TW201522332A - 經取代之７－酮基－吡啶并［２，３－ｄ］嘧啶及其使用方法 - Google Patents

經取代之７－酮基－吡啶并［２，３－ｄ］嘧啶及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本發明涵蓋用於預防及治療癌症之化合物、其類似物、前藥及醫藥上可接受之鹽、醫藥組合物、用途及方法。

Description

經取代之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶及其使用方法 優先權
本申請案主張2013年3月1日提出申請之美國臨時專利申請案第61/771,582號及2013年11月5日提出申請之美國臨時專利申請案第61/900,156號之權利，該等說明書之全部內容以引用方式併入本文中。
本發明係醫藥藥劑領域且具體而言係關於用於治療癌症之化合物、組合物、用途及方法。
蛋白質激酶代表在調控各種細胞過程、維持細胞功能控制中發揮主要作用之較大蛋白質家族。該等激酶之部分列表包含ab1、Atk、bcr-ab1、Blk、Brk、Btk、c-kit、c-met、c-src、CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、cRaf1、CSF1R、CSK、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Erk、Fak、fes、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR5、Fgr、flt-1、Fps、Frk、Fyn、Hck、IGF-1R、INS-R、Jak、KDR、Lck、Lyn、MEK、p38、PDGFR、PIK、PKC、PYK2、ros、tie、tie2、TRK、Yes及Zap70。該等激酶之抑制已成為重要治療目標。
對於作為藥理學靶之蛋白質激酶之初始興趣係由以下發現所刺 激：許多病毒癌基因編碼在結構上改質之具有組成性酶活性之細胞蛋白質激酶。該等發現指出，在人類增殖性病症中可能涉及癌基因相關性蛋白質激酶。隨後，失調之蛋白質激酶活性(由各種更微妙機制所致)與諸多重要人類病症(包含(例如)癌症、CNS病狀及免疫相關性疾病)之病理生理學有關。由此生出較大興趣來研發可阻斷由異常蛋白質激酶活性所致之疾病病況及/或症狀之選擇性蛋白質激酶抑制劑。
ErbB受體家族屬於亞類I受體酪胺酸激酶超家族且包含4種不同受體(包含表皮生長因子受體(EGFR或ErbB 1)、Erb132(HER22或p185neu)、Erb133(HER3)及Erb134(HER4或rvro2))。所有實體腫瘤中之60%以上過度表現該等蛋白質或其配體中之至少一者。
EGFR或ErbB1與人類惡性腫瘤有關。EGFR之過度表現通常發現於乳房腫瘤、肺腫瘤、頭頸腫瘤、膀胱腫瘤中。針對EGFR或其配體TGF-α及EGF之單株抗體已經評估作為用於治療該等惡性腫瘤之治療劑。可逆抑制劑塔西法(Tarceva)(埃羅替尼(erlotinib))及易瑞沙(Iressa)(吉非替尼(gefitinib))當前係用於具有活性突變之非小細胞肺癌患者之一線療法。
在患有非小細胞肺癌之患者中鑑別出EGFR之酪胺酸激酶結構域中之活性突變(Lin,N.U.、Winer,E.P.,Breast Cancer Res 6：204-210,2004)。最常見活性突變係L858R及delE746-A750。另一突變體T790M已在至少一般該等臨床抗性患者中檢測到。另外，T790M亦可預存在，T790M突變可具有獨立致癌作用。此外，種系EGFR T790M突變與某些家族性肺癌有關。
當前研發藥物(包含第二代共價抑制劑，例如BIBW2992、HKI-272及PF-0299804)可有效抵抗T790M抗性突變，但因同時抑制WT EGFR而展現劑量限制性毒性。因此，仍需要尋找可用作治療劑之突變體選擇性EGFR激酶抑制劑。
未曾闡述本發明化合物用於治療癌症。
本發明包括可用於治療疾病(例如EGFR突變體介導之疾病，例如癌症)之新種類之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶。因此，本發明亦包括包括該等化合物之醫藥組合物、使用本發明之化合物及組合物治療EGFR突變體介導之疾病及其他病況(例如治療實體腫瘤，例如乳癌、肺癌、頭頸癌、膀胱癌)之方法及可用於製備本發明化合物之中間體及製程。
藉由下列一般結構代表本發明化合物：
及其醫藥上可接受之鹽；其中X、R1、R2及R3定義於下文中。
亦藉由下列一般結構代表本發明化合物：
及其醫藥上可接受之鹽；其中R、R10、R12及R14定義於下文中。
前文僅匯總本發明之某些態樣且並不意欲、不應解釋為以任一方式限制本發明。本文所引用之所有專利、專利申請案及其他出版物之全部內容皆以引用方式併入本文中。
本發明之一態樣係關於具有式1之一般結構之化合物：
其中R1係 其中環A係5員雜芳基；其中環T係苯基或6員雜芳基；其中R2係H、F、Cl或甲基；其中R3係H、C1-C6烷基或C1-C6-二烷基胺基-C1-C6烷基；其中R5係未經取代或經取代之5至6員飽和雜環基或經取代之4至7員雜環基胺基；其中R6係H、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基或鹵基；且其中X係CH或N；前提係R5並非4-嗎啉基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，基團X係CH。
在另一實施例中，基團R3係H。
在另一實施例中，基團R2係H或甲基。
在另一實施例中，基團R2係甲基。
在另一實施例中，基團R1係經取代之苯基。
在另一實施例中，R1係經取代之吡啶基或經取代之嘧啶基。
在另一實施例中，R5係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基、視情況經取代之二氮雜環庚烷基或視情況經取代之氮雜環丁基胺基；其中六氫吡嗪基、六氫吡啶基、吡咯啶基、二氮雜環庚烷基及氮雜環丁基環視情況經一或多 個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基。
在另一實施例中，基團R1係
在另一實施例中，R5係1-氟乙基氮雜環丁-3-基胺基。
在另一實施例中，R6係H、甲氧基或氯。
本發明之另一態樣係關於具有式II之一般結構之化合物：
其中R2係H或甲基；其中Ra係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基、視情況經取代之二氮雜環庚烷基或視情況經取代之氮雜環丁基胺基；且其中Rb係H或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，基團R2係甲基。
在另一實施例中，基團Rb位於苯基環上之3位處。
在另一實施例中，基團Ra係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基或視情況經取代之二氮雜環庚烷基；其中六氫吡嗪基、六氫吡啶基、吡咯啶基及二氮雜環庚烷基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基。
在另一實施例中，基團Ra係氮雜環丁基胺基；其中氮雜環丁基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基。
式1內尤其受關注之具體化合物之家族由下列化合物及其醫藥上 可接受之衍生物組成：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)-3-吡啶基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-4-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(4-氟-3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；2-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)乙醯胺；3-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺；N-(3-(2-((4-((1-乙醯基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺； N-(3-(2-((2-氯-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；及N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
本發明之一態樣係關於具有式Ia之一般結構之化合物： 其中R係 R10係未經取代或經取代之苯基或未經取代或經取代之4至6員雜環基；R12係H或甲基；R14係H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或苯基-C1-C6烷基；且R17係H或甲基；及其醫藥上可接受之鹽； 前提係在R係3-苄基丙烯醯胺，R12係甲基且R14係H時，R10不為3-甲氧基-4-甲基六氫吡嗪-1-基-苯基或苯基；另一前提係在R係3-苄基丙烯醯胺，R12係H且R14係苄基時，R10不為3-甲氧基-4-甲基六氫吡嗪-1-基-苯基；另一前提係在R12係H時，R14不為甲基或甲氧基。
在另一實施例中，R係 ；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R14係H、苄基或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R14係H；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R12係甲基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R10係，其中環A係5員雜 芳基；其中環T係苯基；其中R15係未經取代或經取代之6員含氮雜環基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基胺基、C1-4羥基烷基胺基、5員含氮雜環基-C1-4烷基胺基、5員含氮雜環基-氧基、C1-4烷基胺基-C1-4烷氧基或C1-4烷氧基-C1-4烷氧基；其中R16係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；且其中R18係C1-4烷基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基、未經取代或經取代之5員含氮雜環基或未經取代或經取代之6員含氮雜環基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R10係經取代之苯基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R10係經取代之吡唑基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R15係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經 取代之六氫吡啶基、N-(N’,N’-二甲基胺基乙基)-N-甲基胺基、N-羥乙基-N-甲基胺基、N-(2-酮基-1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、N-(1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、1-甲基-3-吡咯啶基氧基、N,N-二甲基胺基丙氧基、N,N-二甲基胺基乙氧基或甲氧基乙氧基；其中六氫吡嗪基及六氫吡啶基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、三氟甲基、1-羥基-1-甲基乙基及乙醯基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R16係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R18係甲基、乙基、異丙基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基或1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，及其醫藥上可接受之鹽，R10係 。
本發明之另一態樣係關於具有式IIa之一般結構之化合物：
其中Ra1係未經取代或經取代之6員含氮雜環基；且其中Rb1係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；及其醫藥上可接受之鹽；前提係在Rb1係3-甲氧基時，Ra1並非1-甲基-4-六氫吡嗪基。
在另一實施例中，Rb1位於苯基環之3位處；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，Ra1係六氫吡啶基或六氫吡嗪基；其中六氫吡啶基或六氫吡嗪基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-4烷基羰基或C1-4羥基烷基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，及其醫藥上可接受之鹽，Ra1係
在另一實施例中，Rb1係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係關於具有式IIIa之一般結構之化合物：
其中R31係經取代之5員雜芳基；R32係H或甲基；R34係H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或苯基-C1-C6烷基；且R31經一或多個選自以下之取代基取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、C1-4鹵代烷氧基、C1-4鹵代烷基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基、未經取代或經取代之5員含氮雜環基及未經取代或經取代之6員含氮雜環基；及及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R31係視情況經取代之吡唑基、視情況經取代之異噁唑基、視情況經取代之噻二唑基或視情況經取代之咪唑基；其中吡唑基、異噁唑基、噻二唑基或咪唑基環經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、甲氧基、氯、氟、三氟甲基、二氟甲氧基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基或1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R31係視情況經取代之吡唑基；其中吡唑基環經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、甲氧基、氯、氟、三氟甲基、二氟甲氧基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基及1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R31係 及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，R34係H、苄基或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係關於具有式IVa之一般結構之化合物：
其中Ra4係C1-4烷基胺基-C1-4烷基胺基、C1-4羥基烷基胺基、5員含氮雜環基-C1-4烷基胺基、5員含氮雜環基-氧基、C1-4烷基胺基-C1-4烷氧基或C1-4烷氧基-C1-4烷氧基；且其中Rb4係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，Ra4係N-(N’,N’-二甲基胺基乙基)-N-甲基胺基、N-羥乙基-N-甲基胺基、N-(2-酮基-1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺 基、N-(1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、1-甲基-3-吡咯啶基氧基、N,N-二甲基胺基丙氧基、N,N-二甲基胺基乙氧基或甲氧基乙氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，Rb4係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
式1a內尤其受關注之具體化合物之家族由下列化合物及其醫藥上可接受之衍生物組成：N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((3-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1-(2-(二甲基胺基)乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；8-(((3S)-1-丙烯醯基-3-吡咯啶基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1-乙基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并 [2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((4-(1-甲基-4-六氫吡啶基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-7-酮基-2-((4-(4-六氫吡啶基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基-4-六氫吡啶基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((5-甲基-1-(1-甲基-4-六氫吡啶基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(S)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯基)胺基)- 5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽；N-(3-(2-((3-氟-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-(1-羥基-1-甲基乙基)-1-六氫吡啶基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-乙醯基-1-六氫吡嗪基)-2-氯苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((3R)-3,4-二甲基-1-六氫吡嗪基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((3S)-3,4-二甲基-1-六氫吡嗪基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(2-酮基-1-吡咯啶基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-((3S)-1-甲基-3-吡咯啶基)-1H-吡唑-4- 基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(1-吡咯啶基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；及(2E)-N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺。
如本文中(下文)詳細闡述，所提供化合物係至少一種EGFR突變之選擇性抑制劑。已令人吃驚地地發現，所提供化合物係至少一種與野生型(「WT」)EGFR相比之EGFR突變之選擇性抑制劑。在某些實施例中，EGFR突變係T790M。在某些實施例中，EGFR突變係缺失突變。在一些實施例中，EGFR突變係活性突變。在某些實施例中，與WT EGFR相比，本發明化合物選擇性抑制至少一種抗性突變及至少一種活性突變。在一些實施例中，本發明化合物選擇性抑制至少一種缺失突變及/或至少一種點突變，且對WT EGFR抑制係有節製的。
EGFR突變可選自T790M(抗性或致癌)、L858R(活性)、delE746-A750(活性)、G719S(活性)或其組合。
如本文中所使用，術語「選擇性抑制」(如用於與WT EGFR抑制進行對比)意指，所提供化合物在本文所闡述之至少一種分析(例如生物化學或細胞分析)中抑制至少一種EGFR突變(亦即至少一種缺失突變、至少一種活性突變、至少一種抗性突變或至少一種缺失突變及 至少一種點突變之組合)。在一些實施例中，術語「選擇性抑制」(如用於與WT EGFR抑制進行對比)意指，作為至少一種EGFR突變之抑制劑(如本文中所定義及闡述)，所提供化合物之效力為針對WT EGFR之效力之至少50倍、至少45倍、至少40倍、至少35倍、至少30倍、至少25倍或至少20倍。
如本文中所使用，術語「對WT EGFR有節製」意指至少一種EGFR突變之選擇性抑制劑(如上文及本文中所定義及闡述)在如本文所闡述之至少一種分析(例如如詳細闡述於實例56-58中之生物化學或細胞分析)之檢測上限下抑制EGFR。在一些實施例中，術語「對WT EGFR有節製」意指所提供化合物在以下IC50下抑制WT EGFR：至少10μM、至少9μM、至少8μM、至少7μM、至少6μM、至少5μM、至少3μM、至少2μM或至少1μM。
在某些實施例中，所提供化合物選擇性抑制(a)至少一種活性突變；及(b)T790M；且(c)對WT貧乏有節製。在一些實施例中，活性突變係缺失突變。在一些實施例中，活性突變係點突變。在一些實施例中，活性突變係delE746-A750。在一些實施例中，活性突變係L858R。在一些實施例中，活性突變係G719S。
在一些實施例中，至少一種EGFR突變係L858R及/或T790M。
不期望受限於任一特定理論，據信，向具有至少一種活性突變之患者投與所提供化合物可預先抑制形成T790M抗性突變。因此，在某些實施例中，本發明提供抑制患者中之活性突變之方法，其包括向患者投與如本文所闡述之所提供化合物或其組合物。
熟習此項技術者應瞭解，某些患者患有T790M突變之致癌形式，亦即，在向患者投與任一EGFR抑制劑之前存在T790M突變且由此致癌。因此，在一些實施例中，本發明提供抑制患者中之致癌T790之方法，其包括向患者投與如本文所闡述之所提供化合物或其組合物。
適應症
本發明化合物可用於但不限於預防或治療EGFR突變體介導之疾病。本發明化合物具有激酶抑制活性，例如T790M抑制活性。
本發明化合物可用於治療贅瘤形成(包含癌症及轉移)，包含但不限於：癌瘤，例如實體腫瘤癌，例如乳癌、肺癌、頭頸癌、膀胱癌。
除用於人類治療外，該等化合物亦可用於伴侶動物、境外動物及家畜(包含哺乳動物、齧齒類動物及諸如此類)之獸醫治療。更佳之動物包含馬、狗及貓。
本發明包含所有醫藥上可接受之同位素標記之本發明化合物，其中一或多個原子由具有相同原子數但具有與在自然界中佔優勢之原子量或質量數不同之原子量或質量數的原子代替。
適於納入本發明化合物中之同位素實例包含但不限於：氫之同位素(例如2H及3H)、碳之同位素(例如11C、13C及14C)、氯之同位素(例如38Cl)、氟之同位素(例如18F)、碘之同位素(例如123I及125I)、氮之同位素(例如13N及15N)、氧之同位素(例如15O、17O及18O)、磷之同位素(例如32P)及硫之同位素(例如35S)。
某些同位素標記之本發明化合物(例如彼等納入放射性同位素者)可用於藥物及/或受質組織分佈研究。放射性同位素氚(亦即3H)及碳-14(亦即14C)因易於納入且容易探測而尤其可用於此目的。
較重同位素(例如氘，亦即2H)之取代具有更強代謝穩定性從而可提供某些治療優點，例如活體內半衰期之增加或劑量需要量之減少，且由此在一些情況下較佳。
使用正電子發射同位素(例如11C、18F、15O及13N)進行取代可在正電子發射斷層掃描(PET)研究中用於檢驗受質受體佔據情況。
經同位素標記之本發明化合物通常可藉由彼等熟習此項技術者已知之習用技術來製備，或可藉由與彼等闡述於隨附實例及製備中者 類似之製程使用適當經同位素標記之試劑代替先前採用之非標記試劑來製備。
如本文中所使用，本發明化合物包含其醫藥上可接受之衍生物。
定義
術語「治療」包含治療性治療以及預防性治療(完全預防個體中之病症發作或延遲臨床前明顯階段之病症之發作)。
術語「預防」包含完全預防個體中之病症發作或延遲臨床前明顯階段之病症之發作。舉例而言，此包含預防性治療彼等處於發生疾病(例如癌症)之風險下者。「預防(prophylaxis)」係預防(prevention)之另一術語。
「醫藥上可接受之衍生物」表示本發明化合物之任一鹽、酯或在投與患者後能夠提供(直接或間接)本發明化合物之任一其他化合物或其代謝物或殘餘物，其特徵在於在活體內治療有效。
片語「治療有效」意欲限定每一藥劑之量，其將達成病症嚴重程度及發病頻率之改良超過每一藥劑單獨治療之目標，同時避免通常與替代療法有關之不利副效應。舉例而言，有效腫瘤治療劑延長患者之存活力，抑制與贅瘤有關之快速增殖性細胞生長，或實現贅瘤之消退。
術語「H」表示單一氫原子。此基團可附接(例如)至氧原子以形成羥基。
在單獨或於其他術語內(例如「鹵代烷基」及「烷基胺基」)使用術語「烷基」之情形下，其涵蓋具有一至約十二個碳原子之直鏈或具支鏈基團。更佳烷基係具有一至約六個碳原子之「低碳數烷基」。該等烷基之實例包含甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、己基及諸如此類。甚至更佳者 係具有一或兩個碳原子之低碳數烷基。術語「烷烯基」涵蓋橋接二價烷基，例如甲烯基及乙烯基。
術語「鹵基」意指鹵素，例如氟、氯、溴或碘原子。
術語「鹵代烷基」涵蓋烷基碳原子中之任一者或多者經如上文所定義之鹵基取代之基團。具體而言，其涵蓋單鹵代烷基、二鹵代烷基及多鹵代烷基。對於一實例而言，單鹵代烷基可在基團內具有碘、溴、氯或氟原子。二鹵代烷基及多鹵代烷基可具有兩個或更多個相同鹵基原子或不同鹵基之組合。「低碳數鹵代烷基」涵蓋具有1-6個碳原子之基團。甚至更佳者係具有一至三個碳原子之低碳數鹵代烷基。鹵代烷基之實例包含氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基及二氯丙基。「全氟烷基」意指所有氫原子皆經氟原子代替之烷基。實例包含三氟甲基及五氟乙基。
術語「羥基烷基」涵蓋具有一至約十個碳原子(任一碳原子可經一或多個羥基取代)之直鏈或具支鏈烷基。更佳羥基烷基係具有一至六個碳原子及一或多個羥基之「低碳數羥基烷基」。該等基團之實例包含羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥丁基及羥己基。甚至更佳者係具有一至三個碳原子之低碳數羥基烷基。
術語「烷氧基」涵蓋直鏈或具支鏈含氧基基團，其各自具有一至約十個碳原子之烷基部分。更佳烷氧基係具有一至六個碳原子之「低碳數烷氧基」。該等基團之實例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基及第三丁氧基。甚至更佳者係具有一至三個碳原子之低碳數烷氧基。烷氧基可進一步經一或多個鹵基原子(例如氟、氯或溴)取代以提供「鹵代烷氧基」。甚至更佳者係具有一至三個碳原子之低碳數鹵代烷氧基。該等基團之實例包含氟甲氧基、氯甲氧基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、氟乙氧基及氟丙氧基。
術語「芳基」(單獨或組合)意指含有一或兩個環之碳環芳族系統，其中該等環可以稠合方式附接至一起。術語「芳基」涵蓋芳族基團，例如苯基、萘基、茚基、四氫萘基及二氫茚基。更佳芳基係苯基。該「芳基」可具有1至3個取代基，例如低碳數烷基、羥基、鹵基、鹵代烷基、硝基、氰基、烷氧基及低碳數烷基胺基。
術語「雜環基」涵蓋飽和、部分飽和及不飽和之含有雜原子之環形基團，其中雜原子可選自氮、硫及氧。其並不包含含有-O-O-、-O-S-或-S-S-部分之環。該「雜環基」可具有1至3個取代基，例如羥基、鹵基、鹵代烷基、氰基、低碳數烷基、低碳數芳烷基、酮基、低碳數烷氧基、胺基及低碳數烷基胺基。
飽和雜環基團之實例包含含有1至4個氮原子之飽和3至6員雜單環基團[例如吡咯啶基、咪唑啶基、六氫吡啶基、吡咯啉基、六氫吡嗪基]；含有1至2個氧原子及1至3個氮原子之飽和3至6員雜單環基團[例如嗎啉基]；含有1至2個硫原子及1至3個氮原子之飽和3至6員雜單環基團[例如噻唑啶基]。部分飽和雜環基之實例包含二氫噻吩基、二氫吡喃基、二氫呋喃基及二氫噻唑基。
不飽和雜環基團(亦稱為「雜芳基」)之實例包含含有1至4個氮原子之不飽和5至6員雜單環基，例如吡咯基、咪唑基、吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三唑基[例如4H-1,2,4-三唑基、1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基]；含有氧原子之不飽和5至6員雜單環基團，例如吡喃基、2-呋喃基、3-呋喃基等；含有硫原子之不飽和5至6員雜單環基團，例如2-噻吩基、3-噻吩基等；含有1至2個氧原子及1至3個氮原子之不飽和5至6員雜單環基團，例如噁唑基、異噁唑基、噁二唑基[例如1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基]；含有1至2個硫原子及1至3個氮原子之不飽和5至6員雜單環基團，例如噻唑基、噻二唑基[例如1,2,4-噻二唑基、 1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基]。
該術語亦涵蓋雜環基團與芳基稠合/縮合之基團：含有1至5個氮原子之不飽和縮合雜環基團，例如吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、吲唑基、苯并三唑基、四唑并噠嗪基[例如四唑并[1,5-b]噠嗪基]；含有1至2個氧原子及1至3個氮原子之不飽和縮合雜環基團[例如苯并噁唑基、苯并噁二唑基]；含有1至2個硫原子及1至3個氮原子之不飽和縮合雜環基團[例如苯并噻唑基、苯并噻二唑基]。較佳雜環基團包含5至10員稠合或非稠合基團。雜芳基之更佳實例包含喹啉基、異喹啉基、咪唑基、吡啶基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、呋喃基及吡嗪基。其他較佳雜芳基係含有一或兩個選自硫、氮及氧之雜原子之5-或6員雜芳基，其選自噻吩基、呋喃基、吡咯基、吲唑基、吡唑基、噁唑基、三唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、吡啶基、六氫吡啶基及吡嗪基。
「雜環」意指包括至少一個碳原子及至少一個選自N、O及S之其他原子之環。可發現於申請專利範圍中之雜環之實例包含但不限於下列雜環：
術語「磺醯基」(不論單獨使用或結合其他術語(例如烷基磺醯基)使用)分別表示二價基團-SO2-。
術語「羧基(carboxy或carboxyl)」(不論單獨使用或與其他術語(例如「羧基烷基」)一起使用)表示-CO2H。
術語「羰基」(不論單獨使用或與其他術語(例如「胺基羰基」)一起使用)表示-(C=O)-。
術語「烷基胺基」涵蓋「N-烷基胺基」及「N,N-二烷基胺基」，其中胺基分別經一個烷基及兩個烷基取代。更佳烷基胺基係一或兩個具有一至六個碳原子之烷基附接至氮原子之「低碳數烷基胺基」。甚至更佳者係具有一至三個碳原子之低碳數烷基胺基。適宜烷基胺基可為單烷基胺基或二烷基胺基，例如N-甲基胺基、N-乙基胺基、N,N-二甲基胺基、N,N-二乙基胺基或諸如此類。
術語「雜環基胺基」涵蓋經雜環基取代之胺基。
術語「烷基羰基」表示經烷基取代之羰基。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之烷基長度之烷基羰基。
術語「烷氧基羰基」表示含有經烷氧基取代之羰基之酯基團。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之烷氧基長度之烷氧基羰基。
術語「鹵代烷基羰基」表示經鹵代烷基取代之羰基。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之鹵代烷基長度之鹵代烷基羰基。
術語「羥基烷基羰基」表示經羥基烷基取代之羰基。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之羥基烷基長度之羥基烷基羰基。
術語「烷基胺基羰基」表示經烷基胺基取代之羰基。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之烷基長度之烷基胺基羰基。
術語「烷基磺醯基」表示經烷基取代之磺醯基。甚至更佳者係具有一至四個碳原子之烷基長度之烷基磺醯基。
術語「胺基磺醯基」表示經胺基取代之磺醯基。另一選擇為，此取代基稱為磺醯胺基或胺磺醯基。
術語「亞磺醯基」(不論單獨使用或結合其他術語(例如烷基亞磺醯基)使用)分別表示二價基團-SO-。
術語「酮基」代表基團=O(如在羰基中)。
術語「包括」意欲具有開放端，包含所指示組份但不排除其他要素。
「飽和、部分飽和或不飽和」包含氫飽和取代基、氫完全不飽和取代基及氫部分飽和取代基。
「離去基團」通常係指易於藉由親核基團(例如胺、硫醇或醇親核基團)置換之基團。該等離去基團在業內已眾所周知。該等離去基團之實例包含但不限於N-羥基琥珀醯亞胺、N-羥基苯并三唑、鹵化物、三氟磺酸酯、甲苯磺酸酯及諸如此類。若適當，則較佳離去基團指示於本文中。
「保護基團」通常係指業內熟知用於防止所選反應性基團(例如羧基、胺基、羥基、巰基及諸如此類)發生不期望反應(例如親核反應、親電反應、氧化反應、還原反應及諸如此類)之基團。若適當，則較佳保護基團指示於本文中。胺基保護基團之實例包含但不限於芳 烷基、經取代之芳烷基、環烯基烷基及經取代之環烯基烷基、烯丙基、經取代之烯丙基、醯基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基、矽烷基及諸如此類。芳烷基之實例包含但不限於苄基、鄰-甲基苄基、三苯甲基及二苯甲基，其可視情況經鹵素、烷基、烷氧基、羥基、硝基、醯基胺基、醯基及諸如此類取代，及鹽，例如鏻及銨鹽。芳基之實例包含苯基、萘基、二氫茚基、蒽基、9-(9-苯基茀基)、菲基、杜烯基(durenyl)及諸如此類。環烯基烷基或經取代之環烷烯基烷基之實例較佳地具有6-10個碳原子，包含但不限於環己烯基甲基及諸如此類。適宜醯基、烷氧基羰基及芳烷氧基羰基包含苄氧基羰基、第三丁氧基羰基、異丁氧基羰基、苯甲醯基、經取代之苯甲醯基、丁醯基、乙醯基、三氟乙醯基、三氯乙醯基、鄰苯二甲醯基及諸如此類。可使用保護基團之混合物來保護同一胺基，例如一級胺基可由芳烷基及芳烷氧基羰基保護。胺基保護基團亦可與其所附接之氮一起形成雜環(例如1,2-雙(亞甲基)苯、鄰苯二甲醯亞胺基、琥珀醯亞胺基、馬來醯亞胺基及諸如此類)且其中該等雜環基團可進一步包含鄰接芳基及環烷基環。此外，雜環基團可為單-、二-或三取代，例如硝基鄰苯二甲醯亞胺基。亦可經由形成加成鹽(例如鹽酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽及諸如此類)來防止胺基發生不期望反應(例如氧化反應)。許多胺基保護基團亦適用於保護羧基、羥基及巰基。例如，芳烷基。烷基亦係用於保護羥基及巰基之適宜基團，例如第三丁基。
矽烷基保護基團係視情況經一或多個烷基、芳基及芳烷基取代之矽原子。適宜矽烷基保護基團包含但不限於三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、三異丙基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基、二甲基苯基矽烷基、1,2-雙(二甲基矽烷基)苯、1,2-雙(二甲基矽烷基)乙烷及二苯基甲基矽烷基。胺基之矽烷化提供單-或二矽烷基胺基。胺基醇化合物之矽烷化可得到N,N,O-三矽烷基衍生物。易於藉由使用(例如)金屬氫氧 化物或氟化銨試劑處理作為單獨反應步驟或在與醇基團進行反應期間原位自矽烷基醚官能基去除矽烷基官能基。使用矽烷化劑係(例如)三甲基矽烷基氯、第三丁基-二甲基矽烷基氯、苯基二甲基矽烷基氯、二苯基甲基矽烷基氯或其與咪唑或DMF之組合產物。彼等熟習此項技術者熟知將胺矽烷化並去除矽烷基保護基團之方法。彼等熟習有機化學(包含胺基酸/胺基酸酯或胺基醇化學)技術者亦熟知自相應胺基酸、胺基酸醯胺或胺基酸酯製備該等胺衍生物之方法。
在並不影響分子剩餘部分之條件下去除保護基團。該等方法在業內已眾所周知且包含酸水解、氫解及諸如此類。較佳方法涉及藉由利用碳載鈀在適宜溶劑系統(例如醇、乙酸及諸如此類或其混合物)中進行氫解來去除保護基團(例如去除苄氧基羰基)。可利用無機或有機酸(例如HCl或三氟乙酸)在適宜溶劑系統(例如二噁烷或二氯甲烷)中去除第三丁氧基羰基保護基團。所得胺基鹽可易於發生中和以得到游離胺。可在彼等熟習此項技術者熟知之水解及氫解條件下去除羧基保護基團(例如甲基、乙基、苄基、第三丁基、4-甲氧基苯基甲基及諸如此類)。
本發明亦包括本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於急性或慢性治療血管生成介導之疾病狀態(包含彼等闡述於前文中者)之醫藥。本發明化合物可用於製造抗癌醫藥。本發明化合物亦可用於製造經由抑制EGFR突變體來減弱或預防病症之醫藥。
本發明包括一種醫藥組合物，其包括治療有效量之式I-IVa之化合物以及至少一種醫藥上可接受之載劑、佐劑或稀釋劑。
本發明亦包括治療個體之EGFR突變體相關病症(例如癌症)之方法，該方法包括使用治療有效量之式I-IVa之化合物治療患有或易患該病症之個體。此包含一線療法及二線療法。
組合
儘管本發明化合物可作為唯一活性醫藥藥劑投與，但其亦可與一或多種本發明化合物或其他藥劑組合使用。在組合投與時，治療劑可調配為同時或在不同時間依序投與之單獨組合物，或治療劑可以單一組合物給予。
在定義本發明化合物及另一醫藥藥劑之用途中，片語「共療法」(或「組合療法」)意欲涵蓋在將提供有益藥物組合效應之方案中以依序方式投與每一藥劑，且同樣意欲涵蓋以實質上同時之方式共投與該等藥劑，例如以具有固定比率之該等活性劑之單一膠囊形式或以每一藥劑之多個單獨膠囊形式。
具體而言，可連同彼等熟習此項技術者已知之其他療法投與本發明化合物以預防或治療贅瘤形成，例如連同放射療法或連同細胞生長抑制劑或細胞毒性劑。
若調配為固定劑量，則該等組合產物採用在所接受劑量範圍內之本發明化合物。在組合調配物不適當時，式I化合物亦可與已知抗癌劑或細胞毒性劑依序投與。本發明並不限制投與順序；式I化合物可在投與已知抗癌劑或細胞毒性劑之前、同時或之後投與。
目前，原發腫瘤之標準治療係由手術切除及隨後放射或IV投與化學療法組成。典型化學療法方案係由DNA烷基化劑、DNA螯合劑、CDK抑制劑或微管毒劑組成。所用化學療法劑量略低於最大耐受劑量且由此劑量限制毒性通常包含噁心、嘔吡、腹瀉、頭髮脫落、嗜中性白血球減少及諸如此類。
有許多可用於商業用途、臨床評估及臨床前研發之抗腫瘤劑，該等抗腫瘤劑可經選擇藉由與藥物化學療法組合用於治療贅瘤形成。該等抗腫瘤劑屬於若干種主要種類，亦即，抗生素型藥劑、烷基化劑、抗代謝藥劑、激素藥劑、免疫藥劑、干擾素型藥劑及一系列各種 藥劑。
可與本發明化合物組合使用之抗腫瘤劑之第一家族係由抗代謝型/胸苷酸合酶抑制劑抗腫瘤劑組成。適宜抗代謝抗腫瘤劑可選自但不限於由以下組成之群：5-FU-血纖維蛋白原、黑海棉酸(acanthifolic acid)、胺基噻二唑、布喹那鈉(brequinar sodium)、卡莫氟(carmofur)、Ciba-Geigy CGP-30694、環戊基胞嘧啶、阿糖胞苷磷酸硬脂酸鹽(cytarabine phosphate stearate)、阿糖胞苷偶聯物、Lilly DATHF、Merrel Dow DDFC、地紮脈寧(dezaguanine)、雙去氧胞苷(dideoxycytidine)、雙去氧鳥苷(dideoxyguanosine)、底杜克斯(didox)、Yoshitomi DMDC、去氧氟尿苷(doxifluridine)、Wellcome EHNA、Merck & Co.EX-015、法紮拉濱(fazarabine)、氟尿苷(floxuridine)、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、N-(2'-呋喃烷基)-5-氟尿嘧啶、Daiichi Seiyaku FO-152、異丙基吡咯嗪、Lilly LY-188011、Lilly LY-264618、甲基苯并乍普(methobenzaprim)、胺甲蝶呤(methotrexate)、Wellcome MZPES、去亞精胺(norspermidine)、NCI NSC-127716、NCI NSC-264880、NCI NSC-39661、NCI NSC-612567、Warner-Lambert PALA、噴司他丁(pentostatin)、吡曲克辛(piritrexim)、普卡黴素(plicamycin)、Asahi Chemical PL-AC、Takeda TAC-788、硫鳥嘌呤(thioguanine)、噻唑呋林(tiazofurin)、埃博曼特(Erbamont)TIF、三甲曲沙(trimetrexate)、酪胺酸激酶抑制劑、酪胺酸蛋白質激酶抑制劑、Taiho UFT及優你生(uricytin)。
可與本發明化合物組合使用之抗腫瘤劑之第二家族係由烷基化型抗腫瘤劑組成。適宜烷基化型抗腫瘤劑可選自但不限於由以下組成之群：Shionogi 254-S、醛磷醯胺模擬物、六甲蜜胺(altretamine)、阿那昔酮(anaxirone)、Boehringer Mannheim BBR-2207、貝斯特氮芥 (bestrabucil)、布朵替坦(budotitane)、Wakunaga CA-102、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、車諾義(Chinoin)-139、車諾義-153、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、American Cyanamid CL-286558、Sanofi CY-233、西普雷特(cyplatate)、Degussa D-19-384、Sumimoto DACHP(Myr)2、二苯基螺莫司汀(diphenylspiromustine)、細胞增殖抑制二鉑(diplatinum cytostatic)、Erba偏端黴素(distamycin)衍生物、Chugai DWA-2114R、ITI E09、依莫司汀(elmustine)、埃博曼特FCE-24517、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine phosphate sodium)、福莫司汀(fotemustine)、Unimed G-6-M、車諾義GYKI-17230、和普塞法(hepsul-fam)、異磷醯胺(ifosfamide)、異丙鉑(iproplatin)、洛莫司汀(lomustine)、馬磷醯胺(mafosfamide)、二溴衛矛醇(mitolactol)、Nippon Kayaku NK-121、NCI NSC-264395、NCI NSC-342215、奧沙利鉑(oxaliplatin)、Upjohn PCNU、潑尼莫司汀(prednimustine)、Proter PTT-119、雷莫司汀(ranimustine)、司莫司汀(semustine)、SmithKline SK&F-101772、Yakult Honsha SN-22、螺莫司汀(spiromus-tine)、Tanabe Seiyaku TA-077、牛磺莫司汀(tauromustine)、替莫唑胺(temozolomide)、替羅昔隆(teroxirone)、四鉑(tetraplatin)及三甲密醇(trimelamol)。
可與本發明化合物組合使用之抗腫瘤劑之第三家族係由抗生素型抗腫瘤劑組成。適宜抗生素型抗腫瘤劑可選自但不限於由以下組成之群：Taiho 4181-A、阿柔比星(aclarubicin)、放線菌素D(actinomycin D)、遊放線酮(actinoplanone)、埃博曼特ADR-456、艾瑞普森(aeroplysinin)衍生物、Ajinomoto AN-201-II、Ajinomoto AN-3、Nippon Soda茴香黴素(anisomycins)、蒽環黴素(anthracycline)、阿嗪黴素-A(azino-mycin-A)、重溶癌菌素(bisucaberin)、Bristol-Myers BL- 6859、Bristol-Myers BMY-25067、Bristol-Myers BMY-25551、Bristol-Myers BMY-26605、Bristol-Myers BMY-27557、Bristol-Myers BMY-28438、硫酸博萊黴素(bleomycin sulfate)、苔蘚蟲素-1(bryostatin-1)、Taiho C-1027、卡奇黴素(calichemycin)、色氧黴素(chromoximycin)、更生黴素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、Kyowa Hakko DC-102、Kyowa Hakko DC-79、Kyowa Hakko DC-88A、Kyowa Hakko DC89-A1、Kyowa Hakko DC92-B、二丙八疊紅菌素B(ditrisarubicin B)、Shionogi DOB-41、多柔比星(doxorubicin)、多柔比星-血纖維蛋白原、依沙蘆星-A(elsamicin-A)、表柔比星(epirubicin)、製表菌素(erbstatin)、依索比星(esorubicin)、埃斯培拉黴素-A1(esperamicin-A1)、埃斯培拉黴素-Alb、埃博曼特FCE-21954、Fujisawa FK-973、福司曲星(fostriecin)、Fujisawa FR-900482、滑桿菌素(glidobactin)、聚頭孢素-A(gregatin-A)、淺內紅黴素(grincamycin)、除莠黴素(herbimycin)、伊達比星(idarubicin)、隱陡頭菌素S(illudins)、上總黴素(kazusamycin)、克如赫汀黴素(kesarirhodins)、Kyowa Hakko KM-5539、Kirin Brewery KRN-8602、Kyowa Hakko KT-5432、Kyowa Hakko KT-5594、Kyowa Hakko KT-6149、American Cyanamid LL-D49194、Meiji Seika ME 2303、美諾立爾(menogaril)、絲裂黴素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、SmithKlineM-TAG、新擬定菌素(neoenactin)、Nippon Kayaku NK-313、Nippon Kayaku NKT-01、SRI International NSC-357704、惡溶菌素(oxalysine)、氧奧黴素(oxaunomycin)、培洛黴素(peplomycin)、必杯菌素(pilatin)、吡柔比星(pirarubicin)、普樂黴素(porothramycin)、普瑞達黴素A(pyrindanycin A)、東芝RA-I、雷帕黴素(rapamycin)、利索新(rhizoxin)、羅多比星(rodorubicin)、西班米星(sibanomicin)、思文黴素(siwenmycin)、Sumitomo SM-5887、Snow Brand SN-706、 Snow Brand SN-07、堆囊菌素-A(sorangicin-A)、司帕黴素(sparsomycin)、SS Pharmaceutical SS-21020、SSPharmaceutical SS-7313B、SS Pharmaceutical SS-9816B、司替黴素B(steffimycin B)、Taiho 4181-2、他利黴素(talisomycin)、Takeda TAN-868A、類萜菌素(terpentecin)、氯丙嗪(thrazine)、鳶尾蘭醌A(tricrozarin A)、Upjohn U-73975、Kyowa Hakko UCN-10028A、Fujisawa WF-3405、Yoshitomi Y-25024及佐柔比星(zorubicin)。
可與本發明化合物組合使用之抗腫瘤劑之第四家族係由各種一系列抗腫瘤劑組成，其包含微管蛋白相互作用藥劑、拓撲異構酶II抑制劑、拓撲異構酶I抑制劑及激素藥劑，其選自但不限於由以下組成之群：α-胡蘿蔔素(α-carotene)、α-二氟甲基-精胺酸、阿曲汀(acitretin)、Biotec AD-5、Kyorin AHC-52、解熱樹鹼(alstonine)、胺萘非特(amonafide)、安非塔恩(amphethinile)、安丫啶(amsacrine)、安知斯特(Angiostat)、安諾黴素(ankinomycin)、抗瘤酮(anti-neoplaston)A10、抗瘤酮A2、抗瘤酮A3、抗瘤酮A5、抗瘤酮AS2-1、Henkel APD、阿非迪黴素甘胺酸鹽(aphidicolin glycinate)、天門冬醯胺酶、阿瓦醇(Avarol)、酒神菊素(baccharin)、巴特環啉(batracylin)、本福酮(benfluron)、氯苯醯色胺酸(benzotript)、Ipsen-Beaufour BIM-23015、比生群(bisantrene)、Bristo-Myers BMY-40481、Vestar boron-10、溴異環磷醯胺(bromofosfamide)、Wellcome BW-502、Wellcome BW-773、卡拉醯胺(caracemide)、鹽酸卡甲唑(carmethizole hydrochloride)、Ajinomoto CDAF、氯磺胺喹喏酮(chlorsulfaquinoxalone)、Chemex CHX-2053、Chemex CHX-100、Warner-Lambert CI-921、Warner-Lambert CI-937、Warner-Lambert CI-941、Warner-Lambert CI-958、克蘭氟脲(clanfenur)、克萊若得酮(claviridenone)、ICN化合物1259、ICN化合物4711、康退安(Contracan)、Yakult Honsha CPT-11、克雷斯 托(crisnatol)、克羅德姆(curaderm)、松胞菌素B(cytochalasin B)、阿糖胞苷、環托西汀(cytocytin)、Merz D-609、DABIS馬來酸鹽、達卡巴嗪(dacarbazine)、達依利銨(datelliptinium)、膜海鞘素-B(didemnin-B)、雙血卟啉醚(dihaematoporphyrin ether)、二氫侖哌隆(dihydrolenperone)、地那林(dinaline)、偏端黴素、Toyo Pharmar DM-341、Toyo Pharmar DM-75、Daiichi Seiyaku DN-9693、多西他賽(docetaxel)、依利普賓(elliprabin)、依利醋銨(elliptinium acetate)、Tsumura EPMTC、埃坡黴素(epothilone)、麥角胺(ergotamine)、依託泊苷(etoposide)、依曲替酯(etretinate)、維甲醯酚胺(fenretinide)、Fujisawa FR-57704、硝酸鎵、芫花瑞香寧(genkwadaphnin)、Chugai GLA-43、Glaxo GR-63178、奇果菌多糖(grifolan)NMF-5N、米替福星(hexadecylphosphocholine)、Green Cross HO-221、高三尖杉酯鹼(homoharringtonine)、羥基脲、BTG ICRF-187、伊莫福新(ilmofosine)、異麩醯胺酸(isoglutamine)、異維甲酸(isotretinoin)、Otsuka JI-36、Ramot K-477、Otsuak K-76COONa、Kureha Chemical K-AM、MECT Corp KI-8110、American Cyanamid L-623、白細胞調節素(leucoregulin)、氯尼達明(lonidamine)、Lundbeck LU-23-112、Lilly LY-186641、NCI(US)MAP、馬瑞素(marycin)、Merrel Dow MDL-27048、Medco MEDR-340、美巴龍(merbarone)、部花青(merocyanlne)衍生物、甲基苯胺基吖啶(methylanilinoacridine)、Molecular Genetics MGI-136、茗萘酊(minactivin)、米托萘胺(mitonafide)、米托喹酮(mitoquidone)、莫哌達醇(mopidamol)、毛替垂尼(motretinide)、Zenyaku Kogyo MST-16、N-(異維A醯基)胺基酸、Nisshin Flour Milling N-021、N-醯化-去氫丙胺酸、來法查壯(nafazatrom)、Taisho NCU-190、諾考達唑(nocodazole)衍生物、血晶素(Normosang)、NCI NSC-145813、NCI NSC-361456、NCI NSC- 604782、NCI NSC-95580、奧曲肽(ocreotide)、Ono ONO-112、奧喹那辛(oquizanocine)、Akzo Org-10172、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、帕折普汀(pazelliptine)、Warner-Lambert PD-111707、Warner-Lambert PD-115934、Warner-Lambert PD-131141、Pierre Fabre PE-1001、ICRT肽D、吡羅蒽醌(piroxantrone)、聚血紫質(polyhaematoporphyrin)、聚烯瑞尼酸(polypreic acid)、月見草油(Efamol)紫質(porphyrin)、丙雙嗎啉(probimane)、丙卡巴肼(procarbazine)、丙麩胺(proglumide)、Invitron蛋白酶連接素I(protease nexin I)、Tobishi RA-700、雷佐生(razoxane)、Sapporo Breweries RBS、限制性蛋白(restrictin-P)、雷替尼蔔(retelliptine)、視黃酸(retinoic acid)、Rhone-Poulenc RP-49532、Rhone-Poulenc RP-56976、SmithKline SK&F-104864、Sumitomo SM-108、Kuraray SMANCS、SeaPharm SP-10094、褐舌藻醇(spatol)、螺環丙烷衍生物、鍺螺胺(spirogermanium)、Unimed、SSPharmaceutical SS-554、棕葉藻二啶酮(strypoldinone)、棕葉藻二酮(Stypoldione)、Suntory SUN 0237、Suntory SUN 2071、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)、Toyama T-506、Toyama T-680、紫衫酚(taxol)、Teijin TEI-0303、替尼泊苷(teniposide)、唐松草卡品鹼(thaliblastine)、Eastman Kodak TJB-29、生育三烯酚(tocotrienol)、拓撲替康(topotecan)、拓撲酶抑素(Topostin)、Teijin TT-82、Kyowa Hakko UCN-01、Kyowa Hakko UCN-1028、尤克恩(ukrain)、Eastman Kodak USB-006、硫酸長春花鹼(vinblastine sulfate)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、長春醯胺(vinestramide)、長春瑞濱(vinorelbine)、長春曲醇(vintriptol)、長春利定(vinzolidine)、睡茄素(withanolide)及Yamanouchi YM-534。
另一選擇為，本發明化合物亦可與其他抗腫瘤劑用於共療法中，例如醋孟南(acemannan)、阿柔比星、阿地白介素(aldesleukin)、 阿侖單抗(alemtuzumab)、阿利維A酸(alitretinoin)、六甲蜜胺、阿米福汀(amifostine)、胺基乙醯丙酸、胺柔比星(amrubicin)、安丫啶、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、ANCER、安西司亭(ancestim)、ARGLABIN、三氧化砷、BAM 002(Novelos)、貝紮羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、溴脲苷(broxuridine)、卡培他濱(capecitabine)、西莫白介素(celmoleukin)、西曲瑞克(cetrorelix)、克拉曲濱(cladribine)、克黴唑(clotrimazole)、十阿糖胞苷八烷基磷酸鹽(cytarabine ocfosfate)、DA 3030(Dong-A)、利珠單抗(daclizumab)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地洛瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、地拉齊普(dilazep)、多西他賽、山崳醇、度骨化醇(doxercalciferol)、去氧氟尿苷、多柔比星、溴隱亭(bromocriptine)、卡莫司汀、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、HIT雙氯芬酸(diclofenac)、干擾素α(interferon alfa)、柔紅黴素、多柔比星、維甲酸(tretinoin)、依地福新(edelfosine)、依決洛單抗(edrecolomab)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、乙嘧替氟(emitefur)、表柔比星、倍他依泊汀(epoetin beta)、磷酸依託泊苷、依西美坦(exemestane)、依昔舒林(exisulind)、法屈唑(fadrozole)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、磷酸氟達拉濱、福美司坦(formestane)、福莫司汀、硝酸鎵、吉西他濱、吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab zogamicin)、吉莫斯特/奧替拉西/喃氟啶組合(gimeracil/oteracil/tegafur combination)、克拉卡品(glycopine)、戈舍瑞林(goserelin)、庚鉑(heptaplatin)、人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin)、人胚胎α胎蛋白(human fetal alpha fetoprotein)、伊班膦酸(ibandronic acid)、伊達比星、咪喹莫特(imiquimod)、干擾素α、干擾素α、天然干擾素α-2、干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素α-N1、干擾素α-n3、干擾素αcon-1、干擾素α、天然干擾素β、干擾素β-1a、干擾素β-1b、干 擾素γ、天然干擾素γ-1a、干擾素γ-1b、介白素-1 β(interleukin-1 beta)、碘苄胍(iobenguane)、伊立替康(irinotecan)、伊索拉定(irsogladine)、蘭瑞肽(lanreotide)、LC 9018(Yakult)、來氟洛米(leflunomide)、來格司亭(lenograstim)、硫酸化香菇多糖(lentinan sulfate)、來曲唑(letrozole)、白血球α干擾素(leukocyte alpha interferon)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)+氟尿嘧啶、利阿唑(liarozole)、洛鉑(lobaplatin)、氯尼達明、洛伐他汀(lovastatin)、馬索羅酚(masoprocol)、美拉胂醇(melarsoprol)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、失配雙鏈RNA、米托胍腙(mitoguazone)、二溴衛矛醇、米托蒽醌、莫拉司亭(molgramostim)、那法瑞林(nafarelin)、鈉洛酮(naloxone)+噴他佐辛(pentazocine)、那托司亭(nartograstim)、萘達鉑(nedaplatin)、尼魯米特(nilutamide)、諾司卡品(noscapine)、新穎紅血球生成刺激蛋白、NSC 631570奧曲肽、奧普瑞白介素(oprelvekin)、奧沙特隆(osaterone)、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、帕米膦酸(pamidronic acid)、培門冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇干擾素(peginterferon)α-2b、戊聚糖硫酸鈉(pentosan polysulfate sodium)、噴司他丁、溶鏈菌素(picibanil)、吡柔比星、兔抗胸腺細胞多株抗體(rabbit antithymocyte polyclonal antibody)、聚乙二醇干擾素α-2a、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲噻(raltitrexed)、拉布立酶(rasburicase)、錸Re 186依替膦酸鹽(rhenium Re 186 etidronate)、RII維甲醯胺(RII retinamide)、利妥昔單抗(rituximab)、羅莫肽(romurtide)、來昔決南(lexidronam)釤(153 Sm)、沙格司亭(sargramostim)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、索納明(sonermin)、氯化鍶-89、蘇拉明(suramin)、他索納明(tasonermin)、他紮羅汀(tazarotene)、喃氟啶、替莫卟吩 (temoporfin)、替莫唑胺、替尼泊苷、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、沙利度胺(thalidomide)、胸腺法新(thymalfasin)、促甲狀腺激素α(thyrotropin alfa)、拓撲替康、托瑞米芬(toremifene)、托西莫單抗-碘131(tositumomab-iodine 131)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、蘇消安(treosulfan)、維甲酸、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙、曲普瑞林(triptorelin)、腫瘤壞死因子α、天然烏苯美司(ubenimex)、膀胱癌疫苗、丸山疫苗(Maruyama vaccine)、黑素瘤裂解物疫苗、戊柔比星(valrubicin)、維替泊芬(verteporfin)、長春瑞濱、VIRULIZIN、淨司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)或唑來磷酸(zoledronic acid)；阿巴瑞克(abarelix)；AE 941(Aeterna)、胺莫司汀(ambamustine)、反義寡核苷酸、bcl-2(Genta)、APC 8015(Dendreon)、西妥昔單抗(cetuximab)、地西他濱(decitabine)、右旋胺魯米特(dexaminoglutethimide)、地吖醌(diaziquone)、EL 532(Elan)、EM 800(Endorecherche)、恩尿嘧啶(eniluracil)、依他硝唑(etanidazole)、維甲醯酚胺、非格司亭(filgrastim)SD01(Amgen)、氟維司群(fulvestrant)、加洛他濱(galocitabine)、胃泌素17免疫原(gastrin 17 immunogen)、HLA-B7基因療法(Vical)、粒細胞巨噬細胞菌落刺激因子、組胺二鹽酸鹽、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、伊洛馬司他(ilomastat)、IM 862(Cytran)、介白素-2、伊普西吩(iproxifene)、LDI 200(Milkhaus)、來立司亭(leridistim)、林妥珠單抗(lintuzumab)、CA 125 MAb(Biomira)、癌症MAb(Japan Pharmaceutical Development)、HER-2及Fc MAb(Medarex)、獨特型(idiotypic)105AD7 MAb(CRC Technology)、獨特型CEA MAb(Trilex)、LYM-1-碘131 MAb(Techniclone)、多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin)-釔90 MAb(Antisoma)、馬立馬司他(marimastat)、美諾立爾(menogaril)、米妥莫單抗(mitumomab)、莫特 沙芬釓(motexafin gadolinium)、MX 6(Galderma)、奈拉濱(nelarabine)、諾拉曲特(nolatrexed)、P 30蛋白、培維索孟(pegvisomant)、培美曲塞(pemetrexed)、波弗黴素(porfiromycin)、普馬司他(prinomastat)、RL 0903(Shire)、魯比替康(rubitecan)、沙鉑(satraplatin)、苯乙酸鈉、斯帕磷酸(sparfosic acid)、SRL 172(SR Pharma)、SU 5416(SUGEN)、TA 077(Tanabe)、四硫鉬酸鹽(tetrathiomolybdate)、唐松草卡品鹼(thaliblastine)、血小板生成素(thrombopoietin)、乙基錫初紫紅素(tin ethyl etiopurpurin)、替拉紮明(tirapazamine)、癌症疫苗(Biomira)、黑素瘤疫苗(New York University)、黑素瘤疫苗(Sloan Kettering Institute)、黑素瘤腫瘤溶解劑疫苗(New York Medical College)、病毒性黑色素瘤裂解物疫苗(Royal Newcastle Hospital)或伐司撲達(valspodar)。
另一選擇為，本發明化合物亦可與其他抗腫瘤劑(例如其他激酶抑制劑、TNF抑制劑、金屬基質蛋白酶抑制劑(MMP)及VEGFR抑制劑)一起用於共療法中。
在本發明組合物包括本文所闡述式之激酶抑制劑與一或多種其他治療劑或預防劑之組合時，該激酶抑制劑及該其他試劑二者皆應以介於在單一療法方案中通常投與劑量之約10%至100%之間及更佳地介於約10%至80%之間的劑量值存在。該等其他激酶抑制劑係彼等可調變、調控或以其他方式影響激酶活性者。該等效應可使得調變疾病病況及/或症狀。激酶抑制劑包含(例如)小分子、多肽、抗體(包含(例如)單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、單鏈抗體、免疫因子等)及諸如此類。其他激酶抑制小分子藥劑之實例包含但不限於CDK抑制劑及p38抑制劑，包含SU-6668、SU-5416、ZD-4190、ZD-1839、STI-571、CP-358774、LY-333531及諸如此類。
本發明之醫藥組合物包括其他免疫阻抑劑。其他免疫阻抑劑之 實例包含但不限於環孢素A(cyclosporin A)、FK506、雷帕黴素、來氟洛米、去氧精胍菌素(deoxyspergualin)、潑尼松(prednisone)、硫唑嘌呤(azathioprine)、麥考酚酸嗎乙酯(mycophenolate mofetil)、OKT3、ATAG、干擾素及咪唑立賓(mizoribine)。
本發明之醫藥組合物可另外包括抗體(包含(例如)單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、單鏈抗體、免疫因子等)、細胞毒性劑或激素抗癌劑或其組合。
本發明包括製備式I-IVa之化合物之製程。
一般而言，本發明化合物可擁有一或多個不對稱碳原子且由此能夠以光學異構體形式以及以其外消旋或非外消旋混合物形式存在。可藉由根據習用製程(例如藉由形成非對映異構體鹽，藉由使用光學活性酸或鹼進行處理)拆分外消旋混合物來獲得光學異構體。適當酸之實例係酒石酸、二乙醯基酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二甲苯甲醯基酒石酸及樟腦磺酸且然後藉由結晶隨後自該等鹽釋放光學活性鹼來分離非對映異構體混合物。用於分離光學異構體之不同製程涉及使用對掌性層析管柱，其最佳地經選擇以最大化對映異構體之分離。又一可用方法涉及藉由使本發明化合物與活化形式之光學純酸或光學純異氰酸酯進行反應來合成共價非對映異構體分子。可藉由習用方式(例如層析、蒸餾、結晶或昇華)來分離所合成非對映異構體，且然後水解以遞送對映異構體純化合物。本發明之光學活性化合物可同樣藉由使用活性起始材料獲得。該等異構體可呈游離酸、游離鹼、酯或鹽之形式。
式I-IVa之化合物家族亦包含其醫藥上可接受之鹽。術語「醫藥上可接受之鹽」涵蓋通常用於形成鹼金屬鹽及形成游離酸或游離鹼之加成鹽的鹽。鹽之性質並不重要，只要其為醫藥上可接受即可。式I-IVa之化合物之適宜醫藥上可接受之酸加成鹽可自無機酸或自有機酸 製備。該等無機酸之實例係鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳酸、硫酸及磷酸。適當有機酸可選自脂肪族酸、脂環族酸、芳族酸、芳基脂肪族酸、雜環酸、羧酸及磺酸類有機酸，其實例為乙酸、已二酸、海藻酸、鄰胺基苯甲酸、抗壞血酸、天門冬胺酸、苯甲酸、苯磺酸、丁酸、樟腦酸、樟腦磺酸、檸檬酸、環戊烷丙酸、環己基胺基磺酸、二葡糖酸、十二烷基磺酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、黏酸、半乳糖醛酸、羥乙酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡庚糖酸、麩胺酸、甘油膦酸、庚酸、己酸、4-羥基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、β-羥基丁酸、乳酸、蘋果酸、馬來酸、扁桃酸、甲磺酸(mesylic acid、methanesulfonic acid)、菸鹼酸、2-萘磺酸、草酸、棕櫚酸、果膠酯酸、新戊酸、過硫酸、2-苯基丙酸、苦味酸、丙酮酸、丙酸、苯基乙酸、雙羥萘酸(巴莫酸(pamoic acid))、環戊烷丙酸、泛酸、甲苯磺酸、水楊酸、對胺基苯磺酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸及十一酸。
式I-IVa之化合物之適宜醫藥上可接受之鹼加成鹽包含金屬鹽，例如自鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅製得之鹽，或自有機鹼製得之鹽，該等有機鹼包含一級胺、二級胺及三級胺胺，經取代胺(包含環胺)，例如咖啡因、精胺酸、二乙胺、N-乙基六氫吡啶、組胺酸、葡糖胺、異丙胺、離胺酸、嗎啉、N-乙基嗎啉、六氫吡嗪、六氫吡啶、三乙胺、三甲胺。所有該等鹽可藉由習用方式自相應之本發明化合物藉由使(例如)適當酸或鹼與式I-IVa之化合物反應來製備。
另外，鹼性含氮基團可使用諸如以下試劑四級銨化：低碳數烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基及丁基之氯化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯及硫酸二戊酯；長鏈鹵化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂醯基之氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物，例如苄基溴及苯乙基溴及其他。由此獲得水或油溶性或可分散產物。該等鹽之其他實例可參見 Berge等人，J.Pharm.Sci.,66,1(1977)。
本發明亦係關於製備本文所闡述式之化合物之方法，其包括合成本文合成反應圖中所圖解說明之任一種或多種中間體且然後將中間體轉化成本文所闡述式之化合物。本發明亦係關於製備本文所闡述式之化合物之方法，其包括合成本文實例中所闡釋之任一種或多種中間體且然後將中間體轉化成本文所闡述式之化合物。
一般合成程序
可根據反應圖1之下列程序來合成本發明化合物，其中除非另外說明，否則取代基係如上文針對式I-II所定義。
使用下列縮寫：
RT- 室溫
MCPBA 3-氯過氧苯甲酸
DCM、CH2Cl2 二氯甲烷
DIEA、EtNiPr2- 二異丙基乙基胺，許尼希氏鹼(Hunig's base)
DMF- 二甲基甲醯胺
DMSO 二甲基亞碸
K2CO3- 碳酸鉀
AcCN、ACN- 乙腈
TFA- 三氟乙酸
HOAc、AcOH- 乙酸
LiAlH4 氫化鋰鋁
THF 四氫呋喃
CHCl3 氯仿
CDCl3 氘代氯仿
EtOAc 乙酸乙酯
Na2SO4- 硫酸鈉
LiHMDS 雙(三甲基矽烷基)醯胺鋰
mg- 毫克
g- 克
ml- 毫升
h- 小時
min- 分鐘
Et2O- 乙醚
MgSO4- 硫酸鎂
NH4Cl 氯化銨
H2O- 水
NaHCO3- 碳酸氫鈉
Na2CO3- 碳酸鈉
Na2SO4- 硫酸鈉
MeOH 甲醇
Boc- 第三丁氧基羰基
NaOH- 氫氧化鈉
NaH- 氫化鈉
CuI 碘化銅
NH3 氨
EtOH- 乙醇
Et3N- 三乙胺
Pd/C- 碳載鈀
NMP N-甲基吡咯啶基
Cs2CO3 碳酸銫
H2- 氫
可根據反應圖1中所闡述之方法來製備經丙烯醯胺取代之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶。使用氧化劑(例如MCPBA)在適當溶劑中(例如在DCM中)處理2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(I)以提供2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(II)。使用鹼(例如DIEA)處理2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(II)，且在高於室溫之溫度下(較佳地高於約50℃、更佳地在約80℃下)加熱以得到經胺基取代之7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(III)。實施去保護(例如使用酸處理)，隨後使用不飽和醯氯(例如丙烯醯氯)以得到期望產物(IV)。
另一選擇為，藉由類似於上文所闡述方法之方法自起始材料(I)形成丙烯醯胺(V)。可藉由類似於上文所闡述方法之方法來氧化2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶基丙烯醯胺(V)，隨後實施胺化以得到期望產物(IV)。
可根據反應圖2中所闡述之方法自二-Boc保護之化合物來製備經 丙烯醯胺取代之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶。使用鹼(例如使用DIEA)處理2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(57)並在高於室溫之溫度下(較佳地高於約50℃、更佳地在約80℃下)加熱以得到經胺基取代之7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(VII)。實施去保護(例如使用酸處理)，隨後使用不飽和醯氯(例如丙烯醯氯)以得到期望產物(IV)。
可根據反應圖1a中所闡述之方法來製備經丙烯醯胺取代之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶。藉由(例如)使用酸(例如TFA)進行處理來將經保護(3-(-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺(Ix)去保護以形成游離胺。使用鹼(例如使用DIPEA)進行處理，隨後添加醯氯(例如丙烯醯氯)以提供期望丙烯醯胺。將硫化物氧化(例如使用MCPBA)以得到亞磺醯基衍生物(IIx)。使用經取代胺在酸(例如TFA)或DMAc存在下於高於室溫之溫度下(較佳地高於約50℃及更佳地在約90-110℃下)處理亞磺醯基IIx以提供期望7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(IIIx)。
可根據反應圖2a中所闡述之方法來製備經丙烯醯胺取代之7-酮基-吡啶并[2,3-d]嘧啶。藉由(例如)使用酸(例如HCl)進行處理來將經保 護(3-(-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺(Ix)去保護以形成游離胺。使用鹼(例如使用NaOH)進行處理，隨後添加醯氯(例如丙烯醯氯)以提供期望丙烯醯胺Vx。使用經取代胺在酸(例如AcOH)存在下於高於室溫之溫度下(較佳地高於約70℃及更佳地在約125℃下)處理丙烯醯胺Vx以提供期望7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶(IIIx)。
使用(例如)酸(例如TFA)對經保護(R)-3-((2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)甲基)吡咯啶之溶液進行去保護處理以得到游離胺。使用鹼(例如DIPEA)及醯氯在低於室溫之溫度下(較佳地在約0℃下)進行處理以提供丙烯醯胺衍生物VIIx。藉由使丙烯醯胺衍生物VIIx與經取代胺進行偶合來製備期望之本發明化合物VIIIx。該偶合之一實例涉及在酸(例如TFA)存在下於高於室溫之溫度下(較佳地高於約50℃及更佳地在約100℃下)加熱反應物。
反應圖1-3a中所定義之起始化合物亦可存在呈經保護形式(若需要)及/或呈鹽形式之官能基，前提係存在成鹽基團且可發生鹽形式之反應。若期望，則可將一種式I化合物轉化成另一式I化合物或其N-氧化物；可將式I化合物轉化成鹽；可將式I化合物之鹽轉化成游離化合物或另一鹽；及/或可將式I之異構體化合物之混合物分離成個別異構體。
可以已知方式藉由使式I化合物與過氧化氫或過酸(例如3-氯過氧-苯甲酸)在介於約-10℃至約35℃(例如約0℃至約室溫)之間之溫度下 於惰性溶劑(例如CH2Cl2)中進行反應來獲得N-氧化物。
若一或多個其他官能基(例如羧基、羥基、胺基或巰基)在式I-IVa之化合物中經保護或需要保護(此乃因其不應參與反應)，則該等基團係(例如)通常用於合成肽化合物亦及頭孢菌素(cephalosporin)及青黴素(penicillin)以及核酸衍生物及糖者。
保護基團可業已存在於前體中且應保護涉及不期望二級反應(例如醯基化、醚化、酯化、氧化、溶劑分解及類似反應)之官能基。保護基團之特性在於其通常(例如)在類似於生理學條件之條件下藉由溶劑分解、還原、光解或亦藉由酶活性自身適合易於(亦即無期望二級反應)去除且其不存於終產物中。熟習此項技術者知曉或可容易地確立與上文及下文所提及之反應適宜之保護基團。
該等官能基由保護基團之保護、保護基團本身及其去除反應闡述於(例如)標準參考著作中，例如J.F.W.McOmie,「Protective Groups in Organic Chemistry」,Plenum Press,London and New York 1973；T.W.Greene,「Protective Groups in Organic Synthesis」,Wiley,New York 1981；「The Peptides」；第3卷(編者：E.Gross及J.Meienhofer),Academic Press,London and New York 1981；「Methoden der organischen Chemie」(Methods of organic chemistry),Houben Weyl，第4版，第15/1卷，Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke及H.Jescheit,「Aminosäuren,Peptide,Proteine」(Amino acids,peptides,proteins),Verlag Chemie,Weinheim,Deerfield Beach,and Basel 1982；及Jochen Lehmann,「Chemie der Kohlenhydrate：Monosaccharide und Derivate」(Chemistry of carbohydrates：monosaccharides and derivatives),Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974。
在視需要實施之額外製程步驟中，不應參與反應之起始化合物 之官能基可以未經保護形式存在或可(例如)由上文在「保護基團」下所提及之一或多個保護基團保護。然後根據本文所闡述之方法中之一者完全或部分去除保護基團。
可以本身已知之方式來製備具有成鹽基團之式I化合物之鹽。由此可藉由使用酸或使用適宜陰離子交換試劑進行處理來獲得式I化合物之酸加成鹽。亦可將具有兩個酸分子之鹽(例如式I化合物之二鹵化物)轉化成每一化合物具有一個酸分子之鹽(例如單鹵化物)；此可藉由以下方式來實施：加熱成熔體或(例如)藉由在高真空及升高溫度(例如約130℃至約170℃)下加熱固體形式，從而使每一式I化合物分子去除一個酸分子。
通常可(例如)藉由使用適宜鹼性試劑(例如使用鹼金屬碳酸鹽、鹼金屬碳酸氫鹽或鹼金屬氫氧化物，通常係K2CO3或NaOH)進行處理來將鹽轉化成游離化合物。
本文所闡述之所有製程步驟皆可在以下已知反應條件(較佳地在彼等具體提及之條件下)實施：在不存在或通常在存在溶劑或稀釋劑(較佳地(例如)對所用試劑呈惰性且能夠溶解該等試劑者)下，在不存在或存在觸媒、縮合劑或中和劑(例如離子交換劑，通常係陽離子交換劑，例如呈H+形式)，端視反應及/或反應物之類型在減小、正常或升高溫度下(例如在約-100℃至約190℃之範圍內，較佳地約-80℃至約150℃，例如在約-80℃至約60℃下、在室溫下、在約-20℃至約40℃下或在所用溶劑之沸點下)，在大氣壓下或在密閉器皿中，若適當在壓力下，及/或在惰性氣氛中(例如在氬或氮下)。
鹽可存在於所有起始化合物及暫態(若該等起始化合物及暫態含有成鹽基團)。鹽亦可存在於該等化合物之反應期間，前提係反應並不由此中斷。
除非在製程闡述中另有所述，否則彼等可經選擇適用於所論述 反應之溶劑包含(例如)水、酯(例如EtOAc)、醚(通常係脂肪族醚，例如Et2O；或環狀醚，例如THF)、液體芳族烴(通常係苯或甲苯)、醇(通常係MeOH、EtOH、IpOH或1-丙醇)、腈(通常係AcCN)、鹵化烴(通常係CH2Cl2)、醯胺(例如DMF)、鹼(通常係雜環氮鹼，例如吡啶)、羧酸(通常係低碳數烷烴羧酸，例如HOAc)、羧酸酐(通常係低碳數烷烴酸酐，例如乙酸酐)、環狀、直鏈或具支鏈烴(通常係環己烷、己烷或異戊烷)或該等溶劑之混合物(例如水溶液)。
本發明亦係關於彼等如下製程形式：其中反應始於可在任一階段以暫態形式獲得之化合物並實施剩餘步驟，或在任一階段打斷製程，或在反應條件下形成起始材料，或使用該呈反應性衍生物或鹽形式之起始材料，或產生可藉助本發明製程獲得之化合物並原位處理該化合物。在較佳實施例中，反應始於彼等得到上述較佳化合物之起始材料。
可根據本文所描述之任一製程來合成本文所描述之任一式之化合物。在本文所描述之製程中，該等步驟可以交替順序實施且可在其前或其後視需要具有其他保護/去保護步驟。製程可進一步包括使用適當反應條件，包含惰性溶劑、其他試劑(例如鹼(例如LDA、DIEA、吡啶、K2CO3及諸如此類))、觸媒及上文之鹽形式。中間體可經或未經進一步純化即原位分離或繼續使用。業內已知純化方法且包含(例如)結晶、層析(液相及氣相、模擬移動床(「SMB」))、萃取、蒸餾、研磨、反相HPLC及諸如此類。業內已知反應條件(例如溫度、持續時間、壓力及氣氛(惰性氣體、環境))且可根據反應需要予以調節。
另外，上述各合成步驟可以交替次序或順序實施以得到期望化合物。業內已知可用於合成本文所闡述抑制劑化合物之合成化學轉變及保護基團方法(保護及去保護)且包含(例如)彼等(例如)闡述於以下文獻中者：R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene及P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley and Sons(1999)；L.Fieser及M.Fieser,Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；及L.Paquette編輯，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)。
式I-IVa之化合物(包含其鹽)亦可以水合物形式獲得，或其晶體可包含(例如)用於結晶之溶劑(以溶劑合物形式存在)。
新起始材料及/或中間體以及其製備製程同樣係本發明之標的。在較佳實施例中，使用該等起始材料及由此選擇以能夠獲得較佳化合物之反應條件。
本發明之起始材料已知，市面有售，或可類似於業內已知方法或根據業內已知方法來合成。
在起始材料之製備中，並不參與反應之所存在官能基應視需要加以保護。較佳保護基團、其引入及其去除闡述於上文或實例中。
下列實例含有式I-IVa之化合物之製備方法之詳細說明。該等詳細說明屬於本發明範圍內且用於例示形成本發明之一部分之上述一般合成程序。該等詳細說明僅係出於闡釋性目的而呈現且並不意欲限制本發明範圍。
本發明化合物可含有一或多個不對稱中心且由此以外消旋物及外消旋混合物、定比混合物、單一對映異構體、個別非對映異構體及非對映異構體混合物形式存在。該等化合物之所有該等異構體形式皆明確包含於本發明中。
本發明明確包含本文所闡述化合物之所有互變異構體形式。
化合物亦可以順式-或反式-或E-或Z-雙鍵異構體形式存在。該等化合物之所有該等異構體形式皆明確包含於本發明中。本文所闡述化合物之所有晶體形式皆明確包含於本發明中。
環部分(例如苯基、噻吩基等)上之取代基可附接至具體原子，藉此其意欲固定至該原子，或其可繪製為未附接至具體原子(參見下文)，藉此其意欲附接於任一尚未經藉由除H外之原子取代之可用原子。
該等雜環系統可經由環系統中之碳原子或雜原子附接。在雜環或雜芳基環系統陳述為附接於雜原子(例如氮原子)處之情況下，此係指附接至該氮雜原子處之指定官能基之雜環或雜芳基環系統。除非另有說明，否則所有材料皆係自商業供應商獲得且未經進一步純化即使用。除非另外指示，否則所有份數皆係以重量計且溫度係以攝氏度表示。所有化合物皆展示與其指配結構一致之NMR光譜。
為使得可更意欲理解本文所闡述之本發明，闡述下列實例。應理解，該等實例僅出於闡釋目的且不應解釋為以任何方式限制本發明。
分析方法：
除非另外指示，否則在具有HP Zorbax SB-C18(5μ)反相管柱(4.6×150mm)(在30℃下以1.00mL/min之流速運行)之HP-1050系統上運行所有HPLC分析。流動相使用溶劑A(H2O/0.1% TFA)及溶劑B(AcCN/0.1% TFA)以及10%至90% AcCN之20min梯度。在梯度後係經2min返回10% AcCN及3min沖洗。
LC-MS方法： 方法A：
1.在具有HP Zorbax SB-C8(5μ)反相管柱(4.6×50mm)(在30℃下以0.75ml/min之流速運行)之HP-1100 MSD系統上運行試樣。
2.流動相使用溶劑A(H2O/0.1% HOAc)及溶劑B(AcCN/0.1% HOAc)以及10%至90% AcCN之10min梯度。在梯度後係經1min返回10% AcCN及2min沖洗。
方法B：
1.在具有HP Zorbax SB-C8(5μ)反相管柱(4.6×50mm)(在30℃下以1.5ml/min之流速運行)之HP-1100系統上運行試樣。
2.流動相使用溶劑A(H2O/0.1% HOAc)及溶劑B(AcCN/0.1% HOAc)以及10%至90% AcCN之5min梯度。在梯度後係經0.5min返回10% AcCN及1.5min沖洗。
製備型HPLC：在指示情形下，經由製備型HPLC使用具有20×50mm管柱之Gilson工作站以20ml/min純化所關注化合物。流動相使用溶劑A(H2O/0.1% TFA)及溶劑B(AcCN/0.1% TFA)以及10%至95% AcCN之10min梯度。在梯度後係經2min返回20% AcCN。
質子NMR光譜：除非另外指示，否則所有1H NMR光譜皆係在Bruker Advance 400MHz儀器上運行。所有所觀察質子皆報告為距四甲基矽烷(TMS)或適當指示溶劑中之其他內部標準之百萬份數(ppm)低磁場。
中間體 (3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50)之製備。
步驟1.在室溫下，使用K2CO3(361g,2.6mol)處理存於DMF(200mL)中之N-Boc-間-伸苯基二胺(50a，根據報導於Duceppe,J.-S.等人， Org.Process.Res.Dev. 2009,13,1156-1160中之程序製得)(280g,1.35mol)及4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(Sigma-Aldrich；303.7g,1.32mol)之混合物。將混合物在80℃下於油浴中攪拌過夜。將其冷卻至室溫並使用冰水處理。過濾所得白色懸浮液並使用水洗滌。收集白色固體並乾燥以提供粗製4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(50c)(450g，產率為84%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.22(s,1 H),9.44(s,1 H),8.72(s,1 H),7.90(s,1 H),7.35-7.33(m,1 H),7.28-7.24(m,1 H),7.14-7.12(m,1 H),4.38-4.33(q,2 H),2.51(s,3 H),1.48(s,9 H),1.35(t,3 H)。m/z(ESI，+ve離子)405.0(M+1)+。
步驟2.在-40℃下，向存於THF(200mL)中之4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(50c)(340g,0.84mol)之懸浮液中逐滴添加LiAlH4(2.57L，存於THF中之1.0M溶液，2.57mol)。將反應混合物在0℃下攪拌13h，然後冷卻至-20℃並使用固體Na2SO4‧10H2O小心驟冷。過濾反應混合物並使用2×150mL EtOAc沖洗。濃縮濾液以提供粗製(3-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50d)(280g，產率為92%)。m/z(ESI，+ve離子)363.0(M+1)+。
步驟3.在室溫下，將氧化錳(IV)(358g,4.1mol)添加至存於CHCl3中之(3-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50d)(140g,386.8mmol)之溶液中。在18h之後，經由矽藻土(Celite)墊過濾反應混合物並使用3×100mL CHCl3洗滌。濃縮濾液且在矽膠管柱上(使用存於己烷中之15-65% EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(60g，產率為43%)。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 10.61(1 H,br.s.),9.77(1 H,s),8.44(1 H,s),7.99(1 H,br.s.), 7.33-7.39(1 H,m),7.27-7.30(1 H,m),7.00-7.06(1 H,m),6.41-6.55(1 H,m),2.59(3 H,s),1.53(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)361.1(M+1)+。
(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(51)之製備。
在-78℃下，將LiHMDS(41.6mL存於THF中之1.0M溶液，41.6mmol)添加至2-MeTHF(70mL)中並使用EtOAc(4.34mL,44.4mmol)處理。將溶液在-78℃下攪拌10min，然後一次性添加固體(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50)(5.00g,13.87mmol)且將溶液在-78℃下攪拌10min，然後自升溫至室溫之冷卻浴取出並保持3h。在冰浴中冷卻反應液且使用NH4Cl飽和溶液驟冷並使用EtOAc(2×100mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。將粗製固體懸浮於Et2O(50mL)中並藉由過濾收集，使用Et2O(2×15mL)洗滌並在真空下乾燥以提供淺黃色固體形式之(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(51)(4.24g，11.03mmol，產率為80%)。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.60-8.65(1 H,m),7.64-7.71(1 H,m),7.52(1 H,s),7.39-7.47(1 H,m),7.29(2 H,dd,J=8.3,1.3Hz),6.89-6.95(1 H,m),6.71(1 H,d,J=9.6Hz),6.56(1 H,s),2.19(3 H,s),1.50(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)385.0(M+1)+。
(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(52)之製備。
在0℃下，使用過乙酸(32wt%，存於AcOH中，1.95mL，9.29mmol)緩慢逐滴處理存於DCM(80mL)中之(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(51)(3.57g,9.29mmol)之懸浮液。在5-10min之後，反應混合變為均質黃色溶液，且在20min之後，其再次變為懸浮液。在1h之後，使用DCM(50mL)處理反應混合物，隨後使用硫代硫酸鈉水溶液處理並在0℃下攪拌5min。然後使用NaHCO3飽和溶液處理，使用DCM(6×50mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮以提供淺黃色結晶固體形式之(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(52)(2.50g,9.70mmol，產率為67%)。粗製材料未經進一步純化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.58(1 H,s),9.28(1 H,s),8.18(1 H,d,J=9.6Hz),7.53(1 H,s),7.37-7.47(2 H,m),6.89-6.95(2 H,m),2.71(3 H,s),1.46(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)422.9(M+Na)+。
(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(53)之製備。
步驟1.向配備有加料漏斗、溫度探針及氮入口之3頸2L圓底燒瓶中裝填(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50)(25.0g,69.4mmol)及THF(400mL)。使用冰水浴將混合物 冷卻至0.5℃。經由加料漏斗經35min逐滴添加甲基溴化鎂(3.0M，存於Et2O中，74.0mL，222mmol)。在添加期間保持溫度低於8℃。將反應混合物在0.5℃下攪拌90min且然後經由加料漏斗緩慢添加飽和NH4Cl(水溶液)同時在冰中冷卻。將混合物攪拌1h，然後使用EtOAc(2×300mL)萃取。使用鹽水洗滌合併之有機層，藉由無水MgSO4乾燥，過濾並濃縮以提供黃色固體。將黃色固體懸浮於Et2O(約200mL)中，過濾，使用額外Et2O(2×50mL)洗滌，並在真空下乾燥過夜以提供淺黃色固體形式之(3-((5-(1-羥乙基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(23.17g，61.5mmol，產率為89%)。m/z(ESI，+ve離子)377.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δpm 9.34(1 H,s),8.86(1 H,s),8.07(1 H,s),7.80(1 H,s),7.32(1 H,dd,J=8.1,1.1Hz),7.19(1 H,t,J=8.1Hz),6.95-7.07(1 H,m),5.87(1 H,d,J=4.1Hz),4.93(1 H,dd,J=6.5,4.3Hz),2.43(3 H,s),1.47(9 H,s),1.40(3 H,d,J=6.5Hz)。
步驟2.在室溫下，將過釕酸四丙基銨(1.05g,2.99mmol)添加至存於DCM(460mL)中之(3-((5-(1-羥乙基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(22.5g,59.8mmol)及4-甲基嗎啉N-氧化物(8.75g,74.7mmol)之異質混合物中。將混合物在室溫下攪拌3h並在減壓下濃縮。將深色固體溶於存於DCM中之10% MeOH中且將材料吸附於矽膠上。藉由矽膠墊(2-L經矽膠部分填充之經燒結中號玻璃料)純化材料，其中使用存於DCM中之10% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之20% EtOAc(2L)洗脫。濃縮含有期望產物之部分以提供白色固體。向固體中添加1.2L 1/1MeOH/EtOAc且將混合物加熱至回流並緩慢冷卻至室溫。使混合物在室溫下靜置過夜。藉由過濾收集白色鬆散針形物並使用EtOAc洗滌以提供(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(53)(12.66g，33.8mmol，產 率為56%)。濃縮濾液且將殘餘物吸收於矽膠上，且藉由矽膠墊(2-L經矽膠部分填充之經燒結中號玻璃料)純化材料，其中使用存於DCM中之10% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之15% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之20% EtOAc洗脫。濃縮含有期望產物之部分以提供白色固體。向固體中添加600mL 1/1MeOH/EtOAc且將混合物加熱至回流並緩慢冷卻至室溫。在混合物處於60℃下時，使用少量期望產物接種混合物。將混合物在室溫下靜置過夜。藉由過濾收集白色鬆散針形物並使用EtOAc洗滌以提供額外(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(53)(4.20g，11.22mmol，產率為18%)。m/z(ESI，+ve離子)374.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 11.30(1 H,s),8.68-8.73(1 H,m),7.91(1 H,s),7.30-7.35(1 H,m),7.05(1 H,dd,J=8.0,1.0Hz),6.46(1 H,br.s.),2.59(3 H,s),2.56(3 H,s),1.52(9 H,s)。
(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(54)之製備。
在-78℃下，將LiHMDS(1.0M，存於THF中，27.3mL，27.3mmol)添加至THF(100mL)中且使用EtOAc(2.50mL,25.6mmol)處理並攪拌15min。在-78℃下，一次性添加(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(53)(3.19g,8.52mmol)且將溶液升溫至室溫並攪拌3h。使用NH4Cl飽和溶液將反應混合物驟冷並使用EtOAc(150mL)萃取，使用鹽水洗滌並藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。在矽膠管柱上(存於己烷中之10-90% EtOAc)純化粗製殘餘物以提供淺黃色非晶型固體形式之標題化合物(54)(2.49g，6.25mmol，產 率為73%)。m/z(ESI，+ve離子)398.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.72(1 H,s),7.46(1 H,br.s.),7.42(1 H,t,J=8.0Hz),7.31(1 H,dd,J=8.2,1.4Hz),6.87-6.94(1 H,m),6.50-6.59(2 H,m),2.50(3 H,d,J=1.0Hz),2.17(3 H,s),1.50(9 H,s).
(3-(6-乙基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(55)之製備。
根據針對中間體51所闡述之程序使用丁酸甲酯(1.89mL,16.65mmol)及(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(50)(2.00g,5.55mmol)作為起始材料來製備所獲得灰白色固體形式之此化合物(720mg，1.75mmol，產率為31%)。m/z(ESI，+ve離子)413.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.62(1 H,s),7.47-7.55(2 H,m),7.39-7.46(1 H,m),7.29(1 H,d,J=1.4Hz),6.92(1 H,dd,J=7.8,1.0Hz),6.57(1 H,br.s.),2.66(2 H,q,J=7.4Hz),2.19(3 H,s),1.50(9 H,s),1.23-1.31(3 H,m).
(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(56)之製備。
在室溫下，使用MCPBA(75wt.%,681mg,2.76mmol)處理存於DCM(10mL)中之(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(54)(440mg,1.10mmol)並攪拌90min。使用DCM(25mL)稀釋反應混合物，使用冰及1N NaOH(30 mL)處理。分離DCM層且使用額外量之DCM(2×20mL)萃取水層，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以提供灰白色發泡體形式之(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(451mg，1.05mmol，產率為95%)。粗製材料未經進一步純化即使用。m/z(ESI，+ve離子)453.0(M+Na)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 9.11(1 H,s),7.60(1 H,br.s.),7.45(1 H,t,J=8.0Hz),7.23(1 H,dt,J=8.2,1.0Hz),6.91(1 H,ddd,J=7.9,1.9,0.8Hz),6.80(1 H,d,J=1.4Hz),6.60(1 H,s),3.04(3 H,s),2.60(3 H,d,J=1.2Hz),1.49(9 H,s)。
中間體57之製備。
步驟1.在20mL玻璃微波管中，使用K2CO3(715mg,5.18mmol)、CuI(99mg,0.52mmol)及4,7-二甲氧基-1,10-菲咯啉(Sigma Aldrich,187mg,0.77mmol)處理2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(57a,Matrix Scientific；500mg,2.59mmol)，隨後使用氬吹掃3min。然後使用DMSO(6.0mL)及3-碘苯胺(0.31mL,2.59mmol)處理固體。密封管並加熱至110℃保持20h。使用水處理反應混合物且使用EtOAc(3×50mL)萃取並經由矽藻土墊過濾懸浮液。在矽膠管柱上(存於DCM中之1-20% MeOH)純化粗製材料以提供富集產物。然後在Gilson製備型HPLC上(Silicvcle Silichrome XT C18管柱；30×150 mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之5-95% 0.1%TFA/CH3CN)再純化以提供淺黃色結晶固體形式之8-(3-胺基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(57b)(150mg，0.38mmol，產率為14%)。m/z(ESI，+ve離子)285.0(M+1)+。
步驟2.在0℃下，使用NaH(存於礦物油中之60wt.%分散液，60mg，1.51mmol)一次性處理存於THF(5.0mL)中之8-(3-胺基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(57b)(150mg,0.38mmol)。將其在此溫度下攪拌30min然後使用二碳酸二-第三丁基酯(205mg,0.94mmol)處理並加熱至70℃保持6h。將反應混合物冷卻至室溫，使用冰水驟冷並使用EtOAc(2×30mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，濃縮並在矽膠管柱上(存於己烷中之10-90% EtOAc)純化以提供黃色膜形式之胺基甲酸雙(第三丁基(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基))酯(57c)(158mg，0.33mmol，產率為87%)。m/z(ESI，+ve離子)485.1(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.65(1 H,s),7.69(1 H,d,J=9.6Hz),7.52(1 H,t,J=8.0Hz),7.24-7.29(1 H,m),7.20(1 H,d,J=7.8Hz),7.07(1 H,t,J=1.8Hz),6.71(1 H,d,J=9.4Hz),2.22(3 H,s),1.43(18 H,s)。
步驟3.使用DCM(5.0mL)處理胺基甲酸雙(第三丁基(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基))酯(57c,157mg,0.32mmol)，隨後使用MCPBA(75% max.,200g,0.81mmol)並在室溫下攪拌1h。LC-MS展示完全形成期望產物m/z(ESI，+ve離子)539.0(M+Na)+。使用100mL DCM稀釋反應混合物，使用10mL飽和NaHCO3洗滌，隨後使用10mL鹽水洗滌。藉由Na2SO4乾燥有機溶液，過濾並濃縮以得到灰白色固體形式之中間體57。粗製材料未經純化即使用。
(4-氟-3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁 基酯(58)之製備。
根據針對中間體50所闡述之程序自(3-胺基-4-氟苯基)胺基甲酸第三丁基酯(58a；根據Kuramoto,Y.等人，J.Med.Chem. 2003,46,1905-1917中之報導方案製得)開始來製備標題化合物。
4-((5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-氟苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(58b)：m/z(ESI，+ve離子)422.9(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.36(1 H,s),9.48(1 H,s),8.76(1 H,s),8.48(1 H,d,J=5.3Hz),7.19-7.28(1 H,m),7.07-7.15(1 H,m),4.37(2 H,q,J=7.2Hz),2.49(3 H,s),1.45-1.51(9 H,s),1.35(3 H,t,J=7.0Hz)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -134.43(1 F,s)。
(4-氟-3-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(58c)：m/z(ESI，+ve離子)380.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.33(1 H,d,J=5.7Hz),7.75-7.81(1 H,m),6.84-6.94(2 H,m),4.50(2 H,s),2.40-2.44(3 H,m),1.39-1.43(9 H,s)。
(4-氟-3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(58)：m/z(ESI，+ve離子)379.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δppm 10.78(1 H,br.s.),9.81(1 H,s),8.60(1 H,d,J=4.7Hz),8.48(1 H,s),7.04-7.11(1 H,m),6.97-7.03(1 H,m),6.43(1 H,br.s.),2.61(3 H,s),1.52(9 H,s)。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ ppm -133.41(1 F,s)。
(4-氟-3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(59)之製備。
根據針對中間體51所闡述之程序使用(4-氟-3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(58)(430mg,1.14mmol)作為起始材料來製備淺黃色結晶固體形式之此化合物(270mg，產率為59%)。m/z(ESI，+ve離子)403.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.64(1 H,s),7.70(1 H,d,J=9.6Hz),7.55(1 H,br.s.),7.28-7.35(1 H,m),7.17(1 H,t,J=9.0Hz),6.72(1 H,d,J=9.6Hz),6.56(1 H,br.s.),2.22(3 H,s),1.49(9 H,s)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -126.87(1 F,s)。
(4-氟-3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(60)之製備。
在0℃下，使用MCPBA(77wt.%,161mg,0.72mmol)一次性處理存於DCM(10mL)中之(4-氟-3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(59)(270mg,0.67mmol)之懸浮液並在0℃下攪拌1h。使用DCM(50mL)稀釋反應混合物，並使用冰及水(30mL)處理，隨後使用10% Na2CO3(約10mL)處理。分離DCM層且使用額外量之DCM(2×50mL)萃取水層，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以得到淺黃色固體形式之粗製(4-氟-3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶 并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(60)(369mg)。m/z(ESI，+ve離子)440.9(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.63(1 H,br.s.),8.24(1 H,d,J=9.6Hz),7.68(1 H,d,J=3.5Hz),7.44-7.52(1 H,m),7.33-7.41(1 H,m),6.95-7.01(1 H,m),5.76(1 H,s),2.72-2.78(3 H,m),1.47(9 H,s)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -129.58(1 F,s)。
N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)之製備。
步驟1.在室溫及氮下，將存於THF(620mL)及DMF(310mL)中之5-溴-2,4-二氯-嘧啶(180g,0.79mol,Matrix Scientific)、N-Boc-間-伸苯基二胺(170g，0.82mol，Synchem公司)及Na2CO3(90g,0.85mol)之混合物攪拌18h。使用水(6L)及EtOAc(6L)處理。過濾含有期望產物之不溶性固體[m/z(ESI，+ve離子)400.9/422.9(M+1)+]並使用EtOAc(2×1L)洗滌並收集。將濾液轉移至分液漏斗中。棄除水層且將有機層與上述經過濾固體合併。將漿液在減壓下蒸發至乾燥且將粗製殘餘物在高真空下進一步乾燥。在Et2O(1L)中攪拌並經由經燒結 玻璃料過濾。將灰白色固體在40℃下於真空烘箱中乾燥中18h以得到(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(100a，150g，22.17mmol，產率為53%)。1H-NMR(400MHz,DMSO-D6)δ ppm 9.42(1 H,s),9.27(1 H,s),8.44(1 H,s),7.65(1 H,s),7.19-7.29(2 H,m),7.07-7.17(1 H,m),1.48(9 H,s).m/z(ESI,+ve ion)400.9/422.9(M+1)+。
步驟2.向配備有機械攪拌器之3-L 3頸圓底燒瓶中添加(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(100a,92g,230mmol)、巴豆酸(78.95g,920mmol)、雙(苯甲腈)氯化鈀(ii)(4.41g,11.51mmol,Sigma-Aldrich)、三(鄰甲苯基)膦(3.50g,11.51mmol,Sigma-Aldrich)、THF(319mL)、DIPEA(400mL,2302mmol)。使用氬將懸浮液吹掃5min。將其在68℃下於油浴中攪拌過夜。將反應混合物冷卻至室溫，並使用乙酸酐(58.6mL,622mmol)一次性處理。將反應混合物在68℃下於油浴中攪拌1h。將其冷卻至室溫，使用2.1L EtOAc稀釋。使用1.12L 1N HCl洗滌混合物，隨後使用1.12L飽和NaHCO3溶液洗滌。藉由MgSO4乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮。向褐色油狀物殘餘物中緩慢添加1L二乙醚。將所得懸浮液在室溫下於通風櫥中靜置過夜。過濾固體，收集且使用500mL EtOAc處理並在45℃下攪拌30min。過濾不溶性淺棕色固體並乾燥以得到期望(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(100b)(45g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.81(1 H,s),7.48(2 H,m),7.30(1 H,d,J=8.4Hz),6.88(1 H,d,J=8.0Hz),6.67(1 H,s),6.60(1 H,br.),2.54(3 H,s),1.50(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)387.1(M+1)+。濃縮濾液並在矽膠管柱上(存於己烷中之10-50% EtOAc)純化以得到淺棕色結晶固體形式之期望(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(20g)。m/z(ESI，+ve離 子)387.1(M+1)+。
步驟3.在配備有溫度計之3-L三頸圓底燒瓶中，將存於4.0M鹽酸(存於二噁烷中，200mL，801mmol)中之(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(100b,31g,80mmol)之懸浮液在50℃下攪拌2.5h。LCMS指示完全去除N-Boc保護基團。在完成反應之後，在冰浴中冷卻整體混合物，並使用NaOH 10.0N溶液(88mL,882mmol)以內部溫度並不超過15℃之速率處理。在0℃下，使用丙烯醯氯(8.46mL,104mmol)處理所得混合物且將混合物在0℃下攪拌1h。過濾所得褐色沈澱物，使用水(2×25mL)洗滌，收集並在40℃下於真空烘箱中乾燥48h以得到N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(27g，產率為98%)。粗製褐色固體未經進一步純化即用於下一步驟中。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ 10.69(br.,1 H),9.11(s,1 H),7.78(d,J=8.22Hz,1 H),7.71(br.,1 H),7.49(t,J=7.92Hz,1 H),7.00(d,J=7.63Hz,1 H),6.74(s,1 H),6.56(dd,J=10.27,16.92Hz,1 H),6.26(d,J=16.82Hz,1 H),5.76(d,J=10.17Hz,1 H),2.55(s,3 H)。m/z(ESI，+ve離子)341.0(M+1)+。
(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101)之製備。
步驟1.在室溫下，使用碳酸鉀(361g,2.6mol)處理存於DMF(200mL)中之N-Boc-間-伸苯基二胺(280g,1.35mol)及4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(Sigma-Aldrich；303.7g,1.32mol)之混合物。將混合物在80℃下於油浴中攪拌過夜。將其冷卻至室溫並使用冰水處理。過濾所得白色懸浮液並使用水洗滌。收集白色固體並乾燥以提供粗製4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙基酯(101a)(450g，產率為84%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.22(s,1 H),9.44(s,1 H),8.72(s,1 H),7.90(s,1 H),7.35-7.33(m,1 H),7.28-7.24(m,1 H),7.14-7.12(m,1 H),4.38-4.33(q,2 H),2.51(s,3 H),1.48(s,9 H),1.35(t,3 H)。m/z(ESI，+ve離子)405.0(M+1)+。
步驟2.在-40℃下，向存於THF(200mL)中之4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(101a)(340g,0.84mol)之懸浮液中逐滴添加LiAlH4(2.57L存於THF中之1.0M溶液，2.57mol)。將反應混合物在0℃下攪拌13h，然後冷卻至-20℃並使用固體Na2SO4‧10H2O小心驟冷。過濾反應混合物並使用2×150mL EtOAc沖洗。濃縮濾液以提供粗製(3-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(280g，產率為92%)。m/z(ESI，+ve離子)363.0(M+1)+。
步驟3.在室溫下，將氧化錳(IV)(358g,4.1mol)添加至存於CHCl3中之(3-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101c)(140g,386.8mmol)之溶液中。在18h之後，經由矽藻土墊過濾反應混合物並使用3×100mL CHCl3洗滌。濃縮濾液且在矽膠管柱上(使用存於己烷中之15-65% EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101)(60g，產率為43%)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ ppm 10.61(1 H,br.s.),9.77(1 H,s),8.44(1 H,s),7.99(1 H,br. s.),7.33-7.39(1 H,m),7.27-7.30(1 H,m),7.00-7.06(1 H,m),6.41-6.55(1 H,m),2.59(3 H,s),1.53(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)361.1(M+1)+。
(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(102)之製備。
步驟1.向配備有加料漏斗、溫度探針及氮入口之3頸2-L圓底燒瓶中裝填(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(25.0g,69.4mmol)及THF(400mL)。使用冰水浴將混合物冷卻至0.5℃。經由加料漏斗經35min逐滴添加甲基溴化鎂(3.0M，存於Et2O中，74.0mL，222mmol)。在添加期間保持溫度低於8℃。將反應混合物在0.5℃下攪拌90min且然後經由加料漏斗緩慢添加飽和NH4Cl(水溶液)同時使用冰浴冷卻。將混合物攪拌1h，然後使用EtOAc(2×300mL)萃取。使用鹽水洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮以提供黃色固體。將黃色固體懸浮於Et2O(約200mL)中，過濾，使用額外Et2O(2×50mL)洗滌，並在真空下乾燥過夜以提供淺黃色固體形式之(3-((5-(1-羥乙基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(23.17g，61.5mmol，產率為89%)。m/z(ESI，+ve離子)377.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.34(1 H,s),8.86(1 H,s),8.07(1 H,s),7.80(1 H,s),7.32(1 H,dd,J=8.1,1.1Hz),7.19(1 H,t,J=8.1Hz),6.95-7.07(1 H,m),5.87(1 H,d,J=4.1Hz),4.93(1 H,dd,J=6.5,4.3Hz),2.43(3 H,s),1.47(9 H,s),1.40(3 H,d,J=6.5Hz)。
步驟2.在室溫下，將過釕酸四丙基銨(1.05g,2.99mmol)添加至存於DCM(460mL)中之(3-((5-(1-羥乙基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(22.5g,59.8mmol)及4-甲基嗎啉N-氧化物(8.75g,74.7mmol)之異質混合物中。將混合物在室溫下攪拌3h並在減壓下濃縮。將深色固體溶於存於DCM中之10% MeOH中且將材料吸附於矽膠上。藉由矽膠墊(2-L經矽膠部分填充之經燒結中號玻璃料)純化材料，其中使用存於DCM中之10% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之20% EtOAc(2L)洗脫。濃縮含有期望產物之部分以提供具有黑色條紋之白色固體。向固體中添加1.2L 1/1MeOH/EtOAc且將混合物加熱至回流並緩慢冷卻至室溫。將混合物保持於室溫下過夜。藉由過濾收集白色鬆散針形物並使用EtOAc洗滌以提供(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(102)(12.66g，33.8mmol，產率為56%)。濃縮濾液且將殘餘物吸收於矽膠上，且藉由矽膠墊(2000mL經矽膠部分填充之經燒結中號玻璃料)純化材料，其中使用存於DCM中之10% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之15% EtOAc(2L)洗脫，隨後使用存於DCM中之20% EtOAc洗脫。濃縮含有期望產物之部分以提供具有黑色條紋之白色固體。向固體中添加600mL 1/1MeOH/EtOAc且將混合物加熱至回流並緩慢冷卻至室溫。在混合物處於60℃下時，使用少量期望產物接種混合物。將混合物保持於室溫下過夜。藉由過濾收集白色鬆散針形物並使用EtOAc洗滌以提供額外(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(102)(4.20g，11.22mmol，產率為18%)。m/z(ESI，+ve離子)374.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 11.30(1 H,s),8.68-8.73(1 H,m),7.91(1 H,s),7.30-7.35(1 H,m),7.05(1 H,dd,J=8.0,1.0Hz),6.46(1 H,br.s.),2.59(3 H,s),2.56(3 H,s),1.52(9 H,s)。
N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)之製備。
步驟1.向配備有磁力攪拌器之圓底燒瓶中裝填(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(102)(49.5g,132mmol)及THF(1300mL)。將混合物在室溫下攪拌30min，並經由多孔漏斗過濾。將含有102之所得濾液裝填至加料漏斗上，脫氣並使用氮吹掃。向配備有頂置式攪拌器、熱電偶及氮入口之單獨5L 3頸圓底燒瓶中裝填THF(325mL)。將溶劑脫氣並使用氮吹掃。將其冷卻至-78℃，使用LiHMDS(463mL 1M THF溶液，463mmol，Aldrich)處理。將混合物在-78℃下攪拌5min，並使用EtOAc(45.3mL,463mmol)經由注射器逐滴處理。將所得烯醇化物在-78℃下攪拌30min，並使用存於THF中之起始材料(102)之溶液經由上述加料漏斗逐滴處理同時維持反應溫度<-70℃。在-78℃下攪拌反應混合物並升溫至室溫過夜。將反應混合物傾倒至使用冰浴冷卻之EtOAc(1000mL)及飽和NH4Cl溶液(200mL)之雙相混合物中。將混合物攪拌30min。分離各層。使用鹽水(950mL)洗滌有機層，藉由Na2SO4乾燥並濃縮至乾燥，由此期望產物自溶液結晶出。使用MTBE沖洗若干次。過濾灰白色固體，使用MTBE洗滌並在真空下使用氮吹掃乾燥以提供(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基 酯(103a,46,7g,89%)。m/z(ESI，+ve離子)398.9(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ ppm 8.72(1 H,s),7.46(1 H,br.s.),7.42(1 H,t,J=8.0Hz),7.31(1 H,dd,J=8.2,1.4Hz),6.87-6.94(1 H,m),6.50-6.59(2 H,m),2.50(3 H,d,J=1.0Hz),2.17(3 H,s),1.50(9 H,s)。
步驟2.向存於DCM(50mL)中之(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(103a,6.52g,16.36mmol)之懸浮液中添加TFA(30mL)。將所得均質溶液在室溫下攪拌30min。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物且然後在高真空下濃縮20min以得到黏性褐色油狀物形式之103b。m/z(ESI，+ve離子)299.1(M+H)+。
步驟3.將103b之粗製殘餘物吸收於DCM(75mL)中，冷卻至0℃並使用DIEA(14.23mL,82mmol)處理，隨後使用丙烯醯氯(1.60mL,19.63mmol)處理。將所得黃色懸浮液在0℃下保持50min。藉由添加約1.0M K2CO3(50mL)水溶液將反應混合物驟冷且經由中號孔隙率經燒結玻璃料過濾所得淺黃色懸浮液，使用水洗滌且然後使用Et2O洗滌以在高真空下乾燥2h之後提供淺黃色非晶型固體形式之N-(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103c，5.46g，15.49mmol，產率為95%)。m/z(ESI，+ve離子)353.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.31(1 H,s),8.98(1 H,s),7.64-7.71(2 H,m),7.48(1 H,t,J=8.0Hz),7.01(1 H,d,J=8.2Hz),6.59(1 H,d,J=1.2Hz),6.44(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.26(1 H,dd,J=16.8,2.0Hz),5.71-5.81(1 H,m),2.51(3 H,s),2.20(3 H,s)。
步驟4.在0℃下，使用3-氯過氧苯甲酸(77% max.wt.，來自Aldrich)(3.72g,16.58mmol)一次性處理存於DCM(100mL)中之N-(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103c,5.46g,15.49mmol)之懸浮液並在0℃下攪拌1h。使用DCM (150mL)稀釋反應混合物並使用約1.0M K2CO3(25mL)之冰冷溶液處理。分離有機層，使用鹽水(15mL)洗滌，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供淺黃色發泡體形式之粗製N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)(5.62g，15.25mmol，產率為98%，約90%純，m/z(ESI，+ve離子)369.1(M+H)+)，其經約10% N-(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(m/z(ESI，+ve離子)385.1(M+H)+)污染。粗製材料未經進一步純化即使用。
N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104)之製備。
步驟1.在-78℃下，將LiHMDS(41.6mL 1.0M THF溶液，41.6mmol)添加至2-MeTHF(70mL)中並使用EtOAc(4.34mL,44.4mmol)處理。將溶液在-78℃下攪拌10min，然後一次性添加固體(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101)(5.00g,13.87mmol)且將溶液在-78℃下攪拌10min，然後自冷卻浴取出並升溫至室溫保持3h。在冰浴中冷卻反應液且使用NH4Cl飽和溶液驟冷並使用EtOAc(2×100mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。將粗製固體懸浮於Et2O(50mL)中並藉由過濾收集，使用Et2O(2×15mL)洗滌並在真空下乾燥以提供淺黃色固體形式之(3-(2-(甲硫基)-7-酮基 吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(104a)(4.24g，11.03mmol，產率為80%)。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.60-8.65(1 H,m),7.64-7.71(1 H,m),7.52(1 H,s),7.39-7.47(1 H,m),7.29(2 H,dd,J=8.3,1.3Hz),6.89-6.95(1 H,m),6.71(1 H,d,J=9.6Hz),6.56(1 H,s),2.19(3 H,s),1.50(9 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)385.0(M+1)+。
步驟2.向存於DCM(30mL)中之(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(104a,3.30g,8.58mmol)之懸浮液中添加20mL TFA。將所得均質溶液在室溫下攪拌30min，並在減壓下濃縮以提供黏性橙色油狀物104b。
步驟3.將104b之粗製殘餘物吸收於DCM(70mL)中，冷卻至0℃並使用DIEA(7.47mL,42.9mmol)處理，隨後使用丙烯醯氯(0.84mL,10.30mmol)緩慢處理。將所得橙色懸浮液在0℃下攪拌15min，並藉由飽和K2CO3溶液(15mL)驟冷。經由中號孔隙率經燒結玻璃料過濾懸浮液並使用水(2×5mL)及Et2O(2×5mL)洗滌。收集淺黃色非晶型固體並在高真空下乾燥以提供N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104c)(2.25g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 10.31(1 H,s),8.94(1 H,s),8.04(1 H,d,J=9.6Hz),7.64-7.72(2 H,m),7.49(1 H,t,J=8.2Hz),7.03(1 H,dt,J=7.4,1.2Hz),6.71(1 H,d,J=9.6Hz),6.44(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.25(1 H,dd,J=16.8,2.0Hz),5.72-5.81(1 H,m),2.19(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)338.9(M+1)+。使用DCM(2×150mL)萃取水性濾液，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮以提供黃色非晶型固體。將其懸浮於Et2O(50mL)中，過濾並使用Et2O(2×10mL)洗滌以得到N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104c)(400mg)。m/z(ESI，+ve離子)338.9(M+1)+。
步驟4.在0℃下，使用MCPBA(1.559g，6.96mmol，77% max.wt.，來自Aldrich)處理存於DCM(100mL)中之N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104c,2.20g,6.50mmol)之懸浮液並在0℃下攪拌75min。使用碎冰處理反應混合物，隨後使用飽和K2CO3溶液(15mL)處理。使用DCM(2×75mL)萃取水層，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供淺黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104)(2.38g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.34(1 H,s),9.29(1 H,s),8.20(1 H,d,J=9.6Hz),7.75(1 H,br.s.),7.67(1 H,br.),7.50(1 H,t,J=8.0Hz),7.03-7.08(1 H,m),6.94(1 H,d,J=9.6Hz),6.44(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.25(1 H,dd,J=17.0,2.0Hz),5.75-5.79(1 H,m),5.75(1 H,s),2.71(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)354.9(M+1)+。粗製材料未經進一步純化即使用。
(E)-N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(105)之製備。
向500mL圓底燒瓶中添加(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(100b,2.00g,5.17mmol)、HCl(4.0M，存於1,4-二噁烷中，19.4mL，78mmol)及1,4-二噁烷(10mL)。使用回流冷凝器將混合物在50℃下攪拌且使用LC/MS跟蹤進展。在90min之後，所有起始材料皆已消耗。使用冰/鹽水浴將混合物冷卻至0℃並經由加料漏斗使用10N NaOH(8.79mL,88mmol)逐滴緩慢處理，且保持溫度低於15℃。在完成添加之後，檢查pH以確保鹼性。在0℃下攪拌混合物並經由注射器使用(E)-巴豆醯氯(Sigma Aldrich,0.64mL,6.72mmol)逐滴處理且使用LC/MS跟蹤進展。在1h之後，LC-MS指示完全形成期望產物。使用水(50mL)將反應混合物驟冷且經由600-mL精小孔隙率經燒結玻璃料過濾沈澱物且使用水洗滌濾餅並在50℃下於真空烘箱中乾燥過夜以提供灰白色脆性固體形式之(E)-N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(1.83g，5.40mmol，產率為100%)。m/z(ESI，+ve離子)355.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.15(1 H,s),9.10(1 H,s),7.63-7.71(2 H,m),7.41-7.53(1 H,m),6.93-7.02(1 H,m),6.74-6.86(1 H,m),6.73(1 H,d,J=1.2Hz),6.13(1 H,dd,J=15.2,1.7Hz),2.53-2.57(3 H,m),1.87(3 H,dd,J=6.8,1.6Hz)。
實例1：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
步驟1.向存於第三丁醇(10mL,105mmol)中之2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(Combi-Blocks公司，目錄編號：SS-3744；342mg，1.55mmol)及(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(52)(521mg,1.30mmol)之混合物中添加DIEA(0.57mL,3.25mmol)。將反應混合物在80℃下於油浴中加熱21h。在減壓下濃縮所得褐色懸浮液且將粗製固體懸浮於Et2O(約20mL)中並過濾以提供綠色固體形式之(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基 六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(1a)之粗製材料。m/z(ESI，+ve離子)558.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.57(1 H,s),8.73(1 H,s),8.14(1 H,s),7.89(1 H,d,J=9.4Hz),7.57(1 H,d,J=8.4Hz),7.42(3 H,t,J=8.0Hz),7.28(1 H,d,J=8.8Hz),6.87(1 H,d,J=8.6Hz),6.53(1 H,d,J=2.3Hz),6.43(1 H,d,J=9.4Hz),6.05(1 H,br.s.),3.73-3.82(3 H,m),3.06(4 H,br.s.),2.36-2.47(4 H,m),2.15-2.26(3 H,s),1.45(9 H,s)。
步驟2.使用DCM(20mL)及TFA(20mL)處理來自上文之粗製物1a並在室溫下攪拌30min。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物並在矽膠管柱上(存於DCM中之1-20% 2M NH3/MeOH)純化以提供褐色非晶型固體形式之8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1b)(470mg，1.03mmol，產率為79%)。m/z(ESI，+ve離子)458.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 8.67(1 H,s),7.88(1 H,d,J=9.4Hz),7.63(1 H,d,J=8.2Hz),7.32(1 H,t,J=8.0Hz),6.91(1 H,dd,J=8.1,1.5Hz),6.59-6.65(2 H,m),6.53-6.59(1 H,m),6.46-6.52(1 H,m),6.24(1 H,br.s.),3.88(3 H,s),3.21(4 H,br.s.),2.84(4 H,br.s.),2.53(3 H,s)。
步驟3.在0℃下經15min，使用DIEA(1.66mL,9.49mmol)及丙烯醯氯(0.46mL,5.69mmol)逐滴處理存於DCM(30mL)及THF(30mL)中之8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1b)(2.17g,4.74mmol)並在0℃下攪拌。在1.5h之後，經10min緩慢添加額外丙烯醯氯(0.20mL)，然後將懸浮液在0℃下再攪拌20min。添加額外丙烯醯氯(0.1mL)並將反應混合物再攪拌15min。使用NaHCO3飽和溶液處理反應混合物，使用DCM(5×100mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。在矽膠管柱上(存於 DCM中之1-20% MeOH)純化粗製殘餘物以提供黃色固體形式之期望產物。使用20mL EtOH處理此材料且經由中號孔隙率經燒結玻璃料過濾漿液並使用額外EtOH(10mL)及Et2O(3×10mL)洗滌以在36℃下於真空烘箱中乾燥過夜之後提供黃色固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(1)(680mg，1.33mmol，產率為28%)。m/z(ESI，+ve離子)512.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.35(1 H,s),8.75(1 H,br.s.),8.17(1 H,br.s.),7.92(2 H,d,J=9.4Hz),7.59(1 H,br.s.),7.52(1 H,t,J=8.1Hz),7.29(1 H,d,J=9.0Hz),7.01(1 H,d,J=8.0Hz),6.54(1 H,br.s.),6.37-6.50(2 H,m),6.20-6.33(1 H,m),6.03(1 H,br.s.),5.77(1 H,d,J=10.0Hz),3.78(3 H,s),3.07(4 H,br.s.),2.43(3 H,s),2.34(4 H,br.s.)。
實例2：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-嗎啉基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
步驟1.使用第三丁醇(2.0mL)及Et3N(0.14mL,0.97mmol)處理2-甲氧基-4-嗎啉基苯胺(Matrix Scientific,Columbia,SC；135mg,0.65mmol)及胺基甲酸雙(第三丁基(3-(2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基))酯(57)(167mg,0.32mmol)並加熱至110℃保持75min。濃縮反應混合物且粗製胺基甲酸雙(第三丁基(3-(2-((2-甲 氧基-4-嗎啉基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基))酯(2a)未經進一步純化即用於下一步驟中。m/z(ESI，+ve離子)668.1(M+Na)+。
步驟2.使用DCM(5mL)及TFA(3mL)處理粗製胺基甲酸雙(第三丁基(3-(2-((2-甲氧基-4-嗎啉基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基))酯(2a)並在室溫下攪拌15min。濃縮反應混合物並在Gilson製備型HPLC上(Silicycle Silichrome XT C18管柱；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之5-95% 0.1%TFA/CH3CN)純化以在genevac中乾燥過夜之後提供褐色非晶型固體形式之8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-嗎啉基苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(2b，74mg，0.13mmol，產率為41%)。m/z(ESI，+ve離子)446.1(M+Na)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 8.86(1 H,s),8.05(1 H,d,J=9.6Hz),7.51-7.58(1 H,m),7.32(1 H,dt,J=7.6,1.3Hz),7.15-7.21(2 H,m),6.90(1 H,d,J=8.6Hz),6.71(1 H,d,J=9.6Hz),6.67(1 H,d,J=2.5Hz),6.53(1 H,dd,J=8.7,2.6Hz),3.87-3.93(5 H,m),3.68(3 H,s),3.18-3.24(4 H,m)。
步驟3.使用DCM(5.0mL)處理8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-嗎啉基苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(2b,63mg,0.11mmol)，冷卻至0℃且使用DIEA(0.06mL,0.34mmol)及丙烯醯氯(9.16μL,0.113mmol)處理並在0℃下攪拌40min。使用冰及水處理反應混合物且然後使用NaHCO3飽和溶液處理。使用DCM(3×25mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。在Gilson製備型HPLC上(Silicycle Silichrome XT C18管柱；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之20-95% 0.1%TFA/CH3CN)純化粗製殘餘物以在濃縮含有試樣之部分之後提供淺橙色非晶型固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-嗎啉基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(2)(26 mg，0.054mmol，產率為47%)，使用NaHCO3飽和溶液處理，使用DCM(3×25mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥，過濾並在真空下乾燥。m/z(ESI，+ve離子)500.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.88(1 H,s),8.04(1 H,d,J=9.6Hz),7.66-7.70(1 H,m),7.64(1 H,d,J=8.2Hz),7.45(1 H,t,J=8.0Hz),6.94-7.00(1 H,m),6.90(1 H,d,J=8.6Hz),6.67(1 H,d,J=9.6Hz),6.59(1 H,d,J=2.5Hz),6.42-6.51(1 H,m),6.40(1 H,dd,J=8.8,2.5Hz),6.22-6.32(1 H,m),5.77-5.82(1 H,m),3.71-3.80(4 H,m),3.63(3 H,s),3.04-3.14(4 H,m)。
實例3：(2E)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺
根據針對實例1所闡述之程序使用8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(1b,78mg,0.14mmol)及(E)-巴豆醯氯(Sigma Aldrich,0.013mL,0.14mmol)作為起始材料來製備黃色非晶型固體形式之此化合物(10mg，產率為14%)。m/z(ESI，+ve離子)526.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.17(1 H,s),8.76(1 H,s),8.17(1 H,br.s.),7.92(1 H,d,J=9.4Hz),7.84(1 H,br.s.),7.61(1 H,s),7.50(1 H,t,J=8.0Hz),7.29(1 H,d,J=8.8Hz),6.99(1 H,d,J=7.6Hz),6.76-6.86(1 H,m),6.54(1 H,s),6.46(1 H,d,J=9.4Hz),6.14(1 H,d,J=15.1Hz),6.05(1 H,d,J=16.0Hz),3.79(3 H,s),3.05(4 H,br.s.),2.45(4 H,d,J=4.5Hz),2.24(3 H,s),1.85-1.91(3 H,m)。
實例4：N-(3-(2-((4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
根據針對實例2所闡述之程序使用8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(57)及4-(4-甲基六氫吡嗪基)苯胺(Maybridge,Cambridge,UK)作為起始材料分離橙色非晶型固體形式之此化合物。m/z(ESI，+ve離子)482.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.40(1 H,s),9.88(1 H,br.s.),8.78(1 H,s),7.92(2 H,d,J=9.4Hz),7.62(1 H,s),7.56(1 H,t,J=8.1Hz),7.15-7.27(2 H,m),7.00-7.07(1 H,m),6.57(2 H,br.s.),6.40-6.50(2 H,m),6.22-6.31(1 H,m),5.75-5.83(1 H,m),2.98(4 H,m),2.43(4 H,m),2.23(3 H,s)。
實例5：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
步驟1.在室溫下，向存於DCM(30mL)中之(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(54)(2.49g,6.25mmol)之懸浮液中添加TFA(20mL)。將所得均質溶液攪拌1h，此時LC-MS分析指示Boc去保護完成。m/z(ESI，+ve離子)299.1(M+H)+。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物。將殘餘物溶於DCM(50mL)中，冷卻至0℃並使用DIEA(5.43mL,31.2mmol)處理，隨後使用丙烯醯氯(0.61mL,7.50mmol)處理。在攪拌25min之後此得到黃色懸浮液。LC-MS指示完全轉化成期望化合物。m/z(ESI，+ve離子)353.1(M+H)+。藉由添加1.0M K2CO3水溶液將反應混合物驟冷且經由中號孔隙率經燒結玻璃料過濾所得淺黃色懸浮液，使用水及Et2O洗滌以在高真空下乾燥之後提供淺黃色固體形式之N-(3-(5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5a；2.17g，6.15mmol，產率為98%)。m/z(ESI，+ve離子)353.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.31(1 H,s),8.98(1 H,s),7.64-7.71(2 H,m),7.48(1 H,t,J=8.0Hz),7.01(1 H,d,J=8.2Hz),6.59(1 H,d,J=1.2Hz),6.44(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.26(1 H,dd,J=16.8,2.0Hz),5.71-5.81(1 H,m),2.51(3 H,s),2.20(3 H,s)。
步驟2及3.在0℃下，向存於DCM(100mL)中之N-(3-(5-甲基-2- (甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5a；5.15g,14.63mmol)之懸浮液中一次性添加MCPBA(77wt.%,3.51g,15.65mmol)。將所得懸浮液在0℃下攪拌1h。使用DCM(100mL)稀釋反應混合物並使用1.0M K2CO3之冰冷溶液處理。使用DCM(2×100mL)萃取水層。藉由Na2SO4乾燥有機萃取物，過濾並濃縮以提供淺黃色發泡體形式之粗製N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b；1.09g,2.96mmol，產率為20%)。水層含有懸浮材料，因此經由中號孔隙率經燒結玻璃料將其過濾並使用水及Et2O洗滌以在真空下之後乾燥提供額外之淺黃色自由流動固體形式之N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b；4.59g,12.46mmol，產率為85%)。m/z(ESI，+ve離子)369.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),9.33(1 H,s),7.69-7.76(1 H,m),7.66(1 H,d,J=1.8Hz),7.43-7.52(1 H,m),6.97-7.07(1 H,m),6.81(1 H,d,J=1.4Hz),6.44(1 H,dd,J=16.9,10.1Hz),6.25(1 H,dd,J=16.9,1.9Hz),5.69-5.81(1 H,m),2.71(3 H,s),2.59(3 H,d,J=1.2Hz)。
步驟4.在室溫下，向存於無水第三丁醇(40mL)及二噁烷(5mL)中之2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(Green Chempharm；3.45g，15.57mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b)(4.59g,12.46mmol)之懸浮液中添加DIEA(4.33mL,24.92mmol)。將混合物在100℃下加熱40h。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物以去除揮發物且將所得粗製殘餘物懸浮於Et2O中並過濾。使用Et2O(3×50mL)洗滌綠色-褐色非晶型固體且此去除了大部分剩餘苯胺起始材料。將粗製材料乾堆積於矽膠上並在矽膠管柱上(存於DCM中之1-20% MeOH)純化以提供黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)- 5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5)(2.03g，3.86mmol，產率為31%)。m/z(ESI，+ve離子)526.2(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.80(1 H,s),8.09(1 H,s),7.88(1 H,d,J=8.2Hz),7.56(1 H,t,J=1.9Hz),7.50(1 H,t,J=8.1Hz),7.27(1 H,d,J=8.8Hz),6.97(1 H,dt,J=6.9,1.0Hz),6.52(1 H,d,J=2.5Hz),6.37-6.48(1 H,m),6.29-6.35(1 H,m),6.19-6.29(1 H,m),6.01(1 H,br.s.),5.71-5.80(1 H,m),3.78(3 H,s),3.02(4 H,br.s.),2.46(3 H,s),2.43(4 H,t,J=4.9Hz),2.22(3 H,s)。
實例6：N-(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
步驟1.在0℃下，使用3-氯過氧苯甲酸(70wt.%,460mg,1.87mmol)一次性處理存於DCM(15mL)中之(3-(6-乙基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(55)(720mg,1.75mmol)之懸浮液並在0℃下攪拌1h。使用DCM(15mL)稀釋反應混合物，並使用冰及10% Na2CO3溶液(約10mL)處理。分離DCM層且使用額外量之DCM(2×50mL)萃取水層，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以得到淺黃色非晶型固體形式之(3-(6-乙基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(6a)(682mg， 1.59mmol，產率為91%)。m/z(ESI，+ve離子)451.0(M+Na)+。粗製材料未經進一步純化即用於後續步驟中。
步驟2.使用第三丁醇(10mL)及DIEA(0.69mL,3.97mmol)處理2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(Combi-Blocks公司，San Diego，CA，目錄編號：SS-3744；386mg，1.75mmol)、(3-(6-乙基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(6a)(680mg,1.59mmol)並在具有回流冷凝器之250mL圓底燒瓶中加熱至85℃保持14h。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物且藉由層析在矽膠管柱上(存於DCM中之1-20% MeOH)純化粗製固體以提供淺褐色膜形式之(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(6b；717mg，1.23mmol，產率為77%)。m/z(ESI，+ve離子)585.9(M+H)+。
步驟3及4.使用DCM(10mL)及TFA(10mL)處理來自上文之(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯並在室溫下攪拌30min。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮反應混合物並在矽膠上(在ISCO Combiflash RF上，40g Redisep管柱，存於DCM中之5-20% 2M NH3/MeOH)純化以提供褐色/黃色膜形式之8-(3-胺基苯基)-6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(392mg，0.81mmol，產率為51%)。m/z(ESI，+ve離子)486.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 8.67(1 H,s),7.74(1 H,s),7.68(1 H,d,J=8.6Hz),7.34(1 H,t,J=7.9Hz),6.92(1 H,dd,J=8.1,1.5Hz),6.61-6.67(2 H,m),6.58(1 H,dd,J=7.6,1.0Hz),6.26(1 H,d,J=7.2Hz),5.51(2 H,s),3.90(3 H,s),3.30(4 H,br.s),3.18(4 H,br.s),2.79(3 H,s),2.63(2 H,q,J=7.4Hz),1.28(3 H,t, J=7.5Hz)。在0℃下，使用DIEA(0.35mL,2.01mmol)處理存於DCM(7mL)及THF(7mL)之混合物中之8-(3-胺基苯基)-6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(390mg,0.80mmol)，隨後經5min緩慢逐滴添加丙烯醯氯(0.078mL,0.964mmol)。將溶液在0℃下攪拌15min。LC-MS指示約79：11比率之期望產物：m/z(ESI，+ve離子)539.9(M+H)+及起始材料：m/z(ESI，+ve離子)486.0(M+H)+。再添加2滴丙烯醯氯且將混合物在0℃下再攪拌2h。使用矽膠處理反應混合物並在旋轉蒸發儀上濃縮至乾燥。在ISCO Combiflash RF上(40g Redisep管柱，使用存於DCM中之0-20% MeOH之梯度)純化材料以提供黃色粉末狀固體形式之富集產物。在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)將其再純化，在旋轉蒸發儀上濃縮以去除CH3CN且使用1N NaOH處理並使用CHCl3(3×50mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供亮黃色固體形式之N-(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(6)(154mg，0.29mmol，產率為35%)。m/z(ESI，+ve離子)540.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 8.68(1 H,s),8.04(1 H,d,J=7.2Hz),7.77(1 H,s),7.58-7.65(2 H,m),7.49(1 H,d,J=8.4Hz),7.08(1 H,d,J=8.0Hz),6.58(1 H,d,J=2.5Hz),6.34-6.51(2 H,m),6.14(1 H,d,J=7.0Hz),5.80(1 H,dd,J=9.6,2.2Hz),3.88(3 H,s),3.13(4 H,d,J=3.9Hz),2.58-2.69(6 H,m),2.38(3 H,s),1.30(3 H,t,J=7.4Hz)。
實例7：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-嗎啉基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
向5mL玻璃微波管中稱取(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(56)(150mg,0.35mmol)、2-甲氧基-4-嗎啉基苯胺(Matrix Scientific,Columbia,SC,54mg,0.26mmol)，隨後使用氬吹掃。然後使用第三丁醇(2.0mL)及DIEA(0.11mL,0.65mmol)處理固體。密封管並加熱至85℃保持20h。在矽膠上(在ISCO Combiflash RF上，40g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-15% MeOH之梯度)純化粗製反應混合物以提供褐色膜形式之(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(7a；150mg,0.35mmol)。m/z(ESI，+ve離子)560.0(M+H)+。
根據針對實例6所闡述之程序使用(3-(5-甲基-2-(甲基磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(7a；150mg,0.35mmol)作為起始材料來製備黃色固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-嗎啉基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺(7)(11mg，2個步驟之總產率為9%)。m/z(ESI，+ve離子)514.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 9.01(1 H,s),7.66(1 H,d,J=7.6Hz),7.47-7.53(1 H,m),7.33(1 H,t,J=8.0Hz),6.77-6.85(2 H,m),6.56(1 H,s),6.40-6.47(3 H,m),6.36(1 H,dd,J=8.7,2.4Hz),5.82(1 H,dd,J=9.6,2.2Hz),3.82-3.92(4 H,m),3.61(3 H,s),3.05-3.14(4 H,m),2.62(3 H,s)。
實例8：N-(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)-3-吡啶基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-胺(8a)之製備。使用氬吹掃2-氯-4-甲氧基-5-硝基吡啶(Frontier Scientific,Newark,DE；1.02g,5.40mmol)及K2CO3(895mg,6.48mmol)，使用DMF(10mL)處理，隨後使用1-甲基六氫吡嗪(0.66mL,5.94mmol)處理。然後將反應混合物加熱至60℃保持3h。將反應混合物冷卻至室溫並使用水處理，使用EtOAc(2×100mL)萃取，使用鹽水(2×25mL)洗滌並藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮以提供粗製1-(4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)-4-甲基六氫吡嗪(1.36g，5.39mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)252.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.88(1 H,s),5.97(1 H,s),3.97(3 H,s),3.70-3.78(4 H,m),2.47-2.55(4 H,m),2.36(3 H,s)。使用EtOH(20mL)及EtOAc(20mL)處理Pd/C(10wt.%,586mg,0.55mmol)及1-(4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)-4-甲基六氫吡嗪(1.36g,5.39mmol)並在室溫及H2氣氛(氣囊)下攪拌過夜(18h)。經由矽藻土墊過濾反應混合物，使用MeOH洗滌，並濃縮至乾燥以提供紫色黏性油狀物形式之4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-胺(8a)(1.22g，5.77mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)223.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 7.67(1 H,s),6.17(1 H,s),3.87(3 H,s),3.37-3.45(4 H,m),3.32(2 H,br.s.),2.51-2.60(4 H,m),2.36(3 H,s)。
(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(8b)之製備。使用第三丁醇(20mL)及DIEA(1.53mL,8.74mmol)處理4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-胺(8a；1.22g,5.49mmol)、(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(52；1.40g,3.50mmol)並在具有回流冷凝器之250mL圓底燒瓶中加熱至85℃過夜(20h)。在旋轉蒸發儀上濃縮反應混合物且將粗製固體懸浮於Et2O中並過濾以提供褐色-黃色非晶型固體形式之粗製(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲第三丁基酸酯(8b；1.50g，2.69mmol，產率為77%)。m/z(ESI，+ve離子)559.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.48(1 H,br.s.),8.65(1 H,br.s.),8.54(1 H,s),7.86(1 H,d,J=9.4Hz),7.82(1 H,s),7.43(1 H,d,J=8.0Hz),7.37(2 H,br.s.),6.81(1 H,br.s.),6.38(1 H,d,J=9.4Hz),6.29(1 H,br.s.),3.73(3 H,s),3.45(4 H,br.s.),2.40(4 H,br.s.),2.24(3 H,s),1.47(9 H,s)。
根據針對實例6所闡述之程序使用(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)吡啶-3-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(8b)作為起始材料來製備黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)-3-吡啶基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺(8)(2個步驟之總產率為14%)。m/z(ESI，+ve離子)512.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.26(1 H,br.s.),8.67(1 H,br.s.),8.55(1 H,s),7.87(1 H,d,J=9.4Hz),7.82(1 H,s),7.70(1 H,d,J=7.8Hz),7.57(1 H,br.s.),7.34-7.48(1 H,m),6.94(1 H,br.s.),6.37-6.49(2 H,m),6.20-6.32(2 H,m),5.72-5.80(1 H,m),3.72(3 H,s),3.43(4 H,br.s.),2.38(4 H,t,J=4.9Hz),2,22(3 H,s)。
實例9：(2E)-4-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺。
在0℃下，將8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1b,255mg,0.56mmol)以固體形式一次性添加至存於THF(10mL)中之(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯氯鹽酸鹽(283mg,1.538mmol)之懸浮液中。使用DIEA(0.39mL,2.23mmol)緩慢處理所得橙色懸浮液並在0℃下攪拌30min。自冰浴取出反應混合物並在室溫下攪拌30min。使用矽膠處理反應混合物，在旋轉蒸發儀上濃縮並在ISCO Combiflash RF上(40g Redisep管柱，使用存於DCM中之0-20% MeOH之梯度)純化以提供黃色固體形式之富集產物。在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)再純化此試樣。將含有產物之部分在genevac中濃縮過夜且然後使所得橙色固體通過Silicycle SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用10% MeOH/DCM)，然後濃縮並在genevac中再次乾燥3h以提供橙色固體形式之(E)-4-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(35mg，0.062mmol，產率為11%)。m/z(ESI，+ve離子)569.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.25(1 H,s),8.74(1 H,s),8.14(1 H,s),7.90(1 H,d,J=9.4Hz),7.79-7.88(1 H,m),7.59 (1 H,s),7.49(1 H,t,J=8.0Hz),7.27(1 H,d,J=9.0Hz),6.98(1 H,d,J=8.6Hz),6.73(1 H,dt,J=15.4,5.8Hz),6.51(1 H,d,J=2.3Hz),6.44(1 H,d,J=9.4Hz),6.27(1 H,d,J=15.3Hz),6.02(1 H,br.s.),3.77(3 H,s),3.04(6 H,d,J=5.7Hz),2.36-2.46(4 H,m),2.22(3 H,s),2.16(6 H,s)。
實例10：N-(4-氟-3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
根據針對實例1所闡述之程序自(4-氟-3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(60)開始來製備標題化合物。(4-氟-3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10a)：m/z(ESI，+ve離子)575.9(M+H)+。19F NMR(376MHz,CDCl 3 )δ ppm -127.13(1 F,s)。
8-(5-胺基-2-氟苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(10b)：m/z(ESI，+ve離子)476.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 8.73(1 H,s),8.25(1 H,br.s.),7.90(1 H,d,J=9.4Hz),7.39(1 H,d,J=8.6Hz),7.08(1 H,t,J=9.3Hz),6.67-6.73(1 H,m),6.56(1 H,d,J=2.3Hz),6.50(1 H,dd, J=6.5,2.7Hz),6.42(1 H,d,J=9.4Hz),6.20(1 H,br.s.),5.14(2 H,s),3.75-3.83(3 H,m),3.12(4 H,br.s.),2.58(3 H,br.s.),2.21-2.40(4 H,m)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -139.03(1 F,s)。
N-(4-氟-3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(10)。m/z(ESI，+ve離子)529.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.42(1 H,s),8.78(1 H,br.s.),8.35(1 H,br.s.),7.95(1 H,d,J=9.4Hz),7.88(1 H,br.s.),7.74(1 H,dd,J=6.7,2.5Hz),7.44(1 H,t,J=9.3Hz),7.24(1 H,d,J=8.8Hz),6.50-6.56(1 H,m),6.38-6.50(2 H,m),6.22-6.31(1 H,m),6.03(1 H,br.s.),5.74-5.83(1 H,m),3.77(3 H,s),3.05(4 H,br.s.),2.44(4 H,t,J=4.8Hz),2.23(3 H,s)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -127.45(1 F,s)。
實例11：N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11a)之製備。在室溫下，向存於10mL DCM中之(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(51)(651mg,1.69mmol)之懸浮液中添加3mL TFA。將所得均質溶液在室 溫下攪拌1h。在減壓下濃縮。將殘餘物溶於20mL DCM中並使用冰浴冷卻，然後使用DEIA(1.47mL,8.47mmol)處理，隨後使用丙烯醯氯(0.16mL,2.03mmol)處理。在0℃下保持20min之後，添加額外丙烯醯氯(80μL)。將所得混合物攪拌5min，然後使用0.5N NaOH(10mL)驟冷。分離各層並使用50mL DCM萃取水層。使用2×5mL鹽水洗滌合併之DCM萃取物，藉由Na2SO4乾燥並濃縮。在25mL EtOAc中攪拌殘餘物。過濾不溶性固體並乾燥以得到310mg N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11a)。濃縮濾液並在矽膠管柱上(存於己烷中之35-100% EtOAc)純化以得到140mg N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11a)。m/z(ESI，+ve離子)338.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.40(1 H,s),8.95(1 H,s),8.05(1 H,d,J=9.6Hz),7.68(2 H,m),7.49(1 H,t,J=7.8Hz),7.04(1 H,d,J=8.2Hz),6.72(1 H,d,J=9.6Hz),6.46(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.26(1 H,d,J=16.8Hz),5.78(1 H,d,J=9.6Hz),2.20(3 H,s)。
N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11b)之製備。在0℃下，向存於25mL DCM中之N-(3-(2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11a)(450mg,1.33mmol)之懸浮液中添加MCPBA(319mg 77% max.，來自Aldrich，1.42mmol)。在將反應混合物在0℃下攪拌35min之後，使用100mL DCM稀釋，使用20mL冰冷飽和Na2CO3溶液洗滌。藉由Na2SO4乾燥DCM層並濃縮以得到灰白色結晶固體形式之N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11b)(398mg，產率為84%)。粗製材料未經進一步純化即用於下一步驟中。m/z(ESI，+ve離子)355.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.36(1 H,s),9.30(1 H,s),8.20(1 H,d,J=9.6Hz),7.76(1 H, m),7.69(1 H,m),7.51(1 H,t,J=8.0Hz),7.06(1 H,d,J=7.6Hz),6.94(1 H,m),6.45(1 H,dd,J=16.9,10.1Hz),6.26(1 H,d,J=16.8Hz),5.79(1 H,m),2.72(3 H,s)
根據闡述於WO 2012064706 A1(2012年4月),Avila Therapeutics,公司中之程序來製備N1-(1-(2-氟乙基)氮雜環丁-3-基)-3-甲氧基苯-1,4-二胺(11c)。
N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11)之製備。在室溫下，向存於1mL二噁烷及1mL tBuOH中之N1-(1-(2-氟乙基)氮雜環丁-3-基)-3-甲氧基苯-1,4-二胺(11c)(135mg,0.56mmol)及N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(11b)(230mg,0.65mmol)之懸浮液中添加DIEA(0.29mL,1.69mmol)。將混合物在85℃下於油浴中加熱3h。在減壓下濃縮。在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之2-6% 2M NH3/MeOH)純化殘餘物以得到約95%純之材料。將材料溶於10mL DMSO中並在反相HPLC上(使用存於0.1% TFA/水中之10-90% 0.1% TFA/CH3CN之梯度)純化。收集期望部分，凍乾且將粉末狀殘餘物溶於2mL MeOH中，通過Silicycle(5G)碳酸鹽柱，使用MeOH(20mL)沖洗。收集該等部分並濃縮以得到褐色結晶固體形式之標題化合物(95mg，產率為31%)。m/z(ESI，+ve離子)530.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.40(1 H,br.),8.73(1 H,br.),8.10(1 H,br.),7.90(1 H,d,J=9.4Hz),7.83(1 H,br.),7.64(1 H,s),7.51(1 H,t,J=8.0Hz),7.15(1 H,br.),7.02(1 H,d,J=8.6Hz),6.44(2 H,m),6.29(1 H,m),6.16(1 H,d,J=2.0Hz),5.86(1 H,br.),5.78(1 H,m),5.57(1 H,br.),4.49(1 H,t,J=4.8Hz),4.37(1 H,t,J=4.9Hz),3.90(1 H,br.),3.72(3 H,s),3.70(2 H,m),2.83(2 H,m),2.74(1 H,t,J=4.8Hz),2.67 (1 H,t,J=4.8Hz)。
實例12：2-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)乙醯胺
在0℃下，使用DIEA(0.13mL,0.72mmol)處理存於DCM(5mL)中之8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1b,131mg,0.29mmol)並在0℃下於冰浴中冷卻。然後經10min使用2-氯乙醯氯(Sigma Aldrich；0.027mL,0.344mmol)緩慢逐滴處理溶液並在0℃下攪拌30min。LC-MS指示僅痕量期望產物。將反應混合物超音波處理10min以幫助溶解基質且再添加2滴2-氯乙醯氯。在30min之後，LC-MS指示有74%轉化成期望產物：m/z(ESI，+ve離子)533.9(M+H)+以及未反應起始材料。再添加2滴2-氯乙醯氯且將溶液再攪拌75min，從而使得完全轉化成期望產物。濃縮反應混合物，使用DMSO(8mL)處理並在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)純化。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮含有產物之部分且使用10% Na2CO3水溶液處理所得水溶液並使用DCM(4×30mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥並在真空下乾燥過夜以提供黃色固體形式之2-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)乙醯胺(53.4mg，0.100mmol，產率為35%)。m/z(ESI，+ve離子)533.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.50(1 H,s),8.75(1 H,s),8.17(1 H,s),7.91(1 H, d,J=9.4Hz),7.75(1 H,d,J=8.2Hz),7.49-7.57(2 H,m),7.25(1 H,d,J=9.0Hz),7.04(1 H,d,J=7.8Hz),6.53(1 H,d,J=2.2Hz),6.44(1 H,d,J=9.4Hz),6.04(1 H,br.s.),4.25(2 H,s),3.78(3 H,s),3.06(4 H,br.s.),2.40-2.48(4 H,m),2.23(3 H,s)。
實例13：3-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺
步驟1.在0℃下，使用DIEA(0.19mL,1.09mmol)處理存於DCM(5mL)中之8-(3-胺基苯基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1b；200mg,0.44mmol)並在0℃下於冰浴中冷卻。然後經10min使用3-氯丙醯氯(Sigma Aldrich,St.Louis,MO；0.042mL,0.44mmol)逐滴處理溶液並在0℃下攪拌30min，然後在室溫下攪拌2h。再添加3滴3-氯丙醯氯且將反應液在室溫下攪拌過夜。然後濃縮反應混合物，使用DMSO(8mL)處理並在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)純化。在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮含有產物之部分且使用10% Na2CO3溶液處理所得水溶液並使用DCM(4×30mL)萃取，藉由Na2SO4乾燥並在真空下濃縮過夜以提供黃色固體形式之3-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺(57mg，0.10mmol，產率為23%)。m/z(ESI，+ve離子)548.0(M+H)+，純度為約65%且具有對應於丙烯醯胺之質量平衡。該材料未經進一步純化即 用於後續步驟中。
步驟2.使用二甲胺(2.0M，存於THF中，2.00mL，4.00mmol)處理3-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺(57mg,0.086mmol)並在50℃下攪拌90min，然後在室溫下攪拌72h。然後藉由層析在矽膠上(ISCO Combiflash RF，24g Redisep HP(Gold)，使用存於DCM中之0-20% 2M NH3/MeOH之梯度)純化反應混合物以提供黃色-橙色非晶型發泡體形式之3-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺(44.6mg，0.066mmol，產率為76%)。m/z(ESI，+ve離子)557.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 8.71(1 H,s),7.92(1 H,d,J=9.4Hz),7.57-7.61(1 H,m),7.56(1 H,s),7.44(1 H,d,J=7.8Hz),7.06(1 H,d,J=8.0Hz),6.58(1 H,d,J=2.5Hz),6.53(1 H,d,J=9.4Hz),6.12(1 H,br.s.),3.88(3 H,s),3.10-3.19(4 H,m),2.77(2 H,q,J=6.7Hz),2.63-2.68(4 H,m),2.57-2.62(2 H,m),2.39(3 H,s),2.33(6 H,s)。
實例14：N-(3-(2-((4-((1-乙醯基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺
在室溫下，向存於1mL二噁烷及1mL tBuOH中之1-(3-((4-胺基-3-甲氧基苯基)胺基)氮雜環丁-1-基)乙酮(14a，根據闡述於WO 2012064706 A1(2012年4月),Avila Therapeutics公司中之程序製得)(120mg,0.51mmol)及N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧 啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(51)(150mg,0.42mmol)之懸浮液中添加DIEA(0.22mL,1.27mmol)。將混合物在85℃下於油浴中加熱1h。向反應混合物中添加NMP(0.5mL)且繼續加熱3h。在減壓下濃縮。在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之2-6% 2M NH3/MeOH)純化殘餘物以得到約90%純之材料。將此材料溶於10mL DMSO中並在反相HPLC上(使用存於0.1% TFA/水中之10-90% 0.1% TFA/CH3CN之梯度)純化。收集期望部分，凍乾且將粉末狀殘餘物溶於MeOH中，通過Silicycle(5G)碳酸鹽柱，使用MeOH(20mL)沖洗。收集該等部分並濃縮以得到黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((4-((1-乙醯基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(14)(135mg，0.257mmol，產率為60.7%)。m/z(ESI，+ve離子)526.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 10.42(1 H,br.),8.74(1 H,s),8.15(1 H,s),7.91(2 H,d,J=9.4Hz),7.61(1 H,br.),7.51(1 H,t,J=8.0Hz),7.18(1 H,br.),7.02(1 H,d,J=8.0Hz),6.36-6.56(2 H,m),6.23-6.36(1 H,m),6.15(2 H,m),5.71-5.87(1 H,m),4.44(1 H,m),4.18(1 H,m),4.10(1 H,m),3.75(1 H,m),3.73(3 H,s),3.58(1 H,m),3.03(1 H,m),1.80(3 H,s)。
實例15：N-(3-(2-((2-氯-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
根據針對實例1所闡述之程序自2-氯-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(Aurum Pharmatech LLC,Wowell,NJ)開始來製備標題化合物。(3-(2-((2-氯-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(15a)：m/z(ESI，+ve離子)562.0(M+H)+。
8-(3-胺基苯基)-2-((2-氯-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(15b)：m/z(ESI，+ve離子)461.9(M+H)+。
N-(3-(2-((2-氯-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(15)：m/z(ESI，+ve離子)515.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.35(1 H,s),10.03(1 H,br.s.),8.83(1 H,s),7.94(1 H,d,J=9.4Hz),7.83(1 H,d,J=8.4Hz),7.69(1 H,s),7.53(1 H,t,J=8.0Hz),7.41(1 H,br.s.),7.28(1 H,d,J=7.2Hz),7.02(1 H,d,J=7.8Hz),6.78(1 H,br.s.),6.50(1 H,d,J=9.4Hz),6.44(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.25(1 H,dd,J=17.0,2.0Hz),5.76(1 H,dd,J=10.2,2.0Hz),2.83(4 H,br.s.),2.44(4 H,br.s.),2.23(3 H,s)。
實例16：N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯 基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
向存於第三丁醇(10mL)中之N1-(1-(2-氟乙基)氮雜環丁-3-基)-3-甲氧基苯-1,4-二胺(11c；373mg,1.56mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b；440mg,1.194mmol)之懸浮液中添加DIEA(0.62mL,3.58mmol)。將混合物在80℃下於油浴中加熱1h。將反應混合物在減壓下(旋轉蒸發儀)濃縮至乾燥且在矽膠上(ISCO Combiflash RF，40g Redisep管柱，使用存於DCM中之5-10% 2M NH3/MeOH之梯度)純化粗製殘餘物以提供富集產物。然後在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)將其再純化。收集期望部分，並在genevac中濃縮至乾燥過夜。將所得固體溶於9：1=DCM：MeOH中且然後通過Silicycle SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用10% MeOH/DCM)，然後濃縮並在真空下乾燥以提供黃色固體形式之N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(317mg，0.58mmol，產率為49%)。m/z(ESI，+ve離子)544.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.37(1 H,s),8.78(1 H,br.s.),8.05(1 H,br.s.),7.84(1 H,d,J=7.0Hz),7.60(1 H,s),7.50(1 H,t,J=8.0Hz),7.15(1 H,d,J=9.0Hz),6.99(1 H,d,J=9.0Hz),6.41-6.51(1 H,m),6.23-6.34(2 H,m),6.16(1 H,d,J=2.2Hz),5.85(1 H,br.s.),5.73-5.81(1 H,m),5.57(1 H,br.s.),4.49(1 H,t,J=4.8Hz),4.37(1 H,t,J=4.8Hz),3.90(1 H,br.s.),3.73 (5 H,br.s.),2.76-2.88(2 H,m),2.74(1 H,t,J=4.9Hz),2.63-2.71(1 H,m),2.46(3 H,s)。
實例17：N-(3-(5-甲基-2-((4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
向微波管中裝填存於第三丁醇(5.5mL)中之N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b；210mg,0.57mmol)、4-(4-甲基六氫吡嗪基)苯胺(136mg,0.71mmol)及DIEA(0.20mL,1.14mmol)。密封管且將混合物加熱至100℃保持3d。濃縮混合物且然後將褐色固體懸浮於Et2O中並藉由過濾收集。使用Et2O洗滌褐色固體以提供270mg粗製材料。將粗製材料吸收於矽膠塞上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(12g，使用存於DCM中之0-20% MeOH之梯度洗脫)純化。在Gilson製備型HPLC上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)再純化此富集產物。合併含有產物之部分並濃縮。添加NaHCO3飽和水溶液且使用3：1 CHCl3/IPA(3×30mL)萃取混合物。藉由無水Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並濃縮以提供黃色固體形式之N-(3-(5-甲基-2-((4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(52mg，0.11mmol，產率為18%)。m/z(ESI，+ve離子)496.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.35(1 H,s),8.82(1 H,s),7.93(1 H,d,J=8.61Hz),7.57-7.56(1 H,m),7.53(1 H,t,J=8.12Hz),7.17-7.19(2 H,m),6.95 -7.02(1 H,m),6.53-6.56(1 H,m),6.37-6.48(1 H,m),6.31(1 H,d,J=0.39Hz),6.21-6.28(1 H,m),5.72-5.80(1 H,m),2.91-3.02(4 H,m),2.46(3 H,s),2.39-2.44(4 H,m),2.21(3 H,s)。
實例18：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺
4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(18a)之製備：將存於DMSO(11mL)中之1-六氫吡嗪甲酸1-第三丁基酯(Sigma Aldrich,3.37g,18.12mmol)、5-氟-2-硝基苯甲醚(Oakwood Products,West Columbia,SC,3.10g,18.12mmol)及N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(6.31mL,36.2mmol)之溶液在20mL玻璃微波管中密封並在95℃下於加熱塊中加熱過夜(20h)。在冷卻後，反應混合物結晶成黃色固體。使用150mL EtOAc將其稀釋，依次使用20mL水、20mL NaHCO3及鹽水(20mL)洗滌。藉由MgSO4乾燥有機溶液並濃縮以提供黃色結晶固體形式之4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(6.14g，18.20mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)359.9(M+Na)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 7.96(1 H,d,J=9.2Hz),6.59(1 H,dd,J=9.4,2.5Hz),6.55(1 H,d,J=2.3Hz),3.97(3 H,s),3.56-3.65(4 H,m),3.45-3.52(4 H,m),1.51(9 H,s)。使用EtOH(30mL)處理 Pd/C(10wt.%，乾基，濕活化，284mm，0.267mmol)及4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(600mg,1.78mmol)並在H2氣氛(氣囊)下攪拌23h。經由acrodisc(0.20um)過濾反應混合物，然後在旋轉蒸發儀上濃縮所得紫色溶液且然後在真空下過夜以提供紫色膜形式之4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(539mg，1.76mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)307.0/309.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 6.71(1 H,d,J=8.4Hz),6.62(1 H,d,J=2.3Hz),6.46(1 H,dd,J=8.3,2.4Hz),3.85(3 H,s),3.51-3.61(4 H,m),2.92-3.02(4 H,m),1.47-1.52(9 H,s)。
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(18)之製備。在室溫下，向存於第三丁醇(15mL)中之4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(18a,539mg,1.753mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b,432mg,1.173mmol)之懸浮液中添加DIEA(0.61mL,3.52mmol)，隨後添加二噁烷(6mL)。將反應混合物在90℃下於加熱塊中加熱20h。LC-MS分析指示約13%轉化成期望產且指示未反應起始材料。在旋轉蒸發儀上濃縮反應混合物且將粗製殘餘物懸浮於Et2O中並過濾。使用Et2O(3×20mL)洗滌綠褐色非晶型固體且此去除大部分苯胺起始材料(18a)。粗製材料含有約19%期望產物(18b)以及回收之5b。m/z(ESI，+ve離子)611.9(M+H)+。粗製殘餘物未經進一步純化即用於後續步驟中。
使用DCM(5mL)及TFA(5.0mL,64.9mmol)處理來自先前步驟之粗製4-(4-((8-(3-丙烯醯胺基苯基)-5-甲基-7-酮基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(18b)並在室溫下攪拌30min。濃縮反應混合物並在ISCO Combiflash RF上(24g Redisep Gold管柱，使用存於DCM中之5-20% 2M NH3/MeOH之梯 度)純化以提供富集產物。在Gilson上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)將其再純化，在genevac中濃縮過夜且然後通過Silicycle SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用20% MeOH/DCM)以去除任何殘餘鹽，然後在真空下乾燥以提供亮黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(18)(20.6mg,0.040mmol)。m/z(ESI，+ve離子)512.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.80(1 H,s),8.08(1 H,s),7.87(1 H,d,J=8.2Hz),7.57(1 H,s),7.50(1 H,t,J=8.0Hz),7.27(1 H,d,J=8.8Hz),6.97(1 H,d,J=8.6Hz),6.50(1 H,d,J=2.3Hz),6.38-6.48(1 H,m),6.20-6.35(2 H,m),5.99(1 H,br.s.),5.76(1 H,dd,J=10.1,1.9Hz),3.77(3 H,s),2.87-2.99(4 H,m),2.74-2.85(4 H,m),2.46(3 H,s)。
實例19：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺
2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯胺(19b)之製備：向25mL玻璃微波管中裝填磷酸三鉀(3.00g,13.05mmol)、2-(二環己基膦基)- 2',4',6',-三-異丙基-1,1'-聯苯(Strem Chemicals,Newburyport,MA,83mg,0.174mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(Strem Chemicals,Newburyport,MA,80mg,0.087mmol)、1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-酸頻哪醇酯(Acros Organics,New Jersey,971mg,4.35mmol)，隨後裝填5-氯-2-硝基苯甲醚(Sigma Aldrich,816mg,4.35mmol)。使用氬吹掃固體並使用1,4-二噁烷(12mL)及水(4mL)處理，密封並在110℃下於加熱塊中加熱1h。使用1N NaOH處理反應混合物並使用EtOAc(3×30mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。在ISCO Combiflash RF上(80g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-20% MeOH之梯度)純化粗製殘餘物以提供鏽棕色固體形式之4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶(19a；970mg，3.91mmol，產率為90%)，其在靜置後結晶。m/z(ESI，+ve離子)249.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 7.86(1 H,d,J=8.4Hz),6.99-7.08(2 H,m),6.17-6.24(1 H,m),3.97(3 H,s),3.15(2 H,q,J=2.8Hz),2.65-2.74(2 H,m),2.53-2.62(2 H,m),2.38-2.46(3 H,m)。在50mL玻璃反應器中，使用氫氧化鈀(20wt% Pd，乾基，位於濕碳上，degussa型e101 ne/w，266mg，0.38mmol)及無水EtOH(20mL)處理4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶(940mg,3.79mmol)。使用H2(5×)吹掃反應器並在50psi H2及室溫下攪拌4h。經由0.45um acrodisc過濾反應混合物以去除觸媒殘餘物(使用MeOH洗滌)並在高真空下濃縮至乾燥以提供黃色結晶固體形式之2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯胺(19b；830mg，3.77mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)221.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 6.56-6.74(3 H,m),3.76-3.89(3 H,m),3.54-3.76(2 H,m),2.97(2 H,d,J=11.2Hz),2.34-2.47(1 H,m),2.23-2.34(3 H,m),1.95-2.12(2 H,m),1.70-1.90(4 H,m)。
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(19)之製備：在室溫下，向存於第三丁醇(15mL)中之2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯胺(19b,363mg,1.65mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b,300mg,0.81mmol)之懸浮液中添加EtNiPr2(0.43mL,2.443mmol)。將混合物在100℃下加熱48h。在旋轉蒸發儀上濃縮反應混合物且將粗製殘餘物懸浮於Et2O中並過濾。使用Et2O(3×50mL)洗滌所得淺黃色非晶型固體並在ISCO Combiflash RF上(40g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-15% MeOH之梯度)實施層析以提供富集產物。在Gilson上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5μ，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)將其再純化，在genevac中濃縮過夜且然後通過Silicyclc SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用20% MeOH/DCM)以去除任何殘餘鹽，然後在真空下乾燥以提供淺黃色固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(22mg)。m/z(ESI，+ve離子)525.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 10.34(1 H,s),8.85(1 H,s),8.16(1 H,s),7.85(1 H,d,J=9.2Hz),7.63(1 H,s),7.48-7.56(1 H,m),7.36(1 H,d,J=8.4Hz),7.00(1 H,d,J=7.8Hz),6.80(1 H,d,J=1.4Hz),6.38-6.47(1 H,m),6.30-6.38(2 H,m),6.19-6.29(1 H,m),5.70-5.78(1 H,m),3.80(3 H,s),2.84(2 H,d,J=11.2Hz),2.47(3 H,s),2.25-2.36(1 H,m),2.19(3 H,s),1.92(2 H,td,J=11.1,3.7Hz),1.52-1.69(4 H,m)。
實例20：N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺
1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20a)之製備。在室溫下，向存於5mL DCM中之4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(18a；1.66g,4.92mmol)之溶液中添加TFA(3.65mL,49.2mmol)且將所得將混合物在室溫下攪拌2h。在減壓下濃縮。將黃色殘餘物分配於200mL EtOAc與25mL 1N NaOH之間。分離各層且使用25mL鹽水洗滌有機溶液，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以得到1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪，m/z(ESI，+ve離子)238.1(M+H)+。將黃色殘餘物溶於100mL DCM中，使用冰浴冷卻，使用三乙胺(1.37mL,9.84mmol)處理，隨後使用乙醯氯(0.38mL,5.41mmol)處理。在0℃下保持1h之後，使用25mL 0.5N NaOH處理。分離各層且使用50mL DCM萃取水層。使用25mL鹽水洗滌合併之DCM溶液，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以得到黃色結晶固體形式之1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20a)。將粗製材料用於下一步驟中。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 7.91(1 H,d,J=9.4Hz),6.59(1 H,dd,J=9.4,2.3Hz),6.54(1 H,d,J=2.3Hz),3.92(3 H,s),3.59(4 H,d,J=2.7Hz),3.51-3.56(2 H,m),3.43-3.50(2 H,m),2.05(3 H,s)。
1-(4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20b)之製備。在室溫下，使用H2填充氣囊在Pd/C(10wt.%,0.61g,0.57mmol)存在下 對存於10mL EtOH中之1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20a)之溶液實施氫化18h。經由矽藻土墊將其過濾並使用EtOAc(2×20mL)沖洗。濃縮濾液。使用10mL己烷研磨褐色殘餘物。傾析液體。將固體在40℃下於真空烘箱中乾燥1h以得到褐色固體形式之1-(4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20b；1.42g，5.70mmol，產率為99%)。將粗製材料用於下一步驟中。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 6.54(2 H,m),6.32(1 H,dd,J=8.3,2.4Hz),4.63(2 H,br.),3.76(3 H,s),3.54(4 H,m),2.95(2 H,m),2.89(2 H,m),2.02(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)250.1(M+H)+。
N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(20)之製備。將密封玻璃管中存於第三丁醇(2mL)及二噁烷(1mL)中之1-(4-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(20b；351mg,1.40mmol)、EtNiPr2(0.41mL,2.34mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(5b；288mg,0.78mmol)之懸浮液在110℃下於油浴中加熱72h。在減壓下濃縮。將褐色殘餘物在5mL乙醚中攪拌10min。傾析液體；將剩餘固體載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之2-10% MeOH洗脫，隨後使用存於DCM中之5% 2M NH3/MeOH以得到黃色結晶固體形式之標題化合物(20)(150mg，產率為34%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.81(1 H,s),8.12(1 H,s),7.88(1 H,d,J=8.0Hz),7.42-7.61(2 H,m),7.28(1 H,d,J=9.0Hz),6.98(1 H,d,J=7.8Hz),6.56(1 H,m),6.44(1 H,m),6.33(1 H,s),6.24(1 H,m),6.04(1 H,br.s.),5.75(1 H,m),3.78(3 H,s),3.56(4 H,m),3.04(2 H,m),2.97(2 H,m),2.46(3 H,s),2.03(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)554.3(M+H)+。
實例B1 N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2- 甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-3-甲氧基-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(B1b)之製備。在室溫下，使用N,N,N'-三甲基乙二胺(Sigma Aldrich,22.46mL,177mmol)處理存於THF(100mL)及DMF(50.0mL)中之5-氟-2-硝基苯甲醚(TCI America,25.20g,147mmol)之混合物，隨後使用Na2CO3(46.8g,442mmol)處理。將所得混合物在85℃下加熱22h。將粗製反應混合物冷卻至室溫且過濾以去除Na2CO3並使用EtOAc(2×50mL)沖洗。使用EtOAc(300mL)稀釋濾液，使用水(2×100mL)洗滌，隨後使用鹽水(50mL)洗滌，並藉由無水Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以在高真空下乾燥過夜之後提供黏性黃色油狀物形式之粗製N1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(B1a，34.68g，137mmol，產率為93%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 7.90(1 H,d,J=9.4Hz),6.38(1 H,d,J=9.4Hz),6.25(1 H,s),3.91(3 H,s),3.57(2 H,t,J=6.7Hz),3.08(3 H,s),2.43(2 H,t,J=6.7Hz),2.20(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)254.0(M+H)+。
在配備有空氣冷卻回流冷凝器之500-mL圓底燒瓶中添加N1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(B1a,34.68g,137 mmol)，隨後添加EtOH(100mL)及5N HCl(54.8mL,274mmol)。以約20小份經20min向此攪拌溶液中添加鋅粉塵(<10微米，44.8g，685mmol)並將反應混合物(懸浮液)劇烈攪拌30min(升溫至50℃)。在藉由LC-MS分析指示還原可視為完成時，反應混合物簡單冷卻且經由矽藻土墊過濾懸浮液。使用MeOH(約200mL)洗滌固體並在減壓下濃縮濾液以去除MeOH及EtOH。添加5N NaOH(60mL)，隨後添加CHCl3(300mL)且混合各相並分離。使用額外CHCl3(50mL)萃取水相且使用無水Na2SO4乾燥合併之有機層並在減壓下蒸發至乾燥。將游離鹼吸收於Et2O(150mL)中並在氬下於冰浴中冷卻至0℃。然後使用HCl(存於1,4-二噁烷中之4.0M溶液，31.7mL，127mmol)處理並靜置5min。然後在旋轉蒸發儀上攪拌塊狀懸浮液並緩慢濃縮以去除揮發物。然後將所得淺灰色固體在高真空下乾燥過夜以提供N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-3-甲氧基-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(B1b，32.17g，124mmol，產率為90%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 6.75(1 H,d,J=6.7Hz),6.49(1 H,br.s.),6.32(1 H,d,J=7.4Hz),3.83(3 H,br.s.),3.58(2 H,br.s.),3.16(2 H,br.s.),2.70-2.89(8 H,m)。m/z(ESI，+ve離子)224.0(M+H)+。
N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(1)之製備。向350-mL玻璃反應器皿中裝填N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-3-甲氧基-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(8.77g,33.7mmol)及N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100,10.00g,29.3mmol)，隨後使用氬吹掃並添加EtOH(55mL)及冰HOAc(1.85mL,32.3mmol)。將反應混合物密封並在油浴中加熱至125℃保持1.5h。使用水(約50mL)將反應混合物轉移至1-L圓底燒瓶中且在旋轉蒸發儀上濃縮以去除大部分EtOH並使用水(350mL)及EtOAc(300mL)處理。 分離有機層並棄除。使用EtOAc(2×300mL)萃取水層並棄除。使用NaOAc(約18g)處理水層(pH為約5-6)並使用CHCl3/5% IPA(3×300mL)萃取，然後使用1N NaOH(10mL)處理並使用CHCl3/5% IPA(1×300mL)再次萃取。使用1N NaOH(10mL)處理並使用CHCl3/5% IPA(300mL)再次萃取。使用NaHCO3飽和溶液處理合併之有機萃取物並分離。藉由無水MgSO4乾燥有機萃取物，過濾並濃縮以提供褐色-黃色固體形式之粗製標題化合物。自EtOH：水之4：1混合物(約80mL)藉由使用熱槍簡單加熱至回流直至溶液均質為止來將此材料重結晶，然後逐漸冷卻過夜且然後經由中號孔隙率經燒結玻璃料過濾，使用水洗滌以在乾燥之後提供精細黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B1，4.85g，9.19mmol，產率為31%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 10.31(1 H,s),8.77(1 H,s),8.06(1 H,br.s.),7.84(1 H,br.s.),7.55(1 H,s),7.48(1 H,t,J=8.0Hz),7.20(1 H,d,J=8.8Hz),6.97(1 H,d,J=7.8Hz),6.37-6.49(1 H,m),6.18-6.34(3 H,m),5.64-5.91(2 H,m),3.66-3.84(3 H,m),2.75-2.89(3 H,m),2.45(3 H,s),2.33(2 H,br.s.),2.19(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)527.9(M+H)+。
實例B2：N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於DMSO(50mL)中之4-氟硝基苯(Sigma Aldrich；6.14mL,57.9mmol)、N,N,N"-三甲基乙二胺(Sigma Aldrich,7.36mL,57.9mmol)及碳酸鉀(16.00g,116mmol)之混合物在70℃下加熱4h。將反應混合物冷卻至室溫並使用水處理。使用EtOAc(3×150mL)萃取黃色混合物，使用鹽水洗滌，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮以提供粗製黏性黃色油狀物形式之N1,N1,N2-三甲基-N2-(4-硝基苯基)乙烷-1,2-二胺(2a，12.90g，57.8mmol，產率為100%)。m/z(ESI，+ve離子)224.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.07-8.15(2 H,m),6.56-6.66(2 H,m),3.51-3.60(2 H,m),3.10(3 H,s),2.48-2.55(2 H,m),2.30(6 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中，使用存於無水EtOH(15mL)中之Pd/C(10wt.%(乾基)，194mg，0.18mmol)處理N1,N1,N2-三甲基-N2-(4-硝基苯基)乙烷-1,2-二胺(B2a,406mg,1.818mmol)且使燒瓶氣氛經受真空/H2回填循環(×5)並在H2氣氛下(使用氣囊)攪拌16h。經由使用MeOH洗滌之0.45um acrodisc過濾反應混合物並濃縮至乾燥以提供淺黃色黏性油狀物形式之N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺(B2b，337mg，1.74mmol，產率為96%)。m/z(ESI，+ve離子)194.1 (M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 6.55-6.74(4 H,m),3.34(2 H,t,J=7.1Hz),2.75-2.87(3 H,m),2.48(2 H,t,J=7.0Hz),2.30(6 H,s)。
使用DMAc(4.0mL)處理N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺(335mg,1.733mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103,350mg,0.950mmol)並加熱至100℃保持3.5h。將粗製反應混合物直接添加至矽膠管柱上且在ISCO Combiflash RF上(40g Silicycle管柱，使用存於DCM中之0-20% 2M NH3/MeOH之梯度)純化材料以提供富集產物。在Gilson上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)純化材料，在genevac中濃縮過夜且然後通過Silicycle SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用20% MeOH/DCM)，然後在真空下乾燥以提供亮黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽(實例B2；290mg，0.47mmol，產率為50%)。m/z(ESI，+ve離子)498.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),9.73(1 H,br.s.),8.79(1 H,s),7.89(1 H,d,J=7.2Hz),7.43-7.61(2 H,m),7.14(2 H,d,J=6.5Hz),6.98(1 H,dd,J=7.8,1.0Hz),6.37-6.49(1 H,m),6.17-6.37(4 H,m),5.67-5.83(1 H,m),3.21-3.29(2 H,m),2.72-2.84(3 H,s),2.45(3 H,s),2.28(2 H,t,J=7.1Hz),2.09-2.21(6 H,s)。
實例B3：N-(3-(2-((3-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
使用無水2-丁醇(5mL,54.5mmol)及TFA(0.075mL,0.97mmol)處理3-氟苯胺(Alfa Aesar,Ward Hill,MA,0.112mL,1.166mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103,358mg,0.972mmol)，配備回流冷凝器並加熱至110℃保持15h。將粗製反應混合物直接添加至矽膠管柱上且在ISCO Combiflash RF上(40g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-20% 2M NH3/MeOH之梯度)純化材料以在使用Et2O洗滌並在真空烘箱中乾燥之後提供淺黃色固體形式之N-(3-(2-((3-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(283mg，0.68mmol，產率為70%)。m/z(ESI，+ve離子)415.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),10.20(1 H,br.s.),8.93(1 H,s),7.68-7.81(2 H,m),7.52(1 H,t,J=8.0Hz),7.22(1 H,d,J=12.3Hz),7.16(1 H,d,J=8.0Hz),6.92-7.09(2 H,m),6.64(1 H,t,J=8.4Hz),6.35-6.50(2 H,m),6.15-6.31(1 H,m),5.66-5.82(1 H,m)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -111.67。
實例B4：N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
將存於N,N-二甲基乙醯胺(0.51mL,5.40mmol)中之1-甲基-1-H- 吡唑-4-基胺(63.0mg，0.65mmol，Astatech公司)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)(199mg,0.54mmol)之混合物在90℃下於油浴中加熱90min。將反應混合物載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之3-10% MeOH洗脫以得到褐色結晶固體形式之N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B4，168mg，0.419mmol，產率為77%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.39(1 H,br.),10.03(1 H,s),8.81(1 H,s),7.86(1 H,d,J=8.6Hz),7.66(1 H,s),7.60(1 H,t,J=8.0Hz),7.11(1 H,s),7.04(1 H,d,J=8.4Hz),6.75(1 H,s),6.35-6.51(1 H,m),6.07-6.32(2 H,m),5.74-5.81(1 H,m),3.51(3 H,s),2.46(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)402.2(M+H)+。
實例5：N-(3-(2-((1-(2-(二甲基胺基)乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於N,N-二甲基乙醯胺(0.53mL,5.59mmol)中之1-(2-(二甲基胺基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(103mg，0.671mmol，Enamine有限公司)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)(206mg,0.559mmol)之混合物在90℃下於油浴中加熱2h。將混合物載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之3-10% MeOH洗脫以得到褐色結晶固體形式之N-(3-(2-((1-(2-(二甲基胺基)乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B5，178mg，0.388mmol，產率為69%)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.38(1 H,br.),10.04(1 H,s),8.81(1 H,s),7.86(1 H,d,J=8.6Hz),7.64(1 H,s),7.59(1 H,t,J=8.0Hz),7.14(1 H,s),7.05(1 H,d,J=7.6Hz),6.78(1 H,s),6.40(1 H,m),6.34(1 H,s),6.25(1 H,m),5.76(1 H,dd,J=10.2,1.8Hz),3.80(2 H,q,J=6.3Hz),2.46(3 H,s),2.42(2 H,m),2.09(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)459.2(M+H)+
實例B6：8-(((3S)-1-丙烯醯基-3-吡咯啶基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。
步驟1.在室溫下，使用(R)-3-(胺基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(923mg，4.61mmol，Astatech公司)處理存於3mL THF及18mL環己烷中之1-(2,4-二氯嘧啶-5-基)乙酮(800mg,4.19mmol,Princeton Bio)之溶液，隨後使用NaHCO3(387mg,4.61mmol)處理。將其在室溫下攪拌2h，並使用150mL EtOAc稀釋。經由矽藻土墊過濾混合物。棄除固體。濃縮濾液且在矽膠管柱上(存於己烷中之25-55% EtOAc)純化殘餘物以提供灰白色非晶型固體形式之(R)-3-(((5-乙醯基-2-氯嘧啶-4-基)胺基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(B6a，398mg，1.12mmol，產率為26%，約85%純)。m/z(ESI，+ve離子)376.9(M+23)+。
步驟2.在-78℃下，將EtOAc(329μL,3.36mmol)逐滴添加至存於5mL THF中之LiHMDS(3.48mL存於THF中之1.0M溶液，3.48mmol)之溶液中。將其在-78℃下攪拌15min，然後使用存於THF(6mL)中之(R)-3-(((5-乙醯基-2-氯嘧啶-4-基)胺基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(398mg B6a，約85%純，1.12mmol)之溶液逐滴處理。在-78℃下攪拌10min之後，去除冷浴，且將混合物攪拌90min。使用25mL飽和NH4Cl將其驟冷並使用2×50mL EtOAc萃取。藉由Na2SO4乾燥有機溶液並濃縮。在矽膠管柱上(存於己烷中之35-55% EtOAc)純化殘餘物以得到褐色非晶型固體形式之(R)-3-((2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(B6b，340mg，0.897mmol，產率為80%，約40%純)。m/z(ESI，+ve離子)401(M+23)+。
步驟3.在室溫下，使用TFA(667μL,8.97mmol)處理存於3mL DCM中之(R)-3-((2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(340mg 6b，約40%純，0.90mmol)之溶液且在LCMS指示完全去除Boc基團時在室溫下攪拌45min。在減壓下濃縮。將褐色殘餘物溶於10mL DCM中，使用冰浴冷卻並使用EtNiPr2(0.62mL,3.59mmol)處理，隨後使用丙烯醯氯(87μL,1.07mmol)處理。將混合物在0℃下攪拌30min。使用50mL DCM稀釋，使用10mL飽和NaHCO3洗滌，隨後使用5mL鹽水洗滌。藉由Na2SO4乾燥DCM溶液並濃縮。在矽膠管柱上(存於DCM中之65-100% EtOAc)純化殘餘物以提供黃色非晶型固體形式之(S)-8-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)甲基)-2-氯-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(B6c，187mg，0.562mmol，產率為63%)。m/z(ESI，+ve離子)333.0(M+H)+。
步驟4.將存於2-丁醇(2mL,21.80mmol)中之(S)-8-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)甲基)-2-氯-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(B6c,185mg, 0.55mmol)、2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(148mg,0.66mmol,GreenchemPharm)及TFA(0.045mL,0.61mmol)之混合物在100℃下於油浴中加熱3h。使用50mL EtOAc稀釋反應混合物，使用5mL 0.5N NaOH洗滌，隨後使用5mL鹽水洗滌。濃縮有機溶液並在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之5-8% 2M NH3/MeOH)純化兩次以得到黃色非晶型固體形式之(S)-8-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(實例B6)(41mg，0.079mmol，產率為14%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 8.73(1 H,s),8.58-8.70(1 H,m),7.53(1 H,t,J=9.0Hz),6.63(1 H,d,J=2.3Hz),6.48-6.57(1 H,m),6.36-6.48(1 H,m),6.19(1 H,s),6.03-6.14(1 H,m),5.62(1 H,ddd,J=10.3,8.0,2.4Hz),4.13(2 H,m),3.77(3 H,s),3.45(2 H,m),3.24(2 H,m),3.14(4 H,br.),2.67(1 H,m),2.46(4 H,m),2.38(3 H,s),2.23(3 H,s),1.82(1 H,m),1.63(1 H,m)。m/z(ESI，+ve離子)518.2(M+H)+。
實例B7：N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於N,N-二甲基乙醯胺(0.37mL,4.02mmol)中之1,3-二甲基-1H-吡唑-4-胺二鹽酸鹽(85mg，0.462mmol，ChemBridge，目錄編號：4031729)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)(148mg,0.402mmol)之混合物在100℃下於油浴中加熱90min。將其載於矽膠管柱上並使用存於DCM 中之3-10% MeOH洗脫以得到黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B7，126mg，0.303mmol，產率為75%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.38(1 H,br.),9.52(1 H,s),8.82(1 H,s),7.85(1 H,m),7.59(2 H,m),7.03(1 H,d,J=7.8Hz),6.69(1 H,s),6.48(1 H,m),6.25(2 H,m),5.77(1 H,m),3.41(3 H,m),2.47(3 H,s),2.10(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)416.1(M+1)+。
實例B8：N-(3-(2-((1-乙基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
使用TFA(0.025mL,0.33mmol)處理存於2-丁醇(2mL)中之5-胺基-1-乙基吡唑(Sigma Aldrich,48mg,0.432mmol)及N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(103)(100mg,0.27mmol)之混合物並在110℃下加熱15h。在Gilson上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1% TFA/水中之10-95% 0.1% TFA/CH3CN)純化粗製反應混合物以提供富集產物。在ISCO Combiflash RF上(12g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-10% MeOH之梯度)將其再純化以在45℃下於真空烘箱中乾燥1.5h之後提供黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-((1-乙基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(23.8mg，0.057mmol，產率為21%)。m/z(ESI，+ve離子)416.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.30(1 H,s),9.83(1 H,br.s.),8.89(1 H,s),7.69(1 H,d,J=7.8Hz),7.63(1 H,s),7.47(1 H,t,J=7.9Hz), 7.06(1 H,d,J=8.0Hz),6.98(1 H,d,J=8.2Hz),6.34-6.53(3 H,m),6.18-6.32(1 H,m),5.92(1 H,br.s.),5.60-5.84(2 H,m),3.92-4.08(2 H,m),3.79-3.91(1 H,m),1.10-1.29(3 H,m)，約1：0.3比率之兩種構形異構體(展示主要構形異構體之數據)。
實例B9：N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯胺鹽酸鹽(9b)之製備。向存於DMF(12mL)中之3-氟-4-硝基苯酚(Sigma Aldrich,1.30g,8.26mmol)之攪拌溶液中添加Cs2CO3(6.72g,20.64mmol)及2-(二甲基胺基)乙基氯鹽酸鹽(Sigma Aldrich,1.55g,10.73mmol)且將亮黃色懸浮液在50℃下攪拌過夜。在將混合物冷卻至室溫之後，使用H2O(30mL)稀釋反應混合物並使用DCM(3×40mL)萃取。使用鹽水洗滌有機萃取物並藉由Na2SO4乾燥。過濾溶液並在真空中濃縮以得到黃色油狀物形式之粗製材料。將粗製材料吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g，使用存於CH2Cl2中之0-3% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之2-(3-氟-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(B9a，0.392g，產率為21%)。MS(ESI正離子)：C10H13FN2O3之m/z計算值：228；實驗值：229(M+H)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.00-8.13(m,1H),6.69-6.85(m,2H),4.15(t,J=5.58Hz,2H),2.78(t,J=5.48Hz,2H),2.36(s,6H)。將上文所分離B9a之材料再溶於EtOH(5.00mL)中且添加濕10%碳載鈀(0.39g,0.36mmol)並將 懸浮液在1 atm H2下攪拌3h。使混合物通過短矽藻土路徑。使用MeOH(3×5mL)洗滌濾餅且濃縮合併之有機相以得到無色油狀物形式之粗製2-(3-氟-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺。MS(ESI正離子)：C10H15FN2O之m/z計算值：198；實驗值：199(M+H)。向存於EtOAc(5mL)中之上文所分離粗製材料之無色溶液中添加HCl(存於1,4-二噁烷中之4.0N溶液，0.45mL，1.80mmol)並攪拌5min。濃縮所得白色懸浮液以得到白色固體形式之4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯胺鹽酸鹽(B9b，0.40g，自3-氟-4-硝基苯酚之總產率為21%)，其未經進一步純化即直接用於下一反應中。
N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B9)之製備。向N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(202mg,0.59mmol)及4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯胺鹽酸鹽(B9b,167mg,0.71mmol)之經攪拌混合物中添加EtOH(2.00mL)及AcOH(0.051mL,0.89mmol)且將懸浮液在125℃下加熱2h。在反應液冷卻至室溫之後，濃縮混合物並使用NaHCO3飽和水溶液處理，且收集所得沈澱物並在減壓下乾燥。將粗製材料吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g，使用存於CH2Cl2中之0-7% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)純化，隨後實施兩個製備型TLC純化(存於EtOAc中之7% 2M NH3．MeOH)以提供灰白色固體形式之N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(17mg，產率為6%)。MS(ESI正離子)：C27H27FN6O3之m/z計算值：502；實驗值：503(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.31(s,1H),9.23(br.s.,1H),8.83(br.s.,1H),7.75(d,J=8.22Hz,1H),7.57(s,1H),7.47(t,J=8.12Hz,1H),7.27(t,J=8.80Hz,1H),6.96(d,J=7.63Hz,1H),6.75(d,J= 12.52Hz,1H),6.22-6.49(m,4H),5.77(d,J=9.98Hz,1H),3.91-4.01(m,2H),2.60(t,J=4.89Hz,2H),2.47(s,3H),2.22(s,6H)。
實例B10：N-(3-(2-((3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
根據報導於WO 201039731(Novartis AG,Switzerland)中之程序來製備3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(B10b)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 7.10(1 H,s),4.02(2 H,br.),3.64(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)132.1(M+1)+。
使用TFA(29.5μL,0.39mmol)處理存於2-丁醇(2.5mL)中之3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(B10b,52mg,0.39mmol)及N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(123mg,0.361mmol)之混合物且將混合物在100℃下於油浴中加熱20h。將混合物載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之35-75% EtOAc洗脫以得到富集期望產物之材料，m/z(ESI，+ve離子)436.1(M+1)+。在矽膠管柱上(存於DCM中之50% EtOAc)再次純化材料以提供黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B10，101mg，0.232mmol，產率為64%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.43(1 H,br.),9.57(1 H,br.),8.87(1 H,s),7.83(1 H,m),7.53-7.68(2 H,m),7.05(1 H,m),6.78(1 H,s),6.45(1 H,m),6.35(1 H,s),6.28(1 H,m),5.78(1 H,d, J=10.2Hz),3.48(3 H,s),2.47(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)436.1(M+1)+。
實例B11：N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
使用DIPEA(0.14mL,0.779mmol)處理存於DMAc(1mL)中之1,3-二甲基-1H-吡唑-4-胺二鹽酸鹽(Frontier Scientific,Newark,DE,55.0mg,0.299mmol)及N-(3-(2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(104,92mg,0.260mmol)之混合物並在100℃下加熱2h。在ISCO Combiflash RF上(24g Redisep管柱，使用存於DCM中之0-10% MeOH之梯度)純化粗製反應混合物以在使用Et2O洗滌並在42℃下於真空烘箱中乾燥過夜之後提供黃色非晶型固體形式之N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(17mg，0.043mmol，產率為16%)。m/z(ESI，+ve離子)401.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.38(1 H,s),9.54(1 H,s),8.77(1 H,s),7.91(1 H,d,J=9.6Hz),7.85(1 H,d,J=8.4Hz),7.66(1 H,s),7.59(1 H,t,J=8.0Hz),7.06(1 H,d,J=7.2Hz),6.72(1 H,s),6.37-6.49(2 H,m),6.20-6.30(1 H,m),5.71-5.82(1 H,m),3.41(3 H,s),2.10(3 H,s)。
實例B12：N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於2-丁醇(2mL)中之1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-胺鹽酸鹽(67.0mg,0.33mmol,Princeton Bio及N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(103mg,0.30mmol)之混合物在100℃下加熱於油浴中18h。使用50mL EtOAc稀釋，使用1N NaOH(5mL)洗滌，隨後使用鹽水(5mL)洗滌。濃縮有機溶液且將殘餘物載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之35-75% EtOAc洗脫以得到灰白色結晶固體形式之N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(66mg，產率為46%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.40(1 H,br.),9.43(1 H,br.),8.88(1 H,s),7.81(1 H,d,J=7.8Hz),7.48-7.66(2 H,m),7.04(2 H,m),6.32-6.48(2 H,m),6.22(1 H,m),5.78(1 H,d,J=10.0Hz),3.60(3 H,s),2.48(3 H,s)。19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ ppm -58.66(s)。m/z(ESI，+ve離子)470.0
實例B13：N-(3-(5-甲基-2-((4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於對-二噁烷/H2O(4：1,15mL)中之4-溴苯胺(0.80g,4.65 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1,2,3,6-四氫吡啶(1.04g,4.65mmol)、二環己基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(0.089g,0.186mmol)、磷酸鉀(2.96g,13.95mmol)及Pd2(dba)3(0.085g,0.093mmol)之混合物在100℃下加熱2h。冷卻反應液，使用水處理，並使用EtOAc(3×)萃取。藉由MgSO4乾燥萃取物，濃縮並藉由矽膠管柱(0-10% MeOH/DCM)純化以得到4-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)苯胺(B13a,0.567g,65%)。m/z(ESI，+ve離子)189.1(M+H)+。
在H2氣囊下，對存於EtOH(10mL)中之4-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)苯胺(0.567g,3.01mmol)及10% Pd/C(50mg)之混合物實施氫化過夜。過濾掉觸媒，將濾液濃縮至乾燥且將所得4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯胺(B13b)用於下一步驟中(0.515g,90%)。m/z(ESI，+ve離子)191.1(M+H)+。
將存於DMA(2mL)中之N-(3-(5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.100g,0.271mmol)及4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯胺(0.077g,0.407mmol)之混合物在100℃下加熱14h。冷卻反應混合物，並使用水處理。收集固體，使用H2O洗滌，乾燥並藉由反相HPLC純化。將純部分濃縮至乾燥且溶於MeOH中並通過Stratophere SPE PL-HCO3 MP SPE(200mg,0.36mmol)以得到N-(3-(5-甲基-2-((4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B13；16mg,12%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.37(1 H,s),9.93(1 H,br.s.),8.86(1 H,s),7.88(1 H,d,J=8.8Hz),7.64(1 H,s),7.54(1 H,t,J=8.1Hz),7.15-7.32(2 H,m),6.96-7.06(1 H,m),6.83(2 H,m,J=8.0Hz),6.38-6.48(1 H,m),6.34(1 H,d,J=1.2Hz),6.19-6.29(1 H,m),5.71-5.80(1 H,m),2.82(2 H,d,J=11.3Hz),2.45(3 H,s),2.20-2.31(1 H,m),2.18(3 H,s),1.83-1.95(2 H,m),1.47-1.64(4 H,m)。m/z(ESI， +ve離子)495.2(M+H)+。
實例B14：N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於DMF(20mL)中之4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(5.94g,34.7mmol)、2-(二甲基胺基)乙醇(4.64g,52.1mmol)及碳酸銫(22.62g,69.4mmol)之混合物在80℃下於油浴中加熱4h。使用250mL EtOAc稀釋反應混合物並過濾。使用水(2×20mL)洗滌濾液，隨後使用鹽水(20mL)洗滌並濃縮。在矽膠管柱上(存於DCM中之1-5% 2M NH3/MeOH)純化殘餘物以得到黃色黏性油狀物形式之2-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(B14a，6.3g，產率為75%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 7.97(1 H,s),6.82(1 H,d,J=2.5Hz),6.69(1 H,dd,J=9.2,2.3Hz),4.21(2 H,t,J=5.8Hz),3.94(3 H,s),2.66(2 H,t,J=5.7Hz),2.24(6 H,s)。
在室溫下，使用H2填充氣囊在Pd/C(10% 2.23g,2.09mmol)存在下對存於50mL EtOH及70mL EtOAc中之2-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(B14a,6.3g,26.2mmol)之溶液實施氫化18h。經由矽藻土墊將其過濾並使用2×30mL EtOAc沖洗。濃縮濾液以得到褐色黏性油狀物形式之4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯胺(5.39 g，25.6mmol，產率為98%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 6.54(1 H,d,J=8.4Hz),6.45(1 H,s),6.30(1 H,d,J=8.4Hz),4.22(2 H,br.),3.92(2 H,t,J=5.8Hz),3.75(3 H,s),2.57(2 H,t,J=5.8Hz),2.21(6 H,s)。將褐色黏性油狀物溶於3mL二噁烷中且使用存於二噁烷中之4N HCl(6.5mL,26mmol)之溶液處理並在室溫下攪拌10min。將異質混合物濃縮至乾燥以得到褐色固體形式之4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯胺鹽酸鹽(B14b，6.30g，25.5mmol，產率為97%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 6.59(1 H,m),6.55(1 H,s),6.39(1 H,d,J=7.8Hz),5.40(3 H,br.),4.22(2 H,m),3.75(3 H,s),3.42(2 H,m),2.82(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)211.2
將存於5mL EtOH中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(630mg,1.849mmol)、4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯胺鹽酸鹽(B14b,525mg,2.12mmol)及HOAc(0.11mL,1.85mmol)之異質混合物在120℃下於微波中加熱75min。使用100mL CHCl3稀釋並使用10mL 1N NaOH洗滌，隨後使用5mL鹽水洗滌。濃縮有機溶液。使用2×15mL乙醚洗滌褐色殘餘物。在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之5-10% 2M NH3/MeOH)純化剩餘固體以提供富集材料(約580mg黃色固體)。將黃色固體在10mL乙醚中攪拌30min。過濾黃色固體，並使用3×10mL乙醚洗滌。棄除乙醚濾液。收集黃色固體並乾燥以得到N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B14，440mg，產率為46%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.34(1 H,br.),8.82(1 H,s),8.16(1 H,s),7.84(1 H,d,J=7.8Hz),7.60(1 H,s),7.52(1 H,t,J=8.0Hz),7.32(1 H,d,J=8.6Hz),6.99(1 H,d,J=7.4Hz),6.54(1 H,s),6.36-6.49(1 H,m),6.34(1 H,s),6.18-6.31(1 H,m),6.05(1 H, br.s.),5.77(1 H,d,J=10.0Hz),3.96(2 H,m),3.80(3 H,s),2.59(2 H,m),2.47(3 H,s),2.23(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)515.3
實例B15：N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於DMSO(2mL)中之1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺(0.024g,0.220mmol,FSSI)、N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.050g,0.147mmol)及Cs2CO3(0.072g,0.220mmol)之混合物在100℃下攪拌4h。冷卻反應混合物，且添加H2O。過濾固體，乾燥，然後藉由反相HPLC純化以得到單TFA鹽形式之標題化合物(3.5mg,6%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.35(1 H,s),10.01(1 H,br.s.),8.92(1 H,s),7.79(1 H,d,J=8.2Hz),7.66(1 H,s),7.51(1 H,t,J=8.0Hz),6.88-7.04(1 H,m),6.36-6.56(2 H,m),6.19-6.32(1 H,m),5.78(1 H,dd,J=10.0,2.0Hz),5.43(1 H,br.s.),3.58(6 H,s),1.90(3 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)416.2(M+H)+。
實例B16：N-(3-(2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於DMF(3mL)中之4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺(0.074g,0.440mmol,Matrix)、碳酸鈉(0.156g,1.467mmol)及N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮 基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.100g,0.293mmol)之混合物在80℃下加熱4h。冷卻反應混合物，且添加H2O。過濾固體，使用乙醚洗滌，乾燥以得到標題化合物(0.083g,83%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.37(1 H,br.s.),9.90(1 H,br.s.),8.85(1 H,s),7.84(1 H,d,J=7.8Hz),7.65(1 H,br.s.),7.54(1 H,t,J=7.8Hz),7.15-7.35(2 H,m),7.01(1 H,d,J=7.6Hz),6.57(2 H,br.s.),6.44(1 H,dd,J=16.7,10.3Hz),6.33(1 H,s),6.17-6.30(1 H,m),5.76(1 H,d,J=10.0Hz),3.96(2 H,br.s.),3.62(2 H,br.s.),3.35(3h,s),2.48(3 H,br.s.)。m/z(ESI，+ve離子)472.2(M+H)+。
實例B17：N-(3-(2-((4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙醇(17b)之製備。向存於NMP(70mL)中之5-氟-2-硝基苯甲醚(Oakwood Products公司，7.0g，40.9mmol)及DIPEA(12.15mL,69.5mmol)之黃色溶液中添加N-甲基乙醇胺(Sigma Aldrich,4.92mL,61.4mmol)且將亮黃色溶液在80℃下加熱過夜。在將反應液冷卻至室溫之後，使用H2O(80mL)稀釋反應混合物並使用EtOAc(3×60mL)萃取。使用鹽水洗滌有機萃取物並藉由Na2SO4乾燥。過濾溶液並在真空中濃縮以得到褐色油狀物形式之粗製材料。將粗製殘餘物吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積 矽膠管柱(120g，使用存於CH2Cl2中之0-5% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙醇(B17a)，其在真空下乾燥後變為黃色半固體。MS(ESI正離子)：C10H14N2O4之m/z計算值：226；實驗值：227(M+H)。
向上文所分離材料中添加EtOH(70.0mL)及EtOAc(10mL)並添加Pd/C(4.6g，10wt%，位於濕碳上)且將黑色懸浮液在1 atm H2下攪拌過夜。使混合物通過短矽藻土路徑。使用EtOAc(3×50mL)洗滌濾餅。濃縮合併之有機相以得到深紫色油狀物形式之粗製2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙醇(B17b，6.24g，兩個步驟中之產率為78%)。MS(ESI正離子)：C10H16N2O2之m/z計算值：196；實驗值：197(M+H)。
實例B17之製備。向存於2-丁醇(5.00mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(510mg,1.497mmol)(100)及粗製2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙醇(382mg,1.946mmol)之經攪拌混合物中添加TFA(0.15mL,1.95mmol)且將異質混合物在110℃下攪拌過夜。反應並未完成，因此添加另一當量之存於2-丁醇(2.5mL)中之粗製2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙醇且將整個混合物在110℃下再加熱12h。使用H2O(20mL)稀釋反應混合物並使用CH2Cl2(3×60mL)萃取。使用H2O洗滌有機萃取物並藉由Na2SO4乾燥。過濾溶液並在真空中濃縮以得到黑色固體。將粗製材料吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g，使用存於CH2Cl2中之0-7% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)純化以提供黃色固體形式之N-(3-(2-((4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B17，0.43g，產率為57%)。MS(ESI正離子)：C27H28N6O4之m/z計算值：500；實驗值：501(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.32(s, 1H),8.76(s,1H),8.07(br s,1H),7.83(d,J=7.63Hz,1H),7.58(s,1H),7.48(t,J=8.02Hz,1H),7.19(d,J=8.80Hz,1H),6.96(d,J=7.82Hz,1H),6.38-6.56(m,1H),6.16-6.32(m,3H),5.82(br s,1H),5.76(dd,J=1.86,10.07Hz,1H),4.60(t,J=5.38Hz,1H),3.75(s,3H),3.51(q,J=5.87Hz,2H),3.33-3.42(m,2H),2.86(s,3H),2.45(s,3H)。
實例B18：N-(3-(5-甲基-7-酮基-2-((4-(六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於n-BuOH(4mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.10g,0.293mmol)、4-(4-胺基苯基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(0.097g,0.352mmol)及HOAc(0.017mL,0.293mmol)之混合物在100℃下加熱16h。冷卻反應混合物，濃縮至乾燥，藉由矽膠管柱(25%丙酮/DCM)純化以得到boc保護之六氫吡啶中間體，將其溶於DCM(5mL)中且添加TFA(2mL)並在室溫下攪拌過夜。將混合物濃縮至乾燥並藉由反相HPLC純化。將純部分濃縮至最小量H2O，藉由NaHCO3飽和水溶液中和。收集淺棕色固體，乾燥以得到單TFA鹽形式之標題化合物(16.5mg,9.5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),9.98(1 H,br.s.),8.87(1 H,s),8.52(1 H,d,J=11.0Hz),8.25(1 H,d,J=10.0Hz),7.97(1 H,d,J=7.8Hz),7.54(1 H,t,J=8.0Hz),7.49(1 H,s),7.29(2 H,m,J=7.8Hz),7.00-7.09(1 H,m),6.83(2 H,m,J=7.8Hz),6.38-6.48(1 H,m),6.36(1 H,d,J=1.2Hz),6.20-6.32(1 H,m),5.70-5.82(1 H,m),3.24-3.40 (3 H,m),2.88-3.05(2 H,m),2.60-2.74(1 H,m),2.48(2 H,br.s.),1.83(2 H,d,J=13.5Hz),1.53-1.74(2 H,m)。m/z(ESI，+ve離子)595.2(M+H)+。
實例B19：N-(3-(2-((1-異丙基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺
向20-mL玻璃反應器皿中稱取1-(丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-胺(Astatech公司，Bristol，PA；目錄編號：62876，37.5mg，0.299mmol)及N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100,102mg,0.30mmol)，隨後使用氬吹掃並添加2-丁醇(2.0mL,21.80mmol)。密封反應混合物並在加熱塊中加熱至125℃保持2h。在旋轉蒸發儀上濃縮反應混合物並在ISCO Combiflash RF上(40g Thompson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-10% MeOH之梯度)實施層析以提供黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((1-異丙基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(59mg，0.138mmol，產率為46%)。m/z(ESI，+ve離子)430.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.39(1 H,br.s.),10.03(1 H,s),8.82(1 H,s),7.90(1 H,d,J=8.4Hz),7.67(1 H,br.s.),7.59(1 H,t,J=8.0Hz),7.16(1 H,s),7.04(1 H,d,J=7.0Hz),6.84(1 H,s),6.36-6.50(1 H,m),6.18-6.34(2 H,m),5.77(1 H,d,J=9.6Hz),3.95-4.14(1 H,m),2.47(3 H,s),1.20(6 H,dd,J=15.6,6.6Hz)。
實例B20：N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺
2-(3-氯-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(20a)之製備。在室溫下，使用N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(3.17mL,18.18mmol)處理存於50mL THF中之N,N,N"-三甲基乙二胺(2.21mL,17.43mmol)及2-氯-4-氟硝基苯(2.66g，15.15mmol，Oakwood Products公司)之溶液並攪拌18h。使用50mL EtOAc稀釋並使用2×5mL水洗滌。濃縮有機溶液並在矽膠管柱上(存於DCM中之50% EtOAc，隨後存於DCM中之5% 2M NH3/MeOH)純化以得到黃色黏性油狀物形式之N1-(3-氯-4-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(B20a，3.40g，13.19mmol，產率為87%，純度為約80%)[m/z(ESI，+ve離子)258.0]，其經20%之N1-(5-氟-2-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺[m/z(ESI，+ve離子)242.0]污染。此材料未經進一步純化即用於下一步驟中。
3-氯-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(B20b)之製備。使用H2填充氣囊在拉尼鎳(0.85g存於水中之50%漿液，活性觸媒，5.67mmol)存在下對存於MeOH/THF(1/1,62mL)中之N1-(3-氯-4-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(B20a，1.46g，5.67mmol，經20%之N1-(5-氟-2-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺污染)之溶液實施氫化。藉由矽藻土過濾反應混合物，使用MeOH/THF(2×20mL 1：1溶液)洗滌。將濾液蒸發至乾燥以得到黏性藍色油狀物，其含有3-氯-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二 胺(1.15g，約80%)及N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-氟-N1-甲基苯-1,2-二胺(約20%)之混合物。在室溫下，向存於10mL乙醚中之740mg黏性藍色油狀物之溶液中逐滴添加存於二噁烷中之4M HCl(0.82mL,3.25mmol)。將其在室溫下攪拌15min。將異質混合物濃縮至乾燥。將所得紫色固體在3mL乙醚及3mL己烷中攪拌5min。過濾紫色固體，使用2×15mL己烷沖洗，收集並乾燥以得到3-氯-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(B20b，803mg，約90%純，m/z(ESI，+ve離子)228.0)，其經N1-(5-氟-2-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(約10%，m/z(ESI，+ve離子)212.0)污染。
N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(B20)之製備。使用HOAc(32.9μL,0.57mmol)處理存於2.5mL EtOH中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100,194mg,0.57mmol)、3-氯-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(20b，188mg，0.71mmol，約90%純)之異質混合物(經10%之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺污染)並在100℃下於油浴中加熱30min。LCMS指示<5%轉化成期望產物，m/z(ESI，+ve離子)532.0。將反應混合物在120℃下於微波中加熱1h。將所得深色混合物載於矽膠管柱上並使用存於DCM中之2% MeOH洗脫，隨後使用存於DCM中之5-10% 2M NH3/MeOH洗脫。濃縮含有期望質量(m/z(ESI，+ve離子)532.0)之部分。將殘餘物在5mL乙醚中攪拌10min。過濾沈澱之黃色固體，使用2×2mL乙醚沖洗。棄除濾液。收集黃色固體並乾燥以得到N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(155mg，0.291mmol，產率為51%，約90%純)。為進一步純化，將100mg 90%純黃色固體在75℃下於油浴 中在EtOH/H2O(5mL,4/1)中攪拌5min。冷卻至室溫並在通風櫥中靜置18h。過濾黃色固體並乾燥以得到N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B20，58mg)。濃縮母液並在矽膠管柱上(存於DCM中之5-10% 2M NH3/MeOH)純化以得到N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B20，30mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.30(1 H,br.),8.78(2 H,br.),7.77(1 H,d,J=8.0Hz),7.55(1 H,s),7.44(1 H,m),7.19(1 H,m),6.96(1 H,m),6.59(1 H,m),6.45(1 H,m),6.31(2 H,m),6.26(1 H,m),5.75(1 H,m),3.41(2 H,m),2.86(3 H,s),2.46(3 H,s),2.34(2 H,m),2.19(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)532.0。
實例B21：N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺及N-(3-(5-甲基-2-((5-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
3-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺鹽酸鹽及5-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺鹽酸鹽(21b)之製備。在0℃下，向存於無水THF(15mL)中之4-羥基-N-甲基六氫吡啶(Acros； 1.156g,10.04mmol)、3-甲基-4-硝基-1H-吡唑(Alfa Aesar；0.813mL,9.13mmol)及三苯基膦(Sigma Aldrich；3.11g,11.86mmol)之經攪拌混合物中逐滴添加偶氮二甲酸二異丙基酯(Sigma Aldrich；2.307mL,11.86mmol)。在添加之後，將反應混合物逐漸升溫至室溫並攪拌過夜。然後濃縮混合物並藉由二氧化矽層析(存於DCM中之0-25%丙酮)純化以得到21a(1.0g,4.46mmol)，其呈兩種區域異構體1-甲基-4-(5-甲基-4-硝基-1H-吡唑-1-基)六氫吡啶及1-甲基-4-(3-甲基-4-硝基-1H-吡唑-1-基)六氫吡啶之不可分離混合物形式。m/z(ESI，+ve離子)225.2(M+1)+
將存於EtOH及水之混合物(5：1,35mL)中之21a(1.000g,4.46mmol)、NH4Cl(Sigma Aldrich；0.06g,1.11mmol)及鐵(Sigma Aldrich；1.245g,22.30mmol)之混合物在回流下加熱2h。去除熱，且經由矽藻土墊熱過濾混合物。將濾液濃縮至乾燥，然後分配於1N NaOH(10mL)與CHCl3(10mL)之間。使用額外CHCl3(10mL)萃取水性部分且使用MgSO4乾燥合併之有機物，然後在減壓下蒸發至乾燥以得到深色油狀物形式之游離胺。將其溶於EtOAc(5mL)中並使用存於Et2O中之1N HCl(0.5mL)處理。形成白色沈澱物且將混合物在減壓下蒸發至乾燥。粗製鹽21b未經進一步純化即使用。m/z(ESI，+ve離子)195.1(M+1)+。
實例21之製備。將3-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺鹽酸鹽及5-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺鹽酸鹽混合物(21b,0.10g,0.43mmol)與N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(0.137g,0.40mmol)合併並在微波小瓶中懸浮於EtOH(1mL)中。添加HOAc(Sigma Aldrich；0.023mL,0.40mmol)並密封小瓶。將其在115℃油浴中加熱90min。將粗製物在減壓下蒸發至乾燥並分配於DCM(75mL)與50%飽和NaHCO3(50mL)之 間。使用MgSO4乾燥有機物並在減壓下蒸發至乾燥。使用二氧化矽層析(存於DCM中之0-10% 2N NH3/MeOH梯度)純化以得到N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(51mg，0.102mmol，產率為25%)及N-(3-(5-甲基-2-((5-甲基-1-(1-甲基六氫吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺之橙色固體形式之混合物。m/z(ESI，+ve離子)195.1(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl 3 )δ ppm 8.97(br.s.,1H),8.68(br.s.,1H),7.89-8.39(m,2H),7.27-7.55(m,2H),6.63-6.94(m,1H),6.25-6.50(m,1H),5.99-6.21(m,1H),5.62(d,J=10.2Hz,1H),3.66-4.16(m,1H),2.93-3.04(m,1H),2.46(s,3H),2.32(s,3H),1.81-2.23(12H)。
對比實例22：N-(3-(6-苄基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
在250-mL圓底燒瓶中添加THF(55.5mL)，隨後在乾冰/丙酮中冷卻至-78℃並添加LiHMDS(1.0M，存於THF中，16.65mL，16.65mmol)，隨後緩慢逐滴添加3-苯基丙酸甲酯(TCI America,Portland,OR,1.93ml,12.21mmol)。將溶液在此溫度下攪拌30min。然後一次性添加(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101,2.00g,5.55mmol)且自冷卻浴取出溶液且升溫至室溫並攪 拌3.5h。使用NH4Cl飽和溶液將反應液驟冷且使用EtOAc(2×70mL)萃取反應混合物，使用鹽水洗滌並藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。然後在ISCO Combiflash RF上(80g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-10% EtOAc之梯度(使用約3-5% EtOAc洗脫))對粗製殘餘物實施層析以提供起始材料及期望產物之混合物。將固體懸浮於Et2O中並藉由過濾收集，且使用Et2O洗滌並在40℃下於真空烘箱中乾燥4h以提供白色固體形式之(3-(6-苄基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(22a；824mg，1.738mmol，產率為31%)。m/z(ESI，+ve離子)475.2(M+H)+。1H NMR(400MHz，MeOH-d4/CDCl 3 混合物)δ ppm 8.52(1 H,s),7.48(1 H,br.s.),7.30-7.42(6 H,m),7.22-7.30(3 H,m),6.82-6.90(1 H,m),3.91(2 H,s),2.14(3 H,s),1.41-1.54(9 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中添加(3-(6-苄基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(653mg,1.37mmol)及HCl(4M，存於1,4-二噁烷中，3.44mL，13.76mmol)。在50℃下攪拌將混合物且使用LC/MS跟蹤進展。在1h之後，LC-MS指示完全轉化成期望產物。使用冰/NaCl將混合物冷卻至0℃並使用NaOH 10.0N(3.03mL,30.3mmol)逐滴處理。在完成添加之後，在0℃下，攪拌混合物並經由注射器使用丙烯醯氯(145μl,1.789mmol)逐滴處理。將混合物在0℃下攪拌10min且然後在室溫下攪拌1h。使用水(5mL)將反應混合物驟冷且使用中號孔隙率經燒結玻璃料過濾所得精細白色沈澱物，且使用Et2O洗滌濾餅。將所得固體在40℃下於真空烘箱中乾燥過夜以提供灰白色非晶型固體形式之N-(3-(6-苄基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(22b；554mg，1.29mmol，產率為94%)。m/z(ESI，+ve離子)429.2(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.32(1 H,br.s.),8.89(1 H,s),7.76(1 H, s),7.62-7.74(2 H,m),7.49(1 H,t,J=7.8Hz),7.33(4 H,br.s.),7.25(1 H,br.s.),7.03(1 H,d,J=7.8Hz),6.44(1 H,dd,J=16.9,10.1Hz),6.26(1 H,d,J=16.8Hz),5.77(1 H,d,J=10.2Hz),3.89(2 H,s),2.20(3 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中，使用DCM(20mL)處理N-(3-(6-苄基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(531mg,1.24mmol)，在冰浴中冷卻至0℃並使用3-氯過氧苯甲酸(77% max.,278mg,1.239mmol)一次性處理。將溶液在0℃下攪拌1h 30min。使用10% Na2CO3溶液處理反應混合物，使用DCM(2×50mL)萃取，藉由無水Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供灰白色發泡體形式之粗製N-(3-(6-苄基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(22c；545mg，1.22mmol，產率為99%)。m/z(ESI，+ve離子)445.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.34(1 H,s),9.24(1 H,s),7.91(1 H,s),7.62-7.79(2 H,m),7.49(1 H,t,J=8.0Hz),7.31-7.39(3 H,m),7.26(1 H,dq,J=8.8,4.1Hz),6.98-7.08(1 H,m),6.44(1 H,dd,J=16.9,10.1Hz),6.24(1 H,dd,J=17.0,1.8Hz),5.75-5.80(2 H,m),3.89-4.00(2 H,m),2.63-2.75(3 H,m)產物亦含有約7%之相應碸。
使用DMAc(2.0mL)在N2下處理2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(GreenChemPharm,Bardonia,NY,96mg,0.432mmol)及N-(3-(6-苄基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(22c；160mg,0.360mmol)並加熱至90℃保持6.5h。使用1N NaOH處理反應混合物並首先使用EtOAc(20mL)及DCM(3×20mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。在ISCO(40g Thomson管柱，使用存於DCM中之0-10% MeOH之梯度)純化粗製殘餘物以在使用Et2O洗滌並在高真空下乾燥之後提供亮黃色-橙色固體形式之N-(3-(6-苄基 -2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例22；37mg，0.062mmol，產率為17%)。m/z(ESI，+ve離子)602.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.70(1 H,s),8.06(1 H,br.s.),7.87(1 H,d,J=8.2Hz),7.66(1 H,s),7.59(1 H,s),7.52(1 H,t,J=7.8Hz),7.18-7.38(6 H,m),7.01(1 H,d,J=7.4Hz),6.52(1 H,br.s.),6.43(1 H,dd,J=17.0,9.8Hz),6.25(1 H,d,J=17.0Hz),6.03(1 H,br.s.),5.77(1 H,d,J=9.8Hz),3.84(2 H,s),3.69-3.81(3 H,m),3.03(4 H,br.s.),2.44(4 H,br.s.),2.23(3 H,br.s.)。
實例B23. (S)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽
將Cs2CO3(4.96g,15.21mmol)、(S)-(+)-1-甲基-3-吡咯啶醇(1g,9.89mmol,Acros Organics)、5-氟-2-硝基苯甲醚(1.3g,7.61mmol,Oakwood Products)及DMF(15.21mL)之混合物加熱至100℃過夜。使用DCM稀釋反應混合物並使用水及鹽水洗滌以得到(S)-3-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)-1-甲基吡咯啶(23a，1.58g，6.26mmol，產率為約82%)。油狀物殘餘物在進一步純化之前用於下一步驟中。
將存於水(2.75mL)及EtOH(13.74mL)中之(S)-3-(3-甲氧基-4-硝 基苯氧基)-1-甲基吡咯啶(23a,1.58g,6.26mmol)、鐵(1.749g,31.3mmol)、NH4Cl(0.335g,6.26mmol)之混合物加熱至100℃保持約2h。藉由矽藻土過濾反應混合物並使用大量水沖洗。旋轉蒸發濾液以去除揮發性溶劑且然後使用5N NaOH溶液鹼化至pH>9。然後使用CHCl3(2×)反萃取濾液。藉由Mg2SO4乾燥有機層且然後旋轉蒸發以得到(S)-2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯胺(816mg，3.67mmol，產率為約58%)。將深色油狀物殘餘物直接用於下一步驟中。m/z(ESI，+ve離子)223.1(M+H)+。
將存於EtOH(1.673mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.171g,0.502mmol)、HOAc(0.035ml,0.602mmol)、(S)-2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯胺(23b,0.145g,0.652mmol)、TFA(0.043mL,0.552mmol)之混合物加熱至110℃過夜。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。將澄清部分與AcCN共沸以提供(S)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽(實例B23，31.9mg，0.050mmol，產率為10%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ 8.69-8.87(m,1H),8.10(br.s.,1H),7.33-7.62(m,3H),7.01(d,J=7.75Hz,1H),6.28-6.60(m,4H),6.08(br.s.,1H),5.78(dd,J=2.78,8.92Hz,1H),5.09(br.s.,1H),3.83(s,5H),3.16-3.46(m,5H),3.02(br.s.,3H),2.65(br.s.,1H),2.11-2.40(m,1H),2.08-2.37(m,1H),2.46(s,5H)。m/z(ESI，+ve離子)527.0(M+H)+。
實例B24：N-(3-(2-((3-氟-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺。
將存於EtOH(1.467ml)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.15g,0.440mmol)、AcOH(0.031ml,0.528mmol)、3-氟-4-(4-甲基六氫吡嗪基)苯胺(0.079ml,0.440mmol,Advanced ChemBlocks)、HCl(0.088mL，5N，存於iPrOH中，0.440mmol)及TFA(0.037mL,0.484mmol)之混合物加熱至110℃過夜(約14h)。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。旋轉蒸發該等部分以去除揮發性溶劑。將殘餘油狀物再溶於MeOH中並使用Silicycle SiliaPrep碳酸鹽柱中和。濃縮濾液以提供N-(3-(2-((3-氟-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺(實例B24，24.5mg，0.048mmol，產率為11%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ8.83(s,1H),7.86(d,J=8.48Hz,1H),7.71(s,1H),7.55(t,J=8.04Hz,1H),7.15(d,J=12.86Hz,1H),6.91-7.07(m,2H),6.72(t,J=9.13Hz,1H),6.24-6.51(m,3H),5.75(dd,J=2.05,9.50Hz,1H),2.99(br.s.,4H),2.61(br.s.,4H),2.53(s,3H),2.35(s,3H),1.88-1.95(m,1H)。m/z(ESI，+ve離子)514.0(M+H)+。
實例B25及B26：N-(3-(2-((2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺及N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
2-(3-氯-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(25a)之製備。將存於DMF(10mL)中之2-氯-4-氟硝基苯(2.15g，12.25mmol，Oakwood Products公司)、2-(二甲基胺基)乙醇(1.42g,15.92mmol,Aldrich)及Cs2CO3(11.97g,36.7mmol)之混合物在室溫下攪拌36h。使用H2O(25mL)處理反應混合物並使用DCM(3×50mL)萃取。合併萃取物，使用鹽水(15mL)洗滌，並濃縮。藉由矽膠層析(存於DCM中之50% EtOAc，隨後存於DCM中之5% 2M NH3/MeOH)純化殘餘物以提供黃色黏性油狀物形式之2-(3-氯-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(25a，2.60g，10.63mmol，產率為87%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 8.10(1 H,d,J=9.0Hz),7.96(1 H,s),7.14(1 H,d,J=9.0Hz),4.22(2 H,t,J=5.6Hz),2.64(2 H,t,J=5.5Hz),2.22(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)245.0(M+H)+。
N-(3-(2-((2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例25)及N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例26)之製備。在室溫下，使用H2填充氣囊在拉尼鎳(1.1g活性觸媒，存於水中之50%漿液，Aldrich)存在下對 存於MeOH/THF(62mL，1/1)中之2-(3-氯-4-硝基苯氧基)-N,N-二甲基乙胺(25a,2.60g,10.63mmol)之溶液實施氫化18h。藉由矽藻土床過濾反應混合物，使用MeOH/THF(2×20mL,1/1)洗滌。將濾液蒸發至乾燥以得到淺棕色固體，其係2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺[m/z(ESI，+ve離子)250.1(M+H)+]及4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺[m/z(ESI，+ve離子)181.1(M+H)+]之約60%：40%比率之混合物。將淺棕色固體懸浮於5mL二噁烷中並使用HCl(2.5mL，4.0M，存於二噁烷中，10mmol,Aldrich)處理。將混合物在室溫下攪拌5min，並在減壓下濃縮以得到淺棕色固體。將淺棕色固體在25mL庚烷中攪拌5min。過濾固體並乾燥以得到2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺鹽酸鹽(25b，2.51g，9.99mmol，產率為94%)，其呈與4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺鹽酸鹽之約60%：40%比率之混合物形式。m/z(ESI，+ve離子)250.1(M+H)+及m/z(ESI，+ve離子)181.1(M+H)+。
將存於5mL EtOH中之2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺鹽酸鹽(25b，178mg，0.71mmol，呈與4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯胺鹽酸鹽之混合物形式)、N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100,210mg,0.61mmol)及HOAc(35μL,0.61mmol)之異質混合物在120℃下於微波中加熱75min。將反應混合物在15mL乙醚中攪拌15min。傾析液體。將剩餘固體吸附於5g矽膠上並在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之2-6% 2M NH3/MeOH)純化以提供兩種化合物。第一洗脫物係黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B25，50mg，產率為15%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.31(1 H,br.),8.90(1 H,s),8.83(1 H,s),7.74(1 H,d,J=8.4Hz),7.58(1 H,s),7.46(1 H,t,J=8.1Hz),7.34(1 H,d,J=8.8Hz),6.97(2 H,m),6.58(1 H,br.),6.48 (1 H,m),6.35(1 H,s),6.26(1 H,m),5.78(1 H,m),4.01(2 H,m),2.61(2 H,t,J=5.7Hz),2.47(3 H,s),2.23(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)519.2(M+H)+。第二洗脫物係黃色結晶固體形式之N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B26)(35mg，產率為11%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.36(1 H,s),9.90(1 H,br.),8.85(1 H,s),7.86(1 H,d,J=8.2Hz),7.63(1 H,br.),7.54(1 H,t,J=7.9Hz),7.24(2 H,d,J=5.5Hz),7.01(1 H,d,J=7.4Hz),6.56(2 H,br.),6.38-6.50(1 H,m),6.33(1 H,s),6.16-6.30(1 H,m),5.76(1 H,d,J=10.0Hz),3.91(2 H,m),2.57(2 H,m),2.48(3 H,s),2.21(6 H,s)。m/z(ESI，+ve離子)485.3(M+H)+。
實例B27：N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於EtOH(0.978mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.1g,0.293mmol)、HOAc(0.020mL,0.352mmol)、3-甲基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(0.060g,0.293mmol,FSSI)、TFA(0.025mL,0.323mmol)之混合物加熱至110℃過夜。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。將該等部分與AcCN共沸。使用McOH再溶解殘餘物並使用Silicycle SiliaPrep碳酸鹽柱中和。濃縮濾液以提供N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙 烯醯胺(實例B27，31.6mg，0.062mmol，產率為21%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ 8.79(s,1H),8.75-8.83(m,1H),7.93(d,J=8.18Hz,1H),7.47-7.70(m,4H),6.96-7.15(m,3H),6.71(d,J=8.04Hz,1H),6.26-6.50(m,3H),5.76(dd,J=2.05,9.35Hz,1H),2.74-2.93(m,8H),2.44-2.57(m,7H),2.09(s,3H)。m/z(ESI，+ve離子)510.0(M+H)+。
對比實例28：N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
在500-mL圓底燒瓶中於氮下，將THF(55.5mL)在乾冰/丙酮中冷卻至-78℃並使用LiHMDS(1.0M，存於THF中，16.65ml，16.65mmol)處理，隨後緩慢逐滴添加甲氧基乙酸甲酯(Sigma Aldrich,1.21mL,12.21mmol)。然後將溶液在此溫度下攪拌20min。然後一次性添加(3-((5-甲醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(101,2.00g,5.55mmol)且自冷卻浴取出溶液並升溫至室溫保持2h。反應混合物係懸浮液。使用NH4Cl飽和溶液處理且使用精細孔隙率經燒結玻璃料(使用水及Et2O洗滌)過濾所得懸浮液以在40℃下於真空烘箱中乾燥過夜之後提供白色結晶固體形式之(3-(6-甲氧基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(28a；1.70g，4.10mmol，產率為74%)。m/z(ESI，+ve離子)415.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.57(1 H,s),8.87(1 H, s),7.33-7.54(4 H,m),6.93(1 H,d,J=7.4Hz),3.90(3 H,s),2.21(3 H,s),1.48(9 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中添加(3-(6-甲氧基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(1.66g,4.01mmol)、HCl(4M，存於1,4-二噁烷中，10.01mL，40.4mmol)。將混合物在50℃下攪拌1h。將混合物冷卻至室溫且在0℃下使用冰/NaCl攪拌並使用NaOH 10.0N(8.81ml,88mmol)逐滴處理。在完成添加之後，檢查pH以確保鹼性且在0℃下攪拌混合物並經由注射器使用丙烯醯氯(0.42mL,5.21mmol)逐滴處理。將混合物在0℃下攪拌15min且然後在室溫下攪拌1h。使用水(5mL)將反應混合物驟冷且在中號孔隙率經燒結玻璃料上過濾所得沈澱物，且使用水洗滌濾餅並在40℃下於真空烘箱中乾燥3h以提供白色結晶固體形式之N-(3-(6-甲氧基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(28b；1.38g,3.75mmol，產率為94%)。m/z(ESI，+ve離子)368.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.33(1 H,s),8.87(1 H,s),7.70(2 H,br.s.),7.50(1 H,t,J=7.5Hz),7.38(1 H,s),7.05(1 H,d,J=7.8Hz),6.45(1 H,dd,J=17.0,9.8Hz),6.26(1 H,d,J=17.0Hz),5.78(1 H,d,J=10.4Hz),3.90(3 H,s),2.19(3 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中，使用DCM(50mL)處理N-(3-(6-甲氧基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(1.02g,2.78mmol)，在冰浴中冷卻至0℃並使用3-氯過氧苯甲酸(77% max.；0.623g,2.78mmol)一次性處理。將溶液在0℃下攪拌1h。使用10% Na2CO3溶液處理反應混合物，使用DCM(2×50mL)萃取，藉由無水Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供淺黃色結晶固體形式之粗製N-(3-(6-甲氧基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(28c；1.07g，2.89mmol，產率為100%)。m/z(ESI，+ve離子) 385.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.36(1 H,br.s.),9.19(1 H,s),7.74-7.81(1 H,m),7.63-7.74(1 H,m),7.45-7.59(2 H,m),7.00-7.13(1 H,m),6.45(1 H,dd,J=17.0,10.2Hz),6.26(1 H,d,J=17.0Hz),5.79(1 H,s),3.92-4.01(3 H,s),2.70(3 H,s)期望亞碸及相應碸之84：16混合物。粗製材料未經進一步純化即用於下一步驟中。
將存於2-丁醇(20ml,54.5mmol)中之N-(3-(6-甲氧基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.134g,0.349mmol)、1-(4-胺基-3-甲氧基苯基)-4-甲基-六氫吡嗪(0.085g,0.383mmol)、TFA(0.026ml,0.349mmol)之懸浮液在110℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，濃縮粗製物並經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g)(使用存於DCM中之0%至10% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)實施層析。使用反相製備型HPLC(使用phenomenex C18，30×150mm，利用10-100% AcCN/水之梯度，16分鐘)再純化產物以提供淺黃色固體形式之N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例28；35mg，0.065mmol，19%)。m/z(ESI，+ve離子)542.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.36(br.s.,1H),8.69(s,1H),7.90(br.s.,1H),7.84(br.s.,1H),7.62(br.s.,1H),7.54(br.s.,1H),7.31(br.s.,2H),7.03(d,J=7.24Hz,1H),6.53(br.s.,1H),6.38-6.50(m,1H),6.28(br.s.,1H),5.98-6.08(m,1H),5.76(s,1H),3.85(br.s.,3H),3.79(br.s.,3H),3.02(br.s.,4H),2.44(br.s.,4H),2.23(br.s.,3H)。
實例B29：N-(3-(2-((4-(4-(2-羥基丙烷-2-基)六氫吡啶-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於EtOH(0.978mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.1g,0.293mmol)、HOAc(0.020mL,0.352mmol)、2-(1-(4-胺基苯基)六氫吡啶-4-基)丙烷-2-醇(0.069g,0.293mmol,FSSI)、TFA(0.025mL,0.323mmol)之混合物加熱至110℃過夜。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。將澄清部分與AcCN共沸。使用MeOH再溶解殘餘物並使用Silicycle SiliaPrep碳酸鹽柱中和以提供N-(3-(2-((4-(4-(2-羥基丙烷-2-基)六氫吡啶-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B29，45.3mg，0.84mmol，產率為29%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ 8.89(s,1H),7.96-8.12(m,1H),7.60(t,J=8.11Hz,2H),7.49(br.s.,1H),7.42-7.47(m,2H),7.29(d,J=9.35Hz,2H),7.07(dd,J=0.95,8.84Hz,1H),6.37-6.49(m,3H),5.79(dd,J=3.14,8.84Hz,1H),3.48-3.65(m,4H),3.18-3.33(m,4H),2.53(s,3H),2.07-2.21(m,2H),1.72-1.97(m,3H),1.25(s,7H)。m/z(ESI，+ve離子)539.1(M+H)+。
實例B30：N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
在-78℃下，將LiHMDS(1.0M，存於THF中，2.00mL，2.00mmol)添加至THF(10mL)中並使用甲氧基乙酸甲酯(Sigma Aldrich,0.145mL,1.469mmol)緩慢逐滴處理。將溶液在-78℃下攪拌25min，然後一次性添加(3-((5-乙醯基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(102,250mg,0.668mmol)且自冷卻浴取出溶液，升溫至室溫並攪拌2h。向反應混合物中一次性添加馬丁硫烷(Martin sulfurane)去水劑(Sigma Aldrich,449mg,0.668mmol)並攪拌3h。使用NH4Cl飽和溶液終止反應並使用EtOAc(2×15mL)萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮。在ISCO Combiflash RF上(25g Thomson管柱，使用存於己烷中之0-60% EtOAc之梯度)純化反應液以提供淺黃色結晶固體形式之(3-(6-甲氧基-5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(30a；142mg,0.33mmol，產率為49%)。m/z(ESI，+ve離子)428.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.55(1 H,br.s.),8.98(1 H,s),7.31-7.60(3 H,m),6.91(1 H,d,J=7.4Hz),3.32(2 H,s),2.43(3 H,s),2.20(3 H,s),1.47(9 H,s)。
在250-mL圓底燒瓶中，使用HCl(4M，存於1,4-二噁烷中，1.90mL，7.61mmol)處理(3-(6-甲氧基-5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(30a；163mg,0.38 mmol)並加熱至50℃保持45min。在減壓下去除揮發物且使用1,4-二噁烷(4mL)處理粗製材料，冷卻至0℃並使用NaOH(10N,0.84ml,8.37mmol)在冰浴中處理。將溶液攪拌30min，然後使用丙烯醯氯(40.2μL,0.495mmol)處理並攪拌升溫至室溫保持1h。使用水(15mL)將反應混合物驟冷並使用EtOAc及DCM萃取，藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮，並在高真空下乾燥過夜。m/z(ESI，+ve離子)383.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.34(1 H,s),8.98(1 H,s),7.65-7.74(2 H,m),7.49(1 H,t,J=8.0Hz),7.00-7.08(1 H,m),6.45(1 H,dd,J=16.9,10.1Hz),6.25(1 H,dd,J=17.0,2.0Hz),5.71-5.81(1 H,m),3.83(3 H,s),2.43(3 H,s),2.13-2.22(3 H,s)。
在250mL圓底燒瓶中，使用DCM(20mL)處理N-(3-(6-甲氧基-5-甲基-2-(甲硫基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(30b；101mg,0.26mmol)，在冰浴中冷卻至0℃並使用3-氯過氧苯甲酸(59mg 77% max.，0.26mmol)一次性處理。將溶液在0℃下攪拌50min。使用10% Na2CO3溶液處理反應混合物，使用DCM(2×20mL)萃取，藉由無水Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以提供淺黃色發泡體形式之粗製N-(3-(6-甲氧基-5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(105mg，0.28mmol，產率為100%)。m/z(ESI，+ve離子)399.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.36(1 H,br.s.),9.34(1 H,s),7.63-7.81(2 H,m),7.51(1 H,t,J=8.0Hz),7.06(1 H,d,J=7.6Hz),6.46(1 H,dd,J=16.7,10.3Hz),6.26(1 H,d,J=16.8Hz),5.78(1 H,d,J=10.6Hz),3.89(3 H,s),2.70(3 H,s)試樣亦含有約7%之相應碸。
在250mL圓底燒瓶中，在氮下，使用DMAc(2.0mL)處理2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯胺(GreenChemPharm,Bardonia,NY,70.0mg,0.316mmol)及N-(3-(6-甲氧基-5-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-7-酮 基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(30c；105mg,0.264mmol)並加熱至90℃保持24h。使用DCM將粗製反應混合物轉移至矽膠管柱上並在ISCO Combiflash RF上(40g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-20% MeOH之梯度(使用約15-18% MeOH洗脫))純化以提供富集產物。在Gilson上(Gemini Phenomenex；30×150mm，5u，存於0.1%TFA/水中之10-95% 0.1%TFA/CH3CN)再純化材料，在genevac中濃縮過夜且然後通過Silicycle SPE-R66030B-20X SiliaSep OT(5g/25mL碳酸鹽管柱，使用20% MeOH/DCM)，然後在真空下乾燥以在40℃下於真空烘箱中乾燥3h之後提供亮黃色固體之N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B30；8.8mg，0.016mmol，產率為6%)。m/z(ESI，+ve離子)556.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.35(1 H,s),8.80(1 H,s),7.97(1 H,s),7.90(1 H,d,J=8.0Hz),7.59(1 H,br.s.),7.52(1 H,t,J=7.9Hz),7.27(1 H,d,J=7.8Hz),7.01(1 H,d,J=7.8Hz),6.52(1 H,br.s.),6.43(1 H,dd,J=17.4,10.6Hz),6.25(1 H,d,J=17.0Hz),6.01(1 H,br.s.),5.76(1 H,d,J=10.2Hz),3.78(6 H,br.s.),3.02(4 H,br.s.),2.36-2.46(7 H,m),2.22(3 H,s)。
實例31：N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-氯苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
1-(4-(4-胺基-3-氯苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(31b)之製備。將存於DMSO(25mL,352mmol)中之2-氯-4-氟硝基苯(3.45g,19.68mmol)、1-乙醯基六氫吡嗪(2.52g,19.68mmol)之溶液在90℃下攪拌3h。在將反應混合物冷卻至室溫之後，添加水(25mL)且使用EtOAc(3×100mL)萃取化合物。使用水(3×50mL)、鹽水(10mL)洗滌有機萃取物並藉由Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮以得到黃色黏性油狀物形式之1-(4-(3-氯-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(31a，3.56g，產率為64%)。m/z(ESI，+ve離子)284.2。
在室溫下攪拌存於EtOH(15mL,258mmol)中之1-(4-(3-氯-4-硝基苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(31a,5.36g,18.89mmol)及HCl(7.56mL5N溶液，37.8mmol)之溶液並使用鋅粉塵(3.71g,56.7mmol)逐份處理。將混合物在50℃下攪拌1h。將混合物簡單冷卻且經由矽藻土床過濾懸浮液且使用MeOH洗滌矽藻土濾餅。在減壓下濃縮濾液且添加5N NaOH(10mL)，隨後添加CHCl3(100mL)且混合各相並分離。使用額外CHCl3(20mL)萃取水層。藉由Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在真空中濃縮以得到深色黏性油狀物形式之1-(4-(4-胺基-3-氯苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(31b，2.65g，10.44mmol，產率為55%)[m/z(ESI，+ve離子)254.1。
實例B31之製備。將存於2-丁醇(20mL,109mmol)中之1-(4-(4-胺基-3-氯苯基)六氫吡嗪-1-基)乙酮(31b,0.135g,0.53mmol)、N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.165g,0.484mmol)、TFA(0.036mL,0.48mmol)之溶液在110℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，濃縮粗製物並經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g)(使用存於CH2Cl2中之0-10% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)實施層析。藉由反相製備型HPLC(使用Phenomenex Luna管柱，5微米，C18(2)，100Å，150×30mm，存於CH3CN/H2O中之0.1% TFA，15%至100%梯度，16分鐘)純化產物以提供黃色固體形式之N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-氯苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B31，47mg，0.084mmol，產率為22%)。[m/z(ESI，+ve離子)558.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.31(s,1H),8.84(d,J=10.37Hz,2H),7.79(d,J=9.00Hz,1H),7.54(s,1H),7.46(t,J=8.02Hz,1H),7.28(d,J=9.00Hz,1H),6.87-7.00(m,2H),6.40-6.63(m,2H),6.23-6.37(m,2H),5.75-5.83(m,2H),3.57(q,J=5.48Hz,4H),2.98-3.15(m,4H),2.47(s,3H),2.04-2.09(m,2H)。
實例B32：(R)及(S)N-(3-(2-((4-(3,4-二甲基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽
將存於DMSO(29.2mL)中之5-氟-2-硝基苯甲醚(2.498g,14.60mmol,Oakwood Products)、K2CO3(6.05g,43.8mmol)、1,2-二甲基六氫吡嗪(2g,17.51mmol,FSSI)之混合物加熱至70℃保持約4h。使用DCM稀釋反應混合物並使用水及鹽水洗滌。旋轉蒸發有機層並在高真空下乾燥以提供橙色半固體形式之4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2-二甲基六氫吡嗪(32a,3.97g,14.96mmol)。材料在進一步純化之前即用於下一步驟中。m/z(ESI，+ve離子)266.1(M+H)+。
將存於EtOH(32.0mL)及水(6.40mL)中之4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2-二甲基六氫吡嗪(32a,3.87g,14.60mmol)、鐵(4.08g,73.0mmol)、NH4Cl(0.781g,14.60mmol)之混合物加熱至100℃保持2h。藉由矽藻土過濾反應混合物並使用大量水沖洗。旋轉蒸發濾液以去除揮發性溶劑且然後使用5N NaOH溶液鹼化至pH>9。然後使用CHCl3(2×)反萃取濾液。藉由Mg2SO4乾燥有機層且隨後旋轉蒸發。將油狀物殘餘物(32b)直接用於下一步驟中。m/z(ESI，+ve離子)236.1(M+H)+。
將存於EtOH(1.956mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.2g,0.587mmol)、HOAc(0.041mL,0.704mmol)、4-(3,4-二甲基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯胺(0.180g,0.763mmol)、TFA(0.050mL,0.646mmol)之混合物加熱至110℃過夜。反應混合物形成固體懸浮液，使用大量DMSO、MeOH及AcCN洗滌以提供(R)及(S)N-(3-(2-((4-(3,4-二甲基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽(實例B32，277.3mg，0.424mmol，產率為72%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 10.44(s,1H),10.16-10.33(m,1H),8.81(s,1H),8.17(s,1H),7.94(d,J=7.89Hz,1H),7.44-7.57(m,2H),7.30(d,J=8.92Hz,1H),6.98(d,J=7.60Hz,1H),6.60(br.s.,1H), 6.39-6.55(m,1H),6.37-6.37(m,1H),6.33(s,2H),6.06(br.s.,1H),5.77(d,J=10.82Hz,1H),3.64-3.87(m,5H),3.53(d,J=11.98Hz,1H),3.18(br.s.,1H),2.62-3.04(m,6H),2.46(s,3H),1.37(d,J=5.41Hz,3H)。m/z(ESI，+ve離子)540.2(M+H)+。
實例B33：N-(3-(2-((4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於EtOH(0.978mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.1g,0.293mmol)、HOAc(0.020ml,0.352mmol)、4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)苯胺(0.057g,0.293mmol,FSSI)、TFA(0.025mL,0.323mmol)之混合物加熱至110℃過夜。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。將澄清部分與AcCN共沸。使用MeOH再溶解殘餘物並使用Silicycle SiliaPrep碳酸鹽柱中和以提供N-(3-(2-((4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B33，16.1mg，0.032mmol，產率為11%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ 8.80(s,1H),7.95(d,J=8.62Hz,1H),7.47-7.70(m,3H),7.19(d,J=8.18Hz,2H),7.03(d,J=7.60Hz,1H),6.58(d,J=8.18Hz,2H),6.31-6.49(m,3H),5.77(dd,J=2.34,9.50Hz,1H),3.92(t,J=6.07Hz,2H),2.46-2.62(m,6H),2.33(s,6H),1.87-2.01(m,2H),1.25(d,J=6.28Hz,1H)。m/z(ESI，+ve離子)499.1(M+H)+。
實例B34：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(2-酮基吡咯啶-1-基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
1-(2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙基)吡咯啶-2-酮(34c)之製備。在N2下，將2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙醇(B17a,1.7g,7.51mmol)及DIPEA(Sigma-Aldrich；2.0mL,11.50mmol)溶於DCM(45mL)中。在冰浴中冷卻黃色溶液且逐滴添加存於DCM中之甲磺醯氯(Alfa-Aesar；0.6mL,7.75mmol)(5mL)之溶液。將反應液升溫至室溫。再過45min之後，添加額外DIPEA(2.0mL,11.50mmol)，隨後添加甲磺醯氯(0.6mL,7.75mmol)。將混合物攪拌5min，然後添加水(75mL)。混合各相並分離。使用MgSO4乾燥有機層並在減壓下蒸發至乾燥。使用二氧化矽層析(DCM至EtOAc梯度)純化以得到淺黃色固體形式之期望甲烷磺酸2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙酯(34a，1.75g，5.75mmol，產率為77%)。m/z(ESI，+ve離子)326.9(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.97(d,J=9.4Hz,1H),6.26(d,J=9.4Hz,1H),6.20(s,1H),4.40(t,J=5.8Hz,2H),3.95(s,3H),3.81(t,J=5.8Hz,2H),3.14(s,3H),3.00(s,3H)。
在氮下，將NaH(Sigma-Aldrich；存於礦物油中之60%分散液，0.17g，4.19mmol)懸浮於無水THF(10mL)中並在冰浴中冷卻。逐滴 添加2-吡咯啶酮(Sigma-Aldrich；0.50ml,6.58mmol)且將混合物攪拌15min。一次性添加甲烷磺酸2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙酯(34a,0.85g,2.79mmol)且將懸浮液在氮下攪拌60h。添加無水DMSO(1mL)且將混合物在60℃油浴中加熱90min。將反應液冷卻至室溫。添加水(75mL)及EtOAc(100mL)且混合各相並分離。使用CHCl3(100mL)萃取水層併合併兩個有機層，使用MgSO4乾燥並在減壓下蒸發至乾燥。使用二氧化矽層析(存於DCM中之0-5% MeOH梯度)純化以得到黃色固體形式之期望1-(2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙基)吡咯啶-2-酮(34b，0.74g,2.52mmol，產率為90%)。m/z(ESI，+ve離子)294.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.00(d,J=9.2Hz,1H),6.21-6.35(m,2H),3.99(s,3H),3.62(t,J=6.6Hz,2H),3.47(t,J=6.6Hz,2H),3.39(t,J=6.9Hz,2H),3.09(s,3H),2.30(t,J=8.0Hz,2H),1.95(quin,J=7.5Hz,2H)。
在氬下，將1-(2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙基)吡咯啶-2-酮(0.740g,2.52mmol)懸浮於無水EtOH(15mL)中。添加Pd/C(Sigma-Aldrich；10wt%,0.25g,0.23mmol)並將所得懸浮液在H2氣囊下攪拌過夜。經由矽藻土墊過濾混合物並使用DCM(50mL)洗滌固體。將濾液在減壓下蒸發至乾燥。初始濾液澄清且無色，但在去除溶劑期間其緩慢變為深綠色。在高真空下將其進一步乾燥以提供1-(2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙基)吡咯啶-2-酮(34c)，其未經進一步純化即使用。m/z(ESI，+ve離子)264.0(M+1)+
實例B34之製備。在氬下，將1-(2-((4-胺基-3-甲氧基苯基)(甲基)胺基)乙基)吡咯啶-2-酮(34c,0.64g,2.430mmol)、N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(0.828g,2.43mmol)、HOAc(Sigma-Aldrich；0.14mL,2.43mmol)及EtOH(5mL)合併於壓力器皿中並在120℃油浴中加熱。在105min之後，將反應液冷 卻至室溫。將反應混合物在減壓下蒸發至乾燥並將粗製物分配於水(50mL)、1N HCl(5mL)及EtOAc(75mL)之間。使用飽和NaHCO3水溶液(20mL)小心鹼化水溶液並使用DCM(3×40mL)萃取。使用MgSO4乾燥合併之DCM層並在減壓下蒸發至乾燥以得到黃色固體。使用第三丁基甲基醚(50mL)將其研磨並在50℃水浴中加熱懸浮液。在5min之後，經由經燒結玻璃料過濾混合物並在高真空下乾燥固體。將粗製懸浮於EtOH(10mL)中並加熱至輕度回流。冷卻混合物且過濾掉固體。將其在高真空下乾燥以得到橙色固體形式之N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(2-酮基吡咯啶-1-基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B34，0.59g，1.04mmol，產率為42%)。m/z(ESI，+ve離子)568.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.55(br.s.,1H),8.60(s,1H),8.19(br.s.,1H),7.71(br.s.,1H),7.53(d,J=7.0Hz,1H),7.35-7.47(m,2H),6.97(d,J=7.6Hz,1H),6.10-6.42(m,4H),6.02(d,J=8.2Hz,1H),5.61(dd,J=9.6,1.8Hz,1H),3.82(s,3H),3.24-3.62(m,6H),2.91(s,3H),2.41(d,J=8.2Hz,5H),1.92-2.10(m,2H)。
實例B35：(S)-N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基吡咯啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽。
將存於THF(19.77mL)中之三苯基磷(3.37g,12.85mmol)、3-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.881ml,9.89mmol,Ark Pharm)、(r)-(-)-1-甲基-3-吡咯啶醇(1g,9.89mmol,Alfa Aesar)之溶液預冷卻至0℃，然後添加偶氮二甲酸二異丙基酯(2.53ml,12.85mmol)。將反應混合物逐漸升溫至室溫並攪拌過夜。將混合物直接載於矽膠上。藉由Biotage(0-10% MeOH/DCM)純化以產生(S)-3-甲基-1-(1-甲基吡咯啶-3-基)-4-硝基-1H-吡唑(35a，0.96g，4.57mmol，產率為46%)。m/z(ESI，+ve離子)211.1(M+H)+。
在氮下，將存於EtOH(10.01ml)及水(2.003mL)中之(S)-3-甲基-1-(1-甲基吡咯啶-3-基)-4-硝基-1H-吡唑(0.96g,4.57mmol)、鐵(1.275g,22.83mmol)、NH4Cl(0.244g,4.57mmol)之混合物加熱至100℃保持約2h。將反應混合物冷卻至室溫並藉由矽藻土濾餅過濾。旋轉蒸發濾液以去除儘可能多之殘餘EtOH。然後使用5M NaOH溶液將溶液鹼化至pH>9。然後反萃取水溶液以得到(S)-3-甲基-1-(1-甲基吡咯啶-3-基)-1H-吡唑-4-胺(35b，541mg，3.00mmol，產率為65%)，其在旋轉蒸發乾燥之後發生固化。m/z(ESI，+ve離子)181.1(M+H)+。
將存於EtOH(2.080mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.213g,0.624mmol)、HOAc(0.043mL,0.749mmol)、(S)-3-(1-二甲基六氫吡嗪-1-基)-4-甲氧基苯胺(0.180g,0.999mmol)、TFA(0.053mL,0.687mmol)之混合物加熱至110℃過夜。藉由Gilson HPLC(Gemini-NX，10u，C18，100×50mm；0.1% TFA/水，0.1% TFA/AcCN)直接純化反應混合物。將該等部分與AcCN共沸。使用MeOH再溶解殘餘物並使用製備板TLC(2% MeOH/DCM)第二次純化以提供(S)-N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基吡咯啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽(實例B35，38.6mg，0.064mmol，產 率為10%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ 8.82(s,1H),8.15(br.s.,1H),8.07-8.27(m,1H),7.64(t,J=7.67Hz,1H),7.39(d,J=19.15Hz,1H),7.08(br.s.,1H),6.88(d,J=5.12Hz,1H),6.24-6.51(m,3H),5.80(d,J=8.62Hz,1H),4.59-4.78(m,2H),3.33-4.03(m,4H),3.05(br.s.,3H),2.52(s,4H),2.19(s,4H)。m/z(ESI，+ve離子)485.1(M+H)+。
實例B36：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
在氮下，將甲烷磺酸2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)(甲基)胺基)乙酯(34a,0.775g,2.55mmol)添加至存於無水THF(10mL)中之吡咯啶(Sigma-Aldrich；2.0ml,23.90mmol)之混合物中。將反應液在60℃油浴中加熱2½h。在減壓下濃縮反應混合物且將粗製物分配於水(75mL)與DCM(150mL)之間。使用MgSO4乾燥有機層，然後在減壓下蒸發至乾燥。在高真空下乾燥粗製物以得到黃色油狀物形式之3-甲氧基-N-甲基-4-硝基-N-(2-(吡咯啶-1-基)乙基)苯胺(36a，0.694g,2.48mmol，產率為98%)。m/z(ESI，+ve離子)280.1(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.00(d,J=9.4Hz,1H),6.25(d,J=9.5Hz,1H),6.12(s,1H),3.94(s,3H),3.57(t,J=7.5Hz,2H),3.09(s,3H),2.69(t,J=7.5Hz,2H),2.55-2.65(m,4H),1.75-1.90(m,4H)。
在氬下，將3-甲氧基-N-甲基-4-硝基-N-(2-(吡咯啶-1-基)乙基)苯 胺(36a,0.694g,2.48mmol)懸浮於無水EtOH(15mL)中。添加Pd/C(10wt%,Sigma-Aldrich；0.25g,0.23mmol)並在H2氣囊下攪拌所得懸浮液。在2h之後，經由矽藻土墊過濾懸浮液並使用DCM(30mL)洗滌固體。將濾液在減壓下蒸發至乾燥以得到淺黃色油狀物。將其在高真空下進一步乾燥30min。將粗製物溶於EtOAc(20mL)及MeOH(5mL)中，並使用存於二乙醚中之1N HCl(Sigma-Aldrich；2.5mL)處理。將混合物在減壓下蒸發至乾燥且含有36b之粗製固體未經進一步純化即使用。m/z(ESI，+ve離子)250.1(M+1)+。
在氬下，將3-甲氧基-N1-甲基-N1-(2-(吡咯啶-1-基)乙基)苯-1,4-二胺鹽酸鹽(36b,0.70g,2.45mmol)、N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(0.835g,2.45mmol)、AcOH(Sigma-Aldrich；0.14mL,2.45mmol)及EtOH(5mL)合併於壓力器皿中並在120℃油浴中加熱。在75min之後，將反應液冷卻至室溫。添加水(50mL)及EtOAc(75mL)並攪拌混合物。分離各相並棄除有機物。使用1N NaOH鹼化水相並使用DCM(3×30mL)萃取。使用MgSO4乾燥合併之DCM層並在減壓下蒸發至乾燥。將固體懸浮於EtOAc(75mL)中並在60℃油浴中加熱10min。將懸浮液冷卻至室溫且經由經燒結玻璃料過濾。將固體懸浮於EtOH(10mL)中並加熱至輕微回流。將混合物冷卻至室溫過夜。經由經燒結玻璃料過濾懸浮液以得到黃色固體形式之粗製產物。使用矽膠層析(存於DCM中之2-10% MeOH梯度)純化以得到N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(實例B36)(297mg，0.54mmol，產率為22%)。m/z(ESI，+ve離子)554.0(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.62(s,1H),7.90(br.s.,1H),7.69(br.s.,1H),7.48(t,J=8.2Hz,1H),7.39(br.s.,1H),6.99(d,J=8.5Hz,1H),6.29-6.47(m,3H),6.19(br.s.,1H),5.92 (br.s.,1H),5.68(d,J=10.5Hz,1H),3.83(s,3H),3.44(t,J=7.5Hz,2H),2.83-3.03(m,5H),2.63-2.74(m.,6H),2.47(s,3H),2.10-2.20(m,4H)。
實例B37：N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
將存於DMSO(25mL,352mmol)中之5-氟-2-硝基甲苯(1.93mL,15.86mmol)、N,N,N'-三甲基乙二胺(2.01mL,15.86mmol)及DIEA(2.76mL,15.86mmol)之溶液在90℃下攪拌3h。在冷卻至室溫之後，添加水(25mL)且使用EtOAc(3×100mL)萃取化合物。使用水(3×50mL)、鹽水洗滌有機層並藉由Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮以得到黃色黏性油狀物形式之N1,N1,N2-三甲基-N2-(3-甲基-4-硝基苯基)乙烷-1,2-二胺(37a，3.4g，14.33mmol，產率為90%)。m/z(ESI，+ve離子)238.2。
在室溫下攪拌存於EtOH(25mL,429mmol)中之N1,N1,N2-三甲基-N2-(3-甲基-4-硝基苯基)乙烷-1,2-二胺(37a,3.58g,15.09mmol)、HCl(12.07mL 5N溶液，60.3mmol)之溶液並使用鋅粉(4.93g,75mmol)逐份處理。將混合物在50℃下攪拌1h。將混合物簡單冷卻且經由矽藻土床過濾懸浮液並使用MeOH洗滌矽藻土濾餅。在減壓下濃縮濾液且添加5N NaOH(10mL)，隨後添加CHCl3(100mL)且混合各相 並分離。使用額外CHCl3(20mL)萃取水層。藉由Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在真空中濃縮以得到深色黏性油狀物形式之N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1,3-二甲基苯-1,4-二胺(37b，2.35g，11.34mmol，產率為75%)。m/z(ESI，+ve離子)208.2。
將存於2-丁醇(25mL,273mmol)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(110mg,0.32mmol)、N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1,3-二甲基苯-1,4-二胺(37b,67mg,0.32mmol)、TFA(0.024mL,0.32mmol)之懸浮液在110℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，濃縮粗製產物並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(40g)(使用存於DCM中之0-10% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫)純化。藉由反相製備型HPLC(使用Phenomenex Luna管柱，5微米，C18(2)，100Å，150×30mm，存於AcCN/H2O中之0.1% TFA，10%至100%梯度，16min)再純化粗製材料以提供黃色固體形式之N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(80mg，0.156mmol，產率為48%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.29(br.s.,1H),8.77(d,J=9.00Hz,2H),7.74(d,J=7.82Hz,1H),7.56(br.s.,1H),7.39-7.46(m,1H),7.01-7.10(m,1H),6.94(br.s.,1H),6.44(d,J=10.17Hz,2H),6.20-6.34(m,3H),5.78(d,J=9.78Hz,1H),3.33(br.s.,3H),2.83(br.s.,3H),2.45(br.s.,3H),2.35(br.s.,2H),2.20(s,6H),2.08(br.s.,3H)。m/z(ESI，+ve離子)517.3。
實例B38：(E)-N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺。
在20-mL玻璃微波管中稱取N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-3-甲氧基-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(269mg,1.037mmol)及(E)-N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(105)(320mg,0.90mmol)，隨後使用氬吹掃並添加EtOH(1.8mL)及冰AcOH(56.8μL,0.99mmol)。密封反應混合物並在加熱塊中加熱至125℃保持90min。將反應混合物濃縮至乾燥且藉由層析在ISCO Combiflash RF上(40g Thomson SingleStep管柱，使用存於DCM中之0-20% 2M NH3/MeOH之梯度)純化粗製殘餘物以提供亮黃色固體形式之(E)-N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(256mg，0.474mmol，產率為52%)。m/z(ESI，+ve離子)542.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.13(1 H,s),8.79(1 H,s),8.08(1 H,br.s.),7.83(1 H,d,J=7.4Hz),7.56(1 H,t,J=1.8Hz),7.47(1 H,t,J=8.0Hz),7.23(1 H,d,J=9.0Hz),6.95(1 H,dd,J=7.8,1.0Hz),6.74-6.87(1 H,m),6.22-6.35(2 H,m),6.13(1 H,dd,J=15.3,1.8Hz),5.67-5.96(1 H,m),3.78(3 H,s),2.85(3 H,s),2.46(3 H,s),2.34(2 H,t,J=6.8Hz),2.21(6 H,s),1.87(3 H,dd,J=7.0,1.4Hz)。
實例B39：N-(3-(2-((2-(二氟甲氧基)-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基苯(39a)之製備。向存於DMF(40mL)中之5-氟-2-硝基苯酚(Sigma-Aldrich,3.1g,19.73mmol)及K2CO3(4.23g,30.6mmol)之經攪拌亮黃色懸浮液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸甲酯(Fluka,3.26mL,30.6mmol)且將混合物在100℃下攪拌2h。將反應混合物冷卻至室溫且使用H2O(50mL)小心稀釋並使用EtOAc(3×70mL)萃取。使用鹽水洗滌有機萃取物並藉由Na2SO4乾燥。過濾溶液並在真空中濃縮以得到褐色油狀物形式之殘餘物。將粗製材料吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(80g)(使用存於己烷中之0-20% EtOAc之梯度洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之標題化合物(39a，3.01g，產率為74%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.03(dd,J=5.67,9.00Hz,1H),7.06-7.21(m,2H),6.64(s,1H)。
3-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(39c)之製備。向存於DMSO(20mL)中之2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基苯(39a,3.01g,14.53mmol)、DIPEA(3.30mL,18.89mmol)之溶液中添加N,N,N"-三甲基乙二胺(2.21mL,17.44mmol)且將黃色溶液在80℃下攪拌4.5h並冷卻至室溫。使用NH4Cl飽和水溶液(50mL)稀釋反應混合物並使用EtOAc(3×70mL)萃取。使用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，並藉由Na2SO4乾燥。過濾溶液並在真空中濃縮以得到黃色油狀物形式之N 1-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)-N 1,N 2,N 2-三甲基乙烷- 1,2-二胺(39b)，其在真空下變為深色黃色固體。MS(ESI正離子)：C12H17F2N3O3之m/z計算值：289；實驗值：290(M+H)。此材料未經進一步純化即直接用於下一反應中。向存於EtOH(8.00mL)中之N 1-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)-N 1,N 2,N 2-三甲基乙烷-1,2-二胺(2.81g,9.71mmol)之經攪拌黃色溶液中添加濕10% Pd/C(1.03g)且將懸浮液在1 atm H2下攪拌3h。使混合物通過短矽藻土路徑。使用MeOH(3×10mL)洗滌濾餅。濃縮合併之有機相以得到粗製深紫色殘餘物。將其再溶於乙醚(10mL)中且逐滴添加存於1,4-二噁烷中之4N HCl(2.42mL,9.71mmol)。濃縮淡紫色-褐色混合物並在真空下乾燥以得到淡紫色固體形式之標題化合物(39c，2.66g，產率為93%)。MS(ESI正離子)：C12H19F2N3O之m/z計算值：259；實驗值：260(M+H)。此材料未經進一步純化即直接用於下一反應中。
N-(3-(2-((2-(二氟甲氧基)-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(B39)之製備。向存於EtOH(1.50mL)中之N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺(100)(189mg,0.55mmol)之經攪拌懸浮液中添加3-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N1-甲基苯-1,4-二胺鹽酸鹽(39c,180mg,0.61mmol)且然後添加AcOH(0.048mL,0.83mmol)。將混合物在125℃下加熱2h並冷卻至室溫。濃縮混合物且使用NaHCO3飽和水溶液洗滌殘餘物，且收集所得褐色沈澱物並在減壓下乾燥。將粗製固體材料吸收於矽膠上並藉由層析經由Redi-Sep預堆積矽膠管柱(24g)(使用存於CH2Cl2中之0-10% 2M NH3．MeOH之梯度洗脫，隨後使用EtOAc洗滌)純化以提供亮黃色固體形式之實例39(61mg，產率為20%)。MS(ESI正離子)：C29H31F2N7O3之m/z計算值：563；實驗值：564(M+H)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 10.31(s,1H),8.79(br.,1H),8.59(br.,1H),7.81(d,J=7.82 Hz,1H),7.54(br.,1H),7.45(t,J=8.02Hz,1H),7.21(br s,1H),6.86-7.13(m,2H),6.16-6.52(m,5H),5.77(d,J=9.98Hz,1H),3.37(br.,2H),2.85(s,3H),2.46(br.,5H),2.25(br.,6H)。
實例B40：(E)-N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺。
將存於3mL EtOH中之(E)-N-(3-(2-氯-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(105)(190mg,0.53mmol)、4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯胺鹽酸鹽(152mg,0.61mmol)及AcOH(31μL,0.53mmol)之異質混合物在120℃下於微波中加熱75min。使用5mL 1N NaOH處理。過濾固體並使用2×1mL水沖洗。棄除濾液。使用2×2mL乙醚沖洗固體，收集並在矽膠管柱上(存於DCM中之5% MeOH，隨後存於DCM中之5-10% 2M NH3/MeOH)純化以提供黃色結晶固體形式之(E)-N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丁-2-烯醯胺(實例B40，175mg，0.33mmol，產率為61%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 10.14(1 H,s),8.82(1 H,s),8.16(1 H,br.),7.81(1 H,d,J=8.0Hz),7.59(1 H,br.),7.49(1 H,t,J=7.9Hz),7.33(1 H,d,J=8.6Hz),6.96(1 H,d,J=7.6Hz),6.80(1 H,dd,J=14.9,7.6Hz),6.54(1 H,),6.34(1 H,s),6.13(1 H,d,J=15.5Hz),6.06(1 H,br.),3.96(2 H,m),3.79(3 H,s),2.60(2 H,m),2.47(3 H,s),2.23(6 H,s),1.86(3 H,d,J=6.7Hz)。m/z(ESI，+ve離子)529.3(M+H)+。
儘管式I-IVa之化合物之藥理學性質隨結構變化而有所變化，但一般而言，式I-IVa之化合物所擁有之活性可顯示於活體內。本發明化合物之藥理學性質可藉由諸多藥理學活體外分析來證實。使用本發明化合物及其鹽實施下文所例示之藥理學分析。
已令人吃驚地發現，所提供化合物選擇性抑制EGFR活化及缺失突變中之每一者。另外，所提供化合物對於WT EGFR及相關劑量限制毒性有節製。此與其他已知EGFR抑制劑(例如BIBW2992及HKI-272)相反，該等其他已知EGFR抑制劑僅略微有效地抵抗突變體但對於WT EGFR保留活性且由此受限於與WT EGFR抑制有關之毒性。
生物評估 非小細胞肺癌[NSCLC]細胞系中之pEGFR之檢測。 NSCLC細胞系中之pEGFR之檢測。
使用MesoscaleTM多重分析(MSD)監測化合物對於野生型、T790M突變體及Exon19缺失(△746-750)EGFR之磷酸化之效應，其中使用總PRAS40含量測定磷酸化EGFR蛋白之含量以進行正規化。將H1975(T790M/L858R)、HCC827(△746-750)及A431(野生型)細胞接種於6孔組織培養板中，血清饑餓過夜並使用10個濃度化合物自10μM開始(5倍連續稀釋液)處理60min。使用100ng/mL EGF激發A431細胞15min，然後收集。根據製造商說明書將細胞裂解且處理裂解物以用於MSD分析。結果示於表A1中。
NSCLC細胞系中之pEGFR之檢測。
使用MesoscaleTM多重分析(MSD)監測化合物對於野生型、T790M突變體及Exon19缺失(△746-750)EGFR之磷酸化之效應，其中使用總PRAS40含量測定磷酸化EGFR蛋白之含量作為對照。將H1975(T790M/L858R)、HCC827(△746-750)及A549(野生型EGFR)NSCLC細胞平鋪於6孔組織培養板上，血清饑餓過夜並使用9種濃度之化合物自2μM開始(5倍稀釋液)處理60min。使用100ng/ml EGF激發野生型A549細胞15min，然後收集。根據製造商說明書將細胞裂解並處理裂解物以用於在MSD多重板讀數儀中分析。結果示於表1中。
NSCLC細胞系增殖之抑制。
以5,000個細胞/孔(H1975)及4,000個細胞/孔(HCC827及A549)在95μL細胞生長培養基中將NSCLC細胞系H1975(T790M/L858R)、HCC827(△746-750)及A549(野生型)接種於96孔組織培養板(Corning,Lowell,MA)中過夜。將化合物(始於10mM濃度並在DMSO中稀釋8倍(4倍稀釋液))在RPMI中稀釋50倍，然後將5μL添加至細胞中。在72h之後，使用Cell Titer Glow(Promega,Madison,WI)及SpectraMax M5板讀數儀(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)根據製造商說明書量化活細胞信號。測試孔及對照孔中之最終DMSO濃度為0.1%。並未觀察到對於細胞生長之DSMO效應。結果示於表1中。
NSCLC細胞系增殖之抑制
以5,000個細胞/孔(H1975及HCC827)及7,000個細胞/孔(A431)於95μL細胞生長培養基中將NSCLC細胞系H1975(T790M/L858R)、HCC827(△746-750)及上皮癌細胞系A431(野生型)接種於96孔組織培 養板(Corning,Lowell,MA)中過夜。將化合物(始於10mM濃度並在DMSO中稀釋8倍(4倍連續稀釋液))在RPMI中稀釋50倍，然後將5μL添加至細胞中。在72h之後，使用CellTiter-Glo(Promega,Madison,WI)及SpectraMax M5板讀數儀(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)根據製造商說明書量化活細胞信號。測試孔及對照孔中之最終DMSO濃度為0.1%。結果示於表B2中。
NSCLC細胞系之腫瘤生長抑制。 H1975腫瘤異種移植物
向雌性無胸腺裸小鼠中植入存於33%基質膠中之5×106個H1975腫瘤細胞(經皮下，0.2mL注射體積)。在第7天，量測腫瘤之基線值且將小鼠隨機化至具有類似平均腫瘤體積之新組中(n=10/組)。自第7天 開始以3mg/kg(QD)、10mg/kg(QD)及30mg/kg(QD)經口投用實例B1。每週兩次量測腫瘤體積直至調配物對照組中之腫瘤在第20天達到1600mm3為止。第20天之腫瘤生長抑制為20%(3mg/kg,p=0.093)、48%(10mg/kg,p<0.0001)及82%(30mg/kg,p<0.0001)。
HCC-827腫瘤異種移植物
向雌性SHO小鼠中植入存於33%基質膠中之5×106個HCC-827腫瘤細胞(經皮下，0.2mL注射體積)。在第13天，量測腫瘤之基線值且將小鼠隨機化至具有類似平均腫瘤體積之新組中(n=10/組)。自第13天開始以10mg/kg(QD)及30mg/kg(QD)以及30mg/kg(BID)經口投用實例B1。每週兩次量測腫瘤體積直至調配物對照組中之腫瘤在第38天達到400mm3為止。第38天之腫瘤生長抑制為48%(10mg/kg QD,p=0.0004)、121%(30mg/kg QD,p<0.0001)及137%(30mg/kg BID,p<0.0001)。
H1975腫瘤異種移植物
向雌性無胸腺裸小鼠中植入存於33%基質膠中之5×106個H1975腫瘤細胞(經皮下，0.2mL注射體積)。在第7天，量測腫瘤之基線值且將小鼠隨機化至具有類似平均腫瘤體積之新組中(n=10/組)。自第7天開始以3mg/kg、10mg/kg及30mg/kg(QD)經口投用實例B14。每週兩次量測腫瘤體積直至調配物對照組中之腫瘤在第17天達到1400mm3為止。第17天之腫瘤生長抑制為33%(3mg/kg,p=0.064)、75%(10mg/kg,p<0.0001)及89%(30mg/kg,p<0.0001)。
在每一研究結束時藉由Anova重複量測隨後藉由鄧奈特事後分析(Dunnett’s post-hoc analysis)(JMP軟體)來評價治療組與對照組之間之統計學顯著性。
調配物
亦涵蓋於本發明中者係一類醫藥組合物，其包括式I-IVa之活性 化合物以及一或多種無毒、醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑(本文中統稱為「載劑」材料)及(若期望)其他活性成份。本發明之活性化合物可藉由任何適宜途徑投與，較佳地以適於此一途徑之醫藥組合物形式且以對期望治療有效之劑量投與。本發明之化合物及組合物可(例如)經口、經黏膜、經局部、經直腸、經肺(例如藉由吸入噴霧劑)或非經腸(包含血管內、靜脈內、腹膜腔內、皮下、肌內、滑膜腔內及輸注技術)以含有習用醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑之劑量單位調配物投與。
本發明之醫藥活性化合物可根據習用製藥方法處理以產生投與患者(包含人類及其他哺乳動物)之醫學藥劑。
對於經口投與而言，醫藥組合物可呈(例如)錠劑、膠囊、懸浮液或液體形式。醫藥組合物較佳地製成含有特定量活性成份之劑量單元形式。該等劑量單元之實例係錠劑或膠囊。舉例而言，該等單元可含有約1mg至2000mg、較佳地約1mg至500mg、更佳地約5mg至150mg之量之活性成份。人類或其他哺乳動物之適宜日劑量可端視患者病狀及其他因素有所變化，但再次可使用常規方法確定。
所投與化合物之量及利用本發明之化合物及/或組合物治療疾病狀況之劑量方案取決於各種因素，其包含個體之年齡、體重、性別及醫學狀況、疾病類型、疾病嚴重程度、投與之途徑及頻率及所用特定化合物。因此，該劑量方案可在很大範圍內改變，但可使用標準方法常規地確定。約0.01mg/kg體重至500mg/kg體重、較佳地介於約0.5mg/kg體重與約50mg/kg體重之間及最佳地介於約0.1mg/kg體重至20mg/kg體重之間之日劑量可適當。日劑量可以每天1至4次投藥來投與。
出於治療目的，本發明之活性化合物通常與一或多種適於所指示投與途徑之佐劑組合。若經口投與，則化合物可與乳糖、蔗糖、澱 粉粉末、鏈烷酸之纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、明膠、阿拉伯膠(acacia gum)、海藻酸鈉、聚乙烯基吡咯啶酮及/或聚乙烯醇混合，且然後製錠或囊封以方便投與。該等膠囊或錠劑可含有受控釋放調配物，其可以活性化合物存於羥丙基甲基纖維素中之分散液形式提供。
適於局部投與之調配物包含適於滲透穿過皮膚之液體或半液體製劑(例如擦劑、洗劑、軟膏、乳霜或膏糊)及適於投與眼睛、耳朵或鼻子之滴劑。本發明化合物之活性成份之適宜局部劑量為0.1mg至150mg，每天投與1至4次、較佳地1或2次。對於局部投與而言，該活性成份可佔調配物之0.001%至10% w/w(例如1重量%至2重量%)，但其可佔調配物之多達10% w/w，但較佳地不超過5% w/w及更佳地0.1%至1%。
在以軟膏形式調配時，該等活性成份可與石蠟或水-可混溶軟膏基質一起採用。另一選擇為，可使用水包油乳霜基質將該等活性成份調配成乳霜。若期望，則乳霜基質之水相可包含(例如)至少30% w/w之多元醇，例如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油、聚乙二醇及其混合物。局部調配物可期望包含增強該活性成份穿過皮膚或其他受感染區域之吸收或滲透之化合物。該等真皮滲透增強劑之實例包含二甲基亞碸及相關類似物。
本發明化合物亦可藉由經皮裝置投與。較佳地，經皮投與可使用儲層及多孔膜型貼片或固體基質類貼片來達成。在任一情形下，活性劑係自儲層或微膠囊穿過膜進入活性劑可滲透黏著劑來持續遞送，黏著劑係與接受者之皮膚或黏膜接觸。若活性劑經由皮膚吸收，則將受控及預定流量之活性劑投與接受者。在微膠囊之情形下，微膠囊劑亦可用作膜。
本發明乳液之油性相可自已知成份以已知方式構成。儘管該相 可僅包括乳化劑，但其可包括至少一種乳化劑與脂肪或油或者與脂肪及油二者之混合物。較佳地，包含親水性乳化劑與用作穩定劑之親脂性乳化劑。亦較佳者包含油與脂肪二者。同時，乳化劑在有或沒有穩定劑之情況下形成所謂的乳化蠟，且該蠟與油及脂肪一起形成所謂的乳化軟膏基質，其形成乳霜調配物之油性分散相。適用於本發明調配物中之乳化劑及乳液穩定劑包含Tween 60、Span 80、鯨蠟硬脂醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、二硬酯酸甘油酯，該等物質可單獨或與蠟或業內熟知之其他材料一起。
由於活性化合物在大多數可能用於醫藥乳液調配物之油中之溶解度極低，故用於該調配物之適宜油或脂肪之選擇應基於達成之期望化妝性質。因此，該乳霜較佳地應為非-油脂、未-著色且可洗產品，同時其具有適宜稠度以避免自管或其他容器洩漏。可使用直鏈或具支鏈、單-或二元烷基酯，例如二-異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙基酯、油酸癸基酯、棕櫚酸異丙基酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己基酯或若干支鏈酯之摻合物。端視所需性質，該等物質可單獨或組合使用。另一選擇為，可使用諸如白軟石蠟及/或液體石蠟或其他礦物油等高熔點脂質。
適用於局部投與眼睛之調配物亦包含滴眼劑，其中將活性成份溶解或懸浮液於適宜載劑中，尤其該等活性成份之水性溶劑中。該等活性成份較佳以0.5%至20%、有利地0.5%至10%及特定而言約1.5% w/w之濃度存在於該等調配物中。
用於非經腸投與之調配物可呈水性或非水性等滲無菌注射溶液或懸浮液形式。該等溶液及懸浮液可由無菌粉末或粒子使用針對用於經口投與調配物中所提及之載劑或稀釋劑中之一或多者或藉由使用其他適宜分散劑或潤濕劑及懸浮劑製備。該等化合物可溶於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯 化鈉、黃蓍膠及/或各種緩衝劑中。其他佐劑及投與模式亦適當且在醫藥技術中已廣泛得知。活性成份亦可作為組合物與適宜載劑(其包含鹽水、右旋糖或水)或與環糊精(亦即Captisol)、共溶劑增溶劑(亦即丙二醇)或膠束增溶劑(亦即Tween 80)一起藉由注射投與。
無菌可注射製劑亦可為存於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，例如作為溶於1,3-丁二醇中之溶液。可用之可接受媒劑及溶劑尤其係水、林格氏溶液(Ringer’s solution)及等滲氯化鈉溶液。此外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。就此目的而言，可採用任一溫和不揮發性油，包含合成甘油單酯或甘油二酯。此外，在可注射製劑中可使用諸如油酸等脂肪酸。
對於肺部投與而言，醫藥組合物可以氣溶膠形式或利用包含乾粉末氣溶膠之吸入器投與。
用於直腸投與藥物之栓劑可藉由將藥物與適宜無刺激賦形劑(例如可可油及聚乙二醇)混合來製備，該等賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體且由此在直腸中熔化並釋放藥物。
醫藥組合物可經受習用醫藥操作(例如殺菌)及/或可含有習用佐劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、緩衝劑等。錠劑及丸劑可另外經製備帶有腸溶包衣。該等組合物亦可包括佐劑，例如潤濕劑、甜味劑、矯味劑及香味劑。
本發明之醫藥組合物包括本文所闡述式之化合物或其醫藥上可接受之鹽；選自以下之其他藥劑：激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等)、免疫阻抑劑、抗癌劑、抗病毒劑、消炎劑、殺真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖化合物；及任何醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。本發明之替代組合物包括本文所闡述式之化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。該等組合物可視情況包括一或多種其他治療劑，其包含(例如)激酶抑制劑(小分子、多肽、抗 體等)、免疫阻抑劑、抗癌劑、抗病毒劑、消炎劑、殺真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖化合物。
術語「醫藥上可接受之載劑或佐劑」係指如下載劑或佐劑：其可與本發明化合物一起投與患者，且並不破壞其藥理學活性且在以阻抑遞送治療量之化合物之劑量投與時無毒。
可用於本發明之醫藥組合物中之醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑包含但不限於：離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物遞送系統(SEDDS)(例如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、用於醫藥劑型之表面活性劑(例如Tween或其他類似聚合遞送基質)、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油脂混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠質二氧化矽、三矽酸鎂)、聚乙烯基吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。環糊精(例如α-、β-及γ-環糊精)或化學改質衍生物(例如羥烷基環糊精，包含2-及3-羥丙基-環糊精)或其他溶解衍生物亦可有利地用於增強本文所闡述式之化合物之遞送。
本發明之醫藥組合物可以任何口服可接受劑型經口投與，該等劑型包含但不限於膠囊、錠劑、乳液及水性懸浮液、分散液及溶液。在供口服用於之錠劑情形下，通常使用之載劑包含乳糖及玉米澱粉。通常亦添加潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式經口投與而言，有用稀釋劑包含乳糖及亁燥之玉米澱粉。在經口投與水性懸浮液及/或乳液時，可將活性成份懸浮或溶解於油性相中並與乳化劑及/或懸浮劑組合。若需要，可添加某些甜味劑及/或矯味劑及/或著色劑。
本發明之醫藥組合物可包括利用脂質體或微囊封技術之調配物。業內已知該等技術。
本發明之醫藥組合物可藉由經鼻氣溶膠或吸入劑投與。該等組合物係根據醫藥調配領域熟知之技術來製得，且可將其製成鹽水溶液，其採用苯甲醇或其他適宜防腐劑、吸收促進劑(以增強生物利用度)、碳氟化合物及/或業內已知之其他增溶劑或分散劑。
以上內容僅用於闡釋本發明且並非意欲將本發明限制於所揭示之化合物。熟習此項技術者可例行做出改變及變化，該等改變及變化意欲屬於定義於隨附申請專利範圍中之本發明之範圍及性質內。
自以上說明，熟習此項技術者可容易地確定本發明之基本特性，且在不背離本發明之精神及範圍之情況下可對本發明作出各種變化及修改以使其適用於各種用途及條件中。
所有提及之參考文獻、專利、申請案及公開案之全部內容皆如同本文中所寫一樣以引用方式併入本文中。

Claims (50)

  1. 一種式I化合物， 其中R1係 其中環A係5員雜芳基；其中環T係苯基或6員雜芳基；其中R2係H、F、Cl或甲基；其中R3係H、C1-C6烷基或C1-C6二烷基胺基-C1-C6烷基；其中R5係未經取代或經取代之5至6員飽和雜環基或經取代之4至7員雜環基胺基；其中R6係H、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基或鹵基；且其中X係CH或N；前提係R5不為4-嗎啉基；及其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中X係CH；及其醫藥上可接受之鹽。
  3. 如請求項1之化合物，其中R3係H；及其醫藥上可接受之鹽。
  4. 如請求項1之化合物，其中R2係H或甲基；及其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項1之化合物，其中R2係甲基；及其醫藥上可接受之鹽。
  6. 如請求項1之化合物，其中R1係經取代之苯基；及其醫藥上可接受之鹽。
  7. 如請求項1之化合物，其中R1係經取代之吡啶基或經取代之嘧啶 基；及其醫藥上可接受之鹽。
  8. 如請求項1之化合物，其中R5係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基、視情況經取代之二氮雜環庚烷基或視情況經取代之氮雜環丁基胺基；其中該等六氫吡嗪基、六氫吡啶基、吡咯啶基、二氮雜環庚烷基及氮雜環丁基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基；及其醫藥上可接受之鹽。
  9. 如請求項1之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其中R1係
  10. 如請求項1之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其中R5係1-氟乙基氮雜環丁-3-基胺基。
  11. 如請求項1之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其中R6係H、甲氧基或氯。
  12. 如請求項1之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其選自N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(6-乙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-甲氧基-6-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)-3-吡啶基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-4-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪 基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(4-氟-3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；2-氯-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)乙醯胺；3-(二甲基胺基)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙醯胺；N-(3-(2-((4-((1-乙醯基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-氯-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((1-(2-氟乙基)-3-氮雜環丁基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((4-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(六氫吡嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基六氫吡啶-4-基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；及N-(3-(2-((4-(4-乙醯基六氫吡嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺。
  13. 一種式II化合物， 其中R2係H或甲基；其中Ra係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基、視情況經取代之二氮雜環庚烷基或視情況經取代之氮雜環丁基胺基；且其中Rb係H或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  14. 如請求項13之化合物，其中R2係甲基；及其醫藥上可接受之鹽。
  15. 如請求項13之化合物，其中Rb位於苯基環之3位處；及其醫藥上可接受之鹽。
  16. 如請求項13之化合物，其中Ra係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、視情況經取代之吡咯啶基或視情況經取代之二氮雜環庚烷基；其中該等六氫吡嗪基、六氫吡啶基、吡咯啶基及二氮雜環庚烷基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基；及其醫藥上可接受之鹽。
  17. 如請求項13之化合物，其中Ra係氮雜環丁基胺基；其中該氮雜環丁基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-3鹵代烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基胺基、視情況經取代之5至6員雜環基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺醯基、胺基磺醯基、C1-4羥基烷基羰基、C1-4烷基胺基羰基及C1-4鹵代烷基羰基；及其醫 藥上可接受之鹽。
  18. 一種式Ia化合物， 其中R係 R10係未經取代或經取代之苯基或未經取代或經取代之4至6員雜環基；R12係H或甲基；R14係H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或苯基-C1-C6烷基；且R17係H或甲基；及其醫藥上可接受之鹽；前提係在R係3-苄基丙烯醯胺，R12係甲基且R14係H時，R10不為3-甲氧基-4-甲基六氫吡嗪-1-基-苯基或苯基；另一前提係在R係3-苄基丙烯醯胺，R12係H且R14係苄基時，R10不為3-甲氧基-4-甲基六氫吡嗪-1-基-苯基；另一前提係在R12係H時，R14不為甲基或甲氧基。
  19. 如請求項18之化合物，其中R係 及其醫藥上可接受之鹽。
  20. 如請求項18之化合物，其中R14係H、苄基或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  21. 如請求項18之化合物，其中R14係H；及其醫藥上可接受之鹽。
  22. 如請求項18之化合物，其中R12係甲基；及其醫藥上可接受之鹽。
  23. 如請求項18之化合物，其中R10係，其中 環A係5員雜芳基；其中環T係苯基；其中R15係未經取代或經取代之6員含氮雜環基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基胺基、C1-4羥基烷基胺基、5員含氮雜環基-C1-4烷基胺基、5員含氮雜環基-氧基、C1-4烷基胺基-C1-4烷氧基或C1-4烷氧基-C1-4烷氧基；其中R16係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；且其中R18係C1-4烷基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基、未經取代或經取代之5員含氮雜環基或未經取代或經取代之6員含氮雜環基；及其醫藥上可接受之鹽。
  24. 如請求項18之化合物，其中R10係經取代之苯基；及其醫藥上可接受之鹽。
  25. 如請求項18之化合物，其中R10係經取代之吡唑基；及其醫藥上可接受之鹽。
  26. 如請求項23之化合物，其中R15係視情況經取代之六氫吡嗪基、視情況經取代之六氫吡啶基、N-(N’,N’-二甲基胺基乙基)-N-甲基胺基、N-羥乙基-N-甲基胺基、N-(2-酮基-1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、N-(1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、1-甲基-3-吡咯啶基氧基、N,N-二甲基胺基丙氧基、N,N-二甲基胺基乙氧基或甲氧基乙氧基；其中該等六氫吡嗪基及六氫吡啶基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、三氟甲基、1-羥基-1-甲基乙基及乙醯基；及其醫藥上可接受之鹽。
  27. 如請求項23之化合物，其中R16係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  28. 如請求項23之化合物，其中R18係甲基、乙基、異丙基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基或1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
  29. 如請求項18之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其中R10係
  30. 一種式IIa化合物， 其中Ra1係未經取代或經取代之6員含氮雜環基；且其中Rb1係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；及其醫藥上可接受之鹽；前提係在Rb1係3-甲氧基時，Ra1不為1-甲基-4-六氫吡嗪基。
  31. 如請求項30之化合物，其中Rb1位於苯基環之3位處；及其醫藥上可接受之鹽。
  32. 如請求項30之化合物，其中Ra1係六氫吡啶基或六氫吡嗪基；其中該六氫吡啶基或六氫吡嗪基環視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C1-3烷基、C1-4烷基羰基或C1-4羥基烷基；及其醫藥上可接受之鹽。
  33. 如請求項30之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其中Ra1係
  34. 如請求項30之化合物，其中Rb1係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  35. 一種式IIIa化合物， 其中R31係經取代之5員雜芳基；R32係H或甲基；R34係H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或苯基-C1-C6烷基；且R31經一或多個選自以下之取代基取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、C1-4鹵代烷氧基、C1-4鹵代烷基、C1-4烷基胺基-C1-4烷基、未經取代或經取代之5員含氮雜環基及未經取代或經取代之6員含氮雜環基；及及其醫藥上可接受之鹽。
  36. 如請求項35之化合物，其中R31係視情況經取代之吡唑基、視情況經取代之異噁唑基、視情況經取代之噻二唑基或視情況經取代之咪唑基；其中該等吡唑基、異噁唑基、噻二唑基或咪唑基環經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、甲氧基、氯、氟、三氟甲基、二氟甲氧基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基或1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
  37. 如請求項35之化合物，其中R31係視情況經取代之吡唑基；其中該吡唑基環經一或多個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、甲氧基、氯、氟、三氟甲基、二氟甲氧基、N,N-二甲基胺基乙基、1-甲基-吡咯啶基及1-甲基六氫吡啶基；及其醫藥上可接受之鹽。
  38. 如請求項35之化合物，其中R31係 ；及其醫藥 上可接受之鹽。
  39. 如請求項35之化合物，其中R34係H、苄基或甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  40. 一種式IVa化合物， 其中Ra4係C1-4烷基胺基-C1-4烷基胺基、C1-4羥基烷基胺基、5員含氮雜環基-C1-4烷基胺基、5員含氮雜環基-氧基、C1-4烷基胺基-C1-4烷氧基或C1-4烷氧基-C1-4烷氧基；且其中Rb4係一或多個選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氯、氟、H、C1-4鹵代烷氧基及C1-4鹵代烷基之取代基；及其醫藥上可接受之鹽。
  41. 如請求項40之化合物，其中Ra4係N-(N’,N’-二甲基胺基乙基)-N-甲基胺基、N-羥乙基-N-甲基胺基、N-(2-酮基-1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、N-(1-吡咯啶基乙基)-N-甲基胺基、1-甲基-3-吡咯啶基氧基、N,N-二甲基胺基丙氧基、N,N-二甲基胺基乙氧基或甲氧基乙氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  42. 如請求項40之化合物，其中Rb4係甲基、甲氧基、氯、氟、H、三氟甲基或二氟甲氧基；及其醫藥上可接受之鹽。
  43. 如請求項18之化合物，及其醫藥上可接受之鹽，其選自N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((3-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1-(2-(二甲基胺基)乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；8-(((3S)-1-丙烯醯基-3-吡咯啶基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1-乙基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7- 酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((4-(1-甲基-4-六氫吡啶基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-7-酮基-2-((4-(4-六氫吡啶基)苯基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-氯-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-(1-甲基-4-六氫吡啶基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺； N-(3-(5-甲基-2-((5-甲基-1-(1-甲基-4-六氫吡啶基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(S)-N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽；N-(3-(2-((3-氟-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-氯-4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-(1-羥基-1-甲基乙基)-1-六氫吡啶基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(6-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-六氫吡嗪基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-(4-乙醯基-1-六氫吡嗪基)-2-氯苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((3R)-3,4-二甲基-1-六氫吡嗪基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((3S)-3,4-二甲基-1-六氫吡嗪基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺； N-(3-(2-((4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(2-酮基-1-吡咯啶基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(5-甲基-2-((3-甲基-1-((3S)-1-甲基-3-吡咯啶基)-1H-吡唑-4-基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(甲基(2-(1-吡咯啶基)乙基)胺基)苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；(2E)-N-(3-(2-((4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺；N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-氟苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丙烯醯胺；及(2E)-N-(3-(2-((4-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-丁烯醯胺。
  44. 如請求項1至43中任一項之化合物，其用作治療劑。
  45. 一種醫藥組合物，其包括醫藥上可接受之載劑及如請求項1至43中任一項之化合物。
  46. 一種如請求項1至43中任一項之化合物於製備治療個體之癌症之藥物的用途。
  47. 一種如請求項1至43中任一項之化合物於製備治療哺乳動物之EGFR/ErbB2相關病症之藥物的用途。
  48. 一種如請求項1至43中任一項之化合物於製備治療個體之EGFR突變體相關疾病之藥物的用途。
  49. 如請求項48之用途，其中該EGFR突變體相關疾病係肺癌。
  50. 如請求項48之用途，其中該EGFR突變體相關疾病係非小細胞肺癌。
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