TARIFNAME EKLEM DEJENERASYONU TEDAVISINE YÖNELIK ENJEKTE EDILEBILIR HYALÜRONIK ASIT JELI Bulus, dogal kaynakli diger polisakkarit(ler) ile veya bu olmaksizin hyalüronik asitten (veya bunun tuzlarindan birinden) ve bir veya daha fazla poliolden olusturulan jel formunda enjekte edilebilir bir steril aköz formülasyon ile ilgilidir. Bu enjekte edilebilir formülasyon, eklem dejenerasyonlari tedavisinde intraartiküler olarak kullanilir. Bir eklem, iki kemigi birlestirmeye ve birbirine göre bunlara bir hareketlilik vermeye olanak saglayan bir baglantidir. Sinoviyal eklemler, özellikle uzuvlarin düzeyinde en fazla sayida olan eklemlerdir. Bu eklemlerde, kemikler sinoviyal likit olarak adlandirilan viskoz ve elastik bir likit ile doldurulan bir kavite vasitasiyla birlesir. Sinoviyal likit iyi isleyisten ve eklemlerin korunmasindan sorumludur. Bu özellikle bir polisakkaritten olusur, sinoviyal likide viskoelastik özelliklerini saglayan hyalüronik asit, uygulanan kisitlamalara göre eklemin yaglanmasina veya darbelerin absorpsiyonuna olanak saglar. Diz artrozu gibi eklem dejenerasyonlarinin durumunda (özellikle obezite, kalitim, travmalar, gibi faktörlerden kaynaklanan dejenerasyonlar), sinoviyal likit bozunur (hyalüronik asidin konsantrasyonunda ve moleküler kütlesinde düsüs) ve bu bozunum eklemi yaglamaya ve darbeleri sönümlemeye yönelik sinoviyal Iikidin kapasitesini Viskosuplemantasyon yoluyla tedavi, bir jelin, yetersiz sinoviyal Iikidin yerini degistirmek amaciyla eklem içine enjekte edilmesinden olusur. Viskosuplemantasyon agriyi hafifletebilir veya durdurabilir ve eklemin hareketliligini onarmaya katki saglayabilir. Pazardaki mevcut Viskosuplemantasyon ürünleri, hyalüronik asit içeren jellerdir. Bu jeller, hayvansal veya hayvansal olmayan kökenli hyalüronik asit bazli olabilir ve çapraz baglanmis (Synvisc®, Durolane® durumlari) veya çapraz baglanmamis (Synocrom®, Arthrum®, Lubravisc®, Structovial® durumlari) olabilir. Teknikte uzman kisi tarafindan hyalüronik asit bazli bir jelin sürekliliginin bir eklem içinde düsük oldugu (birkaç saat ila birkaç gün) bilinir. Laurent « The Chemistry, biology and medical applications of hyaluronan and its derivatives, Wenner-Gren eklemi içindeki yari ömrü, 12 saattir ve %05 Hyalan B'nin bir jelinin sahip oldugu 9 Bu düsük süreklilik (eklem içindeki jelin hizli rezorpsiyonunun kinetigi) hyalüronik asitte bir bozunum (depolimerizasyon yoluyla) yoluyla açiklanir. Eklem içinde hyalüronik asidin temel bozunum faktörleri, radikal bozunum, 37°C'de termal bozunum ve mekanik bozunumdur (enzimatik bozunum, eklem içindeki önemli bir bozunum faktörü degildir). Viskosuplementin terapötik etkinliginin, eklem içinde bulunma süresinden daha uzun olmasina ragmen, eklem içindeki hyalüronik bazli bir jelin sürekliligi ürünün etkinligini kontrol eden en önemli parametredir. Böylelikle, hyalüronik asit bazli jelin eklem içinde daha fazla bir bulunma süresine sahip olmasi halinde ve viskosuplemantasyon yoluyla tedavi daha etkilidir (agrida düsüs, hareketlilik kazanci). Bunun sonucunda, eklem içinde bir jelin bulunma süresindeki artis (süreklilik) hyalüronik asit bazli bir jel araciligiyla viskosuplemantasyon yoluyla bir tedavinin etkinligini arttirmaya yönelik önemli bir noktadir. Hyalüronik asit konsantrasyonundaki artis, yüksek moleküler agirlikli hyalüronik asidin kullanilmasi ve hyalüronik asidin çapraz baglanmasi/asilanmasina yönelik tekniklerin, hyalüronik asit bazli bir jelin sürekliliginin iyilestirilmesine olanak sagladigi teknikte uzman kisi tarafindan iyi sekilde bilinir. Bununla birlikte, yukarida listelenen farkli parametrelerin optimizasyonu, hyalüronik asit bazli bir jelin Intra-artiküler sürekliliginin büyük ölçüde arttirilmasina olanak saglamaya yönelik yeterli olarak görülmez (pazarda mevcut güncel viskosuplemantasyon jellerinin, eklem içindeki yari ömrü maksimum sadece birkaç gündür). burada poliol ozmojen ajan olarak kullanilir ve burada bundan bir tane olmasi halinde sterilizasyonun görevinden bahsedilmez. EP 0499 164 bir canli organizma içine uygulanmasi halinde jelleri olusturmaya yönelik vücut Iikitlerinden su absorbe ederek poliolleri serbest birakan farkli poliollerdeki hyalüronik asit süspansiyonlarini açiklar. EP 0 297 860 bir jelin hazirlanmasina olanak saglayan, hyalüronik asit ve gliserol içeren bir karisimi açiklar, ancak sterilizasyonu açiklamaz. Ilaveten, Ürün topik uygulamaya sahiptir. US 5095 037 bir sodyum hyalüronat ve ksilitol / glukoz solüsyonunu / süspansiyonunu açiklar ancak, bunun jel formuna sahip olup olmadigini ve sterilize edilip edilmedigini belirtmez. US 5 972 909 bilesikleri burada kalinti miktarlarin riskleri olmaksizin birakilmaya olanak saglamasina ragmen spesifik olarak eklem içinde birakilmaya yönelik amaçlanmayan, hyalüronik asit ve glukoz içeren eklem yikama solüsyonlarini açiklar. yönelik gerekli sterilizasyona maruz kalmayan, bir canli doku içine uygulamadan sonra hidrojelleri olusturan bilesimleri açiklar. FR 2 865 737 poliol içermeyen çapraz baglanmis spesifik bir jelin hazirlanmasini açiklar. Tamamiyla beklenmedik ve sasirtici bir sekilde, asagidaki durumlar kanitlanmistir: - hyalüronik asit bazli bir steril aköz formülasyon içinde bir poliol, bu jelin bozunumlara karsi direncini büyük ölçüde arttirmaya olanak saglar - jel disinda poliolün hafif bir salinim kinetigini dahil eden jel içindeki hyalüronik asidin ve poliolün kuvvetli bir afinitesi: hyalüronik asit ile poliol arasindaki bu afinite, bir sinerjik etki ile poliol yoluyla jelin uzun süreli etkili sekilde korunmasini gerektirir - hyalüronik asidin ve bir poliolün bir aköz formülasyonunun belirli bir bilesimine yönelik olarak, sterilizasyon bu jele saglikli sinoviyal Iikidinin viskoelastik özelliklerini pratik olarak yeniden üretmeleri bakimindan tamamen sasirtici viskoelastik özellikler saglar - jelin bu özel reolojik özellikleri, « hyalüronik asit / poliol » sinerjisi yoluyla indüklenen degradasyonlara karsi koruma sayesinde zaman içinde daha uzun süreli muhafaza edilir. Mevcut bulus, dolayisiyla enjekte edilebilir bir aköz formülasyondan olusur. Eklem dejenerasyonlari tedavisinde kullanilan bu formülasyon, bazi durumlarda (bakiniz örnekler 1 ve 3) sinoviyal likidin sahip olduguna yakin bir reolojiye ve daima degradasyona karsi arttirilmis bir dirence sahiptir. Örnek 4, radikal, termal ve mekanik bir bozunum testine tabi tutuldugunda, hyalüronik asit bazli birjelin ve bir poliolün en iyi direncini gösterir. Bozunuma karsi jelin bu en iyi direnci, intra-artiküler olarak enjekte edilen jelin daha uzun sürekliligine olanak saglar. Örnek 5, termal bozumuna karsi, hyalüronik bazli birjelin ve bir poliolün en iyi direncini gösterir (istem 1'in kapsaminda degildir). Termal bozunuma karsi jelin bu en iyi direnci, intra-artiküler olarak enjekte edilen jelin daha uzun süreli sürekliligine ve kullanimdan önce ürünün depolanmasi sirasinda formülasyonda daha iyi bir stabiliteye olanak saglar (ürünün raf ömrüne yönelik önemli bir noktadir). Örnek 8, hyalüronik asit ile bir poliol arasindaki kuvvetli afiniteyi gösterir. Eklem içine enjekte edildiginde, hyalüronik asit ile poliol arasindaki kuvvetli afinite, bir sinerjik etki yoluyla uzun süreli olarak bozunuma karsi jelin daha iyi direncine olanak saglar. Esas olarak, eklem içine bir poliol solüsyonunun bir enjeksiyonunun durumunda, dogal yikama islemi hizli bir sekilde molekülü (= poliol) eklemden elimine edecektir. Poliol ile hyalüronik asit bazli bir jelin durumunda, hyalüronik asit ile poliol arasindaki kuvvetli afinite, poliolün jel disina hizli salinimini (ve dolayisiyla eklem disina bunun hizli eliminasyonunu) önleyecektir ve böylelikle bozunumlara karsi poliol yoluyla jelin uzun süreli etkili sekilde korunmasina olanak saglayacaktir. Örnekler 1 ve 3, sinoviyal likidin sahip olduguna yakin olan hyalüronik asit bazli birjelin ve bir poliolün bir reolojisini gösterir. MAZZUCCO D. et al., « Rheology of joint fluid in total knee arthroplasty patients » ; viskoz molekül (G") arasindaki büyüme frekansinin, dizin saglikli bir sinoviyal Iikidine (aitroz degildir) yönelik 0,41 ± 0,12 Hz`ye esit oldugunu belirtir. Bu büyüme frekansinin degeri, Fam et al., « Rheological properties of synovial fluids », Biorheology, 44, 59-74, 2007 yayini ile dogrulanir. Bu yayinda, bir sekil bir genç veya yasli kisiye ait bir sinoviyal Iikide yönelik veya artroz bir sinoviyal likide yönelik 0 ile 10 Hz arasinda bulunan modüller (G' ile G") arasindaki büyüme frekansini gösterir. - 0,41 Hz'nin altinda: G" G', sinoviyal likit, hasta dinlenirken eklemin kuvvetli sekilde yaglanmasini dahil ederek baskin sekilde viskozdur. - 0,41 Hz"nin üstünde: G' G", sinoviyal likit, hasta kostugunda veya zipladiginda, darbelerin kuvvetli sekilde absorpsiyonunu dahil ederek baskin sekilde elastiktir. Mevcut bulusun bir açisina göre, dogal kökenli diger polisakkarit(ler) ile veya bu olmaksizin hyalüronik asidin (veya bunun tuzlarindan birinin) veya bir veya daha fazla poliolün bir aköz solüsyonundan olusan jel, elastik modül (G') ile viskoz modül (G") arasinda sterilizasyondan sonra 0,41 Hz'ye yakin bir büyüme frekansina (fc) sahiptir. Böylelikle, jel sinoviyal Iikidin sahip olduguna yakin viskoelastik özelliklere sahiptir. Bundan dolayi, mevcut bulusun bir açisina göre: - fc'nin altinda: G" G', jel, dinlenme durumunda eklemin etkili sekilde yaglanmasi ile baskin sekilde viskozdur, - fc'nin üstünde: G' G", jel, hasta kostugunda veya zipladiginda, darbelerin etkili sekilde absorpsiyonu ile baskin sekilde elastiktir (eklemin korunmasi). Mevcut bulusun bir açisina göre, büyüme frekansi 0 ile 10Hz arasinda bulunur, tercih edildigi üzere 0.41 ± 0.41 Hz'dir. Bu tür bir reoloji dolayisiyla, eklemlere ve özellikle dize, kalçaya veya küçük eklemlere yönelik mekanik kisitlamalara uygundur. Bunun sonucunda, dizin veya diger eklemlerin viskosuplemantasyonu yoluyla artroz tedavisinde büyük bir avantaja sahiptir. Sekiller 3-5, mevcut bulusun bir açisina göre jellerin viskoz ve elastik modüllerini gösterir iken sekiller 1 ve 2, istemlerin kapsami dahiline girmeyen jellerin sahip oldugunu gösterir ve sekiller 6-9, ticari jellerin sahip oldugunu gösterir. Sekiller 10 ve 11, jellerin radikal, termal ve mekanik bozunum kinetigini ve hyalüronik asit / poliol afinitesini gösterir. Bulus dolayisiyla istem 1'de belirtildigi üzere enjekte edilebilir bir steril aköz jelin kullanilmasi ile ilgilidir. Hyalüronik asit tercih edildigi üzere biyofermantasyon yoluyla elde edilir ancak bu ayni zamanda hayvansal kökenli olabilir. Bunun moleküler kütlesi, 0,1 ila 10X106Da ve tercih edildigi üzere 2 ila SX106Da'dir. Hyalüronik asit konsantrasyonu, 1 ile 100 mg/ml arasinda ve tercih edildigi üzere 10 ile mg/ml arasinda bulunur. Hyalüronik asit ile birlikte kullanilabilen dogal kökenli polisakkarit (veya polisakkaritler) örnegin kondroitin sülfat, keratan, keratan sülfat, heparin, heparan sülfat, selüloz ve bunun türevleri, kitosan, ksantanlar, alginatlar ve bunlarin ilgili tuzlarinin tümü arasindan seçilir. Dogal kaynakli polisakkarit veya polisakkaritler gibi hyalüronik asit, önceki teknikte açiklanan çapraz baglama / asilama tekniklerine göre çapraz baglanmis veya çapraz baglanmamis, asilanmis veya asilanmamis olabilir. Istemlerin kapsami dahiline girmeyen poliol (veya polioller), örnegin gliserol, eritritol, ksilitol, Iaktitol, maltitol veya glukoz gibi siklik monosakkaritler arasinda seçilebilecektir. mg/ml arasinda bulunur. Kullanilan aköz solüsyon tercih edildigi üzere bir tamponlu solüsyondur. Bu tampon solüsyonun bilesimi, istenen fiziko-kimyasal (pH degeri, osmolarite) ve reolojik özelliklere sahip olmasi amaciyla seçilir. Tercih edildigi üzere, seçilen tampon solüsyonu, bir fosfat tampon solüsyonudur. Mevcut bulusa göre, formülasyon teknikte uzman kisi tarafindan iyi sekilde bilinen teknikler yoluyla ve tercih edildigi üzere otoklavda sterilize edilir. Mevcut bulusa göre formülasyon, eklem içine enjeksiyon yoluyla kullanilir ve enjekte edilen doz, tedavi edilen eklemin yapisina göre 0,1 ile 20 ml arasinda bulunabilir. Tanimlayici olarak, asagida hazirlanabilen 2 viskoelastik jel formülasyonu verilir: - Hyalüronik asit ve gliserol bazli viskoelastik jel (istemlerin kapsami dahilinde degildir) Fosfat tamponu içinde 20 mg/ml hyalüronik asit (MM 2,5x108 Da) ve 20 mg/ml gliserolden olusan steril solüsyon. - Hyalüronik asit ve sorbitol bazli viskoelastikjel Fosfat tamponu içinde 20 mg/ml hyalüronik asit (MM 2,5›<106 Da) ve 40 mg/ml sorbitolden olusan steril solüsyon. Örnekler: Örnekler, bulusu göstermek amaciyla sunulur ancak söz konusu bulusa yönelik hiçbir sekilde sinirlayici degildir. Asagidaki örneklerde hazirlanan formülasyonlar, çapraz baglanmamis veya poliol ile çapraz baglanmis sodyum hyalüronat (NaHA) bazli jellerdir. Çapraz baglanmamis veya çapraz baglanmis jellerin hazirlanmasi, teknikte uzman kisi tarafindan iyi sekilde bilinen tekniklere göre gerçeklestirilir. Bu jelleri imal etmeye yönelik kullanilan sodyum hyalüronat, 2.5<106 Da'ya esit bir moleküler kütleye sahiptir. Çapraz baglanmis jellerin durumunda, kullanilan çapraz baglayici BDDE'dir ve kullanilan çapraz baglama oraninin tanimi: kütle(BDDE) / kütle(kuru NaHA). Jel içine poliolün dahil edilmesi, çapraz baglanmamis veya çapraz baglanmis jel içine gerekli miktarda poliolün eklenmesi ve 10 dakika boyunca spatula ile karistirilmasi ile gerçeklestirilir (100 g"lik nihai jel içindir). Hazirlanan jeller, cam siringalar içine doldurulur, akabinde nemli isida (T = 121°C) sterilize edilir. Reolojik ölçümleri gerçeklestirmeye yönelik kullanilan reometre, 40 mm'lik bir düz instruments). Poliollerin dozaji, bir HPLC Ultimate ve bir iyon degisim kolonu yoluyla gerçeklesti rilir. Örnek 1: Enjekte edilebilir steril formülasyonlarin hazirlanmasi Formülasyonlar (A ve B) istemlerin kapsami dahilinde degildir. Formülasyon (A): gliserol ile çapraz baglanmamis NaHA bazli jel - 2,5X106 Da'da 15 mg NaHA - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Formülasyon (B): gliserol ile çapraz baglanmamis NaHA bazli jel - 2,5<106 Da`da 20 mg NaHA - 20 mg gliserol - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Formülasyonlar (C, D, E ve F) istemlerin kapsami dahilindedir. Formülasyon (C): propilen glikol ile çapraz baglanmamis NaHA bazli jel - 2,5<106 D'de 20 mg NaHA - 15 mg propilen glikol - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Formülasyon (D): mannitol ile çapraz baglanmamis NaHA bazli jel - 2,5›(106 Da'da 20 mg NaHA - 15 mg mannitol - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Formülasyon (E): sorbitol ile çapraz baglanmamis NaHA bazli jel - 2,5<106 Da'da 20 mg NaHA - 40 mg sorbitol - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Formülasyon (F): sorbitol ile çapraz baglanmis NaHA bazli jel - 2,5x106 Da'da 18 mg NaHA, çapraz baglama orani = %6 - 50 mg sorbitol Örnek 2: Örnek 1 'in formülasyonlarinin fiziko-kimyasal özellikleri - pH degeri (ortam sicakliginda) Formülasyon pH degeri A (kapsam dahilinde degildir) 7,0 B (kapsam dahilinde degildir) 7,2 - osmolarite Formülasyon Osmolarite (mûsmlkg) A (kapsam dahilinde degildir) 335 B (kapsam dahilinde degildir) 322 Formülasyonlar (A, B, C, D, E ve F) izotoniktir ve bir nötr pH degerine sahiptir. Örnek 3: Örnek 1'in formülasyonlarinin reolojik özellikleri Formülasyonlarin (A, B, C, D ve E) viskoelastik özellikleri, frekansa göre viskoz modülün (G") ve elastik modülün (G") gelisimi ölçülerek karakterize edilir (bakiniz sekiller 1 ila 5). Bu 5 formülasyona yönelik olarak, modülün (G') ve modülün (G") büyüme frekansi, saglikli sinoviyal Iikidinin sahip olduguna yakindir. Asagidaki tablo, her bir formülasyona yönelik ve saglikli sinoviyal likide yönelik büyüme frekansinin (fc) degerlerini verir. Formülasyon Büyüme frekansi (fc) (Hz) A (kapsam dahilinde degildir) 0,50 B (kapsam dahilinde degildir) 0,32 Saglikli sinoviyal likidi (Mazzucco D. et al. yayini) 0,41 ± 0,12 Mevcut bulusta açiklandigi üzere: - fc'nin altinda: G" G', jel, dinlenme durumunda eklemin etkili sekilde yaglanmasi ile baskin sekilde viskozdur, - fc'nin üstünde: G' G", jel, hasta kostugunda veya zipladiginda, darbelerin etkili sekilde absorpsiyonu ile baskin sekilde elastiktir. Örnek 4: Örnek 1 'in formülasyonlarinin bozunumlara yönelik direnci Bir poliolün NaHA bazli bir jel içindeki varliginin, bir radikal, termal ve mekanik eylem yoluyla jelin bozunumunu düsürmeye olanak sagladigini göstermeye yönelik olarak, poliol ile NaHA bazli jellerin (örnek 1'in formülasyonlari) bozunumuna karsi direnç ile poliol olmaksizin NaHA bazli jelin (= referans jeller) bozunumuna karsi direnç karsilastirilmistir. Örnek 1'in formülasyonlarina (B, C, D ve E) yönelik olarak, poliol olmaksizin NaHA bazli referans jel, 20 mg/ml NaHA'da (fosfat tamponu içinde MM: 2,5<1O6 D) çapraz baglanmamis NaHA bazli birjeldir - formülasyon (G). Örnek 1'in formülasyonuna (F) yönelik olarak, poliol olmaksizin NaHA bazli referans jel, %6'Iik bir çapraz baglanma oranina sahip olan. 18 mg/ml NaHA'da (fosfat tamponu içinde, çapraz baglamadan önce MM: 2,5<106 D) çapraz baglanmis NaHA bazli bir jeldir - formülasyon (H). Bozunum testi, test edilecek jel içine bir oksidan eklenerek, 1 dakika boyunca spatula ile homojen hale getirilerek, 37°C'lik sicakliga yerlestirilerek ve %0.3'Iük bir deformasyon uygulayarak gerçeklestirilir. 0,7 Hz'de parametrenin (tanö=G"/G') degeri (jelin viskoelastik özelliklerinin karakteristik parametresi) zaman içinde ölçülür. Bu parametrenin, jelin dereceli sekilde tahribine es anlamli olarak zaman içinde arttigi bulunur. Formülasyonlara (B, C, D, E, F, G ve H) yönelik t=O ve t=15 dakikada ölçülen degerler asagidaki tabloda verilir. Formülasyon Tanö (t = 0 dakika) Tanö (t = 15 dakika) A Tanö (%) B (kapsam dahilinde degildir) 1,10 3,34 + %204 C 1,08 3,13 + %205 D 1,19 4,63 + %289 E 1,08 2,57 + %138 G 1,41 6,56 + %365 H (referans) 0,74 0,93 %+26 Mevcut bulusta açiklandigi üzere, her bir formülasyon (B, C, D ve E) poliol olmaksizin jelin sahip olduklarindan (formülasyonlar (6)) önemli ölçüde daha büyük bozunumlara karsi bir dirence sahiptir. Ayni sekilde, formülasyon (F) poliol olmaksizin karsilik gelen jelin sahip oldugundan (formülasyonlar (H)) önemli ölçüde daha büyük bozunumlara karsi bir dirence sahiptir. Sonuç olarak, polioller bozunumlara karsi etkili sekilde jeli korur. Örnek 5: Poliol ile ve bu olmaksizin bir formülasyonun hizlandirilmis olgunlastirma çalismasi Iki formülasyona 40°C'de etüvde hizlandirilmis olgunlastirma islemi uygulanir: - örnek 1'in formülasyonu (B) (istemlerin kapsami dahilinde degildir): hyalüronik asit ve gliserol bazli solüsyon - alkol ilavesi olmaksizin formülasyon (G) (örnek 4'te açiklanmistir) - 2,5x106 Da'da 20 mg hyalüronik asit - 1 ml fosfat tamponu için yeterli miktar Bir sifir viskozite ölçümü (sifir kesme viskozitesi) ve elastik modül (G") ve viskoz modül (G") arasindaki büyüme frekansinin (fc) belirlenmesi 3 zamanda gerçeklestirilir (t=0, 7 Elde edilen sonuçlar, asagidaki tabloda verilir: 40°C'de 8 f To'ya göre sifir f To'ya göre fc olgunkastirma Formülasyon viskozite degiskeni gunlerinin sayisi degiskeni (%) (%) B 252 / 0.32 / G 192 / 0,39 / 26 gün *ND: belirlenmemistir Hizlandirilmis olgunlastirma sirasinda, sifir viskozite kaybinin ve büyüme frekansinin (fc) dengelenmesinin, formülasyonun (B) durumunda (mevcut bulusa göre formülasyon), poliol olmaksizin formülasyonun (formülasyon (G)) durumundan daha az oldugu bulunur. Örnek 6: 4 ticari viskosuplemantasyon ürünü ile mevcut bulusa göre elde edilen bir formülasyonun reolojisinin karsilastirilmasi Test edilen ürünler asagidakilerdir: degildir P1 Synocr0m® P2 Structovial® Fermathron P4 Lubravisc® Örnek 1'in formulasyon Hyalüroni Hyalüronik asit k asidin . .. Sterilizasyo lmalatçi konsantrasyon molekuler __ u (mg/ml) kutlesi nemli isi nemli isi HYALTECH 10 1.106 filtrasyon 4.106 nemli isi BIOTECH u ulanama 20 + 15 m /mI yg ( 9 25.105 nemli isi z mannitol) Test edilen 5 jele yönelik olarak, sekiller 6 - 9 frekansa göre viskoz (G") ve elastik (G') modülleri verir. Örnek 1'e göre sadece jelin saglikli sinoviyal Iikidinin sahip olduguna (0,41 Hz) yakin bir büyüme frekansina (0,32 Hz) sahiptir. Asagidaki tablo, ürünlere (P1 ila P4) yönelik ve örnek 1`in formülasyonuna (A) yönelik büyüme frekanslarinin (fc) degerlerini gruplandirir. Örnek 1'in formülasyonu (D) Mazzucco D. et al. yayinina (yukarida belirtilir) göre, saglikli sinoviyal likidin büyüme frekansinin (0,41 Hz) yürüme (0,7 Hz) ve kosma (3 Hz) sirasinda dizde gözlemlenen frekanslarin altinda oldugu bilinir. Ürünlere (P1 ila P3) yönelik olarak, büyüme frekansi 3 Hz'den oldukça yüksektir ve bunun sonucu olarak, ürünler diz hareket halinde oldugu darbelerin absorpsiyonuna olanak saglayan kuvvetli bir elastiklige sahiptir. Ürün (P4), oldukça düsük bir büyüme frekansina sahiptir, elastik modül tüm frekans araliginda (0,1 - 10 Hz) viskoz modülden yüksektir. Bunun sonucu olarak, elasitklik diz hareket halinde oldugunda önemlidir ancak eklemin yaglandirilmasi hasta dinlenirken az miktarda etkilidir. Örnek 7: 3 ticari viskosuplemantasyon ürününün ve mevcut bulusa göre elde edilen bir formülasyonun bozunumlara karsi direncinin karsilastirilmasi Test edilen ürünler asagidakilerdir: Urün Imalatçi degildir konsantrasyonu (mg/ml) T1 Arthrum® 20 Pharmaceutical T2 Ostenil® TRB Chemedica 10 T3 Synocrom® 10 Örnek 1'in uygulanamaz uygulanamaz 20 (+ 40 mg/ml sorbitol) formülasyonu (E) Bozunum testi, örnek 4`te açiklanan yönteme göre gerçeklestirilir. 0,7 Hz'de parametenin (G') degeri, zaman içinde takip edilir. Böylelikle elde edilen reoloji egrileri, sekil 10`da verilir. Mevcut bulusa göre jelin test edilen 3 ticari üründen önemli ölçüde daha yavas sekilde bozundugu bulunur. Örnek 8: kuvvetli hyalüronik asitl poliol afinitesinin kanitlanmasi Hyalüronik asit ile poliol arasindaki kuvvetli afiniteyi ve dolayisiyla poliol yoluyla jelin uzun süreli korunmasini göstermek amaciyla, diyaliz yoluyla bir poliolün salinimini takip etmeye yönelik bir çalisma gerçeklestirilmistir. g formülasyon (E) (20 mg/ml çapraz baglanmamis NaHA ve 40 mg/ml sorbitol bazli jel - örnek 1) bir diyaliz membrani (n°1) (Spectra/Pore®, MWCO : 1244.000) içine uygulanmistir. 40 mg/ml sorbitol içeren 5 g'lik bir fosfat tampon solüsyonu, bir 2. diyaliz membrani (n°2) (Spectra/Pore®, MWCO: 12-14,000) - (membran ile ayni boyuta sahiptir) içine uygulanmistir. Bu membranlar, manyetik karistirma altinda 50 g saflastirilmis su (= diyaliz banyosu) içeren ilgili siseler içinde düzenlenmistir. HPLC yoluyla sorbitol konsantrasyonunun ölçümleri, jel veya tampon solüsyonu ile membran disinda sorbitol saliniminin kinetigini takip etmek amaciyla farkli zamanlarda diyaliz banyolari içinde gerçeklestirilmistir. Zaman içinde sorbitol konsantrasyonunun izlenme egrileri sekil 11'de verilir. Bir jel içinde sorbitol saliniminin kinetigi, bir tampon solüsyonu içinde oldugundan önemli ölçüde daha yavastir. Bu çalisma, hyalüronik asit ile jel içinde mevcut poliol arasindaki sinerjiyi vurgular: kuvvetli hyalüronik asit / poliol afinitesi, poliolün uzun bir zaman süresi boyunca jel içinde mevcut olmasina olanak saglar ve jele karsi poliolün korunma kapasitesi, bozunumlara karsi jelin uzun süreli kuvvetli bir direncine sahip olmaya olanak saglar. TR TR