TARIFNAME KSANTIN OKSIDAZ INHIBITORU OLARAK AZOL BENZEN TUREVI KRISTALI [Teknik Saha] Mevcut bulus, gut, hiperürisemi, tümör liziz sendromu, üriner kalküli, hipertansiyon, dislipidemi, diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, örn., arteryosklerozis veya kalp yetmezligi, böbrek hastaliklari, örn., diyabetik nefropati, respiratuar hastaliklar, örn., kronik obstrüktif pulmoner hastaliklar, enflamatuar bagirsak hastaliklari veya otoimmün hastaliklar gibi ksantin oksidaz ile iliskili hastaliklar için bir terap'otik ajan veya bir profilaktik ajan olarak faydali yeni bir azol benzen türevinin bir kristali ile ilgilidir. [Geçmis Teknoloji] Ksaiitin oksidaz, nükleik asit metabolizmasinda hipoksantinin ksantine ve ayrica ürik aside dönüsümünü katalize eden bir enzimdir. Bir ksantin oksidaz inhibitörü, ürik asit sentezini inhibe ederek ksantin oksidazin etkisi ile iliskili kandaki ürik asit seviyesiiii düsürür. Yaiii bir ksantin oksidaz inhibitörü, hiperürisemi ve hiperüriseminin neden oldugu çesitli hastaliklarda bir terap'otik ajan olarak etkilidir. Diger taraftan uzun süreli hiperürisemi sonrasinda ürat kristalleri birikmesi sonucunun neden oldugu bir klinik durum olarak gut adiyla bilinen gut artriti ve gut tofüsü vardir. Ek olarak hiperürisemi, obezite, hipertansiyon, dislipideini ve diyabet veya metabolik sendromlar ile iliskili yasam tarzi hastaliklarinin bir faktörü olarak da önemli sayilir ve son zainanlarda hiperüriseminin, renal bozukluk, üriner kalküli ve kardiyovasküler hastaliklarin bir risk faktörü oldugu epideiniyolojik arastirmalarla netlesmistir (The Guideline Revising Com- inittee of Japanese Society of Gout and Nucleic Acid Metabolism, ed., Guideline for the management of hyperuricemia and gout, ikinci baski, Medical RevieW (2010)). Ek olarak bir ksantin oksidaz inhibitörünün, aktif oksijen türleri ile iliskili hastaliklarin, aktif oksijen türü üretilmesine karsi inhibe edici aktiviteyle tedavisinde, örnegin vasküler fonksiyonu gelistirme etkisiyle kardiyovasküler hastaliklarin tedavisinde faydali olmasi da beklenir (Circulation. 2006; 114: 2508- 2516). Allopurinol ve febuksostat, hiperürisemi için bir terapötik ajan olarak klinik olarak kullanilir ancak allopurinolün, Stevens-Johnson sendromu, toksik epidermal nekroliz, hepatik bozukluk ve renal disfonksiyon gibi bir yan etkisinin oldugu bildirilmistir (Nippon Rinsho, 2003; 61, Ek. 1: 197 - 201). Bir ksantin oksidaz inhibe edici aktiviteye sahip bir bilesik olarak ömegin bir 2-feniltiyazol türevi bildirilmistir (PTL 1 ila 3). Diger taraftan PTL 4 ve 5°te, ortasinda bir benzen halkasi olan bir ditiyazol karboksilik asit türevi bildirilir. Ayrica PTL 6 ve 7"de bir bifenil tiyazol karboksilik asit türevi de bildirilir. [Alinti Listesi] [Patent Literatürü] [PTL 1] Uluslararasi Yayin No. 92/09279 [PTL 2] Halka Açik Japon Patenti No. 2002-105067 [PTL 3] Uluslararasi Yayin No. 96/31211 [PTL 4] Uluslararasi Yayin No. 201 1/ 1 39886 [PTL 5] Uluslararasi Yayin No. 201 1/ 101867 [PTL 6] Uluslararasi Yayin No. 2010/01845 8 [PTL 7] Uluslararasi Yayin No. 2010/ 128163 [Bulusun Ozeti] [Teknik Problem] Mevcut bulusun bir hedefi, gut, hiperürisemi, tümör liziz sendromu, üriner kalküli, hipertansiyon, dislipidemi, diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, örn., arteryosklerozis veya kalp yetmezligi, böbrek hastaliklari, örn., diyabetik nefropati, respiratuar hastaliklar, örn., kronik obstrüktif pulinoner hastaliklar, enflamatuar bagirsak hastaliklari veya otoimmün hastaliklar gibi ksantin oksidaz ile iliskili hastaliklar için bir terapötik ajan veya bir profilaktik ajan olarak faydali bir yeni bilesigin bir kristalini saglamaktir. [Problemin Çözümü] Yukaridaki hedefle en kazançli çalismalarin bir sonucu olarak mevcut kasifler, 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-( lH-l ,2,3 ,4-tetrazol- l -il)feni1]- 4-meti1-l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin (bundan böyle bir bilesik (1) olarak da anilacaktir), kristallestirilebilecegini ve en az bir kristal polimorf tipi seklinde mevcut oldugunu bulmuslardir. Yani mevcut bulus, sunlari saglar. [1] Bir 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(lH-l,2,3,4-tetrazol-l-il)fenil]- 4-metil-l ,3-tiyazol-5-karb0ksilik asit kristali; [2] [l]°e göre kristal; buradaki kristal, buradaki kristal, bir kristal A formuna sahiptir; [3] [2]"ye göre kristal; buradaki kristal, kendi toz X isini kirinim Spektrumunda 29 kirinim açilari= 7.20, ll.3°, 15.9°, l7.9°, 20.8°, 22.30, 23.l°, 23.8°, 24.3›0 ve 28.6°"de karakteristik piklere sahiptir [4] [2]"ye göre kristal; burada bunun toz X isini kirinim spektrumu, Sekil l,de gösterilen bir paterne sahiptir; [5] [2]'ye göre kristal; burada bunun termogravimetri/diferansiyel termal analizdeki eksotermik piki, 232°C"dedir; [6] [1] ila [5]"ten herhangi birine göre kristal ve farmasötik açidan kabul gören bir tasiyici içeren bir farmasötik kompozisyon; [7] Bir aktif muhteviyat olarak [1] ila [5]°ten herhangi birine göre kristal içeren bir ksantin oksidaz inhibitörü; ve [8] Gut, hiperürisemi, tümör liziz sendromu, üriner kalküli, hipertansiyon, dislipidemi, diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, böbrek hastaliklari, respiratuar hastaliklar, enflamatuar bagirsak hastaliklari ve otoimmün hastaliklarin olusturdugu gruptan seçilen bir veya daha fazla hastalikta kullanim için olup, bir aktif muhteviyat olarak [1] ila [5]"ten herhangi birine göre kristal içeren bir terapötik veya profilaktik ajan. [Bulusun Avantajli Etkileri] Mevcut bulus, gut, hiperürisemi, tümör liziz sendromu, üriner kalküli, hipertansiyon, dislipidemi, diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, örn., arteryosklerozis veya kalp yetmezligi, böbrek hastaliklari, örn., diyabetik nefropati, respiratuar hastaliklar, örn., kronik obstrüktif pulmoner hastaliklar, enflamatuar bagirsak hastaliklari veya otoimmün hastaliklar gibi ksantin oksidaz ile iliskili hastaliklar için terapötik veya profilaktik ajanlar olarak faydali olan bir azol benzen türevi kristallerini saglar. Bu kristaller, farmas'otik ajan üretiminde bir aktif farmasötik muhteviyat olarak kullanilabilir. [Çizimlerin Kisa Açiklamasi] [Sekil 1] Sekil 1, kristal A formunun bir toz X isini kiriiiiin spektrumudur. [Düzeneklerin Açiklamasi] "Ksantin oksidaz", hem genis anlamda, yani hipoksantinden ksantine ve ayrica ürik aside bir oksidasyon reaksiyonunu katalize edecek bir enzim olarak hem de dar anlamda yani ayni reaksiyonu katalize eden enzimlerden biri olan oksidaz tipi bir ksantin oksidoreduktaz olarak kullanilir. Mevcut bulusta, aksi belirtilmedigi sürece, "ksantin oksidaz" toplu olarak hipoksantinin ksantiiie ve ayrica ürik aside oksidasyon reaksiyonunu katalize edeii bir enzim adiyla anilir. Bu reaksiyondan sorumlu olan ksantin oksidoreduktaz içerisinde oksidaz tipi oksidoreduktaz ve dehidrogenaz tipi oksidoreduktaz olmak üzere iki tip bulunur ve her iki tip de, mevcut bulusa ait ksantin oksidaz içerisinde yer alir. Aksi belirtilmedigi sürece "ksantin oksidaz" "ksantin oksidaz inhibe edici aktivite", "ksantin oksidaz inhibitörü" ve benzerinde de yukarida tanimlananla ayiii anlama gelir. Mevcut bulusa ait kristaller, toz X isini kiriniin spektruinlari ve/veya termo-gravimetri/diferansiyel termal analiz (TG/DTA) ve benzeri ile karakterize edilir. Bu kristallerin toz X isini kirinim (XRD) spektrumlari, karakteristik patemler sergiler ve her bir kristal, spesifik kiriiiiin açisi 26 degerlerine sahiptir. Ek olarak bu kristallerin her biri, terinogravimetri/diferansiyel termal analizde (TG/DTA) kendine özgü karakteristik termal davranisini sergiler. Mevcut bulusa ait kristal A formu, kendi toz X isini kirinim spektrumunda 29 kirinim açilari: 72°, 11.30, 15.90, l7.9°, 20.8°, 22.3°, 23.l°, 23.8°, 24.30 ve 28.6°°de karakteristik piklere sahiptir. Ek olarak inevcut bulusa ait kristal A formunun paterni, Sekil 1"deki kendi toz X isini kirinim spektruniu halindedir ve termogravimetri/diferaiisiyel termal analizde (TG/DTA) eksoterinik piki, 232°C°dedir. Kristal A formu, susuz bir kristaldir. Burada kullanildigi gibi "karakteristik pikler", her bir kristal polimorfun toz X isini kirinim spektrumunda temel olarak gözlenen pikler ve ayrica benzersiz pikler anlamina gelir. Kiriiiim açilariyla taiiimlanan mevcut bulusa ait kristaller ayrica yukarida tarif edilen karakteristik pikler olarak gözlenenlerden baska pikler de içerir. Toz X isini kirinim spektrumunda kiriniin açisi 20"nin pozisyonu ve nispi yogunlugu, ölçüm kosullarina bagli olarak biraz degisebilir ve bu yüzden 20" de biraz farklilik olsa bile bir kristal formunun kimligi, uygun sekilde bütün spektrumun paternine gönderme yapilarak taninmalidir. Bu tür hata araliginda olan kristaller de mevcut bulusa dahildir. 20 hatalari, örnegin, ± 0.50 veya ± 0.2O araliginda olabilir. Bir baska deyisle yukaridaki kirinim açilariyla tanimlanan kristaller, kiriniin açilari, ± 0.5° veya ± 0.2° hata araligiiida olanlari da kapsar. Termogravimetrik/diferansiyel termal analizde (TG/DTA) bir "eksotermik pik" ve bir "endotermik pik", bir pikin baslangiç noktasi olan sicaklik olarak tanimlanir ve ekstrapolasyonla belirlenen eksotermik ve endotermik baslangiç sicakligi anlamina gelir. TG/DTA"da "eksotermik pik" ve "endotermik pik", ölçüm kosullarina bagli olarak biraz degiskenlik gösterebilir. Örnegin hata, ±5°C veya ±2°C araliginda sayilir. Baska bit deyisle yukaridaki piklerle tanimlanan kristaller, pikleri, ± 5°C veya ± 2°C hata araliginda olaiilari da kapsar. Ayrica hem toz X isini kiriniin spektrumu hem de TG/DTA duruinunda referans bir kristal materyali, örnegin mevcut örneklerde tarif edilen yöntemle elde edilen her bir kristal için ölçülen degerler ile mevcut basvuruda açiklanan sayisal degerler arasindaki farklilik, ölçüm hatalari olarak kabul edilebilir. Yani ayni kirinim açilarina sahip ve eksotermik ve endoterinik pikleri, bu tür yöntemlerle hesaplanan hata araliginda olan kristaller, mevcut bulusa ait kristallerin kapsamina girer. 2-[4-(2,2-dimetilpr0p0ksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -i1)fenil]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karb0ksilik asidin bir kristal A formu, örnegin, asagida açiklanan sentez yöntemine göre sentezlenebilir. (buradaki Y1 ve YZ, bir ayirma grubunu teiiisil eder.) Yi ve Y2 ile temsil edilen bir ayirma grubunun 'Örnekleri arasinda bir halojen atomu, bir metansülfoniloksi grubu, bir p-tolüensülfoniloksi grubu, bir triflorometansülfoniloksi grubu ve benzeri yer alir. Reaksiyon, neopentil alkolün bir bilesik (A-l) içinde bir ayima grubu Y2 ile bir baz varliginda reaksiyona sokulinasiyla bir bilesik (A-2)°nin sentezlenmesine yönelik bir yöntemdir. Kullanilacak bazin 'Örnekleri arasinda bir inorganik tuz, örn., sodyum hidrid, sodyum hidroksid, potasyum hidroksid, lityum hidroksid, sodyum karbonat, potasyum karbonat, sezyum karbonat; bir inetal alkoksid, örn., sodyum etoksid, sodyum metoksid ve potasyum t-butoksid; ve bir organik amin, örn., trietilamin, piridin, 4-aminopiridin, N-etil-N,N-diizopropilamin (DIPEA) ve l,8-diazabisiklo[5.4.0]-7-undesen (DBU) yer alir. Reaksiyon, bilesik (A-l),e göre denk veya biraz fazla miktarda bir bazin ve bilesik (A-l)"e göre denk veya fazla miktarda neopentil alkolün, reaksiyon için eyleinsiz bir solvent içerisinde, OOC ile 140°C arasinda reaksiyona sokulinasini takiben karisima, bilesik (A-l) ilave edilmesiyle reaksiyonun genellikle 0.5 ila 16 saat süreyle ilerlemesinin saglanmasi suretiyle gerçeklestirilir. Reaksiyon tercihen nitrojen gibi bir eylemsiz gaz atmosferinde gerçeklestirilir. Burada solvent, 'Özellikle sinirli olmamakla birlikte, örnegin, aromatik hidrokarbonlari, örn., benzen, tolüen ve ksileni; eterleri, om., dietil eter, tetrahidrofuran (THF), 1,4- dioksan, 1,2-dimetoksi etan ve 1,2-dietoksi etani; halojene hidrokarbonlari, örn., diklorometan, 1,2- dikloroetan ve kloroformu; N,N-dimetilformamid (DMF); N-metilpirolidon; dimetil sülfoksid (DMSO); su; veya bunlardan olusan karisik bir solventi kapsar. Bilesik (A-4)"ün Sentezi [Kim 2] X0 0 X0 ,R I) ° 0;" v' `N OPN `ß N o-R (A-2] (A-3) (A-4) (buradaki R, 1 ila 6 karbon atoinuna sahip bir alkil grubunu temsil eder.) Sentez yöntemi, bilesik (A-2) ve (A-3),ün birlestirilinesiyle bir bilesik (A-4)"'ûn sentezlenmesine yönelik bir yönelik bir yöntemdir. Y1 ile temsil edilen bir ayirma grubunun örnekleri arasinda bir halojen atomu, bir metansülfoniloksi grubu, bir p-tolüensülfoniloksi grubu ve bir triflorometansülfoniloksi grubu yer alir. Reaksiyon, bilesik (A-2) ve (A-3),ün, bir bilesigi digerine denk veya ondan fazla miktarda kullaninak suretiyle, reaksiyon için eylemsiz bir solvent içerisinde, bir baz ve bir geçis meta] katalizörü varliginda, gerektiginde bir ligand, bir karboksilik asit ve bir monovalent veya divalent bakir tuzu ilave edilerek oda sicakligi ile bir geri akis sicakligi arasinda genellikle 0.5 saat ila 2 gün süreyle reaksiyona sokulmasi suretiyle gerçeklestirilir. Reaksiyon tercihen nitrojen gibi bir eylemsiz gaz atmosferinde gerçeklestirilir. Burada solvent, özellikle sinirli olmamakla birlikte örnegin,aromatik hidrokarbonlari, örn., benzen, tolüen ve ksileni; eterleri, öni., dietil eter, tetrahidrofuran (THF), 1,4- dioksan, 1,2- dimetoksi etan ve 1,2-dietoksi etani; halojene hidrokarbonlari, örn., diklorometan, 1,2- dikloroetan ve kloroformu; alkolleri, örn., metanol, etanol, 2-propanol ve butanolü; N,N-dimetilformamid (DMF); N- metilpirolidon; dimetil sülfoksid (DMSO); su; veya bunlardan olusan karisik bir solventi kapsar. Baz örnekleri arasinda lityum hidrid, sodyum hidrid, potaswm hidrid, sodyum hidroksid, potasyum hidroksid, sodyum karbonat, potasyum karbonat, sezyum karbonat, potasyum florid, sezyuin florid, tripotasyum fosfat, sodyum asetat ve potasyum asetat; 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkoksidin bir metal tuzu (lityum tuzu, sodyum tuzu, potasyum tuzu ve magnezyum tuzu); 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkil anyonunun bir nietal tuzu (lityuin tuzu, sodyum tuzu, potasyum tuzu ve magnezyum tuzu); tetra (1 ila 4 karbon atomuna sahip alkil) anionyum tuzu (florid, klorid ve bromid); diizopropiletilamin; tributilamin; N-metilmorfolin; diazabsikloundesen; diazabisiklooktan; ve imidazo] yer alir. Geçis metal katalizörün'ûn 'Örnekleri arasinda bakir, paladyum, kobalt, demir, rodyum, rutenyum ve iridyum yer alir. Ligand örnekleri arasinda tri(t- butil)fosfin, tri(sikloheksil)f0sfin, t-butildisikloheksilfosfin, di(t- buti1)sikloheksilfosfin ve di(t-buti1)ineti1f0sfin yer alir. Monovalent veya divalent bakir tuzu `örnekleri arasinda bakir klorid (I), bakir bromid (I), bakir iyodid (I), bakir asetat (I), bakir florid (II), bakir klorid (II), bakir bromid (II), bakir iyodid (II), bakir asetat (II), bunlarin bir hidrati ve bunlariii bir karisimi yer alir. Karboksilik asit 'ornekleri arasinda formik asit, asetik asit, propiyonik asit, n-butirik asit, izobutirik asit, pentaiioik asit, izopentanoik asit, pivalik asit ve trifloroasetik asit yer alir. Bilesik (A-5)"in Sentezi [Kim. 3] Lvo 07`IJ{:)\{5 O NWO/ (A-4) R &VODY O (buradaki R, 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkil grubunu temsil eder.) Sentez yöntemi, bilesik (A-4)'i'in bir nitro grubunun indirgenmesi suretiyle bir bilesik (A-5)"in sentezlenmesine yönelik bir yöntemdir. Reaksiyon, bilesik (A-4)"ûn, bir hidrojen gazi atmosferi altinda, reaksiyon için eylemsiz bir solvent içerisinde, bir geçis metal katalizörü varliginda, oda sicakligi ile bir geri akis sicakligi arasinda, genellikle 0.5 saat ila 2 gün süreyle reaksiyona sokulmasi suretiyle gerçeklestirilir. Burada solvent, 'ozellikle sinirli olmamakla birlikte, örnegin aromatik hidrokarbonlari, örn., benzen, tolüen ve ksileni; eterleri, örn., dietil eter, tetrahidrofuran (THF), 1,4-dioksan, 1,2- dimetoksi etan ve 1,2-dietoksi etani; halojene hidrokarbonlari, örn., diklorometan, 1,2-dikloroetan ve kloroformu; alkolleri, örn., metanol, etanol, 2-propanol ve butanoli'i; N,N-dimetilformamidi (DMF); N- metilpirolidonu; dimetil Sülfoksidi (DMSO); etil asetati; ve bunlardan olusan karisik bir solventi kapsar. Geçis metal katalizörûnün tercih edilen örnekleri arasinda paladyum-karbon, paladyum-hidroksid, paladyum karasi, platinyum-karbon, Raney nikeli ve benzeri yer alir. Bilesik (A-6)°nin Sentezi: 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(1H-l,2,3,4- tetrazol-l-i1)fenil]-4-metil-1,3-tiyazol-5-karb0ksilik asidin bir alkil esteri [Kim 4] (buradaki R ve R1 birbirinden bagimsiz olarak 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkil grubunu temsil eder.) Sentez yöntemi, bilesik (A-5)"in bir ortoformat ve bir azid bilesigi ile reaksiyona sokulmasi suretiyle bir tetrazol halkasinin sentezlenmesirie yönelik bir yöntemdir. Reaksiyon, bilesik (A-5), bir ortoformat ve bir azid bilesiginin, bilesiklerden biriiii denk veya fazla miktarda kullanmak suretiyle, reaksiyon için eylemsiz bir solvent içinde, bir asit varliginda, oda sicakligi ile bir geri akis sicakligi arasinda, genellikle 0.5 saat ila 2 gün süreyle reaksiyona sokulmasi suretiyle gerçeklestirilir. Reaksiyon tercihen nitrojen gibi bir eylemsiz gaz atmosferi altinda gerçeklestirilir. Ortoformat 'Örnekleri arasinda trimetil ortoformat ve trietil ortoformat yer alir. Ek olarak azid bilesiginin örnekleri arasinda sodyum azid ve trimetil sililazid yer alir. Kullanilacak asidin örnekleri arasinda bir organik asit, örn., formik asit ve asetik asit, bir inorganik asit, örn., hidroklorik asit ve sülfürik asit ve bir Lewis asidi, örn., indiyum triflat, itterbiyum tritlat, çinko triflat ve trikloroindiyum yer alir. Bu reaksiyonlar için kullanilacak solvent, 'ozellikle sinirli olmamakla birlikte, 'Örnegin benzeri, tolüen, diklorometan, dikloroetan, kloroform, karbon tetraklorid, dietil eter, tetrahidrofuran (THF), 1,4- dioksan, 1,2- dimetoksi etan, 1,2-dietoksi etan, N,N-dimetilformamid (DMF), N-metiplirolidon, dimetil sülfoksid (DMSO) ve bunlardan olusan karisik bir solventi kapsar ve asetik asit gibi bir asit de, bir solvent olarak kullanilabilir. Bilesik (1)"in bir kristal A formunun sentezi: 2-[4-(2,2- dimetilpropoksi)-3-(1H-1,2,3 ,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-l,3-tiyazol- -karboksilik asit [Kim.5] X/O %0 o o /\ S /\ DYS Ni/ Vûf/ "4 ' N./ ,:1 l# NÇN N orR NçN N OH (AJ) Ü) (buradaki R, 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkil grubunu temsil eder.) Bilesik (1)"in bir kristal A formu, bir bilesik (A-7)°nin bir solvent içerisinde süspanse edilmesi ve süspansiyonun, sulu bir baz çözeltisi ilave edilerek hidrolize edilmesi adimini ve reaksiyon ürününün nötralize edilmesi adimini içeren bir yöntemle üretilebilir. Ek olarak yöntem ayrica nötralize edilmis ürüne su ilave edilmesi adimini ve reaksiyon çözeltisinin karistirildigi müteakip bir adimi da içerebilir. Bilesik (A-7)'nin süspanse edilmesi için kullanilan solvent, örnegin, aromatik hidrokarbonlari, örn., benzeri, tolüenve ksileni; eterleri, örn., dietil eter, tetrahidrofuran (THF), 1,4-dioksan, 1,2- dimetoksi etan ve 1,2-dietoksi etani; halojene hidrokarbonlari, örn., diklorometan, 1,2-dikloroetan ve kloroformu; alkolleri, örn., metanol, etanol, 2-pr0panol ve butanolü; N,N-dimetilformamidi (DMF); N- metilpirolidonu; diinetil sülfoksidi (DMSO); suyu; ve bunlardan olusan karisik bir solventi kapsar. Solvent tercihen bir eter, bir alkol, su veya bunlardan olusan karisik bir solventtir. Bilesik (A-7)"de, R tercihen 1 ila 6 karbon atomuna sahip bir alkil grubu ve daha fazla tercihen bir etil grubudur. Burada bir alkil grubu, bir lineer veya dalli alifatik doymus hidrokarbon grubu olarak anilir. 1 ila 6 karbon atoinuna sahip bir alkil grubunun spesifik örnekleri arasinda bir metil grubu, bir etil grubu, bir propil grubu, bir izopropil grubu, bir butil grubu, bir izobutil grubu, bir tert-butil grubu, bir pentil grubu, bir izopentil grubu ve bir heksil grubu yer alir. Bilesik (A-7)"den bilesik (1)"e hidroliz reaksiyonu, bilesik (A-7)°nin solvent (örnegin bilesik (A-7) miktarinin 15 kati miktarda) içinde süspanse edilmesi ve sonra bilesik (A-7)°nin, bilesik (A-7)›ye göre denk veya biraz fazla miktarda bir baz ile reaksiyona sokulmasi suretiyle ilerler. Tercih edilen bazlarin 'Örnekleri arasinda sodyum hidroksid, potasyum hidrid ve lityum hidroksid yer alir. Reaksiyon, O°C ile 100°C araliginda ilerler ancak tercihen 20°C ile 30°C araliginda gerçeklestirilir. Hidroliz reaksiyonundan sonra reaksiyon ürünü, kullanilan bazin, kullanilan baza göre denk veya biraz daha fazla miktarda bir asit ile reaksiyona sokulmasiyla nötralize edilir. Tercih edilen bir asidin bir örnegi, hidroklorik asidi kapsar. Nötralizasyon reaksiyonu, 0°C ile 100°C araliginda ilerler ancak tercihen O°C ila 3OOC araliginda gerçeklestirilir. Müteakiben nötralize edilmis reaksiyon ürününe, su (örnegin bilesik (A-7) miktarinin 5 kati miktarda) ilave edilir ve karisim, bir saat süreyle karistirilir ve sonra çökelti, filtre edilerek çikarilir ve kurutularak kristaller elde edilir. Her ne kadar solvent miktari, ilave edilen su miktari, karistirma kosullari ve filtreleme yoluyla ayirmaya kadar olan süre 'Özellikle sinirli olmasa da, bu kosullar, kristallerin verimi, kimyasal saflik, partiküllerin çapi ve partikül büyüklük dagilimi üzerinde etkili olabileceginden bu kosullar tercihen birlestirilir ve amaca göre ayarlanir. Filtreleme için genel bir yöntem, örnegin dogal filtreleme, basinçli filtreleme, vakumlu filtreleme veya santrifujle ayirma kullanilabilir. Kurutma için genel bir yöntem, ömegin dogal kurutma, vakumlu kurutma, isitarak kurutma ve vakumlu isitarak kurutma kullanilabilir. Reaksiyonun ara bilesigi, sentez prosesi sirasiiida gerekirse yeniden kristallestirme, yeniden çökeltme ve çesitli kroinatografi yöntemleri gibi genel bir yöntemle saflastirilabilir. Her ne kadar mevcut bulusa ait kristaller, bir karakteristik toz X isini kiriniin spektruinu veya termogravimetrik/diferansiyel termal analiz (TG/DTA) yoluyla taniinlanabilse de diger kristal formlari mevcut oldugunda bunlari dahil etme oranina gönderme yapilinaz. Sadece spesifik forinda bir kristal elde edildigi durumda en azindan diger kristal formlarin dahli, bu ölçüm yöntemleriyle saptanamayacak bir dereceye kadar kabul edilebilir. Ek olarak spesifik formda bir kristalin bir farmasötik ajan için bir aktif farmasötik muhteviyat olarak kullanildigi durumda bu, diger kristal formlarinin dahlinin kabul edileineyecegi anlainina gelmez. Mevcut bulusa ait kristaller, bir farmasötik aktif muhteviyat olarak kullanilabilir. Ek olarak diger kristal forinlarinin mevcut oldugu duruinda sadece bir kristal formu degil iki veya daha fazla kristal formundan olusan bir karisim da kullanilabilir. Mevcut bulusta, üretim sirasinda ellenebilirlik, yeniden üretilebilirlik, stabilite ve depolamada stabilite, 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-( lH-l ,2,3 ,4-tetrazol- l -il)fenil]- 4-metil-l,3-tiyazol-5-karboksilik asit kristalleri elde edilmesiyle kristal olmayanlara kiyasla avantajli hale getirilir. Bir farinasötik kompozisyon, mevcut bulusa ait kristaller ve farmasötik açidan kabul gören bir tasiyici kullanilarak elde edilebilir. Mevcut bulusa ait kristaller içeren bir preparasyon, genellikle formülasyon için kullanilan katki maddeleri kullanilarak hazirlanir. Bir kati preparasyon için katki maddeleri örnekleri arasinda bir eksipiyan, örn., laktoz, sakaroz, glukoz, inisir nisastasi, beyaz patates nisastasi, kristal selüloz, hafif susuz silisik asit, sentetik alüminyum silikat, magnezyum alüminosilikat ve kalsiyum hidrojen fosfat; bir baglayici, örn., kristal selüloz, karboksimetil selüloz, hidroksipropil selüloz, karboksimetilselüloz sodyum ve polivinil pirolidon; bir ayristirici, örn., nisasta, karboksimetilselüloz sodyum, karboksimetilselüloz kalsiyum, kroskarmeloz sodyum ve sodyum karboksi metil nisastasi; bir yaglayici, örn., talk ve stearik asit; bir kaplama ajani, örn., hidroksimetilprOpilselüloz, hidroksipropilkinetilSelüloz fitalat ve etilselüloz; veya bir renklendirici ajan yer alir; bir yari kati preparasyon için katki maddeleri arasinda bir baz, Örn., beyaz vazelin yer alir ve bir sivi preparasyon için katki maddeleri arasinda bir solvent, öm., etanol; bir çözünürlestirici ajan, örn., etanol; bir prezervatif, örn., parahidroksibenzoat; bir tonisite ajani, örn., glukoz; bir tamponlama ajani, örn., sitrik asit; bir antioksidan, örn., L-askorbik asit; bir kiskaçlama ajani, örn., EDTA; ve bir süspanse edici ajan ve bir ein'ülsife edici ajan, örn., polisorbat 80 yer alir. Mevcut bulusa ait kristaller, bir kati preparasyon, bir yari kati preparasyon ve bir sivi preparasyon gibi herhangi bir dozaj formunda kullanilabilir ve herhangi bir uygulama formu. için bir preparasyon, örn., bir oral preparasyon ve bir parenteral preparasyon (örn., bir enjeksiyon preparasyonu, bir perk'ûtan preparasyon, bir oftalinik preparasyon, bir fitil preparasyonu, bir transnaza] preparasyon ve bir inhalasyon preparasyonu) halinde kullanilabilir. Bir aktif muhteviyat olarak mevcut bulusa ait kristaller içeren bir farmasötik kompozisyon, bir ksantin oksidaz inhibitör'u olarak veya ksantin oksidaz ile baglantili hastaliklar, öm., gut, hiperürisemi, tümör liziz sendromu, üriner kalküli, hipertansiyon, dislipideini, diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, örn., arteryel sklerozis ve kalp yetmezligi, böbrek hastaliklari, örn., diyabetik nefropati, respiratuar hastaliklar, örn., kronik obstrüktif pulmoner hastalik, enflamatuar bagirsak hastaliklari veya otoimmün hastaliklar için bir terapötik ajan veya bir profilaktik ajan olarak kullanilabilir. Burada "profilaktik" terimi, hastaliklardan etkilenmemis veya henüz hastaliklari gelistirmemis bir kiside hastaliklarin meydana gelmesinin veya baslamasinin engellenmesi anlamina gelir ve "terap'otik" terimi, hastaliklardan etkilenmis veya hastaliklari gelistirmis olan bir kiside hastaliklarin veya semptomlarin tedavi edilmesi, baskilanmasi veya iyilestirilmesi anlamina gelir. [Örnekler] [Olçüm Yöntemi] Mevcut bulusa ait kristallerin toz X isini kirinimi, su kosullar altinda ölçüldü Aparat: Bruker AXS tarafindan üretilen GADDS C S°li D8 DISCOVER Radyasyon kaynagi: Cu KOL, Dalga boyu: 1.541838 (lO'lOm), 40 kV-4O niA, gelen düz plaka grafit monokromatörü kolimatör çapi 300 um, iki boyutlu PSPC detekt'orü, tarama 3 ila 40° Mevcut bulusa ait kristallerin termogravimetrik/diferansiyel termal analizi (TG/DTA), su kosullar altinda ölçüldü. Aparat: Rigaku tarafindan üretilen TG8120 Sicaklik yükselme orani: °C/dak, Atmosfer: nitrojen, Ornek kabi: alüminyum, Referans: alümina, Ornekleme: 1.0 sn., Olçüm sicakligi araligi: 25 ila 300°C lH-NMR spektrumu (400 MHZ, DMSO-d6 veya CDCl3) ölçülmüs olan bilesiklere iliskin olarak kimyasal kayma (ö: ppm) ve birlestirme sabiti (J: Hz) gösterilir. Aparat: JEOL tarafindan üretilen JMTC-400/54/ SS Kisaltmalar, sunlari temsil eder: s=tekli, d=ikili, t=üçlü, q=dörtlü, brs=genis tekli, m=çoklu [Referans Örnegi 1] Etil 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(lH-1,2,3,4-tetrazol-l-il)feni1]-4- metil-l ,3-tiyazol-5 -karboksilatin üretimi (1) 1.06 g ne0pentil alkolün 40.0 inL tolüen içerisinde SÜSpanse edilmesiyle hazirlanmis bir karisim, bir nitrojen atmosferi altinda O°C°ye kadar sogutuldu ve 1.35 g t-butoksisodyum ilave edildi ve elde edilen karisimi, OOC'de 30 dakika süreyle karistirildi. Ardindan 0°C"de yukaridaki karisima 2.20 g 4-bromo-l-floro-2-nitrobenzen ilave edildikten sonra elde edilen reaksiyon karisimi, oda sicakligiiia kadar ilitildi ve oda sicakliginda 2 saat süreyle karistirildi. Reaksiyon karisimi çözeltisine su ilave edildikten sonra etil asetat kullanilarak 'Özümleme yapildi. Organik katman, bir tuz çözeltisi ile yikandiktan sonra indirgenmis basinç altinda kurutma ve konsantrasyon yapilarak 3.12 g 4-br0mo-l -(2,2-dimetilpropoksi)-2-nitrobeiizen elde edildi. (2) 4.18 g 4-bromo-l-(2,2-dimetilpropoksi)-2-nitrobenzene 3.04 g potasyum bikarbonat, 63 mg paladyum klorid (II) ve 297 mg bakir bromid (I) ilave edilerek ve karisiinin 45 mL tolüen içerisinde süspanse edilmesiyle bir süspansiyon hazirlandi. Ardindan süspansiyona 2.97 g etil 4-metil-1,3-tiyazol-5-karboksilat, 133 "L izobutirik asit ve 333 uL di-t-butilsikloheksilfosfin ilave edilerek hazirlanmis olan bir reaksiyon karisiini çözeltisi, bir nitro jen atmosferi altinda 120°C'de 14 saat süreyle isitildi. Reaksiyon karisimi çözeltisi, celite ile filtre edilerek çözülmeyen madde çikarildi; filtrata su ilave edildi ve etil asetat kullanilarak özümleme yapildi. Organik katman, bir tuz çözeltisi ile yikandi ve sonra indirgenmis basinç altinda kurutma ve konsantrasyona tabi tutuldu, ardindan klasik bir yöntemle saflastirilarak 5.13 g etil 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-nitrofenil]-4- metil-l ,3-tiyazol-5 -karboksilat elde edildi. 1H-NMR(400Mz,CDCl3) Özl.08(9H, s), 1.39(3H, t, 1 = 6.8Hz), 2.77(3H, s), 3.79(2H, s), 4.36(2H, q, J = 6.8Hz), 7.12(1H, (1, J = 8.8Hz), 8.10(1H, dd, J = 2.0, 8.8Hz), 8.45 (lH, d, J = 2.0Hz) (3) Bir reaksiyon çözeltisi, 5.13 g etil 2-[4-(2,2-dimetilprOpoksi)-3- nitrofenil]-4-meti1-l,3-tiyazol-S-karboksilatin 50 mL etanol içerisinde süspanse edilmesi ve süspansiyona, 500 mg paladyum/karbon (%10 wt) ilave edilmesiyle hazirlandi ve reaksiyon karisimi, bir hidrojen atmosferi altinda 50°C"de 20 saat süreyle karistirildi. Reaksiyon karisimi çözeltisi filtre edildi ve filtrat, indirgenmis basinç altinda konsantre edilerek 4.66 g etil 2-[3- amino-4-(2,2- dimetilpropoksi)fenil]-4-meti1-1,3-tiyazol-5-karboksilat elde edildi. (4) 2.58 g etil 2-[3-amino-4-(2,2-dimetilpr0p0ksi)feni1]-4-meti1- 1,3-tiyazol-S-karboksilatin 30 mL asetik asit içinde süspanse edilmesi Ve 962 mg sodyum azid ve 2.19 g trietil ortoformat ilave edilmesiyle hazirlanmis bir reaksiyon karisimi çözeltisi, bir nitrojen atmosferi altinda 70°C"de 2 saat süreyle isitildi. Reaksiyon karisimi oda sicakligina kadar sogutulduktan sonra 20 mL su ilave edildi, ardindan klasik bir yöntemle saflastirilarak 2.78 g etil 2-[4-(2,2- dimetilpropoksi)-3-( 1 H- 1 ,2,3 ,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil-l ,3-tiyazol- -karboksilat elde edildi. 1H-NMR(4OOMz,CDCl3) ö:l.00(9H, s), 1.39(3H, t, J = 6.8Hz), 2.78(3H, s), 3.82(2H, s), 4.36(2H, q, J = 6.8Hz), 7.18(1H, d, J = 8.8Hz), 8.08(1H, dd, J = 2.4, 8.8Hz), 8.42(1H, (1, J = 2.4Hz), 9.19(lH, S) [Örnek 1] 2-[4-(2,2-dimetilprop0ksi)-3 -( 1 H- 1 ,2,3 ,4-tetrazol-1-ilfenil]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin bir kristal A formunun üretimi 2.58 g etil 2-[4-(2,2-dimetilpr0poksi)-3-(1H-l,2,3,4- tetrazol-l- il)fenil]-4-metil-l ,3 -tiyazol-S-karboksilatin 30.0 L"1ik tetrahidrofuran/metanolîl/l'den olusan karisik bir çözelti içerisinde çözünd'ûr'ûlmesini takiben 6.50 mL 2 M sodyum hidroksid sulu çözeltisi ilave edilmesi suretiyle hazirlanmis olan bir reaksiyon karisimi çözeltisi, 20°C ile 30°C araliginda 3 saat süreyle karistirildi. °C ile 30°C araliginda karistirilirken reaksiyon karisimi çözeltisine, 6.50 mL 2 M hidroklorik asit yavas yavas ilave edildi ve ayrica 17.0 mL su da yavas yavas eklendi, Reaksiyoii karisimi çözeltisi, 20°C ile °C araliginda bir saat süreyle karistirildi ve filtreleme yapilarak kristaller elde edildi. Elde edilen kristaller, 7.0 mL"lik metanol/suîl/ 1 "den olusan karisik bir çözelti ve 7.0 mL su ile yikandi. Kristaller, 50°C°de vakumla kurutularak 2.25 g 2-[4-(2,2- dimetilpropoksi)-3-( 1 H- 1 ,2,3 ,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-l ,3-tiyazol- -karboksilik asit kristalleri elde edildi. Elde edilen kristallerin XRD°si, Sekil lsde gösterilmistir. Pikler, 26 kirinim açilari: 72°, ll.3°, 15.9°, 17.90, 20.80, 22.3°, 23.10, 23.80, 24.3° ve 28.6°°de gözlendi. Ek olarak termogravimetri/diferansiyel termal analizde (TG/DTA) bir eksotermik pik de, 232°C"de gözlendi. 'H-NMR(4OOMZ,DMSO-d6) ö;0.83(9H, s), 2.66(3H, s), 3.83(2H, s), 7.47(lH, (1, J = 8.8Hz), 8.18(1H, dd, J = 24, 8.8Hz), 8.27(1H, (1, J = 2.0Hz), 9.78(1H, s), 13.40(1H, s) [Referans Ornek 2] 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- l,3-tiyaz01-5-karboksilik asidin üretimi 307 mg etil 2-[4-(2,2-dimetilprop0ksi)-3-(lH-l,2,3,4- tetrazol-l- il)fenil]-4-metil-l ,3 -tiyazol-S-karboksilatin 8.0 mL"lik tetrahidrofuran/metanolîl/l'den olusan karisik bir çözelti içerisinde çözündürûlmesini takiben 1.0 mL 2 M sodyum hidroksid sulu. çözeltisi ilave edilmesi suretiyle hazirlanmis olan bir reaksiyon karisimi çözeltisi, oda sicakliginda 3 saat süreyle karistirildi. Reaksiyon karisimi çözeltisine 1.0 mL 2 M hidroklorik asit ilave edildikteii sonra 6.0 mL su katildi ve ardindan klasik bir yöntemle saflastirnia yapilarak 244 mg of 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(lH-l,2,3,4-tetrazol-l- il)fenil]-4-metil-l ,3-tiyazol-5-karb0ksilik asit elde edildi. 'H-NMR(DMSO-d6) ö:0.83(9H, s), 2.66(3H, s), 3.83(2H, s), 7.47(1H, (1, J : 8.8Hz), 8.18(1H, dd, J : 2.4, 8.8Hz), 8.27(1H, (1, J : 2.0Hz), 9.78(1 H, 5), 13.40(1H, 5) [Referans Örnek 3] Ksantan oksidaz inhibe edici aktivitenin ölçümü (1) Test Bilesiginin Preparasyonu 2-[4-(2,2-dimetilprop0ksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- 1,3-tiyazol-5-karboksilik asidin DMSO (Sigma Corporation tarafindan üretilmistir) içerisinde çözündürülmesinden ve böylelikle konsantrasyonun 20 mM olmasindan sonra çözelti, konsantrasyonun, kullanini sirasindaki amaç için arzu edilen bir degere ayarlanmasi suretiyle kullanildi. (2) Olçüm Yöntemi 2-[4-(2,2-dimetilprop0ksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- 1,3-tiyazol-5-karboksilik asidin ksantin oksidaz inhibe edici aktivitesiiiin degerlendirmesi, kismi modifikasyonla referansta (Enzimatik Analiz Metodu, 1, 521-522, 1974) tarif edilen yöntemle yapildi. Bu degerlendirme, oksidaz tipi ksantin oksidoreduktaz aktivitesinin ölçülmesi suretiyle yapildi. Asikar sekilde bir ksantin (Sigma Co. tarafindan üretilen) çözeltisi, 20 mM°lik bir sodyum hidroksid çözeltisi kullanilarak 10 mM"de hazirlandi ve sonra 100 mM fosfat tamponu ile karistirilarak 30 uM°ye ayarlandi. Çözeltinin 75 uL°si, 96 oyuklu plakaniii her bir oyuguna ilave edildi. DMSO ile nihai konsantrasyonun 100 kati seyreltilmis test bilesigi, her bir oyuga, oyuk basina 1.5 uL olacak sekilde ilave edildi. Plakanin karistirilmasindan sonra 290 nm"de absorbans, bir mikroplaka okuyucu SPECTRA MAX Plus 384 (Molecular Devices, LLC tarafindan üretilen) ile ölçüldü. Müteakiben oksidaz tipi ksantin oksidoreduktaz (yayik ayranindan, Calbiochein Novabiochem Corp. Tarafindan üretilen), 100 mM"lik bir fosfat tainponu çözeltisi kullanilarak 30.6 mU/mIJde hazirlandi ve her bir oyuga, oyuk basina 73.5 uL olacak sekilde ilave edildi. Karistirildiktan heinen sonra 290 nm"de absorbanstaki degisiklik, 5 dakika süreyle ölçüldü. Test bilesigi içermeyen DMSO çözeltisinin enzim aktivitesi, %100 kontrol olarak kullanildi ve test bilesiginin inhibe edici orani hesaplandi. Test bilesiginin oksidaz tipi ksantin oksidoreduktaz aktivitesi üzerindeki yüzde elli inhibe edici konsantrasyonu, doz-tepki egrisine oturtularak hesaplandi. 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-( 1 H- 1 ,2,3,4-tetrazol- 1 -il)fenil]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin ksantin oksidaz inhibe edici aktivitesi, 1.0 nM S IC50 5 5.0 nM idi. [Referans Ornek 4] Hipoürisemik etki (Normal Siçanlar) Hipoürisemik etki, 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- 1-il)fenil]-4-meti1-1,3-tiyazol-5-karboksilik asit için dogrulandi. %0.5°Lik bir metilselüloz çözeltisi içerisinde süspanse edilmis bir test bilesigi, 8 ila 9 haftalik Sprague-Dawley erkek siçanlarina (Japan Charles River Co.) bir besleme ignesi kullanilarak oral gavaj uygulamasiyla zorla uygulandi. Uygulamadan sonraki 2nci saatte kuyruk veninden kan alindiktan sonra plazma ayrildi. Kan örnegi içerisindeki ürik asit düzeyi, ürikaz yöntemiyle, bir absorpsiyon spektrometresi ve ayrica bir ürik asit belirleme kiti (L tipi Wako UA F: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) kullanilarak ölçüldü. Hipoürisemik etki yüzdesi, su ifadeyle belirlendi: Hiperürisemik etki yüzdesi (%): (kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi - test bilesigi uygulanmis hayvanin ürik asit düzeyi) X IOO/kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi 2-[4-(2,2-dimetilprop0ksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- 1,3-tiyazol-5-karboksilik asidin hem 10 mg/kg hem de 1 mg/kg°lik dozlarda hipoürisemik etkisi, %50 veya daha fazla idi.. Yukaridaki sonuçlardan, 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(l H-l ,2,3,4- tetrazol-l-il)fenil]-4-metil-l,3-tiyazol-5-karb0ksilik asidin, güçlü bir hipoüriseinik etkiye sahip oldugu gösterildi. [Ornek 5] Uzun Süreli hipoürisemik etki (Normal Siçanlar) 2-[4-(2,2-diinetilpropoksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karboksilik asit, Sprague-Dawley erkek siçanlarina, Referans Ornek 43tekiyle ayni sekilde uygulandi. Uygulainadan 24 saat sonra kuyruk veninden kan alindiktan sonra plazma ayrildi. Kan içerisindeki ürik asit düzeyi, ürikaz yöntemiyle, bir absorpsiyon spektrometresi ve ayrica bir ürik asit belirleme kiti (L tipi Wako UA F: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) kullanilarak ölçüldü. Hipoürisemik etki yüzdesi, su ifadeyle belirlendi: Hiperürisemik etki yüzdesi (%)= (kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi - test bilesigi uygulanmis hayvanin ürik asit düzeyi) x lOO/kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -i1)feni1]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin uygulamadan sonraki 24üncü saatte mg/kg°lik bir dozda hipoürisemik etkisi, %50 veya daha fazla ve 3 mg/kg"lik bir dozda %40 veya daha fazla idi. Yukaridaki sonuçlardan, 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-( 1 H- 1 ,2,3,4- tetrazol-l-i1)fenil]-4-meti1-l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin, uzun bir zaman periyodu boyunca uzun süreli bir hipoürisemik etkiye sahip oldugu gösterildi. [Referans Örnek 6] Hipoürisemik etki (Hiperürisemik beagle köpekler) Oksonik asitle indüklenmis hiperürisemik beagle köpekte, 2-[4-(2,2- dimetilpropoksi)-3-( 1 H- 1 ,2,3,4-tetrazol- 1 -il)feni1]-4-meti1-l ,3-tiyazol- -karb0ksilik asidin hipoürisemik etkisi dogrulandi. %0.5°Lik bir metilselüloz çözeltisi içinde süspanse edilmis bir test bilesigi, beagle köpege (Kitayama labes), oral gavaj uygulamasiyla uygulandi. Bilesik uygulanmadan önce ve uygulandiktan 4 saat sonra subkütan yoldan potasyum Oksonat (50 mg/kg) uygulandi. Uygulamadan sonraki 8inci saatte sefalik venden kan alindiktan sonra plazma ayrildi. Plazma örnegi içerisindeki ürik asit düzeyi, LC-MS/MS yöntemiyle ölçüldü ve hipoürisemik etki yüzdesi, su ifadeyle belirlendi: Hipoürisemik etki yüzdesi (%)= (Kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi - test bilesigi uygulanmis hayvanin ürik asit düzeyi) X lOO/Kontrol hayvaninin ürik asit düzeyi 2-[4-(2,2-dimetilpropoksi)-3-(l H- 1 ,2,3,4-tetrazol- l -il)fenil]-4-metil- l,3-tiyazol-5-karboksilik asidin uygulamadan sonraki 8inci saatte 10 mg/kg'lik bir dozda hipoürisemik etkisi, %80 veya daha fazla idi.. Yukaridaki sonuçlardan, mevcut bulusa ait bilesiklerin, beagle köpekte güçlü bir hipoürisemik etkiye sahip oldugu gösterilldi. TR TR TR TR TR TR TR