TARIFNAME NEVRALJI, AGRI, KOAH ( KRONIK, OBSTRUKTIF AKCIGER HASTALIGI) VE ASTIM TEDAVISINDE TRPM8-INHIBITÖRLERI OLARAK YARARLI 2-ARIL-4- Bulusun Kisa Açiklamasi Bu bulus ayrica Soguk Mentol Reseptörü 1 (CMR-l) olarak bilinen Geçis Reseptörü Potansiyeli katyon kanali alt-familyasi M üyesi 8"in (bundan sonra TRPMS) aktivitesiyle iliskili hastaliklarin önlenmesi, riskinin azaltilmasi, iyilestirilmesi ve/veya tedavisi için, ve özellikle kasinma, irritabl bagirsak hastaliklari, soguga bagli ve/veya siddetlenmis solunum rahatsizliklari, iskemi, agri, nörodejenerasyon, psikiyatrik rahatsizliklar, inme ve ürolojik rahatsizliklarin önlenmesi, riskinin azaltilmasi, iyilestirilmesi ve/veya tedavisi için yararli olan 2-aril-4-hidr0ksi-1,3-tiyazol türevlerine iliskindir. Bulus ayrica yukaridaki bilesikleri içeren farmasötik bilesimlere iliskindir. Bulusla ilgili bilinen hususlar Geçis Reseptörü Potansiyeli (TRP) kanallari, iyon kanallarinin en büyük grubundan biridir ve, bunlarin dizi homolojisi baz alinarak, 6 alt-familyaya (TRPV, TRPM; TRPA, TRPC, TRPP ve TRPML) klasifiye edilebilir. TRP kanallari, çesitli fiziksel (örnegin sicaklik, ozmolarite ve mekanik uyarici) ve kimyasal uyariciyla aktive edilen katyon-seçici kanallaridir. 2002,& klonlanan TRPM8, duyusal sinir sönümlemesine neden olan dorsal kök gangliyonu ve trigeminal gangliya üzerinde somatik duyusal sinirlerin bir alt-popülasyonu üzerinde eksprese edilen TRP familyasinin bir seçici olmayan katyon kanalidir. Bu, hafif soguk derecelerde ve sentetik serin-mimetik bilesiklerle, örnegin mentol, ökaliptol ve isilinle depolarize transmembran potansiyelinde bir kuvvetli disa rektifikasyonla ve negatif membran potansiyellerinde bir hizli ve potansiyele bagli kapamayla karakterize edilir. Sogutucu maddeler ve mentol uygulamasi, aktivasyon egrisini daha negatif potansiyellere kaydirir, bu da kanalin açilmasi ve fizyolojik membran potansiyellerinde içe dogru akimlarin büyütülmesi için olasiligi arttirir. Diger endojen faktörler, Örnegin fosfolipaz A2 ürünleri [Vanden Abeele Agri, iskemi ve kasinti, irritabl bagirsak hastaliklari, soguga bagli ve/veya siddetli solunum rahatsizliklari gibi hastaliklarda TRPM8 kanal aktivitesinin önemli bir rolünün birçok dogrudan ve dolayli kaniti söz konusudur. Ayrica, TRP kanallarinin, hasarli veya anormal spinal refleks yollariyla hastalarin asiri aktifmesanesiyle ilgili olan refleks sinyallerini TRPM8, 8°C ve 28°C arasinda sicakliklarla aktive edilir ve mesane ürotelyum, dorsal kök gangliya, A-delta ve C-lifler dahil olmak üzere primer nosiseptif nöronlar üzerinde eksprese edilir. Intravezikal buzlu su veya mentol ayrica aciliyeti ve üriner inkontinansi olan hastalarda C-lif aracili spinal miktürisyon refleksini baslatir [Everaerts W. ve digerleri, Bundan baska, TRPM87in soguk sicaklik veya fannakolojik uyariciya yanit olarak Ca2+ konsantrasyonunun içeri akmasini regüle ettigi bilinmektedir. Son olarak, yakin tarihli bir makalede, soguga bagli astim ve astim siddetlenmesinde TRPM8`in potansiyel rolü ileri sürülmüstür, bu, TRPM8iin ayrica bu patolojilerin idare edilmesi için ilgili bir hedef oldugunu önermektedir [Xing H. ve digerleri, Molecular Pain (2008), 4, 22-30]. Beyin, akciger, mesane, mide bagirsak yolu, kan damarlari, prostat ve immün hücrelerde kanalin ekspresyonu, genis bir aralikta patolojilerde TRPM83in aktivitesinin terapötik modülasyonu için baska olasilik sunar. Özellikle, TRPM8sin modülasyonuyla etkilendigi kanitlanmis olan rahatsizliklar veya hastaliklar soguk allodini ve diyabetik nöropati, ameliyat sonrasi agri, osteoartritik agri, romatoid artritik agri, kanser agrisi, nevralji, nöropatiler, aljezi, fibromiyalji, sinir hasari, migren, basagrilari dahil olmak üzere kronik agri, nöropatik agri gibi agri; iskemi, nörodejenerasyon, inme, anksiyete ve depresyon dahil olmak üzere psikiyatrik rahatsizliklar, ve kasinti, irritabl bagirsak hastaliklari, soguga bagli ve/veya siddetli pulmoner hipertansiyon, astim ve COPD gibi soguga bagli ve/veya siddetli solunum rahatsizliklari; agrili mesane sendromu, interstisyal sistit, detrusor asiri aktivitesi (asiri aktif mesane), üriner inkontinans, nörojenik detrusor asiri aktivitesi (detrusor hiperfleksi), idiyopatik detrusor asiri aktivitesi (detrusor instabilitesi), selim prostatik hiperplazi, alt üriner yol rahatsizliklari ve alt üriner yol semptomlari gibi ürolojik rahatsizliklardir [Nilius B. ve Son birkaç yil boyunca, peptid olmayan TRPMS antagonistlerin çesitli siniIlari açiklanmistir. TRPM8 ile iliskili hastaliklarin tedavisi için sülfonamidler açiklanmaktadir; WO TRPM8 modülatörleri olarak spirosiklik piperidin türevlerinin kullanimi açiklanmaktadir; türevleri ve bunlarin enflamatuar, agri ve ürolojik rahatsizliklarin tedavisinde kullanimi oksazol ve tiyazol türevleri ve bunlarin ürolojiyle ilgili rahatsizliklarin önlenmesi, riskinin azaltilmasi, iyilestirilmesi ve/veya tedavisi açiklanmaktadir. TRPM8,in antagonistlerinin gelisimi için halen özellikle yüksek bir ihtiyacin oldugu terapötik bir alan, ürolojik rahatsizliklara ve iliskili agriya ait alandir. Aslinda, üriner inkontinans ve rahatsizliklarin tedavisi için halihazirda mevcut geleneksel ilaçlar ve tibbi ilaçlar, çesitli yan etkilerle karakterize edilir. Örnegin, su anda, asiri aktif mesane sendromunun terapisi, ilaçlarin, özellikle periferal nöral kontrol mekanizmalari veya mesane detrusor düz kas kontraksiyonunu etkileyen antikolinerjik maddelerin kullanimini baz alir. Bu ilaçlar, mesane kasi üzerinde bir direkt spazmolitik etki ortaya koyan parasempatetik sinirleri inhibe eder. Bu etkinin sonucu, intraveziküler basincin azalmasi, kapasitede bir artis ve mesane kontraksiyonunun frekansinda bir azalmadir. Ancak, antikolinerjik maddelerin kullanimi, genel hasta uyumlulugunu bozan kuru agiz, anormal vizyonlar, konstipasyon ve CNS bozukluklari gibi ciddi yan etkilerle iliskilidir. Simdiki terapilerin yetersizlikleri, daha az yan etkilerle yeni, etkili ve güvenli ilaçlar için ihtiyacin altini çizmektedir. Bulusun özeti Bu bulusun amaci, bu spesifik reseptör için yüksek seçicilikle TRPM8'in yeni antagonistleri ve terapide kullanim için yeterli bir farmakokinetik profili saglamaktir. Halihazirdaki bulus sahipleri simdi iyi oral biyoyararlanimla uygun ve yukaridaki eksikleri tatmin eden Geçis Reseptörü Potansiyeli katyon kanali alt-ailesi M üyesi 8,in seçici antagonistleri (bundan sonra TRPM8 olarak atiita bulunulmaktadir) olarak hareket eden 2- aril-4-hidr0ksi-1,3-tiyazol bilesiklerinin bir sinifini tespit etmislerdir. Bu bilesikler TRPM8"in aktivitesiyle iliskili olan bir hastaligin, tercihen TRPM8 reseptörün asiri ekspresyon ve/veya hiperaktivitesinden kaynaklanan bir hastaligin tedavisinde yararlidir. Sekillerin detavli açiklamasi Sekil 1 ve 2 örnek 477de açiklanan testte elde edilen tipik bir yanitla bir grafigi gösterir. Sekil 1 "taklit, siçanlara (Sham) ve vehikülü (vehikül) alan siçanlara karsi, ligasyonu takiben gün 7 (F ig la) ve l4`de (F ig lb) bilesik 2 (DF L23693os) ile uygulanan siçanlarda mekanik Sekil 2 "taklit, siçanlara (Sham) ve vehikülü (vehikül) alan siçanlara karsi, gün 7 (Fig Za) ve Her iki Sekilde, Dunnett testinin takip ettigi iki yollu ANOVA7yla ölçüldügü gibi vehiküle anlamindadir. Bulusun detayli açiklamasi Bu bulusun bir birinci amaci, bir tibbi ilaç olarak kullanim için formül (1)"e sahip bilesikler ve bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilen tuzlaridir: X oksijen, kükürt, NH, NOH, veya NOMesdir; R aril ve heteroarilden seçilen bir gruptur, o hidrojen, o halojen, ° C173, o dogrusal veya dallanmis Ci-C6 alkil, . NR6R7,den seçilen bir veya daha fazla sübstitüentle istege bagli olarak sübstitüe edilir, burada R5, R6 ve R7 bagimsiz olarak hidrojen veya dogrusal veya dallanmis C1-C6 alkildir; R1 asagidakilerden seçilen bir gruptur, dogrusal veya dallanmis C1-C6 alkil, o (CH2)m-OR2, burada m 1 ve 3 arasinda bir tam sayidir ve R2 hidrojen ve dogrusal C1- C3 alkilden seçilir, o C3-C6 sikloalkil, ve o N(R3)OR4, burada R3 ve R4 bagimsiz olarak hidrojen veya dogrusal veya dallanmis C1-C3 alkildir. Söz konusu formül (I),e sahip bilesiklerde bulusun bir birinci tercih edilen düzenlemesine göre R1 asagidakilerden seçilir: . dogrusal veya dallanmis C1-C6 alkil, . (CH2)m-OR2, burada m 1,dir ve R2 dogrusal C1-C3 alkildir, o C3-C6 sikloalkil, veya . N(R3)OR4, burada R3 ve R4 yukarida tanimlandigi gibidir. Özellikle bu düzenlemeye göre bulusun tercih edilen bilesikleri, formül (Die sahip bilesiklerdir, burada R1 asagidaki gibidir, . dogrusal veya dallanmis C 1-C6 alkil, o (CH2)m-OR2, burada m 19dir ve R2 CHftür, o siklopropil, . N(R3)OR4, burada R3 ve R4 bagimsiz olarak C1-C3 alkil, tercihen CH3°tür. Bulusun bir ikinci tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenleineyle kombinasyon halinde, yukaridaki formül (I),e sahip bilesiklerde, Rl metildir. Özellikle bu düzenlemeye göre tercih edilen bilesikler, R1 "in etil, izopropil, izobutil, CH20CH3, siklopropil ve N(CH3)OCH3,ten olusan gruptan seçildigi bilesiklerdir. Bulusun bir üçüncü tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica birinci düzenleme ile kombinasyon halinde, Rl metil, etil, izopropil, izobutil, CH20CH3, siklopropil ve N(CH3)OCH3'ten olusan gruptan seçilir. Istem 10,a göre bulusun bir ikinci amaci, ayrica birinci ve üçüncü düzenleme ile kombinasyon halinde, yukarida formül (I),e sahip bilesiklerdir, burada X, oksijen oldugunda, R"nin 2-tiy0fenil olmamasi kaydiyla, R1, metal oldugunda, R, 3-piridil, 4-klorofenil, 4- triflorometilfenil, 3-tiy0fenil, 2-tiyofenil, 3-tiyazolil-(2-metil), fenil, tiyazol, 2-4-diflor0fenil, 4-metoksifenil ve 2-metiltiyazolden seçilmez. Bulusun baska bir tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenlemelerin herhangi biriyle kombinasyon halinde, X, oksijendir. Bulusun baska bir tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenlemelerin herhangi biriyle kombinasyon halinde, söz konusu aril, fenildir, ve söz konusu heteroaril, N, O ve Siden seçilen 1 ila 3 heteroatom içeren bir 5- veya 6- üyeli heteroarildir. Tercihen, söz konusu 5- veya 6- üyeli heteroaril, tiyofenil, furanil, pirrolil, imidazolil, pirazolil, oksadiazolil, oksazolil ve piridinilden olusan gruptan seçilir. Bulusun baska bir tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenlemelerin herhangi biriyle kombinasyon halinde, söz konusu formül (I)'e sahip bilesiklerde, burada R, arildir, aril, asagidakilerden seçilen bir grupla istege bagli olarak sübstitüe edilir: 0 tercihen Br ve F°den seçilen halojen; o dogrusal veya dallanmis Ci-C3 alkil, tercihen CH3; . OR5 ve NR6R7, burada R5, R6 ve R7 bagimsiz olarak hidrojen veya dogmsal C1-C3 alkildir. OR5 ve NR6R7°nin tercih edilen kimlikleri sirasiyla OH, NH2 ve NHCHftür. Bulusun baska bir tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenlemelerin herhangi biriyle kombinasyon halinde, söz konusu formül (1)"e sahip bilesiklerde, burada R, heteroarildir, bu, dogrusal veya dallanmis C ['C6 alkille, tercihen GPL; ile istege bagli olarak sübstitüe edilir. Özellikle bulusun tercih edilen formül (I),e sahip bilesikleri, R,nin, 3-tlorofenil, 4-tlorofenil, 2-bromofenil, 3-bromofenil, 2-metilfenil, 3-metilfenil, 4-metilfenil, 2-hidroksifenil, 3- hidroksifenil, 4-hidr0ksifenil, 3-amin0fenil, 4-aminofenil, 3-rnetilamin0fenil, 4- metilaminofenil, tiyofen-Zil, iiiran-Zil, pirrol-Zil, lH-imidazol-Sil, l-metil-imidazol-Sil, olusan gruptan seçildigi bilesiklerdir. Bulusa göre özellikle tercih edilen formül (I),e sahip bilesikler asagidakilerden seçilir: l-[2-(3-florofenil)-4-hidr0ksi-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-on (bilesik n. 1) sodyum 2-(3-florofeniD-S-propanoil-l ,3-tiyazol-4-olat (bilesik n. 2) 2-(3-florofeniD-4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-l,3-tiyazol-5-karboksamid (bilesik n. 3) 1-(2-(3-florofeni1)-4-hidroksitiyazo1-5-il)etan0n (bilesik n. 4) 4-hidr0ksi-N-metoksi-N-metil-Z-(tiyofen-Z-il)- l,3-tiyazol-5-karboksamid (bilesik n.6) 4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-2-(2-metilfenil)-1,3-tiyazol-5-karb0ksamid(bilesik n. 8) 4-hidroksi-Z-(Z-hidroksifeni1)-N-met0ksi-N-metil-1,3-tiyazol-5-karb0ksamid (bilesik n. 12) l-[4-hidr0ksi-2-(4-metilfenil)-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-on (bilesik n. 31) 2-(3-Ilorofenil)-5-pr0panimidoil-1,3-tiyazol-4-ol (bilesik n.43) ve Bulusa göre en çok özellikle tercih edilen formül (I),e sahip bilesikler, asagidakilerden seçilir: sodyum 2-(3-flor0fenil)-5-propanoil-l ,3-tiyazol-4-olat (bilesik n. 2) 2-(3-tlorofenil)-4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamid (bilesik n. 3) 4-hidroksi-2-(2-hidroksifenil)-N-metoksi-N-metil-1,3-tiyazol-5-karb0ksamid (bilesik n. 12) Örnek 46"daki detaylarda açiklanacagi gibi, halihazirdaki bulus sahipleri, yukaridaki bilesik 1-45'in, TRPM8°in kuvvetli antagonistleri oldugunu tespit etmislerdir. Detaylarda, yukaridaki bilesiklerin hepsi, insan TRPM8 için yüksek çiktili bir tarama (HTS) hücresel-bazli analizde test edilmistir ve 2 uMlnin altinda bir lCsosyle bir antagonist aktivite göstermistir. Dolayisiyla, bu bulusta açiklanan, TRPMS'in, tercihen insan TRPM8,in antagonistleri olarak kullanim için yukarida formül (l),e sahip bilesiklerdir. Bu bulusun temsilcisi formül (l)"e sahip bir bilesigin agizdan uygulanmasi, doz sonrasi 3. saatte ve 5. saatte soguk ve mekanik allodiniyi anlamli sekilde azaltti. Azami aktiviteye, muameleden sonra 3. saatte ulasildi (parametrelerin her ikisi üzerinde yaklasik %50 oraninda inhibisyon), asagida Örnek 47lye bakiniz. Bundan baska, ayni temsil edici bilesik, genis bir aralikta seçilen GPCRlere karsi, ayni zamanda TRPVl , T'RPV4 ve TRPAI ,e dogru bir yüksek seçicilik gösterdi, dolayisiyla bunun seçici etki mekanizmasi dogrulanmaktadir, asagida Örnek 48°C bakiniz. Son olarak, asagida Örnek 497da bildirildigi gibi, test edilen bilesik, herhangi bir insan sitokrom izoformuna dogru hiç etki göstermemektedir, dolayisiyla potansiyel ilaç ilaç etkilesimi disarida tutulmaktadir. ilaveten, hERG kanalina dogru hiçbir etki gözlemlenmemistir, dolayisiyla klinik gelisme sirasinda potansiyel kardiyotoksik etki disarida tutulmaktadir. Test edilen bilesigin düsük logD degerleri bunu özellikle ürolojik rahatsizliklarin tedavisinde, ip, iv ve i ves uygulamalarini gerektirmeyi özellikle uygun kilar. Ayni zamanda, nispeten yüksek plazma yari ömrü ve yüksek oral biyoyararlanim, enflamatuar ve nöropatik agri gibi kronik hastaliklarin tedavisi için bunu ideal aday kilacaktir. Dolayisiyla, bulusun yukarida açiklanan bilesikler, terapide kullanilmak için özellikle Bu bulusun üçüncü bir amaci, TRPM8°in aktivitesiyle iliskili bir hastaligin, tercihen TRPM8 reseptörünün asiri ekspresyo nu ve/ veya hiperaktivitesinden kaynaklanan bir hastaligin önlenmesi, riskinin azaltilmasi, iyilestirilmesi ve/veya tedavisinde kullanim için yukarida formül (l)7e sahip bilesiklerdir. Bu bulusa göre, "TRPM8 reseptörünün asiri ekspresyonu ve/veya hiperaktivitesi" ile, fizyolojik seviyede oldugundan daha yüksek olan TRPM8 reseptörünün bir ekspresyonu ve/veya aktivitesi anlamindadir. Bu bulusa göre, "TRPM8"in aktivitesiyle iliskili olan hastalik" ile, tercihen agri, kasinma, irritabl bagirsak hastaliklari, soguga bagli ve/veya siddetli solunum rahatsizliklari, iskemi, nörodejenerasyon, inme, ürolojik rahatsizliklar, ve psikiyatrik rahatsizliklardan seçilen bir hastalik anlamindadir. Tercihen, söz konusu agri, kronik agri, kanser agrisi, soguk allodini ve diyabetik nöropatiyi kattigi anlaminda olan nöropatik agri, ameliyat sonrasi agri, osteoartritik agri, romatoid artritik agri, nöralji, nöropatiler, fibromiyalji, aljezi, sinir hasari, migren, basagrilarindan seçilir. Tercihen, söz konusu soguga bagli ve/veya siddetli solunum rahatsizligi, soguga bagli ve/veya siddetli pulmoner hipertansiyon, COPD ve astimdan seçilir. Tercihen, söz konusu ürolojik rahatsizliklar, agrili mesane sendromu, interstisyal sistit, detrusor asiri aktivitesi (ayrica asiri aktif mesane olarak bilinir), üriner inkontinans, nörojenik detrusor asiri aktivitesi (ayrica detrusor hipertleksisi olarak bilinir), idiyopatik detrusor asiri aktivitesi (ayrica detrusor instabilitesi olarak bilinir), selim prostatik hiperplazi, alt üriner yol rahatsizliklari ve alt üriner yol semptomlarindan seçilir. Tercihen, söz konusu psikiyatrik rahatsizliklar, anksiyete ve depresyondan seçilir. Bu bulusun dördüncü bir amaci, farmasötik olarak kabul edilebilen eksipiyanlar ve/veya seyreltiler ile kombinasyon halinde yukaridaki söz konusu formül (I)°e sahip bilesiklerin en az birini içeren farmasötik bilesimlerdir. Tercih edilen bir düzenlemeye göre söz konusu farmasötik bilesim, TRPM8°in aktivitesiyle iliskili bir hastaligin, tercihen asiri ekspresyon ve/veya hiperTRPM8"in aktivitesi reseptöründen kaynaklanan bir hastaligin önlenmesi, riskinin azaltilmasi, iyilestirilmesi ve/Veya tedavisi içindir. Tercih edilen bir düzenlemeye göre, söz konusu farmasötik bilesim, tek aktif prensip(ler) olarak yukarida formül (l),e sahip bilesiklerin en az birini içerir. Alternatif bir tercih edilen düzenlemeye göre, söz konusu farmasötik bilesim, en az bir baska aktif prensiple iliskili yukarida formül (I),e sahip bilesiklerin en az birini içerir. Bulusun baska bir tercih edilen düzenlemesine göre, ayrica önceki düzenlemeyle kombinasyon halindeler, farmasötik bilesimler, intravezikal, intravenöz, topikal veya agizdan uygulama için olabilir. Bulusun formül (Die sahip bilesikleri, "Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook" MACK Publishing, New York, 18. baski, l990Sda açiklananlar gibi geleneksel teknikler ve eksipiyanlar kullanilarak farmasötik bilesimlerde uygun olarak formüle edilir. Bulusun bilesikleri, tek aktif prensipler olarak veya baska terapötik olarak aktif bilesikler ile kombinasyon halinde uygulanabilir. Bulusun bilesiklerinin uygulanmasi, intravezikal instilasyonla, bir bolus olarak intravenöz enjeksiyonla, dermatolojik preparasyonlarda (kremler, losyonlar, Spreyler ve merhemler), inhalasyonla ayni zamanda kapsüller, tabletler, surup, kontrollü-salim formülasyonlar ve benzerleri formunda agizdan etki edebilir. Günlük ortalama doz, hastaligin ciddiyeti, hastanin durum, yas, cinsiyet ve agirligi gibi çesitli faktörlere baglidir. Doz, genellikle istege bagli olarak çoklu uygulamalara bölünmüs, formül (l),e sahip bilesiklerin günde 1 ila 1500 mg,i arasinda degisecektir. Bu bulus, bulusun kapsamini sinirlayici olarak görüldügü düsünülmemesi gereken asagidaki örnekler araciligiyla açiklanacaktir. Örnekler Tercih edilen bilesikleriii sentezi Tablo I"de verilen bilesikler, asagidaki örneklerde açiklanan prosedürler takip edilerek sentezlenmistir. Malzemeler ve usuller Tüm reaktif maddeler, Sigma-Aldrich, Florochem ve Alfa Aesar'dan satin alindi ve daha fazla saflastirma olmadan kullanildi. Nükleer manyetik rezonans (NMR) spektrasi, bir Bruker Avance belirtilen çözücü içinde kaydedildi. Kimyasal kaymalar, iç standartla ilgili olarak beher milyonda pay (ppm) olarak bildirilmektedir. Kisaltmalar asagidaki sekilde kullanilmaktadir: s = tekli, (1 = ikili, t = üçlü, q = dörtlü, m = çoklu, dd = ikilinin ikilileri, bs = genis sinyal. Kenetlenme sabitleri (J degerleri) hertz (Hz) olarak verilir. Analitik HPLC-MS spektrasi, bir Thermo F innigan LCQ DECA XP-PLUS cihaz I ile kenetleninis ve bir C18 (10 uM, 4.61nm X 150mm) Phenomenex Gemini ters faz kolonu ile donatilmis bir Thermo F innigan Surveyor gradyana göre kullanilan 10 HM (pH 4.2) amonyum format/ formik asit tamponu ve asetonitrilden olustu. Tüm MS deneyleri, pozitif ve negatif iyon modunda elektrosprey iyonizasyonu (ESI) kullanilarak gerçeklestirildi. Tüm reaksiyonlar, UV (254 nm) veya KMnO4, p-anisaldehid, ve serik amonyum molibdat (CAM) gibi boyalar kullanilarak görsellestirilen, Grace Resolv Davisil silika jel plakalari, izlendi, Kromatografik saflastirmalar, Grace Resolv Davisil silika 60 ile silika jel kolonlari üzerinde gerçeklestirildi. Tüm organik çözeltiler, susuz NaZSO4 veya MgSO4 üzerinde kurutuldu ve bir döner buharlastirici üzerinde konsantre edildi. Biyolojik analizler için kullanilan tüm bilesikler, baska türlüsü belirtilmedikçe 220 ve 254 nm dalgaboylariyla izlenen HPLC analitik sonuçlar baz alinarak en az %98 safliktadir. Genel prosedür 3-flor0benzenkarbotiyoamidin sentezi (Ara madde a) Kondansör ve manyetik karistirici ile donatilmis bir 100 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, 30 mL THF içinde çözündürülen 3-florobenzoamid (2.0 g, 14.4 mmol) ile dolduruldu, ardindan Lawesson reaktif maddesi, çözeltiye (3.5 g, 8.64 mmol) ilave edildi. Karisim 60 °C°ye isitildi ve gece boyunca karistirildi; dönüsüm, TLC (Eluent: n-heksan / EtOAc 7:3) ile izlendi. Çözelti oda sicakligina isitildi ve çözücü vakumla damitilarak giderildi. Ham, 3-tlorobenzenkarbotiyoamidin sari bir kati olarak (2.0 g, 12.9 mmol, Y = %89) elde edildigi flas kromatografisiyle (Eluent: n-heksan / EtOAc 7 :3) saflastirildi. Bir manyetik karistirici ile donatilmis bir mikrodalga Ilakon, kuru etanol (8 mL) içinde çözündürülmüs 3-flor0benzenkarbotiyoamid (0.5 g, 3.22 mmol) ile dolduruldu, dietilbromomalonat ( ilave edildi ve flakon sikica kapaklandi. Çözelti, 100°C"de 30 dakika bir mikrodalga cihazinda radyasyona tutuldu. Etil 2-(3-flor0fenil)-4- sonra sari bir kati olarak elde edildi. MS (BSH) m/z.' 267.81 [M+H]+. Eti] 2-(3-florofenil)-4-met0ksi-l,3-tiyazol-5-karh0ksilat sentezi (Ara madde c) Bir inanyetik karistirici ile donatilmis bir 25 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, kuru THF (3 mL) ve DMF (-4-hidroksi-l,3-tiyazol-5- 0.022 g, 1.5 esd.) ve metil iyodür ( ile muamele edildi ve gece boyunca oda sicakliginda karistirildi. Reaksiyon, su içinde sönümlendi ve etil asetat (20 mL, 3 kez) ekstrakte edildi, organikler toplandi ve doymus sodyum bikarbonat ve tuzlu su ile yikandi, ardindan kuru sodyum sülfat üzerinde anhidrifiye edildi. Ham, silika jel üzerinde (Eluent: n- sari bir kati olarak (0.053 g, 019 mmol, Y = %50) elde edildi. MS (BSH) m/Z.' 282.08 [M+H]+. Bir manyetik karistirici ile donatilmis bir 25 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, etanol (3 mL) ve su (-4-met0ksi-l,3-tiyazol-5- karboksilat ( ilave edildi ve çözelti was gece boyunca oda sicakliginda karistirildi. Karisim, su (15 mL) içinde seyreltildi, pH 2"ye HC12N ile asitlestirildi ve etil asetat (20 mL x 2) içinde ekstrakte edildi. Organik tabakalar toplandi ve su ve tuzlu su ile yikandi, ardindan kuru sodyum sülfat üzerinde anhidrifiye edildi. 2-(3-Ilorofenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5-karboksilik asit, sari bir MS (ESI') m/z: 252.25 [M-H]`. Bir manyetik karistirici ve bir suyla sogutulmus kondansör ile donatilmis bir 25 mL yuvarlak mmol) ve 5 mL kuru DCM ile oda sicakliginda dolduruldu. Ayni sicaklikta, çözelti, bir fazla tiyonil klorür ( ile muamele edildi, daha sonra 2.5 saat geri akitildi. Çözelti sogutuldu, ardindan uçucular, indirgenmis basinç altinda giderildi. Yagli kalinti, kalinti tiyonil klorürü daha fazla gidermek için toluenle birkaç kez soyuldu. 2-(3-Ilor0fenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5-karbonil klorür, olmadan kullanildi. Bir manyetik karistirici ile donatilmis bir 25 mL yuvarlak tabanli deney sisesinde, 2-(3- florofenil)-4-met0ksi- içinde çözündürüldü ve bir buz banyosuyla 0°C'ye sogutuldu. Bu çözelti, bir N,O- dimetilhidroksilamin hidroklorür (0.038 g, 0.386 mmol), trietilamin ( ve DCM (2 mL) karisimiyla muamele edildi, ve ayni sicaklikta 45 dakika karistirildi. LC-MS ile kontrol edildigi gibi, reaksiyon tamamlandi, dolayisiyla sönümlendi ve asagidaki gibi tetkik edildi: karisim, DCM (50 mL) ile seyreltildi ve su ('10 mL x 2) ve tuzlu su (10 mL) ile yikandi, susuz sodyum sülfat üzerinde kurutuldu ve çözücü, vakumla damitildi. 2-(3-Ilorofenil)-N,4- olarak elde edildi ve bir sonraki sentetik asamada kullanildi. 3.77 (s, 3H), 3.35 (s, 3H). MS (BSH) m/z.' 297.32 [M+H]+. Bir manyetik karistirici ile donatilmis bir 10 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, 2-(3- dolduruldu ve 2.5 mL kuru THF, -78°C"ye sogutuldu. Çözelti, ayni sicaklikta etilmagnezyum klorür ( ile muamele edildi, ardindan -60°C,de 1.5 saat karistirildi. Sogutma sistemi çikarildi ve reaksiyon, doymus sulu amonyum klorür çözeltisi (10 mL) ile oda sicakliginda sönümlendi. Karisim, etil asetatla (20 mL x 2) ekstrakte edildi, organikler toplandi ve suyla (20 mL x 2) iki kez ve tuzlu suyla (20 mL) bir kez yikandi. Organik faz daha sonra anhidrifiye edildi ve çözücüler vakumla giderildi. Ham, silika jel üzerinde flas MS (BSH) m/z.' 266.30 [M+H]+. Bir manyetik karistirici ile donatilmis bir 10 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, 1-[2-(3- sicakliginda kuru DCM içinde (4 mL) çözündürüldü, ardindan 0°C"ye bir buz banyosuyla sogutuldu. Çözelti, diklorometan ( içinde boron tribromür lM ile bu sicaklikta muamele edildi, ardindan 30 dakika karistirildi. Reaksiyon, DCM (20 mL) ile seyreltildi ve suyla (10 mL) 10 dakika karistirildi. Organik tabaka ayrildi ve susuz sodyum sülfat üzerinde anhidrifiye edildi, çözücü dainitildi ve ham, silika jel üzerinde saflastirildi. 1- mmol, Y : %73) elde edildi. Bir manyetik karistirici ile donatilmi bir 25 mL yuvarlak tabanli deney sisesi, l-[2-(3- oda sicakliginda metanol içinde (6 mL) çözündürüldü. Çözelti daha sonra bir esdegerde NaOH ( ile muamele edildi ve 30 dakika karistirildi. Uçucular vakumla dainitildi ve basliktaki bilesik, kantitatif` verimde bir grimsi- beyaz kati olarak (0.037 g, 0.135 mmol) elde edildi. MS (BSH) m/z.' 252.25 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklandigi gibi hazirlanan 3-Horobenzenkarbotiyoamidden (0.110 g, 0.70 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-florofenil)-N,4- dimetoksi-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-(2-(3-Ilorofenil)-4-met0ksitiyazol-5-il)etanonu elde etmek için metilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi bir grimsi-beyaz kati olarak (0.030 g, 0.13 mmol, Y = %87 ) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (ESH) m/z.' 238.0 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklandigi gibi hazirlanan 3-Ilorobenzenkarbotiyoamidden (0.070 g, 0.45 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-Ilorofenil)-N,4- dimetoksi-N-metil-l,3-tiya20l-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(3-florofenil)-4-met0ksi-1,3-tiyazol-5-il]-2-metilpr0pan-l-onu elde etmek için izopropilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesik sari bir kati olarak (0.021 g, 0.08 mmol, Y = %88) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. 1.30 (d, 6H, J=7.0 Hz). MS (BSH) m/z: 266.0 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklandigi gibi hazirlanan tiyofen-Z-karbotiyoamidden (0.074 g, 0.52 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimet0ksi-N-metil-2- (tiyofen-Z-il)-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[4-met0ksi-2-(tiyofen-2-il)-1,3-tiyazol-5-il]pr0pan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.022 g, 0.09 mmol, Y = %88) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. 3H, J= 7.1 Hz). MS (BSH) m/Z.' 240.1 [M+H]+. 1-[4-hidroksi-Z-(Z-metilfenil)-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (9) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer seilde hazirlanan 2- metilbenzenkarbotiyoamidden (0.152 g, 10 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(2-metilfenil)- 1,3-tiyazol-5 -karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[4-met0ksi-2-(2-metilfenil)-1,3-tiyazol-5- il]pr0pan-l-0nu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi kahverengi bir kati (0.44 g, 0.18 mmol, Y = %89) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. 311,1: 7.1 Hz). MS (BSH) m/z; 248.1 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 2- bromobenzenkarbotiyoamidden (0.053 g, 0.15 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(2-br0m0fenil)-N,4-dimet0ksi-N-metil-1,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(2-br0m0fenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5- il]propan-1-0nu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.018 g, 0.06 mmol, Y = %87 ) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 312.10 [M+H]+. 1-[2-(2-hidroksifenil)-4-hidroksi-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (13) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 2- metoksifenil)-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb ainidi) elde etmek için genel prosedür, tiyazoller sentezi için uygulandi. Weinreb amidi, l-[4-met0ksi-2-(2-met0ksifeni1)-l,3-tiyazol-5-il]pr0pan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.016 g, 007 mmol, Y = %95) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle (4 esdegerleri) koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z: 250.10 [M+H]+. 1-[2-(3-bromofenil)-4-hidr0ksi-1,3-tiyazol-S-il]propan-l-on sentezi (14) Örnek 1 - Ara madde a3da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 3- bromobenzenkarbotiyoamidden (0.20 g, 0.92) mmol baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-br0mo fenil)-N,4-dimetoksi-N-metil- l ,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(3-bromofeni1)-4-met0ksi-l,3-tiyazol-5- il] propan-l-onu elde etmek için etilmagnezyuin klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi beyaz bir kati olarak (0.055 g, 0.17 mmol, Y = %95) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 312.1 [M+H]+. 1-[2-(furan-2-il)-4-hidr0ksi-1,3-tiyazol-S-il]propan-l-on sentezi (15) Örnek 1 - Ara madde a°da açiklanan benzer sekilde hazirlanan furan-Z-karbotiyoamidden dimetoksi-N-metil-l ,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(furan-2-il)-4-metoksi-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.034 g, 0.15 mmol, Y = %90) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 224.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 1H-pirrol-2-karbotiyoamidden (lH-pirrol-Z-il)-l ,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonunousu, l-[4-metoksi-2-(1H-pirrol-Z-il)-1,3-tiyazol-5-il]propan-1-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.034 g, 0.15 mmol, Y = %93) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. lH-NMR (CDC13): , 6.20-6.05 MS (ESl+) m/z.' 223.2 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a`da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 1-metil-lH-pirrol-2- karbotiyoamidden (0.105 g, 0.75 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-( l -metil- l H-pirrol-Z-il)- l ,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(1-metil-lH-pirrol-Z-il)-1,3- tiyazol-S-il]pr0pan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0034 g, 0.14 mmol, Y = %91) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle MS (ESH) m/z: 237.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan l-metil-lH-imidazol-S- karbotiyoamidden (0.203 g, 1.44 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(1-metil-lH-iinidazol-5-11)-l ,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-metoksi-2-(1-metil-lH-imidazol-S-il)-l,3- tiyazol-S-il]pr0pan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.065 g, 0.27 mmol, Y = %94) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle MS (BSH) m/z.' 238.4 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a`da açiklanan benzer sekilde hazirlanan lH-imidazol-S- karbotiyoamidden (0.198 g, 1.56 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2- (lH-imidazol-S-il)-N,4-dimet0ksi-N-metil-1,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(1H-imidazol-S-il)-1,3-tiyazol-5-il]pr0pan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.062 g, 0.28 mmol, Y = 3H, J=7.3 Hz). MS (ESH) m/z: 224.4 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 1-metil-lH-pirazol-4- karbotiyoamidden (0.211 g, 1.49 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür N,4-dimetoksi-N-metil-2-( 1 -metil- 1 H-p irazol-4-il)- l ,3 -tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-l,3- tiyazol-S-il]propan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.064 g, 0.27 mmol, Y = %92) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle EP- m/z: 238.5 [M+H]+. 1-[4-hidroksi-Z-(tiyofen-Z-il)-1,3-tiyaz0l-5-il]butan-l-on sentezi (21) Örnek 1 - Ara madde a`da açiklanan benzer sekilde hazirlanan tiyofen-2-karbotiyoamidden (0.20 g, 1.39 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N- metil-2-(tiyofen-2-il)-1,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(tiyofen-2-il)-1,3-tiyazol-5-il]butan-l-onu elde etmek için propilmagnezyum klorürü kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.067 g, 0.26 mmol, Y : %95) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/z.' 254.4 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan tiyofen-2-karb0tiy0amidden (0.150 g, 1.04 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimet0ksi-N- metil-2-(tiy0fen-2-i1)-l ,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. izobutilmagnezyum klorür kullanilarak gene] prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.053 g, 0.20 mmol, Y = %95) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/z.' 268.2 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 1,2,4-oksadiazol-3- karbotiyoamidden (0.151 g, 1.16 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(1,2,4-oksadiazol-3 -il)-1,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) il]propan-1-0nu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0049 g, 0.22 mmol, Y = %88) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. 1:7.3 Hz). MS (BSH) m/z.' 226.1 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde alda açiklanan benzer sekilde hazirlanan 1,2-0ksazol-5- karbotiyoamidden (0.148 g, 1.15 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(1,2-0ksazol-5-il)-1,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.048 g, 0.22 mmol, Y : MS (ESH) m/z.' 225.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan piridin-3-karbotiyoamidden (0.186 g, 1.34 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N- metil-Z-(piridin-3-il)- l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb ainidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-metoksi-2-(piridin-3-il)-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.060 g, 0.26 mmol, Y = %89) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/z: 235.3 [M+H]*. 1-[4-hidr0ksi-Z-(piridin-4-il)-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (26) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan piridin-4-karb0tiyoamidden (0.175 g, 1.27 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimet0ksi-N- metil-2-(piridin-4-il)-1,3-tiyazo1-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.054 g, 0.23 mmol, Y : %92) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 235.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a°da açiklanan benzer sekilde hazirlanan piridin-2-karbotiyoamidden (0.214 g, 1.55 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimet0ksi-N- metil-Z-(piridin-Z-il)-l ,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(piridin-2-il)-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.065 g, 0.28 mmol, Y = %91) elde etinek için bunun daha sonra horon tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (ESH) m/z: 235.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 3- metoksifenil)-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için genel prosedür, tiyazoller sentezi için uygulandi. Weinreb amidi, 1-[4-met0ksi-2-(3-metoksifenil)-l,3-tiyazol-5-il]pr0pan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.029 g, 0.12 mmol, Y = %91) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle (4 esdegerleri) koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 250.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 4- metoksifenil)-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb ainidi) elde etmek için genel prosedür tiyazoller sentezi için uygulandi. Weinreb amidi, l-[4-metoksi-Z-(4-metoksifenil)-l,3-tiyazol-5-il]pr0pan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.058 g, 0.23 mmol, Y = %90) elde etinek için bunun daha sonra boron tribromürle (4 esdegerleri) koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (ESH) m/z: 250.3 [M+H]+. 1-[4-hidroksi-2-(3-metilfeniI)-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (30) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 3- metilbenzenkarbotiyoamidden (0.086 g, 0.57 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(3-metilfenil)- l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuneusu, l-[4-met0ksi-2-(3-metilfenil)-l,3-tiyazol-5- il]propan-l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.027 g, 0.10 mmol, Y = %96) elde etmek Için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/z: 248.4 [M+H]+. 1-[4-hidr0ksi-Z-(4-metilfenil)-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (31) Örnek 1 - Ara madde a°da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 4- metilbenzenkarbotiyoamidden (0.087 g, 0.58 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(4-metilfenil)-1,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[4-metoksi-2-(4-metilfenil)-1,3-tiyazol-5- il]propan-l -onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.027 g, 0.10 mmol, Y = %95) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 248.2 [M+H]+. 1-[2-(3-amin0fenil)-4-hidroksi-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-on sentezi (32) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 3- nitrobenzenkarbotiyoamidden (0.235 g, 1.35 inmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(3-nitrofenil)-1,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[4-metoksi-2-(3-nitrofeniD-1,3-tiyazol-5- il]pr0pan-1-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu. Bilesik daha sonra metanol içinde çözündürüldü ve 5 esdegerinde stanöz klorür dihidratla karistirildi, dolayisiyla bir mikrodalga cihazinda 30 dakika 100°C,de radyasyona tutuldu. Nitro grubunun tam indirgenmesinden sonra, asit baz ekstraksiyonu ve tetkik, 1-[2-(3- aminofenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5-il]propan-l-on saf elde edildi. Sonuncusu, boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirma kosullarina tabi tutuldu, bu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.033 g, 0.13 mmol, son iki asama Y = %51) sundu. MS (BSH) m/z: 249.3 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 4- nitrobenzenkarbotiyoamidden (0.234 g, 1.35 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(4-nitrofenil)-l.3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandiSonuncusu, 1-[4-met0ksi-2-(4-nitr0fenil)-l,3-tiyazol-5- il]pr0pan-1-0nu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu. Bilesik metanol içinde çözündürüldü, 5 esdegerinde stanöz klorür dihidratla karistirildi ve bir mikrodalga cihazinda 30 dakika 100°C ,de radyasyona tutuldu. Nitro grubunun tam indirgenmesinden sonra, asit ekstraksiyonu ve tetkik, 1-[2-(4- amino fenil)-4-met0ksi- 1 ,3-tiyazol-5-il]propan- 1 -on, boron tribromürle müteakip koruyucu grup uzaklastirmasi için saf olarak elde edildi, bu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.032 g, 012 mmol, son iki asama Y = %49) sundu. Ms (BSH) m/z: 249.4 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 3- (bromo)benzenkarb0tiyoamidden (0.429 g, 1.98 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-bromofenil)-N,4-dimet0ksi-N-metil-l ,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(3-bromofenil)-4-metoksi-1,3- tiyazol-S-il]pr0pan- l-onu elde etmek için bilesik etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu. Bromo aril tiyazol türevi daha sonra susuz toluen içinde çözündürüldü ve 5 esdegerinde sodyum tert-butoksit, 1.5 esdegerinde metilamin, 0.1 esdegerinde 2-(di-terbutilfosfino)bifenil, 0.05 esdegerinde tris(dibenziliden-aset0n)dipalladyum(0) ile muamele edildi ve bir flakona sizdirmaz sekilde kapatildi, dolayisiyla bir mikrodalga cihazinda !00°C"de bir saat radyasyona tutuldu. Kromatografiden sonra, l-{4-met0ksi-2-[3-(metilamino)fenil]-l ,3- mmol, son iki asama Y = %21) elde etmek için daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z.' 263.4 [M+i1]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 4- (bromo)benzenkarbotiy0amidden (0.50 g, 2.32 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(4-bromofenil)-N,4-dimet0ksi-N-metil-l ,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, 1-[2-(4-br0m0fenil)-4-met0ksi-1,3- tiyazol-S-il]pr0pan- l-onu elde etmek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu. Bromo aril tiyazol türevi daha sonra susuz toluen içinde çözündürüldü ve 5 esdegerinde sodyum teit-butoksit, 1.5 esdegerinde metilamin, 0.1 esdegerinde 2-(di-terbutilfosfino)bifenil, 0.05 esdegerinde tris(dibenzilidenaset0n)dipalladyum(0) ile muamele edildi ve bir Ilakona sizdirmaz sekilde kapatildy, dolayisiyla bir mikrodalga cihazinda 100°C,de bir saat radyasyona tutuldu. Kromatografiden sonra l-{4-metoksi-2-[4-(metilamin0)fenil]-l ,3-tiyazol-5-il}pr0pan-l-on elde edildi ve ardindan boron tribromür etkisi ile 0 ile demetile edildi, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.015 g, 0.06 mmol, son iki asama Y = %13) sundu. MS (BSH) m/z.' 263.4 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 4- florobenzenkarbotiyoamidden (0.122 g, 0.78 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(4-Ilor0fenil)-N,4-dimetoksi-N-metil-1,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-(4-f10r0fenil)-4-met0ksi-1,3-tiyazol-5- il]pr0pan-1-onu elde etinek için etilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0037 g, 0.15 mmol, Y = %91) elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklandigi gibi hazirlanan 3-florobenzenkarbotiyoainidden (0.124 g, 0.80 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür. 2-(3-Ilor0fenil)-N.4- dimetoksi-N-metil-l ,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(3-Ilorofenil)-4-met0ksi-l,3-tiyazol-5-il)butan- l-onu elde etmek için propilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi açik sari bir kati (0.028 g, 0.10 mmol, Y : %81) olarak elde etmek için bunun daha sonra horon tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (BSH) m/Z: 266.30 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a°da açiklandigi gibi hazirlanan 3-Ilorobenzenkarbotiyoamidden (0.112 g, 072 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-Ilor0fenil)-N,4- dimetoksi-N-metil-l ,3-tiyazol-5-karb0ksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, l-[2-(3-florofenil)-4-met0ksi-l ,3-tiyazol-5-il]-3-metilbutan-l -onu elde etmek için izobutilmagnezyum klorür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi sari bir kati (0.033 g, 012 mmol, Y = %73) olarak elde etmek için bunun daha sonra boron tribromürle koruyucu grubu uzaklastirildi. MS (ESH) m/Z.' 280.23 [M+H]+. Örnek 3,te açiklandigi gibi hazirlanan l-[2-(3-Ilorofenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5-il]etanon g, 0.79 mmol) ilave edildi. Elde edilen karisim, 3 saat oda sicakliginda karistirildi. Daha fazla saflastirma olmadan kullanilan 2-br0mo-1-[2-(3-Ilorofenil)-4-metoksi-l ,3-tiyazol-5- il] etanonu elde etmek için çözücü vakumla damitma altinda buharlastirildi. Bilesik daha sonra 5 mL glasiyal asetik asit içinde çözündürüldü, sodyum asetat (0.65 g, 7.9 mmol) ilave edildi ve karisim 120°C°de 2 saat isitildi. Çözelti 30 mL su ile seyreltildi ve dietil eter (20 mL kromatografisiyle (n-heksan : etil asetat 911 eluent olarak) saflastirildi. Sonuncu bilesik, 10 mL 1,4-dioksan içinde çözündürüldü ve 2 mL NaOH 2M ilave edildi. Çözelti oda sicakliginda 2 saat karistirildi. Çözelti 10 mL HCl 2M ile seyreltildi ve bilesik etil asetatla ekstrakte edildi. l-[2-(3-florofenil)-4-metoksi-l,3-tiyazol-5-il]-2-hidr0ksietanon %65 verimde turuncu yag olarak elde edildi. Sonuncu bilesik (0.089 g, 0.33 mmol), 5 mL kuru sonra 41 uL (0.66 mmol) metil iyodür ilave edildi ve çözelti oda sicakliginda 5 saat karistirildi. Karisim 10 mL doymus NH4C1 ile sönümlendi ve bilesik, etil asetatla ekstrakte edildi. Ham, 1-[2-(3-Ilorofenil)-4-metoksi-1,3-tiyazol-5-il]-2-met0ksietanonu kantitatif verimde elde etmek için eluent olarak n-heksan : etil asetat 921 ile flas kromatografisiyle kuru DCM içinde (4 mL) çözündürüldü, ardindan 0°C°ye bir buz banyosuyla sogutuldu. Çözelti bu sicaklikta diklorometan ( içinde boron tribromür lM ile muamele edildi, ardindan 30 dakika karistirildi. Reaksiyon, DCM (10 mL) ile seyreltildi ve suyla (10 mL) 10 dakika karistirildi. Organik tabaka ayrildi ve susuz sodyum sülfat üzerinde anhidrifiye edildi, çözücü damitildi ve ham, silika jel üzerinde sailastirildi. 1-[2-(3- mmol, Y = %43) elde edildi. 2.37 (s, 311). MS (ESl+) m/z: 268.21 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde gade açiklandigi gibi 1-[2-(3-florofeniD-4-metoksi-l,3-tiyazol-5- sekilde kapatilmis bir tüpte 2 saat isitildi. Çözelti oda sicakligina isitildi ve çözücü vakumla damitilarak giderildi. Ham, l-[2-(3-Ilorofenil)-4-metoksi-l,3-tiyazol-5-il]propan-l-tiyonu sari bir yag (0.037 mg, 0.13 mmol, Y = %29) olarak elde etmek için (n-heksan : etil asetat 85:15 eluent olarak) flas kromatografisiyle saflastirildi. Basliktaki bilesigi sari bir kati olarak için açiklandigi gibi boron tribromürle uzaklastirildi. 2-(3-flor0fenil)-4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-l,3-tiyazol-5-karb0ksamid sentezi (3) Örnek 1 - Ara madde a°da açiklandigi gibi hazirlanan 3-Ilorobenzenkarbotiyoamidden (0.055 g, 035 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(3-Ilor0fenil)-N,4- dimetoksi-N-metil-l,3-tiyazol-5-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. 2- (3-florofeni1)-4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-l,3-tiyazol-S-karboksamidi soluk sari bir kati olarak (0.019 g, 0.07 mmol, Y = %95) elde etmek için sonuncusunun koruyucu grubu boron tribromürle dogrudan uzaklastirildi. 337 (s, 3H). MS (ES1+) m/z: 283.9 [M+H]+. 4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-Z-(tiyofen-Z-il)-1,3-tiyazol-5-karb0ksamid sentezi (6) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan tiyofen-Z-karbotiyoamidden (0.081 g, 057 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimet0ksi-N- metil-2-(tiyofen-2-il)-l,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Basliktaki bilesigi bir grimsi-beyaz kati olarak (0.030 g, 0.11 mmol, Y : %95) elde etmek için sonuncusunun koruyucu grubu horon tribromürle dogrudan uzaklastirildi. MS (ES1+) m/z: 271.1 [M+H]+. 4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-Z-(Z-metilfenil)-1,3-tiyazol-5-karboksamid sentezi (8) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 2- metilbenzenkarbotiyoamidden (0.103 g, 0.68 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-N-metil-2-(2-metilfenil)- 1,3-tiyazol-5 -karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Basliktaki bilesigi bir grimsi-beyaz kati olarak (0.037 g, 0.13 mmol, Y = %95) elde etmek için sonuncusunun koruyucu grubu horon tribromürle dogrudan uzaklastirildi. MS (ESl+) m/z: 279.9 [M+H]+. Örnek 1 - Ara madde a"da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 2- bromobenzenkarbotiyoamidden (0.051 g, 0.15 mmOl) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, 2-(2-bromofenil)-N,4-dimetoksi-N-metil-1,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Basliktaki bilesigi beyaz bir kati olarak (0.021 g, 0.06 mmol, Y : %95) elde etmek için sonuncusunun koruyucu grubu boron tribromürle dogrudan uzaklastirildi. MS (ESl+) m/z: 343.04 [M+H]+. 4-hidroksi-Z-(2-hidroksifenil)-N-met0ksi-N-metil-l,3-tiyazol-5-karb0ksamid sentezi (12) Örnek 1 - Ara madde a°da açiklanan benzer sekilde hazirlanan 2- metoksibenzenkarbotiyoamidden (0.120 g, 0.72 mmol) baslanarak, tiyazoller sentezi için genel prosedür, N,4-dimetoksi-2-(2-met0ksifenil)-N-metil- l ,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0.040 g, 0.14 mmOl, Y = %95) elde etmek için Weinreb amidinin koruyucu grubu boron tribromürle (4 esdegeri) dogrudan uzaklastirildi. MS (BSH) m/z: 281.1 [M+H]+. 2-(3-f10rofenil)-4-hidroksi-N-metoksi-N-metil-l,3-tiyazol-S-karbotiyoamid sentezi (41) Örnek 1 - Ara madde 1" de açiklandigi gibi hazirlanan 2-(3-Ilorofenil)-N,4-dimetoksi-N-metil- saat isitildi. Çözelti oda sicakligina isitildi ve çözücü vakumla damitilarak giderildi. Ham, 2- mmol, Y = %68) olarak elde etmek için flas kromatografisiyle (n-heksan : etil asetat 85: 15 eluent olarak) sailastirildi. Basliktaki bilesigi sari bir kati olarak (0057 g, 019 mmol, Y = tribromürle uzaklastirildi. 3.45 (s, 3H). MS (BSH) m/z: 299.20 [M+H]+. ilave edildi ve elde edilen karisim oda sicakliginda 4 saat karistirildi. Karisim suyla (10 mL) seyreltildi ve etil eter (20 mL) ile ekstrakte edildi. Organik faz ardindan kuru sodyum sülfat üzerinde anhidrifiye edildi ve çözücü vakumla damitilarak giderildi. Ham, 5 mL etanol içinde çözündürüldü ve bir mikrodalga flakonuna aktarildi; daha sonra 0.093 g (0.60 mmol) 3- florobenzenkarbotiyoamid ilave edildi. Flakon, sizdirmaz sekilde kapatildi ve 100 °C"de 60 dakika radyasyona tutuldu. Çözelti oda sicakligina isitildi ve çözücü vakumla damitilarak giderildi. 2-(3-flor0fenil)-5-[(lE)-N-met0ksipropanimidoil]-l,3-tiyazol-4-olü sari bir kati olarak (0.066 mg, 0.23 mmol, Y = %39) elde etmek için ham, flas kromatografisiyle (n- heksan : etil asetat 90: 10 eluent olarak) saflastirildi. MS (BSH) m/z.' 281.12 [M+H]+. çözeltisine, O- ininol) ilave edildi ve elde edilen karisim oda sicakliginda 1 saat karistirildi. Ham, bir mikrodalga flakonuna aktarildi, daha sonra 0.052 g (0.650 mmol) 3- Ilorobenzenkarbotiyoamid ilave edildi. Flakon, sizdirmaz sekilde kapatildi ve 120 °Cide 50 dakika radyasyona tutuldu. Çözelti oda sicakligina isitildi ve çözücü vakumla damitilarak 0.31 mmol, Y = %48) elde etinek için ham flas kromatografisiyle (diklorometan : metanol 99:1 eluent olarak) saIlastirildi. MS (BSH) m/Z: 251.34 [M+H]+. metoksipropanimidoil]-1,3-tiyazol-4-ol (örnek 42) çözeltisi daha sonra 0°Clye bir buz banyosuyla sogutuldu. Çözelti, diklorometan ( içinde boron tribromür lM ile bu sicaklikta muamele edildi, ardindan 30 dakika karistirildi. Reaksiyon, DCM (5 mL) ile seyreltildi ve suyla (5 mL) 10 dakika karistirildi. Organik tabaka ayrildi ve susuz sodyum sülfat üzerinde anhidritiye edildi, çözücü damitildi ve ham, silika jel üzerinde saflastirildi. 0.118 mmol, Y = %83) olarak elde edildi. MS (BSH) m/Z.' 267.22 [M+H]+. Siklopropil[2-(3-Horofenil)-4-hidr0ksi-1,3-tiyazol-5-il]metanon sentezi (45) Örnek 1 - Ara madde a"da açiklandigi gibi hazirlanan 3-Ilorobenzenkarbotiyoamidden (0.085 dimetoksi-N-metil-l ,3-tiyazol-S-karboksamidi (Weinreb amidi) elde etmek için uygulandi. Sonuncusu, siklopropil[2-(3-florofenil)-4-met0ksi-1,3-tiyazol-5-il]metan0nu elde etmek için siklopropilmagnezyum bromür kullanilarak genel prosedürde belirtilen ayni sentetik kosullara tabi tutuldu, basliktaki bilesigi açik kahverengi bir kati (0.121 g, 0.46 mmol, Y = uzaklastirildi. MS (BSH) m/z: 264.40 [M+H]*. a. Klonlama, dizileme. transfeksivon ve insan TRPM8,i eksprese eden pozitif klonlarin FLIPRTETRA7da yüksek çiktili taramaya imkan vermek için en iyi hale getirilen TRPM8 reseptör antagonistlerinin tanimi için bir fonksiyonel hücre bazli analiz, stabil saf klon seçimi ve bir floresan kalsiyuma duyarli boyayla fonksiyonel karakterizasyonla HEK293 hücrelerinde gelistirildi. TRPM8, pcDNA3 inemeli ekspresyon vektörünün çoklu klonlama bölgesine klonlandi; elde edilen yapi pcDNA3/hTRPM8 tamamen diziyle dogrulandi ve HEK293 hücre hatti transfeksiyonu için kullanildi. TRPM8 geniyle dengeli sekilde transfekte edilen HEK293 hücreleri, asgari gerekli ortamda tutuldu. Hücreler, elektroporasyon ile pcDNA3/hTRPM8 vektörüyle transfekte edildi ve ardindan 10-15 gün 0.8 mg/ml G418 içeren ortamla seçildi. Asagidaki ticari bilesikler, hem agonist hein antagonist aktivite için HEK293/hTRPM8 hücre hattini test etmek amaciyla TRPM8 kanal referans bilesigi olarak kullanildi: Aktivatörler: Mentol (SIGMA kat# M2772) WS-3, (N-Etil-S-metil-Z-(l-metiletil) sikloheksankarboksamid) (SIGMA kat# W345501) Bloker: Kapsazepin (SIGMA kat# Cl91) Deneysel aktiviteler, FLIPR cihazlari kullanilarak gerçeklestirildi. Fonksiyonel klonlar, l mM mentol yanit bazinda FLIPR384'te seçildi. Iki en iyi yanit veren klon seçildi, l hücre/kuyucukta bir hücre yogunlugunda seyreltildi ve 1 mM mentolle FLIPR384,te analiz edildi. TRPM8 reseptörü, bir kalsiyuma bagli Iloresan sinyali kullanilarak referans agonisti, mentole yanit için analiz edildi. Flaster kelepçesi kayitlari ayrica reseptör farmakolojisini dogrulamak ve agonist doz-yanit egrisi ve ECso degerini belirlemek amaciyla HEK/TRPM8 klonlari üzerinde voltaj-kelepçesi konfigürasyonunda elde edildi. l.5-2.5 MQ direncine sahip bir yangin cilali borosilikat cam pipetler üzerinde oda sicakliginda tutulan HEK293 hücreleri, ilaç uygulamasini takiben akimlari kaydetmek için kullanildi. Mentol uygulamasi, bir seçili HEK/hTRPM8 klonunda (hesaplanmis EC50 deger = 58uM) bir doza-bagimli içe akimi baslatti. Transfekte edilmemis HEK293 hücrelerinde hiç mentol-kaynakli akimlar kaydedilmedi. Farkli günlerde deneyler boyunca, mentol agonist yanit üzerinde kapsazepin antagonist aktivitesini belirlemek ve antagonist yanit stabilitesini dogrulamak amaciyla, TRPM8,in seçilen klonu, antagonistin degisken konsantrasyonlari varliginda (100 anl ila FLIPR3843teZ4 sonra analiz edildi. Seçilen klon, çok iyi stabilite ve antagonist aktivitenin tekrarlanabilirligini (hesaplanan IC50 degeri = ZOuM) gösterdi. Özetleyecek olursak, en iyi klon, asagidakiler için karakterize edildi: 1- farmakoloji: farkli deneyler araciligiyla agonist EC50 ve antagonist ICso'nin belirlenmesi; 2- optimal hücre yogunlugu ve tohumlama zamani; 3- DMSO duyarliligi; 4- ligand stabilitesi; - flaster kelepçe analizi. b. TRPMS antagonistlerinin tanimi için tarama düzenegi Asagidaki ticari bilesikler, ligandlar olarak kullanildi: m: Kapsazepin (SIGMA kat # D_5879) Deneysel aktiviteler, FLIPRTETRA cihazlari kullanilarak gerçeklestirildi. TRPM8 geniyle dengeli sekilde transfekte edilen HEK293 hücreleri, asgari gerekli ortamda TRPMS hücre hatti, 384 kuyucuklu mikrotitre plaka formatinda bir Ca2+ mobilizasyona bagli floresan sinyali kullanilarak bilesiklerin bir kütüphanesine yanit için analiz edildi. Analiz, Analizin yürütülmesi, üç mikrotitre plakanin kullanimini içerdi: 1. Boyayla yüklenmis hücreler içeren ve asagidaki gibi hazirlanan Analiz plakasi: Hücreler, tam ortamda (25 ul/kuyucuk) Poli-D-Lizin kaplamali 384 kuyucuklu Mikrotitre Plakalarinda 15000 c/kuyucukta tohumlandi. Tohumlamadan 24 saat sonra, hücre plakalari, Mikroplaka Yikayicisi ile Tyrode analiz tamponuyla yikandi ve lOuL Tyrode analiz tamponu her bir kuyucukta birakildi. Hücreler daha sonra CyBi®-Well pipetiyle 10 uL/kuyucukta Flu0-4 NW boya çözeltisiyle yüklendi. Flu04-NW boyasinin her bir sisesi (Moleküler Prob kat. tutuldu ve ile takviye edildi. Boya yüklü hücre plakalari, 1 saat oda sicakliginda inkübe edildi. 2. Asagidaki gibi formüle edilen seyreltilmis test bilesiklerini içeren Bilesik Seyreltme Plakasi: Kolon l: Analiz tamponu ve nihai %0.5 DMSO içeren kuyucuk Kolon 2: birinci enjeksiyonda Maks Sinyal Kontrolü (Maksimum yanit: EC1007de Sogutma Maddesi 10, ve birinci enjeksiyonda Min Sinyal Kontrolüne (Analiz tamponu ve nihai % alternatif kuyucuk; Kolon 3-22: Analiz tamponu ve %0.5 nihai DMSO içeren kuyucuk. Bu test edilecek kuyucuktaki bilesiklere 3x konsantrasyonda ilave edildi. Kolon 23: Analiz tamponu ve %0.5 nihai DMSO"da ikinci enjeksiyonda Maks Sinyal Kontrolü (Analiz tamponu) ve ikinci enjeksiyonda Min Sinyal Kontrolünün (Antagonist Kapsazepin ICioo, 50 uM) alternatif kuyucugu; Kapsazepin (Antagonist) içeren kuyucuk. 3. Asagidaki gibi formüle edilen, EC80"de agonist Sogutma Maddesi 10°u içeren Aktivatör Plakasi: Kolon l: Analiz tamponunda lOOuM, 31.6uM, lOuM, 3.16uM, luM, 316nM, yanitinda Sogutma Maddesi 10 (Agonist); Kolon 2-24: Analiz tamponunda EC309de (3 kat konsantre edildi, 20uM nihai) Sogutma Maddesi 10 (Agonist). Test, asagidaki asamalari içeren bir prosedüre göre gerçeklestirildi: 1. Bilesik plakasinin kuyucugunda bulunan numuneler, Analiz Plakasinin karsilik gelen kuyucuguna FLIP ile ilave edildi, dolayisiyla bu, Kolon 3-22 test bilesiklerinde analiz plakalarinin hücrelerine 3x konsantrasyonda ilaveyle sonuçlandi. Analiz kuyucugunda hiç karistirma gerçeklestirilmedi ve yayilmis floresan sinyali 300 saniye kaydedildi. 2. Aktivatör Plakasinin kuyucugunda bulunan numuneler, Analiz Plakasinin karsilik gelen kuyucuguna FLIPRTETRA ile ilave edildi, dolayisiyla bu, test bilesiklerine ilaveten agonist bilesigin Analiz Plakasinin Kolon 3-22,e ilaveyle sonuçlandi. Yayilmis floresanin sinyal 180 saniye kaydedildi. Kolon 1, 2, 23 ve 24, kontrol olarak kullanildi. Özellikle: "Birinci enjeksiyonda Maks Sinyal Kontrolü", EC100"de Sogutma Maddesi 10 agonist yanitini belirtir, "Ikinci enjeksiyonda Maks Sinyal Kontrolü", önceden enjekte edilmis Analiz tamponunun varliginda ECgo"de (lOuM) agonisti belirtir, "Birinci enjeksiyonda Min Sinyal Kontrolü" Analiz tainponu enjeksiyonuna karsilik gelir ve "Ikinci enjeksiyonda Min Sinyal Kontrolü", lC100,de (SOuM) önceden enjekte edilmis referans antagonist Kapazepin varliginda ECgo°de (ZOuM) agonisti belirtir. Hedef Aktivasyon (TA) fazi sirasinda, EC30,de referans agonistin enjeksiyonu, CA"da analiz tamponunun önceden enjekte edildigi MAKS Sinyal kontrol kuyucugunda floresan sinyalinin bir artisini verdi, diger yandan yanit, referans inhibitörü Kapsazepinin ön-enjeksiyonuna bagli olarak MIN Sinyal kontrol kuyucugunda tamamen inhibe edildi. Analizin ahedefi, TRPM8 aktivitesinin antagonistlerini bulmakti; bu amaçla TA fazi sirasinda floresan sinyalinin degisimi ölçüldü. Çesitli parametreler bilgisayarla hesaplandi ve analiz edildi (2' faktörü, Plakalar arasi degiskenlik, Plaka içi degiskenlik, Günden güne degiskenlik, Antagonist Doz yaniti ve IC50 belirlenmesi, Agonist Doz yaniti ve EC50 belirlenmesi). Antagonist Doz yaniti ve IC50 belirleninesi için oldugu gibi, kapsazepin (referans antagonisti) kontrol olarak katildi ve analiz edilen bilesiklerin hepsinin IC50 degerleri hesaplandi. Bilesik 1-45 test edildi ve hepsi ZiiM,nin altinda bir IC50 degeri gösterdi; bilesiklerin çogu sahipti. Agrinin Kronik Konstriksiyon modülü açiklanan usule göre siyatik sinirin ligasyonuyla baslatilacaktir. Kisaca, erkek Sprague- Dawley siçanlarina anestezi yapilacaktir (100 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg ksilazin i.p.) ve sol siyatik sinir, biceps femoris boyunca künt disseksiyonla kalça seviyesinde ortaya çikacaktir. Siyatik trifi'irkasyona yakin olan, yaklasik 12 mm sinir, yapisan dokudan kurutlacaktir ve dört ligature, yaklasik 1 mm aralikla bunun etrafina gevsekçe baglanacaktir, böylelikle epinöral dolasim korunacaktir. Dolayisiyla etkilenen sinir uzunlugu, 6-8 mm uzunluktaydi. Hayvanlar iyilsemye birakilacak ve ameliyattan sonraki gün kullanilacaktir. Sham hayvanlar, ameliyat edilmis fakat baglanmamis siçanlari temsil etmektedir. Çalisma, bilesik 2lnin antiallodinik etkilerini belirlemek amaciyla gerçeklestirildi. ligasyonu takiben gün 7 ve 14"te, nöropatik siçanlar, bilesik 2"nin bir tekli dozunu aldi; tedaviyi takiben l., 3. ve 5. saatte, mekanik ve soguk allodini, Dynamic Plantar Aesteziyometre (DPA) ve aseton damlasi kullanilarak degerlendirildi. Tüm veriler, ortalama ± SEM olarak sunuldu. Veri analizi, GraphPad Prism 4.01 kullanilarak yürütüldü. Istatistiksel analiz, iki yollu ANOVA ile gerçeklestirildi, bunu, uygun olarak, çoklu kiyaslamalar için Dunnett testi takip etti. Istatistiksel anlamlilik, p<0.05°e ayarlandi. Sinir-kaynakli hasardan sonra gün 7,de ve gün 143te, bilesik 2"nin 10mg/kg"11k dozda agizdan uygulanmasi, dozdan sonra 3. saatte ve 5. saatte, soguk ve mekanik allodiniyi anlamli sekilde azaltti. Azami aktiviteye, bunun farmakokinetik profiline göre tedaviden 3 saat sonra (her iki parameter üzerinde yaklasik %50 oraninda inhibisyon, Sekilla, lb, 2a ve 2b) ulasildi. Seçicilik anali'gi' a. GPCRs Seçicilik Bilesik 2, klonlanmis insan GPCRlerine (G-proteiniyle kenetlenmis reseptörler) dogru aktiviteyi degerlendirmek için radyoligand baglanma analizleri kulanilarak test edildi. Bilesik pMsde iki kez test edildi ve sonuçlar Tablo llde özetlenmektedir. Resegtör insan Müskarinik M2 insan Müskarinik M3 insan Adrenerj ik [3] insan Adrenerj ik ßz insan Adrenerjik &1A insan Adrenerj ik (12 A insan Serotoninerjik 5-HT. A insan Histamin H] insan Histamin Hz insan Kannabinoid CBi insan Kannabinoid CBg insan Bradikinin B1 insan Bradikinin B2 insan Dopamin D2s insan Dopamin D3 insan Opioid 82 (DOP) insan Opioid K (KOP) insan Opioid p (MOP) insan Opioid NOP (ORLI) insan NKl Tablo l°den not etmenin mümkün oldugu üzere, bilesik 2, agri kontrolüyle ilgili oldugu iyi bilinen genis bir aralikta seçilen GPCRlere karsi (Müskarinik M3, CB2, BKl, alfa e beta Adrenerj ik dahil olmak üzere) yüksek bir seçicilik gösterir. Bu veriler, bilesik 2°nin gözlemlenen in Viva etkisini desteklemektedir ve genelde, bulusun tüm bilesikleri, TRPM8 blokajina potansiyel olarak kuvvetli sekilde bagimlidir. b. Iyon Kanali Seçiciligi Daha spesifik olarak potansiyel seçicilik konularina yönelmek amaciyla, TRPVl ve TRPV4 iyon kanallarina karsi, ve TRPA1°e dogru bilesik 2 için bir karsit analiz gerçeklestirildi, her Tablo 29de özetlenmektedir. Bilesik 2inin, TRPV1"in bir antagonisti olarak hareket edebilme özelligi, bir kalsiyum içeri akma analiziyle degerlendirildi. Pozitif kontrol agonisti (kapsaisin) varliginda saglanmis sinyal %100,e ayarlandi ve antagonist (rutenyum kirmizisi) varliginda sinyal, 0,a ayarlandi. Buna parallel olarak, bilesik 27nin TRPV4,ün bir antagonisti olarak hareket edebilme özelligi bir kalsiyum içeri akma analiziyle degerlendirildi. Pozitifkontrol agonisti (GSK1016790A) varliginda saglanan sinyal %100,e ayarlandi ve antagonist (rutenyum kirmizisi) varliginda sinyal 0,a ayarlandi. Bilesik 2"nin, TRPAl 'in bir antagonisti hareket edebilme özelligi bir kalsiyum içeri akma analiziyle degerlendirildi. Pozitif kontrol agonisti (allil izotiyosiyanat, AITC) varliginda saglanan sinyal %100"e ayarlandi ve antagonist (rutenyum kirmizisi) varliginda sinyal 0"a ayarlandi. Bilesik m& ÇTRPVJQ E& (TRPV4 m& (TRPA li Veriler, bilesik 27nin TRPV] , TRPV4 ve TRPAl ,e dogru büyük seçiciligininin altini kuvvetli sekilde çizmektedir, dolayisiyla bunun seçici etki mekanizmasini do grulamaktadir. ADME ve PK degerlendirilmesi Bilesik 27nin ADME özellikleri ve farmakokinetik profili degerlendirildi. Sonuçlar, Tablo 3 Plazma Protein Baglanmasi insan %98.71 - siçan % 29.4 uL/dk/mg intravenöz uygulama agizdan uygulama Bilesik CL (mL/dk/kg) Vds (L/kg) CMaks(ng/mL) AUC(ng-h/mL) mm (11) CL (mL/dk/kg) l(1/2 (h) l`1/2 (h) F(%) alV 5 ing/kg; PO 10 mg/kg Bilesik 2, 10 uM"lik azami konsantrasyonda herhangi bir insan sitokrom izoforma dogru hiç etki göstermedi, dolayisiyla bu, potansiyel ilaç ilaç etkilesimini disarida birakti. ilaveten, hERG kanalina dogru hiçbir etki gözlemlenmedi, dolayisiyla bu, klinik gelisme sirasinda potansiyel kardiyotoksik etkiyi disarida birakti. Bilesik 2snin düsük logD degerleri, ip, iv ve i ves uygulamalari gerektiginde, bunu özellikle ürolojik rahatsizliklarin tedavisinde bilhassa uygun kildi. Ayni zamanda, nispeten yüksek plazma yari öinrü (2.94 saat) ve yüksek oral biyoyararlanim (F= %100), enflamatuar ve nöropatik agri gibi kronik hastaliklarin tedavisi için bunu ideal aday yapabilecektir. TR TR TR TR TR TR TR TR TR