#06) ile veya olmaksizin, tekli tampon sistemi olarak sitrat tamponu varliginda, Tablo 7 içinde gösterilen konsantrasyonlarda formüle edilmistir. Formülasyonun pH degeri, yaklasik olarak pH 5.2'ye ayarlanmistir. Protein çözeltisine, nihai konsantrasyonu ayarlamak üzere kendi stok çözeltilerinden eksipiyanlar ilave edilmis ve hacim, steril su ile veya enjeksiyonluk su ile istenen seviyeye kadar getirilmistir. Formüle edilen yigin, uygun bir kabin (örnegin küçük siseler, siringalar vs) içerisine, normal ve stres sartlari altinda depolanmak üzere aktarilmistir. Ilgili formülasyonlarda kümelesme olusumu ve asidik safsizliklarin (türlerin) deamidasyonu / olusumu bakimindan stabilite incelemeleri, HP boyuta göre ayirma kromatografisi ve isitma üzerine HP-SCX yoluyla farkli zaman noktalarinda yapilmistir.

Sonuçlar, Sekiller 1 ila 4 içerisinde gösterilir.

Tablo 7: #04 Sitrat tamponu*.

Bilesenler Konsantrasyon Adalimumab 50.00 Sodyum klorür 6.16 105.45 Trisodyum sitrat dihidrat 3.17 10.77 Sitrik asit monohidrat 0.83 3.97 Mannitol 12.00 65.87 Polisorbat 80 1.00 Adalimumab, ilgili teknigin iyi bilinen usullerine göre saflastirilmistir. Bu 'örnekte, saflastirilmis olan Adalimumab; mannitol, sodyum klorür ve Polysorbat 80 ile birlikte ve ilave stabilizörler EDTA (#08) ve L-Arginin (#09) ile veya olmaksizin, histidin-sitrat tamponu varliginda, Tablo 8 içinde gösterilen konsantrasyonlarda formüle edilmistir. Formülasyonun pH degeri, yaklasik olarak pH 5.2'ye ayarlanmistir. Protein çözeltisine, nihai konsantrasyonu ayarlamak üzere kendi stok çözeltilerinden eksipiyanlar ilave edilmis ve hacim, steril su ile veya enjeksiyonluk su ile istenen seviyeye kadar getirilmistir. Formüle edilen yigin, uygun bir kabin (örnegin küçük siseler, siringalar vs) içerisine, normal ve stres sartlari altinda depolanmak üzere aktarilmistir.

Ilgili formülasyonlarda kümelesme olusumu ve asidik safsizliklarin (türlerin) deamidasyonu / olusumu bakimindan stabilite incelemeleri, HP boyuta göre ayirma kromatografisi ve isitma üzerine HP-SCX yoluyla farkli zaman noktalarinda yapilmistir. Sonuçlar, Sekiller 1 ila 4 içerisinde gösterilir.

Tablo 8: #07 Histidin-sitrat tamponu*.

Bilesenler Konsantrasyon mgImL mmol/L Adalimumab 50.00 Sodyum klorür 6.16 105.45 L-Histidin bazi 0.02 1.11 L-Histidin HCL 0.24 11.20 Trisodyum sitrat dihidrat 1.58 5.38 Sitrik asit monohidrat 0.42 1.98 Bilesenler Konsantrasyon Mannitol 12.00 65.87 Polisorbat 80 1.00 Ornek 4: Histidin-asetat tamponu içeren Adalimumab farmas'ötik formülasyonu Adalimumab, ilgili teknigin iyi bilinen usullerine göre saflastirilmistir. Bu örnekte, saflastirilmis olan Adalimumab; mannitol, sodyum klorür ve Polysorbat 80 ile birlikte ve ilave stabilizorler EDTA (#11) ve L-Arginin (#12) ile veya olmaksizin, histidin-asetat tamponu varliginda, Tablo 9 içinde gösterilen konsantrasyonlarda formüle edilmistir. Formülasyonun pH degeri, yaklasik olarak pH 5.2'ye ayarlanmistir. Protein çözeltisine, nihai konsantrasyonu ayarlamak üzere kendi stok çözeltilerinden eksipiyanlar ilave edilmis ve hacim, steril su ile veya enjeksiyonluk su ile istenen seviyeye kadar getirilmistir. Formüle edilen yigin, uygun bir kabin (örnegin küçük siseler, siringalar vs) içerisine, normal ve stres sartlari altinda depolanmak üzere aktarilmistir.

Ilgili formülasyonlarda kümelesme olusumu ve asidik safsizliklarin (türlerin) deamidasyonu / olusumu bakimindan stabilite incelemeleri, HP boyuta göre ayirma kromatografisi ve isitma üzerine HP-SCX yoluyla farkli zaman noktalarinda yapilmistir. Sonuçlar, Sekiller 1 ila 4 içerisinde gösterilir.

Tablo 9: #10 Histidin-asetat tamponu*.

Bilesenler Konsantrasyon mglmL mmoIlL Adalimumab 50.00 Sodyum klorür 6.16 105.45 L-Histidin bazi 0.02 1.11 L-Histidin HCL 0.24 11.20 Sodyum asetat trihidrat (yüksek kaliteli) 0.28 20.76 Mannitol 12.00 65.87 Polisorbat 80 1.00 agrega içerigi Test edilen Adalimumab formülasyonlarinin, kümelesme olusumu bakimindan stabilitesi, 6 depolama esnasinda HP-SEC yoluyla ölçülmüst'ur. Buradaki degerler, karsilik gelen sitrat- fosfat tamponlu Adalimumab referans formülasyonlarinda ölçülen kümelenmis pikler ile kiyasli olarak, test edilen Adalimumab formülasyonlarinin kümelenen piklerinin alan yüzdelerindeki farklari [A alan %] temsil eder. L-Arginin içeren formülasyonlar ile ilgili olarak, sadece 3 aylik stabilite verileri mevcuttur. 25°C'de 6 aylik depol amadan sonra histidin-sitrat ve histidin-asetat ile tamponlu Adalimumab farmasötik formülasyonlari, Sitrat-fosfat tabanli referans formülasyonlari ile kiyasli olarak, belirgin sekilde daha düsük bir kümelenme oranina sahiptir.

Salt Sitrat tabanli Adalimumab formülasyonlari, kümelesmeye daha yatkin gözükmektedir. Ne EDTA, ne de L-Arginin eklenmesi (L-Arg 3 ay sonra belirlenir), alternatif formülasyonlarda agrega olusumu üzerinde önleyici veya stabilize edici bir etki gösterir. Sonuç olarak histidin- asetat tamponlu formülasyon, bunun sonrasinda mevcut bulusun histidin-sitrat tamponlu farmas'otik Adalimumab formülasyonu, piyasada bulunan Sitrat-fosfat tamponlu Adalimumab formülasyonu için daha stabil bir alternatiftir.

Tablo 10: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 5'C'de mutlak sayilar olarak agrega Form'ülasyon Agregalar [Alan%], 5'C'de Tablo 11: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 5°C'de referans formülasyonuna göreli agrega içerigi Form'i'ilasyon Agregalar [A Alan%], 5°C'de Tablo 12: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 25°C'de m utlak sayilar olarak agrega Formülasyon Agregalar [Alan%], 25°C'de Tablo 13: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 25°C'de referans formülasyonuna göreli agrega içerigi Form'i'ilasyon Agregalar [A Alan%], 25°C'de Ornek 6: Alternatif Adalimumab form'ülasyonlarinin, stres sartlari (55“C) altinda referans form'ülasyonuna göreli olarak agrega içerigi.

Farkli Adalimumab form'L'iIasyonu örneklerinin 55“C'ye isitilmasi 'üzerine agrega olusumu, HP- SEC kullanilarak degerlendirilmistir. Sekil 2A içerisinde agrega içerigi, alan yüzdeleri (sol sütunlar) olarak gösterilir. Sag sütunlar (A isareti ile gösterilir), ilk sonuçlar için Sitrat-fosfat tamponlu referans formülasyonlarindan gelen farklari ve stres sartlarina tabi tutulan örneklerin ilk sonuçlarindan (stres kaynakli degisim) gelen farklari temsil eder. Test edilen tüm Adalimumab formülasyonlarinin arasindan, bir ilave stabilizör eklenmemis olan histidin-asetat tamponlu formülasyon, en yüksek stabiliteyi, yani 55°C'de en düsük kümelesme hizini göstermistir; ayrica bkz. Sekil 28, Sitrat-fosfat tamponlu formülasyonun 55Ü'deki referans çizgisinin, A eklenmesi, 55“C sicakliga isitma yapilirken ilgili farmasötik formülasyonda (#11) agrega olusumunu belirgin sekilde artirir. Histidin-sitrat ile tamponlanan ve EDTA içeren Adalimumab farmasötik formülasyonu, 55°C'de benzer bir stabilite gösterir. asidik t'L'ir içerigi Test edilen Adalimumab formülasyonlarinin, asidik tür olusumu bakimindan stabilitesi, 6 aylik esnasinda SCX-HPLC yoluyla ölçülmüst'ür. Buradaki degerler, karsilik gelen Sitrat-fosfat tamponlu Adalimumab referans formülasyonlarinda ölçülen asidik safsizlik pikleri ile kiyasli olarak, test edilen Adalimumab formülasyonlarinin asidik safsizlik piklerinin (birinci ve ikinci asidik bölgelerin toplami) alan yüzdelerindeki farklari [A alan %] temsil eder. L-Arginin içeren formülasyonlar ile ilgili olarak, sadece 3 aylik stabilite verileri mevcuttur. 5°C'de depolanan, test edilen tüm alternatif Adalimumab farmasötik formülasyonlari, sitrat-fosfat tamponu içeren referans formülasyonlarindan biraz daha düsük seviyelerde asidik safsizlik sergiler, ancak farkliliklar anlamli degildir (Sekil 3A-C). 25*C'deki stabilite çalismalari, histidin-asetat ve histidin-sitrat tamponlu Adalimumab farmasötik formülasyonlarinin, sitrat-fosfat tamponu esasli referans formülasyonlari ile kiyasli olarak, 6 aylik depolama üzerine anlamli ölçüde daha düsük seviyelerde asidik türler sergiledigini gösterir (Sekil 3D-F; bu husus, L-Arg içeren formülasyonlar durumunda 3 aylik veriler için de geçerlidir). Bir ilave stabilizör olmaksizin, histidin-asetat ile tamponlanan Adalimumab formülasyonu (#10), en yüksek göreli safliga sahiptir (sitrat-fosfat tamponlu referans formülasyonu ile kiyasli olarak, %3.1 oraninda daha düsük asidik safsizliklar seviyesi), buna karsi salt sitrat tamponuna dayanan Adalimumab formülasyonlari, en yüksek miktarda asidik safsizlik göstermistir. Ne EDTA, ne de L-Arginin eklenmesi (L-Arg, 3 ay sonra belirlenir), alternatif Adalimumab formülasyonlarinda asidik tür olusumu üzerinde önleyici veya stabilize edici bir etki gösterir.

Tablo 14: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 5“C'de mutlak sayilar olarak ifade edilen asidik safsizliklari (yani asidik tür içerigi) Formülasyon Asidik safsizliklar [Alan%], 5'C'de Tablo 15: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 5°C'de referans formülasyonuna göreli asidik safsizlik (yani asidik tür) içerigi.

Form'i'ilasyon Asidik safsizliklar [A Alan%], 5°C`de Tablo 16: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 25“C`de m utlak sayilar olarak ifade edilen asidik safsizliklari (yani asidik t'ür içerigi) Form'ülasyon Asidik safsizliklar [Alan%], 25“C'de Tablo 16: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin 25°C'de referans formülasyonuna göreli asidik safsizlik (yani asidik tür) içerigi.

Formülasyon Asidik safsizliklar [A Alan%], 25°C'de Ornek 8: Alternatif Adalimumab formülasyonlarinin, stres sartlari (55“C) altinda referans formülasyonuna göreli olarak asidik tür içerigi.

Farkli Adalimumab formülasyonu örneklerinin 55°C'ye isitilmasi üzerine asidik safsizlik olusumu, HP-SEC kullanilarak degerlendirilmistir (Sekil 4A). Asidik tür olusumunun seviyesi, alan yüzdeleri (sol sütunlar) olarak gösterilir. Sag sütunlar (A isareti ile gösterilir), ilk sonuçlar için Sitrat-fosfat tamponlu referans formülasyonlarindan gelen farklari ve stres sartlarina tabi tutulan örneklerin ilk sonuçlarindan (stres kaynakli degisim) gelen farklari temsil eder. Test edilen tüm Adalimumab formülasyonlari arasinda, ilave stabilizör içermeyen histidin-asetat tamponlu formülasyon (#10), en yüksek stabiliteyi, yani 55“C'de en düsük asidik safsizlik olusum hizini göstermistir. Bu tampon kombinasyonuna EDTA eklenmesi, 55°C sicakliga isitma yapilirken ilgili formülasyonda asidik safsizlik olusumunu hafif sekilde artirir. formülasyona göreli biyolojik aktivitesi.

Metodun Qrensibi Test örneginin biyolojik aktivitesi, HUMIRA® referans çözeltisinin biyolojik aktivitesi ile karsilastirmali olarak, farkli stres sartlari altinda zamana karsi belirlenir. Referans çözeltisi ile ve test örnegi ile hücre ölümünü inhibe etme etkisi, AIamarBIue® reaktifi ile saptandigi üzere, TNFci ve Actinomycin-D ile muamele edilmis L929 hücreleri üzerinde karsilastirilir. Muameleler esnasinda, ayni konsantrasyonda L929 hücreleri içeren bir ortam, 96 gözlü bir mikrotitre plagin uygun gözleri içine eklenir ve 48 saat süresince inkübe edilir. Inkübasyondan sonra 9 noktali seyrelti dizileri, bir seyreltme plagi üzerinde ayni konsantrasyonda olacak sekilde, hem referans çözeltisinden hem de test örneginden üçer kere hazirlanir, daha sonra TNFoi çözeltisi eklenir ve karisimlar oda sicakliginda 15 dakika süresince inkübe edilir. inkübasyon periyodu esnasinda, hücreleri içeren mikrotitre plagin gözleri içerisine Actinomycin-D çözeltisi eklenir, daha sonra TNFoi çözeltisi ve referans çözeltisi ilave edilir, ya da test örnegi hücrelere eklenir. 24 saat sonra hücrelere AlamarBIue® reaktifi eklenir, sonrasinda 24 saatlik inkübasyon sonrasinda, yasayabilir hücrelerin sayisi ile orantili olan flüoresans sinyalleri saptanir. Test örneginin referans çözeltisine göreli biyolojik aktivitesinin degerlendirmesi, seyrelti dizilerinin noktalarindan elde edilen 5 parametreli sigmoid egrilerinin karsilastirmasina dayandirilir.

Grafigin karakteristikleri (regresyon, Iineerlik ve paralellik) analiz edildikten sonra örnegin göreli biyolojik aktivitesi, egrilerin mesafelerinden hesaplanir; optimum deger %100'dür.

Gerekli materyaller ve ekipman& Materyaller Actinomycin-D (Sigma A9415) AIamarBIue® (Invitrogen DAL 1025) DMEM, büyük glukoz, GIutaMAX, HEPES (Gibco 32430) FBS, Fetal Bovin Serum (isiyla etkisizlestirilmis) (Gibco 10500-056) HUMIRA® referans stok çözeltisi (Abbott, 50 mg/m L) Kanamisin sülfat, Streptomyces kanamyceticus, hücre kültürü ile test edilmis (Calbiochem, 420411) Rekombinant Human TNFd (R&D Systems, 210TA/CF) TrypLETM Express (1x), fenol kirmizisi (Gibco, 12605-010) Trypan mavi çözeltisi (Sigma T8154) Test örneginin stok çözeltisi Su, saflastirilmis, HPLC kalitesi Ekipmanlar Doku kültürü sisesi (TPP 711090076) 96 gözlü mikrotitre plak (BD Falcon 3072) 50 mL'Iik santrifüj tüpü (BD Falcon 352070) Eppendorf Research® pipetler %03) Eppendorf Research® pipet Eppendorf tüpler (Eppendorf Millex-GV filtre 'ünitesi, Biosafety II Iaminar kutu C02 inkübator'u Biotek Synergy 2 plak okuyucu, Gen5 Secure yazilimi Beckman Coulter Allegra X-22R tezgah santrif'üj'ü, degistirilebilir rotor ile Sigma Pasteur pipet (Sigma-Aldrich, 86018-250EA) Serolojik pipet, 10 mL (TPP 94010) Serolojik pipet, 25 mL (TPP 94024) Bi'irker bölmesi (0.0025 mm2, Hirscmann) Nucleocounter otomatik h'ücre sayici Agilent Bravo sivi muamele robotu Water ariticisi (Sartorius Arium 611VF) Analytical terazi (Mettler Toledo AX205) Manyetik karistirici (IKA Ret basic) Ayni kalitedeki materyaller ve ekipmanlarin kullanilmasi da mümkündür. çözelti/erin hazirlanmasi Komplet ortam 90 mL DMEM ortam mL FBS Söz konusu ortam, hazirlandiktan sonra en fazla bir hafta kullanilabilir, bilesenler tedarikçi tarafindan sterilize edilmemistir; ortamin filtrelenerek stabilize edilmesi gerekir. 10x PBS 40 g NaCI .8 9 Na2HPO4 1 g KH2PO4 1 g KCI 500 mL saflastirilmis su içinde çözülür, pH 7.0 (1x PBS pH degerini ayarlamak gerekmez, yaklasik olarak pH 7.4-7.5 seviyesinde olacaktir.) TNFg stok cözeltisinin hazi_rlanma_si TNFoi'dan 1 mg/mL konsantrasyonunda bir stok çözeltisi hazirlanir. -20°C'de saklanan 50 ug liyofilize TNFoi içerisine 50 uL steril filtrelenmis PBS eklenir ve daha sonra hafif çalkalanarak çözülür. -70°C'de saklanan TNF a stok çözeltisi, hazirlandiktan sonra 3 ay kullanilabilir.

Actinomycin-D stok çözeltisinin hazirlanmasi Actinomycin-D'den 1 mg/mL konsantrasyonunda bir stok çözeltisi hazirlanir. 2 mg Iyofilize Actinomycin-D üzerine 2 mL etanol eklenir ve daha sonra bir vorteks ile çözülür.

-ZOCC'de saklanan Actinomycin-D stok çözeltisi, haz irlandiktan sonra 3 ay kullanilabilir.

TNFa'nin sezreltilmesi -70°C'de saklanan 1 mg/mL'Iik TNFoi stok çözeltisinden dört seyreltme adiminda 112 pg/mL konsantrasyonunda bir çözelti hazirlanir, bu çözelti gözlerde tekrar 4 misli seyreltilir ve nihai konsantrasyon ise 28 pg/mL olarak ayarlanir.

Seyreltme adimlari: 2. 100X ( 3. 10x ( 4. 89x (3 plak üzerinde: Actinomycin-D'nin seyreltilmesi -20°C'de saklanan 1 mg/mL'Iik Actinomycin-D stok çö zeltisinden 250X seyreltme yapilarak 4 ug/mL konsantrasyonunda bir çözelti hazirlanir (her bir plakta 20 iJL stok çözeltisi + 5 mL komplet ortam), bu çözelti gözlerde tekrar 4 misli seyreltilir ve nihai konsantrasyon ise 1 ug/mL olarak ayarlanir.

Referans çözeltisi ve test çözeltisinin hazirlanmasi HUMIRA® referans stok çözeltisi (50 mg/mL) üç adimda 7.2 pg/mL seviyesine seyreltilir.

Minimum 10 pL'Iik stok çözeltisinden baslanarak sonraki seyreltme adimlari, 10 x, 100X ve 6.94x olarak gerçeklestirilir. 7.2 pg/mL konsantrasyona seyreltilen çözeltiden alinan 50 pL, seyreltme plaginin uygun gözlerine aktarilir ve böylece referans çözeltisinin nihai konsantrasyonu 2.4 ug/mL haline gelir.

Seyreltme adimlari: 1. 10x (90 uL komplet ortam + 10 uL HUMIRA® referans stok çözeltisi veya test çözeltisi) 2. 100X ( 3. 6.94x ( HUMIRA® referans stok çözeltisinin nominal konsantrasyonu, 50 mg/mL'dir; buradan, gerçek konsantrasyon ile nominal konsantrasyon arasindaki farkin, son seyreltme adiminda düzeltilecegi sekilde 7.2 ug/mL konsantrasyonunda bir çözelti hazirlanir. Böylece, ikinci seyreltme adiminda elde edilen çözeltinin miktari ölçülerek, üçüncü çözeltinin konsantrasyonun 7.2 ug/mL olmasi saglanir. (Baslangiç konsantrasyonu (ug/mL) I 1000 = ilk iki seyreltme adimindan sonraki konsantrasyon (ug/mL); üçüncü seyreltme adiminin derecesi = ilk iki seyreltme adimindan sonraki konsantrasyon (ug/mL) / 7.2 (pg/mL); Tartim: 3. çözeltinin toplam hacmi (uL) / 3. seyreltme adiminin derecesi = x (pL) 2. seyreltiden gelir) Test örneginin stok çözeltisi, referans çözeltisi ile benzer olarak 7.2 ug/mL seviyesine seyreltilir.

Testin gerçeklesijrilmesi, test sartlari Her bir adim steril sartlar altinda gerçeklestirilir.

Hücrelerin plak/ara kaplanmasi - 1. Gün Hücre süspansiyonunun hazirlanmasi Hücreler kaplanmadan üç gün önce, yaklasik olarak 25 X1 O6 hücre, bir doku kültürü sisesinde mL komplet ortam içerisine aktarilir. Hücrelerin kaplandigi gün, ortam çekildikten sonra yüzeye yapismis olan hücreler, 3 mL TrypLETM Express çözeltisi ile gevsetilir ve daha sonra 7 mL komplet ortam içinde süspansiyon haline getirilir. Bürker bölgesi ile trypan mavi boyamasi (BTCH-BIOASSAY-BURKER-O1), ya da Nucleocounter (BTCH-BIOASSAY-SEJTSZ-01) kullanilarak hücre sayisi ve viyabilite belirlenir. Viyabl hücrelerin orani, %90'dan daha az ise, hücre kültürü kullanilmaz. Test amaciyla gerektigi sekilde hücre sayisi ortam içerisinde 1.6X 105 hücre/mL olacak sekilde ayarlanir. Bir plak üzerinde 6 mL hücre süspansiyonu, birim gözde 50 pL gereklidir. Hücre süspansiyonu 1 saat içerisinde kullanilir. Plak 37°C sicaklikta %5 CO 2 Hücrelerin muamele edilmesi- 3. Gün Tablo 17 Çözeltilerin bilesimi ve bunlarin plak üzerinde düzenleme sekli.

B Ortam Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Hücre Ortam 1 kültürü C Ortam Ornek1 Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Hücre Ortam D Ortam Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans ActD ktrl Ortam Ortam Ornek2 Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek ActD ktrl Ortam Ortam Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans Referans TNFoi ktrl Ortam Ortam Ornek3 Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek Ornek TNFci ktrl Ortam Ortam: komplet ortam ; Hücre ktrl: hücre süspansiyonu 50 pL/göz + komplet ortam ; ActD ktrl: hücre süspansiyonu 50 pL/göz + Actinomycin-D (4 pg/mL) 50 pL/göz + komplet ortam ; TNFa ktrl: hücre süspansiyonu 50 ;IL/göz + TNFor çözeltisi (112 pg/mL) ; Referans: referans çözeltisinden hazirlanan seyreltme dizisinin çözeltileri 50 pL/göz + hücre süspansiyonu 50 pL/göz + TNFa çözeltisi (112 pg/mL) 50 pL/göz + Actinomycin-D (4 pg/mL) 50 pL/göz, 1-3: bagimsiz seyreltme dizisinden hazirlanan seyreltme dizisi; Ornek: test çözeltisinden hazirlanan seyreltme dizisinin çözeltileri 50 pL/göz + hücre süspansiyonu 50 pL/göz + TNFa çözeltisi (112 pg/mL) 50 pL/göz + Actinomycin-D (4 ug/mL) 50 pL/göz, 1-3: bagimsiz seyreltme dizisinden hazirlanan seyreltme dizisi.

Muamele grosedürü HUMIRA® referans çözeltisinden ve test çözeltisinden, her bir çözelti için üçer tane olacak sekilde bagimsiz seyreltme dizileri hazirlanir. Mikrotitre plak üzerinde, Z'den 9. sütuna kadar 100 pL komplet ortam ölçülür ve daha sonra, önceden seyreltilen 7.2 pg/mL'Iik çözeltilerden 50 pL, 2. sütuna eklenir ve böylece gözler B, D ve F içerisinde, 2.4 pg/mL konsantrasyonunda HUMIRA® referans çözeltisi ve gözler C, E ve G içerisinde ise 2.4 pg/mL konsantrasyonunda test çözeltisi bulunur. Konsantre çözeltiler, bir referans çözeltisi ve bir test çözeltisi olacak sekilde vs., gözlere çiftler halinde aktarilir. Bu çözeltilerden baslanarak, üç misli seyreltilerin hazirlanmasi için 9 noktali seyrelti dizileri hazirlanir. Bu amaçla bir sonraki, bir derece daha konsantre seyreltme noktasindan 50 pL alinir, daha sonra süspansiyon haline getirilir ve 50 pL fazlasi son gözden iskartaya çikarilir. , hazirlanan seyreltme dizisinde her bir 100-pL noktasina aktarilir ve daha sonra oda sicakliginda 15 dakika süresince inkübe edilir. Inkübasyon periyodu esnasinda 50 pL Actinomycin-D çözeltisi, mikrotitre plagin hücreler içeren gözlerine aktarilir ve daha sonra kontrol çözeltisi de uygun gözlere aktarilir. Inkübasyon süresinden sonra TNFoi seyreltme dizisinin her bir noktasindan 100 pL pipetle alinarak, mikrotitre plagin hücreler içeren uygun gözlerine aktarilir ve daha sonra plak, 37°C sicaklikta %5 C02, %85 nispi nem atmosferi altinda inkübe edilir.

Boyama - 4. Gün pL AIamarBlue® reaktifi, plagin her bir bölmesine aktarilir ve daha sonra plak 37°C sicaklikta %5 002, %85 nispi nem atmosferinde 24 saat süresince inkübe edilir.

Test- 5. Gün Plak üzerindeki örneklerin flüoresans yeginligi, 530 nm sönüm ve 590 nm salim dalga boyu degerlerinde (hassasiyet 45 nm), flüoresans moduna alinmis bir çok modlu plak okuma seti ile saptanir.

Degerlendirme Degerlendirme, "5 parametreli lojistik egri (tam egri)" modeli temelinde, PLA 2.0 (Stegman System, Almanya) yazilimi kullanilarak gerçeklestirilir. Yazilimda asagidaki ayarlar kullanilir: Analiz: 5 parametreli lojistik egrisi (tam egri) Hipotez testi: ANOVA, Saf hata ayirma temelinde Parallelik: (%95 güven) Konfigürasyon: Lineer deteksiyon tipi I tam aralik Yazilim ile ölçülen flüoresans degerleri esasinda, test çözeltisine yönelik konsantrasyon-etki egrileri karakteristigi belirlenir ve belirli sartlar uygulanarak bu egrilere 5 parametreli lojistik denklem uygulanir. Bu program, test çözeltisinin biyolojik aktivitesini, egrilerin üzerindeki lineer kisminin x eksenine mesafesi esasinda, referans çözeltisine (HUMIRA®) göreli olarak hesaplar. ilaveten bu yazilim, F-testi esasinda asagidaki sistem uygunluk kriterlerini belirler: Paralel ölçümler için: CV% < %15 CV > %15 olmasi durumunda, Pharmacopoeia ile uygun olarak aykiri deger (outlier) testi ile paralellerden bir noktanin aykiri oldugu ortaya koyulur ise, bu nokta manüel olarak çekilebilir ve plak daha sonra yeniden degerlendirilir.

Regresyon: Fregresyon > Fkritik (%95) Lineerlik: Fnon-Iineer < Fkritik (%95) Paralelik: Fnon-paralel < Fkritik (%95) Göreli güven araligi, %74 ve %136 arasinda Diger sistem uygunluk kriterleri: Hücre kontrol degerlerinin ortalamasi / ActD kontrol degerlerinin ortalamasi, 1-15 arasinda olmalidir; TNFa kontrol degerleri ortalamasinin her halükarda referans çözeltisinin en düsük muamele konsantrasyonuna karsilik gelen ortalama degerden daha küçük olmasi gerekir; Hücre kontrol degerleri ortalamasinin her halükarda referans çözeltisinin en yüksek muamele konsantrasyonuna karsilik gelen ortalama degerden daha büyük olmasi gerekir.

HUMIRA® referans çözeltisinin biyolojik aktivitesi ile kiyasli olarak, test örneklerinin farkli stres sartlari altinda zamana göre biyolojik aktivitesinin belirlenmesi ile, mevcut bulusun her bir Adalimumab formülasyonunun, zamana göre (Sekil SB) veya HUMlRA® referans çözeltisine sonrasinda, bir dondurma-eritme döngüsünden sonra, mekanik stresten sonra ve ayrica SSC'de isil stresten sonra test edilen depolama ve stres sartlarindan en az biri bakimindan üstün oldugu gösterilir (Sekil 5A-C). Ornek olmasi bakimindan, O zaman noktasina göreli olarak, ilave bir stabilizör içermeyen histidin-asetat ile tamponlu formülasyon (örnek ID NO. ve bu formülasyonu, L-Arg içeren histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #12) izlemistir. Dahasi, O zaman noktasina göreli olarak, L-Arg içeren histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek lD NO. #12), bir dondurma-eritme döngüsünden ve ayrica mekanik stres sonrasinda 5 C ve 25 cC'de 3 ay sonra en iyi perfo rmansi göstermistir. O zaman noktasina göreli olarak, ilave bir stabilizör içermeyen histidin-sitrat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. nötralizasyonunu göstermistir. Geriye kalan tüm Adalimumab formülasyonlari, incelenen stres faktörüne karsi benzer yikim hizlari gösterir (Sekil 5A, B). Referans formülasyonuna göreli olarak, ilave bir stabilizör içermeyen histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #10), *C ve 25 cC'de 6 ay sonrasinda TNF d nötralizasyonunda en yüksek beceriyi göstermis ve bu formülasyonu, 5 *C'de 6 ay sonrasi sartlarda histidin-sitrat (örnek ID NO. #07) izlemistir. L- Arg içeren histidin-asetat tamponlu formülasyon (örnek ID NO. #12), incelenen tüm stres faktörlerine karsi toplamda en iyi performansi göstermistir (Sekil 5A, C). Ornek 9 ve Sekil 5 içerisinde özetlenen deneyler, alternatif Adalimumab formülasyonlarinin bir ikinci partisi ile gerçeklestirilmistir. Mevcut bulusun alternatif Adalimumab formülasyonunun TNFoi nötrlestirme yüzdeleri, HUMIRA® referans çözeltisinin TNFoi nötrlestirme özelligine göreli olarak ifade edilir, yani > %100 seklindeki degerler, mevcut bulusun Adalimumab formülasyonu tarafindan korunan göreli TNFd nötrlestirme aktivitesinin, verili sartlar altinda referans çözeltisi tarafindan korunandan daha yüksek oldugunu gösterir.

Ozetle, mevcut bulusun her bir Adalimumab formülasyonu, kendi biyolojik aktivitesi bakimindan, iyilestirilmis depolama stabilitesi sergileyen bir sivi farmasötik antikor formülasyonu sunmaktadir.

Referanslar Arakawa T, Philo JS, Ejima D, Tsumoto K ve Arisaka F (2006). Aggregation analysis of therapeutic proteins, Kisim 1. Bioprocess International 4 (10), 42-49.

Chen B, Bautista R, Yu K, Zapata GA, Chamow SM ve ark. (2003). Influence of histidine on the stability and physical properties of a fully human antibody in aqueous Paborji M, Pochopin NL, Coppola WP, Bogardus JB (1994). Chemical and physical stability of chimeric L6, a mouse-human monoclonal antibody. Pharm Res 11:764-771.

Sarno MEC, Vasquez RA, Yung S-G, Graf CR (1999). Stablo intravenously- administrable immune globulin preparation. Baxter International Inc, US patent U85945098. products containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues (1. gözden geçirilmis baski) A.B.D Saglik ve Sosyal Hizmetler Bakanligi, Gida ve Ilaç Idaresi (Subat 2012).

Guidance for Industry - Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Produc " (DRAFT GUIDANCE).

Public Health Service (PHS) Act 5262. Public Health Service Act, Title 42: The Public Health And Welfare, Chapter 6a: Public Health Service, Subchapter II: General Powers and Duties, Part F: Licensing of Biological Products and Clinical Laboratories, Subpart 1 - Biological Products: @262 Regulation of Biological Products (http://www.fda.gov/regulatoryinformation/Iegislation/ucm148717.htm).

Kappelgaard AM, Bojesen A, Skydsgaard K, Sj'ogren I, Laursen T (2004). Liquid growth hormone: preservatives and buffers. Horm Res.62 Ek 3:98-103.

Frenken LA1, van Lier HJ, Jordans JG, Leunissen KM, van Leusen R, Verstappen VM, Koene RA (1993). Identification of the component part in an epoetin alfa preparation that causes pain after subcutaneous injection.Am J Kidney Dis. 22(4):553-6.

Fransson J, Espander-Jansson A. Local tolerance of subcutaneous injections (1996).

Kolhe P, Amend E, Singh SK (2010). Impact of freezing on pH of buffered solutions and consequences for monoclonal antibody aggregation. Biotechnol Prog. 26(3):727- Gatlin LA ve Gatlin CAB (1999). Formulation and administration techniques to minimize injection pain and tissue damage associated with parenteral products. In Injectablo Drug Development: Techniques to Reduce Pain and Irritation (Gapta PK ve Brazeau GA eds) Interpharm Press, Denver 401-425.

Roskos LK, Davis CG ve Schwab GM (2004). The clinical pharmacology of therapeutic monoclonal antibodies. Drug Devel Res 62(3): 108-120.

Pennica D, Nedwin GE, Hayflick JS, Seeburg PH, Derynck R, Palladino MA, Kohr WJ, Aggarwal BB, Goeddel DV (1984). Human tumour necrosis factor: precursor structure, Wang W (1999). Instability, stabilization, and formulation of quuid protein pharmaceuticals. Int J Pharm 185z129-188.

Chi EY, Krishnan S, Randolph TW ve Carpenter JF (2003). Physical stability of proteins in aqueous solution: mechanism and driving forces in nonnative protein aggregation.

Vermeer AWP ve Norde W (2000). The thermal stability of immunoglobulin: Unfolding and aggregation of a multi-domain protein. Biophys J 76: 394-404.

Moore JM, Patapoff TW ve Cromwell ME (1999). Kinetics and thermodynamics of dimer formation and dissociation for a recombinant humanized monoclonal antibody to Szenczi Ai Kardos J, Medgyesi G ve Zavodszky N (2006). The effect of solvent environment on the conformation and stability of human polyclonal lgG in solution. method for monitoring galactosylation levels during recombinant antibody production by electrospray mass spectrometry with selective-ion monitoring. J Chrom A 913(1- 2):437-446.

Zheng JY, Janis LJ (2005). Influence of pH, buffer Species. and storage temperature on physicochemical stability of a humanized monoclonal antibody LA298. Int J Pharm 308246-51.

Son K, Kwon C.Stabilization of human epidermal growth factor (hEGF) in aqueous Bam NB, Randolph TW, Cleland JL (1995). Stability of protein formulations: investigation of surfactant effects by a novel EPR spectroscopic technique. Pharm Res. 12(1):2-11.

Wade AM ve Tucker HN (1998). Antioxidant characteristics of L-histidine. J Nutr Biochem 9 (6): 308-315.

Pharmaceuticals for Human Use. Quality of Biotechnological Products. Stability Testing of BiotechnologicallBioIogical Products (ICH Q5C).

Cleland JL, Powell MF ve Shire SJ (1993). The development of stablo protein formulations: A close look at protein aggregation, deamidation, and oxidation. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst 10(4): 307-377.

Carpenter JF, Kendrick BS, Chang BS, Manning MC ve Randolph TW (1999). Inhibition of stress-induced aggregation of protein therapeutics. Meth Enzymol 309: 236-255.

Remmele RL Jr, Callahan WJ, Krishnan S, Zhou L ve ark. (2006). Active dimer of Epratuzumab provides insight into the complex nature of an antibody aggregate. J Pharm Sci 95(1): 126-145.

Chelius D, Rehder DS, Bondarenko PV (2005). Identification and characterization of deamidation sites in the conserved regions of human immunoglobulin gamma 95` â '3 B Referans'formülasyonundan fark, A [alan %1 (U 1:: O :1 - D -1 n_ "1 '~'~`. -1 U>I` E L Referanâorm'ülasßnurîjan :1 fark, A [alan %] h 9 E E`- (5 d--d c› 5 c: Referans formulasyonundan fark, A [alan %1 *3 Z" "4 Referans formulasyonundan fark, A [alan %1 ~ 2` 15› Referans formülasyonundan fark, A [alan %1 1 f; _4 Referans formulasyonundan 0 fark, A [alan %1 süre, t [ay] süre, t [ay] süre, t [ay] Formülasyon Agregalar [Alan%], 55°C'de . _ ., Baslangiç 55 °C :5 0, nin 01 g 3 :1 ID 04 Baýangm 'C .& o; IIUUJ Baýangm Referans formulasyonuna goreli asi ik safsizliklar eferans ormulasyonundan fark, A [alan %1 Referans formulasyonundan fark, A [alan %] U 5.) v-4 rans'formulasyonundan' fark, A [alan %1 n i 1 G) i- ":1 -viv Referans formülasyo undan Referans ' u.' formülasyonundan fark, A Referans formulasyohundah 0 fark, A [alan %1 süre, t [ay] süre, t [ay] süre, t [ay] Formülasyon Asidik safsizliklar [Alan%], 55°C'de ampon a iizor [Alan %] A [Alan %] A g 3 9.1 5 5 Cilt) 0.: as angiç ; 'C g 2 0.1 oioos g 2 nin :: E 9.: ~ 6,3 Baslangiç Sekils4 TNFa-nötralizasyonu (%) °C 5 °C 25 °C 25 °C 55 °C (3 ay 5"C) (6 ay 5 C) (3 ay 290 (6 ay 25'”C) donma emme mekanik isil stres SS“C 80/ -30 (3ay S"C) (6 ay S“C) (3ay25`C) (6 ay 25`C) donma ('rime mekanik isil stres SS“C

Claims (6)

ISTEMLER Bir fosfat tamponu içermeyen ve asagida belirtilenlerden olusan gruptan seçilen bir farmasötik formülasyon: Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve S“C'de 3 ila 6 ay depolandiktan sonra kümelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon; Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 25°C'de 3 ila 6 ay süresince depolandiktan sonra kümelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon; Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 25°C'de 3 ila 6 ay süresince depolandiktan sonra asidik Adalimumab içerigi, %40'tan daha az olan bir sivi sulu farmasotik formülasyon; Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 55“C'de 10 dakika isil stres sartlari altinda k'umelesen Adalimumab içerigi, %5'ten daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon; Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 55°C'de 10 dakika isil stres sartlari altinda asidik Adalimumab içerigi, %40'tan daha az olan bir sivi sulu farmasötik formülasyon; ve Adalimumab ajaninin terapötik olarak etkili bir miktarini, L-histidin ve sitrat içeren bir tamponlu çözeltide ihtiva eden ve 5 ila 55'lik bir pH degeri sergileyen ve 5°C'Iik ve / veya 25C'Iik bir sicaklikta 6 ay süresince depolan diktan sonra ve /veya 55°C'de 10 dakika isil strese, -20°C ila 5°C`de dondurma-eritm e sartlarina ve / veya mekanik strese maruz kaldiktan sonra TNFoi nbtralizasyon aktivitesinin en az %80'inini koruyan bir sivi sulu farmasötik form'ulasyon; burada Adalimumab ajaninin, (3) ila (f)'nin herhangi birinin farmasötik formülasyonu içindeki konsantrasyonu, 50 mg/mL'dir ve formülasyon bir poliol ve ayrica bir polisorbat olan bir sürfaktan içerir ve burada kümelesen tür, boyuta göre ayirmali yüksek performansli likit kromatografi yoluyla (HP-SEC) ve asidik tür ise kuvvetli katyon degistirmeli (SCX) yüksek performansli likit kromatografi (SCX-HPLC) yoluyla ölçüI'L'ir.

1. Istemde tanimlanan formülasyon olup bu formülasyon, tek kullanimlik subkütanöz enjeksiyon için uygundur ve bir farmasötik kap içerisinde bulunur. 1 veya

2. Istemde tanimlanan formülasyonu içeren bir farmasötik kap olup bu kap; Önceden doldurulmus bir siringa, enjeksiyon kalemi, ampul, sise, oto-enjekt'or veya bir inf'üzyon torbasi olmakta, tercihen azotlu koruyucu bir atmosfer altinda kapatilmaktadir.

3. Istemde tanimlanan kap olup, burada Adalimumab ajaninin doz gücü, 40 mg olmaktadir.

TNFoi aktivitesinin zararli oldugu bir bozuklugun tedavisinde bir ilaç olarak kullanilmak üzere, 1 veya 2. Istemde tanimlanan formülasyon veya 3 veya 4. Istemde tanimlanan kap olup, burada TNFoi aktivitesinin zararli oldugu bozukluk; bir otoimmün veya enflamatuar bozukluktan olusan gruptan seçilir.

5. Istemde tanimlanan kullanima yönelik formülasyon veya kap olup, burada bahsedilen formülasyon, ihtiyaç halindeki bir insan hastaya, her 13-15 günde, iki haftada birlik bir doz uygulama rejiminde subk'ütanöz olarak uygulanacak sekilde tasarlanir. 5 veya

6. Istemde tanimlanan kullanima yönelik formülasyon veya kap olup, burada bahsedilen formülasyon, TNFoi 'üretimini veya aktivitesini inhibe eden bir ilave terapötik ajan ve tercihen metotreksat ile birlikte uygulanacaktir.