TW200528124A - Active oxygen eliminator derived from natural substance and use thereof - Google Patents

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200528124 (1) 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於來自天然物的活性氧消除劑及其用途。 更詳細而言，本發明係關於含有效成份之類黃酮類或羥基 肉桂酸衍生物等，有效地作爲食品用或化粧料用等之來自 天然物的活性氧消除劑，以及含該活性氧消除劑之食品及 化粧料者。 【先前技術】 氧雖然對於生物體係由代謝產生能量等之維持生命所 必須之物質，但因生物體內外之各反應系，亦即一部份之 免疫反應或紫外線、放射線照射等而產生富有反應性之活 性氧物質（reactive oxygen species)(超氧陰離子·· 〇2_、過氧化氫：H202、氫氧自由基：〇Η·、單態氧： 1 〇 2等）或自由基。已知此等活性氧物質或自由基，例如 φ 於某免疫反應中，扮演將入侵細菌等異物不活性化之角 色，另一方面，與生物體成份反應，引起脂質過氧化，蛋 白質或核酸變性，成爲促進各種疾病或老化的原因等。已 知尤其皮膚係身體的最外層，所以容易受到因紫外線或放 . 射線等外來因素所發生的活性氧物質或自由基之影響，此 等若產生過多於皮膚時，由自由基反應而增強過氧化脂質 生成或產生黑斑、雀斑等之皮膚異常色素。 生物體內，由各種原因所產生之超氧陰離子〇2 '係由 超氧歧化酵素（以下簡稱爲SOD )轉換成Η2 02 ’進而， (2) 200528124 H2〇2因酵素過氧化氫酶或麩胺基硫過氧化酶（Glutathione Peroxidase )的作用，分解成水與氧。除了這些酵素，另 > 外加上生物體存在維生素C或維生素E等來自食品之抗氧 化物質，此等形成抑制生物體內自由基反應或氧化反應之 網路，認爲與防禦由活性氧或自由基之各種障礙相關。然 而，已知由於周圍及生物體內環境的變化，例如細菌或病 毒等之感染、食物之攝取狀態或營養狀態之變化、紫外線 φ 照射過量、接受來自周圍之各種壓力、以及加齡、老化 等，而使上述網路平衡崩潰時，生物體所產生的活性氧或 自由基之代謝平衡崩潰，結果出現過氧化脂質量增加、皮 膚炎、黑斑、皺紋、濕疹及雀斑等成爲美容上障礙之各種 症狀，進而，引起關節炎、動脈硬化、糖尿病、肝炎、腎 炎或癌等疾病。 另外，關於人類所攝取的食品或食品添加物，已知因 紫外線或放射線作用所發生的活性氧或自由基所引起的氧 φ 化或通常的氧化，引起包含於此等之脂質其他成份的過氧 化或變性，攝取此等氧化、變性物，對於健康上並不適 宜。另外，已知化粧品、皮膚外用劑所配合之含不飽和脂 質之天然油脂或界面活性劑中，有容易受紫外線等作用而 - 氧化者，結果係常引起變色或異臭發生等令人厭惡的現 _ 象。容易地推測由使用如此容易受氧化的化粧品基劑，因 上述各原因而使皮膚所產生之脂質過氧化物量增多，增大 成爲上述美容上障礙之各症狀。 傳統上’作爲化粧品、食品、食品添加物及飼料所添 -6- (3) 200528124 加之抗氧化劑，有二丁基羥基甲苯（ΒΗΤ ) 、丁基經基茴 香醚（BHA)及乙氧基奎寧（Ethoxyquin)等之合成抗氧化 .劑，以及抗壞血酸或維生素E等之天然抗氧化劑。上述之 合成抗氧化劑雖然抗氧化效果優異，但仍有致癌性等安全 性上的問題，關於其使用亦有受局限者。另一方面，上述 之來自天然之抗氧化劑，雖然安全性上受到好評，但有抗 氧化效果比合成抗氧化劑差很多之缺點。 φ 近年來，如此狀況下，由香粧品科學上、食品科學上 或藥學上觀點，盛行進行搜尋具有消除活性氧或自由基效 果或抗氧化效果物質或組成物，其結果係逐漸知道相當多 的活性氧與自由基消除劑或抗氧化劑。例如，提出含有黃 今所含類黃酮成分之黃等素（baicalein)的活性氧消除劑 (例如參考特公平4 — 3 4969號公報）、橄欖油或其成份 之dehydrodieugenol所形成之活性氧消除與除去劑（例如 參考特開平3 — 2 2 7 9 3 8號公報）、以胡桃殼萃取物爲有效 鲁 成份之活性氧消除劑（例如參考特開平7 - 6 9 9 1 2號公 報）等。 另一方面’傳統上已知作爲天然的抗菌性物質或促進 健康物質之蜂膠。此蜂膠係蜜蜂爲保護蜂巢所製作的濃綠 ， 色至茶褐色之黏著性物質，蜜蜂由樹木所採取之膠質、樹 — 液、植物色素系物質及香油等之聚集體中，混合自身的分 泌物、爸：繼等而製作。關於該蜂膠，報告指出具有抗腫瘤 活性、ί几氧化活性、抗炎症活性及抗菌活性等各種生物活 性。作爲具有生理活性之化合物群，可舉例如肉桂酸衍生 (4) 200528124 物 '類黃酮類、酯類或其他酚性化合物等，報告指出亞熱 帶產的蜂膠中，並存在萜烯類。 【發明內容】 〔發明之揭示〕 本：發明係以提供高的消除活性氧或自由基能力，而且 對人體安全：’有效地使用於各種用途之來自天然物的活性 φ 氧消除劑及其用途爲目的者。 本發明者爲達成上述目的，努力硏究的結果，發現例 如萃取處理蜂膠原塊粉末可得到含類黃酮類、羥基肉桂酸 衍生物及其他酚性化合物等多種有效成份之來自天然物的 物質，可達成該目的，基於此發現而完成本發明。 亦即，本發明係提供 (1 )含水、有機溶劑與乳化劑，以及含對香豆酸、 3，4〜二鄰咖啡醯奎尼酸、3，5 一二鄰咖啡醯奎尼酸、4 一羥 # 基一 3 —異戊烯基肉桂酸及3,5,7一三羥基一 4，—甲氧基黃 _醇爲主要有效成份爲特徵之來自天然物的活性氧消除 劑， 、 （2)另外，含3,5 -二異戊烯基一 4 —羥基肉桂酸、 ， kaempheride、betuletol、綠原酸、ermanin、白楊黃素、 - 咖啡酸、kaempherol及香草醛爲有效成份之上述（1 )項 記載之活性氧消除劑， (3 )有機溶劑係分子中有2個以上羥基之多元醇系 化合物之上述（1 )或（2 )項記載之來自天然物的活性氧 -8- (5) (5)200528124 消除劑， (4 )乳化劑係至少1種選自甘油脂肪酸酯、聚甘油 脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖 脂肪酸酯、卵磷脂類及類皂角苷類之上述（1 ) 、（ 2 )或 (3 )項記載之來自天然物的活性氧消除劑， (5 )含上述（1 )至（4 )項中任一項記載之活性氧 消除劑爲特徵之食品， (6 )含上述（1 )至（4 )項中任一項記載之活性氧 消除劑爲特徵之化粧料者。 依據本發明，可提供高的消除活性氧或自由基能力， 而且對人體安全，有效地使用於各種用途之來自天然物的 活性氧消除劑，及含該活性氧消除劑之食品及化粧料。 〔用以實施發明之最佳型態〕 本發明之活性氧消除劑係含水、有機溶劑與乳化劑， 以及含具有下述結構之對香豆酸（P - coumaric acid)、 3,4 —二鄰咖啡醯奎尼酸（3,4 一 di — O — caffeoylquinic acid ) 、3,5 —二鄰咖啡醯奎尼酸（3,5 — di — 0 — caffeoylquinic acid) 、4 —經基—3 —異戊燃基肉桂酸（4 — hydroxy — 3 — prenylcinnamic acid )及 3,5,7 —三經基一 4’ —甲氧基黃酮醇（3,5,7 — tri hydroxy - 4’ -methoxyflavonol)爲主要有效成份之來自天然物者。 (6)200528124

CH=CHCO〇H 對香豆酸

3,4-二鄰咖啡醯奎尼酸 3,5-二鄰咖啡醯奎尼酸 4-羥基-3-異戊烯基肉桂酸 3,5,7-三羥基-4’-甲氧基黃酮醇 本發明之活性氧消除劑可再含具有下述結構之3，5 -二異戊烯基一 4 一羥基肉桂酸（阿特盤尼西）[3 / -d i p r e n y 1 — 4 — h y d r o x y c i η n a m i c acid ( a r t e p i 11 i n C )]、 -10 - (7) 200528124 kaempheride 、 b e t υ 1 e t ο 1 ( beturetol ) 、綠原酸 (chlorogenic acid ) 、ermanin、白楊黃素(chrysin)、 咖啡酸（caffeic acid ) 、 kaempherol 及香草醒 (vanillin)爲有效成份。

3,5-二異戊烯基-4-羥基肉桂酸

-11 - (8)200528124

ermanin

白楊黃素

CH=CHCOOH 咖啡

另外，kaempheride係4’ —甲氧基—3,5,7 —二經基頁 色素，b e丨u 1 e t ο 1係4，，6 —二甲氧基一 3，5 ; 7 -三經基黃色 -12 - (9) 200528124 素，ermaniii係 3,4’ 一二甲氧基—5,7—二羥基黃色素，白 楊黃素係5,7 —二羥基黃色素，kaempherol係3,4，，5,7-四 _ 羥基黃色素。 本發明之活性氧消除劑所含之有機溶劑係以分子中有 2個以上羥基之多元醇系化合物爲宜，具體上可舉例如甘 油、乙二醇、二乙二醇、丙二醇、二丙二醇、甘油之環氧 化物加成物、乙二醇之環氧化物加成物、丙二醇之環氧化 • 物加成物、葡萄糖酸內酯（GUcono-delta-1 actone)，另外， 木糖醇、己糖醇、甘露糖醇及山梨糖醇等之糖醇等。此等 係可含1種’亦可含2種以上，但使用該活性氧消除劑於 食品用途時，尤其以甘油及各種糖醇爲宜。 另一方面，作爲乳化劑，可舉例如甘油脂肪酸酯、聚 甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、 蔗糖脂肪酸酯、卵磷脂類及類皂角苷類。 作爲上述之甘油脂肪酸酯，可舉例如甘油單月桂酸 φ 酯、甘油單棕櫚酸酯、甘油單硬脂酸酯、甘油單油酸酯、 甘油單亞油酸酯及甘油單蓖麻醇酸酯等。 作爲聚甘油脂肪酸酯，可舉例如二甘油單月桂酸酯、 二甘油單棕櫚酸酯、二甘油單硬脂酸酯、二甘油單油酸 . 酯、二甘油單亞油酸酯、二甘油單蓖麻醇酸酯、四甘油單 ^ 月桂酸酯、四甘油二月桂酸酯、四甘油單棕櫚酸酯、四甘 油二棕櫚酸酯、四甘油單硬脂酸酯、四甘油二硬脂酸酯、 四甘油單油酸酯、四甘油二油酸酯、四甘油單亞油酸酯、 四甘油二亞油酸酯、四甘油單蓖麻醇酸酯、四甘油二蓖麻 -13 - (10) (10)200528124 醇酸酯、四甘油單二十二烷酸酯、四甘油二二十二烷酸 酯、五甘油單月桂酸酯、五甘油二月桂酸酯、五甘油單棕 櫚酸酯、五甘油二棕櫚酸酯、五甘油單硬脂酸酯、五甘油 二硬脂酸酯、五甘油單油酸酯、五甘油二油酸酯、五甘油 單亞油酸酯、五甘油二亞油酸酯、五甘油單蓖麻醇酸酯、 五甘油二蓖麻醇酸酯、五甘油單二十二烷酸酯、五甘油二 二十二烷酸酯、十甘油單月桂酸酯、十甘油二月桂酸酯、 十甘油三月桂酸酯、十甘油單棕櫚酸酯、十甘油二棕櫚酸 酯、十甘油三棕櫚酸酯、十甘油單硬脂酸酯、十甘油二硬 脂酸酯、十甘油三硬脂酸酯、十甘油單油酸酯、十甘油二 油酸酯、十甘油三油酸酯、十甘油單亞油酸酯、十甘油二 亞油酸酯、十甘油三亞油酸酯、十甘油單蓖麻醇酸酯、十 甘油二蓖麻醇酸酯、十甘油三蓖麻醇酸酯、十甘油單二十 二烷酸酯、十甘油二二十二烷酸酯、十甘油三二十二烷酸 酯、十甘油單異硬脂酸酯、十甘油倍半異硬脂酸酯、十甘 油二異硬脂酸酯、十甘油三異硬脂酸酯、十甘油單（1 2 -羥基）硬脂酸酯、十甘油二（1 2 -羥基）硬脂酸酯及十甘 油三（1 2 -羥基）硬脂酸酯等。 作爲丙二醇脂肪酸酯，可舉例如丙二醇單月桂酸酯、 丙二醇單棕櫚酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、丙二醇單油酸 酉_、丙二醇單亞油酸酯、丙二醇單蓖麻醇酸酯、丙二醇單 褽硬脂酸酯及丙二醇單（1 2 —羥基）硬脂酸酯等。 作爲山梨糖醇酐脂肪酸酯，可舉例如山梨糖醇酐單月 桂酸酯、山梨糖醇酐二月桂酸酯、山梨糖醇酐單棕櫚酸 -14 - (11) 200528124 酯、山梨糖醇酐二棕觸酸酯、山梨糖醇酐單硬脂酸醋 梨糖醇酐二硬脂酸酯、山梨糖醇酐單油酸酯、山梨糖 二油酸酯、山梨糖醇酐單亞油酸酯、山梨糖醇酐二亞 醋、山梨糖醇酐單蓖麻醇酸酯、山梨糖醇酐二蓖麻 酯、山梨糖醇酐單二十二烷酸酯、山梨糖醇酐二二十 酸醋、山梨糖醇酐單異硬脂酸醋、山梨糖醇酐二異硬 酯、山梨糖醇酐單（12—經基）及山梨糖醇酐二（12 基）硬脂酸酯等。 作爲蔗糖脂肪酸酯，可舉例如蔗糖單月桂酸酯、 二月桂酸酯、蔗糖單棕櫚酸酯、蔗糖二棕櫚酸酯、蔗 硬脂酸酯、蔗糖二硬脂酸酯、蔗糖單油酸酯、蔗糖二 酯、蔗糖單亞油酸酯、蔗糖二亞油酸酯、蔗糖單蓖麻 酯、蔗糖二蓖麻醇酸酯、蔗糖單異硬脂酸酯、蔗糖二 脂酸酯、蔗糖單（1 2 -羥基）及蔗糖二（i 2 -羥基） 酸酯等。 另外，作爲卵磷脂類，可舉例如大豆卵磷脂或其 物之卵磷脂等，作爲類皂角苷類，可舉例如皂樹皮萃 (Quill aj a)或大豆皂角苷等。 此等乳化劑係可含1種，亦可含2種以上，另外 述乳化劑係可作爲食品用，所以使用該活性氧消除劑 品用途時，含有亦無妨。 本發明之活性氧消除劑中，水與上述有機溶劑與 乳化劑之含有比率係以此等之合計量爲1 〇 〇質量％時 常的範圍係水：5至5 0質量％，有機溶劑·· 4 5至94 · 卜山 醇酐 油酸 醇酸 二烷 脂酸 卜羥 蔗糖 糖單 油酸 醇酸 異硬 硬脂 他植 取物 ，上 於食 上述 ，通 9質 ~ 15- (12) (12)200528124 量％及乳化劑：〇. I至10質量％ ’以水：5至3 〇質量 %，有機溶劑：65至94.5質量％及乳化劑：〇·1至5質量 %爲宜。 本發明之活性氧消除劑中，上述有效成份之合計含量 雖可因應該活性氧消除劑用途而適當地選擇’但通常爲3 至40質量％程度。 本發明之活性氧消除劑係如下所示，可由萃取處理蜂 膠原塊而製造。 爲有效地進行粉碎及萃取處理原料之蜂膠原塊，要求 使用保存於1 5 °C以下，以〇至1 〇°C程度溫度者爲宜。 首先，由粉碎機粉碎處理上述蜂膠原塊。此時，粉碎 機所安裝的篩網孔徑，通常直徑爲1至5mm，以2至3mm 爲宜。其次，相對於1質量份之此蜂膠原塊粉碎物，加入 3至7質量份程度之含上述比率之水與上述有機溶劑與上 述乳化劑之混合液所形成之萃取溶劑。萃取溶劑之使用量 爲3質量份未滿時，因蜂膠原塊粉碎物與萃取溶劑之黏 性，成爲萃取作業效率降低的原因，另外，超過7質量份 時，則有有效成份含量降低之虞。 其次，加熱溫度係於5 0至9 0 °C程度，以6 5至8 0 °c 爲宜，進行3 0至12 0分鐘程度之萃取處理。萃取處理 後’過爐處理以去除固形物’而得本發明之活性氧消除 劑。 如此所得之本發明之活性氧消除劑，爲成爲適合用途 之濃度，可餾去或添加萃取溶劑，進行調整濃度。進而， -16 - (13) 200528124 因應需要，亦可進行冷凍乾燥或噴霧乾燥，以粉末狀使 用。 • 本發明之活性氧消除劑係含有類黃酮類、羥基肉桂酸 _ 衍生物及其他酚性化合物等之親水性至疏水性範圍大的成 份’具有局的消除活性氧與自由基能力以及抗氧化能力， 可使用於例如食品用途、化粧料用途、進而飼料用途等。 本發明之活性氧消除劑係可直接以液狀品配合於食品 φ 或化粧料等之組成物’或配合預先將該有效成份製劑化者 於上述組成物，賦予消除活性氧效果及抗氧化效果，而可 提高上述組成物之商品價値。 製劑化例’旋劑、膠囊劑、散劑或顆粒劑時，可將上 述有效成份依配方適當地組合澱粉、乳糖或甘露糖醇等之 賦型劑、殘甲基纖維素或羥丙基纖維素等之結合劑、結晶 纖維素或殘甲基纖維素鈣等之崩壞劑、滑石或硬脂酸鎂等 之潤澤劑，因應其他需要之濕潤劑、著色劑或香料等而製 • 劑化。另外，作爲液劑，可爲水性或油性之乳濁劑或糖漿 劑，可適當地組合僅糖漿、山梨糖醇、甲基纖維素或羧甲 基纖維素鈉等之懸濁化劑、蛋黃卵磷脂、山梨糖醇酐單脂 肪酸酯、月桂基聚乙二醇或蓖麻油等之乳化劑，因應其他 ’ 需要之防腐劑、保存劑或安定化劑等而製劑化。軟膏時， • 可適§地配合凡士林、鏈烷烴、矽、增塑基劑、植物油或 蠟類等之疏水性基劑、精製含水羊毛脂、羧乙烯聚合物、 丙一醇或1，3 一 丁二醇等之親水性基劑、聚乙醇胺等之乳 化劑等而製劑化。 -17- (14) 200528124 本發明另外提供含上述活性氧消除劑之食品及化粧 料。 作爲上述食品型態，可舉例如該活性氧消除劑本身、 或味噌、醬油、美乃滋等之調味料、沙拉油等之食用油、 各種調理食品、甜點類、冰果、飴、口香料或果汁等之點 心及飮料等。此等食品中，可使用因應使用目的之任意成 份。例如冰果或飮料時，可適當地配合果汁、甘味料、酸 g 味料、著色料或香料等。本發明之有效成份於食品之添加 量係依其型態而可適當地改變。 另一方面，可舉例如作爲化粧品型態之各種物品，例 如化粧水、乳液、乳霜爲始之洗面乳、面膜料、彩粧化粧 料、頭髮化粧料、嘴唇化粧料、指甲用化粧料、浴劑或抑 汗劑等。此等化粧品中，可使用因應使用目的之任意成 份，例如乳霜時，可依常法適當地配合凡士林、鏈院烴、 三十碳烷等之疏水性基劑、含水羊毛脂、丙二醇及1，3 一 φ 丁二醇等之親水性基劑、脂肪酸單甘油酯類、山梨糖醇酐 脂肪酸酯類等之乳化劑、防腐劑、顏料、香料，因應其他 需要之營養劑、保濕劑、美白劑及紫外線吸收劑等。同樣 地，關於其他製品，亦可適當地配合因應其種類之必要成 份。本發明之有效成份於化粧品之添加量係依其形態而可 適當地改變。 另外’本發明之活性氧消除劑亦可配合於飼料。作爲 飼料之型態，可舉各種物品，例如家畜、家禽及魚類用之 粉狀、煉製品狀或狀之配合飼料。此等飼料中，可使用 -18 - (15) 200528124 因應使用目的之任意成份，例如煉製品狀之飼料時，可適 當地配合著色料或香料等。本發明之有效成份於飼料之添 加量係依其形態而可適當地改變。 【實施方式】 實施例 其次係由實施例更詳細地說明本發明，但本發明並非 局限於此等例者。 實施例1 (1 )蜂膠原塊萃取物 作爲萃取溶劑，係使用4種之（a )水單獨、（b )甘 油單獨、（c) 10質量％之水及90%之甘油之混合液、以 及（d ) 1 0質量％之水及8 9 %之甘油及1 %之乳化劑（甘 油單油酸酯）之混合液。 於25g之蜂膠原塊（巴西產Baccharis draculifolia基 源型）粉碎物中，分別加入200g之上述萃取溶劑（a)至 (d)，於攪拌下，以70°C萃取1小時後過濾，而得4種 蜂膠原塊萃取物（a ) 、（ b ) 、（ c )及（d )。 (2 )蜂膠食品規格成份含量 關於上述（1 )所得之4種蜂膠原塊萃取物（a )、 (b ) 、 （ c )及（d )，適用財團法人日本健康、營養食 品協會蜂膠食品規格成份含量測定法（平成7年改定）， -19- (16) 200528124 使用吸光光度法（λ =415nm)，測定槲黃素（quercetin) (東京化成）當量。其結果如表1。 另外’由財團法人日本健康、營養食品協會蜂膠食品 規格成份含量測定法（平成1 3年改定），測定蜂膠食品 規格成份含量（質量％ )。其結果如表1所示。 (3 ) DPPH自由基消除活性

關於上述（1 )所得之4種蜂膠原塊萃取物（a )、 (b ) 、 （ c )及（d )，爲評估抗氧化活性，製作此等之 各種濃度之乙醇溶液，混合同量的60微莫耳/L濃度之 DPPH ( 1，1——苯基—2 - 苦醯胼（picrylhydrazyl)) (和光純藥工業）乙醇溶液，測定3 0分鐘後之吸光度 (λ = 520nm)，求取各膠膠原塊萃取物之DPPH自由基 消除之IC5〇値。其結果如表1所示。 表1 萃取溶劑 Quercetin 當量 蜂膠規格 DPPH自由基 之種類 (nig) 成分含量 消除活性 (質量％) (% IC5〇) (a) 180 5.3 0.057 (b) 32 1 9.7 0.02 1 (c) 298 9.4 0.020 ⑷ 353 11.0 0.020 由表1可知，使用水與有機溶劑與乳化劑之混合液所 -20- (17) (17)200528124 开夕成之卒取溶劑（d )所得之蜂膠原塊萃取物（d )(本發 明之活性氧消除劑）之蜂膠食品規格成份含量（Quercetin 當量’質量％ )係比使用其他萃取溶劑（a ) 、 （ b )及 (c )所得之蜂膠原塊萃取物（a ) 、（ b )及（^ )顯示高 値。 另外’可知蜂膠原塊萃取物（d )係顯示與蜂膠原塊 萃取物（b )及（c )約相同程度高之DPPH自由基消除活 (4)由HPLC分析含有成份 關於上述（1 )所得之蜂膠原塊萃取物（a )、 (b ) 、 （ c )及（d )，由高效能液相層析法（HPLC )進 行分析。 Η P L C之測定條件係使用管柱 C L C 一 Ο D S ( 1 5 0 X 6.0mm，i.d·)，管柱溫度40°C，移動相係HPLC用之輸 送液，線性梯度條件，由開始時之0.5 %醋酸（和光純藥 工業）一甲醇（和光純藥工業）（7 0 : 3 0v/v ) ，30分鐘 後保持爲0.5%醋酸—甲醇（8 0 : 20v/v ) 30分鐘，分析時 間爲50分鐘，流量爲1.0ml/分，測定波長；I = 2 75 ηηι。 蜂膠原塊萃取物（a ) 、（ b ) 、（ c )及（d )，溶解 於HPLC用蒸餾水（和光純藥工業）或HPLC用甲醇（濃 度：1 0 m g / m 1 )後，以 S a r t 〇 r i u s M i n i s a r t 過濾（〇 · 4 5 μ m， Goettingen，Germany)後，使用 10μ1 濾液於 HPLC 分 析。 -21 - (18) 200528124 將蜂膠原塊萃取物（a ) 、 ( b ) 、 （ c )及（d )之層 析圖，分別如圖1、圖2、圖3及圖4所示，並且以層析 圖之滯留時間爲指標，相對應之波峰面積及波峰高度如表 2所示。 表2

化 合 物 R.T. 萃取物⑻ 萃取ί _ 萃取物(C) 萃取物(d) 波峰 面積 高度 波峰 面積 高度 波峰 面積 高度 波峰 面積 高度 a 5.1 125290 6068 102569 '4791 118675 5196 116167 5088 b 5.4 64218 3516 46914 2708 48786 3089 49486 3048 c 6.8 67983 2923 49105 2668 62464 3141 62474 3148 d 8.5 36815 2422 28592 2137 46542 2485 45092 2452 e 9.5 613175 63510 736791 79462 857236 90101 858366 90377 f 10.2 452055 26322 485907 31914 599082 35311 591450 35039 g 12.1 30527 2569 42026 4122 55639 4936 58157 5020 h 12.5 470342 31374 551542 39007 637013 42228 634979 41826 i 13.5 37333 2824 47636 3484 51477 3869 j 14.0 24799 2254 44366 3166 33045 3091 k 14.8 48871 4511 66827 4881 54559 5328 1 15.4 22556 1933 92674- 2938 92312 2965 m 16.8 60700 3357 131557 9200 163546 10024 165998 10080 n 17.4 50201 4998 63077 5497 69077 6073 o 19.2 43709 3403 185670 19187 172834 16222 212072 20240 P 21.6 49904 2512 49549 1957 51501 2031 q 26.0 183990 13576 149566 10422 215098 15207 r 27.1 55024 5542 51095 4697 62991 5840 s 27.7 54329 5180 45326 3843 65628 5931 t 28.2 115784 11797 89560 8834 139402 14079 u 29.1 123128 5785 104342 3467 166476 5674 V 29.9 • 94387 8707 54525 2650 115563 7012 w 30.8 115012 8519 74578 6122 154801 10109 X 31.5 43888 2120 27047 1620 47771 2711 y 33.2 42724 4575 31290 3187 51312 5149 z 34.5 132448 14993 104284 11750 183655 20617 AA 39.4 154791 11187 126105 9084 232224 16489 AB 41.5 44139 2726 34879 2154 61039 3745 未記載波峰面積爲30000以下時之數據。R.T.=滯留時間(分) -22 - (19) (19)200528124 化學名係a :綠原酸（c h 1 o r o g e n i c a c i d ) ' c :咖啡酸 (caffeic acid ) 、d :香草醛（vani 11 in ) 、e :對香豆酸 (p - coumaric acid ) 、f: 3,5 —二鄰咖啡醯奎尼酸（3,5 —di — O — caffeoylquinic acid) 、h ·· 3,4 —二鄰咖啡醯奎 尼酸（3,4 — di — O — caffeoylquinic acid) 、〇·· 3,5,7 —三 羥基—4’ —甲氧基黃酮醇（3,5,7 — trihydroxy — 4’ — methoxyflavonol ) 、p: kaempherol、q: 4 —經基—3 -異 戊嫌基肉桂酸（4 — hydroxy — 3 — prenylcinnamic acid)、 s:白楊黃素(chrysin) 、u · kaempheride、z: 3,5— 二異 戊烯基—4—羥基肉桂酸（阿特盤尼西）[3,5 — diprenyl— 4 一 hydroxycinnamic acid ( artepillinC ) ] 〇 如圖1至圖4所示，與蜂膠原塊萃取物（a )相比 較，可知蜂膠原塊萃取物（b ) 、 （ c )及（d )之層析 圖，明顯地隨著移動相之甲醇比率上昇，出現蜂膠原塊萃 取物（a )之層析圖中未出現的波峰，依此，進而使用各 個波峰作比較，依據認爲於蜂膠原塊萃取物（b ) 、 ( c ) 及（d )之層析圖上顯示疏水性之化合物波峰群的出現’ 證明上述（2 )及（3 )所表示的結果。更詳細而言，確認 親水性化合物a至h之波峰面積及波峰高度係4種蜂膠原 塊萃取物約相同程度，或蜂膠原塊萃取物（d )具優勢的 傾向。另外，關於i至 A B之化合物，除了化合物m，〇 (3,5,7-三羥基一4’ —甲氧基黃酮醇）及z ( 3,5 —二異 戊烯基- 4 -羥基肉桂酸）以外’雖於蜂膠原塊萃取物 (b ) 、 （ c )及（d )之層析圖上明確地確認，但確認於 -23- (20) 200528124 蜂膠原塊萃取物（d )上具優勢的傾向。 更詳細地而言，於未改變滯留時間1 5分鐘以前所溶 ^ 出之生理活性物質a (綠原酸）、c (咖啡酸）、f ( 3，5 - 二鄰咖啡醯奎尼酸）及h ( 3，4 一二鄰咖啡醯奎尼酸）等之 測定値下，關於滯留時間2 5分鐘以後所溶出之有效的生 理活性成份u(kaempheride)及z(3,5—二異戊烯基一 4 一羥基肉桂酸），與蜂膠原塊萃取物（b) 、 （c)及 ( d )之比較中，可確認蜂膠原塊萃取物（d )測定値明顯 地增加。然而，上述（2 )中之測定値增加，認爲係與化 合物u及z之增加有關，蜂膠原塊萃取物（d)(本發明 之活性氧消除劑）係含有親水性至疏水性範圍大之成份， 顯示具有以消除自由基能力爲始之可期待的生理活性。 〔產業上利用性〕 本發明之活性氧消除劑係對於人體安全性高，而且具 Φ 有高的消除活性氧與自由基能力及抗氧化能力，適合使用 於食品用、化粧料用及飼料用等。 【圖式簡單說明】 - 圖1係使用水爲萃取溶劑所得之蜂膠原塊萃取物之一 - 例之局效能液相層析圖。 圖2係使用甘油爲萃取溶劑所得之蜂膠原塊萃取物之 一例之高效能液相層析圖。 圖3係使用水與甘油之混合液爲萃取溶劑所得之蜂月寥 -24- (21) 200528124 原塊萃取物之一例之高效能液相層析圖。 圖4係使用水與甘油與乳化劑之混合液爲萃取溶劑所 得之蜂膠原塊萃取物之一例之高效能液相層析圖。

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Claims (1)

1. 200528124 (1) 十、申請專利範圍 1 · 一種來自天然物的活性氧消除劑，其特徵爲，含 • 水、有機彳谷劑與乳化劑，以及含對香豆酸、3，4 -二鄰咖 。 啡醯奎尼酸、3，5 —二鄰咖啡醯奎尼酸、4 一羥基一 3 一異 戊烯基肉桂酸及3，5,7—三羥基- 4, -甲氧基黃酮醇爲主 要有效成份。 2 ·如申請專利範圍第1項之來自天然物的活性氧消 泰 除劑’其中再含3,5 —二異戊嫌基一 4 —經基肉桂酸、 kaempheride、betuletol、綠原酸、ermanin、白楊黃素、 咖啡酸、kaempherol及香草醛爲有效成份。 3 ·如申請專利範圍第1項或第2項之來自天然物的 活性氧消除劑，其中有機溶劑係分子中有2個以上羥基之 多元醇系化合物。 4*如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之來自 天然物的活性氧消除劑，其中乳化劑係至少〗種選自甘油 φ 脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨糖醇 酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯 '卵磷脂類及類皂角苷類。 5 · 一種食品，其特徵爲，含如申請專利範圍第1項 至第4項中任一項之活性氧消除劑。 • 6 · —種化粧料，其特徵爲，含如申請專利範圍第i項 _ 至第4項中任一項之活性氧消除劑。 -26-